FI73222B - Foerfarande foer framstaellning av nya makrolidantibiotika. - Google Patents

Description

1 73222

Menetelmä uusien makrolidiantibioottien valmistamiseksi Tämän keksinnön kohteena on menetelmä uusien makrolidiantibioottien ja niiden suolojen valmistamiseksi, jot-5 ka muodostavat uuden ryhmän C-20 mukailtuja tylosiinin, desmykosiinin, makrosiinin, laktenosiinin, 2"'-O-demetyy-limakrosiinin (DOMM), 2"-O-demetyyliasetenosiinin (DOML), dihydrotytosiinin (relomysiini) , dihydrodesmykosiinin, di-hydromakrosiinin, dihydrolaktenosiinin, dihydro-DOMM:in, 10 dihydro-DOML:in ja 4'-deoksidesmykosiinin johdannaisia, jotka ovat käyttökelpoisia antibiootteina ja antibioottien välituotteina.

Parannettuja antibiootteja tarvitaan jatkuvasti. Ihmisten tautien käsittelyyn käyttökelpoisten antibioot-15 tien lisäksi tarvitaan parannettuja antibiootteja myös eläinlääketieteen kentällä. Lisääntynyt teho, laajentunut bakteerintorjuntaspektri, lisääntynyt in vivo teho ja parantuneet farmaseuttiset ominaisuudet (kuten suurempi oraalinen absorboituminen, suuremmat pitoisuudet veressä 20 tai kudoksissa, pitempi puoliintumisaika elimistössä ja edullisempi erittymisnopeus ja -tie ja aineenvaihduntano-peus tai -malli) ovat joitakin parannettujen antibioottien päämääriä.

Tylosiini on hyvin tunnettu eläinlääketieen alan 25 terapeuttinen aine. (Katso esim. Tetrahedon Letters 1970, 2339 ja US-patentti nro 3 178 341). Tylosiinia ja tylosiinin kaltaisia makrolideja on mukailtu yritettäessä saada ominaisuuksiltaan parantuneita johdannaisia. Suuri määrä johdannaisia on tehty, mutta parannusta aktiivisuudes-30 sa ei aikaisemmin ole todettu halutussa määrin.

Tylosiini ja sen valmistus käyttämällä Streptomyces fradiae NRRL 2702 tai 2703 on kuvattu US-patentissa nro 3 178 341. Desmykosiini ja desmykosiinin valmistus tylosiinin lievästi happamassa hydrolyysissä on myös kuvattu 35 US-patentissa nro 3 178 341.

4'-deoksidesmykosiini ja sen valmistusmenetelmä des- 2 73222 mykosiinista on kuvattu julkaisussa A. Tanaka et ai., J. Antibiotics 34, 1381-84 (1981).

Makrosiini ja sen valmistus käyttämällä Streptomy-ces fradiae NRRL 2702 tai 2703 on kuvattu US-patentissa 5 nro 3 326 759. Laktenosiini ja laktenosiinin valmistus lievästi happamassa makrosiinin hydrolyysissä on myös kuvattu US-patentissa nro 3 326 759.

DOMM ja sen valmistus käyttämällä Streptomyces fradiae ATCC 31669 on kuvattu EP-patenttijulkaisussa 45157. 10 DOML ja DOMLtn valmistus DOMM:n lievästi happamassa hydrolyysissä on myös kuvattu EP-patenttijulkaisussa 45157.

Nyt on keksitty, että pelkistävä tylosiinin ja edellä mainittujen tylosiinin kaltaisten makrolidien C-20-al-dehydiryhmän aminointi käyttäen tiettyjä syklisiä amiineja 15 aminoivina aineina johtaa aktiivisuudeltaan merkittävästi parantuneisiin johdannaisiin.

Yksityiskohtaisemmin keksinnön kohteena on menetelmä uusien makrolidiantibioottien valmistamiseksi, joilla on kaava (I) 20 0

II

ί r®3 CH3 \ /* *\19 20

• 6*-CH9-CH -R

Il \ i z.

25 7 λ / CH-} A

4 23 / 3\ / \ (I) r4-Ch2- , f \

I /OH

K /

30 \-i-V

I '3 CH3 rj jossa R on monosyklinen tyydytetty tai tyydyttämätön yhden typpi-atomin ainoana heteroatominaan sisältävä rengas, renkaan 35 sitoutuessa typpiatomin välityksellä ja sisältäessä 5-16 rengasatomia, tai bisyklinen tai trisyklinen tyydytetty 3 73222 tai tyydyttämätön rengas, joka sisältää yhden typpiatomin ainoana heteroatomina, jolloin rengas on sitoutunut typpiatomin välityksellä ja sisältää 8-20 rengasatornia, monosyk-lisen, bisyklisen tai trisyklisen renkaan ollessa vapaava-5 lintaisesti substituoitu yhdessä tai useammassa hiiliatomissa, C^-C^-alkyylillä, fenyylillä, hydroksilla, di-(Ci-C4-alkyyli)karbamoyylillä, piperidinolla, bentsyylil-lä tai etyleenidioksilla; 3

R on hydroksi tai OH

10 C-[-prr / V 3

-O—· ·-OH

\ / (mykarosyylioksi) ΙΪ4 on XcH3 CH, CH3

15 ^H3 tai | tai I

•—° »—o v-o HO—y~°~ H0—.*-0— H0\ y»—ö — OCH3'N'OCH3 KO ^ OH H0 0CH3 (mykinosyylioksi) 20 ja niiden happoadditiosuolojen valmistamiseksi.

Kun R on tyydyttymätön rengas, edustavia ryhmiä ovat 1,2,5,6-tetrahydropyridin-l-yyli; 1,2,3,4-tetrahydro-kinolin-l-yyli; 1,2,3,4-tetrahydroisokinolin-2-yyli, indol-l-yyli; isoindol-2-yyli; indolin-l-yyli; isoindo- 25 lin-2-yyli; 2,3,4,5-tetrahydro-lH-l-bentsatsepin-l-vyli; 2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-bentsatsepin-2-yvli; 2,3,4,5-tet-rahydro-lH-3-bentsatsepin-3-yyli; pyrrol-l-yyli; lH-atse-pin-l-yyli; karbatsol-9-yyli; akridin-10-yyli; ja akri-din-9-oni-10-yyli.

20 Kun R on tyydytetty bisyklinen tai trisyklinen rengas, edustaviin ryhmiin kuuluvat dekahydrokinolin-1-yyli; dekahydroisokinolin-2-yyli; dekahydroksyklohepta-^b/-pyrrol-l-yyli; dekahydrosyklohepto/c7pvrrol-2-yyli; dekahydrosyklopent/c7atsepin-2-yyli; dekahydrosyklopent- 35 i/d7atsepin-3-yyli; atsebisykloheptanvyliryhmä kuten 3-atsabisyklo/3.2.o7heptan-3-yyli; atsabisyklo-oktanvyli-ryhmä kuten 6-atsabisyklo/3.2.l7oktan-6-yyli; atsabisyklo- 4 73222 nonanyyliryhmä kuten 3-atsabisyklo/3.2.27nonan-3-yyli; atsabisyklodekanyyli ryhmä kuten 4-atsabisyklo/5.3.o7de- kan-4-yyli; atsatrisyklotetradekanyyliryhmä kuten 2-at-_ 3 6“ satrisyklo/6.2.2.2 _/-tetradekan-2-yyli; 1-atsaspiro-5 /4.57dekan-l-yyli; ja dodekahydrokarbatsol-9-yyli.

Kun R on substituoitu rengas, edustaviin R-ryhmiin kuuluvat 1,3,3-trimetyyli-6-atsabisvklo/3.2.ljoktan- 6-yyli; 4-piperidinopiperidin-l-yyli; 3,3,5-trimetyyli-heksahydroatsepin-l-yyli; 4-hydroksipiperidin-l-vyli; 10 3-(Ν,Ν-dietyylikarbamoyyli)piperidin-l-yyli; ja vastaa vat.

Ryhmissä, jotka sisältävät "C^-C^-alkyylirvhmän", alkyyliryhmä voi olla suoraketjuinen, haarautunut tai syklinen.

15 Keksinnön mukaiselle menetelmälle uusien kaavan (I) mukaisten makrolidijohdannaisten valmistamiseksi on tunnusomaista, että a) pelkistetään aldehydi, jolla on kaava (III) 0 2Ö ! S 'N— CH, H I 3 o CH3\ / \ »

·—CH-, -CH

I I 2 25 4 CH3\/\

R 2 λ * i | »H

ch3 * /.-N(CH3)2 / #\ 3

30 CH3 R

3.4 jossa R ja R merkitsevät samaa kuin kaavassa (I), kaavan HR mukaisen amiinin läsnäollessa, jossa R merkitsee samaa kuin kaavassa (I), tai

35 b) saatetaan amiini, jolla on kaava HR, jossa ,R

* merkitsee samaa kuin kaavassa (I), reagoimaan makrolidin kanssa, jolla on kaava (IV) 5 73222 0 A — 3 |l I 3 CH > \

5 ·—CH -CH -L

l (IV) R "CH2~[ f \

C<\o/K/-OH l_/H

CH ^ — N (CH-,) „ C 3 \ / 32

/—\R3 CH. R

j 15 jossa L on poistuva ryhmä, joka pystyy korvautumaan amiinilla HR, inertissä orgaanisessa liuottimessa.

Kaavan (III) mukaisiin aldehydilähtöaineisiin kuuluvat seuraavat tunnetut kaavan (III) mukaiset makrolidit: R3 R4 2 0 5- tylosiini mykarosyylioksi mykinosyylioksi desmykosiini OH mykinosyylioksi C)b 25 makrosiini mykarosyylioksi —0

Ofl \)Clb qb . , ... N·—o laktenosuni OH HO-·'' \-0- 30 ·Χ

Oil X0CH^ CHa /*—°\ 2"'-O-demetyyli- mykarosyylioksi HO-· *-0- makrosiini (DOMM) ·—· H</ X0H 35 qb x·—0 2"'-O-demetyyli- OH \-0-

laktenosiini _S

oil N0H

6 73222

Kaavan (III) mukaiset aldehydilähtöaineet muutetaan kaavan (I) mukaisiksi amiineiksi pelkistämällä kaavan HR mukaisen amiinin läsnäollessa, jossa R merkitsee samaa kuin kaavassa (I). Edullinen pelkistävä aine on syaaniboorihyd-5 ridi kaavaltaan MBH^CN, jossa M on ryhmän IA metalli tai ammonium. Natriumsyaaniboorihydridi on edullinen pelkistys-aine. Reaktio suoritetaan edullisesti käyttämällä ylimäärää kaavan HR mukaista amiinia, tyypillisesti 2-3 ekvivalenttia. Reaktioliuotin on tavallisesti inertti polaarinen 10 liuotin kuten C^-C^-alkanoli, edullisesti metanoli. Reaktio-lämpötila voi olla välillä 0-60°C, edullisesti 20-40°C. Neutraalit olosuhteet (pH 6-8) ovat edulliset. Dehydratoi-via aineita kuten 4A molekyyliseulaa tai vedetöntä natrium-tai magnesiumsulfaattia voidaan edullisesti käyttää reak-15 tiossa.

Kaavan (I) mukaiset amiinit voidaan myös valmistaa saattamalla kaavan HR mukainen amiini, jossa R merkitsee samaa kuin kaavassa (I), reagoimaan kaavan (IV) mukaisen mak-rolidin kanssa, jossa L on amiinilla korvautumaan pystyvä 20 poistuva ryhmä. Sopiviin poistuviin ryhmiin kuuluvat esi merkiksi trifluorimetaanisulfonyyli (triflaatti) ja jodi.

Kaavan (IV) mukaiset lähtöaineet valmistetaan seuraa-vista tunnetuista, kaavaa (IV) vastaavista makrolideista, joissa L:n tilalla on OH: 25 R3 R4 dihydrotylosiini mykarosyylioksi mykinosyylioksi (relomysiini) dihydrodesmykosiini OH mykinosyylioksi 30 CHa dihydromakrosiini mykarosyylioksi Μ0-·χ /—0- of\ Jena CHa 3 c .·—0 dihydrolaktenosiini OH HO-·^ \_o- θύ JcHa 7 73222 _^3_ R4 CHa °\ 5 dihydro-DOMM mykarosyylioksi HO-·^ CHa *—0χ dihydro-DOML OH ,10~\ 10 JiTifl Nämä makrolidit valmistetaan pelkistämällä vastaavasti tylosiinin, desmykosiinin, makrosiinin, laktenosii-nin, DOMM:n tai DOMLrn aldehydiryhmä.

