CN1137796A - 多环抗寄生虫剂，其制备的方法和菌株及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了由Nodulisporium属菌株发酵得到的具有式I-Ⅲ的新化合物。所述化合物是高潜力的体外杀寄生虫，抗寄生虫及杀昆虫剂。

Description

多环抗寄生虫剂，其制备的方法和菌株及其应用
本发明的背景
新的抗寄生剂是熟知的，例如US 4310519和4199569中公开的除虫菌素。然而，所述除虫菌素化合物尽管是抗内外寄生虫的有潜力的试剂，但其在结构上与本发明化合物有显著的不同。除虫菌素，作为从放线菌中分离的大环试剂，与本发明多环真菌代谢产物无关。在deJesus等在J.Chem.Soc.Perkin Trans I，pg 697-701，(1984)中描述了鉴定为janthitrem的真菌代谢产物，所述janthitrem具有多环结构，但没有数个本发明化合物的结构元素。本发明综述
本发明涉及新抗寄生虫剂和体外杀寄生虫剂的制备方法。因此本发明的一个目的是公开所述的新化合物。另一目的是提供制备所述化合物的新方法。另一目的是描述用于制备所述化合物的微生物和用于所述生产的发酵条件。还有一目的是描述用本发明化合物作为抗寄生虫剂的组合物和方法。在阅读下列描述的过程中其他目的将是显而易见的。
附图描述
图1，2和3分别是化合物1，2和3的质子核负共振谱。在图中，用“X”标出了数个共振峰。这些峰是溶剂存在的结果，并且对于所述化合物的结构来说不明显。
图1于25℃在Varian Unity 500 NMR光谱仪上，CD2Cl2中于500MHz记录的化合物I的核磁共振谱。以在δ5.32的溶剂峰为内标，以TMS零ppu为标准，用ppu来表示化学位移。仅注明了诊断峰。
图2于25℃在Varian Unity 400 NMR光谱仪上，CD2Cl2中于400MHz记录的化合物II的核磁共振谱。以在δ5.32的溶剂峰为内标，以TMS零ppu为标准，用ppu来表示化学位移。仅注明了诊断峰。
图3于25℃在Varian Unity 300 NMR光谱仪上，CD2Cl2中于300MHz记录的化合物III的核磁共振谱。以在δ7.24的溶剂峰为内标，以TMS零ppu为标准，用ppu来表示化学位移。仅注明了诊断峰。
本发明的详细描述
本发明涉及一种独特结构的新化合物。本发明还涉及在Nodulisporium种或其变异体的发酵培养基中制备本发明化合物的新方法。
本发明的化合物具有下列结构：
Figure A9419452400051
              化合物1
Figure A9419452400052
              化合物2
Figure A9419452400061
                化合物3
上述结构式未在特定的位置描述确定的立体化学，而在其他特定的位置描述了具体的立体化学，应将本发明解释为包括了所有上述的立体异构体。具体地说，可将在不同不对称中心的立体异构体定向为分别在上述分子一般平面下或上的α或β代表的上述基团。
发现了本发明化合物在治疗和/或预防因寄生虫，例如节肢动物寄生虫，蜱，虱，蚤，以及在家畜和家禽中的其他咬啮昆虫，例如，Tenophalides，硬蜱，瘙螨，绿蝇和Hemotobia而引起的疾病中作为抗寄生虫剂的主要应用。它们在治疗包括人的其他动物中发生的寄生虫病方面也是有效的。为了达到最佳结果而使用的最佳剂量当然要取决于被治疗动物的种类和寄生虫感染或侵染的类型及严重程度。通常，通过口服约0.001到约100mg/kg动物体重的我们的新化合物会得到好的结果，所述总剂量可以一次或在相对短的时间，例如1-5天内分几次剂量给药。用本发明的新化合物，通过以约0.025到约50mg/kg体重的单次剂量施用会极好地控制动物中的所述寄生虫。在需要抵御重复感染时要进行重复治疗，而且所述的重复治疗取决于寄生虫种类和所用的饲养技术。将这些物质施用给动物的技术是兽医领域专业人员熟知的。
本发明化合物对于抗家庭的害虫，例如蟑螂，Blatella sp.，蚂蚁，火蚁、衣服蠹，蛾，毯子甲虫，毛蠹，和家蝇也是有效的。
