SK16032003A3 - Použitie IL-18 inhibítora - Google Patents
Použitie IL-18 inhibítora Download PDFInfo
- Publication number
- SK16032003A3 SK16032003A3 SK1603-2003A SK16032003A SK16032003A3 SK 16032003 A3 SK16032003 A3 SK 16032003A3 SK 16032003 A SK16032003 A SK 16032003A SK 16032003 A3 SK16032003 A3 SK 16032003A3
- Authority
- SK
- Slovakia
- Prior art keywords
- inhibitor
- injury
- medicament
- cns
- brain
- Prior art date
Links
- 102000003810 Interleukin-18 Human genes 0.000 title claims abstract description 197
- 108090000171 Interleukin-18 Proteins 0.000 title claims abstract description 197
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 title claims abstract description 84
- 230000006378 damage Effects 0.000 title claims description 90
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 claims abstract description 44
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 35
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 24
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims abstract description 20
- 208000014674 injury Diseases 0.000 claims description 83
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 claims description 75
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 51
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 46
- 208000030886 Traumatic Brain injury Diseases 0.000 claims description 40
- 208000018652 Closed Head injury Diseases 0.000 claims description 30
- 230000037396 body weight Effects 0.000 claims description 20
- 102000044166 interleukin-18 binding protein Human genes 0.000 claims description 19
- 108010070145 interleukin-18 binding protein Proteins 0.000 claims description 19
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 19
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 claims description 16
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 claims description 16
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 13
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 claims description 12
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 claims description 12
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 11
- 102000004557 Interleukin-18 Receptors Human genes 0.000 claims description 10
- 108010017537 Interleukin-18 Receptors Proteins 0.000 claims description 10
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 claims description 10
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 10
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 10
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 10
- 230000009529 traumatic brain injury Effects 0.000 claims description 10
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 9
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 9
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 8
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 8
- 208000020431 spinal cord injury Diseases 0.000 claims description 8
- 108090000467 Interferon-beta Proteins 0.000 claims description 7
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 7
- 229940124638 COX inhibitor Drugs 0.000 claims description 6
- 101000960954 Homo sapiens Interleukin-18 Proteins 0.000 claims description 6
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 claims description 6
- 102000043959 human IL18 Human genes 0.000 claims description 5
- 230000007775 late Effects 0.000 claims description 5
- 102000003996 Interferon-beta Human genes 0.000 claims description 4
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 4
- 229960001388 interferon-beta Drugs 0.000 claims description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 4
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 claims description 3
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 claims description 3
- 102000004890 Interleukin-8 Human genes 0.000 claims description 3
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 claims description 3
- 229940121363 anti-inflammatory agent Drugs 0.000 claims description 3
- 229940111134 coxibs Drugs 0.000 claims description 3
- 239000003255 cyclooxygenase 2 inhibitor Substances 0.000 claims description 3
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 claims description 3
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 claims description 3
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000007727 signaling mechanism Effects 0.000 claims description 3
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 claims description 3
- 230000002792 vascular Effects 0.000 claims description 3
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 claims description 2
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 claims description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 2
- 208000031879 Chédiak-Higashi syndrome Diseases 0.000 claims 1
- 206010054094 Tumour necrosis Diseases 0.000 claims 1
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 claims 1
- 208000025517 cannabinoid hyperemesis syndrome Diseases 0.000 claims 1
- 206010019196 Head injury Diseases 0.000 abstract description 15
- 230000000472 traumatic effect Effects 0.000 abstract description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 4
- 208000001738 Nervous System Trauma Diseases 0.000 abstract description 3
- 208000028412 nervous system injury Diseases 0.000 abstract description 3
- 102100035017 Interleukin-18-binding protein Human genes 0.000 description 65
- 101710205006 Interleukin-18-binding protein Proteins 0.000 description 61
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 43
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 42
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 33
- 208000029028 brain injury Diseases 0.000 description 30
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 29
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 27
- 101000611183 Homo sapiens Tumor necrosis factor Proteins 0.000 description 20
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 20
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 description 16
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 16
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 15
- 230000006931 brain damage Effects 0.000 description 15
- 231100000874 brain damage Toxicity 0.000 description 15
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 15
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 15
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 15
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 14
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 12
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 12
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 12
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 12
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 11
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 11
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 11
- 230000000926 neurological effect Effects 0.000 description 11
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 11
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 10
- 206010010071 Coma Diseases 0.000 description 9
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 9
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 9
- 238000007917 intracranial administration Methods 0.000 description 9
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 9
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 9
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 9
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 8
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 7
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 7
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 7
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 7
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 7
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 7
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 7
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 7
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 7
- 210000003625 skull Anatomy 0.000 description 7
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 7
- 206010048962 Brain oedema Diseases 0.000 description 6
- 102100035904 Caspase-1 Human genes 0.000 description 6
- 108090000426 Caspase-1 Proteins 0.000 description 6
- -1 DNA or RNA Chemical class 0.000 description 6
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 6
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 description 6
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 6
- 208000006752 brain edema Diseases 0.000 description 6
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 6
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 6
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 6
- 229940117681 interleukin-12 Drugs 0.000 description 6
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 6
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 6
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 6
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 5
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 5
- 230000009471 action Effects 0.000 description 5
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 5
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 5
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 5
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 5
- 230000031037 interleukin-18 production Effects 0.000 description 5
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 5
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 5
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 4
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 4
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 4
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 4
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 4
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 4
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 4
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 4
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 4
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 4
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 description 4
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000034656 Contusions Diseases 0.000 description 3
- 241000186427 Cutibacterium acnes Species 0.000 description 3
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 3
- 102100026720 Interferon beta Human genes 0.000 description 3
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 3
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 3
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010033892 Paraplegia Diseases 0.000 description 3
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 3
- 208000003443 Unconsciousness Diseases 0.000 description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 3
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 3
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 3
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 3
- 208000015114 central nervous system disease Diseases 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 3
- 210000003128 head Anatomy 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 3
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 3
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 3
- 210000001865 kupffer cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 210000004126 nerve fiber Anatomy 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 3
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 3
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000010392 Bone Fractures Diseases 0.000 description 2
- 206010012289 Dementia Diseases 0.000 description 2
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 2
- XMPXVJIDADUOQB-RCOVLWMOSA-N Gly-Gly-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)CNC(=O)C[NH3+] XMPXVJIDADUOQB-RCOVLWMOSA-N 0.000 description 2
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 2
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 2
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 2
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 2
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 description 2
- 101000960949 Mus musculus Interleukin-18 Proteins 0.000 description 2
- OKIZCWYLBDKLSU-UHFFFAOYSA-M N,N,N-Trimethylmethanaminium chloride Chemical compound [Cl-].C[N+](C)(C)C OKIZCWYLBDKLSU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 2
- 208000007542 Paresis Diseases 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010036312 Post-traumatic epilepsy Diseases 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- 206010037714 Quadriplegia Diseases 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- IOVBCLGAJJXOHK-SRVKXCTJSA-N Ser-His-His Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CO)N)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(O)=O)C1=CN=CN1 IOVBCLGAJJXOHK-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- KQNDIKOYWZTZIX-FXQIFTODSA-N Ser-Ser-Arg Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N KQNDIKOYWZTZIX-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010042928 Syringomyelia Diseases 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 210000004404 adrenal cortex Anatomy 0.000 description 2
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 210000001130 astrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 2
- 230000007844 axonal damage Effects 0.000 description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 2
- 210000000133 brain stem Anatomy 0.000 description 2
- 208000026106 cerebrovascular disease Diseases 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 230000001054 cortical effect Effects 0.000 description 2
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 2
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 2
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 2
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 230000030279 gene silencing Effects 0.000 description 2
- 230000002008 hemorrhagic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 2
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 2
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 2
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 2
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 2
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 108010085203 methionylmethionine Proteins 0.000 description 2
- 210000000274 microglia Anatomy 0.000 description 2
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 2
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 2
- 230000009251 neurologic dysfunction Effects 0.000 description 2
- 208000015015 neurological dysfunction Diseases 0.000 description 2
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 2
- 239000000041 non-steroidal anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 2
- 229940021182 non-steroidal anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 2
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000008560 physiological behavior Effects 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 239000003642 reactive oxygen metabolite Substances 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000011514 reflex Effects 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 2
- 210000004761 scalp Anatomy 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 208000018726 traumatic encephalopathy Diseases 0.000 description 2
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 2
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 206010002941 Apallic syndrome Diseases 0.000 description 1
- NTAZNGWBXRVEDJ-FXQIFTODSA-N Arg-Asp-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O NTAZNGWBXRVEDJ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- BZMWJLLUAKSIMH-FXQIFTODSA-N Asn-Glu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O BZMWJLLUAKSIMH-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- FBODFHMLALOPHP-GUBZILKMSA-N Asn-Lys-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O FBODFHMLALOPHP-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- ZYPWIUFLYMQZBS-SRVKXCTJSA-N Asn-Lys-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N ZYPWIUFLYMQZBS-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- XAJRHVUUVUPFQL-ACZMJKKPSA-N Asp-Glu-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O XAJRHVUUVUPFQL-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- GHODABZPVZMWCE-FXQIFTODSA-N Asp-Glu-Glu Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O GHODABZPVZMWCE-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- 208000032116 Autoimmune Experimental Encephalomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 238000009010 Bradford assay Methods 0.000 description 1
- 208000002381 Brain Hypoxia Diseases 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 206010008111 Cerebral haemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 206010008190 Cerebrovascular accident Diseases 0.000 description 1
- 206010010305 Confusional state Diseases 0.000 description 1
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- KPENUVBHAKRDQR-GUBZILKMSA-N Cys-His-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O KPENUVBHAKRDQR-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 206010013496 Disturbance in attention Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 206010015769 Extradural haematoma Diseases 0.000 description 1
- 206010017076 Fracture Diseases 0.000 description 1
- 208000036119 Frailty Diseases 0.000 description 1
- XEKAJTCACGEBOK-KKUMJFAQSA-N Glu-Met-Phe Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N XEKAJTCACGEBOK-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- CHDWDBPJOZVZSE-KKUMJFAQSA-N Glu-Phe-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O CHDWDBPJOZVZSE-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- ZOTGXWMKUFSKEU-QXEWZRGKSA-N Gly-Ile-Met Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O ZOTGXWMKUFSKEU-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 1
- 208000023329 Gun shot wound Diseases 0.000 description 1
- 206010018985 Haemorrhage intracranial Diseases 0.000 description 1
- 101000746373 Homo sapiens Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Proteins 0.000 description 1
- 101001019591 Homo sapiens Interleukin-18-binding protein Proteins 0.000 description 1
- 102000039996 IL-1 family Human genes 0.000 description 1
- 108091069196 IL-1 family Proteins 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 102000002227 Interferon Type I Human genes 0.000 description 1
- 108010014726 Interferon Type I Proteins 0.000 description 1
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102000019223 Interleukin-1 receptor Human genes 0.000 description 1
- 108050006617 Interleukin-1 receptor Proteins 0.000 description 1
- 102100026017 Interleukin-1 receptor type 2 Human genes 0.000 description 1
- 101710149731 Interleukin-1 receptor type 2 Proteins 0.000 description 1
- 102100039898 Interleukin-18 Human genes 0.000 description 1
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 1
- 102000000743 Interleukin-5 Human genes 0.000 description 1
- 208000008574 Intracranial Hemorrhages Diseases 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 208000034693 Laceration Diseases 0.000 description 1
- WXDRGWBQZIMJDE-ULQDDVLXSA-N Leu-Phe-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O WXDRGWBQZIMJDE-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- MJWVXZABPOKJJF-ACRUOGEOSA-N Leu-Phe-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O MJWVXZABPOKJJF-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 1
- UIIMIKFNIYPDJF-WDSOQIARSA-N Leu-Trp-Met Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)=CNC2=C1 UIIMIKFNIYPDJF-WDSOQIARSA-N 0.000 description 1
- WPIKRJDRQVFRHP-TUSQITKMSA-N Leu-Trp-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O WPIKRJDRQVFRHP-TUSQITKMSA-N 0.000 description 1
- 206010024971 Lower respiratory tract infections Diseases 0.000 description 1
- OVIVOCSURJYCTM-GUBZILKMSA-N Lys-Asp-Glu Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O OVIVOCSURJYCTM-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- ALGGDNMLQNFVIZ-SRVKXCTJSA-N Lys-Lys-Asp Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N ALGGDNMLQNFVIZ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 206010027202 Meningitis bacterial Diseases 0.000 description 1
- ZYTPOUNUXRBYGW-YUMQZZPRSA-N Met-Met Chemical compound CSCC[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C([O-])=O)CCSC ZYTPOUNUXRBYGW-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- UYDDNEYNGGSTDW-OYDLWJJNSA-N Met-Trp-Trp Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)N[C@@H](CC3=CNC4=CC=CC=C43)C(=O)O)N UYDDNEYNGGSTDW-OYDLWJJNSA-N 0.000 description 1
- 208000019430 Motor disease Diseases 0.000 description 1
- 206010028289 Muscle atrophy Diseases 0.000 description 1
- 206010028851 Necrosis Diseases 0.000 description 1
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 description 1
- 208000025966 Neurological disease Diseases 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 102100040557 Osteopontin Human genes 0.000 description 1
- JMCOUWKXLXDERB-WMZOPIPTSA-N Phe-Trp Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 JMCOUWKXLXDERB-WMZOPIPTSA-N 0.000 description 1
- FRMKIPSIZSFTTE-HJOGWXRNSA-N Phe-Tyr-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O FRMKIPSIZSFTTE-HJOGWXRNSA-N 0.000 description 1
- IPVPGAADZXRZSH-RNXOBYDBSA-N Phe-Tyr-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O IPVPGAADZXRZSH-RNXOBYDBSA-N 0.000 description 1
- GZNYIXWOIUFLGO-ZJDVBMNYSA-N Pro-Thr-Thr Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O GZNYIXWOIUFLGO-ZJDVBMNYSA-N 0.000 description 1
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 241000452413 Sabra Species 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 206010072985 Spinal column fractures Diseases 0.000 description 1
- 208000020339 Spinal injury Diseases 0.000 description 1
- 102000019197 Superoxide Dismutase Human genes 0.000 description 1
- 108010012715 Superoxide dismutase Proteins 0.000 description 1
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 239000004809 Teflon Substances 0.000 description 1
- 229920006362 Teflon® Polymers 0.000 description 1
- 210000000447 Th1 cell Anatomy 0.000 description 1
- NDZYTIMDOZMECO-SHGPDSBTSA-N Thr-Thr-Ala Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O NDZYTIMDOZMECO-SHGPDSBTSA-N 0.000 description 1
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Triethanolamine Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100031988 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 6 Human genes 0.000 description 1
- 108050002568 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 6 Proteins 0.000 description 1
- CGDZGRLRXPNCOC-SRVKXCTJSA-N Tyr-Cys-Cys Chemical compound SC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 CGDZGRLRXPNCOC-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- ZAGPDPNPWYPEIR-SRVKXCTJSA-N Tyr-Cys-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O ZAGPDPNPWYPEIR-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- ANHVRCNNGJMJNG-BZSNNMDCSA-N Tyr-Tyr-Cys Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC2=CC=C(C=C2)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N)O ANHVRCNNGJMJNG-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- CELJCNRXKZPTCX-XPUUQOCRSA-N Val-Gly-Ala Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O CELJCNRXKZPTCX-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 108010087924 alanylproline Proteins 0.000 description 1
- 230000036626 alertness Effects 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 230000006229 amino acid addition Effects 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003435 aroyl group Chemical group 0.000 description 1
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 1
- 108010040443 aspartyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 206010003549 asthenia Diseases 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 201000009904 bacterial meningitis Diseases 0.000 description 1
- 230000003542 behavioural effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000008499 blood brain barrier function Effects 0.000 description 1
- 230000036770 blood supply Effects 0.000 description 1
- 210000001218 blood-brain barrier Anatomy 0.000 description 1
- 208000034526 bruise Diseases 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000002837 carbocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000002680 cardiopulmonary resuscitation Methods 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 1
- 206010008118 cerebral infarction Diseases 0.000 description 1
- 238000011260 co-administration Methods 0.000 description 1
- 230000019771 cognition Effects 0.000 description 1
- 230000001149 cognitive effect Effects 0.000 description 1
- 238000012875 competitive assay Methods 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 108010004073 cysteinylcysteine Proteins 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 239000010432 diamond Substances 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 230000003467 diminishing effect Effects 0.000 description 1
- FSXRLASFHBWESK-UHFFFAOYSA-N dipeptide phenylalanyl-tyrosine Natural products C=1C=C(O)C=CC=1CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FSXRLASFHBWESK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 238000002224 dissection Methods 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 201000002491 encephalomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 125000001033 ether group Chemical group 0.000 description 1
- 208000012997 experimental autoimmune encephalomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 238000005562 fading Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 238000002825 functional assay Methods 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 125000003827 glycol group Chemical group 0.000 description 1
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 206010019465 hemiparesis Diseases 0.000 description 1
- 210000003547 hepatic macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 210000003917 human chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 239000012135 ice-cold extraction buffer Substances 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 230000007365 immunoregulation Effects 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000014828 interferon-gamma production Effects 0.000 description 1
- 108010027775 interleukin-1beta-converting enzyme inhibitor Proteins 0.000 description 1
- 208000020658 intracerebral hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000007914 intraventricular administration Methods 0.000 description 1
- 230000003447 ipsilateral effect Effects 0.000 description 1
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 description 1
- 231100000225 lethality Toxicity 0.000 description 1
- 238000011694 lewis rat Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 1
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 206010027175 memory impairment Diseases 0.000 description 1
- 201000011475 meningoencephalitis Diseases 0.000 description 1
- KBOPZPXVLCULAV-UHFFFAOYSA-N mesalamine Chemical compound NC1=CC=C(O)C(C(O)=O)=C1 KBOPZPXVLCULAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004963 mesalazine Drugs 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 238000000302 molecular modelling Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007659 motor function Effects 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N n-methyl-1-(2-naphthalen-1-ylsulfanylphenyl)methanamine Chemical compound CNCC1=CC=CC=C1SC1=CC=CC2=CC=CC=C12 OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 230000005015 neuronal process Effects 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000007474 nonparametric Mann- Whitney U test Methods 0.000 description 1
- 210000004248 oligodendroglia Anatomy 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 235000006408 oxalic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 238000006213 oxygenation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000001991 pathophysiological effect Effects 0.000 description 1
- 230000007310 pathophysiology Effects 0.000 description 1
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 208000005026 persistent vegetative state Diseases 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000008180 pharmaceutical surfactant Substances 0.000 description 1
- 108010083476 phenylalanyltryptophan Proteins 0.000 description 1
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 150000003141 primary amines Chemical class 0.000 description 1
- MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N procaine Chemical compound CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1 MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004919 procaine Drugs 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000009465 prokaryotic expression Effects 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 230000012846 protein folding Effects 0.000 description 1
- 238000013138 pruning Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 239000003087 receptor blocking agent Substances 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012340 reverse transcriptase PCR Methods 0.000 description 1
- 150000003335 secondary amines Chemical class 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 238000012868 site-directed mutagenesis technique Methods 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 210000000273 spinal nerve root Anatomy 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000021 stimulant Substances 0.000 description 1
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 230000001360 synchronised effect Effects 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000011285 therapeutic regimen Methods 0.000 description 1
- 210000000115 thoracic cavity Anatomy 0.000 description 1
- 230000036962 time dependent Effects 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 231100000563 toxic property Toxicity 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 1
- 238000012762 unpaired Student’s t-test Methods 0.000 description 1
- 210000001364 upper extremity Anatomy 0.000 description 1
- 210000001635 urinary tract Anatomy 0.000 description 1
- 208000019206 urinary tract infection Diseases 0.000 description 1
- 230000002861 ventricular Effects 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 235000019155 vitamin A Nutrition 0.000 description 1
- 239000011719 vitamin A Substances 0.000 description 1
- 235000019154 vitamin C Nutrition 0.000 description 1
- 239000011718 vitamin C Substances 0.000 description 1
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 description 1
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 150000003751 zinc Chemical class 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
- C07K16/244—Interleukins [IL]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Immunology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Description
Oblasť techniky
Vynález sa týka oblasti patologických stavov mozgu. Konkrétnejšie sa týka použitia inhibítora IL-18 na liečenie a/alebo prevenciu poškodenia centrálneho nervového systému (CNS), zvlášť traumatického poškodenia mozgu.