15 Edellä esitettyjen makrolidien C-20 -hydroksyyli- ryhmä muutetaan sitten halutuksi poistuvaksi ryhmäksi L sinänsä tunnetuilla menetelmillä. Esimerkiksi C-20 hydrok-syliryhmä voidaan muuttaa triflaattiryhmäksi saattamalla makrolidi reagoimaan aktivoidun trifluorimetaanisulfoni-20 hapon johdannaisen, kuten trifuorimetaanisulfonihappo- anhydridin tai trifluorimetaanisulfonyylikloridin kanssa emäksen läsnäollessa reagoimattomassa orgaanisessa liuot-timessa. Haluttaessa triflaattiryhmä voidaan muuttaa jodi-ryhmäksi esimerkiksi saattamalla eristämätön sulfonihappo-25 esterivälituote reagoimaan jodidi-ionilähteen kuten tetra-n-butyyliammoniumjodidin tai natriumjodidin kanssa. Dihydrodesmykosiinin, dihydrolaktenosiinin ja dihydro-DOML:n tapauksessa 20-jodijohdannainen voidaan muodostaa suoraan lisäämällä jodia sopivaan liuottimeen kuten dimetyy-30 liformamidiin liuotettuna 20-dihydromakrolidijohdannaisten ja trifenyylifosfiinin liuokseen typpi-ilmakehässä.

Poistuva ryhmä C-20-asemassa voidaan sitten korvata reaktiossa amiinin HR kanssa sopivassa reagoimattomassa orgaanisessa liuottimessa kuten asetonitriilissä kaa-35 van (I) mukaisten yhdisteiden tuottamiseksi.

s 73222 Tämän keksinnön mukaiset C-20-mukaillut johdannaiset muodostavat suoloja, erikoisesti happoadditio-suoloja. Nämä happoadditiosuolat ovat myös hyödyllisiä antibiootteina. Toisesta näkökulmasta tällaiset suolat 5 ovat käyttökelpoisia välituotteina, esimerkiksi johdannaisten eristämiseksi ja puhdistamiseksi. Lisäksi suoloilla on parantunut veteen liukenevuus.

Edustaviin sopiviin suoloihin kuuluvat sellaiset suolat, jotka muodostetaan vakioreaktioissa sekä orgaa- 10 nisten että epäorgaanisten happojen kanssa kuten rikki-, kloori-, fosfori-, etikka-, meripihka-, sitruuna, maito-, maleiini-, fumaari-, palmitiini-, kloori-, pamoe-, lima-, D-glutamiini-, d-kamferi-, glutaari-, glykoli-, ftaali-, viini-, muurahais-, lauriini-, steariini-, sa-15 lisyyli-, metaanisulfoni-, bentseenisulfoni-, sorbiini-, pikriini-, bentsoe-, kaneli- ja vastaavien happojen kanssa.

Tämän keksinnön mukaisiin kuvaaviin C-20-mukail-tuihin johdannaisiin kuuluvat taulukoissa I-VI luetellut 20 yhdisteet.

9 73222

Taulukko I

Tylosiinin3 kuvaavia C-20 mukailtuja johdannaisia 5

Yhdiste R

Tl pyrrolidin-l-yyli T2 piperidin-l-yyli T3 4-hydroksipiperidin-l-yyli 10 T4 4-fenyylipiperidin-l-yyli T5 heksahydroatsepin-l-yyli T6 oktahydroatsokin-l-yyli T7 oktahydro-lH-atsonin-l-yyli T8 dekahydroatsekin-l-yyli 15 T9 atsasykloundekan-l-yyli T10 atsasyklotridekan-l-yyli

Til 1,2,3,4-tetrahydrokinolin-l-yyli T12 1,2,3,4-tetrahydroisokinolin-2-yyli T13 3-atsabisyklo/3.2.27nonan-3-yyli 20 a 4 / \ 3 R = HO—· »-0— · ja R 3 mykarosyylioksi 25 n CHa CHz 10 73222

Taulukko II

Desmykosiinina kuvaavia C-20-mukailtuja johdannaisia 5

Yhdiste nro _R_ R3

Dl pyrrolidin-l-yyli OH

Dia " H

10 D2 piperidin-l-yyli OH

D2a " H

D3 4-hydroksipiperidin-l-yyli OH

D3a " H

D4 4-fenyylipiperidin-l-yyli OH

15 D4a " H

D5 heksahydroatsepin-l-yyli OH

D5a H

Dg oktahydroatsokin-l-yyli OH

D6a " H

20 D7 oktahydro-lH-atsonin-l-yyli OK

D7a H

D8 dekahydroatsekin-l-yyli OH

D8a " H

09 atsasykloundekan-l-yyli OH

25 D9a " H

D10 atsasyklotridekan-l-yyli OH

DlOa " H

JHa

30 a R4 = HO—; ja R3 = OH

La 11 73222

Taulukko II jatkuu 5 Yhdiste nro, _ R _

Dll 1,2,3,4-tetrahydrokinolin-l-yyli OH

Dlla " H

D12 1,2,3,4-tetrahydroisokinolin-2-yyli qh

D12a M H

*·0 D13 4-piperidinopiperdin-l-yyli OH

Dl3a " H

D14 3-atsabisyklo/3.2.27nonan-3-yyli 0H

D14a " H

Dl5 3-(N,N-dietyylikarbamoyyli) piperi-

15 din-l-yyli -jH

D15a " H

D16 4-(N,N-dimetyyliamino)heksahydroat-

sepin-l-yyli 0H

Dl6a " H

2Q D17 2-atsabisyklo/2.2.27oktan-2-yyli

D17a " H

D18 dekahydrosyklopent/d7atsepin-3-yyli

Dl8a " h D19 l-atsaspiro/4.57dekan-l-yyli ^

25 D19a " H

D20 dekahydrokinolin-l-yyli 0H

D20a " H

D21 1,3,3-trimetyyli-6-atsabisyklo

/3.2.l7oktan-6-yyli OH

D21a " „

30 H

D22 1,2,3,6-tetrahydropyridin-l-yyli qh

D22a " H

12 732 2 2

Taulukko II jatkuu

Yhdiste nro _R_ r3 5 D23 3,3,5-trimetyyliheksahyd- roatsepin-l-yyli(isomeeri 1)

Un

D23a " H

D24 " (isomeeri 2) 0H

D24a « " H

10 D25 dodekahydrokarbatsol-9-yyli oh

D25a " H

D26 4-fenyyli-l,2,3,6-tetrahydro-

pyridin-l-yyli OH

D26a ” H

D27 4-bentsyyli-piperidin-l- nH

yyii n

D27a .. H

D28 4-(etyleenidioksi)-piperi-

din-l-yyli OH

D28a " H

D29 dekahydroisokinolin-2-yyli QH

20 D29a » H

D30 7-atsabisyklo/2.2.l7heptan-

7-yyli OH

D30a " H

°31 pyrrol-l-yyli OH

25 D31a » H

D32 karbatsol-9-yyli OH

D32a H

13 73222

Taulukko III

Makroniinina kuvaavia C-20 mukailtuja johdannaisia

5 Yhdiste nro R

Ml pyrrolidin-l-yyli M2 4-fenyylipiperidin-l-yyli M3 heksahydroatsepin-l-yyli M4 oktahydroatsokin-l-yyli 10 M5 oktahydro-lH-atsonin-l-yyli M6 atsasyklotridekan-l-yyli M7 1,2,3,4-tetrahydroisokinolin-2-yyli M8 3-atsabisyklo/3.2.27nonan-3-yyli 15 A.

a R^ = HO—· ^*—0— ; ja RJ = mykarosyylioksi 20 HÖ 9 CHa 14 73222

Taulukko IV

Laktenosiinina kuvaavia C-20 mukailtuja johdannaisia

5 Yhdiste nro R

LI pyrrolidin-l-yyli L2 piperidin-l-yyli L3 4-fenyylipiperidin-l-yyli L4 heksahydroatsepin-l-yyli -^Q L5 oktahydroatsokin-l-yyli L6 oktahydro-lH-atsonin-l-yyli L7 atsasyklotridekan-l-yyli L8 1,2,3,4-tetrahydroisokinolin-2-yyli L9 3-atsabisyklo/3.2.27nonan-3-yyli •^5 L10 l,3,3-trimetyyli-6-atsabisyklo/3.2.l7- oktain-6-yyli CHa Λ—-Cl

20 a R4 = HO-/ J r3 = °H

ηΠ CHs 15 73222 Tämän keksinnön mukaiset johdannaiset estävät patogeenisten bakteereitten kasvua, erikoisesti gram-positiivisten bakteereitten, Mycoplasma-lajien ja gram-ne-gatiivisten bakteereitten kuten Pasteurella-lajien. Joh-5 dannaiset ovat erikoisen hyödyllisiä Pasteurella-lajeja kuten P. multocida ja P. hemolytica vastaan ja Mycoplas-ma-lajeja kuten M. gallisepticum ja M. hyopneumoniae (sikojen mykoplasmakeuhkokuumeen aiheuttava aine) vastaan.

Minimi inhiboiva väkevyys (MIC), jossa kuvaavat 10 yhdisteet inhiboivat tiettyjä bakteereita, on annettu taulukoissa IX ja X. MIC-arvot taulukossa IX määritettiin tavallisilla agar-laimennuskokeilla. MIC-arvot taulukossa X saatiin käyttämällä tavanomaisia lihaliemilaimen-nusmikrotiitterikokeita.

16 73222 mmm ·* · ^ m r-irHCNi—iHooovomcvim ι i vo

r-I rH m <—( iH

m vooiNeeofN^N ι looooi ι i

Sm (N oi

«H ι—I

m m m <n »h (NfMmcNmrHE-tm Q - «-»•’»Z-

OOOOOO O^TTprpoOiNCNVO

m m rH

o m m m m m cn js m fn rH CN<NfN<NCNi— S Q ' - ' ' ---2

S OOOOOO O^'^l'COOJ'fCO

» '1? mmmmmcsmm > vo -

.j Q OOOOOOOO^rCOvOVOTrajVO

ι) i—( rH VO CM rH

MJ Ή 73 mmm

υ ra mm mmcMCNCN

—I m r r · r *· r »-

2 Q OOi—(OOOOOfSOJOOOOrpoOOO

G jQ ^ 21

X) (U m CN

X t) ij ^ ^ «N m r^ in m^

H S .5 Q OOrHOOOOOCOOOvOOOCOTTCO

o -h T3 ^ 2! 2! ί in r\ mmm

^ _£j jj1 mmmmmcMCNCN

X Q OOOOOOOOrH(NOOOO-«P^P(N

to \o vo m ^ £ -n M * tT>

7X rH CNCHtNCNCNi—IrHOiNVOvOvol I0D

Q m rH rH rH CN

(0 ^ G

C rH

S S

O W H Φ .X, Ό m .‘uh π rH O O W UI <N O X j ^ e ·ι—iom-H)_(0s j-(vo · rv.

