JP2532025B2 - 新リンホカインｉｉｉを有効成分とする抗腫瘍作用を有するリンホカインの活性増強剤 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、ヒトインターフェロン
共存下でＫＢ細胞に対して細胞増殖抑制活性を有する新
リンホカインＩＩＩの用途に関する。更に詳細には、新
リンホカインＩＩＩを有効成分とする抗腫瘍作用を有す
るリンホカインの活性増強剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】腫瘍細胞に対して細胞障害活性を有する
リンホカインとしては、リンホトキシンやツモア・ネク
ロシス・ファクターなどが知られている。

【０００３】リンホトキシンは、青木隆一ほか共著『リ
ンホカイン』、新免疫学叢書６、第８７〜１０５頁（１
９７９年）、医学書院、ブルーム・ビー・アール（Ｂｌ
ｏｏｍ Ｂ．Ｒ．）とグレイド・ピー・アール（Ｇｌａ
ｄｅ Ｐ．Ｒ．）との共編『イン・ビトロ・メソッズ・
イン・セルメディエイテッド・イムニティー（Ｉｎｖｉ
ｔｒｏ ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ ｃｅｌｌ−ｍｅｄｉａ
ｔｅｄ ｉｍｍｕｎｉｔｙ）』、アカデミック・プレス
（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ）（１９７１年）およ
び『セルラー・イムノロジー（Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｉｍ
ｍｎｏｌｏｇｙ）』、第３８巻、第３８８〜４０２頁
（１９７８年）などに記載され、ツモア・ネクロシス・
ファクターは、カーズウェル・イー・エイ（Ｃａｒｓｗ
ｅｌｌ Ｅ．Ａ．）による『プロシーディングズ・オブ
・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシーズ
・オブ・ザ・ユー・エス・エイ（Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇ
ｓｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ
ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｕ．Ｓ．
Ａ．）』、第７２巻、第９号、第３６６６〜３６７０頁
（１９７５年）およびイー・ピック（Ｅ．Ｐｉｃｋ）編
『ツモア・ネクロシス・ファクター・イン・リンホカイ
ンズ（Ｔｕｍｏｒ Ｎｅｃｒｏｓｉｓ Ｆａｃｔｏｒ
ｉｎ Ｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅｓ）』、第ＩＩ巻、第２３
５〜２７２頁、アカデミック・プレス（Ａｃａｄｅｍｉ
ｃ Ｐｒｅｓｓ）（１９８１年）などに記載されてい
る。

【０００４】また、最近、大西治夫等は、特開昭５８−
１４６２９３号公報で、本発明者等は特開昭６０−１２
６２２８号公報でリンホカインの一種である抗腫瘍性糖
蛋白質を明らかにしている。

【０００５】本発明者等は、リンホカインについて多年
研究してきた。その結果、従来知られているこれらリン
ホカインとは全く違った理化学的性質を有する新リンホ
カインＩＩＩの存在を認め、その製造方法を確立し、さ
らにインターフェロン共存下での各種悪性腫瘍細胞に対
する著しい細胞障害活性を認め、その用途を確立して本
発明を完成した。

【０００６】即ち、本発明は、理化学的性質が、 分子量 １５，０００±２，０００他 等電点 ｐＩ＝４．５±０．５ 易動度 Ｄｉｓｃ−ＰＡＧＥで、Ｒｆ＝０．７３±０．０５ 紫外線吸収スペクトル ２８０ｎｍ付近に最大吸収 溶剤に対する溶解性 水、生理食塩水またはリン酸塩緩衝液に可溶 エチルエーテル、酢酸エチルまたはクロロホルムに難溶
乃至不溶 呈色反応 ローリー法またはミクロビューレット法で蛋白質陽性反
応を示し、フェノール硫酸法またはアントロン硫酸法で
糖質陽性反応を示す ＫＢ細胞に対する細胞増殖抑制活性、 Ｌ₉₂₉細
胞に対する細胞障害活性、インターロイキン活性および
インターフェロン活性を実質的にいずれも示さず、ヒト
αーインターフェロン共存下でＫＢ細胞に対して細胞増
殖抑制活性を示す 水溶液での活性安定性 ｐＨ７．２で３０分間保持する条件により６０℃まで安
定、４℃で１６時間保持する条件によりｐＨ２．０乃至
１１．０の範囲で安定 −１０℃での凍結貯蔵で１カ月以上安定 である新リンホカインＩＩＩ（本明細書を通じて、本物
質を新リンホカインＩＩＩと言う。）の用途に関する。

【０００７】新リンホカインＩＩＩの製造方法は、例え
ば新リンホカインＩＩＩ産生能を有するヒト由来の細
胞、例えば白血球、リンパ球、培養株化された細胞など
に誘導剤を作用させて生成せしめればよい。

【０００８】ヒト由来の白血球、リンパ球は、ヒトから
採取した血液を分離して調製すればよい。

【０００９】培養株化されたヒト由来の細胞は、常法に
したがって生体外（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）で増殖させた細
胞が使用できる。

【００１０】しかしながら、本発明の場合には、培養株
化された細胞の増殖に際し、ヒト以外の温血動物体内に
直接移植するか、または拡散チャンバー内へ接種して、
その温血動物の体液を受けながら増殖させる方が望まし
い。

【００１１】即ち、生体外（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）で増殖
させる場合とは違って、高価な血清などを含む栄養培地
が不要、または大幅に節約できるばかりでなく、細胞増
殖中の維持管理も極めて容易であり、その上、得られた
細胞から誘導生成される新リンホカインＩＩＩはその活
性が高い特徴を有している。

【００１２】ヒト以外の温血動物を利用する方法は、培
養株化されたヒト由来の細胞を、ヒト以外の温血動物体
内に移植し、あるいは、その動物の体液の供給を受ける
ことのできる拡散チャンバーを、動物体内に埋設して通
常の飼育をすれば、温血動物体から供給される栄養物を
含有する体液を利用してその細胞が容易に増殖しうるの
である。

【００１３】更に、生体外（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）で増殖
させる場合と比較して、この細胞の増殖が安定であるこ
と、その増殖速度が大きいこと、得られる細胞量が多い
こと、また、細胞当たりの新リンホカインＩＩＩの収量
が著しく増加することも大きな特徴である。

