SE465164B - Inositoltrifosfat, ett foerfarande foer framstaellning daerav och en komposition innehaallande detta - Google Patents

Inositoltrifosfat, ett foerfarande foer framstaellning daerav och en komposition innehaallande detta

Info

Publication number
SE465164B
SE465164B SE8504968A SE8504968A SE465164B SE 465164 B SE465164 B SE 465164B SE 8504968 A SE8504968 A SE 8504968A SE 8504968 A SE8504968 A SE 8504968A SE 465164 B SE465164 B SE 465164B
Authority
SE
Sweden
Prior art keywords
inositol
triphosphate
myo
salt
acid
Prior art date
Application number
SE8504968A
Other languages
English (en)
Other versions
SE8504968D0 (sv
SE8504968L (sv
Inventor
M Siren
Original Assignee
Perstorp Ab
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Perstorp Ab filed Critical Perstorp Ab
Publication of SE8504968D0 publication Critical patent/SE8504968D0/sv
Publication of SE8504968L publication Critical patent/SE8504968L/sv
Publication of SE465164B publication Critical patent/SE465164B/sv

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic System
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/06—Phosphorus compounds without P—C bonds
    • C07F9/08—Esters of oxyacids of phosphorus
    • C07F9/09—Esters of phosphoric acids
    • C07F9/117—Esters of phosphoric acids with cycloaliphatic alcohols
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A21—BAKING; EDIBLE DOUGHS
    • A21D—TREATMENT, e.g. PRESERVATION, OF FLOUR OR DOUGH, e.g. BY ADDITION OF MATERIALS; BAKING; BAKERY PRODUCTS; PRESERVATION THEREOF
    • A21D2/00—Treatment of flour or dough by adding materials thereto before or during baking
    • A21D2/08—Treatment of flour or dough by adding materials thereto before or during baking by adding organic substances
    • A21D2/30—Organic phosphorus compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23B—PRESERVING, e.g. BY CANNING, MEAT, FISH, EGGS, FRUIT, VEGETABLES, EDIBLE SEEDS; CHEMICAL RIPENING OF FRUIT OR VEGETABLES; THE PRESERVED, RIPENED, OR CANNED PRODUCTS
    • A23B7/00—Preservation or chemical ripening of fruit or vegetables
    • A23B7/14—Preserving or ripening with chemicals not covered by groups A23B7/08 or A23B7/10
    • A23B7/153—Preserving or ripening with chemicals not covered by groups A23B7/08 or A23B7/10 in the form of liquids or solids
    • A23B7/154—Organic compounds; Microorganisms; Enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L29/00—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
    • A23L29/03—Organic compounds
    • A23L29/05—Organic compounds containing phosphorus as heteroatom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L3/00—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs
    • A23L3/34—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs by treatment with chemicals
    • A23L3/3454—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs by treatment with chemicals in the form of liquids or solids
    • A23L3/3463—Organic compounds; Microorganisms; Enzymes
    • A23L3/3553—Organic compounds containing phosphorus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/66—Phosphorus compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/24—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing atoms other than carbon, hydrogen, oxygen, halogen, nitrogen or sulfur, e.g. cyclomethicone or phospholipids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A61P39/02—Antidotes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P9/00—Preparation of organic compounds containing a metal or atom other than H, N, C, O, S or halogen

