JPS6045850B2 - ヒト副腎皮質刺激ホルモンの製法 - Google Patents
ヒト副腎皮質刺激ホルモンの製法Info
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- JPS6045850B2 JPS6045850B2 JP55176185A JP17618580A JPS6045850B2 JP S6045850 B2 JPS6045850 B2 JP S6045850B2 JP 55176185 A JP55176185 A JP 55176185A JP 17618580 A JP17618580 A JP 17618580A JP S6045850 B2 JPS6045850 B2 JP S6045850B2
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- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/665—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans derived from pro-opiomelanocortin, pro-enkephalin or pro-dynorphin
- C07K14/695—Corticotropin [ACTH]
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- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/22—Hormones
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、ヒト副腎皮質刺激ホルモン（ｈｕｍａｎＡｄ
ｒｅｎｏｃｏｒｔｉｃｏｔｒｏｐｉｃＨｏｒｍｏｎｅ９
以下ｈＡＣＴＨと略称する。
ｒｅｎｏｃｏｒｔｉｃｏｔｒｏｐｉｃＨｏｒｍｏｎｅ９
以下ｈＡＣＴＨと略称する。
）の製法に関する。ｈＡＣＴＨは、ヒト下垂体前案細胞
が産生するホルモンでステロイドホルモンの産生促進、
インシュリン分泌促進作用を有する。
が産生するホルモンでステロイドホルモンの産生促進、
インシュリン分泌促進作用を有する。
本発明者は、ｈＡＣＴＨの大量供給を目ざして鋭意研究
を続けたところ、意外にも、ｈＡＣＴＨ産生能を有する
ヒト由来のリンパ芽球様細胞が、その増殖速度が大きく
、細胞当りのｈＡＣＴＨ産生量も大てｈＡＣＴＨ産生細
胞として好適であることを見い出し本発明を完成した。
を続けたところ、意外にも、ｈＡＣＴＨ産生能を有する
ヒト由来のリンパ芽球様細胞が、その増殖速度が大きく
、細胞当りのｈＡＣＴＨ産生量も大てｈＡＣＴＨ産生細
胞として好適であることを見い出し本発明を完成した。
すなわち、本発明は、ｈＡＣＴＨ産生能を有するヒト由
来のリンパ芽球様細胞をヒト以外の温血動物体内に移植
し、または、その温血動物の体液の供給を受けながら増
殖させた細胞からｈＡＣＴＨを産生せしめることを特徴
とするｈＡＣＴＨの製造方法に関するものである。本発
明の方法は、イソヒドロで培養させる場合とは違つて、
ｈＡＣＴＨの産生量が大であるだけでなく、高価な血清
などを含む栄養培地が不要または大幅に節約でき、更に
細胞増殖中の維持管理も極めて容易である。
来のリンパ芽球様細胞をヒト以外の温血動物体内に移植
し、または、その温血動物の体液の供給を受けながら増
殖させた細胞からｈＡＣＴＨを産生せしめることを特徴
とするｈＡＣＴＨの製造方法に関するものである。本発
明の方法は、イソヒドロで培養させる場合とは違つて、
ｈＡＣＴＨの産生量が大であるだけでなく、高価な血清
などを含む栄養培地が不要または大幅に節約でき、更に
細胞増殖中の維持管理も極めて容易である。
すなわち、ｈＡＣＴＨ産生能を有するヒト由来のリンパ
芽球様細胞をヒト以外の温血動物体内に移植し、または
その動物の体液の供給を受けることのできるチャンバー
に収容し、通常の飼育をすれは、温血動物体から供給さ
れる栄養物を含有する体液を利用してその細胞が容易に
増殖しうるのである。
芽球様細胞をヒト以外の温血動物体内に移植し、または
その動物の体液の供給を受けることのできるチャンバー
に収容し、通常の飼育をすれは、温血動物体から供給さ
れる栄養物を含有する体液を利用してその細胞が容易に
増殖しうるのである。
更にイソヒドロで培養させる場合と比較して、この細胞
の増殖が安定していること、その増殖速度の大きいこと
、得られる細胞量の大きいこ・と、更には細胞当りのｈ
ＡＣＴＨ産生量の大きいことが特徴である。本発明て使
用するヒト由来のリンパ芽球様細胞は、ｈＡＣＴＨ産生
能を有し、かつヒト以外の温血動物の体内に移植して容
易に増殖するものであれ・ばよい。
の増殖が安定していること、その増殖速度の大きいこと
