FI117673B - Nukleosidimonofosfaattijohdannaiset, niiden valmistus ja käyttö immuunivastetta heikentävien lääkkeiden valmistukseen - Google Patents

Description

117673

Nukloosidimonofosfaattijohdannaiset, niiden valmistus ja käyttö immuunivastetta heikentävien lääkkeiden valmistukseen 5 Tämä keksintö kohdistuu lipidiesteritähteiden uusiin nukleosidimonofosfaattijoh-dannaisiin, joilla on yleinen kaava (I), r‘-x-ch2

r2-y-ch O

i il ch2-o-p-o-ch2 b °H m R3 R4 jossa 10 Rl voi olla suora tai haarautunut, tyydyttynyt tai tyydyttymätön alkyyliketju, jossa on 1-20 hiiliatomia; R2 voi olla vety, suora tai haarautunut, tyydyttynyt tai tyydyttymätön 1-20 hiili-atomia sisältävä alkyyliketju; ·· • « * ·· : r3 tarkoittaa vetyä tai hydroksia; • · : 1 2 3 15 R4 onhydroksi; • · · *♦·· — . R*5 on vety tai hydroksi; • * * * # * • * · *·* * X on sulfinyyli- tai sulfonyyliryhmä; : Y on happiatomi; ♦ ♦ · · • « · * « *···’ B on puriini-ja/tai pyrimidiiniemäs, jolla on kaava III (a-d) • · - ,!.

··«·· • · * • · · • · · 2 • · · · • · 3 ·*·.

• · j 2 117673 0 NH2 %V6 nJyr7 (An^V Ο^ϊΤ 1 (ma) I (mb) O R10 X)3 R8 N N R9^ N N 1 1 (mc) (md) joissa R6 voi olla vety, 1-4 hiiliatomia sisältävä alkyyliketju, joka voi olla substituoitu halogeenilla; alkenyyli-ja/tai alkinyylitähde, jossa on 2-6 hiiliatomia, mahdollisesti 5 substituoituna halogeenilla; tai halogeeni; r6' voi olla vetyatomi tai bentsyyli- tai fenyylitiotähde; RV voi olla vety; alkyyliketju, jossa on 1-4 hiiliatomia, joka voi olla substituoitu halogeenilla; tai halogeeni; • · : **· RS voi olla vety; alkyyliketju, jossa on 1-4 hiiliatomia, halogeeni tai hydroksi- tai * ® ·*,*·: 10 aminoryhmä; • · • · R9 voi olla vety; aminoryhmä tai halogeeniatomi; ja ·»·· :.:V RIO voi olla vety, halogeeni, merkapto, hydroksi, Cj-Cg-alkoksi-, C\-Cg-alkyyli- • · · ! merkapto- tai aminoryhmä, joka on mono- tai disubstituoitu Ci-Cg-alkyylillä, C4-

Cg-alkoksilla, hydroksi-C2-C6-alkyylillä ja/tai C3-C6-sykloalkyylillä, aryylillä, • :*; 15 hetaryylillä, aralkyylillä tai hetaryylialkyyliryhmillä, mahdollisesti substituoituna • · · · ;**·. aryyli-tai hetaryylitähteessä yhdellä tai useammalla merkapto-, hydroksi-, C1-C6- • · · ·. alkoksi-tai Ci-Cö-alkyyliryhmällä tai halogeenilla; tai C2-Cö-alkenyyli mahdolli- I sesti substituoituna mono- tai dialkyylillä tai alkoksiryhmillä; • * . \ sillä edellytyksellä, että ainakin toinen tähteistä R^ tai R^ on vety; « « t ···· 20 niiden tautomeereihin ja niiden fysiologisesti hyväksyttäviin suoloihin epäorgaanisen ja orgaanisten happojen ja/tai emästen kanssa, kuten myös menetelmiin niiden valmistamiseksi ja näitä yhdisteitä sisältävien lääkkeiden valmistukseen.

3 117673

Koska nämä yleisen kaavan I yhdisteet sisältävät asymmetrisia hiiliatomeja, kohdistuu keksintö samoin kaikkiin mainittujen yhdisteiden optisesti aktiivisiin muotoihin ja raseemisiin seoksiin.

Keksinnön oleelliset tunnusmerkit on esitetty oheisissa patenttivaatimuksissa.

5 J. Biol. Chem. 265, 6112 (1990) ja EP-0 350 287 selostavat liponukleotidien valmistusta ja käyttöä lääkkeinä viruksia vastaan. Niissä on kuitenkin tutkittu ja syntetisoitu ainoastaan dimyristoyylifosfatidyyli- ja dipalmitoyylifosfatidyylitähteitä kytkettyinä tavanomaisiin nukleosideihin, kuten AZT (atsidotymidiini) ja ddC (2', 3'-didcoksisytidiini), mukaan luettuna niiden rasvahappoesterirakenne.

10 J. Med. Chem. 33, 1380 (1990) selostaa tioeetterilipidien nukleosidikonjugaatteja sytidiinidifosfaatin kanssa, joilla on kasvaimia ehkäisevä vaikutus ja joille voi löytyä käyttöä onkologiassa. Chem. Pharm. Bull. 36, 209 (1988) selostaa 5'-(3-sn-fosfati-dyyli)nukleosideja, joilla on leukemianvastäinen vaikutus, kuten myös niiden entsymaattista synteesiä vastaavista nukleosidcista ja fosfokoliineista transferaasiaktivi-15 teetin omaavan foslblipaasin D läsnä ollessa. Samoin J. Med. Chem. 34 1408 (1991) selostaa nukleosidikonjugaatteja, joilla on anti-HTV 1 -aktiivisuus, jotka on substi-tuoilu nietoksilla tai etoksilla lipidiosan sn-2-asemassa. Patenttihakemus WO-92/03462 selostaa edelleen tioeetterilipidikonjugaatteja, joilla on viruksenvastainen aktiivisuus, erityisesti HIV-infektioiden hoitamiseen.

·· • » • · · *. . 20 Keksinnön mukaisella yhdisteellä on arvokkaita farmakologisia ominaisuuksia. Ne " ovat erityisen käyttökelpoisia hoidettaessa ja ehkäistäessä pahanlaatuisia kasvaimia, φ · • j* kuten malignansseja, neoplasmeja, karsinoomaa, sarkoomaa tai leukemiaa syöpäte- rapiassa. Yhdisteillä on lisäksi immuunivastetta heikentävä vaikutus ja niitä voidaan * sen vuoksi käyttää hoidettaessa elinspesifisiä tai yleisiä autoimmuunisairauksia, ku- * * * — v : 25 ten nivelreumaa, systeemistä punahukkaa, kroonista siirrettä vs. isäntäsairauteen, multippeliskleroosia, jne. tai ehkäistäessä allogeenista tai puoliallogeenista siirrän- • ;*; näishyljintää, esim. munuaisia, maksaa, keuhkoja, sydäntä jne. Yhdisteellä on lisäksi ··· · viruksenvastainen, retroviruksenvastainen tai anti-onkogeeninen vaikutus ja sovel- • · · * . tuu siten myös virussairauksien ja onkogeenisesti aiheutuneiden sairauksien (kuten | 30 AIDS jne.) ennalta ehkäisyyn ja hoitoon. Verrattuna pahanlaatuisten kasvaimien **"* hoidossa tähän asti käytettyihin yhdisteisiin on keksinnön mukaisilla yhdisteillä pa- • rempi tehoja alhaisempi myrkyllisyys ja niillä on siten laajempi terapeuttinen käyt- : töalue. Tämän vuoksi ne ovat edullisia siinä, että näitä yhdisteitä sisältäviä lääkkeitä voidaan antaa jatkuvasti pitkänkin aikaa ja näin voidaan välttää valmisteen käytön 35 keskeytys tai lopettaminen, mikä usein on ollut tapana kasvainterapiassa tähän asti 4 117673 käytettyjen sytostaatti Sten aineiden kohdalla, johtuen niiden ei-toivotuista sivuvaikutuksista.

Keksinnön mukaisilla yhdisteillä ei ole näitä haittoja. Niiden vaikutus on immuunivastetta heikentävä tai antitumoraalinen niiden olematta ei-spesifisen sytotoksisia 5 farmakologisesti kyseeseen tulevissa annoksissa.

