HU196077B - Process for producing inosite-triphosphates and pharmaceutical preparations containing such compounds - Google Patents

Process for producing inosite-triphosphates and pharmaceutical preparations containing such compounds Download PDF

Info

Publication number
HU196077B
HU196077B HU854074A HU407485A HU196077B HU 196077 B HU196077 B HU 196077B HU 854074 A HU854074 A HU 854074A HU 407485 A HU407485 A HU 407485A HU 196077 B HU196077 B HU 196077B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
inositol
triphosphate
myo
salt
acid
Prior art date
Application number
HU854074A
Other languages
English (en)
Other versions
HUT40674A (en
Inventor
Siren Matti
Original Assignee
Siren Matti
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Siren Matti filed Critical Siren Matti
Publication of HUT40674A publication Critical patent/HUT40674A/hu
Publication of HU196077B publication Critical patent/HU196077B/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/06—Phosphorus compounds without P—C bonds
    • C07F9/08—Esters of oxyacids of phosphorus
    • C07F9/09—Esters of phosphoric acids
    • C07F9/117—Esters of phosphoric acids with cycloaliphatic alcohols
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A21—BAKING; EDIBLE DOUGHS
    • A21D—TREATMENT, e.g. PRESERVATION, OF FLOUR OR DOUGH, e.g. BY ADDITION OF MATERIALS; BAKING; BAKERY PRODUCTS; PRESERVATION THEREOF
    • A21D2/00—Treatment of flour or dough by adding materials thereto before or during baking
    • A21D2/08—Treatment of flour or dough by adding materials thereto before or during baking by adding organic substances
    • A21D2/30—Organic phosphorus compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23B—PRESERVING, e.g. BY CANNING, MEAT, FISH, EGGS, FRUIT, VEGETABLES, EDIBLE SEEDS; CHEMICAL RIPENING OF FRUIT OR VEGETABLES; THE PRESERVED, RIPENED, OR CANNED PRODUCTS
    • A23B7/00—Preservation or chemical ripening of fruit or vegetables
    • A23B7/14—Preserving or ripening with chemicals not covered by groups A23B7/08 or A23B7/10
    • A23B7/153—Preserving or ripening with chemicals not covered by groups A23B7/08 or A23B7/10 in the form of liquids or solids
    • A23B7/154—Organic compounds; Microorganisms; Enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L29/00—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
    • A23L29/03—Organic compounds
    • A23L29/05—Organic compounds containing phosphorus as heteroatom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L3/00—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs
    • A23L3/34—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs by treatment with chemicals
    • A23L3/3454—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs by treatment with chemicals in the form of liquids or solids
    • A23L3/3463—Organic compounds; Microorganisms; Enzymes
    • A23L3/3553—Organic compounds containing phosphorus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/66—Phosphorus compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/24—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing atoms other than carbon, hydrogen, oxygen, halogen, nitrogen or sulfur, e.g. cyclomethicone or phospholipids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A61P39/02—Antidotes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P9/00—Preparation of organic compounds containing a metal or atom other than H, N, C, O, S or halogen

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)