Doterajší stav techniky
V roku 1989 bola opísaná endotoxínom vyvolaná aktivita séra, ktorú indukoval interferón-γ (IFN-γ) získaný z buniek sleziny myší (Nakamura a spol., 1989). Táto aktivita séra nepôsobila ako priamy podnet pre IFN-γ, ale skôr ako spoločný stimulant spolu s IL-2 alebo mitogénmi. Pokus získať a vyčistiť túto účinnú látku z post-endotoxínového séra myší poskytol podľa všetkého homogénu 50 až 55 kDa bielkovinu. Pretože iné cytokíny môžu pôsobiť ako spolu-stimulanty pre tvorbu IFN-γ, neschopnosť neutralizujúcich protilátok pre IL-1, IL-4, IL-5, IL-6 alebo TNF neutralizovať aktivitu séra bola navrhnutá ako rozlišujúci faktor. V roku 1995 tí istí vedci demonštrovali, že endotoxínom vyvolaný spolu-stimulant pre tvorbu IFN-γ bol prítomný v extraktoch pečene myší po predchádzajúcom pôsobení s P. acnes (Okamura a spol., 1995). V tomto modeli sa zväčšila populácia hepatických makrofágov (Kupfferové bunky) a u týchto myší sa stala smrteľnou nízka dávka bakteriálneho lipopolysacharidu (LPS), ktorá pre myši bez predkondiciovania nie je smrteľná. Faktor pomenovaný ako IFN-y-indukujúci faktor (IGIF) a neskôr označený ako interleukín-18 (IL-18), bol vyčistený ako homogénna látka z 1200 gramov myších pečení po pôsobení P. acnes. Degenerované oligonukleotidy získané z aminokyselinových sekvencií čisteného IL-18 sa použili na klonovanie myšej IL-18 cDNA. IL-18 je 18 až 19 kDa bielkovina zo 157 aminokyselín, ktorá nemá žiadnu viditeľnú podobnosť na niektorý peptid v databázach. Mediátorové RNA pre IL-18 a interleukín-12 (IL-12) sa ľahko detegujú v Kupfferových bunky a aktivovaných makrofágoch. Rekombinantný IL-18 indukuje IFN-gama silnejšie než IL-12, zrejme
-2pomocou samostatného mechanizmu (Micallef a spol., 1996). Podobne ako endotoxínom vyvolaná aktivita séra, IL-18 neindukuje IFN-γ sám, ale pôsobí primárne ako spolu-stimulant s mitogénmi alebo IL-2. IL-18 zosilňuje proliferáciu T buniek, zrejme pomocou od IL-2 závislého mechanizmu, a zosilňuje tvorbu Th1 cytokínu in vitro a vykazuje synergizmus v spojení s IL-12 v zmysle zvýšenej tvorby IFN-γ (Maliszewski a spol., 1990).
Po naklonovaní myšej formy bola opísaná sekvencia ľudskej cDNA pre IL18 v roku 1996 (Ushio a spol., 1996).
Pomocou klonovania IL-18 z upravených tkanív a štúdiom IL-18 génovej expresie sa zistila tesná asociácia tohto cytokínu s autoimunitnou chorobou. U neobéznych diabetických (NOD) myší sa spontánne vyvíja autoimunitná inzulitída a diabetes, ktoré môžu byť urýchlené a synchronizované pomocou jedinej injekcie cyklofosfamidu. Pomocou reverznej transkriptázy PCR bola v pankrease NOD myší počas skorých štádií inzulitídy preukázaná IL-18 mRNA. Hladiny IL-18 mRNA narástli rýchlo po cyklofosfamidovom pôsobení a predchádzali vzrastu IFN-γ mRNA a následne diabetes. Je zaujímavé, že tieto kinetiky sledujú kinetiku IL-12-p40 mRNA, čo vedie k tesnej korelácii jednotlivých hladín mRNA. Klonovanie IL-18 cDNA z pankreasovej RNA nasledované sekvenovaním ukázalo zhodu s IL-18 sekvenciou klonovanou z Kupfferových buniek a in vivo predaktivovaných makrofágov. NOD myšie makrofágy tiež poskytli odozvu na cyklofosfamid s IL-18 génovou expresiou, kým makrofágy z Balb/c myší spracované paralelne odozvu neposkytli. Preto je IL-18 expresia abnormálne regulovaná u autoimunitných NOD myší a tesne spojená s vývojom diabetes (Rothe a spol., 1997).
IL-18 hrá silnú úlohu v imunoregulácii alebo pri zápaloch zosilnením funkčnej aktivity Fas ligandu na Th1 bunky (Conti a spol., 1997). IL-18 sa tiež exprimuje v kôre nadobličiek a preto môže byť vylučovaným neuroimunomodulátorom, ktorý hrá dôležitú úlohu v zosúladení imunitného systému po stresujúcej situácii (Chater, 1986).
In vivo sa IL-18 tvorí pomocou štiepenia pro-IL-18 a jeho endogénna aktivita sa prejaví ako IFN-γ tvorba v P. acnes a LPS-sprostredkovaná letalita. Zrelý IL-18 sa tvorí zo svojho prekurzora pomocou IL-1 β konvertujúceho enzýmu (IL-31 beta-konvertujúci enzým, ICE, caspáza-1).
IL-18 receptor pozostáva najmenej z dvoch zložiek spolupôsobiacich pri viazaní ligandu. Našli sa miesta viazania s vysokou a nízkou afinitou pre IL-18 u myších IL-12 stimulovaných T buniek (Yoshimoto a spol., 1998), čo poukazuje na viacnásobný receptorový komplex. Doposiaľ boli identifikované dve receptorové subjednotky, obe patriace do IL-1 receptorovej rodiny (Parnet a spol., 1996). Signálna transdukcia IL-18 zahrnuje aktiváciu NF-κΒ (DiDonato a spol., 1997).
Nedávno bola z ľudského moču izolovaná rozpustná bielkovina, ktorá má vysokú afinitu pre IL-18 a bola opísaná ľudská a myšia cDNA (Novick a spol., 1999; WO 99/09063). Táto bielkovina bola označená ako IL-18 viažuca bielkovina (IL18BP).
IL-18BP nie je extracelulárna doména jedného zo známych IL18 receptorov, ale je to vylučovaná prirodzene cirkulujúca bielkovina. Patrí do novej rodiny vylučovaných bielkovín. Táto rodina ďalej zahrnuje viaceré Poxvíruskódované bielkoviny, ktoré majú vysokú homológiu ku IL-18BP (Novick a spol., 1999). IL-18BP je konštitutívne exprimovaný v slezine, patrí do imunoglobulínovej superrodiny a má obmedzenú homológiu ku IL-1 typ II receptoru. Jeho gén bol lokalizovaný na ľudskom chromozóme 11q13 a nezistil sa žiaden exón kódujúci transmembránovú doménu v 8,3 kb genomickej sekvencii (Novick a spol., 1999).
Štyri ľudské a dve myšie izoformy IL-18BP pochádzajúce z mRNA štiepenia a nachádzajúce sa v rôznych cDNA knižniciach, boli exprimované, čistené a ohodnotené z hľadiska viazania a neutralizácie IL-18 biologických aktivít (Kim a spol., 2000). Ľudská IL-18BP izoforma a (IL-18BPa) vykazovala najväčšiu afinitu pre IL-18 s rýchlym nástupom a pomalým doznievaním a s disociačnou konštantou (K(d)) 399 pmol/l. IL-18BPc zdieľa Ig doménu IL-18BPa s výnimkou 29 Cterminálnych aminokyselín; K(d) IL-18BPc je 10-krát menšia (2,94 nmol/I). Napriek tomu, IL-18BPa a IL-18BPc neutralizujú IL-18 >95% pri molovom prebytku dva. IL18BPb a IL-18BPd izoformy nemajú úplnú Ig doménu a nemajú schopnosť viazať alebo neutralizovať IL-18. Myšie IL-18BPc a IL-18BPd izoformy, ktoré majú identickú Ig doménu, tiež neutralizujú >95% myšieho IL-18 pri molovom prebytku dva. Avšak myší IL-18BPd, ktorý zdieľa spoločný C-terminálny motív s ľudským IL18BPa, tiež neutralizuje ľudský IL-18. Molekulové modelovanie identifikovalo veľké
-4zmiešané elektrostatické a hydrofobické miesto viazania v Ig doméne IL-18BP, ktoré doložilo jeho vysokú afinitu viazania na ligand (Kim a spol., 2000).
Traumatické poškodenie mozgu (TBI), tiež jednoducho nazývané poranenie hlavy, alebo uzavreté poranenie hlavy (CHI), znamená poranenie centrálneho nervového systému, pri ktorom poškodenie mozgu je od externého úderu do hlavy. Najčastejšie sa to stane počas automobilovej alebo cyklistickej nehody, ale môže sa tiež vyskytnúť ako výsledok topenia sa, infarktu, mŕtvice a infekcie. Tento typ traumatického poškodenia mozgu bude obvykle dôsledkom nedostatku kyslíka alebo zásobovania mozgu krvou, a preto môže byť označené ako anoxické poškodenie.
Vnútorné poranenie hlavy sa vyskytuje pri údere do hlavy, ako napríklad pri nehode s motorovým vozidlom alebo pri páde. V tomto prípade, lebka predstavuje stacionárny objekt a mozog, ktorý je vo vnútri lebky, sa otáča a krúti na svojej osi (mozgový kmeň), čo spôsobí lokalizované alebo rozsiahle poškodenie. Teda mozog, mäkká hmota obkolesená tekutinou, ktorá mu dovoľuje plávať, môže naraziť proti lebke, čo spôsobí ďalšie poškodenie.
Bezprostredne po úraze môže nastať perióda bezvedomia, ktorá môže trvať minúty, týždne alebo mesiace. V dôsledku krútenia a nárazu, traumatický poškodený mozog pacienta obvykle získa poškodenie alebo podliatiny mnohých častí mozgu. Toto sa nazýva difúzne poškodenie alebo “nestrelné poranenie” mozgu. Typy mozgových poškodení vyskytujúce sa pri nestrelnom poškodení môžu byť klasifikované ako buď primárne alebo sekundárne.
Primáme mozgové poškodenie sa prejavuje v čase poranenia, hlavne na mieste nárazu, zvlášť ak dochádza k fraktúre lebky. Veľká pomliaždenina môže byť spojená s intracerebrálnou hemoragiou, alebo môže byť sprevádzaná kortikálnymi laceráciami. Difúzne axonálne poškodenia sa vyskytujú ako výsledok šmykového a ťahového napätia neurónových výbežkov spôsobených rotačnými pohybmi mozgu v lebke. Môžu sa vyskytnúť malé hemoragické lézie alebo difúzne poškodenie axónov, ktoré môžu byť detegované len mikroskopicky.
Sekundárne mozgové poškodenie sa vyskytuje ako výsledok komplikácií vyvíjajúcich sa po momente poranenia. Zahrnuje intrakraniálnu hemoragiu, traumatické poškodenie extracerebrálnych artérií, intrakraniálnu herniáciu,
-5hypoxické mozgové poškodenie alebo meningitídu.
Otvorenie poranenie hlavy je viditeľné poškodenie hlavy a môže byť výsledkom strelného poranenia, nehody alebo prechodom nejakého objektu cez lebku do mozgu (“strelné poranenie mozgu”). Tento typ poranenia hlavy pravdepodobnejšie poškodí špecifickú oblasť mozgu.
Takzvané mierne poškodenia mozgu sa môžu vyskytnúť bez straty vedomia a môže sa vyskytnúť len pocit omámenia alebo stav zmätenosti trvajúci krátky čas. Hoci poskytovaná medicínska starostlivosť môže byť minimálna, osoby s poškodením mozgu bez kómy môžu pociťovať symptómy a zhoršenie stavu podobné tým, ktorými trpí ten, kto prežil poranenie s kómou.
Ako odozva na úraz sa v mozgu vyskytujú zmeny, ktoré vyžadujú monitorovanie, aby sa zabránilo ďalšiemu poškodeniu. Po ťažkom poranení hlavy sa veľkosť mozgu často zväčší. Toto sa nazýva opuch mozgu a vyskytuje sa vtedy, keď dochádza k rastu množstva krvi v mozgu. Neskôr sa pri chorobe môže voda zadržať v mozgu, čo sa nazýva mozgový edém. Aj opuch mozgu aj edém mozgu má za následok v nadmerný tlak v mozgu nazývaný intrakraniálny tlak (ICP).
Kóma je dlhodobé bezvedomie priamo nasledujúce po traumatickom poranení hlavy.
Existujú viaceré hladiny kómy. Hladiny kómy môžu byť merané pomocou postupu schopnosti odozvy(reakcie) osoby s poranením hlavy. V akútnej fáze poranenia hlavy sa používa “Glasgowská stupnica kómy”. Pri zlepšení stavu pacienta alebo pri jeho stabilizácii, sa používa “Rancho Los Amigos stupnica”, pri ktorej sa merajú hladiny kognitívneho (porozumenie a pochopenie) myslenia.
Poškodenie mozgu často spôsobuje trvalú debilitu, ako napríklad posttraumatická epilepsia, trvalý vegetatívny stav alebo post-traumatická demencia.
