ES2604110T3

ES2604110T3 - Activador de la producción del factor de crecimiento derivado de plaquetas-BB, y activador de la producción de células madre mesenquimatosas, estabilizador de células madre y regenerador de la dermis comprendiendo cada uno el mismo

Info

Publication number: ES2604110T3
Application number: ES11740802.1T
Authority: ES
Inventors: Tsutomu Soma; Masato Iino; Haruyo Yamanishi
Original assignee: Shiseido Co Ltd
Current assignee: Shiseido Co Ltd
Priority date: 2011-07-01
Filing date: 2011-07-01
Publication date: 2017-03-03
Anticipated expiration: 2031-07-01
Also published as: EP2620492A1; US20130004533A1; EP2620492B1; KR20140030346A; RU2011134244A; CN102971415B; US10391137B2; JP5905258B2; JPWO2013005281A1; BRPI1100062A2; CN102971415A; HK1178571A1; WO2013005281A1; KR20170129281A; KR101867620B1; EP2620492A4

Abstract

Utilización de una composición cosmética que comprende uno o más principios activos seleccionados del grupo que consiste en un extracto de arándanos, un extracto de mangostino, un extracto de raíz de escutelaria, inositol y ácido fítico, para activar la producción y/o estabilizar las células madre mesenquimatosas en la dermis, activando la producción de PDGF-BB.

Description

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DESCRIPCION

Activador de la produccion del factor de crecimiento derivado de plaquetas-BB, y activador de la produccion de celulas madre mesenquimatosas, estabilizador de celulas madre y regenerador de la dermis comprendiendo cada uno el mismo

Campo tecnico

La presente invencion se refiere a un activador de la produccion del factor de crecimiento derivado de plaquetas-BB (PDGF-BB), y a un acelerador de la produccion de celulas madre mesenquimatosas, a un estabilizador de celulas madre y a un regenerador dermico que comprende el activador de la produccion de PDGF-BB.

Antecedentes de la tecnica

Las celulas madre son celulas que tienen tanto la propiedad de pluripotencia, mediante la cual se producen celulas diferenciadas en diferentes celulas, y de autorreplicacion, mediante la cual se producen celulas identicas por division celular. Las celulas madre procedentes del embrion en las primeras etapas del desarrollo del ovulo fecundado se conocen como celulas madre embrionarias (celulas ES). Las celulas ES humanas son prometedores para su uso en medicina regenerativa, pero los problemas eticos implicados en el uso de huevos fertilizados ha impedido la creacion de nuevas celulas ES humanas.

Recientemente, las celulas madre pluripotentes inducidas (celulas iPS) han sido tambien el centro de atencion, como las celulas que tienen propiedades similares a las celulas ES. Sin embargo, en la creacion de celulas iPS se han encontrado numerosos problemas, incluidas la cancerizacion celular y la eficiencia de creacion. Por otro lado, las celulas madre somaticas, que tienen capacidad de diferenciarse en tejidos espedficos, se obtienen de los tejidos del propio cuerpo del paciente tales como la medula osea, por ejemplo, y por lo tanto no implican los problemas eticos asociados a las celulas madre embrionarias.

Las celulas madre epidermicas (documento no de patente 1) son bien conocidas por estar presentes en la capa epidermica basal de la piel, y las celulas madre epiteliales foliculares (documento no de patente 2) o celulas madre melanodticas (documento no de patente 3) se han descrito en una region conocida como la region de la protuberancia folicular. Por otra parte, los fibroblastos que tienen formas de husillo alargadas estan presentes en componentes de la fibra en la dermis que se componen principalmente de colageno, pero aun no se ha determinado si las celulas madre estan presentes o no en los fibroblastos dermicos. Asimismo, aunque se sabe que los precursores procedentes de la piel (SKP) que se diferencian en multiples estirpes celulares tales como de grasa, glfa, cartflago y musculo estan presentes en la piel (documento no de patente 4), la relacion entre los fibroblastos dermicos y SKP no se ha aclarado.

Las celulas madre mesenquimatosas que se han separado de la medula osea como precursores de fibroblastos (documento no de patente 5) se diferencian en una variedad de celulas del mesenquima (celulas oseas, celulas musculares, condrocitos, celulas de tendones, adipocitos y similares), y por lo tanto su aplicacion en medicina regenerativa para la reconstruccion de huesos, vasos sangumeos y musculos es prometedora. Recientemente se ha sugerido que pueden estar presentes en grandes cantidades en el tejido que contiene tejido mesenquimatoso, y las celulas madre mesenquimatosas se han aislado tambien de la grasa, el cordon umbilical y la placenta (documentos no de patente 6-8).

Descubrimientos recientes han demostrado que las celulas madre mesenquimatosas estan presentes en los vasos sangumeos generales como pericitos y funcionan para mantener la estabilizacion vascular y la homeostasis tisular (documentos no de patente 9 y 10).

Cuando los vasos sangumeos se destruyen en zonas de dano tisular o de su periferia, las celulas madre mesenquimatosas, o pericitos, se separan de los vasos sangumeos y proliferan para suplir a las celulas perdidas (documentos no de patente 11-14), mientras que liberan factores bioactivos para proteger el tejido (documentos no de patente 15-19) y que funcionan para reparar y regenerar el tejido danado. Se ha publicado de que la funcion de estos factores segregados no solo para angiogenia y antiapoptosis, sino tambien para inhibir fuertemente la inmunidad (documentos no de patente 21 y 22), y para suprimir la destruccion del tejido danado por linfocitos T o linfocitos B (documentos no de patente 9 y 22).

Ademas, se sabe que las celulas madre mesenquimatosas presentan accion antifibrinolttica (documentos no de patente 23 y 24) y los efectos contra la esclerosis multiple y la diabetes (documento no de patente 9).