、得られる細胞量の大きいこ・と、更には細胞当りのｈ
ＡＣＴＨ産生量の大きいことが特徴である。本発明て使
用するヒト由来のリンパ芽球様細胞は、ｈＡＣＴＨ産生
能を有し、かつヒト以外の温血動物の体内に移植して容
易に増殖するものであれ・ばよい。
例えは、下垂体前案細胞、下垂体腫瘍細胞、下垂体色素
嫌性腺腫細胞などの本来ｈＡＣＴＨ産生能を有する細胞
及び膵ランゲルハンス島癌細胞、肺癌細胞などの異所性
ｈＡＣＴＨ産生能を有する細胞からＨＡＣＴＨ産生遺伝
子を、ポリエチレングリコールやセンダイウイルスなど
を利用する細胞融合の手段や、ＤＮＡリガーゼ、制限酵
素（ヌクレアーゼ）、ＤＮＡポリメラーゼなどの酵素を
利用する遺伝子組換えの手段などによつて導入したヒト
由来のリンパ芽球様細胞または異所性ＨＡＣＴＨ産生能
を有するヒト由来のリンパ芽球様細胞などが好適である
。
嫌性腺腫細胞などの本来ｈＡＣＴＨ産生能を有する細胞
及び膵ランゲルハンス島癌細胞、肺癌細胞などの異所性
ｈＡＣＴＨ産生能を有する細胞からＨＡＣＴＨ産生遺伝
子を、ポリエチレングリコールやセンダイウイルスなど
を利用する細胞融合の手段や、ＤＮＡリガーゼ、制限酵
素（ヌクレアーゼ）、ＤＮＡポリメラーゼなどの酵素を
利用する遺伝子組換えの手段などによつて導入したヒト
由来のリンパ芽球様細胞または異所性ＨＡＣＴＨ産生能
を有するヒト由来のリンパ芽球様細胞などが好適である
。
これらリンパ芽球様細胞の利用は、ヒト以外の温血動物
に移植する時、その宿主動物の細胞と混りにくい軟腫瘤
を形成しやすく、摘出後の分散も容易なので生きたヒト
リンパ芽球様細胞の採取に極めて有利である。
に移植する時、その宿主動物の細胞と混りにくい軟腫瘤
を形成しやすく、摘出後の分散も容易なので生きたヒト
リンパ芽球様細胞の採取に極めて有利である。
このようなヒトリンパ芽球様細胞には、ヒト白血病もし
くはヒト悪性リンパ腫由来の細胞株が適しており、例え
ばナマルバ（Ｎａｍａｌｖａ）細胞、ＢＡＬＬ−１細胞
、ＮＡＬＬ−１細胞、ＴＡＬＬ−１細胞、ＪＢＬ細胞な
どの公知ヒト由来細胞株が、特に有利に使用しうる。
くはヒト悪性リンパ腫由来の細胞株が適しており、例え
ばナマルバ（Ｎａｍａｌｖａ）細胞、ＢＡＬＬ−１細胞
、ＮＡＬＬ−１細胞、ＴＡＬＬ−１細胞、ＪＢＬ細胞な
どの公知ヒト由来細胞株が、特に有利に使用しうる。
本発明におけるＨＡＣＴＨの製造方法に使用する温血動
物は、ＨＡＣＴＨ産生能を有するヒト由来のリンパ芽球
様細胞が増殖しうるものであればよく、例えば、ニワト
リ、ハトなどの鳥類、イヌ、ネコ、サル、ヤギ、プタ、
ウシ、ウマ、ウサギ、モルモツト、ラット、ヌードラツ
ト、ハムスター、普通マウス、ヌードマウスなどの咄乳
類などか使用できる。
物は、ＨＡＣＴＨ産生能を有するヒト由来のリンパ芽球
様細胞が増殖しうるものであればよく、例えば、ニワト
リ、ハトなどの鳥類、イヌ、ネコ、サル、ヤギ、プタ、
ウシ、ウマ、ウサギ、モルモツト、ラット、ヌードラツ
ト、ハムスター、普通マウス、ヌードマウスなどの咄乳
類などか使用できる。
これらの動物にヒト由来のリンパ芽球様細胞を移植する
と、好ましくない免疫反応を起すおそれがあるので、そ
の反応をできるだけおさえるため．に、使用する動物は
できるだけ幼若な状態、すなわち卵、胚、胎児、新生期
、幼少期のものの方が好ましい。
と、好ましくない免疫反応を起すおそれがあるので、そ
の反応をできるだけおさえるため．に、使用する動物は
できるだけ幼若な状態、すなわち卵、胚、胎児、新生期
、幼少期のものの方が好ましい。
また、これら動物に、例えば、約２００〜６００レムの
エツクス線若しくはガンマ線を照射するか、ま．たは抗
血清若しくは免疫抑制剤などを注射するなどの前処置を
ほどこして、免疫反応を弱めて移植してもよい。
エツクス線若しくはガンマ線を照射するか、ま．たは抗
血清若しくは免疫抑制剤などを注射するなどの前処置を
ほどこして、免疫反応を弱めて移植してもよい。
使用する動物がヌードマウス、ヌードラツトなどの免疫
不全動物の楊合には、成長したものであ・つても免疫反
応が弱いので、これら前処置を必要とすることなく、培
養株化されたヒト由来のリンパ芽球様細胞が移植でき、
急速に増殖するので、特に好都合である。
不全動物の楊合には、成長したものであ・つても免疫反
応が弱いので、これら前処置を必要とすることなく、培
養株化されたヒト由来のリンパ芽球様細胞が移植でき、
急速に増殖するので、特に好都合である。
また、ヒト由来のリンパ芽球様細胞を、例えば先ずハム
スターに移植し、増殖させた後、この細胞を更にヌード
マウスに移植するなどのように、ヒト以外の温血動物間
で移植して、ヒト由来のリンパ芽球様細胞の増殖をより
安定化したり、更にそれらから産生されるＨＡＣＴＨ量
を増加させることも自由である。
スターに移植し、増殖させた後、この細胞を更にヌード
