JP2926409B2 - 癌転移抑制因子の製造方法 - Google Patents

癌転移抑制因子の製造方法

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Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、癌転移抑制因子の製造方法に関するもので
あり、更に詳しくは、培養株化されたヒト造血器由来の
細胞を用いて癌転移抑制因子を産生せしめ、これを採取
することを特徴とする癌転移抑制因子の製造方法に関す
る。
［従来の技術］ 我国の平均寿命は年々延びており、日本統計年鑑（19
87年）によれば、昭和60年の平均寿命は、男子74.78
歳、女子80.48歳である。死因は第一位は癌で、死亡者
の約25％を占めている。
癌の治療法は、主に外科的手術、化学療法、放射線療
法などが行なわれている。しかしながら、これらの方法
によって大部分の治療はできるものの、一部の行き残っ
た癌細胞を撒き散らして癌転移を促進し、より重篤な転
移癌を招来して、却って寿命を縮める場合すらある。
この癌転移が抑制できるなら、癌患者の苦痛を和ら
げ、余命を大幅に延ばすことが可能であると考えられ、
癌転移抑制方法の開発が強く望まれている。
［発明が解決しようとする課題］ 上記したように癌転移抑制方法の開発が望まれてい
る。癌転移抑制方法として、癌転移抑制因子の探索と、
該因子の工業的製造方法を確立しようとするものであ
る。
［課題を解決するための手段］ 本発明者等は、工業的規模で容易に実施しうる癌転移
抑制因子の探索と、該因子の工業的製造方法の確立を目
的に鋭意研究を続けてきた。
その結果、ヒト大腸癌由来の培養株化細胞RPMI 4788
（微工研条寄第2429号）を用いる転移抑制活性で探索す
ることにより、癌転移抑制因子を探索できることを見出
し、更に、癌転移抑制因子産生能を有する培養株化され
たヒト造血器由来の細胞を用いて癌転移抑制因子を産生
せしめ、これを採取することによる癌転移抑制因子の製
造方法を確立して本発明を完成した。
本発明でいう培養株化されたヒト造血器由来の細胞と
は、例えば、「蛋白質・核酸・酵素」第20巻、第６号、
第616乃至643頁（1975年）、JCRBカタログ（1988年）、
ATCCカタログ（1988年）などに記載されているヒト造血
器由来の細胞が適宜選択できる。
培養株化されたヒト造血器由来の細胞としては、例え
ば、Ｔ−細胞、Ｂ−細胞、nonT・nonB細胞、骨髄単球系
細胞などに分類される細胞が適宜選択され、とりわけ、
例えば、CCRF−CEM、HPB−MLT、MOLT−３、MOLT−４、P
12/ICH、TALL−１などのＴ−細胞が高い癌転移抑制因子
産生能を有しており、工業的に製造する上で優れてい
る。
また、これら細胞の癌転移抑制因子産生能を持つ遺伝
子を、例えば、ポリエチンレングリコールやセンダイウ
イルスなどを利用する細胞融合の手段やDNAリガーゼ、
制限酵素（ヌクレアーゼ）、DNAポリメラーゼなどの酵
素を利用する公知の遺伝子組換えの手段などによって、
より容易に継代培養しうる培養株化された細胞に導入し
てその増殖速度を更に高めることも、また、その癌転移
抑制因子産生能を更に高めることも有利に実施できる。
本発明で使用する培養株化されたヒト造血器由来の細
胞を増殖させる方法は、適宜に選択することができる。
例えば、癌転移抑制因子産生能を有するヒト造血器由来
の細胞を栄養培地に接種して増殖させる生体外で行なう
組織培養法や、癌転移抑制因子産生能を有するヒト造血
器由来の細胞をヒト以外の温血動物の体内に移植する
か、または、ヒト以外の温血動物の体内もしくは体外に
取り付けた拡散チャンバー内に移植して、その体液の供
給を受けながら増殖させる生体内で行なう方法などであ
る。
まず、生体外で増殖させる場合について説明する。
この際使用する栄養培地は、ヒト造血器由来の細胞を
接種して増殖しうるものであればよく、例えば、RPMI 1
640培地、イーグル最少基本培地などであり、必要に応