Por otro lado, cada vez esta mas claro que la inflamacion cronica es una patologfa fundamental comun a una variedad de enfermedades (por ejemplo, smdrome metabolico, enfermedad arteriosclerotica, cancer, enfermedades neurodegenerativas y enfermedades autoinmunitarias) (documento no de patente 25). Por ejemplo, se ha publicado que la disfuncion de las celulas endoteliales y resistencia a la insulina son inducidas por la inflamacion cronica, lo que lleva a diversas enfermedades tales como diabetes o la enfermedad arteriosclerotica (documento no de patente 26). Ademas, se ha descubierto que el propio tejido adiposo de los obesos conduce a cambios inflamatorios (documentos no de patente 27-29). El hecho de que la inflamacion cronica se produce en las proximidades de los

vasos sangumeos sugiere que la inflamacion cronica tambien implica una falta de interaccion entre las celulas madre mesenquimatosas, que son los pericitos, y los vasos sangumeos.

Sobre la base de estos conocimientos, se cree que activar y estabilizar la produccion de celulas madre mesenquimatosas, sena muy eficaz para una variedad de propositos, incluidos la estabilizacion vascular, el 5 mantenimiento de la homeostasis tisular, la reparacion y regeneracion de los tejidos danados, la prevencion de la fibrosis, la prevencion y el tratamiento de enfermedades tales como la esclerosis multiple y diabetes y la prevencion y mejora de enfermedades asociadas a la inflamacion cronica, tal como el smdrome metabolico.

Los presentes inventores ya han publicado que las celulas madre mesenquimatosas tambien estan presentes en la dermis, y han creado un metodo para aislar eficazmente las celulas madre mesenquimatosas de la dermis (Solicitud 10 de Patente Japonesa n° 2009-213291). Teniendo en cuenta la funcion de las celulas madre mesenquimatosas descritas anteriormente, se cree que la estabilizacion y la activacion de la produccion de celulas madre mesenquimatosas en la dermis tambien es eficaz para mejorar la enfermedad y la regenerar la dermis.

Ademas, los presentes inventores han aclarado con mayor detalle los lugares en los que las celulas madre mesenquimatosas estan presentes en la dermis y la grasa subcutanea, y han descubierto que el que el factor de 15 crecimiento derivado de plaquetas-BB (PDGF-BB) esta implicado en la localizacion de celulas madre mesenquimatosas, aunque tambien la determinacion de que la activacion de la produccion de PDGF-BB en las celulas endoteliales vasculares contribuye a un aumento de la produccion y a la estabilizacion de las celulas madre mesenquimatosas (Solicitud de Patente japonesa n° 2010-209705).

El factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF) es un factor de crecimiento involucrado en la regulacion de la 20 migracion y proliferacion de celulas madre mesenquimatosas incluidos los fibroblastos, celulas del musculo liso y celulas gliales, y que es producido por una variedad de celulas tales como las celulas epiteliales y las celulas endoteliales. Existen al menos 4 tipos de PDGF, PDGF-A, B, C y D, la cadena A y la cadena B que adoptan estructuras de homo o heterodfmeros mediante la formacion de enlaces disulfuro, para producir las 3 isoformas (PDGF-AA, AB, BB). PDGF es conocido por exhibir su accion fisiologica a traves del receptor de PDGF (PDGFR), un 25 receptor de tirosina cinasa. Se conoce el gen para PDGF-B y se ha clonado geneticamente (documento no de patente 30).

Cabe esperar que el descubrimiento de un componente eficaz para la activacion de la produccion de PDGF-BB sea util para activar la produccion de celulas madre mesenquimatosas y estabilizar las celulas madre, y por lo tanto sea eficaz para varios propositos como se ha descrito anteriormente.

30 Lista de citas

Bibliograffa no de patentes

Documento no de patente 1 Watt F. M., J. Dermatol. Sci., 28:173-180, 2002 Documento no de patente 2 Cotsarelis G. et al., Cell, 57:201-209, 1989 Documento no de patente 3 Nishimura E. K. et al., Nature, 416:854-860, 2002 35 Documento no de patente 4 Wong C. E. et al., J. Cell Biol., 175:1005-1015, 2006 Documento no de patente 5 Pittenger M. F. et al., Science, 284:143-147, 1999 Documento no de patente 6 Park K. W. et al., Cell Metab., 8:454-457, 2008 Documento no de patente 7 Flynn A. et al., Cytotherapy., 9:717-726, 2007 Documento no de patente 8 Igura K. et al., Cytotherapy., 6:543-553, 2004 40 Documento no de patente 9 da Silva Meirelles L. et al., Stem Cells Sept. 2008; 26(9):2287-2299 Documento no de patente 10 da Silva Meirelles L. et al., J. Cell Sci., 2006; 119:2204-2213 Documento no de patente 11 Dai W. D. et al., Circulation, 2005; 112:214-223 Documento no de patente 12 Fazel S. et al., J. Thorac. Cardiovascular Surg., 2005; 130:1310-18 Documento no de patente 13 Noiseux N. et al., Mol. Ther., 2006; 14:840-850

45 Documento no de patente 14 Zhao L. R. et al., Exp. Neurol., 2002; 174:11-20

Documento no de patente 15 Gnecchi M. et al., Nat. Med., 2005; 11:367-368

Documento no de patente 16 Kinnaird T. et al., Circ. Res., 2004; 94:678-685

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Documento no de patente 17 Kinnaird T. et al., Circulation, 2004; 109/1543-1549 Documento no de patente 18 Tang Y. L. et al., Ann. Surg. Thorac., 2005; 80:229-237 Documento no de patente 19 Zhang M. et al., FASEB J., 2007; 21/3197-3207 Documento no de patente 20 Le Blanc K. et al., J. Intern. Med., 2007; 262/509-525

