JP5508656B2

JP5508656B2 - 最終糖化産物生成阻害組成物

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Publication number: JP5508656B2
Application number: JP2004209331A
Authority: JP
Inventors: 騰坂口; プラジュムナラオテータム; 隆子横澤
Original assignee: Taiyo Kagaku KK
Current assignee: Taiyo Kagaku KK
Priority date: 2004-07-16
Filing date: 2004-07-16
Publication date: 2014-06-04
Anticipated expiration: 2024-07-16
Also published as: JP2006028090A

Description

本発明は、アムラーの果実、果汁又はそれらの抽出物を含有することを特徴とする最終糖化産物生成阻害組成物及びそれを含有する飲食品及び医薬品に関する。

日本は、２1世紀の初頭には６５歳以上の人口が国民の４分の１以上を占めるという本格的な高齢化社会を迎える。これに比例して加齢による糖尿病合併症、動脈硬化症、アルツハイマー病等の各種疾患が急激に増加している。
最終糖化産物（ＡｄｖａｎｃｅｄＧｌｙｃａｔｉｏｎＥｎｄｐｒｏｄｕｃｔｓ：ＡＧＥ）は、グルコースなどの還元糖とタンパク質のアミノ基とが非酵素的に反応し、いくつかの化学反応を経て形成される不可逆な高分子架橋物質をいう。調理時の褐変反応として知られているメイラード反応からスタートし、いくつかの可逆的な化学反応を経た後に不可逆的に高分子化したものがＡＧＥである。生体内ではこれらの反応は、長期間に渡り、ゆっくりとした化学反応を経て生成される。
最近、生体内における複雑なＡＧＥ形成メカニズムが解明され、ＡＧＥは、これまで生体内においてグルコースに由来する経路のみから生成されると考えられてきたが、メイラード反応中間体や糖の自動酸化分解物、又は糖代謝中間体などからも生成することが明らかになった。
ＡＧＥの蓄積およびＡＧＥレセプター（ＲｅｃｅｐｔｏｒｆｏｒＡｄｖａｎｃｅｄＧｌｙｃａｔｉｏｎＥｎｄｐｒｏｄｕｃｔｓ：ＲＡＧＥ）が糖尿病合併症のみならず、動脈硬化症、アルツハイマー病、老化、炎症反応等、多種の疾患に関与していることが明らになってきている。糖尿病合併症との関連では、生成したＡＧＥは血管内皮細胞にある特異的なRＡＧＥに結合して糖尿病血管症の発症に寄与しているとの報告がある。動脈硬化症では、ＡＧＥを生成する過程で生じた悪玉の活性酸素は血管内皮を障害するが、さらに、このメイラード反応は血中の脂質の輸送蛋白であるリポ蛋白にも起こり、悪玉コレステロールが糖化されたり、ＡＧＥと結合する。これらの変性した悪玉コレステロールは代謝されにくいため血中に長くとどまり、動脈の内膜に蓄積して掃除役のマクロファージに取り込まれて泡沫細胞となり、アテロームの形成を促進し動脈硬化を促進する。アルツハイマー病では、ＡＧＥが老人斑と神経原線維変化に沈着していること、また、ＡＧＥ受容体の一つであるＲＡＧＥがアミロイドβ蛋白質による神経細胞毒性を媒介しうることなどの報告がある。老化では、老化における特徴的な現象である心臓血管系の弾性喪失の現象は糖が非酵素的に反応して寿命の長いタンパク（コラーゲンやＡＧＥ）になってしまうためであり、このＡＧＥを分解する薬剤を老犬に投与した試験で、老化の指標である左心室の剛度が改善されたとの報告がある。炎症反応では、慢性日光障害として日光弾性線維症にＡＧＥが局在化することが免疫組織学的に確認されている。

