JPH02308799A - 癌転移抑制因子の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、癌転移抑制因子の製造方法に関するものであ
り、更に詳しくは、培養株化されたヒト造血器由来の細
胞を用いて癌転移抑制因子を産生せしめ、これを採取す
ることを特（欺とする癌転移抑制因子の製造方法に関す
る。

［従来の技術１ 我国の平均寿命は年々延びており、日本統計年鑑（１９
８７年）によれば、昭和６０年の平均寿命は、男子７４
．７８に’Ｒ，女子８０．４８歳である。死因の第−位
は癌で、死亡者の約２５駕を占めている。

癌の治療法は、主に外科的手術、化学療法、放射線療法
などが行なわれている。しかしながら、これらの方法に
よって大部分の治療はできるものの、一部の生＃残った
癌細胞を撒き散らして癌転移を促進し、より重篤な転移
癌を招来して、却って寿命を縮める場合すらある。

この癌転移が抑制できるなら、癌患者の苦痛を和らげ、
余命を大幅に延ばすことが可能であると考えられ、癌転
移抑制方法の開発が強く望まれている。

［発明が解決しようとするｙ：題Ｊ 上記したように癌転移抑制方法の開発が望まれている。

癌転移抑制方法として、癌転移抑制因子の探索と、該因
子の工業的製造方法を確立しょうとするものである。

［ｎＭを解決するための手段１ 本発明者等は、工業的規模で容易に実施しうる癌転移抑
制因子の探索と、該因子の工業的製造方法の確立を目的
に鋭意研究を続けてきた。

その結果、ヒト大腸癌由来の培養株化細胞ＲＰＭ１４７
８８　（ｍ工研条寄第２４２９号）を用いる転移抑制活
性で探索することにより、癌転移抑制因子を探索できる
ことを見出し、更に、癌転移抑制因子産生能を有する培
養株化されたヒト造血器由来の細胞を用いて癌転移抑制
因子を産生せしめ、これを採取することによる癌転移抑
制因子の製造方法を確立して本発明を完成した。

本発明でいう培養株化されたヒト造血器由来の細胞とは
、例えば、「蛋白質・核酸・酵素」第２０巻、第６号、
第６１６乃至６４３頁（１９７５年）　、ＪＣＲＢカタ
ログ（１９８８年）　、ＡＴＣＣカタログ（１９８８年
）などに記Ｉｉされているヒト造血器由来の細胞が適宜
選択できる。

培養株化されたヒト造血器由来の細胞としては、例えば
、Ｔ−１抱、Ｂ−細胞、ｎｏｎＴ−ｎｏｎＢ細胞、骨髄
単球系細胞などに分類される細胞が適宜選択され、トリ
ワケ、例、Ｉｆ、ＣＣＦｅＦ　−ＣＥＭ、）ＩＰＢ−）
ＩＬＴｌＮＯＬＴ−３、）４０ＬＴ　−４、Ｐ１２／Ｉ
ＣＨ，ＴＡＬＬ−１などのＴ−細胞が高い癌転移抑制因
子産生能を有しており、工業的に製造する上で優れてい
る。

また、これら細胞の癌転移抑制因子産生能を持つ遺伝子
を、例えば、ポリエチレングリコールやセンダイウィル
スなどを利用する細胞融合の手段やＤＮＡリガーゼ、制
限酵素（ヌクレアーゼ）　、ＤＮＡポリメラーゼなどの
酵素を利用する公知の遺伝子組換えの手段などによフて
、より容易に継代培養しうる培養株化された細胞に導入
してその増殖速度を更に高めることも、また、その癌転
移抑制因子産生能を更に高めることも有利に実施できる
。

本発明で使用する培養株化されたヒト造血器由来の細ｔ
ｉ！ｅ増殖きせる方法は、適宜に選択することができる
。例えば、癌転移ｔＲｊ＋ａｌ因子産生能を有するヒト
造血器由来の細胞を栄養培地に接種して増殖きせる生体
外で行なう組織培養法や、癌転移抑制因子産生能を有す
るヒト造血器由来の細胞をヒト以外の温血動物の体内に
移植するか、または、ヒト以外の温血動物の体内もしく
は体外に取り付けた拡散チャンバー内に移植して、その
体液の供給を受けながら増殖きせる生体内で行なう方法
などである。

