JP2566385B2 - 新規なストレプトミセス・サーモアルケンシス種の微生物 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本発明は新規な抗生物質化合物を生産する
ストレプトミセス微生物に関する。１つの観点として、
本発明は本発明者らによって抗生物質Ｓ５４１と命名さ
れ、コントロールされた条件下での成長によって製造す
ることのできる新規な種類の物質であって、未だ開示さ
れていない株の微生物を提供するものである。抗生物質
Ｓ５４１は抗生物質として特に抗内部寄生虫（anti-end
oparasitic）、抗外部寄生虫（anti-ectoparasitic）、
抗真菌、殺虫、殺線虫および殺だに活性を有し、農業、
園芸、動物およびヒトの保健の分野での用途において大
いに注目すべきものである。またこれらの化合物は、さ
らに他の活性化合物の製造における中間物質としても使
用することができる。これらの化合物は、本明細書に記
載される如く、発酵によって得ることができ、また実質
的に純粋な状態で回収することができる。

【０００２】抗生物質Ｓ５４１は部分式（Ｉ）

【化２】

【０００３】特に部分式（ＩＩ）

【化３】 を有する一連の関連化合物である。

【０００４】部分式（II）を有する６種類の化合物につ
き、以下により詳細に説明する。本発明は上記の部分式
を有する個々の化合物およびそれらの組み合わせにも及
ぶものである。ある種の用途、例えば農業もしくは園
芸、または獣医学薬剤においては、抗生物質Ｓ５４１を
個々の成分に分離しない使用法がより好適であるが、そ
の他の用途、例えばヒトの薬剤では個々の化合物を使用
することが好ましい。従って、本発明は本発明の少なく
とも１種の他の化合物との混合物としての本発明の化合
物、さらにまた、例えば実質的に純粋な状態または実質
的に他のマクロライド化合物を含まない状態の個々の化
合物をも含むものである。

【０００５】最初に単離した抗生物質Ｓ５４１は、後に
記載する如く、シリカ上のクロマトグラフィーにより、
抗生、例えば抗蠕虫活性を有し、２５４nmで紫外線蛍光
を消す２種の成分に容易に分離することができる。成分
ＩはＲｆ値０.７０〜０.７５を有し、成分IIはＲｆ値
０.３９〜０.４６を有する。このＲｆ値はMerck ５７３
５シリカ６０プレート上でクロロホルム：酢酸エチル
（３：１）で溶出する薄層クロマトグラフィーにより測
定した。抗生物質Ｓ５４１の成分ＩおよびII（式中Ｒ²
は各々−ＣＨ₃および−Ｈである。）もまた本発明に属
する。成分ＩおよびII自体もまた更に精製することがで
き、それにより抗生物活性例えば抗蠕虫活性を有する部
分式（Ｉ）の６種類の化合物を生成することができる。
従って、さらに他の観点から、本発明は一般式（III）
の化合物をも提供するものである。

【０００６】

【化４】 （式中、Ｒ^１はメチル、エチルまたはイソプロピル基で
あり、Ｒ^２は水素原子またはメチル基である。）

【０００７】本発明者らは式（III）の６種類の化合物
をファクターＡ（Ｒ¹＝イソプロピル，Ｒ²＝水素）、フ
ァクターＢ（Ｒ¹＝メチル，Ｒ²＝メチル）、ファクター
Ｃ（Ｒ¹＝メチル，Ｒ²＝水素）、ファクターＤ（Ｒ¹＝
エチル，Ｒ²＝水素）、ファクターＥ（Ｒ¹＝エチル，Ｒ
²＝メチル）およびファクターＦ（Ｒ¹＝イソプロピル，
Ｒ²＝メチル）と命名した。ファクターＡおよびＣが特
に好ましい。

【０００８】ファクターＢ、ＥおよびＦは成分Ｉから得
られ、ファクターＡ、ＣおよびＤは成分IIから得られ
る。

【０００９】本発明の化合物は抗生物活性、例えば緑虫
等に対する抗蠕虫活性、特に抗内部寄生虫および抗外部
寄生虫活性を有する。一般に、これらの化合物は寄生
虫、例えば外部寄生虫および内部寄生虫の寄生虫駆除に
有用である。外部寄生虫および内部寄生虫はヒトや種々
の動物を感染させるものであり、特に農場の動物、例え
ば豚、羊、畜牛、やぎおよび食用飼鳥類、馬、および家
庭で飼育する動物、例えば犬や猫に流行する。家畜類の
寄生虫感染は貧血、栄養失調および体重の減少をもたら
し、全世界的な経済的損失の主たる原因となるものであ
る。

【００１０】このような動物および／またはヒトを感染
させる内部寄生虫の属の例として、鉤虫属、蛔虫属、ア
スカリス、アスピキュラリス属、ブノストムム属、カピ
ラリア属、シヤベルチア属、クーペリア属、ジクチオカ
ウルス属、ジロフィラリア属、蟯虫属、針虫属、ヘテラ
キス属、ネカトール属、ネマトデルス属、ネマトスピロ
イデス属、ニッポストロンギルス属、エーソファゴスト
ムム属、オステルタジア属、オキセウルス属、パラアス
カリス属、円虫属、ストロンギロイデス属、サイファシ
ア属、トキサスカリス属、トキソカラ属、トリコネマ
属、毛様線虫属、トリキネラ属、トリクリス属およびウ
ンシナリア属がある。

【００１１】動物および／またはヒトを感染させる外部
寄生虫の例として、筋足動物外部寄生虫、例えば咬む昆
虫、あおばえ、のみ、しらみ、だに、吸う昆虫、まだに
およびその他の双翅類害虫がある。動物および／または
ヒトを感染させる外部寄生虫の属の例としては、アンビ
ロンマ属、ウシマダニ属、コロプテス属、クリフオレ
属、ダモデクス属、ダモリニア属、ウマバエ属、ヘマト
ビア属、ケモノジラミ属、ヘモフイサリス属、まだに
属、イヌノミ属、キンバエ属、シラミバエ属、ウシバエ
属、ソレルガテス属、ソロプテス属、リピセファルス
属、ヒゼンダニ属、およびサシバエ属がある。

【００１２】本発明の化合物は、一定の種類の内部寄生
虫および外部寄生虫に対し、生体外および生体内のいず
れにおいても有効であることが見出された。特に、本発
明の化合物は寄生線虫、例えばヘモンカス・コントルツ
ス、オステルタジア・サーカムシンクタ、コルブリフオ
ルミス毛様線虫、ウシ肺虫、クーペリア・オンコフェ
ラ、オステルタジア・オステルタジおよびニツポストロ
ンギルス・ブラジリエンシス、ならびに寄生だに、例え
ばヒゼンダニ属種、およびソロプテス属種に対し活性で
あることが見出された。

【００１３】従って、本発明の化合物は内部寄生虫およ
び／または外部寄生虫感染した動物およびヒトの治療に
有用である。寄生虫の種類は、宿主および感染の優勢な
部位によって異なる。即ち、例えばヘモンカス・コント
ルツス、オステルタジア・サーカムシンクタおよびコル
ブリフオルミス毛様線虫は一般に羊に感染し、胃および
小腸内に優勢に存在するのに対し、ウシ肺虫、クーペリ
ア・オンコフオラおよびオステルタジア・オステルタジ
は一般に畜牛に感染し、各々肺、腸または胃内に優勢に
存在する。

【００１４】さらに、本発明の化合物は、抗真菌活性、
例えば、カンジダ属種の株、例えばカンジダ・アルビカ
ンスおよびカンジダ・グラブラタ、ならびに酵母菌、例
えばサッカロミセス・カールスバーヂエンシスに対する
活性を有することが見出された。また、本発明の化合物
は自生性の線虫、セノルハブジチス・エレガンスに対し
ても活性であることが見出された。また、本発明の化合
物は農業、園芸、森林、公衆衛生および貯蔵製品におけ
る昆虫、ダニおよび線虫害虫の駆除にも有効であること
が見出された。土壌の害虫、ならびに穀物（例えば小
麦、大麦、とうもろこしおよび米）、野菜（例えば大
豆）、果物（例えばリンゴ、ぶどうの木およびかんきつ
類）および根菜作物（例えばてん菜糖、ジャガイモ）を
含む作物の害虫を有効に処理することができる。

【００１５】特に、本発明の化合物は例えば果物ダニお
よびあぶらむし、例えばアフィス・フアバエ、アウラコ
ルスム・サーカムフレクスム、ミズス・ペルシカエ、ネ
フォテトティクス・シンクチセプス、ニルパルバタ・ル
ゲンス、パノニクス・ウルミ、フオロドン・フムリ、フ
イロコプトルタ・オレイボラ、テトラニクス・ウルチカ
エおよびトリアレウロイデス属に属するもの；線虫例え
ばアフェレンコイデス属、クロボデラ属、ヘテロデラ
属、メロイドジン属およびパナグレルス属に属するも
の；鱗翅類、例えばヘリオチス、プルテラおよびスポド
プテラ；こくぞうむし、例えばアンソノムス・グランジ
スおよびシトフィルス・グラナリウス；小麦粉につく
虫、例えばトリボリウム・カスタネウム；ハエ、例えば
イエバエ；赤アリ；リーフ・マイナース；ペアー・サイ
ラ；スリプス・タバチ；あぶらむし、例えばブラテラ・
ゲルマニカおよびペリプラネタ・アメリカナならびに
蚊、例えばエデス・エジプチに対しても活性であること
が見出された。

【００１６】従って、本発明は抗生物質として使用し得
る上記部分式（Ｉ）を有する化合物を提供するものであ
る。特に、これらの化合物は内部寄生虫、外部寄生虫お
よび／または真菌感染した動物およびヒトの治療に、ま
た農業、園芸、または森林で昆虫、ダニおよび線虫害虫
を駆除するための殺虫剤として使用することができる。
また、これらは、一般的にその他の環境、例えば倉庫、
ビルディングまたはその他の公共地域あるいは害虫の存
在する地域において、害虫を駆除または抑制するための
殺虫剤として使用することができる。一般に、これらの
化合物は宿主（動物、またはヒト、または作物またはそ
の他の植物）または害虫自体もしくは害虫の存在する場
所のいずれかに適用することができる。特に好ましいも
のは上記のファクターＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、ＥおよびＦであ
る。本発明の化合物は獣医学またはヒトの薬剤における
使用に適したあらゆる投与方法用に製剤化することがで
き、従って本発明は、本発明の化合物を含有し、獣医学
およびヒトの薬剤における使用に適合した製薬組成物を
もその範囲内に含む。このような組成物は１種以上の好
適な担体または賦形剤を用いる従来法により、使用に供
することができる。

【００１７】本発明の組成物には、非経口（乳房内投与
を含む）、経口、直腸、局所または移植用に特定して製
剤化された形態のものも含まれる。無菌であることが要
求される組成物、例えば注射液（乳房内調製液を含
む）、点眼薬、軟膏およびインプラント等に製剤化する
場合には、活性成分自体を無菌的に製造するか、または
製造後γ線照射法またはエチレンオキサイドへの露出等
の方法により、滅菌することができる。

