JP2002541238A

JP2002541238A - 薬理活性のある化合物の細胞内送達のためのカチオン脂質として有用な、ｌ−カルニチンまたはアルカノイルｌ−カルニチンのエステル

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Publication number: JP2002541238A
Application number: JP2000610820A
Authority: JP
Inventors: クラウディオ・ピサノ; マリア・オルネッラ・ティンティ; モーゼ・サンタニエッロ; ルチアナ・クリテッリ; ジョバンニ・サルバトーリ
Original assignee: Sigma Tau Industrie Farmaceutiche Riunite SpA
Current assignee: Sigma Tau Industrie Farmaceutiche Riunite SpA
Priority date: 1999-04-13
Filing date: 2000-04-11
Publication date: 2002-12-03
Anticipated expiration: 2020-04-11
Also published as: IL175366A; HK1045145A1; EE05514B1; DE60017388D1; BRPI0017460B1; JP4703855B2; NO20014985L; PL211710B1; BG105971A; IS2539B; AU2004224958B2; IL185486A0; US6797281B1; CA2650202C; IS6095A; YU70201A; US7629003B2; KR100798499B1; CN1823731A; ATE286873T1

Abstract

(57)【要約】薬理活性のある化合物の細胞内送達のためのカチオン脂質として用いることができるＬ-カルニチンおよびアルカノイルＬ-カルニチンのエステルを開示する。Ｒ基が明細書中に記載されているものである式（Ｉ）のＬ-カルニチンおよびアルカノイルＬ-カルニチンの新規エステルも開示する。【化１】

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本明細書に開示する発明は、一群の新規なＬ-カルニチンおよびアシルＬ-カル
ニチンのエステルおよび、薬理活性化合物の細胞内送達に適し、その膜貫通輸送
を促進するのに、または特定の細胞膜部位（レセプター）との相互作用を促進す
るのに適したカチオン脂質としての、その使用に関する。本明細書に記載する発明はさらに、前記の新規化合物と同じ目的に有用なＬ-
カルニチンとアシルＬ-カルニチンの公知エステルにも関する。本明細書中、「細胞内送達」の用語が示すものは、治療活性（遺伝子送達）を
有する天然起源の、または改変されたポリヌクレオチドまたはプラスミドによる
細胞の感染または、薬物または免疫原性ペプチドの細胞内への導入である。

【０００２】例えばポリペプチドおよびタンパク質または薬物のような薬理活性物質の多く
は、亜細胞または分子レベルで細胞機能に影響を与えることによりその効力を発
揮させるために、細胞へ貫通させる必要がある。これらの分子に対して、細胞膜
は選択的不浸透性のバリアを構成する。細胞膜は実際、保護的機能を果たし、毒
性がある可能性のある物質の侵入を妨げるが、治療活性を有する化合物の通過も
妨げる。細胞膜の複合体組成物には、リン脂質、糖脂質およびタンパク質が含ま
れ、その機能はＣａ⁺⁺および他のイオン、ＡＴＰ、微細繊維、微小管、酵素およ
び、Ｃａ⁺⁺に結合するタンパク質のような細胞質成分により影響を受ける。細胞
の構造および細胞質成分と、外からのシグナルに対する応答との間の相互作用が
、種々の異なる細胞型により、およびそれらの間で示されている選択性の原因で
ある。膜のバリア作用は、複合体中の物質を、天然由来の膜脂質の脂質製剤と組
み合わせることにより克服することができる。これらの脂質は膜と融合すること
ができ、かつ、それらと結合した物質を細胞中に放出することができる。脂質複
合体は膜との融合により細胞内輸送を促進することができるだけでなく、膜と細
胞中に貫通させなければならない分子の間の電荷の反発を減じることもできる。
両親媒性脂質、例えば膜リン脂質は、水系中で脂質ビヒクルまたはリポソームを
形成する。

【０００３】リポソームは、水性容積物を、脂質分子（たいていリン脂質）から成る１また
はそれ以上の膜で完全に封入する小胞である。親水性頭部と一対の炭素鎖（疎水
性尾部）から成るリン脂質は、生物膜の主要成分である。水溶液中で疎水性尾部
が自己会合して水を排除し、一方、親水性頭部は媒質と相互作用して様々な直径
を有する小胞群を形成する。脂質は概して、双イオン性、中性またはアニオン性
である。これらの小胞は、薬物、小分子、タンパク質、ヌクレオチドおよびプラ
スミドのキャリアとして用いることができる。

【０００４】近年、合成脂質から調製される、陽性に荷電した小胞の一クラスであるカチオ
ンリポソームが、遺伝物質の細胞内への輸送にとりわけ用いられている。ＤＮＡ
の陰性電荷がカチオン脂質の陽性電荷と相互作用して、安定なＤＮＡ-リポソー
ム複合体を形成することができる。この技術は単純で融通がきくため、リポソー
ムは遺伝子治療において、ヒトの患者に遺伝子を送達するための重要なビヒクル
となっている。現在のところ、遺伝子治療に用いられ、ＮＩＨ・Ｒｅｃｏｍｂｉ
ｎａｎｔ・Ａｄｖｉｓｏｒｙ・Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅにより認可されているベクタ
ーのほとんどはウイルスおよび合成系に含まれる。

【０００５】ウイルスの感染には、特定の細胞を攻撃し、ＤＮＡを核に輸送することを可能
とするための一連の複雑なメカニズムが関与している。遺伝子治療のためのウイ
ルスベクターの使用に関する原理は、ウイルス遺伝子を治療機能をコードする遺
伝子に、ウイルス粒子を細胞に感染させる能力を阻害することなく置きかえるこ
とができることに基づく。ウイルス治療の限界は、免疫原性、細胞変性性および
組換え原性(recombinogenic)の可能性があるウイルス分子を用いて行わなければ
ならないところにある。

【０００６】遺伝子治療にカチオン脂質を使用することには大きな期待が持たれている。こ
れらのベクターは、生物起源のものと比較して、より安全で毒性が少なく、大き
いサイズの遺伝子を導入することができるために、大きな可能性を有する。しか
し、生物タイプのベクターと比較して、それらは細胞内遺伝子転写収率が低い。
しかし、そのような感染系の使用が研究の初期段階にあることは心にとどめてお
くべきである。カチオン脂質は、ＤＮＡ-脂質複合体の形成、細胞-複合体相互作
用、膜との融合、細胞内へのＤＮＡの放出および転写に非常に重要な役割を果た
す。

【０００７】カチオンリポソームのインビボ適用に関して、重要な例がある。遺伝子治療に
関する最初の臨床試験は、ヒトリポソーム複合ＨＬＡ-Ｂ７遺伝子を含む発現ベ
クターをメラノーマの治療に導入することにより行われた。他の重要な適用は、
リポソーム複合発現ベクターＳＶ４０Ｃ-ＦＴＲの、肺経路による、または鼻腔
内スプレーとしての投与を用いる肺嚢胞性繊維症の治療に関する。遺伝子治療に
おけるリポソームの使用に関連する他の臨床試験が、現在進行中である。

【０００８】４つの構成成分：陽性に荷電したカチオン頭部、スペーサー、アンカー脂質お
よびリンカー結合が、カチオン脂質の構造中に一般に認められる。カチオン頭部によって、カチオンリポソームとＤＮＡ、ＤＮＡ-リポソーム複
合体と細胞膜および他の細胞成分との間の相互作用が生じる。これは、（電荷数
に依存して）様々に置換することができるモノ-またはポリカチオン基から成る
。スペーサーは、カチオン頭部を疎水性尾部から分け、ＤＮＡリン脂質のカチオ
ン頭部と陰性電荷間の最適の接触を確保することに関与する分子の部分である。

【０００９】アンカー脂質は、該分子の非極性炭化水素部分であり、二重脂質層の物理特性
、例えばその硬さおよび膜脂質との交換比等を決定する。「リンカー結合」が示すものは、炭化水素鎖と分子の残りの部分の間の結合で
ある。この結合によりカチオン脂質の化学的安定性および生物分解性が決定され
る。近年、脂質の使用が化粧品分野で確実に増加してきている。この分野でリポソ
ームが成功を収めたのは、これらの化合物が皮膚で非常に良好な耐性を示すとい
う事実のためである。それらは活性成分のためのビヒクルとして、および、活性
成分の吸収を促す化合物としての両方として用いられている。

【００１０】リポソームの調製および使用に関する数多くの化学文献および特許文献がある
が、遺伝子送達に有用なカルニチン誘導体の使用を開示する例はほとんどなく、
薬物送達に関しては、本明細書に開示する発明によるものとほんの少し類似する
化合物の調製に関する公知技術を開示する有用な文献はない。特許出願ＥＰ０２７９８８７は、カルニチン、即ち、ホスファチジルカルニチ
ンの、他のリン脂質および脂質（コレステロール、ホスファチジルコリン、ホス
ファチジルセリン）と組み合わせた、リポソームの調製のための使用を開示する
。

【００１１】リポソームの調製に関して提供される例では、抗高血圧、抗アンギナおよび抗
不整脈剤として活性であることが知られている薬物、プロプラノルオールと組み
合わせたホスファチジルコリンのリポソームが製造されている。ここでは、カル
ニチン誘導体はカルニチンの顕著な心筋親和性のために用いられている。この親
和性により、リポソームが所望の標的部位に達成する前に肝臓で代謝されるのが
回避される。ホスファチジルカルニチンの存在により、リポソームが腸のリパーゼに耐性と
なるため、リポソームを経口投与することも可能となる。

【００１２】 J. Med. Chem. 1998 Jun 18, 41(13): 2207-15では、遺伝子送達に有用な多く
のＬ-カルニチンのエステルが開示されているが、それらは薬物送達に有用な薬
剤としては開示あるいは推薦されていない。ＥＰ５５９６２５Ｂ１は、選択的胃腸管筋肉弛緩活性を有する多くのＬ-カル
ニチンおよびアシルＬ-カルニチンのエステルを開示する。近年、分子生物学者は、ヒトの患者で遺伝子疾患を引き起こす、染色体レベル
での多くの欠損を同定した。現代医薬の重要分野は、遺伝子に基づくこれらの遺伝性疾患を、遺伝子治療プ
ロトコルを用いて治療することに関連している。すでに記載したように、カチオン脂質は特に、膜貫通輸送を促進し、特定の細
胞膜部位（レセプター）とのその相互作用を促す薬理活性化合物の細胞内送達に
用いられる。

【００１３】これらのベクターは生物起源のものと比較して、より安全で毒性が少なく、さ
らに大きなサイズの遺伝子を導入することができるので、大きな潜在能力を有す
る。しかし、生物タイプのベクターと比較して、それらは細胞内遺伝子転写収率
が低い。さらに、常套のカチオン脂質が介在する遺伝子輸送には、プラスミドＤＮＡと
カチオン脂質が分けられていることが必要であり、遺伝子輸送の直前にそれらが
混合される必要がある。これらのポリヌクレオチド複合体を安定化させる試みは、有望な結果をほとん
ど生みそうになく、実際、それらはごく短期間しか安定性を保たない。

【００１４】それゆえ、遺伝子治療または遺伝子送達および薬物送達の分野では、適当な期
間後も活性である安定な、再現可能な部位特異的システムの必要性が強く認識さ
れている。薬理活性化合物の細胞内送達を促進するのに強い活性のあるカチオン脂質の一
クラスに、Ｌ-カルニチンおよびアシルＬ-カルニチンの新規エステルが含まれる
ことが、今回見出された。

【００１５】これらの新規化合物は安定であり、標的器官に到達することに関して部位特異
的であるため、高度に選択的である。この特性により、これら新規化合物が、活性化合物が薬理活性を発揮すること
ができる部位へそれら活性化合物を送達するのに特に有用なものとなる。

【００１６】以下に記載する本発明による化合物は、一般式（Ｉ）

【化４】（式中、ｎは１〜３の整数；Ｒは、水素または、直鎖または分枝鎖の、２-６の炭素原子を有するアルカノ
イル；Ｒ_１およびＲ_２は、同一または異なっていてよく、３-２０の炭素原子を有す
る飽和または不飽和の直鎖アシル鎖；Ｘ⁻は薬理学上許容される酸のアニオンである）を有する化合物である。

【００１７】Ｒの例は、アセチル、プロピオニル、ブチリル、バレリルおよびイソバレリル
である。Ｒ_１とＲ_２の例は、ヘキサノイル、ウンデカノイル、ミリストイル、パルミト
イルまたはオレオイルである。本発明による化合物の好ましい例は、Ｌ-カルニチンブロマイドと２-ヒドロキシアセチル-１，３-ジパルミトイルグ
リセロールのエステル（ＳＴ７７０）、アセチルＬ-カルニチンブロマイドと２-ヒドロキシアセチル-１，３-ジパルミ
トイルグリセロールのエステル（ＳＴ７７１）、プロピオニルＬ-カルニチンブロマイドと２-ヒドロキシアセチル-１，３-ジパ
ルミトイルグリセロールのエステル（ＳＴ７７２）、イソブチリルＬ-カルニチンブロマイドと２-ヒドロキシアセチル-１，３-ジパ
ルミトイルグリセロールのエステル（ＳＴ７７３）、イソバレリルＬ-カルニチンブロマイドと２-ヒドロキシアセチル-１，３-ジパ
ルミトイルグリセロールのエステル（ＳＴ７７４）、Ｌ-カルニチンブロマイドと１，３-ジヘキサノイル-２-ヒドロキシアセチルグ
リセロールのエステル（ＳＴ８１０）、アセチルＬ-カルニチンブロマイドと１，３-ジヘキサノイル-２-ヒドロキシア
セチルグリセロールのエステル（ＳＴ８０９）、プロピオニルＬ-カルニチンブロマイドと１，３-ジヘキサノイル-２-ヒドロキ
シアセチルグリセロールのエステル（ＳＴ８０８）である。

