FI112503B - Polysyklisiä antiparasiittisia aineita ja niiden käyttö - Google Patents
Polysyklisiä antiparasiittisia aineita ja niiden käyttö Download PDFInfo
- Publication number
- FI112503B FI112503B FI20012318A FI20012318A FI112503B FI 112503 B FI112503 B FI 112503B FI 20012318 A FI20012318 A FI 20012318A FI 20012318 A FI20012318 A FI 20012318A FI 112503 B FI112503 B FI 112503B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- compounds
- compound
- medium
- solvent
- production
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
- C07D491/12—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains three hetero rings
- C07D491/16—Peri-condensed systems
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
- C07D491/22—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains four or more hetero rings
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/911—Microorganisms using fungi
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
Description
112503
Polysyklisiä antiparasiittisia aineita ja niiden käyttö
Keksinnön tausta
Tunnetaan uusia antiparasiittisia aineita, kuten 5 US-patenttijulkaisuissa 4 310 519 ja 4 199 569 esitetyt avermektiinit. Mainitunlaiset avermektiiniyhdisteet, vaikka ovatkin tehokkaita sisä- ja ulkoloisten vastaisia aineita, eroavat kuitenkin rakenteellisesti hyvin merkittävästi tässä käsiteltävistä yhdisteistä. Avermektiinit, jotka ovat 10 eräästä aktinomyseetasta eristettyjä makrosyklisiä aineita, eivät ole sukua tässä käsiteltäville polysyklisille sienimetaboliiteille. Julkaisussa de Jesus et ai., J. Chem. Soc. Perkin Trans I (1984) 697 - 701 kuvataan sienimetaboliitteja, jotka on identifioitu jantitreemeiksi 15 (janthitrems), joilla on polysyklinen rakenne, josta kuitenkin puuttuu muutamia tässä käsiteltävien yhdisteiden rakenne-elementtejä.
Keksinnön yhteenveto Tämä keksintö koskee uusia antiparasiittisia ai-20 neita ja ektoparasitisidisia aineita. Yhtenä lisätavoit teena on vielä kuvata koostumuksia ja menetelmiä, joissa käytetään tässä käsiteltäviä yhdisteitä antiparasiittisina * * aineina. Muut tavoitteet käyvät ilmi luettaessa seuraava 1 · » • kuvaus.
25 Piirustusten lyhyt kuvaus .··· Kuviot 1, 2 ja 3 ovat yhdisteiden 1, 2 ja vastaavasti 3 protoni-NMR-spektrejä. Kuvioissa on muutamia reso-nanssipiikeistä merkitty kirjaimella "X". Nämä piikit ovat , seurausta liuotteen läsnäolosta eivätkä merkitseviä yhdis- '. 30 teiden rakenteen kannalta.
2 112503
Kuvio 1 on yhdisteen 1 NMR-spektri, joka on rekisteröity taajuudella 500 MHz CD2Cl2:ssa Varian Unity 500 -NMR-spektrometrillä lämpötilassa 25 °C. Kemialliset siirtymät esitetään ppmrinä suhteessa TMS:iin, jonka ppm-arvo 5 on nolla, käyttämällä kohdassa δ 5,32 esiintyvää liuote- piikkiä sisäisenä standardina. Vain diagnostiset piikit mainitaan.
Kuvio 2 on yhdisteen 2 NMR-spektri, joka on rekisteröity taajuudella 400 MHz CD2Cl2:ssa Varian Unity 400 10 -NMR-spektrometrillä lämpötilassa 25 °C. Kemialliset siirtymät esitetään ppm:inä suhteessa TMS:iin, jonka ppm-arvo on nolla, käyttämällä kohdassa δ 5,32 esiintyvää liuote- piikkiä sisäisenä standardina. Vain diagnostiset piikit mainitaan.
15 Kuvio 3 on yhdisteen 3 NMR-spektri, joka on rekis teröity taajuudella 300 MHz CD2Cl2:ssa Varian XL300 -NMR-spektrometrillä huoneenlämpötilassa. Kemialliset siirtymät esitetään ppm:inä suhteessa TMS:iin, jonka ppm-arvo on nolla, käyttämällä kohdassa δ 7,24 esiintyvää liuotepiikkiä 20 sisäisenä standardina. Vain diagnostiset piikit mainitaan.
Keksinnön yksityiskohtainen kuvaus V.' Tämä keksintö koskee rakenteeltaan ainutlaatuisia "·”· uusia yhdisteitä. Jäljempänä kuvataan myös menetelmää näiden yhdisteiden valmistamiseksi Noduli-sporium sp \! 25 fermentointialustassa ja Nodulisporium sp -tuotantokanta — | sekä menetelmiä, joissa näitä yhdisteitä käytetään, ft patenttivaatimusten mukaisesti.
Tämän keksinnön mukaisilla yhdisteillä on seuraavat , rakenteet: il’ 30 3 112503
5 ^ °V—^ 0H
Yhdiste 1 10
^ ^ OH
«0Χ-γ «°
Yhdiste 2 20 Μ^νγ-^ΙΓΥ^Ι Me T j?
=: := MVVvS· «^mTOH
:·.: Me Me OH λ-k^Me \-H-0 Me
;.·. oj OH
: ,·’ 25 ,, ,; Yhdiste 3
Edellä esitetyt rakennekaavat esitetään stereoke-miallisesti määrittelemättömänä tiettyjen asemien ja ste- 30 reokemiallisesti määriteltynä muiden asemien osalta ja tämä keksintö tulisi ymmärtää kaikki mainitunlaiset ste- reoisomeerit kattavaksi. Stereoisomeerit voivat olla eri-tyisesti erilaisten asymmetriakeskusten kohdalla joko a-tai β-oritentoituneita, jolloin mainitunlaiset ryhmät ovat 4 112503 joko molekyylin yleisen tason ala- tai vastaavasti yläpuolella .
Tämä yhdiste on aktiivinen kotitaloustuholaisia, kuten torakkaa, Blatella-lajeja, muurahaisia, Solenopsista, 5 vaatekoita, Tineola-lajeja, turkiskuoriaista, Attagenus-lajeja ja huonekärpästä, Musca domestica, vastaan.
Tämän keksinnön mukainen yhdiste on käyttökelpoinen myös varastoitujen jyvien hyönteistuhokaisia, kuten Tribo-lium-lajeja ja Teneörio-lajeja, ja viljelykasvien hyön-10 teistuholaisia, kuten kehrääjäpunkkeja (Tetranychus sp.), kirvoja, vaeltavia suorasiipiäisiä (Acyrthiosiphon), kuten kulkusirkkoja, ja kasvikudoksella eläviä hyönteisten epäkypsiä vaiheita vastaan. Nämä yhdisteet ovat käyttökelpoisia nematosideina maaperän sukkulamatojen ja kasviioisten, 15 kuten Meloidogyme-lajien torjuntaan, millä voi olla merkitystä maanviljelyssä.
Tämän keksinnön mukaiset yhdisteet ovat käyttökelpoisia myös torjuttaessa maataloustuholaisia, jotka aiheuttavat vahinkoa viljelykasveille niiden kasvaessa tai 20 varastoinnin aikana. Yhdistettä levitetään tunnetuin menetelmin suihkeina, pölytteinä, emulsioina yms. kasvaville tai varastoiduille viljelykasveille suojan antamiseksi mainitunlaisia maataloustuholaisia vastaan.
’ : Tämän keksinnön mukaisia uudenlaisia yhdisteitä 25 valmistetaan fermentoimalla sienisuvun Nodulisporium erästä kantaa. Yhdellä tällaisella viljelmällä on tunnus MF-5954 ;···, Merck & Co., Inc:n, Rahway, New Jersey, viljelmäko- koelmassa. MF-5954-tuotantokanta on talletettu tal-.. . lennuslaitoksen the American Type Culture Collection, 12301 ‘ti; 30 Parklawn Drive, Rockville, Maryland, Md. 20852, pysyvään '·*' kokoelmaan ja sille on annettu talletusnumero 74245.
