DK172852B1 - Farmaceutisk præparat og anvendelse af inositoltriphosphat (IP3) til fremstilling deraf - Google Patents

Farmaceutisk præparat og anvendelse af inositoltriphosphat (IP3) til fremstilling deraf Download PDF

Info

Publication number
DK172852B1
DK172852B1 DK198504832A DK483285A DK172852B1 DK 172852 B1 DK172852 B1 DK 172852B1 DK 198504832 A DK198504832 A DK 198504832A DK 483285 A DK483285 A DK 483285A DK 172852 B1 DK172852 B1 DK 172852B1
Authority
DK
Denmark
Prior art keywords
inositol
composition according
triphosphate
myo
cadmium
Prior art date
Application number
DK198504832A
Other languages
English (en)
Other versions
DK483285A (da
DK483285D0 (da
Inventor
Matti Siren
Original Assignee
Perstorp Ab
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Perstorp Ab filed Critical Perstorp Ab
Publication of DK483285D0 publication Critical patent/DK483285D0/da
Publication of DK483285A publication Critical patent/DK483285A/da
Application granted granted Critical
Publication of DK172852B1 publication Critical patent/DK172852B1/da

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/06—Phosphorus compounds without P—C bonds
    • C07F9/08—Esters of oxyacids of phosphorus
    • C07F9/09—Esters of phosphoric acids
    • C07F9/117—Esters of phosphoric acids with cycloaliphatic alcohols
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A21—BAKING; EDIBLE DOUGHS
    • A21D—TREATMENT, e.g. PRESERVATION, OF FLOUR OR DOUGH, e.g. BY ADDITION OF MATERIALS; BAKING; BAKERY PRODUCTS; PRESERVATION THEREOF
    • A21D2/00—Treatment of flour or dough by adding materials thereto before or during baking
    • A21D2/08—Treatment of flour or dough by adding materials thereto before or during baking by adding organic substances
    • A21D2/30—Organic phosphorus compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23B—PRESERVING, e.g. BY CANNING, MEAT, FISH, EGGS, FRUIT, VEGETABLES, EDIBLE SEEDS; CHEMICAL RIPENING OF FRUIT OR VEGETABLES; THE PRESERVED, RIPENED, OR CANNED PRODUCTS
    • A23B7/00—Preservation or chemical ripening of fruit or vegetables
    • A23B7/14—Preserving or ripening with chemicals not covered by groups A23B7/08 or A23B7/10
    • A23B7/153—Preserving or ripening with chemicals not covered by groups A23B7/08 or A23B7/10 in the form of liquids or solids
    • A23B7/154—Organic compounds; Microorganisms; Enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L29/00—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
    • A23L29/03—Organic compounds
    • A23L29/05—Organic compounds containing phosphorus as heteroatom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L3/00—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs
    • A23L3/34—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs by treatment with chemicals
    • A23L3/3454—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs by treatment with chemicals in the form of liquids or solids
    • A23L3/3463—Organic compounds; Microorganisms; Enzymes
    • A23L3/3553—Organic compounds containing phosphorus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/66—Phosphorus compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/24—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing atoms other than carbon, hydrogen, oxygen, halogen, nitrogen or sulfur, e.g. cyclomethicone or phospholipids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A61P39/02—Antidotes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P9/00—Preparation of organic compounds containing a metal or atom other than H, N, C, O, S or halogen

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)