Documento no de patente 21 Uccelli A. et al., Trends Immunol., 2007; 28/219-226

Documento no de patente 22 Caplan A. I. et al., J. Cell Biochem., 2006; 98/1076-1084 Documento no de patente 23 Fang B. J. et al., Transplantation, 2004; 78/83-88

Documento no de patente 24 Ortiz L. A. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2003; 100/8407-841

Documento no de patente 25 Ogawa, Y., Jikken Igaku, 28/1680-1687, 2010 Documento no de patente 26 Medzhitov R., Nature, 454/428-35, 2008 Documento no de patente 27 Hotamisligil G. S., Nature, 444 (7121)/860-7, 2006 Documento no de patente 28 Wellen K. E. et al., J. Clin. Invest., 115 (5):1111-9, 2005 Documento no de patente 29 Sugami, T. et al., Jikken Igaku., 28/1717-1723, 2010 Documento no de patente 30 Dalla-Favera R. et al., Nature, 292/31-35, 1981 Descripcion de la invencion Problemas a resolver por la invencion

La presente invencion se ha realizado a la luz de los antecedentes descritos anteriormente, y su objeto es proporcionar un agente eficaz para activar la produccion de PDGF-BB, asf como para proporcionar un agente eficaz para activar la produccion y/o la estabilizacion de las celulas madre mesenquimatosas utilizando el mismo.

Medios para resolver los problemas

Los presentes inventores han llevado a cabo muchas investigaciones sobre una gran variedad de materiales y, como resultado de la deteccion de farmacos que activan la produccion de PDGF-BB, han completado esta invencion al descubrir que los derivados de plantas de arandano rojo, mangostino y rafz de escutelaria, asf como inositol y fosfato de inositol, todos presentan notables efectos de la activacion de la produccion de PDGF-BB.

Asf pues, la presente memoria descriptiva describe las siguientes invenciones.

[1] Un activador de produccion del factor de crecimiento derivado de plaquetas-BB (PDGF-BB) que comprende uno o mas componentes seleccionados de entre los derivados del arandano, derivados de mangostino, derivados de la rafz de escutelaria, inositol y fosfato de inositol, como principio activo.

[2] Un activador de la produccion de PDGF-BB segun [1], que comprende inositol y comprende ademas un extracto de levadura.

[3] Un activador de la produccion de PDGF-BB segun [1] o [2], en donde el inositol es fosfato de inositol obtenido del salvado de arroz.

[4] Un acelerador de la produccion de celulas madre mesenquimatosas que comprende un activador de la produccion de PDGF-BB segun uno cualquiera de [1] a [3].

[5] Un estabilizador de celulas madre que comprende un activador de la produccion decPDGF-BB segun uno cualquiera de [1] a [3].

[6] Un regenerador dermico que comprende un activador de la produccion PDGF-BB segun uno cualquiera de [1] a [3]. La presente solicitud abarca por lo tanto las invenciones siguientes.

[1] La utilizacion de una composicion cosmetica que comprende uno o mas principios activos seleccionados del grupo que consiste en un extracto de arandanos, extracto de mangostino, extracto de rafz de escutelaria, inositol y acido fttico para activar la produccion y/o estabilizar las celulas madre mesenquimatosas en la dermis, activando la produccion de PDGF-BB.

[2] La utilizacion segun la reivindicacion [1], en donde la composicion cosmetica comprende inositol y acido ftico, y

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comprende ademas un extracto de levadura.

[3] La utilizacion segun la reivindicacion [1], en donde el inositol y el acido fftico se obtienen del salvado de arroz. Efecto de la invencion

En la presente memoria se describe un agente eficaz para activar la produccion de PDGF-BB, asf como un agente eficaz para activar la produccion y estabilizar celulas madre mesenquimatosas, que emplea el agente anteriormente mencionado.

Mejor modo de llevar a cabo la invencion Derivado de arandano rojo

El arandano rojo (nombre cientifico: Vaccinium vitis-idaea L.) es una planta de la familia de las ericaceas, genero Vaccinium. Como se describe en la presente solicitud, los derivados de arandano rojo puede ser flores de arandano rojo, puntas florecientes, capsulas, cascaras, frutos, troncos, hojas, ramas, hojas laterales, tallos, corteza, rizomas, corteza de la rafz, rafces, semillas o toda la planta, que se ha sido pulverizado y exprimido, o extrafdo con un disolvente despues de la pulverizacion, o descompuesto despues de la pulverizacion, mediante un tratamiento tal como el tratamiento enzimatico o tratamiento mecanico.

El disolvente de extraccion utilizado como disolvente de extraccion para la extraccion de arandano rojo puede ser cualquiera deseado, y por ejemplo, agua o disolventes organicos incluidos alcoholes tales como metanol, etanol, propilenglicol, 1,3-butilenglicol o glicerina, alcoholes que contienen agua , cloroformo, dicloroetano, tetracloruro de carbono, acetona, acetato de etilo y similares pueden ser utilizados solos o en combinaciones.

La extraccion puede llevarse a cabo a temperatura ordinaria, o puede llevarse a cabo con calentamiento (por ejemplo, usando un disolvente calentado tal como agua templada o agua caliente).

El extracto obtenido por extraccion con disolvente puede usarse directamente, o el extracto concentrado puede usarse, o el extracto puede ser eliminado de impurezas por un proceso de adsorcion utilizando una resina de intercambio ionico o similares, o puede someterse a adsorcion en una columna con polfmero poroso (por ejemplo, AMBERLITE XAD-2) y a continuacion eluirse con metanol o etanol y concentrarse. Puede utilizarse tambien un extracto obtenido mediante un metodo de particion conocido (un metodo de particion que utiliza agua/acetato de etilo, por ejemplo).