マウスに移植するなどのように、ヒト以外の温血動物間
で移植して、ヒト由来のリンパ芽球様細胞の増殖をより
安定化したり、更にそれらから産生されるＨＡＣＴＨ量
を増加させることも自由である。
この場合、同種間、同属間は勿論のこと、同綱間、同門
間移植であつてもよい。ヒト由来のリンパ芽球様細胞を
移植する動物体内ノの部位は、移植した細胞が増殖しう
る部位であればよく、例えば尿液腔、静脈、腹腔、皮下
など自由に選ばれる。また、直接動物体内にヒト由来の
リンパ芽球様細胞を移植することなく、動物細胞の通過
を阻止・しうる多孔性の濾過膜、例えば孔径約１０−７
〜１０一痛を有するメンブランフイルター、限外濾過膜
またはホローフアイバーなどを設けた公知の各種形状、
大きさの拡散チャンバーを動物体内、例えば腹腔内に埋
設して、動物体からの栄養物を含゛む体液の供給を受け
つつ、そのチャンバー内で培養株化されたヒト由来のリ
ンパ芽球様細胞を増殖させることができる。また、必要
に応じて、この拡散チャンバー内の栄養物を含む体液を
動物体内のそれと接続して潅流させるようにした拡散チ
ャンバーを、例えば動物体表に取付け、拡散チャンバー
内のヒト由来のリンパ芽球様細胞の増殖状態を透視でき
るようにすることも、また、この拡散チャンバー部分の
みを着脱交換できるようにして動物を層殺せずに寿命一
杯細胞を増殖させて、動物個体当りの細胞生産量を更に
高めることもできる。
間移植であつてもよい。ヒト由来のリンパ芽球様細胞を
移植する動物体内ノの部位は、移植した細胞が増殖しう
る部位であればよく、例えば尿液腔、静脈、腹腔、皮下
など自由に選ばれる。また、直接動物体内にヒト由来の
リンパ芽球様細胞を移植することなく、動物細胞の通過
を阻止・しうる多孔性の濾過膜、例えば孔径約１０−７
〜１０一痛を有するメンブランフイルター、限外濾過膜
またはホローフアイバーなどを設けた公知の各種形状、
大きさの拡散チャンバーを動物体内、例えば腹腔内に埋
設して、動物体からの栄養物を含゛む体液の供給を受け
つつ、そのチャンバー内で培養株化されたヒト由来のリ
ンパ芽球様細胞を増殖させることができる。また、必要
に応じて、この拡散チャンバー内の栄養物を含む体液を
動物体内のそれと接続して潅流させるようにした拡散チ
ャンバーを、例えば動物体表に取付け、拡散チャンバー
内のヒト由来のリンパ芽球様細胞の増殖状態を透視でき
るようにすることも、また、この拡散チャンバー部分の
みを着脱交換できるようにして動物を層殺せずに寿命一
杯細胞を増殖させて、動物個体当りの細胞生産量を更に
高めることもできる。
これらの拡散チャンバーを利用する方法は、ヒト由来の
リンパ芽球様細胞が動物細胞と直接接触しないので、ヒ
ト由来のリンパ芽球様細胞のみが容易に採取できるだけ
でなく、好ましくない免疫反応を起す心配も少ないので
、免疫反応を抑制する前処置の必要もなく、各種温血動
物を自由に利用できる特徴を有している。
リンパ芽球様細胞が動物細胞と直接接触しないので、ヒ
ト由来のリンパ芽球様細胞のみが容易に採取できるだけ
でなく、好ましくない免疫反応を起す心配も少ないので
、免疫反応を抑制する前処置の必要もなく、各種温血動
物を自由に利用できる特徴を有している。
移植した動物の維持管理は、その動物の通常の飼育を続
ければよく、移植後と言えども特別の取扱いは何ら必要
としないので好都合である。
ければよく、移植後と言えども特別の取扱いは何ら必要
としないので好都合である。
ヒト由来のリンパ芽球様細胞を増殖させるための期間は
通常１〜加週である。このようにして得られるヒト由来
のリンパ芽球様細胞数は、動物個体当り約１０７〜１０
１２、またはそれ以上に達することも見いだした。換言
すれば、本発明で使用するＨＡＣＴＨの製造方法により
増殖させたヒト由来のリンパ芽球様細胞数は、動物固体
当り移植した細胞数の約１σ〜１０７倍、またはそれ以
上にも達し、インビトロで栄養培地に接種して増殖させ
る場合の約１０１〜１Ｃｆ倍、またはそれ以上にも達し
て、１１ＡＣＴＨの製造のためにはきわめて好都合であ
る。
通常１〜加週である。このようにして得られるヒト由来
のリンパ芽球様細胞数は、動物個体当り約１０７〜１０
１２、またはそれ以上に達することも見いだした。換言
すれば、本発明で使用するＨＡＣＴＨの製造方法により
増殖させたヒト由来のリンパ芽球様細胞数は、動物固体
当り移植した細胞数の約１σ〜１０７倍、またはそれ以
上にも達し、インビトロで栄養培地に接種して増殖させ
る場合の約１０１〜１Ｃｆ倍、またはそれ以上にも達し
て、１１ＡＣＴＨの製造のためにはきわめて好都合であ
る。
このようにして増殖させたヒト由来のリンパ芽球様細胞
にＨＡＣＴＨ誘導剤を作用させてＨＡＣＴＨを産生させ
る方法は自由であ。
にＨＡＣＴＨ誘導剤を作用させてＨＡＣＴＨを産生させ
る方法は自由であ。
例えば、腹腔内の腹水に浮遊状で増殖したヒト由来のリ
