DK153555B

DK153555B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af 20-amino-derivater af tylosin, desmycosin, macrosin eller lactenocin eller syreadditionssalte deraf

Info

Publication number: DK153555B
Application number: DK413783A
Authority: DK
Inventors: Manuel Debono; Herbert Andrew Kirst
Original assignee: Lilly Co Eli
Priority date: 1982-09-13
Filing date: 1983-09-12
Publication date: 1988-07-25
Also published as: NL950001I2; IE55916B1; GR79067B; DK413783D0; FI73222C; PT77335B; EP0103465A1; LU90240I2; PL142251B1; ATA320683A; FI833229A; ES548472A0; KR850000961B1; EG16287A; PL243718A1; CS665383A2; KR840005734A; PL250619A1; ES8607336A1; ES8604596A1

Description

1 DK 153555 B

O

Den foreliggende opfindelse angår en analogifremgangsmåde til fremstilling af en hidtil ukendt gruppe af 20-aminoderivater af tylosin, desmycosin, macrocin eller lactenocin eller syreadditionssalte deraf. Disse derivater 5 er værdifulde som antibiotika.

Forbedrede antibiotika behøves kontinuerligt. Udover antibiotika, der er anvendelige ved behandling af sygdomme hos mennesker, er forbedrede antibiotika også nødvendige på det veterinære område. Forøget styrke, udvidet spektrum 10 for bakteriel inhibering, forøget in vivo effektivitet og forbedrede farmaceutiske egenskaber, såsom større oralabsorption, højere blod- eller vævskoncentrationer, længere halveringstid i legemet og mere fordelagtig grad eller måde til udskillelse og grad eller form af metabolisme, er nogle 15 af målene for forbedrede antibiotika.

Tylosin er et velkendt terapeutisk middel på det veterinære område. (Se f.eks. Tetrahedron Letters 1970, 2339, og US-—patentskrift nr. 3.178.341). Tylosin og tylosin- lignende macrolider er blevet modificerede i et forsøq på at 20 opnå derivater med forbedrede egenskaber. Der er blevet fremstillet et stort antal derivater, men forbedring i aktivitet er hidtil ikke blevet opnået i den ønskede grad.

Man har nu fundet frem til, at reduktiv aminering af C-20-aldehydgruppen i tylosin og ovennævnte tylosin-25 lignende macrolider under anvendelse af visse cycliske aminer som amineringsmidler resulterer i derivater med signifikant forøget aktivitet.

De ved den omhandlede fremgangsmåde fremstillede macrolidderivater har formlen (I) 30 35

DK 153555 B

O

/ \-CHs 5 CH j Γ CH\ / \

| ^-CHa—CHa-R

Λ / CHa, /\ β γ \ (i)

1 o XOH Ϊ t/OH

L® Xrs 15 hvori R er en heterocyclisk gruppe indeholdende et nitrogenatom som eneste heteroatom og bundet til C2Q-carbonatornet gennem nitrogenatomet, idet gruppen er pyrrolidino, eventuelt 20 med hydroxy, phenyl, piperidino eller N,N-diethylcarbamoyl monosubstitueret eller med methyl disubstitueret piperidino, eventuelt trimethylsubstitueret hexahydroazepino, 1,2,3,6--tetrahydropyridino, octahydroazocino, 1,2,3,4-tetrahydro-quinolino eller -isoquinolino, decahydroquinolino, octa-25 hydro-lH-azo.nino, azacyclotridecan, dodecahydrocarbazol, 3-azabicyclo[3,2,2]nonan, l-aza-spiro[4,5]decan eller 1,3,3-trimethyl-6-azabicyclo[3,2,1]octan,

O

R"' er hydrogen, hydroxy eller mycarosyloxy

OH

30 T

•-i—CHa

-0-#Y \-0H

Ό-»Y

OHs 35

O

3 DK 153555B

R^ er 9Hs CH3 /*~°\ .·—α 5 H0-* *-0- eller H0-* \-o- ο6η3 X0CHs w/ X°CH3 4 Ί eller syreadditionssalte deraf, forudsat at R , hvis R er hydrogen, er (j!H3 15 H0-./ /*"°~ cféhb xoch3 20 Den omhandlede analogifremgangsmåde er karakteri seret ved, at man (a) reducerer et aldehyd med formlen (III) i 25 / ''V-CHs il i 0 cHy yv (iii) / cH3x /\ FT-^Hs-f 9 \

30 A /K Λ 1 ΐ OH

p*7 VIV 0R v CH3 ^#-N(CHs)2

Cria XRs ' 35

O

4 DK 153555B

hvori 3 4 1 R og R er som defineret ovenfor, og R er hydrogen eller en hydroxybeskyttelsesgruppe, i nærværelse af en amin med formlen HR, hvor R er som defineret ovenfor, hvorpå en even- 5 tuel hydroxybeskyttelsesgruppe R1 fjernes til frigørelse af hydroxygruppen, eller (b) omsætter en amin med formlen HR, hvor R er som defineret ovenfor, med et macrolid med formlen (IV) 10 \ ΓΗ* ) \ (IV)

^V-CHs-CHs-L

15 k A

4 / CH\/ \ R^H2-r T \ Λ ·κ A , I oh 9H* N/iSV^ i—< CHs or \-N(CHa)e 20 hvori X 3 a R , RJ og R4 er som defineret ovenfor, og L er en udtrædende 25 gruppe, som kan fortrænges af aminen HR, i et ikke-reaktivt organisk opløsningsmiddel, hvorpå en eventuel hydroxybeskyttelsesgruppe R fjernes til frigørelse af hydroxygruppen, og om ønsket omdanner en fremstillet forbindelse or med formel (I) fra omsætning (a) eller (b) til et syreaddi-tionssalt deraf.

Udtrykket "hydroxybeskyttelsesgruppe" henviser til en substituent, som ikke fjernes under reaktionsbetingelserne, men som let kan fjernes, efter at omsætningen er afsluttet 35 til frigørelse af den oprindelige hydroxylgruppe. Hydroxy—

O

5

DK 153555B

beskyttelsesgrupper er velkendte i teknikken (se f.eks.

T.W. Greene, "Protective Groups in Organic Synthesis", Wiley-Interscience, 1981, side 10-86). En specielt egnet hydroxybeskyttelsesgruppe er tetrahydropyranylgruppen.

5

Fremstilling af macrolider med formlen (I)

Macrolider med formlen (I) fremstilles som nævnt ud fra de tilsvarende macrolider med formlen (II) i CH,

I I

CHa-/ ^j-GHs-R5 {II) / CH\ /\ 15 R4-CHs-/ ^ \

Λ A Λ i I GH

CH^\/^\/ OR i-/ CHa (CHa) 2

CtH3 20 1 3

hvor R er hydrogen eller en hydroxybeskyttelsesgruppe, R

4 5 og R er som defineret ovenfor i formel (I), og R er -CHO eller -C^L. L står for en udtrædende gruppe, som kan fortrænges af en amin med formlen HR, hvor R er som defineret 25 i formel (I) .

I overensstemmelse med et aspekt i den foreliggende opfindelse fremstilles således macrolider med formel (I) ved reduktiv aminering af aldehyder med formel (II), hvor 5 . 1 R er -CHO. Aldehydudgangsmaterlaler, hvori R er hydrogen, 30 omfatter følgende kendte macrolider med formel (II) 35

6 DK 153555B

>i >i I -? Λ zz g S t g ^v/8 ~*\ S' « / Y ti § § 4A/V 5>sA=

o o i JL

& & s s >1 >i

X X

o o

iH tH

>1 >t tn tn o o cn I u a G w P5 rO O Ό o o υ >1 >1 g s

C G

Η Ή tn c o c o -H o

•h o o G

cn >i o

o g g -G

i—I w o O

>1 <l) rei to

•GOS H

7

O

DK 153555B

Tylosin og dets fremstilling ved fermentering af Streptomyces fradiae NRRL 2702 eller 2703 er beskrevet i US-patentskrift nr. 3.178.341. Desmycosin og fremstilling af desmycosin ved mild syrehydrolyse af tylosin er ocrså 5 beskrevet i US-patentskrift nr. 3.178.341.

Macrocin og dets fremstilling ved fermentering af Streptomyces fradiae NRRL 2702 eller 2703 er beskrevet i US-patentskrift nr. 3.326.759. Lactenocin og fremstilling af lactenocin ved mild syrehydrolyse af macrocin er også 10 beskrevet i US-patentskrift nr. 3.326.759.

Aldehydudgangsmaterialerne med formel (II) omdannes til aminerne med formlen (I) ved reduktion i nærværelse af en amin med formel HR, hvor R er som defineret i formel (I). Det foretrukne reduktionsmiddel er et cyanoborhydrid 15 med formel MBHgCN, hvor M er et metal fra gruppe 1A eller ammonium. Natriumcyanoborhydrid er det reduktionsmiddel, der fortrinsvis vælges. Omsætningen udføres fortrinsvis under anvendelse af en overskydende mængde af aminen med formel HR, typisk fra 2 til 3 ækvivalenter. Opløsningsmid- 20 let til omsætningen er normalt et indifferent, polært opløsningsmiddel, såsom en C^-C^-alkanol, fortrinsvis methanol. Reaktionstemperaturen kan være fra 0 til 60°C, fortrinsvis 20-40°C. Neutrale betingelser (pH-værdi 6-8) foretrækkes. Dehydratiseringsmidler, såsom en 4A molekyl-25 sigte eller vandfrit natrium- eller magnesiumsulfat, kan med fordel anvendes ved omsætningen.

Aminer med formel (I) kan også fremstilles ved at omsætte en amin med formlen HR, hvor R er som defineret c i formel (I), med et macrolid med formel (II), hvor R 30 er -CH2L, og L er en udtrædende gruppe, som kan fortrænges af aminen. Egnede udtrædende grupper omfatter f.eks. tri-fluormethansulfonyl (triflat) og iod.

