KR20010113794A - 약리학적으로 활성인 화합물의 세포 내 전달을 위한양이온성 지질로서 유용한 ｌ-카르니틴 또는 알카노일ｌ-카르니틴의 에스테르 - Google Patents
약리학적으로 활성인 화합물의 세포 내 전달을 위한양이온성 지질로서 유용한 ｌ-카르니틴 또는 알카노일ｌ-카르니틴의 에스테르 Download PDFInfo
- Publication number
- KR20010113794A KR20010113794A KR1020017013018A KR20017013018A KR20010113794A KR 20010113794 A KR20010113794 A KR 20010113794A KR 1020017013018 A KR1020017013018 A KR 1020017013018A KR 20017013018 A KR20017013018 A KR 20017013018A KR 20010113794 A KR20010113794 A KR 20010113794A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- acid
- carnitine
- group
- compound
- liposomes
- Prior art date
Links
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims abstract description 89
- -1 alkanoyl L-carnitines Chemical class 0.000 title claims abstract description 50
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 title claims abstract description 35
- PHIQHXFUZVPYII-ZCFIWIBFSA-N (R)-carnitine Chemical compound C[N+](C)(C)C[C@H](O)CC([O-])=O PHIQHXFUZVPYII-ZCFIWIBFSA-N 0.000 title claims abstract description 19
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 title abstract description 24
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 title abstract description 8
- 239000002502 liposome Substances 0.000 claims description 151
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 70
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims description 56
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 45
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 45
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 35
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 32
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 31
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims description 31
- GCIOXBFOKSICTP-UHFFFAOYSA-N (3-hexadecanoyloxy-2,5-dihydroxy-4-oxopentyl) hexadecanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)C(C(=O)CO)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC GCIOXBFOKSICTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 26
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 claims description 25
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 claims description 24
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 claims description 24
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 23
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 22
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerol Natural products OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 20
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 19
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 19
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 claims description 18
- VSJKWCGYPAHWDS-FQEVSTJZSA-N camptothecin Chemical class C1=CC=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)[C@]5(O)CC)C4=NC2=C1 VSJKWCGYPAHWDS-FQEVSTJZSA-N 0.000 claims description 16
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 229940127093 camptothecin Drugs 0.000 claims description 15
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 15
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 15
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 15
- KLWPJMFMVPTNCC-UHFFFAOYSA-N Camptothecin Natural products CCC1(O)C(=O)OCC2=C1C=C3C4Nc5ccccc5C=C4CN3C2=O KLWPJMFMVPTNCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 14
- VSJKWCGYPAHWDS-UHFFFAOYSA-N dl-camptothecin Natural products C1=CC=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)C5(O)CC)C4=NC2=C1 VSJKWCGYPAHWDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 claims description 14
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 14
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims description 13
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 claims description 13
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 12
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 12
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 claims description 11
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 11
- 125000002811 oleoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])/C([H])=C([H])\C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 10
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 10
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 claims description 10
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 9
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 claims description 9
- 125000001419 myristoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 9
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 claims description 9
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 8
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 8
- UFAHZIUFPNSHSL-MRVPVSSYSA-N O-propanoyl-L-carnitine Chemical compound CCC(=O)O[C@H](CC([O-])=O)C[N+](C)(C)C UFAHZIUFPNSHSL-MRVPVSSYSA-N 0.000 claims description 8
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 claims description 8
- 229940009098 aspartate Drugs 0.000 claims description 8
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims description 8
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 claims description 8
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 claims description 8
- 229940095064 tartrate Drugs 0.000 claims description 8
- 239000004037 angiogenesis inhibitor Substances 0.000 claims description 7
- 229940121369 angiogenesis inhibitor Drugs 0.000 claims description 7
- 239000007922 nasal spray Substances 0.000 claims description 7
- 125000001312 palmitoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 7
- RDHQFKQIGNGIED-MRVPVSSYSA-N O-acetyl-L-carnitine Chemical compound CC(=O)O[C@H](CC([O-])=O)C[N+](C)(C)C RDHQFKQIGNGIED-MRVPVSSYSA-N 0.000 claims description 6
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 claims description 6
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 claims description 6
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 claims description 6
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 claims description 6
- 125000000400 lauroyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 6
- 125000001117 oleyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])/C([H])=C([H])\C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 6
- 239000000668 oral spray Substances 0.000 claims description 6
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 claims description 6
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 claims description 6
- 125000003696 stearoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 6
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 6
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 claims description 5
- 125000000913 palmityl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 5
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 5
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 5
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 claims description 5
- NDVRKEKNSBMTAX-BTVCFUMJSA-N (2r,3s,4r,5r)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O NDVRKEKNSBMTAX-BTVCFUMJSA-N 0.000 claims description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N Methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M Trifluoroacetate Chemical compound [O-]C(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N alpha-glycerophosphate Natural products OCC(O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N hydrogen iodide Chemical compound I XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 150000003893 lactate salts Chemical class 0.000 claims description 4
- 125000001421 myristyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 4
- 125000001402 nonanoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 4
- 125000001400 nonyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 4
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 4
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 claims description 4
- AWUCVROLDVIAJX-GSVOUGTGSA-N sn-glycerol 3-phosphate Chemical compound OC[C@@H](O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-GSVOUGTGSA-N 0.000 claims description 4
- 125000004079 stearyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 4
- 229940066528 trichloroacetate Drugs 0.000 claims description 4
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 125000002948 undecyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 4
- VEEGZPWAAPPXRB-BJMVGYQFSA-N (3e)-3-(1h-imidazol-5-ylmethylidene)-1h-indol-2-one Chemical compound O=C1NC2=CC=CC=C2\C1=C/C1=CN=CN1 VEEGZPWAAPPXRB-BJMVGYQFSA-N 0.000 claims description 3
- LRCNOZRCYBNMEP-SECBINFHSA-N O-isobutyryl-L-carnitine Chemical compound CC(C)C(=O)O[C@H](CC([O-])=O)C[N+](C)(C)C LRCNOZRCYBNMEP-SECBINFHSA-N 0.000 claims description 3
- IGQBPDJNUXPEMT-SNVBAGLBSA-N isovaleryl-L-carnitine Chemical compound CC(C)CC(=O)O[C@H](CC([O-])=O)C[N+](C)(C)C IGQBPDJNUXPEMT-SNVBAGLBSA-N 0.000 claims description 3
- 229940097496 nasal spray Drugs 0.000 claims description 3
- PSHXNVGSVNEJBD-LJQANCHMSA-N O-tetradecanoyl-L-carnitine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCC(=O)O[C@H](CC([O-])=O)C[N+](C)(C)C PSHXNVGSVNEJBD-LJQANCHMSA-N 0.000 claims description 2
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 claims description 2
- 125000004063 butyryl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 2
- 125000001589 carboacyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 229960000678 carnitine chloride Drugs 0.000 claims description 2
- 125000003438 dodecyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims description 2
- 125000003104 hexanoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 2
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 2
- 229940041678 oral spray Drugs 0.000 claims description 2
- 125000001501 propionyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 2
- 125000000297 undecanoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 2
- 125000003774 valeryl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 2
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 claims 6
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 claims 6
- 210000000748 cardiovascular system Anatomy 0.000 claims 4
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 claims 3
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 claims 3
- PXQPEWDEAKTCGB-UHFFFAOYSA-N orotic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC(=O)NC(=O)N1 PXQPEWDEAKTCGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 3
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 claims 3
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 58
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 53
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 41
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 38
- DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N Tert-Butanol Chemical compound CC(C)(C)O DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 33
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 32
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 30
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 28
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 27
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 27
- 239000000047 product Substances 0.000 description 26
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 23
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 18
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 16
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 15
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 15
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 14
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 13
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 13
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 12
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 12
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 11
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 10
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 10
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 9
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 9
- 238000001476 gene delivery Methods 0.000 description 9
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 9
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 8
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 8
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 8
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 8
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 8
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 7
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 7
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 7
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 7
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 7
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 6
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 6
- 125000003435 aroyl group Chemical group 0.000 description 6
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 6
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 6
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- RSMRWWHFJMENJH-LQDDAWAPSA-M 2,3-bis[[(z)-octadec-9-enoyl]oxy]propyl-trimethylazanium;methyl sulfate Chemical compound COS([O-])(=O)=O.CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(C[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC RSMRWWHFJMENJH-LQDDAWAPSA-M 0.000 description 5
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 5
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 5
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 5
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 5
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 5
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 5
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 description 5
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 5
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 5
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 5
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 5
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 5
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N Titanium Chemical compound [Ti] RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229960004203 carnitine Drugs 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- GKIRPKYJQBWNGO-OCEACIFDSA-N clomifene Chemical compound C1=CC(OCCN(CC)CC)=CC=C1C(\C=1C=CC=CC=1)=C(\Cl)C1=CC=CC=C1 GKIRPKYJQBWNGO-OCEACIFDSA-N 0.000 description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 4
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 4
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 4
- 239000002798 polar solvent Substances 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 4
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 4
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 4
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 4
- 229910052719 titanium Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000010936 titanium Substances 0.000 description 4
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 4
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 4
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 4
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IOOMXAQUNPWDLL-UHFFFAOYSA-N 2-[6-(diethylamino)-3-(diethyliminiumyl)-3h-xanthen-9-yl]-5-sulfobenzene-1-sulfonate Chemical compound C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1S([O-])(=O)=O IOOMXAQUNPWDLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 3
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 3
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 3
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 3
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 3
- RXKJFZQQPQGTFL-UHFFFAOYSA-N dihydroxyacetone Chemical compound OCC(=O)CO RXKJFZQQPQGTFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 3
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 3
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 3
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 3
- 229910000027 potassium carbonate Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 3
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 3
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- NYBWUHOMYZZKOR-UHFFFAOYSA-N tes-adt Chemical class C1=C2C(C#C[Si](CC)(CC)CC)=C(C=C3C(SC=C3)=C3)C3=C(C#C[Si](CC)(CC)CC)C2=CC2=C1SC=C2 NYBWUHOMYZZKOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 3
- 125000006726 (C1-C5) alkenyl group Chemical group 0.000 description 2
- 125000006527 (C1-C5) alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 125000006376 (C3-C10) cycloalkyl group Chemical group 0.000 description 2
- PPNCOQHHSGMKGI-UHFFFAOYSA-N 1-cyclononyldiazonane Chemical compound C1CCCCCCCC1N1NCCCCCCC1 PPNCOQHHSGMKGI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- KPRGOTLNGIBVFL-GINZOMEDSA-N 7-ketodehydroepiandrosterone Chemical group C1[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3C(=O)C=C21 KPRGOTLNGIBVFL-GINZOMEDSA-N 0.000 description 2
- 208000035484 Cellulite Diseases 0.000 description 2
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000610640 Homo sapiens U4/U6 small nuclear ribonucleoprotein Prp3 Proteins 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-L L-tartrate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-L 0.000 description 2
- 239000002841 Lewis acid Substances 0.000 description 2
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 2
- 206010027458 Metastases to lung Diseases 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 206010049752 Peau d'orange Diseases 0.000 description 2
- ATUOYWHBWRKTHZ-UHFFFAOYSA-N Propane Chemical compound CCC ATUOYWHBWRKTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101001110823 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) 60S ribosomal protein L6-A Proteins 0.000 description 2
- 101000712176 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) 60S ribosomal protein L6-B Proteins 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100040374 U4/U6 small nuclear ribonucleoprotein Prp3 Human genes 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 230000001153 anti-wrinkle effect Effects 0.000 description 2
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 2
- 230000036232 cellulite Effects 0.000 description 2
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 2
- 125000004093 cyano group Chemical group *C#N 0.000 description 2
- 125000000753 cycloalkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 2
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 2
- 239000012024 dehydrating agents Substances 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 230000001815 facial effect Effects 0.000 description 2
- 238000003818 flash chromatography Methods 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-L fumarate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)\C=C\C([O-])=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-L 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 description 2
- 230000000887 hydrating effect Effects 0.000 description 2
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 2
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 2
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 2
- 150000007529 inorganic bases Chemical class 0.000 description 2
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 2
- 231100001231 less toxic Toxicity 0.000 description 2
- 150000007517 lewis acids Chemical class 0.000 description 2
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 2
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 2
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 2
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 2
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 2
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 2
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 2
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 description 2
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- 150000002923 oximes Chemical class 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 2
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 2
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 2
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940074410 trehalose Drugs 0.000 description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- UOCLXMDMGBRAIB-UHFFFAOYSA-N 1,1,1-trichloroethane Chemical compound CC(Cl)(Cl)Cl UOCLXMDMGBRAIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 description 1
- SYZRZLUNWVNNNV-UHFFFAOYSA-N 2-bromoacetyl chloride Chemical compound ClC(=O)CBr SYZRZLUNWVNNNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010002383 Angina Pectoris Diseases 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical group [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 1
- 208000031229 Cardiomyopathies Diseases 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 201000003883 Cystic fibrosis Diseases 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 1
- 108010091938 HLA-B7 Antigen Proteins 0.000 description 1
- AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N Hydroxylamine Chemical compound ON AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- 206010021118 Hypotonia Diseases 0.000 description 1
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 1
- 208000026350 Inborn Genetic disease Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 1
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 1
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 208000024556 Mendelian disease Diseases 0.000 description 1
- 229920001410 Microfiber Polymers 0.000 description 1
- 108091022875 Microtubule Proteins 0.000 description 1
- 102000029749 Microtubule Human genes 0.000 description 1
- 208000021908 Myocardial disease Diseases 0.000 description 1
- 150000001204 N-oxides Chemical class 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N Sodium Chemical compound [Na] KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 108700005077 Viral Genes Proteins 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 238000011481 absorbance measurement Methods 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001263 acyl chlorides Chemical class 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 1
- 230000006793 arrhythmia Effects 0.000 description 1
- 206010003119 arrhythmia Diseases 0.000 description 1
- 125000003710 aryl alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 108091092356 cellular DNA Proteins 0.000 description 1
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000001739 density measurement Methods 0.000 description 1
- 229940120503 dihydroxyacetone Drugs 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 238000000921 elemental analysis Methods 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 239000003205 fragrance Substances 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- UIVFUQKYVFCEKJ-OPTOVBNMSA-N gimatecan Chemical compound C1=CC=C2C(\C=N\OC(C)(C)C)=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)[C@]5(O)CC)C4=NC2=C1 UIVFUQKYVFCEKJ-OPTOVBNMSA-N 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 125000003147 glycosyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 150000004820 halides Chemical class 0.000 description 1
- 210000005003 heart tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 1
- 125000001072 heteroaryl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 description 1
- 125000000592 heterocycloalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- ARBOVOVUTSQWSS-UHFFFAOYSA-N hexadecanoyl chloride Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(Cl)=O ARBOVOVUTSQWSS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000548 hind-foot Anatomy 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 150000002443 hydroxylamines Chemical class 0.000 description 1
- 150000002466 imines Chemical class 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N iodine Chemical group II PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 239000000644 isotonic solution Substances 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 238000002356 laser light scattering Methods 0.000 description 1
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 1
- 125000003473 lipid group Chemical group 0.000 description 1
- 210000005228 liver tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 230000004758 lung carcinogenesis Effects 0.000 description 1
- 201000005296 lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 239000003658 microfiber Substances 0.000 description 1
- 210000004688 microtubule Anatomy 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 230000036640 muscle relaxation Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- HYDZPXNVHXJHBG-UHFFFAOYSA-N o-benzylhydroxylamine;hydron;chloride Chemical compound Cl.NOCC1=CC=CC=C1 HYDZPXNVHXJHBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZBDXGNXNXXPKJI-UHFFFAOYSA-N o-tert-butylhydroxylamine;hydrochloride Chemical compound Cl.CC(C)(C)ON ZBDXGNXNXXPKJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000424 optical density measurement Methods 0.000 description 1
- 150000004967 organic peroxy acids Chemical class 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- OXNIZHLAWKMVMX-UHFFFAOYSA-N picric acid Chemical class OC1=C([N+]([O-])=O)C=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O OXNIZHLAWKMVMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 238000012809 post-inoculation Methods 0.000 description 1
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 description 1
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 1
- 239000001294 propane Substances 0.000 description 1
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000009993 protective function Effects 0.000 description 1
- 238000000751 protein extraction Methods 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 230000022532 regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- FQENQNTWSFEDLI-UHFFFAOYSA-J sodium diphosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O FQENQNTWSFEDLI-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 239000012312 sodium hydride Substances 0.000 description 1
- 229910000104 sodium hydride Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940048086 sodium pyrophosphate Drugs 0.000 description 1
- 239000012265 solid product Substances 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 125000004434 sulfur atom Chemical group 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- LMBFAGIMSUYTBN-MPZNNTNKSA-N teixobactin Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H]1C(N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C[C@@H]2NC(=N)NC2)C(=O)N[C@H](C(=O)O[C@H]1C)[C@@H](C)CC)=O)NC)C1=CC=CC=C1 LMBFAGIMSUYTBN-MPZNNTNKSA-N 0.000 description 1
- 235000019818 tetrasodium diphosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001577 tetrasodium phosphonato phosphate Substances 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000036962 time dependent Effects 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 238000002723 toxicity assay Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 229940074409 trehalose dihydrate Drugs 0.000 description 1
- GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N trimethylamine Chemical compound CN(C)C GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C229/00—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
- C07C229/02—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C229/00—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
- C07C229/02—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton
- C07C229/04—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated
- C07C229/22—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated the carbon skeleton being further substituted by oxygen atoms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/21—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates
- A61K31/215—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids
- A61K31/22—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acyclic acids, e.g. pravastatin
- A61K31/225—Polycarboxylic acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/02—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by special physical form
- A61K8/14—Liposomes; Vesicles
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/40—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing nitrogen
- A61K8/44—Aminocarboxylic acids or derivatives thereof, e.g. aminocarboxylic acids containing sulfur; Salts; Esters or N-acylated derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
- A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers
- A61K9/1272—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers with substantial amounts of non-phosphatidyl, i.e. non-acylglycerophosphate, surfactants as bilayer-forming substances, e.g. cationic lipids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
- A61K9/1277—Processes for preparing; Proliposomes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
- A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Birds (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
약리 활성 화합물의 세포 내 전달을 위한 양이온성 지질로서 사용될 수 있는 L-카르니틴 및 알카노일 L-카르니틴의 에스테르들이 개시되어 있다. R 그룹들이 발명의 상세한 설명에 정의되어 있는 바와 같은 하기 화학식 I의 신규한 L-카르니틴 및 알카노일 L-카르니틴의 에스테르들이 또한 개시되어 있다:
화학식 I
Description
본 발명에서 “세포 내 전달”이 의미하는 것은 치료 활성(유전자 전달)을 부여하거나, 또는 약물 또는 면역원성 펩티드를 세포 내로 도입시키는, 천연 또는 변형된 폴리뉴클레오티드 또는 플라스미드에 의한 세포의 형질감염이다.