Description

i DK 172852 B1
Den foreliggende opfindelse angår et farmaceutisk præparat, der som aktiv bestanddel indeholder mindst en isomer af inositoltriphosphat (IP3) eller et salt deraf. Præparatet kan anvendes ved behandling og lindring af tilstande, som frem-5 kaldes eller forværres ved tilstedevæerelse af cadmium, aluminium eller frie radikaler i legemet.
En fremgangsmåde til fremstilling af IP3 og dettes isomere er beskrevet i dansk patentansøgning nr. 4833/85.
Så tidligt som i året 1900 rapporterer forskellige forskere, 10 at man har fundet den organiske phosphatforbindelse phytinsyre, dvs. 1,2,3,4,5,6-hexakis (dihydrogenphosphat) myo-inositol (som også undertiden benævnes inositol-hexaphos-phorsyre) i planter. Indholdet af phytinsyre i forskellige planter varierer betydeligt. Indholdet i korn er sædvanligvis 15 omkring 0,5 til 2% med visse undtagelser. Polerede ris har et niveau på kun 0,1%, mens vilde risplanter indeholder helt op til 2,2% phytinsyre. Bønner indeholder omkring 0,4 til 2%, olieplanter indeholder omkring 2 til 5%, og pollen indeholder 0,3 til 2%. Indholdet af phytinsyre i planter varierer i 20 løbet af vækstperioden, og indholdet påvirkes endvidere af blandt andet klimaet.
I litteraturen rapporteres tilstedeværelsen af inositolpenta-phosphat (IP5) og inositoltetraphosphat (IP<) i nogle få planter. Det er desuden kendt, at der dannes phosphatderi-25 vater, som er lavere end IPe, ved spiring af korn. Slutprodukterne ved spiringen er således inositol og phosphat. Anvendelsen af IP« er beskrevet i flere videnskabelige publikationer. Størstedelen af forfatterne af disse artikler har observeret flere negative virkninger på mennesker og dyr ved 30 indtagelse af IP6 eller substanser, der indeholder IP6.
Fodring af hunde med for store mængder IP6 kan eksempelvis give anledning til, at hundene får rachitis (engelsk syge).
Hos mennesker har man observeret en resultende mangel på zink, som har medført en langsommere vækst 2 DK 172852 B1 hos børn. Anæmi er ligeledes observeret, hovedsageligt hos kvinder. På grund af den ovennævnte negative indvirkning på mineralbalancen hos mennesker og dyr har man gjort forsøg på at reducere indtagelsen af IPg og dettes derivater 5 til et minimum.
I C.A. Vol. 33 (1939), Abstr. nr. 7351, nr. 3/4 anføres det, at man har anvendt phosphater, herunder inositolphos-phater, som kur imod engelsk syge. Der nævnes ingen specifikke inositolphosphater, ligesom en eventuel kompleksbin-10 ding af metaller ikke nævnes.
US patentskrift nr. 4 473 563 beskriver en behandling af erythrocyter uden for kroppen med det formål at inkorporere inositolphosphater i erythrocyterne for at forøge oxygentilførslen. Erythrocyterne separeres fra blodet, som er 15 blevet pumpet ud af kroppen til dette formål. Efter en kompliceret behandling af erythrocyterne indføres disse påny i blodet. Der omtales ikke nogen eventuel direkte indgivelse af inositolphosphater i kroppen. Der nævnes heller intet med hensyn til en reduktion af den negative virkning af 20 cadmium i kroppen eller en inhibering af dannelsen af frie radikaler i kroppen under indvirkning af et specifikt udvalgt ino s i tolpho spha t.
I US patentskrift nr. 2 723 938 beskrives anvendelsen af inositolphosphater til stabilisering af dispersioner af 25 vandige suspensioner af penicillin. Herved sikres, at en hurtig og simpel manuel omrystning vil genetablere en tilstand af fuldstændig og ensartet dispergering af penicillinet efter længere tids opbevaring.
Cadmium har vist sig at være sundhedsskadeligt for mennes-30 ker. Generelt er dette metal kun tilstede i ringe mængder i omgivelserne, men de mængder af cadmium, som mennesker udsættes for, afhænger af flere faktorer. Forekomsten af cadmium såvel som metallets tilgængelighed i jorden varie- 3 DK 172852 B1 rer i forskellige områder, og der sker en relativt høj ; optagelse af cadmium i planter, som vokser på arealer med relativt lave pH-værdier. Ved forskellige industrielle aktiviteter, især ved metalforarbejdning, kan der udskilles 5 cadmium i luft, jord og vand. Cadmium i jord absorberes af planter og kan derved finde vej til fødevarer, som indtages af mennesker og dyr. De mest væsentlige måder, hvorpå man kan blive udsat for cadmium, er ved tobaksrygning og gennem· fødevarer samt, i en vis udstrækning, gennem 10 drikkevand.
Cadmium absorberes først og fremmest i tarmene og gennem lungerne, selv om det kun er en lille del af det i føden tilstedeværende cadmium, der bliver absorberet. Den gennemsnitlige optagelse af cadmium via føden er bestemt til at 15 være omkring 50 ;jg pr. dag i de fleste lande, men der kan være store variationer imellem forskellige geografiske områder og imellem de enkelte individer. Data fra rygere viser, at op til 50% af det inhalerede cadmium kan absorberes.
Flere undersøgelser viser dobbelt så høje cadmium-niveauer 20 i blod og organer hos rygere sammenlignet med ikke-rygere. Udskillelsen af cadmium fra menneskelegemet er langsom, og der er rapporteret biologiske halvtider på 10 til 30 år.
Dette er ensbetydende med, at der sker en akkumulering af cadmium i kroppen. Størstedelen af det akkumulerede cad-25 mium, dvs. 80-90% bindes til et protein, metallothionein, først og fremmest i leveren og nyrerne. Dannelsen af metallothionein induceres af metaller, først og fremmest zink og cadmium. Bindingen af cadmium til metallothionein er meget kraftig og resulterer i en detoxifikation af cadmium.
30 Det resterende cadmium i kroppen, som ikke er bundet til metallothioneiner, fordeles i kroppens øvrige organer med relativt høje niveauer i tarmene, lungerne (især hos rygere), kredsløbssystemet (hjerte, arterievægge, milt) og kirtlerne, såsom bugspytkirtlen og prostata.
35 Blandt de negative virkninger er det kendt, at cadmium kan 4 DK 172852 B1 påvirke kroppens elastin/elastase-system. Det er ligeledes kendt, at cadmium kan påvirke flere forskellige enzymer i kroppen, blandt hvilke man kan nævne Na , K (Mg^)-ATP-2+ 2+ ase og Ca , Mg -ATP-ase, som er vigtige i iontransport-5 systemer. Andre eksempler er cytochrom-P450-enzymer, som hydrolyserer steroider, fedtsyrer, aromatiske forbindelser og toxiske forbindelser. Andre vigtige enzymer, som inhibe-res af cadmium, er glutathion-peroxidase og superoxiddis-mutase, som beskytter imod forekomster af peroxidation.
10 Zink-afhængige enzymer, såsom leucinaminopeptidase, inhi-beres også af cadmium.
Resultater fra et stort antal dyreforsøg, som er opnået over et tidsrum på mange år, viser negative virkninger, selv ved meget lave niveauer af cadmium. Dette betyder, at 15 en stor del af befolkningen påvirkes negativt af cadmium, og dette gælder først og fremmest for rygere. Den epidemiologiske forskning har vist en sammenhæng imellem forekomsten af cancer, højt blodtryk og kardiovaskulære lidelser (f.eks. arteriosclerose, hjerteinfarkt og pludselig hjertedød) og 20 forekomsten af cadmium i omgivelserne. En eksponering for cadmium synes også at være en faktor, son forøger risikoen for aldersbetinget diabetes.
Der er endvidere foretaget undersøgelser, som viser, at cadmium kan have en negativ indvirkning på nyrerne, lunger-25 ne (fibrose, emphysem, cancer), blodkarrenes vægge (fedtaflejringer, arteriosclerose, sammentrækning og elasticitet af karvægge, skader på endothelium), prostacyclin-produk-tionen, prostata, hjertet (ledningssystem, kontraktionskraft), placenta, testiklerne og centralnervesystemet. Cad-30 mium kan også inducere dannelsen af frie radikaler og derved bevirke en peroxidation af lipider, som kan spille en rolle ved udbrud af andre lidelser, såsom rheumatisme.
Allergi og bronchitis kan også være forbundet med eksponering for cadmium. Kendskabet til den negative indflydelse 35 af cadmium på mennesker og dyr er blevet betydeligt forø- 5 DK 172852 B1 get i løbet af de seneste årtier.
På trods af en meget intensiv forskningsindsats, hvormed man i mange år har forsøgt at forebygge de ovennævnte negative virkninger af cadmium og/eller at forhindre eller 5 i det mindste lette de ovennævnte problemer, som skyldes cadmium, og som i mange tilfælde involverer meget alvorlige lidelser, har det imidlertid indtil nu ikke været muligt at finde nogen gode midler uden bivirkninger.
Aluminium har hidtil været betragtet som en sundhedsrisiko.
10 Hos dialysepatienter fremkalder aluminium demens og oste-omalaci.
Det formodes, at aluminium kan frembringe mange abnormali-teter, såsom Alzheimer^ sygdom hos mennesker. Der er også foretaget undersøgelser, som viser, at aluminium kan frem-15 bringe adskillige sygdomme hos dyr. Aluminium kan desuden forøge lipid-peroxidationen i biologiske membraner, sandsynligvis ved at forringe membran-strukturens stabilitet.
Ligesom med cadmium har man hidtil ikke fundet noget godt middel imod aluminium-relaterede sygdomme, uden at sådan-20 ne midler er behæftet med bivirkninger.
Med den foreliggende opfindelse har det overraskende vist sig muligt at imødegå de ovennævnte negative virkninger af cadmium, aluminium og frie radikaler på dyr og mennesker, og det er således også blevet muligt at forebygge eller 25 lindre de hermed forbundne sygdomme. Opfindelsen tilvejebringer således et farmaceutisk præparat, der som farmaceutisk aktiv ingrediens indeholder mindst en isomer af inositoltriphosphat (IP^), fortrinsvis på saltform. Præparatet ifølge opfindelsen tænkes først og fremmest anvendt 30 til at forebygge eller lindre tilstande, som opstår, eller som induceres eller fremmes, ved indtagelse af cadmium og aluminium, og til at forebygge eller lindre sygdomme, som har relation til cadmium eller aluminium. Præparatet ifolge 6 DK 172852 B1 opfindelsen tænkes også anvendt til at forebygge eller lindre sygdomme, som har relation til tilstedeværelsen af frie radikaler i kroppen.
Som eksempler på sygdomme, som kan forebygges eller lind-5 res ved hjælp af præparaterne ifølge opfindelsen, kan nævnes skader på forskellige dele af øjet, såsom nethindevævet og linsen, bronchitis, arthritis, forstyrrelser i celledelingen, cancer, forhøjet blodtryk, kardiovaskulære lidelser, aldersbetinget diabetes, skader på cellemembranerne, 10 skader på placenta, skader på centralnervesystemet, skader på testiklerne, lidelser i prostata eller hjertets ledningssystem, emphysem, lungefibrose, migræne, menstruationsfor-styrrelser, skader på endothelium, skader på nyrerne, multipel sclerose, autoimmune lidelser, allergi, thrombose, 15 sammenklumpning af blodpla.der og inhibering af prostacyc-lin-produktionen. Dette skal ikke forstås således, at midlerne ifølge opfindelsen vil forebygge eller lindre alle former af de ovennævnte tilstande, men midlerne vil fore-bygge eller lindre de former af de ovennævnte tilstande, 20 som fremkaldes eller forværres af tilstedeværelsen af cadmium, aluminium eller frie radikaler i kroppen.
Til fremstilling af isomere af IP^, som opfylder de ovennævnte formål, og som er tilstede i præparaterne ifølge opfindelsen, kan man anvende en eller flere af forbindelserne 25 IP^, IP5 ©S IP^ eller et naturligt produkt, som indeholder mindst en af disse forbindelser, som udgangsmateriale. I de tilfælde, hvor udgangsmaterialet er et naturligt forekommende produkt, vælger man fortrinsvis et produkt med et indhold på mindst 0,3%, især mindst 155 inositolphosphat 30 (IP^ + + Særligt egnede produkter er bønner, klid, pollen og frø af olieplanter.
Præparaterne ifølge opfindelsen bør fortrinsvis indeholde mindst 10%, helst mindst 20% og især mindst 40% IP^ beregnet på udgangsmaterialets indhold af inositol. Nan stræ- 7 DK 172852 B1 ber efter at opnå et så højt indhold af IP^ i præparatet som muligt, eftersom IP^ udviser den bedste terapeutiske virkning ved de eksperimenter, som er beskrevet i det følgende. De IP^-isomere, som findes i præparaterne ifølge 5 opfindelsen, kan f.eks. frembringes ved enzymatisk nedbrydning med udgangspunkt i IP^, IP^ og/eller IPg.
Ifølge opfindelsen foretrækker man en procedure, hvor de ovennævnte højere inositolphosphater IPg, IP^ og/eller IP^ nedbrydes enzymatisk til IP^ med eksempelvis phytase-10 enzym. Phytaseenzymet er normalt tilstede i alle inositol-phosphat-holdige planter og frø. Som følge heraf er det sædvanligvis ikke nødvendigt at tilsatte enzymet, hvis man benytter et naturligt forekommende produkt som udgangsmateriale. I de tilfælde, hvor det naturligt forekommende pro-15 dukt har en for ringe enzymatisk aktivitet, eller hvor man som udgangsmateriale benytter IPg, IP^ eller IP^ eller en blanding af disse, tilsætter man et phytaseenzym, eksempelvis fra klid.