Description

-fi 465 164 2 Det är vidare känt genom exempelvis Bull. Stê.
Chim. Biol. 36,9 (1956), sid 85, att hydrolysera fytin- syra med utspädd klorvätesyra vid förhöjd temperatur för erhållande av en blandning av lägre inositolfos- fat, dvs IP5, IP4, IP3, IP2 (inositoldifosfat) och IPI (inositolmonofosfat). Vart och ett av dessa ino- sitolfosfat kan föreligga i form av många isomerer.
Upp till 20 isomerer kan förväntas för IP3.
En specifik isomer av IP3, dvs D-myo-inositol- -l,4,5-trifosfat, har rapporterats i Biochem. Biophys.
Res. Commun. 120,2 (1984), är känd som intracellulär kalciummobiliserare i människo- sid 481. Denna förening kroppen och den kan lätt isoleras från cellmembran.
Ingenting är känt om egenskaperna hos några andra av de specifika isomerer av de olika inositoltrifos- faten i ren form. Sålunda är det mycket svårt att separera det stora antalet IP3-isomerer från varandra och därigenom identifiera och definiera strukturformeln för varje isomer och dess egenskaper. Hittills är ingen metod känd för framställning eller erhållande av någon enkel isomer av IP3 förutom det ovannämnda D-myo-inositol-1,4,5-trifosfatet. I ett förfarande för framställning av IP3 som inbegriper ett hydrolytiskt system måste vidare en omlagring av isomererna och/eller IP en ytterligare defosforylering till IP2, eller inositol betraktas som speciella problem. 1 Beroende på ovanstående svårigheter föreligger det inga data på specifika IP3-isomerer i huvudsakligen ren form förutom för det ovannämnda D-myo-inositol- -l,4,5-trifosfatet.
SAMMANFATTNING AV UPPFINNINGEN Enligt föreliggande uppfinning har det helt oväntat varit möjligt att lösa ovanstående problem med sepa- rering av vissa olika isomerer av IP3 från varandra och bereda dem i huvudsakligen ren form. IP3-isomerer kan erhållas som ett salt eller som en syra därav.
Saltformen föredrages, eftersom denna är lättare att _» G\ in 465 3 bereda i ren och koncentrerad form än syran.
DETALJERAD BESKRIVNING AV FÖREDRAGEN UT- FÖRINGSFORM Enligt uppfinningen har ett inositoltrifosfat (IP3) valt ur den grupp som består av D-myo-inositol- -l,2,6-trifosfat, D-myo-inositol-1,2,5-trifosfat, L-myo-inositol-l,3,4-trifosfat och myo-inositol-l,2,3- -trifosfat i antingen syra- eller saltform framställts och isolerats i huvudsakligen ren form.
Såsom nämnts ovan kan den individuella IP3-isomeren erhållas som ett salt eller en syra därav. I båda formerna kan den för första gången erhållas i huvud- sakligen ren form.
IP3 i syraform erhålles vanligen i form av en vattenlösning. I sådant fall kan syrans koncentration vara 10-45, företrädesvis 15-45 eller helst 20-45 vikt% av lösningens totala vikt.
Saltformen av IP3-isomeren kan lätt erhållas från syraformen med användning av standardförfaranden.
Sålunda kan salter, såsom alkalimetall- och alkaliska jordartsmetallsalter, t ex av litium, natrium, kalium, kalcium eller magnesium, framställas. Emellertid är även aluminium-, zink- och järnsalter mycket användbara, liksom NH4+- och organiska aminsalter. Vidare kan blandade salter innehållande olika katjoner användas.
Exempel på aminer är trietanolamin, dietanolamin, triisopropanolamin, N,N-dimetyl-2-amino-2-metyl-1- -propanol, N,N-dimetyl-etanolamin, tetrabutylamin och cyklohexylamin. Även andra salter kan vara använd- bara. Särskilt föredragna är salter som är fysiologiskt acceptabla.
För framställning av isomeren eller isomererna av IP3 enligt uppfinningen kan en eller flera av före- ningarna IP6, IP5 eller IP4 eller en naturprodukt innehållande minst en av dessa föreningar användas som utgångsmaterial. Det föredrages att använda IP6- innehållande material, eftersom de är de mest lätt- \ 465 164 4 tillgängliga. I de fall då utgångsmaterialet är en naturprodukt väljs företrädesvis en sådan med en halt av minst 0,3 vikt%, företrädesvis minst l vikt% inosi- tolfosfat (IP6 + IP5 + IP4).
Särskilt lämpliga produkter är spannmål, särskilt kli, pollen, bönor och oljeväxter. Dessa produkter innehåller samtliga IP6.
I teorin antas IP3-isomererna kan framställas exempelvis med följande metoder. 1) enzymatisk nedbrytning utgående från IP4, IP5 och/eller IP . 2) kemisk hydrošys utgående från IP4, IP5 och/eller IP6. 3) kemisk syntes utgående exempelvis från inositol, IP1, IP2 och fosfat. 4) enzymatisk syntes utgående från exempelvis ino- sitol, IPl, IP2 och fosfat. ) mikrobiologisk framställning (inklusive även hybrid- -DNA-metoder). 6) kemisk eller enzymatisk migrering av inositol- fosfat eller kemisk eller enzymatisk hydrolys av substituerat inositolfosfat.
En kombination av två eller flera av ovanstående förfaranden kan även vara möjlig. Emellertid åstadkommer många av dessa förfaranden endast blandningar av ett antal isomerer som i bästa fall är ytterst svåra att separera i individuella isomerer, om de alls kan sepa- reras.
Enligt uppfinningen föredrages ett förfarande där ett material som innehåller IP6 används, såsom nämnts ovan. Därvid bryts IP6 ned enzymatiskt till IP3 med fytasenzym. Fytasenzym föreligger normalt i alla inositolfosfatinnehållande växter och fröer.
På grund härav är det enligt uppfinningen vanligen inte nödvändigt att tillsätta enzymet om en naturpro- dukt används som utgångsmaterial. I de fall där natur- produkten har alltför låg enzymatisk aktivitet eller 465 164 när IP6, IP5 eller IP4 eller en blandning av dessa används som utgångsmaterial, tillsättes ett fytas- enzym från exempelvis kli.
Fytasenzym från växter, fröer och mikroorganis- mer har den överraskande effekten att enligt uppfin- ningen möjliggöra framställningen av de specifika IP3-isomerer som nämnts ovan med hög koncentration och i huvudsakligen ren form.
IP6 kan antingen föreligga som rent material eller i form av en IP6-innehållande källa. Ett lämpligt sätt att behandla ett naturligt utgångsmaterial inne- hållande IP6, t ex kli, är att förbehandla det, exempel- vis genom spräckning eller borttagning av yttre membran och borttagning av oönskade beståndsdelar. Därefter blötlägges materialet i vatten så att inositolfosfatet blir tillgängligt för nedbrytning och för aktivering av enzymet. Då ytterligare enzym behövs tillsättes detta vid detta stadium eller ett senare stadium.
Enzymet får därefter verka under så lång tid som behövs för att den önskade hydrolysgraden skall uppnås.
Hydrolysen sker vid en lämplig temperatur, vanligen -70°C, företrädesvis 30-60°C, och vid ett pH-värde av 4-8. För att avbryta hydrolysen vid den önskade nivån kan enzymet förstöras eller inaktiveras, exempel- vis genom snabb upphettning av det hydrolyserade ut- gångsmaterialet. För att överföra materialet till en form som är lagringsstabil kan det lämpligen frys- torkas.
Uppfinningen avser särskilt ett förfarande för framställning av ett inositoltrifosfat (IP3) valt ur den grupp som består av D-myo-inositol-1,2,6-tri- fosfat, D-myo-inositol-l,2,5-trifosfat, L-myo-inosi- tol-1,3,4-trifosfat och myo-inositol-1,2,3-trifosfat i antingen syra- eller saltform, vari ett IP6-innehål- lande material inkuberas vid en temperatur som ligger inom området 20-70°C, företrädesvis 30-50°C, och ett pH-värde av 4-8 med fytas tills en frigöring av ca 465 164 6 -60%, vanligen ca 50%, av den totala esterfosforn har uppnåtts. På detta stadium har en hög andel av den önskade IP3 genom hydrolys av det IP6-innehållande materialet. -isomeren eller -isomererna bildats Den erhållna blandningen av inositolfosfat kan härefter separeras genom kolonnkromatografi för iso- lering av den IP3-innehållande fraktionen. I fallet med kromatografisk separation utsättes fraktionen därefter eventuellt för en annan kromatografisk sepa- ration, företrädesvis i en kolonn. En sådan separation kan erbjuda fördelar om fraktionen innehåller mer än en IP3-isomer. IP3-isomeren eller -isomererna iso- leras därefter företrädesvis i syraform. Genom tillsats av en bas till syran kan om så önskas IP3 erhållas i saltform.
Bland de många fytaskällor som är användbara enligt föreliggande uppfinning föredrages jäst och särskilt föredrages bagerijäst. Svensk bagerijäst framställd av Jästbolaget, Sverige, såväl som bageri- jäst framställd av Rajamäki, Finland, och Hefefabriken AG, Schweiz, uppfinning. När sådan jäst används har det mycket har exempelvis använts enligt föreliggande överraskande fastställts att i huvudsak endast en isomer erhålles, nämligen D-myo-inositol-l,2,6-tri- fosfat. Naturligtvis är användningen av jäst ett mycket värdefullt förfarande när endast denna isomer önskas.
Aktiviteten med avseende på nedbrytning av IP6 skiljer sig åt mellan de olika jästkällorna.
Såvitt man hittills vet ger ingen annan metod en enda isomerprodukt. Vanligen erhålles en blandning av ett antal isomerer.
Ovannämnda förfarande, med lämpliga modifieringaq kan endast användas när en eller flera av beredningarna IP6, IP5 eller IP4 som sådan används som utgångsmaterial.
I en annan utföringsform avser uppfinningen även en inositolfosfatkomposition sammansatt av D-myo-ino- sitol-l,2,6-trifosfat och minst ett av D-myo-inositol- 7 -l,2,5-trifosfat, L-myo-inositol-1,3,4-trifosfat och myo-inositol-l,2,3-trifosfat i syra- eller saltform.
Kompositionen innehåller vanligen 20-99,5, företrädesvis -99,5 vikt% av nämnda IP3. Halten D-myo-inositol- -l,2,6-trifosfat ligger inom området 50-100 vikt% baserat på den totala halten av inositoltrifosfat, varvid resten inbegriper andra inositolfosfat än IP3.
Ibland föredrages det att IP3 i kompositionen består huvudsakligen av enbart D-myo-inositol-l,2,6- -trifosfat.
Förutom IP3 kan resten av inositolfosfatkomposi- tionen även innehålla inositoltetrafosfat (IP4) och inositoldifosfat (IP2).
Kompositionen kan bestå av 20-99,5 vikt%, före- trädesvis mer än 60 vikt% av IP3 och 80-0,5 vikt%, företrädesvis mindre än 40 vikt% av andra inositol- fosfat. 40-85 vikt%, företrädesvis 50-85 vikt% av de andra inositolfosfaten bör därvid bestå av IP2 + IP4.
Det kan föredragas att IP3 består huvudsakligen av D-myo-inositol-l,2,6-trifosfat.
Kompositionen innehåller ibland mindre mängder, t ex mindre än 10 vikt%, företrädesvis 1-8 vikt% av en eller flera av IPl och IP6 beräknat på den totala halten av inositolfosfat i kompositionen.
En sådan typ av kompositioner kan framställas genom anrikning av den initiella inositolfosfatjäs- ningsprodukten genom tillsats av D-myo-inositol-l,2,6- -trifosfat till den önskade slutkoncentrationen av isomeren i kompositionen. Sådana metoder är välkända inom tekniken och inbegriper t ex enkel mekanisk bland- ning. Alternativt kan denna komposition framställas direkt genom jäsning med användning av jäst, särskilt bagerijäst, som fytaskälla. Såsom tidigare angivits resulterar användningen av bagerijäst i nästan uteslu- tande produktion av D-myo-inositol-1,2,6-trifosfat, dvs huvudsakligen hela IP3-fraktionen är D-myo-inositol- -l y 2 y 4655 1654- 8 Inositoltrifosfatet i syra- eller saltform enligt uppfinningen kan användas som ett läkemedel eller livsmedel, eventuellt i tillsatsform eller som ett stabiliseringsmedel för olika produkter. Vidare kan IP3 ge en skyddande effekt vid sådd. Det kan även användas som tillsats till tandkräm, som en korrosions- inhibitor i målarfärg, lacker, smörjoljor och vid ytbehandling av metaller, som en komponent i rengörings- medel, som ett flambeständigt medel, för litografiska tillämpningar, för inhibering av t ex aflatoxinproduk- tion i mikroorganismer och för modifiering eller ökning av enzymaktiviteten hos exempelvis amylas.
