TWI599576B - Platelet-derived growth factor-BB production hyperthyroidism, and its containing between the leaf stem cell production promoter, and stem cell stabilizer - Google Patents

Description

血小板衍生成長因子-BB產生亢進劑、與含有其之間葉系幹細胞產生促進劑、及幹細胞穩定劑

本發明係關於一種血小板衍生成長因子-BB(PDGF-BB，platelet-derived growth factor-BB)產生亢進劑、與含有該PDGF-BB產生亢進劑而成之間葉系幹細胞產生促進劑、幹細胞穩定劑、及真皮再生化劑。

幹細胞為兼具產生分化成複數個細胞之細胞之多分化能力、與藉由細胞分裂而產生與該細胞相同之細胞之自我複製能力的2種性質之細胞。來自受精卵之初始產生階段之胚之幹細胞係稱作胚性幹細胞(ES細胞，Embryonic Stem cell)。雖然期待將人類ES細胞用於再生醫學，但由於利用受精卵之倫理上之問題，故而無法確認新的人類ES細胞之形成。

近年來，作為具有與ES細胞類似之性質之細胞，人工多能性幹細胞(iPS細胞，induced Pluripotent Stem cell)亦受到關注。然而，於iPS細胞之形成中，就細胞之癌化、形成效率等觀點而言存在較多問題。另一方面，具有分化成特定組織之能力之體性幹細胞由於自患者自身之身體組織、例如骨髓中獲得，故不存在如胚性幹細胞之倫理上之問題。

眾所周知，皮膚於表皮基層中存在表皮幹細胞(非專利文獻1)，又報告有，於稱作毛囊之凸出區域之區域中存在毛囊上皮幹細胞(非專利文獻2)或皮膚色素幹細胞(非專利文獻3)。另一方面，真皮雖然於將膠原蛋白作為主體之纖維成分中存在形成為細長之紡錘形之纖維母細胞，但未明確於真皮之纖維母細胞中是否存在幹細胞。又，雖然已知於真皮中存在分化成脂肪、神經膠質、軟骨、肌肉等複數個細胞系列之來自皮膚之前驅細胞(skin-derived precursors：SKP)(非專利文獻4)，但未明確真皮纖維母細胞與SKP之關聯。

作為纖維母細胞之前驅細胞而自骨髓中分離之間葉系幹細胞(非專利文獻5)由於分化成屬於間葉系之各種細胞(骨細胞、肌肉細胞、軟骨細胞、腱細胞、脂肪細胞等)，故期待於骨或血管、肌肉之再成型等再生醫學中之應用。最近，逐漸明確，其有存在較多之具有間葉系組織之組織之可能性，且亦可自脂肪或臍帶血、胎盤等中離析間葉系幹細胞(非專利文獻6~8)。

根據近年來之見解，已知間葉系幹細胞作為血管外被細胞(Pericyte，外被細胞)存在於全身之血管中，並於血管穩定化或組織恆常性之維持中發揮作用(非專利文獻9及10)。

又，若血管於組織損傷部位或其附近受到破壞，則作為血管外被細胞(外被細胞)之間葉系幹細胞自血管中分離並增殖，供給損失之細胞(非專利文獻11~14)，並且釋放具有生物活性之因子而保護組織(非專利文獻15~19)，作用於損傷之組織之修復、再生。亦報告有，該等分泌因子除血管形成或抗細胞凋亡之作用以外，亦具有強力地抑制免疫之作用(非專利文獻21及22)，且經由T細胞或B細胞抑制損傷組織之破壞(非專利文獻9及22)。

進而，已知間葉系幹細胞亦顯示抗纖維化之作用(非專利文獻23及24)、或針對多發性硬化症或糖尿病之效果(非專利文獻9)。

另一方面，逐漸明確慢性炎症為各種疾病(例如代謝綜合症、動脈硬化性疾病、癌、神經退化性疾病、自我免疫疾病等)共同之基礎病態(非專利文獻25)。例如報告有，因慢性炎症而導致內皮細胞功能障礙或抗胰島素性，從而成為糖尿病或動脈硬化性疾病等各種疾病之原因(非專利文獻26)。進而，亦明確肥胖之脂肪組織本身產生向炎症性之轉變(非專利文獻27~29)。由於慢性炎症產生於血管周圍，故可認為於慢性炎症中亦產生作為血管外被細胞(外被細胞)之間葉系幹細胞與血管之相互作用之破綻。

