JP4455955B2

JP4455955B2 - 抗酸化組成物

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Publication number: JP4455955B2
Application number: JP2004241125A
Authority: JP
Inventors: 騰坂口; プラジュムナラオテータム
Original assignee: Taiyo Kagaku KK
Current assignee: Taiyo Kagaku KK
Priority date: 2004-08-20
Filing date: 2004-08-20
Publication date: 2010-04-21
Anticipated expiration: 2024-08-20
Also published as: JP2006057012A

Description

本発明は、アムラーの果実、果汁又はそれらの抽出物を含有することを特徴とする抗酸化組成物及びそれを含有する飲食品、医薬部外品及び医薬品に関する。

ヒトは常時呼吸をし、体に酸素を取り入れている。呼吸によって摂取した酸素のうち約２％〜４％が不安定な不対電子をもつ活性酸素（分子内にひとつ以上の不対電子をもつものをフリーラジカルといい、酸素のフリーラジカルを活性酸素という）となり、これらの活性酸素は早く安定しようと、安定を求めて細胞膜を攻撃する。その後、細胞膜中の不飽和脂肪酸を酸化し、酸化された不飽和脂肪酸は脂質ペルオキシルラジカルに変化する。そして、脂質ペルオキシルラジカルは、再び不飽和脂肪酸を酸化し、酸化を繰り返しながら、過酸化脂質を生成する。活性酸素には、体内に侵入してきた細菌などから身を守る役割もあるが、問題なのは大量に活性酸素が発生した場合である。活性酸素が有害なのは、不飽和脂肪酸が体内で活性酸素によって酸化され、「過酸化脂質」になるからである。人間の身体はおよそ６０兆個の細胞から構成されていて、その細胞の一番外側にある細胞膜は「不飽和脂肪酸」でできている。その不飽和脂肪酸が酸化して、過酸化脂質となり、細胞膜がボロボロになると、さらに細胞膜内にあるタンパク質までもが巻き込まれて酸化し、もっと有害な二次酸化物ができる。これによって、老化、脳卒中、自己免疫疾患、ガン、白内障、脂肪肝、心筋梗塞、虚血性心疾患、アルツハイマー症候群、糖尿病、糖尿病性腎症、動脈硬化、アレルギー、花粉症のような様々な疾病や皮膚のしわ形成や皮膚の弾力性低下等の老化、炎症、肌の色素沈着が引き起こされている。しかし幸いな事に人体には抗酸化物質が備わっており、体内のＳＯＤ（スーパーオキシドディスムターゼ）をはじめ、カタラーゼ、グルタチオン・パーオキシターゼなどの抗酸化物質が備わっており、この活性酸素を消しさってくれる。しかしこのＳＯＤも歳をとると共に減少する。また、最近の農薬、殺虫剤、食品添加物、窒素化合物、紫外線、放射線、ストレス、タバコなど多くの環境汚染物質によって、環境汚染は我々の体内にある貴重なＳＯＤをさらに消費しているだけでなく、活性酸素が作られる環境になっている。

活性酸素を消去させる為には、抗酸化物質を摂取すればよく、また、体内のＳＯＤが不足したらＳＯＤを補えばいいが、ＳＯＤは経口摂取しても速やかに吸収する事は困難であり、また、胃酸に分解されて活性を失う。そこでＳＯＤと同様の活性を示す抗酸化物質をとることが有効な手段となる。

抗酸化剤としては、例えばＬ−アスコルビン酸（ビタミンＣ）、還元型のグルタチオン、尿酸、ポリフェノール類などの水溶性抗酸化化合物や、α−トコフェロール（ビタミンＥ）、ユビキノン（コエンザイムＱ）、カロチノイド類などの脂溶性抗酸化化合物およびＢＨＴ（ブチルヒドロキシトルエン）、ＢＨＡ（ブチルヒドロキシアニソール）などの合成化合物などが知られている。しかし、合成抗酸化剤のＢＨＴ、ＢＨＡには、発癌性の疑いが持たれている等の問題がある。日常的な抗酸化物質の摂取を考える上で、その経済性や安全性から主に抗酸化物質の製造における原料としては食品が用いられ、例えば茶葉からカテキン類や赤ワインからはプロシアニジン類等のポリフェノール類が製造されている。その他の天然成分での抗酸化剤としては、スモモ、セイヨウナツユキソウ、ベンガルカラタチ、ミラクルベリー、ヤーバサンタ、レモングラスから選ばれる抽出物（例えば、特許文献１参照。）、アガリクス、メシマコブ、及びプロポリス（例えば、特許文献２参照。）、椿花抽出物（例えば、特許文献３参照。）、サンショウ水性溶媒抽出物（例えば、特許文献４参照。）、カカオの葉、樹皮又は根抽出物（例えば、特許文献５参照。）、フスマ、胚芽又は穀粉の有機溶媒による抽出物（例えば、特許文献６参照。）、栄養的に優れているといわれる野菜類の、かぼちゃ、ホーレン草、モロヘイヤ、トマト、スイートコーン、人参、紫コーンなどの１５種類以上の天然食品素材からなるもの（例えば、特許文献７参照。）が知られている。一方で、単一な物質の大量摂取より、多種・多様な抗酸化物質を少量ずつ摂取することのほうが、種々の疾病の予防については有効であることがわかってきた。そのためには多彩な抗酸化物質を提供することが必要である。