まず、生体外で増殖させる場合について説明する。

この際使用する栄養培地は、ヒト造血器由来の細胞を接
種して増殖しうるものであればよく、例えば、ＲＰＭＩ
　１６４０培地、イーグル最少基本培地などであり、必
要に応じて、更に、ビタミン、ミネラル、炭水化物、ア
ミノ酸および哺乳類の血清などを補足して改良すること
もできる。

培養方法は、単層培養法または浮遊ｉｌｌ養法が適宜選
択できる。、 培ｇ＆温度は、約２０〜４０℃、好ましくは約３５〜３
８℃、接種量は、接［＊約１週間で最大細胞発胃をみる
ことがでオるような培地−ｌ当りの細胞数であって、好
ましくは培地１１当り約１０４〜１０’個である。

細胞を接種した培地を上記条件で約４〜１０日間培養し
、この間培地を定期的に新鮮なものと取替えて栄養物を
充分補給するとともに、培地中に放出された代謝産物を
洗浄または希釈して増殖させるのが望ましい。

次に、生体内で細胞を増殖させる方法について説明する
。

この方法では、癌転移抑制因子産生能を有する培養株化
されたヒト造血器由来の細胞をヒト以外の温血動物体内
に移植するか、または、その体液の供給を受けることの
できるチャンバー内に収容し、通常の＃ＪＷをすれば、
温血動物の体内から供給される栄養物を含有する体液を
利用してその細胞が容易に増殖しうろことから、インビ
トロにおける組織培養のように高価な血清などを含む栄
養培地を使わずして、または大幅に節約しても大量の癌
転移抑制因子を生成きせることができる。

すなわち、ヒト以外の温血動物を利用する方法は、細胞
増殖中の維持管理が容易なことはもとより、インビトロ
で培養する場合と比較して細胞の増殖が安定しているこ
と、加つるに細胞当りの癌転移抑制因子産生量が増大す
ること、とりわけ２〜１０倍、またはそれ以上にも高ま
るので極めて有利である。

この方法に使用する温血動物は、培養株化されたヒト造
血器由来のＩＩ胞が増殖し得るものであればよく、例え
ば、ニワトリ、ハトなどの鳥類、イヌ、ネコ、サル、ヤ
ギ、ブタ、ウシ、ウマ、ウサギ、モルモット、ラット、
ハムスター、普通マウス、ヌードマウスなどの哺乳類な
どが使用できる。

これら動物にヒト造血器由来の細胞を移植すると好まし
くない免疫反応を起こすおそれがあるので、その反応を
で静るだけ抑えるために使用する動物は、できるだけ幼
若な状態、即ち卵、胚、胎児、または新生期、幼少期の
ものの方が好ましい。

また、これら動物に、例えば、約２００〜６００レム程
度のエックス線若しくはガンマ線を照射するか、または
、抗血清若しくは免疫抑制剤などを注射するなどの前処
置をほどこして、免疫反応を弱めて移植してもよい。

使用する動物がヌードマウスの場合には、成長したもの
であっても免疫反応が弱いので、これらの前処置を必要
とすることなく、培養株化されたヒト造血器由来の細胞
が移植でき、急速に増殖できるので特に好都合である。

また、培養株化されたヒト造血器由来の細胞を、例えば
、先ずハムスターに移植して増殖きせた後、この細胞を
更にヌードマウスに移植するなどのように、ヒト以外の
温血動物間で移植して、ヒト造血器由来の細胞の１ｆｆ
殖をより安定化したり、更にそれらから誘導生成される
癌転移抑制因子量を増加させることも自由である。

この場合、同種間、同属間は勿論のこと、同綱間、同門
間移植であフてもよい。ヒト造血式由来の細胞を移植す
る動物体内の部位は、移植した細胞が増殖し得る部位で
あればよく、例えば、尿液腔、静脈、腹腔、皮下などが
自由に選ばれる。