En passende metode til behandling af det naturlige eller 20 rå udgangsmateriale, .består i at forbehandle materialet, eksempelvis ved nedbrydning eller fjernelse af den ydre membran og fjernelse af uønskede bestanddele. Når man således anvender pollen, bør man fjerne allergenerne. Derefter opbløder man materialet i vand for at gøre inositolphosphatet 25 tilgængeligt for nedbrydning og for at aktivere enzymet.
I tilfælde af, at det er nødvendigt at tilsætte en yderligere mængde enzym, foretages denne tilsætning på dette trin.
Enzymet får derefter lov at reagere i det tidsrum, som er nødvendigt for at opnå den ønskede grad af hydrolyse.
50 Hydrolysen foregår ved en passende temperatur, sædvanligvis 20 til 70°C, fortrinsvis 30 til 60°C, og ved et optimalt pH-niveau for den tilstedeværende phytase. For at standse hydrolysen på det ønskede niveau kan man destruere eller inaktivere enzymet, eksempelvis ved hurtig opvarmning af 8 DK 172852 B1 det hydrolyserede udgangsmateriale. Herved sikrer man også, at en ikke-kontrolleret og uønsket fortsat hydrolyse af IP^ i maven ikke fortsætter, efter at præparatet er blevet indgivet. Med henblik på at overføre materialet til en form, 5 som er stabil ved opbevaring, er det ønskeligt at frysetørre materialet. Man kan med fordel anvende gær som en kilde for phytase. Fortrinsvis anvender man almindeligt bagegær.
Når man anvender gær, opnår man i det væsentlige kun en isomer af IP^, nemlig D-myo-inositol-1,2,6-triphosphat.
10 Den ovenfor beskrevne procedure kan, i passende dele med eventuelle modifikationer, også anvendes, når man benytter en eller flere af forbindelserne IPg, IP^ eller IP^ per se som udgangsmateriale.
Det farmaceutiske præparat ifølge opfindelsen indeholder 15 som aktiv bestanddel mindst en isomer af inositoltriphosphat (IP^) i en mængde, som er tilstrækkelig til at reducere den negative virkning af cadmium eller aluminium i kroppen eller til at inhibere eller reducere dannelsen af frie radikaler i kroppen.
20 Præparatet ifølge opfindelsen fremstilles fortrinsvis i enhedsdosisform. Tabletter, granulater og kapsler er egnede indgivelsesformer til sådanne dosisenheder. Endvidere kan tabletter og granulater let overfladebehandles, således at man opnår en enterisk belægning, som kan modvirke en ikke-25 kontrolleret hydrolyse i maven og tilvejebringe den ønskede absorption i tarmene. Andre egnede indgivelsesformer omfatter formuleringer til langsom frigivelse og formuleringer til transdermal indgivelse. Sædvanlige farmaceutisk acceptable additiver, excipienser og/eller bærestoffer kan være 30 inkluderet i præparatet. Tabletterne eller granulaterne kan også indeholde et disintegrerende middel, som får tabletterne eller granulaterne til let at gå i opløsning i tarmene. I visse tilfælde, i. særdeleshed i akutte situationer, foretrækkes det at anvende en enhedsdosis i form 9 DK 172852 B1 af en opløsning til intravenøs indgivelse.
Det farmaceutiske præparat kan også bestå af IP3 alene uden additiv, excipiens eller bærestof.
Såfremt det ønskes, kan præparatet være befriet for andre 5 inositolphosphater (IPj, IP2, IP«, IPs og ΙΡε) · Blandingen af IP3-isomere kan således have en renhed på 90 til 100%, såsom 93 til 100% eller fortrinsvis 95 til 100%.
Det farmaceutiske præparat kan alternativt bestå af eller omfatte en eller flere specifikke IP3-isomere, som beskrives 10 nærmere i det følgende, og som hver især er tilstede i praktisk talt ren form. De forskellige isomere kan således isoleres fra hinanden i en i det væsentlige ren form, hvilket betyder, at de har en renhed på 80-100%, såsom 82-100% eller 85-100%, fortrinsvis 90-100%. Eftersom disse isomere kan 15 fremstilles i ren form, kan de naturligvis blandes i et hvilket som helst forhold.
Fremstillingen af IP3 og isolationen af de forskellige isomere deraf er beskrevet i den ovennævnte danske patentansøgning nr. 4833/85.
20 I de fleste tilfælde er det bekvemt, at IP3-isomeren eller -isomererne i præparatet er tilstede i saltform, således at mineralbalancen ikke påvirkes negativt. Saltet bør fortrinsvis være et natrium-, calcium-, zink-, kobber- eller magnesiumsalt eller en blanding af to eller flere af disse salte.
25 Calcium- og zinksalte eller blandinger af disse er særligt foretrukne, eftersom calcium- og zinkioner kan konkurrere med cadmiumioner med hensyn til binding til vitale steder i kroppen. På denne måde kan man yderligere nedbringe resorptionen og de negative virkninger af cadmium i kroppen, hvorved man 30 opnår en præventiv og terapeutisk virkning på de ovennævnte lidelser. Isomeren af IP3 kan også delvis være tilstede i form af et salt af en eller 10 DK 172852 B1 flere fysiologisk acceptable forbindelser fra lanthanid-gruppen i det periodiske system, dvs. La, Ce, Pr, Nd, Pm,
Sm, Eu, Gd, Tb, Dy, Ho, Er, Tm, Yb og Lu.
Af de ovennævnte årsager er det også en fordel, hvis præpa-5 ratet indeholder et overskud eller en ekstra tilsætning af mindst et farmaceutisk acceptabelt salt af calcium, zink, magnesium eller kobber med en mineralsyre eller en organisk syre. Dette er især en fordel, når der er tale om ældre personer, som ofte har et underskud af disse mineraler.
10 Præparatet ifølge opfindelsen kan også med fordel indeholde mindst en substans, der indeholder selen, en umættet fedtsyre, såsom V -linolensyre, vitamin E, vitamin C eller en farmaceutisk acceptabel organisk syre eller et salt deraf, såsom et citrat, et oxalat, et malonat eller et tartrat.
15 Disse substanser medvirker også til at modarbejde den negative virkning af cadmium i kroppen og/eller i visse tilfælde til at frembringe en ønskelig virkning sammen med IP^-isomeren i præparatet. Indholdet af selen i præparatet vælges fortrinsvis på en sådan måde, at den daglige indtagelse 20 er omkring 0,7-8 pg/kg legemsvægt, fortrinsvis 0,7-3,3 ^ig/kg.
For vitamin E er de tilsvarende værdier henholdsvis ca.
0,1-2 mg og 0,1-1 mg.
Det omhandlede præparat er i det væsentlige uden indhold af penicillin.
25 Ved indgivelse til mennesker, som lider af en tilstand, der er fremkaldt eller forstærket af tilstedeværelsen af cadmium, aluminium eller frie radikaler i kroppen, kan fagmanden rutinemæssigt bestemme de passende doser i forlængelse af de resultater, som er opnået på dyr ved forskellige do-30 seringer. Foretrukne doser til mennesker er af størrelsesordenen 0,1 til 10 mg IP^/dag/kg legemsvægt.
I dyreforsøg kunne man ikke iagttage negen toxiske virk- f 11 DK 172852 B1 ninger efter indgivelse af meget høje doser IP^, nærmere bestemt 160 mg/kg legemsvægt ved intravenøs injektion i mus eller 1600 mg/kg legemsvægt ved intraperitoneal injektion i mus.
5 Præparatet ifølge opfindelsen indeholder mindst 1, undertiden 2 eller flere af de følgende substanser, som svarer til den vigtige IP^-isomer (eller isomere) nævnt ovenfor: D-myo-inositol-1,2,6-triphosphat med formlen: / 1 °?°>Λ L I n . x1* °po! / \ 0P0j / hvori X er hydrogen, mindst en monovalent, divalent eller 10 multivalent kation eller en blanding deraf, n er antallet af ioner og z er ladningen af den pågældende ion; D-myo-inositol-1,2,5-triphosphat med formlen: hvori X, n og z har de ovenfor angivne betydninger; myo-inositol-1,2,3-triphosphat med formlen: 12 DK 172852 B1 f hvori X, n og z har de ovenfor angivne betydninger; L-myo-inositol-1,3,4-triphosphat med formlen: ( ΟΡΟ,2' jH ^ z +
V 0Ρ02'τ^ν^\>=ί^ΟΡΟ32“ J
hvori X, n og z har de ovenfor angivne betydninger, og D-nyo-inositol-l,4,5-triphosphat med formlen: L. „ ^oh r \ \ OH ^-^OPOj / 5 hvori X, n og z har de ovenfor angivne betydninger.
I hver af de ovenfor viste formler har n en værdi på mellem 6 og 1, og z har en værdi på mellem 1 og 6. Fortrinsvis er n mellem 3 og 6, og z er 3, 2 eller 1. Af de ovenfor viste isomere er D-myo-inositol-1,2,6-triphosphat mest 10 foretrukken.
IP- kan være den eneste farmaceutisk aktive bestanddel i
S
\ 13 DK 172852 B1 præparatet. Der kan imidlertid også være andre farmaceutisk aktive ingredienser tilstede. Mængden af IP3 bør i så fald udgøre fra 5 til 95 eller fra 15 til 80 vægt-%, eksempelvis fra 25 til 60 vægt-%, af de aktive ingredienser.
5
Endvidere kan præparatet være en multi-vitamin-enhed, som indeholder fra 2 til 60 vægt-%, eksempelvis fra 2 til 40 vægt-%, fortrinsvis 2 til 25 vægt-%, IP3 baseret på den totale vægt af de farmaceutisk acceptable ingredienser.
10 Sædvanligvis indeholder præparatet fra 0,01 til 1,5 g IP3, fortrinsvis 0,05 til 1,3 g, især 0,1 til 1 g IP3.
Præparatet ifølge den foreliggende opfindelse kan anvendes ved 15 en metode til at reducere den negative virkning af cadmium- eller aluminiumioner eller frie radikaler i legemsvævene. Ved denne metode indgiver man patienten eller dyret (dvs. et pattedyr) en mængde inositoltriphosphat, som kan forstyrre cadmiumeller aluminiumionerne, eller som kan inhibere eller reducere 20 dannelsen af frie radikaler i kroppen.
Med den foreliggende opfindelse bliver det også muligt at afbøde den skadelige virkning af stråling i kroppen, idet man indgiver patienten eller dyret en mængde inositoltriphosphat, 25 som er tilstrækkeligt til at afbøde denne strålingsvirkning.
Strålingen kan f.eks. være røntgenstråling eller kernestråling, men der kan også være tale om andre former for stråling.
Opfindelsen vil blive forklaret nærmere i det følgende i 30 forbindelse med et antal udførelseseksempler, hvor eksempel 1 viser forekomsten af blodplade-sammenklumpning i blodprøver fra kaniner efter injektion med cadmium. Eksemplerne 2 til 5 viser, at man kan modvirke en sådan sammenklumpning ved injektion eller ved oral indgivelse af IP3. Eksempel 6 illustrerer 35 forekomsten af cadmium i forskellige organer hos mus efter injektion med cadmium. Eksempel 14 DK 172852 B1 7 viser virkningerne af henholdsvis IP£, IP^ og IP^ på indholdet af cadmium i forskellige organer hos mus, som har modtaget injektioner med cadmium. Som det fremgår af eksempel 8, bevirker D-myo-inositol-1,2,6-triphosphat et kraf-5 tigt fald i koncentrationen af cadmium i lungerne, i arterierne omkring aorta, i hjertet og i milten hos mus, som var blevet injiceret med cadmium. Eksempel 9 viser, at IP^ modvirker en forøgelse af den blodplade-sammenklumpning hos mennesker, som skyldes tobaksrygning. I eksempel 10 10 vises det, at et forøget blodglucose-niveau hos mus, som skyldes frie radikaler, kan modvirkes ved injektion af IP^. Eksemplerne 11 til 15 viser, at IP^ modvirker eller reducerer dannelsen af frie radikaler. Eksemplerne 16 og 17 illustrerer eksperimenter vedrørende bindingskonstanterne 15 for binding af zink og cadmium til henholdsvis IPg og IP^. Eksemplerne 18 til 24 viser fremstillingen af IP^ og separationen af dette i forskellige isomere. Eksempel 25 viser fremstillingen af en opløsning af et calciumsalt af D-myo-inositol-1,2,6-triphosphat til injektion. I eksempel 20 26 beskrives fremstillingen af tabletter af calciumsaltet af D-myo-inositol-1,2,6-triphosphat.
I eksemplerne 1 til 5 benyttedes kaniner (hvide han-kaniner fra New Zealand), der vejede 2-2,5 kg. Kaninerne modtog et foder uden indhold af inositolphosphater i 10 dage for-25 ud for eksperimenterne.
I eksemplerne 1 til 3 (intravenøs injektion af testforbin-delseme) benyttedes den følgende procedure: 15 DK 172852 B1
Tid Behandling - II.· I I I. I I - ...» .111- ! - . .11 | 0 minutter Intravenøs injektion af inositolphos- phat i 1 ml fysiologisk saltvand eller 1 ml fysiologisk saltvand uden testfor-5 bindelse.
1 minut Blodprøve 1 (9 ml + 1 ml 3,8% natrium citrat) udtages.
2 minutter Intravenøs injektion af 4 mikrogram Cd som CdClg i 0,5 ml fysiologisk saltvand 10 eller 0,5 ml fysiologisk saltvand uden Cd.
5 minutter Blodprøve 2 (9 ml + 1 ml 3,8% natrium citrat) udtages.
I eksemplerne k og 5 (oral indgivelse af testsubstanser) benyttedes den samme procedure med den undtagelse, at den 3.5 ferste injektion erstattedes af en oral indgivelse af henholdsvis inositolphosphater og saltvand. De injicerede volumener var de samme som angivet ovenfor. Den orale dosering blev foretaget 1 time forud for udtagelsen af blodprøve 1.
Udtagelsen af blodprøver og den anden intravenøse injek-20 tion blev foretaget på samme r.åde som angivet ovenfor. Kaninerne blev ikke bedøvet under eksperimenterne.
Prøverne blev behandlet på følgende måde:
De to blodprøver fra hvert dyr blev centrifugeret ved 1200 omdrejninger pr. minut i 10 minutter, hvorefter blodprøver-25 nes plasma med indhold af blodplader blev opsamlet.
Plasma og blodplader fra de to prøver blev analyseret med hensyn til respons over for tilsætning af ADP (adenosindi- 16 DK 172852 B1 phosphat) 1 et aggregometer (Chronopar Corp Mod. 440) ifølge Born (J. Physiol. 67, 1968). De to prøver blev analyseret samtidigt ved samme koncentration (1-20 mikromolær) af ADP i instrumentets to kanaler.
