JPS61118387A - 新規抗生物質化合物およびその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規な抗生物質化合物およびその製造方法に関
する。特に１本発明はストレプトミセス微生物の発酵に
よって得られる抗生物質化合物に関する。

１つの観点として、本発明は本発明者らによって抗生物
質５５４１と命名され、コントロールされた条件下での
成長によって製造することのできる新規な種類の物質で
あって、未だ開示されていない株の微生物を提供するも
のである。抗生物質５５４１は抗生物質として特に抗外
部寄生虫（ａｎｔｉ−ｅｎｄｏｐａｒａｓｉｔｉｃ　）
、抗外部寄生虫（ａｎ　ｔ　１−ｅｃｔｏｐａｒａｓｉ
ｔｉｃ　）、抗真菌、殺虫、殺線虫および殺だに活性を
有し、農業、園芸、動物およびヒトの保健の分野での用
途において大いに注目すべきものである。またこれらの
化合物は、さらに他の活性化合物の製造における中間物
質としても使用することができる。これらの化合物は、
本明細書に記載される如く、発酵によって得ることがで
き、また実質的に純粋な状態で回収する′ことができる
。

抗生物質５５４１は部分式（Ｉ） Ｈ 丁 有する一連の関連化合物である。

部分式（Ｉｆ）を有する６種類の化合物につき、以下に
よシ詳細に説明する。

本発明は上記の部分式を有する個々の化合物およびそれ
らの組み合わせにも及ぶものである。

ある種の用途、例えば農業もしくは園芸、または獣医学
薬剤においては、抗生物質５５４１を個々の成分に分離
しない使用法がより好適であるが、その他の用途、例え
ばヒトの薬剤では個々の化合物を使用することが好まし
い。従って、本発明は本発明の少なくとも１種の他の化
合物との混合物としての本発明の化合物、さらにまた、
例えば実質的に純粋な状態または実質的に他のマクロラ
イド化合物を含まない状態の個々の化合物をも含むもの
である。

最初に単離した抗生物質５５４１は、後に記載する如く
、シリカ上のクロマトグラフィーによシ、抗生、例えば
抗嬬虫活性を有し、２５４ａｍで紫外線螢光を消す２種
の成分に容易に分離することができる。成分工はＲｆｉ
ｏ、７０〜０．７５を有し、成分■はＲｆ値０．３９〜
０．４６を有する。このＲｆ値はＭｅｒｃｋ　５７３５
シリカ６０プレート上でクロロホルム：酢酸エチル（５
：１　）で溶出する薄層クロマトグラフィーによシ測定
した。抗生物質５５４１の成分工および■（式中Ｒ２は
各々−〇Ｈ５および−Ｈである。）もまた本発明に属す
る。

成分工および■自体もまた更に精製することができ、そ
れによシ抗生物活性例えば抗嬬虫活性を有する部分式（
Ｉ）の６種類の化合物を生成することができる。従って
、さらに他の観点から、本発明は一般式（ＩＩＩ）の化
合物をも提供するものである。

（式中、 Ｒ１ハメチル、エチルまたはインプロピル基であυ、 Ｒ２は水素原子またはメチル基である。）本発明者らは
式（ＩＱ）の６種類の化合物を７アクターＡ（Ｒ１＝イ
ンプロピル、Ｒ２＝水素）、ファクターＥ（Ｒ１＝メチ
ル、Ｒ２±メチル）、ファクターＣ（Ｒ１＝メチル、Ｈ
２＝水素）、ファクターＤ（Ｒ１＝エチル、Ｈ２＝水素
）、ファクターＥ（Ｒ１＝エチル、Ｒ２＝メチル）およ
びファクターＦ（Ｒ１；インプロピル、Ｒ２＝メチル）
と命名した０フアクターＡおよびＣが特に好ましい。

ファクターＢ、ＥおよびＦは成分Ｉから得られ、ファク
ターＡ、ＣおよびＤは成分Ｕから得られる。

本発明の化合物は抗生物情性、例えば線虫等に対する抗
嬬虫活性、特に杭内部寄生虫および抗外部寄生虫活性を
有する。一般に１これらの化合物は寄生虫、例えば外部
寄生虫および内部寄生虫の寄生虫駆除に有用である。外
部寄生虫および内部寄生虫はヒトや種々の動物を感染さ
せるものでアシ、特に農場の動物、例えば豚、羊、畜牛
、やぎおよび食用飼鳥類、馬、および家庭で飼育する動
物、、例えば犬や猫に流行する。

家畜類の寄生虫感染は貧血、栄養失調および体重の減少
をもたらし、全世界的な経済的損失の主たる原因となる
ものである。

このような動物および／ｌたはヒトを感染させる内部寄
生虫の属の例として、鉤虫属、細虫属、アスカリス、ア
スピキュラリス属、プノストムム属、カビシリア属、シ
ャペルチア属、クーヘリア属、ジクチオカウルス属、ジ
ロフイ２リア属、暁虫属、針虫属、ヘテツキス属、ネカ
トール属、ネマトデルス属、ネマトスピａイデス属、ニ
ツポストロンギルス属、二−ン７アゴストムム属、オス
テルタジア属、オキセクルス属、パラアスカリス属、円
虫属、ストロンギロイデス属、サイファシア属、トキサ
スカリス属、トキソカラ属、トリコネマ属、毛様線虫属
、トリキネラ属、トリクリス属、およびランシナリア属
がある。

動物および／またはヒトを感染させる外部寄生虫の≠ｊ
として、節足動物外部寄生虫、例えば咬む昆虫、あおば
え、のみ、しらみ、だに、吸う昆虫、まだにおよびその
他の双翅類害虫がある。

動物および／ｌたはヒトを感染させる外部寄生虫の属の
例としては、アンビロンマ属、ウシマダニ属、コロプテ
ス属、クリ７オレ属、ダモデクス属、ダモリニア属、ウ
マバエ属、ヘマトビア属、ケモノジラミ属、ヘモフイサ
リス属、まだ〈属、イヌノミ属、キンバエ属、シラミバ
エ属、クシバエ属、ソレルガテス属、ソロプテス属、リ
ピセ７アルス属、ヒゼンダニ属、およびサシバエ属があ
る。

本発明の化合物は、一定の種類の内部寄生虫および外部
寄生虫に対し、生体外および生体内のいずれにおいても
有効であることが見出された。特に、本発明の化合物は
寄生線虫、例えばヘモンカス・コントルラス、オステル
タジア・サー力ムシンクタ、フルプリフォルミス毛様線
虫、ウシ肺虫、クーイリア・オンコアエラ、オステルク
リア・オステルタジおよびニツポストロ／ギルス・ブラ
ジリエンシス、ならびに寄生だに、例えばヒゼンダニ属
穐、およびソロプテス属稽に対し活性であることが見出
された。

従って、本発明の化合物は内部寄生虫および／または外
部寄生虫感染した動物およびヒトの治療に有用である。

寄生虫の種類は、宿主および感染の優勢な部位によって
異なる。即ち、例えばヘモンカス・コントルクス、オス
テルタジア・サーカムシンクタおよびコルブリフォルミ
ス毛様線虫は一般に羊に感染し、胃および小腸内に優勢
に存在するのに対し、ウシ肺虫、クーはリア・オン′３
７オラおよびオステルタジア・オステルタジは一般に畜
生に感染し、各々肺、腸または胃内に優勢に存在する。

さらに、本発明の化合物は、抗真菌活性、例えば、カン
ジダ属種の株、例えばカンジダ・アルビカンスおよびカ
ンジダ・グツズ２り、ならびに酵母菌、例えばサツカロ
ミセス・カールスパーヂエンシスに対する活性を有する
ことが見出された。

また、本発明の化合物は自生性の線虫、セノルハブジテ
ス・エレガンスに対しても活性であることが見出された
。

また、本発明の化合物は農業、園芸、森林、公衆衛生お
よび貯蔵製品における昆虫、ダニおよび線虫害虫の駆除
にも有効であることが見出され念。土壌の害虫、ならび
に穀物（例えば小麦、大麦、とうもろこしおよび米）、
野菜（例えば大豆）、果物（例えばリンゴ、ぶどうの木
およびかんきつ類）および根菜作物（例えばてん果糖、
ジャガイモ）を含む作物の害虫を有効に処理することが
できる。

特に、本発明の化合物は例えば果物ダニおよびあぶらむ
し、例えばアフイス・ファパエ、アウラコルスム・サー
カムフレクスム、ミズス・ベルシカエ、ネ７オテトテイ
クス・シンクチセプス、ニルパルパタ愉ルゲンス、パノ
ニクス・ウルミ、フオロドン・フムリ、フイロコプトル
タ・オレイボラ、ナト２ニクス・ウルチカエおよびトリ
アレウロイデス属に属するもの；線虫例えばア７エレン
コイデス属、クロポプラ属、ヘテロデツ属、メロイドジ
ン属およびノξナグレルス属に属するもの纂鱗翅類、例
えばヘリオチス、プルテラおよびスボドプテラ；こくそ
うむし、例えばアンソノムス・グランジスおよびシトフ
ィルス・グラナリウス；小麦粉につく虫、例えばトリポ
リウム・カスタネウム；ノ・工、例えばイエバエ；赤ア
リ；リーフ・マイナース；はアー・サイラ；スリブス・
タパチ；あぶらむし、例えばブラテラ・ケ゛ルマニカお
よびにリゾラネタ・アメリカナならびに蚊、例えばエデ
ス・ニジブチに対しても活性であることが見出された。

従って、本発明は抗生物質として使用し得る上記部分式
（１）を有する化合物を提供するものである。特に、こ
れらの化合物は内部寄生虫、外部寄生虫および／″また
は真菌感染した動物およびヒトの治療に、また農業、園
芸、または森林で昆虫、ダニおよび線虫害虫を駆除する
ための殺虫剤として使用することができる。また、これ
らは、一般的にその他の環境、例えば倉庫、ビルディン
グまたはその他の公共地域あるいは害虫の存在する地域
において、害虫を駆除または抑制するための殺虫剤とし
て使用することができる。一般に、これらの化合物は宿
主（動物、またはヒト、または作物またはその他の植物
）または害虫自体もしくは害虫の存在する場所のいずれ
かに適用することができる。特に好ましいものは、上記
の７アクターＡ、Ｂ、Ｃ，Ｄ、ＥおよびＦである。本発
明の化合物は獣医学またにヒトの薬剤における使用に適
したあらゆる投与方法用に製剤化することができ、従っ
て本発明は、本発明の化合物を含有し、獣医学およびヒ
トの薬剤における使用に適合した製薬組成物をもその範
囲内に含む。とのような組成物は１種以上の好適な担体
または賦形剤を用いる従来法によシ、使用に供すること
ができる。

本発明の組成物には、非経口（乳房内投与を含む）、経
口、直腸、局所または移殖用に特定して製剤化された形
態のものも含まれる。無菌であることが要求される組成
物、例えば注射液（乳房内調製液を含む）、点眼薬、軟
膏およびインブラント等に製剤化する場合には、活性成
分自体を無菌的に製造するか、または製造後γ線照射法
またはエチレンオキサイドへの露出等の方法により、滅
菌することができる。

本発明の化合物は、注射による獣医学用またはヒトの薬
剤として、使用するために製剤化することができ、また
、必要に応じて保存薬を添加したものを単位投与量形態
、アンプル、またはその他の単位投与量内包物、または
多投４量内包物とすることもできる。注射用の組成物は
油性ま九は水性媒質中の懸濁液、溶液またはエマルジョ
ンの形態とすることができ、また調製剤、例えば懸濁剤
、安定剤、溶解剤および／または分散剤を含有すること
ができる。また、活性成分を、使用前に好適な媒質、例
えば無菌の発熱物質を含まない水、と共に再調製するた
めの無菌粉状形態とすることもできる。油性媒質には多
価アルコールおよびそれらのエステル、例えばグリセロ
ールエステル、脂肪酸、植物油例えば落化生油または綿
実油、鉱物油例えば液体パラフィン、およびオレイン酸
エチルならびにその他の類似化合物が含まれる。プロピ
レングリコール等のその他の媒質も使用することができ
る。

獣医学用薬剤用の組成物は、長期作用する基剤や迅速に
放出する基剤中の乳房内調製液として製剤化することが
でき、水性または油性媒質中の無菌溶液または懸濁液と
することができる。

油状媒質は例えば上記のものであってよく、また、濃化
剤または懸濁剤例えば軟または固型パラフィン、ミツロ
ウ、１２−ヒドロキシステアリン、水素化ひまし油、ス
テアリン酸アルミニウム、まだはモノステアリン酸グリ
セリルを含有することができる。従来の非イオン性、カ
チオンまたはアニオン表面活性剤を単独で、または組み
合わせてこの組成物中に用いることができる。

本発明の化合物は、また、獣医学またはヒト用の経口投
与に好適な形態、例えば溶液、シロップまたは懸濁液と
することができ、あるいは使用前に水またはその他の好
適な媒質と調製するための乾燥粉末の形態とすることが
でき、必要に応じ、芳香剤および着色剤を含有せしめる
こともできる。固体組成物、例えば錠剤、カプセル剤、
トローチ剤、丸剤、丸塊剤、散剤、パスタ剤または顆粒
剤もまだ用いることができる。

経口用の固体および液体組成物は当業者に周知の方法で
製造することができる。このような組成物は、製薬上許
容し得る固体または液体状の担体および賦形剤をも含有
することができる。

固体投与形態用に好適な製薬上許容し得る担体の例とし
ては、結合剤（例えば前ゼラチン化トウモロコシデンプ
ン、ポリビニルピロリドンまタハヒドロキシプロビルメ
チルセルロース）；充填剤（例えばラクトース、微結晶
セルロースまたはリン酸カルシウム）；潤滑剤（例えば
ステアリン酸マグネシウム、タルクまたはシリカ）；崩
壊剤（例えばジャガイモデンプンまたはナトリウムデン
プングリコレート）；または潤滑剤（例えばラウリル硫
酸ナトリクム）が含まれる。

