FI85490B - Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbara inositoltrifosfat. - Google Patents

Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbara inositoltrifosfat. Download PDF

Info

Publication number
FI85490B
FI85490B FI854126A FI854126A FI85490B FI 85490 B FI85490 B FI 85490B FI 854126 A FI854126 A FI 854126A FI 854126 A FI854126 A FI 854126A FI 85490 B FI85490 B FI 85490B
Authority
FI
Finland
Prior art keywords
triphosphate
myoinositol
cadmium
inositol
process according
Prior art date
Application number
FI854126A
Other languages
English (en)
Swedish (sv)
Other versions
FI85490C (fi
FI854126L (fi
FI854126A0 (fi
Inventor
Matti Siren
Original Assignee
Perstorp Ab
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Perstorp Ab filed Critical Perstorp Ab
Publication of FI854126A0 publication Critical patent/FI854126A0/fi
Publication of FI854126L publication Critical patent/FI854126L/fi
Application granted granted Critical
Publication of FI85490B publication Critical patent/FI85490B/fi
Publication of FI85490C publication Critical patent/FI85490C/fi

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/06—Phosphorus compounds without P—C bonds
    • C07F9/08—Esters of oxyacids of phosphorus
    • C07F9/09—Esters of phosphoric acids
    • C07F9/117—Esters of phosphoric acids with cycloaliphatic alcohols
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A21—BAKING; EDIBLE DOUGHS
    • A21D—TREATMENT, e.g. PRESERVATION, OF FLOUR OR DOUGH, e.g. BY ADDITION OF MATERIALS; BAKING; BAKERY PRODUCTS; PRESERVATION THEREOF
    • A21D2/00—Treatment of flour or dough by adding materials thereto before or during baking
    • A21D2/08—Treatment of flour or dough by adding materials thereto before or during baking by adding organic substances
    • A21D2/30—Organic phosphorus compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23B—PRESERVING, e.g. BY CANNING, MEAT, FISH, EGGS, FRUIT, VEGETABLES, EDIBLE SEEDS; CHEMICAL RIPENING OF FRUIT OR VEGETABLES; THE PRESERVED, RIPENED, OR CANNED PRODUCTS
    • A23B7/00—Preservation or chemical ripening of fruit or vegetables
    • A23B7/14—Preserving or ripening with chemicals not covered by groups A23B7/08 or A23B7/10
    • A23B7/153—Preserving or ripening with chemicals not covered by groups A23B7/08 or A23B7/10 in the form of liquids or solids
    • A23B7/154—Organic compounds; Microorganisms; Enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L29/00—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
    • A23L29/03—Organic compounds
    • A23L29/05—Organic compounds containing phosphorus as heteroatom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L3/00—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs
    • A23L3/34—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs by treatment with chemicals
    • A23L3/3454—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs by treatment with chemicals in the form of liquids or solids
    • A23L3/3463—Organic compounds; Microorganisms; Enzymes
    • A23L3/3553—Organic compounds containing phosphorus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/66—Phosphorus compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/24—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing atoms other than carbon, hydrogen, oxygen, halogen, nitrogen or sulfur, e.g. cyclomethicone or phospholipids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A61P39/02—Antidotes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P9/00—Preparation of organic compounds containing a metal or atom other than H, N, C, O, S or halogen

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)