【００１４】本発明で使用する培養株化されたヒト由来
の細胞は、ヒト以外の温血動物体内に移植して容易に増
殖し得て、しかも新リンホカインＩＩＩ産生能を有する
細胞であればよく、例えば『蛋白質核酸酵素』、第２０
巻、第６号、第６１６〜６４３頁（１９７５年）に記載
されているヒト由来の各種株化細胞を用いることができ
る。とりわけ、『ジャーナル・オブ・クリニカル・マイ
クロバイオロジー（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉ
ｃａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ）』、第１巻、第１
１６〜１１７頁（１９７５年）に記載されているＮａｍ
ａｌｗａ細胞、アイ・ミヨシ（Ｉ．Ｍｉｙｏｓｈｉ）
著、『ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）』、第２６７巻、第
８４３〜８４４頁（１９７７年）に記載されているＢＡ
ＬＬ−１細胞、ＴＡＬＬ−１細胞、ＮＡＬＬ−１細胞、
『ザ・ジャーナル・オブ・イムノロジー（Ｔｈｅ Ｊｏ
ｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）』、第１１
３巻、第１３３４〜１３４５頁（１９７４年）記載のＭ
−７００２細胞、Ｂ−７１０１細胞、『組織培養』、第
６巻、第１３号、第５２７〜５４６頁（１９８０年）に
記載されているＪＢＬ細胞、ＥＢＶ−Ｓａ細胞、ＥＢＶ
−ｗａ細胞、ＥＢＶ−ＨＯ細胞、ＭＯＬＴ−３細胞や、
その他ＢＡＬＭ−２細胞、ＣＣＲＦ−ＳＢ細胞、（ＡＴ
ＣＣ ＣＣＬ １２０）、ＣＣＲＦ−ＣＥＭ細胞、ＤＮ
Ｄ−４１細胞などの株化されたリンパ球球様細胞や、ま
た、正常な単核細胞、顆粒性白血球細胞などを各種ウイ
ルス、薬剤、放射線などで処理し培養株化させた細胞な
どが好適である。

【００１５】また、これらヒト由来の細胞の新リンホカ
インＩＩＩ産生能を有する遺伝子を、例えば、ポリエチ
レングリコールやセンダイウイルスなどを利用する細胞
融合の手段、ＤＮＡリガーゼ、制限酵素（ヌクレアー
ゼ）、ＤＮＡポリメラーゼなどの酵素を利用する遺伝子
組換えの手段などによって処理し、その増殖速度を高め
たり、細胞当たりの新リンホカインＩＩＩ産生能を高め
たりして使用してもよく、本明細書に記載する株化細胞
のみに限定されるものではない。これらの細胞は、後で
述べる新リンホカインＩＩＩを誘導生成させるまでの過
程で、単独、または二種以上を混合して自由に利用され
る。必要ならば、これに、例えばヒトから採取し調製さ
れる白血球、リンパ球などを併用することもできる。

【００１６】本発明で使用する温血動物は、ヒト由来の
細胞が増殖し得るものであればよく、例えば、ニワト
リ、ハトなどの鳥類、イヌ、ネコ、サル、ウサギ、ヤ
ギ、ブタ、ウマ、ウシ、モルモット、ラット、ヌードラ
ット、ハムスター、普通マウス、ヌードマウスなどの哺
乳類が使用できる。

【００１７】これらの動物にヒト由来の細胞を移植する
と好ましくない免疫反応を起こす恐れがあるので、その
反応をできるだけ抑えるため、使用する動物はできるだ
け幼若な状態、即ち卵、胚、胎児、または新生期、幼少
期のものの方が好ましい。

【００１８】また、これらの動物に、例えば２００〜６
００レム程度のエックス線若しくはガンマ線を照射する
か、または抗血清若しくは免疫抑制剤などを注射するな
どの前処理をほどこして、免疫反応を弱めて移植しても
よい。

【００１９】使用する動物がヌードマウスあるいはヌー
ドラットの場合には、成長したものであっても免疫反応
が弱いので、これらの前処理を必要とすることもなく、
培養株化されたヒト由来の細胞が移植でき、急速に増殖
できるので特に好都合である。

【００２０】また、培養株化されたヒト由来の細胞を例
えば先ずハムスターに移植し増殖させた後、この細胞を
更にヌードマウスに移植するなどのように、ヒト以外の
温血動物間で移植してヒト由来の細胞の増殖をより安定
化したり、更にそれから誘導生成される新リンホカイン
ＩＩＩ量を増加させることも自由である。

【００２１】この場合、同種間、同属間は勿論のこと、
同綱間、同門間移植であってもよい。ヒト由来の細胞を
移植する動物体内の部位は、移植した細胞が増殖し得る
部位であればよく、例えば尿液腔、静脈、腹腔、皮下な
ど自由に選ばれる。

【００２２】また、動物体内にヒト由来の細胞を移植す
ることなく、動物細胞の通過を阻止し得る多孔性の濾過
膜、例えば孔径約１０^-7〜１０^-5ｍを有するメンブラン
フィルター、限外濾過膜またはフォローファイバーなど
を設けた公知の各種形状、大きさの拡散チャンバーを動
物体内、例えば腹腔内に埋設して、動物体からの栄養物
を含む体液の供給を受けつつ、そのチャンバー内で前述
の培養株化されたヒト由来の細胞の何れをも増殖させる
ことができる。

【００２３】また必要に応じて、このチャンバー内の栄
養物を含む溶液を動物体内の体液と接続し、灌流させる
ようにしたチャンバーを、例えば動物体表に取り付け、
チャンバー内のヒト由来の細胞の増殖状態をその表面に
設けた窓を通じて透視できるようにすることも、また、
このチャンバー部分のみを着脱交換できるようにして動
物を屠殺せずに寿命一杯細胞を増殖させて、動物個体当
たりの細胞生産量を更に高めることもできる。

【００２４】これらの拡散チャンバーを利用する方法
は、ヒト由来の細胞が動物細胞と直接接触しないので、
ヒト由来の細胞のみが容易に採取できるだけでなく、好
ましくない免疫反応を起こす心配も少ないので、免疫反
応を抑制する前処置の必要もなく、各種温血動物を自由
に利用できる特徴を有している。

【００２５】移植した動物の維持管理は、その動物の通
常の飼育管理を続ければよく、移植後といえども特別の
取り扱いは何等必要としないので好都合である。

【００２６】ヒト由来の細胞を増殖させるための期間は
通常１〜１０週の期間で目的を達成することができる。
このようにして得られるヒト由来の細胞数は動物個体当
り約１０⁷〜１０¹²個、またはそれ以上に達することも
見出した。