錠剤は当業者に周知の方法で被覆することができる。液
体投与形態用の好適な製薬上許容し得る添加物の例とし
ては、懸濁剤（例えばンルビトールシロップ、メチルセ
ルロースｔ　タハ水ｇ化食用油脂）；乳化剤（例えばレ
シチンまたはアカシア）；非水性媒質（例えばアーモン
ド油、油性エステルまたはエチルアルコール）；および
保存剤（例えばｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルまたはプ
ロピル、あるいけソルビン酸）が含まれ、また安定剤お
よび溶解剤も含むことができる。

経口投与用のパスタ剤を当業者に周知の方法で製剤化す
ることができる。パスタ製剤用に好適な製薬上許容し得
る添加物の例としては、懸濁剤またはゲル化剤、例えば
ニステアリン酸アルミニウムまたは水素化ひまし油；分
散剤、例えばポリンルピン酸エステル、非水性媒質、例
えば落花生油または油性、エステル；安定剤および溶解
剤が含まれる。また、本発明の化合物は、獣医学薬剤の
場合、動物の毎日の固体または液体食事摂取物中にとシ
こむことにより、例えば動物の毎日のエサまたは飲料水
の一部として投与することもできる〇 頬投与用には、組成物を従来の方法によシ錠剤、パスタ
剤またはトローチ剤の形態に製剤化することができる。

また、本発明の化合物は、獣医学用薬剤に用いる場合、
例えば活性成分を製薬上許容し得る担体または賦形剤と
共に含有する溶液、懸濁液または分散液の形態である液
体飲薬の形態で経口的に投与することもできる。

また、本発明の化合物は、例えば、従来の坐剤基剤等を
含有する坐剤として製剤化し、獣医学およびヒトの薬剤
に使用することができる。

本発明の化合物は獣医学およびヒトの薬剤に使用するた
めの局所投与用に軟膏、クリーム、ローション、散剤、
ヘツサリー、スプレー、浸液剤、エアゾール剤または滴
剤（例えば点眼剤または点鼻薬）として製剤化すること
ができる。

例えば軟膏およびクリームは水性または油性基剤を用い
、好適な濃化剤および／″またはゲル化剤を添加して製
剤化することができる。眼に投与する軟膏は、滅菌化合
物を用いる無菌方法で製造することができる。

ローションは水性または油性基剤を用いて製剤化するこ
とができ、一般に一種以上の乳化剤、安定剤、分散剤、
懸濁剤、濃化剤、または着色剤をも含有する。

散剤は好適な散剤基剤を用いて製造することができる。

滴剤は水性または非水性基剤を用いて製剤化することが
でき、１種以上の分散剤、安定剤、溶解剤または懸濁剤
をも含有する。また、これらに保存剤を含有せしめても
よい。

吸入による局所投与用とする場合、本発明の化合物をエ
アゾールスプレー形態または通気器用として獣医学およ
びヒトの薬剤用に適用することができる。

本発明の化合物は、他の製薬的に活性な成分と組み合わ
せて投与することができる。獣医学用およびヒトの薬剤
に用いる本発明の化合物の−日の総投与量は、好適には
１〜２０００μ！Ａｙ体重、好ましくは１０〜１０００
μｆｉ／Ｋｇ、より好ましくは１００〜５００μｂべ９
であり、またこれらを例えば１日に１〜４回に分割した
投与量で投与することができる。

本発明の化合物は園芸または農業用に適した様々な形態
に製剤化することができ、従って本発明は、本発明の化
合物を含有する園芸および農業用に調合された組成物を
、その範囲に含む。

このような製剤には乾燥または液体型が含まれ、例えば
粉剤基剤または濃縮薬を含有する粉剤、溶解性または湿
潤性散剤を含有する散剤、微顆粒および分散性顆粒を含
有する顆粒剤、はレット剤、流動剤、エマルジョン、例
えば希釈エマルジョンまたは乳化し得る濃縮薬、浸液剤
、例えば根浸液剤および種子浸液剤、種子包帯剤、種子
はレット剤、油濃縮薬、油液剤、注射剤例えば幹注射液
、スプレー、煙剤および瘍剤がある。

一般にこれらの組成物は、化合物を好適な担体または希
釈剤と共に含有する。このような担体は液体または固体
とすることができ、化合物を適用する場所に分散せしめ
、または使用者が分散性調製物とし得るような製剤を提
供することによシ、化合物の適用を助ける目的で用いら
れる。このような製剤は当業者に周知であり、従来技術
により、例えば活成成分を担体または希釈剤、例えば固
体担体、溶剤または表面活性剤と共に混合および／また
は粉砕することによシ、調製することができる。

粉剤、顆粒剤および散剤等の製剤用に好適な固体担体は
、例えば天然鉱物充填剤、例えば珪藻土、メルク、カオ
リナイト、モントモリロナイト、ピロフィライトまたは
スタプルガイトから選ぶことができる。高分散ケイ酸ま
たは高分散吸収性ポリマーを、必要に応じ、組成物中に
含有せしめることができる。使用し得る顆粒化吸収性担
体は、多孔性（例えば軽石、粉砕レンガ、セピオライト
またはベントナイト）でも非孔性（例えばカルサイトま
たは砂）でもよい。

使用し得る好適な前顆粒材料は有機物または無機物であ
ることができ、ドロマイトおよびすりつぶした植物残渣
が含まれる。

担体または希釈剤として使用し得る好適な溶剤には、芳
香族炭化水素、脂肪族炭化水素、アルコールおよびグリ
コールまたはそれらのエーテル、エステル、ケトン、酸
アミド、強極性溶剤、任意にエポキシ化した植物油およ
び水が含まれる。

良好な乳化、分散お゛よび／または湿潤特性を有する従
来の非イオン性、カチオンまたはアニオン表面活性剤、
例えばエトキシル化アルキルフェノールおよびアルコー
ル、アルキルベンゼンスルホン酸、リグノスルホン酸も
しくはサルフオコハク酸のアルカリ金属もしくはアルカ
リ土類金属塩、またはポリマーフェノールのスルホン酸
エステルも単独で、または組み合わせて組成物中に用い
ることができる。

必要に応じ、安定剤、抗粘結剤、あわ止め剤、粘性調整
剤、結合剤および接着剤、光安定剤、および肥料、飼育
刺激剤またはその他の活性物質を組成物中に含有せしめ
ることができる。また、本発明の化合物は、他の殺虫剤
、だに駆除薬および殺線虫剤と混合して製剤化すること
もできる。

製剤中、活性成分の濃度は一般に０．０１〜９９重量％
、よシ好ましくは０．０１重量％〜４０重量％である。

市販の製品は、一般に、使用に際し適当な活性材料濃度
、例えば０．００１〜０．０００１重量％に希釈するべ
く、濃縮された組成物として販売されている。

園芸および農業用、または獣医学用薬剤として使用する
場合には、活性化合物源として全発酵ブロスを各成分ま
たはファクターに分離せずに使用することが望ましい。

乾燥ブロス（菌糸体を含有するもの）を使用するか、あ
るいは、固−液分離法または蒸発法によってブロスから
分離した溶解菌糸体、生きているもしくは死滅した菌糸
体を使用するか、あるいは、菌糸体を分離した後に残存
する発酵ブロスを用いることが望ましい。必要に応じ、
菌糸体を低温殺菌するか、より好ましくは例えば噴霧乾
燥またはローラー乾燥によシ乾燥することができる。必
要に応じ、ブロスまたは菌糸体を上記の従来の不活性担
体、賦形剤または希釈剤を含有する組成物に製剤化する
ことができる。

先の記載から、一般に本発明の化合物は、感染または侵
襲の原因である生物またはそれらの存在する場所に１種
またはそれ以上の化合物を有効量適用することによシ、
感染または侵襲を抑制し得るものであることが認められ
るであろうＯ 本発明の他の観点から、本発明者らは抗生物質５５４１
または上記のそれらの成分もしくは７アクターの製造方
法を提供するものであシ、この方法は、少なくとも１種
、の本発明の化合物を製造し得るストレプトミセス属の
微生物を培養する工程、および、必要に応じ、これらの
化合物を単離することからなる。この微生物は、本発明
の１種またはそれ以上の化合物を主として製造するもの
であることが好ましい。

生物分類学的研究によれば、上記物質を製造し得るある
種の微生物はストレプトミセス属の新規な種に属するも
のであり、ストレプトミセス・サーモアルケンシスと命
名された。土壌分離体であるこの微生物の試料はナショ
ナル・コレクション・オブ・インダストリアル・アンド
・マリーン・バクテリア、トリー・リサーチ・ステーシ
ョン、アバディーン、英国の永久培養菌コレクションに
寄託され、受託番号ＮＣＩＢ　１２０１５が付与された
。ストレプトミセス・サーモアルケンシスＮＣＩＢ　１
２０１５の形態学的および培養特性は以下に記載するが
、この微生物は、抗生物質５５４１生産性のその他のス
トレプトミセス属の株と共に、本発明の他の特徴部分を
構成している。

特に、本発明は、ストレプトミセス・サーモアルケンシ
スＮＣｌＢ１２０１５と本質的に等しい形態学的および
培養特性を有するものをそのメンバーとする新規な種の
ストレプトミセスにも及ぶものである。

また、本発明はＳ・サーモアルケンシスＮＣｌＢ１２０
１５の発酵によって製造し得る全ての化合物、および式
（Ｉ）の化合物の光学異性体である全ての化合物にも及
ぶものである。

好ましいストレプトミセス属の微生物はストレフトミセ
ス・サーモアルケンシスＮ（ＪＢ　１２０１５またはそ
の突然変異体である。

ストレフトミセス・サーモアルケンシスＮＣｌＢ１２０
１５の突然変異体は、自然発生的にも生成するが、また
ウィーンで１９７３年に開催されたインターナショナル
・アトミック・エナージー・オーソリティーのシンポジ
ウムに先立ち、「ラジエーション・アンド・ラジオアイ
ントープ・フォア・インダストリアル・マイク四オーガ
ニズムズＪ　ｐ２４１のＨｊ、アドラーによシ「２り二
シス・フォア・ザ・デヴエロツゾメント・オプ・ｉイク
ローオーガニズムズ」に概説された方法等、種々の方法
によシ製造することもできる。

これらの方法にはイオン化放射法、化学的方法、例えば
Ｎ−メチル−Ｎ′−二トローＮ−二トロングアニジン（
ＮＴ（））　ｉ熟；遺伝学的方法、例えば組換え、形質
導入、形質転換、溶製生成および漆原変換、ならびに自
発的突然変異体の選択操作が含まれる。かくして、−例
として本発明者らは４種のストレプトミセス・サーモア
ルケンシスＮｃｘＢ　１２０１５の突然変異体積を得、
それら各種をナショナル雫コレクションズ・オブ・イン
ダストリアル・アンド・マリーン・バクテリア、トリー
・リサーチ・ステーション、アバディーン、英国の永久
培養菌コレクションに寄託し、それらには受託番号ＮＣ
ＩＢ　１２１１１　、ＮＣＩＢ　１２１１２、Ｗ：より
　１２１１３およびＮＣ１，Ｂ　１２１１４が付された
。ストレプトミセス・サーモアルケンシスＮＣＩＢ　１
２１１１．１２１１２．１２１１３および１２１１４お
よびそれらの突然変異体もまた本発明の一部を成す。

菌株ＮＣＩＢ　１２０１５は１９８４年９月１０日にを
託された。菌株ＮＣＩＢ　１２１１１〜４は１９８５年
６月２６日に寄託された。

突然変異体積Ｎ（ＪＥ１２ｊ１１．１２１１２．１２１
１３およヒ１２１１４をストレプトミセス・サーモアル
ケンシスＮＣより　１２０ｆ５をＮＴＣ）で処理するこ
とによって得、次いでホリデイの一工程法（Ｒ，ホリデ
イ（１９５６）ｒネイチャー」１７８巻９８７頁）によ
って特定した。

突然変異［Ｎ（ＪＢ　１２１１４はストレプトミセス・
サーモアルケンシスＮＣＺＢ　１２０１５の自発的突然
変異によって発生したものであり、硫酸ストレプトマイ
シン１００μｔ／ｒＲｔに２８℃で５日間露出した後も
生存可能であり、その後もストレプトマイシンに対する
抵抗力を有することが認められた。

生物分類学的研究により、ストレプトミセス・サーモア
ルケンシスは未だ公開されていない新規な種の微生物で
あることが判明した。これらの特性を以下に記載するが
、それらはこれら全ての種に本質的な特性である。実質
的に類似した本質的特性を有する全ての微生物を含むこ
の種の全ての微生物に本発明が及ぶことは自明である。

好ましい胞子形成培地、オートミール寒天、麦芽−酵母
寒天および無機塩−デンプン寒Ｘシャーリング１．　ｇ
、Ｂ、およびゴツトリープ、Ｄ。

（１９６６）　ｒｎｔ、、　Ｊ、　５ｙｓｔ、　Ｂａｃ
ｔｅｒｉｏｌ、１６巻、３１３〜３４０頁）上でストレ
プトミセス・サーモアルケンシスＮＣＩＢ　１２０１５
は整しく増殖し、安定な基質菌糸体と主菌子から出た側
板としての開らせん鎖状の胞子を有する架空菌糸体とを
生成する。これらの培地上において転換着色（ｒｅｖｅ
ｒｓｅｐｉｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ　）は黄色／茶色であ
シ、胞子体は灰色である。×１００に拡大してみると、
胞子体は鎖１本につき２〜５巻のらせんを有し、らせん
の１巻毎に５〜１０個の胞子を有する。平均すると、胞
子体は２０〜３０個の胞子を有している。