Talletus on tehty 21. syyskuuta 1993 Budapestin sopimuksen (The Budapest Treaty on the International Recognition of the Deposit of Microorganisms for the Purposes of Patent * » •y 35 Procedure) mukaisesti.
• i 5 112503
Nodulisporium sp. MF-5954:n morfologiset ja viljelyominaisuudet ovat seuraavat: MF5954 (tuottaa L-954,967:ää) on eristetty JP337:nä, endofyyttisenä sienenä puumaisesta kasvikudok-5 sesta Billsin ja Polishookin (1991) pintasterilointimene-temällä. Seuraavassa kuvauksessa isolla kirjaimella alkavat värien nimet ovat Ridgwayn (1912) mukaisia.
Maissijauhoagarilla (Difco) pesäke saavuttaa läpimitan 42 mm 6 vuorokaudessa lämpötilassa 25 °C suhteellisen 10 kosteuden ollessa 50 % ja käytettäessä 12 tunnin valaistus j aksoa fluoresoivalla valolla. Pesäkematto kasvaa pinnanalaisesti, pinta tiiviiksi painautunut - huopamainen, kokonaan väritön; erite ja liukoinen pigmentti puuttuvat; kääntöpuoli väritön; makea aromaattinen tuoksu.
15 Kaurajauhoagarilla (Difco) pesäke saavuttaa läpimi tan 42 mm 6 vuorokaudessa samoissa olosuhteissa. Pesäke-matto tiiviiksi painautunut - niukasti vanumainen, pesäkkeen keskusta kellanruskea (Mars Yellow, Raw Sienna) vaalean kellanruskea (Light Orange Yellow, Antimony Yellow) 20 puolivälissä reunaa kohti siirryttäessä; reuna yhtenäinen, valkoinen; erite, haju ja liukoinen pigmentti puuttuvat; v,: kääntöpuoli vaaleanruskea.
O"· Peruna-sakkaroosiagarilla (Singleton et ai. 1992) : ·: pesäke saavuttaa läpimitan 43 mm 6 vuorokaudessa samoissa 25 olosuhteissa. Pesäkematto tiiviiksi painautunut - niukasti vanumainen, punertavanruskea (Light Russet-Vinaceous) pe-,···. säkkeen keskellä ja vaalenee läpinäkyväksi reunalla, reuna erottumaton; erite, haju ja liukoinen pigmentti puuttuvat; , kääntöpuoli punaruskea (Dark Vinaceous) .
30 Lämpötilassa 37 °C, maissijauhoagarilla ja pimeässä pesäke saavuttaa läpimitan 82 mm 6 vuorokaudessa; pesäke-matto vanumainen kaikkialla muualla paitsi inokulaatiokoh-dassa, jossa matto on tiiviiksi painautunut, valkoinen; reuna yhtenäinen, valkoinen, erite ja liukoinen pigmentti ···· 35 puuttuvat; kääntöpuoli väritön; makea aromaattinen tuoksu.
6 112503
Hyyfit läpinäkyviä - vaaleanruskeita, väliseinälli-siä, seinämät sileitä - hieman karheita, paksuseinäisiä, leveys 2,5 - 3,5 pm. Konidioforit yksirihmaisia, pystyjä, 150 - 400 x 3,0 - 4,0 pm, sienirihmamaisesti haaroittunei-5 ta, läpinäkyviä - vaaleanruskeita, väliseinällisiä, paksu seinäisiä, sileitä - hieman karheita - känsäisiä, sisältävät joskus oliivinvihreitä, pyöristyneitä ulkonemia (läpimitta 2,5 pm). Konidiogeeniset solut holoblastisia, terminaalisia, 16 - 24 x 1,5 - 2,0 pm, hieman karheita - kän- 10 säisiä, sylinterimäisiä, kärkestä epäsäännöllisiä. Konidiot munamaisia - pitkänomaisen soikeita, typistynyt liit-tymiskohta, 4,1 - 5,7 x 1,6 - 2,5 pm, läpinäkyviä, väli- seinättömiä, ohutseinäisiä, haarajatkoisesti konidiogeeni-sen solun kärjestä syntyneitä, kerääntyvät kärkirykelmäksi 15 dentikaaleille.
MF-5954 sijoitetaan sienisukuun Nodulisporium (Hyphomycetes, Deuteromycotina). Tämän suvun tärkeimpiin taksonomisiin ominaispiirteisiin kuuluvat yksirihmaiset konidioforit, jotka ovat tyypillisesti haaroittuneita, ja 20 konidioiden haarajatkoinen tuotanto. Lisäksi konidioita sisältävät alueet ovat pääte- tai välialueita ja solmuk-’.V keisia runsaan konidiotuotannon vuoksi (Jong ja Rogers "·“· 1972). Nämä ominaispiirteet erottavat suvun Nodulisporium : ‘: muista samankaltaisista sienistä, kuten sivuista Geniculo- 25 sporium, Xylocladium ja Ustilina. Nämä suvut ovat monien ·...: ksylariamaisten sienten {Ascomycotina) , kuten sukujen Hypo- ,···, xylon, Xylaria, Rosellinia jne., suvuton (anamorf inen) tila.
Toisin kuin useimmat eristetyt Nodulisporium-kannat y 30 MF-5954 kasvaa hyvin lämpötilassa 37 °C, mutta sillä ei ole viljelyssä mitään muita erottuvia piirteitä, jotka liittäisivät sen johonkin tunnettuun lajiin. Siksi siitä käytetään nimeä Nodulisporium sp.
7 112503
Kirjallisuus 1. Bills, G. F. ja Polishook, J. D. , Microfungi from Carpinus caroliniana, Can. J. Bot. 69(7) (1991) 1477 - 1482 5 2. Jong, S. C. ja Rogers, J. D., Illustrations and descriptions of conidial states of some Hypoxylon species, Wash. State Agric. Exp. Sta. Tech. Bull, nro 71 (1972) 51 s.
3. Ridgway, R., Color Standards and color nomencla-10 ture, omakustanne, Washington, D.C. 1912, 43 s. + 53 kuvasivua 4. Methods for research on soilborne phytopatho-genic fungi, toim. Singleton, L. L., Mihail, J. D. ja Rush, C. M., APS Press, St. Paul, Minnesota 1992, liite A, s.
15 247.
Keksinnön mukaisia yhdisteitä tuotetaan fermentoi-malla aerobisesti sopivaa kiinteää tai vesipitoista ravintoalustaa jäljempänä kuvattavissa olosuhteissa käyttämällä Nodulisporium sp. -tuotantokantaa. Vesipitoiset ja 20 kiinteät alustat, kuten monien antibioottien tuotannossa käytettävät, soveltuvat käytettäviksi näiden polysyklisten V.· yhdisteiden tuotantoprosessissa.
Mainitunlaiset ravintoalustat sisältävät mikro-or-: · : ganismin assimiloitavissa olevia hiili- ja typpilähteitä ja 25 yleensä pieninä pitoisuuksina epäorgaanisia suoloja.
Fermentointialustat voivat lisäksi sisältää hivenainemääriä » mikro-organismien kasvulle ja haluttujen yhdisteiden tuotannolle välttämättömiä metalleja. Niitä on yleensä läsnä riittävinä pitoisuuksina monimutkaisissa hiili- ja 30 typpilähteissä, joita voidaan käyttää ravintolähteinä, mutta haluttaessa niitä voidaan tietenkin lisätä erikseen alustaan.
Hiilihydraatit, kuten sokerit, esimerkiksi glukoosi, sakkaroosi, maltoosi, laktoosi, dekstriini, sereloosi, _ 35 maissijauho, kaurajauho yms., ja tärkkelykset, ovat ylei- • C sesti ottaen ravintoalustaan soveltuvia assimiloitavissa 8 112503 olevan hiilen lähteitä. Alustassa käytettävä tarkka hiili-lähdemäärä riippuu osaksi alustan muista aineosista, mutta yleensä havaitaan, että hiilihydraattimäärä 1 - 150 g/1 alustaa on tyydyttävä. Näitä hiilihydraattilähteitä voidaan 5 käyttää yksittäin tai voidaan yhdistää muutamia mainitunlaisia hiililähteitä samaan alustaan.
