FI66428B - Foerfarande foer framstaellning av maenniskospecifikt interferon - Google Patents
Foerfarande foer framstaellning av maenniskospecifikt interferon Download PDFInfo
- Publication number
- FI66428B FI66428B FI790188A FI790188A FI66428B FI 66428 B FI66428 B FI 66428B FI 790188 A FI790188 A FI 790188A FI 790188 A FI790188 A FI 790188A FI 66428 B FI66428 B FI 66428B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- interferon
- cells
- human
- animal
- inducer
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/555—Interferons [IFN]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/91—Cell lines ; Processes using cell lines
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/811—Interferon
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Virology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
|jg| w e") 66 4 2 8
Patent c"dd?lat --‘ ; (51) K«Jk/l>UX3 e 12 P 21/00, A 61 K 1*5/02 SUOMI—FINLAND <m) 790188 (22) η.Ιτ.·*ημ—aH.nkrtfrfu 19.OI.79 (21) ANa*M-G**Ua*t i9.OI.79 (41) TUht|<ftkiM—Mvfc affiMNf 23.07.79
Patnt· och mKwitywl—* ^ AmNcmodi«UkriftHpi>ltin< 29.06.81* (32)(33)(31) «OiB*fc«« 22.01.78 31.10.78 Japani-Japan(JP) 5368/78, 134026/78 (71) Ken Hayashibara, 9"8, 4-chome, Higashifurumatsu, Okayama-shi, Okayama,
Shin Ash idä, 148-3, Uchidekasugacho, Ashiya-shi, Hyogo, Japani-Japan(JP) (72) Kaname Sugimoto, Okayama-shi, Shokichi Yuen, Okayama, Japani-Japan(JP) (74) Berggren Oy Ab (54) Menetelmä ihmisspesifisen interferonin valmistamiseksi - Förfarande för framställning av manniskospecifikt interferon
Interferonilla tarkoitetaan, ks. Shigeyasu Köbayashi ("Interferon” (1975), julkaissut Kodansha Ltd. Tokyo), D.A.J. Tyrell ("Interferon and Its Clinical Potential" (1976) , julkaissut William Heinemann Medical Books Ltd. Lontoo), ja "Protein Nucleic Acid and Enzyme", osa 21, n:o 4 (1976), jonka on julkaissut Kyoritsu Shuppan Co.
Ltd. Tokio, sellaista ainetta, joka on proteiinimainen ja joka syntyy elävien solujen sisä- tai ulkopuolella solujen joutuessa interferoni-indusorien vaikutuksen alaisiksi, joita aineita ovat esimerkiksi virukset, bakteerit, prototsoat, alkueläimet, nukleiinihappo, endotoksiini tai polysakkaridi, ja joilla on sellainen aktiivisuus, että ne estävät ei-spesifisesti erilaisten virusten lisääntymisen soluissa.
Aktiivisuutensa johdosta interferonia on pidetty lupaavana ennalta ehkäisevänä ja terapeuttisena aineena virussairauksia vastaan sen keksimisestä alkaen.
Viime vuosina on interferonin käytölle lääkeaineena asetettu suuria toiveita, koska on todettu, että sillä on tuumorin estovaikutuk sia virusten aiheuttamien ja myös muiden tuumorien suhteen.
2 66428
Koska interferoni on lajispesifinen, on ainoastaan sellainen interferoni, joka on saatu elävistä ihmissoluista, tehokas estämään ja parantamaan ihmisessä esiintyviä sairauksia.
Tavallisesti on leukosyyttejä käytetty elävinä ihmissoluina interferonin valmistuksessa. Leukosyyttejä saadaan erottamalla tuoreesta verestä, mutta niiden valmistaminen ja säilyttäminen suurissa määrissä ja kohtuullisin kustannuksin on erittäin vaikeata.
On myös yritetty käyttää sellaisia eläviä soluja, jotka on saatu istuttamalla ihmisen soluja elatusväliaineeseen ja viljelemällä niitä in vitro interferonin valmistamiseksi. In vitro-menetelmät ovat kuitenkin epäkäytännöllisiä toteutettaviksi suuressa mittakaavassa ja alhaisin kustannuksin, koska niillä on haittana se, että ne vaativat suuria ihmisseerumimääriä ja aikaansaavat epästabiilin lisääntymisen, alhaisen lisääntymisnopeuden ja alhaisen soluväkevyyden.
Edellä mainituista seikoista johtuen ei interferonin teollista valmistamista niin, että se avaisi mahdollisuuksia ihmisten sairauksien estämiseen ja terapiaan, ole tähän asti voitu käytännössä toteuttaa.
Esillä oleva keksintö koskee menetelmää, jota voidaan helposti käyttää interferonin teolliseen valmistamiseen ja joka täten avaa mahdollisuuksia interferonilla parannettavien sairauksien estämiseksi ja käsittelemiseksi.
Edellä oleva keksintö koskee näin ollen menetelmää ihmisspesifisen interferonin valmistamiseksi viljelemällä pysyvää ihmisen solulinjaa, saattamalla saadut solut interferoni-indusorin vaikutuksen alaiseksi ihmisspesifisen interferonin tuotannon indusoimiseksi ja ottamalla talteen ja puhdistamalla interferoni. Sen sijaan, että ihmissoluja istutetaan ja viljellään viljelyväliaineessa in vitro, on keksinnön 3 66428 menetelmälle tunnusomaista se, että a) viljelyvaiheessa istutetaan pysyvä ihmisen solulinja lämminverisen eläimen - ihminen poissuljettuna - kehoon ja että indu-sorivaihe suoritetaan in vitro tai in vivo, jolloin interferonin laatu ja määrä paranee huomattavasti, tai että b) viljelyvaiheessa istutetaan pysyvä ihmisen solulinja ravinto- väliaineeseen diffuusiokammiossa, jonka huokoset ovat halkaisijal--7 -5 taan noin 10 - 10 m, diffuusiokammio sijoitetaan lämmin verisen eläimen - ihminen poissuljettuna - kehoon tai keholle siten, että eläimen ravintokehoneste pääsee kulkeutumaan kammioon, ja annetaan solujen lisääntyä samalla kun eläimen annetaan antaa soluille ravintokehonestettä, ja että indusorivaihe suoritetaan in vitro tai in vivo, jolloin interferonin laatu ja määrä paranee huomattavasti.
Verrattuna tavanomaisiin menetelmiin, joita käytetään solujen saattamiseksi lisääntymään in vitro, on keksinnön mukaisella menetelmällä etuna se, ettei se vaadi ollenkaan tai paljon vähemmän elatusväliainetta, joka on peräisin kalliista ihmisseerumista, että pysyvien solujen lisääntyminen voidaan aikaansaada helpommin ja että voidaan ylläpitää korkeampaa interferoniaktiivisuutta. Tarkemmin sanoen pysyvät ihmissolut voidaan paljon helpommin saada lisääntymään muiden lämminveristen eläinten kehoissa joko istuttamalla solut niihin tai istuttamalla soluja sisältävä diffuusiokammio eläimeen, jota syötetään tavanomaisella tavalla, jolloin tämä eläin antaa kehonsa ravintoliuoksia soluille.
Lisäksi on keksinnön mukaisella menetelmällä verrattuna tavanomaisiin in vitro-menetelmiin etuna se, että pysyvät ihmissolut lisääntyvät tasaisemmin ja nopeammin ja että tällöin aikaansaadaan solujen suurempi tuotanto ja suurempi interferonin saanto solua kohden.