Poranenie miechy je ďalší typ CNS poranenia. Poškodenie miechy spôsobuje väčšinu prijatí ma hospitáciu pre paraplegiu a tetraplegiu. Viac ako 80 % výskytu je dôsledkom cestných nehôd. Klinicky sa rozoznávajú dve hlavné skupiny poranení: otvorené poškodenie a uzavreté poškodenie.
Otvorené poškodenie spôsobuje priamy úraz miechy a nervových koreňov. Perforačné poškodenie môže spôsobiť extenzívne roztrhnutie a hemoragiu. Uzavreté poškodenie spôsobuje väčšinu spinálnych poškodení a sú obvykle
-6spojené so zlomeninami/dislokáciami spinálneho stĺpca, čo je obvykle preukázateľné rádiologický. Poškodenie miechy závisí od rozsahu poškodenia kosti a môže byť uvažované v dvoch hlavných stupňoch: Primárne poškodenie, čo sú pomliaždeniny, prerušenia nervových vlákien a hemoragická nekróza, a sekundárne poškodenie, čo sú extradurálny hematóm, infarkt, infekcia a edém.
Neskoré efekty poškodenia miechy zahrnujú: stúpajúca a klesajúca anterográdná degenerácia poškodených nervových vlákien, post-traumatická syringomyélia a systemické efekty paraplegie, ako napríklad infekcie urinárneho traktu a hrudníka, poruchy tlaku a degenerácia svalov.
Patológia traumatického poškodenia mozgu je veľmi zložitá a ešte slabo pochopená. Výskumné úsilie v poslednej dekáde osvetlilo dôležitú úlohu cytokínov uvoľnených systemicky a lokálne v intratekálnom kompartmente po poškodení mozgu, a bola urobená hypotéza duálneho efektu pro-zápalových cytokínov, ako napríklad TNF, IL-6 alebo IL-8, na základe zistení časovo-závislých priaznivých a škodlivých účinkov týchto mediátorov (Morganti-Kossmann a spol., 1997; Kossmann a spol., 1997; Shohami a spol., 1999, Scherbel a spol., 1999; Whalen a spol., 2000). Ako je opísané vyššie, nedávno objavený cytokín IL-1 rodiny je IL-18. Nedávne štúdie demonštrovali, že IL-18 je konštitutívne exprimovaný v CNS myší, potkanov, a ľudí in vivo (Culhane a spol., 1998; Jander a Stoll, 1998; Prinz a spol., 1999; Fassbender a spol., 1999; Wheeler a spol., 2000), ako aj v primárnych kultúrach astrocytov a mikroglia, ale nie neurónov, in vitro (Conti a spol., 1999). Zvýšené IL-18 hladiny boli detegované v cerebrospinálnej tekutine (CSF) pacientov so zápalovými CNS chorobami, ako napríklad bakteriálna meningitída a vírusová meningoencefalitída, ale nie v CSF pacientov s roztrúsenou sklerózou (MS) (Fassbender a spol., 1999). Oproti zisteniu všeobecne nízkej intratekálnej IL-18 hladiny u MS pacientov, zvýšená IL-18 mRNA expresia bola demonštrovaná v mieche Lewis potkanov s experimentálnou autoimunitnou encefalomyelitídou (EAE), čo je zvierací model pre MS (Jander a Stoll, 1998). Expresia a funkčný význam IL-18 pri neuroúrazoch doteraz neboli preskúmané.
-Ί Podstata vynálezu
Tento vynález sa týka patofyziologickej úlohy IL-18 v CNS chorobách. Je založený na zistení, že liečenie myší s inhibítormi IL-18, buď jednu hodinu alebo tri dni po experimentálnom uzavretom poranení hlavy (CHI), vedie k zlepšenej obnove a oslabenému rozsahu poškodenia mozgu v porovnaní s kontrolnými zvieratami.
Podstatou vynálezu je teda použitie IL-18 inhibítora na výrobu lieku na liečenie a/alebo prevenciu poranenia centrálneho nervového systému (CNS), a zvlášť traumatického poškodenia mozgu.
Použitie kombinácií IL-18 inhibítora s interferónom a/alebo TNF a/alebo inhibítorom zápalu a/alebo antioxidantmi sa tiež poskytuje podľa tohto vynálezu. Aby sa použili génové terapeutické prístupy dodávania IL-18 inhibítora do chorobných tkanív alebo buniek, týkajú sa ďalšie aspekty vynálezu použitia molekúl nukleových kyselín obsahujúcich kódujúcu sekvenciu IL-18 inhibítora na liečenie a/alebo prevenciu CNS poranenia. Vynález sa tiež týka použitia buniek geneticky upravených na expresiu IL-18 inhibítorov na prevenciu a/alebo liečenie CNS poranení.
Tento vynález je založený na zistení štatisticky významného priaznivého účinku IL-18 inhibítora na obnovu poškodeného mozgu v modeli na myšiach uzavretého poranenia hlavy. V zhode s týmto vynálezom sa ďalej zistilo, že IL-18 je v mozgu a cerebrospinálnej tekutine po traumatickom poškodení mozgu nadregulovaný, čo poukazuje na to, že tento pro-zápalový cytokín hrá dôležitú úlohu v patogenéze poškodenia mozgu.
Preto sa vynález týka použitia IL-18 inhibítora na výrobu lieku na liečenie a/alebo prevenciu poranení centrálneho nervového systému (CNS).
Vynález sa ďalej týka použitia IL-18 inhibítora na výrobu lieku na liečenie a/alebo prevenciu komplikácií a neskorých účinkov CNS poranení.
Vo výhodných uskutočneniach vynálezu je CNS poranením traumatické poškodenie mozgu alebo uzavreté poranenie hlavy.
V ďalšom výhodnom uskutočnení je CNS poranením poranenie miechy.
V ešte ďalšom výhodnom uskutočnení vynálezu má poškodenie mozgu vaskulárny pôvod.
-8V kontexte tohto vynálezu sa výraz “poranenie centrálneho nervového systému” alebo “CNS poranenie” týka akéhokoľvek poranenia mozgu alebo miechy, bez ohľadu na dobu nástupu alebo na jeho príčinu. Táto príčina môže napríklad byť mechanická alebo to môže byť infekcia. CNS poranenie a jeho klinické symptómy a implikácie boli opísané podrobne v časti “Doterajší stav techniky”. CNS poranenie zahrnuje napríklad úraz alebo akékoľvek iné poškodenie mozgu alebo miechy a môže tiež byť nazývané neurotrauma.
Poškodenie mozgu môže napríklad zahrnovať alebo spôsobiť jednu alebo viaceré z nasledujúcich porúch: 1. zhoršenie pozornosti; 2. zhoršenie spoznávania; 3. zhoršenie reči; 4. zhoršenie pamäti; 5. porucha chovania; 6. motorické poruchy; 7. akékoľvek iné neurologické dysfunkcie.
Poranenie miechy môže napríklad spôsobiť paraplegiu alebo tetraplegiu.
Komplikácie alebo neskoré účinky CNS poranenia môže tiež byť liečené a/alebo im môže byť predchádzané v zhode s týmto vynálezom. Komplikácie a neskoré účinky poškodení mozgu boli opísané vyššie v časti “Doterajší stav techniky”. Zahrnujú, ale nie sú na ne obmedzené, napríklad kómu, meningitídu, post-traumatickú epilepsiu, post-traumatickú demenciu, degeneráciu nervových vlákien alebo post-traumatickú syringomyélíu alebo hemoragiu.
Tento vynález sa tiež týka použitia IL-18 inhibitorov na prípravu lieku na liečenie a/alebo prevenciu akéhokoľvek poranenia mozgu, ktoré má vaskulárny pôvod, ako napríklad hypoxické poškodenie mozgu cerebrálnym infarktom, ischémiou, cerebrovaskulárnou príhodou alebo mŕtvicou.
Pojmy “liečenie” a “prevencia”, ako sa používajú v tomto dokumente, treba chápať ako čiastočnú alebo úplnú prevenciu, inhibovanie, zoslabenie, zmiernenie alebo zvrátenie jedného alebo viacerých symptómov alebo príčiny(príčin) CNS poranenia, ako aj symptómov, chorôb alebo komplikácií sprevádzajúcich CNS poranenie. Pri “liečení” CNS poranenia sa látky podľa tohto vynálezu podávajú po nástupe choroby, “prevencia” sa týka podávania týchto látok pred tým, ako sú zaznamenané u pacienta znaky choroby.
Liečenie CNS poranenia je výhodne v zhode s týmto vynálezom. Výhodne sa na liečenie CNS poranenia IL-18 inhibítor podáva čo najskôr po CNS poranení, napríklad v prvej hodine po poranení. Avšak, ako je uvedené v Príkladoch nižšie,
-9ukázalo sa, že IL-18 inhibítor vykazuje svoje priaznivé účinky na poškodenie mozgu aj vtedy, keď sa podáva tri dni po poškodení mozgu. Preto je na liečenie CNS poranenia výhodné podávať IL-18 inhibítor počas troch dní od poranenia.
Pojem “inhibítor IL-18” v kontexte tohto vynálezu, znamená akékoľvek molekuly modulujúce IL-18 tvorbu a/alebo pôsobenie takým spôsobom, že IL-18 tvorba a/alebo pôsobenie je zoslabené, znížené alebo je mu čiastočne, podstatne alebo úplne zabránené alebo je zablokované. Pojem “IL-18 inhibítor” je uvažovaný tak, že zahrnuje inhibítory IL-18 tvorby, ako aj inhibítory IL-18 pôsobenia.
Inhibítorom tvorby môže byť akákoľvek molekula negatívne pôsobiaca na syntézu, spracovanie alebo dozrievanie IL-18. Inhibítory uvažované podľa tohto vynálezu môžu byť napríklad supresory génovej expresie interleukínu IL-18, látky pôsobiace proti mRNA, čím znižujú alebo bránia transkripcii IL-18 mRNA alebo vedú k degradácii mRNA, zhoršeniu správneho skladania bielkovín, alebo k čiastočnej alebo podstatnej prevencii vylučovania IL-18, proteázy degradujúce IL18, hneď ako bol syntetizovaný, inhibítory proteáz štiepiacich pro-IL-18, pričom sa tvorí zrelý IL-18, ako napríklad inhibítory caspázy-1 a podobne.
Inhibítorom IL-18 pôsobenia môže byť napríklad IL-18 antagonistická látka. Antagonistické látky môžu buď viazať alebo sekvestrovať IL-18 molekulu samotnú s dostatočnou afinitou a špecificitou na čiastočnú alebo podstatnú neutralizáciu IL-18 alebo IL-18 väzbového miesta(miest) zodpovedného za IL-18 viazanie na jeho ligandy (ako napríklad na jeho receptory). Antagonistická látka môže tiež inhibovať IL-18 signálny mechanizmus, ktorý je aktivovaný v bunke po IL-18 viazaní na jeho receptor.
Inhibítorom IL-18 pôsobenia môžu tiež byť rozpustné IL-18 receptory alebo molekuly napodobňujúce receptory, alebo činidlá blokujúce IL-18 receptory, alebo IL-18 protilátky, ako napríklad polyklonálne alebo monoklonálne protilátky, alebo akékoľvek iné činidlo alebo molekula brániaca viazaniu IL-18 na jeho ciele, čím sa zmenšuje alebo bráni spustenie intra- alebo extra-celulárnych reakcií sprostredkovaných pomocou IL-18.
Vo výhodnom uskutočnení tohto vynálezu je inhibítor IL-18 vybraný z inhibítorov caspáza-1 (ICE), protilátok namierených proti IL-18, protilátok namierených proti akejkoľvek z IL-18 receptorových subjednotiek, inhibítorov IL-18
-10signálneho mechanizmu, antagonistických látok IL-18, ktoré konkurujú IL-18, alebo sa naň viažu a blokujú IL-18 receptor, a na IL-18 viažucich sa bielkovín, ich izoforiem, muteínov, kondenzovaných bielkovín, funkčných derivátov, aktívnych frakcií alebo cirkulačné permutovaných derivátov, alebo solí.
Pojem “IL-18 viažuce bielkoviny” sa používa v tomto dokumente synonymne s “IL18BP”. Zahrnuje na IL-18 sa viažuce bielkoviny ako sú definované v WO 99/09063 alebo v Novick a spol., 1999, vrátane zviazaných variantov a/alebo izoforiem IL-18 viažucich bielkovín, ako sú definované v Kim a spol., 2000. Zvlášť ľudské izoformy a a c IL-18BP sú užitočné v zhode s týmto vynálezom. Bielkoviny užitočné podľa tohto vynálezu môžu byť glykozylované alebo neglykozylované, môžu byť získané z prírodných zdrojov, ako napríklad z moču, alebo môžu výhodne byť vyrábané rekombinačne. Rekombinačná expresia môže byť uskutočnená v prokaryotických systémoch expresie, ako napríklad E. coli, alebo v eukaryotických systémoch expresie a výhodne v systémoch expresie cicavcov. Bunkovým kmeňom zvlášť vhodným pre IL-18 inhibítory podľa tohto vynálezu sú bunky vaječníkov čínskeho škrečka (CHO).
Rekombinantná výroba IL-18 inhibítorov, ak sa rekombinačne exprimujú v bunkách alebo bunkových kmeňoch cicavcov, môže výhodne byť uskutočnená v bezsérovom bunkovom kultivačnom prostredí.
V tomto dokumente sa pojem muteíny používa tak, že znamená analógy IL-18BP, alebo analógy vírusového IL-18BP, v ktorom jedna alebo viaceré z aminokyselinových zvyškov prírodného IL-18BP alebo vírusového IL-18BP sú nahradené rôznymi aminokyselinovými zvyškami, alebo sú odstránené, alebo jeden alebo viaceré aminokyselinové zvyšky sú pridané k prirodzenej sekvencii IL-18BP, alebo vírusovej IL-18BP, bez významného zmenšenia aktivity výsledných produktov v porovnaní s neupraveným typom IL-18BP alebo vírusovým IL-18BP. Tieto muteíny sa pripravujú pomocou známych syntéz a/alebo pomocou miestne namierených techník mutagenézy, alebo akýchkoľvek iných známych na to vhodných techník.
Akýkoľvek takýto muteín má výhodne sekvenciu aminokyselín dostatočne kopírujúcu sekvenciu IL-18BP, alebo dostatočne kopírujúcu vírusový IL-18BP tak, aby mal v podstate podobnú aktivitu ako IL-18BP. Jednou aktivitou IL-18BP je jeho schopnosť viazania IL-18. Pretože muteín má výraznú aktivitu viazania sa na IL-18,
-11 môže byť použitý na čistenie IL-18, ako napríklad pomocou afinitnej chromatografie, a teda môže byť uvažované, že má v podstate podobnú aktivitu na IL-18BP. Teda pomocou bežných experimentov zahrnujúcich podrobenie takéhoto muteínu napríklad jednoduchej sandvičovej konkurenčnej skúške, čím sa určí či sa viaže alebo nie na vhodne označený IL-18, ako napríklad rádioimunoskúška alebo ELISA skúška, môže byť určené či akýkoľvek daný muteín má aktivitu v podstate podobnú na IL-18BP. Jednoduché funkčné skúšky na vyhodnotenie biologickej aktivity IL18BP boli opísané podrobne v WO 99/09063, napríklad v príkladoch 2 (viazanie na IL-18 podľa hodnotenia pomocou zosieťovania) alebo 5 (inhibícia IL-18 vyvolaná INF-gama indukciou v monojadrových bunkách krvi).
Vo výhodnom uskutočnení má akýkoľvek takýto muteín najmenej 40%-nú zhodu alebo homológiu so sekvenciou buď IL-18BP alebo vírusovo-kódovaného IL18BP homológu. Výhodnejšie má najmenej 50%-nú, najmenej 60%-nú, najmenej 70%-nú, najmenej 80%-nú alebo najvýhodnejšie najmenej 90%-nú zhodu alebo homológiu.
Muteíny IL-18BP polypeptidov alebo muteíny vírusových IL-18BP, ktoré môžu byť použité v zhode s týmto vynálezom, alebo ich kódujúce nukleové kyseliny, zahrnujú konečnú sadu v podstate zodpovedajúcich sekvencií, ako substituované peptidy alebo polynukleotidy, ktoré môžu byť rutinne získané odborníkmi v tejto oblasti bez nadmerných experimentov na základe vysvetlení a návodu uvedeného v tomto dokumente.
Muteíny v zhode s týmto vynález zahrnujú bielkoviny kódované nukleovými kyselinami, ako napríklad DNA alebo RNA, ktoré hybridizujú na DNA alebo RNA, ktoré kódujú IL-18 inhibítor v zhode s týmto vynálezom, za mierne alebo vysoko prísnych podmienok. Pojem prísne podmienky označuje hybridizáciu a následné podmienky premývania, ktoré odborník v tejto oblasti konvenčné označuje ako prísne. Pozri Ausubel a spol., Current Protocols in Molecular Biology, supra, Interscience, N.Y., §§6.3 a 6.4 (1987, 1992), a Sambrook a spol. (Sambrook, J. C., Fritsch, E. F., a Maniatis, T. (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY).
