HU230294B1 - IL-18-inhibitorok alkalmazása központi idegrendszeri sérülések kezelésére vagy megelőzésére - Google Patents

Description

A találmány az agy patológiás állapotainak területére tartozik. Közelebbről, a találmány tárgyfe képezi ÍL-IA-inhibiíor alkalmazása központi idegrendszeri sérülés, előnye-: són trauraús agysérülés kezelésére és/vagy megelőzésére.

1489-ben egérlépsejíekhöl származó, endotoxrn áltat indukált széf ranakú vitást Írtak le. amely imerföron-y-át (IFN-y) aktivál (Hakamura és mtsai.., 1989). A. széromaküs úás nem közvetlenül az IPN-y-át indukálja, liánéra inkább IL-2-vet vagy mitogénekkoi együtt kostimulánskéní hat. Az endoíoxin-kezelés utáni egérszémmfeol megkísérelték kitisztítani az aktivitást. és egy látszólag homogén, 5Ő-S5 kDa fehérjét nyertek kt. .Más cltokinek is hathatnak kosthüulánsként az IFN-γ termelődésére, de mivel az IL-1.-ok lL-4-et, IL-S-öt, IL-ó-ot vagy TNF-ot neutralizálő ellenanyagok nem tudták semlegesitem a szérumaktivi15 iást, így ezektől különböző tényezőről van szó- 1995-ben ugyanezen kutatók kimutatták, hogy IFbl-Y-termelés endotoxinnal Indukált knsílnwlánsa P. ncmarszel előre kondicionált egerek mái kivonataiban is megtalálható (ökamura és mtsai., 19^5). libben a modellben a májeredeíü makrofág-populácio (RupSor-sejtok) szaporodott el, és ezekben az egerekben kis dözisú bakteriális lipopolíszaebarld (LPS), amely előre nem kondicionált egerekben nem letáiis, m halálos kimenetelű fzt az IFN-'.-indukáló (akaunak rt(dl’). később interleukin-iS-nak nevezett. (IL-18) faktort homogenitásig tisztították 1200 g tömegű, A öé/nzsszet kezelt egérmájbÖL A tisztított 1L-1S mimsavszekvenerójáhól. származó degenerált oligonuklooíidokat alkalmazták ogér-lL-18 cDNS-énok klónozására. Az 11,-18 157 arumosavból álló, 18-19 kDa fehérje, amely nem mutatott nyilvánvaló hasonlóságot az adatbázisokban lévő egyetlen pepiiddel som. Az IL-18 és az interleukm-1.2 (IL-12) mRHSe könnyen kimutatható Kmpíléosejtokbon os aktivált makrotágokbau. Rekombináns. 1L-18 IFN-y-át hatékonyabban indukál, mint az 11-12, nyilvánvalóan különböző útvonalon (Micallef és mts&n, 1 ’>%) Az ondoioxin által indukált szérumnktb, hájhoz kusonlöan az

..'?

ít-IS önmagában nem indukálja az ÍFNA'-t. hanem elsődlegesen kostinwhmskent hat mrtogénekkei vagy IL-2-vel együtt. Az IL-U serkenti a T^ej*-ptoííferádót_} nylvásválőan Π,-2-tői függő útvonalon, és serkenti a Tbl-ci tokin termelődését in vitt-o, és IL-O-vC kombinálva szinergisztíkus hatást fejt ki az IFN-γ fokozott mértékű termelődésére .5 (Máitszewsö és mtsai.. 1990).

Az egéreredetű fonna klónozása után az íL-18 hnmán-enNS-szekvenciáját ss közölték 1996-ban. (üshlo és mtsai ., 1996).

Az ít-18-nak az érintett szövetekből történő klónozásával és ;az;IL-l§-génexpressziő vizsgálatával szoros kapcsolatot lehetett kimutatni ezen eitokin és egy autoimmun betegség között. Az. el nem m/ott, cukorbeteg egerekben (HÓD, ’hron-obese diabetíe mouse”) spontán autoimmun insulítts és diabeies fejlődik ki, amely ciklolösztáruld egyetlen miekeiójaval -felgyorsítható és szinkronizálható. líeverztranszkriptáz-PCR-rel IL-1 S-niRNS jelenlétét mutatták ki NÖO-egerek' hasnyálmirigyében az ínsuliiis korai fázisaiban. Az IL-18-mBNS szintié gyorsan nőtt dkiöfoszfamíd kezelés utáa_s és megelőzte IFM-y mlOvS-ének növeke15 dósét, és ezt kővetően a díabetest. Érdekes módon ez a kinetika. IL-12~p49 mRNS-ének kinetikájához hasonlít, amely egyedi ruRMS-szintek szoros korrelációját eredményezi. A hasuyáhnirigy-BNS-ből származó IL-lb-eDNS klónozása utáni szekvenálás azonosságot mutatott Knpfíer-sejíekből -és m vivő előre aktivált makroíágokhól klónozott ÍL-13szekveneiával. A HOD-egérből származó makrofágok is Π..-18-génexpresszlóval reagáltak

20- ciklofoszfamidra, mig hasonló módon kezelt Bsíb/c-ege? ebből származó makroíágoknál ez nem tapasztalható. Az IL-18-expresszié tehát nem normális módon szabalyozodik autoimmun NOD-egerekben, és szoros kapcsolatban áll diabeies kifejlődésével (Rothc és mtsai., 1997).

Az B~I§ fontos szerepet játszik az imnnmszabályozásbnn vagy gyulladásban a Thl25 sejteken lévő Fas-lígaud fnnkcionáíís aktivitásának fokozásával (Centi és mtsai., 1997). Az 1L-.18 á tnellékvesekéregben is expresszálődik, igy szekretált nemoimnummoduláíor is lehet, amely jelentős szerepet, tölt be az immunrendszer stressz utáni irányításában íChater. 1986).

,¾ wo az Η,-18 pro-IL-lS hasításává képződik, és úgy fenik, hogy az endogén aktivitásával magyarázható tó. ecumben az IFN-γ termelődése és az I,PS-közvetrtet.te letaliias. Az: érett 8L-I8 a prekurzorábol képződik az ÍL-Í β átalakító enzim kteemBÖdéséveí flt1 beis-converting enzyrne”, ICL, caspase~l>.

két komponensből ál L amelyek a térned kötésében egytátmöködnek, Az IL-18 erős és gyenge affinitásé kötőhelyeit azonosították egéreredetfi

II.,- 12-vel stimulált i -sejtoken (Yoshimoto és mtsai,, 1998), ami arra utak hogy ez egy több láncból álló receptorkomplex. Eddig két íéeeptorafegységet azonosították, mindkettő az IL-1-receptorcsaládba tartozik (Fáméi és mtsai., 199b). Az IL-I8 szignáltranszdttkciója az '19 NF-κΒ aktiválását is magában foglalja (DiDonato és mtsai.. 1997),

Nernrégiben IL-18 tele erős affinitást mutató, oldható fehérjéi izoláltak humán vizeletből, és leírták a humán és egéretedetű cDHS-ekeí (Növitek és nrtsái., 1999: Wö 99A}9963k A fehétja ít~í8-kötó fehérjének jelölik. (IL-1SBP, ”IL-18 bbfewprotein”).

Az IL- 18BP nem az ismert íL-18-reeeptóro.k egyikének exiracdluktós doménje, italé nem szekretált, természetesen keringő fehérje. A szekretált fehérjék új családjába tartozik, Ebbe: a. családba tartozik ntóg számos, tóqx vírus által kódolt fehérje, amelyek erős homológiái mutatnak K..-l8BP-vel (Novick és mtsai,, 1999). Az IL-18BP lépben konstitutívan expresszálődik, az immunglobnhs-szuperesaládba tartozik, és korlátozott mértékben homológ IL-1 Il-típusó receptorral. A génje a hnmánkrotnoszórna 1 lqI3 helyén található, és íranszxnerabrán domént kódoló exoní nem találtak egy 8,3 kb genomí szekvencián (Novick és mtsai., 1999),

Az Ik-ISBB négy humán és két egéreredetű izoíbrmáját - amelyek mfeHS kivágödásáhöl származnak és különböző eDÁS-könyvlárakfean találhatók - expresszálták,. tisztították és értékelték a kötődésüket és ÍL-18 biológiai aktivitásait neatmhzáló képességűket (Kim és .mtsai., 2000). A. bamánemdefe 11,-IBBFa-ízofenna (IL-18BPa) mutatta a legnagyobb affinitást IL-18 felé gyors bekapcsolási sebességgel (,,OB-mte’’)> lassú kikapcsolásí sebességgel („offirate”) és 399 pM dísszociáeiös konstanssal (K(d)l Az IL- I SöPc-ben és az IL-18BPa-ban 29 C-fennínális aminosav kivételével azonos az Ig-doméa, azonban az *

4lL-18BPe Ktdj-je csak tizedannyi (2,94 nM). Az IL-lSBPa és az 1L-18BPc mindazonáltal IL-18-at > 95%-bar nentrafizái kétszeres moláris feleslegben. Az lL-i8BPb·· és az ÍL18BPd-izofcnnákban hiányzik egy teljes Ig-domén, és az a képesség, hogy kötődjön az IL18:-boz.vagy neuíralizáija,. Az egereredeíö IL-lSBPc- és IL-lSfíPd-tzöfermák, amelyekben azonos az Ig-doxnén, szintén > 95%~ban centralizálják az egéreredetn IL-l S-at kétszeres moláris feleslegben. Az egérercdetü H,~!8BPd azonban, amely barnán IL-l&Blife-val közös C-íemhnálls mintát tartalmaz, szintén nentrabzáljá humán-lL-lS-aí. Molekuláris wodHfezéssel egv nagy, kevert, elektrosztatikus és hidroíbb: kötőhelyet azonosítottak az IL-18BP Ig-dom&géfeen, amely magyarázatni szolgálhat a ligaudhoz történő erős affiniíásü kötődé10 sere (Kim és mtsai2000).

Ibaomás agysérülések (IBI, traumatie bram mjury'% vagy egyszerűen fejsérülések, vagy zárt fejsérülések (Cili. closcd head ínjury) kifejezések a központi idegrendszer olyan sérüléseit jelentik, ahol az agy sérülését a fejre történt külső csapás okozza. I öbbnyire autós vagy kerékpáros baleseteknél fordul elő, de fulladás, szívroham, szélütés és fertőiá zés következményeként is bekövetkezhet, A traumás agysérüléseknek ez a típusa az agy oxigén- vagy vérellátásának: hiánya miatt következik be, ezért nnoxíás sérülésmk” nevezhető.

Zárt fejsérülés akkor történik, amikor ütés éri a fejet, mint példán! motorkerékpáros balesetnél vagy leesésénél. Ebben az esetben a koponya ütközik egy álló tárgyba, és a kozd ponyában lévő agy elfordul vagy elcsavarodik a tengelye (az agytörzs) körül, és így helyi vagy távolabbra ható károsodást szenved. Valamint az agy - egy folyadékkal körülvett és:

abban lebegő, lágy anyag - a koponyának ütközhet, amely további károsodást okozhat.

A trauma után közvetlenül eszméletveoztéses időszak következhet, amely percekig, hetekig vagy hónapokig tarthat, A csavarodásnak és az ötközésnak köszönhetően a. traumá25 san sérült: beteg agya az agy több részén szenvedhet: sérülésekéi vagy horzsolásokat, Ezt diffiiz sérülésnek vagy az agy nem lövedék okozta sérülésének'' nevezzük. A nem lövedék okozta serülések során előfordult' agvt károsodások típusai elsődlegesek \eg\ másodlagosak lehetnek.

> # * ** ««·**

Az elsődleges agyi károsodások a sérülés időpontjában keletkeznek, e> -oMmban a behatás helyén, főleg, ha koponyatörés is történt. őlagyobb károsodások mtraeerehrális haemorrhaglával vagy kérgi sebesüléssel társulhatnak, DrSúz axonális sérülések az ügynek koponyán belüli forgó mozgása áltál kiváltott neuronális folyamatok: nyíró vagy nyújtó íajtáinak eredményeképpen következnek be, Ezek lehetnek kis, haemorrhagíás sérülések vagy az axonok diffúz károsodása, amely csak mikroszkóposán mutatható ki.

Másodlagos agyi károsodások a sérülés időpontja után kifejlődő komplikációk eredményeként jöhetnek létre, ilyenek például az intracraniális haemorrhagia, az extraeerebrábs artériák traumás károsodása., az intraeraniális sérv, a hipoxiás agyi károsodás vagy a meningi tis,

A. nyílt fejsérülés” a. féj látható testi sértése, és fegyverlövedék okozta sebből, balesetből vagy a koponyán keresztül az agyba jutó tárgytól származhat (az agy lövedék okozta sérülése”). Ez a fajta fejsérülés nagy valószínűséggel az agy egy konkrét területét károsítja, $ Az úgy nevezett közepes agyi sérülés nem jár eszméletvesztéssel, és csak rövid

Ideig tartó szédülést vagy zavart állapotot okoz. A kómával nem járó agyi sérülést szenvedett személyek, bár orvosi közreműködést csak minimális mértékben igényelnek, hasonló tüneteket tapasztalhatnak, és hasonló károsodásokat szenvedhetnek, mint amelyek kómás sérülés túlélőinél lépnek fel.

A traumára reagálva változások történnek az agyban, amelyek a további károsodások megelőzése céljából ellenőrzést igényelnek. Súlyos fejsérülés után az agy mérete gyakran megnő. Ezt agyi duzzadásnak nevezik, és akkor fordul elő, amikor az agyban lévő vér mennyisége megnő. A betegség során később víz gyülemlík fel az agyban, amelyet agyi ödémának nevezünk. Mind az agyi duzzadás, mind az agyi ödéma az agy túlnyomását $ eredményezi, amelyet intraeraníáhs nyomásnak nevezünk (ICP, iúttaeraniái pressnre).