根據以上之見解，可認為：只要可實現間葉系幹細胞之產生促進或穩定化，則對血管穩定化、組織恆常性維持、損傷組織之修復、再生、抗纖維化、多發性硬化症或糖尿病等各種疾病之預防、治療、以代謝綜合症等慢性炎症為基礎之各種狀態之預防、改善等各種用途極其有效。

本發明者等人報告有於真皮中亦存在間葉系幹細胞，並確立了自真皮中高效地離析間葉系幹細胞之方法(日本專利特願2009-213291)。若考慮上述間葉系幹細胞之作用，則可認為，藉由實現真皮中之間葉系幹細胞之穩定化或產生亢進，而對真皮之狀態改善或再生等亦有效。

進而，本發明者等人更詳細地確認了於真皮或皮下脂肪中存在間葉系幹細胞之部位，並且發現血小板衍生成長因子-BB(PDGF-BB)與間葉系幹細胞之定域相關，進而明確血管內皮細胞中之PDGF-BB之產生亢進有助於間葉系幹細胞之產生亢進及穩定化(日本專利特願2010-209705)。

血小板衍生成長因子(PDGF)為與纖維母細胞、平滑肌肉細胞、神經膠質細胞等間葉系幹細胞之趨化及增殖等調節相關之增殖因子，且由上皮細胞或內皮細胞等各種細胞產生。於PDGF中存在PDGF-A、B、C及D之至少4種，但A鏈及B鏈係藉由形成二硫鍵而獲得同型或異型二聚體結構，且具有3種同種型(PDGF-AA、AB、BB)。已知PDGF係經由作為酪胺酸激酶關聯型之PDGF受體(PDGFR)而表現其生理作用。PDGF-B之基因為公知，且可進行基因克隆(非專利文獻30)。

可認為，只要可發現對該PDGF-BB之產生亢進有效之成分，則可使用其謀求間葉系幹細胞之產生促進或幹細胞之穩定化，進而可有效地用於上述各種用途等。

[先前技術文獻] [非專利文獻]

