CZ20013617A3 - Estery L-karnitinu nebo alkanoyl L-karnitinů vhodné jako kationické lipidy k přísunu farmakologicky účinných sloučenin do buňky - Google Patents
Estery L-karnitinu nebo alkanoyl L-karnitinů vhodné jako kationické lipidy k přísunu farmakologicky účinných sloučenin do buňky Download PDFInfo
- Publication number
- CZ20013617A3 CZ20013617A3 CZ20013617A CZ20013617A CZ20013617A3 CZ 20013617 A3 CZ20013617 A3 CZ 20013617A3 CZ 20013617 A CZ20013617 A CZ 20013617A CZ 20013617 A CZ20013617 A CZ 20013617A CZ 20013617 A3 CZ20013617 A3 CZ 20013617A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- acid
- ester
- group
- liposome
- carnitine
- Prior art date
Links
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims abstract description 87
- -1 alkanoyl L-carnitines Chemical class 0.000 title claims abstract description 69
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 title claims abstract description 14
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 title abstract description 27
- PHIQHXFUZVPYII-ZCFIWIBFSA-N (R)-carnitine Chemical compound C[N+](C)(C)C[C@H](O)CC([O-])=O PHIQHXFUZVPYII-ZCFIWIBFSA-N 0.000 title abstract description 12
- 239000002502 liposome Substances 0.000 claims description 162
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 84
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims description 54
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 42
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims description 32
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 30
- 229940127093 camptothecin Drugs 0.000 claims description 29
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 29
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 claims description 27
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 claims description 27
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 claims description 27
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 24
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 24
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 21
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 claims description 19
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 19
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 15
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 14
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 14
- GCIOXBFOKSICTP-UHFFFAOYSA-N (3-hexadecanoyloxy-2,5-dihydroxy-4-oxopentyl) hexadecanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)C(C(=O)CO)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC GCIOXBFOKSICTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 claims description 13
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 claims description 13
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 13
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 13
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 13
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 13
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 12
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 12
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 claims description 11
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 claims description 10
- 125000002811 oleoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])/C([H])=C([H])\C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 10
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 10
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 claims description 10
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 claims description 9
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 claims description 9
- 125000001419 myristoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 9
- 125000001312 palmitoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 9
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 8
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerol Natural products OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 8
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 8
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims description 8
- 229940009098 aspartate Drugs 0.000 claims description 8
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-M hexadecanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 8
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims description 8
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 claims description 8
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 8
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 8
- 229940095064 tartrate Drugs 0.000 claims description 8
- 239000007922 nasal spray Substances 0.000 claims description 7
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 claims description 6
- 230000000884 anti-protozoa Effects 0.000 claims description 6
- VSJKWCGYPAHWDS-FQEVSTJZSA-N camptothecin Chemical class C1=CC=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)[C@]5(O)CC)C4=NC2=C1 VSJKWCGYPAHWDS-FQEVSTJZSA-N 0.000 claims description 6
- 239000000417 fungicide Substances 0.000 claims description 6
- 125000000400 lauroyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 6
- 239000000668 oral spray Substances 0.000 claims description 6
- 125000003696 stearoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 6
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 6
- 230000001772 anti-angiogenic effect Effects 0.000 claims description 5
- 125000001421 myristyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 5
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 5
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 5
- 125000001117 oleyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])/C([H])=C([H])\C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 5
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M Trifluoroacetate Chemical compound [O-]C(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N alpha-glycerophosphate Natural products OCC(O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 claims description 4
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 4
- XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N hydrogen iodide Chemical compound I XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 125000001402 nonanoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 4
- 125000001400 nonyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 4
- 125000000913 palmityl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 4
- AWUCVROLDVIAJX-GSVOUGTGSA-N sn-glycerol 3-phosphate Chemical compound OC[C@@H](O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-GSVOUGTGSA-N 0.000 claims description 4
- 229940066528 trichloroacetate Drugs 0.000 claims description 4
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 125000002948 undecyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N Methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229920000715 Mucilage Polymers 0.000 claims description 3
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 claims description 3
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 claims description 3
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 claims description 3
- 210000000748 cardiovascular system Anatomy 0.000 claims description 3
- 230000000855 fungicidal effect Effects 0.000 claims description 3
- 229940097496 nasal spray Drugs 0.000 claims description 3
- SNKAWJBJQDLSFF-NVKMUCNASA-N 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC SNKAWJBJQDLSFF-NVKMUCNASA-N 0.000 claims description 2
- KLWPJMFMVPTNCC-UHFFFAOYSA-N Camptothecin Natural products CCC1(O)C(=O)OCC2=C1C=C3C4Nc5ccccc5C=C4CN3C2=O KLWPJMFMVPTNCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- PSHXNVGSVNEJBD-LJQANCHMSA-N O-tetradecanoyl-L-carnitine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCC(=O)O[C@H](CC([O-])=O)C[N+](C)(C)C PSHXNVGSVNEJBD-LJQANCHMSA-N 0.000 claims description 2
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 claims description 2
- 125000004063 butyryl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 2
- 125000001589 carboacyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 229960000678 carnitine chloride Drugs 0.000 claims description 2
- VSJKWCGYPAHWDS-UHFFFAOYSA-N dl-camptothecin Natural products C1=CC=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)C5(O)CC)C4=NC2=C1 VSJKWCGYPAHWDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000003104 hexanoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 2
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 2
- 125000001501 propionyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 2
- 125000000297 undecanoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 2
- 125000003774 valeryl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 2
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 claims 6
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 claims 6
- PXQPEWDEAKTCGB-UHFFFAOYSA-N orotic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC(=O)NC(=O)N1 PXQPEWDEAKTCGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 3
- 239000004037 angiogenesis inhibitor Substances 0.000 claims 2
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 claims 2
- 229940041678 oral spray Drugs 0.000 claims 2
- 125000004079 stearyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims 2
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 claims 2
- YSVYWVPJJXVIFM-GNAFDRTKSA-N (3r)-3-octadecanoyloxy-4-(trimethylazaniumyl)butanoate;hydrochloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)O[C@H](CC(O)=O)C[N+](C)(C)C YSVYWVPJJXVIFM-GNAFDRTKSA-N 0.000 claims 1
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-M Methanesulfonate Chemical compound CS([O-])(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 1
- 150000001805 chlorine compounds Chemical group 0.000 claims 1
- 229940001468 citrate Drugs 0.000 claims 1
- 125000003438 dodecyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims 1
- 235000006408 oxalic acid Nutrition 0.000 claims 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 abstract description 7
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 58
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 51
- DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N Tert-Butanol Chemical compound CC(C)(C)O DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 33
- UIVFUQKYVFCEKJ-OPTOVBNMSA-N gimatecan Chemical compound C1=CC=C2C(\C=N\OC(C)(C)C)=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)[C@]5(O)CC)C4=NC2=C1 UIVFUQKYVFCEKJ-OPTOVBNMSA-N 0.000 description 31
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 31
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 30
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 30
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 28
- 239000000047 product Substances 0.000 description 28
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 23
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 21
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 17
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 16
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 16
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 16
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 16
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 238000000034 method Methods 0.000 description 15
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 13
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 12
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 11
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 10
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 10
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 9
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 9
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 9
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 9
- 230000004044 response Effects 0.000 description 9
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 8
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 8
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 8
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 8
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 8
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 8
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 8
- 238000012430 stability testing Methods 0.000 description 8
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 7
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 7
- 238000001476 gene delivery Methods 0.000 description 7
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 7
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 7
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 7
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 7
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 6
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 6
- 125000003435 aroyl group Chemical group 0.000 description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 6
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 6
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 description 6
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 6
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- KSXTUUUQYQYKCR-LQDDAWAPSA-M 2,3-bis[[(z)-octadec-9-enoyl]oxy]propyl-trimethylazanium;chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(C[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC KSXTUUUQYQYKCR-LQDDAWAPSA-M 0.000 description 5
- IOOMXAQUNPWDLL-UHFFFAOYSA-N 2-[6-(diethylamino)-3-(diethyliminiumyl)-3h-xanthen-9-yl]-5-sulfobenzene-1-sulfonate Chemical compound C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1S([O-])(=O)=O IOOMXAQUNPWDLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 5
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 5
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 5
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 5
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 5
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 5
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 5
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 5
- BVKFQEAERCHBTG-UHFFFAOYSA-N 17,18,19-trihydroxypentatriacontane-16,20-dione Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)C(O)C(O)C(O)C(=O)CCCCCCCCCCCCCCC BVKFQEAERCHBTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 4
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N Titanium Chemical compound [Ti] RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 4
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 4
- GKIRPKYJQBWNGO-OCEACIFDSA-N clomifene Chemical compound C1=CC(OCCN(CC)CC)=CC=C1C(\C=1C=CC=CC=1)=C(\Cl)C1=CC=CC=C1 GKIRPKYJQBWNGO-OCEACIFDSA-N 0.000 description 4
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 4
- 230000006870 function Effects 0.000 description 4
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 4
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 4
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 4
- 239000002798 polar solvent Substances 0.000 description 4
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 4
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 4
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 4
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 4
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 4
- 229910052719 titanium Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000010936 titanium Substances 0.000 description 4
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 4
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 4
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 4
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 4
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZAQJHHRNXZUBTE-UHFFFAOYSA-N 1,3,4,5-tetrahydroxypentan-2-one Chemical compound OCC(O)C(O)C(=O)CO ZAQJHHRNXZUBTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000035484 Cellulite Diseases 0.000 description 3
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010027458 Metastases to lung Diseases 0.000 description 3
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010049752 Peau d'orange Diseases 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 3
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 3
- 125000000753 cycloalkyl group Chemical group 0.000 description 3
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 3
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 3
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 3
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 3
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 3
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 3
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 3
- 239000008389 polyethoxylated castor oil Substances 0.000 description 3
- 229910000027 potassium carbonate Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 3
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 3
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- NYBWUHOMYZZKOR-UHFFFAOYSA-N tes-adt Chemical class C1=C2C(C#C[Si](CC)(CC)CC)=C(C=C3C(SC=C3)=C3)C3=C(C#C[Si](CC)(CC)CC)C2=CC2=C1SC=C2 NYBWUHOMYZZKOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 3
- 125000006726 (C1-C5) alkenyl group Chemical group 0.000 description 2
- 125000006527 (C1-C5) alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- PPNCOQHHSGMKGI-UHFFFAOYSA-N 1-cyclononyldiazonane Chemical compound C1CCCCCCCC1N1NCCCCCCC1 PPNCOQHHSGMKGI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- XKIDBQHJMYSFPX-NRFANRHFSA-N 80758-83-4 Chemical compound C1=CC=C2C(C=O)=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)[C@]5(O)CC)C4=NC2=C1 XKIDBQHJMYSFPX-NRFANRHFSA-N 0.000 description 2
- 239000011547 Bouin solution Substances 0.000 description 2
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000610640 Homo sapiens U4/U6 small nuclear ribonucleoprotein Prp3 Proteins 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WTDHULULXKLSOZ-UHFFFAOYSA-N Hydroxylamine hydrochloride Chemical compound Cl.ON WTDHULULXKLSOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000026350 Inborn Genetic disease Diseases 0.000 description 2
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-L L-tartrate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-L 0.000 description 2
- 239000002841 Lewis acid Substances 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 2
- 208000024556 Mendelian disease Diseases 0.000 description 2
- 239000004909 Moisturizer Substances 0.000 description 2
- ATUOYWHBWRKTHZ-UHFFFAOYSA-N Propane Chemical compound CCC ATUOYWHBWRKTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101001110823 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) 60S ribosomal protein L6-A Proteins 0.000 description 2
- 101000712176 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) 60S ribosomal protein L6-B Proteins 0.000 description 2
- 208000031439 Striae Distensae Diseases 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100040374 U4/U6 small nuclear ribonucleoprotein Prp3 Human genes 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 230000001153 anti-wrinkle effect Effects 0.000 description 2
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 2
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 2
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 244000309464 bull Species 0.000 description 2
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 2
- 125000004093 cyano group Chemical group *C#N 0.000 description 2
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 2
- 238000010217 densitometric analysis Methods 0.000 description 2
- RXKJFZQQPQGTFL-UHFFFAOYSA-N dihydroxyacetone Chemical compound OCC(=O)CO RXKJFZQQPQGTFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 238000003818 flash chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 2
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-L fumarate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)\C=C\C([O-])=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-L 0.000 description 2
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 2
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 2
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 2
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 2
- 150000002466 imines Chemical class 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 150000007529 inorganic bases Chemical class 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 231100001231 less toxic Toxicity 0.000 description 2
- 150000007517 lewis acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 2
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 2
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 2
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 230000034217 membrane fusion Effects 0.000 description 2
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 2
- 230000001333 moisturizer Effects 0.000 description 2
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 2
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 2
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 2
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 2
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 description 2
- AQHHHDLHHXJYJD-UHFFFAOYSA-N propranolol Chemical compound C1=CC=C2C(OCC(O)CNC(C)C)=CC=CC2=C1 AQHHHDLHHXJYJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 2
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 description 2
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 2
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 229940074410 trehalose Drugs 0.000 description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- UOCLXMDMGBRAIB-UHFFFAOYSA-N 1,1,1-trichloroethane Chemical compound CC(Cl)(Cl)Cl UOCLXMDMGBRAIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 description 1
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SYZRZLUNWVNNNV-UHFFFAOYSA-N 2-bromoacetyl chloride Chemical compound ClC(=O)CBr SYZRZLUNWVNNNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 8-[3-(1-cyclopropylpyrazol-4-yl)-1H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-5-yl]-3-methyl-3,8-diazabicyclo[3.2.1]octan-2-one Chemical class C1(CC1)N1N=CC(=C1)C1=NNC2=C1N=C(N=C2)N1C2C(N(CC1CC2)C)=O HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 101100167365 Caenorhabditis elegans cha-1 gene Proteins 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical group [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 102000013658 Carnitine Acyltransferases Human genes 0.000 description 1
- 108010051527 Carnitine Acyltransferases Proteins 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 201000003883 Cystic fibrosis Diseases 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 1
- 108010091938 HLA-B7 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N Hydroxylamine Chemical compound ON AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010021118 Hypotonia Diseases 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 1
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 1
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 1
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 1
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001410 Microfiber Polymers 0.000 description 1
- 102000029749 Microtubule Human genes 0.000 description 1
- 108091022875 Microtubule Proteins 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- UFAHZIUFPNSHSL-MRVPVSSYSA-N O-propanoyl-L-carnitine Chemical compound CCC(=O)O[C@H](CC([O-])=O)C[N+](C)(C)C UFAHZIUFPNSHSL-MRVPVSSYSA-N 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 206010040925 Skin striae Diseases 0.000 description 1
- KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N Sodium Chemical compound [Na] KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 108700005077 Viral Genes Proteins 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 238000011481 absorbance measurement Methods 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 150000001263 acyl chlorides Chemical class 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000004004 anti-anginal agent Substances 0.000 description 1
- 230000003257 anti-anginal effect Effects 0.000 description 1
- 230000003276 anti-hypertensive effect Effects 0.000 description 1
- 239000003416 antiarrhythmic agent Substances 0.000 description 1
- 239000002220 antihypertensive agent Substances 0.000 description 1
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 1
- 125000003710 aryl alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960004203 carnitine Drugs 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 1
- 230000009918 complex formation Effects 0.000 description 1
- 230000000536 complexating effect Effects 0.000 description 1
- 239000008406 cosmetic ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 229940124447 delivery agent Drugs 0.000 description 1
- 238000000326 densiometry Methods 0.000 description 1
- 229940120503 dihydroxyacetone Drugs 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- 229940088679 drug related substance Drugs 0.000 description 1
- 238000000921 elemental analysis Methods 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 125000003147 glycosyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 150000004820 halides Chemical class 0.000 description 1
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 description 1
- 210000005003 heart tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 1
- 125000001072 heteroaryl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 description 1
- 125000000592 heterocycloalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- ARBOVOVUTSQWSS-UHFFFAOYSA-N hexadecanoyl chloride Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(Cl)=O ARBOVOVUTSQWSS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 150000002443 hydroxylamines Chemical class 0.000 description 1
- 238000005805 hydroxylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N iodine Chemical group II PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 239000000644 isotonic solution Substances 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 238000002356 laser light scattering Methods 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 1
- 210000005228 liver tissue Anatomy 0.000 description 1
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 1
- 238000007422 luminescence assay Methods 0.000 description 1
- 230000004758 lung carcinogenesis Effects 0.000 description 1
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 230000008384 membrane barrier Effects 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 239000003658 microfiber Substances 0.000 description 1
- 210000004688 microtubule Anatomy 0.000 description 1
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 125000000896 monocarboxylic acid group Chemical group 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 230000036640 muscle relaxation Effects 0.000 description 1
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- ZBDXGNXNXXPKJI-UHFFFAOYSA-N o-tert-butylhydroxylamine;hydrochloride Chemical compound Cl.CC(C)(C)ON ZBDXGNXNXXPKJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004967 organic peroxy acids Chemical class 0.000 description 1
- PXQPEWDEAKTCGB-UHFFFAOYSA-M orotate Chemical compound [O-]C(=O)C1=CC(=O)NC(=O)N1 PXQPEWDEAKTCGB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 150000002923 oximes Chemical class 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- OXNIZHLAWKMVMX-UHFFFAOYSA-N picric acid Chemical class OC1=C([N+]([O-])=O)C=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O OXNIZHLAWKMVMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 239000001294 propane Substances 0.000 description 1
- 229960003712 propranolol Drugs 0.000 description 1
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000009993 protective function Effects 0.000 description 1
- 238000000751 protein extraction Methods 0.000 description 1
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000002390 rotary evaporation Methods 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- FQENQNTWSFEDLI-UHFFFAOYSA-J sodium diphosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O FQENQNTWSFEDLI-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 239000012312 sodium hydride Substances 0.000 description 1
- 229910000104 sodium hydride Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940048086 sodium pyrophosphate Drugs 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 231100000338 sulforhodamine B assay Toxicity 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 235000019818 tetrasodium diphosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001577 tetrasodium phosphonato phosphate Substances 0.000 description 1
- 230000002992 thymic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036962 time dependent Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 238000002723 toxicity assay Methods 0.000 description 1
- 231100000820 toxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 230000032895 transmembrane transport Effects 0.000 description 1
- 229940074409 trehalose dihydrate Drugs 0.000 description 1
- GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N trimethylamine Chemical compound CN(C)C GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004879 turbidimetry Methods 0.000 description 1
- 239000002691 unilamellar liposome Substances 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C229/00—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
- C07C229/02—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C229/00—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
- C07C229/02—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton
- C07C229/04—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated
- C07C229/22—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated the carbon skeleton being further substituted by oxygen atoms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/21—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates
- A61K31/215—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids
- A61K31/22—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acyclic acids, e.g. pravastatin
- A61K31/225—Polycarboxylic acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/02—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by special physical form
- A61K8/14—Liposomes; Vesicles
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/40—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing nitrogen
- A61K8/44—Aminocarboxylic acids or derivatives thereof, e.g. aminocarboxylic acids containing sulfur; Salts; Esters or N-acylated derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
- A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers
- A61K9/1272—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers with substantial amounts of non-phosphatidyl, i.e. non-acylglycerophosphate, surfactants as bilayer-forming substances, e.g. cationic lipids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
- A61K9/1277—Processes for preparing; Proliposomes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
- A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Birds (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
Estery L-karnitinu nebo alkanoyl L-karnitinů vhodné jako kationické lipidy k přísunu farmakologicky účinných sloučenin do buňky
Oblast techniky
Zde popsaný vynález se týká skupiny nových esterů L-karnitinu a acyl-L-karnitinů a jejich využití jako kationických lipidů vhodných k podpoře přísunu farmakologicky účinných sloučenin do buňky a usnadňujících jejich transport membránou nebo podporujících jejich interakci se specifickými místy membrány (receptory).
