NO336949B1 - Anvendelse av estere av L-karnitin eller alkanoyl L-karnitiner som kationiske lipider for intracellulær avlevering av farmakologisk aktive forbindelser - Google Patents
Anvendelse av estere av L-karnitin eller alkanoyl L-karnitiner som kationiske lipider for intracellulær avlevering av farmakologisk aktive forbindelser Download PDFInfo
- Publication number
- NO336949B1 NO336949B1 NO20085413A NO20085413A NO336949B1 NO 336949 B1 NO336949 B1 NO 336949B1 NO 20085413 A NO20085413 A NO 20085413A NO 20085413 A NO20085413 A NO 20085413A NO 336949 B1 NO336949 B1 NO 336949B1
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- acid
- use according
- group
- liposomes
- carnitine
- Prior art date
Links
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims abstract description 32
- -1 alkanoyl L-carnitines Chemical class 0.000 title claims abstract description 14
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 title abstract description 17
- PHIQHXFUZVPYII-ZCFIWIBFSA-N (R)-carnitine Chemical compound C[N+](C)(C)C[C@H](O)CC([O-])=O PHIQHXFUZVPYII-ZCFIWIBFSA-N 0.000 title abstract description 12
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 title abstract description 8
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 title abstract description 8
- 239000002502 liposome Substances 0.000 claims description 102
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims description 50
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 36
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 24
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 22
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 21
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 claims description 21
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 claims description 20
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 claims description 20
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 claims description 14
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 8
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 claims description 7
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 claims description 7
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 claims description 7
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 claims description 5
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims description 5
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 4
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 claims description 4
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 claims description 4
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 4
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- 229940009098 aspartate Drugs 0.000 claims description 4
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 4
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims description 4
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 claims description 4
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 4
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 4
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 4
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 claims description 4
- 229940095064 tartrate Drugs 0.000 claims description 4
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 claims description 3
- NDVRKEKNSBMTAX-BTVCFUMJSA-N (2r,3s,4r,5r)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O NDVRKEKNSBMTAX-BTVCFUMJSA-N 0.000 claims description 2
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N Methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M Trifluoroacetate Chemical compound [O-]C(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N alpha-glycerophosphate Natural products OCC(O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 230000001772 anti-angiogenic effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000000884 anti-protozoa Effects 0.000 claims description 2
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 claims description 2
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 claims description 2
- 229960000678 carnitine chloride Drugs 0.000 claims description 2
- XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N hydrogen iodide Chemical compound I XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000000400 lauroyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 2
- 125000001419 myristoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 2
- 125000001421 myristyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 2
- 125000001402 nonanoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 2
- 125000001400 nonyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 2
- 125000001117 oleyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])/C([H])=C([H])\C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 2
- PXQPEWDEAKTCGB-UHFFFAOYSA-N orotic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC(=O)NC(=O)N1 PXQPEWDEAKTCGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000001312 palmitoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 2
- 125000000913 palmityl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 2
- AWUCVROLDVIAJX-GSVOUGTGSA-N sn-glycerol 3-phosphate Chemical compound OC[C@@H](O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-GSVOUGTGSA-N 0.000 claims description 2
- 125000003696 stearoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 2
- 229940066528 trichloroacetate Drugs 0.000 claims description 2
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000002948 undecyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 2
- VSJKWCGYPAHWDS-FQEVSTJZSA-N camptothecin Chemical class C1=CC=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)[C@]5(O)CC)C4=NC2=C1 VSJKWCGYPAHWDS-FQEVSTJZSA-N 0.000 claims 2
- 239000004037 angiogenesis inhibitor Substances 0.000 claims 1
- 230000003217 anti-cancerogenic effect Effects 0.000 claims 1
- 210000000748 cardiovascular system Anatomy 0.000 claims 1
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 42
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 39
- DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N Tert-Butanol Chemical compound CC(C)(C)O DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 229940127093 camptothecin Drugs 0.000 description 27
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 27
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 25
- UIVFUQKYVFCEKJ-OPTOVBNMSA-N gimatecan Chemical compound C1=CC=C2C(\C=N\OC(C)(C)C)=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)[C@]5(O)CC)C4=NC2=C1 UIVFUQKYVFCEKJ-OPTOVBNMSA-N 0.000 description 24
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 23
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 19
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 17
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 17
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 16
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 239000000047 product Substances 0.000 description 14
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 14
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 13
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 12
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 11
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 10
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 description 10
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 9
- 238000004879 turbidimetry Methods 0.000 description 9
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 8
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 8
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 8
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 7
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 7
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 7
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 6
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 6
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 6
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 5
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 5
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 5
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 5
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 5
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N Dimethyl sulfoxide Chemical compound [2H]C([2H])([2H])S(=O)C([2H])([2H])[2H] IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N 0.000 description 4
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 4
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 4
- GKIRPKYJQBWNGO-OCEACIFDSA-N clomifene Chemical compound C1=CC(OCCN(CC)CC)=CC=C1C(\C=1C=CC=CC=1)=C(\Cl)C1=CC=CC=C1 GKIRPKYJQBWNGO-OCEACIFDSA-N 0.000 description 4
- 238000001476 gene delivery Methods 0.000 description 4
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 4
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 4
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 4
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 4
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 4
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IOOMXAQUNPWDLL-UHFFFAOYSA-N 2-[6-(diethylamino)-3-(diethyliminiumyl)-3h-xanthen-9-yl]-5-sulfobenzene-1-sulfonate Chemical compound C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1S([O-])(=O)=O IOOMXAQUNPWDLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 3
- 206010027458 Metastases to lung Diseases 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N Titanium Chemical compound [Ti] RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 3
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 3
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 3
- 229910052719 titanium Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000010936 titanium Substances 0.000 description 3
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 3
- 230000010415 tropism Effects 0.000 description 3
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 3
- SNKAWJBJQDLSFF-NVKMUCNASA-N 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC SNKAWJBJQDLSFF-NVKMUCNASA-N 0.000 description 2
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- XKIDBQHJMYSFPX-NRFANRHFSA-N 80758-83-4 Chemical compound C1=CC=C2C(C=O)=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)[C@]5(O)CC)C4=NC2=C1 XKIDBQHJMYSFPX-NRFANRHFSA-N 0.000 description 2
- 239000011547 Bouin solution Substances 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 2
- 101000610640 Homo sapiens U4/U6 small nuclear ribonucleoprotein Prp3 Proteins 0.000 description 2
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 2
- 101001110823 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) 60S ribosomal protein L6-A Proteins 0.000 description 2
- 101000712176 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) 60S ribosomal protein L6-B Proteins 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 2
- 102100040374 U4/U6 small nuclear ribonucleoprotein Prp3 Human genes 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 238000003818 flash chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 2
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 2
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 2
- 231100001231 less toxic Toxicity 0.000 description 2
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 2
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 2
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 2
- 239000007922 nasal spray Substances 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 2
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 2
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 2
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 2
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- AQHHHDLHHXJYJD-UHFFFAOYSA-N propranolol Chemical compound C1=CC=C2C(OCC(O)CNC(C)C)=CC=CC2=C1 AQHHHDLHHXJYJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000012430 stability testing Methods 0.000 description 2
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 2
- NYBWUHOMYZZKOR-UHFFFAOYSA-N tes-adt Chemical class C1=C2C(C#C[Si](CC)(CC)CC)=C(C=C3C(SC=C3)=C3)C3=C(C#C[Si](CC)(CC)CC)C2=CC2=C1SC=C2 NYBWUHOMYZZKOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 230000032895 transmembrane transport Effects 0.000 description 2
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 2
- 229940074410 trehalose Drugs 0.000 description 2
- UOCLXMDMGBRAIB-UHFFFAOYSA-N 1,1,1-trichloroethane Chemical compound CC(Cl)(Cl)Cl UOCLXMDMGBRAIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical group [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 201000003883 Cystic fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 1
- 108010091938 HLA-B7 Antigen Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 1
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 1
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 1
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 102000029749 Microtubule Human genes 0.000 description 1
- 108091022875 Microtubule Proteins 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 108700005077 Viral Genes Proteins 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 238000011481 absorbance measurement Methods 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000004004 anti-anginal agent Substances 0.000 description 1
- 230000003257 anti-anginal effect Effects 0.000 description 1
- 230000003276 anti-hypertensive effect Effects 0.000 description 1
- 239000003416 antiarrhythmic agent Substances 0.000 description 1
- 239000002220 antihypertensive agent Substances 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 229960004203 carnitine Drugs 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 230000000536 complexating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 description 1
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000548 hind-foot Anatomy 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 239000000644 isotonic solution Substances 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 238000002356 laser light scattering Methods 0.000 description 1
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 230000004758 lung carcinogenesis Effects 0.000 description 1
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 210000003632 microfilament Anatomy 0.000 description 1
- 210000004688 microtubule Anatomy 0.000 description 1
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 description 1
- 229940097496 nasal spray Drugs 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- HYDZPXNVHXJHBG-UHFFFAOYSA-N o-benzylhydroxylamine;hydron;chloride Chemical compound Cl.NOCC1=CC=CC=C1 HYDZPXNVHXJHBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZBDXGNXNXXPKJI-UHFFFAOYSA-N o-tert-butylhydroxylamine;hydrochloride Chemical compound Cl.CC(C)(C)ON ZBDXGNXNXXPKJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000668 oral spray Substances 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- OXNIZHLAWKMVMX-UHFFFAOYSA-N picric acid Chemical class OC1=C([N+]([O-])=O)C=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O OXNIZHLAWKMVMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 238000012809 post-inoculation Methods 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 229960003712 propranolol Drugs 0.000 description 1
- 230000009993 protective function Effects 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 210000003314 quadriceps muscle Anatomy 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 125000002456 taxol group Chemical group 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 231100000041 toxicology testing Toxicity 0.000 description 1
- 229940074409 trehalose dihydrate Drugs 0.000 description 1
- 239000002691 unilamellar liposome Substances 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C229/00—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
- C07C229/02—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton
- C07C229/04—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated
- C07C229/22—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated the carbon skeleton being further substituted by oxygen atoms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C229/00—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
- C07C229/02—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/21—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates
- A61K31/215—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids
- A61K31/22—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acyclic acids, e.g. pravastatin
- A61K31/225—Polycarboxylic acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/02—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by special physical form
- A61K8/14—Liposomes; Vesicles
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/40—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing nitrogen
- A61K8/44—Aminocarboxylic acids or derivatives thereof, e.g. aminocarboxylic acids containing sulfur; Salts; Esters or N-acylated derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
- A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers
- A61K9/1272—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers with substantial amounts of non-phosphatidyl, i.e. non-acylglycerophosphate, surfactants as bilayer-forming substances, e.g. cationic lipids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
- A61K9/1277—Processes for preparing; Proliposomes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
- A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Birds (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
Estere av L-karnitin og alkanoyl L-karnitiner er beskrevet som kan anvendes som kationiske lipider for den intracellulære leveringen av farmakologiske aktive forbindelser. Nye estere av L-karnitin og alkanoyl L-karnitiner med formel (I) er også beskrevet hvori R-gruppene er som definert i beskrivelsen.