【００２７】換言すれば、動物生体内で増殖させたヒト
由来の細胞の細胞数は、動物個体当り移植した細胞数の
約１０²〜１０⁷倍、またはそれ以上にも達し、生体外の
栄養培地に接種して増殖させる場合の約１０〜１０
⁶倍、またはそれ以上にも達して、新リンホカインＩＩ
Ｉの製造のために極めて好都合である。

【００２８】このようにして増殖させたヒト由来の細胞
から新リンホカインＩＩＩを誘導生成させる方法は自由
である。それが、増殖した動物体内のままで新リンホカ
インＩＩＩ誘導剤を作用させることもできる。例えば、
腹腔内の腹水に浮遊状で増殖したヒト由来の細胞に、ま
た皮下に生じた腫瘍細胞に、新リンホカインＩＩＩ誘導
剤を直接作用させて新リンホカインＩＩＩを誘導生成さ
せ、次いで、その血清、腹水または腫瘍から新リンホカ
インＩＩＩを精製採取すればよい。

【００２９】また、ヒト由来の細胞の増殖細胞をヒト以
外の温血動物体外から取り出し、生体外で新リンホカイ
ンＩＩＩ誘導剤を作用させて新リンホカインＩＩＩを誘
導生成させることもできる。例えば、腹水中で増殖した
ヒト由来の細胞を採取し、または皮下に生じたヒト由来
の細胞を含む腫瘍を摘出、分散し、得られる細胞を約２
０〜４０℃に保った栄養培地に細胞濃度が約１０⁵〜１
０⁸個／ｍｌになるように浮遊させ、これに新リンホカ
インＩＩＩ誘導剤を作用させることによって新リンホカ
インＩＩＩを誘導生成させ、これを精製採取すればよ
い。

【００３０】更に、ヒト由来の細胞を拡散チャンバー内
で増殖させた場合は、増殖させた細胞をチャンバー内の
ままで、またはチャンバーから取り出して、新リンホカ
インＩＩＩ誘導剤を作用させることもできる。

【００３１】また、前述のようにヒト以外の温血動物を
利用して得られるヒト由来の細胞を、必要ならば、更に
生体外（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）で１〜４日間程度培養し、
細胞の増殖世代を同調させるなどした後、新リンホカイ
ンＩＩＩ誘導剤を作用させ新リンホカインＩＩＩを誘導
生成させることも自由である。

【００３２】また、例えば、増殖させたヒト由来の細胞
に先ず動物体内のままで新リンホカインＩＩＩを誘導生
成させた後、次いで、同一動物個体の特定の部位または
全体から採取したヒト由来の細胞に動物体外で新リンホ
カインＩＩＩを誘導生成させる方法、また、一度新リン
ホカインＩＩＩの誘導生成に使用した細胞を、更に２度
以上使用する方法、または動物体内に埋設、若しくは接
続するチャンバーを交換して得られる細胞数を増加させ
る方法などによって、使用する動物個体当たりの新リン
ホカインＩＩＩ生成量を更に高めることも自由である。

【００３３】本発明の新リンホカインＩＩＩ誘導剤とし
ては、α−インターフェロン誘導剤として知られている
ウイルス、核酸、ヌクレオチドやγ−インターフェロン
誘導剤として知られているフィトヘマグルチニン、コン
カナバリンＡ、ポークウィードミトーゲン、リポポリサ
ッカライド、エンドトキシン、多糖類、細菌などが適宜
用いられる。また、感作された細胞にとっては、抗原も
新リンホカインＩＩＩの誘導剤である。

【００３４】更に、ヒト由来の細胞から新リンホカイン
ＩＩＩを誘導生成させるに際し、新リンホカインＩＩＩ
誘導剤として、α−インターフェロン誘導剤とγ−イン
ターフェロン誘導剤とを併用することにより新リンホカ
インＩＩＩの生産量を高めることも自由である。

【００３５】また、これらの誘導方法によれば、新リン
ホカインＩＩＩが産生されるだけでなく、種特異性の高
いヒトインターフェロンも同時に産生されることが判明
した。

【００３６】このことは、貴重な２種以上のヒト生理活
性物質の同時生産を可能にし、更に、ヒト由来の細胞の
高度利用を可能にし、新リンホカインＩＩＩおよびヒト
インターフェロンを大量に安価に供給する点から極めて
好都合である。

【００３７】このようにして誘導生成された新リンホカ
インＩＩＩは、公知の精製分離法、例えば、塩析、透
析、濾過、遠心分離、濃縮、凍結乾燥などを行うことに
よって容易に精製分離し、採取することができる。更に
高度の精製を必要とする場合には、例えば、イオン交換
体への吸着−溶出、ゲル濾過および等電点分画、電気泳
動、イオン交換クロマトグラフィー、高速液体クロマト
グラフィー、カラムクロマトグラフィー、アフィニティ
クロマトグラフィーなどの公知の方法を組合わせれば、
最高純度の新リンホカインＩＩＩを採取することも可能
である。

【００３８】また、このようにして得られた新リンホカ
インＩＩＩを、抗原としてヒト以外の温血動物を免疫
し、該動物から抗体産生細胞を採取して、この細胞と骨
髄腫細胞とを融合せしめ、得られる融合細胞から抗新リ
ンホカインＩＩＩ抗体産生能を有する融合細胞を選択
し、この選択細胞を増殖させ、生成したモノクローナル
抗体を、例えば、ブロムシアン活性化セファロースと反
応させて得られる固定化モノクローナル抗体を用いて精
製し、高純度の新リンホカインＩＩＩを高収率で採取す
ることも有利に用いることができる。

【００３９】このようにして精製し製造された新リンホ
カインＩＩＩは、理化学的性質が、 分子量 １５，０００±２，０００ 等電点 ｐＩ＝４．５±０．５ 易動度 Ｄｉｓｃ−ＰＡＧＥで、Ｒｆ＝０．７３±０．０５ 紫外線吸収スペクトル ２８０ｎｍ付近に最大吸収 溶剤に対する溶解性 水、生理食塩水またはリン酸塩緩衝液に可溶エチルエー
テル、酢酸エチルまたはクロロホルムに難溶乃至不溶 呈色反応 ローリー法またはミクロビューレット法で蛋白質陽性 反応を示し、フェノール硫酸法またはアントロン硫酸法
で糖質陽性反応を示す ＫＢ細胞に対する細胞増殖抑制活性、 Ｌ₉₂₉細
胞に対する細胞障害活性、インターロイキン活性および
インターフェロン活性を実質的にいずれも示さず、ヒト
αーインターフェロン共存下でＫＢ細胞に対して細胞増
殖抑制活性を示す 水溶液での活性安定性 ｐＨ７．２で３０分間保持する条件により６０℃まで安
定、４℃で１６時間保持する条件によりｐＨ２．０乃至
１１．０の範囲で安定 −１０℃での凍結貯蔵で１カ月以上安定 であることが判明した。