A kóma az eszméletvesztés elnyúl tolt időszaka, amely közvetlenül a traumás fejsérülést követi.

-ό4 « * » « 9 9

Φ 4 * 944 » X* *.Χ·4

9φ»9 * $ * * * Λ «fc *<* φ* φφ-#·

A kómának különböző -szintjei vannak. A kóma szintjeit a fejsérülést szenvedeti személy reagálóképességének fejlődésével mérhetjük. A fejsérülés akut fázisában a Gl®>~ gow-kőrnaskála («Glasgow Coma Scalefo alkalmazható. Ahogy a beteg állapota javul vagy stabilizálódik, a ^fSRaneho Los Amigos skála használható, amely a kognitív gondolkodás (megértés és érvelés) szintjeit méri.

Az agyi sérülések gyakran tartós debi Inast okoznak, például positraumás epilepsziát, tartós vegetatív állapotot vagy poszttraumás dementiát.

A gerincvelői sérülések alkotják a központi idegrendszeri sérülések (ÖMS-sérüiések, 'foentral: nervoos sysfem”) egy másik típusát. A kétoldali vagy teljes bénulással kórházi lö felvételre kerülők többségénél gerincvelői sérülés, a 'betegségük oka. Több- mint 8Ö°/e~nk Közút? baleset következménye. Klhúkailag a sérülések két nagy csoportja ismerhető fel; a nyílt sérülések és a zárt sérülések,

A nyílt sérülések a gerincvelő és az ideggyökerek közvetlen traumáját okozzák. Perlő r aló sérülések kitérj edt ronesolásokat és haemorrhagiát okozhatnak. A legtöbb gerincve15 lől sérülés zárt sérülés, és általában a gerincoszlop törésével vagy kiíleamodásával kapcso latos, amely általában radiolőgiailag matatható kk A gerincvelő károsodása a csontsérülés mértékétől függ, és két fo állapota van: az elsődleges károsodás, amely züzodás, idegrostszakadás és haemorrhagiás necrosis, és a másodlagos károsodás, amely eztradtuális haemaíoma, infarktus, fertőzés és ödéma.

A gerincvelői sérülések utóhatásai; a károsodott idegrostok felszálló és leszálló, asterograd degenerációja, posztraumás sztringomiéha és kétoldali bénulás szisztémás hatásai, például húgyúti és mellkasi fertőzések, nyomást fajdalom; és izotnsorvadás,

A. franmás agysérülés patológiája nagyon összetett, és még: mindig kevéssé ismert. Az elmúlt fiz évben végzett kísérletekben kimutatták, hogy szisztémásán és lokálisán az tnfmíheeatis komparímeotben felszabadult eítokínek fontos szerepet játszanak agyi sérülést követően, és promfianmiaiorikus citokineknél, például TNF-nél, IL-6-nál: vagy 11-8-nál kettős hatást feitélefeztek ezeknek a közvetítő anyagoknak időfüggő, jőiéfcony és káros hatásai alapján (Morganti-Kossmann és mtsai,, 1997: Kossmann és mtsai.,, 1997; Shohstni

V * Λ ·* * * $ * *κ» * $#· * $ %' k * ♦

V *·.# **· **·* és mtsai., 1999.; Seherbel és mtsai,, 1999; Whalen és mtsai,, 2009). Mint. az. előzőek: ismertettük, az IL-1 -eitokincsalád egy mostanában felismert tagja az IL-18. Közelmúltban végzett vizsgálatokban kimutatták, hogy az 1L-1K egerek, patkányok és humán egyedek központi idegrendszerében m vivő (Culhane és mtsai., 1998; Jander és Stoll, Í998;Fsanz és mtsai., 1999; Fassbender és mtsai., 1999; Wheeler és mtsai., 2009), valamint asztroeiták és míkroglía elsődleges tenyészetében /« váró konstitutívon expresszálödik, viszont neuronok tenyészetében nem (Centi és mtsai., 1999), Gyulladásos központi idegrendszeri betegségekben, például bakteriális meningibsben és vírusos meningoencephalítísben szenvedő betegek cerebrospinális folyadékában (CSF) az 1L-1S szintje megnőtt, viszont multiplex 19 sderosisban (MS) szenvedő betegek CSF-jében ezt nem tapasztalták (Fassbender és mtsai., 1999). Az .MS-beíegeknéi általában alacsony intrafoecalis IL-18-szintet mértek, mig magasabb szintű ÍL-18-mKlbfi-expresszlőt figyeltek meg kísérletes autoimmun eneephalomyelitisben (BAE, experímental auloimmune enoephalomyelitis”) - MS állati modellje - szenvedő Lewis -patkányok gerincvelőjében (lander és SfoH, 1998). Az ÍL-1S 15 expresszióját és fimkcionális jelentőségét neuroíramna esetén idáig még nem vizsgálták,

A következőkben röviden összefoglaljuk a találmányt. A találmány tárgyát képezi 11,-18 központi idegrendszeri betegségekben betöltött patoftzfologiás szerepe. Azon a felismerésen alapul, hogy egerek IL-18 inhibitoraival történő kezelése akár egy órával, akár három nappal a kísérletes, zárt fejsérülés matt (CH1, elosed bead injury'ö javítja a íel2(1 gyógyulást, és a kontroli állatokhoz képest mérsékeli az agykárosodás mértékét. A találmány tárgyát képezi IL~18-inhíhkorök alkalmazása központi idegrendszeri sérülés, előnyösen traumás agysérülés kezelésére és/vagy megelőzésére szolgáló gyógyszer eiöállitására.

Az IL-18-inhibitor interferonnal és/vagy TNF-íel és/vagy gyulladásgátlőkkal és/vagy antio.xidánsokkal történő kombinációinak alkalmazása szintén a találmány lárgyál képezi. 25 Az IL-lS-inlubiíotnak a beteg szövetekhez vagy sejtekhez történő szállítására génterápiás megközelítés alkalmazható, és a találmány tárgyát képezi továbbá iL-18-inhsbitor kódoló szekvenciáját tartalmazó nnkleinsavmokiulák alkalmazása CKS-sérölés kezelésére és/vagy megélő 'ősére, A találmány tárgyát képezi továbbá, genetikailag oly módon átalakís *<<

* « * r».· tort sejtek alkalmazása: CNS-sérülés megelőzésem és/vagy kezelésére, hogy a sejtek IL-18 inhibitorait expresszálják.

A kővetkezőkben röviden ismertetjük az ábrákat.

Az 1. ábrán btsztogrammon ábrázoliuk mtrácetebrálís IL48 (ng/ml) szérumszmtjmt teljes agyban (csíkos), a hal féltekében (fekete) vagy a jobb féltekében (szürke) különböző körülmények között.

A .2. ábrán NSS (Neurologica! Severity Seore'k neurológiát súlyosság! pontszám) fejlődését mutatjuk be .1 órával (b), 24 órával, 72 órával vagy 168 órával a traumái kö vetőit) en mérve, vagy 50 gg, a trauma után 1 órával i.p, adott IL-ISBF-vel (négyzetek) vagy csak a hordozó injekciójával (kontroll, kör),

A 3. ábrán a ANSS-értekeket mutatjuk be 24 órával, 72 órával vagy lök órával a fonmát kővetően mérve vagy 50 pg, a trauma után 1 órával i.p. adott ÍL~l&SF-vei (négyzetek) vagy csak a hordozó injekciójával (kontroll, kör), .A 4. ábrán a ANSS-értékekei mutatjuk be 1 órával, 24 órával, 3 nappal (d), 7 nappal vagy 14 nappal a traumát kővetően mérve vagy 50 pg IL-1 SBF kp. történő beadásával akár a traumát kővetően 3 nappal ad va egyetlen adagban (rombusz), akár két adagban a traumát kővetően I órával és 3 nappal (négyzet), vagy csak a hordozó injekciójával (kontroll, háromszög),

A következőkben részletesen ismertetjük á találmányi. A találmány azon a felismerésen alapul, hogy ÍL-IS-inhibitor statisztikailag szignifikánsan kedvező hatást gyakorol agysérülésből történő felépülésre zárt fejsérülés egéreredetü modelljében. A találmány vonatkozásában azt. is tapasztaltuk, hogy 11,-18 teaumás agysérülést követően az agyban és a eereferospinális folyadékban magasabb szintre szabályozödik, amely azt mnbdjn, hogy ez a proinibunma toríkus cifokin fontos szerepel j átszik agysérülés ontogenezisében,

A találmány tárgyát képezi tehát lL-18-inbifeifor alkalmazása központi Idegrendszeri (CMS) sérülés kezelésére és/vagy megelőzésére szolgáló gyógyszer előállítására.

« » ♦ * > *

A találmány tárgyát képezi továbbá IL-18-inhibitor alkalmazása CNS-sérülés komplikációinak és utóhatásainak kezelésére és/vagy megelőzésére szolgaié gyógyszer előállítására.

A találmány előnyös megvalösttási módjai szerint a CNS-sérülés tranmás agysérülés vagy zárt lejsérülés.

További előnyös megvalósítási módok szerint a CNS-sétUlés gerincvelői sérülés,

A találmány egy további előnyös megvalósítási módja szerint az agysérülés érrendszeri eredetű.

A találmányi leírásban a központi idegrendszert sérülés vagy CNS-sérülés kífe10 jezeseken az agy vagy a gerincvelő bármilyen sérülését értjük, függetlenül a sérüléskori kortól és az alapul szolgáló októl. Az ok leket például mechanikai barás vagy fertőzés. A OéS-sérüléseket, a klinikai tüneteit és következményeit az előzőekben részletesen ismertetettük a leírásban. CMS-Sérülés például a. trauma vagy az agy vagy a gerincvelő bármilyen más károsodása, és nenroíraumándt ís nevezhető.

Agysérülések lehetnek például a kővetkezők, illetve a következők közül egyet, kettőt vagy többet eredményezhetnek; 1. rigydemromlás. 2. kognitív képességek romlása, 3. nyelvhasználat tmnlása,. 4, memóriagyengülés, 5, életviteli rendellenességek, ő. motoros rendellenességek, 6, bármilyen más neurológiai zavar,

A gerincvelői sérülés például kétoldali vagy teljes bénulást eredményezhet.

A CNS-sérülés komplikációi vagy utóhatásai a találmány szerint kezelhetők és/vagy megelőzhetők. Az agysérülés komplikációit és utóhatásait az előzőekben részletesen ismertettük. a leírásban.. Ilyenek például, de nem kizárólag a kóma, a meuiugitis, a poszttraumás epilepszia, a poszttraumás demeafia, az idegrostok degenerációja vagy a poszüraumás szlringomieha vagy a haernorrhagia.

A találmány tárgyát képezi továbbá 11,-18-tnbibiíörok alkalmazása minden érrendszeri eredetű agysérülés, például hipoxíás agykárosodás agyi infárktussal, isehaemla, eerebrovaseulsris: baleset vagy szélütés kezelésére és/vagy megelőzésére szolgáló gyógyszer készítésére.

-se » * *

A teás szerint .a kezelés és megelőzés kifejezéseket CNS-sérülés egy vagy több tünetének vagy ofebiak,_: valamint €NS~sérűlést kísérő tünetek, betegségek vagy komplikációk részleges vagy teljes megelőzése, gátlása, enyhítése, javítása vagy visszaferditása értelemében Lasznábufc A CNS-sérüíés kezelésekor a találmány szerinti anyagokat a

S betegség fellépése után adjuk, a megelőzéskor az anyagok adása a betegség tünetei előtt Írható fel a betegnek.

CNS-séröiés kezelése a találmány szerint előnyösen végrehajtható. Előnyösen CMSsérülés kezelésére az IL-iS-inbibdort a CNS-sérülés után amint lehet beadjuk, példáni a sérülés utáni első órában. Az alábbi Példák részben azonban bemutatjuk, hogy az egyik 11,10 18-inhibitor kedvező .teást fejt ki az agysérülésre, még ha három nappal az agysérülés ntán adjuk is, A CNS-sérülés kezelésére tehát az lL~18~ínhibítort előnyösen a. sérülés utáni három napon beiül adjuk.

A találmányi leírás szerint az Π,-18-ínhihitor kifejezésen minőén olyan molekulát értünk, amely befolyásolja IL-18 termelődését és/vagy hatását oly módon, hogy az IL-18 termelődését és/vagy hatását enyhíti, csökkenti vagy részlegesen, alapvetően vagy teljesen megakadályozza vagy gátolja. Az IL-IŐ-inhibitor kifejezésen IL-18 termelődésének, valamint IL-18 hatásának inhibitorait értjük,

A termelődés Inhibitora minden olyan molekula lehet, amely negatívan hat az ÍL-18 szintézisére, feldolgozására vagy érésére, A találmány szerinti inhibitorok például mterlcukm Π -bs génexpre^s/mianak gáűos/eren antíszensz R\S-ek, amelyek csökkentik vagy megakadályozzák az. Π..-l 8-mRNS transzkripcióját, vagy az mRNS bomlását eredményezik, fehétjék, amelyek nem: megfelelő felgombolyodást okoznak, vagy részlegesen vagy alapvetően gátolják 0,-18 szekrécióját, ÍL-18-at a szimetizáfodása mán azonnal lebontó profeázok, pro-ÍL~í8-at hasító proteázoL amelyek az érett iL-18-at állítják elő, péh dául easpase-I Inhifeitoraí, és hasonlók.