また、直接動物体内にヒト造血器由来の細胞を移植する
ことなく、動物細胞の通過を阻止し得る多孔性の濾過膜
、例えば、孔径的１０−７〜１０”−を有するメンブラ
ンフィルタ−１限外濾過膜またはホローファイバーなど
を設けた公知の各種形状、大きざのに敢チャンバーを動
物体内、例えば、腹腔内に埋設して、動物体からの栄養
物を含む体液の供給を受けつつ、そのチャンバー内で前
述の培養株化されたヒト造血器由来の細胞を何れも増鼎
させることができる。

また、必要に応じて、このチャンバー内の栄養物を含む
溶液を動物体内の体液と接続し７ａ流きせるようにした
チャンバーを、例えば、動物体表に取り付け、チャンバ
ー内のヒト造血器由来の細胞の増殖状態を透視できるよ
うにすることも、また、このチャンバ一部分のみを着脱
交換できるようにして、動物を屠殺せずに寿命一杯細胞
を増殖させ、動物固体当りの細胞生産量を更に高めるこ
ともできる。

これらの拡散チャンバーを利用する方法は、ヒト造血器
由来の細胞が動物細胞と直接接触しないので、ヒト造血
器由来の細胞のみが容易に採取できるｔ二けでなく、好
ましくない免疫反応を起こす心配も少ないので、免疫反
応を抑制する前処置の必要もなく、各種温血動物を自由
に利用できる特徴を有している。

移植した動物の維持管理は、その動物の通常の飼育を続
ければよく、移植後と言えども特別の取扱いは何ら必要
としないので好都合である。

ヒト造血器由来の細胞を増殖ざ廿るための期間は通常約
１〜１０ｉの期間で目的を達成することができる。

このようにして得られる培養株化されたヒト造血器由来
の細胞数は、動物固体当り約１０７〜１０１２、または
それ以上に達する。

換言すれば、ヒト以外の温血動物を利用する方法により
増殖させたヒト造血善由来の細胞数は、動物固体当り移
植した細胞数の約１０２〜１０７倍、またはそれ以上に
も達し、生体外の栄養培地に接種して増殖きせる場合の
約１０１〜１０６倍、またはそれ以上にも達して、癌転
移抑制因子の製造のため極めて好都合である。

このようにして増殖させたヒト造血器由来の生細胞を用
いて癌転移抑制因子を産生させる方法は自由である。そ
れが増殖した動物体内のままで、癌転移抑制因子誘導剤
を作用させることもできる。

例えば、腹腔内の腹水に浮遊状で増殖したヒト造血器由
来の細胞に、または皮下に生じたＩｌｌ瘍細胞に、癌転
移抑制因子誘導剤を直接作用させて癌転移抑制因子を誘
導生成させ、次いで、その腹水または闘瘍から癌転移抑
制因子を精製し採取すればよい。

また、ヒト造血器由来の細胞を動物体内から取り出し、
生体外で癌転移抑制因子誘導剤を作用させて癌転移抑１
’１ｌｌＪ因子を誘導生成きせることもできる。例えば
、腹水中で増殖したヒト造血器由来の細胞を分取し、ま
たは皮下に生じたヒト造血器由来の細胞を含む腫瘍を摘
出、分散し、得られる細胞を約２０〜４０℃に保った栄
養培地に細胞濃度が約１０５〜１０８／ｍｌになるよう
に浮遊させ、これに癌転移抑制因子誘導剤を作用きせる
ことによって癌転移抑制因子を誘導生成させ、これを精
製し採取すればよい。

更に、ヒト造血器由来の細胞を拡散チャンバー内で増殖
させた場合には、増殖させたｍ胞をチャンバー内のまま
で、またはチャンバーから取り出して、癌転移抑制因子
を誘導生成させることもできる。

また、例えば、増殖させたヒト造血器由来の細胞に、先
ず動物体内のままで癌転移抑制因子を誘導生成させた後
、次いで同一動物固体の特定の部位または全体から採取
したヒト造血器由来の細胞に、動物体外で癌転移抑制因
子を誘導生成させる方法、また、１度癌転移抑制囚子の
び導生成に使用した細胞を、更に２度以上癌転移抑制因
子の誘導生成に使用する方法、または、動物体内に埋設
、若しくは接続するチャンバーを交換して、得られる細
胞数を増加させる方法などの方法によって、使用する動
物個体当りの癌転移抑制因子生成量を更に高めることも
自由である。