【００４０】また、新リンホカインＩＩＩは、インター
フェロン共存下で多くのヒト腫瘍細胞に障害を与え死滅
させる能力を有しているが、ヒト正常細胞には実質的に
障害を与えないことも判明した。

【００４１】したがって、新リンホカインＩＩＩは、こ
れを有効成分とする抗腫瘍作用を有するリンホカインの
活性増強剤として、例えば、悪性腫瘍の予防剤、治療剤
なかでも、従来、治療が極めて困難とされていたヒトの
各種悪性腫瘍治療剤として使用されてきたヒトインター
フェロンなど他のリンホカインと共に有利に用いること
ができる。

【００４２】作用は、標的細胞としてＫＢ細胞、または
Ｌ₉₂₉細胞を用いて調べた。

【００４３】即ち、ＫＢ細胞を用いる場合には、『キャ
ンサー・ケモセラピー・リポーツ（Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈ
ｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ Ｒｅｐｏｒｔｓ）』、パーツ
（Ｐａｒｔｓ）３、第３巻、第２号（１９７２年９月）
の記載に準じて、ＫＢ細胞の増殖抑制活性を測定し、ま
たは、この測定に際し、高純度のヒトα−インターフェ
ロン（比活性２×１０⁸単位／ｍｇ蛋白質）をｍｌ当り
２０，０００単位共存させてＫＢ細胞の増殖抑制活性を
測定した。

【００４４】Ｌ₉₂₉細胞を用いる場合には、イー・ピッ
ク（Ｅ．Ｐｉｃｋ）編、『ツモア・ネクロシス・ファク
ター・イン・リンホカインズ（Ｔｕｍｏｒ Ｎｅｃｒｏ
ｓｉｓＦａｃｔｏｒ ｉｎ Ｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅ
ｓ）』、第ＩＩ巻、第２４５〜２４９頁、『アカデミッ
ク・プレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ）』（１９
８１年）の記載に準じて、アクチノマイシンＤ存在下で
のＬ₉₂₉細胞に与える細胞障害活性を測定した。

【００４５】新リンホカインＩＩＩの活性は、本明細書
を通じて特に断らない限り、ヒトα−インターフェロン
を共存させたＫＢ細胞の増殖抑制活性を測定する方法を
採用した。

【００４６】インタロイーキン活性については、ダイア
ナ・ボラッシ（Ｄｉａｎａ Ｂｏｒａｓｃｈｉ）等によ
る『ザ・ジャーナル・オブ・イムノロジー（Ｔｈｅ Ｊ
ｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）』、第１
３３巻、第２号（１９８４年８月）の記載に準じてイン
ターロイキン−１の活性を測定し、また、ステベン・ギ
リス（Ｓｔｅｖｅｎ Ｇｉｌｌｉｓ）等による『ザ・ジ
ャーナル・オブ・イムノロジー（Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａ
ｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）』、第１２０巻、第
６号（１９７８年６月）の記載に準じてインターロイキ
ン−２の活性を測定した。

【００４７】ヒトに種特異性の高いインターフェロンの
活性は、『蛋白質核酸酵素』、第２０巻、第６号、第６
１６〜６４３頁（１９７５年）に報告されているヒト羊
膜由来のＦＬ細胞を使用して公知のプラーク半減法で測
定した。

【００４８】赤血球凝集価は、ゼイ・イー・サーク
（Ｊ．Ｅ．Ｓａｌｋ）著、『ザ・ジャーナル・オブ・イ
ムノロジー（Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕ
ｎｏｌｏｇｙ）』、第４９巻、第８７頁（１９４４年）
の方法に準じて測定した。

【００４９】次に、本発明を実験により説明する。

【００５０】

【実験Ａ−１ 部分精製した新リンホカインＩＩＩの調
製】新生児のハムスターに、ウサギから公知の方法で調
製した抗血清を注射して、ハムスターの免疫反応を弱め
た後、その皮下にＢＡＬＬ−１細胞を移植し、その後通
常の方法で３週間飼育した。皮下に生じた腫瘤を摘出し
て細切し、生理食塩水中で分散させほぐした。得られた
細胞を血清添加のＲＰＭＩ １６４０培地（ｐＨ７．
２）で洗浄し、同培地に約２×１０⁶個／ｍｌになるよ
うに懸濁した。本細胞懸濁液に対して、ｍｌ当り約４０
０赤血球凝集価のセンダイウイルスを添加し、３７℃で
２４時間保って新リンホカインＩＩＩを誘導生成させ
た。

【００５１】これを約４℃、約１，０００ｇで遠心分離
し、沈殿物を除去し、得られた上清をｐＨ７．２、０．
０１Ｍリン酸塩緩衝液を含有する生理食塩水で２０時間
透析し、更に、精密濾過して得た濾液を、抗インターフ
ェロン抗体を固定化している抗体カラムに流し、その非
吸着画分を採取し、更に、これをクロマトフォーカッシ
ング法により活性画分を採取し、濃縮し、凍結乾燥して
新リンホカインＩＩＩ活性を有する粉末を得た。