Description

1 85490
Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten inositolitri-fosfaattien valmistamiseksi
Keksinnön kohteena on menetelmä terapeuttisesti 5 käyttökelpoisten inositolitrifosfaattien (IP3) valmistamiseksi, jotka kuuluvat ryhmään, jonka muodostavat D-myo-inositoli-1,2,6-trifosfaatti, D-myoinositoli-1,2,5-tri-fosfaatti, L-myoinositoli-1,3,4-trifosfaatti ja myoinosi-toli-1,2,3-trifosfaatti, joko happo- tai suolamuodossa.
10 Ainakin yhtä tällaista yhdistettä sisältävät farmaseuttiset koostumukset sopivat sellaisten tilojen, joita aiheuttaa tai pahentaa kadmiumin tai alumiinin tai vapaiden radikaalien esiintyminen elimistössä, hoitamiseen tai lievittämiseen.
15 Menetelmiä IP3:n ja sen isomeerien tuottamiseksi esitetään hakijan samanaikaisesti jätetyssä patenttihakemuksessa FI-854127, jolle on myönnetty patentti 82 474.
Jo niin varhain kuin vuonna 1900 eri tutkijat tiedottivat orgaanisen fosfaattiyhdisteen, fytiinihapon, so. 20 1,2,3,4,5,6-heksakis(divetyfosfaatti)myoinositolin (jota joskus kutsutaan inositoliheksafosforihapoksi), löytämisestä kasveista. Eri kasvien fytiinihapposisältö vaihte-lee huomattavasti. Jyvissä pitoisuus on tavallisesti noin 0,5 - 2 % määrätyin poikkeuksin. Kiillotetussa riisissä 25 taso on vain 0,1 %, kun taas intiaaniriisi sisältää niinkin paljon kuin 2,2 % fytiinihappoa. Pavut sisältävät noin 0,4 - 2 %, öljykasvit noin 2 - 5 % ja siitepöly 0,3 - 2 % fytiinihappoa. Fytiinihappopitoisuus vaihtelee kasveissa kasvukauden aikana. Pitoisuuteen vaikuttaa myös 30 muun muassa ilmasto.
Kirjallisuudessaon selostuksia inositolipentafos-faatin (IP5) ja inositolitetrafosfaatin (IP4) esiintymisestä muutamissa kasveissa. Lisäksi tiedetään, että : IP6:ta alempia fosfaattijohdannaisia muodostuu jyvien 35 idätyksessä. Esimerkiksi lopputuotteita idätyksessä ovat inositoli ja fosfaatti. IP6:n käyttöä on kuvattu useissa 2 85490 tieteellisissä julkaisuissa. Enemmistö näiden artikkelien kirjoittajista on havainnut useita negatiivisia vaikutuksia ihmisissä ja eläimissä IP6:ta tai aineita, jotka sisältävät IP6:ta, nautittaessa. Koirien ruokkiminen liian 5 suurella IP6-määrällä aiheuttaa esimerkiksi riisitautia. Ihmisissä on havaittu sinkin puutetta ja sen seurauksena lasten hitaampaa kasvua. Anemiaa on havaittu pääasiassa naisilla. Edellä mainittujen, ihmisten ja eläinten mine-raalitasapainoon kohdistuvien negatiivisten vaikutusten 10 vuoksi on toistaiseksi pyritty vähentämään IP6:n ja sen johdannaisten nauttiminen minimiin.
Chemical Abstractsissa (Voi. 33 (19 39), tiivistelmä n:o 7351, n:o 3/4) on kerrottu fosfaattien, mukaan luettuina inositolifosfaatit, käytöstä riisitautia ehkäi-15 sevänä ravintona. Yksittäisistä inositolifosfaateista ei mainita mitään kuten ei myös kompleksoitumisesta metallien kanssa.
US-patenttijulkaisu 4 473 563 kuvaa punasolujen käsittelemistä kehon ulkopuolella inositolifosfaattien 20 sisällyttämiseksi niihin hapen saannin parantamiseksi. Punasolut erotetaan tällöin verestä, joka on pumpattu ulos kehosta kyseistä tarkoitusta varten. Monimutkaisen käsittelyn jälkeen punasolut palautetaan vereen. Inositolifosfaattien antamisesta suoraan kehoon ei mainita mi-25 tään. Lisäksi siinä ei ole mainittu mitään kadmiumin kehossa aikaansaaman negatiivisen vaikutuksen vähentämisestä tai kehossa tapahtuvan vapaiden radikaalien muodostumisen ehkäisemisestä sopivasti valitun inositolifosfaatin avulla.
30 US-patenttijulkaisussa 2 723 938 selostetaan ino sitolifosfaattien käyttöä dispersioiden stabilointiin penisilliinin vesisuspensioissa. Tämä varmistaa sen, että lyhyt ja yksinkertainen ravistus käsin palauttaa penisilliinin täydellisesti ja tasaisesti dispergoituneeseen ti-35 laan pitkäaikaisen varastoinnin jälkeen.
Kadmium on todettu haitalliseksi ihmisen tervey- 3 85490 delle. Vaikka tätä metallia esiintyykin ympäristössämme yleensä vähän, se kadmiummäärä, jolle me joudumme alttiiksi, riippuu monista seikoista. Kadmiumin esiintyminen maaperässä samoin kuin sen saatavuus siitä vaihtelee 5 eri alueiden kesken siirtymisen kasveihin ollessa suhteellisen suurta sellaisten kasvien tapauksessa, jotka kasvavat alueilla, joilla maaperän pH on suhteellisen alhainen. Teollisen toiminnan, pääasiassa metallien käsittelyn, tuloksena kadmiumia voi päästä ilmaan, maaperään 10 ja veteen. Kasvit absorboivat maaperässä olevaa kadmiumia, ja näin kadmiumia voi joutua ihmisten ja eläinten ravintoon. Tärkeimmät tavat, joilla kadmiumille joudutaan alttiiksi, ovat tupakoinnin kautta, ravinnon kautta ja jossakin määrin juomaveden kautta.
15 Kadmium absorboituu pääasiassa suolistossa ja keuhkojen kautta, vaikkakin vain pieni osa ravinnon sisältämästä kadmiumista absorboituu. Keskimääräisen, ravinnon kautta tapahtuvan kadmiumin saannin arvioidaan olevan noin 50 pg vuorokaudessa useimmissa maissa, mutta 20 eri maantieteellisten alueiden ja eri yksilöiden kesken esiintyy suurta vaihtelua. Tupakoijista saadut tiedot osoittavat, että jopa 50 % sisäänhengitetystä kadmiumista voi absorboitua. Useat tutkimukset osoittavat tupakoijilla esiintyvän kaksinkertaisia kadmiumpitoisuuksia veressä 25 ja elimissä verrattuna tupakoimattomiin. Kadmiumin erittyminen ihmisruumiista on hidasta, ja puoliintumisajaksi on ilmoitettu 10 - 30 vuotta. Tämä merkitsee sitä, että kadmiumia akkumuloituu kehoon. Pääosa, 80 - 90 %, akkumu-loituneesta kadmiumista sitoutuu erääseen proteiiniin, 30 metallotioneiiniin, pääasiassa maksassa ja munuaisissa. Metallotioneiinin muodostumisen saavat aikaan metallit, pääasiassa sinkki ja kadmium. Kadmiumin sitoutuminen metallotioneiiniin on erittäin luja ja johtaa kadmiumin myrkyllisyyden häviämiseen. Loppuosa kadmiumista, so. me-35 tallotioneiiniin sitoutumaton kadmium, on jakautunut kehossa muiden elinten kesken; suhteellisen korkeita pitoi- 4 C5490 suuksia esiintyy suolistossa, keuhkoissa (erityisesti tupakoijilla), verenkiertoelimistössä (sydämessä, valtimoiden seinämissä, pernassa) ja rauhasissa, kuten haimassa ja eturauhasessa.
5 Mitä haitallisiin vaikutuksiin tulee, tiedetään, että kadmium voi vaikuttaa haitallisesti kehon elastiini-elastaasi j Mr j es telinään. On myös tunnettua, että kadmium voi vaikuttaa haitallisesti useisiin eri entsyymeihin kehossa, joista entsyymeistä ovat esimerkkejä Na+, K+ 10 (Mg2+)-ATP-aasi ja Ca2*, Mg2*-ATP-aasi, jotka ovat tärkei tä ionikuljetusjärjestelmissä. Lisäesimerkkejä ovat syto-kromi-P450-entsyymit, jotka hydrolysoivat steroideja, rasvahappoja, aromaattisia yhdisteitä ja toksisia yhdisteitä. Muita tärkeitä entsyymejä, joita kadmium inhiboi, 15 ovat glutationiperoksidaasi ja peroksididismutaasi, jotka suojäavat peroksidaatiolta. Kadmium inhiboi myös sinkki-riippuvaisia entsyymejä, kuten leusiiniaminopeptidaasia.
Suurella määrällä eläinkokeita monien vuosien aikana saadut tulokset osoittavat negatiivisia vaikutuksia 20 esiintyvän jopa hyvin alhaisilla kadmiumtasoilla. Tämä merkitsisi sitä, että suuri osa väestöstä kärsii haitallisista vaikutuksista, ja ennen kaikkea tämä pätee tupakoijiin. Epidemiologiset tutkimukset osoittavat syövän, korkean verenpaineen ja kardiovaskulaaristen sairauksien 25 (esimerkiksi arterioskleroosin, sydäninfarktin ja sydämestä aiheutuvan äkillisen kuoleman) esiintymisen ja kadmiumin ympäristössä esiintymisen välillä yhteyden. Kadmiumille alttiiksi joutuminen tuntuu myös olevan yksi vanhemman iän sokeritaudin riskiä lisäävä tekijä.
30 On myös olemassa tutkimuksia, jotka osoittavat, että kadmiumilla voi olla haitallisia vaikutuksia munuaisiin, keuhkoihin (fibroosi, emfyseema, syöpä), verisuonien seinämiin (rasvan kerrostuminen, arterioskleroosi, suonten seinämien kontraktio, kimmoisuus, endoteelille 35 aiheutuvat vauriot), prostasykliinin tuotantoon, eturauhaseen, sydämeen (johtumisjärjestelmään, supistusvoi- 5 85490 maan), istukkaan, kiveksiin ja keskushermostoon. Kadmium voi myös saada aikaan vapaiden radikaalien muodostumista ja aiheuttaa siten lipidien peroksidaatiota, joka saattaa olla merkityksellistä muiden sairauksien, kuten reuman, 5 synnyssä. Allergioita ja bronkiitti voidaan myös yhdistää kadmiumille alttiinaoloon. Tietämys kadmiumin haitallisista vaikutuksista ihmisiin ja eläimiin on lisääntynyt huomattavasti viime vuosikymmeninä.
Huolimatta siitä monivuotisesta, hyvin intensii-10 visestä tutkimustyöstä, jonka päämääränä on ollut edellä mainittujen kadmiumin negatiivisten vaikutusten ehkäisy ja/tai edellä mainittujen kadmiumin aiheuttamien ongelmien, joissa monesti on kysymys hyvin vakavista sairauksista, ehkäisy tai lievittäminen, yhtään hyvää hoitokei-15 noa, jolla ei olisi sivuvaikutuksia, ei tähän mennessä ole löydetty.
Alumiini on viime aikoina tiedostettu terveysriskiksi. Dialyysipotilailla alumiini aiheuttaa tylsistymistä ja osteomalasiaa (luunpehmenemistautia).
20 Pidetään mahdollisena, että alumiini saattaa ai heuttaa monenlaisia poikkeavuuksia, kuten Alzheimerin tautia ihmisissä. On myös olemassa tutkimuksia, jotka osoittavat alumiinin voivan aiheuttaa monenlaisia tauteja eläimissä. Alumiini voi myös lisätä lipidien peroksi-25 daatiota biologisissa membraaneissa, todennäköisesti des-tabiloimalla membraanien rakennetta. Samoin kuin kadmiumin tapauksessa alumiiniin yhteydessä oleviin sairauksiinkaan ei ole tähän mennessä löydetty hyvää hoitokeinoa, jolla ei olisi sivuvaikutuksia.
30 Tämän keksinnön mukaisesti on aivan yllättävästi todettu mahdolliseksi tarjota ratkaisu edellä mainittuihin, kadmiumin, alumiinin ja vapaiden radikaalien ihmisissä ja eläimissä aiheuttamiin haitallisiin vaikutuksiin ja siten myös ehkäistä tai lievittää niihin yhteydessä 35 olevia sairauksia. On saatu aikaan farmaseuttinen koostumus, joka sisältää farmaseuttisesti aktiivisena aineosana 6 85490 ainakin yhtä inositolitrifosfaatti-isomeeria (IP3-isomee-ria), edullisesti suolamuodossa. Inositolitrifosfaattien sisältävä koostumus on tarkoitettu pääasiassa kadmiumin ja alumiinin elimistöönsaannin synnyttämien, indusoimien 5 tai edistämien tilojen ehkäisyyn tai lievittämiseen sekä kadmiumiin ja alumiiniin yhteydessä olevien sairauksien estämiseen tai lievittämiseen. Koostumus on lisäksi tarkoitettu myös sellaisten sairauksien, jotka ovat yhteydessä vapaiden radikaalien esiintymiseen kehossa, ehkäi-10 syyn tai lievittämiseen.
Esimerkkeinä sairauksista, joiden ehkäisemiseen tai lievittämiseen tämän keksinnön mukaisesti valmistettu IP3 soveltuu, mainittakoon silmän eri osille, kuten verk-kokalvokudokselle ja mykiölle, aiheutuvat vauriot, bron-15 kiitti, artriitti, proliferatiiviset solumuutokset, syö pä, korkea verenpaine, kardiovaskulaariset sairaudet, vanhemman iän sokeritauti, solumembraanivaurio, istukka-vaurio, keskushermostovaurio, kivesvaurio, eturauhasvau-rio, sydämen johtumisjärjestelmän vaurio, emfyseema, 20 keuhkofibroosi, migreenipäänsärky, kuukautishäiriöt, en- doteelivaurio, munuaisvaurio, multippeliskleroosi, autoimmuunisairaudet, allergiat, tromboosi, lisääntynyt verihiutaleiden aggregaatio ja prostasykliinituotannon estyminen. Tarkoituksena ei ole väittää, että tämä keksintö 25 ehkäisee tai lievittää edellä lueteltujen tilojen kaikkia muotoja, mutta se ehkäisee tai lievittää niitä edellä mainittujen tilojen muotoja, jota kadmiumin, alumiinin tai vapaiden radikaalien esiintyminen elimistössä aiheuttaa tai pahentaa.
30 Sellaisen lP3-isomeerin tai sellaisten IP3-isomee- rien, jonka/joiden avulla edellä mainitut päämäärät saavutetaan voidaan valmistaa keksinnön mukaisesti menetelmällä, jolle on tunnusomaista, että inositoliheksafos-faattia sisältävää materiaalia inkuboidaan 20 - 70 °C:n 35 lämpötilassa pH:n ollessa 4-8 fytaasin kanssa, kunnes 30 - 60 % koko esterifosforista on vapautunut, saatu seos 7 85490 erotetaan kromatografisesti jakeisiin inositolitrifos-faattia sisältävän jakeen eristämiseksi, mainittu jae jaetaan edelleen kromatografisesti ja tietty IP3-isomeeri eristetään happo-tai suolamuodossa liuoksena. Tapauksis-5 sa, joissa lähtömateriaalina on luonnontuote, valitaan edullisesti sellainen luonnontuote, joka sisältää vähintään 0,3 %, edullisesti vähintään 1 %, inositolifostaat-tia (IP6 + IP5 + IP4). Erityisen hyvin soveltuvia tuotteita ovat pavut, leseet, siitepöly ja öljykasvien siemenet. 10 Inositolitrifosfaattikoostumuksen tulisi edulli sesti sisältää vähintään 10 %, edullisesti vähintään 20 % tai vieläkin edullisemmin 40 %, IP3:a lähtömateriaalin inositolisisällöstä laskettuna. Tavoitteena on mahdollisimman korkea IP3-pitoisuus koostumuksessa, koska IP3:n 15 paras terapeuttinen vaikutus on jäljempänä esitettyjen kokeiden mukainen. Tässä esitetynen koostumuksen sisältämiä IP3-isomeereja voidaan tuottaa esimerkiksi entsymaat-tisella hajotuksella käyttäen lähtöaineena IP6:ta, sisältävää materiaalia.
20 Keksinnön mukaan inositolifosfaatteja hajotetaan entsymaattisesti IP3:ksi fytaasientsyymin avulla. Fytaa-sientsyymiä esiintyy normaalisti kaikissa inositolifos-faattia sisältävissä kasveissa ja siemenissä. Tästä syystä ei keksinnön mukaan tavallisesti ole välttämätöntä li-25 sätä entsyymiä, mikäli lähtömateriaalina käytetään luonnontuotetta. Tapauksissa, joissa luonnontuotteen entsy-maattinen aktiivisuus on liian alhainen, tai käytettäessä lähtömateriaalina IP6:ta, lisätään esimerkiksi leseistä saatua fytaasientsyymiä.