C

Udgangsmaterialer med formel (II) , hvor R er -CH2L, fremstilles hensigtsmæssigt ud fra de følgende 35 kendte macrolider, som svarer til formel (II), men hvor R5 er -CH20H: 8

O

DK 153555B

R3 R4 dihydrotylosin (relomycin) mycarosyloxy mycinosyloxy 5 dihydrodesmycosin OH mycinosyloxy CHa /*~°\ dihydromacrocm mycarosyloxy HO-·^ *-0— oti OCHa 10 9Hs /*“°\ dihydrolactenocin OH HO-·^ /*-0-

Clti ^CHa 15 Disse macrolider fremstilles ved at reducere aldehyd gruppen i henholdsvis tylosin, desmycosin, macrocin og lactenocin.

C-20-Hydroxylgruppen i ovennævnte macrolider omdannes derefter til den ønskede udtrædende gruppe L ved hjælp 20 af kendte metoder. C-20-hydroxylgruppen kan f.eks. omdannes til triflatgruppen ved omsætning af macrolidet med et aktiveret derivat af trifluormethansulfonsyre, såsom tri-fluormethansulfonsyreanhydrid eller trifluormethansulfo- nylchlorid, i nærværelse af en base i et ikke-reaktivt 25 organisk opløsningsmiddel. Om Ønsket kan triflatgruppen omdannes til iodgruppen, f.eks. ved omsætning af det ui-solerede sulfonestermellemprodukt med en kilde til iod-idion, såsom tetra-n-butyl-ammoniumiodid eller natrium- i iodid. I tilfælde af dihydrodesmycosin og dihydrolacteno- 30 cin kan 20-iodderivaterne dannes direkte ved at sætte iod opløst i et egnet opløsningsmiddel, såsom dimethylformamid, til en opløsning af 2O-dihydromacrolidderivatet og triphenylphosphin under nitrogen.

Den udtrædende gruppe ved C-20 kan derefter ombyttes ved omsætning med aminen HR i et egnet ikke-reaktivt organisk opløsningsmiddel, såsom acetonitril, til opnåelse af forbindelser med formlen (I).

35 ! 9

DK 153555B

O

De C-20-modificerede derivater fremstillet ifølge den foreliggende opfindelse danner syreadditionssalte. Disse syreadditionssalte er også anvendelige som antibiotika og fremstilles ligeledes ved fremgangsmåden ifølge den fore-5 liggende opfindelse. Sådanne salte er f.eks. anvendelige til adskillelse og rensning af derivaterne. Derudover har saltene en forbedret opløselighed i vand.

Repræsentative, egnede salte omfatter de salte, der er dannet ved standardomsætninger med både organiske og uor-10 ganiske syrer som f.eks. svovlsyre, saltsyre, phosphorsyre, eddikesyre, ravsyre, citronsyre, mælkesyre, maleinsyre, fu-marsyre, palmitinsyre, cholinsyre, pamoesyre, slimsyre, D-glutaminsyre, D-camphersyre, glutarsyre, glycolsyre, phthal-syre, vinsyre, myresyre, laurinsyre, stearinsyre, salicyl-15 syre, methansulfonsyre, benzensulfonsyre, sorbinsyre, pi-crinsyre, benzoesyre og kanelsyre.

Illustrative C-2O-modificerede derivater fremstillet ifølge den foreliggende opfindelse omfatter de forbindelser, der er anført i tabel I-IV.

20 25 30 35

10 DK 153555B

O

Tabel I

g

Illustrative C-20-modificerede derivater af tylosin

Forbindelse nr. _R_ 5 T6 octahydroazocin-l-yl T13 3-azabicyclo[3,2,2]nonan-3-yl

A

’O a r4 = HQ-· ^ °9 r3 = mycarosyloxy π 6h3 chs

15 Tabel II

Illustrative C-2O-modificerede derivater af desmycosin 3

Forbindelse nr« R_ R

Dl pyrrolidin-l-yl OH

D2 piperidin-l-yl OH

20 D3 4-hydroxypiperidin-l-yl OH

D4 4-phenylpiperidin-l-yl OH

D5 hexahydroazepin-l-yl OH

D5a " H

D6 octahydroazocin-l-yl OH

25 D7 octahydro-lH-azonin-l-yl OH

DIO azacyclotridecan-l-yl OH

CH.3 30 /* °\ a R4 = \-0- , 5 i iH3 CHa 35

O

11 DK 153555B

Tabel II (fortsat) 3

Forbindelse nr. _R^_ R

Dll 1,2,3,4-tetrahydroquinolin-l-yl OH

D12 1/2,3,4-tetrahydroisoquinolin-

5 -2-yl OH

D13 4-piperidinopiperidin-l-yl OH

Dl4 3-azabicyclo[3,2,2]nonan-3-yl OH

D15 3-(Ν,Ν-diethylcarbamoyl)-pipe-

ridin-l-yl OH

D19 1-azaspiro[4,5]decan-l-yl OH

10

D20 decahydroquinolin-l-yl OH

D21 1,3,3-trimethyl-6-azabicyclo- OH

[3,2,1]octan-6-yl

D22 1,2,3,6-tetrahydropyridin-l-yl OH

D23 3,3,5-trimetbylhexahvdroazepin- OH

15 -1-yl (isomer 1)

D24 " (isomer 2) OH

D25 dodecahydrocarbazol-9-yl OH

D33 cis-3,5-dimethylpiperidin-l-yl OH

D34 trans-3,5-dimethylpiperidin-l-yl OH

20

Tabel III

Illustrative C-2O-modificerede derivater af macrocin

Forbindelse nr. _R_ M3 hexahydroazepin-l-yl 25 M4 octahydroazocin-l-yl (jJHa a 4 -3 30 R - HO-·^ J og R = mycarosyloxy ηΠ QH3 35

O

12 DK 153555B

Tabel IV

Illustrative C-20-modificerede derivater af lactenocina

Forbindelse nr. _R_ L4 hexahydroazepin-l-yl 5 L5 octahydroazocin-l-yl CHa

,0 a R4 = H0-<^ ^>-0- , R3 = OH

' ηΠ

Ana 15

Derivaterne fremstillet ifølge den foreliggende opfindelse inhiberer væksten af pathogene bakterier, især grampositive bakterier, Mycoplasmaarter og gramnegative bakterier, såsom Pasteurellaarter. Derivaterne er særligt • 20 anvendelige overfor Pasteurellaarter, såsom P. multocida og P. hemolytica, og overfor Mycoplasmaarter, såsom M. gallisepticum og M. hyopneumoniae (organisme, der forårsager mycoplasmapneumonia hos svin).

De minimale inhiberingskoncentrationer (MIC), ved 25 hvilke illustrative forbindelser inhiberer visse bakterier, er anført i tabel V og VI. MIC i tabel V er bestemt ved standardagarfortyndingsbestemmelser. MIC i tabel VI er opnået under anvendelse af konventionelle næringsmediumf ortyndingsmikrotiter forsøg.

30 35 13

DK 153555B

in in lo Λ ^ m Hr-tCNr-lr-iOOOUOlOCNVOI I tf

J Η ιΗ ΙΟ r-i rH

Π ^OOMCDMN^N I I CO 00 I I I

g ro <N (N

Η H

*j* in in m <n pH C^CMin<NlDr-lBin Q in r» ·» ·» »\ V· J3 ·*

O O O O O O OO’^'TCOOJCN^O

ro ro H

(tf ^ o in in κι κι κι ηί m ω H cs<ncn(NcnhE-'cn "O Q »»*ν·*«-»«γ>ι«->55»% £? _ i O O O O O O OT3«rrO,CD(N'3,00 > rQ i ro vo H o m ^ ® ininmininNinin ,2 7 ID p- _ r·

^ J2 Q OOOOOOOO'^OOlOiO'^COyO

'O i—i H vo rs i—i

(DS .H

m n m in in £ tj <3 m in in m in ni m ^ η ΙΛ <* Λ p. P. P- ^

2 ,y o OOHOOOOOCMCNCOCO’q'OOCO

U 4-1 (O C4

Η ω · H

*+·&> in cn z! "S in in cNinninm Ή 2 m -.λ .-

X S Q OOHOOOOOOOOOlKOOOOO^rOO

g r° Η (N (N

* i—I H

Si in in in k, i inininminrscNcs ** r \ r''

, u Q OOOOOOOOr-llSCOCO^-irCS

H w ίο ίο ro <u y Λ π3 m (tf cn

^ S r-i CNCNnjninjrHHOCNVOlOlOI ICO

2 Q ro H ri H (N

•H M

> -P ^

7 H

m ft 10 Η Η Φ

Ό ro :>P

., Hoowanjo^ ftio "?2 .rHOrO-rlHni>-|VO rir'· .2 O (tf Ό O υ Π χ > x cn -w a cu x ό ti g υ; σι <u

2 tn m a1 aj q σ (tf h S

O E 0) G (tf NOCJW

j flj Ό C <U=2 d 3 a C C = 3 c φ (0 O >' I H -rj _ _ § in m o) C o

,_l 3 3 tn C -H O

S O O fl 0.

rtf o o o tc. (0 di o o o S_l o Ό C r-1 £ O c 0 _ o . 7 . S - - (/} r—' 5 5 S r-ί·^. 0 - - - pC · -W- &i ^ ή S’ y ·©. Λ rG c 2 2 m Cl Cl <D I 71

Li (tf (tf Μ Φ O

η -p 4J -U (tf in h tn tn cn es ta 14 DK 153 555 £ m cN m m m m m on m ,—j λ O »» λ Λ i4 Q ΟΟΟΟΟθΟιΗ·Μ*ΟΟΙΟθσ I CO H·

rH CM ID

tH

in r-i m in in in m cn m ^ ^ **v ^ ^

Q OOOOOOOCNCOOON'COI I I

ID

in m mtninintncNOin p— n r' η n ^ <· ^

Q o-oooooOO'srcaOio-TTPio (¾ i—j rH VO ID rH

M

Ο)

4J ft-) oOOOVOOOCO'N,iHCOCOCNN,'M'l I I

(C Q r-i CN Π ID ID

>1 «“· -H £} j-ι a> in m

0)¾ m in m mcMCN

tØiHfM λ ^ ^

QJ Q OOiHOr—lOOOlDlOlOlD I I ID

φ 1C' rH 1 i r—ΐ I—ί 1—J

XS d

Φ -H

M rQ (T) Ν'νΙΟΗ'νΝΝ'ΙΟΜ 1 COCO I I I

<1J ί-l r-1 H CN CM CN

O O Ph i—I i—i i—1 •Η Ή i« 03 -H tn n ©.