Description

A találmány tárgya speciális inozit-trifoszfát vegyületek (IP3) és hatóanyagként ilyen vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítási eljárása.
Még az 1900-as évek elején több kutató beszámolt a fitinsav, vagyis az 1,2,3,4,5,6-hexakis-(dihidrogén-foszfát)-mio-inozit felfedezéséről növényekben (ezt az anyagot néha inozit-hexafoszfátnak is hívják). A fitinsav-tartalom különböző növényekben jelentős mértékben változó. A gabonában ez mintegy 0,52%-bán van jelen, bizonyos kivételekkel. A hántolt rizsben ennek a szintje csupán 0,1%, míg a vadrizsben elérheti a 2,2% fitinsav-mennyiséget. A babfélék 0,4-2%-ot. az olajos növények mintegy 2-5%-ot, és a pollen 0.3—2%-ot tartalmaz. A fitinsav tartalom a növényekben változik a növekedési periódus során. A fitinsav-tartalmat befolyásolja többek között az éghajlat is.
Az irodalomban vannak beszámolók az inozit-pentafoszfát (IP5) és inozit-tetrafoszfát (IP4) jelenlétéről is néhány növényben. Az is ismeretes továbbá, hogy az IP6-nál kisebb foszforszámú származékok keletkeznek a magvak csírázásakor. így például a csírázásnál a végtermékek az inozit és a foszfát. Az IP6 alkalmazását számot tudományos közleményben leírták, A közlemények szerzőinek többsége megfigyelt több negatív hatást emberekre és állatokra, amikor IP6-ot, vagy IP6-ot, tartalmazó anyagokat fogyasztottak Kutyák etetése túl nagy mennyiségű IP6-tal, például angolkórt okoz. Emberekben cinkhiányt és ennek következményeként a gyermekek lassabb fejlődését figyelték meg. Főleg nőkben vérszegénységet figyeltek meg. A fentebb említett negatív hatások miatt az ásványi anyag mérlegre állatokban és emberekben kísérleteket végeztek arra, hogyan csökkenthessék minimumra az IP6-nak és származékainak a bejutását szervezetbe.
A Chemical Amstract-ban 33 (1939), 7351, 3/4 beszámoltak a foszfátok beleértve az inozit-foszfátot is, alkalmazásáról angolkór elleni étrendben. Nem tettek említést, hogy ténylegesen melyik inozit-foszfátról van szó, és azt sem említették, hogy fémet vinnének ilyen módon komplexbe.
Ismert továbbá (pl. Bull. Sté. Cilim. Bioi. 36, 9 (1956) 85/ hogy fitinsavat emelt hőmérsékleten hígított sósavval hidrolizálva rövidszénláncú inozitfoszfátok (IP5, IP4. IP3, IP2) és inozit monofoszfátok (IP,) állíthatók elő, amelyek mindegyike több izomer formájában létezik. Az IP3 például 20 különböző izomer formájában létezik.
Az IP3 egyik jellemző izomeqét, a D-mio-inozit-1.4.5 trifoszfátot például a Blochem. Biophys Rés. Commun. 120, 2 (1984) 881 irodalmi közleményben ismertetik. Ez a vegyület az emberi testben mint sejten belüli kalcium-mobilizátor ismert és a sejtmembránból könnyen Izolálható.
Nem ismeretesek azonban a különböző inozit-trifoszfátok többi izomeijének tulajdonságai. Ily módon a nagyszámú IP3 izomerek egymástól való elválasztása és szerkezetük, valamint tulajdonságaik meghatározása igen nehéz. Mostanáig nem volt ismert olyan módszer, amellyel az előzőekben említett D-mio-inozit-l,4,5-trifoszfáttól eltérő izomer előállítható lenne. További nehézséget jelent, hogy az IP3 hidrolitikus előállítási eljárása során az izomerek átrendeződése IPj és/vagy IPt vegyületekké vagy az inozittá történő további defoszforileződése megy végbe. '
A fenti nehézségek miatt nem ismertek az IP3 D-mio-inozit-1,4 5-trifoszfáttól eltérő tiszta izomer’jeinek jellemző tulajdonságai.
Felismertük, hogy az IP3 vegyületek képesek az emberi szervezetbe jutott kadmium, alumínium, valamint az ezek révén indukált szabad gyökök által okozott megbetegedéseket megelőzni, vagy gyógyítani.
A kadmium, amely környezetünkben gyakorlatilag mindenhol jelen van, elsősorban dohányzás, étkezés vagy vlzlvás révén kerül a szervezetbe és például szív- és érrendszerbeli elváltozások, rák, magas vérnyomás, köztponti idegrendszert károsító elváltozások reumatikus, allergiás, tüdő- és veséelváltozások fokozott vérlemezke-aggregáció okozója lehet.
Hasonlóképpen káros elváltozásokat okozhat a szervezetbe jutott alumínium, így például növelheti a lipid-peroxid-képzést a biológiai membránokban.
Mindezideig a kadmium- és alumínium káros hatásának kiküszöbölésére mellékhatás nélküli szert még nem találtak.
Találmányunk célja ezek alapján az IP3 különböző izomeijelnek elválasztása és a lényegében tiszta formában történő előállítása. Találmányunk szerinti eljárás során az IP3 izomereket előnyösen sóik formájában állítjuk elő, mivel ezek tiszta formában való előállítása könnyebb.
Találmányunk szerinti eljárással D-mio-inozit-1,2,-6 trifoszfát D-mio-inozit-l,2,3-trifoszfát, L-mio-inozit-l,3,4-trifoszfát és mio-inozit-l,2,3-trifoszfát IP3 izomereket állítunk elő sav- vagy só formájában lényegében tiszta formában.
Az IP3 vegyületek sav-formáját általában vizes oldatban nyeljük és a sav mennyisége általában 1045 előnyösen 15-45. még előnyösebben 20—45 t% az oldat teljes mennyiségére számítva.
Az IP3- izomerek sóit általában a savakból állítjuk elő ismert eljárások segítségével. Általában alkáli- és földalkáli-sókat, így például lítium-, nátrium-, kálium-, kalcium- vagy magnézium-sókat állítunk elő, de igen előnyösek az ammónium- vagy szerves amin-sók, továbbá a kevert sók is. A sóképzéshez felhasználható szerves aminok előnyösen a következők lehetnek: trietanol-amin, dietanoí-amin, triizopropanol-amin,N,N-dimetil-2-amino-2-metil-l-propanolΝ,Ν-dimetiI-etanol-amin, tetrabutil-amin, ciklohexil-amin. Ezeken kívül bármely, fiziológiásán elfogadható só képzésére alkamas vegyület is felhasználható.
Az IP3 izomerjeinek előállítására kiindulási anyagként IP6, IP5 vagy 1P4 vegyületeket vagy legalább egy ilyen vegyületeket tartalmazó természetes eredetű terméket alkalmazunk. Előnyösen az IP6 tartalmú anyag mivel ez a legkönnyebben hozzáférhető. Amennnyiben kündulási anyagként természetes eredetű terméket használunk, előnyös, ha annak inozit-foszfát-tartalma (IP6 : IPS ♦ IP4) legalább 0,3, előnyösen 1 t%.
Különösen alkalmas termékek a gabonafélék, különösen a korpa pollen, bab, valamint az Olajos növények-Ezek mindegyike tartalmaz IP6-ot.
Elvileg az IP3 Izomerek előállítására például a következő eljárások alkalmazhatók:
1) A kündulási IP4, IPS és/vagy IP6 enzlmatikus bontása.
2) A kiindulási IP4, IP5 és/vagy IP6 kémiai hidrolízise.
3) Kémiai szintézis, például IP], IP2 vagy inozit kiindulási anyagokból,
4) Enzimatikus szintézis, például inozit, IP,, IP2 és foszfát kiindulási anyagokból,
5) Mikrobiológiai eljárás, beleértve például a DNShibridizációs technikát is,
6) Inozit-foszfát kémiai vagy enzimatikus migrációja vagy a szubsztituált inozit-foszfát-vegyületek kémiai vagy enzimatikus hidrolízise, vagy a fenti eljárások kombinációja.
Mindazonáltal, ezen eljárások alkalmazásával csak az izomerek keverékét lehet előállítani, amelyek elválasztása. ha egyáltalán lehetséges, igen nehéz.
A találmány szerinti eljárásnál kiindulási anyagként előnyösen IP6 tartalmú anyagot használunk, amelyet enzimatikus úton, fitáz-enzim alkalmazásával alakítunk IP3 vegyületté. A fitáz-enzim általában minden inozit-foszfát-tartalmú növényben és magban jelen van. Ennélfogva, ha a találmány szerinti eljárásnál kiindulási anyagként természetes eredetű anyagot alkalmazunk, külön fitáz-enzim adagolása nem szükséges. Ha azonban a kiindulási anyag enzimatikus aktivitása kicsi vagy ha kündulási anyagként IP6, IPS vagy IP4 vagy ezek keveréke kerül felhasználásra, például korpából származó fitáz-enzimet adagolunk a reakciórendszerbe.
A találmány szerinti eljárásnál alkalmazott, növényekből, magokból vagy mikoorganizmusokból nyert fitáz-enzim meglepetésszerűen lehetővé teszi, hogy a fenti IP3 izomereket nagy koncentrációban és lényegében tiszta formában állítsuk elő.
Az IP6 vegyületeket vagy tiszta formában, vagy IP6 tartalmú anyag formájában alkalmazzuk. A természetes eredetű kiindulási anyag — például korpa — esetében az anyagot előkezeljük, amely során a külső membránt szétroncsoljuk vagy eltávolítjuk, valamint eltávolítjuk az egyéb nemkívánatos alkotókat is. Ezután az anyagot vízzel itatjuk át részben az inozit-foszfát hozzáférhetőségének biztosítására, részben pedig az enzim aktiválására. Amennyiben enzim-pótíás szükséges, azt végezhetjük ebben a lépésben, de adagolhatjuk később is. Ezután az enzimatikus reakciót addig tartjuk fent, ameddig a kívánt mértékű hidrolízis végbemegy.
A hidrolízist általában 20—70, előnyösen 30— 60°C hőmérsékleten 4-8 közötti pH-tartományban végezzük. Ha a hidrolízis a kívánt mértékben végbement, a reakciót a hidrolizált kiindulási anyag szétroncsolásával vagy az enzim dezaktiválásával, például gyors hűtéssel állítjuk meg. A kapott anyagot fagyasztva, szárítva tároljuk.
A találmány szerinti eljárást különösen D-mio-inozit-l,2,6-trifoszfát. D-mio-inozit-1,2,5-trifoszfát, L-mio-inozit-1.3,4-trifoszfát és mio-inozit-l,2,3-trifoszfát 1P3 izomerek sav- vagy só-formáinak előállítására alkalmazzuk, amely eljárásnál az IP6 tartalmú anyagot 20-70, előnyösen 3Ő-5O°C hőmérséklettartományban 4 és 8 közötti pH értéken fitáz-enzim jelenlétében addig inkubáljuk, amíg a teljes észtermennyiség 30—60, előnyösen 50%-os felszabadulását eléijük. Az IP6 tartalmú kiindulási anyag IP3 izomerré vagy izomerekké való hidrolízise ennél az értéknél a legnagyobb.