【００１８】薬理学上許容される酸のアニオンが意味するものは、有害な毒性または副作用
を引き起こさない酸のあらゆるアニオンである。これらの酸は、薬理学者および、製薬技術の専門家に周知である。

【００１９】これらのアニオンの例は、掲載するものに限定されないが、クロライド、ブロ
マイド、ヨーダイド、アスパルテート、酸アスパルテート、シトレート、酸シト
レート、タートレート、酸タートレート、ホスフェート、酸ホスフェート、フマ
レート、酸フマレート、グリセロホスフェート、グルコースホスフェート、ラク
テート、マレエート、酸マレエート、ムケート、オロテート、オキサレート、酸
オキサレート、スルフェート、酸スルフェート、トリクロロアセテート、トリフ
ルオロアセテート、メタンスルホネート、パモエートおよび酸パモエートである
。

【００２０】リポソームの形態の式（Ｉ）の化合物は、ワクチンとして有用なペプチドまた
はタンパク質をコードしている、遺伝子治療に有用な、天然由来のまたは改変さ
れたプラスミドまたはヌクレオチドの送達と、例えば抗癌剤、抗ウイルス剤、抗
細菌剤、抗真菌剤、抗原生動物剤の、心血管系疾患の治療に有用な薬物、または
免疫原性ペプチドおよび治療に有用な他の薬物などの薬物の一般的な送達の両方
に有用な薬物である。

【００２１】式（Ｉ）の化合物を含むリポソームは、当業者に周知の常套法を用いて調製さ
れる。例えば、Allen T.M. Drugs 56, 747-56 (1998)を参照されたい。本発明に
よるリポソームは、リポソーム技術の実施において周知の他の化合物を用いても
調製することができる。本発明の一態様では、リポソームはヘルパー脂質を含む
（この用語は当業者にはよく理解される）。ヘルパー脂質の例としては、コレス
テロール、１-パルミトイル-２-オレオイルホスファチジルコリンまたはジオレ
イルホスファチジルコリンが挙げられる。

【００２２】本発明によるリポソームは、組成物として適切に提供される。薬理活性化合物
の送達に関係する態様において、該組成物は、医薬上許容されるビヒクルおよび
/または賦形剤を含んでいてよい医薬組成物として理解される。リポソームの形態の式（Ｉ）の化合物は、リポソームそれ自体を美容活性剤と
して含む化粧用組成物の調製にも、および、美容活性を有する物質、例えば水和
剤、栄養剤、洗顔のための物質、抗皺剤、抗小胞炎剤および抗-伸展線剤の送達
のための化粧用組成物の調製にも有用であり得る。

【００２３】式（Ｉ）の化合物を含むリポソームは、経口または非経口、静脈内、筋肉内、
皮下、経皮にて、または鼻腔または口内スプレーの形態で投与することができる
。本明細書中に開示する発明はさらに、別の使用がすでに知られている一般式（
ＩＩ）を有する更なるカチオン脂質にも関する(前記のＥＰ５５９６２５）。本発明に従い、式（ＩＩ）の化合物は、薬物送達において強い活性を有し、前
記の式（Ｉ）の化合物のものに匹敵するほど、安定で、標的器官に関して選択的
であるという特徴を示すリポソームの調製に有用なＬ-カルニチンのエステルで
ある。同じ有利な特性は、化粧品の場合に適用することができる。

【００２４】これらの化合物は一般式（ＩＩ）：

【化５】（式中、Ｒ_３は飽和または不飽和の、４-２６の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖ア
シル鎖、Ｒ_４は飽和または不飽和の、４-２６の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖ア
ルキル鎖、および、Ｘ⁻は薬理学上許容される酸のアニオンである）を有する。

【００２５】Ｒ_３の好ましい例は、ノナノイル、ドデカノイル、ミリストイル、パルミトイ
ル、ステアロイルまたはオレオイルである。Ｒ_４の好ましい例は、ノニル、ウンデシル、テトラデシル、ヘキサデシルまた
はオレイルである。

【００２６】本明細書中に記載する発明による式（ＩＩ）の特定化合物の例は、パルミトイルＬ-カルニチンクロライドウンデシルエステル（ＳＴ９８３）、ステアロイルＬ-カルニチンクロライドウンデシルエステル（ＳＴ１０５５）
、ステアロイルＬ-カルニチンクロライドテトラデシルエステル（ＳＴ１３５１
）、パルミトイルＬ-カルニチンクロライドテトラデシルエステル（ＳＴ１３７９
）、ミリストイルＬ-カルニチンクロライドテトラデシルエステル（ＳＴ１３８０
）、パルミトイルＬ-カルニチンブロマイドヘキサデシルエステル（ＳＴ１３９０
）、オレイルＬ-カルニチンクロライドオレイルエステル（ＳＴ１３９２）である。

【００２７】式（ＩＩ）の多くの化合物、すなわち、ＳＴ１３８０、ＳＴ１３９０およびＳ
Ｔ１３９２は公知であり、前記のJ.Med. Chem. 1998 Jun 18; 41(13): 2207-15
に、治療活性を有する、細胞感染のためのリポソームの調製に有用な薬剤として
開示されているが、薬物送達のためのリポソームの調製に有用な薬剤としては開
示されていない。平均的な経験のある、医薬製剤分野の技術者は、リポソーム-薬物複合体の調
製において遭遇する難点をよく知るが、実際、遺伝子送達に有用なリポソームを
薬物送達に用いることができるかどうかを演繹的に確認することは、薬物を結合
させることができ、かつ治療活性を発揮させなければならない器官に薬物を選択
的に送達するリポソームを得るのに克服されなければならない多くの問題のため
に、不可能である。

【００２８】リポソームの形態の式（ＩＩ）の化合物は、薬物、例えば抗癌、抗脈管形成、
抗ウイルス、抗細菌、抗真菌、抗原生生物剤または、心血管疾患に治療に有用な
薬物、または免疫原性ペプチド、および治療に有用な他の薬物の送達に有用な薬
剤である。リポソームの形態の式（ＩＩ）の化合物はさらに、それ自体を美容剤としての
化粧用組成物の調製にまたは、美容活性を有する物質、例えば水和剤、栄養剤、
洗顔剤および抗皺剤、抗小胞炎剤および抗-伸展線剤の送達のための化粧用組成
物の調製に有用である。該リポソームは、式（ＩＩ）の化合物を含むリポソームの場合のように、ヘル
パー脂質を含んでいてよい。

【００２９】式（ＩＩ）の化合物を含むリポソームは、経口または非経口、静脈内、筋肉内
、皮下、経皮にてまたは、鼻腔あるいは口内スプレーの形態で投与することがで
きる。本明細書に開示する発明はさらに、別の使用が既に公知の（前記ＥＰ５５９６
２５）、一般式（ＩＩＩ）を有する更なるカチオン脂質に関する。本発明に従い式（ＩＩＩ）の化合物は、薬物送達を促進する強い活性を有し、
かつ、標的器官に到達したとき、前記式（Ｉ）の化合物のものに匹敵する程安定
で選択的であるという特徴を示すリポソームの調製に有用な、Ｌ-カルニチンの
エステルである。

【００３０】これらの化合物は、一般式（ＩＩＩ）

【化６】（式中、Ｒ_５は飽和または不飽和の、４-２６の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖ア
シル鎖、Ｒ_６は飽和または不飽和の、４-２６の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖ア
ルキル鎖、Ｘ⁻は、薬理学上許容される酸のアニオンである。ただし、Ｒ_５がステアロイルのとき、Ｒ_６はステアリールではなく、Ｒ_５がオレオイルのとき、Ｒ_６はステアリールではなく、Ｒ_５がパルミトイルのとき、Ｒ_６はパルミチルではなく、Ｒ_５がミリストイルのとき、Ｒ_６はミリスチルではなく、Ｒ_５がラウロイルのとき、Ｒ_６はラウリルではなく、Ｒ_５がオレオイルのとき、Ｒ_６はオレイルではない。）を有する。

【００３１】請求項に記載しなかったリポソーム形態の化合物が、J. Med. Chem. 1988, 41
, 2207-2215に、もっぱら遺伝子送達に関して開示されている。Ｒ_５の好ましい例は、ノナノイル、ドデカノイル、ミリストイル、パルミトイ
ル、ステアロイルまたはオレオイルである。Ｒ_６の好ましい例は、ノニル、ウンデシル、テトラデシル、ヘキサデシルまた
はオレイルである。

【００３２】本明細書中に記載する本発明による式（ＩＩＩ）の化合物の好ましい例は、パルミトイルＬ-カルニチンクロライドウンデシルエステル（ＳＴ９８３）；ステアロイルＬ-カルニチンクロライドウンデシルエステル（ＳＴ１０５５）
；ステアロイルＬ-カルニチンクロライドテトラデシルエステル（ＳＴ１３５１
）；パルミトイルＬ-カルニチンクロライドテトラデシルエステル（ＳＴ１３７９
）である。

【００３３】式（ＩＩＩ）の化合物は、遺伝子治療に有用な天然由来の、あるいは改変され
たプラスミドまたはヌクレオチドまたは、ワクチンとして有用なペプチドまたは
タンパク質をコードするそれらのプラスミドまたはヌクレオチドの送達に有用な
薬剤である。式（ＩＩＩ）の化合物は、経口または非経口、静脈内、筋肉内、皮下、経皮に
て、または鼻腔または口内スプレーの形態で投与することができる。

【００３４】本発明による式（Ｉ）の化合物の調製法を、次の反応図に示すが、この図は一
般式（Ｉ）の化合物全てに当てはまると考える。全ての必要な試薬が市場入手可
能であり、または文献中に開示されており、反応条件は、本発明の全範囲に一般
に適用でき、所望により、いずれの変更も一般的に共通に知られている範囲内で
正規になし得るため、当業者は、Ｒ、Ｒ_１およびＲ_２で示した基のすべてを容易
に得ることができる。

【００３５】

【化７】

【００３６】前記反応図１を参考に、本発明による式（Ｉ）の化合物の調製法を以下に示す
。実施例１プロピオニルＬ-カルニチンブロマイドと２-ヒドロキシアセチル１，
３ジパルミトイルグリセロールのエステル（ＳＴ７７２）の調製ａ）１，３-ジヒドロキシプロパン-２-オン１，３-ジパルミテート（１）の調製ジヒドロアセトン（７ｇ、０．０７８モル）を３００ｍＬの無水クロロホルム
に０℃（外部温度）にて無水窒素流下で溶解した。こうして得られた溶液に、パルミトイルクロライド（４４ｇ、０．１６モル）
と無水ピリジン（１５ｍＬ）を滴下した。生じた混合液を、その温度を室温まで上昇させ、２４時間攪拌下に置いた。

【００３７】次いで混合液を次の順序で、３００ｍＬの０．５％塩酸水溶液、３００ｍＬの
５％重炭酸ナトリウム水溶液および最後に３００ｍＬの水を用いて抽出した。分離した有機相を無水硫酸ナトリウム上で脱水し、セルロースフィルター上で
濾過し、乾燥状態まで濃縮して粗生成物（１）を得た。純粋な生成物（１）を５００ｍＬのエチルアルコールからの結晶化により得た
。３０．４ｇの生成物（１）を得た。

【００３８】収率７３％。ｍ.ｐ.＝８０-８１℃ H¹NMR(CDCl₃): 0.9(6H, t, CH₃CH₂-); 1.3(48H, m, (CH₂)_n=24); 1.55(4H, m, -
OCOCH₂CH₂-); 2.4(4H, t, -OCOCH₂-); 4.7(4H, s, -OCCH₂-).

【００３９】ｂ）１，２，３-トリヒドロキシプロパン-１，３-ジパルミテート（２）の調製テトラヒドロフラン（１２５ｍＬ）およびトルエン（２５ｍＬ）中に溶解した
生成物（１）（５ｇ、９ｍｍｏｌ）に、水（７．５ｍＬ）を攪拌下でゆっくりと
添加した。得られた乳白色の懸濁液の温度を５℃（外部の温度）まで上昇させ、ホウ水素
化ナトリウム（５００ｍｇ、１３ｍｍｏｌ）を少しずつ添加した。懸濁液を攪拌
下、３０分間５℃に置いた。氷酢酸を次いでゆっくりと、過剰のホウ水素化ナトリウムの分解により生じる
泡立ちが止むまでゆっくりと添加し、最終的に溶液を得た。クロロホルム（１００ｍＬ）を溶液に添加し、二相系の形成を得た。ＣＨＣｌ_３から成る低い方の有機相を分離し、次の順序で水（２５ｍＬ）、重
炭酸ナトリウム（２５ｍＬの１０％水溶液）および水（２５ｍＬ）を用いて抽出
した。

【００４０】（２）を含む有機溶液を硫酸ナトリウム上で脱水し、濾過し、乾燥状態まで濃
縮して、ワックス様の生成物を得た。生成物（２）を、ワックス様粗生成物のアセトン結晶化により得た。４．８ｇの生成物（２）を得た。収率９４％。ｍ.ｐ.＝７１-７２℃。 H¹NMR(CDCl₃): 0.9(6H, t, CH₃CH₂-); 1.3(48H, m, (CH₂)_n=24); 1.55(4H, m, -
OCOCH₂CH₂-); 2.4(4H, t, -OCOCH₂-); 4.2(5H, m, -CHCH₂O-).