Keksinnön mukaisia yhdisteitä ja niiden farmaseuttisia formulaatteja voidaan samoin käyttää yhdessä muiden lääkkeiden kanssa edellä mainittujen sairauksien hoidossa ja profylaksiassa. Esimerkkejä tällaisista muista lääkkeistä ovat sellaiset aineet kuin esim. mitoosi-inhibiittorit, kuten kolkkisiini, mitopodotsidi, vinblastiini, alky-10 loivat sytostaattiset aineet, kuten syklofosfamidi, melfalaani, mylcraani tai sisplatiini, antimetaboliitit, kuten foolihappoantagonistit (metotreksaatti) ja puriini-ja pyrimidiiniemästen antagonistit (merkaptopuriini, 5-fluoriuridiini, sytarabiini), sytostaattisesti aktiiviset antibiootit, kuten antrasykliinit (esim. doksorubisiini, dau-norubisiini), hormonit, kuten fosfestroli, tamoksifeeni, muut sytostaattisesti/sytotok-15 sisesti aktiiviset kemoterapeuttiset aineet ja muut immuunivastetta heikentävät lääkkeet (kuten syklosporiinit, FK 506, rapamysiinit, desoksipergualiini, jne.).

Yleisen kaavan I yhdisteiden mahdollisia suoloja ovat ennen kaikkea alkali-, maa-alkali-ja ammoniumsuolat fosfaattiryhmästä. Edullisia alkalisuoloja ovat litium-, natrium-ja kaliumsuolat. Mahdollisia maa-alkalisuoloja ovat magnesium ja kalsium 20 erityisesti. Keksinnön mukaan ammoniumsuoloilla käsitetään niitä, jotka sisältävät ammoniumionin, joka voi olla substituoilu jopa neljä kertaa alkyylitähleellä, jossa φ · :·. on 1-4 hiiliatomia ja/tai aralkyylitähteellä, edullisesti bentsyylitähteillä. Tässä sub- • ·· stituentit voivat olla samanlaisia tai erilaisia.

··· ···«

Yleisen kaavan I yhdisteet voivat sisältää emäksisiä ryhmiä, erityisesti aminoryhmiä, • · · ϊ,ί : 25 jotka voidaan muuntaa happoadditiosuoloiksi sopivilla epäorgaanisilla tai or gaanisilla hapoilla. Tässä mielessä mahdollisia happoja ovat erityisesti kloorivety- • ·*♦ happo, bromivetyhappo, rikkihappo, fosforihappo, fumaarihappo, meripihkahappo, • · * · .···. viinihappo, sitruunahappo, maitohappo, maleiinihappo tai metaanisulfonihappo.

«·· *:*·: Yleisessä kaavassa I tarkoittaa edullisesti suoraketjuista Cg-Ci5-alkyyliryhmää.

·;··· 30 Erityisesti Rl tarkoittaa nonyyli-, dekyyli-, undekyyli-, dodekyyli-, tridckyyli- tai . *, tetradekyyliryhmää.

• · · ·*·· R2 tarkoittaa edullisesti suoraketjuista Cg-Ci5-alkyyliryhmää. R^ tarkoittaa erityisesti oktyyli-, nonyyli-, dekyyli-, undekyyli-, dodekyyli-, tridckyyli- tai tetradekyyliryhmää.

5 117673 X on edullisesti sulfinyyli tai sulfonyyli ja Y on happi. r5 on edullisesti vety.

Kumpikin R^ ja R^ tarkoittaa edullisesti hydroksia.

Erityisen edullisia ovat sellaiset yhdisteet, joissa R^ tarkoittaa vetyatomia ja R^ ja 5 R4 tarkoittavat hydroksia.

Yleisen kaavan III emäksissä tähteet R^ ja R^ tarkoittavat edullisesti vetyatomia, metyyliä, trilluorimetyyliä, etyyliä, propyyliä tai butyyliä tai halogeeniatomia, kuten fluoria, klooria, bromia tai jodia, kuten myös alkenyyli- ja/tai alkenyyliryhmää, joka voi olla substituoitu halogeenilla.

10 RÖ ja R7 ovat erityisen edullisesti vetyatomi, metyyli-, trifluorimetyyli- tai etyyli-tähde ja fluori-, kloori- tai bromiatomi ja/tai vinyyli-, propenyyli-, etinyyli- tai pro-pinyylitähteitä mahdollisesti substituoituna halogeenilla.

Tähde RS on edullisesti vetyatomi, metyyli, etyyli, propyyli tai butyyli, aminoryhmä tai halogeeniatomi, kuten fluori, kloori, bromi tai jodi, edullisesti kloori tai bromi.

15 Rtarkoittaa edullisesti vetyä, fluoria, klooria tai bromia, C j -C^-alkoksiryhmää, erityisesti metoksia, etoksia, propoksia, butoksia tai heksyylioksia, merkaptotähdet-tä, Ci-Cg-alkyylimerkaptoryhmää, erityisesti metyylimerkaptoa, etyylimerkaptoa, • · · . butyylimerkaptoa tai heksyylimerkaptoryhmää, tai aminoryhmää, joka voi olla mo- • · * no-tai disubstituoitu Ci-Cö-alkyyliryhmällä, kuten metyylillä, etyylillä, butyylilla • · : ” 20 tai heksyylillä, hydroksi^-Cg-alkyyliryhmällä, kuten hydroksietyylillä, hydroksi- propyylillä, hydroksibutyylillä tai hydroksiheksyyliryhmällä, C3-C(5-sykloalkyyli-tähteellä, kuten syklopropyylillä, syklopentyylillä tai sykloheksyylillä, aryylillä, • · · : edullisesti fenyylillä, aralkyylitähteellä, kuten erityisesti bentsyylillä, joka mahdolli sesti on substituoitu yhdellä tai useammalla hydroksi-tai metoksiryhmällä, Ci-Cg- • ;*: 25 alkyyliryhmällä, kuten metyylillä, etyylillä, propyylillä, butyylillä tai heksyylillä, tai * * * * .·*·. halogeeniatomeilla, kuten fluorilla, kloorilla tai bromilla. Samoin aminoryhmä voi • φ olla substituoitu hetaryylialkyylillä tai hetaryylillä, kuten erityisesti tienyylillä, fu- * * ryylillä tai pyridyylillä. Erityisesti tarkoitetaan hetaryylitähteellä tienyylimetyyli-, furyylimetyyli- tai pyridyylimetyylitähdettä.

• · « · · ·** j 30 Seuraavat nukleosidit ovat erityisen sopivia kytkentäkomponentteja kaavan I lipidi-• · · *· *: nukleotidikonjugaattien valmistamiseksi: 6-merkaptopuriini-9^-D-ribofuranosidi 6 117673 5-fiuoriuridiini lnosiini 5-metyyliuridiini 2',3'-didesoksi-2',3'-difluoritymidiini 5 5-klooriuridiini 5-trifluorimetyyliuridiini 5-etinyyliuridiini 5-etinyylisytidiini 5-prop-1-enyyliuridiini 10 5-prop-2-enyyliuridiini Adenosiini Guanosiini 2,6-diaminopuriini-9-3-D-ribofuranosidi 2-amino-6-merkaptopuriini-9-3-D-ribofuranosidi 15 2-amino-6-merkaptometyylipuriini-9-3-D-ribofuranosidi 2-amino-6-klooripuriini-9-3-D-ribofuranosidi 2'-dcsoksi-2'-aminoadenosiini 2'-desoksi-2'-atsidoadenosiini 2'-desoksi-2'-atsidosytidiini 20 2'-desoksi-5-fluoriuridiini 2-klooriadenosiini 2-bromiadenosiini : 3'-desoksi~3'-fluoriadenosiini • · · * * :·. 6-metyylimarkaptopuriini-9-P-D-ribofuranosidi • * · 25 2-lluori adenosiini • · · **" 2-fluori-2'-desoksiadenosiini • · · * * · • · · :.:: Yleisen kaavan I yhdisteet voidaan valmistaa

. . 1. saattamalla yhdiste, jolla on kaava V

• * · ··· · R-X-nb

* * R2-Y-CH O

***** I II

..... ch2-o-p-oh (V)

***** I

OH

• · • * · • * · : 30 jossa Rl, r2, X ja Y tarkoittavat samaa kuin edellä, reagoimaan yhdisteen kanssa,

jolla on kaava VI

7 117673

H-O-CTl·, B

Y°h) <V’) R3 R4 jossa R^, R^, r5 ja B tarkoittavat samaa kuin edellä, tai tarkoittavat hydroksiryh-mää, joka on suojattu yleisesti tunnetulla happea suojaavalla ryhmällä, 5 aktivoivan happokloridin, kuten 2,4,6-tri-isopropyylibentseenisulfonihappokloridin ja tertiäärisen typpiemäksen, esim. pyridiinin tai lutidiinin läsnä ollessa, inertissä liuottimessa, kuten tolueenissa, tai välittömästi vedettömässä pyridiinissä ja mahdollisesti hydrolyysin jälkeen, poistamalla happea suojaavat ryhmät nukleosidikemiassa 10 tunnetuilla menetelmillä, tai 2. saattamalla yleisen kaavan VII yhdiste r'-x-ch2 r2-y-ch O ch3 > Il +1 CH2-0“P-0-CH2-CH2-N-CH3 (vn) o ch3 •a''.'1' u aa1 *aa< * a a 15 jossa R^, R^, X ja Y tarkoittavat samaa kuin edellä, reagoimaan yhdisteen kanssa, : *·· jolla on kaava VI, jossa R3, r4, r5 ja b tarkoittavat samaa kuin edellä, Streptomy- „;·* ces peräisen fosfolipaasin D läsnä ollessa inertissä liuottimessa, kuten kloroformissa : :*: sopivan puskurin läsnä ollessa ja mahdollisesti reaktion jälkeen poistetaan happea suojaavat ryhmät nukleosidikemiassa tunnetuilla menetelmillä.