Az IL-18 hatásának inhibitora például egy IL-18-antagonísts lehet. Az antagonisták akár magához az IL-ld-molekalához kötődnek, akár megfelelő aktivitással és specifiíással lefoglalják, hogy részlegesen vagy alapvetően neutmlizálják az IL-18-at vagy ox ÍL-18-nak «V * «

X χ. « χ * Ο * χ * »*♦ *χ « χ *♦:

* ♦♦ * ♦ « * « ♦ X «· ** «X X» « *χ a Ilgandjáboz (például receptoraihoz) történő kötődéséért felelős IL-18~köíö helyeket- Az antagonista gátolhatja az IE-18 szignálúívonalát, amely a sejten helül aktiválódik, ha az ILII 8 kötődik a receptorához.

Az IL-18 hatásának inhibitorai lehetnek oldható Π ~i8-recepferok vagy a reeeptoro5 kát utánzó molekulák, vagy az ÍL-18-receptorokuí gátló anyagok, vagy 1L-18 ellent ellenanyagok, mint például monokíonáiis^ vagy poliklonális ellenanyagok, vagy bármilyen más anyag vagy molekula, amely megakadályozza az IL-18 kötődését a céljához, így csökkenti vagy megakadályozza az IL-I8 által közvetített intra- vagy extracellnlárls reakciók kiválrődását.

A találmány egy előnyös megvalósítást módja szerint az IL-18-inhibitor az alábbiak bármelyike;: caspase-I inhibitorai (1CE),_: 1L-18 elleni ellenanyagok, bármelyik IL-18-receptoralegység elleni ellenanyag, az IL-18 szígnálúivonalának inhibitorai, IL-18anfegonisták, amelyek kompetálnak IL-18-eal vagy kötődnek hozzá és gátolják az ÍL-1Sreeeptori és IL-18:-kötŐ fehérjék, izofermák, műfemek,. fuzionált febégék, fenkcionális származékok, aktív frakciók vagy cirkulárisán permutálí származékok vagy ezek sót.

A leírás szerint az LL-18~fcötő fehérjék” kifejezést az ”íL-l88F^ts kifejezés szinontmájaként alkalmazzuk, és IL-lS-kötő fehérjéket ériünk alatta, ahogy a WO 99/09Θ63 számú nemzetközi közzétételi iratban vagy Novick és munkatársai (Noviek és mtsaí,, 1999} meghatározták, beleértve az IL-18-köfe fehéijék illesztési („sp&efo variánsait és/vagy izotermáit, ahogy Kim es munkatársai {Kim és mtsai., 2000} meghatározták. A találmány szerint előnyösen az 1L-18SF a és c jelű humánersdetu: izöförmáí alkalmazhatók.. A. találmány szerint alkalmazható fehérjék lehetnek glikoziláltak vagy nem gh közi kutak, származhatnak természetes femásokhők például vizeletből, vagy előnyösen rekombtuáus úton állíthatok elő, A rekombináns expresszi© prokarióta expresszlós rendszerekben végezhető,

2ö például E. ooAhan, vagy eukartőta, és előnyösen: emlősetedelü expresszlós rendszerekben.

A találmány szerinti Ii,-18-inhibhorok számára előnyös sejtvonal kínai aranyhörcsög peteleszek sej tjei (CHO-sejtek, Thinese ham.ster ovary”').

»·44 * *Κ »* *· »* fc 4 fc· 4 4 * « fi »94 4 fi» »44

444 4 Μ X ♦ * fc ·»: ** 44 fc*«

Az. ÍL-18-tnhibifor rekombináns termelése, amikor emlőssejtében vagy emlössejtvonalakban rekombinánsan expresszálják, előnyösen szérammentes sejtíenyésziŐ tápközegben végezhető..

A. leírás- szerinti értelemben a “möW kifejezésen IL-18BP vagy vímseredetű ít5 1SBP olyan analógjait értjük, amelyekben a természetesen előforduló 1I.-18BP vagy a viraseredető íL-lSBP egy vagy több aminosavát különbőzé amrnosavakkal helyettesítjük, vagy kivágjuk., vagy egy vagy több amínosavat adónk az E.,-18BP vagy a vímseredetá 1LI8BP természetes szekvenciájához anélkül, hegy jelentősen csökkenne a képződő termékek aktivitása a vad típusú. IL-l&SP-hez vagy a viraseredető IL-18BP~bez képest. Ezek a maternek ismert szintézístechnolőgiákkal és/vagy helyspeciSkns mutagenezisteebnológíáfekal vagy bármilyen más, ismert, erre alkalmas teehnolőgiával állíthatok elő.

Minden ilyen nmíein ammösavszévenciaja kielégítő másolata az IL-í ŐBP vagy a víruteredetű ÍL-Í8BP wínosavszekvenciájának, hogy alapvetően azonos aktivitása legyen az IL-18BP-vei. Az I L-.18BP egyik aktivitása, hegy Π..-1 S-at köt. Amennyiben a maíemnek lényegében van IL-18-aí kötő aktivitása, ÍL-18 tisztítására felhasználható, például ariimtáskromatográfiával, és így lényegében iL~18BP-vel azonos aktivitásúnak tekinthető. Az, hogy az. adott m ütemnek van-e ÍL-18BP-vei lényegében azonos aktivitása ralin kísérletezéssel eldönthető, például a nmteinnel egyszerű szendvics kompetíciós vizsgálat végezhető annak meghatározására, hogy kötődik vagy sem megfelelő módon jelzett ÍL-18-hoz, '20 ilyen például a radímmmunoiőgiai vizsgálat vagy ELíSA-vízsgábt. Az IL-18BP biológiai aktivitásának kiértékelésére szolgáló, egyszerit, fenkcíonális vizsgálatokat a. WO 99/09063 számú nemzetközi közzétételi iratban ismertetnek, például a 2. példában (az IL-I8-hoz történő kötődést fceresztkötessei -értékelik) vagy az 5. példában (tNF-gamma indukcióval kiváltott IL~í 8 gátlása monoodkíeárís verseitekben).

Egy előnyös megvalósítási mód szerint minden ilyen műiéin legalább 40%-ban azo~ nos vagy homológ: akár IL-í SBB, akár vírus által kódolt ÍL-18BF homológ szekvenciájával. Előnyösebben legalább S0%~han, legalább 60%-ban, legalább 70%-han, legalább ί

-.13♦ ♦: * ♦ ♦

».* & Λ t» * * Κ

Sö%-ban vagy legelőnyösebben legalább 90%-ban azonos vagy homológ akár IL-ISBF, akár vírus által kódolt 1L-ISBP homológ szekvenciájával

A találmány szerint alkalmazható IL-1 SEP-muteinek vagy viruseredetü IL-lhBl?mufeinek, vagy az ezeket kódoló nnkblnsavuk például a véges számú, lényegében mégis5 leió szekvenciák., mint szubsztitűciös pepiidet vagy polinukleoíídok, amelyeket szakember rutinszerűen elő tud állítani túlzott kísérletezés nélkül a leírás kitanítása és útmutatása alapján..

A találmány szerinti mnteinek például olyan nnkleínsav, példáit! DNS vagy RNS, által kódolt fehérjék, amely nukleíusav hibridizal a taláhnány szerinti IL-í8-inhihitort kódo10 ló DHS-sel vagy RNS-sel mérsékelten vagy erősen szíringens körülmények között, A sztringens: körülmények kifejezést azokra a hibridizációs és azt követő mosási körülményekre értjük, amelyeket szakember általában sztringensnek nevez. Lásd például Ausubel és mtsai.,, Current Froíoeols itt Molcetűar Biology, ld. fent, Intsrseience, Nt §6,3 fc §6.4 (19&7_;. 1992) és Samferook és mtsai,, [Sambrook, 1 C„ Fritseh, E, p. és

Mamaris, T,, Molecnlar Gtening: A. Lahoratory Manual, Gold Spring Bárkor Lahoratory Press, Coki Sprirtg Earber, NY (1989)].

Sztringens körülmények például, de nem kizárólag az olyan mosási körülmények, amelyek hőmérséklete 12~20°C-kaÍ alacsonyabb a vizsgálandó hibrid számított Tm~ ériékénél, pl. 2 x SSG-vel és 0,5¾ SDS-sel 5 percen keresztül, 2 x SSG-vel és 0,1% SDS20 sel 15 percen keresztül 9,1% SSG-vel és 0,5% SDS-sel Sv^C-on, 30-60 percig, majd 0,1 x SSG-vel és 6,5% SDS-sel ő8⁹G-on, 30-öü percen keresztül történő mosás:. Szakember számára nyilvánvaló, hogy a sztringens körülmények a DNS-szekveneíák, az ohgonnkleotid-prőfeák (pl. 10-46 bázis) vagy a kevert oligonnkleotíd-prőbák hosszától ís iúggenek. Amennyiben kévén próbákat alkalmazunk, elöntésen tetrnmetü-emmónium25 klorídfc (TMAC)· alkalmazunk. SSC helyett. Lásd: Ausubel (stgw).

Előnyös: megvalósítási mód szerint minden ilyen inaiéin legalább 40%-ban azonos vagy homológ a mellékelt szekvencialistában található l., 2, vagy 3. azonosítószámú szekvenciával 1 O! szebben legalább SÖ%~han, legalább 06%-ban, legalább 70%-ban, légX X Φ ♦ *♦* •’ϊ «»

-14 ·» «· ♦ ♦*« » ♦ * alább 80%-ban vagy legelőnyösebben legalább 90%-ban azonos vagy homológ az 1., a '2, vagy a 3. azonosítószámú szekvenciát

Áz azonosság: két vagy több polipepíid-szekvencla vagy két vagy több polinukleottdszekvencia közötti rokonságot tükrözi, amely a szekvenciák összehasontttásával hatsroz5 ható meg. Általánosságban az azonosság a. két pottnukfeoíid-szekvencla vagy a két pohpeptíd-szekvenoia pontos nnkleotíd-nijkleodd vagy aminosav-anainosav megfeleltetésén alapul az összehasonlítandó szekvenciák hosszában.

Azoknál: a szekvenciáknál, ahol nincs pontos megfeleltetés %-os azonosság határozható meg. Általánosságban az összehasonlítandó két szekvenciát egymás mellé rendez10 zűk oly mádon, hogy a szekvenciák kozott maximális megfeleltetést kapjunk, Ilyenkor lyukak építhetők be az egyik vagy minőkéi szekvenciába, hogy az egymás mellé rendezés mértekét fokozzak. A %-os azonosság az összehasonlítandó szekvenciák mindegyikének teljes hosszában határozható meg (úgynevezett tettes egymás mellé rendezés), amely elsősorban egyforma vagy nagyon hasonló hosszúságú szekvenciáknál alkalmazható, vagy roviáebb, meghatározón hosszban vizsgálható (úgynevezett lokális egymás mellé rendezés), amely nem egyforma hosszúságú szekvenciáknál alkalmazható.

Két vagy több szekvencia azonosságának vagy homofogiájának összehasonlítására szolgáló eljárások szakember számára jól ismertek- .Például a Kfeconsm >&</ausee AnafysA Pncífoge 9.1 verzió csomagban (Devereux, J, és míssL 1934) lévő programok, például a

BESTFTT- és O'.AP-programok alkalmazhatók két. polinukleotíd közötti százalékos azonosság és két polipeptitt-szekvencia közötti százalékos azonosság és százalékos bomolőgla meghatározására, A BESTFIT Srníth és Wutennan (1.981) ''lokális, homolőgla algoritmusát alkalmazza, és a két szekvencia közönt leginkább hasonló egyetlen szakaszt keresi meg. Szekvenciák közötti azonosság és/vagy hasonlóság meghatározására más programok is ismertek a technika állása szeritfo például a BLÁST-progtárncsalád (Áfeschuk S, F. és mtsai l°9ik il s I ts mtsai l‘í^u'' \iűi honlapul vtic-ztui cdvfo el wmv.ncbknte.níb,gov), és a FASTA-pmgram (Beámon, W. fe, 199Cf; Pearson, 1983).

** * χ χ * » * « »*·« * «.

ί*?.... *, ;·*»

15Α találmány szennti nruíeiaek számára előnyös változások az úgynevezett konzervatív szubsztitúciók, Az ÍL-ÍSBP-pobpeptidek vagy -fehérjék vagy víraseredetű 1L18BP-k konzervatív aminosavszohszfituciói szinonim aminosavak lehetnek olyan csoportbök amelynek megfelelően hasonlóak a Szíkai-kemiaí tulajdonságai, hogy a csoport tagjai:

közötti szubsztlióciő megőrizze a molekula biológiai hmkdóját (Grantbaur, 1974). Nyilvánvaló, hogy aminosavak inszereiős és deléciól végezhetők az előzőekben megbatározott szekvenciákban a funkciójuk megváltoztatása nélkül, előnyöséig ha az mszerdók vagy ddéciofc csak néhány aminosavat érintenek, például harmincnál kevesebbet és előnyösen tíznél kevesebbet, és nem távolítanak cl és nem helyeítentfenek olyan aminosavakat, ame10 iyeh alapxeióen fentosak a funkcionális konformációhoz, például ciszteinelot. Az ilyen deíéeiókkal és/vagy ínszercíókkal elöál hunt fehérjék és műtétnek a találmány oltalmi körébe tartoznak.