Príklady prísnych podmienok zahrnujú bez obmedzenia podmienky premývania 12 až 20 °C pod vypočítanou Tm študovaného hybridu, napríklad, 2 x
-12SSC a 0,5 % SDS počas 5 minút, 2 x SSC a 0,1 % SDS počas 15 minút; 0,1 x SSC a 0,5 % SDS pri 37 °C počas 30 až 60 minút a potom 0,1 x SSC a 0,5 % SDS pri 68 °C počas 30 až 60 minút. Odborník v tejto oblasti rozumie, že prísnosť podmienok tiež závisí od dĺžky DNA sekvencii, oligonukleotidových sond (ako napríklad 10 až 40 báz) alebo zmiešaných oligonukleotidových sond. Ak sa používajú zmiešané sondy, je výhodné použiť tetrametylamóniumchlorid (TMAC) namiesto SSC. Pozri Ausubel, supra.
Vo výhodnom uskutočnení má akýkoľvek takýto muteín najmenej 40%-nú zhodu alebo homológiu so sekvenciou SEQ ID NO: 1, 2 alebo 3 pripojeného zoznamu sekvencii. Výhodnejšie má najmenej 50%-nú, najmenej 60%-nú, najmenej 70%-nú, najmenej 80%-nú alebo, najvýhodnejšie najmenej 90%-nú zhodu alebo homológiu.
Zhoda odráža vzťah medzi dvoma alebo viacerými polypeptidovými sekvenciami alebo dvoma alebo viacerými polynukleotidovými sekvenciami, určený pomocou porovnania sekvencii. Všeobecne zhoda označuje presný súhlas nukleotid ku nukleotidu alebo aminokyselina ku aminokyseline dvoch polynukleotidových alebo dvoch polypeptidových sekvencii pri porovnávaní pozdĺž sekvencii.
Pre sekvencie, kde neexistuje presná zhoda, sa môže určiť % zhody. Všeobecne sa dve porovnávané sekvencie zarovnajú tak, aby poskytli maximálnu koreláciu medzi sekvenciami. Toto môže zahrnovať vloženie medzier buď do jednej alebo do oboch sekvencii, čím sa zvýši stupeň zarovnania. % zhody môže byť určené pre celú dĺžku každej porovnávanej sekvencie (takzvané globálne zarovnanie), čo je zvlášť vhodné pre sekvencie rovnakej alebo veľmi podobnej dĺžky, alebo pre kratšie, definované dĺžky (takzvané lokálne zarovnanie), čo je vhodnejšie pre sekvencie nerovnakej dĺžky.
Metódy porovnávania zhody a homológie dvoch alebo viacerých sekvencii sú v tomto odbore známe. Teda napríklad môžu byť použité programy dostupné vo Wisconsin Sequence Analysis Package, version 9.1 (Devereux J a spol., 1984), napríklad programy BESTFIT a GAP, na určenie % zhody medzi dvoma polynukleotidmi a % zhody a % homológie medzi dvoma polypeptidovými sekvenciami. BESTFIT používa algoritmus lokálnej homológie Smitha a Watermana (1981) a
-13nachádza najlepšiu samostatnú oblasť podobnosti medzi dvoma sekvenciami; Iné programy na určenie zhody a/alebo podobnosti medzi sekvenciami sú tiež známe v tomto odbore, napríklad rodina programov BLAST (Altschul S.F, a spol., 1990, Altschul S.F. a spol., 1997, dostupná cez domovskú stránku NCBI na www.ncbi.nlm.nih.gov) a FASTA (Pearson W R, 1990; Pearson 1988).
Výhodné zmeny pre muteíny v zhode s týmto vynálezom sú tie, čo sú známe ako konzervatívne substitúcie. Konzervatívne aminokyselinové substitúcie IL-18BP polypeptidov alebo bielkovín alebo vírusových IL-18BP, môžu zahrnovať synonymné aminokyseliny zo skupiny, ktoré majú dostatočne podobné fyzikálnochemické vlastnosti, takže substitúcia medzi členmi skupiny bude zachovávať biologickú funkciu molekuly (Grantham, 1974). Je jasné, že vloženie a odstránenie aminokyselín môže tiež byť urobené vo vyššie definovaných sekvenciách bez zmeny ich funkcie, zvlášť ak vloženie alebo odstránenie zahrnuje len niekoľko aminokyselín, napríklad pod tridsať, a výhodne pod desať, a neodstraňuje alebo nenahrádza aminokyseliny, ktoré sú kritické pre funkčnú konformáciu, napríklad cysteínové zvyšky. Bielkoviny a muteíny tvorené pomocou takýchto odstránení a/alebo vložení vchádzajú do rozsahu tohto vynálezu.
Výhodne synonymné aminokyselinové skupiny sú tie, čo sú definované v Tabuľke 1. Výhodnejšie synonymné aminokyselinové skupiny sú tie, čo sú definované v Tabuľke 2; a najvýhodnejšie synonymné aminokyselinové skupiny sú definované v Tabuľke 3.
Tabuľka 1
Výhodné skupiny synonymných aminokyselín
Aminokyselina Synonymná skupina
Ser
Arg
Leu
Pro
Thr
Ala
Ser, Thr, Gly, Asn
Arg, Gin, Lys, Glu, His lle, Phe, Tyr, Met, Val, Leu
Gly, Ala, Thr, Pro
Pro, Ser, Ala, Gly, His, Gin, Thr
Gly, Thr, Pro, Ala
| Val | Met, Tyr, Phe, lle, Leu, Val |
| Gly | Ala, Thr, Pro, Ser, Gly |
| lle | Met, Tyr, Phe, Val, Leu, lle |
| Phe | Trp, Met, Tyr, lle, Val, Leu, Phe |
| Tyr | Trp, Met, Phe, lle, Val, Leu, Tyr |
| Cys | Ser, Thr, Cys |
| His | Glu, Lys, Gin, Thr, Arg, His |
| Gin | Glu, Lys, Asn, His, Thr, Arg, Gin |
| Asn | Gin, Asp, Ser, Asn |
| Lys | Glu, Gin, His, Arg, Lys |
| Asp | Glu, Asn, Asp |
| Glu | Asp, Lys, Asn, Gin, His, Arg, Glu |
| Met | Phe, lle, Val, Leu, Met |
| Trp | Trp |
Tabuľka 2
Výhodnejšie skupiny synonymných aminokyselín
| yselina | Synonymná skupina |
| Ser | Ser |
| Arg | His, Lys, Arg |
| Leu | Leu, lle, Phe, Met |
| Pro | Ala, Pro |
| Thr | Thr |
| Ala | Pro, Ala |
| Val | Val, Met, lle |
| Gly | Gly |
| lle | lle, Met, Phe, Val, Leu |
| Phe | Met, Tyr, lle, Leu, Phe |
| Tyr | Phe, Tyr |
| Cys | Cys, Ser |
| His | His, Gin, Arg |
| Gin | Glu, Gin, His |
| Asn | Asp, Asn |
| Lys | Lys, Arg |
| Asp | Asp, Asn |
| Glu | Glu, Gin |
| Met | Met, Phe, lle, Val, Leu |
| Trp | Trp |
Tabuľka 3
Najvýhodnejšie skupiny synonymných aminokyselín
| yselina | Synonymná skupina |
| Ser | Ser |
| Arg | Arg |
| Leu | Leu, lle, Met |
| Pro | Pro |
| Thr | Thr |
| Ala | Ala |
| Val | Val |
| Gly | Gly |
| lle | lle, Met, Leu |
| Phe | Phe |
| Tyr | Tyr |
| Cys | Cys, Ser |
| His | His |
| Gin | Gin |
| Asn | Asn |
| Lys | Lys |
| Asp | Asp |
| Glu | Glu |
| Met | Met, lle, Leu |
| Trp | Met |
-16Príklady tvorby aminokyselinových substitúcií v bielkovinách, ktoré môžu byť použité na získanie muteínov IL-18BP polypeptidov alebo bielkovín, alebo muteínov vírusových IL-18BP, pre použitie v tomto vynáleze zahrnujú akékoľvek známe kroky metód, ako napríklad uvedené v US patentoch 4,959,314, 4,588,585 a 4,737,462, od Mark a spol.; 5,116,943 od Koths a spol., 4,965,195 od Namen a spol.; 4,879,111 od Chong a spol.; a 5,017,691 od Lee a spol.; a lyzínom substituované bielkoviny uvedené v US patente č. 4,904,584 (Shaw a spol.).
Pojem kondenzovaná bielkovina označuje polypeptid, ktorý zahrnuje IL18BP, alebo vírusový IL-18BP, alebo muteín alebo jeho fragment, kondenzovaný s inou bielkovinou, ktorá má napríklad predĺžený čas pobytu v telesných tekutinách. IL-18BP alebo a vírusový IL-18BP, môže teda byť kondenzovaný na inú bielkovinu, polypeptid alebo podobne, napríklad imunoglobulín alebo jeho fragment.
Funkčné deriváty, ako sa používajú v tomto dokumente, pokrývajú deriváty IL-18BP alebo vírusových IL-18BP, a ich muteíny a kondenzované bielkoviny, ktoré môžu byť pripravené z funkčných skupín, ktoré sa vyskytujú ako bočné reťazce na zvyškoch alebo N- alebo C-terminálne skupiny, pomocou prostriedkov známych v tomto odbore a sú zahrnuté vo vynáleze, ak zostávajú farmaceutický prijateľné, t.j. nenarušujú aktivitu bielkoviny, ktorá je v podstate podobná ako aktivita IL-18BP alebo vírusových IL-18BP, a neudeľujú toxické vlastnosti zlúčeninám, ktoré ju obsahujú.
Tieto deriváty môžu napríklad zahrnovať polyetylénglykolové bočné reťazce, ktoré môžu maskovať antigénové miesta a predĺžiť pobyt IL-18BP alebo vírusovej IL-18BP v telesných tekutinách. Iné deriváty zahrnujú alifatické estery karboxylových skupín, amidy karboxylových skupín reakciou s amoniakom alebo s primárnymi alebo sekundárnymi amínmi, N-acyl deriváty voľných aminoskupín aminokyselinových zvyškov tvorené s acylovými skupinami (napríklad alkanoylové alebo karbocyklické aroylové skupiny) alebo O-acyl deriváty voľných hydroxylových skupín (napríklad takýchto skupín zo serylového alebo treonylového zvyšku) tvorené s acylovými skupinami.
Ako aktívne frakcie IL-18BP alebo vírusového IL-18BP, muteínov a kondenzovaných bielkovín, tento vynález pokrýva akékoľvek fragmenty alebo prekurzory polypeptidového reťazca bielkovinovej molekuly samotnej alebo spolu so
-17spojenými molekulami alebo zvyškami, na ktoré je naviazaná, napríklad cukrové alebo fosfátové zvyšky, alebo agregáty bielkovinovej molekuly alebo cukrových zvyškov navzájom, za predpokladu, že táto frakcia má v podstate podobnú aktivitu ako IL-18BP.
Pojem soli v tomto dokumente označuje aj soli karboxylových skupín aj kyslé adičné soli aminoskupín IL-18 inhibítorovej molekuly, alebo jej analógov. Soli karboxylovej skupiny môžu byť tvorené pomocou prostriedkov známych v tomto odbore a zahrnujú anorganické soli, napríklad sodné, vápenaté, amónne, železité alebo zinočnaté soli a podobne, a soli s organickými zásadami, ako sú soli tvorené napríklad s amínmi, ako napríklad trietanolamín, arginín alebo lyzín, piperidín, prokaín a podobne. Kyslé adičné soli zahrnujú napríklad soli s minerálnymi kyselinami, ako sú napríklad, kyselina chlorovodíková alebo kyselina sírová, a soli s organickými kyselinami, ako sú napríklad kyselina octová alebo kyselina šťaveľová. Samozrejme, akékoľvek takéto soli si musia zachovať biologickú aktivitu OPN relevantnú pre tento vynález, t.j. vykazujú proliferatívny účinok na oligodendrocyty.
V ďalšom výhodnom uskutočnení vynálezu inhibítorom IL-18 je IL-18 protilátka. Anti-IL-18 protilátky môžu byť polyklonálne alebo monoklonálne, chimerické, humanizované, alebo aj úplne ľudské. Rekombinantné protilátky a ich fragmenty sú charakterizované vysokou afinitou viazania sa na IL-18 in vivo a nízkou toxicitou. Protilátky, ktoré môžu byť použité v tomto vynáleze sú charakterizované schopnosťou liečiť pacientov počas doby dostatočnej na dosiahnutie dobrej až vynikajúcej regresie alebo zmiernenia patogenického stavu alebo akéhokoľvek symptómu alebo skupiny symptómov spojených s patogenickým stavom, a nízkou toxicitou.
Neutralizujúce protilátky sa ľahko získajú od zvierat, ako napríklad králiky, kozy alebo myši, pomocou imunizácie s IL-18. Imunizované myši sú zvlášť užitočné na poskytovanie zdrojov B buniek na výrobu hybridómov, ktoré zas sú kultivované tak, aby produkovali veľké množstvá anti-IL-18 monoklonálnych protilátok.
Chimerické protilátky sú imunoglobulínové molekuly charakterizované dvoma alebo viacerými segmentmi alebo časťami získanými z rôznych zvieracích látok. Všeobecne, premenná oblasť chimerickej protilátky sa získa z nie-ľudskej protilátky cicavca, ako napríklad myšacia monoklonálna protilátka, a imuno-18globulínová konštantná oblasť sa získa z ľudskej imunoglobulínovej molekuly. Výhodne majú obe oblasti a ich kombinácia nízku imunogenicitu podľa rutinného určenia (Elliott a spol., 1994). Humanizované protilátky sú imunoglobulínové molekuly tvorené pomocou techník génového inžinierstva, v ktorých sú myšacie konštantné oblasti nahradené ľudskými náprotivkami, pri zachovaní myšací antigén viažucich oblastí. Výsledná myšacia-ľudská chimérická protilátka má výhodne zníženú imunogenicitu a zlepšenú farmakokinetiku u ľudí (Knight a spol., 1993).
Teda, v ďalšom výhodnom uskutočnení je IL-18 protilátkou humanizovaná IL-18 protilátka. Výhodné príklady humanizovaných anti-IL-18 protilátok sú opísané napríklad v Európskej patentovej prihláške EP 0 974 600.
V ešte ďalšom výhodnom uskutočnení je IL-18 protilátka úplne ľudská. Technológia výroby ľudských protilátok je opísaná podrobne napríklad v WO00/76310, WO99/53049, US 6,162,963 alebo AU5336100. Úplne ľudské protilátky sú výhodne rekombinantné protilátky, vyrábané pomocou transgénových zvierat, napríklad xenomyší, zahrnujúce celé alebo časti funkčných ľudských Ig lokusov.
Vo vysoko výhodnom uskutočnení tohto vynálezu inhibítorom IL-18 je IL18BP, alebo jeho izoforma, muteín, kondenzovaná bielkovina, funkčný derivát, aktívna frakcia alebo cirkulačné permutované deriváty. Tieto izoformy, muteíny, kondenzované bielkoviny alebo funkčné deriváty si zachovávajú biologickú aktivitu IL-18BP, zvlášť viazanie na IL-18, a výhodne majú v podstate najmenej takú aktivitu ako IL-18BP. Ideálne takéto bielkoviny majú biologickú aktivitu, ktorá je ešte zvýšená v porovnaní s nemodifikovaným IL-18BP. Výhodné aktívne frakcie majú aktivitu, ktorá je lepšia než aktivita IL-18BP, alebo ktoré majú ďalšie výhody, ako napríklad lepšia stabilita alebo nižšia toxicita alebo imunogenicita, alebo sa ľahšie vyrábajú vo veľkých množstvách, alebo sa ľahšie čistia.
Sekvencie IL-18BP a jeho zviazané varianty/izoformy môžu byť vybraté z WO 99/09063 alebo z Novick a spol., 1999, ako aj z Kim a spol., 2000.
Funkčné deriváty IL-18BP môžu byť konjugované na polyméry s cieľom zlepšiť vlastnosti bielkoviny, ako napríklad stabilita, polčas života, biodostupnosť, tolerancia ľudským telom alebo imunogenicita. Aby sa dosiahol tento cieľ, funkčný derivát môže zahrnovať najmenej jednu skupinu naviazanú na jednu alebo viaceré
-19funkčné skupiny, ktoré sa vyskytujú ako jeden alebo viaceré bočné reťazce na aminokyselinových zvyškoch. Takéto funkčné skupiny môžu napríklad byť polyetylénglykol (PEG). PEGylácia môže byť uskutočnená pomocou známych metód, ktoré sú opísané napríklad v WO 92/13095.