30 Sopiva tapa käsitellä luonnon tai puhdistamatonta lähtömateriaalia on esikäsitellä se esimerkiksi rikkomalla tai poistamalla ulompi membraani ja poistamalla eitoivotut aineosat. Siten siitepölyä käytettäessä tulisi poi-: staa allergeenit. Tämän jälkeen materiaalia liotetaan ve- 35 dessä inositolifosfaatin järjestämiseksi saataville hajotusta varten ja entsyymin aktivoimiseksi. Tarvittaessa 8 85490 enemmän entsyymiä tarvittava määrä voidaan lisätä tässä vaihees sa. Entsyymin annetaan sitten toimia niin kauan kuin on tarpeellista halutun hydrolysoitumisasteen saavuttamiseksi .
5 Hydrolyysi toteutetaan sopivassa lämpötilassa, ta vallisesti 20 - 70 °C:ssa, edullisesti 30 - 60 °C:ssa, läsnäolevan fytaasientsyymin kannalta edullisemmassa pH:ssa. Hydrolyysin pysäyttämiseksi halutulle tasolle entsyymi voidaan tuhota tai inaktivoida esimerkiksi hyd-10 rolysoituneen lähtömateriaalin nopealla kuumennuksella.
Tämä takaa myös sen, että IP3 ei jatka hydrolysoitumista kontrolloimattomasti ja ei-toivotusti vatsassa, kun koostumusta annetaan. Materiaalin muuttamiseksi muotoon, jossa se kestää varastointia, se voidaan kylmäkuivata sopi-15 valla tavalla. Fytaasin lähteenä voidaan edullisesti käyttää hiivaa. Edullisesti käytetään leivinhiivaa. Hiivaa käytettäessä saadaan pääasiallisesti vain yhtä IP3-isomeeria, nimittäin D-myoinositoli-1,2,6-trifosfaattia.
Edellä mainittua menettelyä voidaan, mahdollisesti 20 soveltuvin osin muunnettuna, käyttää myös silloin, kun lähtömateriaalina käytetään IP6 sellaisenaan.
IP3:a sisältävä farmaseuttinen koostumus sisältää farmaseuttisesti aktiivisena aineosana sellaisen määrän ainakin yhtä inositolitrifosfaatti-isomeeria (IP3-isomee-25 ria), joka riittää alentamaan kadmiumin tai alumiinin haitallista vaikutusta kehossa tai estämään tai vähentämään vapaiden radikaalien muodostumista kehossa.
Kuvatun koostumuksen on edullista olla yksikköan-nosmuodossa. Sopivia antomuotoja sellaiseen yksikköannos-30 tukseen ovat tabletit, rakeet tai kapselit. Sitä paitsi tabletit ja rakeet ovat helposti pintakäsiteltävissä siten, että saadaan aikaan enteerinen päällyste vatsassa tapahtuvan kontrolloimattoman hydrolyysin estämiseksi ja halutun imeytymisen aikaansaamiseksi suolessa. Muita so-35 pivia antotapoja ovat anto hitaasti vaikuttavaa ainetta vapauttavassa muodossa ja anto ihon läpi. Koostumukseen 9 85490 voidaan sisällyttää jotakin tavanomaista farmaseuttisesti hyväksyttävää lisäainetta, täyteainetta ja/tai kantaja-ainetta. Tabletit ja rakeet voivat sisältää myös hajotus-ainetta, joka saa aikaan tablettien tai vastaavasti ra-5 keiden hajoamisen helposti suolessa. Eräissä tapauksissa, erityisesti akuuteissa tilanteissa, on edullista käyttää laskimoon annettavaksi soveltuvan liuoksen muodossa olevaa yksikköannosta.
Farmaseuttinen koostumus voi myös sisältää pelkäs-10 tään IP3:a sellaisenaan, ilman lisäainetta, täyteainetta tai kantaja-ainetta.
Haluttaessa koostumus voi olla sisältämättä muita inositolifosfaatteja IPlf IP2, IP4, IP5, ja IP6. Niinpä IP3-isomeerien seoksen puhtausaste voi olla 90 - 100 %, 15 kuten esimerkiksi 93 - 100 % tai edullisesti 95 - 100 %.
Vaihtoehtoisesti farmaseuttinen koostumus voi sisältää yhtä tai useampaa jäljempänä esitettyä yksittäistä IP3-isomeeria kunkin ollessa suurinpiirtein puhtaassa muodossa. Eri isomeerit voidaan siis erottaa toisistaan 20 suurin piirtein puhtaina, mikä tarkoittaa sitä, että niiden puhtausaste on 80 - 100 %, kuten esimerkiksi 82 - 100 % tai 85 - 100 %, edullisesti 90 - 100 %. Koska isomeerejä voidaan tuottaa puhtaassa muodossa, niitä voidaan luonnollisesti sekoittaa millaisessa suhteessa tahansa.
25 IP3:n tuotanto ja sen eri isomeerien eristys on esitetty edellä mainitussa, samanaikaisesti jätetyssä patenttihakemuksessa FI-854127, jolle on myönnetty patentti 82 474.
Useimmissa tapauksissa on edullista, että IP3.iso-30 meeri tai -isomeerit on/ovat esitetyssä koostumuksessa suolamuodossa, jotta mineraalitasapainoon ei kohdistu haitallista vaikutusta. Suolan tulisi edullisesti olla natrium-, kalsium-, sinkki-, kupari- tai magnesiumsuola tai seos, joka koostuu kahdesta tai useammasta tällaises-35 ta suolasta. Kalsium- ja sinkkisuolat ja niiden seokset ovat erityisen edullisia, koska kalsium- ja sinkki-ionit ίο 8 b 4 9 0 pystyvät kilpailemaan kadmiumionien kanssa sitoutumisessa kehon elintärkeisiin kohtiin. Näin kadmiumin resorptio ja haitalliset vaikutukset kehossa vähenevät edelleen ja saavutetaan edellä mainittuihin tauteihin kohdistuva, es-5 tävä ja terapeuttinen vaikutus. IP3-isomeeri voi olla osaksi myös yhden tai useamman, lantanidisarjän (so. La, Ce, Pr, Nd, Pm, Sm, Eu, Gd, Tb, Dy, Ho, Er, Tm, Yb ja Lu) fysiologisesti hyväksyttävän yhdisteen muodostamana suolana .
10 Edellä mainituista syistä on myös edullista, jos koostumukseen on lisätty ylimääräisestä ainakin yhtä kalsiumin, sinkin, magnesiumin tai kuparin mineraalihapon tai orgaanisen hapon kanssa muodostamaa, farmaseuttisesti hyväksyttävää suolaa. Tämä on erityisen merkityksellistä 15 vanhempien henkilöiden kannalta, jotka usein kärsivät näiden mineraalien puutteesta.
Tässä esitetty koostumus voi sisältää edullisesti myös ainakin yhtä seleeniä sisältävää ainetta, tyydytty-mätöntä rasvahappoa, kuten gammalinolihappoa, E-vitamii-20 nia, C-vitamiinia tai farmaseuttisesti hyväksyttävää orgaanista happoa tai sen suolaa, kuten sitraattia, oksa-laattia, malonaattia tai tartraattia. Nämä aineet auttavat ehkäisemään kadmiumin haitallista vaikutusta kehossa ja/tai aiheuttavat sen lisäksi eräissä tapauksissa toivo-25 tun yhteisvaikutuksen koostumuksen sisältämän IP3-isomee-rin kanssa. Seleenin määrä koostumuksessa on edullisesti sellainen, että sen päivittäinen saanti on noin 0,7 - 8 pg, edullisesti 0,7 - 3,3 pg kehon paino-kg kohden. E-vitamiinin osalta vastaavat luvut ovat noin 0,1 - 2 mg ja 30 0,1 - 1 mg, samassa järjestyksessä.
Koostumus ei edullisesti sisällä penisilliiniä.
Ihmispotilaille, jotka kärsivät tilasta, jonka on aiheuttanut tai jota on pahentanut kadmiumin, alumiinin tai vapaiden radikaalien esiintyminen elimistössä, 35 annettavaksi soveltuvat annokset voivat tämän alan asiantuntijat määrätä soveltamalla tuloksia, jotka on saatu eläimillä erilaisilla annoksilla, ihmisiin. Edullinen n 85490 annos ihmisille on 0,1-10 mg IP-^a kehon paino-kg:a kohden vuorokaudessa.
Eläinkokeissa ei havaittu mitään toksisia vaikutuksia erittäin suurten IP^-annosten (160 mg painokiloa 5 kohden laskimonsisäisenä injektiona hiirille tai 1600 mg painokiloa kohden intraperitoneaalisena injektiona hiirille) antamisen jälkeen.
Tässä esitetty koostumus sisältää ainakin yhtä, joskus kahta tai useampaakin, seuraavista aineista, 10 jotka ovat yhtäpitäviä edellä mainittujen olennaisten IP3-isomeerien kanssa: D-myoinositoli-1,2,6-trifosfaatti, joka vastaa kaavaa 15 f OPO*"^ V OPQj' j 20 jossa X on vety, ainakin yksi yksi-, kaksi- tai moniarvoinen kationi tai niiden seos, n on ionien lukumäärä ja z on kunkin eri ionin varaus; D-myoinositoli-1,2,5-trifosfaatti, joka vastaa 25 kaavaa : , <) jossa X:llä, n:llä ja z:lla on edellä mainittu merkitys; : myoinositoli-1,2,3-trifosfaatti, joka vastaa : 35 kaavaa 12 85 490 / «o, / r „ . χ*- s =;- \ jossa X:llä, n:llä ja z:lla on edellä mainittu merkitys; ja L-myoinositoli-1,3,4-trifosfaatti, joka vastaa 10 kaavaa f 2- QH \
0H^\ °™3 I
l OH^ ^ ^ ^ n . X
,5 \ I
jossa X:llä, n;llä ja z:lla on edellä mainittu merkitys;
Kussakin edellä esitetyistä kaavoista n vaihtelee 20 6:sta 1;een ja z 1:stä 6:een. Edullisesti n on 3-6 ja z on 3, 2 tai 1. Edellä mainituista isomeereistä D-myoinositoli-1,2,6-trifosfaatti on edullinen.
IP^ voi olla ainoa farmaseuttisesti aktiivinen aineosa koostumuksessa. Se voi kuitenkin sisältää myös 2 5 muita farmaseuttisesti aktiivisia aineosia. IP^:n osuuden tulisi silloin olla 5-95 p-% tai 15-80 p-%, kuten esimerkiksi 25-60 p-%, mainittujen aktiivisten aineosien yhteismäärästä.
Lisäksi koostumus voi olla monivitamiiinivalmiste, 30 joka sisältää 2-60 p-%, kuten esimerkiksi 2-40 p-% tai edullisesti 2-25 p-%, IP^ra farmaseuttisesti aktiivisten aineosien kokonaismäärästä laskettuna.
Koostumus sisältää tavallisesti 0,01-1,5 g, kuten esimerkiksi 0,05-1,3 g tai edullisesti 0,1-1 g, IP^ra.
33 Tässä esitetään myös menetelmä kadmium- tai alu miini-ionin tai vapaiden radikaalien kehon, kudoksissa,.
i3 s 5 4 9 Ο aiheuttaman haitallisen vaikutuksen vähentämiseksi. Mainittu menetelmä käsittää riittävän inositolitrifos-faattimäärän antamisen ihmiselle tai eläimelle, so. nisäkkäälle, kadmium- tai alumiini-ionin vaikutuksen 5 ehkäisemiseksi tai vapaiden radikaalien muodostumisen estämiseksi tai vähentämiseksi kehossa.
Tässä esitetään myös menetelmä minkä tahansa tiloista artriitti, bronkiitti, proliferatiivinen solumuutos, syöpä, korkea verenpaine, kardiovaskulaarinen 10 sairaus, vanhemman iän sokeritauti, istukkavaurio, kives-vaurio, silmän eri osien, kuten verkkokalvokudoksen ja mykiön, vauriot, eturauhasvaurio, solumembraanivaurio, keskushermostovaurio, sydämen johtumisjärjestelmän vaurio, emfyseema, keuhkotibroosi, migreenipäänsärky, kuukau-tishäiriöt, endoteelivaurio, munuaisvaurio, allergia, tromboosi, multippeliskleroosi, lisääntynyt verihiutaleiden aggregaatio ja prostasykliinituotannon estymisen ehkäisemiseksi tai lievittämiseksi, kun mainittu tila on luettavissa kadmiumin tai vapaiden radikaalien elimis-20 tössä esiintymisen syyksi eli mainitun tilan saa aikaan tai sitä pahentaa kadmiumin tai vapaiden radikaalien esiintyminen elimistössä.
Menetelmä käsittää sellaisen inositolitrifosfaat-timäärän, joka riittää mainitun ehkäisyn tai lievityksen 2e; aikaansaamiseen, antamisen ihmiselle tai eläimelle.
Lisäksi tässä esitetään menetelmä säteilyn haitallisen vaikutuksen lievittämiseksi kehossa, jossa menetelmässä ihmiselle tai eläimelle annetaan riittävä määrä inositolitrifosfaattia mainitun säteilyn 30 vaikutuksen vähentämiseksi. Säteily voi olla esimerkiksi röntgensäteilyä tai radioaktiivista säteilyä, mutta myös muunlaiset säteilyt ovat mahdollisia.
Keksintöä selitetään lisää jäljempänä suoritus-esimerkkien yhteydessä, joista esimerkeistä esimerkki 1 35 kuvaa verihiutaleiden aggregaation esiintymistä kaniinien verinäytteissä kadmiuminjektion jälkeen. Esimerkit 2-5 osoittavat, että sellaista aggregoitumista voidaan ehkäis- i4 «5-4 90 tä IP^-injektiellä tai oraalisella IP^in annolla. Esimerkki 6 valaisee kadmiumin esiintymistä hiirien eri elimissä kadmiuminjektion jälkeen. Esimerkki 7 erikseen l^in, IP3:n ja IP4:n vaikutuksen hiirien, jotka olivat saaneet 5 kadmiumruiskeen, eri elinten kadmiumpitoisuuteen. Kuten esimerkissä 8 on esitetty, D-myoinositoli-1,2,6-trifos-faatti alensi voimakkaasti kadmiumpitoisuutta kadmium-ruiskeen saaneiden hiirien keuhkossa, aortassa, sydämessä ja pernassa. Esimerkki 9 osoittaa, että IP^ estää tupa-10 koinnin aiheuttamaa verihiutaleiden aggregaation lisääntymistä ihmisillä. Esimerkissä 10 on osoitettu, että vapaiden radikaalien aiheuttamaa veren glukoositason kohoamista hiirillä voidaan ehkäistä IP^-injektiolla. Esimerkit 11-15 osoittavat, että IP^ estää vapaiden 15 radikaalien muodostumisen tai vähentää sitä. Esimerkit 16-17 valaisevat kokeita, joilla selvitettiin sitoutumis-vakioita sinkin ja kadmiumin sitoutumiselle IP^reen ja IP^ieen, tässä järjestyksessä. Esimerkit 18-24 kuvaavat IPg:n tuottamista ja jakamista eri isomeereihin. Esi-20 merkki 25 kuvaa D-myoinositoli-1,2,6-trifosfaatin kal-siumsuolan ruiskeina annettavaksi soveltuvan liuoksen valmistusta. Esimerkissä 26 käsitellään D-myoinositoli-1,2,6-trifosfaatin kalsiumsuolaa sisältävien tablettien valmistusta.
25 Esimerkeissä 1^5 käytetyt menetelmät Käytettiin kaniineja (valkoisia, urospuolisia Uuden-Seelannin kaneja), jotka painoivat 2-2,5 kg. Niitä ruokittiin inositolifosfaatteja sisältämättömällä ravinnolla 10 vuorokautta ennen koetta.
30 Eläinkoeproseduuri
Esimerkeissä 1-3 (testatut aineet ruiskutettiin laskimoon) käytettiin seuraavaa menettelyä:
Aika Käsittely 0 min: Laskimonsisäisenä ruiskeena inositolifosfaattia 35 1 ml:ssa fysiologista suolaliuosta tai 1 ml fysiologista suolaliuosta is « 5 4 90 1 min: Otettiin verinäyte 1 (9 ml + 1 ml 3,8-%:ista natriumsitraattia) 2 min: Laskimonsisäisenä ruiskeena 4 ug kadmiumia
CdCl2:na 0,5 ml:ssa fysiologista suolaliuosta 5 tai 0,5 ml fysiologista suolaliuosta 5 min: Otettiin verinäyte 2 (9 ml + 1 ml 3,8-%:ista natriumsitraattia).
Esimerkeissä 4-5 (testatut aineet annettiin suun kautta) käytettiin samaa menettelyä sillä poikkeuksella, että ensimmäinen injektio korvattiin inositolifosfaattien tai vastaavasti fysiologisen suolaliuoksen oraalisella annolla. Injektoidut määrät olivat samoja kuin edellä. Oraalinen anto tapahtui 1 tunti ennen verinäytteen 1 ottamista. Verinäytteiden otto ja toinen laskimoinjektoin-ti suoritettiin samalla tavalla kuin edellä. Kaniinit olivat nukuttamattomia kokeiden aikana.
