NO336949B1 - Anvendelse av estere av L-karnitin eller alkanoyl L-karnitiner som kationiske lipider for intracellulær avlevering av farmakologisk aktive forbindelser - Google Patents

Anvendelse av estere av L-karnitin eller alkanoyl L-karnitiner som kationiske lipider for intracellulær avlevering av farmakologisk aktive forbindelser Download PDF

Info

Publication number
NO336949B1
NO336949B1 NO20085413A NO20085413A NO336949B1 NO 336949 B1 NO336949 B1 NO 336949B1 NO 20085413 A NO20085413 A NO 20085413A NO 20085413 A NO20085413 A NO 20085413A NO 336949 B1 NO336949 B1 NO 336949B1
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
acid
use according
group
liposomes
carnitine
Prior art date
Application number
NO20085413A
Other languages
English (en)
Other versions
NO20085413L (no
Inventor
Claudio Pisano
Mari Ornella Tinti
MOSè SANTANIELLO
Luciana Critelli
Giovanni Salvatori
Original Assignee
Sigma Tau Ind Farmaceuti
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Publication of NO20085413L publication Critical patent/NO20085413L/no
Application filed by Sigma Tau Ind Farmaceuti filed Critical Sigma Tau Ind Farmaceuti
Publication of NO336949B1 publication Critical patent/NO336949B1/no

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07CACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C229/00Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C229/02Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton
    • C07C229/04Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated
    • C07C229/22Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated the carbon skeleton being further substituted by oxygen atoms
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07CACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C229/00Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C229/02Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/21Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates
    • A61K31/215Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids
    • A61K31/22Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acyclic acids, e.g. pravastatin
    • A61K31/225Polycarboxylic acids
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/02Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by special physical form
    • A61K8/14Liposomes; Vesicles
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/40Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing nitrogen
    • A61K8/44Aminocarboxylic acids or derivatives thereof, e.g. aminocarboxylic acids containing sulfur; Salts; Esters or N-acylated derivatives thereof
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127Liposomes
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127Liposomes
    • A61K9/1271Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers
    • A61K9/1272Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers with substantial amounts of non-phosphatidyl, i.e. non-acylglycerophosphate, surfactants as bilayer-forming substances, e.g. cationic lipids
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127Liposomes
    • A61K9/1277Processes for preparing; Proliposomes
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00Antineoplastic agents
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00Drugs for immunological or allergic disorders
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02Immunomodulators
    • A61P37/04Immunostimulants
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61QSPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00Preparations for care of the skin
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/19Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)

Abstract

Estere av L-karnitin og alkanoyl L-karnitiner er beskrevet som kan anvendes som kationiske lipider for den intracellulære leveringen av farmakologiske aktive forbindelser. Nye estere av L-karnitin og alkanoyl L-karnitiner med formel (I) er også beskrevet hvori R-gruppene er som definert i beskrivelsen.

