ES3034016T3 - Methods of treating hemophilia a - Google Patents

Methods of treating hemophilia a

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ES3034016T3
ES3034016T3 ES19732781T ES19732781T ES3034016T3 ES 3034016 T3 ES3034016 T3 ES 3034016T3 ES 19732781 T ES19732781 T ES 19732781T ES 19732781 T ES19732781 T ES 19732781T ES 3034016 T3 ES3034016 T3 ES 3034016T3
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Kara Rice
Dan Rudin
Chhabra Ekta Seth
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Abstract

La presente divulgación proporciona un método para tratar la hemofilia A en un sujeto humano que lo necesita, que comprende administrar al sujeto un polipéptido quimérico que comprende (i) una proteína del factor VIII (FVIII) y (ii) un fragmento del factor de von Willebrand (VWF) que comprende un dominio D' del VWF y un dominio D3 del VWF en un intervalo de dosificación. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Métodos de tratamiento de la hemofilia A
a n t e c e d e n t e s d e la d e s c r ip c ió n
La hemofilia A es un trastorno hemorrágioo causado por defectos en el gen que codifica el factor VIII de coagulación (FVIII) y afecta a 1-2 de cada 10000 nacimientos de varones. Graw et al.,Nat. Rev. Genet.6(6): 488-501 (2005). Los pacientes afectados de hemofilia A se pueden tratar con infusiones de FVIII purificado o producido de forma recombinante. Se sabe que muchos productos de FVIII disponibles en el mercado tienen una vida media de aproximadamente 8-12 horas, lo que requiere una administración intravenosa frecuente a los pacientes. Véase Weiner M.A. y Cairo, M.S.,Pediatric Hematology Secrets, Lee, M.T., 12. Disorders of Coagulation, Elsevier Health Sciences, 2001; Lillicrap, D.Thromb. Res.122 Supl. 4: S2-8 (2008). Además, se han probado una serie de procedimientos con el fin de prolongar la vida media del FVIII. Por ejemplo, los procedimientos en desarrollo para prolongar la vida media de los factores de coagulación incluyen pegilación, glicopegilación y conjugación con albúmina. Véase Dumont y col.,Blood.119(13): 3024-3030 (2012). Se han demostrado resultados compatibles en seres humanos, por ejemplo, se describió que rFVIIIFc mejora la vida media hasta ~1.7 veces en comparación con ADVATE® en pacientes con hemofilia A. Véase Powell et al.,Blood.119(13): 3031-3037 (2012). Por lo tanto, los aumentos de la vida media, a pesar de mejoras poco importantes, indican la presencia de otros factores limitantes de la vida media. Véase, Liu, T. et al., Congreso de ISTH 2007, resumen Núm. P-M-035; Henrik, A. et al., Congreso de ISTH 2011, resumen Núm. P=MO-181; Liu, T. et al., Congreso de ISTH 2011 resumen Núm. P-WE-131.
El tratamiento de referencia recomendado actualmente implica la administración regular (profilaxis de rutina) de FVIII para minimizar el número de episodios hemorrágicos. La profilaxis de rutina se ha asociado con mejoras en los resultados a largo plazo, pero es un régimen exigente limitado por la necesidad de la administración intravenosa (IV) frecuente. Véase Manco-Johnson et al.,N Engl J Med.357(6):535-44 (2007). Los productos de FVIII de vida media prolongada han reducido la frecuencia de administración de FVIII para la profilaxis; sin embargo, todos interaccionan con el factor de von Willebrand (VWF) y tienen una vida media en la circulación comparables, de acuerdo con un límite superior en la vida media de las variantes del rFVIII debido a la vida media del VWF endógeno. Véase, p. ej., Pipe et al.,Blood.128(16):2007-16 (2016). La dosis profiláctica de estos productos de FVIII es cada 3 a 5 días. El documento WO 2015/106052 A1 describe una proteína del FVIII quimérica y sus dosis generales en el intervalo de 0,1 a 100.000 pg/kg de peso corporal.
Los productos de FVIII de vida media prolongada de próxima generación que previenen y controlan los episodios hemorrágicos durante periodos de tiempo más prolongados, lo que da como resultado una administración menos frecuente, podrían abordar los desafíos de la observancia a los regímenes profilácticos exigentes, lo que a su vez podría mejorar la calidad de vida para los pacientes con hemofilia.
b r e v e s u m a r io DE la d e s c r ip c ió n
La invención se expone en las reivindicaciones adjuntas. Específicamente, la presente invención proporciona un polipéptido quimérico que comprende (i) una proteína del factor VIII (FVIII) que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 207, y (ii) una proteína del factor de von Willebrand (VWF) con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 202, para uso en el tratamiento de la hemofilia A en un sujeto humano que lo necesite, en la que el polipéptido quimérico se administra por vía intravenosa en dosis múltiples de 45 UI/kg a 55 UI/kg, y el intervalo de dosificación es al menos 7 días, en la que la proteína FVIII está asociada a la proteína VWF mediante un enlace covalente.
En algunas modalidades, las dosis múltiples comprenden al menos dos dosis, al menos tres dosis, al menos cuatro dosis, al menos cinco dosis, al menos seis dosis, al menos siete dosis, al menos ocho dosis, al menos nueve dosis, al menos diez dosis, al menos once dosis, al menos doce dosis, al menos trece dosis, al menos catorce dosis, al menos quince dosis, al menos dieciséis dosis, al menos diecisiete dosis, al menos dieciocho dosis, al menos diecinueve dosis, al menos veinte dosis o más.
En algunas modalidades, el tratamiento de la hemofilia A comprende controlar o disminuir la incidencia o frecuencia de un episodio hemorrágico en un sujeto humano que lo necesite. En algunas modalidades, el tratamiento de la hemofilia A comprende prevenir o tratar un episodio hemorrágico en un sujeto humano que lo necesite.
En algunas modalidades, al menos una de las dosis múltiples es de aproximadamente 50 UI/kg.
En algunas modalidades, e l intervalo de dosificación es de al menos 7 días, al menos aproximadamente 8 días, al menos aproximadamente 9 días, al menos aproximadamente 10 días, al menos aproximadamente 11 días, al menos aproximadamente 12 días, al menos aproximadamente 13 días, al menos aproximadamente 14 días, al menos aproximadamente 15 días, al menos aproximadamente 16 días, al menos aproximadamente 17 días, al menos aproximadamente 18 días, al menos aproximadamente 19 días, al menos aproximadamente 20 días, menos aproximadamente 21 días, al menos aproximadamente 22 días, al menos aproximadamente 23 días, menos aproximadamente 24 días, al menos aproximadamente 25 días, al menos aproximadamente 26 días, menos aproximadamente 27 días, al menos aproximadamente 28 días, al menos aproximadamente 29 días, menos aproximadamente 30 días<o>al menos aproximadamente 31 días.
En algunas modalidades, la frecuencia de dosificación es una vez por semana, una vez cada 2 semanas, una vez cada 3 semanas o una vez cada 4 semanas,
En algunas modalidades, el polipéptido quimérico se administra para tratamiento profiláctico,
En algunas modalidades, el enlace covalente es un enlace peptídico o un enlace disulfuro,
En algunas modalidades, la proteína del FVIII y el fragmento del VWF están asociados entre sí a través de un enlace covalente entre el primer dominio Fc y el segundo dominio Fc, En algunas modalidades, la proteína del FVIII y el fragmento del VWF están además asociados entre sí a través de una interacción no covalente entre la proteína de FVIII y el fragmento del VWF,
El polipéptido quimérico para uso según la presente invención comprende según una modalidad: (i) una proteína del FVIII que comprende un primer fragmento de polipéptido del FVIII que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 215; una primera secuencia XTEN que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 218 (AE288_3); un segundo fragmento de polipéptido del FVIII que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 216; y una primera región Fc que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 217; y (ii) una proteína del VWF que comprende: un dominio D' del VWF que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 210; un dominio D3 del VWF que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 214; una segunda secuencia XTEN que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 58 (AE144_5A); un conector a2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 88; y una segunda región Fc que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 217, y en donde la primera región Fc está unida covalentemente a la segunda región Fc por un enlace disulfuro,
El polipéptido quimérico comprende una proteína del FVIII que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 207; y una proteína del VWF que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 202,
Según la invención, el polipéptido quimérico se administra mediante inyección intervanosa,
En algunas modalidades, el polipéptido quimérico después de la administración da como resultado un nivel de actividad plasmática de FVIII de al menos aproximadamente 1%, al menos aproximadamente 2%, al menos aproximadamente 3%, al menos aproximadamente 4%, al menos aproximadamente 5%, al menos aproximadamente 6%, al menos aproximadamente 7%, al menos aproximadamente 8%, al menos aproximadamente 9% o al menos aproximadamente 10%, En algunas modalidades, el nivel de actividad plasmática de FVIII es al menos aproximadamente 3%, En algunas modalidades, el nivel de actividad plasmática de FVIII es al menos aproximadamente 5%,
En algunas modalidades, el polipéptido quimérico después de la administración da como resultado un nivel de actividad plasmática de FVIII de al menos aproximadamente 1 UI/dl, al menos aproximadamente 2 UI/dl, al menos aproximadamente 3 UI/dl, al menos aproximadamente 4 UI/dl, al menos aproximadamente 5 UI/dl, al menos aproximadamente 6 UI/dl, al menos aproximadamente 7 UI/dl, al menos aproximadamente 8 UI/dl, al menos aproximadamente 9 UI/dl o al menos aproximadamente 10 UI/dl, En algunas modalidades, el nivel de actividad plasmática de FVIII es al menos aproximadamente 3 UI/dl, En algunas modalidades, el nivel de actividad plasmática de FVIII es al menos aproximadamente 5 UI/dl,
En algunas modalidades, el nivel de actividad plasmática de FVIII es al menos aproximadamente 10 UI/dl al menos aproximadamente 5 días después de la administración del polipéptido quimérico, En algunas modalidades, el nivel de actividad plasmática de FVIII es al menos aproximadamente 5 UI/dl al menos aproximadamente 7 días después de la administración del polipéptido quimérico, En algunas modalidades, el nivel de actividad plasmática de FVIII es al menos aproximadamente 3 UI/dl al menos aproximadamente 8 días después de la administración del polipéptido quimérico, En algunas modalidades, el nivel de actividad plasmática de FVIII es al menos aproximadamente 1 UI/dl al menos aproximadamente 10 días después de la administración del polipéptido quimérico,
En algunas modalidades, las dosis múltiples son de aproximadamente 50 UI/kg, y el intervalo de dosificación es de 7 días, En algunas modalidades, las dosis múltiples son de aproximadamente 50 UI/kg, y el intervalo de dosificación es de aproximadamente 14 días,
En algunas modalidades, al menos una de las dosis múltiples es de aproximadamente 50 UI/kg a aproximadamente 65 UI/kg, y el intervalo de dosificación es de aproximadamente 10 días,
En algunas modalidades, el intervalo de dosificación es de 7 días a aproximadamente 14 días, En algunas modalidades, el intervalo de dosificación es de al menos aproximadamente 10 días, En algunas modalidades, el intervalo de dosificación es de aproximadamente 10 días a aproximadamente 21 días, En algunas modalidades, el intervalo de dosificación es de aproximadamente 14 días a aproximadamente 21 días, En algunas modalidades, el intervalo de dosificación es aproximadamente 14 días,
En algunas modalidades, el sujeto humano es una mujer. En algunas modalidades, el sujeto humano es un niño. En algunas modalidades, el sujeto humano es un niño de menos de o igual a aproximadamente 12 años, menos de aproximadamente 11 años, menos de aproximadamente 10 años, menos de aproximadamente 9 años, menos de aproximadamente 8 años, menos de aproximadamente 7 años, menos de aproximadamente 6 años, menos de aproximadamente 5 años, menos de aproximadamente 4 años, menos de aproximadamente 3 años, menos de aproximadamente 2 años o menos de aproximadamente 1 año.
En algunas modalidades, la administración induce inmunotolerancia al FVIII en el sujeto humano. En algunas modalidades, la administración reduce una respuesta inmunitaria inhibidora contra el FVIII en el sujeto humano. En algunas modalidades, la respuesta inmunitaria inhibidora contra el FVIII comprende un título alto de anticuerpos anti-FVIII en el sujeto humano.
En algunas modalidades, la administración del polipéptido quimérico no induce inhibidor del FVIII después de aproximadamente 7 días, aproximadamente 10 días, aproximadamente 11 días, aproximadamente 12 días, aproximadamente 13 días, aproximadamente 14 días, aproximadamente 15 días, aproximadamente 20 días, aproximadamente 24 días, aproximadamente 25 días, aproximadamente 28 días, aproximadamente 30 días o aproximadamente 35 días de la administración. En algunas modalidades, la administración del polipéptido quimérico no induce inhibidor del FVIII después de aproximadamente 28 días de la administración. Otros aspectos y modalidades se describirán en las reivindicaciones adjuntas.
b r e v e d e s c r ip c ió n de l o s d ib u j o s / f ig u r a s
La figura 1 es una representación esquemática de rFVIIIFc-VWF-XTEN. FVIII: factor VIII; VWF: factor de von Willebrand; A1, A2, A3, C1, C2: dominios de FVIII; D'D3: dominios de VWF; Fc: región Fc de la región constante de inmunoglobulina.
Las figuras 2A y 2B muestran el protocolo para ensayar la seguridad y eficacia de rFVIIIFc-VWF-XTEN en pacientes humanos en una cohorte de dosis baja a la que se administraban 25 UI/kg de rFVIIIFc-VWF-XTEN (Figura 2A) y una cohorte de dosis alta a la que se administraban 65 UI/kg de rFVIIIFc-VWF-XTEN (Figura 2B).
Las figuras 3A a 3B son representaciones gráficas de los niveles de actividad de FVIII corregidos respecto a la línea base, basados en un ensayo de tiempo parcial de tromboplastina activada (aPTT) en sujetos humanos con hemofilia A grave a los que se les administraba 25 UI/kg de rFVIII seguido de un periodo de lavado y después 25 UI/kg de rFVIIIFc-VWF-XTEN (Figura 3A; cohorte de dosis baja) o 65 UI/kg de rFVIII seguido de un periodo de lavado y después 65 UI/kg de rFVIIIFc-VWF-XTEN (Figura 3B; cohorte de dosis alta). Las líneas discontinuas horizontales indican actividad de FVIII de 3%, 5%, 10% y 20%.
La figura 4 es una representación esquemática del diseño de un estudio clínico para evaluar la seguridad y tolerabilidad de un total de cuatro dosis una vez por semana de rFVIIIFc-VWF-XTEN con una dosis de 50 UI/kg o 65 UI/kg en pacientes tratados previamente (PTP), varones adultos, de 18 a 65 años (inclusive), con hemofilia A grave. EOS = Fin del estudio; ET = Terminación anticipada; PK = farmacocinética.
d e s c r ip c ió n DETALLADA DE la d e s c r ip c ió n
La presente descripción se refiere a un polipéptido quimérico para uso en el tratamiento de la hemofilia A en un sujeto humano que lo necesite, en la que el polipéptido quimérico comprende (i) una proteína del factor VIII (FVIII) que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 207, y (ii) una proteína del factor de von Willebrand (VWF) que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 202, en la que el polipéptido quimérico se administra por vía intravenosa en dosis múltiples de 45 UI/kg a 55 UI/kg, y el intervalo de dosificación es de al menos 7 días, y en el que la proteína del FVIII está asociada a la proteína del VWF mediante un enlace covalente.
I. Definiciones
Hay que indicar que el término "un" o "una" entidad se refiere a una o más de esa entidad; por ejemplo, se entiende que "una secuencia de nucleótidos" representa una o más secuencias de nucleótidos. Así pues, los términos "un" (o "una"), "uno o más" y "al menos uno" se pueden usar indistintamente en el presente documento.
Además, "y/o", cuando se usa en el presente documento, debe considerarse como una descripción específica de cada una de las dos características o componentes especificados con o sin el otro. Por lo tanto, el término "y/o" como se usa en una frase tal como "A y/o B" en el presente documento pretende incluir "A y B", "A o B", "A" (solo) y "B "(solo). Asimismo, el término "y/o" tal como se usa en una frase tal como "A, B y/o C" pretende abarcar cada uno de los siguientes aspectos: A, B y C; A, B o C; A o C; A o B; B o C; A y C; A y B; B y C; A (solo); B (solo); y C (solo).
Se entiende que siempre que se describan en el presente documento aspectos con el lenguaje "que comprende", también se proporcionan aspectos análogos descritos en términos de "que consiste en" y/o "que consiste esencialmente en".
A menos que se defina de otro modo, todos los términos técnicos y científicos usados en el presente documento tienen el mismo significado que el comúnmente entendido por un experto en la técnica a la que se refiere esta descripción. Por ejemplo, el Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology, Juo, Pei-Show, 2a ed,, 2002, CRC Press; The Dictionary of Cell and Molecular Biology, 3a ed,, 1999, Academic Press; y el Oxford Dictionary Of Biochemistry And Molecular Biology, Revised, 2000, Oxford University Press, proporcionan al experto un diccionario general de muchos de los términos usados en esta descripción,
Las unidades, prefijos y símbolos se indican en su forma aceptada por el Sistema Internacional de Unidades (SI), Los intervalos numéricos incluyen los números que definen el intervalo, A menos que se indique lo contrario, las secuencias de aminoácidos se escriben de izquierda a derecha en la orientación de amino a carboxilo, Los títulos proporcionados en el presente documento no son limitaciones de los diversos aspectos de la descripción, Por consiguiente, los términos definidos inmediatamente a continuación se definen de forma más completa por referencia a la memoria descriptiva en su totalidad,
El término "aproximadamente" se usa en el presente documento para significar de forma aproximada, del orden de, alrededor o en las regiones de, Cuando el término "aproximadamente" se usa junto con un intervalo numérico, modifica ese intervalo extendiendo los límites por encima y por debajo de los valores numéricos expuestos, En general, el término "aproximadamente" puede modificar un valor numérico por encima y por debajo del valor expuesto por una variación de, p, ej,, 10 por ciento, hacia arriba o hacia abajo (mayor o menor),
El término "polinucleótido" o "nucleótido" pretende abarcar un ácido nucleico único así como varios ácidos nucleicos, y se refiere a una molécula o construcción de ácido nucleico aislada, p, ej,, ARN mensajero (ARNm) o ADN plasmídico (pADN), Un polinucleótido puede comprender un enlace fosfodiéster convencional o un enlace no convencional (p, ej,, un enlace amida, tal como se encuentra en los ácidos nucleicos peptídicos (APN)), El término "ácido nucleico" se refiere a uno o más segmentos de ácido nucleico, p, ej,, fragmentos de ADN o ARN, presentes en un polinucleótido, Por ácido nucleico o polinucleótido "aislado" se entiende una molécula de ácido nucleico, ADN o ARN, que se ha sacado de su entorno natural, Por ejemplo, un polinucleótido recombinante que codifica un polipéptido del factor VIII contenido en un vector se considera aislado para los propósitos de la presente descripción, Otros ejemplos de un polinucleótido aislado incluyen polinucleótidos recombinantes mantenidos en células hospedantes heterólogas o purificados (parcial o sustancialmente) de otros polinucleótidos en una solución, Las moléculas de ARN aisladas incluyen transcritos de ARNin vivooin vitrode polinucleótidos de la presente descripción, Los polinucleótidos o ácidos nucleicos aislados de acuerdo con la presente descripción incluyen además dichas moléculas producidas de forma sintética, Además, un polinucleótido o un ácido nucleico puede incluir elementos reguladores tales como promotores, potenciadores, sitios de unión a ribosomas o señales de terminación de la transcripción,
Ciertas proteínas secretadas por células de mamíferos están asociadas con un péptido señal secretor que se escinde de la proteína madura una vez que se ha iniciado la exportación de la cadena de proteína en crecimiento a través del retículo endoplásmico rugoso, Los expertos en la técnica saben que los péptidos señal generalmente se fusionan al extremo N-terminal del polipéptido y se escinden del polipéptido completo o "de longitud completa" para producir una forma secretada o "madura" del polipéptido.Opcioanlmente, puede estar presente un péptido señal natural o un derivado funcional de esa secuencia que retiene la capacidad de dirigir la secreción del polipéptido que está asociado operativamente con él, Alternativamente, se puede usar un péptido señal de mamífero heterólogo, p, ej,, un activador de plasminógeno tisular humano (TPA, por sus siglas en inglés) o péptido señal de p-glucuronidasa de ratón, o un derivado funcional del mismo,
Como se usa en el presente documento, el término "polipéptido" pretende abarcar un "polipéptido" único, así como también "polipéptidos" en plural, y se refiere a una molécula compuesta de monómeros (aminoácidos) unidos de forma lineal por enlaces amida (también conocidos como enlaces peptídicos), El término "polipéptido" se refiere a cualquier cadena o cadenas de dos o más aminoácidos y no se refiere a una longitud específica del producto, Por tanto, péptidos, dipéptidos, tripéptidos, oligopéptidos, "proteína", "cadena de aminoácidos" o cualquier otro término usado para referirse a una cadena o cadenas de dos o más aminoácidos, están incluidos dentro de la definición de "polipéptido", y el término "polipéptido" se puede usar en lugar de, o de manera intercambiable con cualquiera de estos términos, El término "polipéptido" también pretende referirse a los productos de modificaciones posteriores a la expresión del polipéptido, que incluyen, sin limitación, glicosilación, acetilación, fosforilación, amidación, derivatización por grupos protectores/bloqueantes conocidos, escisión proteolítica o modificación por aminoácidos no naturales, Un polipéptido puede derivar de una fuente biológica natural o ser producido por tecnología recombinante, pero no es traducido necesariamente de una secuencia de ácido nucleico designada, Se puede generar de cualquier manera, incluyendo por síntesis química,
Un polipéptido "aislado" o un fragmento, variante o derivado del mismo se refiere a un polipéptido que no se encuentra en su medio natural, No se requiere un nivel particular de purificación, Por ejemplo, un polipéptido aislado se puede simplemente separar de su entorno nativo o natural, Los polipéptidos y proteínas producidos de forma recombinante expresados en células hospedantes se consideran aislados para los fines de la descripción, al igual que los polipéptidos nativos o recombinantes que se han separado, fraccionado o purificado parcial o sustancialmente por cualquier técnica adecuada,
También se incluyen en la presente descripción fragmentos o variantes de polipéptidos y cualquier combinación de los mismos, El término "fragmento" o "variante" cuando se refiere a dominios de unión de polipéptidos o moléculas de unión de la presente descripción incluye cualquier polipéptido que conserve al menos algunas de las propiedades (p. ej., afinidad de unión de FcRn para un dominio de unión de FcRn o variante de Fc, actividad de coagulación para una variante de FVIII, o actividad de unión de FVIII para el fragmento del VWF) del polipéptido de referencia. Los fragmentos de polipéptidos incluyen fragmentos proteolíticos, así como fragmentos de deleción, además de fragmentos de anticuerpos específicos descritos en otra parte en el presente documento, pero no incluyen el polipéptido de longitud completa natural (o polipéptido maduro). Las variantes de dominios de unión de polipéptidos o moléculas de unión de la presente descripción incluyen fragmentos como se ha descrito anteriormente, y también polipéptidos con secuencias de aminoácidos alteradas debido a sustituciones, deleciones o inserciones de aminoácidos. Las variantes pueden ser de origen natural o no natural. Se pueden producir variantes de origen no natural utilizando técnicas de mutagénesis conocidas en la técnica. Los polipéptidos variantes pueden comprender sustituciones, deleciones o adiciones de aminoácidos conservadoras o no conservadoras.
La expresión "proteína del VWF" o "proteínas del VWF" usada en el presente documento significa cualquier fragmento del VWF que interaccione con el FVIII y retenga al menos una o más propiedades que normalmente proporciona al FVIII el VWF de longitud completa, p. ej., prevención de la activación prematura del FVIIIa, prevención de la proteólisis prematura, prevención de la asociación con membranas de fosfolípidos que podría conducir a un aclaramiento prematuro, prevención de la unión a los receptores de aclaramiento del FVIII que pueden unirse al FVIII desnudo pero no al FVIII unido al VWF, y/o estabilización de las interacciones de la cadena pesada y la cadena ligera del FVIII. Un fragmento de VWF al que se hace referencia en el presente documento es un polipéptido del VWF que es menor que la proteína del VWF de longitud completa, en donde el fragmento de VWF retiene la capacidad de interaccionar y/o unirse al FVIII.
Una "sustitución de aminoácido conservadora" es aquella en la que el residuo de aminoácido se sustituye por un residuo de aminoácido que tiene una cadena lateral similar. Se han definido en la técnica familias de residuos de aminoácidos que tienen cadenas laterales similares, que incluyen cadenas laterales básicas (p. ej., lisina, arginina, histidina), cadenas laterales ácidas (p. ej., ácido aspártico, ácido glutámico), cadenas laterales polares no cargadas (p. ej., glicina, asparagina, glutamina, serina, treonina, tirosina, cisteína), cadenas laterales no polares (p. ej., alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina, metionina, triptófano), cadenas laterales de ramificación beta (p. ej., treonina, valina, isoleucina) y cadenas laterales aromáticas (p. ej., tirosina, fenilalanina, triptófano, histidina). Por lo tanto, si un aminoácido en un polipéptido se sustituye por otro aminoácido de la misma familia de cadenas laterales, la sustitución se considera que es conservadora. Opcionalmente, una cadena de aminoácidos se puede sustituir de forma conservadora por una cadena estructuralmente similar que difiere en el orden y/o composición de los miembros de la familia de cadenas laterales.
Como se conoce en la técnica, la "identidad de secuencia" entre dos polipéptidos se determina comparando la secuencia de aminoácidos de un polipéptido con la secuencia de un segundo polipéptido. Cuando se describe en el presente documento, el que cualquier polipéptido en particular sea al menos aproximadamente 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% o 100% idéntico a otro polipéptido se puede determinar usando métodos y programas/software informáticos conocidos en la técnica tales como, pero no limitados al programa BESTFIT (Wisconsin Sequence Analysis Package, versión 8 para Unix, Genetics Computer Group, University Research Park, 575 Science Drive, Madison, Wl 53711). BESTFIT usa el algoritmo de homología local de Smith y Waterman,Advances in Applied Mathematics2: 482-489 (1981), para encontrar el mejor segmento de homología entre dos secuencias. Cuando se usa BESTFIT o cualquier otro programa de alineación de secuencias para determinar si una secuencia particular es, por ejemplo, 95% idéntica a una secuencia de referencia de acuerdo con la presente descripción, los parámetros se establecen, por supuesto, de manera que el porcentaje de identidad se calcula a lo largo de la longitud completa de la secuencia del polipéptido de referencia y que están permitidos huecos en la homología de hasta 5% del número total de aminoácidos en la secuencia de referencia.
Como se usa en el presente documento, un "aminoácido que corresponde a" o un "aminoácido equivalente" en una secuencia de VWF o una secuencia de proteína del FVIII se identifica por alineación para maximizar la identidad o similitud entre una primera secuencia de VWF o FVIII y una segunda secuencia de VWF o FVIII. El número usado para identificar un aminoácido equivalente en una segunda secuencia de VWF o FVIII se basa en el número usado para identificar el aminoácido correspondiente en la primera secuencia de VWF o FVIII.
Como se usa en el presente documento, la expresión "sitio de inserción" se refiere a una posición en un polipéptido del FVIII, o fragmento, variante o derivado del mismo, que está inmediatamente secuencia abajo de la posición en la que se puede insertar un motivo que prolonga la vida media o motivo heterólogo. Un "sitio de inserción" se especifica como un número, y el número es el número del aminoácido en el FVIII nativo maduro (SEQ ID NO: 65) al que corresponde el sitio de inserción, que es inmediatamente C-terminal respecto a la posición de la inserción. Por ejemplo, la frase "a3 comprende un XTEN en un sitio de inserción que corresponde al aminoácido 1656 de la SEQ ID NO: 65" indica que el motivo heterólogo se encuentra entre dos aminoácidos que corresponden al aminoácido 1656 y al aminoácido 1657 de la SEQ ID. NO: 65.
La frase "inmediatamente secuencia abajo de un aminoácido", como se usa en el presente documento, se refiere a la posición justo al lado del grupo carboxilo terminal del aminoácido. Por ejemplo, un sitio de inserción inmediatamente secuencia abajo del aminoácido 745 correspondiente a la proteína del FVIII de tipo silvestre madura significa que el sitio de inserción está entre el aminoácido 745 y el aminoácido 746 correspondiente a la proteína del FVIII de tipo silvestre madura. De manera similar, la frase "inmediatamente secuencia arriba de un aminoácido" se refiere a la posición justo al lado del grupo amino terminal del aminoácido.
La frase "entre dos aminoácidos de un sitio de inserción", como se usa en el presente documento, se refiere a una posición en la que se inserta un XTEN o cualquier otro polipéptido entre dos aminoácidos adyacentes. Por lo tanto, las frases "insertado inmediatamente secuencia abajo de un aminoácido" e "insertado entre dos aminoácidos de un sitio de inserción" se usan como sinónimos de "insertado en un sitio de inserción".
Los términos "insertado", "se inserta", "insertado en" o términos gramaticalmente relacionados, como se usan en el presente documento, se refieren a la posición de un XTEN en un polipéptido quimérico con respecto a la posición análoga en el FVIII humano maduro nativo. Como se usa en el presente documento, los términos se refieren a las características del polipéptido de FVIII recombinante en relación con el FVIII humano maduro nativo, y no indican, implican o infieren ningún método o procedimiento mediante el cual se ha preparado el polipéptido quimérico. Por ejemplo, en referencia a un polipéptido quimérico proporcionado en el presente documento, la frase "se inserta un XTEN inmediatamente secuencia abajo del residuo 745 del polipéptido del FVIII" significa que el polipéptido quimérico comprende un XTEN inmediatamente secuencia abajo de un aminoácido que corresponde al aminoácido 745 en el FVIII humano maduro nativo, p. ej., unido por aminoácidos que corresponden a los aminoácidos 745 y 746 del FVIII humano maduro nativo.
Una proteína de "fusión" o "quimérica" comprende una primera secuencia de aminoácidos unida a una segunda secuencia de aminoácidos con la que no está unida naturalmente en la naturaleza. Las secuencias de aminoácidos que normalmente existen en proteínas separadas se pueden juntar en el polipéptido de fusión, o las secuencias de aminoácidos que normalmente existen en la misma proteína se pueden poner en una nueva disposición en el polipéptido de fusión, p. ej., fusión de un dominio del factor VIII de la descripción con un dominio Fc de Ig. Una proteína de fusión se crea, por ejemplo, por síntesis química, o creando y traduciendo un polinucleótido en el que las regiones peptídicas están codificadas en la relación deseada. Un polipéptido quimérico puede comprender además una segunda secuencia de aminoácidos asociada con la primera secuencia de aminoácidos por un enlace covalente no peptídico o un enlace no covalente.
El término "unido", como se usa en el presente documento, se refiere a una primera secuencia de aminoácidos o secuencia de nucleótidos unida de forma covalente o no covalente a una segunda secuencia de aminoácidos o secuencia de nucleótidos, respectivamente. La primera secuencia de aminoácidos o nucleótidos se puede unir directamente o yuxtaponer a la segunda secuencia de aminoácidos o nucleótidos o, alternativamente, una secuencia intermedia puede unir covalentemente la primera secuencia a la segunda secuencia. El término "unido" significa no solo una fusión de una primera secuencia de aminoácidos con una segunda secuencia de aminoácidos en el extremo C-terminal o extremo N, sino que también incluye la inserción de la primera secuencia de aminoácidos completa (o la segunda secuencia de aminoácidos) en dos aminoácidos cualesquiera en la segunda secuencia de aminoácidos (o la primera secuencia de aminoácidos, respectivamente). Opcionalmente, la primera secuencia de aminoácidos se puede unir a una segunda secuencia de aminoácidos por un enlace peptídico o un conector. La primera secuencia de nucleótidos se puede unir a una segunda secuencia de nucleótidos por un enlace fosfodiéster o un conector. El conector puede ser un péptido o un polipéptido (para cadenas polipeptídicas) o un nucleótido o una cadena de nucleótidos (para cadenas nucleotídicas) o cualquier motivo químico (para cadenas de polipéptidos y de polinucleótidos). El término "unido" también se indica mediante un guion (-).
Como se usa en el presente documento, la expresión "asociado con" se refiere a un enlace covalente o no covalente formado entre una primera cadena de aminoácidos y una segunda cadena de aminoácidos. Opcionalmente, la expresión "asociado con" significa un enlace covalente, no peptídico o un enlace no covalente. Esta asociación se puede indicar con dos puntos, es decir, (:). En otros casos, significa un enlace covalente excepto un enlace peptídico. Por ejemplo, el aminoácido cisteína comprende un grupo tiol que puede formar un enlace disulfuro o un puente con un grupo tiol en un segundo residuo de cisteína. En la mayoría de las moléculas de IgG de origen natural, las regiones CH1 y CL están asociadas por un enlace disulfuro y las dos cadenas pesadas están asociadas por dos enlaces disulfuro en las posiciones que corresponden a 239 y 242 usando el sistema de numeración de Kabat (posición 226 o 229, sistema de numeración EU). Los ejemplos de enlaces covalentes incluyen, pero no se limitan a un enlace peptídico, un enlace metálico, un enlace de hidrógeno, un enlace disulfuro, un enlace sigma, un enlace pi, un enlace delta, un enlace glicosídico, un enlace agóstico, un enlace flexionado, enlace dipolar, una retrodonación Pi, un enlace doble, un enlace triple, un enlace cuádruple, un enlace quíntuple, un enlace séxtuple, conjugación, hiperconjugación, aromaticidad, hapticidad o antienlace. Los ejemplos no limitantes de enlace no covalente incluyen un enlace iónico (p. ej., enlace catión-pi o enlace de sal), un enlace metálico, un enlace de hidrógeno (p. ej., enlace de dihidrógeno, complejo de dihidrógeno, enlace de hidrógeno de barrera baja o enlace de hidrógeno simétrico), fuerza de van der Walls, fuerza de dispersión de London, un enlace mecánico, un enlace halógeno, aurofilia, intercalación, apilamiento, fuerza entrópica o polaridad química.
Como se usa en el presente documento, la expresión "sitio de escisión" o "sitio de escisión enzimática" se refiere a un sitio reconocido por una enzima. Ciertos sitios de escisión enzimática comprenden un sitio de procesamiento intracelular. Opcionalmente, un polipéptido tiene un sitio de escisión enzimática escindido por una enzima que se activa durante la cascada de coagulación, de modo que la escisión de dichos sitios se produce en el sitio de formación del coágulo. Ejemplos de dichos sitios incluyen, p. ej., aquellos reconocidos por trombina, Factor Xla o Factor Xa. Los sitios de escisión de FXIa de ejemplo incluyen, p. ej,, TQSFNDFTR (SEQ ID NO: 1) y SVSQTSKLTR (SEQ ID NO: 3). Los sitios de escisión de trombina de ejemplo incluyen, p. ej., DFL<a>E<g>GGVR (SEQ ID NO: 4), TTKIKPR (SEQ ID NO: 5), LVPRG (SEQ ID NO: 6), ALRPR (SEQ ID NO: 7), ISDKNTGDYYEDSYEDISAYLLSKNNAIEPRSFS (SEQ ID NO: 106), DKNTGDYYEDSYEDISAYLLSKNNAIEPRSFS (SEQ ID NO: 88), y IEPRSFS (SEQ ID NO: 194). En la técnica se conocen otros sitios de escisión enzimática y se describen en otra parte en el presente documento.
Como se usa en el presente documento, la expresión "sitio de procesamiento" o "sitio de procesamiento intracelular" se refiere a un tipo de sitio de escisión enzimática en un polipéptido que es un objetivo para enzimas que funcionan después de la traducción del polipéptido. Opcionalmente, dichas enzimas funcionan durante el transporte desde el lumen de Golgi al compartimento trans-Golgi. Las enzimas de procesamiento intracelular escinden los polipéptidos antes de la secreción de la proteína de la célula. Los ejemplos de dichos sitios de procesamiento incluyen, p. ej., los dirigidos por la familia de endopeptidasas PACE/furina (donde PACE es un acrónimo del inglésPaired Basic Amino acid Cleaving Enzyme(enzima de escisión de aminoácidos básicos emparejados)). Estas enzimas se localizan en la membrana de Golgi y escinden proteínas en el lado carboxi terminal del motivo de secuencia Arg- [cualquier residuo]-(Lys o Arg)-Arg. Como se usa en el presente documento, la familia de enzimas "furina" incluye, p. ej., PCSK1 (también conocida como PC1/PC3), PCSK2 (también conocida como PC2), PCSK3 (también conocida como furina o PACE), PCSK4 (también conocida como PC4), PCSK5 (también conocido como PC5 o PC6), PCSK6 (también conocido como PACE4) o PCSK7 (también conocido como PC7/LPC, PC8 o SPC7). Se conocen en la técnica otros sitios de procesamiento.
En construcciones que incluyen más de un sitio de procesamiento o escisión, se entenderá que dichos sitios pueden ser iguales o diferentes.
Un "conector procesable" como se usa en el presente documento se refiere a un conector que comprende al menos un sitio de procesamiento intracelular, que se describen en otra parte del presente documento.
Como se usa en el presente documento, el término "vida media" se refiere a una vida media biológica de un polipéptido particularin vivo.La vida media se puede representar por el tiempo necesario para que la mitad de la cantidad administrada a un sujeto se aclare de la circulación y/o de otros tejidos del animal. Cuando se construye una curva de aclaramiento de un polipéptido dado en función del tiempo, la curva normalmente es bifásica con una fase a rápida y una fase p más larga. La fase a representa típicamente un equilibrio del polipéptido Fc administrado entre el espacio intra y extravascular y está determinada, en parte, por el tamaño del polipéptido. La fase p representa típicamente el catabolismo del polipéptido en el espacio intravascular. Opcionalmente, el FVIII y los polipéptidos quiméricos que comprenden el FVIII son monofásicos y, por tanto, no tienen una fase alfa, sino solo una fase beta única. Por lo tanto, en ciertos casos, el término vida media como se usa en el presente documento se refiere a la vida media del polipéptido en la fase p. La vida media de la fase beta típica de un anticuerpo humano en seres humanos es de 21 días. Opcionalmente, la vida media se expresa como la vida media de la fase terminal.
El trastorno hemostático, como se usa en el presente documento, significa una afección genéticamente heredada o adquirida caracterizada por una tendencia a la hemorragia, ya sea espontáneamente o como resultado de un traumatismo, debido a una capacidad disminuida o incapacidad para formar un coágulo de fibrina. Ejemplos de dichos trastornos incluyen las hemofilias. Las tres formas principales son la hemofilia A (deficiencia de factor VIII), hemofilia B (deficiencia de factor IX o "enfermedad de Navidad") y hemofilia C (deficiencia de factor XI, tendencia leve a hemorragias). Otros trastornos hemostáticos incluyen, p. ej., enfermedad de Von Willebrand, deficiencia de factor XI (deficiencia de PTA), deficiencia de factor XII, deficiencias o anomalías estructurales en fibrinógeno, protrombina, factor V, factor VII, factor X o factor XIII, síndrome de Bernard-Soulier, que es un defecto o deficiencia en GPIb. GPIb, el receptor para el VWF, puede ser defectuoso y conducir a la falta de formación de coágulos primarios (hemostasia primaria) y mayor tendencia al sangrado) y trombastenia de Glanzman y Naegeli (trombastenia de Glanzmann). En la insuficiencia hepática (formas aguda y crónica), hay una producción insuficiente de factores de coagulación por parte del hígado; esto puede aumentar el riesgo de hemorragia.
"Administración" o "administrar", como se usa en el presente documento, se refiere a suministrar a un sujeto una composición descrita en el presente documento, p. ej., un polipéptido quimérico. La composición, p. ej., el polipéptido quimérico, se puede administrar a un sujeto usando métodos conocidos en la técnica. En particular, la composición se puede administrar por vía intravenosa, subcutánea, intramuscular, intradérmica o por cualquier superficie mucosa, p. ej., por vía oral, sublingual, bucal, nasal, rectal, vaginal o por vía pulmonar. polipéptido quimérico. Opcionalmente, la administración es autoadministración, o un padre administra el polipéptido quimérico a un niño, o el polipéptido quimérico es administrado a un sujeto por un profesional de la asistencia sanitaria, tal como un doctor, un médico o una enfermera.
Como se usa en el presente documento, el término "dosis" se refiere a una sola administración de una composición a un sujeto. Una sola dosis se puede administrar toda de una vez, p. ej., como un bolo, o a lo largo de un periodo de tiempo, p. ej., por una infusión intravenosa. La expresión "dosis múltiples" significa más de una dosis, p. ej., más de una administración.
Cuando se hace referencia a la coadministración de más de una composición, se puede administrar una dosis de la composición A simultáneamente con una dosis de la composición B. Alternativamente, se puede administrar una dosis de la composición A antes o después de una dosis de la composición B. Opcionalmente, la composición A y la composición B se combinan en una única formulación.
Como se usa en el presente documento, el término "intervalo" o "intervalo de dosificación" se refiere a la cantidad de tiempo que transcurre entre una primera dosis de la composición A y una dosis posterior de la misma composición administrada a un sujeto. Un intervalo de dosificación se puede referir al tiempo que transcurre entre una primera dosis y una segunda dosis, o un intervalo de dosificación se puede referir a la cantidad de tiempo que transcurre entre múltiples dosis.
La expresión "frecuencia de dosificación" como se usa en el presente documento se refiere al número de dosis administradas por un intervalo de dosificación específico. Por ejemplo, una frecuencia de dosificación se puede escribir como una vez a la semana, una vez cada dos semanas, etc. Por lo tanto, un intervalo de dosificación de 7 días también se puede escribir como un intervalo de dosificación de una vez en 7 días o una vez cada semana, o una vez a la semana.
Como se usa en el presente documento, la expresión "tratamiento profiláctico" se refiere a la administración de una terapia para el tratamiento de la hemofilia, donde dicho tratamiento está destinado a prevenir o reducir la gravedad de uno o más síntomas de la hemofilia, p. ej., episodios hemorrágicos, p. ej., uno o más episodios hemorrágicos espontáneos y/o daño articular. Véase, Jimenez-Yuste et al.,Blood Transfus.I2(3):314-19 (2014). Para prevenir o reducir la gravedad de dichos síntomas, p. ej., episodios hemorrágicos y la progresión de la enfermedad articular, los pacientes con hemofilia A pueden recibir infusiones regulares de factor de coagulación como parte de un régimen de tratamiento profiláctico. La base de dicho tratamiento profiláctico es la observación de que los pacientes con hemofilia con un nivel de factor de coagulación, p. ej., FVIII, de 1% o más, raramente experimentan episodios de hemorragia espontánea y tienen menos comorbilidades relacionadas con la hemofilia en comparación con los pacientes con hemofilia grave. Véase, p. ej., Coppola A. et al,Semin. Thromb. Hemost.38(1): 79-94 (2012). . Los profesionales de la salud que tratan a estos pacientes con hemofilia supusieron que mantener los niveles de factor en aproximadamente 1% con infusiones regulares podría reducir potencialmente el riesgo de síntomas de hemofilia, incluyendo episodios hemorrágicos y daño articular. Véase antes. Investigaciones posteriores han confirmado estos beneficios en pacientes pediátricos con hemofilia que reciben tratamiento profiláctico con factor de coagulación, lo que hace que el tratamiento profiláctico sea el objetivo para las personas con hemofilia grave. Véase antes.
Un tratamiento "profiláctico" también se puede referir a la administración preventiva de la composición descrita en el presente documento, p. ej., un polipéptido quimérico, a un sujeto con el fin de controlar, gestionar, prevenir o reducir la aparición o gravedad de uno o más síntomas de hemofilia A, p. ej., episodios hemorrágicos. El tratamiento profiláctico con un factor de coagulación, p. ej., FVIII, es el tratamiento de referencia para sujetos con hemofilia A grave. Véase, p. ej., Oldenburg,Blood125:2038-44 (2015). Opcionalmente, el tratamiento profiláctico se refiere a la administración de una composición descrita en el presente documento a un sujeto que lo necesite para reducir la aparición de uno o más síntomas de hemofilia A. Un tratamiento profiláctico puede incluir la administración de dosis múltiples. Las dosis múltiples usadas en el tratamiento profiláctico se administran típicamente a intervalos de administración particulares. Opcionalmente, la tasa anual de hemorragias se puede reducir a menos de 10, menos de 9, menos de 8, menos de 7, menos de 6, menos de 5, menos de 4, menos de 3, menos de 2 o menos de 1.
La expresión "tratamiento a demanda" o "tratamiento episódico" se refiere a la administración "según sea necesario" de una molécula quimérica en respuesta a síntomas de hemofilia A, p. ej., un episodio de hemorragia, o antes de una actividad que puede causar hemorragia. En un aspecto, el tratamiento a demanda se puede dar a un sujeto cuando comienza la hemorragia, tal como después de una lesión, o cuando se espera la hemorragia, tal como antes de cirugía. En otro aspecto, el tratamiento a demanda se puede dar antes de actividades que aumentan el riesgo de hemorragia, tales como los deportes de contacto. Opcionalmente, el tratamiento a demanda se da como una dosis única, o el tratamiento a demanda se da como una primera dosis, seguida de una o más dosis adicionales. Cuando el polipéptido quimérico se administra a demanda, la una o más dosis adicionales se pueden administrar al menos aproximadamente 12 horas, al menos aproximadamente 24 horas, al menos aproximadamente 36 horas, al menos aproximadamente 48 horas, al menos aproximadamente 60 horas, al menos aproximadamente 72 horas, al menos aproximadamente 84 horas, al menos aproximadamente 96 horas, al menos aproximadamente 108 horas o al menos aproximadamente 120 horas después de la primera dosis. Sin embargo, obsérvese que el intervalo de dosificación asociado con el tratamiento a demanda no es el mismo que el intervalo de dosificación usado para el tratamiento profiláctico.
En algunas modalidades, el sujeto que necesita un agente hemostático general se somete o está a punto de someterse a una cirugía. El polipéptido quimérico de la descripción se puede administrar antes o después de la cirugía. El polipéptido quimérico de la descripción también se puede administrar durante o después de la cirugía para controlar un episodio de hemorragia aguda. Cuando el polipéptido quimérico se administra antes de la cirugía, la administración puede ser al menos aproximadamente 1 hora, al menos aproximadamente 2 horas, al menos aproximadamente 4 horas, al menos aproximadamente 8 horas, al menos aproximadamente 12 horas, al menos aproximadamente 24 horas, al menos aproximadamente 36 horas, al menos aproximadamente 48 horas o al menos aproximadamente 72 horas antes de la cirugía. Cuando el polipéptido quimérico se administra después de la cirugía, la administración puede ser al menos aproximadamente 1 hora, al menos aproximadamente 2 horas, al menos aproximadamente 4 horas, al menos aproximadamente 8 horas, al menos aproximadamente 12 horas, al menos aproximadamente 24 horas, al menos aproximadamente 36 horas, al menos aproximadamente 48 horas, o al menos aproximadamente 72 horas después de la cirugía. La cirugía puede incluir, pero no se limita a trasplante de hígado, resección de hígado, procedimientos dentales o trasplante de células madre.
Como se usa en el presente documento, la expresión "hemorragia aguda" se refiere a un episodio de hemorragia independientemente de la causa subyacente. Por ejemplo, un sujeto puede tener un traumatismo, uremia, un trastorno hemorrágico hereditario (p. ej., deficiencia de factor Vil) un trastorno plaquetario o resistencia debido al desarrollo de anticuerpos contra factores de coagulación.
"Tratar", "tratamiento", "trata", como se usan en el presente documento, se refieren, p. ej., a la reducción en la gravedad de una enfermedad o afección; la reducción de la duración del curso de una enfermedad; la mejora de uno o más síntomas asociados con una enfermedad o afección; la provisión de efectos beneficiosos a un sujeto con una enfermedad o afección, sin curar necesariamente la enfermedad o afección, o la profilaxis de uno o más síntomas asociados con una enfermedad o afección. En algunas modalidades, el término "tratar" o "tratamiento" significa mantener un nivel mínimo de FVlll de al menos aproximadamente 1 Ul/dl, 2 Ul/dl, 3 Ul/dl, 4 Ul/dl, 5 Ul/dl, 6 Ul/dl, 7 Ul/dl, 8 Ul/dl, 9 Ul/dl, 10 Ul/dl, 11 Ul/dl, 12 Ul/dl, 13 Ul/dl, 14 Ul/dl, 15 Ul/dl, 16 Ul/dl, 17 Ul/dl, 18 Ul/dl, 19 Ul/dl o 20 Ul/dl en un sujeto, administrando un polipéptido quimérico o un fragmento de VWF de la descripción. Como se usa en el presente documento, un "nivel mínimo" en un paciente con hemofilia es la medición de la concentración más baja alcanzada por una terapia de factor, p. ej., una terapia de FVlll, antes de que se administre la siguiente dosis. En otras modalidades, trata o tratamiento significa mantener un nivel mínimo de FVlll de al menos aproximadamente 1 Ul/dl entre el intervalo de dosificación. En otras modalidades, tratar o tratamiento significa mantener un nivel mínimo de FVlll de al menos aproximadamente 3 Ul/dl entre el intervalo de dosificación. En otras modalidades, tratar o tratamiento significa mantener un nivel mínimo de FVlll de al menos aproximadamente 5 Ul/dl entre el intervalo de dosificación. En otras modalidades, tratar o tratamiento significa mantener un nivel mínimo de FVlll entre aproximadamente 1 y aproximadamente 20 Ul/dl, aproximadamente 2 y aproximadamente 20 Ul/dl, aproximadamente 3 y aproximadamente 20 Ul/dl, aproximadamente 4 y aproximadamente 20 Ul/dl, aproximadamente 5 y aproximadamente 20 Ul/dl, aproximadamente 6 y aproximadamente 20 Ul/dl, aproximadamente 7 y aproximadamente 20 Ul/dl, aproximadamente 8 y aproximadamente 20 Ul/dl, aproximadamente 9 y aproximadamente 20 Ul/dl o aproximadamente 10 y aproximadamente 20 Ul/dl durante el intervalo de dosificación.