Zde popsaný vynález se týká také dalších známých esterů Lkarnitinu a acyl-L-karnitinů vhodných ke stejným účelům jako výše zmíněné nové sloučeniny.
Dosavadní stav techniky „Přísunem do buňky“ se míní buněčný přenos (transfekce) polynukleotidy nebo plasmidy přirozeného původu nebo upravenými a vybavenými terapeutickými účinky (přísun genu) nebo zavedení léčiv nebo imunogenních peptidů do buněk.
Mnoho farmakologicky účinných látek jako například polypeptidy a proteiny nebo léčiva obecně musejí proniknout do buněk, aby mohly uplatnit své působení při ovlivňování funkcí buněk na subcelulární nebo molekulární úrovni. Pro tyto látky
- 2 vytváří buněčná membrána selektivně nepropustnou barieru. Buněčná membrána má ve skutečnosti ochrannou funkci, brání vstupu látkám potenciálně toxickým, ale také průchodu sloučenin majících terapeutické účinky. Komplikované složení buněčné membrány sestává z fosfolipidů, glykolipidů a proteinů; jejich funkce je ovlivněna cytoplasmatickými složkami jako je Ca2+ a další ionty, ATP, mikrovlákny, mikrotubuly, enzymy a proteiny, které váží Ca2+. Interakce mezi strukturními a cytoplasmatickými složkami buněk a odezvami na vnější podněty jsou odpovědné za selektivitu vykazovanou mnohými různými buněčnými typy i mezi nimi navzájem. Membránovému bariérovému efektu je možno předejít kombinováním látek do komplexů s lipidovými přípravky, které znovu vytvářejí směsi přirozeně se vyskytujících membránových lipidů. Tyto lipidy jsou schopné vazby na membrány a uvolnění látek s nimi spojenými do buněk. Lipidové komplexy jsou schopné nejen umožnit vnitrobuněčný přenos fúzí s membránami, ale mohou i snižovat odpuzující sílu náboje mezi membránou a molekulou, která do buňky musí vnikat. Amfipatické lipidy jako například membránové fosfolipidy vytvářejí ve vodných systémech lipidové vesikuly nebo liposomy.
Liposomy jsou vesikuly, ve kterých je určitý objem vody zcela uzavřen jednou nebo více membránami složenými z lipidových molekul, obvykle fosfolipidů. Fosfolipidy, které sestávají z hydrofilní hlavy a páru uhlíkových řetězců (hydrofobní chvost) jsou hlavními složkami biologických membrán. Ve vodném
- 3 roztoku se hydrofobní řetězce autoassociují za vyloučení vody, zatímco hydrofilní hlavy interagují s mediem vytvářejíc tak spontánně kolonie vesikulů o různém průměru. Obecně jsou lipidy zwitterionové, neutrální nebo anionické. Tyto vesikuly mohou být využity jako nosiče léčiv, malých molekul, proteinů, nukleotidů a plasmidů.
Během posledních let byly kationické liposomy - skupina pozitivně nabitých vesikulů připravených ze syntetických lipidů - rozsáhle využívány k přenosu genetického materiálu do buněk. Negativně nabitá DNK může interagovat s pozitivními náboji kationických lipidů a vytvářet tak stabilní DNKliposomový komplex. Jednoduchost a univerzálnost této techniky udělala z liposomů důležitého přenašeče pro přísun genů při genové terapii u lidských jedinců. Většina vektorů běžně používaných v genové terapii a schválených NIH Recombinant Advisory Committee obsahuje virové a syntetické systémy.
Mezi virové infekce patří řada komplexních mechanismů schopných napadat specifickou buňku a přinášet do jejího jádra DNK. Princip využívání virových vektorů v genové terapii spočívá v možnosti nahradit geny virů takovými geny, které kódují terapeutické funkce aniž by se eliminovaly schopnost virové částice infikovat buňky. Virová terapie musí být omezena na takové virové prvky, které jsou imunogenní, cytopatické a rekombinační.
• 9
Velká naděje v genové terapii se vkládá do využívání kationických lipidů. Tyto vektory mají v porovnání s vektory virového původu velký potenciál, protože jsou mnohem bezpečnější, méně toxické a jsou také schopny inkorporovat geny ve větším měřítku. V porovnání s vektory biologického typu však mají malý výtěžek transkripce nitrobuněčného genu. Proto je nutné vzít v úvahu, že využití takových přenosových systémů je v počáteční fázi výzkumu. Kationické lipidy hrají důležitou úlohu při tvorbě komplexu DNK-lipid, při interakci buňky s komplexem, při fúzi s membránou, při uvolňování DNK uvnitř buňky a při transkripci.
Existují již důležité příklady aplikací kationických liposomů in vivo. První klinická zkouška genové terapie při léčbě melanomu byla provedena zaváděním expresního vektoru obsahujícího lidský gen HLA-B7 zakomplexovaný na liposom. Další důležitá aplikace se týká léčby pulmonární cystické fibrozy podáváním expresního vektoru SV-40C-FTR zakomplexovaného na liposom pulmonární cestou nebo pomocí nosního spreje. Mezi další klinické zkoušky, které pokračují patří využití liposomů při genové terapii nádoru.
- 5 Ve struktuře kationických lipidů jsou obvykle identifikovány čtyři stavební prvky: pozitivně nabitá kationická hlava (head), vložka (spacer), kotevní lipid a spojovací vazba.
Kationická hlava je zodpovědná za interakci mezi kationickými liposomy a DNK a mezi komplexem DNK-liposom a buněčnou membránou a dalšími složkami buňky. Sestává z mono nebo polykationických skupin (v závislosti na počtu nábojů), které mohou být různě substituovány.
Vložka je ta část molekuly, která odděluje kationickou hlavu od hydrofobního chvostu a je zodpovědná za zajištění optimálního kontaktu mezi kationickou hlavou a negativními náboji fosfátů DNK.
Kotevní lipid je nepolární uhlovodíkovou částí molekuly a určuje fyzikální vlastnosti lipidové dvojvrstvy jako je tuhost a rychlost výměny s membránovými lipidy.
„Spojovací vazbou“ je míněna vazba mezi uhlovodíkovými řetězci a zbytkem molekuly. Tato vazba určuje chemickou stabilitu a biologickou degradovatelnost kationických lipidů.
V posledních letech se neustále zvyšuje používání liposomů v kosmetické oblasti. Úspěch liposomů v této oblasti padá na vrub těchto sloučenin díky tomu, že jsou pokožkou velmi dobře • 9
9 9 9 9 9
9* 9 9999
9 9 9 9 9
9994 9**9 999 449 99 9
- 6 tolerovány. Používají se jak jako vehikuly účinných složek, tak jako sloučeniny pomáhající při jejich absorbci.
Vědecká a patentová literatura je bohatá na odkazy na preparáty a využívání liposomů; přesto existuje jen velmi málo odkazů popisujících využívání derivátů kamitinů vhodných pro přívod genů, zatímco pro přívod léčiv nejsou k dispozici žádné dokumenty zabývající se známými technologiemi přípravy sloučenin vzdáleně připomínající sloučeniny popisované v tomto vynálezu.
Patentová přihláška EP 0 279 887 popisuje využití derivátů karnitinu, tj. fosfatidylkarnitinu, případně ve směsi s dalšími fosfolipidy a lipidy (cholesterol, fosfatidylcholin, fosfatidylserin) pro přípravu liposomů.
V uvedeném příkladu týkajícího se přípravy liposomů se vytvářejí liposomy fosfatidylkarnitinu, do kterých se inkorporuje propranolol - léčivo se známým účinkem jako antihypertensivní, antianginosní a antiarytmická látka. Karnitinový derivát se zde používá pro zřejmé myokardiální působení karnitinu. Toto působení zabraňuje liposomům, aby byly spíše metabolizovány játry, než by dosáhly požadovaného cílového místa.
Přítomnost fosfatidylkarnitinu také umožňuje podávat liposomy orálně, protože jsou odolné intestinálním lipázám.
• 44
V J. Med. Chem., 41, (13), 2207-15, 18. červen 1998 je popsán velký počet esterů L-karnitinu vhodných k přísunu genů, avšak nejsou popsány nebo navrženy jako vhodné látky pro přísun léčiv.
WO 96/39193 popisuje nové léčivé látky cílené pro vstup do mitochondrií přes translokázový systém karnitin-acylkarnitin, avšak nenavrhuje je jako vhodné látky k přípravě liposomů.
EP 559625 B1 popisuje velký počet esterů L-karnitinu a acyl-Lkamitinů se selektivními účinky na svalové uvolnění gastrointestinálního traktu.
V posledních letech molekulární biologové identifikovali mnoho defektů na chromozomální úrovni, které způsobují dědičná onemocnění lidských jedinců.
Důležitá oblast moderní medicíny se týká léčby těchto genetických dědičných onemocnění založených na využívání protokolů genové terapie.
Jak již bylo zmíněno, kationické liposomy jsou ve velké míře využívány pro intracelulární přísun farmakologicky účinných sloučenin usnadňujících transmembránový transport nebo umožňujících jejich interakci se specifickými místy buněčné membrány (receptory).
·· ·· • · · · ·· · • · · · • · · • · · • · · • * ·· ·
Tyto vektory mají v porovnání s vektory biologického původu velké možnosti, protože jsou mnohem bezpečnější, méně toxické a jsou také ve větší míře schopny inkorporace genů.
V porovnání s vektory biologického typu však mají nízký výtěžek intracelulámí genové transkripce.
Transfer genů zprostředkovaný běžnými kationickými lipidy navíc vyžaduje, aby byl plasmid DNK a kationické lipidy uchovávány odděleně, a aby bylo jejích míšení uskutečňováno bezprostředně před transferem genu.
Pokusy o stabilizaci těchto polynukleotidových komplexů dosud postrádaly povzbudivých výsledků; ve skutečnosti zůstávají stabilní pouze po krátkou dobu.
V oblasti genové terapie nebo přísunu genu a léčiva si tudíž silně uvědomujeme potřebu stabilních, reprodukovatelných a lokálně specifických systémů, které jsou účinné také i po nějakém čase.
Podstata vynálezu
Nyní bylo zjištěno, že do skupiny kationických lipidů významně účinných při podporování intracelulárního přísunu farmakologicky účinných sloučenin náleží nové estery Lkarnitinu a acyl-L-kamitinů.
* · «« • 4 · 4 • 4 · » ·
• 4 » • · 4 · «44 4 · 4
4 4
4 · · 4
Tyto nové sloučeniny jsou stabilní a vysoce selektivní, protože jsou při dosahování cílového orgánu lokálně specifické.
Tyto charakteristiky je určují jako zvláště vhodné pro transport účinných sloučenin přímo na místo, kde mohou projevit svůj farmakologický účinek.
Sloučeniny podle zde popsaného vynálezu jsou sloučeninami obecného vzorce (I):
| 0 | |
| 3 | |
| f\ Λ | |
| 0 |
O'
O
O
R1
R2 (I) kde:
n je celé číslo od 1 do 3;
R je vodík nebo alkanoyl, přímý nebo rozvětvený, se 2 až 6 uhlíkovými atomy;
R-i a R2, které mohou být stejné nebo různé představují nasycený nebo nenasycený přímý acylový řetězec se 3 až 30 uhlíkovými atomy; a
X' je aniont farmakologický přijatelné kyseliny.
Příklady R jsou acetyl, propionyl, butyryl, valeryl a isovaleryl.
Příklady Ri a R2 jsou hexanoyl, undekanoyl, myristoyl, palmitoyl nebo oleoyl.
- 10 • 4 44
Λ 1 « * • · « · « • ·
Μ *« ••4 *·· ·· ·
Sloučeninami, kterým se podle vynálezu dává přednost jsou:
ester L-karnitinbromidu s 2-hydroxyacetyl-1,3dipalmitoylglycerolem (ST 770);
ester acetyl-L-karnitinbromidu s 2-hydroxyacetyl-1,3dipalmitoylglycerolem (ST 771);
ester propionyl-L-karnitinbromidu s 2-hydroxyace ty 1-1,3dipalmitoylglycerolem (ST 772);
ester isobutyryl-L-karnitinbromidu s 2-hydroxyacetyl-1,3dipalmitoylglycerolem (ST 773);
ester isovaleryl-L-karnitinbromidu s 2-hydroxyacetyl-1,3dipalmitoylglycerolem (ST 774);
ester L-karnitinbromidu s 1,3-dihexanoyl-2-hydroxyacetylglycerolem (ST 810);
ester acetyl-L-karnitinbromidu s 1,3-dihexanoyl-2hydroxyacetyl-glycerolem (ST 809); ester propionyl-L-karnitinbromidu s 1,3-dihexanoyl-2hydroxyacetyl-glycerolem (ST 808).
Aniontem farmakologicky přijatelné kyseliny se míní jakýkoliv aniont kyseliny, který nedává vznik nežádoucím toxickým nebo vedlejším jevům.
Tyto kyseliny jsou farmakologiím a odborníkům ve farmaceutické technologii dobře známy.
Příklady těchto aniontů, i když se tím jejich výčet neomezuje, jsou: chlorid, bromid, jodid, aspartát, kyselý aspartát, citrát, kyselý citrát, vínan, kyselý vínan, fosforečnan, kyselý fosforečnan, fumarát, kyselý fumarát, glycerofosfát, glukofosfát, mléčnan, maleinát, kyselý maleinát, mukát (ester kyseliny slizové), orotát, šťavelan, kyselý šťavelan, síran, kyselý síran, trichloracetát, trifluoracetát, methansulfonát, palmitan, kyselý palmitan.
Sloučeniny obecného vzorce (I) ve formě liposomů jsou látky vhodné k přísunu přírodně se vyskytujících či modifikovaných plasmidů nebo nukleotidů vhodných pro genovou terapii nebo které kódují peptidy či proteiny vhodné jako vakcíny a obecně k přísunu léčiv jako například protinádorových léčiv, protivirových látek, protibakteriálních látek, fungicidů, antiprotozoans, léčiv vhodných při terapii onemocnění kardiovaskulárního systému nebo imunogenních peptidů a dalších léčiv vhodných pro terapii.
Liposomy obsahující sloučeninu obecného vzorce (I) se připravují běžnými technologiemi odborníkům dobře známými; viz například T. M. Allen, Drugs, 56, 747 - 56, (1998). Liposomy mohou být podle předloženého vynálezu připraveny také za použití jiných složek odborníkům pracujícím v liposomové technologii dobře známých. U jednoho z řešení podle předloženého vynálezu mohou liposomy obsahovat pomocné lipidy, což je termín odborníkům tohoto oboru známý. Příklady pomocných lipidů jsou cholesterol, 1 -palmitoyl-2oleoylfosfatidylcholin nebo dioleoylfosfatidylcholin.
Liposomy podle předloženého vynálezu se vhodně prezentují jako přípravky. U řešení týkajícího se přísunu farmakologicky účinné sloučeniny se přípravkem rozumí takový farmaceutický přípravek obsahující případně farmaceuticky přijatelné vehikuly a/nebo excipienty.
Sloučeniny obecného vzorce (I) ve formě liposomů mohou být také vhodné pro přípravu kosmetických přípravků jak obsahujících liposom per se jako kosmeticky účinnou látku, tak pro přísun látek s kosmetickými účinky jako jsou například hydratační látky, nutrienty, látky k čištění pleti, látky proti vráskám, látky proti celulitidě a látky působící na strie (antistretch-mark).
Liposomy obsahující sloučeniny obecného vzorce (I) mohou být podávány orálně, parenterátně, intravenozně, intramuskulárně, subkutálně, transdermálně nebo ve formě nosních nebo ústních sprejů.
- 13 Vynález zde popsaný se také týká přídavných kationických lipidů obecného vzorce (II) známých již při různém jiném využívání (EP 559 625 zmiňovaný výše).
Podle předloženého vynálezu jsou sloučeninami obecného vzorce (II) estery L-karnitinu vhodné pro přípravu liposomů majících výrazné účinky na přísun léčiv a charakterizovaných stabilitou a selektivitou při dosahování cílového orgánu srovnatelnou se sloučeninami obecného vzorce (I) popsanými výše. Stejné výhodné vlastnosti jsou aplikovatelné v případě kosmetiky.