Inositolfosfatkompositionen som framställts an- tingen direkt genom jäsning eller genom anrikning såsom beskrivits ovan är användbar i alla de ovan- nämnda tillämpningarna.
De ovan nämnda IP3-isomererna har följande form- ler: D-myo-inositol-1,2,6-trifosfat med formeln ovoš' Qfi ak n _Xz+ _ _ nPo§' nvøš' där X är väte, minst en envärd, tvåvärd eller fler- värd katjon, eller en blandning därav, n är antalet joner och z är laddningen för respektive jon; D-myo-inositol-l,2,5-trifosfat med formeln åh ON CI1 _¿ CT\ 9 myo-inositol-1,2,3-trifosfat med formeln 2- GPU 2 3 O OP xl+ n I Oy oro) där X, n och z har ovanstående betydelse; L-myo-inositol-l,3,4-trifosfat med formeln 2_ on nu oPo3 1, 2- 2- OPO OPC) där X, n och z har ovanstående betydelse.
I var och en av ovanstående formler ligger n området 6-l och z inom området 1-6. Företrädesvis inom området 3-6 och z är 3, 2 eller 1.
Den nya IP3-isomeren enligt föreliggande uppfin- är särskilt effektiv i den ovannämnda terapeutiska inom är n ning användningen och de saknar särskilt alla oönskade biverkningar i denna användning. Särskilt D-myo-ino- sitol-l,2,6-trifosfat är effektivt och uppvisar en högre aktivitetsgrad i jämförelse med de andra isome- rerna, särskilt D-myo-inositol-1,4,5-trifosfat. Komplex bildade av D-myo-inositol-l,2,6-trifosfat med Cd är avsevärt mycket stabilare än Cd-komplexen som bildats med exempelvis D-myo-inositol-l,4,5-trifosfat. I mindre utsträckning är även D-myo-inositol-1,2,5-trifosfat, L-myo-inositol-1,3,4-trifosfat och myo-inositol-l,2,3- -trifosfat mer önskvärda för terapeutisk användning än D-myo-inositol-l,4,5-trifosfat av flera av dessa orsaker.
Uppfinningen kommer nu att förklaras närmare i samband med utföringsexemplen nedan och de bifogade figurerna och tabellen. Exemplen 1 och 2 visar hydro- 465 164 lys av natriumfytat med vetefytas och fraktionering av en blandning av inositolfosfat. Exempel 3 och 4 avser strukturbestämning av isomerer av IP3. Exempel illustrerar en bestämning av pKa-värden för IP3.
Exempel 6 visar en bestämning av relativa bindnings- konstanter för IP3 med Ca, Zn respektive Cd. Exemplen 7-10 avser upparbetningsförfaranden för kalciumsal- ter av IP3-isomererna enligt uppfinningen. Exempel ll illustrerar infrarödspektrum för kalciumsaltet av D-myo-inositol-l,2,6-trifosfat. Exemplen 12 och 13 visar hydrolys av natriumfytat med vetekli och en fraktionering av blandningen av de erhållna inosi- tolfosfaten. Exempel 14 avser ett förfarande för upp- arbetning av zinksaltet av D-myo-inositol-1,2,6-tri- fosfat. Exemplen 15-17 visar hydrolys av natriumfytat med bagerijäst, en fraktionering av den erhållna bland- ningen av inositolfosfat och en bestämning av den enda erhållna isomeren av IP3.
Exempel 18 illustrerar ett förfarande för uppar- betning av natriumsaltet av D-myo-inositol-l,2,6-tri- fosfat. Exempel 19 visar kemisk hydrolys av natrium- fytat med klorvätesyra och en fraktionering av den erhållna blandningen av inositolfosfat. Exempel 21 avser kemisk syntes av inositolfosfat från polyfosfor- syra och myoinositol och en strukturbestämning av IP3 med H-NMR. Exempel 21 visar hydrolys av fytinsyra i riskli, extraktion och analys av de erhållna inosi- tolfosfaten. Exempel 22 avser en karaktärisering av olika salter av D-myo-inositol-l,2,6-trifosfat. Exempel 23 visar att IP3 hämmar en ökning av trombocytaggrega- tion hos människor förorsakad av rökning. I exempel 24 visas att en ökad blodglukoshalt hos möss förorsakad av fria radikaler kan motverkas av injektion av IP3.
Exempel 1 Hydrolys av natriumfytat med vetefytas och frak- tionering av en blandning av inositolfosfat. 1,6 g natriumfytat (från vete, Sigma Chemical 11 Co, St. Louis, Missouri, USA) löstes i 650 ml nat- riumacetatbuffert, pH-värde 5,2. 2,7 g vetefytas (EC 3.l.3.26, 0,015 U/mg, från Sigma Chemical Co) tillsattes och blandningen inkuberades vid 38°C.
Defosforyleringen följdes genom bestämning av frigjord oorganisk fosfor. Efter 3 h, när 50% av den oorganiska fosforn frigjorts, avbröts hydrolysen genom tillsats av 30 ml ammoniak till pH 12. En vätskebland- ning innehållande inositolfosfat erhölls. 350 ml av blandningen fick passera genom en jon- bytarkolonn ("Dowex l", kloridform, 25 mm x 250 mm) och eluerades med en linjär gradient av klorvätesyra (0-0,7 N HC1). Lika mängder av eluerade fraktioner hydrolyserades fullständigt för att bestämma halten fosfor och inositol. Mängden fosfor gentemot eluerad volym visas i fig 1. Topparna motsvarar de olika ino- sitolfosfaten, dvs en topp med förhållandet tre till ett mellan fosfor och inositol består av inositol- trifosfat etc. Två fraktioner med förhållandet tre till ett mellan fosfor och inositol erhölls.
Exempel 2 Fraktionering av inositoltrifosfat. 100 ml av den första fraktionen som erhållits i exempel 1 med ett fosfor/inositolförhållande av tre till ett neutraliserades och utfälldes som ett bariumsalt efter tillsats av 10% överskott av 0,1 M bariumacetatlösning. 600 mg av det utfällda saltet löstes i 50 ml utspädd klorvätesyra. Lösningen Sepa- rerades på en jonbytarkolonn ("Dowex 1", kloridform, mm x 2500 mm) med utspädd klorvätesyra som eluerings- medel. Lika delar av eluerade fraktioner analyserades med avseende på fosfor. Mängden fosfor gentemot eluerad volym visas i fig 2. Tre toppar bestående av isomerer av inositoltrifosfat kan iakttas i figuren.
Exempel 3 Strukturbestämning av isomerer av inositoltrifos- fat med H-NMR. 465 164 12 De tre topparna som erhållits i exempel 2 analy- serades med H-NMR. Spektra visas i fig 3 a, b och c. Data visar att topparna består av myo-inositol- -l,2,6-trifosfat, pektive myo-inositol-l,3,4-trifosfat. myo-inositol-1,2,3-trifosfat res- Den andra fraktionen som erhållits i exempel l med ett fosfor/inositolförhållande av tre till ett analyserades med H-NMR. Spektrum visas i fig 4. Data visar att fraktionen består av myo-inositol-l,2,5- -trifosfat. I detta utföringsexempel såväl som i samt- liga följande där H-NMR användes, var H-NMR-instrumentet en Nicolet 360 WB spektrometer. Den interna standarden var tetrametylsilan.
Exempel 4 Bestämning av optiska isomerer av inositoltrifosfat. mg av föreningarna som med NMR enligt exempel 3 bestämts till att vara myo-inositol-l,2,6-trifosfat och myo-inositol-l,3,4-trifosfat kromatograferades vidare på en kiral kolonn baserad på acetylerad cellu- losa (20 mm x 300 mm från Merck) med en blandning av etanol och vatten som elueringsmedel. Fraktionerna analyserades med en polarimeter. Såsom framgår av fig 5 består varje förening av en optisk isomer, D-myo- -inositol-l,2,6-trifosfat respektive L-myo-inositol- -l,3,4-trifosfat.
Exempel 5 Bestämning av pKa-värden för inositoltrifosfat. ml av den första fraktion som erhölls i exempel l med ett fosfor/inositolförhållande av tre till ett titrerades med 0,01 M NaOH. pH-värdet under tireringen mättes med en elektrod. Fig 6 visar pH-värdet mot volymen av NaOH.
Följande pKa-värden erhölls: 4,7 7,5 pKal = pKa2 = .CL CN LH _; Ch ..!> l3 Exempel 6 Bestämning av relativa bindningskonstanter för inositoltrifosfat och kalcium, zink respektive kad- mium. ml av den första fraktionen som erhölls i exempel 1 med ett fosfor/inositolförhållande av tre till ett titrerades 0,2 mM kalcium-, zink- respektive kadmiumjoner. En större tendens till bildning av inositoltrifosfat-metal1- med 0,01 M NaOH i närvaro av komplex resulterar i en sänkning av pH-värdet vid en viss tillsatt volym NaOH. Såsom framgår av fig 7 ökar metallbindningskonstanterna för IP3 i följande ordning: Ca < Zn < Cd Exempel 7 Upparbetningsförfarande för kalciumsaltet av D-myo-inositol-1,2,6-trifosfat. 100 ml av den fraktion som innehåller D-myo-ino- sitol-l,2,6-trifosfat som erhållits i exempel 2 neut- raliserades till ett pH-värde av ca 7 med en vatten- lösning av Ca(OH)2. Kalciumsaltet utfälldes genom tillsats av 100 ml etanol. Fällningen centrifugerades, omkristalliserades och torkades i vakuum.
Det renade kalciumsaltet av D-myo-inositol-l,2,6- -trifosfat som erhölls bekräftades strukturellt genom analys med H-NMR.
Ovanstående omkristalliserade kalciumsalt av D-myo-inositol-1,2,6-trifosfat analyserades även kemiskt för bestämning av halten kol, fosfor, syre och kalcium.
Tabell 1 visar resultatet. Saltets formel är Ca3IP3.
Exempel 8 Förfarande för upparbetning av kalciumsaltet av L-myo-inositol-l,3,4-trifosfat. 100 ml av den i exempel 2 erhållna fraktionen innehållande L-myo-inositol-l,3,4-trifosfat neutrali- serades till ett pH-värde av ca 7 med en vattenlösning av Ca(OH)2. Kalciumsaltet utfälldes genom tillsats e 465 164 14 av 100 ml etanol. Fällningen centrifugerades, omkristal- liserades och torkades i vakuum.
Det renade kalciumsaltet av L-myo-inositol-l,3,4- -trifosfat bekräftades strukturellt genom analys med H-NMR.
Ovan omkristalliserade kalciumsalt av L-myo-ino- sitol-l,3,4-trifosfat analyserades även kemiskt för att bestämma halten kol, fosfor, syre och kalcium.
IP .
Tabell l visar resultatet. Saltets formel är Ca3 3 Exemgel 9 Förfarande för upparbetning av kalciumsalt av myo-inositol-1,2,3-trifosfat. 100 ml av den i exempel 2 erhållna fraktionen innehållande myo-inositol-1,2,3-trifosfat neutraliserades till ett pH-värde av ca 7 med en vattenlösning av Ca(OH)2. Kalciumsaltet utfälldes genom tillsats av 100 ml etanol. des i vakuum.
Fällningen omkristalliserades och torka- Det renade kalciumsaltet av myo-inositol-l,2,3- -trifosfat bekräftades strukturellt genom analys med H-NMR.
Ovanstående omkristalliserade kalciumsalt av myo-inositol-1,2,3-trifosfat analyserades även kemiskt för bestämning av halten kol, fosfor, syre och kalcium.
Tabell l visar resultatet. Saltets formel är Ca3IP3.
Exemgel 10 Förfarande för upparbetning av kalciumsalt av D-myo-inositol-l,2,5-trifosfat. 100 ml av den i exempel 1 erhållna fraktionen innehållande D-myo-inositol-l,2,5-trifosfat neutrali- serades till ett pH-värde av ca 7 med en vattenlösning av Ca(OH)2. Kalciumsaltet utfälldes genom tillsats av 100 ml etanol. Fällningen centrifugerades, omkris- talliserades och torkades i vakuum.
Det renade kalciumsaltet av D-myo-inositol-l,2,5- -trifosfat bekräftades strukturellt genom analys med H-NMR.
Ovanstående omkristalliserade kalciumsalt av D-myo-inositol-l,2,5-trifosfat analyserades även kemiskt för bestämning av halten kol, fosfor, syre och kalcium.
Tabell 1 visar resultatet. Saltets formel är Ca3IP3.
Exempel ll Infraröd(IR)spektrum för kalciumsaltet av D-myo- -inositol-1,2,6-trifosfat.
Det renade kalciumsaltet av D-myo-inositol-1,2,6- -trifosfat som erhållits i exempel 7 analyserades med IR. De karaktäristiska banden är: 3500 cm'l - on 2900 cm'1 - cn 1600 cm"1 - on 1100 cm_1 - C-O och -P 1000 cm_l - C-O och -P 800 cm_l - C-C Exempel 12 Hydrolys av natriumfytat med vetekli och fraktione- ring av en blandning av inositolfosfat. g natriumfytat (från vete, Sigma Chemical Co) löstes i 500 ml natriumacetatbuffert vid pH 5,0.