A kapott inozit-foszfát-keveréket ezután oszlopkromatográfiával választjuk szét a kívánt IP3-frakciókra. A kapott frakciókat adott esetben egy további kromatográfiás, előnyösen oszlopkromatográfiás elválasztásnak vetjük alá. Ennek akkor van előnye, ha a frakció több különböző IP3 izomert tartalmaz. Az IP3 izomert vagy izomereket előnyösen sav-formában izoláljuk, majd kívánt esetben bázis hozzáadásával állítjuk elő a sót.
A különböző fitáz-enzim-források közül előnyösen élesztőt, még előnyösebben pék-élesztőt alkalmazunk, A találmány szerinti eljárásnál igen előnyösek a Jastbolaget, svéd, a Rajamaki finn és a Hefefabriken AG. svájci élesztőgyártmáijyok. Ezek alkalmazásával meglepetésszerűen azt tapasztaltuk, hogy csak egy. nevezetesen a D-mio-ínozít-l,2,6-trífoszfát képződik. Ezért ezek az élesztők igen értékesek, ha csak ez az izomer az előállítani kivánt termék.
Más eljárás szerint eddig még nem sikerült egyetlen izomert előállítani.
A fenti eljárást alkalmazzuk bizonyos módosításokkal, ha a kiindulási anyag egy vagy több IP6, IP5 vagy IP4 vegyület.
A találmány szerinti eljárás egy előnyös megvalósítási formájánál, a D-mio-inozit-1,2,6-trifoszfátot és legalább egy D-mio-inozit-1,2,5-trifoszfátot, L-mlo-inozit-1.3,4-trifoszfátot vagy mio-inozit-1,2,3-trifoszfátot tartalmazó kompozíciót állítunk elő sav- vagy só formában.
A kompozícióban az IP3 vegyületek mennyisége 20—99,5. előnyösen 30—99,5 t% és a D-mio-inozlt-1 2,6 trifoszfát mennyisége 50—100 t% az inozit-trifoszfátok teljes mennyiségére számolva. A maradék IP3-tól eltérő.
Esetenként előnyös, ha a kompozíció egyedül D-mio-inozit-l,2.6-trifoszfátot tartalmaz IP3 vegyületként.
Az inozit-foszfát kompozícióban az IP3-tól eltérő maradék lehet inozit-tetrafoszfát (IP4) vagy inozit-difoszfát (IP2).
A találmány szerinti eljárással előállított kompozíció 20-99 t%, előnyösen több, mint 60 t%-ban > tartalmaz IP3 vegyületeket és 80—0,5 t%, előnyösen kevesebb minf4Ó t%-ban más inozit-foszfát vegyületet Az IP3-tól eltérő inozit-foszfát-vegyületek 4085 t%, előnyösen 50-85 t% mennyiségben tartalmaznak IP2 + IP4 vegyületeket. Előnyös, ha az IP3 tisztán D-mio-inozit-1,2,6-trifoszfát.
A kompozíció esetenként a teljes inozit-foszfát mennyiségre számított, kismennyiségű, például 10 t%nál kevesebb előnyösen 1-8 t% egy vagy több IP3 és IP6 vegyületet is tartalmazhat.
Ilyen kompozíciókat úgy állítunk elő, hogy a kezdeti fermentációs inozit-foszfát termékhez a kívánt koncentrációban D-mio-inozit-1,2,6-trifoszfátot adagolunk. Az adagolást ismert módon, például keveréssel végezzük. Más módszer szerint a kompozíciókat úgy is előállíthatjuk, ha a fermentációnál élesztőt, előnyösen pékélesztőt alkalmazunk fitáz-enzim-forrásként. Mint az előzőekben már említettük, a pékélesztő alkalmazásával majdnem kizárólag D-mio-inozit-1 2.6-trifoszfát keletkezik.
A találmány szerinti eljárással előállított inozit-trifoszfát vegyületeket akár sav-, akár só-formájukban felhasználhatjuk, gyógyszerkészítmények hatóanyagaként, továbbá élelmiszereknél adalékként vagy adott esetben különböző egyéb termékeknél stabili-31 zátorként, Az IP3 vegyületek továbbá védőhatásúak magoknál, adalékként alkalmazhatók fogkrémeknél, korróziógátlóként festékek, lakkok, kenőolajok esetében, fémeknél felületkezelésre, tisztítószerek komponenseként, lángálló-szerként, felhasználhatók a nyomdaiparban, mikroorganizmusok esetében alfatoxin termelést gátló szerként, továbbá növelik az amiláz enzim-aktivitását is.
A fenti célokra mind a közvetlen fermentációval előállított, mind pedig az előzőekben leírt adagolási eljárással előállított kompozíciók alkalmasak.
A találmány szerinti eljárással előállított IP3 izomerek a következő általános képleteknek felelnek meg:
D-mio-inozit-1.2 6-trifoszfát, (I) általános képletű amely képletben X jelentése hidrogénatom, legalább egy vagy több értékű kation vagy ezek keveréke, n az ionok száma és z az ion tötése,
D-mio-inozit-1 2.5-trifoszfát: (II) általános képlet, amelyben X, n és z jelentése a fenti,
Mio-inozit-1 2.3 trifoszfát, (ΠΙ) általános képlet, amelyben X, n és z jelentése a fenti,
L-mio-inozit-1.3.4-trifoszfát: (IV) általános képlet, amelyben X, n és z jelentése a fenti.
Mindegyik fenti képlet esetében n értéke 6 és 1 közötti szám és z értéke 1-6, előnyösen n értéke 3-6 ész értéke 3. 2 vagy 1.
A találmány szerinti eljárással előállított IP3 vegyületek különösen hatásosak a fentiekben felsorolt esetekben és különös előnyük, hogy mellékhatásoktól mentesek. A fenti IP3 vegyületek közül különösen a D-mio inozit-1,2,6-trifoszfiít hatásos és aktivitása a többi vegyületét, különösen a D-mio-inozit-1,4,5-trifoszfátét felülmúlja.
A D-mio-inozit-1.2 6-trifoszfát Cd-mal képzett komplexének stabilitása felülmúlja a D-mio-inozit-1 2 5-trifoszfát Cd-komplexének stabilitását. Kisebb mértékben de különbség van a különböző IP3 izomerek gyógyászati felhasználásában is, így például az L-mio-inozit-1 3,4-trifoszfát, a D-mio-inozit-1,2,5-trifoszfát vagy a mio-inozit-1,2,3-trifoszfát előnyösebben alkalmazható, mint például a D-mio-ínozit-1,4,5-trifoszfát.
A találmány szerinti eljárást részletesebben a következő példákkal illusztráljuk. Az 1. és 2. példa a nátrium-fitát búza-fitán enzimmel való hidrolízisét és a kapott inozit-foszfátok frakcionálását mutatja be. A 3. és 4. példa az IP3 izomerek szerkezetének meghatározását, az 5 példa az IP3 pKa-értékének meghatározását a 6. példa az IP3 vegyületek és Ca, Zn és Cd ionok közötti kötés erősségét, az 7—10. példák a kalcium-sók előállítását, a 11. példa a D-mio-inozit-trifoszfát-kalciumsó infravörös spektrumát. a 12. és 13. példa a nátrium-fitát búzakorpával való hidrolízisét és a kapott inozit-foszfátok frakcionálását. A 14 példa a D-mio-inozit-1,2,6-trifoszfátcinksó előállítását a 15.-17. példák a nátrium-fitát pékélesztővel való hidrolízisét és a kapott inozit-foszfátok frakcionálását. valamint a kapott egyetlen 1P3 izomer meghatározását ismertetik. A 18. példában a D-mio-inozit-1,2,6-trifoszfát-nátriumsó előállítását a 19. példa a nátrium-fitát sósavval végzett kémiai hidrolízisét és a kapott anyag frakcionálását, a 20. példa a mio-inozitból és poli-foszforsavból történő inozit-foszfát kémiai előállítását és a kapott IP3 szerkezeti meghatározását, a 21. példa a rizskorpából származó fitínsav hidrolízisét és a kapott inozit-foszfátok elválasztását és analízisét a 22. példa a D-mio inozit-1.2 6-trifoszfát különböző sóinak jellemzését, a 23 példa az IP3 vegyületek vérlemezke-agg' regációt gátló hatását mutatja be dohányos emberek esetében, míg a 24. példa egerekkel végzett kísérletet mutat be, amelyben a találmány szerinti eljárással előállított IP3 vegyületekkel a magas vércukor szintet okozó szabad gyököket blokkoljuk.
példa
Nátrium-fitát hidrolízise búza-eredetű fitázzal, és az inozit-foszfátok keverékének frakcionálása.
1,6 g nátrium-fitátot (kukorica-eredetű, Sigma Chemical Co.) feloldunk 650 ml nátrium-acetát pufferban (pH 5,2) 2,7 g búza-eredetű fitázt (EC 3.1.3.26. 0 015 egység/mg, Sigma Chemical Co.) adunk hozzá és a keveréket 38OC hőmérsékleten inkubáljuk.
A foszfor-mentesítést a kibocsájtott szervetlen foszfor meghatározásával követjük. 3 órával később amikor a szervetlen foszfát 50%-ka felszabadul, a hidrolízist 30 ml ammónia hozzáadásával pH 12-re beállítással, leállítjuk. Inozit-foszfátokat tartalmazó folyékony keveréket nyerünk
350 ml keveréket engedünk át ioncserélő oszlopon (Dowex 1. klorid-forma, 25 mm x 250 mm), és eluáljuk. sósav lineáris gradiensével (0 -0,7 n HCI). Az eluált frakciók A küb alikvotjait teljesen elhidrolizáljuk abból a célból, hogy meghatározzuk a foszforés az inozit tartalmát. A csúcsok megfelelnek a különböző inozit foszfátoknak, azaz egy olyan csúcs, amelyben a foszfor aránya az inozíthoz 3:1, inozit-trifoszfátot tartalmaz, stb. Két olyan frakciót kapunk. amelyben a foszfor aránya az inozithoz 3:1. A két frakcióban lévő inozít-foszfát mennyisége az beadagolt nátrium-fitáz mennyiségének 45%-a.
A különböző foszformennyiségeket az elvált térfogatok függvényében az 1. ábrán ábrázoltuk.
példa
Az inozit-trifoszfátok frakcionálása
Az 1. példában nyert első frakcióból 100 ml-t, amelyben a foszfor/inozit aránya 3 :1, semlegesítünk és báriumsó formájában kicsapjuk, 10% fölöslegben lévő 0,1 mól/l-es bárium-acetát oldat hozzáadásával. 600 g kicsapott sót feloldunk 50 ml hígított sósavban. Az oldatot ioncserélő oszlopon szeparáljuk (Dowex 1, klorid-forma, 25 mm x 2500 eluensként hígított sósavat alkalmazva. Az eluált frakciók alikvotjait foszforra elemezzük. A foszformennyiségeket az eluált térfogat függvényében a
2. ábrán mutatjuk be. Három csúcs látható, amelyek az inozit-trifoszfátok izomerjeit tartalmazzák. A . mio-inozit-1,2 6-trifoszfát mennyisége kb. a teljes képződött inozit-trifoszfát 60%-a. A három IP3 csúcs H-NMR vizsgálatát a következő 3. példában mutatjuk be.