O CO (n rJ'TTCO'T'N'CNCNCO I I 'T I I I l -(-> β M g* vo

(CIO

to o (¾

-P CN

M i

O U CNCNCNCNCNrHr—ICOCNIOVDIO I I I

*P J CO rH rH rH

— *P

(d

> -P

® rr. 'fTCO'T^'CNCNCN I I 00 CO I I !

rH -P ^ cn CN CN

CD Ή. S r-ί r—! •10 >

rC -H

-P H

«* H

<c p,

£} H <U NH

T3 n · io •S rHOOHWCNOAi ^ r-

™ .rHOm-HHCNPIO

'Π rH'^'f-H'dCUO (ClDOU

£ X > X W -H W Dixie 0 e ra cntt) ΊΤ _

'd co h ¢1 dl D οι d 7} S

0 .3 φ fi <? NOOW

ΤΊ φ Ό φ Ή C ιΗ M

£ Μ fe s : H t 51 C 0=2 bl 3 Οι 0 0 = 3

*· nJ i S "Η -H

Λ1 &. 3 ip H = = g CO W 0 fi 0 g 3 3 m fi -ho

-2 υ 0 3 CL

do Ο o to (d

So ου 3 -H

2. 0 0 0 H -C

P o 0 8 - . . t! - 2 - - n rH i=- = = «Hi; Qt~ "S” "d” 2 >, >1 -p a p £, JC λ n 2 2 S n no e λ

£ ns (CM o O

M 4J 4J -p . .2 M

ο ω ω w : s ta frl 15

DK 153 55 5 B

lo in in m in in in cn cn in CN f· Λ n rt ^

Q OOHOOOOOrrN,'0COO3COCN

rH cn cn ro

rH iH

m in τ m m m in in in cg «» η λ ^ λ Q oOiHOOOOrHTCorgcori'^rrg ro 10 lø ro ro in in in m in in m fsj <"* c* r** ** ·** q oohooooon’ooioco-cn'cn rH iø in ro in in m in in cn cg

Cg ·*> λ Λ Λ r< CN iHO iHOOOOHCOGOlØOOl 1-31 to j Q rH 10 U :

(D

„p tø i in in in > 1 rH »*s

T* _ CN rHiHrHiHrH©©OH<eoCNlØn,'a,CN

MrQ^Q ro H iø id ro Ό o; m in in cn

“c o ininininincgcNH

Ό Ό £\j μ Γι Λ λ r< f*.

® 5 Q ooooooooæcoiovøcoæcN

« 'i Η H CN CN ro S -2. η h D " in in ni IH N »« ™ I] m ~ ~ -

H ri rH rHiHrHrHrHOOOlØVØlOløCOOOCN

'-r'OgiQ rH ,Η rH -H CN CN ro -P o W. ri ri

Id g ω tn i n +> ° p m H Cg Eli _ ' H in ih m — P Λ rH CNCN-cTCNCNiHOiHCNCNCNCN I I H- ro ro ro ro vø

IH

cd >· _μ m Η Φ 2 ^

^ ^ Q OrHrHrHrHOCNCNCNCNlØOO 1 I I

Cd > 1 H

EΗ -H

M £ W H (D Ή M Ό ro *10 7$ rHO O W Cfi CN O _i4 iJ C" .rj .rHOrO-HHCN H 10

11 Hifg'fH'dPiU iijiooU

o X > X W -H W PgXiØ g tfl cn 0) Ν'

o 0! UOJdJQO'cd rH S

□ S CUCco N o O W

Π <U Τ3Φ-Η 3 Η M gi

G Msss-HsCrC! 0) = Z

2 a) 3 a oo = 3

^ g Id < g H-H

§ a 3 ΜΗ r- S S

•h tn tn ø C 0

ri 3 3 W C -HU

id O 0 3 0* tn o o o tn ία

iH O CO C -H

o o 0 0 r- £,

tfll O CO -n C

ίτι Ή 3 S - iH - OSSSÆS -ri SS

·©. > > -u Q S- tn Λ Λ a 0 0 na a α> g æ o cd ια u <u o ϋ, 4J +j jj cd tn w w w s w 16

DK 153555B

in '•o P P

CO I

S

P 00

Q

O

P VO D P

A

(1) “ ΙΟ «

Φ O H

<d β c: aj ρ * Φ

1 s - -S

o Q c M-i 02 O) &i %_ Ό s· in I ® ra g 1 > 7: h ° s.

+i o P

S'* £ 0 rr <N "* «w ο η Φ

"" P

tn Ρ» φ ϊ α S s

rQ M 4J

$ P 0) O) ^ jU 0) ^ (ϋ Ό

p l -P § ro H

p W Φ P g se cn P tn \ Ρ P tn tn

p Ρ β p uL

β α) > β ρ φ ρ ρ φ co ~ Φ 4J ω ρ ρ cn ζ} g tn ρ -η ιη η κ g -η tn tn ρ β tn Φ β tn πβ β φ ρ φ Φ Φ Ρ ο, tn ρ ι tn ρ g φ α Ρ φ I β I I > 5 gtnβHββ>·Θ.

.2 % Ρ Ρ Ρ Ρ Ρ Ρ ρ t-i οιφΡΡΡΡΡ ίΐ

S _ d.TjPPPP,PP

5, β s ρ υ ρ ρ β β

P? ^ Ρ Ρ Ο Ρ O O I

η Α ·ρ Λ -Ρ ·ρ Φ Φ S ω ΟΡβΡΟιβιΛ^ ·* ηοφφ£6^.μ ·& 5 g lx, (¾ S β <β Η Η ^ ·2 ΦροτίΦΡίΡΡ! % Ρ £ *

DK 153555B

17 ΓΊ Η (Ν Q ΓΟ

γΗ I

γΡ

D

Γ- I

Q

rQ

φ rp to Q ό Η (D Ώ Π Η ,Q (Ν Ο

Μ Ο 1-1 0 m tn tn S

cn en I

ti H

<— O E-t •P (¾ cd tn jj ti 0 ko i tw E-t >

rH *3· VD

S * H

td >3* i 2

KO

CN

X

O) i c ^

03 I H

ί .2 s 3 ^ « » d P 535 o

Cn

O

18

DK 153555B

in co 5 cm cm

Q H

n* CO

_ CM CM

Q ^ tn m ^ 03 10 β Q “*

H

Λ % <M rr U (M vo

*H Q

tn “ &>

«I

—- M _i — H y CM M3

15 cn fe Q

+>

M

O o M3 S § *

Q

>

, C\ CM

m ή cn

o Q

20 § E-i

in cm pH cn Q

cn vo P—i 1—f

Q

25

VO

CM

O) X

g tn

H

β td

tP

S_| <0

30 o> H

tn h tn 5 m tn H Λ

0 <D

h « 35

19 DK 153555 B

oo CN in H CN <" h o ro ·Ή rH CN i'- *— /* CN f·1 q HcovoHroooHro v | oo

NO CN in O' 00 in VQ

r-l ΙΛ H » © r~- CN in

,-1 ^«Ncsoin n r> <n Q HfOHinCNOOOH

v I

tti 00 P mcoioNiooi'Tinco d) o ro [n in h m o © <* r* 4-1 r- Λ ^ ^ o. ncN «Ν

Ό Q OOHroHOOHO

> V I

H & P o © cn in m cn © © © 0} tn r- in H cn cn H ro ro in HCJ I—1 Q 0% ·-> «r> ø·*. r-N ¥*V *"· ΙΠ ·*>

0) Hrnvo^moocNH

r2 Ό ό p< æ æ cn in © co co © <u η io tNCNiHCNininn- m

P O fN r* <r* /N r—* »\ #-¾ O »N

S p ©orovOHHOinH

D O

•H m CO CN CN CN VO VO © VO

^ cnm mHHHininro m "P Cji Q γν

g Ό. HrororoHHomH

O tn S p οι cn in m m m in oo 0 ^ ro o cn cn n-i ro o r» H ® ft| Q O ^ > ™ ©ονοιοιοοοιηο * v

H U

Φ , m m in in ·© 'jd ro ^ cn cn

2 di QCNCN000in«.0<N

E"1 _p HHininincNioin© ® coin in cn cn oo in cn r~ cn cn η h p·· o »n

*jj Q *** ·*** LO »λ Γ· i- ^ 1/) iN

ej> O^OCNVDfnmOAH

H to m m in in in σι in 73 H r^· CN CN CN CN ^ CO *-»

ra Q r· »n ·».·-. *»CN «·* O CN

OlOlOlOlCHOinH

Μ ϋ Ό U

.H W < CN

• Μ ΓΝ O CN £ dJ

£ r-l vo 3 <0

H (C U -H

o 0) W. o >0 U’H C

□ 2 p co τ -η «o ni. <u -ri -P Q. d) H £ dn p . O to Φ id C 3

« S S Mft r 0Oi S

& “ H S r-4 C P ft h cn a (uh c o o o 3 w S nr >< > >1 Q O 3 cr W Λ Λ tn ϋ O (0 (0 Q, o U Η H (0 tn U 0 H H £ u o o ,-P3=3H= = = w λ o- cu o α α si u -p o ca p cn cn o P P (0 Id >i