【００１８】本発明の化合物は、注射による獣医学用ま
たはヒトの製剤として、使用するために製剤化すること
ができ、また、必要に応じて保存薬を添加したものを単
位投与量形態、アンプル、またはその他の単位投与量内
包物、または多投与量内包物とすることもできる。注射
用の組成物は油性または水性媒質中の懸濁液、溶液また
はエマルジョンの形態とすることができ、また調製剤、
例えば懸濁剤、安定剤、溶解剤および／または分散剤を
含有することができる。また、活性成分を、使用前に好
適な媒質、例えば無菌の発熱物質を含まない水、と共に
再調製するための無菌粉状形態とすることもできる。油
性媒質には多価アルコールおよびそれらのエステル、例
えばグリセロールエステル、脂肪酸、植物油例えば落花
生油または綿実油、鉱物油例えば液体パラフィン、およ
びオレイン酸エチルならびにその他の類似化合物が含ま
れる。プロピレングリコール等のその他の媒質も使用す
ることができる。

【００１９】獣医学用薬剤用の組成物は、長期作用する
基剤や迅速に放出する基剤中の乳房内調製液として製剤
化することができ、水性または油性媒質中の無菌溶液ま
たは懸濁液とすることができる。油状媒質は例えば上記
のものであってよく、また、濃化剤または懸濁剤例えば
軟または固型パラフィン、ミツロウ、１２−ヒドロキシ
ステアリン、水素化ひまし油、ステアリン酸アルミニウ
ム、またはモノステアリン酸グリセリルを含有すること
ができる。従来の非イオン性、カチオンまたはアニオン
表面活性剤を単独で、または組み合わせてこの組成物中
に用いることができる。

【００２０】本発明の化合物は、また、獣医学またはヒ
ト用の経口投与に好適な形態、例えば溶液、シロップま
たは懸濁液とすることができ、あるいは使用前に水また
はその他の好適な媒質と調製するための乾燥粉末の形態
とすることができ、必要に応じ、芳香剤および着色剤を
含有せしめることもできる。固体組成物、例えば錠剤、
カプセル剤、トローチ剤、丸剤、丸塊剤、散剤、パスタ
剤または顆粒剤もまた用いることができる。経口用の固
体および液体組成物は当業者に周知の方法で製造するこ
とができる。このような組成物は、製薬上許容し得る固
体または液体状の担体および賦形剤をも含有することが
できる。固体投与形態用に好適な製薬上許容し得る担体
の例としては、結合剤（例えば前ゼラチン化トウモロコ
シデンプン、ポリビニルピロリドンまたはヒドロキシプ
ロピルメチルセルロース）；充填剤（例えばラクトー
ス、微結晶セルロースまたはリン酸カルシウム）；潤滑
剤（例えばステアリン酸マグネシウム、タルクまたはシ
リカ）；崩壊剤（例えばジャガイモデンプンまたはナト
リウムデンプングリコレート）；または潤滑剤（例えば
ラウリル硫酸ナトリウム）が含まれる。錠剤は当業者に
周知の方法で被覆することができる。液体投与形態用の
好適な製薬上許容し得る添加物の例としては、懸濁剤
（例えばソルビトールシロップ、メチルセルロースまた
は水素化食用油脂）；乳化剤（例えばレシチンまたはア
カシア）；非水性媒質（例えばアーモンド油、油性エス
テルまたはエチルアルコール）；および保存剤（例えば
ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルまたはプロピル、あるい
はソルビン酸）が含まれ、また安定剤および溶解剤も含
むことができる。

【００２１】経口投与用のパスタ剤を当業者に周知の方
法で製剤化することができる。パスタ製剤用に好適な製
薬上許容し得る添加物の例としては、懸濁剤またはゲル
化剤、例えばニステアリン酸アルミニウムまたは水素化
ひまし油；分散剤、例えばポリソルビン酸エステル、非
水性媒質、例えば落花生油または油性エステル；安定剤
および溶解剤が含まれる。また、本発明の化合物は、獣
医学薬剤の場合、動物の毎日の固体または液体食事摂取
物中にとりこむことにより、例えば動物の毎日のエサま
たは飲料水の一部として投与することもできる。

【００２２】頬投与用には、組成物を従来の方法により
錠剤、パスタ剤またはトローチ剤の形態に製剤化するこ
とができる。また、本発明の化合物は、獣医学用薬剤に
用いる場合、例えば活性成分を製薬上許容し得る担体ま
たは賦形剤と共に含有する溶液、懸濁液または分散液の
形態である液体飲薬の形態で経口的に投与することもで
きる。また、本発明の化合物は、例えば、従来の坐剤基
剤等を含有する坐剤として製剤化し、獣医学およびヒト
の薬剤に使用することができる。

【００２３】本発明の化合物は獣医学およびヒトの薬剤
に使用するための局所投与用に軟膏、クリーム、ローシ
ョン、散剤、ペッサリー、スプレー、浸液剤、エアゾー
ル剤または滴剤（例えば点眼剤または点鼻薬）として製
剤化することができる。例えば軟膏およびクリームは水
性または油性基剤を用い、好適な濃化剤および／または
ゲル化剤を添加して製剤化することができる。眼に投与
する軟膏は、滅菌化合物を用いる無菌方法で製造するこ
とができる。ローションは水性または油性基剤を用いて
製剤化することができ、一般に一種以上の乳化剤、安定
剤、分散剤、懸濁剤、濃化剤、または着色剤をも含有す
る。散剤は好適な散剤基剤を用いて製造することができ
る。滴剤は水性または非水性基剤を用いて製剤化するこ
とができ、１種以上の分散剤、安定剤、溶解剤または懸
濁剤をも含有する。また、これらに保存剤を含有せしめ
てもよい。収入による局所投与用とする場合、本発明の
化合物をエアゾールスプレー形態または通気器用として
獣医学およびヒトの薬剤用に適用することができる。

【００２４】本発明の化合物は、他の製薬的に活性な成
分と組み合わせて投与することができる。獣医学用およ
びヒトの薬剤に用いる本発明の化合物の一日の総投与量
は、好適には１〜２０００μｇ／kg体重、好ましくは１
０〜１０００μｇ／kg、より好ましくは１００〜５００
μｇ／kgであり、またこれらを例えば１日に１〜４回に
分割した投与量で投与することができる。本発明の化合
物は園芸または農業用に適した様々な形態に製剤化する
ことができ、従って本発明は、本発明の化合物を含有す
る園芸および農業用に調合された組成物を、その範囲に
含む。このような製剤には乾燥または液体型が含まれ、
例えば粉剤基剤または濃縮薬を含有する粉剤、溶解性ま
たは湿潤性散剤を含有する散剤、微顆粒および分散性顆
粒を含有する顆粒剤、ペレット剤、流動剤、エマルジョ
ン、例えば希釈エマルジョンまたは乳化し得る濃縮薬、
浸液剤、例えば根浸液剤および種子浸液剤、種子包帯
剤、種子ペレット剤、油濃縮薬、油液剤、注射剤例えば
幹注射液、スプレー、煙剤および霧剤がある。

【００２５】一般にこれらの組成物は、化合物を好適な
担体または希釈剤と共に含有する。このような担体は液
体または固体とすることができ、化合物を適用する場所
に分散せしめ、または使用者が分散性調製物とし得るよ
うな製剤を提供することにより、化合物の適用を助ける
目的で用いられる。このような製剤は当業者に周知であ
り、従来技術により、例えば活性成分を担体または希釈
剤、例えば固体担体、溶剤または表面活性剤と共に混合
および／または粉砕することにより、調製することがで
きる。粉剤、顆粒剤および散剤等の製剤用に好適な固体
担体は、例えば天然鉱物充填剤、例えば珪藻土、タル
ク、カオリナイト、モントモリロナイト、ピロフィライ
トまたはスタプルガイトから選ぶことができる。高分散
ケイ酸または高分散吸収性ポリマーを、必要に応じ、組
成物中に含有せしめることができる。使用し得る顆粒化
吸収性担体は、多孔性（例えば軽石、粉砕レンガ、カピ
オライトまたはベントナイト）でも非孔性（例えばカル
サイトまたは砂）でもよい。使用し得る好適な前顆粒材
料は有機物または無機物であることができ、ドロマイト
およびすりつぶした植物残渣が含まれる。

【００２６】担体または希釈剤として使用し得る好適な
溶剤には、芳香族炭化水素、脂肪族炭化水素、アルコー
ルおよびグリコールまたはそれらのエーテル、エステ
ル、ケトン、酸アミド、強極性溶剤、任意にエポキシ化
した植物油および水が含まれる。良好な乳化、分散およ
び／または湿潤特性を有する従来の非イオン性、カチオ
ンまたはアニオン表面活性剤、例えばエトキシル化アル
キルフェノールおよびアルコール、アルキルベンゼンス
ルホン酸、リグノスルホン酸もしくはサルフォコハク酸
のアルカリ金属もしくはアルカリ土類金属塩、またはポ
リマーフェノールのスルホン酸エステルも単独で、また
は組み合わせて組成物中に用いることができる。

【００２７】必要に応じ、安定剤、抗粘結剤、あわ止め
剤、粘性調整剤、結合剤および接着剤、光安定剤、およ
び肥料、飼育刺激剤またはその他の活性物質を組成物中
に含有せしめることができる。また、本発明の化合物
は、他の殺虫剤、だに駆除薬および殺線虫剤と混合して
製剤化することもできる。製剤中、活性成分の濃度は一
般に０.０１〜９９重量％、より好ましくは０.０１重量
％〜４０重量％である。市販の製品は、一般に、使用に
際し適当な活性材料濃度、例えば０.００１〜０.０００
１重量％に希釈するべく、濃縮された組成物として販売
されている。

【００２８】園芸および農業用、または獣医学用薬剤と
して使用する場合には、活性化合物源として全発酵ブロ
スを各成分またはファクターに分離せずに使用すること
が望ましい。乾燥ブロス（菌糸体を含有するもの）を使
用するか、あるいは、固−液分離法または蒸発法によっ
てブロスから分離した溶解菌糸体、生きているもしくは
死滅した菌糸体を使用するか、あるいは、菌糸体を分離
した後に残存する発酵ブロスを用いることが望ましい。
必要に応じ、菌糸体を低温殺菌するか、より好ましくは
例えば噴霧乾燥またはローラー乾燥により乾燥すること
ができる。必要に応じ、ブロスまたは菌糸体を上記の従
来の不活性担体、賦形剤または希釈剤を含有する組成物
に製剤化することができる。先の記載から、一般に本発
明の化合物は、感染または侵襲の原因である生物または
それらの存在する場所に１種またはそれ以上の化合物を
有効量適用することにより、感染または侵襲を抑制し得
るものであることが認められるであろう。

【００２９】本発明の他の観点から、本発明者らは抗生
物質Ｓ５４１または上記のそれらの成分もしくはファク
ターの製造方法を提供するものであり、この方法は、少
なくとも１種の本発明の化合物を製造し得るストレプト
ミセス属の微生物を培養する工程、および必要に応じ、
これらの化合物を単離することからなる。この微生物
は、本発明の１種またはそれ以上の化合物を主として製
造するものであることが好ましい。生物分類学的研究に
よれば、上記物質を製造し得るある種の微生物はストレ
プトミセス属の新規な種に属するものであり、ストレプ
トミセス・サーモアルケンシスと命名された。土壌分離
体であるこの微生物の試料はナショナル・コレクション
・オブ・インダストリアル・アンド・マリーン・バクテ
リア、トリー・リサーチ・ステーション、アバディー
ン、英国の永久培養菌コレクションに寄託され、受託番
号ＮＣＩＢ １２０１５が付与された。ストレプトミセ
ス・サーモアルケンシスＮＣＩＢ １２０１５の形態学
的および培養特性は以下に記載するが、この微生物は、
抗生物質Ｓ５４１生産性のその他のストレプトミセス属
の株と共に、本発明の他の特徴部分を構成している。特
に、本発明は、ストレプトミセス・サーモアルケンシス
ＮＣＩＢ １２０１５と本質的に等しい形態学的および
培養特性を有するものをそのメンバーとする新規な種の
ストレプトミセスにも及ぶものである。