Tyto sloučeniny mají obecný vzorec (II):
H3<
HC
Hj (II) kde:
R3 je nasycený nebo nenasycený přímý nebo rozvětvený acylový řetězec se 4 až 26 uhlíkovými atomy;
R4 je je nasycený nebo nenasycený přímý nebo rozvětvený alkylový řetězec se 4 až 26 uhlíkovými atomy; a X' je aniont farmakologicky přijatelné kyseliny.
- 14 ··· ··· ·· ·
Příklady R3, kterým se dává přednost jsou nonanoyl, dodekanoyl, myristoyl, palmitoyl, stearoyl nebo oleoyl.
» 9 Příklady R4, kterým se dává přednost jsou nonyl, undecyl, tetradecyl, hexadecyl nebo oleyl.
Příklady specifických sloučenin obecného vzorce (II) podle zde popsaného vynálezu jsou:
• undecyl ester palmitoyl-L-karnitinchloridu (ST 983);
• undecyl ester stearoyl-L-kamítinchloridu (ST 1055);
• tetradecyl ester stearoyl-L-karnitinchloridu (ST 1351);
• tetradecyl ester palmitoyl-L-karnitinchloridu (ST 1379);
• tetradecyl. ester myristoyl-L-karnitinchloridu (ST 1380);
• hexadecyl ester palmitoyl-L-karnitinbromidu (ST 1390);
• oleyl ester oleyl-L-karnitinchloridu (ST 1392).
Mnoho sloučenin obecného vzorce (II), jmenovitě ST 1380, ST1390 a ST 1392 jsou známy a popsány ve výše citovaném J. Med. Chem., 41, (13), 2207 - 15, (18. červen 1998) jako látky vhodné k přípravě liposomů pro přenos do buněk s terapeutickými účinky, avšak nebyly nikdy popsány jako látky vhodné kpřípravě liposomů pro přísun léčiv.
Odborníci s průměrnou zkušeností v oblasti farmaceutických přípravků se obávají obtíží spojených s přípravou komplexů liposomů s léčivem; ve skutečnosti není možné předem určit,
zda se může liposom vhodný pro přísun genu použít i k přísunu léčiva, vzhledem k mnoha problémům, kterým se musí předejít při získávání liposomu schopného zakomplexovat léčivo, které se má přivést cíleně k orgánu, který jeho léčivou schopnost vyžaduje.
Sloučeniny obecného vzorce (II) ve formě liposomů jsou vhodnými látkami k přísunu takových léčiv jako například látek protinádorových, antiangiogenních, protivirových, protibakteriálních, fungicidů, antiprotozoans nebo léčiv vhodných k terapii kardiovaskulárních onemocnění nebo imunogenních peptidů a dalších léčiv vhodných v terapii.
Sloučeniny obecného vzorce (II) ve formě liposomů jsou také vhodné pro přípravu kosmetických přípravků jako jsou kosmetické látky per se nebo pro přísun látek s kosmetickými účinky jako takovými, například hydratačních látek, nutrientů, pleťových čistících prostředků a látek proti vráskám, látkám proti celulitidě a látky působící na strie (anti-stretch-mark).
Řečené liposomy mohou případně obsahovat pomocné lipidy jako v případě liposomů obsahujících sloučeniny obecného vzorce (II).
Liposomy obsahující sloučeniny obecného vzorce (II) mohou být podávány orálně nebo parenterálně, intravenosně,
- 16 intramuskulárně, subkutálně, transdermálně nebo ve formě nosních nebo ústních sprejů.
Vynález zde popsaný se také týká přídavných kationických lipidů obecného vzorce (lil) známých již z různého jiného využívání (EP 559 625 zmiňovaný výše).
Podle předloženého vynálezu jsou sloučeninami obecného vzorce (III) estery L-karnitinu vhodné při přípravu liposomů majících silné účinky podporující přísun léčiv a charakterizovaných stabilitou a selektivitou při dosahování cílového orgánu srovnatelně se sloučeninami obecného vzorce (I) popsanými výše.
Tyto sloučeniny mají obecný vzorec (III):
(III) kde:
Rs je nasycený nebo nenasycený přímý nebo rozvětvený acylový řetězec se 4 až 26 uhlíkovými atomy;
R6 je je nasycený nebo nenasycený přímý nebo rozvětvený alkylový řetězec se 4 až 26 uhlíkovými atomy; a X' je aniont farmakologicky přijatelné kyseliny; s výjimkou, že:
• · ··· · ·· · 4 pokud je R5 stearoyl, není R6 stearyl, pokud je R5 oleoyl, není R6 stearyl, pokud je R5 palmitoyl, není R6 palmityl, pokud je R5 myristoyl, není R6 myristyl, pokud je R5 lauroyl, není R6 lauryl, pokud je R5 oleoyl, není R6 oleyl.
Nenárokované sloučeniny ve formě liposomů jsou uvedeny v J. Med. Chem., 41, 2207 - 2215, (1988) výhradně pro přísun genu.
Příklady R5, kterým se dává přednost jsou nonanoyl, dodekanoyl, myristoyl, palmitoyl, stearoyl nebo oleoyl.
Příklady R6, kterým se dává přednost jsou nonyl, undecyl, tetradecyl, hexadecyl nebo oleyl.
Příklady sloučenin obecného vzorce (III), kterým se podle zde popsaného vynálezu dává přednost jsou:
• undecyl ester palmitoyl-L-karnitinchloridu (ST 983);
• undecyl ester stearoyl-L-karnitinchloridu (ST 1055);
• tetradecyl ester stearoyl-L-karnitinchloridu (ST 1351);
• tetradecyl ester palmítoyl-L-karnitinchloridu (ST 1379); Sloučeniny obecného vzorce (III) jsou látkami vhodnými k přísunu přirozeně se vyskytujících nebo upravených plasmidů nebo nukleotidů vhodných pro genovou terapii nebo které kódují peptidy nebo proteiny vhodné jako vakcína.
Sloučeniny obecného vzorce (III) mohou být podávány orálně nebo parenterálně, intravenosně, intramuskulárně, subkutálně, transdermálně nebo ve formě nosních nebo ústních sprejů.
Postup přípravy sloučenin obecného vzorce (I) podle vynálezu je uveden v následujících reakčních schématech, čímž se míní, že tato schémata platí pro celý obecný vzorec (I). Odborníci mohou snadno získat všechny skupiny zmíněné jako jsou R, R-i a R2, protože všechna nezbytná činidla jsou komerčně dostupná nebo uvedená v literatuře a reakční podmínky jsou obecně aplikovatelné na celý rozsah předloženého vynálezu v jakékoliv úpravě a v případě potřeby jich lze docílit s běžnými obecnými znalostmi.
» * · · · «·* ··· · · ···
- 19 CH2OH
C=0 + 2 CICO-(CH2)14CH3 -►
CH2OH
CH2OCO(CH2)14CH3
C=0 (1)a)
CH2OCO(CH2)14CH3
CH2OCO(CH2)14CH3
C=0 + NaBH4
CH2OCO(CH2)14CH3
CH2OCO(CH2)14CH3
CH-OH (2) b)
CH2OCO(CH2)14CH3
CH2OCO(CH2)14CH3
CH-OH + CIOCCH2Br -►
CH2OCO(CH2)14CH3
CH2OCO(CH2)14CH3
CH-OCOCH2Br (3)c)
CH2OCO(CH2)14CH3
CH2OCO(CH2)14CH3
CH2OCO(CH2)14CH3
CH-OCOCH2Br
CH2OCO(CH2)14CH3 • · · · • · · φ • · * 9 · • ·
- 20 S odkazem na výše uvedené reakční schéma 1 je příprava sloučenin obecného vzorce (I) podle vynálezu popsána dále.
w ·
Příklady provedení
Příklad 1
Příprava esteru propionyl-L-kamitinbromidu s 2-hydroxyacetyl1,3-dipalmitoylglycerolem (ST 772)
a) Příprava 1,3-díhydroxypropan-2-on-1,3-dipalmitátu (1) Dihydroxyaceton (7 g, 0,078 mol) byl při 0°C (vnější teplota) rozpuštěn ve 300 ml bezvodého chloroformu za průtoku suchého dusíku.
K takto získanému roztoku byl po kapkách přidáván palmitoylchlorid (44 g; 0,16 mol) a bezvodý pyridin (15 ml).
Výsledná směs, jejíž teplota se ponechala vyrovnat s okolní teplotou, byla při ní za míchání udržována po dobu 24 hodin.
Potom byla směs extrahována v takovémto pořadí: se 300 ml vodného roztoku 0,5 % kyseliny chlorovodíkové, se 300 ml vodného roztoku 5 % hydrogenuhličitanu sodného a konečně se 300 ml vody.
Oddělená organická fáze byla odvodněna nad bezvodým síranem sodným, zfiltrována celulosovým filtrem, zkoncentrována k suchu a získán surový produkt (1).
• 9
999 999 ♦ * ♦ 9 • 9 « ·
- 21 Čistý produkt (1) byl získán krystalizací z 500 ml ethylalkoholu.
Bylo získáno 30,4 g produktu (1).
Výtěžek; 73 %.
b.t. = 80 až 81 °C.
H1NMR (CDCI3): 0,9 (6H, t, CH3CH2-); 1,3 (48H, m, (CH2)n=24); 1,55 (4H, m, -OCOCH2 CH2 -); 2,4 (4H, t, -OCO CH2-); 4,7 (4H, s, -OC CH? -).
b) Příprava 1,2,3-trihydroxypropan-1,3-dipalmitátu (2)
K produktu (1) (5 g, 9 mmol) rozpuštěnému v tetrahydrofuranu (125 ml) a toluenu (25 ml) byla pomalu za míchání přidávána voda (7,5 ml).
Teplota získané mléčně bílé suspenze byla upravena na 5 °C (vnější teplota) a po malých částech přidáván borohydrid sodíku (500 mg; 13 mmol). Suspenze byla za míchání udržována při teplotě 5 °C po dobu 30 minut.
Potom byla pomalu přidávána ledová kyselina octová až do vyšumění pocházejícího od rozkladu nadbytečného borohydridu sodíku za získání roztoku.
K roztoku byl přidán chloroform (100 ml) a získán tak dvoufázový systém.
• · 4 * • 4 4 4
- 22 Spodní organická fáze sestávající z CHCI3 byla oddělena, a extrahována v tomto pořadí: vodou (25 ml), hydrogenuhličitanem sodným (25 ml 10 % vodného roztoku) a vodou (25 ml).
Organický roztok obsahující (2) byl vysušen nad síranem sodným, zfiltrován a vysušením zkoncentrován za získání voskového produktu.
Produkt (2) byl získán krystalizací z acetonu jako surový voskový produkt.
Bylo získáno 4,8 g produktu (2).
Výtěžek: 94 %. b.t. = 71 až 72 °C.
H1NMR (CDCb): 0,9 (6H, t, CH3CH2-); 1,3 (48H, m, (CH2)n=24);
l, 55 (4H, m, -OCOCH2 CH2 -); 2,4 (4H, t, -OCO CH2-); 4,2 (5H, m, CHCH^O -).
c) Příprava 1,3-dipalmitoyl-2-bromacetylglycerolu (3)
Produkt (2) (2,5 g; 4,4 mmol) byl za míchání při teplotě 0 °C (vnější teplota) rozpuštěn v bezvodém chloroformu (50 ml).
K takto získanému roztoku byl pomalu přidáván pyridin (0,42 ml) a po kapkách 3 ml chloroformového roztoku obsahujícího bromacetylchlorid (0,43 ml; 5,2 mmol).
Reakční směs byla udržována po dobu 30 minut na teplotě 0 °C (vnější teplota) a po dobu dalších 30 minut při teplotě okolí.
- 23 Potom byla reakční směs upravována tímto postupem: 1 % vodným roztokem kyseliny chlorovodíkové (přibližně 50 ml), 5 % vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (přibližně 50 ml) a vodou.
Produkt (3) byl po dehydrataci reakční směsi (síranem sodným) přečištěn krystalizací z acetonu a zkoncentrován vysušením do sucha.
Bylo získáno 2,5 g produktu (3).
Výtěžek: 89 %.
b.t. = 46 až 47 °C.
H1NMR (CDCI3): 0,9 (6H, t, CHj CH2-); 1,3 (48H, m, (CH2)n=24); 1,55 (4H, m, -OCOCH2 CH2 -); 2,4 (4H, t, -OCO CHr ); 3,9 (2H, s, -O CHgCOO-), 4,2 - 4,4 (5H, m, -CH CH? O -); 5,25 (1H, m, CH.CH2O-).
d) Příprava esteru propionyl-L-karnitinbromidu s 2hydroxyacetyl-1,3-dípalmitoylglycerolem (4)
Vnitřní komplexní sůl propionyl-L-karnitinu (0,95 g; 4,4 mmol) předem vysušená ve vakuu při 40 °C byla suspendována v bezvodém dimethylformamidu (přibližně 20 ml).
Do suspenze byl přidáván po malých částech produkt (3) (3 g; 4,7 mmol). Suspenze byla pomalu zahřívána na 38 °C a za těchto podmínek udržována až k získání roztoku.
* ♦ · ·«
- 24 Po 10 minutách byl roztok ochlazen na teplotu 0 °C a při této teplotě udržován po dobu 30 minut. Byla získána sraženina, která byla odfiltrována a promyta ethyleterem a rozpuštěna v chloroformu (100 ml). Získaný opaleskující roztok (30 ml) byl zfiltrován na celitu a zkoncentrován. K takto získanému roztoku byl přidán hexan (100 ml) a získaný vysrážený produkt (4) byl zfiltrován a vysušen ve vakuu při 35 °C.
Bylo získáno 3,19 g sloučeniny.
Výtěžek: 80 %.
b.t. = 127 až 128 °C.
[a]25o = -3,9 (C = 1 % chloroform)
| Elementární analýza C47H88BrNO10 | % N | % Br | ||
| %C | % H | |||
| Výpočtem | 62,23 | 9,78 | 1,54 | 8,81 |
| Zjištěno | 62,73 | 10,15 | 0,79 | 8,77 |
H1NMR (CDCI3): 0,9-0,95 (6H, t, CHa CH2CH2-); 1,1-1,2 (3H, t, CHa CH?CO); 1,2-1,4 (24H, m, (CH2)„.24); 1,5-1,6 (4H, m, OCCH2 CH2 -); 2,3-2,4 (4H, t, -OC CHa CHa-1: 2,4-2,45 (4H, d.d„ -CH CH2 O-): 2,95 (2H, d, -CHa COOCH2COO-); 3,5 (9H, s, N(CH3)3); 4,2 (4H, m, -CHa OCOCH2-); 4,35 (2H, m, -CH; N-í 4,65 (2H, d, d, -O CH; CO-); 5,25 (1H, m, -OCH2 CH CHaO-1: 5,75 (1H, m, -CHCH2N-).
·· ·· • ♦ · · • · · • ·
- 25 Příklady 2 až 7
Stejným způsobem jako v minulém příkladu byly připraveny i tyto sloučeniny:
ester L-karnitinbromidu dipalmitoylglycerolem (ST 770); ester acetyl-L-karnitinbromidu dipalmitoylglycerolem (ST 771); ester isobutyryl-L-karnitinbromidu dipalmitoylglycerolem (ST 773); ester isovaleryl-L-karnitinbromidu dipalmitoylglycerolem (ST 774); ester L-karnitinbromidu s hydroxyacetylglycerolem (ST 810); ester acetyl-L-karnitinbromidu, hydroxyacetylglycerolem (ST 809); ester propionyl-L-karnitinbromidu hydroxyacetylglycerolem (ST 808).
s 2-hydroxyacetyl-1,3s 2-hydroxyacetyl-1,3s 2-hydroxyacetyl-1,3s 2-hydroxyacetyl-1,31,3-dihexanoyl- 2s 1,3-dihexanoyl- 2s 1,3-dihexanoyl- 2Jedno z řešení, kterému se v tomto vynálezu dává přednost spočívá v přípravě liposomů s protinádorovými léčivy a zvláště liposomů, které působí jako vehikulum pro kamptotheciny, například takové, které jsou uvedeny ve WO 97/31003. Při řešení, kterému se ve zde popisovaném vynálezu dává zvláště
- 26 přednost se využívají liposomy k přísunu kamptothecinů obecného vzorce (IV):
kde: R7 je skupina -C(R1i)=N-0(n)Rio, ve které je R10 vodík nebo C1-C5 alkylová nebo C-1-C5 alkenylová skupina, s přímým nebo rozvětveným řetězcem, nebo C3-C10 cykloalkylová skupina nebo přímá nebo rozvětvená (C3-C10) cykloalkyl-(Ci-C5) alkylová skupina nebo C6-Ci4 aryl nebo přímá nebo rozvětvená (Ce-C14) aryl-(Ci-C5) alkylová skupina nebo heterocyklická nebo přímá nebo rozvětvená heterocyklo-(Ci-C5) alkylová skupina, kde jmenovaná heterocyklická skupina obsahuje alespoň jeden heteroatom vybíraný z atomů dusíku, případně substituovaných (C1-C5) alkylovou skupinou a/nebo kyslíku a/nebo síry; jmenovaná alkylová, alkenylová, cykloalkylová, arylová, arylalkylová, heterocyklická nebo heterocyklo-alkylová skupina je případně substituována dalšími skupinami vybíranými z: vodíku, hydroxylu, C1-C5 alkylu, C1-C5 alkoxylu, fenylu, kyanoskupiny, nitroskupiny, -NR12R13, kde R12 a R13, které mohou být stejné ·· «·
- 27 ··· ···
nebo různé, jsou vodík, přímý nebo rozvětvený (C1-C5) alkyl, COOH skupina nebo jeden z jejich farmaceuticky přijatelných esterů; nebo skupina -CONR14R15, kde R14 a R15 mohou být stejné nebo různé, a to vodík, přímý nebo rozvětvený (C1-C5) alkyl; nebo
R10 je zbytek C6-Ci0 aroylu, případně substituovaný jedním nebo více skupinami vybíranými z; halogenu, hydroxylu, přímého nebo rozvětveného C^Cs alkylu, přímého nebo rozvětveného CrC5 alkoxylu, fenylu, kyanoskupiny, nitroskupiny, -NR16Ri7, kde R16 a R17, mohou být stejné nebo různé, a to vodík, přímý nebo rozvětvený (C1-C5) alkyl;
R10je polyaminoalkylový zbytek; nebo
R10 je glykosylový zbytek;
n je číslovka 0 nebo 1;
R11 je vodík, přímý nebo rozvětvený CrC5 alkyl, přímý nebo rozvětvený C-1-C5 alkenyl, C3-C10 cykloalkyl, přímý nebo rozvětvený (C3-C10) cykloalkyl-(CrC5) alkyl, C6-Ci4 aryl, přímý nebo rozvětvený (C6-Ci4) aryKCrCs) alkyl;
R8 a R9, které mohou být stejné nebo různé, a to vodík, hydroxyl, přímý nebo rozvětvený CrC5 alkoxyl; jejich Nroxidy, jednotlivé isomery, zvláště syn a anti isomery skupiny -C(Rn)=N-0(n)Rio, jejich možné enantiomety, diastereoisomery a odpovídající směsi, jejich farmaceuticky přijatelné sole a jejich účinné metabolity.