다수의 약리 활성 물질들, 예를 들어 폴리펩티드 및 단백질 또는 약물들은일반적으로 세포 내로 침투되어 세포 이하 또는 분자 수준으로 세포 기능에 영향을 미침으로써 효과를 발휘하는 것을 필요로 한다. 이들 분자에 대해서 세포막은 선택적으로 불 투과성인 차단 층을 구성한다. 실제로, 세포막은 잠재적으로 독성인 물질의 침입을 방지하는 보호 기능을 수행하지만, 또한 치료 활성인 화합물의 통과를 막기도 한다. 세포막의 복합적인 조성에는 인지질, 당지질 및 단백질이 포함되며; 그의 기능은 세포질 성분들, 예를 들어 Ca++및 다른 이온들, ATP, 미세섬유, 미세소관, 효소 및 Ca++와 결합하는 단백질에 의해 영향을 받는다. 세포의 구조와 세포질 성분들간의 상호작용 및 외부 신호에 대한 반응은 많은 상이한 세포 유형들에 의해 나타나는 선택성에 기여한다. 세포막의 차단 효과는 물질들을 천연 막 지질의 조성을 재현한 지질 제형과 복합적으로 결합시킴으로써 극복될 수 있다. 이러한 지질들은 막과 융합하고 상기와 결합된 물질들을 세포 내로 방출시킬 수 있다. 상기 지질 복합체는 막과의 융합에 의한 세포 내 전달을 촉진시킬 뿐만 아니라 또한 막과 세포 내로 침투해야 하는 분자간의 전하 척력을 감소시킬 수 있다. 양쪽성 지질, 예를 들어 막 인지질은 수성 시스템에서 지질 소낭 또는 리포솜을 형성한다.
리포솜은 수성의 일정 부피가 지질 분자, 대개는 인지질로 구성된 하나 이상의 막에 의해 완전히 둘러싸인 소낭이다. 친수성 헤드와 한 쌍의 탄소 쇄(소수성 테일)로 이루어진 인지질은 생물 막의 주요 성분이다. 수용액에서, 상기 소수성 테일은 자동적으로 협력하여 물을 차단하는 반면, 친수성 헤드는 매질과 상호작용하여 가변 직경의 소낭 집단을 자발적으로 형성한다. 상기 지질은 일반적으로는 쯔비터이온, 중성 또는 음이온성이다. 이들 소낭을 약물, 소 분자, 단백질, 뉴클레오티드 및 플라스미드의 운반자로서 사용할 수 있다.
최근 수년에 걸쳐, 합성 지질로부터 제조된 양으로 하전된 소낭 군을 유전 물질의 세포 내로의 전달에 광범위하게 사용하여 왔다. DNA의 음 전하는 양이온성 지질의 양 전하와 상호 작용하여 안정한 DNA-리포솜 복합체를 형성시킬 수 있다. 이러한 기술의 간편성과 융통성은 리포솜을 인간 대상에서의 유전자 요법을 위한 유전자의 전달에 중요한 비히클로 만들었다. 현재, 유전자 요법에 사용되고 NIH 재조합 자문 위원회에 의해 승인된 대부분의 벡터들은 바이러스성과 합성 시스템을 포함한다.
바이러스 감염은 특정한 세포를 공격하여 DNA를 핵 내로 운반할 수 있도록 하는 일련의 복잡한 기전을 수반한다. 유전자 요법에 바이러스 벡터를 사용하는 근본 원리는 바이러스 입자가 세포를 감염시킬 수 있는 능력을 제거하지 않으면서, 치료 기능을 암호화하는 유전자로 상기 바이러스 유전자를 대체할 수 있다는 가능성을 근거로 한다. 상기 바이러스 요법의 한계는 면역원성이고, 세포 병원성이며, 재조합성일 수 있는 바이러스 요소를 사용해야 한다는 것이다.
유전자 요법을 위해서 양이온성 지질의 사용에 큰 희망을 걸고 있다. 이들 벡터는 생물 기원의 것들에 비해 큰 잠재성을 갖는데, 그 이유는 이들이 훨씬 더 안전하고, 덜 독성이며, 또한 큰 크기의 유전자를 결합시킬 수 있기 때문이다. 그러나, 생물 유형의 벡터에 비해, 이들은 세포 내 유전자 전사 수율이 낮다.그러나, 이러한 형질감염 시스템의 사용은 초기 연구 단계에 있다는 것을 명심해야 한다. 양이온성 지질은 DNA-지질 복합체의 형성, 세포-복합체 상호 작용, 막과의 융합, 세포 내부의 DNA-방출 및 전사에서 매우 중요한 역할을 한다.
양이온성 리포솜의 생체 내 적용에 대해 중요한 예들이 존재한다. 유전자 요법에 대한 첫 번째 임상적 시험은 흑색종의 치료를 위한 인간 리포솜과 복합체를 이룬 HLA-B7 유전자를 함유하는 발현 벡터를 도입시킴으로써 수행하였다. 또 다른 중요한 적용은 상기 리포솜과 복합체를 이룬 발현 벡터 SV-40C-FTR의 폐 경로 또는 코 분무를 통한 투여에 의한 폐 낭성 섬유증의 치료에 관한 것이다. 암에 대한 유전자 요법에 리포솜의 사용을 수반하는 다른 임상적 시험들이 현재 진행중이다.
4 개의 구성 요소들은 일반적으로 양이온성 지질의 구조, 즉 양으로 하전된 양이온성 헤드, 스페이서, 앵커 지질 및 링커 결합으로 확인되었다.
양이온성 헤드는 양이온성 리포솜과 DNA, DNA-리포솜 복합체와 세포막, 및 세포의 다른 성분들간의 상호 작용에 기여한다. 상기는 가변적으로 치환될 수 있는 모노- 또는 폴리양이온성 그룹(전하의 수에 따라)으로 이루어진다.
스페이서는 상기 양이온성 헤드를 소수성 테일로부터 분리시키는 분자 부분으로, 상기 양이온성 헤드와 DNA 포스페이트의 음 전하 간에 최적의 접촉을 보장하는데 관여한다.
앵커 지질은 분자의 비-극성 탄화수소 부분으로, 이중 지질 층의 물리적 성질, 예를 들어 그의 강도 및 막 지질과의 교환율을 결정한다.
“링커 결합”이 의미하는 것은 상기 탄화수소 쇄와 분자의 나머지 부분간의 결합이다. 이 결합은 양이온성 지질의 화학 안정성과 생분해성을 결정한다.
최근 몇 년 동안, 리포솜은 화장료 분야에서 그 사용이 꾸준히 증가하여 왔다. 이 분야에서의 리포솜의 성공은 이들 화합물이 피부에 매우 관대히 허용된다는 점이다. 이들은 유효 성분에 대한 비히클 및 상기 유효성분의 흡수를 돕는 화합물 모두로서 사용된다.
리포솜의 제조와 용도에 대한 과학 및 특허 참고 문헌들이 풍부하지만, 유전자 전달에 유용한 카르니틴 유도체의 용도를 기술하는 참고문헌은 매우 적으며, 반면에 약물 전달에 대해서 본 발명에 따른 화합물을 조금이나마 닮은 화합물의 공지된 제조 기술들을 다루는 문헌들은 입수할 수가 없다.
특허 출원 EP 0 279 887에는 리포솜의 제조를 위한, 임의로 다른 인지질 및 지질(콜레스테롤, 포스파티딜 콜린, 포스파티딜 세린)과 혼합된, 카르니틴의 유도체, 즉 포스파티딜 카르니틴의 용도가 개시되어 있다.
리포솜의 제조에 관하여 제공된 예 중에서, 고혈압 치료제, 협심증 치료제 및 부정맥 치료제로서 활성인 것으로 알려진 약물인 프로프라놀올을 포함하는 포스파티딜 카르니틴의 리포솜을 제조하는 것이 있다. 여기에서 상기 카르니틴 유도체는 카르니틴의 현저한 심근 향성 때문에 사용된다. 이러한 향성은 리포솜이 목적하는 표적 부위에 도달하기보다는 간에 의해 대사되는 것을 피할 수 있게 한다.
포스파티딜 카르니틴의 존재는 또한 리포솜을 경구로 투여할 수 있게 하는데, 그 이유는 상기가 장 리파제에 내성이기 때문이다.
문헌[J. Med. Chem. 1998, Jun 18; 41(13): 2207-15]에는 유전자 전달에 유용한 다수의 L-카르니틴의 에스테르들이 개시되어 있으나, 이들은 약물 전달에 유용한 약제로서 개시되거나 제안되지 않았다.
EP 559 625 B1에는 선택적인 위장관 근육 이완 활성이 부여된 다수의 L-카르니틴 및 아실 L-카르니틴의 에스테르들이 개시되어 있다.
최근 몇 년 동안, 분자 생물학자들은 인간 대상자에서 유전성 질환을 일으키는 염색체 수준의 다수의 결함들을 확인하였다.
현대 의학의 중요 분야는 유전자 요법 프로토콜의 사용에 의한 이들 유전적인 유전자에 의거한 질환들의 치료와 관련된다.
이미 언급한 바와 같이, 양이온성 리포솜은 약리 활성 화합물의 세포 내 전달에 광범위하게 사용되어, 막을 통한 수송을 용이하게 하거나 특정한 세포막 부위(수용체)와의 상호 작용을 촉진시킨다.
이들 벡터는 생물 기원의 것들에 비해 큰 잠재성을 갖는데, 그 이유는 이들이 훨씬 더 안전하고, 덜 독성이며, 또한 큰 크기의 유전자를 결합시킬 수 있기 때문이다. 그러나, 생물 유형의 벡터에 비해, 이들은 세포 내 유전자 전사 수율이 낮다.
더욱이, 통상적인 양이온성 지질에 의해 매개되는 유전자 전달은 플라스미드 DNA와 양이온성 지질을 분리시켜 유지할 것을 요하며, 이들의 혼합을 유전자 전달 직전에 수행할 것을 요한다.
이들 폴리뉴클레오티드 복합체의 안정화를 위한 시도들은 지금까지 장려된 결과를 얻는데 실패했으며; 실제로 이러한 시도들은 단지 단기간 동안의 안정성에 머문다.
따라서 유전자 요법 또는 유전자 전달 및 약물 전달 분야에서, 적합한 기간 후에도 또한 활성인 안정하고 재현 가능한 부위-특이적인 시스템에 대한 요구가 강하게 인식되고 있다.
본 발명은 L-카르니틴 및 아실 L-카르니틴의 신규 에스테르 군, 및 약리 활성 화합물의 세포 내 전달을 돕거나, 그의 막간(transmembrane) 이동을 촉진시키거나, 또는 특정한 세포막 부위(수용체)와의 상호작용을 촉진시키기에 적합한 양이온성 지질로서의 그의 용도에 관한 것이다.
본 발명은 또한 상기 언급한 신규 화합물과 동일한 목적에 유용한, L-카르니틴 및 아실 L-카르니틴의 추가로 공지된 에스테르에 관한 것이다.
본 발명에 이르러 약리 활성 화합물의 세포 내 전달의 촉진에 강력하게 활성인 양이온성 지질 군이 L-카르니틴 및 아실 L-카르니틴의 신규 에스테드들을 포함함을 발견하였다.
이들 신규 화합물은 표적 기관에 도달함에 있어서 부위-특이적이므로 안정하고 대단히 선택성이다.
이러한 특징은 이들 화합물을 상기 화합물들이 그의 약리 활성을 발휘할 수 있는 부위로 직접 수송하는데 특히 유용하게 만든다.
본 발명에 따른 화합물은 하기 화학식 I의 화합물이다:
상기 식에서,
n은 1 내지 3의 정수이고;
R은 수소, 또는 탄소수 2 내지 6의 직쇄 또는 분지된 알카노일이고;
R1및 R2는 동일하거나 상이할 수 있으며, 탄소수 3 내지 20의 포화되거나 불포화된 직쇄 아실을 나타내고;
X-는 약리학적으로 허용가능한 산의 음이온이다.
R의 예로는 아세틸, 프로피오닐, 부티릴, 발레릴 및 이소발레릴이 있다.
R1및 R2의 예로는 헥사노일, 운데카노일, 미리스토일, 팔미토일 또는 올레오일이 있다.
본 발명에 따른 화합물의 바람직한 예는
-2-하이드록시아세틸-1,3-디팔미토일 글리세롤을 갖는 L-카르니틴 브로마이드의 에스테르(ST770);
-2-하이드록시아세틸-1,3-디팔미토일 글리세롤을 갖는 아세틸 L-카르니틴 브로마이드의 에스테르(ST771);
-2-하이드록시아세틸-1,3-디팔미토일 글리세롤을 갖는 프로피오닐 L-카르니틴 브로마이드의 에스테르(ST772);
-2-하이드록시아세틸-1,3-디팔미토일 글리세롤을 갖는 이소부티릴 L-카르니틴 브로마이드의 에스테르(ST773);
-2-하이드록시아세틸-1,3-디팔미토일 글리세롤을 갖는 이소발레릴 L-카르니틴 브로마이드의 에스테르(ST774);
-1,3-디헥사노일-2-하이드록시아세틸 글리세롤을 갖는 L-카르니틴 브로마이드의 에스테르(ST810);
-1,3-디헥사노일-2-하이드록시아세틸 글리세롤을 갖는 아세틸 L-카르니틴 브로마이드의 에스테르(ST809);
-1,3-디헥사노일-2-하이드록시아세틸 글리세롤을 갖는 프로피오닐 L-카르니틴 브로마이드의 에스테르(ST808).
약리학적으로 허용가능한 산의 음이온이 의미하는 것은 불필요한 독성 또는 부작용을 발생시키지 않는 산의 임의의 음이온이다.
이들 산은 약리학자들 및 약학 기술 전문가들에게 널리 공지되어 있다.
이들 음이온의 예로는 비 제한적으로 클로라이드; 브로마이드; 요오다이드; 아스파테이트; 산 아스파테이트; 시트레이트; 산 시트레이트; 타르트레이트; 산 타르트레이트; 포스페이트; 산 포스페이트; 푸마레이트; 산 푸마레이트; 글리세로포스페이트; 글루코스 포스페이트; 락테이트; 말리에이트; 산 말리에이트; 뮤케이트;오로테이트; 옥살레이트; 산 옥살레이트; 설페이트; 산 설페이트; 트리클로로아세테이트; 트리플루오로아세테이트; 메탄 설포네이트; 파모에이트 및 산 파모에이트가 있다.
화학식 I의 화합물은 리포솜의 형태로 유전자 요법에 유용하거나, 또는 백신으로서 유용한 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 천연 또는 변형된 플라스미드 또는 뉴클레오티드의 전달과, 약물, 예를 들어 항암 약물, 항바이러스제, 항균제, 항진균제, 항원생동물제, 심근계 질환의 치료에 유용한 약물, 또는 면역원성 펩티드 또는 치료에 유용한 다른 약물들의 일반적인 전달 모두에 유용한 약제이다.
화학식 I의 화합물을 함유하는 리포솜은 당해 분야의 숙련가에게 잘 알려진 통상적인 기술에 의해 제조한다(예를 들어 문헌[Allen T.M. Drugs 56, 747-56(1998)]을 참조하시오). 본 발명에 따른 리포솜을 또한 리포솜 기법의 실행에 널리 알려진 다른 성분들을 사용함으로써 제조할 수도 있다. 본 발명의 하나의 실시태양에서, 상기 리포솜은 헬퍼 지질(helper lipid, 이 용어는 당해 분야에서 널리 이해되고 있다)을 함유할 수도 있다. 헬퍼 지질의 예로는 콜레스테롤, 1-팔미토일-2-올레오일 포스파티딜 콜린 또는 디올레일 포스파티딜 콜린이 있다.
본 발명에 따른 리포솜은 조성물로서 적합하게 제공된다. 약리 활성 화합물의 전달에 관한 실시태양에서, 상기 조성물은 임의로 약학적으로 허용가능한 비히클 및/또는 부형제를 포함하는 약학 조성물로서 이해된다.
리포솜 형태의 화학식 I의 화합물은 또한 리포솜 자체를 미용 활성 성분으로서 포함하는 화장료 조성물의 제조와, 미용 활성을 갖는 물질, 예를 들어 수화제, 영양분, 훼이셜 클렌징 물질, 주름 방지제, 셀룰라이트 억제제 및 임신선 생성 방지제의 전달에 유용할 수 있다.
화학식 I의 화합물을 포함하는 리포솜을 경구 또는 비경구, 정맥내, 근육내, 피하, 경피, 또는 코 또는 구강 스프레이의 형태로 투여할 수 있다.
본 원에 개시된 발명은 또한 이미 다른 용도로 공지된(상기 언급한 EP 559 625) 화학식 II의 추가적인 양이온성 지질에 관한 것이다.