W W Ph Ph S

20 . DK 153555B

ίο β n m λ λ N in m ^ ^ λ μ η ø J Λ Λ OJ (Μ ^ Ο &4

HoioHHvocoinjg Ρ* ιη ΜΝΐ/ΐΛίΝίΛΛίπσι cm r—( i—( ο- λ ^ m o r> cn O η ΛΝ M «>» /N P· CN »*\ ηηηηηοοηο Γ' cn cm in tn in σι cn co CM HH <N CM CM H O r~~ q n' cn η n ·> ι/i

cncnHVOVOOOCNO

ø 5-) p~ p-

0 (V) NliiniilNClOllflCD

-P cn h m fM o. h o o cn r- J0 O «* P* CN r, Λ Λ ·\ ri ΠΗΌΗΗΟΟΙΟΟ •Η j-| ο cm ιο ηι in in cm co οο vo is m CN in H p"· **“ Η P«· P* m Ό mQ n r Μ N «-»Com ο»

q i—j Η ΓΟ Η Η C*1 O O CM H

^ hH oo io cm cm cn ό σι in 0 rtCMt^inHHHincn cn

M -rJ Q r> Γ* !\ ·*·** »*n. I rH

0 o oHcnncnno *-» 3 ΐ o o 0¾ 4_|0 CD CN CN CN CN CD O'! 00 W CM p-HHHHP'H P* tT. Q P λ r· ο i' no «^ “ 2 ©. orncncocoooino

y lj <n oo cm cm cn cm ιο σ> CM

° ° OH P'HHHHincOOH

-N fa Ω r.^^rrrr.in ocncncncoHOAco !> „, m m m in m cn vo .cm > % ,_| CM p Hin OH h O acm cm cm m *v.m «-* ^ lOHHHCMHHACO Ol Λ +1 0 «3· CD Ό CM CM CO VO σ .00 ^.Tj, ΗΡ~ιηΗΗΐηιηη ρ» η k, Q λ·οο^ΑΡΡΟ ·*ι Η 2 OHcnmHHomo !u Η ti η cMininmininw cm ο "5 Η Η CN i' Ρ -CM ιη Η X! υ Ο »-nMCSCM «ηο 0 mvoHHHvoHinn Ρ ω ϋ Τ3 U f . w < CM 4=

Π Γ- O CN £ 0 P

Π H VO β 0 .S , 0 0 ·Η Μ η ® 0 0 Ο Η β 0 ζί 6 3 ο γ0 -η 4-> ø ο i

-dS ø S η xJCLø-ςε I

ri ri M Ø Ϊ* 0 ø C 3 3

3 g 3.0f=HØHHØ β 4-> -P

ø rv -ρ 0Η>.ββ to øø tn £ η ε h 0 s- ft hø H> y cnw3 øhcco SM-POia

O 3Wg ,β ø >· > >i \ H 0 0 M

0 η ·“> n x β tn ø η h ft £ 0000 5L. ·« O jB <w S? OØHHØ ØCQMØ 2 Ο o Η H £ ‘H ‘ri 'ri. ^ y n o 0 0 0 -Q tn M 0

r° H 0 M Mø Uri^a)'M

k >4J3=3H= = = H 0 > -n

Æ ft 0 0 ft S 1¾ W ft H

ft <U0 ØXJOOØ ø M 0 0 0 4-1 -M 0 0 >· CO W ft ft 2

DK1S3555B

m cm in in m oo oo cn i—it—iLDLnfMrHt^-Lnr^· (V)

Q mmCNCNlOOOCNO i—I i—I '—I

cn in m frt in in h cn cn . »-> /—> r> r> o gl -=r cNcNOOomoom 4j SHHinmin m nj Λ Λ Λ Λ •Η ^ μ in cn ιη ο s ^

r,-j m CNOOOOlOinOCN

S Hinminm cn m h α) Λ Λ Λ

Ti

(D

μ in 10 10 o m cn in in U H r* c* •H £h lOOO.OOfHr-HOin ^ ιμ in m in in mm -Η Λ Λ Λ ni nd m co m o m ή Γ' m 4J g Λ Λ Λ

μι lomoooomoocN

Oo Ε-< η m m in in m h IH (N Λ Λ Λ — I Λ O o) mm ίο vo h cn cn cn m m mm m

|> m H cf «>* iV Γ r> A O A

CddJ JlOlOCNCNmCNHOH

H Ti HHCNr-im >

Φ ' 4-> fi H

,q tu -H mm i

(ti-PrQ cncnmcNCNcoocNcn H

£-1 ·Η P (d COr^CNi—Ir—ΙΓ^γ-ΙιΗιΗ

J> 0 Lf) O «-> ^ fA π A A /A i—I

h in Qooiancnoocno Φ +j cn Λ M iJ1 di cd o. +> tn

M U

cn o P

H fri O Ti U Ή P Cl) < m

O Γ- O CN g <U P

-Η H VO ϋ <0 2 Λ <C O -H g H m <d υ ·η C g •P 3 O T3 ·Π -P W O' g ,.

Cl Q) oo ·Η -P Q- 0) Ή g in -P

<! P O >c 0 cd G 3 J

3 . 0 s H W H -H CD H <U

2 cdo.-p o -p > -G g ^ f5 ti S

s en η g h o p &, \ ^ ^ “

cn 03 3 <D H G 0 O

h 3 en g jScd>>>t i. 'O O ™ S u 3 επιηΛΛ . 2 3 ji to O Ό (0 <0 ·Η " '2, i

tn o O I—i rH Cd -Q O' P

Pi OO-HrHg UPjW OJ

o oocucucn η 0 ^ Γ cn HOP P Cd S rh J* tji >-P3=3<P= = = cd Λ O Ti

O. Si Qi CD <U CP

w α (U -P -P 0 P id p en tn o O 4J 4J Cd cd >1

1¾ en cn Ci AS

O

DK 153555B

De C-2O-modificerede derivater fremstillet ifølge den foreliggende opfindelse har vist in vivo antibakteriel aktivitet overfor forsøgsfremkaldte infektioner hos laboratoriedyr. Hvis 2 doser af forsøgsforbindelsen indgives 5 til mus, der er forsøgsinficeret med S.pyogenes C203, måles den iagttagede aktivitet som en ED., -værdi (effek-

bU

tiv dosis i mg/kg til beskyttelse af 50% af forsøgsdyrene: se Warren Wick, et al., J. Bacteriol. 81, 233-235 (1961)). EDsQ-værdier iagttaget for illustrative forbindelser er 10 anført i tabel VII.

15 20 25 30 35

O

23 DK 153555B

Tabel VII

ED5o“Værdier af C-20-modificerede derivater overfor Streptococcus pyogenes C203 i mus_;__

Forsøgsforbindelse'*3 Subkutant Oralt 5 - ' " —-- -

Dl 1.2 >50 D2 0,9 50 D4 6,0 19 D5 1,3 50 10 D5a 1,5 34 D6 0,7 14 D7 1,6 12 D10 >10 68

Dll 7,5 19 D12 2,0 <6,3 15 D14 1,0 50 D19 2,9 46 D20 1,7 34 D21 1,0 10 20 D22 0,8 40 L5 1,8 100 M3 >10 >100 T6 >10 44 T13 >10 30 25 D33 0,625 7,98 D34 0,88 10,93

Desmycosin 1,03 84,1 mg/kg x 2, doser indgivet 1 og 4 timer post-infektion 30 Forbindelsesnummer fra tabel I-IV.

35

24 DK 153555B

O

Mange af de C-20-modificerede derivater fremstillet ifølge den foreliggende opfindelse har vist in vivo anti-bakteriel aktivitet overfor infektioner fremkaldt af gramnegative bakterier. Tabel VIII og IX opsummerer resul-5 taterne af forsøg, hvor illustrative forbindelser vurderes overfor Pasteurellainfektioner hos en dage gamle kyllinger. Forbindelserne indgives parenteralt eller oralt efter inficering af kyllingerne med Pasteurella multocida (0,1 ml -4 af en 10 -fortynding af en 24 timer gammel tryptosenæ-10 ringsmediumkultur af fjerkræ-P. multocida indgivet subku-tani). Alle ikke-behandlede, inficerede kyllinger dør i løbet af 24 timer af Pasteurellainfektion i disse forsøg.

I forsøgene opsummeret i tabel VIII indgives forbindelserne ved subkutan injektion i en dosis på 30 mg/kg 1 og 4 ti-15 mer post-infektion af kyllingerne med Ps-multocida. I forsøgene opsummeret i tabel IX indgives forbindelserne i behandlet drikkevand (i et niveau på 0,53 g/liter) tilgængeligt fra 4 til 20 timer forud for inficering af kyllingerne med P. multocida og under den 3 dages forsøgs-20 periode.

25 30 35 25

O

DK 153555B

Tabel VIII

Aktivitet af C-2O-modificerede derivater indgivet subkutant til Pasteurella multocidå-inficerede kyllinger^_ 5 Forsøgsforbindelse Antal døde/antal behandlede

Dl 0/10 D2 0/10 D4 9/10 D5 0/10 10 D6 0/10 D7 3/10 D10 10/10

Dll 10/10 D12 9/10 15 D14 2/10 D19 0/10 D21 7/10 D22 0/10 D23 8/10 20 D24 2/10 D25 0/10 L5 Q/10 25.

Indgivet subkutant, 30 mg/kg x 2.

30 Forbindelsesnummer fra tabel II og IV.

35

O

26 DK 153555 B

Tabel IX

Aktivitet af C-20-modificerede derivater indgivet oralt til Pasteurella multocida-inficerede kyllinger_ 5 Forsøgsforbindelse0 Antal døde/antal behandlede

Dl 9/10 D2 5/10 D4 6/10 D5 2/10 10 D6 1/10 D7 2/10

Dll 8/10 D12 8/10 D14 0/10 15 D19 3/10 D20 0/10 D21 3/10 D22 5/10 D23 4/10 20 D25 7/10 D34 3/10, 0/10, 1/10, 6/10

Desmvcosin 5/10 25 a

Indgivet i det tilgængelige drikkevand i en koncentration på 0,53 g/liter.

3d

Forbindelsesnummer fra tabel II.

30 35

DK 153555B

O

De omhandlede forbindelser kan anvendes til kontrol af infektioner forårsaget af bakterie- og Myco-plasmaarter. Ved en sådan kontrol indgives en effektiv mængde af en forbindelse med formel I parenteralt eller 5 oralt til et inficeret eller modtageligt varmblodet dyr. Forbindelserne kan også indgives ved insufflation, dvs. ved at blæse forbindelsen i form af et præpareret pudder ind i et lukket område eller rum, hvor dyrene eller fjerkræet holdes,. Dyrene eller fjerkræet indånder det præ-10 parerede pudder, der er til stede i luften. Det præparerede pudder bringes også ind i kroppen gennem øjnene, en metode, der kaldes intraocular injektion.