非專利文獻1：Watt FM,J Dermatol Sci,28:173-180,2002

非專利文獻2：Cotsarelis G et al.,Cell,57:201-209,1989

非專利文獻3：Nishimura EK et al.,Nature,416:854-860,2002

非專利文獻4：Wong CE al.,J Cell Biol,175:1005-1015,2006

非專利文獻5：Pittenger MF et al.,Science,284:143-147,1999

非專利文獻6：Park KW et al.,Cell Metab,8:454-457,2008

非專利文獻7：Flynn A et al.,Cytotherapy,9:717-726,2007

非專利文獻8：lgura K et al.,Cytotherapy,6:543-553,2004

非專利文獻9：da Silva Meirelles L et al,Stem Cells,2008 Sep;26(9):2287-2299

非專利文獻10：da Silva Meirelles L et al.,J Cell Sci,2006;119:2204-2213

非專利文獻11：Dai WD et al.,Circulation,2005;112:2I4-223

非專利文獻12：Fazel S et al.,J Thorac Cardiovasc Surg,2005;130:1310-1318

非專利文獻13：Noiseux N et al.,Mol Ther,2006;14:840-850

非專利文獻14：Zhao LR et al.,Exp Neurol,2002;174:11-20

非專利文獻15：Gnecchi M et al.,Nat Med,2005;11:367-368

非專利文獻16：Kinnaird T et al.,Circ Res,2004;94:678-685

非專利文獻17：Kinnaird T et al.,Circulation,2004;109:1543-1549

非專利文獻18：Tang YL et al.,Ann Thorac Surg,2005;80:229-237

非專利文獻19：Zhang M et al.,FASEB J,2007;21:3197-3207

非專利文獻20：Le Blanc K et al.,J Intern Med,2007;262:509-525

非專利文獻21：Uccelli A et al.,Trends Immunol,2007;28:219-226

非專利文獻22：Caplan Al et al.,J Cell Biochem,2006;98:1076-1084

非專利文獻23：Fang BJ et al.,Transplantation,2004;78:83-88

非專利文獻24：Ortiz LA et al.,Proc Natl Acad Sci USA,2003;100:8407-841

非專利文獻25：小川佳宏，實驗醫學，28:1680-1687，2010

非專利文獻26：Medzhitov R,Nature,454:428-35,2008

非專利文獻27：Hotamisligil GS,Nature,444(7121):860-7,2006

非專利文獻28：Wellen KE et al.,J Clin Invest,115(5):1111-9,2005

非專利文獻29：菅波孝祥他，實驗醫學，28:1717-1723，2010

非專利文獻30：Dalla-Favera R et al.,Nature,292:31-35,1981

本發明係鑒於上述背景而成者，其課題在於提供一種對PDGF-BB之產生亢進有效之劑，並且使用其提供一種對間葉系幹細胞之產生促進及/或其穩定化有效之劑。

本發明者等人對各種材料進行了反覆研究並篩選出使PDGF-BB之產生亢進之藥劑，結果發現：越橘、山竹及黃芩之各植物來源物、以及肌醇及肌醇磷酸分別顯示顯著之PDGF-BB產生亢進作用，從而達成本發明。

因此，本申請案包含下述發明：

[1]一種血小板衍生成長因子-BB(PDGF-BB)產生亢進劑，其係含有選自越橘來源物、山竹來源物、黃芩來源物、肌醇及肌醇磷酸中之1種或2種以上成分作為有效成分而成。

[2]如上述[1]之PDGF-BB產生亢進劑，其係含有肌醇並且進而含有酵母萃取物而成。

[3]如上述[1]或[2]之PDGF-BB產生亢進劑，其中肌醇為來自米糠之肌醇磷酸。

[4]一種間葉系幹細胞產生促進劑，其係含有如上述[1]至[3]中任一項之PDGF-BB產生亢進劑而成。

[5]一種幹細胞穩定劑，其係含有如上述[1]至[3]中任一項之PDGF-BB產生亢進劑而成。

[6]一種真皮再生化劑，其係含有如上述[1]至[3]中任一項之PDGF-BB產生亢進劑而成。

根據本發明，可提供一種對PDGF-BB之產生亢進有效之劑，並且亦可藉由使用上述劑而提供一種對間葉系幹細胞之產生促進或穩定化等有效之劑。

[越橘來源物]

越橘(學名：Vaccinium vitis-idaea L.)為杜鵑花科越橘屬之植物。於本發明中，作為越橘來源物，可使用：將越橘之花、花穗、果穗、果皮、果實、莖、葉、枝、枝葉、樹幹、樹皮、根莖、根皮、根、種子或全草粉碎後所榨取者，粉碎後利用溶劑等所萃取者，或粉碎後藉由酶處理或機械處理等處理所分解者。

於萃取越橘之情形時，作為萃取溶劑，只要為用於萃取之溶劑則可任意地使用，例如可分別單獨或組合使用：水，甲醇、乙醇、丙二醇、1,3-丁二醇、丙三醇等醇類，氯仿、二氯乙烷、四氯化碳、丙酮、乙酸乙酯等有機溶劑。

萃取可於常溫下進行，亦可於加熱下(例如使用溫水或熱水等經加熱之溶劑)進行。

可直接使用利用上述溶劑進行萃取而獲得之萃取物，或使用濃縮之萃取物，或者亦可使用，對該等萃取物利用吸附法例如離子交換樹脂去除雜質而獲得者、或利用多孔性聚合物(例如Amberlite XAD-2)之柱吸附後以甲醇或乙醇進行溶析並濃縮而獲得者。又，亦可使用藉由公知之分配法(例如使用水/乙酸乙酯等之分配法)進行萃取而獲得之萃取物等。

於分解越橘之情形時，可進行選擇性地分解細胞間質且維持細胞形態之類的「單細胞化處理」。例如可參考日本專利特開2002-193734中所記載之方法。具體而言係指如下處理：藉由酶分解或機械分解等於幾乎不使細胞壁分解之情況下對植物選擇性地分解或破壞細胞間質，於維持細胞形態之狀態下將對象物分解成細胞單元，而形成粥狀、液體組合物或凍結乾燥品。為了進行上述選擇性之分解，可使用酶處理。例如可使用藉由通常公知之方法自根霉菌(Rizopus)屬或曲霉菌(Aspergillus)屬等之酶原料中離析或離析、純化而獲得者，或者亦可使用市售品。於使該等單細胞化酶於越橘中發揮作用之情形時，較佳於使用之酶之最適溫度及最適pH等最適條件下發揮作用，且使用所需之最少量。此處，單細胞化酶之最適溫度為30~45℃，最適pH為4~6。又，進行酶反應後成為殘渣之部分例如可藉由使用20網眼左右之篩子予以去除而成為可包含於本外用組合物中之越橘來源物。