じて、更に、ビタミン、ミネラル、炭水化物、アミノ酸
および哺乳類の血清などを補足して改良することもでき
る。
培養方法は、単層培養法または浮遊培養法が適宜選択
できる。
培養温度は、約20〜40℃、好ましくは約35〜38℃、接
種量は、接種後約１週間で最大細胞発育をみることがで
きるような培地ml当りの細胞数であって、好ましくは培
地ml当り約104〜107個である。
細胞を接種した培地を上記条件で約４〜10日間培養
し、この間培地を定期的に新鮮なものと取替えて栄養物
を充分補充するとともに、培地中に放出された代謝産物
を洗浄または希釈して増殖させるのが望ましい。
次に、生体内で細胞を増殖させる方法について説明す
る。
この方法では、癌転移抑制因子産性能を有する培養株
化されたヒト造血器由来の細胞をヒト以外の温血動物体
内に移植するか、または、その体液の供給を受けること
のできるチャンバー内に収容し、通常の飼育をすれば、
温血動物の体内から供給される栄養物を含有する体液を
利用してその細胞が容易に増殖しうることから、インビ
トロにおける組織培養のように高価な血清などを含む栄
養培地を使わずして、または大幅に節約しても大量の癌
転移抑制因子を生成させることができる。
すなわち、ヒト以外の温血動物を利用する方法は、細
胞増殖中の維持管理が容易なことはもとより、インビト
ロで培養する場合と比較して細胞の増殖が安定している
こと、加うるに細胞当りの癌転移抑制因子産生量が増大
すること、とりわけ２〜10倍、またはそれ以上にも高ま
るので極めて有利である。
この方法に使用する温血動物は、培養株化されたヒト
造血器由来の細胞が増殖し得るものであればよく、例え
ば、ニワトリ、ハトなどの鳥類、イヌ、ネコ、サル、ヤ
ギ、ブタ、ウシ、ウマ、ウサギ、モルモット、ラット、
ハムスター、普通マウス、ヌードマウスなどの哺乳類な
どが使用できる。
これら動物にヒト造血器由来の細胞を移植すると好ま
しくない免疫反応を起こすおそれがあるので、その反応
をできるだけ抑えるために使用する動物は、できるだけ
幼若な状態、即ち卵、胚、胎児、または新生期、幼少期
のものの方が好ましい。
また、これら動物に、例えば、約200〜600レム程度の
エックス線若しくはガンマ線を照射するか、または、抗
血清若しくは免疫抑制剤などを注射するなどの前処置を
ほどこして、免疫反応を弱めて移植してもよい。
使用する動物がヌードマウスの場合には、成長したも
のであっても免疫反応が弱いので、これらの前処置を必
要とすることなく、培養株化されたヒト造血器由来の細
胞が移植でき、急速に増殖できるので特に好都合であ
る。
また、培養株化されたヒト造血器由来の細胞を、例え
ば、先ずハムスターに移植して増殖させた後、この細胞
を更にヌードマウスに移植するなどのように、ヒト以外
の温血動物間で移植して、ヒト造血器由来の細胞の増殖
をより安定化したり、更にそれらから誘導生成される癌
転移抑制因子量を増加させることも自由である。
この場合、同種間、同属間は勿論のこと、同綱間、同
門間移植であってもよい。ヒト造血器由来の細胞を移植
する動物体内の部位は、移植した細胞が増殖し得る部位
であればよく、例えば、尿液腔、静脈、腹腔、皮下など
が自由に選ばれる。
また、直接動物体内にヒト造血器由来の細胞を移植す
ることなく、動物細胞の通過を阻止し得る多孔性の濾過
膜、例えば、孔径約10-7〜10-5mを有するメンブランフ
ィルター、限外濾過膜またはホローファイバーなどを設
けた公知の各種形状、大きさの拡散チャンバーを動物体
内、例えば、腹腔内に埋設して、動物体からの栄養物を
含む体液の供給を受けつつ、そのチャンバー内で前述の
培養株化されたヒト造血器由来の細胞を何れも増殖させ
ることができる。
また、必要に応じて、このチャンバー内の栄養物を含
む溶液を動物体内の体液と接続し潅流させるようにした
チャンバーを、例えば、動物体表に取り付け、チャンバ
ー内のヒト造血器由来の細胞の増殖状態を透視できるよ
うにすることも、また、このチャンバー部分のみを着脱