Description
Foreliggende oppfinnelse angår anvendelse av kjente estere av L-karnitin og acyl L-karnitiner som kationiske lipider egnet for å favorisere den intracellulære leveringen av farmakologisk aktive forbindelser, lette deres transmembrantransport, eller for å fremme deres interaksjon med spesifikke cellemembranseter (reseptorer).
Hva som menes her med begrepet "intracellulær levering" er cellulær transfeksjon med polynukleotider eller plasmider av naturlig opprinnelse eller modifisert, utstyrt med terapeutisk aktivitet (genlevering) eller introduksjon av legemidler eller immunogeniske peptider inn i cellene.
Mange av de farmakologisk aktive substansene, slik som for eksempel polypeptider og proteiner eller legemidler generelt trenger å penetrere inn i cellene for å fremvise deres effekter ved å influere cellefunksjonene ved undercellulært eller molekylært nivå. For disse molekylene utgjør cellemembranen en selektivt impermeabel barriere. Cellemembranen gir i virkeligheten en beskyttende funksjon, som hindrer at potentielt toksiske substanser kommer inn, men også passering av forbindelser med terapeutisk aktivitet. Den komplekse sammensetningen av cellemembranen inkluderer fosfolipider, glykolipider og proteiner; hvor dens funksjon blir influert av cytoplasmatiske komponenter slike som Ca<++>og andre ioner, ATP, mikrofilamenter, mikrorør, enzymer og proteiner som binder Ca<-1-1->. Interaksjonen mellom de strukturelle og cytoplasmatiske komponentene til cellene og responsen til eksterne signaler er ansvarlig for selektiviteten vist ved og blant de forskjellige typer celler. Barriereeffekten til membranene kan overkommes ved å kombinere substanser i kompleks med lipidformuleringer som reproduserer sammensetningen til naturlig forekommende membranlipider. Disse lipidene er i stand til å sammensmelte med membranene og å frigi substansene kombinert med dem til cellene. Lipidkompleksene er i stand ikke bare til å lette intracellulær overføring ved hjelp av fusjon med membranene, men kan også redusere ladningsfrastøtingen mellom membranen og molekylet som skal penetrere inn i cellen. Amfipatiske lipider, slik som membranfosfolipider, danner lipidvesikler eller liposomer i de vandige systemene.
Liposomer er vesikler hvori et vandig volum er fullstendig innesperret av et eller flere membraner bestående av lipidmolekyler, vanligvis fosfolipider. Fosfolipider, som består av et hydrofilt hode og et par av karbonkjeder (hydrofob hale), er hovedkomponentene til biologiske membraner. I vandig løsning autoassosierer løsningen de hydrofobe halene og ekskluderer vann, mens de hydrofile hodene reagerer innbyrdes med mediet og danner spontant populasjoner av vesikler med forskjellige diametre. Lipidene er generelt zwitterioniske, nøytrale eller anioniske. Disse vesiklene kan anvendes som bærere for legemidler, små molekyler, proteiner, nukleotider og plasmider.
I det siste har kationiske liposomer, en klasse av positivt ladede vesikler fremstilt fra syntetiske lipider, blitt omfattende anvendt for overføring av genetisk materiale til cellene. Den negative ladningen til DNA kan reagere innbyrdes med de positive ladningene til de kationiske lipidene, som danner et stabilt DNA-liposomkompleks. Enkeltheten og mangfoldigheten til denne teknologien har gjort liposomer til en viktig vehikel for levering av gener for genterapi i humane subjekter. Pr. i dag inkluderer de fleste av vektorene som anvendes for genterapi og som er godkjent av NTH Recombinant Advisory Committee virale og syntetiske systemer.
Viral infeksjon omfatter en serie komplekse mekanismer for å være i stand til å angripe en spesifikk celle og bære DNAet inn i kjernen. Forklaringen på anvendelsen av virale vektorer ved genterapi er basert på muligheten å erstatte viralgenene med gener som koder for en terapeutisk funksjon uten å eliminere evnen til den virale partikkelen å infisere cellen. Begrensningene ved viral terapi har å gjøre med de virale elementene som kan være immunogene, cytopatiske og rekombinogene.
Det er store forventninger til anvendelsen av kationiske lipider for genterapi. Disse vektorene fremviser stort potentiale sammenlignet med de med biologisk opprinnelse, siden de er langt sikrere, mindre toksiske og også er i stand til å inkorporere gener med stor størrelse. Sammenlignet med biologisk-type vektorer har de imidlertid en lav intracellulær gentransskripsjonsytelse. Det bør derfor tas hensyn til at anvendelsen av slike transfeksjonssystemer imidlertid er i en begynnende forskningsfase. Kationiske lipider spiller en viktig rolle ved dannelse av DNA-lipidkomplekset, i cellekompleks-interaksjon, i fusjon med membranen, i DNA-frigivelse inne i cellen og i transkripsjon.
Det er viktige eksempler på in-vivo applikasjoner av kationiske liposomer. Det første kliniske forsøket på genterapi ble utført ved å introdusere en ekspresjonsvektor som inneholder det humane liposomkomplekserte HLA-B7 genet for behandling av melanomi. En annen viktig applikasjon angår behandling av pulmonær cystisk fibrose ved hjelp av administrasjon via den pulmonære ruten eller som en nasalspray av den liposom-komplekserte ekspresjonsvektoren SV-40C-FTR. Andre kliniske forsøk som omfatter anvendelsen av liposomer i behandling for kreft er for tiden under utvikling. Fire utgjørende elementer er generelt identifisert i strukturen til kationiske lipider: det positivt ladede kationiske hodet, spaceren, ankerlipidet og "linker"-bindingen.
Det kationiske hodet er ansvarlig for interaksjonene mellom de kationiske liposomene og DNA, mellom DNA-liposomkomplekset og cellemembranen og de andre komponentene til cellen. Den består av mono- eller polykationiske grupper (avhengig av antall ladninger) som kan være i varierende grad substituert.
Spaceren er den delen av molekylet som separerer det kationiske hodet fra den hydrofobe halen og er involvert i å sikre en optimal kontakt mellom det kationiske hodet og de negative ladningene til DNA-fosfatene.
Ankerlipidet er den ikke-polare hydrokarbondelen til molekylet og bestemmer de fysikalske egenskapene til dobbeltlipidlaget, slik som dets stivhet og utbyttingshastigheten med membranlipidene.
Hva som er ment med "linker-bindingen" er bindingen mellom hydrokarbonkj edene og resten av molekylet. Denne bindingen bestemmer den kjemiske stabiliteten og bionedbrytbarheten til de kationiske lipidene.
I forsknings- og patentlitteraturen er det fyldig referanser til fremstillingen og anvendelsen av liposomer; det er imidlertid svært få referanser som beskriver anvendelsen av karnitinderivater anvendbare for genlevering, mens for legemiddellevering er ingen dokumenter tilgjengelige som angår kjente teknikker for fremstilling av forbindelser som fjernt ligner de ifølge oppfinnelsen beskrevet heri.
Patentsøknad EP 0 279 887 beskriver anvendelsen av et derivat av karnitin, dvs. fosfatidylkarnitin, eventuelt i blandinger med andre fosfolipider og lipider (kolesterol, fosfatidylkolin, fosfatidylserin), for fremstilling av liposomer.
I eksempelet som er angitt som angår fremstillingen av liposomer blir liposomer av fosfatidylkarnitin fremstilt som inkorporerer propranolol, et legemiddel kjent for å være aktivt som et antihypertensivt, anti-angina og anti-arrytemisk middel. Karnitinderivatet anvendes her på grunn av den uttalte myokardiske tropismen til karnitin. Denne tropismen gjør det mulig å unngå at liposomene blir metabolisert av leveren, i stedet for å nå det ønskede målsetet.
Tilstedeværelsen av fosfatidylkarnitin gjør det også mulig å administrere liposomene oralt, siden de er resistente for intestinale lipaser.
IJ. Med. Chem. 1998 18. juni; 41(13):2207-15 er et antall estere av L-karnitin anvendelig for genlevering beskrevet, men de er ikke beskrevet eller foreslått som anvendelige midler for legemiddellevering.
WO 96/39193 beskriver nye mållegemiddelmidler som er målrettet for å komme inn i mitokondria via karnitin-acylkarnitin-traslokasesystemet, men foreslår ikke at de er anvendelige midler for fremstilling av liposomer.
EP 559 625 Bl beskriver et antall estere av L-karnitin og acyl L-karnitiner utstyrt med selektiv gastrointestinaltrakt muskel-relakserende aktivitet.
Som allerede nevnt, blir kationiske liposomer inngående anvendt for intracellulær levering av farmakologisk aktive forbindelser, som letter transmembrantransport eller fremmer deres interaksjon med spesifikke cellemembranseter (reseptorer).
Disse vektorene har stort potentiale sammenlignet med de med biologisk opprinnelse, siden de er langt sikrere og mindre toksiske.
Innenfor feltet legemiddellevering er det derfor et sterkt behov for stabile, reproduserbare setespesifikke systemer som også er aktive etter en passende tidsperiode.
Det er nå blitt funnet at en klasse kationiske lipider er svært aktive i å fremme den intracellulære leveringen av farmakologisk aktive forbindelser som innbefatter anvendelse av de kjente estrene av L-karnitin og acyl L-karnitiner med formel (II) for fremstilling av et medikament for transport av legemidler.
Disse forbindelsene er stabile og svært selektive fordi de er setespesifikke i å nå målorganet.
Denne karakteristikken gjør dem særlig anvendelige for transport av aktive forbindelser direkte til setet hvor de kan fremvise deres farmakologiske aktivitet.
Forbindelser med den generelle formel (II) er allerede kjent for en forskjellig anvendelse (EP 559 625 nevnt ovenfor).