Med temperaturen ökad till 37°C tillsattes vetekli (10 g) under omröring. Inkubering-påbörjades och fort- sattes vid 37°C. Defosforyleringen följdes genom be- stämning av den frigjorda oorganiska fosforn. Hydro- lysen avbröts genom tillsats av 100 ml ammoniak efter 2 h när 50% oorganisk fosfor hade frigjorts. Den erhållna suspensionen centrifugerades och den överstående väts- kan uppsamlades. 300 ml av den överstående vätskan fick passera genom en jonbytarkolonn ("Dowex 1", kloridform, 25 mm x 250 mm) och eluerades med en linjär gradient av klor- vätesyra (0-0,7 N HCl). tioner hydrolyserades fullständigt för bestämning Lika delar av eluerade frak- av halten fosfor och inositol. Två fraktioner med fosfor/inositolförhållandet tre till ett (IP3) uppsam- lades. 465 164 16 Exempel 13 Fraktionering av inositoltrifosfat.
Samma metod användes som beskrivs i exempel 2 med undantag för skillnaden att den första i exempel 12 uppsamlade fraktionen kromatograferades. Tre toppar erhölls och analyserades med H-NMR. Topparna består av myo-inositol-1,2,6-trifosfat, myo-inositol-l,2,3- -trifosfat respektive myo-inositol-1,3,4-trifosfat.
Exempel 14 Förfarande för upparbetning av zinksaltet av D-myo-inositol-l,2,6-trifosfat. 100 ml av den i exempel 13 erhållna fraktionen innehållande D-myo-inositol-1,2,6-trifosfat neutrali- serades till ett pH-värde av ca 7 med en vattenlös- ning av Zn0. Zinksaltet utfälldes vid tillsatsen av 100 ml etanol. serades och torkades i vakuum. Det ovan omkristalli- Fällningen centrifugerades, omkristalli- serade zinksaltet av D-myo-inositol-1,2,6-trifosfat analyserades även kemiskt för bestämning av halten och zink. Tabell 1 visar resultatet.
Zn3IP3. kol, fosfor, syre Saltets formel är Exempel 15 Hydrolys av natriumfytat med bagerijäst och frak- tionering av en blandning av inositolfosfat. 0,7 g natriumfytat (från vete, Sigma Chemical Co) 50 g bagerijäst från Jästbolaget, Sverige, (torrsubstans: 28%, kvävehalt: 2%; fosforhalt: 0,4%) tillsattes under omröring. Inkubering påbörjades och fortsattes vid löstes i 600 ml natriumacetatbuffert, pH 4,6. 45°C. Defosforyleringen följdes genom bestämning av frigjord oorganisk fosfor. Efter 7 h, när 50% oorganisk fosfor hade frigjorts, avbröts hydrolysen genom tillsats av 30 ml ammoniak till pH 12. Suspensionen centrifuge- rades och den överstàende vätskan uppsamlades. 400 ml av den överstående vätskan fick passera genom en jonbytarkolonn ("Dowex 1", kloridform, 25 mm x 250 mm) och eluerades med en linjär gradient av klorväte- syra (0-0,7 N HC1). 465 164- 17 Lika delar av eluerade fraktioner hydrolyserades fullständigt för att bestämma halterna fosfor och inositol. Mängden fosfor gentemot eluerad volym visas i fig 8. Topparna motsvarar de olika inositolfosfaten, dvs en topp med förhållandet tre till ett mellan fosfor och inositol består av inositoltrifosfat etc.
Exempel 16 Strukturbestämning av isomerer av inositoltri- fosfat.
Den fraktion som erhållits i exempel 15 med ett fosfor/inositolförhållande av tre till ett neutralise- rades och indunstades före analys med H-NMR. Spektret visade sig vara identiskt med det som visas i fig 3a. -trifosfat.
Exempel 17 Bestämning av optiska isomerer av myo-inositol- trifosfat.
Samma metod användes som beskrivs i exempel 4 Data visar att toppen består av myo-inositol-l,2,6- med skillnaden att 10 mg av föreningen som bestämts med NMR enligt exempel 16 analyserades. Såsom framgår av fig 9 består föreningen av en optisk isomer, D- -myo-inositol-1,2,3-trifosfat. Denna isomer kan omlag- ras till L-myo-inositol-l,3,4-trifosfat genom behand- ling med en syra, såsom klorvätesyra.
Exempel 18 Förfarande för upparbetning av natriumsaltet av D-myo-inositol-1,2,6-trifosfat. 100 ml av den i exempel 15 erhållna fraktionen innehållande D-myo-inositol-1,2,6-trifosfat neutrali- serades till ett pH-värde av ca 7 med en vattenlösning av NaOH. Efter tillsats av 100 ml etanol reducerades volymen av lösningen genom indunstning och natriumsaltet utfälldes, centrifugerades, omkristalliserades och torkades i vakuum. Det renade natriumsaltet av D-myo- -inositol-1,2,6-trifosfat som erhölls bekräftades strukturellt genom analys med H-NMR. 465 164 18 Det omkristalliserade natriumsaltet av D-myo-ino- sitol-l,2,6-trifosfat analyserades kemiskt för bestäm- ning av halterna av kol, fosfor, syre och natrium.
Tabell l visar resultatet. Saltets formel är Na6IP3.
Exempel 19 Kemisk hydrolys av natriumfytat och fraktionering av en blandning av inositolfosfat. 1,0 g natriumfytat (fràn vete, Sigma Chemical Co) löstes i 15 ml 6 N HCl. vakuum i ett tillslutet rör i en ugn (105°C) i 5 h.
Provet uppvärmdes under Efter denna tid hade 34% av den oorganiska fosforn frigjorts. ml av den vätskeformiga blandningen neutrali- serades till pH 7 med en vattenlösning av Na0H och fick passera genom en jonbytarkolonn ("Dowex 1", klorid- form, 10 mm x 150 mm) och eluerades med en linjär gradient av klorvätesyra (0-0,7 N HCl). Lika delar av eluerade fraktioner hydrolyserades fullständigt för bestämning av halterna av fosfor och inositol.
Mängden fosfor gentemot eluerad volym visas i fig . Fraktionen med förhållandet tre till ett mellan H-NMR-spektret visade ett väsentligt antal isomera produkter.
Exempel 20 Kemisk syntes av inositolfosfat.
Polyfosforsyra (80% P O 2 5' med glas tillsluten kolv och uppvärmdes till 150°C. fosfor och inositol uppsamlades. 3,5 9) infördes i en Myo-inositol, 0,2 g, tillsattes och blandningen hölls vid nämnda temperatur i 2 h tills den neutraliserades till pH 7 med en vattenlösning av NaOH. Den erhållna kompositionen utfälldes som ett bariumsalt efter till- sats av 10% överskott av 0,1 M bariumacetatlösning. mg av bariumsaltet omvandlades till syraformen genom tillsats av utspädd klorvätesyra och analyserades med HPLC. Analysmetoden kalibrerades med väldefiniera- de inositolfosfat. Fig ll visar kromatogrammet. Frak- tionen som bestämdes vara inositoltrifosfat uppsamlades. 465 164 19 H-NMR-spektret visade ett väsentligt antal isomera produkter.
Exempel 21 1,0 kg riskli, innehållande ca 1% inositolhexa- fosfat buffert vid pH 5 vid 25°C. Efter 4 h, när 50% oorganisk (IP6), suspenderades i 10 liter natriumacetat- fosfor hade frigjorts, extraherades uppslamningen med en tillsats av l liter 2 M HCl. kades i 1 h och centrifugerades därefter. stående vätskan neutraliserades till pH 7 med en vatten- Suspensionen ska- Den över- lösning av Ca(OH)2. En fällning erhölls när 5 liter etanol tillsattes. Kalciumsaltet bestående av en kom- position av olika inositolfosfat centrifugerades, torkades och omkristalliserades. 20 mg av det omkris- talliserade kalciumsaltet omvandlades till syraformen genom tillsats av utspädd klorvätesyra och analyserades med HPLC. Kompositionen bestod av 40% inositoltrifos- fat, varav 70% var D-myo-inositol-1,2,6-trifosfat.
Resten bestod av andra inositolfosfat.
Exempel 22 Karaktärisering av olika salter av D-myo-inosi- tol-l,2,6-trifosfat. 70 ml av den i exempel 15 erhållna fraktionen med fosfor/inositolförhållandet tre till ett uppdelades i sju delar. Efter pH-justering med 0,1 M NaOH tillsat- tes olika positiva joner i kloridform, en jon till varje del. De använda salterna var FeCl3, MgCl2, AlCl3, KCl, NH4C1, (CH3CH2CH2CH2)4NCl och C6H13NH3Cl.
Efter tillsats av 10 ml etanol bildades fäll- ningar. Salterna omkristalliserades och analyserades med avseende på halten fosfor, kol, syre och metall efter omkristallisation. Tabell 1 visar sammansätt- ningen av de renade salterna.
Exempel 23 Effekten av IP3 på trombocytaggregation efter rökning hos människor studerades. '4es 164 Fyra unga friska icke rökande män fick vid två tillfällen en kapsel innehållande 50 mg IP3 eller 3 var Ca-saltet av D-myo-inositol-1,2,6-trifosfat. Varken försöks- 50 mg av en placebo. Det använda IP personen eller undersökaren visste om försökspersonen hade fått IP3 eller placebo. 2 h efter intag av kapseln togs ett blodprov.
Försökspersonen rökte därefter två cigarretter i snabb följd. Ett andra blodprov togs efter rökningen. Aggre- gationsresponserna hos trombocyterna gentemot ADP och kollagen i de två proven bestämdes med användning av huvudsakligen samma förfarande som i exempel 1.
Resultaten uttrycks såsom ändring av aggregationen från provet före rökning till provet efter rökning.
Ett plustecken anger att aggregationen var starkare efter rökning.
Skillnaden mellan IP3 och placebo ,85 1,75 1,5 1,75 6,5 ,0 Koncentrationen av aggregations- IP medlet Aggregations- medel Placebo 3 ADP +l,5 + 7,25 -1,5 + 0,25 -1,5 0 -2,5 - 0,75 +5,15 +12,25 -8,25 + 1,75 mg -3,75 0 3,75 " 5 mg -1,5 - 0,25 1,25 I placebogruppen förorsakade rökning en ökning mmol mmol “ 5 mmol mmol Kollagen II 0, l 2, " 5 0,5 mg l mg 2, av aggregationen, vilken var mest markerad vid låga koncentrationer av aggregationsmedlen. I samtliga fall motverkades denna effekt av IP . Sålunda hämmar 3 IP3 ökningen av trombocytaggregation förorsakad av rökning.
Exempel 24 Möss, 10 i varje grupp, injicerades intraperitonealt med IP3 (Na-salt av D-myo-inositol-1,2,6-trifosfat) på tre dosnivåer eller med fysiologisk koksaltlösning. min efter denna injektion fick alla möss med undan- tag av en kontrollgrupp en intravenös injektion av alloxan, 50 mg/kg i koksaltlösning. 465 164 21 Djuren fick svälta i 12 h före och l h efter alloxaninjektionen. 72 h efter alloxaninjektionen analyserades ett blodprov från mössen med avseende på glukoshalten. Resultaten var följande: Dos av IP Dos av alloxan mg/kg 3 mg/kg Blodglukos 0 O 216 0 50 864 800 50 857 1600 50 677 Alloxan förorsakar diabetes och höjda blodglukos- nivåer genom främjande av friradikalreaktioner hos insulinproducerande celler. Med IP3 erhölls en dosbe- roende minskning av blodglukoshalterna och den högsta dosen gav ett visst skydd mot alloxan. 465 164 22 Tabell 1 Kemiska formler för olika salter av IP3.
Fö ening Elementaranalys Formel Me % C % 0 % P % N% Kalciumsalt av Kalciumsalt av 1,3,4-IP3 21,4 13,8 42,9 16,3 -- Ca3IP3 Kalciumsalt av Kalciumsalt av Zinksalt av l,2,6-IP3 Zn: 31,5 12,1 38,2 14,7 -- Zn3IP3 Natriumsalt av Järnsalt av 1,2,6-IP3 Fe: 21,5 13,1 43,4 18,2 -- Fe2IP3 Kalium, mag- nesiumsalt av K: 27,5 11,3 38,7 14,1 -- K4MgIP3 1,2,6-IP3 Mg: 3,8 Ivlagnesimnsalt Alumln' iumsalt Amnoniumsalt av 1,2,6-IP3 -- 13,1 47,8 16,9 15,6 (LIH4)6IP3 Tetrabutyl- anmonimnsalt av1,2,6-IP3 -- 57,0 20,1 7,8 3,5 [(cH3(cH2)3> N] H3IP3 Cyklohexyl- anmoniwnsalt 465 164 23 För bättre förståelse av uppfinningen ges nedan formler för IP3-isomererna enligt uppfinningen. Formler ges även för IP6, IP5, IP4 och IP2.
De lägre fosfatestrarna av myo-inositol får namn beroende på var fosforsyragrupperna är belägna på inositolringen, varvid numreringen ger så låga posi- tionsnummer som möjligt. L och D betecknar medsols respektive motsols räkning och används beroende på vilket resultat som ger det lägsta positionstalet.
Kolatomen som har en axiell fosforsyragrupp har alltid positionstalet 2. Strukturformlerna nedan är förenklade till syraformen. * ,oH | myo-inositol; C6H6 (OH)6 ø ø 0 1,2,3,4,5,6-hexakis-(diväte- 0 fosfat)-myo-inositol alterna- ø tivt myo-inositolhexakis (fosfat) eller IP6 D-myo-inositol-1,2,6-trifosfat 06/ alternativt D-l,2,6-IP3 O .
P 05' D-myo-inositol-l,2,5-trifosfat Op alternativt D-l,2,5-IP3 _4e5 164 24 ' 0,” ø ø myo-inositol-LZ,3-trifosfat 04/ alternativt l,2,3-IP3 0 L-myo-inositol-1,3,4-tri- fosfat alternativt L-l,3,4-IP3 L-myo-inositol-l,2-difosfat alternativt L-1,2-IP2 D-myo-inositol-l,2,5,6-tetra- e L-myo-inositol-l , 2 , 3 , 4 , 5- -pentafosfat eller L-l,2,3,4,5-