A) rHTPTTrHO&.CJnJVOO^ X, X > X Cfl -rl W Λ X vo 3 E W en a; -«r o w m a> a> a <x> <a rns

Zj 3 <D G (0 N O O M

qj ό <d -h CrHwtn

(0 VH= = = -H=DvC.m Q)=Z

5 3 aoo-2s3

H «J <D >i H 5 -H -H

C CL, 3 "h Ή rH = = , tn ui o r1 c o A d 3 w c w -h o cm -h u υ 3 cu

ι 3 o ου m A

Λ S o o o 3 -H

^ Zj O O O rH JC

3 0 o o -n o £ rH S S S rH S 0= = = jS=-H= = S, >- >, jj a m g1 JS -G cu o o 3 cl cu v e js

rn «J HJ >H a) O

O HJ 4J 4J nj U) ^ m w CO s u I? 73222 tn m tn tn in m m m m rH ·»·* r ·» w

O OOOOOoOf-tTTOOVOOO I 00 TT

rH (N U3

rH

tn rH in m m in m cn tn |-H ** » ·*··» V ^

O OOOOOoOnjoooorrcoi ι I

to in te mtnmininctj oin t/) p·* 3 O ΟΟΟΟΟοΟΟττοονΟΌττττνΟ

0 rH rH VO VO rH

in

H

> nooootooooorrrHooca«NTj<Tr)ii rl Q H in ro to to

rl rH

-P

X m in rö m in in m m m m * ·- r ·“ V- *-

C Q OOrHOrHOOOtOtOtOtOI ItO

3 O rH rH rH rH rH

d c Λί Ή +J U m •^'Taj^rpnj^rtooolcoaDi ι i

d -P rH rH <N CM <N

•| t O rH rH rH

O Λ X -H 0) H rQ +> · •H U) •rl -P ·Η to ·<Τ·Ν·α0Ν·Ν·<ΝίΝΟΟΙ I TJ· I I I | ^ G 'O EH to Λ (0 £

M >H

a> c a)

E O) O

•d -P W Tr CNCNCNCNtNrHi—ICOtNlOOtO I | |

tn tn |J n rH rH rH

W -H

d C C

d ^r^*HrooTr^r(NCN<Nllcoooiii 'OS ro (Nm

rH rH

o •ro

rH

Q) (li •ro W M dl Ή 3 ό ro · to -P rHOOWtniNO^ PJ r-

rH »rHOrO-HMlN ptO

d H tf »f H U (¾ (J d Ό O U

2 X > X CO -d « Οι X tO

X E tn at <u rj· g W μ Hl 11 Q 71 O! rH 2 « d <ucd n o u w

ι υ >ΰ<υ·Η CrHtqgH

O Ρ=ϊ = ·Η= CP C <U=2 7 s aoo-gsd

Λ d <W >H E 5 Ή -H

U O, d HH rH = : tn in <u p? c o d 3 m c w -h o ,o 0 3a ‘3 0 O O tn m

So O CJ 3 -H

.2 O O O rH SX

do ου -do drHSSSrHS 0* = = .3=·Ηϊ: 2, >1 >i -p a u S Ä .CO* 0 0 3 a a o e c 5 d d )h <u υ S 4J -P -p a tn £ tn w to = h 18 73222 tn m m m tn in m m m m (M ·- * ·" »· »> r· ·> O ΟΟιΗΟΟΟΟΟ'Τ'β'νβΟΟΟΟΟΟΓΜ rH rg cg ro

rH <—I

tn tn m tn m m m m (N ·— ·- r· r- ».

to Ω OOrHOOOOtH^COmCO^^prvl 3 ro vo vo ro 3 tn

•H

> roinin in in in m tn •H m ^ ^ ^ r· ·# r»

•Η Ω OOrHOOOOOH’OOVOCQrT'TCN

P p-t vo vo ro Λί in in <0 m m m m m (N ·» ^ r* r- r G CN i—ΙΟι—lOOOOrHCOCOVOCOI | ^j· d) Ω i—i vo

G •H

+j -P in m tn 3 0 <“t ·-··— 3 O m rHiHrHrHrHOOO'^OOmvOn'^m M -<-i Ω ro i—( vo vo ro •P Λ

fO *H

•ro -P λ mmm

G o mmmmmmcNrH

X to o m h -p o oooooooooooovovocooom _ G M rH h m m ro

O O *P rH rH

-P . Ό mm X v> xl mmm 3 -h > o\ ·· - - '—I <0 CU H rH i—trHiHi—lOOOVOVOVOVOOOCOm P G O Q rH r-t h h cg m ro

fö G W rH rH

E-· m Ό Λ m O m p ro iH mmrrmmiHO^gmmmmi i h· Ω ro ro ro ro vo

G

Φ •ro 3 m -P ro m m i—I rH r* *r •p Ω OrHrHiHrHommmmvocoi ι i

JS

3 6 r-t

H

0 Ct, <7* W M φ Ή 1 Ό ro · vo u h y o ω tn m o pj r- • iHoro-HHm ΡΌ

rH H· -cr rH Ό Oi O flJVOOCJ

X > X W ·Η W G, X VO

6 w en Φ «T

tn μ φ φ α σι «o h s 3 Φ G (0 NOCJCd O) Ό Φ -P C HHfn psss-Hs en G -s φ s 2 3 DU 0 0 5 5 3 φ 5Π >ι ε ·? h h O. 3 f? Ή rH S s tn tn φ h e o

, 3 3 tn e -HO

•P O O 3 QJ

g o o o ra nj

“ O O o 3 -H

O O O rH X

5 O 0 0 -HO

2, rH5SSrH*0srs£=.Het

£ >i >i -P CU U

n -S ·£ CU O Φ 9 cu cu φ sr X nj φ p φ o o -O -P -P ro tn M w en en s ω 19 73222

S S

2 Q 04<NrrtNCNr-(0<NC3CDCN<N I I «T

n n ro νΛ

•H

> Λ •ι-t d) in in

3 ® K *1 °l “L

^ .2 Ω r-trHf-)HHOOO(N^T(NVOa3C3fN

0 li ro r-1 «N on ro 3 S ^ ^ Q) >

3 -h O in in LO

Zf Π v* ό mininmmoMiNoM

5 Tj «N

Jl Λ Q OOOOOOOOr^CNCNCOCOCOCN

,ϊ, X oo CN CN 00

•J i—I iH

X Λ .

H -H Ξ

-P M

SS M H 1) IW

Ό 00 · VO

-S rHU o w tn cn o ►Jr·' 2 fl) · Ή O 00 Ή M CN ^ ifl

rt jj -H-^PTTf-lOftOiaiOOU

M to X > x w -t « o* x vo S .j e to σ\ a Tr ^ m m u <υ <u q c\ in -ης c 3 tueta Nooa c d) Ό <J) -H :3 C -H W fr* rt ^ = = = -h = tr C £ <Us2 S 3 0*00.3=3 rl <0 O >i E >i i—( 0 Q* 3 M M-ι .-I = s X, to to o) c o

•H 3 3 to c -HO

3 ε O 0 3 0*

m tn O O O to (O

Fo -H o O O 3 -H

3 C O O O -i jS

4J rt o O O -HO

r-| ζρ ^HSSSrHs 0= = = .3 = -H 1 = !rt S >1 >1 -U O* Li rt o *3 Λα o o ΰ ä a a <d ε λ 3 0 <U ftj <U o P v; J-1 4J 4J (C 10 1 tn ca tn ~ ω 0

CN

u 20 73222 LT) Ό 1-3 I—t m

S I

I—I

D oo O (0

H VO X

Q Ή o n 3

3 Xi VO VO f-H

3 03 Q H rH

Ai -P 3 3 0 P 03 +J -P 03 3 -H 3 3 3 π Ό 3 3 -p x: 3 λ: X > in h

h Q) D oo :(d -h B

O X -P \

O X Ai -P CP

-¾ P 3 3

Ai 03 3 \ 3 m cp .3 -P co Ή Q I 03 CM 3

3 0) Ή i—1 -P

3 rH 03 -P

EH rH Q3 3 3

•H p 03 -P

^ CM £ -H G 03 Q n -h G -H 03 3

•H -H > -P -P

i—I ·Η Ή -p rH i—I Ή G 3

rl i—| -P *rl -P

rH VO 03 -H M 0 03 Q rH -rl 03 3 λ; 03

CP -P P -P

E CU -PO

«! E 03 λ; -H

< W

03 m Cn i x! 03 ΐ> Ή VO H | 03 CM -P I d> 3 03 X O H p -p p P -H G -H 3

H 0) 3 C 3 G -P

ε ε -ρ ·η m -h e 03 3 rH 3 03 -H -H -H 3 •rl H E G *P rH *P h aj

3 i—I \ 03 O i—I -P i—I

3 03 en 4-1 X -P G -H -H

Cn -H 3 03 3 3 3 03 -P

p 03 \ -H H -H -P -H -p O Λ O Ό 3 3 03 -P 3 03 03 HÄ303-H 033

O H S £h -P Dj 03 S-P

X X 3 XI O Ό 21 73222

(N

-H CN

Q m

Ή I

rH

Q

r-~ i Q

ro *r O vo 3 3

X

+J

-ri CN vo

π Q >H

X J3 H 0)

•P

o ω λ; τ> 2 1 3 Λ Γ rH >1

3 QJ (0 Ο Η X

νο ι Η

ΤΓ VO

J -Η

Ί· I

S

νθ (Ν

X

•Η

ω «J

•Η Ή C Ή

(0 <D

tJi Ή

Μ W

o -Q

<υ Ο) ο ^

X X

22 73222 00 «Γ 04 Ό α

ΟΙ VO

Ο VO ΤΤ

01 VO

α tn οο 04 04 Q ΓΗ Ό· 00 04 04 Ο <Η η οο 04 04 Q ·γΗ 3 3 jj 04 >«·

+J 04 VO

flj Q

Μ ί

X rQ

Η S -Η * ο s s “= Λί -Η λ; ό

3 « SS

to O 2 H X α σ> 04 iH m

Q

tn 04 r-t m

Q

n vo

Ή i—I

Q

VO

OI

X

r-4 n « C 3 S' « o Λ S « o d

X X

23 73222 co

«(ΝΐηΐίΙΝ-ίΟΙΙίΙΝ (N UI H (N * H O H ► H

H ^ CN m, r r fM

a HfiiOHtnoOHro v I co «O OI UI rj CO UI U) ,h m h — o r~ cn m i—i ·» - cn o m —

Q HCOHtnCNOOVOH

v I

r- co eieoicduiai^uico o n r'- m h m o o ·- r» H . ·“ *" . r· CN «-

a OOHHHOOHO

v I

tn 2 io cn m m cn σ\ io 3 t^inrH(MtNr-inm in W a .--.-.-.-.-.-1/1 — .

•h HcovomnoocNH

> H oo co cn tn m vo ao vo •p lor^t^HCNinm.r- m -p a

rM oomcoHHomH

rO

VO <N <N <N VO νβ C* to G mmrHfHr-4ininm tn O Q »· ^ · ·* ^ »—- « o ^

3 HcnencriHHomH

-P σι cn m m m σι m oo -P ry n o cn cn cn m o r· O q — — — — _.-o — xo oovovoioooino •H w O Λ Λ A! ·η ο mm mm

-¾ -P +? m ·* cn (N

PC tn q cn (n o o o m — o — rHi—immmcNvomvo 3 cöT3£ com m cn cn oo m sf CN CN CN fH fH o ·

-P0Ja*-»-m— --^-mcN

tn P OvotNtororoOAfH

•H KM

2 co m m m m m ov m C Hr^CNCNCNCN-H ·_

5 a .OCN

(0 ovomvotOiHomrH

Ti

£ O Ό U

O W < CN

° r* o cn £ 0) fH NO 3 3 m « O -h

W o <β O -h C

'7 3 oo Ό -H n) tn O

R 3 -H -U O. 3 H £ P VJ.H o >i 3 3 C 3 Π 3 -n o S fH « -H ft J)

H co rt P O -H > Ä C

3 m--1 e h o p c.

•3 CO 3 3 fH 3 0 0 2 . 3 tn E .3 3 >. >i >, f e 03 &> M Ä x: im o o to (0 S .J O O ΓΗ Ή to

7 C O O Ή HE

Λ rt 0 0 3 3 tn u S, hop p «o V >,4J3S3HS = : n £ Q< Φ 3 0.

V, 0. 3 H hi O

2 3 p tn tn o S 4J H> 3 3 >.

^ cn cn &. cu s 24 732 22 vo co in in in m cn m m r- cn - »* cn <h <d >-3 - ·- CN CN .roE-t

iHOVOrHr-tlOcnmZ

r· in cNCNinmcscvcvincv cn I—I I—I ·· * r—t m o * m Q ·· ·- CN CN — ·- ·* CN r

POrOrHrHmOOr-lO

2 r* d n· cn cn m m in crv σν co jr (N iHi—I - tNiNmo r-' j Q ·- ·- cn ·-·* in ~

Tj ΓΟΠι-ΙΙΟΙΟΟΟίΝΟ •H ^ f; m CNioininiNijvovinoo

Jr cn tHinm vtHOorvir' — dj Q »-»»cn ·-··»·-·.