3. példa
Az inozit-trifoszfátok izomerjeinek szerkezet-megha tározása NMR-rel
A 2. példában nyert három csúcsot H-NMR-rel elemezzük. Az NMR-spektrumokat a 3., 4. és 5. ábrán mutatjuk be. Az adatok azt mutatják, hogy a csúcsok mio-inozit-1,2/5-trifoszfátot, mio-inozit-1,24
-3-trifoszfátot, ill. mio-inozít-l,3,4-trifoszfátot tartalmaznak.
Az 1 példában nyert második frakciót, amelyben a foszfor/inozit arány 3:1, elemezzük N-NMR-rel. Az NMR-spektrumot a 4. ábrán mutatjuk be. Az adatok azt mutatják, hogy a frakció mio-in ozit-1,2,5-trifoszfátot tartalmaz. Az NMR vizsgálatokhoz Nicolet 360 WB spektrometert alkalmaztunk, a belső standard tetrametilén-szilán volt.
4. példa
Az inozit-trifoszfát optikai izomerjeinek meghatározása
20—20 mg anyagot, amelyeket a 3. példa szerint NMR-rel mio-inozit-1,2,6-trifoszfátnak és mio-inozit-1,3 4-trifoszfátnak határoztunk meg, tovább kromatografálunk acetilezett cellulóz alapú királis oszlopon (20 mm x 300 mm, Merck) eluensként etanol és víz keverékét alkalmazva. A frakciókat polariméterrel elemezzük. A kapott eredményeket a 7. ábrán mutatjuk be. Az ábrákból látható, hogy mindegyik komponenst egy optikai izomert tartalmaz, D-mio-inozit-l,2,6-trifoszfátot, illetve L-mio-inozit-1,3,4-trifoszfátot.
5. példa
Inozit-trifoszfátok pKa értékének meghatározása
Az 1. példa szerint nyert első frakció — amelyben a foszfor/inozit arány 3 : 1 - 10 ml-ét 0,01 n NaOH-dal titráljuk. A titrálás alatt a pH értékét elektródokkal méljük. A kapott eredményeket a 8. ábra szemlélteti. A kapott pKa értékek a következők:
pKa 1 =4,7 pKa 2 = 7.5
6. példa
Inozit-trifoszfát és kalcium, cink, ill. kadnium közötti realtív kötési erősség meghatározása
Az 1. példa szerinti termék (első frakció, inozit/ foszfor arány 1 : 3), 10 ml-ét 0,01 n NaOH-dal titráljuk 0.2 mmól kalcium, cink illetve kadmium jelenlétében Az inozit-trifoszfát-fémkomplex képzésre való nagyobb hajlam a pH nagyobb mértékű csökkenését eredményezi adott térfogatú NaOH adagolásával. Ahogy az a 9. ábra szerinti görbéből kitűnik az IP3 -ra vonatkozó realtív kötési erősség a vizsgált ionok esetében a következők szerint növekszik:
Ca < Zn <Cd
7. példa
D-niio-inozit-1,2,6-trifoszfát-kalciumsó előállítása
A 2. példa szerint nyert D-mio-inozit-l,2,6-trifoszfát-tartalmú frakció 100 ml-ét kalcium-hidroxid adagolásával semlegesítünk pH = 7 értékig. A képződő kalciumsót etanol adagolásával kicsapjuk, centrifugálással elválasztjuk átkristályosítjuk és vákuumban szárítjuk.
A tisztított kalciumsó szerkezetét H-NMR-rel vizsgáltuk és kémiailag is meghatároztuk a foszfor, szén oxigén és kalcium tartalmat. A kapott eredményeket az 1. táblázat tartalmazza. A vizsgálati eredmények alapján a vegyület képlete Ca3IP3. Kitermelés 80%-a az eredeti frakcióban jelenlévő D-amo-inozit-1,2.6-tnfoszfát-mennyiségére számolva.
8. példa
L-mio inozit-1 3,4-trifoszfát előállítása
A 2. példa szerint nyert L-mio-inozit-1,3,4--trifoszfát-tartalmú frakció 100 ml-ét kalcium-hidroxid adagolásával pH- = 7-ig semlegesítjük, a képződő kalciumsót 100 ml etanollal kicsapjuk, centrifugálással elválasztjuk, átkrsitályosítjuk. vákuumban szárítjuk.
A tisztított kalciumsó szerkezetét H-NMR vizsgálattal igazoltuk kémiai analízissel pedig meghatároztuk. a szén, foszfor, oxigén és kalcium tartalmát. A só képlete Ca3IP3. (lásd 1. táblázat)
9. példa
Mio-inozit-1 2,3-trifoszfát-kalciumsó előállítása
A 2. példa szerint nyert mio-in ozit-1,2,3-trifoszfát tartalmú frakció 100 ml-ét pH = 7-ig semlegesítjük kalcium-hidroxid vizes oldatának adagolásával, a képződő kalciumsót 100 ml etanollal lecsapjuk, centrifugálással elválasztjuk, átkristályosítjuk és vákuumban szárítjuk.
A tisztított kalciumsó szerkezetét H-NMR-vizsgálattal igazoltuk és kémiai analízissel meghatároztuk az összetételét. A kapott eredményeket az 1. Táblázat tartalmazza. A só képlete Ca3IP3.
10. példa
D-mio-inozit-l,2,5-trjfoszfát-kalciumsó előállítása
Az 1. példa szerint nyert D-mio-inozit-l,2,5-trifoszfát-tartalmú frakció 100 ml-ét pH = 7-igkalcium-hidroxid vizes oldatának adagolásával semlegesítjük. a képződött kalciumsót 100 ml etanollal kicsapjuk centrifugálással elválasztjuk, átkristályosítjuk és vákuumban szárítjuk.
A tisztított kalciumsó szerkezetét H-NMR-vizsgálattal igazoltuk kémiai analízissel meghatároztuk az összetételét. A kapott eredményeket az 1. Táblázatban foglaltuk össze. A só képlete: Ca3IP3.
11. példa
D-mio inozit-l(2,6-trifoszfát-kalciumsó infravörös spektruma
A 7. példa szerint nyert kalciumsót IR spektroszkópiával vizsgáltuk. A jellemző sávok a következők:
3500cm' -OH
2900 cm1 - CH
1600 cm'1 - OH
1100 cm'l — CO és -P
1000 cm'l — C-0 és -P 800 cm’1 - C-C
12. példa
Nátrium-fitát hidrolízise búzakorpával és a kapott inozit-foszfát keverék frakcionálása 10 g nátrium-fitátot (Sigma Chemical Co., kukoricaeredetű) feloldunk 500 ml nátriumacetát pufféiban (pH = 5.0). A hőmérsékletet 37°C-ra emeljük és keverés közben 10 g búzakorpát adunk hozzá, majd a keveréket 37°C-on inkubáljuk. A defoszforileződést a felszabaduló szervetlen foszfor mennyiségének meghatározásával növeljük. A hidrolízist 2 óra elteltével, amikor a felszabadult szervetlen foszfor mennyisége 50%, 100 ml ammónia adagolá-51 sával t leállítjuk. A szuszpenziót centrifugáljuk és a felülúszót elválasztjuk.
300 ml felülúszót ioncserélő oszlopra visszük (Dowex 1. klorid-forma, 25 mm x 250 mm) és lineáris gradiensű (0-0,7 n) sósavval eluáljuk. Az eluátumok alikvot részeit teljesen elhidrolizáljuk a foszfor és inozittartalom meghatározása céljából. Két frakciót nyerünk, amelyben a foszfor/inozit arány 3 :1. A kapott IP3 mennyiségére az eredetileg adagolt nátrium-fitáz 80%-a.
13. példa
Inozit-trifoszfát frakcionálása
A 2. példában leírtak szerint járunk el, kivéve, hogy a 12. példa szerinti első frakciót kromatografáljuk, amikoris három csúcsot nyerünk, amelyeket H-NMR-rel vizsgálunk. A három csúcs mio-inozit-1,2,6-trifoszfátból, mio-inozit-1,2,3-trifoszfátból, illetve mio inozit-1.3,4-trifoszfátból áll.
14. példa
D-mio-inozit-1,2 6-trifoszfát-cinksó előállítása
A 13. példa szerint nyert D-mio-inozit-1,2,6-trifoszfát-tartalmú frakció 100 ml-ét vizes ZnO oldattal pH = 7-ig semlegesítjük, a képződött cinksót 100 ml etanollal kicsapjuk, centrifugálással elválasztjuk, átkristályosítjuk és vákuumban szárítjuk. A kapott cinksót kémiailag analizálva meghatározzuk a szén foszfor, oxigén és cink tartalmát. A kapott eredményeket az 1. Táblázat tartalmazza. A só képlete: Zn3IP3, kitermelés 90%, az eredeti D-mio-inozot-1 2.6-trifoszfátra számolva.
15. példa
Pékélesztő-eredetű nátrium-fitát hidrolízise, és az inozit-trifoszfátok keverékének frakcionálása 0,7 g nátrium-fitátot (kukorica-eredetű, Sigma
Chemical Co.) feloldunk 600 ml nátrium-acetát pufferban (pH 4,6). 50 g pékélesztőt (Jastbolaget, Svédország) (szárazanyag: 28%, nitrogéntartalom: 2%, foszfortartalom: 0,4%), adunk hozzá keverés közben, és az inkubálást folytatjuk 45°C- hőmérsékleten. A defoszforilezést olyan módon követjük, hogy meghatározzuk a kibocsájtott szervetlen foszfort. 7 óra múlva, amikor a szervetlen foszfor 50%-a felszabadul, a hidrolízist leállítjuk 30 ml ammónia hozzáadásával a pH-t 12-re állítva. A szuszpenziót centrifugáljuk és a felülúszót összegyűjtjük.
400 ml felülúszót átengedünk ioncserélő oszlopon (Dowex 1, klorid-forma, 25 mm x 250 mm), és sósav lineáris gradiensével eluáljuk (0—0,7 n HCI).
Az eluált frakciókból alikvotokat hidrolizálunk teljes mértékben abból a célból, hogy meghatározzuk a foszfor- és az inozit-tartalmat. A foszformenynyiségeket az elvált térfogat függvényében a 10. ábrán mutatjuk be.
A csúcsok különböző inozit-foszfátoknak felelnek meg, azaz egy olyan csúcs, amelynél a foszfor és az inozit aránya 3:1, inozit-trifoszfátokat tartalmaz, stb Kitermelés 50% a kiindulási nátrium-fitátra számolva.
16. példa
Az inozit-trifoszfátok izomerjeinek szerkezeti meghatározása
A 15. példában nyert frakciót, amely 3 : 1 aránybán tartalmazza a foszfort és az inozitot, semlegesítjük és a H-NMR-rel végzett elemzés előtt bepároljuk. Az adatok azt mutatják, hogy a csúcs mio-inozit-l,2-6-trifoszfátot tartalmaz. Az adatok megfelelnek a 3. ábrán bemutatott spektrum adataival.
17. példa
Mio-inozit-trifoszfát opitikai izomeijének meghatározása
A 4. példa szerint járunk el, azzal a különbséggel, hogy 10 mg vegyületet vizsgálunk a 16. példa szerinti NMR-analízissel. A II. ábra alapján megállapítható, hogy a vegyület egy optikai izomer, a D-mio-inozit-1,2,6-trifoszfát, amely sósavas kezeléssel L-mio-inozot-l,3,4-trifoszfáttá rendeződik át.
18. példa
D-mio-inozit-1,2,6-trifoszfát nátriumsó előállítása
A 15. példa szerint nyert D-mio-inozit-1,2,6-tri-foszfát-tartalmú frakció 100 ml-ét vizes nátrium-hidroxid adagolásával pH = 7-ig semlegesítjük, majd képződött sót 100 ml etanollal kicsapjuk, jük a sót centrifugálással elválasztjuk, átkristályosítjuk és vákuumban szárítjuk. A kapott só szerkezetét H-NMR-vizsgálattal igazoltuk és kémiai vizsgálattal meghatároztuk a szén, foszfor, oxigén és nátrium-tartalmat. A kapott eredményeket az 1. Táblázat tartalmazza. A só képlete Na6IP3.