20 • .·. Yleisten kaavojen V ja VII yhdisteet valmistetaan analogisesti julkaisujen Lipids 22, 947 (1987) ja J. Med. Chem. 34, 1377 (1991) mukaisesti.

• · * · # *"*ί Yleisen kaavan VI yhdisteiden valmistusta on selostettu esim. julkaisussa EP-A- ·:·*; 25 0 286 028 ja WO-90/08147. Eräät kyseisistä nukleosideistä ovat kaupallisesti saata- via yhdisteitä.

* * · ·*· · * * • · · * " Kaavan I mukaisia yhdisteitä selostetaan julkaisussa EP- A-0 350 287. Siinä on se lostettu glyserolin vastaavia 1,2-diestereitä.

' ' . i 8 117673

Kaavan I mukaisia yhdisteitä sisältäviä lääkkeitä virusinfektioiden hoitamiseen voidaan antaa nestemäisissä tai kiinteissä muodoissa suolistoon tai ruoansulatuskanavan ulkopuolista tietä. Tässä tavalliset antomuodot ovat mahdollisia, kuten tabletit, 5 kapselit, päällystetyt tabletit, siirappi, liuokset tai suspensiot. Vettä käytetään edullisesti ruiskeväliaineena, jolloin se sisältää lisäaineita, kuten stabilointiaineita, liuotinaineita ja puskureita, kuten tavanomaista ruiskeliuoksissa. Tällaisia lisäaineita ovat esim. tartraatti- ja sitraattipuskurit, etanoli, kompleksointiaineet, kuten etyleeni-di amiini te traetikkahappo ja sen myrkyttömät suolat, suunnolekyylipolymeerit, kuten 10 nestemäinen polyetyleenioksidi viskositeetin säätämiseksi. Nestemäisten apuaineiden tulee ruiskeliuoksia varten olla steriilejä ja ne täytetään ampulleihin. Kiinteitä kantajia ovat esim. tärkkelys, laktoosi, mannitoli, metyyliselluloosa, talkki, erittäin hienoksi dispergoidut piihapot, suurmolekyyliset rasvahapot, kuten steariinihappo, gelatiini, agar-agar, kalsiumfosfaatti, magnesiumstearaatti, eläin-ja kasvirasvat, 15 kiinteät suunnolekyylipolymeerit, kuten polyetyleeniglykoli jne. Haluttaessa voivat suun kautta annettavat formulaalit sisältää maku- tai makeutusaineita.

Annostus riippuu eri tekijöistä, kuten antotavasta, lajista, iästä tai yksilöllisestä kunnosta. Keksinnön mukaisia yhdisteitä annetaan tavallisesti 0,1-100 mg, edullisesti 0,2-80 mg päivässä/kg painoa. On edullista jakaa päiväannos 2-5 osaan, jolloin tab-20 lettejä, joiden aktiivisen ainesosan pitoisuus on 0,5-500 mg, annetaan kullakin ker- • * • *·· ralla. Tabletit voivat samoin olla hitaasti vapautuvia, jolloin annostuksien lukumää- * · rää voidaan vähentää 1-3/päivä. Hitaasti vapautuvien tablettien aktiivisen ainesosan pitoisuus voi olla 2-1000 mg. Aktiivista ainesosaa voidaan myös an taa jatkuvina in- ··· fuusioina, jolloin 5-1000 mg päivässä tavallisesti riittää.

• · * * · * *;j;' 25 Esimerkeissä mainittujen yhdisteiden lisäksi voidaan esillä olevan keksinnön mukai- • · * *·* * sesti käyttää seuraavia kaavan 1 yhdisteitä: : 1. (5-klooriuridiini)-5'-fosforihappo-(3-dodekyylimerkapto-2-dekyylioksi)propyyli-

Ml I

,··*. esteri • · *·' 2. (5-trifluorimetyyliuridiini)-5'-fosforihappo-(3-dodekyylimcrkapto-2-dekyylioksi)- ’*'** 30 propyylicsteri « 3. (6-merkaptopuriini-9-3-D-ribofuranosidi)-5'-fosforihappo-(3-dodekyylimerkapto-: 2-dekyylioksi)propyyliesteri · 4, (5-fluoriuridiini)-5'-fosforihappo-(3-dodekyylimerkapto-2-dekyylioksi)propyyli-

• M

esteri 9 117673 5. (5-prop-l-enyyliuridiini)-5'-fosforihappo-(3-dodekyylimerkapto-2-dekyylioksi)-propyyliesteri 6. (5-etinyylisytidiini)-5'-fosforihappo-(3-dodekyylimerkapto-2-dekyylioksi)propyy-liesteri 5 7. (2-amino-6-merkaptopuriini-9-3-D-ribofuranosidi)-5'-fosforihappo-(3-dodekyyli- merkapto~2-dekyylioksi)propyyli esteri 8. (2,6-diaminopuriini-9^-D-ribofuranosidi)-5'-fbsfbrihappo-(3-dodekyylimerkap~ to-2-dekyylioksi)propyyliesteri 9. (5-prop-2-enyyliuridiini)-5'-fosforihappo-(3-dodekyylimerkapto-2-dekyylioksi)-10 propyyliesteri 10. (5riluoriuridiini)-5'-fosforihappo-(3-dodekyylisulfonyyli-2-dekyylioksi)propyy-liesteri 11. (5-klooriuridiini)-5'-fosforihappo-(3-dodekyylisulfonyyli-2-dekyylioksi)propyy-liesteri 15 12. (6-merkaptopuriini-9-P-D-ribofuranosidi)-5'-fosforihappo-(3-dodekyylisulfo- nyyli-2-dekyylioksi)propyyliesteri 13. (5-fluoriuridiini)-5'-fosforihappo-(3-dodekyylioksi-2-dekyylioksi)propyyliesteri 14. (6-merkaptopuriini’9^-D-ribofuranosidi)-5'-fosforihappo-(3-dodekyylioksi-2- dekyylioksi)propyyli esteri 20 15. (5-fluoriuridiinii)-5’-fosforihappo-(3-dodekyylimerkapto-2-dekyylimerkapto)- propyyliesteri 16. (5-fluoriuridiini)-5'-fosforihappo-(3-undekyylimerkapto-2-undekyylioksi)pro-.·. : pyyliesteri ’ 17. (5-trifluorimetyyliuridiini)-5'-fosforihappo-(3-undckyylimerkapto-2-undekyyli- • * * 25 oksi)propyyliesteri **·; 18. (6-merkaptopuriini-9^-D-ribofuranosidi)-5'-fosforihappo-(3-undekyylimerkap- • · · *·ί·* to-2-undekyylioksi)propyyliesteri * 19. (5-trifluorimetyyliuridiini)-5'-fosforihappo-(3-dekyylimerkapto-2-dodekyyli-ok- si)propyyliesteri 30 20. (5-fluoriuridiini)-5'-fosforihappo-(3-undekyylimerkapto-2-dodekyylioksi)pro- :***: pyyliesteri * ·· | . 21. (5-trifluorimetyyliuridiini)-5'-fosforihappo-(3-undekyylimerkapto-2-dekyyli- [ oksi)propyyliesteri * * 22. (6-merkaptopuriini-9-3-D-ribofuranosiidi)-5'-fosforihappo-(3-tetradekyylimer- j 35 kapto-2-dekyylioksi)propyyliesteri :\j 23. (5-fluoriuridiini)-5,-fosforihappo-(3-tridekyylimerkapto»2-dekyylioksi)propyyli- ♦ · esteri f 117673 ίο 24. (2-fluoriadenosiini)-5'-fosfonhappo-(3-dodekyylimerkapto-2-dekyylioksi)pro-pyyliesteri 25. (2-desoksi-2-fluoriadenosiini)-5'-fosforihappo-(3-dodekyylimerkapto-2-dekyyli-oksi)propyyliesteri 5 26. (6-merkaptopuriini-9-3-D-ribofuranosidi)-5'-fosforihappododekyyliesteri 27. (5-fluoriuridiini)-5'-fosforihappohcksadekyyliesteri 28. (5-trifIuorimctyyliuridiini)-5'-fosforihappoeikosyyliesteri 29. (5-fluoriuridiini)-5'-fosforihappododckyyliesteri 30. (6-merkaptopuriini-9^-D-ribofuranosidi)-5'-fosfbrihappododekyyliesteri 10