본 발명에 따라, 화학식 II의 화합물은 효능 있는 약물 전달 활성을 가지며 표적 기관에 도달함에 있어서 상기 개시된 화학식 I의 화합물에 필적할만한 안정성과 선택성의 특징을 제공하는 리포솜의 제조에 유용한 L-카르니틴의 에스테르이다. 동일한 유리한 성질들을 화장료의 경우에도 적용할 수 있다.
이들 화합물은 하기 화학식 II를 갖는다:
상기 식에서,
R3는 탄소수 4 내지 26의 포화되거나 불포화된 직쇄 또는 분지된 아실 쇄이고;
R4는 탄소수 4 내지 26의 포화되거나 불포화된 직쇄 또는 분지된 알킬 쇄이고;
X-는 약리학적으로 허용가능한 산의 음이온이다.
R3의 바람직한 예는 노나노일, 도데카노일, 미리스토일, 팔미토일, 스테아로일 또는 올레오일이다.
R4의 바람직한 예는 노닐, 운데실, 테트라데실, 헥사데실 또는 올레일이다.
본 발명에 따른 화학식 II의 구체적인 화합물의 예는 하기와 같다:
-팔미토일 L-카르니틴 클로라이드 운데실 에스테르(ST983);
-스테아로일 L-카르니틴 클로라이드 운데실 에스테르(ST1055);
-스테아로일 L-카르니틴 클로라이드 테트라데실 에스테르(ST1351);
-팔미토일 L-카르니틴 클로라이드 테트라데실 에스테르(ST1379);
-미리스토일 L-카르니틴 클로라이드 테트라데실 에스테르(ST1380);
-팔미토일 L-카르니틴 브로마이드 헥사데실 에스테르(ST1390);
-올레일 L-카르니틴 클로라이드 올레일 에스테르(ST1392).
다수의 화학식 II의 화합물들, 즉 ST1380, ST1390 및 ST1392는 치료 활성이 부여된 세포 형질 감염을 위한 리포솜의 제조에 유용한 약제로서 공지되어 있고 상기 인용된 문헌[J. Med. Chem. 1998, Jun 18;41(13):2207-15]에 개시되어 있으나, 약물 전달용 리포솜의 제조에 유용한 약제로서는 결코 개시되지 않았다.
약학 제형 분야의 평균적인 경험을 가진 숙련가는 리포솜-약물 복합체의 제조에서 접하게되는 어려움을 잘 알고 있으며; 실제로, 약물과 복합체를 이룰 수 있는 리포솜을 얻기 위해 극복해야 하며 상기 약물이 치유 활성을 발휘해야 하는 기관에 우선적으로 상기 약물을 전달해야 하는 다수의 문제점들로 인해 유전자 전달에 유용한 리포솜을 약물 전달에 사용할 수 있는지를 정하는 것은 불가능하다.
리포솜 형태의 화학식 II의 화합물은 약물, 예를 들어 항암제, 혈관형성 억제제, 항바이러스제, 항균제, 항진균제, 항원생동물제, 또는 심근 질환의 치료에 유용한 약물, 또는 면역원성 펩티드 및 치료에 유용한 다른 약물들의 전달에 유용한 약제이다.
리포솜 형태의 화학식 II의 화합물은 또한 미용 약제 자체로서 화장료 조성물의 제조, 또는 미용 활성을 갖는 물질, 예를 들어 수화제, 영양분, 훼이셜 클렌징 물질, 주름 방지제, 셀룰라이트 억제제 및 임신선 생성 방지제의 전달에도 유용할 수 있다.
상기 리포솜은 화학식 II의 화합물을 포함하는 리포솜의 경우에서와 같이 헬퍼 지질을 임의로 포함할 수도 있다.
화학식 II의 화합물을 포함하는 리포솜을 경구 또는 비경구, 정맥내, 근육내, 피하, 경피, 또는 코 또는 구강 스프레이의 형태로 투여할 수 있다.
본 원에 개시된 발명은 또한 이미 다른 용도로 공지된(상기 언급한 EP 559 625) 화학식 III의 추가적인 양이온성 지질에 관한 것이다.
본 발명에 따라, 화학식 III의 화합물은 효능 있는 약물 전달 활성을 가지며 표적 기관에 도달함에 있어서 상기 개시된 화학식 I의 화합물에 필적할만한 안정성과 선택성의 특징을 제공하는 리포솜의 제조에 유용한 L-카르니틴의 에스테르이다.
이들 화합물은 하기 화학식 III를 갖는다:
상기 식에서,
R5는 탄소수 4 내지 26의 포화되거나 불포화된 직쇄 또는 분지된 아실 쇄이고;
R6는 탄소수 4 내지 26의 포화되거나 불포화된 직쇄 또는 분지된 알킬 쇄이고;
X-는 약리학적으로 허용가능한 산의 음이온이나; 단
R5가 스테아로일일 때, R6는 스테아릴이 아니고,
R5가 올레오일일 때, R6는 스테아릴이 아니고,
R5가 팔미토일일 때, R6는 팔미틸이 아니고,
R5가 미리스토일일 때, R6는 미리스틸이 아니고,
R5가 라우로일일 때, R6는 라우릴이 아니고,
R5가 올레오일일 때, R6는 올레일이 아니다.
유전자 전달에 대해서만 제외된 리포솜 형태의 화합물이 문헌[J. Med. Chem. 1988, 41, 2207-2215]에 개시되어 있다.
R5의 바람직한 예는 노나노일, 도데카노일, 미리스토일, 팔미토일, 스테아로일 또는 올레오일이다.
R6의 바람직한 예는 노닐, 운데실, 테트라데실, 헥사데실 또는 올레일이다.
본 발명에 따른 화학식 III의 바람직한 화합물의 예는 하기와 같다:
-팔미토일 L-카르니틴 클로라이드 운데실 에스테르(ST983);
-스테아로일 L-카르니틴 클로라이드 운데실 에스테르(ST1055);
-스테아로일 L-카르니틴 클로라이드 테트라데실 에스테르(ST1351);
-팔미토일 L-카르니틴 클로라이드 테트라데실 에스테르(ST1379).
화학식 III의 화합물은 유전자 요법에 유용하거나, 또는 백신으로서 유용한 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 천연 또는 변형된 플라스미드 또는 뉴클레오티드의 전달에 유용한 약제이다.
화학식 III의 화합물을 경구 또는 비경구, 정맥내, 근육내, 피하, 경피, 또는 코 또는 구강 스프레이의 형태로 투여할 수 있다.
본 발명에 따른 화학식 I 화합물의 제조 과정을 하기 반응식으로 나타내며, 이 반응식을 전체 화학식 I에 적용시키고자 한다. 숙련가는 모든 필요 시약들을 상업적으로 입수할 수 있거나 또는 이들 시약이 문헌에 개시되어 있으므로, R, R1및 R2가 의미하는 모든 그룹들을 쉽게 수득할 수 있으며, 반응 조건들을 일반적으로 본 발명의 전체 범위에 적용할 수 있고, 경우에 따라 임의의 변경을 일반적인 상식 내에서 통상적으로 수행한다.
상기 반응식 1과 관련하여, 본 발명에 따른 화학식 I 화합물의 제조 방법을 하기에 예시한다.
실시예 1
2-하이드록시 아세틸 1,3-디팔미토일 글리세롤을 갖는 프로피오닐 L-카르니틴 브로마이드의 에스테르(ST772)의 제조
a)1,3-디하이드록시프로판-2온 1,3-디팔미테이트(1)의 제조
디하이드록시아세톤(7 g; 0.078 몰)을 0 ℃(외부 온도)에서 무수 클로로포름 300 ㎖에 무수 질소 기류 하에서 용해시켰다.
상기 수득된 용액에 팔미토일 클로라이드(44 g; 0.16 몰) 및 무수 피리딘(15 ㎖)을 적가하였다.
온도를 주변 온도로 만든 생성 혼합물을 24 시간 동안 교반 하에서 유지시켰다.
이어서 상기 혼합물을 하기의 순서로 추출하였다: 0.5% 염산 수용액 300 ㎖, 5% 중탄산 나트륨의 수용액 300 ㎖ 및 마지막으로 물 300 ㎖.
분리된 유기 상을 무수 황산 나트륨 상에서 탈수시키고, 셀룰로즈 필터 상에서 여과하고 농축 건조시켜 조 생성물(1)을 수득하였다.
순수한 생성물(1)을 에틸 알콜 500 ㎖로부터 결정화시켜 수득하였다.
생성물(1) 30.4 g을 수득하였다.
수율: 73%
융점: 80 내지 81 ℃
1HNMR(CDCl3): 0.9(6H, t,CH 3 CH2-); 1.3(48H, m, (CH2)n=24); 1.55(4H, m, -OCOCH2 CH 2 -); 2.4(4H, t, -OCOCH 2 -); 4.7(4H, s, -OCCH 2 -).
b) 1,2,3-트리하이드록시프로판-1,3-디팔미테이트(2)의 제조
물(7.5 ㎖)을 테트라하이드로푸란(125 ㎖)과 톨루엔(25 ㎖)에 용해시킨 생성물(1)(5 g, 9 밀리몰)에 교반하면서 서서히 가하였다.
수득된 유백색 현탁액의 온도를 5 ℃(외부 온도)로 만들고 붕수소화 나트륨(500 ㎎; 13 밀리몰)을 조금씩 나누어 가하였다. 상기 현탁액을 5 ℃에서 30 분간 교반하면서 유지시켰다.
이어서 빙초산을 과잉의 붕수소화 나트륨의 분해에 의해 생성된 거품이 멈출 때까지 서서히 가하여 최종적으로 용액을 수득하였다.
클로로포름(100 ㎖)을 상기 용액에 가하여 2상 시스템이 형성되었다.
CHCl3로 이루어진 하부의 유기 상을 분리시키고, 이를 하기의 순서로 추출하였다: 물(25 ㎖), 중탄산 나트륨(10% 수용액 25 ㎖) 및 물(25 ㎖).
(2)를 함유하는 유기 용액을 황산 나트륨 상에서 탈수시키고, 농축 건조시켜 왁스형 생성물을 수득하였다.
생성물(2)를 상기 왁스형 조 생성물의 아세톤 결정화에 의해 수득하였다.
생성물(2) 4.8 g을 수득하였다.
수율: 94%
융점: 71 내지 72 ℃
1HNMR(CDCl3): 0.9(6H, t,CH 3 CH2-); 1.3(48H, m, (CH 2 )n=24); 1.55(4H, m, -OCOCH2 CH 2 -); 2.4(4H, t, -OCOCH 2 -); 4.2(5H, m, -CHCH 2 O-).
c) 1,3-디팔미토일-2-브로모아세틸 글리세롤(3)의 제조
생성물(2)(2.5 g; 4.4 밀리몰)를 0 ℃(외부 온도)에서 교반하면서 무수 클로로포름(50 ㎖)에 용해시켰다.
상기 수득된 용액에 피리딘(0.42 ㎖)을 서서히 가하고 브로모아세틸클로라이드(0.43 ㎖; 5.2 밀리몰)를 함유하는 클로로포름 용액 3 ㎖을 적가하였다.
반응 혼합물을 0 ℃(외부 온도)에서 30 분간 유지시키고 주변 온도에서 30 분간 유지시켰다.
이어서 반응 혼합물을 하기의 순서로 처리하였다: 1% 염산의 수용액(대략 50 ㎖), 5% 중탄산 나트륨의 수용액(대략 50 ㎖) 및 물.
생성물(3)을 아세톤 결정화에 의해 정제하고, 그 후에 반응 혼합물을 탈수(황산 나트륨에 의해)시키고 농축 건조시켰다.
생성물(3) 2.5 g을 수득하였다.
수율: 89%
융점: 46 내지 47 ℃
1HNMR(CDCl3): 0.9(6H, t,CH 3 CH2-); 1.3(48H, m, (CH2)n=24); 1.55(4H, m, -OCOCH2 CH 2 -); 2.4(4H, t, -OCOCH 2 -); 3.9(2H, s, -OCH 2 COO-); 4.2-4.4(5H, m, -CHCH 2 O-); 5.25(1H, m, -CHCH2O-).
d) 2-하이드록시아세틸-1,3-디팔미토일글리세롤을 갖는 에스테르 L-프로피오닐 카르니틴 브로마이드(4)의 제조
40 ℃에서 미리 진공 건조시킨 L-프로피오닐 카르니틴 내염(0.95 g, 4.4 밀리몰)을 무수 디메틸포름아미드(대략 20 ㎖)에 현탁시켰다.
생성물(3)(3 g, 4.7 밀리몰)을 조금씩 나누어 상기 현탁액에 가하였다. 상기 현탁액을 38 ℃로 서서히 가열하고 용액이 수득될 때까지 상기 조건 하에서 유지시켰다.
10 분 후에, 상기 용액의 온도를 30 분간 0 ℃로 만들었다. 침전물이 수득되고, 이를 여과하고 에틸 에테르로 세척하고 클로로포름(100 ㎖)에 용해시켰다. 수득된 유백광 용액(30 ㎖)을 셀라이트 상에서 여과하고 농축시켰다. 이 용액에 헥산(100 ㎖)을 가하고 수득된 생성물(4)의 침전물을 여과하고 35 ℃에서 진공 건조시켰다.
표제 화합물 3.19 g을 수득하였다.
수율: 80%
융점: 127 내지 128 ℃
[α]25 D=-3.9(c=1% 클로로포름)
C47H88BrNO10에 대한 원소분석
계산치(%): C, 62.23; H, 9.78; N, 1.54; Br, 8.81
실측치(%): C, 62.73; H, 10.15; N, 0.79; Br, 8.77
1HNMR(CDCl3): 0.9-0.95(6H, t,CH 3 CH2CH2-); 1.1-1.2(3H, t,CH 3 CH2CO); 1.2-1.4(24H, m, CH2n=24); 1.5-1.6(4H, m, -OCCH2 CH 2 -); 2.3-2.4(4H, t, -OCCH 2 CH2-); 2.4-2.45(4H, d.d., -CHCH 2 O-); 2.95(2H, d, -CH 2 COOCH2COO-); 3.5(9H, s, N(CH3)3); 4.2(4H, m, -CH 2 OCOCH2-); 4.35(2H, m, -CH 2 N-); 4.65(2H, d,d, -OCH 2 CO-); 5.25(1H, m, -OCH2 CHCH2O-); 5.75(1H, m, -CHCH2N-).
실시예 2 내지 7
하기의 화합물들을 선행 실시예에서와 동일한 방식으로 제조하였다:
-2-하이드록시아세틸-1,3-디팔미토일 글리세롤을 갖는 L-카르니틴 브로마이드의 에스테르(ST770);
-2-하이드록시아세틸-1,3-디팔미토일 글리세롤을 갖는 아세틸 L-카르니틴 브로마이드의 에스테르(ST771);
-2-하이드록시아세틸-1,3-디팔미토일 글리세롤을 갖는 이소부티릴 L-카르니틴 브로마이드의 에스테르(ST773);
-2-하이드록시아세틸-1,3-디팔미토일 글리세롤을 갖는 이소발레릴 L-카르니틴 브로마이드의 에스테르(ST774);
-1,3-디헥사노일-2-하이드록시아세틸 글리세롤을 갖는 L-카르니틴 브로마이드의 에스테르(ST810);
-1,3-디헥사노일-2-하이드록시아세틸 글리세롤을 갖는 아세틸 L-카르니틴 브로마이드의 에스테르(ST809);
-1,3-디헥사노일-2-하이드록시아세틸 글리세롤을 갖는 프로피오닐 L-카르니틴 브로마이드의 에스테르(ST808).
본 발명의 하나의 바람직한 실시태양은 항암 약물을 갖는 리포솜, 및 특히 캠토테신에 대한 비히클로서 작용하는 리포솜의 제조이며, 이의 예가 WO 97/31003에 개시되어 있다. 보다 바람직한 실시태양에서, 본 발명은 하기 화학식 IV의 캠토테신, 그의 N1-옥사이드, 단일 이성체, 특히 -C(R11)=N-O(n)R10그룹의 syn 및 anti 이성체, 그의 가능한 에난티오머, 디아스테레오머 및 관련 혼합물, 그의 약학적으로 허용가능한 염 및 그의 활성 대사산물의 전달을 위한 리포솜을 제공한다:
상기 식에서,
R7은 -C(R11)=N-O(n)R10그룹이고, 여기에서
R10은 수소, 또는 직쇄 또는 분지된 C1-C5알킬 또는 C1-C5알케닐 그룹, 또는 C3-C10사이클로알킬 그룹, 또는 직쇄 또는 분지된 (C3-C10) 사이클로알킬-(C1-C5) 알킬 그룹, 또는 C6-C14아릴, 또는 직쇄 또는 분지된 (C6-C14)아릴-(C1-C5) 알킬 그룹, 또는 헤테로사이클릭 또는 직쇄 또는 분지된 헤테로사이클릭-(C1-C5) 알킬 그룹이며, 이때 상기 헤테로사이클릭 그룹은 (C1-C5) 알킬 그룹에 의해 임의로 치환되며 질소 및/또는 산소 및/또는 황 원자 중에서 선택된 하나 이상의 헤테로원자를 함유하고; 상기 알킬, 알케닐, 사이클로알킬, 아릴, 아릴-알킬, 헤테로사이클릭 또는 헤테로사이클로-알킬 그룹은 할로겐, 하이드록시, C1-C5알킬, C1-C5알콕시, 페닐, 시아노, 니트로, -NR12R13(여기에서 R12및 R13은 동일하거나 상이하게 수소, 직쇄 또는분지된 (C1-C5) 알킬이다), -COOH 그룹 또는 그의 약학적으로 허용가능한 에스테르; 및 -CONR14R15그룹(여기에서 R14및 R15는 동일하거나 상이하게 수소, 직쇄 또는 분지된 (C1-C5) 알킬이다) 중에서 선택된 다른 그룹들로 임의로 치환되거나;
R10은 할로겐, 하이드록시, 직쇄 또는 분지된 C1-C5알킬, 직쇄 또는 분지된 C1-C5알콕시, 페닐, 시아노, 니트로, -NR16R17(여기에서 R16및 R17은 동일하거나 상이하게 수소, 직쇄 또는 분지된 C1-C5알킬이다) 중에서 선택된 하나 이상의 그룹에 의해 임의로 치환된 C6-C10아로일 잔기이거나;
R10은 폴리아미노알킬 잔기이거나; 또는
R10은 글리코실 잔기이고;
n은 0 또는 1이고;
R11은 수소, 직쇄 또는 분지된 C1-C5알킬, 직쇄 또는 분지된 C1-C5알케닐, C3-C10사이클로알킬, 직쇄 또는 분지된 (C3-C10) 사이클로알킬-(C1-C5) 알킬, C6-C14아릴, 직쇄 또는 분지된 (C6-C14) 아릴-(C1-C5) 알킬이고;
R8및 R9는 동일하거나 상이하게 수소, 하이드록실, 직쇄 또는 분지된 C1-C5알콕시이다.