Előnyösen a szinonim arninocsoportok az 1. táblázatban található arninocsoportok. Előnyösebben a szinonim ammocsoportok a A táblázatban meghatározott arninocsoportok, 15 és legelőnyösebben amínocsoportok.

a szinonim arninocsoportok a 3. táblázatban megbatározott

Aminosavak

Ser Arg Len Pro Thr

Alá Val Gly be

Phe

Tyr

X-láfelázaí ^iőnyösesonoríjai

Szinonim csoport

Ser, Tbr, Gly, Asn

Arg, Gin, Lys, Glm His be, Phe, Tyr, Met, Val, Len

Gly, Alá. Tbr, Pro

Pro, Ser, Alá, Gly, Hís, Gin, Thr

Gly, Tbr, Pro, Alá

Met, Tyr, Phe, lie, Leu, Val

Ab, Túr, Pro, Ser, Gly

Met, Tyr, Phe, Val, Len, He

Trp, Met, Tyr, íte, Val, Len, Phe

Trp, Met, Phe, lie, Val, Lem Tvr « »♦*» **

S * *

•16-

L,ys His Gin Asn	bcr, í hi\ Lys Gin, Lys, Gin, Thr, Árg, His
Gin, Lys, Asn, His, TI Gin, Asp, Ser, Asn	ír, Arg, Gin
Lys	Gin, G In, His, Arg, Ly	•-'8
Ásp	Gin, Asn, Asp
Gin	Asp, Lys, Asn, Gin, H	A, Arg. Gin
Met	Phe, De, Val, Len, Me	t
Trp	W

2. táblázat

Szinonim aminosavak előnyösebb csoportja?

Amin	osav 57n?orn.n? csopor?
Arg		His, Lys, Arg
Mf·. Pro Thr		AaV-'j ί iíA>x iyLVt Ab, Pro Thr
Ab Val		Pro, Alá Val, Me?, Se
Gly		Gly
Se		Se, McL Phe, Val,
Phe		Met, Tyr, Be, Len,
1At		Phe, Tyr
Gys		Gys. Ser
PbS Gin		His, Gin, Arg Gin, Gin, His
Asn Lys		Asp, Asn Lys, Arg
A Gin		Asp, Asn Gin, Gin
Me?		Met, Phe, Se, Val,
írp		Trp

Leu

Phe

Len xt ** »>··'' s ··*· & * 9

-r

Aminosav

Ser

Árg Lett Pm Tbr Ab

Val öly Ik Phe táblázat

Szinonim anúnosavak tegélőnynsebb csoportjai Szinonim csoport Ser

Len, lle, Meí

Pro

Thr

Áh

Gly

Ik, Met, Lett Phe

Cys: Hrs Gin

Asa

Lys

Asp Glu Met Trp

Cys, Ser

HA

Gin

Ásn

Lys

Gin

Met. Ile, Len

W

Fehér :e,\h<.tt amínosavszabszdtúciók eiőáiihására szolgák példák, amelyek ILÍ88P-poIipsptidek vagy -fehérjék műfemjeinek vagy vhusercdetu IL-lbBP-rmkemek előállítására alfcalrnazbatők, bármilyen ismert eljárási lépési tartaimazhainak, mrnt amelyeket például a 4,959.314. a 4.588.585 és a 4.737,462 számú amerikai egyesüli államokbeli szabadalmakban (Mark és munkatársai), az 5,116.943 (Koths és munkatársai), a 4.965.195 (Namen és munkatársad), a 4,879.11 (Ghong: és munkatársai), és áz 5.817.691 (Lee és munkatársai) .számú: amerikai egyesült államokbeli szabadalmakban ismertetnek, és Lziunel ♦ ** * » < * * ♦ ♦ ♦ * »»» ««« * ** ** ♦.# ♦.*»

-18szahszütu^t fehérjék, amelyeket: a 4.9Ö4.584 (Shawés munkatársai) számú amerikai egyeseit államokbeli szabadalmi iratban tettek közzé.

.A fúziós fehérje* kifejezésen olyan polipépíidet értünk, amely ÍL-I8BP-1 vagy vimseredetn IL-ISBP-t vagy ezek műfemjét vagy fragmensei tartalmazza egy másik febétjé5 vei fuzionálva, amely pl. hosszabb ideig marad meg a testfolyadekokbaa. Az IL-18BP vagy a virusereáetű IL-18BP tehát egy másik fehérjéhez,, pohpeptidhcz vagy hasonlóhoz fuzionálható, például Irumunglefeuhnhoz vagy egy fragmenséhez.

A Ieirás szerint a “funkeiorsábs származékok kifejezésen az IL-18BP vagy a víruseredetű ÍL-I8BP és rauteinjeik és fúziós fehérjéik származékait értjük, amelyek azN- vagy

C-terminális csoportokon vagy az amlnosavak oldalíáncain található funkcionális csoportokból készíthetők a technika állása szerinti eszközökkel, és a találmány tárgykörébe tartoznak, amíg megőrzik gyógyászati alkalmazhatőságukai, azaz néni rontják á fehérje aktivitását, amely lényegében azonos az II-18BP vagy a víroseredeíü IL-18BP aktivitásával, és nem okoznak toxikus tulajdonságokat az ezeket tartalmazó készítményeknek.

I 5 Ezek a származékok például polied lén-glíkol oldalláncokat tartalmazhatnak^ amelyek antigénhelyeket álcázhatnak és meghosszabbíthatják az IL-18BP vagy a viruseredetu ík18BP testűd) adékokbun történő megmaradásának idejét Egyéb származékok például: a karhoxifesoportok alifás észterei, karboxifesoportoknak ammóniával, vagy elsődleges: vagy másodlagos aminokkal történő reakciója során képződő amldok, aminosavak szabad aminocsoportjainak ácilrészekkel alkotott fe-acfl-számiazékai (pl. alk&noii- vagy karhocikfesos atoll csoportok) vagy szabad hldroxilesoportok (például szerit- vagy treomlcsoportok hiároxífesoportjainak) acilrészekkel történő Ö-actl-szánnazékai.

Az 1L-18RP vagy a víruseredetú .1L-ISB?, műiéinek és fuzionált fehérjék aktív írakcióiként’¹ a találmány tárgyát képezi a fehérjeniolekula pohpepödláncának bármilyen feagmense vagy prekurzora Önmagában vagy ezekhez kapcsolt molekulákkal vagy aminosavakkal együtt, például cukor- vagy foszfátcsoportokkal, vagy fehértemolekula vagy eukorcsoportok önmagával alkotott aggregátuma val, feltéve ha. a feakciónak lényegében azonos az aktivitása az. 11,-1 SBP-vst

-19‘*·> ♦ « ♦ V ♦ X;» * « X * :*:♦ ♦ * > χ ♦ »*♦ *«4 * * **

A tótfe szermíi értelembe» a ^sők” kifejezést mind áz lL-18-inhfoitormolekula karboxilcsoportjainak sóira, mind az aminocsoporíok: savadáfeiős sóira érti ük vagy ezek analógiáira. A karboxilesoportok sói a technika állása széliét ismert eljárásokkal képezhetők, és például szervetlen sók, példád nátrium-, kalcium-, ammőnium-, vas- és omksők és hasonlók, és szerves bázisokkal képezett sók, például antinokkal, például trieianolamlnnai, argimrmei vagy lizlnnel, piperidinnel, prokainnal és hasonlókkal alkotott sók. Savaddfciós sók. például ásványi savakkal, például sósavval vagy kénsavval al kőiéit sók, és szerves savakkal, például ecetsavval vagy oxálsavval alkotott sók. Természetesen valamennyi sónak meg kell tartania az ÖPN találmány szempontjából releváns biológiai aktivi10 tását. azaz oligodendrodIák szaporodását serkentse,

A találmány további előnyös megvalósítási módja szerint az 11,-18 inhibitora 11,-18 elleni ellenanyag. Az IL-18 ellem ellenanyag lehet poliklonálfe vagy monokionáhs, iáméra, humanizált vagy teljesen humán eredetű. A rekombináns ellenanyagok és ffagmenseik m m II,-18 télé erős affinitást mutatnak és kis mértekben toxikusuk, A találmány szerint alkalmazható ellenanyagok azzal a tulajdonságukkal jellemezhetők, hogy betegeket elegendő ideig kezelve jó utg> kit aló mértékben nuuítpák vissza \ug> enyhítik a pamgén állapotot vagy a patogén állapottal kapcsolatos bármilyen tünetet vagy tünetcsoportot, és kis mértékben toxlkusak.

A neuíralizáló ellenanyagok állatokban, például nyálban, kecskében vagy egérben

2Ö könnyen előállíthatok 11,-18-cal történ® immunizálással. Az immunizált egerek kütöcösen alkalmas forrásai B-sejtek híbrtdőmagyárláshoz történő előállítására, amelyek azután tenyészthetők, hogy 1L-18 elleni monoklonáhs ellenanyagokat nagy mennyiségben lehessen előállítani.

A Iáméra ellenanyagok olyan. immúsglobuhn-molekulák, amelyek különböző állaí25 fajokból származó két vagy több szegmenssel vagy résszel jellemezhetők. Általában a kimerő ellenanyagok variábilis szakasza nem humán eredetű emlosellenanyugbói származik, például egéreredeíu mouoklonális ellenanyagból, és az immunglobulin konstans szakasza humán tmmnnglobuHn-molekuláből származik. Előnyösen mindkét szakasz és a kombiná* « Φ ♦ * * φ « a φ φ ,χ * * W « » φ * « * ♦** φ>φ **** « Φ < φ Ν « ·* ** *·* *Χ Λ·*«

-26cíó kis mérték ben immuno gén. mint ez könnyen meghatározható (Ellíott és mtsai,. I994k A humanizált ellenanyagok géntechnológiai módszerekkel előállított immunglobuiinmoíekulák, amelyekben egéreredetú konstans szakaszokat humáneredetű, azonos szakaszszal hdyeheshűnL míg az egéreredetú antigénkotö szakaszokat megfenjük. A képződő egér-humán kíméra ellenanyag előnyösen kevésbé ímmunogén, és jobb a fármakoklnetlkája humán szervezetekben (Knigki és mtsai,. 1993).

Egy további előnyös: megvalósítási mód szerint az IL-iS-edenanyag humanizált 11.,18-dleúányag. A humanizált IL-18 elleni ellenanyagok előnyös példáit például az FP 09^4600 szama európai közzétételi iratban ismertetik.

Egy további douyos megvalósítási mód. szerint az IL-18-el lenanyag teljesen humán eredetű. A humán ellenanyagok termelésére szolgáló technológiák részletes ismertetése például a WÖW7Ó31Ö, a WO99/S3649 számú nemzetközi közzétételi iratokban, az Ü5? Ő.1Ó2.963 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi iratban vagy az AP533610Ö számú ausztrál szabadakul iratban található, A teljesen humán ellenanyagok előnyösen transzgéníkus állatokban, például xenoegerekben előállított rekombináns ellenanyagok, amelyek a teljes funkcionális humán íg-íőkuszt vagy csak részeit tartalmazzák.

A találmány további előnyös megvalósitási módja szerint az IL-lS-inhlhtlor 1L-I8BE vagy izotermája, muteiuje. fezionált fehéíjéje, fenkeionális származéka, aktív frakciója vagy cirkulárisán permutálf származéka, Ezek az izofenpák? műtétnek, fuzionált fehérjék vagy fankdonális származékok megfejjék az IL-18BP biológiai aktívifesáí, előnyösen áss IL-18~hoz történő kötődést, és előnyösen legalább lényegében hasonló áktlvítástbk, mint az IL-ISBP. ideálisan az ilyen fehérjék biológiai aktivitása meg magasabb, mist a nem módosított 1L-18BF--Ó. Előnyös aktív frakciók aktivitása jobb, mint az. IL-ISBP-e, vagy egyéb előnyeik vannak, például kedvezőbb a stabilitások, vagy alacsonyabb a fextettásuk vagy az ímmonogemtásuk, vagy könnyebben: állíthatók elő nagyobb mennyiségben vagy könnyebben tíszífrhatők.

-21Az IL-18BP és iileszfeses Ó.splice) variánsaí/izoförmái szekvenciái a W099/99ÖŐ3 számú nemzetközi közzétételi iratból vagy Novick és munkatársai (Novick és mtsai., 1999) valamint Kim és munkatársai (Kim és mtsai., 20Ö0) munkáiból szerezhetők he.

Az ÍL-ISBF funkcionális származékai polimerhez kapcsolhatók, hogy a fehérje tu5 iajdonságai kedvezőbbek legyenek, például a stabilitása, a feléletideje, a biológiai hozzáférhetősége, a humán szervezet általi tolerancia a. vagy az imnumogenitasa. Ennek elérése érdekében a fimkcionálís származék tartalmazhat legalább egy részt, amely aminosav fik egy vagy több oldalláncún található egy vagy több fenkeionáiis csoporthoz kapcsolódik. Ilyen funkcionális csoportok például a polietilén-glíkol (PEG). FEG -Származékok képzése az ismert eljárásokkal végezhető, amelyek ismertetése például a WO92/13995 számé nemzetközi közzétételi iratban található.

A találmány egy előnyős megvalósítási módja szerint tehát az IL-lfednbíbítörnák és előnyösen az IL-lSBP-nek FEG -származékát képezzük,

A találmány egy további; előnyős megvalósítási módja szerint az 1E~ 18-inhibitor fe•15 zionált fehérje, amely ÍL-18-at kötő fehérjét teljes egészében vagy csak részletében tartalmaz, és amely egy teljes inmmngiobuhrshoz vagy egy immtmglöbulin-részhez van fuzionálva, Szakember számára nyilvánvaló, hogy a képződő fúziós fehérje az ÍL- ISBF biológiai. aktivitását megtartja, előnyösen az fL-'l 8-hoz történő kötődési. A fúzió történhet közvetlenül vagy egy rövid kapcsoló (linkért pepiiden keresztül, amely lehet rövid 1-3 aminosav hosszúságú, vagy hosszabb, például 1.3 aminosav hosszúságú. A kapcsoló molekula például az: S-E-M (Glo-Phe-Mef) tripeptíd-szekvencía lehet, vagy egy 13 amhrasavbóí álló kapcsoló szekvencia, amely a. Glu-Fhe-Gly-Ala-Gly-Iyeu-Vai-Leu-Gly^Gly-Gfe-Fhe-Met szekvenciát tartalmazza ez IL-18BP -szekvencia és az immunglobulin-szekvencia között, A képződő fúziós fehérjének jobbak a tulajdonságai, például hosszabb ideig marad meg a teátfortadekokhan Uelélendöh jobb a 'gaxiriku? aktivitása, magasabb az expresszlős szintje vagy a fúziós fehérje; tisztítása könnyebb.