本发明化合物对于抗贮存粮食中的昆虫害虫，例如谷盗，粉虫和农作物害虫例如蜘蛛螨(Tetranychus sp.)，蚜虫，长管蚜，迁移直翅目，例如飞蝗和以植物组织为生的不成熟阶段的昆虫也是有用的。所述化合物对于用于控制农业中重要的土壤线虫和植物寄生虫，例如根瘤线虫的杀线虫剂是有用的。
可以经口以单位剂量形式，例如胶囊，药团或片剂，或作为活性成分通常在水中与悬浮剂，例如膨润土和润湿剂等赋形剂一起的溶液，悬浮液或分散剂的兽用顿服药施用本发明的化合物。通常兽用顿服药还含有一种抗泡剂。兽用顿服药制剂通常含有约0.001到约1.0％重的活性化合物。优选的兽用顿服药制剂可含有约0.01到0.1％重的活性化合物。胶囊和药团含有与载体例如淀粉，滑石，硬脂酸镁或磷酸二钙混合的活性成分。
若需要施用干燥，固体单位剂量形式的本发明化合物，则通常施用含有所需量本发明化合物的胶囊、药团或片剂。通过均匀或不均匀地将所述活性成分与适宜的良好分散的稀释剂，填充剂，崩裂剂和/或粘合剂，例如淀粉、乳糖、滑石、硬脂酸镁、植物胶等混合而制备这些剂量形式。所述的单位剂量形式根据例如待治疗的宿主动物类型，感染的严重性和类型以及宿主的体重，随其总重量和抗寄生虫剂的含量可以有很大的变化。
若经动物的食料施用本发明的化合物，则将所述化合物不均匀地分散在饲料中或洒在饲料上或以然后可加到拌好的饲料中的颗粒形式使用或单独饲喂。另外，可以不经肠地，例如经刍内，肌肉内，气管内或皮下注射将本发明的抗寄生虫化合物施用给动物，在所述的皮下注射中，将活性成分溶解或分散在液体载体中。对于不经肠施用来说，将活性物质与可接受的载体，优选与各种植物油，例如花生油，棉花籽油等适宜地混合。也可以使用其他不经肠载体，例如利用solketal，甘油的有机制品，有效和含水的不经肠制剂。将本发明化合物溶解或悬浮在不经肠制剂中用于施用；所述制剂通常含有约0.55％到约5％重的本发明化合物。
若将本文所述的化合物作为动物饲料的成分施用，或溶解或悬浮在饮用水中，则提供组合物，其中将活性化合物不均匀地分散在惰性载体或稀释剂中。惰性载体指与抗寄生虫剂不发生反应并可以安全地施用给动物的那些。优选的，用于饲喂施用的载体是即为或可以为动物食物的那些。
适宜的组合物含有饲料预混合物或补充物，其中本发明化合物以相对大的数量存在，而且所述饲料预混合物或补充物适于直接饲喂给动物或直接或在过渡的稀释或混合步骤后加入到饲料中。适用于所述组合物的典型载体或稀释剂包括例如，干酒糟，玉米粉，柑橘粉(citrusmeal)发酵残留物，磨碎的贝壳，小麦细麸子，糖蜜可溶物(molassessolubles)，玉米穗轴粉，可食的豆粉饲料feed，soya grits，碎的石灰石等。通过例如研磨，搅拌，碾碎或磨滚方法将本发明的化合物不均匀地完全分散在载体中。含有约0.005％到约2.0％重本发明化合物的组合物特别适于作为饲料预混物。直接饲喂给动物的饲料补充物含有约0.0002％到约0.3％重的本发明化合物。
将所述补充物以治疗和控制寄生虫疾病所需的活性化合物浓度的量加入动物饲料中以得到加工好的饲料。尽管所需的本发明化合物的浓度将随上述因素以及所用的特定化合物而不同，但是通常以在饲料中约0.001％到约0.2％的浓度饲喂本发明的化合物以达到所需的抗寄生虫效果。
另外，若将所述化合物加到动物饲料中，则可以使用来自发酵液的干菌丝饼。菌丝含有较大的活性而且由于可以确定菌丝的活性水平，因此可将其直接加到动物饲料中。
本发明化合物可用于抗在作物生长或贮存时使其遭受损坏的农业害虫。利用如喷雾，喷粉，乳化等已知的技术应用本发明的化合物于正在生长的或贮存中的作物以便使其抵御所述的农业害虫。
通过将饲料、单一化合物样品、所述化合物的混合物、浓缩的提取物等口服施用给用适当的寄生虫已经感染了3天的小鼠，来确定本发明化合物的抗寄生虫活性。在开始给药后的11，12和13天，检测小鼠粪便中的卵，在接下来的一天杀死小鼠，确定在小肠邻近部分中的虫数。与感染的未给药控制的对照相比卵和虫计数明显减少时，观察活性化合物。