Näytteiden käsittely
Molempia kustakin eläimestä otettuja verinäytteitä sentrifugoitiin nopeudella 1200 kierrosta/min 10 2q minuuttia, ja saatiin verihiutaleita sisältävä plasma.
Molemmista näytteistä saatu plasma verihiutalei-neen analysoitiin Bornin (J. Physiol. 67 (1968)) mukaisesti aggregometrillä (Chronopar Corp Mod 440) ADP:n (adenosiinidifosfaatin) lisäykseen reagoinnin selvittä- 25 miseksi. Molemmat näytteet analysoitiin samanaikaisesti samaa ADP-pitoisuutta (1-20yUM) käyttäen laitteen kahdessa kanavassa.
Tämän testin periaate on se, että verihiutaleita sisältävä plasma on samea ja sen valonläpäisevyys on 30 alhainen. ADP:tä lisättäessä verihiutaleet aggregoituvat ja muodostavat kokkareita. Tämä johtaa läpäisevyyden lisääntymiseen, jonka suuruus määritetään laitteella. Reagointi ADP:hen mitataan mittasuhdeyksikköinä 80 mit-tasuhdeyksikön vastatessa suurinta mahdollista aggregaa-35 tiota. Jotta menetelmä olisi mahdollisimman herkkä totea- ie 85 490 maan muutokset verihiutaleiden reaktiivisuudessa, ADP-annoksen tulisi saada aikaan noin 5-30 mittasuhdeyksik-köä vastaava reagointi. Tämä saavutetaan normaalisti 5^uM ADPillä, mutta joidenkin eläinten tapauksissa vaadi-5 taan pienempää tai suurempaa annosta (1-20yUM).
Tämän testin tulos ilmoitetaan muodossa maksimi-aggregoitumisen näytteessä 2 (mittasuhdeyksikköinä) miinus maksimiaggregoituminen näytteessä 1. Esimerkissä 1 esitetään myös molemmissa näytteissä todettujen aggregoitu-10 misten keskiarvot.
Verihiutaleiden aggregoitumisen lisääntymistä on raportoitu tapahtuvan tupakoinnin jälkeen ja kardiovasku-laarisissa sairauksissa, ja aineiden, jotka estävät verihiutaleiden aggregoitumista, arvellaan olevan merki-15 tyksellisiä esimerkiksi kardiovaskulaaristen sairauksien hoidossa.
Esimerkki 2
Menetelmät esitettiin edellä. Injektio 1 oli aina fysiologista suolaliuosta ja injektio 2 fysiologista 20 suolaliuosta (13 eläintä) tai kadmiumia (14 eläintä).
Tulokset olivat seuraavat: 17 8 5 4 90
Aggregoituminen Aggregoituminen Muutos näyttees-Näyte 1 Näyte 2 tä 1 näytteeseen (mittasuhde- (mittasuhde- 2 (mittasuhde- yksikköinä)_ yksikköinä)_ yksikköinä)_ 5 Suolaliuoksella käsitellyt 18,2 17,1 -1,1
Cd: 1 1<i k.is i - tellyt 21,4 24,8 +3,4 10 Cd-käsittely siis lisäsi verihiutaleiden aggre- goitumista, kun taas lievää vähenemistä havaittiin fysiologisella suolaliuoksella käsitellyissä eläimissä. Esimerkki 2
Menetelmät esitettiin edellä. Kaniinit saivat 15 laskimonsisäisinä injektioina 2-10 6 mol inositolidifos-faattia (IP2), inositolitrifosfaattia (IP3) tai inositol itetrafosfaattia (IP4) fysiologiseen suolaliuokseen liuotettuna. Kukin inositolifosfaateista IP2, IP3 3a IP4 koostui isomeerien, joita muodostuu hydrolysoitaessa 20 IP^rta vehnän fytaasin avulla, seoksesta.
Saatiin seuraavat tulokset. Esimerkin 1 Cd-käsi-tellyt kaniinit on otettu mukaan vertailun vuoksi.
Verihiutaleiden aggregoitumisen 25 Injektio 1 Injektio 2 Eläinten muutos näytteestä lukumäärä 1 näytteeseen 2 (mittasuhdeyksik- _köinä)_ 30 IP Cd 9 +1,9 IP3 Cd 8 -0,2 IP4 Cd 9 +5,6
Suolaliuos Cd 14 +3,4 35 Tulokset osoittavat, että IP^ esti kadmiumin aggregoitumista aiheuttavan vaikutuksen. IP2:lla oli is 8 5 490 lievä estovaikutus, kun taas IP^:llä käsitellyillä eläimillä esiintyi jopa suurempaa aggregoitumista.
Esimerkki 3
Menetelmät olivat samoja kuin edellä. Testattiin — 7 5 neljä eri IP^-isomeeriä, ja injektoitu määrä oli 2 x 10 mol. Isomeerit olivat D-myoinositoli-1,2,6-trifosfaatti (1,2,6), L-myoinositoli-1,3,4-trifosfaatti (1,3,4), myoinositol i- 1 , 2 , 3-tr if osfaatti (1,2,3) ja D-myoinositoli- 1,2,5-trifosfaatti (1,2,5).
10 Tulokset olivat seuraavia (esimerkin 1 Cd-käsi- tellyt eläimet on otettu mukaan vertailun vuoksi):
Aggregoitumisen muutos näytteestä 1 näytteeseen 2 15 (mittasuhdeyksik-
Injektio 1_Injektio 2 N:o köinä)_ 1,2,6 Cd 15 -0,4 1.2.3 Cd 12 +0,3 1.3.4 Cd 13 +0,6 20 1,2,5 Cd 14 +1,7
Suolaliuos Cd 14 +3,4
Tulokset osoittavat, että kaikilla testatuilla V:„: isomeereillä oli hyvä vaikutus kadmiumilla aiheutetun ·.: 25 aggregoitumisen estossa ja että paras vaikutus saavu- — tettiin isomeerillä 1,2,6.
- ·. Esimerkki 4
Menetelmät olivat samoja kuin edellä. 2 x 10 ^ mol:n annos IP^:a (D-myoinositoli-1,2,6-trifosfaattia 30 1 ml:ssa fysiologista suolaliuosta tai pelkkää fysiolo gista suolaliuosta annettiin suun kautta.
Tulokset olivat seuraavat: 19 85490
Aggregoitumi sen muutos näytteestä 1
Oraalinen näytteeseen 2 (mitta- anto_ Injektio Lukumäärä suhdeyksikköinä)_ 5 Suolaliuos Cd 23 +1,9 IP3 Cd 20 +1,1
Kadmium sai aikaan verihiutaleiden aggregaation lisääntymisen kuten esimerkissä 1. Tässä käytettynä 10 annoksena suun kautta annettu IP^ esti osaksi tätä lisääntymistä.
Esimerkki 5 -5
Menetelmät olivat samoja kuin edellä. 2 x 10 mol:n annos IP3:a (D-myoinositoli-1,2,6-trifosfaattia) 15 annettiin suun kautta. Esimerkin 4 fysiologisella suolaliuoksella ja kadmiumilla käsitellyt eläimet on otettu mukaan vertailun vuoksi.
Saatiin seuraavat tulokset:
Aggregoitumisen 20 Oraalinen muutos näytteestä anto_ Injektio Lukumäärä 1 näytteeseen 2
Suolaliuos Cd 23 +1,9 IP3 Cd 15 -0,4 25 Tässä kokeessa käytettynä annoksena IP3 esti kad miumin vaikutuksen verihiutaleiden aggregoitumiseen.
Verihiutaleiden aggregoitumisen lisääntymistä pidetään yhtenä tärkeimmistä arterioskleroosia aiheuttavista tekijöistä, ja IP3:n kyky estää kadmiumin (esi-30 merkit 2-5) ja tupakoinnin (esimerkki 9) aiheuttamaa ____: aggregoitumista osoittaa, että IP3 on erittäin käyttökelpoinen sellaisen sairauden ehkäisyssä tai lievittämisessä.
Esimerkki 6 35 14 hiirtä pidettiin fytiinihappoa ja inositoli- • fosfaatteja sisältämättömällä ruokavaliolla 1 viikon ajan 20 85490 ennen koetta ja koko kokeen ajan. Hiirille annettiin 109 laskimonsisäisenä injektiona 2,5^uCi Cd:tä CdC^ina, joka oli liuotettu 50^,ul:aan fysiologista suolaliuosta.
7 vuorokauden kuluttua injektoinnista hiiret tapettiin, 5 ja useat elimet irrotettiin ja punnittiin. Radioaktiivisen kadmiumin taso elimissä määritettiin gammalaskurilla. Tulokset olivat seuraavat:
Elin Pulssia/min/mg kudosta
Maksa 542,3 10 Munuainen 356,3
Sydän 53,5
Aortan seinämä 29,4
Keuhko 31,5
Lihas 7,3 15 Ra sva 1,8
Kehon yleiskudoksiin, lihas- ja rasvakudokseen, verrattuna huomattavia määriä kadmiumia kerääntyi elimiin (sydämeen, aortan seinämään, keuhkoon), joissa on koe-eläimillä todettu kadmiumin indusoimia sairauksia.
20 Korkean Cd-tason maksassa ja munuaisessa selittää se seikka, että nämä kudokset sisältävät metallotioneii-nia, joka sitoo kadmiumia ja tekee sen myrkyttömäksi. Niinpä, vaikka nämä elimet ottavat vastaan suurimman osan kadmiumista, mitään vaurioita ei esiinny, ennen 25 kuin saavutetaan erittäin korkea taso.
Esimerkki 7 Käytettiin hiiriä, jotka kokeen alussa painoivat 18-20 g. Kokeen aikana ja vähintään 7 vuorokauden ajan ennen koetta hiiriä ruokittiin inositolifosfaatteja 30 sisältämättömällä puolisynteettisellä ravinnolla.
Hiiret jaettiin neljään ryhmään.
Ne saivat päivittäin 9 vuorokauden ajan intraperi-toneaalisina ruiskeina fysiologista suolaliuosta, ino-: ‘ - sitolidifosfaattia (IP2)» inositolitrifosfaattia (IP3) 35 tai inositol itetraf osf aa tt ia (IP.) . Inositolifosfaatte ja annettiin 10 mol vuorokaudessa. Injektiomäärä oli 21 8 5 490 0,2 ml. I?2' IP3 3a IP4 olivat niiden isomeerien, joita muodostuu hajotettaessa fytiinihappoa vehnän fytaasin avulla, seoksia.
Kokeen 2. päivänä kaikki hiiret saivat 5-10 minuu- 5 tin kuluttua toisesta intraperitoneaalisesta injektoin- 109 nista laskimonsisäisenä injektiona 2,5^uCi Cd:tä kadmiumkloridina 50^,ul:ssa fysiologista suolaliuosta. Viimeisen intraperitoneaalisen ruiskeen jälkeen hiiret tapettiin, ja useat elimet irrotettiin ja punnittiin.
10 Eri elinten radioaktiivisuus mitattiin gammalasku- rilla. Eri inositolifosfaateilla käsiteltyjen eläinten elinten radioaktiivisuutta verrattiin vertailueläinten, joita oli käsitelty sama ajanjakso fysiologisella suolaliuoksella, elinten radioaktiivisuuteen. Tuloksissa eri 15 inositolifosfaateilla käsiteltyjen eläinten elinten radioaktiivisuus ilmoitetaan prosentteina vertailueläi-missä todetusta radioaktiivisuudesta.
Tulokset olivat seuraavat: IP2:lla, IP^rlla ja IP^:llä käsiteltyjen hiirien 20 elinten kadmiumtasot prosentteina vertailutasoista (ver-tailutasot = 100). 15 hiirtä kussakin ryhmässä.
Elin IP2 IP IP4
Keuhko 111 80 113
Sydän 99 77 89 25 Aortta 95 89 81
Perna 151 81 132
Sylkirauhanen 104 82 89
Maksa 100 100 101
Munuainen 101 102 94 30
Tulokset osoittavat, että IP^ alensi kadmium-tasoja kaikissa elimissä maksaa ja munuaista lukuunottamatta. IP^rn tapauksessa havaittiin alenemista jois-:/-i sakin mutta ei kaikissa elimissä, eikä minkäänlaista :··: 35 positiivista vaikutusta havaittu IP2:n tapauksessa.
22 85490
Esimerkki 8
Esimerkissä 7 esitetty koe toistettiin sillä erolla, että käytettiin puhdasta IP,-isomeeriä, D-myo-inositoli-1,2,6-trifosfaattia. Annostus oli 10 mol 5 vuorokaudessa, ja hiiret saivat 4 ruisketta vuorokaudessa. Kontrolliryhmä sai suolaliuosruiskeita. Tulokset olivat seuraavat: D-myoinositoli-1,2,6-trifosfaatilla käsiteltyjen hiirien elinten kadmiumtasot ilmoitettuina prosentteina 10 vertailutasoista.
Elin Cd-taso
Keuhko 74
Sydän 67
Aortta 65 15 Perna 57
Sylkirauhanen 87
Maksa 100
Munuainen 104 Nämä tulokset osoittavat, että IP^:n 1,2,6-iso-20 meeri alensi voimakkaasti kadmiumpitoisuutta keuhkossa, aortassa, sydämessä ja pernassa. Vaikutusta maksan ja munuaisen tasoihin ei esiintynyt.
Esimerkki 9 : : Tutkittiin IP^n vaikutusta verihiutaleiden aggre- 25 goitumiseen tupakoinnin jälkeen ihmisissä.
Neljä nuorta tervettä miespuolista tupakoimatonta henkilöä sai kahdessa tapauksessa kapselin, joka sisälsi - 50 mg IP^ia, ja kahdessa tapauksessa kapselin, joka sisälsi 50 mg plaseboa. Käytetty IP^ oli D-myoinositoli-30 1,2,6-trifosfaatin Ca-suola. Ei kohde eikä tutkija tien nyt, saiko kohde IP^a tai plaseboa.
Kahden tunnin kuluttua kapselin nielemisestä otettiin verinäyte. Sen jälkeen kohde poltti nopeasti peräkkäin kaksi savuketta. Savukkeiden polton jälkeen 35 otettiin toinen verinäyte. Kummastakin näytteestä määritettiin verihiutaleiden aggregaatioreagointi ADP:hen ja 23 8 5 4 90 kollageeniin käyttäen jokseenkin samaa menettelyä kuin esimerkissä 1. Tulokset ilmoitetaan aggregoitumisen muutoksena tupakointia edeltäneestä näytteeseen tupakoinnin jälkeiseen näytteeseen. Plusmerkki merkitsee sitä, 5 että aggregoituminen oli voimakkaampaa savukkeiden polton jälkeen.
Aggregoitu- Aggregoitu- IP3:n 3a mistä aiheut- mistä aiheut- plasebon tava aine tavan aineen välinen 1 0 _pitoisuus_IP^ Plasebo ero_ ADP 0,5 mmol +1*5 +7,25 5,85 " 1 mmol -1,5 +0,25 1,75 " 2,5 mmol -1,5 0 1,5 15 5 mmol -2,5 -0,75 1,75
Kollageeni 0,5 mg +5,15 +12,25 6,5 " 1 mg -8,25 +1,75 10,0 " 2,5 mg -3,75 0 3,75 " 5 mg -1,5 -0,25 1,25 20
Plaseboryhmässä tupakointi aiheutti aggregaation lisääntymisen, joka oli merkittävintä alhaisilla aggre-goitumista aiheuttavan aineen pitoisuuksilla. Kaikissa tapauksissa IP^ ehkäisi tätä vaikutusta. IP^ estää siis : ·.· 25 verihiutaleiden aggregaation tupakoinnista aiheutuvaa li sääntymi s tä.
Esimerkki 10
Hiirille (10 kussakin ryhmässä) annettiin intra-peritoneaalisena injektiona IP-^a (D-myoinositoli-1,2,6-30 trifosfaatin Na-suolaa) kolmea annostasoa käyttäen tai fysiologista suolaliuosta. 30 minuutin kuluttua tästä injektiosta kaikki hiiret kontrolliryhmää lukuunottamatta saivat laskimoon alloksaaniruiskeen, 50 mg/kg fysiologisessa suolaliuoksessa.
35 Eläimiä pidettiin paastolla 12 tuntia ennen alloksaani-injektiota ja tunnin ajan sen jälkeen. 72 tun- 24 8 5490 nin kuluttua alloksaani-injektiosta hiiristä otetut verinäytteet analysoitiin glukoositason määrittämiseksi. Tulokset olivat seuraavat: IP^-annos Alloksaaniannos 5 mg/kg mg /kg_ Veren glukoosi 0 0 216 0 50 864 800 50 857 1600 50 677 10
Alloksaani aiheuttaa diabetesta ja nostaa veren glukoositasoa edistämällä vapaaradikaalireaktiota insuliinia tuottavissa soluissa. IP^ra saaneilla hiirillä ilmeni veren glukoositason annoksesta riippuvaa alenemis-15 ta, ja suurin annos antoi jonkin verran suojaa alloksaania vastaan.
Esimerkki 11
Valmistettiin vesiliuos, joka sisälsi 0,3 mM FeC^ia, 5 mM etyleenidiaminotetraetikkahappoa (EDTA) , 20 50 mM tris(hydroksimetyyli)aminometaania (TRIS) ja 1,0 mM NaN^ja. Liuoksessa muodostui kompleksi Fe^-EDTA-N^· Valon absorptiossa todettiin huippu aallonpituudella 409 nm.
: : Valmistettiin toinen vesiliuos, joka sisälsi 25 0,3 mM FeCl,:a, 50 mM EDTA:a ja 50 mM TRIS:ä. Liuoksessa J 3 + muodostui kompleksi Fe -EDTA-i^O. Aallonpituudella 409 nm ei havaittu huippua valon absorptiossa.
Edellä todettu ero tuloksissa aiheutuu siitä, että korvaa kompetitiivisesti Fe^+-EDTA-kompleksiin sitou-30 tuvan yhden vesimolekyylin. Tämä puolestaan osoittaa, että Fe^+-EDTA-kompleksissa on dissosioituvan vesimolekyylin täyttämä sitoutumiskohta.