【００４１】ｃ）１，３-ジパルミトイル-２-ブロモアセチルグリセロール（３）の調製生成物（２）（２．５ｇ、４．４ｍｍｏｌ）を無水クロロホルム（５０ｍＬ）
に攪拌下、０℃（外部温度）で溶解した。こうして得られた溶液に、ゆっくりとピリジン（０．４２ｍｌ）を添加し、ブ
ロモアセチルクロライド（０．４３ｍＬ、５．２ｍｍｏｌ）を含む３ｍｌのクロ
ロホルム溶液を滴下した。反応混合液を３０分間０℃（外部温度）に保ち、かつ、３０分間室温に保った
。

【００４２】反応混合液を次いで次の順序で、１％塩酸水溶液（約５０ｍＬ）、５％重炭酸
ナトリウム水溶液（約５０ｍＬ）および水を用いて処理した。反応混合液を（硫酸ナトリウムで）脱水し、乾燥状態まで濃縮した後、生成物
（３）をアセトンの結晶化により精製した。

【００４３】２．５ｇの生成物（３）を得た。収率８９％。ｍ.ｐ.＝４９-４７℃。 H¹NMR(CDCl₃): 0.9(6H, t, CH₃CH₂-); 1.3(48H, m, (CH₂)_n=24); 1.55(4H, m, -
OCOCH₂CH₂-); 2.4(4H, t, -OCOCH₂-); 3.9(2H, s, -OCH₂COO-) 4.2-4.4(5H, m,
-CHCH₂O-); 5.25(1H, m, CHCH₂O-).

【００４４】ｄ）Ｌ-プロピオニルカルニチンブロマイドと２-ヒドロキシアセチル-１，３-ジ
パルミトイルグリセロールのエステル（４）の調製予め４０℃にて真空乾燥させたＬ-プロピオニルカルニチン分子内塩（０．９
５ｇ、４．４ｍｍｏｌ）を無水ジメチルホルムアミド（約２０ｍＬ）に懸濁した
。生成物（３）（３ｇ、４．７ｍｍｏｌ）を懸濁液に少しずつ添加した。懸濁液
をゆっくりと３８℃まで加熱し、溶液が得られるまでこの条件下に置いた。１０分後から、溶液を３０分間０℃に保った。沈殿を得、これを濾過し、エチ
ルエーテルで洗浄し、クロロホルム（１００ｍＬ）に溶解した。得られた乳白色
溶液（３０ｍＬ）をセライト上で濾過し、濃縮した。この後者の溶液に、ヘキサ
ン（１００ｍＬ）を添加し、得られた生成物（４）の沈殿を濾過し、３５℃にて
真空乾燥させた。３．１９ｇの標題化合物を得た。収率８０％。

【００４５】ｍ.ｐ.＝１２７-１２８℃。 [α]^２５ _Ｄ＝−３．９（Ｃ＝１％クロロホルム）。Ｃ_４７Ｈ_８８ＢｒＮＯ_１０の元素分析

【００４６】

【表１】

【００４７】 H¹ NMR(CDCl₃) :0.9-0.95(6H,t, CH₃CH₂CH₂-); 1.1-1.2(3H,t, CH₃CH₂CO); 1.2-
1.4(24H, m, CH₂n=24); 1.5-1.6(4H, m, -OCCH₂CH₂-); 2.3-2.4(4H, t, -OCCH₂C
H₂-); 2.4-2.45(4H, d.d., -CHCH₂O-); 2.95(2H, d, -CH₂COOCH₂COO-); 3.5(9H,
s, N(CH₃)₃); 4.2(4H, m, -CH₂OCOCH₂-); 4.35(2H,m, -CH₂N-); 4,65(2H,d,d,
-OCH₂CO-); 5.25(1H,m, -OCH₂CHCH₂O-); 5.75(1H, m, -CHCH₂N-).

【００４８】実施例２-７以下の化合物を前記実施例と同じ方法で調製した。Ｌ-カルニチンブロマイドと２-ヒドロキシアセチル-１，３-ジパルミトイルグ
リセロールのエステル（ＳＴ７７０）、アセチルＬ-カルニチンブロマイドと２-ヒドロキシアセチル-１，３ジパルミ
トイルグリセロールのエステル（ＳＴ７７１）、イソブチリルＬ-カルニチンブロマイドと２-ヒドロキシアセチル-１，３-ジパ
ルミトイルグリセロールのエステル（ＳＴ７７３）、イソバレリルＬ-カルニチンブロマイドと２-ヒドロキシアセチル-１，３-ジパ
ルミトイルグリセロールのエステル（ＳＴ７７４）、Ｌ-カルニチンブロマイドと１，３-ジヘキサノイル-２-ヒドロキシアセチルグ
リセロールのエステル（ＳＴ８１０）、アセチルＬ-カルニチンブロマイドと１，３-ジヘキサノイル-２-ヒドロキサセ
チルグリセロールのエステル（ＳＴ８０９）、１，３-ジヘキサノイル-２-ヒドロキシアセチルグリセロールとのプロピオニ
ルＬ-カルニチンブロマイドエステル（ＳＴ８０８）。

【００４９】本明細書中に開示する発明の一つの好ましい態様は、抗癌剤を含むリポソーム
および特に、カンプトテシン（例えばＷＯ９７/３１００３に開示されているも
の）のためのビヒクルとして作用するリポソームの調製から成る。より好ましい
態様では、本明細書に開示する発明により、一般式（ＩＶ）：

【化８】（式中、Ｒ_７は-Ｃ（Ｒ_１１）＝Ｎ-Ｏ_（ｎ）Ｒ_１０基であり、Ｒ_１０は水素また
は、直鎖あるいは分枝鎖のＣ_１-Ｃ_５アルキルまたはＣ_１-Ｃ_５アルケニル基、ま
たはＣ_３-Ｃ_１０シクロアルキル基、または直鎖または分枝鎖の（Ｃ_３-Ｃ_１０）
シクロアルキル-（Ｃ_１-Ｃ_５）アルキル基、またはＣ_６-Ｃ_１４アリール、また
は直鎖または分枝鎖（Ｃ_６-Ｃ_１４）アリール-（Ｃ_１-Ｃ_５）アルキル基、また
は複素環式または直鎖あるいは分枝鎖複素環式-（Ｃ_１-Ｃ_５）アルキル基であり
、該複素環式基は、（Ｃ_１-Ｃ_５）アルキル基で置換されていてよい窒素、およ
び/または酸素および／または硫黄の原子から選択される少なくとも一つのヘテ
ロ原子を含み、該アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリール、アリール
-アルキル、複素環式または複素環アルキル基は、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ_１-
Ｃ_５アルキル、Ｃ_１-Ｃ_５アルコキシ、フェニル、シアノ、ニトロ、-ＮＲ_１２Ｒ _１３（Ｒ_１２およびＲ_１３は同一または異なっていてよく、水素、直鎖または分
枝鎖（Ｃ_１-Ｃ_５）アルキル、-ＣＯＯＨ基またはその医薬上許容されるエステル
の一つである）、または-ＣＯＮＲ_１４Ｒ_１５基（Ｒ_１４およびＲ_１５は同一ま
たは異なっていてよく、水素、直鎖または分枝鎖（Ｃ_１-Ｃ_５）アルキルである
）から選択される他の基で置換されていてよい。または、Ｒ_１０は、ハロゲン、ヒドロキシ、直鎖または分枝鎖Ｃ_１-Ｃ_５アルキル、直
鎖または分枝鎖Ｃ_１-Ｃ_５アルコキシ、フェニル、シアノ、ニトロ、-ＮＲ_１６Ｒ _１７（Ｒ_１６およびＲ_１７は同一または異なっていてよく、水素、直鎖または分
枝鎖Ｃ_１-Ｃ_５アルキルである）から選択される１またはそれ以上の基で置換さ
れていてよいＣ_６-Ｃ_１０アロイル基である。

【００５０】Ｒ_１０はポリアミノアルキル基、または、Ｒ_１０はグリコシル基、ｎは０または１、Ｒ_１１は、水素、直鎖または分枝鎖Ｃ_１-Ｃ_５アルキル、直鎖または分枝鎖Ｃ
_１-Ｃ_５アルケニル、Ｃ_３-Ｃ_１０シクロアルキル、直鎖または分枝鎖（Ｃ_３-Ｃ
_１０）シクロアルキル-（Ｃ_１-Ｃ_５）アルキル、Ｃ_６-Ｃ_１４アリール、直鎖ま
たは分枝鎖（Ｃ_６-Ｃ_１４）アリール-（Ｃ_１-Ｃ_５）アルキルである、Ｒ_８およびＲ_９は同一または異なっていてよく、水素、ヒドロキシ、直鎖また
は分枝鎖Ｃ_１-Ｃ_５アルコキシである）を有するカンプトテシン、そのＮ_１-オキシド、単一異性体、特に、-Ｃ（Ｒ_１１）＝Ｎ-Ｏ_（ｎ）Ｒ_１０基のシンおよびアンチ異性体、その可能なエナンチオマ
ー、ジアステレオ異性体および関連混合物、その医薬上許容される塩およびその
活性代謝物を送達するためのリポソームが提供される。

【００５１】式（ＩＶ）の化合物は、１９９９年３月９日出願のヨーロッパ特許出願Ｎｏ．
９９８３０１２４．６に開示されている。ｎが１であり、Ｒ_１０がアロイルを除いて前に定義するものである式（ＩＶ）
の化合物に関して、これらの化合物は、カンプトテシン７-アルデヒド（式ＩＶ
ａ、Ｒ_１１は水素）またはカンプトテシン７-ケト（式ＩＶａ、Ｒ_１１は水素以
外である）から出発して調製することができる。

【００５２】

【化９】（式中、Ｒ_７は、-（ＣＲ_１１）＝Ｏ基であり、および、Ｒ_１１は式（ＩＶ）で
定義するものであり、Ｒ_８およびＲ_９は式（ＩＶ）で定義するものである。）式
（ＩＶａ）の化合物を式（Ｖａ）の化合物Ｒ_１０Ｏ-ＮＨ_２（Ｒ_１０は前記のも
のである）と反応させ、式（Ｉ）（式中、Ｒ_７は-Ｃ（Ｒ_１１）＝Ｎ-Ｏ-Ｒ_１０
基であり、Ｒ_１０はアロイルを除いて式（ＩＶ）で定義するものである）の化合
物を得る。

【００５３】反応は、オキシムの通常の形成を含む方法である、当業者に公知の常套法を用
いて行うことができる。好ましくは、カンプトテシン７-アルデヒドまたは７-ケ
トのヒドロキシルアミンに対するモル比は、１：３〜３：１の範囲内にあるべき
である。関連するヒドロキシルアミン塩を用いることもできる。反応は塩基（例
えば、炭酸カリウムのような無機塩基）または有機塩基（トリエチルアミンまた
はジアザビシクロノナンなど）の存在下、極性溶媒、好ましくはメタノールまた
はエタノールを用いて行い、該反応は、室温から溶媒の沸点の範囲の温度で、任
意に脱水剤（例えば硫酸ナトリウムまたはマグネシウム、モレキュラーシーブ）
の存在下で行う。所望の場合、反応は触媒、例えばルイス酸の存在下で行うこと
もできる。

【００５４】別に、前記化合物は、（Sawada et al Chem. Pharm. Bull. 39, 2574(1991)に
開示されるようにして得られた）カンプトテシン７-アルデヒドまたは７-ケトの
オキシムから、または対応する７-アシルカンプトテシンから、Ｒ_１０-Ｘハロゲ
ン化物（Ｘは好ましくはヨウ素である）を極性溶媒（例えばテトラヒドロフラン
またはアルコール）中、塩基（例えば水素化ナトリウムまたは炭酸カリウム）の
存在下で用いる反応により調製することができる。

【００５５】ｎが１であり、Ｒ_１０が式（ＩＶ）に定義するアロイルである式（ＩＶ）の化
合物に関し、これらの化合物は、カンプトテシン７-オキシム（この調製に関し
ては前の段落に記載してある）から出発して、Ｒ_１０-ＣＯＣｌアシルクロライ
ドを極性溶媒中、塩基（好ましくはピリジン）の存在下で、またはそれを直接ピ
リジン中で用いて調製することができる（Cho et al. J. Org. Chem. 62, 2230(
1997)に開示されている）。

【００５６】ｎが０であり、Ｒ_１０がアロイル基を除いて前に定義するものである式（ＩＶ
）の化合物に関し、該化合物はカンプトテシン７-アルデヒド（式ＩＶａ、Ｒ_１
_１は水素である）またはカンプトテシン７-ケト（式ＩＶａ、Ｒ_１１は水素以外
である）から出発して調製することができる。