通过发酵真菌属Nodulisporium的菌株而制备本发明的新化合物。一种所述的培养物是在Merck and Co.，Inc.，Rahway，New Jersey培养物保藏中心的MF-5954。MF-5954的生产菌株已成为位于12301Parklawn Drive，Rockville，Md.20852的美国典型培养物保藏中心的的永久保藏品，保藏号为74245。根据用于专利程序目的的微生物保藏的布达佩斯条约，于1993年9月21日完成了保藏。Nodulisporium种MF-5954的形态学和培养特征如下：
用Bill和Polishook(1991)的表面灭菌法从木本植物组织中分离称为JP337的MF-5954(生产L-954，967)(一种植物内生真菌)。在下列描述中，用大写字母开头的颜色名称来自Ridgway(1972)。
于25℃，50％相对湿度培养6天并经12小时的荧光光照期后，在玉米粉琼脂(Difco)上得到直径为42mm的菌落。Colony mat在琼脂表面内生长，表面紧贴粘结在一起，完全无色；没有渗出物和可溶的色素；背面无色；有甜的芳香的气味。
在相同的条件下6天后，在燕麦粉琼脂(Difco)上得到直径为42mm的菌落。Colony mat紧贴，呈零星的棉状，菌落中心呈棕黄色(MarsYellow，Raw Sienna)，中部到边缘呈淡棕黄色(Light Orange，AntimonyYellow)；边缘完整，白色；没有渗出物，气味和可溶色素；背面呈淡棕色。
在相同的条件下培养6天后，在马铃薯-蔗糖琼脂(Singleton等人，1992)上得到直径为43mm的菌落。Colony mat紧贴，呈零星的棉状，中心为红棕色(Light Russet-Vinaceous)逐渐变淡，在边缘透明，边缘不清楚；没有渗出物，气味和可溶的色素；背面红棕色(DarkVinaceous)。
于37℃在玉米粉琼脂上，黑暗中，6天后得到直径为82mm菌落；除mat紧贴的接种点外，Colony mat完全呈棉状，白色；边缘完整，白色；没有渗出物和可溶色素；背面不能着色；有甜的芳香气味。
菌丝透明呈淡棕色，有隔膜，壁光滑稍有些粗糙，厚壁，2.5-3.5μm厚。分生孢子梗，单丝状，竖直的，150-400×3.0-4.0μm，青霉状分支，透明呈淡棕色，有隔膜，厚壁，光滑较粗糙，多疣，有时有橄榄色的圆的突出(直径2.5μm)。产分生孢子(conidiogenous)细胞是全裂的，末端分生，16-24×1.5-2.0μm，较粗糙，多疣，柱状，顶部不规则。分生孢子倒卵形到长椭圆-椭圆，带有截断的附着点，4.1-5.7×1.6-2.5μm，透明，没有隔膜，薄壁，从分生细胞的顶部合轴产生，积累为顶部的簇或小齿。
将MF-5954分在真菌属Nodulisporium(Hyphonycetes，Deuteromycotina)中。该属的关键分类性状包括典型分枝并合轴产生分生孢子的单丝状分生孢子。另外，由于产生丰富的分生孢子，分生孢子携带区在末端或居中的而且有球结(Jong和Rogers，1972)。这些特征将Nodulisporium属与其他相似的真菌，例如GeniculosporiumZylocladium和Ustilina区别开来。这些属是许多xylariaceous(Ascomyxotina)真菌，例如Hypoxylon，Xylaria，Rosellinia等的无性(变形)状态。
与Nodulisporium的大多数分离物不同，MF-5954于37℃生长良好，但在培养基中未表现出与一已知种相关的任何其他区别特征。因此，将其称为Nodulisporium种。引述的文献1.Bills，G.F.and Polishook，.J.D.1991.“Microfungi from Carpinuscaroliniana”.，Can.J.Bot.69(7)：1477-1482.2.Jong，S.C.and Rogers，J.D.1972.“Illustrations and descriptions ofconidial states of some Hypoxylon species”.Wash.State Agric.Exp.Sta.Tech.Bull.No.71.51p.3.Ridgway，R.1912.Color standards and color nomenclature，publ.by theauthor，Washington，D.C.43p.+53pl.4.Singleton，L.L，Mihail，J.D.and Rush，C.M.(Eds).1992.Methods forresearch on soilborne phtopathogenic fungi，appendix A，p.247.APS Press，St.Paul，Minnesota.