화학식 IV의 화합물은 1999년 3월 9일자로 출원된 유럽 특허 출원 제99830124.6에 개시되어 있다.
n이 1이고 R10이 아로일을 제외하고 상기 정의한 바와 같은 화학식 IV의 화합물에 대해서, 상기 화합물을 캠토테신 7-알데히드(화학식 IVa, R11수소) o 캠토테신 7-케토(화학식 IVa, R11수소 이외의 것)로부터 출발하여 제조할 수 있다:
상기 식에서,
R7은 -C(R11)=O 그룹이고, 여기에서 R11은 화학식 IV에서 정의한 바와 같고,
R8및 R9는 화학식 IV에서 정의한 바와 같다.
화학식 IVa의 화합물을 화학식 Va 화합물 R10O-NH2(여기에서 R10은 상기와 같다)와 반응시켜 R7이 -C(R11)=N-O-R10그룹이고, R10이 아로일을 제외하고 화학식 IV에서와 같이 정의되는 화학식 I의 화합물을 수득한다.
상기 반응을 당해 분야의 숙련가들에게 공지된 통상적인 방법들을 사용하여 수행할 수 있으며, 이때 상기 방법은 통상적인 옥심 제조 방법이다. 바람직하게는 캠토테신 7-알데히드 o 7-케토 대 하이드록실아민의 몰 비는 1:3 내지 3:1의 범위이어야 한다. 관련된 하이드록실아민 염들도 또한 사용할 수 있다. 상기 반응을 염기, 예를 들어 탄산 칼륨과 같은 무기 염기, 또는 트리에틸아민 또는 디아자비사이클로노난과 같은 유기 염기의 존재 하에서 극성 용매, 바람직하게는 메탄올 또는 에탄올을 사용하여 수행하며, 임의로 탈수제, 예를 들어 황산 나트륨 또는 마그네슘, 분자체의 존재 하에서 주변 온도 내지 용매의 비점 범위의 온도에서 수행한다. 경우에 따라, 상기 반응을 또한 촉매, 예를 들어 루이스 산의 존재 하에서 수행할 수도 있다.
한편으로, 상기 언급한 화합물들을 극성 용매, 예를 들어 테트라하이드로푸란 또는 알콜 중에서 염기, 예를 들어 수소화 나트륨 또는 탄산 칼륨의 존재 하에 캠토테신 7-알데히드의 옥심(문헌[Sawada et al Chem. Pharm. Bull. 39, 2574(1991)]에 개시된 바와 같이 수득함) 또는 7-케톤으로부터, 또는 R10-X 할라이드(여기에서 X는 바람직하게는 요오드이다)와의 반응에 의해 상응하는 7-아실캠토테신으로부터 제조할 수 있다.
화학식 IV에서 정의한 바와 같이 n이 1이고 R10이 아로일인 화학식 IV의 화합물에 대해서, 상기 화합물을 문헌[Cho et al., J. Org. Chem. 62, 2230(1997)]에 개시된 바와 같이 캠토테신 7-옥심(그의 제조 방법은 선행 단락에 개시되어 있다)으로부터 출발하여 R10-COCl 아실 클로라이드를 사용하여 극성 용매 중에서 염기, 바람직하게는 피리딘의 존재 하에서 또는 피리딘 중에서 직접 제조할 수 있다.
n이 0이고 R10이 아로일을 제외하고 상기 정의한 바와 같은 화학식 IV의 화합물에 대해서, 상기 화합물을 캠토테신 7-알데히드(화학식 IVa, R11수소) 또는 캠토테신 7-케토(화학식 IVa, R11수소 이외의 것)로부터 출발하여 제조할 수 있다:
화학식 IVa
상기 식에서,
R7은 -C(R11)=O 그룹이고, 여기에서 R11은 화학식 IV에서 정의한 바와 같고,
R8및 R9는 화학식 IV에서 정의한 바와 같다.
화학식 IVa의 화합물을 화학식 Vb 화합물 R10-NH2(여기에서 R10은 상기 정의한 바와 같다)와 반응시켜 화학식 IV의 화합물(이때 R7은 -C(R11)=N-R10그룹이고, R10은 아로일을 제외하고 화학식 IV에서와 같이 정의된다)을 수득한다. 상기 반응을 약학 기술 전문가들에게 공지된 통상적인 방법으로 수행할 수 있으며, 상기 방법은 통상적인 이민 제조 방법이다. 바람직하게는 캠토테신 7-알데히드 또는 7-케토 대이민의 몰 비는 1:3 내지 3:1의 범위이어야 한다. 관련된 아민 염들도 또한 사용할 수 있다. 상기 반응을 염기, 예를 들어 탄산 칼륨과 같은 무기 염기, 또는 트리에틸아민 또는 디아자비사이클로노난과 같은 유기 염기의 존재 하에서 극성 용매, 바람직하게는 메탄올 또는 에탄올을 사용하여 수행하며, 임의로 탈수제, 예를 들어 황산 나트륨 또는 마그네슘, 분자체의 존재 하에서 주변 온도 내지 용매의 비점 범위의 온도에서 수행한다. 경우에 따라, 상기 반응을 또한 촉매, 예를 들어 루이스 산의 존재 하에서 수행할 수도 있다(예를 들어 문헌[Moretti and Torre, Synthesis, 1970, 141; 또는 Kobayashi et al, Synlett, 1977, 115]을 참조하시오).
캠토테신 7-알데히드 및 캠토테신 7-옥심은 유럽 특허 출원 EP 0056692 및 상기 인용된 문헌[Sawada et al, Chem. Pharm. Bull. 39, 2574(1991)]에 개시되어 있다.
화학식 IV 화합물의 N-옥사이드를 공지된 헤테로방향족 질소 산화 방법에 따라, 바람직하게는 아세트산 또는 트리플루오로아세트산 및 과산화 수소에 의한 산화, 또는 유기 과산소산과의 반응에 의해 제조한다(A. Albini and S. Pietra, Heterocyclic N-oxides, CRC, 1991).
상이한 화학식 V의 시약들 중에 존재하는 R10의 가변적인 의미에 대해서, 상기 시약들을 상업적으로 입수하거나, 또는 문헌으로부터 친숙한 방법들에 따라 제조할 수 있으며, 상기 분야의 숙련가는 상기 방법들을 주제에 대한 그 자신의 지식에 따라 보충하여 재분류할 수 있다.
약학적으로 허용가능한 염을 문헌에 개시된 통상적인 방법에 따라 수득하며, 추가로 개시할 필요는 없다.
실시예 8
7-벤질옥시이미노메틸캠토테신(CPT172)
7-포르밀캠토테신 500 ㎎(1.33 밀리몰)을 에탄올 100 ㎖에 용해시킨다. 피리딘 15 ㎖ 및 O-벤질하이드록실아민 하이드로클로라이드 638 ㎎(4 밀리몰)을 가한다. 상기 용액을 5 시간 동안 환류시킨다. 용매를 진공 증발시키고 수득된 잔사를 용출제로서 헥산/에틸 아세테이트의 4:6 혼합물을 사용하여 실리카 겔 상에서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제시킨다.
수율: 65%
융점: 200 내지 205 ℃(분해)
수득된 생성물은 대략 8:2의 2 개의 syn 및 anti 이성체의 혼합물로 이루어진다(이성체 A: Rf 0.32; 이성체 B, Rf 0.19, Merck 60 F254 실리카겔 상에서; 용출제: 헥산:에틸 아세테이트 3:7).
HPLC: 레오다인 사출기(Rheodyne injector)(20 ㎕ 루프)를 갖는 4 급 펌프(HP 1050)와 HPLC-켐스테이션(ChemStation) 프로그램에 의해 실행되는 다이오드-배열 검출기(HP 1050)가 장착된 장치 상에서 분석을 수행하였다. 스펙트럼을 200 내지 600 nm에서 얻고 크로마토그램을 360 및 400 nm에서 기록하였다.
RP18 프리컬럼을 갖는 C18 역상 컬럼(Rainin C18; 25 x 0.4 ㎝, Varian)을사용하였다. 분석을 20 분간 아세토니트릴:물 30:70에서 출발하여 아세토니트릴 100%까지의 선형 용출 구배로 1㎖/분의 유속으로 수행하였다. 체류 시간은 이성체 B에 대해서 12.51 분이고 이성체 A에 대해서 14.48 분이었다.
1H-NMR(300 MHz; DMSO-d6): δ: 0.88(t, H3-18A+H3-18B), 1.87 8m, (H2-19A+H2-19B), 5.18(s, H2-5B), 5.21(8s, H2-Ph B), 5.30(H2-Ph A), 5.40(s, H2-5A), 5.45(s, H2-17A+H2-17B), 6.53(s, -OH A+ -OH B), 7.3-7.6(m, Ar A+ Ar B+ H-14A+H-14B), 7.75(m, H-11A+H-11B), 7.85-7.95(m, H-10A+H-10B), 7.98(dd, H-12B), 8.18-8.27(m, H-12A+H9-B), 8.45(s, CH=N B), 8.59(dd, H-9A), 9.38(s, CH=N A).
질량 m/z 481(M+100) 374(30) 330(70) 300(30) 273(20) 243(20) 91(34).
실시예 9
7-부톡시이미노메틸캠토테신(CPT 184)
7-포르밀캠토테신 400 ㎎(1.06 밀리몰)을 에탄올 80 ㎖에 용해시킨다. 피리딘 12 ㎖ 및 O-t-부틸하이드록실아민 하이드로클로라이드 400 ㎎(3.18 밀리몰)을 가한다. 상기 용액을 4 시간 동안 환류시킨다. 용매를 진공 증발시키고 수득된 잔사를 용출제로서 헥산/에틸 아세테이트의 4:6 혼합물을 사용하여 실리카 겔 상에서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제시킨다.
황색 고체 322 ㎎(0.72 밀리몰)을 수득한다.
수율: 68%
융점: 250 ℃(분해)
수득된 생성물은 대략 8:2의 2 개의 syn 및 anti 이성체의 혼합물로 이루어진다(이성체 A: Rf 0.31; 이성체 B, Rf 0.24, Merck 60 F254 실리카겔 상에서; 용출제: 헥산:에틸 아세테이트 3:7).
HPLC: 레오다인 사출기(20 ㎕ 루프)를 갖는 4 급 펌프(HP 1050)와 HPLC-켐스테이션 프로그램에 의해 실행되는 다이오드-배열 검출기(HP 1050)가 장착된 장치 상에서 분석을 수행하였다. 스펙트럼을 200 내지 600 nm에서 얻고 크로마토그램을 360 및 400 nm에서 기록하였다.
RP18 프리컬럼을 갖는 C18 역상 컬럼(Rainin C18; 25 x 0.4 ㎝, Varian)을 사용하였다. 분석을 20 분간 아세토니트릴:물 30:70에서 출발하여 아세토니트릴 100%까지의 선형 용출 구배로 1㎖/분의 유속으로 수행하였다. 체류 시간은 이성체 B에 대해서 12.92 분이고 이성체 A에 대해서 14.61 분이었다.
1H-NMR(300 MHz; DMSO-d6): δ: 0.88(t, H3-18A+H3-18B), 1.30(s, t-but.B), 1.47(s, t-but.A), 1.87(m, H2-19A+H2-19B), 5.18(s, H2-5B), 5.37(H2-5A), 5.42(s, H2-17A+H2-17B), 6.54(s, -OH A+ -OH B), 7.35(s H-14A), 7.36(s, H-14B), 7.69-7.83(m, H-11A+H-11B), 7.85-7.98(m, H-10A+H-10B), 8.07(dd, H-9B), 8.16-8.27(m, H-9A+H-12B), 8.40(s, CH B), 8.62(dd, H-12A), 9.31(s, CH A).
질량 m/z 448(M+28) 391(40) 374(100) 362(40) 330(34) 57(17).
리포솜의 제조
본 발명에 따른 화합물을 사용하여 건조 분말 형태 및 수용액 중의 현탁액으로서 다층 리포솜(MLV)과 단층 리포솜(SUV)을 제조할 수 있다.
실시예 1 내지 7에 개시된 바와 같이 제조된 본 발명에 따른 화합물을 사용하여 하기 과정에 따라 리포솜을 제조한다. 적합한 양의 화합물을 클로로포름에 용해시키고; 상기 용액을 지질 막이 얻어질 때까지 회전 증발기에서 진공 농축 건조시킨다. 상기 지질 막을 용매의 마지막 잔량이 제거될 때까지 고 진공 하에서 건조시키고 이어서 3급-부틸 알콜 또는 물로 용해시킨다. 상기 수득된 용액을 동결 건조시켜 연질의 건조 분말을 수득한다.
상기 분말을 적합한 양의 수용액으로 수화시켜 사용된 화합물의 리포솜을 수득하고, 이어서 이를 폴리뉴클레오티드 또는 목적하는 약물과 복합체로 만든다.
또 다른 리포솜 제조 방법은 용매 중의 본 발명에 따른 화합물로 이루어진 지질 막을 적합한 불활성 지지체, 예를 들어 솔비톨, 만니톨 또는 다른 약리학적으로 허용가능한 탄수화물 상에 흡착시키는 것이다. 상기 혼합물을 진공 건조시켜 고체를 수득하며, 이를 사용 전에 용이하고 매우 빠르게 수화시킬 수 있다.
건조 분말 형태의 제제는 장기적으로 안정한 이점을 제공하며 사용하기 용이하다.
더욱 또한, 본 발명에 따른 화합물을 하기의 과정에 따라 사용하여 DNA 또는 목적하는 약물과 복합체를 이룬 건조 분말 형태의 리포솜을 제조할 수 있다. 본 발명에 따른 화합물을 3급-부틸 알콜 또는 물로 용해시키고; 상기 수득된 용액을 DNA 또는 목적하는 약물과 혼합하고, 혼합물을 동결 건조시켜 연질의 건조 분말 형태의, 프로리포솜-DNA 또는 프로리포솜-약물이라 정의할 수 있는 복합체를 수득한다.
상기 수득된 분말(프로리포솜)을 약학 조성물의 제조에 사용할 수 있으며, 상기 조성물을 에어로졸을 통해 투여하거나, 또는 한편으로 물 또는 적합한 완충액으로 재조성하는 경우 비경구 또는 경구로 투여할 수 있다.
고체 형태의, DNA 또는 약물과 복합체를 이룬 리포솜을 또한 상기 개시된 방법에 의해 지질 막을 불활성 지지체, 예를 들어 솔비톨, 만니톨 또는 다른 탄수화물 상에 흡착시키는 방법으로 수득할 수 있다.
리포솜 형성에 대한 시험
리포솜 형성을 하기 과정에 따라 수용성 염료를 사용하여 비색법에 의해 시험하였다. 수용성 염료인 아르센아조 III의 수용액을 수득하였다(m.w.=776.37; 2.3 ㎎/㎖).
상기 용액을 물 대신에 사용하여 상기 언급한 제법으로부터 얻은 지질 막을 수화시켰다.
상기 염료를 둘러싼 리포솜을 함유하는 현탁액의 분액을 물로 100 배 희석하였다.
2 ㎖의 리포솜 현탁액을 사용하여 660 ㎚에서 첫 번째 흡광도를 판독하였으며; 블랭크로서 한정된 동등한 샘플에 관해서도 판독하였다. CaCl2용액(15 ㎎/㎖) 200 ㎕를 상기 첫 번째 샘플에 가하고, 블랭크에 대해서 660 ㎚에서 흡광도를 측정하고, 여기에 물 200 ㎕를 가하였다. 상기 얻어진 흡광도 값을 판독 2로서 나타내었다. 상기 샘플에 트리톤 X-100(5% v/v; 최종 농도 0.26%) 용액 100 ㎕를 가하고 블랭크에 물 200 ㎕를 가하였으며; 660 ㎚에서 판독한 흡광도를 판독 3으로 정의하였다. 캡슐화된 염료의 퍼센트를 계산하기 위해서, 하기 식을 사용하였다:
캡슐화된 염료%=(판독 3-판독 2)/판독 3 x 100
상기 캡슐화된 염료의 퍼센트는 리포솜 형성의 척도를 제공하며, 평균적으로 대략 40%이고; 리포솜 크기 검사를 레이저 광 산란을 사용하여 수행하여 양의 결과가 나왔다.
리포솜의 제조예
하기 형태들의 팔미토일 L-카르니틴 클로라이드 운데실 에스테르(ST983)의 리포솜의 제조:
a) 동결 건조 분말
팔미토일 L-카르니틴 클로라이드 운데실 에스테르 65 ㎎(0.11 밀리몰)을 100 ㎖의 플라스크에서 클로로포름 20 ㎖에 용해시켰다.