Description

Foreliggende oppfinnelse angår anvendelse av kjente estere av L-karnitin og acyl L-karnitiner som kationiske lipider egnet for å favorisere den intracellulære leveringen av farmakologisk aktive forbindelser, lette deres transmembrantransport, eller for å fremme deres interaksjon med spesifikke cellemembranseter (reseptorer).
Hva som menes her med begrepet "intracellulær levering" er cellulær transfeksjon med polynukleotider eller plasmider av naturlig opprinnelse eller modifisert, utstyrt med terapeutisk aktivitet (genlevering) eller introduksjon av legemidler eller immunogeniske peptider inn i cellene.
Mange av de farmakologisk aktive substansene, slik som for eksempel polypeptider og proteiner eller legemidler generelt trenger å penetrere inn i cellene for å fremvise deres effekter ved å influere cellefunksjonene ved undercellulært eller molekylært nivå. For disse molekylene utgjør cellemembranen en selektivt impermeabel barriere. Cellemembranen gir i virkeligheten en beskyttende funksjon, som hindrer at potentielt toksiske substanser kommer inn, men også passering av forbindelser med terapeutisk aktivitet. Den komplekse sammensetningen av cellemembranen inkluderer fosfolipider, glykolipider og proteiner; hvor dens funksjon blir influert av cytoplasmatiske komponenter slike som Ca<++>og andre ioner, ATP, mikrofilamenter, mikrorør, enzymer og proteiner som binder Ca<-1-1->. Interaksjonen mellom de strukturelle og cytoplasmatiske komponentene til cellene og responsen til eksterne signaler er ansvarlig for selektiviteten vist ved og blant de forskjellige typer celler. Barriereeffekten til membranene kan overkommes ved å kombinere substanser i kompleks med lipidformuleringer som reproduserer sammensetningen til naturlig forekommende membranlipider. Disse lipidene er i stand til å sammensmelte med membranene og å frigi substansene kombinert med dem til cellene. Lipidkompleksene er i stand ikke bare til å lette intracellulær overføring ved hjelp av fusjon med membranene, men kan også redusere ladningsfrastøtingen mellom membranen og molekylet som skal penetrere inn i cellen. Amfipatiske lipider, slik som membranfosfolipider, danner lipidvesikler eller liposomer i de vandige systemene.
Liposomer er vesikler hvori et vandig volum er fullstendig innesperret av et eller flere membraner bestående av lipidmolekyler, vanligvis fosfolipider. Fosfolipider, som består av et hydrofilt hode og et par av karbonkjeder (hydrofob hale), er hovedkomponentene til biologiske membraner. I vandig løsning autoassosierer løsningen de hydrofobe halene og ekskluderer vann, mens de hydrofile hodene reagerer innbyrdes med mediet og danner spontant populasjoner av vesikler med forskjellige diametre. Lipidene er generelt zwitterioniske, nøytrale eller anioniske. Disse vesiklene kan anvendes som bærere for legemidler, små molekyler, proteiner, nukleotider og plasmider.
I det siste har kationiske liposomer, en klasse av positivt ladede vesikler fremstilt fra syntetiske lipider, blitt omfattende anvendt for overføring av genetisk materiale til cellene. Den negative ladningen til DNA kan reagere innbyrdes med de positive ladningene til de kationiske lipidene, som danner et stabilt DNA-liposomkompleks. Enkeltheten og mangfoldigheten til denne teknologien har gjort liposomer til en viktig vehikel for levering av gener for genterapi i humane subjekter. Pr. i dag inkluderer de fleste av vektorene som anvendes for genterapi og som er godkjent av NTH Recombinant Advisory Committee virale og syntetiske systemer.
Viral infeksjon omfatter en serie komplekse mekanismer for å være i stand til å angripe en spesifikk celle og bære DNAet inn i kjernen. Forklaringen på anvendelsen av virale vektorer ved genterapi er basert på muligheten å erstatte viralgenene med gener som koder for en terapeutisk funksjon uten å eliminere evnen til den virale partikkelen å infisere cellen. Begrensningene ved viral terapi har å gjøre med de virale elementene som kan være immunogene, cytopatiske og rekombinogene.
Det er store forventninger til anvendelsen av kationiske lipider for genterapi. Disse vektorene fremviser stort potentiale sammenlignet med de med biologisk opprinnelse, siden de er langt sikrere, mindre toksiske og også er i stand til å inkorporere gener med stor størrelse. Sammenlignet med biologisk-type vektorer har de imidlertid en lav intracellulær gentransskripsjonsytelse. Det bør derfor tas hensyn til at anvendelsen av slike transfeksjonssystemer imidlertid er i en begynnende forskningsfase. Kationiske lipider spiller en viktig rolle ved dannelse av DNA-lipidkomplekset, i cellekompleks-interaksjon, i fusjon med membranen, i DNA-frigivelse inne i cellen og i transkripsjon.
Det er viktige eksempler på in-vivo applikasjoner av kationiske liposomer. Det første kliniske forsøket på genterapi ble utført ved å introdusere en ekspresjonsvektor som inneholder det humane liposomkomplekserte HLA-B7 genet for behandling av melanomi. En annen viktig applikasjon angår behandling av pulmonær cystisk fibrose ved hjelp av administrasjon via den pulmonære ruten eller som en nasalspray av den liposom-komplekserte ekspresjonsvektoren SV-40C-FTR. Andre kliniske forsøk som omfatter anvendelsen av liposomer i behandling for kreft er for tiden under utvikling. Fire utgjørende elementer er generelt identifisert i strukturen til kationiske lipider: det positivt ladede kationiske hodet, spaceren, ankerlipidet og "linker"-bindingen.
Det kationiske hodet er ansvarlig for interaksjonene mellom de kationiske liposomene og DNA, mellom DNA-liposomkomplekset og cellemembranen og de andre komponentene til cellen. Den består av mono- eller polykationiske grupper (avhengig av antall ladninger) som kan være i varierende grad substituert.
Spaceren er den delen av molekylet som separerer det kationiske hodet fra den hydrofobe halen og er involvert i å sikre en optimal kontakt mellom det kationiske hodet og de negative ladningene til DNA-fosfatene.
Ankerlipidet er den ikke-polare hydrokarbondelen til molekylet og bestemmer de fysikalske egenskapene til dobbeltlipidlaget, slik som dets stivhet og utbyttingshastigheten med membranlipidene.
Hva som er ment med "linker-bindingen" er bindingen mellom hydrokarbonkj edene og resten av molekylet. Denne bindingen bestemmer den kjemiske stabiliteten og bionedbrytbarheten til de kationiske lipidene.
I forsknings- og patentlitteraturen er det fyldig referanser til fremstillingen og anvendelsen av liposomer; det er imidlertid svært få referanser som beskriver anvendelsen av karnitinderivater anvendbare for genlevering, mens for legemiddellevering er ingen dokumenter tilgjengelige som angår kjente teknikker for fremstilling av forbindelser som fjernt ligner de ifølge oppfinnelsen beskrevet heri.
Patentsøknad EP 0 279 887 beskriver anvendelsen av et derivat av karnitin, dvs. fosfatidylkarnitin, eventuelt i blandinger med andre fosfolipider og lipider (kolesterol, fosfatidylkolin, fosfatidylserin), for fremstilling av liposomer.
I eksempelet som er angitt som angår fremstillingen av liposomer blir liposomer av fosfatidylkarnitin fremstilt som inkorporerer propranolol, et legemiddel kjent for å være aktivt som et antihypertensivt, anti-angina og anti-arrytemisk middel. Karnitinderivatet anvendes her på grunn av den uttalte myokardiske tropismen til karnitin. Denne tropismen gjør det mulig å unngå at liposomene blir metabolisert av leveren, i stedet for å nå det ønskede målsetet.
Tilstedeværelsen av fosfatidylkarnitin gjør det også mulig å administrere liposomene oralt, siden de er resistente for intestinale lipaser.
IJ. Med. Chem. 1998 18. juni; 41(13):2207-15 er et antall estere av L-karnitin anvendelig for genlevering beskrevet, men de er ikke beskrevet eller foreslått som anvendelige midler for legemiddellevering.
WO 96/39193 beskriver nye mållegemiddelmidler som er målrettet for å komme inn i mitokondria via karnitin-acylkarnitin-traslokasesystemet, men foreslår ikke at de er anvendelige midler for fremstilling av liposomer.
EP 559 625 Bl beskriver et antall estere av L-karnitin og acyl L-karnitiner utstyrt med selektiv gastrointestinaltrakt muskel-relakserende aktivitet.
Som allerede nevnt, blir kationiske liposomer inngående anvendt for intracellulær levering av farmakologisk aktive forbindelser, som letter transmembrantransport eller fremmer deres interaksjon med spesifikke cellemembranseter (reseptorer).
Disse vektorene har stort potentiale sammenlignet med de med biologisk opprinnelse, siden de er langt sikrere og mindre toksiske.
Innenfor feltet legemiddellevering er det derfor et sterkt behov for stabile, reproduserbare setespesifikke systemer som også er aktive etter en passende tidsperiode.
Det er nå blitt funnet at en klasse kationiske lipider er svært aktive i å fremme den intracellulære leveringen av farmakologisk aktive forbindelser som innbefatter anvendelse av de kjente estrene av L-karnitin og acyl L-karnitiner med formel (II) for fremstilling av et medikament for transport av legemidler.
Disse forbindelsene er stabile og svært selektive fordi de er setespesifikke i å nå målorganet.
Denne karakteristikken gjør dem særlig anvendelige for transport av aktive forbindelser direkte til setet hvor de kan fremvise deres farmakologiske aktivitet.
Forbindelser med den generelle formel (II) er allerede kjent for en forskjellig anvendelse (EP 559 625 nevnt ovenfor).
Forbindelsene med formel (II) er estere av L-karnitin anvendelige for fremstilling av liposomer som fremviser potent aktivitet innen legemiddellevering og viser karakteristikker vedrørende stabilitet og selektivitet for å nå målorganet.
Disse forbindelsene har den generelle formelen (II):
hvor:
R3er en mettet, rett eller forgrenet acylkjede, med 4-26 karbonatomer;
R4er en mettet eller umettet, rett eller forgrenet, alkylkjede med 4-26 karbonatomer; og X" er anionet av en farmakologisk akseptabel syre.
Foretrukne eksempler på R3er nonanoyl, dodekanoyl, myristoyl, palmitoyl eller stearoyl.
Foretrukne eksempler på R4er nonyl, undecyl, tetradecyl, heksadecyl eller oleyl.
Eksempler på spesifikke forbindelser med formel (II), ifølge foreliggende oppfinnelse beskrevet heri er: - palmitoyl L-karnitinkloridundecylester (ST 983); - stearoyl L-karnitinkloridundecylester (ST 1055); - stearoyl L-karnitinkloridtetradecylester (ST 1351); - palmitoyl L-karnitinkloridtetradecylester (ST 1379); - myristoyl L-karnitinkloridtetradecylester (ST 1380);
- palmitoyl L-karnitinbromidheksadecylester (ST 1390).
Hva som forstås med et anion av en farmakologisk akseptabel syre er et hvilket som helst anion av en syre som ikke gir opphav til uønskede toksiske effekter eller bivirkninger.
Disse syrene er godt kjente for farmasøyter og eksperter innen farmasøytisk teknologi.