5 10 ΟΠίΠΙΟιΗΠΟΟΙΟΟ cn vo cn m in cn oo co vo

Jr 3 cNiniH«.*rHr'r^ m 3 Q «-PNN .»»l/ι k

π Jj iHnrHrHCOOOCNrH

·* "JJ rU 00 VO CN CN CN VO OV m X cn r-in.-ir-i<-iinro cv 8 .2 n Q - , -h X Λ Λ) o rH n m m o - 3 -P -P ΙΛ

Tl "2 2 O 00 CN CN CN CN 00 CV 00 | s % 8 - d d o d M ^ ^ omcnmroooino

£ 3v CV 00 CN CN CN CN VO CV CN

3 1-4 r^rHiHr-(r-tinmOr-C

tx K ,Q »••••'•-•'«in ·.

3 OpnmmrOiHOAm 'g w [3 m in m m m cn vo cn >1 3 {3 iH CN » - - i—I m O i—I -p+j d Q »(NNNin · »m · w -n

iS VOi—liHiHCNCViH Λ C**l -H(C

x M -P

5 «r oo vo cn cn vo vo cv co (DW

X r^r^miHfHininn r- 3 <u

π O «·».-*....·.© — -P-P

~ OrHmnrHrHOino 3

m ’P

_X n cNinminminvo cn *p <u

P1 H (—t CN ► · · CN in r-t Ό <U

jj Q --CNCNCN - * O — X, CnVOrH^IHVOrHinn

m O Ό U

S u < cn

3 n- o CN ε <U

g Ή VO 3 dj >

f (0 O -H H

0 m ca o ή e ^ CM 3 o Ή -H -P W0 “ 1 <u co ή -p a <u ή ε r? U P ·Ρ O > 0) 3 C 3 Jji-im 3 -n o : cn -h -h a> Jr JJ ^ (C3 CB 4J o Ή > X e P H fj Ή £ <-h O P O, mcrtflv M 3 CUr-ICOO _.cm3 rl 3 cn £ s: co >, >, >, d « £ g U 3 IJ|| M £ £ ε 3 m r-v 5 uom (0 d ~

rl O O rB rH CO ? ^ 9 S

rj O O Ή ι-l ε rl ov S O O 0) cucn ^

S ^ O ij . JS . . . U-Ö3P

5 jz a <u <ua 2 ίί S

a, di CU -P PO «j n^ ^ rv S co p en en o Λυ 3 P P CO (0 >1 Λ cn en cu cu z 25 7 3 2 2 2 cm in m

in in rH CM CM

m r » »» r* tr fMCMOOomiooio S rH «h m m m m

Λ Λ Λ A

in m cm m r ψ* ψ* m cMOOOOiomocM S «h m m m m cm m i—i

Λ Λ A

m vo vo m cm in m ,. rH — ·“ ™ E-llOOOOOrHrHOin 3 in in in in mm

3 A A A

CM 03 'P m rH r- m > — — - »-

[J VO CMOOOOCAOOCM

p E-ι rH m m in in mrH

M .

'ö mm io vo cm cm m m mm m ^ C ft* ·* * ·» ·» ··» ·.

q Ϊ P) VO VOCMCMmCMrHOrH

"ίο -H -· rH m h m H"* £ mm q ovcomcMCMooffvcMcn

Λ ΰ fOmmCMrHrHr-rHrHrH

Q oovommoofno .V Ή 0) 3 -Ρ -Ρ 3 m “ γ- ^ d 10 £ cm cm m σι οι ιο ,2 q 00 H rl cm OrH m ^ -r CM r r r m m r — m ·_

53 y D POfniOCMCMOOCMrH

-P O

in « _ _ •H 00 CO uj J2 cm co m m m -σ’ τι· σι >-3 ΰ H h CM *--00 rA +j

3 CM •-».r-CMCMr-rir)·' y) 4J

3 QrAOVOrHrHOOCMO -H (0

rri V I V I Ρ -P

rj ω in

0 co 3 <D

.r. cm co m m m rr 00 co vo ri r- cm - '-or- r·* c

CM ·-·-* CM CM r^m «- -rH -rH

3 Q CAOVOrHrHO OCMO ,-H Q) •1-1 v I Ό ai 3

-P

rH

rt ϋ Ό U

2 ω <C CM

q r> o cm e <u g rH VO 3 (0

1 fl ϋ -H

o M « O -H C in cm so-u-h-p ino > >i

. <U 00 ·<Η -P Oi 0) -H £ H -P

rj M -,-H O >1 <U dj C 3 -p | tn 3 *|—1 O S rH ΙΟ ·Η ·*Η O O l—l ‘3 e m u o-h>x:c p u Η Ή £ ^H 0 P Cm <1) «0 1) W 3 «DrHCOO £-PiÖ

3 in £ Jrl0>1>1>1 r—1 31η ·|—I

-H 03 OTinjS^gC-HP

g 0 o m m \ d) 0 m tn o o rH rH m tn p m >:

-rH OO^H rH E 3 in 3 -H

c o o a) a) tn \ -H rH >

rt rH 0 P pm O Ό 3 P

tn >,HJ3=3rH=rr M^jm m u λ a o ma s >h .p en o cum-p-po m λ o S m p in en o n hj mj m m >1 « co co cu &- s 26 7 3 2 2 2 Tämän keksinnön mukaiset 020 -mukaillut johdannaiset ovat osoittautuneet in vivo antimikrobisesti aktiivisiksi kokeellisesti aiheutettuja tartuntoja vastaan labo-ratorioeläimillä. Kun kaksi annosta kokeiltavaa yhdistet-5 tä annettiin hiirille, jotka oli kokeellisesti tartutet tu lajilla S. pyogenes C203, todettu aktiivisuus mitattiin -arvona (tehokas mg/kg suojaamaan 50 % koe- eläimistä: katso Warren Wick et ai., J. Bacteriol. 81, 233-235 (1961)). Kuvaaville yhdisteille todetut ED^q-10 arvot on annettu taulukossa XI.

27 7 3 2 2 2

Taulukko XI

C-20-mukailtujen johdannaisten EDj-q arvot vastaan Streptococcus pyogenes C2303 hiirillä3 j_

KoeyhdisteD Ihon alle Suuhun

Dl 1,2 >50 D2 0,9 50 D4 6,0 19 D5 1,3 50 D5a 1,5 34 D6 0,7 14 D7 1,6 12 D10 >10 68

Dll 7,5 19 D12 2,0 <6,3 D14 1,0 50 D19 2,9 46 D20 1,7 34 D21 1,0 10 D22 0,8 40 L5 1,8 100 M3 >10 >100 T6 >10 44 T13 >10 30 amg/kg x 2; annokset annettu 1 ja 4 tuntia tartunnan jälkeen b

Yhdistenumerot taulukoista I-IV.

28 73222

Monilla tämän keksinnön C-20-mukailluilla johdannaisilla on myös esiintynyt in vivo antibakteerista aktiivisuutta gram-negatiivisten bakteereitten aiheuttamia tartuntoja vastaan. Taulukot XII ja XIII esittä-5 vät yhteenvetona kokeitten tulokset, joissa kuvaavia yhdisteitä arvioitiin päivän vanhojen kananpoikien Pasteurella-tartuntaa vastaan. Yhdisteet annettiin paren- teraalisesti tai suuhun, sen jälkeen kun kananpojille oli -4 tartutettu Pasteurella multocida (0,1 ml 10 laimennusta 10 lintujen P. multocida 20 tunnin tryptoosilihaliemiviljelmää annettuna ihon alle). Näissä kokeissa, ellei toisin ole esitetty, kaikki lääkitsemättömät tartutetut kananpojat kuolivat 24 tunnin kuluessa Pasteurella tartutukses-ta. Taulukossa XII esitetyissä kokeissa yhdisteet annet-15 tiin ihon alaisella ruiskeella annoksissa 30 mg/kg, 1 ja 4 tuntia kananpoikien P. multocida tartutuksen jälkeen. Taulukossa XIII esitetyissä kokeissa yhdisteet annettiin juomaveteen lisättyinä (tasolla 0,5 g/1), joka oli käytettävissä 4-20 tuntia ennen kananpoikien P. multocida tar-20 tutusta ja 3-päiväisen koeajan kuluessa.

29 7 3 2 2 2

Taulukko XII

£

Pasteurella multocida'11a tartutetuille kananpojille ihon alla annettujen C-20-mukailtujen johdannaisten 5 aktiivisuus

Koeyhdisteb Kuolleitten lukumäärä/ käsiteltyjen lukumäärä

Dl 0/10 D2 0/10 10 04 9/10 D5 0/10 D6 0/10 D7 3/10 D10 10/10

Dll 10/10 D12 9/10 D14 2/10 15 D19 0/10 D21 7/10 D22 0/10 D23 8/10 D24 2/10 D25 0/10 D26 10/10 20 D27 8/10 D28 0/10 L5 0/10 annettu ihon alle, 30 mg/kg x 2 25 bYhdistenumerot taulukoista II ja so 73222

Taulukko XIII

a

Pasteurella multocida'11a tartutetuille kananpojille suuhun annettujen C-20-mukailtujen johdannaisten aktiivisuus 5 i*

Koeyhdiste Kuolleitten lukumäärä/ Käsiteltyjen lukumäärä D2 9/10 ?2 5/i° 10 P* 6/10 D6 2/10 SS 1/10 S?, 2/10 M2 8/10 !“ 8/10 D19 0/10 3/10 15 Sli °/10 D22 3/10 023 0/10

Sis “/1° D28 7/10 028 7/10 20 annttu käytettävissä olevassa juomavedessä väkevyy dessä 0,5 g/1

°Yhdistenumerot taulukosta II

31 73222 Tämän keksinnön mukaiset yhdisteet sopivat bakteeri- ja mykoplasmalajien aiheuttamien tartuntojen hallitsemiseen. Tällöin annetaan tehokas määrä keksinnön mukaista yhdistettä parenteraalisesti tai oraalisesti 5 tartutetulle tai alttiille lämminveriselle eläimelle. Yhdisteet voidaan myös antaa täyttöpuhalluksella, so. puhaltamalla yhdiste lääkkeellä käsitellyn pölyn muodossa suljettuun tilaan tai huoneeseen, jossa eläimiä tai siipikarjaa pidetään. Eläimet tai siipikarja hengittävät 10 ilmassa olevaa lääkkeellä käsiteltyä pölyä; lääkkeellä käsitelty pöly siirtyy elimistöön myös silmien kautta (menetelmä, jota kutsutaan silmän sisäiseksi ruiskeeksi) .

Annos, joka on tehokas tartunnan hallitsemiseksi, 15 vaihtelee tartunnan vakavuuden ja eläimen iän, painon ja kunnon mukaan. Suojaukseen parenteraalisesti tarvittava kokonaisannos on yleensä kuitenkin alueella välillä noin 0,1 - noin 100 mg/kg ja edullisesti alueella noin 0,5 - noin 40 mg/kg. Suuhun antamiseen tarvittava 20 annos on yleensä alueella noin 1 - noin 300 mg/kg, ja edullisesti alueella noin 1 - noin 100 mg/kg. Sopivat annosjärjestykset on rakennettavissa.

Usein käytännöllisin tie yhdisteiden antamiseksi on muokkaus rehuannokseen tai juomaveteen. Voidaan käyt-25 tää erilaisia rehuja mukaan lukien yleiset kuivarehut, nestemäinen ravinto ja pelletoidut rehut.

Menetelmät lääkkeitten muokkaamiseksi eläinten rehuihin ovat hyvin tunnettuja. Edullinen menetelmä on tehdä väkevöity lääkkeen esisekoite, joka vuorostaan 30 käytetään lääkityn rehun valmistamiseen. Tyypilliset esisekoitteet voivat sisältää noin 5 - noin 500 g lääkettä esisekoitekiloa kohti . Esisekoitteet voivat olla joko nestemäisiä tai kiinteitä valmisteita.

32 73222

Lopullinen eläinten tai siipikarjan rehujen muotoilu riippuu annettavan lääkkeen määrästä. Yleistä rehujen muotoilu-, sekoitus- ja pelletointimenetelmiä voidaan käyttää keksinnön mukaista yhdistettä sisältävien rehu- 5 jen valmistamiseksi.

Tehokkaat näitä yhdisteitä sisältävät ruiskutettavat seokset voivat olla joko suspensio- tai liuosmuodossa. Sopivia seoksia valmistettaessa on todettava, että yleensä happoadditiosuolojen vesiliuköisuus on suurempi kuin 10 vapaitten emästen. Samoin emäkset ovat paremmin liukenevia laimeisiin happoihin tai happamiin liuoksiin kuin neutraaleihin tai emäksisiin liuoksiin.