【００５７】

【化１０】（式中、Ｒ_７は-Ｃ（Ｒ_１１）＝Ｏ基であり、Ｒ_１１は式（ＩＶ）で定義するも
のであり、Ｒ_８およびＲ_９は式（ＩＶ）で定義するものである）。式（ＩＶａ）
の化合物を式（Ｖｂ）の化合物Ｒ_１０-ＮＨ_２（Ｒ_１０は前に定義したものであ
る）と反応させて、式（ＩＶ）（式中Ｒ_７は-Ｃ（Ｒ_１１）＝Ｎ-Ｒ_１０基であり
、Ｒ_１０はアロイルを除いて式（ＩＶ）で定義するものである）の化合物を得る
。反応は、製薬技術の専門家に公知の常套法（当該工程はイミンの通常の形成か
ら成る）を用いて行うことができる。好ましくは、カンプトテシン７-アルデヒ
ドまたは７-ケトのイミンに対するモル比は１：３〜３：１の範囲内であるべき
である。関連するアミンの塩を用いることもできる。反応は塩基、例えば無機塩
基（炭酸カリウムなど）または有機塩基（トリエチルアミンまたはジアザビシク
ロノナンなど）の存在下で、極性溶媒（好ましくはメタノールまたはエタノール
）を用いて行い、当該反応は、室温から溶媒の沸点の範囲の温度で、任意に脱水
剤（例えば硫酸ナトリウムまたはマグネシウム、モレキュラーシーブ）の存在下
で行う。所望の場合、反応は触媒、例えばMoretti and Torre, Synthesis, 1970
, 141;または、Kobayashi et al, Synlett, 1977, 115に開示されているような
ルイス酸などの存在下で行うこともできる。

【００５８】カンプトテシン７-アルデヒドおよびカンプトテシン７-オキシムは、ヨーロッ
パ特許出願ＥＰ００５６６９２および、Sawada et al, Chem. Pharm. Bull. 39,
2574(1991)による前に引用した文献に開示されている。式（ＩＶ）の化合物のＮ_１-オキシドは、公知の複素環式芳香族窒素酸化法に
従い、好ましくは酢酸またはトリフルオロ酢酸および過酸化水素を用いる酸化ま
たは有機ペルオキシ酸を用いる反応(A. Albini and S. Pietra, Heterocyclic N
-oxides, CRC, 1991)により調製する。

【００５９】異なる式Ｖの反応物に存在するＲ_１０の種々の意義に関して、これらの反応物
は市場入手可能であり、または、当該分野の専門家が、当該事項に関する彼ら自
身の知識を補充するものとして信頼することができる文献から知ることができる
方法に従い調製することができる。医薬上許容される塩は当該文献に開示される常套法を用いて得られ、更なる開
示は必要でない。

【００６０】実施例８７-ベンジルオキシイミノメチルカンプトテシン（ＣＰＴ１７２）５００ｍｇ（１．３３ｍｍｏｌ）の７-ホルミルカンプトテシンを１００ｍｌ
のエタノールに溶解する。１５ｍｌのピリジンおよび６３８ｍｇ（４ｍｍｏｌ）
のＯ-ベンジルヒドロキシルアミンヒドロクロライドを添加する。溶液を５時間
還流する。溶媒を真空蒸発させ、こうして得られた残存物をシリカゲル上、ヘキ
サン/酢酸エチルの４：６混合物を溶離剤として用いるフラッシュクロマトグラ
フィーにより精製する。収率；６５％。ｍ．ｐ．：２００−２０５℃ｄｅｃ。

【００６１】得られた生成物は、２つのシンおよびアンチ異性体のおよそ８：２の混合物か
ら成る（異性体Ａ：Ｒｆ０．３２；異性体Ｂ、Ｒｆ０．１９、メルク６０Ｆ２５
４シリカゲル上；溶離剤：ヘキサン：酢酸エチル３：７）。ＨＰＬＣ：分析はローダインインジェクター（２０μｌ白金匙）を有する４つ
組ポンプ（ＨＰ１０５０）とＨＰＬＣ-ＣｈｅｍＳｔａｔｉｏｎプログラムで操
作するダイオードアレイ検出器（ＨＰ１０５０）を備えた装置上で行った。スペ
クトル取得は２００〜６００ｎｍで行い、クロマトグラムは３６０と４００ｎｍ
で記録した。

【００６２】Ｃ１８逆相カラム（ＲａｉｎｉｎＣ１８：２５×０．４ｃｍ、Ｖａｒｉａｎ）
を、ＲＰ１８プレカラムと共に用いた。分析は、アセトニトリル：水３０：７０
から出発してアセトニトリル１００％までの、２０分間、１ｍｌ／分の流速での
線形溶離勾配を用いて行った。保持時間は異性体Ｂに関しては１２．５１分、異
性体Ａに関しては１４．４８分であった。¹ H-NMR (300 MHz; DMSO-d₆): δ: 0.88 (t, H₃-18A+H₃-18B), 1.87 8m, (H₂-19A
+H₂-19B), 5.18 (s, H₂-5B), 5.21 (8s, H₂-Ph B), 5.30 (H₂-Ph A), 5.40 (s,
H₂-5A), 5.45 (s, H₂-17A+H₂-17B), 6.53 (s, -OH A+-OH B), 7.3-7,6 (m, Ar A
+ Ar B+H-14A+ H-14B), 7.75 (m, H-11A+H-11B), 7.85-7-95 (m, H10A+H-10B),
7.98 (dd, H-12B), 8.18-8.27 (m, H-12A+H9-B), 8.45 (s, CH=N B), 8.59 (dd,
H-9A), 9.38 (s, CH=N A). Mass m/z 481 (M⁺ 100) 374 (30)330(70)300(30)273(20)243(20)91(34).

【００６３】実施例９７-ブトキシイミノメチルカンプトテシン（ＣＰＴ１８４）４００ｍｇ（１．０６ｍｍｏｌ）の７-ホルミルカンプトテシンを８０ｍｌの
エタノールに溶解する。１２ｍｌのピリジンおよび４００ｍｇ（３．１８ｍｍｏ
ｌ）のＯ-ｔ-ブチルヒドロキシルアミンヒドロクロライドを添加する。溶液を４
時間還流する。溶媒を真空蒸発させ、こうして得られた残存物をシリカゲル上、
ヘキサン/酢酸エチルの４：６混合物を溶離剤として用いるフラッシュクロマト
グラフィーにより精製する。３２２ｍｇ（０．７２ｍｍｏｌ）の黄色固体を得る。収率６８％。ｍ．ｐ．２５０℃ｄｅｃ。

【００６４】得られた生成物は、２つのシンおよびアンチ異性体の約８：２の混合物（異性
体Ａ：Ｒｆ０．３１、異性体Ｂ、Ｒｆ０．２４、メルク６０Ｆ２５４シリカゲル
；溶離剤：ヘキサン：酢酸エチル３：７）から成る。ＨＰＬＣ：分析は、ローダインインジェクター（２０μｌ白金匙）を有する４
つ組ポンプ（ＨＰ１０５０）とＨＰＬＣ-ＣｈｅｍＳｔａｔｉｏｎプログラムで
操作するダイオードアレイ検出器（ＨＰ１０５０）を備えた装置上で行った。ス
ペクトル取得は２００〜６００ｎｍで行い、クロマトグラムは３６０と４００ｎ
ｍで記録した。

【００６５】Ｃ１８逆相カラム（ＲａｉｎｉｎＣ１８；２５×０．４ｃｍ、Ｖａｒｉａｎ）
をＲＰ１８プレカラムと共に用いた。分析はアセトニトリル：水３０：７０から
出発してアセトニトリル１００％まで、２０分間、１ｍｌ／分の流速で用いる線
形溶離勾配を用いて行った。保持時間は異性体Ｂに関しては１２．９２分および
、異性体Ａに関しては１４．６１分であった。

【００６６】¹ H-NMR (300 MHz; DMSO-d₆): δ: 0.88 (t, H₃-18A+H₃-18B), 1.30 (s, t-but.B
), 1.47 (s, t-but.A) 1.87 (m, H₂-19A+H₂-19B) 5.18 (s, H₂-5 B), 5.37 (H₂-
5 A), 5.42 (s, H₂-17A+H₂-17B), 6.54 (s, -OH A+-OH B), 7.35 (s H-14A), 7.
36 (s, H-14B) 7.69-7.83 (m, H-11A+H-11B), 7.85-7.98 (m, H-10A+H-10B), 8.
07 (dd, H-9B), 8.16-8.27 (m, H-9A+H-12B) 8.40 (s, CH B), 8.62 (dd, H-12A
), 9.31 (s, CH A). Mass m/z 448 (M⁺ 28) 391 (40)374(100)362(40)330(34)57(17).

【００６７】リポソームの調製本発明による化合物は、多層リポソーム（ＭＬＶ）および単層リポソーム（Ｓ
ＵＶ）を、共に乾燥粉末形態で、および水溶液中の懸濁物として調製するのに用
いることができる。実施例１-７に開示するように調製した本発明による化合物を、以下の方法に
従いリポソームを調製するのに用いる。適量の化合物をクロロホルム中に溶解し
、該溶液を乾燥状態までロータリーエバポレーター中で、脂質層が得られるまで
真空濃縮する。脂質層を、最終的に残っている微量の溶媒が除去されるまで高真
空下で乾燥させ、次いでｔｅｒｔ-ブチルアルコールまたは水で溶解する。こう
して得られた溶液を凍結乾燥し、軟質の乾燥粉末を得た。

【００６８】粉末を適量の水溶液で水和し、使用する化合物から成るリポソームを得、これ
を次いでポリヌクレオチドまたは所望の薬物と結合させる。リポソームの調製の別の方法は、本発明による化合物から成る脂質層を溶媒中
で、適当な不活性支持体（例えばソルビトール、マンニトールまたは他の薬理学
上許容される炭水化物など）の上に吸着させることから成る。混合物を真空乾燥
させ、固体を得、これは使用前に容易かつ非常に迅速に水和できる。乾燥粉末の形態の調製物は、長期間安定であり、使用しやすいという利点を示
す。

【００６９】さらに、本発明による化合物を以下の方法に従い、ＤＮＡまたは所望の薬物を
結合させた、乾燥粉末形態のリポソームを調製するのに用いることができる。本
発明による化合物をｔｅｒｔ-ブチルアルコール中に、または水で溶解し、こう
して得られた溶液をＤＮＡまたは所望の薬物を混合し、当該混合物を凍結乾燥し
、プロリポソーム-ＤＮＡまたはプロリポソーム-薬物として定義することができ
る複合物を軟質の乾燥粉末形態で得る。

【００７０】こうして得られた粉末（プロリポソーム）を、エアゾルにより投与することが
できる、または、別に、水または適当なバッファー溶液で復元した場合に非経口
または経口投与することができる医薬組成物の調製に用いることができる。ＤＮＡまたは薬物と結合させた固体形態のリポソームは、ソルビトール、マン
ニトールまたは他の炭水化物のような不活性支持体上に、前記の方法を用いる脂
質層を吸着させる方法を用いても得ることができる。

【００７１】リポソームの形成に関する試験リポソームの形成を、以下の方法に従い、水溶性色素を用いる比色法を用いて
試験した。水溶性色素ＡｒｓｅｎａｚｏＩＩＩの水溶液を得た（ｍ．ｗ．＝７７
６．３７；２．３ｍｇ／ｍＬ）。この溶液を水の代わりに用いて前記の調製から生じる脂質層を水和した。色素を内包するリポソームを含む懸濁液の一部を水で１００倍に希釈した。

【００７２】２ｍＬのリポソーム懸濁液を用いて６６０ｎｍでの第一光学濃度示数を得た。
この示数はブランクとして定義した等量のサンプルに対して得た。２００μｌの
ＣａＣｌ_２溶液（１５ｍｇ／ｍＬ；１００ｍＭ）を第一サンプルに添加し、光学
濃度を、２００μｌの水を添加したブランクに対して６６０ｎｍで測定した。得
られた吸収値は示数２として示された。サンプルには１００μｌのトライトンＸ
−１００（５％ｖ／ｖ；０．２６％終濃度）溶液を、ブランクには２００μｌの
水を添加し、６６０ｎｍでの光学濃度示数は、示数３と定義される光学濃度値で
あった。内包される色素の割合を算出するために、以下の式を用いた。

【００７３】

【化１１】

【００７４】内包される色素の割合により、リポソーム形成の基準が提供され、平均は約４
０％である。リポソームサイズの検査をレーザー光スキャニングを用いて行い、
ポジティブな結果を得た。

【００７５】リポソームの調製に関する実施例以下の形態でのパルミトイルＬ−カルニチンクロライドウンデシルエステル（
ＳＴ９８３）の調製ａ）凍結乾燥粉末６５ｍｇ、０.１１ｍｍｏｌのパルミトイルＬ−カルニチンクロライドウンデ
シルエステルを２０ｍＬのクロロホルムに、１００ｍＬのフラスコ中で溶解した
。該溶液を、脂質層が得られるまで蒸発させ、これを３時間真空乾燥させた。こ
うして得られた生成物をｔｅｒｔ−ブチルアルコールに溶解し、この溶液を迅速
に−７０℃まで液体窒素を用いて冷却し、２４時間凍結乾燥させた。スポンジ状の軟質白色固体を得た。

【００７６】ｂ）吸着粉末１４３ｍｇ、０．２３１ｍｍｏｌのパルミトイルＬ−カルニチンクロライドウ
ンデシルエステルを１０ｍＬのクロロホルムに溶解した。こうして得られた溶液
を少量ずつ、７５０ｍｇのソルビトールを含む１００ｍＬのフラスコに注いだ。
クロロホルム溶液を何回もに分けて添加した添加の終わりに、クロロホルムを迅
速に蒸発させた。こうして得られた溶液を３時間真空乾燥させた。８９３ｍｇの固体の白色生成物を得た。使用前に当該生成物を迅速に適容量の水で水和し、等張性溶液を得た。