5 Princippet i denne test er, at plasma-prøven, som indeholder blodplader, er uklar og derfor udviser en ringe gennemskinnelighed for lys. Når der tilsættes ADP, vil blodpladerne samle sig og danne klumper. Dette resulterer i en forøget transmittans, hvis størrelse kan måles på instrumentet.
10 Responsen over for ADP blev målt i skalaenheder, idet 80 skalaenheder repræsenterede den maksimale sammenklumpning.
Med henblik på at opnå en maksimal følsomhed ved metoden, således at man kan registrere ændringerne i blodplade-re-aktiviteten, bør den tilsatte ADP-dosis frembringe en re-15 spons på 5-30 skalaenheder. Dette kunne normalt opnås med 5 }M ADP, men hos nogle af dyrene var en lavere eller højere dosis (1-20 jjM) nødvendig.
Resultaterne af denne test er udtrykt som den maksimale sammenklumpning i prøve 2 (skalaenheder) minus den maksi-20 male sammenklumpning i prøve 1. I eksempel 1 er også angivet de gennemsnitlige værdier for sammenklumpningen i de to prøver.
Det har været rapporteret, at der sker en forøgelse af blodplade-sammenklumpningen efter rygning og ved kardiovas-25 kulære sygdomme, og midler, som undertrykker blodplade-sammenklumpningen, vil således være af værdi ved behandling af eksempelvis kardiovaskulære lidelser.
EKSEMPEL 1
Der anvendtes de ovenfor beskrevne metoder. Injektionen 1 30 var saltvand i alle tilfælde, mens injektionen 2 var saltvand hos 13 dyr og cadmium hos 14 dyr.
17 DK 172852 B1
Man fandt følgende resultater:
Aggregering Aggregering Ændring fra prø-Prøve 1 Prøve 2 ve 1 til prøve 2 (skalaenheder) (skalaenheder) (skalaenheder) 5 Behandling med saltvand 18,2 17,1 -1»1
Cd-behandling 21,4 24,8 +3,4
Behandlingen med Cd fremkaldte således en forøgelse i blod-plade-aggregeringen, mens man kunne iagttage en svag for-10 mindskelse hos de dyr, der behandledes med saltvand.
EKSEMPEL 2
Der anvendtes de ovenfor beskrevne metoder. Kaninerne blev injiceret intravenøst med 2 x 10“^ mol inositoldiphosphat (IP2), inositoltriphosphat (IP^) eller inositoltetraphosphat 15 (IP4) opløst i fysiologisk saltvand. Inositolphosphaterne IP2, IP3 og IP^ bestod hver især af blandinger af isomere, som dannes, når IPg hydrolyseres med hvede-phytase.
Man fandt følgende resultater (de Cd-behandlede kaniner fra eksempel .1 er medtaget til sammenligningsformål): 20 Ændring i blodpla- de-aggregering fra prove 1 til prøve 2
Injektion 1 Injektion 2 Antal dyr (skalaenheder) 25 IP2 Cd 9 +1,9 IP3 Cd 8 -0,2 IP4 Cd 9 +5,6
Saltvand Cd 1¾ +3,4 18 DK 172852 B1
Resultaterne viser, at IP^ modvirker den aggregerende virkning af cadmium. har en svagt præventiv virkning, mens IP^-behandlede dyr udviser en endnu større tilbøjelighed til aggregering.
5 EKSEMPEL 3
Der anvendtes de samme metoder som ovenfor anført. Man testede fire forskellige isomere af IP-z, og den injicerede -7 ^ mængde var 2 x 10 mol. De undersøgte isomere var D-myo-inositol-1,2,6-triphosphat (1,2,6), L-myo-inositol-1,3,4-10 triphosphat (1,3,4), myo-inositol-1,2,3-triphosphat (1,2,3) og D-myo-inositol-1,2,5-triphosphat (1,2,5).
Man fandt følgende resultater (de Cd-behandlede dyr fra eksempel 1 er medtaget til sammenligning); Ændring i aggre- 15 gering fra prøve 1
Injektion 1 Injektion 2 Antal dyr til prøve 2 (ska- _ _ _ laenheder)_ 1,2,6 Cd 15 -0,4 1,2,3 Cd 12 +0,3 20 1,3,4 Cd 13 +0,6 1,2,5 Cd 14 +1,7
Saltvand Cd 14 +3,4
Resultaterne viser, at samtlige de afprøvede isomere havde en god virkning med hensyn til at forebygge den cadmium-25 inducerede aggregering, og at den bedste virkning opnåedes med isomeren 1,2,6.
EKSEMPEL 4
Der anvendtes samme metoder som beskrevet ovenfor. Dyrene 19 DK 172852 B1 fik oralt indgivet IP, (D-myo-inositol-l,2,6-triphosphat), dosis 2 x 10 mol i 1 Jul fysiologisk saltvand, eller saltvand alene.
Man fandt følgende resultater: 5 Ændring i aggrege-
Oral ind- ring fra prøve 1 til givelse Injektion Antal dyr prøve 2 (skalaenheder)
Saltvand Cd 23 +1,9 IP3 Cd 20 +1,1 10 Ligesom i eksempel 1 fremkaldte Cd en forøgelse af blodplade- sammenklumpningen. I den pågældende dosis bevirkede en oral indgivelse af IP^ en delvis forebyggelse af denne forøgelse.
EKSEMPEL 5 15 Der anvendtes samme metoder som beskrevet ovenfor. Dyrene fik oralt indgivet IP, (D-myo-inositol-l,2,6-triphosphat), -5 dosis 2 x 10 mol. Dyrene fra eksempel 4, som behandledes med saltvand og Cd, er medtaget til sammenligning.
Man fandt følgende resultater: 20 Ændring i aggrege-
Oral ind- ring fra prøve 1 til givelse Injektion Antal dyr prøve 2 (skalaenheder)
Saltvand Cd 23 +1,9 IP3 Cd 15 -0,^ 25 Ved den dosis, som anvendtes i dette eksperiment, virkede I?3 forhindrende på indflydelsen af Cd på blodplade-sammen- 20 DK 172852 B1 klumpningen.
En forøgelse af blodplade-sammenklumpningen betragtes som en af de mest vigtige faktorer, som fremkalder arterioscle-rose, og evnen hos IP^ til at forebygge den aggregering, 5 som induceres af cadmium (eksempel 2-5) og tobaksrygning (eksempel 9), viser, at IP^ er meget nyttig til at forhindre eller i det mindste at lette sådanne lidelser.
EKSEMPEL 6 14 mus blev holdt på en kur, som var fri for phytinsyre og 10 inositolphosphater, i 1 uge forud for eksperimentet og under selve eksperimentet. Musene blev injiceret intravenøst 109 med 2,5 mikrocurie Cd som CdClg opløst i 50 mikroliter fysiologisk saltvand. 7 dage efter injektionen blev musene aflivet, og flere organer blev dissekeret ud og vejet. Ni-15 veauet af radioaktivt cadmium i organerne blev bestemt ved optælling i en gamma-tæller. Man fandt følgende resultater:
Organ Tællinger/minut/mg væv
Lever 54-2,3
Nyre 356,3 20 Hjerte 53,5
Aorta-væg 29,4
Lunge 31,5
Muskel 7,3
Fedt 1.8 25 I sammenligning med almindelige væv, såsom muskel- eller fedtvæv, var der akkumuleret signifikante mængder Cd i organer (hjerte, aorta-væg, lunge) i de tilfælde, hvor man fandt Cd-inducerede sygdomme hos forsøgsdyrene.
Det høje. niveau af Cd i lever og nyre kan forklares ved 21 DK 172852 B1 den kendsgerning, at disse væv indeholder metallothionein, som binder og detoxificerer cadmium. Selv om disse organer således optager størstedelen af Cd-mængden, sker der ikke nogen skade, før man når op på meget høje niveauer.
5 EKSEMPEL 7
Der anvendtes mus, som vejede 18-20 gram ved forsøgets start.
Under eksperimentet og mindst 7 dage forud for dette blev musene fodret med en semisyntetisk diæt, som ikke indeholdt inositolphosphater. Musene blev opdelt i 4 grupper.
10 Musene modtog daglige intraperitoneale injektioner af fysiologisk saltvand, inositoldiphosphat (iPg), inositoltri-phosphat (IP^) eller inositoltetraphosphat (IP^) i 9 dage.
Den indgivne dosis af inositolphosphater var 10-8 mol/dag.
Det injicerede volumen var 0,2 ml. Inositolphosphaterne 15 IP2> IP3 og IP^ var blandinger af de isomere, som dannes, når phytinsyre nedbrydes af hvede-phytase.
5 til 10 minutter efter den anden intraperitoneale injektion på eksperimentets anden dag modtog alle mus en intravenøs injektion af 2,5 mikrocurie 18^Cd som cadmiumchlorid 20 i 50 mikroliter saltvand. Efter den sidste intraperitoneale injektion blev musene aflivet, og flere organer blev dissekeret ud og vejet.
Radioaktiviteten i de forskellige organer blev målt ved optælling med en gamma-tæller. Radioaktiviteten i organerne 25 fra de IP^-behandlede dyr blev sammenlignet med radioaktiviteten i organerne fra kontroldyr, som var blevet behandlet med saltvand i den samme tidsperiode. Den fundne radioaktivitet i organerne fra de dyr, som var behandlet med forskellige inositolphosphater, er udtrykt som procent af 30 den radioaktivitet, som blev fundet i kontroldyrene. Resultaterne var følgende: 22 DK 172852 B1
Organ-niveauer af cadmium i mus med IP2, ΙΡ^> IP^ som # af kontrol-niveauer (kontrol =100). 15 mus i hver gruppe.
Organ IP2 IP^ IP^
Lunge 111 80 113 5 Hjerte 99 77 89
Aorta 95 89 81
Milt 151 81 132
Spytkirtel 104 82 89
Lever 100 100 101 10 Nyre 101 102 94
Disse resultater viser, at IP^ frembragte en reduktion i cadmium-niveauerne i samtlige undersøgte organer med undtagelse af lever og nyre. Med IP^ kunne man se en reduktion i nogle organer, men ikke i alle, og der kunne ikke ses no-15 Sen positiv effekt med IP2· EKSEMPEL 8
Forsøget fra eksempel 7 blev gentaget med den forskel, at man benyttede den rene isomer D-myo-inositol-l,2,6-triphos-phat. Den indgivne dosis var 10"^ mol pr. dag, og musene 20 modtog 4 daglige injektioner. En kontrolgruppe modtog injektioner med fysiologisk saltvand. Man fandt følgende resultater:
Organ-niveauer af cadmium i mus behandlet med D-myo-inosi-tol-l,2,6-triphosphat, udtrykt som % af kontrolværdier.
23 DK 172852 B1
Organ Cd-niveau
Lunge 74
Hjerte 67
Aorta 65 5 Milt 57
Spytkirtel 87
Lever 100
Nyre 104
Disse resultater viser, at 1,2,6-isomer en af IP^ bevirker 10 et kraftigt fald i cadmium-koncentrationen i lunge, aortaarterie, hjerte og milt. Niveauerne i lever og nyre blev ikke påvirket.
EKSEMPEL 9 I dette eksempel undersøgtes virkningen af IP^ på blodpla-15 de-aggregeringen hos mennesker efter tobaksrygning.
Fire unge sunde mandlige ikke-rygere modtog ved to lejligheder en kapsel indeholdende enten 50 mg IP^ eller 50 mg placebo. Det anvendte IP^ var calciumsaltet af D-myo-inosi-tol-l,2,6-triphosphat. Hverken forsøgspersonen eller under-20 søgelseslederen viste, hvorvidt personen modtog IP^ eller placebo i det enkelte tilfælde.
To timer efter indgivelse af kapslen udtog man en blodprøve. Derefter røg forsøgspersonen to cigaretter i hurtig rækkefølge. Efter rygningen udtog man endnu en blodprøve. Man 25 bestemte blodplademes aggregerings-respons over for ADP og collagen i de to prøver, idet man i det væsentlige anvendte samme procedure som i eksempel 1. Resultaterne er udtrykt som ændringen i aggregering fra prøven før rygning til prøven efter rygning. En positiv angivelse (+) indike-30 rer, at aggregeringen var kraftigst efter rygning.
24 DK 172852 B1
Koncentration Forskel
Aggregerings- af aggrerings- mellem IP^ middel middel IP^ Placebo og placebo ADP 0,5 mmol +1,5 +7,25 5,85 5 1 mmol -1,5 +0,25 1,75 2,5 mmol -1,5 0 1,5 5 mmol -2,5 -0,75 1,75
Collagen 0,5 mg +5,15 +12,25 6,5 -"- 1 mg -8,25 +1,75 10,0 10 -"- 2,5 mg -3,75 0 . 3,75 5 mg -1,5 -0,25 1,25 I placebo-gruppen bevirkede rygningen en forøgelse af aggregeringen, som var mest udtalt ved lave koncentrationer af aggregeringsmiddel. I samtlige tilfælde blev denne ef-15 fekt modvirket af IP^. Dette betyder, at IP^ modvirker den forøgelse af blodplade-aggregeringen, som fremkaldes af rygning.
EKSEMPEL 10
Et antal mus i grupper på 10 blev injiceret intraperitone-20 alt med IP^ (natriumsaltet af D-myo-inositolr-1,2,6-triphos-phat) i 3 dosisniveauer eller med fysiologisk saltvand, 30 minutter efter denne injektion modtog alle musene, med undtagelse af en kontrolgruppe, en intravenøs injektion af alloxan (50 mg/kg i saltvand).
25 Dyrene blev sultet 12 timer før og 1 time efter injektionen med alloxan. 72 timer efter alloxan-injektionen blev' en blodprøve fra musene analyseret med hensyn til glucose-ni-veau. Resultaterne var følgende: 25 DK 172852 B1
Dosis af IP^ Dosis af alloxan mg/kg_ _mg/kg_ Blod-glucose 0 O 216 0 50 864 5 800 50 857 1600 50 677
Alloxan fremkalder diabetes og forøgede blodsukkerniveauer ved at fremkalde omsætning med frie radikaler i de insulin-producerende celler. Med IP^ iagttog man en dosis-afhængig 10 nedgang i blodsukkerniveauerne, og den højeste dosis gav en vis beskyttelse imod alloxan.
EKSEMPEL 11
Man fremstillede en vandig opløsning indeholdende 0,3 mmol FeClj, 5,0 mmol ethylendiaminotetraeddikesyre (EDTA), 50 15 mmol tris-(hydroxymethyl)-aminomethan (TRIS) og 1,0 mol
NaN^. I denne opløsning dannedes komplekset Pe^4- - EDTA - N^.
Der påvistes en maksimal lysabsorption ved bølgelængden 409 nm.
Man fremstillede en anden vandig opløsning indeholdende 20 0,3 mmol FeCl,, 50 mmol EDTA og 50 mmol TRIS. I denne opløs- ning dannedes komplekset Fe-'^ - EDTA - H^O. Der viste sig ikke nogen maksimal lysabsorption ved bølgelængden 409 nm.
Denne forskel imellem resultaterne skyldes, at N^“ på konkurrerende måde erstatter et vandmolekyle, som binder sig 25 til Fe^-EDTA-komplekset. Dette viser, at Fe^-SDTA-kom-plekset har et bindingssted, som optages af et dissocier-bart vandmolekyle.
Det er endvidere kendt, at jern katalyserer dannelsen af hydroxy-radikaler. Til dannelsen af disse kræves binding 50 af et vandmolekyle til jern.
26 DK 172852 B1
Dette betyder, at EDTA i EDTA-Fe^-komplekset ikke kan in-hibere den dannelse af hydroxy-radikaler, som katalyseres af jern.
Det ovenfor beskrevne eksperiment blev gentaget med den for-5 skel, at man erstattede EDTA med IP^. Der opnåedes ikke nogen maksimal lysabsorption ved bølgelængden 409 nm.
3+