進而，除上述單細胞化植物之懸浮液以外，亦可將利用離心分離等方法使該懸浮液脫水而獲得之單細胞漿料或其乾燥品用於本發明。

迄今為止，越橘存在用作：含有經單細胞化處理之越橘之外用劑(日本專利特開2002-193734)，殺菌、抗菌及頭皮屑防止用化妝料(日本專利特開昭61-238719)，彈性蛋白酶活性抑制劑(日本專利特開2002-363088)，活性酶消除劑(日本專利特開2002-363027)，黑色素生成抑制劑(日本專利特開2002-363057)，過氧化脂質生成抑制劑(日本專利特開2002-363089)，膠原酶活性抑制劑(日本專利特開2003-12531)，透明質酸酶活性抑制劑(日本專利特開2003-73287)，金屬蛋白酶表現抑制劑(日本專利特開2002-193738)，抗糖化劑(日本專利特表2004-505007)，及針對皮膚肥厚、皮膚硬化等皮膚障礙之抗皮膚障礙劑(日本專利特開2005-306850)之例，但越橘來源物具有PDGF-BB產生促進作用、間葉系幹細胞產生促進作用、幹細胞穩定化作用及真皮穩定化作用之情況迄今為止完全不為人知，該等作用係由本發明者等人初次發現。

[山竹來源物]

山竹(學名：Garcinia mangostana)為小連翹科菲島福木屬之植物。

於本發明中，作為山竹來源物，可使用將山竹之果穗、果皮、果實、莖，葉、枝、枝葉、樹幹、樹皮、根莖、根皮、根、種子或全草粉碎後所榨取者，或粉碎後利用溶劑等所萃取者。

於萃取山竹之情形時，作為萃取溶劑，只要為用於萃取之溶劑則可任意地使用，例如可藉由利用下述溶劑進行萃取並餾去溶劑而獲得：甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丁醇、異丁醇等低級醇或含水低級醇，丙二醇、1,3-丁二醇等多元醇或含水多元醇，丙酮，乙酸乙酯等各種有機溶劑。

萃取可於常溫下進行，亦可於加熱下(例如使用溫水或熱水等經加熱之溶劑)進行。

又，亦可於溶劑中加入酶而進行萃取處理。藉由加入酶，可使果實之細胞組織崩解，藉此可進而提高萃取效率。作為酶，較佳為使用細胞組織崩解酶。作為此種酶，例如可列舉果膠酶、纖維素酶、半纖維素酶、α-澱粉酶、肌醇六磷酸酶。該等酶可單獨使用1種，亦可混合2種以上使用。

可直接使用利用上述萃取溶劑而獲得之萃取液，亦可餾去萃取溶劑並視需要乾燥後而加以使用。

迄今為止，山竹存在用作紫外線吸收劑(日本專利特開平9-87155)、MMPs(matrix metalloproteinases，基質金屬蛋白酶)抑制劑(日本專利特開2003-252745)、纖維母細胞活化劑(日本專利特開2006-249051)之例，又，已知具有氧雜蒽酮衍生物之製造作用及膠原蛋白產生作用(日本專利特開2009-84169)，但山竹來源物具有PDGF-BB產生促進作用、間葉系幹細胞產生促進作用、幹細胞穩定化作用及真皮穩定化作用之情況迄今為止完全不為人知，該等作用係由本發明者等人初次發現。

[黃芩來源物]

黃芩(學名：Scutellaria baicalensis Georgi，Labiatae)為紫蘇科黃芩屬之植物。於本發明中，作為黃芩來源物，可使用將黃芩之果穗、果皮、果實、莖、葉、枝、枝葉、樹幹、樹皮、根莖、根皮、根、種子或全草粉碎後所榨取者，或粉碎後利用溶劑等所萃取者。

於萃取黃芩之情形時，作為萃取溶劑，只要為通常用於植物萃取等之溶劑則可任意地使用，例如可列舉：水，甲醇、乙醇、異丙醇、正丁醇等低級醇，丙二醇、1,3-丁二醇等多元醇，或該等醇類之含水物，正己烷、甲苯等烴系溶劑等。該等可分別單獨使用，或者亦可組合任意2種以上使用。其中較佳為使用甲醇或乙醇等低級醇。