Den dosis, der er virksom til kontrol af infektionen, varierer med alvorligheden af infektionen og med dyrets 15 alder, vægt og tilstand. Den samlede dosis, der er nødvendig til parenteral beskyttelse, er imidlertid almindeligvis i området fra ca. 0,1 til ca. 100 mg/kg og fortrinsvis i området fra ca. 0,5 til ca. 50 mg/kg. Den dosis, der er nødvendig til oral indgivelse, er almindeligvis i området 20 fra ca. 1 til ca. 300 mg/kg og fortrinsvis i området fra ca. 1 til ca. 100 mg/kg. Egnede dosissystemer kan konstrueres .

Den mest praktiske måde til indgivelse af forbindelserne er ofte ved formulering i foderforsyningen eller i drikke-25 vandet. Forskellige foderstoffer, f.eks. almindeligt tørfoder, flydende foder og foder i pilleform, kan anvendes.

Endvidere kan de omhandlede forbindelser indgå i præparater, der er anvendelige til kontrol med infektioner forårsaget af bakterie- og Mycoplasmaarter. Disse præparater 30 indeholder en forbindelse med formel (I) sammen med en grundmasse. Præparater kan formuleres til parenteral eller oral indgivelse ved metoder, der er anerkendte i den farmaceutiske teknik.

Metoderne til formulering af farmaceutisk stof i dyre-35 foder er velkendte. En foretrukket metode er at fremstille 3--

28 DK 153555 B

O

en forblanding af koncentreret farmaceutisk stof, som igen anvendes til fremstilling af præparerede foderstoffer.

Typiske forblandinger kan indeholde fra ca. 1 til ca. 200 g 5 farmaceutisk stof pr. kg forblanding. Forblandinger kan enten være flydende eller faste formuleringer.

Den endelige formulering af foderstoffer til dyr eller fjerkræ afhænger af den mængde farmaceutisk stof, der skal indgives. De gængse metoder til formulering, blanding og 10 pelletering kan anvendes til fremstilling af foderstoffer indeholdende en forbindelse med formel (I).

Virksomme, injicerbare præparater indeholdende disse forbindelser kan være i fom af enten suspension eller opløsning. Ved fremstillingen af fomuleringer vil det 15 vides, at vandopløseligheden af syreadditionssaltene almindeligvis er større end den af de frie baser. På lignende måde er baserne mere opløselige i fortyndede syrer eller i sure opløsninger end i neutrale eller basiske opløsninger.

I opløsningsformen opløses forbindelsen i en fysio-2Q logisk acceptabel grundmasse. Sådanne grundmasser indeholder et egnet opløsningsmiddel, om nødvendigt konserveringsmidler, såsom benzylalkohol, og puffere. Anvendelige opløsningsmidler omfatter f.eks. vand og vandige alkoholer, glycoler og carbonates tere, såsom diethylcarbonat. Sådanne vandige opløsninger 25 indeholder almindeligvis ikke mere end 50 volumen% af det organiske opløsningsmiddel.

Injicerbare suspensionspræparater kræver et flydende suspenderingsmedium, med eller uden hjælpestoffer, som grundmasse. Suspenderingsmediet kan f.eks. være vandigt 30 polyvinylpyrrolidon, indifferente olier, såsom vegetabilske olier eller højt raffinerede mineralolier, eller vandig carboxymethylcellulose.

Egnede fysiologisk acceptable hjælpestoffer er nødvendige for at holde forbindelsen suspenderet i suspensions-35 præparaterne. Hjælpestofferne kan udvælges blandt fortyk-

O

29

DK 153555B

kelsesmidler, såsom carboxymethylcellulose, polyvinylpyrro- lidon, gelatine og alginaterne. Mange overfladeaktive midler er også anvendelige som suspenderingsmidler. Lecithin, alkylphenolpolyethylenoxidadd itionsprodukter, naphthalen-5 sulfonater, alkylbenzensulfonater og polyoxyethylensorbitan-estrene er anvendelige suspenderingsmidler.

Mange stoffer, som påvirker hydrophiliciteten, vægtfylden og overfladespændingen af det flydende suspenderingsmedium, kan hjælpe · til ved fremstillingen af injicerbare 10 suspensioner i individuelle tilfælde. F.eks. kan silicone-antiskummidler, sorbitol og sukkerarter være anvendelige suspenderingsmidler.

Til yderligere illustration af den foreliggende opfindelse tilvejebringes de følgende eksempler. I disse ek-15 sempler anvendes forkortelsen "20-DH-DO" for udtrykket "20-dihydro-20-deoxy".

Fremstilling 1 20-Dihydrotylosin (relomycin) 20 30,0 g (32,8 mmol) af en opløsning af tylosinbase i 300 ml 2-propanol og 200 ml vand behandles portionsvis med 315 mg (8,2 mmol) natriumborhydrid i løbet af 5 minutter. 30 minutter efter at tilsætningen er afsluttet, indstilles reaktionsopløsningens pH-værdi på 7,0 ved tilsætning af 1 N svovl-25 syreopløsning. Den neutraliserede opløsning inddampes under vakuum til fjernelse af 2-propanol, den resterende vandige opløsning behandles med 500 ml af en mættet natriumbicarbonat- opløsning. Blandingen ekstraheres 3 gange med dichlormethan, hver gang med 300 ml, og de kombinerede ekstrakter ekstra-30 heres med 200 ml af en mættet natriumchloridopløsning og tørres over natriumsulfat. Filtrering efterfulgt af inddamp- ning giver et glas, som brydes op i n-hexan, opsamles på et filter og lufttørres til opnåelse af 28,5 g (95%) 20-dihydro- tylosin.

35

” SJ

30 DK 153555 B

O

Fremstilling 2 20-Dihydrodesmycosin 10 g (13 mmol) desmycosin, opløst i isopropanol:vand (1:1, 175 ml), omrøres ved stuetemperatur, medens 125 mg 5 (3,3 mmol) NaBH4 tilsættes. Efter 1/2 time indstilles reak tionsblandingens pH-værdi på 7,0 med 1 N I^SO^. Alkoholen fjernes under formindsket tryk. En mættet NaHCOg-opløsning sættes til den vandige opløsning^ og produktet ekstraheres over i CH2C12· Det organiske lag tørres (Na2S04), og opløsnings-10 midlet fjernes undér formindsket tryk til opnåelse af 9,65 g (12,5 mmol, 96% udbytte) 20-dihydrodesmycosin som et hvidt skum.

Fremstilling 3 15 20-DH-DQ-20-ioddesmycosin (metode 1) 2,0 g (2,6 mmol) 20-dihydrodesmycosin og 1,5 g (3,9 mmol) tetra-n-butylammoniumiodid opløses i 30 ml CH2C12, hvortil der er sat 0,6 ml (4,5 mmol) s-collidin. Denne opløsning afkøles til -78°c under nitrogenatmosfære og behandles med 20 0,6 ml (3,9 mmol) trifluormethansulfonsyreanhydrid dråbevist ved hjælp af en sprøjte. Omsætningen onrøres i 5 minutter ved -78°C og får derefter lov til at komme op på stuetemperatur (ca.

30 minutter). En mættet NaHCO^-opløsning tilsættes, og produktet ekstraheres med CH2C12- Det organiske lag tørres 25 (Na2S04), og inddampes til opnåelse af en rød olie, som renses ved silicagellynchromatografi under eluering indledningsvis med 400 ml CH2C12 og derefter trinvis med CH2C12: CHgOH-opløsninger på følgende måde: 98:2 (250 ml), 96:4 (500 ml), 95:5 (250 ml}, 94:6 (750 ml) 30 og 92:8 (250 ml). Fraktioner indeholdende det ønskede produkt identificeres ved TLC, kombineres og inddampes til tørhed til opnåelse af 595 mg (0,67 mmol, 26% udbytte) 20-DH--DO-20-ioddesmycosin som et hvidt skum.

35

DK 153555B

O

Fremstilling 4 2Q-DH-DQ-2Q-Ioddesmycosin (metode 2) .

5/0 g (6/5 mmol) 20-dihydrodesmycosin og 2,54 g (9,70 mmol) triphenylphosphin opløses i 10 ml dlraethylformanid (ETC). Denne blanding 5 omrøres ved stuetemperatur under N2, medens 2,,.46 g (9,70 mmol) iod i 5 ml DMF tilsættes dråbevist. Reaktionsblandingen omrøres i 2 timer bg hældes derefter ud i en kold mættet

NaHCOg-opløsning. Produktet ekstraheres 2 gange med CHCl^, og de kombinerede CHC1,-ekstrakter omrystes med 0,1 mol 10 ύ natriumthiosulfat til fjernelse af uomsat iod. Det organiske lag tørres (Na^O^) og inddampes under formindsket tryk til opnåelse af en lys, gul olie, som renses ved silica-gellynchromatografi. Søjlen elueres indledningsvis med 500 ml CH2C12 og derefter med 250 ml portioner af CH2C12rCH^OH-15 -blandinger på følgende måde: 98:2, 96:4, 95:5, 94:6, 92:8, 88:12 og 86:14. Fraktioner indeholdende det ønskede produkt identificeres som i fremstilling 3 og kombineres til opnåelse af 1,78 g (2,0 mmol, 31% udbytte) 20-DH-DO-20-ioddesmycosin som et hvidt skum.

20

Eksempel 1 20-DH-DO-2Q-(Octahydroazocin-l-yl)-desmycosin 575 mg (0,65 mmol) 20-DH-D0-20-ioddesmycosin opløses i 10 ml acetonitril, og 0,37 g (0,41 ml, 3,3 mmol) heptamethylen- 25 imin sættes til denne opløsning. Omsætningen omrøres ved tilbagesvaling i 1,5 timer. Derefter fjernes flygtige stoffer under vakuum. Remanensen opløses i CH2Cl2 og ekstraheres med en mættet NaHCOø-opløsning. Det organiske lag tørres (Na2SO^) og inddampes derefter under formindsket tryk til opnåelse 30 af et lysebrunt skum. Dette skum renses ved silicagellyn- chromatografi under eluering med 250 ml af hver af følgende CH2Cl2:CH3OH-blandinger: 98:2, 96:4, 94:6, 9:1, 88:12, 82:18, 65:35, 1:..1, 1:3 og til sidst med 300 ml CH^OH.