Erilaiset typpilähteet, kuten hiivahydrolysaatit, hiiva-autolysaatit, hiivasolut, tomaattisose, maissijauho, kaurajauho, soijajauho, kaseiinihydrolysaatit, hiivauut-10 teet, maissinliotusliemet, liukoiset tislaamomateriaalit, puuvillansiemenjauho, lihauute yms., ovat Nodulisporium sp:n helposti assimiloitavissa keksinnön mukaisten yhdisteiden tuotannossa. Erilaisia typpilähteitä voidaan käyttää yksinään tai yhdistelminä määrinä 1-5 g/1 alustaa.
15 Epäorgaanisiin ravintosuoloihin, joita voidaan si sällyttää kasvualustaan, kuuluvat tavanomaiset suolat, jotka pystyvät antamaan natrium-, kalsium-, magnesium-, ammonium-, kalsium-, fosfaatti-, sulfaatti-, kloridi-, karbonaatti-, yms. ioneja. Joukkoon kuuluvat myös hivenai-20 nemetallit, kuten rauta, sinkki, mangaani, kupari, boori, molybdeeni yms.
, ·, * Tulisi huomata, että jäljempänä ja esimerkeissä kuvattavat alustat ovat vain valaisevia esimerkkejä monista erilaisista alustoista, joita voidaan käyttää, eikä niitä . I 25 ole tarkoitettu rajoittaviksi.
Seuraavat ovat esimerkkejä Nodulisporium sp. -kan-<>' tojen MF-5954, ATCC 74245, kasvatukseen soveltuvista alus toista.
·’ 3 0 Vinopinta-alustan koostumus
Hiivauute 4 g
Mallasuute 10 g ", Glukoosi 4 g • Bacto-agar 10 g 35 Tislattu vesi 1 000 ml . pH 7,0 9 112503
Inokulaatti- ja tuotantoalustojen koostumus Inokulaattialusta
Komponentti g/1
Hiivauute 4,0 5 Mallasuute 8,0
Glukoosi 4,0
Junlon 1,5
Alusta valmistettiin käyttämällä tislattua vettä, 10 pH säädettiiin arvoon 7,0 ennen sterilointia, ja sitä käytettiin 50 ml väliseinatöntä 250 ml:n erlenmeyerpulloa kohden. Käytettiin vanutulppia. Steriloitiin 20 minuuttia 121 °C:n lämpötilassa.
Tuotantoalusta A 15 1. Kiinteä osa
Lisätään 1 250 cm3 vermikuliittia 4 l:n pyöritys-pulloon. Suljetaan lateksitulpalla; autoklavoidaan 60 minuuttia ynnä 30 minuuttia kuivassa.
2. Nestemäinen osa 20 Komponentti g/1
Glukoosi 150,0 V,: Urea 4,0 ':“: N Z -amiini, tyyppi A 4,0 K2HP04 0,5 ‘ f 25 MgS04.7H20 0,25 KC1 0,25
ZnS04.7H20 0,9
CaC03 16,5 ** 30 Alusta valmistettiin käyttämällä tislattua vettä (ei pH:n säätöä). Sitä käytettiin 425 ml/1 l:n erlenmeyer-pullo. Käytettiin vanutulppia ja alustaa steriloitiin 15 minuuttia 121 °C:n lämpötilassa.
> * 10 112503
Tuotantoaloista B
Komponentti g/1
Glyseroli 75,0
Glukoosi 10,0 5 Ardamine PH 5,0 (NH4)2S04 2,0
Soij aj auho 5,0
Tomaattisose 5,0
Natriumsitraatti 2,0 10
Alusta valmistettiin käyttämällä tislattua vettä, pH säädettiiin arvoon 7,0 ennen sterilointia. Alustaa käytettiin 50 ml väliseinätöntä 250 ml: n erlenmeyerpulloa kohden. Pullot suljettiin vanulla ja niitä autoklavoitiin 15 20 minuuttia 121 °C:n lämpötilassa.
Fermentointi, jossa käytetään Nodulisporium sp:a, voidaan tehdä suunnilleen lämpötila-alueella 20 - 40 °C.
Optimaalisten tulosten saavuttamiseksi on kätevintä tehdä nämä fermentoinnit suunnilleen alueella 22 - 36 °C olevassa 20 lämpötilassa. Lämpötilat noin 22 - 27 °C ovat edullisimpia. Keksinnön mukaisten yhdisteiden tuotantoon soveltuvan ravintoalustan pH voi vaihdella suunnilleen alueella 6,5 -; 8,0; edullinen alue on noin 6,8 - 7,3. Pienimittaiset fermentoinnit tehdään kätevästi sijoittamalla sopivia mää-j 25 riä ravintoalustaa pulloon käyttämällä tunnettuja ste- ____; rillejä menetelmiä, inokuloimalla pullo joko Nodulisporium . sp:n itiöillä tai vegetatiivisella solukasvustolla, sul kemalla pullo löysästi vanulla ja antamalla fermentaation edetä noin 7-35 vuorokautta vakiona pidettävässä huo-30 neenlämpötilassa noin 25 °C pyöröravistimella, jonka kier- ' rostaajuus on 95 - 300 min"1. Suuremmassa mitassa työsken- ; neltäessä on edullista tehdä fermentointi sopivissa säili öissä, jotka on varustettu sekoittimella ja välineillä fermentointialustan ilmastamiseksi. Ravintoalusta valmis-35 tetaan säiliössä ja inokuloidaan steriloinnin jälkeen Nodu- : lisporium sp:n vegetatiivisen solukasvuston lähteellä.
11 112503
Fermentoinnin annetaan edetä 7 - 25 vuorokautta sekoittaen ja/tai ilmastaen ravintoalustaa suunnilleen alueella 22 -27 °C olevassa lämpötilassa. Ilmastusaste riippuu muutamista tekijöistä, kuten fermentorin koosta, sekoitusnopeu-5 desta yms. Suurempimittaisten fermentointien yhteydessä sekoitusnopeus on yleensä noin 95 - 300 min’1 ja ilmastus-nopeus noin 50 - 500 1/min.
Keksinnön mukaisten yhdisteiden erottaminen koko fermentointiliemestä ja yhdisteen talteenotto tehdään 10 liuoteuutolla ja käyttämällä erilaisilla kromatografiamene-telmiilä ja liuotejärjestelmillä toteutettavia kromatografisia fraktiointeja.
Keksinnön mukaiset yhdisteet ovat veteen niukkaliu-koisia, mutta liukenevat orgaanisiin liuotteisiin. Tätä 15 ominaisuutta voidaan käyttää kätevästi yhdisteen ottamiseen talteen fermentointiliemestä. Niinpä yhdessä tal-teenottomenetelmässä koko fermentointiliemi yhdistetään suunnilleen yhtä suuren tilavuuden kanssa orgaanista liuo-tetta. Vaikka voidaan käyttää mitä tahansa orgaanista 20 liuotetta, on edullista käyttää veteen sekoittumatonta liuotetta, kuten etyyliasetaattia, dikloorimetaania, tri-kloorimetaania yms. Yleensä on toivottavaa tehdä muutamia ".· uuttoja maksimisaannon saavuttamiseksi. Liuote poistaa kek sinnön mukaisia yhdisteitä, samoin kuin muita aineita, : 25 joilta puuttuu keksinnön mukaisen yhdisteen antiparasiitti- ____; nen aktiivisuus. Jos liuote on veteen sekoittumaton, kerrokset erotetaan ia oraaaninen liuote konsentroidaan alipaineessa. Jäännös laitetaan kromatografiakolonnille, joka sisältää edullisesti silikageeliä. Kolonni pidättää 30 halutun tuotteen ja joitakin epäpuhtauksia, mutta päästää • lävitseen monet epäpuhtaudet, erityisesti poolittomat epä puhtaudet. Kolonni huuhdotaan kohtalaisen polaarisella orgaanisella liuotteella, kuten dikloorimetaanilla tai Y trikloorimetaanilla, epäpuhtauksien poistamiseksi edelleen 35 ja sitten dikloorimetaanin tai trikloorimetaanin ja orgaa- ; nisten liuotteen seoksella, joista liuotteista ovat edulli- 12 112503 siä asetoni, metanoli, etanoli yms. Liuote haihdutetaan ja jäännös käsitellään edelleen kromatografisesti käyttämällä pylväskromatografiaa, ohutkerroskromatografiaa, pre- paratiivista ohutkerroskromatografiaa, suurpainenestekro- 5 matografiaa yms., joissa käytetään silikageeliä, alumiini-oksidia, ioninvaihtohartseja, dekstraanigeelejä yms., kromatograf iaväliaineena ja erilaisia liuotteita ja liuoteyh-distelmiä eluenttina. Ohutkerros-, suurpaine-, neste- ja preparatiivista kerroskromatografiaa voidaan käyttää kek-10 sinnön mukaisen yhdisteen läsnäolon detektointiin ja eristämiseen .