ンパ芽球様細胞を採取し、また皮下で増殖した腫瘤を摘
出し、分散させた後採取し、この細胞を約２０〜４０′
Ｃに保つた栄養培地に細胞濃度が約１０１〜１０３／Ｍ
ｔになるように浮遊させ、これにＨＡＣＴＨ誘導剤を約
１〜５（２）間作用させることによつて、ＨＡＣＴＨを
誘導生成させればよい。ＨＡＣＴＨ誘導剤としては、Ｈ
ＡＣＴＨの産生を促進する物質であれば自由に用いられ
、例えば、バソプレツシン、メトロピン、インシュリン
、グルカゴン、細菌性エンドトキシン、、セロトニン、
プロプラノロールなどが適宜利用される。なお、本発明
によつて、ＨＡＣＴＨの産生と同時に多量の色素胞刺激
ホルモン（ＨｕｍａｎＭｅｌａｎＯｃｙｔｅ−Ｓｔｉｍ
ｕｌａｔｉｎｇ−ＨＯｒｒＴｌＯｎｅ，以下ＨＭＳＨと
略称する。
ンパ芽球様細胞を採取し、また皮下で増殖した腫瘤を摘
出し、分散させた後採取し、この細胞を約２０〜４０′
Ｃに保つた栄養培地に細胞濃度が約１０１〜１０３／Ｍ
ｔになるように浮遊させ、これにＨＡＣＴＨ誘導剤を約
１〜５（２）間作用させることによつて、ＨＡＣＴＨを
誘導生成させればよい。ＨＡＣＴＨ誘導剤としては、Ｈ
ＡＣＴＨの産生を促進する物質であれば自由に用いられ
、例えば、バソプレツシン、メトロピン、インシュリン
、グルカゴン、細菌性エンドトキシン、、セロトニン、
プロプラノロールなどが適宜利用される。なお、本発明
によつて、ＨＡＣＴＨの産生と同時に多量の色素胞刺激
ホルモン（ＨｕｍａｎＭｅｌａｎＯｃｙｔｅ−Ｓｔｉｍ
ｕｌａｔｉｎｇ−ＨＯｒｒＴｌＯｎｅ，以下ＨＭＳＨと
略称する。
）およびまたはヒトリポトロピン（ＨｌｌｒＴｌａｎＬ
ｉｐＯｔｒＯｐｉｃＨＯｒｍＯｎｅ，以下ＨＬＰＨと略
称する。）を産生することを見いだした。このようにし
て誘導生成されたＨＡＣＴＨｌｈＭＳＨおよびＨＬＰＨ
は、公知の精製分離法、例えば、塩析、透析、泊過、遠
心分離、濃縮、凍結乾燥などを行なうことによつて容易
に精製分離し、採取することができる。
ｉｐＯｔｒＯｐｉｃＨＯｒｍＯｎｅ，以下ＨＬＰＨと略
称する。）を産生することを見いだした。このようにし
て誘導生成されたＨＡＣＴＨｌｈＭＳＨおよびＨＬＰＨ
は、公知の精製分離法、例えば、塩析、透析、泊過、遠
心分離、濃縮、凍結乾燥などを行なうことによつて容易
に精製分離し、採取することができる。
更に高度の精製を必要とする場合には、例えば、イオン
交換体への吸着・脱着、ゲルろ過、アフイニテイクロマ
トグラフイー、等電点分画、電気泳動などの公知の方法
を更に組み合せればよく、最高純度のＨＡＣＴＨを採取
することも可能である。このようにして得たＨＡＣＴＨ
は、単一物質で、またはこれにその他の一種若しくは二
種以上の物質を含有せしめ、例えは、注射薬、外用薬、
内服薬、診断薬などとしてヒトの疾患、例えば下垂体前
葉機能低下症などの予防、治療に有利に利用できる。
交換体への吸着・脱着、ゲルろ過、アフイニテイクロマ
トグラフイー、等電点分画、電気泳動などの公知の方法
を更に組み合せればよく、最高純度のＨＡＣＴＨを採取
することも可能である。このようにして得たＨＡＣＴＨ
は、単一物質で、またはこれにその他の一種若しくは二
種以上の物質を含有せしめ、例えは、注射薬、外用薬、
内服薬、診断薬などとしてヒトの疾患、例えば下垂体前
葉機能低下症などの予防、治療に有利に利用できる。
ＨＡＣＴＨの産生量は、Ｓ．Ｍａｔｓｕｋｕｒａｅｔａ
ｌ．，Ｊ．Ｌｌｂ．Ｃｌｌｎ．Ｍｅｄ．，■０１．７７
，４９０〜５００（１９７１）に記載されているラジオ
イムノアツセイ法に準じて測定し、１１ＡＣＴＨの重量
で表示した。ＨＭＳＨおよびＨＬＰＨの産生量は、Ｋ．
Ａｂｅｅｔａｌ．，Ｊ．Ｃｌｌｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，Ｖ
Ｏｌ．４６，ｌ９Ｏ６〜１９１６（１９６７）に記載さ
れているラジオイムノアツセイ法に準じてヒトβ−ＭＳ
Ｈを用いて両ホルモンの全量を測定し、次いで、ゲル泊
過分画によつて得られるヒトβ−ＭＳＨおよびヒトβ上
ＰＨの量比から求めた。以下、２〜３の実施例を述べる
。
ｌ．，Ｊ．Ｌｌｂ．Ｃｌｌｎ．Ｍｅｄ．，■０１．７７
，４９０〜５００（１９７１）に記載されているラジオ
イムノアツセイ法に準じて測定し、１１ＡＣＴＨの重量
で表示した。ＨＭＳＨおよびＨＬＰＨの産生量は、Ｋ．
Ａｂｅｅｔａｌ．，Ｊ．Ｃｌｌｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，Ｖ
Ｏｌ．４６，ｌ９Ｏ６〜１９１６（１９６７）に記載さ
れているラジオイムノアツセイ法に準じてヒトβ−ＭＳ
Ｈを用いて両ホルモンの全量を測定し、次いで、ゲル泊
過分画によつて得られるヒトβ−ＭＳＨおよびヒトβ上
ＰＨの量比から求めた。以下、２〜３の実施例を述べる
。
実施例１
肺癌患者から摘出、細切、分散させて得たヒト肺癌細胞