倍率Ｘ１２０００の走査電子顕微鏡によシ、この胞子は
なめらかな外面を有し、最も厚い部分で０，７μｍＸ　
１４μｍの寸法を有する濱円形状を有することがわかっ
た。ストレプトミセス・サーそアルケンシスＮＣＩＢ　
１２０１５はグラム陽性であり、２０℃〜５０℃におい
て成長し、かつ、胞子を形成することができる。

後に記載するデータと「パーゲイズ・マニュアル・オプ
・デタミネイティブ・バクテリオロジー（エイス、エデ
ィトン）」に公開された記述との比較により、微生物ス
トレプトミセス・サーモアルケンシスＮＣＩＢ　１２０
１５はストレプトミセス属に属することが判明した。

ストレフトミセス・サーモアルケンシスＮＣｌＢ１２０
１５が属する種の段階の同定はウィリアムス等（Ｊ、　
Ｇｅｎ、　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ　（１９ｓ　３年）１２
９巻、１８１５〜１８３０頁）によって報告されたコン
ピューター化された同定マトリックスを用いて行った。

上記の著者によって示された４１の生物分類学的試験を
ストレプトミセス・サーそアルケンシスＮＣＩＢ　１２
０１５に行った結果を下記に示す。

特性　　　　　　　　結果 胞子鎖分岐　　　　　　　　　　　　　　−胞子鎖網状
構造　　　　　　　　　　　　−胞子鎖矯正可撓性　　
　　　　　　　　　−胞子鎖らせん　　　　　　　　　
　　　　＋菌子体の分断　　　　　　　　　　　　　−
なめらかな胞子表面　　　　　　　　　　十しわになっ
た胞子表面　　　　　　　　　−灰色の胞子色　　　　
　　　　　　　　　十赤色の胞子色　　　　　　　　　
　　　　−緑色の胞子色　　　　　　　　　　　　　−
転換黄色／茶色　　　　　　　　　　　　十転換赤色／
橙色　　　　　　　　　　　−メラニン形成　　　　　
　　　　　　　　−アドニトールの利用　　　　　　　
　　　−セロビオースの利用　　　　　　　　　　　＋
Ｄ−７ラクトースの利用　　　　　　　　　十メンーイ
ノシトールの利用　　　　　　　−イヌリンの利用　　
　　　　　　　　　　十マンニトールの利用　　　　　
　　　　　−２フイノースの利用　　　　　　　　　　
十ヲムノースの利用　　　　　　　　　　　十り−キシ
ロースの利用　　　　　　　　　十ＤＬ−α−７ミノブ
チル酸の利用− Ｌ−ヒスチジンの利用　　　　　　　　　十し−ヒドロ
キシプ四リンの利用　　　　　−アラントインの分解　
　　　　　　　　　十アルブチンの分解　　　　　　　
　　　　十キサンチンの分解　　　　　　　　　　　十
イクチンの分解　　　　　　　　　　　　十レシチンの
分解　　　　　　　　　　　　−硝酸塩の還元　　　　
　　　　　　　　　十硫化水素の生成　　　　　　　　
　　　　十ナトリウムアジド耐性（α０１％、Ｗ／Ｖ）
　　　　−塩化ナトリウム耐性（７％、ｗ／ｖ）　　　
　　　−７エノール耐性（０，０俤、ｗ／ｖ）　　　　
’　　　　＋４５℃における成長　　　　　　　　　　
十ネオマイシンに対する抵抗性（５０μｇ、ｆ）　　　
−リファンピシンに対する抵抗性（５０μｇ−ｍ″″）
　　＋アスペルギルス・ニガーＬＴＶ１３１に対する抗
生　　十バチルス・サブチリスＮＣＩＢ　３６１０に対
する抗生　　−ストレプトミセス・ムリヌスＩＳＰ　５
０９１に対する抗生　十この微生物は２３の主種分類群
（ｍａｊｏｒ　ｓｐｅｃｉｅｓｇｒｏｕｐｓ）　（ウィ
リアムス、　Ｓ、’ｒ、等、（１９８３＠ｒ　Ｊ、　　
Ｇｅｎ、　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ　Ｊ　１２９巻、１８１
５〜１８３０頁）、またはウィリアムスおよび共同研究
者によって定められた副種分類群（ｍ１ｎｏｒ　５ｐｅ
ｃｉｅｓ　ｇｒｏｕｐｓ）および単独メンバ一群（ｓｉ
ｎｇｌｅ　ｍｅｍｂｅｒ　ｃｌｕｓｔｅｒｓ）（Ｊ　、
　　Ｇｅｎ、　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ　（１９８５年）１
２９巻、１７４３〜１８１５頁）のいずれにも属さなか
った。さらに、ストレプトミセス・サーモアルケンシス
ＮｃｘＢ１２０１５の特性を「パージエイズ・ｉニュア
ル・オプ・デターミネイティブ・バクテリオ四ジーＪ　
（８８版）、シャーリングおよびゴツトリープによるｘ
ｓｐ報告（ｒｎｔ、Ｊ、　８ｙａＬ　Ｂａｃｔｓｒｉｏ
ｌ。

（１９（５８年）４巻、６９〜１８９頁；　Ｉｎｔ、　
Ｊ、　８ｙｓｔ。

Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、　（１９６８年）１巻、２７９〜
５９２頁；Ｉｎｔ、　Ｊ、　　５ｙｓｔ、　Ｂａｃｔｅ
ｒｉｏｌ、　　（１９６９年）１９巻、３９１〜５１２
頁ｉ　Ｉｎｔ、　Ｊ、　５ｙｓｔ、　Ｅａｃｔｅｒｉｏ
ｌ、（１９７２年）■巻、２６５〜３９４頁）に記載さ
れた公知、のストレプトミセス種の記述、および１９８
０年からの「インターナショナル・ジャーナル・オブ・
システマテイツク・バクテリオロジー」に明確に記載さ
れた新規な種と比較した。

ストレプトミセス・サーモアルケンシスＮＣｌＢ１２０
１５と合致するものが既に開示された種には見出されな
かったことから、本発明者らはストレプトミセス・サー
モアルケンシスＮＣＩＢ　１２０１５がストレプトミセ
ス属に属する新規な種の新規な微生物であると信じるに
至りた。

突然変異体法Ｎ（ＪＢ　１２１１１．１２１１２．１２
１１３．１２１１４および１２１１５は全てストレプト
ミセス・サーモアルケンシスと実質的に同様の本質的特
性を有する。しかしながら、ＮＣＩＢ　１２１１１は成
長にアデニンを必要とし、ＮＣＩＢ　１２１１２は成長
にセリンを必要とし、ＮＣＩＢ　１２１１３は成長にヒ
スチジンを必要とし、ＮＣＩＢ　１２１１４はストレプ
トマイシンに対する耐性を有する。

５５４１抗生物質を製造し得る微生物は、線虫セノルハ
ブデイテイス・エレガンスを用いる従来の小規模試験に
よって容易に見出すことができる。この試験には、例え
ば、試験試料を線虫の懸濁液に添加し、その後の線虫の
生育力に及はす作用を観察するととによる方法がある。

好適なストレプトミセス微生物の発酵による抗生物質５
５４１の製造は、従来方法、例えばストレプトミセス微
生物を同化性の炭素、窒素および鉱物塩源の存在下で培
養することによシ行うことができる。

同化性の炭素、窒素および鉱物源は、単独または複数の
栄養源から得ることができる。一般的な炭素源としては
グルコース、ｉルトー°ス、デンプン、グリセロール、
モラセス、デキストリン、ラクトース、スクロース、７
ラクトース、カルボン酸、アミノ酸、グリセリド、アル
コール、アルカ／および植物油が含まれる。炭素源は一
般に発酵培地の１５〜１０重量％を占める。

一般に窒素源としては、大豆穀粉、とうもろこし浸漬液
、デイステイラーズンルブルズ（ｄｉｓｔｉｌｌｅｒｓ
　５ｏｌｕｂｌｅｓ　）、酵母エキス、綿実ミール、は
プトン、粉砕クルミミール、麦芽抽出物、ｌＩ蜜、カゼ
イン、アミノ酸混合物、アンモニア（気体または溶液）
、アンモニウム塩または硝酸塩が含まれる。尿素やその
他のアミドも使用することができる。窒素源は一般に発
酵培地のα１〜１０重量％を占める。

培養培地に混入し得る栄養素としての鉱物塩には、一般
に用いられているナトリウム、カリウム、アンモニウム
、鉄、マグネシウム、亜鉛、ニッケル、コバルト、マン
ガン、バナジウム、クロム、カルシウム、銅、モリブデ
ン、ホウ素、リン酸塩、硫酸塩、塩化物および炭酸塩イ
オンを生じ得る塩が含まれる。

あわ止め剤は過剰な発泡を抑制するために用いられ、必
要に応じ、時々添加する。

ストレプトミセス微生物の培養は、一般に、２０〜５０
℃、好ましくは２５〜４０℃、特に３４℃前後の温度で
行い、また通気および振とうまたは攪拌によってかきま
ぜながら行うことが望ましい。最初に培地に少量の胞子
形成微生物の懸濁液を接種するのであるが、成長の遅滞
を避けるためには、少量の培養培地に胞子状の微生物を
接種して微生物の栄養接種物（ｖｅｇａｔａｔｉｖｅｉ
ｎｏｃｕｌｕｍ　）を調製し、得られた栄養接種物を発
酵培地に移植するか、あるいは、よシ好ましくは、主発
酵培地に移植する前に１以上の接種段階を経てさらに成
長させておく。発酵は一般にｐＨ５，５〜８，５、好ま
しくは５．５〜Ｚ５で行う。

発酵は２〜１０日間、例えば約５日間行う。

全発酵物から抗生物質５５４１およびそのあらゆる成分
または７アクターを含有する物質を分離すること、ある
いはある成分または７アクターを単離することを望む場
合には、従来の単離および分離操作を用いて行うことが
できる。本発明の抗生物質５５４１は主として細胞の菌
糸体中に含有されているが、発酵プロス中にも見出さへ
精製の前または後に発酵ブロスに対し単離操作を行うこ
ともできる。単離操作の選択にあたっては、各場合に応
じ、広い範囲から適合するものを選択することが望まし
い。

抗生物質５５４１の単離および分離には種々の分別操作
が用いられ、例えば吸着−溶出、沈澱、分別結晶および
溶媒抽出があシ、これらを様々に組み合わせることもで
きる。

溶媒抽出およびクロマトグラフィーおよび分別結晶が本
発明の化合物の単離および分離に最も適していることが
見出された。

発酵後、菌糸体を従来の操作、例えば、濾過または遠心
沈澱法を用いて回収する。その後、この物質を例えば好
適な有機溶媒、例えばケトン、例えばアセトン、メチル
エチルケトンもしくはメチルイソブチルケトン；炭化水
素、例えばヘキサン；ハロゲン化炭化水素、例えばクロ
ロホルム、四塩化炭素もしくは塩化メチレン；アルコー
ル、例えばメタノールもしくはエタノール；またはジオ
ール、例えばプロパン１．２−ジオール；またはエステ
ル、例えば酢酸メチルまたは酢酸エチルで菌糸体から抽
出する。菌糸体がかなりの量の水を含有する場合には、
水溶性溶媒を用いることが好ましい。

一般に、最大限の回収を達成するためには、２以上の抽
出を行うことが望ましい。好ましくは、最初の抽出は水
に混和する溶媒、例えばメタノールまたはアセトンを用
いて行う。溶媒の除去によシ、抗生物質が粗抽出物とし
て得られる。溶媒抽出物自体も、所望に応じ、溶媒の容
量を蒸発等によって減少させた後に抽出することができ
る。この段階では、水と混和しない溶媒、例えばヘキサ
ン、クロロホルム、塩化メチレンまたは酢酸エチルまた
はそれらの混合物を用いることが好ましく、抗生物質化
合物を充分に分離するに足る量の水を添加する。水に混
和する相を除去することによシ、抗生物質５５４１を含
有する物質が得られる。所望に応じ、好適な溶媒、例え
ばインプロパツールからの結Ａ　化によシ、ファクター
Ｂを分離することができる。

活性化合物および／またはファクターの（全ての７アク
ターまたは存在する他のマクロライド化合物か、らの）
精製および／または分離は従来操作、例えば好適な担体
、例えばシリカ、非官能性巨大網状吸着樹脂、例えば架
橋ポリスチレン樹脂、例えばアンバーライトＸＡＤ−２
、ＸＡＤ−４またはＸＡＤ−１１８０樹脂（Ｒｏｈｍ　
＆　Ｈａａｓ　Ｌｔｄ社Ｍ）または５１１２樹脂（Ｋａ
ｇｔｅｌｌ　Ｌｔｄ社製）上でのクロマトグラフィー（
高性能液体クロマトグラフィーを含む）、あるいは有機
溶媒と適合し得る架橋デキスト２ン、例えばセファデッ
クスＬＨ２０（Ｐｈａｒｍａｃｉａ　ＵＫ　Ｌｔｄ社製
）上でのりＯｆｆトゲラフイー、あるいは、高性能液体
クロマトグラフィーの場合には可逆相担体、例えば炭化
水素結合シリカ、例えば０１８−結合シリカ上でのクロ
マトグラフィーによって行うことができる。

担体は来状、またはより好ましくはカラムに充填した形
態とすることができる。非官能性巨大網状樹脂、例えば
ＸＡＤ−１１８０または５１１２の場合には、有機溶媒
、例えばアセトニトリルと水との混合物を溶出に用いる
ことができる。

一般に、好適な溶媒中の化合物の溶液を、必要に応じま
ず溶媒の量を減少させた後、シリカまたはセファデック
ヌカ２ム上にローデイングする。このカラムは、必要に
応じ洗浄した後、好適な極性溶媒で溶出せしめることが
できる。

セファデックスおよびシリカの場合には、アルコール、
例えばメタノール暮炭化水素、例えばヘキサン；アセト
ニトリル；ハロゲン化災化水素、例えばクロロホルムま
たは塩化メチレン；ま九はエステル、例えば酢酸エチル
を溶媒として用いることができる。これらの溶媒を組み
合わせたものも水と共に、または水なしで用いることが
できる。