Edellä mainittujen samoin kuin ammattimiesten tuntemien muiden menetelmien käytöllä saadaan aikaan puhdistettuja koostumuksia, jotka sisältävät keksinnön mukaista 15 yhdistettä. Halutun yhdisteen läsnäolo määritetään analysoimalla eri kromatografiafraktioista biologinen aktiivisuus tai fysikokemialliset ominaisuudet. Molemmat yhdisteet on määritetty analysoimalla yksityiskohtaisesti yhdisteiden erilaiset spektriominaisuudet, erityisesti niiden NMR-, 20 massa-, ultravioletti- ja infrapunaspektrit.
Esimerkki 1 ; : : 1. Viljely: MF-5954 saatiin agarvinopinnalla ja *; ; käytettiin pakastettujen vegetatiivisten myseelien (FVMs; frozen vegetative mycelia) valmistukseen. Osa agarvinopin- ; 25 nasta siirrettiin aseptisesti inokulaattialustaan A (50 ml, » ; väliseinätön 250 ml:n pullo). Sitä inkuboitiin pyöröravis- timella, jonka liikerata oli 5 cm (2 tuumaa), » _ 2 kierrostaajuudella 220 min 3 vuorokautta lämpötilassa 25 °C suhteellisen kosteuden (rh) ollessa 85 %, jolloin 30 saatiin biomassaa. Biomassa-annoksia siirrettiin sterii- • leihin pulloihin, jotka sisälsivät glyserolia, ja pakas tettiin (FVM:nä). Niitä pidettiin yllä lopullisen glysero-lipitoisuuden ollessa 10 - 15 % lämpötilassa -75 °C. Se- kundaari-FVM:iä valmistettiin primaari-FVM:stä siirtämällä 35 1,0 ml sulatettua primaari-FVM:ää inokulaattialustaan ja j inkuboimalla 2-3 vuorokautta lämpötilassa 25 °C käyttä- 13 112503 mällä kierrostaajuutta 220 min"1 ja pakastamalla edellä kuvatulla tavalla.
2. Inokulaatti: Pakastettu pullo (FVM) sulatettiin huoneenlämpötilaan ja käytettiin NF-5954-inokulaattivil- 5 jelmien inokulointiin suhteessa 0,5 - 1,0 ml 50 ml:aa kohden inokulaattialustaa A. Kasvatettiin pyöröravistimella (220 min-1) 2-3 vuorokautta lämpötilassa 25 °C rh:n ollessa 85 %. Joskus käytettiin toisen vaiheen inokulaattia. Sen kehittämiseksi laimennettiin 1 ml edellä kuvattua en-10 simmäisen vaiheen inokulaattia 50 mlrksi tuoreella inoku-laattialustalla A ja inkuboitiin 24 - 30 tuntia lämpöti- _i lassa 25 °C sekoitustaajuudella 220 min rh:n ollessa 85 %.
3. Tuotanto: Tuotantoalustan A koostumus on kiin- teäsubstraattifermentointialusta. Annos (18 - 24 ml) ino- 15 kulaattia laitettiin 425 ml:aan tuotantoalustaa A. Pulloa pyöritettiin voimakkaasti biomassan dispergoimiseksi. Sisältö kaadettiin 4 l:n pyöritysviljelyastiaan, joka sisälsi 1 250 cm3 suurihiukkasista vermikuliittia. Pyörityspullon sisältö ravisteltiin/sekoitettiin homogeenisen inokulaation 20 ja peiton takaamiseksi. Pyörityspulloja inkuboitiin
vaakasuorassa pyörittäen niitä kierrostaajuudella noin 4 min"1 Wheaton-pyorityslaitteella lämpötilassa 22 - 25 °C
‘; rh:n ollessa 50 - 75 % 19 - 28 vuorokautta, jolloin saatiin sekundaarista metaboliittia fermentointialustaan.
. : 25 Joukosta nestemäisiä alustoja tutkittiin keksinnön . mukaisten yhdisteiden tuotanto, niin että fermentointi voitiin helposti laajentaa suuriin astioihin. Tuotantoa havaittiin vain pienessä määrässä tutkituista nestemäisistä alustoista. Käytettiin nestemäistä tuotantoalustaa B.
·’ 30 Inokulaattiviljelmät inokuloitiin edellä kuvatulla tavalla ja niitä kasvatettiin kierrostaajudella 220 min"1 pyöriväl- lä pyöröravistimella 3 vuorokautta lämpötilassa 25 °C rh:n ,·>·, ollessa 85 %. Inokuloitiin annoksella inokulaattia (1 ml) • * ’7 kukin tuotantopullo, jonka sisältö oli 50 ml (2 % inoku- 35 laattia) . Pulloja inkuboitiin pyöröravistimella (220 min"1) 21 - 28 vuorokautta lämpötilassa 25 °C rh:n ollessa 50 %.
14 112503 Käytetyt kaksi tuotantomenetelmää olivat olennaisesti samanlaiset valmistetun tuotteen määrän suhteen. Toisen menetelmän (nestemäinen tuotantoalusta B) etuna on kuitenin, että se voidaan laajentaa sekoituksella varus-5 tettuihin astioihin, niin että voidaan valmistaa suuria määriä. Kiinteään alustaan perustuva tuotantomenetelmä (pyörityspullot, alusta A) tekee laajentamisen vaikeaksi.
Myös suurempia astioita (22 l:n säiliöitä) on käytetty keksinnön mukaisten yhdisteiden tuottamiseen tästä 10 viljelmästä.
Esimerkki 2
Puhdistus ja alustava karakterisointi
Uutettiin kutakin 12:sta 2 l:n pyörityspullosta, jotka sisälsivät alustalla 21 vuorokautta kasvatettua viljelmää, 15 650 ml:lla metyylietyyliketonia (MEK) 4 tuntia pyörityslaitteella käyttämällä kierrostaajuutta 100 min-1. Uutteet suodatettiin, yhdistettiin ja haihdutettiin alipaineessa kuiviin, 8 g:ksi. Tämä materiaali liuotettiin 20 ml:aan dikloorimetaania ja syötettiin silikageelia (E. 20 Merck) sisältävään 800 ml: n kolonniin liuoteseoksessa di-kloorimetaanirmetanoli 95:5. Eluointiin käytettin yksi *.V kolonnin tilavuus kutakin seuraavista liuotteista: dikloo- ‘: rimetaani:metanoli 95:5, 9:1, 3:1 ja 1:1 ja metanoli.