Cuando el arandano rojo se va a descomponer, puede llevarse a cabo la "preparacion unicelular", en la que las sustancias intercelulares se descomponen de forma selectiva para mantener las formas celulares. Se puede hacer referencia, por ejemplo al metodo descrito en la publicacion de patente japonesa no examinada n° 2002193734. Espedficamente, este es un tratamiento en el que la planta se somete a enzimolisis, descomposicion mecanica o similares para la descomposicion selectiva o la interrupcion de las sustancias intercelulares practicamente sin descomposicion de las paredes celulares, para resolucion de la sustancia en unidades celulares con formas celulares mantenidas, y obteniendo una forma similar a una pasta, composicion lfquida o producto liofilizado. El tratamiento enzimatico puede utilizarse para llevar a cabo dicha descomposicion selectiva. Por ejemplo, pueden utilizarse productos que se han aislado o aislado y purificado por metodos comunmente conocidos a partir de materiales enzimaticos tales como Rhizopus o Aspergillus, o pueden utilizarse productos comerciales. Cuando estas enzimas de la preparacion unicelular se van a utilizar para el arandano rojo, se les permite preferiblemente actuar en condiciones optimas tales como la temperatura optima y el pH optimo de la enzima, en las cantidades mmimas necesarias. La temperatura optima para una enzima de preparacion unicelular es de 30-45°C, y el pH optimo es 4-6. La parte restante despues de la reaccion enzimatica puede eliminarse usando un tamiz de aproximadamente 20 mesh para obtener un derivado de arandano rojo que se puede anadir a una composicion para uso externo.

Tambien, ademas de la suspension de la preparacion unicelular, la suspension puede prepararse como una pasta unicelular, o su forma seca, obtenido por deshidratacion por un metodo tal como separacion centnfuga, para su uso como se describe en la presente descripcion.

El arandano rojo se ha utilizado en el pasado como un preparado externo que comprende un preparado de arandano rojo unicelular (publicacion de patente japonesa no examinada n° 2002-193734), como cosmetico bactericida, antibacteriano o anticaspa (publicacion de patente japonesa no examinada SHO n° 61-238719), como inhibidor de la actividad de la elastasa (publicacion de patente japonesa no examinada n° 2002-363088), como eliminador de la enzima activa (publicacion de patente Japonesa no examinada n° 2002-363027), como inhibidor de la produccion de melanina (publicacion de patente japonesa sin examinar n° 2002-363057), como inhibidor de la produccion de peroxido de lfpidos (publicacion de patente japonesa sin examinar n° 2002-363089), como inhibidor de la actividad de la colagenasa (publicacion de patente japonesa sin examinar n° 2003-12531), como inhibidor de la actividad de hialuronidasa (publicacion de patente japonesa sin examinar n° 2003-73287), como inhibidor de la expresion de metaloproteasas (publicacion de patente japonesa sin examinar n° 2002-193738), como inhibidor de glucosilacion (inspeccion publica de patente japonesa n° 2004-505007) y como agente de control de dano a la piel contra

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trastornos cutaneos tales como paquidermia y esclerodermia (publicacion de patente japonesa sin examinar n° 2005306850); sin embargo, se ha desconocido completamente hasta la fecha que los derivados del arandano rojo tienen efectos de activacion de la produccion de PDGF-BB, efectos de activacion de la produccion de celulas madre mesenquimatosas, efectos de estabilizacion de celulas madre y efectos de estabilizacion de la dermis, y estos efectos han sido descubiertos por primera vez por los presentes inventores.

Derivados del mangostino

El mangostino (nombre cientffico: Garcinia mangostana) es una planta de la familia Otogiriso,

genero Garcinia. Como se describe en la presente solicitud, un derivado de mangostino puede ser una capsula, cascara, fruta, tronco, hoja, rama, cotiledon, tallo, corteza, rizoma, corteza de la rafz, rafz, semilla o toda la planta de mangostino, que se ha pulverizado y exprimido, o extrafdo con un disolvente despues de la pulverizacion.

Cuando va a extraerse el mangostino, se puede usar como disolvente de extraccion cualquier disolvente que permita la extraccion y, por ejemplo, la extraccion puede realizarse usando alguno de los diversos disolventes organicos incluidos los alcoholes inferiores tales como metanol, etanol, alcohol propflico, alcohol isopropflico, butanol o isobutanol, o alcoholes inferiores acuosos, alcoholes politndricos tales como propilenglicol o 1,3-butilenglicol o alcoholes politndricos acuosos, acetona, ester de acetato de etilo o similares, con el disolvente posteriormente separado por destilacion.

La extraccion puede llevarse a cabo a temperatura ordinaria , o puede llevarse a cabo con calentamiento (por ejemplo, usando un disolvente calentado, tal como agua templada o agua caliente).

Puede anadirse tambien una enzima al disolvente para el tratamiento de extraccion. La adicion de una enzima puede disgregar el tejido celular de la fruta y aumentar aun mas la eficacia de la extraccion. La enzima utilizada es preferiblemente una enzima degradadora de tejido celular. Ejemplos de dichas enzimas incluyen pectinasas, celulasas, hemicelulasas, a-amilasas y fitasas. Cualquiera de estas enzimas pueden usarse solas, o dos o mas de ellas se pueden usar en combinacion.

El extracto obtenido usando un disolvente de extraccion puede utilizarse directamente, o el disolvente de extraccion puede eliminarse por destilacion y el extracto utilizarse despues del secado si es necesario.

El mangostino se ha utilizado en el pasado como un absorbente de ultravioleta (Publicacion de patente japonesa no examinada HEI n° 9-87155), como inhibidor de MMP (Publicacion de patente japonesa no examinada n° 2003252745) y como activador de fibroblastos (Publicacion de patente japonesa no examinada n° 2006-249051), y se ha conocido por tener efectos sobre la produccion del derivado de xantona y la produccion de colageno (Publicacion de patente japonesa no examinada n° 2009-84169); sin embargo, ha sido completamente desconocido hasta la fecha que los derivados de mangostino tienen efectos de activacion de la produccion de PDGF-BB, efectos de activacion de la produccion de celulas madre mesenquimatosas, efectos de estabilizacion de celulas madre y efectos de estabilizacion de la dermis, y estos efectos los han descubierto por primera vez los presentes inventores.