とリンパ芽球様ナマルバ細胞（Ｎａｍａｌｖａｃａｌｌ
）とを１４０ｍＭＮａＣ１，５４ｍＭＫＣＩ，１ｍＭＮ
ａＨ２Ｐ０４，２ｒｒ１ＭＣａＣ１２を含有する塩類溶
液にそれぞれ約１０１／ｍｌになるようにフラスコ中に
浮遊させ、これに予め紫外線で不活化したセンダイウイ
ルスを含有する前記塩類溶液を氷冷下で混合１７、約５
分後に３ｒＣ恒温水槽に移して、約３紛間攪拌しつつ細
胞融合を起させ、リンパ芽球様ナマルバ細胞にＨＡＣＴ
Ｈ産生能を導入した。
とリンパ芽球様ナマルバ細胞（Ｎａｍａｌｖａｃａｌｌ
）とを１４０ｍＭＮａＣ１，５４ｍＭＫＣＩ，１ｍＭＮ
ａＨ２Ｐ０４，２ｒｒ１ＭＣａＣ１２を含有する塩類溶
液にそれぞれ約１０１／ｍｌになるようにフラスコ中に
浮遊させ、これに予め紫外線で不活化したセンダイウイ
ルスを含有する前記塩類溶液を氷冷下で混合１７、約５
分後に３ｒＣ恒温水槽に移して、約３紛間攪拌しつつ細
胞融合を起させ、リンパ芽球様ナマルバ細胞にＨＡＣＴ
Ｈ産生能を導入した。
このリンーパ芽球様ナマルバ細胞を成長したヌードマウ
スの腹腔内に移植した後、通常の方法で５週間飼育した
。皮下に生じた腫瘤約１５ｇを摘出し、細切した後、ト
リプシン含有の生理食塩水に懸濁して細胞を分散させた
。この細胞を牛脂児血清１０Ｖ／ｖ％ノを補足したＥａ
ｒｌｅ培地１９９（ＰＨ７．２）で洗浄した後、Ｍｔ当
りグルカゴンを０．１μｇを存在せしめた同培地に細胞
濃度約１Ｃｆ′／ｍｌになるように浮遊させ、３５℃で
２（転）間保つてＨＡＣＴＨを産生させた。その後、細
胞を超音波処理し、得られる上清を用７いてＨＡＣＴＨ
．．ｈＭＳＨおよびＨＬＰＨの産生量を測定したところ
、浮遊液Ｔ！Ｌｌ当りそれぞれ２５０μＧｌ５８ＯμＧ
ｌ４Ｏμｇであつた。対照として、ヒト肺癌細胞をヌー
ドマウスに直接移植した後、通常の方法で５週間飼育し
、皮下に生じた腫瘤約５ｇを摘出し、細切、分散させて
得た細胞を用いて同様にＨＡＣＴＨを誘導生成させた後
、ＨＡＣＴＨ，．ｈＭＳＨおよびＨＬＰＨの産生量を測
定したところ、浮遊液Ｍｔ当りそれぞれ６００ｒ１ｇ、
１．２μｇおよび３５０ｒ１ｇであつた。
スの腹腔内に移植した後、通常の方法で５週間飼育した
。皮下に生じた腫瘤約１５ｇを摘出し、細切した後、ト
リプシン含有の生理食塩水に懸濁して細胞を分散させた
。この細胞を牛脂児血清１０Ｖ／ｖ％ノを補足したＥａ
ｒｌｅ培地１９９（ＰＨ７．２）で洗浄した後、Ｍｔ当
りグルカゴンを０．１μｇを存在せしめた同培地に細胞
濃度約１Ｃｆ′／ｍｌになるように浮遊させ、３５℃で
２（転）間保つてＨＡＣＴＨを産生させた。その後、細
胞を超音波処理し、得られる上清を用７いてＨＡＣＴＨ
．．ｈＭＳＨおよびＨＬＰＨの産生量を測定したところ
、浮遊液Ｔ！Ｌｌ当りそれぞれ２５０μＧｌ５８ＯμＧ
ｌ４Ｏμｇであつた。対照として、ヒト肺癌細胞をヌー
ドマウスに直接移植した後、通常の方法で５週間飼育し
、皮下に生じた腫瘤約５ｇを摘出し、細切、分散させて
得た細胞を用いて同様にＨＡＣＴＨを誘導生成させた後
、ＨＡＣＴＨ，．ｈＭＳＨおよびＨＬＰＨの産生量を測
定したところ、浮遊液Ｍｔ当りそれぞれ６００ｒ１ｇ、
１．２μｇおよび３５０ｒ１ｇであつた。
実施例２
下垂体色素嫌性細胞腺腫患者から摘出、細切、分散させ
て得たヒト色素嫌性腺腫細胞とリンパ芽球様ＪＢＬ細胞
とを実施例１の方法に準じて細胞融合させ、リンパ芽球
樹ＢＬ細胞にＨＡＣＴＨ産生能を導入した。
て得たヒト色素嫌性腺腫細胞とリンパ芽球様ＪＢＬ細胞
とを実施例１の方法に準じて細胞融合させ、リンパ芽球
樹ＢＬ細胞にＨＡＣＴＨ産生能を導入した。
この細胞を、ウサギから公知の方法で調製した抗血清を
予め注射し免疫反応を弱めた新生児ハムスターの皮下に
移植し、その後通常の方法で３週間飼育した。皮下に生
じた腫瘤約１０ｇを摘出し、細切した後、コラゲナーゼ
含有の生理食塩水に懸濁して細胞を分散させた。
予め注射し免疫反応を弱めた新生児ハムスターの皮下に
移植し、その後通常の方法で３週間飼育した。皮下に生
じた腫瘤約１０ｇを摘出し、細切した後、コラゲナーゼ
含有の生理食塩水に懸濁して細胞を分散させた。
この細胞をヒト血清５Ｖ／ｖ％を補足したＥａｇｌｅの
最少基本培地（ＰＨ７．２）で洗浄した後、ｍｌ当りバ
ソプレツシンを３μＵ存在せしめた同培地に細胞濃度約
１Ｃｆ′／ｍｌになるように浮遊させ、３７℃に１５１
１寺間保つてＨＡＣＴＨを産生させた。次いで、実施例
１と同様にホルモン産生量を測定したところ、ＨＡＣＴ
Ｈ．．ｈＭＳＨおよびＨＬＰＨは浮遊液ｍｌ当りそれぞ
れ３８０ｐｇ１７４０μＧｌ５ｌＯμｇであつた。対照
としてヒト色素嫌性腺腫細胞をハムスターに移植した後
、３週間飼育し、皮下に生じた腫瘤約３ｇを摘出し、細
切、分散させて得た細胞を用いて同様にＨＡＣＴＨを産
生させ、ホルモン産生量を測定したところＨＡＣＴＨ，
．ｈＭＳＨおよびＨＬＰＨは浮遊液ｍｌ当りそれぞれ７