Eksempler på disse anionene, selv om listen ikke er fullstendig, er: klorid; bromid; jodid; aspartat; syreaspartat; citrat; syrecitrat; tartrat; syretartrat; fosfat; syrefosfat; fumarat; syrefumarat; glycerofosfat; glukosefosfat; laktat; maleat; syremaleat; mukat; orotat; oksalat; syreoksalat; sulfat; syresulfat; trikloracetat; trifluoracetat; metansulfonat; pamoat og syrepamoat.
Liposomene som inneholder forbindelsen med formel (II) fremstilles ved hjelp av vanlige teknikker, godt kjente for fagmannen; se for eksempel Allen T.M. Drugs 56, 747-56 (1998). Liposomene ifølge foreliggende oppfinnelse kan fremstilles også ved anvendelse av andre komponenter godt kjent innenfor liposomteknologi. Ifølge en utførelsesform av den foreliggende oppfinnelsen kan liposomene inneholde hjelperlipider, et begrep som er godt forstått innenfor teknikkens stand. Eksempler på hjelperlipider er kolesterol, 1-palmitoyl-2-oleoylfosfatidylkolin eller dioleylfosfatidylkolin.
Liposomene ifølge foreliggende oppfinnelse er egnet presentert som sammensetninger. I en utførelsesform som angår levering av farmasøytisk aktive forbindelser er sammensetningene å forstå som farmasøytiske sammensetninger, som eventuelt innbefatter farmasøytisk akseptable vehikler og/eller eksipienter.
Et antall forbindelser med formel (II), nemlig ST 1380, ST 1390 og ST 1392, er kjente og beskrevet i den ovenfor siterte J. Med. Chem 1998, 18. Juni; 41(13):2207-15, som anvendelige midler for fremstilling av liposomer for cellelær transfeksjon utstyrt med terapeutisk aktivitet, men har ikke tidligere blitt beskrevet som anvendelige midler for fremstilling av liposomer for legemiddellevering.
Fagmannen innenfor feltet farmasøytiske formuleringer er godt kjent med problemene som gjelder ved fremstilling av liposom-legemiddelkomplekser; i virkeligheten er det ikke mulig å si på forhånd om et liposom som er anvendelig for genlevering kan anvendes for legemiddellevering på grunn av det antallet problemer som må overkommes for å oppnå et liposom i stand til å kompleksere et legemiddel og som vil levere det foretrukket til organet hvor det skal utvise sin kurative aktivitet.
Forbindelser med formel (II), i form av liposomer, er anvendelige midler for levering av legemidler, slik som for eksempel antikreft, antiangiogenisk, antiviralt, antibakterielt, antifungalt, antiprotozoane midler, eller legemidler anvendelige for behandling av kardiovaskulære sykdommer eller immunogene peptider, og andre legemidler anvendelige ved behandling.
Nevnte liposomer kan eventuelt innbefatte hjelperlipider.
Liposomer som innbefatter forbindelser med formel (II) kan administreres oralt eller parenteralt, intravenøst, intramuskulært, subkutant, transdermalt, eller i form av nasal-eller munnsprayer.
EKSEMPEL 1
7-benzyloksyiminometylkamptotecin (CPT 172)
500 mg (1,33 mmol) av 7-formylkamptotecin løses i 100 ml etanol. 15 ml pyridin og 638 mg (4 mmol) O-benzylhydroksylaminhydroklorid tilsettes. Løsningen reflukseres i 5 timer. Løsemidlet vakuumfordampes og residuet oppnådd på denne måten renses ved flash-kromatografi på silikagel ved anvendelse av 4:6 blanding av heksan/etylacetat som eluent.
Utbytte: 65%
Smeltepunkt: 200-205°C dek.
Produktet som ble oppnådd består av en ca. 8:2 blanding av de to syn- og anti-isomerene (isomer A: Rf 0,32; isomer B, Rf 0,19, på Merck 60 F254 silikagel; eluent: heksan:etylacetat 3:7).
HPLC: analysene ble utført på et apparat utstyrt med en kvaternær pumpe (HP 1050) med en Rheodyne-injektor (20 [ il loop) og en diodetabelldetektor (HP 1050) kjørt med HPLC-ChemStation-program. Spektra-akvisisjon ble gjort fra 200 til 600 nm og kromatogrammene ble avlest ved 360 og 400 nm.
En Cl 8 omvendt-fasekolonne (Rainin Cl8; 25x0,4 cm, Varian) ble anvendt med en RP18 prekolonne. Analysen ble utført med en lineær elueringsgradient som startet fra acetonitril:vann 30:70 til acetonitril 100% i 20 minutter med en strømningshastighet på 1 ml/min. Retensjonstidene var 12,52 for isomer B og 14,48 min. for isomer A.
'H-NMR (300 MHz; DMSO-d6): 8: 0,88 (t, H3-18A+H3-18B), 1,87 (m, (H2-19A+H2-19B), 5,18 (s, H2-5B), 5,21 (8s, H2-Ph B), 5,30 (H2-Ph A), 5,40 (s, H2-5A), 5,45 (s, H2-17A+H2-17B), 6,53 (s, -OH A+-OH B), 7,3-7,6 (m, Ar A+ Ar B+H-14A+ H-14B), 7,75 (m, H-11A+H-11B), 7,85-7,95 (m, H-10A+H-10B), 7,98 (dd, H-12B), 8,18-8,27 (m, H-12A+H9-B), 8,45 (s, CH=N B), 8,59 (dd, H-9A), 9,38 (s, CH=N A).
Masse m/z 481 (M<*>100) 374 (30) 330 (70) 300 (30) 273 (20) 243 (20) 91 (34). ;EKSEMPEL 2 ;7-butoksyiminometylkamptotecin (CPT 184) ;400 mg (1,06 mmol) av 7-formylkamptotecin løses i 80 ml etanol. 12 ml pyridin og 400 mg (3,18 mmol) O-t-butylhydroksylaminhydroklorid tilsettes. Løsningen reflukseres i 4 timer. Løsemidlet blir vakuumfordampet og residuet oppnådd på denne måten blir renset ved flash-kromatografi på silikagel ved anvendelse av 4:6 blanding av heksan/etylacetat som eluent. ;322 mg (0,72 mmol) av gult fast stoff oppnås. ;Utbytte: 68% ;Smeltepunkt: 250°C dek. ;Det oppnådde produktet består av en ca. 8:2 blanding av de to syn- og anti-isomerene (isomer A: Rf 0,31; isomer B, Rf 0,24, på Merck 60 F254 silikagel; eluent: heksan:etylacetat 3:7). ;HPLC: analysene ble utført på et apparat utstyrt med en kvaternær pumpe (HP 1050) med en Rheodyne-injektor (20 ul loop) og en diodetabelldetektor (HP 1050) kjørt med HPLC-ChemStation-programmet. Spektra-akvisisjon ble gjort fra 200 til 600 nm og kromatogrammene ble avlest ved 360 og 400 nm. ;En Cl 8 omvendt-fasekolonne (Rainin Cl8; 25x0,4 cm, Varian) ble anvendt med en RP18 prekolonne. Analysen ble utført med en lineær elueringsgradient som startet fra acetonitril:vann 30:70 til acetonitril 100% i løpet av 20 minutter med en strømningshastighet på 1 ml/min. Retensjonstidene var: 12,92 for isomer B og 14,61 min. for isomer A. ;'H-NMR (300 MHz; DMSO-d6): 6: 0,88 (t, H3-18A+H3-18B), 1,30 (s, t-but.B), 1,47 (s, t-butA), 1,87 ( m, (H2-19A+H2-19B), 5,18 (s, H2-5B), 5,37 (H2-5 A), 5,42 (s, H2-17A+H2-17B), 6,54 (s, -OH A+-OH B), 7,35 (s, H-14A), 7,36 (s, H-14B), 7,69-7,83 (m, H-11A+H-11B), 7,85-7,98 (m, H-10A+H-10B), 8,07 (dd, H-9B), 8,16-8,27 (m, H-9A+H-12B), 840 (s, CH B), 8,62 (dd, H-12A), 9,31 (s, CH A). ;Masse m/z 448 (M* 28) 391 (40) 374 (100) 362 (40) 330 (34) 57 (17).
FREMSTILLING AV LIPOSOMER
De kjente forbindelsene kan anvendes for å fremstille multilamellære liposomer (MLV) og unilamellære liposomer (SUV), begge i form av tørre pulvere og som suspensjoner i vandige løsninger.
Forbindelsene anvendes for å fremstille liposomene ifølge følgende prosedyre. En egnet mengde av forbindelsen løses i kloroform; løsningen vakuumkonsentreres til tørrhet på en rotasjonsfordamper til en lipidfilm oppnås. Lipidfilmen tørkes under høyvakuum til siste gjenværende spor av løsemiddel er blitt eliminert og deretter løst i tert-butylalkohol eller med vann. Løsningen oppnådd på denne måten lyofiliseres og det oppnås et mykt, tørt pulver.
Pulverene hydratiseres med en egnet mengde vandig løsning, som gir liposomet til forbindelsen som anvendes, som deretter komplekseres med polynukleotidet eller med det ønskede legemidlet.
En annen fremgangsmåte for fremstilling av liposomer består av å absorbere en lipidfilm, som består av en forbindelse ifølge oppfinnelsen i et løsemiddel, på et egnet inert støttemateriale slik som sorbitol, mannitol eller andre farmakologisk akseptable karbohydrater. Blandingen vakuumtørkes og gir et fast stoff som enkelt og svært raskt blir hydratisert før anvendelse.
Preparatene i form av tørre pulvere gir fordelen av å være stabile i lange perioder, og er enkle å anvende.
Videre kan forbindelsene anvendes for å fremstille liposomer kompleksert med ønsket legemiddel, i form av tørre puvlere, ifølge følgende fremgangsmåte. Forbindelsen ifølge oppfinnelsen løses i tert-butylalkohol eller med vann; løsningen oppnådd på denne måten blandes med ønsket legemiddel og blandingen lyofiliseres og gir komplekset som kan defineres som proliposom-legemiddel, i form av et mykt, tørt pulver.
Pulveret således oppnådd (proliposomer) kan anvendes for fremstilling av farmasøytiske sammensetninger som kan administreres via aerosol, eller som alternativt, når de rekonstitusjoneres med vann, eller med en egnet buffer løsning, kan administreres parenteralt eller oralt.
Liposomene kompleksert med legemidler i fast form, kan også oppnås ved fremgangsmåten med å adsorbere lipidfilmen på et inert støttemateriale slik som sorbitol, mannitol eller andre karbohydrater ved hjelp av fremgangsmåten beskrevet ovenfor.
TESTING AV LIPOSOMDANNELSE
Liposomdannelsen ble testet ved hjelp av en kolorimetrisk metode, ved anvendelse av et vannløselig fargestoff, ifølge følgende fremgangsmåte. En vandig løsning av det vannløselige fargestoffet Arsenazo UJ ble oppnådd (molekylvekt = 776,37; 2,3 mg/ml).
Denne løsningen ble anvendt i stedet for vann for å hydratisere lipidfilmene som kommer fra den ovenfor nevnte fremstillingen.
En aliquot av suspensjonen som inneholder liposomet som innkapsler fargestoffet ble fortynnet 100 ganger med vann.
To ml av liposomsuspensjonen ble anvendt for å oppnå den første optiske tetthetsavlesningen ved 660 nm; hvor avlesningen ble oppnådd i relasjon til en lik prøve definert som en blindprøve. 200 ul av en CaCb-løsning (15 mg/ml; 100 mm) ble tilsatt til den første prøven, og den optiske tettheten ble målt ved 660 nm mot blindprøven, til hvilken 200 ul vann ble tilsatt. Absorbansverdien som ble oppnådd ble indikert som avlesning 2. Vi fortsatte ved å tilsette til prøven 100 ul av en løsning av Triton X-100
(5% v/v; 0,26% sluttkonsentrasjon) og til blindprøven 200 ul vann; den optiske tetthetsavlesningen ved 660 nm ga den optiske tetthetsverdien definert som avlesning 3. For å beregne prosentandel innkapslet fargestoff, ble følgende formel anvendt:
Prosentandelen innkapslet fargestoff gir et mål på liposomdannelsen og er gjennomsnittlig ca. 40%: liposomstørrelsessjekken ble utført ved anvendelse av laserlysspredning med et positivt utbytte.
EKSEMPLER PÅ FREMSTILLING AV LIPOSOMER
Fremstilling av liposomer av palmitoyl L-karnitinkloridundecylester (ST 983) i form av:
a) Lyofilserte pulvere
65 mg, 0,11 mmol palmitoyl L-karnitinkloridundecylester ble løst i 20 ml kloroform, i
en 100 ml kolbe.
Løsningen ble fordampet til en lipidfilm ble oppnådd som ble vakuumtørket i 3 timer. Det således oppnådde produktet ble løst i tert-butylalkohol og denne løsningen ble raskt avkjølt til -70°C med flytende nitrogen og lyofilisert i 24 timer.
Et svampaktig mykt hvitt faststoff ble oppnådd.
b) Adsorberte pulvere
143 mg, 0,231 mmol palmitoyl L-karnitinkloridundecylester ble løst i 10 ml kloroform.
Løsningen således oppnådd ble helt i små porsjoner over i en 100 ml kolbe som inneholdt 750 mg sorbitol. Ved slutten av tilsetningen av de forskjellige prosjonene kloroformløsning, ble kloroformen raskt fordampet.
Det faste stoffet således oppnådd ble vakuumtørket i 3 timer.
893 mg av et hvitt fast produkt ble oppnådd.