Forbindelsene med formel (II) er estere av L-karnitin anvendelige for fremstilling av liposomer som fremviser potent aktivitet innen legemiddellevering og viser karakteristikker vedrørende stabilitet og selektivitet for å nå målorganet.
Disse forbindelsene har den generelle formelen (II):
hvor:
R3er en mettet, rett eller forgrenet acylkjede, med 4-26 karbonatomer;
R4er en mettet eller umettet, rett eller forgrenet, alkylkjede med 4-26 karbonatomer; og X" er anionet av en farmakologisk akseptabel syre.
Foretrukne eksempler på R3er nonanoyl, dodekanoyl, myristoyl, palmitoyl eller stearoyl.
Foretrukne eksempler på R4er nonyl, undecyl, tetradecyl, heksadecyl eller oleyl.
Eksempler på spesifikke forbindelser med formel (II), ifølge foreliggende oppfinnelse beskrevet heri er: - palmitoyl L-karnitinkloridundecylester (ST 983); - stearoyl L-karnitinkloridundecylester (ST 1055); - stearoyl L-karnitinkloridtetradecylester (ST 1351); - palmitoyl L-karnitinkloridtetradecylester (ST 1379); - myristoyl L-karnitinkloridtetradecylester (ST 1380);
- palmitoyl L-karnitinbromidheksadecylester (ST 1390).
Hva som forstås med et anion av en farmakologisk akseptabel syre er et hvilket som helst anion av en syre som ikke gir opphav til uønskede toksiske effekter eller bivirkninger.
Disse syrene er godt kjente for farmasøyter og eksperter innen farmasøytisk teknologi.
Eksempler på disse anionene, selv om listen ikke er fullstendig, er: klorid; bromid; jodid; aspartat; syreaspartat; citrat; syrecitrat; tartrat; syretartrat; fosfat; syrefosfat; fumarat; syrefumarat; glycerofosfat; glukosefosfat; laktat; maleat; syremaleat; mukat; orotat; oksalat; syreoksalat; sulfat; syresulfat; trikloracetat; trifluoracetat; metansulfonat; pamoat og syrepamoat.
Liposomene som inneholder forbindelsen med formel (II) fremstilles ved hjelp av vanlige teknikker, godt kjente for fagmannen; se for eksempel Allen T.M. Drugs 56, 747-56 (1998). Liposomene ifølge foreliggende oppfinnelse kan fremstilles også ved anvendelse av andre komponenter godt kjent innenfor liposomteknologi. Ifølge en utførelsesform av den foreliggende oppfinnelsen kan liposomene inneholde hjelperlipider, et begrep som er godt forstått innenfor teknikkens stand. Eksempler på hjelperlipider er kolesterol, 1-palmitoyl-2-oleoylfosfatidylkolin eller dioleylfosfatidylkolin.
Liposomene ifølge foreliggende oppfinnelse er egnet presentert som sammensetninger. I en utførelsesform som angår levering av farmasøytisk aktive forbindelser er sammensetningene å forstå som farmasøytiske sammensetninger, som eventuelt innbefatter farmasøytisk akseptable vehikler og/eller eksipienter.
Et antall forbindelser med formel (II), nemlig ST 1380, ST 1390 og ST 1392, er kjente og beskrevet i den ovenfor siterte J. Med. Chem 1998, 18. Juni; 41(13):2207-15, som anvendelige midler for fremstilling av liposomer for cellelær transfeksjon utstyrt med terapeutisk aktivitet, men har ikke tidligere blitt beskrevet som anvendelige midler for fremstilling av liposomer for legemiddellevering.
Fagmannen innenfor feltet farmasøytiske formuleringer er godt kjent med problemene som gjelder ved fremstilling av liposom-legemiddelkomplekser; i virkeligheten er det ikke mulig å si på forhånd om et liposom som er anvendelig for genlevering kan anvendes for legemiddellevering på grunn av det antallet problemer som må overkommes for å oppnå et liposom i stand til å kompleksere et legemiddel og som vil levere det foretrukket til organet hvor det skal utvise sin kurative aktivitet.
Forbindelser med formel (II), i form av liposomer, er anvendelige midler for levering av legemidler, slik som for eksempel antikreft, antiangiogenisk, antiviralt, antibakterielt, antifungalt, antiprotozoane midler, eller legemidler anvendelige for behandling av kardiovaskulære sykdommer eller immunogene peptider, og andre legemidler anvendelige ved behandling.
Nevnte liposomer kan eventuelt innbefatte hjelperlipider.
Liposomer som innbefatter forbindelser med formel (II) kan administreres oralt eller parenteralt, intravenøst, intramuskulært, subkutant, transdermalt, eller i form av nasal-eller munnsprayer.
EKSEMPEL 1
7-benzyloksyiminometylkamptotecin (CPT 172)
500 mg (1,33 mmol) av 7-formylkamptotecin løses i 100 ml etanol. 15 ml pyridin og 638 mg (4 mmol) O-benzylhydroksylaminhydroklorid tilsettes. Løsningen reflukseres i 5 timer. Løsemidlet vakuumfordampes og residuet oppnådd på denne måten renses ved flash-kromatografi på silikagel ved anvendelse av 4:6 blanding av heksan/etylacetat som eluent.
Utbytte: 65%
Smeltepunkt: 200-205°C dek.
Produktet som ble oppnådd består av en ca. 8:2 blanding av de to syn- og anti-isomerene (isomer A: Rf 0,32; isomer B, Rf 0,19, på Merck 60 F254 silikagel; eluent: heksan:etylacetat 3:7).
HPLC: analysene ble utført på et apparat utstyrt med en kvaternær pumpe (HP 1050) med en Rheodyne-injektor (20 [ il loop) og en diodetabelldetektor (HP 1050) kjørt med HPLC-ChemStation-program. Spektra-akvisisjon ble gjort fra 200 til 600 nm og kromatogrammene ble avlest ved 360 og 400 nm.
En Cl 8 omvendt-fasekolonne (Rainin Cl8; 25x0,4 cm, Varian) ble anvendt med en RP18 prekolonne. Analysen ble utført med en lineær elueringsgradient som startet fra acetonitril:vann 30:70 til acetonitril 100% i 20 minutter med en strømningshastighet på 1 ml/min. Retensjonstidene var 12,52 for isomer B og 14,48 min. for isomer A.
'H-NMR (300 MHz; DMSO-d6): 8: 0,88 (t, H3-18A+H3-18B), 1,87 (m, (H2-19A+H2-19B), 5,18 (s, H2-5B), 5,21 (8s, H2-Ph B), 5,30 (H2-Ph A), 5,40 (s, H2-5A), 5,45 (s, H2-17A+H2-17B), 6,53 (s, -OH A+-OH B), 7,3-7,6 (m, Ar A+ Ar B+H-14A+ H-14B), 7,75 (m, H-11A+H-11B), 7,85-7,95 (m, H-10A+H-10B), 7,98 (dd, H-12B), 8,18-8,27 (m, H-12A+H9-B), 8,45 (s, CH=N B), 8,59 (dd, H-9A), 9,38 (s, CH=N A).
Masse m/z 481 (M<*>100) 374 (30) 330 (70) 300 (30) 273 (20) 243 (20) 91 (34). ;EKSEMPEL 2 ;7-butoksyiminometylkamptotecin (CPT 184) ;400 mg (1,06 mmol) av 7-formylkamptotecin løses i 80 ml etanol. 12 ml pyridin og 400 mg (3,18 mmol) O-t-butylhydroksylaminhydroklorid tilsettes. Løsningen reflukseres i 4 timer. Løsemidlet blir vakuumfordampet og residuet oppnådd på denne måten blir renset ved flash-kromatografi på silikagel ved anvendelse av 4:6 blanding av heksan/etylacetat som eluent. ;322 mg (0,72 mmol) av gult fast stoff oppnås. ;Utbytte: 68% ;Smeltepunkt: 250°C dek. ;Det oppnådde produktet består av en ca. 8:2 blanding av de to syn- og anti-isomerene (isomer A: Rf 0,31; isomer B, Rf 0,24, på Merck 60 F254 silikagel; eluent: heksan:etylacetat 3:7). ;HPLC: analysene ble utført på et apparat utstyrt med en kvaternær pumpe (HP 1050) med en Rheodyne-injektor (20 ul loop) og en diodetabelldetektor (HP 1050) kjørt med HPLC-ChemStation-programmet. Spektra-akvisisjon ble gjort fra 200 til 600 nm og kromatogrammene ble avlest ved 360 og 400 nm. ;En Cl 8 omvendt-fasekolonne (Rainin Cl8; 25x0,4 cm, Varian) ble anvendt med en RP18 prekolonne. Analysen ble utført med en lineær elueringsgradient som startet fra acetonitril:vann 30:70 til acetonitril 100% i løpet av 20 minutter med en strømningshastighet på 1 ml/min. Retensjonstidene var: 12,92 for isomer B og 14,61 min. for isomer A. ;'H-NMR (300 MHz; DMSO-d6): 6: 0,88 (t, H3-18A+H3-18B), 1,30 (s, t-but.B), 1,47 (s, t-butA), 1,87 ( m, (H2-19A+H2-19B), 5,18 (s, H2-5B), 5,37 (H2-5 A), 5,42 (s, H2-17A+H2-17B), 6,54 (s, -OH A+-OH B), 7,35 (s, H-14A), 7,36 (s, H-14B), 7,69-7,83 (m, H-11A+H-11B), 7,85-7,98 (m, H-10A+H-10B), 8,07 (dd, H-9B), 8,16-8,27 (m, H-9A+H-12B), 840 (s, CH B), 8,62 (dd, H-12A), 9,31 (s, CH A). ;Masse m/z 448 (M* 28) 391 (40) 374 (100) 362 (40) 330 (34) 57 (17).
FREMSTILLING AV LIPOSOMER
De kjente forbindelsene kan anvendes for å fremstille multilamellære liposomer (MLV) og unilamellære liposomer (SUV), begge i form av tørre pulvere og som suspensjoner i vandige løsninger.
Forbindelsene anvendes for å fremstille liposomene ifølge følgende prosedyre. En egnet mengde av forbindelsen løses i kloroform; løsningen vakuumkonsentreres til tørrhet på en rotasjonsfordamper til en lipidfilm oppnås. Lipidfilmen tørkes under høyvakuum til siste gjenværende spor av løsemiddel er blitt eliminert og deretter løst i tert-butylalkohol eller med vann. Løsningen oppnådd på denne måten lyofiliseres og det oppnås et mykt, tørt pulver.