糖尿病合併症の治療は、基本的には血糖コントロール又はタンパク制限食を基本とした糖尿病治療が行われる。血糖コントロールには食事療法、運動療法及び薬物療法があるが、薬物療法には、インスリン抵抗性を改善するメルホルミンやピログリダゾンがあり、インスリン分泌改善薬としてαグルコシダーゼ阻害薬、インスリン及びスルホニル尿素薬がある、このような治療は細心の注意を払って患者を監視する必要があり、費用が係り、しばしば有害な副作用を伴う。動脈硬化治療薬には、高脂血症を防ぐ脂質代謝改善薬（プラバスタチン、シンバスタチン、フルバスタチン、アトルバスタチン、プロブコール）、高血圧での降圧薬（アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤やアンジオテンシン１受容体拮抗薬）、粥状動脈硬化を抑えたり、ＬＤＬコレステロールを下げてＨＤＬコレステロールを増やすカルシウム拮抗剤（ヘルベッサーＲ、バイミカード、ノルバスク、ヒポカ等）等が使われる。アルツハイマー病治療薬として抗精神病薬（ハロペリドールなど）、アセチルコリンエステラーゼ阻害薬（塩酸ドネペジル、タクリン）等がある。老化の治療薬に関しては、まだ、痴呆症関係のものがあるだけであり、皮膚の老化及び皮膚炎症治療としては、レチノイン酸、ビタミンＣ、トラネキサム酸などがある。
ＡＧＥ形成阻害剤としてアミノグアニジン、ＯＰＢ−９１９５、ＡＬＴ−７１１などが開発・治験中であるが、製品化にはまだかなりの時間が必要である。

このように糖尿病合併症、動脈硬化症、アルツハイマー病、老化、炎症反応に対して、それぞれに適した医薬品が使用されてはいるものの、ＡＧＥ生成阻害剤のような医薬品はまだ開発段階である。最近では、副作用が伴うことが多い合成医薬品による治療よりは食生活を通じて疾患を予防、抑制、改善及び治療できるな機能を持った成分又は食品成分に対する研究も注目されるようになってきている。
最終糖化産物（ＡＧＥ）生成阻害効果に関する食品成分としては、茶抽出物及びエピガロカテキンガレート等の茶中の成分（例えば、非特許文献１参照。）が報告されているだけである。食品成分以外では、化学合成可能なオリゴペプチド（例えば、特許文献1参照。）、ピリジウム系の化合物（例えば、特許文献２、３参照。）、ペニシラミン類および他のα−アミノ−β, β−メルカプト−β, β−ジメチルエタン化合物（例えば、特許文献４参照。）ＡＧＥ生成阻害関連阻害剤としてのプラスミノーゲンアクチベーターインヒビター１産生抑制剤（例えば、特許文献５参照。）が報告されている。

Ｊ．Ａｇｒｉｃ．ＦｏｏｄＣｈｅｍ．，Ｖｏｌ. ５０，ｐ．２４１８-２４２２，２００２特開２００３−２３０３８２号公報（第２-４頁）特開２００２−２７５１５８号公報（第２−１７頁）特表２００３−５１１３６９号公報（第２−１７頁）特表２００３−５３０４３４号公報（第１−２頁）特開２０００−１１９１８３号公報（第１−２頁）

本発明の課題は、幅広い飲食品及び医薬品に使用可能な糖尿病合併症、動脈硬化症、アルツハイマー病、老化、炎症反応等、多種の疾患に関与する最終糖化産物生成を阻害する効果のある組成物及びそれを含有する飲食品及び医薬品を提供することにある。

本発明者らは様々な天然植物を利用して糖尿病合併症、動脈硬化症、アルツハイマー病、老化、炎症反応等、多種の疾患に関与する最終糖化産物生成を阻害する効果のある組成物を捜す目的で、多角的に研究検討した結果、アムラーの果実、果汁又はそれらの抽出物に優れた最終糖化産物生成の阻害する効果があることを見出し、本発明を完成させた。

本発明で得られたアムラーの果実、果汁又はそれらの抽出物を含有する最終糖化産物生成阻害組成物は、牛血清アルブミン、グルコース及びフラクトースの反応によって生成される最終糖化産物の生成を阻害試験結果から、最終糖化産物の生成を阻害する効果が高いことがわかった。
特にアムラーは、昔から人間が日常食生活に使用してきた天然植物なので、従来使用していた薬剤とは違い、副作用が無く安全である。
本発明はアムラーの果実、果汁又はそれらの抽出物を含有する最終糖化産物生成阻害組成物を各種飲食品及び医薬品等に利用して、糖尿病合併症、動脈硬化症、アルツハイマー病、老化、炎症反応等、多種の疾患に関与する最終糖化産物生成を阻害することによって糖尿病合併症、動脈硬化症、アルツハイマー病、老化、炎症反応の予防、改善、治療ができる。

本願発明に用いるアムラーとは、学名：エンブリカ・オフィシナリス（Ｅｍｂｌｉｃａｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）又は、フィランサス・エンブリカ（Ｐｈｙｌｌａｎｔｈｕｓｅｍｂｌｉｃａ）といい、トウダイグサ科コミカンソウ属に属する落葉の亜高木であり、インドからマレーシア地域及び中国南部にかけて分布しており、インドが原産地と考えられている。また、各地方又は言語により、各々固有の名称があり、余柑子、油甘、奄摩勒、エンブリック・ミロバラン、アーマラキー、マラッカノキ、マラッカツリー、インディアングーズベリー、アロンラ、アミラ、アミラキ、アミラキャトラ、ネリカイ、ネルリ、タシャ、カユラカ、ケムラカ、ナックホンポン等とも称されている。