Dette resultat betyder, at Fe^-komplekset med IP^ ikke binder vand. Derved forhindres dannelsen af frie radikaler, EKSEMPEL 12 10 En reaktionsblanding bestående af 48 mmol KH^PO^, 2 mmol
Na-ascorbat, 0,1 mmol H2O2, 0,5 mmol Fe og 1,7 mmol deoxy-ribose blev inkuberet ved 37°C i 1 time. Tilsvarende reaktionsblandinger indeholdende 1 mmol EDTA eller 1 mmol ino-sitoltriphosphat (IP^) blev inkuberet på lignende måde.
15 Det anvendte IP^ var D-myo-inositol-l,2,6-triphosphat.
Efter inkubationen sattes 1,65 ml thiobarbitursyre i 50 mmol NaOH og 1,65 ml 2,8% trichloreddikesyre til 2 ml af reaktionsblandingen. Den resulterende blanding blev opvarmet til 100°C i 20 minutter, hvorefter man målte absorban-20 sen ved 532 nm med vand som reference.
2+
Eksperimenterne blev gennemført med jern i form af Fe (Fe(NH^)SO^) og Fe'*+ (FeCl-j). Man fandt følgende resultater:
Dannelse af frie radikaler katalyseret af Fe2+ og Fe^- i nærværelse af IP^ eller EDTA, udtrykt som absorbans ved 25 532 nm.
Gruppe Fe2* Fe^*~
Kontrol 0,76 0,79 EDTA 2,2 1,86 IP3 0,46 0,43 27 DK 172852 B1
Disse resultater viser, at dannelsen af frie radikaler i reaktionsblandingen blev formindsket med 40% efter tilsætning af IP^. En tilsætning af EDTA havde den modsatte virkning. Her skete der nemlig en kraftig forøgelse af dannel-5 sen af frie radikaler. Dette viser, at IP^ kan reducere den jern-afhængige dannelse af frie radikaler.
EKSEMPEL 15
Man undersøgte lipid-peroxidationen i lipid-miceller. Den følgende reaktionsblanding blev inkuberet i 2 timer ved 10 37°C: 0,4 ml Clark-Lubs puffer pH 5»5 0,2 ml pho sphol ip id-1 ipo some r 0,1 ml IP, 0,5-5 mmol eller 0,1 ml H20
0,1 ml Fe*+ 1 mmol eller 0,1 ml HgO
15 0,1 ml Al'^*' 4 mmol eller 0,1 ml H20 0,1 ml H20
Det anvendte IP^ var D-myo-inositol-l,2,6-triphosphat.
Efter inkubation tilsattes 0,5 ml thiobarbitursyre og 0,5 ml 25% HC1, hvorefter blandingen blev opvarmet til 100°C 20 i 15 minutter. Der tilsattes 1 ml lubrol PX 1% (Sigma), og lipid-peroxidationen blev målt ved at bestemme absorbansen ved 532 nm. Man fandt følgende resultater: 28 DK 172852 B1
Koncentration, mmol ?. ·*, Absorbans
Forsøg Fe^+ Al^ IP^ 532 nm 1 0,1 0 0 0,36 5 2 0 0,4 0 0,12 3 0,1 0,4 0 0,89 4 0,1 0,4 0,5 0,36 5 0,1 0 0,5 0,30 6 0,1 0 0,4 0,26 10 7 0,1 0 0,2 0,29 8 0,1 0 0,1 0,28 9 0,1 0 0,05 0,27 10 0 0 0 0,13 pi
Fe bevirkede lipid-peroxidation (gruppe 1 over for gruppe 15 10). Al^- frembragte i sig selv ingen peroxidation (2 over 2+ 3+ for 10), hvorimod kombinationen af Fe og Al"^ frembragte p, en meget kraftigere peroxidation end Fe alene (l over for 3). En tilsætning af IP^, kunne fuldstændigt forebygge vek- yp i *z.
selvirkningen imellem Fe og A!-' (3 over for 4). I syste- 2+ 20 mer, som kun indeholdt Fe , frembragte IP^ en tydelig reduktion i radikal-dannelsen (1 over for 5-9).
EKSEMPEL 14
Lipid-peroxidationen blev atter undersøgt i lipid-miceller.
Til dette formål inkuberedes den følgende reaktionsblanding 25 i 2 timer ved 37°C: 0,4 ml Clark-Lubs puffer pH 5,5 0,2 ml phospholipid-liposomer 0,1 ml IP3 10 mmol eller 0,1 ml ^0 0,1 ml Fe2+ 1 mmol 30 0,1 ml Cd2+ 1 mmol eller 1 ml Pb2+ (l
mmol) eller 0,1 ml HgO
0,1 ml H20 .
29 DK 172852 B1
Det anvendte IP^ var D-myo-inositol-l,2,6-triphosphat.
Efter inkubation tilsattes 0,5 ml thiobarbitursyre og 0,5 ml 2596 HC1, og blandingen opvarmedes til 100°C i 15 minutter. Der tilsattes 1 ml lubrol PX 1% (Sigma), og lipid-per-5 oxidationen blev målt ved at bestemme absorbansen ved 532 nm.
Man fandt følgende resultater:
Koncentration, mmol o. o, Absorbans
Forsøg Cd^+ Pb^ IP^ 532 nm 10 1 0 0 0 0,63 2 0,1 0 0 1,08 3 0,1 0 1,0 0,73 4 0 0,1 0 1,79 5 0 0,1 1,0 1,32 2+ 15 Den lipid-peroxidation, som fremkaldtes af Fe (gruppe 1), blev kraftigt forøget af Cd (2) og af Pb (4). Effekterne af begge disse metaller blev kraftigt modvirket af IP^ (3 over for 2 og 5 over for 4).
EKSEMPEL 15 20 Reaktionsblandinger med følgende sammensætninger blev inkuberet i 5 minutter ved 37°· KH2P0/+ puffer pH 7,4 20 mmol EDTA 0,1 mmol
Salicylat 1 mmol 25 Ascorbat 1 mmol ^2^2 3»3 mmol
Fe^+ 0,05 mmol IP3 0, 2,5, 5 eller 10 mmol 30 DK 172852 B1 Mængderne af produkter, som dannedes ved oxidation af salicyla tet, blev bestemt ved højtryksvæskechromatografi. Det anvendte IP^ var D-myo-inositol-1,2,6-triphosphat.
Med dette system undersøges fjernelsen af radikaler. Under 5 disse reaktionsbetingelser vil hele mængden af Fe·^* danne komplekser med EDTA. Dette Fe-EDTA-kompleks vil inducere dannelsen af frie radikaler, hvorefter man undersøger evnen hos IP^ til at modvirke oxidationen af salicylatet.
Man fandt følgende resultater: 10 Koncentration Relativ mængde oxi- af IP3, mmol deret salicylat 0 100 2,5 44 5 43 15 10 19
Det ses, at IP^ er i stand til at virke som radikal-binden-de middel, hvorved man undgår den beskadigelse af andre molekyler, som skyldes frie radikaler.
EKSEMPEL 16 20 5 ml af en vandig opløsning indeholdende 2 pmol IPg og en ækvivalent mængde kationer blev titreret med en 10 mM natriumhydroxidopløsning .
Kationerne var cadmium- og zinkioner tilført i ferm af cad-miumchlorid og zinksulfat.
25 Man bestemte pH som funktion af den tilsatte mængde natriumhydroxid. Det ovenfor beskrevne eksperiment blev gentaget med I?-.
31 DK 172852 B1
Resultatet af eksperimenterne var, at zink i pH-området fra 4 til 8 binder sig stærkere til IP^ end cadmium. For IP^ gælder det modsatte, nemlig at cadmium binder sig stærkere end zink.
EKSEMPEL 17 5 Bindingskonstanten for IP^-cadmium-komplekset blev bestemt ved hjælp af NMR. Konstanten blev bestemt ved sammenlignende undersøgelser af andre komplekser, såsom EDTA-cadmium og parvalbumin-cadmium.
Bindingskonstanten (K) for IP^- cadmium-kompleks et var 10^.
10 EKSEMPEL 18 I dette eksempel undersøgtes hydrolysen af natriumphytat med phytase fra hvede og fraktioneringen af en blanding af ino s i tolpho sphater.
1.6 g natriumphytat (fra majs, Sigma Chemical Co.) blev op-15 løst i 650 ml natriumacetatpuffer, pH 5,2. Der tilsattes 2.7 g hvede-phytase (EC 3.1.3.26, 0,015 U/mg, fra Sigma Chemical Co.), hvorefter blandingen inkuberedes ved 33°C.
Dephosphoryleringen blev fulgt ved at bestemme det frigivne uorganiske phosphor. Efter 3 timers forløb, da der var 20 frigivet 5C$> uorganisk phosphor, blev hydrolysen standset ved tilsætning af 30 ml ammoniak til pH 12. Der opnåedes en flydende blanding indeholdende inositolphosphater.
350 ml af denne blanding blev ledt igennem en ionbytterko-lonne (Dowex 1, chloridform, 25 mm x 250 mm) og elueret 25 med en lineær gradient af saltsyre (0-0,7 N HC1). Prøver af de eluerede fraktioner blev hydrolyseret fuldstændigt med henblik på at bestemme indholdet af phosphor og inositol. De fundne toppe svarer til forskellige inositolphos- 32 DK 172852 B1 phater, idet en top med et forhold imellem phosphor og inositol på 3:1 består af inositoltriphosphat etc. Der opnåedes to fraktioner, hvor forholdet imellem phosphor og inositol var 3:1.
5 EKSEMPEL 19
Fraktionering af inosltoltriphosphater 100 ml af den første fraktion, der opnåedes i eksempel 18, med et phosphor/inositol-forhold på 3:1 blev neutraliseret og udfældet som et bariumsalt efter tilsætning af et 1096 10 overskud af en 0,1 M bar iumace ta topløsning. 600 mg af det udfældede salt blev opløst i 50 ml fortyndet saltsyre. Opløsningen blev separeret på en ionbytterkolonne (Dov/ex 1, chloridform, 25 mm x 2500 mm) med fortyndet saltsyre som elueringsmiddel. Prøver af de eluerede fraktioner blev ana-15 lyseret for phosphor. Der kunne ses tre toppe, som bestod af isomere af inosltoltriphosphater.
EKSEMPEL 20
Strukturbestemmelse af isomere af inosltoltriphosphater ved NMR_ 20 De tre toppe opnået i eksempel 19 blev analyseret ved pro- ton-NMR. De fundne data viser, at toppene består af henholdsvis myo-inositol-l,2,6-triphosphat, myo-inosit0l-l,2,3-triphosphat og myo-inositol-1,3>4-triphosphat.
Den anden fraktion fra eksempel 18 med et phosphor/inosi-25 tol-forhold på 3:1 blev analyseret ved proton-NMR. De fundne data viser, at fraktionen består af myo-inositol-1,2,5-triphosphat.
.33 DK 172852 B1 EKSEMPEL 21
Bestemmelse af optiske isomere af inositoltriphosphater 20 mg af hver af de forbindelser, der ved NMR ifølge eksempel 20 viste sig at være myo-inositol-l,2,6-triphosphat 5 og myo-inositol-1,3,A-triphosphat, blev yderligere chroma-tograferet på en chiralkolonne baseret på acetyleret cellulose (20 mm x 300 mm fra Merck) med en blanding af ethanol og vand som elueringsmiddel. Fraktionerne blev analyseret ved hjælp af et polarimeter. Det ses, at hver forbindelse 10 består af en optisk isomer, henholdsvis D-myo-inositol- 1,2,6-triphosphat og L-myo-inositol-l,3,4-triphosphat.
EKSEMPEL 22
Hydrolyse af natriumphytat med bagegær og fraktionering af en blanding af inositolnhosphater_ 15 0,7 g natriumphytat (fra majs, Sigma Chemical Co.) blev op løst i 600 ml natriumacetatpuffer (pH 4,6), og der tilsattes 50 g bagegær fra JSstbolaget, Sverige (tørstof 23%, nitrogen 2%, phosphor 0,4jé) under omrøring, hvorefxer inkubationen blev fortsat ved 45°C. Dephosphoryleringen blev 20 fulgt ved at bestemme det frigivne uorganiske phosphor.
Efter 7 timers forløb, da der var frigivet 50% uorganisk phosphor, blev hydrolysen standset ved tilsætning af 30 ml ammoniak til pH 12. Suspensionen blev centrifugeret, hvorefter supematanten blev opsamlet.
25 400 ml af supematanten blev ledt igennem en ionbytterko- lonne (Dov/ex 1, chloridform, 25 mm x 250 mm) og elueret med en lineær gradient af saltsyre (0-0,7 H HCl).
Prøver af de eluerede fraktioner blev hydrolyseret fuldstændigt med henblik på at bestemme indholdet af phosphor 30 og inositol. Toppene svarer til forskellige inositolphos- 34 DK 172852 B1 phater, således at en top med et forhold imellem phosphor og inositol på 3:1 består af inositoltriphosphater etc.
EKSEMPEL 23
Strukturbestemmelse af isomere af inositoltriphosphat 5 Fraktionen fra eksempel 22 med et phosphor/inositol-forhold på 3:1 blev neutraliseret og inddampet, hvorefter den blev analyseret ved proton-NMR. De fundne data viser, at toppen består af myo-inositol-l,2,6-triphosphat.
EKSEMPEL 24 10 Bestemmelse af optiske isomere af myo-inositol-triphosphat
Man benyttede den samme metode som beskrevet i eksempel 21 med den forskel, at man analyserede 10 mg af den forbindelse, som bestemtes ved NMR i eksempel 23. Det ses, at forbindelsen består af en optisk isomer, nemlig D-myo-inositol-15 1,2,6-triphosphat.
EKSEMPEL 25
Opløsning af kaliumsaltet af D-myo-inositol-l,2,6-triphos-phat til injektionsbrug__ 0,5 g af kaliumsaltet af IP^ og 0,77 g NaCl blev opløst i 20 93,73 ml vand til injektionsbrug, hvorved der fremkom en opløsning, som egner sig til injektion i mennesker eller dyr.
EKSEMPEL 26
Tabletter af calciumsaltet af D-rryo-inositol-l,2,6-triphosphat 25 Tabletter af calciumsaltet af D-nyo-inositol-1,2,6-triphos- 35 DK 172852 B1 phat blev fremstillet på følgende måde: 50 g af calciumsaltet af D-myo-inositol-l,2,6-triphosphat blev blandet med 132 g lactose og 6 g acaciegummi. Der sattes renset vand til blandingen, hvorefter man fortsatte med at blande, 5 indtil der opnåedes en passende konsistens. Derpå blev blandingen sigtet og tørret. Den tørrede blanding blev blandet med 10 g talkum og 2 g magnesiumstearat. Derefter blev blandingen presset til tabletter, der hver vejede 200 mg.
10 For at lette forståelsen af den foreliggende opfindelse er der nedenfor angivet formler for IP^-isomerene ifølge opfindelsen. Der er ligeledes angivet formler for IPg, IP^, IP4 og IP2.
De lavere phosphatestere af myo-inositol navngives i afhæn-15 gighed af, på hvilke steder i inositol-ringen phosphorsyre-grupperne er anbragt, idet nummereringen skal give så lave positionsnumre som muligt. L og D står for tælling henholdsvis med uret og mod uret, og disse betegnelser anvendes i afhængighed af, hvilket resultat der fører til det laveste 20 positionsnummer. Carbonatomet, som indeholder en aksial phosphorsyregruppe, har altid position nr. 2. De nedenfor viste strukturformler er hver især simplificeret til syreformen:
^ ( , OH
H C ^ i - PH 1
Oh myo-inositol; C^ (0H)6 36 DK 172852 B1 v (p j r l»2,3,4,5,6-hexakis-(dihydrogen- phosphat)-myo-inositol eller al-ternativt myo-inositol-hexakls (phosphat) eller IP^ OH D-myo-inositol-1,2,6-triphosphat eller alternativt D-1,2,6-IP^ OV 'v' D-myo-inositol-1,2,5-triphosphat eller alternativt D-1,2,5-IP* >L) I—^ myo-inositol-l, 2,3-triphosphat . ---eller alternativt 1,2,3-IP* ογ 3 P = O-PO^Hp (Tj L-myo-inositol-l,2-diphosphat 0eller alternativt L-1,2-IP? C// fp ) D-myo-inositol-l,2,5,6-tetra- phosphat eller D-1,2,5,6-IP^ 37 DK 172852 B1 ^T\ Cl) L-myo-inositol-1,2,3, h, 5-penta- phosphat eller L-1,2, 3,4,5-IP^ p = -o-po3h2