Pulverene hydratiseres med en egnet mengde vandig løsning, som gir liposomet til forbindelsen som anvendes, som deretter komplekseres med polynukleotidet eller med det ønskede legemidlet.
En annen fremgangsmåte for fremstilling av liposomer består av å absorbere en lipidfilm, som består av en forbindelse ifølge oppfinnelsen i et løsemiddel, på et egnet inert støttemateriale slik som sorbitol, mannitol eller andre farmakologisk akseptable karbohydrater. Blandingen vakuumtørkes og gir et fast stoff som enkelt og svært raskt blir hydratisert før anvendelse.
Preparatene i form av tørre pulvere gir fordelen av å være stabile i lange perioder, og er enkle å anvende.
Videre kan forbindelsene anvendes for å fremstille liposomer kompleksert med ønsket legemiddel, i form av tørre puvlere, ifølge følgende fremgangsmåte. Forbindelsen ifølge oppfinnelsen løses i tert-butylalkohol eller med vann; løsningen oppnådd på denne måten blandes med ønsket legemiddel og blandingen lyofiliseres og gir komplekset som kan defineres som proliposom-legemiddel, i form av et mykt, tørt pulver.
Pulveret således oppnådd (proliposomer) kan anvendes for fremstilling av farmasøytiske sammensetninger som kan administreres via aerosol, eller som alternativt, når de rekonstitusjoneres med vann, eller med en egnet buffer løsning, kan administreres parenteralt eller oralt.
Liposomene kompleksert med legemidler i fast form, kan også oppnås ved fremgangsmåten med å adsorbere lipidfilmen på et inert støttemateriale slik som sorbitol, mannitol eller andre karbohydrater ved hjelp av fremgangsmåten beskrevet ovenfor.
TESTING AV LIPOSOMDANNELSE
Liposomdannelsen ble testet ved hjelp av en kolorimetrisk metode, ved anvendelse av et vannløselig fargestoff, ifølge følgende fremgangsmåte. En vandig løsning av det vannløselige fargestoffet Arsenazo UJ ble oppnådd (molekylvekt = 776,37; 2,3 mg/ml).
Denne løsningen ble anvendt i stedet for vann for å hydratisere lipidfilmene som kommer fra den ovenfor nevnte fremstillingen.
En aliquot av suspensjonen som inneholder liposomet som innkapsler fargestoffet ble fortynnet 100 ganger med vann.
To ml av liposomsuspensjonen ble anvendt for å oppnå den første optiske tetthetsavlesningen ved 660 nm; hvor avlesningen ble oppnådd i relasjon til en lik prøve definert som en blindprøve. 200 ul av en CaCb-løsning (15 mg/ml; 100 mm) ble tilsatt til den første prøven, og den optiske tettheten ble målt ved 660 nm mot blindprøven, til hvilken 200 ul vann ble tilsatt. Absorbansverdien som ble oppnådd ble indikert som avlesning 2. Vi fortsatte ved å tilsette til prøven 100 ul av en løsning av Triton X-100
(5% v/v; 0,26% sluttkonsentrasjon) og til blindprøven 200 ul vann; den optiske tetthetsavlesningen ved 660 nm ga den optiske tetthetsverdien definert som avlesning 3. For å beregne prosentandel innkapslet fargestoff, ble følgende formel anvendt:
Prosentandelen innkapslet fargestoff gir et mål på liposomdannelsen og er gjennomsnittlig ca. 40%: liposomstørrelsessjekken ble utført ved anvendelse av laserlysspredning med et positivt utbytte.
EKSEMPLER PÅ FREMSTILLING AV LIPOSOMER
Fremstilling av liposomer av palmitoyl L-karnitinkloridundecylester (ST 983) i form av:
a) Lyofilserte pulvere
65 mg, 0,11 mmol palmitoyl L-karnitinkloridundecylester ble løst i 20 ml kloroform, i
en 100 ml kolbe.
Løsningen ble fordampet til en lipidfilm ble oppnådd som ble vakuumtørket i 3 timer. Det således oppnådde produktet ble løst i tert-butylalkohol og denne løsningen ble raskt avkjølt til -70°C med flytende nitrogen og lyofilisert i 24 timer.
Et svampaktig mykt hvitt faststoff ble oppnådd.
b) Adsorberte pulvere
143 mg, 0,231 mmol palmitoyl L-karnitinkloridundecylester ble løst i 10 ml kloroform.
Løsningen således oppnådd ble helt i små porsjoner over i en 100 ml kolbe som inneholdt 750 mg sorbitol. Ved slutten av tilsetningen av de forskjellige prosjonene kloroformløsning, ble kloroformen raskt fordampet.
Det faste stoffet således oppnådd ble vakuumtørket i 3 timer.
893 mg av et hvitt fast produkt ble oppnådd.
Før anvendelse ble produktet hydratisert raskt med et egnet volum vann for å oppnå en isoton løsning.
c) MLV-suspensjoner
65 mg, 0,11 mmol palmitoyl L-karnitinkloridundecylester ble løst i 20 ml kloroform, i
en 100 ml kolbe.
Løsningen således oppnådd ble fordampet til en lipidfilm ble oppnådd som deretter ble vakuumtørket i 3 timer.
Lipidfilmen ble hydratisert med 10 ml vann, ved 30°C, i 3 timer som ga en MLV-suspensjon. MLV-suspensjonen, passende fortynnet, ble kompleksert med et legemiddel og anvendt for biologiske undersøkelser.
d) SUV-suspensjoner
65 mg, 0,11 mmol palmitoyl L-karnitinkloridundecylester ble løst i 20 ml kloroform, i
en 100 ml kolbe.
Løsningen således oppnådd ble fordampet til en lipidfilm ble oppnådd som deretter ble vakuumtørket i 3 timer.
Lipidfilmen ble hydratisert med 10 ml vann ved 30°C i 3 timer, som ga en MLV-suspensjon. MLV-suspensjonen ble ekstrudert 10 ganger gjennom et polykarbonatfilter med en porestørrelse på 200 nm. Den unilamellære liposomsuspensjonen således oppnådd ble kompleksert med et legemiddel og anvendt for biologiske undersøkelser.
e) Testing av fysisk stabilitet av liposomer
Den fysiske stabiliteten av liposomsuspensjonen ble testet ved hjelp av turbidimetri i en
periode på 30 dager.
En absorbansmåling ved 600 nm i et visst tidsintervall ble utført for hver suspensjon som skulle testes. Den midlere absorbansverdien målt ved tid 0 holdt seg konstant for alle de testede formuleringene.
Molekylene ga samsvarende verdier i tidsperiodene som ble undersøkt.
MLV- og SUV-liposomsuspensj onene kan fremstilles ved å kombinere forbindelsene ifølge oppfinnelsen med hjelperlipider slike som kolesterol, l-palmitoyl-2-oleoyl fosfatidylkolin (POPC) eller dioleylfosfatidylkoliln (DOPE).
Forbindelsene kombineres med hjelperlipider for å oppnå liposomer med stablermembraner. Nedenfor, i kapittelet som beskriver fremstilling av liposomer, er et eksempel på en fremstilling gitt, hvori en forbindelse ifølge oppfinnelsen kombineres med et hjelperlipid slik som kolesterol eller POPC.
EKSEMPLER PÅ FREMSTILLING AV LIPOSOMER FOR LEGEMTDDELLEVERTNG
EKSEMPEL 3
Fremstilling av taksol-ST 983 ML\ -liposomer (1:40)
20 mg, 0,0234 mmol taksol og 556 mg, 0,9417 mmol ST 983 ble løst i 20 ml kloroform.
Løsningen ble konsentrert til en lipidfilm ble oppnådd på overflaten av glasskolben.
Etter eliminering av de siste spor av kloroform ved hjelp av en vakuumpumpe, ble 20 ml tert-butylalkohol tilsatt til lipidfilmen og løsningen således oppnådd ble underoppdelt i 19 fraksjoner som umiddelbart ble frosset til -70°C med flytende nitrogen og lyofilisert i 24 timer. Hver fraksjon av faststoff inneholdt taksol (1,05 mg) og ST 983 (29,2 mg).
For å oppnå den endelige liposomsuspensjonen, ble det lyofilserte produktet hydratisert ved anvendelse med vann (450 ul) eller annen saltvannsløsning, rørt i 10 minutter og stående i 30 minutter for å muliggjøre fullstendig utførelse av svelle (hydratiserings)-prosessen.
MLV-liposomer ble oppnådd.
Testing av fysisk stabilitet ved fremstillingen
Den fysikalske stabiliteten til preparatet ble testet ved hjelp av turbidimetri med avlesning av en TDC ("Time Drive Curve") ved 800 nm, ved 20°C, i 20 timer.
En konstant turbiditetstrend som er indikativ for stabilitet av preparatet ble avlest uten noe presipitasjonsfenomen.
Testing av kjemisk stabilitet av taksol ved fremstillingen
Den kjemiske stabiliteten til taksol ble testet med HPLC.
De kromatografiske betingelsene var som følger:
Kolonne: uBondapack C-18
Eluent: acetonitril:vann 70:30
Detektor UV-VIS: 227 nm
Strømningshastighet: 1 ml/min.
Retensjonstid: 4,5 min.
Taksolkonsentrasjonen, bestemt mot en standard, var 2,13 mg/ml.
Prosent innkapslet taksol var 98%.
EKSEMPEL 4
Fremstilling av taksol-ST 983 SUV-liposomer
20 mg, 0,0234 mmol taksol og 556 mg, 0,9417 mmol ST 983 ble løst i 20 ml kloroform.
Løsningen ble konsentrert til en lipidfilm ble oppnådd på overflaten av glasskolben.
Etter eliminering av siste spor av kloroform med en høyvakuumpumpe, ble 20 ml tert-butylalkohol tilsatt til lipidfilmen og løsningen således oppnådd ble underoppdelt i 19 fraksjoner som umiddelbart ble frosset til -70°C med flytende nitrogen og lyofilisert i 24 timer. Hver fraksjon faststoff inneholdt taksol (1,05 mg) og ST 983 (29,2 mg).
For å oppnå den endelige SUV-liposomsuspensjonen ble det lyofiliserte produktet, hydratisert med en PBS-løsning (1 ml), lydbehandlet i 20 minutter ved 0°C.
Filtrering ble deretter utført på et 400 nm filter for å eliminere spor av titan frigitt ved lydbehandlingsproben.