本発明において、アムラーの部位としては、果実が用いられる。その形態は、特に限定するものではなく、未熟果実、完熟果実、乾燥果実、果汁、果汁粉末等のいずれでも良い。
果汁又は果汁粉末の場合は、そのままでも使用できるが、生果実又は乾燥果実等、水不溶性成分を含む物を使用する場合は、抽出により、水不溶性成分が除去されていることが効果を上げる点好ましい。
抽出の際、生果実を使用する場合は、種子を除去した後、水を添加又は無添加で、抽出効率を高めるためにミキサー等により破砕、均質化したものを用いることが好ましい。
乾燥果実を使用する場合は、抽出効率を高めるために４０メッシュ以下の粒度になるように粉砕されていることが好ましい。

抽出方法は、抽出溶媒、抽出温度等、特に限定されるものではなく、抽出溶媒としては、水、塩基、酸、親水性溶媒、アセトンを使うことができる。親水性溶媒はメチルアルコール、エチルアルコール、ｎ−プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブチルアルコールの低級アルコール群より選ばれる１種類以上が操作性、抽出効率の点から好ましい。特に好ましくは、水、塩基、酸のいずれかである。
酸又は塩基を抽出溶媒に使用する場合、抽出物を中和させることが好ましい。中和反応によって生成された塩は、透析法やゲル濾過等、公知の方法により、取り除くことができる。水を抽出溶媒として用いた場合には、上記のような中和反応は必要なく、生成された塩を取り除く必要もないため、水を用いることが更に好ましい。
この時使用する酸としては、特に限定するものではなく、大部分の酸を使うことができるが、好ましくは、入手しやすい点及び操作性の点により塩酸、硫酸より選ばれる１種又は両者の併用である。
また、塩基としては、特に限定するものではなく、大部分の塩基を使うことができるが、好ましくは、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムより選ばれる１種又は両者の併用である。
抽出に使用される酸又は塩基の濃度は、抽出物を酵素処理する前であっても後であっても特に限定するものではなく、酸又は塩基の強さによって変化するが、操作性及び抽出効率の点より、０．０１〜０．５モルの濃度を使用することが好ましい。

上記の抽出において、酵素処理することによって収率や風味の改善ができるので、酵素処理をすることは好ましい。酵素処理する時のｐＨは使用する酵素の至摘ｐＨ及びｐＨ安定性を指標に適宜選択できる。また、処理する時の温度に関しても酵素の至摘温度及び温度安定性を指標に適宜選択できる。本発明の酵素処理に使用する酵素は限定するものではないが、食品工業用に用いるものであれば、特に限定するものではなく、ペクチナーゼ、セルラーゼ、へミセルラーゼ、α−アミラーゼ、グルコアミラーゼ、マルトトリオヒドロラーゼ、β−アミラーゼ、トランスグルコシダーゼ、リパーゼ、プロテアーゼ、グルタミナーゼ、ヌクレアーゼ、デアミナーゼ、デキストラナーゼ、グルコースオキシダーゼ、ラクターゼ、タンナーゼ、クロロゲン酸エステラーゼ、プルラナーゼ、トリプシン、パパイン、レンネット、ホスホリパーゼＡ２等より選ばれる１種類または２種類を併用することができる。好ましくは、ぺクチナーゼ、セルラーゼ、ヘミセルラーゼ、プロテアーゼ、クロロゲン酸エステラーゼ、タンナーゼより選ばれる１種類または２種類を併用することができる。酵素の使用量は特に限定するものではないが、酵素の種類や反応条件によっても異なるが、アムラに対して０．０５〜２％使用するのが好ましい。更に、上記の抽出において、抽出残渣に対して再度抽出工程を１回又はそれ以上繰り返すことで、抽出率が向上し、収率が向上するので、好ましい。この場合の抽出に用いる溶媒は、同じでも良いし、別の溶媒を用いても良い。