Otettiin talteen 40 ml: n fraktioita; suurin osa aktiivi-: 25 suudesta oli fraktioissa 51 - 55 biologisesti määritettynä {Lucilia) Fraktiot yhdistettiin ja haihdutettiin kuiviin ">_ alipaineessa, ja niiden massa oli 200 mg. Tämä näyte liuo tettiin 8,5 ml:aan metanolia, syötettiin Sephadex LH20 -kolonniin (Pharmacia) metanolissa ja kerättiin 13 ml:n • ·’ 30 fraktioita virtausnopeudella 6,5 ml/min. Aktiivisuuden I I s määritettiin olevan fraktioissa 41 - 50, ja nämä fraktiot yhdistettiin ja kuivattiin; massa oli 90 mg. Tämä mate-,'· , riaali liuotettiin 0,5 ml: aan metanolia ja injektoitiin kahtena eränä Eka Nobel C-18 -HPLC-kolonniin (9,6 mm x t *·- 35 250 mm) huoneenlämpötilassa; seuranta tapahtui aallon- ί pituudella 270 nm, ja virtausnopeus oli 4 ml/min. Käytetty 15 112503 liuotejärjestelmä oli suhteessa 70:30 asetonitriiliä ja vettä, joka sisälsi 0,1 % TFA:a, ja aktiivinen materiaali tuli eristetyksi fraktioissa 26 - 27 ensimmäisessä eris tyksessä ja fraktioissa 27 - 28 toisessa. Yhdisteen puhtaus 5 varmistettiin analyyttisellä HPLC:llä Eka-Nobel-kolonnissa (9,6 mm x 250 mm, C-18) virtausnopeudella 1 ml/min lämpötilassa 40 °C samoin kuin TLC:llä käyttämällä muutamia liuotejärjestelmiä. Yhdistetyt fraktiot konsentroitiin alipaineessa, uutettiin dikloorimetaaniin ja kuivattiin, 10 jolloin saatiin 4,8 mg puhdasta yhdistettä (yhdiste 1).
Silikageelipylväästä tulleet myöhemmät fraktiot olivat myös bioaktiivisia; ne yhdistettiin ja haihdutettiin kuiviin alipaineessa, ja niiden massa oli 1,4 g. Kiinteä aines pestiin metanolilla muutamaan kertaan, ja se sisälsi 15 yhdisteitä, joilla oli samanlainen UV-spektri kuin yhdisteellä 1. Tätä spektroskooppista ominaisuutta käytettiin jatkopuhdistusvaiheiden seuraamiseen ja varmistettiin bioaktiivisuus lopullisesti puhtaista yhdisteistä. Niinpä 500 mg ainesta sisältävä metanoliliuos fraktioitiin 20 250 ml:n Sephadex LH20 -kolonnissa metanolissa. Pääosa massasta oli näissä yhdisteyissä fraktioissa. Materiaali ,· kuivattiin, liuotettiin 3 ml: aan metanolia ja injektoitiin t 1 ml: n annoksina preparatiiviselle Zorbax C-18 -kolonnille (22,5 mm x 250 mm) huoneenlämpötilassa käyttämällä liuote-25 järjestelmänä asetonitriiliä ja vettä (0,1 % TFA:a) suh-teessä 80:20 virtausnopeudella 8 ml/min, tehden UV-detek-tointi aallonpituudella 270 nm ja keräten 8 ml:n fraktioita. Kussakin kolmesta fraktioinnista saadut fraktiot 29 , , yhdistettiin, jolloin saatiin yhdistettä 2, ja fraktiot ·’ 30 21 - 22 sisälsivät yhdistettä 3. Molemmat liuokset kon- ·.* sentroitiin, uutettiin etyyliasetaatilla, pestiin vedellä ja kuivattiin. Yhdisteen 2 massa oli 1,8 mg ja yhdistettä 16 112503 3 oli 1,0 mg. Molemmat yhdisteet karakterisoitiin NMR- ja MS-tutkimuksilla yhdisteen 1 analogeiksi.
Nopeilla atomeilla tehtävään pommitukseen perustuvat (FAB) massaspektrit rekisteröitiin JEOL HX110 -massa-5 spektrometrillä. FAB-spektri mitattiin käyttämällä ditio-treitoli-ditioerytritolimatriksia (20:80). Tarkat massa-mittaukset tehtiin suurella resoluutiolla käyttämällä re-ferenssiyhdisteenä Ultramark 1960:tä (Fomblin). Ratkaisevat suurella resoluutiolla mitatut tulokset esitetään seuraa-10 vassa.
Yhdiste 1
Mitattu Teoreettinen Kaava Kohdennus
15 680,3891 680,3951 C43H53NO6+H M+H
662,3790 662,3845 C43H51NO5+H 680—H2O
Yhdiste 2
Mitattu Teoreettinen Kaava Kohdennus 20 --------------------------------------------------------- 695, 3806 695,3822 C43H53N07 M+ N 13C-NMR- tulokset : : 13C-NMR-spektrit rekisteröitiin CD2Cl2:ssa taajuuk- 25 silla 100 ja 125 MHz Varian Unity 400 ja vastaavasti 500 -NMR-spektrometreillä lämpötilassa 25 °C. Kemialliset ,*·*, siirtymät esitetään ppm.-inä suhteessa tetrametyylisilaaniin » · (TMS), jonka ppm-arvo on nolla, käyttämällä kohdassa ., 53,8 ppm esiintyvää liuotepiikkiä sisäisenä standardina.
30 Yhdiste 1 (125 MHz); 198,0, 172,6, 162,0, 154,7, 154,6, 140,8, 140,0, 138,4, 135,9, 134,0, 125, 9, 125, 1, Γ: 122,7, 122,0, 121,8, 117,5*, 116,7, 113,1, 76,8, 76,4*, ··. 75, 3, 73,9, 72,6, 58,2, 56, 1, 48,0, 47,8, 45,2, 39, 1, 32, 3, 32,0, 30,1, 29, 9, 27,8, 26, 0, 25, 7, 24,7, 23, 5, 19,6, ·' 35 18,1*, 15,1, 12,6, 11,2 ppm.
17 112503
Hiilien lukumäärä 43 sopii yhteen HR-FAB-MS: llä saadun molekyylikaavan C43H53N06 kanssa.
Yhdiste 2 (100 MHz); 198,1, 172,0, 162,0, 154,8, 147,1, 140, 1, 138, 1, 135, 9, 134,0, 126, 8, 122, 6, 122,0, 5 121, 8, 117,8*, 116,7, 113,2, 106, 9, 76, 6*, 75,3, 73, 9, 73, 3, 72,7, 58,2, 55,5, 49,6, 48,1, 44,5, 41,3, 39, 5, 32,0, 30, 4, 30,1, 30,0, 29, 9, 27,8, 26, 0, 24,8, 23, 4, 18,0*, 17,7, 16,7, 15,3, 12,5 ppm.
Hiilien lukumäärä 43 sopii yhteen HR-FAB-MS:llä 10 saadun molekyylikaavan C43H53NO7 kanssa.
*Asteriskilla merkityt hiilet havaittiin leveinä resonansseina.
^^H-NMR-tulokset 1H-NMR-tulokset rekisteröitiin 300, 400 tai 15 500 MHz:n spektrometreillä. Kemialliset siirtymät ilmoite taan ppmrinä suhteessa TMS:ään, jonka ppm-arvo on nolla, käyttämällä liuotepiikkejä sisäisinä standardeina.
Yhdiste 1 (katso kuvio 1) (500 MHz); δ 0,96 (3 H, s), 1,07 (3 H, s), 1,12 (3 H, s), 1,14 (3 H, s), 1,31 (3 H, 20 s), 1,33 (3 H, s), 1,42 (3 H, s), „ 1,46 (3 H, br. s), 1,96 (3 H, d, J = 1 Hz), 2,32 (1 H, dd, J = 11, 14 Hz), V.: 2,75 (1 H, dd, J = 6,5, 14 Hz), 2,81 (1 H, dd, J = 3, 6,0 Hz), 2,85 (1 H, m), 3,43 (1 H, m), 4,96 (1 H, br. s), : 1 : 5,09 (1 H, s), 5,20 (1 H, br. s), 5,22 (1 H, d, 25 J = 6,0 Hz), 5,95 (1 H, d, J = 15 Hz), 6,06 (1 H, d, J = \J 3 Hz), 6,40 (1 H, dd, J = 11, 15 Hz), 7,33 (1 H, br.d, J _ 11 Hz) , 7,71 (1 H, s) .