: Tiedetään lisäksi, että rauta katalysoi hydroksyyli- : radikaalien muodostumista. Jotta näitä muodostuisi, vaa- 35 ditaan yhden vesimolekyylin sitoutumista rautaan.
Tämä merkitsee sitä, että Fe^+-EDTA-kompleksissa 25 85490 mukana oleva EDTA ei kykene estämään raudan katalysoimaa hyöroksyyliradikaalien muodostumista.
Edellä esitetty koe toistettiin sillä erolla, että EDTA korvattiin IP^Ha.
5 Aallonpituudella 409 nm ei saatu huippua valon absorptiossa.
Tämä merkitsee sitä, että Fe3*:n IP-^n kanssa muodostama kompleksi ei sido vettä. Tästä syystä vapaiden radikaalien muodostuminen estyy.
10 Esimerkki 12
Reaktioseosta, joka sisälsi 48 mmol Kl^PO^tää, 2 mmol Na-askorbaattia, 0,1 mmol I^C^ta, 0,5 mmol Fe:tä ja 1,7 mmol deoksiriboosia, inkuboitiin 37°C:ssa 1 tunnin ajan. Samanlaisia reaktioseoksia, jotka sisälsivät 1 mmol 15 EDTA:a tai 1 mmol inositolitrifosfaattia (IP3), inkuboitiin samalla tavalla. Käytetty IP3 oli D-myoinositoli- 1,2,6-trifosfaatti.
Inkuboinnin jälkeen 2 ml:aan reaktioseosta lisättiin 1,65 ml tiobarbituurihappoa 50 mmol:ssa NaOH:ta ja ‘ 20 1,65 ml 2,8-%:ista trikloorietikkahappoa. Seos kuumen nettiin 100°C:seen 20 minuutiksi, ja mitattiin absorbanssi aallonpituudella 532 nm käyttäen nollakokeena vettä.
2 +
Kokeet suoritettiin Fe -muodossa (Fe(NH. )SO.) ja 3+ qq
Fe -muodossa (FeCl^) olevalla raudalla. Tulokset olivat 25 seuraavat: 2+3 +
Fe :n ja Fe :n katalysoima vapaiden radikaalien muodostuminen IP^rn ja EDTA:n läsnäollessa ilmoitettuna absorbanssina aallonpituudella 532 nm.
Ryhmä Fe2* Fe3* 30 Vertailu 0,76 0,79 EDTA 2,2 1,86 IP3 0,46 0,43 Nämä tulokset osoittavat, että vapaiden radikaalien muodostuminen reaktioseoksessa väheni 40 % IP3:n lisäämi-35 sen jälkeen. EDTA:n lisäämisellä oli päinvastainen vaikutus. Se lisäsi voimakkaasti vapaiden radikaalien muo- 26 8 5 490 dostumista. ΙΡ3*.η osoitettiin siten vähentävän raudasta riippuvaista vapaiden radikaalien muodostumista.
Esimerkki 13
Tutkittiin lipidien peroksidaatiota lipidimisel-5 leissä. Seuraavaa reaktioseosta inkuboitiin 2 tuntia 37°C:ssa: 0,4 ml Clark-Lubs -puskuria, pH 5,5 0,2 ml fosfolipidiliposomeja 0,1 ml 0,5-5 mM IP3:a tai 0,1 ml H20:ta 10 0,1 ml 1 mM Fe2+:a tai 0,1 ml H90:ta 3+ 2 0,1 ml 4 mM Ai :a tai 0,1 ml H20:ta 0,1 ml H20:ta IP3 oli D-myoinositoli-1,2,6-trifosfaatti. Inku-boinnin jälkeen lisättiin 0,5 ml tiobarbituurihappoa 15 sekä 0,5 ml 25-%:ista HCl:ä, ja seosta kuumennettiin 100°C:ssa 15 minuuttia. Lisättiin 1 ml 1 S Lubrol PX:ä (Sigma), ja määritettiin lipidien peroksidaatio mittaamalla absorbanssi aallonpituudella 532 nm. Tulokset olivat seuraavat:
^ Pitoisuus, mM
Absorbanssi
Koe_ Fe2* A43* IP_3 532 nm 1 0,1 0 0 0,36 25 2 ° °»a ° °’12 : " 3 0,1 0,4 0 0,89 : 4 Q, 1 0,4 0,5 0,36 5 ο,ι o 0,5 0,30 6 0,1 0 0,4 0,26 7 0,1 0 0,2 0,29 8 0,1 0 0,1 0,28 9 0,1 0 °,Q5 0,27 10 0 0 0 0,13 **** OC 2 +
Fe aiheutti lipidien peroksidaatiota (vrt. kokei- . ta 1 ja 10). Al3+ itsessään ei aiheuttanut peroksidaatiota • * • m « 27 85490 (vrt. kokeita 2 ja 10), mutta sen sijaan yhdistelmä 2+ 3 +
Fe + AI sai aikaan paljon voimakkaamman peroksidaation kuin Fe2+ yksinään (vrt. kokeita 1 ja 3). IP^:n lisääminen
2+ 3+ J
esti täysin Fe :n ja AI :n keskinäisen vuorovaikutuksen 2 + 5 (vrt. kokeita 3 ja 4). Vain Fe :a sisältäneissä systeemeissä IP3 sai aikaan radikaalien muodostumisen huomattavan vähenemisen (vrt. kokeita 1 ja 5-9).
Esimerkki 14
Tutkittiin lipidien peroksidaatiota lipidimisel-10 leissä. Seuraavaa reaktiota inkuboitiin 2 tuntia 37°C:ssa: 0,4 ml Clark-Lubs -puskuria, pH 5,5 0,2 ml fosfolipidiliposomeja 0,1 ml 10 mM IP^ia tai 0,1 ml H2<0:ta 0,1 ml 1 mM Fe^+ja 15 0,1 ml 1 mM Cd2+:a tai 1 ml 1 mM Pb2+:a tai 0,1 ml H20:ta 0,1 ml H20:ta IP3 oli D-myoinositoli-1,2,6-trifosfaatti. Inku-boinnin jälkeen lisättiin 0,5 ml tiobarbituurihappoa sekä 0,5 ml 25-%:ista HClsä, ja seosta kuumennettiin 100°C:ssa 20 15 minuuttia. Lisättiin 1 ml 1 % Lubrol PX:ä (Sigma), ja määritettiin lipidien peroksidaatio mittaamalla absor-banssi aallonpituudella 532 nm. Tulokset olivat seuraavat:
Pitoisuus, mM
25 Absorbanssi
Koe Cd21 Pb21 IP3 532_nm- l 0 0 0 0,63 2 0T1 0 0 1108 3 0,1 0 1,0 0,73 30 4 0 0,1 0 1,79 5 0 0,1 1,0 1,32 · · ’·’ 1 Kadmium (koe 2) ja lyijy (koe 4) lisäsivät voi- makkaasti Fe^+:n (ryhmä 1) aiheuttamaa lipidien peroksi-35 daatiota. IP3 ehkäisi voimakkaasti näiden kummankin metallin vaikutusta (vrt. kokeita 3 ja 2 sekä kokeita 5 ja 4).
28 8 5 4 90
Esimerkki 15
Reaktioseoksia, joiden koostumukset olivat seu-raavia, inkuboitiin 5 minuuttia 37°C:ssa:
Kl^PO^-puskuri, pH 7,4 20 mM
5 EDTA 0,1 mM
Salisylaatti 1 mM
Askorbaatti 1 mM
H202 3,3 mM
Fe3+ 0,05 mM
10 IP3 0, 2,5, 5 tai 10 mM
Salisylaatin hapettumisen tuloksena muodostuneet tuotteet määritettiin HPLC:n avulla. IP^ oli D-myoinosi-toli-1,2,6-trifosfaatti.
Systeemillä tutkitaan radikaalien vastaanottoa.
15 Näissä reaktio-olosuhteissa kaikki Fe^+ kompleksoituu EDTA:n kanssa. Fe3+-EDTA-kompleksi aiheuttaa vapaiden radikaalien muodostumista, ja IP^tn kykyä estää salisylaatin hapettumista tutkitaan.
Kokeen tulokset olivat seuraavat: 20 iP^rn pitoisuus, mM Hapettuneen salisylaatin __suhteellinen määrä_ 0 100 2,5 44 • 5 43 25 10 19 IP3 pystyy siis toimimaan radikaalien vastaanottajana estäen siten vapaita radikaaleja aiheuttamasta vahinkoa muille molekyyleille.
Esimerkki 16 30 5 ml vesiliuosta, joka sisälsi 2^umol IPg:ta ja ekvivalenttisen määrän kationeja, titrattiin 10 mM natriumhydroksidiliuoksella.
Kationeina olivat kadmium- ja sinkki-ioni kadmium-kloridin ja sinkkisulfaatin muodossa.
35 Mitattiin pH lisätyn natriumhydroksidimäärän funktiona.
29 8 5 490
Edellä kuvattu koe toistettiin IP^:a käyttäen.
Kokeiden tulos oli se, että pH-alueella 4-8 sinkki sitoutuu IPgiteen lujemmin kuin kadmium. IP3:n tapauksessa asia oli päinvastoin, ts. kadmium sitoutuu 5 lujemmin kuin sinkki.
Esimerkki 17 IP^-kadmium -kompleksin sitoutumisvakiota arvioitiin NMR:n avulla.
Vakiota arvioitiin muilla komplekseilla, kuten 10 EDTA-kadmium ja parvalbumiini-kadmium -kompleksilla, suoritettuja vertailututkimuksia apuna käyttäen.
IP-.-kadmium -kompleksin sitoutumisvakio (K)
9 J
oli 10 .
Esimerkki 18 15 Natriumfytaatin hydrolyysi vehnän fytaasin avulla ja inositolifosfaattien seoksen fraktiointi 1,6 g natriumfytaattia (peräisin maissista, Sigma Chemical Co.) liuotettiin 650 ml:aan natriumasetaatti-puskuria, pH 5,2. Liuokseen lisättiin 2,7 g vehnän fytaa-20 siä (EC 3.1.3.26, 0,015 yksikköä/mg, Sigma Chemical Co.rlta), ja seosta inkuboitiin 38°C:ssa.
Defosforylaatiota seurasi vapautuneen epäorgaanisen fosforin määritys. 3 tunnin kuluttua, jolloin epäorgaanista fosforia oli vapautunut 50 % koko esteri-25 fosforimäärästä, hydrolyysi pysäytettiin lisäämällä 30 ml ammoniakkia, jolloin pH kohosi 12:teen. Saatiin nestemäinen inositolifosfaatteja sisältävä seos.
350 ml seosta johdettiin ioninvaihtopylvään (Dowex 1, kloridimuoto, 25 mm x 250 mm) läpi ja eluoitiin 30 lineaarista suolahappogradienttia (0-0,7 N HCl) käyttäen. Tasaosat eluoituneista fraktioista hydrolysoitiin täydellisesti fosfori- ja inositolisisällön määrittämiseksi. Huiput vastaavat eri inositolifosfaatteja, ts. huipun, jossa fosforin suhde inositoliin on 3:1, muodostaa ino-35 sitolitrifosfaatti, jne. Kaksi fraktiota, joissa fosforin suhde inositoliin oli 3:1, saatiin.
30 8 5 490
Esimerkki 19
Inositolitrifosfaattien fraktiointi 100 ml ensimmäistä esimerkissä 18 saatua jaetta, jossa fosforin suhde inositoliin oli 3:1, neutraloitiin 5 ja saostettiin bariumsulfaattina, sen jälkeen kun siihen oli lisätty ylimäärin 0,1 M bariumasetaattiliuosta.
600 mg saostunutta suolaa liuotettiin 50 ml:aan laimennettua suolahappoa. Liuos jaettiin ioninvaihtopylväässä (Dowex 1, kloridimuoto, 25 mm x 2500 mm) käyttäen eluenttina 10 laimeata suolahappoa. Tasaosat eluoituneista fraktioista analysoitiin fosforin suhteen. Kolme inositolitrifosfaat-ti-isomeereistä koostuvaa huippua voidaan havaita.
Esimerkki 20
Inositolitrifosfaatti-isomeerien rakenteen määri-15 tys NMR:n avulla
Kolme esimerkissä 19 saatua huippua analysoitiin H-NMR:n avulla. Spektritiedot osoittavat, että huiput koostuvat myoinositoli-1,2,6-trifosfaatista, myoinosi-toli-1,2,3-trifosfaatista ja myoinositoli-1,3,4-trifos-20 faatista, tässä järjestyksessä.
Toinen esimerkissä 18 saatu jae, jossa fosfori-inositolisuhde oli 3:1, analysoitiin H-NMR:n avulla.
Tiedot osoittavat, että jae koostuu myoinositoli-1,2,5-trifosfaatista.
25 Esimerkki 21
Inositolitrifosfaattien optisten isomeerien määritys 20 mg yhdisteitä, jotka oli esimerkin 20 mukaisesti H-NMR:n avulla määritetty myoinositoli-1,2,6-30 trifosfaatiksi ja myoinositoli-1,3,4-trifosfaatiksi, käsiteltiin edelleen kromatografisesti asetyloituun selluloosaan pohjautuvassa kiraalisessa pylväässä (20 x 300 mm, Merckiltä) käyttäen eluenttina etanolin ja veden seosta. Jakeet analysoitiin polarimetrillä.
35 Kuten voidaan havaita, kumpikin yhdiste koostuu yhdestä optisesta isomeeristä, D-myoinositoli-1,2,6-trifos-
31 ö 5 4 SO
faatista ja L-myoinositoli-1,3,4-trifosfaatista, vastaavasti .
Esimerkki 22
Natriumfytaatin hydrolyysi leivinhiivan avulla 5 ja inositolifosfaattien seoksen fraktiointi 0,7 g natriumfytaattia (peräisin maissista, Sigma Chemical Co.) liuotettiin 600 ml:aan natriumasetaatti-puskuria, pH 4,6. Liuokseen lisättiin 50 g leivinhiivaa (valmistaja Jästbolaget, Ruotsi; kuiva-ainepitoisuus 10 28 %, typpipitoisuus 2 %, fosforipitoisuus 0,4 %) sekoit taen samalla, ja jatkettiin inkubointia 45°C:ssa. Defos-forylaatiota seurasi vapautuneen epäorgaanisen fosforin määritys. 7 tunnin kuluttua, jolloin 50 % epäorgaanista fosforia oli vapautunut, hydrolyysi pysäytettiin lisää-15 mällä 30 ml ammoniakkia, jolloin pH nousi 12:teen. Suspensio sentrifugoitiin ja supernatantti otettiin talteen.
400 ml supernatanttia laskettiin ioninvaihto-pylvään (Dowex 1, kloridimuoto, 25 mm x 250 mm) läpi ja eluoitiin lineaarista suolahappogradienttia (0-0,7 N 20 HCl) käyttäen.
Tasaosat eluoituneista fraktioista hydrolysoitiin täydellisesti fosfori- ja inositolisisällön määrittämiseksi. Huiput vastaavat eri inositolifosfaatteja, ts. huipun, jossa fosforin suhde inositoliin on 3:1, 25 muodostavat inositolitrifosfaatit, jne.
Esimerkki 23 - Inositolitrifosfaatti-isomeerien rakenteen määritys
Esimerkissä 22 saatu jae, jossa fosfori-inositoli-30 suhde oli 3:1, neutraloitiin ja haihdutettiin ennen H-NMR-analyysia. Spektritiedot osoittavat, että huippu koostuu myoinositoli-1,2,6-trifosfaatista.
Esimerkki 24
Myoinositolitrifosfaattien optisten isomeerien - 35 määritys Käytettiin samaa menetelmää kuin esimerkissä 21
32 8 S 4 9 O
sillä erolla, että analysoitiin 10 mg yhdistettä, joka oli identifioitu NMR:n avulla esimerkin 23 mukaisesti. Kuten voidaan havaita, yhdiste koostuu yhdestä optisesta isomeeristä, D-myoinositoli-1,2,6-trifosfaatista.
5 Esimerkki 25
Ruiskeena annettavaksi soveltuva D-myoinositoli- 1,2,6-trifosfaatin kaliumsuolan liuos 0,5 g Ip3:n kaliumsuolaa ja 0,77 g NaCl:a liuotettiin 98,73 ml:aan injektioihin tarkoitettua vettä, jolloin 10 muodostui liuos, joka soveltuu injektoitavaksi ihmiseen tai eläimeen.
Esimerkki 26 D-myoinositoli-1,2,6-trifosfaatin kalsiumsuolaa sisältävät tabletit 15 D-myoinositoli-1,2,6-trifosfaatin kalsiumsuolaa sisältävät tabletit valmistettiin seuraavasti. Sekoitettiin 50 g D-myoinositoli-1,2,6-trifosfaatin kalsium-suolaa, 132 g laktoosia ja 6 g arabikumia. Sitten seokseen lisättiin puhdistettua vettä, minkä jälkeen sekoi-20 tusta jatkettiin, kunnes saavutettiin sopiva konsis-tenssi. Seos kuivattiin ja seulottiin. Sitten seokseen sekoitettiin 10 g talkkia ja 2 g magnesiumstearaattia.
Seos puristettiin 200 mg:n painoisiksi tableteiksi.
Paremman käsityksen saamiseksi keksinnöstä alla - 25 esitetään valmistettujen IP3-isomeerien kaavat. Kaa voja esitetään myös IPg:lle, IP5:lle, IP^lle ja IP2:He.
Myoinositolin alemmat fosfaattiesterit nimetään sen mukaan, missä kohdassa inositolirengasta fosfori-30 happoryhmät sijaitsevat, ja niin, että numerointi antaa tulokseksi mahdollisimman alhaiset sijaintinumerot, L ja D vastaavat myötäpäiväistä ja vastapäiväistä laskentaa, tässä järjestyksessä, ja niitä käytetään sen mukaan, kumpi johtaa pienempään sijaintinumeroiden sum-. .; 35 maan. Hiiliatomilla, johon on liittynyt aksiaalinen - fosforihapporyhmä, on aina sijaintinumero 2. Alla olevat rakennekaavat on yksinkertaistettu happomuotoon.
33 8 5 4 90
; . <0H
HO πκ ' myoinositoli; CgH^ 5 kJl/ 1,2,3,4,5,6-heksakis- ( p I _ (divetyf osf aatti) myoino- Γ^Λ sitoli, vaihtoehtoisesti
15 v J Vp J
s>—' - myoinositoliheksakis- (fosfaatti) eli IP, .___ o ^ ^ D-myoinositoli-1,2,6-tri- fosfaatti eli D-1,2,6-IP-.
20 (p) ^vp) J
Oy N-' D-myoinositoli-1,2,5- ‘ * '' trifosfaatti eli D-1,2,5-IP3 · (jT\ V/y myoinositoli-1,2,3-tri- 30 fosfaatti eli 1,2,3-IP^ ....: P = 0-P03H2 34 85490 ύ^^00 ,Χ L-myoinositoli-1,2-di- 0Η fosfaatti eli L-1,2-IP2 5 ^ Ο Vy D-myoinositoli-1,2,5,6- (ρ\ tetrafosfaatti eli (f) D-1,2,5,6-IP^ 10 Ay ^ /^T\ L-myoinositoli-1,2,3,4,5- y^r\ pentaf osf aatti eli 15 (j9 L-1,2,3,4,5-IP5 P = -0-P03II2