Testing av fysisk stabilitet av sammensetningen
Den fysiske stabiliteten til sammensetningen ble testet ved hjelp av turbidimetri med avlesning på en TDC ("Time Drive Curve") ved 800 nm, ved 20°C, i 20 timer.
En konstant turbiditetstrend, indikativ for stabilitet til preparatet, ble avlest uten noe presipitasjonsfenomen.
Testing av kjemisk stabilitet av taksol ved fremstillingen
Den kjemiske stabiliteten til taksol ble testet med HPLC.
De kromatografiske betingelsene var som følger:
Kolonne: uBondapack C-18
Eluent: acetonitril:vann 70:30
Detektor UV-VIS: 227 nm
Strømningshastighet: 1 ml/min.
Retensjonstid: 4,5 min.
HPLC-analyse av SUV-liposomsuspensjonen ga samme resultater som den korresponderende MLV-liposomsuspensjonen, og i dette tilfellet var også prosentandelen innkapslet taksol 98%.
HPLC-analyse gjentatt etter 24 timer avdekket ingen nye topper andre enn taksolgroppen som indikerer stabilitet for den aktive ingrediensen.
EKSEMPEL 5
Fremstilling av taksol-ST 983-kolesterolliposomer (1:15)
Disse typene liposomer ble fremstilt for å oppnå komplekser med stablermembraner.
6 mg, 0,0101 mmol taksol, 62,2 mg, 0,105 mmol ST 983 og 40 mg kolesterol ble løst i
10 ml kloroform.
Den således oppnådde løsningen ble konsentrert til en lipidfilm ble oppnådd på overflaten av glasskolben.
Etter eliminering av de siste sporene av kloroform med en høyvakuumpumpe, ble 6,3 ml tert-butylalkohol tilsatt til lipidfilmen og løsningen således oppnådd ble underoppdelt i 5 fraksjoner som umiddelbart ble frosset til -70°C med flytende nitrogen og lyofilisert i 24 timer. Hver fraksjon faststoff inneholdt taksol (1,2 mg), ST 983 (12,44 mg) og kolesterol (8 mg).
For å oppnå den endelige liposomsuspensjonen, ble det lyofiliserte produktet hydratisert ved anvendelse med vann (1000 ul) eller andre saltvannsløsninger, rørt i 10 minutter og stående i 30 minutter for å muliggjøre fullstendig svelle (hydratiserings)-prosess.
MLV-liposomer ble oppnådd.
Testing av fysisk stabilitet av sammensetningen
Den fysiske stabiliteten til preparatet ble testet ved hjelp av turbidimetri med avlesning på en TDC ("Time Drive Curve") ved 800 nm, ved 20°C, i 6 timer.
En konstant turbiditetstrend som er indikativ for stabiliteten til preparatet, ble avlest uten noe presipiteringsfenomen.
EKSEMPEL 6
Fremstilling av CPT 83-ST 983 MLV-liposomer (1:40)
6,3 mg, 0,0168 mmol CPT 83 (7-karbonitrilkampotecin, beskrevet i WO 97/31003) og 400 mg, 0,667 mmol ST 983 ble løst i 20 ml kloroform.
Løsningen ble konsentrert til en lipidfilm ble oppnådd på overflaten av glasskolben.
Etter eliminering av de siste sporene av kloroform ved hjelp av en vakuumpumpe, ble 26 ml tert-butylalkohol tilsatt til lipidfilmen, og løsningen således oppnådd ble underoppdelt i 12 fraksjoner som umiddelbart ble nedfrosset til -70°C med flytende nitrogen og lyofilisert i 24 timer. Hver fraksjon fast stoff inneholdt CPT 83 (0,525 mg) og ST 983 (33,33 mg).
For å oppnå den endelige liposomsuspensjonen ble det lyofiliserte produktet hydratisert ved anvendelse med vann (1000 ul) eller annen saltvannsløsning og rørt i 10 minutter.
MLV-liposomer ble oppnådd.
Testing av fysisk stabilitet av sammensetningen
Den fysiske stabiliteten til preparatet ble testet ved hjelp av turbidimetri med avlesning på en TDC ("Time Drive Curve") ved 800 nm, ved 20°C, i 20 timer.
En konstant turbiditetstrend som er indikativ for stabiliteten til preparatet, ble avlest uten noe presipiteringsfenomen.
Testing av kjemisk stabilitet av CPT 83 ved fremstillingen
Den kjemiske stabiliteten til CPT 83 ble testet med HPLC.
De kromatografiske betingelsene var som følger:
Kolonne: Supelcosil LC-ABZ
Eluent: fosfatbuffer 20 mm:metanol 40:60, pH = 7,3
Detektor UV-VIS: 360 nm
Strømningshastighet: 1 ml/min.
Retensjonstid: 4,033 min.
CTP 83-konsentrasjon, bestemt mot en standard, var 0,502 mg/ml.
Prosent innkapslet CPT 83 var 99%.
EKSEMPEL 7
Fremstilling av CPT 83-ST 983 SUV-liposomer (1:40)
6,3 mg, 0,0168 mmol CPT 83 og 400 mg, 0,667 mmol ST 983 ble løst i 20 ml kloroform.
Løsningen ble konsentrert til en lipidfilm ble oppnådd på overflaten av glasskolben.
Etter eliminering av de siste sporene av kloroform ved hjelp av en høyvakuumpumpe, ble 26 ml tert-butylalkohol tilsatt til lipidfilmen, og løsningen således oppnådd ble underoppdelt i 12 fraksjoner som umiddelbart ble frosset til -70°C med flytende nitrogen og lyofilisert i 24 timer. Hver fraksjon fast stoff inneholdt CPT 83 (0,525 mg) og ST 983 (33,33 mg).
For å oppnå den endelige SUV-liposomsuspensjonen ble det lyofiliserte produktet, hydratisert ved anvendelse med vann (1000 ul), lydbehandlet i 40 minutter ved 0°C.
Filtrering ble utført på et 400 nm filter for å eliminere spor av titan frigitt av den lydbehandlede proben.
Testing av kjemisk stabilitet av CPT 83 i sammensetningen Den kjemiske stabiliteten til CPT 83 ble testet ved HPLC.
De kromatografiske betingelsene var som følger:
Kolonne: Supelcosil LC-ABZ
Eluent: fosfatbuffer 20 mm:metanol 40:60, pH = 7,3
Detektor UV-VIS: 360 nm
Strømningshastighet: 1 ml/min.
Retensjonstid: 4,033 min.
CTP 83-konsentrasjon, bestemt mot en standard, var 0,3 mg/ml.
Prosent innkapslet CPT 83 var 59%.
HPLC-analyse gjentatt etter 24 timer avdekket ingen nye topper forskjellig fra CPT 83-toppen, som indikerer stabiliteten til forbindelsen.
Testing av fysisk stabilitet av sammensetningen
Den fysiske stabiliteten til preparatet ble testet ved hjelp av turbidimetri med avlesning på en TDC ("Time Drive Curve") ved 600 nm, ved 20°C, i 20 timer.
En konstant turbiditetstrend som er indikativ for stabiliteten til preparatet, ble avlest uten noe presipiteringsfenomen.
EKSEMPEL 8
Fremstilling av CPT 184-ST 983 MLV-liposomer (1:40)
7,29 mg, 0,0168 mmol CPT 184 og 400 mg, 0,667 mmol ST 983 ble løst i 20 ml kloroform.
Løsningen ble konsentrert til en lipidfilm ble oppnådd på overflaten av glasskolben.
Etter eliminering av de siste sporene av kloroform ved hjelp av en vakuumpumpe, ble 26 ml tert-butylalkohol tilsatt til lipidfilmen, og løsningen således oppnådd ble underoppdelt i 12 fraksjoner som umiddelbart ble frosset ned til -70°C med flytende nitrogen og lyofilisert i 24 timer. Hver fraksjon fast stoff inneholdt CPT 184 (0,607 mg) og ST 983 (33,33 mg).
For å oppnå den endelige liposomsuspensjonen ble det lyofiliserte produktet hydratisert ved anvendelse med vann (1000 ul) eller annen saltvannsløsning og rørt i 10 minutter.
MLV-liposomer ble oppnådd.
Testing av fysisk stabilitet av sammensetningen
Den fysiske stabiliteten til preparatet ble testet ved hjelp av turbidimetri med avlesning av en TDC ("Time Drive Curve") ved 600 nm, ved 20°C, i 20 timer.
En konstant turbiditetstrend som indikerer stabiliteten til preparatet, ble avlest, uten noe presipiteringsfenomen.
Testing av kjemisk stabilitet til CPT 184 i sammensetningen Den kjemiske stabiliteten til CPT 184 ble testet ved HPLC.
De kromatografiske betingelsene var som følger:
Kolonne: Supelcosil LC-ABZ
Eluent: fosfatbuffer 20 mm:metanol 40:60, pH = 7,3
Detektor UV-VIS: 360 nm
Strømningshastighet: 1 ml/min.
Retensjonstid: 25,5 min.
CTP 184-konsentrasjon, bestemt mot en standard, var 0,600 mg/ml.
Prosent innkapslet CPT 184 var 99%.
EKSEMPEL 9
Fremstilling av CPT 184-ST 983 SUV-liposomer (1:40)
7,29 mg, 0,0168 mmol CPT 184 og 400 mg, 0,667 mmol ST 983 ble løst i 20 ml kloroform.
Løsningen ble konsentrert til en lipidfilm ble oppnådd på overflaten av glasskolben.
Etter eliminering av de siste sporene av kloroform ved hjelp av en høyvakuumpumpe, ble 26 ml tert-butylalkohol tilsatt til lipidfilmen, og løsningen således oppnådd ble underoppdelt i 12 fraksjoner som umiddelbart ble frosset ned til -70°C med flytende nitrogen og lyofilisert i 24 timer. Hver fraksjon fast stoff inneholdt CPT 184 (0,607 mg) og ST 983 (33,33 mg).
For å oppnå den endelige SUV-liposomsuspensjonen ble det lyofiliserte produktet hydratisert med vann (1000 ul), lydbehandlet i 40 minutter ved 0°C.
Filtrering ble utført på et 400 nm filter for å eliminere spor av titan frigitt av den lydbehandlede proben.
Testing av kjemisk stabilitet av CPT 184 i sammensetningen Den kjemiske stabiliteten til CPT 184 ble testet ved HPLC.