19. példa
Nátrium-fitát kémiai hidrolízise és a kapott inozít-trifoszfátok frakcionálása
1,9 g nátrium-fitát-ot (kukorica-eredetű, Sigma Chemical Co.) 15 ml sósavban oldunk, majd vákuumban, lezárt csőben 105°C-on 5 órán át melegítjük. Ez idő után 34% szervetlen foszfor szabadul fel.
A reakciókeverék 5 ml-ét pH - 7-ig vizes nátrium-hidroxiddal semlegesítjük, majd ioncserélő oszlopon (Dowex, 1, klorid-forma, 10 mm x 150 mm) átengedjük és 0—0.7 n koncentráció-sorú sósavval eluáljuk. Az eluátumok alikvot részét teljesen hidrolizáljuk a foszfor és inozit tartalom meghatározására. A foszfortartalom alakulását a 2. ábra szemlélteti. Azokat a frakciókat, amelyekben a foszfor-, : inozit arány 3 : 1 volt, összegyűjtöttük. A H-NMR vizsgálat az izomerek jelenlétét igazolta.
20. példa
Inozit-foszfátok kémiai szintézise
Uvegdugós lombikba polifoszforsavat (80% P2OS tartalom, 3,5 g) adagolunk, 150°C-ra melegítjük, hozzáadunk 0,2 g monoinozitot és a hőmérsékletet 2 órán át tartjuk. Ekkor a pH-értékét vizes nátrium-hidroxiddal 7-es értékre állítjuk be. A kívánt terméket 10% feleslegben adagolt 0,1 mólos bárium-acetát adagolásával kicsapva, báriumsó formájában nyerjük. A báriumsó 20 mg-ját hígított sósavval elkeverjük ily módon szabad savvá alakítjuk, amelyet HPLCvel vizsgálunk. Az analízist ismert inozit-foszfáttal való kalibráció alapján végeztük (a kromatogramot a 3 ábra szemlélteti) és az inozit-foszfátokat tartalmazó frakciókat összegyűjtöttük. Az izomer termékek jelenlétét H-NMR-vizsgálattal is igazoltuk. Az inozit-trifoszfát mennyisége az összes inozit-trifoszfátok 20%-a.
21. példa
1% inozit-hexafoszfátot (IP6) tartalmazó rizskorpát (1 kg) 10 liter nátrium-acetátban szuszpendálunk pH = 5 érték mellett, 25 C-on, majd 4 óra elteltével 50% szerves foszfor szabadul fel, ekkor az iszapot 1 liter 2 mólos sósavval extraháljuk, az iszapot 1 órán át rázzuk, majd centrifugáljuk. A felülúszót vizes kalcium-hidroxid oldattal semlegesítjük (pH = 7) és a sót 5 liter etanol adagolásával kicsapjuk, a csapadékot centrifugáljuk, szárítjuk átkristályositjuk és sósav adagolásával a savat felszabadítjuk. A kompozíciót HPLC-vel analizáljuk, amelynek alapján a 40% inozit-trifoszfátot tartalmaz, amelynek 70%-a D-mio-inozit-1,2 6-trifoszfát. A maradék más egyéb inozit-foszfát.
22. példa
Különböző D-mio-inozit-1,2,6-trifoszfát-sók előállítása
A 15. példa szerint nyert frakció (foszfor : inozít = 3 : 1) 70 ml-ét 7 részre osztjuk, majd mindegyik rész pH-ját 0,1 mólos nátrium-hidroxid-dal beállítjuk és mindegyikhez különböző klorid-vegyületeket adunk, így FeCl-j-ot, MgC^-ot, AICI3-0L KCl-ot NH4Cl-ot, (CH3CH2CH2)4-NCl-ot és C^Hj3NH3Cl-ot. A képződött sókat 10—10 ml etanollal kicsapjuk átkristályositjuk, majd meghatározzuk a szén foszfor, oxigén és fém-tartalmat. A kapott eredményeket az 1. táblázatban foglaltuk össze.
23. példa
Az IP3 hatását tanulmányozzuk a vérlemezke aggrerációra dohányzás után emberekben
Négy fiatal, egészséges, nem dohányzó férfi kap két alkalommal olyan kapszulát, amely 50 mg IP3-at vagy 50 mg placebot tartalmaz. Az alkalmazott IP3- D-mio-inozit-1,2,6-trifoszfát- Ca-só. Sem a kísérlet alanyai, sem a vizsgálók nem tudják, vajon az alany IP3-at vagy placebot kap-e.
Két órával a kapszula lenyelése után vérmintát veszünk. A vizsgálat alanya ezután elszív két cigarettát gyorsan egymás után. Második vérmintát veszünk a dohányzás után. A vérlemezkék aggregációs válaszát ADP-re és kollagénre a két mintában meghatározzuk, lényegében azonos módszert alkalmazva, mint az 1. példában. Az eredményeket a dohányzás előtti és dohányzás utáni minták aggregálódásának különbségében fejezzük ki. A pozitív jel azt jelzi, hogy az aggregálódás erősebb a dohányzás után.
Aggregáló szer Az aggregáló szer koncentrációja IP3 Placebo Különbség az IP3 és a placebo között
ADP 0,5 mmól ♦ 1,5 + 7,25 5,85
ADP 1 mmól —1,5 + 0,25 1,75
ADP 2,5 mmól -1,5 0 1,5
ADP 5 mmól -2,5-0,75 1,75
Kollagén 0,5 mg +5,15+12,25 6,5
Kollagén 1 mg -8,25+1,75 10,0
Kollagén 2,5 mg -3,75 0 3,75
Kollagén 5 mg -1,5- 0,25 1,25
A placebo csoportban a dohányzás az aggregálódás növekedését okozza, amely a legmarkánsabban az aggregáló szerek kis koncentrációinál. Ezt a hatást minden esetben befolyásolni lehet IP3-mal. így az IP3 megelőzi a dohányzás által okozott vérlemezke-aggregálódást.
24. példa
Csoportonként 10 egeret injekciózunk intra peritoneálisan IP3-mal (D-mio-inozit-1,2,6-trifoszfát), három dózis szinten vagy fiziológiás sóoldattal. 30 perccel ez után az injekció után egy kontroll csoport kivételével az összes egér alloxán (50 mg/kg fiziológiás sóoldatban) intravénás injekcióját kapja.
Az állatokat az alloxános injekció előtt 12 órán át, majd utána 1 órán át éheztetjük. 72 órával az alloxános injekció után az egerekből vett vérmintát elemezzük a glükóz-szint szempontjából. Az eredmé-
nyék az alábbiak
IP3 dózis mg/kg Alloxán dózis, mg/kg Vér glükóztartalma
0 0 216
0 50 864
800 50 857
1600 50 677
Az alloxán cukorbajt és megnövekedett vér glükóz szintet okoz, a szabadgyökös reakciók elősegítésével az inzulin-termelő sejtekben. IP3-mal dózis függő csökkenés érhető el a glükóz-szintben, és a legnagyobb dózis bizonyos védettséget ad alloxánra.
196 077
1. Táblázat
IPRj különböző sóinak kémiai analízise
Vegyüiet Me% Elemanalízis C% 0% P% N% Képlet
1,2 6-IPj-kalciumsó Ca: 22,0 14,1 44,2 · 17,1 - Ca3IP3
1,3,4IPj-kalciumsó Ca: 21,4 13,8 42,9 16,3 - Ca3IP3
1,2,3-IPykalciumsó Ca: 22,7 12,9 45,6 18,2 - Ca3IP3
1,2,6-IP 2-kalciumsó Ca: 23,2 13,3 44,7 16,9 - Ca31P3
l,2,6-IP3-cinksó Zn: 31,5 12,1 38,2 14,7 - Zn3IP3
1 ,2,6-IP3-nátriumsó Na: 23,1 12,8 44,6 15,8 -
1,2,6-IPyvassó Fe: 21,5 13,1 43,4 18,2 - Ρ«2ΙΡ3
1,2,6 IP.3-káliumsó, magnéziumsó K: 27,5 11,3 38,7 14,1 - K4MgIP3
Mg: 3,8
1,2,6-IPj-magnéziumsó Mg: 15,8 16,0 50,8 18,9 - Mg3!p3
1,2,6-IP3-alumíniumsó Al: 12,6 15,8 53,3 21,2 - Al2 Ip3
1,2,6-ΙΡβ-ammóniumsó - - 13,1 47,8 16,9 15,6 (NH4)6-Ip3
1,2,6-IP3-tetrabutil-ammóniumsó - - 57,0 20,1 7,8 3,5
1.2.6-IP -ciklohexil-ammóniumsó 3 — - 39,5 35,1 12,6 ,6,2 (C6H3NH3)3 H3Ip3
D-mio-inozit-1,2 6-trifoszfát kalciumsó tablettákat 35 állítunk elő az alábbi módon. 50 g D-mio-inozit-1,2,6-trifoszfátot, 132 g laktózt és 6 g gumiarábikumot összekeverünk. Tisztított vizet adunk azután a keverékhez, amely után a keverést tovább folytatjuk addig, amíg megfelelő konzisztenciát érünk el. A keveréket átszitáljuk és szárítjuk. Ezután a keveréket összedolgozzuk 10 g talkummal és 2 g magnézium-sztearáttal. A keveréket tablettákká nyomjuk össze, amelyek egyébként 200 mg-ot nyomnak.
A találmány további megértése szempontjából az ábrák között megadjuk a találmány szerinti IP3 4c izomerek képletét. Megadjuk az IP6, IPS, IP4 és IP2 képletét is.
A mio-inozit kisebb foszfát-számú észtereit attól függően nevezzük el, hogy a foszforsav-csoportok hol helyezkednek el az inozit gyűrűn, a számozást úgy végezve, hogy olyan kis helyzetszámokat adjunk 50 meg, amilyen kicsi csak lehetséges. Az L és D óramutató járásával azonos, illetve óramutató járásával ellentétes irányt vesz, és ezeket annak függvényében használjuk, hogy az eredmény a legalacsonyabb pozíciószámot adja (VI. képlet). Az a szénatom, amelynek axiáiis foszforsava van, mindig a 2.Tielyzetszámot viseli. Az ábrákban jelzett szerkezeti képletek a savformára vannak egyszerűsítve. A képletekben a P mindig-O-PO3H2 gyököt jelent.
mio-inozit, C6H6(0H)6 = (V) képlet 1.2,3 4,5,6-hexakisz-(dihidrogén-foszfát)-mio-inozit vagy más néven mio-inozit-hexakisz(foszfát) vagy még más néven
IP<s = (VII) képlet D-mio-inozi t-1,2,6-trifoszfát, más néven D-l ,2,6-IP3 = (VII) képlet,
D-mio-inozit-1,2.5-trifoszfát, más néven D-1,2,5-IP3 = (IX) képlet, mio inozit-1,2,3-trifoszfát, más néven 1,2,3-IP3 =(X) képlet,
L-mio inozit-1,3,4-trifoszfát, más néven L-l ,3,4-IP3 = (XI) képlet L-mio-inozit-1,2-difoszfát, más néven L-l 2-IP2 = (XII) képlet,
D-mlo-inozi t-1,2 <5,6-te trafoszfá t, más néven D-l ,2,5,6-IP4 = (XIII) képlet L-mio-inozit-1.2,3,4-5-pentafoszfát, más névén L-l,2,3,4,5 IP3 = (XIV) képlet
196 077
1- ábra:
2. ábra
3. ábra
4. ábra
5. ábra:
7. ábra:
8. ábra
9. ábra
10. ábra
11. ábra
12. ábra
13. ábra
ÁBRÁK JEGYZÉKE
Nátrium-fitát hidrolízise buza-fitázzal 5
Inozit-trifoszfát izomerek elválasztása
a) mio-inozit-l,3,4-trifoszfát
b) mio-inozit-1,2,3-trifoszfát
c) mio-inozit-1,2,6-trifoszfát , n
Mio-inozit-1,2,6-trifoszfát N-NMRspektruma
Mio-inozit-1,2,3-trifoszfát H-NMRspektruma
Mio-inozit-1,3,4-trifoszfát H-NMR-spektruma j 5
Mio-inozit-1,2,5-trifoszfát H-NMRspektruma
Mio-inozit-1,2,6-trifoszfát és mio-inozit-1,3,4-trifoszfát forgatóképessége
a) D-mio-inozit-1,2,6-trifoszfát
b) L-mjo-inozit-l,3,4-trifoszfát 20
IP3 titrálása NaOH-dal
IP3 titrálása NaOH-dal fémion jelen létében
Nátrium-fitát hidrolízise pékélesztővel
Mio-inozit-1,2,6-trifoszfát forgató- 25 képessége
Nátrium-fitát kémiai hidrolízise
Kémiailag szintetizált inozit-foszfát HPLC-kromatogrammja