Esimerkki 1 (5-fluoriuridiini)-5l-fosforihappo-(3-dodekw1imerkapto-2-dekwlioksi')nropwliesteri 3,6 g (6,1 mmol) fosforihappo-(3-dodekyylimerkapto-2-dckyylioksi)propyyliesteriä 15 käsiteltiin kahdesti 30 mklla vedetöntä pyridiiniä ja väkevöitiin haihduttamalla. Jäännös liuotettiin 30 inkaan vedetöntä pyridiiniä, käsiteltiin 2,76 g:lla (9,1 mmol) 2,4,6-tri-isopropyylibentseenisulfonihappokloridia typpiatmosfäärissä ja sekoitettiin huoneenlämpötilassa 30 min. Sen jälkeen lisättiin 1,60 g (6,1 mmol) 5-fluoriuridii-nia (Fluka) ja panoksen annettiin seistä N2:ssa 24 tuntia.

20 .. Hydrolyysi suoritettiin käyttäen 15 ml vettä, seosta sekoitettiin vielä 2 tuntia huo- • * · *, . neenlämpötilassa, liuotin poistettiin tyhjössä ja stripattiin kahdesti käyttäen pientä • · » \‘m· määrää tolueenia. Jäännös puhdistettin kolonnikromatografialla LiChroprcp® RP- * · : " . 18 metanoli/vesi 7/1 lineaarigradicntilla käyttäen metanolia eluenttina. Saanto oli 25 3,1 g (69 % teoreettisesta määrästä), öljy, Rf = 0,24 (CH2/Cl2/MeOH 82); Rf - 0,55 (CH2Cl2/MeOH/H20 6,5/2,5/0,4 Merck 5715 TLC-levyillä, piigeeli 60 F.

··· • · · • P ·

Fosforihappo-(3-dodekyylimerkapto-2-dekyylioksi)propyyliesteri valmistettiin, ku- : :*· ten on selostettu julkaisussa WO-92/03462.

· * · • * · *·”* 30 Esimerkki 2 *:·*: (6-merkaptopuriini-9-B-D-ribofuranosidi)-5,-fosforihappo-('3-dodekwlimerkaDto-2- *:1: dekwlioksi)propvvliesteri * * · • » * *,1 ; 6,2 g (12,5 mmol) fosforihappo (3-dodekyylimcrkapto-2-dekyylioksi)proppyliesteriä • · * 35 käsiteltiin 5,7 g:lla (18,75 mmol) 2,4,6-tri-isopropyylibentseenisulfonihappokloridia, 117673 li kuten on selostettu esimerkissä 1 ja sen jälkeen 3,55 g:lla (11,25 mmol) 6-merkap-topuriini-9-3-D-ribofuranosidia ja 24 tunnin jälkeen tämä hydrolysoitiin vedellä.

Sen jälkeen 2,85 g kalsiumasetaattia 15 mhssa vettä lisättiin hitaasti tipoittain saos-5 taen konjugaatin raaka kalsiumsuola. Sakan pitempiaikaisen sekoituksen jälkeen asetonin kanssa (1/10) saatiin 6 g amorfista raakatuotetta, jolla oli 72 pinta-% HPLC:n mukaan.

Kalsiumsuola suspendoitiin 350 mkaan metanolia, käsiteltiin 150 g:lla Amberlite IR

120 Na+-muodossa ja sekoitettiin 2 päivää.

10 Sen jälkeen ioninvaihdin poistettiin, suodate haihdutettiin ja jäännös puhdistettiin kolonnikromatografialla LiChroprep® RP-18 metanoli/veden 5/1-9/1 lineaarigradi-entilla. Tuotetta sisältävät fraktiot haihdutettiin tyhjössä ja jäännös sekoitettiin asetonin kanssa ja kuivattiin. Saanto: 3,52 g (41 % teoreettisesta määrästä).

DC: Rf= 0,45 (isopropanoli/butyyliasetaatti/väkevä ammoniakki/vesi 50/30/5/15).

15

Esimerkki 3 (6-merkaptopuriini-9-B-D-ribofuranosidiV5'-fosforihappo-(3-dodekwlimerkapto-2-dekvvlioksi)propvvliesterin natriumsuola *· t · " 20 Analogisesti esimerkin 2 kanssa saatettiin 41,4 g fosforihappo-(3-dodekyylimerkap- * « · ]· to-2-dekyylioksi)propyyliesteriä 400 mhssa vedetöntä pyridiiniä reagoimaan 42,9 g • · I ** kanssa 2,4,6-tri-isopropyylibentseenisulfonihappokloridia ja sen jälkeen 23,7 g kanssa 6-merkaptopuriini-9-[3-D-ribofuranosidia. Raaka kalsiumsuola, joka imusuo-

Ci.: datettiin hydrolyysin jälkeen ja saostettiin 25 g:lla kalsiumasetaattia 160 mhssa :T: 25 vettä, jaettiin 500 mhn MTB ja 250 mhn 2N HC1 kesken ja sekoitettiin, kunnes se oli kokonaan liuennut orgaaniseen faasiin. Orgaaninen faasi erotettiin, pestiin kylläi- : .*. sellä natriumkloridiliuoksella ja väkevöitiin pyörivässä haihduttimessa. Jäännös ,···. levitettiin 80 g:lle LiChroprep® RP-18 (käsittele raakatuotteen MTB-liuosta RP- ***t 18:sta, haihduta ja kuivaa) ja erotettiin annos annokselta pre-kolonnissa RP-18:sta.

30 Kullakin kerralla seos, jossa oli 3,7 1 metanolia, 400 ml vettä, 3 ml jääetikkahappoa ja 2 g natriumasetaattia, toimi eluenttina. Tuotetta sisältävät jakeet yhdistettiin, : haluttu yhdiste saostettiin lisäämällä 20 g kalsiumasetaattia 100 mhssa vettä ja ['·[ I imusuodatettiin. Saanto: 32 g (43 % teoreettisesta määrästä).

· · * * 12 117673

Kalsiumsuola suspendoitiin 250 ml:aan MTB:tä, uutettiin 80 ml:lla 2N HC1 ravistaen ja orgaaninen faasi pestiin kahdesti natriumkloridin kylläisellä liuoksella. Liuottimen poistamisen jälkeen jäännös liuotettiin 200 ml:aan tolueenia ja säädettiin pH-arvoon 7 Friscolyt-elektrodia vasten 30:%:isella natriummetylaattiliuoksella.

5 Natriumsuola saostettiin sekoittamalla 200 ml:aan asetonia, imusuodatettiin ja kuivattiin tyhjökuivausuunissa. Saanto: 29 g (37 % teoreettisesta määrästä).

Rf-arvo: 0,18 (piigeeli; eluentti; isopropanoli/butyyliasetaatti/vesi/väkevä ammoniakki 50/30/15/5).

10

Esimerkki 4 (6-merkaptopuriini-9-B-D-ribofuranosidi)-5'-fosforihappo-(3-dodekw1imerkapto-2-dekvvlioksi)propvvliesterin natriumsuola 15 Analogisesti esimerkin 3 kanssa valmistettiin raakakonjugaattia 40 g 6-merkaptopu-riini-9-(3-D-ribofuranosidia. Raakatuote puhdistettiin kolonnikromatografialla käyttäen 8 g kullakin kerralla, kolonnilla DIOL-faasilla (halkaisija 4 cm; pituus 25 cm) (mittaus 254 nm:ssa; eluentti: metanoli/MTB 10/4). Lisätty näyte oli selvästi liuennut eluenttiin. Eri valmistusten tuotetta sisältävät jakeet yhdistettiin, haihdutettiin ja 20 saostettiin natriumsuolan tolueenista ja asetonista, kuten esimerkissä 3. Saanto: 64,5 g (51 % teoreettisesta määrästä).