"Tratamiento" de o "tratar” una enfermedad o afección también puede incluir mantener la actividad del FVlll en un sujeto en un nivel comparable con al menos aproximadamente 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19% o 20% de la actividad del FVlll en un sujeto no hemofílico entre el intervalo de dosificación. En otras modalidades, tratar o tratamiento significa mantener un nivel de actividad de FVll de al menos aproximadamente 1% entre el intervalo de dosificación. En otras modalidades, tratar o tratamiento significa mantener un nivel de actividad de FVll de al menos aproximadamente 2% entre el intervalo de dosificación. En otras modalidades, tratar o tratamiento significa mantener un nivel de actividad de FVll de al menos aproximadamente 3% entre el intervalo de dosificación. En otras modalidades, tratar o tratamiento significa mantener un nivel de actividad de FVll de al menos aproximadamente 4% entre el intervalo de dosificación. En otras modalidades, tratar o tratamiento significa mantener un nivel de actividad de FVll de al menos aproximadamente 5%. entre el intervalo de dosificación. En otras modalidades, tratar o tratamiento significa mantener un nivel de actividad de FVll de al menos aproximadamente 6% entre el intervalo de dosificación. En otras modalidades, tratar o tratamiento significa mantener un nivel de actividad de FVll de al menos aproximadamente 7% entre el intervalo de dosificación. En otras modalidades, tratar o tratamiento significa mantener un nivel de actividad de FVll de al menos aproximadamente 8% entre el intervalo de dosificación. En otras modalidades, tratar o tratamiento significa mantener un nivel de actividad de FVll de al menos aproximadamente 9% entre el intervalo de dosificación. En otras modalidades, tratar o tratamiento significa mantener un nivel de actividad de FVll de al menos aproximadamente 10% entre el intervalo de dosificación. El nivel mínimo requerido para el tratamiento se puede medir mediante uno o más métodos conocidos (por ejemplo, los ensayos de aPTT o ensayos cromogénicos descritos en el presente documento) y se puede ajustar (aumentar o disminuir) para cada persona.
ll. El polipéptido quimérico para uso
Ciertos aspectos de la presente invención se refieren al polipéptido quimérico como se define en este documento para uso en el tratamiento de la hemofilia A en un sujeto que lo necesite, que comprende administrar al sujeto el polipéptido quimérico en un intervalo de dosificación. Por ejemplo, el polipéptido quimérico se administra al sujeto en múltiples dosis.
En algunas modalidades, las múltiples dosis comprenden al menos dos dosis, al menos tres dosis, al menos cuatro dosis, al menos cinco dosis, al menos seis dosis, al menos siete dosis, al menos ocho dosis, al menos nueve dosis, al menos diez dosis, al menos once dosis, al menos doce dosis, al menos trece dosis, al menos catorce dosis, al menos quince dosis, al menos dieciséis dosis, al menos diecisiete dosis, al menos dieciocho dosis, al menos diecinueve dosis, al menos veinte dosis o más. En algunas modalidades, las dosis múltiples se administran durante al menos aproximadamente 1 mes, al menos aproximadamente 2 meses, al menos aproximadamente 3 meses, al menos aproximadamente 4 meses, al menos aproximadamente 5 meses, al menos aproximadamente 6 meses, al menos aproximadamente 12 meses, al menos aproximadamente 18 meses, al menos aproximadamente 2 años, al menos aproximadamente 3 años, al menos aproximadamente 4 años, al menos aproximadamente 5 años, al menos aproximadamente 10 años, al menos aproximadamente 15 años, al menos aproximadamente 20 años o durante al menos aproximadamente 25 años.
En algunas modalidades, el tratamiento de la hemofilia A comprende prevenir un episodio de hemorragia en un sujeto humano que lo necesite. En algunas modalidades, el tratamiento de la hemofilia A comprende tratar un episodio de hemorragia en un sujeto humano que lo necesite. En algunas modalidades, el tratamiento de la hemofilia A comprende controlar la incidencia o frecuencia de un episodio de hemorragia en un sujeto humano que lo necesite. En algunas modalidades, el tratamiento de la hemofilia A comprende disminuir la incidencia o frecuencia de un episodio de hemorragia en un sujeto humano que lo necesite.
A. Dosis
En algunas modalidades, las cantidades de cada una de las dosis múltiples son las mismas. En otras modalidades, una o más de las dosis múltiples son diferentes de una o más de las otras dosis múltiples.
En algunas modalidades, al menos una de las dosis múltiples del polipéptido quimérico es de aproximadamente 50 ül/kg a aproximadamente 55 ül/kg.
En algunas modalidades, el polipéptido quimérico se administra profilácticamente a una dosis de 50 ül/kg, una vez por semana.
En algunas modalidades, el polipéptido quimérico se administra a demanda. En ciertas modalidades, el polipéptido quimérico se administra a demanda como dosis múltiples de aproximadamente 45 ül/kg, aproximadamente 50 ül/kg, o aproximadamente 55 ül/kg.
En algunas modalidades, la administración del polipéptido quimérico de acuerdo con los presentes métodos no induce inhibidor del FVlll después de aproximadamente 7 días, aproximadamente 10 días, aproximadamente 11 días, aproximadamente 12 días, aproximadamente 13 días, aproximadamente 14 días, aproximadamente 15 días, aproximadamente 20 días, aproximadamente 24 días, aproximadamente 25 días, aproximadamente 28 días, aproximadamente 30 días o aproximadamente 35 días de la administración. En algunas modalidades, la administración del polipéptido quimérico no induce inhibidor del FVlll después de aproximadamente 28 días de la administración.
B. Intervalo de dosificación
El polipéptido quimérico se administra como dosis múltiples en un intervalo de dosificaciónal menos 7 días, al menos aproximadamente 8 días, al menos aproximadamente 9 días, al menos aproximadamente 10 días, al menos aproximadamente 11 días, al menos aproximadamente 12 días, al menos aproximadamente 13 días, al menos aproximadamente 14 días, al menos aproximadamente 15 días, al menos aproximadamente 16 días, al menos aproximadamente 17 días, al menos aproximadamente 18 días, al menos aproximadamente 19 días, al menos aproximadamente 20 días, al menos aproximadamente 21 días, al menos aproximadamente 22 días, al menos aproximadamente 23 días, al menos aproximadamente 24 días, al menos aproximadamente 25 días, al menos aproximadamente 26 días, al menos aproximadamente 27 días, al menos aproximadamente 28 días, al menos aproximadamente 29 días, al menos aproximadamente 30 días o al menos aproximadamente 31 días.
En ciertas modalidades, el intervalo de dosificación, p. ej., para el tratamiento profiláctico de la hemofilia A, es de al menos aproximadamente 5 días. En ciertas modalidades, el intervalo de dosificación, p. ej., para el tratamiento profiláctico de la hemofilia A, es de al menos aproximadamente 6 días. En ciertas modalidades, el intervalo de dosificación, p. ej., para el tratamiento profiláctico de la hemofilia A, es de al menos aproximadamente 7 días. En ciertas modalidades, el intervalo de dosificación, p. ej., para el tratamiento profiláctico de la hemofilia A, es de al menos aproximadamente 8 días. En ciertas modalidades, el intervalo de dosificación, p. ej., para el tratamiento profiláctico de la hemofilia A, es de al menos aproximadamente 9 días. En ciertas modalidades, el intervalo de dosificación es de al menos de aproximadamente 10 días. En ciertas modalidades, el intervalo de dosificación, p. ej., para el tratamiento profiláctico de la hemofilia A, es de al menos aproximadamente 11 días. En ciertas modalidades, el intervalo de dosificación, p. ej., para el tratamiento profiláctico de la hemofilia A, es de al menos aproximadamente 12 días. En ciertas modalidades, el intervalo de dosificación, p. ej., para el tratamiento profiláctico de la hemofilia A, es de al menos aproximadamente 13 días. En ciertas modalidades, el intervalo de dosificación, p. ej., para el tratamiento profiláctico de la hemofilia A, es de al menos aproximadamente 14 días. En ciertas modalidades, el intervalo de dosificación, p. ej., para el tratamiento profiláctico de la hemofilia A, es de al menos aproximadamente 21 días. En ciertas modalidades, el intervalo de dosificación, p. ej., para el tratamiento profiláctico de la hemofilia A, es de al menos aproximadamente 27 días. En ciertas modalidades, el intervalo de dosificación, p. ej., para el tratamiento profiláctico de la hemofilia A, es de al menos aproximadamente 30 días.
La frecuencia de dosificación, p. ej., para el tratamiento profiláctico de la hemofilia A, es de una vez por semana, al menos una vez cada 2 semanas, al menos una vez cada 3 semanas, al menos una vez cada 4 semanas, al menos una vez cada 5 semanas o al menos una vez cada 6 semanas. En ciertas modalidades, el intervalo de dosificación, p. ej., para el tratamiento profiláctico de la hemofilia A, es de una vez por semana. En ciertas modalidades, el intervalo de dosificación, p. ej., para el tratamiento profiláctico de la hemofilia A, es al menos 2 semanas. En ciertas modalidades, el intervalo de dosificación, p. ej., para el tratamiento profiláctico de la hemofilia A, es de al menos 3 semanas. En ciertas modalidades, el intervalo de dosificación, p. ej,, para el tratamiento profiláctico de la hemofilia A, es de al menos 4 semanas.
En algunas modalidades, la frecuencia de dosificación, p. ej., para el tratamiento profiláctico de la hemofilia A, es de aproximadamente 2 veces cada tres meses, aproximadamente 1 vez al mes, aproximadamente 2 veces al mes, aproximadamente 3 veces al mes, o aproximadamente 4 veces al mes. En ciertas modalidades, la frecuencia de dosificación es de aproximadamente 2 veces al mes. En ciertas modalidades, la frecuencia de dosificación es de aproximadamente 3 veces al mes. En ciertas modalidades, la frecuencia de dosificación es de aproximadamente 4 veces al mes.
En algunas modalidades, el intervalo de dosificación, p. ej., para el tratamiento profiláctico de la hemofilia A, es de al menos aproximadamente de 7 a 9 días. En algunas modalidades, el intervalo de dosificación, p. ej., para el tratamiento profiláctico de la hemofilia A, es de al menos aproximadamente de 7 a 10 días. En algunas modalidades, el intervalo de dosificación, p. ej., para el tratamiento profiláctico de la hemofilia A, es de al menos aproximadamente de 7 a 11 días. En algunas modalidades, el intervalo de dosificación, p. ej., para el tratamiento profiláctico de la hemofilia A, es de al menos aproximadamente de 7 a 12 días. En algunas modalidades, el intervalo de dosificación, p. ej., para el tratamiento profiláctico de la hemofilia A, es de al menos aproximadamente de 7 a 13 días. En algunas modalidades, el intervalo de dosificación, p. ej., para el tratamiento profiláctico de la hemofilia A, es de al menos aproximadamente de 7 a 14 días. En algunas modalidades, el intervalo de dosificación, p. ej., para el tratamiento profiláctico de la hemofilia A, es de al menos aproximadamente de 8 a 14 días. En algunas modalidades, el intervalo de dosificación, p. ej., para el tratamiento profiláctico de la hemofilia A, es de al menos aproximadamente de 9 a 14 días. En algunas modalidades, el intervalo de dosificación, p. ej., para el tratamiento profiláctico de la hemofilia A, es de al menos aproximadamente de 10 a 14 días. En algunas modalidades, el intervalo de dosificación, p. ej., para el tratamiento profiláctico de la hemofilia A, es de al menos aproximadamente de 11 a 14 días. En algunas modalidades, el intervalo de dosificación, p. ej., para el tratamiento profiláctico de la hemofilia A, es de al menos aproximadamente de 10 a 21 días. En algunas modalidades, el intervalo de dosificación, p. ej., para el tratamiento profiláctico de la hemofilia A, es de al menos aproximadamente de 12 a 14 días. En algunas modalidades, el intervalo de dosificación, p. ej., para el tratamiento profiláctico de la hemofilia A, es de al menos aproximadamente de 12 a 15 días. En algunas modalidades, el intervalo de dosificación, p. ej., para el tratamiento profiláctico de la hemofilia A, es de al menos aproximadamente de 13 a 15 días. En algunas modalidades, el intervalo de dosificación, p. ej., para el tratamiento profiláctico de la hemofilia A, es de al menos aproximadamente de 14 a 21 días.
Las dosis y las frecuencias de dosificación ejemplares, incluyendo las que caen bajo la presente invención, se describen en la tabla 1.
Tabla 1 A: Cantidades de dosis y la frecuencia de dosificación correspondiente, p. ej., para el tratamiento profiláctico de la hemofilia.
Tabla IB. Cantidades de dosis e intervalos de dosificación correspondiente, p. ej,, para el tratamiento profiláctico de la hemofilia.
En algunas modalidades, tal como para el tratamiento profiláctico de la hemofilia A, al menos una de las dosis múltiples se administra en una dosis de aproximadamente 50 üi/kg con un intervalo de dosificación de al menos 7 a 9 días En algunas modalidades, al menos una de las dosis múltiples se administra en una dosis de aproximadamente 50 üi/kg con un intervalo de dosificación de al menos 7a 10 días. En algunas modalidades, al menos una de las dosis múltiples se administra en una dosis de aproximadamente 50 üi/kg con un intervalo de dosificación de al menos 7 a 11 días. En algunas modalidades, al menos una de las dosis múltiples se administra en una dosis de aproximadamente 50 üi/kg con un intervalo de dosificación de al menos 7a 12 días. En algunas modalidades, al menos una de las dosis múltiples se administra en una dosis de aproximadamente 50 üi/kg con un intervalo de dosificación de al menos 7 a 13 días. En algunas modalidades, al menos una de las dosis múltiples se administra en una dosis de aproximadamente 50 üi/kg con un intervalo de dosificación de al menos 7 a 14 días. En algunas modalidades, al menos una de las dosis múltiples se administra en una dosis de aproximadamente 50 üi/kg con un intervalo de dosificación de al menos aproximadamente 8 a 14 días. En algunas modalidades, al menos una de las dosis múltiples se administra en una dosis de aproximadamente 50 üi/kg con un intervalo de dosificación de al menos aproximadamente 9 a 14 días. En algunas modalidades, al menos una de las dosis múltiples se administra en una dosis de aproximadamente 50 üi/kg con un intervalo de dosificación de al menos aproximadamente 10 a 14 días. En algunas modalidades, al menos una de las dosis múltiples se administra en una dosis de aproximadamente 50 üi/kg con un intervalo de dosificación de al menos aproximadamente 10 a 21 días. En algunas modalidades, al menos una de las dosis múltiples se administra en una dosis de aproximadamente 50 üi/kg con un intervalo de dosificación de al menos aproximadamente 11 a 14 días. En algunas modalidades, al menos una de las dosis múltiples se administra en una dosis de aproximadamente 50 üi/kg con un intervalo de dosificación de al menos aproximadamente 12 a 14 días. En algunas modalidades, al menos una de las dosis múltiples se administra en una dosis de aproximadamente 50 üi/kg con un intervalo de dosificación de al menos aproximadamente 12 a 15 días. En algunas modalidades, al menos una de las dosis múltiples se administra en una dosis de aproximadamente 50 üi/kg con un intervalo de dosificación de al menos aproximadamente 13 a 15 días. En algunas modalidades, al menos una de las dosis múltiples se administra en una dosis de aproximadamente 50 üi/kg con un intervalo de dosificación de al menos aproximadamente 14 a 21 días.
En ciertas modalidades, al menos una de las dosis múltiples es de aproximadamente 50 üi/kg, y el intervalo entre dosis es de al menos 7 días. En ciertas modalidades, al menos una de las dosis múltiples es de aproximadamente 50 üi/kg, y el intervalo entre dosis es de al menos 8 días. En ciertas modalidades, al menos una de las dosis múltiples es de aproximadamente 50 üi/kg, y el intervalo entre dosis es de al menos 9 días. En ciertas modalidades, al menos una de las dosis múltiples es de aproximadamente 50 üi/kg, y el intervalo entre dosis es de al menos 10 días. En ciertas modalidades, al menos una de las dosis múltiples es de aproximadamente 50 üi/kg, y el intervalo entre dosis es de al menos 11 días. En ciertas modalidades, al menos una de las dosis múltiples es de aproximadamente 50 üi/kg, y el intervalo entre dosis es de al menos 12 días. En ciertas modalidades, al menos una de las dosis múltiples es de aproximadamente 50 üi/kg, y el intervalo entre dosis es de al menos 13 días. En ciertas modalidades, al menos una de las dosis múltiples es de aproximadamente 50 üi/kg, y el intervalo entre dosis es de al menos 14 días. En ciertas modalidades, al menos una de las dosis múltiples es de aproximadamente 50 üi/kg, y el intervalo entre dosis es de al menos 15 días. En ciertas modalidades, al menos una de las dosis múltiples es de aproximadamente 50 üi/kg, y el intervalo entre dosis es de al menos 16 días. En ciertas modalidades, al menos una de las dosis múltiples es de aproximadamente 50 üi/kg, y el intervalo entre dosis es de al menos 17 días. En ciertas modalidades, al menos una de las dosis múltiples es de aproximadamente 50 üi/kg, y el intervalo entre dosis es de al menos 18 días. En ciertas modalidades, al menos una de las dosis múltiples es de aproximadamente 50 üi/kg, y el intervalo entre dosis es de al menos 19 días. En ciertas modalidades, al menos una de las dosis múltiples es de aproximadamente 50 üi/kg, y el intervalo entre dosis es de al menos 20 días. En ciertas modalidades, al menos una de las dosis múltiples es de aproximadamente 50 üi/kg, y el intervalo entre dosis es de al menos 21 días.
En algunas modalidades, el polipéptido quimérico se administra para el tratamiento profiláctico de la hemofilia A. El tratamiento profiláctico de la hemofilia A incluye aliviar o reducir la gravedad de los síntomas de la hemofilia A de forma continua o casi continua. En algunas modalidades, el tratamiento profiláctico se administra antes de la aparición de un síntoma de hemofilia A, p. ej., antes de un episodio de hemorragia. En otras modalidades, el tratamiento profiláctico se administra de forma periódica, p. ej., con un intervalo de dosificación descrito en el presente documento, para prevenir la aparición de o reducir la gravedad de un síntoma antes de la aparición del síntoma. Se puede usar cualquier intervalo de dosificación descrito en el presente documento en un tratamiento profiláctico de la hemofilia A.
En otras modalidades, el polipéptido quimérico se administra antes de una actividad que puede traer uno o más síntomas de hemofilia A, p. ej., como un tratamiento a demanda. Por ejemplo, se puede administrar un polipéptido quimérico de la presente descripción al sujeto que padece hemofilia A, antes de que el sujeto se someta a cirugía o participe en una actividad que aumente de otro modo el riesgo de traumatismo físico y/o un episodio de hemorragia.
En algunas modalidades, el sujeto se ha tratado previamente con una o más terapias de sustitución de FVIII. En ciertas modalidades, el sujeto no responde a una terapia previa de sustitución de FVIII. En ciertas modalidades, la terapia de sustitución de FVIII es ELOCTATE® o ADVATE®. En algunas modalidades, el sujeto es un adulto. En algunas modalidades, el sujeto es un adulto varón. En otras modalidades, el sujeto es un adulto mujer. En otras modalidades, el sujeto es un niño, p. ej., menor de o igual a aproximadamente 12 años, menor de o igual a o igual a aproximadamente 11 años, menor de o igual a aproximadamente 10 años, menor de o igual a aproximadamente 9 años, menor de o igual a aproximadamente 8 años, menor de o igual a aproximadamente 7 años, menor de o igual a aproximadamente 6 años, menor de o igual a aproximadamente 5 años, menor de o igual a aproximadamente 4 años, menor de o igual a aproximadamente 3 años, menor de o igual a aproximadamente 2 años o menor de o igual a aproximadamente 1 año). En algunas modalidades, el sujeto es una mujer. En algunas modalidades, el sujeto es un varón. En algunas modalidades, el sujeto es una mujer menor de o igual a aproximadamente 12 años. En algunas modalidades, el sujeto es una mujer menor de o igual a aproximadamente 11 años. En algunas modalidades, el sujeto es una mujer menor de o igual a aproximadamente 10 años.
ün polipéptido quimérico descrito en el presente documento se puede administrar por cualquier medio conocido en la técnica usando la vía de inyección intravenosa.
En algunas modalidades, el polipéptido quimérico, después de la administración, da como resultado un nivel de actividad plasmática de FVIII de al menos aproximadamente 1%, al menos aproximadamente 2%, al menos aproximadamente 3%, al menos aproximadamente 4%, al menos aproximadamente 5%, al menos aproximadamente 6%, al menos aproximadamente 7%, al menos aproximadamente 8%, al menos aproximadamente 9% o al menos aproximadamente 10%. En ciertas modalidades, el nivel de actividad plasmática de FVIII es al menos aproximadamente 3%. En algunas modalidades, el nivel de actividad plasmática de FVIII es al menos aproximadamente 4%. En algunas modalidades, el nivel de actividad plasmática de FVIII es al menos aproximadamente 5%. En algunas modalidades, el nivel de actividad plasmática de FVIII es al menos aproximadamente 4%. En algunas modalidades, el nivel de actividad plasmática de FVIII es al menos aproximadamente 5%. En algunas modalidades, el nivel de actividad plasmática de FVIII es al menos aproximadamente 5.6% En algunas modalidades, el nivel de actividad plasmática de FVIII es al menos aproximadamente 7%. En algunas modalidades, el nivel de actividad plasmática de FVIII es al menos aproximadamente 10%. En algunas modalidades, el nivel de actividad plasmática de FVIII es al menos aproximadamente 12%. En algunas modalidades, el nivel de actividad plasmática de FVIII es al menos aproximadamente 12.95%. Como se usa en el presente documento, el nivel de actividad plasmática se expresa como un porcentaje (%). Alternativamente, la actividad plasmática se puede expresar en unidades de üI/dl, en donde 1% es igual a 1 üI/dl
En algunas modalidades, el nivel de actividad plasmática de FVIII es al menos aproximadamente 10% al menos aproximadamente 5 días después de la administración del polipéptido quimérico, p. ej., en una dosis de 25 üI/kg. En algunas modalidades, el nivel de actividad plasmática de FVIII es de al menos aproximadamente 12% al menos aproximadamente 5 días después de la administración del polipéptido quimérico, p. ej., en una dosis de 25 üI/kg. En algunas modalidades, el nivel de actividad plasmática de FVIII es de al menos aproximadamente 12.95% al menos aproximadamente 5 días después de la administración del polipéptido quimérico, p. ej., en una dosis de 25 üI/kg. En algunas modalidades, el nivel de actividad plasmática de FVIII es de al menos aproximadamente 5% al menos aproximadamente 7 días después de la administración del polipéptido quimérico, p. ej., en una dosis de 25 üI/kg. En algunas modalidades, el nivel de actividad plasmática de FVIII es de al menos aproximadamente 5.6% al menos aproximadamente 7 días después de la administración del polipéptido quimérico, p. ej., en una dosis de 25 üI/kg. En algunas modalidades, el nivel de actividad plasmática de FVIII es de al menos aproximadamente 3% al menos aproximadamente 8 días después de la administración del polipéptido quimérico, p. ej., en una dosis de 25 üI/kg. En algunas modalidades, el nivel de actividad plasmática de FVIII es de al menos aproximadamente 1% al menos aproximadamente 10 días después de la administración del polipéptido quimérico, p. ej., en una dosis de 25 üI/kg.
C. Inducción de inmunotolerancia
Ciertos aspectos de la presente descripción se refieren a la inducción de inmunotolerancia al FVIII en el sujeto. Por ejemplo, el polipéptido quimérico opcionalmente reduce una respuesta inhibidoria al FVIII en el sujeto, o no induce una respuesta inmunitaria al polipéptido quimérico tras su administración. Otro aspecto de la presente descripción se refiere a la inducción de inmunotolerancia en un ser humano con hemofilia, en la que una cantidad efectiva del polipéptido quimérico induce inmunotolerancia en el ser humano. Diversos métodos de inducción de inmunotolerancia que utilizan polipéptidos quiméricos que comprenden un FVIII y un Fc se describen en la Publicación Internacional n.2 WO 2018/102760 A1.
Después de inducir inmunotolerancia, se puede administrar opcionalmente al ser humano un régimen de disminución progresiva de la composición o el polipéptido quimérico. En ciertas modalidades, la inducción de inmunotolerancia se produce cuando el título de anticuerpos inhibidores en el ser humano es menor de aproximadamente 0.6 UB. En ciertas modalidades, la inducción de inmunotolerancia se produce cuando el título de anticuerpos inhibidores en el ser humano es menor de aproximadamente 0.6 UB, y 60% de recuperación de la actividad del factor de coagulación controlado en el plasma. Después del régimen de disminución progresiva, se puede administrar al ser humano una dosis profiláctica del polipéptido quimérico descrito en el presente documento.
En ciertos aspectos, el ser humano no se ha tratado con una terapia de inmunotolerancia previa contra el factor de coagulación, p. ej., contra un FVIII. El polipéptido quimérico, p. ej., rFVIIIFc-VWF-XTEN, se puede administrar al ser humano en cualquier momento en que se haya determinado que el ser humano ha desarrollado una respuesta inmunitaria de inhibidores, p. ej., después de medir el nivel de una respuesta inmunitaria inhibidora en el ser humano. En otras modalidades, el polipéptido quimérico se puede administrar al ser humano que todavía no ha desarrollado una o más respuestas inmunitarias de inhibidores para prevenir el desarrollo de una respuesta inmunitaria de inhibidores. En algunas modalidades, el polipéptido quimérico se administra al ser humano que tiene una probabilidad alta (p. ej., antecedentes familiares, predisposición genética, o que muestra un biomarcador) de desarrollar una respuesta inmunitaria de inhibidores. En algunas modalidades, el método comprende además medir una respuesta inmunitaria inhibidora o la probabilidad de desarrollar una respuesta inmunitaria de inhibidores antes de la administración.
En algunas modalidades, el polipéptido quimérico se administra al ser humano menos de aproximadamente 1 día, menos de aproximadamente 2 días, menos de aproximadamente 3 días, menos de aproximadamente 4 días, menos de aproximadamente 5 días, menos de aproximadamente 6 días, menos de aproximadamente 7 días, menos de aproximadamente 2 semanas, menos de aproximadamente 3 semanas, menos de aproximadamente 4 semanas, menos de aproximadamente 2 meses, menos de aproximadamente 3 meses, menos de aproximadamente 4 meses, menos de aproximadamente 5 meses, menos de aproximadamente 6 meses, menos de aproximadamente 1 año, menos de aproximadamente 2 años, menos de aproximadamente 3 años, menos de aproximadamente 4 años o menos de aproximadamente 5 años después de haber determinado que el ser humano ha desarrollado una respuesta inmunitaria de inhibidores o que el ser humano tiene una probabilidad de desarrollar una respuesta inmunitaria de inhibidores, p. ej., después de medir el nivel de una respuesta inmunitaria inhibidora o la probabilidad de desarrollar una respuesta inmunitaria de inhibidores en el ser humano. En ciertas modalidades, el polipéptido quimérico se administra al ser humano inmediatamente después de haber determinado que el ser humano ha desarrollado una respuesta inmunitaria de inhibidores o que el ser humano tiene una probabilidad de desarrollar una respuesta inmunitaria de inhibidores, p. ej., después de medir el nivel de una respuesta inmunitaria inhibidora o la probabilidad de desarrollar una respuesta inmunitaria de inhibidores en el ser humano. En modalidades particulares, el polipéptido quimérico se administra al ser humano menos de aproximadamente 5 minutos, menos de aproximadamente 10 minutos, menos de aproximadamente 15 minutos, menos de aproximadamente 20 minutos, menos de aproximadamente 30 minutos, menos de aproximadamente 45 minutos, menos de aproximadamente 1 hora, menos de aproximadamente 2 horas, menos de aproximadamente 3 horas, menos de aproximadamente 4 horas, menos de aproximadamente 5 horas, menos de aproximadamente 6 horas, menos de aproximadamente 7 horas, menos de aproximadamente 8 horas, menos de aproximadamente 9 horas, menos de aproximadamente 10 horas, menos de aproximadamente 11 horas, menos de aproximadamente 12 horas, aproximadamente 18 horas o menos de aproximadamente 24 horas después de haber determinado que el ser humano ha desarrollado una respuesta inmunitaria de inhibidores o que el ser humano tiene una probabilidad de desarrollar una respuesta inmunitaria de inhibidores, p. ej., después de medir el nivel de una respuesta inmunitaria inhibidora o la probabilidad de desarrollar una respuesta inmunitaria de inhibidores en el ser humano. En modalidades particulares, el polipéptido quimérico se administra al ser humano aproximadamente 5 minutos, aproximadamente 10 minutos, aproximadamente 15 minutos, aproximadamente 20 minutos, aproximadamente 30 minutos, aproximadamente 45 minutos, aproximadamente 1 hora, aproximadamente 2 horas, aproximadamente 3 horas, aproximadamente 4 horas, aproximadamente 5 horas, aproximadamente 6 horas, aproximadamente 7 horas, aproximadamente 8 horas, aproximadamente 9 horas, aproximadamente 10 horas, aproximadamente 11 horas, aproximadamente 12 horas, aproximadamente 18 horas o aproximadamente 24 horas después de haber determinado que el ser humano ha desarrollado una respuesta inmunitaria de inhibidores o que el ser humano tiene una probabilidad de desarrollar una respuesta inmunitaria de inhibidores, p. ej., después de medir el nivel de una respuesta inmunitaria inhibidora o la probabilidad de desarrollar una respuesta inmunitaria de inhibidores en el ser humano. En ciertas modalidades, el polipéptido quimérico se administra al ser humano menos de aproximadamente 1 día después de haber determinado que el ser humano ha desarrollado una respuesta inmunitaria de inhibidores o que el ser humano tiene una probabilidad de desarrollar una respuesta inmunitaria de inhibidores, p. ej., después de medir el nivel de una respuesta inmunitaria inhibidora o la probabilidad de desarrollar una respuesta inmunitaria de inhibidores en el ser humano.
La inducción de una respuesta inmunitaria se puede continuar hasta que el nivel de inhibidor es menor que un determinado nivel o hasta que los inhibidores no sean detectables, En ciertas modalidades, el periodo de inducción puede continuar durante al menos aproximadamente 24 semanas, al menos aproximadamente 26 semanas, al menos aproximadamente 28 semanas, al menos aproximadamente 30 semanas, al menos aproximadamente 32 semanas, al menos aproximadamente 34 semanas, al menos aproximadamente 36 semanas, al menos aproximadamente 38 semanas, al menos aproximadamente 40 semanas, al menos aproximadamente 42 semanas, al menos aproximadamente 44 semanas, al menos aproximadamente 46 semanas, al menos aproximadamente 48 semanas, al menos aproximadamente 50 semanas, al menos aproximadamente 52 semanas, al menos aproximadamente 54 semanas, al menos aproximadamente 56 semanas, al menos aproximadamente 58 semanas, al menos aproximadamente 60 semanas, al menos aproximadamente 62 semanas, al menos aproximadamente 64 semanas, al menos aproximadamente 66 semanas, al menos aproximadamente 68 semanas, al menos aproximadamente 70 semanas, En una modalidad particular, el periodo de inducción es menos de 60 semanas,
La respuesta inmunitaria inhibidora tratada por los métodos descritos aquí puede incluir cualquier respuesta en el ser humano que tenga un impacto negativo en uno o más efectos de un tratamiento con factor de coagulación, En algunas modalidades, la respuesta inmunitaria inhibidora comprende la producción de anticuerpos inhibidores contra el factor de coagulación, p, ej,, anticuerpos anti-FVIII inhibidores, En determinadas modalidades, el método de la presente descripción comprende además medir el título de uno o más anticuerpos inhibidores en el ser humano antes (p, ej,, en el valor inicial) y después de administrar una cantidad eficaz de un polipéptido quimérico descrito en el presente documento, o un polinucleótido que codifique el mismo, En algunas modalidades, el título de los anticuerpos inhibidores antes de la administración (p, ej,, en el valor inicial) es al menos aproximadamente 0,6 Unidades Bethesda (UB). En determinadas modalidades, el título de los anticuerpos inhibidores antes de la administración (p, ej,, en el valor inicial) es al menos aproximadamente 1 UB, al menos aproximadamente 2 UB, al menos aproximadamente 3 UB, al menos aproximadamente 4 UB, al menos aproximadamente 5 UB, al menos aproximadamente 6 UB, al menos aproximadamente 7 UB, al menos aproximadamente 10 UB, al menos aproximadamente 20 UB, al menos aproximadamente 30 UB, al menos aproximadamente 40 UB, al menos aproximadamente 50 UB, al menos aproximadamente 100 UB, al menos aproximadamente 150 UB, o al menos aproximadamente 200 UB, En una modalidad particular, el título de los anticuerpos inhibidores antes de la administración (p, ej,, en el valor inicial) es al menos aproximadamente 5 UB,
En algunas modalidades, los métodos descritos aquí reducen el título de anticuerpos inhibidores en un sujeto humano con respecto al título de anticuerpos inhibidores antes de la administración, En determinadas modalidades, el título de los anticuerpos inhibidores después de la administración es menos de aproximadamente 0,6 UB, En algunas modalidades, el título de los anticuerpos inhibidores después de la administración es menos de aproximadamente 0,5 UB, menos de aproximadamente 0,4 UB, menos de aproximadamente 0,3 UB, menos de aproximadamente 0,2 UB o menos de aproximadamente 0,1 UB, En una modalidad particular, el título de los anticuerpos inhibidores después de la administración es 0 UB, En otras modalidades, el título de los anticuerpos inhibidores después de la administración es menos de 5 UB, menos de 4 UB, menos de 3 UB, menos de 2 UB, menos de 1 UB, menos de 0,9 UB, menos de 0,8 UB, menos de 0,7 UB o menos de 0,6 UB,
En algunas modalidades, la administración del polipéptido quimérico descrito en el presente documento aumenta la diferenciación de macrófagos en el ser humano hacia un fenotipo de tipo M2, en comparación con la diferenciación de macrófagos en controles no tratados y seres humanos tratados con el factor de coagulación solo, En algunas modalidades, el fenotipo de tipo M2 comprende la regulación por aumento de la ruta NRF2, la ruta PPAR gamma, o tanto la ruta NRF2 como la ruta PPAR gamma, En algunas modalidades, el fenotipo de tipo M2 comprende la regulación por aumento de CD206 (MRC1), En algunas modalidades, el fenotipo de tipo M2 comprende la regulación por aumento de ARG1, En algunas modalidades, el fenotipo de tipo M2 comprende la regulación por aumento de CD206 (MRC1) y ARG1,
En algunas modalidades, la administración de un polipéptido quimérico descrito en el presente documento da como resultado una mayor expresión de uno o más genes en el ser humano, con respecto a la expresión de uno o más genes en un sujeto no tratado o en un sujeto tratado con el factor de coagulación solo, En algunas modalidades, la administración da como resultado una mayor expresión de uno o más genes seleccionados del grupo que consiste en Hmox1, PPAR gamma, LPL, EGR2, SLC04A1, hemo oxigenasa 1 (HO-1), inhibidor 1 del crecimiento inducido por estrés oxidativo (0SGIN1), superóxido dismutasa 1 (S0D1), glutatión-disulfuro reductasa (GSR), subunidad catalítica de glutamato-cisteína ligasa (GCLC), subunidad modificadora de glutamato-cisteína ligasa (GCLM), NAD(P)H quinona deshidrogenasa 1 (NQ01), proteína de unión a ácido graso 5 (FABP5), B7-H3 (CD276), miembro de la familia SLAM 3 (SLAMF3; antígeno de linfocitos 9; LY9), miembro de la familia SLAM 7 (SLAMF7), receptor de mañosa C-tipo 1 (MRC1), miembro 4 de la familia de transportadores de soluto 12 (SLC12A), neuropilina 1 (NRP1) y cualquier combinación de los mismos, En algunas modalidades, la administración da como resultado una mayor expresión de uno o más genes de la ruta NRF2, En determinadas modalidades, el uno o más genes de la ruta NRF2 se seleccionan del grupo que consiste en HO-1, 0SGIN1, S0D1, GSR, GCLC, GCLM, NQ01 y cualquier combinación de los mismos, En algunas modalidades, la administración da como resultado mayor expresión de uno o más genes de la ruta PPAR gamma, En algunas modalidades, el uno o más genes de la ruta PPAR gamma se seleccionan del grupo que consiste en PPAR gamma, LPL, FABP5, EGR2 y cualquier combinación de los mismos, En algunas modalidades, la administración da como resultado mayor expresión de uno o más genes seleccionados del grupo que consiste en B7-H3 (CD276), SLAMF3, SLAMF7, MRC1, SLC12A, NRP1 y cualquier combinación de los mismos. En modalidades particulares, la administración da como resultado una mayor expresión de uno o más genes con respecto a la expresión de uno o más genes en un ser humano no tratado o en un ser humano al que se le administra el factor de coagulación solo, en donde la expresión es al menos aproximadamente 1.5 veces mayor, al menos aproximadamente 2 veces mayor, al menos aproximadamente 2.5 veces mayor, al menos aproximadamente 3 veces mayor, al menos aproximadamente 3.5 veces mayor, al menos aproximadamente 4 veces mayor, al menos aproximadamente 4.5 veces mayor, o al menos aproximadamente 5 veces mayor.
En algunas modalidades, la expresión diferencial de uno o más genes se observa menos de 6 horas después de la administración de un polipéptido quimérico descrito en el presente documento. En algunas modalidades, la expresión diferencial se observa menos de 12 horas después de la administración. En algunas modalidades, la expresión diferencial se observa menos de 18 horas después de la administración. En algunas modalidades, la expresión diferencial se observa menos de 24 horas después de la administración.
En algunas modalidades, la respuesta inmunitaria inhibidora comprende una respuesta inmunitaria mediada por células. En determinadas modalidades, la respuesta inmunitaria mediada por células comprende la liberación de una citoquina. En algunas modalidades, la citoquina es cualquier citoquina asociada con una respuesta inmunitaria mayor. En algunas modalidades, la citoquina se selecciona del grupo que consiste en IL-1, IL-6, IL-16, IL-12, IL-4, I L-17, factor de necrosis tumoral a (TNF-a), interferón a, interferón<y>y cualquier combinación de los mismos. En una modalidad, la respuesta inmunitaria mediada por células comprende niveles mayores de IL-12 en suero. En otra modalidad, la respuesta inmunitaria mediada por células comprende niveles mayores de IL-4 en suero. En otra modalidad, la respuesta inmunitaria mediada por células comprende niveles mayores de IL-17 en suero. En otra modalidad, la respuesta inmunitaria mediada por células comprende niveles mayores de TNF-a en suero.
Varias mutaciones genéticas se han relacionado con un riesgo mayor de desarrollar una respuesta inmunitaria inhibidora. Por ejemplo, el polimorfismo de TNF-a 308G>A dentro de Hap2, que se asocia con niveles mayores de transcripción constitutiva e inducible de TNF, se ha relacionado con un riesgo mayor de desarrollar una respuesta inmunitaria inhibidora. Véase Astermark et al.,Blood108: 3739-3745 (2006). Por lo tanto, en algunas modalidades, el ser humano tiene un polimorfismo genético asociado con aumento de TNF-a. En algunas modalidades, el polimorfismo es el polimorfismo de TNF-a -308G>A. En algunas modalidades, el ser humano tiene un polimorfismo en un gen de IL10, p. ej. un polimorfismo asociado con mayor secreción de IL10. En algunas modalidades, se administra FVIII-Fc a un sujeto con el alelo 134 del microsatélite IL10G en la región promotora del gen IL10. Véase Astermark et al.Hemostatis, Thrombosis, and Vascular Biology108: 3739-3745 (2006).
En algunas modalidades, el ser humano tiene un polimorfismo genético asociado con una menor expresión de CTLA-4 (Antígeno 4 del linfocito T citotóxico). En algunas modalidades, el ser humano tiene una mutación en DR15 (HLA-DR15) o moléculas MHC (complejo principal de histocompatibilidad) de Clase II DQB0602. Otras moléculas MHC de clase II asociadas con el desarrollo de una respuesta inmunitaria inhibidora en sujetos con hemofilia son A3, B7, C7, DQA0102, C2, DQA0103, DQB0603 y DR13 (véase "Inhibitors in Patients with Hemophilia", EC Rodriguez-Merchan y CA Lee, Eds., Blackwell Science, Ltd, 2002).
En algunas modalidades, los métodos descritos aquí reducen el nivel de una o más citoquinas en el sujeto en comparación con el nivel de una o más citoquinas en el sujeto después de un tratamiento previo con un polipéptido que consiste en una proteína del FVIII. En otra modalidad, los métodos descritos aquí reducen el nivel de una o más citoquinas en el sujeto en comparación con el nivel de una o más citoquinas en el sujeto antes de la administración. En otras modalidades, la expresión de una o más moléculas tolerogénicas aumenta después de la administración de los métodos descritos aquí con respecto al nivel de expresión de una o más moléculas tolerogénicas antes de la administración. En determinadas modalidades, la una o más moléculas tolerogénicas se seleccionan de IL-10, TGF-p, IL-35, IDO-1 y cualquier combinación de los mismos.
En otras modalidades, la respuesta inmunitaria comprende un síntoma clínico seleccionado del grupo que consiste en: mayor tendencia a la hemorragia, alto consumo de factor de coagulación, falta de respuesta a la terapia con factor de coagulación, menor eficacia de la terapia con factor de coagulación, vida media acortada del factor de coagulación y cualquier combinación de los mismos. En ciertas modalidades, la respuesta inmunitaria comprende un síntoma clínico seleccionado del grupo que consiste en: mayor tendencia a la hemorragia, alto consumo de factor de coagulación, falta de respuesta a la terapia con factor de coagulación, menor eficacia de la terapia con factor de coagulación, menor recuperación de la actividad del factor de coagulación según el seguimiento en el plasma, vida media acortada del factor de coagulación y cualquier combinación de los mismos.
En ciertas modalidades, se había diagnosticado previamente al ser humano que tenía una respuesta inmunitaria inhibidora. Dicho diagnóstico se puede hacer usando cualquier método conocido en la técnica. Por ejemplo, un ser humano se puede caracterizar por tener una respuesta inmunitaria a un factor de coagulación, p. ej., un FVIII, si el ser humano tiene uno o más de los siguientes: (a) un título de anticuerpos inhibidores contra el factor de coagulación mayor o igual a 0.6 UB; (b) niveles en suero aumentados de una o más citoquinas seleccionadas del grupo que consiste en IL-12, IL-4, IL-17 y TNF-a; (c) mayor tendencia a la hemorragia; (d) alto consumo de factor de coagulación; (e) una falta de respuesta a la terapia con factor de coagulación; (f) menor eficacia de la terapia con factor de coagulación; (g) vida media acortada del factor de coagulación y cualquier combinación de Ios mismos. En una modalidad particular, el ser humano se caracteriza por tener una respuesta inmunitaria a un factor de coagulación si el ser humano tiene un título de anticuerpos inhibidores contra el factor de coagulación mayor o igual a 0.6 UB.
En algunas modalidades, se ha diagnosticado previamente al ser humano que ha desarrollado una respuesta inmunitaria inhibidora al factor de coagulación al menos aproximadamente 1 mes, al menos aproximadamente 2 meses, al menos aproximadamente 3 meses, al menos aproximadamente 4 meses, al menos aproximadamente 5 meses, al menos aproximadamente 6 meses, al menos aproximadamente 7 meses, al menos aproximadamente 8 meses, al menos aproximadamente 9 meses, al menos aproximadamente 10 meses, al menos aproximadamente 11 meses, al menos aproximadamente 12 meses, al menos aproximadamente 13 meses, al menos aproximadamente 14 meses, al menos aproximadamente 15 meses, al menos aproximadamente 16 meses, al menos aproximadamente 17 meses, al menos aproximadamente 18 meses, al menos aproximadamente 19 meses, al menos aproximadamente 20 meses, al menos aproximadamente 21 meses, al menos aproximadamente 22 meses, al menos aproximadamente 23 meses, al menos aproximadamente 24 meses, al menos aproximadamente 27 meses, al menos aproximadamente 30 meses, al menos aproximadamente 33 meses, al menos aproximadamente 36 meses, al menos aproximadamente 39 meses, al menos aproximadamente 42 meses, al menos aproximadamente 45 meses, al menos aproximadamente 48 años, al menos aproximadamente 51 meses, al menos aproximadamente 54 meses, al menos aproximadamente 57 meses, al menos aproximadamente 60 meses, al menos aproximadamente 6 años, al menos aproximadamente 7 años, al menos aproximadamente 8 años, al menos aproximadamente 10 años, al menos aproximadamente 15 años o al menos aproximadamente 20 años antes de la administración. En una modalidad, se ha diagnosticado previamente al ser humano que ha desarrollado una respuesta inmunitaria inhibidora al factor de coagulación al menos aproximadamente 5 años antes de la administración.
Los métodos descritos aquí proporcionan un tiempo mejorado para la tolerancia en comparación con los métodos de tratamientos de referencia de inducción de inmunotolerancia. La expresión "tiempo para la tolerancia" como se usa en el presente documento se refiere a la cantidad de tiempo entre la administración de la primera dosis de la composición o la proteína quimérica que comprende un factor de coagulación y una región Fc y el desarrollo de inmunotolerancia en el ser humano. La disminución del tiempo para la tolerancia puede tener beneficios significativos para el ser humano, incluyendo, pero no limitado a la reducción de la carga económica requerida para lograr la tolerancia. En algunas modalidades, el tiempo para la tolerancia es de aproximadamente 1 a aproximadamente 24 semanas, de aproximadamente 1 a aproximadamente 23 semanas, de aproximadamente 1 a aproximadamente 22 semanas, de aproximadamente 1 a aproximadamente 21 semanas, de aproximadamente 2 a aproximadamente 20 semanas, de aproximadamente 2 a aproximadamente 19 semanas, de aproximadamente 2 a aproximadamente 18 semanas, de aproximadamente 2 a aproximadamente 17 semanas, de aproximadamente 3 a aproximadamente 16 semanas, de aproximadamente 3 a aproximadamente 15 semanas, de aproximadamente 3 a aproximadamente 14 semanas, de aproximadamente 3 a aproximadamente 13 semanas, de aproximadamente 4 a aproximadamente 12 semanas, de aproximadamente 4 a aproximadamente 11 semanas, de aproximadamente 4 a aproximadamente 10 semanas, de aproximadamente 4 a aproximadamente 9 semanas, de aproximadamente 5 a aproximadamente 8 semanas, de aproximadamente 5 a aproximadamente 7 semanas, de aproximadamente 5 a aproximadamente 6 semanas, de aproximadamente 1 a aproximadamente 12 semanas, de aproximadamente 1 a aproximadamente 11 semanas, de aproximadamente 1 a aproximadamente 10 semanas, de aproximadamente 1 a aproximadamente 9 semanas, de aproximadamente 1 a aproximadamente 8 semanas, de aproximadamente 1 a aproximadamente 7 semanas, de aproximadamente 1 a aproximadamente 6 semanas, de aproximadamente 1 a aproximadamente 5 semanas o de aproximadamente 1 a aproximadamente 4 semanas. En algunas modalidades, el tiempo para la tolerancia es de menos de aproximadamente 70 semanas, menos de aproximadamente 65 semanas, menos de aproximadamente 60 semanas, menos de aproximadamente 58 semanas, menos de aproximadamente 56 semanas, menos de aproximadamente 54 semanas, menos de aproximadamente 52 semanas, menos de aproximadamente 50 semanas, menos de aproximadamente 48 semanas, menos de aproximadamente 46 semanas, menos de aproximadamente 44 semanas, menos de aproximadamente 42 semanas, menos de aproximadamente 40 semanas, menos de aproximadamente 38 semanas, menos de aproximadamente 36 semanas, menos de aproximadamente 34 semanas, menos de aproximadamente 32 semanas, menos de aproximadamente 30 semanas, menos de aproximadamente 28 semanas, menos de aproximadamente 26 semanas, menos de aproximadamente 24 semanas, menos de aproximadamente 23 semanas, menos de aproximadamente 22 semanas, menos de aproximadamente 21 semanas, menos de aproximadamente 20 semanas, menos de aproximadamente 19 semanas, menos de aproximadamente 18 semanas, menos de aproximadamente 17 semanas, menos de aproximadamente 16 semanas, menos de aproximadamente 15 semanas, menos de aproximadamente 14 semanas, menos de aproximadamente 13 semanas, menos de aproximadamente 12 semanas, menos de aproximadamente 11 semanas, menos de aproximadamente 10 semanas, menos de aproximadamente 9 semanas, menos de aproximadamente 8 semanas, menos de aproximadamente 7 semanas, menos de aproximadamente 6 semanas, menos de aproximadamente 5 semanas, menos de aproximadamente 4 semanas, menos de aproximadamente 3 semanas, menos de aproximadamente 2 semanas o menos de aproximadamente 1 semana. En ciertas modalidades, el tiempo para la tolerancia es de aproximadamente 4 a aproximadamente 12 semanas. En una modalidad, el tiempo para la tolerancia es de aproximadamente 4 semanas. En otra modalidad, el tiempo para la tolerancia es de aproximadamente 12 semanas. En algunas modalidades, el tiempo para la tolerancia es de menos de aproximadamente 10 meses. En algunas modalidades, el tiempo para la tolerancia es de menos de aproximadamente 9 meses. En algunas modalidades, el tiempo para la tolerancia es de menos de aproximadamente 8 meses. En algunas modalidades, el tiempo para la tolerancia es de menos de aproximadamente 7 meses. En algunas modalidades, el tiempo para la tolerancia es de menos de aproximadamente 6 meses. En algunas modalidades, el tiempo para la tolerancia es de menos de aproximadamente 5 meses. En algunas modalidades, el tiempo para la tolerancia es de menos de aproximadamente 4 meses. En algunas modalidades, los métodos de la presente descripción dan como resultado un tiempo más corto para la tolerancia en el ser humano después de tratamiento con una composición o la proteína quimérica que comprende un factor de coagulación y una región Fc en comparación con el tiempo para la tolerancia después de tratamiento con el factor de coagulación solo.