【００３０】また、本発明はＳ・サーモアルケンシスＮ
ＣＩＢ １２０１５の発酵によって製造し得る全ての化
合物、および式（Ｉ）の化合物の光学異性体である全て
の化合物にも及ぶものである。好ましいストレプトミセ
ス属の微生物はストレプトミセス・サーモアルケンシス
ＮＣＩＢ １２０１５またはその突然変異体である。ス
トレプトミセス・サーモアルケンシスＮＣＩＢ １２０
１５の突然変異体は、自然発生的にも生成するが、また
ウイーンで１９７３年に開催されたインターナショナル
・アトミック・エナージー・オーソリティーのシンポジ
ウムに先立ち、「ラジエーション・アンド・ラジオアイ
ソトープ・フォア・インダストリアル・マイクロオーガ
ニズムズ」ｐ２４１のＨ.Ｉ.アドラーにより「ラクニク
ス・フォア・ザ・デヴェロップメント・オブ・マイクロ
−オーガニズムズ」に概説された方法等、種々の方法に
より製造することもできる。これらの方法にはイオン化
放射法、化学的方法、例えばＮ−メチル−Ｎ′−ニトロ
−Ｎ−ニトロソグアニジン（ＮＴＧ）；熱；遺伝学的方
法、例えば組換え、形質導入、形質転換、溶原生成およ
び溶原変換、ならびに自発的突然変異体の選択操作が含
まれる。かくして、一例として本発明者らは４種のスト
レプトミセス・サーモアルケンシスＮＣＩＢ １２０１
５の突然変異体種を得、それら各種のナショナル・コレ
クションズ・オブ・インダストリアル・アンド・マリー
ン・バクテリア、トリー・リサーチ・ステーション、ア
バディーン、英国の永久培養菌コレクションに寄託し、
それらには受託番号ＮＣＩＢ １２１１１、ＮＣＩＢ １
２１１２、ＮＣＩＢ １２１１３およびＮＣＩＢ １２１
１４が付された。ストレプトミセス・サーモアルケンシ
スＮＣＩＢ １２１１１、１２１１２、１２１１３およ
び１２１１４およびそれらの突然変異体もまた本発明の
一部を成す。

【００３１】菌株ＮＣＩＢ １２０１５は１９８４年９
月１０日に寄託された。菌株ＮＣＩＢ １２１１１〜４
は１９８５年６月２６日に寄託された。突然変異体種Ｎ
ＣＩＢ １２１１１、１２１１２、１２１１３および１
２１１４をストレプトミセス・サーモアルケンシスＮＣ
ＩＢ １２０１５をＮＴＧで処理することによって得、
次いでホリデイの一工程法（Ｒ.ホリデイ（１９５６）
「ネイチャー」１７８巻９８７頁）によって特定した。
突然変異種ＮＣＩＢ １２１１４はストレプトミセス・
サーモアルケンシスＮＣＩＢ １２０１５の自発的突然
変異によって発生したものであり、硫酸ストレプトマイ
シン１００μｇ／mlに２８℃で５日間露出した後も生存
可能であり、その後もストレプトマイシンに対する抵抗
力を有することが認められた。

【００３２】生物分類学的研究により、ストレプトミセ
ス・サーモアルケンシスは未だ公開されていない新規な
種の微生物であることが判明した。これらの特性を以下
に記載するが、それらはこれら全ての種に本質的な特性
である。実質的に類似した本質的特性を有する全ての微
生物を含むこの種の全ての微生物に本発明が及ぶことは
自明である。好ましい胞子形成培地、オートミール寒
天、麦芽−酵母寒天および無機塩−デンプン寒天（シャ
ーリング、Ｅ.Ｂ.およびゴットリーブ，Ｄ.（1966）In
t. J. Syst. Bacteriol, 16巻，313〜340頁）上でスト
レプトミセス・サーモアルケンシスＮＣＩＢ １２０１
５は夥しく増殖し、安定な基質菌糸体と主菌子から出た
側板としての開らせん鎖状の胞子を有する架空菌糸体と
を生成する。これらの培地上において転換着色（revers
e pigmentation）は黄色／茶色であり、胞子体は灰色で
ある。×１００に拡大してみると、胞子体は鎖１本につ
き２〜５巻のらせんを有し、らせんの１巻毎に５〜１０
個の胞子を有する。平均すると、胞子体は２０〜３０個
の胞子を有している。倍率×１２００の走査電子顕微鏡
により、この胞子はなめらかな外面を有し、最も厚い部
分で０.７μｍ×１.４μｍの寸法を有する楕円形状を有
することがわかった。ストレプトミセス・サーモアルケ
ンシスＮＣＩＢ １２０１５はグラム陽性であり、２０
℃〜５０℃において成長し、かつ、胞子を形成すること
ができる。

【００３３】後に記載するデータと「バーゲイズ・マニ
ュアル・オブ・デタミネイティブ・バクテリオロジー
（エイス・エディトン）」に公開された記述との比較に
より、微生物ストレプトミセス・サーモアルケンシスＮ
ＣＩＢ １２０１５はストレプトミセス属に属すること
が判明した。ストレプトミセス・サーモアルケンシスＮ
ＣＩＢ １２０１５が属する種の段階の同定はウイリア
ムス等（J. Gen. Microbiol（1983年）129巻，1815〜18
30頁）によって報告されたコンピューター化された同定
マトリックスを用いて行った。上記の著者によって示さ
れた４１の生物分類学的試験をストレプトミセス・サー
モアルケンシスＮＣＩＢ １２０１５に行った結果を下
記に示す。

【００３４】 特 性 結果 胞子鎖分岐 − 胞子鎖網状構造 − 胞子鎖矯正可撓性 − 胞子鎖らせん ＋ 菌子体の分断 − なめらかな胞子表面 ＋ しわになった胞子表面 − 灰色の胞子色 ＋ 赤色の胞子色 − 緑色の胞子色 − 転換黄色／茶色 ＋ 転換赤色／橙色 − メラニン形成 − アドニトールの利用 − セロビオースの利用 ＋ Ｄ−ラクトースの利用 ＋ メソ−イノシトールの利用 − イヌリンの利用 ＋ マンニトールの利用 − ラフィノースの利用 ＋ ラムノースの利用 ＋ Ｄ−キシロースの利用 ＋ ＬＤ−α−アミノブチル酸の利用 − Ｌ−ヒスチジンの利用 ＋ Ｌ−ヒドロキシプロリンの利用 − アラントインの分解 ＋ アルブチンの分解 ＋ キサンチンの分解 ＋ ペクチンの分解 ＋ レシチンの分解 − 硝酸塩の還元 ＋ 硫化水素の生成 ＋ ナトリウムアジド耐性（0.01％，w/v） − 塩化ナトリウム耐性（７％，w/v） − フェノール耐性（0.0％，w/v） ＋ 45℃における成長 ＋ ネオマイシンに対する抵抗性（50μg.ml^-1） − リファンピシンに対する抵抗性（50μg.ml^-1） ＋ アスペルギルス・ニガーLTV 131に対する抗生 ＋ バチルス・サブチリスNCIB 3610に対する抗生 − ストレプトミセス・ムリヌスISP 5091に対する抗生 ＋

【００３５】この微生物は２３の主種分類群（najor sp
ecies groups）（ウイリアムス，S.T.等，（1983年）
「J. Gen. Microbiol」129巻，1815〜1830頁）、または
ウイリアムスおよび共同研究者によって定められた副種
分類群（minor species groups)および単独メンバー群
（single member clusters）（J. Gen. Microbiol（198
3年）129巻，1743〜1813頁）のいずれにも属さなかっ
た。さらに、ストレプトミセス・サーモアルケンシスＮ
ＣＩＢ １２０１５の特性を「バージエイズ・マニュア
ル・オブ・デターミネティブ・バクテリオロジー」（第
８版）、シャーリングおよびゴットリーブによるＩＳＰ
報告（Int. J. Syst. Bacteriol. (1968年）18巻，69〜
189頁；Int. J. Syst. Bacteriol. (1968年）18巻，279
〜392頁；Int. J. Syst. Bacteriol. (1969年）19巻，3
91〜512頁；Int. J. Syst. Bacteriol. (1972年）22
巻，265〜394頁）に記載された公知のストレプトミセス
種の記述、および１９８０年からの「インターナショナ
ル・ジャーナル・オブ・システマティック・バクテリオ
ロジー」に明確に記載された新規な種と比較した。

【００３６】ストレプトミセス・サーモアルケンシスＮ
ＣＩＢ １２０１５と合致するものが既に開示された種
には見出されなかったことから、本発明者らはストレプ
トミセス・サーモアルケンシスＮＣＩＢ １２０１５が
ストレプトミセス属に属する新規な種の新規な微生物で
あると信じるに至った。突然変異体株ＮＣＩＢ １２１
１１、１２１１２、１２１１３、１２１１４および１２
１１５は全てストレプトミセス・サーモアルケンシスと
実質的に同様の本質的特性を有する。しかしながら、Ｎ
ＣＩＢ １２１１１は成長にアデニンを必要とし、ＮＣ
ＩＢ １２１１２は成長にセリンを必要とし、ＮＣＩＢ
１２１１３は成長にヒスチジンを必要とし、ＮＣＩＢ
１２１１４はストレプトマイシンに対する耐性を有す
る。

【００３７】Ｓ５４１抗生物質を製造し得る微生物は、
線虫セノルハブディティス・エレガンスを用いる従来の
小規模試験によって容易に見出すことができる。この試
験は、例えば、試験試料を線虫の懸濁液に添加し、その
後の線虫の生育力に及ぼす作用を観察することによる方
法がある。好適なストレプトミセス微生物の発酵による
抗生物質Ｓ５４１の製造は、従来方法、例えばストレプ
トミセス微生物を同化性の炭素、窒素および鉱物塩源の
存在下で培養することにより行うことができる。

【００３８】同化性の炭素、窒素および鉱物源は、単独
または複数の栄養源から得ることができる。一般的な炭
素源としてはグルコース、マルトース、デンプン、グリ
セロール、モラセス、デキストリン、ラクトース、スク
ロース、フラクトース、カルボン酸、アミノ酸、グリセ
リド、アルコール、アルカンおよび植物油が含まれる。
炭素源は一般に発酵培地の０.５〜１０重量％を占め
る。一般に窒素源としては、大豆穀物、とうもろこし浸
漬液、ディスティラーズソルブルズ（distillers solub
les）、酵母エキス、綿実ミール、ペプトン、粉砕クル
ミミール、麦芽抽出物、糖蜜、カゼイン、アミノ酸混合
物、アンモニア（気体または溶液）、アンモニウム塩ま
たは硝酸塩が含まれる。尿素やその他のアミドも使用す
ることができる。窒素源は一般に発酵培地の０.１〜１
０重量％を占める。