• · • · * *· \ . Rf arvo: 0,85 (DIOL-faasi; eluentti: metanoli).

• *·· • · ·♦ : ** Esimerkki 5 • # ---- •••t 25 (6-merkaptopuriini-9-B-D-ribofuranosidi)-5,-fosforihappo-(3-dodekvvlimerkapto-2- ♦ dekwlioksi)propvvliesterin natriumsuola ·♦· . · * * · • · · «

Analogisesti esimerkin 1 kanssa saatettiin 14,9 g 6-merkaptopuriini-9-B-D-ribofura- : nosidia (50 mmol) reagoimaan seka-anhydridin kanssa, joka oli valmistettu 27,3 ··· · 30 g:sta fosforihappo-(3-dodekyylimerkapto-2-dekyylioksi)propyyliesteriä ja 25 g:sta ··♦ • , 2,4,6-tri-isopropyylibentseenisulfonihappokloridia 250 mkssa vedetöntä pyridiiniä, | hydrolysoitiin ja väkcvöitiin haihduttamalla. Analogisesti esimerkin 3 kanssa puh- distettiin raakatuote (HPLC: 67 pinta-%) kromatografisesti RP-18:lla, saostettiin • :*· kalsiumsuolana ja muunnettiin natriumsuolaksi. Saanto: 15,2 g (38 % teoreettisesta * · * .‘.j 35 määrästä).

• * 13 117673

Rf arvo: 0,22 (piigeeli; eluentti: isopropanoli/butyyliasetaatti/vesi/väkevä ammoniakki 50/30/15/5).

Esimerkki 6 5 (5-fluoriuridiini)-5'-fosforihappo-(3-dodekwlimerkapto-2-dekwlioksi)propwli-esterin natriumsuola

Analogisesti esimerkin 1 kanssa muunnettiin 50 g 5-fluoriuridiinia raakakonjugaa-tiksi, saostettiin kalsiumsuolana, kuten on selostettu esimerkissä 3 ja sen jälkeen 10 muunnettiin vapaaksi hapoksi, puhdistettiin raakatuote kromatografisesti analogisesti esimerkin 4 DIOL-faasilla käyttäen metanolia/MTB 10/4 eluenttina. Natrium-suola, joka oli valmistettu kuten esimerkissä 3, eristettiin 69 % saantona.

Rf arvo: 0,35 (DIOL-levyt; eluentti: metanoli/MTB 10/4).

15

Esimerkki 7

Atsatiopriinin, 6-merkaptopuriinin (6- MP), 6-merkaptopuriiniribosidin, 6-MPR-DMDOPE ja doksorubisiinin lC5o-arvoja ^g/ml) CFU-E ja CFU-GM-analyyseissä.

Tämä taulukko esittää atsatiopriinin, 6-merkaptopuriinin (6- MP) ja 6-merkaptopu-20 riiniribosidin ICso-arvoja (μg/ml) verrattuna (6-merkaptopuriini-9-p-D-ribofuraano-sidi)-5'-fosiorihappo-(3-dodekyylimerkapto-2-dekyylioksi)propyyliesteri 6-MPR- * · * : DMDOPE:hen in vitro sytotoksisuuden suhteen hiirten rintalastan luuydinsoluissa, ’* mukaan luettuna kasvupesäkkeitä muodostavat yksiköt/erytrosyytit (CFU-E) ja : ** kasvupesäkkeitä muodostavat yksiköt/granulosyytti-makrofagit (CFU-GM).

25 Sytostaatti/sytotoksinen yhdiste doksorubisiini oli myös mukana vertailuaineena. Kaikkia yhdisteitä testattiin 3-6 erilaisessa kokeessa konsentraatioriippuvaisesti • t· V * vähintään kaksikertaisilla tai kolminkertaisilla inkubaatioilla testattua pitoisuutta kohden.

• · # * a *".* Kuten tuloksista nähdään, sietävät rintalastan luuydinsolut paljon paremmin 6-MPR- ·;·* 30 DMDOPE:tä verrattuna kaikkiin muihin testattuihin yhdisteisiin, erityisesti verrattu- *“*: na 6-merkaptopuriiniribosidiin.

* * . Atsatiopriinin, 6-merkaptopuriinin (6- MP), 6-merkaptopuriiniribosidin, 6-MPR- ; DMDOPE:njadoksorubisiininIC50-arvoja(pg/ml)CFU-EjaCFU-GM-analyy- • · seissä.a 35 14 117673

Yhdiste CFU-E CFU-GM

Atsatiopriini 0,0004 ± 0,0001 (4) 0,0043 ± 0,0019 (3) 6-MP 0,0003 ± 0,0001 (4) 0,0023 ± 0,00009 (3) 6-MP-ribosidi 0,0003 + 0,0001 (4) 0,0023 ± 0,00013 (3) 6-MPR-DMDOPE 0,056 ± 0,013 (5) 0,0247 ± 0,044 (6)

Doksorubisiini 0,0017 ± 0,0005 (4) 0,050 ± 0,004 (4) a Keskiarvo ± SEM; n erilaisten kokeiden lukumäärä.

Esimerkki 8 6-MPR-DMDOPE:n, atsatiopriinin, 6-merkaptopuriinin ja 6-merkaptopuriiniribo-5 sidin luuydintoksisuus naaraspuolisissa Balb/c-hiirissä: Päivä + 4 (koe. 930740).

Koe 930740 osoittaa 6-MPR-DMDOPE:n, atsatiopriinin, 6-merkaptopuriinin ja 6- merkaptopuriiniribosidin luuydintoksisuuden naaraspuolisissa Balb/c-hiirissä, joita käsiteltiin kerran päivässä suun kautta neljänä perättäisenä päivänä (päivä 0 - päivä +3). Eläimet tapettiin päivänä+4 ja luuydinsoluisuus (soluja/reisiluu) määritettiin.

10 Tulokset eivät osoita mitään luuydintoksisuutta 6-merkaptopuriiniribosidieetterilipi- dikonjugaatille 6-MPR-DMDOPE suurimmallekaan testatulle annokselle, se on 100 mg/kg'Vpäivä'l, joka vastaa mooleissa 30 mg/kg'Vpäivä'l 6-merkaptopuriiniribo- ..f sidia. Tällä jälkimmäisellä yhdisteellä esiintyy päinvastoin kuin eetterilipidikonju- • «· *. . gaatilla 6-MPR-DMDOPE selvästi annoksesta riippuva aleneminen yhdessä luu- • · · 15 ydinsoluisuudessa. Sama huomio tehtiin muillekin aineille mukaan luettuna atsatio- ♦ · : ** priini ja 6-merkaptopuriini.

··· i«·· : 6-MPR-DMDOPE:n, atsatiopriinin, 6-merkaptopuriinin ja 6-merkaptopuriiniribosi- * * * ' .\ din luuydintoksisuus naaraspuolisissa Balb/c hiirissä: päivä + 4 (koe 930740).

* · • « · ·*** .*·*. Yhdiste Annos Soluja/reisiluu (10^) (mg/kg-V- ***** ··_ 1 \ päivä ')

Verrokki (0,5 % Tylosla) - 15,9 ± 1,4 (8) a J .*. Atsatiopriini 10 11,6 ± 0,4 (9) * .\t: Atsatiopriini 30 9,6 ± 0,9 (9) ** 6-merkaptopuriini 10 13,0 ± 1,5 (8) 6-merkaptopuriini 30 6,5 ± 0,7 (9) ** 117673 15 Γ 6-merkaptopuriiniribosidi 1Ö 12,6 + 0,5 (9) ** 6-merkaplopuriiniribosidi 30 9,3 ± 0,5 (9) ** 6-MPR-DMDOPE 30 15,4 ± 0,9 (9) 6-MPR-DMDOPE 100 13,0 ± 0,6 (9) a keskiarvo + SEM, käsittely kerran päivässä suun kautta, päivä 0 - päivä+3 tapettiin päivänä +4 * p < 0,05 5

Mann-Whitney-testi ** p < 0.01 10 Esimerkki 9 6-MPR-DMDOPE:n, atsatiopriinin, 6-merkaptopuriinin ja 6-merkaptopuriiniribosi-din ja syklosporiinin A luuydinloksisuus naaraspuolisissa Balb/c-hiirissä: Päivä + 4 (koe. 940026).