De kromatografiske betingelsene var som følger:
Kolonne: Supelcosil LC-ABZ
Eluent: fosfatbuffer 20 mm:metanol 40:60, pH = 7,3
Detektor UV-VIS: 360 nm
Strømningshastighet: 1 ml/min.
Retensjonstid: 25,5 min.
CTP 184-konsentrasjon, bestemt mot en standard, var 0,36 mg/ml.
Prosent innkapslet CPT 184 var 70%.
HPLC-analyse gjentatt etter 24 timer avdekket ingen nye topper forskjellig fra CPT 184-toppen, som indikerer stabilitet til den aktive ingrediensen.
Testing av fysisk stabilitet av sammensetningen
Den fysiske stabiliteten til preparatet ble testet ved hjelp av turbidimetri med avlesning av en TDC ("Time Drive Curve") ved 600 nm, ved 20°C, i 20 timer.
En konstant turbiditetstrend som er indikativ for stabiliteten til preparatet, ble avlest uten noe presipiteringsfenomen.
I de følgende eksempler ble liposomer fremstilt ved anvendelse av hjelperlipider og/eller kryobeskyttende midler.
EKSEMPEL 10
Fremstilling av CPT 184-ST 983 liposomer
I en 2 1 kolbe ble 100 ml metylkloroform tilsatt til 20 mg CPT 184 og 600 mg ST 983 og blandingen ble forsiktig varmet til fullstendig oppløsning. Løsningen som ble oppnådd ble konsentrert på en rotavapor til en lipidfilm ble oppnådd, som ble ytterligere tørket i to timer på en høyvakuumpumpe. Lipidfilmen ble hydratisert med en laktoseløsning (6 g/300 ml vann) ved 45°C og holdt under røring i rotavaporen i 2 timer. Suspensjonen ble deretter lydbehandlet i 2 timer, hvor hver cykel tok en halv time. Deretter ble produktet filtrert gjennom et 200 nm filter og lyofilisert.
Testing av kjemisk stabilitet av CPT 184 i sammensetningen
Den kjemiske stabiliteten til CPT 184 ble fastslått ved HPLC. Produktet var stabilt i løpet av 24 timer med testing.
Testing av fysisk stabilitet av sammensetningen
Den fysiske stabiliteten til preparatet ble testet ved hjelp av turbidimetri. Produktet var stabilt gjennom 24-timers testen. Partikkelstørrelsen var også stabil (middelverdi på 100 nm).
EKSEMPEL 11
Fremstilling av CPT 184-ST 983 liposomer
For 1 ml liposomal formulering (POPC - l-palmitoyl-2-oleoyl fosfatidylkolin 5 mm; ST 983 1,25 mm; CPT 184 0,25 og trehalose 150 mm), ble den følgende fremgangsmåte anvendt: 0,11 mg, 0,25 umol CPT 184 ble løst i 250 ul etylacetat, 3,79 mg, 4,89 umol POPC ble løst i 100 ml etanol og 0,74 mg, 1,25 umol ST 983 ble løst i 100 ul etanol. De tre løsningene ble blandet sammen og virvlet. Løsningene ble fordampet med en rotavapor ved romtemperatur, 80 mbar. Lipidfilmen ble tørket i to timer i mørket. Lipidfilmen ble suspendert i en 1 ml av en 150 mm D(+)-trehalosedihydrat (Fluka, HPLC 99%) løsning, sterilisert gjennom et 0,22 mm filter og virvlet i to minutter. Suspensjonen ble ekstrudert 21 ganger gjennom 200 nm polykarbonatfilter. Den ekstruderte liposomsuspensjonen ble frosset i flytende nitrogen og lyofilisert i 2 netter. Et hvitt fast stoff ble oppnådd.
EKSEMPEL 12
Fremstilling av CPT 184-ST 983 liposomer
Samme fremgangsmåte som i eksempel 11 ble anvendt unntatt at trehalose 500 mm ble anvendt.
Antikreftaktivitet til ST 983 liposom-antikreftmiddelkompleks
Som det fremgår nedenfor, viser ST 983 liposomet fremherskende akkumulering i lungene. Denne karakteristikken av setespesifisitet favoriserer dens anvendelse i en murinmodell av pulmonar karsinogenese.
Antikreftmidlet anvendt i dette eksperimentet var taksol.
For å indusere tumoren in-vivo, mottok ikke-anestesibehandlede Balb/c mus injeksjoner av 3x10<5>celler murin pulmonar karsinom Ml 09 i 0,1 ml RPMI-1640 (Sigma) i quadriceps femoris til den høyre bakre poten.
Ti dager etter implantering av tumoren ble liposom-taksolkomplekset fortynnet med fosfatbufret saltvannsløsning (PBS, SIGMA, P-4417) og injisert intravenøst ved en konsentrasjon på 2,5 mg/ml av ST 983 og 75 ug/ml taksol.
Taksol (paclitaxel INDENA) anvendt som en kontroll ble løst i kremoforvehikel EL (BASF) ved en konsentrasjon på 20 mg/ml og lagret ved +4°C i de neste 24 timene, beskyttet mot lyset. Ved anvendelsen ble løsningen fortynnet med fosfatbufret saltvannsløsning (PBS, SIGMA) og injisert intravenøst i samme volum og konsentrasjonsbetingelser som beskrevet for taksol transportert av ST 983 liposomet.
Kremoforen ble fremstilt ved å fortynne 1:1 med etylalkohol.
Administrasjoner ble gitt i syv etterfølgende dager som startet fra dag 10 etter inokulering av tumoren. Dyrene ble holdt under observasjon opp til dag 17 post-inokulasjon og avlivet ved cervical dislokasjon, og deres lunger ble fjernet for bestemmelse av antallet metastaser. Beising av lungene for å dektere metastaser ble gjort ved å inkubere lungene i 10 dager i 5 ml Bouins løsning, som består av 71% mettet pikrinsyreløsning, 4,8% iseddiksyre (Merck) og 24% 10% formaldehyd (Fluka). Ved slutten av inkuberingsperioden i Bouins løsning ble antallet metastaser talt.
Sammenlignet med ubehandlede kontrollmus viste kremofortransportert taksol ingen redusert effekt på antallet lungemetastaser, selv om sistnevnte var mindre enn de til ubehandlede kontroller, mens taksol kompleksert med ST 983 liposom viste en signifikant reduksjon både i antall og størrelse lungemetastaser.
Statistisk analyse av dataene for antallet lungemetastaser ble gjort ved anvendelse av Mann-Whitney ikke-parametriske tester for uparede data.
Resultatene som ble oppnådd er presentert i tabell 1 nedenfor.
In-vitro cytotoksitetstester
Toksisitetsundersøkelsene ble gjort på HeLa og Ml09 celler i 96-brønns plater. Dagen etter avsetning på platene, ble cellene behandlet med molekylene som ble testet i de neste 48 timene. Cellene ble deretter vasket med PBS og utsatt for normale vekstbetingelser i 48 timer. Etter fjerning av vekstmediet ble cellene inkubert på is med 16% TCA, vasket 3 ganger i H20, behandlet i 30 minutter med sulforhodamin B (SRB) i 1% eddiksyre, vasket 3 ganger i 1% eddiksyre alene, inkubert i 20 minutter i TRIS 10 mm pH 10,5 og til slutt ble avlesninger gjort ved 540 nm.
Cytotoksisitetstester med CPT 83
In-vitro cytotoksisitetstester med CPT 83 ble utført for å evaluere cytotoksisiteten til antikreftmidlet kompleksert med liposomet, som en forhåndsindikasjon på effektiv aktivitet.
For å evaluere evnen liposomet har til å transportere CPT 83 in-vitro i Ml 09 celler, ble sulforhodamin B testen beskrevet ovenfor anvendt.
I tillegg ble cytotoksisiteten til CPT 83 løst i dimetylsulfoksid (DMSO) også evaluert sammenlignet med den for samme molekyl kompleksert med ST 983 liposomet.
Liposom-CPT 83 komplekset ble anvendt i cytotoksisitetsundersøkelsene ved konsentrasjonene indikert i tabellene 2.1, 2.2 og 2.3 nedenfor både i SUV- og MLV-konfigurasjoner. Liposom:CPT 83 molart forhold som ble anvendt var 40:1.
Midlere cytotoksisitetsverdier for ST 983-CPT 83 kompleksene i både i SUV- og MLV-konfigurasjonene gitt i tabellene 2.1, 2.2 og 2.3 nedenfor, indikerer at ST 983 liposomet er i stand til å transportere CPT 83 langt på samme måte som DMSO, som presenterer cytotoksisitetsnivåer i samme størrelsesorden.
Verdiene gitt i tabellen refererer til optiske tetthetsavlesninger ved 540 nm.
Verdiene gitt i tabellen refererer til optiske tetthetsavlesninger ved 540 nm.
Biologisk aktivitet til ST 983 liposom-CPT 184 kompleks
Den biologiske aktiviteten til liposomene i eksempel 10 (under navngitt liposom A) og i eksempel 12 (under navngitt liposom B) ble testet.
Toksisitet i friske mus
Liposomene A og B ble gitt oralt, intravenøst, sammenlignet med fritt CPT 184, ved en dose på 1,2 mg/kg ifølge q4dx4-skjemaet. De to liposomene hadde ikke signifikante effekter på vekten av kroppen, lungen, milten og nyrene. Liposom B, intravenøst, og liposom A, oralt som ble gitt påvirket tymusvekten tilsvarende fritt CPT 184. Intravenøst liposom A hadde kun minimal effekt. Haematologiske parametre viste ingen signifikante variasjoner etter 24 timer, med begge liposomene. Liposom A, gitt intravenøst ifølge qd5-skjemaet viste en toksisitet sammenlignbar med fritt CPT 184.
Lungetropisme av liposomer
Liposomer A og B viste fremherskende akkumulering i lungen. Liposomene ble gitt i. v. 1,2 mg/kg. Fritt CPÅ 184 ble gitt oralt 1,2 mg/kg i DMSO. Dyrene, friske mus, ble avlivet 24 timer etter siste administrasjon. Lungene ble fjernet fra den døde kroppen og frosset i flytende nitrogen. Idet de tinte, ble organene samlet og homogenisert i en 0,1% eddiksyre/acetonitril l:5-løsning. Homogenater ble oppdelt i tre aliquoter, hvor to av dem ble tilsatt CPT 184 for utvinningsberegning. De tre prøvene ble sentrifugert ved 16.000 g i 5 minutter. Surnatanter ble samlet og ekstrahert med diklormetan. Den organiske fasen ble tørket med en speedvac og residuet ble løst i acetonitril for å få mengden som korresponderer til et dyr i 50 ul for anvendelse ved HPLC. HPLC ble kjørt på en Waters Symmetry Cl8 3,5 um (4,6 x 7,5 mm). Et Merck-fluorimeter var detektoren ved 370 nm eksistasjon og 510 nm emisjon. Eluenten var vann/acetonitril 60:40, isokratisk. Prøvevolumet var 50 ul. CPT 184 utvunnet var ca. 70%. Både liposomer A og B hadde et akkumuleringsnivå for CPT 184 høyere enn fritt CPT 184 i
DMSO.