Før anvendelse ble produktet hydratisert raskt med et egnet volum vann for å oppnå en isoton løsning.
c) MLV-suspensjoner
65 mg, 0,11 mmol palmitoyl L-karnitinkloridundecylester ble løst i 20 ml kloroform, i
en 100 ml kolbe.
Løsningen således oppnådd ble fordampet til en lipidfilm ble oppnådd som deretter ble vakuumtørket i 3 timer.
Lipidfilmen ble hydratisert med 10 ml vann, ved 30°C, i 3 timer som ga en MLV-suspensjon. MLV-suspensjonen, passende fortynnet, ble kompleksert med et legemiddel og anvendt for biologiske undersøkelser.
d) SUV-suspensjoner
65 mg, 0,11 mmol palmitoyl L-karnitinkloridundecylester ble løst i 20 ml kloroform, i
en 100 ml kolbe.
Løsningen således oppnådd ble fordampet til en lipidfilm ble oppnådd som deretter ble vakuumtørket i 3 timer.
Lipidfilmen ble hydratisert med 10 ml vann ved 30°C i 3 timer, som ga en MLV-suspensjon. MLV-suspensjonen ble ekstrudert 10 ganger gjennom et polykarbonatfilter med en porestørrelse på 200 nm. Den unilamellære liposomsuspensjonen således oppnådd ble kompleksert med et legemiddel og anvendt for biologiske undersøkelser.
e) Testing av fysisk stabilitet av liposomer
Den fysiske stabiliteten av liposomsuspensjonen ble testet ved hjelp av turbidimetri i en
periode på 30 dager.
En absorbansmåling ved 600 nm i et visst tidsintervall ble utført for hver suspensjon som skulle testes. Den midlere absorbansverdien målt ved tid 0 holdt seg konstant for alle de testede formuleringene.
Molekylene ga samsvarende verdier i tidsperiodene som ble undersøkt.
MLV- og SUV-liposomsuspensj onene kan fremstilles ved å kombinere forbindelsene ifølge oppfinnelsen med hjelperlipider slike som kolesterol, l-palmitoyl-2-oleoyl fosfatidylkolin (POPC) eller dioleylfosfatidylkoliln (DOPE).
Forbindelsene kombineres med hjelperlipider for å oppnå liposomer med stablermembraner. Nedenfor, i kapittelet som beskriver fremstilling av liposomer, er et eksempel på en fremstilling gitt, hvori en forbindelse ifølge oppfinnelsen kombineres med et hjelperlipid slik som kolesterol eller POPC.
EKSEMPLER PÅ FREMSTILLING AV LIPOSOMER FOR LEGEMTDDELLEVERTNG
EKSEMPEL 3
Fremstilling av taksol-ST 983 ML\ -liposomer (1:40)
20 mg, 0,0234 mmol taksol og 556 mg, 0,9417 mmol ST 983 ble løst i 20 ml kloroform.
Løsningen ble konsentrert til en lipidfilm ble oppnådd på overflaten av glasskolben.
Etter eliminering av de siste spor av kloroform ved hjelp av en vakuumpumpe, ble 20 ml tert-butylalkohol tilsatt til lipidfilmen og løsningen således oppnådd ble underoppdelt i 19 fraksjoner som umiddelbart ble frosset til -70°C med flytende nitrogen og lyofilisert i 24 timer. Hver fraksjon av faststoff inneholdt taksol (1,05 mg) og ST 983 (29,2 mg).
For å oppnå den endelige liposomsuspensjonen, ble det lyofilserte produktet hydratisert ved anvendelse med vann (450 ul) eller annen saltvannsløsning, rørt i 10 minutter og stående i 30 minutter for å muliggjøre fullstendig utførelse av svelle (hydratiserings)-prosessen.
MLV-liposomer ble oppnådd.
Testing av fysisk stabilitet ved fremstillingen
Den fysikalske stabiliteten til preparatet ble testet ved hjelp av turbidimetri med avlesning av en TDC ("Time Drive Curve") ved 800 nm, ved 20°C, i 20 timer.
En konstant turbiditetstrend som er indikativ for stabilitet av preparatet ble avlest uten noe presipitasjonsfenomen.
Testing av kjemisk stabilitet av taksol ved fremstillingen
Den kjemiske stabiliteten til taksol ble testet med HPLC.
De kromatografiske betingelsene var som følger:
Kolonne: uBondapack C-18
Eluent: acetonitril:vann 70:30
Detektor UV-VIS: 227 nm
Strømningshastighet: 1 ml/min.
Retensjonstid: 4,5 min.
Taksolkonsentrasjonen, bestemt mot en standard, var 2,13 mg/ml.
Prosent innkapslet taksol var 98%.
EKSEMPEL 4
Fremstilling av taksol-ST 983 SUV-liposomer
20 mg, 0,0234 mmol taksol og 556 mg, 0,9417 mmol ST 983 ble løst i 20 ml kloroform.
Løsningen ble konsentrert til en lipidfilm ble oppnådd på overflaten av glasskolben.
Etter eliminering av siste spor av kloroform med en høyvakuumpumpe, ble 20 ml tert-butylalkohol tilsatt til lipidfilmen og løsningen således oppnådd ble underoppdelt i 19 fraksjoner som umiddelbart ble frosset til -70°C med flytende nitrogen og lyofilisert i 24 timer. Hver fraksjon faststoff inneholdt taksol (1,05 mg) og ST 983 (29,2 mg).
For å oppnå den endelige SUV-liposomsuspensjonen ble det lyofiliserte produktet, hydratisert med en PBS-løsning (1 ml), lydbehandlet i 20 minutter ved 0°C.
Filtrering ble deretter utført på et 400 nm filter for å eliminere spor av titan frigitt ved lydbehandlingsproben.
Testing av fysisk stabilitet av sammensetningen
Den fysiske stabiliteten til sammensetningen ble testet ved hjelp av turbidimetri med avlesning på en TDC ("Time Drive Curve") ved 800 nm, ved 20°C, i 20 timer.
En konstant turbiditetstrend, indikativ for stabilitet til preparatet, ble avlest uten noe presipitasjonsfenomen.
Testing av kjemisk stabilitet av taksol ved fremstillingen
Den kjemiske stabiliteten til taksol ble testet med HPLC.
De kromatografiske betingelsene var som følger:
Kolonne: uBondapack C-18
Eluent: acetonitril:vann 70:30
Detektor UV-VIS: 227 nm
Strømningshastighet: 1 ml/min.
Retensjonstid: 4,5 min.
HPLC-analyse av SUV-liposomsuspensjonen ga samme resultater som den korresponderende MLV-liposomsuspensjonen, og i dette tilfellet var også prosentandelen innkapslet taksol 98%.
HPLC-analyse gjentatt etter 24 timer avdekket ingen nye topper andre enn taksolgroppen som indikerer stabilitet for den aktive ingrediensen.
EKSEMPEL 5
Fremstilling av taksol-ST 983-kolesterolliposomer (1:15)
Disse typene liposomer ble fremstilt for å oppnå komplekser med stablermembraner.
6 mg, 0,0101 mmol taksol, 62,2 mg, 0,105 mmol ST 983 og 40 mg kolesterol ble løst i
10 ml kloroform.
Den således oppnådde løsningen ble konsentrert til en lipidfilm ble oppnådd på overflaten av glasskolben.
Etter eliminering av de siste sporene av kloroform med en høyvakuumpumpe, ble 6,3 ml tert-butylalkohol tilsatt til lipidfilmen og løsningen således oppnådd ble underoppdelt i 5 fraksjoner som umiddelbart ble frosset til -70°C med flytende nitrogen og lyofilisert i 24 timer. Hver fraksjon faststoff inneholdt taksol (1,2 mg), ST 983 (12,44 mg) og kolesterol (8 mg).
For å oppnå den endelige liposomsuspensjonen, ble det lyofiliserte produktet hydratisert ved anvendelse med vann (1000 ul) eller andre saltvannsløsninger, rørt i 10 minutter og stående i 30 minutter for å muliggjøre fullstendig svelle (hydratiserings)-prosess.
MLV-liposomer ble oppnådd.
Testing av fysisk stabilitet av sammensetningen
Den fysiske stabiliteten til preparatet ble testet ved hjelp av turbidimetri med avlesning på en TDC ("Time Drive Curve") ved 800 nm, ved 20°C, i 6 timer.
En konstant turbiditetstrend som er indikativ for stabiliteten til preparatet, ble avlest uten noe presipiteringsfenomen.
EKSEMPEL 6
Fremstilling av CPT 83-ST 983 MLV-liposomer (1:40)
6,3 mg, 0,0168 mmol CPT 83 (7-karbonitrilkampotecin, beskrevet i WO 97/31003) og 400 mg, 0,667 mmol ST 983 ble løst i 20 ml kloroform.
Løsningen ble konsentrert til en lipidfilm ble oppnådd på overflaten av glasskolben.
Etter eliminering av de siste sporene av kloroform ved hjelp av en vakuumpumpe, ble 26 ml tert-butylalkohol tilsatt til lipidfilmen, og løsningen således oppnådd ble underoppdelt i 12 fraksjoner som umiddelbart ble nedfrosset til -70°C med flytende nitrogen og lyofilisert i 24 timer. Hver fraksjon fast stoff inneholdt CPT 83 (0,525 mg) og ST 983 (33,33 mg).
For å oppnå den endelige liposomsuspensjonen ble det lyofiliserte produktet hydratisert ved anvendelse med vann (1000 ul) eller annen saltvannsløsning og rørt i 10 minutter.
MLV-liposomer ble oppnådd.
Testing av fysisk stabilitet av sammensetningen
Den fysiske stabiliteten til preparatet ble testet ved hjelp av turbidimetri med avlesning på en TDC ("Time Drive Curve") ved 800 nm, ved 20°C, i 20 timer.
En konstant turbiditetstrend som er indikativ for stabiliteten til preparatet, ble avlest uten noe presipiteringsfenomen.
Testing av kjemisk stabilitet av CPT 83 ved fremstillingen
Den kjemiske stabiliteten til CPT 83 ble testet med HPLC.
De kromatografiske betingelsene var som følger:
Kolonne: Supelcosil LC-ABZ
Eluent: fosfatbuffer 20 mm:metanol 40:60, pH = 7,3
Detektor UV-VIS: 360 nm
Strømningshastighet: 1 ml/min.
Retensjonstid: 4,033 min.
CTP 83-konsentrasjon, bestemt mot en standard, var 0,502 mg/ml.
Prosent innkapslet CPT 83 var 99%.
EKSEMPEL 7
Fremstilling av CPT 83-ST 983 SUV-liposomer (1:40)
6,3 mg, 0,0168 mmol CPT 83 og 400 mg, 0,667 mmol ST 983 ble løst i 20 ml kloroform.
Løsningen ble konsentrert til en lipidfilm ble oppnådd på overflaten av glasskolben.
Etter eliminering av de siste sporene av kloroform ved hjelp av en høyvakuumpumpe, ble 26 ml tert-butylalkohol tilsatt til lipidfilmen, og løsningen således oppnådd ble underoppdelt i 12 fraksjoner som umiddelbart ble frosset til -70°C med flytende nitrogen og lyofilisert i 24 timer. Hver fraksjon fast stoff inneholdt CPT 83 (0,525 mg) og ST 983 (33,33 mg).
For å oppnå den endelige SUV-liposomsuspensjonen ble det lyofiliserte produktet, hydratisert ved anvendelse med vann (1000 ul), lydbehandlet i 40 minutter ved 0°C.
Filtrering ble utført på et 400 nm filter for å eliminere spor av titan frigitt av den lydbehandlede proben.
Testing av kjemisk stabilitet av CPT 83 i sammensetningen Den kjemiske stabiliteten til CPT 83 ble testet ved HPLC.
De kromatografiske betingelsene var som følger:
Kolonne: Supelcosil LC-ABZ
Eluent: fosfatbuffer 20 mm:metanol 40:60, pH = 7,3
Detektor UV-VIS: 360 nm
Strømningshastighet: 1 ml/min.
Retensjonstid: 4,033 min.
CTP 83-konsentrasjon, bestemt mot en standard, var 0,3 mg/ml.
Prosent innkapslet CPT 83 var 59%.
HPLC-analyse gjentatt etter 24 timer avdekket ingen nye topper forskjellig fra CPT 83-toppen, som indikerer stabiliteten til forbindelsen.
Testing av fysisk stabilitet av sammensetningen
Den fysiske stabiliteten til preparatet ble testet ved hjelp av turbidimetri med avlesning på en TDC ("Time Drive Curve") ved 600 nm, ved 20°C, i 20 timer.
En konstant turbiditetstrend som er indikativ for stabiliteten til preparatet, ble avlest uten noe presipiteringsfenomen.
EKSEMPEL 8
Fremstilling av CPT 184-ST 983 MLV-liposomer (1:40)
7,29 mg, 0,0168 mmol CPT 184 og 400 mg, 0,667 mmol ST 983 ble løst i 20 ml kloroform.
Løsningen ble konsentrert til en lipidfilm ble oppnådd på overflaten av glasskolben.
Etter eliminering av de siste sporene av kloroform ved hjelp av en vakuumpumpe, ble 26 ml tert-butylalkohol tilsatt til lipidfilmen, og løsningen således oppnådd ble underoppdelt i 12 fraksjoner som umiddelbart ble frosset ned til -70°C med flytende nitrogen og lyofilisert i 24 timer. Hver fraksjon fast stoff inneholdt CPT 184 (0,607 mg) og ST 983 (33,33 mg).