交換できるようにして、動物を屠殺せずに寿命一杯細胞
を増殖させ、動物固体当りの細胞生産量を更に高めるこ
ともできる。
これらの拡散チャンバーを利用する方法は、ヒト造血
器由来の細胞が動物細胞と直接接触しないので、ヒト造
血器由来の細胞のみが容易に採取できるだけでなく、好
ましくない免疫反応を起こす心配も少ないので、免疫反
応を抑制する前処置の必要もなく、各種温血動物を自由
に利用できる特徴を有している。
移植した動物の維持管理は、その動物の通常の飼育を
続ければよく、移植後と言えども特別の取扱いは何ら必
要としないので好都合である。
ヒト造血器由来の細胞を増殖させるための期間は通常
約１〜10週の期間で目的を達成することができる。
このようにして得られる培養株化されたヒト造血器由
来の細胞数は、動物固体当り約107〜1012、またはそれ
以上に達する。
換言すれば、ヒト以外の温血動物を利用する方法によ
り増殖させたヒト造血器由来の細胞数は、動物固体当り
移植した細胞数の約102〜107倍、またはそれ以上にも達
し、生体外の栄養培地に接種して増殖させる場合の約10
1〜106倍、またはそれ以上にも達して、癌転移抑制因子
の製造のための極めて好都合である。
このようにして増殖させたヒト造血器由来の生細胞を
用いて癌転移抑制因子を産生させる方法は自由である。
それが増殖した動物体内のままで、癌転移抑制因子誘導
剤を作用させることもできる。例えば、腹腔内の腹水に
浮遊状で増殖したヒト造血器由来の細胞に、または皮下
に生じた腫瘍細胞に、癌転移抑制因子誘導剤を直接作用
させて癌転移抑制因子を誘導生成させ、次いで、その腹
水または腫瘍から癌転移抑制因子を精製し採取すればよ
い。
また、ヒト造血器由来の細胞を動物体内から取り出
し、生体外で癌転移抑制因子誘導剤を作用させて癌転移
抑制因子を誘導生成させることもできる。例えば、腹水
中で増殖したヒト造血器由来の細胞を分取し、または皮
下に生じたヒト造血器由来の細胞を含む腫瘍の摘出、分
散し、得られる細胞を約20〜40℃に保った栄養培地に細
胞濃度が約105〜108/mlになるように浮遊させ、これに
癌転移抑制因子誘導剤を作用させることによって癌転移
抑制因子を誘導生成させ、これを精製し採取すればよ
い。
更に、ヒト造血器由来の細胞を拡散チャンバー内で増
殖させた場合には、増殖させた細胞をチャンバー内のま
まで、またはチャンバーから取り出して、癌転移抑制因
子を誘導生成させることもできる。
また、例えば、増殖させたヒト造血器由来の細胞に、
先ず動物体内のままで癌転移抑制因子を誘導生成させた
後、次いで同一動物固体の特定の部位または全体から採
取したヒト造血器由来の細胞に、動物体外で癌転移抑制
因子を誘導生成させる方法、また、１度癌転移抑制因子
の誘導生成に使用した細胞を、更に２度以上癌転移抑制
因子の誘導生成に使用する方法、または、動物体内に埋
設、若しくは接続するチャンバーを交換して、得られる
細胞数を増加させる方法などの方法によって、使用する
動物個体当りの癌転移抑制因子生成量を更に高めること
も自由である。
癌転移抑制因子誘導剤としては、通常、例えばフィト
ヘマグルチニン、コンカナバリンＡ、ポークウィードミ
トーゲン、リポポリサッカリド、リピドＡ、エンドトキ
シン、多糖類、細菌、ウイルス、核酸、ポリヌクレオチ
ドなどのミトーゲンが好適である。
これら癌転移抑制因子誘導剤を用いる場合には、通常
約0.001μg/mlの濃度で使用される。必要ならば、これ
ら誘導剤を二種以上併用して、癌転移抑制因子量を更に
増加させることも、癌転移抑制因子とともに、他のリン
ホカインを同時に生成させることも自由である。
このようにして誘導生成させた癌転移抑制因子は、公
知の精製分離法、例えば、塩析、透析、濾過、遠心分
離、濃縮、凍結乾燥などを行うことによって容易に精製
分離し、採取することができる。更に、高度の精製を必
要とする場合には、例えば、イオン交換体への吸着・溶
出、ゲル濾過、アフィニティクロマトグラフィー、等電
点分画、高速液体クロマトグラフィー、電気泳動などの