【００５２】本粉末の比活性は、約１０⁵単位／ｍｌ蛋
白質であった。また、新リンホカインＩＩＩの収量は、
ハムスター１匹当り約１，０００，０００単位であっ
た。

【００５３】

【実験Ａ−２ 抗新リンホカインＩＩＩ抗体の調製】実
験Ａ−１の方法で得た新リンホカインＩＩＩを生理食塩
水に蛋白質濃度として約０．０５ｗ／ｗ％になるように
溶解し、これとフロイント完全アジュバント乳化液とを
等量混合して、この混合液０．２ｍｌをマウスの皮下に
注射し、７日後再び同様に注射してマウスを免疫した。
その抗体産生能を有する細胞に抗新リンホカインＩＩＩ
抗体を誘導生成せしめ、このマウスからひ臓を摘出し、
細切分散して得られるひ臓細胞とマウス骨髄腫細胞Ｐ₃
−Ｘ６３−Ａｇ８『フロー・ラボラトリーズ（Ｆｌｏｗ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）』社製とを、血清無含有
Ｅａｇｌｅの最少基本培地で調製した５０ｗ／ｖ％ポリ
エチレングリコール−１０００溶液（ｐＨ７．２、温度
３７℃）に、それぞれ１０⁴個／ｍｌになるように浮遊
させて５分間保った後、前記基本培地で２０倍に希釈
し、ダビソン（Ｄａｖｉｓｏｎ）などが『ソマティック
・セル・ゼネティックス（Ｓｏｍａｔｉｃｃｅｌｌ Ｇ
ｅｎｅｔｉｃｓ）』に報告している方法に準じて、ヒポ
キサンチン−アミノプテリン−チミジン培養液で増殖し
うる融合細胞を採取し、この融合細胞から抗新リンホカ
インＩＩＩ抗体産生能を有する融合細胞を選択した。得
られた融合細胞をマウス腹腔内に１匹当り約１０⁶個移
植して２週間飼育した後、これを屠殺して腹水、血液な
どの体液を集め、遠心分離し、この上清を硫安塩析して
飽和度３０〜５０％の沈殿画分を集め、次いで透析し、
更に、この液を、実験Ａ−１の方法で得た新リンホカイ
ンＩＩＩをブロムシアン活性化セファロースと室温下で
反応させて得られる固定化新リンホカインＩＩＩゲルを
用いてアフィニティクロマトグラフィーを行い、抗新リ
ンホカインＩＩＩ抗体画分を得、透析した後濃縮し、凍
結乾燥して新リンホカインＩＩＩのモノクローナル抗体
粉末を採取した。

【００５４】本品は、新リンホカインＩＩＩの活性に対
して免疫学的に特異的な中和活性を示した。

【００５５】

【実験Ａ−３ 高度に精製した新リンホカインＩＩＩの
調製とその理化学的性質】実験Ａ−１の方法で調製した
新リンホカインＩＩＩの部分精製品を、実験Ａ−２の方
法で調製したモノクローナル抗体を固定化したゲルを用
いてアフィニティクロマトグラフィーを行い新リンホカ
インＩＩＩの活性画分を採取し、透析し、濃縮して凍結
乾燥した。

【００５６】本品は、高純度に精製された新リンホカイ
ンＩＩＩであって、その比活性は、約１０⁷単位／ｍｇ
蛋白質であった。

【００５７】本品を用いて、理化学的性質を調べた。

【００５８】 分子量ケイ・ウェーバー・アンド・エ
ム・オズホーン（Ｋ．Ｗｅｂｅｒ ａｎｄ Ｍ．Ｏｓｂ
ｏｒｎ）、『ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミ
ストリー（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａ
ｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）』、第２４４巻、第４４０６
頁（１９６９年）の記載に準じて、ＳＤＳ−ポリアクリ
ルアミドゲル電気泳動により調べた。即ち、０．１％Ｓ
Ｄ存在下、１０％アクリルアミドゲルカラムに試料約１
０μｇを負荷し、カラム当り８ｍＡで４時間泳動後、抽
出し、その活性測定から分子量を求めたところ、１５，
０００±２，０００であった。

【００５９】 等電点スウェーデン、ＬＫＢ社製、等
電点電気泳動用ゲル、商品名『ＡＭＰＨＯＬＩＮＥ Ｐ
ＡＧＰＬＡＴＥ（ｐＨ３．５〜９．５）』を用いて、２
５Ｗ、２時間泳動した結果、等電点ｐＩは４．５±０．
５であった。

【００６０】 電気易動度ビー・ゼイ・デービス
（Ｂ．Ｊ．Ｄａｖｉｓ）、『アニュアル・オブ・ザ・ニ
ューヨーク・アカデミー・オブ・サイエンシーズ（Ａｎ
ｎｕａｌ ｏｆ ｔｈｅＮｅｗ Ｙｏｒｋ Ａｃａｄｅ
ｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）』、第１２１巻、第４
０４頁（１９６４年）の記載に準じて、７．５％アクリ
ルアミドゲルカラムに試料を約１０μｇ負荷し、ｐＨ
８．３、カラム当り３ｍＡで２時間泳動後、抽出してそ
の活性測定から電気易動度を求めたところ、Ｒｆは０．
７３±０．０５であった。

【００６１】 紫外線吸収スペクトル株式会社島津製
作所製の分光光度計、商品名『ＵＶ−２５０』を用いて
紫外部での吸収スペクトルを調べた結果、２８０ｎｍ付
近に最大吸収を示した。

【００６２】 溶剤に対する溶解性水、生理食塩水ま
たはリン酸塩緩衝液に可溶エチルエーテル、酢酸エチル
またはクロロホルムに難溶乃至不溶であった。

【００６３】 呈色反応ローリー法またはミクロビュ
ーレット法で蛋白質陽性反応を示し、フェノール硫酸法
またはアントロン硫酸法で糖質陽性反応を示した。

【００６４】 作用単独では、ＫＢ細胞に対する細胞
増殖抑制活性、Ｌ₉₂₉細胞に対する細胞障害活性、イン
ターロイキン活性およびインターフェロン活性は実質的
にいずれも示さなかった。ヒトα−インターフェロン共
存下で、ＫＢ細胞に対して細胞増殖抑制活性を示した。

【００６５】 水溶液での活性安定性 １）熱安定性 約１×１０³単位／ｍｌの試料を各温度によりｐＨ７．
２で３０分間保持した後、残存する活性を測定した結
果、６０℃まで安定であった。

【００６６】２）ｐＨ安定性約１×１０⁴単位／ｍｌの
試料０．１ｍｌを各ｐＨ緩衝液（ｐＨ２〜７．．．マッ
クルベイン緩衝液（Ｍｃｌｌｖａｉｎｅ ｂｕｆｆｅ
ｒ）、ｐＨ７〜８．．．リン酸塩緩衝液（Ｐｈｏｓｐｈ
ａｔｅ ｂｕｆｆｅｒ）、ｐＨ８〜１１．．．グリシン
−水酸化ナトリウム緩衝液（Ｇｌｙｃｉｎｅ−ＮａＯＨ
ｂｕｆｆｅｒ））１ｍｌに加え、４℃で１６時間保持
した後、この０．１ｍｌをｐＨ７．２、０．０５Ｍリン
酸塩緩衝液で、ｐＨ７．２に調整して残存する活性を測
定した結果、ｐＨ２．０乃至１１．０の範囲で安定であ
った。