用Nodulisporium种的生产菌株在下文所述的条件下，于适宜固体或液体营养培养基的需氧发酵期间生产本发明化合物。例如用于生产许多抗生素物质的液体和固体培养基均适于在这些多环化合物的生产过程中使用。
所述营养培养基含有可由微生物吸收的碳和氮源以及通常低水平的无机盐。另外，发酵培养基可含有微生物生长及生产所需化合物所必需的痕量金属。这些物质常常以足够的浓度存在，于复合碳和氮源中，可作为营养源，当然如果需要可分别加到所述培养基中。通常，如糖的碳水化合物，例如葡萄糖，蔗糖，麦芽糖，乳糖，右旋糖，cerelose，玉米粉，燕麦粉等以及淀粉是营养培养基中适宜的可吸收碳源。在培养基中所利用的碳源的精确量部分取决于培养基中的其他组分，但发现碳水化合物的量通常在1到150g/l培养基是令人满意的。可以使用这些碳源中的一种或将数种碳源在相同的培养基中结合使用。
各种氮源，例如酵母水解产物，酵母自溶产物，酵母细胞，番茄膏，玉米粉，燕麦粉，大豆粉，酪蛋白水解产物，酵母提取物，玉米浆，酒糟，棉籽粉，肉提取物等在本发明化合物的生产中很容易为Nodulisporium种所吸收。各种氮源可以以1到5g/l培养基的量单独或结合使用。
可掺入培养基中的营养无机盐是能够产生钠，钾，镁，铵，钙，磷酸盐，硫酸盐，氯，碳酸盐等离子的常规盐。培养基中还包括了痕量的金属，例如铁，锌，锰，铜，硼，钼等。
应注意到，下文和实施例中描述的培养基仅仅是为了说明可使用的各种的培养基，而不是为了进行限制。
下列是适于生长Nodulisporium种MF-5954，ATCC 74245菌株的培养基：
斜面培养基的组分
酵母提取物                                  4g
麦芽提取物                                  10g
葡萄糖                                      4g
Bacto Agar                                  20g
蒸馏水                                      1000ml
pH 7.0接种和生产培养基的组分
接种培养基
组分                                          g/L
酵母提取物                                    4.0
麦芽提取物                                    8.0
葡萄糖                                        4.0
Junlon                                        1.5
用蒸馏水制备所述培养基，灭菌前将pH调到7.0，以每250ml未分隔的Erlenmeyer烧瓶50ml的量分开。用棉花密封。于121℃灭菌20分钟。
生产培养基1固体部分
将1250cc蛭石加到4L旋转瓶中。用乳胶塞子塞上；于60℃高压灭菌，再加上30分钟的干燥。2液体部分
组分                                      g/L
葡萄糖                                    150.0
脲                                        4.0
NZ A型胺                                  4.0