상기 용액을 지질 막이 얻어질 때까지 증발시키고 3 시간 동안 진공 건조시켰다. 상기 수득된 생성물을 3급-부틸 알콜에 용해시키고 상기 용액을 액체 질소로 -70 ℃로 급속히 냉각시키고 24 시간 동안 동결 건조시켰다.
스폰지형의 연질 백색 고체를 수득하였다.
b) 흡착 분말
팔미토일 L-카르니틴 클로라이드 운데실 에스테르 143 ㎎(0.231 밀리몰)을 클로로포름 10 ㎖에 용해시켰다. 상기 수득된 용액을 솔비톨 750 ㎎을 함유하는 100 ㎖의 플라스크에 조금씩 나누어 부었다. 다양한 분취량의 상기 클로로포름 용액의 첨가 종료시에 클로로포름을 급속히 증발시켰다.
상기 수득된 고체를 3 시간 동안 진공 건조시켰다.
백색 고체 생성물 893 ㎎을 수득하였다.
사용에 앞서, 상기 생성물을 적합한 분량의 물로 신속히 수화시켜 등장성 용액을 얻는다.
c) MLV 현탁액
팔미토일 L-카르니틴 클로라이드 운데실 에스테르 65 ㎎(0.11 밀리몰)을 100 ㎖의 플라스크에서 클로로포름 20 ㎖에 용해시켰다.
상기 수득된 용액을 지질 막이 얻어질 때까지 증발시키고 이어서 3 시간 동안 진공 건조시켰다.
상기 지질 막을 30 ℃에서 3 시간 동안 물 10 ㎖로 수화시켜 MLV 현탁액을 수득하였다.
적합하게 희석된 상기 MLV 현탁액을 폴리뉴클레오티드 또는 약물과 복합체로 만들어 생물학적 분석에 사용하였다.
e) SUV 현탁액
팔미토일 L-카르니틴 클로라이드 운데실 에스테르 65 ㎎(0.11 밀리몰)을 100㎖의 플라스크에서 클로로포름 20 ㎖에 용해시켰다.
상기 수득된 용액을 지질 막이 얻어질 때까지 증발시키고 이어서 3 시간 동안 진공 건조시켰다.
상기 지질 막을 30 ℃에서 3 시간 동안 물 10 ㎖로 수화시켜 MLV 현탁액을 수득하였다.
상기 MLV 현탁액을 기공 크기 200 ㎚의 폴리카보네이트 필터를 통해 10 회 압출시켰다. 상기 수득된 단 층 리포솜 현탁액을 폴리뉴클레오티드 또는 약물과 복합체로 만들고 생물학적 분석에 사용하였다.
f) 리포솜의 물리적 안정성에 대한 시험
리포솜 현탁액의 물리적 안정성을 30 일간 탁도 측정에 의해 시험하였다.
특정한 시간 간격으로 600 ㎚에서 시험할 각 현탁액에 대한 흡광도 측정을 수행하였다. 0 시간 째에 측정한 평균 흡광도 값은 시험된 모든 제형에 대해 일정하였다.
고려되는 분자들은 고려되는 기간에 걸쳐 순응적인 값들을 제공하였다.
MLV 및 SUV 리포솜 현탁액을 본 발명에 따른 화합물과 헬퍼 지질, 예를 들어 콜레스테롤, 1-팔미토일-2-올레오일 포스파티딜 콜린(POPC) 또는 디올레일 포스파티딜 콜린(DOPE)을 배합시킴으로써 제조할 수 있다.
상기 화합물을 보다 안정한 막을 갖는 리포솜을 수득하기 위해서 헬퍼 지질과 배합시킨다. 하기 리포솜의 제조를 개시하는 부분에서, 본 발명에 따른 화합물과 콜레스테롤 또는 POPC와 같은 헬퍼 지질을 배합하는 제조예를 제공한다.
약물 전달을 위한 리포솜의 제조예
실시예 10
탁솔-ST983 MLV 리포솜(1:40)의 제조
탁솔 20 ㎎(0.0234 밀리몰) 및 ST983 556 ㎎(0.9417 밀리몰)을 클로로포름 20 ㎖에 용해시켰다.
상기 용액을 지질 막이 유리 플라스크의 표면에 얻어질 때까지 농축시켰다.
진공 펌프의 도움으로 마지막 잔량의 클로로포름을 제거한 후에, 3급-부틸 알콜 20 ㎖을 상기 지질 막에 가하고, 상기 수득된 용액을 19 개의 분획으로 나누고, 이들을 액체 질소로 -70 ℃에서 즉시 냉동시키고 24 시간 동안 동결 건조시켰다. 각각의 고체 분획은 탁솔(1.05 ㎎) 및 ST983(29.2 ㎎)을 함유하였다.
최종 리포솜 현탁액을 수득하기 위해서, 상기 동결 건조된 생성물을 물(450 ㎕) 또는 다른 염수 용액으로 사용 시에 수화시키고, 10 분간 교반하고, 30 분간 방치시켜 팽윤(수화) 과정을 완료시켰다.
MLV 리포솜을 수득하였다.
제제의 물리적 안정성에 대한 시험
상기 제제의 물리적 안정성을 800 ㎚, 20 ℃에서 20 시간 동안 TDC(시간 구동 곡선)를 기록하면서 탁도 측정에 의해 시험하였다.
제제의 안정성을 가리키는 일정한 탁도 경향이 기록되었으며 침전 현상은 없었다.
제제 중의 탁솔의 화학적 안정성에 대한 시험
탁솔의 화학적 안정성을 HPLC에 의해 시험하였다.
크로마토그래피 조건은 하기와 같다:
컬럼: μ본다팩(Bondapack) C-18
용출제: 아세토니트릴:물 70:30
검출기 UV-VIS: 227 ㎚
유속: 1 ㎖/분
체류 시간: 4.5 분
기준에 대해 측정된 탁솔 농도는 2.13 ㎎/㎖이었다.
캡슐화된 탁솔의 퍼센트는 98%이었다.
실시예 11
탁솔-ST983 SUV 리포솜의 제조
탁솔 20 ㎎(0.0234 밀리몰) 및 ST983 556 ㎎(0.9417 밀리몰)을 클로로포름 20 ㎖에 용해시켰다.
상기 용액을 지질 막이 유리 플라스크의 표면에 얻어질 때까지 농축시켰다.
고-진공 펌프의 도움으로 마지막 잔량의 클로로포름을 제거한 후에, 3급-부틸 알콜 20 ㎖을 상기 지질 막에 가하고, 상기 수득된 용액을 19 개의 분획으로 나누고, 이들을 액체 질소로 -70 ℃에서 즉시 냉동시키고 24 시간 동안 동결 건조시켰다. 각각의 고체 분획은 탁솔(1.05 ㎎) 및 ST983(29.2 ㎎)을 함유하였다.
최종 SUV 리포솜 현탁액을 수득하기 위해서, 상기 동결 건조된 생성물을 PBS 용액(1 ㎖)으로 수화시키고 0 ℃에서 20 분간 초음파 처리하였다.
이어서 400 ㎚ 필터 상에서 여과를 수행하여 초음파기 탐침에 의해 방출된 티탄의 잔량을 제거하였다.
제제의 물리적 안정성에 대한 시험
상기 제제의 물리적 안정성을 800 ㎚, 20 ℃에서 20 시간 동안 TDC(시간 구동 곡선)를 기록하면서 탁도 측정에 의해 시험하였다.
제제의 안정성을 가리키는 일정한 탁도 경향이 기록되었으며 침전 현상은 없었다.
제제 중의 탁솔의 화학적 안정성에 대한 시험
탁솔의 화학적 안정성을 HPLC에 의해 시험하였다.
크로마토그래피 조건은 하기와 같다:
컬럼: μ본다팩 C-18
용출제: 아세토니트릴:물 70:30
검출기 UV-VIS: 227 ㎚
유속: 1 ㎖/분
체류 시간: 4.5 분
상기 SUV 리포솜 현탁액의 HPLC 분석은 상응하는 MLV 리포솜 현탁액과 동일한 결과를 낳았으며, 이 경우에도 역시 캡슐화된 탁솔의 퍼센트는 98%이었다.
24 시간 후에 반복된 HPLC 분석은 탁솔 피크 이외에 다른 새로운 피크가 없음을 보였으며, 이는 유효 성분의 안정성을 가리킨다.
실시예 12
탁솔-ST983-콜레스테롤 리포솜(1:15)의 제조
보다 안정한 막을 갖는 복합체를 수득하기 위해서 상기 유형의 리포솜을 제조하였다.
탁솔 6 ㎎(0.0101 밀리몰), ST983 62.2 ㎎(0.105 밀리몰) 및 콜레스테롤 40 ㎎을 클로로포름 10 ㎖에 용해시켰다.
상기 수득된 용액을 지질 막이 유리 플라스크의 표면에 얻어질 때까지 농축시켰다.
고-진공 펌프의 도움으로 마지막 잔량의 클로로포름을 제거한 후에, 3급-부틸 알콜 6.3 ㎖을 상기 지질 막에 가하고, 상기 수득된 용액을 5 개의 분획으로 나누고, 이들을 액체 질소로 -70 ℃에서 즉시 냉동시키고 24 시간 동안 동결 건조시켰다. 각각의 고체 분획은 탁솔(1.2 ㎎), ST983(12.44 ㎎) 및 콜레스테롤(8 ㎎)을 함유하였다.
최종 리포솜 현탁액을 수득하기 위해서, 상기 동결 건조된 생성물을 사용 시에 물(1000 ㎕) 또는 다른 염수 용액으로 수화시키고, 10 분간 교반하고, 30 분간 방치시켜 팽윤(수화) 과정을 완료시켰다.
MLV 리포솜을 수득하였다.
제제의 물리적 안정성에 대한 시험
상기 제제의 물리적 안정성을 800 ㎚, 20 ℃에서 6 시간 동안 TDC(시간 구동 곡선)를 기록하면서 탁도 측정에 의해 시험하였다.
제제의 안정성을 가리키는 일정한 탁도 경향이 기록되었으며 침전 현상은 없었다.
실시예 13
탁솔-ST772 SUV 리포솜(1:70)의 제조
탁솔 20 ㎎(0.0234 밀리몰) 및 ST772 1485 ㎎(1.638 밀리몰)을 클로로포름 20 ㎖에 용해시켰다.
상기 용액을 지질 막이 유리 플라스크의 표면에 얻어질 때까지 농축시켰다.
고-진공 펌프의 도움으로 마지막 잔량의 클로로포름을 제거한 후에, 3급-부틸 알콜 20 ㎖을 상기 지질 막에 가하였다. 등명한 용액을 수득하기 위해서, 상기를 60 ℃로 가열해야 했다. 상기 용액을 액체 질소로 -70 ℃에서 즉시 냉동시키고 24 시간 동안 동결 건조시켰다.
최종 SUV 리포솜 현탁액을 수득하기 위해서, 상기 동결 건조된 생성물을 PBS 용액(20 ㎖)으로 수화시키고 0 ℃에서 20 분간 초음파 처리하였다.
이어서 400 ㎚ 필터 상에서 여과를 수행하여 초음파기 탐침에 의해 방출된 티탄의 잔량을 제거하였다.
제제의 물리적 안정성에 대한 시험
상기 제제의 물리적 안정성을 800 ㎚, 20 ℃에서 6 시간 동안 TDC(시간 구동 곡선)를 기록하면서 탁도 측정에 의해 시험하였다.
제제의 안정성을 가리키는 일정한 탁도 경향이 기록되었으며 침전 현상은 없었다.
실시예 14
CPT83-ST983 MLV 리포솜(1:40)의 제조
CPT83(7-카보니트릴 캠토테신, WO 97/31003에 개시되어 있음) 6.3 ㎎(0.0168 밀리몰) 및 ST983 400 ㎎(0.667 밀리몰)을 클로로포름 20 ㎖에 용해시켰다.
상기 용액을 지질 막이 유리 플라스크의 표면에 얻어질 때까지 농축시켰다.
진공 펌프의 도움으로 마지막 잔량의 클로로포름을 제거한 후에, 3급-부틸 알콜 26 ㎖을 상기 지질 막에 가하고, 상기 수득된 용액을 12 개의 분획으로 나누고, 이들을 액체 질소로 -70 ℃에서 즉시 냉동시키고 24 시간 동안 동결 건조시켰다. 각각의 고체 분획은 CPT83(0.525 ㎎) 및 ST983(33.33 ㎎)을 함유하였다.
최종 리포솜 현탁액을 수득하기 위해서, 상기 동결 건조된 생성물을 사용 시에 물(1000 ㎕) 또는 다른 염수 용액으로 수화시키고 10 분간 교반하였다.
MLV 리포솜을 수득하였다.
제제의 물리적 안정성에 대한 시험
상기 제제의 물리적 안정성을 800 ㎚, 20 ℃에서 20 분간 TDC(시간 구동 곡선)를 기록하면서 탁도 측정에 의해 시험하였다.
제제의 안정성을 가리키는 일정한 탁도 경향이 기록되었으며 침전 현상은 없었다.
제제 중의 CPT83의 화학적 안정성에 대한 시험
CPT83의 화학적 안정성을 HPLC에 의해 시험하였다.
크로마토그래피 조건은 하기와 같다:
컬럼: 슈펠코실(Supelcosil) LC-ABZ
용출제: 인산염 완충제 20 mM:메탄올 40:60, pH=7.3
검출기 UV-VIS: 360 ㎚
유속: 1 ㎖/분
체류 시간: 4.033 분
기준에 대해 측정된 CPT83의 농도는 0.502 ㎎/㎖이었다.
캡슐화된 CPT83의 퍼센트는 99%이었다.
실시예 15
CPT83-ST983 SUV 리포솜(1:40)의 제조
CPT83 6.3 ㎎(0.0168 밀리몰) 및 ST983 400 ㎎(0.667 밀리몰)을 클로로포름 20 ㎖에 용해시켰다.
상기 용액을 지질 막이 유리 플라스크의 표면에 얻어질 때까지 농축시켰다.
고-진공 펌프의 도움으로 마지막 잔량의 클로로포름을 제거한 후에, 3급-부틸 알콜 26 ㎖을 상기 지질 막에 가하고, 상기 수득된 용액을 12 개의 분획으로 나누고, 이들을 액체 질소로 -70 ℃에서 즉시 냉동시키고 24 시간 동안 동결 건조시켰다. 각각의 고체 분획은 CPT83(0.525 ㎎) 및 ST983(33.33 ㎎)을 함유하였다.
최종 SUV 리포솜 현탁액을 수득하기 위해서, 상기 동결 건조된 생성물을 물(1000 ㎕)로 수화시키고 0 ℃에서 40 분간 초음파 처리하였다.
이어서 400 ㎚ 필터 상에서 여과를 수행하여 초음파기 탐침에 의해 방출된 티탄의 잔량을 제거하였다.
제제 중의 CPT83의 화학적 안정성에 대한 시험
CPT83의 화학적 안정성을 HPLC에 의해 시험하였다.
크로마토그래피 조건은 하기와 같다:
컬럼: 슈펠코실 LC-ABZ
용출제: 인산염 완충제 20 mM:메탄올 40:60, pH=7.3
검출기 UV-VIS: 360 ㎚
유속: 1 ㎖/분
체류 시간: 4.033 분
기준에 대해 측정된 CPT 83의 농도는 0.3 ㎎/㎖이었다.
캡슐화된 CPT83의 퍼센트는 59%이었다.
24 시간 후에 반복된 HPLC 분석은 CPT83 피크 이외에 다른 새로운 피크가 없음을 보였으며, 이는 유효 성분의 안정성을 가리킨다.
제제의 물리적 안정성에 대한 시험
상기 제제의 물리적 안정성을 600 ㎚, 20 ℃에서 20 시간 동안 TDC(시간 구동 곡선)를 기록하면서 탁도 측정에 의해 시험하였다.
제제의 안정성을 가리키는 일정한 탁도 경향이 기록되었으며 침전 현상은 없었다.
실시예 16
CPT184-ST983 MLV 리포솜(1:40)의 제조
CPT184 7.29 ㎎(0.0168 밀리몰) 및 ST983 400 ㎎(0.677 밀리몰)을 클로로포름 20 ㎖에 용해시켰다.
상기 용액을 지질 막이 유리 플라스크의 표면에 얻어질 때까지 농축시켰다.
진공 펌프의 도움으로 마지막 잔량의 클로로포름을 제거한 후에, 3급-부틸 알콜 26 ㎖을 상기 지질 막에 가하고, 상기 수득된 용액을 12 개의 분획으로 나누고, 이들을 액체 질소로 -70 ℃에서 즉시 냉동시키고 24 시간 동안 동결 건조시켰다. 각각의 고체 분획은 CPT184(0.607 ㎎) 및 ST983(33.33 ㎎)을 함유하였다.
최종 리포솜 현탁액을 수득하기 위해서, 상기 동결 건조된 생성물을 사용 시에 물(1000 ㎕) 또는 다른 염수 용액으로 수화시키고 10 분간 교반하였다.
MLV 리포솜을 수득하였다.
제제의 물리적 안정성에 대한 시험
상기 제제의 물리적 안정성을 600 ㎚, 20 ℃에서 20 시간 동안 TDC(시간 구동 곡선)를 기록하면서 탁도 측정에 의해 시험하였다.
제제의 안정성을 가리키는 일정한 탁도 경향이 기록되었으며 침전 현상은 없었다.
제제 중의 CPT184의 화학적 안정성에 대한 시험
CPT184의 화학적 안정성을 HPLC에 의해 시험하였다.
크로마토그래피 조건은 하기와 같다:
컬럼: 슈펠코실 LC-ABZ
용출제: 인산염 완충제 20 mM:메탄올 40:60, pH=7.3
검출기 UV-VIS: 360 ㎚
유속: 1 ㎖/분
체류 시간: 25.5 분
기준에 대해 측정된 CPT184의 농도는 0.600 ㎎/㎖이었다.