Voidaan käyttää mitä hyvänsä pysyviä ihmissoluja mikäli ne voivat lisääntyä nopeasti siirrettynä muiden lämminveristen eläinten kehoihin. Esimerkiksi pysyviä normaaleja ihmissoluja, kuten OUMS-20-soluja, OUMS-25-soluja, HEF-soluja, HUF-2-soluja ja WI-38-soluja, jotka on esitetty aikakausjulkaisussa "Protein, Nucleic Acid and Enzyme" voi. 20, n:o 6, s. 616-643 (1975), 4 66428 jonka on julkaissut Kyoritsu Shuppan Co. Ltd. Tokio, ja sellaisia pysyviä soluja, jotka ovat peräisin ihmisen tuumorisoluista, kuten Namalva-soluja, jotka on selostettu kirjassa "Journal of Clinical Microbiology", voi. 1, s. 116-117 (1975), BALL-1-soluja, TALL-l-soluja, NALL-l-soluja, joita on kuvannut Isao Miyoshi /"Nature", voi. 267, s. 843-844 (1977/7» ja JBL-soluja, joita on kuvannut Isao Miyoshi /"Cancer" voi. 40, n:o 6, painos (1977J7 voidaan käyttää keksinnön mukaisesti.
Esillä olevan keksinnön mukaisesti voidaan käyttää mitä hyvänsä lämminverisiä eläimiä mikäli siirretyt ihmissolut voivat lisääntyä niissä helposti, kuten esimerkiksi siipikarjaa, kuten kanoja ja kyyhkysiä, ja imettäväisiä, kuten koiria, kissoja, apinoita, vuohia, sikoja, nautoja, hevosia, kaniineja, marsuja, rottia, hamstereita, tavallisia hiiriä ja karvattomia hiiriä.
Koska eläimet ovat taipuvaisia aikaansaamaan haitallisia immuuni-reaktioita kun niihin istutetaan ihmissoluja, on edullista käyttää eläimiä mahdollisimman kehittymättömissä muodoissa nimittäin munan, alkion, sikiön, juuri syntyneen ja nuoren eläimen muodossa, immunoparalyysin hyväksikäyttämiseksi.
Ennen solujen istuttamista voidaan eläintä käsitellä joko säteilyt-tämällä röntgensäteillä tai gammasäteilyllä voimakkuudella 200-600 rem tai antiseerumilla tai immuniteettia alentavalla aineella immuuni-reaktioiden pienentämiseksi.
Kaz-vaton hiiri on edullinen lämminverinen eläin, koska se ei aikaansaa minkäänlaisia tai vain alhaisia immuunireaktioita ja ihmissoluja voidaan helposti siirtää ja saada lisääntymään siinä ilman minkäänlaisia esikäsittelyjä.
Pysyvien ihmissolujen lisääntymistä voidaan edelleen stabiloida istuttamalla solut ensin hamsteriin ja istuttamalla ne sitten karvattomaan hiireen, jolloin saadaan sellaista interferonia, jolla on lisääntynyt aktiivisuus.
Tässä tapauksessa lisääntyneet solut istutetaan edelleen yhdestä lämminverisen eläimen kehosta toisen eläimen kehoon, joka on samaa lajia, sukua, luokkaa tai alaryhmää, ihmistä lukuunottamatta. Ihmis- 5 66428 solut voidaan istuttaa eläimen kehon mihin hyvänsä osaan mikäli ne lisääntyvät siinä helposti, esimerkiksi intravenööttisesti, intraperitoneaalisesti, subkutaanisesti ja allantoinionteloon.
Sen sijaan, että ihmissolut saatetaan lisääntymään suoraan eläimen kehossa, voidaan ihmissolut istuttaa ja saada lisääntymään eri muotoisissa ja eri kokoisissa diffuusiokammiossa, jotka on varus- _7 tettu suodatuskalvolla, jonka huokosten halkaisija on noin 10 10 m, jolloin käytetään esimerkiksi kalvosuodatinta, ultrasuoda-tinta tai onttoja kuituja, ja kammio sovitetaan eläimen kehoon esimerkiksi intraperitoneaalisesti, jolloin solut käyttävät hyväkseen eläinten ravintoliuoksia.
Mikäli välttämätöntä voidaan pysyvät ihmisten solut saada lisääntymään diffuusiokammiossa antamalla lämminverisen eläimen kehon ravintoliuoksen kiertää kammiossa olevaan ravintoväliaineeseen ja siitä pois ravintoliuosten antamiseksi soluille. Tässä tapauksessa, mikäli kammio on sovitettu eläimen kehoon, voidaan solujen lisään-tymisastetta tarkkailla kammiossa olevan seinämän lävitse, ja solujen lukumäärää eläintä kohden voidaan lisätä edelleen, uhraamatta tarpeettomasti eläintä, suorittamalla peräkkäin kammion poistaminen, solujen istuttaminen toiseen kammioon, joka sisältää tuoretta ela-tusvälineainetta, ja sovittamalla viimemainittu kammio samaan eläimeen.
Diffuusiokammiomenetelmällä on lisäetuna se, että voidaan käyttää mitä hyvänsä lämminveristä eläintä, ihmistä lukuunottamatta, ihmis-solujen monistamiseen, ettei tarvita esikäsittelyä immuunireaktioiden pienentämiseksi ja että kammiossa lisääntyneet ihmissolut voidaan ottaa helposti talteen ilman, että niissä on epäpuhtautena eläin-soluja koska ihmissolut eivät ole välittömässä kosketuksessa eläin-solujen kanssa eikä esiinny ei-toivottujen reaktioiden vaaraa-^
Ihmissolujen istuttamisen jälkeen ruokitaan eläintä tavalliseen tapaan ilman erikoiskäsittelyjä.
Pysyvien ihmissolujen lisääntymisaika on tavallisesti 1-20 viikkoa. Mikäli pysyvät solut ovat peräisin ihmisen normaaleista tai tuumori-leukosyyteistä, on solujen lisääntymisnopeus niin suuri, että lisääntyminen voidaan aikaansaada tavallisesti 1-5 viikon kuluessa.
Lisääntyneiden ihmissolujen määrä laskettiin ja sen todettiin olevan 7 12 noin 10' - 10 tai suurempi eläintä kohden.
Keksinnön mukainen menetelmä on toisin sanoen erittäin edullinen 6 66428 valmistettaessa interferonia, koska niiden solujen määrä, jotka on istutettu eläimeen, lisääntyy noin 10 - 10 -kertaisesti tai vielä enemmän; tämä on 101 - 10 kertaa enemmän kuin mikä aikaansaadaan istutettaessa samoja soluja ja annettaessa niiden lisääntyä elatusvällaineessa in vitro.
Lisääntyneet elävät ihmissolut voidaan saattaa millä hyvänsä menetelmällä muodostamaan interferonia. Se eläimen kehon osa, jossa solut lisääntyvät, voidaan saattaa interferoni-indusorin vaikutuksen alaiseksi. Interferonia voidaan esimerkiksi saada saattamalla suoraan ne ihmissolut, jotka on saatettu lisääntymään intraperitoneaalisesti tai ne ihmisen tuumorisolut, jotka ovat muodostuneet subkutaanisesti, interferoni-indusorin vaikutuksen alaisiksi interferonin valmistamiseksi ja ottamalla talteen ja puhdistamalla se interferoni, joka on muodostunut ihmisen soluista.