本発明の化合物の溶出および分離／精製は従来の操作、
例えばクロマドグ２フイー、例えば薄層クロマトグラフ
ィー訃よび高性能液体クロマトグラフィーによシ、ある
いは先に記載した化合物の特性を利用することによシ監
視することができる。

シリカ上のクロマトグラフィーでは、好ましくはクロロ
ホルム；酢酸エチル等の溶出液を用いることによシ、容
易に抗生物質５５４１が成分■および■に分離され、成
分工が初めに溶出する。

次いでりはマドグラフィー、例えば高性能液体クロマド
グ、９フイーを用いることによシ、ファクターＢＳＲお
よびＦを成分工から容易に得ることができる。同様にし
て、ファクターＡ、　ＣおよびＤを成分Ｋから容易に単
離することができる・次に、アルコール、例えばメタノ
ールまたはイン−プロパツールからの結晶化によシ、７
アクターＢを７アクターＥおよび？から分離することが
できる。ファクターＥおよびＦを含有する母液を、必要
に応じ、シリカ上でのクロマトグラフィー躯によってさ
らにＮ製し、７アクｐ−ｇ＞よびＦを高性能液体クロマ
トグラフィー（よ）単離することができる。これらの７
アクターを得た後、さらにメタノール、イン−プロパツ
ールま九はメタノール／水混合物からの結晶化によって
精製することができ、また本発明は結晶状の本発明の化
合物にも及ぶ。

前述の操作を適宜組み合わせることにより、本発明の化
合物が固体として単離された。上記の精製工程を行う順
序および用いるそれらの工程の選択を広範に変化し得る
ことは明らかである。

かくして、ファクターＢが９０％を越える純度を有する
結晶性の固体として得られた。同様に、ファクターＡ、
Ｃ，Ｄ、ＢおよびＦもまた９０％を越える純度で得られ
た。しかしながら、上記の如く、これらの７アクターは
それらの使用目的に適した純度で使用することができる
。

ヒトの薬剤として使用する場合には、少なくとも９０％
、好ましくは９５チを越える純度であることが望ましい
。獣医学または農業または園芸に用いる場合には、よシ
低い純度、例えば５゜慢以下の純度で充分である。

下記の実施例で本発明を説明する。以下の略称を用いる
；　ｔｉｃ−薄層クロマトグラフィー（別記しない限シ
、Ｍｅｒｃｋ　５７５５　、シリカ６ｏプレートを用い
、ｃＨｃｔ５　：酢酸エチル（３：１）で展開する）　
；ＣＣＭ−カラムクロマトグラフィー（別記しない限シ
、Ｍｅｒｃｋ　７７５４、シリカ６ｏ充填（別記しなＩ
ＡｖａＦ）２００ｘＡｍ力９ム）を用い、ＣＨＣｌ　３
　：酢酸エチル（３：１）で溶出する）　；　ｈｐｌｃ
−高性能液体クロマトグラフィーｉ　ＰＥ−石油エーテ
ル（“別記しない限シ、沸点６０〜８０℃）：Ｌ−リッ
トルｉ　ＥＡ−酢酸エチル。

実施例中に記載される培地ＡＳＢおよびＣとは、下記の
ものを示す。

Ｄ−グルコース　　　　　　　　　　１５．。

グリセロール　　　　　　　　　　１５．０ンヤペプト
ン　　　　　　　　　　１５．。

ＮａＣ１５，０ ＱａＣＯ５’Ｌ　Ｏ 蒸留水を加えて１ｊとし、高圧滅菌する前に−をＮａＯ
Ｈ水溶液でｌ１ｌ（７，０に調整した。

Ｄ−グルコース　　　　　　　　　　　　２．５麦芽デ
キストリｙＤＭ３１（Ｒｏｑｕｅｔｔ、ｅ（ＵＫ）Ｌｔ
、ｄ社製）２５．０Ａｒｋｓ、ｓｏｙ　５０　（Ｂｒｔ
ｉｓｈ　Ａｒｋａｄｙ　Ｃｏ、　Ｌｔｄ社［）　　１２
．５糖蜜　　　　　　　ｔ５ に２ＨＰＯ４Ｑ、１２５ 炭酸カルシウム　　　　　　　　　　　１２５Ｍ０ＰＢ
（５−（Ｎ−％＃７ｊｔリノ）プロ／センスルホンｌ！
２）２ｔ。

蒸留水を加えて１ノとし、高圧滅菌する前に声を５　Ｍ
　ＮａＯＨで６．５に調整した。

培地Ｃ Ｌ−１ Ｄ−グルコース　　　　　　　　　　　　ｚ５麦芽デΦ
ストリンＭＤ３０ｇ（Ｒｏｑｕｅｔｔｅα］’Ｋ）Ｌｔ
ｄ社製）２５．０Ａｒｋａｓｏｙ　５０　　　　　　　
　　　　　　１Ｚ５ビート糖＊　　　　　　　　　　　
　　　　　　　ｔＳＫ２ＨＰＯ４α１２５ ＣａＣＯ５ｔ２５ シリコーン１５２０　（ＤａｗＣｏｒｎｉｎｇ社ＩＩ！
り　　　　　　＋１６２５蒸留水を加えて１）とし、滅
菌する前に田を６５にＩＩ！した。

実施例　１ ストレプトミセス・ナーモアルヶンシス（８ｔｒｅｐｔ
ｏｍｙｃｅｓ　ｔｈｅｒｍｏａｒｃｈａｅｎｇｉｓ　）
ＮＣより１２０１５酵母工中ス（オキソイドＬ２１　）
　　　　　　　　　　　０．５麦芽エキス（オキソイド
Ｌ３９）　　　　　　　　　　３α０菌学上の堅プトン
（オキソイドＬ４０）　　　　　　　　５．０寒天ｌ６
３（オキソイドＬ１５）　　　　　　　　　　　１５．
０上記に蒸留水を加えて１１にし、その虜を約５．４に
調整する から調製された寒天スラント上べ接種しついで２８°で
１０日間培養した。ついでこの成熟したスラントを１０
％グリセロール溶液（６ｄ）で被覆しそして胞子および
菌糸を離すために滅菌具でとすシ取った。生成する胞子
懸濁液の０．４一定量を滅菌ポリエチレンストロ−に移
しついでそれらをヒートシールし、必要とされるまで液
体窒素蒸気中に貯蔵した。

上記の１本のストロ−の含量を１０１１／培地人に接種
するのに使用しついで５０簡直径の軌道運動を有して２
５　Ｏｒｐｍで回転する振とり機上で２８℃において３
日間培養した。この培養された培地はそれぞれ１０１１
／お上び５０Ｍの培地Ｂを含有する２個の２５０１４三
角７２スコおよび１５本の管に２％の量で接種するのに
使用された。

これらの管およびフラスコを２８℃で５日間増殖させつ
いでそれらの培養菌を真空下で別々にろ過しそして細胞
を培養ろ液の容量と同じ１容量のメタノールで５０分間
振とうした。

管および７２スコの両方で増殖した細胞のエキス中ニカ
ノルハフシチスエレガンス（Ｃａｅｎｏｒ−ｈａｂｄｉ
ｔｉａ　ｅｌｅｇａｎｓ　）に対する活性が検出され、
これらの菌糸エキスを一緒にしてかさばらせ、蒸発乾固
しついで再びメタノールで抽出して濃縮物（６ｄ）にし
、これをメタノールで溶離されるセファデックスＬＨ２
０のカラム（１１０ｘ２．５ｃｍ）に入れた。各１０ｊ
Ｌ／フラクシヨンを集めた。

７ラクシヨン２１〜２８をプールし、蒸発させて油状残
留物（１５ｓｍｇ）を得、これをＣＭ（Ｊ５　：Ｅｋ　
（３：　１　）で抽出して抽出物（３ｄ）を得っいでそ
れをＣＣＭ（５５Ｘ２．５傳カラム）にかけた。

各Ｉ　ＱＭＩ７ツクシヨンを集めそして螢光指示薬含有
のプレートを使用してｔｉｃによシ分析した。

７ラクシヨン２０−２３および７−ｙクレヨン３６−４
４は螢光を消光しそして本発明者等が成分１　（Ｒｆα
７Ｇ）および成分１（ａｆＱ、４３）として同定した２
つの主！！な領域を生成した。７ラクシヨン２０−２３
を蒸発させて成分工を固形物（９９）として得た。−ａ
工２３８ｎｍ　、町３４０；λｍａ、　２４５ｎｍ、　
ｉ、　３５０　＋およびλ、、、　２５４ｎｍ　。

！’　２００゜７５Ｐクション５６−４４を蒸発させて
成分■を固形物（ｆｌａｐ）として得た。λｍａ工２３
８ｎｍ、　　Ｅ、４４０　；　Ａｌｎａ、　２４５ｎｍ
、　　Ｉ、４６０；およびλｍａｘ　２５４ｎｍ　ＳＢ
、２８０゜実施例　２ ５０−の培地Ａを含有する２個の２５０ｄ三角７ラスコ
のそれぞれに前記実施例１に記載のよンにして調製され
たストロ−から採取したストレプトミセス・サーモアル
ケンシスＮＣより１２０ｆ５の胞子懸濁液α２−を接種
した。これらの７ツスコを５０ｗｍ＠径の軌道運動を有
して２５０ｐｙｍで回転する振とり機上で２８℃におい
て３日間培養し、ついで両７．ｊスコの内容物は培地Ｂ
（１２７）を含有する２０ノ発酵容器に接種するために
使用された。この培養菌を５日間の増殖後に収穫しそし
て実施例３に記載のように処理し九。

実施例　３ 実施例２に記載のようにして得られた発酵肉汁（１２７
）を２８℃で５日間増殖させた後に収穫しついで遠心分
離し九（１０℃で１５分間４．２０　Ｏｒｐｍにおいて
）。その細施にレットをメタノ−＆（５））と混合しつ
いで４℃において２０時間放置した。菌糸エキスをろ過
し、４０℃で蒸発させついでブタン−１−オール（１０
０−）の添加後に共沸蒸留に付した。ついでこのエキス
を２００ｄずつのメタノールで５回処理しそして各抽出
物を一緒にし、それらを蒸発させ１００ｄにし、それか
らセファデックスＬＨ２００カラム（１１２Ｘ５３）に
入れた。このカラムをメタノールで溶離させついで２０
０ｄの前留分後に５０１１１１７ラクシヨンを集めた。

７ラクシヨン４０−９０をプールしついで蒸発させて油
状残留物（１！Ｍｌ）を得た。この残留物を７７−のＣ
ＨＣノ、：ＥＡ（３：１）で抽出し、ろ過しついでＣＣ
Ｍに付して、２０ＣＩＩＪ１７）前留分後に１５ｖ７ラ
クシヨンを集めた。

成分工を含有するフラクション１２４−１４２をプール
しついで蒸発させて固形物（２５３ＪＩＦ）を得、この
うちの２１６ｐｙをｈｐｌｃ　（Ｚｏｒｂａｘ　ＯＤＳ
、２５Ｘ２．１　（ｎ、　８０チＣＨ，ＣＮ／Ｈ２０）
により精製した。成分■を含有するフラクション２５０
−３２０をプールしついで蒸発させて固形物（６０２ｑ
）を得、このうちの５４０　ｍｙをｈｐｌｃによシ精製
しく７ラクシヨン１２４−１４２の場合のように）そし
て数回の留分からの７ラクシヨンを集めた。

ｈｐｌｃカラムから溶出された物質は２４３ｎｍでの石
分光分析によシ調査された。この波長で吸収するピーク
を乾燥しセしてＩ）カノルハプジチスエレガンス（Ｃａ
ｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉａ　ｅｌｅｇａｎｓ　）に対す
る活性を試験しついでＩＩ）ｔｉｅによシ分析した。

またカノルハプジチスエレガンスに対して活性であった
４個のピークは０．３９〜α４６または０．７０〜α７
５の範囲のＲｆ値を有した。

成分工はα７０〜α７５のＲｆ値を有する１個のピーク
を与えたが、このピークはファクターＢとして指定され
ている。成分■はα５９〜［１４６のＲｆ値を有する３
個のピークを与えたが、これらのピークはファクターＡ
１ファクターＣおよび７アクターＤとして指定されてい
る。

ファクターＡは試料の注入後に２６０〜３４０ａでｈｐ
ｌｃカラムから溶出され、ｔｉｃによるＲｆ値０．４４
を有した。ファクターＢは試料の注入後に２７０〜３１
０Ｒｔでｈｐｌｃカラムから溶出され、ｔｉｃによるＲ
ｆ値Ｑ、７２を有した。７アクターＣは試料の注入後に
１６０〜１８０−でｈｐｌｃカッムから溶出され、ｔｉ
ｅによるＲｆ値α４を有した。７アクターＤは試料の注
入後に２２０〜２５（Ｃｊでｈｐｌｃカラムから溶出さ
れ、ｔｌｃによるＲｆ値α４２を有した。ファクターＡ
、Ｂ、ＣおよびＤの上記以外の特性については後に記載
する。

実施例　４ 実施例１に記載のようにして調製されたストロ−から採
取したストレプトミセス・サーモアルケンシス菌ＮＣＩ
Ｂ　１２０１５の胞子懸濁液０．４１ｕを一培地Ａ（５
０ａｌ）を含有する２　５０　ｍｌ三角７ラス；に接種
するのに使用した。このフラスコを５０ｍ直径の軌道運
動を有して２５　Ｏｒｐｍで回転する振とり機上におい
て２８℃で４日間培養した。ついで一部分（８ｄ）を、
それぞれが４００ｄの上記と同一の培地を含有する２個
の２ノ干底７２スごの各々に接種するのに使用しついで
上記と同一の条件下で３日間培養した。