Előnyős megvalósítási möd .szerint az íE-18BP~t az Ig-molekula konstans szakaszához fuzionáljuk. Előnyösen a nehézláncszakaszokboz, például a. humán IgGi €B2- és „0% * 9Χ«« «ο « * V * X ' ♦ * * * ♦ ♦ * ♦ » *» *99 * *Χ * X « χ # $ _κ * 99

CH3~doménjeihez femionáljuk, Ít-ISSÍM és immunglobulin; egy szakaszát tartalmazó, specifikus fúziós fehérjék elealhtavV, a WO99/Ő9ÖÓ3 száma nemzetközi közzétételi írat 11, példájában ismertetik. Az Ig-molékulák egyéb izotermái is alkalmasuk a találmány szerinti fúziós ibhérjek előállítására, például az. fgOz- vagy az IgCó-izotermák vagy más lg5 osztályok, mint az. IgM vagy az IgA például. A fúziós fehérjék lehetnek monomerek vagy multi merek, hetem- vagy Hornom ultimerek.

Az interferonokról elsősorban vírusreplikáciÓra és sejiprol Iterációra gyakorolt gátló Hatásuk ismert, Áz mterferoh-y példán! fontos szerepet játszik az immunfölyamaiokhan és a gyulladásos folyamatokban. Az iníerforon-p-nak (ΙΡΝ-β, í-hpusú Interferont feltehetőleg gyűl ladásgátlö hatása van.

A találmány tárgyát képezi tehát továbbá az IL-18 -mhibiíor és egy interferon kombinációjának alkalmazása CNS-sérülés kezelésére szolgáló gyógyszer előállítására.

Az interferonok is polimerekhez kapcsolhatok, hogy jobb legyen a fehérjék stabilitása, Az interféfon-β és .a pokol, polletilén-ghkoi (PEG) közötti konjugátumot például a

WO99/55377 számú nemzetközi közzétételi iratban ismertetik.

A találmány egy további előnyös megvalósítási módja szerint az interferon lőtériéron-p (LFN-β) és előnyösebben IFN-β la típusú.

Az Ik-18 termelődésének és/vagy hatásának, gátlőszerét az. imerferosnal egy időben, egymást kösetöen \agy külön adjuk.

A huoörnekfoxís-íaktorról az irodalomban léniák, hogy agysérüléseknél mind védő, mind toxikus hatása lehet (Shohami és mtsai., 1999). Az. alábbi 1, példában bemutatjuk, hogy TNF-nek súlyos agyi traumát kővetően egerekbe történő Injektálása az 11,-18 szintjének szignifikáns csökkenését okozta az agyban, amely azt mutatja. hogy a 1SF kedvező hatást gyakorolhat traumáé agysérülésből történő felgyógyulásra. A találmány egy előnyös megvalósítási módja szerint a találmány tárgyát képezi JL- 1 S-inhibltornak INF-fel kombinációban - egy időben, egymást követően vagy külön - történő alkalmazása, agysérülés kezelésére és/vagy megelőzésére szolgáló gyógyszer előállítására.

Az IL-tS-mhibttorok JNF-a~vaí történő kombinációja előnyös a találmány szerint.

Λ * * » ·»:

* «Μ * ί '/ χ ♦ V * ¥ ♦ #*?♦ *«« ♦<« * χ $ :Φ χ- ♦ χ χ * Α * ** »χ ,η» »««

A találmány egy további előnyös megvalósítási módja szerint a gyógyszer gyulladásgátlö anyagot is tartalmaz, például NSzllD-t ftecnrieröídal o-ntímílammatory’ drugs, nem szteroid jellegű, gyulbdásgátló gyógyhatású anyagok). Égy előnyös megválósitási mód szerint COX-mhibúort, dónyósebben CÖX2~mhibiiori alkalmazunk az 1L-I85 inhibitorral kombinációban. A COX-ínbibitorok a technika állása szerint Ismertek. Konkrét COX2-inhi kitörőkről például a WOö 1/00229 számú nemzetközi közzétételi iratban adnak kitwiíást, Az aktív komponensek egy időben, egymást követően vagy külön alkalmazhatok.

Az agykárosodás patofízíológiájában az: oxídalív stressz, előnyösen a reaktív oxígén10 fajták (ROS) is szerepet játszanak (Sbohamí és mtsai., 1997).

Á találmány egy előnyős megvalósítási módja szerint a gyógyszer aniioxidánst is tartalmaz, egy időben, egymást követően vagy külön alkalmazva. A technika állása szerint sok antioxiöáns ismeretes, például A-, €- vagy É-vItamínok vagy 5-aminoszahdÍsav vagy szuperoxid-diszmútáz.

A találmány egy további előnyös megvalósítási módja szerint az IL-l S-inhihitori körülbelül 0,001-100 mg/kg. testsúly mennyiségben vagy körülbelül 0,01-10 mg/kg testsúly vagy körülbelül 0,1-3 mg/kg testsúly vagy körülbelül 1-2 mg/kg testsúly mennyiségben >

A találmány egy további megvalósítási módja szerint az íL-lO-inhí kitöri körülbelül 10 0,1-1000 pg/kg testsúly vagy 1-100 pg/kg testsúly vagy 1-100 ng/kg testsúly vagy 10-50 rtg/kg testsúly mennyiségben adjuk,

A: találmány tárgyát képezi továbbá JL-1 S-inhibitor, műfemje, funkcionális származéka vagy aktív riakciója kódoló szekvenciáját tartalmazó uukleinsavmőlefcuia alkalmazás saCNS-sérülés megelőzésére és/vagy kezelésére szolgáló gyógyszer előállítására, .Előnyősén a nukleinsavmolekub egy expressziós vektor szekvenciáját ís tartalmazza, pl. a találmány szerinti IL-18-inhibitor adagolásához génterápia alkalmazása esetén. A nukteinsavmolekttlát előnyösen istramúseuhrisan adjuk.

ϊ» * 4» ? * < * ** ^Χ. * * * ·24· ♦η

Á CNS-sérülés kezelése és vagy megelőzése érdekében az IL-18-termelődés és/vagy -hatás inhibitorának szekvenciáját tartalmazó génterápiás vektort például közvetlenül a beteg szövetbe injektálhatjuk, ily módon á génterápiás vektorok szisztémás adagolásával járó problémák, mint a vektor hígnlása, a célsejt k vagy -szövetek elérése és megcélzása, és a mellékhatások elkerülhetők.

A találmány tárgykörébe tartozik továbbá IL-d8-í.nhibíto.r endogén termelődésének redukálására és/vagy serkentésére - olyan sejtekben, amelyekben normál esetben IL-18mblbhor nem expresszáiódik, vagy amelvek nem elegendő mennyiségben expresszáiják az inhibitort ·· szolgáló vektor alkalmazása ÖNS-sérülés kezelésére és/vagy megelőzésére. A vektor olyan szabályozó elemeket tartalmazhat, amelyek azokban a sejtekben működnek, amelyekben az inhibitort vagy az lL-18-at expresszálni kívánjuk, ilyen szabályozó szekvenciák vagy elemek példáid promóterek vagy serkentők lehetnek. A szabályozó elemek azután a genom megfelelő helyére homológ rekombinációval vihetők be, amellyel a szabályozó szekvencia működőképesen kapcsolódik a génnel amelynek az expressziőját káván15 juk indukálni vagy serkenteni, Lzt a technológiát általában endogén génaktiválásnak nevezik (LBndögenous Gene Achvatíon'l BOA), és Ismertetése például a WO91/W955 számú nemzetközi közzétételi iratban található.

Szakember számára nyilvánvaló, hogy ugyanezzel a technológiával 1L-18 express^őm kopekom megakadaiyo, h'ZÓ, II-18 uíhíbuo? alkaim,raam uéiku. Fonok érdekében egy negatív szabályozó elemet, például egy elfojtó, silencing elemei vihetünk be az IL-18 géslókuszába, amely az; IL-18 expressziójának alacsonyabb szintre történő szabályozását vagy megakadályozását eredményezi. Szakember számára nyilvánvaló, hogy az IL- 18-expresszló alacsonyabb szintre történő szabályozásának vagy ei&itásának ugyanaz a hatása, mint az IL-Ί 8-mhíhíter betegség megelőzésére és/vagy kezelésére történő al25 kai utazásának.

A találmány tárgyát képezi továbbá genetikailag oly módon módosítóit sejt amely

IL-18~inhibdort álltt elő, alkalmazása CNS-sérülés kezelésére és/vagy megelőzésére szolgáló gyógyszer előállítására.

-25* *.♦· fc* ^{-s<

Á találmány tárgyát képezik, továbbá gyógyászati készítmények, előnyösen, gyulladásos ÜNS-sérülés megelőzésére éslvágy kezelésére szolgáló gyógyászati készítmények, amelyek 1 L-l S-iuhibitor terápiásán hatékony mennyiségét és/vagy interferon terápiásán hatékony mennyiségét és/vagy INF gyógyászatilag hatékony mennyiségét és/vagy gvuöadásgátte anyag gyögyászaiiiag hatékony mennyiségét és/vagy antfexidáns anyag gyógyászatilag: hatékony mennyiségét tartalmazzák,

A készítményben az ÍL-18-inbibifer easpase-í-inhibitor, 1L-1S elleni ellenanyag, az.

11.,-lg bármelyik reeeptoralegysége elleni ellenanyag, az IL-lk szíguálutvonalát gátló anyag, olyan IL-18-antagonista, amely az IL-i 8~cal kompétól és gátolja az lL-13-reeepíort, Tö és IL-18-kötö fehérje lehet, - valamint ezek izotermái, mutelpjei, fuzionált fehérjéi, funkcionális származékai, aktív frakciói vagy cirkulárisán pernratált származékai, amelyeknek ugyanolyan az aktivitása.

Az előzőekben Ismertetett 1L-18BP és izotermái, inuteinjeí, fuzionált fehérjéi, funkeionáhs származékai, aktív .frakciói vagy cirkulárisán permutált szánnazékai a gyógyászati készítmények előnyös aktív alkotórészei,

A gyógyászati készítményben lévő interferon előnyösen ÍFN-β vagy IEN-a,

Egy további előnyös megvalósítási mód szerint a gyógyászati készítmény TNF-a terápiásán hatékony mennyiségét tartalmazza, A találmány szerinti gyógyászati készítmény tartalmazhat továbbá egy vagy több CÜX-inhibitort

2ő· A «gyögyászaúfeg elfegaAmő⁴’ kifejezésen minden olyan hordozót értőnk, amely nem zavarja az aktív alkotórész biológiai aktivitásának hatékonyságát és nem toxikus a gazdára nézve, amelynek adni kívánjak. Parepteráhs beadásnál például az aktív féhérjedékér.ék az nnekuohoz egv emseghól olló adag tonnájában szerelheto(k) kt valamilyen hordozóban, példán! sóoldatban, dexfrőzoidalbaa, szémmalbumisban vagy Eínger25 oldatban,

A faláhnány szerinti gyógyászati készítmény aktív alkotórészei különböző módokon adhatók az egyednek. A beadás módja lehet imradennális, transzdermálls (pl, lassan felszabaduló kiszerelésben), mtramuscularis, mtraperitoneafrs, intravénás, «/ubkutan, orális.

#**♦ X9 ·. <9 ' * X ·» V ·> X*» >Λ>«· <· V

-26míraesnmiaiis, epidurális, reeíalkg topikális és intranasalis, Bámálye» utás,_: győgyászatilag hatásos beadási mód alkalmazható, például epiíéllális vagy endótéliáks szöveteken keresztül történd abszorpció, \ag,v génterápia, ahol a betegnek aktív hatóanyagot kódolo D\’Smolekulát adunk (pi. vektoron keresztül), amely az aktí v hatóanyag in Gw expfesszióját és szekrécióját eredményezi. A találmány szerinti fehérje/fehénék továbbá más biológiailag aktív hatóanyag-komponensekkel együtt is adható(k), például gyógyászátilag elfogadható felületaktív anyagokkal, kötőanyagokkal, hordozókkal, higííószerekkel és vivőanyagokkal,.

Pareníeráhs adagolásnál (pl. intravénás, szubkután. Intramuscularis) az aktív fehérje/föhérjék oldatként, szuszpenziőkéot, emulzióként vagy liofii szák porként szerelhetők ki győgyászatilag elfogadható pareníeráhs hordozóval (pl, viz. sóoldat, deatrózoldat) és olyan adalékanyagokkal együtt, amelyek az izotóniát (pl. manna) vagy a kémiai stabilitást blztositják (pk konzerváiőszerek és pufforek), A kiszerelést az általánosan alkalmazott technológiákkal steríli záijuk,

A találmány ^szerinti aktív fehésje/fehérjék biológiai hozzáférhetősége olyan: hoppn gáelós módszerekkel is javítható, amelyekkel a. molekula foléleudeje az emberi szervezetben nó\elbető. például a molekulának poíieúíen-ghkolhoz történő kapcsolásán ah amehet a WO 92/13095 számú PCT-bejelentésben ismertetnek.