For å oppnå den endelige liposomsuspensjonen ble det lyofiliserte produktet hydratisert ved anvendelse med vann (1000 ul) eller annen saltvannsløsning og rørt i 10 minutter.
MLV-liposomer ble oppnådd.
Testing av fysisk stabilitet av sammensetningen
Den fysiske stabiliteten til preparatet ble testet ved hjelp av turbidimetri med avlesning av en TDC ("Time Drive Curve") ved 600 nm, ved 20°C, i 20 timer.
En konstant turbiditetstrend som indikerer stabiliteten til preparatet, ble avlest, uten noe presipiteringsfenomen.
Testing av kjemisk stabilitet til CPT 184 i sammensetningen Den kjemiske stabiliteten til CPT 184 ble testet ved HPLC.
De kromatografiske betingelsene var som følger:
Kolonne: Supelcosil LC-ABZ
Eluent: fosfatbuffer 20 mm:metanol 40:60, pH = 7,3
Detektor UV-VIS: 360 nm
Strømningshastighet: 1 ml/min.
Retensjonstid: 25,5 min.
CTP 184-konsentrasjon, bestemt mot en standard, var 0,600 mg/ml.
Prosent innkapslet CPT 184 var 99%.
EKSEMPEL 9
Fremstilling av CPT 184-ST 983 SUV-liposomer (1:40)
7,29 mg, 0,0168 mmol CPT 184 og 400 mg, 0,667 mmol ST 983 ble løst i 20 ml kloroform.
Løsningen ble konsentrert til en lipidfilm ble oppnådd på overflaten av glasskolben.
Etter eliminering av de siste sporene av kloroform ved hjelp av en høyvakuumpumpe, ble 26 ml tert-butylalkohol tilsatt til lipidfilmen, og løsningen således oppnådd ble underoppdelt i 12 fraksjoner som umiddelbart ble frosset ned til -70°C med flytende nitrogen og lyofilisert i 24 timer. Hver fraksjon fast stoff inneholdt CPT 184 (0,607 mg) og ST 983 (33,33 mg).
For å oppnå den endelige SUV-liposomsuspensjonen ble det lyofiliserte produktet hydratisert med vann (1000 ul), lydbehandlet i 40 minutter ved 0°C.
Filtrering ble utført på et 400 nm filter for å eliminere spor av titan frigitt av den lydbehandlede proben.
Testing av kjemisk stabilitet av CPT 184 i sammensetningen Den kjemiske stabiliteten til CPT 184 ble testet ved HPLC.
De kromatografiske betingelsene var som følger:
Kolonne: Supelcosil LC-ABZ
Eluent: fosfatbuffer 20 mm:metanol 40:60, pH = 7,3
Detektor UV-VIS: 360 nm
Strømningshastighet: 1 ml/min.
Retensjonstid: 25,5 min.
CTP 184-konsentrasjon, bestemt mot en standard, var 0,36 mg/ml.
Prosent innkapslet CPT 184 var 70%.
HPLC-analyse gjentatt etter 24 timer avdekket ingen nye topper forskjellig fra CPT 184-toppen, som indikerer stabilitet til den aktive ingrediensen.
Testing av fysisk stabilitet av sammensetningen
Den fysiske stabiliteten til preparatet ble testet ved hjelp av turbidimetri med avlesning av en TDC ("Time Drive Curve") ved 600 nm, ved 20°C, i 20 timer.
En konstant turbiditetstrend som er indikativ for stabiliteten til preparatet, ble avlest uten noe presipiteringsfenomen.
I de følgende eksempler ble liposomer fremstilt ved anvendelse av hjelperlipider og/eller kryobeskyttende midler.
EKSEMPEL 10
Fremstilling av CPT 184-ST 983 liposomer
I en 2 1 kolbe ble 100 ml metylkloroform tilsatt til 20 mg CPT 184 og 600 mg ST 983 og blandingen ble forsiktig varmet til fullstendig oppløsning. Løsningen som ble oppnådd ble konsentrert på en rotavapor til en lipidfilm ble oppnådd, som ble ytterligere tørket i to timer på en høyvakuumpumpe. Lipidfilmen ble hydratisert med en laktoseløsning (6 g/300 ml vann) ved 45°C og holdt under røring i rotavaporen i 2 timer. Suspensjonen ble deretter lydbehandlet i 2 timer, hvor hver cykel tok en halv time. Deretter ble produktet filtrert gjennom et 200 nm filter og lyofilisert.
Testing av kjemisk stabilitet av CPT 184 i sammensetningen
Den kjemiske stabiliteten til CPT 184 ble fastslått ved HPLC. Produktet var stabilt i løpet av 24 timer med testing.
Testing av fysisk stabilitet av sammensetningen
Den fysiske stabiliteten til preparatet ble testet ved hjelp av turbidimetri. Produktet var stabilt gjennom 24-timers testen. Partikkelstørrelsen var også stabil (middelverdi på 100 nm).
EKSEMPEL 11
Fremstilling av CPT 184-ST 983 liposomer
For 1 ml liposomal formulering (POPC - l-palmitoyl-2-oleoyl fosfatidylkolin 5 mm; ST 983 1,25 mm; CPT 184 0,25 og trehalose 150 mm), ble den følgende fremgangsmåte anvendt: 0,11 mg, 0,25 umol CPT 184 ble løst i 250 ul etylacetat, 3,79 mg, 4,89 umol POPC ble løst i 100 ml etanol og 0,74 mg, 1,25 umol ST 983 ble løst i 100 ul etanol. De tre løsningene ble blandet sammen og virvlet. Løsningene ble fordampet med en rotavapor ved romtemperatur, 80 mbar. Lipidfilmen ble tørket i to timer i mørket. Lipidfilmen ble suspendert i en 1 ml av en 150 mm D(+)-trehalosedihydrat (Fluka, HPLC 99%) løsning, sterilisert gjennom et 0,22 mm filter og virvlet i to minutter. Suspensjonen ble ekstrudert 21 ganger gjennom 200 nm polykarbonatfilter. Den ekstruderte liposomsuspensjonen ble frosset i flytende nitrogen og lyofilisert i 2 netter. Et hvitt fast stoff ble oppnådd.
EKSEMPEL 12
Fremstilling av CPT 184-ST 983 liposomer
Samme fremgangsmåte som i eksempel 11 ble anvendt unntatt at trehalose 500 mm ble anvendt.
Antikreftaktivitet til ST 983 liposom-antikreftmiddelkompleks
Som det fremgår nedenfor, viser ST 983 liposomet fremherskende akkumulering i lungene. Denne karakteristikken av setespesifisitet favoriserer dens anvendelse i en murinmodell av pulmonar karsinogenese.
Antikreftmidlet anvendt i dette eksperimentet var taksol.
For å indusere tumoren in-vivo, mottok ikke-anestesibehandlede Balb/c mus injeksjoner av 3x10<5>celler murin pulmonar karsinom Ml 09 i 0,1 ml RPMI-1640 (Sigma) i quadriceps femoris til den høyre bakre poten.
Ti dager etter implantering av tumoren ble liposom-taksolkomplekset fortynnet med fosfatbufret saltvannsløsning (PBS, SIGMA, P-4417) og injisert intravenøst ved en konsentrasjon på 2,5 mg/ml av ST 983 og 75 ug/ml taksol.
Taksol (paclitaxel INDENA) anvendt som en kontroll ble løst i kremoforvehikel EL (BASF) ved en konsentrasjon på 20 mg/ml og lagret ved +4°C i de neste 24 timene, beskyttet mot lyset. Ved anvendelsen ble løsningen fortynnet med fosfatbufret saltvannsløsning (PBS, SIGMA) og injisert intravenøst i samme volum og konsentrasjonsbetingelser som beskrevet for taksol transportert av ST 983 liposomet.
Kremoforen ble fremstilt ved å fortynne 1:1 med etylalkohol.
Administrasjoner ble gitt i syv etterfølgende dager som startet fra dag 10 etter inokulering av tumoren. Dyrene ble holdt under observasjon opp til dag 17 post-inokulasjon og avlivet ved cervical dislokasjon, og deres lunger ble fjernet for bestemmelse av antallet metastaser. Beising av lungene for å dektere metastaser ble gjort ved å inkubere lungene i 10 dager i 5 ml Bouins løsning, som består av 71% mettet pikrinsyreløsning, 4,8% iseddiksyre (Merck) og 24% 10% formaldehyd (Fluka). Ved slutten av inkuberingsperioden i Bouins løsning ble antallet metastaser talt.
Sammenlignet med ubehandlede kontrollmus viste kremofortransportert taksol ingen redusert effekt på antallet lungemetastaser, selv om sistnevnte var mindre enn de til ubehandlede kontroller, mens taksol kompleksert med ST 983 liposom viste en signifikant reduksjon både i antall og størrelse lungemetastaser.
Statistisk analyse av dataene for antallet lungemetastaser ble gjort ved anvendelse av Mann-Whitney ikke-parametriske tester for uparede data.
Resultatene som ble oppnådd er presentert i tabell 1 nedenfor.
In-vitro cytotoksitetstester
Toksisitetsundersøkelsene ble gjort på HeLa og Ml09 celler i 96-brønns plater. Dagen etter avsetning på platene, ble cellene behandlet med molekylene som ble testet i de neste 48 timene. Cellene ble deretter vasket med PBS og utsatt for normale vekstbetingelser i 48 timer. Etter fjerning av vekstmediet ble cellene inkubert på is med 16% TCA, vasket 3 ganger i H20, behandlet i 30 minutter med sulforhodamin B (SRB) i 1% eddiksyre, vasket 3 ganger i 1% eddiksyre alene, inkubert i 20 minutter i TRIS 10 mm pH 10,5 og til slutt ble avlesninger gjort ved 540 nm.
Cytotoksisitetstester med CPT 83
In-vitro cytotoksisitetstester med CPT 83 ble utført for å evaluere cytotoksisiteten til antikreftmidlet kompleksert med liposomet, som en forhåndsindikasjon på effektiv aktivitet.
For å evaluere evnen liposomet har til å transportere CPT 83 in-vitro i Ml 09 celler, ble sulforhodamin B testen beskrevet ovenfor anvendt.
I tillegg ble cytotoksisiteten til CPT 83 løst i dimetylsulfoksid (DMSO) også evaluert sammenlignet med den for samme molekyl kompleksert med ST 983 liposomet.
Liposom-CPT 83 komplekset ble anvendt i cytotoksisitetsundersøkelsene ved konsentrasjonene indikert i tabellene 2.1, 2.2 og 2.3 nedenfor både i SUV- og MLV-konfigurasjoner. Liposom:CPT 83 molart forhold som ble anvendt var 40:1.
Midlere cytotoksisitetsverdier for ST 983-CPT 83 kompleksene i både i SUV- og MLV-konfigurasjonene gitt i tabellene 2.1, 2.2 og 2.3 nedenfor, indikerer at ST 983 liposomet er i stand til å transportere CPT 83 langt på samme måte som DMSO, som presenterer cytotoksisitetsnivåer i samme størrelsesorden.
Verdiene gitt i tabellen refererer til optiske tetthetsavlesninger ved 540 nm.
Verdiene gitt i tabellen refererer til optiske tetthetsavlesninger ved 540 nm.
Biologisk aktivitet til ST 983 liposom-CPT 184 kompleks
Den biologiske aktiviteten til liposomene i eksempel 10 (under navngitt liposom A) og i eksempel 12 (under navngitt liposom B) ble testet.
Toksisitet i friske mus
Liposomene A og B ble gitt oralt, intravenøst, sammenlignet med fritt CPT 184, ved en dose på 1,2 mg/kg ifølge q4dx4-skjemaet. De to liposomene hadde ikke signifikante effekter på vekten av kroppen, lungen, milten og nyrene. Liposom B, intravenøst, og liposom A, oralt som ble gitt påvirket tymusvekten tilsvarende fritt CPT 184. Intravenøst liposom A hadde kun minimal effekt. Haematologiske parametre viste ingen signifikante variasjoner etter 24 timer, med begge liposomene. Liposom A, gitt intravenøst ifølge qd5-skjemaet viste en toksisitet sammenlignbar med fritt CPT 184.
Lungetropisme av liposomer
Liposomer A og B viste fremherskende akkumulering i lungen. Liposomene ble gitt i. v. 1,2 mg/kg. Fritt CPÅ 184 ble gitt oralt 1,2 mg/kg i DMSO. Dyrene, friske mus, ble avlivet 24 timer etter siste administrasjon. Lungene ble fjernet fra den døde kroppen og frosset i flytende nitrogen. Idet de tinte, ble organene samlet og homogenisert i en 0,1% eddiksyre/acetonitril l:5-løsning. Homogenater ble oppdelt i tre aliquoter, hvor to av dem ble tilsatt CPT 184 for utvinningsberegning. De tre prøvene ble sentrifugert ved 16.000 g i 5 minutter. Surnatanter ble samlet og ekstrahert med diklormetan. Den organiske fasen ble tørket med en speedvac og residuet ble løst i acetonitril for å få mengden som korresponderer til et dyr i 50 ul for anvendelse ved HPLC. HPLC ble kjørt på en Waters Symmetry Cl8 3,5 um (4,6 x 7,5 mm). Et Merck-fluorimeter var detektoren ved 370 nm eksistasjon og 510 nm emisjon. Eluenten var vann/acetonitril 60:40, isokratisk. Prøvevolumet var 50 ul. CPT 184 utvunnet var ca. 70%. Både liposomer A og B hadde et akkumuleringsnivå for CPT 184 høyere enn fritt CPT 184 i
DMSO.