公知の方法を更に組み合せればよく、とりわけ、モノク
ローナル抗体を用いたクロマトグラフィーなどにより、
最高純度の癌転移抑制因子を採取することも可能であ
る。
このようにして得られた癌転移抑制因子は、癌転移抑
制因子感受性疾患の予防剤、治療剤などとして有利に利
用できる。
癌転移抑制因子感受性疾患とは、癌転移抑制因子によ
って予防され、若しくは治療される疾患であり、それが
ウイルス性疾患、例えば、流行性結膜炎、ヘルペス性角
膜炎、インフルエンザ、風疹、血清肝炎、エイズなどで
あっても、また、非ウイルス性疾患、例えば、大腸癌、
肺癌、肝癌、骨肉種などの悪性腫瘍、更には、アトピー
性アレルギー、重症筋無力症、膠原病、悪性貧血、関節
リウマチ、全身性エリテマトーデスなどの免疫疾患など
であってもよい。
また、癌転移抑制因子感受性疾患予防剤、若しくは治
療剤は、その目的に応じてその形状を自由に選択でき
る。その一例をあげれば、噴霧剤、点眼剤、うがい剤、
注射剤などの液剤、軟膏、はっぷ剤のようなペースト
剤、粉剤、顆粒剤、カプセル剤、錠剤などの固剤などで
ある。
これらの予防剤、治療剤には、癌転移抑制因子を、通
常、グラム当り１〜10,000,000単位程度の活性を含有せ
しめればよく、必要に応じて癌転移抑制因子とともに他
のリンホカイン、例えば、インターフェロン−α、イン
ターフェロン−β、インターフェロン−γ、ツモア・ネ
クロシス・ファクター、リンホトキシン、インターロイ
キン１、インターロイキン２およびＢ細胞分化因子など
の癌転移抑制因子以外のリンホカイン、更には、他の天
然または合成化学治療剤などの１種または２種以上を有
効成分として含有せしめ、その予防、治療効果を更に高
めることも有利に実施できる。
更に必要ならば、補助剤、増量剤、安定剤などの１種
または２種以上を併用することも随意である。
このようにして製造される本発明の癌転移抑制因子感
受性疾患の予防剤、治療剤は、癌転移抑制剤としてだけ
でなく、例えば、抗ウイルス剤、抗腫瘍剤として、ま
た、抗腫瘍性化学療法剤の抗腫瘍効果増強剤、悪性腫瘍
の再発防止剤、免疫調節剤、免疫疾患治療剤などとして
有利に利用できる。
癌転移抑制因子の活性は、猶本等が「ジャーナル・オ
ブ・キャンサー・リサーチ・クリニカル・オンコロジー
（Journal of Cancer Research Clinical Oncology）」
第113巻、第544乃至549頁（1987年）で報告しているヒ
ト大腸癌由来の培養株化細胞RPMI 4788（微工研条寄第2
429号）を用いる肺転移誘導方法に準じてヌードマウス
に肺転移を起こさせるとともに、これに癌転移抑制因子
含有液を投与して、その転移抑制の強さを求めた。
すなわち、RPMI 4788を２×106個含む生理食塩水0.2m
lをBALB/cヌードマウスの尾静脈に注射し、翌日から癌
転移抑制因子含有液0.1mlを毎日、10日間尾静脈へ注射
し、21日目に屠殺し、肺表面に転移したRPMI 4788の結
節を染色し、その数を計測する。対照は生理食塩水と
し、１供試液につき、ヌードマウス８匹ずつ使用する。
前記条件で、対照の発生結節数が100個以上の場合、こ
の結節数を1/2に減じる活性を癌転移抑制因子の活性1,0
00単位とする。但し、供試液は、これに含まれるインタ
ーフェロン−α、インターフェロン−β、インターフェ
ロン−γ、ツモア・ネクロシス・ファクター−α、ツモ
ア・ネクロシス・ファクター−β、インターロイキン１
およびインターロイキン−２の活性をそれぞれのモノク
ローナル抗体で除去して使用した。
赤血球凝集価は、J.E.Salk著、「ザ・ジャーナル・オ
ブ・イムノロジー（The Journal of Immunology）」第4
9巻、第87頁（1944年）の記載の方法に準じて測定し
た。
以下、本発明を実験を用いて詳細に説明する。
実験 培養株化されたヒト造血器由来の細胞の癌転移抑
制因子産生能の比較 （１）生体外で増殖させた細胞による癌転移抑制因子の
産生 牛胎児血清20V/V％を補足したRPMI 1640培地（pH7.