Az aktív féhéríe/tehéríék lerántásán hatékony memtyiséae sok tényező tugnvénve,. íugg. például az aníagonísta típusától, az aníagonlstának 1L-18 iránt mutatott afísni íásától, az antagonísták által kIfejtett bámütyen, maradvány, eitotoxikus aktivitástól, a beadás módjától, a beteg klinikai állapotától (beleértve azt a kívánalmat, hogy az endogén 1L~inaktivitás nem toxikus szintjét fenntartsuk),

A ”terápiásán hatékony mennyiség olyan mennyiség, amelyet ha beadunk, az 11..-18mhibitor az 112-18 biológiai aktivitásának gátlását eredményezi. Az egyednek beadott dózis

- egyetlen vagy több dózisban - sok tényezőtől függ. például az IL-IS-inhíbstor formakokinetikal tulajdonságaitól, az adagolás módjától, a beteg állapotától és jellemzőitől (nemétől, korától, testsúlyától, egészségi állapotától, méretétől), a tünetek mértékétől, a folyamatban lévő kezelésektől, a kezelés gyakoriságától és a kívánt hatástól. A bevett dó» * ♦:» * * # * *·:<.<

zistartományok beállítását és kezeléséi szakember el tudja végezd, valamint az «gyedben az IL-18 gátlásának meghatározására szolgáló itt viiro és m ww eljárások ÍS ismertek a szakember számára.

A találmány szerint az 1L-IS-Inhibitort körülbelül 0,0001-109 mg/kg vagy körülbelül 5 0,01-10 tng/kg testsúly, vagy körülbelül 0,1-5 mg/kg testsúly vagy körülbelül 1-3 mg/kg testsúly vagy körülbelül 1-2 mg/kg testsúly mennyiségben alkaimazztxk. ligy lehen ségkéui az; IL-lA-inbibiföroka( körüibelüT 0,1-1000 pg/kg testsúly vagy körülbelül 1-100 pg/kg testsúly vagy körülbélüi 10-SÖ u.g/kg testsúly mennyiségben adjuk.

A találmány szerinti előnyös beadási mód a szubkután beadás. Az: intramuseularis beadás szintén előnyös a találmány szerint. Áz IL-lS-nak közvetlenül a hatás helyére történő beadásának érdekében előnyösen iiüraerámalisan vagy intmthecalisaü adható. Az intraeraniális beadási möd elsősorban nyílt fejsérülés esetén előnyös (az agy lövedék okozta sérülése).

További előnyös megvalósítási módok szerint az IL-18-ishibitort naponta vagy min1S den második napon adjak.

A napi dózist általában adagokra osztva vagy elnyújtott felszabadulási Tonnában adjuk a kívánt hatás eléréséhez hatékony mennyiségben. A második vagy az ezt követő beadásokat ugyanilyen adagban, vagy az egyednek beadott kezded vagy a megelőző dózisnál kevesebb vagy nagyobb mennyiségben adhatjuk. A második vagy az ezt követő beadások a betegség kufakuldx-.i ;oh .anan vagy előtt adhatók

A találmány szerint az IL-18-inhibitor megelőzés céljából vagy terápiásán adható; az egyednek más terápiás kezelések vagy hatóanyagok (pl. több hatóanyaggal történő kezelés) előtt, ezekkel egy időben vagy ezeket követően, terápiásán hatékony mennyiségben, előnyösen interferonnal és/vagy TNF-fel és/vagy más gyulladásgáílő hatóanyaggal, például

25: CÖX-inlnbitorral és/vagy antroxídánssal együtt. Az agysérüléstől függően THF helyett egy

TNF-aníagomsíával együtt történő adagolása is elképzelhető (Shohann és mtsai., 1999).

Az egyéb terápiás hatóanyagokkal egy időben adandó aktív hatóanyagok ugyanabban a készíttneuybea vagy más készítményben adhatók be.

* ♦ * « * * * ♦ * *»» **♦ «♦* *-**♦ « « « * « ψ ·>' ** »» ♦* A » Χ

-28Α. találmány tárgyát képezi továbbá eljárás gyógyászait készítmény előállítására, amely során 1L-I84ohlbltnr és/vagy interferon és/vagy TNF-antagonista és/vagy COXinhibifer hatékony mennyiségét gyógyászatilag elfogadható hordozóval keverjük össze.

A találmány tárgyát képezi msábbú eljárás CNS-seriHés kezelésére, amely során IL5 ló-inhibitor gyógyászatilag hatékony mennyiségét adjuk a betegnek szükség: esetén.

Valamennyi, a leírásban idézett hivatkozás, példán! folyóiratcikkek, -kivonatok,, közzétett vagy közzé nem tett amerikai egyesült államokbeli vagy külföldi szabadalmi bejelentések, kibocsátott amerikai egyesült államokbeli vagy külföldi szabadalmi iratok vagy bármilyen más hivatkozás teljes egészében a leírás részét képezi, az idézett hívatkozások10 bán lévő, valamennyi adattal, táblázattal, ábrával és szöveggel együtt. Továbbá a leírásban idézett hivatkozásokban lévő, idézett hivatkozások teljes tartalma is teljes egészében a leírás részét képezi.

ismert eljárási lépésekre, hagyományos eljárási lépésekre, ismert eljárásokra vagy hagyományos eljárásokra történő hivatkozás nem jelenti annak az elismerését, hogy a ta15 lálmánv bármelyik szempontját, leírását vagy megvalósítási módját a technikában már közzétették, kítanítást adtak rá vagy j avasolták.

A konkrét megvalósítási módok következő leírása teljes mértékben megvilágítja a találmány teljes természetét, így mások a technika állása szerinti ismeretek alkalmazásával (például a leírásba?· idézett hivatkozások tartalmával? túlzott kísérletezés nélkül különböző felhasználásokhoz módosíthatják és/vagy adaptálhatják a konkrét: megvalósítási módokat, a találmány alapgondolatától való eltérés nélkül. Az ilyen adaptációk és módosítások a közzétett megvalósítási módokkal gondolatiságukban és terjedelmükben azonosaknak tekinthetők a leírásban bemutatott kkaaíüb és útmnteíás alapján, Nyilvánvaló, hogy a leírás kifejezései vagv szakkifejezései a leírás cé|át szolgálják és nem korlátozó jellegnek, oly tnó.25 dón hogy a leírás szakkifejezéseit vagy kifejezéseit a szakember a leírásban bemutatott knanítás és útmutatás alapján értelmezi a szakember általános szaktudásával egyetemben.

A találmány leírása után a következő példákkal, amelyek a szemléltetés célját szolgálják, és nem korlátozzák a találmányt, még teljesebben·megvilágítjuk a találmányt.

-2fó ·*·*

PÉLDÁK

Anyagok és módszerek

Traumamodell

A vizsgálatban alkalmazott egerek 8-16 hetes. 3Ő-35 g súlyú, hón egerek voltak. O5 lonleges, paíogénmentes környezetben tenyésztették, és a szokásos hőmérsékleti és fényviszonyok mellett tartották őket, 4-6 állatot egy ketrecben, étellel és itallal kívánságuk szerint ellátva. A vizsgálatot a Jeruzsálem! Ifehrew Lníversity (Izrael) Intézményi állatgondozási bizottságának (Insttüttioual Animál Care Committee) útmutatása szeriül, végeztük. A kísérletes CHLt a. korábban kifejlesztett súlyejto készülékkel végeztük (Chen és mtsaí.,

1906), Röviden, éterrel történő cfeltaiást követően a középvonalon hosszanti vágást ejtettünk, a bőrt lehúztuk, és á koponyát feltártok. Azonosítottuk a bal első frontális területet, és egy kihegyezett tehonkúpof helyeztünk a középvonaltól ~1 Mni-te oldalra, á középső koronális területre, A fejet rögzítettük, és egy 75 g-os súlyt ejtettüttk a kúpra IS cm magashói, amely a bal féltekén lokális sérülést okozott, A trauma után az egerek 100%-os oxi15 génnel oxigénrátápíálást kaptak nem több, mint 2 percen keresztül, majd visszakerültek a ketrecükbe.

Az lt-18 iníracramalis szintjének mennyiségi értékeléséhez C57BL/6 (Bő) törzsbe tartózó egereket (összesen n ™ 62) hat külön csoportra osztottunk: (1) normál koaíroOcso20 pori,, azaz nem kezeit Bö-egerek (n ~ 10), (2) éter-anesziéztás csoport, ahol az egereket éterrel altattok. W perceniketesztül, majd 24 óra(n ~ 10) vagy 7 nap múlva (n IÖ) levágtok a fejültet, (3) áloperáciős csoport, ezeket az egereket elaltattak, és hosszanti bemetszés végeztünk a fejbőrön, majd 24 óra (n ~ 15} vagy 7 nap múlva megöltük az egereket, (4i íranmacsoport, kísérletes ClÖ-t végeztünk az előzőekben ismertetettek szerint, az állatokat éter-anesztéziában lefejezlek a traumát követő 4 óránál, (n - 7), 24 óránál (n « 7) és 7 napnál (n ~ 7), (5): INL-iníekeiéi csoport, a TW-nek intraeerebráiís IL-18 szabályozásában betöltött szerepének értékelésére az egereket éterrel elaltattuk, intmcerebro-vetrtrikulárisnn (ió.y.) injektáltuk 10 uí steril, feszíM pnféereh sóoldathan (PBS) lévő, 200 ng egérere·· detn, rekombináns TNF-fél (RÁD Systems, Abíngdon, UK), majd 24 óra múltán megöltük az állatokat (n 10), (6) álinjekciős csoport, az állatokat i.c.v. injektáltuk csak hordozóval (W uí steril MS), majd 24 óra elteltével megöltük (n ~ 6), így ezek szolgáltak kontrollcsoportként a TNF-íe! injektált egerekhez. Valamennyi egérben az agyat a dekapitáeiót követően azonnal eltávo Irtottuk, felyékony nitrogénben hirtelen lefagyasztottuk, és a vizsgálatig -TOAVoo tároltuk. A traumacsoportből származó agyakat bal (ipszílaterális) és jobb (kontralaterális) teltekére választottuk szét, hogy összehasonhtbassuk a sérült és a nem sérült féltekében lévő IL-W-szintet A szövetek bomogenízáeióját Mjwk (Kínematiea, Kriens, Svritzerlaud) készülékkel végeztük 1:4 hígításban (M) jéghideg: extrakeiós puffer10 ben, amely 50 mM Trisi (pí-í 7,2), 159 mM. nátrium-klori dót, 1% Triton-X-döÖ-at (Boeirrínger Mannheim, Rotkrenz, Switzcrland) és proteázinhíbitor-koktélt (Boehringer Mannheim) tartalmaz. A bomogeuátumot 90 percen keresztül jégen rázaítnk, majd 15 percig cenin&gáltuk 3000 g-vA, 4⁰C-on, A félüiúszókat kis térfogatokra osztottuk, és a vizsgálatig -70°C-on tároltuk. Az agykivonatokban lévő összes fehérje konetniracioiaí

Bradfbrd-inéréssel határoztuk meg (Bio Rád Laboratories Munich, Oermany), és egyformának tapasztaltuk valamennyi vizsgált egérben <12,1 ± 2,1 mg/ml átlag ± átlagos eltérés), Az íntracsrebráiís ei toki úszhat mennyiségi mérését egéreredetű lL-18-ra specifikus ELISA-val végeztük a gyártó útmutatásai szerint (RÁD Systems, Abíngdon, UK). A mérés érzékenysége 5 pgrtnl. Á különböző állatcsoportok között az intraeerehrális IL-18 összehá20 sonlftása érdekében valamennyi, az 5 pg/nrf kimutatási határ alatt lévő koncentrációt 4,9 pgZnd értékkel jelöltünk. A mintákat hígítstiauul mértük két párhuzamos lyukban, és a végső koneentrácrőt a két minta átlagos ÖU-értékéhöi számoltuk. Az OD-t spektrofotométerrel határoztuk meg (Dynatech Laboratories Inc., Ubaníilly, VA) 495 ntn extínkcíés hullámhossznál.

SdbBIAkc^Bdmbter

A Liebrew University Babrajelű egértörzsének hím egyedeií (h - 40) alkalmaztok az ik-LSBP-vízsgalatokhoz A^? anes/íe/iái és a kísérletes CHl-t az előzőekben ismertetettek szerint végeztük. A kezeléshez az állatokat két csoportra osztottuk: az A-csoportban (bont* * * ♦*»

Φ « X * * ♦ « » ♦: ι>

* *φ ** **«

-31ro&söportx η = ló) lévő egereken kísérletes Cffi-t bajíottunk végre, és csak hordozóval: injektáltuk (PBS) egy óra méltán, a neurológiai kimtékclést ? Pap múlva végeztük (lásd alább) Λ B-c\oportban (vizsgái,ui csoport, n ~ ISI levő egereket i.p 50 pg Ii -KBP-\el injektáltuk közvetlenül a neurológiai pontérték 1 órával a Cl-H-t követően történt meghatá5 rozása után. Mivel a vér-agy-gát átjárhatósága 5-6-szor nagyobb a CHI-t követő M' órában, mint ezt ugyanebben a kísérleti modellben korábban már kimutatták (Cben és mtsai,, 19961 az_: IL-18BP ezen körülmények, között juthat be az agyba. Két további egéresoportot kezeltünk az A- és B-esoportok szerím (C-csoport: kontrollcsoport, D-esoport: vizsgálati csoport), és 48: óra múltán, lefejeztük az egereket, majd az agyat kivettük és a poszttraumús

I0 ödémát értékeltük az alábbiak szerint.

A poszttraumús neurológiai károsodás értékeléséhez neurológiai súlyossági pontrendszert <NSS, Neurologicai Severity Score”) fejlesztettek ki és érvényesítettek (Stahel és mtsai., 20G0).