【００７７】ｃ）ＭＬＶ懸濁液６５ｍｇ、０.１１ｍｍｏｌのパルミトイルＬ−カルニチンクロライドウンデ
シルエステルを２０ｍＬのクロロホルムに、１００ｍＬのフラスコ中で溶解した
。こうして得られた溶液を、脂質層が得られるまで蒸発させ、次いでこれを３
時間真空乾燥させた。脂質層を１０ｍＬの水で、３０℃にて３時間水和し、ＭＬＶ懸濁液を得た。適当に希釈したＭＬＶ懸濁液をポリヌクレオチドまたは薬物と結合させ、生物
アッセイに用いた。

【００７８】ｅ）ＳＵＶ懸濁液６５ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌのパルミトイルＬ−カルニチンクロライドウンデ
シルエステルを２０ｍＬのクロロホルムに、１００ｍＬのフラスコ中で溶解した
。こうして得られた溶液を、脂質層が得られるまで蒸発させ、これを次いで３時
間真空乾燥させた。脂質層を１０ｍＬの水で、３０℃にて３時間水和し、ＭＬＶ懸濁液を得た。ＭＬＶ懸濁液を１０回、２００ｎｍのサイズの穴を有するポリカルボネートフ
ィルターに通した。こうして得られた単層リポソーム懸濁液をポリヌクレオチド
または薬物と結合させ、生物アッセイに用いた。

【００７９】ｆ）リポソームの物理的安定性に関する試験リポソーム懸濁液の物理的安定性を３０日間濁度計を用いて試験した。６００ｎｍにて所定の間隔で、各被検懸濁液に関して吸光度測定を行った。０
時間にて測定した平均吸光値は、試験した全製剤に関して一定であった。考慮した分子は考慮した時間中、妥当な値を示した。

【００８０】ＭＬＶおよびＳＵＶリポソーム懸濁液は、本発明による化合物をヘルパー脂質
（例えば、コレステロール、１-パルミトイル-２-オレイルホスファチジルコリ
ン（ＰＯＰＣ）またはジオレイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＥ）など）と結
合させて調製することができる。化合物は、安定な膜を有するリポソームを得るために、ヘルパー脂質と結合さ
せる。これ以下、リポソームの調製を開示するセクションに、調製に関する例を
示すが、そこでは本発明による化合物は、コレステロールまたはＰＯＰＣのよう
なヘルパー脂質と結合させる。

【００８１】薬物送達のためのリポソームの調製に関する実施例実施例１０タキソール-ＳＴ９８３ＭＬＶリポソーム（１：４０）の調製２０ｍｇ、０．０２３４ｍｍｏｌのタキソールおよび５５６ｍｇ、０．９４１
７ｍｍｏｌのＳＴ９８３を２０ｍＬのクロロホルムに溶解した。溶液を、脂質層がガラスフラスコの表面上に得られるまで濃縮した。最終的に
残った微量のクロロホルムを真空ポンプを用いて除去した後、２０ｍＬのｔｅｒ
ｔ-ブチルアルコールを脂質層に添加し、こうして得られた溶液を１９のフラク
ションに細別し、これをすぐ、液体窒素で−７０℃で凍結させ、２４時間凍結乾
燥させた。固体の各フラクションはタキソール（１．０５ｍｇ）およびＳＴ９８
３（２９．２ｍｇ）を含んでいた。

【００８２】目的のリポソーム懸濁液を得るために、使用時に水（４５０μｌ）または他の
塩水溶液で凍結乾燥生成物を水和し、１０分間攪拌し、３０分間静置して、膨張
（水和）工程を完了させた。ＭＬＶリポソームを得た。

【００８３】調製物の物理的安定性に関する試験調製物の物理的安定性を、ＴＤＣ（時間駆動曲線）を８００ｎｍ、２０℃にて
２０時間記録する濁度計を用いて試験した。調製物の安定性を示す一定の濁度傾向が記録され、沈殿現象はなかった。

【００８４】調製物中のタキソールの化学的安定性に関する試験タキソールの化学的安定性をＨＰＬＣにより試験した。クロマトグラフィー条件は以下のようであった。カラム：μＢｏｎｄａｐａｃｋ・Ｃ-１８溶離剤：アセトニトリル：水７０：３０検出器ＵＶ-ＶＩＳ：２２７ｎｍ流速：１ｍＬ/分保持時間：４．５分スタンダードに対して測定したタキソール濃度は２．１３ｍｇ／ｍＬであった
。内包されるタキソールの割合は９８％であった。

【００８５】実施例１１ＳＴ９８３ＳＵＶリポソームの調製２０ｍｇ、０．０２３４ｍｍｏｌのタキソールと５５６ｍｇ、０．９４１７ｍ
ｍｏｌのＳＴ９８３を２０ｍＬのクロロホルムに溶解した。該溶液を、脂質層がガラスフラスコの表面上に得られるまで濃縮した。最終的に残る微量のクロロホルムを高真空ポンプを用いて除去した後、２０ｍ
Ｌのｔｅｒｔ-ブチルアルコールを脂質層に添加し、こうして得られた溶液を１
９のフラクションに細分し、これらをすぐに液体窒素で−７０℃にて凍結し、２
４時間凍結乾燥した。固体の各フラクションはタキソール（１．０５ｍｇ）とＳ
Ｔ９８３（２９．２ｍｇ）を含んでいた。最終目的のＳＵＶリポソーム懸濁液を得るために、ＰＢＳ溶液（１ｍＬ）で水
和した凍結乾燥生成物を２０分間０℃で超音波処理した。４００ｎｍの濾紙上で濾過を次いで行い、ソニケータープローブにより放出さ
れた微量のチタンを除いた。

【００８６】調製物の物理的安定性に関する試験調製物の物理的安定性を、ＴＤＣ（時間駆動曲線）を８００ｎｍで、２０℃に
て２０時間記録する濁度計を用いて試験した。調製物の安定性の指標である一定の濁度傾向が記録され、沈殿現象は認められ
なかった。

【００８７】調製物中のタキソールの化学的安定性に関する試験タキソールの化学的安定性を、ＨＰＬＣにより試験した。クロマトグラフィー条件は以下のようであった。カラム：μＢｏｎｄａｐａｃｋ・Ｃ−１８溶離剤：アセトニトリル：水７０：３０検出器ＵＶ-ＶＩＳ：２２７ｎｍ流速：１ｍＬ／分保持時間：４．５分ＳＵＶリポソーム懸濁液のＨＰＬＣ分析は、対応するＭＬＶリポソーム懸濁液
と同じ結果を生じ、この場合にも、内包されるタキソールの割合は９８％であっ
た。２４時間後に繰り返したＨＰＬＣ分析により、タキソール以外の新たなピーク
は明らかにされず、該活性成分の安定性が示唆される。

【００８８】実施例１２タキソール-ＳＴ８９３コレステロールリポソーム（１：１５）の
調製このタイプのリポソームを、もっと安定な膜を有する複合体を得るために調製
した。６ｍｇ、０．０１０１ｍｍｏｌのタキソール、６２．２ｍｇ、０．１０５ｍｍ
ｏｌのＳＴ９８３および４０ｍｇのコレステロールを１０ｍＬのクロロホルムに
溶解した。こうして得られた溶液を、脂質層がガラスフラスコの表面上に得られるまで濃
縮した。

【００８９】最終的に残る微量のクロロホルムを高真空ポンプで除去した後、６．３ｍＬの
ｔｅｒｔ-ブチルアルコールを脂質層に添加し、こうして得られた溶液を５フラ
クションに細分し、これをすぐに‐７０℃にて液体窒素で凍結し、２４時間凍結
乾燥させた。固体の各フラクションはタキソール（１．２ｍｇ）、ＳＴ９８３（
１２．４４ｍｇ）およびコレステロール（８ｍｇ）を含んでいた。最終目的のリポソーム懸濁液を得るために、凍結乾燥した生成物を使用時に水
（１０００ｍＬ）または他の塩水溶液で水和し、１０分間攪拌し、３０分間静置
して、膨張（水和）工程を完遂した。ＭＬＶリポソームを得た。

【００９０】調製物の物理的安定性に関する試験調製物の物理的安定性を、ＴＤＣ（時間駆動曲線）を８００ｎｍ、２０℃にて
６時間記録する濁度計を用いて試験した。調製物の安定性の指標である一定の濁度傾向が記録され、沈殿現象は見られな
かった。

【００９１】実施例１３タキソール‐ＳＴ７７２ＳＵＶリポソーム（１：７０）の調製２０ｍｇ、０．０２３４ｍｍｏｌのタキソールと１４８５ｍｇ、１．６３８ｍ
ｍｏｌのＳＴ７７２を２０ｍＬのクロロホルムに溶解した。該溶液を脂質層がガラスフラスコの表面上に得られるまで濃縮した。最終的に残る微量のクロロホルムを高真空ポンプで除去した後、２０ｍＬのｔ
ｅｒｔ-ブチルアルコールを脂質層に添加した。透明の溶液を得るために、６０
℃まで加熱しなければならなかった。該溶液を即座に液体窒素で-７０℃にて凍
結し、２４時間凍結乾燥した。最終目的であるＳＵＶリポソーム懸濁液を得るために、ＰＢＳ溶液（２０ｍＬ
）で水和した凍結乾燥生成物を２０分間０℃で超音波処理した。濾過を次いで４００ｎｍフィルター上で行い、ソニケータープローブにより放
出された微量のチタンを除去した。

【００９２】調製物の物理的安定性に関する試験調製物の物理的安定性を、ＴＤＣ（時間駆動曲線）を８００ｎｍ、２０℃にて
６時間記録する濁度計を用いて試験した。調製物の安定性の指標である一定の濁度傾向が記録され、沈殿現象はなかった
。

【００９３】実施例１４ＣＰＴ８３-ＳＴ９８３ＭＬＶリポソーム（１：４０）の調製６．３ｍｇ、０．０１６８ｍｍｏｌのＣＰＴ８３（ＷＯ９７／３１００３に開
示される７-カルボニトリルカンプトテシン）および４００ｍｇ、０．０６６７
ｍｍｏｌのＳＴ９８３を２０ｍＬのクロロホルムに溶解した。該溶液を、脂質層がガラスフラスコの表面上に得られるまで濃縮した。最終的に残っている微量のクロロホルムを真空ポンプを用いて除去した後、２
６ｍＬのｔｅｒｔ-ブチルアルコールを脂質層に添加し、こうして得られた溶液
を１２のフラクションに細分し、これを即座に液体窒素で‐７０℃にて凍結し、
２４時間凍結乾燥した。固体の各フラクションはＣＰＴ８３（０．５２５ｍｇ）
およびＳＴ９８３（３３．３３ｍｇ）を含んでいた。

【００９４】最終目的であるリポソーム懸濁液を得るために、凍結乾燥生成物を使用時に水
（１０００μＬ）または他の塩水溶液で水和し、１０分間攪拌した。ＭＬＶリポソームを得た。

【００９５】調製物の物理的安定性に関する試験調製物の物理的安定性を、ＴＤＣ（時間駆動曲線）を８００ｎｍにて、２０℃
にて２０時間記録する濁度計を用いて試験した。調製物の安定性の指標である一定の濁度傾向が記録され、沈殿現象は見られな
かった。

【００９６】調製物中のＣＰＴ８３の化学安定性に関する試験ＣＰＴ８３の化学的安定性をＨＰＬＣにより試験した。クロマトグラフィー条件は以下のようであった。カラム：Ｓｕｐｅｌｃｏｓｉｌ・ＬＣ-ＡＢＺ溶離剤：リン酸バッファー２０ｍＭ：メタノール４０：６０、ｐＨ＝７．３検出器ＵＶ-ＶＩＳ：３６０ｎｍ流速：１ｍＬ／分保持時間：４.０３３分標準に対して決定したＣＰＴ８３濃度は０．５０２ｍｇ／ｍＬであった。内包されるＣＰＴ８３の割合は９９％であった。

【００９７】実施例１５ＣＰＴ８３-ＳＴ９８３ＳＵＶリポソーム（１：４０）の調製６．３ｍｇ、０．０１６８ｍｍｏｌのＣＰＴ８３および４００ｍｇ、０．６６
７ｍｍｏｌのＳＴ９８３を２０ｍＬのクロロホルムに溶解した。脂質層がガラスフラスコの表面上に得られるまで該溶液を濃縮した。最終的に残る微量のクロロホルムを高真空ポンプで除去した後、２６ｍＬのｔ
ｅｒｔ-ブチルアルコールを脂質層に添加し、こうして得られた溶液を１２のフ
ラクションに細分し、これを即座に液体窒素で‐７０℃にて凍結し、２４時間凍
結乾燥した。固体の各フラクションはＣＰＴ８３（０．５２５ｍｇ）およびＳＴ
９８３（３３．３３ｍｇ）を含んでいた。最終目的であるＳＵＶリポソーム懸濁液を得るために、水（１０００μＬ）で
水和した凍結乾燥生成物を４０分間０℃にて超音波処理した。次いで濾過を４００ｎｍのフィルター上で行い、ソニケータープローブにより
放出された微量のチタンを除去した。