Liuosmuodossa yhdiste liuotetaan fysiologisesti hyväksyttävään sideaineeseen. Tällaiset sideaineet kä-15 sittävät sopivan liuottimen, säilöntäaineita kuten bent-syylialkoholi, tarvittaessa, ja puskureita. Käyttökelpoisiin liuottimiin kuuluvat esimerkiksi vesi ja alkoholien vesiliuokset, glykolit ja karbonaattiesterit kuten dietyylikarbonaatti. Tällaiset vesiliuokset sisältävät 20 yleensä enintään 50 % orgaanista liuotinta tilavuudesta.

Ruiskutettavat suspensioseokset tarvitsevat nestemäisen suspendointiväliaineen apuaineiden kanssa tai ilman, sideaineeksi.. Suspendointiväliaine voi olla esimerkiksi polyvinyylipyrrolidonin vesiliuos, inertti öljy kuten 25 kasvisöljyt tai suuresti jalostetut mineraaliöljyt tai ve-sipitoinen karboksimetyyliselluloosa.

Sopivat fysiologisesti hyväksyttävät apuaineet ovat välttämättömiä yhdisteen pitämiseksi suspendoitunee-na suspensioseoksissa. Apuaineet voidaan valita paksunti-30 mien kuten karboksimetyyliselluloosan, polyvinyylipyrrolidonin, gelatiinin ja alginaattien joukosta. Monet pinta-aktiiviset aineet ovat myös käyttökelpoisia suspendointi- 33 7 3 2 2 2 aineina. Lesitiini, alkyylifenolipolyetyleenoksidiadduk-tit, naftaleenisulfonaatit, alkyylibentseenisulfonaatit ja polyoksietyleenisorbitaaniesterit ovat käyttökelpoisia suspendointiaineina.

5 Monet aineet, jotka vaikuttavat nestemäisen sus- pendointiväliaineen hydrofiilisyyteen, tiheyteen ja pintajännitykseen, voivat auttaa ruiskutettavien suspen-sioitten tekemisessä yksittäisissä tapauksissa. Esimerkiksi silikonivaahdonestoaineet, sorbitoli ja sokerit 10 voivat olla käyttökelpoisia suspendointiaineita.

Tämän keksinnön toiminnan täydellisemmin, kuvaamiseksi annetaan seuraavat esimerkit. Näissä esimerkeissä lyhennys "20-DH-DO" on käytössä termin ”20-dihydro-20-de-oksi" asemesta.

15 Valmistus 1 20-dihydrotylosiini ( :elomysiini)

Tylosiiniemäksen (30,0 g 32,8 mmoolia) liuosta 2-propanolissa (300 ml) ja vedessä (200 ml) käsiteltiin natriumboorihydridillä (325 mg, 8,2 mmoolia), annoksit-20 tain 5 minuutin aikana. 30 minuutin kuluttua lisäyksen lopettamisesta reaktioliuoksen pH säädettiin 7,0:ksi lisäämällä IN rikkihappoliuosta. Neutraloitu liuos haihdutettiin tyhjössä 2-propanolin poistamiseksi; jäljelle jäänyttä vesiliuosta käsiteltiin kyllästetyllä natrium-25 bikarbonaattiliuoksella (500 ml). Seos uutettiin dikloori- metaanilla (3 x 300 ml) ja yhdistetyt uutteet uutettiin kyllästelyllä natriumkloridiliuoksella (200 ml) ja kuivattiin natriumsulfaatilla. Haihdutusta seurannut suodatus tuotti lasia, joka sekoitettiin n-heksaaniin, kerättiin 30 suodattimelle ja ilmakuivattiin, jolloin saatiin 28,5 g (95 %) 20-dihydrotylosiinia.

« 73222

Valmistus 2 20-dihydrodesmykosiini

Desmykosiinia (10 g, 13 mmoolia) liuotettuna iso-propanoli:veteen (1:1, 175 ml) sekoitettiin huoneen 5 lämpötilassa samalla kun lisättiin NaBH^ (125 mg, 3,3 mmoo lia). 1/2 tunnin kuluttua reaktioseoksen pH säädettiin 7,0:ksi IN ^SO^rllä. Alkoholi poistettiin alennetussa paineessa. Kyllästettyä NaHCO^ liuosta lisättiin vesi-liuokseen ja tuote uutettiin CH2Cl2:een. Orgaaninen ker-10 ros kuivattiin (Na2SO^) ja liuotin poistettiin alenne tussa paineessa, jolloin saatiin 9,65 g 20-dihydrodesmy-kosiinia (12,5 mmoolia, 96 % saanto) valkeana vaahtona.

Valmistus 3 20-DH-DO-2Q-jodidesmykosiini (menetelmä 1) 15 20-dihydrodesmykosiinia (2,0 g, 2,6 mmoolia) ja tetra-n-butyyliammoniumjodidia (1,5 g, 3,9 mmoolia) liuotettiin CH2Cl2:een (30 ml) lisäten s-kollidiinia (0,6 ml, 4,5 mmoolia). Tämä liuos jäähdytettiin -78°C:een typpi-ilmakehässä ja sitä käsiteltiin trifluorimetaanisul-20 fonihappoanhydridillä (0,6 ml, 3,9 mmoolia) tipoittain pipetillä. Reaktiota sekoitettiin 5 minuutin ajan -78°C:ssa ja annettiin sitten lämmetä huoneen lämpötilaan (noin 30 minuutin ajan). Lisättiin kyllästettyä NaHCO^ liuosta ja tuote uutettiin CH2Cl2:lla. Orgaaninen kerros 25 kuivattiin (Na2SO^) ja haihdutettiin, jolloin saatiin punainen öljy, joka puhdistettiin silikageelitasapaino-kromatografisesti eluoiden aluksi CH2Cl2:lla (400 ml) ja sitten askeleittain CH^l^CH^OH liuoksilla seuraavasti: 98:2 (250 ml); 96:4 (500 ml) 95:5 (250 ml); 94:6 30 (750 ml) ja 92:8 (250 ml). Halutun tuotteen sisältävät fraktiot tunnistettiin TLC:llä, yhdistettiin ja haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin 20-DH-DO-20-jodidesmy-kosiinia (595 mg, 0,67 mmoolia, 26 % saanto) valkeana vaahtona.

35 73222

Valmistus 4 20-DH-DO-2Q-jodidesmykosiini (menetelmä 2) 20-dihydrodesmykosiinia (5,0 g, 6,5 mmoolia) ja 5 trifenyylifosfiinia (2,54 g, 9,70 mmoolia) liuotettiin dimetyyliformamidiin (DMF) (10 ml). Tätä seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa ^"ilmakehässä samalla kun jodia (2,46 g, 9,70 mmoolia) DMF:ssä (5 ml) lisättiin tipoittain. Reaktioseosta sekoitettiin kahden tunnin 10 ajan ja kaadettiin sitten kylmään kyllästettyyn NaHC03 liuokseen. Tuote uutettiin CHCl^Ha (kaksi annosta) ja yhdistetyt CHCl^ uutteet ravistettiin 0,2 M natriumtio-sulfaatin kanssa reagoimattoman jodin poistamiseksi. Orgaaninen kerros kuivattiin (Na2SO^) ja haihdutettiin 15 alennetussa paineessa, jolloin saatiin vaalean keltai nen öljy, joka puhdistettiin aluksi Cl^C^illa (500 ml) ja sitten 250 ml annoksilla C^C^iCH^OH seoksia seuraavasti: 98:2; 96:4; 95:5; 94:6; 92:8; 88:12; ja 86:14. Halutun tuotteen sisältävät fraktiot tunnistettiin kuten 20 valmistuksessa 3 ja yhdistettiin, jolloin saatiin 1,78 g (2,0 mmoolia, 31 % saanto) 20-DH-DO-20-jodidesmykosiinia valkeana vaahtona.

Esimerkki 1 20-DH-DO-20-(oktahydroatsokin-l-yyli)desmykosiini 25 20-DH-DO-20-jodidesmykosiinia (575 mg, 0,65 mmoolia) liuotettiin asetonitriiliin (10 ml) ja heptametyleeni-imiiniä (0,37 g, 0,41 ml, 3,3 mmoolia) lisättiin tähän liuokseen. Reaktiota sekoitettiin palautusjäähdyttäen 1,5 tunnin ajan. Haihtuvat aineosat poistettiin sitten 30 tyhjössä. Jäännös liuotettiin C^C^^een ja uutettiin kyllästetyllä NaHCO^ liuoksella. Orgaaninen kerros kuivattiin (Na2SO^) ja haihdutettiin sitten alennetussa paineessa, jolloin saatiin vaalean ruskea vaahto. Tämä vaahto puhdistettiin silikageelitasapainokromatografi-35 sesti, eluoiden 250 ml :11a kutakin seuraavaa ΟΗ2012· CH3OH seosta: 98:2; 96:4; 94:6; 9:1; 88:12; 82:18; 65:35; 36 7 3 2 2 2 1:1, 1:3 ja lopulta 300 ml:11a CH^OH. Halutun tuotteen sisältävät fraktiot tunnistettiin TLC:llä, yhdistettiin ja haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin 397 mg (0,46 mmoo-lia, 71 % saanto) 20-DH-DO-20(oktahydroatsokin-l-yyli)des-5 mykosiinia valkeana vaahtona.

Esimerkki 2 20-DH-DQ-2Q-(heksahydroatsepin-l-yyli)desmykosiini

Desmykosiini (10 g, 13 mmoolia) liuotettuna vedettömään metanoliin (100 ml), lisättiin nopeasti NaBH^CN 10 (3,3 g, 52 mmoolia) ja heksametyleeni-imiinin (6,5 g, 7,5 ml, 65 mmoolia) liuokseen vedettömässä metanolissa (50 ml) ^-ilmakehässä. Reaktioseosta sekoitettiin N2~ ilmakehässä huoneen lämpötilassa noin kolmen tunnin ajan ja haihdutettiin sitten alennetussa paineessa. Saa-15 tu jäännös liuotettiin CH2Cl2:een käyttäen juuri riittävästi etyyliasetaattia auttamaan jäännöksen liukenemista ja tämä liuos uutettiin kyllästetyllä NaHCO^-liuoksella. Orgaaninen kerros erotettiin, kuivattiin (Na2SC>4) ja haihdutettiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 20 vaalean keltainen vaahto. Tämä vaahto puhdistettiin silikageelitasapainokromatografisesti eluoiden aluksi CH2Cl2:lla (1 1), sitten askeleittain 500 ml annoksilla CH2C12: CH^OH seoksia seuraavasti: 98:2; 96:4; 94:6; 92:8; ja 9:1, ja lopuksi CH2C12:CH^OH:NH4OH seoksil-25 la seuraavasti: 90:10:0,5 (500 ml) ja 75:25:0,5 (2 1). Halutun tuotteen sisältävät fraktiot tunnistettiin TLC:llä, yhdistettiin ja haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin 6,035 g (7,07 mmoolia) 20-DH-DO-20-(heksahydroatsepin-l-yyli) -desmykosiinia valkeana vaahtona. Muut 30 fraktiot, jotka sisälsivät epäpuhdasta tuotetta, yhdis tettiin, liuotettiin uudelleen CH2Cl2:een, uutettiin jälleen kyllästetyllä NaHCO^ liuoksella ja puhdistettiin kuten aikaisemmin käyttäen silikageelipylvästä, joka oli täytetty CH2C12:CH20H (9:1) avulla ja eluoitiin 35 CH„C10: CHo0H:NH.0H:11a seuraavasti: 2 2 3 4 37 73222 90:10:0,5 (500 ml) ja 80:20:0,5 (1 1), jolloin saatiin vielä 1,372 g (1,61 mmoolia) tuotetta. 20-DH-DO-20-(heksahydroatsepin-l-yyli)desmykosiinin kokonaissaanto oli 7,407 g (8,68 mmoolia, 67 %).