上記の果汁又は抽出物は、そのままでも使用できるが、濾過、遠心分離及び分留により、不溶性物質及び溶媒を取り除くことにより、最終糖化産物生成を阻害する効果が高くなり、応用範囲が広がるので好ましい。
不溶性物質及び溶媒を取り除いた後、果汁又は抽出液をそのまま又は濃縮した後に親水性溶媒又は疎水性溶媒用いて分配を行い、それぞれの溶媒可溶画分を得る。これら溶媒可溶画分は、更に最終糖化産物生成阻害効果が高くなるので好ましい。親水性溶媒としてはメチルアルコール、エチルアルコール、ｎ−プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブチルアルコールの低級アルコールが使用でき、疎水性溶媒としては酢酸エチル、酢酸ブチル、ジエチルエーテル、メチルエーテル、メチルイソブチルケトン、ヘキサン、アセトン又はクロロホルムが使用できる。また可溶画分の純度を上げる為には、他の疎水性溶媒による分配を組み合わせることもできる。これら溶媒の濃度としては、特に限定するものではないが、収率及び効果の点より、終濃度として３０〜９０％が好ましく、５０〜８０％が更に好ましい。
さらに純度を高める為に、フェノール系、スチレン系、アクリル酸系、エポキシアミン系、ピリジン系、メタクリル系など母体とした疎水性樹脂を用いることも可能である。その場合、樹脂吸着後の溶離液としては、メチルアルコール、エチルアルコール、ｎ−プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブチルアルコールなどの低級アルコール及びアセトンを単独又は水溶液として使用できる。
抽出物及び画分はそのままでの使用も可能だが、必要であれば噴霧乾燥や凍結乾燥等の手段により乾燥粉末化させて使用することも可能である。

本願発明において最終糖化産物生成阻害効果は、例えば、牛血清アルブミン、グルコース及びフラクトースの反応によって生成される最終糖化産物の生成量を測定する方法であり、これらの生成量の低下割合より、最終糖化産物生成阻害効果を確認することができる。

本願発明の最終糖化産物生成阻害組成物は、飲食品、医薬品、飼料等に応用でき、好ましくは、人が手軽に摂食できる飲食品又は医薬品が好ましい。
本願発明における飲食品とは溶液、懸濁物、粉末、固体成形物等経口摂取可能な形態であれば良く特に限定するものではない。より具体的には、即席麺、レトルト食品、缶詰、電子レンジ食品、即席スープ・みそ汁類、フリーズドライ食品等の即席食品類、清涼飲料、果汁飲料、野菜飲料、豆乳飲料、コーヒー飲料、茶飲料、粉末飲料、濃縮飲料、栄養飲料、アルコール飲料等の飲料類、パン、パスタ、麺、ケーキミックス、から揚げ粉、パン粉等の小麦粉製品、飴、キャラメル、チューイングガム、チョコレート、クッキー、ビスケット、ケーキ、パイ、スナック、クラッカー、和菓子、デザート菓子等の菓子類、ソース、トマト加工調味料、風味調味料、調理ミックス、たれ類、ドレッシング類、つゆ類、カレー・シチューの素類等の調味料、加工油脂、バター、マーガリン、マヨネーズ等の油脂類、乳飲料、ヨーグルト類、乳酸菌飲料、アイスクリーム類、クリーム類等の乳製品、冷凍食品、魚肉ハム・ソーセージ、水産練り製品等の水産加工品、畜肉ハム・ソーセージ等の畜産加工品、農産缶詰、ジャム・マーマレード類、漬け物、煮豆、シリアル等の農産加工品、栄養食品、錠剤、カプセル等が例示される。

本願発明の最終糖化産物生成阻害組成物の飲食品としての摂取量は、本発明の病気の状態、病人の体重、年齢、体質、体調等によって調整されるべきであるが、一般に１日あたり、最終糖化産物生成阻害組成物として０．０５ｇ〜２０ｇ、好ましくは０．１ｇ〜５ｇの範囲で適宜選択することができる。これを病気の状態や食品等の形態によって１日１ないし数回にわけて摂取することができる。

本願発明において、最終糖化産物生成阻害組成物又は、飲食品等に加工する際に、各種栄養成分を強化することができる。
強化できる栄養成分としては、ビタミンＡ、ビタミンＢ_１、ビタミンＢ_２、ビタミンＢ_６、ビタミンＢ_１２、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ナイアシン（ニコチン酸）、パントテン酸、葉酸等のビタミン類、リジン、スレオニン、トリプトファン等の必須アミノ酸類や、カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛、銅等のミネラル類及び、例えば、α−リノレン酸、ＥＰＡ、ＤＨＡ、月見草油、オクタコサノール、カゼインホスホペプチド（ＣＰＰ）、カゼインカルシウムペプチド（ＣＣＰ）、水溶性食物繊維、不溶性食物繊維、オリゴ糖等の人の健康に寄与する物質類、その他の食品や食品添加物として認可されている有用物質の１種又は２種以上が使用できる。