Derivados de la rafz de escutelaria

La rafz de escutelaria (nombre cientffico: Scutellaria baicalensis Georgi, Labiaceas) es una planta de la familia de las Lamiaceas, genero Scutellaria. Segun se describe en la presente solicitud, un derivado de la rafz de escutelaria puede ser una capsula, cascara, fruto, tronco, hoja, rama, cotiledon, tallo, corteza, rizoma, corteza de la rafz, rafz, semilla o toda la planta de la rafz de escutelaria que ha sido pulverizada y exprimida, o extrafda con un disolvente despues de la pulverizacion.

Para la extraccion de la rafz de escutelaria, el disolvente de extraccion puede ser cualquier disolvente deseado que se utiliza normalmente para la extraccion de plantas, y los ejemplos incluyen agua, alcoholes inferiores tales como metanol, etanol, isopropanol y n-butanol, alcoholes politndricos tales como propilenglicol y 1,3-butilenglicol, o formas hidratadas de estos alcoholes, y disolventes a base de hidrocarburos tales como n-hexano y tolueno. Estos pueden usarse solos, o cualquiera de dos o mas de los mismos se pueden usar en combinacion. Se utilizan preferiblemente alcoholes inferiores tales como metanol o etanol.

La extraccion puede llevarse a cabo a temperatura ordinaria, o puede llevarse a cabo con calentamiento (por ejemplo, usando un disolvente calentado, tal como agua templada o agua caliente).

Puede anadirse tambien una enzima al disolvente para el tratamiento de extraccion. La adicion de una enzima puede disgregar el tejido celular del fruto y aumentar aun mas la eficacia de la extraccion. La enzima utilizada es preferiblemente una enzima degradadora del tejido celular. Ejemplos de dichas enzimas incluyen pectinasas, celulasas, hemicelulasas, a-amilasas y fitasas. Cualquiera de estas enzimas puede utilizarse sola, o dos o mas de ellas pueden usarse en combinacion.

En el pasado se ha utilizado ra^z de escutelaria como agente de activacion de la papila pilosa (Publicacion de patente japonesa no examinada HEI n° 11-240823), como potenciador de la produccion de acido hialuronico (Publicacion de patente japonesa no examinada HEI n° 10-95735), como inmunoestimulante para prevenir la perdida inducida por ultravioleta de la funcion inmunologica de la piel (Publicacion de patente japonesa no examinada HEI 5 n° 11-71295), como farmaco antinflamatorio (Publicacion de patente japonesa no examinada n° 2006-8536) y como antioxidante (Publicacion de patente japonesa no examinada HEI n° 5-238925); sin embargo, ha sido completamente desconocido hasta la fecha que los derivados de rafz de escutelaria tienen efectos activadores de la produccion de PDGF-BB, efectos activadores de la produccion de celulas madre mesenquimatosas, efectos estabilizadores de las celulas madre y efectos estabilizadores de la dermis, y estos efectos los han descubierto por primera vez los 10 presentes inventores.

Inositol/fosfato de inositol

El inositol se considera que es una forma de vitamina B, y tambien se sabe que se biosintetiza en el cuerpo a partir de glucosa. El inositol se encuentra en plantas tales como cereales, azucar, alubias y frutas. El inositol a menudo esta presente en una forma con grupos hidroxi fosforilados (fosfato de inositol). Segun se describe en la presente 15 descripcion, tambien se puede utilizar el fosfato de inositol. Tambien estan incluidos varios estereoisomeros de inositol en el inositol utilizado para la invencion. Los estereoisomeros de inositol incluyen cis-inositol (1,2,3,4,5,6/0- inositol), epi-inositol (1,2,3,4,5/6-inositol), alo-inositol (1,2,3,4/5,6-inositol), mio-inositol 1,2,3,5/4,6-inositol, muco- inositol (1,2,4,5/3,6-inositol), neo-inositol (1,2,3/4,5,6-inositol), quiro-inositol (1,2,4/3,5,6-inositol) y escilo-inositol (1,3,5/2,4,6-inositol). El fosfato de inositol puede un compuesto que tiene uno o mas de los 6 grupos hidroxi de 20 inositol fosforilado. Se prefiere el acido fftico, que es un compuesto que tiene los 6 grupos hidroxi de inositol fosforilados. El inositol o el acido fftico utilizado para la invencion procede preferiblemente del salvado de arroz. Cualquiera de las sales del acido fftico puede usarse tambien para la invencion.

Segun una realizacion de la invencion, el inositol y el acido fftico pueden utilizarse en forma de diluciones apropiadas obtenidas por disolucion de polvo simple en un medio.

25 El inositol y acido fftico tambien pueden combinarse con otras sustancias para mejorar el efecto de activacion de la produccion de PDGF-BB. Tales otras sustancias pueden ser extractos de levadura, tales como BiodyneR EMPP (producto de Arch Personal Care Products L.P.). Cuando dicho extracto se va a utilizar, el extracto puede anadirse al medio a aproximadamente 0,1% de concentracion del residuo seco del extracto.