【００６７】 凍結乾燥による安定性ｐＨ７．２の水
溶液を−１０℃で凍結し１カ月間貯蔵した後、融解し、
活性を測定した結果、活性の低下は見られなかった。

【００６８】以上の結果から、新リンホカインＩＩＩ
は、従来知られているリンホトキシン、ツモア・ネクロ
シス・ファクター、インターロイキン、インターフェロ
ンなどのリンホカインとは、明らかに違った理化学的性
質を有する。

【００６９】

【実験Ｂ−１ 悪性腫瘍細胞に対する増殖抑制作用】実
験Ａ−３の方法で得た新リンホカインＩＩＩを用いて、
ヒト由来の各種細胞に対する増殖抑制作用を調べた。

【００７０】牛胎児血清を補足した公知の栄養培地１ｍ
ｌにヒト由来の各種細胞を１０⁶個ずつとり、１日培養
した後、これに実験Ａ−３の方法で調製した新リンホカ
インＩＩＩを２０単位またはこの２０単位とともにヒト
α−インターフェロン（比活性２×１０⁸単位／ｍｌ蛋
白質）２，０００単位含有する生理食塩水０．１ｍｌを
加え、３７℃で２日間培養した。培養終了後、『アプラ
イド・マイクロバイオロジー（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍｉｃ
ｒｏｂｉｏｌｏｇｙ）』、第２２巻、第４号、第６７１
〜６７７頁（１９７１年）に記載されている方法に準じ
て、染色剤ニュートラルレッドで生細胞を染色し、続い
て、この染色剤をアシドエタノールで溶出し、溶出液の
５４０ｎｍにおける吸光度から生細胞量を測定した。

【００７１】なお、対照実験には、新リンホカインＩＩ
Ｉを含まない生理食塩水０．１ｍｌを用いた。

【００７２】細胞の増殖抑制率（％）は、次の式１から
算出した。

【式１】

【００７３】その結果を、表１に示した。

【表１】

【００７４】第１表の結果から明らかなように、新リン
ホカインＩＩＩは、各種悪性腫瘍細胞に対しては、ヒト
インターフェロン共存下でその増殖を著しく抑制するこ
とが判明した。また、新リンホカインＩＩＩまたは高純
度のヒトα−インターフェロンは、それぞれ単独では、
正常細胞、悪性腫瘍細胞に対して殆ど影響を与えないこ
とも判明した。

【００７５】

【実験Ｂ−２ 悪性腫瘍細胞に対する増殖抑制作用】Ｂ
ＡＬＢ／ｃ由来ヌードマウスにヒト乳癌組織片を背部皮
下に移植し、その腫瘍体積が約２００ｍｍ³なった時期
から、実験Ａ−１、または実験Ａ−３の方法で得られた
新リンホカインＩＩＩを生理食塩水に溶解した状態で、
毎日１回、ヒトα−インターフェロン（比活性２×１０
⁸単位／ｍｇ蛋白質）５，０００単位とともに、５０ま
たは５００単位／ｋｇずつ２０日間静脈注射を行った。
その後、ヌードマウスを屠殺して腫瘍の重量を測定し
た。

【００７６】その結果を、表２に示した。

【表２】

【００７７】

【実験Ｂ−３ 急性毒性試験】生後２０日のマウスを使
用して、実験Ａ−３の方法で得られた新リンホカインＩ
ＩＩの急性毒性試験をしたところ、新リンホカインＩＩ
Ｉの毒性は極めて低く、腹腔内に注射した時のＬＤ
₅₀は、１０⁸単位以上であることが判明した。

【００７８】以上の結果からも明らかなように、本発明
の新リンホカインＩＩＩは、インターフェロンと併用し
て、生体外（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）のみならず、生体内に
おいても悪性腫瘍の増殖抑制に極めて有効であり、その
有効用量から見て安全性は極めて高い。

【００７９】本発明の新リンホカインＩＩＩの成人１日
当りの用量は、１〜１００，０００，０００単位であ
り、好ましくは局所注射および点眼などの局所適用用量
は１〜１，０００，０００単位、軟膏または坐剤などの
経皮または経粘皮適用の場合１０〜５０，０００，００
０単位、静注および筋注など全身注射の場合１０〜１
０，０００，０００単位、経口投与の場合５０〜１０
０，０００，０００単位であるが、用法あるいは症状に
応じて適宜増減することができる。必要に応じて任意、
慣用の製薬用担体、基剤あるいは賦形剤とともに慣用の
方法で医薬用製剤に調製することができる。その使用量
は、新リンホカインＩＩＩの毒性、有効量および安全性
を考慮すると医薬用製剤グラム当り１単位以上の新リン
ホカインＩＩＩを含有せしめるのが望ましい。

【００８０】新リンホカインＩＩＩを含有する抗腫瘍作
用を有するリンホカインの活性増強剤、例えば、悪性腫
瘍の予防剤、治療剤は、その目的に応じてその形状を自
由に選択できる。

【００８１】経口投与剤としては、カプセル剤、錠剤、
散剤などの腸溶製剤、直腸内投与剤としては直腸坐剤、
注射剤としては、例えば、用事に注射用蒸留水に溶解し
て使用する凍結乾燥注射剤、その他点鼻もしくは点眼、
軟膏剤として用いることもできる。

【００８２】また、新リンホカインＩＩＩとともにイン
ターフェロンを用いて悪性腫瘍を治療するに際し、例え
ば、患者の腫瘍の一部を取り、これを新リンホカインＩ
ＩＩで処理することによって、その腫瘍の免疫原性を高
めた後、腫瘍患者の体内に戻し、次いで、インターフェ
ロンを投与するなどの方法により、この悪性腫瘍の治療
を効果的に行うこともできる。また、新リンホカインＩ
ＩＩと共に用いるインターフェロンとしては、α−イン
ターフェロン、β−インターフェロン、γ−インターフ
ェロンのいずれでもよく、また、ヒト由来の細胞が産生
した天然型のインターフェロンであっても、微生物が産
生した遺伝子組換型のインターフェロンであってもよ
い。また、他の各種抗腫瘍剤、例えばツモア・ネクロシ
ス・ファクター、リンホトキシン、インターロイキンな
どの他のリンホカイン、β−１，３グルカン、アラビノ
マンナン、リポポリサッカライド、ＯＫ−４３２（ピシ
バニール）、ＰＳＫ（クレスチン）、レンチナンなどの
抗腫瘍性多糖類、メソトレキサート（ＭＴＸ）、フルオ
ロウラシル（５−ＦＵ）などの代謝拮抗剤、トキソルビ
シン（ＡＤＭ）、マイトマイシンＣ（ＭＭＣ）などの抗
生物質などと併用することも有利に実施できる。