Interferonia voidaan myös aikaansaada ottamalla talteen monistuneet ihmissolut eläimen kehosta ja saattamalla nämä solut interferoni-indusorin vaikutuksen alaiseksi in vitro. Esimerkiksi ihmissoluja, jotka on saatu ottamalla talteen ne ihmissolut, jotka ovat lisääntyneet intraperitoneaalisesti tai sellaiset, jotka on saatu hajottamalla eristetty ihmisen massiivinen tuumori, joka on muodostunut subkutaanisesti eläimen ruumiissa, voidaan suspendoida elatusväliaineeseen, jota pidetään lämpötilassa noin 20-40°C siksi, kunnes muodostuu 5 p suspensio, jossa on noin 10 - 10° solua/ml. Tämän jälkeen kohdis tetaan soluihin interferoni-indusorin vaikutus interferonin valmistamiseksi ja muodostunut interferoni otetaan talteen ja puhdistetaan.
Kun ihmissolut saatetaan lisääntymään diffuusiokammiossa voidaan soluihin kohdistaa interferoni-indusorin vaikutus näissä kammioissa tai sen jälkeen kun solut on otettu talteen näistä kammioista.
Interferonia valmistettaessa voidaan sen tuotantoa lisätä edelleen tunnetuilla menetelmillä, kuten primingmenetelmällä, interferonia käyttäen ja superinduktiomenetelmällä käyttäen aineenvaihdunnan estoainetta.
Interferonin muodostumista eläintä kohden voidaan lisätä edelleen seuraavilla menetelmillä: a) Menetelmällä, jossa eläinten solujen lukumäärää eläintä kohden voidaan edelleen lisätä tappamatta eläintä poistamalla kammio, istuttamalla solut tämän jälkeen toiseen kammioon, joka sisältää tuoretta elatusväliainetta, ja sovittamalla viimemainittu kammio tämän jälkeen samaan eläimeen, 7 66428 b) menetelmällä, jossa ihmissolut, jotka lisääntyvät eläimen kehossa, käsitellään interferoni-indusorilla in vivo ja/tai in vitro interferonin muodostamiseksi käyttäen samoja soluja kerran tai useampia kertoja.
Mitä hyvänsä interferoni-indusoria, esimerkiksi viruksia, bakteereja, alkueläimiä, siimaeläimiä, nukleiinihappoja, endotoksiinia ja polysakkarideja, i voidaan käyttää.
Muodostunut interferoni voidaan puhdistaa helposti tunnetuilla puhdistusmenetelmillä, esimerkiksi erottamalla ulos-suolauksella, dialyysin avulla, suodattamalla, sentrifugoimalla, väkevöimällä ja lyofilisoimalla. Mikäli välttämätöntä voidaan saatu interferoni-preparaatti puhdistaa edelleen tunnetuilla menetelmillä, kuten ! adsorboimalla ja desorboimalla, käyttämällä ioninvaihtajia, geeli- j suodatusta, affiniteettikromatografiaa, isoelektriseen pisteeseen j perustuvaa fraktiointia ja elektroforeesia. ;
Interferoni-aktiivisuus määritetään käyttäen FL-soluja, jotka ovat ! peräisin ihmisen amnion-kalvosta, siten kuin julkaisussa "Protein Nucleic Acid and Enzyme" voi. 20, n:o 6, s. 616-643 (1975), julkaissut Kyoritsu Shuppan Co. Ltd. Tokio, on kuvattu, käyttäen tavanomaista plakki-vähenemismenetelmää.
Hemaglutiinitiitteri määritetään menetelmällä, jonka on kuvannut J.E. Salk /"Journal of Immunology", voi. 49, s. 87 (1944/7-
Keksinnön mukaista menetelmää kuvataan lähemmin seuraavien esimerkkien avulla:
Esimerkki A. Interferonin valmistus A-l) Täysikasvuisiin karvattomiiin hiiriin istutettiin subkutaani-sesti luonnollisia, ihmisestä peräisin olevia BALL-l-soluja, ja hiiriä ruokittiin tavanomaisella tavalla 3 viikkoa. Erotettiin jokaisesta hiirestä noin 10 g:n massiivinen tuumori, joka oli muodostunut subku-taanisesti, se leikattiin hienojakoiseksi, suspendoitiin suolaliuokseen, joka sisälsi trypsiiniä tuumorin hajottamiseksi soluiksi ja solut otettiin talteen sentrifugoimalla. Solut pestiin mahdollisimman pienellä määrällä Eaglen väliainetta pH-arvossa 7,2 ja lämpötilassa 37°C sen sisältäessä 5 tilavuus-% ihmisen seerumia, ja suspendoitiin uudelleen niin, että väkevyydeksi saatiin noin 5 χ 106 solua/ml. Saatuun seokseen lisättiin noin 100 yksikköä/ml osittain puhdistettua, ihmisestä peräisin olevaa interferonia, ja seosta inkuboitiin noin 2 tuntia ja sitten lisättiin noin 300 hemaglutiniini-tiitteriä/ml Sendai-virusta ja inkuboitiin vielä 20 tuntia interferonin aikaansaamiseksi. Inkuboitua liuosseosta 8 66428 sentrifugoitiin arvossa noin 1000 kertaa g lämpötilassa noin 4°C sakan, kuten solujen, poistamiseksi. Sakan yläpuolella oleva neste dialysoitiin käyttäen 0,1 M puskuriliuosta pH 2,0, joka sisälsi kloorivetyhappoa ja kaliuxnkloridia, lämpötilassa 4°C 48 tuntia, ja dialysoitiin sitten käyttäen 0,01 M fosfaattipuskuroitua suolaliuosta, pH 7,2, 12 tuntia ja suodatettiin huolellisesti kalvosuoda-tusta käyttäen. Suodos väkevöitiin ja lyofilisoitiin interferoni-jauheeksi, jolla oli suuri aktiivisuus. Interferoniaktiivisuus oli suunnilleen 20 miljoonaa yksikköä kutakin karvatonta hiirtä kohden, A-2) Karvattomiin täysikasvuisiin hiiriin istutettiin intraperitone-aalisesti luonnollisia, ihmisestä peräisin olevia OUMS-20-soluja, ja eläimiä ruokittiin tavanomaisella tavalla 5 viikkoa. Hiiriin injektoitiin intraperitoneaalisesti "Newcastle-sairauden" aiheuttavia viruksia, joiden alkuperäinen hemagglutiniini-tiitteri oli noin 3000, mutta jotka oli melkein täydellisesti ennakkoon inaktivoitu ultravio-lettisäteilytyksen avulla, ja eläimet tapettiin 24 tunnin kuluttua ja askiittineste otettiin talteen. Neste sentrifugoitiin, noin 1000 x g, lämpötilassa 4°C sakan, kuten solujen,poistamiseksi.
Sakan yläpuolella oleva neste dialysoitiin käyttäen 0,1 M puskuri-liuosta, pH 2,0, joka sisälsi kloorivetyhappoa ja kaliumkloridia, lämpötilassa 4°C 48 tuntia, dialysoitiin sitten käyttäen 0,01 M fos faattipuskuroitua suolaliuosta, pH 7,2, 15 tuntia ja suodatettiin huolellisesti kalvosuodattimen lävitse. Suodos väkevöitiin, jolloin saatiin interferoniliuosta, jolla oli suuri aktiivisuus.