5 Esimerkki 3 20-DH-DO-2Q-(4-fenyylipiperidin-l-yyli)desmykosiini

Desmykosiinia (1,5 g, 2 mmoolia) liuotettiin absoluuttiseen metanoliin (60 ml) ja sitä käsiteltiin 4-fenyylipiperidiinillä (640 mg 4 mmoolia) Linde 4A mole-10 kyyliseulojen läsnäollessa. 0,5 tunnin kuluttua

NaBH3CN (500 mg, 8 mmoolia) lisättiin ja seosta sekoitettiin 2,5 tunnin ajan huoneenlämpötilassa. Seos kaadettiin kyllästettyyn NaHCO^ liuokseen (200 ml) ja uutettiin CH2Cl2:lla (3 x 200 ml). Yhdistetyt orgaaniset uut-15 teet kuivattiin (Na2SO^), suodatettiin ja haihdutettiin alennetussa paineessa. Jäännös (3,6 g) puhdistettiin tasapainokromatografisesti silikageelillä eluoiden gradientilla 1 1 CH2C12 - 1 1 MeOH:CH2Cl2 (5:95) ja sitten 1 1:11a MeOH:CH2Cl2 (5.95). Halutun tuotteen si-20 sältävät fraktiot tunnistettiin TLC:llä, yhdistettiin ja haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin 680 mg 20-DH-DO-20-(4-fenyylipiperidin-l-yyli)desmykosiinia. Esimerkki 4 20-DH-DO-20-(heksahydroatsepin-l-yyli)-41-deoksidesmy- 25 kosiini_

Liuosta, joka sisälsi 4'-deoksidesmykosiinia (565 mg, 0,75 mmoolia) metanolissa (15 ml) argon-ilmakehässä, sekoitettiin aktivoitujen Linde 3A molekyyli-seulojen (2,2 g) kanssa 30 minuutin ajan ennen heksame-30 tyleeni-imiinin (0,25 mo, 2,25 mmoolia) lisäämistä. Tun tia myöhemmin natriumsyaaniboorihydridiä (141 mg, 2,25 mmoolia) lisättiin reaktioon. Vielä 45 minuutin kuluttua reaktioseos kaadettiin kyllästettyyn natriumbikar-bonaattiliuokseen ja uutettiin etyyliasetaatilla. Yhdis-35 tetyt orgaaniset uutteet ravisteltiin kyllästetyllä natriumkloridiliuoksella, kuivattiin natriumsulfaatilla, 38 73222 suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin 600 mg raakatuotetta. Tämä tuote puhdistettiin preparatiivi-sellä TLCrllä silikageelillä eluoiden dikloorimetaani/ metanoli/väk.ammoniumhydroksidilla (90:15:2), jolloin 5 saatiin 150 mg (24 % saanto) 20-DH-DO-20-(heksahydro- atsepin-l-yyli)-4'-deoksidesmykosiinia.

Esimerkit 5-6 20-DH-DO-20-(oktahydroatsokin-l-yyli)desmykosii-ni, valmistettu esimerkin 2 menetelmällä.

10 20-DH-DO-20-(heksahydroatsepin-l-yyli)desmyko- siini, valmistettu esimerkin 1 menetelmällä.

Esimerkki 7 20-DH-DO-20-(oktahydroatsokin-l-yyli)desmykosiini (menetelmä 3)_ 15 Desmykosiinia (4,0 g, 5,2 mmoolia) liuotettiin absoluuttiseen metanoliin (30 ml) ja käsiteltiin heptametyleeni-imiinillä (1,2 g, 1,3 ml, 10,4 mmoolia) 3A molekyyliseulojen läsnäollessa. Kun reaktioseosta oli sekoitettu 1 tunnin ajan huoneenlämpötilassa, lisät-20 tiin nopeasti NaBH^ (60 mg, 1,6 mmoolia) liuos absoluuttisessa metanolissa (10 ml) nopeasti pipetillä. Reaktioseosta sekoitettiin 1,5 tunnin ajan huoneen lämpötilassa, sitten lisättiin toinen 30 mg NaBH^ (yksi annos kiinteänä aineena). Reaktioseosta sekoitettiin vielä 25 75 minuutin ajan ja sitten se suodatettiin. Suodos haih dutettiin alennetussa paineessa. Jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin (150 ml) ja tämä liuos uutettiin vedellä (150 ml) ja kyllästetyllä NaHCO^ liuoksella (100 ml). Etyyliasetaattiliuos uutettiin sitten pH 6,5, 0,5M 30 NaH2PO^ puskurilla (150 ml). Puskuriuute haihdutettiin tyhjössä, jäljelle jääneen etyyliasetaatin poistamiseksi ja sitten sitä nopeasti sekoitettiin lisättäessä hitaasti 5N NaOH, jolloin saatiin paksu valkea sakka. Valkea kiinteä aine poistettiin suodattamalla, pestiin pienellä 35 määrällä vettä ja kuivattiin, jolloin saatiin 3,55 g 20-DH-DO-20-(oktahydroatsokin-l-yyli)desmykosiinia.

39 7 3 2 2 2

Esimerkki 8 20-DH-DO-20- (l-atsaspiro/4, dekan-l-yyli)desmykosiini Desmykosiinia (5,0 g, 6,5 mmoolia) liuotettiin absoluuttiseen metanoliin (50 ml) ja käsiteltiin 1-atsas-5 piro/4.57dekaanilla (1,36 g, 9,8 mmoolia) 3A molekyyli-seulojen läsnäollessa. 15 minuutin kuluttua NaBH^CN (620 mg, 9,8 mmoolia) lisättiin ja seosta sekoitettiin 17 tunnin a jän huoneen lämpötilassa. Reaktioseos suodatettiin ja suodos haihdutettiin alennetussa paineessa.

10 Jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin (300 ml) ja uutettiin vedellä (300 ml ja 100 ml). Sitten tuote uutettiin etyyliasetaattiliuoksesta pH 6,5 0,5M NaH2P04 puskurilla (300 ml ja 100 ml). Fosfaattipuskuriuutteet yhdistettiin ja haihdutettiin tyhjössä jäljelle jääneen etyyliasetaa-15 tin poistamiseksi. Fosfaattipuskuriliuosta sekoitettiin sitten nopeasti lisättäessä hitaasti 5N NaOH, jolloin saatiin paksu valkea sakka. Valkea kiinteä aine poistettiin suodattamalla, pestiin vedellä ja kuivattiin, jolloin saatiin 20-DH-DO-20-(l-atsaspiro/4.57-dekan-l-yyli) 20 desmykosiinia (3,52 g).

Esimerkki 9 20-DH-DO-2Q-(1,2,3,4-tetrahydrokinolin-l-yyli)desmykosiini Desmykosiinia (11,6 g, 15 mmoolia) liuotettiin kuivaan metanoliin (100 ml) ja 1,2,3-tetrahydrokinoliinia 25 (3,8 ml, 30 mmoolia) lisättiin. Kun seosta oli sekoitettu 30 minuutin ajan huoneen lämpötilassa, natriumsyaaniboori-hydridiä (1,25 g, 20 mmoolia) lisättiin. Seosta sekoitettiin yli yön ja haihdutettiin sitten alennetussa paineessa. Jäännös jaettiin etyyliasetaatin ja veden välille (100 ml 30 kumpaankin). Orgaaninen kerros uutettiin sitten jaksoit tain pH 6,5 vesipitoisella fosfaattipuskurilla (100 ml) ja pH 4,5 vesipitoisella fosfaattipuskurilla (100 ml). Etyyliasetaattikerros kuivattiin (natriumsulfaatti), suodatettiin ja haihdutettiin; ja jäännös 4,6 g erotettiin 35 kromatografisesti silikageelillä (Waters Prep 500).

Pylväs eluoitiin lineaarisella dikloorimetaanigradientilla 40 73222 (4 1) ja 5 % metanolilla plus 0,5 % väkevällä ammonium-hydroksidilla dikloorimetaanissa (4 1). Halutun tuotteen sisältävät fraktiot tunnistettiin TLC-analyysillä, otettiin talteen ja haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin 5 3,4 g otsikkoyhdistettä.

Esimerkki 10 20-DH-DO-20-(1,2,3,4-tetrahydroisokinolin-2-yyli)- desmykosiini_

Desmykosiinia (11,6 g, 15 mmoolia) liuotettiin 10 kuivaan raetanoliin (100 ml) ja 1,2,3,4-tetrahydroiso- kinoliinia (3,8 ml, 30 mmoolia) lisättiin. Kun seosta oli sekoitettu 30 minuutin ajan huoneen lämpötilassa, natriumsyaaniboorihydridiä (1,25 g, 20 mmoolia) lisättiin. Seosta sekoitettiin yli yön ja sitten haihdutettiin 15 alennetussa paineessa. Jäännös jaettiin etyyliasetaattiin ja veteen (150 ml kumpaankin). Orgaaninen kerros uutettiin sitten jaksoittain pH 6,5 fosfaattipuskurilla (100 ml) ja pH 4,5 fosfaattipuskurilla (100 ml). Kun pH 4,5 pusku-riuute oli haihdutettu alennetussa paineessa etyliasetaa-20 tin poistamiseksi, pH säädettiin 10 reen 5N natriumhydrok- silla. Muodostunut sakka otettiin talteen ja ilmakuivat-tiin, jolloin saatiin 5,6 g otsikkotuotetta.

Esimerkki 11 25 20-DH-DO-2Q-(1,2,3,6-tetrahydropyridin-l-yyli)desmykosiini

Desmykosiinia (11,6 g, 15 mmoolia) liuotettiin kuivaan metanoliin )100 ml) ja 1,2,3,6-tetrahydropyri-diiniä (2,8 ml, 30 mmoolia) lisättiin. Kun seosta oli sekoitettu 30 minuutin ajan huoneenlämpötilassa, lisät-30 tiin natriumsyaaniboorihydridiä (1,25 g, 20 mmoolia).

Seosta sekoitettiin yli yön ja haihdutettiin sitten alennetussa paineessa. Jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin (150 ml). Tämä liuos uutettiin vedellä (150 ml) ja sitten pH 6,5 vesipitoisella fosfaattipuskuriliuoksella (2x100 ml). 35 Puskuriliuokset haihdutettiin erikseen alennetussa painees sa etyyliasetaatin poistamiseksi ja säädettiin sitten 4i 73222 pH:hon 10 5N natriumhydroksidilla. Muodostuneet sakat otettiin talteen suodattamalla ja ilmakuivattiin, jolloin saatiin 5,4 g (ensimmäinen uuttaminen) ja 3,2 g (toinen uuttaminen) otsikkoyhdistettä.

5 Esimerkit 12-31

Seuraavat yhdisteet valmistettiin esimerkkien 1, 2, 7 tai 8 menetelmällä: 20-DH-DO-20-(oktahydroatsokin-l-yyli)laktenosiini 20-DH-DO-20 -(pyrrolidin-l-yyli)desmykosiini 10 20-DH-D0-20-(atsasyklotridekan-l-yyli)desmykosiini 20-DH-DO-20-(4-hydroksipiperidin-1-yyli)desmykosiini 20-DH-DO-20-(deksahydroatsepin-l-yyli)makrosiini 20-DH-DO-20-(3-atsabisyklo/3.2.27nonan-3-yyli)desmykosiini 20-DH-DO-20-(piperidin-l-yyli)desmykosiini 15 20-DH-DO-20-(3-(N,N-dietyylikarbamoyyli)piperidin-l-yyli desmykosiini 20-DH-DO-20-((4-piperidino)piperidin-l-yyli))desmykosiini 20-DH-DO-20-(oktahydro-lH-atsonin-l-yyli)desmykosiini 20-DH-DO-20-(dekahydrokinolin-l-yyli)desmykosiini 20 20-DH-DO-20-(1,3,3,-trimetyyli-6-atsabisyklo/3.2.1/oktan- 6-yyli desmykosiini 20-DH-D0-20-(dodekahydrokarbatsol-9-yyli)desmykosiini 20-DH-DO-20-(oktahydroatsokin-l-yyli)tylosiini 20-DH-DO-20-(3-atsabisyklo/3.2.2/nonan-3-yyli)tylosiini 25 20-DH-DO-20-(4-fenyyli-1,2,3,6-tetrahydro-pyridin-l- yyli)desmykosiini 20-DH-DO-20-(4-bentsyyli-piperidin-l-yyli)desmykosiini 20-DH-DO-20-(4-etyleenidioksi)-piperidin-l-yyli)desmykosiini 30 20-DH-DO-20-/4-(etyleenidioksi)-piperidin-l-yyli7desmy- kosiini 20-DH-DO-20-(oktahydroatsokin-l-yyli)makrosiini 20-DH-DO-20-(heksahydroatsepin-l-yyli)laktenosiini 42 7 3 2 2 2

Esimerkit 32-35 20-DH-DO-20-(3,3,5-trimetyyliheksahydroatsepin-l-yyli)desmykosiini valmistettiin esimerkin 8 menetelmällä ja erotettiin sitten yksittäisiin isomeereihinsä 1 ja 2 5 silikageelitasapainokromatografisesti.