Preto vo výhodnom uskutočnení tohto vynálezu je inhibítor IL-18 a zvlášť IL18BP PEGylovaný.
V ďalšom výhodnom uskutočnení vynálezu je inhibítorom IL-18 kondenzovaná bielkovina obsahujúca celú alebo časť IL-18 viazacej bielkoviny, ktorá je kondenzovaná na celý alebo na časť imunoglobulínu. Odborník v tomto odbore pochopí, že výsledná konjugovaná bielkovina si zachováva biologickú aktivitu IL-18BP, zvlášť viazanie na IL-18. Konjugovanie môže byť priame, alebo cez krátky spojovací peptid, ktorý môže mať dĺžku 1 až 3 aminokyselinové zvyšky alebo môže byť dlhší, napríklad 13 aminokyselinových zvyškov. Táto spojovacia skupina môže byť tripeptid sekvencie E-F-M (Glu-Phe-Met), napríklad, alebo 13aminokyselinová spojovacia sekvencia obsahujúca Glu-Phe-Gly-Ala-Gly-Leu-ValLeu-Gly-Gly-GIn-Phe-Met zavedená medzi IL-18BP sekvencie a imunoglobulínovú sekvenciu. Výsledná konjugovaná bielkovina má zlepšené vlastnosti, ako napríklad predĺžený čas pobytu v telesných tekutinách (polčas), zvýšenú špecifickú aktivitu, zvýšenú hladinu expresie, alebo je uľahčené čistenie konjugovanej bielkoviny.
Vo výhodnom uskutočnení je IL-18BP kondenzovaný na konštantnú oblasť Ig molekuly. Výhodne je kondenzovaný na oblasti ťažkých reťazcov, ako napríklad CH2 a CH3 domény ľudského lgG1. Generovanie špecifickej konjugovanej bielkoviny obsahujúcej IL-18BP a podielu imunoglobulínu sú opísané napríklad v príklade 11 WO 99/09063. Iné izoformy Ig molekúl sú tiež vhodné na generovanie konjugovanej bielkoviny podľa tohto vynálezu, ako napríklad izoformy lgG2 alebo lgG4, alebo iné Ig triedy, ako napríklad IgM alebo IgA. Konjugovaná bielkovina môže byť monomérická alebo multimérická, hetero- alebo homomultimérická.
Interferóny sú hlavne známe pre inhibičné účinky na vírusovú replikáciu a celulárnu proliferáciu. Interferón-γ hrá napríklad dôležitú úlohu pri podpore imunitnej a zápalovej odozvy. Je známe, že interferón β (IFN-β, interferón typu I) hrá protizápalovú úlohu.
Vynález sa preto tiež týka použitia kombinácie inhibítora IL-18 a interferónu
-20na výrobu lieku na liečenie CNS poranení.
Interferóny môžu tiež byť konjugované na polyméry s cieľom zlepšiť stabilitu bielkoviny. Konjugát medzi Interferónom β a polyolom polyetylénglykol (PEG) bol opísaný napríklad v WO99/55377.
V inom výhodnom uskutočnení vynálezu je interferónom lnterferón-β (IFNβ) a výhodnejšie IFN-β 1a.
Inhibítor IL-18 tvorby a/alebo pôsobenia sa výhodne používa simultánne, sekvenčne alebo oddelene s interferónom.
Faktor nekrotizujúci tumory bol opísaný v literatúre ako faktor, ktorý má aj ochranné aj toxické účinky pri poškodení mozgu (Shohami a spol., 1999). V Príklade 1 nižšie, TNF injekcia myši nasledujúca po ťažkom mozgovom úraze viedla k významnému poklesu IL-18 hladiny v mozgu, čo poukazuje, že TNF môže mať priaznivé účinky na obnovu po traumatickom poškodení mozgu. Preto sa výhodné uskutočnenie vynálezu týka použitia inhibítora IL-18 v kombinácii s TNF na prípravu lieku na liečenie a/alebo prevenciu poškodenia mozgu, pre simultánne, sekvenčné alebo oddelené použitie.
Kombinácia IL-18 inhibítorov s TNF alfa je výhodná v zhode s týmto vynálezom.
V ďalšom výhodnom uskutočnení vynálezu liek ďalej zahrnuje protizápalové činidlo, ako napríklad NSAID (nesteroidné protizápalové liečivo). Vo výhodnom uskutočnení sa používa COX-inhibítor, a najvýhodnejšie COX-2 inhibítor, v kombinácii s IL-18 inhibítorom. COX-inhibítory sú známe v tomto odbore. Špecifické COX-2 inhibítory sú opísané napríklad vo WO 01/00229. Aktívne zložky môžu byť použité simultánne, sekvenčne alebo oddelene.
Oxidačný stres, zvlášť reaktívne kyslíkaté látky (ROS), boli opísané ako látky, ktoré hrajú úlohu v patofyziológii poškodenia mozgu (Shohami a spol., 1997).
Preto vo výhodnom uskutočnení tohto vynálezu liek ďalej zahrnuje antioxidant, pre simultánne, sekvenčné alebo oddelené použitie. Mnohé antioxidanty sú známe v tomto odbore, ako napríklad vitamíny A, C alebo E, alebo kyselina 5-aminosalicylová, alebo superoxid-dismutáza.
V ďalšom výhodnom uskutočnení tohto vynálezu sa používa inhibítor IL-18 v množstve asi 0,001 až 100 mg/kg telesnej hmotnosti, alebo asi 0,01 až 10 mg/kg
-21 telesnej hmotnosti alebo asi 0,1 až 3 mg/kg telesnej hmotnosti alebo asi 1 až 2 mg/kg telesnej hmotnosti.
V ešte ďalšom výhodnom uskutočnení sa používa inhibítor IL-18 v množstve asi 0,1 až 1000 pg/kg telesnej hmotnosti alebo 1 až 100 pg/kg telesnej hmotnosti alebo asi 10 až 50 pg/kg telesnej hmotnosti.
Vynález sa ďalej týka použitia molekuly nukleovej kyseliny, ktorá zahrnuje kódujúcu sekvenciou IL-18 inhibítora, muteínu, funkčného derivátu alebo ich aktívnej frakcie, na prípravu lieku na prevenciu a/alebo liečenie CNS poranení.
Výhodne molekula nukleovej kyseliny ďalej zahrnuje sekvenciu vektora expresie, napríklad na použitie génovej terapie pri podávaní IL-18 inhibítora podľa tohto vynálezu.
Výhodne sa molekula nukleovej kyseliny podáva intramuskulárne.
Na liečenie a/alebo prevenciu CNS poranenia, vektor génovej terapie obsahujúci sekvenciu inhibítora tvorby a/alebo pôsobenia IL-18 môže byť injektovaný napríklad priamo do chorého tkaniva, čím sa zabráni problémom zahrnutým pri systemickom podávaní vektorov génovej terapie, ako je napríklad zriedenie vektorov, dosiahnutie a zacielenie cieľovej bunky alebo tkaniva, a vedľajšie účinky.
Použitie vektora na indukovanie a/alebo zvýšenie endogénnej tvorby inhibítora IL-18 v bunke normálne tichej z hľadiska expresie IL-18 inhibítora, alebo ktorý exprimuje množstvá inhibítora, ktoré nie sú dostatočné, sú tiež uvažované v tomto vynáleze na liečenie a/alebo prevenciu CNS poranenia. Tento vektor môže zahrnovať regulačné prvky funkčné v bunkách požadované na expresiu inhibítora alebo IL-18. Takéto regulačné sekvencie alebo prvky môžu byť napríklad promotórmi alebo zosilňovačmi. Regulačná sekvencia môže potom byť zavedená do pravého lokusu genómu pomocou homologickej rekombinácie, čím sa operačne viaže na regulačnú sekvenciu s génom, u ktorého sa vyžaduje vyvolanie alebo zvýšenie expresie. Táto technológia sa obvykle označuje ako “Endogénna génová aktivácia” (EGA) a je opísaná napríklad v WO 91/09955.
Odborník v tomto odbore porozumie, že je tiež možné zastaviť IL-18 expresiu priamo, bez použitia inhibitorov IL-18, rovnakou technikou. Na to sa môže zaviesť negatívne riadiaci prvok, ako napríklad umlčujúci prvok, do génového
-22lokusu IL-18, čo vedie k spomaleniu alebo prevencii IL-18 expresie. Odborník v tomto odbore pochopí, že takéto spomalenie alebo stíšenie IL-18 expresie, má rovnaký účinok ako použitie IL-18 inhibítora s cieľom, zabrániť a/alebo liečiť chorobu.
Vynález sa ďalej týka použitia bunky, ktorá bola geneticky modifikovaná na výrobu inhibítora IL-18 na výrobu lieku na liečenie a/alebo prevenciu CNS poranenia.
Vynález sa ďalej týka farmaceutických prípravkov zvlášť užitočných na prevenciu a/alebo liečenie zápalových CNS poranení, ktoré zahrnujú terapeuticky účinné množstvo inhibítora IL-18 a/alebo terapeuticky účinné množstvo interferónu a/alebo farmaceutický účinné množstvo TNF a/alebo farmaceutický účinné množstvo protizápalového činidla a/alebo farmaceutický účinné množstvo antioxidatívneho činidla.
Ako inhibítor IL-18, prípravok môže zahrnovať inhibítor caspázy-1, protilátky proti IL-18, protilátky proti akejkoľvek IL-18 receptorovej subjednotke, inhibítory IL18 signálneho mechanizmu, antagonistické látky IL-18, ktoré konkurujú IL-18 a blokujú IL-18 receptor, IL-18 viažuce bielkoviny, ich izoformy, muteíny, kondenzované bielkoviny, funkčné deriváty, aktívne frakcie alebo cirkulačné permutované deriváty, ktoré majú rovnakú aktivitu.
IL-18BP a jeho izoformy, muteíny, kondenzované bielkoviny, funkčné deriváty, aktívne frakcie alebo cirkulačné permutované deriváty, ako sú opísané vyššie, sú výhodné aktívne zložky farmaceutických prípravkov.
Interferónom zahrnutým vo farmaceutickom prípravku je výhodne IFN-beta alebo IFN-alfa.
V ešte inom výhodnom uskutočnení farmaceutický prípravok zahrnuje terapeuticky účinné množstvá TNF alfa. Farmaceutický prípravok podľa tohto vynálezu môže ďalej zahrnovať jeden alebo viaceré COX-inhibítory.
Definícia “farmaceutický prijateľný je uvažovaná tak, že zahrnuje akýkoľvek nosič, ktorý neinterferuje s účinnosťou biologickej aktivity aktívnej zložky a nie je toxický pre hostiteľa, ktorému sa podáva. Napríklad na parenterálne podávanie môže byť aktívna bielkovina(y) upravená v jednotkovej dávkovej forme pre injekciu vo vehikule, ako je napríklad soľný roztok, dextrózový roztok, sérový albumín a
-23Ringerov roztok.
Aktívne zložky farmaceutického prípravku podľa tohto vynálezu môžu byť podávané jednotlivcovi rôznymi spôsobmi. Cesty podávania zahrnujú intradermálnu, transdermálnu (napríklad v prípravkoch s pomalým uvoľňovaním), intramuskulárnu, intraperitoneálnu, intravenóznu, subkutánnu, orálnu, intrakraniálnu, epidurálnu, rektálnu, topikálnu a intranazálnu cestu. Môžu byť použité akékoľvek iné terapeuticky účinné spôsoby podávania, napríklad absorpcia cez epitelové alebo endotelové tkanivá alebo pomocou génovej terapie, kde sa DNA molekula kódujúca aktívne činidlo podáva pacientovi (napríklad pomocou vektora), čo spôsobuje, že aktívne činidlo je exprimované a vylučované in vivo. Okrem toho, bielkovina(y) podľa tohto vynálezu môže byť podávaná spolu s inými zložkami biologicky aktívnych činidiel, ako sú napríklad farmaceutický prijateľné povrchovo aktívne látky, excipienty, nosiče, zrieďovadlá a vehikulá.
Na parenterálne podávanie (napríklad intravenózne, subkutánne, intramuskulárne), môže byť aktívna bielkovina(y) upravená ako roztok, suspenzia, emulzia alebo lyofilizovaný prášok v spojení s farmaceutický prijateľným parenterálnym vehikulom (napríklad voda, soľný roztok, dextrózový roztok) a aditívami, ktoré udržujú izotonicitu (napríklad manitol) alebo chemickú stabilitu (napríklad konzervačné látky a pufre). Prípravok sa sterilizuje pomocou bežne používaných techník.
Biologická dostupnosť aktívnej bielkoviny(bielkovín) podľa tohto vynálezu môže tiež byť zlepšená použitím konjugačných procedúr, ktoré zvyšujú polčas molekuly v ľudskom tele, napríklad naviazaním molekuly na polyetylénglykol, ako je opísané v PCT patentovej prihláške WO 92/13095.
Terapeuticky účinné množstvá aktívnej bielkoviny(bielkovín) budú funkciou mnohých premenných, vrátane typu antagonistickej látky, afinity antagonistickej látky k IL-18, reziduálnej cytotoxickej aktivity vykazovanej antagonistickými látkami, spôsobu podávania, klinického stavu pacienta (vrátane požiadavky udržovania netoxickej hladiny endogénnej IL-18 aktivity).
Terapeuticky účinné množstvo je také množstvo, ktoré pri podávaní IL-18 inhibítora spôsobí inhibíciu biologickej aktivity IL-18. Dávka podávaná ako jediná alebo ako viacnásobné dávky jedincovi sa bude meniť v závislosti od viacerých
-24faktorov, vrátane farmakokinetických vlastností IL-18 inhibítora, cesty podávania, pacientovho stavu a charakteristiky (pohlavie, vek, telesná hmotnosť, zdravie, veľkosť), rozsahu symptómov, konkurenčných liečení, frekvencie liečenia a požadovaného účinku. Nastavenie a úpravu použitých dávkových rozsahov môže urobiť odborník v tomto odbore, ako aj in vitro a in vivo spôsobmi určenia inhibície IL-18 u jedinca.
Podľa tohto vynálezu sa inhibítor IL-18 používa v množstve asi 0,0001 až 100 mg/kg alebo asi 0,01 až 10 mg/kg alebo telesnej hmotnosti, alebo asi 0,1 až 5 mg/kg telesnej hmotnosti alebo asi 1 až 3 mg/kg telesnej hmotnosti alebo asi 1 až 2 mg/kg telesnej hmotnosti. Alternatívne sa IL-18 inhibítor môže podávať v množstvách asi 0,1 až 1000 pg/kg telesnej hmotnosti alebo asi 1 až 100 pg/kg telesnej hmotnosti alebo asi 10 až 50 pg/kg telesnej hmotnosti
Spôsobom podávania, ktorý je výhodný podľa tohto vynálezu, je podávanie subkutánnou cestou. Intramuskuláme podávanie je ďalšie výhodné podávanie podľa tohto vynálezu. S cieľom podávať IL-18 inhibítor priamo na miesto jeho pôsobenia, je tiež výhodné podávať ho intrakraniálnou alebo intratekálnou cestou. Intrakraniálna cesta je zvlášť výhodná v kombinácii s otvoreným poranením hlavy (strelné poranenie mozgu).
V ďalších výhodných uskutočneniach sa inhibítor IL-18 podáva denne alebo každý druhý deň.
Denné dávky sú obvykle podávané v rozdelených dávkach alebo vo forme s trvalým uvoľňovaním účinnej látky na získanie požadovaných výsledkov. Druhé alebo následné podávanie môže byť uskutočnené s dávkou, ktorá je rovnaká, menšia alebo väčšia než počiatočná alebo predchádzajúca dávka podávaná danému jedincovi. Druhé alebo nasledujúce podávanie môže byť podávané počas choroby alebo pred nástupom choroby.
Podľa tohto vynálezu môže IL-18 inhibítor byť podávaný profylaktický alebo terapeuticky jedincovi pred, simultánne alebo sekvenčne s inými terapeutickými režimami alebo činidlami (napríklad režimy s viacerými liečivami), v terapeuticky účinnom množstve, zvlášť s interferónom a/alebo TNF a/alebo iným protizápalovým činidlom, ako napríklad COX inhibítor a/alebo nejaký antioxidant. V závislosti od poškodenia mozgu môže tiež byť uvažované spoločné podávanie TNF-25antagonistickej látky namiesto TNF samotného (Shohami a spol., 1999). Aktívne činidlá, ktoré sú podávané simultánne s inými terapeutickými činidlami, môžu byť podávané v rovnakom alebo v iných prípravkoch.
Vynález sa ďalej týka spôsobov prípravy farmaceutických prípravkov, ktoré obsahujú zmiešané účinné množstvo IL-18 inhibítora a/alebo interferónu a/alebo TNF antagonistickej látky a/alebo COX inhibítora s farmaceutický prijateľným nosičom.