Claims (11)
1.
Anvendelse av liposomet som innbefatter en forbindelse med formel (II)
hvor: R3er en mettet, rett eller forgrenet acylkjede, med 4-26 karbonatomer; R4er en mettet eller umettet, rett eller forgrenet, alkylkjede med 4-26 karbonatomer; og X" er anionet av en farmakologisk akseptabel syre for fremstilling av et medikament for transport av legemidler.
2.
Anvendelse ifølge krav 1, hvori R3er foretrukket utvalgt fra gruppen som består av nonanoyl, dodekanoyl, myristoyl, palmitoyl eller stearoyl.
3.
Anvendelse ifølge krav 1, hvori R4er foretrukket utvalgt fra gruppen som består av nonyl, undecyl, tetradecyl, heksadecyl eller oleyl.
4.
Anvendelse ifølge krav 1, hvori X" er utvalgt fra gruppen som består av klorid; bromid; jodid; aspartat; syreaspartat; citrat; syrecitrat; tartrat; syretartrat; fosfat; syrefosfat; fumarat; syrefumarat; glycerofosfat; glukosefosfat; laktat; maleat; syremaleat; mukat; orotat; oksalat; syreoksalat; sulfat; syresulfat; trikloracetat; trifluoracetat; metansulfonat; pamoat og syrepamoat.
5.
Anvendelse ifølge krav 1-4, hvori forbindelsen er utvalgt fra gruppen som består av: - palmitoyl L-karnitinkloridundecylester; - stearoyl L-karnitinkloridundecylester; - stearoyl L-karnitinkloridtetradecylester; - palmitoyl L-karnitinkloridtetradecylester; - myristoyl L-karnitinkloridtetradecylester; - palmitoyl L-karnitinbromidheksadecylester.
6.
Anvendelse ifølge krav 1, hvor legemidlet er utvalgt fra gruppen som består av antikreft, antiangiogenske, antivirale, antibakterielle, antifungale, antiprotozoane midler, forbindelser aktive på det kardiovaskulære systemet eller immunogene peptider.
7.
Anvendelse ifølge krav 6, hvori nevnte legemiddel er et antikreft eller antiangiogent middel.
8.
Anvendelse ifølge krav 7, hvori nevnte antikreftmiddel er utvalgt fra gruppen som består av taksol eller et derivat av kamptotecin.
9.
Anvendelse ifølge krav 8, hvori nevnte derivat av kamptotecin er utvalgt fra gruppen som består av
7-benzyloksyiminometylkamptotecin eller - 7-butoksyiminometylkamptotecin.
10.
Anvendelse ifølge krav 1, hvori liposomet ytterligere inneholder hjelperlipider.
11.
Anvendelse ifølge krav 10, hvori nevnte hjelperlipider er utvalgt fra gruppen som består av kolesterol, l-palmitoyl-2-oleoyl fosfatidylkolin eller dioleylfosfatidylkolin.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
IT1999RM000220A IT1306129B1 (it) | 1999-04-13 | 1999-04-13 | Esteri della l-carnitina o di alcanoil l-carnitine utilizzabili comelipidi cationici per l'immissione intracellulare di composti |
PCT/IT2000/000137 WO2000061543A2 (en) | 1999-04-13 | 2000-04-11 | Esters of l-carnitine or alkanoyl l-carnitines |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
NO20085413L NO20085413L (no) | 2001-10-12 |
NO336949B1 true NO336949B1 (no) | 2015-11-30 |
Family
ID=11406659
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
NO20014985A NO327742B1 (no) | 1999-04-13 | 2001-10-12 | Estere av L-karnitin eller alkanoyl L-karnitiner, anvendelse derav for fremstilling av liposomer, de oppnadde liposomer samt anvendelse derav samt farmasoytiske og kosmetiske sammensetninger |
NO20085413A NO336949B1 (no) | 1999-04-13 | 2008-12-30 | Anvendelse av estere av L-karnitin eller alkanoyl L-karnitiner som kationiske lipider for intracellulær avlevering av farmakologisk aktive forbindelser |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
NO20014985A NO327742B1 (no) | 1999-04-13 | 2001-10-12 | Estere av L-karnitin eller alkanoyl L-karnitiner, anvendelse derav for fremstilling av liposomer, de oppnadde liposomer samt anvendelse derav samt farmasoytiske og kosmetiske sammensetninger |
Country Status (34)
Country | Link |
---|---|
US (4) | US6797281B1 (no) |
EP (3) | EP1435232A1 (no) |
JP (2) | JP4703855B2 (no) |
KR (2) | KR100798499B1 (no) |
CN (2) | CN100402017C (no) |
AT (2) | ATE317257T1 (no) |
AU (2) | AU776301B2 (no) |
BG (3) | BG65501B1 (no) |
BR (2) | BRPI0017460B1 (no) |
CA (2) | CA2650202C (no) |
CZ (1) | CZ302628B6 (no) |
DE (2) | DE60025961T2 (no) |
DK (2) | DK1426044T3 (no) |
EA (2) | EA004459B1 (no) |
EE (2) | EE05719B1 (no) |
ES (2) | ES2258688T3 (no) |
HK (2) | HK1045145B (no) |
HR (1) | HRP20010740B1 (no) |
HU (1) | HU229366B1 (no) |
IL (4) | IL145765A0 (no) |
IS (2) | IS2476B (no) |
IT (1) | IT1306129B1 (no) |
ME (2) | ME00113B (no) |
MX (1) | MXPA01010359A (no) |
NO (2) | NO327742B1 (no) |
NZ (2) | NZ528874A (no) |
PL (2) | PL211710B1 (no) |
PT (2) | PT1183228E (no) |
RS (3) | RS20090448A (no) |
SI (2) | SI1183228T1 (no) |
SK (2) | SK287253B6 (no) |
TR (2) | TR200202358T2 (no) |
WO (1) | WO2000061543A2 (no) |
ZA (1) | ZA200109291B (no) |
Families Citing this family (22)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP1246792B1 (en) * | 2000-01-13 | 2014-08-13 | Emisphere Technologies, Inc. | Compounds and compositions for delivering active agents |
DE10113446A1 (de) † | 2001-03-19 | 2002-09-26 | Schwarzkopf Gmbh Hans | Haarbehandlungsmittel mit Betainen |
DK2108362T3 (da) * | 2002-06-26 | 2013-09-02 | Medigene Ag | Kationisk liposomal-fremstilling omfattende en taxan |
EP2108362B1 (en) * | 2002-06-26 | 2013-05-29 | MediGene AG | A cationic liposomal preparation comprising a taxane |
ITRM20040288A1 (it) * | 2004-06-11 | 2004-09-11 | Sigma Tau Ind Farmaceuti | Uso della 7-t-butossiimminometilcamptotecina per la preparazione di un medicamento per il trattamento delle neoplasie dell'utero. |
GT200500310A (es) * | 2004-11-19 | 2006-06-19 | Compuestos organicos | |
US20080095834A1 (en) * | 2005-03-02 | 2008-04-24 | Volkmar Weissig | Mitochondriotropic Phospholipid Vesicles |
SA06270147B1 (ar) | 2005-06-09 | 2009-12-22 | نوفارتيس ايه جي | عملية لتخليق 5-(مثيل–1h–إيميدازول–1-يل )–3-(ثلاثي فلـورو مثيل)–بنزامـين |
CN101287448A (zh) * | 2005-08-10 | 2008-10-15 | 诺瓦提斯公司 | 拓扑异构酶i的抑制剂7-叔丁氧基亚氨基甲基喜树碱的微粒组合物 |
WO2007017513A2 (en) * | 2005-08-10 | 2007-02-15 | Novartis Ag | Formulations for 7-(t-butoxy)iminomethyl camptothecin |
US20100178325A1 (en) * | 2006-08-23 | 2010-07-15 | Biodelivery Sciences International, Inc. | Amphiphilic nucleotide cochleate compositions and methods of using the same |
AU2008210511A1 (en) * | 2007-02-01 | 2008-08-07 | Sigma-Tau Industrie Farmaceutiche Riunite S.P.A. | Pharmaceutical composition comprising a campothecin derivative |
US20100104625A1 (en) * | 2007-02-16 | 2010-04-29 | Cornell University | Biodegradable compositions and materials |
US20100204432A1 (en) | 2007-05-28 | 2010-08-12 | Husam Younes | Biodegradable elastomers prepared by the condensation of an organic di-, tri- or tetra-carboxylic acid and an organic diol |
ES2569660T3 (es) | 2007-06-08 | 2016-05-12 | Mannkind Corporation | Inhibidores de la IRE-1alfa |
EP2706121A1 (en) | 2008-03-13 | 2014-03-12 | PerkinElmer Health Sciences, Inc. | Enzymatic substrate building blocks for multiple detection systems |
EP2532649B1 (en) * | 2011-06-07 | 2015-04-08 | Incella GmbH | Amino lipids, their synthesis and uses thereof |
WO2013032643A2 (en) * | 2011-08-31 | 2013-03-07 | Dicerna Pharmaceuticals, Inc. | Lipids capable of conformational change and their use in formulations to deliver therapeutic agents to cells |
CA2906839A1 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-18 | Perkinelmer Health Sciences, Inc. | Compounds and methods relating to testing for lysosomal storage disorders |
MX2018010586A (es) | 2016-03-02 | 2019-03-28 | Univ Texas | Nanovacuna de activacion de "sting" para inmunoterapia. |
EP3634942A4 (en) | 2017-06-06 | 2021-03-10 | Wayne State University | PROCESSES AND COMPOSITIONS ASSOCIATED WITH MATERIALS DERIVED FROM CARNITINE |
CN115177608B (zh) * | 2022-07-26 | 2023-12-05 | 南方医科大学南方医院 | 长链酰基肉碱类化合物在制备预防和/或治疗肝癌的药物中的应用 |
Family Cites Families (22)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5008288A (en) * | 1986-01-06 | 1991-04-16 | Alfred Stracher | Carnitine directed pharmaceutical agents |
US4866040A (en) * | 1986-01-06 | 1989-09-12 | Alfred Stracher | Aminocarnitine directed pharmaceutical agents |
IT1230142B (it) * | 1989-05-03 | 1991-10-14 | Fidia Spa | Derivati della carnitina, processo per la loro preparazione e impiego in terapia umana |
DE69119074T2 (de) * | 1990-06-15 | 1996-12-12 | University Of North Carolina At Chapel Hill, Chapel Hill, N.C. | Kovalente-ther lipidnukleosid-konjugate |
IT1248321B (it) * | 1991-05-15 | 1995-01-05 | Sigma Tau Ind Farmaceuti | Uso di esteri di acil l-carnitine con l'acido gamma-idrossibutirrico per produrre composizioni farmaceutiche per il trattamento di epatopatie |