Yhdiste 2 (katso kuvio 2) (400 MHz): δ 0,95 (3 H, s), 1,07 (3 H, s), 1,122 (3 H, s), 1,126 (3 H, s), 1,31 30 (3 H, s), 1,34 (3 H, s), 1,42 (6 H, s), 1,73 (1 H, dd, F J = 9,5, 12,5 Hz), 1,86 (3 H, d, J = 1,5 Hz), 2,34 (1 H, br. dd, J = 7,5, 12,5 Hz), 2,36 (1 H, dd, J = 11, 14 Hz), 2,78 (1 H, dd, J = 6,5, 14 Hz), 2,81 (1 H, dd, J = 3, 6,5 Hz), 2,93 (1 H, m), 4,88 (H, br.q, J 8 Hz), 5,00 35 (1 H, br.s), 5,10 (1 H, s), 5,20 (1 H, dq, J ~ 1 Hz), 5,21 18 112503 (1 H, d, J = 6,5 Hz), 6,06 (1 H, d, J = 3 Hz), 6,93 (1 H, dq, J = 8, 1,5 Hz), 7,72 (1 H, s).
Yhdiste 3 (katso kuvio 3) (300 MHz) : δ 0,91 (3 H, s), 1,05 (3 H, s), 1,09 (3 H, s), 1,11 (3 H, d, J ^ 5 7,5 Hz), 1,13 (3 H, s), 1,33 (3 H, s), 1,34 (3 H, s), 1,47 (3 H, s), 2,30 (1 H, dd, J = 10,5, 13,5 Hz), 2,72 (1 H, dd, J = 6,5, 13,5 Hz), 2,87 (1 H, dd, J = 3, 6,0 Hz), 4,00 (1 H, dd, J = 2,5, 10,5 Hz), 4,58 (1 H, m), 5,02 (1 H, br.s), 5,07 (1 H, s), 5,17 (1 H, br.s), 5,23 (1 H, d, 10 J = 6,0 Hz), 6,02 (1 H, d, J = 3 Hz), 7,67 (1 H, s).
Lyhenteet: s = singletti, d = dubletti, q = kvar tetti, br = leveä, m = multipletti, J = 1H-1H-kytkentävakio hertseinä (± 0,5 Hz, _ = suunnilleen).
Claims (3)
1. Yhdisteet, joiden kaavat ovat (I) ^oH
10 II (ii) 0Hcr OH ja Mev^v—9H o . 9ς Μβ·"| || | Me I Me |j °Vv^r N (m) i X T T I Me I X Me Me OH λ-\^Me -0 Mb O Y OH '30
2. Menetelmä kasvien tai kasvisatojen loisinfek- *’ tioiden hoitamiseksi, tunnettu siitä, että levitetään j kasviin tai maaperään, jossa se kasvaa, vaikuttava määrä patenttivaatimuksen 1 mukaista yhdistettä.
3. Kasvien loisinfektioiden hoitoon käyttökelpoinen 35 koostumus, tunnettu siitä, että se käsittää inerttiä : kantajaa ja patenttivaatimuksen 1 mukaista yhdistettä. 20 112503
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US08/146,638 US5399582A (en) | 1993-11-01 | 1993-11-01 | Antiparasitic agents |
| US14663893 | 1993-11-01 | ||
| PCT/US1994/012302 WO1995012599A1 (en) | 1993-11-01 | 1994-10-27 | Polycyclic antiparasitic agents, process and strain for their preparation and their use |
| US9412302 | 1994-10-27 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI20012318L FI20012318L (fi) | 2001-11-27 |
| FI112503B true FI112503B (fi) | 2003-12-15 |
Family
ID=22518283
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI961839A FI110871B (fi) | 1993-11-01 | 1996-04-30 | Menetelmä polysyklisten antiparasiittisten aineiden valmistamiseksi ja menetelmässä käytettävä mikro-organismi |
| FI20012318A FI112503B (fi) | 1993-11-01 | 2001-11-27 | Polysyklisiä antiparasiittisia aineita ja niiden käyttö |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI961839A FI110871B (fi) | 1993-11-01 | 1996-04-30 | Menetelmä polysyklisten antiparasiittisten aineiden valmistamiseksi ja menetelmässä käytettävä mikro-organismi |
Country Status (24)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US5399582A (fi) |
| EP (1) | EP0726902B1 (fi) |
| JP (1) | JP3557212B2 (fi) |
| KR (1) | KR100333017B1 (fi) |
| CN (2) | CN1046943C (fi) |
| AT (1) | ATE188476T1 (fi) |
| AU (1) | AU688405B2 (fi) |
| CA (1) | CA2174645C (fi) |
| CZ (1) | CZ286032B6 (fi) |
| DE (1) | DE69422526T2 (fi) |
| DK (1) | DK0726902T3 (fi) |
| ES (1) | ES2143558T3 (fi) |
| FI (2) | FI110871B (fi) |
| GR (1) | GR3032493T3 (fi) |
| HU (1) | HU221276B1 (fi) |
| NO (1) | NO315942B1 (fi) |
| NZ (1) | NZ275339A (fi) |
| PL (1) | PL178879B1 (fi) |
| PT (1) | PT726902E (fi) |
| RU (1) | RU2139874C1 (fi) |
| SI (1) | SI0726902T1 (fi) |
| SK (1) | SK281510B6 (fi) |
| WO (1) | WO1995012599A1 (fi) |
| ZA (1) | ZA948542B (fi) |
Families Citing this family (76)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5399582A (en) * | 1993-11-01 | 1995-03-21 | Merck & Co., Inc. | Antiparasitic agents |
| US5541208A (en) * | 1994-01-24 | 1996-07-30 | Merck & Co., Inc. | Indole diterpene alkaloid compounds |
| US6221894B1 (en) | 1995-03-20 | 2001-04-24 | Merck & Co., Inc. | Nodulisporic acid derivatives |
| US5962499A (en) * | 1995-03-20 | 1999-10-05 | Merck & Co., Inc. | Nodulisporic acid derivatives |
| US5595991A (en) * | 1995-03-20 | 1997-01-21 | Merck & Co., Inc. | Anthelmintic use of nodulisporic acid and analogs thereof |
| ATE435648T1 (de) * | 1995-03-20 | 2009-07-15 | Merck & Co Inc | Derivaten von nodulisporen säure |
| WO1998012196A1 (en) * | 1996-09-19 | 1998-03-26 | Merck & Co., Inc. | Nodulisporic acid derivatives |
| US5834260A (en) * | 1996-08-30 | 1998-11-10 | Merck & Co., Inc. | Antiparasitic agents |
| WO1999018796A2 (en) * | 1997-10-09 | 1999-04-22 | Rhone-Poulenc Agro | Pesticidal combination |
| US6733767B2 (en) | 1998-03-19 | 2004-05-11 | Merck & Co., Inc. | Liquid polymeric compositions for controlled release of bioactive substances |
| US6787342B2 (en) | 2000-02-16 | 2004-09-07 | Merial Limited | Paste formulations |
| US6586452B1 (en) | 2000-07-14 | 2003-07-01 | Merck & Co., Inc. | C1 to C4 side chain modified nodulisporic acid analogs |
| US6399786B1 (en) * | 2000-07-14 | 2002-06-04 | Merck & Co., Inc. | Nonacyclic nodulisporic acid derivatives |
| US20040077703A1 (en) * | 2002-10-02 | 2004-04-22 | Soll Mark D. | Nodulisporic acid derivative spot-on formulations for combating parasites |
| US8362086B2 (en) | 2005-08-19 | 2013-01-29 | Merial Limited | Long acting injectable formulations |
| WO2008005489A2 (en) | 2006-07-05 | 2008-01-10 | Aventis Agriculture | 1-aryl-5-alkyl pyrazole derivative compounds, processes of making and methods of using thereof |
| HUE029127T2 (en) | 2007-05-15 | 2017-02-28 | Merial Inc | Arylazol-2-yl-cyanoethylamino compounds, a process for their preparation and use |
| TWI556741B (zh) | 2007-08-17 | 2016-11-11 | 英特威特國際股份有限公司 | 異唑啉組成物及其作為抗寄生蟲藥上的應用 |
| CA2710171C (en) | 2007-12-21 | 2016-02-02 | Merial Limited | The use of 6-halogeno-[1,2,4]-triazolo-[1,5-a]-pyrimidine compounds for combating pests in and on animals |
| RS58508B1 (sr) | 2008-11-14 | 2019-04-30 | Merial Inc | Enantiomerno obogaćena paraziticidalna jedinjenja ariloazol-2-il cijanoetilamino |
| US8450357B2 (en) | 2008-11-19 | 2013-05-28 | Merial Limited | Compositions comprising an aryl pyrazole and/or a formamidine, methods and uses thereof |
| MX2011005726A (es) | 2008-12-04 | 2011-07-29 | Merial Ltd | Derivados de avermectina y milbemicina dimericos. |