Interferoni-aktiivisuus oli noin 700 000 yksikköä/10 karvatonta hiirtä.
A-3) Vastasyntyneitä hamstereita, joihin oli ruiskutettu intraperitoneaalisesti tunnettua kaniinin antilymfosyytti-seerumia hamsterin tymosyyttejä vastaan ja subkutaanisesti istutettu luonnollisia ihmisestä peräisin olevia JBL-soluja, ruokittiin tavanomaisella tavalla neljä viikkoa.
Noin 30 g massiivista tuumoria/hamsteri, joka on muodostunut subkutaanisesti, erotettiin ja hajotettiin samalla tavoin kuin esimerkissä A-l). Saadut solut pestiin RPMI-1640-väliaineella, pH 7,4, lämpötilassa 37°C, joka väliaine sisälsi 10 tilavuus-% vasikan seerumia, ja suspendoitiin uudelleen, jolloin väkevyydeksi saariin 7 66428 noin 2 x 10 solua/ml. Saatuun liuosseokseen lisättiin 200 yksik-köä/ml osittain puhdistettua ihmislajille spesifistä interferonia ja seosta inkuboitiin noin tunnin ajan. Kun oli lisätty noin 100 hemaglutiniini-tiitteriä/ml Sendai-virusta, inkuboitiin saatua seosta vielä 16 tuntia interferonin aikaansaamiseksi.
Tämän jälkeen puhdistettiin saatu liuos ja väkevöitiin samalla tavoin kuin esimerkissä A-2), jolloin saatiin interferoniliuos, jolla oli korkea aktiivisuus. Interferoniaktiivisuus oli noin 15 miljoonaa yksikköä/hamsteri.
A-4) Vastasyntyneisiin rottiin istutettiin laskimonsisäisesti luonnollisia, ihmisestä peräisin olevia Namalva-soluja, ja eläimiä ruokittiin tavanomaisella tavalla 4 viikkoa.
Jokaisesta rotasta erotettiin noin 50 g subkutaanisesti muodostunutta massiivista tuumoria ja se hajotettiin samalla tavoin kuin esimerkissä A-l) .
Tämän jälkeen käsiteltiin saatuja soluja samalla tavoin kuin esimerkissä A-l) interferonin valmistamiseksi. Saatu interferoniliuos puhdistettiin ja lyofilisoitiin samalla tavoin kuin esimerkissä A-l) interferonijauheeksi, jolla oli voimakas aktiivisuus. Interferoniaktiivisuus oli noin 30 miljoonaa yksikköä/rotta.
A-5) Täysikasvuisia hiiriä säteilytettiin röntgensäteiden avulla voimakkuudella noin 400 rem niiden immunoreaktioiden heikentämiseksi, ja tämän jälkeen niihin istutettiin subkutaanisesti ihmisestä peräisin olevia luonnollisia TALL-l-soluja ja niitä ruokittiin tavanomaisella tavalla 3 viikkoa.
Sitten erotettiin noin 10 g massiivista tuumoria, joka oli muodostunut subkutaanisesti kussakin hiiressä, ja hajottaminen suoritettiin samalla tavoin kuin esimerkissä A-l).
Saatuja soluja käsiteltiin samalla tavoin kuin esimerkissä A-3) interferonin saamiseksi. Saatu interferoniliuos puhdistettiin ja väkevöitiin samalla tavoin kuin esimerkissä A-2) suuren aktiviteetin omaavaksi interferoniliuokseksi. Interferonin aktiivisuus on noin 8 000 OOO yksikköä/hiiri.
10 66428 A-6) Luonnosta saatuja ihmisen OUMS-25-soluja istutettiin subkutaa-nisesti hamstereihin samalla tavoin kuin esimerkissä A-3) 3 viikon ajaksi ja siirrettiin tämän jälkeen intraperitoneaalisesti 10 päivää vanhoihin karvattomiin hiiriin. Näitä karvattomia hiiriä ruokittiin tavanomaisella tavalla 5 viikkoa, anestetoitiin ja askiittineste otettiin talteen. Neste sentrifugoitiin monistuneiden solujen tal-teenottamiseksi. Solut pestiin ja niihin aikaansaatiin interferonia samalla tavoin kuin esimerkissä A-l). Saatu interferoniliuos puhdistettiin ja väkevöitiin samalla tavoin kuin esimerkissä A-2), jolloin saatiin interferoniliuos, jolla oli suuri aktiivisuus. Interferoni aktiivisuus on suunnilleen 2 000 000 yksikköä/karvaton hiiri.
A-7) Ihmisestä peräisin olevia luonnollisia JBL-soluja suspendoitiin suolaliuokseen 10 ml:n sylinterimäisessä, muovisessa diffuusiokam-miossa, joka oli varustettu kalvolla, jonka huokosten halkaisija oli noin 0,5 ^u. Kammiot oli sovitettu intraperitoneaalisti täysikasvuisiin rottiin.
Rottia ruokittiin tavanomaisella tavalla 4 viikkoa ja kammiot poistettiin.
Kammiossa olevien solujen väkevyyksien todettiin olevan noin 9 3 5 x 10 solua/ml, joka oli noin 10 suurempi kuin se, mitä aikaansaatiin in vitro elatusaineessa C02~inkubointilaitteessa.
Soluja käsiteltiin samalla tavoin kuin esimerkissä A-l) interferonin aikaansaamiseksi. Saatu interferoniliuos puhdistettiin, väkevöitiin ja lyofilisoitiin suuren aktiivisuuden omaavaksi interferonijauheeksi . Interferonin aktiivisuus oli noin 30 000 000 yksikköä/rotta.
A-8) Allantoiinionteloihin hedelmöitettyihin valkoisiin muniin, joita haudottiin lämpötilassa 37°C 5 vuorokautta, istutettiin ihmi sestä peräisin olevia NALL-l-soluja ja munia haudottiin lämpötilassa 37°C viikon ajan.
Munat avattiin ja monistetut solut otettiin talteen. Näitä soluja käsiteltiin samalla tavoin kuin esimerkissä A-l) interferonin aikaansaamiseksi. Saatu interferoniliuos puhdistettiin ja väkevöitiin samalla tavoin kuin esimerkissä A-2), jolloin saatiin suuren aktiivisuuden omaava interferoniliuos. Interferonin aktiivisuus oli noin 11 66428 400 000 yksikköä/10 hedelmöitettyä valkoista munaa.
A-9) Esimerkin A-l) mukaisesti valmistettu interferonijauhe puhdistetaan edelleen käyttäen menetelmää, jonka on kuvannut G.Bodo (Symposium on Preparation, Standardization and Clinical Use of Interferon, "11th International Immunobiological Symposium" 8 & 9 Juni, 1977 Zagreb, Jugoslavia), so. adsorboimalla ja desorboimalla käyttäen ioninvaihtajia, molekyyli-paino-fraktiointia geelisuoda-tuksen avulla, väkevöimistä ja huolellista suodattamista kalvosuo-dattimen avulla. Saadun interferoniliuoksen aktiivisuus oli 2 x 10^ yksikköä/mg proteiinia. Interferonin talteenottoprosentti oli noin 40 %.