En algunas modalidades, el desarrollo de inmunotolerancia se caracteriza por un título de un anticuerpo inhibidor contra el factor de coagulación de menos de aproximadamente 0.6 UB. En algunas modalidades, el desarrollo de inmunotolerancia se caracteriza por un título de un anticuerpo inhibidor contra el factor de coagulación de aproximadamente 0.5 UB. En algunas modalidades, el desarrollo de inmunotolerancia se caracteriza por un título de un anticuerpo inhibidor contra el factor de coagulación de menos de aproximadamente 0.4 UB. En algunas modalidades, el desarrollo de inmunotolerancia se caracteriza por un título de un anticuerpo inhibidor contra el factor de coagulación de menos de aproximadamente 0.3 UB. En algunas modalidades, el desarrollo de inmunotolerancia se caracteriza por un título de un anticuerpo inhibidor contra el factor de coagulación de menos de aproximadamente 0.2 UB. En algunas modalidades, el desarrollo de inmunotolerancia se caracteriza por un título de un anticuerpo inhibidor contra el factor de coagulación de menos de aproximadamente 0.1 UB. En algunas modalidades, el desarrollo de inmunotolerancia se caracteriza por un título de un anticuerpo inhibidor contra el factor de coagulación de 0.0 UB. En ciertas modalidades, el título de anticuerpos inmunitarios inhibidores se observa en dos mediciones consecutivas, p. ej., en dos semanas consecutivas en un periodo de cuatro semanas.
En algunas modalidades, el desarrollo de inmunotolerancia se caracteriza por una recuperación progresiva >66% (p. ej., recuperación progresiva de aproximadamente 67%, aproximadamente 68%, aproximadamente 69%, aproximadamente 70%, aproximadamente 71%, aproximadamente 72%, aproximadamente 73%, aproximadamente 74%, aproximadamente 75%, aproximadamente 76%, aproximadamente 77%, aproximadamente 78%, aproximadamente 79%, aproximadamente 80%, aproximadamente 81%, aproximadamente 82%, aproximadamente 83%, aproximadamente 84%, aproximadamente 85%, aproximadamente 86%, aproximadamente 87%, aproximadamente 88%, aproximadamente 89%, aproximadamente 90%, aproximadamente 91%, aproximadamente 92%, aproximadamente 93%, aproximadamente 94%, aproximadamente 95%, aproximadamente 96%, aproximadamente 97%, aproximadamente 98%, aproximadamente 99% o aproximadamente 100%). Como se usa en el presente documento, "recuperación progresiva" se refiere a niveles de FVIII máximos 15 -30 minutos después de infusión.
Una vez que se completan el periodo de inducción y el periodo de disminución progresiva, el sujeto puede entonces seguir el tratamiento profiláctico de la proteína quimérica. El régimen de dosificación profiláctico puede ser cualquier régimen de dosificación descrito en el presente documento.
En algunas modalidades, el ser humano tratado usando los métodos descritos aquí está recibiendo o ha recibido recientemente una terapia inmunoestimuladora. Por ejemplo, se han descrito también inhibidores en pacientes con hemofilia A positivos para VHC que se someten a tratamiento con interferón, así como en pacientes con hemofilia A positivos para VIH que tienen un síndrome inflamatorio de reconstitución inmune asociado con terapia antirretroviral. Véase "Report of Expert Meeting on FVIII Products and Inhibitor Development", Agencia Europea de Medicamentos (28 de febrero de 2006 - 2 de marzo de 2006). Por lo tanto, en algunas modalidades, el ser humano está recibiendo terapia con interferón. En algunas modalidades, el ser humano está recibiendo terapia antiviral. En algunas modalidades, el ser humano está recibiendo una terapia antirretroviral y tiene un síndrome inflamatorio de reconstitución inmune.
En ciertas modalidades, el ser humano ha tenido menos de 150 días de exposición (DE) al factor de coagulación, p. ej. FVIII. En una modalidad, el ser humano ha tenido menos de 50 DE. En otra modalidad, el ser humano ha tenido menos de 20 DE.
Algunos aspectos descritos aquí se dirigen a reducir la gravedad o aparición de una reacción alérgica o anafiláctica a un factor de coagulación en un sujeto que lo necesite, que comprenden administrar al sujeto una composición o una proteína quimérica que comprende el factor de coagulación y una región Fc. En algunas modalidades, la administración de la composición o la proteína quimérica reduce la gravedad de una reacción anafilactoide al factor de coagulación. En algunas modalidades, la administración de la composición o la proteína quimérica reduce la gravedad de una reacción alérgica al factor de coagulación.
III. Polipéptidos quiméricos
Los polipéptidos quiméricos según la presente invención comprenden una proteína del FVIII que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 207, y un fragmento de VWF que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 202. El fragmento de VWF se utiliza para prevenir o bloquear la interacción de la proteína del FVIII con el VWF endógeno, impidiendo así su aclaramiento a través de la ruta de aclaramiento del VWF. Para evitar la disociación de la proteína del FVIII del fragmento de VWF, ambos se unen directamente mediante un enlace covalente.
El enlace oovalente puede ser cualquier enlace covalente conocido en la técnica. En algunas modalidades, el enlace covalente es un enlace disulfuro. En algunas modalidades, el enlace covalente es un enlace peptídico. En otras modalidades, la proteína del FVIII se modifica para aumentar la fuerza de la interacción entre la proteína del FVIII y el fragmento de VWF. En otras modalidades, el fragmento de VWF se modifica para aumentar la fuerza de la interacción entre la proteína del FVIII y el fragmento de VWF. En otras modalidades más, la proteína del FVIII y la proteína del VWF se modifican para aumentar la fuerza de la interacción entre la proteína del FVIII y el fragmento VWF.
En modalidades particulares, la proteína del FVIII que comprende un polipéptido del FVIII y el fragmento de VWF que comprende un dominio D' y un dominio D3 del VWF se asocian directamente a través de al menos un enlace covalente entre al menos un aminoácido en la secuencia de polipéptido del FVIII y al menos un aminoácido en los dominios D' y D3 del VWF. En otras modalidades, la proteína del FVIII y el fragmento de VWF se asocian indirectamente a través de al menos un enlace covalente entre al menos un aminoácido en la secuencia de polipéptido del FVIII y al menos un aminoácido en una secuencia heteróloga fusionada directa o indirectamente con loa dominios D' y D3 del VWF. En otras modalidades, la proteína del FVIII y el fragmento de VWF se asocian indirectamente a través de al menos un enlace covalente entre al menos un aminoácido en la secuencia del fragmento de VWF y al menos un aminoácido en una secuencia heteróloga fusionada directa o indirectamente con el polipéptido del FVIII. En otras modalidades más, la proteína del FVIII y el fragmento de VWF se asocian indirectamente a través de al menos un enlace covalente entre al menos un aminoácido en una secuencia heteróloga fusionada directa o indirectamente con los dominios D' y D3 del VWF y al menos un aminoácido en una secuencia heteróloga fusionada directa o indirectamente con el polipéptido del FVIII.
El polipéptido o proteína quimérico para uso según la presente invención comprende un heterodímero FVIII-Xt En Fc/D ’D3-XTEN-Fc. El polipéptido quimérico heterodímero FVIII-XTEN-Fc/D ’D3-XTEN-Fc comprende: (i) la proteína del FVIII, que comprende el polipéptido del FVIII, un XTEN insertado en el dominio B del polipéptido del FVIII y una primera región Fc; y (ii) la proteína del VWF, que comprende un fragmento del VWF, una segunda secuencia XTEN, un conector a2 y una segunda región Fc. En la figura 1 se presenta una representación esquemática de un heterodímero FVIII-XTEN-F<c>/D’D3-XTEN-F<c>ejemplar, denominado rFVIIIFc-VWFXTEN.
III. A. Polipéptidos del factor VIII
"Factor VIII", abreviado a lo largo de la presente solicitud como "FVIII", como se usa en el presente documento, significa polipéptido funcional de FVIII en su función normal en la coagulación, a menos que se especifique lo contrario. Por tanto, el término FVIII incluye variantes de polipéptidos que son funcionales. "Una proteína del FVIII" se usa para referirse a un polipéptido (o proteína) del FVIII solo, un polipéptido del FVIII fusionado con polipéptidos adicionales y un polipéptido de FVIII asociado con uno o más polipéptidos adicionales siempre que la proteína del FVIII presente una función/actividad de FVIII. Las expresiones "polipéptido del FVIII", "parte del FVIII" y "FVIII" se refieren a la secuencia de polipéptido del FVIII sola. Los ejemplos de las funciones/actividades del FVIII incluyen, pero no se limitan a una capacidad para activar la coagulación, una capacidad para actuar como un cofactor para el factor IX o una capacidad para formar un complejo tenasa con el factor IX en presencia de Ca2+ y fosfolípidos, que después convierte el Factor X en la forma Xa activada. El polipéptido del FVIII puede ser el polipéptido del FVIII humano, porcino, canino, de rata o murino. Además, las comparaciones entre el FVIII de seres humanos y otras especies han identificado residuos conservados que es probable que sean necesarios para la función (Cameron et al.,Thromb. Haemost.
79:317-22 (1998); US 6251 632). Se conocen las secuencias de polipéptidos y polinucleótidos de longitud completa, al igual que muchos fragmentos funcionales, mutantes y versiones modificadas. Varias secuencias de aminoácidos y nucleótidos del FVIII se describen, p. ej., en las publicaciones de EE.UU. Núm. 2015/0158929 A1, 2014/0308280<a>1 y 2014/0370035 A1 y publicación internacional Núm. WO 2015/106052 A1. Los polipéptidos del FVIII incluyen, p. ej., FVIII de longitud completa, FVIII de longitud completa menos Met en el extremo N, polipéptido del FVIII maduro (menos la secuencia señal), polipéptido del FVIII maduro con una Met adicional en el extremo N-terminal y/o polipéptido del FVIII con una deleción total o parcial del dominio B. Las variantes de FVIII incluyen deleciones del dominio B, ya sean deleciones parciales o totales.
El polipéptido del FVIII del polipéptido quimérico usado en el presente documento tiene actividad de FVIII en el plasma. La actividad de FVIII se puede medir por cualquier método conocido en la técnica. Hay una serie de ensayos disponibles para evaluar la función del sistema de coagulación: prueba de tiempo parcial de tromboplastina activada (aPTT), prueba cromogénica, prueba ROTEM, prueba de tiempo de protrombina (PT) (también usada para determinar INR), prueba de fibrinógeno (a menudo por el método de Clauss), recuento de plaquetas, pruebas de función plaquetaria (a menudo por PFA-100), TCT, tiempo de sangrado, prueba de mezcla (si una anomalía se corrige si el plasma del paciente se mezcla con plasma normal), ensayos de factor de coagulación, anticuerpos antifosfolípidos, D-dímero, pruebas genéticas (p. ej., factor V Leiden, mutación de protrombina G20210A), tiempo de veneno de víbora diluido de Russell (dRVVT), pruebas de función plaquetaria diversas, tromboelastografía (TEG o Sonoclot), tromboelastometría (TEM®, p. ej., ROTEM®), o tiempo de lisis de euglobulina (ELT).
La prueba de aPTT es un indicador de rendimiento que mide la eficacia tanto de la vía "intrínseca" (también denominada vía de activación por contacto) como de las vías de coagulación comunes. Esta prueba se usa habitualmente para medir la actividad de coagulación de factores de coagulación recombinantes disponibles en el mercado, p. ej., FVIII. Se usa típicamente junto con el tiempo de protrombina (TP), que mide la vía extrínseca. (Véase, p. ej., Kamal et al.,Mayo Clin Proc.,82 (7): 864-873 (2007)). En una modalidad, el aPTT se prueba usando un ensayo en el que se mide la actividad de FVIII usando el reactivo de PTT activado Dade®Actin® FSL (Siemens Health Care Diagnostics) en un analizador BCS® XP (Siemens Healthcare Diagnostics), En ciertas modalidades, el polipéptido quimérico tiene una actividad plasmática de FVIII de al menos aproximadamente 1%, al menos aproximadamente 2%, al menos aproximadamente 3%, al menos aproximadamente 4%, al menos aproximadamente 5%, al menos aproximadamente 6%, al menos aproximadamente 7%, al menos aproximadamente 8%, al menos aproximadamente 9%, al menos aproximadamente 10%, al menos aproximadamente 11%, al menos aproximadamente 12%, al menos aproximadamente 13%, al menos aproximadamente 14%, al menos aproximadamente 15%, al menos aproximadamente 15%, al menos aproximadamente 16%, al menos aproximadamente 17%, al menos aproximadamente 18%, al menos aproximadamente 19% o al menos aproximadamente 20% medido por la prueba de aPTT,
El ensayo de aPTT también se puede usar para evaluar la potencia de un polipéptido quimérico antes de la administración a un paciente o sujeto, (Hubbard AR, et al,J Thromb Haemost11: 988-9 (2013)), El ensayo de aPTT se puede usar además junto con cualquiera de los ensayos descritos en el presente documento, ya sea antes de la administración o después de la administración a un paciente o sujeto,
El análisis ROTEM proporciona información sobre toda la cinética de la hemostasia: tiempo de coagulación, formación de coágulos, estabilidad y lisis de coágulos, Los diferentes parámetros de la tromboelastometría dependen de la actividad del sistema de coagulación plasmática, función plaquetaria, fibrinólisis o muchos factores que influyen en estas interacciones, Este ensayo puede proporcionar una visión completa de la hemostasia secundaria,
El mecanismo del ensayo cromogénico se basa en los principios de la cascada de coagulación sanguínea, donde el FVIII activado acelera la conversión del Factor X en Factor Xa en presencia de Factor IX activado, fosfolípidos e iones calcio, La actividad del factor Xa se evalúa por hidrólisis de un sustrato de p-nitroanilida (pNA) específico del factor Xa, La velocidad inicial de liberación de p-nitroanilina medida a 405 nM es directamente proporcional a la actividad del factor Xa y, por tanto, a la actividad del FVIII en la muestra, En una modalidad, el ensayo cromogénico es el ensayo BIOPHEN FVI11 :C (Hyphen Biomed, Neurville sur Oise, Francia)
El ensayo cromogénico es recomendado por el Subcomité de FVIII y Factor IX del Comité Científico y de Normalización (SSC) de la Sociedad Internacional de Trombosis y Hemostasis (ISTH). Desde 1994, el ensayo cromogénico también ha sido el método de referencia de la Farmacopea Europea para la asignación de la potencia de concentración del FVIII, Por lo tanto, en algunas modalidades, el polipéptido quimérico que comprende un polipéptido del FVIII tiene una actividad de FVIII comparable con un polipéptido quimérico que comprende el polipéptido del FVIII maduro o un polipéptido del FVIII BDD (p, ej,, RECOMBINATE®, KOGENATE FS®, HELIXATE FS®, XYNTHA/REFACTO AB®, HEMOFIL-M®, MONARC-M®, MONOCLATE-P®, HUMATE-P®, ALPHANATE®, KOATE-DVI®, AFSTYLA®, y HYATE:C®),
El ensayo cromogénico también se puede usar para evaluar la potencia de un polipéptido quimérico antes de la administración a un paciente o sujeto, (Hubbard AR, et al,J Thromb Haemost11: 988-9 (2013)), El ensayo cromogénico se puede usar además junto con cualquiera de los ensayos descritos en el presente documento, ya sea antes de la administración o después de la administración a un paciente o sujeto,
En otras modalidades, el polipéptido quimérico que comprende un polipéptido del FVIII de esta descripción tiene una velocidad de generación de Factor Xa comparable con un polipéptido quimérico que comprende un polipéptido del FVIII maduro o un polipéptido del FVIII BDD (p, ej,, ADVATE®, REFACTO® o ELOCTATE®),
Con el fin de activar el factor X en factor Xa, el factor IX activado (factor IXa) hidroliza un enlace arginina-isoleucina en el factor X para formar el factor Xa en presencia de Ca2+, fosfolípidos de membrana y un cofactor de FVIII, Por lo tanto, la interacción del FVIII con el Factor IX es fundamental en la vía de coagulación, En ciertas modalidades, el polipéptido quimérico que comprende un polipéptido del FVIII puede interaccionar con el Factor IXa a una velocidad comparable con un polipéptido quimérico que comprende una secuencia de polipéptido del FVIII maduro o un polipéptido del FVIII BDD (p, ej,, ADVATE®, REFACTO® o ELOCTATE®),
Además, el FVIII se une al factor de von Willebrand mientras está inactivo en la circulación, El FVIII se degrada rápidamente cuando no está unido al VWF y se libera del VWF por la acción de la trombina, En algunas modalidades, el polipéptido quimérico que comprende un polipéptido del FVIII que se une al factor von Willebrand, p, ej,, un fragmento de VWF descrito en el presente documento, en un nivel comparable a un polipéptido quimérico que comprende una secuencia de polipéptido del FVIII maduro o un polipéptido de FVIII BDD (p, ej,, ADVATE®, REFACTO® o ELOCTATE®),
El FVIII puede ser inactivado por la proteína C activada en presencia de calcio y fosfolípidos, La proteína C activada escinde la cadena pesada del FVIII después de la arginina 336 en el dominio A1, lo que altera un sitio de interacción del sustrato del factor X, y escinde después de la arginina 562 en el dominio A2, lo que mejora la disociación del dominio A2 y también altera un sitio de interacción con el Factor IXa, Esta escisión también biseca el dominio A2 (43 kDa) y genera dominios A2-N (18 kDa) y A2-C (25 kDa), Por lo tanto, la proteína C activada puede catalizar múltiples sitios de escisión en la cadena pesada, En algunas modalidades, el polipéptido quimérico que comprende un polipéptido del FVIII es inactivado por la proteína C activada en un nivel comparable a un polipéptido quimérico que comprende una secuencia de polipéptido del FVIII maduro o un polipéptido de FVIII BDD (p. ej,, ADVATE®, REFACTO® o e l o c t a t e ®).
En otras modalidades, el polipéptido quimérico que comprende un polipéptido del FVIII tiene actividad de FVIIIin vivocomparable a un polipéptido quimérico que comprende una secuencia de polipéptido del FVIII maduro o un polipéptido de FVIII BDD (p. ej., ADVATE®, REFa Ct O® o ELOCTATE®). En una modalidad particular, el polipéptido quimérico que comprende un polipéptido del FVIII es capaz de proteger un ratón HemA en un nivel comparable al de un polipéptido quimérico que comprende una secuencia de polipéptido del FVIII maduro o un polipéptido de FVIII BDD (p. ej., ADVATE®, REFACTO® o ELOCTATE®) en un modelo de corte transversal de la vena de la cola de un ratón HemA.
A continuación se muestran ejemplos de secuencias de FVIII humano (de longitud completa).
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Los polipéptidos del FVIII incluyen FVIII de longitud completa, FVIII de longitud completa menos Met en el extremo N, FVIII maduro (menos la secuencia señal), FVIII maduro con una Met adicional en el extremo N-terminal y/o FVIII con una deleción completa o parcial del dominio B. Las variantes de FVIII incluyen deleciones del dominio B, ya sean deleciones parciales<o>totales.
La secuencia del polipéptido de FVIII humano maduro nativo se presenta como SEQ ID NO: 65. Un polipéptido del FVIII nativo tiene la siguiente fórmula: A1-a1-A2-a2-B-a3-A3-C1-C2, donde A1, A2 y A3 son los "dominios A" estructuralmente relacionados, B es el "dominio B", C1 y C2 son los "dominios C" estructuralmente relacionados, y a1, a2 y a3 son regiones espadadoras ácidas. Con referencia a la posición en la secuencia de aminoácidos primaria en la SEQ ID NO: 65, el dominio A1 del FVIII humano se extiende desde Ala1 hasta aproximadamente Arg336, la región espadadora a1 se extiende desde aproximadamente Met337 hasta aproximadamente Val374, el dominio A2 se extiende desde aproximadamente Ala375 hasta aproximadamente Tyr719, la región espadadora a2 se extiende desde aproximadamente Glu720 hasta aproximadamente Arg740, el dominio B se extiende desde aproximadamente Ser741 hasta aproximadamente Arg 1648, la región espadadora a3 se extiende desde aproximadamente Glu1649 hasta aproximadamente Arg1689, el dominio A3 se extiende desde aproximadamente Ser1690 hasta aproximadamente Leu2025, el dominio C1 se extiende desde aproximadamente Gly2026 hasta aproximadamente Asn2072, y el dominio C2 se extiende desde aproximadamente Ser2073 hasta Tyr2332. Aparte de los sitios de escisión proteolítica específicos, la designación de las ubicaciones de los límites entre los dominios y regiones del FVIII puede variar en diferentes referencias bibliográficas. Por lo tanto, los límites indicados en el presente documento se designan como aproximados mediante el uso del término "aproximadamente".
El gen del FVIII humano se aisló y expresó en células de mamíferos (Toole, J. J., et al.,Nature312:342-347 (1984); Gitschier, J., et al.,Nature312:326-330 (1984); Wood, W. I., et al.,Nature312:330-337 (1984); Vehar, G. A., et al.,Nature312:337-342 (1984); WO 87/04187; WO 88/08035; WO 88/03558; y patente de EE.UU. Núm. 4757006). La secuencia de aminoácidos del FVIII se dedujo del ADNc como se muestra en la patente de EE.UU. N24965 199. Además, el FVIII con el dominio B parcial o totalmente eliminado se muestra en las patentes de EE.UU. Núm.
4 994371 y 4868 112. Opcionalmente, el dominio B del FVIII humano se reemplaza por el dominio B del Factor V humano como se muestra en la patente de EE.UU. N25004803. La secuencia de ADNc que codifica el factor VIII humano y la secuencia de aminoácidos se muestran en las SEQ ID NO: 1 y 2, respectivamente, de la publicación de solicitud de EE.UU. Núm. 2005/0100990.
La secuencia del FVIII porcino está publicada en Toole, J. J., et al.,Proc. Natl. Acad. Sci. USA83: 5939 - 5942 (1986). Además, la secuencia completa de ADNc porcino obtenida a partir de amplificación por PCR de secuencias de FVIII de una biblioteca de ADNc de bazo de cerdo se ha descrito en Healey, J. F., et al.,Blood88: 4209-4214 (1996). El FVIII híbrido humano/porcino que tiene sustituciones de todos los dominios, todas las subunidades y secuencias de aminoácidos específicas se describió en la patente de EE.UU. Núm. 5364771 de Lollar y Runge, y en el documento WO 93/20093. Más recientemente, las secuencias de nucleótidos y de aminoácidos correspondientes de los dominios A1 y A2 del FVIII porcino y un FVIII quimérico con dominios A1 y/o A2 porcinos sustituidos por los dominios humanos correspondientes se han descrito en el documento WO 94/11503. La patente de EE.UU. Núm. 5859204, Lollar, J. S., también describe el ADNc porcino y las secuencias de aminoácidos deducidas. La patente de EE.UU. Núm. 6458563 describe un FVIII porcino con el dominio B eliminado.
La patente de EE.UU. Núm. 5859204 de Lollar, J. S. describe mutantes funcionales del FVIII que tienen antigenicidad reducida e inmunorreactividad reducida. La patente de EE.UU. Núm. 6376463 de Lollar, J. S. también describe mutantes del FVIII que tienen inmunorreactividad reducida. La publicación de solicitud de EE.UU. Núm. 2005/0100990 de Saenko et al. describe mutaciones funcionales en el dominio A2 del FVIII.
El "dominio B" del FVIII, como se usa en el presente documento, es el mismo que el dominio B conocido en la técnica que se define por la identidad de la secuencia de aminoácidos interna y sitios de escisión proteolítica, p. ej., los residuos Ser741-Arg1648 del FVIII humano de longitud completa. L<os>otros dominios del FVIII humano se definen por los siguientes residuos de aminoácidos: A1, residuos Ala1-Arg372; A2, residuos Ser373-Arg740; A3, residuos Ser1690-Asn2019; C1, residuos Lys2020-Asn2172; C2, residuos Ser2173-Tyr2332. La secuencia A3-C1-C2 incluye los residuos Ser1690-Tyr2332. La secuencia restante, residuos Glu1649-Arg1689, se denomina habitualmente región ácida a3. Las situaciones de los límites para todos los dominios, incluyendo los dominios B, para FVIII porcino, de ratón y canino también se conocen en la técnica. Según la presente invención, el dominio B del FVIII se elimina ("factor VIII con el dominio B eliminado" o "FVIII BDD").
�� Un TV!!! con dominio B eliminado" puede tener deleciones completas o parciales descritas en las patentes de EE.UU. Núm. 6 316226, 6 346513, 7041 635, 5789203, 6 060447, 5595886 , 6 228620, 5972885, 6 048720, 5543502, 5 610278, 5171 844, 5112950, 4868 112, y 6458563, publicaciones de EE.UU. Núm. 2017/0073393 A1 y US 2012/308641 A1, y publicaciones internacionales Núm. WO 2011/041770 A1, WO 2015/106052 A1 (PCT/US2015/010738) y WO 2016/025764. Opcionalmente, una secuencia de FV!!! con el dominio B eliminado, usada en los métodos de la presente descripción comprende cualquiera de las deleciones descritas en la col. 4, línea 4 hasta col. 5, línea 28 y ejemplos 1-5 de la patente de EE.UU. Núm. 6 316226 (también en US 6 346513), o un factor V!!! con el dominio B eliminado es el factor V!!! con el dominio B eliminado de S743/Q1638 (SQ BDD FV!!!) (p. ej., factor V!!! que tiene una deleción desde el aminoácido 744 al aminoácido 1637, p. ej., el factor V!!! que tiene los aminoácidos 1 -743 y aminoácidos 1638-2332 del FV!!! maduro), o un FV!!! con el dominio B eliminado tiene una eliminación descrita en la col. 2, líneas 26-51 y ejemplos 5-8 de la patente de EE.UU. N25789203 (también US 6 060447, US 5595886 y US 6 228620), o un Factor V!!! con el dominio B eliminado tiene una deleción descrita en la col. 1, líneas 25 a col.
2, línea 40 de la patente de EE.UU. Núm. 5972885; col. 6 , líneas 1-22 y ejemplo 1 de la patente de EE.UU. Núm. 6 048720; col. 2, líneas 17-46 de la patente de EE.UU. Núm. 5543502; col. 4, línea 22 a col. 5, línea 36 de la patente de EE.UU. Núm. 5171 844; col. 2, líneas 55-68, figura 2, y ejemplo 1 de la patente de EE.UU. Núm. 5112950; col.
2, línea 2 a col. 19, línea 21 y tabla 2 de la patente de EE.UU. Núm. 4868 112; col. 2, línea 1 a col. 3, línea 19, col. 3, línea 40 a col. 4, línea 67, col. 7, línea 43 a col. 8 , línea 26, y col. 11, línea 5 a col. 13, línea 39 de la patente de EE.UU. Núm. 7041 635; o col. 4, líneas 25-53, de la patente de EE.UU. Núm. 6458563. Opcionalmente, un polipéptido de FV!!! con el dominio B eliminado tiene una deleción de la mayor parte del dominio B, pero todavía contiene secuencias amino terminales del dominio B que son esenciales para el procesamiento proteolíticoin vivodel producto de traducción primario en dos cadenas polipeptídicas, como se describe en el documento WO 91/09122, o un polipéptido del FV!!! con el dominio B eliminado se construye con una deleción de los aminoácidos 747-1638, es decir, prácticamente una deleción completa del dominio B. Hoeben R.C., et al.J. Biol. Chem.265 (13): 7318-7323 (1990). Un polipéptido del factor V!!! con el dominio B eliminado también puede contener una deleción de los aminoácidos 771-1666 o los aminoácidos 868-1562 del FV!!!. Meulien P. et al.Protein Eng.2(4): 301-6 (1988). Las deleciones adicionales del dominio B incluyen: deleción de los aminoácidos 982 al 1562 o del 760 al 1639 (Toole et al.,Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.(1986) 83, 5939-5942)), del 797 al 1562 (Eaton, et al.Biochemistry(1986) 25:8343-8347)), del 741 al 1646 (Kaufman (solicitud PCT publicada N2 WO 87/04187)), 747-1560 (Sarver, et al.,DNA(1987) 6:553-564)), del 741 al 1648 (Pasek (solicitud PCT N288/00831)), o del 816 al 1598 o del 741 al 1648 (Lagner(Behring Inst. Mitt.(1988) N282:16-25, EP 295597)). Opcionalmente, un polipéptido del FV!!! con el dominio B eliminado comprende una deleción de los residuos de aminoácidos 746 al 1648 del FV!!! maduro (que corresponde a una deleción del 765 al 1665 del FV!!! de longitud completa), o una deleción de los residuos de aminoácidos 745 al 1648 del FV!!! maduro (que corresponde a una deleción del 764 al 1665 del FV!!! de longitud completa).
Opcionalmente, el FV!!! BDD incluye un polipéptido del FV!!! que contiene fragmentos del dominio B que retienen uno o más sitios de glicosilación unidos a N, p. ej., los residuos 757, 784, 828, 900, 963 u opcionalmente 943, que corresponden a la secuencia de aminoácido de la secuencia del FV!!! de longitud completa. Los ejemplos de los fragmentos del dominio B incluyen 226 aminoácidos o 163 aminoácidos del dominio B como se describe en Miao, H.Z., et al.,Blood103(a): 3412-3419 (2004), Kasuda, A, et al.,J. Thromb. Haemost.6 : 1352-1359 (2008), y Pipe, S.W., et al.,J. Thromb. Haemost.9: 2235-2242 (2011) (es decir, se retienen los primeros 226 aminoácidos o 163 aminoácidos del dominio B). Opcionalmente, el FV!!! BDD comprende además una mutación puntual en el residuo 309 (de Phe a Ser) para mejorar la expresión del polipéptido del FV!!! BDD. Véase Miao, H.Z., et al.,Blood103 (a): 3412-3419 (2004). Opcionalmente, el FV!!! BDD incluye un polipéptido del FV!!! que contiene una parte del dominio B, pero que no contiene uno o más sitios de escisión de furina (p. ej., Arg1313 y Arg 1648). Véase Pipe, S.W. et al., J.Thromb. Haemost.9:2235-2242 (2011). Opcionalmente, el FV!!! BDD comprende el FV!!! monocatenario que contiene una deleción en los aminoácidos 765 al 1652 que corresponde al FV!!! maduro de longitud completa (también conocido como rFV!!!-SingleChain y AFSTYLA®). Véase la patente de EE.UU. Núm. 7041 635. Cada una de las deleciones anteriores se puede realizar en cualquier secuencia de FV!!!.
Opcionalmente, el FV!!! se escinde justo después de la arginina en el aminoácido 1648 (en el Factor V!!! de longitud completa o SEQ ID NO: 65), el aminoácido 754 (en el factor V!!! con deleción del dominio B S743/Q1638 o SEQ ID NO: 67), o el residuo de arginina correspondiente (en otras variantes), dando como resultado una cadena pesada y una cadena ligera. Opcionalmente, un polipéptido del FV!!! comprende una cadena pesada y una cadena ligera, que están unidas o asociadas por un enlace no covalente mediado por iones metálicos.
Opcionalmente, el FV!!! es un FV!!! monocatenario que no se ha escindido justo después de la arginina en el aminoácido 1648 (en el FV!!! de longitud completa o SEQ !D NO: 65), el aminoácido 754 (en el factor V!!! con deleción del dominio B S743/Q1638 o SEQ !D NO: 67), o el residuo de arginina correspondiente (en otras variantes). Un FV!!! monocatenario puede comprender una o más sustituciones de aminoácidos. Opcionalmente, la sustitución de aminoácidos es en un residuo correspondiente al residuo 1648, residuo 1645, o ambos del polipéptido del factor V!!! maduro de longitud completa (SEQ !D NO: 65) o residuo 754, residuo 751 o ambos del factor V!!! BDD SQ (SEQ !D NO: 67). La sustitución de aminoácidos puede ser cualquier aminoácido distinto de arginina, p. ej., isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, treonina, triptófano, valina, alanina, asparagina, ácido aspártico, cisteína, ácido glutámico, glutamina, glicina, prolina, selenocisteína, serina, tirosina, histidina, ornitina, pirrolisina o taurina.
El FV!!! puede ser además escindido por trombina y después activado como FV!!!a, sirviendo como un cofactor para el Factor !X activado (F!Xa). Y el F!X activado junto con el FV!!! activado forma un complejo Xasa y convierte el factor X en factor X activado (FXa), Para la activación, el FVIII es escindido por la trombina después de tres residuos de arginina, en los aminoácidos 372, 740 y 1689 (que corresponden a los aminoácidos 372, 740 y 795 en la secuencia del FVIII con el dominio B eliminado), generando la escisión el FVIIIa que tiene las cadenas de 50 kDa A1,43 kDa A2 y 73 kDa A3-C1-C2. Opcionalmente, el polipéptido del FVIII es el FVIII no activo, o un FVIII activado.
La proteína que tiene el polipéptido del FVIII unido o asociado con la proteína del VWF tiene la actividad de coagulación del FVIII, p. ej. activando el Factor IX como cofactor para convertir el Factor X en Factor X activado (FXa).
Los polipéptidos y proteínas "híbridos" o "quiméricos", como se usan en el presente documento, incluyen una combinación de un primer polipéptido y un segundo polipéptido. Opcionalmente, el polipéptido híbrido o quimérico comprende una sola cadena de polipéptido, p. ej. un polipéptido quimérico que comprende un polipéptido del FVIII y un XTEN. Véase, p. ej. el documento US 2015/0158929 A1. Opcionalmente, el polipéptido híbrido o quimérico comprende una combinación de una primera cadena de polipéptido, p. ej. un fragmento de VWF fusionado con una secuencia XTEN y una primera región constante de Ig o una parte de la misma, con una segunda cadena de polipéptido, p. ej. un polipéptido del FVIII fusionado con una segunda región constante de Ig o una parte de la misma, formando así un heterodímero. Véanse, p. ej. los documentos US 2015/0266943 A1, US 2016/0251408 A1, US 2017/0073393 A1.
Según la presente invención, el rFVIIIFc-VWF-XTEN comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 207.
En las Tablas 18-19 se proporcionan secuencias polipeptídicas adicionales relacionadas con las proteínas del FVIII de los polipéptidos quiméricos descritos aquí.
Se conocen muchas variantes funcionales del FVIII, como se describe antes y a continuación. Además, se han identificado cientos de mutaciones no funcionales en el FVIII en pacientes con hemofilia, y se ha determinado que el efecto de estas mutaciones en la función del FVIII se debe más a dónde se encuentran dentro de la estructura tridimensional del FVIII que a la naturaleza de la sustitución (Cutler et al.,Hum. Mutat.19: 274-8 (2002)). Además, las comparaciones entre el FVIII de seres humanos y otras especies han identificado residuos conservados que es probable que sean necesarios para la función (Cameron et al.,Thromb. Haemost.79:317-22 (1998); US 6 251 632).
III.B. Fragmentos del factor de von Willebrand (VWF)
El VWF (también conocido como F8VWF) es una glicoproteína multimérica grande presente en el plasma sanguíneo y producida constitutivamente en el endotelio (en los cuerpos de Weibel-Palade), megacariocitos (gránulos a de plaquetas) y tejido conectivo subendoteliano. El monómero básico del VWF es una proteína de 2813 aminoácidos. Cada monómero contiene una serie de dominios específicos con una función específica, el dominio D'/D3 (que se une al factor VIII), el dominio A1 (que se une al receptor de plaquetas GPIb, heparina y/o posiblemente colágeno), el dominio A3 (que se une al colágeno), el dominio C1 (en el que el dominio RGD se une a la integrina plaquetaria aIIIp3 cuando se activa) y el dominio de "nudo de cisteína" en el extremo C-terminal de la proteína (que el VWF comparte con el factor de crecimiento derivado plaquetas (PDGF), factor de crecimiento transformante p (TGFp) y gonadotropina coriónica humana p (pHCG)).
La expresión "un fragmento de VWF" como se usa en el presente documento incluye, pero no se limita a fragmentos de VWF funcionales que comprenden un dominio D' y un dominio D3, que son capaces de inhibir la unión del VWF endógeno al FVIII. Opcionalmente, el fragmento de VWF se une a la proteína del FVIII, o bloquea el sitio de unión del VWF en la proteína del FVIII, inhibiendo así la interacción de la proteína del FVIII con el VWF endógeno. Opcionalmente, el fragmento de VWF bloquea la unión del FVIII al VWF endógeno, evitando así el aclaramiento de la proteína del FVIII a través de una ruta de aclaramiento del VWF. Los fragmentos de VWF incluyen derivados, variantes, mutantes o análogos que retienen estas actividades del VWF.
La secuencia de 2813 aminoácidos monomérica para el VWF humano se describe como número de acceso en Genbank NP000543.2. La secuencia de nucleótidos que codifica el VWF humano se describe como número de acceso en Genbank NM000552.3. Una secuencia de nucleótidos del VWF humano se designa como SEQ ID NO: 20. La SEQ ID NO: 21 es la secuencia de aminoácidos del VWF de longitud completa. Cada dominio de VWF se da en la Tabla 6.
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�� La proteína del VWF como se usa en el presente documento es un fragmento de VWF que comprende un dominio D' y un dominio D3 del VWF, en donde el fragmento de VWF se une al Factor VIII (FVIII) e inhibe la unión del VWF endógeno (VWF de longitud completa) al FVIII.
El fragmento de VWF que comprende un dominio D' y un dominio D3 está asociado con la proteína del FVIII. Véase, p. ej., los documentos US 2015/0023959 A l, US 2015/0266943 A l, US 2016/0251408 A l, US 2017/0073393 A l, US 2018/185455 A1, US 2018/0051067 A1, US 2017/0152300 A1, US 9,878,017 B2, US 9,458,223 B2, US 8,575,104 B2, WO 2017/117630 A1, US 2018/0161402 A1, WO 2017/117631 A1, WO 2018/087271 A1, US 9107902 B2, WO 2017/222337 A1, WO 2015/185758 A1. Al asociarse con una proteína del FVIII, un fragmento de VWF de la descripción protege al FVIII de la escisión por proteasa y la activación del FVIII, estabiliza la cadena pesada y la cadena ligera del FVIII y previene el aclaramiento del FVIII por los receptores depuradores. En otras modalidades, el fragmento de VWF se une o se asocia con una proteína del FVIII y bloquea o previene la unión de la proteína del FVIII al fosfolípido y la proteína C activada. Al prevenir o inhibir la unión de la proteína del FVIII con el VWF endógeno de longitud completa, el fragmento de VWF de la descripción reduce el aclaramiento del FVIII por los receptores de aclaramiento del VWF y, por lo tanto, prolonga la vida media del polipéptido quimérico. La prolongación de la vida media de un polipéptido quimérico se debe, por lo tanto, a la unión o asociación del fragmento de VWF que carece de un sitio de unión al receptor de aclaramiento del VWF con la proteína del FVIII y al blindaje o protección de la proteína del FVIII por el fragmento de VWF del VWF endógeno que contiene el sitio de unión al receptor de aclaramiento del VWF. La proteína del FVIII unida o protegida por el fragmento de VWF también puede permitir el reciclaje de una proteína del FVIII. Al eliminar los sitios de unión al receptor de la ruta de aclaramiento del VWF contenidos en la molécula de VWF de longitud completa, los heterodímeros de FVIII/VWF de la descripción están protegidos de la ruta de aclaramiento del VWF, prolongando aún más la vida media del FVIII.
Las proteínas del VWF útiles para la descripción pueden tener otras modificaciones, p. ej., la proteína puede estar pegilada, glicosilada, hesilada o polisialilada.
El polipéptido quimérico de la invención comprende la proteína del VWF que comprende un fragmento de VWF, una secuencia XTEN, un conector a2 del FVIII y una región Fc. La proteína del VWF comprende, ordenado de N-terminal a C-terminal, un fragmento de VWF, fusionado con una secuencia XTEN, fusionada con un conector a2, fusionado con una región Fc. La proteína del VWF comprende un dominio D' del VWF que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 210, un dominio D3 del VWF que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 214, una secuencia XTEN que comprende la secuencia aminoácidos de SEQ ID NO: 58 (AE144_5A), un conector a2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 88 , y una región Fc que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 217.
Según la presente invención, el polipéptido quimérico es rFVIIIFc-VWF-XTEN y comprende una proteína del VWF que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 202.
En las tablas 18-19 se proporcionan secuencias polipeptídicas ejemplares adicionales de proteínas del VWF.
III.C. Motivos que prolongan la vida media
El polipéptido quimérico según la presente invención comprende motivos que prolongan la vida media en forma de regiones Fc y secuencias XTEN.
III.C.1. Región constante de Ig o una parte de la misma
El polipéptido quimérico incluye una primera región constante de Ig fusionada al polipéptido del FVIII mediante un enlace. El polipéptido quimérico incluye además una segunda región constante de Ig fusionada a la proteína del VWF. En modalidades particulares, la primera región constante de Ig se une o asocia con la segunda región constante de Ig mediante un enlace covalente, p. ej., un enlace disulfuro.
La región constante de Ig puede mejorar las propiedades farmacocinéticas o farmacodinámicas del polipéptido quimérico en combinación con la secuencia XTEN y la proteína del VWF. En ciertas modalidades, la región constante de Ig prolonga la vida media de una molécula fusionada con la región constante de Ig.
Una región constante de Ig se compone de dominios denominados dominios CH (constante pesada) (CH1, CH2, etc.). Dependiendo del isotipo (p. ej. IgG, IgM, IgA, IgD o IgE), la región constante puede estar compuesta por tres o cuatro dominios CH. En algunos isotipos (p. ej. IgG) las regiones constantes también contienen una región bisagra. Véase Janeway et al. 2001,Inmunobiology,Garland Publishing, N.Y., N.Y.
La región constante de Ig para producir el polipéptido quimérico de la presente descripción es el isotipo humano IgG 1.
Las secuencias de la región constante de Ig se pueden clonar, p. ej., usando la reacción en cadena de la polimerasa y cebadores que se seleccionan para amplificar el dominio de interés. Para clonar una secuencia de la región constante de Ig o una parte de la misma a partir de un anticuerpo, se puede aislar ARNm de hibridoma, bazo o células linfáticas, realizar la transcripción inversa en ADN y amplificar genes de anticuerpos por PCR. Los métodos de amplificación por PCR se describen en detalle en las patentes de EE.UU. Núm. 4683 195; 4683202; 4800 159; 4965 188; y en, p.
ej,, "PCR Protoools; A Guide to Methods and Applications" innis et al, eds,, Aoademio Press, San Diego, CA (1990); H<o>et al, 1989.Gene77:51; Horton et al, 1993,Methods Enzymol,217:270), La PCR se puede iniciar mediante cebadores de región constante consenso o mediante cebadores más específicos basados en las secuencias de aminoácidos y ADN de la cadena pesada y ligera publicadas, Como se ha descrito antes, la PCR también se puede usar para aislar clones de ADN que codifican las cadenas ligeras y pesadas del anticuerpo, En este caso, las bibliotecas se pueden cribar mediante cebadores consenso o sondas homólogas más grandes, tal como sondas de región constante de ratón, Se conocen en la técnica numerosos conjuntos de cebadores adecuados para la amplificación de genes de anticuerpos (p, ej,, cebadores 5' basados en la secuencia N-terminal de anticuerpos purificados (Benhar y Pastan, 1994,Protein Engineering7:1509); amplificación rápida de extremos de ADNc (Ruberti, F, et al, 1994,J. Immunol. Methods173; 33); secuencias líder de anticuerpos (Larrick et al, 1989Biochem. Biophys. Res. Commun.160; 1250)), La clonación de secuencias de anticuerpos se describe adicionalmente en Newman et al,, patente de EE,ÜÜ, Núm, 5658570, presentada el 25 de enero de 1995,
Como se usa en el presente documento, la expresión "región Fc" se define como la parte de un polipéptido que corresponde a la región Fc de la ig nativa, es decir, como se forma por la asociación dimérica de los respectivos dominios Fc de sus dos cadenas pesadas, Üna región Fc nativa forma un homodímero con otra región Fc, Por el contrario, la expresión "región Fc fusionada genéticamente" o "región Fc monocatenaria" (región scFc), como se usa en el presente documento, se refiere a una región Fc dimérica sintética compuesta por dominios Fc genéticamente unidos dentro de una única cadena de polipéptido (es decir codificado en una sola secuencia genética contigua),
La región Fc de una región constante de ig, dependiendo del isotipo de ig, puede incluir los dominios CH2, CH3 y CH4, así como la región bisagra, Los polipéptidos quiméricos que comprenden una región Fc de una ig confieren varias propiedades deseables a un polipéptido quimérico que incluyen mayor estabilidad, mayor vida media en suero (véase Capon et al,, 1989,Nature337:525) así como unión a receptores de Fc tales como el receptor de Fc neonatal (FcRn) (patente de EE,ÜÜ, Núm, 6 086875, 6485726, 6 030613; WO 03/077834; ÜS2003-0235536A1), La región Fc según la presente invención comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 217,
Üna región constante de ig o una parte de la misma puede ser una pareja de unión de FcRn, El FcRn es activo en tejidos epiteliales adultos y se expresa en el lumen de los intestinos, vías respiratorias pulmonares, superficies nasales, superficies vaginales, superficies rectales y de colon (patente de EE,ÜÜ, Núm, 6 485726), Üna pareja de unión de FcRn es una parte de una ig que se une a FcRn, Otro ejemplo de una pareja de unión de FcRn es la albúmina, que se describe con más detalle a continuación,
El receptor FcRn se ha aislado de varias especies de mamíferos, incluyendo seres humanos, Se conocen las secuencias del FcRn humano, FcRn de mono, FcRn de rata y FcRn de ratón (Story et al, 1994,J. Exp. Med.180:2377), El receptor FcRn se une a la igG (pero no a otras clases de ig tales como la igA, igM, igD e igE) a un pH relativamente bajo, transporta activamente la igG transcelularmente en una dirección de lumen a serosa y luego libera la igG a un pH relativamente más alto que se encuentra en los fluidos intersticiales, Se expresa en tejido epitelial adulto (patente de EE,ÜÜ, Núm, 6 485726, 6 030613, 6 086875; WO 03/077834; ÜS2003-0235536A1) que incluye epitelio pulmonar e intestinal (israel et al, 1997,Immunology92:69) epitelio tubular proximal renal (Kobayashi et al, 2002,Am. J. Physiol. Renal Physiol,282:F358), así como el epitelio nasal, las superficies vaginales y superficies del árbol biliar,
Las parejas de unión de FcRn útiles en la presente descripción abarcan moléculas que pueden ser unidas específicamente por el receptor FcRn que incluye igG completa, el fragmento Fc de la igG y otros fragmentos que incluyen la región de unión completa del receptor FcRn, La región de la parte Fc de la igG que se une al receptor FcRn se ha descrito basándose en cristalografía de rayos X (Burmeister et al, 1994,Nature372: 379), El área de contacto principal del Fc con el FcRn está cerca de la unión de los dominios CH2 y CH3, Los contactos Fc-FcRn están todos dentro de una sola cadena pesada de ig, Las parejas de unión de FcRn incluyen igG completa, el fragmento Fc de igG y otros fragmentos de igG que incluyen la región de unión completa de FcRn, Los principales sitios de contacto incluyen los residuos de aminoácidos 248, 250-257, 272, 285, 288, 290-291, 308-311 y 314 del dominio CH2 y los residuos de aminoácidos 385-387, 428 y 433-436 del dominio CH3, Las referencias hechas a la numeración de aminoácidos de ig o fragmentos de ig, o regiones, se basan todas en Kabat et al, 1991, "Sequences of Proteins of immunological interest", Departamento de salud pública de EE,ÜÜ,, Bethesda, Md,
Las regiones Fc o las parejas de unión de FcRn unidas a FcRn pueden ser transportadas eficazmente a través de las barreras epiteliales por el FcRn, proporcionando así un medio no invasivo para administrar sistémicamente una molécula terapéutica deseada, Además, las proteínas de fusión que comprenden una región Fc o una pareja de unión de FcRn sufren endocitosis por células que expresan el FcRn, Pero en lugar de ser marcadas para su degradación, estas proteínas de fusión se reciclan de nuevo a la circulación, aumentando así la vida mediain vivode estas proteínas, Las partes de las regiones constantes de ig son opcionalmente una región Fc o una pareja de unión de FcRn que típicamente se asocia, mediante enlaces disulfuro y otras interacciones no específicas, con otra región Fc u otra pareja de unión de FcRn para formar dímeros y multímeros de orden superior,
Dos receptores FcRn se pueden unir a una sola molécula de Fc, Los datos cristalográficos sugieren que cada molécula de FcRn se une a un único polipéptido del homodímero Fc, La unión de la pareja de unión de FcRn, p, ej,, un fragmento Fc de una igG, a una molécula biológicamente activa proporciona un medio para suministrar la molécula biológicamente activa por vía oral, bucal, sublingual, rectal, vaginal, como un aerosol administrado por vía nasal o a través de una vía pulmonar<o>vía ocular.