K2HPO4                                  0.5
MgSO4·7H2O                             0.25
KCl                                        0.25
ZnSO4·7H2O                             0.9
CaCO3                                    16.5
用蒸馏水制备所述培养基(不用调pH)。将其以425ml/1LErlenmeyer烧瓶分开。用棉塞塞上，于121℃将培养基灭菌15分钟。
生产培养基
组分                                       (g/l)
甘油                                        75.0
葡萄糖                                      10.0
Ardamine PH                                 5.0
(NH4)2SO4                                   2.0
  大豆粉                                    5.0
  番茄膏                                    5.0
  柠檬酸钠                                  2.0
用蒸馏水制备所述培养基，在灭菌前，将pH调到7.0。将培养基以50ml/250ml未分隔的Erlenmeyer烧瓶分开。用棉花将烧瓶塞上然后于121℃将其灭菌20分钟。
使用Nodulisporium种的发酵可以在约20℃到约40℃的温度完成。为了达到最佳结果，最方便的是在约22℃到约36℃的范围内完成发酵。约22℃到约27℃的温度是最佳的。生产本发明化合物的适宜的营养培养基的pH为约6.5到约8.0，优选的范围在约6.8到约7.3。
通过将适宜量的营养培养基放在烧瓶中利用已知灭菌技术灭菌，用Nodulisporium种的孢子或营养细胞培养物接种烧瓶，用棉花松松地将烧瓶塞上，然后在95到300rpm的旋转振荡仪上于约25℃的恒定室温发酵约7到35天来完成小规模的发酵。对于进行大规模生产来说，有效地是在备有搅拌器和使发酵培养基通气的装置的适宜罐中完成发酵。在罐中制备营养培养基，灭菌后用Nodulisporium种的营养细胞培养物接种。使发酵在约22℃到约27℃持续7到25天，同时搅拌和/或使营养培养基通气。通气的程度取决于几个因素，例如发酵罐的大小，搅拌的速度等。通常在进行较大规模的发酵时，以约95到约300rpm和约50到约500L/分(LPM)的空气搅拌。
用溶剂抽提和使用各种层析技术及溶剂系统的层析分级分离从全部的发酵液中分离本发明的化合物并回收所述的化合物。
本发明化合物在水中溶解性很小，但是溶于有机溶剂。可以很方便地利用该特性从发酵液中回收所述的化合物。因此，在一种回收方法中，将全部的发酵液与约等体积的有机溶剂混合。尽管可以使用任何有机溶剂，但，优选的是使用水不混溶的溶剂，例如，乙酸乙酯，二氯甲烷，氯仿等。通常需要抽提数次以达到最佳的回收。溶剂提出了本发明化合物和没有本发明抗寄生虫活性的其他物质。如果溶剂是水不混溶的，则会分层，在减压条件下浓缩有机溶剂。将残留物放在优选的含有硅胶的层析柱上。所述柱留下了所需的产物和一些杂质，但是许多杂质，特别是非极性杂质可以通过。用中度的极性有机溶剂例如，二氯甲烷或氯仿，洗涤该柱以进一步除去杂质，然后，用二氯甲烷或氯仿与优选的丙酮，甲醇，和乙醇等有机溶剂中的一种的混合物洗涤。蒸发掉溶剂，利用含有硅胶，氧化铝，离子交换树脂，葡聚糖凝胶等作为层析介质，以各种溶剂和溶剂的组合作为洗脱剂的柱层析，薄层层析，制备性的薄层层析等将残留物再进行层析。可以用薄层，高压，液体和制备性薄层层析检测本发明化合物的存在并分离所述化合物。