特開２００３−１８３１２０号公報（第１−２頁）特開２００２−２３５０８４号公報（第１−２頁）特開２００２−３７１０９２号公報（第１−２頁）特開２００２−１０４９８５号公報（第２−３頁）特開２０００−６０４８５号公報（第１−２頁）特開平１０−１４７７７９号公報（第１−２頁）特開平１０−７５７４０号公報（第２−５頁）

本発明の課題は、幅広い飲食品や医薬品に使用可能な抗酸化効果のある組成物及びそれを含有する飲食品、医薬部外品及び医薬品を提供することにある。

本発明者らは、このような状況を鑑み、従来技術の問題点を改善せんとして鋭意研究を重ねた結果、アムラーに強い抗酸化作用及びＳＯＤ様活性を有することを見出し、本発明を完成させた。

本発明で得られたアムラーの果実、果汁又はそれらの抽出物を含有する抗酸化組成物は、電子スピン共鳴（ＥＳＲ）装置を用いた、ＤＰＰＨ（ジフェニルピクリルヒドラジル）フリーラジカル消去能の測定結果及び同じく、適当な方法で発生させた活性酸素種をＤＭＰＯなどのスピントラップ剤で捕捉し、各活性酸素種に特異的なＥＳＲシグナルを定量する方法によるＳＯＤ様活性測定結果及びストレプトゾトシン（ＳＴＺ）を投与して誘発させた糖尿病性腎症ラットへの抗酸化組成物投与試験及び魚肉への添加試験により、酸化によって生体内で増加する過酸化脂質をチオバルビツール酸（ＴＢＡ）と反応する物質（チオバルビツール酸反応性物質；ＴＢＡＲＳ）の量で測定した結果から、抗酸化効果が高いことがわかった。
特にアムラーは、昔から人間が日常食生活に使用してきた天然植物なので、従来使用していた薬剤とは違い、副作用が無く安全である。
本発明はアムラーの果実、果汁又はそれらの抽出物を含有する抗酸化組成物を各種飲食品及び医薬品等に利用して、老化、脳卒中、自己免疫疾患、ガン、白内障、脂肪肝、心筋梗塞、虚血性心疾患、アルツハイマー症候群、糖尿病、糖尿病性腎症、動脈硬化、アレルギー、花粉症のような様々な疾病やシミ・ソバカス等の異常な色素沈着の進行を抑制並びに食品の劣化を抑制することができる。

本願発明に用いるアムラーとは、学名：エンビリカ・オフィシナル（Ｅｍｂｌｉｃａｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ）又は、フィランサス・エンブリカ（Ｐｈｙｌｌａｎｔｈｕｓｅｍｂｉｌｉｃａ）といい、トウダイグサ科コミカンソウ属に属する落葉の亜高木であり、インドからマレーシア地域及び中国南部にかけて分布しており、インドが原産地と考えられている。また、各地方又は言語により、各々固有の名称があり、余柑子、油甘、奄摩勒、エンブリック・ミロバラン、アーマラキー、マラッカノキ、マラッカツリー、インディアングーズベリー、アロンラ、アミラ、アミラキ、アミラキャトラ、ネリカイ、ネルリ、タシャ、カユラカ、ケムラカ、ナックホンポン等とも称されている。

本発明において、アムラーの部位としては、特に限定されるものではないが果実、果汁、葉、茎、根等を用いることができるが、好ましくは果実、果汁が用いられる。その形態は、特に限定するものではなく、未熟果実、完熟果実、乾燥果実、果汁、果汁粉末等のいずれでも良い。
果汁又は果汁粉末の場合は、そのままでも使用できるが、生果実又は乾燥果実等、水不溶性成分を含む物を使用する場合は、抽出により、水不溶性成分が除去されていることが効果を上げる点で好ましい。
抽出の際、生果実を使用する場合は、種子を除去した後、水を添加又は無添加で、抽出効率を高めるためにミキサー等により破砕、均質化したものを用いることが好ましい。
乾燥果実を使用する場合は、抽出効率を高めるために４０メッシュ以下の粒度になるように粉砕されていることが好ましい。

抽出方法は、抽出溶媒、抽出温度等、特に限定されるものではなく、抽出溶媒としては、水、塩基、酸、親水性溶媒、アセトンを使うことができる。親水性溶媒はメチルアルコール、エチルアルコール、ｎ−プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブチルアルコールの低級アルコール群より選ばれる１種類以上が操作性、抽出効率の点から好ましい。特に好ましくは、水、塩基、酸のいずれかである。
酸又は塩基を抽出溶媒に使用する場合、抽出物を中和させることが好ましい。中和反応によって生成された塩は、透析法やゲル濾過等、公知の方法により、取り除くことができる。水を抽出溶媒として用いた場合には、上記のような中和反応は必要なく、生成された塩を取り除く必要もないため、水を用いることが更に好ましい。
この時使用する酸としては、特に限定するものではなく、大部分の酸を使うことができるが、好ましくは、入手しやすい及び操作性点により塩酸、硫酸より選ばれる１種又は両者の併用である。
また、塩基としては、特に限定するものではなく、大部分の塩基を使うことができるが、好ましくは、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムより選ばれる１種又は両者の併用である。
抽出に使用される酸又は塩基の濃度は、抽出物を酵素処理する前であっても後であっても特に限定するものではなく、酸又は塩基の強さによって変化するが、操作性及び抽出効率の点より、０．０１〜０．５モルの濃度を使用することが好ましい。