Vynález sa ďalej týka spôsobu liečenia CNS poranenia, ktorý zahrnuje podávanie farmaceutický účinného množstva IL-18 inhibítora pacientovi, ktorý to potrebuje.
Všetky odkazy citované v tomto dokumente, vrátane článkov v časopisoch alebo abstraktov, publikovaných alebo nepublikovaných, US alebo zahraničných patentových prihlášok, vydaných US alebo zahraničných patentov alebo akékoľvek iné odkazy, sú celkovo začlenené ako odkaz v tomto dokumente, vrátane všetkých údajov, tabuliek, obrázkov a textov uvedených v citovaných odkazoch. Okrem toho, celkový obsah odkazov citovaných v odkazoch citovaných v tomto dokumente je tu tiež úplne začlenený pomocou odkazu.
Odkazy na známe kroky metód, konvenčné kroky metód, známe metódy alebo konvenčné metódy, nie sú žiadnym spôsobom potvrdením toho, že nejaký aspekt, opis alebo uskutočnenie tohto vynálezu je už opísaný, uvažovaný alebo navrhovaný v doterajšom stave tohto odboru.
Predchádzajúci opis špecifických uskutočnení teda úplne ukazuje všeobecnú povahu vynálezu, ktorá inak môže byť aplikovaním znalostí odborníka v tejto oblasti (vrátane obsahu odkazov citovaných v tomto dokumente) ľahko modifikovaná a/alebo adaptovaná pre rôzne aplikácie takýchto špecifických uskutočnení, bez nadmerných experimentov, bez odstúpenia od všeobecného konceptu tohto vynálezu. Preto sú takéto adaptácie a modifikácie zamýšľané ako zahrnuté v rozsahu ekvivalentov opísaných uskutočnení na základe vysvetlení a návodov uvedených v tomto dokumente. Treba rozumieť, že frazeológia alebo terminológia v tomto dokumente je použitá pre účely opisu a nie obmedzenia, tak že terminológia alebo frazeológia tejto prihlášky sa má interpretovať odborníkom v tejto oblasti vo svetle vysvetlení a návodov uvedených v tomto dokumente, v kombinácii so znalosťami odborníka v
-26tomto odbore.
Keď už je vynález opísaný, bude ho ľahšie pochopiť pomocou nasledujúcich príkladov, ktoré sú poskytnuté ako ilustrácia a nie sú zamýšľané ako obmedzenie tohto vynálezu.
Prehľad obrázkov na výkresoch
Obr. 1 ukazuje histogram zobrazujúci sérové hladiny intracerebrálneho IL18 (ng/ml) v celom mozgu (šrafované), v ľavej hemisfére (čierne) alebo v pravej hemisfére (sivé) za rôznych podmienok.
Obr. 2 ukazuje vývoj NSS (Skóre neurologickej závažnosti) merané 1 hodinu (h), 24 h, 72 h alebo 168 h po úraze, buď s 50 pg IL-18BP podávané i.p. 1 hodinu po úraze (štvorčeky), alebo s injekciou len vehikula (kontrolná skupina, krúžky).
Obr. 3 ukazuje ANSS merané 24 h, 72 h alebo 168 h po úraze, buď s 50 pg IL-18BP podávané i.p. 1 hodinu po úraze (štvorčeky), alebo s injekciou len vehikula (kontrolná skupina, krúžky).
Obr. 4 ukazuje ANSS merané 1 h, 24 h, 3 dni (d), 7 d alebo 14 d po úraze, buď s 50 pg IL-18BP podávané i.p. buď ako jediná dávka 3 d po úraze (kosoštvorčeky), alebo ako dvojitá dávka 1 h a 3 d po úraze (štvorčeky) alebo s injekciou len vehikula (kontrolná skupina, trojuholníčky).
Príklady uskutočnenia vynálezu
Materiály a metódy
Model úrazu
Myši použité v tejto štúdii boli samce veku 8 až 16 týždňov vážiace 30 až 35 g. Narodili sa v špecifickom bezpatogénovom prostredí, chovali sa za štandardných podmienok teploty a svetla v klietkach po 4 až 6 zvieratách, kŕmili sa potravou a vodou ad libitum. Štúdia bola uskutočnená podľa smerníc Institutional Animal Čare Committee Hebrejskej Univerzity Jeruzalem, Izrael. Experimentálny CHI bol
-27uskutočnený použitím vopred vyvinutého zariadenia s padajúcim závažím (Chen a spol. 1996). Stručne povedané, po vyvolaní éterovej anestézie sa uskutočnil pozdĺžny rez stredovou čiarou, koža bola odtiahnutá a odkryla sa lebka. Vyhľadala sa ľavá predná čelná plocha a teflónový špicatý kužeľ sa umiestnil asi 1 mm bokom od stredovej línie v stredovo-koronárnej rovine. Hlava bola zafixovaná a na kužeľ sa nechalo padnúť 75 g závažie z výšky 18 cm, čo spôsobilo ložiskové poranenie v ľavej hemisfére. Po úraze myši obdržali podporné okysličenie 100%-ným O2 počas menej než 2 minút a potom sa preniesli späť do ich klietok.
Vyhodnotenie IL-18 hladín v mozgu myší
Na kvantifikáciu intrakraniálnych IL-18 hladín boli myši kmeňa C57BL/6 (B6) (celkovo n=62) rozdelené do šiestich zvláštnych skupín: (1) normálna kontrolná vzorka”; neliečené B6 myši (n=10). (2) éterová anestézia”; myši boli anestetizované éterom počas 10 minút a dekapitované po 24 hodinách (n=10) alebo 7 dňoch (n=10). (3) simulovaná operácia”; tieto myši podstúpili anestéziu a pozdĺžnu incíziu skalpu a boli usmrtené po 24 hodinách (n=15) alebo 7 dňoch. (4) skupina s úrazom; experimentálny CHI bol uskutočnený tak, ako je opísané vyššie a zvieratá boli dakapitované za éterovej anestézie po 4 hodinách (n=7), 24 hodinách (n=7), a 7 dňoch (n=7) po úraze. (5) TNF injekcia”; na vyhodnotenie možnej úlohy TNF v regulácii intracerebrálneho IL-18 boli myši anestetizované éterom, podala sa im injekcia intra-cerebro-ventrikulárne (i.c.v.) 200 ng myšieho rekombinantného TNF (R&D Systems, Abingdon, UK) v 10 μΙ sterilného fosfátom pufrovaného soľného roztoku (PBS) a boli usmrtené po 24 hodinách (n=10). (6) simulovaná injekcia”; tieto zvieratá dostali injekciu i.c.v. len s vehikulom (10 μΙ sterilného PBS) a boli usmrtené po 24 hodinách (n=6) ako kontrolná skupina pre zvieratá s TNF-injekciou. U všetkých myši sa ihneď po dekapitácii odstránil mozog, prudko sa zmrazil v kvapalnom dusíku a uložil sa pri -70 °C až do analýzy. Mozgy zo skupiny po úraze boli rozdelené na ľavú (ipsilaterálnu) a pravú (kontralaterálnu) hemisféru, s cieľom umožniť porovnanie IL-18 hladiny v poranenej oproti neporanenej hemisfére. Homogenizácia tkaniva bola uskutočnená zariadením Polytron (Kinematica, Kriens, Švajčiarsko) použitím zriedenia 1:4 v ľadovostudenom extrakčnom pufri (hmotnostné) obsahujúcom Tris 50 mmol/l (pH 7,2), NaCl 150 mmol/l, Triton-X-100
-281%-ný (Boehringer Mannheim, Rotkreuz, Švajčiarsko), a proteázový inhibítorový koktail (Boehringer Mannheim). Homogenát sa trepal na ľade počas 90 minút, potom sa centrifugoval počas 15 minút pri 3000 g a 4 °C. Supernatanty boli rozdelené na alikvóty a uskladnené pri -70 °C do analýzy. Koncentrácie celkovej bielkoviny v mozgových extraktoch boli merané pomocou Bradfordovej skúšky (Bio Rad Laboratories, Mníchov, Nemecko) a zistilo sa, že sú veľmi konštantné u všetkých hodnotených myší (12,1 ± 2,1 mg/ml; priemer ± SD). Kvantifikácia intracerebrálnej cytokínovej hladiny bola uskutočnená pomocou ELISA testu špecifického pre myší IL-18, podľa návodu výrobcu (R&D Systems, Abingdon, UK). Citlivosť skúšky bola 5 pg/ml. Pre porovnanie intracerebrálnych IL-18 hladín medzi rôznymi skupinami zvierat boli všetky koncentrácie pod detekčný limit 5 pg/ml priradené hodnote 4,9 pg/ml. Vzorky boli analyzované nezdedené v kalíškoch s dvoma opakovaniami a konečná koncentrácia bola vypočítaná z priemernej OD duplikovaných vzoriek. OD boli určené pomocou spektrofotometra (Dynatech Laboratories Inc., Chantilly, VA) pri vlnovej dĺžke absorpcie 405 nm.
Postup IL-18BP liečenia
Samce Sabra myší z kmeňa z Hebrejskej Univerzity (n=40) sa použili na IL18BP štúdie. Anestézia a experimentálny CHI boli uskutočnené tak, ako je opísané vyššie. Pre postup skúmania boli zvieratá rozdelené na dve skupiny: v skupina A (kontrolná skupina”, n=16), boli myši podrobené experimentálnemu CHI, dostali injekciu samotného vehikulá (PBS) po jednej hodine a pozorovali sa počas 7 dní z hľadiska neurologického vyhodnotenia (pozri nižšie). V skupine B (študovaná skupina”, n=18), myši dostali injekciu i.p. s 50 pg IL-18BP ihneď po určení neurologického skóre pri t=1 hodina po CHI. Pretože permeabilita hematoencefalickej bariéry je 5 až 6 krát zvýšená medzi 1 až 4 hodinami po CHI, ako bolo skôr určené v rovnakom experimentálnom modeli (Chen a spol. 1996), IL-18BP za týchto podmienok môže vstúpiť do mozgu. Podľa skupín A a B boli spracované dve dodatočné skupiny myší (skupina C: kontrolná skupina”; skupina D: študovaná skupina”) a dekapitované po 48 hodinách, po čom nasledovala pitva mozgu na ohodnotenie post-traumatického edému, ako je opísané nižšie.
-29Vyhodnotenie neurologického poškodenia
Na vyhodnotenie post-traumatického neurologického poškodenia bolo skôr vyvinuté a validované Skóre neurologickej závažnosti (NSS) (Stahel a spol., 2000). Toto skóre pozostáva z 10 samostatných klinických úloh na motorické funkcie, pohotovosť a fyziologické správanie sa, kde jeden bod sa dáva pri neúspechu úlohy a nula bodov pri úspešnej úlohe (Tabuľka 4). Maximálne NSS 10 bodov indikuje ťažkú neurologickú dysfunkciu s neúspechom všetkých úloh, zatiaľ čo skóre nula sa dosiahne zdravými neporanenými myšami. NSS po 1 hodine po úraze odráža počiatočný rozsah poranenia a je vysoko korelovaný s klinickým výsledkom (Beni-Adani a spol. 2001). Vyhodnotenie vykonania úloh bolo uskutočnené dvoma výskumníkmi, ktorí nevedeli o zadelení v študovaných skupinách, v časových bodoch 1 hodina, 24 hodín, 72 hodín a 7 dni po experimentálnom CHI. ANSS vypočítaný ako rozdiel medzi NSS pri t = 1 hodina a NSS v niektorom neskoršom časovom bode je parameter, ktorý odráža stupeň spontánnej obnovy nasledujúcej po poškodení mozgu, ako je opísané skôr (Chen a spol. 1996).
Tabuľka 4: Skóre neurologickej závažnosti (NSS) pre myši s poranením hlavy.
| Úloha | Opis | Body pre úspech/neús. |
| Východ z kruhu | Schopnosť a iniciatíva vychádzať z kruhu 30 cm priemeru v priebehu 3 minút | 0/1 |
| Mono- /Hemiparéza | Paréza hornej a/alebo dolnej končatiny kontralaterálnej strany. | 0/1 |
| Priame chodenie | Pohotovosť, iniciatíva a motorická schopnosť chodiť priamo. | 0/1 |
| Reflex plašenia | Vrodený reflex; Myš bude skákať ako odozva na hlasné tlesknutie rúk. | 0/1 |
| Hľadanie | Fyziologické správanie ako znak záujmu” o prostredie. | 0/1 |
| Rovnováha na nosníku | Schopnosť udržať rovnováhu na nosníku 7 mm širokom počas najmenej 10 sekúnd. | 0/1 |
| Rovnováha na okrúhlej tyčke | Schopnosť udržať rovnováhu na okrúhlej tyčke 5 mm priemeru počas najmenej 10 s | 0/1 |
| Chodenie po nosníku: 3 cm | Schopnosť prejsť 30 cm dlhý nosník 3 cm šírky. | 0/1 |
| Chodenie po nosníku: 2 cm | Rovnaká úloha, zvýšená obťažnosť na 2 cm širokom nosníku. | 0/1 |
| Chodenie po nosníku: 1 cm | To isté, zvýšená obťažnosť na 1 cm širokom nosníku. | 0/1 |
| Maximálne skóre | 10 |
Vyhodnotenie edému mozgu
Rozsah cerebrálneho edému sa hodnotil pomocou určenia obsahu vody v tkanive v poranenej hemisfére, ako je skôr opísané (Chen a spol. 1996). Stručne povedané, myši boli anestetizované, ako je opísané vyššie po 48 hodinách po úraze, čo zodpovedá časovému bodu, pri ktorom je edém ešte významný v tomto modeli systému (Chen a spol. 1996). Po dekapitácii sa odstránil malý mozog a mozgový kmeň a pripravil sa kortikálny segment asi 20 mg z oblasti hraničiacej s miestom úrazu a z jeho kontralaterálnej hemisféry. Pravá (neporanená) hemisféra bola použitá ako interná kontrolná vzorka. Tkanivové plátky boli zvážené a vysušené počas 24 hodín pri 95 °C. Po vážení vysušených plátkov sa percento obsahu vody v mozgu vypočítalo ako:
%H2O = [(vlhká hmotnosť - suchá hmotnosť) x 100] / vlhká hmotnosť
Poškodenie mozgu pacientov
Desať pacientov s izolovaným ťažkým CHI (stredný vek ± SD: 37 ± 10 rokov; rozsah 24 až 57 rokov; 9 mužov a jedna žena) prijatých na Úrazovú Divíziu
-31 Univerzitnej nemocnice Zurich bolo zahrnutých do tejto štúdie. Všetci pacienti mali na Glasgowskej stupnici kómy (GCS) skóre < 8 po kardiopulmonálnej resuscitácii (Teasdale a Jennett, 1974). Po CT vyhodnotení všetci pacienti dostali intraventrikulárne katétre na terapeutickú CSF drenáž, keď intrakraniálny tlak (ICP) presiahol 15 mm Hg. Žiaden pacient nebol liečený steroidmi. Pacienti s mnohonásobným poškodením vyžadujúci intervencie pre súbežné torakálne, abdominálne, panvové, spinálne poranenia alebo zlomeninu dlhých kostí boli vylúčení zo štúdie. Individuálny výsledok bol ohodnotený použitím Glasgowskej stupnice následkov (GOS) (Jennett a Bond, 1975). Postup pre CSF a odber séra bol schválený Etickou komisiou Univerzitnej nemocnice Zurich.
Odber vzoriek a IL-18 analýza
CSF a zodpovedajúce vzorky séra CHI pacientov (n=10) boli odoberané denne v jednom pevnom časovom bode. Kontrolné CSF boli odoberané pacientom, ktorí podstúpili diagnostickú chrbticovú punkciu (n=5). Títo pacienti nemali znaky zápalovej CNS choroby, na základe normálnych CSF hodnôt bielkovín, glukózy a počty buniek (údaje nie sú uvedené). V CHI skupine bol odber vzoriek uskutočnený počas 10 dní po úraze, ak ventrikulárny katéter nebol odstránený skôr, napríklad v prípadoch, kde ICP zostal v normálnom rozsahu (< 15 mm Hg) počas viac než 24 hodín. Celkovo sa odobralo v tejto štúdii 106 zodpovedajúcich vzoriek CSF a séra u pacientov s úrazom. Všetky vzorky boli ihneď po odobratí centrifugované, rozdelené na alikvóty a zmrazené pri -70 °C až do analýzy. Kvantifikácia IL-18 hladín v CSF a sére bola uskutočnená pomocou ELISA testu špecifického pre ľudský IL-18 použitím komerčne dostupných kitov (R&D Systems, Abingdon, UK). Tak ako pri myšej skúške, citlivosť ELISA testu bola 5 pg/ml a konečná IL-18 koncentrácia bol vypočítaná z priemerného OD určeného z dvojíc opakovaných vzoriek pri vlnovej dĺžke absorpcie 405 nm. Pre porovnanie IL-18 CSF hladín medzi CHI pacientmi a kontrolnými pacientmi, všetky koncentrácie pod detekčný limit 5 pg/ml boli priradené hodnote 4,9 pg/ml.