Claims (11)

1. Anvendelse av liposomet som innbefatter en forbindelse med formel (II)
hvor: R3er en mettet, rett eller forgrenet acylkjede, med 4-26 karbonatomer; R4er en mettet eller umettet, rett eller forgrenet, alkylkjede med 4-26 karbonatomer; og X" er anionet av en farmakologisk akseptabel syre for fremstilling av et medikament for transport av legemidler.
2. Anvendelse ifølge krav 1, hvori R3er foretrukket utvalgt fra gruppen som består av nonanoyl, dodekanoyl, myristoyl, palmitoyl eller stearoyl.
3. Anvendelse ifølge krav 1, hvori R4er foretrukket utvalgt fra gruppen som består av nonyl, undecyl, tetradecyl, heksadecyl eller oleyl.
4. Anvendelse ifølge krav 1, hvori X" er utvalgt fra gruppen som består av klorid; bromid; jodid; aspartat; syreaspartat; citrat; syrecitrat; tartrat; syretartrat; fosfat; syrefosfat; fumarat; syrefumarat; glycerofosfat; glukosefosfat; laktat; maleat; syremaleat; mukat; orotat; oksalat; syreoksalat; sulfat; syresulfat; trikloracetat; trifluoracetat; metansulfonat; pamoat og syrepamoat.
5. Anvendelse ifølge krav 1-4, hvori forbindelsen er utvalgt fra gruppen som består av: - palmitoyl L-karnitinkloridundecylester; - stearoyl L-karnitinkloridundecylester; - stearoyl L-karnitinkloridtetradecylester; - palmitoyl L-karnitinkloridtetradecylester; - myristoyl L-karnitinkloridtetradecylester; - palmitoyl L-karnitinbromidheksadecylester.
6. Anvendelse ifølge krav 1, hvor legemidlet er utvalgt fra gruppen som består av antikreft, antiangiogenske, antivirale, antibakterielle, antifungale, antiprotozoane midler, forbindelser aktive på det kardiovaskulære systemet eller immunogene peptider.
7. Anvendelse ifølge krav 6, hvori nevnte legemiddel er et antikreft eller antiangiogent middel.
8. Anvendelse ifølge krav 7, hvori nevnte antikreftmiddel er utvalgt fra gruppen som består av taksol eller et derivat av kamptotecin.
9. Anvendelse ifølge krav 8, hvori nevnte derivat av kamptotecin er utvalgt fra gruppen som består av 7-benzyloksyiminometylkamptotecin eller - 7-butoksyiminometylkamptotecin.
10. Anvendelse ifølge krav 1, hvori liposomet ytterligere inneholder hjelperlipider.
11. Anvendelse ifølge krav 10, hvori nevnte hjelperlipider er utvalgt fra gruppen som består av kolesterol, l-palmitoyl-2-oleoyl fosfatidylkolin eller dioleylfosfatidylkolin.
NO20085413A 1999-04-13 2008-12-30 Anvendelse av estere av L-karnitin eller alkanoyl L-karnitiner som kationiske lipider for intracellulær avlevering av farmakologisk aktive forbindelser NO336949B1 (no)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
IT1999RM000220A IT1306129B1 (it) 1999-04-13 1999-04-13 Esteri della l-carnitina o di alcanoil l-carnitine utilizzabili comelipidi cationici per l'immissione intracellulare di composti
PCT/IT2000/000137 WO2000061543A2 (en) 1999-04-13 2000-04-11 Esters of l-carnitine or alkanoyl l-carnitines