【００３９】培養培地に混入し得る栄養源としての鉱物
塩には、一般に用いられているナトリウム、カリウム、
アンモニウム、鉄、マグネシウム、亜鉛、ニッケル、コ
バルト、マンガン、バナジウム、クロム、カルシウム、
銅、モリブデン、ホウ素、リン酸塩、硫酸塩、塩化物お
よび炭酸塩イオンを生じ得る塩が含まれる。あわ止め剤
は過剰な発泡を抑制するために用いられ、必要に応じ、
時々添加する。ストレプトミセス微生物の培養は、一般
に２０〜５０℃、好ましくは２５〜４０℃、特に３４℃
前後の温度で行い、また通気および振とうまたは撹拌に
よってかきまぜなら行うことが望ましい。最初に培地に
少量の胞子形成微生物の懸濁液を接種するのであるが、
成長の遅滞を避けるためには、少量の培養培地に胞子状
の微生物を接種して微生物の栄養接種物（vegatative i
noculum）を調製し、得られた栄養接種物を発酵培地に
移植するか、あるいは、より好ましくは、主発酵培地に
移植する前に１以上の接種段階を経てさらに成長させて
おく。発酵は一般にpH５.５〜８.５、好ましくは５.５
〜７.５で行う。発酵は２〜１０日間、例えば約５日間
行う。

【００４０】全発酵物から抗生物質Ｓ５４１およびその
あらゆる成分またはファクターを含有する物質を分離す
ること、あるいはある成分またはファクターを単離する
ことを望む場合には、従来の単離および分離操作を用い
て行うことができる。本発明の抗生物質Ｓ５４１は主と
して細胞の菌糸体中に含有されているが、発酵ブロス中
にも見出され、精製の前または後に発酵ブロスに対し単
離操作を行うこともできる。単離操作の選択にあたって
は、各場合に応じ、広い範囲から適合するものを選択す
ることが望ましい。

【００４１】抗生物質Ｓ５４１の単離および分離には種
々の分別操作が用いられ、例えば吸着−溶出、沈殿、分
別結晶および溶媒抽出があり、これらを様々に組み合わ
せることもできる。溶媒抽出およびクロマトグラフィー
および分別結晶が本発明の化合物の単離および分離に最
も適していることが見出された。発酵後、菌糸体を従来
の操作、例えば濾過または遠心沈殿法を用いて回収す
る。その後、この物質を例えば好適な有機溶媒、例えば
ケトン、例えばアセトン、メチルエチルケトンもしくは
メチルイソブチルケトン；炭化水素、例えばヘキサン；
ハロゲン化炭化水素、例えばクロロホルム、四塩化炭素
もしくは塩化メチレン；アルコール、例えばメタノール
もしくはエタノール；またはジオール、例えばプロパン
１,２−ジオール；またはエステル、例えば酢酸メチル
または酢酸エチルで菌糸体から抽出する。菌糸体がかな
りの量の水を含有する場合には、水溶性溶媒を用いるこ
とが好ましい。

【００４２】一般に、最大限の回収を達成するために
は、２以上の抽出を行うことが望ましい。好ましくは、
最初の抽出は水に混和する溶媒、例えばメタノールまた
はアセトンを用いて行う。溶媒の除去により、抗生物質
が粗抽出物として得られる。溶媒抽出物自体も、所望に
応じ、溶媒の容量を蒸発等によって減少させた後に抽出
することができる。この段階では、水と混和しない溶
媒、例えばヘキサン、クロロホルム、塩化メチレンまた
は酢酸エチルまたはそれらの混合物を用いることが好ま
しく、抗生物質化合物を充分に分離するに足る量の水を
添加する。水に混和する相を除去することにより、抗生
物質Ｓ５４１を含有する物質が得られる。所望に応じ、
好適な溶媒、例えばイソプロパノールからの結晶化によ
り、ファクターＢを分離することができる。

【００４３】活性化合物および／またはファクターの
（全てのファクターまたは存在する他のマクロライド化
合物からの）精製および／または分離は従来操作、例え
ば好適な担体、例えばシリカ、非官能性巨大網状吸着樹
脂、例えば架橋ポリスチレン樹脂、例えばアンバーライ
トＸＡＤ−２、ＸＡＤ−４またはＸＡＤ−１１８０樹脂
（Rohm ＆ Haas Ltd社製）またはＳ１１２樹脂（Kastel
l Ltd社製）上でクロマトグラフィー（高性能液体クロ
マトグラフィーを含む）、あるいは有機溶媒と適合し得
る架橋デキストラン、例えばセファデックスＬＨ２０
（Pharmacia UK Ltd社製）上でのクロマトグラフィー、
あるいは、高性能液体クロマトグラフィーの場合には可
逆相担体、例えば炭化水素結合シリカ、例えばＣ₁₈−結
合シリカ上でのクロマトグラフィーによって行うことが
できる。担体は床状、またはより好ましくはカラムに充
填した形態とすることができる。非官能性巨大網状樹
脂、例えばＸＡＤ−１１８０またはＳ１１２の場合に
は、有機溶媒、例えばアセトニトリルと水との混合物を
溶出に用いることができる。

【００４４】一般に、好適な溶媒中の化合物の溶液を、
必要に応じまず溶媒の量を減少させた後、シリカまたは
セファデックスカラム上にローディングする。このカラ
ムは、必要に応じ洗浄した後、好適な極性溶媒で溶出せ
しめることができる。セファデックスおよびシリカの場
合には、アルコール、例えばメタノール；炭化水素、例
えばヘキサン；アセトニトリル；ハロゲン化炭化水素、
例えばクロロホルムまたは塩化メチレン；またはエステ
ル、例えば酢酸エチルを溶媒として用いることができ
る。これらの溶媒を組み合わせたものも水と共に、また
は水なしで用いることができる。

【００４５】本発明の化合物の溶出および分離／精製は
従来の操作、例えばクロマトグラフィー、例えば薄層ク
ロマトグラフィーおよび高性能液体クロマトグラフィー
により、あるいは先に記載した化合物の特性を利用する
ことにより監視することができる。シリカ上のクロマト
グラフィーでは、好ましくはクロロホルム；酢酸エチル
等の溶出液を用いることにより、容易に抗生物質Ｓ５４
１が成分ＩおよびIIに分離され、成分Ｉが初めに溶出す
る。次いでクロマトグラフィー、例えば高性能液体クロ
マトグラフィーを用いることにより、ファクターＢ、Ｅ
およびＦを成分Ｉから容易に得ることができる。同様に
して、ファクターＡ、ＣおよびＤを成分IIから容易に単
離することができる。次に、アルコール、例えばメタノ
ールまたはイソ−プロパノールからの結晶化により、フ
ァクターＢをファクターＥおよびＦから分離することが
できる。ファクターＥおよびＦを含有する母液を、必要
に応じ、シリカ上でのクロマトグラフィー等によってさ
らに精製し、ファクターＥおよびＦを高性能液体クロマ
トグラフィーにより単離することができる。これらのフ
ァクターを得た後、さらにメタノール、イソ−プロパノ
ールまたはメタノール／水混合物からの結晶化によって
精製することができ、また本発明の結晶状の本発明の化
合物にも及ぶ。

【００４６】前述の操作を適宜組み合わせることによ
り、本発明の化合物が固体として単離された。上記の精
製工程を行う順序および用いるそれらの工程の選択を広
範に変化し得ることは明らかである。かくして、ファク
ターＢが９０％を越える純度を有する結晶性の固体とし
て得られた。同様に、ファクターＡ、Ｃ、Ｄ、Ｅおよび
Ｆもまた９０％を越える純度で得られた。しかしなが
ら、上記の如く、これらのファクターはそれらの使用目
的に適した純度で使用することができる。ヒトの薬剤と
して使用する場合には、少なくとも９０％、好ましくは
９５％を越える純度であることが望ましい。獣医学また
は農業または園芸に用いる場合には、より低い純度、例
えば５０％以下の純度で充分である。

【００４７】下記の実施例で本発明を説明する。以下の
略称を用いる；ｔｌｃ−薄層クロマトグラフィー（別記
しない限り、Merck 5735、シリカ６０プレートを用い、
ＣＨＣｌ₃：酢酸エチル（３：１）で展開する）；ＣＣ
Ｍ−カラムクロマトグラフィー（別記しない限り、Merc
k 7734、シリカ６０充填（別記しない限り２００×４cm
カラム）を用い、ＣＨＣｌ₃：酢酸エチル（３：１）で
溶出する）；ｈｐｌｃ−高性能液体クロマトグラフィ
ー；ＰＥ−石油エーテル（別記しない限り、沸点６０〜
８０℃）；Ｌ−リットル；ＥＡ−酢酸エチル。実施例中
に記載される培地Ａ、ＢおよびＣとは、下記のものを示
す。

【００４８】培地Ａ

【表１】 蒸留水を加えて１リットルとし、高圧滅菌する前にpHを
ＮａＯＨ水溶液でpH７.０に調整した。

【００４９】培地Ｂ

【表２】 蒸留水を加えて１リットルとし、高圧滅菌する前にpHを
５Ｎ ＮａＯＨで６.５に調整した。

【００５０】培地Ｃ

【表３】 蒸留水を加えて１リットルとし、滅菌する前にpHを６.
５に調整した。

【００５１】実施例１ ストレプトミセス・サーモアルケンシス（Streptomyces
thermoarchaensis）ＮＣＩＢ １２０１５の胞子を以下
の成分：

【表４】 から調製された寒天スラント上に接種しついで２８℃で
１０日間培養した。ついでこの成熟したスラントを１０
％グリセロール溶液（６ml）で被覆しそして胞子および
菌糸を離すために滅菌具でこすり取った。生成する胞子
懸濁液の０.４ml定量を滅菌ポリエチレンストローに移
しついでそれらをヒートシールし、必要とされるまで液
体窒素蒸気中に貯蔵した。

【００５２】上記の１本のストローの含量を１０ml培地
Ａに接種するのに使用し次いで５０mm直径の軌道運動を
有して２５０rpmで回転する振とう機上で２８℃におい
て３日間培養した。この培養された培地はそれぞれ１０
mlおよび５０mlの培地Ｂを含有する２個の２５０ml三角
フラスコおよび１５本の管に２％の量で接種するのに使
用された。これらの管およびフラスコを２８℃で５日間
増殖させついでそれらの培養菌を真空下で別々に濾過し
そして細胞を培養濾液の溶液と同じ１容量のメタノール
で３０分間振とうした。管およびフラスコの両方で増殖
した細胞のエキス中にカノルハブジチスエレガンス（Ca
enorhabditis elegans）に対する活性が検出され、これ
らの菌糸エキスを一緒にしてかさばらせ、蒸発乾固しつ
いで再びメタノールで抽出して濃縮物（６ml）にし、こ
れをメタノールで溶離されるセファデックスＬＨ２０の
カラム（１１０×２５cm）に入れた。各１０mlフラクシ
ョンを集めた。

【００５３】フラクション２１〜２８をプールし、蒸発
させて油状残留物（１５６mg）を得、これをＣＨＣ
ｌ₃：ＥＡ（３：１）で抽出して抽出物（３ml）を得つ
いでそれをＣＣＭ（５５×２.５cmカラム）にかけた。
各１０mlフラクションを集めそして蛍光指示薬含有のプ
レートを使用してｔｌｃにより分析した。フラクション
２０〜２３およびフラクション３６〜４４は蛍光を消光
しそして本発明者等が成分Ｉ（Ｒｆ ０.７０）および成
分II（Ｒｆ ０.４３）として同定した２つの主要な領域
を生成した。フラクション２０〜２３を蒸発させて成分
Ｉを固形物（９mg）として得た。λmax ２３８nm、Ｅ¹ ₁
３４０；λmax ２４５nm、Ｅ¹ ₁ ３５０；およびλmax
２５４nm、Ｅ¹ ₁ ２００。フラクション３６〜４４を蒸
発させて成分IIを固形物（１１mg）として得た。λmax
２３８nm、Ｅ¹ ₁ ４４０；λmax ２４５nm、Ｅ¹ ₁ ４６
０；およびλmax ２５４nm、Ｅ¹ ₁ ２８０。