Claims (18)

10 15 20 25 30 25 PATENTKRAV
1. l. Ett inositoltrifosfat (IP3) valt ur den grupp som består av D-myo-inositol-l,2,6-trifosfat, D-myo- -inositol-1,2,5-trifosfat, L-myo-inositol-1,3,4-trifos- fat och myo-inositol-l,2,3-trifosfat i antingen syra- eller saltform.
2. Inositoltrifosfat enligt krav 1, k ä n n e - t e c k n a t av att det -l,2,6-trifosfat. består av D-myo-inosito1-
3. Inositoltrifosfat enligt krav l, k ä n n e - t e c k n a t av att det består av myo-inositol-l,2,3- -trifosfat.
4. Inositoltrifosfat enligt krav l, k ä n n e - t e c k n a t av att det föreligger i huvudsakligen ren form. syraform enligt krav l, att det föreligger i form
5. Inositoltrifosfat i k ä n n e t e c k n a t av av en vattenlösning.
6. Inositoltrifosfat i syraform enligt krav 1, k ä n n e t e c k n a t av att det föreligger i form av en vattenlösning, i vilken syrakoncentrationen är 10-45 vikt% baserat på lösningens totala vikt.
7. Inositoltrifosfat i saltform enligt krav l, k ä n n e t e c k n a t av att dess katjoner är valda ur den grupp som består av alkalimetaller och alkaliska jordartsmetaller.
8. Salt enligt krav 7, av att katjonerna är valda ur den grupp som består k ä n n e t e c k n a t av litium, natrium, kalium, kalcium eller magnesium.
9. Inositoltrifosfat i saltform enligt krav l, k ä n n e t_e c k n a t av att katjonerna är valda ur den grupp som består av aluminium, zink eller järn.
10. Inositoltrifosfat i saltform enligt krav 1, k ä n n e t e c k n a t av att saltet är ett ammonium- salt eller ett organiskt aminsalt. 465 16 10 15 20 25 30 A 26
11. ll. Förfarande för framställning av ett inositol- trifosfat (IP3) valt ur den grupp som består av D- -myo-inositol-l,2,6-trifosfat, D-myo-inositol-l,2,5- -trifosfat, L-myo-inositol-1,3,4-trifosfat och myo- -inositol-l,2,3-trifosfat antingen i syra- eller salt- form, k ä n n e t e c k n a t av att ett inositol- hexafosfatinnehållande material inkuberas vid en tem- peratur av inom området 20-70°C och vid ett pH-värde av 4-8 med fytas tills frigöring av ca 30-60% av den totala esterfosforn uppnås, därefter separering genom kromatografi av den erhållna blandningen för isolering av den inositoltrifosfatinnehàllande fraktionen, var- efter eventuellt denna fraktion underkastas ytterligare kromatografisk separation, och isolering av det speci- fika isomera inositoltrifosfatet i syra- eller salt- form i lösning.
12. Förfarande enligt krav ll, k ä n n e t e c k - n a t av att fytaset är ett jästfytas.
13. Förfarande enligt krav 12, k ä n n e t e c k - n a t av att jästen är bagerijäst.
14. Förfarande För framställning av D-myo-inositol- -l,2,6-trifosfat enligt patentkrav ll, k ä n n e - t e c k n a t och att D-myo-inositol-l,2,6-trifosfatet isoleras därav, att fytaset utgöres av jästfytas direkt i syra- eller saltform i lösning från den bland- ning som erhålles efter det första kromatografisteget.
15. Förfarande enligt krav 14, k ä n n e t e c k - n s t av att jästen är bagerijäst.
16. Inositolfosfatkomposition sammansatt av D-myo- -inositol-l,2,6-trifosfat och minst en av D-myo-ino- sitol-l,2,5-trifosfat, L-myo-inositol-l,3,4-trifosfat och myo-inositol-l,2,3-trifosfat i syra- eller salt- av att den innehåller Form, k ä n n e t e c k n a t 10 465 164 27 20-99,5 vikt% av inositoltrifosfatet och halten D-myo- -inositol-l,2,5-trifosfat ligger inom området 50-100 vikt%, baserat på den totala halten inositoltrifosfat, varvid resten inbegriper andra inositolfosfat än ino- sitoltrifosfat.
17. l7. Komposition enligt krav 16, av att inositoltrifosfatfraktionen är närvarande k ä n n e t e c k - n a d i en mängd av 30-99,5 vikt%.
18. Komposition enligt krav 16, av att inositoltrifosfatet är huvudsakligen k ä n n e t e c k - n a d D-myo-inositol-l,2,6-trifosfat.
SE8504968A 1984-10-23 1985-10-22 Inositoltrifosfat, ett foerfarande foer framstaellning daerav och en komposition innehaallande detta SE465164B (sv)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SE8405295A SE465951B (sv) 1984-10-23 1984-10-23 Isomer av inositoltrifosfat foeretraedesvis i saltform foer anvaendning som terapeutiskt eller profylaktiskt medel samt kompositioner daerav