En el pasado se han utilizado inositol y fosfato de inositol como composiciones cosmeticas que contienen inositol 30 para la piel envejecida y/o para la piel devastada por el estres (Inspeccion publica de patente japonesa n°204- 501069), en forma de composiciones cosmeticas que contienen fosfato de inositol (especialmente acido fftico y sus sales) para reducir o prevenir los signos de lipedema (Publicacion de patente japonesa no examinada HEI n° 8253406), y en forma de composiciones para la retencion de humedad de la piel y/o proteccion de la piel y/o la prevencion del envejecimiento de la piel (publicacion de patente japonesa no examinada n° 2010-150258). Los 35 ejemplos como vitaminas B incluyen preparados externos para activacion celular para la piel que contienen vitamina B2 y B6 (publicacion de patente japonesa no examinada HEI n° 9-241146 ) y antioxidantes que contienen vitamina B (publicacion de patente japonesa no examinada HEI n° 7-277939 y publicacion de patente japonesa no examinada y n° 205306831). Sin embargo, ha sido completamente desconocido que las vitaminas B e inositol o fosfato de inositol tienen tienen efectos de activacion de la produccion de PDGF-BB, efectos de activacion de la produccion de celulas 40 madre mesenquimatosas, efectos de estabilizacion de celulas madre y efectos de estabilizacion de la dermis, y esto lo han descubierto por primera vez por los presentes inventores.

Activador de la produccion de PDGF-BB, acelerador de la produccion de celulas madre mesenquimatosas, estabilizador de celulas madre y regenerador dermico

El activador de la produccion de PDGF-BB de la invencion comprende uno o mas componentes seleccionados de 45 entre los derivados del arandano, derivados de mangostino, derivados de la rafz de escutelaria, inositol y fosfato de inositol, como principio activo. El acelerador de la produccion de celulas madre mesenquimatosas, el estabilizador de celulas madre y el regenerador dermico de la invencion comprenden un activador de la produccion de PDGF-BB que incluye un principio activo como se ha descrito anteriormente. El activador de la produccion de PDGF-BB, el acelerador de la produccion de celulas madre mesenquimatosas, el estabilizador de celulas madre y el regenerador 50 dermico (en adelante estos tambien se denominaran en conjunto "agentes de la invencion") pueden contener cualquiera de los principios activos anteriormente mencionados solos, o dos o mas de los mismos en cualquier combinacion y proporcion deseadas.

Basandose en el conocimiento de los presentes inventores, como se menciono anteriormente, PDGF-BB contribuye a la localizacion de las celulas madre mesenquimatosas, y activa la produccion de PDGF-BB por las celulas 55 endoteliales vasculares, lo que ayuda a activar la produccion y estabilizar las celulas madre mesenquimatosas (solicitud de patente japonesa n° 2010-209705). Es decir, el activador de la produccion de PDGF-BB de la invencion se puede utilizar de manera muy eficaz para activar la produccion de celulas madre mesenquimatosas y estabilizarlas.

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Tambien, como se menciono anteriormente, se sabe que la activacion de la produccion, y la estabilizacion, de las celulas madre mesenquimatosas, es muy eficaz para la estabilizacion vascular, el mantenimiento de la homeostasis tisular, la reparacion y regeneracion de tejido danado (especialmente la regeneracion dermica), la prevencion de la fibrosis, la prevencion y el tratamiento de enfermedades tales como la esclerosis multiple y la diabetes y la prevencion y mejora de enfermedades relacionadas con la inflamacion cronica, tal como el smdrome metabolico. Por lo tanto, un acelerador de la produccion de celulas madre mesenquimatosas y el estabilizador de celulas madre que emplea el activador de la produccion de PDGF-BB se pueden usar de manera muy eficaz para tales propositos.

Los agentes se pueden preparar como composiciones que comprenden el principio activo mencionado anteriormente en combinacion con uno o mas de otros componentes, tales como excipientes, vetuculos y/o diluyentes. La constitucion y la forma de la composicion pueden ser como se desee, y pueden seleccionarse apropiadamente dependiendo de las condiciones incluidos el principio activo y el proposito de su utilizacion. La composicion puede prepararse por un metodo corriente como una formulacion en una combinacion adecuada con un excipiente, vetuculo y/o diluyente u otros componentes, dependiendo de la forma farmaceutica.

Los agentes pueden mezclarse con diversos alimentos y bebidas o piensos (alimentos para mascotas o similares) para la ingestion por un ser humano o animal. Tambien pueden combinarse en cosmeticos o similares para seres humanos o animales, o administrarse en forma de preparados medicos a seres humanos o animales.

Espedficamente, cuando ha de anadirse un agente a un alimento o bebida o pienso, el contenido (peso seco) del organismo vegetal o su extracto puede determinarse apropiadamente segun el tipo de planta, el proposito, la forma y el metodo de uso. Por ejemplo, el contenido puede ser tal que el consumo diario de una planta o su extracto para adultos es de 0,5 mg-1 g (residuo seco) para el extracto de grosella espinosa india o aproximadamente 0,5 mg-3 g de extracto de arandano rojo. En particular, cuando se va a utilizar como un alimento o bebida saludable, se anade preferiblemente a 10 mg-50o mg (residuo seco) para el extracto de grosella espinosa india o 10 mg-1,5 g (residuo seco) para el extracto de arandano rojo, al dfa para adultos, de modo que el efecto deseado del principio activo se exhibe de manera adecuada.

La forma de la comida o bebida o pienso puede ser cualquier forma deseada, y por ejemplo, puede moldearse en forma granular, en partfculas, similar a una pasta, similar a un gel, solida o lfquida. Estas formas pueden combinarse aproximadamente con distintas sustancias conocidas aprobados para adicion a los alimentos y bebidas, incluidos excipientes tales como aglutinantes, disgregantes, espesantes, agentes dispersantes, aceleradores de reabsorcion, correctores del sabor, agentes tampon, tensioactivos, auxiliares de disolucion, conservantes, emulsionantes, agentes isotonizantes, estabilizadores y reguladores del pH.

Cuando se va a anadir un agente a un cosmetico, el contenido (peso seco) del organismo vegetal o su extracto se puede determinar apropiadamente segun el tipo de planta, el proposito, la forma y el metodo de uso. Por ejemplo, el extracto de grosella espinosa india o de extracto de arandano rojo pueden anadirse a 0,00001%-50% (referido al peso seco), y mas preferiblemente a 0,0001%-5% (referido al peso seco), del cosmetico total.