Fraktioner indeholdende det ønskede produkt identificeres 35 ved TLC, kombineres og inddampes til tørhed til opnåelse af 397 mg (0,46 mmol, 71% udbytte) 20-DH-DO-20-(octahydroazocin--1-yl)-desmycosin som et hvidt skum.

O

32 DK 153555 B

Eksempel 2 20-DH-DO-2Q-(Hexahydroazepin-l-yl)-desmycosin 10 g (13 mmol) desmycosin opløst i 100 ml vandfrit methanol sættes hurtigt til en opløsning af 3,3 g (52 mmol) 5 NaBH^CN og 6,5 g (7,5 ml, 65 mmol) hexamethylenimin i 50 ml vandfrit methanol under . Reaktionsblandingen omrøres under N2 ved stuetemperatur i ca. 3 timer og inddampes derefter under formindsket tryk·.Den resulterende remanens opløses i me<^ netop tilstrækkeligt ethylacetat til at 10 hjælpe med til opløsningen af remanensen, og denne opløsning ekstraheres med en mættet NaHCO^-opløsning. Det organiske lag fraskilles, tørres (Na2S0^), og inddampes under formindsket tryk til opnåelse af et lysegult skum. Dette skum renses ved silicagellynchromatografi under eluering indled-15 ningsvis med 1 liter CH2C12, og derefter trinvist med 500 ml portioner af CH2C12iCH^OH-blandinger på følgende måde: 98:2, 96:4, 94:6, 92:8 og 9:1, og til sidst med CH2C12: CH3OH:NH4OH-blandinger på følgende måde: 90:10:0,5 (500 ml) og 75:25:0,5 (2 liter).

ΡΩ

Fraktioner indeholdende det .ønskede produkt identificeres ved TLC, kombineres og inddampes til tørhed til opnåelse af 6,035 mg (7,07 mmol) 20-DH-DO-20-(hexahydroazepin-l-yl)--desmycosin som et hvidt skum. Andre fraktioner, som indeholder urent produkt^ kombineres, genopløses i CH2C12, ekstra-25 heres igen med en mættet NaHCO^-opløsning og renses som ovenfor under anvendelse af en silicagelsøjle fyldt med CH2C12:CH30H (9:1) under eluering med CH2C12:CH3OH:NH4OH på følgende måde: 90:10:0,5 (500 ml) og 80:20:0,5 (1 liter) til opnåelse af yderligere 1,372 g (1,61 mmol) produkt.

30 Det samlede udbytte af 20-DH-DO-20-(hexahydroazepin-l-yl)--desmycosin er 7,407 g (8,68 mmol,67% udbytte).

35

O

DK 153S55B

Eksempel 3 20-DH-DO-2Q- (4-Phenylpiperidin-l-yl) -desittycosin 1,5 g (2 mmol) desmycosin opløses i 60 ml absolut methanol og behandles med 640 mg (4 mmol) 4-pheny'lpiperidin i nærværelse af "Linde^A" molekylsigter. Efter 1/2 time tilsættes 500 mg (8 mmol) NaBH^CN, og blandingen omrøres i 2,5 timer ved stuetemperatur. Blandingen hældes ud i 200 ml af en mættet NaHCO^-opløsning og ekstraheres 3 gange med CI^C^, hver gang med 200 ml. De kombinerede organiske ekstrakter tørres (Na2SO^), filtreres og inddampes under formindsket tryk. Remanensen på 3,6 g renses ved lynchroma- tografi på silicagel under eluering med en gradient af 1 liter CH2CI2 til 1 liter MeOHsCE^C^ (5:95) og derefter med 1 liter

MeOH:CH~Cl~ (5:95). Fraktioner indeholdende det ønskede pro-15 z z dukt lokaliseres ved TLC, kombineres og inddampes til tørhed til opnåelse af 680 mg 20-DH-DO-20-(4-phenyipiperidin-l-yl)--desmycosin.

2Q Eksempel 4 20-DH-DO-20-(Hexahydroazepin-l-yl)-41-deoxydesmycosin

En opløsning af 565 mg (0,75 mmol) 4'-deoxydesmycosin i 15 ml methanol under argon omrøres med 2,2 g aktiverede "Lind^B)3A" molekylsigter i 30 minutter^ før 0,25 ml (2,25 mmol) 25 hexamethylenimin tilsættes. 1 time senere sættes 141 mg (2,25 mmol) natriumcyanoborhydrid til opløsningen. Efter yderligere 45 minutter hældes reaktionsblandingen ud i en mættet natriumbicarbonatopløsning og ekstraheres med ethyl-acetat. De kombinerede organiske ekstrakter rystes med en 30 mættet natriumchloridopløsning, tørres.: over natriumsulfat, filtreres og inddampes til opnåelse af 600 mg råprodukt.

Dette produkt renses ved preparativ TLC på silicagel under eluering med dichlormethan:methanol:koncentreret ammoniumhydroxid (90:15:2) til opnåelse af 150 mg (24% udbytte) 35 20-DH-DO-20-(hexahydroezepin-l-yl)-4'-deoxydesmycosin.

O

34 DK 153555B

Eksempel 5-6 20-DH-DO-20-(Octahydroazocin-l-yl)-desmycosin fremstilles analogt med metoden ifølge eksempel 2.

_ 20-DH-DO-20-(Hexahydroazepin-l-yl)-desmycosin frem-

O

stilles analogt med metoden ifølge eksempel 1.

Eksempel 7 20-DH-DO-2Q-(Octahydroazocin-l-yl)-desmycosin (metode 3) 1Q 4,0 g (5,2 mmol) desmycosin opløses i 30 ml absolut methanol og behandles med 1,2 g (1,3 ml, 10,4 mmol) hepta-methylenimin i nærværelse af 3A molekylsigter. Efter at reaktionsblandingen er blevet omrørt i 1 time ved stuetemperatur, tilsættes en opløsning af 60 mg (1,6 mmol) NaBH^ 15 i 10 ml absolut methanol hurtigt ved hjælp af en pipette.

Reaktionsblandingen omrøres i 1,5 timer ved stuetemperatur, og derefter tilsættes yderligere 30 ml NaBH^ (i én portion som faststof). Reaktionsblandingen omrøres i yderligere 75 minutter og filtreres derefter. Filtratet inddampes under 20 formindsket tryk. Remanensen opløses i 150 ml ethylacetat, og denne opløsning ekstraheres med 150 ml vand og 100 ml af en mættet NaHCO^-opløsning. Derefter ekstraheres ethyl-acetatopløsningen med 150 ml af en 0,5 M NaE^PO^-puffer med pH-værdi 6,5. Pufferekstrakten inddampes under vakuum 25 til fjernelse af resterende ethylacetat og omrøres der efter hurtigt, medens 5 N NaOH tilsættes langsomt, hvilket giver et tykt, hvidt bundfald. Det hvide faststof fjernes ved filtrering, vaskes med en lille mængde vand og tørres til opnåelse af 3,55 g 20-DH-DO-20-(octahydroazocin-l-yl)-3Q -desmycosin.

35

O

35 DK 153555 B

Eksempel 8 20-DH-DO-2Q- [l-Azaspiro[4,51decan-l-yl]-desmycosin 5/0 g (6,5 mmol) desmycosin opløses i 50 ml absolut methanol og behandles med 1,36 g (9,8 mmol) l-azaspiro[4,5]-5 decan i nærværelse af 3A molekylsigtér. Efter 15 ninutter tilsættes 620 mg (9,8 mmol) NaBH^CN, og blandingen omrøres i 17 timer ved stuetemperatur. Reaktionsblandingen filtreres, og filtratet inddampes under formindsket tryk. Remanensen opløses i 300 ml ethylacetat og ekstraheres med 300 og 10 100 ml vand. Derefter ekstraheres produktet fra ethylacetat- opløsningen med 300 ml og 100 ml af en 0,5 M NaH^TC^-puffer med pH-værdi 6,5. Phosphatpufferekstrakteme kombineres og inddampes under vakuum til fjernelse af resterende ethylacetat. Phosphat- pufferopløsningen omrøres derefter hurtigt, medens 5 N 15

NaOH tilsættes langsomt, hvilket giver et tykt, hvidt bundfald. Det hvide faststof fjernes ved filtrering, vaskes med vand og tørres til opnåelse af 3,52 g 20-DH-DO-20-- [1-azaspiro [4,5]decan-l-yl]-desmycosin.

20

Eksempel 9 20-DH-DO-2Q-(1,2,3,4-Tetrahydroquinolin-l-yl)-desmycosin 11,6 g (15 mmol) desmycosin opløses i 100 ml tørt methanol, og 3,8 ml (30 mmol) 1,2,3,4-tetrahydroguinolin tilsættes. Efter at blandingen er omrørt i 30 minutter 25 ved stuetemperatur, tilsættes 1,25 g (20 mmol) natrium- cyanoborhydrid. Blandingen omrøres natten over og inddampes derefter under formindsket tryk. Remanensen deles mellem 100 ml ethylacetat og 100 ml vand. Derefter ekstraheres det organiske lag i nævnte rækkefølge med 100 ml af en vandig* 30 phosphatpuffer med pH-værdi 6,5 og 100 ml af en vandig phosphatpuffer med pH-værdi 4,5. Ethylacetatlaget tørres over natriumsulfat, filtreres og inddampes, og remanensen på 4,6 g adskilles ved chromatografi på silicagel ("Waters Prep 500"). Søjlen elueres med en lineær gradient af 4 liter OO i

O

36 DK 153555B

dichlormethan og 5% methanol plus 0,5% koncentreret ammoniumhydroxid i 4 liter dichlormethan. Fraktioner indeholdende det ønskede produkt identificeers ved TLC-analyse, opsamles og inddampes til tørhed til opnåelse af 3,4 g af titelfor- 5 bindeisen.