本願発明における医薬品とは、経口または非経口投与に適した賦形剤、その他の添加剤を用いて、常法に従って、経口製剤または注射剤として調製することができる。好ましいのは、経口製剤であり、最も好ましいのは、容易に服用でき且つ保存、持ち運びに便利な経口固形製剤である。
経口固形製剤としては、錠剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、カプセル剤、丸剤、徐放剤等が用いられる。このような固形製剤においては、適宜の薬理学的に許容され得る坦体、賦形剤（例えばデンプン、乳糖、白糖、炭酸カルシウム、リン酸カルシウムなど）、結合剤（例えばデンプン、アラビアゴム、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、結晶セルロース、アルギン酸、ゼラチン、ポリビニルピリドンなど）、滑沢剤（例えばステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウムなど）、崩壊剤（例えばカルボキシメチルセルロース、タルクなど）、などと混合し、常法により錠剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、カプセル剤、丸剤、徐放剤等を調整することができる。経口液状製剤は、製薬学的に許容される乳濁剤、溶液剤、懸濁剤、シロップ剤、エリキシル剤等を含み、一般的に用いられる不活性な希釈剤、例えば精製水、エタノールを含む。この組成物は不活性な希釈剤以外に湿潤剤、懸濁剤のような補助剤、甘味剤、風味剤、芳香剤、防腐剤を含有していてもよい。
非経口投与しての注射剤としては、無菌の水性又は非水性の溶液剤、懸濁剤、乳濁剤を包含する。水性の溶液剤、懸濁剤の希釈剤としては、例えば注射用蒸留水及び生理食塩水が含まれる。非水溶性の溶液剤、懸濁剤の希釈剤としては、例えばプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油のような植物油、エタノールのようなアルコール類、ポリソルベート８０等がある。このような組成物は、さらに防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、安定化剤（例えばラクトース）、溶解補助剤（例えば、グルタミン酸、アスパラギン酸）のような補助剤を含んでもよい。これらは例えばバクテリア保管フィルターを通す濾過、殺菌剤の配合又は照射によって無菌化される。これらはまた無菌の固体組成物を製造し、使用前に無菌水又は無菌の注射用溶媒に溶解して使用することもできる。

尚、本発明の薬剤はインスリン製剤、スルホニル尿素系薬剤、スルホンアミド系薬剤、ビグアナイド系薬剤、アルドース還元酵素阻害剤、α−グルコシダーゼ阻害剤、インスリン抵抗性改善薬、その他血糖降下薬などの糖尿病の治療に用いる薬剤、プロスタノイド関連薬、ＡＣＥ阻害剤、アンジオテンシンＩＩ受容体拮抗剤、トロンボキサン合成酵素阻害剤、ビタミンＢ製剤、漢方製剤、カルシウム拮抗剤、利尿剤等の高血圧の治療に用いる降圧薬治剤、高脂血症薬としての脂質代謝改善薬やアルツハイマー病治療薬としての抗精神病薬、アセチルコリンエステラーゼ阻害薬等と同時にまたは時間をおいて併用することができる。糖尿病治療薬としてはインスリン、中性インスリン、インスリン亜鉛水性懸濁、イソフェンインスリン水性懸濁、プロタミンインスリン亜鉛水性懸濁、アセトヘキサミド、クロルプロパミド、グリクロピラミド、トラザミド、トルブタミド、グリブゾール、塩酸メトホルミン、塩酸ブホルミン、エパルレスタット、アカルボース、トログリタゾン、ピオグリタゾン、ナテグリニド、アルプロスタジルアルファデックス、リポＰＧＥ_１、リマプロストアルファデックス、高血圧治療薬としてはレニベース、ロンゲス、テノーミン、インデラールマレイン酸エナラプリル、ブロプレス、ニューロタン、アダラート、アムロジン、カルスロットなど、脂質代謝改善薬としてはプラバスタチン、シンバスタチン、フルバスタチン、アトルバスタチン、コレスチラミン、コレスチミド、シンレスタール、ロレルコ挙げられる。アルツハイマー病治療薬としてはハロペリドール、塩酸ドネペジル、タクリン、タルサクリジン，コリン、ネフィラセタム，アセチルコリンなどが挙げられる。