Una reglón pareja de unión de FcRn es una molécula o una parte de la misma a la que se puede unir específicamente el receptor FcRn con el consiguiente transporte activo por el receptor FcRn de la región Fc, Unir específicamente se refiere a dos moléculas que forman un complejo que es relativamente estable en condiciones fisiológicas, La unión específica se caracteriza por una alta afinidad y una capacidad de baja a moderada, a diferencia de la unión no específica que normalmente tiene una baja afinidad con una capacidad de moderada a alta, Típicamente, la unión se considera específica cuando la constante de afinidad KA es superior a 106 M'1, o superior a 108 M'1, Si es necesario, la unión no específica se puede reducir sin afectar sustancialmente a la unión específica variando las condiciones de unión, Las condiciones de unión adecuadas, tales como la concentración de las moléculas, la fuerza iónica de la solución, temperatura, tiempo permitido para la unión, concentración de un agente bloqueante (p, ej,, seroalbúmina, caseína de leche), etc,, pueden ser optimizadas por un experto en la materia usando técnicas rutinarias,
Opcionalmente, la región constante de inmunoglobulina o una parte de la misma comprende una secuencia de aminoácidos en la región bisagra o una parte de la misma que forma uno o más enlaces disulfuro con otra región constante de inmunoglobulina o una parte de la misma, El enlace disulfuro por la región constante de inmunoglobulina o una parte de la misma pone el primer polipéptido que comprende un polipéptido del FVIII y el segundo polipéptido que comprende el fragmento de VWF juntos de manera que el VWF endógeno no reemplaza el fragmento de VWF y no se une al polipéptido del FVIII, Por tanto, el enlace disulfuro entre la primera región constante de inmunoglobulina o una parte de la misma y una segunda región constante de inmunoglobulina o una parte de la misma evita la interacción entre el VWF endógeno y el polipéptido del FVIII, Esta inhibición de la interacción entre el VWF y el polipéptido del FVIII permite que la vida media del polipéptido quimérico sobrepase el límite de dos veces, La región de bisagra o una parte de la misma se puede unir además a uno o más dominios de CH1, CH2, CH3, un fragmento de los mismos y cualquier combinación de los mismos, En una modalidad particular, la región constante de inmunoglobulina o una parte de la misma es una región de bisagra y CH2,
En ciertas modalidades, la región constante de Ig o una parte de la misma está hemiglicosilada, Por ejemplo, el polipéptido quimérico que comprende dos regiones Fc o parejas de unión de FcRn puede contener una primera región Fc (p, ej,, una región CH2 glicosilada) o una pareja de unión de FcRn glicosilada y una segunda región Fc (p, ej,, una región CH2 aglicosilada) o pareja de unión de FcRn aglicosilada, En otras modalidades, la región Fc o la pareja de unión de FcRn está completamente glicosilada, es decir, todas las regiones Fc están glicosiladas, En otras modalidades, la región Fc puede estar aglicosilada, es decir, ninguno de los motivos Fc está glicosilado,
III.C.2. Secuencias XTEN
Como se usa en el presente documento, "secuencia XTEN" se refiere a polipéptidos de longitud extendida con secuencias no naturales, sustancialmente no repetitivas que están compuestas principalmente de aminoácidos hidrófilos pequeños, teniendo la secuencia un grado bajo o ninguna estructura secundaria o terciaria en condiciones fisiológicas, Como pareja de polipéptido quimérico, los XTEN pueden servir como transportador, confiriendo ciertas propiedades farmacocinéticas, fisicoquímicas y farmacéuticas deseables cuando se unen a una proteína del VWF o una secuencia de FVIII de la descripción para crear un polipéptido quimérico, Dichas propiedades deseables incluyen, pero no se limitan a, parámetros farmacocinéticos y características de solubilidad mejorados, Como se usa en el presente documento, "XTEN" excluye específicamente anticuerpos o fragmentos de anticuerpos tales como anticuerpos monocatenarios o fragmentos Fc de una cadena ligera o una cadena pesada,
Una secuencia XTEN más corta proporciona una propiedad mejorada de prolongación de la vida media en comparación con una secuencia XTEN más larga cuando la secuencia XTEN se fusiona con la proteína del VWF, Por tanto, la secuencia XTEN fusionada con la proteína del VWF contiene menos de 288 aminoácidos de longitud, es decir, es más corta que 288 aminoácidos, La secuencia XTEN fusionada con la proteína del VWF es una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 58, y el polipéptido quimérico presenta una vida media mejorada en comparación con un polipéptido quimérico sin la secuencia XTEN,
El polipéptido quimérico de la presente descripción comprende además una segunda secuencia XTEN adicional, Esta segunda secuencia XTEN adicional está fusionada al polipéptido del FVIII, Las secuencias XTEN adicionales se describen en la SEQ ID NO: 218,
Las secuencias XTEN comprenden motivos de secuencias que no se superponen que consisten en múltiples unidades de secuencias que no se superponen seleccionadas de una única familia de motivos seleccionada de la Tabla 7, lo que da como resultado una secuencia de la familia, Como se usa en el presente documento, "familia" significa que XTEN tiene motivos seleccionados sólo de una única categoría de motivos de la Tabla 7; es decir, XTEN AD, AE, Af , AG, AM, AQ, BC o BD, y que cualquier otro aminoácido en XTEN que no sea de un motivo de la familia se selecciona para lograr una propiedad necesaria, tal como para permitir la incorporación de un sitio de restricción por los nucleótidos codificantes, incorporación de una secuencia de escisión, o para lograr una mejor unión con FVIII o VWF, XTEN comprende múltiples unidades de secuencias de motivos de dos o más de las familias de motivos de la Tabla 7, Estas secuencias se pueden seleccionar para lograr las características físicas/químicas deseadas, incluyendo propiedades tales como carga neta, hidrofilicidad, falta de estructura secundaria o falta de repetitividad que confiere la composición de aminoácidos de los motivos, que se describen con más detalle a continuación, Los motivos incorporados en el XTEN se pueden seleccionar y ensamblar usando Ios métodos descritos en el presente documento para lograr un XTEN de aproximadamente 36 a aproximadamente 3000 residuos de aminoácidos.
Tabla 7, Motivos de secuencias XTEN de 12 aminoácidos y familias de motivos
Las secuencias de aminoácidos para ciertas secuencias XTEN ejemplares se muestran en la Tabla 8. Tabla 8. Secuencias XTEN
Opcionalmente, la secuencia XTEN usada en la descripción afecta a propiedades físicas<o>químicas, p. ej,, la farmacocinética, del polipéptido quimérico de la presente descripción. La secuencia XTEN usada en la presente descripción puede presentar una o más de las siguientes propiedades ventajosas: flexibilidad conformacional, solubilidad acuosa mejorada, alto grado de resistencia a proteasas, baja inmunogenicidad, baja unión a receptores de mamíferos o radios hidrodinámicos (o de Stokes} mayores. Opcionalmente, la secuencia XTEN unida a una proteína del FVIII en esta descripción aumenta las propiedades farmacocinéticas tales como vida media terminal más larga o mayor área bajo la curva (AUC, por sus síglas en inglés}, de modo que el polipéptido quimérico descrito en el presente documento permanecein vivodurante un periodo de tiempo mayor en comparación con el FVIII de tipo silvestre. Opcionalmente, la secuencia XTEN usada en esta descripción aumenta las propiedades farmacocinéticas tales como vida media terminal más larga o mayor área bajo la curva (AUC), de modo que la proteína del FVIII permanecein vivodurante un periodo de tiempo mayor en comparación con el FVIII natural.
Se puede usar una variedad de métodos y ensayos para determinar las propiedades físicas/químicas de las proteínas que comprenden la secuencia XTEN. Dichos métodos incluyen, pero no se limitan a centrifugación analítica, EPR, HPLC de intercambio iónico, HPLC de exclusión por tamaño, HPLC de fase inversa, dispersión de luz, electroforesis capilar, dicroísmo circular, calorimetría de barrido diferencial, fluorescencia, HPLC de intercambio iónico, HPLC de exclusión por tamaño, IR, RMN, espectroscopia Raman, refractometría y espectroscopia UV/visible. Se describen métodos adicionales en Amau et al.,Prot Expr and Purif48, 1-13 (2006).
Ejemplos adicionales de secuencias XTEN se describen en las publicaciones de patente de EE.UU. Núm.
2010/0239554 A1, 2010/0323956 A1, 2011/0046060 A1, 2011/0046061 A1, 2011/0077199 A1 o 2011/0172146 A1 o publicaciones de patentes internacionales Núm. WO 2010091122 A1, WO 2010144502 A2, WO 2010144508 A1, WO 2011028228 A1, WO 2011028229 A1, WO 2011028344 A2<o>WO 20130122617 A1.
III.C.2. Albúminas
Una albúmina o una parte de la misma puede ser una pareja de unión del FcRn. En ciertos aspectos, un polipéptido quimérico usado en el contexto de la presente descripción comprende al menos un polipéptido de albúmina o fragmento, variante o derivado del mismo. La seroalbúmina humana (HSA o HA), una proteína de 609 aminoácidos en su forma completa, es responsable de una proporción significativa de la presión osmótica del suero y también funciona como transportadora de ligandos endógenos y exógenos. El término "albúmina" como se usa en el presente documento incluye albúmina de longitud completa<o>un fragmento funcional, variante, derivado<o>análogo de la misma. Se describen ejemplos de albúmina o los fragmentos o variantes de la misma en las publicaciones de patentes de EE.UU. Núm. 2008/0194481A1, 2008/0004206 A1, 2008/0161243 A1, 2008/0261877 A1 o 2008/0153751 A1 o publicaciones de solicitudes PCT Núm. 2008/033413 A2, 2009/058322 A1<o>2007/021494 A2.
Los polipéptidos de unión a albúmina (ABP) pueden comprometer, sin limitación, dominios de unión a albúmina bacteriana, péptidos de unión a albúmina<o>fragmentos de anticuerpos de unión a albúmina que pueden unirse a albúmina. El dominio 3 de la proteína G estreptocócica, como describen Kraulis et al.,FEBSLett.378: 190-194 (1996) y Linhult et al.,Protein Sci.11: 206-213 (2002) es un ejemplo de un dominio de unión a albúmina bacteriana. Se describen ejemplos de péptidos de unión a albúmina en Dennis et al.,J. Biol. Chem.2002 , 277: 35035-35043 (2002 ). Se describen ejemplos de fragmentos de anticuerpos de unión a la albúmina en Muller y Kontermann,Curr. Opin. Mol. Ther.9:319-326 (2007); Roovers et al.,Cancer Immunol. Immunother.56: 303-317 (2007) y Holt et al.,Prot. Eng. Design Sci.,21: 283-288 (2008).
En ciertos aspectos, un polipéptido quimérico usado en el contexto de la presente descripción comprende al menos un sitio de unión para una molécula pequeña no polipeptídica, variante<o>derivado al que puede unirse la albúmina. Por ejemplo, el polipéptido quimérico puede incluir uno o más motivos de unión a albúmina orgánicos. Un ejemplo de dichos motivos de unión a albúmina es 2-(3-maleimidopropanamido)-6- (4-(4-yodofenil)butanamido)hexanoato (marca "Albu") como describen Trussel et al.,Bioconjugate Chem.20:2286-2292 (2009).
En ciertas modalidades, el fragmento de VWF descrito en el presente documento se fusiona con una albúmina. En algunas modalidades, las construcciones de fragmento de VWF-albúmina forman homodímeros. En algunas modalidades, el dominio D'D3 del VWF que se fusiona con la albúmina se asocia con un polipéptido del FVIII. En ciertas modalidades, el dominio D'D3 del VWF se fusiona con la albúmina asociada con el polipéptido del FVIII por una interacción más fuerte que las interacciones no covalentes naturales entre el FVIII de tipo silvestre y el VWF.
III.C.3. CTP
En ciertos aspectos, un polipéptido quimérico usado en el contexto de la presente descripción comprende al menos un péptido C-terminal (CTP) de la subunidad p de gonadotropina coriónica humana o fragmento, variante o derivado del mismo. Se sabe que los péptidos CTP aumentan la vida media de esa proteína. Véase, p. ej., la patente de EE.UU. Núm. 5712 122. Los péptidos CTP de ejemplo no limitantes se describen en la publicación de solicitud de patente de EE.UU. Núm. US 2009/0087411 A1.
III.C.4. PAS
En ciertos aspectos, un polipéptido quimérico usado en el contexto de la presente descripción comprende al menos un péptido PAS o fragmento, variante o derivado del mismo. Un péptido PAS o secuencia PAS, como se usa en el presente documento, significa una secuencia de aminoácidos que comprende principalmente residuos de alanina y serina<o>que comprende principalmente residuos de alanina, serina y prolina, formando la secuencia de aminoácidos una conformación helicoidal aleatoria en condiciones fisiológicas. Por consiguiente, la secuencia PAS es una unidad estructural, un polímero de aminoácidos<o>un casete de secuencia que comprende, consiste esencialmente en,<o>consiste en alanina, serina y prolina que se puede usar como parte del motivo heterólogo en el polipéptido quimérico. Un polímero de aminoácidos también puede formar conformación helicoidal aleatoria cuando se añaden residuos distintos de alanina, serina y prolina como constituyentes minoritarios en la secuencia PAS. Por "constituyente minoritario" se entiende que se pueden añadir aminoácidos distintos de alanina, serina y prolina en la secuencia PAS hasta cierto grado, p. ej,, hasta aproximadamente 12%, es decir, aproximadamente 12 de 100 aminoácidos de la secuencia PAS, hasta aproximadamente 10%, hasta aproximadamente 9%, hasta aproximadamente 8%, aproximadamente 6%, aproximadamente 5%, aproximadamente 4%, aproximadamente 3%, es decir, aproximadamente 2%, o aproximadamente 1%, de los aminoácidos. Los aminoácidos diferentes de alanina, serina y prolina se pueden seleccionar del grupo formado por Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, lle, Leu, Lys, Met, Phe, Thr, Trp, Tyr y Val. En condiciones fisiológicas, un péptido PAS forma una conformación helicoidal aleatoria y, por lo tanto, puede mediar en una mayor estabilidadin vivoy/oin vitrode una proteína recombinante de la descripción, y tiene actividad procoagulante.
Se describen ejemplos no limitantes de los péptidos PAS en, p. ej., la publicación de patente de EE.ÜÜ. Núm.
2010/0292130 A1 ; publicación de solicitud PCT Núm. WO 2008/155134 A 1 ; y patente expedida europea EP2173890.
lll.C.5. HAP
En ciertos aspectos, un polipéptido quimérico usado en el contexto de la presente descripción comprende al menos un péptido de polímero de homoaminoácidos (HAP) o fragmento, variante o derivado del mismo. Ün péptido HAP puede comprender una secuencia repetitiva de glicina, que tiene al menos 50 aminoácidos, al menos 100 aminoácidos, 120 aminoácidos, 140 aminoácidos, 160 aminoácidos, 180 aminoácidos, 200 aminoácidos, 250 aminoácidos, 300 aminoácidos, 350 aminoácidos, 400 aminoácidos, 450 aminoácidos o 500 aminoácidos de longitud. Üna secuencia HAP es capaz de prolongar la vida media de un motivo fusionado o unido a la secuencia HAP. Los ejemplos no limitantes de la secuencia HAP incluyen, pero no se limitan a (Gly)n, (Gly4Ser)n o S(Gly4Ser)n, en donde n es 1,2, 3, 4, 5, 6 , 7, 8 , 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20. En algunas modalidades, n es 20, 21,22, 23, 24, 25, 26, 26, 28, 29, 30, 31,32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39 o 40. En otras modalidades, n es 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190 o 200. Véase, p. ej., Schlapschy M et al.,Protein Eng. Design Selection,20: 273-284 (2007).
lll.C.6. Transferrina
En ciertos aspectos, un polipéptido quimérico usado en el contexto de la presente descripción comprende al menos un péptido de transferrina o fragmento, variante o derivado del mismo. Cualquier transferrina se puede fusionar con el polipéptido quimérico usado en los métodos de la presente descripción. Como ejemplo, la Tf (Tf) humana de tipo silvestre es una proteína de 679 aminoácidos, de aproximadamente 75 kDa (sin tener en cuenta la glicosilación), con dos dominios principales, N (aproximadamente 330 aminoácidos) y C (aproximadamente 340 aminoácidos), que parece que se originan a partir de la duplicación génica. Véanse los números de acceso de GenBank NM001063, XM002793, M12530, XM039845, XM 039847 y S95936 (www.ncbi.nlm.nih.gov).
La transferrina transporta el hierro a través de la endocitosis mediada por el receptor de transferrina (TfR). Üna vez que el hierro es liberado en un compartimento endosomal y el complejo Tf-TfR es reciclado a la superficie celular, la Tf se libera de nuevo al espacio extracelular para el siguiente ciclo de transporte de hierro. La Tf posee una vida media larga que supera los 14-17 días (Li et al.,Trends Pharmacol. Sci.23:206-209 (2002)). Las proteínas de fusión de transferrina se han estudiado para prolongar la vida media, la administración dirigida para terapias contra el cáncer, el suministro oral y activación sostenida de proinsulina (Brandsma et al.,Biotechnol. Adv.,29: 230-238 (2011); Bai et al.,Proc. Nati. Acad. Sci. USA102: 7292-7296 (2005); Kim et al.,J. Pharmacol. Exp. Ther,334: 682 - 692 (2010); Wang et al.,J. Controlled Release155: 386-392 (2011)).
lll.C.7. PEG
En ciertos aspectos, un polipéptido quimérico usado en el contexto de la presente descripción comprende al menos un sitio de unión para un motivo heterólogo no polipeptídico, o fragmento, variante o derivado del mismo. Por ejemplo, un polipéptido quimérico usado en los métodos de la presente descripción puede incluir uno o más motivos de polietilenglicol (PEG) unidos a uno o más residuos de aminoácidos en el factor de coagulación y/o la región Fc.
La PEGilación de una proteína se puede referir a un conjugado formado entre la proteína y al menos una molécula de polietilenglicol (PEG). El PEG está disponible en el mercado en una gran variedad de pesos moleculares e intervalos de pesos moleculares medios. Los ejemplos típicos de intervalos de pesos moleculares medios de PEG incluyen, pero no se limitan a aproximadamente 200, aproximadamente 300, aproximadamente 400, aproximadamente 600, aproximadamente 1000, aproximadamente 1300-1600, aproximadamente 1450, aproximadamente 2000, aproximadamente 3000, aproximadamente 3000-3750, aproximadamente 3350, aproximadamente 3000-7000, aproximadamente 3500-4500, aproximadamente 5000-7000, aproximadamente 7000-9000, aproximadamente 8000, aproximadamente 10000, aproximadamente 8500-11500, aproximadamente 16000-24000, aproximadamente 35 000, aproximadamente 40000, aproximadamente 60000 y aproximadamente 80000 Daltons. Estos pesos moleculares medios se proporcionan simplemente como ejemplos y no pretenden ser limitantes de ninguna manera.
Ün polipéptido quimérico usado en el contexto de la presente descripción se puede PEGilar para incluir motivos mono o poli-PEG (p. ej., 2-4). La PEGilación se puede llevar a cabo por cualquiera de las reacciones de PEGilación conocidas en la técnica. Los métodos para preparar un producto de proteína PEGilado generalmente incluirán (i) hacer reaccionar un polipéptido con polietilenglicol (tal como un éster reactivo o derivado de aldehído de PEG) en condiciones en las que el péptido de la descripción se une a uno o más grupos PEG; y (ii) obtener el(los) producto(s) de reacción. En general, las condiciones de reacción óptimas para las reacciones se determinarán caso por caso basándose en parámetros conocidos y el resultado deseado.
Hay una serie de métodos de unión de PEG disponibles para los expertos en la técnica, por ejemplo Malik F et al.,Exp. Hematol.20: 1028-35 (1992); Francis,Focus on Growth Factors3 (2): 4-10 (1992); publicaciones de patentes europeas Núm. EP0401384, EP0154316 y EP0401384; y publicaciones de solicitudes de patentes internacionales W092/16221 y W095/34326. Como un ejemplo no limitante, las variantes del FVIII pueden contener sustituciones de cisteína, y las cisteínas se pueden conjugar además con el polímero de PEG. Véase Mei et al.,Blood116: 270-279 (2010) y patente de EE.ÜÜ. Núm. 7632921.
En determinadas modalidades, el polipéptido quimérico comprende un polipéptido del FVIII monocatenario unido covalentemente a un fragmento de VWF que comprende un dominio D' y un dominio D3 del VWF, en donde el polipéptido del FVIII comprende una deleción del dominio B, en donde el polipéptido del FVIII está pegilado, y en donde el fragmento de VWF se fusiona directa o indirectamente con el extremo N-terminal del polipéptido del FVIII (p. ej., PEG-scFVIII-D'D3, "MG1121" o LAFATE). En otras modalidades, el polipéptido quimérico comprende un polipéptido del FVIII monocatenario unido covalentemente a un fragmento de VWF que comprende un dominio D' y un dominio D3 del VWF, en donde el polipéptido del FVIII comprende una deleción del dominio B, en donde el fragmento de VWF está pegilado y en donde el fragmento de VWF se fusiona directa o indirectamente con el extremo N-terminal del polipéptido del FVIII (p. ej., scFVIII-D'D3-PEG). En otras modalidades, el polipéptido quimérico comprende un polipéptido del FVIII monocatenario unido covalentemente a un fragmento de VWF que comprende un dominio D' y un dominio D3 del VWF, en donde el polipéptido del FVIII comprende una deleción del dominio B, en donde el polipéptido del FVIII y el fragmento de VWF están pegilados, y en donde el fragmento de VWF se fusiona directa o indirectamente con el extremo N-terminal del polipéptido del FVIII (p. ej., scFVIII-D'D3-PEG).
III.C.8. HES
En ciertos aspectos, un polipéptido quimérico usado en el contexto de la presente descripción comprende al menos un polímero de hidroxietil-almidón (HES). El HES es un derivado de la amilopectina natural y es degradado por la alfaamilasa en el cuerpo. El HES presenta propiedades biológicas ventajosas y se usa como agente de reemplazo del volumen sanguíneo y en terapia de hemodilución en las clínicas. Véase, p. ej., Sommermeyer et al., Krankenhauspharmazie 8 : 271-278 (1987); y Weidler et al.,Arzneim.-Forschung/Drug Res.41: 494-498 (1991).
El HES se caracteriza principalmente por la distribución de pesos moleculares y el grado de sustitución. El HES tiene un peso molecular medio (peso medio) de 1 a 300 kD, de 2 a 200 kD, de 3 a 100 kD o de 4 a 70 kD. El hidroxietilalmidón puede presentar además un grado molar de sustitución de 0.1 a 3, de 0.1 a 2, de 0.1 a 0.9 o de 0.1 a 0.8, y una relación entre la sustitución en C2:C6 en el intervalo de 2 a 20 con respecto a los grupos hidroxietilo. El HES con un peso molecular medio de aproximadamente 130 kD es VOLUVEN® de Fresenius. VOLUVEN® es un coloide artificial, usado, p. ej., para el reemplazo de volumen usado en la indicación terapéutica para la terapia y la profilaxis de la hipovolemia. Hay una serie de métodos de unión de HES disponibles para los expertos en la técnica, p. ej., los mismos métodos de unión de PEG descritos antes.
III.C.9. PSA
En ciertos aspectos, un polipéptido quimérico usado en el contexto de la presente descripción comprende al menos un polímero de poli(ácido siálico) (PSA). Los PSA son polímeros no ramificados de ácido siálico de origen natural producidos por ciertas cepas bacterianas y en mamíferos en ciertas células. Véase, p. ej., Roth J. et al. (1993) en Polysialic Acid: From Microbes to Man, eds. Roth J., Rutishauser U., Troy F. A. (BirkhauserVerlag, Basilea, Suiza), págs. 335-348. Los PSA se pueden producir en varios grados de polimerización desde n = aproximadamente 80 o más residuos de ácido siálico hasta n = 2 por hidrólisis ácida limitada o por digestión con neuraminidasas, o por fraccionamiento de las formas del polímero naturales derivadas de bacterias. Hay una serie de métodos de unión de PSA disponibles para los expertos en la técnica, p. ej., los mismos métodos de unión de PEG descritos antes. En ciertos aspectos, un PSA activado también se puede unir a un residuo de aminoácido cisteína dentro del factor de coagulación, p. ej., en FVIII, o dentro de la región Fc. Véase, p. ej., la patente de EE.ÜÜ. Núm. 5846951.
III. C.10. Receptores de aclaramiento
En ciertos aspectos, la vida media de un polipéptido quimérico usado en el contexto de la presente descripción se puede prolongar cuando el factor de coagulación del polipéptido quimérico comprende un polipéptido del FVIII y al menos un fragmento de un receptor de aclaramiento del FVIII o un fragmento de unión al FVIII, variante o derivado del mismo. La inserción de formas solubles de receptores de aclaramiento, tales como la proteína relacionada con el receptor de lipoproteínas de baja densidad LRP1, o fragmentos de la misma, puede bloquear la unión del FVIII a los receptores de aclaramiento y así prolongar su vida media, p. ej., vida mediain vivo.LRP1 es una proteína de membrana integral de 600 kDa que está implicada en el aclaramiento mediado por receptor de una variedad de proteínas, incluido el FVIII. Véase, por ejemplo, Lenting et al.,Haemophilia16: 6-16 (2010). Otros receptores de aclaramiento del FVIII adecuados son, p. ej., LDLR (receptor de lipoproteínas de baja densidad), VLDLR (receptor de lipoproteínas de muy baja densidad) y megalina (LRP-2), o fragmentos de los mismos. Véase, p. ej., Bovenschen et al.Blood106: 906- 912 (2005); Bovenschen,Blood116: 5439-5440 (2010); Martinelli et al.,Blood116: 5688-5697 (2010 ).
III.D. Sitios de inserción
Según la presente invención, la XTEN se inserta en el dominio B del FVIII. Específicamente, la secuencia de XTEN, que comprende la secuencia de aminoácidos AE288_3 (SEQ ID NO: 218), se inserta entre los aminoácidos 745 y 746 de un FVIII maduro, donde el FVIII maduro tiene una deleción de los residuos de aminoácidos 746-1648, más específicamente, la XTEN se inserta inmediatamente en dirección 3’ del aminoácido 745.
III.E. Conectores
El polipéptido quimérico de la presente descripción comprende además un conector en el fragmento de VWF. El conector es un conector escindióle, que puede ser escindido por diversas proteasas cuando se administra a un sujetoin vivo,p. ej., en un sitio de coagulación. El conector escindióle permite la escisión de un motivo, p. ej., una proteína del VWF, de la secuencia XTEN, por lo tanto del polipéptido quimérico en el sitio de la cascada de coagulación, permitiendo así que el FVIII activado (FVIIIa) tenga su actividad de FVIIIa.
En algunas modalidades, el polipéptido quimérico usado en el contexto de la presente invención comprende un primer polipéptido que comprende (i) un polipéptido del FVIII y (ii) una primera región constante de Ig, y un segundo polipéptido que comprende (iii) una proteína del VWF, (iv) un conector (p. ej., un conector escindióle), (v) una secuencia XTEN y (vi) una segunda región constante de Ig.
El conector usado en el contexto de la presente invención es el conector a2 que tiene la secuencia de aminoácidos como se estaólece en SEQ ID NO: 88.
III. F. Sitios de escisión
El conector escindióle puede incorporar un motivo capaz de escindirse químicamente (p. ej., hidrólisis de un enlace éster), enzimáticamente (es decir, incorporación de una secuencia de escisión de proteasa) o fotolíticamente (p. ej., un cromóforo tal como ácido 3-amino-3-(2-nitrofenil)propiónico (ANP)) con el fin de lióerar una molécula de otra. Se pueden encontrar ejemplos de conectores escindióles, p. ej., en los documentos US 2016/0229903 A1 y US 2016/0251408 A1.
En ciertas modalidades, el conector escindióle es escindióle en un ensayo de escisión de tromóina como se proporciona en este documento o como se conoce en la técnica.
En modalidades particulares, el polipéptido quimérico de la presente descripción comprende: (i) una proteína del FVIII que comprende un polipéptido del FVIII, una primera secuencia XTEN, y una primera región Fc; y (ii) un fragmento de VWF que comprende un dominio D' del VWF y un dominio D3 del VWF, una segunda secuencia XTEN, un conector a2 del FVIII, y una segunda región Fc; en donde:
(a) la proteína del FVIII tiene una deleción de los aminoácidos 746 a 1648 que corresponde al FVIII maduro; (ó) la primera secuencia XTEN se inserta dentro del polipéptido del FVIII inmediatamente secuencia aóajo del aminoácido 745 que corresponde al FVIII maduro;
(c) la primera secuencia XTEN comprende la secuencia de aminoácidos de AE288_3 (SEQ ID NO: 218); (d) la primera región Fc está fusionada en el extremo C-terminal del polipéptido del FVIII;
(e) la segunda secuencia XTEN está fusionada en el extremo C-terminal del fragmento de VWF;
(f) la segunda secuencia XTEN comprende la secuencia de aminoácidos de AE144_5A (SEQ ID NO: 58); (g) el conector a2 está fusionada en el extremo C-terminal de XTEN;
(h) el conector a2 comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 88 ;
(i) la segunda región Fc está fusionada en el extremo C-terminal del conector a2; y
(j) la primera región Fc está unida covalentemente a la segunda región Fc por un enlace disulfuro.
Según la invención, el polipéptido quimérico comprende dos secuencias de polipéptidos, una primera secuencia de polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos como se expone en SEQ ID NO: 207; y una segunda secuencia de polipéptido que comprende un fragmento de VWF que comprende un dominio D' de VWF y un dominio D3 de VWF, y una región Fc como se expone en SEQ ID NO: 202.
IV. Composiciones farmacéuticas
Las composiciones que contienen el polipéptido quimérico para uso de la presente descripción pueden contener un vehículo adecuado farmacéuticamente aceptable. Por ejemplo, pueden contener excipientes y/o auxiliares que faciliten el procesamiento de los compuestos activos en preparaciones diseñadas para suministrar en el sitio de acción.
La composición farmacéutica se puede formular para administración parenteral (es decir, intravenosa, subcutánea o intramuscular) mediante inyección en bolo. Las formulaciones para inyección se pueden presentar en forma farmacéutica unitaria, p. ej., en ampollas o en envases multidosis con un conservador añadido. Las composiciones pueden tener formas tales como suspensiones, soluciones o emulsiones en vehículos aceitosos o acuosos, y contener agentes de formulación tales como agentes de suspensión, estabilizantes y/o dispersantes. Alternativamente, el principio activo puede estar en forma de polvo para reconstituir con un vehículo adecuado, p. ej., agua exenta de pirógenos.
Las formulaciones adecuadas para la administración parenteral también incluyen soluciones acuosas de los compuestos activos en forma soluble en agua, p. ej., sales solubles en agua. Además, se pueden administrar suspensiones de los compuestos activos como suspensiones aceitosas para inyección apropiadas. Los disolventes o vehículos lipófilos adecuados incluyen aceites grasos, por ejemplo, aceite de sésamo, o ésteres de ácidos grasos sintéticos, por ejemplo, oleato de etilo o triglicéridos. Las suspensiones acuosas para inyección pueden contener sustancias que aumentan la viscosidad de la suspensión, incluyendo, por ejemplo, carboximetilcelulosa de sodio, sorbitol y dextrano. Opcionalmente, la suspensión también puede contener estabilizantes. Los liposomas también se pueden usar para encapsular las moléculas de la descripción para suministrar en células o espacios intersticiales. Los vehículos farmacéuticamente aceptables de ejemplo son disolventes fisiológicamente compatibles, medios de dispersión, recubrimientos, agentes antibacterianos y antifúngicos, agentes isotónicos y retardadores de la absorción, agua, solución salina, solución salina amortiguada con fosfato, dextrosa, glicerol, etanol y similares. Opcionalmente, la composición comprende agentes isotónicos, p. ej., azúcares, polialcoholes tales como manitol, sorbitol o cloruro de sodio. Opcionalmente, las composiciones comprenden sustancias farmacéuticamente aceptables tales como agentes humectantes o cantidades menores de sustancias auxiliares tales como agentes humectantes o emulsionantes, conservadores o soluciones amortiguadoras, que mejoran la vida en anaquel o la eficacia de los principios activos.
Las composiciones como se describen aquí pueden estar en una variedad de formas, que incluyen, por ejemplo, líquidas (p. ej., soluciones inyectables y para infusión), dispersiones, suspensiones, formas farmacéuticas sólidas y semisólidas. La forma preferida depende del modo de administración y la aplicación terapéutica.
La composición se puede formular como una solución, microemulsión, dispersión, liposoma u otra estructura ordenada adecuada para una concentración de fármaco alta. Se pueden preparar soluciones inyectables estériles incorporando el principio activo en la cantidad requerida en un disolvente adecuado con uno o una combinación de los ingredientes enumerados antes, según se requiera, seguido de esterilización por filtración. Generalmente, las dispersiones se preparan incorporando el principio activo en un vehículo estéril que contiene un medio de dispersión básico y los otros ingredientes requeridos de los enumerados antes. En el caso de polvos estériles para la preparación de soluciones inyectables estériles, los métodos preferidos de preparación son el secado a vacío y la liofilización que producen un polvo del principio activo más cualquier ingrediente adicional deseado a partir de una solución previamente esterilizada por filtración. La fluidez adecuada de una solución se puede mantener, p. ej., mediante el uso de un recubrimiento tal como lecitina, mediante el mantenimiento del tamaño de partículas requerido en el caso de dispersión y mediante el uso de tensioactivos. La absorción prolongada de composiciones inyectables se puede lograr incluyendo en la composición un agente que retrasa la absorción, por ejemplo, sales de monoestearato y gelatina.
El principio activo se puede formular con una formulación o dispositivo de liberación controlada. Los ejemplos de dichas formulaciones y dispositivos incluyen implantes, parches transdérmicos y sistemas de administración microencapsulados. Se pueden usar polímeros biodegradables, biocompatibles, por ejemplo, etileno-acetato de vinilo, polianhídridos, poli(ácido glicólico), colágeno, poliortoésteres y poli(ácido láctico). Los métodos para la preparación de tales formulaciones y dispositivos son conocidos en la técnica. Véase, p. ej., "Sustained y Controlled Release Drug Delivery Systems", J. R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978.
Las formulaciones de depósito inyectable se pueden preparar formando matrices microencapsuladas del fármaco en polímeros biodegradables tales como polilactida-poliglicólido. Dependiendo de la relación de fármaco a polímero y de la naturaleza del polímero empleado, se puede controlar la velocidad de liberación del fármaco. Otros polímeros biodegradables de ejemplo son poliortoésteres y polianhídridos. También se pueden preparar formulaciones inyectables de depósito atrapando el fármaco en liposomas o microemulsiones.
Se pueden incorporar compuestos activos suplementarios en las composiciones. Opcionalmente, el polipéptido quimérico de la descripción se formula con otro factor de coagulación, o una variante, fragmento, análogo o derivado del mismo. Por ejemplo, el factor de coagulación incluye, pero no se limita a factor V, factor VII, factor VIII, factor IX, factor X, factor XI, factor XII, factor XIII, protrombina, fibrinógeno, factor de von Willebrand o factor tisular soluble recombinante (rsTF) o formas activadas de cualquiera de los anteriores. El factor de coagulación del agente hemostático también puede incluir fármacos antifibrinolíticos, p. ej., ácido épsilon-amino-caproico, ácido tranexámico.
Los regímenes de dosificación se pueden ajustar para proporcionar la respuesta óptima deseada. Por ejemplo, se puede administrar un solo bolo, se pueden administrar varias dosis divididas a lo largo del tiempo, o la dosis se puede reducir o aumentar proporcionalmente según lo indiquen las exigencias de la situación terapéutica. Es ventajoso formular composiciones parenterales en forma de unidad de dosificación para facilitar la administración y uniformidad de la dosificación. Véase, p. ej., Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Pub. C<o>., Easton, Pensilvania, 1980).
Además del compuesto activo, la forma farmacéutica líquida puede contener ingredientes inertes tales como agua, alcohol etílico, carbonato de etilo, acetato de etilo, alcohol bencílico, benzoato de bencilo, propilenglicol, 1,3-butilenglicol, dimetilformamida, aceites, glicerol, alcohol tetrahidrofurfurílico, polietilenglicoles y ésteres de ácidos grasos de sorbitán.
También se describen ejemplos no limitantes de vehículos farmacéuticos adecuados en Remington's Pharmaceutical Sciences por E. W. Martin. Algunos ejemplos de excipientes incluyen almidón, glucosa, lactosa, sacarosa, gelatina, malta, arroz, harina, yeso, gel de sílice, estearato de sodio, monoestearato de glicerol, talco, cloruro de sodio, leche desnatada en polvo, glicerol, propileno, glicol, agua, etanol, y similares. La composición también puede contener reactivos de amortiguamiento del pH y agentes humectantes o emulsionantes.
Opcionalmente, una composición farmacéutica comprende un polipéptido quimérico y un vehículo farmacéuticamente aceptable. La proteína del FVIII en un polipéptido quimérico tiene vida media prolongada en comparación con la proteína del FVIII de tipo silvestre o la correspondiente proteína del FVIII sin el fragmento de VWF. Opcionalmente, la vida media del polipéptido quimérico se prolonga al menos aproximadamente 1.5 veces, al menos aproximadamente 2 veces, al menos aproximadamente 2.5 veces, al menos aproximadamente 3 veces, al menos aproximadamente 4 veces, al menos aproximadamente 5 veces, al menos aproximadamente 6 veces, al menos aproximadamente 7 veces, al menos aproximadamente 8 veces, al menos aproximadamente 9 veces, al menos aproximadamente 10 veces, al menos aproximadamente 11 veces o al menos aproximadamente 12 veces más tiempo que el FVIII de tipo silvestre. En otras modalidades, la vida media del factor VIII es al menos aproximadamente 17 horas, al menos aproximadamente 18 horas, al menos aproximadamente 19 horas, al menos aproximadamente 20 horas, al menos aproximadamente 21 horas, al menos aproximadamente 22 horas, al menos aproximadamente 23 horas, al menos aproximadamente 24 horas, al menos aproximadamente 25 horas, al menos aproximadamente 26 horas, al menos aproximadamente 27 horas, al menos aproximadamente 28 horas, al menos aproximadamente 29 horas, al menos aproximadamente 30 horas, al menos aproximadamente 31 horas, al menos aproximadamente 32 horas, al menos aproximadamente 33 horas, al menos aproximadamente 34 horas, al menos aproximadamente 35 horas, al menos aproximadamente 36 horas, al menos aproximadamente 48 horas, al menos aproximadamente 60 horas, al menos aproximadamente 72 horas, al menos aproximadamente 84 horas, al menos aproximadamente 96 horas o al menos aproximadamente 108 horas. Opcionalmente, la vida media del polipéptido quimérico se prolonga aproximadamente 3 veces en comparación con el FVIII de tipo silvestre.
La composición se administra opcionalmente mediante administración intravenosa.
Opcionalmente, la composición se usa para tratar una enfermedad o afección hemorrágica en un sujeto que lo necesite. La enfermedad o afección hemorrágica se selecciona del grupo que consiste en un trastorno hemorrágico de coagulación, hemartrosis, sangrado muscular, sangrado oral, hemorragia, hemorragia en los músculos, hemorragia oral, traumatismo, traumatismo de la cabeza, hemorragia gastrointestinal, hemorragia intracraneal, hemorragia intraabdominal, hemorragia intratorácica, fractura ósea, sangrado del sistema nervioso central, sangrado en el espacio retrofaríngeo, sangrado en el espacio retroperitoneal, sangrado en la vaina del psoas ilíaco y cualquier combinación de los mismos. Opcionalmente, el sujeto está programado para someterse a una cirugía. Opcionalmente, el tratamiento es profiláctico o bajo demanda.
Habiendo descrito ahora la presente descripción en detalle, la misma se entenderá más claramente haciendo referencia a los siguientes ejemplos, que se incluyen aquí con fines ilustrativos únicamente y no pretenden ser una limitación de la descripción.
EJEMPLOS
Ejemplo 1: Primer estudio en seres humanos de heterodímeros de FVIII-XTEN-Fc/D’D3-XTEN-Fc
La terapia de reemplazo basada en factores es el principio básico de la asistencia de la hemofilia. Los productos de FVIII recombinante convencional (rFVIII) tienen una vida media corta y requieren una administración frecuente. El rFVIIIFc (Eloctate®) ha traído avances significativos en la atención del paciente, que incluyen el intervalo de dosificación más largo para la hemofilia A; control de hemorragias adecuado, incluyendo profilácticamente, en situaciones agudas, perioperatorias, de emergencia; protección más allá del control del sangrado, incluyendo la protección de las articulaciones y la mejora de la calidad de vida; y un perfil de seguridad consistente y bien caracterizado a largo plazo. Sin embargo, la dosis profiláctica de factor VIII semanal o más prolongada sigue siendo una necesidad insatisfecha para la mayoría de las personas con hemofilia A.
El presente estudio investiga la seguridad y farmacocinética (PK) de rFVIIIFc-VWF-XTEN, un polipéptido quimérico que comprende a (i) un polipéptido del FVIII, un XTEN insertado dentro del dominio B del polipéptido del FVIII y una primera región Fc; y (ii) un fragmento de VWF, una segunda secuencia XTEN, un conector a2 y una segunda región Fc (Figura 1).
Diseño del estudio
El objeto del presente estudio era evaluar la seguridad, tolerabilidad y actividad del FVIII (PK) de una dosis única de rFViiíFe-VWF-XTEN en comparación con rFVIII. La población de pacientes incluía hombres adultos previamente tratados con hemofilia A grave (nivel de actividad de FVIII endógeno <1 UI/dl [<1%]) con al menos 150 días de exposición a productos de FVIII, y sin antecedentes de pruebas de inhibidores positivas o signos clínicos de disminución de la respuesta a la administración de FVIII. Los criterios de valoración principales fueron los acontecimientos adversos y las anomalías clínicas en las pruebas de laboratorio, incluyendo el desarrollo de inhibidores. Los criterios de valoración secundarios clave incluían parámetros farmacocinéticos, que incluyen, pero no se limitan a la vida media de eliminación (t1/2), aclaramiento (CL), área bajo la curva de 0 a infinito (AUCo-~), el tiempo medio de permanencia (TMP) y la recuperación progresiva (IR).
Los pacientes se incorporaron en una cohorte de dosis baja (7 pacientes; Figura 2A) o una cohorte de dosis alta (9 pacientes; Figura 2B). A cada paciente se le administró rFVIII (ADVATE®) seguido de un periodo de toma de muestras PK. Después de un breve periodo de lavado (> 3 días para la cohorte de dosis baja (Figura 2A) y > 4 días para la cohorte de dosis alta (Figura 2B)), se administró después a cada sujeto rFVIIIFc-VWF-XTEN seguido de un periodo de toma de muestras PK. Los sujetos se sometieron a observación de seguridad durante 28 días después de la inyección de rFVIIIFc-VWF-XTEN, que incluía recogida de muestras para evaluaciones de inhibidores a los 14 y 28 días después de la inyección de rFVIIIFc-VWF-XTEN. Los pacientes en la cohorte de dosis baja recibieron 25 UI/kg de rFVIII y 25 UI/kg de rFVIIIFc-VWF-XTEN. Los pacientes en la cohorte de dosis alta recibieron 65 UI/kg de rFVIII y 65 UI/kg de rFVIIIFc-VWF-XTEN.
Métodos
Se midieron los parámetros farmacocinéticos mediante un ensayo de coagulación de tiempo parcial de tromboplastina activada (aPTT) modificado (ensayo de "una etapa"). Brevemente, la actividad del FVIII se mide en un ensayo de aPTT modificado usando el reactivo de PTT activada Dade® Actin® FSL (Siemens Health Care Diagnostics) en un analizador BCS® XP (Siemens Healthcare Diagnostics). Se prepararon curvas de calibración de 7 puntos (alta: 1.500 0.050 UI/ml; baja: 0.150-0.0025 UI/ml) usando un calibrador específico de rFVIIIFc-VWF-XTEN. Para la curva de calibración alta, el calibrador de rFVIIIFc-VWF-XTEN [1.000 ml/ml] se diluye en tampón Tris/BSA (50 mM, cloruro de sodio 150 mM, pH 7.4 /- 0.2, que contiene BSA al 1%). Esta dilución se lleva a cabo en el analizador BCS® XP para generar niveles de actividad de FVIII de calibración preseleccionados. Después, estos se analizan a la dilución de trabajo 1:2 preparada en tampón Tris/BSA. Para la curva de calibración baja, el calibrador de rFVIIIFc-VWF-XTEN [1.000 UI/ml] se diluye en plasma inmunorreducido deficiente en FVIII (Siemens Healthcare Diagnostics) mediante el analizador BCS® XP, y se ensaya solo (en ausencia de una dilución de trabajo). La calibración se realiza por duplicado. Las curvas se representan para la actividad de FVIII en UI/ml (eje x) y el tiempo de coagulación en segundos (eje y). Las curvas de calibración tanto alta como baja usan un ajuste de curva de regresión lineal lineal-log.
Las muestras se ensayan por duplicado usando el metaanálisis de curva de calibración alta (diluciones de trabajo 1:2, 1:4 y 1:8 en Tris/BSA) o el metaanálisis de curva de calibración baja (diluciones de trabajo solo, 1:2 y 1:4, en plasma inmunorreducido deficiente en FVIII). Después de la dilución de trabajo adecuada, todos los calibradores, las muestras de pacientes y las muestras de control de calidad se mezclan 1:1 con plasma inmunorreducido deficiente en FVIII, que contiene menos o igual a 0.010 UI/ml de actividad de FVIII y al menos 0.400 UI/ml de los otros factores de coagulación. Después de mezclar las muestras con este plasma, se añade el reactivo APTT y la mezcla se incuba. Después de la incubación, se añade cloruro de calcio y se mide ópticamente el tiempo de formación del coágulo. Después, un algoritmo examina si los resultados de las diluciones de trabajo individuales están dentro de /- 15.0% de la media para determinar la actividad de FVIII presentada. Se necesitan como mínimo dos resultados de dilución de trabajo del metaanálisis para determinar la actividad de FVIII presentada, excepto cerca del límite inferior de cuantificación (LLOQ).
Resultados: Cohorte de dosis baja
Se incluyeron siete sujetos en la cohorte de dosis baja; un sujeto se retiró por razones no relacionadas con el estudio antes de recibir rFVIIIFc-VWF-XTEN. Seis sujetos recibieron una única dosis baja de rFVIIIFc-VWF-XTEN (25 UI/kg). Las características de los primeros cuatro sujetos tratados en la cohorte de dosis baja incluían: sujetos varones adultos previamente tratados con hemofilia A grave (nivel de actividad de FVIII endógeno <1 UI/dl [<1%]); todos los sujetos eran caucásicos; la edad de los sujetos variaba entre 19 y 60 años, con una edad promedio de 33; y el peso promedio era de 85 kg (que variaba de 67.2-100.6 kg).
En todos los pacientes, rFVIIIFc-VWF-XTEN en general eran bien tolerado y no se observaron inhibidores el día 14 o el día 28 después de la administración.
La actividad media de FVIII después de infusión para los primeros seis sujetos que recibieron una única dosis baja de rFVIIIFc-VWF-XTEN (25 UI/kg) a los 5 días era de aproximadamente 12.0% y a los 7 días era de aproximadamente 5.3% (Figura 3A). La actividad media de FVIII se mantuvo por encima de 1% durante 10 días (Figura 3A). Los parámetros farmacocinéticos, medidos por la medición del tiempo parcial de tromboplastina activada (aPTT), para rFVIIIFc-VWF-XTEN (25 UI/kg) y rFVIII (25 UI/kg) se muestran en la tabla 9. Se observó que rFVIIIFc-VWF-XTEN tenía una vida media media de aproximadamente 37.6 horas en los sujetos humanos, que era más de 4 veces mayor que la vida media media para el rFVIII (aproximadamente 9.12 horas) administrado con la misma dosis.
Tabla 9: Parámetros farmacocinétioos (PK) para la cohorte de dosis baja
Resultados: Cohorte de dosis alta
Se incluyeron nueve sujetos en la cohorte de dosis alta. A los sujetos se les administró una única dosis alta de rFVIIIFc-VWF-XT<e>N (65 ül/kg). En un sujeto no se pudieron evaluar los parámetros farmacocinéticos debido a razones no relacionadas con el estudio. Las características de los sujetos tratados en la cohorte de dosis alta incluían: sujetos varones adultos previamente tratados con hemofilia A grave (nivel de actividad de FVIII endógeno <1 ül/dl [<1%]); 7 de 9 sujetos eran caucásicos; la edad de los sujetos variaba de 32-63 años, con una edad promedio de 44; y el peso promedio era de 81.1 kg (en un intervalo de 61.5-100.7 kg).
La actividad media de FVIII después de infusión para los ocho sujetos evaluados que recibieron una única dosis alta de rFVIIIFc-VWF-XTEN (65 üI/kg) a los 5 días era de aproximadamente 38.0% y a los 7 días era de aproximadamente 17% (Figura 3B). La actividad media de FVIII se mantuvo por encima de 1% durante 14 días (Figura 3B). Los parámetros farmacocinéticos, medición del tiempo parcial de tromboplastina activada (aPTT) medido, para rFVIIIFc-VWF-XTEN (65 üI/kg) y rFVIII (65 üI/kg) se muestran en la tabla 10. Se observó que rFVIIIFc-VWF-XTEN tenía una vida media media de aproximadamente 42.5 horas en los sujetos humanos, que era más de 3 veces mayor que la vida media media del rFVIII (aproximadamente 13 horas) administrado con la misma dosis.