- 28 ·· «« • · « « • · • » » * « ·♦· · ··« » • * »· η
Sloučeniny obecného vzorce (IV) jsou popisovány v evropské patentové přihlášce č. 99830124.6 podané 9. března 1999.
Co se týká sloučenin obecného vzorce (IV), ve kterých je n rovno 1 a R10 je podle definice uvedené výše s výjimkou aroylu, mohou být tyto sloučeniny připravovány z výchozího kamptothecin-7-aldehydu (vzorce IVa, Rn je vodík), nebo kamptothecin-7-ketonu (vzorce IVa, Rn je jiná skupina než vodík).
kde R7 je skupina -C(Rn)=O a Rn je definován u obecného vzorce (IV), a Rs a R9 jsou definovány u obecného vzorce (IV). Sloučenina obecného vzorce (IVa) reaguje se sloučeninou obecného vzorce (Va) Ri0O-NH2, kde R10 je stejná jako výše a získány sloučeniny obecného vzorce (I), ve kterých je R7 skupina -C(Rn)=N-O-R10, R10 je definována jako u obecného vzorce (IV) vyjma aroylu.
- 29 «· «· • 4 · • · ft 9 »·Φ
9 + ·· · · · · * • · · » < · ·
O·· 9· 9
Reakce může být provedena běžnými metodami odborníkům známými, a postup spočívá v normální tvorbě oximů. Molární poměr kamptothecin-7-aldehydu nebo 7-ketonu ku hydroxylaminu má být přednostně v rozmezí od 1 : 3 do 3 : 1. Také lze použít odpovídající sole hydroxylaminu. Reakce se provádí v přítomnosti báze, například anorganické báze jako je uhličitan draselný nebo organické báze jako je například triethylamin nebo diazabicyklononan za použití polárních rozpouštědel, nejlépe methanolu nebo ethanolu a provádí se při teplotě v rozmezí od okolní teploty do teploty bodu varu rozpouštědla, případně v přítomnosti dehydratačních činidel, např. síranu sodného nebo hořečnatého či molekulárních sít. Pokud to je nutné, může se reakce provádět také v přítomnosti katalyzátoru, např. Lewisovy kyseliny.
Výše uvedené sloučeniny se mohou také alternativně připravovat z oximu kamptothecin-7-aldehydu (získaného podle popisu publikovaného Sawadou, et al., Chem. Pharm. Bull., 39, 2574, (1991), nebo 7- ketonu nebo zodpovídajícího 7acylkamptothecinu reakcí s Rw-X halogenidem, kde X je přednostně jod v polárním rozpouštědle, např. tetrahydrofuranu nebo alkoholech a v přítomnosti báze, např. hydridu sodného nebo uhličitanu draselného.
·· ·· » · ·· • * » · ·» ·» · · · • · · · · · • · · · · · · · • · · · · · ···· ···· ··· ··· ·· ·
- 30 Co se týká sloučenin obecného vzorce (IV) ve kterých je n rovno 1 a R10 je aroyl podle definice obecného vzorce (IV), lze tyto sloučeniny připravovat reakcí z výchozího kamptothecin-7oximu, jehož příprava je popsána v předešlých odstavcích, s R10-COCI acylchloridy v polárních rozpouštědlech a v přítomnosti báze, přednostně pyridinu nebo přímo v pyridinu, jak to popisuje Cho, et al., J. Org. Chem., 62, 2230, (1997).
Co se týká sloučenin obecného vzorce (IV), ve kterých n je 0 a Rw je podle definice uvedené výše, s výjimkou aroylu, mohou být tyto sloučeniny připravovány z výchozího kamptothecin-7aldehydu (obecný vzorec IVa, Rn je vodík) nebo kamptothecin7-ketonu (obecný vzorec IVa, Rn je jiná skupina než vodík).
kde R7 je skupina -C(Rn)=O a Rn je definována v obecném vzorci (IV), R8 a R9 jsou definovány v obecném vzorci (IV). Sloučenina obecného vzorce (IVa) reaguje se sloučeninou
I
99 · · 99 9 ·«·· 9 9 ·· 9 · 9 9 • · 9 · · · · • ·· · 9 9 9 9 9 • 9 · · · · · ···· ···· 999 999 99 999
- 31 obecného vzorce R10-NH2 (Vb), kde R10 je definována výše, a získají se sloučeniny obecného vzorce (IV), ve kterých je R7 skupina -C(Rn)=N-R10, kde R10 je definována stejně jako v obecném vzorci (IV) vyjma aroylu. Reakce může být uskutečněna běžnými způsoby odborníkům ve farmaceutické technologii známými a postup spočívá v normální tvorbě iminů.
Molární poměr kamptothecin-7-aldehydu nebo 7-ketonu ku iminu má být přednostně v rozmezí od 1 : 3 do 3 : 1. Také lze použít odpovídající sole aminů. Reakce se provádí v přítomnosti báze, například anorganické báze jako je uhličitan draselný, nebo organické báze jako je triethylamin nebo diazabicyklononan za použití polárních rozpouštědel, přednostně methanolu nebo ethanolu a teplota, za které se reakce provádí se pohybuje v rozmezí od okolní teploty do teploty bodu varu rozpouštědla, případně v přítomnosti dehydratačních činidel, např. síranu sodného nebo hořečnatého či molekulárních sít. Pokud to reakce vyžaduje, může se provádět v přítomnosti katalyzátoru, např. Lewisovy kyseliny, jak to je například popsáno Morettim a Torrem, Synthesis, 141, (1970); nebo Kobayashim, et al., Synlett, 115, (1977).
Kamptothecin-7-aldehyd a kamptothecin-7-oxim jsou popsány v přihlášce evropského patentu EP 0056692 a ve výše citovaném sdělení Sawady, et al., Chem. Pharm. Bull., 39, 2574, (1991).
Ν-ι-oxidy sloučenin obecného vzorce (IV) se připravují známými způsoby oxidace heteroaromatického dusíku, přednostně oxidací kyselinou octovou nebo trifluoroctovou a peroxidem vodíku nebo reakcí s organickými peroxykyselinami (Albíni, A. a Pietra, S., Heterocyclic N-oxides, CRC, 1991).
Co se týká různých důležitých R10 uváděných u různých reagens obecného vzorce (V), tato reakční činidla jsou komerčně dostupná, nebo mohou být připravována způsoby z literatury známými a ke kterým mohou odborníci z této oblasti sáhnout podle svých zkušeností.
Farmaceuticky přijatelné sole se získají běžnými způsoby popsanými v literatuře a nevyžadují žádný další popis.
Příklad 8
7-benzyloxyiminomethylkamptothecin (CPT 172)
500 mg (1,33 mmol) 7-formylkamptothecinu se rozpustí ve 100 ml ethanolu. Přidá se 15 ml pyridinu a 638 mg (4 mmol) Obenzylhydroxylamin hydrochloridu. Roztok se refluxuje po dobu 5 hodin. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a takto získaný zbytek se přečistí flash chromatografií na silikagelu za použití
směsi hexanu a ethylacetátu v poměru 4 : 6 jako elučního činidla.
Výtěžek: 65 %.
b.t.: 200 až 205 °C.
Získaný produkt sestává ze směsi dvou isomerů syn a anti v poměru přibližně 8 : 2 (isomer A: Rf 0,32; isomer B: Rf 0,19, na silikagelu Merck 60 F254; eluent: hexan : ethylacetát = 3:7).
HPLC: analýza byla provedena na přístroji vybaveném čtyřstupňovým čerpadlem (HP 1050) s injektorem Rheodyn (smyčka 20 μΙ) a mřížkovým diodovým detektorem Diode-array) (HP 1050) řízeným softwarem HPLC-ChemStation. Spektra byla pořizována od 200 do 600 nm a chromatogramy byly zaznamenávány při 360 a 400 nm.
Kolona s reverzní fází C18 (Rainin C18; 25 x 0,4 cm, Varian) měla ještě předřazenou předkolonu RP18. Analýza byla prováděna při lineárním elučním gradientu počínaje od poměru acetonitrilu ku vodě 30 : 70 ke 100 % acetonitrilu ve 20. minutě při průtoku 1 ml.min'1. Retenční časy: 12,51 min. pro isomer B a 14,48 min. pro isomer A.
H’-NMR (300 MHz; DMSO-d6): δ: 0,88 (t, Η3Ί8Α + H3-18B), 1,87 8m, (H2-19A + H2-19B), 5,18 (s, H2-5B), 5,21 (8s, H2-Ph B), 5,30 (H2-Ph A), 5,40 (s, H2-5A), 5,45 (s, H2-17A + H2-17B), 6,53 (s, -OH A + -OH B), 7,3 - 7,6 (m, Ar A + Ar B + H-14A + H9 99 4 44444
4 4 4 4 4 9
9944 4444 449 444 «4 444
- 34 14B), 7,75 (m, H-11 A + H-11B), 7,85 - 7,95 (m, H-10A + H10B), 7,98 (dd, H-12B), 8,18 - 8,27 (m, H-12A + H9-B), 8,45 (s,
CH=N B), 8,59 (dd, H-9A), 9,38 (s, CH=N A).
Hmotnostní spektra m/z: 481 (M+100), 374 (30), 330 (70), 300 (30), 273 (20), 243 (20), 91 (34).
Příklad 9
7-butoxyiminomethylkamptothecin (CPT 184)
400 mg (1,06 mmol) 7-formylkamptothecinu bylo rozpuštěno v 80 ml ethanolu. Přidáno bylo 12 ml pyridinu a 400 mg (3,18 mmol) O-t-butylhydroxylamin hydrochloridu. Roztok byl ponechán 4 hodiny pod refluxem. Rozpouštědlo bylo odpařeno pod vakuem a takto získaný zbytek přečištěn flash chromatografii na silikagelu za použití eluční směsi hexanu s ethylacetátem v poměru 4 : 6.
Bylo získáno 322 mg (0,72 mmol) žluté tuhé látky.
Výtěžek byl 68 %.
b.t.: 250°C
Získaný produkt se skládá ze směsi syn a anti izomerů v poměru přibližně 8 : 2 (izomer A: Rf 0,31; izomer B: Rf 0,24 na silikagelu Merck 60 F 254, eluční činidlo: hexan a ethylacetát v poměru 3 : 7).
HPLC: analýzy byly provedeny na přístroji vybaveném čtyřstupňovým čerpadlem (HP 1050) s injektorem Rheodyn
- 35 (smyčka 20 μΙ) a mřížkovým diodovým detektorem (HP 1050) řízeném softwarem HPLC-ChemStation. Spektra byla snímána od 200 do 600 nm a chromatogramy byly registrovány při 360 a 400 nm.
Byla použita reverzní kolona s fází C18 (Rainin C18; 25 x 0,4 cm, Varian) s představenou předkolonou kolonou RP18. Analýza byla provedena při lineárním elučním gradientu počínajíc od směsi acetonitril : vodě v poměru 30 : 70 ke 100 % acetonitrilu ve 20. minutě při průtoku 1 ml.min’1. Retenční časy byly: 12,92 min. pro izomer B a 14,61 min. pro izomer A.
1H-NMR (300 MHz; DMSO-d6): δ: 0,88 (t, H3-18A+H3-18B),
1.30 (s, t-but.B), 1,47 (s, t-but.A), 1,87 (m, H2-19A+H2-19B), 5,18 (s, H2-5B), 5,37 (H2-5A), 5,42 (s, H2-17A+H2-17B), 6,54 (s, -OH A+ -OH B), 7,35 (s, H-14A), 7,36 (s, H-14B), 7,69-7,83 (m, H-11A+H-11B), 7,85-7,98 (m, H-10A+H-10B), 8,07 (dd, H-9B), 8,16-8,27 (m, H-9A+H-12B), 8,40 (s, CH B), 8,62 (dd,H-12A),
9.31 (s, CH A).
Hmotnostní spektrum (m/z): 448 (M+28), 391 (40), 374 (100), 362 (40), 330 (34), 57 (17).
Příprava liposomů
Sloučeniny podle vynálezu moou být použity k přípravě multilamelárních liposomů (MLV) i unilamelárních liposomů (SUV), obojích ve formě suchých prášků i jako suspenzí ve vodných roztocích.
- 36 Sloučeniny podle vynálezu připravené podle popisu v příkladech 1 až 7 se používají k přípravě liposomů podle následujícího postupu. Vhodné množství sloučeniny se rozpustí v chloroformu; roztok se ve vakuové rotační odparce odpařuje do sucha až do vytvoření lipidového filmu. Lipidový film se pod silným vakuem vysuší až do odstranění posledních stop rozpouštědla, potom se rozpustí v tercbutylalkoholu nebo ve vodě. Takto získaný roztok se lyofilizuje a získá se jemný, suchý prášek.
Prášky se hydratují vhodným množstvím vodného roztoku za získání liposomů použité sloučeniny, který se potom zakomplexuje polynukleotidem nebo požadovaným léčivem.
Jiný způsob přípravy liposomů spočívá v adsorbci lipidového filmu obsahujícího sloučeninu podle vynálezu v rozpouštědle na vhodném inertním nosiči jako je například sorbitol, manitol nebo farmakologicky přijatelné cukry. Směs se vakuově odpaří za získání tuhé látky, kterou lze snadno a velmi rychle před použitím hydratovat.
Preparáty ve formě suchých prášků mají výhodu v tom, že jsou po dlouhou dobu stálé a snadno se používají.
Sloučeniny podle vynálezu mohou být navíc použity k přípravě liposomových komplexů s DNK nebo požadovaným léčivem ve
- 37 • · · ·* · formě suchých prášků podle následujícího postupu. Sloučenina podle vynálezu se rozpustí v tercbutylalkoholem nebo vodou; takto získaný roztok se smísí s DNK nebo požadovaným léčivem a směs se lyofilizuje za získání komplexu, který můžeme definovat jako proliposom-DNK nebo proliposomléčivo, a to ve formě jemného suchého prášku.
Prášky takto získané (proliposomy) mohou být použity k přípravě farmaceutických přípravků, které mohou být podávány jako aerosoly, nebo mohou být alternativně rekonstituovány vodou nebo ústojným roztokem a mohou být podávány parenterálně nebo orálně.
Liposomy zakomplexované s DNK nebo léčivem v tuhé formě mohou být také získány adsorbcí lipidového filmu na inertní nosič jako je sorbitol, manitol nebo jiné cukry způsobem popsaným výše.
Zkoušení vytváření liposomů
Vytváření liposomů bylo zkoušeno kolorimetricky za použití barviva rozpustného ve vodě podle následujícího postupu. Byl připraven vodný roztok ve vodě rozpustného barviva arsenazo III (m. hm. = 776,37; 2,3 mg.ml'1).
Tento roztok byl použit namísto vody k hydrataci lipidových filmů pocházejících z výše uvedeného postupu.
Alikvotní podíl suspenze obsahující liposom obsahující barvivo byl stonásobně zředěn vodou.
K získání první hodnoty optické hustoty měřené při 660 nm byly použity dva ml liposomové suspenze; odečet optické hustoty byl proveden proti stejnému vzorku připravenému jako slepá zkouška. K prvnímu vzorku bylo přidáno 200 μΙ roztoku CaCI2 (15 mg.ml'1; 100 mM) a změřena optická hustota při 660 nm proti slepému pokusu, ke kterému bylo přidáno 200 μΙ vody. Získaná hodnota absorbance byla označena jako hodnota 2. Pokračovali jsme přidáním 100 μΙ roztoku Tritonu X-100 (5 % obj./obj.; 0,26 % konečná koncentrace) ke vzorku a 200 μΙ vody ke slepému pokusu; optická hustota při 660 nm byla označena jako hodnota 3. K výpočtu procenta adsorbovaného barviva bylo použito tohoto vzorce:
hodnota 3 - hodnota 2 x 100 % adsorbovaného barviva = hodnota 3
Procento adsorbovaného barviva dává míru vytvořeného liposomů a pohybuje se průměrně okolo 40 %; kontrola této hodnoty liposomů byla provedena přístrojem Laser Light Scattering s kladným výsledkem.
Příklady přípravy liposomů
Příprava liposomů undecyl esteru palmitoyl-L-karnitinchloridu (ST 983) ve formě:
• 9 · #
• 9
- 39 a) Lyofilizovaných prášků mg, 0,11 mmol undecyl esteru palmitoyl-L-karnitinchloridu bylo ve 100 ml baňce rozpuštěno ve 20 ml chloroformu.
Roztok byl odpařen až do získání lipidového filmu, který byl sušen ve vakuu po dobu 3 hodin. Takto získaný produkt byl rozpuštěn v tercbutylalkoholu a tento roztok byl rychle ochlazen na -70 °C kapalným dusíkem a lyofilizován po dobu 24 hodin. Byla získána bílá houbovitá tuhá látka.
b) Adsorbovaných prášků
143 mg, 0,231 mmol undecyl esteru palmitoyl-L-karnitinchloridu bylo rozpuštěno v 10 ml chloroformu. Takto získaný roztok byl po malých částech naléván do 100 ml baňky obsahující 750 mg sorbitolu. Ke konci přidávání jednotlivých dávek chloroformového roztoku byl tento chloroform vždy rychle odpařen.