Claims (23)

1. Farmaceutisk præparat, kendetegnet ved, at det 5 som aktiv bestanddel indeholder mindst en isomer af inositol-triphosphat (IP3) eller et salt deraf.
2. Præparat ifølge krav 1, kendetegnet ved, at det foreligger i farmaceutisk enhedsdosisform, og at det yderligere indeholder et farmaceutisk acceptabelt bærestof, excipi- 10 ens eller additiv.
3. Præparat ifølge krav 1, kendetegnet ved, at inositoltriphosphatet foreligger i saltform.
4. Præparat ifølge krav 3, kendetegnet ved, at inositoltriphosphatsaltet er et salt af calcium, zink, kobber 15 eller magnesium eller en blanding af to eller flere af disse salte.
5. Præparat ifølge krav 2, kendetegnet ved, at det foreligger som tabletter eller i granuleret form.
6. Præparat ifølge krav 2, kendetegnet ved, at det 20 foreligger i form af en opløsning.
7. Præparat ifølge krav 2, kendetegnet ved, at det yderligere indeholder et farmaceutisk acceptabelt salt af en mineralsyre eller en organisk syre med mindst et af metallerne calcium, zink, magnesium og kobber.
8. Præparat ifølge krav 2, kendetegnet ved, at det yderligere indeholder mindst et additiv valgt blandt selen-forbindelser, vitamin E, vitamin C og farmaceutisk acceptable organiske syrer eller salte deraf.
9. Præparat ifølge krav 8, kendetegnet ved, at DK 172852 B1 saltet er et citrat, et oxalat, et malonat eller et tar-trat.
10. Præparat ifølge krav 1, kendetegnet ved, at det ikke indeholder penicillin.
11. Præparat ifølge krav 1, kendetegnet ved, at inositoltriphosphatet er D-myo-inositol-1,2,6-triphos-phat med formlen y opOj" '^-‘0P0j~ l hvori X er hydrogen eller mindst en monovalent, divalent eller multivalent kation, n er antallet af ioner, og z er 10 ladningen af den pågældende ion.
12. Præparat ifølge krav 11, kendetegnet ved, at n og z hver for sig er et tal mellem 1 og 6, idet n fortrinsvis er 3-6, og z fortrinsvis er 1, 2 eller 3.
13. Præparat ifølge krav 1, kendetegnet ved, 15 at inositoltriphosphatet er D-myo-inositol-1,2,5-triphos- phat med formlen / .. opo*~ \ I 2- °H j 1 Π . X'* \ .On / hvori X er hydrogen eller mindst en monovalent, divalent eller multivalent kation, n er antallet af ioner, og z er DK 172852 B1 ladningen af den pågældende ion.
14. Præparat ifølge krav 1, kendetegnet ved, at inositoltriphosphatet er myo-inositol-1,2,3-triphosphat 5 med formlen hvori X er hydrogen eller mindst en monovalent, divalent eller multivalent kation, n er antallet af ioner, og z er 15 ladningen af den pågældende ion.
15. Præparat ifølge krav 1, kendetegnet ved, at inositoltriphosphatet er L-myo-inositol-1,3,4-triphosphat med formlen 20 [ 2- CH \ I 0?G, I l r. . xZ + V o?oj' 'v''v^0f.032- , 25 / hvori X er hydrogen eller mindst en monovalent, divalent eller multivalent kation, n er antallet af ioner, og z er ladningen af den pågældende ion. 30
16. Præparat ifølge krav 1, kendetegnet ved, at inositoltriphosphatet er D-myo-inositol-1,4,5-triphosphat med formlen 35 DK 172852 B1 11- 2'30?0^\ m f ^ i . ...» \ OH 0?03 hvori X er hydrogen eller mindst en monovalent, divalent eller multivalent kation, n er antallet af ioner, og z er 10 ladningen af den pågældende ion.
17. Præparat ifølge krav 1, kendetegnet ved, at IP3 er den eneste aktive bestanddel i præparatet.
18. Præparat ifølge krav 1, kendetegnet ved, at det ud over IP3 indeholder mindst en anden farmaceutisk aktiv bestanddel.
19. Præparat ifølge krav 18, kendetegnet ved, at 20 mængden af IP3 ligger i området fra 5 til 95 vægt-% af de aktive bestanddele.
20. Præparat ifølge krav 18, kendetegnet ved, at det er en multi-vitamin-enhed, der indeholder 2-60 vægt-% IP3 25 baseret på den totale vægt af farmaceutisk acceptable ingredienser.
21. Præparat ifølge krav 1, kendetegnet ved, at det indeholder fra 0,01 til 1,5 g IP3. 30
22. Anvendelse af inositoltriphosphat til fremstilling af et medikament, som er virksomt imod tilstande, der fremkaldes eller forstærkes af tilstedeværelsen af cadmium, aluminium eller frie radikaler i legemet. 35
23. Anvendelse af inositoltriphosphat til fremstilling af DK 172852 B1 Λ2 et medikament, der kan forebygge eller lindre arthritiske tilstande, bronchitis, ændringer i celleformeringen, cancer, forhøjet blodtryk, kardiovaskulære lidelser, aldersbetinget diabetes, skader på placenta, skader på testiklerne, 5 skader på prostata, skader på centralnervesystemet, skader på hjertets ledningssystem, emphysem, lungefibrose, skader på endothelium, nyrelidelser, allergi, thrombose, forøget blodplade-aggregering eller inhibering af prostacyclin-produktionen.
DK198504832A 1984-10-23 1985-10-22 Farmaceutisk præparat og anvendelse af inositoltriphosphat (IP3) til fremstilling deraf DK172852B1 (da)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SE8405295 1984-10-23
SE8405295A SE465951B (sv) 1984-10-23 1984-10-23 Isomer av inositoltrifosfat foeretraedesvis i saltform foer anvaendning som terapeutiskt eller profylaktiskt medel samt kompositioner daerav