Publications (3)

Publication Number Publication Date
SE8504968D0 SE8504968D0 (sv) 1985-10-22
SE8504968L SE8504968L (sv) 1986-04-24
SE465164B true SE465164B (sv) 1991-08-05

Family

ID=20357457

Family Applications (6)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SE8405295A SE465951B (sv) 1984-10-23 1984-10-23 Isomer av inositoltrifosfat foeretraedesvis i saltform foer anvaendning som terapeutiskt eller profylaktiskt medel samt kompositioner daerav
SE8503165A SE8503165L (sv) 1984-10-23 1985-06-26 Stabilisator ii
SE8503164A SE8503164L (sv) 1984-10-23 1985-06-26 Stabilisator
SE8504967A SE8504967L (sv) 1984-10-23 1985-10-22 Farmaceutisk komposition och forfarande for behandling av kroppen
SE8504969A SE8504969L (sv) 1984-10-23 1985-10-22 Forfarande for framstellning av en livsmedelskomposition innehallande inositoltrifosfat och kompositionen
SE8504968A SE465164B (sv) 1984-10-23 1985-10-22 Inositoltrifosfat, ett foerfarande foer framstaellning daerav och en komposition innehaallande detta

Family Applications Before (5)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SE8405295A SE465951B (sv) 1984-10-23 1984-10-23 Isomer av inositoltrifosfat foeretraedesvis i saltform foer anvaendning som terapeutiskt eller profylaktiskt medel samt kompositioner daerav
SE8503165A SE8503165L (sv) 1984-10-23 1985-06-26 Stabilisator ii
SE8503164A SE8503164L (sv) 1984-10-23 1985-06-26 Stabilisator
SE8504967A SE8504967L (sv) 1984-10-23 1985-10-22 Farmaceutisk komposition och forfarande for behandling av kroppen
SE8504969A SE8504969L (sv) 1984-10-23 1985-10-22 Forfarande for framstellning av en livsmedelskomposition innehallande inositoltrifosfat och kompositionen

Country Status (19)

Country Link
US (7) US4735936A (sv)
EP (3) EP0179440B1 (sv)
JP (4) JPS61171422A (sv)
AT (3) ATE37788T1 (sv)
AU (3) AU596080B2 (sv)
BE (2) BE903498A (sv)
CH (2) CH666812A5 (sv)
DE (6) DE3569188D1 (sv)
DK (2) DK172857B1 (sv)
FI (3) FI88855C (sv)
FR (2) FR2571967B1 (sv)
GB (3) GB2167283B (sv)
HU (1) HU196077B (sv)
IL (1) IL76777A (sv)
IT (2) IT1190402B (sv)
NO (3) NO854211L (sv)
NZ (1) NZ213855A (sv)
SE (6) SE465951B (sv)
ZA (4) ZA858106B (sv)