【００５４】実施例２ ５０mlの培地Ａを含有する２個の２５０ml三角フラスコ
のそれぞれに前記実施例１に記載のようにして調製され
たストローから採取したストレプトミセス・サーモアル
ケンシスＮＣＩＢ １２０１５の胞子懸濁液０.２mlを接
種した。これらのフラスコを５０mm直径の軌道運動を有
して２５０rpmで回転する振とう機上で２８℃において
３日間培養し、ついで両フラスコの内容物は培地Ｂ（１
２リットル）を含有する２０リットル発酵容器に接種す
るために使用された。この培養菌を５日間の増殖後に収
穫しそして実施例３に記載のように処理した。

【００５５】実施例３ 実施例２に記載のようにして得られた発酵肉汁（１２リ
ットル）を２８℃で５日間増殖させた後に収穫しついで
遠心分離した（１０℃で１５分間４,２００rpmにおい
て）。その細胞ペレットをメタノール（５リットル）と
混合しついで４℃において２０時間放置した。菌糸エキ
スを濾過し、４０℃で蒸発させついでブタン−１−オー
ル（１００ml）の添加後に共沸蒸留に付した。ついでこ
のエキスを２００mlずつのメタノールで５回処理しそし
て各抽出物を一緒にし、それらを蒸発させ１００mlに
し、それからセファデックスＬＨ２０のカラム（１１２
×５cm）に入れた。このカラムをメタノールで溶離させ
ついで２００mlの前留分後に５０mlフラクションを集め
た。フラクション４０〜９０をプールしついで蒸発させ
て油状残留物（３.８５ｇ）を得た。この残留物を７７m
lのＣＨＣｌ₃：ＥＡ（３：１）で抽出し、濾過しついで
ＣＣＭに付して、２００mlの前留分後に１５mlフラクシ
ョンを集めた。

【００５６】成分Ｉを含有するフラクション１２４〜１
４２をプールしついで蒸発させて固形物（２５３mg）を
得、このうちの２１６mgをｈｐｌｃ（Zorbax ODS，25×
2.1cm，80％CH₃CN／H₂O）により精製した。成分IIを含
有するフラクション２５０〜３２０をプールしついで蒸
発させて固形物（６０２mg）を得、このうちの５４０mg
をｈｐｌｃにより精製し（フラクション１２４〜１４２
の場合のように）そして数回の留分からのフラクション
を集めた。ｈｐｌｃカラムから溶出された物質は２４３
nmでのＵＶ分光分析により調査された。この波長で吸収
するピークを乾燥しそしてi）カノルハブジチスエレガ
ンス（Caenorhabitis elegans）に対する活性を試験し
ついでii）ｔｌｃにより分析した。またカノルハブジチ
スエレガンスに対して活性であった４個のピークは０.
３９〜０.４６または０.７０〜０.７５の範囲のＲｆ値
を有した。

【００５７】成分Ｉは０.７０〜０.７５のＲｆ値を有す
る１個のピークを与えたが、このピークはファクターＢ
として指定されている。成分IIは０.３９〜０.４６のＲ
ｆ値を有する３個のピークを与えたが、これらのピーク
はファクターＡ、ファクターＣおよびファクターＤとし
て指定されている。ファクターＡは試料の注入後に２６
０〜３４０mlでｈｐｌｃカラムから溶出され、ｔｌｃに
よるＲｆ値０.４４を有した。ファクターＢは試料の注
入後に２７０〜３１０mlでｈｐｌｃカラムから溶出さ
れ、ｔｌｃによるＲｆ値０.７２を有した。ファクター
Ｃは試料の注入後に１６０〜１８０mlでｈｐｌｃカラム
から溶出され、ｔｌｃによるＲｆ値０.４を有した。フ
ァクターＤは試料の注入後に２２０〜２５０mlでｈｐｌ
ｃカラムから溶出され、ｔｌｃによるＲｆ値０.４２を
有した。ファクターＡ、Ｂ、ＣおよびＤの上記以外の特
性については後に記載する。

【００５８】実施例４ 実施例１に記載のようにして調製されたストローから採
取したストレプトミセス・サーモアルケンシス菌ＮＣＩ
Ｂ １２０１５の胞子懸濁液０.４mlを培地Ａ（５０ml）
を含有する２５０ml三角フラスコに接種するのに使用し
た。このフラスコを５０mm直径の軌道運動を有して２５
０rpmで回転する振とう機上において２８℃で４日間培
養した。ついで一部分（８ml）を、それぞれが４００ml
の上記と同一の培地を含有する２個の２リットル平底フ
ラスコの各々に接種するのに使用しついで上記と同一の
条件下で３日間培養した。

【００５９】ついで上記両フラスコの内容物をシリコン
５２５〔ダウ−コーニング社製、０.０６２５％（v/
v）〕で追加された培地Ｂ（４０リットル）を含有する
発酵容器（７０リットル）に接種するのに使用した。必
要に応じてシリコン消泡剤を添加し、２０％以上の飽和
状態の溶解酸素量を維持するのに充分な通気を行ないそ
して振とうさせながら発酵を実施した。１０日後に発酵
物を取り出し、その肉汁（４０ml）を遠心分離（１５０
０r.p.m.）により清澄した。残留する上澄み液を水（５
リットル）で置換し、回収した細胞（１.４kg）を−２
０°で凍結させた。

【００６０】１週間後この凍結した細胞を解凍し、メタ
ノール（１５リットル）中に懸濁させついで１５時間温
和に撹拌した。ついでこの懸濁液を濾過し、固形残留物
をメタノール（１０リットル）で再抽出した。一緒にし
た濾液（２５リットル）を水（１２リットル）で希釈
し、ＰＥ（２５リットル）で抽出した。３０分後各相を
遠心分離により分離した。下方のメタノール相をＰＥ
（２５リットル，１５リットルおよび１５リットル）で
３回再抽出した。一緒にしたＰＥ相（８０リットル）を
Pfaudler ８.８−１２Ｖ−２７ワイピング処理されたフ
ィルム蒸発器（蒸気圧０.１バール，蒸気温度２０°，
スチーム温度１２７°）に３回通して濃縮しついでその
濃縮物（８リットル）を硫酸ナトリウム（１kg）で乾燥
させそしてさらに回転フィルム蒸発器中において減圧下
４０°で濃縮した。その油状残留物（１５ml）をＣＨＣ
ｌ₃およびＥＡの混合物（７０ml，３：１v/v）中に溶解
しそしてＣＣＭにかけて１４００mlの前留分の後に約４
０mlのフラクションを集めた。

【００６１】フラクション４５〜６５を一緒にしついで
蒸発させてファクターＢ（９４０mg，実施例３で定義さ
れたもの）を得、これをメタノールから２回そして最後
にニトロメタンから結晶化させた。それらの結晶を単結
晶Ｘ−線回折分析にかけたところ、それらはＣｕ−Ｋα
放射線（λ＝１.５４１７８Å）を用いて回折計上で測
定してａ＝１０.１７１（３）、ｂ＝１３.３１７
（５）、ｃ＝２５.０３２（７）Å、Ｖ＝３３９１ų、
空間群Ｐ２₁２₁２₁、Ｄ_c＝１.１８gcm^-3、２１６９独立
観測反射（independent observed reflections）（θ≦
５８°）に関してＲ＝０.０５３を有する斜方晶の透明
プリズムであることが示された。Ｘ−線結晶学により決
定された構造は第５図に示されている。

【００６２】実施例５ 増殖期間を２日間にして実施例４に記載のようにストレ
プトミセス・サーモアルケンシスＮＣＩＢ １２０１５
の接種物を調製し、これをシリコン５２５の代わりにポ
リプロピレン２０００（０.０６％v/v）が追加された培
地Ｂ（４０リットル）を含有する発酵容器（７０リット
ル）に接種するために使用した。発泡を阻止するために
発酵中、必要に応じてポリプロピレン２０００を加え
た。発酵は３０％以上の飽和度を有する溶解酸素量を維
持するのに充分な通気を行ないそして振とうさせながら
２８℃において実施された。２４時間の発酵後一部分の
肉汁（９リットル）を以下のようにして調製された培地
（４５０リットル）を含有する発酵そう（７００リット
ル）に移した。

【００６３】

【表５】 滅菌前にpH６.５に調整した。

【００６４】発酵は２０％以上の飽和度を有する溶解酸
素量を維持するのに充分な通気を行ないそして振とうさ
せながら２８℃において実施された。必要に応じてポリ
プロピレン２０００消泡剤を加えた。２日後Ｈ₂ＳＯ₄を
添加してそのpHを７.２に調整した。５日後に発酵物を
とり出した。肉汁（４５０リットル）を遠心分離により
清澄し、残留上澄み液を水（２０リットル）で置換し
た。回収した細胞（２５.５kg）を、全量を７５リット
ルにするのに充分なメタノール中において１時間撹拌し
た。この懸濁液を濾過し、固形残留物をメタノール（３
５リットル）で再抽出しついで濾過した。一緒にした濾
液（８７リットル）を水（４０リットル）で希釈しそし
てＰＥで抽出した。３０分後各相を遠心分離により分離
しついで下方のメタノール相を水（４０リットル）の添
加後にＰＥ（３０リットル）で再抽出した。分離後、下
相を再びＰＥ（３０リットル）で抽出した。一緒にした
ＰＥ相（８５リットル）はファンドラー（Pfandler）
８.８−１２Ｖ−２７ワイプドフィルム蒸発器（蒸気圧
０.１バール，蒸気温度２０°，スチーム温度１２７
°）に３回通すことにより濃縮した。濃縮物（９リット
ル）を硫酸ナトリウム（２kg）で乾燥し、さらに回転フ
ィルム蒸発器中において減圧下４０°で濃縮した。油状
残留物（１３０ｇ）をＣＨＣｌ₃中に溶解して１９０ml
にしついでこれをＣＣＭ〔ＣＨＣｌ₃中において充填さ
れ且つ洗浄（５００ml）されたカラム〕にかけて１,４
００mlの前留分の後に約４０mlのフラクションを集め
た。

【００６５】フラクション３２〜４６を一緒にしついで
蒸発させて油状物（２１.２ｇ）を得た。フラクション
４７〜９３を一緒にしついで蒸発させて油状物（２０.
１ｇ）を得、これをＣＨＣｌ₃：ＥＡ（３：１）中に溶
解して５０mlにしそしてＣＣＭにかけて１４００mlの前
留分の後に約４０mlのフラクションを集めた。フラクシ
ョン２２〜３６を一緒にしついで蒸発させて油状物
（３.１ｇ）を得、これを最初のカラムからのフラクシ
ョン３２〜４６より得られた油状物に加えた。一緒にし
た油状物を沸騰メタノール（４ml）中に溶解し、ついで
これを熱プロパン−２−オール（２０ml）に加えて放置
後に結晶性ファクターＢ（２.５７ｇ）を得た。

【００６６】ファクターＢの結晶化後の母液を蒸発させ
て油状物を得、これを等容量のＣＨ ₂Ｃｌ₂中に溶解しつ
いでＣＨ₂Ｃｌ₂中に充填されたメルク珪藻土（７０−２
３０メッシュＡＳＴＭ，Ａｒｔ. Ｎｏ．７７３４）のカ
ラム（３０×２.２cm）上に入れた。その床をＣＨ₂Ｃｌ
₂（２床容量）で洗浄しついでＣＨＣｌ₃：ＥＡ（３：
１）（２床容量）で溶出させた。溶出物を蒸発させて油
状物を得、これをメタノール中に溶解しそしてSpheriso
rb S5 ODS-2（２５０mm×２０mm，フェイズセパレーシ
ョン（Phase Sep.）社製）上でプレパラティブｈｐｌｃ
にかけた。試料（５ml）を１分間かかってカラム上に注
入しついでそのカラムを以下の条件下において