ついで上記両７ツスコの内容物をシリコン５２５〔ダク
ーコーニング社製、０．０６２５チＣｖ／ｖ）　）で追
加された培地Ｂ（４０７）を含有する発酵容器（７０Ｉ
ｌ）に接種するのに使用した。必要に応じてシリコン消
泡剤を添加し、２０％以上の飽和状態の溶解酸素量を維
持するのに充分な通気を行ないそして振とうさせながら
発酵を実施した。１０日後に発酵物を取シ出し、その肉
汁（４０Ｍ）を遠心分離（１５０００ｒ、ｐ、ｍ、）に
ょシ清澄した。残留する上澄み液を水・（５１）で置換
し、回収した細胞（ｔ４ＫＩｉ）を−２０’で凍結させ
た。

１週間後この凍結した細・胞を解凍し、メタノール（１
５１）中に懸濁させついで１５時間温和に攪拌した。つ
いでこの懸濁液を濾過し、固形残留物をメタノール（１
０１）で再抽出した。

−緒にしたろ液（２５１）を水（１２１）で希釈し、Ｐ
Ｒ（２５１）で抽出した。３０分後各相を遠心分離によ
シ分離した。

下方のメタノール相をＰＫ　（２５１，１５７および１
５））で３回再抽出した。−緒にしたｐｇ相（８０７）
をＰｆａｕｄｌｅｒ　８．８−１２　Ｖ　−２７ワイピ
ング処理されたフィルム蒸発器（蒸気圧０．１パール、
蒸気温度２０°、スチーム温度１２７°）に３回通して
濃縮しついでその濃縮物（８））を硫酸ナトリウムＣ１
Ｋｐ’）で乾燥させそしてさらに回転フィルム蒸発器中
におｈて減圧下４０’で濃縮した。その油状残留物（１
５ｍ）をＣＨＣ７３およびＥＡの混合物（７０ｍ、　５
　：　１　ｖ／ｖ　）中に溶解しセしてＣＣＭにかけて
１４ｐＱｍの前留分の後に約４０νの７ラクシコンを集
めた。

７ラクシヨン４５−６５を一緒にしついで蒸発させてフ
ァクターＢ（９４０ｑ、実施例３で定義さ、２れたもの
）を得、これをメタノールから２回そして最後にニド四
メタンから結晶化させた。

それらの結晶を単結晶Ｘ−線回折分析にかけたとζろ、
それ・ら、はＣｕ−Ｋｇ放射ＩＩＫ（λ−ｔ５４１７８
又）を用いての回折計上で測定してａ＝１０．１７１　
（５）、ｂａ１５．５１７（５）、ｃ＝２５．０５２（
カス、■＝３３９１又６、空間群号−卦稠→！Ｐ２ｔ２
１２１、ｐｃ＝１．１８＃ｌＩ　　、２１６９独立観測
反射（１ｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｏｂｓｅｒｖｅａ　ｒ
ｅｆｌｅｃｔｉｏｎｓ）（θ＜５８°）に関してＲ＝α
０５３を有する斜方晶の透明プリズムであることが示さ
れた。Ｘ−線結晶学によシ決定された構造は第５図に示
されている。

実施例　５ 増殖期間を２日間にして実施例４に記載のよウニストレ
プトミセス・サーモアルケンシスＮＣＩＢ　１２０１５
の接種物を調製し、これをシリコン５２５の代わシにポ
リプロピレン２０００　（Ｑ、０６Ｔ。

ｖ／ｖ　）が追加された培地Ｂ（４０））を含有する発
酵容器（７０７）に接種するために使用した。発泡を阻
止するために発酵中、必要に応じてボリプ四ピレン２０
００を加えた。発酵は３０チ以上の飽和度を有する溶解
酸素量を維持するのに充分゛な通気を行ないそして振と
うさせながら２８Ｃにおいて実施された。２４時間の発
酵後一部分の肉汁（９１）を以下のようにして調製さ″
れた培地（４ｓｏｊ）を含有する発酵そう（７００１）
に移した。

産に− Ｄ−グルコース　　　　　　　　　　２．８麦芽デキス
トリン（ＭＤ３０Ｅ）　　　　　２７．８アルカソイ（
Ａｒｋａｓｏｙ　）　　　　　　　１３．９糖蜜　　　
　　　　ｔ７ に２ＨＰＯ４α１４ ＣａＣＯ５ｔ　３９ シリ：ｚン５２５　（ダク；−ニング社展）　　　０．
０６％（ｖ／ｖ　）滅菌前に−６，５に調整した。

発酵は２０１以上の飽和度を有する溶解酸素量を維持す
るのに充分な通気を行ないそして振とうさせながら２８
℃において実施された。必要に応じてポリプロピレン２
０００消泡剤を加えた。２日後Ｈ２８０４を添加してそ
の−を７．２に調整した。５日後に発酵物をとシ出した
。

肉汁（４５０７）を遠心分離によシ清澄し、残留上澄み
液を水（２０１）で置換した。回収した細胞（２５，５
Ｋｐ）を、全量を７５１ＦＩＣするのに充分なメタノー
ル中において１°時間攪拌した。

この懸濁液をろ過し、固形残留物をメタノール（３５Ｊ
）で再抽出しついでろ過した。−緒にしたろ液（８７／
）を水（４０１）で希釈しそしてｐｍで抽出した。３０
分後各相を遠心分離によ部分離しついで下方のメタノー
ル相を水（４０１）の添加後にｐｍ　（ｓ　０１　）で
再抽出した。分離後、下相を再びｐｍ（３０））で抽出
した。−緒にしたＰＨ相（８５７）はファンドラ−（Ｐ
ｆａｎｄｌｅｒ　）８．８−１２Ｖ−２７ワイプドフイ
ルム蒸発器（蒸気圧０．１パール、蒸気温度２０’、２
チ一ム温度１２７°＞ｆｃ３ｕ通ｆことｌｌｃ！りｆｌ
ｋｍＬｆｃ。１ｌＪｉ物（９ｊ）を硫酸ナトリウム（２
Ｋｆ）で乾燥し、さらに回転フィルム蒸発器中において
減圧下４０’で濃縮した。油状残留物（ｔｌｌＦ）をＣ
Ｈ１ｊ５中に溶解して１９０ｄにしついでこれをｃｃｎ
ＣＣＨＪ５中において充填され且つ洗浄（５０ｏｍ）さ
れ九カラム〕にかけて１，４００ＩＬｔの前留分の後に
約４０ｄの７２クシヨンを集めた。

７ラクシヨン３２−４６を一緒にしついで蒸発させて波
状物（２ｔ２．Ｆ　）を得た。クラクション４７−９３
を一緒にしついで蒸発させて波状物（２０，ＩＩ）を得
、これをｃＨｃｔ５　：ＥＡ（ｓ　：　１）中に溶解し
て５ＱｍにしそしてＣＣＭ　Ｋかけて１４００１１７の
前留分の後に約４０１１７の７ラク７ヨンを集めた。７
ラクシヨン２２−５６を一緒にしついで蒸発させて波状
物（工１１）を得、これを最初のカラムからのフラクシ
ョン３２−４６よシ得られた油状物に加えた。−緒にし
た油状物を沸騰メタノール（４−）中に溶解し、ついで
これを熱プＣ１／ぞノー２−オール（２０ＬＩ）に加え
て放置後に結晶性ファクターＢ（２，５７１）を得九。

ファクターＢの結晶化後の母液を蒸発させて油状物を得
、これを等容量のＣＨ２ＣＪ２中に溶解しついでｃａ２
ｃｚ２中に充填されたメルク珪藻±（７〇−２３０メｙ
　シュＡ８ＴＭ　５Ａｒｔ、　Ａ　７７３４）の力２ム
（３０Ｘ２．２０＋１）上に入れた。その床をＣＨ２Ｃ
ノ２（２床容量）で洗浄しついでＣＨＣＪ５：ＥＡ（３
：　１　）（２床容量）で溶出させた。溶出物を蒸発さ
せて油状物を得、これをメタノール中に溶解しそして８
ｐｈｅｒｉｓｏｒｂ　８５０ＤＳ−２（２５０ｓｃｍＸ
　２０ｍ、フェイズセパレーション（Ｐｈａｓｅ　Ｓｅ
ｐ、）社製）上でプレパラテイプｈｐｌｃにかけた。試
料（５１１ｊ）を１分間かかつてカラム上に注入しつい
でそのカラムを以下の条件下において １１０　　　　　　３０．００ ３９、９０　　　　　　５α００ ４０．００　　　　　　　！５．００ ７５．００　　　　　　５５．００ アセトニトリル：水（７：３）で溶出させた。

ｈｐｌｏ”う１かも溶出される物質は２３８　ｎｍ　ｆ
石分光法によシ調べた。２６３分で溶出されるピークを
有するクラクションを一緒にし、それを蒸発させてファ
クターＥを固形物として得た。

３６．４分で溶出されるピークを有する７ラクシヨンを
一緒にし、それを蒸発させて７アクター２を固形物とし
て得た。ファクターＥおよびＦのこれ以外の特性は後に
記載される。

実施例　６ １１７時間後に取シ出された発酵肉汁（実施例２で調製
されたものと同様の）をオートクレーブ（１２１℃、１
時間）Ｋ入れ、室温に冷却しついで磁気攪拌機上工攪拌
して細胞の均質懸濁液を得た。２つの部分（２ｄ）を遠
心分離にかけ（１２，０００１２分、室温）、その上澄
みを傾写し、残留細胞を水（２ｄ）中に懸濁し、完全に
混合しついで再び遠心弁１ｍＫかけた（１２ρ００１．
２分、室温）。上澄みを傾写後それらの細胞を蒸留水（
２ｍずつの）で２回以上洗浄し九〇ついで洗浄した細胞
を水（２ｄ）またはメタノール（２ｄ）のいずれかと完
全に混合しついで時々振とうさせながら室温に１５時間
放置した。

これらの懸濁液を再び遠心分離にかけ（１２，０００ｙ
ｓ　２分、室温）そして引き続き上澄みを水中で希釈し
た。水性懸濁液からの細胞を再び水中に懸濁し、直ちに
引き続き水中で希釈した。各希釈液の一部分（１０μｌ
）をＮａ２ＨＰＯ４（６１／ｌ）、Ｋ２ＨＰＯ４（３１
／　ｌ　）、ＮａＣＪ　（５１／　ｌ　）およびＭｇ８
０ａ・７Ｈ２０（α２５１１／ｌ）を含有し、ｐｉ（７
，０に！Ｉｌｌ整された緩衝溶液中の線虫カノルハブジ
チスエレガンス（Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ　ｅｌ
ｅｇａｎｓ　）の懸濁液（２００μｊ）に加えた。４時
間−後、試験混合物のどの希釈が試験懸濁液中において
線虫の９８％以上にわたって固有運動性の全阻害をもた
らすかを見出すために前記線虫懸濁液を調べた。メタノ
ールエキスの５倍希釈に１個、２５倍希釈に１個、２５
０倍希釈に１個および５００倍希釈に１個、細胞懸濁液
の５倍希釈に１個、２５倍希釈に１個、２５０倍希釈に
１個、５００倍希釈に１個および１００．０倍希釈に１
個そして水性エキスの２倍希釈に１個、４倍希釈に１個
および８倍希釈に１個が２００μｊの線虫懸濁液に１０
μｌを加えた際に線虫のこのような抑制をもたらすこと
が見出された。

実施例　７ ５１１４の培地Ａまたは５Ｑｓｌの培地Ｂのいずれかを
含有する２５０Ｍ三角７ツスコに実施例１に記載のよう
にして調製されたメトロ−から採取したストレプトミセ
ス・サーモアルケンシスＮＣＩＢ　１２０１５の胞子懸
濁液０．４１１Ｌｔを接種した。培地Ａまたは培地Ｂを
含有するフラスコを５０ｍ直径行程を有して２５０　ｒ
ｅｖ／分で操作される回転振とり器上で２８°において
２日間培養した。

ついで各培地からの一部分（８ｄ）を４００−の同一培
地（それぞれＡまたはＢ）含有の２ノ平底フラスコに接
種するのに使用した。これらのフラスコを同一条件下で
２日間培養した。

２個の７０４発酵そうのそれぞれに２フラスコの培地Ａ
を接種しそして１個の他の７０ｊ発酵そうに２フラスコ
の培地Ｂを接種した。各発酵そうは４０４の培地Ｃを含
有していた。

各発酵は、３Ｃ１以上の飽和度の溶解酸素量を維持する
のに充分な通気を行ないそして振とうさせながら３４°
で実施された。約２４時間発酵させた後にＨ２ＳＯ４水
溶液を添加してその−を７２に調整した。必要に応じて
ポリプロピレングリコール２０００消泡剤を加えた。５
日後これらの発酵物を取り出して、まとめた。

培地Ｂを含有する２フラスコが接種された１個の他の７
０ｊ発酵そうはシリコン１５２０（Ｑ、０６チ）の追加
された培地Ｂを含有した。この発酵は、３０チ以上の飽
和度の溶解酸素量を維持するのに充分な通気を行ないそ
して振とうさせながら２８″において実施された。発泡
を抑制するために必要に応じてポリプロピレングリコー
ル２０００を加えた。２４時間後９１部分を、４５０ノ
の培地Ｃを含有する７００ノ発酵そうに移した。

この発酵は５０％以上の飽和度の溶解酸素量を維持する
のに充分な通気を行ないそして振とうさせながら３４℃
において実施された。発泡はボリプ嚢ピレングリコール
２０００の添加によシ抑制されそして約２４時間の発酵
後にその虜はＨ２ＳＯ４水溶液の添加で７．２に調整さ
れた。この発酵物を４日後に取り出しついで前記の３個
の４０ｊ発酵物と一緒にしてまとめた。