| JP5834006B2 (ja) | 2009-07-30 | 2015-12-16 | メリアル リミテッド | 殺虫性４−アミノ−チエノ［２，３−ｄ］−ピリミジン化合物及びその使用方法 |
| US8846569B2 (en) | 2009-12-04 | 2014-09-30 | Merial Limited | Pesticidal bis-organosulfur compounds |
| WO2011075592A1 (en) | 2009-12-17 | 2011-06-23 | Merial Limited | Compositions comprising macrocyclic lactone compounds and spirodioxepinoindoles |
| ES2569486T3 (es) | 2009-12-17 | 2016-05-11 | Merial, Inc. | Compuestos de dihidroazol antiparasitarios y composiciones que comprenden los mismos |
| EP2531506B1 (en) | 2010-02-05 | 2014-05-14 | Intervet International B.V. | Spiroindoline compounds for use as anthelminthics |
| UA108641C2 (uk) | 2010-04-02 | 2015-05-25 | Паразитицидна композиція, яка містить чотири активних агенти, та спосіб її застосування | |
| MX340985B (es) | 2010-09-29 | 2016-08-01 | Intervet Int Bv | Compuestos de n-heteroarilo. |
| EP2621923B1 (en) | 2010-09-29 | 2017-03-29 | Intervet International B.V. | N-heteroaryl compounds with cyclic bridging unit for the treatment of parasitic diseases |
| NZ610547A (en) | 2010-11-16 | 2015-07-31 | Merial Ltd | Novel monensin derivatives for the treatment and prevention of protozoal infections |
| AU2012273133A1 (en) | 2011-06-20 | 2013-11-07 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Heterocyclic compounds for treating helminth infections |
| WO2013003505A1 (en) | 2011-06-27 | 2013-01-03 | Merial Limited | Amido-pyridyl ether compounds and compositions and their use against parasites |
| WO2013003168A1 (en) | 2011-06-27 | 2013-01-03 | Merial Limited | Novel insect-repellent coumarin derivatives, syntheses, and methods of use |
| EP2739626B1 (en) | 2011-08-04 | 2016-05-04 | Intervet International B.V. | Novel spiroindoline compounds |
| RS61048B1 (sr) | 2011-09-12 | 2020-12-31 | Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc | Paraziticidne kompozicije koje sadrže izoksazolin aktivni agens, postupak i njihove primene |
| US20130079394A1 (en) | 2011-09-23 | 2013-03-28 | Cnrs (Centre National Recherche Scientifique) | Indirect modeling of new repellent molecules active against insects, acarids, and other arthropods |
| KR102066757B1 (ko) | 2011-11-17 | 2020-01-15 | 뵈링거 잉겔하임 애니멀 헬스 유에스에이 인코포레이티드 | 아릴 피라졸 및 치환된 이미다졸을 함유하는 조성물, 그의 방법 및 용도 |
| CN103958476A (zh) | 2011-11-28 | 2014-07-30 | 纳幕尔杜邦公司 | N-(4-喹啉基甲基)磺酰胺衍生物以及它们作为驱肠虫剂的用途 |
| WO2013082373A1 (en) | 2011-12-02 | 2013-06-06 | Merial Limited | Long-acting injectable moxidectin formulations and novel moxidectin crystal forms |
| HUE043949T2 (hu) | 2012-02-06 | 2019-09-30 | Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc | Szisztémásan ható hatóanyagokat tartalmazó, parazitaellenes, szájon át adagolt állatgyógyászati készítmények, eljárások és alkalmazásuk |
| JO3626B1 (ar) | 2012-02-23 | 2020-08-27 | Merial Inc | تركيبات موضعية تحتوي على فيبرونيل و بيرميثرين و طرق استخدامها |
| US9321724B2 (en) | 2012-03-28 | 2016-04-26 | Intervet Inc. | Heteroaryl compounds with A-cyclic bridging unit |
| US9260441B2 (en) | 2012-03-28 | 2016-02-16 | Intervet Inc. | Heteroaryl compounds with cyclic bridging unit |
| JP6161173B2 (ja) | 2012-04-20 | 2017-07-12 | メリアル インコーポレイテッド | ベンズイミダゾール誘導体を含む殺寄生虫組成物、その方法及び使用 |
| SG11201503959VA (en) | 2012-11-20 | 2015-06-29 | Merial Inc | Anthelmintic compounds and compositions and method of using thereof |
| WO2014099837A1 (en) | 2012-12-18 | 2014-06-26 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Sulfonamide anthelmintics |
| US9447084B2 (en) | 2013-11-01 | 2016-09-20 | Merial, Inc. | Antiparisitic and pesticidal isoxazoline compounds |
| CN106455560B (zh) | 2014-04-17 | 2020-12-22 | 勃林格殷格翰动物保健美国公司 | 用于保护动物免受寄生物的丙二腈化合物的用途 |
| US10045979B2 (en) | 2014-05-19 | 2018-08-14 | Merial Inc. | Anthelmintic compounds |
| US9776986B2 (en) | 2014-06-19 | 2017-10-03 | Merial Inc. | Parasiticidal compositions comprising indole derivatives, methods and uses thereof |
| ES2887302T3 (es) | 2014-10-31 | 2021-12-22 | Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc | Composiciones parasiticidas que comprenden fipronil |
| PY1609250A (es) | 2015-02-26 | 2018-03-01 | Merial Inc | Formulaciones inyectables de acción prolongada que comprenden un agente activo isoxazolina, métodos y usos de las mismas |
| CN114891070A (zh) | 2015-05-20 | 2022-08-12 | 勃林格殷格翰动物保健美国公司 | 驱虫缩酚酸肽化合物 |
| UY40429A (es) | 2016-02-24 | 2023-10-13 | Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc | Compuestos antiparasitarios de isoxazolina, formulaciones inyectables de acción prolongada que los comprenden, métodos y usos de los mismos |
| WO2018039508A1 (en) | 2016-08-25 | 2018-03-01 | Merial, Inc. | Method for reducing unwanted effects in parasiticidal treatments |
| EP3525590B1 (en) | 2016-10-14 | 2025-08-20 | Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH | Pesticidal and parasiticidal vinyl isoxazoline compounds |
| MX2019005628A (es) | 2016-11-16 | 2019-12-18 | Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc | Compuestos depsipeptidos antihelminticos. |
| AR111260A1 (es) | 2017-03-31 | 2019-06-19 | Intervet Int Bv | Formulación farmacéutica de la sal de crotonil amino piridina |
| ES2944616T3 (es) | 2017-08-14 | 2023-06-22 | Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc | Compuestos de pirazol-isoxazolina plaguicidas y parasiticidas |
| WO2019064243A1 (en) | 2017-09-29 | 2019-04-04 | Victoria Link Limited | HETEROLOGICAL BIOSYNTHESIS OF NODULISPORIC ACID |
| EP3749096A1 (en) | 2018-02-08 | 2020-12-16 | Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. | Parasiticidal compositions comprising eprinomectin and praziquantel, methods and uses thereof |
| WO2020002593A1 (en) | 2018-06-29 | 2020-01-02 | Intervet International B.V. | Compound for use against helminthic infection |
| MX2021000293A (es) | 2018-07-09 | 2021-07-15 | Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc | Compuestos heterociclicos antihelminticos. |
| US11773066B2 (en) | 2018-11-20 | 2023-10-03 | Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. | Indazolylcyanoethylamino compound, compositions of same, method of making, and methods of using thereof |
| NZ776819A (en) | 2019-01-16 | 2023-04-28 | Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc | Topical compositions comprising a neonicotinoid and a macrocyclic lactone, methods and uses thereof |