20-DH-DO-20- (dodekahydrokarbatsol-9-yyli)desipykosii-ni (yhdiste D25) oli kahden isomeerin seos. Seos erotettiin kahteen fraktioon, joista molemmissa oli paljon yhtä isomeeriä, silikageelitasapainokromatografisesti.

10 Kummallakin isomeeririkastetulla fraktiolla oli saman lainen aktiivisuusmalli kuin seoksella.

Esimerkit 36-37 20-DH-DO-20-(oktahydroatsokin-l-yyli)desmykosiinin dihydrokloridi ja tartraattisuolat valmistettiin 15 20-DH-DO-20-(oktahydroatsokin-l-yyli)desmykosiinistä käyttäen vakiomenetelmiä.

Taulukot IV-XVI esittävät yhteenvetona esimerkkiyh-disteiden tiettyjä fysikaalisia tietoja: 43 7322 2 .¾ Ό H-ι O tn U C5 ro χ PJ ·- 3 6h o β tn

H

(T3 β -P m vo f in n n h r- o vo co •H ίΟ *" ·- ^ #. r» f- ·- £ > ον σ> σι σι σν σ\ σι co σι αισι

O fO

•P

rO -P-P ' ·>·.**...««. „ „ H (ΰ:(ΰσι σι σι ο o σι co rH σι *r σ\ tn MS *“ *- r- »· ί- *- r •Μ -P .C Γ'· Is* Is CO ΙΟ r· ^ Γ' Γ-ί -Η >1 1 (ΰ Επ Μ Λ <tS Ο 3 ___ _ _____ tn οοοσοσοοοο ο» ο οο >ι Λ oootnoooouoo ο·*τ ο οο > Ή coininr^invomuor-o r» cn vo mm Η td «.-w «, „

X β ? ^ ΉιΗι—l<—(OOOOrrOO VO O OrH

CN CS CN CN r-I Ή (N CN (N CN (N JZ <N CNCN

·< ro<NCNfN(N(N<N(NCNiN H H CO CNCN

3 2 cococooocococooococo Γ— CO 00 00 CO

rHC CNCNCNCN<N(N(NCN(NCM (N CN (Nl (NCN

β β (ts <ts

Eh Ό Λ 0 -M — •n β i-i Ο+ι^ρ^ιησισσιττ,ΗΓ-ΐΓ^Γο co co o rr

R 52 ^^^^VOrOtNCO^TLOCO CO OO ry CO

'2 SOgcoocooocooooocoooco CO CO σιοο •H P E w tn feos 0 λ: >1 s tn tts frt 5 o m ^ rH (N tn o c .« gaaQoaQQOQQQ q q aa <v ό β , ., •π -β ·Μ ^

3 5η γΗ Ή —n. rH

jj >i 1 Ή H I I Ή rH -Η >ιβηΗ>ιβΟΗ>ι

rH rH -H -H I (OH >1 >ί Ή β >i I

(0 ·Η >i H -HrHHflH >il-H -H rH ^

Λί 4-> >i >i r—I >1 I 0>i I H O M O I

β -P I >1 >i >1 CCS rH I β o e c g c rH I >1 I •Hh-.i I β ·η tn <ö «s

1 Q) I rH I rH T) ι-f) β ·Η At -H A M

Ο β β I rH I ·Η · ·ΗβΟ O MO)

ΓΜ -P ·Η ·Η β I β M CN Τ30Μ M

I -Η «Η Ό ·Η β ftS 0) · ·Η ·Η tn tS 'O Ä Ή l\

t_) 4-> >ι -H dl ·Η Μ DjM rH Μ ·Ρ >1 >1 Ή rl LDI

tn >i m as λ; <u •H'vi >1 (u te .β λ ^ >i · r> I a> to O Ό DjO >1 Dj I ttS ti >i >i l*r

β rH Dl -P tn -H OrH I -H K H M >1 I "-J

to I H m : 4-) M fi Ή Dj Ή -P ^ ^ O

| β CU O (0 4J ·Η >ι | ·Η I (1) 0) ·Η Q) I H

O -H -H M O O Ό W β tn O -P +J P j c n >b h 'b m h ·η -h ·η λ; m i i >i ft •H >ι >ι Ό At M Λ ΌΟΌη· ·σ>ιΐΌΐη

>Η >ι ,β >1 >i 0)lJ ·Η M >1 -·Η »I 2 -H (tS

O β <ts Λ tn Djtn Ht3x;mrHrr)ojvHin

Hd)tn β O ‘H 4-) <l)>j(ts - >i - I 2 tu 4J

H <44 A! 4-) tn Dj ti ft £ H) IN >1 <N β — Dj (tS

>,|φ At 4-) I I -H I At - I - 'H 1

P, Vf ^ O (tS H' (H Dj H" OrHrHrHrHrODjrH

44 7322 2 fd

•rl Ό IM

tn U « -¾ H ffi g H o l " « « * 1 I , ^ <" o « £ <r m o g r> w ·- >····.·. G)

° |0 ^ c\ en m m oi p< S

P \ C -P-P v 04

m S:§ ~ * * m ... H

.2 ^ g ^ o r- λ λ m ^ u

3 2 * - - - - w Λ. (N

5 « . Se? ^ 00 ^ ^ ^ ^ ^ g M Φ C ^

•Π 'n -P

s_ Ζζ · >iC(0

— o o O O O O O >-HrH

m -'O o o m σ> o o <1> -P O

C2 - . .H 10 o o ι-h mm m m o 3 m J.....- 3WtÖ

DxJ % z! Ή ή 1-) rH IN σ> O-H-iHi-l

H "b g ^ 04 04 OI N (N p—| VO r-t Ό O

·$« E w w w w _ 3 -HS

•5 ^ -H —. U 10

. jj Js 04 (N 04 m 04 04 rH LO O P

o b ® 00 CO CO 00 00 CO 0)*·|—l-P

<TJf3 ^ 04 O) 04 04 04 04 <» ° ·* +!

crrt Ö"1 ·· O C

H Ί2 fÖ O p (0

n _I <-* X rH T3 P

O ij Λ in -H · >1 -P

jST rH O .C P

'g o + -H <n -H ro -h 5 n+<= ~ 00 σι VO o- m en tn ~ Ό +> . s S ,§ ^ o m σι en m vo Ό ID w in g § 00 σι oo oo co <n co 0 >1

E

tn to <u <u

^ tjn o ή o) m n- m o iH

cl .~j X (N 04 04 IN 0404V0V0 ro § -ΟβΟ QQ o QQQQ H £ '3 £ I M -H (0 3 ·* rH I I -H rH O) il l l O rH O r-t (Ö0<n "J -h e -H P P ^ >1 -P C <u 2 , Λ ·Η ·Η H Ό H U >1 tn «ö tn

S Tl -H (0 rH Ό >1 >1 P >1-H I -H O -P X

3 H»>1 X 0) 0 1 £ >h -P >h P C <D C <D I >i 3 3 γ >r, <0 1 >Η m ε » J) H >, rH -rt -r|

Λ b I I rH G< Ai O Λ E O I 3 <0 rH

,3 R r-tvO|0'<DWQ)0WH nJ+J-H

v i 1 I d M d ·η d 10 +J 1 -P tn

Λ 'Tl C Ή Ίί Ό ·Η ·Η ·Η (0 fi C3 <D

w r; Hri 4) >, h ή ·λ h -p tn > b rH >, .* Ä ίρ-H >,H H 4! O to •ä 0 >1 0 <0 >irH >1 rH (0 0 >H -rl Cu

5 fi 44|-ν )H +J >, 4J >1 ,* W 0) rH S

Ψ H 0) rll 4J <U >1 <U >1 O P g O Ω ' .* E · e 6 i ε I n β t 3 c 2 0-HOI.P ·Η H H H Ό 0 C <0 <#>

01 P P » I P I p I >1 P QD-P

Ό -P im vo 4J C 4J C C fl -P <U VO

>1 I - I -H I Ή m >i W E vo t Λ m o m m am ajt C -h C » rH - — Q> ·> <U <l> rt* Ό O 0 X m x 04 minmioO+J -C -m-r-i <U ' >1 e e

Ό H in rH mcmcOO C Λ O

« 73222

P

<u Ό vo 3 £ 3 Ό u_i .

W UK O

g E-

•H

0 01/1

u 'T (N

4J P “ Φ § * ^ ” 3 * * 1 p t—I o Π pp σι σι 2 nj:m .

5 PH VO 10

iZ PP

>i -

£ § C

C ° p 2 ω Cl -3

#r^ ^ «w rH

C =3 * (N

> c I “ £ x £ Ά " Ό o 0 ·

Λί O O

^ ·η I—( 3

Ή C O

=> <u -H Ä σι (0 "Γ“1 r* --

* 5 § + « « B

3 *S*e SS o.

15 fc <u k 3 ^ £ sc Λ ° o 0 cn o) a ' P M \ u W p rn *r H ™

·Η M 5* 3T H fOrH

ζ Ό C A. A W U

*2 Ä <0 W <N

c >h p a> tc -1 ->H w w υ ',« rH -Η Ο Λ “ >1 H X 0

0 ·Η >i >h 3 3 P

Jj -p I >1 rH -H >1 •X P rH I 3 rH > ™ C I rH (0 -HO)

s ω c I p m rH

3 -H C (0 <D

p Qi -ri p w > o •H Q) ,¾ 0 W vo p wo p p iii

w P W <D rH s -rH

Λ (OP E O Q γη

3 0 (0 SC (U

W P O C (0 <#> 0) I Ό P (UP t7> o >1 ό p a) vo to (n .C >i w E VO x

(0 .C Ή -H

W (0 T3 O O I—I

M P Λ ·Γ~ι -r-ι ·Η

(U Μ >ι (0 3 W

Λ O (0 Λ υ Ό 46 73222

-P

CD

Ό 3 3 01 Ή 3 c

•H

0 ! •P o 0) j, r~- m -h § σ> σ> H £ 3 JJ - 3 4J4J O 03 •3 3:3 *” ~ •H PE CO Γ» ® +J£ - ϋ& c a) iä υ -p — -- 01 J2 o o

•H Λ O O

3 u in in MC > -X. -

> C DX M M

Xl <0 «3 (N «N

Ό P w ^ O Xl “ Λ1 O <N cn M ·η oo co

3 CM CM

•H G

3 O) 3 -n

Eh 3 -h — P C i H O + r-t tn •H CO -1-1+ *3· oo 3 S O = oo oo * Q E - 3 ti d)

E

° > 7 H Λ 1 <0 0) t) <U (0 01 P +1 (1) G 01 o 4f in m 03 -H M P tl tl O * C -3 C ^ o '2 -S 3 3

>4 M M

n 3 Ή

o 1« -H

P Jj 01

2 -H -H 10 CD

ti 9 Ή +J ro 01 > ·* ti >· ·Η o -p oi *3 C >, M P 01 -rl Pm

^ 2 1 >i CD -P rP E

2 rp ?-i E *p o ω ti I I 3 0 e

Ti 3 Ή 3 3 3 <#>

t? ·Ρ I CD ιβ -P

2 & G -P -P (D

•9 CD -P 01 CD E ‘-O

2 01 X -P

W -p O Ό O O O

I G 01 _G -r-ι -n ·π ® O -P >5 fO <0 Π3 ™ P 3 3 Λ υ Ό Ό O >i P Xl Ό 3 >i 01 xl X 3

2 S

X o 47 73222 +> Φ Ό 3 d m 2 I ο ο C ο ο 'ä „ I o m ε — k ^ ° Μ Μ Η 43 >~ Ci ΰ ο αχ ω g ·Η J= m cm 1-1 ^ 00 00

ro CN CN

(0 λ: •Η cη >1 , ^ C ~ ·· C ο + Η ο> 2·^- m m

H 3 g g =· rH CM

£ “ S φ O O

X -H ^ ^ rH rH

(0

0 C

X G

x m r S £ 1 ° " s s I c S s *i i ^ d

-P

rH

m 1

2 C

"m -rl (0

2 43 -H C

I +J rH O

' G >1 ti

° Φ >ilN

7 d I CMI

rj +J rH ·

U -H I CM

H -PC* 5 is h in

e Λ X '"J

5 3 O O

"T m M rH

m l *P X

S? o Φ >i o cm o m

Τ' P -H

ch T3 Λ

H >1 ID -H

d IS H

(Ö -P ΪΡ -P <β >1

X I I

O m m 48 7 3 2 2 2

Esimerkit 38-61

Seuraavat yhdisteet voidaan valmistaa edeltävien esimekkien menetelmillä.