15 Koe 940026 on koe, jonka tarkoituksena on toistaa kokeessa 930740 (esimerkki 8) saadut tulokset. Tässä kokeessakin käytettiin syklosporiinia A vertailun yhdisteenä. Kokeen 940026 tulos vahvisti kokeessa 930740 in vivo saatuja tuloksia.

m • · • · · 6-MPR-DMDOPE:n, atsatiopriinin, 6-merkaptopuriinin ja 6-merkaptopuriiniribosi- • · ; ** din ja syklosporiinin A luuydintoksisuus naaraspuolisissa Balb/c hiirissä: päivä + 4 20 (koe 940026).

• ♦ ♦ • · ·

Yhdiste Annos Soluja/reisiluu (lOfy (mg/kg-V- . ^ päivä’1) :l.: Verrokki (0,5 % Tylosla) - 15,6 ± 0,8 (10) a *·;*' Atsatiopriini 10 11,1 ± 0,6 (10) ** :··: Atsatiopriini 30 9,1 ± 0,5 (10) ** ·;·*· 6-merkaptopuriini 10 10,9 ± 0,9 (10) * , *, 6-merkaptopuriini 30 6,2 ± 0,5 (10) ** • · * | 6-merkaptopuriiniribosidi 10 13,7 ±1,4 (10)* *· " 6-merkaptopuriiniribosidi 30 8,4 ± 0,4 (10) ** 6-MPR-DMDOPE 30 14,3 ± 0,5 (10) 16 117673 6-MPR-DMDOPE 100 13,0 ± 0,4 (10)

Sykloporiini A 5 13,1 ± 0,4 (10)

Sykloporiini A 10 7,6 ± 1,4 (10) ** a keskiarvo + SEM, käsittely kerran päivässä suun kautta, päivä 0 - päivä +3 tapettiin päivänä +4 * p < 0,05 5

Mann-Whitney-testi ** p < 0,01 10 Esimerkki 10 5-FU-DMDOPE:n ja 5-FU:n luuydintoksisuus (μΜ) CFU-E-ja CFU-GM-analyy- seissä.

Seuraavalla sivulla esitetty taulukko esittää 5-fluoriuridiinin (5-FU) ja (5-fluoriuridiini)-5,-fosforihappo-(3-dodekyylimerkapto-2-dekyylioksi)propyyliesterin 15 (5-FU-DMDOPE) keskimääräiset IC5o-arvot luuydintoksisuudelle in vitro CFU-E-ja CFU-GM analyyseissä. Analyysiolosuhteiden suhteen viitataan esimerkin 7 selos- ·*·,, tukseen.

• · * * ·

Tulokset osoittavat 5-fluoriuridiini(5-FU-DMDOPE)eetterilipidikonjugaatin 610 • « : I* kertaa ja 238 kertaa vähemmän myrkylliseksi crytrosyyttF ja granulosyytti/makro- 20 fagiluuydinsoluille verrattuna itse 5-FU:hun.

• · * • « * 5-FU-DMDOPE:n ja 5-FU:n luuydintoksisuus (μΜ) CFU-E-ja CFU-GM-analyy- seissä

Yhdiste CFU-Ea CFU-GM3 C.*: 5-FU-DMDOPE 0,372 (3) 1,178 (7) 610 x 238 x 5-FU 0,00061 (3) 0,00496(10) • * • · ·«· * ♦ • * € · : a keskiarvo, n kokeiden lukumäärä • ·· • · 25 117673 17

Esimerkki 11

Konjugaatti 5-FU-DMDOPE:n (kuvio 1) ja 5-FU:n (kuvio 2) vaikutus L 1210 leukemiaan in vivo: Elinaika.

Lieriöön ympättiin L 1210 -leukemiasoluja päivänä 0 (n = 19 eläintä/ryhmä) ja kä-5 siteltiin sen jälkeen kerran päivässä ip päivästä 0 (+1 tunti) - päivään+41 (6 viikkoa) kuvioissa 1 ja 2 esitetyillä viikkokierroilla.

Kuvion 1 esittämien verrokki- ja hoitoryhmien eloonjäämiskäyristä ilmenee, että 5-FU:lla on, kuten kirjallisuudessa on ilmoitettu, hyvin kapea annos-tehoprofiili, so. kun annosta lisätään esim. 2 x 10/5 x 0,1 mg/kg" Vpäivä'1 - 2 x 10/5 x 0,3 10 mg/kg 1 /päivä" 1 tai jopa korkeampiin annoksiin, saadaan lyhyempiä eloonjäämislu- kuja.

Sitä vastoin 5-FU-eetterilipidikonjugaatilla 5-FU-DMDOPE saadaan selvästi annosriippuvainen lisäys eloonjäämisajassa verrattuna verrokkiin 1 ja II (kuvio 1), mikä osoittaa, että ekvimolaariset annokset 5-FU-DMDOPE:tä ovat selvästi 15 tehokkaampia tässä leukemiamallissa verrattuna standardiyhdisteeseen 5-FU.

Ottaen huomioon, että 5-FU-DMDOPE on tehokkaampi (kuviot 1 ja 2) ja paljon vähemmän myrkyllinen luuydinsoluille, voidaan todeta, että 5-FU-DMDOPE: llä on paljon korkeampi terapeuttinen indeksi/suhde verrattuna standardisytostaattiseen 5- • *** FU:n.

• · ·. ·: 20 • « * · • ·· • · · «·1· • ] • · · • · 1 ··· • « · ··· • 1 1 t · • · · • · ♦ ·1·· • · · ...

• · • 1 • · · ···1· • · ····· • · • · • · · • · φ ··· · - ' . . 1 • · • · ♦ ·

Claims (10)

18 117673

1. Nukleosidimonofosfaattijohdannaiset, tunnetut siitä, että niillä on kaava I r‘-x-ch2 r2-y-ch o CH-O-P-O-CH, B 2 I Jo. I 0,1 CD

2 I R-Y-CH O CH3 CH2-0-P-0-CH2“CH2“N-CH3 (VH) O CH3 5 jossa Rl, R^, X ja Y tarkoittavat samaa kuin edellä, reagoimaan yhdisteen kanssa, jolla on kaava VI, jossa R^, r4? r5 ja jj tarkoittavat samaa kuin edellä, Streptomy-ces-peräisen fosfolipaasin D läsnä ollessa inertissä liuottimessa, kuten kloroformissa, sopivan puskurin läsnä ollessa ja mahdollisesti reaktion jälkeen poistetaan happea suojaavat ryhmät nukleosidikemiasta tunnetuilla menetelmillä. 10

2 I OH 15 · . . - jossa Rl. R-. X ja Y tarkoittavat samaa kuin edellä, reagoimaan yhdisteen kanssa, jolla on kaava VI :·. H-O-CIh B ·:··! ^°h) (VD * · 1 “ *:· R3 R4 « 1· 1 : : 20 jossa R^, r4, r5 ja g tarkoittavat samaa kuin edellä tai tarkoittavat hydroksiryhmää, joka on suojattu yleisesti tunnetulla happea suojaavalla ryhmällä, aktivoivan happo- ; kloridin, kuten 2,4,6-tri-isopropyylibentseenisulfonihappokloridin ja tertiäärisen typ- • · 1 piemäksen, esim. pyridiinin tai lutidiinin, läsnä ollessa, inertissä liuottimessa, kuten • · *;2 25 tolueenissa, tai välittömästi vedettömässä pyridiinissä ja mahdollisesti hydrolyysin *t2: jälkeen, poistamalla happea suojaavat ryhmät nukleosidikemiassa tunnetuilla mene- *:··· telmillä, tai ···'.' • ♦ · • · · ♦ ·♦ ♦ · • · · • · · 2 • · 22 117673 b. saattamalla yhdiste, jolla on yleinen kaavan VII R-X-CH,

2. Patenttivaatimuksen 1 mukaiset nukleosidimonofosfaattijohdannaiset, joilla on kaava I, tunnetut siitä, että Rl on suoraketj uinen Cg-C^-alkyyliryhmä.

3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukaiset nukleosidimonofosfaattijohdannaiset, 5 joilla on kaava 1, tunnetut siitä, että on suoraketjuinen C8-Ci5-alkyyliryhmä.