Claims (3)

  1. SZABADALMI IGÉNYPONTOK
    1. Eljárás inozit-trifoszfátok körébe tartozó D-mio-inozit-l,2,6-trifoszfát, D-mio-inozit-1,2,5-trifoszfát L-mio-inozit, 1,3,4-trifoszfát és mio-inozit-1,2,3-trifoszfát (IP3) vagy keverékeik előállítására sav vagy só formájában.
    azzal j e 11 e m ez v e, hogy ,
    a) inozit-hexafoszfát-tartalmú anyagot 20 és 70 C közötti hőmérsékleten pH 4-8 között fitáz enzim jelenlétében addig inkubálunk, amíg a teljes foszfor-észter mennyiség 30-60%-a felszabadul, majd a kapott keverékből az IP3 tartalmú, adott esetben ezt a frakciót ismételt elválasztásnak vetjük alá, és a frakciókból az izomer IP3 vegyületet sav vagy só formájában kinyerjük, vagy
    b) D-mio-inozit-1,2,6-trifoszfát előállítására sav vagy só formájában, inozit-hexafoszfát-tartalmú anyagot 20 és 70°C közötti hőmérsékleten élesztő fitáz enzim jelenlétében addig inkubálunk, amíg a teljes foszfor-észter mennyiség 30-60%-a felszabadul, majd a kapott keverékből az IP3- tartalmú frakciót ismert módon, előnyösen kromatografálással elválasztjuk és a D-mio-inozit-1,2,6-trifoszfátot a frakcióból sav vagy só formájában kinyerjük.
  2. 2. Az l. igénypont szerinti b) eljárás, azzal j e 11 e m e z v e, hogy élesztő-fitáz-enzimként pékélesztő fitázt alkalmazunk.
  3. 3. Eljárás gyógyszerkészítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy hatóanyagként valamely az 1 vagy 2. igénypontok szerint előállított egy vagy több inozit-trifoszfát vegyületet gyógyszerészetileg elfogadható hordozóanyaggal és/vagy más alkalmas segédanyaggal összekeverünk és adagolásra alkalmas készítménnyé alakítjuk.
HU854074A 1984-10-23 1985-10-22 Process for producing inosite-triphosphates and pharmaceutical preparations containing such compounds HU196077B (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SE8405295A SE465951B (sv) 1984-10-23 1984-10-23 Isomer av inositoltrifosfat foeretraedesvis i saltform foer anvaendning som terapeutiskt eller profylaktiskt medel samt kompositioner daerav