Takto získaná tuhá látka byla po dobu 3 hodin sušena pod vakuem.
Bylo získáno 893 mg pevného bílého produktu.
K získání isotonického roztoku byl produkt před použitím rychle hydratován vhodným množstvím vody.
c) MLV suspenzí
650 mg, 0,11 mmol undecyl esteru palmitoyl-L-karnitinchloridu bylo ve 100 ml baňce rozpuštěno ve 20 ml chloroformu.
- 40 Takto získaný roztok byl odpařen až do získání lipidového filmu, který byl sušen ve vakuu po dobu 3 hodin.
Lipidový film byl hydratován 10 ml vody při 30 °C po dobu 3 hodin a získána suspenze MLV.
Vhodně zředěná suspenze MLV byla zakomplexována polynukleotidem nebo léčivem a použita při biologických zkouškách.
e) Suspenzí SUV
650 mg, 0,11 mmol undecyl esteru palmitoyl-L-karnitinchloridu bylo ve 100 ml baňce rozpuštěno ve 20 ml chloroformu.
Takto získaný roztok byl odpařen až do vzniku lipidového filmu, který byl sušen ve vakuu po dobu 3 hodin.
Lipidový film byl hydratován 10 ml vody při 30 °C po dobu 3 hodin a získána suspenze MLV.
Suspenze MLV byla 10 krát prolisována polykarbonátovým filtrem s velikostí pórů 200 nm. Takto získaná unilamelární suspenze liposomu byla zakomplexována polynukleotidem nebo léčivem a použita při biologických zkouškách.
f) Zkoušení fyzikální stability liposomů
Fyzikální stabilita liposomové suspenze byla zkoušena turbidimetricky po dobu 30 dní.
- 41 U každé zkoušené suspenze bylo provedeno měření absorbance při 600 nm v určitých časových intervalech. Střední hodnota absorbance v čase 0 zůstávala u všech přípravků stálá.
Navržené sloučeniny dávaly vyhovující hodnoty po celou uvažovanou dobu.
Liposomové suspenze MLV a SUV lze připravovat kombinováním sloučenin podle vynálezu s pomocnými lipidy jako je cholesterol, 1 -palmitoyl-2-oleoylfosfatidylcholin (POPC) nebo dioleylfosfatidylcholin (DOPE).
Sloučeniny se kombinují s pomocným lipidy za účelem získání liposomů se stabilnějšími membránami. V dále uvedeném odstavci popisujícím přípravu liposomů je uveden příklad přípravy ve kterém se sloučenina podle vynálezu kombinuje s pomocným lipidem jako je například cholesterol nebo POPC.
Příklady přípravy liposomů k přísunu léčiv
Příklad 10
Příprava taxol-ST 983 MLV liposomů (1 : 40) mg, 0,0234 mmol taxolu a 556 mg, 0,9417 mmol ST 983 bylo rozpuštěno ve 20 ml chloroformu.
Roztok byl koncentrován až do získání lipidového filmu na skleněné baňce.
- 42 Po odstranění posledních stop chloroformu pomocí vývěvy bylo k lipidovému filmu přidáno 20 ml tercbutylalkoholu a takto získaný roztok byl rozdělen do 19 podílů, které byly okamžitě zmrazený kapalným dusíkem na -70 °C a lyofilizovány po dobu 24 hodin. Každý podíl tuhé látky obsahoval taxol (1,05 mg) a ST 983 (29,2 mg).
K získání výsledné liposomové suspenze byl lyofilizovaný produkt v okamžiku jeho použití hydratován vodou (450 μΙ) nebo jinými roztoky solí, míchán po dobu 10 minut a ponechán stát po dobu zbylých 30 minut k dokončení procesu bobtnání (hydratace).
Byly získány MLV liposomy.
Zkoušení fyzikální stability preparátů
Fyzikální stabilita preparátu byla zkoušena turbidimetricky záznamem TDC (křivka časové závislosti) při 800 nm při 20 °C po dobu 20 hodin.
Průběh hodnot turbidity indikující stabilitu preparátu byl trvale zaznamenáván bez známek srážení.
Zkoušení chemické stability taxolu v preparátu
Chemická stálost preparátu byla zkoušena HPLC.
Podmínky chromatografického stanovení;
Kolona: MBondapack C-18
- 43 Eluent: acetonitril + voda v poměru 70 : 30
Detektor: UV-VIS: 227 nm
Průtok: 1 ml.min'1
Retenční čas: 4,5 min.
Koncentrace taxolu stanovená vztažením na standard byla 2,13 mg.ml’1.
Obsah taxolu byl 98 %.
Příklad 11
Příprava SUV liposomů taxol - ST 983 mg, 0,0234 mmol taxolu a 556 mg, 0,9417 mmol ST 983 bylo rozpuštěno ve 20 ml chloroformu.
Roztok byl koncentrován až do získání lipidového filmu na skleněné baňce.
Po odstranění posledních stop chloroformu pomocí vývěvy pro získání vysokého vakua bylo k lipidovému filmu přidáno 20 ml tercbutylalkohoiu a takto získaný roztok byl rozdělen do 19 podílů, které byly okamžitě zmrazený kapalným dusíkem na 70 °C a lyofilizovány po dobu 24 hodin. Každý podíl tuhé látky obsahoval taxol (1,05 mg) a ST 983 (29,2 mg).
K získání výsledné SUV liposomové suspenze byl lyofilizovaný produkt hydratován roztokem PBS (1 ml) a homogenizován ultrazvukem po dobu 30 minut při 0 °C.
- 44 K odstranění stop titanu uvolněného ultrazvukovou sondou byla potom provedena filtrace přes 400 nm filtr.
Zkoušení fyzikální stability preparátu
Fyzikální stabilita preparátu byla zkoušena turbidimetricky záznamem TDC (křivka časové závislosti) při 800 nm při 20 °C po dobu 20 hodin.
Průběh hodnot turbidity indikující stabilitu preparátu byl trvale zaznamenáván bez známek srážení.
Zkoušení chemické stability taxolu v preparátu
Chemická stálost preparátu byla zkoušena HPLC.
Podmínky chromatografického stanovení:
Kolona: gBondapack C-18
Eluent: acetonitril + voda v poměru 70 : 30
Detektor: UV-VIS: 227 nm
Průtok: 1 ml.min'1
Retenční čas: 4,5 min.
Analýza HPLC suspenze SUV liposomu dala stejné výsledky jako odpovídající suspenze MLV liposomu a také v tomto případě byl obsah taxolu 98 %.
Analýza HPLC byla opakována po 24 hodinách, kdy se neobjevily žádné další píky kromě píku taxolu indikující stabilitu účinné složky.
- 45 Příklad 12
Příprava liposomů taxol - ST 983 - cholesterol (1 : 15)
Tyto typy liposomů byly připraveny za účelem získání komplexů se stabilnějšími membránami.
V 10 ml chloroformu bylo rozpuštěno 6 mg, 0,0101 mmol taxolu, 62,2 mg, 0,105 mmol ST 983 a 40 mg cholesterolu.
Takto získaný roztok byl koncentrován až do získání lipidového filmu na skleněné baňce.
Po odstranění posledních stop chloroformu pomocí vývěvy pro získání vysokého vakua bylo k lipidovému filmu přidáno 6,3 ml tercbutylalkoholu a takto získaný roztok byl rozdělen do 5 podílů, které byly okamžitě zmrazený kapalným dusíkem na 70 °C a lyofilizovány po dobu 24 hodin. Každý podíl tuhé látky obsahoval taxol (1,2 mg), ST 983 (12,44 mg) a cholesterol (8 mg).
V době použití byl k získání výsledné liposomové suspenze lyofilizovaný produkt hydratován vodou (1000 μί) nebo jinými roztoky solí, míchán po dobu 10 minut a ponechán do konce 30. minuty stát k dokončení procesu bobtnání (hydratace).
Byly získány liposomy MVL.
Zkoušení fyzikální stability preparátu •4 A
- 46 Fyzikální stabilita preparátu byla zkoušena turbidimetricky záznamem TDC (křivka časové závislosti) při 800 nm při 20 °C po dobu 6 hodin.
Průběh hodnot turbidity indikující stabilitu preparátu byl trvale zaznamenáván bez známek srážení.
Příklad 13
Příprava SUV liposomů taxol - ST 772 (1 : 70) mg, 0,0234 mmol taxolu a 1485 mg, 1,638 mmol ST 772 bylo rozpuštěno ve 20 ml chloroformu.
Roztok byl koncentrován až do získání lipidového filmu na povrchu skleněné baňky.
Po odstranění posledních stop chloroformu pomocí vývěvy pro získání vysokého vakua bylo k lipidovému filmu přidáno 20 ml tercbutylalkoholu. K získání čirého roztoku se muselo zahřát na 60 °C. Roztok byl okamžitě zmrazen kapalným dusíkem na 70 °C a lyofilizován po dobu 24 hodin.
K získání výsledné SUV liposomové suspenze byl lyofilizovaný produkt hydratován roztokem PBS (20 ml) a homogenizován ultrazvukem po dobu 20 minut při 0 °C.
K odstranění stop titanu uvolněného ultrazvukovou sondou byla potom provedena filtrace přes 400 nm filtr.
- 47 Zkoušení fyzikální stability preparátu
Fyzikální stabilita preparátu byla zkoušena turbidimetricky záznamem TDC (křivka časové závislosti) při 800 nm při 20 °C po dobu 6 hodin.
Průběh hodnot turbidity indikující stabilitu preparátu byl trvale zaznamenáván bez známek srážení.
Příklad 14
Příprava MLV liposomů CPT 83 - ST 983 (1 : 40)
6,3 mg, 0,0168 mmol CPT 83 (7-karbonitrilkamptothecin) popsaný ve WO 97/31003) a 400 mg, 0,667 mmol ST 983 bylo rozpuštěno ve 20 ml chloroformu.
Roztok byl koncentrován až do získání lipidového filmu na povrchu skleněné baňky.
Po odstranění posledních stop chloroformu pomocí vývěvy pro získání vysokého vakua bylo k lipidovému filmu přidáno 26 ml tercbutylalkoholu a takto získaný roztok byl rozdělen do 12 podílů, které byly okamžitě zmrazený kapalným dusíkem na 70 °C a lyofilizovány po dobu 24 hodin. Každý podíl obsahoval CPT 83 (0,525 mg) a ST 983 (33,33 mg).
K získání výsledné SUV liposomové suspenze byl lyofilizovaný produkt hydratován vodou (1000 μΙ) nebo roztoky dalších solí a homogenizován ultrazvukem po dobu 10 minut.
Byly získány MLV liposomy.
- 48 Zkoušení fyzikální stability preparátu
Fyzikální stabilita preparátu byla zkoušena turbidimetricky záznamem TDC (křivka časové závislosti) při 800 nm při 20 °C po dobu 20 hodin.
Průběh hodnot turbidity indikující stabilitu preparátu byl trvale zaznamenáván bez známek srážení.
Zkoušení chemické stability CPT 83 v preparátu
Chemická stálost CPT 83 byla zkoušena HPLC.
Podmínky chromatografického stanovení:
Kolona: Supelkosil LC-ABZ
Eluent: 20 mM fosfátový ústojný roztok + methanol v poměru : 60, pH = 7,3
Detektor: UV-VIS: 360 nm
Průtok: 1 ml.min'1
Retenční čas: 4,033 min.
Koncentrace CPT 83 stanovená vztažením na standard byla 0,502 mg.ml'1.
Obsah adsorbovaného CPT 83 byl 99 %.
Příklad 15
Příprava SUV liposomů CPT 83 - ST 983 (1 : 40)
6,3 mg, 0,0168 mmol CPT 83 a 400 mg, 0,667 mmol ST 983 bylo rozpuštěno ve 20 ml chloroformu.
- 49 Roztok byl koncentrován až do získání lipidového filmu na povrchu skleněné baňky.
Po odstranění posledních stop chloroformu pomocí vývěvy pro získání vysokého vakua bylo k lipidovému filmu přidáno 26 ml tercbutylalkoholu a takto získaný roztok byl rozdělen do 12 podílů, které byly okamžitě zmrazený kapalným dusíkem na 70 °C a lyofilizovány po dobu 24 hodin. Každý podíl obsahoval CPT 83 (0,525 mg) a ST 983 (33,33 mg).
K získání výsledné SUV liposomové suspenze byl lyofilizovaný produkt hydratován vodou (1000 μΙ) a při 0 °C homogenizován ultrazvukem po dobu 40 minut.
K odstranění stop titanu uvolněného ultrazvukovou sondou byla potom provedena filtrace přes 400 nm filtr.
Zkoušení chemické stability CPT 83 v preparátu
Chemická stálost CPT 83 byla zkoušena HPLC.
Podmínky chromatografického stanovení:
Kolona: Supelkosil LC-ABZ
Eluent: 20 mM fosfátový ústojný roztok + methanol v poměru : 60, pH = 7,3
Detektor: UV-VIS: 360 nm
Průtok: 1 ml.min'1
Retenční čas: 4,033 min.
i β
- 50 Koncentrace CPT 83 stanovená vztažením na standard byla 0,3 mg.ml'1.
Obsah adsorbovaného CPT 83 byl 59 %.
Analýza HPLC byla opakována po 24 hodinách, kdy se neobjevily žádné další píky kromě píku CPT 83 indikující stabilitu sloučeniny.
Zkoušení fyzikální stability preparátu
Fyzikální stabilita preparátu byla zkoušena turbidimetricky záznamem TDC (křivka časové závislosti) při 600 nm při 20 °C po dobu 20 hodin.
Průběh hodnot turbidity indikující stabilitu preparátu byl trvale zaznamenáván bez známek srážení.
Příklad 16
Příprava MLV liposomů CPT 184 - ST 983 (1 : 40)
7,29 mg, 0,0168 mmol CPT 184 a 400 mg, 0,667 mmol ST 983 bylo rozpuštěno ve 20 ml chloroformu.
Roztok byl koncentrován až do získání lípidového filmu na povrchu skleněné baňky.
Po odstranění posledních stop chloroformu pomocí vývěvy bylo k lipidovému filmu přidáno 26 ml tercbutylalkoholu a takto získaný roztok byl rozdělen do 12 podílů, které byly okamžitě zmrazený kapalným dusíkem na -70 °C a lyofilizovány po dobu 24 hodin. Každý podíl obsahoval CPT 184 (0,607 mg) a ST 983 (33,33 mg).
- 51 K získání výsledné liposomové suspenze byl lyofilizovaný produkt hydratován vodou (1000 μΙ) nebo roztoky dalších solí a míchán po dobu 10 minut.
Byly získány MLV liposomy.
Zkoušení fyzikální stability preparátu
Fyzikální stabilita preparátů byla zkoušena turbidimetricky záznamem TDC (křivka časové závislosti) při 600 nm při 20 °C po dobu 20 hodin.
Průběh hodnot turbidity indikující stabilitu preparátu byl trvale zaznamenáván bez známek srážení.
Zkoušení chemické stability CPT 184 v preparátu
Chemická stálost CPT 184 byla zkoušena HPLC.
Podmínky chromatografického stanovení:
Kolona: Supelkosil LC-ABZ
Eluent: 20 mM fosfátový ústojný roztok + methanol v poměru : 60, pH = 7,3
Detektor: UV-VIS: 360 nm
Průtok: 1 ml.min'1
Retenční čas: 25,5 min.
Koncentrace CPT 184 stanovená'vztažením na standard byla 0,600 mg.ml·1.
Obsah adsorbovaného CPT 184 byl 99 %.
- 52 Příklad 17
Příprava SUV liposomů CPT 184 - ST 983 (1 : 40)
7,29 mg, 0,0168 mmol CPT 184 a 400 mg, 0,667 mmol ST 983 bylo rozpuštěno ve 20 ml chloroformu.
Roztok byl koncentrován až do získání lipidového filmu na povrchu skleněné baňky.
Po odstranění posledních stop chloroformu pomocí vývěvy pro získání vysokého vakua bylo k lipidovému filmu přidáno 26 ml tercbutylalkoholu a takto získaný roztok byl rozdělen do 12 podílů, které byly okamžitě zmrazený kapalným dusíkem na 70 °C a lyofilizovány po dobu 24 hodin. Každý podíl obsahoval CPT 184 (0,607 mg) a ST 983 (33,33 mg).
K získání výsledné SUV liposomové suspenze byl lyofilizovaný produkt hydratován vodou (1000 μΙ) a homogenizován ultrazvukem po dobu 40 minut při 0 °C.
K odstranění stop titanu uvolněného ultrazvukovou sondou byla potom provedena filtrace přes 400 nm filtr.
Zkoušení chemické stability CPT 184 v preparátu
Chemická stálost preparátu byla zkoušena HPLC.
Podmínky chromatografického stanovení:
Kolona: Supelkosil LC-ABZ
- 53 Eluent: 20 mM fosfátový ústojný roztok + methanol v poměru : 60, pH = 7,3
Detektor: UV-VIS: 360 nm
Průtok: 1 ml.min'1
Retenční čas: 25,5 min.
Koncentrace CPT 184 stanovená vztažením na standard byla 0,36 mg.ml'1.
Obsah adsorbovaného CPT 184 byl 70 %.
Analýza HPLC byla opakována po 24 hodinách, kdy se neobjevily žádné další píky kromě píku CPT 184 indikující stabilitu účinné složky.
Zkoušení fyzikální stability preparátu
Fyzikální stabilita preparátů byla zkoušena turbidimetricky záznamem TDC (křivka časové závislosti) při 600 nm při 20 °C po dobu 20 hodin.
Průběh hodnot turbidity indikující stabilitu preparátu byl trvale zaznamenáván bez známek srážení.
V dalších příkladech byly liposomy připraveny za pomoci pomocných lipidů a/nebo kryptoprotektivních látek.