A pontrendszer a motoros működések, az élénkség és a fiziológiai viselkedés 10 egyedi klinikai feladatát értékeli oly mődon, hogy a feladat sikertelensége esetén egy pontot kell számolni, és: nulla pontot, ha a feladat sikerült (4. táblázat). A 10 pontos maximális: 'NS'S súlyos neurológiai müködésvesztört. jelent, mivel valamennyi feladat sikertelen, ntlg. a nulla érték az egészséges, nem sérült egereket jellemzi, A traumát kővető 1 őrá val mért

2Ö NSS a sérülés kezdeti súlyosságát tükrözi, és erős korrelációt mutat a klinikai következményekkel (Som-Adaní és mtsai., 2001). A feladatvégzés értékelését két kutató végezte, akik nem ismerték a vizsgálati csoportot (vak vizsgálat), a kísérletes CBí-t követő í órával, 24 órával, 72 órával és 7 nappal, A ANS.S, amelyet az 1 óránál mért NSS és bármilyen más, későbbi időpontban mért NSS közötti különbséggel számolunk, az agysérülés: utáni spon25 tán felépülés mértéket jelző paraméter, mint ezt korábban már leírták (Cben és mtsai.,

1996).

’3 ·Ύ

444 4 * * «* *·««

4. táblázat:

Heurológiai sülyossági pontrendszer (NSS) fejsérülést szenvedett egereknél

---------------------'----------------------Feladat .eirás

Fontok siker/síkerteles 1

i Körből való kilépés: | Mom-Zheiniparesis ií	| Az a képesség ? 1 egy 30 cm-es Az ellenkező ol	ís kezdeménye körből 3 perc»	ző képess ín beiül ki	ég. hogy lépjen	0/1 : :
dali felső és/ví rudasa	rgy alsó ví	igíag bé-	0/1
					09
		,ψνί-ί ÁK-.l A Ύ VÍ.A?
1	1 képessé	g, hogy egyenesen járjei	í
J Ijedtség! reflex	| Veleszületettre	fi ex, az egér h	angos íap>	,.ra ugrik.	0/1
í Kereső viselkedés	i j A környezet ír	Inti érdeklődé; viselkedés	st jelző fiz	iölogiai	0/1
| Rúdon egyensúlyozás:	1 7 mm szélesség; i keresztül tör	S rúdon legalá fenő egyensál)	fe 10 rmfo Ozás képe	rdpercen ssége	0/1 i
1 Köralakú pálcán tör-	| 5 mm átmérőjű.	köralakű pále;	ín legaláb	? 10 má-	0/1 1

tenó cg\ önsúly o/ás sodpercen keresztül történő egyensúlyozás képesí séae cm-es rúdon járás ; 30 ca hosszá., 3 ént széles rúdon történd végigfea_ | ladás képessége em-es rúdon járás j Ugyanez a feladat 2 cm széles rúddal nehezítve 1 cffl-cs rúdon járás 1 gsauez a feladat 1 cm Sz’eles rúddal uebe/nve Maximális pont

Ágyödéma értékelése

A eerebrális ödéma mértékét a sáriik feliekében a szövetek víztartalmának meghw rozásával értékeltük, az előzőekben ismertetettek szerint (Chen és mtsai,, 1996). Röviden

-33az egereket az előzőekben leírtak szerbi etótatíuk 48 órával a traumái kővetően, amely annak az. időpontnak felel meg, amelynél az ödéma még szignifikáns ebben a modelbends/crben IChcu >.s rusm. 19^6; A feA‘!e/esí kővetően a kwugwü es a/ aguet/se* eltavol·tottuk, és á trauma helyével határos területről és az ellentétes oldali feliekéből körülbelül

2b mg kéig! részt kis énünk. A jobb (nem sérült) tekékét hasznaitok belső kontrollként A szövetszeletek súlyát lemértük, és 24 órán keresztül 95°C-on szárítottuk. A szárított széfetek \U)at ’emermx az egv ϊν,.ωΙΑο⁴· űrtartalmat a hoseske, ok szerűn rámoltuk %H?O - [nedves tömeg: - száraz tömeg) x 100j/'nedves tömeg: Agysérülésesfeefegek

W A zürichi Ihúversity Oospital baleseti részlegére felvett fiz, súlyos izolált CHi-t szenvedett beteget vizsgáltuk (átlagéletkor ± átlagos eltérés: 37 ± lő év, az életkor tartománya 24-5? év, 9 férfi és I nő). Valamennyi betegnél a Glasgow kornapontszáin (Glasgow Górna Scale, GCS) értéke < 8 kardiopulmonárts újraélesztési követően tleasáale és Jennett, 1974). Á CT-vizsgálatoi kővetően valamennyi beteg íntráventríknlárls katétert kapott terápiás CSF-elvezetéshez, amikor az íntracraniáUs nyomás (1CP) meghaladta a 15 Hgmm-t. Egyetlen beteget sem kezeitek szíeroidokkal. A többszörös sérüléseket .szenvedett betegeket, akiknél mellkasi, hasi, medencei, gerincvelői sérülések vagy hosszúcsonrtöres miatti beavatkozás. Is szükséges volt, kizártuk a vizsgálatból. Az egyedi következményeket Glasgow Öuteome Seale (GÖS, Glasgow következményskála) alapján becsültük (Jennek és Bond, 1975), A CSF’-tnódszen. és a szérumgyujtést a zürichi University Hospltal Etikai testületének bizottsága, jóváhagyta,

A CHI~t szenvedett betegek (nMO) CSF-jeíí és: a hozzátartozó szérummhttá&aí naponta egy meghatározott időpontban gyűjtöttük,. A. kontroll-CSF diagnosztikus gerincvelői csapoiásí kapott, betegekből származott (n~$), Ezekben a betegekben nem volt nyoma gyulladásos CNS-betegséguek, a fehérje, a glükóz és a sejtszámok normái CSF-értékei alapján (az adatokat nem. mutatjuk). A GHÍ-esoporthan a onutagyüjtést 10 nappal a traumát kmetou' \„gertmk b tesw nem a \erui\nl m- kakiért fom, feun wol torták ek pl uhun

-34* á»·» ***<

* ♦ ♦ X * ♦ * » * *x»

X X-X tr ♦ « * jfr

M ♦ ♦ «w> «fe *»» esetekben, amikor az 1CP normál értéken maradt (< 15 Bgínrry több, mint 24 órán keresztül. Az ebben a vizsgálatban részt vevő, traumáit betegekből összesen 1.ÖŐ, egymásnak megfelelő CSF-et és szérutnrniníáí gyűjtöttünk. Valamennyi mintát a begyűjtést követően azonnal centrifugáltuk, kis térfogatokra osztottuk, és -VÖ^C-on fogyasztva, tároltuk a vizsgálatig. A CSF-ben és a szérumban lévő II. -18 mennyiségi vizsgálatát humán lt-I8-ra specifikus EL'ISA-vaí végeztük kereskedelmi forgalomban kapható reagenskészlettel (R&D Systems, Abingdon, öK). Az egérvizsgálafoknál az BUSA érzékenysége 5 pg/ml. a végső IL-koneentráefot a két párhuzamos mintából 405 mn extinkeíós hullámhossznál meghatározott 01) átlagából számoltuk. A CHi-betegek és a kontrollok 11,-18 CSFszinpelneb összehasonlítása érdekében valamennyi, az 5 pg/ml kimutatási hatat alatt lévő koncentrációt 4,9 pg/ml ériekkel jelöltünk, .Adatelemzés

Az adatok statisztikai elemzését kereskedeluu fergalomlw kapható szoftverrel végeztük (SPSS 9.0, Windows™), A nem normál eloszlású adatok (pl. NSS és ANSS neuro'15 logiai eredmények) vizsgálatához nem parametrikus Mann-Whímey~U-teszíeí alkalmaztunk, Nem párosított Stndent-fele Mesztet alkalmaztunk a különböző egéresoportofc iníraeerebrális lL-18-koncentráeióinak összehasonlítására és az iL~18BP-vel kezelt és a hordozóval kezelt egerekből nyert agyvíztartalom közötti különbségek vizsgálatára, A humán IL-18 -szintek összehasonlítását, akár a CPll-t szenvedett betegek napi CSF-jének és a

2Ö megfelelő szérurnmintáknak, akár a Sommás és a kontroh-CSF-ck összehasonlít v»al az ismételt mérésekre alkalmas ANÖVÁ általános lineáris modellel végeztük, A p < '0,05 értékeket tekintettük statisztikailag szignifikánsnak.

1, példa: Iníraeerebrális ÍL-18-szi Az 1. ábrán bemutatjuk, hogy IL-18 ELISA~val kimutatható volt Bő típusú, nem kezelt (normál) kontrol legerek tn 10) agyhcmtogenáímnáhan, és az átlagos szint 27,7 ± 1,7 ng/ml tt SLMj. A kísérleti csoportokban: a csak az éteres anesztézia vagy az anesztézia áloperáeiőval egy ütt (azaz éteres anesztézia és hosszanti fej Körbevágás) szignifikánsan

IS

Φ fc X fc ♦ X # *

Φ* magasabb intraeraniális it-ld-sziuteí eredményezett: 48,9 ± 1,1 ng/töl (éteres: csoport, η~§) és 54,3 ± 2,7 ng/ml (áloperáeies csoport, n^::::13} (p < ö,öl a norma! egerekkel szemben, nem párosított Stndent-lele í-teszt, 1. ábra). Az éteres csoport és az áloperáelós csoport állatai közötti különbség statisztikailag nem szignifikáns (p - 0, 16).

A témacsoportban (n^:::: 21) a Cili kiváltása megnövelte az: IL-18-szintet mind & sérült, mind az ellenkező oldali teltekében a trauma utáni 4 óra (60,6 ± 3,3 és 59,8 ± 5,0 ng/ml} és 24 óra között (56,9 ± 2,1 és 56,3 ± 3,7 ng/ml), ezek a szintek azonban az. éteres vagy az átoperácios csoporthoz képest szignifikánsan nem magasabbak (p > 0,:05).

Ezzel szemben a CH1 utáni 7. napra a sérült féltekében mért Intracerehtáhs IL-táti) koncentráció szignifikánsan nagyobb volt az éterrel elaltatott vagy az áloperált állatokéhoz képest (ő?,6 ± 5,1 og/ml a 42,2 ± 0,8 ng/ml és 45,2 ± 0,5 ng/ml koncentrációkhoz képest, p < 001). mig az ellenkező oldali féltekében az IL-18-s/ínt nem emelkedett szignifikánsan az ezen két kontrollcsoportban mért értékek fölé (63,2 ± 6,0 ng/ml, ρ ^::: {látó}.

A TNE-nek,. ebben a tranmamodellben a gyulladás egyik fontos közvetítőjének 15 (Shobanh és mtsaL, 1999), az intraeerebráüs IL-lS-szhü szabályozásában betöltött szerepének felmérése érdekében egy további Bö-egéresoportot (n~10) injektáltunk t.c.v. 2Ö0 ng, I Ö μΐ steril BBS-ben lévő, egéreredetü, rekombináns THF-fel, majd 24 óra múl va megöltük az állatokat. Az 1. ábrán mutatjuk be, hogy a csak a hordozóval történő álinjekció (n = 6) az intracerebrális 1L-18 szignifikáns, magasabb szintre történő szabályozását eredményezte

24 órán belül a nem kezelt, normál Bö-egerekhez képest (53,6 :fc 3,9 ng/ml a 27,7 2 1,7 ng/ml-rel szemben, p < 0,001).

A TNF injekciója az lL-18-szmí szignifikáns csökkenését eredményezte az mtraeramáiís részben 24 órán belül (22,1 ± 6,9 ng/ml, n = 10) az áhnjektált konírollcsoport 24 órás értekéhez képest (?Lo ± 3,9 ng/ml, p < 0,901). A TNF-csoporíbsn lévő l.L-1825 szintek még a nem. .kezek, normál egerekénél is alacsonyabbak voltak (2.7,7 ± 1,7 ng/ml), bár ebben az esetben a különbség statisztikailag nem volt szigpifikáns (p ~ 9,45).

.ItdlBBfedé^

Annak az: elméletnek vizsgálata érdekében, miszerint IL-1S gátlása elősegíti agysérülés gyógyulását, 11.M&13F egyetlen injekcióját követően különböző időpontokban tepnll· tettük össze a gyógyulást. Korábban kimutatták, hogy a neurológiai súlyosság! pontrendszer (NSS; a traumát követő egy órával tükrözi a legpontosabban a trauma nagyságát és a sérült szövet mennyiségével áll kapcsolatban, mint ez MRI-n es szövettanon tapasztalható.

Az egereket a t ~ 1 óránál mert kezdeti NS-S alapján különböző kezelési csoportokba •osztottuk, hogy összehasonlítható mértékű, traumát szenvedett egerek esoporíiah alakítsuk ki. Mint a 2. ábrán bemutatjuk [HSS az IL-1 hBE-csoportban (négyzetek) a kmhrollesoporttai szemben (kör)] mindkét csoportnak hasonló volt a kezdeti NSS(1 óra) értéke (7,ő9 ± 6,3023 (kontroll) és 7,44 ± 6,3027 (IL-1 SBP)j, és ez hasonló súlyosság» sérülést jelez.

Az: NSS későbbi időpontokban történő értékelése (1-7 nap) kimutatta, hogy az íntraperitoneáhsan (i,p,) IL-lSBE-vel kezeit állatokban számottevően kisebb a neurológiai

IS károsodás, amely az NSS-értékekből látható, és 7 nappal a traumát követően szignifikáns a különbség (ρ 0,645).