５０ｒ１ｇ１５６０ｎｇおよび４３０ｒ１ｇであつた。
最少基本培地（ＰＨ７．２）で洗浄した後、ｍｌ当りバ
ソプレツシンを３μＵ存在せしめた同培地に細胞濃度約
１Ｃｆ′／ｍｌになるように浮遊させ、３７℃に１５１
１寺間保つてＨＡＣＴＨを産生させた。次いで、実施例
１と同様にホルモン産生量を測定したところ、ＨＡＣＴ
Ｈ．．ｈＭＳＨおよびＨＬＰＨは浮遊液ｍｌ当りそれぞ
れ３８０ｐｇ１７４０μＧｌ５ｌＯμｇであつた。対照
としてヒト色素嫌性腺腫細胞をハムスターに移植した後
、３週間飼育し、皮下に生じた腫瘤約３ｇを摘出し、細
切、分散させて得た細胞を用いて同様にＨＡＣＴＨを産
生させ、ホルモン産生量を測定したところＨＡＣＴＨ，
．ｈＭＳＨおよびＨＬＰＨは浮遊液ｍｌ当りそれぞれ７
５０ｒ１ｇ１５６０ｎｇおよび４３０ｒ１ｇであつた。
実施例３
新生児ラットの静脈内へ、実施例１の方法に準じてＨＡ
ＣＴＨ産生能を導入したリンパ芽球様．ＢＡＬＬ−１細
胞を移植した後、通常の方法で４週間飼育した。
ＣＴＨ産生能を導入したリンパ芽球様．ＢＡＬＬ−１細
胞を移植した後、通常の方法で４週間飼育した。
生じた腫瘤約３０ｇを摘出し、細切し、分散させた。
この細胞を子牛血清１０Ｖ／ｖ％を補足したＲＰＭＩｌ
６亀培地（ＰＨ７．４）で洗浄した後、セロトニン６１
ｍＭ存在せしめた同培地に細胞濃度約１０７／ｍｌにな
るように浮遊させ、３０℃で４時間保つてＨＡＣＴＨを
産生させた。次いでホルモン産生量を求めたところ、Ｈ
ＡＣＴＨおよびＨＭＳＨは浮遊液ｍｌ当りそれぞれ７３
０μｇおよび９４０μｇであつた。対・照として肺癌細
胞をラットに移植した後、４週間飼育し、生じた腫瘤約
５ｇを摘出し、細切、分散させて得た細胞を用いて同様
にＨＡＣＴＨを産生させた。次いで同様にホルモン産生
量を測定したところＨＡＣＴＨおよびＨＭＳＨは浮遊液
Ｍｔ当りそれぞれ６５０ｎｇおよび１．８μｇであつた
。実施例４成長した普通マウスに約４００レムのエツク
ス線を照射してマウスの免疫反応を弱めた後、その皮下
に実施例２の方法に準じてＨＡＣＴＨ産生能を導入した
リンパ芽球様ＮＡＬＬ−１細胞を移植し、通常の方法で
３週間飼育した。
６亀培地（ＰＨ７．４）で洗浄した後、セロトニン６１
ｍＭ存在せしめた同培地に細胞濃度約１０７／ｍｌにな
るように浮遊させ、３０℃で４時間保つてＨＡＣＴＨを
産生させた。次いでホルモン産生量を求めたところ、Ｈ
ＡＣＴＨおよびＨＭＳＨは浮遊液ｍｌ当りそれぞれ７３
０μｇおよび９４０μｇであつた。対・照として肺癌細
胞をラットに移植した後、４週間飼育し、生じた腫瘤約
５ｇを摘出し、細切、分散させて得た細胞を用いて同様
にＨＡＣＴＨを産生させた。次いで同様にホルモン産生
量を測定したところＨＡＣＴＨおよびＨＭＳＨは浮遊液
Ｍｔ当りそれぞれ６５０ｎｇおよび１．８μｇであつた
。実施例４成長した普通マウスに約４００レムのエツク
ス線を照射してマウスの免疫反応を弱めた後、その皮下
に実施例２の方法に準じてＨＡＣＴＨ産生能を導入した
リンパ芽球様ＮＡＬＬ−１細胞を移植し、通常の方法で
３週間飼育した。
皮下に生じた腫瘤約１５ｇを摘出し、分散させて得られ
た細胞を実施例Ｊ２と同様に処理してＨＡＣＴＨを産生
させた。次いで、ホルモン産生量を測定したところ、Ｈ
ＡＣＴＨおよびＨＬＰＨは浮遊液Ｍｔ当りそれぞれ４８
０μｇおよび３５０ｐｇであつた。対照としてヒト色素
嫌性腺腫細胞をマウスに移植した後、３週間飼育し、生
じた腫瘤約５ｇを摘出し、細切、分散させて得た細胞を
用いて同様にＨＡＣＴＨを産生させた。
た細胞を実施例Ｊ２と同様に処理してＨＡＣＴＨを産生
させた。次いで、ホルモン産生量を測定したところ、Ｈ
ＡＣＴＨおよびＨＬＰＨは浮遊液Ｍｔ当りそれぞれ４８
０μｇおよび３５０ｐｇであつた。対照としてヒト色素
嫌性腺腫細胞をマウスに移植した後、３週間飼育し、生
じた腫瘤約５ｇを摘出し、細切、分散させて得た細胞を
用いて同様にＨＡＣＴＨを産生させた。
次いでホルモン産生能を求めたところ、ＨＡＣＴＨおよ
びＨＬＰＨは浮遊液ｍｌ当りそれぞれ５２０ｎｇおよび
７９０ｎｇであつた。実施例５孔径約０．５ミクロンの
メンブランフイルターを設けた内容量約１０ｍ１のプラ
スチック製円筒型拡散チャンバー内に、実施例１の方法
に準じてＨＡＣＴＨ産生能を導入したリンパ芽球様ＴＡ
ＬＬ一１細胞を生理食塩水て浮遊させ、これを成長した
ラットの腹腔内に埋設した。
びＨＬＰＨは浮遊液ｍｌ当りそれぞれ５２０ｎｇおよび
７９０ｎｇであつた。実施例５孔径約０．５ミクロンの
メンブランフイルターを設けた内容量約１０ｍ１のプラ
スチック製円筒型拡散チャンバー内に、実施例１の方法
に準じてＨＡＣＴＨ産生能を導入したリンパ芽球様ＴＡ
ＬＬ一１細胞を生理食塩水て浮遊させ、これを成長した
ラットの腹腔内に埋設した。
このラットを通常の方法で４週間飼育した後、この拡散
チャンバーを取り出した。
チャンバーを取り出した。