上記の果汁又は抽出物は、そのままでも使用できるが、濾過、遠心分離及び分留により、不溶性物質及び溶媒を取り除くことにより、抗酸化効果が高くなり、応用範囲も広がるので好ましい。
不溶性物質及び溶媒を取り除いた後、果汁又は抽出液をそのまま又は濃縮した後に有機溶媒用いて分配を行い、それぞれの溶媒可溶画分を得る。これら溶媒可溶画分は、更に抗酸化効果が高くなるので好ましい。有機溶媒としてはメチルアルコール、エチルアルコール、ｎ−プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブチルアルコールの低級アルコール、酢酸エチル、酢酸ブチル、ジエチルエーテル、メチルエーテル、メチルイソブチルケトン、ヘキサン、アセトン又はクロロホルムからなる群より選ばれる１種類以上が使用できる。また可溶画分の純度を上げる為には、他の疎水性溶媒による分配を組み合わせることもできる。これら溶媒の濃度としては、特に限定するものではないが、収率及び効果の点より、終濃度として１０〜１００％が好ましく、６０〜１００％が更に好ましい。
さらに純度を高める為に、フェノール系、スチレン系、アクリル酸系、エポキシアミン系、ピリジン系、メタクリル系など母体とした疎水性樹脂を用いることも可能である。その場合、樹脂吸着後の溶離液としては、メチルアルコール、エチルアルコール、ｎ−プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブチルアルコールなどの低級アルコール及びアセトンを単独又は水溶液として使用できる。
抽出物及び画分はそのままでの使用も可能だが、必要であれば噴霧乾燥や凍結乾燥等の手段により乾燥粉末化させて使用することも可能である。

抗酸化作用効果は、フリーラジカル消去能や血液中の過酸化脂質を測定することによって確認できる。フリーラジカル消去能の測定は、ＥＳＲを用いた方法やチトクロームＣ還元法、亜硝酸法、ニトロブルーテトラゾリウム塩還元法（ＮＢＴ還元法）などの化学的方法により、ＤＰＰＨラジカル（ジフェニルピクリルヒドラジルラジカル）阻害率、スーパーオキシドラジカル消去能、ＳＯＤ様活性値、ヒドロキシラジカル値を測定によって確認することができる。効果は特に限定されるものではないが、通常、ＳＯＤ様活性値は１〜６、ＤＰＰＨ阻害率は３０〜１００％、好ましくは、ＳＯＤ様活性値は４〜６、ＤＰＰＨ阻害率は５０〜１００％がよい。

本願発明の抗酸化組成物は、飲食品、医薬品、飼料等に応用でき、好ましくは、人が手軽に摂食できる飲食品、医薬部外品及び医薬品が好ましい。
本願発明における飲食品とは溶液、懸濁物、粉末、固体成形物等経口摂取可能な形態であれば良く特に限定するものではない。より具体的には、即席麺、レトルト食品、缶詰、電子レンジ食品、即席スープ・みそ汁類、フリーズドライ食品等の即席食品類、清涼飲料、果汁飲料、野菜飲料、豆乳飲料、コーヒー飲料、茶飲料、粉末飲料、濃縮飲料、栄養飲料、アルコール飲料等の飲料類、パン、パスタ、麺、ケーキミックス、から揚げ粉、パン粉等の小麦粉製品、飴、キャラメル、チューイングガム、チョコレート、クッキー、ビスケット、ケーキ、パイ、スナック、クラッカー、和菓子、デザート菓子等の菓子類、ソース、トマト加工調味料、風味調味料、調理ミックス、たれ類、ドレッシング類、つゆ類、カレー・シチューの素類等の調味料、加工油脂、バター、マーガリン、マヨネーズ等の油脂類、乳飲料、ヨーグルト類、乳酸菌飲料、アイスクリーム類、クリーム類等の乳製品、冷凍食品、魚肉ハム・ソーセージ、水産練り製品等の水産加工品、畜肉ハム・ソーセージ等の畜産加工品、農産缶詰、ジャム・マーマレード類、漬け物、煮豆、シリアル等の農産加工品、栄養食品、錠剤、カプセル等が例示される。

本願発明の抗酸化組成物の飲食品としての摂取量は、本発明の病気の状態、病人の体重、年齢、体質、体調等によって調整されるべきであるが、一般に１日あたり、抗酸化組成物として０．０５ｇ〜２０ｇ、好ましくは０．１ｇ〜５ｇの範囲で適宜選択することができる。これを病気の状態や食品等の形態によって１日１回ないし数回にわけて摂取することができる。