Claims (9)

35 8 5 4 90
1. Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten inositolitrifosfaattien (IP3) valmistamiseksi, jotka kuu- 5 luvat ryhmään, jonka muodostavat D-myoinositoli-1,2,6-trifosfaatti, D-myoinositoli-1,2,5-trifosfaatti, L-myo-inositoli-1,3,4-trifosfaatti ja myoinositoli-1,2,3-tri-fosfaatti, joko happo- tai suolamuodossa, tunnet-t u siitä, että inositoliheksafosfaattia sisältävää ma-10 teriaalia inkuboidaan 20 - 70 °C:n lämpötilassa pH:n ollessa 4-8 fytaasin kanssa, kunnes 30 - 60 % koko este-rifosforista on vapautunut, saatu seos erotetaan kromato-grafisesti jakeisiin inositolitrifosfaattia sisältävän jakeen or4 s läntiseksi, mainittu jae jaetaan edelleen kro-15 matografisesti ja tietty IP3-isomeeri eristetään happo-tai suolamuodossa liuoksena.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että fytaasi on hiivan fytaasi.
3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, 20 tunnettu siitä, että valmistetaan D-myoinosito-li-1,2,6-trifosfaattia joko happo- tai suolamuodossa in-kuboimalla inositoliheksafosfaattia sisältävää materiaalia leivinhiivan fytaasin kanssa.
4. Jonkin patenttivaatimuksista 1-3 mukainen me-25 netelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan IP3 - suola, joka on kalsium-, sinkki-, kupari- tai magnesium-suola tai kahden tai useamman niistä seos.
5. Jonkin patenttivaatimuksista 1-4 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan D- 30 myoinositoli-1,2,6-trifosfaattia, jonka kaava on / o* TH : 35 OPOj" OPOj" j 36 ti 5 4 90 jossa X on vety ja/tai vähintään yksi yksi-, kaksi- tai moniarvoinen kationi; n on ionien lukumäärä; ja z on kunkin eri ionin varaus.
6. Jonkin patenttivaatimuksista 1-4 mukainen me-5 netelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan D-my- oinositoli-1,2,5-trifosfaatti, jonka kaava on / 0P0?" \ / 2- OH J 1 n . ΧΙΟ ,. I \ on \^opc3 jossa X on vety ja/tai vähintään yksi yksi-, kaksi- tai moniarvoinen kationi; n on ionien lukumäärä; ja z on kun-15 kin eri ionin varaus.
7. Jonkin patenttivaatimuksista 1-4 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan myoi-nositoli-1,2,3-trifosfaattia, jonka kaava on I j "· jossa X on vety ja/tai vähintään yksi yksi-, kaksi- tai 25 moniarvoinen kationi; n on ionien lukumäärä; ja z on kunkin eri ionin varaus.
8. Jonkin patenttivaatimuksista 1-4 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan L-myoinositoli-1,3,4-trifosfaattia, jonka kaava on 30 / 2- O» \ f 0P0) I zi* ^7po23-^\^oio32' . ‘ : 35 / 37 d 5 4 90 jossa X on vety ja/tai vähintään yksi yksi-, kaksi- tai moniarvoinen kationi; n on ionien lukumäärä; ja z on kunkin eri ionin varaus. 38 b 5 4
9 O
FI854126A 1984-10-23 1985-10-22 Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbara inositoltrifosfat. FI85490C (fi)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SE8405295 1984-10-23
SE8405295A SE465951B (sv) 1984-10-23 1984-10-23 Isomer av inositoltrifosfat foeretraedesvis i saltform foer anvaendning som terapeutiskt eller profylaktiskt medel samt kompositioner daerav