캡슐화된 CPT184의 퍼센트는 99%이었다.
실시예 17
CPT184-ST983 SUV 리포솜(1:40)의 제조
CPT184 7.29 ㎎(0.0168 밀리몰) 및 ST983 400 ㎎(0.667 밀리몰)을 클로로포름 20 ㎖에 용해시켰다.
상기 용액을 지질 막이 유리 플라스크의 표면에 얻어질 때까지 농축시켰다.
고-진공 펌프의 도움으로 마지막 잔량의 클로로포름을 제거한 후에, 3급-부틸 알콜 26 ㎖을 상기 지질 막에 가하고, 상기 수득된 용액을 12 개의 분획으로 나누고, 이들을 액체 질소로 -70 ℃에서 즉시 냉동시키고 24 시간 동안 동결 건조시켰다. 각각의 고체 분획은 CPT184(0.607 ㎎) 및 ST983(33.33 ㎎)을 함유하였다.
최종 SUV 리포솜 현탁액을 수득하기 위해서, 상기 동결 건조된 생성물을 물(1000 ㎕)로 수화시키고 0 ℃에서 40 분간 초음파 처리하였다.
이어서 400 ㎚ 필터 상에서 여과를 수행하여 초음파기 탐침에 의해 방출된 티탄의 잔량을 제거하였다.
제제 중의 CPT184의 화학적 안정성에 대한 시험
CPT184의 화학적 안정성을 HPLC에 의해 시험하였다.
크로마토그래피 조건은 하기와 같다:
컬럼: 슈펠코실 LC-ABZ
용출제: 인산염 완충제 20 mM:메탄올 40:60, pH=7.3
검출기 UV-VIS: 360 ㎚
유속: 1 ㎖/분
체류 시간: 25.5 분
기준에 대해 측정된 CPT184의 농도는 0.36 ㎎/㎖이었다.
캡슐화된 CPT184의 퍼센트는 70%이었다.
24 시간 후에 반복된 HPLC 분석은 CPT184 피크 이외에 다른 새로운 피크가 없음을 보였으며, 이는 유효 성분의 안정성을 가리킨다.
제제의 물리적 안정성에 대한 시험
상기 제제의 물리적 안정성을 600 ㎚, 20 ℃에서 20 시간 동안 TDC(시간 구동 곡선)를 기록하면서 탁도 측정에 의해 시험하였다.
제제의 안정성을 가리키는 일정한 탁도 경향이 기록되었으며 침전 현상은 없었다.
하기의 실시예들에서, 리포솜을 헬퍼 지질 및/또는 항냉동제를 사용하여 제조하였다.
실시예 18
CPT184-ST983 리포솜의 제조
2 ℓ 플라스크 중에서, 메틸클로로포름 100 ㎖을 CTP184 20 ㎎ 및 ST983 600 ㎎에 가하고 상기 혼합물을 완전히 용해될 때까지 가볍게 가온시켰다. 수득된용액을 지질 막이 얻어질 때까지 회전증발기 상에서 농축시키고, 이를 고 진공 펌프에서 2 시간 동안 추가로 건조시켰다. 상기 지질 막을 45 ℃에서 락토오즈 용액(6 g/물 300 ㎖)으로 수화시키고 약 2 시간 동안 회전 증발기에서 교반 하에 방치시켰다. 이어서 상기 현탁액을 2 시간 동안 초음파 처리하고, 각 주기를 30 분 동안 지속시켰다. 후속적으로, 생성물을 200 ㎚ 필터를 통해 여과하고 동결 건조시켰다.
제제 중의 CPT184의 화학 안정성에 대한 시험
CPT184의 화학 안정성을 HPLC에 의해 확인하였다. 생성물은 24 시간의 시험 기간 동안 안정하였다.
제제의 물리적 안정성에 대한 시험
제제의 물리적 안정성을 탁도 측정에 의해 시험하였다. 생성물은 24 시간의 시험 기간 전체를 통해 안정하였다. 입자 크기도 또한 안정하였다(평균 값 100 ㎚).
실시예 19
CPT184-ST983 리포솜의 제조
리포솜 제형(POPC - 1-팔미토일-2-올레오일 포스파티딜 콜린 5 mM; ST983 1.25 mM; CPT184 0.25 및 트레할로즈 150 mM) 1 ㎖에 대해서, 하기의 과정을 사용하였다:
CPT184 0.11 ㎎(0.25 μ몰)을 에틸 아세테이트 250 ㎕에 용해시키고, POPC 3.79 ㎎(4.89 μ몰)을 에탄올 100 ㎕에 용해시키고, ST983 0.74 ㎎(1.25 μ몰)을에탄올 100 ㎕에 용해시켰다. 상기 3 개의 용액들을 함께 혼합하고 와동시켰다. 용매를 실온, 80 밀리바에서 회전 증발기로 증발시켰다. 지질 막을 암실에서 2 시간 동안 건조시켰다. 상기 지질 막을 150 mM D(+)-트레할로즈 디하이드레이트(Fluka, HPLC 99%) 용액 1 ㎖에 현탁시키고, 0.22 ㎚ 필터를 통해 멸균시키고 2 분간 와동시켰다. 상기 현탁액을 200 ㎚ 폴리카보네이트 필터를 통해 21 회 압출시켰다. 상기 압출된 리포솜 현탁액을 액체 질소 중에서 냉동시키고 2 일 밤 동안 동결 건조시켰다. 백색 고체를 수득하였다.
실시예 20
CPT184-ST983 리포솜의 제조
트레할로즈 500 mM을 사용함을 제외하고 실시예 19와 동일한 과정을 사용하였다.
ST983 리포솜-항암제 복합체의 항암 활성
하기에서 알 수 있는 바와 같이, ST983 리포솜은 폐 수준에서 우세한 축적을 보였다. 이러한 특징적인 부위-특이성은 폐의 발암에 대한 쥐 모델에서의 상기 리포솜의 사용을 유리하게 하였다.
본 실험에 사용된 항암제는 탁솔이었다.
생체 내에서 종양을 유발시키기 위해서, 마취시키지 않은 Balb/c 마우스의 오른쪽 뒷발의 대퇴부 사두근에 RPMI-1640(Sigma) 0.1 ㎖ 중의 쥐 폐 암종 M109 3 x 105개의 세포를 주입하였다.
상기 종양 이식 후 10 일 째에 리포솜-탁솔 복합체를 인산염 완충된 염수 용액(PBS, SIGMA, P-4417)으로 희석하고 ST983 2.5 ㎎/㎖ 및 탁솔 75 ㎍/㎖의 농도로 정맥내 주입하였다.
대조용으로서 사용된 탁솔(패클리탁셀 INDENA)을 크레모포어 비히클 EL(BASF)에 20 ㎎/㎖의 농도로 용해시키고 다음 24 시간 동안 +4 ℃에서 보관하고, 빛을 차단시켰다. 사용 시에, 상기를 인산염 완충된 염수 용액(PBS, SIGMA)으로 희석하고 ST983 리포솜에 의해 수송되는 탁솔에 대해 개시된 바와 동일한 부피 및 농도 조건으로 정맥내 주입하였다.
크레모포어는 에틸 알콜로 1:1로 희석시켜 제조하였다.
상기 종양 접종 후 10 일 째에 출발하여 연속해서 7 일간 투여하였다. 동물들을 접종 후 17 일까지 계속 관찰하고 경부 탈구에 의해 죽이고, 그들의 폐를 전이 수를 측정하기 위해서 회수하였다. 전이를 탐지하기 위해서 상기 폐들을 10 일간 피크르산 포화 용액 71%, 빙초산(Merck) 4.8% 및 10% 포름알데히드(Fluka) 24%로 이루어진 뷰인액 5 ㎖ 중에서 배양시킴으로써 염색시켰다. 상기 뷰인액 중에서의 배양 기간의 끝에서, 전이의 수를 세었다.
비 처리된 대조용 마우스에 비해, 상기 크레모포어-수송된 탁솔은 폐 전이 수에 대해 감소 효과를 보이지 않았지만 상기 비 처리된 대조 군에 비해 그 크기가 보다 작었으며, 반면에 ST983 리포솜과 복합체를 이룬 탁솔은 폐 전이의 수 및 크기 모두에 있어서 현저한 감소를 보였다.
폐 전이 수에 대한 데이터의 통계학적 분석을 쌍을 이루지 않은 데이터에 대해서 만-휘트니 비-파라메트릭 시험을 사용하여 수행하였다.
얻어진 결과들을 하기 표 1에 나타낸다.
생체 외 세포독성 시험
독성 분석을 96-웰 플레이트에서 HeLa 및 M109 세포에 대해 수행하였다. 도말한 다음날, 세포들을 다음 48 시간 동안 시험할 분자로 처리하였다. 이어서 상기 세포들을 PBS로 세척하고 48 시간 동안 전형적인 성장 조건 하에서 방치시켰다. 성장 배지를 제거한 후에, 세포들을 16% TCA와 함께 얼음 상에서 배양하고, H2O로 3 회 세척하고, 1% 아세트산 중의 설포르호다민 B(SRB)로 30 분간 처리하고, 1% 아세트산 단독으로 3 회 세척하고, 트리스 10 mM(pH 10.5) 중에서 20 분간 배양하고, 마지막으로 540 ㎚에서 판독하였다.
CPT83에 의한 세포독성 시험
생체 외에서 CPT83에 의한 세포독성 시험을 유효 활성의 예비적인 표시로서리포솜과 복합체를 이룬 항암제의 세포독성을 평가하기 위해서 수행하였다.
생체 외에서 M109 세포에서 CPT83을 수송하는 상기 리포솜의 능력을 평가하기 위해서, 상기 개시된 설포르호다민 B를 사용하였다.
또한, 디메틸설폭사이드(DMSO)에 용해된 CPT83의 세포독성을 또한 ST983 리포솜과 복합체를 이룬 동일 분자의 것과 비교하여 평가하였다.
상기 리포솜-CPT83 복합체를 SUV 및 MLV 형태 모두에서 하기 표 2.1, 2.2 및 3.3에 나타낸 농도로 세포독성 분석에 사용하였다. 사용된 리포솜:CPT83의 몰비는 40:1이었다.
하기 표 2.1, 2.2 및 2.3에 나타낸 SUV 및 MLV 형태 모두에서의 ST983-CPT83 복합체의 평균적인 세포독성 값은 상기 ST983 리포솜이 DMSO와 훨씬 더 동일한 방식으로 CPT83을 수송할 수 있으며, 이는 동일한 정도의 세포독성 수준을 제공함을 가리킨다.
ST983 리포솜-CPT184 복합체의 생물 활성
실시예 18의 리포솜(하기에 리포솜 A라 명명함) 및 실시예 20의 리포솜(하기에 리포솜 B라 명명함)의 생물 활성을 시험하였다.
건강한 마우스에서의 독성
리포솜 A 및 B를 유리 CPT184와 비교하여 q4dx4 안에 따라 1.2 ㎎/㎏의 용량으로 경구, 정맥 내 제공하였다. 상기 2 개의 리포솜은 체중, 폐, 비장 및 신장에 대해 현저한 효과를 나타내지 않았다. 정맥 내 제공된 리포솜 B 및 경구 제공된 리포솜 A는 유리 CPT184와 유사하게 흉선 중량에 영향을 미쳤다. 정맥 내 제공된 리포솜 A는 단지 최소의 효과만을 가졌다. 혈액학적 변수들은 24 시간 후에 상기 두 리포솜에 의해서 현저한 변화를 나타내지 않았다. qd5 안에 따라 정맥 내 제공된 리포솜 A는 유리 CPT184에 필적할만한 독성을 나타내었다.
리포솜의 폐 향성
리포솜 A 및 B는 폐 수준에서 우세한 축적을 보였다. 상기 리포솜들을 정맥 내로 1.2 ㎎/㎏으로 제공하였다. 유리 CPT184를 DMSO 중에서 경구로 1.2 ㎎/㎏으로 제공하였다. 건강한 마우스를 최종 투여 후 24 시간째에 죽였다. 상기 시체로부터 폐를 절제하여 액체 질소 중에서 냉동시켰다. 일단 해동되면, 기관들을 모아 0.1% 아세트산/아세토니트릴 1:5 중에서 균질화시켰다. 균질물을 3 개의 분액으로 나누고, 회수율을 추정하기 위해서 이들 중 2 개에 CPT184를 가하였다. 3 개의 샘플을 5 분간 16,000 g에서 원심분리시켰다. 상등액을 모으고 디클로로포름으로 추출하였다. 유기 상을 스피드백(speedvac)으로 건조시키고 HPLC에 걸기 위해서 50 ㎕ 중에 한 마리의 동물에 해당하는 양을 갖도록 아세토니트릴에 잔사를 재 용해시켰다. HPLC를 워터스 시메트리(Waters Symmetry) C18 3.5 ㎛(4.6 x 7.5 ㎜) 상에서 실시하였다. 머크(Merck) 형광측정계로 370 ㎚에서 여기를, 510 ㎚에서 방출을 검출하였다. 용출제는 균등하게 물/아세토니트릴 60:40이었다. 샘플 부피는 50 ㎕이었다. CPT184의 회수율은 약 70%이었다. 리포솜 A와 B 모두 도 3에 나타낸 바와 같이 DMSO 중의 유리CPT184보다 큰 CPT184 축적 수준을 제공하였다.
유전자 전달
리포솜-DNA 복합체의 제조
리포솜과 플라스미드 DNA를 별도로 PBS로 적합하게 희석하였다. 이어서 상기 DNA를 상기 리포솜에 가하고 상기 리포솜-DNA 복합체를 4 ℃에서 대략 30 분간 방치시켜 안정한 리포솜-DNA 상호 작용의 형성을 촉진시켰다.
생체 외 실험에서, 1,2-디올레오일옥시-3-트리메틸암모늄 프로판(DOTAP)을 기준 양이온성 지질로 사용하였으며; 플라스미드 DNA 2.5 ㎍을 2 x 105HeLa 세포 당 사용하였으며, 리포솜 농도는 9 μM이었다.
생체 내 실험에서, DOTAP 및 [2,3-(디올레오일)프로필] 트리메틸암모늄(DOTMA)을 기준 양이온성 지질로서 사용하였다.
결과 중에 한정된 몰비는 DNA ㎎ 당 각각의 양이온성 지질의 nmol 농도를 지칭하는 것이다.
생체 내 형질 감염 실험에서, 동물 당 플라스미드 DNA 25 ㎍을 사용하였다.
이들 실험에 사용된 플라스미드 pCMVluc는 세포확대바이러스(CMV) 프로모터의 전사 조절 하의 루시페라제 유전자의 cDNA를 함유하였다.
루시페라제 활성의 정량적 측정
세포 및 조직에서의 단백질 루시페라제 활성을 베링거 만하임 키트(카탈로그 번호 1669 893)를 사용하여 측정하였다.
세포를 PBS로 3 회 세척하고 이어서 용균 완충액(100 mM 인산 칼륨 pH 7.8, 1 mM 디티오쓰레이톨-DTT) 중에서 스크래퍼를 사용하여 플레이트로부터 제거하여 3 회의 연속적인 냉동 및 해동 주기를 가하였다. 1.5 ㎖의 에펜도르프 튜브에서 원심분리시킨 후에, 상등액을 단백질 추출 후 5 시간 이내에 발광 시험에 사용하였다. 발광 방출 측정은 발광계를 사용하여 562 ㎚에서 수행하였다. 액체 N2중에서 처음 냉동시킨 다음 미분시켜 분말을 수득한 후에, 조직을 용균 완충액에 재 현탁시키고 얼음 중에서 10 내지 15 분간 배양시켰다.
이어서 샘플을 2 ㎖ 에펜도르프 튜브에서 원심분리시키고 상등액을 루시페라제 활성에 대해 시험하였다.
도트-블럿 분석
세포 DNA를 문헌[Sanbrook, Fritsch and Maniatis, Molecular Cloning, 1989]에 개시된 알칼리 용균 과정에 따라 추출하였다.
세포로부터 추출된 DNA 5 ㎍을 바이오래드 도트-블럿 어플라이언스(Biorad dot-blot appliance)를 사용하여 나일론 필터(베링거) 상에 예비 흡수시켰다. 이어서 상기 필터를 65 ℃에서 4 시간 동안 피로인산 나트륨(NaPi) 0.5 M, 1 mM EDTA, 7% SDS를 함유하는 용액과 예비 하이브리드화시켰다.32P(알파)로 표지된 탐침을 주형으로서 플라스미드 pCMVluc DNA와 랜덤하게 프라임 처리된 에머샴 키트(Amersham Kit)를 사용하여 제조하였다. 상기 필터를 1 x 106CPM/㎖을 사용하여 42 ℃에서 12 시간 동안 동일한 예비 하이브리드화 완충액에서 하이브리드화시켰다. 이어서 상기 필터를 40 mM NaPi, 1% SDS 함유 완충액으로 65 ℃에서 3 회 10 분 세척하였다. 상 분석 프로그램과 함께 광배율기 시스템에 의해 판독되고 정량화되는 베타 조사에 의해 활성화되는 인 스크린을 사용하는 인 영상기의 도움으로 자동 방사능 사진 분석을 수행하였다. 도트 블럿 상에서 수행된 광 농도 측정을 IP-LabGel 상 분석 프로그램을 사용하여 수행하였다.
플라스미드 DNA 형질 감염 시험
다수의 플라스미드 DNA 형질 감염 시험을 생체 외 및 생체 내 모두에서 수행하였다.