萃取可於常溫下進行，亦可於加熱下(例如使用溫水或熱水等經加熱之溶劑)進行。

又，亦可於溶劑中加入酶而進行萃取處理。藉由加入酶，可使果實之細胞組織崩解，藉此可進而提高萃取效率。作為酶，較佳為使用細胞組織崩解酶。作為此種酶，例如可列舉果膠酶、纖維素酶、半纖維素酶、α-澱粉酶、肌醇六磷酸酶。該等酶可單獨使用1種，亦可混合2種以上使用。

可直接使用利用上述萃取溶劑而獲得之萃取液，亦可餾去萃取溶劑並視需要乾燥後而加以使用。

迄今為止，黃芩存在用作毛乳頭活化劑(日本專利特開平11-240823)、透明質酸產生能增加劑(日本專利特開平10-95735)、紫外線皮膚免疫功能下降防止用免疫活化劑(日本專利特開平11-71295)、抗炎症劑(日本專利特開2006-8536)、及抗氧化劑(日本專利特開平5-238925)之例，但黃芩來源物具有PDGF-BB產生促進作用、間葉系幹細胞產生促進作用、幹細胞穩定化作用、及真皮穩定化作用之情況迄今為止完全不為人知，該等作用係由本發明者等人初次發現。

[肌醇、肌醇磷酸]

已知，肌醇被稱作維生素B之一種，即便於有機體內亦自葡萄糖中進行生物合成而獲得。肌醇亦包含於穀物、糠、豆、果物等植物中。肌醇通常以該羥基磷酸化之形態(肌醇磷酸)存在。於本發明中亦可使用該肌醇磷酸。於本發明所使用之肌醇中包括肌醇之各種立體異構物。作為肌醇之立體異構物，存在cis-肌醇(1,2,3,4,5,6/0-肌醇)、epi-肌醇(1,2,3,4,5/6-肌醇)、allo-肌醇(1,2,3,4/5,6-肌醇)、myo-肌醇(1,2,3,5/4,6-肌醇)、muco-肌醇(1,2,4,5/3,6-肌醇)、neo-肌醇(1,2,3/4,5,6-肌醇)、chiro-肌醇(1,2,4/3,5,6-肌醇)、及scyllo-肌醇(1,3,5/2,4,6-肌醇)。作為肌醇磷酸，可列舉使肌醇之6個羥基中任意1個或2個以上磷酸化而成之化合物。其中較佳為使肌醇之6個羥基全部磷酸化而成之化合物，即植酸。本發明所使用之肌醇或肌醇磷酸較佳為來自米糠。又，肌醇磷酸之任意鹽亦可用於本發明中。

根據本發明之某實施態樣，肌醇及肌醇磷酸可將單體之粉末溶解於培養基中並適當稀釋而使用。

肌醇及肌醇磷酸亦可藉由與其他物質組合而提高PDGF-BB產生亢進作用。作為上述其他物質，可列舉酵母萃取物，例如可使用Biodyne(註冊商標)EMPP(Arch Personal Care Products L.P.公司製造)。於使用該萃取物之情形時，可藉由自萃取物之乾燥殘留成分中進行濃度轉換，而以成為0.1%左右之方式於培養基中添加萃取物而使用。

迄今為止，肌醇及肌醇磷酸存在用作含有肌醇之老化皮膚及/或承受壓力之皮膚用之美容組合物(日本專利特表204-501069)、含有肌醇磷酸(尤其是植酸與其鹽)之用以降低或預防脂肪性浮腫之徵兆之化妝料組合物(日本專利特開平8-253406)、及皮膚保濕及/或皮膚保護及/或皮膚抗老化用之組合物(日本專利特開2010-150258)之例。又，作為維生素B類，存在用作含有維生素B2及B6之細胞活化用皮膚外用劑(日本專利特開平9-241146)、含有維生素B之抗氧化劑(日本專利特開平7-277939及日本專利特開205306831等)之例。然而，維生素B類或肌醇或肌醇磷酸具有PDGF-BB產生促進作用、間葉系幹細胞產生促進作用、幹細胞穩定化作用，及真皮穩定化作用之情況迄今為止完全不為人知，該等作用係由本發明者等人初次發現。

[PDGF-BB產生亢進劑、間葉系幹細胞產生促進劑、幹細胞穩定劑及真皮再生化劑]

本發明之PDGF-BB產生亢進劑含有選自越橘來源物、山竹來源物、黃芩來源物、肌醇及肌醇磷酸中之1種或2種以上作為有效成分。又，本發明之間葉系幹細胞產生促進劑、幹細胞穩定劑及真皮再生化劑包含含有上述有效成分之本發明之PDGF-BB產生亢進劑。本發明之PDGF-BB產生亢進劑、間葉系幹細胞產生促進劑、幹細胞穩定劑及真皮再生化劑(以下存在將該等統稱作「本發明之劑」之情況)可單獨含有上述有效成分之任意1種，亦可以任意之組合及比率含有2種以上。