本願発明において、抗酸化組成物又は、飲食品等に加工する際に、各種栄養成分を強化することができる。
強化できる栄養成分としては、ビタミンＡ、ビタミンＢ_１、ビタミンＢ_２、ビタミンＢ_６、ビタミンＢ_１２、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ナイアシン（ニコチン酸）、パントテン酸、葉酸等のビタミン類、リジン、スレオニン、トリプトファン等の必須アミノ酸類や、カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛、銅等のミネラル類及び、例えば、α−リノレン酸、ＥＰＡ、ＤＨＡ、月見草油、オクタコサノール、カゼインホスホペプチド（ＣＰＰ）、カゼインカルシウムペプチド（ＣＣＰ）、水溶性食物繊維、不溶性食物繊維、オリゴ糖等の人の健康に寄与する物質類、その他の食品や食品添加物として認可されている有用物質の１種又は２種以上が使用できる。

本願発明における医薬部外品及び医薬品とは、経口または非経口投与に適した賦形剤、その他の添加剤を用いて、常法に従って、経口製剤または注射剤として調製することができる。好ましいのは、経口製剤であり、最も好ましいのは、容易に服用でき且つ保存、持ち運びに便利な経口固形製剤である。
経口固形製剤としては、錠剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、カプセル剤、丸剤、徐放剤等が用いられる。このような固形製剤においては、適宜の薬理学的に許容され得る坦体、賦形剤（例えばデンプン、乳糖、白糖、炭酸カルシウム、リン酸カルシウムなど）、結合剤（例えばデンプン、アラビアゴム、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、結晶セルロース、アルギン酸、ゼラチン、ポリビニルピリドンなど）、滑沢剤（例えばステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウムなど）、崩壊剤（例えばカルボキシメチルセルロース、タルクなど）、などと混合し、常法により錠剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、カプセル剤、丸剤、徐放剤等を調整することが出来る。経口液状製剤は、製薬学的に許容される乳濁剤、溶液剤、懸濁剤、シロップ剤、エリキシル剤等を含み、一般的に用いられる不活性な希釈剤、例えば精製水、エチルアルコールを含む。この組成物は不活性な希釈剤以外に湿潤剤、懸濁剤のような補助剤、甘味剤、風味剤、芳香剤、防腐剤を含有していてもよい。
非経口投与しての注射剤としては、無菌の水性又は非水性の溶液剤、懸濁剤、乳濁剤を包含する。水性の溶液剤、懸濁剤の希釈剤としては、例えば注射用蒸留水及び生理食塩水が含まれる。非水溶性の溶液剤、懸濁剤の希釈剤としては、例えばプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油のような植物油、エチルアルコールのようなアルコール類、ポリソルベート８０等がある。このような組成物は、さらに防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、安定化剤（例えばラクトース）、溶解補助剤（例えば、グルタミン酸、アスパラギン酸）のような補助剤を含んでもよい。これらは例えばバクテリア保管フィルターを通す濾過、殺菌剤の配合又は照射によって無菌化される。これらはまた無菌の固体組成物を製造し、使用前に無菌水又は無菌の注射用溶媒に溶解して使用することもできる。

以下本発明を、実施例にて詳細に説明するが、次の実施例は、本発明の範囲を限定するものではない。

（実施例１）抗酸化組成物の調製１
アムラー乾燥果実を４０メッシュ以下に粉砕し、その粉末８０ｇに、蒸留水２Ｌを加え、５５℃で３時間抽出した。その後、遠心分離（３０００ｒｐｍ、１０分間）し、その上清を濾過し、抽出物と残渣を分離した。その残渣に蒸留水２Ｌを加え、同条件でもう１回繰り返し抽出し、それぞれの抽出液をあわせた後、凍結乾燥し、本願発明の抗酸化組成物Ａ３５．０ｇを得た。収率は４３．８％であった。

（比較例１）種々の抽出物の調製
かぶせ伊勢茶５０ｇに７０℃の温水１Ｌを加え、５分間振とうして抽出した。その後、遠心分離し、その上清を濾過し、濾液を濾液を減圧濃縮後、凍結乾燥して比較試料の茶抽出物１８．４ｇを得た。また、同様の方法でウーロン茶（台湾製）５０ｇよりウーロン茶抽出物１７．６ｇを得た。さらに、グレープ種子抽出物はサビンサ（インド製）より入手した。また、ビタミンＣは、和光純薬より、試薬グレードのものを入手した。