4. Nukleosidmonofosfatderivat enligt nägot av patentkraven 1 till 3 enligt formeln ....: (I), kännetecknade av att R5 betyder väte. ♦ * »« m « * * . 5. Nukleosidmonofosfatderivat enligt nägot av patentkraven 1 till 4 enligt • · :.:: 35 formeln (I), kännetecknade av att R10 betyder en väte- eller halogenatom, enCrC6- * · alkoxigrupp, en merkaptogrupp, en Ci-C6-alkylmerkaptogrupp eller aminogrupp, som kan vara mono-eller disubstituerad med en CpCg-alkylgrupp eller hydroxi-C2-Ce-alkyl- eller C3-C6-cykloalkylgrupper, aryl, en arylgrupp, som företrädesvis kan 25 117673 vara ytterligare substituerad med en eller flera hydroxigrupper, Ci-C6-alkoxi- eller CrC6,-alkylgrupper eller halogenatomer.

4. Jonkin patenttivaatimuksen 1-3 mukaiset nukleosidimonofosfaattijohdannaiset, joilla on kaava I, tunnetut siitä, että R5 tarkoittaa vetyä.

5 OH i vilken R1, R2, X och Y har den tidigare angivna innebörden, bringas att reagera med en förening med den allmänna farmein VI 10 ii-o-ch2 B &j) : (VI) R3 R4 15. vilken R3, R4’ R5 och B har den tidigare angivna innebörden, eller stär för en av en : 1·1 för fackmannen välkänd syreskyddsgrupp skyddad hydroxigrupp, i närvaro av en • · :,1·· aktiverande syraklorid, tili exempel 2,4,ö-triisopropylbensensulfansyraklorid, och en Γ1.. tertiär kvävebas, tili exempel pyridin eller luhdin, i ett inert lösningsmedel, tili ··· exempel toluen, eller direkt i vattenfritt pyridin, varvid syreskyddsgrupperna efter ; 20 genomförd hydrolys vid behov avspjälkas enligt de inom nukleosidkemin gängse * 1 · metoderna, eller att ··· . b. en förening med den allmänna farmein VII • · · ··· ♦ ··· r‘-x-ch2 ·:··: R2-Y-CH O CH3 ·:··: ch2-o-p-o-ch2-ch2-n-ch3 (Vii) : !\ 25 0 ch3 * · · ···· · • · · • · 1 • · 27 ':: 117673 i vilken R1, R2, X och Y har den tidigare angivna innebörden, bringas att reagera med en förening med den allmänna formeln VI, i vilken R3, R4, R5 och B har den tidigare angivna innebörden, i närvaro av fosfolipas D Iran Streptomyces i ett inert lösningsmedel, till exempel kloroform, i närvaro av en lämplig buffert, varvid 5 syrcskyddsgrupperna efter genomförd hydrolys vid behov avspjälkas enligt de inom nukleosidkemin gängse metodema.

5. Jonkin patenttivaatimuksen 1-4 mukaiset nukleosidimonofosfaattijohdannaiset, joilla on kaava T, tunnetut siitä, että RlO tarkoittaa vetyä tai halogeeni atomia, C4-Cg-alkoksia, merkaptoa, Ci-Cg-alkyylimerkaptoa tai aminoa, joka voi olla mono-tai disubstituoitu Ci-C^-alkyylillä tai hydroksi C2-C6-alkyylillä, tai C3-Cö-syklo-alkyylillä, aryylillä tai aralkyylillä, jotka mahdollisesti edelleen voivat olla substi-15 tuoituna yhdellä tai useammalla hydroksilla, Ci-Cg-alkoksilla tai Ci-Cö-alkyylillä tai halogeeniatomeilla. 6. jonkin patenttivaatimuksen 1-5 mukaiset nukleosidimonofosfaattijohdannaiset, joilla on kaava I, tunnetut siitä, että 20 Rl tarkoittaa suoraketjuista Cg-C^-alkyyliryhmää; R2 tarkoittaa suoraketjuista Cg-Ci4-alkyyliryhmää; R^ ja R4 on hydroksitähde; R^ on vety; • ·· * ... 25 R6 on vety, metyyli, trifluorimetyyli, etyyli, vinyyli, propenyyli, etinyyli, propinyyli tai fluori-, kloori-tai bromiatomi; ;;;* RÖ on vety; • · I - _ R' on vety, metyyli, etyyli, vinyyli, propenyyli, etinyyli, propinyyli tai kloori- tai bromiatomi; : 30 ja/tai R10 tarkoittaa vetyä, metoksia, etoksia, propoksia, butoksia, heksyylioksia, merkap-toa, metyylimerkaptoa, etyylimerkaptoa, butyylimerkaptoa, heksyylimerkaptoa, ..... aminoryhmää, joka mahdollisesti on substituoitu tienyylillä, furyylillä, pyridyylillä, . tienyylimetyylillä, furyylimetyylillä tai pyridyylimetyylillä. : 35 * * * ·

5 R3 R4 joissa Rl voi olla suoraketjuinen tai haarautunut, tyydyttynyt tai tyydyttymätön alkyyli-ketju, jossa on 1-20 hiiliatomia;

10 R2 voi olla vety, suora tai haarautunut, tyydyttynyt tai tyydyttymätön 1 -20 hiili- atomia sisältävä alkyyliketju; R3 tarkoittaa vetyä tai hydroksia; R4 on hydroksi; ®# • * • »· : R5 on vety tai hydroksi; φ · • · ’* 15 X On sulfinyyli-tai sulfonyyliryhmä; • · * ···· ; Y on happiatomi; ··· ··· * · · ‘ B on puriini-ja/tai pyrimidiiniemäs, jolla on kaava III (a-d) • · • · » • * ♦ • · φ φ φ ® · • φ • φ ··· φ φ φ φ φ · · • · φ φφφφφ * · φ φ • · · • · · ··· · * · * φ · #** ·' • φ 19 117673

0 NH. %jVR6 iiRl CT'-N^V' CT^tT 1 (ma) I (mb) O R10 IxY> jfc R8^ N N R N N I I (mc) (md) joissa r6 voi olla vety, alkyyliketju, jossa on 1 -4 hiiliatomia, joka voi olla substituoitu halogeenilla; alkenyyli- ja/tai alkenyylitähde, jossa on 2-6 hiiliatomia, mahdollisesti 5 substituoituna halogeenilla; tai halogeeni; R6' voi olla vetyatomi tai bentsyyli- tai fenyylitiotähde; R7 voi olla vety; 1-4 hiiliatomia sisältävä alkyyliketju, joka voi olla substituoitu halogeenilla; tai halogeeni; RS voi olla vety; 1-4 hiiliatomia sisältävä alkyyliketju, halogeeni tai hydroksi- tai 1. aminoryhmä; • * · • * · * · R9 voi olla vety; aminoryhmä tai halogeeniatomi; ja * * · Rio voi olla vety, halogeeni, merkapto, hydroksi, Cj-Cg-alkoksi, Ci-Cö-alkyyli- • · · merkapto tai aminoryhmä, joka voi olla mono- tai disubstituoitu C] -Cg-alkyylillä, * · · *·* * Cj-Cg-alkoksilla, hydroksi-C2-C6-alkyylillä ja/tai C3-C6-sykloalkyylillä, aryylillä, 15 hetaryylillä, aralkyylillä tai hetaryylialkyylillä, mahdollisesti subsitutoituna aryyli- • · : tai hetaryylitähteessä yhdellä tai useammalla merkaptolla, hydroksilla, C ] -Cg- • · · alkoksilla tai Ci-Cg-alkyylilla tai halogeenillä; tai C2-C6-alkenyyli mahdollisesti substituoituna mono- tai dialkyyli- tai alkoksiryhmillä; • · sillä edellytyksellä, että ainakin toinen tähteistä R3 tai on vety; • * • · * **· | 20 niiden tautomeerit, optisesti aktiiviset muodot ja raseemiset seokset sekä epäor- • · ’· " gaanisten ja orgaanisten happojen tai emästen kanssa muodostetut fysiologisesti hyväksyttävät suolat. 117673 : ai

6. Nukleosidmonofosfatderivat enligt nägot av patentkraven 1 tili 5 enligt 5 formeln (I), kännetecknade av att R1 betyder en rak alkylkedja med 9 tili 13 kolatomer; R2 betyder en rak alkylkedja med 8 tili 14 kolatomer; 10 R3 och R4 betyder hydroxi; R5 betyder väte;

15 R6 betyder väte, en metyl-, trifluormetyl-, etyl-, vinyl-, propenyl-, etinyl-, propinylgrupp eller en fluor-, klor eller bromatom; R betyder väte; :