このまとめた収穫物肉汁を約１２０７／時間でシャープ
ルズ（５ｈａｒｐｌｅａ　）　Ａ８１６ＦＹに通して遠
心分離した。遠心分離器中の残留上澄みを水で置換した
。

回収した細胞（１ｔＳ５Ｋｐ）をシルパーツ７Ｃ８ｉｌ
ｖｅｒａｏｎ）Ｚキサ−でメタノール（５５１）中にお
いて乳化した。６０分後この懸濁液を綾織布に通してろ
過し、残留物を再びメタノール（３４４）中で乳化した
。４０分後その懸濁液を再びろ過した。

２回のメタノール抽出からのる液を一緒にした。

−緒にした抽出物（５３，５７）を水（２７１）および
ＰＥ　（２７ｊ　）と混合した。２０分間攪拌した後に
２相をウエストファリア（Ｗｅｓｔ、ｆａｌｉａ　）Ｍ
ＭＡ１２５６遠心分離機上で分離した。下方の水性メタ
ノール相（７０１）を水（３７１）およびＰＥ（２７ｊ
）と混合しそして前のように攪拌し、分離させた。ＰＥ
相中の界面乳濁はアセトン（４））で破壊された。つい
で下方の水性メタノール相（１ｏｓｔ　）を水（４０ｊ
）およびＰＫ　（２７ｊ　）と２０分間混合しそして前
のように攪拌し、分離しついでアセトン（４））を使用
してＰＥ相中の界面乳濁を澄ませた。ついでこれら３つ
のｐｍ抽出物を一緒にした。

一緒にしたｐｍ抽出物（８５１）をワイプドフィルム蒸
発器（蒸気圧０．１５パール、蒸気温度２６）で濃縮し
た。濃縮物（３ｊ）を硫酸ナトリウム（２Ｋｆ）で乾燥
しついでさらに減圧下４０°で蒸発させた。生成する油
状物（６５９１１）をクロロホルムおよび臥の混合物（
５：　１　ｖ／ｖ　）　３００ｉｕ中に溶解しそしてろ
過しついでガラス繊維紙に通して洗浄した。ろ過液およ
び洗液（１０６０ｍ）を６１７時の流速で溶出させるＣ
ＣＭ（１５００ｍ×１００藤直径）にかけた。

８．８〜ｊ　３．１１で溶出する７ラクシヨンを一緒に
しついで低圧で蒸発させて油状物（５６，１）を得、一
方１５．１〜２４．６１で溶出するフラクションは低圧
で同様に減少されて淡黄色固形物（１５３，４ｇ）にな
った。初めのフラクションはファクターＢを豊富に含有
し、一方後の方のフラクションはファクターＡ、ＢＳＣ
およびＤの混合物を含有していることが示された。この
後の方のフラクション中のファクターＢは流速を３１７
時に減じる以外は同一の条件下で前記クロマトグー）フ
ィー〇〇Ｍを２同一最後は新しいシリカ上で−繰り返す
ことによシ次第に取シ出された。

これら力２ムの第２からの７アクターＡ、　ＣおよびＤ
を含有するピークを８．８〜１７．６ｊで溶出させ、含
有されていた残留ファクターＢはファクターＡＳＣおよ
びＤが１４〜２８！で溶出された第３カラムにおいて分
離された。この最後のまとめた溶出物は低圧で減量させ
て固形物（１１４１）にした。前記２個のカラム（それ
ぞれ７．５〜８４８）および１０．３〜１五４ノ）から
の７アクターＢを含有しているピークを蒸発させて油状
物（それぞれ１α７９および１０Ｉｉ）を得ついでこれ
らを前記３個のカラムの内の最初のカラムから得られた
油状物と一緒にした。

ファクターＢを含有する。油状物を沸騰メタノール（２
５ｓｕ）中に溶解しついで沸騰プロパン−２−オール（
１０ｏｍ）と混合した。４＠に冷却してファクターＢを
結晶化させた。それをろ去し、メタノール（２ｏｏｍ）
で洗浄し、−２０°に冷却しついで真空乾燥させて２５
．５１１の７アクターＢを得た。

ファクターＡＳＣおよびＤを含有した第３シリカカ２ム
からの固形物を真空乾燥させて恒量（８７Ｊｉｌ）Ｋし
た。この固形物の試料（２ＯＮ）をメタノール（１９０
ｍ）中に溶解しついで７：３（Ｖ／Ｖ）アセトニトリル
：水で２３０ｄに調製した。

ついでこの溶液の一部分（５−）を、溶離溶媒として７
：５アセトニトリル−水を用いて５ｐｈｅｒｉｓｏｒＯ
ＯＤ８−２　（５μ口の粒子直径）のカラム（２５０露
Ｘ２ｔ２ｍ直径）上でクロマトグラフィーにかけた。そ
の流速を約１０秒間２０ｄ／分に保持し、ついで２２分
かかつて着々と３４ｄ／分に増加させそしてさらに３分
間この速度に保持した。溶出するファクタ”−は２３８
　ｍ１ｍにおいて検出された。ファクターＣは１１０〜
ＩＫ４分で溶出され、ファクターＤは１！１．４〜１７
．４分で溶出されそしてファクターＡは１７．４〜２＆
０分で溶出された。

各クロマトグラフィー分離からの７アクターＣを含有す
る７ラクシヨンを一緒にしついで低圧で減量させて固形
物を得た。ファクターＡ含有クラクションを同様に減量
させて固形物を得た。また７アクターＤ含有７−）クシ
ョンも一緒にしついで減量させて不純な固形物（７ＩＩ
）を得た。これを再びメタノール（６５ｊｌｊ）中に溶
解し、７：３アセトニトリル−水と混合しついで流速を
その間ずつと２０ｄ／分に一定に保持する以外は前述の
ようにして８ｐｈｅｒｉｓｏｒｂ　０Ｄ８２カラム上で
再びクロマトグラフィーにかけた。ことで７アクターＤ
が１６〜２０分で溶出され、このフラクションを各クロ
マドグ２フイーからのものと一緒にした。このかさばっ
た溶出物を固形物にした。ファクターＡＳＣおよびＤを
含有するこれら３種の固形物を真空下Ｐ２Ｏ５で乾燥さ
せて恒量（それぞれ５５ＮＳ７．０ＩＩお！びｔ２１１
）にした。

前記過程から単離された４ａｉの固形物はそれぞれファ
クターＡ、ＥＳＣおよびＤの基準試料と同様であること
が示された。

実施例　８ ５０Ｍｔの培地Ｂを含有する２５０−三角フラスコに実
施例１に記載のようにして調製されたストロ−から採取
したストレプトミセス・サーモアルケンシス（８ｔｒｅ
ｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｔｈｅｒｍｏａｒｃｈａｅｎｓｉｓ
）ＮＣＩＢの１２１１１．１２１１２．１２１１３およ
び１２１１４のそれぞれの施子懸濁液０．５ｍｇを接種
した。

ストレプトミセス・サーモアルケンシスＮＣｌＢ１２１
１１、ＮＣＩＢ　１２１１２およびＮＣＩＢ　１２１１
３を含有するフラスコを回転振とり器上において３１℃
で培養した。ストレプトミセス・サーモアルケンシスＮ
ＣＸＢ　１２１１４を含有するフラスコを２８℃で２日
間培養しついで１１１ｔの肉汁を、５０ｄの培地Ｂを含
有する別の２５０ｇ三角フラスコに移した。この７ラス
；を回転振とり機上において５１’Ｃで培養した。すべ
てのフラスコを５０鵡直径行程を有する２　５０　ｒｅ
ｖ　７分で振とうした。

４日間の培養後、各肉汁の１０ｊｌＪ？試料を１２５０
１で４５分間、遠心分離しついで以下のように処理した
。上澄みを除去し、はレットを再びメタノール中１ｃＩ
！！濁させてｊＱｍを得た。この懸濁液を激しく振とう
しそして時々混合させながら１時間放置した。ついでこ
の懸濁液を１０，０００　　　・Ｉで５分間遠心分離し
ついで上澄みをｈｐｌｃ（８５０Ｄ８−２．１０（ＭＩ
Ｘ　４．６ｗＬ、　７０％ＣＨ３ＣＮ１０．　Ｉ　ＭＮ
Ｈ４Ｈ２ＰＯ４）によ部分析した。ピークは２４６ｎｍ
において調べられた。

ｈｐｌｃによる分析は各場合において７アクターＡ、Ｂ
５ＣＴｈよびＤの存在を示した。

実施例　９ ７アクターＡＳＢＳＣ，Ｄ、ＥおよびＦは以下の特性を
有することが見出された。

１）それらは炭素、水素および酸素だけを含有する。

ｉ）７アクターＡ、Ｂ、ＣＳＤ、ＥおよびＦの電子衝撃
（Ｆ：、１．）質量分光法は以下の結果を与えた。

Ａ　　　　　６１２．５７　　　　　　Ｃｓ６Ｈｓ２０
ｓＢ　　　　　５９Ｂ、５５　　　　　　Ｃｓ５Ｈｓａ
ＯａＣ５８４，３４Ｃ５４Ｈ４８０８ Ｄ　　　　　５９　Ｂ、３５　　　　　　Ｃ３ｓＨｓｏ
ＯｓＥ　　　　　６１２．５６５８　　　　Ｃｓ６Ｈ５
２０８Ｆ　　　　　６２６．３８０７　　　　Ｃ５７Ｈ
５４０８高速原子衝撃（ＦＤ）質量分光法は以下の結果
を与えた。

Ａ　　　ｇ／Ｚ　６３５ＣＭ＋Ｎａ）”　　Ｍｙ／Ｚ　
６１１　（Ｍ−Ｈ〕−６１２１６１５［Ｍ＋Ｈ］“ Ｂ　　　　　１１４／Ｚ　　６９１ＣＭ＋Ｈ＋ｎＪ　　
　　　　　　　　　　　　　　　５９８セロール〕＋ ７アクター　　＋ｖｅ　　ＦＡＢ　　　　　　　　−ｖ
ｅ　　ＦＡＢ　　　分子量Ｂ　　　ＩＺ　５９９（Ｍ＋
Ｈ］＋ Ｍ／Ｚ　５８１　（ＭＥｆ−Ｈ２Ｏ３”Ｖｚ５６３［”
ＪＪ（−２Ｈ２０）” Ｃｇ／Ｚ　６０７ＣＭ＋Ｎａ）”　　　ｈ４５８３（Ｍ
−Ｈ）−５８４Ｄ　　　ＶＺ　６２１　ＣＭ＋Ｎａ：ｌ
”　　Ｖｚ　５９２（Ｍ−Ｈ）−５９８７アクターＥの
電場脱着質量分光法では以下の結果ＩＺ　６１２Ｍ＋が
得られそしてファクターＦのそれではＭ／Ｚ　６２６Ｍ
＋の結果が得られた。

正確な質量測定に関する７アクターＡのＥ、工。

スハクトルは６１２３７　Ｃ５６Ｈ５２ＯＢ＋　４ＭＪ
Ｉ　Ｃ３０Ｈ４２０４ｉ４４８３０　Ｃ３０Ｈ４００５
ｉ　４２５２５　Ｃ２６Ｈ５ｓ０５ｉ　５５４２２　Ｃ
２３Ｈ３ｏＯ３ｉ２９７．２２　Ｃ２１Ｈ２９０ｉ　２
７８．１１０１５Ｈ１ｓＯｓｉ　２４７．１７　ＣｕＨ
ｚｓＯ２ｉ２１９．１８　Ｃ１５Ｈ２３０；９５Ｄ５　
Ｃ６Ｈ７０においてイオンを与えた。

正確な質量測定に関する７アクターＢ　（Ｄ　Ｅ、工。

スはストロは５９８３５　Ｃ５５Ｈ５００６ｉ　４３８
２８　ｃ２８Ｈ５８ｏ４ｉ４２Ｌ！６　Ｃ２８Ｈ３６０
５ｉ　３１４．１９　Ｃ２５Ｈ２６０５ｉ　２４８．１
４　Ｃ１５Ｈ２００５；１５１．０８　Ｃ９Ｈ１１０２
においてイオンを与えた。

正確な質量測定に関するファクターＣのＥ、Ｉ。

スはクトルは５８４ｊ４　Ｃ５４Ｈ４ＢＯ６ｊ　５６６
．５５　Ｃ５４Ｈ４６０７＋４３８、？８０２ｓＨ５ｓ
０４Ｋ　オイテイオｙを与エタ。

正確な質量測定に関するファクターＤのＢ、Ｉ。

スペクトルは５９８．３５　ｃ５５Ｈ５０ｏｅ＋　４５
Ｌ２９　Ｃ２９Ｈ４ｏ０４ｉ４５４２８　ｃ２９Ｈｇ８
ｏ５においてイオンを与えた。

Ｅ、１．イオン化法におけるファクターＥの正確な質量
測定では４５２２９０８　Ｃ２，Ｈ４ｏＯ４においてそ
してファクターＦのそれでは４６６３０６７　Ｃ３０Ｈ
２４０４においてイオンが得られた。

１ｉｉ）　　７ア４クターＡＳＢＳＣＳＤ、ＥおよびＦ
はブロモホルム中において特有のＩＨスはクトルを有し
、以下のピークを包含する。

ファクター人の場合には約３５１０（ＯＨ）、１７１２
（エステル）および９９　Ｅｌ）？！　　（Ｃ−０）に
おいて、７アク／−Ｂ（Ｄ場合には約３５１０（ＯＨ）
、１７１ａ（エステル）および９９６濡−’（ｃ−ｏ）
　４ｃおいて、ファクターＣの場合には約３５１０（Ｏ
Ｈ）、１７１２（エステル）および９９６傷−’（ｃ−
ｏ）において、ファクターＤの場合には約３５０８（Ｏ
Ｈ）、１７１１（エステル）および９９６ａｌｒ’　（
Ｃ−０）　Ｋ　オ？　テ、７アクｐ−ｍｏ場合には約５
５００（ＯＨ）、１７０８（エステル）および９９４（
ＩＩ−’　（Ｃ−０）　において、そして ７アクターＦの場合には約３５００（ＯＨ）、１７０８
（エステル）および９９７Ｑｓ−’（Ｃ−０）　ニオイ
テピークを包含する。