Publications (2)

Publication Number Publication Date
NO20085413L NO20085413L (no) 2001-10-12
NO336949B1 true NO336949B1 (no) 2015-11-30

Family

ID=11406659

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO20014985A NO327742B1 (no) 1999-04-13 2001-10-12 Estere av L-karnitin eller alkanoyl L-karnitiner, anvendelse derav for fremstilling av liposomer, de oppnadde liposomer samt anvendelse derav samt farmasoytiske og kosmetiske sammensetninger
NO20085413A NO336949B1 (no) 1999-04-13 2008-12-30 Anvendelse av estere av L-karnitin eller alkanoyl L-karnitiner som kationiske lipider for intracellulær avlevering av farmakologisk aktive forbindelser

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO20014985A NO327742B1 (no) 1999-04-13 2001-10-12 Estere av L-karnitin eller alkanoyl L-karnitiner, anvendelse derav for fremstilling av liposomer, de oppnadde liposomer samt anvendelse derav samt farmasoytiske og kosmetiske sammensetninger

Country Status (34)

Country Link
US (4) US6797281B1 (no)
EP (3) EP1435232A1 (no)
JP (2) JP4703855B2 (no)
KR (2) KR100798499B1 (no)
CN (2) CN100402017C (no)
AT (2) ATE317257T1 (no)
AU (2) AU776301B2 (no)
BG (3) BG65501B1 (no)
BR (2) BRPI0017460B1 (no)
CA (2) CA2650202C (no)
CZ (1) CZ302628B6 (no)
DE (2) DE60025961T2 (no)
DK (2) DK1426044T3 (no)
EA (2) EA004459B1 (no)
EE (2) EE05719B1 (no)
ES (2) ES2258688T3 (no)
HK (2) HK1045145B (no)
HR (1) HRP20010740B1 (no)
HU (1) HU229366B1 (no)
IL (4) IL145765A0 (no)
IS (2) IS2476B (no)
IT (1) IT1306129B1 (no)
ME (2) ME00113B (no)
MX (1) MXPA01010359A (no)
NO (2) NO327742B1 (no)
NZ (2) NZ528874A (no)
PL (2) PL211710B1 (no)
PT (2) PT1183228E (no)
RS (3) RS20090448A (no)
SI (2) SI1183228T1 (no)
SK (2) SK287253B6 (no)
TR (2) TR200202358T2 (no)
WO (1) WO2000061543A2 (no)
ZA (1) ZA200109291B (no)

Families Citing this family (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1246792B1 (en) * 2000-01-13 2014-08-13 Emisphere Technologies, Inc. Compounds and compositions for delivering active agents
DE10113446A1 (de) 2001-03-19 2002-09-26 Schwarzkopf Gmbh Hans Haarbehandlungsmittel mit Betainen
DK2108362T3 (da) * 2002-06-26 2013-09-02 Medigene Ag Kationisk liposomal-fremstilling omfattende en taxan
EP2108362B1 (en) * 2002-06-26 2013-05-29 MediGene AG A cationic liposomal preparation comprising a taxane
ITRM20040288A1 (it) * 2004-06-11 2004-09-11 Sigma Tau Ind Farmaceuti Uso della 7-t-butossiimminometilcamptotecina per la preparazione di un medicamento per il trattamento delle neoplasie dell'utero.
GT200500310A (es) * 2004-11-19 2006-06-19 Compuestos organicos
US20080095834A1 (en) * 2005-03-02 2008-04-24 Volkmar Weissig Mitochondriotropic Phospholipid Vesicles
SA06270147B1 (ar) 2005-06-09 2009-12-22 نوفارتيس ايه جي عملية لتخليق 5-(مثيل–1h–إيميدازول–1-يل )–3-(ثلاثي فلـورو مثيل)–بنزامـين
CN101287448A (zh) * 2005-08-10 2008-10-15 诺瓦提斯公司 拓扑异构酶i的抑制剂7-叔丁氧基亚氨基甲基喜树碱的微粒组合物
WO2007017513A2 (en) * 2005-08-10 2007-02-15 Novartis Ag Formulations for 7-(t-butoxy)iminomethyl camptothecin
US20100178325A1 (en) * 2006-08-23 2010-07-15 Biodelivery Sciences International, Inc. Amphiphilic nucleotide cochleate compositions and methods of using the same
AU2008210511A1 (en) * 2007-02-01 2008-08-07 Sigma-Tau Industrie Farmaceutiche Riunite S.P.A. Pharmaceutical composition comprising a campothecin derivative
US20100104625A1 (en) * 2007-02-16 2010-04-29 Cornell University Biodegradable compositions and materials
US20100204432A1 (en) 2007-05-28 2010-08-12 Husam Younes Biodegradable elastomers prepared by the condensation of an organic di-, tri- or tetra-carboxylic acid and an organic diol
ES2569660T3 (es) 2007-06-08 2016-05-12 Mannkind Corporation Inhibidores de la IRE-1alfa
EP2706121A1 (en) 2008-03-13 2014-03-12 PerkinElmer Health Sciences, Inc. Enzymatic substrate building blocks for multiple detection systems
EP2532649B1 (en) * 2011-06-07 2015-04-08 Incella GmbH Amino lipids, their synthesis and uses thereof
WO2013032643A2 (en) * 2011-08-31 2013-03-07 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Lipids capable of conformational change and their use in formulations to deliver therapeutic agents to cells
CA2906839A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Perkinelmer Health Sciences, Inc. Compounds and methods relating to testing for lysosomal storage disorders
MX2018010586A (es) 2016-03-02 2019-03-28 Univ Texas Nanovacuna de activacion de "sting" para inmunoterapia.
EP3634942A4 (en) 2017-06-06 2021-03-10 Wayne State University PROCESSES AND COMPOSITIONS ASSOCIATED WITH MATERIALS DERIVED FROM CARNITINE
CN115177608B (zh) * 2022-07-26 2023-12-05 南方医科大学南方医院 长链酰基肉碱类化合物在制备预防和/或治疗肝癌的药物中的应用