これにより得られたＴＡＬＬ−１細胞の濃度は約７×１
Ｃｆ３／ｍｌであつて、インビトロでの炭酸ガスインキ
ュベーター中で培養する場合の約１σ倍以上にも達する
ことがわかつた。この細胞を実施例３と同様に処理して
ＨＡＣＴＨを産生させた。次いで、ホルモン産生量を求
めたところ、ＨＡＣＴＨ．．ｈＭＳＨおよびＨＬＰＨは
浮遊液ｍｌ当りそれぞれ２８０μｇ、７７０μｇおよび
１６０ｐｇであつた。対照としてヒト肺癌細胞を同様に
拡散チャンバー内に収容し、ラット腹腔内に埋設して同
様に４週間飼育し、細胞濃度約１０７／ｍｌを得、この
細胞を用いて同様にＨＡＣＴＨを産生させ、ホルモン産
生量を求めたところ、ＨＡＣＴＨ，．ｈＭＳＨぉょびＨ
Ｌ．ＰＨは４８０ｒ１ｇ１２．３μｇおよび２５０ｒ１
ｇであつた。
Ｃｆ３／ｍｌであつて、インビトロでの炭酸ガスインキ
ュベーター中で培養する場合の約１σ倍以上にも達する
ことがわかつた。この細胞を実施例３と同様に処理して
ＨＡＣＴＨを産生させた。次いで、ホルモン産生量を求
めたところ、ＨＡＣＴＨ．．ｈＭＳＨおよびＨＬＰＨは
浮遊液ｍｌ当りそれぞれ２８０μｇ、７７０μｇおよび
１６０ｐｇであつた。対照としてヒト肺癌細胞を同様に
拡散チャンバー内に収容し、ラット腹腔内に埋設して同
様に４週間飼育し、細胞濃度約１０７／ｍｌを得、この
細胞を用いて同様にＨＡＣＴＨを産生させ、ホルモン産
生量を求めたところ、ＨＡＣＴＨ，．ｈＭＳＨぉょびＨ
Ｌ．ＰＨは４８０ｒ１ｇ１２．３μｇおよび２５０ｒ１
ｇであつた。
実施例６３７℃で５日間保つたニワトリの受精卵に、実
施例１の方法に準じてヒト肺癌細胞からＨＡＣＴＨ産生
能を導入したリンパ芽球躬ＢＬ細胞を移植した後、３７
℃で１週間保つた。この卵を割卵した後、増殖細胞を採
取し、実施例２と同様に処理してＨＡＣＴＨを産生させ
た。
施例１の方法に準じてヒト肺癌細胞からＨＡＣＴＨ産生
能を導入したリンパ芽球躬ＢＬ細胞を移植した後、３７
℃で１週間保つた。この卵を割卵した後、増殖細胞を採
取し、実施例２と同様に処理してＨＡＣＴＨを産生させ
た。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ ヒト副腎皮質刺激ホルモン産生能を有するヒト由来
のリンパ芽球様細胞をヒト以外の温血動物に移植し、ま
たはその温血動物の体液の供給を受けながら増殖させた
細胞からヒト副腎皮質剌激ホルモンを産生せしめること
を特徴とするヒト副腎皮質刺激ホルモンの製法。 ２ ヒト副腎皮質刺激ホルモン産生能を有するヒト由来
のリンパ芽球様細胞をヒト以外の温血動物に移植し、ま
たはその温血動物の体液の供給を受けながら増殖させた
細胞からヒト副腎皮質刺激ホルモンおよび色素胞剌激ホ
ルモン若しくはヒトリポトロピンのいずれかを産生せし
めることを特徴とするヒト副腎皮質刺激ホルモン含有複
合ホルモンの製法。
Priority Applications (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP55176185A JPS6045850B2 (ja) | 1980-12-13 | 1980-12-13 | ヒト副腎皮質刺激ホルモンの製法 |
| IT49852/81A IT1195331B (it) | 1980-12-13 | 1981-12-07 | Procedimento per la produzione del l'ormone adrenocorticotropico umano |
| KR1019810004772A KR860001591B1 (ko) | 1980-12-13 | 1981-12-07 | 인체 부신피질 자극호르몬의 제법 |
| CH7889/81A CH652745A5 (fr) | 1980-12-13 | 1981-12-10 | Procede pour la production d'hormone adrenocorticotrope humaine. |
| GB8137471A GB2091741B (en) | 1980-12-13 | 1981-12-11 | Process for the production of human adrenocorticotropic hormone |
| FR8123152A FR2495938B1 (fr) | 1980-12-13 | 1981-12-11 | Procede pour la production d'hormone adrenocorticotrope humaine |