以下本発明を、実施例にて詳細に説明するが、次の実施例は、本発明の範囲を限定するものではない。

（実施例１）最終糖化産物生成阻害組成物の調製１
アムラー乾燥果実を４０メッシュ以下に粉砕し、その粉末８０ｇに、蒸留水２Ｌを加え、５５℃で３時間抽出した。その後、遠心分離（３０００ｒｐｍ、１０分間）し、その上清を濾過し、抽出物と残渣を分離した。その残渣に蒸留水２Ｌを加え、同条件でもう１回繰り返し抽出し、それぞれの抽出液をあわせ、減圧濃縮後、凍結乾燥し、本願発明の最終糖化産物生成阻害組成物Ａ３５．０ｇを得た。収率は４３．８％であった。

（実施例２）最終糖化産物生成阻害組成物の調製２
アムラー乾燥果実を４０メッシュ以下に粉砕し、その粉末８０ｇに、蒸留水２Ｌを加え、５５℃で３時間抽出した。その後、遠心分離（３０００ｒｐｍ、１０分間）し、その上清を濾過し、抽出物と残渣を分離した。その残渣に蒸留水２Ｌを加え、同条件でもう１回繰り返し抽出し、それぞれの抽出液をあわせて、減圧濃縮し、２００ｍＬとした。この濃縮液にエタノールを加え、１Ｌになるように調製（最終エタノール濃度８０％）した後、４℃で２４時間静置後、不溶性成分を沈殿させた。沈澱物を遠心分離で分離除去し、上清を減圧濃縮後、水１Ｌに再溶解し、濾過して不溶性成分除去後、濾液を減圧濃縮後、凍結乾燥して本願発明の最終糖化産物生成阻害組成物Ｂ１２．５ｇを得た。
同様にして、エタノールの終濃度が２０％、４０％、６０％にして、本願発明の最終糖化産物生成阻害組成物Ｃ１３．６ｇ，Ｄ２０．８ｇ，Ｅ２１．２gを得た。

（実施例３）最終糖化産物生成阻害組成物の調製３
アムラー乾燥果実を４０メッシュ以下に粉砕し、その粉末８０ｇに、蒸溜水２Ｌを入れ、５５℃で３時間抽出した。その後、遠心分離し、その上清を濾過し、抽出物と残渣を分離した。その残渣に蒸留水２Ｌを入れ、同条件でもう１回繰り返し抽出し、それぞれの抽出液をあわせて、減圧濃縮し、２００ｍＬとした。この濃縮液に酢酸エチルを加え、５００ｍＬになるように調製（最終酢酸エチル濃度６０％）し、よく攪拌後、４℃で２４時間静置した後、酢酸エチル層を分離し、減圧濃縮後、濾液を凍結乾燥して本願発明の最終糖化産物生成阻害組成物F１２．５ｇを得た。

（実施例４）最終糖化産物生成阻害組成物の調製４
アムラー乾燥果実を４０メッシュ以下に粉砕し、その粉末１００ｇに、蒸留水２Ｌを加え、さらにペクチナーゼ０．１ｇ及びタンナーゼ０．１ｇを加えて、５５℃で２時間抽出した。その後、９０℃で３０分間酵素失活させた。その後、遠心分離（３０００ｒｐｍ、１０分間）し、その上清を濾過し、濾液をスプレードライし、本願発明の最終糖化産物生成阻害組成物Ｇ４５ｇを得た。

（比較例１）茶抽出物の調製
かぶせ伊勢茶（四日市産）５０ｇに７０℃の温水１Ｌを加え、５分間振とうして抽出した。その後、遠心分離し、その上清を濾過し、濾液を凍結乾燥して比較試料の茶抽出物１８．４ｇを得た。

（試験例１）最終糖化産物生成阻害効果の確認
牛血清アルブミン（和光純薬社製）１０ｍｇ／ｍＬを５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）に溶解し、さらに０．０２％アジ化ナトリウム、グルコース２５ｍＭ及びフラクトース２５ｍＭを加えて、反応溶液を調整した。この反応溶液にそれぞれ実施例１の最終糖化産物生成阻害組成物Ａ、実施例２の最終糖化産物生成阻害組成物Ｂ、実施例３の最終糖化産物生成阻害組成物Ｆ及び比較例１の茶抽出物を加え、３７℃下で２週間インキュベートした。対照は反応溶液に何も加えないものとした。そして、３５０ｎｍの励起波長と４５０ｎｍの放射波長を持つ蛍光スペクトロメーターで最終糖化産物の蛍光強度を測定した。最終糖化産物生成阻害率は下記の式に基づいて計算した。
最終糖化産物生成阻害率（％）
＝（２週間インキュベート後の最終糖化産物生成阻害組成物を添加した反応溶液の蛍光強度）/（２週間インキュベート後の反応溶液の蛍光強度）×１００
その結果を図１に示す