Publications (4)

Publication Number Publication Date
FI854126A0 FI854126A0 (fi) 1985-10-22
FI854126L FI854126L (fi) 1986-04-24
FI85490B true FI85490B (fi) 1992-01-15
FI85490C FI85490C (fi) 1992-04-27

Family

ID=20357457

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI854127A FI82474C (fi) 1984-10-23 1985-10-22 Inositoltrifosfat och foerfarande foer dess produktion.
FI854128A FI88855C (fi) 1984-10-23 1985-10-22 Foerfarande foer framstaellning av en livsmedelskomposition som innehaoller inositoltrifosfat
FI854126A FI85490C (fi) 1984-10-23 1985-10-22 Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbara inositoltrifosfat.

Family Applications Before (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI854127A FI82474C (fi) 1984-10-23 1985-10-22 Inositoltrifosfat och foerfarande foer dess produktion.
FI854128A FI88855C (fi) 1984-10-23 1985-10-22 Foerfarande foer framstaellning av en livsmedelskomposition som innehaoller inositoltrifosfat

Country Status (19)

Country Link
US (7) US4734283A (fi)
EP (3) EP0179440B1 (fi)
JP (4) JPS61171491A (fi)
AT (3) ATE37788T1 (fi)
AU (3) AU589378B2 (fi)
BE (2) BE903498A (fi)
CH (2) CH668597A5 (fi)
DE (6) DE3537542A1 (fi)
DK (2) DK172857B1 (fi)
FI (3) FI82474C (fi)
FR (2) FR2573080B1 (fi)
GB (3) GB2167298B (fi)
HU (1) HU196077B (fi)
IL (1) IL76777A (fi)
IT (2) IT1190403B (fi)
NO (3) NO854211L (fi)
NZ (1) NZ213855A (fi)
SE (6) SE465951B (fi)
ZA (4) ZA858105B (fi)

Families Citing this family (73)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5095035A (en) * 1981-07-31 1992-03-10 Eby Iii George A Flavor stable zinc acetate compositions for oral absorption
SE465951B (sv) 1984-10-23 1991-11-25 Perstorp Ab Isomer av inositoltrifosfat foeretraedesvis i saltform foer anvaendning som terapeutiskt eller profylaktiskt medel samt kompositioner daerav
US4735902A (en) * 1984-10-23 1988-04-05 Matti Siren Stabilized composition containing inositoltriphosphate
US5128332A (en) * 1984-10-23 1992-07-07 Perstorp Ab Method of treating cardiovascular diseases using inositoltrisphosphate
US5407924A (en) * 1984-10-23 1995-04-18 Perstorp Ab Method of treating pain using inositol triphosphate
SE465305B (sv) * 1986-04-16 1991-08-26 Perstorp Ab Anvaendning av inositolfosfat foer framstaellning av ett laekemedel
US5330979A (en) * 1984-10-23 1994-07-19 Perstorp Ab Method of treating renal disorders with inositoltriphosphate
JPS63198642A (ja) * 1986-03-11 1988-08-17 Mitsui Toatsu Chem Inc ミオイノシトール誘導体の製造方法
DE3783694T2 (de) * 1986-03-11 1993-05-19 Mitsui Toatsu Chemicals Verfahren zur herstellung von myoinositolabkoemmlingen.
US5057507A (en) * 1986-04-16 1991-10-15 Perstorp Ab Method of alleviating bone damage with inositoltriphosphate
EP0438386A4 (en) * 1986-11-05 1991-09-11 George Weston Foods Limited Novel improvers for flour and yeast raised baked goods
US5274161A (en) * 1986-11-26 1993-12-28 Perstorp Ab Derivatives of cyclohexane
SE8605063D0 (sv) * 1986-11-26 1986-11-26 Matti Siren Derivatives of cyclohexane
GB8705811D0 (en) * 1987-03-11 1987-04-15 Research Corp Ltd Inositol derivatives
JP2597618B2 (ja) * 1987-12-28 1997-04-09 三井東圧化学 株式会社 光学分割方法
JPH01287035A (ja) * 1988-05-13 1989-11-17 Sanwa Kagaku Kenkyusho Co Ltd 薬物並びにアルコール性中毒の予防剤とその治療剤
JPH01294631A (ja) * 1988-05-19 1989-11-28 Sanwa Kagaku Kenkyusho Co Ltd 糖尿性疾患治療予防剤及び飲食、し好物
SE464059C (sv) * 1988-09-15 1997-06-02 Perstorp Ab Användning av inositoltrifosfat för framställning av läkemedel
US5366736A (en) * 1989-02-16 1994-11-22 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Vitamin D derivative feed compositions and methods of use
US5316770A (en) * 1989-02-16 1994-05-31 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Vitamin D derivative feed compositions and methods of use
JPH04504847A (ja) * 1989-03-08 1992-08-27 ザ　ユニバーシティ　オヴ　バージニア　パテント　ファウンデーション インスリン抵抗性糖尿病のための食事用補添物
US5428066A (en) * 1989-03-08 1995-06-27 Larner; Joseph Method of reducing elevated blood sugar in humans
US5427956A (en) * 1989-03-08 1995-06-27 The University Of Virginia Patent Foundation Quantitative analysis for diabetic condition predictor
US5750348A (en) * 1989-03-08 1998-05-12 The University Of Virginia Patents Foundation Method for detecting insulin resistance
SE8902766D0 (sv) * 1989-08-17 1989-08-17 Siren Matti Saett att oeka den farmaceutiska effekten av inositolfosfat samt en beredning med foerbaettrad farmaceutisk effekt
SE8904355D0 (sv) * 1989-12-21 1989-12-21 Perstorp Ab Medicament
US5593963A (en) * 1990-09-21 1997-01-14 Mogen International Expression of phytase in plants
KR100225087B1 (ko) * 1990-03-23 1999-10-15 한스 발터라벤 피타아제의 식물내 발현
US7033627B2 (en) 1990-03-23 2006-04-25 Syngenta Mogen B.V. Production of enzymes in seeds and their use
US5543576A (en) * 1990-03-23 1996-08-06 Mogen International Production of enzymes in seeds and their use
SE9002278L (sv) * 1990-06-28 1991-12-29 Perstorp Ab Anvaendning av inositoltrisfosfat foer framstaellning av ett laekemedel
US6007809A (en) * 1990-08-29 1999-12-28 Chaykin; Sterling Method and product for eliminating undesirable side effects of eating vegetables such as onion or garlic
KR930702013A (ko) * 1990-08-29 1993-09-08 차이킨 스터얼링 양파 또는 마늘과 같은 채소류를 섭취하는 데에 있어서 바람직하지 않은 부작용을 제거하기 위한 방법 및 생성물
US5514398A (en) * 1990-11-05 1996-05-07 Amano Pharmaceutical Co., Ltd. Food additive and use thereof
SE9102068L (sv) * 1991-07-03 1993-01-04 Perstorp Ab Derivat av inositol, kompositioner innehaallande dessa samt anvaendning daerav
SE469260B (sv) * 1992-02-25 1993-06-14 Perstorp Ab En farmaceutisk komposition med foerbaettrad biotillgaenglighet avseende inositolfosfat
US5292537A (en) * 1992-11-12 1994-03-08 Bran Tec, Inc. Method for stabilizing rice bran and rice bran products
JP2696057B2 (ja) * 1993-05-11 1998-01-14 ニチモウ株式会社 穀類を原料とした生成物の製造方法
US5827837A (en) * 1993-08-20 1998-10-27 The Regents Of The University Of California Polyanion anti-inflammatory agents
SE503122C2 (sv) * 1993-11-22 1996-03-25 Perstorp Ab Användning av en inositoltrisfosfatester för behandling av inflammatoriska tillstånd
SE502989C2 (sv) * 1993-11-22 1996-03-04 Perstorp Ab Användning av en inositoltrisfosfatester för beredning av läkemedel
US5466465A (en) * 1993-12-30 1995-11-14 Harrogate Holdings, Limited Transdermal drug delivery system
SE502574C2 (sv) * 1994-01-25 1995-11-13 Perstorp Ab En farmaceutisk komposition med förbättrad biotillgänglighet hos inositolfosfat
US6451572B1 (en) 1998-06-25 2002-09-17 Cornell Research Foundation, Inc. Overexpression of phytase genes in yeast systems
ES2248067T3 (es) 1999-03-31 2006-03-16 Cornell Research Foundation, Inc. Fosfatasas con actividad de fitasa mejorada.
US6841370B1 (en) 1999-11-18 2005-01-11 Cornell Research Foundation, Inc. Site-directed mutagenesis of Escherichia coli phytase
US6383817B2 (en) 1999-12-30 2002-05-07 Wake Forest University Cadmium is a risk factor for human pancreatic cancer
US20020193379A1 (en) * 2001-06-05 2002-12-19 Insmed Incorporated Compositions and methods for decreasing the risk of or preventing neural tube disorders in mammals
FR2828206B1 (fr) * 2001-08-03 2004-09-24 Centre Nat Rech Scient Utilisation d'inhibiteurs des lysyl oxydases pour la culture cellulaire et le genie tissulaire
AU2002356880A1 (en) 2001-10-31 2003-05-12 Phytex, Llc Phytase-containing animal food and method
US20050108780A1 (en) * 2002-01-24 2005-05-19 Erasmus University Intracellular antibodies for a retrovirus protein
US7084115B2 (en) 2002-04-29 2006-08-01 Oxyplus, Inc. Inositol pyrophosphates, and methods of use thereof
CA2498017C (en) * 2002-09-13 2016-06-14 Cornell Research Foundation, Inc. Using mutations to improve aspergillus phytases
CA2413240A1 (en) * 2002-11-29 2004-05-29 Mcn Bioproducts Inc. Purification of inositol from plant materials
US20050123644A1 (en) * 2003-01-24 2005-06-09 Cargill, Incorporated Phosphate-containing fertilizer derived from steepwater
US7521481B2 (en) 2003-02-27 2009-04-21 Mclaurin Joanne Methods of preventing, treating and diagnosing disorders of protein aggregation
US20050048165A1 (en) * 2003-03-31 2005-03-03 Sadanandan Bindu Process for the preparation of Chapathi dough with reduced phytic acid level
US7745423B2 (en) * 2004-07-06 2010-06-29 NormOxys, Inc Calcium/sodium salt of inositol tripyrophosphate as an allosteric effector of hemoglobin
US20060258626A1 (en) * 2004-07-06 2006-11-16 Claude Nicolau Use of inositol-tripyrophosphate in treating tumors and diseases
US20070135389A1 (en) * 2004-07-06 2007-06-14 Claude Nicolau Tumor eradication by inositol-tripyrophosphate
US20060106000A1 (en) * 2004-07-06 2006-05-18 Claude Nicolau Use of inositol-tripyrophosphate in treating tumors and diseases
JP5028405B2 (ja) * 2005-03-18 2012-09-19 ノームオクシス インコーポレイテッド ヘモグロビンのアロステリックエフェクターとしてのミオイノシトール１，６：２，３：４，５トリピロリン酸のカルシウム塩
US7919297B2 (en) 2006-02-21 2011-04-05 Cornell Research Foundation, Inc. Mutants of Aspergillus niger PhyA phytase and Aspergillus fumigatus phytase
US20070212449A1 (en) * 2006-03-02 2007-09-13 Shamsuddin Abulkalam M Reduction of the titratable acidity and the prevention of tooth and other bone degeneration
WO2008017066A2 (en) * 2006-08-03 2008-02-07 Cornell Research Foundation, Inc. Phytases with improved thermal stability
US20110218176A1 (en) 2006-11-01 2011-09-08 Barbara Brooke Jennings-Spring Compounds, methods, and treatments for abnormal signaling pathways for prenatal and postnatal development
US20090214474A1 (en) * 2006-11-01 2009-08-27 Barbara Brooke Jennings Compounds, methods, and treatments for abnormal signaling pathways for prenatal and postnatal development
US20080103116A1 (en) * 2006-11-01 2008-05-01 Jennings-Spring Barbara L Method of treatment and compositions of D-chiro inositol and phosphates thereof
AU2008246061A1 (en) * 2007-05-01 2008-11-06 Normoxys, Inc. Erythropoietin complementation or replacement
US8192734B2 (en) 2007-07-09 2012-06-05 Cornell University Compositions and methods for bone strengthening
CA2699854A1 (en) * 2007-09-17 2009-03-26 Bioneris Ab Use of compounds comprising phosphorous for the treatment of cachexia
ES2604110T3 (es) * 2011-07-01 2017-03-03 Shiseido Company, Ltd. Activador de la producción del factor de crecimiento derivado de plaquetas-BB, y activador de la producción de células madre mesenquimatosas, estabilizador de células madre y regenerador de la dermis comprendiendo cada uno el mismo
FR3017134B1 (fr) * 2014-02-06 2018-04-20 Lesaffre Et Compagnie Levure biologique, procede d'obtention et utilisations