【００９８】調製物中のＣＰＴ８３の化学的安定性に関する試験ＨＰＬＣにより、ＣＰＴ８３の化学的安定性を試験した。クロマトグラフィー条件は以下のようであった。カラム：ＳｕｐｅｌｃｏｓｉｌＬＣ-ＡＢＺ溶離剤：リン酸バッファー２０ｍＭ：メタノール４０：６０、ｐＨ＝７．３ディテクターＵＶ-ＶＩＳ：３６０ｎｍ流速：１ｍｌ/分保持時間：４．０３３分基準に対して決定したＣＰＴ８３濃度は０．３ｍｇ/ｍＬであった。内包されるＣＰＴ８３の割合は５９％であった。２４時間後に反復したＨＰＬＣ分析でＣＰＴ８３のピーク以外の新規なピーク
は現れず、該化合物の安定性が示唆される。

【００９９】調製物の物理的安定性に関する試験調製物の物理的安定性を、ＴＤＣ（時間駆動曲線）を６００ｎｍで、２０度で
２０時間記録する濁度計を用いて試験した。調製物の物理的安定性の指標である一定の濁度傾向が記録され、沈殿現象は見
られなかった。

【０１００】実施例１６ＣＰＴ１８４-ＳＴ９８３ＭＬＶリポソーム（１：４０）の調製７．２９ｍｇ、０．０１６８ｍｍｏｌのＣＰＴ１８４および４００ｍｇ、０．
６７７ｍｍｏｌのＳＴ９８３を２０ｍＬのクロロホルムに溶解した。脂質層がガラスフラスコの表面上に得られるまで該溶液を濃縮した。最終的に残る微量のクロロホルムを真空ポンプを用いて除去した後、２６ｍＬ
のｔｅｒｔ-ブチルアルコールを脂質層に添加し、こうして得られた溶液を１２
のフラクションに細分し、これを即座に液体窒素で-７０℃にて凍結し、２４時
間凍結乾燥した。固体の各フラクションはＣＰＴ１８４（０．６０７ｍｇ）とＳ
Ｔ９８３（３３．３３ｍｇ）を含んでいた。最終目的のリポソーム懸濁液を得るために凍結乾燥生成物を使用時に水（１０
００μｌ）または他の塩水溶液で水和し、１０分間攪拌した。ＭＬＶリポソームを得た。

【０１０１】調製物の物理的安定性に関する試験調製物の物理的安定性を、ＴＤＣ（時間駆動曲線）を６００ｎｍにて、２０℃
で２０時間記録する濁度計を用いて試験した。調製物の安定性の指標である一定の濁度傾向が記録され、沈殿現象は見られな
かった。

【０１０２】調製物中のＣＰＴ１８４の化学的安定性に関する試験ＣＰＴ１８４の化学的安定性をＨＰＬＣにより試験した。クロマトグラフィー条件は以下のようであった。カラム：Ｓｕｐｅｌｃｏｓｉｌ・ＬＣ-ＡＢＺ溶離剤：リン酸バッファー２０ｍＭ：メタノール４０：６０、ｐＨ＝７．３ディテクターＵＶ-ＶＩＳ：３６０ｎｍ流速：１ｍＬ／分保持時間：２５．５分基準に対して決定したＣＰＴ１８４濃度は０．６００ｍｇ／ｍＬであった。内包されるＣＰＴ１８４の割合は９９％であった。

【０１０３】実施例１７ＣＰＴ１８４-ＳＴ９８３ＳＵＶリポソーム（１：４０）の調製７．２９ｍｇ、０．０１６８ｍｍｏｌのＣＰＴ１８４および４００ｍｇ、０．
６６７ｍｍｏｌのＳＴ９８３を２０ｍＬのクロロホルムに溶解した。該溶液を、脂質層がガラスフラスコの表面上に得られるまで濃縮した。最終的に残っている微量のクロロホルムを高真空ポンプを用いて除去した後、
２６ｍＬのｔｅｒｔ−ブチルアルコールを脂質層に添加し、こうして得られた溶
液を１２のフラクションに細分し、これらを即座に液体窒素で‐７０℃にて凍結
し、２４時間凍結乾燥させた。固体の各フラクションはＣＰＴ１８４（０．６０
７ｍｇ）およびＳＴ９８３（３３．３３ｍｇ）を含んでいた。最終目的であるＳＵＶリポソーム懸濁液を得るために、水（１０００μＬ）で
水和した凍結乾燥生成物を４０分間０℃で超音波処理した。濾過を次いで４００ｎｍの濾紙上で行い、ソニケータープローブにより放出さ
れた微量のチタンを除去した。

【０１０４】調製物中のＣＰＴ１８４の化学的安定性に関する試験ＣＰＴ１８４の化学的安定性をＨＰＬＣにより試験した。クロマトグラフィー条件は以下のようであった。カラム：Ｓｕｐｅｌｃｏｓｉｌ・ＬＣ−ＡＢＺ溶離剤：リン酸バッファー２０ｍＭ：メタノール４０：６０、ｐＨ＝７．３ディテクターＵＶ−ＶＩＳ：３６０ｎｍ流速：１ｍＬ／分保持時間：２５．５分基準に対して測定したＣＰＴ１８４濃度は０．３６ｍｇ／ｍＬであった。内包されるＣＰＴ１８４の割合は７０％であった。２４時間後に反復したＨＰＬＣ分析ではＣＰＴ１８４のピーク以外の新規なピ
ークは現れず、活性成分の安定性が示唆される。

【０１０５】調製物の物理的安定性に関する試験調製物の物理的安定性を、ＴＤＣ（時間駆動曲線）を６００ｎｍで、２０℃に
て２０時間記録する濁度計を用いて試験した。調製物の安定性の指標である一定の濁度傾向が記録され、沈殿現象は見られな
かった。以下の実施例で、リポソームをヘルパー脂質および／または凍結防止剤を用い
て調製した。

【０１０６】実施例１８ＣＰＴ１８４-ＳＴ９８３リポソームの調製２ｌフラスコ中、１００ｍｌのメチルクロロホルムを２０ｍｇのＣＰＴ１８４
および６００ｍｇのＳＴ９８３に添加し、混合液を溶解が完遂するまで少しだけ
温めた。得られた溶液を脂質層が得られるまでロータベイパー中で濃縮し、これ
をさらに２時間高真空ポンプにて乾燥させた。脂質層をラクトース溶液（６ｇ／
３００ｍｌ水）で４５℃にて水和し、ロータベイパー中２時間攪拌下に置いた。
懸濁液を次いで２時間超音波処理し、各サイクルを１時間半続けた。次いで生成
物を２００ｎｍフィルターで濾過し、凍結乾燥した。

【０１０７】調製物中のＣＰＴ１８４の化学安定性に関する試験ＣＰＴ１８４の化学的安定性をＨＰＬＣで確認した。生成物は２４時間の試験中、安定していた。

【０１０８】調製物の物理的安定性に関する試験調製物の物理的安定性を、濁度計を用いて試験した。生成物は２４時間の試験
中安定であった。粒子のサイズも安定していた（１００ｎｍの平均値）。

【０１０９】実施例１９ＣＰＴ１８４-ＳＴ９８３リポソームの調製１ｍｌのリポソーム製剤（ＰＯＰＣ-１-パルミトイル-２-オレオイルホスファ
チジルコリン５ｍＭ；ＳＴ９８３１．２５ｍＭ；ＣＰＴ１８４０．２５およ
びトレハロース１５０ｍＭ）のために、以下の方法を用いた。０．１１ｍｇ、０．２５μモルのＣＰＴ１８４を２５０μＬの酢酸エチルに溶
解し、３．７９ｍｇ、４.８９μモルのＰＯＰＣを１００μＬのエタノールに溶
解し、０．７４ｍｇ、１．２５μモルのＳＴ９８３を１００μＬのエタノールに
溶解した。３溶液を混合し、かき混ぜた。溶媒をローターベイパーを室温で８０
ｍバールで用いて蒸発させた。脂質膜を２時間暗中で乾燥させた。脂質層を１ｍ
ｌの１５０ｍＭのＤ（+）-トレハロース二水和物（Ｆｌｕｋａ、ＨＰＬＣ９９％
）溶液中に懸濁し、０．２２ｎｍフィルターを通して滅菌し、２分間かき混ぜた
。懸濁液を２００ｎｍのポリカルボネートフィルターに２１回通した。通過させ
たリポソーム懸濁液を液体窒素中で凍結し、二晩凍結乾燥させた。白色固体を得
た。

【０１１０】実施例２０ＣＰＴ１８４-ＳＴ９８３リポソームの調製トレハロース５００ｍＭを用いる以外は実施例１９と同じ方法を用いた。ＳＴ９８３リポソーム-抗癌剤複合体の抗癌活性これ以下に見られるように、ＳＴ９８３リポソームは肺レベルで際立った蓄積
を示した。この部位特異的な特徴は、肺癌のネズミモデルにおける使用に適して
いる。この実験で用いた抗癌剤はタキソールであった。

【０１１１】腫瘍をインビボで誘導するために、非麻酔Ｂａｌｂ／ｃマウスに、０．１ｍｌ
のＲＰＭＩ-１６４０（シグマ）中３×１０^５細胞のネズミ肺癌Ｍ１０９の注射
を、右後ろ足の大腿骨四等筋に施した。腫瘍の移植１０日後、リポソーム‐タキソール複合体をリン酸緩衝塩水溶液（
ＰＢＳ、ＳＩＧＭＡ、Ｐ-４４１７）で希釈し、ＳＴ９８３２．５ｍｇ/ｍＬおよ
び、タキソール７５μｇ／ｍＬの濃度で静脈注射した。コントロールとして用いたタキソール(paclitaxel INDENA)はクレモフォアビ
ヒクルＥＬ（ＢＡＳＦ）に２０ｍｇ／ｍＬの濃度で溶解し、＋４℃にてその後の
２４時間、光を遮断して貯蔵した。使用時にリン酸緩衝塩水溶液（ＰＢＳ、ＳＩ
ＧＭＡ）で希釈し、ＳＴ９８３リポソームで輸送されるタキソールに関して記載
したものと同じ体積および濃度条件で静脈注射した。

【０１１２】クレモフォアは、エチルアルコールで１：１に希釈することにより調製した。腫瘍の接種後１０日から始め、７日間連続投与した。接種後１７日まで動物を
観察下に起き、頚部脱臼により屠殺し、その肺を腫瘍転移数を測定するために取
り出した。腫瘍の転移を検出するための肺の染色を、肺を１０日間、７１％飽和
ピクリン酸溶液、４.８％の氷酢酸（メルク）および２４％１０％ホルムアルデ
ヒド（フルカ）から成る５ｍｌのＢｏｕｉｎの溶液中でインキュベートすること
により行った。Ｂｏｕｉｎの溶液中でのインキュベーション期間の終了時、腫瘍
転移数を計測した。非処置のコントロールマウスと比較して、クレモフォア輸送性タキソールによ
り、肺の腫瘍転移数を減じる効果は示されなかった（後者は非処置のコントロー
ルのものよりも腫瘍は小さかった。）が、一方、ＳＴ９８３リポソームと結合さ
せたタキソールは、肺の腫瘍転移数とそのサイズの両方に関して有意な低下を示
した。肺の腫瘍転移数に関するデータの統計学的分析を、Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ
非パラメトリック試験を非対データに関して用いて行った。得られた結果を以下の表１に示す。

【０１１３】

【表２】タキソールおよびタキソール／リポソームＳＴ９８３を用いた処置後のＢＡＬＢ
／ｃマウスにおける、Ｍ１０９腫瘍接種後第１７日目の肺腫瘍転移Ｍ＝平均（１-２ｍｍの直径）Ｓ＝小（＜１ｍｍの直径＞

【０１１４】インビトロ細胞毒性試験毒性アッセイを、９６ウェルのプレート中のヒーラーおよびＭ１０９細胞に関
して行った。培養後１日目に、細胞を被検分子でその後の４８時間処置した。細
胞を次いでＰＢＳで洗浄し、通常の生育条件下に４８時間置いた。生育培地の除
去後、細胞を１６％のＴＣＡと共に氷上でインキュベートし、３回Ｈ_２Ｏ中で洗
浄し、３０分間１％酢酸中のスルホールホダミンＢ（ＳＲＢ）で処置し、３回１
％酢酸のみで洗浄し、２０分間ＴＲＩＳ１０ｍＭ、ｐＨ１０．５中でインキュベ
ートし、最後に５４０ｎｍで記録を行った。

【０１１５】ＣＰＴ８３を用いる細胞毒性試験リポソームと結合させた抗癌剤の細胞毒性を有効活性の予備的指標として評価
するために、ＣＰＴ８３を用いるインビトロ細胞毒性試験を行った。ＣＰＴ８３を輸送するリポソームの能力をインビトロで評価するために、Ｍ１
０９細胞において、前記のスルホールホダミンＢ試験を用いた。加えて、ジメチル‐スルホキシド（ＤＭＳＯ）中に溶解したＣＰＴ８３の細胞
毒性も、ＳＴ９８３リポソームと結合させた同じ分子の細胞毒性と比較して評価
した。リポソーム-ＣＰＴ８３複合体を細胞毒性アッセイにおいて、以下の表２．１
、２．２および３．３に示す濃度で、ＳＵＶおよびＭＬＶ形態の両方で用いた。
用いたリポソーム：ＣＰＴ８３のモル比は４０：１であった。以下の表２．１、２．２および２．３に示す、両ＳＵＶおよびＭＬＶ形態のＳ
Ｔ９８３-ＣＰＴ８３複合体の平均細胞毒性値は、ＳＴ９８３リポソームがＤＭ
ＳＯとほとんど同じ様式でＣＰＴ８３を輸送することができ、同じ大きさのオー
ダーの細胞毒性レベルを示すことを示唆する。