癌転移抑制因子誘導剤としては、通常、例えばフィトヘ
マグルチニン、コンカナバリンＡ１ボークウイードミト
ーゲン、リボポリサツカリド、リビドＡ１エンドトキシ
ン、多種類、ｍｍ、ウィルス、核酸、ポリヌクレオチド
などのミトーゲンが好適である。

これら癌転移抑制因子誘導剤を用いる場合にＬよ、通常
約０．００１　ｕ　ｇ〜Ｌｏｎｇ／ｍｌの濃度で使用さ
れる。

必要ならば、これら誘導剤を二種以上併用して、癌転移
抑制因子量を更に増加きせることも、癌転移抑制因子と
ともに、他のリンホカインを同時に生成させることも自
由である。

このようにして誘導生成させた癌転移抑制因子は、公知
の′ｔｆ４製分離製分側法ば、塩析、透析、濾過、遠心
分離、製糊、凍結乾燥などを行うことによって容易に精
製分離し、採取することができる。

更に、高度の精製を必要とする場合には、例えば、イオ
ン交換体への吸着・溶出、ゲル濾過、アフィニティクロ
マトグラフィー、等電点分画、高ｉ！！液体クロマトグ
ラフィー、電気泳動などの公知の方法を更に組み合せれ
ばよく、とりわけ、モノクローナル抗体を利用したクロ
マトグラフィーなどにより、最高純度の癌転移抑制因子
を採取することも可能である。

このようにして得られた癌転移抑制因子は、癌転移抑制
因子感受性疾患の予防剤、治療剤などとして有利に利用
できる。

癌転移抑制因子感受性疾患とは、癌転移抑制因子によっ
て予防され、若しくは治療される疾患であり、それがウ
ィルス性疾患、例えば、流行性結膜炎、ヘルペス性角膜
炎、インフルエンザ、風疹、血清肝炎、エイズなどであ
っても、また、非ウィルス性疾患、例えば、大腸癌、肺
癌、肝癌、骨肉腫などの悪性腫瘍、更には、アトピー性
アレルギー、重症筋無力症、膠原病、悪性貧血、関節リ
ウマチ、全身性エリテマトーデスなどの免疫疾患などで
あってもよい。

また、癌転移抑制因子感受性疾患予防剤、若しくは治療
剤は、その目的に応じてその形状を自由に選択できる。

その−例をあげれば、噴霧剤、点眼剤、うがい剤、注射
剤などの液剤、軟膏、はつぶ剤のようなペースト剤、粉
剤、顆粒剤、カプセル剤、錠剤などの固剤なとである。

これら予防剤、治療剤には、癌転移抑制因子を、通常、
ダラム当り１〜１０．ＯＯｏ、０００単位程度の活性を
含有せしめればよく、必要に応じて癌転移抑制因子とと
もに他のリンホカイン、例えば、インターフェロン−α
、インターフェロン−β、インターフェロン−γ、ツモ
ア・ネクロシス０ファクター、リンホトキシン、インタ
ーロイキン１、インターロイキン２およびＢ細胞分化因
子などの癌転移抑制因子以外のリンホカイン、更には、
他の天然または合成化学治療剤などの１８１または２１
Ｍ以上を有効成分として含有せしめ、その予防、治療効
果を更に高めることも有利に実施できる。

更に必要ならば、補助剤、増量剤、安定剤などの１１１
または２種以上を併用することも随意である。

このようにして製造される本発明の癌転移抑制因子感受
性疾患の予防剤、治療剤は、癌転移抑制剤としてだけで
なく、例えば、抗ウィルス剤、抗腫瘍剤として、また、
抗腫瘍性化学療法剤の抗腫瘍効果増強剤、悪性１１ｇｌ
１の再発防止剤、免疫調節剤、免疫疾患治療剤などとし
て有利に利用できる。