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2723938A (en) * 1952-12-05 1955-11-15 Bristol Lab Inc Aqueous penicillin suspensions comprising inositol phosphoric acids and their salts
US3591665A (en) * 1967-09-08 1971-07-06 Mitsui Toatsu Chemicals Process for producing phytic acid
FI51469C (fi) * 1968-01-10 1977-01-10 Morinaga Milk Industry Co Ltd Menetelmä radioaktiivisen strontium 90 saasteen poistamiseksi nestemäi sistä elintarvikkeista tai vedestä.
JPS50111246A (fi) * 1974-02-14 1975-09-01
US4154824A (en) * 1976-07-20 1979-05-15 Interx Research Corporation Nonbitter tasting potassium product for oral administration to warm-blooded animals and method for preparing same
JPS53124636A (en) * 1977-04-04 1978-10-31 Kisaku Mori Method of increasing meranine contained in animal and plant
DE2740053A1 (de) * 1977-09-06 1979-05-03 Klaus Prof Dr Med Gersonde Verwendung von allosterischen effektoren mit hilfe von lipidvesikeln ueber eine irreversible inkorporierung zwecks verbesserter o tief 2 -entladung des haemoglobins in erythrozyten
JPS5486666A (en) * 1977-12-22 1979-07-10 Ajinomoto Kk Cola beverage
JPS5798292A (en) * 1980-12-09 1982-06-18 Jiyaade:Kk Powdery phytic acid and its preparation
JPS58198254A (ja) * 1982-05-14 1983-11-18 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd 加工食品の品質改良法
SE450325B (sv) * 1983-02-23 1987-06-22 Tricum Ab Kostfiberprodukt baserad pa skaldelar fran froet hos ceralier
SE465951B (sv) * 1984-10-23 1991-11-25 Perstorp Ab Isomer av inositoltrifosfat foeretraedesvis i saltform foer anvaendning som terapeutiskt eller profylaktiskt medel samt kompositioner daerav
US4735902A (en) * 1984-10-23 1988-04-05 Matti Siren Stabilized composition containing inositoltriphosphate
AU2001248278A1 (en) 2000-04-13 2001-10-30 Novozymes A/S Extracellular expression of pectate lyase using bacillus or escherichia coli

Also Published As

Publication number Publication date
JPS61171789A (ja) 1986-08-02
SE8504968D0 (sv) 1985-10-22
GB8526079D0 (en) 1985-11-27
JPH0338824B2 (fi) 1991-06-11
FI85490C (fi) 1992-04-27
SE8504968L (sv) 1986-04-24
AU4893285A (en) 1986-05-01
EP0179440A1 (en) 1986-04-30
GB2167283A (en) 1986-05-29
IL76777A (en) 1990-09-17
FI854126L (fi) 1986-04-24
FR2571967A1 (fr) 1986-04-25
SE8503164L (sv) 1986-04-24
JPH0354924B2 (fi) 1991-08-21
AU4893185A (en) 1986-05-01
IT8522573A0 (it) 1985-10-22
US4794014A (en) 1988-12-27
ZA858105B (en) 1986-06-25
FI854128A0 (fi) 1985-10-22
ZA858108B (en) 1986-06-25
SE465164B (sv) 1991-08-05
NO168227B (no) 1991-10-21
US5003098A (en) 1991-03-26
DK483385A (da) 1986-04-24
SE8504967L (sv) 1986-04-24
SE8504969D0 (sv) 1985-10-22
FI854128L (fi) 1986-04-24
JPS61181347A (ja) 1986-08-14
NO854211L (no) 1986-04-24
ZA858106B (en) 1986-06-25
US4851560A (en) 1989-07-25
CH668597A5 (fr) 1989-01-13
EP0179441A2 (en) 1986-04-30
GB8526080D0 (en) 1985-11-27
FI82474C (fi) 1991-03-11
FR2573080B1 (fr) 1988-11-10
ATE53038T1 (de) 1990-06-15
AU589378B2 (en) 1989-10-12
SE8504967D0 (sv) 1985-10-22
US4735936A (en) 1988-04-05
ZA858107B (en) 1986-06-25
NO854212L (no) 1986-04-24
FI82474B (fi) 1990-11-30
GB2169602A (en) 1986-07-16
GB2167298A (en) 1986-05-29
IT1190402B (it) 1988-02-16
IT8522574A0 (it) 1985-10-22
FI88855B (fi) 1993-04-15
GB2167298B (en) 1988-11-02
EP0179440B1 (en) 1990-05-23
NO854213L (no) 1986-04-24
NZ213855A (en) 1989-05-29
GB8526078D0 (en) 1985-11-27
SE8503165D0 (sv) 1985-06-26
FI854127L (fi) 1986-04-24
DK483385D0 (da) 1985-10-22
JPH0515719B2 (fi) 1993-03-02
HUT40674A (en) 1987-01-28
EP0179439A1 (en) 1986-04-30
DK483285A (da) 1986-04-24
FR2573080A1 (fr) 1986-05-16
SE8405295D0 (sv) 1984-10-23
JPS61171422A (ja) 1986-08-02
SE465951B (sv) 1991-11-25
DE3569188D1 (en) 1989-05-11
AU596080B2 (en) 1990-04-26
IL76777A0 (en) 1986-02-28
SE8503164D0 (sv) 1985-06-26
EP0179441A3 (en) 1988-03-16
FR2571967B1 (fr) 1988-02-05
SE8405295L (sv) 1986-04-24
BE903498A (fr) 1986-02-17
FI88855C (fi) 1993-07-26
SE8503165L (sv) 1986-04-24
IT1190403B (it) 1988-02-16
GB2169602B (en) 1988-10-19
DE3537569A1 (de) 1986-05-22
DE3537542A1 (de) 1986-05-15
SE8504969L (sv) 1986-04-24
NO169010B (no) 1992-01-20
NO169010C (no) 1992-04-29
DK172857B1 (da) 1999-08-16
BE903497A (fr) 1986-02-17
DE3537550A1 (de) 1986-05-15
US4797390A (en) 1989-01-10
FI854127A0 (fi) 1985-10-22
AU582594B2 (en) 1989-04-06
JPS61171491A (ja) 1986-08-02
NO168227C (no) 1992-01-29
EP0179441B1 (en) 1989-04-05
JPH037233B2 (fi) 1991-02-01
AU4893085A (en) 1986-05-01
GB2167283B (en) 1989-05-24
DK172852B1 (da) 1999-08-16
ATE41853T1 (de) 1989-04-15
FI854126A0 (fi) 1985-10-22
CH666812A5 (fr) 1988-08-31
US4734283A (en) 1988-03-29
DE3577851D1 (de) 1990-06-28
US4777134A (en) 1988-10-11
EP0179439B1 (en) 1988-10-12
HU196077B (en) 1988-09-28
ATE37788T1 (de) 1988-10-15
DE3565464D1 (en) 1988-11-17
DK483285D0 (da) 1985-10-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
FI85490B (fi) Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbara inositoltrifosfat.
EP0252227B1 (en) Use of inositol triphosphate in the treatment of metal intoxication
CA1337338C (en) Inositoltriphosphate
US5023248A (en) Method of treating diabetes with inositol triphosphate
US5015634A (en) Method of treating tissue damage with inositol triphosphate
JPS6133118A (ja) 抗脳性酸素欠乏症代謝賦活剤
US5135923A (en) Method of treating cardiovascular diseases
US5057507A (en) Method of alleviating bone damage with inositoltriphosphate
CN111031813A (zh) 用于预防和治疗心血管器官病症的组合物
WO1984004922A1 (en) Copper complex for treating cancer
JP2001506277A (ja) マグネシウム吸収を高め、アテローム性動脈硬化症を防ぐ方法
JPH0128006B2 (fi)

Legal Events

Date Code Title Description
MM Patent lapsed

Owner name: PERSTORP AB