Esimerkeissä A-l) - A-9) saatua interferonia voidaan käyttää edullisesti sellaisenaan tai seoksena yhden tai useamman muun aineen kanssa injektioina ja lääkeaineina ulkoisiin ja sisäisiin tarkoituksiin ennalta ehkäisemään sekä käsittelemään interferonilla parannettavia ihmisten sairauksia. Keksintöä kuvataan edelleen viittaamalla seu-raaviin kokeisiin.
Koe 1
Virussairauksien käsittely interferonilla (virusten lisääntymisen inhibition tutkiminen in vitro).
Ihmisalkion keuhkosolujen yksikerroksiin, jotka oli muodostettu primääriseksi viljelmäksi petrimaljoissa, joiden halkaisija oli 6 cm, lisättiin 0, 1, 10 ja 100 yksikköä interferonia, joka oli valmistettu esimerkin A-9) mukaisella menetelmällä ja saatua seosta inku-boitiin 5-painoprosenttisessa CC^-inkubointilaitteessa lämpötilassa 37°C 20 tuntia. Soluihin lisättiin Varicella-zoster-virusta tai ihmisen sytomegalovirusta niin paljon, että muodostui 100 plakkia kun soluihin ei oltu lisätty interferonia. Seosta inkuboitiin ja muodostuneiden plakkien määrä laskettiin.
Interferonin estovaikutus virusten lisääntymiseen määrättiin käyttäen seuraavaa yhtälöä.
A - B
Plakkimäärän pienentyminen (%) = —-- x 100 Ά jossa A on plakkien lukumäärä silloin kun interferonia ei ole lisätty, 12 66428 ja B on plakkien lukumäärä kun interferonia on lisätty.
Tulokset on esitetty taulukossa 1.
Taulukko 1
Yksikköjen lukumäärä Varicella-zoster-virus Ihmisen sytomegalovirus 0 0 % 0 % 1 12 % 5 % 10 53 % 64 % 100 91 % 84 %
Taulukosta 1 ilmenee selvästi, että keksinnön mukainen interferoni estää patogeenisten virusten lisääntymisen.
Mitään poikkeavuuksia ei todettu viljellyissä ihmisen soluissa kun interferonia oli lisätty näihin soluihin.
Koe 2
Ei-viraalisten sairauksien käsittely interferonilla.
1) Tuumorisolujen lisääntymisen inhibition tutkiminen in vitro.
RPMI-164O-väliaineeseen, johon oli lisätty 15 tilavuusprosenttia vasikansikiöseerumia, lisättiin sellaista interferonia, joka oli valmistettu esimerkin A-9) mukaisella menetelmällä niin, että väkevyyksiksi saatiin vastaavasti 30, 300 ja 3000 yksikköä/ml. Saatuihin seoksiin istutettiin ihmisen tuumorisoluja niin, että väkevyys oli 5 x 10^ solua/ml, ja inkuboitiin 5 tilavuusprosenttisessa CC^-inkubointilaitteessa lämpötilassa 37°C 5 vuorokautta.
Tämän jälkeen laskettiin solujen lukumäärä 1 ml:ssa väliainetta. Vertailuseoksia, jotka oli valmistettu edellä esitetyllä tavalla sillä erotuksella, että interferoni oli ennakolta inaktivoitu kuumentamalla lämpötilassa 100°C 30 minuuttia, inkuboitiin samalla tavoin.
Interferonin estovaikutus solujen lisääntymisen suhteen määrättiin seuraavasta yhtälöstä.
........... ^ . ,„4 (A-5x105) - (B-5x105)
Solujen lisääntymisen estyminen (%) = --?- x 100 (A-5x10 ) jossa A on solujen lukumäärä vertailunäytteessä ja B on solujen lukumäärä interferonilla käsitellyssä näytteessä.
13 66428
Tulokset on esitetty taulukossa II.
Taulukko II
Interferoniväkevyys Ihmisen tuumorisolut
(yksikköä/ml) BALL-1 TALL-1 NALL-1 JBL
30 +18 % +12 % +21 % +19 % 300 +57 % +61 % +63 % +54 % 3000 +88 % +82 % +85 % +91 %
Kuten taulukon II tuloksista selvästi ilmenee, niin interferoni estää voimakkaasti tuumorisolujen, kuten BALL-l-solujen, TALL-1-solujen, NALL-l-solujen ja JBL-solujen monistumisen, ja interferoni on tehokas väkevyysalueella 30-3000 yksikköä/ml.
2) Tuumorisolujen lisääntymisen inhibition tutkiminen in vivo.
Koe suoritettiin käyttäen 8 karvatonta hiirtä, joiden ikä oli noin 2 kuukautta. TALL-l-soluja (tuumorisoluja), 7,5 x 106 solua/karvaton hiiri, istutettiin subkutaanisesti kaikkiin hiiriin. Kolmannesta päivästä alkaen istuttamisen jälkeen neljälle hiirelle annettiin intra-peritoneaalisesti 20 annosta interferonia, joka oli valmistettu esimerkin A-3) mukaisella menetelmällä; yksi annos = 10 000 yksikköä/kar-vaton hiiri, 3 annosta viikossa. Istuttamisen jälkeen ruokittiin hiiriä 48 vuorokautta ja ne tapettiin sitten. Hiirissä muodostuneiden tuumorien märkäpainot määrättiin. Jäljellä olevat neljä hiirtä, joita käytettiin vertailuun, ruokittiin ja tapettiin samalla tavoin lukuunottamatta sitä,että niille ei annettu interferonia. Muodostuneiden massiivisten tuumorien märkäpainot määrättiin.
Tulokset on esitetty taulukossa III.
Taulukko III
Vertailu Interferonilla käsitelty koe 1 5,8 g 1,6 g 2 8,8 g 1,1 g 3 4,3 g 0 g 4 7,5 g 0 g
Keskim. paino 6,6 g 0,7 g 14 66428 3) Tuumorisolujen monistumisen estokoe in vivo.
Koe suoritettiin käyttäen 8 karvatonta hiirtä, jotka olivat noin 2 kuukautta vanhoja.
7
Kaikkiin näihin hiiriin istutettiin 10 JBL-solua (tuumorisoluja) subkutaanisesti per hiiri. Kolmannesta viikosta alkaen istuttamisen jälkeen annettiin neljälle hiirelle intraperitoneaalisesti kahdeksan annosta interferonia, joka oli valmistettu esimerkin A-2) mukaisella menetelmällä, jolloin yksi annos oli 1000 yksikköä/karvaton hiiri, ja tällöin annettiin 2 annosta viikossa. Istuttamisen jälkeen hiiriä ruokittiin 42 vuorokautta ja ne tapettiin sitten. Tämän jälkeen punnittiin muodostuneiden tuumorien märkäpaino. Jäljellä olevat 4 hiirtä, joita käytettiin vertailuun, ruokittiin ja tapettiin samalla tavoin lukuunottamatta sitä, että niille ei annettu interferonia. Muodostuneiden tuumorien märkäpaino punnittiin.
Tulokset on esitetty taulukossa IV.
Taulukko IV
Vertailu Interferonikäsittelykoe 1 4,5 g 0,7 g 2 4,9 g 1,4 g 3 17,1 g 0,9 g 4 20,3 g 0,7 g
Keskim. paino 11,7 g 0,9 g
Kuten taulukoista III ja IV selvästi ilmenee, niin interferoni estää ihmisen massiivisen tuumorin muodostumista hiirissä, ja myös mikäli tuumori oh muodostunut, on sen paino huomattavasti pienempi kuin ver-tailueläimillä. Verrattuna vertailueläimiin oli interferonilla käsitellyillä karvattomilla hiirillä parempi ruokahalu ja ne olivat fyysisesti aktiivisempia.