Příklad 18
Příprava liposomů CPT 184 - ST 983
Ve 2 I baňce bylo ke 20 mg CPT 184 a 600 mg ST 983 přidáno 100 ml methylchloroformu a směs mírně zahřívána až do •4 13
- 54 úplného rozpuštění látek. Získaný roztok byl koncentrován na rotační odparce až k získání lipidového filmu, který byl dále po dobu dvou hodin sušen pomocí vysokovakuové vývěvy lipidový film byl potom hydratován roztokem laktozy (6 g ve 300 ml vody) při 45 °C a pokračováno v míchání v rotační odparce přibližně 2 hodiny. Suspenze byla potom míchána ultrazvukem po dobu 2 hodin s každým cyklem trvajícím půl hodiny. Následně byl produkt filtrován filtrem 200 nm a lyofilizován.
Zkoušení chemické stability CPT 184 v preparátu
O chemické stabilitě CPT 184 jsme se ujistili HPLC. Během 24 hodinové zkoušky byl produkt stálý.
Zkoušení fyzikální stability preparátu
Fyzikální stabilita preparátu byla zkoušena turbidimetricky. Produkt byl během 24 hodinové zkoušky stabilní. Rovněž velikost částic byla stabilní (střední hodnota 100 nm).
Příklad 19
Příprava liposomů CPT 184 - ST 983
Pro 1 ml liposomového přípravku (POPC - 5 mM 1 -palmitoyl-2oleoylfosfatidylcholín; 1,25 mM ST 983; 0,25 (?) CPT 184 a 150 mM trehalosa) byl použit tento postup:
0,11 mg, 0,25 μίτιοίύ CPT 184 bylo rozpuštěno ve 250 μΙ ethylacetátu, 3,79 mg, 4,89 Limol POPC bylo rozpuštěno ve 100 μΙ ethanolu a 0,74 mg, 1,25 μΓηοΙ ST 983 bylo rozpuštěno ve
- 55 100 μΙ ethanolu. Tyto tři roztoky byly spojeny dohromady a promíseny. Rozpouštědla byla za laboratorní teploty odpařena na rotační odparce při tlaku 80 mbar. Lipidový film byl temnu sušen po dobu dvou hodin. Lipidový film byl potom suspendován v 1 ml 150 mM roztoku dihydrátu D(+)-trehalosy (Fluka, HPLC 99 %), sterilizován na 0,22 nm filtru a po dobu dvou minut promícháván. Suspenze byla ponechána 21 krát projít 200 nm polykarbonátovými filtry. Prošlá liposomová suspenze byla zmrazená kapalným dusíkem a lyofilizována po dobu 2 nocí. Byla získána bílá tuhá hmota.
Příklad 20
Příprava liposomů CPT 184 - ST 983
Byl použit stejný postup jako v příkladu 19 vyjma toho, že byla použita trehalosa o koncentraci 500 mM.
Protinádorové působení liposom ST 983 -protinádorové komplexní látky
Jak bude z dalšího zřejmé, liposom ST 983 vykazuje na převažující akumulaci v pulmonární oblasti. Tato charakteristika vedlejší specificity usnadnila jeho použití u myšího modelu pulmonární karcinogeneze.
Protinádorovou látkou použitou v těchto pokusech byl taxol.
- 56 K vyvolání nádoru in vivo obdržely myši Balb/c bez anesteze injekce 3.105 buněk myšího pulmonárního karcinomu M109 v 0,1 ml RPMI-1640 (Sigma) do kvadricepsů femoris pravé zadní končetiny.
Deset dnů po implantaci nádoru byl fyziologickým rozokem pufrovaným fosfátem (PBS, SIGMA, P-4417) zředěn liposomtaxolový komplex a intravenózně injikován v koncentraci 2,5 mg.ml1 ST 983 a 75 ,ug.ml1 taxolu.
Taxol (paclitaxel INDENA) použitý jako kontrolní látka byl rozpuštěn v kremoforovém vehikulu EL (BASF) na koncentraci 20 mg.ml'1 a uchováván při +4 °C po následujících 24 hodin chráněný před světlem. V době použití byl zředěn fyziologickým roztokem pufrovaným fosfátem (BPS, sigma) a intravenózně injikován za stejných podmínek co se týká objemu a koncentrace, jaké byly popsány u taxolu transportovaného liposomem ST 983.
Kremofor byl připraven zředěním ethylalkoholem 1:1.
Podávání bylo realizováno sedm po sobě následujících dní počínaje 10. dnem po inokulaci nádoru. Zvířata byla pozorována do 17. dne po inokulaci, utracena cervikální dislokací a jejich plíce byly odejmuty ke stanovení počtu metastáz. Barvení plic ke stanovení metastáz bylo provedeno inkubací plic po dobu 10 dní v 5 ml Bouinova roztoku obsahujícího 71 % nasyceného roztoku kyseliny pikrové, 4,8 %
- 57 ledové kyseliny octové (Merck) a 24 % 10 % formaldehydu (Fluka). Na konci inkubační doby v Bouinově roztoku byly počítány metastázy.
V porovnání s kontrolními myšmi neukazoval taxol transportovaný kremoforem na žádné snížení počtu pulmonárních metastáz, i když tyto byly menší než u kontrolních zvířat, zatímco taxol zakomplexovaný s liposomem ST 983 vykazoval významné snížení jak počtu, tak velikosti pulmonárních metastáz.
Statistická analýza dat počtu metastáz byla provedena za použití Man-Whitneyových neparametrických testů nepárových hodnot.
Získané výsledky jsou uvedeny v následující tabulce 1.
Tabulka 1
Plicní metastázy 17. den po inokulaci nádoru M109 myším BALB/c, kterým byl podáván taxol a taxol s liposomem ST 983
| Skupina | Metastázy střední hodnota ± std. odch. | Velikost metastáz |
| Kontrolní | 21±12 | M |
| Taxol | 22±9 | S |
| Taxol - ST983 | 10±2 | S |
M = střední (průměr 1 - 2 mm)
S = malé (průměr < 1 mm) •4 *3
- 58 Zkoušky toxicity in vitro
Zkoušky toxicity byly prováděny na HeLa a M109 buňkách na 96 jamkových destičkách. Ve dni nanesení destiček bylo na buňky působeno zkoušenými sloučeninami po dalších 48 hodin. Potom byly buňky promyty PBS a ponechány růst za normálních podmínek po dobu 48 hodin. Po odstranění růstového media byly buňky inkubovány na ledu se 16 % TCA, třikrát promyty vodou, po dobu 30 minut na ně působeno sulforhodaminem B (SRB) v 1 % kyselině octové, třikrát promyto samotnou 1 % kyselinou octovou, inkubováno 20 minut v 10 mM TRIS o pH 10,5 a konečně změřeno při 540 nm.
Zkoušky cytotoxicity s CPT 83
Zkoušky cytotoxicity in vitro CPT 83 byly provedeny za účelem vyhodnocení protinádorové látky zakomplexované s liposomem jakožto předběžného ukazatele účinnosti působení.
K vyhodnocení schopnosti liposomu transportovat CPT 83 in vitro do buněk M109 byla použita výše popsaná zkouška se sulforhodaminem B.
Navíc byla také hodnocena cytotoxicita CPT 83 rozpuštěného v dimethylsulfoxidu (DMSO) a porovnána se stejnou látkou zakomplexovanou s liposomem ST 983.
- 59 Při zkouškách cytotoxicity byl použit komplex liposom - CPT 83 v koncentracích uvedených v dalších tabulkách 2.1, 2.2 a 2.3 a to jak v konfiguraci SUV, tak MLV. Použitý molární poměr liposomů ku CPT 83 byl 40:1,
Střední hodnota cytotoxicity komplexů ST 983 - CPT 83 v konfiguraci jak SUV, tak MLV v níže uvedených tabulkách 2.1, 2.2 a 2.3 ukazuje, že liposom ST 983 je schopen transportovat CPT 83 stejným způsobem jako DMSO vykazujíc úroveň cytotoxicity stejného řádu.
Tabulka 2.1
| Cytotoxicita (SRB) ST 983 SUV - CPT 83 | ||||
| Koncentrace jsou v μΜ | ||||
| Kontrolní | 1,3 | 0,13 | 0,013 | 0,0013 |
| 0,911 | 0,294 | 0,705 | 0,908 | 0,911 |
| 0,745 | 0,198 | 0,525 | 0,821 | 0,83 |
| 0,884 | 0,204 | 0,801 | 0,906 | 0,91 |
| 0,833 | 0,25 | 0,748 | 0,856 | 0,853 |
| 0,854 | 0,254 | 0,778 | 0,867 | 0,873 |
| 0,793 | 0,231 | 0,739 | 0,802 | 0,803 |
| 0,792 | 0,193 | 0,602 | 0,827 | 0,829 |
| 0,901 | 0,248 | 0,69 | 0,904 | 0,89 |
| střed 0,839125 | 0,352444 | 0,635333 | 0,767111 | 0,7667 |
| std. odch. 0,060645 | 0,034513 | 0,092925 | 0,042054 | 0,040149 |
Hodnoty v tabulce uvedené jsou hodnotami optické hustoty při 540 nm.
- 60 Tabulka 2.2
Cytotoxicita (SRB) ST 983 MLV - CPT 83
Koncentrace jsou v μΜ
| Kontrolní | 1,3 | 0,13 | 0,013 | 0,0013 |
| 0,895 | 0,038 | 0,04 | 0,095 | 0,088 |
| 0,82 | 0,038 | 0,046 | 0,109 | 0,124 |
| 0,896 | 0,041 | 0,049 | 0,128 | 0,127 |
| 0,847 | 0,041 | 0,042 | 0,105 | 0,115 |
| 0,863 | 0,041 | 0,053 | 0,111 | 0,107 |
| 0,794 | 0,043 | 0,041 | 0,073 | 0,095 |
| 0,829 | 0,039 | 0,044 | 0,08 | 0,085 |
| 0,893 | 0,041 | 0,044 | 0,064 | 0,065 |
| 0,854625 | 0,04025 | 0,044875 | 0,095625 | 0,10075 |
std.odch. 0,038682 0,001753 0,004357 0,021738 0,021359
Hodnoty v tabulce uvedené jsou hodnotami optické hustoty při 540 nm.
- 61 Tabulka 2.3
Cytotoxicita (SRB) DMSO - CPT 83
| Koncentrace jsou v μΜ Kontrolní 13 | 1,3 | 0,13 | 0,013 | 0,0013 | ||
| 0,898 | 0,281 | 0,33 | 0,406 | 0,8 | 0,809 | |
| 0,774 | 0,267 | 0,302 | 0,407 | 0,804 | 0,816 | |
| 0,857 | 0,3 | 0,285 | 0,57 | 0,863 | 0,886 | |
| 0,787 | 0,286 | 0,287 | 0,383 | 0,836 | 0,841 | |
| 0,808 | 0,285 | 0,318 | 0,474 | 0,851 | 0,863 | |
| 0,745 | 0,288 | 0,317 | 0,467 | 0,79 | 0,795 | |
| 0,775 | 0,312 | 0,328 | 0,429 | 0,806 | 0,831 | |
| 0,864 | 0,318 | 0,305 | 0,421 | 0,81 | 0,878 | |
| střed | 0,8135 | 0,292125 | 0,309 | 0,444625 | 0,82 | 0,839875 |
| std.odch. | 0,053519 | 0,016848 | 0,017205 | 0,059269 | 0,026506 | 0,033237 |
Hodnoty v tabulce uvedené jsou hodnotami optické hustoty při 540 nm.
Biologické účinky komplexu liposom ST 983 - CPT 184
Byly zkoušeny biologické účinky liposomů příkladu 18 (dále nazývaný liposom A) a příkladu 20 (dále nazývaný liposom B). Toxicita na zdravých myších
Liposomy A a B byly podávány orálně a intravenozně a porovnávány s volným CPT 184 v dávce 1,2 mg.kg'1 podle schématu q4dx4. Tyto dva liposomy nevykazovaly na tělesnou hmotnost, plíce, slezinu a ledviny významné působení. Liposom
- 62 ÍJS
B intravenózně a liposom A orálně podávány ovlivňovaly hmotnost thymu podobně jako volný CPT 184. Intravenozní liposom A měl pouze minimální účinek. Hematologické hodnoty nevykazovaly u obou liposomů po 24 hodinách významné změny. Liposom A podávaný intravenosně vykazuje podle schématu qd5 toxicitu srovnatelnou s volným CPT 184.
Reakce plic na liposomy
Liposomy A a B se hlavně akumulují v pulmonární oblasti. Liposomy byly podávány intravenosně 1,2 mg.kg'1. Volná CPT 184 byla podávána orálně v dávce 1,2 mg.kg'1 v DMSO. Zvířata - zdravé myši - byly utraceny 24 hodin po poslední dávce. Plíce byly z těla vyjmuty a zmrazený v kapalném dusíku. Po rozmražení byly zhomogenizovány ve směsi 0,1 % kyseliny octové a acetonitrilu v poměru 1 : 5. Homogenáty byly rozděleny na tři díly, z nichž ke dvěma byl pro výpočet výtěžku přidán CPT 184. Tři vzorky byly centrifugovány při 16,000 g po dobu 5 minut. Supernatanty byly sebrány a extrahovány dichlormethanem. Organická fáze byla vysušena rychlým vakuováním a zbytek byl opětně rozpuštěn v takovém množství acetonitrilu, aby od jednoho zvířete vycházel objem 50 μΙ pro nástřik do HPLC. HPLC pracoval s náplní Waters Symmetry C 18, 3,5 μιτι (4,6 x 7,5 mm). Jako detektor byl použit fluorimetr Merck s excitací při 370 nm a emisí 510 nm. Elučním činidlem byla isokratická směs vody a acetonitrilu v poměru 60 : 40.
- 63 Objem vzorku byl 50 μ|. Výtěžek byl 70 % CPT 184. Oba liposomy A i B poskytly vyšší hladinu akumulace CPT 184 než volný CPT 184 v DMSO, jak to znázorňuje obrázek 3.
Transfer genu
Příprava komplexu liposom - DNK
Liposom a plasmid DNK byly vhodně a odděleně zředěny v PBS. K liposomů byla potom přidána DNK a komplex liposom - DNK byl ponechán přibližně 30 minut při 4 °C k usnadnění tvorby stabilního komplexu liposom - DNK.
Při pokusech in vitro byl použit jako referenční kationický lipid 1,2-dioleoyloxy-3-trimethylamoniumpropan (DOTAP); na 2.105 buněk HeLa bylo použito 2,5 pg plasmidu DNK a koncentrace liposomů byla 9 μΜ.
Při pokusech in vivo byly použity jako referenční kationické lipidy jak DOTAP, tak [2,3-(dioleoyl)propyl]trimethylamonium (DOTMA).
Molární poměry udávané ve výsledcích ukazují na nanomoiární koncentrace odpovídajících kationických lipidů na mg DNK.
U in vivo pokusů s přenosem bylo použito 25 pg plasmidu DNK na jedno zvíře.
- 64 Plasmid pCMVIuc použitý v těchto pokusech obsahoval cDNK genu luciferazy za řízené transkripce promotoru cytomegaloviru (CMV).
Kvantitativní stanovení účinků luciferazy
Účinky proteinové luciferazy v buňkách a tkáních byla stanovena za použití soupravy Boehringer Mannheim (č. kat. 1669 893).
Buňky byly třikrát promyty PBS a potom stěrkou z plotny setřeny do lyžujícího ústojného roztoku (100 mM fosforečnan draselný, pH 7,8, 1 mM dithiothreitol - DTT) a podrobeny třem po sobě jdoucím cyklům zmrazení a tání. Po zcentrifugování v 1,5 ml Eppendorfových kyvetách byl pro luminiscenční zkoušku použit supernatant a to ne později než 5 hodin po extrakci proteinů. Měření emise luminiscence byla prováděna luminometrem při 562 nm. Po prvním zmrazení v kapalném dusíku následovaném jemným rozmělněním za účelem získání prášku byly tkáně resuspendovány v lyžujícím ústojném roztoku a inkubovány po dobu 10 až 15 minut na ledu.
Potom byly vzorky zcentrifugovány ve 2 ml Eppendorfových kyvetách a supernatant zkoušen na účinnost luciferazy.
Blotting analýza (dot-blot)
Buněčná DNA byla extrahována postupem alkalického lyžování popsaným Sanbrookem, Fritschem a Maniatisem v Molecular Cloning, 1989.
- 65 5 pg DNK extrahované z buněk bylo předběžně absorbováno na nylonových filtrech (Boehringer) za použití zařízení Biorad dot-blot. Filtry byly potom prehybridizovány po dobu 4 hodin při 65 °C roztokem obsahujícím 0,5 M pyrofosforečnan sodný (NaPi), 1 mM EDTA a 7 % SDS. Vzorky značené 32P (alfa) byly připraveny za použití plasmidů pCMVIuc DNK jako matrice a soupravou s náhodným uspořádáním Amersham (random primed Amersham). Filtr byl hybridizován ve stejném prehybridizačním ústojném roztoku po dobu 12 hodin při 42 °C za použití 1.106 CPM.ml'1. Potom byl filtr podroben třem desetiminutovým promytím při 65 °C v ústojném roztoku obsahujícím 40 mM NaPi a 1 % SDS. Autoradiografická analýza byla provedena s pomocí luminiscenčního zobrazení, které používá luminiscenčního stínítka aktivovaného beta zářením, na kterém se odečítá a kvantifikuje pomocí fotonásobičového systému ve spojení s programem zobrazovací analýzy. Densitometrie skvrn (dot-blot) byla provedena s použitím programu zobrazovací analýzy IPLabGel.
Zkoušky přenosu plasmidů DNK
Byl proveden velký počet zkoušek přenosu plasmidů DNK, a to jak in vitro, tak in vivo.
Jako referenční kationické plasmidy byly použity jak DOTAP, tak DOTMA, jejichž přenosová kapacita byla bohatě charakterizována a popsána Abkenetem, et al., Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 90, 6518, (1993). Při pokusech in vivo byly za
- 66 účelem stanovení účinnosti kationických lipidů a odpovídajících nejúčinnějších koncentrací pro přenos genů analyzovány různé molární poměry kationických lipidů ku plasmidům DNK. Schopnost přenosu různých liposomů byla hodnocena jak in vitro, tak in vivo za použití přenašeče genu luciferazy obsaženého v pOMVIuc plasmidu, jehož aktivita byla vyjádřená pro snadnou kvantifikaci v relativních luminiscenčních jednotkách (RLU) (popsaná již dříve).