Publications (3)

Publication Number Publication Date
DK483285D0 DK483285D0 (da) 1985-10-22
DK483285A DK483285A (da) 1986-04-24
DK172852B1 true DK172852B1 (da) 1999-08-16

Family

ID=20357457

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DK198504833A DK172857B1 (da) 1984-10-23 1985-10-22 Inositoltriphosphat-forbindelse, fremgangsmåde til dens fremstilling samt vandig opløsning og sammensætning med indhold der
DK198504832A DK172852B1 (da) 1984-10-23 1985-10-22 Farmaceutisk præparat og anvendelse af inositoltriphosphat (IP3) til fremstilling deraf

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DK198504833A DK172857B1 (da) 1984-10-23 1985-10-22 Inositoltriphosphat-forbindelse, fremgangsmåde til dens fremstilling samt vandig opløsning og sammensætning med indhold der

Country Status (19)

Country Link
US (7) US4734283A (da)
EP (3) EP0179440B1 (da)
JP (4) JPS61171491A (da)
AT (3) ATE37788T1 (da)
AU (3) AU589378B2 (da)
BE (2) BE903498A (da)
CH (2) CH668597A5 (da)
DE (6) DE3537542A1 (da)
DK (2) DK172857B1 (da)
FI (3) FI82474C (da)
FR (2) FR2573080B1 (da)
GB (3) GB2167298B (da)
HU (1) HU196077B (da)
IL (1) IL76777A (da)
IT (2) IT1190403B (da)
NO (3) NO854211L (da)
NZ (1) NZ213855A (da)
SE (6) SE465951B (da)
ZA (4) ZA858105B (da)

Families Citing this family (73)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5095035A (en) * 1981-07-31 1992-03-10 Eby Iii George A Flavor stable zinc acetate compositions for oral absorption
SE465951B (sv) 1984-10-23 1991-11-25 Perstorp Ab Isomer av inositoltrifosfat foeretraedesvis i saltform foer anvaendning som terapeutiskt eller profylaktiskt medel samt kompositioner daerav
US4735902A (en) * 1984-10-23 1988-04-05 Matti Siren Stabilized composition containing inositoltriphosphate
US5128332A (en) * 1984-10-23 1992-07-07 Perstorp Ab Method of treating cardiovascular diseases using inositoltrisphosphate
US5407924A (en) * 1984-10-23 1995-04-18 Perstorp Ab Method of treating pain using inositol triphosphate
SE465305B (sv) * 1986-04-16 1991-08-26 Perstorp Ab Anvaendning av inositolfosfat foer framstaellning av ett laekemedel
US5330979A (en) * 1984-10-23 1994-07-19 Perstorp Ab Method of treating renal disorders with inositoltriphosphate
JPS63198642A (ja) * 1986-03-11 1988-08-17 Mitsui Toatsu Chem Inc ミオイノシトール誘導体の製造方法
DE3783694T2 (de) * 1986-03-11 1993-05-19 Mitsui Toatsu Chemicals Verfahren zur herstellung von myoinositolabkoemmlingen.
US5057507A (en) * 1986-04-16 1991-10-15 Perstorp Ab Method of alleviating bone damage with inositoltriphosphate
EP0438386A4 (en) * 1986-11-05 1991-09-11 George Weston Foods Limited Novel improvers for flour and yeast raised baked goods
US5274161A (en) * 1986-11-26 1993-12-28 Perstorp Ab Derivatives of cyclohexane
SE8605063D0 (sv) * 1986-11-26 1986-11-26 Matti Siren Derivatives of cyclohexane
GB8705811D0 (en) * 1987-03-11 1987-04-15 Research Corp Ltd Inositol derivatives
JP2597618B2 (ja) * 1987-12-28 1997-04-09 三井東圧化学 株式会社 光学分割方法
JPH01287035A (ja) * 1988-05-13 1989-11-17 Sanwa Kagaku Kenkyusho Co Ltd 薬物並びにアルコール性中毒の予防剤とその治療剤
JPH01294631A (ja) * 1988-05-19 1989-11-28 Sanwa Kagaku Kenkyusho Co Ltd 糖尿性疾患治療予防剤及び飲食、し好物
SE464059C (sv) * 1988-09-15 1997-06-02 Perstorp Ab Användning av inositoltrifosfat för framställning av läkemedel
US5366736A (en) * 1989-02-16 1994-11-22 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Vitamin D derivative feed compositions and methods of use
US5316770A (en) * 1989-02-16 1994-05-31 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Vitamin D derivative feed compositions and methods of use
JPH04504847A (ja) * 1989-03-08 1992-08-27 ザ　ユニバーシティ　オヴ　バージニア　パテント　ファウンデーション インスリン抵抗性糖尿病のための食事用補添物
US5428066A (en) * 1989-03-08 1995-06-27 Larner; Joseph Method of reducing elevated blood sugar in humans
US5427956A (en) * 1989-03-08 1995-06-27 The University Of Virginia Patent Foundation Quantitative analysis for diabetic condition predictor
US5750348A (en) * 1989-03-08 1998-05-12 The University Of Virginia Patents Foundation Method for detecting insulin resistance
SE8902766D0 (sv) * 1989-08-17 1989-08-17 Siren Matti Saett att oeka den farmaceutiska effekten av inositolfosfat samt en beredning med foerbaettrad farmaceutisk effekt
SE8904355D0 (sv) * 1989-12-21 1989-12-21 Perstorp Ab Medicament
US5593963A (en) * 1990-09-21 1997-01-14 Mogen International Expression of phytase in plants
KR100225087B1 (ko) * 1990-03-23 1999-10-15 한스 발터라벤 피타아제의 식물내 발현
US7033627B2 (en) 1990-03-23 2006-04-25 Syngenta Mogen B.V. Production of enzymes in seeds and their use
US5543576A (en) * 1990-03-23 1996-08-06 Mogen International Production of enzymes in seeds and their use
SE9002278L (sv) * 1990-06-28 1991-12-29 Perstorp Ab Anvaendning av inositoltrisfosfat foer framstaellning av ett laekemedel
US6007809A (en) * 1990-08-29 1999-12-28 Chaykin; Sterling Method and product for eliminating undesirable side effects of eating vegetables such as onion or garlic
KR930702013A (ko) * 1990-08-29 1993-09-08 차이킨 스터얼링 양파 또는 마늘과 같은 채소류를 섭취하는 데에 있어서 바람직하지 않은 부작용을 제거하기 위한 방법 및 생성물
US5514398A (en) * 1990-11-05 1996-05-07 Amano Pharmaceutical Co., Ltd. Food additive and use thereof
SE9102068L (sv) * 1991-07-03 1993-01-04 Perstorp Ab Derivat av inositol, kompositioner innehaallande dessa samt anvaendning daerav
SE469260B (sv) * 1992-02-25 1993-06-14 Perstorp Ab En farmaceutisk komposition med foerbaettrad biotillgaenglighet avseende inositolfosfat
US5292537A (en) * 1992-11-12 1994-03-08 Bran Tec, Inc. Method for stabilizing rice bran and rice bran products
JP2696057B2 (ja) * 1993-05-11 1998-01-14 ニチモウ株式会社 穀類を原料とした生成物の製造方法
US5827837A (en) * 1993-08-20 1998-10-27 The Regents Of The University Of California Polyanion anti-inflammatory agents
SE503122C2 (sv) * 1993-11-22 1996-03-25 Perstorp Ab Användning av en inositoltrisfosfatester för behandling av inflammatoriska tillstånd
SE502989C2 (sv) * 1993-11-22 1996-03-04 Perstorp Ab Användning av en inositoltrisfosfatester för beredning av läkemedel
US5466465A (en) * 1993-12-30 1995-11-14 Harrogate Holdings, Limited Transdermal drug delivery system
SE502574C2 (sv) * 1994-01-25 1995-11-13 Perstorp Ab En farmaceutisk komposition med förbättrad biotillgänglighet hos inositolfosfat
US6451572B1 (en) 1998-06-25 2002-09-17 Cornell Research Foundation, Inc. Overexpression of phytase genes in yeast systems
ES2248067T3 (es) 1999-03-31 2006-03-16 Cornell Research Foundation, Inc. Fosfatasas con actividad de fitasa mejorada.
US6841370B1 (en) 1999-11-18 2005-01-11 Cornell Research Foundation, Inc. Site-directed mutagenesis of Escherichia coli phytase
US6383817B2 (en) 1999-12-30 2002-05-07 Wake Forest University Cadmium is a risk factor for human pancreatic cancer
US20020193379A1 (en) * 2001-06-05 2002-12-19 Insmed Incorporated Compositions and methods for decreasing the risk of or preventing neural tube disorders in mammals
FR2828206B1 (fr) * 2001-08-03 2004-09-24 Centre Nat Rech Scient Utilisation d'inhibiteurs des lysyl oxydases pour la culture cellulaire et le genie tissulaire
AU2002356880A1 (en) 2001-10-31 2003-05-12 Phytex, Llc Phytase-containing animal food and method
US20050108780A1 (en) * 2002-01-24 2005-05-19 Erasmus University Intracellular antibodies for a retrovirus protein
US7084115B2 (en) 2002-04-29 2006-08-01 Oxyplus, Inc. Inositol pyrophosphates, and methods of use thereof
CA2498017C (en) * 2002-09-13 2016-06-14 Cornell Research Foundation, Inc. Using mutations to improve aspergillus phytases
CA2413240A1 (en) * 2002-11-29 2004-05-29 Mcn Bioproducts Inc. Purification of inositol from plant materials
US20050123644A1 (en) * 2003-01-24 2005-06-09 Cargill, Incorporated Phosphate-containing fertilizer derived from steepwater
US7521481B2 (en) 2003-02-27 2009-04-21 Mclaurin Joanne Methods of preventing, treating and diagnosing disorders of protein aggregation
US20050048165A1 (en) * 2003-03-31 2005-03-03 Sadanandan Bindu Process for the preparation of Chapathi dough with reduced phytic acid level
US7745423B2 (en) * 2004-07-06 2010-06-29 NormOxys, Inc Calcium/sodium salt of inositol tripyrophosphate as an allosteric effector of hemoglobin
US20060258626A1 (en) * 2004-07-06 2006-11-16 Claude Nicolau Use of inositol-tripyrophosphate in treating tumors and diseases
US20070135389A1 (en) * 2004-07-06 2007-06-14 Claude Nicolau Tumor eradication by inositol-tripyrophosphate
US20060106000A1 (en) * 2004-07-06 2006-05-18 Claude Nicolau Use of inositol-tripyrophosphate in treating tumors and diseases
JP5028405B2 (ja) * 2005-03-18 2012-09-19 ノームオクシス インコーポレイテッド ヘモグロビンのアロステリックエフェクターとしてのミオイノシトール１，６：２，３：４，５トリピロリン酸のカルシウム塩
US7919297B2 (en) 2006-02-21 2011-04-05 Cornell Research Foundation, Inc. Mutants of Aspergillus niger PhyA phytase and Aspergillus fumigatus phytase
US20070212449A1 (en) * 2006-03-02 2007-09-13 Shamsuddin Abulkalam M Reduction of the titratable acidity and the prevention of tooth and other bone degeneration
WO2008017066A2 (en) * 2006-08-03 2008-02-07 Cornell Research Foundation, Inc. Phytases with improved thermal stability
US20110218176A1 (en) 2006-11-01 2011-09-08 Barbara Brooke Jennings-Spring Compounds, methods, and treatments for abnormal signaling pathways for prenatal and postnatal development
US20090214474A1 (en) * 2006-11-01 2009-08-27 Barbara Brooke Jennings Compounds, methods, and treatments for abnormal signaling pathways for prenatal and postnatal development
US20080103116A1 (en) * 2006-11-01 2008-05-01 Jennings-Spring Barbara L Method of treatment and compositions of D-chiro inositol and phosphates thereof
AU2008246061A1 (en) * 2007-05-01 2008-11-06 Normoxys, Inc. Erythropoietin complementation or replacement
US8192734B2 (en) 2007-07-09 2012-06-05 Cornell University Compositions and methods for bone strengthening
CA2699854A1 (en) * 2007-09-17 2009-03-26 Bioneris Ab Use of compounds comprising phosphorous for the treatment of cachexia
ES2604110T3 (es) * 2011-07-01 2017-03-03 Shiseido Company, Ltd. Activador de la producción del factor de crecimiento derivado de plaquetas-BB, y activador de la producción de células madre mesenquimatosas, estabilizador de células madre y regenerador de la dermis comprendiendo cada uno el mismo
FR3017134B1 (fr) * 2014-02-06 2018-04-20 Lesaffre Et Compagnie Levure biologique, procede d'obtention et utilisations