Families Citing this family (73)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5095035A (en) * 1981-07-31 1992-03-10 Eby Iii George A Flavor stable zinc acetate compositions for oral absorption
US5330979A (en) * 1984-10-23 1994-07-19 Perstorp Ab Method of treating renal disorders with inositoltriphosphate
SE465305B (sv) * 1986-04-16 1991-08-26 Perstorp Ab Anvaendning av inositolfosfat foer framstaellning av ett laekemedel
US5407924A (en) * 1984-10-23 1995-04-18 Perstorp Ab Method of treating pain using inositol triphosphate
US5128332A (en) * 1984-10-23 1992-07-07 Perstorp Ab Method of treating cardiovascular diseases using inositoltrisphosphate
SE465951B (sv) 1984-10-23 1991-11-25 Perstorp Ab Isomer av inositoltrifosfat foeretraedesvis i saltform foer anvaendning som terapeutiskt eller profylaktiskt medel samt kompositioner daerav
US4735902A (en) * 1984-10-23 1988-04-05 Matti Siren Stabilized composition containing inositoltriphosphate
EP0262227B1 (en) * 1986-03-11 1993-01-20 MITSUI TOATSU CHEMICALS, Inc. Process for the preparation of myoinositol derivatives
JPS63198642A (ja) * 1986-03-11 1988-08-17 Mitsui Toatsu Chem Inc ミオイノシトール誘導体の製造方法
US5057507A (en) * 1986-04-16 1991-10-15 Perstorp Ab Method of alleviating bone damage with inositoltriphosphate
WO1988003365A1 (en) * 1986-11-05 1988-05-19 George Weston Foods Limited Novel improvers for flour and yeast raised baked goods
SE8605063D0 (sv) * 1986-11-26 1986-11-26 Matti Siren Derivatives of cyclohexane
US5274161A (en) * 1986-11-26 1993-12-28 Perstorp Ab Derivatives of cyclohexane
GB8705811D0 (en) * 1987-03-11 1987-04-15 Research Corp Ltd Inositol derivatives
JP2597618B2 (ja) * 1987-12-28 1997-04-09 三井東圧化学 株式会社 光学分割方法
JPH01287035A (ja) * 1988-05-13 1989-11-17 Sanwa Kagaku Kenkyusho Co Ltd 薬物並びにアルコール性中毒の予防剤とその治療剤
JPH01294631A (ja) * 1988-05-19 1989-11-28 Sanwa Kagaku Kenkyusho Co Ltd 糖尿性疾患治療予防剤及び飲食、し好物
SE464059C (sv) * 1988-09-15 1996-12-04 Perstorp Ab Användning av inositoltrifosfat för framställning av läkemedel
US5316770A (en) * 1989-02-16 1994-05-31 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Vitamin D derivative feed compositions and methods of use
US5366736A (en) * 1989-02-16 1994-11-22 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Vitamin D derivative feed compositions and methods of use
US5750348A (en) * 1989-03-08 1998-05-12 The University Of Virginia Patents Foundation Method for detecting insulin resistance
US5427956A (en) * 1989-03-08 1995-06-27 The University Of Virginia Patent Foundation Quantitative analysis for diabetic condition predictor
EP0465508B1 (en) * 1989-03-08 2000-05-31 The University Of Virginia Patent Foundation Pharmaceutical composition for insulin-resistant diabetics
US5428066A (en) * 1989-03-08 1995-06-27 Larner; Joseph Method of reducing elevated blood sugar in humans
SE8902766D0 (sv) * 1989-08-17 1989-08-17 Siren Matti Saett att oeka den farmaceutiska effekten av inositolfosfat samt en beredning med foerbaettrad farmaceutisk effekt
SE8904355D0 (sv) * 1989-12-21 1989-12-21 Perstorp Ab Medicament
US5543576A (en) * 1990-03-23 1996-08-06 Mogen International Production of enzymes in seeds and their use
US5593963A (en) * 1990-09-21 1997-01-14 Mogen International Expression of phytase in plants
KR100225087B1 (ko) * 1990-03-23 1999-10-15 한스 발터라벤 피타아제의 식물내 발현
US7033627B2 (en) 1990-03-23 2006-04-25 Syngenta Mogen B.V. Production of enzymes in seeds and their use
SE9002278L (sv) * 1990-06-28 1991-12-29 Perstorp Ab Anvaendning av inositoltrisfosfat foer framstaellning av ett laekemedel
US6007809A (en) * 1990-08-29 1999-12-28 Chaykin; Sterling Method and product for eliminating undesirable side effects of eating vegetables such as onion or garlic
JP3266249B2 (ja) * 1990-08-29 2002-03-18 スターリング チェイキン タマネギ又はニンニクのような野菜を食べることによる望ましくない副作用の除去方法及び生成物
US5514398A (en) * 1990-11-05 1996-05-07 Amano Pharmaceutical Co., Ltd. Food additive and use thereof
SE9102068L (sv) * 1991-07-03 1993-01-04 Perstorp Ab Derivat av inositol, kompositioner innehaallande dessa samt anvaendning daerav
SE9200547L (sv) * 1992-02-25 1993-06-14 Perstorp Ab En farmaceutisk komposition med foerbaettrad biotillgaenglighet avseende inositolfosfat
US5292537A (en) * 1992-11-12 1994-03-08 Bran Tec, Inc. Method for stabilizing rice bran and rice bran products
JP2696057B2 (ja) * 1993-05-11 1998-01-14 ニチモウ株式会社 穀類を原料とした生成物の製造方法
WO1995005830A1 (en) * 1993-08-20 1995-03-02 The Regents Of The University Of California Polyanion anti-inflammatory agents
SE503122C2 (sv) * 1993-11-22 1996-03-25 Perstorp Ab Användning av en inositoltrisfosfatester för behandling av inflammatoriska tillstånd
SE502989C2 (sv) * 1993-11-22 1996-03-04 Perstorp Ab Användning av en inositoltrisfosfatester för beredning av läkemedel
US5466465A (en) * 1993-12-30 1995-11-14 Harrogate Holdings, Limited Transdermal drug delivery system
SE502574C2 (sv) * 1994-01-25 1995-11-13 Perstorp Ab En farmaceutisk komposition med förbättrad biotillgänglighet hos inositolfosfat
US6451572B1 (en) 1998-06-25 2002-09-17 Cornell Research Foundation, Inc. Overexpression of phytase genes in yeast systems
CA2365418C (en) * 1999-03-31 2009-05-26 Cornell Research Foundation, Inc. Phosphatases with improved phytase activity
US6841370B1 (en) 1999-11-18 2005-01-11 Cornell Research Foundation, Inc. Site-directed mutagenesis of Escherichia coli phytase
WO2001050125A1 (en) * 1999-12-30 2001-07-12 Wake Forest University Cadmium is a risk factor for human pancreatic cancer
US20020193379A1 (en) * 2001-06-05 2002-12-19 Insmed Incorporated Compositions and methods for decreasing the risk of or preventing neural tube disorders in mammals
FR2828206B1 (fr) * 2001-08-03 2004-09-24 Centre Nat Rech Scient Utilisation d'inhibiteurs des lysyl oxydases pour la culture cellulaire et le genie tissulaire
AU2002356880A1 (en) 2001-10-31 2003-05-12 Phytex, Llc Phytase-containing animal food and method
US20050108780A1 (en) * 2002-01-24 2005-05-19 Erasmus University Intracellular antibodies for a retrovirus protein
US7084115B2 (en) 2002-04-29 2006-08-01 Oxyplus, Inc. Inositol pyrophosphates, and methods of use thereof
CA2498017C (en) * 2002-09-13 2016-06-14 Cornell Research Foundation, Inc. Using mutations to improve aspergillus phytases
CA2413240A1 (en) * 2002-11-29 2004-05-29 Mcn Bioproducts Inc. Purification of inositol from plant materials
US20050123644A1 (en) * 2003-01-24 2005-06-09 Cargill, Incorporated Phosphate-containing fertilizer derived from steepwater
US7521481B2 (en) 2003-02-27 2009-04-21 Mclaurin Joanne Methods of preventing, treating and diagnosing disorders of protein aggregation
US20050048165A1 (en) * 2003-03-31 2005-03-03 Sadanandan Bindu Process for the preparation of Chapathi dough with reduced phytic acid level
US7745423B2 (en) * 2004-07-06 2010-06-29 NormOxys, Inc Calcium/sodium salt of inositol tripyrophosphate as an allosteric effector of hemoglobin
US20060258626A1 (en) * 2004-07-06 2006-11-16 Claude Nicolau Use of inositol-tripyrophosphate in treating tumors and diseases
US20060106000A1 (en) * 2004-07-06 2006-05-18 Claude Nicolau Use of inositol-tripyrophosphate in treating tumors and diseases
US20070135389A1 (en) * 2004-07-06 2007-06-14 Claude Nicolau Tumor eradication by inositol-tripyrophosphate
ES2532591T3 (es) * 2005-03-18 2015-03-30 Normoxys, Inc. Sal de calcio y de sodio de mio-inositol 1,6:2,3:4,5 tripirofosfato para el tratamiento del cáncer
US7919297B2 (en) 2006-02-21 2011-04-05 Cornell Research Foundation, Inc. Mutants of Aspergillus niger PhyA phytase and Aspergillus fumigatus phytase
US20070212449A1 (en) * 2006-03-02 2007-09-13 Shamsuddin Abulkalam M Reduction of the titratable acidity and the prevention of tooth and other bone degeneration
US8540984B2 (en) * 2006-08-03 2013-09-24 Cornell Research Foundation, Inc. Phytases with improved thermal stability
US20090214474A1 (en) * 2006-11-01 2009-08-27 Barbara Brooke Jennings Compounds, methods, and treatments for abnormal signaling pathways for prenatal and postnatal development
US20080103116A1 (en) * 2006-11-01 2008-05-01 Jennings-Spring Barbara L Method of treatment and compositions of D-chiro inositol and phosphates thereof
US20110218176A1 (en) 2006-11-01 2011-09-08 Barbara Brooke Jennings-Spring Compounds, methods, and treatments for abnormal signaling pathways for prenatal and postnatal development
AU2008246061A1 (en) * 2007-05-01 2008-11-06 Normoxys, Inc. Erythropoietin complementation or replacement
US8192734B2 (en) 2007-07-09 2012-06-05 Cornell University Compositions and methods for bone strengthening
CN101951921A (zh) * 2007-09-17 2011-01-19 比奥尼里斯有限责任公司 用于治疗恶病质的方法和手段
CN102971415B (zh) * 2011-07-01 2016-06-01 株式会社资生堂 血小板源性生长因子-bb产生增强剂、以及包含该增强剂的间充质系干细胞产生促进剂、干细胞稳定剂和真皮再生剂
FR3017134B1 (fr) * 2014-02-06 2018-04-20 Lesaffre Et Compagnie Levure biologique, procede d'obtention et utilisations