Ademas de los componentes mencionados anteriormente, tambien pueden anadirse apropiadamente, segun sea necesario, los componentes que se utilizan normalmente en preparados externos para la piel tales como cosmeticos o productos farmaceuticos, incluidos antioxidantes, aceites, agentes protectores contra el ultravioleta, tensioactivos, espesantes, alcoholes, constituyentes en polvo, materiales colorantes, componentes acuosos, agua y preparados de nutrientes de la piel, en intervalos que no interfieran con el efecto de la invencion.

Ademas, tambien pueden anadirse cantidades apropiadas de quelantes de iones metalicos, tales como edetato disodico, edetato trisodico, citrato de sodio, polifosfato de sodio, metafosfato de sodio y acido gluconico, agentes antisepticos tales como metilparabeno, etilparabeno y butilparabeno, farmacos, incluidos la cafema, tanino, verapamilo, acido tranexamico y sus derivados, extracto de regaliz, glabridina, extracto en agua caliente de membrillo chino, preparados galenicos, acetato de tocoferol, enoxolona y sus derivados y sales, blanqueadores de la piel tales como la vitamina C, fosfato de ascorbato de magnesio, ascorbato glucosido, arbutina y acido kojico, y sacaridos tales como glucosa, fructosa, manosa, sacarosa y trehalosa.

Estos preparados externos para la piel pueden utilizarse ampliamente en cosmeticos, cuasi farmacos y similares, que se aplican externamente a la piel, y aun mas preferiblemente en los cosmeticos. La forma farmaceutica puede ser cualquiera que pueda aplicarse a la piel, tal como una solucion, forma disuelta, emulsion, dispersion de polvo, bicapa de agua-aceite, tricapa de agua-aceite-polvo, pomada, agua cosmetica, gel, aerosol o similares.

Cuando un agente es para ser usado como cosmetico, se utiliza preferiblemente en forma de un agua cosmetica, latex, base, barra de labios, crema de labios, crema de limpieza, masaje, crema, compresa, crema de manos, polvo para manos, cuerpo, champu, cuerpo, locion, cuerpo, crema, cosmetico para bano o similares, en cuyo caso los componentes normalmente anadidos y formulados con dichas formas pueden ser incluidos como componentes adecuados, incluidos tales como humectantes, compuestos aromaticos, agentes disolventes, estabilizantes, absorbentes del ultravioleta, agentes de dispersion del ultravioleta y similares.

Cuando un agente es para ser aplicado como preparado externo, el contenido (peso seco) del organismo vegetal o su extracto se puede determinar apropiadamente segun el tipo de planta, el proposito, la forma y el metodo de

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uso. Por ejemplo, se utiliza preferiblemente al 0,00001%-50% (referido al peso seco) en un cosmetico, o preferiblemente al 0,0001% -5% (referido al peso seco) en un alimento o bebida.

Cuando un agente es para ser utilizado como producto parafarmaceutico, la formulacion puede utilizarse segun proceda ya sea en forma oral o parenteral (por administracion intravenosa, administracion intraperitoneal o similares). La forma farmaceutica puede ser como se desee, y puede prepararse adecuadamente por un metodo conocido para cualquier forma, incluidas las formulaciones solidas orales tales como comprimidos, granulos, polvo o capsulas, formulaciones lfquidas orales, tales como farmacos o jarabes internos lfquidos, o formulaciones lfquidas parenterales tales como inyecciones. Dichos preparados medicos pueden contener apropiadamente excipientes utilizados normalmente tales como aglutinantes, disgregantes, espesantes, agentes dispersantes, aceleradores de reabsorcion, correctores del sabor, agentes tampon, tensioactivos, auxiliares de disolucion, conservantes, emulsionantes, agentes isotonizantes, estabilizantes y reguladores del pH.

Un preparado externo puede aplicarse generalmente en una forma tal como una pomada, y se utiliza preferiblemente en forma de locion, agente de suspension, emulsion, farmaco lfquido, pomada o parche medico. Formas que pueden aplicarse para el agente no se limitan a estas formas farmaceuticas.

El nivel de expresion del gen de PDGF-BB en las celulas madre mesenquimatosas tras la administracion de un agente puede determinarse y evaluarse midiendo el nivel de PDGF-BB, por ejemplo. Preferiblemente, la medicion se lleva a cabo por un metodo que es conocido en el campo usando anticuerpos espedficos para PDGF-BB, y por ejemplo, puede llevarse a cabo por un metodo de inmunotincion usando una sustancia fluorescente, colorante, enzima y similares, o por trasferencia Western o un metodo de inmunoanalisis tal como ELISA o RIA. Ademas, puede extraerse el RNA total en las celulas madre mesenquimatosas, y medirse la cantidad de ARNm que codifica a PDGF-B para la determinacion y evaluacion. Los metodos de extraccion y medicion de ARNm son bien conocidos en el campo, y por ejemplo, el ARN se cuantifica por reaccion en cadena de la polimerasa (PCR) cuantitativa, tal como reaccion en cadena de la polimerasa en tiempo real (RT-PCR). La seleccion de un cebador adecuado para RT-PCR puede llevarse a cabo por un metodo conocido para los expertos en la tecnica.

Ejemplos

La presente invencion se explicara ahora con mayor detalle mediante ejemplos. Sin embargo, la invencion no esta en modo alguno limitada por los ejemplos.

Muestra de evaluacion

Las siguiente se utilizaron como muestras para la evaluacion del efecto de activacion de la produccion de PDGF-BB.

■ Inositol:

Polvo de inositol disponible en el mercado (myo-inositol, producto de Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) se disolvio en PBS y despues se utilizo en una cantidad de 10 ppm en el medio descrito a continuacion.