Family Cites Families (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5008288A (en) * 1986-01-06 1991-04-16 Alfred Stracher Carnitine directed pharmaceutical agents
US4866040A (en) * 1986-01-06 1989-09-12 Alfred Stracher Aminocarnitine directed pharmaceutical agents
IT1230142B (it) * 1989-05-03 1991-10-14 Fidia Spa Derivati della carnitina, processo per la loro preparazione e impiego in terapia umana
DE69119074T2 (de) * 1990-06-15 1996-12-12 University Of North Carolina At Chapel Hill, Chapel Hill, N.C. Kovalente-ther lipidnukleosid-konjugate
IT1248321B (it) * 1991-05-15 1995-01-05 Sigma Tau Ind Farmaceuti Uso di esteri di acil l-carnitine con l'acido gamma-idrossibutirrico per produrre composizioni farmaceutiche per il trattamento di epatopatie
IT1258370B (it) * 1992-03-02 1996-02-26 Sigma Tau Ind Farmaceuti Esteri della l-carnitina e di acil l-carnitine dotati di attivita' miorilassante selettiva sull'apparato gastro-intestinale e composizioni farmaceutiche che li contengono.
US5972600A (en) * 1992-04-03 1999-10-26 The Regents Of The University Of California Separation of active complexes
IT1263013B (it) * 1992-10-20 1996-07-23 Avantgarde Spa Esteri della l-carnitina e di alcanoil l-carnitine con l'acido glicolico o suoi esteri e composizioni farmaceutiche contenenti tali per il trattamento di affezioni cutanee.
US5552156A (en) * 1992-10-23 1996-09-03 Ohio State University Liposomal and micellular stabilization of camptothecin drugs
US5512671A (en) * 1993-02-16 1996-04-30 Wake Forest University Ether lipid-nucleoside covalent conjugates
IT1261984B (it) * 1993-06-22 1996-06-11 Avantgarde Spa Uso di esteri della l-carnitina o di acil l- carnitine con idrossiacidi per produrre composizioni farmaceutiche per il trattamento di affezioni cutanee.
EP0706374B1 (en) * 1993-06-30 1997-12-10 Genentech, Inc. Method for preparing liposomes
IT1273987B (it) * 1994-09-29 1997-07-14 Sigma Tau Ind Farmaceuti Uso di esteri ftalidilidenici della carnitina e di alcanoil carnitine per il trattamento dello shock endotossico
US6008202A (en) * 1995-01-23 1999-12-28 University Of Pittsburgh Stable lipid-comprising drug delivery complexes and methods for their production
US6316652B1 (en) * 1995-06-06 2001-11-13 Kosta Steliou Drug mitochondrial targeting agents
AU707734B2 (en) * 1995-06-07 1999-07-15 Regents Of The University Of California, The Stabilization of polynucleotide complexes
US5811406A (en) * 1995-06-07 1998-09-22 Regents Of The University Of California Dry powder formulations of polynucleotide complexes
IT1283955B1 (it) * 1996-03-20 1998-05-07 Sigma Tau Ind Farmaceuti Bis alcanoil esteri della carnitina ad attivita' antibatterica, antimicotica ed antiprotozoaria.
WO1998004720A1 (en) * 1996-07-26 1998-02-05 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Method and reagents for genetic immunization
US6056973A (en) * 1996-10-11 2000-05-02 Sequus Pharmaceuticals, Inc. Therapeutic liposome composition and method of preparation
US6071532A (en) * 1996-10-15 2000-06-06 Emory University Synthesis of glycophospholipid and peptide-phospholipid conjugates and uses thereof
IT1299172B1 (it) * 1998-05-06 2000-02-29 Sigma Tau Ind Farmaceuti Esteri perfluorurati di alcanoil l-carnitine utilizzabili quali lipidi cationici per l'immissione intracellulare di composti

Also Published As

Publication number Publication date
BG109876A (en) 2008-02-29
AU2004224958A1 (en) 2004-11-25
PT1426044E (pt) 2006-06-30
NO20014985D0 (no) 2001-10-12
EP1183228A2 (en) 2002-03-06
PL211710B1 (pl) 2012-06-29
HK1092732A1 (en) 2007-02-16
EA200101076A1 (ru) 2002-04-25
DK1426044T3 (da) 2006-06-12
DE60025961D1 (de) 2006-04-20
ATE317257T1 (de) 2006-02-15
US20050079209A1 (en) 2005-04-14
IL145765A (en) 2007-07-04
ME00113B (me) 2010-10-10
IS8719A (is) 2008-03-07
DE60025961T2 (de) 2006-08-17
JP2011042657A (ja) 2011-03-03
AU2004224958B2 (en) 2007-11-22
HUP0201446A3 (en) 2002-11-28
CA2370143A1 (en) 2000-10-19
US6797281B1 (en) 2004-09-28
DK1183228T3 (da) 2005-05-17
KR20060113799A (ko) 2006-11-02
NO20014985L (no) 2001-10-12
DE60017388D1 (de) 2005-02-17
HK1045145B (zh) 2006-01-27
HRP20010740A2 (en) 2002-10-31
NZ528874A (en) 2005-09-30
ITRM990220A1 (it) 2000-10-13
CZ20013617A3 (cs) 2002-02-13
CN100402017C (zh) 2008-07-16
EE201100028A (et) 2011-08-15
EP1426044B1 (en) 2006-02-08
US20070190128A1 (en) 2007-08-16
EP1183228B1 (en) 2005-01-12
JP5420507B2 (ja) 2014-02-19
TR200202358T2 (tr) 2002-12-23
NO20085413L (no) 2001-10-12
HRP20010740B1 (en) 2005-08-31
YU70201A (sh) 2004-07-15
EE05514B1 (et) 2012-02-15
ATE286873T1 (de) 2005-01-15
JP2002541238A (ja) 2002-12-03
SI1183228T1 (en) 2005-04-30
HK1045145A1 (en) 2002-11-15
EE200100518A (et) 2002-12-16
CA2370143C (en) 2011-06-21
CA2650202C (en) 2012-12-11
IS2476B (is) 2008-12-15
IS6095A (is) 2001-09-28
NZ515270A (en) 2004-02-27
PL351112A1 (en) 2003-03-24
BG105971A (en) 2002-08-30
HU229366B1 (en) 2013-11-28
AU776301B2 (en) 2004-09-02
ES2258688T3 (es) 2006-09-01
CZ302628B6 (cs) 2011-08-10
RS50911B (sr) 2010-08-31
NO327742B1 (no) 2009-09-14
SK287253B6 (sk) 2010-04-07
ZA200109291B (en) 2002-08-16
IL175366A0 (en) 2006-09-05
CN1263730C (zh) 2006-07-12
PL204418B1 (pl) 2010-01-29
WO2000061543A2 (en) 2000-10-19
BR0009765B1 (pt) 2013-11-05
BG65501B1 (bg) 2008-10-31
KR100684378B1 (ko) 2007-02-20
KR100798499B1 (ko) 2008-01-28
US7585519B2 (en) 2009-09-08
CN1359370A (zh) 2002-07-17
HUP0201446A2 (en) 2002-08-28
US7629003B2 (en) 2009-12-08
ES2234591T3 (es) 2005-07-01
IL175366A (en) 2010-12-30
BRPI0017460B1 (pt) 2016-04-19
CA2650202A1 (en) 2000-10-19
TR200102941T2 (tr) 2002-05-21
EE05719B1 (et) 2014-08-15
BR0009765A (pt) 2002-01-02
PT1183228E (pt) 2005-04-29
IS2539B (is) 2009-09-15
KR20010113794A (ko) 2001-12-28
BG65312B1 (bg) 2008-01-31
SI1426044T1 (sl) 2006-04-30
CN1823731A (zh) 2006-08-30
EA006021B1 (ru) 2005-08-25
EP1435232A1 (en) 2004-07-07
IT1306129B1 (it) 2001-05-30
DE60017388T2 (de) 2006-03-30
SK288246B6 (sk) 2015-03-03
EA004459B1 (ru) 2004-04-29
AU4312300A (en) 2000-11-14
RS52682B (en) 2013-08-30
IL145765A0 (en) 2002-07-25
MXPA01010359A (es) 2002-05-06
US20040186175A1 (en) 2004-09-23
EP1426044A1 (en) 2004-06-09
IL185486A0 (en) 2008-01-06
WO2000061543A3 (en) 2001-01-11
JP4703855B2 (ja) 2011-06-15
RS20090448A (en) 2010-06-30
MEP24008A (en) 2010-06-10
SK14312001A3 (sk) 2002-02-05
EA200300745A1 (ru) 2003-12-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
NO336949B1 (no) Anvendelse av estere av L-karnitin eller alkanoyl L-karnitiner som kationiske lipider for intracellulær avlevering av farmakologisk aktive forbindelser
US9233971B2 (en) Lipomacrocycles and uses thereof
AU2007214359B2 (en) Esters of L-carnitine or alkanoyl L-carnitines useful as cationic lipids for the intracellular delivery of pharmacologically active compounds
KR20070023826A (ko) 미용 활성 화합물의 세포 내 전달을 위한 양이온성지질로서 유용한 l-카르니틴 또는 알카노일 l-카르니틴의에스테르함유 리포솜이

Legal Events

Date Code Title Description
MM1K Lapsed by not paying the annual fees