Analýza údajov
Štatistická analýza údajov bola vykonaná na komerčne dostupnom softvéri
-32 (SPSS 9.0 pre Windows™). Neparametrický Mann-Whitney-U test bol použitý na analýzu údajov, ktoré neboli normálne rozdelené, ako napríklad neurologické skóre (NSS a ANSS). Nepárový Študentov t-test bol použitý na porovnanie intracerebrálnych IL-18 koncentrácií v rôznych skupinách myší a na analýzu rozdielov obsahu vody v mozgu u IL-18BP liečených myší oproti myšiam s injekciou vehikulá. Porovnanie ľudských IL-18 hladín, buď u denných CSF oproti, zodpovedajúcim vzorkám séra u CHI pacientov, alebo u pacientov s úrazom oproti, kontrolnej skupine CSF, bolo urobené použitím všeobecného lineárneho modelu pre opakované merania ANOVA. Za štatisticky významnú sa považovala p-hodnota <0,05.
Výsledky
Príklad 1
Intracerebrálne IL-18 hladiny u myší
Ako je uvedené na Obrázku 1, IL-18 bol detegovateľný pomocou ELISA testu v homogenátoch mozgu neliečených (normálnych”) kontrolných myší B6 kmeňa (n=10) s priemernou hladinou 27,7 ± 1,7 [± SEM] ng/ml. V experimentálnych skupinách, indukcia samotnou éterovou anestéziou alebo v kombinácii so simulovanou” operáciou (t.j. éterovou anestéziou a pozdĺžnym prerezaním skalpu), viedla k významne zvýšeným intrakraniálnym IL-18 hladinám 48,9 ±1,1 ng/ml (éterová” skupina, n=8) a 54,3 ± 2,7 ng/ml (simulovaná skupina, n=13), (p<0,01 oproti normálnym” myšiam, nepárový Študentov í-test; Obr. 1). Rozdiel medzi éterovo” a simulovane” liečenými zvieratami bol štatisticky nevýznamný (p=0,16).
V skupinu s úrazom (n=21) vyvolanie CHI viedlo k zvýšeným IL-18 hladinám aj v poranenej aj v kontralaterálnej hemisfére počas 4 hodín (60,6 ± 3,3 a 59,8 ± 5,0 ng/ml) až 24 hodín (56,9 ± 2,1 a 56,3 ± 3,7 ng/ml) po úraze, avšak hladiny boli nevýznamné vyššie v porovnaní s éterovou” alebo simulovanou” skupinou (p>0,05).
Oproti tomu, po 7 dňoch po CHI boli detegované významne zvýšené
-33intracerebrálne IL-18 koncentrácie v poranenej hemisfére v porovnaní s éterovoanestetizovanými alebo simulovane-operovanými zvieratami (67,6 ± 5,1 ng/ml oproti 42,2 ± 0,8 a 45,2 ± 0,5 ng/ml; p<0,01), kým IL-18 hladiny v kontralaterálnej hemisfére boli nevýznamné zvýšené nad hladiny dvoch kontrolných skupín (63,2 ± 6,0 ng/ml; p=0,06).
Aby sa vyhodnotila úloha TNF, rozhodujúceho mediátora zápalu v tomto modeli úrazu (Shohami a spol. 1999), s ohľadom na reguláciu intracerebrálnych IL18 hladín, bolo ďalšej skupine B6 myší (n=10) injektované i.c.v. 200 ng myšieho rekombinantného TNF v 10 μΙ sterilného PBS a boli usmrtené po 24 hodinách. Ako je uvedené na Obr. 1, simulovaná” injekcia len vehikulá (n=6) viedla k významnému nárastu intracerebrálneho IL-18 v priebehu 24 hodín v porovnaní s neliečenými normálnymi B6 myšami (53,6 ± 3,9 oproti 27,7 ± 1,7 ng/ml; p<0,001).
Injekcia TNF vyvolala významné utlmenie IL-18 hladiny v intrakraniálnom kompartmente v priebehu 24 hodín (22,1 ± 6,9 ng/ml; n=10) v porovnaní s kontrolnou skupinou po “simulovanej” injekcii v priebehu 24 hodín (53,6 ± 3,9 ng/ml; p<0,001). Hladiny IL-18 u “TNF skupiny” boli dokonca nižšie než u neliečených normálnych myší (27,7 ±1,7 ng/ml), hoci v tomto prípade rozdiel bol štatisticky nevýznamný (p=0,45).
Príklad 2
Účinok IL-18BP liečenia na neurologické zotavenie po úraze
Aby sa preskúmala hypotéza, že inhibícia IL-18 môže uľahčiť zotavenie poškodenia mozgu, porovnalo sa zotavenie v rôznych časových bodoch po jedinej injekcii IL-18BP. Už skôr bolo ukázané, že Skóre neurologickej závažnosti (NSS) po 1 hodine po úraze odráža najpresnejšie veľkosť úrazu a koreluje s objemom poraneného tkaniva, ako je vidno na MRI a v histológii.
Aby sa získala skupina zvierat s porovnateľným úrazom, boli myši priradené do rôzne liečených skupín po vyhodnotení ich počiatočného NSS po ŕ = 1 hodina. Ako je uvedené na Obr. 2 (NSS u IL-18BP (štvorčeky) oproti, kontrolnej skupine (krúžky), obe skupiny mali podobné počiatočné NSS (1 hodina) (7,69 ± 0,3023 a
-34 7,44 ± 0,3627 kontrolná skupina a IL-18BP), čo poukazuje porovnateľný rozsah poranenia.
Vyhodnotenie NSS v neskorších časoch (1 až 7 dni) ukázalo, že zvieratá liečené intraperitoneálne (i.p.) s IL-18BP vykazujú významne menšie neurologické poškodenie, ako je evidentné podľa NSS hodnôt, ktoré dosiahli štatistickú významnosť po 7 dňoch po úraze (p=0,045).
Vypočítala sa rýchlosť zotavenia vyjadrená ako ANSS (t) = NSS (1 hodina) - NSS (t). Vyššia hodnota ANSS odráža väčšie zotavenie a nula alebo negatívne ANSS odráža žiadne zotavenie alebo zhoršenie. Obr. 3 znázorňuje ANSS hodnoty týchto dvoch skupín. V dvoch časových bodoch, aj po 24 hodinách aj po 7 dňoch, rozdiel medzi priemernými ANSS hodnotami dosahoval štatistickú významnosť.
Uskutočnil sa ďalší experiment na preskúmanie toho, či liečenie s IL-18BP podávané po 3 dňoch po poranení môže byť účinné. Problém časovania liečenia je kritický a pri doterajšej terapii sa uvádza, že je účinná vtedy, keď sa podáva po niekoľko málo hodinách. Pretože sa zistilo, že IL-18 samotný stúpa počas 7 dní po úraze a liečenie s IL-18BP podané 1 hodinu po úraze vedie k najväčšiemu účinku tiež po dni 7, teraz bolo zvolené liečenie myší v deň 3 po poranení. Pre porovnanie boli ďalšie skupiny liečené po 1 hodine a po 3 dňoch s IL-18BP. Kontrolná skupina bola liečená len s rozpúšťadlom (vehikulom).
Výsledky tohto experimentu sú zobrazené na Obr. 4, z ktorého je jasné, že jediné liečenie podané v deň 3 je také účinné, ako liečenie podané jednu hodinu po CHI a znova po 3 dňoch.
Tento experiment demonštruje dramatický priaznivý účinok jednorázového podávania IL-18BP, buď daného 1 h alebo 3 dni po uzavretom poranení hlavy, na zotavenie z traumatického poranenia hlavy v experimentálnom modeli na myšiach.
Príklad 3
Zvýšenie IL-18 hladiny v ľudskej CSF po poškodení mozgu
IL-18 hladiny boli hodnotené denne vo vzorkách CSF a séra od 10 pacientov s ťažkým CHI počas 10 dní po úraze. Demografické a klinické údaje
-35pacientov sú uvedené v Tabuľke 5.
Tabuľka 5: Demografické a klinické údaje pacientov s ťažkým CHIa
| Pacient č. | Vek (roky)/- pohlavie | GCSb | GOSC | IL-18 v CSF 0 (pg/ml) | IL-18 v sére (pg/ml) medián [rozsah]6 | ||
| medián [ | rozsah]e | ||||||
| 1 | 48/m | 3 | 1 | 283 | [78-966] | 57,5 | [12-66] |
| 2 | 31 / m | 7 | 4 | 228,4 | [22-745] | 19,7 | [4,9-108] |
| 3 | 26/m | 5 | 3 | 208,5 | [20-392] | 37,2 | [14-163] |
| 4 | 57 / m | 5 | 4 | 72,6 | [30-286] | 48,9 | [14-104] |
| 5 | 24 / m | 4 | 5 | 32,6 | [4,9-155] | 17 | [4,9-58] |
| 6 | 36 /m | 8 | 1 | 49,4 | [10-290] | 16,7 | [12-67] |
| 7 | 38/f | 3 | 4 | 17,9 | [11-100] | 13 | [4,9-46] |
| 8 | 35/m | 3 | 3 | 69,8 | [4,9-329] | 19,8 | [7-77] |
| 9 | 37/m | 3 | 4 | 37 | [23-75] | 57,3 | [25-98] |
| 10 | 41 / m | 7 | 5 | 4,9 | h, 9-169] | 26,2 | [15-38] |
| Kontrolné CSF (n=5) | 4,9 | [4,9-7,8] |
aCHI, uzavreté poranenie hlavy bGCS, Glasgowská stupnica kómy (Teasdale a Jennett, 1974).
c GOS = Glasgowská stupnica následkov po 3 mesiacoch po poranení; 5 = asymptomatické, 4 = mierna neschopnosť, 3 = ažká neschopnosť, 2 = pretrvávajúci vegetatívny stav, 1 = smrť (Jennett a Bone, 1975).
dCSF = cerebrospinálna tekutina.
e IL-18 hladiny pod detekčnou medzou 5 pg/ml boli priradené hodnote 4,9 pg/ml.
Ako je uvedené v Tabuľke 5, intratekálne IL-18 hladiny boli významne zvýšené u 9/10 CHI pacientov, v porovnaní s kontrolnou CSF od 5 pacientov bez úrazu alebo zápalovej neurologickej choroby (p<0,05; opakované merania ANOVA). Len jeden pacient (č. 10) mal IL-18 CSF hladiny, ktoré boli nevýznamné zvýšené v porovnaní s kontrolnou CSF (p=0,31). Medián hladiny a individuálne rozsahy IL-18 v CSF a sére sú uvedené v Tabuľke 5.
-36 Je pozoruhodné, že maximálne IL-18 koncentrácie v CSF (966 ng/ml) boli do 200-krát vyššie u pacientov s poranením hlavy, než u kontrolnej skupiny. Intracerebrálny IL-18 bol detegovateľný pomocou ELISA testu u 90 % všetkých CSF vzoriek v skupine s úrazom, kým len 40 % kontrolných CSF vzoriek malo detegovateľné intracerebrálne IL-18 hladiny (t.j. > 4,9 ng/ml). U 8/10 CHI pacientov, medián IL-18 koncentrácii bol významne vyšší v CSF než v sére (p<0,05; opakované merania ANOVA). Avšak u dvoch pacient: v (č. 9, 10) medián IL-18 hladiny v sére presahoval zodpovedajúce koncentrácia v CSF, ako je uvedené v Tabuľke 5.
Tieto výsledky ukazujú, že existujú významne zvýšené hladiny IL-18 v cerebrospinálnej tekutine pacientov s traumatickým poranením hlavy. Dodanie IL18BP môže znížiť tieto zvýšené hladiny a môže teda vykázať priaznivý účinok na zotavenie z uzavretého poranenia hlavy, ako je uvedené v Príklade 2 vyššie.
-XOdkazy
1. Altschul S F a spol., J Mol Biol, 215, 403-410, 1990, Altschul S F a spol., Nucleic Acids Res., 25:389-3402, 1997
2. Chater, K. F. a spol., in Sixth International Symposium on Actinomycetales Biology, Akademiai Kaido, Budapest, Hungary (1986), str. 45-54).
3. Chen, Y., S. Constantini, V. Trembovler, M. Weinstock, and E. Shohami. 1996. An experimental model of closed head injury in mice: pathophysiology, histopathology, and cognitive deficits. J. Neurotrauma 13:557-68
4. Conti, C.B., N.Y. Calingasan, Y. Kim, H. kim, Y. Bae, E. Gibson, and T.H. Joh. 1999. Cultures of astrocytes and microglia express interleukin-18. Mol. Brain Res. 67:46-52
5. Conti, B., J. W. Jahng, C. Tinti, J. H. Son, and T. H. Joh. 1997. Induction of interferon-gamma inducing factor in the adrenal cortex. J. Biol. Chem. 272:2035-2037.
6. Culhane, A.C, M.D. Halí, N.J. Rothwell, and G.N. Luheshi. 1998. Cloning of rat brain interleukin-18 cDNA. Mol. Psychiatry 3:362-6
a. Devereux J a spol., Nucleic Acids Res, 12, 387-395,1984.
7. DiDonato, J A, Hayakawa, M, Rothwarf, D M, Zandi, E and Karin, M. (1997), Náture 388, 16514-16517.
8. Elliott, M.J., Maini, R.N., Feldmann, M., Long-Fox, A., Charles, P., Bijl, H., and Woody, J.N., 1994, Lancet 344, 1125-1127.
9. Fassbender, K., O. Mielke, T. Bertsch, F. Muehlhauser, M. Hennerici, M. Kurimoto, and S. Rossol. 1999. Interferon-y-inducing factor (IL-18) and interferon-γ in inflammatory CNS diseases. Neurology 53:1104-6
10. Jander, S., and G. Stoll. 1998. Differential induction of interleukin-12, interleukin-18, and interleukin-ΐβ coverting enzýme mRNA in experimental autoimmune encephalomyelitis of the Lewis rat. J. Neuroimmunol. 91:93-9
11. Lancet 1975 Mar 1;1 (7905):480-4. Jennett B, Bond M.
12. Izaki, K. (1978) Jpn. J. Bacteriol. 33:729-742).
13. Kim SH, Eisenstein M, Rezníkov L, Fantuzzi G, Novick D, Rubinstein M, Dinarello CA. Structural requirements of six naturally occurring isoforms of
3«?
-0the IL-18 binding protein to inhibit IL-18. Proc Natl Acad Sci U S A
2000;97:1190-1195.
14. Kossmann, T., P.F. Stahel, P.M. Lenzlinger, H. Redl, R.W. Dubs, O. Trentz, G. Schlag, and M.C. Morganti-Kossmann. 1997. lnterleukin-8 released into the cerebrospinal fluid after brain injury is associated with blood brainbarrier dysfunction and nerve growth factor production. J. Cereb. Blood Flow Metab. 17:280-9
15. Knight DM, Trinh H, Le J, Siegel S, Shealy D, McDonough M, Scallon B, Moore MA, Vilcek J, Daddona P, a spol., Construction and initial characterization of a mouse-human chimeric anti-TNF antibody.Mol Immunol 1993 Nov 30:16 1443-53
16. Maliszewski, C. R., T. A. Sato, T. Vanden Bos, S. Waugh, S. K. Dower, J. Slack, M. P. Beckmann, and K. H. Grabstein. 1990. Cytokine receptors and B celí functions. I. Recombinant soluble receptors specifically inhibit IL-1and IL-4-induced B celí activities in vitro. J. Immunol. 144:3028-3033.
17. Micallef, M. J., T. Ohtsuki, K. Kohno, F. Tanabe, S. Ushio, M. Namba, T. Tanimoto, K. Torigoe, M. Fujii, M. Ikeda, S. Fukuda, and M. Kurimoto. 1996. Interferon-gamma-inducing factor enhances T helper 1 cytokine production by stimulated human T celíš: synergism with interleukin-12 for interferongamma production. Eur-J-Immunol 26:1647-51 issn: 0014-2980.