20-DH-DO-20-(okdahydroatsoksin-l-yyli)tylosiini 5 20-DH-DO-20-(piperidin-l-yyli)laktenosiini 20-DH-DO-20-(4-hydroksipiperidin-l-yyli)DOML 20-DH-DO-20-(dekahydroatsekin-l-yyli)desmykosiini 20-DH-DO-20-(oktahydroatsokin-l-yyli)makrosiini 20-DH-DO-20-(atsasyklotridekan-l-yyli)laktenosiini 10 2 0—DH-DO— 20-(heksahydroatsepin-l-yyli)laktenosiini 20-DH-DO-20-(1/2,3,4-tetrahydroisokinolin-2-yyli)-makrosiini 20-DH-DO-20-(1,2,3,4-tetrahydrokinolin-l-yyli)makrosiini 20-DH-DO-20-(atsasykloundekan-l-yyli)desmykosiini 15 20-DH-DO-20-(4-metyylipiperidin-l-yyli)desmykosiini 20-DH-DO-20-(pyrrolidin-l-yyli)laktenosiini 20-DH-DO-20-(oktahydro-lH-atsonin-l-yyli)tylosiini 20-DH-DO-20-(oktahydroatsokin-l-yyli)DOMM 20-DH-DO-20-(oktahydroatsokin-l-yyli)DOML 20 20-DH-DO-20-(4-fenyyli-piperidin-l-yyli)laktenosiini 20-DH-DO-20-(4-fenyylipiperidin-l-yyli)-4'-deoksidesmy-kosiini 20-DH-DO-20-(oktahydroatsokin-l-yyli)-4-deoksidesmyko-siini 25 20-DH-DO-20-(3-atsanisyklo/3.2.27nonan-3-yyli)-4'-deoksi- desmykosiini 20-DH-DO-20-(1,2,3,4-tetrahydroisokinolin-2-yyli)laktenosiini 20-DH-DO-20-(3,3,5-trimetyyliheksahydroatsepin-l-yyli) 30 makrosiini 20-DH-DO-20-(dekahydrosyklopent^c7atsepin-l-yyli)desmykosiini 20-DH-DO-20-(7-atsabisyklo/2.2.l7heptan-7-yyli)desmykosiini 35 20-DH-DO-20-(dekahydroisokinolin-2-yyli-desmykosiini 49 73222

Esimerkki 62

Ruiskutettavia valmisteita A) Kaavan 1 mukainen emäs lisätään propyleenigly-koliin. Vettä ja bentsyylialkoholia lisätään, niin että 5 liuos sisältää 50 % (tilavuudesta) propyleeniglykolia, 4 % (tilavuudesta) bentsyylialkoholia ja 200 mg/ml kaavan 1 mukaista emästä.

B) Liuos valmistetaan osassa A kuvatusti paitsi, että liuos sisältää 50 mg/ml kaavan 1 mukaista emästä.

10 C) Liuos valmistetaan osassa A kuvatusti paitsi, että liuos sisältää 350 mg/nl .kaavan 1 mukaista emästä.

D) Liuos valmistetaan osassa A kuvatusti paitsi, että liuos sisältää 500 mg/ml kaavan 1 mukaista tartraattia.

E) Suspensio valmistetaan lisäämällä hienoksi 15 jauhettua kaavan 1 mukaista yhdistettä karboksimetyyli- selluloosaan sekoittaen huolellisesti niin,että suspensio sisältää 200 mg kaavan 1 mukaista emästä suspensiota kohti.

Esimerkki 63 20 Kananpojan päivän ravintoannos Mycoplasman hallit semiseksi

Tasapainotettu, runsaasti energiaa sisältävä annos, joka soveltuu kananpoikien ruokintaan painon nopeaksi lisäämiseksi valmistetaan seuraavalla reseptillä: 50 7 3 2 2 2

Aineosa % kg

Jauhettua keltaista maissia 50 454

Soijapapu jauhoa, liuottimena uutettu kuorittu,hienoksi jauhettu, 5 50 % proteiinia 31,09 282

Eläinrasvaa (naudantalia) 6,5 59

Kuivattua kalajauhoa sisältäen liukoiset (60 % proteiinia) 5,0 45

Maissin liukeneva tislausjäte 4,0 36 20 dikalsiumfosfaatti,ravintolaatu 1,8 16

Kalsiumkarbonaatti 0,8 7

Vitamiinisekoite(edustaa vitamiineja A, D, E, K ja B._/ kaoliini, niasiini, pantoteenihappo, riboflaviini, biotiini, täyttä-15 mässä glukoosi) 0,5 4,5

Hivenainemineraaliesisekoite (edustaa MnSO., ZnO, KJ, FeSO.,

CaC03) 0,2 2 2-amino-4-hydroksivoihappo (metioniinin hydroksianalogi) 0,1 1 20 Kaavan 1 tai 2 mukaista yhdistettä 0,01 0,1 Nämä aineet sekoitetaan tavallisen rehunsekoi- tustekniikan mukaan. Tällaisella päiväannoksella syötetyt kananpojat lisäten vettä ad libitum ovat suojatut 25 Myicoplasmatartunnoilta.

Claims (6)

51 73222

1. Menetelmä uusien makrolidiantibioottien valmistamiseksi, joilla on kaava (I) 5 0 II

10 CH3 /V3 3\/ \19 20 i 6 rCH2"CH2-R 23 /* CH, i R4-CH—i \ (I) 2 l 1 [ \

15 I_J>H CH ° 2'\ 3 <$ N(CH > \-±.'S 3 CH, l3 20. jossa R on monosyklinen tyydytetty tai tyydyttymätön yhden typpi-atomin ainoana heteroatominaan sisältävä rengas, renkaan 25 sitoutuessa typpiatomin välityksellä ja sisältäessä 5-16 rengasatomia, tai bisyklinen tai trisyklinen tyydytetty tai tyydyttymätön rengas, joka sisältää yhden typpiatomin ainoana heteroatomina, jolloin rengas on sitoutunut typpiatomin välityksellä ja sisältää 8-20 rengasatomia, monosyk- 30 lisen, bisyklisen tai trisyklisen renkaan ollessa vapaavalintaisesti substituoitu yhdessä tai useammassa hiiliatomissa, 0^-C^-alkyylillä, fenyylillä, hydroksilla, di-(C1-C4-alkyyli)karbamoyylillä, piperidinolla, bentsyylillä tai etyleenidioksilla; 3 35. on hydroksi tai 52 73222 OH /—1^h3 -O—# \ _ Qpj \ _'/ (mykarosyylioksi)

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä kaavan (I) mukaisen makrolidin valmistamiseksi, tunnettu siitä, että R on (i) tyydytetty monosyklinen kaavan -ν7οη2)π mukainen 20 rengas, jossa n on kokonaisluku välillä 4-15, jossa rengas on vapaavalintaisesti yhdessä tai useammassa hiiliatomissa substituoitu C^-C^-alkyylillä, hydroksilla, piperidino, di- (C^j-C^-alkyyliJkarbamoyylillä tai fenyylillä, tai (ii) bisyklinen tai trisyklinen sekundäärinen amino-25 ryhmä, joka on 1.2.3.4- tetrahydrokinolin-1-yyli, dekahydrok ino1in-1-yy1i, 1.2.3.4- tetrahydroisokinolin-2-yyli, dekahydroi sok inolin-2-yy1i, 30 indolin-1-yyli, isoindolin-2-yyli, dekahydrosyklohepta^7pyrrol-1 -yy 1 i, dekahydrosyklohepta£c7pyrroi-2-yy1i, dekahydrosyklopent Zc7atsepin-2-yy1i, 35 dekahydrosyklopent£|7atsepin-3-yyli, 2.3.4.5- tetrahydro-1H-2-bentsatsepin-2-yyli, 2.3.4.5- tetrahydro-lH-3-bentsatsepin-3-yyli, 54 73222 atsabisykloheptanyyli, atsabisyklo-oktanyyli, atsabisyklononanyyli, atsabisyklodekanyyli tai 5 atsatrisyklodekanyyli.

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä kaavan (I) mukaisen makrolidin tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan valmistamiseksi, tunnettu siitä, että R on ryhmä, joka on oktahydroatsokin-1-yyli, heksahydroatsepin- 10 1-yyli, 4-fenyylipiperidin-1-yyli, pyrrolidin-1-yyli, atso-syklotridekan-1-yyli, 4-hydroksipiperidin-1-yyli, 3-atsa-bisyklo^.2.Sj-nonan-B-yyli, piperidin-1-yyli, 3-(N,N-dietyy-likarbamoyyli)piperidine1-yyli, (4-piperidino)piperidin-1-yyli, oktahydro-1H-atsokin-1-yyli, dekahydroklnolin-1-yyli, 15 1,2,3,4-tetrahydrokinolin-1-yyli, 1,2,3,4-tetrahydroisokino- lin-2-yyli, 1, 3,3-trimetyyli-6-atsabisyklo,£3-2.1_7oktan-6-yyli, 1-atsaspiro^.57dekan-1-yyli, 1,2,3,6-tetrahydro-pyri-din-1-yyli, dodekahydrokarbatsol-9-yyli, 3,3,5-trimetyyli-heksahydroatsepin-1-yyli, dekahydroatsekin-1-yyli, atsasyk- 20 lotridekan-1-yyli, atsasykloundekan-1-yyli, 4-metyylipipe-ridin-1-yyli, 4-fenyylipiperidin-1-yyli, dekahydrosyklopent-/c7atsepin-1-yyli tai 7-atsablsyklo£2.2.l7heptan-1-yyli.

4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä kaavan (I) mukaisen makrolidin tai sen farmaseuttisesti hyväksyt- 25 tävän suolan valmistamiseksi, tunnettu siitä, että 4 3 R on mykinosyylioksi ]a R on hydroksi.

5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä kaavan (I) mukaisen makrolidin valmistamiseksi, tunnettu siitä, että R on tyydytetty monosyklinen rengas.

5 XCH3 „4 R on CH- CH, 3 ^3 tai I o tai [_0 HO-/ ^f-O- HO y—O — H0~^ f~ 10 ^ \r>CH r ,/ ^ΛΤΤ HO \>CH- OCH3 UUH3 HO OH 3 (mykinosyylioksi) ja niiden happiadditiosuolojen valmistamiseksi, tunnet-t u siitä, että 15 a) pelkistetään aldehydi, jolla on kaava (III) Λ- "I o CH3\ /· \ V

20. N.-CH2-CH R 'CH2 I ] \ c/\/i\/voH I /0H i 0 /—\

25 CH3 £ y — N(CH3)2 / 3 ch3 R1 4 jossa R ja R merkitsevät samaa kuin kaavassa (i) , kaavan 30 HR mukaisen amiinin läsnäollessa, jossa R merkitsee samaa kuin kaavassa (I), tai b) saatetaan amiini, jolla on kaava HR, jossa R merkitsee samaa kuin kaavassa (I), reagoimaan makrolidin kanssa, jolla on kaava (IV) 53 73222 0 ,/xr«3 5 ^ \ i VCH2-CH2-L , /* CH„ /\ ‘IV> c/ \/{,\ / noh I _ /" 10. y \ CH O ;.-N(CH^)_ / \r3 ch3 jossa L on poistuva ryhmä, joka pystyy korvautumaan amiinil-15 la HR, inertissä orgaanisessa liuottimessa.

6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tun nettu siitä, että valmistetaan 20-dihydro-20-deoksi-Zj-atsabisyklo£3·2.27nonan-3-yyl£7-desmykosiinia. 55 73222