2）に、培養株化されたヒト由来の各種細胞をそれぞれ
に接種し、37℃で常法に従って培養し、次いで、血清無
添加のRPMI 1640倍地（pH7.2）で洗浄し、同培地に濃度
５×106/mlになるように懸濁した。
このようにして得たヒト由来の各種細胞懸濁液それぞ
れにBCGをml当り10μｇ加え、37℃で１日維持し、これ
にリポポリサッカリドをml当り１μｇを加え、更に、37
℃で１日維持して癌転移抑制因子を誘導させ遠心分離
し、上清を分画分子量6,000の膜で50倍に濃縮して、癌
転移抑制因子の活性を測定し、上清ml当りの活性を算出
した。
結果を第１表にまとめた。
第１表の結果から明らかなように、培養株化されたヒ
ト造血器由来の各種細胞は、癌転移抑制活性産生能を有
する。とりわけ、Ｔ−細胞の産生能の多いことが見い出
された。HPB−MLT細胞（微工研条寄第2430号）は、癌転
移抑制因子産生能が高く、本発明に有利に利用できる。
（２）生体内で増殖させた細胞による癌転移抑制因子の
産生 新生児のハムスターに、ウサギから公知の方法で調製
した抗血清を予め注射し、ハムスターの免疫を弱めた
後、その皮下に培養株化されたヒト造血器由来の細胞を
それぞれ移植して、その後、通常の方法で３週間飼育し
た。皮下に生じた腫瘍を摘出して細切した後、トリプシ
ン含有の生理食塩水に懸濁して細胞を分散、分取した。
得られたそれぞれの細胞を、（１）と同様に懸濁液と
し、同様に活性を測定した。
その結果を第２表にまとめた。
（３）癌転移抑制因子の部分精製 （２）の方法で、生体内で増殖させたHPB−MLT細胞を
用いて、（１）の方法に準じて癌転移抑制因子を産生せ
しめ、遠心分離し、この上清を、分画分子量6,000の膜
を用いて50倍に濃縮し、これをファルマシア社製ゲル
「商品名PBE−94」を用いてクロマトフォーカッシング
を行ない、pH5乃至７の癌転移抑制因子含有画分を採取
し、更にファルマシア社製ゲル「商品名Sephacryl S−2
00」を用いてゲル濾過クロマトグラフィーを行ない、分
子量10,000乃至450,000の癌転移抑制因子高含有画分を
採取、濃縮して、ml当り約2,800,000単位を含有する部
分精製液を活性収率約60％で得た。本品は、ヒト大腸癌
由来のRPMI 4788の肺臓への転移抑制活性を示すのみな
らず、ヒト大腸癌由来のLoVo（ATCC CCL 229）の脾臓へ
の転移抑制活性をも示す。
本品は癌転移抑制因子として、単独で使用するか、ま
たは他のリンホカイン、化学療法剤、更には手術、放射
線治療などと併用して癌患者の治療に有利に利用でき
る。
以下、本発明の２〜３の実施例を述べる。
実施例１ RAMOS細胞（ATCC CRL 1596）を仔牛血清10V/V％を補
足したRPMI 1640倍地（pH7.2）に細胞濃度５×105/mlに
なるよう接種した。
その後、常法に従って、定期的に新鮮な培地と取り替
えながら、37℃で培養し、次いで、新鮮な同培地で洗浄
し、同培地に濃度２×106/mlになるよう懸濁した。これ
にBCGおよびリポポリサッカリドをml当り約10μｇずつ
添加し、37℃で、２日間保って癌転移抑制因子を誘導さ
せた。これを遠心分離し、その上清ml当り、約60単位の
癌転移抑制因子を得た。
実施例２ 新生児のハムスターに、ウサギから公知の方法で調製
した抗血清を予め注射し、ハムスターの免疫を弱めた
後、その皮下にHPB−MLT細胞（微工研条寄第2430号）を
移植し、その後、通常の方法で、５週間飼育した。皮下
に生じた約20gの腫瘍を摘出した後、コラゲナーゼ含有
の生理食塩水に懸濁して、細胞を分散、分取した。
この細胞を、イーグルの最少基本培地で洗浄した後、
37℃に保った同じ組成の培地に、細胞濃度が約２×106/
mlになるように希釈し、これにml当りフィトヘマグルチ
ニン200μｇおよびリピドA5μｇを加え、37℃で、２日
間保って癌転移抑制因子を誘導させた。これを遠心分離
し、上清ml当り、約9,400単位の癌転移抑制因子を得
た。ハムスター１匹当り、約16,500,000単位の癌転移抑
制因子が得られた。
実施例３ 新生児のラットの静脈内へ、MOLT−３細胞（ATCC CRL
1552）を移植した後、通常の方法で４週間飼育した。
皮下に生じた約20gの腫瘍を摘出した後、実施例２と
同様にして分散し、細胞懸濁液を得た。これに、ml当り