使用前述的技术及本领域专业人员已知的其他技术，可以提供含有本发明化合物的组合物。通过分析各层析组分的生物活性或物理-化学特性确定所需化合物的存在。通过详细分析所述化合物的各种谱特征，特别是其核磁共振，质谱，紫外光谱和红外光谱已确定了这两种化合物。
实施例11培养：在琼脂斜面上接种MF-5954，然后用于制备FVM(冷冻的营养菌丝)。将部分琼脂斜面无菌转移到种子培养基A(50ml 250ml未分隔的烧瓶)中。在直径2-英寸旋转振荡器上，以220rpm于25℃，85％的相对湿度(rh)培养3天以达到生物量。将部分生物量转移到含有甘油的无菌小瓶中，然后冷冻(作为FVM)。在-75℃，终浓度为10-15％的甘油中保持。通过将1.0ml融解的初级FVM转移到种子培养基中，然后在25℃，220rpm培养2-3天，并按上述冷冻而制备次级FVM。2  接种：将冷冻的小瓶(FVM)融解到室温，然后以0.5-1.0ml/50ml种子培养基接种MF-5954的种子培养物。使其在25℃，85％rh的旋转振荡器(220rpm)上生长2-3天。有时使用第二个阶段的种子。到此，将1ml上述第一阶段的接种物稀释到50新鲜的种子培养基A中，然后于25℃，220rpm，85％rh培养24-30小时。3 生产：生产培养基A的组分是固体底物的发酵培养基。将一份种子(18-24ml)加到425ml的生产培养基A中。使劲地旋转该烧瓶以分散生物量。通过注入到含有1250立方厘米大颗粒蛭石的4L旋转培养容器中而将内含物分开。将旋转瓶的内含物振荡和/或混合以确保均匀接种和覆盖。将旋转瓶水平于22-25℃，50-75％rh培养，在Wheaton旋转器上以约4rpm旋转培养19-28天以便在发酵培养基中得到次级代谢产物。
对大量的液体培养基进行检测，以确定其是否生产了本发明化合物，以便将发酵更容易地扩大到大容器中。仅在少量所检测的液体培养基中检测到生产。使用液体生产培养基B。按上述接种种子培养物，然后于25℃85％rh在旋转振荡器上以220rpm生长3天。用一份种子(1ml)接种含50ml的各生产烧瓶(2％接种量)。于25℃50％rh，在旋转振荡器(220rpm)上将烧瓶培养21-28天。
两种生产方法在生产的产量方面基本上相等。但是，第二种方法(液体生产培养基B)有优点，原因在于可以将其扩大到搅拌的容器中，以便可进行大量生产。固体生产方法(培养基A的旋转瓶)扩大生产有困难。
从该培养基广口容器(22L桶)也被用到生产本化合物中。实施例2纯化和初步表征
在100rpm旋转器上各用650ml甲基乙基酮(MEK)将12个含有在培养基中生长了21天的培养物的2-升旋转瓶抽提4小时。将提取物过滤，混合，真空下蒸发至干燥，得到8克的产物。将该物质溶解在20ml二氯甲烷中，注到二氯甲烷∶甲醇为95∶5的800ml硅胶柱(E.Merck)上一柱体积的下列各种溶剂被用作洗脱剂：95∶5，9∶1，3∶1，1∶1二氯甲烷∶甲醇。收集按生物量确定的在有最大活性的级分51-55中的40ml级分(Lucilia)。将级分混在一起，在真空下蒸发至干燥，重量为200mg。将该样品溶解在8.5ml甲醇中，注到在甲醇中的Sephadex LH20柱(Pharmacia)上，以6.5ml/分的流速收集13ml级分。确定活性在级分41-50，集中这些级分，干燥，重量为90mg。将该物质溶解在0.5ml甲醇中，在室温于270nm监测，以4ml/分的流速在EkaNobel C-18 HPLC柱(9.6mm×250mm)上注射两次。所用的溶剂系统是含有0.1％TFA的70∶30的乙腈∶水，在第一次分离中活性物质分离在级分26-27中，在第二次中分离在26-28中。用分析HPLC确定所述化合物的纯度：以1ml/分的流速，于40℃的Eka Nobel柱(4.6×250mmC-18)以及在数个溶剂系统中的TLC。在真空下浓缩集中的级分，用二氯甲烷抽提，干燥，得到4.8克的纯产物(化合物1)。