DOTAP 및 DOTMA를 모두 기준 양이온성 지질로서 사용하였으며, 그의 형질 감염 능력은 문헌[Abkenet et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1993, 90, 6518]에 충분히 특성화되고 개시되어 있다. 생체 내 실험에서, 상기 양이온성 지질의 활성과 유전자 전달에 가장 효율적인 각각의 농도들을 측정하기 위해서 상기 양이온성 지질 대 플라스미드 DNA의 여러 상이한 몰 비를 분석하였다. 여러 리포솜들의 형질 감염 능력을 pCMVluc 플라스미드 중에 함유된 루시페라제 유전자 수송자를 사용하여 생체 외 및 생체 내 모두에서 평가하고, 용이한 정량분석을 위해서 그의 활성을 상대적인 형광 단위(RLU)(이전에 개시되었음)의 항으로 나타내었다.
한편으로, 다수의 양이온성 리포솜들의 형질 감염 효율을 니트로셀룰로즈 필터 상에 예비 흡수시킨 형질 감염된 세포로부터 추출된 DNA 샘플(도트-블럿)의 광 밀도 측정 분석(인 영상기)에 의해 평가하고 상기 개시한 바와 같이32P-표지된 플라스미드 DNA 마커와 하이브리드화시켰다.
생체 내 형질 감염 시험
ST983 리포솜:DNA 몰 비에 대한 생체 내 형질 감염 효율 의존성
본 실험에서, ST983 리포솜:플라스미드 DNA 몰비에 대한 간, 폐 및 심장 형질 감염 효율 의존성을 평가하였다. 하기의 DNA ㎍ 당 리포솜의 nmol 비를 시험하였다: 12:1, 24:1, 36:1 및 48:1.
체중이 대략 20 g인 6 마리의 Balb/c 마우스 그룹들을 PBS 200 ㎕ 부피 중의 상기 언급한 양의 리포솜-DNA 복합체로 정맥 내로 처리하고 상기 복합체 투여 후 24 시간 째에 죽였다.
상기 폐, 심장 및 간 조직으로부터 추출한 루시페라제 활성은 분석된 모든 몰 비에서 루시페라제의 우세한 폐 분포를 드러내었다. 실제로, 상기 3 개의 조직들로부터 추출된 전체 루시페라제의 대략 99%가 폐에 위치하였다. 12:1의 리포솜:DNA 몰 비가 최상인 것으로 입증되었다. 얻은 결과를 하기 표 3에 나타낸다.
SRT983 리포솜 제제들 간의 차이에 대한 생체 내 형질 감염 효율 의존성
12:1의 리포솜:DNA 몰 비에서 상이한 ST983 리포솜 제제들을 정맥 내로 처리한 Balb/c 마우스의 폐로부터 추출된 루시페라제 활성 값(상대 발광 유니트, RLU)을 표 4에 나타낸다.
DOTMA보다 높고/높거나 필적할만한 효율 등급을 갖는 데이터는 ST983 리포솜이 생체 내에서 플라스미드 DNAI을 수송할 수 있음을 입증하는 것 이외에, 또한 상이한 ST983 제제들 간의 변화 정도를 나타낸다. 이는 다수의 물리화학적 특징들, 예를 들어 리포솜 소낭들의 크기, 또는 상이한 ST983 제제들의 단층(SUV) 또는 다층 구조와 관련된 상기 소낭들의 상대적인 비율에 기인할 수 있다. 사실상, 상기 열거된 물리화학적 변수들은 문헌[R.I. Mahato et al., Human Gene Therapy9. 1998:2083]에 최적의 생체 내 및 생체 외 형질 감염 효율을 성취하기 위한 결정자로서 충분히 개시되어 있다.
ST983-DNA 리포솜 복합체 예비 배양 시간에 대한 생체 내 형질 감염 효율 의존성
표 5는 플라스미드 DNA와 30 분 동안 또는 투여 전 3 시간 동안 예비 배양시킨 ST983 리포솜을 정맥 내로 처리한 마우스의 간, 폐 및 심장으로부터 추출된 상대 발광 단위를 나타낸다. DNA와 3 시간 동안 예비 배양시킨 ST983으로 처리된 동물들은 30 분간 예비 배양시킨 동일한 리포솜으로 처리된 동물들에 비해 폐 및 심장에서 대략 5 배의 루시페라제 활성 증가를 보인다. 이러한 결과는 안정한 리포솜-DNA 복합체의 형성이 시간 의존적인 현상이며 생체 내 형질 감염 효율의 결정자로서 중요한 역할을 함을 암시한다.
ST772 리포솜에 의한 HeLa 세포에서의 플라스미드 DNA 형질 감염
도 1 및 2는 HeLa 세포에서의 ST772 리포솜의 플라스미드 DNA 형질 감염 효율을 나타낸다. 이를 위해서, 기준 양이온성 지질로서 ST272 및 DOTAP로 형질 감염시킨 세포로부터 추출된 DNA에 대한 광 밀도 측정 분석을 수행하였다. 상기 블럿 분석의 결과는 DOTAP에 의해 수득된 정도와 동일한 정도의 플라스미드 DNA의 양을 보였다.
Claims (53)
- 하기 화학식 I의 화합물:화학식 I상기 식에서,n은 1 내지 3의 정수이고;R은 수소, 또는 탄소수 2 내지 6의 직쇄 또는 분지된 알카노일이고;R1및 R2는 동일하거나 상이할 수 있으며, 탄소수 3 내지 20의 포화되거나 불포화된 직쇄 아실을 나타내고;X-는 약리학적으로 허용가능한 산의 음이온이다.
- 제 1 항에 있어서, R이 아세틸, 프로피오닐, 부티릴, 발레릴 및 이소발레릴로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 화합물.
- 제 1 항에 있어서, R1및 R2가 헥사노일, 운데카노일, 미리스토일, 팔미토일 및 올레오일로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 화합물.
- 제 1 항에 있어서, X-가 클로라이드; 브로마이드; 요오다이드; 아스파테이트; 산 아스파테이트; 시트레이트; 산 시트레이트; 타르트레이트; 산 타르트레이트; 포스페이트; 산 포스페이트; 푸마레이트; 산 푸마레이트; 글리세로포스페이트; 글루코스 포스페이트; 락테이트; 말리에이트; 산 말리에이트; 뮤케이트; 오로테이트; 옥살레이트; 산 옥살레이트; 설페이트; 산 설페이트; 트리클로로아세테이트; 트리플루오로아세테이트; 메탄 설포네이트; 파모에이트 및 산 파모에이트로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 화합물.
- 제 1 항에 있어서,-2-하이드록시아세틸-1,3-디팔미토일 글리세롤을 갖는 L-카르니틴 브로마이드의 에스테르;-2-하이드록시아세틸-1,3-디팔미토일 글리세롤을 갖는 아세틸 L-카르니틴 브로마이드의 에스테르;-2-하이드록시아세틸-1,3-디팔미토일 글리세롤을 갖는 프로피오닐 L-카르니틴 브로마이드의 에스테르;-2-하이드록시아세틸-1,3-디팔미토일 글리세롤을 갖는 이소부티릴 L-카르니틴 브로마이드의 에스테르;-2-하이드록시아세틸-1,3-디팔미토일 글리세롤을 갖는 이소발레릴 L-카르니틴 브로마이드의 에스테르;-1,3-디헥사노일-2-하이드록시아세틸 글리세롤을 갖는 L-카르니틴 브로마이드의 에스테르;-1,3-디헥사노일-2-하이드록시아세틸 글리세롤을 갖는 아세틸 L-카르니틴 브로마이드의 에스테르;-1,3-디헥사노일-2-하이드록시아세틸 글리세롤을 갖는 프로피오닐 L-카르니틴 브로마이드의 에스테르로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 화합물.
- 리포솜의 제조를 위한 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 따른 화합물의 용도.
- 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항의 화합물을 포함하는 리포솜.
- 제 7 항에 있어서, 헬퍼 지질(helper lipid)을 추가로 함유하는 리포솜.
- 제 8 항에 있어서, 헬퍼 지질이 콜레스테롤, 1-팔미토일-2-올레오일 포스파티딜 콜린 및 디올레일 포스파티딜 콜린으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 리포솜.
- 약리학적으로 활성인 화합물의 수송에 유용한 조성물의 제조를 위한, 제 7 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 따른 리포솜의 용도.
- 제 10 항에 있어서, 약리학적으로 활성인 화합물이 천연 또는 변형된 플라스미드 또는 폴리뉴클레오티드인 용도.
- 제 11 항에 있어서, 플라스미드 또는 폴리뉴클레오티드가 유전자 요법에 유용한 용도.
- 제 11 항에 있어서, 플라스미드 또는 폴리뉴클레오티드가 백신으로서 유용한 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 용도.
- 제 10 항에 있어서, 활성 화합물이 약물인 용도.
- 제 14 항에 있어서, 약물이 항암제, 혈관생성 억제제, 항바이러스제, 항균제, 항진균제, 항원생동물제, 심혈관계에 대해 활성인 화합물, 및 면역원성 펩티드로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 용도.
- 제 15 항에 있어서, 약물이 항암제 또는 혈관생성 억제제인 용도.
- 제 16 항에 있어서, 항암제가 탁솔 및 캠토테신 유도체로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 용도.
- 제 17 항에 있어서, 캠토테신 유도체가-7-카보니트릴캠토테신;-7-벤질옥시이미노메틸캠토테신 및-7-부톡시이미노메틸캠토테신으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 용도.
- 화장료 조성물의 제조를 위한 제 7 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 따른 리포솜의 용도.
- 제 7 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 따른 리포솜을 포함하는 약학 조성물.
- 제 20 항에 있어서, 리포솜이 약리 활성 화합물을 함유하는 조성물.
- 제 21 항에 있어서, 활성 화합물이 천연 또는 변형된 플라스미드 또는 폴리뉴클레오티드인 조성물.
- 제 22 항에 있어서, 플라스미드 또는 폴리뉴클레오티드가 유전자 요법에 유용한 조성물.
- 제 22 항에 있어서, 플라스미드 또는 폴리뉴클레오티드가 백신으로서 유용한 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 조성물.
- 제 7 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 따른 리포솜을 포함하는 화장료 조성물.
- 제 25 항에 있어서, 리포솜이 미용 활성을 갖는 물질을 함유하는 조성물.
- 제 21 항에 있어서, 화합물이 항암제, 혈관생성 억제제, 항바이러스제, 항균제, 항진균제, 항원생동물제, 심혈관계에 대해 활성인 화합물, 및 면역원성 펩티드로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 조성물.
- 제 20 항 내지 제 27 항 중 어느 한 항에 있어서, 경구, 비 경구, 정맥 내, 근육 내, 피하, 경피, 또는 코 또는 구강 스프레이의 형태로 투여될 수 있는 조성물.
- 약물 또는 미용 활성을 갖는 물질의 수송을 위한 하기 화학식 II의 화합물을 포함하는 리포솜의 용도:화학식 II상기 식에서,R3는 탄소수 4 내지 26의 포화되거나 불포화된 직쇄 또는 분지된 아실 쇄이고;R4는 탄소수 4 내지 26의 포화되거나 불포화된 직쇄 또는 분지된 알킬 쇄이고;X-는 약리학적으로 허용가능한 산의 음이온이다.
- 제 29 항에 있어서, R3가 바람직하게는 노나노일, 도데카노일, 미리스토일, 팔미토일, 스테아로일 및 올레오일로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 용도.
- 제 29 항에 있어서, R4가 바람직하게는 노닐, 운데실, 테트라데실, 헥사데실 및 올레일로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 용도.
- 제 30 항에 있어서, X-가 클로라이드; 브로마이드; 요오다이드; 아스파테이트; 산 아스파테이트; 시트레이트; 산 시트레이트; 타르트레이트; 산 타르트레이트; 포스페이트; 산 포스페이트; 푸마레이트; 산 푸마레이트; 글리세로포스페이트; 글루코스 포스페이트; 락테이트; 말리에이트; 산 말리에이트; 뮤케이트; 오로테이트; 옥살레이트; 산 옥살레이트; 설페이트; 산 설페이트; 트리클로로아세테이트; 트리플루오로아세테이트; 메탄 설포네이트; 파모에이트 및 산 파모에이트로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 용도.
- 제 29 항 내지 제 32 항 중 어느 한 항에 있어서,화합물이-팔미토일 L-카르니틴 클로라이드 운데실 에스테르;-스테아로일 L-카르니틴 클로라이드 운데실 에스테르;-스테아로일 L-카르니틴 클로라이드 테트라데실 에스테르;-팔미토일 L-카르니틴 클로라이드 테트라데실 에스테르;-미리스토일 L-카르니틴 클로라이드 테트라데실 에스테르;-팔미토일 L-카르니틴 브로마이드 헥사데실 에스테르;-올레오일 L-카르니틴 클로라이드 올레일 에스테르로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 용도.
- 제 29 항에 있어서, 약물이 항암제, 혈관생성 억제제, 항바이러스제, 항균제, 항진균제, 항원생동물제, 심혈관계에 대해 활성인 화합물, 및 면역원성 펩티드로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 용도.
- 제 34 항에 있어서, 약물이 항암제 또는 혈관생성 억제제인 용도.
- 제 35 항에 있어서, 항암제가 탁솔 및 캠토테신 유도체로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 용도.
- 제 36 항에 있어서,캠토테신 유도체가-7-벤질옥시이미노메틸캠토테신 및-7-부톡시이미노메틸캠토테신으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 용도.
- 제 29 항에 있어서, 리포솜이 헬퍼 지질을 추가로 함유하는 용도.
- 제 38 항에 있어서, 헬퍼 지질이 콜레스테롤, 1-팔미토일-2-올레오일 포스파티딜 콜린 및 디올레일 포스파티딜 콜린으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 용도.
- 약물 또는 미용 활성을 갖는 물질의 수송을 위한 제 29 항에 따른 리포솜을 포함하는 조성물.
- 제 40 항에 있어서, 약물이 항암제, 혈관생성 억제제, 항바이러스제, 항균제, 항진균제, 항원생동물제, 심혈관계에 대해 활성인 화합물, 및 면역원성 펩티드로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 조성물.
- 제 40 항 또는 제 41 항에 있어서, 경구, 비 경구, 정맥 내, 근육 내, 피하, 경피, 또는 코 또는 구강 스프레이의 형태로 투여될 수 있는 조성물.
- 천연 또는 변형된 플라스미드 또는 폴리뉴클레오티드의 수송을 위한 하기 화학식 III의 화합물을 포함하는 리포솜의 용도:화학식 III상기 식에서,R5는 탄소수 4 내지 26의 포화되거나 불포화된 직쇄 또는 분지된 아실 쇄이고;R6는 탄소수 4 내지 26의 포화되거나 불포화된 직쇄 또는 분지된 알킬 쇄이고;X-는 약리학적으로 허용가능한 산의 음이온이나; 단R5가 스테아로일일 때, R6는 스테아릴이 아니고,R5가 올레오일일 때, R6는 스테아릴이 아니고,R5가 팔미토일일 때, R6는 팔미토일이 아니고,R5가 미리스토일일 때, R6는 미리스토일이 아니고,R5가 라우로일일 때, R6는 라우릴이 아니고,R5가 올레오일일 때, R6는 올레일이 아니다.
- 제 43 항에 있어서, R5가 바람직하게는 노나노일, 도데카노일, 미리스토일, 팔미토일, 스테아로일 및 올레오일로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 용도.
- 제 43 항에 있어서, R6가 바람직하게는 노닐, 운데실, 테트라데실, 헥사데실 및 올레일로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 용도.
- 제 43 항에 있어서, X-가 클로라이드; 브로마이드; 요오다이드; 아스파테이트; 산 아스파테이트; 시트레이트; 산 시트레이트; 타르트레이트; 산 타르트레이트; 포스페이트; 산 포스페이트; 푸마레이트; 산 푸마레이트; 글리세로포스페이트; 글루코스 포스페이트; 락테이트; 말리에이트; 산 말리에이트; 뮤케이트; 오로테이트; 옥살레이트; 산 옥살레이트; 설페이트; 산 설페이트; 트리클로로아세테이트; 트리플루오로아세테이트; 메탄 설포네이트; 파모에이트 및 산 파모에이트로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 용도.
- 제 43 항 내지 제 46 항 중 어느 한 항에 있어서,화합물이-팔미토일 L-카르니틴 클로라이드 운데실 에스테르;-스테아로일 L-카르니틴 클로라이드 운데실 에스테르;-스테아로일 L-카르니틴 클로라이드 테트라데실 에스테르;-팔미토일 L-카르니틴 클로라이드 테트라데실 에스테르로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 용도.
- 제 43 항에 있어서, 플라스미드 또는 폴리뉴클레오티드가 백신으로서 유용한 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 용도.
- 제 43 항에 있어서, 리포솜이 헬퍼 지질을 추가로 함유하는 용도.
- 제 49 항에 있어서, 헬퍼 지질이 콜레스테롤, 1-팔미토일-2-올레오일 포스파티딜 콜린 및 디올레일 포스파티딜 콜린으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 용도.
- 천연 또는 변형된 플라스미드 또는 폴리뉴클레오티드의 수송을 위한 제 43 항에 따른 리포솜을 포함하는 조성물.
- 제 51 항에 있어서, 플라스미드 또는 폴리뉴클레오티드가 백신으로서 유용한 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 조성물.