【００８３】以下、参考例で本発明における新リンホカ
インＩＩＩの製造例を、また実施例で本発明の活性増強
剤である各種薬剤の製造例を述べる。

【００８４】

【参考例１】ヒト由来のリンパ芽球様細胞ＢＡＬＬ−１
細胞牛胎児血清を２０％補足したＥａｇｌｅの最少基本
培地（ｐＨ７．４）に接種し、３７℃で常法にしたがい
生体外（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）に浮遊培養した。得られた
細胞を血清無添加のＥａｇｌｅの最少基本培地（ｐＨ
７．４）で洗浄し、同培地に約１×１０⁷個／ｍｌにな
るように懸濁した。この懸濁液にセンダイウイルスをｍ
ｌ当り約１，０００赤血球凝集価添加し、３８℃で１日
保って、新リンホカインＩＩＩを誘導生成させた。これ
を４℃、約１，０００ｇで遠心分離し、得られた上清を
ｐＨ７．２、０．０１Ｍリン酸塩緩衝液を含有する生理
食塩水で１５時間透析し、更に精密濾過して得た濾液を
実験Ａ−１と同様に抗インターフェロン抗体カラムに流
し、その非吸着画分を、実験Ａ−３で述べた方法でモノ
クローナル抗体のゲルカラムを用いてアフィニティクロ
マトグラフィーにより精製し、濃縮して比活性約１０7
^単位／ｍｇ蛋白質を有する新リンホカインＩＩＩの濃縮
液を得た。

【００８５】活性収率は、誘導生成時の懸濁液１ｍｌ当
り約２０，０００単位であった。

【００８６】

【参考例２】新生児のハムスターに、ウサギから公知の
方法で調製した抗血清を注射してハムスターの免疫反応
を弱めた後、その皮下に培養株化されたヒト由来のリン
パ芽球様細胞ＢＡＬＬ−１細胞を移植し、その後通常の
方法で３週間飼育した。皮下に生じた約１５ｇの腫瘤を
摘出し細切し、生理食塩水中で分散させほぐした。得ら
れた細胞を血清無添加のＲＭＰＩ １６４０培地（ｐＨ
７．２）で洗浄し、同培地に約５×１０⁶個／ｍｌに懸
濁した。この懸濁液に、センダイウイルスをｍｌ当り約
１，０００赤血球凝集価およびＥ．ｃｏｌｉ由来のエン
ドトキシンをｍｌ当り約１０μｇを添加し、３７℃で１
日間保って新リンホカインＩＩＩを誘導生成させた。こ
れを約４℃、約１，０００ｇで遠心分離し、沈殿物を除
去し、得られた上清をｐＨ７．２、０．０１Ｍリン酸塩
緩衝液を含有する生理食塩水で２１時間透析し、更に精
密濾過して得た濾液を、参考例１と同様に抗体カラムを
用いて精製し、得られる溶液を濃縮し、凍結乾燥して比
活性約１×１０⁷単位／ｍｇ蛋白質を有する新リンホカ
インＩＩＩの粉末を得た。

【００８７】活性収率は、約１，５００，０００単位で
あった。

【００８８】

【参考例３】成長したヌードマウスの腹腔内に、培養株
化されたヒト由来のリンパ芽球様細胞ＴＡＬＬ−１細胞
の移植後、通常の方法で５週間飼育した。この腹腔内
へ、約３，０００赤血球凝集価のニューカッスル病ウイ
ルスを紫外線によって予め殆ど失活させて注入し、２４
時間後に屠殺して腹水を採取した。以後、参考例２と同
様に精製し濃縮乾燥して新リンホカインＩＩＩの粉末を
得た。活性収率は、ヌードマウス１匹当たり約３００，
０００単位であった。

【００８９】

【参考例４】成長した普通マウスに約４００レムのエッ
クス線を予め照射してマウスの免疫能を弱めた後、その
マウスの皮下に培養株化されたヒト由来のリンパ芽球様
細胞Ｍｏｎｏ−１細胞を移植し、その後通常の方法で３
週間飼育した。皮下に生じた約１０ｇの腫瘤を摘出した
後、参考例２と同様にして細胞を分散させた。この細胞
を参考例２と同様に懸濁した後、この懸濁液に、センダ
イウイルスをｍｌ当り約５００赤血球凝集価およびコン
カナバリンＡをｍｌ当り０．８μｇを添加し、３７℃で
１日間保って新リンホカインＩＩＩを誘導生成させた。
以後、参考例２と同様に精製、濃縮、乾燥して新リンホ
カインＩＩＩの粉末を得た。

【００９０】活性収率は、マウス１匹当たり１，００
０，０００単位であった。

【００９１】

【参考例５】新生児のハムスターに参考例２と同様にし
て培養株化されたヒト由来のリンパ芽球様細胞Ｎａｍａ
ｌｗａ細胞を移植し、その後通常の方法で４週間飼育し
た。皮下に生じた約２０ｇの腫瘤を参考例２と同様にほ
ぐして約３×１０⁶個／ｍｌ細胞懸濁液を得た。本懸濁
液にセンダイウイルスをｍｌ当り約１，０００赤血球凝
集価を添加し３６℃で２日間保って新リンホカインＩＩ
Ｉを誘導生成させ、次いで参考例１と同様に精製濃縮し
て新リンホカインＩＩＩの濃縮液を得た。

【００９２】活性収率は、ハムスター１匹当たり約１，
３００，０００単位であった。

【００９３】

【参考例６】孔径０．５ミクロンのメンブランフィルタ
ーを設けた内容量約１０ｍｌのプラスチック製円筒型拡
散チャンバー内に、培養株化されたヒト由来のリンパ芽
球様細胞ＮＡＬＬ−１細胞を生理食塩水で浮遊させ、こ
れを成長したラットの腹腔内に埋設した。このラットを
通常の方法で４週間飼育した後、この拡散チャンバーを
取り出した。これにより得られたヒト由来の細胞濃度は
約５×１０⁸個／ｍｌであって、生体外の栄養培地に炭
酸ガスインキュベーター中で増殖させる場合の約１０²
倍以上にも達することがわかった。この細胞を参考例２
と同様に懸濁し、この懸濁液に、ｍｌ当り約５００赤血
球凝集価のニューカッスル病ウイルスを紫外線で予め殆
ど失活させて加え、さらにフィトヘマグルチニンをｍｌ
当り約５００μｇ加え、３７℃で１日間保って新リンホ
カインＩＩＩを誘導生成させた。以後、参考例２と同様
に精製し、濃縮、乾燥して新リンホカインＩＩＩの粉末
を得た。