【０１１６】

【表３】表に示す値は５４０ｎｍでの光学濃度示数を示す。

【０１１７】

【表４】表に示す値は５４０ｎｍでの光学濃度示数を示す。

【０１１８】

【表５】表に示す値は５４０ｎｍでの光学濃度示数を示す。

【０１１９】ＳＴ９８３リポソーム-ＣＰＴ１８４複合体の生物活性実施例１８のリポソーム（以下、リポソームＡと呼ぶ）および実施例２０のリ
ポソーム（以下、リポソームＢと呼ぶ）の生物活性を試験した。

【０１２０】健康なマウスにおける細胞毒性遊離ＣＰＴ１８４との比較において、リポソームＡおよびＢを、１．２ｍｇ／
ｋｇの投与量でｑ４ｄｘ４スキームにより、経口、静脈内投与した。２つのリポ
ソームは、体、肺、脾臓および腎臓の重量にさほど影響しなかった。リポソーム
Ｂの静脈内、リポソームＡの経口投与は、遊離ＣＰＴ１８４と同様に胸腺の重量
に影響を及ぼした。リポソームＡの静脈内投与はわずかしか影響しなかった。血
液分析学的パラメータは２４時間後、両リポソームに関して有意な変動を示さな
かった。ｑｄ５スキームに従い静脈投与したリポソームＡは遊離ＣＰＴ１８４に
匹敵する毒性を示した。

【０１２１】リポソームの肺親和性リポソームＡとＢは肺レベルで懸著な蓄積が示された。リポソームは１．２ｍ
ｇ／ｋｇで静脈投与した。遊離ＣＰＴ１８４は、ＤＭＳＯ中１．２ｍｇ／ｋｇで
経口投与した。動物、健康なマウスを最終投与の２４時間後に屠殺した。それら
の群から肺を摘出し、液体窒素中に凍結した。一度溶解し、肺をプールし、０．
１％酢酸／アセトニトリル１：５中でホモジェナイズした。ホモジェネートを３
等分し、その２つにＣＰＴ１８４を、回収率算定のために添加した。３サンプル
を１６，０００ｇにて５分間遠心分離した。上清を集め、ジクロロメタンで抽出
した。有機相をスピードバックを用いて乾燥させ、残存物を、ＨＰＬＣにローデ
ィングするための５０μｌ中に一匹の動物に対応する量を含むように、アセトニ
トリル中に再溶解した。ＨＰＬＣをＷａｔｅｒｓＳｙｍｍｅｔｒｙＣ１８
３．５μｍ（４．６×７．５ｍｍ）において行った。メルク蛍光計は３７０ｎｍ
の励起および５１０ｎｍの放出の検出器であった。溶離剤は、水／アセトニトリ
ル６０：４０、イソクラティックであった。サンプルの体積は５０μｌであった
。ＣＰＴ１８４の回収率は約７０％であった。図３に示すように、リポソームＡ
およびＢは共に、ＤＭＳＯ中の遊離ＣＰＴ１８４よりも高いＣＰＴ１８４の蓄積
レベルを示した。

【０１２２】遺伝子送達リポソーム‐ＤＮＡ複合体の調製リポソームおよびプラスミドＤＮＡを適当に別々にＰＢＳに希釈した。ＤＮＡ
を次いでリポソームに添加し、リポソーム‐ＤＮＡ複合体を約３０分間、４℃に
置き、安定なリポソーム‐ＤＮＡ相互作用の形成を促した。インビトロ実験において、１，２−ジオレオイルオキシ‐３-トリメチル‐ア
ンモニウムプロパン（ＤＯＴＡＰ）を参考カチオン脂質として用いた。２．５μ
ｇのプラスミドＤＮＡを２×１０^５ヒーラー細胞につき使用し、リポソーム濃度
は９μＭであった。

【０１２３】インビトロ実験において、ＤＯＴＡＰおよび[２，３−（ジオレオイル）プロ
ピル]トリメチルアンモニウム（ＤＯＴＭＡ）の両方を参考カチオン脂質として
使用した。結果中に示すモル比は、ＤＮＡ１ｍｇあたりのそれぞれのカチオン脂質のｎｍ
ｏｌ濃度を意味する。インビボ感染実験で、２５μｇのプラスミドＤＮＡを動物一匹当たりに用いた
。これらの実験で使用したプラスミドｐＣＭＶｌｕｃは、サイトメガロウイルス
（ＣＭＶ）プロモーターの転写コントロール下のルシフェラーゼ遺伝子のｃＤＮ
Ａを含んでいた。

【０１２４】ルシフェラーゼ活性の定量測定タンパク質ルシフェラーゼの細胞および組織内での活性を、ベーリンガー・マ
ンハイムキット（ｃａｔｎｏ．１６６９８９３）を用いて測定した。細胞を３回ＰＢＳ中で洗浄し、次いで溶解バッファー（１００ｍＭのリン酸カ
リウムｐＨ７．８。１ｍＭのジチオトレイトール‐ＤＴＴ）中でスクレーパーを
用いてプレートからはがし、凍結と溶解の３連続サイクルに供した。１．５ｍＬ
のエッペンドルフチューブ中で遠心分離した後、上清をタンパク質の抽出後５時
間以内に発光試験に使用した。発光放出測定を、発光計を５６２ｎｍで用いて行
った。液体窒素中でまず凍結させた後、粉末を得るために細かく粉砕し、組織を
溶解バッファーに再懸濁し、１０-１５分間氷中でインキュベートした。サンプルを次いで２ｍｌのエッペンドルフチューブ中で遠心分離し、上清をル
シフェラーゼ活性に関して試験した。

【０１２５】ドットブロット分析細胞のＤＮＡを、Sanbrook, Fritsch and ManiatisによりMolecular Cloning,
1989に記載されているアルカリ溶解法に従い抽出した。細胞から抽出した５μｇのＤＮＡをナイロンフィルター(ベーリンガー）に、
バイオラッドドット-ブロット器具を用いて予め吸着させた。フィルターを次い
で４時間６５度で、０．５Ｍのピロリンサンナトリウム（ＮａＰｉ）、１ｍＭの
ＥＤＴＡ、７％のＳＤＳを含む溶液でプレハイブリダイゼーションした。^３２Ｐ
（アルファ）でラベルしたプローブを、プラスミドｐＣＭＶｌｕｃ・ＤＮＡを鋳
型としておよび、ランダムプライムしたアマシャムのキットを用いて調製した。
フィルターを同じプレハイブリダイゼーションバッファー中で１２時間４２℃で
１×１０^６ＣＰＭ／ｍｌを用いてハイブリダイゼーションした。フィルターを次
いで３１０分、６５℃にて、４０ｍＭのＮａＰｉ、１％のＳＤＳを含むバッファ
ー中で洗浄した。オートラジオグラフィー分析を、ベータ放射線（これは、電子
増倍管システムを用いて読み、かつ定量する）で活性化させた蛍光スクリーンを
用いる蛍光画像を画像分析プログラムと組み合わせてを用いて行った。ドットブ
ロットに関して行った濃度測定は、ＩＰ-ＬａｂＧｅｌ画像分析プログラムを用
いて行った。

【０１２６】プラスミドＤＮＡ感染試験多くのプラスミドＤＮＡ感染試験を、インビトロとインビボの両方で行った。その感染力がAbkenet et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1993, 90, 6518
に特徴づけられ、および開示されているＤＯＴＡＰとＤＯＴＭＡの両方を、参考
となるカチオン脂質として用いた。インビボ試験では、プラスミドＤＮＡに対す
るカチオン脂質の種々の異なるモル比を、カチオン脂質の活性と遺伝子輸送に最
も有効な個々の濃度を決定するために分析した。種々のリポソームの感染力を、
ｐＣＭＶｌｕｃプラスミド中に含まれるルシフェラーゼ遺伝子トランスポーター
（定量を容易にするために相対蛍光単位（前に記載した）に関して活性化させた
もの）を用いて、インビボとインビトロの両方で評価した。別法として、感染させた細胞から抽出し、ニトロセルロースフィルター上に予
め吸着させ（ドットブロット）、^３２Ｐ-標識プラスミドＤＮＡマーカーでハイ
ブリダイゼーションさせたＤＮＡサンプルの濃度分析（蛍光画像）を用いて、多
くのカチオンリポソームの感染力を前記のように評価した。

【０１２７】インビトロ感染試験この実験では、肝臓、肺および心臓の感染効率の、ＳＴ９８３リポソーム：プ
ラスミドＤＮＡのモル比への依存性を評価した。次の、ＤＮＡ１μｇ当たりのリ
ポソームのｎｍｏｌ比を試験した；１２：１、２４：１、３６：１および４８：
１。各群６匹の約２０ｇの体重のＢａｌｂ／ｃマウスへ、２００μｌ容積のＰＢＳ
中、前記の量のリポソーム‐ＤＮＡ複合体を静脈投与し、複合体の投与の２４時
間後に屠殺した。肺、心臓および肝臓組織から抽出されたルシフェラーゼの活性により、分析し
た全モル比でルシフェラーゼが肺に際立って分布していることが明らかになった
。実際、３つの組織から抽出されたトータルのルシフェラーゼの約９９％が肺に
位置していた。１２：１のリポソーム:ＤＮＡモル比が最良であることが分かっ
た。得られた結果を以下の表３に示す。

【０１２８】

【表６】

【０１２９】インビボ感染効率の、ＳＲＴ９８３リポソーム調製物間の違いへの依存性１２：１のリポソーム：ＤＮＡモル比で異なるＳＴ９８３リポソーム調製物を
静脈処置したＢａｌｂ／ｃマウスの肺から抽出したルシフェラーゼ活性の値を、
相対蛍光単位（ＲＬＵ）として表４に示す。得られたデータは、ＳＴ９８３リポソームがプラスミドＤＮＡＩをインビボで
、ＤＯＴＭＡよりも高いおよび／またはそれに匹敵する効率で輸送することがで
きることを示していることに加え、さらに、異なるＳＴ９８３調製物間の変動の
程度をも示している。これは、多くの物理化学的特徴、例えばリポソーム小胞の
サイズ、異なるＳＴ９８３調製物の単層（ＳＵＶ）または多層構造に関する小胞
の相対的割合などによるものであり得る。実際に、前記物理化学的パラメータは
、最適のインビボおよびインビトロ感染効率を得ることに関する決定要因として
、R.I. Mahato et al., Human Gene Therapy 9. 1998: 2083に詳細に記載されて
いる。

【０１３０】

【表７】

【０１３１】インビボ感染力の、ＳＴ９８３-ＤＮＡリポソーム複合体プレインキュベーショ
ン時間への依存性表５は、プラスミドＤＮＡと共に投与前３０分間、または３時間プレインキュ
ベーションしたＳＴ９８３リポソームを用いて静脈処置したマウスの肝臓、肺お
よび心臓から抽出した相対蛍光単位を示す。ＤＮＡと共に３時間プレインキュベ
ーションしたＳＴ９８３で処置した動物は、肺および心臓におけるルシフェラー
ゼ活性に関し、３０分間プレインキュベーションした同じリポソームを用いて処
置したものと比較して約５倍の増加を示している。この結果は、安定なリポソー
ムＤＮＡ複合体の形成が時間に依存する現象であり、インビボ感染力の決定要因
として決定的な役割を果たしていることを示唆する。

【０１３２】

【表８】

【０１３３】ＳＴ７７２リポソームを用いた、ヒーラー細胞におけるプラスミドＤＮＡの感染図１および図２は、ヒーラー細胞におけるＳＴ７７２リポソームのプラスミド
ＤＮＡ感染効率を示す。この目的のために、ＳＴ２７２および、参考カチオン脂
質としてＤＯＴＡＰを用いて感染させた細胞から抽出したＤＮＡの濃度分析を行
った。ブロット分析の結果は、ＤＯＴＡＰを用いて得られるものと同じ大きさの
オーダーのプラスミドＤＮＡの量を明らかにしている。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｋ 31/4745 Ａ６１Ｋ 31/4745 ４Ｈ００６ 39/00 39/00 Ｇ 45/00 45/00 47/18 47/18 47/24 47/24 47/44 47/44 48/00 48/00 Ａ６１Ｐ 35/00 Ａ６１Ｐ 35/00 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者マリア・オルネッラ・ティンティイタリア、イ−00182ローマ、ビア・エルネスト・バジレ82番 (72)発明者モーゼ・サンタニエッロイタリア、イ−00048ネットゥノ（ローマ）、ビア・デイ・ジャルディーニ15番 (72)発明者ルチアナ・クリテッリイタリア、イ−00040ポメツィア（ローマ）、ビア・ドン・ルイージ・ストゥルツォ22番 (72)発明者ジョバンニ・サルバトーリイタリア、イ−00144ローマ、ビア・ジュゼッペ・ペレゴ47番Ｆターム(参考） 4C076 AA19 AA93 BB01 BB13 BB15 BB16 BB22 BB25 BB31 CC07 CC11 CC27 CC31 CC32 CC35 DD46 DD51 DD63 DD70 FF43 4C083 AC421 AC661 AD491 AD571 CC01 CC02 DD45 4C084 AA13 AA17 MA05 MA24 MA52 MA55 MA57 MA59 MA63 MA66 NA02 NA11 NA13 ZA36 ZB05 ZB26 ZB32 ZB33 ZB35 ZB38 4C085 AA03 BB23 CC31 EE05 GG02 GG03 GG04 GG08 4C086 AA01 AA02 BA02 CB22 MA02 MA05 MA24 MA52 MA57 MA59 MA63 MA66 NA02 NA10 NA11 ZA36 ZB26 ZB32 ZB33 ZB35 ZB38 4H006 AA01 AA03 AB20