（試験例１）ＥＳＲによるスーパーオキシドラジカル測定
ＥＳＲスペクトロメーター（ＪＥＳ−ＲＥ１Ｘ（Ｘ−バンド）：日本電子社製）を用いたスピントラップ法による、ＳＯＤ試薬（１５０００Ｕｎｉｔ：ラボテック社製）のスーパーオキシドラジカル（Ｏ^２−）の測定した。
ＳＯＤ試薬を蒸留水で希釈して０、０．７８１２５、１．５６２５、３．１２５、６．２５、１２．５Ｕ／ｍＬの各濃度の試料を調整した。ＥＳＲ用の試験管にリン酸緩衝液（ｐＨ７．８）で調整した２ｍＭヒポキサンチン（ラボテック社製）５０μＬ、リン酸緩衝液（ｐＨ７．８）で調整した５．５ｍＭＤＴＰＡ（Ｄｉｅｔｈｙｌｅｎｅｔｒｉａｍｉｎｅｐｅｎｔａａｃｅｔｉｃａｃｉｄ：ラボテック社製）３５μＬ、試料５０μＬ、蒸留水で調整した０．０９２μＭＤＭＰＯ（５，５Ｄｉｍｅｔｈｉ−１−ｐｙｒｏｌｉｎｅ−１−ｏｘｉｄｅ）１５μＬ及びリン酸緩衝液（ｐＨ７．８）で調整したキサンチンオキシダーゼ５０μＬを加えて１０分間混合した。その後下記測定条件でＥＳＲシグナルを定量した。なお、Ｍｎ^２＋を内部標準とした。結果を表１に示す。
ＥＳＲ測定条件：磁場３３６ｍＴ、変調周波数１００ＫＨｚ、変調幅０．１ｍＴ、返答時間０．０３秒、出力８ｍＷ、掃引時間４０秒

表１に示すようにＳＯＤ試薬の５０％ＳＯＤ活性値を示すＩＣ５０は、０．８Ｕ／ｍＬであった。各素材のＳＯＤ様活性値を求めるＳＯＤ濃度とアダクト比との関係式は、ＳＯＤ様活性値（Ｕ／ｍＬ）＝１．１１９×アダクト比＋０．１０５３（ｒ＝０．９９６）であった。

（試験例２）ＥＳＲによる各素材のＳＯＤ活性値測定
実施例１で得られた抗酸化組成物Ａ、比較例で調整及び入手した茶抽出物、ウーロン茶抽出物、グレープ種子抽出物及びビタミンＣをそれぞれ蒸留水で１０μｇ／ｍＬとなるように希釈し、試料を調整した。そして、試験例１と同様の方法で測定し、ＳＯＤ様活性値を求めた。その結果を表２に示す。

表２に示すように抗酸化組成物Ａは、一般的な抗酸化剤であるビタミンＣよりもＳＯＤ様活性値は非常に高く、またＩＣ５０の値よりも非常に高い値を示し、強力な抗酸化効果があることが確認できた。

（実施例２）抗酸化組成物の調製２
アムラー乾燥果実を４０メッシュ以下に粉砕し、その粉末８０ｇに、蒸留水２Ｌを加え、５５℃で３時間抽出した。その後、遠心分離（３０００ｒｐｍ、１０分間）し、その上清を濾過し、抽出物と残渣を分離した。その残渣に蒸留水２Ｌを加え、同条件でもう１回繰り返し抽出し、それぞれの抽出液をあわせて、減圧濃縮し、２００ｍＬとした。この濃縮液にエチルアルコールを加え、１Ｌになるように調製（最終エチルアルコール濃度８０％）した後、４℃で２４時間静置後、不溶性成分を沈殿させた。沈澱物を遠心分離（３０００ｒｐｍ、１０分間）で分離除去し、上清を減圧濃縮後、水１Ｌに再溶解し、濾過して不溶性成分除去後、濾液を凍結乾燥して本願発明の抗酸化組成物Ｂ１２．５ｇを得た。
同様にして、エチルアルコールの終濃度が２０％、４０％、６０％にして、本願発明の抗酸化組成物組成物Ｃ１３．６ｇ、Ｄ２０．８ｇ、Ｅ２１．２ｇを得た。

（実施例３）抗酸化組成物の調製３
アムラー乾燥果実を４０メッシュ以下に粉砕し、その粉末８０ｇに、蒸留水２Ｌを加え、５５℃で３時間抽出した。その後、遠心分離（３０００ｒｐｍ、１０分間）し、その上清を濾過し、抽出物と残渣を分離した。その残渣に蒸留水２Ｌを加え、同条件でもう１回繰り返し抽出し、それぞれの抽出液をあわせた後、凍結乾燥し、乾燥物約３７．０ｇを得た。その乾燥物３５ｇにエチルアルコール１Ｌを加え、４℃で２４時間静置後、不溶性成分を沈殿させた。沈澱物を遠心分離（３０００ｒｐｍ、１０分間）で分離除去し、上清を減圧濃縮後、水１Ｌに再溶解し、濾過して不溶性成分除去後、濾液を凍結乾燥して本願発明の抗酸化組成物Ｆ３．５ｇを得た。

（実施例４）抗酸化組成物の調製３
アムラー乾燥果実を４０メッシュ以下に粉砕し、その粉末８０ｇに、蒸留水２Ｌ加え、５５℃で３時間抽出した。その後、遠心分離（３０００ｒｐｍ、１０分間）し、その上清を濾過し、抽出物と残渣を分離した。その残渣に蒸留水２Ｌを入れ、同条件でもう１回繰り返し抽出し、それぞれの抽出液をあわせて、減圧濃縮し、２００ｍＬとした。この濃縮液に酢酸エチルを加え、５００ｍＬになるように調製（最終酢酸エチル濃度６０％）し、よく攪拌後、４℃で２４時間静置した後、酢酸エチル層を分離し、減圧濃縮後、濾液を凍結乾燥して本願発明の抗酸化組成物Ｇ１２．５ｇを得た。