■ Acido ftico:

Se utilizo acido ftico disponible en el mercado (solucion acuosa al 50%, producto de la Nacalai Tesque, Inc.) en una cantidad de 10 ppm en el medio descrito a continuacion.

■ Extracto de rafz de escutelaria

Rafces de escutelaria con la pelfcula eliminada se extrajeron con etanol al 70% vol (mezcla de agua y etanol en una relacion en volumen de 3.7) y se utilizo el extracto. El extracto se seco y almaceno, y se anadio 70% en volumen de etanol para la disolucion inmediatamente antes del uso, en una cantidad de l5 ppm en el medio descrito a continuacion (con referencia al peso seco del extracto).

■ Arandano rojo CRS (sistema de liberacion celular):

La suspension utilizo compuesto 1,3-BG anadido a 40% en volumen a una suspension celular obtenida por tratamiento de hojas de arandano rojo con una enzima citolftica (macerozima A). La suspension se almaceno en forma lfquida y se utilizo en una cantidad de 30 ppm en el medio descrito a continuacion (referido al peso seco del extracto).

■ Extracto de corteza de mangostino:

Se extrajo corteza de mangostino con 70% en volumen de 1,3-BG (una mezcla de agua y 1,3-BG en una relacion en volumen de 3:7) y el extracto obtenido se utilizo. El extracto se seco y almaceno, y 70% en volumen de 1,3-BG se anadio para la disolucion inmediatamente antes de su uso, en una cantidad de 10 ppm en el medio descrito a continuacion (referido al peso seco del extracto).

Evaluacion del efecto activador de la produccion de PDGF-BB en celulas endoteliales vasculares

Celulas endoteliales vasculares humanas HUVEC se subcultivaron con medio EGM-2 (Sanko Junyaku Co., Ltd.), y las celulas del cuarto subcultivo se pusieron en suspension en medio HuMedia-EG2 exento de VEGF-A (Kurabo Industries, Ltd.) y se sembraron en una multiplaca de 24 pocillos recubiertos con colageno (Asahi Glass Co., Ltd.) a una relacion celular de 20.000, y el cultivo se llevo en presencia de CO2 al 5% durante 3-5 dfas hasta que las celulas 5 alcanzaron confluencia a 37°C. Despues del intercambio con el medio HuMedia-EG2 (Kurabo Industries, Ltd.) que contiene cada muestra anadido a la concentracion especificada o un disolvente anadido que disuelve cada muestra de evaluacion, el cultivo se continuo durante 2 dfas. El ARNm se extrajo y se purifico de las celulas cultivadas utilizando un reactivo de extraccion de ARN MagNA Pure LC mRNA HS kit (Roche) y un aparato de extraccion de acido nucleico automatico MagNA Pure LC 1.0 Instrument (Roche), segun el protocolo del fabricante. Para cada 10 muestra, se utilizo un volumen igual de ARNm como plantilla para lal (RT)-PCR en tiempo real cuantitativa de una sola etapa del gen PDGF-B usando pares de cebadores de SEQ ID n°: 1 y n°: 2 enumerados a continuacion, el reactivo de reaccion QuantiFast sYbR Green RT-PCR Kit (Qiagen) y un reactor LightCycler (Roche). Las condiciones de la composicion fueron segun el protocolo por Qiagen. Las condiciones de RT-PCR fueron reaccion en RT a 50°C durante 20 minutos, desnaturalizacion inicial a 95°C durante 15 minutos, desnaturalizacion a 94°C 15 durante 15 segundos, hibridacion a 60°C durante 20 segundos y ampliacion a 72°C durante 30 segundos. Se utilizo G3PDH como patron interno (par de cebadores de SEQ ID n°: 3 y n°: 4), y el nivel de ARNm se calibro con respecto a la referencia.

PDGF-B:

Cebador directo: 5'-CCTGGCATGCAAGTGTGA-3' (SEQ ID n°: 1)

20 Cebador inverso: 5'-CCAATGGTCACCCGATTT-3' (SEQ ID n°: 2)

G3PDH:

Cebador directo: 5'-GCACCGTCAAGGCTGAGAAC-3' (SEQ ID n°: 3)

Cebador inverso: 5'-ATGGTGGTGAAGACGCCAGT-3' (SEQ ID n°: 4)

Resultados de evaluacion

25 Los niveles de expresion de ARNm de PDGF-BB para cada muestra se presentan en la tabla siguiente, en comparacion con los niveles de expresion para la referencia (disolvente que disuelve cada muestra de evaluacion), como se obtiene por el procedimiento de evaluacion descrito anteriormente. Los resultados siguientes demuestran que los componentes tienen actividad de activar la expresion de PDGF-BB.

Tabla 1

Nombre del farmaco: Concentracion (relacion al medio) Expresion de PDGF-BB (frente a referencia )

Inositol: 10 ppm 1,37

Acido fftico: 10 ppm 1,20

Extracto de rafz de escutelaria: 15 ppm 1,56

Arandano rojo CRS: 30 ppm 1,85

Extracto de corteza de mangostino: 10 ppm 1,31

30

Claims

REIVINDICACIONES

1. Utilizacion de una composicion cosmetica que comprende uno o mas principios activos seleccionados del grupo que consiste en un extracto de arandanos, un extracto de mangostino, un extracto de rafz de escutelaria, inositol y acido fftico, para activar la produccion y/o estabilizar las celulas madre mesenquimatosas en la dermis, activando la

5 produccion de PDGF-BB.
2. La utilizacion segun la reivindicacion 1, en donde la composicion cosmetica comprende inositol o acido fftico, y comprende ademas un extracto de levadura.
3. La utilizacion segun la reivindicacion 1, en donde el inositol o el acido fftico se obtiene del salvado de arroz.