| US06/584,017 US4621053A (en) | 1980-07-30 | 1984-02-27 | Process for the production of human peptide hormones |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP55176185A JPS6045850B2 (ja) | 1980-12-13 | 1980-12-13 | ヒト副腎皮質刺激ホルモンの製法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5799526A JPS5799526A (en) | 1982-06-21 |
| JPS6045850B2 true JPS6045850B2 (ja) | 1985-10-12 |
Family
ID=16009130
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP55176185A Expired JPS6045850B2 (ja) | 1980-07-30 | 1980-12-13 | ヒト副腎皮質刺激ホルモンの製法 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6045850B2 (ja) |
| KR (1) | KR860001591B1 (ja) |
| CH (1) | CH652745A5 (ja) |
| FR (1) | FR2495938B1 (ja) |
| GB (1) | GB2091741B (ja) |
| IT (1) | IT1195331B (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6338675A (ja) * | 1986-08-05 | 1988-02-19 | Suzuki Motor Co Ltd | 多気筒エンジンの吸気装置 |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB9015327D0 (en) * | 1990-07-12 | 1990-08-29 | Tan Kim S | Hybridomas |
| GB9105532D0 (en) * | 1991-03-15 | 1991-05-01 | Imutran Ltd | Antibody production |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB2016015B (en) * | 1978-01-22 | 1982-05-06 | Hayashibara Co | Method of preparing interferon and preparations containing interferon |
-
1980
- 1980-12-13 JP JP55176185A patent/JPS6045850B2/ja not_active Expired
-
1981
- 1981-12-07 KR KR1019810004772A patent/KR860001591B1/ko active
- 1981-12-07 IT IT49852/81A patent/IT1195331B/it active
- 1981-12-10 CH CH7889/81A patent/CH652745A5/fr not_active IP Right Cessation
- 1981-12-11 GB GB8137471A patent/GB2091741B/en not_active Expired
- 1981-12-11 FR FR8123152A patent/FR2495938B1/fr not_active Expired
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6338675A (ja) * | 1986-08-05 | 1988-02-19 | Suzuki Motor Co Ltd | 多気筒エンジンの吸気装置 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR860001591B1 (ko) | 1986-10-13 |
| JPS5799526A (en) | 1982-06-21 |
| FR2495938B1 (fr) | 1985-06-21 |
| FR2495938A1 (fr) | 1982-06-18 |
| CH652745A5 (fr) | 1985-11-29 |
| GB2091741A (en) | 1982-08-04 |
| IT1195331B (it) | 1988-10-12 |
| KR830007090A (ko) | 1983-10-14 |
| IT8149852A0 (it) | 1981-12-07 |
| GB2091741B (en) | 1984-07-04 |
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