（試験例３）ＥＳＲによる活性酸素阻害測定
実施例１で得られた抗酸化組成物Ａ、実施例２で得られた抗酸化組成物Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、実施例３で得られた抗酸化組成物Ｆ及び実施例４で得られた抗酸化組成物Ｇをそれぞれ蒸留水で１μｇ／ｍＬとなるように希釈し、試料を調整した。そして試験例１同様の方法で測定し、Ｏ^２−阻害率を求めた。また、エチルアルコールで溶解して３０ｍＭＤＰＰＨ（１，１ｄｅｐｈｅｎｙｌ−２−ｐｉｃｒｙｌｈｙｄｒａｚｙｌ）を調整した。また、新たに各抗酸化組成物をエチルアルコールで１μｇ／ｍＬとなるように希釈し、試料を調整した。ＤＰＰＨ溶液１００μＬと試料１００μＬをＥＳＲ用の試験管に加え、１０分間混合後、試験例１同様の条件でＥＳＲシグナルを定量し、ＤＰＰＨフリーラジカル阻害率を求めた。これらの結果を表３に示す。

表３に示すようにエチルアルコール濃度を変えた処理をしてもＯ^２−阻害効果には、大きな差は認められなかったが、ＤＰＰＨフリーラジカル阻害については、６０％以上のアルコール濃度で処理した抗酸化組成物において高い効果が認められた。

（試験例４）ＳＴＺ誘発糖尿病性腎症ラットの作製
ウィスター系雄性ラット（日本ＳＬＣ、８週齢）に２４．０％カゼイン、３．５％脂質、６０．５％糖質を含む試験飼料を与え、１週間予備飼育した後、ＳＴＺ（５０ｍｇ／ｋｇ）をクエン酸バッファーに溶解して腹腔内注射した。その後も試験が終了するまで継続して上記飼料を与えた。ＳＴＺを腹腔内注射したラットについて１週間後に尾静脈から採血し、血中グルコース値及び体重を測定して糖尿病性腎症誘発ラットの作製確認をした。

（試験例５）生体内抗酸化効果の確認
平均体重がほぼ等しくなるように１０匹／群となるようにＳＴＺ誘発糖尿病性腎症ラットを３群に分けた。
１）正常群：コントロールの為に、ＳＴＺを注射せずに、飼育した正常ラット群
２）対照群：０．５％生理食塩液経口投与
３）抗酸化組成物Ａ投与群：抗酸化組成物Ａ２０ｍｇ／試験開始時体重ｋｇ／日を経口投与
４）抗酸化組成物Ｇ投与群：抗酸化組成物Ｇ２０ｍｇ／試験開始時体重ｋｇ／日を経口投与
ＳＴＺ誘発糖尿病性腎症ラット群には、上記組成物を０．５％生理食塩液に懸濁して、２０日間毎日経口投与し、試験例４の試験飼料で飼育した。正常群は、試験飼料のみで飼育した。試験終了前に採血を行い、得られた血液より、定法に基づき、血清グルコシル化蛋白値、血清クレアチニン値及びＴＢＡ反応物質濃度を測定した。その結果を表４に示す。

＊ｐ＜０．０５対照に対して

生体内抗酸化効果
表４に示すようにＳＴＺ誘発糖尿病性腎症ラットにおいて、抗酸化組成物投与群は、対照群に比べてＴＢＡ反応物質濃度が低く、糖尿病性腎症発症によって引き起こされる過酸化脂質の増加を抗酸化組成物摂取によって抑制すると共に糖尿病性腎症を改善する効果も認められ、抗酸化組成物は、生体内抗酸化効果を発揮することが認められた。

（試験例６）食品の過酸化脂質阻害試験
ミンチ状にした鮭肉３ｇに実施例２で得られた抗酸化組成物Ｅ、実施例４で得られた抗酸化組成物Ｇ及びα−トコフェロールをエチルアルコールで０．１ｇ／１０ｍＬに調製したもの５０μＬ、またはエチルアルコール５０μＬ（対照）を加え、よく混合する。そして混合後と４℃で４日間保存後のものについて、定法によりこれらのＴＢＡ反応物質濃度を測定した。対照のＴＢＡ反応物質濃度を１００％とした時の抗酸化組成物を配合した時の割合を表５に示す。

表５に示すように抗酸化組成物を食品に配合することにより、一般に良く用いられているα−トコフェロールよりも食品の劣化の原因となる過酸化脂質の減少及び生成を抑制する高い抗酸化効果が認められた。

（実施例５）抗酸化組成物含有食品（錠菓）の調製
実施例１で得られた抗酸化組成物Ａ５ｇ、乳糖３０ｇ、ＤＨＡ含有粉末油脂（サンコートＤＹ−５；太陽化学株式会社製）１２ｇ、ショ糖脂肪酸エステル４ｇ、ヨーグルト香料４ｇを混合し、この混合物をロータリー式打錠機を用いて加圧成形して１錠が３００ｍｇの本願発明の抗酸化組成物含有飲食品（錠菓）を得た。