Eksempel 10 20-DH-DO-2Q-(1,2,3,4-Tetrahydroisoquinolin-2-yl)-desmycosin 11.6 g (15 mmol) desmycosin opløses i 100 ml tørt methanol og 3,8 ml (30 mmol) 1,2,3,4-tetrahydroisoquinolin tilsættes. Efter at blandingen er 'blevet omrørt i 30 minutter ved stuetemperatur, tilsættes 1,25 g (20 mmol) natrium-cyanoborhydrid. Blandingen omrøres natten over og inddampes derefter under formindsket tryk. Remanensen deles mellem 15 150 ml ethylacetat og 150 ml vand. Derefter ekstraheres der organiske lag i nævnte rækkefølge med 100 ml phospha tpuf fer med pH-værdi 6,5 og 100 ml phosphatpuffer med pH-værdi 4,5. Efter inddampning af pufferekstrakten med pH-værdi 4,5 under formindsket tryk til fjernelse af ethylacetat ind- 20 stilles pH-værdien på 10 med 5 N natriumhydroxid. Bundfaldet, der dannes, opsamles og lufttørres til opnåelse af 5,6 g af titelforbindelsen.

Eksempel 11 25 20-DH-DO-2Q-(1,2,3,6-Tetrahydropyridin-l-yl)-desmycosin 11.6 g (15 mmol) desmycosin opløses i 100 ml tørt methanol og 2,8 ml (30 mmol) 1,2,3,6-tetrahydropyridin tilsættes. Efter at blandingen er omrørt i 30 minutter ved stuetemperatur, tilsættes 1,25 g (20 mmol) natriumcyano-30 borhydrid. Blandingen omrøres natten over og inddampes derefter under formindsket tryk. Remanensen opløses i 150 ml ethylacetat. Denne opløsning ekstraheres med 150 ml vand og derefter 2 gange med en vandig phosphatpufferopløsning med pH-værdi 6,5, hver gang med 100 ml. Pufferopløsningerne 35 inddampes separat under formindsket tryk til fjernelse af

O

DK 153555B

ethylacetat og indstilles derefter på pH-værdi 10 med 5 N

natriumhydroxid. De udfældninger, der dannes, opsamles ved filtrering og lufttørres til opnåelse af 5,4 -g (første ekstrakt) og 3,2 g (andet ekstrakt) af titelforbindelsen.

5

Eksempel 12- 29

De følgende eksempler fremstilles analogt med metoderne beskrevet i eksempel 1, 2, 7 eller 8: 20-DH-DO-20-(octahydroazocin-l-yl)-lactenocin, 10 20-DH-DO-20(pyrrolidin-l-yl)-desmycosin, 20-DH-DO-20-(azacyclotridecan-l-yl)-desmycosin, 20-DH-DO-20-(4-hydroxypiperidin-l-yl)-desmycosin, 20-DH-DO-20- (hexahydroazepin-l-yl) -macrocin., 20-DH-DO-20-[3-azabicyclo[3,2,2]-nonan-3-y13—desmycosin, 15 20-DH-DO-20-(piperidin-l-yl)-desmycosin, 20-DH-DO-20-[3-. (N,N-diethylcarbamoy1)-piperidin-l-yl]--desmycosin, 20-DH-DO-20-[(4-piperidino)-piperidin-l-yl] -desmycosin, 20-DH-DO-20-(octahydro-lH-azonin-l-yl)-desmycosin, 20 20-DH-DO-20-(decahydroquinolin-l-yl)-desmycosin, 20-DH-DO-20-[1,3,3-trimethyl-6-azabicyclo[3,,2,1]octan--6-yl]-desmycosin, 20-DH-DO-20-(dodecahydrocarbazol-9-yl)-desmycosin, 20-DH-DO-20-(octahydroazocin-l-yl)-tylosin, 25 20-DH-DO-20-(3-azabicyclo[3,2,2]nonan-3-yl)-tylosin, 20-DH-DO-20- (octahydroazocin-l-yl) -macrocin,, 20-DH-DO-20-(hexahydroazepin-l-yl)-lactenocin.

30 35

O

38 DK 153555 B

Eksempel 30-33 20-DH-DO-20-(3,3,5-Trimethylhexahydroazepin-l-yl)--desmycosin fremstilles analogt metoden ifølge eksempel 8 5 og adskilles derefter i individuelle isomere 1 og 2 ved silicagellynchromatografi.

20-DH-DO-20-(Dodecahydrocarbazol-9-yl)-desmycosin (forbindelse D25) er en blanding af 2 isomere. Blandingen adskilles i 2 fraktioner, som hver er rig på en af isomerene, 1Q ved silicagellynchromatografi. Hvert af de isomerberigede fraktioner har et aktivitetsmønster, som er lig med blandingens mønster.

Eksempel 34-35 15 20-DH-DO-20-(Octahydroazocin-l-yl)-desmycosin-dihydro- chloridet og -tartratet fremstilles ud fra 20-DH-DO-20--(octahydroazocin-l-yl)-desmycosin under anvendelse af standardmetoder.

2Q Tabel X-XIII opsummerer visse fysiske data for de eksemplicerede forbindelser.

25 30 35

39 DK 153555 B

Ό «w o U PS m Λ ·"» o 0)

V| ID so "3* Irt CM CM H O VOOO

flSO *> Λ *N r» r> <» Λ r» .q 5j o> σ\ m m σι m o\ a co a\ P <D 0) Gi _i 5_j * *«*·.*«.·. * - .5 +> D cr, a\ m o o a a η λ ^ & m HP«*, ·* λ ^ λ r» η Λ r ** ·"* q Ent^r* r- Γ'-οονοΡ'Ρ'Γ-Γ^ t" i" 0 ~ ε ° 1 S ^ ^ Λ rrt 00000000000* 0 o o u ^ ooomoooomo o ^r o o o π. oomint^invoinini^o cm ό man U %·»·· ** *.*·* * « ·w y ' ;· * *

> W (_|HHHOacOO«*lOO O O o H

μ DX CNOJCMCNr-Hr—ICNCNCN<N ^,¾ f^. ^ i \ £

frt 1< fOCNCMCMCMCMCMCMCM CMHH fn. CN OJ

<> cocooooococococooooor^co co co æo

.μ NNOIOItNOliNNOJOl CM CN CM N M

p

CD

Ό

rrt Cfl ^ iH

0) s9+r*r^in(J»o<yi"5p<H<Hr^fn æ oo o ^ X μ Q'2f NrlinnaciNffl'l'WCO CO oo ^P W> CD feBgæooococowocococooo co ca c\ το Η O !S ^ Φ -H £ Λ H 03 (ti Ή (til E-i Ό ifl

g -IB

I fli (ti o co ^ H N UJ ej

° lp qqqpqqqqqqq Q Q Q.Q

o li ' h £g S .3 1 ' *

Η n CO

(ti >å I ··"· C 1 H* I C . Η Η H *-* >i Η H flj H O S H · +3 (H i c >i i c σ >i h

tQ >, H C O I Η Η O O I

H IH Η >ι Ή S T^iiSi !2§S

P H >1 >ι I T3 — 0) II I Η H CM C Η O ΟΛΟ •P C H HIM·"· Zj 5 i* P !h _j r« X Hl I C 0) cm Ό O Ό ^ £ Γ1 Ό (ti HOC C lfl Ql ·«* Η N >1 >i O H r-’ S-l +)>iHH Η Ο Η Μ Η P <ti Λ Λ Hlart (ti c I P Di O O Dl ^ >1 o I Id Id » X 5) H 11) II : O Ό O O I Di 55 P S-J ΛΙη· 3ldiN NHdHHHH-P -P -PC u“- o) 4J c h id «s ρ η o ι α ι o ω 3 o

Λ HH Di O 0-PO>iC>iO-P -P ‘PO P

CD 4J Ό H p VI o η O η X P I I ? ·Η -Η H W Η >ι Ό «OHPHOOO'* ^ 1¾°1 CO Λ H C >1 >ιΟΦΛΗ>-Ι>ι-Η -Η2ΦΜ > αοαίΛ ωνιΛίβ njoHNO>iid»i -ish.n I μΟιΧ ΗΟΟι(βΩιΛ·ΡΜΗ CMCM^Di iti o >i I <D ONII'PIO*·* »llfl

N ft ^ £ O n3rt>n Dl-Μ· OH H co H

DK 153555B

40 flo pT g 1 jr cn c!

Q

en * g O cn r; 0 Μ Ν' j*. O rf m Tf n p; < M 0 ^ ·\ *%»%«·*»* »^ /ni)* ω ιί ft » 'q οί <n σ> cn r- d·

Ο ·2 2* „ ·« Λ R

ϋ H p * ft-Η ·Η S„ Ο) Μι** **ΙΛ**· π-ί ρ

g Μ tr· σ\ ο Γ*σ>σ>σ>τρ n R

ω +*, Λ ** λ «% .-» ·* »* j .μ co Φ -η r* co Γ> r* γ* γ- ιη fttnr*

Ti m Μ ·η * *> τί ο ‘id tr tn Ο Αί C Η (ti Λ “ ·· ra ίο

M o °° o O O ogg Η -P O

•W D X CN CN CN CN N N M ^ φ O O

M (ti'"' -'-p *- —- H h (D g Φ ·· ιΰ r< CN N (N CN ro CM CN CN CN ^ φ H Ti — cn co co co coco æ oo co ^ >·μφ -PØ CN CN CN CN CN CN CN CN CN ^ μ J> (ti ^i g a -p mø , cn ø ·η m -ρ m tn Ti a ø M CD ^ acorn O O o'" 1-1 -H fti -P Ti 4-1 -H 01 Η H *- C CCD-H- ^ 44 a’g+m æ os vo r* in ® fe m tn -H o ft •M Q5f ® o n cn cn ro « ^ S «c (ti cn