【００６７】

【表６】 アセトニトリル：水（７：３）で溶出させた。ｈｐｌｃ
カラムから溶出される物質は２３８nmでＵＶ分光法によ
り調べた。２６.３分で溶出されるピークを有するフラ
クションを一緒にし、それを蒸発させてファクターＥを
固形物として得た。３６.４分で溶出されるピークを有
するフラクションを一緒にし、それを蒸発させてファク
ターＦを固形物として得た。ファクターＥおよびＦのこ
れ以外の特性は後に記載される。

【００６８】実施例６ １１７時間後に取り出された発酵肉汁（実施例２で調製
されたものと同様の）をオートクレーブ（１２１℃，１
時間）に入れ、室温に冷却しついで磁気撹拌機上で撹拌
して細胞の均質懸濁液を得た。２つの部分（２ml）を遠
心分離にかけ（１２,０００ｇ，２分，室温）その上澄
みを傾写し、残留細胞を水（２ml）中に懸濁し、完全に
混合しついで再び遠心分離にかけた（１２,０００ｇ，
２分，室温）。上澄みを傾写後それらの細胞を蒸留水
（２mlずつの）で２回以上洗浄した。ついで洗浄した細
胞を水（２ml）またはメタノール（２ml）のいずれかと
完全に混合しついで時々振とうさせながら室温に１.５
時間放置した。これらの懸濁液を再び遠心分離にかけ
（１２,０００ｇ，２分，室温）そして引き続き上澄み
を水中で希釈した。水性懸濁液からの細胞を再び水中に
懸濁し、直ちに引き続き水中で希釈した。各希釈液の一
部分（１０μｌ）をＮａ₂ＨＰＯ₄（６ｇ／リットル）、
Ｋ₂ＨＰＯ₄（３ｇ／リットル）、ＮａＣｌ（５ｇ／リッ
トル）およびＭｇＳＯ₄・７Ｈ₂Ｏ（０.２５ｇ／リット
ル）を含有し、pH７.０に調整された緩衝溶液中の線虫
カノルハブジチスエレガンス（Caenorhabditis elegan
s）の懸濁液（２００μｌ）に加えた。４時間後、試験
混合物のどの希釈が試験懸濁液中において線虫の９８％
以上にわたって固有運動性の全阻害をもたらすかを見出
すために前記線虫懸濁液を調べた。メタノールエキスの
５倍希釈に１個、２５倍希釈に１個、２５０倍希釈１個
および５００倍希釈に１個、細胞懸濁液の５倍希釈に１
個、２５倍希釈に１個、２５０倍希釈に１個、５００倍
希釈に１個および１０００倍希釈に１個そして水性エキ
スの２倍希釈に１個、４倍希釈に１個および８倍希釈に
１個が２００μｌの線虫懸濁液に１０μｌを加えた際に
線虫のこのような抑制をもたらすことが見出された。

【００６９】実施例７ ５０mlの培地Ａまたは５０mlの培地Ｂのいずれかを含有
する２５０ml三角フラスコに実施例１に記載のようにし
て調製されたストローから採取したストレプトミセス・
サーモアルケンシスＮＣＩＢ １２０１５の胞子懸濁液
０.４mlを接種した。培地Ａまたは培地Ｂを含有するフ
ラスコを５０mm直径行程を有して２５０rev／分で操作
される回転振とう器上で２８℃において２日間培養し
た。ついで各培地からの一部分（８ml）を４００mlの同
一培地（それぞれＡまたはＢ）含有の２リットル平底フ
ラスコに接種するのに使用した。これらのフラスコを同
一条件下で２日間培養した。

【００７０】２個の７０リットル発酵そうのそれぞれに
２フラスコの培地Ａを接種しそして１個の他の７０リッ
トル発酵そうに２フラスコの培地Ｂを接種した。各発酵
そうは４０リットルの培地Ｃを含有していた。各発酵
は、３０％以上の飽和度の溶解酸素量を維持するのに充
分な通気を行ないそして振とうさせながら３４°で実施
された。約２４時間発酵させた後にＨ₂ＳＯ₄水溶液を添
加してそのpHを７.２に調整した。必要に応じてポリプ
ロピレングリコール２０００消泡剤を加えた。５日後こ
れらの発酵物を取り出してまとめた。

【００７１】培地Ｂを含有する２フラスコが接種された
１個の他の７０リットル発酵そうはシリコン１５２０
（０.０６％）の追加された培地Ｂを含有した。この発
酵は、３０％以上の飽和度の溶解酸素量を維持するのに
充分な通気を行ないそして振とうさせながら２８°にお
いて実施された。発泡を抑制するために必要に応じてポ
リプロピレングリコール２０００を加えた。２４時間後
９リットル部分を、４５０リットルの培地Ｃを含有する
７００リットル発酵そうに移した。この発酵は３０％以
上の飽和度の溶解酸素量を維持するのに充分な通気を行
ないそして振とうさせながら３４℃において実施され
た。発泡はポリプロピレングリコール２０００の添加に
より抑制されそして約２４時間の発酵後にそのpHはＨ ₂
ＳＯ₄水溶液の添加で７.２に調整された。この発酵物を
４日後に取り出しついで前記の３個の４０リットル発酵
物と一緒にしてまとめた。

【００７２】このまとめた収穫物肉汁を約１２０リット
ル／時間でシャープルズ（Sharples）ＡＳ １６ＰＹに
通して遠心分離した。遠心分離器中の残留上澄みを水で
置換した。回収した細胞（１１.６５kg）をシルバーソ
ン（Silverson）ミキサーでメタノール（３３リット
ル）中において乳化した。６０分後この懸濁液を綾織布
に通して濾過し、残留物を再びメタノール（３４リット
ル）中で乳化した。４０分後その懸濁液を再び濾過し
た。２回のメタノール抽出からの濾液を一緒にした。

【００７３】一緒にした抽出物（５３.５リットル）を
水（２７リットル）およびＰＥ（２７リットル）と混合
した。２０分間撹拌した後に２相をウエストファリア
（Westfalia）ＭＥＭ １２５６遠心分離機上で分離し
た。下方の水性メタノール相（７０リットル）を水（３
７リットル）およびＰＥ（２７リットル）と混合しそし
て前のように撹拌し、分離させた。ＰＥ相中の界面乳濁
はアセトン（４リットル）で破壊された。ついで下方の
水性メタノール相（１０８リットル）を水（４０リット
ル）およびＰＥ（２７リットル）と２０分間混合しそし
て前のように撹拌し、分離しついでアセトン（４リット
ル）を使用してＰＥ相中の界面乳濁を澄ませた。ついで
これら３つのＰＥ抽出物を一緒にした。

【００７４】一緒にしたＰＥ抽出物（８５リットル）を
ワイプドフィルム蒸発器（蒸気圧０.１５バール，蒸気
温度２６°）で濃縮した。濃縮物（３リットル）を硫酸
ナトリウム（２kg）で乾燥しついでさらに減圧下４０°
で蒸発させた。生成する油状物（６３９ｇ）をクロロホ
ルムおよびＥＡの混合物（３：１v/v）３００ml中に溶
解しそして濾過しついでガラス繊維紙に通して洗浄し
た。濾過液および洗液（１０６０ml）を６リットル／時
の流速で溶出させるＣＣＭ（１５００mm×１００mm直
径）にかけた。

【００７５】８.８〜１３.１リットルで溶出するフラク
ションを一緒にしついで低圧で蒸発させて油状物（５
６.３ｇ）を得、一方１３.１〜２４.６リットルで溶出
するフラクションは低圧で同様に減少されて淡黄色固形
物（１５３.４ｇ）になった。初めのフラクションはフ
ァクターＢを豊富に含有し、一方後の方のフラクション
はファクターＡ、Ｂ、ＣおよびＤの混合物を含有してい
ることが示された。この後の方のフラクション中のファ
クターＢは流速を３リットル／時に減じる以外は同一の
条件下で前記クロマトグラフィーＣＣＭを２回−最後は
新しいシリカ上で−繰り返すことにより次第に取り出さ
れた。

【００７６】これらカラムの第２からのファクターＡ、
ＣおよびＤを含有するピークを８.８〜１７.６リットル
で溶出させ、含有されていた残留ファクターＢはファク
ターＡ、ＣおよびＤが１４〜２８リットルで溶出された
第３カラムにおいて分離された。この最後のまとめた溶
出物は低圧で減量させて固形物（１１４ｇ）にした。前
記２個のカラム（それぞれ７.５〜８.８リットルおよび
１０.３〜１３.４リットル）からのファクターＢを含有
しているピークを蒸発させて油状物（それぞれ１０.７
ｇおよび１０ｇ）を得ついでこれらを前記３個のカラム
の内の最初のカラムから得られた油状物と一緒にした。

【００７７】ファクターＢを含有する油状物を沸騰メタ
ノール（２５ml）中に溶解しついで沸騰プロパン−２−
オール（１００ml）と混合した。４°に冷却してファク
ターＢを結晶化させた。それを濾去し、メタノール（２
００ml）で洗浄し、−２０°に冷却しついで真空乾燥さ
せて２５.３ｇのファクターＢを得た。ファクターＡ、
ＣおよびＤを含有した第３シリカカラムからの固形物を
真空乾燥させて恒量（８７ｇ）にした。この固形物の試
料（２０ｇ）をメタノール（１９０ml）中に溶解しつい
で７：３（v/v）アセトニトリル：水で２３０mlに調製
した。ついでこの溶液の一部分（５ml）を、溶離溶媒と
して７：３アセトニトリル−水を用いてSpherisorb ODS
-2（５μｍの粒子直径）のカラム（２５０mm×２１.２m
m直径）上でクロマトグラフィーにかけた。その流速を
約１０秒間２０ml／分に保持し、ついで２２分かかって
着々と３４ml／分に増加させそしてさらに３分間この速
度に保持した。溶出するファクターは２３８nmにおいて
検出された。ファクターＣは１１.０〜１３.４分で溶出
され、ファクターＤは１３.４〜１７.４分で溶出されそ
してファクターＡは１７.４〜２３.０分で溶出された。

【００７８】各クロマトグラフィー分離からのファクタ
ーＣを含有するフラクションを一緒にしついで低圧で減
量させて固形物を得た。ファクターＡ含有フラクション
を同様に減量させて固形物を得た。またファクターＤ含
有フラクションも一緒にしついで減量させて不純な固形
物（７ｇ）を得た。これを再びメタノール（６５ml）中
に溶解し、７：３アセトニトリル−水と混合しついで流
速をその間ずっと２０ml／分に一定に保持する以外は前
述のようにしてSpherisorb ODS2カラム上で再びクロマ
トグラフィーにかけた。これでファクターＤが１６〜２
０分で溶出され、このフラクションを各クロマトグラフ
ィーからのものと一緒にした。このかさばった溶出物を
固形物にした。ファクターＡ、ＣおよびＤを含有するこ
れら３種の固形物を真空下Ｐ₂Ｏ₅で乾燥させて恒量（そ
れぞれ５５ｇ，７.０ｇおよび１.２１ｇ）にした。前記
過程から単離された４種の固形物はそれぞれファクター
Ａ、Ｂ、ＣおよびＤの基準試料と同様であることが示さ
れた。