如上所述，根據本發明者等人之見解，PDGF-BB與間葉系幹細胞之定域相關，藉由使血管內皮細胞中之PDGF-BB之產生亢進，可實現間葉系幹細胞之產生亢進及穩定化(日本專利特願2010-209705)。即，本發明之PDGF-BB產生亢進劑可極其有效地用於間葉系幹細胞之產生亢進及穩定化之目的。

又，如上所述，已知間葉系幹細胞之產生亢進及穩定化對於血管之穩定化、組織恆常性之維持、損傷組織之修復、再生(尤其是真皮之再生)、抗纖維化、多發性硬化症或糖尿病等各種疾病之預防、治療，以代謝綜合症等慢性炎症為基礎之各種狀態之預防、改善等用途極其有效。因此，使用本發明之PDGF-BB產生亢進劑之本發明之間葉系幹細胞產生促進劑及幹細胞穩定劑可極其有效地用於該等用途。

本發明之劑亦可製成將上述有效成分與1種或2種以上之其他成分例如賦形劑、載體及/或稀釋劑等組合而成之組合物。組合物之組成或形態為任意，只要根據有效成分或用途等條件適當選擇即可。該組合物可根據其劑形，利用與賦形劑、載體及/或稀釋劑等及其他成分適當組合而成之調配物，並藉由常規方法，而製造。

本發明之劑可調配於各種飲食品、飼料(寵物食品等)中而使人類及動物攝取。又，亦可調配於化妝料等中而用於人類及動物，或作為醫藥製劑而對人類及動物投與。

具體而言，於將本發明之劑調配於飲食品或飼料等中之情形時，植物體或其萃取物之調配量(乾燥質量)可根據該等之種類、目的、形態、用法等而適當決定。例如可以如下方式調配：成人每天對植物或其萃取物之攝取量係蜀葵萃取物成為0.5 mg~1 g(乾燥殘留成分)、越橘萃取物成為0.5 mg~3 g左右。尤其是於用作保健用飲食品等之情形時，為了充分發揮本發明之有效成分之特定效果，成人每天較佳為以蜀葵萃取物成為10 mg~500 mg(乾燥殘留成分)、越橘萃取物成為10 mg~1.5 g(乾燥殘留成分)之方式進行攝取。

作為飲食品或飼料之形態，可設為任意之形態，例如可成形為顆粒狀、粒狀、漿料狀、凝膠狀、固體狀或液體狀。於該等形態中可適當含有確認包含於飲食品等中之公知之各種物質，例如黏合劑、崩解劑、增黏劑、分散劑、再吸收促進劑，調味劑、緩衝劑、界面活性劑、溶解輔助劑、保存劑、乳化劑、等張劑、穩定劑或PH調整劑等賦形劑。

於將本發明之劑用於化妝料之情形時，植物體或其萃取物之調配量(乾燥質量)可根據該等之種類、目的、形態、用法等而適當決定。例如，可於化妝料總量中分別調配蜀葵萃取物、越橘萃取物0.00001%~50%(換算成乾燥質量)，其中較佳為0.0001%~5%(換算成乾燥質量)。

除了上述成分以外，進而亦可視需要於不損害本發明之效果之範圍內視需要適當調配通常用於化妝料或醫藥品等皮膚外用劑中之成分，例如抗氧化劑、油分、紫外線防禦劑、界面活性劑、增黏劑、醇類、粉末成分、有色材料、水性成分、水、各種皮膚營養劑等。

進而，亦可適當調配：乙二胺四乙酸二鈉、乙二胺四乙酸三鈉、檸檬酸鈉、聚磷酸鈉、偏磷酸鈉、葡萄糖酸等金屬離子螯合劑，尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丁酯等防腐劑，咖啡因、鞣酸、維拉帕米、傳明酸及其衍生物、甘草萃取物、光甘草啶、木瓜果實之熱水萃取物、各種天然藥、乙酸維生素E、甘草酸及其衍生物或其鹽等藥劑，維生素C、抗壞血酸磷酸鎂、抗壞血酸葡糖苷、熊果苷、曲酸等美白劑，葡萄糖、果糖、甘露糖、蔗糖、海藻糖等糖類等。