Ti ft 2 gen σ> co co ooen co ra ~ h i kp Q £ ~ ftttiTiO«

1X5 g w 0 M 0 -P

I I 44 g ( 1—io m g, cd cn o w t n 0 Λ i n< cd C t n (

(ti O (til' E C -H

B Cfl O iH cn cn 41 Ifldl *4 co s ft M tn

44 $ CNCNfNCNCNCNVOVOfP)^ .. 0 0 -H

(ti % Ρ Ρ P P QQQQqq B Ai C W

m u H H O cn H

(ti (Q r4 HHOCD ØM- -¾ §M i >, >h β g fi 0 •Μ Ή S 0 I I H (ti (ti M cn

4-> tjgHH H.CDiJCN A< 0 H

CO 8 g O I I Λ 4J h H T3>

H . , ft C >i C I I Cr (tiCDgU N* C

Μ O ·Η O O Ή ·Η Η -P P cn (O d fi 0 -HTIMHMCN>1 d L Μ E QØ,

-P r4 Λ -Μ Ό TJ I -M.S cti 0 -P U ØM

0 II^OXOXOOls-H# Μ β0·Ρ co . 1 CO

A! βνηΐΜ ø w ø w n h ftB* ø η (ti Ti h coo-h

·Η|ρ4τΐΛ·ΗΛ·ΗβΙ H "o, g O > (ti (ti P A! I

0 i-4 iH I >i H r4 PC ^ it g fi Ή0 I W

Ai +)0>ιβΛ>(*>ι·“Ρ·Η ίβ>ι d 0 m ft τ) 00β Μ αβΛίϋίβ-βΗ,βΗίβϋ -Ρ -g β Λ “ I ·Η fi τ|0

•Η φ ·η -Ρ -Ρ Μ4->>ι·Ρ>ιΟ 0 0¾ ϋ 41 df Ο Μ MtnM

cn ssøo-pøl Øl O N Se φ0νηνοοΡ0βΒ >ι -Ρ^εΟΟδΗδΗΜβ ·Η·Η W g (>0 I Η 4 Μΐ !Μ1 -Μ Ο ·Η r-ι +J ·Η 1 -Η I Τ3 Ο Ti TJ Η Η Β 0 Η (ti ·

jJMMHI MCMfi>iM IL Ø-H-HØOØØMP

W'a4J^v£>4J-H4J-HBO ID ^ Ό tnO-P>d+J(ti

ΰ > I CN «.Iftlftø?*! *“ro C-P-PCMøCHjC

gj3(O«nif)Øi000j3 co i -ΗΜΜϋτΙΜΉβόι

Witi *no * *N *NØ(0 1¾ Λ·©··&·Μ>ιΡΛΐω I πηκ-ριηοηΛΆ^: cn S M4444HBMMW0 Oø* * * * O O -m2 OtJT)-H-MøOPÆ CN Ό 1-4 r4 CO ro 'O 0 O Jj ftpp cn P E4 fe O ft ^0ΛϋΌ044ΐη

41 DK 153555B

Ό vo

u <4-t CM

a« “v

Em O

0 r; a) o m

MM >q· fS

Π (d (D * «-.

O rQ ft| 0> C\ Μ M ft n Φ 2 - *· ^

(ti MM Ή O LD

p 4-1 CTi 0\ ON k

K -H ~ O

ii_i Em vo vo ·· <ti o

rH

Μ Λ '*

0)0 O

•μ A 5 Ch td *** ο — > ω · ^41 Sj Μ > X ™ ^

CD CD Πί — H

6 d

«5 cs -M

Φ 00 g

trt CN W

(!) 17» Μ β

(!) -H

Ό 3

•Η W

g S "Ρ + m <Τι I

! Q |+ 00 <Τι K

H ° fcn S Τ' β' ° CM +-1 w nr X I ω n o s ,_i ··

0) μ H S

A «J m H O

<d ω Η Φ

Em id dj, r S

3 I I n » ® S N

S- li ε.ε ·8 ° 3 •Η M G μ μ cm

Μ Ρ tr> W

ω ^ Id -Η U

μ Μ d 44 μ c! ·· id Η (ti Μ Η Μ Ο > <0 (ti (Η ιΗ Φ ^ ^ Μ· >ι >ι 6 5 «

Il g ί! - Η 0) rH r-i 3 μ ο\ο G)

Αί II fi <D vo I

ω c c ω g νο ο •Η +J -Η ·Η ω Ό ω c Οι ϋ ω -η ·η ι > ω Φ Ο τΐ ω fe 3 Ν Ν ^ .¾ § 0 3 ^ t « μ 2 Μ ·Η Μ Μ Ο S 5 'Ο -S μ μ Η ·§ £ £ ο d d μ

ω « « ^ nD oD

I ^ 4J fd Λ 0 Ό

O Φ O

CN 43 O

42 DK 153555B

o CD r- ro

rid * -N

Λ ri ! m m ri ri φ •H <1) fij *· »· u ^ a o co o +j ri Λ ^ ri -H ri co r— Φ Eh t n

-P

0 (ti iri

«Μ ^ <L

(ti O O

^ o o ri ω in in 0) > — · * +J D X Ή η

fp (ti CM CN

> S w ^ ·<

ri CN CN

ω co co

Ό CN CN

Φ •c d u o ~ ® tog + iH in S SSf ^ 1Λ [H Q-ri 6 co co

HH feC0 W

Η Π3 X! o H ^ (til φ ° s fQ ^ m ίΰ I r—i B U ^ ti «* m

^ I ^ H

(ti 'J3 3 , r h ri h fø (ti P Φ §

^ [X( rQ Q

-ri (ti 4J +> +> ω

•ri (ti -H

ri ri rd Φ in ri .μ , . η φ * $ o 2 '

S HH S J

* uSS ! 5 ® S

S e o. o S » 0 10

1 g g o 8 .H .H

t -H S § « r^1 -ririri d4J+)+i 2 'd 'p -ri ri ri ri

2 X! £! ri H H MH

™ S 5 S, S o o o m o « Λ U t)

43 DK 153555B

g Η *—' ·—*· m ο ο Ο ο ο η ^ ο ιη >ι ω * * -Ρ > w CNJ γΗ Ο X ν ν ¾ <d id g

r< CM CM

P 00 00

Φ CM CM

P

id > •Η £ P O — ω η co m

•ϋ OTfS + ri CM

gå f o o

® Q+J E HH

P

<D ^ ϋ H yj W φ •Η * n η i 31 S g S f .sl Λ O ^ η θ g ^ i s ώ g Id s o «a -¾ H G ^

Ti >1 <—' u +3 I CM m « H - g H I CM a ^ c »"* § ® +J -Η H g a g o “ §

* ω oo S

S G N Η M

P +j (d O H

[5 ·Η 0 >1 Φ ^ -P P 0 $ W Ό H d

S Λ ►. Λ .S

·“ G ,G id b “ C/3 Cd N 7] i -p <d π .....

« O o I £ £| CM o ro «Γ

Claims

44 DK 153555B O Patentkrav.

1. Analogifremgangsmåde til fremstilling af 20-ami-noderivater af tylosin, desmycosin, macrocin eller lac-5 tenocin med formlen (I) i io / p*» - CHa /* *\ is so V ef-CHa-CHa-R ii i

23 CHS /\ R4-CH2-j/ \

15 CHs^ \ /j[\ / Nh Ϊ_/0H I cr 0 · /"TV CHs CQ V-N(CHa)a \_±/ L Ns CHa 20 hvori R er en heterocyclisk gruppe indeholdende et nitrogenatom som eneste heteroatom og bundet til C2Q-carbonatornet gennem nitrogenatomet, idet gruppen er pyrrolidino, eventuelt 25 med hydroxy, phenyl, piperidino eller N,N-diethylcarbamoyl monosubstitueret eller med methyl disubstitueret piperidi-no, eventuelt trimethylsubstitueret hexahydroazepino, 1,2,3,6-tetrahydropyridino, octahydroazocino, ^2,3,4-te- trahydroquinolino eller -isoquinolino, decahydroquinolino, 30 octahydro-lH-azonino, azacyclotridecan, dodecahydrocarb-azol, 3-azabicyclo[3,2,2]nonan, l-aza-spiro[4,5]decan el-ler l,3,3-trimethyl-6-azabicyclo[3,2,l]octan, R er hydrogen, hydroxy eller mycarosyloxy 35 O

45 DK 153555B Γ ,·-·ς-—CH3 -O-·. .·—OH 5 χ CH3 4 R er 10 CHs CHa ΗΟ-*χ /*-0- eller HO-*' ^*-0- 0^h3 OCH3 HC^ ''(DCH 15 4 3 eller syreadditionssalte deraf, forudsat at R , hvis R er hydrogen, er 20 CHs κ*~\ HO—\-0- \-fi 0ΌΗ3 X0CH3 25 kendetegnet ved, at man (a) reducerer et aldehyd med formlen (III) 30 \ 35 O

46 DK 153555B i * ''V-CHa

5. I I o CHy yJH ^Hy* CHy\ <iH> 10 cH/V/fX./’^R1 I_·/0Η CH3 r/ Cri3 XR3 15 hvori R3 og er som defineret ovenfor, og R3- er hydrogen eller en hydroxybeskyttelsesgruppe, i nærværelse af en amin med formlen HR, hvor R er som defineret ovenfor, hvorpå en eventuel hydroxybeskyttelsesgruppe R3" fjernes til fri-20 gørelse af hydroxygruppen, eller (b) omsætter en amin med formlen HR, hvor R er som defineret ovenfor, med et macrolid med formlen (IV) 25 | CHa / \ (IV) Y CH2-CH2—L 30 , / CH\ y\ R'^ I \ ch/\/|\/xor1 I t/0H ^Hs 0^ ^«-N(CHs)e

35 Ciis \z O

47 DK 153555B hvori 1 o 4 R , RJ og R er som defineret ovenfor, og L er en udtrædende gruppe, som kan fortrænges af aminen HR, i et ikke-reak-tivt organisk opløsningsmiddel, hvorpå en eventuelt hydroxy- i 5 beskyttelsesgruppe R fjernes til frigørelse af hydroxy- gruppen, og om ønsket omdanner en fremstillet forbindelse med formlen (I) fra omsætning (a) eller (b) til et syreadditionssalt deraf.

2. Analogifremgangsmåde ifølge krav 1 til fremstilling 10 af et macrolid med formlen (I) eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf, kendetegnet ved, at R^ er mycinosyloxy, 0g R^ er hydroxy.

3. Analogifremgangsmåde ifølge krav 1 til fremstilling af 20-dihydro-20-deoxy-20-[3-azabicyclo[3,2,2]nonan- 15 -3-yl]-desmycosin. 20 25 30 35