癌転移抑制因子の活性は、猶本等が「ジャーナル・オン
・キャンサー・リサーチ・クリニカル・オンコロジー（
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅ５ｅａｒｃ
ｈ　Ｃ１１ｎｉｃａｌ　Ｏｎｃｏｌｏｇｙ）　Ｊ第１１
３巻、第５４４乃至５４９頁（１９８７年）で報告して
いるヒト大腸癌由来の培養株化細胞ＲＰＭ１４７８８　
（黴工研条寄第２４２９号）を用いる肺転移誘導方法に
準じてヌードマウスに肺転移を起こさせるとともに、こ
れに癌転移抑制因子含有液を投与して、その転移抑制の
強ざを求めた。

すなわち、ＲＰＭＩ　４７８８を２　Ｘ　１０６個含む
生理食塩水０．２＋＊ｌをＢＡＬＢ／Ｃヌードマウスの
尾静脈に注射し、翌日から癌転移抑制因子含有［０，１
ｍｌを毎日、１０日間尾静脈へ注射し、２１日目に層殺
し、肺表面に転移したＲＰＭＩ　４７８８の結節を染色
し、その数を計測する。対照は生理食塩水とし、１供試
液につき、ヌードマウス８匹ずつ使用する。前記条件で
、対照の発生結節数が１００個以上の場合、この結節数
を１／２に減じる活性を癌転移抑制因子の活性１，００
０単位とする。但し、供試液は、これに含まれるインタ
ーフェロン−α、インターフェロン−β、インターフェ
ロン−γ、ツモア・ネクロシスφファクター−α、ツモ
ア・ネクロシス・ファクター−β、インターロイキン１
およびインターロイキン２の活性をそれぞれのモノクロ
ーナル抗体で除去して使用した。

赤血球凝集価は、Ｊ、Ｅ、５ａｌｋ著、「ザ・ジャーナ
ル◆オン帝イムノロジー（Ｔｈｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏ
ｆ　Ｉｍｍｕｎ。

１ｏｇｙ）　Ｊ第４９巻、第８７頁（１９４４年）の記
載の方法に準じて測定した。

以下、本発明を実験を用いて詳細に説明する。

実験　培養株化されたヒト造血器由来の細胞の癌転移抑
制因子産生能の比較 （１）生体外で増殖きせた細胞による癌転移抑制因子の
産生 牛胎児血清２０Ｖ／Ｖ％ヲ補足Ｌ　ｉ、＝ＲＰＭＩ　１
６４０培地（ｐＨ７，２）に、培養株化されたヒト由来
の各種細胞をそれぞれに接種し、３７℃で常法に従って
培養し、次イテ、血清無添加ノＲＰＭＩ　１６４０培地
（ｐＨ１７゜２）で洗浄し、同培地に濃度５Ｘ１０”／
ｍｌになるように懸濁した。

このようにして得たヒト由来の各種細胞懸濁液それぞれ
にＢＣＧをｍｌ当り１０ｕｇ加え、３７℃で１日剥持し
、これにリボポリサツカリドを１１当り１μ（を加え、
更に、３７℃７１日維持して癌転移抑制Ｖ子を誘導させ
遠心分離し、上清を分画分子量６．（００の膜で５０倍
に濃縮して、癌転移抑制因子の炉性を測定し、上溝１当
りの活性を算出した。

結果を第１表にまとめた。

第　　　　１　　　　表 【 １１！１表の結果から明らかなように、培養株化された
ヒト造血器由来の′？！ｒ８１Ｉｆｌ胞は、癌転移抑制
活性産生能を有する。とりわけ、Ｔ　−ｔｔｍ　Ｆｐ、
の産生能の多いことが見い出された。）ＩＰＢ　−）Ｉ
ＬＴ細胞（黴工研条嵜第２４３０号）は、癌転移抑制因
子産生能が高く、本発明に有利に利用できる。

（２）生体内で増殖させた細胞による癌転移抑制因子の
産生 新生児のハムスターに、ウサギから公知の方法で調製し
た抗血清を予め注射し、ハムスターの免疫を弱めた後、
その皮下に培養株化されたヒト造血器由来の細胞をそれ
ぞれ移植して、その後、通常の方法で３週間飼胃した。