Kiszámoltuk a gyógyulás sebességét amelyet ANS8(u ^::: NSS (I h) - NSS (t) egyenlettel fejezünk ki. A ANSS magasabb értékei gyorsabb gyógyulási, a nulla vagy negatív értékek gyógyulás hiányát vagy rosszabbodást jelentenek. A 3. ábrán két csoport AHSS20 értékelt ábrázoljuk. .Két időpontban, a 24 órás és a 7 napos értékeknél a ANSS-értékek átlaga közötti különbség: szignifikáns.

Egy másik kísérletet is elvégeztünk annak vizsgálata érdekében, hogy IL-lkBP-vel töriénö kezdés 3 nappal a sérülést követően, hatásos-e. A. kezdés időzítése fontos, és idáig azok a. terápiák bizonyultak hatásosnak, amelyeket néhány órán beiül elkezdtek. Mivel azt tapasztaltuk, hogy az IL-1S· a traumát követő 7 nap emelkedik, és az lt-18BP~ve! 1 órával a traumát követően történő kezelés eredményezi a legnagyobb hatást még a 7, napon is, ügy döntöttünk, hogy az egereket 3 nappal a. sérülést kővetően kezeljük. Az Ősszehasonlí* *

-37· fás érdekében egy másik csoportot 1 óránál és 3 napnál kezeltünk ÍL-í8BP-vel. A. kontrolicsoportot csak oldószerrel (hordozóval) kezeltük.

A kísérlet eredményeit a 4. ábrán muíatjük be, amely bői kitűnik, hogy a. 3. napon adott egyetlen kezelés ugyanolyan hatékony, mint az 1 órával a ÖII-í kővetően majd a 3.

napon ismételten adott kezelés.

A kísérlet azt is szemlélteti, hogy egy időpontban adott ÍL-1.&BP, akár zárt fejsérülés utáni 1 óránál, akár 3 napnál, rendkívül kedvező halast gyakorol a tranmás fejsérülésből történő felgyógyulásra kísérletes egérmodellbem lő Macasabb.lQ $ ό mtek ag> sertó atanthuntán CSF ocn

Tiz, súlyos CBIA szenvedeti betegből származó napi CSF-hen. és szérununiníában a traumát követő: tizedik napig mértük az IL-18-szÍntekeí, A betegek demográfiai és klinikai adatait az 5. táblázatban mutatjuk be.

Ádábfezat

Súlyos αίΓύszenvedettbemgekdempgráfia^

Beteg száma	Kor (év)feem	GCSb	GOSC	1.1..-18 a CSFd-ben (pgórd)	l.L-18 a szérumban ípgönl)
				átlag	[tartományi*	átlag	[íartománvf
1	48/nt	3	1	283	[78-966]	57,5	112-661
2	31.ón	7	4	228,4	[22-745]	19.7	[4,9-108]
3	26/tn	5	3	208,5	[20-392Ί	37,2	[14-1631
4	57/m	5	4	72.6	[30-2861	48,9	[14-1041
5	24/m	4	5	32,6	[4,9-155]	17	B^8]
6	3 bőn	8	I	49,4	[10-290]	16,7	[12-67]
7	38/f	3:	4	17,9	(ll-lOOj	13	[4,9-46]
8	35/m	3	3	69,8	[4,9-329]	19,8	(7-771
9	3?/m	3	4	37	[23-75]	57,3	[25-98]
10	4I/m	7	5	4,9	[4,9-169]	26,2	[15-381
Kontroll CSF (n-:5)	4,9	[4,9-7,8]

-38^Λ€Β1, zárt fejsérülés (dosed head iniury) ^GCS, Glasgow kómapontszám (Glasgow Górna Seore·’) (Teasdale és lenned,

1974) ^CGÖS, Glasgow fcövetkezroénypímtszám (Glasgow Ouíeome Sörre) 3 hónappal 5 a sérülés után, 5 ” tünetmentes, 4 ~ mérsékelt működésképtelenség, 3 ^:::: súlyos működésképtelenség, 2 ^:::: fermmaradő vegetatív állapot, I ~ halál (Jehnett és Blond, 1975) \ SG eetebrospínáhs folyadék (eerebrospinal fluid) * Áz 5 pgőnl kimutatási határ alatt lévő IL-18-szinteket 4,9 ggönl értéknek jelöljük.

lö

Mint az 5. táblázatban látható az intrathecalís IL-lS-színtek szignifikánsan emelkedtek 9-Ί0 (.'ill-betegnék a kontroll CSF-hez képest, amelyet 5. trauma vagy gyulladásos neurológiai betegség nélküli betegből vettünk (p < Ő.Ő5, ismételt mérések ANOVA). Csak egyetlen betegnél (ólö) nem emelkedett meg szignifikánsan a CSF IL-18-szímje a kontroll

CSF-hez képest (p = 0,31). Áz átlagszinteket és a CSF-ben, illetve a szérumban mért IL18-sximek egyedi tartományait az 5. táblázatban mutatjuk be.

Észrevehető, hogy a CSF maximális lL-18-koneeníráciőI (9ŐŐ ng/mi) akár 200-szor magasabbak a fejsérülést szenvedett betegeknél, mint a konfrolloknál. Intraeerehrálís IL-18 FLIS A-vai a feaumaoseporthau lévő CSF-minták 9Ö%~ábao volt kimutatható, míg a kont20 roll-üSF-mlrUáfcnuk esek 70%-áhan volt detektálható mtraeerehrális. IL-l S-szmí (azaz: >

4,9 ag mf Λ uz Glll-heteg kozid mólénál m átlagos ÍL-^? 8-koncenuac ok szumbLawan magasabbal; voltak a CSF-ben. miül a szérumban (p < Ő,Ö5, ismételt mérések ANOVA). bét betegben azonban (#9, lő) a szérum átlagos 1L-18 értékei nern. haladták meg a megletelő CSF-ben lévő koncentrációkat, mint az 5. táblázatban látható.

özek az eredmények omlanak, bogy uaumas fejsérülést vt>hvdeU betegek eerebrospinális folyadékában az IL-18 szintje szignifikánsan emelkedett. ÍL-1SBP hozzáadása csökkentheti ezeket a megnővekedett szinteket, és így jótékony hatást fejthet ki zárt fejsérülésből történő felgyógyulásra, mint ezt az előzőekben, a 2, példában bemutattok.

39* ♦ * í

M »«}$ ♦ *9 * X # V $ « ** 9« «9 X-9#

Irodalomíegvzék ü a f ot < 4 to* m 215, <$$ hd s F fe < Htedfec _f2S>

0SB<R5x4^S4),

3, Chsn, V- B< Constendnj V, Trombovteh M, and E, Shdmú. 1

ώ.< ^$sss«3$> TV,.

> í* &&

fe feaood honé fetey fe r *%j6Ö

4, Cor< C.8., H,Y. Cslíngnsnso Y. Kim, H. fem₍ Y. δηη, £, Glbson, nmá Ϊ.Η. doh. 1899« Calteras fe otemoytes aad mternpfe axproan fetefefecfe-í8« Mól, 3rofe

5. Cood, B.« d> W. dohog, 0, Tinfe 4. H, Són, and T. H. doh, 1997, Inotedion of r fe ihn sdronoi mfeex 4. Bife Chem, 272:2038ne, A,C, M,0. Hell, S J. RodnneC and G.C. UsheshL 1938.

a. Efewtws 4 fe fe, teudteo Afeds Re®, 12, SS7-3S5,1984.

'?.. B§3eneM 4 A, Hevstew®, M_s Mw< ö M, Zondi, £ feg fe ffe.

jí« V<.5: ΐ

8. Bited M4L, teteni, RM, Fektfearfe, Ufeg-Fox, A., Ctertsa, F„, Bijk

1894, Laecfe 344,112S-1127, fed K_s O, tetelte.. T, Becs ísutv, ód 8, %w. 1999, h feterfeme-y fe feOanwYory CHS dteoaa 10. Jancfc.r, S,_s and G, Stete 1008. Wfeetei

IS, and inteteootetete swefeag onows mRHA fe t nncophstennytebte felbe Lmafe afe., λ Hfeeölfefeeaöl, 91:83-9 11 Lenem 1975 Mer 1; 1 <790S};4S£M. 4mOO 8, »h M.

13. Hím: SH, Befetfeefe M ítetlkev t, Farfefe S<

ft<18 bofeg protein te fehlfeí lt-18, Froo Rfel Acad Sd ü É A 2®W:

83:1104-8 í M, nos,.

XR x « * > : 4

-46» * <.*4*

4 4

X- ν :>«*·>

9 4 » * * tfy «V

Kosomasm X, P,F, SfeM, Ρ .Μ ΙΑ.

IsfeMb.

18. Kbight IM Tddh K Le A SfegM S, SbWy O_t

MA Weesk A öaddona P, et < Confemfeínn séd MsÉ öbarssfe-teadon ef a monse-bunw ehímede- endXHF aotModyMfe rtoM 1M Nov 38; 161443-53

16, Mfeiszewnfe,, C. R., X A. Safe, X Vaodeo Boa,. S, Wsegh, S, X.. 0<w« A SMsk, Μ, R. BecAmanfe dód K. Hl Grabstefe, 18541. CytcKse rooapfers and B oaS ÍR fehÁA <«1« and ÍMtak I.

Mmssd Ö eeí atMte b vfeo, A Rím 17, IfeM » A, Ts O8AM8, K. Mm P. X

Tawhófe, K,

sMMMM humán 7 «Μ synerAsm wffe tnfedauWIS far fe AAterd M.1847A1 Mm 8814-2880.

M.G,> PM tanfenguu V, Hsns, P„ 3 fen, P- GfecMr, Ö> Tmnfe, and T,. Kossmsnm W. P cRMfeas feíMMg brafe bjwy. bwtei and defeíer «χ·.

Feh;W):C

H, Wedd PL Nagfea K, (1O), Immynfey 16_t 127-7

21, Ökumufe H, Hagafo K, MmaM X Ta? Tefego© K, ökora T, Fos

22, PorM, P, Gafea, X £,. fened, T P, Chem, 247 WW ¥,

3(10):3388-72 Dower, B K, ®d SMs, d B, (1 §§S), A 8M

a, PeatwíW R, MethsM b Bs^hxjfegy, 183,83-88,1980 h. Marson W R and öpman 0 A Pnoo Xat Aeed 88 OB

23, Rlort ki, and UK Hanísoh, 1Ό, fe fefedatAkMe. A New

’*»* $♦ * * « * > fc

AZ >fcfc *.>« fc*_A ^r X < fc fc » ** ** *f> ¥·**

-41:♦ **»

' sipba in örafe ir^nty, Cytekhó Gmwfe Bas&r Bsw tö;11 2«30 27, Shoh&rb, E; BsíOVannal Homwiíz M; Koten R (1997); A Comb, 8

IX Í6W-1ÍW.

£§a» í'S. írfWífcSfcÖíí^' £> $ “fcfit’Tjií Sfcíiíi vt, .Urtfsr«_s anf'-Kossnwn MÜ J

Ft

GT

K, V, AM&fC $ M, Tongoe K_s Tardmoto T_s Fteuda S, iketfe M, Oksmura mffteb 1333 3 w 1í1$S(11)s<274-9 feri R.Ö., A3X Üblhsss, MÖ, RMl, S, RsteH^Wöáfflk íUWM 2Oöa Detecbm of the btetfelAWS Mrbly in mt órain by ier,, Mj_v TM Carfcs, FA. Kod-wtek, S.R, WboMwMd, ód Bell, ;, S.T.. GeKoedy, G,W, kladnn, and P.D, Adebcr', 2000. feíerfeufe· in csmb'mpinsi ifelö of chiidmn wtth ssavare head Injury. CM. 23:929-34 nfea X Takeá®, K_f Tanaha, T₍ ÖóteM, iOX 3. Immurfo . Wi 340(93407,

Claims (10)

1, lL-l§-inhibitor, amely 5L-t3-aí kőtő fehérje 0L-18 ÖP), alkalmazása ír&amás agysérülés kezelésére szolgáló gyógyszer előállítására, almi az Ib-I S BP~t egyete dózisban, a sérülés után 3 nappal adjuk be,

2< Az 1. igénypont szériái i alkalmazás, ahol a trsomás agysérülés zárt fejsérülés.

3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti alkalmazás, ahol az IL-lb BP egy vagy több helyen glikozilált.

4. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, ahol az 0,-18 ÖP immnnglohulirt (íg) egészéhez: vagy részéhez fezienáit.

5. Az 1-4, igénypontok Amelyike szerbiti alkalmazás, ahol: az IL-18 ÖP legalább egy molekularészt tartalmaz, amely az amhmsavak egy vagy több eklalláocán lévő egy vagy több Smkoio-nális csoporthoz kapcsolódik.

ó, Az 5. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a melskularész polietilén-glíkol (PBG).

7, Az előzd igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, ásol a gyógyszer íaterfeoní is tartalmaz.

8. A 7. igénypont szerinti alkalmazás, ahol az interferon interferon-a vagy' interferon-fk

Ő. Az előző igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, ahol a gyógyszer tumor nakrózis faktort (TNR is tartalmaz.

18, A 9, igénypont szerinti alkalmazás, ahol a INF 'INF-alíá.

1L Az előző Igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás,, ahol a gyógyszer gynlfedásgátió hatóanyagot is tartalmaz,

12. All. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a gyniladásgátló hatóanyag COX-inhihilor, előnyösen COXd-mhibfíor.

1.3. Az előző igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, ahol a gyógyszer «ioxldánsi is tartalmaz,

14. Az előző igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, ahol az 0,-18 BP-t mintegy Ő,Wí-1t)ö mg/ttkg. vagy mintegy 8,84-10 mg/ttkg. vagy mintegy 0,1-5 mg/ttkg vagy mintegy 1-3 tttgdifcg mennyiségben alkalmazzuk..

15. Az előző igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, ahol az 4L-18 ÖP-t sznbkután sójuk he.