（実施例６）抗酸化組成物含有飲料の調製
実施例２で得られた抗酸化組成物Ｂ５ｇ及び、１／５濃縮グレープフルーツ透明果汁２．１ｇ、エリスリトール３０ｇ、クエン酸結晶２．５ｇ、クエン酸三ナトリウム０．５ｇ、Ｌ−アスコルビン酸０．５ｇ、乳酸カルシウム１．９３ｇ、ＣＣＰ０．１５ｇ、グレープフルーツ香料１．０を水に混合溶解して、全量を１０００ｍｌとし、それを１００ｍｌの瓶に充填し、キャップで密栓した後、９０℃、３０分間加熱殺菌をして、本願発明の抗酸化組成物含有飲食品を得た。

（実施例７）抗酸化組成物含有飲料（野菜果汁混合飲料）の調製
実施例２で得られた抗酸化組成物Ｃ１ｇ及び、グアーガム分解物（サンファイバーＲ；太陽化学株式会社製）３ｇを市販の野菜果汁混合飲料１００ｍｌに添加混合溶解して、本願発明の抗酸化組成物含有飲食品（野菜果汁混合飲料）を得た。

（実施例８）抗酸化組成物含有クッキーの調製
実施例２で得られた抗酸化組成物Ｄ４ｇ及び、市販のケーキミックス粉２００ｇを容器に入れた後、バター３５ｇを入れ、木杓子で混ぜ合わせた。それに溶き卵２５ｇを加えて、なめらかな生地になるまで良く練った。小麦粉を振った台の上に生地を取り出し、さらに小麦粉を振って麺棒で５ｍｍの厚さに伸ばし、丸型で抜き、それを１７０℃のオーブンで１０分間焼いて、１個約５ｇの本願発明の抗酸化組成物含有クッキーを得た。

（実施例９）抗酸化組成物含有ヨーグルトの調製
実施例２で抗酸化組成物Ｅ１０ｇ、市販の脱脂乳（明治乳業社製。蛋白質含量３４％）０．９５ｋｇ、及び市販の無塩バター（雪印乳業社製）０．３５ｋｇを温水８Ｌに溶解し、均質化し、全量を１０Ｌに調整した。次いで、９０℃で１５分間加熱殺菌し、冷却し、市販の乳酸菌スターター（ハンゼン社製）０．０３ｋｇ（ストレプトコッカス・サーモフィラス０．０２ｋｇ及びラクトバシラス・ブルガリクス０．０１ｋｇ）を接種し、均一に混合し、１００ｍｌの容器に分注，充填し、密封し、３７℃で２０時間発酵させた後、冷却し、本願発明の抗酸化組成物含有ヨーグルトを得た。

（実施例１０）抗酸化組成物含有経口流動食の調製
カゼインナトリウム（ＤＭＶ社製）１００ｇ、卵白酵素分解物（太陽化学社製）８５ｇ、デキストリン（松谷化学社製）２００ｇ水２Ｌに溶解し、水相をタンク内に調製した。これとは別に、ＭＣＴ（花王社製）９０ｇ、パーム油（不二製油社製）３５ｇ、サフラワー油（太陽油脂社製）３５ｇ、レシチン（太陽化学社製）１．４ｇ、消泡剤（太陽化学社製）２ｇを混合溶解し、油相を調製した。タンク内の水相に油相を添加し、攪拌して混合した後、７０℃に加温し、更に、ホモゲナイザーにより１４．７ＭＰａの圧力で均質化した。次いで、９０℃で１０分間殺菌した後、濃縮し、噴霧乾燥して、中間製品粉末約５１０ｇを調製した。この中間製品粉末５００ｇに実施例２で得られた抗酸化組成物Ｃ１０ｇ、デキストリン（松谷化学社製）３９０ｇ、グアーガム分解物（サンファイバーＲ；太陽化学社製）４５ｇ、少量のビタミンとミネラルおよび粉末香料を添加し、均一に混合して、抗酸化組成物を含有する経口流動食約９５０ｇを得た。

（実施例１１）抗酸化組成物含有錠剤の調製
実施例１で得られた抗酸化組成物Ａ２０ｇ、結晶セルロース１０ｇ、トウモロコシデンプン２７．５ｇ、乳糖６５ｇ、ヒドロキシプロピルセルロース６．５ｇを混合し、顆粒化した。この顆粒化物にステアリン酸マグネシウム２．０ｇを加え、均一に混合し、この混合物をロータリー式打錠機を用いて加圧成形して一錠が１３０ｍｇの本願発明の抗酸化組成物含有錠剤を得た。

（実施例１２）抗酸化組成物組成物含有カプセルの調製
実施例４で得られた抗酸化組成物組成物Ｇ１０ｇ、乳糖９９ｇ、コーンスターチ９．４ｇ、及びポリビニルピロリドン１．６ｇを均一混合しゼラチンカプセルにこの混合物５００ｍｇを充填して抗酸化組成物組成物含有カプセルを得た。