皮下に生じた１１邊を摘出して細切した後、トリプシン
含有の生理食塩水に１！！濁して細胞を分散、分取した
。

得られたそれぞれの細胞を、（ｌ）と同様に！！濁液と
し、同様に活性を測定した。

その結果を第２表にまとめた。

第２表 （３）癌転移抑制因子の部分精製 （２）の方法で、生体内で増殖きせた）ＩＰＢ−）ＩＬ
Ｔ細胞を用いて、（１）の方法に準じて癌転移抑制因子
を産生せしめ、遠心分離し、この上清を、分画分子量ｅ
、ｏｏｏの膜を用いて５０倍に濃縮し、これをファルマ
シア社製ゲル「商品名ＰＲＥ　−９４、を用いてクロマ
トフォー力ツシングを行ない、ｐｉ（５乃至７の癌転移
抑制因子高含有画分を採取し、更にファルマシア社製ゲ
ル「商品名５ｅｐｈａｃｒｙｌ　Ｓ−２００Ｊを用いて
ゲル濾過クロマトグラフィーを行ない、分子量１０，０
００乃至４５０，０００の癌転移抑制因子高含有画分を
採取、濃縮して、■ｌ当り約２，８００，０００単位を
含有する部分精製液を活性収率約６０駕で得な。

水晶ハ、ヒト大１［由来）ＲＰＭＩ　４７８８ノ％Ｍｍ
ヘノ転移抑制活性を示すのみならず、ヒト大腸癌由来の
ＬｏＶｏ　（ＡＴＣＣＣ，ＣＬ　２２９）の肝臓への転
移抑制活性をも示す。

水晶は癌転移抑制因子として、単独で使用するか、また
は他のリンホカイン、化学療法剤、更には手術、放射線
治療などと併用して癌患者の治療に有利に利用できる。

以下、本発明の２〜３の実施例を述べる。

実施例ｌ ＲＡＭ０Ｓ細胞（ＡＴＣＣＣＲＬ　１５９６）　！仔牛
血清１０Ｖ／Ｖ％を補足したＲＰＭＩ　１６４０培地（
ｐＨ７，２）に細胞濃度５Ｘ　１０５／ｍｌになるよう
ｔｉｅ檎した。

その後、常法に従って、定期的に新鮮な培地と取り替え
ながら、３７℃で培養し、次いで、新鮮な同培地で洗浄
し、同培地に濃度２Ｘ１０６／ｍｌになるよう！！濁し
た。これにＢＣＧおよびリボポリサツカリドを膳ｌ当り
約１０μｇずつ添加し、３７℃で、２日間保って癌転移
抑制因子を誘導させた。これを遠心分離し、その上清−
１当り、約６０単位の癌転移抑制因子を得た。

実施例２ 新生児のハムスターに、ウサギから公知の方法で調製し
た抗血清を予め注射し、ハムスターの免疫を弱めた後、
ソノ皮下ニＨＰＢ　　ＭＬＴＩｉｒ！　（黴工研条寄第
２４３０号）を移植し、その後、通常の方法で、５′ｓ
間飼育した。皮下に生じた約２０ｇの腫瘍を摘出した後
、コラゲナーゼ含有の生理食塩水に！！濁して、細胞を
分散、分取した。

この細胞を、イーグルの最少基本培地で洗浄した後、３
７℃に保った同じ組成の培地に、細胞濃度が約２　Ｘ　
１０’／■ｌになるように希釈し、これに■ｌ当りフィ
トへマグルチニン２００μｇおよびリビドＡ５μｇを加
え、３７℃で、２日間保って癌転移抑制因子を誘導させ
た。これを遠心分離し、上清ｍｌ当り、約９，４００単
位の癌転移抑制因子を得た。ハムスター１匹当り、約１
６．５００，０００単位の癌転移抑制因子が得られた。