最終糖化産物生成阻害効果
図１に示すように本発明の最終糖化産物生成阻害組成物は、比較例の茶抽出物に比べて有意に高い最終糖化産物生成阻害率を示すことが認められ、最終糖化産物生成阻害に効果があることが示唆された。

（実施例４）最終糖化産物生成阻害組成物含有食品（錠菓）の調製
実施例1で得られた最終糖化産物生成阻害組成物Ａ５０ｇ、乳糖３０ｇ、ＤＨＡ含有粉末油脂（サンコートＤＹ−５；太陽化学株式会社製）１２ｇ、ショ糖脂肪酸エステル４ｇ、ヨーグルト香料４ｇを混合し、この混合物をロータリー式打錠機を用いて加圧成形して１錠が３００ｍｇの本願発明の最終糖化産物生成阻害組成物含有飲食品（錠菓）を得た。

（実施例５）最終糖化産物生成阻害組成物含有飲料の調製
実施例２で得られた最終糖化産物生成阻害組成物Ｂ５ｇ及び、１／５濃縮グレープフルーツ透明果汁２．１ｇ、エリスリトール３０ｇ、クエン酸結晶２．５ｇ、クエン酸三ナトリウム０．５ｇ、Ｌ−アスコルビン酸０．５ｇ、乳酸カルシウム１．９３ｇ、ＣＣＰ０．１５ｇ、グレープフルーツ香料１．０を水に混合溶解して、全量を１０００ｍｌとし、それを１００ｍＬの瓶に充填し、キャップで密栓した後、９０℃、３０分間加熱殺菌をして、本願発明の最終糖化産物生成阻害組成物含有飲食品を得た。

（実施例６）最終糖化産物生成阻害組成物含有飲料（野菜果汁混合飲料）の調製
実施例２で得られた最終糖化産物生成阻害組成物組成物Ｃ１．０ｇ及びグアーガム分解物（サンファイバーＲ;太陽化学株式会社製）３ｇを市販の野菜果汁混合飲料１００ｍｌに添加混合溶解して、本願発明の最終糖化産物生成阻害組成物含有飲食品（野菜果汁混合飲料）を得た。

（実施例７）最終糖化産物生成阻害組成物含有クッキーの調製
実施例２で得られた最終糖化産物生成阻害組成物Ｄ４．０ｇ及び、市販のケーキミックス粉２００ｇを容器に入れた後、バター３５ｇを入れ、木杓子で混ぜ合わせた。それに溶き卵２５ｇを加えて、なめらかな生地になるまで良く練った。小麦粉を振った台の上に生地を取り出し、さらに小麦粉を振って麺棒で５ｍｍの厚さに伸ばし、丸型で抜き、それを１７０℃のオーブンで１０分間焼いて、１個約５ｇの本願発明の最終糖化産物生成阻害組成物含有クッキーを得た。

（実施例８）最終糖化産物生成阻害組成物含有ヨーグルトの調製
実施例３で最終糖化産物生成阻害組成物Ｅ１０ｇ、市販の脱脂乳（明治乳業社製。蛋白質含量３４％）０．９５ｋｇ、及び市販の無塩バター（雪印乳業社製）０．３５ｋｇを温水８Ｌに溶解し、均質化し、全量を１０Ｌに調整した。次いで、９０℃で１５分間加熱殺菌し、冷却し、市販の乳酸菌スターター（ハンゼン社製）０．０３ｋｇ（ストレプトコッカス・サーモフィラス０．０２ｋｇ及びラクトバシラス・ブルガリクス０．０１ｋｇ）を接種し、均一に混合し、１００ｍＬの容器に分注、充填し、密封し、３７℃で２０時間発酵させ、のち冷却し、本願発明の脂質代謝改善組成物含有ヨーグルトを得た。

（実施例９）最終糖化産物生成阻害組成物含有錠剤の調製
実施例３で得られた最終糖化産物生成阻害組成物Ｆ２０ｇ、結晶セルロース１０ｇ、トウモロコシデンプン２７．５ｇ、乳糖６５ｇ、ヒドロキシプロピルセルロース６．５ｇを混合し、顆粒化した。この顆粒化物にステアリン酸マグネシウム２．０ｇを加え、均一に混合し、この混合物をロータリー式打錠機を用いて加圧成形して一錠が１３０ｍｇの本願発明の最終糖化産物生成阻害組成物含有錠剤を得た。