【００７９】実施例８ ５０mlの培地Ｂを含有する２５０ml三角フラスコに実施
例１に記載のようにして調製されたストローから採取し
たストレプトミセス・サーモアルケンシス（Streptomyc
es thermoarchaensis）ＮＣＩＢの１２１１１、１２１
１２、１２１１３および１２１１４のそれぞれの胞子懸
濁液０.５mlを接種した。ストレプトミセス・サーモア
ルケンシスＮＣＩＢ １２１１１、ＮＣＩＢ １２１１２
およびＮＣＩＢ １２１１３を含有するフラスコを回転
振とう器上において３１℃で培養した。ストレプトミセ
ス・サーモアルケンシスＮＣＩＢ １２１１４を含有す
るフラスコを２８℃で２日間培養しついで１mlの肉汁
を、５０mlの培地Ｂを含有する別の２５０ml三角フラス
コに移した。このフラスコを回転振とう機上において３
１℃で培養した。すべてのフラスコを５０mm直径行程を
有する２５０rev／分で振とうした。

【００８０】４日間の培養後、各肉汁の１０ml試料を１
２５０ｇで４５分間、遠心分離しついで以下のように処
理した。上澄みを除去し、ペレットを再びメタノール中
に懸濁させて１０mlを得た。この懸濁液を激しく振とう
しそして時々混合させながら１時間放置した。ついでこ
の懸濁液を１０,０００ｇで５分間遠心分離しついで上
澄みをｈｐｌｃ（Ｓ５ ＯＤＳ−２，１０cm×４.６mm，
７０％ＣＨ₃ＣＮ／０.１Ｍ ＮＨ₄Ｈ₂ＰＯ₄）により分析
した。ピークは２４６nmにおいて調べられた。ｈｐｌｃ
による分析は各場合においてファクターＡ、Ｂ、Ｃおよ
びＤの存在を示した。

【００８１】実施例９ ファクターＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、ＥおよびＦは以下の特性を
有することが見出された。 i） それらは炭素、水素および酸素だけを含有する。 ii） ファクターＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、ＥおよびＦの電子衝
撃（Ｅ.Ｉ.）質量分光法は以下の結果を与えた。

【００８２】

【表７】 高速原子衝撃（ＦＡＢ）質量分光法は以下の結果を与え
た。

【００８３】

【表８】

【００８４】ファクターＥの電場脱着質量分光法では以
下の結果Ｍ／Ｚ ６１２Ｍ⁺が得られそしてファクターＦ
のそれではＭ／Ｚ ６２６Ｍ⁺の結果が得られた。正確な
質量測定に関するファクターＡのＥ.Ｉ.スペクトルは61
2.37 C₃₆H₅₂O₈；466.31 C₃₀H ₄₂O₄；448.30 C₃₀H₄₀O₃；4
25.23 C₂₆H₃₃O₅；354.22 C₂₃H₃₀O₃；297.22 C₂₁H₂₉O；2
78.11 C₁₅H₁₈O₅；247.17 C₁₆H₂₃O₂；219.18 C₁₅H₂₃O；9
5.05 C₆H₇Oにおいてイオンを与えた。正確な質量測定に
関するファクターＢのＥ.Ｉ.スペクトルは598.35 C₃₅H
₅₀O₈；438.28 C₂₃H₃₈O₄；420.26 C₂₈H₃₆O₃；314.19 C₂₀
H₂₆O₃；248.14 C₁₅H₂₀O₃；151.08 C₉H₁₁O₂においてイオ
ンを与えた。正確な質量測定に関するファクターＣの
Ｅ.Ｉ.スペクトルは584.34 C₃₄H₄₈o₈；566.33 C₃₄H
₄₆O₇；438.28 C₂₈H₃₈O₄においてイオンを与えた。正確
な質量測定に関するファクターＤのＥ.Ｉ.スペクトルは
598.35 C₃₅H₅₀O₈；452.29 C₂₉H₄₀O₄；434.28 C₂₉H₃₈O₃
においてイオンを与えた。Ｅ.Ｉ.イオン化法におけるフ
ァクターＥの正確な質量測定では452.2908 C₂₉H_{4 0}O₄に
おいてそしてファクターＦのそれでは466.3067 C₃₀H₂₄O
₄においてイオンが得られた。

【００８５】iii） ファクターＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅおよ
びＦはブロモホルム中において特有のＩＲスペクトルを
有し、以下のピークを包含する。ファクターＡの場合に
は約３５１０（ＯＨ）、１７１２（エステル）および９
９８cm^-1（Ｃ−Ｏ）において、ファクターＢの場合には
約３５１０（ＯＨ）、１７１０（エステル）および９９
６cm^-1（Ｃ−Ｏ）において、ファクターＣの場合には約
３５１０（ＯＨ）、１７１２（エステル）および９９６
cm^-1（Ｃ−Ｏ）において、ファクターＤの場合には約３
５０８（ＯＨ）、１７１１（エステル）および９９６cm
^-1（Ｃ−Ｏ）において、ファクターＥの場合には約３５
００（ＯＨ）、１７０８（エステル）および９９４cm^-1
（Ｃ−Ｏ）において、そしてファクターＦの場合には約
３５００（ＯＨ）、１７０８（エステル）および９９７
cm^-1（Ｃ−Ｏ）においてピークを包含する。

【００８６】ファクターＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、ＥおよびＦに
関する全スペクトルはそれぞれ添付図面の第１、２、
３、４、６および７図に示されている。 iv） ファクターＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、ＥおよびＦはメタノ
ール（ｃ＝０.００２％）中においてＵＶスペクトルを
有し、結果は次のとおりである（ここでＩ＝屈折そして
Ｍ＝最大値を意味する）。

【００８７】

【表９】

【００８８】上記λmax値は各ファイターの特徴を示
し、Ｅ¹ ₁値は得られた際の物質の純度を示している点に
注目されたい。しかしながらＥ¹ ₁値の割合は化合物それ
自体の特徴を示すものである。 v） ジュウテロ−クロロホルム中の各ファイター溶液
の２００ ＭＨｚプロトンnmrスペクトルは以下の記載の
およその値に集中されるシグナル〔（）内に多重度、結
合定数（Ｈｚ）および積分値を有するτ値〕を包含す
る。

【００８９】ファクターＡ：4.1-4.4(m, 2H), 4.61(広
いs, 1H), 4.6-4.75(m, 2H), 4.81(d, 9, 1H), 5.05(m,
1H), 5.34(s, 2H), 5.69(d, 5, 1H), 6.06(d, 5, 1H),
6.17(m, 1H), 6.26(d, 11, 1H), 6.37(m, 1H), 6.46
(d, 10, 1H), 6.74(q, 2, 1H),7.42(m, 1H), 7.7-7.9
(m, 5H), 8.14(s, 3H), 8.40(s, 3H), 8.47(s, 3H), 8.
61(t, 11, 1H), 8.96(d, 7, 3H), 9.06(d, 7, 3H), 9.0
2(d, 7, 3H), 9.13(q, 11,1H), 9.21(d, 7, 3H)。

【００９０】ファクターＢ：4.2-4.4(m, 2H), 4.55(q,
7, 1H), 4.65(幅広いs, 1H), 4.6-4.8(m, 2H), 5.06(m,
1H), 5.3-5.5(m, 2H), 6.01(d，5, 1H), 6.07(d, 5, 1
H),6.12(s, 1H), 6.24(d, 11, 1H), 6.24(m, 1H), 6.3-
6.5(m, 2H), 6.53(s, 3H),6.73(q, 2, 1H), 7.62(m, 1
H), 7.6-8.0(m, 4H), 8.22(s, 3H), 8.35(d, 7, 3H),
8.41(s, 3H), 8.49(s, 3H), 8.62(t, 11, 1H), 9.03(d,
6, 3H), 9.12(q, 11,1H), 9.22(d, 7, 3H)。

【００９１】ファクターＣ：4.29(d, 11, t, 2, 1H),
4.4-4.6(m, 3H), 4.56(幅広いs, 1H), 5.14(dd, 15, 1
0, 1H), 5.23(m, 1H), 5.65(幅広いs, 2H), 5.72(d, 6,
1H),5.95(d, 10, 1H), 5.99(d, 6, 1H), 6.08(幅広い
s, 1H), 6.1-6.4(m, 3H), 6.62(q, 3, 1H), 7.7-8.1(m,
約7H), 8.18(s, 3H), 8.33(s, 3H), 8.48(d, 7, 3H),
8.64(s, 3H), 8.68(t, 11, 1H), 9.00(d, 7, 3H), 9.08
(d, 7, 3H), 9.12(q, 12, 1H)。

【００９２】ファクターＤ：4.18-4.4(m, 2H), 4.47-4.
81(m, 4H), 5.04(m, 1H), 5.35(s,2H), 5.72(d, 7, 1
H), 6.07(d, 7, 1H), 6.15-6.45(m, 4H), 6.74(q, 4, 1
H), 7.45-8.1(m, 8H), 8.16(s, 3H), 8.41(s, 3H), 8.4
9(s, 3H), 8.62(t, 11, 1H),8.92-9.05(m, 6H), 9.21
(d, 7, 3H)。

【００９３】ファクターＥ：4.1-4.3(m, 2H), 4.5-4.8
(m, 4H全体), 5.04(m, 1H), 5.2-5.5(m, 2H), 6.01(d,
5, 1H), 6.05(d, 5, 1H), 6.11(s, 1H), 6.1-6.4(m, 3
H), 6.45(d, 10, 1H), 6.51(s, 3H), 6.70(q, 2, 1H),
7.60(m, 1H), 8.20(s, 3H), 8.41(s, 3H), 8.47(s, 3
H), 8.60(t, 11, 1H), 9.00(t, 7, 3H), 9.02(d, 6, 3
H),9.11(q, 11, 1H), 9.20(d, 7, 3H)。

【００９４】ファクターＦ：4.2-4.4(m, 2H), 4.62(s,
1H), 約4.70(m, 2H), 4.80(d, 9, 1H), 5.04(m, 1H),
5.2-5.5(m, 2H), 5.99(d, 5, 1H), 6.05(d, 5, 1H), 6.
11(s,1H), 6.1-6.3(m, 2H), 約6.36(m, 1H), 6.45(d, 1
0, 1H), 6.51(s, 3H), 6.70(q, 2, 1H), 7.42(m, 1H),
7.58(m, 1H), 8.19(s, 3H), 8.40(s, 3H), 8.47(s, 3
H), 8.60(t, 11, 1H), 8.95(d, 7, 3H), 9.05(d, 7, 3
H), 9.01(d, 7, 3H), 9.10(q, 11, 1H), 9.21(d, 6, 3
H)。

【００９５】vi） ジュウテロ−クロロホルム中の各フ
ァクター溶液のノイズ−滅結合された（noise-decouple
d）２５.０５ ＭＨｚカーボン−１３nmrスペクトルは以
下の記載のおよその値にあるピーク〔（）内に共鳴外ス
ペクトル（off-resonance spectrum）中のシグナルの多
重度が示されたτ値〕を包含する。

【００９６】ファクターＡ：173.2(s), 142.6(d), 139.
2(s), 137.6(s), 137.1(s), 137.0(d), 130.4(s), 123.
1(d), 120.1(d), 117.8(d), 99.5(s), 80.0(s), 79.0
(d), 76.5(d), 69.0(d), 18.3*, 67.4(d), 48.2(t), 4
5.5(d), 40.9(t), 40.5(t), 35.8*, 34.5(t), 22.1(q),
34.5(t), 26.6(d), 22.6(q), 22.0(q), 19.7(q), 15.3
(q), 13.7(q), 10.8(q)。