センダイウイルス約100赤血球凝集価およびリポポリサ
ッカリド約５μｇを加え、37℃で、２日間保って癌転移
抑制因子を誘導させた。これを遠心分離し、更に超遠
心、膜濾過してウイルスを除去し、その濾液ml当り、約
4,200単位の癌転移抑制因子を得た。ラット１匹当り、
約6,900,000単位の癌転移抑制因子が得られた。
実施例４ 孔径約0.5ミクロンのメンブランフィルターを設けた
内容量約10mlのプラスチック製円筒型チャンバー内に、
TALL−１細胞（JCRB 0086）を生理食塩水で浮遊させ、
これを成長したラットの腹腔内に埋設した。
このラットを、通常の方法で、４週間飼育した後、こ
のチャンバーを取り出した。
この細胞を、実施例１と同様に処理して癌転移抑制因
子を誘導させた。これを遠心分離し、上清ml当り、約1,
600単位の癌転移抑制因子を得た。ラット１匹当り、約
1,800,000単位の癌転移抑制因子が得られた。
実施例５ 37℃で、５日間保ったニワトリの受精卵に、Ｕ−937
細胞（ATCC CRL 1593）を移植した後、37℃で１週間保
った。この卵を割卵した後、増殖細胞を採取し、その細
胞を実施例２と同様に処理して癌転移抑制因子を誘導さ
せた。これを遠心分離し、上清ml当り、約120単位の癌
転移抑制因子を得た。受精卵10個当り、約9,000単位の
癌転移抑制因子が得られた。
［発明の効果］ 本文で述べたごとく、本発明は、ヒト造血器由来の細
胞から癌転移抑制因子の製造方法を確立するものであ
る。
癌転移抑制因子は、癌の転移を抑制し、癌患者の苦痛
を和らげ、余命を延長できるばかりでなく、癌転移抑制
因子感受性疾患、例えば、ウイルス性疾患、悪性腫瘍、
免疫疾患などの予防剤、治療剤などとしても有用であ
り、医薬品業界に与える工業的意義は極めて大きい。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｒ 1:91）

Claims (4)

    (57)【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】下記の理化学的性質を有する癌転移抑制因
    子を産生する能力を有する培養株化されたＴ−細胞、BA
    LL−１細胞、KM−３細胞、Ｕ−937細胞、KG−１細胞お
    よびRAMOS細胞から選ばれるヒト造血器由来の細胞を用
    いて癌転移抑制因子を産生せしめ、これを採取すること
    を特徴とする癌転移抑制因子の製造方法； 理化学的性質： （ａ）ヒト大腸癌由来の培養株化細胞RPMI 4788（微工
    研条寄第2429号）を用いる転移抑制活性を示す、 （ｂ）インターフェロン活性、ツモア・ネクロシス・フ
    ァクター活性、インターロイキン１活性およびインター
    ロイキン２活性を示さない、および （ｃ）ゲル濾過法で分子量10,000乃至450,000の範囲を
    示す。
  2. 【請求項２】ヒト造血器由来の細胞が、ヒト以外の温血
    動物体内に移植されるか、または、ヒト以外の温血動物
    体内もしくは体外に取り付けた拡散チャンバー内に移植
    されて、その温血動物の体液を受けながら増殖して得ら
    れる細胞であることを特徴とする請求項１に記載の癌転
    移抑制因子の製造方法。
  3. 【請求項３】癌転移抑制因子の産生に際し、癌転移抑制
    因子産生能を有する培養株化されたヒト造血器由来の細
    胞に誘導剤を接触させることを特徴とする請求項１また
    は２に記載の癌転移抑制因子の製造方法。
  4. 【請求項４】培養株化されたＴ−細胞、BALL−１細胞、
    KM−３細胞、Ｕ−937細胞、KG−１細胞およびRAMOS細胞
    から選ばれるヒト造血器由来の細胞から得ることのでき
    る下記の理化学的性質を有する癌転移抑制因子； 理化学的性質： （ａ）ヒト大腸癌由来の培養株化細胞RPMI 4788（微工
    研条寄第2429号）を用いる転移抑制活性を示す、 （ｂ）インターフェロン活性、ツモア・ネクロシス・フ
    ァクター活性、インターロイキン１活性およびインター
    ロイキン２活性を示さない、および （ｃ）ゲル濾過法で分子量10,000乃至450,000の範囲を
    示す。
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