- 제 51 항 또는 제 52 항에 있어서, 경구, 비 경구, 정맥 내, 근육 내, 피하, 경피, 또는 코 또는 구강 스프레이의 형태로 투여될 수 있는 조성물.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ITRM99A000220 | 1999-04-13 | ||
| IT1999RM000220A IT1306129B1 (it) | 1999-04-13 | 1999-04-13 | Esteri della l-carnitina o di alcanoil l-carnitine utilizzabili comelipidi cationici per l'immissione intracellulare di composti |
| PCT/IT2000/000137 WO2000061543A2 (en) | 1999-04-13 | 2000-04-11 | Esters of l-carnitine or alkanoyl l-carnitines |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020067021555A Division KR100798499B1 (ko) | 1999-04-13 | 2000-04-11 | 약리학적으로 활성인 화합물의 세포 내 전달을 위한양이온성 지질로서 유용한 ｌ-카르니틴 또는 알카노일ｌ-카르니틴의 에스테르 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20010113794A true KR20010113794A (ko) | 2001-12-28 |
| KR100684378B1 KR100684378B1 (ko) | 2007-02-20 |
Family
ID=11406659
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020017013018A KR100684378B1 (ko) | 1999-04-13 | 2000-04-11 | 약리학적으로 활성인 화합물의 세포 내 전달을 위한 양이온성 지질로서 유용한 ｌ-카르니틴 또는 알카노일ｌ-카르니틴의 에스테르 |
| KR1020067021555A KR100798499B1 (ko) | 1999-04-13 | 2000-04-11 | 약리학적으로 활성인 화합물의 세포 내 전달을 위한양이온성 지질로서 유용한 ｌ-카르니틴 또는 알카노일ｌ-카르니틴의 에스테르 |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020067021555A KR100798499B1 (ko) | 1999-04-13 | 2000-04-11 | 약리학적으로 활성인 화합물의 세포 내 전달을 위한양이온성 지질로서 유용한 ｌ-카르니틴 또는 알카노일ｌ-카르니틴의 에스테르 |
Country Status (34)
| Country | Link |
|---|---|
| US (4) | US6797281B1 (ko) |
| EP (3) | EP1435232A1 (ko) |
| JP (2) | JP4703855B2 (ko) |
| KR (2) | KR100684378B1 (ko) |
| CN (2) | CN100402017C (ko) |
| AT (2) | ATE286873T1 (ko) |
| AU (2) | AU776301B2 (ko) |
| BG (3) | BG65501B1 (ko) |
| BR (2) | BRPI0017460B1 (ko) |
| CA (2) | CA2370143C (ko) |
| CZ (1) | CZ302628B6 (ko) |
| DE (2) | DE60017388T2 (ko) |
| DK (2) | DK1426044T3 (ko) |
| EA (2) | EA004459B1 (ko) |
| EE (2) | EE05719B1 (ko) |
| ES (2) | ES2234591T3 (ko) |
| HK (2) | HK1045145B (ko) |
| HR (1) | HRP20010740B1 (ko) |
| HU (1) | HU229366B1 (ko) |
| IL (4) | IL145765A0 (ko) |
| IS (2) | IS2476B (ko) |
| IT (1) | IT1306129B1 (ko) |
| ME (2) | MEP24008A (ko) |
| MX (1) | MXPA01010359A (ko) |
| NO (2) | NO327742B1 (ko) |
| NZ (2) | NZ528874A (ko) |
| PL (2) | PL204418B1 (ko) |
| PT (2) | PT1426044E (ko) |
| RS (3) | RS20090448A (ko) |
| SI (2) | SI1183228T1 (ko) |
| SK (2) | SK287253B6 (ko) |
| TR (2) | TR200202358T2 (ko) |
| WO (1) | WO2000061543A2 (ko) |
| ZA (1) | ZA200109291B (ko) |
Families Citing this family (22)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7151191B2 (en) * | 2000-01-13 | 2006-12-19 | Emisphere Technologies, Inc. | Compounds and compositions for delivering active agents |
| DE10113446A1 (de) † | 2001-03-19 | 2002-09-26 | Schwarzkopf Gmbh Hans | Haarbehandlungsmittel mit Betainen |
| PT2286795T (pt) * | 2002-06-26 | 2017-01-27 | Syncore Biotechnology Co Ltd | Processo de produção de uma preparação lipossomal catiónica que compreende um composto lipófilo |
| ATE444062T1 (de) * | 2002-06-26 | 2009-10-15 | Medigene Ag | Herstellung einer kationisch liposomalen zubereitung, einen lipophilen wirkstoff enthaltend |
| ITRM20040288A1 (it) * | 2004-06-11 | 2004-09-11 | Sigma Tau Ind Farmaceuti | Uso della 7-t-butossiimminometilcamptotecina per la preparazione di un medicamento per il trattamento delle neoplasie dell'utero. |
| GT200500310A (es) * | 2004-11-19 | 2006-06-19 | Compuestos organicos | |
| EP1868571A4 (en) * | 2005-03-02 | 2011-10-26 | Univ Northeastern | MITOCHONDRIOTROPIC PHOSPHOLIPIDE VESICLES |
| SA06270147B1 (ar) | 2005-06-09 | 2009-12-22 | نوفارتيس ايه جي | عملية لتخليق 5-(مثيل–1h–إيميدازول–1-يل )–3-(ثلاثي فلـورو مثيل)–بنزامـين |
| CA2617873A1 (en) * | 2005-08-10 | 2007-02-15 | Novartis Ag | Formulations for 7-(t-butoxy)iminomethyl camptothecin |
| TW200800195A (en) * | 2005-08-10 | 2008-01-01 | Novartis Ag | Organic compounds |
| WO2008024389A2 (en) * | 2006-08-23 | 2008-02-28 | Biodelivery Sciences International, Inc. | Amphiphilic nucleotide cochleate compositions and methods of using the same |
| US20100166843A1 (en) * | 2007-02-01 | 2010-07-01 | Sigma-Tau Industrie Farmaceutiche Riunite S.P.A. | Pharmaceutical composition comprising a campothecin derivative |
| US20100104625A1 (en) * | 2007-02-16 | 2010-04-29 | Cornell University | Biodegradable compositions and materials |
| US20100204432A1 (en) | 2007-05-28 | 2010-08-12 | Husam Younes | Biodegradable elastomers prepared by the condensation of an organic di-, tri- or tetra-carboxylic acid and an organic diol |
| US7858666B2 (en) | 2007-06-08 | 2010-12-28 | Mannkind Corporation | IRE-1α inhibitors |
| WO2009114763A2 (en) | 2008-03-13 | 2009-09-17 | Perkinelmer Las, Inc. | Enzymatic substrates for multiple detection systems |
| EP2532649B1 (en) * | 2011-06-07 | 2015-04-08 | Incella GmbH | Amino lipids, their synthesis and uses thereof |
| WO2013032643A2 (en) * | 2011-08-31 | 2013-03-07 | Dicerna Pharmaceuticals, Inc. | Lipids capable of conformational change and their use in formulations to deliver therapeutic agents to cells |
| US20140274798A1 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-18 | University Of Washington Through Its Center For Commercialization | Compounds and methods relating to lysosomal storage disorders |
| CN109069440A (zh) | 2016-03-02 | 2018-12-21 | 得克萨斯州大学系统董事会 | 用于免疫治疗的激活sting的纳米疫苗 |
| WO2018226854A2 (en) * | 2017-06-06 | 2018-12-13 | Wayne State University | Antifouling polymer coatings and reverse coating method |
| CN115177608B (zh) * | 2022-07-26 | 2023-12-05 | 南方医科大学南方医院 | 长链酰基肉碱类化合物在制备预防和/或治疗肝癌的药物中的应用 |
Family Cites Families (22)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4866040A (en) * | 1986-01-06 | 1989-09-12 | Alfred Stracher | Aminocarnitine directed pharmaceutical agents |
| US5008288A (en) * | 1986-01-06 | 1991-04-16 | Alfred Stracher | Carnitine directed pharmaceutical agents |
| IT1230142B (it) * | 1989-05-03 | 1991-10-14 | Fidia Spa | Derivati della carnitina, processo per la loro preparazione e impiego in terapia umana |
| AU660417B2 (en) * | 1990-06-15 | 1995-06-29 | University Of North Carolina At Chapel Hill, The | Ether lipid-nucleoside covalent conjugates |
| IT1248321B (it) * | 1991-05-15 | 1995-01-05 | Sigma Tau Ind Farmaceuti | Uso di esteri di acil l-carnitine con l'acido gamma-idrossibutirrico per produrre composizioni farmaceutiche per il trattamento di epatopatie |
| IT1258370B (it) * | 1992-03-02 | 1996-02-26 | Sigma Tau Ind Farmaceuti | Esteri della l-carnitina e di acil l-carnitine dotati di attivita' miorilassante selettiva sull'apparato gastro-intestinale e composizioni farmaceutiche che li contengono. |
| US5972600A (en) * | 1992-04-03 | 1999-10-26 | The Regents Of The University Of California | Separation of active complexes |
| IT1263013B (it) * | 1992-10-20 | 1996-07-23 | Avantgarde Spa | Esteri della l-carnitina e di alcanoil l-carnitine con l'acido glicolico o suoi esteri e composizioni farmaceutiche contenenti tali per il trattamento di affezioni cutanee. |
| US5552156A (en) * | 1992-10-23 | 1996-09-03 | Ohio State University | Liposomal and micellular stabilization of camptothecin drugs |
| US5512671A (en) * | 1993-02-16 | 1996-04-30 | Wake Forest University | Ether lipid-nucleoside covalent conjugates |
| IT1261984B (it) * | 1993-06-22 | 1996-06-11 | Avantgarde Spa | Uso di esteri della l-carnitina o di acil l- carnitine con idrossiacidi per produrre composizioni farmaceutiche per il trattamento di affezioni cutanee. |
| DE69407292T2 (de) * | 1993-06-30 | 1998-06-25 | Genentech Inc | Verfahren zur herstellung von liposomen |
| IT1273987B (it) * | 1994-09-29 | 1997-07-14 | Sigma Tau Ind Farmaceuti | Uso di esteri ftalidilidenici della carnitina e di alcanoil carnitine per il trattamento dello shock endotossico |
| US6008202A (en) * | 1995-01-23 | 1999-12-28 | University Of Pittsburgh | Stable lipid-comprising drug delivery complexes and methods for their production |
| US6316652B1 (en) * | 1995-06-06 | 2001-11-13 | Kosta Steliou | Drug mitochondrial targeting agents |
| US5811406A (en) * | 1995-06-07 | 1998-09-22 | Regents Of The University Of California | Dry powder formulations of polynucleotide complexes |
| WO1996040265A1 (en) * | 1995-06-07 | 1996-12-19 | The Regents Of The University Of California | Stabilization of polynucleotide complexes |
| IT1283955B1 (it) * | 1996-03-20 | 1998-05-07 | Sigma Tau Ind Farmaceuti | Bis alcanoil esteri della carnitina ad attivita' antibatterica, antimicotica ed antiprotozoaria. |
| WO1998004720A1 (en) * | 1996-07-26 | 1998-02-05 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Method and reagents for genetic immunization |
| US6056973A (en) * | 1996-10-11 | 2000-05-02 | Sequus Pharmaceuticals, Inc. | Therapeutic liposome composition and method of preparation |
| US6071532A (en) * | 1996-10-15 | 2000-06-06 | Emory University | Synthesis of glycophospholipid and peptide-phospholipid conjugates and uses thereof |
| IT1299172B1 (it) * | 1998-05-06 | 2000-02-29 | Sigma Tau Ind Farmaceuti | Esteri perfluorurati di alcanoil l-carnitine utilizzabili quali lipidi cationici per l'immissione intracellulare di composti |
-
1999
- 1999-04-13 IT IT1999RM000220A patent/IT1306129B1/it active
-
2000
- 2000-04-11 TR TR2002/02358T patent/TR200202358T2/xx unknown
- 2000-04-11 HU HU0201446A patent/HU229366B1/hu not_active IP Right Cessation
- 2000-04-11 SK SK1431-2001A patent/SK287253B6/sk not_active IP Right Cessation
- 2000-04-11 NZ NZ528874A patent/NZ528874A/en not_active IP Right Cessation
- 2000-04-11 CN CNB2005101295985A patent/CN100402017C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2000-04-11 SK SK5094-2008A patent/SK288246B6/sk not_active IP Right Cessation
- 2000-04-11 ME MEP-240/08A patent/MEP24008A/xx unknown
- 2000-04-11 SI SI200030596T patent/SI1183228T1/xx unknown
- 2000-04-11 TR TR2001/02941T patent/TR200102941T2/xx unknown
- 2000-04-11 CZ CZ20013617A patent/CZ302628B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2000-04-11 JP JP2000610820A patent/JP4703855B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2000-04-11 NZ NZ515270A patent/NZ515270A/xx not_active IP Right Cessation
- 2000-04-11 EA EA200101076A patent/EA004459B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2000-04-11 RS RSP-2009/0448A patent/RS20090448A/sr unknown
- 2000-04-11 ME MEP-2008-240A patent/ME00113B/me unknown
- 2000-04-11 DE DE60017388T patent/DE60017388T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-04-11 CA CA2370143A patent/CA2370143C/en not_active Expired - Fee Related
- 2000-04-11 DK DK03020049T patent/DK1426044T3/da active
- 2000-04-11 RS RS20090448A patent/RS52682B/en unknown
- 2000-04-11 DE DE60025961T patent/DE60025961T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-04-11 EA EA200300745A patent/EA006021B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2000-04-11 PT PT03020049T patent/PT1426044E/pt unknown
- 2000-04-11 PL PL351112A patent/PL204418B1/pl unknown
- 2000-04-11 EP EP04006990A patent/EP1435232A1/en not_active Withdrawn
- 2000-04-11 EP EP03020049A patent/EP1426044B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-04-11 AU AU43123/00A patent/AU776301B2/en not_active Ceased
- 2000-04-11 BR BRPI0017460A patent/BRPI0017460B1/pt not_active IP Right Cessation
- 2000-04-11 EE EEP201100028A patent/EE05719B1/et not_active IP Right Cessation
- 2000-04-11 BG BG109876A patent/BG65501B1/bg unknown
- 2000-04-11 AT AT00922852T patent/ATE286873T1/de active
- 2000-04-11 WO PCT/IT2000/000137 patent/WO2000061543A2/en active Application Filing
- 2000-04-11 DK DK00922852T patent/DK1183228T3/da active
- 2000-04-11 KR KR1020017013018A patent/KR100684378B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2000-04-11 PL PL386640A patent/PL211710B1/pl unknown
- 2000-04-11 CA CA2650202A patent/CA2650202C/en not_active Expired - Fee Related
- 2000-04-11 RS YUP-702/01A patent/RS50911B/sr unknown
- 2000-04-11 BR BRPI0009765-9B1A patent/BR0009765B1/pt not_active IP Right Cessation
- 2000-04-11 CN CNB008070539A patent/CN1263730C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2000-04-11 EE EEP200100518A patent/EE05514B1/xx not_active IP Right Cessation
- 2000-04-11 SI SI200030799T patent/SI1426044T1/sl unknown
- 2000-04-11 EP EP00922852A patent/EP1183228B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-04-11 PT PT00922852T patent/PT1183228E/pt unknown
- 2000-04-11 ES ES00922852T patent/ES2234591T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-04-11 AT AT03020049T patent/ATE317257T1/de active
- 2000-04-11 IL IL14576500A patent/IL145765A0/xx active IP Right Grant
- 2000-04-11 MX MXPA01010359A patent/MXPA01010359A/es active IP Right Grant
- 2000-04-11 KR KR1020067021555A patent/KR100798499B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2000-04-11 ES ES03020049T patent/ES2258688T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-11-04 US US09/958,328 patent/US6797281B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2001
- 2001-09-28 IS IS6095A patent/IS2476B/is unknown
- 2001-10-03 BG BG105971A patent/BG65312B1/bg unknown
- 2001-10-03 BG BG109876A patent/BG109876A/en unknown
- 2001-10-04 IL IL145765A patent/IL145765A/en not_active IP Right Cessation
- 2001-10-12 NO NO20014985A patent/NO327742B1/no not_active IP Right Cessation
- 2001-10-12 HR HR20010740A patent/HRP20010740B1/xx not_active IP Right Cessation
- 2001-11-12 ZA ZA200109291A patent/ZA200109291B/en unknown
-
2002
- 2002-06-12 HK HK02104388.0A patent/HK1045145B/zh not_active IP Right Cessation
-
2003
- 2003-07-23 US US10/624,645 patent/US7629003B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2004
- 2004-01-28 US US10/765,091 patent/US20040186175A1/en not_active Abandoned
- 2004-10-29 AU AU2004224958A patent/AU2004224958B2/en not_active Ceased
-
2006
- 2006-05-01 IL IL175366A patent/IL175366A/en not_active IP Right Cessation
- 2006-12-14 HK HK06113747A patent/HK1092732A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2007
- 2007-03-27 US US11/727,526 patent/US7585519B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2007-08-23 IL IL185486A patent/IL185486A0/en not_active IP Right Cessation
-
2008
- 2008-03-07 IS IS8719A patent/IS2539B/is unknown
- 2008-12-30 NO NO20085413A patent/NO336949B1/no not_active IP Right Cessation
-
2010
- 2010-09-21 JP JP2010210849A patent/JP5420507B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR100684378B1 (ko) | 약리학적으로 활성인 화합물의 세포 내 전달을 위한 양이온성 지질로서 유용한 ｌ-카르니틴 또는 알카노일ｌ-카르니틴의 에스테르 | |
| TW202337498A (zh) | 用於ｒｎａ遞送之可離子化陽離子脂質 | |
| KR20070023826A (ko) | 미용 활성 화합물의 세포 내 전달을 위한 양이온성지질로서 유용한 ｌ-카르니틴 또는 알카노일 ｌ-카르니틴의에스테르함유 리포솜이 | |
| AU2007214359B2 (en) | Esters of L-carnitine or alkanoyl L-carnitines useful as cationic lipids for the intracellular delivery of pharmacologically active compounds |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A201 | Request for examination | ||
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| A107 | Divisional application of patent | ||
| E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
| GRNT | Written decision to grant | ||
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20130128 Year of fee payment: 7 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20140128 Year of fee payment: 8 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20150128 Year of fee payment: 9 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20160125 Year of fee payment: 10 |
|
| LAPS | Lapse due to unpaid annual fee |