又，該皮膚外用劑可廣泛地用於外皮所使用之化妝料、準藥品等中，尤佳為可廣泛地用於化妝料中。該劑型只要為可適用於皮膚者即可，可使用溶液系、可溶化系、乳化系、粉末分散系、水-油二層系、水-油-粉末三層系、軟膏、化妝水、凝膠、氣溶膠等任意之劑型。

於將本發明之劑用作化妝料之情形時，較佳作為化妝水、乳液、粉底、口紅、唇膏、潔面膏、按摩膏、剝撕式面膜、護手霜、香手粉、沐浴露、身體乳液、身體霜、浴用化妝料等形態使用，此時亦可適當調配，於形成該等形態時通常所添加、調配之成分，例如保濕劑、香料、可溶化劑、穩定劑、紫外線吸收劑、紫外線散射劑等成分。

於將本發明之劑用作外用劑之情形時，植物體或其萃取物之調配量(乾燥質量)可根據該等之種類、目的、形態、用法等而適當決定。例如於化妝料總量中較佳為0.00001%~50%(換算成乾燥質量)，於其他飲食品中較佳為0.0001%~5%(換算成乾燥質量)。

於將本發明之劑用作準藥品之情形時，該製劑可以經口或非經口(靜脈投與、腹腔內投與等)之方式較佳地使用。劑型亦為任意，例如可藉由公知之方法適當製成，錠劑、顆粒劑、散劑、膠囊劑等經口用固體製劑，或內服液劑、糖漿劑等經口用液體製劑，或注射劑等非經口用液體製劑等任意形態。於該等醫藥製劑中，亦可適當使用通常所使用之黏合劑、崩解劑、增黏劑、分散劑、再吸收促進劑、調味劑、緩衝劑、界面活性劑、溶解輔助劑、保存劑、乳化劑、等張劑、穩定劑或pH調製劑等賦形劑。

若為外用劑，則可廣泛地用於各種軟膏劑等形態，但較佳為作為乳液劑、懸浮劑、乳劑、液劑、軟膏劑、貼附劑等形態而使用。再者，本發明之劑可採用之形態並不限定於該等劑型及形態。

對於投與本發明之劑時之間葉系幹細胞中之PDGF-BB基因的表現，例如可藉由測定PDGF-BB之量而決定表現量並進行評價。該測定較佳為利用對PDGF-BB特異之抗體並藉由業界周知之方法而實施，例如：利用螢光物質、色素、酶等之免疫染色法，西方墨點法，免疫測定方法，例如ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay，酶聯免疫吸附實驗)法，RIA法(Radio Immunoassay，放射免疫法)等各種方法。又，例如可藉由萃取間葉系幹細胞中之總RNA(Ribonucleic Acid，核糖核酸)，測定編碼PDGF-B之mRNA之量而決定表現量並進行評價。mRNA之萃取、其量之測定亦為業界所周知，例如RNA之定量可藉由定量聚合酶連鎖反應(PCR，polymerase chain reaction)法，例如即時聚合酶連鎖反應(RT-PCR，Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction)而進行。適於RT-PCR之引子之選定可藉由業者所周知之方法而實施。

[實施例]

繼而，藉由實施例對本發明進行更詳細地說明。再者，本發明並不限定於此。

[評價對象樣品]

使用以下者作為PDGF-BB之產生亢進作用之評價對象樣品。

‧肌醇：

將市售之肌醇粉末(和光純藥工業公司製造：肌醇)溶解於PBS(Phosphate Buffered Saline，磷酸鹽緩衝液)中後，以相對於下述培養基成為10 ppm之方式使用。

‧植酸：

以相對於下述培養基成為10 ppm之方式使用市售之植酸(Nacalai Tesque,Inc.公司製造：50%之水溶液)。

‧黃芩萃取物：

使用以70體積%之乙醇(水與乙醇之體積比例3：7之混合液)萃取去除黃芩之外皮之根而獲得之萃取物。萃取物係進行乾燥並保存，於使用前加入70體積%乙醇而使其溶解後，以相對於下述培養基(以萃取物之乾燥重量換算計)成為15 ppm之方式使用。

‧越橘CRS(cell release system)：

使用於利用細胞分解酶(Macerozyme A)處理越橘之葉而獲得之細胞懸浮液中以成為40體積%之方式加入1,3-BG而成之懸浮液。懸浮液係作為液體而保存，以相對於下述培養基(以萃取物之乾燥重量換算計)成為30 ppm之方式使用。