20 R7 betyder väte, en metyl-, etyl-, vinyl-, propenyl-, etinyl-eller propinylgrupp eller en klor-eller bromatom; och/eller ·*·.. R10 betyder väte, en metoxi-, etoxi-, propöxi-, butoxi-, hexyloxi-, merkapto-, : 25 metylmerkapto-, etylmerkapto-, butylmerkapto-, hexylmerkaptogrupp, en * aminogrupp, som eventucllt ar substituerad med tienyl, furyl, pyridyl, J " tienylmetyl, furylmetyl eller pyridylmetyl. φ ··· *··· tj.t 7. Nukleosidmonofosfatderivat enligt nägot av patentkraven 1 tili 6 enligt :T: 30 formeln (I), kännetecknade av att nukleosiddelen är vald ur följande grupp: : 6-merkaptopurin-9-B-D-ribofuranosid, 5-fluoruridin, inosin, 5-metyluridin, 5- • * * · .···. kloruridin, 5- trifluormetyluridin, 5- etinyluridin, 5-etinylcytidin, 5-prop-l-enyl- * * *·* uridin, 5-prop-2-enyl-uridin, adenosin, guanosin, 2,6-diaminopurin-9-B-D- ’ ’ 35 ribofuranosid, 2-amino-6-merkaptopurin-9-B-D-ribofuranosid, 2-amino-6- merkaptometylpurin-9-B-D-ribofuranosid, 2-amino-6-klorpurin-9-B-D- : .·. ribofuranosid, 2-kloradenosin, 2-fluoradenosin, 3'-desoxi-5-fluoradenosin, 6- • ♦ · · melylmerkaptopurin-9-B-D- ribofuranosid, 2-bromadenosin. • * * • φ 40 8. Förfarande för framställning av nukleosidmonofosfatderivat enligt nägot av 26 117673 patentkraven 1 till 7 enligt farmein (1), känneteeknat av att a. en förening med den allmänna farmein V R“X-CH2 R2—Y-CH O l II CHo-O-P-OH (V)

7. Jonkin patenttivaatimuksen 1-6 mukaiset nukleosidimonofosfaattijohdannaiset, joilla on kaava I, tunnetut siitä, että nukleosidiosa on jokin seuraavista: 21 117673 6-merkaptopuriini-9-3-D-ribofuranosidi, 5-fluoriuridiini, inosiini, 5-metyyliuridiini, 5- klooriuridiini, S-trifluorimetyyliuridiini, 5-etinyyliuridiini, 5-etinyylisytidiini, 5-prop-l-enyyliuridiini, 5-prop-2-enyyliuridiini, adenosiini, guanosiini, 2,6-diamino-puriinb9-(3-D-ribufuranosidi, 2-amino-6-merkaptopuriini-9-f3-D-ribofuranosidi, 2- 5 amino-6-merkaptopuriini-9-P-D-ribofuranosidi, 2-amino-6-klooripuriini-9-p-D-ribofuranosidi, 2-klooriadenosiini, 2-fluoriadcnosiini, 3'-desoksi-5-fluoriadenosiini, 6- metyylimerkaptopuriini-9-3-D-ribofuranosidi, 2-bromiadenosiini.

8. Menetelmä jonkin patenttivaatimuksen 1-7 mukaisten nukleosidimonofosfaat-10 tijohdannaisten valmistamiseksi, joilla on kaava I, tunnettu siitä, että a. saatetaan yhdiste, jolla on yleinen kaava V r-x-ch2 r2-y-ch O i II CH2“0-P-OH (V)

9. Läkemedel innehällande minst en förening enligt formeln I enligt nägot av patentkraven 1 tili 7 samt farmaceutiska hjälp- eller bärämnen för behandling av 10 tumörer eller immunsjukdomar.

9. Lääkeaine, joka sisältää ainakin yhtä jonkin patenttivaatimuksen 1-7 mukaista kaavan I yhdistettä, kuten myös farmaseuttisia apuaineita tai lisäaineita, joka lääkeaine on tarkoitettu kasvainten tai ihmisen autoimmuunisairauksien hoitamiseksi.

10. Jonkin patenttivaatimuksen 1-7 mukaisten yhdisteiden, joilla on kaava I, käyttö kasvainten tai ihmisen autoimmuunisairauksien hoitoon tarkoitettujen lääkeaineiden valmistuksessa. • *·* 11. (5-fhiorouridiini)-5’-fosforihappo-(3-dodekyylimerkapto-2-desyIoksi)propyyli- 20 esteri ja sen fysiologisesti hyväksyttävät suolat. * · • • t · • · · ♦ · * .’ji 1. Nukleosidmonofosfatderivat, kännetecknade av att de har formeln (I): • · · 25 • · : r‘-X-CH? **· oi R--Y-CH O CH-O-P-O-CIL B “I I ‘CL 0H y h/ ω • · * • · · • · · : R3 R4 • · 23 117673 i viikon R1 star för en rak eller grenad, mättad ellcr omättad alkylkedja med 1 till 20 kolatomer; 5 R2 stär för väte eller en rak eller grenad, mättad eller omättad alkylkedja med 1 till 20 kolatomer, R3 star för väte eller hydroxi; 10 R4 star för hydroxi; R5 star för väte eller hydroxi; 15. star för svavel eller sulfonylgruppen; Y är en syreatom; B betyder en purin- eller pyrimidinbas enligt formeln TTT (a-d) 20 O NH2 K : "Ä" /f" CT^N^R6 Cr^lNT ’ .:. I (lila) I (mb) • * · · o r10 "iV> Αλ :.:: . Rs/>4 iN R9^Sr^N I . I • 4 •( (IIlc) (Hid) * · · * · * · * ***** *1' * * varvid · • · * R6 kan vara väte, en alkylkedja med 1 till 4 kolatomer, som kan vara substituerad I I I '· " 25 med halogen; en alkenyl- eller alkinylgrupp med 2 till 6 kolatomer, som eventuellt kan vara substituerad med halogen; eller halogen; 24 117673 R6 kan vara en vateatom eller en bensyl- eller fcnyltiogrupp; R7 kan vara väte; en alkylkedja med 1 till 4 kolatomer, som kan vara substituerad 5 med halogen; eller halogen, R8 kan vara väte; en alkylkedja med 1 till 4 kolatomer, halogen eller en hydroxi-eller en aminogrupp;

10 R9 kan vara väte, en aminogrupp eller en halogenatom; och R10 kan vara väte, halogen, merkapto, hydroxi, CrC6-alkoxi, CrC6-alkylmerkapto eller en aminogrupp, som kan vara mono- eller disubstituerad med CrC6-alkyl-, CrCG-alkoxi-, hydroxi-C2-CG-alkyl- och eller C3-C6-cykloalkyl-, aryl-, hetaryl-, 15 aralkyl eller hetarylalkylgrupper, som eventuellt i aryl- eller hetarylgruppen kan vara ytterligare substituerade med en eller flera merkapto-, hydroxi-, CrC6-alkoxi-, eller Ci-CG-alkylgrupper eller halogen; eller C2-C6-alkenyl-, som eventuellt kan vara substituerad med mono- eller dialkyl- eller alkoxigrupper; 20 med villkoret att minst en av grupperna R3 och R5 skall vara väte; ·*·.. deras tautomera optiskt aktiva former och racemiska blandningar och deras fysiologiskt kompatibla sailer med oorganiska och organiska syror eller baser. * * • · * · • · · * 25 2. Nukleosidmonofosfatderivat enligt patentkrav 1 enligt formeln (I), kännetecknade av att R star för en Cg-Qs-alkylgrupp med rak kedja. * * * * * Ml • · » ... *** * 3. Nukleosidmonofosfatderivat enligt patentkrav 1 eller 2 enligt formeln (I), kännetecknade av att R2 betyder en C8-Cj5-alkylgrupp med rak kedja. 30 • · *

10. Användning av föreningar enligt formeln T enligt nägot av patentkraven 1 tili 7 för framställning av läkemedel för behandling av tumörer eller immunsjukdomar. 15 11. (5-fluoruridin)-5'-fosforsyra-(3-dodecylmerkapto-2-decyloxi)-propylester och dess fysiologiskt kompatibla salter. * · ··· • · • · · . • ·· • * ·· * · · • · · ·* « • · · • · · ·♦· • · · ··· ... * • * • · · • · * • · * · ··· · »·· • e..'’· • · * # • · · • · · *·· · · • · · • ·· · · • ·