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2723938A (en) * 1952-12-05 1955-11-15 Bristol Lab Inc Aqueous penicillin suspensions comprising inositol phosphoric acids and their salts
US3591665A (en) * 1967-09-08 1971-07-06 Mitsui Toatsu Chemicals Process for producing phytic acid
FI51469C (sv) * 1968-01-10 1977-01-10 Morinaga Milk Industry Co Ltd Förfarande för avlägsning av radioaktivt strontium 90 ur flytande livs medel eller vatten.
JPS50111246A (sv) * 1974-02-14 1975-09-01
US4154824A (en) * 1976-07-20 1979-05-15 Interx Research Corporation Nonbitter tasting potassium product for oral administration to warm-blooded animals and method for preparing same
JPS53124636A (en) * 1977-04-04 1978-10-31 Kisaku Mori Method of increasing meranine contained in animal and plant
DE2740053A1 (de) * 1977-09-06 1979-05-03 Klaus Prof Dr Med Gersonde Verwendung von allosterischen effektoren mit hilfe von lipidvesikeln ueber eine irreversible inkorporierung zwecks verbesserter o tief 2 -entladung des haemoglobins in erythrozyten
JPS5486666A (en) * 1977-12-22 1979-07-10 Ajinomoto Kk Cola beverage
JPS5798292A (en) * 1980-12-09 1982-06-18 Jiyaade:Kk Powdery phytic acid and its preparation
JPS58198254A (ja) * 1982-05-14 1983-11-18 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd 加工食品の品質改良法
SE450325B (sv) * 1983-02-23 1987-06-22 Tricum Ab Kostfiberprodukt baserad pa skaldelar fran froet hos ceralier
US4735902A (en) * 1984-10-23 1988-04-05 Matti Siren Stabilized composition containing inositoltriphosphate
SE465951B (sv) * 1984-10-23 1991-11-25 Perstorp Ab Isomer av inositoltrifosfat foeretraedesvis i saltform foer anvaendning som terapeutiskt eller profylaktiskt medel samt kompositioner daerav
EP1276854A2 (en) 2000-04-13 2003-01-22 Novozymes A/S Extracellular expression of pectate lyase using bacillus or escherichia coli

Also Published As

Publication number Publication date
FR2571967B1 (fr) 1988-02-05
AU4893185A (en) 1986-05-01
US4794014A (en) 1988-12-27
JPS61171422A (ja) 1986-08-02
US4777134A (en) 1988-10-11
JPS61171789A (ja) 1986-08-02
SE8503165D0 (sv) 1985-06-26
GB8526079D0 (en) 1985-11-27
ATE41853T1 (de) 1989-04-15
DE3569188D1 (en) 1989-05-11
IL76777A (en) 1990-09-17
JPH0515719B2 (sv) 1993-03-02
FI854128A0 (fi) 1985-10-22
FR2571967A1 (fr) 1986-04-25
GB2167283B (en) 1989-05-24
EP0179441B1 (en) 1989-04-05
GB2169602A (en) 1986-07-16
NO168227B (no) 1991-10-21
FI82474C (sv) 1991-03-11
NO854211L (no) 1986-04-24
ZA858107B (en) 1986-06-25
US4851560A (en) 1989-07-25
DE3537569A1 (de) 1986-05-22
GB8526080D0 (en) 1985-11-27
EP0179439B1 (en) 1988-10-12
HU196077B (en) 1988-09-28
GB2169602B (en) 1988-10-19
NO169010B (no) 1992-01-20
NO169010C (no) 1992-04-29
CH668597A5 (fr) 1989-01-13
FI88855C (sv) 1993-07-26
DK483285D0 (da) 1985-10-22
SE8504969D0 (sv) 1985-10-22
ZA858106B (en) 1986-06-25
AU4893085A (en) 1986-05-01
AU596080B2 (en) 1990-04-26
JPH037233B2 (sv) 1991-02-01
JPH0354924B2 (sv) 1991-08-21
FR2573080B1 (fr) 1988-11-10
DK483385A (da) 1986-04-24
SE8503164L (sv) 1986-04-24
FI854128L (fi) 1986-04-24
NO168227C (no) 1992-01-29
DE3577851D1 (de) 1990-06-28
SE8504967D0 (sv) 1985-10-22
IT8522574A0 (it) 1985-10-22
EP0179440B1 (en) 1990-05-23
HUT40674A (en) 1987-01-28
DK172852B1 (da) 1999-08-16
GB8526078D0 (en) 1985-11-27
NO854212L (no) 1986-04-24
FI88855B (fi) 1993-04-15
SE8504968D0 (sv) 1985-10-22
GB2167283A (en) 1986-05-29
SE8405295L (sv) 1986-04-24
NZ213855A (en) 1989-05-29
FI854126L (fi) 1986-04-24
IT1190402B (it) 1988-02-16
DE3537550A1 (de) 1986-05-15
JPS61181347A (ja) 1986-08-14
SE8504968L (sv) 1986-04-24
EP0179441A2 (en) 1986-04-30
SE8504969L (sv) 1986-04-24
US4735936A (en) 1988-04-05
SE465951B (sv) 1991-11-25
FR2573080A1 (fr) 1986-05-16
JPS61171491A (ja) 1986-08-02
US5003098A (en) 1991-03-26
FI85490C (sv) 1992-04-27
SE8504967L (sv) 1986-04-24
BE903497A (fr) 1986-02-17
SE8503164D0 (sv) 1985-06-26
AU4893285A (en) 1986-05-01
IT8522573A0 (it) 1985-10-22
IL76777A0 (en) 1986-02-28
EP0179440A1 (en) 1986-04-30
DK172857B1 (da) 1999-08-16
AU589378B2 (en) 1989-10-12
FI854127A0 (fi) 1985-10-22
SE8503165L (sv) 1986-04-24
EP0179441A3 (en) 1988-03-16
FI854126A0 (fi) 1985-10-22
GB2167298A (en) 1986-05-29
BE903498A (fr) 1986-02-17
JPH0338824B2 (sv) 1991-06-11
US4797390A (en) 1989-01-10
AU582594B2 (en) 1989-04-06
GB2167298B (en) 1988-11-02
DK483285A (da) 1986-04-24
ATE53038T1 (de) 1990-06-15
SE8405295D0 (sv) 1984-10-23
FI854127L (fi) 1986-04-24
US4734283A (en) 1988-03-29
ATE37788T1 (de) 1988-10-15
FI85490B (fi) 1992-01-15
DE3565464D1 (en) 1988-11-17
DK483385D0 (da) 1985-10-22
CH666812A5 (fr) 1988-08-31
EP0179439A1 (en) 1986-04-30
FI82474B (fi) 1990-11-30
IT1190403B (it) 1988-02-16
ZA858105B (en) 1986-06-25
ZA858108B (en) 1986-06-25
DE3537542A1 (de) 1986-05-15
NO854213L (no) 1986-04-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SE465164B (sv) Inositoltrifosfat, ett foerfarande foer framstaellning daerav och en komposition innehaallande detta
CA1337338C (en) Inositoltriphosphate
EP0508488B1 (en) Use of inositol triphosphate for the treatment of inflammations
US5023248A (en) Method of treating diabetes with inositol triphosphate
Hawthorne The inositol phospholipids
EP0338407A1 (de) Neue Alkylphosphonoserine, Verfahren zu deren Herstellung und diese enthaltende pharmazeutische Mittel
Sacktor et al. Dephosphorylation of adenosine triphosphate by tissues of the American cockroach, Periplaneta americana (L.)
Aldman et al. Inhibition of alkaline phosphatase by oestradiol phosphates
SE458121B (sv) Stabiliserad komposition samt foerfarande foer stabilisering
Chakrabarti et al. CYCLITOLS AND PHOSPHOINOSITIDES
Plaut Inosine diphosphatase (nucleoside diphosphatase) from mammalian tissues: 3.6. 1.6 Nucleosiddiphosphate phosphohydrolase

Legal Events

Date Code Title Description
NAL Patent in force

Ref document number: 8504968-2

Format of ref document f/p: F

NUG Patent has lapsed

Ref document number: 8504968-2

Format of ref document f/p: F