ファクターＡ、Ｂ５Ｃ５ＤＳＥ！および？に関する全ス
ペクトルはそれぞれ添付図面の第１．２．３．４．６お
よび７図゛に示されている。

１Ｖ）７７クターＡ、Ｂ、Ｃ５ＤＳＥおよびＦはメタノ
ール（Ｃ＝０．００２％）中において石スにクトルを有
し、結果は次のとお）である（ことで工＝屈折そしてＭ
＝最大値を意味する）。

Ａ　　　２５２　（１）　３１８　　　　　Ｄ　　　２
５２　（Ｉ）　２６３２４４５（ロ）４６８　　　　　
　２４４．５（ロ）３９３２３９　（Ｉ）　４５０　　
　　　　２５９　（Ｉ）　５６２Ｂ　　　２５２　（Ｉ
）３０２　　　　”Ｅ　　　２５２　（Ｉ）２６５２４
４ｓ（ロ）４２６　　　　　　２４４（ロ）４０２２５
９　（Ｉ）３９４　　　　　　２３８　（ロ）３７３Ｃ
２５２（１）５１５　　　　”Ｆ’　　　２５２　（Ｉ
）２８５２４４．５（ロ）４７０　　　　　　２４４５
（ロ）４２１２３９　（Ｉ）４３２′２３９　（Ｍ）３
８９（％メタノールｃ＝０．００１チ） 上記λｍａＸ値は各ファイターの特徴を示し、Ｅ、値は
得られた際の物質の純度を示している点に注目されたい
。しかしながらＣ値の割合は化合物それ自体の特徴を示
すものである。

■）シュウテロ−クロロホルム中の各７アクター溶液の
２００　ＭＥｉＺプロトンｎｍｒスペクトルは以下の記
載のおよその値に集中されるシグナル〔（）内に多重度
、結合定数（ａＺ　）および積分値を有するｒ値〕を包
含する。

ファクターＡ　：　４．１〜４．４（ｍｅ２Ｈ）、４６
１（広いａ、ＩＨ）、４．６〜４．７５（ｍ、２Ｈ）、
４．８１（１，９，１Ｈ）、５．０５（ｍ、ＩＨ）、５
．３４（ｓ。

２Ｈ）、５．６９（ａ、５．１Ｈ）、４（Ｍ（ａ、５．
ＩＨ）Ｓ６．１７（ｍ、ｆＨ）。

４２６（ｄ、１１．ＩＩ（χ４３７（ｍ、ＩＨχ４４６
（ｄ、１０．ＩＨＸ＆７４（ｑ、２．ＩＨχ７．４２（
ｍ、ＩＨχ７．７〜７．９（ｍ、５Ｈ）、　８．１４（
ｇｊＨχ８ＡＯ（ａ、５Ｈ入８Ａ７（ｇｊＨχ８．＋５
１（ｔ、ｔｌ、ＩＨχａ９５（ｄ。

７．６Ｈχ９．０６（ａ、７，５Ｈχ９．０２（ｄ、７
，５Ｈ）、　９．１３（ｑ、１１　。

１Ｈχ９．２１　（ｄ　、　７．５Ｈ）。

ファクターＢ　：　４．２〜４．４（ｍ、２Ｈ入４５５
（ｑ、７．１Ｈ入４．６５（幅広いｓ、ＩＨＸ４６〜４
．８（ｍ、２Ｈχ５．０６（ｍ、ＩＨχ５．５〜５５（
ｍ、２Ｈ）、　６．０１　（ｄ５．　ＩＨ入６．０７（
ｄ、５．ＩＨＸ４１２（ｓ、ＩＨ入６．２４（ｄ、１１
　、ＩＨ）、６．２４（ｍ、ＩＨ入６．５〜６．５　（
ｍ　、　２Ｈχ６５３（ｓ、３Ｈχ６．７３（ｑ、２．
１ａχ７．６２（ｍ、ＩＨχ７．６〜８．０　（ｍ　、
ａ）。

８２２（ｓ、３Ｈχ８．５５（ｄ　、　７　、５Ｈ″）
Ｓ８．４１（ｓ、３Ｈχａ４９（Ｓ。

３Ｈ）、　８．６２（ｔ、１１　、ＩＨχ９．０！（ｄ
、６．！Ｈχ９．１２（ｑ、１１゜１Ｈχ９．２２（ｄ
、７，５Ｈ）。

７アクターＣ：　４．２９（ｄ、１１．ｔ、２．ＩＨχ
４．４〜４．６　（ｍ　、　５Ｈ）。

４．５６　（＠広いｓ、ＩＨ’）、　５．１４（ｄｄ、
１５，１０．ＩＨ）Ｓ５．２３（ｍ。

１Ｈχ５．６５　（幅広いｓ、２Ｈ）、　５．７２（ｄ
、６．ＩＨχ５．９５（ｄ、１０゜１Ｈχ５．９９（ｄ
、５．１Ｈ″）Ｓ６．０８（幅広いｓ、１）！χ６．１
〜４４（ｍ。

５Ｈ）Ｓ６．６２（ｑ、５ＡＨχ７．７〜８．１　（ｍ
　ｌ約７Ｈχ８．１８　（ａ　、　５Ｅχ８．３３（ｓ
、３Ｈ）Ｓ８．４８（ｄ、７．３Ｈχ８．６４（ｓ、３
Ｈ）、　８．６８（ｔ。

１１、ＩＨχ９．００（ｄ、７．３Ｈχ９．０８（ｄ、
７．５Ｈ又９．１２（ｑ、１２゜ＩＨ）。

ファクターＤ　：　４．１８〜４．４（ｍ、　２Ｈ）、
　４．４７〜４．８１　（ｍ、　４Ｈ）。

５．０４（ｍ、　ＩＨ）、　５．３５（ｓ　、　２Ｈ）
、　５．７２（ｄ、　７　、　ＩＨ）、　６．０７（ｄ
、　７　。

１Ｈχ６．１５〜６．４５（ｍ、４Ｈ）、　４７４（ｑ
、４．ＩＨχ７．４５〜８．１　（ｍ。

８Ｈχ８．１６　（ｓ　、　５Ｈ″）Ｓ８．４１（ｓ、
３Ｈχ８．４９（ｓ、３Ｈχ８．６２（ｔ。

１１．１Ｈ′）Ｓ８．９２〜９．０５（ｍ、６Ｈ）、　
９．２１（ｄ、７．３Ｈ）。

ファクターＥ：　４．１〜４３　（ｍ　、　２Ｈ′）Ｓ
４．５〜４．８　（ｍ　、　４！全体Ｘ５．０４（ｍ、
ＩＨ）、　５２〜５．５（ｍ、２Ｈ）、　６．０１　（
ｄ、５，１Ｈ）、６．０５　（ｄ。

５．１Ｈ）、　６．１１　（ｓ、ＩＨ）、　６．１〜６
．４（ｍ、３Ｈ）、６．４５（ｄ、　１０．ＩＨ）、６
．５１　（ｓ　、　３Ｈ）、　６．７０（ｑ　、　２．
　ＩＨ）、　７．６０（ｍ、　ＩＨ）、８．２０（ｓ。

５Ｈ）Ｓ８．４１　（ｇ　、　３Ｈ）Ｓ８．４７（ｓ　
、　５Ｈ″）Ｓ８．６０（ｔ、１１１Ｈ入９．００（ｔ
、７．３Ｈ）、　９．０２（ｄ、６．ＡＨ入９．１１（
ｑ、１１　、ＩＨ）、９．２０（ｄ。

７．３Ｈ）。

ファクターＦ　：　４．２〜４．４（ｍ、　２Ｈ）、４
．６２（ｓ、ＩＨ）、約４．７０（ｍ。

２Ｈχ４．８０（ｄ、９．１Ｈ′）Ｓ５．０４（ｍ、Ｉ
Ｈχ５．２〜５．５　（ｍ　、　２Ｈ）、５．９９（ｄ
、５．ＩＨ）、６．０５（ｄ、５．ＩＨ）、　６．１１
（ｓ、ＩＨ′）Ｓ６．１〜６５（ｍ、）Ｈ入約６．５６
（ｍ、１Ｈ）Ｓ６．４５Ｃｃｉ、１０．ＩＨ入４５１（
ｓ。

３Ｈχ６．７０（ｑ　、　２．　ＩＨ）Ｓ７．４２（ｍ
、　ＩＨ′）Ｓ７．５８（ｍ、　ＩＨχ８．１９（ｓ、
５Ｈχ８．４０　（ｓ　、　５Ｈχ８，４７（ｓ、！Ｈ
′）Ｓ８．６０（ｔ、１１　、ＩＨ又８．９５（ｄ、７
，３Ｈ）、９．０５（ｄ、７．３Ｈ入９．０１（ｄ、７
．３Ｈ又９１０（（１，１１，１１り、　９．２１　（
ｄ、６．５Ｈ）。

ｖｔ）　　ジエウテロークロロホルム中の各ファクター
溶液のノイズ−減結合された（ｎｏｆｓｅ−ｄｅｃｏｕ
ｐｌｅｄ）２５．０５ＭＨｚカーボンー１３　ｎｍｒス
ペクトルは以下の記載のおよその値にあるピーク〔０内
に共鳴外スはクトル（ｏｆｆ−ｒｅｓｏｎａｎｃｅ　ｓ
ｐｅｃｔｒｕｍ）中のシグナルの多重度が示されたで値
〕を包含する。

７アクターＡ　：　１７に２（８入１４２．６（ｄ）、
１５９．２＜８入１３７．６（ａ′）Ｓ１３７１（ｓχ
１３７．０（ｄχ１３０．４（ａχ１２Ｌ１　（ｄ）、
　１２ＣＬ１（ｄ％　１１７．８（ｄ）、　９９．５（
ａ′）Ｓ８０．０（ｓ）、７９．０（ｄ）、　７＆５（
ｄχ６９．０（ｄχ６８．！ｆ、　６１４（ｄ）、　４
８．２（ｔ）、４５．５　（ｄχ４０．９　（ｔχ４邸
（ｔ　）、　５５ＪＰ、　３４．５　（ｔχ２２．１（
ｑ）、３４．５（ｔ、χ２６．６（ｄχ２ｕ（Ｑ）、　
２２．０（ｑ）、　１９．７（ｑχ１５３（ｑχ１５．
７（ｑχ１０．８（ｑ）。

ファクターＢ　：　１７！Ａ、４（ｓ）Ｓ１４２．１（
ｄχ１５９．５（５′）Ｓ１！１７．１（ｓ）、１５５
．７（ｓ）、　１３３．７（ｓχ１２５．６（ｄχ１２
５．５（ｄ’）、　１２０Ｄ（ｄχ１１９．３（ｄχ１
１８．２（ｄ）、　９９．５（ｓχ８０．１（ｓ）、７
１３（低７６．６（ｄ入７６．４（ｄ）、　＋５９．０
（ｄχ６８．３　（ｄχ６１へ６１式％式％ ｔ５９．２（ｄ入６ｐ、ｏ（ａ′）Ｓ６ｓ、式６８．０
（ｄ）、６７．９（ｄ入４Ｂ、６（ｔ、又４６．３（ｄ
χ４１．４（ｔχ３＆代３６式５６．１（ｄ）、　５５
．０（ｔ）。

２２ｊ（ｑ）、２α０（ｑ）、　１５．４（ｑχ１４．
３（ｑ）、１５．１（ｑχ１０．８（ｑ）。

ファクターＤ　：　１７′５．２（ｓ）、　１４′２３
（ｄ）、　１３９．１（ｓ）、１３１５（８χ１３７．
１　（ｓ）、　１５２．１　（ｓχ１３ｔ４（ｄ）、　
１２３．１　（ｄ）、　１２０．１（ｄχ１１７：８（
ｄ）Ｓ９９．５（ｇ入７９．９（ｓ入７９．２（ｄχ７
６５（ｄ入６９．０（ｄ）、　６８．？、６ｓ、１チ、
６７、代６ｚＰ、　４ｓｘ（ｔ、χ４５．５（ｄ）、４
０．８（ｔ）、　　４０．５（ｔ）、　５５．７人３４
．５（ｔχ２２．０　（ｑ　）、　２０．６（ｉ１１９
６（ｑ入１５．３（ｑ′）Ｓ１３．７（ｑ）、　１５．
６（（１人１０．７（ｑ）。

簀多重度は不詳 （ｖｌｌ）　７アクターＡＳＢ、ＣおよびＤ（メタノー
ル中の約０．１％溶液）についての円二色性曲線が第８
図に示されている。これらの曲線はジエン発色団の吸収
と結合して２６０〜２６０ｎｍの領域において接近し肩
を並べている。これはすべて４′ｓ１のファクターにお
いてＣ２、Ｃ７、Ｃ１７およびＣ１９での絶対配置が同
一であることを示してい゛る。

以下に本発明による製剤例を記載する。以下に使用され
る「活性成分」の用語は本発明化合物を意味し、たとえ
ばファクターＡ、Ｂ、Ｃ。

ＤＸｌｌまたはＦの内の１種であることができる。

多投４量非経口の注射 チη〜　　　　範囲 活性成分　　　　　　　　４．０１〜５％η〜ベンゼル
アルコール　　　　　２．０ グリセリルトリアセテ−）　　　　！１０．０プロピレ
ングリコールを加えて１００．０％にする。

ベンジルアルコールおよびグリセリルトリアセテート中
に活性成分を溶解する。ついでこれにプロピレングリコ
ールを加えて一定容量にする。この溶液をろ過していず
れもの微粒子状汚染物を除去する。生成物を無菌状態で
注射バイアル中に入れ、アルミニウムオーバーシールに
より所定の位置に保持してゴムのシールまたは栓で閉じ
る。終シにその製剤をオートクレーブ中での加熱により
滅菌する。