Koe 3
Akuutti myrkyllisyyskoe.
Akuutti myrkyllisyyskoe suoritettiih käyttäen 20-vuorokautta vanhoja hiiriä injektoimalla intraperitoneaalisesti esimerkin A-9) mukaisella menetelmällä valmistettua interferoniliuosta. Tulokseksi saatiin erittäin alhainen myrkyllisyys; LD^-arvo on suurempi kuin 20 000 OOO yksikköä/kg suoritettaessa injektio intraperitoneaalisesti hiiriin.
15 66428
Edellä olevista kokeista ilmenee selvästi, että interferoni-herkät sairaudet, jotka edellä on esitetty, ovat sellaisia, jotka voidaan estää tai joita voidaan käsitellä interferonilla keksinnön mukaisesti, so. virussairaudet, kuten epideeminen sarveis- ja sidekalvontulehdus, herpeettinen sarveiskalvontulehdusinfluenssa, vihurirokko ja seerumi-hepatitis, ja ei-viraaliset sairaudet, kuten leukemia ja osteosarkooma.
Lääkeaineet tai terapeuttisesti aineet interferonilla parannettavia sairauksia varten, jotka sisältävät interferonia, valmistetaan eri .muodoissa ja faaseissa lopullisesta käyttötavasta riippuen, so. nestemäisinä preparaatteina, kuten sumuttimina, silmätippoina, nenätippoina, kurlausaineina, injektiopreparaatteina, tahnamaisina valmisteina, kuten salvoina, ja kiinteinä aineina, kuten jauheina, rakeina ja tabletteina.
Nämä valmisteet ovat riittävän tehokkaita estämään interferonilla parannettavat sairaudet ja niiden käsittelyyn, mikäli ne sisältävät yleensä 1-10 000 000 yksikköä interferonia/g. Tarvittaessa voidaan näihin valmisteisiin yhdistää yhtä tai useampaa ainetta, jotka kuuluvat ryhmään, jonka muodostavat terapeuttiset aineet, väliaineet, täyteaineet ja stabiloimisaineet.
Koska interferoni helposti poistuu verestä 10 minuutissa ja poistuu systeemistä, kun se injektoidaan laskimonsisäisesti, saadaan erikoisesti interferonin tiputuksessa, esimerkiksi lisäämällä interferoni ruiske-sokeriliuokseen, sopiva aine syöttöäjän pidentämiseksi annetun interferonin täyden tehon ja hyväksikäytön saavuttamiseksi sekä interferonin terapeuttisen ja profylaktisen vaikutuksen edelleen parantamiseksi interferonilla parannettaviin sairauksiin nähden.
Claims (7)
1. Menetelmä ihmisspesifisen interferonin valmistamiseksi viljelemällä pysyvää ihmisen solulinjaa, saattamalla saadut solut interferoni-indusorin vaikutuksen alaiseksi ihmisspe-sifisen interferonin tuotannon indusoimiseksi ja ottamalla talteen ja puhdistamalla interferoni, tunnettu siitä, että viljelyvaiheessa istutetaan pysyvä ihmisen solulinja lämminverisen eläimen - ihminen poissuljettuna - kehoon ja että indusorivaihe suoritetaan in vitro tai in vivo, jolloin interferonin laatu ja määrä paranee huomattavasti.
2. Menetelmä ihmisspesifisen interferonin valmistamiseksi viljelemällä pysyvää ihmisen solulinjaa, saattamalla saadut solut interferoni-indusorin vaikutuksen alaiseksi ihmis- spesifisen interferonin tuotannon indusoimiseksi ja ottamalla talteen ja puhdistamalla interferoni, tunnettu siitä, että viljelyvaiheessa istutetaan pysyvä ihmisen solulinja ra- vintoväliaineeseen diffuusiokammiossa, jonka huokoset ovat -7 -5 halkaisijaltaan noin 10 - 10 m, diffuusiokammiot sijoitetaan lämminverisen eläimen - ihminen poissuljettuna - kehoon tai keholle siten, että eläimen ravintokehoneste pääsee kulkeutumaan kammioon, ja annetaan solujen lisääntyä Selmalla kun eläimen annetaan antaa soluille ravintokehonestettään, ja että indusorivaihe suoritetaan in vitro tai in vivo, jolloin interferonin laatu ja määrä paranee huomattavasti.
3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että pysyvä ihmisen solulinja on peräisin ihmisen leukosyyteistä tai lymfosyyteistä.
4. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että pysyvä ihmisen solulinja on Namalva, BALL-1, NALL-1, TALL-1 tai JBL.
5. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmä, tunnet-t u siitä, että lämminverinen eläin on imettäväinen.
6. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmä, tunnet-t u siitä, että pysyvän ihmisen soliilinjan annetaan lisääntyä 1-20 viikkoa. 66428 17
7. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmä, tunnet- t u siitä, että saadut ihmisen solut saatetaan interferoni- 5 8 indusorin vaikutuksen alaiseksi soluväkevyydessä 10 - 10 solua/ml.