本発明の実施態様ならびに目的生成物を挙げれば以下の通りである。
（１）アムラー又はその抽出物を含有することを特徴とする抗酸化組成物。
（２）アムラーの抽出物が、アムラー果実又は果汁から水、塩基、酸、親水性溶媒のいずれかにより抽出されていることを特徴とする前記（１）記載の抗酸化組成物。
（３）アムラーの抽出物が、アムラー果実又は果汁から水により抽出されていることを特徴とする前記（１）又は（２）記載の抗酸化組成物。
（４）親水性溶媒がメチルアルコール、エチルアルコール、ｎ−プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブチルアルコールの群より選ばれる１種類以上の低級アルコールであることを特徴とする前記（１）又は（２）記載の抗酸化組成物。
（５）アムラー果実又は果汁の抽出物、又は果汁から、有機溶媒により分画されていることを特徴とする前記（１）〜（４）いずれか記載の抗酸化組成物。
（６）有機溶媒がメチルアルコール、エチルアルコール、ｎ−プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブチルアルコール、酢酸エチル、酢酸ブチル、ジエチルエーテル、メチルエーテル、メチルイソブチルケトン、ヘキサン、又はクロロホルムからなる群より選ばれる少なくともの１種類であることを特徴とする前記（５）記載の抗酸化組成物抗酸化組成物。
（７）アムラー果実又は果汁の抽出物、又は果汁から、エチルアルコールにより抽出し、エチルアルコール可溶分画を特徴とする前記（１）〜（６）いずれか記載の抗酸化組成物。
（８）エチルアルコールで分画する際のエチルアルコール濃度が、終濃度として１０〜１００％であり、そのエチルアルコール可溶化成分であることを特徴とする前記（７）記載の抗酸化組成物。
（９）エチルアルコールで分画する際のエチルアルコール濃度が、終濃度として６０〜１００％であり、そのエチルアルコール可溶化成分であることを特徴とする前記（７）又は（８）記載の抗酸化組成物。
（１０）アムラー果実又は果汁の抽出物、又は果汁から、酢酸エチルにより抽出し、酢酸エチル可溶分画を特徴とする前記（１）〜（５）いずれか記載の抗酸化組成物。
（１１）酢酸エチルで分画する際の酢酸エチル濃度が、終濃度として２０〜８０％であり、その酢酸エチル可溶化成分であることを特徴とする前記（１０）記載の抗酸化組成物。
（１２）酢酸エチルで分画する際の酢酸エチル濃度が、終濃度として４０〜８０％であり、その酢酸エチル可溶化成分であることを特徴とする前記（１０）又は（１１）記載の抗酸化組成物。
（１３）前記（１）〜（１２）いずれか記載の抗酸化組成物を含有することを特徴とする飲食品。
（１４）前記（１）〜（１２）いずれか記載の抗酸化組成物を含有することを特徴とする医薬部外品。
（１５）前記（１）〜（１２）いずれか記載の抗酸化組成物を含有することを特徴とする医薬品。
（１６）前記（１）〜（１２）いずれか記載の抗酸化組成物を含有することを特徴とする飼料。

本発明で得られたアムラー抽出物を含有する抗酸化組成物は、ＥＳＲ法による試験で活性酸素消去能、ＳＯＤ様活性値やＤＰＰＨフリーラジカル消去能が高く、またＳＴＺを投与して誘発させた糖尿病性腎症ラットへの抗酸化組成物投与試験及び魚肉への添加試験により、過酸化脂質であるＴＢＡＲＳの減少及び生成抑制を示し、生体内並びに食品への添加によっても高い抗酸化効果があることが確認でき、各種飲食品、医薬部外品及び医薬品等に利用して、老化、脳卒中、自己免疫疾患、ガン、白内障、脂肪肝、心筋梗塞、虚血性心疾患、アルツハイマー症候群、糖尿病、糖尿病性腎症、動脈硬化、アレルギー、花粉症のような様々な疾病やシミ・ソバカス等の異常な色素沈着の進行を抑制並びに食品の劣化を抑制することができる。

Claims

アムラー又はその抽出物を含有することを特徴とする血清グルコシル化蛋白値低減剤。
アムラー抽出物が、アムラー果実又は果汁から、水、塩基、酸、親水性溶媒、アセトンのいずれかにより抽出されていることを特徴とする請求項１記載の血清グルコシル化蛋白値低減剤。
親水性溶媒がメチルアルコール、エチルアルコール、ｎ−プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブチルアルコールの群より選ばれる１種類以上の低級アルコールであることを特徴とする請求項１又は２記載の血清グルコシル化蛋白値低減剤。
アムラー又はその抽出物が、有機溶媒により分画されていることを特徴とする請求項１〜３いずれか記載の血清グルコシル化蛋白値低減剤。
有機溶媒がメチルアルコール、エチルアルコール、ｎ−プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブチルアルコール、酢酸エチル、酢酸ブチル、ジエチルエーテル、メチルエーテル、メチルイソブチルケトン、ヘキサン、又はコロロホルムからなる群より選ばれる少なくとも１種類であることを特徴とする請求項４記載の血清グルコシル化蛋白値低減剤。