【００９７】ファクターＢ：173.4(s), 142.1(d), 139.
5(s), 137.1(s), 135.7(s), 133.7(s), 123.6(d), 123.
3(d), 120.0(d), 119.3(d), 118.2(d), 99.5(s), 80.1
(s),77.3(d), 76.6(d), 76.4(d), 69.0(d), 68.3(d), 6
7.9*, 67.6*, 57.5(q), 48.2(t), 45.4(d), 40.7(t), 4
0.5(t), 35.8*, 34.5(t), 22.1(q), 19.6(q), 15.3(q),
13.6(q), 12.9(q), 10.5(q)。

【００９８】ファクターＣ：173.3(s), 142.2(d), 140.
3(s), 138.5(s), 137.0(s), 134.9(s), 123.9(d), 121.
1(d), 120.6(d), 118.1(d), 100.2(s), 80.6(s), 80.1
(d),77.4(d), 69.2(d), 69.0(d), 68.3*, 68.0(d), 67.
9(d), 48.6(t), 46.3(d), 41.4(t), 36.5*, 36.3*, 36.
1(d), 35.0(t), 22.6(q), 20.0(q), 15.4(q), 14.3(q),
13.1(q), 10.8(q)。

【００９９】ファクターＤ：173.2(s), 142.5(d), 139.
1(s), 137.5(s), 137.1(s), 132.1(s), 131.4(d), 123.
1(d), 120.1(d), 117.8(d), 99.5(s), 79.9(s), 79.2
(d), 76.5(d), 69.0(d), 68.3*, 68.1*, 67.6*, 67.4*,
48.2(t), 45.5(d), 40.8(t),40.5(t), 35.7*, 34.5
(t), 22.0(q), 20.6(t), 19.6(q), 15.3(q), 13.7(q),
13.6(q), 10.7(q)。＊ 多重度は不詳

【０１００】vii） ファクターＡ、Ｂ、ＣおよびＤ
（メタノール中の約０.１％溶液）についての円二色性
曲線が第８図に示されている。これらの曲線はジエン発
色団の吸収と結合して２３０〜２６０nmの領域において
接近し肩を並べている。これはすべて４種のファクター
においてＣ₂、Ｃ₇、Ｃ₁₇およびＣ₁₉での絶対配置が同一
であることを示している。以下に本発明による製剤例を
記載する。以下に使用される「活性成分」の用語は本発
明化合物を意味し、例えばファクターＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、
ＥまたはＦの内の１種であることができる。

【０１０１】多投与量非経口の注射

【表１０】 ベンジルアルコールおよびグリセリルトリアセテート中
に活性成分を溶解する。ついでこれにプロピレングリコ
ールを加えて一定容量にする。この溶液を濾過していず
れもの微粒子状汚染物を除去する。生成物を無菌状態で
注射バイアル中に入れ、アルミニウムオーバーシールに
より所定の位置に保持してゴムのシールまたは栓で閉じ
る。終りにその製剤をオートクレーブ中での加熱により
滅菌する。

【０１０２】エアロゾルスプレー

【表１１】 活性成分とトリクロロエタンとを混合し、それをエアロ
ゾル容器中に入れる。その頭部空間をガス状放射薬でパ
ージしついでバルブを適所まで閉める。加圧下バルブを
通して必要とされる重量の液体抛射薬を入れる。アクチ
ュエーターおよびダスト−キャップを取りつける。

【０１０３】錠剤 製造方法−湿潤顆粒形成

【表１２】 活性成分に充分量の１０％殿粉ペーストを加えて顆粒形
成に適当な湿潤練り薬を調製する。顆粒を調製しついで
トレーまたは流動床ドライヤーを使用して乾燥させる。
これを篩にかけてより分けついで残留する前記成分を加
えて圧搾して錠剤にする。必要に応じて水性または非水
性のいずれかの溶媒系を使用し、ヒドロキシプロピルメ
チルセルロースまたは他の同様なフィルム形成物質を用
いて錠剤芯をフィルム被覆する。このフィルム−コーテ
ィング溶液中に可塑剤および適当な着色剤を含有させて
もよい。

【０１０４】小さな／家庭にいる動物用の獣医薬錠剤 製造方法−乾燥顆粒形成

【表１３】 活性成分をステアリン酸マグネシウムおよび微結晶性セ
ルロースとブレンドする。このブレンドの密度を大きく
してスラグ（slug）にする。これらのスラグを回転顆粒
機に通して破壊し、自由流動性錠剤を得る。これを圧搾
して錠剤にする。ついでこれらの錠剤芯は所望により前
述のようにフィルム被覆することができる。

【０１０５】獣医薬の乳線内注射

【表１４】 落花生油、白ろうおよびポリソルベート６０を撹拌しな
がら１６０℃に加熱する。１６０℃に２時間維持しつい
で撹拌しながら室温に冷却する。無菌状態で活性成分を
ビヒクルに加えついで高速ミキサーを使用して分散す
る。これをコロイドミルに通して精製する。無菌状態で
この製剤を滅菌プラスチック注射器中に入れる。

【０１０６】獣医薬の経口用飲薬

【表１５】 ポリソルベート８５、ベンジルアルコールおよびプロピ
レングリコール中に活性成分を溶解する。これに上記水
の一部分を加えついで必要によりホスフェートバッファ
ーでpHを６.０〜６.５に調整する。水を加えて最終容量
に調製する。この製剤を飲薬用容器中に入れる。

【０１０７】獣医薬の経口ペースト

【表１６】 分留されたヤシ油およびポリソルベート８５中にジステ
アリン酸アルミニウムを加熱により分散させる。これを
室温に冷却しついでその油状ビヒクル中のサッカリンを
分散させる。これに主剤の活性成分を配分する。これら
をプラスチック注射器に入れる。

【０１０８】飼料内投与用獣医薬のための顆粒 石灰石粉を加えて１００.０％にする。

【０１０９】活性成分を石灰石粉とブレンドする。湿潤
顆粒形成法を使用して顆粒を調製する。これをトレーま
たは流動床ドライヤーを使用して乾燥させる。これを適
当な容器中に入れる。

【０１１０】 乳化性濃縮物 活性成分 ５０ｇ 陰イオン性乳化剤(例えばフェニルスルホネートＣＡＬＸ) ４０ｇ 非イオン性乳化剤(例えばシペロニック(Syperonic)NP13) ６０ｇ 芳香溶液（例えばソルベソ(Solvesso)100)を加えて１リ
ットルにする。すべての成分を混合し、溶解するまで撹
拌する。

【０１１１】顆粒 （ａ） 活性成分 ５０ｇ 木材樹脂 ４０ｇ 石こう顆粒（２０〜６０メッシュ）を加えて１kgにす
る。（例えばアグソルブ（Agsorb）１００Ａ） （ｂ） 活性成分 ５０ｇ シペロニック(Syperonic)NP13 ４０ｇ 石こう顆粒（２０〜６０メッシュ）を加えて１kgにす
る。

【０１１２】全成分を例えばメチレンクロライドのよう
な揮発性溶媒中に溶解しついでこれをミキサー中で振と
うさせながら顆粒に加える。ついで溶媒を除去するため
に乾燥させる。ファクターＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、ＥおよびＦ
の活性は多種の害虫およびそれらの宿主を使用して測定
された。例えば以下のものをあげることができる。テト
ラニクスウルチカ（Tetranychus urticae）（インゲン
豆およびミロバラン（Murobalan）Ｂプラム）、ミズス
ペルシカ（Myzus persicae）（ハクサイおよびハツカダ
イコン）、ヘリオチスビレセンス（Heliothis virescen
s）（綿）、チロポルテルス（Chilo portellus）（アブ
ラナ豆（rape bean））、メロイドジンインコグニタ（M
eloidogyne incognita）（ヤエナリ）、パノンクスウル
ミ（Panonchus ulmi）（ミロバタンＢプラム）、ホロド
ンヒュームリ（Phorodon humuli）（ホップ）、アウラ
コルスムサーカムフレックスム（Aulacorthum circumfl
exum）（シクラメン）。

【０１１３】生成物は液体製剤の形態で使用された。こ
れらの製剤は生成物をアセトン中に溶解することにより
調製された。ついでこれらの溶液を、その液体製剤が必
要濃度の生成物を含有するまで０.１重量％または０.０
１重量％の湿潤剤を含有する水で希釈した。各害虫に関
して採用された試験法は通常宿主植物である媒質上に多
数の害虫を支持しついでその媒質を製剤で処理すること
からなった（残留試験）。テトラニクスウルチカの場合
には害虫と媒質の両方が製剤で処理された（接触試
験）。

【０１１４】この操作にしたがってファクターＡ〜Ｆは
５００ppmまたはそれ以下の濃度（生成物の重量での）
で有効であることが見出された。牛肺虫（Dictyocaulus
viviparus）に感染した仔牛に対する本発明化合物の効
力を測定した。仔牛に牛肺虫を感染させそして次に感染
２３日後に本発明化合物で１回（２００μｇ／kg）処理
した。感染２９日後に動物を殺しそして虫負荷数を数え
た。従って、例えばこの操作に従えば因子Ａ、Ｂ、Ｃお
よびＤは牛肺虫を排除した。

【０１１５】毒性 一般に本発明化合物は生理学的に活性な量で無毒性であ
る。従って、例えば因子Ａ、Ｂ、ＣおよびＤはＣＲＨ系
マウスで試験した場合にすべて少くとも２５mg／kgのＬ
Ｄ₅₀値を有した。

【図面の簡単な説明】

【図１】ファクターＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、ＥおよびＦについ
てのＩＲスペクトルを示す。

【図２】ファクターＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、ＥおよびＦについ
てのＩＲスペクトルを示す。

【図３】ファクターＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、ＥおよびＦについ
てのＩＲスペクトルを示す。

【図４】ファクターＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、ＥおよびＦについ
てのＩＲスペクトルを示す。

【図５】実施例４で得られる化合物のＸ−線結晶学によ
り決定された構造を示す。

【図６】ファクターＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、ＥおよびＦについ
てのＩＲスペクトルを示す。

【図７】ファクターＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、ＥおよびＦについ
てのＩＲスペクトルを示す。

【図８】ファクターＡ、Ｂ、ＣおよびＤについての円二
色性曲線を示す。

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:465） (Ｃ１２Ｐ 17/18 Ｃ１２Ｒ 1:465） (72)発明者 ニール・ポーター イギリス国ミドルセツクス州ピンナー. ジヨージフオースアベニユー111 (72)発明者 リチヤード・アラン・フレツトン イギリス国ミドルセツクス州ライスリツ プ．セントエドマンズアベニユー12 (72)発明者 デイビツド・ノウブル イギリス国バークシヤー州スラウ．バー ンハム．ストンプロード113

Claims (3)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 一般式 【化１】 （式中、Ｒ^１はメチル、エチルまたはイソプロピル基で
   あり、Ｒ^２は水素原子またはメチル基である）で表わさ
   れる抗生物質化合物を生産することができるストレプト
   ミセス・サーモアルケンシス種の微生物。
2. 【請求項２】 ストレプトミセス・サーモアルケンシス
   ＮＣＩＢ １２０１５およびその突然変異体である特許
   請求の範囲第１項記載の微生物。
3. 【請求項３】 ストレプトミセス・サーモアルケンシス
   ＮＣＩＢ １２１１１、ＮＣＩＢ １２１１２、ＮＣＩ
   Ｂ １２１１３およびＮＣＩＢ １２１１４およびそれ
   らの突然変異体である特許請求の範囲第１項記載の微生
   物。