‧山竹樹皮萃取物：

使用以70體積%之1,3-BG(水與1,3-BG之體積比例3：7之混合液)萃取山竹之樹皮而獲得之萃取物。萃取物係進行乾燥並保存，於使用前加入70體積%之1,3-BG而使其溶解後，以相對於下述培養基(以萃取物之乾燥重量換算計)成為10 ppm之方式使用。

[血管內皮細胞中之PDGF-BB之產生亢進作用之評價]

利用EGM-2培養基(三光純藥)對人類血管內皮細胞HUVEC(Human Umbilical Vein Endothelial Cells，人臍靜脈內皮細胞)進行繼代培養，將繼代第4代之細胞懸浮於不含VEGF-A(vascular endothelial growth factor-A，血管內皮生長因子-A)之Humedia-EG2培養基(Kurabo)中，以20,000個之比例播種於塗覆膠原蛋白之24孔多片(旭硝子)上，於5%之CO₂存在下、於37℃下進行3~5天之培養直至細胞達到集密為止。以成為上述濃度之方式添加上述各種樣品，或於添加有溶解各種評價對象樣品之溶劑之Humedia-EG2培養基(Kurabo)中交換後，進而進行2天之培養。使用RNA萃取試劑MagNA Pure LC mRNA HS試劑盒(Roche)與自動核酸萃取裝置MagNA Pure LC 1.0 Instruments(Roche)，按照提供之操作說明，對培養後之細胞進行mRNA之萃取、純化。對於各樣品，將相同容量之mRNA放入鑄模中，使用下述序列號1及2之引子對、反應試劑QuantiFast SYBR Green RT-PCR Kit(Qiagen)與反應裝置LightGycler(Roche)，進行PDGF-B基因之一步驟定量即時(RT)-PCR。組成條件係根據Qiagen之操作說明。又，RT-PCR之條件係於RT反應中設為50℃、20分鐘，於初始改質中設為95℃、15分鐘，於改質中設為94℃、15秒，於退火中設為60℃、20秒，於延伸中設為72℃、30秒。再者，G3PDH係用作內部標準(序列號3及4之引子對)，使用其修正對照群之mRNA量。

PDGF-B：

正向引子：5'-CCTGGCATGCAAGTGTGA-3'(序列號1)

反向引子：5'-CCAATGGTCACCCGATTT-3'(序列號2)

G3PDH:

正向引子：5'-GCACCGTCAAGGCTGAGAAC-3'(序列號3)

反向引子：5'-ATGGTGGTGAAGACGCCAGT-3'(序列號4)

[評價結果]

按照上述評價順序，將上述各樣品所獲得之PDGF-BB之mRNA之表現量相對於對照(溶解各評價對象樣品之溶劑)所獲得的表現量之比示於以下之表中。根據以下之結果，可知該等成分具有使PDGF-BB表現亢進之活性。

<110>　資生堂股份有限公司

<120>　血小板衍生成長因子-BB產生亢進劑、與含有其之間葉系幹細胞產生促進劑、幹細胞穩定劑、及真皮再生化劑

<130>　SSD-Z669-PCT

<140>　100123401

<141>　2011-07-01

<160>　4

<170>　PatentIn version 3.5

<210>　1

<211>　18

<212>　DNA

<213>　人工序列

<220>

<223>　PDGF-B正向引子

<400>　1

<210>　2

<211>　18

<212>　DNA

<213>　人工序列

<220>

<223>　PDGF-B反向引子

<400>　2

<210>　3

<211>　20

<212>　DNA

<213>　人工序列

<220>

<223>　G3PDH正向引子

<400>　3

<210>　4

<211>　20

<212>　DNA

<213>　人工序列

<220>

<223>　G3PDH反向引子

<400>　4

Claims (3)

1. 一種選自由越橘萃取物、山竹萃取物及黃芩萃取物所組成之群中之1種或2種以上的用途，其係用於製造血小板衍生成長因子-BB(PDGF-BB)產生亢進劑者。
2. 一種選自由越橘萃取物、山竹萃取物及黃芩萃取物所組成之群中之1種或2種以上的用途，其係用於製造間葉系幹細胞產生促進劑者。
3. 一種選自由越橘萃取物、山竹萃取物及黃芩萃取物所組成之群中之1種或2種以上的用途，其係用於製造幹細胞穩定劑者。