実施例３ 新生児のラットの静脈内へ、ＭＯＬＴ　−３細胞（ＡＴ
ＣＣＣＲＬ　１５５２）を移植した後、通常の方法で４
週間飼育した。

皮下に生じた約２０ｇの１１１瘍を摘出した後、実施例
２と同様にして分散し、細胞懸濁液を得た。これに、ｍ
ｌ当りセンダイウィルス約１００赤血ｆＩＩｉ集価およ
びリボポリサツカリド約５μｇを加え１．３７℃で、２
日間保って癌転移抑制因子を誘導させた。

これを遠心分離し、更に超遠心、膜濾過してウィルスを
除去し、その濾液ｍｌ当り、約４　、２００単位の癌転
移抑制因子を得た。ラット１匹当り、約６゜９００　、
０００単位の癌転移抑制因子が得られた。

実施例４ 孔径約０．５ミクロンのメンブランフィルタ−を設けた
内容盟約１０ｍ１のプラスチック製円筒型チャンバー内
に、ＴＡＬＬ−１細胞（ＪＣＲ８００８６）を生理食塩
水で浮遊させ、これを成長したラットの腹腔内に埋設し
た。

このラットを、通常の方法で、４週間飼育した後、この
チャンバーを取り出した。

この細胞を、実施例１と同様に処理して癌転移抑制因子
を誘導させた。これを遠心分離し、上清■ｌ当り、約１
，６００単位の癌転移抑制因子を得た。

ラット１匹当り、約１，８００，０００単位の癌転移抑
制因子が得られた。

実施例５ ３７℃で、５日間保ったニワトリの受精卵に、υ−９３
７細胞（ＡＴＣＣＣＲＬ　１５９３）を移植した後、３
７℃で１Ｍ間保った。この卵を割卵した後、増殖細胞を
採取し、その細胞を実施例２と同様に処理して癌転移抑
制因子を誘導させた。これを遠心分離し、上清−１当り
、約１２０単位の癌転移抑制因子を得た。

受精卵１０個当り、約９，０００単位の癌転移抑制因子
が得られた。

［発明の効果］ 本文で述べたごとく、本発明は、ヒト造血器由来の細胞
から癌転移抑制因子の製造方法を確立するものである。

癌転移抑制因子は、癌の転移を抑制し、癌患者の苦痛を
和らげ、余命を延長できるばかりでなく、癌転移抑制因
子感受性疾患、例えば、ウィルス性疾患、悪性［！４ｔ
ｐＡ１免疫疾患などの予防剤、治療剤などとしても有用
であり、医薬品業界に与える工業的意義は極めて大きい
。

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. （１）癌転移抑制因子産生能を有する培養株化されたヒ
   ト造血器由来の細胞を用いて癌転移抑制因子を産生せし
   め、これを採取することを特徴とする癌転移抑制因子の
   製造方法。
2. （２）ヒト造血器由来の細胞が、ヒト以外の温血動物体
   内に移植されるか、または、ヒト以外の温血動物体内も
   しくは体外に取り付けた拡散チャンバー内に移植されて
   、その温血動物の体液を受けながら増殖して得られる細
   胞であることを特徴とする特許請求の範囲第（１）項記
   載の癌転移抑制因子の製造方法。
3. （３）ヒト造血器由来の細胞が、Ｔ−細胞に分類される
   細胞であることを特徴とする特許請求の範囲第（１）項
   または第（２）項記載の癌転移抑制因子の製造方法。
4. （４）癌転移抑制因子の産生に際し、癌転移抑制因子産
   生能を有する培養株化されたヒト造血器由来の細胞に誘
   導剤を接触させることを特徴とする特許請求の範囲第（
   １）項、第（２）項または第（３）項記載の癌転移抑制
   因子の製造方法。
5. （５）癌転移抑制因子が、ヒト大腸癌由来の培養株化細
   胞ＲＰＭＩ４７８８（微工研条寄第２４２９号）を用い
   る転移抑制活性を示し、インターフェロン活性、ツモア
   ・ネクロシス・ファクター活性、インターロイキン１活
   性およびインターロイキン２活性を示さず、ゲル濾過法
   で分子量１０，０００乃至４５０，０００の範囲にある
   物質であることを特徴とする特許請求の範囲第（１）項
   、第（２）項、第（３）項または第（４）項記載の癌転
   移抑制因子の製造方法。