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】式（Ｉ）【化１】（式中、ｎは１〜３の整数；Ｒは、水素または、直鎖または分枝鎖の、２-６の炭素原子を有するアルカノ
イル；Ｒ_１およびＲ_２は、同一または異なっていてよく、３-２０の炭素原子を有す
る飽和または不飽和の直鎖アシル鎖である；および、Ｘ⁻は薬理学上許容される酸のアニオンである）の化合物。
【請求項２】Ｒがアセチル、プロピオニル、ブチリル、バレリルおよびイ
ソバレリルから成る群から選択される請求項１記載の化合物。
【請求項３】Ｒ_１およびＲ_２が、ヘキサノイル、ウンデカノイル、ミリス
トイル、パルミトイルまたはオレオイルから成る群から選択される請求項１記載
の化合物。
【請求項４】Ｘ⁻が、クロライド、ブロマイド、ヨーダイド、アスパルテ
ート、酸アスパルテート、シトレート、酸シトレート、タートレート、酸タート
レート、ホスフェート、酸ホスフェート、フマレート、酸フマレート、グリセロ
ホスフェート、グルコースホスフェート、ラクテート、マレエート、酸マレエー
ト、ムケート、オロテート、オキサレート、酸オキサレート、スルフェート、酸
スルフェート、トリクロロアセテート、トリフルオロアセテート、メタンスルホ
ネート、パモエートおよび酸パモエートから成る群から選択される請求項１記載
の化合物。
【請求項５】Ｌ-カルニチンブロマイドと２-ヒドロキシアセチル-１，３-
ジパルミトイルグリセロールのエステル、アセチルＬ-カルニチンブロマイドと２-ヒドロキシアセチル-１，３-ジパルミ
トイルグリセロールのエステル、プロピオニルＬ-カルニチンブロマイドと２-ヒドロキシアセチル-１，３-ジパ
ルミトイルグリセロールのエステル、イソブチリルＬ-カルニチンブロマイドと２-ヒドロキシアセチル-１，３-ジパ
ルミトイルグリセロールのエステル、イソバレリルＬ-カルニチンブロマイドと２-ヒドロキシアセチル-１，３-ジパ
ルミトイルグリセロールのエステル、Ｌ-カルニチンブロマイドと１，３-ジヘキサノイル-２-ヒドロキシアセチルグ
リセロールのエステル、アセチルＬ-カルニチンブロマイドと１，３-ジヘキサノイル-２-ヒドロキシア
セチルグリセロールのエステル、プロピオニルＬ-カルニチンブロマイドと１，３-ジヘキサノイル-２-ヒドロキ
シアセチルグリセロールのエステルから成る群から選択される請求項１記載の化合物。
【請求項６】リポソームの調製のための請求項１-５いずれか一項に記載
の化合物の使用。
【請求項７】請求項１-５のいずれか一項の化合物を含むリポソーム。
【請求項８】さらにヘルパー脂質を含む請求項７記載のリポソーム。
【請求項９】ヘルパー脂質が、コレステロール、１-パルミトイル-２-オ
レオイルホスファチジルコリンまたはジオレイルホスファチジルコリンから成る
群から選択される請求項８記載のリポソーム。
【請求項１０】薬理活性化合物の輸送に有用な組成物の調製のための、請
求項７-９のいずれか一項に記載のリポソームの使用。
【請求項１１】薬理活性化合物が、天然由来の、あるいは改変されたプラ
スミドまたはポリヌクレオチドである請求項１０記載の使用。
【請求項１２】プラスミドまたはポリヌクレオチドが遺伝子治療に有用な
請求項１１記載の使用。
【請求項１３】プラスミドまたはポリヌクレオチドがワクチンとして有用
なペプチドまたはタンパク質をコードするものである請求項１１記載の使用。
【請求項１４】活性化合物が薬物である請求項１０記載の使用。
【請求項１５】薬物が、抗癌、抗脈管形成、抗ウイルス、抗細菌、抗真菌
、抗原生動物剤、心血管系で活性のある化合物または免疫原性ペプチドから成る
群から選択される請求項１４記載の使用。
【請求項１６】薬物が抗癌または、抗脈管形成剤である請求項１５記載の
使用。
【請求項１７】抗癌剤が、タキソールまたはカンプトテシン誘導体から成
る群から選択される請求項１６記載の使用。
【請求項１８】カンプトテシンの誘導体が、７-カルボニトリルカンプトテシン、７-ベンジルオキシイミノメチルカンプトテシンおよび、７-ブトキシイミノメチルカンプトテシンから成る群から選択される請求項１７記載の使用。
【請求項１９】化粧用組成物の調製のための請求項７-９に記載のリポソ
ームの使用。
【請求項２０】請求項７、８または９記載のリポソームを含む医薬組成物
。
【請求項２１】リポソームが薬理活性化合物を含む請求項２０記載の組成
物。
【請求項２２】活性化合物が、天然由来の、あるいは改変されたプラスミ
ドまたはポリヌクレオチドである請求項２１記載の組成物。
【請求項２３】プラスミドまたはポリヌクレオチドが遺伝子治療に有用な
ものである請求項２２記載の組成物。
【請求項２４】プラスミドまたはポリヌクレオチドがワクチンとして有用
なペプチドまたはタンパク質をコードするものである請求項２２記載の組成物。
【請求項２５】請求項７-９のいずれか一項に記載のリポソームを含む化
粧用組成物。
【請求項２６】リポソームが美容活性を有する物質を含む請求項２５記載
の組成物。
【請求項２７】化合物が、抗癌、抗脈管形成、抗ウイルス、抗細菌、抗真
菌、抗原生動物剤、心血管系で活性のある化合物または免疫原性ペプチドから成
る群から選択される請求項２１記載の組成物。
【請求項２８】経口、非経口、静脈内、筋肉内、皮下、経皮にて、または
鼻腔あるいは口内スプレーの形態で投与することができる請求項２０-２７記載
の組成物。
【請求項２９】式（ＩＩ）【化２】（式中、Ｒ_３は飽和または不飽和の、４-２６の炭素原子を有する直鎖または分
枝鎖アシル鎖、Ｒ_４は飽和または不飽和の、４-２６の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖ア
ルキル鎖、および、Ｘ⁻は薬理学上許容される酸のアニオンである）の化合物を含む、美容活性を有する薬物または物質の輸送のためのリポソームの
使用。
【請求項３０】Ｒ_３が好ましくは、ノナノイル、ドデカノイル、ミリスト
イル、パルミトイル、ステアロイルまたはオレオイルから成る群から選択される
請求項２９記載の使用。
【請求項３１】Ｒ_４が好ましくは、ノニル、ウンデシル、テトラデシル、
ヘキサデシルまたはオレイルから成る群から選択される請求項２９記載の使用。
【請求項３２】Ｘ⁻が、クロライド、ブロマイド、ヨーダイド、アスパル
テート、酸アスパルテート、シトレート、酸シトレート、タートレート、酸ター
トレート、ホスフェート、酸ホスフェート、フマレート、酸フマレート、グリセ
ロホスフェート、グルコースホスフェート、ラクテート、マレエート、酸マレエ
ート、ムケート、オロテート、オキサレート、酸オキサレート、スルフェート、
酸スルフェート、トリクロロアセテート、トリフルオロアセテート、メタンスル
ホネート、パモエートおよび酸パモエートから成る群から選択される請求項３０
記載の使用。
【請求項３３】化合物が、パルミトイルＬ-カルニチンクロライドウンデシルエステル、ステアロイルＬ-カルニチンクロライドウンデシルエステル、ステアロイルＬ-カルニチンクロライドテトラデシルエステル、パルミトイルＬ-カルニチンクロライドテトラデシルエステル、ミリストイルＬ-カルニチンクロライドテトラデシルエステル、パルミトイルＬ-カルニチンブロマイドヘキサデシルエステル、オレイルＬ-カルニチンクロライドオレイルエステルから成る群から選択される請求項２９-３２記載の使用。
【請求項３４】薬物が、抗癌、抗脈管形成、抗ウイルス、抗細菌、抗真菌
、抗原生動物剤、心血管系で活性のある化合物または免疫原性ペプチドから成る
群から選択される請求項２９記載の使用。
【請求項３５】薬物が抗癌または抗脈管形成薬である請求項３４記載の使
用。
【請求項３６】抗癌剤が、タキソールまたはカンプトテシンの誘導体から
なる群から選択される請求項３５記載の使用。
【請求項３７】カンプトテシンの誘導体が、７-ベンジルオキシイミノメチルカンプトテシンまたは、７-ブトキシイミノメチルカンプトテシンから成る群から選択される請求項３６記載の使用。
【請求項３８】リポソームがさらにヘルパー脂質を含む請求項２９記載の
使用。
【請求項３９】ヘルパー脂質が、コレステロール、１-パルミトイル-２-
オレオイルホスファチジルコリンまたはジオレイルホスファチジルコリンから成
る群から選択される請求項３８記載の使用。
【請求項４０】薬物または、美容活性を有する物質の輸送のための、請求
項２９記載のリポソームを含む組成物。
【請求項４１】薬物が、抗癌、抗脈管形成、抗ウイルス、抗細菌、抗真菌
、抗原生動物剤、心血管系で活性のある化合物または免疫原性ペプチドから成る
群から選択される請求項４０記載の組成物。
【請求項４２】経口、非経口、静脈内、筋肉内、皮下、経皮にて、または
鼻腔または口内スプレーの形態で投与することができる請求項４０-４１記載の
組成物。
【請求項４３】式（ＩＩＩ）【化３】（式中、Ｒ_５は飽和または不飽和の、４-２６の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖ア
シル鎖、Ｒ_６は飽和または不飽和の、４-２６の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖ア
ルキル鎖、Ｘ⁻は、薬理学上許容される酸のアニオンである。ただし、Ｒ_５がステアロイルのとき、Ｒ_６はステアリールではなく、Ｒ_５がオレオイルのとき、Ｒ_６はステアリールではなく、Ｒ_５がパルミトイルのとき、Ｒ_６はパルミトイルではなく、Ｒ_５がミリストイルのとき、Ｒ_６はミリストイルではなく、Ｒ_５がラウロイルのとき、Ｒ_６はラウリルではなく、Ｒ_５がオレオイルのとき、Ｒ_６はオレイルではない）の化合物を含む、天然由来の、あるいは改変されたプラスミドまたはポリヌクレ
オチドの輸送のためのリポソームの使用。
【請求項４４】Ｒ_５が、好ましくはノナノイル、ドデカノイル、ミリスト
イル、パルミトイル、ステアロイルまたはオレイルから成る群から選択される請
求項４３記載の使用。
【請求項４５】Ｒ_６が、好ましくはノニル、ウンデシル、テトラデシル、
ヘキサデシルまたはオレイルから成る群から選択される請求項４３記載の使用。
【請求項４６】Ｘ⁻が、クロライド、ブロマイド、ヨーダイド、アスパル
テート、酸アスパルテート、シトレート、酸シトレート、タートレート、酸ター
トレート、ホスフェート、酸ホスフェート、フマレート、酸フマレート、グリセ
ロホスフェート、グルコースホスフェート、ラクテート、マレエート、酸マレエ
ート、ムケート、オロテート、オキサレート、酸オキサレート、スルフェート、
酸スルフェート、トリクロロアセテート、トリフルオロアセテート、メタンスル
ホネート、パモエートおよび酸パモエートから成る群から選択される請求項４３
記載の使用。
【請求項４７】化合物が、パルミトイルＬ-カルニチンクロライドウンデシルエステル、ステアロイルＬ-カルニチンクロライドウンデシルエステル、ステアロイルＬ-カルニチンクロライドテトラデシルエステル、パルミトイルＬ-カルニチンクロライドテトラデシルエステル、から成る群から選択される請求項４３-４６記載の使用。
【請求項４８】プラスミドまたはポリヌクレオチドが、ワクチンとして有
用なペプチドまたはタンパク質をコードするものである請求項４３記載の使用。
【請求項４９】リポソームがさらにヘルパー脂質を含む請求項４３記載の
使用。
【請求項５０】ヘルパー脂質が、コレステロール、１-パルミトイル-２-
オレオイルホスファチジルコリンまたはジオレイルホスファチジルコリンから成
る群から選択される請求項４９記載の使用。
【請求項５１】天然由来の、あるいは改変されたプラスミドまたはポリヌ
クレオチドの輸送のための請求項４３記載のリポソームを含む組成物。
【請求項５２】ポリヌクレオチドまたはプラスミドが、ワクチンとして有
用なペプチドまたはタンパク質をコードするものである請求項５１記載の組成物
。
【請求項５３】経口、非経口、静脈内、筋肉内、皮下、経皮にて、または
鼻腔または口内スプレーの形態で投与することができる請求項５１-５２記載の
組成物。