Tabla 10: Parámetros farmacocinéticos (PK) para la cohorte de dosis alta
Conclusiones:
rFViiiFc-VWF-XTEN era bien tolerado en todos los pacientes con hemofilia A grave que se trataron con una sola dosis baja (25 üi/kg) o una sola dosis alta (65 üi/kg). Ningún paciente desarrolló un inhibidor del FVIII. El rFViiiFc-VWF-XTEN demostró una vida media que era de 3 veces a 4 veces mayor que el rFViii, lo que sugiere un gran avance en el tope de vida media impuesto por el VWF. La actividad alta y sostenida del FViii tiene el potencial de proporcionar una protección prolongada contra todo tipo de hemorragias.
Ejemplo 2: Estudio de dosis repetidas de heterodímeros FViii-XTEN-Fc/D'D3-XTEN-Fc
El rFViiiFc-VWF-XTEN era bien tolerado y proporcionaba niveles sostenidos de FViii en una cohorte de sujetos que recibieron una dosis única de rFViiiFc -VWF-XTEN. (Ejemplo 1). El presente estudio evaluará la seguridad y tolerabilidad y caracterizará la farmacocinética de dosis repetidas de rFViiiFc-VWF-XTEN (Figura 1).
Diseño del estudio
Se administrará un total de 4 dosis una vez por semana de rFViiiFc-VWF-XTEN a pacientes varones adultos con hemofilia A grave que se han tratado previamente con tratamiento de FViii y han recibido al menos 150 días de exposición a dicho tratamiento de FViii. Se incluirán dos cohortes, consistiendo cada una en aproximadamente diez varones adultos de 18 a 65 años de edad. Cada sujeto de la cohorte 1 recibirá un total de cuatro dosis una vez por semana de 50 üi/kg de rFViiiFc-VWF-XTEN los días 1, 8 , 15 y 22. Cada sujeto de la cohorte 2 recibirá un total de cuatro dosis una vez por semana de 65 üi/kg de rFViiiFc-VWF-XTEN los días 1, 8 , 15 y 22.
üna representación esquemática del diseño del estudio clínico se representa en la Figura 4. Se tomará una muestra farmacocinética previa a la dosis el día 1. Además, se tomarán varias muestras PK después de la administración los días 1 y 22, y una muestra de concentración mínima (168 h) antes de la administración los días 8 , 15 y 22. Los sujetos se someterán a un periodo de observación de seguridad durante 28 días después de la última dosis de rFViiiFc-VWF-XTEN, que incluye evaluaciones de inhibidores a los 14 y 28 días después de la última dosis de rFViiiFc-VWF-XTEN. Para los sujetos que completen las cuatro dosis una vez por semana de rFViiiFc-VWF-XTEN, el periodo de observación de seguridad finalizará con la visita de fin de estudio (EOS) el día 50 (+3 días). Para los sujetos que interrumpen el tratamiento antes de tiempo, el periodo de observación de seguridad finalizará con la visita de terminación anticipada (ET) 28 días después de la última dosis de rFViiiFc-VWF-XTEN.
El objetivo principal del estudio es evaluar la seguridad y tolerabilidad de un total de cuatro dosis una vez por semana de rFViiiFc-VWF-XTEN intravenoso (iV). Los criterios de valoración principales son la aparición de acontecimientos adversos (EA) y la aparición de anomalías clínicamente significativas en las pruebas de laboratorio, incluyendo el desarrollo de inhibidores (anticuerpos neutralizantes dirigidos contra el FViii) según se determina por el ensayo Bethesda modificado con Nijmegen. (Verbruggen et al.,Thrombosis and Haemostasis,73: 247-251 (1995)).
El objetivo secundario del estudio es la caracterización de la farmacocinética de rFViiiFc-VWF-XTEN después de un total de cuatro dosis iV una vez por semana, con la actividad del FViii determinada por el ensayo de coagulación del tiempo parcial de tromboplastina activada (aPTT) en una etapa, como se describe en el ejemplo 1. Los criterios de valoración secundarios son la farmacocinética evaluada mediante la estimación de parámetros, que incluyen, pero no se limitan a la actividad máxima (Cmáx), vida media (t1/2), aclaramiento total en el estado estacionario (CLee), índice de acumulación (Al), el área bajo la curva de actividad-tiempo desde la hora 0 a lo largo del intervalo de dosificación (AüC0-tau), volumen de distribución en estado estacionario (Vee), tiempo medio de permanencia (TMP), iR, concentración más baja (mínima) que alcanza un fármaco antes de administrar la siguiente dosis (Cmín), y el tiempo hasta el 1% por encima del valor inicial para la actividad de FViii.
El objetivo exploratorio del estudio es caracterizar la farmacocinética de rFViiiFc VWF-XTEN después de un total de cuatro dosis iV una vez por semana, con la actividad del FViii determinada por el ensayo de coagulación cromogénico de dos etapas. Los criterios de valoración exploratorios son la PK evaluada mediante la estimación de parámetros, que incluyen, pero no se limitan a Cmáx, t1/2, CLee, Al, AUC0-tau, Vee, TMP, IR, Cmín y el tiempo hasta 1% por encima del valor inicial para la actividad de FVIII.
Métodos
La actividad del FVIII se determinó mediante el ensayo de coagulación de tiempo parcial de tromboplastina activada (aPTT) modificado (ensayo de "una etapa"}, como se ha detallado antes en el ejemplo 1.
El ensayo cromogénico de coagulación de dos etapas mide la actividad del FVIII usando el ensayo BIOPHEN FVIII:C (Hyphen Biomed 221402-RUO) en el analizador BCS® XP (Siemens Healthcare Diagnostics). Brevemente, los fosfolípidos, calcio y FVI11 :C activado por trombina forman un complejo enzimático en presencia de una cantidad constante de factor IXa. Este complejo enzimático a su vez activa el factor X (FX), que se suministra en una concentración constante y en exceso respecto al factor Xa (FXa). La activación de FX a FXa está directamente relacionada con la cantidad de FVI 11 :C, que es el factor limitante en el ensayo en presencia de una cantidad constante y en exceso de factor IXa. La actividad del FXa generado se mide luego usando un sustrato de FXa cromogénico específico, SXa-11 (Hyphen Biomed). El factor Xa escinde SXa-11 y libera para-nitroanilina (pNA). La cantidad de pNA liberada es directamente proporcional a la cantidad de FXa generada. Existe una relación directa entre la cantidad de FVI 11 :C en la muestra, la cantidad de FXa generada y la cantidad de pNA liberada. La liberación de pNA se determina por el desarrollo de color a una longitud de onda de 405 nm.
Se preparan curvas de calibración de 8 puntos (alta: 1.500 - 0.150 UI/ml; baja: 0.200 - 0.008 UI/ml) usando un calibrador específico de rFVIIIFc-VWF-XTEN. Para la curva de calibración alta, se diluye rFVIIIFc-VWF-XTEN a 1 UI/ml en tampón Tris/BSA para generar niveles de calibración preseleccionados de actividad del FVIII. Esta dilución se lleva a cabo en el analizador BCS® XP. Los niveles de calibración preseleccionados de actividad de FVIII se ensayan a una dilución de trabajo 1:4 en tampón Tris/BSA. Para la curva de calibración baja, rFVIIIFc-VWF-XTEN en 1 UI/ml se prediluye 1:4 en plasma deficiente en FVIII congénito (Helena Laboratories) y después se diluye más mediante el analizador BCS® XP en tampón Tris/BSA para generar niveles de calibración preseleccionados de actividad del FVIII que se ensayan en ausencia de dilución adicional en la configuración de la reacción.
La calibración se realiza por duplicado. Se representan las curvas para la actividad de FVIII en UI/ml (eje x) y el cambio en la absorbancia/min (eje y). Para la curva de calibración alta, se usa un ajuste de curva de regresión lineal log-log. Para la curva de calibración baja, se usa un ajuste de curva de regresión lineal lin-lin. Las muestras se analizan por duplicado en la curva de calibración alta a una dilución de trabajo 1:4 o en la curva de calibración baja usando la dilución 1:4 en plasma deficiente en FVIII congénito o puro (en ausencia de una dilución de trabajo).
Resultados
Características demográficas y basales
Se incluyeron 10 sujetos varones adultos de 18 a 65 años de edad (inclusive) en la cohorte 1 (50 UI/kg) y se incluyeron 5 sujetos varones adultos de 18 a 65 años de edad (inclusive) en la cohorte 2 (65 UI/kg). Los 10 sujetos de la cohorte de dosificación de 50 UI/kg recibieron 4 dosis de rFVIIIFc-VWF-XTEN. Tres de los 5 sujetos incluidos en la cohorte de dosificación de 65 UI/kg recibieron al menos una dosis de rFVIIIFc-VWF-XTEN. Los 15 sujetos incluidos eran de un solo sitio en Sofía, Bulgaria. De los 15 sujetos incluidos, 13 sujetos recibieron al menos una dosis de BIVV001 y se incluyeron en el resumen de características demográficas y basales. Todos los sujetos eran varones. La mediana de edad era de 35 años (intervalo: 25 a 55 años) y todos los sujetos eran blancos. El peso medio era de 86.7 kg (intervalo: 51.0 a 130.9 kg) y el índice de masa corporal medio era de 25.9 kg/m2 (intervalo: 16.4 a 40.9 kg/m2).
Análisis de seguridad
Para el análisis intermedio, se incluyó un total de 13 sujetos en el conjunto de análisis de seguridad (n = 10 de la cohorte de 50 UI/kg y n = 3 de la cohorte de 65 UI/kg). Todos los análisis de seguridad se realizaron basados en el conjunto de análisis de seguridad e incluían a todos los sujetos que recibieron al menos una dosis de rFVIIIFc VWF-XTEN.
Un EA surgido durante el tratamiento (TEAE) se define como cualquier acontecimiento adverso que comenzó en o después de la primera administración de rFVIIIFc-VWF-XTEN y en los 28 días después de la administración final de rFVIIIFc-VWF-XTEN. Se asume que los EA con fechas de inicio ausentes han surgido durante el tratamiento, a menos que la fecha de finalización sea anterior a la fecha de administración. En general, los EA se resumían por incidencia de sujetos por cohorte y global, y también se presentaron en una lista de datos por cohorte y sujeto. También se evaluaron los acontecimientos adversos graves surgidos durante el tratamiento (TESAE) para cada sujeto, pero no se observó en ninguno en los sujetos tratados (Tabla 11).
De los 15 sujetos incluidos, 13 sujetos recibieron al menos una dosis de rFVIIIFc-VWF-XTEN y se incluyeron en el análisis de seguridad. Se notificaron 19 TEAE en 8 de los 13 sujetos (61.5%) (Tabla 11). No se notificaron TEAE graves o relacionados y ningún sujeto interrumpió el estudio debido a un TEAE. Los TEAE más comunes fueron artralgia, infección del tracto respiratorio superior, dolor de cabeza y rinitis (2/13 sujetos cada uno; 15.4%). No se detectó desarrollo de Inhibidores del FVIII y no hubo Informes de hipersensibilidad grave o anafllaxla. En cada nivel de resumen de sujeto, un sujeto se cuenta una vez si el sujeto notificaba uno o más sucesos. Los porcentajes dados en la tabla 11 se basan en el número de sujetos que recibieron al menos una dosis de rFVIIIFc-VWF-XTEN en cada cohorte y global.
Tabla 11. Resumen de los acontecimientos adversos surgidos durante el tratamiento (TEAE) en el conjunto de análisis de seguridad
Análisis de inmunogenicidad
Se evaluó en todos los sujetos el desarrollo de inhibidores y anticuerpos anti-rFVIIIFc-VWF-XTEN en la selección, el día 1, día 8 , día 15, día 22, día 36 y día 50 (visita EOS o ET). El ensayo de inhibidores lo hizo el laboratorio central usando el ensayo Bethesda modificado por Nijmegen. Si el resultado de un ensayo de Bethesda modificado por Nijmegen era > 0.6 UB/ml, se recogía una muestra separada y se analizaba para confirmar el desarrollo de inhibidores en un plazo de 2 a 4 semanas. El ensayo de la formación potencial de anticuerpos se realizó en un laboratorio central usando un ensayo validado de anticuerpos antifármaco (ADA) específicos de rFVIIIFc-VWF-XTEN. Las muestras positivas confirmadas se caracterizaron adicionalmente para detectar anticuerpos específicos contra FVIII, D'D3 o XTEN. El número y porcentaje de sujetos que dieron positivo para el desarrollo de inhibidores y el número y porcentaje de sujetos que dieron positivo para anticuerpos anti-rFVIIIFc-VWF-XTEN se resumieron por cohorte usando el conjunto de análisis de seguridad.
Ningún sujeto desarrolló un resultado positivo en el ensayo de anticuerpos antifármaco después de la administración de rFVIIIFc-VWF-XTEN.
Análisis y resultados farmacocinéticos
En general, los datos de seguridad y farmacocinéticos se resumieron usando estadísticas de resumen estándar para datos continuos y categóricos. Los datos se resumieron por cohorte. Las variables continuas se resumieron usando estadísticos descriptivos, que incluyen el número de valores no perdidos (n), media, desviación estándar (DE), mediana, mínimo y máximo. Los parámetros farmacocinéticos también se resumieron usando la media geométrica y el coeficiente de variación en porcentaje (% CV). Las variables categóricas se resumieron por recuentos y porcentajes.
Todos los análisis farmacocinéticos se realizaron basados en el conjunto de análisis PK (PKAS) e incluían 9 sujetos de la cohorte de dosificación de 50 UI/kg que tenían muestras de sangre recogidas adecuadas después de la administración de rFVIIIFc-VWF-XTEN.
Actividad de FVIII
Para caracterizar la farmacocinética de rFViiiFc-VWF-XTEN después de un total de cuatro dosis IV una vez por semana, se determinó la actividad del FViii en cada sujeto en los puntos de tiempo especificados previamente. La actividad del FViii se resumió por cohorte, visita PK programada y punto de tiempo tanto para el ensayo de coagulación de una etapa (tiempo parcial de tromboplastina activada [aPTT]) como para el ensayo de coagulación cromogénico. Los perfiles de actividad de FViii frente a tiempo se representaron tanto a escala original como logarítmica para ambos ensayos de actividad del FViii. La actividad del FViii individual se daba para cada sujeto por cohorte, visita de PK programada y punto de tiempo para ambos ensayos de actividad del FViii. Los resultados para la actividad del FViii según el ensayo de una etapa [aPTT] se representan en la Tabla 12. Los resultados de la actividad del FViii según el ensayo cromogénico se representan en la tabla 13.
Brevemente, después de la administración del día 1, las actividades medias de FViii basadas en el ensayo de una etapa y cromogénico a las 72 h eran 45.53% y 29.37%, a las 120 h eran 21.56% y 13.49%, y a las 168 h eran 7.91% y 5.97%, respectivamente. Después de la administración del día 22, las actividades medias del FViii basadas en el ensayo de una etapa y cromogénico a las 72 h eran 46.28% y 30.46%, a las 120 h eran 22.30% y 14.48%, y a las 168 h eran 9.83% y 6.74%, respectivamente. En general, en todos los pacientes, puntos de tiempo y con ambos ensayos, la Cmín para rFViiiFc-VWF-XTEN en 50 üi/kg 1 vez por semana en este análisis intermedio variaba entre 7-10%.
Parámetros PK
Las estimaciones de los parámetros de PK individuales se daban para cada sujeto y se resumían descriptivamente por cohorte, visita de PK programada y punto de tiempo para ambos ensayos de actividad de FViii.
La vida media de eliminación media geométrica (t1/2) para todos los sujetos que recibían rFViiiFc-VWF-XTEN en 50 üi/kg 1 vez por semana en este análisis intermedio era de 41.24 horas según el ensayo de una etapa (Tabla 16B) y de 43.87 horas según la ensayo cromogénico (Tabla 17B).
Después de la administración el día 1, la media geométrica de la actividad máxima de FViii (Cmáx) era de 113 üi/dl con el ensayo de una etapa (Tabla 14) y 108 üi/dl con el ensayo cromogénico (Tabla 15). Después de la administración del día 22, la media geométrica de la actividad de FViii en estado estacionario (Cmáx,ee) era de 127 üi/dl según el ensayo de una etapa (Tabla 16A) y de 115 üi/dl según el ensayo cromogénico (Tabla 17A).
Después de la administración del día 1, la media geométrica de la actividad de FViii acumulada (AüCü-tau) era de 7650 h*üi/dl según el ensayo de una etapa (Tabla 14) y de 5630 h*üi/dl según el ensayo cromogénico (Tabla 15). Después de la administración del día 22 , la media geométrica de AüC0-tau era de 8270 h*üi/dl según el ensayo de una etapa (Tabla 16A) y 5880 h*üi/dl según el ensayo cromogénico (Tabla 17A).
Los datos de Cmáx y AüC0-tau en la administración del día 1 y del día 22 indicaban una acumulación mínima respaldada por un índice de acumulación (Al) de 1.07 (ensayo de una etapa, tabla 16B) y 1.08 (ensayo cromogénico, tabla 17B). Para todos los datos de parámetros PK presentados en las Tablas 12-17, los valores por debajo del límite de cuantificación (BLQ) se trataron como 0 con el fin de los análisis. Cuando fue necesario para el cálculo de los parámetros PK, puesto que no se capturó el tiempo de finalización de la infusión, a la duración de la infusión se le atribuyeron 8 minutos para cada sujeto de acuerdo con las directrices de administración en el documento de Guía de gestión y administración del estudio.
Tabla 12. Resumen de los niveles de actividad de FViii corregidos por los valores iniciales (üi/dl) basados en el ensayo de coagulación aPTT de una etapa: Conjunto de análisis PK (Nivel de dosis: 50 üi/kg)
Tabla 13. Resumen de I<os>niveles de actividad de FVIII corregidos por I<os>valores Iniciales (üi/dl) basados en el ensayo cromogénico: Conjunto de análisis PK (Nivel de dosis: 50 üi/kg)
Tabla 14. Resumen de administración el día 1 de parámetros farmacocinétioos para la actividad del FVIII corregida por valores iniciales basado en el ensayo de coagulación aPTT de una etapa: conjunto de análisis PK
Tabla 15; Resumen del día 1 de parámetros farmacocinéticos para la actividad del FVIII corregida por valores iniciales basado en el ensayo cromogénico; conjunto de análisis PK
Tabla 16A. Día 22 - Resumen de parámetros farmacocinéticos para la actividad del FVIII corregida por valores iniciales basado en el ensayo de coagulación aPTT de una etapa; conjunto de análisis PK (Parte 1}
Tabla 16B. Día 22 - Resumen de parámetros farmacocinéticos para la actividad del FVIII corregida por valores iniciales basado en el ensayo de coagulación aPTT de una etapa; conjunto de análisis PK (Parte 2}
Tabla 17A, Día 22 - Resumen de parámetros farmacocinéticos para la actividad del FVIII corregida por valores iniciales basado en el ensayo cromogénico; conjunto de análisis PK (Parte 1)
Tabla 17B. Día 22 - Resumen de parámetros farmacocinéticos para la actividad del FVIII corregida por valores iniciales basado en el ensayo cromogénico; conjunto de análisis PK (Parte 2}
Conclusiones
De acuerdo con los resultados observados en el estudio de dosis única (ejemplo 1), la dosificación semanal de rFVIIIFc-VWF-XTEN en general era bien tolerada y no se detectaron inhibidores durante los 28 días después de la administración final de rFVIIIFc-VWF-XTEN, El rFVIIIFc-VWF-XTEN en una dosis de 50 UI/kg presentaba una vida media de eliminación media (ti/2) de 41,24 y 43,87 horas con los ensayos de una etapa y cromogénico, respectivamente, Estos resultados intermedios demuestran que la vida media mejorada observada en la dosis única de rFVIIIFc-VWF-XTEN se mantiene con dosis repetidas 1 vez por semana, lo que indica claramente que las ventajas de rFVIIIFc-VWF-XTEN pueden obtenerse en pacientes con hemofilia A que reciben tratamiento de acuerdo con un régimen de dosificación profiláctico de FVIII,
Ejemplo 3: Estudio de fase 3 de rFVIIIFc-VWF-XTEN en pacientes previamente tratados con hemofilia A grave
El presente estudio evaluará la seguridad y la tolerabilidad y caracterizará la farmacocinética de la administración una vez por semana de 50 UI/kg de rFVIIIFc-VWF-XTEN (Figura 1), El objetivo principal del estudio es evaluar la eficacia del tratamiento profiláctico con rFVIIIFc-VWF-XTEN en comparación con el tratamiento a demanda con rFVIIIFc-VWF-XTEN, La dificultad secundaria del estudio es evaluar el rFVIIIFc-VWF-XTEN como tratamiento profiláctico, su efecto sobre los episodios hemorrágicos y el consumo de rFVIIIFc-VWF-XTEN, la salud de las articulaciones y la calidad de vida medida por los resultados percibidos por el paciente (RPP) y evaluar rFVIIIFc-VWF-XTEN para el tratamiento a demanda,
Además, el objetivo farmacocinético (PK) es caracterizar la PK de la profilaxis de rFVIIIFc-VWF-XTEN al inicio del estudio para todos los sujetos y repetida a los tres meses para un subconjunto predefinido de sujetos, basado en el ensayo de actividad de FVIII aPTT, Los objetivos adicionales son evaluar la eficacia de rFVIIIFc-VWF-XTEN en sujetos que se someten a cirugía y evaluar la seguridad y tolerabilidad de rFVIIIFc-VWF-XTEN, Además, los resultados estructurales de la salud de las articulaciones se evaluarán por ultrasonidos y se evaluará el impacto del tratamiento en otras mediciones de la calidad de vida y en el uso de los recursos sanitarios,
Diseño del estudio
Este es un estudio multicéntrico, sin ocultación, de fase 3, fundamental de la seguridad, eficacia y PK de rFVIIIFc-VWF-XTEN intravenoso en pacientes de >12 años de edad con hemofilia A grave (definida como FVIII endógeno <1 UI/dl [<1%]), Aproximadamente veinticinco sujetos que actualmente reciben un régimen a demanda recibirán rFVIIIFc-VWF-XTEN en una dosis de 50 UI/kg IV a demanda durante veintiséis semanas, después recibirán rFVIIIFc-VWF-XTEN en una dosis de 50 UI/kg IV una vez por semana en un régimen de tratamiento profiláctico durante veintiséis semanas, Los sujetos que actualmente reciben un régimen de tratamiento profiláctico recibirán rFVIIIFc-VWF-XTEN en una dosis de 50 UI/kg IV una vez por semana en un régimen de tratamiento profiláctico durante cincuenta y dos semanas,
Se incluirán aproximadamente 140 sujetos >12 años de edad; se realizarán evaluaciones PK repetidas en un subconjunto de aproximadamente dieciséis sujetos a las 12 semanas,
Se seleccionarán los sujetos y, después de cumplir los criterios de inclusión, se procederá a uno de los dos regímenes de tratamiento (es decir, a demanda o profilaxis) con rFVIIIFc-VWF-XTEN en una dosis de 50 UI/kg IV, Todos los sujetos se someterán a evaluaciones PK iniciales después de un periodo de lavado (al menos de 4 a 5 días, según la terapia actual), Los sujetos se someterán a evaluaciones de eficacia y seguridad durante todo el estudio, Estas evaluaciones de seguridad incluirán el ensayo de la formación potencial de inhibidores, Se realizará una visita de seguimiento de seguridad o una llamada telefónica veintiocho días después de la última dosis de rFVIIIFc-VWF-XTEN, a menos que el sujeto se incluya en el estudio de extensión sin ocultación,
El fin del estudio (EOS) puede ocurrir cuando se cumplen ambos criterios; (i) al menos 104 sujetos han alcanzado 50 días de exposición (DE) y han completado un ensayo de inhibidores válido después de los 50 DE; y (ii) al menos veinticinco sujetos han completado el grupo de estudio a demanda, incluyendo el periodo de tratamiento profiláctico de 26 semanas, o se han retirado del estudio temprano. Además, los sujetos de cualquier grupo que se sometan a cirugía durante el estudio se incluirán en el subconjunto de cirugía. Se estudiará un mínimo de diez cirugías mayores en al menos cinco sujetos para evaluar el control y la prevención de la hemorragia en el entorno quirúrgico.
Los sujetos acudirán a la clínica en un periodo de selección de aproximadamente 28 días para determinar su elegibilidad. Además de la(s) visita(s) de selección, los sujetos regresarán a la clínica para las visitas inicial, semana 4, semana 12, semana 26, semana 36, semana 52 y EOS/ET. El periodo de dosificación será de más de 52 semanas. Los sujetos que entren en el grupo de tratamiento profiláctico recibirán 52 dosis una vez por semana de rFVIIIFc-VWF-XTEN y dosis adicionales según sea necesario para tratar los episodios hemorrágicos. Los sujetos que entren en el grupo de tratamiento a demanda recibirán rFVIIIFc-VWF-XTEN a demanda durante el periodo de tratamiento a demanda de 26 semanas y 26 dosis una vez por semana de rFVIIIFc-VWF-XTEN y dosis adicionales según sea necesario para tratar episodios hemorrágicos durante el siguiente periodo de tratamiento profiláctico de 26 semanas. La seguridad se evaluará durante todo el estudio. Se realizará una visita de seguimiento de seguridad o una llamada telefónica 28 días después de la última dosis de rFVIIIFc-VWF-XTEN, a menos que el sujeto se inscriba en el estudio de extensión sin ocultación.
El criterio de valoración principal del estudio será una comparación intrasujeto de la tasa anual de hemorragias (ABR) mientras los sujetos están en tratamiento a demanda con rFVIIIFc-VWF-XTEN (26 semanas) frente al tratamiento profiláctico una vez por semana (26 semanas).
Los criterios de valoración secundarios del estudio incluirán (i) una comparación intrasujeto de la ABR en la profilaxis con rFVIIIFc-VWF-XTEN frente a la ABR histórica (para sujetos que reciben profilaxis que participaron en un estudio observacional previo); (ii) la aparición de episodios hemorrágicos y el consumo (ABR global, ABR por tipo y ubicación, y consumo total anual de rFVIIIFc-VWF-XTEN por sujeto); (iii) la respuesta al tratamiento; (iv) índice de eficacia (porcentaje de sujetos que mantienen un nivel mínimo de L3% el día 7; (v) salud de las articulaciones; y (vi) cambios en las mediciones de calidad de vida (Haem-A-QoL y PROMIS-SF Función física para los sujetos de al menos 18 años, y HAEMO-QoL y PROMIS Pediatric-SF Actividad Física para sujetos menores de 18 años).
La respuesta al tratamiento incluirá (i) el número de infusiones y dosis de rFVIIIFc-VWF-XTEN necesarias para resolver un episodio hemorrágico; (ii) porcentaje de episodios hemorrágicos que requieren una sola infusión para su resolución; (iii) evaluación de la respuesta del sujeto al tratamiento con rFVIIIFc-VWF-XTEN de episodios hemorrágicos individuales basada en una escala de respuesta de 4 puntos; (iv) y la evaluación global del investigador de la respuesta del sujeto al tratamiento con rFVIIIFc-VWF-XTEN basada en una escala de respuesta de 4 puntos.
La evaluación de la salud de las articulaciones incluirá (i) ABR de episodios de hemorragia articular; (ii) Resolución de la articulación objetivo a las 52 semanas, basado en los criterios de la Sociedad Internacional de Trombosis y Hemostasia (ISTH); (iii) Resultados funcionales basados en el cambio absoluto desde el inicio hasta las 52 semanas evaluados por la puntuación de salud de las articulaciones en la hemofilia modificada (mHJHS) o HJHS); (iv) Porcentaje de sujetos sin deterioro de las articulaciones a las 52 semanas evaluados por el mHJHS o HJHS.
Los criterios de valoración adicionales incluyen (i) concentración plasmática máxima (pico) del fármaco (Cmáx), vida media de eliminación (t1/2), índice de acumulación (Al), área bajo la curva de concentración plasmática-tiempo (AUC), volumen aparente de distribución en estado estacionario (Vee), tiempo medio de permanencia (TMP), recuperación progresiva (IR), concentración plasmática mínima (Cmín) y tiempo por encima de los niveles de actividad de FVIII predefinidos; (ii) Evaluaciones de los investigadores o cirujanos de la respuesta hemostática de los sujetos al tratamiento con rFVIIIFc-VWF-XTEN en una escala de respuesta de 4 puntos, número y dosis de infusiones necesarias para mantener la hemostasia durante la cirugía, consumo total de rFVIIIFc-VWF-XTEN durante el periodo quirúrgico, pérdida de sangre estimada durante la cirugía, el número y tipo de transfusiones de componentes sanguíneos necesarias durante la cirugía y episodios hemorrágicos posteriores a la cirugía durante el periodo quirúrgico; (iii) la aparición de acontecimientos adversos (AE) y acontecimientos adversos graves (SAE), anomalías clínicamente significativas en la exploración clínica, signos vitales y ensayos de laboratorio, y el desarrollo de inhibidores (anticuerpos neutralizantes dirigidos contra el FVIII determinado por el ensayo de Bethesda modificado por Nijmegen; y (iv) resultados de salud de las articulaciones estructurales anatómicos mediante imágenes por ultrasonidos en una subpoblación, cambios en otras medidas de CdV (EQ-5D-5L, PGIC (solo semana 52), intensidad del dolor PROMIS, interferencia del dolor PROMIS-SF (sujetos >18 años), interferencia del dolor PROMIS-SF pediátrico (sujetos <18 años)) y HRU.
Criterios de inclusión/exclusión