IT1258370B (it) * | 1992-03-02 | 1996-02-26 | Sigma Tau Ind Farmaceuti | Esteri della l-carnitina e di acil l-carnitine dotati di attivita' miorilassante selettiva sull'apparato gastro-intestinale e composizioni farmaceutiche che li contengono. |
US5972600A (en) * | 1992-04-03 | 1999-10-26 | The Regents Of The University Of California | Separation of active complexes |
IT1263013B (it) * | 1992-10-20 | 1996-07-23 | Avantgarde Spa | Esteri della l-carnitina e di alcanoil l-carnitine con l'acido glicolico o suoi esteri e composizioni farmaceutiche contenenti tali per il trattamento di affezioni cutanee. |
US5552156A (en) * | 1992-10-23 | 1996-09-03 | Ohio State University | Liposomal and micellular stabilization of camptothecin drugs |
US5512671A (en) * | 1993-02-16 | 1996-04-30 | Wake Forest University | Ether lipid-nucleoside covalent conjugates |
IT1261984B (it) * | 1993-06-22 | 1996-06-11 | Avantgarde Spa | Uso di esteri della l-carnitina o di acil l- carnitine con idrossiacidi per produrre composizioni farmaceutiche per il trattamento di affezioni cutanee. |
EP0706374B1 (en) * | 1993-06-30 | 1997-12-10 | Genentech, Inc. | Method for preparing liposomes |
IT1273987B (it) * | 1994-09-29 | 1997-07-14 | Sigma Tau Ind Farmaceuti | Uso di esteri ftalidilidenici della carnitina e di alcanoil carnitine per il trattamento dello shock endotossico |
US6008202A (en) * | 1995-01-23 | 1999-12-28 | University Of Pittsburgh | Stable lipid-comprising drug delivery complexes and methods for their production |
US6316652B1 (en) * | 1995-06-06 | 2001-11-13 | Kosta Steliou | Drug mitochondrial targeting agents |
AU707734B2 (en) * | 1995-06-07 | 1999-07-15 | Regents Of The University Of California, The | Stabilization of polynucleotide complexes |
US5811406A (en) * | 1995-06-07 | 1998-09-22 | Regents Of The University Of California | Dry powder formulations of polynucleotide complexes |
IT1283955B1 (it) * | 1996-03-20 | 1998-05-07 | Sigma Tau Ind Farmaceuti | Bis alcanoil esteri della carnitina ad attivita' antibatterica, antimicotica ed antiprotozoaria. |
WO1998004720A1 (en) * | 1996-07-26 | 1998-02-05 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Method and reagents for genetic immunization |
US6056973A (en) * | 1996-10-11 | 2000-05-02 | Sequus Pharmaceuticals, Inc. | Therapeutic liposome composition and method of preparation |
US6071532A (en) * | 1996-10-15 | 2000-06-06 | Emory University | Synthesis of glycophospholipid and peptide-phospholipid conjugates and uses thereof |
IT1299172B1 (it) * | 1998-05-06 | 2000-02-29 | Sigma Tau Ind Farmaceuti | Esteri perfluorurati di alcanoil l-carnitine utilizzabili quali lipidi cationici per l'immissione intracellulare di composti |
-
1999
- 1999-04-13 IT IT1999RM000220A patent/IT1306129B1/it active
-
2000
- 2000-04-11 ES ES03020049T patent/ES2258688T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-04-11 IL IL14576500A patent/IL145765A0/xx active IP Right Grant
- 2000-04-11 EP EP04006990A patent/EP1435232A1/en not_active Withdrawn
- 2000-04-11 RS RSP-2009/0448A patent/RS20090448A/sr unknown
- 2000-04-11 DK DK03020049T patent/DK1426044T3/da active
- 2000-04-11 SK SK1431-2001A patent/SK287253B6/sk not_active IP Right Cessation
- 2000-04-11 AU AU43123/00A patent/AU776301B2/en not_active Ceased
- 2000-04-11 SI SI200030596T patent/SI1183228T1/xx unknown
- 2000-04-11 KR KR1020067021555A patent/KR100798499B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2000-04-11 TR TR2002/02358T patent/TR200202358T2/xx unknown
- 2000-04-11 EE EEP201100028A patent/EE05719B1/et not_active IP Right Cessation
- 2000-04-11 CN CNB2005101295985A patent/CN100402017C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2000-04-11 SK SK5094-2008A patent/SK288246B6/sk not_active IP Right Cessation
- 2000-04-11 NZ NZ528874A patent/NZ528874A/en not_active IP Right Cessation
- 2000-04-11 PL PL386640A patent/PL211710B1/pl unknown
- 2000-04-11 ME MEP-2008-240A patent/ME00113B/me unknown
- 2000-04-11 EP EP00922852A patent/EP1183228B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-04-11 PT PT00922852T patent/PT1183228E/pt unknown
- 2000-04-11 TR TR2001/02941T patent/TR200102941T2/xx unknown
- 2000-04-11 RS YUP-702/01A patent/RS50911B/sr unknown
- 2000-04-11 CZ CZ20013617A patent/CZ302628B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2000-04-11 EA EA200101076A patent/EA004459B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2000-04-11 EE EEP200100518A patent/EE05514B1/xx not_active IP Right Cessation
- 2000-04-11 DK DK00922852T patent/DK1183228T3/da active
- 2000-04-11 KR KR1020017013018A patent/KR100684378B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2000-04-11 MX MXPA01010359A patent/MXPA01010359A/es active IP Right Grant
- 2000-04-11 DE DE60025961T patent/DE60025961T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-04-11 JP JP2000610820A patent/JP4703855B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2000-04-11 NZ NZ515270A patent/NZ515270A/xx not_active IP Right Cessation
- 2000-04-11 ES ES00922852T patent/ES2234591T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-04-11 RS RS20090448A patent/RS52682B/en unknown
- 2000-04-11 CN CNB008070539A patent/CN1263730C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2000-04-11 SI SI200030799T patent/SI1426044T1/sl unknown
- 2000-04-11 BR BRPI0017460A patent/BRPI0017460B1/pt not_active IP Right Cessation
- 2000-04-11 CA CA2650202A patent/CA2650202C/en not_active Expired - Fee Related
- 2000-04-11 DE DE60017388T patent/DE60017388T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-04-11 PL PL351112A patent/PL204418B1/pl unknown
- 2000-04-11 PT PT03020049T patent/PT1426044E/pt unknown
- 2000-04-11 BR BRPI0009765-9B1A patent/BR0009765B1/pt not_active IP Right Cessation
- 2000-04-11 AT AT03020049T patent/ATE317257T1/de active
- 2000-04-11 BG BG109876A patent/BG65501B1/bg unknown
- 2000-04-11 AT AT00922852T patent/ATE286873T1/de active
- 2000-04-11 EP EP03020049A patent/EP1426044B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-04-11 WO PCT/IT2000/000137 patent/WO2000061543A2/en active Application Filing
- 2000-04-11 CA CA2370143A patent/CA2370143C/en not_active Expired - Fee Related
- 2000-04-11 HU HU0201446A patent/HU229366B1/hu not_active IP Right Cessation
- 2000-04-11 ME MEP-240/08A patent/MEP24008A/xx unknown
- 2000-04-11 EA EA200300745A patent/EA006021B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2000-11-04 US US09/958,328 patent/US6797281B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2001
- 2001-09-28 IS IS6095A patent/IS2476B/is unknown
- 2001-10-03 BG BG109876A patent/BG109876A/en unknown
- 2001-10-03 BG BG105971A patent/BG65312B1/bg unknown
- 2001-10-04 IL IL145765A patent/IL145765A/en not_active IP Right Cessation
- 2001-10-12 HR HR20010740A patent/HRP20010740B1/xx not_active IP Right Cessation
- 2001-10-12 NO NO20014985A patent/NO327742B1/no not_active IP Right Cessation
- 2001-11-12 ZA ZA200109291A patent/ZA200109291B/en unknown
-
2002
- 2002-06-12 HK HK02104388.0A patent/HK1045145B/zh not_active IP Right Cessation
-
2003
- 2003-07-23 US US10/624,645 patent/US7629003B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2004
- 2004-01-28 US US10/765,091 patent/US20040186175A1/en not_active Abandoned
- 2004-10-29 AU AU2004224958A patent/AU2004224958B2/en not_active Ceased
-
2006
- 2006-05-01 IL IL175366A patent/IL175366A/en not_active IP Right Cessation
- 2006-12-14 HK HK06113747A patent/HK1092732A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2007
- 2007-03-27 US US11/727,526 patent/US7585519B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2007-08-23 IL IL185486A patent/IL185486A0/en not_active IP Right Cessation
-
2008
- 2008-03-07 IS IS8719A patent/IS2539B/is unknown
- 2008-12-30 NO NO20085413A patent/NO336949B1/no not_active IP Right Cessation
-
2010
- 2010-09-21 JP JP2010210849A patent/JP5420507B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
NO336949B1 (no) | Anvendelse av estere av L-karnitin eller alkanoyl L-karnitiner som kationiske lipider for intracellulær avlevering av farmakologisk aktive forbindelser | |
US9233971B2 (en) | Lipomacrocycles and uses thereof | |
AU2007214359B2 (en) | Esters of L-carnitine or alkanoyl L-carnitines useful as cationic lipids for the intracellular delivery of pharmacologically active compounds | |
KR20070023826A (ko) | 미용 활성 화합물의 세포 내 전달을 위한 양이온성지질로서 유용한 l-카르니틴 또는 알카노일 l-카르니틴의에스테르함유 리포솜이 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM1K | Lapsed by not paying the annual fees |