Přenosová účinnost velkého počtu kationických liposomů byla alternativně vyhodnocena densitometrickou analýzou (luminiscenční obrazovka) vzorků DNK extrahovaných z přenesených buněk předem absorbovaných na nitrocelulozových filtrech (dot-blot) a hybridizovaných markéry plasmidu DNK značenými 32P, jak to již bylo popsáno dříve.
Zkoušky přenosu in vivo
Závislost účinnosti přenosu in vivo na molárním poměru liposomů ST 983 ku DNK
Při těchto pokusech byla hodnocena závislost účinnosti přenosu na játra, plíce a srdce na molárním poměru liposomů ST 983 ku plasmidu DNK. Zkoušeny byly tyto nanomolární poměry liposomů na Lig DNK: 12 : 1,24 : 1, 36 : 1 a 48 : 1.
K intravenoznímu podání výše uvedených množství komplexů liposom - DNK o objemu 200 μΙ PBS byly použity skupiny myší
- 67 o 6 zvířatech Balb/c o hmotnosti přibližně 20 g, které byly utraceny 24 hodin po podání komplexu.
Aktivita luciferazy extrahované z tkáně plic, srdce a jater ukázala na převažující distribuci luciferazy všech analyzovaných molárních poměrů do plic. Ve skutečnosti bylo přibližně 99 % celkové luciferazy extrahované ze tří druhů tkání obsaženo v plicích. Ukázalo se, že molární poměr liposomu ku DNK 12 : 1 je nejlepší. Získané výsledky jsou uvedeny v následující tabulce 3.
- 68 Tabulka 3
Účinnost přenosu ST 983 in vivo jako funkce molárního poměru ST 983 ku DNK (μρ DNK)
| Liposom | střední RLU.mg'1 proteinu ± std. odch. | Molární poměr ST 983 DNA | ||
| Játra | Plíce | Srdce | ||
| ST 983 | 2589+140 | 8818442±449529 | 28875±2593 | 12:1 |
| 1310±385 | 2257856±280480 | 7091±249 | 24:1 | |
| 1035±347 | 301107±21503 | 8351±477 | 36:1 | |
| 1571±156 | 112747±5655 | 5251±489 | 48:1 | |
| Kontrolní | 396±55 | 458±45 | 755±55 | |
| DOTMA | 1352±226 | 3828742±161332 | 3363±123 | 12:1 |
Závislost účinnosti přenosu in vivo na rozdílech mezi preparáty liposomů SRT 983
Hodnoty účinnosti luciferázy extrahované z plic myší Balb/c, které íntravenozně obdržely různé preparáty liposomů ST 983 při molárním poměru liposom : DNK 12 : 1 jako relativní jednotky luminiscence (RLU) jsou uvedeny v tabulce 4.
- 69 Vedle toho, že získané hodnoty představují schopnost liposomů ST 983 transportovat plasmid DNKI in vivo s hodnocením účinnosti vyšším než a/nebo srovnatelným s hodnotami pro DOTMA, vykazují také určitý stupeň variability mezi různými preparáty ST 983. To může být zaviněno různými fyzikálně chemickými charakteristikami jako je velikost liposomových vesikulů nebo relativním poměrem těchto vesikulů ve vztahu k unilamelární nebo multilamelární struktuře různých preparátů ST 983. Ve skutečnosti byly výše uvedené fyzikálně chemické parametry bohatě popsány Mahatem, R. I., et al., Human Gene Therapy, 9, 2083, (1998) jako determinanty k dosažení optimální účinnosti přenosu in vivo a in vitro.
·*-«*
- 70 Tabulka 4
Účinnost přenosu ST 983 in vivo (různé preparáty)
| Liposom | střední RLU.mg'1 proteinu ± std. odch. | Molární poměr |
| Plíce | ST 983 : DNK | |
| ST 983/#72 | 3118235±184726 | 12:1 |
| ST 983/#73 | 7285835±827067 | 12:1 |
| ST 983/#4 | 1022117±60402 | 12:1 |
| Kontrolní | 1523±98 | |
| DOTMA | 3410125±189520 | 12:1 |
Závislost účinnosti přenosu in vivo na preinkubační dobu liposomového komplexu ST 983 - DNK
Tabulka 5 uvádí jednotky relativní luminiscence extraktů z jater, plic a srdce myší, kterým byl intravenozně podáván liposom ST 983 předem inkubovaný s plasmidem DNK po dobu 30 minut nebo 3 hodin. Zvířata, kterým by podáván ST 983 předem inkubovaný po dobu 3 hodin s DNK vykazoval přibližně pětinásobný vzrůst aktivity luciferazy v plicích a srdci v porovnáním se zvířaty, která obdržela stejný liposom předem inkubovaný po dobu 30 minut.
- 71 Tyto výsledky svědčí o tom, že tvorba stabilního komplexu liposom - DNK je časově závislým jevem a hraje kritickou úlohu jakožto určující prvek v účinnosti přenosu in vivo.
Tabulka 5
Účinnost přenosu ST 983 in vivo jako funkce doby preinkubace systému liposom - DNK
Liposom Čas střední RLU.mg'1 proteinu ± std. odch. Molární poměr
Játra Plíce Srdce ST 983 : DNA
ST 983 30 3526±260 874882±65917 8118±263 12:1 min.
ST983 3 2497±682 4225656+211731 37100±1853 12:1 hod.
Přenos plasmidu DNK s liposomem ST 772 v HeLa buňkách
Obrázky 1 a 2 znázorňují účinnost přenosu plasmidu DNK liposomem ST 772 v HeLa buňkách. Za tímto účelem byla provedena densitometrická analýza DNK extrahované z buněk přenesených ST 272 a DOTAP jako referenčním kationickým lipidem. Výsledky analýzy skvrn ukazují na množství plasmidu DNK stejného řádu jaký byl získán s DOTAP.
Claims (51)
- Patentové nároky1. Sloučeniny obecného vzorce (I)O f\R1R2O \kde:n je celé číslo od 1 do 3;R je vodík nebo alkanoyl, přímý nebo rozvětvený se 2 až 6 uhlíkovými atomy;Ri a R2, které mohou být stejné nebo různé představují nasycené nebo nenasycené přímé acylové řetězce se 3 až 20 uhlíkovými atomy; aX' je aniont farmakologicky přijatelné kyseliny.
- 2. Sloučeniny podle nároku 1, vyznačující se tím, že R je vybrán ze skupiny sestávající z acetylu, propionylu, butyrylu, valerylu a isovalerylu.
- 3. Sloučeniny podle nároku 1, vyznačující se tím, že Ri a R2 jsou vybírány ze skupiny sestávající z hexanoylu, undekanoylu, myristoylu, palmitoylu nebo oleoylu.- 73 4. Sloučeniny podle nároku 1, vyznačující se tím, že X' je vybrán ze skupiny obsahující chlorid, bromid, jodid, aspartát, kyselý aspartát, citrát, kyselý citrát, vínan, kyselý vínan, fosforečnan, kyselý fosforečnan, fumarát, kyselý fumarát, glycerofosfát, glukofosfát, mléčnan, maleinát, kyselý maleinát, mukát (ester kyseliny slizové), orotát, šťavelan, kyselý šťavelan, síran, kyselý síran, trichloracetát, trifluoracetát, methansulfonát, palmitan a kyselý palmitan.5. Sloučeniny podle nároku 1 vybrané ze skupiny obsahující:• ester L-karnitinbromidu s 2-hydroxyacetyl-1,3dipalmitoylglycerolem;• ester acetyl-L-karnitinbromidu s 2-hydroxyacetyl-1,3dipalmitoylglycerolem ;• ester propionyl-L-karnitinbromidu s 2-hydroxyacetyl-1,3dipalmitoylglycerolem • ester isobutyryl-L-karnitinbromidu s 2-hydroxyacetyl-1,3dipalmitoylglycerolem ;• ester isovaleryl-L-karnitinbromidu s 2-hydroxyacetyl-1,3dipalmitoylglycerolem;• ester L-karnitinbromidu s 1,3-dihexanoyl-2-hydroxyacetylglycerolem;• ester acetyl-L-karnitinbromidu s 1,3-dihexanoyi-2hydroxyacetyl-glycerolem;
- 4 *1- 74 • ester propionyl-L-karnitinbromidu s 1,3-dihexanoyl-2hydroxyacetyl-glycerolem.
- 6. Použití sloučeniny podle kteréhokoliv z nároků 1 až 5 k přípravě liposomů.
- 7. Liposom vyznačující se tím, že obsahuje sloučeninu podle kteréhokoliv z nároků 1 až 5.
- 8. Liposom podle nároku 7 vyznačující se tím, že obsahuje dále pomocný lipid.
- 9. Liposom podle nároku 8, vyznačující se tím, že jmenovaný pomocný lipid je vybrán ze skupiny sestávající z cholesterolu, 1 -palmitoyl-2-oleoylfosfatidylcholinu nebo dioleoylfosfatidylcholinu.
- 10. Použití liposomů podle kteréhokoliv z nároků 7 až 9 k přípravě přípravku vhodného pro transport farmakologicky účinných sloučenin.
- 11. Použití podle nároku 10, vyznačující se tím, že farmakologicky účinnou sloučeninou je přirozeně se vyskytující nebo upravený plasmid nebo polynukleotid.
- 12. Použití podle nároku 11, vyznačující se tím, že plasmid nebo polynukleotid je vhodný pro genovou terapii.
- 13. Použití podle nároku 11, vyznačující se tím, že plasmid nebo polynukleotid kóduje peptid nebo protein vhodný jako vakcína.75
- 14. Použití podle nároku 10, vyznačující se tím, že účinnou sloučeninou je léčivo.
- 15. Použití podle nároku 14, vyznačující se tím, že jmenované léčivo je vybráno ze skupiny sestávající z protinádorových, antiangiogenních, protiví rových, protibakteriálních látek, fungicidů, antiprotozoans, sloučenin účinkujících na kardiovaskulární systém nebo imunogenních peptidů.
- 16. Použití podle nároku 15, vyznačující se tím, že jmenovaným léčivem je protinádorová nebo antiangiogenní látka.
- 17. Použití podle nároku 16, vyzačující se tím, že protinádorová látka je vybrána ze skupiny sestávající z taxolových nebo kamptothecinových derivátů.
- 18. Použití podle nároku 17, vyznačující se tím, že jmenovaný derivát kamptothecinu je vybrán ze skupiny obsahující:• 7-karbonitrilkamptothecin;• 7-benzyloxyiminomethylkamptothecin; a • 7-butoxyíminomethylkamptothecin.
- 19. Použití liposomů podle nároků 7 až 9 k přípravě kosmetických přípravků.
- 20. Farmaceutický přípravek vyznačující se tím, že obsahuje liposom podle nároků 7, 8 nebo 9.
- 21. Přípravek podle nároku 20, vyznačující se tím, že jmenovaný liposom obsahuje farmakologicky účinnou sloučeninu.- 76
- 22. Přípravek podle nároku 21, vyznačující se tím, že účinnou sloučeninou je přirozeně se vyskytující nebo upravený plasmid nebo polynukleotid.
- 23. Přípravek podle nároku 22, vyznačující se tím, že plasmid nebo nukleotid je vhodný pro genovou terapii.
- 24. Přípravek podle nároku 22, vyznačující se tím, že plasmid nebo nukleotid kóduje peptid nebo protein vhodný jako vakcína.
- 25. Kosmetický přípravek vyznačující se tí, že obsahuje liposom podle kteréhokoliv z nároků 7 až 9.
- 26. Kosmetický přípravek podle nároku 25, vyznačující se tím, že jmenovaný liposom obsahuje látku s kosmetickými účinky.
- 27. Kosmetický přípravek podle nároku 21, vyznačující se tím, že jmenovaná sloučenina je vybrána ze skupiny sestávající z látek protinádorových, antiangiogenních, proti virových, protibakteriálních, fungicidů, antiprotozoans nebo léčiv vhodných k terapii kardiovaskulárního systému nebo imunogenních peptidů.
- 28. Přípravek podle nároků 20 až 27, vyznačující se tím, že je podáván orálně, parenterálně, intravenozně, intramuskulámě, subkutálně, transdermálně nebo ve formě nosního nebo ústního spreje.
- 29. Použití liposomu obsahujícího sloučeninu obecného vzorce (II) (II) kde;R3 je nasycený nebo nenasycený přímý nebo rozvětvený acylový řetězec se 4 až 26 uhlíkovými atomy;R4 je je nasycený nebo nenasycený přímý nebo rozvětvený alkylový řetězec se 4 až 26 uhlíkovými atomy; a X' je aniont farmakologický přijatelné kyseliny k transportu léčiv nebo látek s kosmetickými účinky.
- 30. Použití podle nároku 29, vyznačující se tím, že R3 je přednostně vybrán ze skupiny obsahující nonanoyl, dodekanoyl, myristoyl, palmitoyl, stearoyl nebo oleoyl.
- 31. Použití podle nároku 29, vyznačující se tím, že R4 je přednostně vybrán ze skupiny obsahující nonyl, undecyl, tetradecyl, hexadecyl nebo oleyl.
- 32. Použití podle nároku 30, vyznačující se tím, že X je vybrán ze skupiny obsahující chlorid, bromid, jodid, aspartát, kyselý aspartát, citrát, kyselý citrát, vínan, kyselý vínan, fosforečnan, kyselý fosforečnan, fumarát, kyselý fumarát, glycerofosfát, glukofosfát, mléčnan, maleinát, kyselý maleinát, mukát (ester kyseliny slizové), orotát, štavelan,- 78 kyselý šťavelan, síran, kyselý síran, trichloracetát, trifluoracetát, methansulfonát, palmitan, kyselý palmitan.
- 33. Využití podle nároků 29 až 32, vyznačující se tím, že sloučenina je vybrána ze skupiny obsahující • undecyl ester palmitoyl-L-karnitinchloridu;• undecyl ester stearoyl-L-karnitinchloridu ;• tetradecyl ester stearoyl-L-karnitinchloridu ;• tetradecyl ester palmitoyl-L-karnitinchloridu ;• tetradecyl ester myristoyl-L-karnitinchloridu ;• hexadecyl ester palmitoyl-L-karnitinbromidu ;• oleyl ester oleoyl-L-karnitinchloridu .
- 34. Použití podle nároku 29, vyznačující se tím, že léčivo je vybráno ze skupiny sestávající z látek protinádorových, antiangiogenních, protivirových, protibakteriálních, fungicidů, antiprotozoans, sloučenin účinkujících na kardiovaskulární systém nebo imunogenních peptidů.
- 35. Použití podle nároku 34, vyznačující se tím, že jmenovaná léčiva jsou protinádorovými nebo antiangiogenními látkami.- 79
- 36. Použití podle nároku 35, vyznačující se tím, že jmenovaná protinádorová látka je vybrána ze skupiny sestávající • · z taxolu nebo derivátů kamptothecinu.
- 37. Použiti podle nároku 36, vyznačující se tím, že jmenované deriváty kamptothecinu jsou vybírány ze skupiny obsahující • 7-benzyloxyiminomethylkamptothecin nebo • 7-butoxyiminomethylkamptothecin.33. Použití podle nároku 29, vyznačující se tím, že liposom obsahuje navíc pomocné lipidy.
- 39. Použití podle nároku 38, vyznačující se tím, že jmenovaný pomocný lipid je vybírán ze skupiny sestávající z cholesterolu, 1 -palmitoyl-2-oleoylfosfatidylcholínu nebo dioleylfosfatidylcholinu.
- 40. Přípravek- obsahující liposom· podle nároku 29 pro transport léčiv nebo látek s kosmetickými účinky.
- 41. Přípravek podle nároku 40, vyznačující se tím, že léčivo je vybráno ze skupiny sestávající z protinádorových, antiangiogenních, protivírových, protibakteriálních látek, fungicidů, antiprotozoans, sloučenin účinkujících na kardiovaskulární systém nebo imunogenních peptidů.
- 42. Přípravek podle nároků 40 až 41, vyznačující se tím, že je podáván orálně, parenterálně, intravenózně, intramuskulárně, subkutálně, transdermálně nebo ve formě nosního nebo ústního spreje.
- 43. Použití liposomu obsahujícího sloučeninu obecného vzorce (III):O Ó (lil) kde:Rs je nasycený nebo nenasycený přímý nebo rozvětvený acylový řetězec se 4 až 26 uhlíkovými atomy;R6 je je nasycený nebo nenasycený přímý nebo rozvětvený alkylový řetězec se 4 až 26 uhlíkovými atomy; a X' je aniont farmakologicky přijatelné kyseliny; s výjimkou, že:pokud je R5 stearoyl, není R6 stearyl, pokud je R5 oleoyl, není R6 stearyl, pokud je R5 palmitoyl, není R6 palmitoyl, pokud je R5 myristoyl, není R6 myristoyl, pokud je R5 lauroyl, není R6 lauryl, pokud je R5 oleoyl, není R6 oleyl k transportu přirozeně se vyskytujících nebo upravených plasmidu nebo polynukleotidú.- 81
- 44. Použití podle nároku 43, vyznačující se tím, že R5 je přednostně vybírán ze skupiny obsahující nonanoyl, dodekanoyl, myristoyl, palmitoyl, stearoyl nebo oleoyl.
- 45. Použití podle nároku 43, vyznačující se tím, že R6 je přednostně vybírán ze skupiny obsahující nonyl, undecyl, tetradecyl, hexadecyl nebo oleyl.
- 46. Použití podle nároku 43, vyznačující se tím, že X' je vybrán ze skupiny obsahující chlorid, bromid, jodid, aspartát, kyselý aspartát, citrát, kyselý citrát, vínan, kyselý vínan, fosforečnan, kyselý fosforečnan, fumarát, kyselý fumarát, glycerofosfát, glukofosfát, mléčnan, maleinát, kyselý maleinát, mukát (ester kyseliny slizové), orotát, šťavelan, kyselý šťavelan, síran, kyselý síran, trichloracetát, trifluoracetát, methansulfonát, palmitan a kyselý palmitan.