Publications (2)

Publication Number Publication Date
HUT40674A HUT40674A (en) 1987-01-28
HU196077B true HU196077B (en) 1988-09-28

Family

ID=20357457

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU854074A HU196077B (en) 1984-10-23 1985-10-22 Process for producing inosite-triphosphates and pharmaceutical preparations containing such compounds

Country Status (19)

Country Link
US (7) US4735936A (hu)
EP (3) EP0179440B1 (hu)
JP (4) JPS61171789A (hu)
AT (3) ATE41853T1 (hu)
AU (3) AU596080B2 (hu)
BE (2) BE903498A (hu)
CH (2) CH666812A5 (hu)
DE (6) DE3577851D1 (hu)
DK (2) DK172857B1 (hu)
FI (3) FI85490C (hu)
FR (2) FR2573080B1 (hu)
GB (3) GB2169602B (hu)
HU (1) HU196077B (hu)
IL (1) IL76777A (hu)
IT (2) IT1190403B (hu)
NO (3) NO168227C (hu)
NZ (1) NZ213855A (hu)
SE (6) SE465951B (hu)
ZA (4) ZA858108B (hu)

Families Citing this family (73)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5095035A (en) * 1981-07-31 1992-03-10 Eby Iii George A Flavor stable zinc acetate compositions for oral absorption
US5407924A (en) * 1984-10-23 1995-04-18 Perstorp Ab Method of treating pain using inositol triphosphate
US5330979A (en) * 1984-10-23 1994-07-19 Perstorp Ab Method of treating renal disorders with inositoltriphosphate
US5128332A (en) * 1984-10-23 1992-07-07 Perstorp Ab Method of treating cardiovascular diseases using inositoltrisphosphate
SE465305B (sv) * 1986-04-16 1991-08-26 Perstorp Ab Anvaendning av inositolfosfat foer framstaellning av ett laekemedel
SE465951B (sv) 1984-10-23 1991-11-25 Perstorp Ab Isomer av inositoltrifosfat foeretraedesvis i saltform foer anvaendning som terapeutiskt eller profylaktiskt medel samt kompositioner daerav
US4735902A (en) * 1984-10-23 1988-04-05 Matti Siren Stabilized composition containing inositoltriphosphate
DE3783694T2 (de) * 1986-03-11 1993-05-19 Mitsui Toatsu Chemicals Verfahren zur herstellung von myoinositolabkoemmlingen.
JPS63198642A (ja) * 1986-03-11 1988-08-17 Mitsui Toatsu Chem Inc ミオイノシトール誘導体の製造方法
US5057507A (en) * 1986-04-16 1991-10-15 Perstorp Ab Method of alleviating bone damage with inositoltriphosphate
WO1988003365A1 (en) * 1986-11-05 1988-05-19 George Weston Foods Limited Novel improvers for flour and yeast raised baked goods
US5274161A (en) * 1986-11-26 1993-12-28 Perstorp Ab Derivatives of cyclohexane
SE8605063D0 (sv) * 1986-11-26 1986-11-26 Matti Siren Derivatives of cyclohexane
GB8705811D0 (en) * 1987-03-11 1987-04-15 Research Corp Ltd Inositol derivatives
JP2597618B2 (ja) * 1987-12-28 1997-04-09 三井東圧化学 株式会社 光学分割方法
JPH01287035A (ja) * 1988-05-13 1989-11-17 Sanwa Kagaku Kenkyusho Co Ltd 薬物並びにアルコール性中毒の予防剤とその治療剤
JPH01294631A (ja) * 1988-05-19 1989-11-28 Sanwa Kagaku Kenkyusho Co Ltd 糖尿性疾患治療予防剤及び飲食、し好物
SE464059C (sv) * 1988-09-15 1997-06-02 Perstorp Ab Användning av inositoltrifosfat för framställning av läkemedel
US5316770A (en) * 1989-02-16 1994-05-31 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Vitamin D derivative feed compositions and methods of use
US5366736A (en) * 1989-02-16 1994-11-22 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Vitamin D derivative feed compositions and methods of use
US5428066A (en) * 1989-03-08 1995-06-27 Larner; Joseph Method of reducing elevated blood sugar in humans
US5750348A (en) * 1989-03-08 1998-05-12 The University Of Virginia Patents Foundation Method for detecting insulin resistance
US5427956A (en) * 1989-03-08 1995-06-27 The University Of Virginia Patent Foundation Quantitative analysis for diabetic condition predictor
WO1990010439A1 (en) * 1989-03-08 1990-09-20 The University Of Virginia Alumni Patents Foundation Dietary supplement for insulin-resistant diabetics
SE8902766D0 (sv) * 1989-08-17 1989-08-17 Siren Matti Saett att oeka den farmaceutiska effekten av inositolfosfat samt en beredning med foerbaettrad farmaceutisk effekt
SE8904355D0 (sv) * 1989-12-21 1989-12-21 Perstorp Ab Medicament
US5593963A (en) * 1990-09-21 1997-01-14 Mogen International Expression of phytase in plants
KR100225087B1 (ko) * 1990-03-23 1999-10-15 한스 발터라벤 피타아제의 식물내 발현
US5543576A (en) * 1990-03-23 1996-08-06 Mogen International Production of enzymes in seeds and their use
US7033627B2 (en) 1990-03-23 2006-04-25 Syngenta Mogen B.V. Production of enzymes in seeds and their use
SE9002278L (sv) * 1990-06-28 1991-12-29 Perstorp Ab Anvaendning av inositoltrisfosfat foer framstaellning av ett laekemedel
WO1992004037A1 (en) * 1990-08-29 1992-03-19 Sterling Chaykin Method and product for eliminating undesirable side effects of eating vegetables such as onion or garlic
US6007809A (en) * 1990-08-29 1999-12-28 Chaykin; Sterling Method and product for eliminating undesirable side effects of eating vegetables such as onion or garlic
US5514398A (en) * 1990-11-05 1996-05-07 Amano Pharmaceutical Co., Ltd. Food additive and use thereof
SE9102068L (sv) * 1991-07-03 1993-01-04 Perstorp Ab Derivat av inositol, kompositioner innehaallande dessa samt anvaendning daerav
SE469260B (sv) * 1992-02-25 1993-06-14 Perstorp Ab En farmaceutisk komposition med foerbaettrad biotillgaenglighet avseende inositolfosfat
US5292537A (en) * 1992-11-12 1994-03-08 Bran Tec, Inc. Method for stabilizing rice bran and rice bran products
JP2696057B2 (ja) * 1993-05-11 1998-01-14 ニチモウ株式会社 穀類を原料とした生成物の製造方法
US5827837A (en) * 1993-08-20 1998-10-27 The Regents Of The University Of California Polyanion anti-inflammatory agents
SE503122C2 (sv) * 1993-11-22 1996-03-25 Perstorp Ab Användning av en inositoltrisfosfatester för behandling av inflammatoriska tillstånd
SE502989C2 (sv) * 1993-11-22 1996-03-04 Perstorp Ab Användning av en inositoltrisfosfatester för beredning av läkemedel
US5466465A (en) * 1993-12-30 1995-11-14 Harrogate Holdings, Limited Transdermal drug delivery system
SE502574C2 (sv) * 1994-01-25 1995-11-13 Perstorp Ab En farmaceutisk komposition med förbättrad biotillgänglighet hos inositolfosfat
US6451572B1 (en) * 1998-06-25 2002-09-17 Cornell Research Foundation, Inc. Overexpression of phytase genes in yeast systems
CN100347303C (zh) * 1999-03-31 2007-11-07 康乃尔研究基金会有限公司 具有改良的肌醇六磷酸酶活性的磷酸酶
US6841370B1 (en) 1999-11-18 2005-01-11 Cornell Research Foundation, Inc. Site-directed mutagenesis of Escherichia coli phytase
US6383817B2 (en) 1999-12-30 2002-05-07 Wake Forest University Cadmium is a risk factor for human pancreatic cancer
US20020193379A1 (en) * 2001-06-05 2002-12-19 Insmed Incorporated Compositions and methods for decreasing the risk of or preventing neural tube disorders in mammals
FR2828206B1 (fr) * 2001-08-03 2004-09-24 Centre Nat Rech Scient Utilisation d'inhibiteurs des lysyl oxydases pour la culture cellulaire et le genie tissulaire
EP1450627B1 (en) * 2001-10-31 2012-09-05 Phytex, Llc Use of phytase containing animal food
US20050108780A1 (en) * 2002-01-24 2005-05-19 Erasmus University Intracellular antibodies for a retrovirus protein
WO2003092700A1 (en) 2002-04-29 2003-11-13 Gmp Oxycell, Inc. Inositol pyrophosphates, and methods of use thereof
US7309505B2 (en) * 2002-09-13 2007-12-18 Cornell Research Foundation, Inc. Using mutations to improve Aspergillus phytases
CA2413240A1 (en) * 2002-11-29 2004-05-29 Mcn Bioproducts Inc. Purification of inositol from plant materials
US20050123644A1 (en) * 2003-01-24 2005-06-09 Cargill, Incorporated Phosphate-containing fertilizer derived from steepwater
US7521481B2 (en) * 2003-02-27 2009-04-21 Mclaurin Joanne Methods of preventing, treating and diagnosing disorders of protein aggregation
US20050048165A1 (en) * 2003-03-31 2005-03-03 Sadanandan Bindu Process for the preparation of Chapathi dough with reduced phytic acid level
US20070135389A1 (en) * 2004-07-06 2007-06-14 Claude Nicolau Tumor eradication by inositol-tripyrophosphate
US20060258626A1 (en) * 2004-07-06 2006-11-16 Claude Nicolau Use of inositol-tripyrophosphate in treating tumors and diseases
US20060241086A1 (en) * 2005-03-18 2006-10-26 Claude Nicolau Calcium salt of myo-inositol 1,6:2,3:4,5 tripyrophosphate as an allosteric effector of hemoglobin
US20060106000A1 (en) * 2004-07-06 2006-05-18 Claude Nicolau Use of inositol-tripyrophosphate in treating tumors and diseases
US7745423B2 (en) * 2004-07-06 2010-06-29 NormOxys, Inc Calcium/sodium salt of inositol tripyrophosphate as an allosteric effector of hemoglobin
US7919297B2 (en) 2006-02-21 2011-04-05 Cornell Research Foundation, Inc. Mutants of Aspergillus niger PhyA phytase and Aspergillus fumigatus phytase
US20070212449A1 (en) * 2006-03-02 2007-09-13 Shamsuddin Abulkalam M Reduction of the titratable acidity and the prevention of tooth and other bone degeneration
EP2069486A2 (en) * 2006-08-03 2009-06-17 Cornell Research Foundation, Inc. Phytases with improved thermal stability
US20110218176A1 (en) 2006-11-01 2011-09-08 Barbara Brooke Jennings-Spring Compounds, methods, and treatments for abnormal signaling pathways for prenatal and postnatal development
US20090214474A1 (en) * 2006-11-01 2009-08-27 Barbara Brooke Jennings Compounds, methods, and treatments for abnormal signaling pathways for prenatal and postnatal development
US20080103116A1 (en) * 2006-11-01 2008-05-01 Jennings-Spring Barbara L Method of treatment and compositions of D-chiro inositol and phosphates thereof
EP2152085A4 (en) * 2007-05-01 2012-05-23 Normoxys Inc COMPLEMENTATION OR REPLACEMENT OF ERYTHROPOIETIN
US8192734B2 (en) 2007-07-09 2012-06-05 Cornell University Compositions and methods for bone strengthening
JP2010539231A (ja) * 2007-09-17 2010-12-16 ビオネリス・アクチボラゲット 悪液質の治療のための方法および手段
ES2604110T3 (es) * 2011-07-01 2017-03-03 Shiseido Company, Ltd. Activador de la producción del factor de crecimiento derivado de plaquetas-BB, y activador de la producción de células madre mesenquimatosas, estabilizador de células madre y regenerador de la dermis comprendiendo cada uno el mismo
FR3017134B1 (fr) * 2014-02-06 2018-04-20 Lesaffre Et Compagnie Levure biologique, procede d'obtention et utilisations