| EP3930684A1 (en) | 2019-03-01 | 2022-01-05 | Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. | Injectable clorsulon compositions, methods and uses thereof |
| BR112021018631A2 (pt) | 2019-03-19 | 2021-11-23 | Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc | Compostos anti-helmínticos de aza-benzotiofeno e aza-benzofurano |
| MX2022007671A (es) | 2019-12-18 | 2022-07-19 | Intervet Int Bv | Compuestos antihelminticos que comprenden una estructura de azaindoles. |
| WO2021122911A1 (en) | 2019-12-18 | 2021-06-24 | Intervet International B.V. | Anthelmintic compounds comprising a quinoline structure |
| WO2021242581A1 (en) | 2020-05-29 | 2021-12-02 | Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. | Anthelmintic heterocyclic compounds |
| AU2021395477A1 (en) | 2020-12-11 | 2023-06-22 | Intervet International B.V. | Anthelmintic compounds comprising a thienopyridine structure |
| WO2022140728A1 (en) | 2020-12-21 | 2022-06-30 | Boehringer Ingelheim Animam Health Usa Inc. | Parasiticidal collar comprising isoxazoline compounds |
| JP2025507585A (ja) | 2022-02-17 | 2025-03-21 | ベーリンガー インゲルハイム フェトメディカ ゲーエムベーハー | 流体製品メーラーを提供する方法及びシステム |
| CN121620507A (zh) | 2023-08-02 | 2026-03-06 | 英特维特国际股份有限公司 | 具有驱虫活性的甲酰胺-4-喹啉化合物 |
| WO2025257633A1 (en) | 2024-06-12 | 2025-12-18 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Long-acting castor oil-containing injectable formulations and methods of use thereof |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SE434277B (sv) * | 1976-04-19 | 1984-07-16 | Merck & Co Inc | Sett att framstella nya antihelmintiskt verkande foreningar genom odling av streptomyces avermitilis |
| US4199569A (en) * | 1977-10-03 | 1980-04-22 | Merck & Co., Inc. | Selective hydrogenation products of C-076 compounds and derivatives thereof |
| US4378353A (en) * | 1981-02-17 | 1983-03-29 | Merck & Co., Inc. | Novel C-076 compounds |
| DE3611168C2 (de) * | 1985-04-02 | 1994-01-20 | Asahi Chemical Ind | Hydroxybenzoesäurephenylester, deren Herstellung und deren Verwendung als physiologisch wirksame Substanzen |
| US4873247A (en) * | 1987-11-27 | 1989-10-10 | Goegelman Robert T | Derivatives of paraherquamide isolated from a fermentation broth active as antiparasitic agents |
| JP2805564B2 (ja) * | 1992-08-13 | 1998-09-30 | 明治製菓株式会社 | 新規物質ｐｆ１１０１ｂ物質及びその製造法 |
| US5399582A (en) * | 1993-11-01 | 1995-03-21 | Merck & Co., Inc. | Antiparasitic agents |
-
1993
- 1993-11-01 US US08/146,638 patent/US5399582A/en not_active Expired - Lifetime
-
1994
- 1994-10-27 AT AT94932063T patent/ATE188476T1/de active
- 1994-10-27 SK SK539-96A patent/SK281510B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1994-10-27 KR KR1019960702262A patent/KR100333017B1/ko not_active Expired - Lifetime
- 1994-10-27 PL PL94314190A patent/PL178879B1/pl unknown
- 1994-10-27 EP EP94932063A patent/EP0726902B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-10-27 DK DK94932063T patent/DK0726902T3/da active
- 1994-10-27 DE DE69422526T patent/DE69422526T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1994-10-27 HU HU9601138A patent/HU221276B1/hu unknown
- 1994-10-27 NZ NZ275339A patent/NZ275339A/en not_active IP Right Cessation
- 1994-10-27 AU AU80929/94A patent/AU688405B2/en not_active Expired
- 1994-10-27 RU RU96112175A patent/RU2139874C1/ru active
- 1994-10-27 ES ES94932063T patent/ES2143558T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1994-10-27 WO PCT/US1994/012302 patent/WO1995012599A1/en not_active Ceased
- 1994-10-27 JP JP51328695A patent/JP3557212B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1994-10-27 PT PT94932063T patent/PT726902E/pt unknown
- 1994-10-27 CN CN94194524A patent/CN1046943C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1994-10-27 SI SI9430297T patent/SI0726902T1/xx unknown
- 1994-10-27 CA CA002174645A patent/CA2174645C/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-10-27 CZ CZ961249A patent/CZ286032B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1994-10-31 ZA ZA948542A patent/ZA948542B/xx unknown
- 1994-12-20 US US08/359,666 patent/US5614546A/en not_active Expired - Lifetime
-
1996
- 1996-04-30 NO NO19961748A patent/NO315942B1/no not_active IP Right Cessation
- 1996-04-30 FI FI961839A patent/FI110871B/fi not_active IP Right Cessation
-
1999
- 1999-04-24 CN CN99106438A patent/CN1082543C/zh not_active Expired - Lifetime
-
2000
- 2000-01-27 GR GR20000400187T patent/GR3032493T3/el unknown
-
2001
- 2001-11-27 FI FI20012318A patent/FI112503B/fi not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI112503B (fi) | Polysyklisiä antiparasiittisia aineita ja niiden käyttö | |
| EP0132082B1 (en) | Antibiotic/antitumor compounds and their production | |
| GB2046737A (en) | Antihypercholesteraemic Agent, Monacolin K, and Its Preparation | |
| EP0185456B1 (en) | Cl-1577d and cl-1577e antibiotic/antitumor compounds, their production and use | |
| CA2013412A1 (en) | Anthelmintic bioconversion products | |
| US5516686A (en) | Fungicidal antibiotic producing Streptomyces sp. NCIMB 40212 | |
| US3647776A (en) | 1-hydroxy- and acetyloxy-3-(1-hexenylazoxy)-2-butanone | |
| JP2815166B2 (ja) | 新規抗生物質ｍｋ１６８８物質ならびにその製造法 | |
| JPS6348284A (ja) | 新抗生物質ｙｐ−０２９０８ｌ−ａおよびその製造法 | |
| JPS62186787A (ja) | 新規な微生物 | |
| JPS60130394A (ja) | 新規抗生物質ｓｆ−２３２４物質、その製造法及び用途 | |
| JPS61115081A (ja) | 新規な抗生物質ｓｓ２１０２０ｄ及びその製造法 | |
| JPH03279379A (ja) | 新規化合物インダノナフトールａおよびｂ | |
| JPS5834112B2 (ja) | 新抗生物質ｓｆ−１５４０−ｂ物質及びそれの製造法並びに農業用抗カビ剤 | |
| JPH01199582A (ja) | 新規抗生物質ｆｏ−１２５ａ↓４、ａ↓５、ｂおよびそれらの製造法 | |
| JPS6330492A (ja) | 新規抗生物質ａ１−ｒ２３９７物質及びその製造法 | |
| JPH03220196A (ja) | ベンズアンスラキノン化合物 | |
| JPH03198783A (ja) | 新規抗生物質ｓｆ２６９５ａ物質およびｓｆ２６９５ｂ物質ならびにその製造法 | |
| JPS6176498A (ja) | アンスラサイクリン化合物ｒ２０ｘ２およびその用途 | |
| JPS59159786A (ja) | 新規物質アルゴマイシン | |
| JPH0366307B2 (fi) | ||
| JPS61137893A (ja) | アンスラサイクリン化合物ｒ２０ｘ４ | |
| JPS6178395A (ja) | 新規な抗生物質ｓｓ２１０２０ｂ及びその製造法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PC | Transfer of assignment of patent |
Owner name: MERCK SHARP & DOHME CORP. Free format text: MERCK SHARP & DOHME CORP. |
|
| PC | Transfer of assignment of patent |
Owner name: MERCK SHARP & DOHME CORP. |
|
| MA | Patent expired |