Los candidatos elegibles deben cumplir con los siguientes criterios de elegibilidad: (1) >12 años de edad en el momento del consentimiento informado; (2) hemofilia A grave, definida como FVIII endógeno <1 UI/dl (<1%) comprobado por un laboratorio clínico certificado; (3) tratamiento previo para la hemofilia A (profiláctico o a demanda) con cualquier FVIII recombinante y/o derivado de plasma, o crioprecipitado durante al menos 150 DE; (4) recibiendo actualmente un régimen de tratamiento profiláctico con un producto de FVIII del mercado y que haya tenido al menos cuatro episodios hemorrágicos en los doce meses previos a la inclusión en el estudio, o recibiendo actualmente en un régimen de tratamiento a demanda con un producto de FVIII en el mercado y que haya tenido al menos doce episodios hemorrágioos en Ios doce meses anteriores a la Inclusión en el estudio; y (5) recuento de plaquetas >100000 células/piL en la selección (prueba realizada por el laboratorio central y revisada antes de la dosis del día 1). Los sujetos serán excluidos por cualquiera de las siguientes razones: (1) otro(s) trastorno(s) de coagulación conocidos además de la hemofilia A; (2) antecedentes de hipersensibilidad o anafilaxia asociados con cualquier producto de FVIII; (3) antecedentes de un ensayo positivo de inhibidores o signos clínicos de respuesta disminuida a las administraciones de FVIII (los antecedentes familiares de inhibidores no excluirán al sujeto); (4) resultado positivo de inhibidores, tomado en la selección, definido como >0.6 BU/ml; (5) función renal anormal, definida como creatinina sérica >2.0 mg/dL tomada en la selección; (6) alanina aminotransferasa (ALT) o aspartato aminotransferasa (AST) séricas > 5 x límite superior normal (LSN) tomado en la selección; (7) bilirrubina total sérica >3 x LSN, tomado en el examen; (8) uso de fitusirán o emicizumab dentro de las 12 semanas previas a la selección; (9) tratamiento dentro de las 12 semanas previas a la selección con un anticuerpo monoclonal terapéutico, una proteína de fusión Fc distinta de rFVIIIFc o inmunoglobulina IV; (10) Tratamiento con ácido acetilsalicílico (AAS) dentro de las 2 semanas previas a la detección o tratamiento con fármacos antiinflamatorios no esteroideos (AINE) a o por encima de la dosis máxima especificada en la información de prescripción regional para cada producto; (11) tratamiento sistémico dentro de las 12 semanas previas a la selección con quimioterapia y/u otros fármacos inmunosupresores (excepto para el tratamiento del virus de la hepatitis C [VHC] o VIH; se permite el uso de corticosteroides, excepto para el tratamiento con corticosteroides sistémicos administrados diariamente o en días alternos con 20 mg/día de prednisona o su equivalente durante >14 días; se permite el uso de esteroides locales, tópicos y/o inhalados; y (12) cirugía mayor dentro de las 8 semanas previas a la selección (la cirugía mayor se define como cualquier procedimiento quirúrgico (electivo o emergente) que normalmente, pero no siempre, implica anestesia general y/o asistencia respiratoria, en el que se penetra y expone una cavidad corporal importante, o se produce un deterioro sustancial de las funciones físicas o fisiológicas (p. ej., laparotomía, toracotomía, craneotomía, reemplazo articular o amputación de una extremidad)).
SECUENCIAS
Secuencia de nucleótidos de VWF031 (SEQ ID NO: 147)
1 ATGAT TCCTG CCAGA TTTGC CGGGG TGCTG CTTGC TCTGG CCCTC ATTTT 51 GCCAG GGACC CTTTG TGCAG AAGGA ACTCG CGGCA GGTCA TCCAC GGCCC 101 GATGC AGCCT TTTCG GAAGT GACTT CGTCA ACACC T U G A TGGGA GCATG 151 TACAG CTTTG CGGGA TACTG CAGTT ACCTC CTGGC AGGGG GCTGC CAGAA 201 ACGCT CCTTC TCGAT TATTG GGGAC TTCCA GAATG GCAAG AGAGT GAGCC 251 TCTCC GTGTA TCTTG GGGAA H T T T TGACA TCCAT TTGTT TGTCA ATGGT 301 ACCGT GACAC AGGGG GACCA AAGAG TCTCC ATGCC CTATG CCTCC AAAGG 351 GCTGT ATCTA GAAAC TGAGG CTGGG TACTA CAAGC TGTCC GGTGA GGCCT 401 ATGGC TTTGT GGCCA GGATC GATGG CAGCG GCAAC TTTCA AGTCC TGCTG 451 TCAGA CAGAT ACTTC AACAA GACCT GCGGG CTGTG TGGCA ACTTT AACAT 501 CTTTG CTGAA GATGA CTTTA TGACC CAAGA AGGGA CCTTG ACCTC GGACC 551 CTTAT GACTT TGCCA ACTCA TGGGC TCTGA GCAGT GGAGA ACAGT GGTGT 601 GAACG GGCAT CTCCT CCCAG CAGCT CATGC AACAT CTCCT CTGGG GAAAT 651 GCAGA AGGGC CTGTG GGAGC AGTGC CAGCT TCTGA AGAGC ACCTC GGTGT 701 TTGCC CGCTG CCACC CTCTG GTGGA CCCCG AGCCT TTTGT GGCCC TGTGT 751 GAGAA GACTT TGTGT GAGTG TGCTG GGGGG CTGGA GTGCG CCTGC CCTGC 801 CCTCC TGGAG TACGC CCGGA CCTGT GCCCA GGAGG GAATG GTGCT GTACG 851 GCTGG ACCGA CCACA GCGCG TGCAG CCCAG TGTGC CCTGC TGGTA TGGAG 901 TATAG GCAGT GTGTG TCCCC TTGCG CCAGG ACCTG CCAGA GCCTG CACAT 951 CAATG AAATG TGTCA GGAGC GATGC GTGGA TGGCT GCAGC TGCCC TGAGG 1001 GACAG CTCCT GGATG AAGGC CTCTG CGTGG AGAGC ACCGA GTGTC CCTGC 1051 GTGCA TTCCG GAAAG CGCTA CCCTC CCGGC ACCTC CCTCT CTCGA GACTG 1101 CAACA CCTGC ATTTG CCGAA ACAGC CAGTG GATCT GCAGC AATGA AGAAT 1151 GTCCA GGGGA GTGCC TTGTC ACTGG TCAAT CCCAC TTCAA GAGCT TTGAC 1201 AACAG ATACT TCACC TTCAG TGGGA TCTGC CAGTA CCTGC TGGCC CGGGA 1251 TTGCC AGGAC CACTC CTTCT CCATT GTCAT TGAGA CTGTC CAGTG TGCTG 1301 ATGAC CGCGA CGCTG TGTGC ACCCG CTCCG TCACC GTCCG GCTGC CTGGC 1351 CTGCA CAACA GCCTT GTGAA ACTGA AGCAT GGGGC AGGAG TTGCC ATGGA 1401 TGGCC AGGAC ATCCA GCTCC CCCTC CTGAA AGGTG ACCTC CGCAT CCAGC 1451 ATACA GTGAC GGCCT CCGTG CGCCT CAGCT ACGGG GAGGA CCTGC AGATG 1501 GACTG GGATG GCCGC GGGAG GCTGC TGGTG AAGCT GTCCC CCGTC TATGC 1551 CGGGA AGACC TGCGG CCTGT GTGGG AATTA CAATG GCAAC CAGGG CGACG 1601 ACTTC CTTAC CCCCT CTGGG CTGGC GGAGC CCCGG GTGGA GGACT TCGGG 1651 AACGC CTGGA AGCTG CACGG GGACT GCCAG GACCT GCAGA AGCAG CACAG 1701 CGATC CCTGC GCCCT CAACC CGCGC ATGAC CAGGT TCTCC GAGGA GGCGT 1751 GCGCG GTCCT GACGT CCCCC ACATT CGAGG CCTGC CATCG TGCCG TCAGC 1801 CCGCT GCCCT ACCTG CGGAA CTGCC GCTAC GACGT GTGCT CCTGC TCGGA 1851 CGGCC GCGAG TGCCT GTGCG GCGCC CTGGC CAGCT ATGCC GCGGC CTGCG 1901 CGGGG AGAGG CGTGC GCGTC GCGTG GCGCG AGCCA GGCCG CTGTG AGCTG 1951 AACTG CCCGA AAGGC CAGGT GTACC TGCAG TGCGG GACCC CCTGC AACCT 2001 GACCT GCCGC TCTCT CTCTT ACCCG GATGA GGAAT GCAAT GAGGC CTGCC 2051 TGGAG GGCTG CTTCT GCCCC CCAGG GCTCT ACATG GATGA GAGGG GGGAC 2101 TGCGT GCCCA AGGCC CAGTG CCCCT GTTAC TATGA CGGTG AGATC TTCCA 2151 GCCAG AAGAC ATCTT CTCAG ACCAT CACAC CATGT GCTAC TGTGA GGATG 2201 GCTTC ATGCA CTGTA CCATG AGTGG AGTCC CCGGA AGCTT GCTGC CTGAC 2251 GCTGT CCTCA GCAGT CCCCT GTCTC ATCGC AGCAA AAGGA GCCTA TCCTG 2301 TCGGC CCCCC ATGGT CAAGC TGGTG TGTCC CGCTG ACAAC CTGCG GGCTG 2351 AAGGG CTCGA GTGTA CCAAA ACGTG CCAGA ACTAT GACCT GGAGT GCATG 2401 AGCAT GGGCT GTGTC TCTGG CTGCC TCTGC CCCCC GGGCA TGGTC CGGCA 2451 TGAGA ACAGA TGTGT GGCCC TGGAA AGGTG TCCCT GCTTC CATCA GGGCA 2501 AGGAG TATGC CCCTG GAGAA ACAGT GAAGA TTGGC TGCAA CACTT GTGTC 2551 TGTCG GGACC GGAAG TGGAA CTGCA CAGAC CATGT GTGTG ATGCC ACGTG 2601 CTCCA CGATC GGCAT GGCCC ACTAC CTCAC CTTCG ACGGG CTCAA ATACC 2651 TGTTC CCCGG GGAGT GCCAG TACGT TCTGG TGCAG GATTA CTGCG GCAGT 2701 AACCC TGGGA CCTTT CGGAT CCTAG TGGGG AATAA GGGAT GCAGC CACCC 2751 CTCAG TGAAA TGCAA GAAAC GGGTC ACCAT CCTGG TGGAG GGAGG AGAGA 2801 TTGAG CTGTT TGACG GGGAG GTGAA TGTGA AGAGG CCCAT GAAGG ATGAG 2851 ACTCA CTTTG AGGTG GTGGA GTCTG GCCGG TACAT CATTC TGCTG CTGGG 2901 CAAAG CCCTC TCCGT GGTCT GGGAC CGCCA CCTGA GCATC TCCGT GGTCC 2951 TGAAG CAGAC ATACC AGGAG AAAGT GTGTG GCCTG TGTGG GAATT TTGAT 3001 GGCAT CCAGA ACAAT GACCT CACCA GCAGC AACCT CCAAG TGGAG GAAGA 3051 CCCTG TGGAC TTTGG GAACT CCTGG AAAGT GAGCT CGCAG TGTGC TGACA 3101 CCAGA AAAGT GCCTC TGGAC TCATC CCCTG CCACC TGCCA TAACA ACATC 3151 ATGAA GCAGA CGATG GTGGA TTCCT CCTGT AGAAT CCTTA CCAGT GACGT 3201 CTTCC AGGAC TGCAA CAAGC TGGTG GACCC CGAGC CATAT CTGGA TGTCT 3251 GCATT TACGA CACCT GCTCC TGTGA GTCCA TTGGG GACTG CGCCG CATTC 3301 TGCGA CACCA TTGCT GCCTA TGCCC ACGTG TGTGC CCAGC ATGGC AAGGT 3351 GGTGA CCTGG AGGAC GGCCA CATTG TGCCC CCAGA GCTGC GAGGA GAGGA 3401 ATCTC CGGGA GAACG GGTAT GAGGC TGAGT GGCGC TATA A CAGC'T GTGCA 3451 CC'TGC C'TGTC AAGTC ACGTG TCAGC ACCCT GAGCC ACTGG CCTGC CCTGT 3501 GCAGT GTGTG GAGGG CTGCC ATGCC CACTG CCCTC CAGGG AAAAT CCTGG 3551 ATGAG CTTTT GCAGA CCTGC GTTGA CCCTG AAGAC TGTCC AGTGT GTGAG 3601 GTGGC TGGCC GGCGT TTTGC CTCAG GAAAG AAAGT CACCT TGAAT CCCAG 3651 TGACC CTGAG CACTG CCAGA TTTGC CACTG TGATG TTGTC AACCT CACCT 3701 GTGAA GCCTG CCAGG AGCCG ATATC TGGCG GTGGA GGTTC CGGTG GCGGG 3751 GGATC CGGCG GTGGA GGTTC CGGCG GTGGA GGTTC CGGTG GCGGG GGATC 3801 CGGTG GCGGG GGATC CCTGG TCCCC CGGGG CAGCG GCGGT GGAGG TTCCG 3851 GTGGC GGGGG ATCCG ACAAA ACTCA CACAT GCCCA CCGTG CCCAG CTCCA 3901 GAACT CCTGG GCGGA CCGTC AGTCT TCCTC TTCCC CCCAA AACCC AAGGA 3951 CACCC TCATG ATCTC CCGGA CCCCT GAGGT CACAT GCGTG GTGGT GGACG 4001 TGAGC CACGA AGACC CTGAG GTCAA GTTCA ACTGG TACGT GGACG GCGTG 4051 GAGGT GCATA ATGCC AAGAC AAAGC CGCGG GAGGA GCAGT ACAAC AGCAC 4101 GTACC GTGTG GTCAG CGTCC TCACC GTCCT GCACC AGGAC TGGCT GAATG 4151 GCAAG GAGTA CAAGT GCAAG GTCTC CAACA AAGCC CTCCC AGCCC CCATC 4201 GAGAA AACCA TCTCC AAAGC CAAAG GGCAG CCCCG AGAAC CACAG GTGTA 4251 CACCC TGCCC CCATC CCGCG ATGAG CTGAC CAAGA ACCAG GTCAG CCTGA 4301 CCTGC CTGGT CAAAG GCTTC TATCC CAGCG ACATC GCCGT GGAGT GGGAG 4351 AGCAA TGGGC AGCCG GAGAA CAACT ACAAG ACCAC GCCTC CCGTG TTGGA 4401 CTCCG ACGGC TCCTT CTTCC TCTAC AGCAA GCTCA CCGTG GACAA GAGCA 4451 GGTGG CAGCA GGGGA ACGTC TTCTC ATGC'T CCGTG ATGCA TGAGG CTCTG 4501 CACAA CCAC'T ACACG CAGAA GAGCC TCTCC CTGTC TCCGG GTAAA TGA
Secuencia de proteína de VWF031 (SEQ ID NO: 86)
1 MIPARFAGVL LALALILPGT LCAEGTRGRS STARCSLFGS DFVNTFDGSM 51 YSFAGYCSYL LAGGCQKRSF SIIGDFQNGK RVSLSVYLGE FFDIHLFVNG 101 TVTQGDQRVS MPYASKGLYL ETEAGYYKLS GEAYGFVARIDGSGNFQVLL 151 SDRYFNKTCG LCGNFNIFAE DDFMTQEGTL TSDPYDFANS WALSSGEQWC 201 ERASPPSSSC NISSGEMQKG LWEQCQLLKS TSVFARCHPL VDPEPFVALC 251 EKTLCECAGG LECACPALLE YARTCAQEGM VLYGWTDHSA CSPVCPAGME 301 YRQCVSPCAR TCQSLH1NEM CQERCVDGCS CPEGQLLDEG LCVESTECPC 351 VHSGKRYPPG TSLSRDCNTC ICRNSQWICS NEECPGECLV TGQSHFKSFD 401 NRYFTFSGIC QYLLARDCQD HSFSIVIETV QCADDRDAVC TRSVTVRLPG 451 LHNSLVKLKH GAGVAMDGQD IQLPLLKGDL RIQHTVTASV RLSYGEDLQM 501 DWDGRGRLL V KLSPVYAGKT CGLCGNYNGN QGDDFLTPSG LAEPRVEDFG 551 NAWKLHGDCQ DLQKQHSDPC ALNPRMTRFS EEACAVLTSP TFEACHRAVS 601 PLPYLRNCRY DVCSCSDGRE CLCGALASYA AACAGRGVRV AWREPGRCEL 651 NCPKGQVYLQ CGTPCNLTCR SLSYPDEECN EACLEGCFCP PGL YMDERGD 701 CVPKAQCPCY YDGEIFQPED IFSDHHTMCY CEDGFMHCTM SGVPGSLLPD 751 AVLSSPLSHR SKRSLSCRPP MVKLVCPADN LRAEGLECTK TCQNYDLECM 801 SMGCVSGCLC PPGMVRHENR CVALERCPCF HQGKEYAPGE TVKIGCNTCV 851 CRDRKWNCTD HVCDATCSTI GMAHYLTFDG LKYLFPGECQ YVLVQDYCGS 901 NPGTFRILVG NKGCSHPSVK CKKRVTILVE GGEIELFDGE VNVKRPMECDE 951 THFEVVESGR YIILLLGKAL SVVWDRHLSI SVVLKQTYQE KVCGLCGNFD 1001 GIQNNDLTSS NLQVEEDPVD FGNSWKVSSQ CADTRKVPLD SSPATCHNNI 1051 MKQTMVDSSC RILTSDVFQD CNKLVDPEPY LDVCIYDTCS CESIGDCAAF 1101 CDTIAAYAHV CAQHGKVVTW RTATLCPQSC EERNLRENGY EAEWRYNSCA 1151 PACQVTCQHP EPLACPVQCV EGCHAHCPPG KILDELLQTC VDPEDCPVCE 1201 VAGRRFASGK KVTLNPSDPE HCQICHCDVV NLTCEACQEP ISGGGGSGGG 1251 GSGGGGSGGG GSGGGGSGGG GSLVPRGSGG GGSGGGGSDK THTCPPCPAP 1301 ELLGGPSVFL FPPKPKDTLM ISRTPEVTCV VVDVSHEDPE VKFNWYVDGV 1351 EVHNAKTKPR EEQYNSTYRV VSVLTVLHQD WLNGKEYKCK VSNKALPAPI 1401 EKTISKAKGQ PREPQVYTLP PSRDELTKNQ VSLTCLVKGF YPSDIAVEWE 1451 SNGQPENNYK TTPPVLDSDG SFFLYSKLTV DKSRWQQGNV FSCSVMHEAL 1501 HNHYTQKSLS LSPGK*
Secuencia de nucleótidos de VWF034 (SEQ ID NO: 148)
1 ATGAT TCCTG CCAGA TTTGC CGGGG TGCTG CTTGC TCTGG CCCTC ATTTT 51 GCCAG GGACC CTTTG TGCAG AAGGA ACTCG CGGCA GGTCA TCCAC GGCCC 101 GATGC AGCCT TTTCG GAAGT GACTT CGTCA ACACC T U G A TGGGA GCATG 151 TACAG CTTTG CGGGA TACTG CAGTT ACCTC CTGGC AGGGG GCTGC CAGAA 201 ACGCT CCTTC TCGAT TATTG GGGAC TTCCA GAATG GCAAG AGAGT GAGCC 251 TCTCC GTGTA TCTTG GGGAA TTTTT TGACA TCCAT TTGTT TGTCA ATGGT 301 ACCGT GACAC AGGGG GACCA AAGAG TCTCC ATGCC CTATG CCTCC AAAGG 351 GCTGT ATCTA GAAAC TGAGG CTGGG TACTA CAAGC TGTCC GGTGA GGCCT 401 ATGGC TTTGT GGCCA GGATC GATGG CAGCG GCAAC TTTCA AGTCC TGCTG 451 TCAGA CAGAT ACTTC AACAA GACCT GCGGG CTGTG TGGCA ACTTT AACAT 501 CTTTG CTGAA GATGA CTTTA TGACC CAAGA AGGGA CCTTG ACCTC GGACC 551 CTTAT GACTT TGCCA ACTCA TGGGC TCTGA GCAGT GGAGA ACAGT GGTGT 601 GAACG GGCAT CTCCT CCCAG CAGCT CATGC AACAT CTCCT CTGGG GAAAT 651 GCAGA AGGGC CTGTG GGAGC AGTGC CAGCT TCTGA AGAGC ACCTC GGTGT 701 TTGCC CGCTG CCACC CTCTG GTGGA CCCCG AGCCT TTTGT GGCCC TGTGT 751 GAGAA GACTT TGTGT GAGTG TGCTG GGGGG CTGGA GTGCG CCTGC CCTGC 801 CCTCC TGGAG TACGC CCGGA CCTGT GCCCA GGAGG GAATG GTGCT GTACG 851 GCTGG ACCGA CCACA GCGCG TGCAG CCCAG TGTGC CCTGC TGGTA TGGAG 901 TATAG GCAGT GTGTG TCCCC TTGCG CCAGG ACCTG CCAGA GCCTG CACAT 951 CAATG AAATG TGTCA GGAGC GATGC GTGGA TGGCT GCAGC TGCCC TGAGG 1001 GACAG CTCCT GGATG AAGGC CTCTG CGTGG AGAGC ACCGA GTGTC CCTGC 1051 GTGCA TTCCG GAAAG CGCTA CCCTC CCGGC ACCTC CCTCT CTCGA GACTG 1101 CAACA CCTGC ATTTG CCGAA ACAGC CAGTG GATCT GCAGC AATGA AGAAT 1151 GTCCA GGGGA GTGCC TTGTC ACTGG TCAAT CCCAC TTCAA GAGCT TTGAC 1201 AACAG ATACT TCACC TTCAG TGGGA TCTGC CAGTA CCTGC TGGCC CGGGA 1251 TTGCC AGGAC CACTC CTTCT CCATT GTCAT TGAGA CTGTC CAGTG TGCTG 1301 ATGAC CGCGA CGCTG TGTGC ACCCG CTCCG TCACC GTCCG GCTGC CTGGC 1351 CTGCA CAACA GCCTT GTGAA ACTGA AGCAT GGGGC AGGAG TTGCC ATGGA 1401 TGGCC AGGAC ATCCA GCTCC CCCTC CTGAA AGGTG ACCTC CGCAT CCAGC 1451 ATACA GTGAC GGCCT CCGTG CGCCT CAGCT ACGGG GAGGA CCTGC AGATG 1501 GACTG GGATG GCCGC GGGAG GCTGC TGGTG AAGCT GTCCC CCGTC TATGC 1551 CGGGA AGACC TGCGG CCTGT GTGGG AATTA CAATG GCAAC CAGGG CGACG 1601 ACTTC CTTAC CCCCT CTGGG CTGGC GGAGC CCCGG GTGGA GGACT TCGGG 1651 AACGC CTGGA AGCTG CACGG GGACT GCCAG GACCT GCAGA AGCAG CACAG 1701 CGATC CCTGC GCCCT CAACC CGCGC ATGAC CAGGT TCTCC GAGGA GGCGT 1751 GCGCG GTCCT GACGT CCCCC ACATT CGAGG CCTGC CATCG TGCCG TCAGC 1801 CCGCT GCCCT ACCTG CGGAA CTGCC GCTAC GACGT GTGCT CCTGC TCGGA 1851 CGGCC GCGAG TGCCT GTGCG GCGCC CTGGC CAGCT ATGCC GCGGC CTGCG 1901 CGGGG AGAGG CGTGC GCGTC GCGTG GCGCG AGCCA GGCCG CTGTG AGCTG 1951 AACTG CCCGA AAGGC CAGGT GTACC TGCAG TGCGG GACCC CCTGC AACCT 2001 GACCT GCCGC TCTCT CTCTT ACCCG GATGA GGAAT GCAAT GAGGC CTGCC 2051 TGGAG GGCTG CTTCT GCCCC CCAGG GCTCT ACATG GATGA GAGGG GGGAC 2101 TGCGT GCCCA AGGCC CAGTG CCCCT GTTAC TATGA CGGTG AGATC TTCCA 2151 GCCAG AAGAC ATCTT CTCAG ACCAT CACAC CATGT GCTAC TGTGA GGATG 2201 GCTTC ATGCA CTGTA CCATG AGTGG AGTCC CCGGA AGCTT GCTGC CTGAC 2251 GCTGT CCTCA GCAGT CCCCT GTCTC ATCGC AGCAA AAGGA GCCTA TCCTG 2301 TCGGC CCCCC ATGGT CAAGC TGGTG TGTCC CGCTG ACAAC CTGCG GGCTG 2351 AAGGG CTCGA GTGTA CCAAA ACGTG CCAGA ACTAT GACCT GGAGT GCATG 2401 AGCAT GGGCT GTGTC TCTGG CTGCC TCTGC CCCCC GGGCA TGGTC CGGCA 2451 TGAGA ACAGA TGTGT GGCCC TGGAA AGGTG TCCCT GCTTC CATCA GGGCA 2501 AGGAG TATGC CCCTG GAGAA ACAGT GAAGA TTGGC TGCAA CACTT GTGTC 2551 TGTCG GGACC GGAAG TGGAA CTGCA CAGAC CATGT GTGTG ATGCC ACGTG 2601 CTCCA CGATC GGCAT GGCCC ACTAC CTCAC CTTCG ACGGG CTCAA ATACC 2651 TGTTC CCCGG GGAGT GCCAG TACGT TCTGG TGCAG GATTA CTGCG GCAGT 2701 AACCC TGGGA CCTTT CGGAT CCTAG TGGGG AATAA GGGAT GCAGC CACCC 2751 CTCAG TGAAA TGCAA GAAAC GGGTC ACCAT CCTGG TGGAG GGAGG AGAGA 2801 TTGAG CTGTT TGACG GGGAG GTGAA TGTGA AGAGG CCCAT GAAGG ATGAG 2851 ACTCA CTTTG AGGTG GTGGA GTCTG GCCGG TACAT CATTC TGCTG CTGGG 2901 CAAAG CCCTC TCCGT GGTCT GGGAC CGCCA CCTGA GCATC TCCGT GGTCC 2951 TGAAG CAGAC ATACC AGGAG AAAGT GTGTG GCCTG TGTGG GAATT TTGAT 3001 GGCAT CCAGA ACAAT GACCT CACCA GCAGC AACCT CCAAG TGGAG GAAGA 3051 CCCTG TGGAC TTTGG GAACT CCTGG AAAGT GAGCT CGCAG TGTGC TGACA 3101 CCAGA AAAGT GCCTC TGGAC TCATC CCCTG CCACC TGCCA TAACA ACATC 3151 ATGAA GCAGA CGATG GTGGA TTCCT CCTGT AGAAT CCTTA CCAGT GACGT 3201 CTTCC AGGAC TGCAA CAAGC TGGTG GACCC CGAGC CATAT CTGGA TGTCT 3251 GCATT TACGA CACCT GCTCC TGTGA GTCCA TTGGG GACTG CGCCG CATTC 3301 TGCGA CACCA TTGCT GCCTA TGCCC ACGTG TGTGC CCAGC ATGGC AAGGT 3351 GGTGA CCTGG AGGAC GGCCA CATTG TGCCC CCAGA GCTGC GAGGA GAGGA 3401 ATCTC CGGGA GAACG GGTAT GAGGC TGAGT GGCGC TATAA CAGCT GTGCA 3451 CCTGC CTGTC AAGTC ACGTG TCAGC ACCCT GAGCC ACTGG CCTGC CCTGT 3501 GCAGT GTGTG GAGGG CTGCC ATGCC CACTG CCCTC CAGGG AAAAT CCTGG 3551 ATGAG CTTTT GCAGA CCTGC GTTGA CCCTG AAGAC TGTCC AGTGT GTGAG 3601 GTGGC TGGCC GGCGT TTTGC CTCAG GAAAG AAAGT CACCT TGAAT CCCAG 3651 TGACC CTGAG CACTG CCAGA TTTGC CACTG TGATG TTGTC AACCT CACCT 3701 GTGAA GCCTG CCAGG AGCCG ATATC GGGTA CCTCA GAGTC TGCTA CCCCC 3751 GAGTC AGGGC CAGGA TCAGA GCCAG CCACC TCCGG GTCTG AGACA CCCGG 3801 GACTT CCGAG AGTGC CACCC CTGAG TCCGG ACCCG GGTCC GAGCC CGCCA 3851 CTTCC GGCTC CGAAA CTCCC GGCAC AAGCG AGAGC GCTAC CCCAG AGTCA 3901 GGACC AGGAA CATCT ACAGA GCCCT CTGAA GGCTC CGCTC CAGGG TCCCC 3951 AGCCG GCAGT CCCAC TAGCA CCGAG GAGGG AACCT CTGAA AGCGC CACAC 4001 CCGAA TCAGG GCCAG GGTCT GAGCC TGCTA CCAGC GGCAG CGAGA CACCA 4051 GGCAC CTCTG AGTCC GCCAC ACCAG AGTCC GGACC CGGAT CTCCC GCTGG 4101 GAGCC CCACC TCCAC TGAGG AGGGA TCTCC TGCTG GCTCT CCAAC ATCTA 4151 CTGAG GAAGG TACCT CAACC GAGCC ATCCG AGGGA TCAGC TCCCG GCACC 4201 TCAGA GTCGG CAACC CCGGA GTCTG GACCC GGAAC TTCCG AAAGT GCCAC 4251 ACCAG AGTCC GGTCC CGGGA CTTCA GAATC AGCAA CACCC GAGTC CGGCC 4301 CTGGG TCTGA ACCCG CCACA AGTGG TAGTG AGACA CCAGG ATCAG AACCT 4351 GCTAC CTCAG GGTCA GAGAC ACCCG GATCT CCGGC AGGCT CACCA ACCTC 4401 CACTG AGGAG GGCAC CAGCA CAGAA CCAAG CGAGG GCTCC GCACC CGGAA 4451 CAAGC ACTGA ACCCA GTGAG GGTTC AGCAC CCGGC TCTGA GCCGG CCACA 4501 AGTGG CAGTG AGACA CCCGG CACTT CAGAG AGTGC CACCC CCGAG AGTGG 4551 CCCAG GCAC'T AGTAC CGAGC CCTCT GAAGG CAGTG CGCCA GATTC TGGCG 4601 GTGGA GGTTC CGGTG GCGGG GGATC CGGTG GCGGG GGATC CGGTG GCGGG 4651 GGATC CGGTG GCGGG GGATC CC'TGG TCCCC CGGGG CAGCG GAGGC GACAA 4701 AACTC ACACA TGCCC ACCGT GCCCA GCTCC AGAAC TCCTG GGCGG ACCGT 4751 CAGTC TTCCT CTTCC CCCCA AAACC CAAGG ACACC CTCAT GATCT CCCGG 4801 ACCCC TGAGG TCACA TGCGT GGTGG TGGAC GTGAG CCACG AAGAC CCTGA 4851 GGTCA AGTTC AACTG GTACG TGGAC GGCGT GGAGG TGCAT AATGC CAAGA 4901 CAAAG CCGCG GGAGG AGCAG TACAA CAGCA CGTAC CGTGT GGTCA GCGTC 4951 CTCAC CGTCC TGCAC CAGGA CTGGC TGAAT GGCAA GGAGT ACAAG TGCAA 5001 GGTCT CCAAC AAAGC CCTCC CAGCC CCCAT CGAGA AAACC ATCTC CAAAG 5051 CCAAA GGGCA GCCCC GAGAA CCACA GGTGT ACACC CTGCC CCCAT CCCGG 5101 GATGA GCTGA CCAAG AACCA GGTCA GCCTG ACCTG CCTGG TCAAA GGCTT 5151 CTATC CCAGC GACAT CGCCG TGGAG TGGGA GAGCA ATGGG CAGCC GGAGA 5201 ACAAC TACAA GACCA CGCCT CCCGT GTTGG ACTCC GACGG CTCCT TCTTC 5251 CTCTA CAGCA AGCTC ACCGT GGACA AGAGC AGGTG GCAGC AGGGG AACGT 5301 CTTCT CATGC TCCGT GATGC ATGAG GCTCT GCACA ACCAC TACAC GCAGA 5351 AGAGC CTCTC CCTGT CTCCG GGTAA ATGA
Secuencia de proteína de VWF034 (SEQ ID NO: 87)
1 MIPARFAGVL LALALILPGT LCAEGTRGRS STARCSLFGS DFVNTFDGSM 51 YSFAGYCSYL LAGGCQKRSF SIIGDFQNGK RVSLSVYLGE FFDIHLFVNG 101 TVTQGDQRVS MPYASKGLYL ETEAGYYKLS GEAYGFVARIDGSGNFQVLL 151 SDRYFNKTCG LCGNFNIFAE DDFMTQEGTL TSDPYDFANS WALSSGEQWC 201 ERASPPSSSC NISSGEMQKG LWEQCQLLKS TSVFARCHPL VDPEPFVALC 251 EKTLCECAGG LECACPALLE YARTCAQEGM VL YGWTDHSA CSPVCPAGME 301 YRQCVSPCAR TCQSLHINEM CQERCVDGCS CPEGQLLDEG LCVESTECPC 351 VHSGKRYPPG TSLSRDCNTC ICRNSQWICS NEECPGECLV TGQSHFKSFD 401 NRYFTFSGIC QYLLARDCQD HSFSIVIETV QCADDRDAVC TRSVTVRLPG 451 LHNSLVKLKH GAGVAMDGQD IQLPLLKGDL RIQHTVTASV RLSYGEDLQM 501 DWDGRGRLLV KLSPVYAGKT CGLCGNYNGN QGDDFLTPSG LAEPRVEDFG 551 NAWKLHGDCQ DLQKQHSDPC ALNPRMTRFS EEACAVLTSP TFEACHRAVS 601 PLPYLRNCRY DVCSCSDGRE CLCGALASYA AACAGRGVRV AWREPGRCEL 651 NCPKGQVYLQ CGTPCNLTCR SLSYPDEECN EACLEGCFCP PGLYMDERGD 701 CVPKAQCPCY YDGEIFQPED IFSDHHTMCY CEDGFMHCTM SGVPGSLLPD 751 AVLSSPLSHR SKRSLSCRPP MVKLVCPADN LRAEGLECTK TCQNYDLECM 801 SMGCVSGCLC PPGMVRHENR CVALERCPCF HQGKEYAPGE TVKIGCNTCV 851 CRDRKWNCTD PIVCDATCSTI GMAHYLTFDG LKYLFPGECQ YVLVQDYCGS 901 NPGTFRILVG NKGCSHPSVK CKKRVTILVE GGEIELFDGE VNVKRPMKDE 951 THFEVVESGR YIILLLGKAL SVVWDRHLSI SVVLKQTYQE KVCGLCGNFD 1001 GIQNNDLTSS NLQVEEDPVD FGNSWKVSSQ CADTRKVPLD SSPATCHNM 1051 MKQTMVDSSC RILTSDVFQD CNKLVDPEPY LDVCIYDTCS CESIGDCAAF 1101 CDTIAAYAHV CAQHGKVVTW RTATLCPQSC EERNLRENGY EAEWRYNSCA 1151 PACQVTCQHP EPLACPVQCV EGCHAHCPPG KILDELLQTC VDPEDCPVCE 1201 VAGRRFASGK KVTLNPSDPE HCQICHCDVV NLTCEACQEP ISGTSESATP 1251 ESGPGSEPAT SGSETPGTSE SATPESGPGS EPATSGSETP GTSESATPES 1301 GPGTSTEPSE GSAPGSPAGS PTSTEEGTSE SATPESGPGS EPATSGSETP 1351 GTSESATPES GPGSPAGSPT STEEGSPAGS PTSTEEGTST EPSEGSAPGT 1401 SESATPESGP GTSESATPES GPGTSESATP ESGPGSEPAT SGSETPGSEP 1451 ATSGSETPGS PAGSPTSTEE GTSTEPSEGS APGTSTEPSE GSAPGSEPAT 1501 SGSETPGTSE SATPESGPGT STEPSEGSAP DIGGGGGSGG GGSLVPRGSG 1551 GDKTHTCPPC PAPELLGGPS VFLFPPKPKD TLMISRTPEV TCVVVDVSHE 1601 DPEVKFNWYV DGVEVHNAKT KPREEQYNST YRVVSVLTVL HQDWLNGKEY 1651 KCKVSNKALP APIEKTISKA KGQPREPQVY TLPPSRDELT KNQVSLTCLV 1701 KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPVLD SDGSFFLYSK LTVDKSRWQQ 1751 GNVFSCSVMH EALHNHYTQK SLSLSPGK*
Secuencia de nucleótidos de VWF050 (mutante triple IHH) (SEQ ID NO: 149)
1 ATGAT TCCTG CCAGA TTTGC CGGGG TGCTG CTTGC TCTGG CCCTC ATTTT 51 GCCAG GGACC CTTTG TGCAG AAGGA ACTCG CGGCA GGTCA TCCAC GGCCC 101 GATGC AGCCT TTTCG GAAGT GACTT CGTCA ACACC TTTGA TGGGA GCATG 151 TACAG CTTTG CGGGA TACTG CAGTT ACCTC CTGGC AGGGG GCTGC CAGAA 201 ACGCT CCTTC TCGAT TATTG GGGAC TTCCA GAATG GCAAG AGAGT GAGCC 251 TCTCC GTGTA TCTTG GGGAA H T T T TGACA TCCAT TTGTT TGTCA ATGGT 301 ACCGT GACAC AGGGG GACCA AAGAG TCTCC ATGCC CTATG CCTCC AAAGG 351 GCTGT ATCTA GAAAC TGAGG CTGGG TACTA CAAGC TGTCC GGTGA GGCCT 401 ATGGC TTTGT GGCCA GGATC GATGG CAGCG GCAAC TTTCA AGTCC TGCTG 451 TCAGA CAGAT ACTTC AACAA GACCT GCGGG CTGTG TGGCA ACTTT AACAT 501 CTTTG CTGAA GATGA CTTTA TGACC CAAGA AGGGA CCTTG ACCTC GGACC 551 CTTAT GACTT TGCCA ACTCA TGGGC TCTGA GCAGT GGAGA ACAGT GGTGT 601 GAACG GGCAT CTCCT CCCAG CAGCT CATGC AACAT CTCCT CTGGG GAAAT 651 GCAGA AGGGC CTGTG GGAGC AGTGC CAGCT TCTGA AGAGC ACCTC GGTGT 701 TTGCC CGCTG CCACC CTCTG GTGGA CCCCG AGCCT TTTGT GGCCC TGTGT 751 GAGAA GACTT TGTGT GAGTG TGCTG GGGGG CTGGA GTGCG CCTGC CCTGC 801 CCTCC TGGAG TACGC CCGGA CCTGT GCCCA GGAGG GAATG GTGCT GTACG 851 GCTGG ACCGA CCACA GCGCG TGCAG CCCAG TGTGC CCTGC TGGTA TGGAG 901 TATAG GCAGT GTGTG TCCCC TTGCG CCAGG ACCTG CCAGA GCCTG CACAT 951 CAATG AAATG TGTCA GGAGC GATGC GTGGA TGGCT GCAGC TGCCC TGAGG 1001 GACAG CTCCT GGATG AAGGC CTCTG CGTGG AGAGC ACCGA GTGTC CCTGC 1051 GTGCA TTCCG GAAAG CGCTA CCCTC CCGGC ACCTC CCTCT CTCGA GACTG 1101 CAACA CCTGC ATTTG CCGAA ACAGC CAGTG GATCT GCAGC AATGA AGAAT 1151 GTCCA GGGGA GTGCC TTGTC ACTGG TCAAT CCCAC TTCAA GAGCT TTGAC 1201 AACAG ATACT TCACC TTCAG TGGGA TCTGC CAGTA CCTGC TGGCC CGGGA 1251 TTGCC AGGAC CACTC CTTCT CCATT GTCAT TGAGA CTGTC CAGTG TGCTG 1301 ATGAC CGCGA CGCTG TGTGC ACCCG CTCCG TCACC GTCCG GCTGC CTGGC 1351 CTGCA CAACA GCCTT GTGAA ACTGA AGCAT GGGGC AGGAG TTGCC ATGGA 1401 TGGCC AGGAC ATCCA GCTCC CCCTC CTGAA AGGTG ACCTC CGCAT CCAGC 1451 ATACA GTGAC GGCCT CCGTG CGCCT CAGCT ACGGG GAGGA CCTGC AGATG 1501 GACTG GGATG GCCGC GGGAG GCTGC TGGTG AAGCT GTCCC CCGTC TATGC 1551 CGGGA AGACC TGCGG CCTGT GTGGG AATTA CAATG GCAAC CAGGG CGACG 1601 ACTTC CTTAC CCCCT CTGGG CTGGC GGAGC CCCGG GTGGA GGACT TCGGG 1651 AACGC CTGGA AGCTG CACGG GGACT GCCAG GACCT GCAGA AGCAG CACAG 1701 CGATC CCTGC GCCCT CAACC CGCGC ATGAC CAGGT TCTCC GAGGA GGCGT 1751 GCGCG GTCCT GACGT CCCCC ACATT CGAGG CCTGC CATCG TGCCG TCAGC 1801 CCGCT GCCCT ACCTG CGGAA CTGCC GCTAC GACGT GTGCT CCTGC TCGGA 1851 CGGCC GCGAG TGCCT GTGCG GCGCC CTGGC CAGCT ATGCC GCGGC CTGCG 1901 CGGGG AGAGG CGTGC GCGTC GCGTG GCGCG AGCCA GGCCG CTGTG AGCTG 1951 AACTG CCCGA AAGGC CAGGT GTACC TGCAG TGCGG GACCC CCTGC AACCT 2001 GACCT GCCGC TCTCT CTCTT ACCCG GATGA GGAAT GCAAT GAGGC CTGCC 2051 TGGAG GGCTG CTTCT GCCCC CCAGG GCTCT ACATG GATGA GAGGG GGGAC 2101 TGCGT GCCCA AGGCC CAGTG CCCCT GTTAC TATGA CGGTG AGATC TTCCA 2151 GCCAG AAGAC ATCTT CTCAG ACCAT CACAC CATGT GCTAC TGTGA GGATG 2201 GCTTC ATGCA CTGTA CCATG AGTGG AGTCC CCGGA AGCTT GCTGC CTGAC 2251 GCTGT CCTCA GCAGT CCCCT GTCTC ATCGC AGCAA AAGGA GCCTA TCCTG 2301 TCGGC CCCCC ATGGT CAAGC TGGTG TGTCC CGCTG ACAAC CTGCG GGCTG 2351 AAGGG CTCGA GTGTA CCAAA ACGTG CCAGA ACTAT GACCT GGAGT GCATG 2401 AGCAT GGGCT GTGTC TCTGG CTGCC TCTGC CCCCC GGGCA TGGTC CGGCA 2451 TGAGA ACAGA TGTGT GGCCC TGGAA AGGTG TCCCT GCTTC CATCA GGGCA 2501 AGGAG TATGC CCCTG GAGAA ACAGT GAAGA TTGGC TGCAA CACTT GTGTC 2551 TGTCG GGACC GGAAG TGGAA CTGCA CAGAC CATGT GTGTG ATGCC ACGTG 2601 CTCCA CGATC GGCAT GGCCC ACTAC CTCAC CTTCG ACGGG CTCAA ATACC 2651 TGTTC CCCGG GGAGT GCCAG TACGT TCTGG TGCAG GATTA CTGCG GCAGT 2701 AACCC TGGGA CCTTT CGGAT CCTAG TGGGG AATAA GGGAT GCAGC CACCC 2751 CTCAG TGAAA TGCAA GAAAC GGGTC ACCAT CCTGG TGGAG GGAGG AGAGA 2801 TTGAG CTGTT TGACG GGGAG GTGAA TGTGA AGAGG CCCAT GAAGG ATGAG 2851 ACTCA CTTTG AGGTG GTGGA GTCTG GCCGG TACAT CATTC TGCTG CTGGG 2901 CAAAG CCCTC TCCGT GGTCT GGGAC CGCCA CCTGA GCATC TCCGT GGTCC 2951 TGAAG CAGAC ATACC AGGAG AAAGT GTGTG GCCTG TGTGG GAATT TTGAT 3001 GGCAT CCAGA ACAAT GACCT CACCA GCAGC AACCT CCAAG TGGAG GAAGA 3051 CCCTG TGGAC TTTGG GAACT CCTGG AAAGT GAGCT CGCAG TGTGC TGACA 3101 CCAGA AAAGT GCCTC TGGAC TCATC CCCTG CCACC TGCCA TAACA ACATC 3151 ATGAA GCAGA CGATG GTGGA TTCCT CCTGT AGAAT CCTTA CCAGT GACGT 3201 CTTCC AGGAC TGCAA CAAGC TGGTG GACCC CGAGC CATAT CTGGA TGTCT 3251 GCATT TACGA CACCT GCTCC TGTGA GTCCA TTGGG GACTG CGCCG CATTC 3301 TGCGA CACCA TTGCT GCCTA TGCCC ACGTG TGTGC CCAGC ATGGC AAGGT 3351 GGTGA CCTGG AGGAC GGCCA CATTG TGCCC CCAGA GCTGC GAGGA GAGGA 3401 ATCTC CGGGA GAACG GGTAT GAGGC TGAGT GGCGC TATAA CAGCT GTGCA 3451 CCTGC CTGTC AAGTC ACGTG TCAGC ACCCT GAGCC ACTGG CCTGC CCTGT 3501 GCAGT GTGTG GAGGG CTGCC ATGCC CACTG CCCTC CAGGG AAAAT CCTGG 3551 ATGAG CTTTT GCAGA CCTGC GTTGA CCCTG AAGAC TGTCC AGTGT GTGAG 3601 GTGGC TGGCC GGCGT TTTGC CTCAG GAAAG AAAGT CACCT TGAAT CCCAG 3651 TGACC CTGAG CACTG CCAGA TTTGC CACTG TGATG TTGTC AACCT CACCT 3701 GTGAA GCCTG CCAGG AGCCG ATATC TGGCG GTGGA GGTTC CGGTG GCGGG 3751 GGATC CGGCG GTGGA GGTTC CGGCG GTGGA GGTTC CGGTG GCGGG GGATC 3801 CGGTG GCGGG GGATC CCTGG TCCCC CGGGG CAGCG GCGGT GGAGG TTCCG 3851 GTGGC GGGGG ATCCG ACAAA ACTCA CACAT GCCCA CCGTG CCCAG CTCCA 3901 GAACT CCTGG GCGGA CCGTC AGTCT TCCTC TTCCC CCCAA AACCC AAGGA 3951 CACCC TCATG GCCTC CCGGA CCCCT GAGGT CACAT GCGTG GTGGT GGACG 4001 TGAGC CACGA AGACC CTGAG GTCAA GTTCA ACTGG TACGT GGACG GCGTG 4051 GAGGT GCATA ATGCC AAGAC AAAGC CGCGG GAGGA GCAGT ACAAC AGCAC 4101 GTACC GTGTG GTCAG CGTCC TCACC GTCCT GGCCC AGGAC TGGCT GAATG 4151 GCAAG GAGTA CAAGT GCAAG GTCTC CAACA AAGCC CTCCC AGCCC CCATC 4201 GAGAA AACCA TCTCC AAAGC CAAAG GGCAG CCCCG AGAAC CACAG GTGTA 4251 CACCC TGCCC CCATC CCGCG ATGAG CTGAC CAAGA ACCAG GTCAG CCTGA 4301 CCTGC CTGGT CAAAG GCTTC TATCC CAGCG ACATC GCCGT GGAGT GGGAG 4351 AGCAA TGGGC AGCCG GAGAA CAACT ACAAG ACCAC GCCTC CCGTG TTGGA 4401 CTCCG ACGGC TCCTT CTTCC TCTAC AGCAA GCTCA CCGTG GACAA GAGCA 4451 GGTGG CAGCA GGGGA ACGTC TTCTC ATGCT CCGTG ATGCA TGAGG CTCTG 4501 CACAA CGCCT ACACG CAGAA GAGCC TCTCC CTGTC TCCGG GTAAA TGA
Secuencia de proteína de VWF050 (mutante triple IHH) (SEQ ID NO: 150)
1 MIPARFAGVL LALALILPGT LCAEGTRGRS STARCSLFGS DFVNTFDGSM 51 YSFAGYCSYL LAGGCQKRSF SIIGDFQNGK RVSLSVYLGE FFDIHLFVNG 101 TVTQGDQRVS MPYASKGLYL ETEAGYYKLS GEAYGFVARI DGSGNFQVLL 151 SDRYFNKTCG LCGNFMFAE DDFMTQEGTL TSDPYDFANS WALSSGEQWC 201 ERASPPSSSC MSSGEMQKG LWEQCQLLKS TSVFARCHPL VDPEPFVALC 251 EKTLCECAGG LECACPALLE YARTCAQEGM VL YGWTDHSA CSPVCPAGME 301 YRQCVSPCAR TCQSLHINEM CQERCVDGCS CPEGQLLDEG LCVESTECPC 351 VHSGKRYPPG TSLSRDCNTC ICRNSQWICS NEECPGECLV TGQSHFKSFD 401 NRYFTFSGIC QYLLARDCQD HSFSIVIETV QCADDRDAVC TRSVTVRLPG 451 LHNSLVKLKH GAGVAMDGQD IQLPLLKGDL RIQHTVTASV RLSYGEDLQM 501 DWDGRGRLLV KLSPVYAGKT CGLCGNYNGN QGDDFLTPSG LAEPRVEDFG 551 NAWKLHGDCQ DLQKQHSDPC ALNPRMTRFS EEACAVLTSP TFEACHRAVS 601 PLPYLRNCRY DVCSCSDGRE CLCGALASYA AACAGRGVRV AWREPGRCEL 651 NCPKGQVYLQ CGTPCNLTCR SLSYPDEECN EACLEGCFCP PGLYMDERGD 701 CVPKAQCPCY YDGEIFQPED IFSDHHTMCY CEDGFMHCTM SGVPGSLLPD 751 AVLSSPLSHR SKRSLSCRPP MVKLVCPADN LRAEGLECTK TCQNYDLECM 801 SMGCVSGCLC PPGMVRHENR CVALERCPCF HQGKEYAPGE TVKIGCNTCV 851 CRDRKWNCTD HVCDATCSTI GMAHYLTFDG LKYLFPGECQ YVLVQDYCGS 901 NPGTFRILVG NKGCSHPSVK CKKRVTILVE GGEIELFDGE VNVKRPMKDE 951 THFEVVESGR YIILLLGKAL SVVWDRHLSI SVVLKQTYQE KVCGLCGNFD 1001 GIQNNDLTSS NLQVEEDPVD FGNSWKVSSQ CADTRKVPLD SSPATCHNM 1051 MKQTMVDSSC RILTSDVFQD CNKLVDPEPY LDVCIYDTCS CESIGDCAAF 1101 CDTIAAYAHV CAQHGKVVTW RTATLCPQSC EERNLRENGY EAEWRYNSCA 1151 PACQVTCQHP EPLACPVQCV EGCHAHCPPG KILDELLQTC VDPEDCPVCE 1201 VAGRRFASGK KVTLNPSDPE HCQICHCDVV NLTCEACQEP ISGGGGSGGG 1251 GSGGGGSGGG GSGGGGSGGG GSLVPRGSGG GGSGGGGSDK THTCPPCPAP 1301 ELLGGPSVFL FPPKPKDTLM ASRTPEVTCV VVDVSHEDPE VKFNWYVDGV 1351 EVHNAKTKPR EEQYNSTYRV VSVLTVLAQD WLNGKEYKCK VSNKALPAPI 1401 EKTISKAKGQ PREPQVYTLP PSRDELTKNQ VSLTCLVKGF YPSDIAVEWE 1451 SNGQPENNYK TTPPVLDSDG SFFLYSKLTV DKSRWQQGNV FSCSVMHEAL 1501 HNAYTQKSLS LSPGK*
Secuencia de nucleótidos de VWF057 (SEQ ID NO: 151)