来自上述硅柱的较后的级分也有生物活性的；将其混合，在真空下干燥，重量为1.4g。用甲醇将固体洗涤数次，含有与化合物1的UV光谱相似的成分。用该光谱学特性监测进一步的纯化步骤，最终证实了纯化合物的生物活性。因此，在甲醇中的250ml Sephadex LH-20柱分离含有500mg重的甲醇溶液。这些混合的级分占了大部分重量。将所述物质干燥，然后再溶于3ml甲醇中，在室温，在用80-20乙腈-水(0.1％TFA)溶剂系统的制备性Zorbax C-18柱(22.5mm×250mm)，以8ml/分的流速注射1ml，在270nm进行UV检测，收集8ml的流分。将分别来自三个组分的级分29混合在一起以得到化合物2，级分21-22含有化合物3。将两个溶液进行浓缩，用乙酸乙酯抽提，用水洗涤，然后干燥。化合物2的重量为1.8mg，化合物3的为1.0mg。经NMR和MS研究，两种化合物均为化合物I的类似物。
在JEOL HX110质谱仪上记录快速原子轰击(FAB)质谱。用二硫苏糖醇∶二硫赤藓糖醇(20/80)的基质得到FAB谱。以ultramark1960(Fomblin)为参照化合物，在以分辨率测量精确的质量。重要的高分辨率数据如下所示。化合物1发现的         计算的         分子式               排列680.3891      680.3951      C43H53NO6+H        M+H662.3790      662.3845      C43H51NO5+H        680-H2O化合物2发现的        计算的         分子式           排列695.3806      695.3822      C43H53NO7       M+ 13C NMR数据
于25℃，分别在Varian Unity400和500NMR分光计上于100和125MHz在CD2Cl2中记录13C NMR谱。以四甲基硅烷(TMS)为零ppm给出化学位移的ppm值，使用在53.8ppm的溶剂峰为内标。化合物1(125MHz)：198.0，172.6，162.0，154.7，154.6，140.8，140.0，138.4，135.9，134.0，125.9，125.1，122.7，122.0，121.8，117.5*，116.7，113.1，76.8，76.4*，75.3，73.9，72.6，58.2，56.1，48.0，47.8，45.2，39.1，32.3，32.0，30.1，29.9，27.8，26.0，25.7，24.7，23.5，19.6，18.1*，15.1，12.6，11.2ppm。43个碳原子与经HR FAB-MS得到的分子式C43H53NO6一致。化合物2(100MHz)：198.1，172.0，162.0，154.8，147.1，140.1，138.3，135.9，134.0，126.8，122.6，122.0，121.8，117.8*，116.7，113.2，106.9，76.6*，75.3，73.9，73.3，72.7，58.2，55.5，49.6，48.1，44.5，41.3，39.5，32.0，30.4，30.1，30.0，29.9，27.8，26.0，24.8，23.4，18.0*，17.7，16.7，15.3，12.5ppm。
43个碳原子与经HR FAB-MS得到的分子式C43H53NO7一致。
在宽共振观察到用*表示的碳。1H NMR数据
在300，400或500MHz分光计记录1H NMR谱。用溶剂峰为内标，用在零ppm的TMS以ppm表示化学位移。化合物1(见图1)(500MHz)：δ0.96(3H，s)，1.07(3H，s)，1.12(3H，s)，1.14(3H，s)，1.31(3H，s)，1.33(3H，s)，1.42(3H，s)，～1.46(3H，br.s)，1.96(3H，d，J＝1Hz)，2.32(1H，dd，J＝11，14Hz)，2.75(1H，dd，J＝6.5，14Hz)，2.81(1H，dd，J＝3，6.0Hz)，2.85(1H，m)，3.43(1H，m)，4.96(1H，br.s)，5.09(1H，s)，5.20(1H，br.s)，5.22(1H，d，J＝6.0Hz)，5.95(1H，d，J＝15Hz)，6.06(1H，d，J＝3Hz)，6.40(1H，dd，J＝11，15Hz)，7.33(1H，br.d，J～11Hz)，7.71(1H，s).