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP536878A JPS5498307A (en) | 1978-01-22 | 1978-01-22 | Production of interferon |
| JP536878 | 1978-01-22 | ||
| JP13402678A JPS5562024A (en) | 1978-10-31 | 1978-10-31 | Preventive and remedy for interferon-sensitive disease |
| JP13402678 | 1978-10-31 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI790188A FI790188A (fi) | 1979-07-23 |
| FI66428B true FI66428B (fi) | 1984-06-29 |
| FI66428C FI66428C (fi) | 1984-10-10 |
Family
ID=26339293
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI790188A FI66428C (fi) | 1978-01-22 | 1979-01-19 | Foerfarande foer framstaellning av maenniskospecifikt interferon |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4276282A (fi) |
| AU (1) | AU533201B2 (fi) |
| CA (1) | CA1135186A (fi) |
| CH (1) | CH637831A5 (fi) |
| DE (1) | DE2902136C2 (fi) |
| DK (1) | DK153848C (fi) |
| ES (1) | ES477060A1 (fi) |
| FI (1) | FI66428C (fi) |
| FR (1) | FR2414920A1 (fi) |
| GB (1) | GB2016015B (fi) |
| IT (1) | IT1116493B (fi) |
| NL (1) | NL192086C (fi) |
| NO (1) | NO152976C (fi) |
| SE (1) | SE436969B (fi) |
Families Citing this family (63)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5598118A (en) * | 1979-01-18 | 1980-07-25 | Hayashibara Takeshi | Preparation of type-2 interferon and drug containing the same |
| JPS55122717A (en) * | 1979-03-15 | 1980-09-20 | Asai Gerumaniumu Kenkyusho:Kk | Interferon inducer |
| WO1981001102A1 (en) * | 1979-10-19 | 1981-04-30 | A Romano | Medicine for the treatment of viral infections of the eye and other organs |
| US4328207A (en) * | 1979-12-27 | 1982-05-04 | Ken Hayashibara | Process for preparing mouse interferon |
| US4396601A (en) * | 1980-03-26 | 1983-08-02 | The Regents Of The University Of Calif. | Gene transfer in intact mammals |
| US4497796A (en) * | 1980-03-26 | 1985-02-05 | The Regents Of The University Of California | Gene transfer in intact mammals |
| JPS5825439B2 (ja) * | 1980-12-30 | 1983-05-27 | 株式会社林原生物化学研究所 | ヒト副甲状腺ホルモンの製造方法 |
| JPS5825440B2 (ja) * | 1980-12-30 | 1983-05-27 | 株式会社林原生物化学研究所 | ヒトカルシトニンの製造方法 |
| JPS5729294A (en) * | 1980-07-30 | 1982-02-17 | Hayashibara Biochem Lab Inc | Preparation of human insulin |
| JPS6045851B2 (ja) * | 1980-12-19 | 1985-10-12 | 株式会社林原生物化学研究所 | ヒト胎盤性ラクトゲンの製造方法 |
| US4621053A (en) * | 1980-07-30 | 1986-11-04 | Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo | Process for the production of human peptide hormones |
| JPS6045848B2 (ja) * | 1980-07-31 | 1985-10-12 | 株式会社林原生物化学研究所 | ヒト成長ホルモンの製造方法 |
| JPS5739795A (en) * | 1980-08-22 | 1982-03-05 | Hayashibara Biochem Lab Inc | Preparation of human prolactin |
| JPS5826317B2 (ja) * | 1980-12-30 | 1983-06-02 | 株式会社 林原生物化学研究所 | ヒト甲状腺刺激ホルモンの製造方法 |
| JPS6045850B2 (ja) * | 1980-12-13 | 1985-10-12 | 株式会社林原生物化学研究所 | ヒト副腎皮質刺激ホルモンの製法 |
| US4462985A (en) * | 1980-08-22 | 1984-07-31 | University Of Illinois Foundation | Delivery of biologically active components of heterologous species interferon isolates |
| JPS586475B2 (ja) * | 1980-08-23 | 1983-02-04 | 株式会社 林原生物化学研究所 | ヒト絨毛性性腺刺激ホルモンの製造方法 |
| JPS6045849B2 (ja) * | 1980-08-25 | 1985-10-12 | 林原 健 | ヒトエリトロポエチンの製造方法 |
| JPS585671B2 (ja) * | 1980-08-27 | 1983-02-01 | 株式会社 林原生物化学研究所 | ヒト卵胞刺激ホルモンの製造方法 |
| JPS5743696A (en) * | 1980-08-27 | 1982-03-11 | Hayashibara Biochem Lab Inc | Preparation of human luteinizing hormone |
| JPS5852634B2 (ja) * | 1980-12-05 | 1983-11-24 | 株式会社林原生物化学研究所 | ウロキナ−ゼの製造法 |
| JPS609795B2 (ja) * | 1980-12-11 | 1985-03-13 | 株式会社林原生物化学研究所 | ヒト上皮細胞成長因子の製造方法 |
| US4364863A (en) * | 1980-12-29 | 1982-12-21 | Schering Corporation | Extraction of interferon from bacteria |
| JPS6030657B2 (ja) * | 1980-12-31 | 1985-07-17 | 株式会社林原生物化学研究所 | ヒト細胞増殖促進因子の製造方法 |
| JPS6030654B2 (ja) * | 1980-12-31 | 1985-07-17 | 株式会社林原生物化学研究所 | ヒトコロニ−刺激因子の製造方法 |
| DE3249946C2 (de) * | 1981-07-21 | 1996-03-21 | Hayashibara Biochem Lab | hTNF-haltiges therapeutisches Mittel gegen maligne Tumoren und dessen Verwendung |
| SE8204382L (sv) * | 1981-07-21 | 1983-01-22 | Hayashibara Biochem Lab | Sett att framstella malcellysfaktor och anvendning derav |
| WO1983001198A1 (en) * | 1981-10-08 | 1983-04-14 | Kurt Frimann Berg | Method and composition for treating a patient suffering from interferon-susceptible disorder |
| US4675295A (en) * | 1981-10-28 | 1987-06-23 | Denki Kagaku Kogyo Kabushiki Kaisha | Process for producing subculturable lymphokine-producing human T cell hybridomas |
| JPS58126786A (ja) * | 1982-01-25 | 1983-07-28 | Hayashibara Biochem Lab Inc | ヒトカリクレインの製造方法 |
| JPS58138395A (ja) * | 1982-02-12 | 1983-08-17 | Hayashibara Biochem Lab Inc | ヒト免疫応答抑制因子の製造方法 |
| US4624917A (en) * | 1982-02-17 | 1986-11-25 | Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo | Process for the production of human T-cell growth factor |
| US4987079A (en) * | 1982-07-06 | 1991-01-22 | Wilbur D. Smith | Composition and method for in vitro cell culture |
| JPS59501533A (ja) * | 1982-08-10 | 1984-08-30 | ザ トラステイ− オブ コロンビア ユニバ−シテイ− イン ザ シテイ オブ ニユ− ヨ−ク | 蛋白質様物質の製造における真生核促進体連鎖の使用 |
| US5702699A (en) * | 1982-09-23 | 1997-12-30 | Cetus Corporation | Process for the recovery of lipophilic proteins |
| US4870009A (en) * | 1982-11-22 | 1989-09-26 | The Salk Institute For Biological Studies | Method of obtaining gene product through the generation of transgenic animals |
| US5910304A (en) * | 1982-12-13 | 1999-06-08 | Texas A&M University System | Low-dose oral administration of interferons |
| US4820515A (en) * | 1982-12-13 | 1989-04-11 | Texas A&M University System | Method of using interferon in low dosage to regulate appetite and efficiency of food utilization |
| JPS59163313A (ja) * | 1983-03-09 | 1984-09-14 | Teijin Ltd | 経鼻投与用ペプチドホルモン類組成物 |
| US4489163A (en) | 1983-04-14 | 1984-12-18 | The Salk Institute For Biological Studies | rCRF and analogs |
| DE3476634D1 (en) * | 1983-06-13 | 1989-03-16 | Ragnvald Erik Lindblom | A method of treating interferon sensitive diseases, and a method and a device for preparing a _g(g)-interferon containing preparation |
| US4680174A (en) * | 1984-05-24 | 1987-07-14 | Damon Biotech, Inc. | Induction of immune response by immunization with encapsulated antigen-producing cells |
| US5019385A (en) * | 1984-11-09 | 1991-05-28 | Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo | Novel lymphopine LK 2 and pharmaceutic compositions containing same |