（実施例１０）最終糖化産物生成阻害組成物含有カプセルの調製
実施例３で得られた最終糖化産物生成阻害組成物Ｆ２０ｇ、乳糖１９８ｇ、コーンスターチ１８．８ｇ、及びポリビニルピロリドン３．２ｇを均一混合しゼラチンカプセルにこの混合物５００ｍｇを充填して最終糖化産物生成阻害組成物含有カプセルを得た。

本発明の実施態様ならびに目的生成物を挙げれば以下の通りである。
（１）アムラーの果実、果汁又はそれらの抽出物を含有することを特徴とする最終糖化産物生成阻害組成物。
（２）アムラー果実又は果汁の抽出物が、アムラー果実又は果汁から水、塩基、酸、親水性溶媒のいずれかにより抽出されていることを特徴とする前記（１）記載の最終糖化産物生成阻害組成物。
（３）アムラー果実又は果汁の抽出物が、アムラー果実又は果汁から水により抽出されていることを特徴とする前記（１）又は（２）記載の最終糖化産物生成阻害組成物。
（４）アムラー果実、果汁又はそれら抽出物を酵素処理したことを特徴とする前記（１）〜（３）いずれか記載の最終糖化産物生成阻害組成物。
（５）アムラー果実、果汁又はそれら抽出物をぺクチナーゼ、セルラーゼ、ヘミセルラーゼ、プロテアーゼ、クロロゲン酸エステラーゼ、タンナーゼより選ばれる１種類または２種類以上を併用する酵素処理により抽出されていることを特徴とする前記（１）〜（４）いずれか記載の最終糖化産物生成阻害組成物。
（６）アムラー果実又は果汁の抽出物、又は果汁から、親水性溶媒もしくは疎水性溶媒により分画されていることを特徴とする前記（１）〜（５）いずれか記載の最終糖化産物生成阻害組成物。
（７）アムラー果実又は果汁の抽出物、又は果汁から、エタノールにより抽出し、エタノール可溶分画を特徴とする前記（１）〜（６）いずれか記載の最終糖化産物生成阻害組成物。
（８）エタノールで分画する際のエタノール濃度が、終濃度として１０〜９０％であり、そのエタノール可溶化成分であることを特徴とする前記（７）記載の最終糖化産物生成阻害組成物。
（９）エタノールで分画する際のエタノール濃度が、終濃度として３０〜５０％であり、そのエタノール可溶化成分であることを特徴とする前記（７）又は（８）記載の最終糖化産物生成阻害組成物。
（１０）アムラー果実又は果汁の抽出物、又は果汁から、酢酸エチルにより抽出し、酢酸エチル可溶分画を特徴とする前記（１）〜（５）いずれか記載の最終糖化産物生成阻害組成物。
（１１）酢酸エチルで分画する際の酢酸エチル濃度が、終濃度として３０〜９０％であり、その酢酸エチル可溶化成分であることを特徴とする前記（１０）記載の最終糖化産物生成阻害組成物。
（１２）酢酸エチルで分画する際の酢酸エチル濃度が、終濃度として５０〜８０％であり、その酢酸エチル可溶化成分であることを特徴とする前記（１０）又は（１１）記載の最終糖化産物生成阻害組成物。
（１３）前記（１）〜（１２）いずれか記載の最終糖化産物生成阻害組成物を含有することを特徴とする飲食品。
（１４）前記（１）〜（１２）いずれか記載の最終糖化産物生成阻害組成物を含有することを特徴とする医薬品。
（１５）前記（１）〜（１２）いずれか記載の最終糖化産物生成阻害組成物を含有することを特徴とする飼料。

本発明で得られたアムラー抽出物を含有する最終糖化産物生成阻害組成物は、牛血清アルブミン、グルコース及びフラクトースの反応によって生成される最終糖化産物の生成を阻害する効果が高く、幅広い飲食品及び医薬品に利用して糖尿病合併症、動脈硬化症、アルツハイマー病、老化、炎症反応等、多種の疾患に関与する最終糖化産物生成を阻害することによって糖尿病合併症、動脈硬化症、アルツハイマー病、老化、炎症反応の予防、改善、治療ができる。

最終糖化産物生成阻害組成物Ａ（○）、Ｂ（▲）、Ｆ（□）および茶抽出物（◆）の濃度と最終糖化産物生成阻害率を示した図である。

Claims

アムラーの果実、果汁又はそれらの水抽出物を含有することを特徴とする最終糖化産物生成阻害剤。
アムラーの果実、果汁又はそれらの水抽出物のエタノール又は酢酸エチル抽出物を含有することを特徴とする最終糖化産物生成阻害剤。