化合物2(见图2)(400MHz)：δ0.95(3H，s)，1.07(3H，s)，1.122(3H，s)，1.126(3H，s)，1.31(3H，s)，1.34(3H，s)，1.42(6H，s)，1.73(1H，dd，J＝9.5，12.5Hz)，1.86(3H，d，J＝1.5Hz)，2.34(1H，br.dd，J＝7.5，12.5Hz)，2.36(1H，dd，J＝11，14Hz)，2.78(1H，dd，J＝6.5，14Hz)，2.81(1H，dd，J＝3，6.5Hz)，2.93(1H，m)，4.88(H，br.q.J～8Hz)，5.00(1H，br.s)，5.10(1H，s)，5.20(1H，dq，J～1Hz)，5.21(1H，d，J＝6.5Hz)，6.06(1H，d，J＝3Hz)，6.93(1H，dq，J＝8，1.5)，7.72(1H，s).
化合物33(见图3)(300MHz)：δ0.91(3H，s)，1.05(3H，s)，1.09(3H，s)，1.11(3H，d，J～7.5Hz)，1.13(3H，s)，1.33(3H，s)，1.34(3H.s)，1.47(3H，s)2.30(1H，dd，J＝10.5，13.5Hz)，2.72(1H，dd，J＝6.5，13.5Hz)，2.87(1H，dd，J＝3，6.0Hz)，4.00(1H，dd.J＝2.5，10.5Hz)，4.58(1H，m)，5.02(1H，br.s)，5.07(1H，s)，5.17(1H，br.s)，5.23(1H，d，J＝6.0Hz)，6.02(1H，d，J＝3Hz)，7.67(1H，s).
Abbreviations：s＝单峰，d＝双重峰，q＝四重峰，br＝宽峰，m＝多重峰，J＝1H-1H用赫兹表示偶合常数(±0.5Hz，～＝近似地)。

Claims (9)

1.具有式或
Figure A9419452400022
的化合物。
2.制备权利要求1化合物的方法，包括在碳，氮源和痕量元素源的培养基中发酵Nodulisporium sp.MF-5954生产菌株，然后分离所述化合物。
3.权利要求2的方法，其中所述菌株是Nodulisporium sp.MF-5954，ATCC 74245。
4.治疗动物寄生虫感染的方法，包括用有效量权利要求1的化合物治疗寄生虫感染的动物。
5.用于治疗动物寄生虫感染的组合物，含有惰性载体和权利要求1的化合物。
6.治疗植物或植物作物寄生虫感染的方法，包括给植物或其生长的土壤施用有效量的权利要求1的化合物。
7.用于治疗植物寄生虫感染的组合物，含有惰性载体和权利要求1的化合物。
8.能够制备权利要求1的化合物的Nodulisporium sp.MF-5954的生物纯培养物。
9.权利要求8的生物纯培养物是Nodulisporium sp.MF-5954，ATCC74245。
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