| ZA878295B (en) * | 1986-11-06 | 1988-05-03 | Amarillo Cell Culture Co. Inc. | Treatment of immuno-resistant disease |
| CA1320905C (en) * | 1986-11-06 | 1993-08-03 | Joseph M. Cummins | Treatment of immuno-resistant disease |
| US5175385A (en) * | 1987-09-03 | 1992-12-29 | Ohio University/Edison Animal Biotechnolgy Center | Virus-resistant transgenic mice |
| DE3731255A1 (de) * | 1987-09-17 | 1989-04-06 | Boehringer Ingelheim Int | Stabilisierung von therapeutisch wirksamen proteinen in pharmazeutischen zubereitungen |
| US5017371A (en) * | 1988-01-06 | 1991-05-21 | Amarillo Cell Culture Company, Incorporated | Method for reducing side effects of cancer therapy |
| JPH0665297A (ja) * | 1992-08-21 | 1994-03-08 | Hayashibara Biochem Lab Inc | メラニン合成抑制蛋白質とその製造方法並びに用途 |
| DE69431320T2 (de) * | 1993-04-09 | 2003-04-17 | Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo, Okayama | Verwendung von menschlichem Interferon-d zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung von Atemwegserkrankungen in Katzen |
| US7135458B1 (en) | 1995-11-15 | 2006-11-14 | Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo | Interferon-γ inducing polypeptide, pharmaceutical composition thereof, monoclonal antibody thereto, and methods of use |
| JP4004088B2 (ja) | 1995-09-26 | 2007-11-07 | 株式会社林原生物化学研究所 | 免疫担当細胞においてインターフェロン−γの産生を誘導する蛋白質 |
| US5723718A (en) * | 1994-12-20 | 1998-03-03 | St. Joseph's Hospital And Medical Center | Induction of immune tolerance to tumor cells |
| US5939286A (en) * | 1995-05-10 | 1999-08-17 | University Of Florida | Hybrid interferon tau/alpha polypeptides, their recombinant production, and methods using them |
| US6204022B1 (en) | 1996-04-12 | 2001-03-20 | Pepgen Corporation And University Of Florida | Low-toxicity human interferon-alpha analogs |
| JPH1080270A (ja) * | 1996-07-19 | 1998-03-31 | Hayashibara Biochem Lab Inc | ポリペプチドをプロセッシングする酵素 |
| TW515843B (en) * | 1996-07-25 | 2003-01-01 | Hayashibara Biochem Lab | Process for producing an active polypeptide inducing interferon-γ production |
| US6514728B1 (en) * | 1998-11-09 | 2003-02-04 | Nippon Biocaptal Limited | Process for preparation of cytokines using Sendai virus expression system |
| EP1092773A3 (en) * | 1999-10-15 | 2001-08-08 | Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo | Polypeptide and uses thereof |
| JP2002201141A (ja) | 2000-10-27 | 2002-07-16 | Hayashibara Biochem Lab Inc | 蛋白質合成抑制遺伝子の発現増強剤 |
| EP1425409A4 (en) * | 2001-08-12 | 2005-11-09 | Pepgen Corp | INTERFERON HYBRID / INTERFERON TAU PROTEINS, COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF |
| US20160106813A1 (en) | 2013-03-29 | 2016-04-21 | Centre National De La Recherche Schientifique (Cnrs) | Cgrp receptor agonist for hiv treatment or prevention |
| WO2015140348A2 (en) | 2014-03-21 | 2015-09-24 | Centre National De La Recherche Scientifique (Cnrs) | Use of dj-1 deglycase activity |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| BR6914761D0 (pt) * | 1969-01-17 | 1973-03-08 | Merck & Co Inc | Processos quimicos |
-
1979
- 1979-01-11 GB GB7901089A patent/GB2016015B/en not_active Expired
- 1979-01-12 AU AU43345/79A patent/AU533201B2/en not_active Expired
- 1979-01-19 IT IT47712/79A patent/IT1116493B/it active
- 1979-01-19 DK DK025579A patent/DK153848C/da not_active IP Right Cessation
- 1979-01-19 SE SE7900493A patent/SE436969B/sv not_active IP Right Cessation
- 1979-01-19 FR FR7901324A patent/FR2414920A1/fr active Granted
- 1979-01-19 NO NO790195A patent/NO152976C/no unknown
- 1979-01-19 FI FI790188A patent/FI66428C/fi not_active IP Right Cessation
- 1979-01-19 CH CH54179A patent/CH637831A5/fr not_active IP Right Cessation
- 1979-01-19 DE DE2902136A patent/DE2902136C2/de not_active Expired
- 1979-01-22 NL NL7900476A patent/NL192086C/nl not_active IP Right Cessation
- 1979-01-22 ES ES477060A patent/ES477060A1/es not_active Expired
- 1979-01-22 CA CA000320042A patent/CA1135186A/en not_active Expired
- 1979-01-22 US US06/005,585 patent/US4276282A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NO790195L (no) | 1979-07-24 |
| AU4334579A (en) | 1979-08-02 |
| DE2902136C2 (de) | 1986-09-04 |
| FR2414920A1 (fr) | 1979-08-17 |
| NL192086C (nl) | 1997-02-04 |
| NL192086B (nl) | 1996-10-01 |
| DK25579A (da) | 1979-07-23 |
| SE7900493L (sv) | 1979-07-23 |
| CA1135186A (en) | 1982-11-09 |
| CH637831A5 (fr) | 1983-08-31 |
| FR2414920B1 (fi) | 1982-08-06 |
| FI66428C (fi) | 1984-10-10 |
| US4276282A (en) | 1981-06-30 |
| IT7947712A0 (it) | 1979-01-19 |
| GB2016015B (en) | 1982-05-06 |
| NO152976C (no) | 1985-12-27 |
| NL7900476A (nl) | 1979-07-24 |
| SE436969B (sv) | 1985-02-04 |
| FI790188A (fi) | 1979-07-23 |
| NO152976B (no) | 1985-09-16 |
| ES477060A1 (es) | 1979-12-16 |
| DK153848B (da) | 1988-09-12 |
| DE2902136A1 (de) | 1979-08-09 |
| AU533201B2 (en) | 1983-11-10 |
| IT1116493B (it) | 1986-02-10 |
| GB2016015A (en) | 1979-09-19 |
| DK153848C (da) | 1989-04-03 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI66428B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av maenniskospecifikt interferon | |
| FI68519C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av interferon | |
| KR930000188B1 (ko) | 신규 림포카인(lymphokine), 이 림포카인에 특이적인 모노클로날 항체 및 이들의 제조방법 | |
| KR870000238B1 (ko) | 휴먼 유로키나아제의 제조방법 | |
| JPS6227048B2 (fi) | ||
| NO173144B (no) | Fremgangsmaate til fremstilling av interferongamma | |
| JPS6011890B2 (ja) | ツモアネクロシスフアクタ−の製造方法 | |
| GB2083824A (en) | Process for the production of human growth hormone | |
| JPH0214039B2 (fi) | ||
| JP2926409B2 (ja) | 癌転移抑制因子の製造方法 | |
| JPS6245208B2 (fi) | ||
| KR950008569B1 (ko) | 신규 림포카인(lymphokine) 및 그 제조방법과 사용방법 | |
| KR820001174B1 (ko) | 사람 특이성 인터페론의 제조법 | |
| JPS5888322A (ja) | 標的細胞障害性因子を含有する悪性腫瘍治療剤とその製造方法 | |
| KR830001817B1 (ko) | 타이프ⅱ 인터페론의 제조방법 | |
| GB2118560A (en) | Process for producing human Immune Response Suppressor | |
| JPS5815921A (ja) | 抗リンホトキシン感受性疾患剤 | |
| JPS63152993A (ja) | γ―インターフェロンの製造方法 | |
| JP2850293B2 (ja) | γ−インターフェロン感受性疾患剤 | |
| JPS61115027A (ja) | 新リンホカイン２とその製法および用途 | |
| JPH0526468B2 (fi) | ||
| JPH0523755B2 (fi) | ||
| JPS61115099A (ja) | モノクロ−ナル抗体とその製法 | |
| JPH0527640B2 (fi) | ||
| JPS58320B2 (ja) | マウスインタ−フエロンの製造方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MA | Patent expired | ||
| MA | Patent expired |
Owner name: ASHIDA, SHIN Owner name: HAYASHIBARA, KEN |