1 ATGAT TCCTG CCAGA TTTGC CGGGG TGCTG CTTGC TCTGG CCCTC ATTTT 51 GCCAG GGACC CTTTG TGCAG AAGGA ACTCG CGGCA GGTCA TCCAC GGCCC 101 GATGC AGCCT TTTCG GAAGT GACTT CGTCA ACACC TTTGA TGGGA GCATG 151 TACAG CTTTG CGGGA TACTG CAGTT ACCTC CTGGC AGGGG GCTGC CAGAA 201 ACGCT CCTTC TCGAT TATTG GGGAC TTCCA GAATG GCAAG AGAGT GAGCC 251 TCTCC GTGTA TCTTG GGGAA<h t t>T TGACA TCCAT TTGTT TGTCA ATGGT 301 ACCGT GACAC AGGGG GACCA AAGAG TCTCC ATGCC CTATG CCTCC AAAGG 351 GCTGT ATCTA GAAAC TGAGG CTGGG TACTA CAAGC TGTCC GGTGA GGCCT 401 ATGGC TTTGT GGCCA GGATC GATGG CAGCG GCAAC TTTCA AGTCC TGCTG 451 TCAGA CAGAT ACTTC AACAA GACCT GCGGG CTGTG TGGCA ACTTT AACAT 501 CTTTG CTGAA GATGA CTTTA TGACC CAAGA AGGGA CCTTG ACCTC GGACC 551 CTTAT GACTT TGCCA ACTCA TGGGC TCTGA GCAGT GGAGA ACAGT GGTGT 601 GAACG GGCAT CTCCT CCCAG CAGCT CATGC AACAT CTCCT CTGGG GAAAT 651 GCAGA AGGGC CTGTG GGAGC AGTGC CAGCT TCTGA AGAGC ACCTC GGTGT 701 TTGCC CGCTG CCACC CTCTG GTGGA CCCCG AGCCT TTTGT GGCCC TGTGT 751 GAGAA GACTT TGTGT GAGTG TGCTG GGGGG CTGGA GTGCG CCTGC CCTGC 801 CCTCC TGGAG TACGC CCGGA CCTGT GCCCA GGAGG GAATG GTGCT GTACG 851 GCTGG ACCGA CCACA GCGCG TGCAG CCCAG TGTGC CCTGC TGGTA TGGAG 901 TATAG GCAGT GTGTG TCCCC TTGCG CCAGG ACCTG CCAGA GCCTG CACAT 951 CAATG AAATG TGTCA GGAGC GATGC GTGGA TGGCT GCAGC TGCCC TGAGG 1001 GACAG CTCCT GGATG AAGGC CTCTG CGTGG AGAGC ACCGA GTGTC CCTGC 1051 GTGCA TTCCG GAAAG CGCTA CCCTC CCGGC ACCTC CCTCT CTCGA GACTG 1101 CAACA CCTGC ATTTG CCGAA ACAGC CAGTG GATCT GCAGC AATGA AGAAT 1151 GTCCA GGGGA GTGCC TTGTC ACTGG TCAAT CCCAC TTCAA GAGCT TTGAC 1201 AACAG ATACT TCACC TTCAG TGGGA TCTGC CAGTA CCTGC TGGCC CGGGA 1251 TTGCC AGGAC CACTC CTTCT CCATT GTCAT TGAGA CTGTC CAGTG TGCTG 1301 ATGAC CGCGA CGCTG TGTGC ACCCG CTCCG TCACC GTCCG GCTGC CTGGC 1351 CTGCA CAACA GCCTT GTGAA ACTGA AGCAT GGGGC AGGAG TTGCC ATGGA 1401 TGGCC AGGAC ATCCA GCTCC CCCTC CTGAA AGGTG ACCTC CGCAT CCAGC 1451 ATACA GTGAC GGCCT CCGTG CGCCT CAGCT ACGGG GAGGA CCTGC AGATG 1501 GACTG GGATG GCCGC GGGAG GCTGC TGGTG AAGCT GTCCC CCGTC TATGC 1551 CGGGA AGACC TGCGG CCTGT GTGGG AATTA CAATG GCAAC CAGGG CGACG 1601 ACTTC CTTAC CCCCT CTGGG CTGGC GGAGC CCCGG GTGGA GGACT TCGGG 1651 AACGC CTGGA AGCTG CACGG GGACT GCCAG GACCT GCAGA AGCAG CACAG 1701 CGATC CCTGC GCCCT CAACC CGCGC ATGAC CAGGT TCTCC GAGGA GGCGT 1751 GCGCG GTCCT GACGT CCCCC ACATT CGAGG CCTGC CATCG TGCCG TCAGC 1801 CCGCT GCCCT ACCTG CGGAA CTGCC GCTAC GACGT GTGCT CCTGC TCGGA 1851 CGGCC GCGAG TGCCT GTGCG GCGCC CTGGC CAGCT ATGCC GCGGC CTGCG 1901 CGGGG AGAGG CGTGC GCGTC GCGTG GCGCG AGCCA GGCCG CTGTG AGCTG 1951 AACTG CCCGA AAGGC CAGGT GTACC TGCAG TGCGG GACCC CCTGC AACCT 2001 GACCT GCCGC TCTCT CTCTT ACCCG GATGA GGAAT GCAAT GAGGC CTGCC 2051 TGGAG GGCTG CTTCT GCCCC CCAGG GCTCT ACATG GATGA GAGGG GGGAC 2101 TGCGT GCCCA AGGCC CAGTG CCCCT GTTAC TATGA CGGTG AGATC TTCCA 2151 GCCAG AAGAC ATCTT CTCAG ACCAT CACAC CATGT GCTAC TGTGA GGATG 2201 GCTTC ATGCA CTGTA CCATG AGTGG AGTCC CCGGA AGCTT GCTGC CTGAC 2251 GCTGT CCTCA GCAGT CCCCT GTCTC ATCGC AGCAA AAGGA GCCTA TCCTG 2301 TCGGC CCCCC ATGGT CAAGC TGGTG TGTCC CGCTG ACAAC CTGCG GGCTG 2351 AAGGG CTCGA GTGTA CCAAA ACGTG CCAGA ACTAT GACCT GGAGT GCATG 2401 AGCAT GGGCT GTGTC TCTGG CTGCC TCTGC CCCCC GGGCA TGGTC CGGCA 2451 TGAGA ACAGA TGTGT GGCCC TGGAA AGGTG TCCCT GCTTC CATCA GGGCA 2501 AGGAG TATGC CCCTG GAGAA ACAGT GAAGA TTGGC TGCAA CACTT GTGTC 2551 TGTCG GGACC GGAAG TGGAA CTGCA CAGAC CATGT GTGTG ATGCC ACGTG 2601 CTCCA CGATC GGCAT GGCCC ACTAC CTCAC CTTCG ACGGG CTCAA ATACC 2651 TGTTC CCCGG GGAGT GCCAG TACGT TCTGG TGCAG GATTA CTGCG GCAGT 2701 AACCC TGGGA CCTTT CGGAT CCTAG TGGGG AATAA GGGAT GCAGC CACCC 2751 CTCAG TGAAA TGCAA GAAAC GGGTC ACCAT CCTGG TGGAG GGAGG AGAGA 2801 TTGAG CTGTT TGACG GGGAG GTGAA TGTGA AGAGG CCCAT GAAGG ATGAG 2851 ACTCA CTTTG AGGTG GTGGA GTCTG GCCGG TACAT CATTC TGCTG CTGGG 2901 CAAAG CCCTC TCCGT GGTCT GGGAC CGCCA CCTGA GCATC TCCGT GGTCC 2951 TGAAG CAGAC ATACC AGGAG AAAGT GTGTG GCCTG TGTGG GAATT TTGAT 3001 GGCAT CCAGA ACAAT GACCT CACCA GCAGC AACCT CCAAG TGGAG GAAGA 3051 CCCTG TGGAC TTTGG GAACT CCTGG AAAGT GAGCT CGCAG TGTGC TGACA 3101 CCAGA AAAGT GCCTC TGGAC TCATC CCCTG CCACC TGCCA TAACA ACATC 3151 ATGAA GCAGA CGATG GTGGA TTCCT CCTGT AGAAT CCTTA CCAGT GACGT 3201 CTTCC AGGAC TGCAA CAAGC TGGTG GACCC CGAGC CATAT CTGGA TGTCT 3251 GCATT TACGA CACCT GCTCC TGTGA GTCCA TTGGG GACTG CGCCG CATTC 3301 TGCGA CACCA TTGCT GCCTA TGCCC ACGTG TGTGC CCAGC ATGGC AAGGT 3351 GGTGA CCTGG AGGAC GGCCA CATTG TGCCC CCAGA GCTGC GAGGA GAGGA 3401 ATCTC CGGGA GAACG GGTAT GAGGC TGAGT GGCGC TATAA CAGCT GTGCA 3451 CCTGC CTGTC AAGTC ACGTG TCAGC ACCCT GAGCC ACTGG CCTGC CCTGT 3501 GCAGT GTGTG GAGGG CTGCC ATGCC CACTG CCCTC CAGGG AAAAT CCTGG 3551 ATGAG CTTTT GCAGA CCTGC GTTGA CCCTG AAGAC TGTCC AGTGT GTGAG 3601 GTGGC TGGCC GGCGT TTTGC CTCAG GAAAG AAAGT CACCT TGAAT CCCAG 3651 TGACC CTGAG CACTG CCAGA TTTGC CACTG TGATG TTGTC AACCT CACCT 3701 GTGAA GCCTG CCAGG AGCCG ATATC GGGCG CGCCA ACATC AGAGA GCGCC 3751 ACCCC TGAAA GTGGT CCCGG GAGCG AGCCA GCCAC ATCTG GGTCG GAAAC 3801 GCCAG GCACA AGTGA GTCTG CAACT CCCGA GTCCG GACCT GGCTC CGAGC 3851 CTGCC ACTAG CGGCT CCGAG ACTCC GGGAA CTTCC GAGAG CGCTA CACCA 3901 GAAAG CGGAC CCGGA ACCAG TACCG AACCT AGCGA GGGCT CTGCT CCGGG 3951 CAGCC CAGCC GGCTC TCCTA CATCC ACGGA GGAGG GCACT TCCGA ATCCG 4001 CCACC CCGGA GTCAG GGCCA GGATC TGAAC CCGCT ACCTC AGGCA GTGAG 4051 ACGCC AGGAA CGAGC GAGTC CGCTA CACCG GAGAG TGGGC CAGGG AGCCC 4101 TGCTG GATCT CCTAC GTCCA CTGAG GAAGG GTCAC CAGCG GGCTC GCCCA 4151 CCAGC ACTGA AGAAG GTGCC TCGAG CGGCG GTGGA GGTTC CGGTG GCGGG 4201 GGATC CGGTG GCGGG GGATC CGGTG GCGGG GGATC CGGTG GCGGG GGATC 4251 CCTGG TCCCC CGGGG CAGCG GAGGC GACAA AACTC ACACA TGCCC ACCGT 4301 GCCCA GCTCC AGAAC TCCTG GGCGG ACCGT CAGTC TTCCT CTTCC CCCCA 4351 AAACC CAAGG ACACC CTCAT GATCT CCCGG ACCCC TGAGG TCACA TGCGT 4401 GGTGG TGGAC GTGAG CCACG AAGAC CCTGA GGTCA AGTTC AACTG GTACG 4451 TGGAC GGCGT GGAGG TGCAT AATGC CAAGA CAAAG CCGCG GGAGG AGCAG 4501 TACAA CAGCA CGTAC CGTGT GGTCA GCGTC CTCAC CGTCC TGCAC CAGGA 4551 CTGGC TGAAT GGCAA GGAGT ACAAG TGCAA GGTCT CCAAC AAAGC CCTCC 4601 CAGCC CCCAT CGAGA AAACC ATCTC CAAAG CCAAA GGGCA GCCCC GAGAA 4651 CCACA GGTGT ACACC CTGCC CCCAT CCCGG GATGA GCTGA CCAAG AACCA 4701 GGTCA GCCTG ACCTG CCTGG TCAAA GGCTT CTATC CCAGC GACAT CGCCG 4751 TGGAG TGGGA GAGCA ATGGG CAGCC GGAGA ACAAC TACAA GACCA CGCCT 4801 CCCGT GTTGG ACTCC GACGG CTCCT TCTTC CTCTA CAGCA AGCTC ACCGT 4851 GGACA AGAGC AGGTG GCAGC AGGGG AACGT CTTCT CATGC TCCGT GATGC 4901 ATGAG GCTCT GCACA ACCAC TACAC GCAGA AGAGC CTCTC CCTGT CTCCG 4951 GGTAAATGA
Secuencia de proteína de VWF057 (SEQ ID NO: 152)
1 MIPARFAGVL LALALILPGT PCAEGTRGRS STARCSLFGS DFVNTFDGSM
51 YSFAGYCSYL LAGGCQKRSF SIIGDFQNGK RVSLSVYLGE FFDIIILFVNG
101 TVTQGDQRVS MPYASKGLYL ETEAGYYKLS GEAYGFVARIDGSGNFQVLL 151 SDRYFNKTCG LCGNFNIFAE DDFMTQEGTL TSDPYDFANS WALSSGEQWC 201 ERASPPSSSC NISSGEMQKG LWEQCQLLKS TSVFARCHPL VDPEPFVALC
251 EKTLCECAGG LECACPALLE YARTCAQEGM VLYGWTDHSA CSPVCPAGME 301 YRQCVSPCAR TCQSLHINEM CQERCVDGCS CPEGQLLDEG LCVESTECPC 351 VHSGKRYPPG TSLSRDCNTC ICRNSQWICS NEECPGECLV TGQSHFKSFD
401 NRYFTFSGIC QYLLARDCQD HSFSIVIETV QCADDRDAVC TRSVTVRLPG 451 LHNSLVKLKH GAGVAMDGQD IQLPLLKGDL RIQHTVTASV RLSYGEDLQM 501 DWDGRGRLL V KLSPVYAGKT CGLCGNYNGN QGDDFLTPSG LAEPRVEDFG 551 NAWKLHGDCQ DLQKQHSDPC ALNPRMTRFS EEACAVLTSP TFEACHRAVS 601 PLPYLRNCRY DVCSCSDGRE CLCGALASYA AACAGRGVRV AWREPGRCEL 651 NCPKGQVYLQ CGTPCNLTCR SLSYPDEECN EACLEGCFCP PGLYMDERGD 701 CVPKAQCPCY YDGEIFQPED IFSDHHTMCY CEDGFMHCTM SGVPGSLLPD 751 AVLSSPLSHR SKRSLSCRPP MVKLVCPADN LRAEGLECTK TCQNYDLECM 801 SMGCVSGCLC PPGMVRHENR CVALERCPCF HQGKEYAPGE TVKIGCNTCV 851 CRDRKWNCTD HVCDATCSTI GMAHYLTFDG LKYLFPGECQ YVLVQDYCGS 901 NPGTFRILVG NKGCSHPSVK CKKRVTILVE GGEIELFDGE VNVKRPMKDE 951 THFEVVESGR YIILLLGKAL SVVWDRHLSI SVVLKQTYQE KVCGLCGNFD 1001 GIQNNDLTSS NLQVEEDPVD FGNSWKVSSQ CADTRKVPLD SSPATCHNM 1051 MKQTMVDSSC RILTSDVFQD CNKLVDPEPY LDVCIYDTCS CESIGDCAAF 1101 CDTIAAYAHV CAQHGKVVTW RTATLCPQSC EERNLRENGY EAEWRYNSCA 1151 PACQVTCQHP EPLACPVQCV EGCHAHCPPG KILDELLQTC VDPEDCPVCE 1201 VAGRRFASGK KVTLNPSDPE HCQICHCDVV NLTCEACQEP ISGAPTSESA 1251 TPESGPGSEP ATSGSETPGT SESATPESGP GSEPATSGSE TPGTSESATP 1301 ESGPGTSTEP SEGSAPGSPA GSPTSTEEGT SESATPESGP GSEPATSGSE 1351 TPGTSESATP ESGPGSPAGS PTSTEEGSPA GSPTSTEEGA SSGGGGSGGG 1401 GSGGGGSGGG GSGGGGSLVP RGSGGDKTHT CPPCPAPELL GGPSVFLFPP 1451 KPKDTLMISR TPEVTC VVVD VSHEDPEVKF NWYVDGVEVH NAKTKPREEQ 1501 YNSTYRVVSV LTVLHQDWLN GKEYKCKVSN KALPAPIEKT ISKAKGQPRE 1551 PQVYTLPPSR DELTKNQVSL TCL VKGFYPS DIAVEWESNG QPENNYKTTP 1601 PVLDSDGSFF LYSKLTVDKS RWQQGNVFSC SVMHEALHNH YTQKSLSLSP 1651 GK*
Secuencia de nucleótidos de VWF058 (VWF034 con mutación IHH) (SEQ ID NO: 153)
1 ATGAT TCCTG CCAGA TTTGC CGGGG TGCTG CTTGC TCTGG CCCTC ATTTT 51 GCCAG GGACC CTTTG TGCAG AAGGA ACTCG CGGCA GGTCA TCCAC GGCCC 101 GATGC AGCCT TTTCG GAAGT GACTT CGTCA ACACC TTTGA TGGGA GCATG 151 TACAG CTTTG CGGGA TACTG CAGTT ACCTC CTGGC AGGGG GCTGC CAGAA 201 ACGCT CCTTC TCGAT TATTG GGGAC TTCCA GAATG GCAAG AGAGT GAGCC 251 TCTCC GTGTA TCTTG GGGAA<t t t t t>TGACA TCCAT TTGTT TGTCA ATGGT 301 ACCGT GACAC AGGGG GACCA AAGAG TCTCC ATGCC CTATG CCTCC AAAGG 351 GCTGT ATCTA GAAAC TGAGG CTGGG TACTA CAAGC TGTCC GGTGA GGCCT 401 ATGGC TTTGT GGCCA GGATC GATGG CAGCG GCAAC TTTCA AGTCC TGCTG 451 TCAGA CAGAT ACTTC AACAA GACCT GCGGG CTGTG TGGCA ACTTT AACAT 501 CTTTG CTGAA GATGA CTTTA TGACC CAAGA AGGGA CCTTG ACCTC GGACC 551 CTTAT GACTT TGCCA ACTCA TGGGC TCTGA GCAGT GGAGA ACAGT GGTGT 601 GAACG GGCAT CTCCT CCCAG CAGCT CATGC AACAT CTCCT CTGGG GAAAT 651 GCAGA AGGGC CTGTG GGAGC AGTGC CAGC T TCTGA AGAGC ACCTC GGTGT 701 TTGCC CGCTG CCACC CTCTG GTGGA CCCCG AGCCT TTTGT GGCCC TGTGT 751 GAGAA GACTT TGTGT GAGTG TGCTG GGGGG CTGGA GTGCG CCTGC CCTGC 801 CCTCC TGGAG TACGC CCGGA CCTGT GCCCA GGAGG GAATG GTGCT GTACG 851 GCTGG ACCGA CCACA GCGCG TGCAG CCCAG TGTGC CCTGC TGGTA TGGAG 901 TATAG GCAGT GTGTG TCCCC TTGCG CCAGG ACCTG CCAGA GCCTG CACAT 951 CAATG AAATG TGTCA GGAGC GATGC GTGGA TGGCT GCAGC TGCCC TGAGG 1001 GACAG CTCCT GGATG AAGGC CTCTG CGTGG AGAGC ACCGA GTGTC CCTGC 1051 GTGCA TTCCG GAAAG CGCTA CCCTC CCGGC ACCTC CCTCT CTCGA GACTG 1101 CAACA CCTGC ATTTG CCGAA ACAGC CAGTG GATCT GCAGC AATGA AGAAT 1151 GTCCA GGGGA GTGCC TTGTC ACTGG TCAAT CCCAC TTCAA GAGCT TTGAC 1201 AACAG ATACT TCACC TTCAG TGGGA TCTGC CAGTA CCTGC TGGCC CGGGA 1251 TTGCC AGGAC CACTC CTTCT CCATT GTCAT TGAGA CTGTC CAGTG TGCTG 1301 ATGAC CGCGA CGCTG TGTGC ACCCG CTCCG TCACC GTCCG GCTGC CTGGC 1351 CTGCA CAACA GCCTT GTGAA ACTGA AGCAT GGGGC AGGAG TTGCC ATGGA 1401 TGGCC AGGAC ATCCA GCTCC CCCTC CTGAA AGGTG ACCTC CGCAT CCAGC 1451 ATACA GTGAC GGCCT CCGTG CGCCT CAGCT ACGGG GAGGA CCTGC AGATG 1501 GACTG GGATG GCCGC GGGAG GCTGC TGGTG AAGCT GTCCC CCGTC TATGC 1551 CGGGA AGACC TGCGG CCTGT GTGGG AATTA CAATG GCAAC CAGGG CGACG 1601 ACTTC CTTAC CCCCT CTGGG CTGGC GGAGC CCCGG GTGGA GGACT TCGGG 1651 AACGC CTGGA AGCTG CACGG GGACT GCCAG GACCT GCAGA AGCAG CACAG 1701 CGATC CCTGC GCCCT CAACC CGCGC ATGAC CAGGT TCTCC GAGGA GGCGT 1751 GCGCG GTCCT GACGT CCCCC ACATT CGAGG CCTGC CATCG TGCCG TCAGC 1801 CCGCT GCCCT ACCTG CGGAA CTGCC GCTAC GACGT GTGCT CCTGC TCGGA 1851 CGGCC GCGAG TGCCT GTGCG GCGCC CTGGC CAGCT ATGCC GCGGC CTGCG 1901 CGGGG AGAGG CGTGC GCGTC GCGTG GCGCG AGCCA GGCCG CTGTG AGCTG 1951 AACTG CCCGA AAGGC CAGGT GTACC TGCAG TGCGG GACCC CCTGC AACCT 2001 GACCT GCCGC TCTCT CTCTT ACCCG GATGA GGAAT GCAAT GAGGC CTGCC 2051 TGGAG GGCTG CTTCT GCCCC CCAGG GCTCT ACATG GATGA GAGGG GGGAC 2101 TGCGT GCCCA AGGCC CAGTG CCCCT GTTAC TATGA CGGTG AGATC TTCCA 2151 GCCAG AAGAC ATCTT CTCAG ACCAT CACAC CATGT GCTAC TGTGA GGATG 2201 GCTTC ATGCA CTGTA CCATG AGTGG AGTCC CCGGA AGCTT GCTGC CTGAC 2251 GCTGT CCTCA GCAGT CCCCT GTCTC ATCGC AGCAA AAGGA GCCTA TCCTG 2301 TCGGC CCCCC ATGGT CAAGC TGGTG TGTCC CGCTG ACAAC CTGCG GGCTG 2351 AAGGG CTCGA GTGTA CCAAA ACGTG CCAGA ACTAT GACCT GGAGT GCATG 2401 AGCAT GGGCT GTGTC TCTGG CTGCC TCTGC CCCCC GGGCA TGGTC CGGCA 2451 TGAGA ACAGA TGTGT GGCCC TGGAA AGGTG TCCCT GCTTC CATCA GGGCA 2501 AGGAG TATGC CCCTG GAGAA ACAGT GAAGA TTGGC TGCAA CACTT GTGTC 2551 TGTCG GGACC GGAAG TGGAA CTGCA CAGAC CATGT GTGTG ATGCC ACGTG 2601 CTCCA CGATC GGCAT GGCCC ACTAC CTCAC CTTCG ACGGG CTCAA ATACC 2651 TGTTC CCCGG GGAGT GCCAG TACGT TCTGG TGCAG GATTA CTGCG GCAGT 2701 AACCC TGGGA CCTTT CGGAT CCTAG TGGGG AATAA GGGAT GCAGC CACCC 2751 CTCAG TGAAA TGCAA GAAAC GGGTC ACCAT CCTGG TGGAG GGAGG AGAGA 2801 TTGAG CTGTT TGACG GGGAG GTGAA TGTGA AGAGG CCCAT GAAGG ATGAG 2851 ACTCA CTTTG AGGTG GTGGA GTCTG GCCGG TACAT CATTC TGCTG CTGGG 2901 CAAAG CCCTC TCCGT GGTCT GGGAC CGCCA CCTGA GCATC TCCGT GGTCC 2951 TGAAG CAGAC ATACC AGGAG AAAGT GTGTG GCCTG TGTGG GAATT TTGAT 3001 GGCAT CCAGA ACAAT GACCT CACCA GCAGC AACCT CCAAG TGGAG GAAGA 3051 CCCTG TGGAC TTTGG GAACT CCTGG AAAGT GAGCT CGCAG TGTGC TGACA 3101 CCAGA AAAGT GCCTC TGGAC TCATC CCCTG CCACC TGCCA TAACA ACATC 3151 ATGAA GCAGA CGATG GTGGA TTCCT CCTGT AGAAT CCTTA CCAGT GACGT 3201 CTTCC AGGAC TGCAA CAAGC TGGTG GACCC CGAGC CATAT CTGGA TGTCT 3251 GCATT TACGA CACCT GCTCC TGTGA GTCCA TTGGG GACTG CGCCG CATTC 3301 TGCGA CACCA TTGCT GCCTA TGCCC ACGTG TGTGC CCAGC ATGGC AAGGT 3351 GGTGA CCTGG AGGAC GGCCA CATTG TGCCC CCAGA GCTGC GAGGA GAGGA 3401 ATCTC CGGGA GAACG GGTAT GAGGC TGAGT GGCGC TATAA CAGCT GTGCA 3451 CCTGC CTGTC AAGTC ACGTG TCAGC ACCCT GAGCC ACTGG CCTGC CCTGT 3501 GCAGT GTGTG GAGGG CTGCC ATGCC CACTG CCCTC CAGGG AAAAT CCTGG 3551 ATGAG CTTTT GCAGA CCTGC GTTGA CCCTG AAGAC TGTCC AGTGT GTGAG 3601 GTGGC TGGCC GGCGT TTTGC CTCAG GAAAG AAAGT CACCT TGAAT CCCAG 3651 TGACC CTGAG CACTG CCAGA TTTGC CACTG TGATG TTGTC AACCT CACCT 3701 GTGAA GCCTG CCAGG AGCCG ATATC GGGTA CCTCA GAGTC TGCTA CCCCC 3751 GAGTC AGGGC CAGGA TCAGA GCCAG CCACC TCCGG GTCTG AGACA CCCGG 3801 GACTT CCGAG AGTGC CACCC CTGAG TCCGG ACCCG GGTCC GAGCC CGCCA 3851 CTTCC GGCTC CGAAA CTCCC GGCAC AAGCG AGAGC GCTAC CCCAG AGTCA 3901 GGACC AGGAA CATCT ACAGA GCCCT CTGAA GGCTC CGCTC CAGGG TCCCC 3951 AGCCG GCAGT CCCAC TAGCA CCGAG GAGGG AACCT CTGAA AGCGC CACAC 4001 CCGAA TCAGG GCCAG GGTCT GAGCC TGCTA CCAGC GGCAG CGAGA CACCA 4051 GGCAC CTCTG AGTCC GCCAC ACCAG AGTCC GGACC CGGAT CTCCC GCTGG 4101 GAGCC CCACC TCCAC TGAGG AGGGA TCTCC TGCTG GCTCT CCAAC ATCTA 4151 CTGAG GAAGG TACCT CAACC GAGCC ATCCG AGGGA TCAGC TCCCG GCACC 4201 TCAGA GTCGG CAACC CCGGA GTCTG GACCC GGAAC TTCCG AAAGT GCCAC 4251 ACCAG AGTCC GGTCC CGGGA CTTCA GAATC AGCAA CACCC GAGTC CGGCC 4301 CTGGG TCTGA ACCCG CCACA AGTGG TAGTG AGACA CCAGG ATCAG AACCT 4351 GCTAC CTCAG GGTCA GAGAC ACCCG GATCT CCGGC AGGCT CACCA ACCTC 4401 CACTO AGGAG GGCAC CAGCA CAGAA CCAAG CGAGG GCTCC GCACC CGGAA 4451 CAAGC ACTGA ACCCA GTGAG GGTTC AGCAC CCGGC TCTGA GCCGG CCACA 4501 AGTGG CAGTG AGACA CCCGG CACTT CAGAG AGTGC CACCC CCGAG AGTGG 4551 CCCAG GCACT AGTAC CGAGC CCTCT GAAGG CAGTG CGCCA GATTC TGGCG 4601 GTGGA GGTTC CGGTG GCGGG GGATC CGGTG GCGGG GGATC CGGTG GCGGG 4651 GGATC CGGTG GCGGG GGATC CCTGG TCCCC CGGGG CAGCG GAGGC GACAA 4701 AACTC ACACA TGCCC ACCGT GCCCA GCTCC AGAAC TCCTG GGCGG ACCGT 4751 CAGTC TTCCT CTTCC CCCCA AAACC CAAGG ACACC CTCAT GGCCT CCCGG 4801 ACCCC TGAGG TCACA TGCGT GGTGG TGGAC GTGAG CCACG AAGAC CCTGA 4851 GGTCA AGTTC AACTG GTACG TGGAC GGCGT GGAGG TGCAT AATGC CAAGA 4901 CAAAG CCGCG GGAGG AGCAG TACAA CAGCA CGTAC CGTGT GGTCA GCGTC 4951 CTCAC CGTCC TGGCC CAGGA CTGGC TGAAT GGCAA GGAGT ACAAG TGCAA 5001 GGTCT CCAAC AAAGC CCTCC CAGCC CCCAT CGAGA AAACC ATCTC CAAAG 5051 CCAAA GGGCA GCCCC GAGAA CCACA GGTGT ACACC CTGCC CCCAT CCCGC 5101 GATGA GCTGA CCAAG AACCA GGTCA GCCTG ACCTG CCTGG TCAAA GGCTT 5151 CTATC CCAGC GACAT CGCCG TGGAG TGGGA GAGCA ATGGG CAGCC GGAGA 5201 ACAAC TACAA GACCA CGCCT CCCGT GTTGG ACTCC GACGG CTCCT TCTTC 5251 C'TCTA CAGCA AGCTC ACCGT GGACA AGAGC AGGTG GCAGC AGGGG AACGT 5301 C'TTCT CATGC TCCGT GATGC ATGAG GCTCT GCACA ACGCC TACAC GCAGA 5351 AGAGC CTCTC CCTGT CTCCG GGTAA ATOA
Secuencia de proteína de VWF058 (VWF034 con mutación IHH) (SEQ ID NO: 154)
1 MIPARFAGVL LALALILPGT LCAEGTRGRS STARCSLFGS DFVNTFDGSM 51 YSFAGYCSYL LAGGCQKRSF SIIGDFQNGK RVSLSVYLGE FFDIHLFVNG 101 TVTQGDQRVS MPYASKGLYL ETEAGYYKLS GEAYGFVARI DGSGNFQVLL 151 SDRYFNKTCG LCGNFNIFAE DDFMTQEGTL TSDPYDFANS WALSSGEQWC 201 ERASPPSSSC NISSGEMQKG LWEQCQLLKS TSVFARCFLPL VDPEPFVALC 251 EKTLCECAGG LECACPALLE YARTCAQEGM VL YGWTDHSA CSPVCPAGME 301 YRQCVSPCAR TCQSLHINEM CQERCVDGCS CPEGQLLDEG LCVESTECPC 351 VHSGKRYPPG TSLSRDCNTC ICRNSQWICS NEECPGECLV TGQSHFKSFD 401 NRYFTFSGIC QYLLARDCQD HSFSIVIETV QCADDRDAVC TRSVTVRLPG 451 LHNSLVKLKH GAGVAMDGQD IQLPLLKGDL RIQHTVTASV RLSYGEDLQM 501 DWDGRGRLLV KLSPVYAGKT CGLCGNYNGN QGDDFLTPSG LAEPRVEDFG 551 NAWKLHGDCQ DLQKQHSDPC ALNPRMTRFS EEACAVLTSP TFEACHRAVS 601 PLPYLRNCRY DVCSCSDGRE CLCGALASYA AACAGRGVRV AWREPGRCEL 651 NCPKGQVYLQ CGTPCNLTCR SLSYPDEECN EACLEGCFCP PGLYMDERGD 701 CVPKAQCPCY YDGEIFQPED IFSDHHTMC Y CEDGFMHCTM SGVPGSLLPD 751 AVLSSPLSHR SKRSLSCRPP MVKLVCPADN LRAEGLECTK TCQNYDLECM 801 SMGCVSGCLC PPGMVRHENR CVALERCPCF HQGKEYAPGE TVKIGCNTCV 851 CRDRKWNCTD HVCDATCSTI GMAHYLTFDG LKYLFPGECQ YVLVQDYCGS 901 NPGTFRILVG NKGCSHPSVK CKKRVTILVE GGEIELFDGE VNVKRPMKDE 951 THFEVVESGR YIILLLGKAL SVVWDRHLSI SVVLKQTYQE KVCGLCGNFD 1001 GIQNNDLTSS NLQVEEDPVD FGNSWKVSSQ CADTRKVPLD SSPATCHNM 1051 MKQTMVDSSC RILTSDVFQD CNKLVDPEPY LDVCIYDTCS CESIGDCAAF 1101 CDTIAAYAHV CAQHGKVVTW RTATLCPQSC EERNLRENGY EAEWRYNSCA 1151 PACQVTCQHP EPLACPVQCV EGCHAHCPPG KILDELLQTC VDPEDCPVCE 1201 VAGRRFASGK KVTLNPSDPE HCQICHCDVV NLTCEACQEP ISGTSESATP 1251 ESGPGSEPAT SGSETPGTSE SATPESGPGS EPATSGSETP GTSESATPES 1301 GPGTSTEPSE GSAPGSPAGS PTSTEEGTSE SATPESGPGS EPATSGSETP 1351 GTSESATPES GPGSPAGSPT STEEGSPAGS PTSTEEGTST EPSEGSAPGT 1401 SESATPESGP GTSESATPES GPGTSESATP ESGPGSEPAT SGSETPGSEP 1451 ATSGSETPGS PAGSPTSTEE GTSTEPSEGS APGTSTEPSE GSAPGSEPAT 1501 SGSETPGTSE SATPESGPGT STEPSEGSAP DSGGGGSGGG GSGGGGSGGG 1551 GSGGGGSLVP RGSGGDKTHT CPPCPAPELL GGPSVFLFPP KPKDTLMASR 1601 TPEVTCVVVD VSHEDPEVKF NWYVDGVEVH NAKTKPREEQ YNSTYRVVSV 1651 LTVLAQDWLN GKEYKCKVSN KALPAPIEKT ISKAKGQPRE PQVYTLPPSR 1701 DELTKNQVSL TCLVKGFYPS DIAVEWESNG QPENNYKTTP PVLDSDGSFF 1751 LYSKLTVDKS RWQQGNVFSC SVMHEALHNA YTQKSLSLSP GK*
Secuencia de nucleótidos de FVIII 169 (SEQ ID NO: 155)
1 ATGCA AATAG AGCTC TCCAC CTGCT TCTTT CTGTG CCTTT TGCGA TTCTG 51 C U T A GTGCC ACCAG AAGAT ACTAC CTGGG TGCAG TGGAA CTGTC ATGGG 101 ACTAT ATGCA AAGTG ATCTC GGTGA GCTGC CTGTG GACGC AAGAT TTCCT 151 CCTAG AGTGC CAAAA TCTTT TCCAT TCAAC ACCTC AGTCG TGTAC AAAAA 201 GACTC TGTTT GTAGA ATTCA CGGAT CACCT TTTCA ACATC GCTAA GCCAA 251 GGCCA CCCTG GATGG GTCTG CTAGG TCCTA CCATC CAGGC TGAGG TTTAT 301 GATAC AGTGG TCATT ACACT TAAGA ACATO GCTTC CCATC CTGTC AGTCT 351 TCATG CTGTT GGTGT ATCCT ACTGG AAAGC TTCTG AGGGA GCTGA ATATG 401 ATGAT CAGAC CAGTC AAAGG GAGAA AGAAG ATGAT AAAGT CTTCC CTGGT 451 GGAAG CCATA CATAT GTCTG GCAGG TCCTG AAAGA GAATG GTCCA ATGGC 501 CTCTG ACCCA CTGTG CCTTA CCTAC TCATA TCTTT CTCAT GTGGA CCTGG 551 TAAAA GACTT GAATT CAGGC CTCAT TGGAG CCCTA CTAGT ATGTA GAGAA 601 GGGAG TCTGG CCAAG GAAAA GACAC AGACC TTGCA CAAAT TTATA CTACT 651 TTTTG CTGTA TTTGA TGAAG GGAAA AGTTG GCACT CAGAA ACAAA GAACT 701 CCTTG ATGCA GGATA GGGAT GCTGC ATCTG CTCGG GCCTG GCCTA AAATG 751 CACAC AGTCA ATGGT TATGT AAACA GGTCT CTGCC AGGTC TGATT GGATG 801 CCACA GGAAA TCAGT CTATT GGCAT GTGAT TGGAA TGGGC ACCAC TCCTG 851 AAGTG CACTC AATAT TCCTC GAAGG TCACA CATTT CTTGT GAGGA ACCAT 901 CGCCA GGCTA GCTTG GAAAT CTCGC CAATA ACTTT CCTTA CTGCT CAAAC 951 ACTCT TGATG GACCT TGGAC AGTTT CTACT GTTTT GTCAT ATCTC TTCCC 1001 ACCAA CATGA TGGCA TGGAA GCTTA TGTCA AAGTA GACAG CTGTC CAGAG 1051 GAACC CCAAC TACGA ATGAA AAATA ATGAA GAAGC GGAAG ACTAT GATGA 1101 TGATC TTACT GATTC TGAAA TGGAT GTGGT CAGGT TTGAT GATGA CAACT 1151 CTCCT TCCTT TATCC AAATT CGCTC AGTTG CCAAG AAGCA TCCTA AAACT 1201 TGGGT ACATT ACATT GCTGC TGAAG AGGAG GACTG GGACT ATGCT CCCTT 1251 AGTCC TCGCC CCCGA TGACA GAAGT TATAA AAGTC AATAT TTGAA CAATG 1301 GCCCT CAGCG GATTG GTAGG AAGTA CAAAA AAGTC CGATT TATGG CATAC 1351 ACAGA TGAAA CCTTT AAGAC TCGTG AAGCT ATTCA GCATG AATCA GGAAT 1401 CTTGG GACCT TTACT TTATG GGGAA GTTGG AGACA CACTG TTGAT TATAT 1451 TTAAG AATCA AGCAA GCAGA CCATA TAACA TCTAC CCTCA CGGAA TCACT 1501 GATGT CCGTC CTTTG TATTC AAGGA GATTA CCAAA AGGTG TAAAA CATTT 1551 GAAGG ATTTT CCAAT TCTGC CAGGA GAAAT ATTCA AATAT AAATG GACAG 1601 TGACT GTAGA AGATG GGCCA ACTAA ATCAG ATCCT CGGTG CCTGA CCCGC 1651 TATTA CTCTA GTTTC GTTAA TATGG AGAGA GATCT AGCTT CAGGA CTCAT 1701 TGGCC CTCTC CTCAT CTGCT ACAAA GAATC TGTAG ATCAA AGAGG AAACC 1751 AGATA ATGTC AGACA AGAGG AATGT CATCC TGTTT TCTGT ATTTG ATGAG 1801 AACCG AAGCT GGTAC CTCAC AGAGA ATATA CAACG CTTTC TCCCC AATCC 1851 AGCTG GAGTG CAGCT TGAGG ATCCA GAGTT CCAAG CCTCC AACAT CATGC 1901 ACAGC ATCAA TGGCT ATGTT TTTGA TAGTT TGCAG TTGTC AGTTT GTTTG 1951 CATGA GGTGG CATAC TGGTA CATTC TAAGC ATTGG AGCAC AGACT GACTT 2001 CCTTT CTGTC TTCTT CTCTG GATAT ACCTT CAAAC ACAAA ATGGT CTATG 2051 AAGAC ACACT CACCC TATTC CCATT CTCAG GAGAA ACTGT CTTCA TGTCG 2101 ATGGA AAACC CAGGT CTATG GATTC TGGGG TGCCA CAACT CAGAC TTTCG 2151 GAACA GAGGC ATGAC CGCCT TACTO AAGGT TTCTA GTTGT GACAA GAACA 2201 CTGGT GATTA TTACG AGGAC A G U A TGAAG ATATT TCAGC ATACT TGCTG 2251 AGTAA AAACA ATGCC ATTGA ACCAA GAAGC TTCTC TCAAA ACGGC GCGCC 2301 AGGTA CCTCA GAGTC TGCTA CCCCC GAGTC AGGGC CAGGA TCAGA GCCAG 2351 CCACC TCCGG GTCTG AGACA CCCGG GACTT CCGAG AGTGC CACCC CTGAG 2401 TCCGG ACCCG GGTCC GAGCC CGCCA CTTCC GGCTC CGAAA CTCCC GGCAC 2451 AAGCG AGAGC GCTAC CCCAG AGTCA GGACC AGGAA CATCT ACAGA GCCCT 2501 CTGAA GGCTC CGCTC CAGGG TCCCC AGCCG GCAGT CCCAC TAGCA CCGAG 2551 GAGGG AACCT CTGAA AGCGC CACAC CCGAA TCAGG GCCAG GGTCT GAGCC 2601 TGCTA CCAGC GGCAG CGAGA CACCA GGCAC CTCTG AGTCC GCCAC ACCAG 2651 AGTCC GGACC CGGAT CTCCC GCTGG GAGCC CCACC TCCAC TGAGG AGGGA 2701 TCTCC TGCTG GCTCT CCAAC ATCTA CTGAG GAAGG TACCT CAACC GAGCC 2751 ATCCG AGGGA TCAGC TCCCG GCACC TCAGA GTCGG CAACC CCGGA GTCTG 2801 GACCC GGAAC TTCCG AAAGT GCCAC ACCAG AGTCC GGTCC CGGGA CTTCA 2851 GAATC AGCAA CACCC GAGTC CGGCC CTGGG TCTGA ACCCG CCACA AGTGG 2901 TAGTG AGACA CCAGG ATCAG AACCT GCTAC CTCAG GGTCA GAGAC ACCCG 2951 GATCT CCGGC AGGCT CACCA ACCTC CACTG AGGAG GGCAC CAGCA CAGAA 3001 CCAAG CGAGG GCTCC GCACC CGGAA CAAGC ACTGA ACCCA GTGAG GGTTC 3051 AGCAC CCGGC TCTGA GCCGG CCACA AGTGG CAGTG AGACA CCCGG CACTT 3101 CAGAG AGTGC CACCC CCGAG AGTGG CCCAG GCACT AGTAC CGAGC CCTCT 3151 GAAGG CAGTG CGCCA GCCTC GAGCC CACCA GTCTT GAAAC GCCAT CAAGC 3201 TGAAA TAACT CGTAC TACTC TTCAG TCAGA TCAAG AGGAA ATCGA TTATG 3251 ATGAT ACCAT ATCAG TTGAA ATGAA GAAGG AAGAT TTTGA CATTT ATGAT 3301 GAGGA TGAAA ATCAG AGCCC CCGCA GCTTT CAAAA GAAAA CACGA CACTA 3351 TTTTA TTGCT GCAGT GGAGA GGCTC TGGGA TTATG GGATG AGTAG CTCCC 3401 CACAT GTTCT AAGAA ACAGG GCTCA GAGTG GCAGT GTCCC TCAGT TCAAG 3451 AAAGT TGTTT TCCAG GAATT TACTG ATGGC TCCTT TACTC AGCCC TTATA 3501 CCGTG GAGAA CTAAA TGAAC ATTTG GGACT CCTGG GGCCA TATAT AAGAG 3551 CAGAA GTTGA AGATA ATATC ATGGT AACTT TCAGA AATCA GGCCT CTCGT 3601 CCCTA TTCCT TCTAT TCTAG CCTTA TTTCT TATGA GGAAG ATCAG AGGCA 3651 AGGAG CAGAA CCTAG AAAAA ACTTT GTCAA GCCTA ATGAA ACCAA AACTT 3701 ACTTT TGGAA AGTGC AACAT CATAT GGCAC CCACT AAAGA TGAGT TTGAC 3751 TGCAA AGCCT GGGCT TATTT CTCTG ATGTT GACCT GGAAA AAGAT GTGCA 3801 CTCAG GCCTG ATTGG ACCCC TTCTG GTCTG CCACA CTAAC ACACT GAACC 3851 CTGCT CATGG GAGAC AAGTG ACAGT ACAGG AATTT GCTCT GTTTT TCACC 3901 ATCTT TGATG AGACC AAAAG CTGGT ACTTC ACTGA AAATA TGGAA AGAAA 3951 CTGCA GGGCT CCCTG CAATA TCCAG ATGGA AGATC CCACT TTTAA AGAGA 4001 ATTAT CGCTT CCATG CAATC AATGG CTACA TAATG GATAC ACTAC CTGGC 4051 TTAGT AATGG CTCAG GATCA AAGGA TTCGA TGGTA TCTGC TCAGC ATGGG 4101 CAGCA ATGAA AACAT CCATT CTATT CATTT CAGTG GACAT GTGTT CACTG 4151 TACGA AAAAA AGAGG AGTAT AAAAT GGCAC TGTAC AATCT CTATC CAGGT 4201 GTTTT TGAGA CAGTG GAAAT GTTAC CATCC AAAGC TGGAA TTTGG CGGGT 4251 GGAAT GCCTT ATTGG CGAGC ATCTA CATGC TGGGA TGAGC ACACT TTTTC 4301 TGGTG TACAG CAATA AGTGT CAGAC TCCCC TGGGA ATGGC TTCTG GACAC 4351 ATTAG AGATT TTCAG ATTAC AGCTT CAGGA CAATA TGGAC AGTGG GCCCC 4401 AAAGC TGGCC AGACT TCATT ATTCC GGATC AATCA ATGCC TGGAG CACCA 4451 AGGAG CCCTT TTCTT GGATC AAGGT GGATC TGTTG GCACC AATGA TTATT 4501 CACGG CATCA AGACC CAGGG TGCCC GTCAG AAGTT CTCCA GCCTC TACAT 4551 CTCTC AGTTT ATCAT CATGT ATAGT CTTGA TGGGA AGAAG TGGCA GACTT 4601 ATCGA GGAAA TTCCA CTGGA ACCTT AATGG TCTTC TTTGG CAATG TGGAT 4651 TCATC TGGGA TAAAA CACAA TATTT TTAAC CCTCC AATTA TTGCT CGATA 4701 CATCC GTTTG CACCC AACTC ATTAT AGCAT TCGCA GCACT CTTCG CATGG 4751 AGTTG ATGGG CTGTG ATTTA AATAG TTGCA GCATG CCATT GGGAA TGGAG 4801 AGTAA AGCAA TATCA GATGC ACAGA TTACT GCTTC ATCCT ACTTT ACCAA 4851 TATGT TTGCC ACCTG GTCTC CTTCA AAAGC TCGAC TTCAC CTCCA AGGGA 4901 GGAGT AATGC CTGGA GACCT CAGGT GAATA ATCCA AAAGA GTGGC TGCAA 4951 GTGGA CTTCC AGAAG ACAAT GAAAG TCACA GGAGT AACTA CTCAG GGAGT 5001 AAAAT CTCTG CTTAC CAGCA TGTAT GTGAA GGAGT TCCTC ATCTC CAGCA 5051 GTCAA GATGG CCATC AGTGG ACTCT CTTTT TTCAG AATGG CAAAG TAAAG 5101 GTTTT TCAGG GAAAT CAAGA CTCCT TCACA CCTGT GGTGA ACTCT CTAGA 5151 CCCAC CGTTA CTGAC TCGCT ACCTT CGAAT TCACC CCCAG AGTTG GGTGC 5201 ACCAG ATTGC CCTGA GGATG GAGGT TCTGG GCTGC GAGGC ACAGG ACCTC 5251 TACGA CAAAA CTCAC ACATG CCCAC CGTGC CCAGC TCCAG AACTC CTGGG 5301 CGGAC CGTCA GTCTT CCTCT TCCCC CCAAA ACCCA AGGAC ACCCT CATGA 5351 TCTCC CGGAC CCCTG AGGTC ACATG CGTGG TGGTG GACGT GAGCC ACGAA 5401 GACCC TGAGG TCAAG TTCAA CTGGT ACGTG GACGG CGTGG AGGTG CATAA 5451 TGCCA AGACA AAGCC GCGGG AGGAG CAGTA CAACA GCACG TACCG TGTGG 5501 TCAGC GTCCT CACCG TCCTG CACCA GGACT GGCTG AATGG CAAGG AGTAC 5551 AAGTG CAAGG TCTCC AACAA AGCCC TCCCA GCCCC CATCG AGAAA ACCAT 5601 CTCCA AAGCC AAAGG GCAGC CCCGA GAACC ACAGG TGTAC ACCCT GCCCC 5651 CATCC CGGGA TGAGC TGACC AAGAA CCAGG TCAGC CTGAC CTGCC TGGTC 5701 AAAGG CTTCT ATCCC AGCGA CATCG CCGTG GAGTG GGAGA GCAAT GGGCA 5751 GCCGG AGAAC AACTA CAAGA CCACG CCTCC CGTGT TGGAC TCCGA CGGCT 5801 CCTTC TTCCT CTACA GCAAG CTCAC CGTGG ACAAG AGCAG GTGGC AGCAG 5851 GGGAA CGTCT TCTCA TGCTC CGTGA TGCAT GAGGC TCTGC ACAAC CACTA 5901 CACGC AGAAG AGCCT CTCCC TGTCT CCGGG TAAAT GA
Secuencia de proteína de FVIII 169 (SEQ ID NO: 70)
1 MQIELSTCFF LCLLRFCFSA TRRYYLGAVE LSWDYMQSDL GELPVDARFP 51 PRVPKSFPFN TSVVYKKTLF VEFTDHLFNIAKPRPPWMGL LGPTIQAEVY 101 DTVVITLKNM ASHPVSLHAV GVSYWKASEG AEYDDQTSQR EKEDDKVFPG 151 GSHTYVWQVL KENGPMASDP LCLTYSYLSH VDLVKDLNSG LIGALLVCRE 201 GSLAKEKTQT LHKFILLFAV FDEGKSWHSE TKNSLMQDRD AASARAWPKM 251 HTVNGYVNRS LPGLIGCHRK SVYWHVIGMG TTPEVHSIFL EGHTFLVRNH 301 RQASLEISPI TFLTAQTLLM DLGQFLLFCH ISSHQHDGME AYVKVDSCPE 351 EPQLRMKNNE EAEDYDDDLT DSEMDVVRFD DDNSPSFIQI RSVAKKHPKT 401 WVHYIAAEEE DWDYAPLVLA PDDRSYKSQY LNNGPQRIGR KYKKVRFMAY 451 TDETFKTREAIQHESGILGP LLYGEVGDTL LIIFKNQASR PYNIYPHGIT 501 DVRPLYSRRL PKGVKHLKDF PILPGEIFKY KWTVTVEDGP TKSDPRCLTR 551 YYSSFVNMER DLASGLIGPL LICYKESVDQ RGNQIMSDKR NVILFSVFDE 601 NRSWYLTENI QRFLPNPAGV QLEDPEFQAS NIMHSINGYV FDSLQLSVCL 651 HEVAYWYILS IGAQTDFLSV FFSGYTFKHK MVYEDTLTLF PFSGETVFMS 701 MENPGLWILG CHNSDFRNRG MTALLKVSSC DKNTGDYYED SYEDISAYLL 751 SKNNAIEPRS FSQNGAPGTS ESATPESGPG SEPATSGSET PGTSESATPE 801 SGPGSEPATS GSETPGTSES ATPESGPGTS TEPSEGSAPG SPAGSPTSTE 851 EGTSESATPE SGPGSEPATS GSETPGTSES ATPESGPGSP AGSPTSTEEG 901 SPAGSPTSTE EGTSTEPSEG SAPGTSESAT PESGPGTSES ATPESGPGTS 951 ESATPESGPG SEPATSGSET PGSEPATSGS ETPGSPAGSP TSTEEGTSTE 1001 PSEGSAPGTS TEPSEGSAPG SEPATSGSET PGTSESATPE SGPGTSTEPS 1051 EGSAPASSPP VLKRHQAEIT RTTLQSDQEE IDYDDTISVE MKKEDFDIYD 1101 EDENQSPRSF QKKTRHYFIA AVERLWDYGM SSSPHVLRNR AQSGSVPQFK 1151 KVVFQEFTDG SFTQPLYRGE LNEHLGLLGP YIRAEVEDNI MVTFRNQASR 1201 PYSFYSSLIS YEEDQRQGAE PRKNFVKPNE TKTYFWKVQH HMAPTKDEFD 1251 CKAWAYFSDV DLEKDVHSGL IGPLLVCHTN TLNPAHGRQV TVQEFALFFT 1301 IFDETKSWYF TENMERNCRA PCNIQMEDPT FKENYRFHAI NGYIMDTLPG 1351 LVMAQDQRIR WYLLSMGSNE NIHSIHFSGH VFTVRKKEEY KMALYNLYPG 1401 VFETVEMLPS KAGIWRVECL IGEHLHAGMS TLFLVYSNKC QTPLGMASGH 1451 IRDFQITASG QYGQWAPKLA RLHYSGSINA WSTKEPFSWI KVDLLAPMII 1501 HGIKTQGARQ KFSSLYISQF IIMYSLDGKK WQTYRGNSTG TLMVFFGNVD 1551 SSGIKHNIFN PPIIARYIRL HPTHYSIRST LRMELMGCDL NSCSMPLGME 1601 SKAISDAQIT ASSYFTNMFA TWSPSKARLH LQGRSNAWRP QVNNPKEWLQ 1651 VDFQKTMKVT GVTTQGVKSL LTSMYVKEFL ISSSQDGHQW TLFFQNGKVK 1701 VFQGNQDSFT PVVNSLDPPL LTRYLRIHPQ SWVHQIALRM EVLGCEAQDL 1751 YDKTHTCPPC PAPELLGGPS VFLFPPKPKD TLMISRTPEV TCVVVDVSHE 1801 DPEVKFNWYV DGVEVHNAKT KPREEQYNST YRVVSVLTVL HQDWLNGKEY 1851 KCKVSNKALP APIEKTISKA KGQPREPQVY TLPPSRDELT KNQVSLTCLV 1901 KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPVLD SDGSFFLYSK LTVDKSRWQQ 1951 GNVFSCSVMH EALHNHYTQK SLSLSPGK*
Secuencia de nucleótidos de FVIII 263 (mutante triple IHH) (SEQ ID NO: 156)