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2723938A (en) * 1952-12-05 1955-11-15 Bristol Lab Inc Aqueous penicillin suspensions comprising inositol phosphoric acids and their salts
US3591665A (en) * 1967-09-08 1971-07-06 Mitsui Toatsu Chemicals Process for producing phytic acid
FI51469C (fi) * 1968-01-10 1977-01-10 Morinaga Milk Industry Co Ltd Menetelmä radioaktiivisen strontium 90 saasteen poistamiseksi nestemäi sistä elintarvikkeista tai vedestä.
JPS50111246A (da) * 1974-02-14 1975-09-01
US4154824A (en) * 1976-07-20 1979-05-15 Interx Research Corporation Nonbitter tasting potassium product for oral administration to warm-blooded animals and method for preparing same
JPS53124636A (en) * 1977-04-04 1978-10-31 Kisaku Mori Method of increasing meranine contained in animal and plant
DE2740053A1 (de) * 1977-09-06 1979-05-03 Klaus Prof Dr Med Gersonde Verwendung von allosterischen effektoren mit hilfe von lipidvesikeln ueber eine irreversible inkorporierung zwecks verbesserter o tief 2 -entladung des haemoglobins in erythrozyten
JPS5486666A (en) * 1977-12-22 1979-07-10 Ajinomoto Kk Cola beverage
JPS5798292A (en) * 1980-12-09 1982-06-18 Jiyaade:Kk Powdery phytic acid and its preparation
JPS58198254A (ja) * 1982-05-14 1983-11-18 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd 加工食品の品質改良法
SE450325B (sv) * 1983-02-23 1987-06-22 Tricum Ab Kostfiberprodukt baserad pa skaldelar fran froet hos ceralier
SE465951B (sv) * 1984-10-23 1991-11-25 Perstorp Ab Isomer av inositoltrifosfat foeretraedesvis i saltform foer anvaendning som terapeutiskt eller profylaktiskt medel samt kompositioner daerav
US4735902A (en) * 1984-10-23 1988-04-05 Matti Siren Stabilized composition containing inositoltriphosphate
AU2001248278A1 (en) 2000-04-13 2001-10-30 Novozymes A/S Extracellular expression of pectate lyase using bacillus or escherichia coli

Also Published As

Publication number Publication date
JPS61171789A (ja) 1986-08-02
SE8504968D0 (sv) 1985-10-22
GB8526079D0 (en) 1985-11-27
JPH0338824B2 (da) 1991-06-11
FI85490C (fi) 1992-04-27
SE8504968L (sv) 1986-04-24
AU4893285A (en) 1986-05-01
EP0179440A1 (en) 1986-04-30
GB2167283A (en) 1986-05-29
IL76777A (en) 1990-09-17
FI854126L (fi) 1986-04-24
FR2571967A1 (fr) 1986-04-25
SE8503164L (sv) 1986-04-24
JPH0354924B2 (da) 1991-08-21
AU4893185A (en) 1986-05-01
IT8522573A0 (it) 1985-10-22
US4794014A (en) 1988-12-27
ZA858105B (en) 1986-06-25
FI854128A0 (fi) 1985-10-22
ZA858108B (en) 1986-06-25
SE465164B (sv) 1991-08-05
NO168227B (no) 1991-10-21
US5003098A (en) 1991-03-26
DK483385A (da) 1986-04-24
SE8504967L (sv) 1986-04-24
SE8504969D0 (sv) 1985-10-22
FI854128L (fi) 1986-04-24
JPS61181347A (ja) 1986-08-14
NO854211L (no) 1986-04-24
ZA858106B (en) 1986-06-25
US4851560A (en) 1989-07-25
CH668597A5 (fr) 1989-01-13
EP0179441A2 (en) 1986-04-30
GB8526080D0 (en) 1985-11-27
FI82474C (fi) 1991-03-11
FR2573080B1 (fr) 1988-11-10
ATE53038T1 (de) 1990-06-15
AU589378B2 (en) 1989-10-12
FI85490B (fi) 1992-01-15
SE8504967D0 (sv) 1985-10-22
US4735936A (en) 1988-04-05
ZA858107B (en) 1986-06-25
NO854212L (no) 1986-04-24
FI82474B (fi) 1990-11-30
GB2169602A (en) 1986-07-16
GB2167298A (en) 1986-05-29
IT1190402B (it) 1988-02-16
IT8522574A0 (it) 1985-10-22
FI88855B (fi) 1993-04-15
GB2167298B (en) 1988-11-02
EP0179440B1 (en) 1990-05-23
NO854213L (no) 1986-04-24
NZ213855A (en) 1989-05-29
GB8526078D0 (en) 1985-11-27
SE8503165D0 (sv) 1985-06-26
FI854127L (fi) 1986-04-24
DK483385D0 (da) 1985-10-22
JPH0515719B2 (da) 1993-03-02
HUT40674A (en) 1987-01-28
EP0179439A1 (en) 1986-04-30
DK483285A (da) 1986-04-24
FR2573080A1 (fr) 1986-05-16
SE8405295D0 (sv) 1984-10-23
JPS61171422A (ja) 1986-08-02
SE465951B (sv) 1991-11-25
DE3569188D1 (en) 1989-05-11
AU596080B2 (en) 1990-04-26
IL76777A0 (en) 1986-02-28
SE8503164D0 (sv) 1985-06-26
EP0179441A3 (en) 1988-03-16
FR2571967B1 (fr) 1988-02-05
SE8405295L (sv) 1986-04-24
BE903498A (fr) 1986-02-17
FI88855C (fi) 1993-07-26
SE8503165L (sv) 1986-04-24
IT1190403B (it) 1988-02-16
GB2169602B (en) 1988-10-19
DE3537569A1 (de) 1986-05-22
DE3537542A1 (de) 1986-05-15
SE8504969L (sv) 1986-04-24
NO169010B (no) 1992-01-20
NO169010C (no) 1992-04-29
DK172857B1 (da) 1999-08-16
BE903497A (fr) 1986-02-17
DE3537550A1 (de) 1986-05-15
US4797390A (en) 1989-01-10
FI854127A0 (fi) 1985-10-22
AU582594B2 (en) 1989-04-06
JPS61171491A (ja) 1986-08-02
NO168227C (no) 1992-01-29
EP0179441B1 (en) 1989-04-05
JPH037233B2 (da) 1991-02-01
AU4893085A (en) 1986-05-01
GB2167283B (en) 1989-05-24
ATE41853T1 (de) 1989-04-15
FI854126A0 (fi) 1985-10-22
CH666812A5 (fr) 1988-08-31
US4734283A (en) 1988-03-29
DE3577851D1 (de) 1990-06-28
US4777134A (en) 1988-10-11
EP0179439B1 (en) 1988-10-12
HU196077B (en) 1988-09-28
ATE37788T1 (de) 1988-10-15
DE3565464D1 (en) 1988-11-17
DK483285D0 (da) 1985-10-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DK172852B1 (da) Farmaceutisk præparat og anvendelse af inositoltriphosphat (IP3) til fremstilling deraf
US5019566A (en) Method of treating inflammation with inositol triphosphate
CA1337338C (en) Inositoltriphosphate
US5023248A (en) Method of treating diabetes with inositol triphosphate
US4847082A (en) Method of treatment of Alzheimer&#39;s disease using phytic acid
US5015634A (en) Method of treating tissue damage with inositol triphosphate
US5135923A (en) Method of treating cardiovascular diseases
JP2859319B2 (ja) イノシトールトリホスフェートを含有する移植に関する障害に対する医薬
Gemede Potential health benefits and adverse effects associated with phytate in foods: A review
CN111031813A (zh) 用于预防和治疗心血管器官病症的组合物
EP0420428A2 (en) Mehod of treatment of rheumatoid arthritis using phytic acid
SE501284C2 (sv) Användning av inositoltrifosfat för framställning av ett läkemedel
Wang 2-Phosphorylated L-ascorbate; chemical preparation and use in selected foods

Legal Events

Date Code Title Description
B1 Patent granted (law 1993)
PBP Patent lapsed