エアロゾルスプレー チｗ／ｖｒ　　　　範囲 活性成分　　　　　　　（Ｌｌ　　　０．０１〜０．５
０％ψトリクロロエタン　　　　　　　２９９トリクロ
ロフルオロメタン　　３５．０ジクロ筒ジフルオロメタ
ン　　３５．０活性酸分とトリクロロエタンとを混合し
、それをエアロゾル容器中に入れる。その頭部空間をガ
ス状抛射薬でパージしついでバルブを適所まで閉める。

加圧下パルプを通して必要とされる重量の液体抛射薬を
入れる。アクチュエーターおよびダスト−キャップを取
り付ける。

錠剤 製造方法−湿潤顆粒形成 一叩一 活性成分　　　　　　　　　　　　　　２５Ｑ、０ステ
アリン酸マグネシウム　　　　　１％ｗ／ｗ　　　　　
　４．５　。

トウモロコシ澱粉　　　　　　　　　　５％Ｗ／Ｗ　　
　　　２２．５ナトリウム澱粉グリコレート　　　　２
％ｖ／ｗ　　　　　　９０ラウリリ硫酸ナトリウム　　
　　　　ｉ　％　ｗ／ｗ　　　　　　４．５微結晶性セ
ルロースを加えて４５０１ｇの錠剤芯にする。

活性成分に充分量の１０％澱粉は−ストを加えて顆粒形
成に適当な湿潤練り薬を調製する。

顆粒を調製しついでトレーまたは流動床ドライヤーを使
用して乾燥させる。これを篩にかけてよ多分けついで残
留する前記成分を加えて圧搾して錠剤にする口 必要に応じて水性または非水性のいずれかの溶媒系を使
用し、ヒドロキシプロピルメチルセルロースまたは他の
同様なフィルム形成物質を用いて錠剤芯をフィルム被覆
する。このフィルム−コーティング溶液中に可塑剤およ
び適当な着色剤を含有させてもよい。

小さな／家庭にいる動物用の獣医薬錠剤製造方法−乾燥
顆粒形成 ｆ 活性成分　　　　　　　　　　　５０．０ステアリン酸
マグネシウム　　　　　　　　　　７．５微結晶性セル
ロースを加えて７５．Ｏｑの錠剤芯重量にする。

活性成分をステアリン酸マグネシウムおよび微結晶性セ
ルロースとブレンドする。このブレンドの密度を大きく
してスラグ（ｓｌｕｇ　）にする。

これらのスラグを回転顆粒機に通して破壊し、自由流動
性錠剤を得る。これを圧搾して錠剤にする。

ついでこれらの錠剤芯は所望により前述のようにフィル
ム被覆することができる。

獣医薬の乳線内注射 活性成分　　　　　　　　　１５０１ｇ　１５０〜５ｏ
ａｐｙポリソルベート６０　　３．０％　Ｗ／Ｗ）　　
　　　３ＪＩまたはｓｙｔで白ろう（Ｗヒｔｅ　Ｂｅｅ
ｓｍｏｃ）　６．０％　Ｗ７／Ｗ〜５１１　　　５１ま
たは５Ｉまで落花生油　　　　９ｔＯ％Ｗ／Ｗ）　　　
　３＃ま憇５Ｉまで落花生油、白ろうおよびポリソルベ
ート６０を攪拌しながら１６０℃に加熱する。１６０℃
に２時間維持しついで攪拌しながら室温に冷却する。

無菌状態で活性成分をビヒクルに加えついで高速ミキサ
ーを使用して分散する。これをコロイドミルに通して精
製する。無菌状態でこの製剤を滅菌プラスチック注射器
中に入れる。

獣医薬の経口用飲薬 活性成分　　　　　　　α３５０．０５〜α５０％ｖｒ
／ｖボリンルベー）　８５　　　　　　５．０ベンジル
アル；−ル　　　　　五〇 プロピレングリコール　　　３αＯ ホス７エートパツ７アー　　６０〜６．５トシて水を加
えて１００．０％にする。

ポリソルベート８５、ベンジルアルコールおよびプロピ
レングリコール中に活性成分を溶解する。これに上記水
の一部分を加えついで必要によジホスフェートバッファ
ーで−を６０〜６．５に調整する。水を加えて最終容量
に調製する。

この製剤を飲薬用容器中に入れる。

獣医薬の経口ペースト ％　ｖ／ｗ　　　　範囲　− 活ｉ　成分７．５　　　１〜１０　％　ｖ／ｖｒサッカ
リン　　　　　２５．０ ポリソルベー）８５　　　　　　３．０ジステアリン酸
アルミニウム　　５．０分留されたヤシ油を加えて１０
０．０％にする。

分留されたヤシ油およびポリソルベート８５中にジステ
アリン酸アルミニウムを加熱によ部分散させる。これを
室温に冷却しついでその油状ビヒクル中にサッカリンを
分散させる。これに主剤の活性成分を配分する。これら
をプラスチック注射器に入れる。

飼料内投与用獣医薬のだめの顆粒 活性成分　　　　　２．５　　　　０．０５〜５％　ｗ
／ｗ石灰石粉を加えて１００．０％にする。

活性成分を石灰石粉とブレンドする。湿潤顆粒形成法を
使用して顆粒を調製する。これをトレーまたは流動床ド
ライヤーを使用して乾燥させる。これを適当な容器中に
入れる。

乳化性濃縮物 活性成分　　　　　　　　５０ＪＦ 芳香溶媒（たとえばンルベン（Ｓｏｌｖｅｓ＋ｏ　）１
００　）を加えて１７にする。

すべての成分を混合し、溶解するまで攪拌する。

顆粒 （ａ）活性成分　　　　　　　５０．Ｆ木材樹脂　　　
　　　　４１［’ 石こう顆粒（２０〜６０メツシユ）を加えてＩＫｇにす
る。（たとえばアグンルプ（Ａｇｓｏｒｂ）　１００Ａ
　）（ｂ）活性成分　　　　　　　　　　　５０１１シ
ペｏニツク（８ｙｐｅｒｏｎｉｃ）ＮＰ１３　　　　４
０．５１石こう顆粒（２０〜６０メツシユ）を加えてＩ
　Ｋｙにする。

全成分をたとえばメチレンクロライドのような揮発性溶
媒中に溶解しついでこれをミキサー中で振とうさせなが
ら顆粒に加える。ついで溶媒を除去するために乾燥させ
る。

７アクターＡＳＥＳＣ’ＳＤ、ＥおよびＦの活性は多種
の害虫およびそれらの宿主を使用して測定された。例え
ば以下のものをあげることができる。

ナト２ニクスウルチカ（Ｔｅｔｒａｎｙｃｈｕｓ　ｕｒ
ｔｉｃａｅ　）（インゲン豆およびミロバラン（Ｍｙｒ
ｏｂａｌａｎ）Ｂプラム）、ミズスズルシカ（Ｍｙｚｕ
ｓ　ｐｅｒｓｉｃａｅ　Ｘハクサイおよびハツカダイコ
ン）、へりオチスビレセンス（Ｈｅ１ｉｏｔｈｉｓ　ｖ
Ｌｒｅｓｃｅｎｓ　）　（綿）、チロボルテルス（Ｃｈ
ｉｌｏ　ｐｏｒｔｅｌｌｕｓ　）　（アブラナ豆（ｒａ
ｐｅ　ｂｅａｎ）　）、メロイドジンインコグニタ（Ｍ
ｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ　ｉｎｃｏ）ｇｎｉｔａ　）　（
ヤエナリ）、パノンシスクルミ（Ｐａｎｏｎｃｈｕｓ　
ｕｌｍｉ　）　（ミクパタンＢプラム）、ホロドンヒュ
ームリ（Ｐｈｏｒｏｄｏｎｈｕｍｕｌｉ　）　（ホップ
）、アクラコルスムサーカム７レツシスム（Ａｕｌａｃ
ｏｒｔｈｕｍ　ｃｉｒｃｕｍｆｌｅ−）　（シクラメン
）。

生成物は液体製剤の形態で使用された。これらの調剤は
生成物をアセトン中に溶解することＩｃよシ調製された
。ついでこれらの溶液を、その液体製剤が必！！濃度の
生成物を含有するまで０、１　ｉ、ｉｌｔ＆＃ｄＯ，９
１１ｉｆ％ノｆｉ潤剤ｔ−含有する水で希釈した。□ 各害虫に関して採用され九試験法は通常宿主植物である
媒質上に多数の害虫を支持しついでその媒質を製剤で処
理することからなった（残留試験）。テトラニシスウル
チ力の場合には害虫と媒質の両方が製剤で処理された（
接触試験）。

この操作にしたがってファクターＡ−Ｆは５００　ｐｐ
ｍまたはそれ以下の濃度（生成物の重量での）で有効で
あることが見出された。

牛肺虫（Ｄｉｃｔｙｏｃａｕｌｕｓ　ｖｉｖｉｐａｒｕ
ｓ　）に感染した仔牛に対する本発明化合物の効力を測
定した。

仔牛に牛肺虫な感染させそして次に感染２３日後に本発
明化合物で１回（２００μｔＡｐ　）処理した。

感染２９日後に動物を殺しそして虫負荷数を数えた。従
って、例えばこの操作に従えば因子Ａ、Ｂ、　Ｃおよび
Ｄは牛肺虫を排除した。

毒性 一般に本発明化合物は生理学的に活性な量で無毒性であ
る。従って、例えば因子Ａ％Ｂ、　ＣおよびＤはＣＲＨ
系マウスで試験した場合にすべて少くとも２５ａｇｈの
ＬＤ５Ｑ値を有した。

【図面の簡単な説明】

第１図、第２図、第３図、第４図、第６図および第７図
はそれぞれファクターＡ、　Ｂ、　Ｃ，Ｄ。 ＥおよびＦについてのＩＲスペクトルを示し、第５図は
実施例４で得られる化合物のＸ−線結晶学により決定さ
れた構造を示し、そして第８図はファクターＡ、　Ｂ、
　ＣおよびＤについての円二色性曲線を示す。 特許出願人　　グラクツ・グループ・リミテッド外２名 透過率（％）　　　　　　透過率（％）透過！　Ｃ％）
　　　　　　　透過率（ｙ−）ＦＩＧ、　５

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）部分式（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） を有する化合物。 ２）部分式（II） ▲数式、化学式、表等があります▼（II） を有する特許請求の範囲第１項記載の化合物。 ３）一般式（III） ▲数式、化学式、表等があります▼（III） （式中、 Ｒ＾１はメチル、エチルまたはイソプロピル基であり、 Ｒ＾２は水素またはメチル基である。） を有する特許請求の範囲第２項記載の化合物。 ４）実質的に純粋な形態または実質的に他のマクロライ
   ド化合物を含まない状態の特許請求の範囲第１項記載の
   化合物。 ５）混合物としての特許請求の範囲第３項記載の化合物
   、あるいはＲ＾２が水素である混合物としての該化合物
   またはＲ＾２がメチル基である混合物としての該化合物
   。 ６）特許請求の範囲第１項記載の化合物の少なくとも１
   種と１種またはそれ以上の担体および／または賦形剤と
   を、必要に応じ、１種またはそれ以上の表面活性剤、抗
   ケーキング剤、あわ止め剤、粘度調整剤、結合剤、接着
   剤、肥料、安定剤またはその他の添加物もしくは活性成
   分と共に含有する例えば農業、園芸または森林における
   害虫駆除に用いるための組成物。 ７）特許請求の範囲第１項記載の化合物の少なくとも１
   種を含有する発酵ブロス全体の固体、該ブロスから分離
   したそのままのまたは溶解させた菌糸体、あるいはその
   ままのまたは溶解させた菌糸体を分離した後の該ブロス
   の固体を含む特許請求の範囲第６項記載の組成物。 ８）特許請求の範囲第１項記載の化合物の少なくとも１
   種を１種以上の担体または賦形剤と共に含有するヒトま
   たは獣医学用薬剤に用いるための組成物。 ９）少なくとも５０％の純度を有する特許請求の範囲第
   ３項記載の化合物の１種以上を含有し、非経口（乳房内
   を含む）、経口、直腸、局所または移殖投与用に好適な
   形態の獣医学用薬剤に用いるための特許請求の範囲第８
   項記載の組成物。 １０）Ｒ＾１がイソプロピル基でありかつＲ＾２が水素
   であるか、またはＲ＾１がメチル基でありかつＲ＾２が
   水素である特許請求の範囲第３項記載の化合物を含有す
   る特許請求の範囲第６項または第８項記載の組成物。 １１）特許請求の範囲第１項記載の化合物の製造方法で
   あつて、ストレプトミセス属の微生物（例えばストレプ
   トミセス・サーモアルケンシス種の微生物、例えばスト
   レプトミセス・サーモアルケンシスＮＣＩＢ　１２０１
   ５またはその突然変異体）を培養して該化合物を製造す
   る工程、および所望に応じ次いで発酵ブロスから特許請
   求の範囲第１項記載の化合物の少なくとも１種を分離す
   ることからなる方法。 １２）微生物の菌糸体を水混和性溶剤と接触せしめるこ
   とにより菌糸体から特許請求の範囲第１項記載の化合物
   の１種以上を抽出する特許請求の範囲第１１項記載の方
   法。 １５）ストレプトミセス・サーモアルケンシス種の微生
   物、特にストレプトミセス・サーモアルケンシスＮＣＩ
   Ｂ　１２０１５およびその突然変異体、ならびにストレ
   プトミセス・サーモアルケンシスＮＣＩＢ　１２１１１
   、ＮＣＩＢ　１２１１２、ＮＣＩＢ　１２１１３および
   ＮＣＩＢ　１２１１４およびそれらの突然変異体。 １４）感染または侵襲をおこす寄生生物またはその他の
   害虫または真菌またはその他の生物あるいはそれらの存
   在する場所に有効量の特許請求の範囲第１項記載の化合
   物または特許請求の範囲第６項記載の組成物を適用する
   ことからなる感染または侵襲を抑制する方法。