18. Morganti-Kossmann, M.C., P.M. Lenzlinger, V. Hans, P. Stahel, E. Csuka, E. Ammann, R. Stocker, O. Trentz, and T. Kossmann. 1997. Production of cytokines following brain injury: beneficial and deleterious for the damaged tissue. Mol. Psychiatry 2:133-6
19. Nakamura K, Okamura H, Wada M, Nagata K, Tamura T. Infect Immun 1989 Feb;57(2):590-5
20. Novick, D, Kim, S-H, Fantuzzi, G, Rezníkov, L, Dinarello, C, and Rubinstein, M (1999). Immunity 10, 127-136.
21. Okamura H, Nagata K, Komatsu T, Tanimoto T, Nukata Y, Tanabe F, Akita K, Torigoe K, Okura T, Fukuda S, a spol., Infect Immun 1995 Oct;63(10):3966-72
22. Parnet, P, Garka, K E, Bonnert, T P, Dower, S K, and Sims, J E. (1996), J.
Biol. Chem. 271, 3967-3970.
a. Pearson W R, Methods in Enzymology, 183, 63-99, 1990
b. Pearson W R and Lipman D J, Proc Nat Acad Sci USA, 85, 24442448,1988
23. Prinz, M., and U.K. Hanisch. 1999. Murine microglial celíš pradúce and respond to interleukin-18. J. Neurochem. 72:2215-8
24. J Clin Invest 1997 Feb 1 ;99(3):469-74 Rothe H, Jenkins NA, Copeland NG, Kôlb H.
25. Scherbel, U., R. Raghupathi, M. Nakamura, K.E. Saatman, J.Q. Trojanowski, E. Neugebauer, M.W. Marino, and T.K. Mclntosh. 1999. Differential acute and chronic responses of tumor necrosis factor-deficient mice to experimental brain injury. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 96:8721-6
26. Shohami, E., I. Ginis, and J.M. Hallenbeck. 1999. Dual role of tumor necrosis factor alpha in brain injury. Cytokine Growth Factor Rev. 10:119-30
27. Shohami, E; Beit-Yannai E., Horowitz M; Kohen R (1997): J. Cereb. Blood FlowMetab. 17, 1007-1019.
28. Teasdale G, Jennett B. Lancet 1974 Jul 13;2(7872):81 -4
29. Stahel PF, Shohami E, Younis FM, Kariya K, Otto VI, Lenzlinger PM, Grosjean MB, Eugster HP, Trentz O, Kossmann T, Morganti-Kossmann MC.J Cereb Blood Flow Metab 2000 Feb;20(2):369-80
30. Ushio S, Namba M, Okura T, Hattori K, Nukada Y, Akita K, Tanabe F, Konishi K, Micallef M, Fujii M, Torigoe K, Tanimoto T, Fukuda S, Ikeda M, Okamura H, Kurimoto M. J Immunol 1996 Jun 1 ;156(11):4274-9
31. Wheeler, R.D., A.C. Culhane, M.D. Halí, S. Pickering-Brown, N.J. Rothwell, and G.N. Luheshi. 2000. Detection of the interleukin-18 family in rat brain by RT-PCR. Mol. Brain Res. 77:290-3
32. Whalen, M.J., T.M. Carlos, P.M. Kochanek, S.R. Wisniewski, M.J. Bell, R.S. Clark, S.T. DeKosky, D.W. Marion, and P.D. Adelson. 2000. lnterleukin-8 is increased in cerebrospinal fluid of children with severe head injury. Crit. Čare Med. 28:929-34
33.Yoshimoto T, Takeda, K, Tanaka, T, Ohkusu, K, Kashiwamura, S, Okamu-ra, H, Akira, S and Nakanishi, K (1998), J. Immunol. 161,3400-3407.
Claims (32)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Použitie IL-18 inhibítora na výrobu lieku na liečenie a/alebo prevenciu poškodenia centrálneho nervového systému - CNS.
- 2. Použitie IL-18 inhibítora na výrobu lieku na liečenie a/alebo prevenciu komplikácií a neskorých účinkov CNS poranenia.
- 3. Použitie podľa nároku 1 alebo 2, kde CNS poškodením je traumatické poškodenie mozgu.
- 4. Použitie podľa ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, kde CNS poškodením je uzavreté poranenie hlavy.
- 5. Použitie podľa nároku 1 alebo 2, kde CHS poškodením je poranenie miechy.
- 6. Použitie podľa ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, kde CNS poškodenie má vaskulárny pôvod.
- 7. Použitie podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 6, kde inhibítor IL-18 je vybraný z inhibítorov caspázy-1 - ICE, protilátok proti IL-18, protilátok proti akejkoľvek zo subjednotiek IL-18 receptora, inhibítorov IL-18 signálneho mechanizmu, antagonistických látok IL-18, ktoré konkurujú IL-18 a blokujú IL-18 receptor, a na IL-18 viažucich sa bielkovín, ich izoforiem, muteínov, kondenzovaných bielkovín, funkčných derivátov, aktívnych frakcií alebo cirkulačné permutovaných derivátov alebo solí.
- 8. Použitie podľa nároku 7, kde inhibítorom IL-13 je IL-18 protilátka.
- 9. Použitie podľa nároku 8, kde IL-18 protilátkou je humanizovaná IL-18 protilátka.v
- 10. Použitie podľa nároku 8 alebo 9, kde IL-18 protilátkou je ľudská IL-18 protilátka.
- 11. Použitie podľa nároku 7, kde inhibítorom IL-18 je IL-18 viažuca bielkovina, alebo jej soľ, izoforma, muteín, kondenzovaná bielkovina, funkčný derivát, aktívna frakcia alebo cirkulačné permutovaný derivát.
- 12. Použitie podľa ktoréhokoľvek z nárokov 7 až 11, kde inhibítor IL-18 je glykozylovaný na jednom alebo viacerých miestach.
- 13. Použitie podľa ktoréhokoľvek z nárokov 7 až 12, kde kondenzovaná bielkovina zahrnuje imunoglobulínový (Ig) konjugát.
- 14. Použitie podľa ktoréhokoľvek z nárokov 7 až 13, kde funkčný derivát zahrnuje najmenej jednu skupinu naviazanú na jednu alebo viaceré funkčné skupiny, ktoré sa vyskytujú ako jeden alebo viaceré bočné reťazce na aminokyselinových zvyškoch.
- 15. Použitie podľa nároku 14, kde uvedenou skupinou je polyetylénglykolová (PEG) skupina.
- 16. Použitie podľa ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, kde liek ďalej zahrnuje interferón, pre simultánne, sekvenčné alebo oddelené použitie.
- 17. Použitie podľa nároku 15, kde uvedeným hterferónom je interferón-a alebo interferón-β.
- 18. Použitie podľa ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, kde liek ďalej zahrnuje faktor nekrotizujúci tumory - TNF, r,a simultánne, sekvenčné alebo oddelené použitie.w
- 19. Použitie podľa nároku 18, kde uvedeným TNF je TNF alfa.
- 20. Použitie podľa ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, kde liek ďalej zahrnuje protizápalové činidlo, na simultánne, sekvenčné alebo oddelené použitie.
- 21. Použitie podľa nároku 20, kde proť,zápalovým činidlom je COXinhibítor, zvlášť COX-2 inhibítor.
- 22. Použitie podľa ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, kde liek ďalej zahrnuje antioxidant na simultánne, sekvenčné alebo oddelené použitie.
- 23. Použitie podľa ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, kde účinné množstvo inhibítora IL-18 je asi 0,001 až 100 mg/kg telesnej hmotnosti, alebo asi 0,01 až 10 mg/kg telesnej hmotnosti alebo asi 0,1 až 5 mg/kg telesnej hmotnosti alebo asi 1 až 3 mg/kg telesnej hmotnosti.
- 24. Použitie podľa ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, kde IL-18 inhibítor je vo forme na subkutánne podanie.
- 25. Použitie podľa ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, kde IL-18 inhibítor je na denné podanie.
- 26. Použitie podľa ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, kde IL-18 inhibítor sa podáva každý druhý deň.
- 27. Použitie molekuly nukleovej kyseliny, ktorá obsahuje kódujúcu sekvenciu inhibítora IL-18 na výrobu lieku na liečenie a/alebo prevenciu CNS poškodenia.
- 28. Použitie podľa nároku 27, kde molekula nukleovej kyseliny ďalej obsahuje sekvenciu vektora expresie.tt
- 29. Použitie podľa nároku 27 alebo 28, kde uvedená molekula nukleovej kyseliny je vo forme na intramuskulárne podanie.
- 30. Použitie vektora na indukovanie a/alebo na zvýšenie endogénnej tvorby inhibítora IL-18 v bunke na výrobu lieku na liečenie a/alebo prevenciu CNS poškodenia.
- 31. Použitie bunky, ktorá bola geneticky modifikovaná na výrobu inhibítora IL-18, na výrobu lieku na liečenie a/alebo prevenciu CNS poškodenia.
- 32. Použitie IL-8 inhibítora na výrobu lieku otcahujúceho účinné množstvo IL-8 inhibítora na liečenie a/alebo prevenciu CNS poškodenia u osôb, ktoré to potrebujú.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP01112067 | 2001-05-25 | ||
| PCT/EP2002/005666 WO2002096456A1 (en) | 2001-05-25 | 2002-05-23 | Use of il-18 inhibitors for treating or preventing cns injuries |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SK16032003A3 true SK16032003A3 (sk) | 2004-05-04 |
| SK288413B6 SK288413B6 (sk) | 2016-10-03 |
Family
ID=8177454
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SK1603-2003A SK288413B6 (sk) | 2001-05-25 | 2002-05-23 | Použitie proteínu viažuceho IL-18 |
Country Status (30)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7655616B2 (sk) |
| EP (1) | EP1390070B1 (sk) |
| JP (1) | JP4344142B2 (sk) |
| KR (1) | KR20040030625A (sk) |
| CN (1) | CN1305529C (sk) |
| AU (1) | AU2002314103B2 (sk) |
| BG (1) | BG66395B1 (sk) |
| BR (1) | BR0210007A (sk) |
| CA (1) | CA2445664C (sk) |
| CY (1) | CY1119190T1 (sk) |
| CZ (1) | CZ307321B6 (sk) |
| DK (1) | DK1390070T3 (sk) |
| EA (1) | EA006744B1 (sk) |
| EE (1) | EE05263B1 (sk) |
| ES (1) | ES2617084T3 (sk) |
| HK (1) | HK1069762A1 (sk) |
| HR (1) | HRP20030842B1 (sk) |
| HU (1) | HU230294B1 (sk) |
| IL (2) | IL159014A0 (sk) |
| LT (1) | LT1390070T (sk) |
| ME (1) | ME00550B (sk) |
| MX (1) | MXPA03010743A (sk) |
| NO (1) | NO331882B1 (sk) |
| PL (1) | PL216228B1 (sk) |
| PT (1) | PT1390070T (sk) |
| RS (1) | RS56006B1 (sk) |
| SK (1) | SK288413B6 (sk) |
| UA (1) | UA80396C2 (sk) |
| WO (1) | WO2002096456A1 (sk) |
| ZA (1) | ZA200308172B (sk) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2384241T3 (es) | 2003-05-13 | 2012-07-02 | Merck Serono Sa | Variantes activas de la proteína que fija IL-18 y usos médicos de las mismas |
| EP2177907B1 (en) * | 2004-06-30 | 2014-01-01 | Atsuo Sekiyama | Indicator agent for noninflammatory stress response and use therefor |
| ES2376534T3 (es) * | 2005-06-03 | 2012-03-14 | Merck Serono Sa | Uso de isoformas de il-18bp para el tratamiento y/o prevención de enfermedades inflamatorias neurológicas. |
| PL1885753T3 (pl) | 2005-06-03 | 2011-12-30 | Ares Trading Sa | Wytwarzanie rekombinowanego białka wiążącego IL-18 |
| PT1891088E (pt) | 2005-06-10 | 2011-12-19 | Ares Trading Sa | Processo para a purificação da proteína de ligação il-18 |
| US8685400B2 (en) | 2007-07-30 | 2014-04-01 | University Of Miami | Modulating inflammasome activity and inflammation in the central nervous system |
| AU2014317035B2 (en) | 2013-09-05 | 2020-02-27 | Ab2 Bio Sa | IL-18 binding protein (IL-18BP) in inflammatory diseases |
| CN107660150B (zh) | 2015-03-05 | 2023-10-24 | Ab2生物股份有限公司 | Il-18结合蛋白(il-18bp)和抗体在炎性疾病中 |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0873453A (ja) * | 1994-09-02 | 1996-03-19 | Otsuka Pharmaceut Co Ltd | サイトカイン阻害剤 |
| IL121860A0 (en) * | 1997-08-14 | 1998-02-22 | Yeda Res & Dev | Interleukin-18 binding proteins their preparation and use |
| ATE296812T1 (de) * | 1998-03-09 | 2005-06-15 | Vertex Pharma | 1,2-diazepanderivate als inhibitoren des interleukin-1beta umwandelnden enzyms |
| CA2276216A1 (en) * | 1998-06-24 | 1999-12-24 | Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo | An artificial peptide capable of neutralizing the biological activity of interleukin-18 |
| EA007014B1 (ru) * | 2000-05-05 | 2006-06-30 | Апплайд Резеч Системз Арс Холдинг Н.В. | Применение il-18 в качестве диагностического маркера |
| AU2001266289A1 (en) * | 2000-06-23 | 2002-01-02 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | 2-arachidonylglycerol (2-ag) - an inhibitor of tumor necrosis factor -alfa and neuroprotector of brain in closed head injury |
| WO2002032374A2 (en) * | 2000-10-18 | 2002-04-25 | Immunex Corporation | Methods for treating il-18 mediated disorders |
| US6671553B1 (en) * | 2001-05-23 | 2003-12-30 | Pacesetter, Inc. | Implantable cardiac lead having terminating connector strain relief and method of manufacture |
-
2002
- 2002-05-23 BR BR0210007-0A patent/BR0210007A/pt not_active Application Discontinuation
- 2002-05-23 MX MXPA03010743A patent/MXPA03010743A/es active IP Right Grant
- 2002-05-23 AU AU2002314103A patent/AU2002314103B2/en not_active Expired
- 2002-05-23 WO PCT/EP2002/005666 patent/WO2002096456A1/en active IP Right Grant
- 2002-05-23 PT PT2740641T patent/PT1390070T/pt unknown
- 2002-05-23 HU HU0304067A patent/HU230294B1/hu unknown
- 2002-05-23 PL PL367545A patent/PL216228B1/pl unknown
- 2002-05-23 DK DK02740641.2T patent/DK1390070T3/en active
- 2002-05-23 ME MEP-2008-618A patent/ME00550B/me unknown
- 2002-05-23 LT LTEP02740641.2T patent/LT1390070T/lt unknown
- 2002-05-23 EE EEP200300582A patent/EE05263B1/xx unknown
- 2002-05-23 SK SK1603-2003A patent/SK288413B6/sk not_active IP Right Cessation
- 2002-05-23 CN CNB028147510A patent/CN1305529C/zh not_active Expired - Lifetime
- 2002-05-23 CA CA2445664A patent/CA2445664C/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-05-23 CZ CZ2003-3268A patent/CZ307321B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2002-05-23 EA EA200301299A patent/EA006744B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2002-05-23 KR KR10-2003-7015310A patent/KR20040030625A/ko active Search and Examination
- 2002-05-23 US US10/478,614 patent/US7655616B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-05-23 ES ES02740641.2T patent/ES2617084T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-05-23 IL IL15901402A patent/IL159014A0/xx unknown
- 2002-05-23 UA UA20031212328A patent/UA80396C2/uk unknown
- 2002-05-23 RS YU89403A patent/RS56006B1/sr unknown
- 2002-05-23 EP EP02740641.2A patent/EP1390070B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-05-23 JP JP2002592965A patent/JP4344142B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
2003
- 2003-10-17 HR HRP20030842AA patent/HRP20030842B1/hr not_active IP Right Cessation
- 2003-10-21 ZA ZA200308172A patent/ZA200308172B/xx unknown
- 2003-11-20 NO NO20035160A patent/NO331882B1/no not_active IP Right Cessation
- 2003-11-23 IL IL159014A patent/IL159014A/en active IP Right Grant
- 2003-12-15 BG BG108451A patent/BG66395B1/bg unknown
-
2004
- 2004-12-31 HK HK04110391A patent/HK1069762A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2017
- 2017-05-08 CY CY20171100494T patent/CY1119190T1/el unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR100877033B1 (ko) | 패혈증의 치료 또는 예방을 위한 ｉｌ-18 저해물질의 용도 | |
| AU2001267390B2 (en) | Use of IL-18 inhibitors for the treatment and/or prevention of atherosclerosis | |
| US7696154B2 (en) | Methods for treating interleukin-18 mediated disorders with interleukin-18 binding proteins | |
| NZ520122A (en) | Use of IL-18 inhibitors | |
| US7704944B2 (en) | Interleukin-18 binding proteins, their preparation and use for the treatment of sepsis | |
| AU2001267390A1 (en) | Use of IL-18 inhibitors for the treatment and/or prevention of atherosclerosis | |
| US7655616B2 (en) | Use of IL-18 inhibitors for treating head injuries | |
| AU2002314103A1 (en) | Use of IL-18 inhibitors for treating or preventing CNS injuries | |
| AU2002309887B2 (en) | Use of IL-18 inhibitors for the treatment or prevention of sepsis | |
| AU2002309887A1 (en) | Use of IL-18 inhibitors for the treatment or prevention of sepsis |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MK4A | Patent expired |
Expiry date: 20220523 |