JP5496951B2 - 血小板由来成長因子(pdgf)−bb産生亢進剤、及びそれを含む幹細胞安定化剤 - Google Patents
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Description
また、組織損傷部位又はその近傍において血管が破壊されると、血管周皮細胞(ぺリサイト)である間葉系幹細胞は血管から離れて増殖し、失われた細胞を供給するとともに(非特許文献11〜14)、生物活性を持つ因子を放出して組織を保護し(非特許文献15〜19)、損傷した組織の修復・再生に作用する。これらの分泌因子は、血管形成や抗アポトーシスの作用のほか、免疫を強力に抑制する作用も有し(非特許文献21及び22)、T細胞やB細胞を介した損傷組織の破壊を抑える(非特許文献9及び22)ことも報告されている。
更に、間葉系幹細胞は、抗線維化の作用(非特許文献23及び24)や、多発性硬化症や糖尿病に対する効果(非特許文献9)も示すことが知られている。
[1]アムラ抽出物及びリンゴンベリー抽出物の少なくともいずれかを有効成分として含んでなる血小板由来成長因子−BB(PDGF−BB)産生亢進剤。
[2][1]に記載のPDGF−BB産生亢進剤を含んでなる、幹細胞安定化剤。
アムラ(学名:Phyllanthus emblica又はEmblica officinalis)は、トウダイグサ科エンブリカ属に属する落葉中低木亜高木である。本発明に用いられるアムラの抽出物としては、アムラの果実(果肉や果皮)の抽出物が最も好ましいが、アムラの種、葉、茎、花、根等にも有効成分が含まれているので、これらのうちいずれか1又は2以上の抽出物を使用することもできる。
リンゴンベリー(通称コケモモ、学名:Vaccinium vitis-idaea L)は、ツツジ科スノキ属の常緑小低木である。本発明に用いられるリンゴンベリーの抽出物としては、リンゴンベリーの果実(果肉や果皮)の抽出物が最も好ましいが、リンゴンベリーの種、葉、茎、花、根等にも有効成分が含まれているので、これらのうちいずれか1又は2以上の抽出物を使用することもできる。
本発明のPDGF−BB産生亢進剤は、アムラ抽出物及びリンゴンベリー抽出物の少なくともいずれかを有効成分として含有する。また、本発明の幹細胞安定化剤は、上記の有効成分を含む本発明のPDGF−BB産生亢進剤を含有する。本発明のPDGF−BB産生亢進剤及び幹細胞安定化剤(以降これらを総称して「本発明の剤」という場合がある。)は、上記の有効成分の何れか1種を単独で含有してもよく、2種類以上を任意の組み合わせ及び比率で含有してもよい。
PDGF−BBの産生亢進作用の評価対象サンプルとして以下を用いた。
太陽化学株式会社より市販されているアムラ抽出物(商品名:サンアムラ)を用いた。抽出物は乾燥した状態で冷蔵庫に保存し、後述の培地に対して(抽出物の乾燥重量換算で)1.8ppmとなるように使用した。
オリザ油化株式会社より市販されているリンゴンベリー抽出物(商品名:リンゴンベリーP0.5)を用いた。抽出物は乾燥した状態で冷蔵庫に保存し、後述の培地に対して(抽出物の乾燥重量換算で)15ppmとなるように使用した。
ヒト血管内皮細胞HUVECをEGM-2培地(三光純薬)で継代培養し、継代4代目の細胞を、VEGF−Aを含まないHumedia-EG2培地(クラボウ)に懸濁して、コラーゲンコート24穴マルチプレート(旭硝子)に20,000個の割合で播種し、5%CO2存在下、37℃で細胞が集密に達するまで3〜5日間の培養を行った。上記の各サンプルを上記濃度となるように添加、又は無添加のHumedia-EG2培地(クラボウ)に交換した後、さらに2日間培養を行った。培養後の細胞からRNA抽出試薬MagNA Pure LC mRNA HSキット(Roche)と自動核酸抽出装置MagNA Pure LC 1.0 インスツルメント(Roche)を用いて、提供されたプロトコールに従ってmRNAの抽出・精製を行った。各サンプルについて、同容量のmRNAを鋳型に、後述の配列番号1及び2のプライマーペア、反応試薬QuantiFast SYBR Green RT-PCR Kit(Qiagen)と反応装置LightCycler(Roche)を用いて、PDGF−B遺伝子のワンステップ定量リアルタイム(RT)−PCRを行った。組成条件はQiagenのプロトコールに従った。また、RT−PCRの条件は、RT反応50℃で20分、初期変性95℃で15分、変性94℃で15秒、アニール60℃で20秒、伸長72℃で30秒とした。なお、G3PDHは内部標準として用い(配列番号3及び4のプライマーペア)、これを用いて対照群のmRNA量を補正した。
フォワードプライマー:5'-CCTGGCATGCAAGTGTGA-3'(配列番号1)
リバースプライマー:5'-CCAATGGTCACCCGATTT-3'(配列番号2)
G3PDH:
フォワードプライマー:5'-GCACCGTCAAGGCTGAGAAC-3'(配列番号3)
リバースプライマー:5'-ATGGTGGTGAAGACGCCAGT-3'(配列番号4)
上記評価手順に従い、上記各サンプルについて得られたPDGF−BBのmRNAの発現量の、対照(DMSO)(サンプル無添加)について得られた発現量に対する比を、以下の表に示す。以下の結果から、これらの成分はPDGF−BB発現を亢進させる活性を有することが分かる。
Claims (1)
- アムラ抽出物及びリンゴンベリー抽出物の少なくともいずれかを有効成分として含んでなる血小板由来成長因子−BB(PDGF−BB)産生亢進剤。
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