- 47. Použití podle nároků 43 až 46, vyznačující se tím, že sloučenina je vybrána ze skupiny sestávající z:• undecyl esteru palmitoyl-L-karnitinchloridu;• undecyl esteru stearoyl-L-karnitinchloridu;• tetradecyl esteru stearoyl-L-karnitinchloridu;• tetradecyl esteru palmitoyl-L-karnitinchloridu.
- 48. Použití podle nároku 43, vyznačující se tím, že plasmid nebo polynukleotid kóduje peptid nebo protein vhodný jako vakcína.- 82
- 49. Použití podle nároku 43, vyznačující se tím, že liposom obsahuje navíc pomocné lipidy.
- 50. Použití podle nároku 49, vyznačující se tím, že pomocný lipid je vybrán ze skupiny sestávající z cholesterolu, 1palmitoyl-2-oleoyl-fosfatidylcholinu nebo dioleylfosfatidylcholinu.
- 51. Přípravek obsahující liposom podle nároku 43 k transportu přirozeně se vyskytujícího nebo upraveného plasmidu nebo polynukleotidu.
- 52. Přípravek podle nároku 51, vyznačující se tím, že polynukleotid nebo plasmid kóduje peptid nebo protein vhodný jako vakcína.
- 53. Přípravek podle nároků 51 až 52, vyznačující se tím, že je podáván orálně, parenterálně, intravenozně, intramuskulárně, subkutálně, transdermálně nebo ve formě nosních nebo ústních sprejů.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT1999RM000220A IT1306129B1 (it) | 1999-04-13 | 1999-04-13 | Esteri della l-carnitina o di alcanoil l-carnitine utilizzabili comelipidi cationici per l'immissione intracellulare di composti |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ20013617A3 true CZ20013617A3 (cs) | 2002-02-13 |
| CZ302628B6 CZ302628B6 (cs) | 2011-08-10 |
Family
ID=11406659
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20013617A CZ302628B6 (cs) | 1999-04-13 | 2000-04-11 | Estery L-karnitinu nebo alkanoyl L-karnitinu vhodné jako kationické lipidy k prísunu farmakologicky úcinných sloucenin do bunky |
Country Status (34)
| Country | Link |
|---|---|
| US (4) | US6797281B1 (cs) |
| EP (3) | EP1435232A1 (cs) |
| JP (2) | JP4703855B2 (cs) |
| KR (2) | KR100684378B1 (cs) |
| CN (2) | CN100402017C (cs) |
| AT (2) | ATE317257T1 (cs) |
| AU (2) | AU776301B2 (cs) |
| BG (3) | BG65501B1 (cs) |
| BR (2) | BR0009765B1 (cs) |
| CA (2) | CA2370143C (cs) |
| CZ (1) | CZ302628B6 (cs) |
| DE (2) | DE60017388T2 (cs) |
| DK (2) | DK1426044T3 (cs) |
| EA (2) | EA006021B1 (cs) |
| EE (2) | EE05719B1 (cs) |
| ES (2) | ES2234591T3 (cs) |
| HK (2) | HK1045145B (cs) |
| HR (1) | HRP20010740B1 (cs) |
| HU (1) | HU229366B1 (cs) |
| IL (4) | IL145765A0 (cs) |
| IS (2) | IS2476B (cs) |
| IT (1) | IT1306129B1 (cs) |
| ME (2) | ME00113B (cs) |
| MX (1) | MXPA01010359A (cs) |
| NO (2) | NO327742B1 (cs) |
| NZ (2) | NZ528874A (cs) |
| PL (2) | PL204418B1 (cs) |
| PT (2) | PT1426044E (cs) |
| RS (3) | RS20090448A (cs) |
| SI (2) | SI1183228T1 (cs) |
| SK (2) | SK287253B6 (cs) |
| TR (2) | TR200102941T2 (cs) |
| WO (1) | WO2000061543A2 (cs) |
| ZA (1) | ZA200109291B (cs) |
Families Citing this family (22)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1246792B1 (en) * | 2000-01-13 | 2014-08-13 | Emisphere Technologies, Inc. | Compounds and compositions for delivering active agents |
| DE10113446A1 (de) † | 2001-03-19 | 2002-09-26 | Schwarzkopf Gmbh Hans | Haarbehandlungsmittel mit Betainen |
| PT2108362E (pt) * | 2002-06-26 | 2013-07-11 | Medigene Ag | Preparação lipossomal catiónica que compreende um taxano |
| WO2004002468A1 (en) | 2002-06-26 | 2004-01-08 | Medigene Oncology Gmbh | Method of producing a cationic liposomal preparation comprising a lipophilic compound |
| ITRM20040288A1 (it) * | 2004-06-11 | 2004-09-11 | Sigma Tau Ind Farmaceuti | Uso della 7-t-butossiimminometilcamptotecina per la preparazione di un medicamento per il trattamento delle neoplasie dell'utero. |
| GT200500310A (es) * | 2004-11-19 | 2006-06-19 | Compuestos organicos | |
| US20080095834A1 (en) * | 2005-03-02 | 2008-04-24 | Volkmar Weissig | Mitochondriotropic Phospholipid Vesicles |
| SA06270147B1 (ar) | 2005-06-09 | 2009-12-22 | نوفارتيس ايه جي | عملية لتخليق 5-(مثيل–1h–إيميدازول–1-يل )–3-(ثلاثي فلـورو مثيل)–بنزامـين |
| TW200800195A (en) * | 2005-08-10 | 2008-01-01 | Novartis Ag | Organic compounds |
| MX2008001970A (es) * | 2005-08-10 | 2008-03-24 | Novartis Ag | Formulaciones para 7-(t-butoxi)iminometil camptotecin. |
| WO2008024389A2 (en) * | 2006-08-23 | 2008-02-28 | Biodelivery Sciences International, Inc. | Amphiphilic nucleotide cochleate compositions and methods of using the same |
| WO2008094959A1 (en) * | 2007-02-01 | 2008-08-07 | Sigma-Tau Industrie Farmaceutiche Riunite S.P.A. | Pharmaceutical composition comprising a campothecin derivative |
| WO2008101173A2 (en) * | 2007-02-16 | 2008-08-21 | Cornell University | Biodegradable compositions and materials |
| US20100204432A1 (en) | 2007-05-28 | 2010-08-12 | Husam Younes | Biodegradable elastomers prepared by the condensation of an organic di-, tri- or tetra-carboxylic acid and an organic diol |
| WO2008154484A1 (en) | 2007-06-08 | 2008-12-18 | Mannkind Corporation | Ire-1a inhibitors |
| AU2009223222A1 (en) | 2008-03-13 | 2009-09-17 | Perkinelmer Health Sciences, Inc. | Enzymatic substrates for multiple detection systems |
| EP2532649B1 (en) * | 2011-06-07 | 2015-04-08 | Incella GmbH | Amino lipids, their synthesis and uses thereof |
| WO2013032643A2 (en) * | 2011-08-31 | 2013-03-07 | Dicerna Pharmaceuticals, Inc. | Lipids capable of conformational change and their use in formulations to deliver therapeutic agents to cells |
| US20140274798A1 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-18 | University Of Washington Through Its Center For Commercialization | Compounds and methods relating to lysosomal storage disorders |
| US11376324B2 (en) | 2016-03-02 | 2022-07-05 | The Board Of Regents Of The University Of Texas System | Sting activating nanovaccine for immunotherapy |
| CN110997624B (zh) | 2017-06-06 | 2024-05-24 | 韦恩州立大学 | 与肉毒碱衍生的材料相关的方法和组合物 |
| CN115177608B (zh) * | 2022-07-26 | 2023-12-05 | 南方医科大学南方医院 | 长链酰基肉碱类化合物在制备预防和/或治疗肝癌的药物中的应用 |
Family Cites Families (22)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4866040A (en) * | 1986-01-06 | 1989-09-12 | Alfred Stracher | Aminocarnitine directed pharmaceutical agents |
| US5008288A (en) * | 1986-01-06 | 1991-04-16 | Alfred Stracher | Carnitine directed pharmaceutical agents |
| IT1230142B (it) * | 1989-05-03 | 1991-10-14 | Fidia Spa | Derivati della carnitina, processo per la loro preparazione e impiego in terapia umana |
| DE69119074T2 (de) * | 1990-06-15 | 1996-12-12 | University Of North Carolina At Chapel Hill, Chapel Hill, N.C. | Kovalente-ther lipidnukleosid-konjugate |
| IT1248321B (it) * | 1991-05-15 | 1995-01-05 | Sigma Tau Ind Farmaceuti | Uso di esteri di acil l-carnitine con l'acido gamma-idrossibutirrico per produrre composizioni farmaceutiche per il trattamento di epatopatie |
| IT1258370B (it) * | 1992-03-02 | 1996-02-26 | Sigma Tau Ind Farmaceuti | Esteri della l-carnitina e di acil l-carnitine dotati di attivita' miorilassante selettiva sull'apparato gastro-intestinale e composizioni farmaceutiche che li contengono. |
| US5972600A (en) * | 1992-04-03 | 1999-10-26 | The Regents Of The University Of California | Separation of active complexes |
| IT1263013B (it) * | 1992-10-20 | 1996-07-23 | Avantgarde Spa | Esteri della l-carnitina e di alcanoil l-carnitine con l'acido glicolico o suoi esteri e composizioni farmaceutiche contenenti tali per il trattamento di affezioni cutanee. |
| US5552156A (en) * | 1992-10-23 | 1996-09-03 | Ohio State University | Liposomal and micellular stabilization of camptothecin drugs |
| US5512671A (en) * | 1993-02-16 | 1996-04-30 | Wake Forest University | Ether lipid-nucleoside covalent conjugates |
| IT1261984B (it) * | 1993-06-22 | 1996-06-11 | Avantgarde Spa | Uso di esteri della l-carnitina o di acil l- carnitine con idrossiacidi per produrre composizioni farmaceutiche per il trattamento di affezioni cutanee. |
| DE69407292T2 (de) * | 1993-06-30 | 1998-06-25 | Genentech Inc | Verfahren zur herstellung von liposomen |
| IT1273987B (it) * | 1994-09-29 | 1997-07-14 | Sigma Tau Ind Farmaceuti | Uso di esteri ftalidilidenici della carnitina e di alcanoil carnitine per il trattamento dello shock endotossico |
| US6008202A (en) * | 1995-01-23 | 1999-12-28 | University Of Pittsburgh | Stable lipid-comprising drug delivery complexes and methods for their production |
| US6316652B1 (en) * | 1995-06-06 | 2001-11-13 | Kosta Steliou | Drug mitochondrial targeting agents |
| JP2001516329A (ja) * | 1995-06-07 | 2001-09-25 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア | ポリヌクレオチド複合体の安定化 |
| US5811406A (en) * | 1995-06-07 | 1998-09-22 | Regents Of The University Of California | Dry powder formulations of polynucleotide complexes |
| IT1283955B1 (it) * | 1996-03-20 | 1998-05-07 | Sigma Tau Ind Farmaceuti | Bis alcanoil esteri della carnitina ad attivita' antibatterica, antimicotica ed antiprotozoaria. |
| WO1998004720A1 (en) * | 1996-07-26 | 1998-02-05 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Method and reagents for genetic immunization |
| US6056973A (en) * | 1996-10-11 | 2000-05-02 | Sequus Pharmaceuticals, Inc. | Therapeutic liposome composition and method of preparation |
| US6071532A (en) * | 1996-10-15 | 2000-06-06 | Emory University | Synthesis of glycophospholipid and peptide-phospholipid conjugates and uses thereof |
| IT1299172B1 (it) * | 1998-05-06 | 2000-02-29 | Sigma Tau Ind Farmaceuti | Esteri perfluorurati di alcanoil l-carnitine utilizzabili quali lipidi cationici per l'immissione intracellulare di composti |
-
1999
- 1999-04-13 IT IT1999RM000220A patent/IT1306129B1/it active
-
2000
- 2000-04-11 KR KR1020017013018A patent/KR100684378B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2000-04-11 CA CA2370143A patent/CA2370143C/en not_active Expired - Fee Related
- 2000-04-11 EE EEP201100028A patent/EE05719B1/et not_active IP Right Cessation
- 2000-04-11 SK SK1431-2001A patent/SK287253B6/sk not_active IP Right Cessation
- 2000-04-11 RS RSP-2009/0448A patent/RS20090448A/sr unknown
- 2000-04-11 TR TR2001/02941T patent/TR200102941T2/xx unknown
- 2000-04-11 TR TR2002/02358T patent/TR200202358T2/xx unknown
- 2000-04-11 ES ES00922852T patent/ES2234591T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-04-11 EP EP04006990A patent/EP1435232A1/en not_active Withdrawn
- 2000-04-11 ME MEP-2008-240A patent/ME00113B/me unknown
- 2000-04-11 BR BRPI0009765-9B1A patent/BR0009765B1/pt not_active IP Right Cessation
- 2000-04-11 EA EA200300745A patent/EA006021B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2000-04-11 CZ CZ20013617A patent/CZ302628B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2000-04-11 ME MEP-240/08A patent/MEP24008A/xx unknown
- 2000-04-11 HU HU0201446A patent/HU229366B1/hu not_active IP Right Cessation
- 2000-04-11 SI SI200030596T patent/SI1183228T1/xx unknown
- 2000-04-11 PT PT03020049T patent/PT1426044E/pt unknown
- 2000-04-11 AT AT03020049T patent/ATE317257T1/de active
- 2000-04-11 CN CNB2005101295985A patent/CN100402017C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2000-04-11 CA CA2650202A patent/CA2650202C/en not_active Expired - Fee Related
- 2000-04-11 IL IL14576500A patent/IL145765A0/xx active IP Right Grant
- 2000-04-11 PT PT00922852T patent/PT1183228E/pt unknown
- 2000-04-11 SI SI200030799T patent/SI1426044T1/sl unknown
- 2000-04-11 CN CNB008070539A patent/CN1263730C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2000-04-11 BG BG109876A patent/BG65501B1/bg unknown
- 2000-04-11 AT AT00922852T patent/ATE286873T1/de active
- 2000-04-11 JP JP2000610820A patent/JP4703855B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2000-04-11 WO PCT/IT2000/000137 patent/WO2000061543A2/en active Application Filing
- 2000-04-11 EA EA200101076A patent/EA004459B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2000-04-11 NZ NZ528874A patent/NZ528874A/en not_active IP Right Cessation
- 2000-04-11 PL PL351112A patent/PL204418B1/pl unknown
- 2000-04-11 RS RS20090448A patent/RS52682B/en unknown
- 2000-04-11 MX MXPA01010359A patent/MXPA01010359A/es active IP Right Grant
- 2000-04-11 EE EEP200100518A patent/EE05514B1/xx not_active IP Right Cessation
- 2000-04-11 DK DK03020049T patent/DK1426044T3/da active
- 2000-04-11 RS YUP-702/01A patent/RS50911B/sr unknown
- 2000-04-11 AU AU43123/00A patent/AU776301B2/en not_active Ceased
- 2000-04-11 BR BRPI0017460A patent/BRPI0017460B1/pt not_active IP Right Cessation
- 2000-04-11 EP EP00922852A patent/EP1183228B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-04-11 DE DE60017388T patent/DE60017388T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-04-11 KR KR1020067021555A patent/KR100798499B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2000-04-11 NZ NZ515270A patent/NZ515270A/xx not_active IP Right Cessation
- 2000-04-11 PL PL386640A patent/PL211710B1/pl unknown
- 2000-04-11 EP EP03020049A patent/EP1426044B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-04-11 DE DE60025961T patent/DE60025961T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-04-11 SK SK5094-2008A patent/SK288246B6/sk not_active IP Right Cessation
- 2000-04-11 ES ES03020049T patent/ES2258688T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-04-11 DK DK00922852T patent/DK1183228T3/da active
- 2000-11-04 US US09/958,328 patent/US6797281B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2001
- 2001-09-28 IS IS6095A patent/IS2476B/is unknown
- 2001-10-03 BG BG105971A patent/BG65312B1/bg unknown
- 2001-10-03 BG BG109876A patent/BG109876A/en unknown
- 2001-10-04 IL IL145765A patent/IL145765A/en not_active IP Right Cessation
- 2001-10-12 HR HR20010740A patent/HRP20010740B1/xx not_active IP Right Cessation
- 2001-10-12 NO NO20014985A patent/NO327742B1/no not_active IP Right Cessation
- 2001-11-12 ZA ZA200109291A patent/ZA200109291B/en unknown
-
2002
- 2002-06-12 HK HK02104388.0A patent/HK1045145B/zh not_active IP Right Cessation
-
2003
- 2003-07-23 US US10/624,645 patent/US7629003B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2004
- 2004-01-28 US US10/765,091 patent/US20040186175A1/en not_active Abandoned
- 2004-10-29 AU AU2004224958A patent/AU2004224958B2/en not_active Ceased
-
2006
- 2006-05-01 IL IL175366A patent/IL175366A/en not_active IP Right Cessation
- 2006-12-14 HK HK06113747A patent/HK1092732A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2007
- 2007-03-27 US US11/727,526 patent/US7585519B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2007-08-23 IL IL185486A patent/IL185486A0/en not_active IP Right Cessation
-
2008
- 2008-03-07 IS IS8719A patent/IS2539B/is unknown
- 2008-12-30 NO NO20085413A patent/NO336949B1/no not_active IP Right Cessation
-
2010
- 2010-09-21 JP JP2010210849A patent/JP5420507B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP5420507B2 (ja) | 薬理活性のある化合物の細胞内送達のためのカチオン脂質として有用な、ｌ−カルニチンまたはアルカノイルｌ−カルニチンのエステル | |
| AU2007214359B2 (en) | Esters of L-carnitine or alkanoyl L-carnitines useful as cationic lipids for the intracellular delivery of pharmacologically active compounds | |
| KR20070023826A (ko) | 미용 활성 화합물의 세포 내 전달을 위한 양이온성지질로서 유용한 ｌ-카르니틴 또는 알카노일 ｌ-카르니틴의에스테르함유 리포솜이 | |
| TW202337498A (zh) | 用於ｒｎａ遞送之可離子化陽離子脂質 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20170411 |