【００９４】活性収率は、ラット１匹当たり約４００，
０００単位であった。

【００９５】

【参考例７】３７℃で５日間保ったニワトリの受精卵
に、ヒト由来の株化細胞ＣＣＲＦ−ＣＥＭ細胞を移植し
た後、３７℃で１週間保った。この卵を割卵した後、増
殖細胞を採取した。この細胞を参考例１と同様に５×１
０⁶個／ｍｌに懸濁した。この懸濁液にｍｌ当り約５０
０赤血球凝集価のセンダイウイルスを添加し、３７℃で
１日間保って新リンホカインＩＩＩを誘導生成させ、次
いで参考例２と同様に精製し、濃縮乾燥して新リンホカ
インＩＩＩの粉末を得た。

【００９６】活性収率は、受精卵１０個当たり約５０，
０００単位であった。

【００９７】

【実施例１ 注射液】参考例２の方法で調製した新リン
ホカインＩＩＩ５００，０００単位を２００ｍｌの生理
食塩水に溶解し、メンブランフィルターを用いて無菌的
に濾過する。濾液を滅菌したガラス容器に２ｍｌずつ充
填して、凍結乾燥し、凍結乾燥粉末製剤とする。

【００９８】本品は、ヒトα−インターフェロン注射
剤、ヒトβ−インターフェロン注射剤などとともに用い
ることにより、乳癌、肺癌、肝癌、白血病などの治療に
好適である。

【００９９】

【実施例２ 注射剤】実施例１の注射剤の製造におい
て、新リンホカインＩＩＩ２００，０００単位と共に、
リンパ芽球様細胞由来のヒトα−インターフェロン３０
０，０００，０００単位を生理食塩水２００ｍｌに溶解
したほかは、実施例１と同様に製造して凍結乾燥粉末製
剤を得た。

【０１００】本品は、乳癌、肺癌、肝癌、胃癌、白血病
などの治療に好適である

【０１０１】

【実施例３ 軟膏剤】参考例３の方法で調製した新リン
ホカインＩＩＩおよびヒトα−インターフェロンを常法
にしたがい少量の流動パラフィンに研和した後、ワセリ
ンを加えｇ当りそれぞれ１，０００単位、１００，００
０単位含有する軟膏薬とした。

【０１０２】本品は、皮膚癌、乳癌、リンパ腫などの治
療に好適である

【０１０３】

【実施例４ 点眼剤】蒸留水８００ｍｌに、β−フェニ
ルエチルアルコール５ｍｌ、参考例４の方法で調製した
新リンホカインＩＩＩ１，０００単位、ヒトα−インタ
ーフェロン１０，０００，０００単位および食塩を加え
等張化するよう蒸留水で１，０００ｍｌとし点眼剤とし
た。

【０１０４】本品は、網膜芽細胞腫などの治療に好適で
ある。

【０１０５】

【実施例５ 腸溶性錠剤】参考例７の方法で調製した新
リンホカインＩＩＩを常法にしたがって澱粉とマルトー
スとを混合使用して打錠するに際し、新リンホカインＩ
ＩＩを製品１錠（１００ｍｇ）当り２００，０００単位
になるように含有せしめて錠剤を製造し、これにメチル
セルロースフタレートをコーティングして腸溶性錠剤と
した。

【０１０６】本品は、ヒトα−インターフェロンまたは
ヒトγ−インターフェロンを含有する各種投与経路の薬
剤などと併用して大腸癌、結腸癌、肝癌などの治療に好
適である。

【０１０７】

【発明の効果】上記したことから明らかなように、本発
明の新リンホカインＩＩＩを有効成分とする抗腫瘍作用
を有するリンホカインの活性増強剤は、インターフェロ
ンなどのリンホカインと共に使用したとき、それらリン
ホカインの抗腫瘍作用を増強することから、例えば、悪
性腫瘍の予防剤、治療剤なかでもヒトの各種悪性腫瘍治
療剤として有利に用いることができる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｐ 21/00 (Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｒ 1:91） Ｃ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｐ 21/08 Ａ６１Ｋ 37/66 ＡＤＵＧ Ｃ１２Ｒ 1:91） 9162−4Ｂ Ｃ１２Ｎ 15/00 Ｃ

Claims (2)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 理化学的性質が、 分子量 １５，０００±２，０００ 等電点 ｐＩ＝４．５±０．５ 易動度 Ｄｉｓｃ−ＰＡＧＥで、Ｒｆ＝０．７３±０．０５ 紫外線吸収スペクトル ２８０ｎｍ付近に最大吸収 溶剤に対する溶解性 水、生理食塩水またはリン酸塩緩衝液に可溶 エチルエーテル、酢酸エチルまたはクロロホルムに難溶
   乃至不溶 呈色反応 ローリー法またはミクロビューレット法で蛋白質陽性反
   応を示し、フェノール硫酸法またはアントロン硫酸法で
   糖質陽性反応を示す ＫＢ細胞に対する細胞増殖抑制活性、 Ｌ₉₂₉細
   胞に対する細胞障害活性、インターロイキン活性および
   インターフェロン活性を実質的にいずれも示さず、ヒト
   αーインターフェロン共存下でＫＢ細胞に対して細胞増
   殖抑制活性を示す 水溶液での活性安定性 ｐＨ７．２で３０分間保持する条件により６０℃まで安
   定、４℃で１６時間保持する条件によりｐＨ２．０乃至
   １１．０の範囲で安定 −１０℃での凍結貯蔵で１カ月以上安定 である新リンホカインＩＩＩを有効成分として含有する
   ことを特徴とする抗腫瘍作用を有するリンホカインの活
   性増強剤。
2. 【請求項２】 抗腫瘍作用を有するリンホカインが、イ
   ンターフェロン、ツモア・ネクロシス・ファクター、リ
   ンホトキシンおよびインターロイキンから選ばれる１種
   以上のリンホカインであるこことを特徴とする特許請求
   の範囲第１項記載の活性増強剤。