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2723938A (en) * 1952-12-05 1955-11-15 Bristol Lab Inc Aqueous penicillin suspensions comprising inositol phosphoric acids and their salts
US3591665A (en) * 1967-09-08 1971-07-06 Mitsui Toatsu Chemicals Process for producing phytic acid
FI51469C (fi) * 1968-01-10 1977-01-10 Morinaga Milk Industry Co Ltd Menetelmä radioaktiivisen strontium 90 saasteen poistamiseksi nestemäi sistä elintarvikkeista tai vedestä.
JPS50111246A (hu) * 1974-02-14 1975-09-01
US4154824A (en) * 1976-07-20 1979-05-15 Interx Research Corporation Nonbitter tasting potassium product for oral administration to warm-blooded animals and method for preparing same
JPS53124636A (en) * 1977-04-04 1978-10-31 Kisaku Mori Method of increasing meranine contained in animal and plant
DE2740053A1 (de) * 1977-09-06 1979-05-03 Klaus Prof Dr Med Gersonde Verwendung von allosterischen effektoren mit hilfe von lipidvesikeln ueber eine irreversible inkorporierung zwecks verbesserter o tief 2 -entladung des haemoglobins in erythrozyten
JPS5486666A (en) * 1977-12-22 1979-07-10 Ajinomoto Kk Cola beverage
JPS5798292A (en) * 1980-12-09 1982-06-18 Jiyaade:Kk Powdery phytic acid and its preparation
JPS58198254A (ja) * 1982-05-14 1983-11-18 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd 加工食品の品質改良法
SE450325B (sv) * 1983-02-23 1987-06-22 Tricum Ab Kostfiberprodukt baserad pa skaldelar fran froet hos ceralier
US4735902A (en) * 1984-10-23 1988-04-05 Matti Siren Stabilized composition containing inositoltriphosphate
SE465951B (sv) * 1984-10-23 1991-11-25 Perstorp Ab Isomer av inositoltrifosfat foeretraedesvis i saltform foer anvaendning som terapeutiskt eller profylaktiskt medel samt kompositioner daerav
EP1276854A2 (en) 2000-04-13 2003-01-22 Novozymes A/S Extracellular expression of pectate lyase using bacillus or escherichia coli

Also Published As

Publication number Publication date
DE3569188D1 (en) 1989-05-11
NO168227B (no) 1991-10-21
DK172857B1 (da) 1999-08-16
IT1190403B (it) 1988-02-16
DE3577851D1 (de) 1990-06-28
FI854128A0 (fi) 1985-10-22
FI85490C (fi) 1992-04-27
GB2167283A (en) 1986-05-29
DE3537550A1 (de) 1986-05-15
SE465951B (sv) 1991-11-25
US4794014A (en) 1988-12-27
JPH0515719B2 (hu) 1993-03-02
US4797390A (en) 1989-01-10
FR2571967A1 (fr) 1986-04-25
ZA858105B (en) 1986-06-25
FI88855C (fi) 1993-07-26
EP0179440B1 (en) 1990-05-23
FR2571967B1 (fr) 1988-02-05
EP0179441A2 (en) 1986-04-30
SE8504969L (sv) 1986-04-24
ZA858107B (en) 1986-06-25
IL76777A (en) 1990-09-17
BE903497A (fr) 1986-02-17
FI854127A0 (fi) 1985-10-22
AU582594B2 (en) 1989-04-06
SE8503164L (sv) 1986-04-24
GB2169602A (en) 1986-07-16
JPS61171789A (ja) 1986-08-02
EP0179439A1 (en) 1986-04-30
FI854128L (fi) 1986-04-24
DE3537542A1 (de) 1986-05-15
DK483385D0 (da) 1985-10-22
DK483285A (da) 1986-04-24
FI854126A0 (fi) 1985-10-22
JPH0338824B2 (hu) 1991-06-11
DK483285D0 (da) 1985-10-22
CH666812A5 (fr) 1988-08-31
FR2573080B1 (fr) 1988-11-10
AU4893085A (en) 1986-05-01
SE8405295L (sv) 1986-04-24
GB8526080D0 (en) 1985-11-27
GB2167298A (en) 1986-05-29
NZ213855A (en) 1989-05-29
JPH037233B2 (hu) 1991-02-01
AU4893285A (en) 1986-05-01
ATE53038T1 (de) 1990-06-15
GB2167298B (en) 1988-11-02
SE465164B (sv) 1991-08-05
ZA858106B (en) 1986-06-25
AU589378B2 (en) 1989-10-12
NO854213L (no) 1986-04-24
JPH0354924B2 (hu) 1991-08-21
IT1190402B (it) 1988-02-16
US4734283A (en) 1988-03-29
SE8504969D0 (sv) 1985-10-22
US5003098A (en) 1991-03-26
AU4893185A (en) 1986-05-01
EP0179441A3 (en) 1988-03-16
NO168227C (no) 1992-01-29
ZA858108B (en) 1986-06-25
JPS61181347A (ja) 1986-08-14
DK483385A (da) 1986-04-24
NO854212L (no) 1986-04-24
NO169010B (no) 1992-01-20
NO169010C (no) 1992-04-29
GB2169602B (en) 1988-10-19
DE3565464D1 (en) 1988-11-17
SE8405295D0 (sv) 1984-10-23
US4851560A (en) 1989-07-25
EP0179440A1 (en) 1986-04-30
NO854211L (no) 1986-04-24
US4735936A (en) 1988-04-05
CH668597A5 (fr) 1989-01-13
JPS61171491A (ja) 1986-08-02
FI82474B (fi) 1990-11-30
ATE41853T1 (de) 1989-04-15
IT8522574A0 (it) 1985-10-22
FI82474C (fi) 1991-03-11
BE903498A (fr) 1986-02-17
FI854127L (fi) 1986-04-24
IT8522573A0 (it) 1985-10-22
GB2167283B (en) 1989-05-24
SE8504968D0 (sv) 1985-10-22
US4777134A (en) 1988-10-11
EP0179439B1 (en) 1988-10-12
SE8504967D0 (sv) 1985-10-22
SE8504967L (sv) 1986-04-24
GB8526078D0 (en) 1985-11-27
DK172852B1 (da) 1999-08-16
FI85490B (fi) 1992-01-15
AU596080B2 (en) 1990-04-26
EP0179441B1 (en) 1989-04-05
DE3537569A1 (de) 1986-05-22
FR2573080A1 (fr) 1986-05-16
HUT40674A (en) 1987-01-28
JPS61171422A (ja) 1986-08-02
IL76777A0 (en) 1986-02-28
SE8503165L (sv) 1986-04-24
GB8526079D0 (en) 1985-11-27
FI88855B (fi) 1993-04-15
ATE37788T1 (de) 1988-10-15
SE8503165D0 (sv) 1985-06-26
SE8503164D0 (sv) 1985-06-26
SE8504968L (sv) 1986-04-24
FI854126L (fi) 1986-04-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU196077B (en) Process for producing inosite-triphosphates and pharmaceutical preparations containing such compounds
CA1337338C (en) Inositoltriphosphate
EP0508488B1 (en) Use of inositol triphosphate for the treatment of inflammations
US5023248A (en) Method of treating diabetes with inositol triphosphate
Ludwig et al. Stereospecific synthesis of guanosine 5'-O-(1, 2-dithiotriphosphates)
Zimowski et al. Enzymatic synthesis of steryl 6′-O-acyl-β-d-glucosides in Sinapis alba and some other plants
Redei Effects of the degradation products of fructose on the glycolytic pathway
Liau et al. Lysolecithin acyltransferase and alveolar phosphatidylcholine palmitate in experimental acute alveolar injury in the dog lung
Chakrabarti et al. CYCLITOLS AND PHOSPHOINOSITIDES
SE458121B (sv) Stabiliserad komposition samt foerfarande foer stabilisering

Legal Events

Date Code Title Description
HU90 Patent valid on 900628
HMM4 Cancellation of final prot. due to non-payment of fee