1 ATGCA AATAG AGCTC TCCAC CTGCT TCTTT CTGTG CCTTT TGCGA TTCTG 51 C U T A GTGCC ACCAG AAGAT ACTAC CTGGG TGCAG TGGAA CTGTC ATGGG 101 ACTAT ATGCA AGGCG CGCCA ACATC AGAGA GCGCC ACCCC TGAAA GTGGT 151 CCCGG GAGCG AGCCA GCCAC ATCTG GGTCG GAAAC GCCAG GCACA AGTGA 201 GTC'TG CAACT CCCGA GTCCG GACCT GGCTC CGAGC CTGCC ACTAG CGGCT 251 CCGAG AC'TCC GGGAA CTTCC GAGAG CGCTA CACCA GAAAG CGGAC CCGGA 301 ACCAG TACCG AACCT AGCGA GGGCT CTGCT CCGGG CAGCC CAGCC GGCTC 351 TCCTA CATCC ACGGA GGAGG GCACT TCCGA ATCCG CCACC CCGGA GTCAG 401 GGCCA GGATC TGAAC CCGCT ACCTC AGGCA GTGAG ACGCC AGGAA CGAGC 451 GAGTC CGCTA CACCG GAGAG TGGGC CAGGG AGCCC TGCTG GATCT CCTAC 501 GTCCA CTGAG GAAGG GTCAC CAGCG GGCTC GCCCA CCAGC ACTGA AGAAG 551 GTGCC TCGAG CAGTG ATCTC GGTGA GCTGC CTGTG GACGC AAGAT TTCCT 601 CCTAG AGTGC CAAAA TCTTT TCCAT TCAAC ACCTC AGTCG TGTAC AAAAA 651 GACTC TGTTT GTAGA ATTCA CGGAT CACCT TTTCA ACATC GCTAA GCCAA 701 GGCCA CCCTG GATGG GTCTG CTAGG TCCTA CCATC CAGGC TGAGG TTTAT 751 GATAC AGTGG TCATT ACACT TAAGA ACATG GCTTC CCATC CTGTC AGTCT 801 TCATG CTGTT GGTGT ATCCT ACTGG AAAGC TTCTG AGGGA GCTGA ATATG 851 ATGAT CAGAC CAGTC AAAGG GAGAA AGAAG ATGAT AAAGT CTTCC CTGGT 901 GGAAG CCATA CATAT GTCTG GCAGG TCCTG AAAGA GAATG GTCCA ATGGC 951 CTCTG ACCCA CTGTG CCTTA CCTAC TCATA TCTTT CTCAT GTGGA CCTGG 1001 TAAAA GACTT GAATT CAGGC CTCAT TGGAG CCCTA CTAGT ATGTA GAGAA 1051 GGGAG TCTGG CCAAG GAAAA GACAC AGACC TTGCA CAAAT TTATA CTACT 1101 TTTTG CTGTA TTTGA TGAAG GGAAA AGTTG GCACT CAGAA ACAAA GAACT 1151 CCTTG ATGCA GGATA GGGAT GCTGC ATCTG CTCGG GCCTG GCCTA AAATG 1201 CACAC AGTCA ATGGT TATGT AAACA GGTCT CTGCC AGGTC TGATT GGATG 1251 CCACA GGAAA TCAGT CTATT GGCAT GTGAT TGGAA TGGGC ACCAC TCCTG 1301 AAGTG CACTC AATAT TCCTC GAAGG TCACA CATTT CTTGT GAGGA ACCAT 1351 CGCCA GGCTA GCTTG GAAAT CTCGC CAATA ACTTT CCTTA CTGCT CAAAC 1401 ACTCT TGATG GACCT TGGAC AGTTT CTACT GTTTT GTCAT ATCTC TTCCC 1451 ACCAA CATOA TGGCA TGGAA GCTTA TGTCA AAGTA GACAG CTGTC CAGAG 1501 GAACC CCAAC TACGA ATGAA AAATA ATGAA GAAGC GGAAG ACTAT GATGA 1551 TGATC TTACT GATTC TGAAA TGGAT GTGGT CAGGT TTGAT GATGA CAACT 1601 CTCCT TCCTT TATCC AAATT CGCTC AGTTG CCAAG AAGCA TCCTA AAACT 1651 TGGGT ACATT ACATT GCTGC TGAAG AGGAG GACTG GGAC'T ATGCT CCCTT 1701 AGTCC TCGCC CCCGA TGACA GAAGT TATAA AAGTC AATAT TTGAA CAATG 1751 GCCCT CAGCG GATTG GTAGG AAGTA CAAAA AAGTC CGATT TATGG CATAC 1801 ACAGA TGAAA CCTTT AAGAC TCGTG AAGCT ATTCA GCATG AATCA GGAAT 1851 CTTGG GACCT TTACT TTATG GGGAA GTTGG AGACA CACTG TTGAT TATAT 1901 TTAAG AATCA AGCAA GCAGA CCATA TAACA TCTAC CCTCA CGGAA TCACT 1951 GATGT CCGTC CTTTG TATTC AAGGA GATTA CCAAA AGGTG TAAAA CATTT 2001 GAAGG ATTTT CCAAT TCTGC CAGGA GAAAT ATTCA AATAT AAATG GACAG 2051 TGACT GTAGA AGATG GGCCA ACTAA ATCAG ATCCT CGGTG CCTGA CCCGC 2101 TATTA CTCTA GTTTC GTTAA TATGG AGAGA GATCT AGCTT CAGGA CTCAT 2151 TGGCC CTCTC CTCAT CTGCT ACAAA GAATC TGTAG ATCAA AGAGG AAACC 2201 AGATA ATGTC AGACA AGAGG AATGT CATCC TGTTT TCTGT ATTTG ATGAG 2251 AACCG AAGCT GGTAC CTCAC AGAGA ATATA CAACG CTTTC TCCCC AATCC 2301 AGCTG GAGTG CAGCT TGAGG ATCCA GAGTT CCAAG CCTCC AACAT CATGC 2351 ACAGC ATCAA TGGCT ATGTT TTTGA TAGTT TGCAG TTGTC AGTTT GTTTG 2401 CATGA GGTGG CATAC TGGTA CATTC TAAGC ATTGG AGCAC AGACT GACTT 2451 CCTTT CTGTC TTCTT CTCTG GATAT ACCTT CAAAC ACAAA ATGGT CTATG 2501 AAGAC ACACT CACCC TATTC CCATT CTCAG GAGAA ACTGT CTTCA TGTCG 2551 ATGGA AAACC CAGGT CTATG GATTC TGGGG TGCCA CAACT CAGAC TTTCG 2601 GAACA GAGGC ATGAC CGCCT TACTG AAGGT TTCTA GTTGT GACAA GAACA 2651 CTGGT GATTA TTACG AGGAC AGTTA TGAAG ATATT TCAGC ATACT TGCTG 2701 AGTAA AAACA ATGCC ATTGA ACCAA GAAGC TTCTC TCAAA ACGGC GCGCC 2751 AGGTA CCTCA GAGTC TGCTA CCCCC GAGTC AGGGC CAGGA TCAGA GCCAG 2801 CCACC TCCGG GTCTG AGACA CCCGG GACTT CCGAG AGTGC CACCC CTGAG 2851 TCCGG ACCCG GGTCC GAGCC CGCCA CTTCC GGCTC CGAAA CTCCC GGCAC 2901 AAGCG AGAGC GCTAC CCCAG AGTCA GGACC AGGAA CATCT ACAGA GCCCT 2951 CTGAA GGCTC CGCTC CAGGG TCCCC AGCCG GCAGT CCCAC TAGCA CCGAG 3001 GAGGG AACCT CTGAA AGCGC CACAC CCGAA TCAGG GCCAG GGTCT GAGCC 3051 TGCTA CCAGC GGCAG CGAGA CACCA GGCAC CTCTG AGTCC GCCAC ACCAG 3101 AGTCC GGACC CGGAT CTCCC GCTGG GAGCC CCACC TCCAC TGAGG AGGGA 3151 TCTCC TGCTG GCTCT CCAAC ATCTA CTGAG GAAGG TACCT CAACC GAGCC 3201 ATCCG AGGGA TCAGC TCCCG GCACC TCAGA GTCGG CAACC CCGGA GTCTG 3251 GACCC GGAAC TTCCG AAAGT GCCAC ACCAG AGTCC GGTCC CGGGA CTTCA 3301 GAATC AGCAA CACCC GAGTC CGGCC CTGGG TCTGA ACCCG CCACA AGTGG 3351 TAGTG AGACA CCAGG ATCAG AACCT GCTAC CTCAG GGTCA GAGAC ACCCG 3401 GATCT CCGGC AGGCT CACCA ACCTC CACTG AGGAG GGCAC CAGCA CAGAA 3451 CCAAG CGAGG GCTCC GCACC CGGAA CAAGC ACTGA ACCCA GTGAG GGTTC 3501 AGCAC CCGGC TCTGA GCCGG CCACA AGTGG CAGTG AGACA CCCGG CACTT 3551 CAGAG AGTGC CACCC CCGAG AGTGG CCCAG GCACT AGTAC CGAGC CCTCT 3601 GAAGG CAGTG CGCCA GCCTC GAGCC CACCA GTCTT GAAAC GCCAT CAAGC 3651 TGAAA TAACT CGTAC TACTC TTCAG TCAGA TCAAG AGGAA ATCGA TTATG 3701 ATGAT ACCAT ATCAG TTGAA ATGAA GAAGG AAGAT TTTGA CATTT ATGAT 3751 GAGGA TGAAA ATCAG AGCCC CCGCA GCTTT CAAAA GAAAA CACGA CACTA 3801 TTTTA TTGCT GCAGT GGAGA GGCTC TGGGA TTATG GGATG AGTAG CTCCC 3851 CACAT GTTCT AAGAA ACAGG GCTCA GAGTG GCAGT GTCCC TCAGT TCAAG 3901 AAAGT TGTTT TCCAG GAATT TACTG ATGGC TCCTT TACTC AGCCC TTATA 3951 CCGTG GAGAA CTAAA TGAAC ATTTG GGACT CCTGG GGCCA TATAT AAGAG 4001 CAGAA GTTGA AGATA ATATC ATGGT AACTT TCAGA AATCA GGCCT CTCGT 4051 CCCTA TTCCT TCTAT TCTAG CCTTA TTTCT TATGA GGAAG ATCAG AGGCA 4101 AGGAG CAGAA CCTAG AAAAA ACTTT GTCAA GCCTA ATGAA ACCAA AACTT 4151 ACTTT TGGAA AGTGC AACAT CATAT GGCAC CCACT AAAGA TGAGT TTGAC 4201 TGCAA AGCCT GGGCT TATTT CTCTG ATGTT GACCT GGAAA AAGAT GTGCA 4251 CTCAG GCCTG ATTGG ACCCC TTCTG GTCTG CCACA CTAAC ACACT GAACC 4301 CTGCT CATGG GAGAC AAGTG ACAGT ACAGG AATTT GCTCT GTTTT TCACC 4351 ATCTT TGATG AGACC AAAAG CTGGT ACTTC ACTGA AAATA TGGAA AGAAA 4401 CTGCA GGGCT CCCTG CAATA TCCAG ATGGA AGATC CCACT TTTAA AGAGA 4451 ATTAT CGCTT CCATG CAATC AATGG CTACA TAATG GATAC ACTAC CTGGC 4501 TTAGT AATGG CTCAG GATCA AAGGA TTCGA TGGTA TCTGC TCAGC ATGGG 4551 CAGCA ATGAA AACAT CCATT CTATT CATTT CAGTG GACAT GTGTT CACTG 4601 TACGA AAAAA AGAGG AGTAT AAAAT GGCAC TGTAC AATCT CTATC CAGGT 4651 GTTTT TGAGA CAGTG GAAAT GTTAC CATCC AAAGC TGGAA TTTGG CGGGT 4701 GGAAT GCCTT ATTGG CGAGC ATCTA CATGC TGGGA TGAGC ACACT TTTTC 4751 TGGTG TACAG CAATA AGTGT CAGAC TCCCC TGGGA ATGGC TTCTG GACAC 4801 ATTAG AGATT TTCAG ATTAC AGCTT CAGGA CAATA TGGAC AGTGG GCCCC 4851 AAAGC TGGCC AGACT TCATT ATTCC GGATC AATCA ATGCC TGGAG CACCA 4901 AGGAG CCCTT TTCTT GGATC AAGGT GGATC TGTTG GCACC AATGA TTATT 4951 CACGG CATCA AGACC CAGGG TGCCC GTCAG AAGTT CTCCA GCCTC TACAT 5001 CTCTC AGTTT ATCAT CATGT ATAGT CTTGA TGGGA AGAAG TGGCA GACTT 5051 ATCGA GGAAA TTCCA CTGGA ACCTT AATGG TCTTC TTTGG CAATG TGGAT 5101 TCATC TGGGA TAAAA CACAA TATTT TTAAC CCTCC AATTA TTGCT CGATA 5151 CATCC GTTTG CACCC AACTC ATTAT AGCAT TCGCA GCACT CTTCG CATGG 5201 AGTTG ATGGG CTGTG ATTTA AATAG TTGCA GCATG CCATT GGGAA TGGAG 5251 AGTAA AGCAA TATCA GATGC ACAGA TTACT GCTTC ATCCT ACTTT ACCAA 5301 TATGT TTGCC ACCTG GTCTC CTTCA AAAGC TCGAC TTCAC CTCCA AGGGA 5351 GGAGT AATGC CTGGA GACCT CAGGT GAATA ATCCA AAAGA GTGGC TGCAA 5401 GTGGA CTTCC AGAAG ACAAT GAAAG TCACA GGAGT AACTA CTCAG GGAGT 5451 AAAAT CTCTG CTTAC CAGCA TGTAT GTGAA GGAGT TCCTC ATCTC CAGCA 5501 GTCAA GATGG CCATC AGTGG ACTCT CTTTT TTCAG AATGG CAAAG TAAAG 5551 GTTTT TCAGG GAAAT CAAGA CTCCT TCACA CCTGT GGTGA ACTCT CTAGA 5601 CCCAC CGTTA CTGAC TCGCT ACCTT CGAAT TCACC CCCAG AGTTG GGTGC 5651 ACCAG ATTGC CCTGA GGATG GAGGT TCTGG GCTGC GAGGC ACAGG ACCTC 5701 TACGA CAAAA CTCAC ACATG CCCAC CGTGC CCAGC TCCAG AACTC CTGGG 5751 CGGAC CGTCA GTCTT CCTCT TCCCC CCAAA ACCCA AGGAC ACCCT CATGG 5801 CCTCC CGGAC CCCTG AGGTC ACATG CGTGG TGGTG GACGT GAGCC ACGAA 5851 GACCC TGAGG TCAAG TTCAA CTGGT ACGTG GACGG CGTGG AGGTG CATAA 5901 TGCCA AGACA AAGCC GCGGG AGGAG CAGTA CAACA GCACG TACCG TGTGG 5951 TCAGC GTCCT CACCG TCCTG GCCCA GGACT GGCTG AATGG CAAGG AGTAC 6001 AAGTG CAAGG TCTCC AACAA AGCCC TCCCA GCCCC CATCG AGAAA ACCAT 6051 CTCCA AAGCC AAAGG GCAGC CCCGA GAACC ACAGG TGTAC ACCCT GCCCC 6101 CATCC CGCGA TGAGC TGACC AAGAA CCAGG TCAGC CTGAC CTGCC TGGTC 6151 AAAGG CTTCT ATCCC AGCGA CATCG CCGTG GAGTG GGAGA GCAAT GGGCA 6201 GCCGG AGAAC AACTA CAAGA CCACG CCTCC CGTGT TGGAC TCCGA CGGCT 6251 CCTTC TTCCT CTACA GCAAG CTCAC CGTGG ACAAG AGCAG GTGGC AGCAG 6301 GGGAA CGTCT TCTCA TGCTC CGTGA TGCAT GAGGC TCTGC ACAAC GCCTA 6351 CACGC AGAAG AGCCT CTCCC TGTCT CCGGG TAAAT GA
Secuencia de proteína de FVIII 263 (mutante triple IHH) (SEQ ID NO: 157)
1 MQIELSTCFF LCLLRFCFSA TRRYYLGAVE LSWDYMQGAP TSESATPESG 51 PGSEPATSGS ETPGTSESAT PESGPGSEPA TSGSETPGTS ESATPESGPG 101 TSTEPSEGSA PGSPAGSPTS TEEGTSESAT PESGPGSEPA TSGSETPGTS 151 ESATPESGPG SPAGSPTSTE EGSPAGSPTS TEEGASSSDL GELPVDARFP 201 PRVPKSFPFN TSVVYKKTLF VEFTDHLFNIAKPRPPWMGL LGPTIQAEVY 251 DTVVITLKNM ASHPVSLHAV GVSYWKASEG AEYDDQTSQR EKEDDKVFPG 301 GSHTYVWQVL KENGPMASDP LCLTYSYLSH VDLVKDLNSG LIGALLVCRE 351 GSLAKEKTQT LHKFILLFAV FDEGKSWHSE TKNSLMQDRD AASARAWPKM 401 HTVNGYVNRS LPGLIGCHRK SVYWHVIGMG TTPEVHSIFL EGHTFLVRNH 451 RQASLEISPI TFLTAQTLLM DLGQFLLFCH ISSHQHDGME AYVKVDSCPE 501 EPQLRMKNNE EAEDYDDDLT DSEMDVVRFD DDNSPSFIQIRSVAKKHPKT 551 WVHYIAAEEE DWDYAPLVLA PDDRSYKSQY LNNGPQRIGR KYKKVRFMAY 601 TDETFKTREA IQHESGILGP LLYGEVGDTL LIIFKNQASR PYNIYPHGIT 651 DVRPLYSRRL PKGVKHLKDF PILPGEIFKY KWTVTVEDGP TKSDPRCLTR 701 YYSSFVNMER DLASGLIGPL LICYKESVDQ RGNQIMSDKR NVILFSVFDE 751 NRSWYLTENI QRFLPNPAGV QLEDPEFQAS NIMHSINGYV FDSLQLSVCL 801 HEVAYWYILS IGAQTDFLSV FFSGYTFKHK MVYEDTLTLF PFSGETVFMS 851 MENPGLWILG CHNSDFRNRG MTALLKVSSC DKNTGDYYED SYEDISAYLL 901 SKNNAIEPRS FSQNGAPGTS ESATPESGPG SEPATSGSET PGTSESATPE 951 SGPGSEPATS GSETPGTSES ATPESGPGTS TEPSEGSAPG SPAGSPTSTE 1001 EGTSESATPE SGPGSEPATS GSETPGTSES ATPESGPGSP AGSPTSTEEG 1051 SPAGSPTSTE EGTSTEPSEG SAPGTSESAT PESGPGTSES ATPESGPGTS 1101 ESATPESGPG SEPATSGSET PGSEPATSGS ETPGSPAGSP TSTEEGTSTE 1151 PSEGSAPGTS TEPSEGSAPG SEPATSGSET PGTSESATPE SGPGTSTEPS 1201 EGSAPASSPP VLKRHQAEIT RTTLQSDQEE IDYDDTISVE MKKEDFDIYD 1251 EDENQSPRSF QKKTRHYFIA AVERLWDYGM SSSPHVLRNR AQSGSVPQFK 1301 KVVFQEFTDG SFTQPL YRGE LNEHLGLLGP YIRAEVEDM MVTFRNQASR 1351 PYSFYSSLIS YEEDQRQGAE PRKNFVKPNE TKTYFWKVQH HMAPTKDEFD 1401 CKAWAYFSDV DLEKDVHSGL IGPLLVCHTN TLNPAHGRQV TVQEFALFFT 1451 IFDETKSWYF TENMERNCRA PCMQMEDPT FKENYRFHAINGYIMDTLPG 1501 LVMAQDQRIR WYLLSMGSNE MHSIHFSGH VFTVRKKEEY KMALYNLYPG 1551 VFETVEMLPS KAGIWRVECL IGEHLHAGMS TLFLVYSNKC QTPLGMASGH 1601 IRDFQITASG QYGQWAPKLA RLHYSGSINA WSTKEPFSWI KVDLLAPMII 1651 HGIKTQGARQ KFSSLYISQF IIMYSLDGKK WQTYRGNSTG TLMVFFGNVD 1701 SSGIKHNIFN PPIIARYIRL HPTHYSIRST LRMELMGCDL NSCSMPLGME 1751 SKAISDAQIT ASSYFTNMFA TWSPSKARLH LQGRSNAWRP QVNNPKEWLQ 1801 VDFQKTMKVT GVTTQGVKSL LTSMYVKEFL ISSSQDGHQW TLFFQNGKVK 1851 VFQGNQDSFT PVVNSLDPPL LTRYLRIHPQ SWVHQIALRM EVLGCEAQDL 1901 YDKTHTCPPC PAPELLGGPS VFLFPPKPKD TLMASRTPEV TC VVVDVSHE 1951 DPEVKFNWYV DGVEVHNAKT KPREEQYNST YRVVSVLTVL AQDWLNGKEY 2001 KCKVSNKALP APIEKTISKA KGQPREPQVY TLPPSRDELT KNQVSLTCLV 2051 KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPVLD SDGSFFLYSK LTVDKSRWQQ 2101 GNVFSCSVMH EALHNAYTQK SLSLSPGK*
Secuencia de nucleótidos de FVIII 282 (SEQ ID NO: 158)
1 ATGCA AATAG AGCTC TCCAC CTGCT TCTTT CTGTG CCTTT TGCGA TTCTG 51 CTTTA GTGCC ACCAG AAGAT ACTAC CTGGG TGCAG TGGAA CTGTC ATGGG 101 ACTAT ATGCA AAGTG ATCTC GGTGA GCTGC CTGTG GACGC AAGAT TTCC'T 151 CCTAG AGTGC CAAAA TCTTT TCCAT TCAAC ACCTC AGTCG TGTAC AAAAA 201 GACTC TGTTT GTAGA ATTCA CGGAT CACCT TTTCA ACATC GCTAA GCCAA 251 GGCCA CCCTG GATGG GTCTG CTAGG TCCTA CCATC CAGGC TGAGG TTTAT 301 GATAC AGTGG TCATT ACACT TAAGA ACATG GCTTC CCATC CTGTC AGTCT 351 TCATG CTGTT GGTGT ATCCT ACTGG AAAGC TTCTG AGGGA GCTGA ATATG 401 ATGAT CAGAC CAGTC AAAGG GAGAA AGAAG ATGAT AAAGT CTTCC CTGGT 451 GGAAG CCATA CATAT GTCTG GCAGG TCCTG AAAGA GAATG GTCCA ATGGC 501 CTCTG ACCCA CTGTG CCTTA CCTAC TCATA TCTTT CTCAT GTGGA CCTGG 551 TAAAA GACTT GAATT CAGGC CTCAT TGGAG CCCTA CTAGT ATGTA GAGAA 601 GGGAG TCTGG CCAAG GAAAA GACAC AGACC TTGCA CAAAT TTATA CTACT 651 TTTTG CTGTA TTTGA TGAAG GGAAA AGTTG GCACT CAGAA ACAAA GAACT 701 CCTTG ATGCA GGATA GGGAT GCTGC ATCTG CTCGG GCCTG GCCTA AAATG 751 CACAC AGTCA ATGGT TATGT AAACA GGTCT CTGCC AGGTC TGATT GGATG 801 CCACA GGAAA TCAGT CTATT GGCAT GTGAT TGGAA TGGGC ACCAC TCCTG 851 AAGTG CACTC AATAT TCCTC GAAGG TCACA CATTT CTTGT GAGGA ACCAT 901 CGCCA GGCTA GCTTG GAAAT CTCGC CAATA ACTTT CCTTA CTGCT CAAAC 951 ACTCT TGATG GACCT TGGAC AGTTT CTACT GTTTT GTCAT ATCTC TTCCC 1001 ACCAA CATGA TGGCA TGGAA GCTTA TGTCA A AGT A GACAG CTGTC CAGAG 1051 GAACC CCAAC TACGA ATGAA AAATA ATGAA GAAGC GGAAG ACTAT GATGA 1101 TGATC TTACT GATTC TGAAA TGGAT GTGGT CAGGT TTGAT GATGA CAACT 1151 CTCCT TCCTT TATCC AAATT CGCTC AGTTG CCAAG AAGCA TCCTA AAACT 1201 TGGGT ACATT ACATT GCTGC TGAAG AGGAG GACTG GGACT ATGCT CCCTT 1251 AGTCC TCGCC CCCGA TGACA GAAGT TATAA AAGTC AATAT TTGAA CAATG 1301 GCCCT CAGCG GATTG GTAGG AAGTA CAAAA AAGTC CGATT TATGG CATAC 1351 ACAGA TGAAA CCTTT AAGAC TCGTG AAGCT A U C A GCATG AATCA GGAAT 1401 CTTGG GACCT TTACT TTATG GGGAA GTTGG AGACA CACTG TTGAT TATAT 1451 TTAAG AATCA AGCAA GCAGA CCATA TAACA TCTAC CCTCA CGGAA TCACT 1501 GATGT CCGTC CTTTG TATTC AAGGA GATTA CCAAA AGGTG TAAAA CATTT 1551 GAAGG ATTTT CCAAT TCTGC CAGGA GAAAT A U C A AATAT AAATG GACAG 1601 TGACT GTAGA AGATG GGCCA ACTAA ATCAG ATCCT CGGTG CCTGA CCCGC 1651 TATTA CTCTA GTTTC GTTAA TATGG AGAGA GATCT AGCTT CAGGA CTCAT 1701 TGGCC CTCTC CTCAT CTGCT ACAAA GAATC TGTAG ATCAA AGAGG AAACC 1751 AGATA ATGTC AGACA AGAGG AATGT CATCC TGTTT TCTGT ATTTG ATGAG 1801 AACCG AAGCT GGTAC CTCAC AGAGA ATATA CAACG CTTTC TCCCC AATCC 1851 AGCTG GAGTG CAGCT TGAGG ATCCA GAGTT CCAAG CCTCC AACAT CATGC 1901 ACAGC ATCAA TGGCT ATGTT TTTGA TAGTT TGCAG TTGTC AGTTT GTTTG 1951 CATGA GGTGG CATAC TGGTA CATTC TAAGC ATTGG AGCAC AGACT GACTT 2001 CCTTT CTGTC TTCTT CTCTG GATAT ACCTT CAAAC ACAAA ATGGT CTATG 2051 AAGAC ACACT CACCC TATTC CCATT CTCAG GAGAA ACTGT CTTCA TGTCG 2101 ATGGA AAACC CAGGT CTATG GATTC TGGGG TGCCA CAACT CAGAC TTTCG 2151 GAACA GAGGC ATGAC CGCCT TACTG AAGGT TTCTA GTTGT GACAA GAACA 2201 CTGGT GATTA TTACG AGGAC AGTTA TGAAG ATATT TCAGC ATACT TGCTG 2251 AGTAA AAACA ATGCC ATTGA ACCAA GAAGC TTCTC TCAAA ACGGC GCGCC 2301 AACAT CAGAG AGCGC CACCC CTGAA AGTGG TCCCG GGAGC GAGCC AGCCA 2351 CATCT GGGTC GGAAA CGCCA GGCAC AAGTG AGTCT GCAAC TCCCG AGTCC 2401 GGACC TGGCT CCGAG CCTGC CACTA GCGGC TCCGA GACTC CGGGA ACTTC 2451 CGAGA GCGCT ACACC AGAAA GCGGA CCCGG AACCA GTACC GAACC TAGCG 2501 AGGGC TCTGC TCCGG GCAGC CCAGC CGGCT CTCCT ACATC CACGG AGGAG 2551 GGCAC TTCCG AATCC GCCAC CCCGG AGTCA GGGCC AGGAT CTGAA CCCGC 2601 TACCT CAGGC AGTGA GACGC CAGGA ACGAG CGAGT CCGCT ACACC GGAGA 2651 GTGGG CCAGG GAGCC CTGCT GGATC TCCTA CGTCC ACTGA GGAAG GGTCA 2701 CCAGC GGGCT CGCCC ACCAG CACTG AAGAA GGTGC CTCGA GCCCA CCAGT 2751 CTTGA AACGC CATCA AGCTG AAATA ACTCG TACTA CTCTT CAGTC AGATC 2801 AAGAG GAAAT C GATT ATGAT GATAC CATAT CAGTT GAAAT GAAGA AGGAA 2851 GATTT TGACA TTTAT GATGA GGATG AAAAT CAGAG CCCCC GCAGC TTTCA 2901 AAAGA AAACA CGACA CTATT TTATT GCTGC AGTGG AGAGG CTCTG GGATT 2951 ATGGG ATGAG TAGCT CCCCA CATGT TCTAA GAAAC AGGGC TCAGA GTGGC 3001 AGTGT CCCTC AGTTC AAGAA AGTTG TTTTC CAGGA ATTTA CTGAT GGCTC 3051 CTTTA CTCAG CCCTT ATACC GTGGA GAACT AAATG AACAT TTGGG ACTCC 3101 TGGGG CCATA TATAA GAGCA GAAGT TGAAG ATAAT ATCAT GGTAA CTTTC 3151 AGAAA TCAGG CCTCT CGTCC CTATT CCTTC TATTC TAGCC TTATT TCTTA 3201 TGAGG AAGAT CAGAG GCAAG GAGCA GAACC TAGAA AAAAC TTTGT CAAGC 3251 CTAAT GAAAC CAAAA CTTAC TTTTG GAAAG TGCAA CATCA TATGG CACCC 3301 ACTAA AGATG AGTTT GACTG CAAAG CCTGG GCTTA TTTCT CTGAT GTTGA 3351 CCTGG AAAAA GATGT GCACT CAGGC CTGAT TGGAC CCCTT CTGGT CTGCC 3401 ACACT AACAC ACTGA ACCCT GCTCA TGGGA GACAA GTGAC AGTAC AGGAA 3451 TTTGC TCTGT TTTTC ACCAT CTTTG ATGAG ACCAA AAGCT GGTAC TTCAC 3501 TGAAA ATATG GAAAG AAACT GCAGG GCTCC CTGCA ATATC CAGAT GGAAG 3551 ATCCC ACTTT TAAAG AGAAT TATCG CTTCC ATGCA ATCAA TGGCT ACATA 3601 ATGGA TACAC TACCT GGCTT AGTAA TGGCT CAGGA TCAAA GGATT CGATG 3651 GTATC TGCTC AGCAT GGGCA GCAAT GAAAA CATCC ATTCT ATTCA TTTCA 3701 GTGGA CATGT GTTCA CTGTA CGAAA AAAAG AGGAG TATAA AATGG CACTG 3751 TACAA TCTCT ATCCA GGTGT TTTTG AGACA GTGGA AATGT TACCA TCCAA 3801 AGCTG GAATT TGGCG GGTGG AATGC CTTAT TGGCG AGCAT CTACA TGCTG 3851 GGATG AGCAC ACTTT TTCTG GTGTA CAGCA ATAAG TGTCA GACTC CCCTG 3901 GGAAT GGCTT CTGGA CACAT TAGAG ATTTT CAGAT TACAG CTTCA GGACA 3951 ATATG GACAG TGGGC CCCAA AGCTG GCCAG ACTTC ATTAT TCCGG ATCAA 4001 TCAAT GCCTG GAGCA CCAAG GAGCC CTTTT CTTGG ATCAA GGTGG ATCTG 4051 TTGGC ACCAA TGATT ATTCA CGGCA TCAAG ACCCA GGGTG CCCGT CAGAA 4101 GTTCT CCAGC CTCTA CATCT CTCAG TTTAT CATCA TGTAT AGTCT TGATG 4151 GGAAG AAGTG GCAGA CTTAT CGAGG AAATT CCACT GGAAC CTTAA TGGTC 4201 TTCTT TGGCA ATGTG GATTC ATCTG GGATA AAACA CAATA TTTTT AACCC 4251 TCCAA TTATT GCTCG ATACA TCCGT TTGCA CCCAA CTCAT TATAG CATTC 4301 GCAGC ACTCT TCGCA TGGAG TTGAT GGGCT GTGAT TTAAA TAGTT GCAGC 4351 ATGCC ATTGG GAATG GAGAG TAAAG CAATA TCAGA TGCAC AGATT ACTGC 4401 TTCAT CCTAC TTTAC CAATA TGTTT GCCAC CTGGT CTCCT TCAAA AGCTC 4451 GACTT CACCT CCAAG GGAGG AGTAA TGCCT GGAGA CCTCA GGTGA ATAAT 4501 CCAAA AGAGT GGCTG CAAGT GGACT TCCAG AAGAC AATGA AAGTC ACAGG 4551 AGTAA CTACT CAGGG AGTAA AATCT CTGCT TACCA GCATG TATGT GAAGG 4601 AGTTC CTCAT CTCCA GCAGT CAAGA TGGCC ATCAG TGGAC TCTCT H TTT 4651 CAGAA TGGCA AAGTA AAGGT TTTTC AGGGA AATCA AGACT CCTTC ACACC 4701 TGTGG TGAAC TCTCT AGACC CACCG TTACT GACTC GCTAC CTTCG AATTC 4751 ACCCC CAGAG TTGGG TGCAC CAGAT TGCCC TGAGG ATGGA GGTTC TGGGC 4801 TGCGA GGCAC AGGAC CTCTA CGACA AAACT CACAC ATGCC CACCG TGCCC 4851 AGCTC CAGAA CTCCT GGGCG GACCG TCAGT CTTCC TCTTC CCCCC AAAAC 4901 CCAAG GACAC CCTCA TGATC TCCCG GACCC CTGAG GTCAC ATGCG TGGTG 4951 GTGGA CGTGA GCCAC GAAGA CCCTG AGGTC AAGTT CAACT GGTAC GTGGA 5001 CGGCG TGGAG GTGCA TAATG CCAAG ACAAA GCCGC GGGAG GAGCA GTACA 5051 ACAGC ACGTA CCGTG TGGTC AGCGT CCTCA CCGTC CTGCA CCAGG ACTGG 5101 CTGAA TGGCA AGGAG TACAA GTGCA AGGTC TCCAA CAAAG CCCTC CCAGC 5151 CCCCA TCGAG AAAAC CATCT CCAAA GCCAA AGGGC AGCCC CGAGA ACCAC 5201 AGGTG TACAC CCTGC CCCCA TCCCG GGATG AGCTG ACCAA GAACC AGGTC 5251 AGCCT GACCT GCCTG GTCAA AGGCT TCTAT CCCAG CGACA TCGCC GTGGA 5301 GTGGG AGAGC AATGG GCAGC CGGAG AACAA CTACA AGACC ACGCC TCCCG 5351 TGTTG GACTC CGACG GCTCC TTCTT CCTCT ACAGC AAGC'T CACCG TGGAC 5401 AAGAG CAGGT GGCAG CAGGG GAACG TCTTC TCATG CTCCG TGATG CATGA 5451 GGCTC TGCAC AACCA CTACA CGCAG AAGAG CCTCT CCCTG TCTCC GGGTA 5501 AATGA
Secuencia de proteína de FVIII 282 (SEQ ID NO: 159)
1 MQIELSTCFF LCLLRFCFSA TRRYYLGAVE LSWDYMQSDL GELPVDARFP 51 PRVPKSFPFN TSVVYKKTLF VEFTDIII.T’NI AKPRPPWMGL LGPTIQAEVY 101 DTVVITLKNM ASHPVSLHAV GVSYWKASEG AEYDDQTSQR EKEDDKVFPG 151 GSHTYVWQVL KENGPMASDP LCLTYSYLSH VDLVKDLNSG LIGALLVCRE 201 GSLAKEKTQT LHKFILLFAV FDEGKSWHSE TKNSLMQDRD AASARAWPKM 251 HT VNGYVNRS LPGLIGCHRK SVYWHVIGMG TTPEVHSIFL EGHTFL VRNH 301 RQASLEISPI TFLTAQTLLM DLGQFLLFCH ISSHQHDGME AYVKVDSCPE 351 EPQLRMKNNE EAEDYDDDLT DSEMDVVRFD DDNSPSFIQIRSVAKKHPKT 401 WVHYIAAEEE DWDYAPLVLA PDDRSYKSQY LNNGPQRIGR KYKKVRFMAY 451 TDETFKTREAIQHESGILGP LLYGEVGDTL LIIFKNQASR P YM YPHGIT 501 DVRPLYSRRL PKGVKHLKDF PILPGEIFKY KWTVTVEDGP TKSDPRCLTR 551 YYSSFVNMER DLASGLIGPL LICYKESVDQ RGNQIMSDKR NVILFSVFDE 601 NRSWYLTENI QRFLPNPAGV QLEDPEFQAS NIMHSINGYV FDSLQLSVCL 651 HEVAYWYILS IGAQTDFLSV FFSGYTFKHK MVYEDTLTLF PFSGETVFMS 701 MENPGLWILG CHNSDFRNRG MTALLKVSSC DKNTGDYYED SYEDISAYLL 751 SKNNAIEPRS FSQNGAPTSE SATPESGPGS EPATSGSETP GTSESATPES 801 GPGSEPATSG SETPGTSESA TPESGPGTST EPSEGSAPGS PAGSPTSTEE 851 GTSESATPES GPGSEPATSG SETPGTSESA TPESGPGSPA GSPTSTEEGS 901 PAGSPTSTEE GASSPPVLKR HQAEITRTTL QSDQEEIDYD DTISVEMKKE 951 DFDIYDEDEN QSPRSFQKKT RHYFIAAVER LWDYGMSSSP HVLRNRAQSG 1001 SVPQFKKVVF QEFTDGSFTQ PLYRGELNEH LGLLGPYIRA EVEDNIMVTF 1051 RNQASRPYSF YSSLISYEED QRQGAEPRKN FVKPNETKTY FWKVQHHMAP 1101 TKDEFDCKAW AYFSDVDLEK DVHSGLIGPL LVCHTNTLNP AHGRQVTVQE 1151 FALFFTIFDE TKSWYFTENM ERNCRAPCNI QMEDPTFKEN YRFHAINGYI 1201 MDTLPGLVMA QDQRIRWYLL SMGSNEMHS IHFSGHVFTV RKKEEYKMAL 1251 YNLYPGVFET VEMLPSKAGI WRVECLIGEH LHAGMSTLFL VYSNKCQTPL 1301 GMASGHIRDF QITASGQYGQ WAPKLARLHY SGSINAWSTK EPFSWIKVDL 1351 LAPMIIHGIK TQGARQKFSS LYISQFIIMY SLDGKKWQTY RGNSTGTLMV 1401 FFGNVDSSGI KHMFNPPIIARYIRLHPTH YSIRSTLRME LMGCDLNSCS 1451 MPLGMESKAI SDAQITASSY FTNMFATWSP SKARLHLQGR SNAWRPQVNN 1501 PKEWLQVDFQ KTMKVTGVTT QGVKSLLTSM YVKEFLISSS QDGHQWTLFF 1551 QNGKVKVFQG NQDSFTPVVN SLDPPLLTRY LRIHPQSWVH QIALRMEVLG 1601 CEAQDLYDKT HTCPPCPAPE LLGGPSVFLF PPKPKDTLMI SRTPEVTCVV 1651 VDVSHEDPEV KFNWYVDGVE VHNAKTKPRE EQYNSTYRVV SVLTVLHQDW 1701 LNGKEYKCKV SNKALPAPIE KTISKAKGQP REPQVYTLPP SRDELTKNQV 1751 SLTCLVKGFY PSDIAVEWES NGQPENNYKT TPPVLDSDGS FFLYSKLTVD 1801 KSRWQQGNVF SCSVMHEALH NHYTQKSLSL SPGK*
Secuencia de nucleótidos de FVIII 283 (FVIII 169 con mutación triple IHH) (SEQ ID NO: 160)
1 ATGCA AATAG AGCTC TCCAC CTGCT TCTTT CTGTG CCTTT TGCGA TTCTG 51 C U T A GTGCC ACCAG AAGAT ACTAC CTGGG TGCAG TGGAA CTGTC ATGGG 101 ACTAT ATGCA AAGTG ATCTC GGTGA GCTGC CTGTG GACGC AAGAT TTCCT 151 CCTAG AGTGC CAAAA TCTTT TCCAT TCAAC ACCTC AGTCG TGTAC AAAAA 201 GACTC TGTTT GTAGA ATTCA CGGAT CACCT TTTCA ACATC GCTAA GCCAA 251 GGCCA CCCTG GATGG GTCTG CTAGG TCCTA CCATC CAGGC TGAGG TTTAT 301 GATAC AGTGG TCATT ACACT TAAGA ACATG GCTTC CCATC CTGTC AGTCT 351 TCATG CTGTT GGTGT ATCCT ACTGG AAAGC TTCTG AGGGA GCTGA ATATG 401 ATGAT CAGAC CAGTC AAAGG GAGAA AGAAG ATGAT AAAGT CTTCC CTGGT 451 GGAAG CCATA CATAT GTCTG GCAGG TCCTG AAAGA GAATG GTCCA ATGGC 501 CTCTG ACCCA CTGTG CCTTA CCTAC TCATA TCTTT CTCAT GTGGA CCTGG 551 TAAAA GACTT GAATT CAGGC CTCAT TGGAG CCCTA CTAGT ATGTA GAGAA 601 GGGAG TCTGG CCAAG GAAAA GACAC AGACC TTGCA CAAAT TTATA CTACT 651 TTTTG CTGTA TTTGA TGAAG GGAAA AGTTG GCACT CAGAA ACAAA GAACT 701 CCTTG ATGCA GGATA GGGAT GCTGC ATCTG CTCGG GCCTG GCCTA AAATG 751 CACAC AGTCA ATGGT TATGT AAACA GGTCT CTGCC AGGTC TGATT GGATG 801 CCACA GGAAA TCAGT CTATT GGCAT GTGAT TGGAA TGGGC ACCAC TCCTG 851 AAGTG CACTC AATAT TCCTC GAAGG TCACA CATTT CTTGT GAGGA ACCAT 901 CGCCA GGCTA GCTTG GAAAT CTCGC CAATA ACTTT CCTTA CTGCT CAAAC 951 ACTCT TGATG GACCT TGGAC AGTTT CTACT GTTTT GTCAT ATCTC TTCCC 1001 ACCAA CATGA TGGCA TGGAA GCTTA TGTCA AAGTA GACAG CTGTC CAGAG 1051 GAACC CCAAC TACGA ATGAA AAATA ATGAA GAAGC GGAAG ACTAT GATGA 1101 TGATC TTACT GATTC TGAAA TGGAT GTGGT CAGGT TTGAT GATGA CAACT 1151 CTCCT TCCTT TATCC AAATT CGCTC AGTTG CCAAG AAGCA TCCTA AAACT 1201 TGGGT ACATT ACATT GCTGC TGAAG AGGAG GACTG GGACT ATGCT CCCTT 1251 AGTCC TCGCC CCCGA TGACA GAAGT TATAA AAGTC AATAT TTGAA CAATG 1301 GCCCT CAGCG GATTG GTAGG AAGTA CAAAA AAGTC CGATT TATGG CATAC 1351 ACAGA TGAAA CCTTT AAGAC TCGTG AAGCT ATTCA GCATG AATCA GGAAT 1401 CTTGG GACCT TTACT TTATG GGGAA GTTGG AGACA CACTG TTGAT TATAT 1451 TTAAG AATCA AGCAA GCAGA CCATA TAACA TCTAC CCTCA CGGAA TCACT 1501 GATGT CCGTC CTTTG TATTC AAGGA GATTA CCAAA AGGTG TAAAA CATTT 1551 GAAGG ATTTT CCAAT TCTGC CAGGA GAAAT ATTCA AATAT AAATG GACAG 1601 TGACT GTAGA AGATG GGCCA ACTAA ATCAG ATCCT CGGTG CCTGA CCCGC 1651 TATTA CTCTA GTTTC GTTAA TATGG AGAGA GATCT AGCTT CAGGA CTCAT 1701 TGGCC CTCTC CTCAT CTGCT ACAAA GAATC TGTAG ATCAA AGAGG AAACC 1751 AGATA ATGTC AGACA AGAGG AATGT CATCC TGTTT TCTGT ATTTG ATGAG 1801 AACCG AAGCT GGTAC CTCAC AGAGA ATATA CAACG CTTTC TCCCC AATCC 1851 AGCTG GAGTG CAGCT TGAGG ATCCA GAGTT CCAAG CCTCC AACAT CATGC 1901 ACAGC ATCAA TGGCT ATGTT TTTGA TAGTT TGCAG TTGTC AGTTT GTTTG 1951 CATGA GGTGG CATAC TGGTA CATTC TAAGC ATTGG AGCAC AGACT GACTT 2001 CCTTT CTGTC TTCTT CTCTG GATAT ACCTT CAAAC ACAAA ATGGT CTATG 2051 AAGAC ACACT CACCC TATTC CCATT CTCAG GAGAA ACTGT CTTCA TGTCG 2101 ATGGA AAACC CAGGT CTATG GATTC TGGGG TGCCA CAACT CAGAC TTTCG 2151 GAACA GAGGC ATGAC CGCCT TACTG AAGGT TTCTA GTTGT GACAA GAACA 2201 CTGGT GATTA TTACG AGGAC AGTTA TGAAG ATATT TCAGC ATACT TGCTG 2251 AGTAA AAACA ATGCC ATTGA ACCAA GAAGC TTCTC TCAAA ACGGC GCGCC 2301 AGGTA CCTCA GAGTC TGCTA CCCCC GAGTC AGGGC CAGGA TCAGA GCCAG 2351 CCACC TCCGG GTCTG AGACA CCCGG GACTT CCGAG AGTGC CACCC CTGAG 2401 TCCGG ACCCG GGTCC GAGCC CGCCA CTTCC GGCTC CGAAA CTCCC GGCAC 2451 AAGCG AGAGC GCTAC CCCAG AGTCA GGACC AGGAA CATCT ACAGA GCCCT 2501 CTGAA GGCTC CGCTC CAGGG TCCCC AGCCG GCAGT CCCAC TAGCA CCGAG 2551 GAGGG AACCT CTGAA AGCGC CACAC CCGAA TCAGG GCCAG GGTCT GAGCC 2601 TGCTA CCAGC GGCAG CGAGA CACCA GGCAC CTCTG AGTCC GCCAC ACCAG 2651 AGTCC GGACC CGGAT CTCCC GCTGG GAGCC CCACC TCCAC TGAGG AGGGA 2701 TCTCC TGCTG GCTCT CCAAC ATCTA CTGAG GAAGG TACCT CAACC GAGCC 2751 ATCCG AGGGA TCAGC TCCCG GCACC TCAGA GTCGG CAACC CCGGA GTCTG 2801 GACCC GGAAC TTCCG AAAGT GCCAC ACCAG AGTCC GGTCC CGGGA CTTCA 2851 GAATC AGCAA CACCC GAGTC CGGCC CTGGG TCTGA ACCCG CCACA AGTGG 2901 TAGTG AGACA CCAGG ATCAG AACCT GCTAC CTCAG GGTCA GAGAC ACCCG 2951 GATCT CCGGC AGGCT CACCA ACCTC CACTG AGGAG GGCAC CAGCA CAGAA 3001 CCAAG CGAGG GCTCC GCACC CGGAA CAAGC ACTGA ACCCA GTGAG GGTTC 3051 AGCAC CCGGC TCTGA GCCGG CCACA AGTGG CAGTG AGACA CCCGG CACTT 3101 CAGAG AGTGC CACCC CCGAG AGTGG CCCAG GCACT AGTAC CGAGC CCTCT 3151 GAAGG CAGTG CGCCA GCCTC GAGCC CACCA GTCTT GAAAC GCCAT CAAGC 3201 TGAAA TAACT CGTAC TACTC TTCAG TCAGA TCAAG AGGAA ATCGA TTATG 3251 ATGAT ACCAT ATCAG TTGAA ATGAA GAAGG AAGAT TTTGA CATTT ATGAT 3301 GAGGA TGAAA ATCAG AGCCC CCGCA GCTTT CAAAA GAAAA CACGA CACTA 3351 TTTTA TTGCT GCAGT GGAGA GGCTC TGGGA TTATG GGATG AGTAG CTCCC 3401 CACAT GTTCT AAGAA ACAGG GCTCA GAGTG GCAGT GTCCC TCAGT TCAAG 3451 AAAGT TGTTT TCCAG GAATT TACTG ATGGC TCCTT TACTC AGCCC TTATA 3501 CCGTG GAGAA CTAAA TGAAC ATTTG GGACT CCTGG GGCCA TATAT AAGAG 3551 CAGAA GTTGA AGATA ATATC ATGGT AACTT TCAGA AATCA GGCCT CTCGT 3601 CCCTA TTCCT TCTAT TCTAG CCTTA TTTCT TATGA GGAAG ATCAG AGGCA 3651 AGGAG CAGAA CCTAG AAAAA ACTTT GTCAA GCCTA ATGAA ACCAA AACTT 3701 ACTTT TGGAA AGTGC AACAT CATAT GGCAC CCACT AAAGA TGAGT TTGAC 3751 TGCAA AGCCT GGGCT TATTT CTCTG ATGTT GACCT GGAAA AAGAT GTGCA 3801 CTCAG GCCTG ATTGG ACCCC TTCTG GTCTG CCACA CTAAC ACACT GAACC 3851 CTGCT CATGG GAGAC AAGTG ACAGT ACAGG AATTT GCTCT GTTTT TCACC 3901 ATCTT TGATG AGACC AAAAG CTGGT ACTTC ACTGA AAATA TGGAA AGAAA 3951 CTGCA GGGCT CCCTG CAATA TCCAG ATGGA AGATC CCACT TTTAA AGAGA 4001 ATTAT CGCTT CCATG CAATC AATGG CTACA TAATG GATAC ACTAC CTGGC 4051 TTAGT AATGG CTCAG GATCA AAGGA TTCGA TGGTA TCTGC TCAGC ATGGG 4101 CAGCA ATGAA AACAT CCATT CTATT CATTT CAGTG GACAT GTGTT CACTG 4151 TACGA AAAAA AGAGG AGTAT AAAAT GGCAC TGTAC AATCT CTATC CAGGT 4201 GTTTT TGAGA CAGTG GAAAT GTTAC CATCC AAAGC TGGAA TTTGG CGGGT 4251 GGAAT GCCTT ATTGG CGAGC ATCTA CATGC TGGGA TGAGC ACACT TTTTC 4301 TGGTG TACAG CAATA AGTGT CAGAC TCCCC TGGGA ATGGC TTCTG GACAC 4351 ATTAG AGATT TTCAG ATTAC AGCTT CAGGA CAATA TGGAC AGTGG GCCCC 4401 AAAGC TGGCC AGACT TCATT ATTCC GGATC AATCA ATGCC TGGAG CACCA 4451 AGGAG CCCTT TTCTT GGATC AAGGT GGATC TGTTG GCACC AATGA TTATT 4501 CACGG CATCA AGACC CAGGG TGCCC GTCAG AAGTT CTCCA GCCTC TACAT 4551 CTCTC AGTTT ATCAT CATGT ATAGT CTTGA TGGGA AGAAG TGGCA GACTT 4601 ATCGA GGAAA TTCCA CTGGA ACCTT AATGG TCTTC TTTGG CAATG TGGAT 4651 TCATC TGGGA TAAAA CACAA TATTT TTAAC CCTCC AATTA TTGCT CGATA 4701 CATCC GTTTG CACCC AACTC ATTAT AGCAT TCGCA GCACT CTTCG CATGG 4751 AGTTG ATGGG CTGTG ATTTA AATAG TTGCA GCATG CCATT GGGAA TGGAG 4801 AGTAA AGCAA TATCA GATGC ACAGA TTACT GCTTC ATCCT ACTTT ACCAA 4851 TATGT TTGCC ACCTG GTCTC CTTCA AAAGC TCGAC TTCAC CTCCA AGGGA 4901 GGAGT AATGC CTGGA GACCT CAGGT GAATA ATCCA AAAGA GTGGC TGCAA 4951 GTGGA CTTCC AGAAG ACAAT GAAAG TCACA GGAGT AACTA CTCAG GGAGT 5001 AAAAT CTCTG CTTAC CAGCA TGTAT GTGAA GGAGT TCCTC ATCTC CAGCA 5051 GTCAA GATGG CCATC AGTGG AC'TCT CTTTT TTCAG AATGG CAAAG TAAAG 5101 GTTTT TCAGG GAAAT CAAGA CTCCT TCACA CCTGT GGTGA AC'TCT CTAGA 5151 CCCAC CGTTA CTGAC TCGCT ACCTT CGAAT TCACC CCCAG AGTTG GGTGC 5201 ACCAG ATTGC CCTGA GGATG GAGGT TCTGG GCTGC GAGGC ACAGG ACCTC 5251 TACGA CAAAA CTCAC ACATG CCCAC CGTGC CCAGC TCCAG AACTC CTGGG 5301 CGGAC CGTCA GTCTT CCTCT TCCCC CCAAA ACCCA AGGAC ACCCT CATGG 5351 CCTCC CGGAC CCCTG AGGTC ACATG CGTGG TGGTG GACGT GAGCC ACGAA 5401 GACCC TGAGG TCAAG TTCAA CTGGT ACGTG GACGG CGTGG AGGTG CATAA 5451 TGCCA AGACA AAGCC GCGGG AGGAG CAGTA CAACA GCACG TACCG TGTGG 5501 TCAGC GTCCT CACCG TCCTG GCCCA GGACT GGCTG AATGG CAAGG AGTAC 5551 AAGTG CAAGG TCTCC AACAA AGCCC TCCCA GCCCC CATCG AGAAA ACCAT 5601 CTCCA AAGCC AAAGG GCAGC CCCGA GAACC ACAGG TGTAC ACCCT GCCCC 5651 CATCC CGGGA TGAGC TGACC AAGAA CCAGG TCAGC CTGAC CTGCC TGGTC 5701 AAAGG CTTCT ATCCC AGCGA CATCG CCGTG GAGTG GGAGA GCAAT GGGCA 5751 GCCGG AGAAC AACTA CAAGA CCACG CCTCC CGTGT TGGAC TCCGA CGGCT 5801 CCTTC TTCCT CTACA GCAAG CTCAC CGTGG ACAAG AGCAG GTGGC AGCAG 5851 GGGAA CGTCT TCTCA TGCTC CGTGA TGCAT GAGGC TCTGC ACAAC GCCTA 5901 CACGC AGAAG AGCCT CTCCC TGTCT CCGGG TAAAT GA
Secuencia de proteína de FVIII 283 (FVIII 169 con mutación triple IHH) (SEQ ID NO: 161)
1 MQIELSTCFF LCLLRFCFSA TRRYYLGAVE LSWDYMQSDL GELPVDARFP 51 PRVPKSFPFN TSVVYKKTLF VEFTDHLFNIAKPRPPWMGL LGPTIQAEVY 101 DTVVITLKNM ASHPVSLHA V GVS YWKASEG AEYDDQTSQR EKEDDK VFPG 151 GSHTYVWQVL KENGPMASDP LCLTYSYLSH VDLVKDLNSG LIGALLVCRE 201 GSLAKEKTQT LHKFILLFAV FDEGKSWHSE TKNSLMQDRD AASARAWPKM 251 HTVNGYVNRS LPGLIGCHRK SVYWHVIGMG TTPEVHSIFL EGHTFLVRNH 301 RQASLEISPI TFLTAQTLLM DLGQFLLFCH ISSHQHDGME AYVKVDSCPE 351 EPQLRMKNNE EAEDYDDDLT DSEMDVVRFD DDNSPSFIQIRSVAKKHPKT 401 WVHYIAAEEE DWDYAPLVLA PDDRSYKSQY LNNGPQRIGR KYKKVRFMAY 451 TDETFKTREAIQHESGILGP LLYGEVGDTL LIIFKNQASR PYNIYPHGIT 501 DVRPLYSRRL PKGVKHLKDF PILPGEIFKY KWTVTVEDGP TKSDPRCLTR 551 YYSSFVNMER DLASGLIGPL LICYKESVDQ RGNQIMSDKR NVILFSVFDE 601 NRSWYLTENI QRFLPNPAGV QLEDPEFQAS NIMHSINGYV FDSLQLSVCL 651 HEVAYWYILS IGAQTDFLSV FFSGYTFKHK MVYEDTLTLF PFSGETVFMS 701 MENPGLWILG CHNSDFRNRG MTALLKVSSC DKNTGDYYED SYEDISAYLL 751 SKNNAIEPRS FSQNGAPGTS ESATPESGPG SEPATSGSET PGTSESATPE 801 SGPGSEPATS GSETPGTSES ATPESGPGTS TEPSEGSAPG SPAGSPTSTE 851 EGTSESATPE SGPGSEPATS GSETPGTSES ATPESGPGSP AGSPTSTEEG 901 SPAGSPTSTE EGTSTEPSEG SAPGTSESAT PESGPGTSES ATPESGPGTS 951 ESATPESGPG SEPATSGSET PGSEPATSGS ETPGSPAGSP TSTEEGTSTE 1001 PSEGSAPGTS TEPSEGSAPG SEPATSGSET PGTSESATPE SGPGTSTEPS 1051 EGSAPASSPP VLKRHQAEIT RTTLQSDQEE IDYDDTISVE MKKEDFDIYD 1101 EDENQSPRSF QKKTRHYFIA AVERLWDYGM SSSPHVLRNR AQSGSVPQFK 1151 KVVFQEFTDG SFTQPL YRGE LNEHLGLLGP YIRAEVEDN1 MVTFRNQASR 1201 PYSFYSSLIS YEEDQRQGAE PRKNFVKPNE TKTYFWKVQH HMAPTKDEFD 1251 CKAWAYFSDV DLEKDVHSGL IGPLLVCHTN TLNPAHGRQV TVQEFALFFT 1301 IFDETKSWYF TENMERNCRA PCMQMEDPT FKENYRFHAI NGYIMDTLPG 1351 LVMAQDQRIR WYLLSMGSNE MHSIHFSGH WTVRKKEEY KMALYNLYPG 1401 VFETVEMLPS KAGIWRVECL IGEHLHAGMS TLFLVYSNKC QTPLGMASGH 1451 IRDFQITASG QYGQWAPKLA RLHYSGSINA WSTKEPFSWI KVDLLAPMII 1501 HGIKTQGARQ KFSSLYISQF IIMYSLDGKK WQTYRGNSTG TLMVFFGNVD 1551 SSGIKHNIFN PPIIARYIRL HPTHYSIRST LRMELMGCDL NSCSMPLGME 1601 SKAISDAQIT ASSYFTNMFA TWSPSKARLH LQGRSNAWRP QVNNPKEWLQ 1651 VDFQKTMKVT GVTTQGVKSL LTSMYVKEFL ISSSQDGHQW TLFFQNGKVK 1701 VFQGNQDSFT PVVNSLDPPL LTRYLRIHPQ SWVHQIALRM EVLGCEAQDL 1751 YDKTHTCPPC PAPELLGGPS VFLFPPKPKD TLMASRTPEV TC VVVDVSHE 1801 DPEVKFNWYV DGVEVHNAKT KPREEQYNST YRVVSVLTVL AQDWLNGKEY 1851 KCKVSNKALP APIEKTISKA KGQPREPQVY TLPPSRDELT KNQVSLTCLV 1901 KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPVLD SDGSFFLYSK LTVDKSRWQQ 1951 GNVFSCSVMH EALHNAYTQK SLSLSPGK*
Secuencia de nucleótidos de pSYNFVIII 010-(FVIIIFc cadena doble) (SEQ ID NO: 162)
1 ATGCAAATAG AGCTCTCCAC CTGCTTCTTT CTGTGCCTTT TGCGATTCTG 51 CTTTAGTGCC ACCAGAAGAT ACTACCTGGG TGCAGTGGAA CTGTCATGGG 101 ACTATATGCA AAGTGATCTC GGTGAGCTGC CTGTGGACGC AAGATTTCCT 151 CCTAGAGTGC CAAAATCTTT TCCATTCAAC ACCTCAGTCG TGTACAAAAA 201 GACTCTGTTT GTAGAATTCA CGGATCACCT TTTCAACATC GCTAAGCCAA 251 GGCCACCCTG GATGGGTCTG CTAGGTCCTA CCATCCAGGC TGAGGTTTAT 301 GATACAGTGG TCATTACACT TAAGAACATG GCTTCCCATC CTGTCAGTCT 351 TCATGCTGTT GGTGTATCCT ACTGGAAAGC TTCTGAGGGA GCTGAATATG 401 ATGATCAGAC CAGTCAAAGG GAGAAAGAAG ATGATAAAGT CTTCCCTGGT 451 GGAAGCCATA CATATGTCTG GCAGGTCCTG AAAGAGAATG GTCCAATGGC 501 CTCTGACCCA CTGTGCCTTA CCTACTCATA TCTTTCTCAT GTGGACCTGG 551 TAAAAGACTT GAATTCAGGC CTCATTGGAG CCCTACTAGT ATGTAGAGAA 601 GGGAGTCTGG CCAAGGAAAA GACACAGACC TTGCACAAAT TTATACTACT 651 TTTTGCTGTA TTTGATGAAG GGAAAAGTTG GCACTCAGAA ACAAAGAACT 701 CCTTGATGCA GGATAGGGAT GCTGCATCTG CTCGGGCCTG GCCTAAAATG 751 CACACAGTCA ATGGTTATGT AAACAGGTCT CTGCCAGGTC TGATTGGATG 801 CCACAGGAAA TCAGTCTATT GGCATGTGAT TGGAATGGGC ACCACTCCTG 851 AAGTGCACTC AATATTCCTC GAAGGTCACA CATTTCTTGT GAGGAACCAT 901 CGCCAGGCGT CCTTGGAAAT CTCGCCAATA ACTTTCCTTA CTGCTCAAAC 951 ACTCTTGATG GACCTTGGAC AGTTTCTACT GTTTTGTCAT ATCTCTTCCC 1001 ACCAACATGA TGGCATGGAA GCTTATGTCA AAGTAGACAG CTGTCCAGAG 1051 GAACCCCAAC TACGAATGAA AAATAATGAA GAAGCGGAAG ACTATGATGA 1101 TGATCTTACT GATTCTGAAA TGGATGTGGT CAGGTTTGAT GATGACAACT 1151 CTCCTTCCTT TATCCAAATT CGCTCAGTTG CCAAGAAGCA TCCTAAAACT 1201 TGGGTACATT ACATTGCTGC TGAAGAGGAG GACTGGGACT ATGCTCCCTT 1251 AGTCCTCGCC CCCGATGACA GAAGTTATAA AAGTCAATAT TTGAACAATG 1301 GCCCTCAGCG GATTGGTAGG AAGTACAAAA AAGTCCGATT TATGGCATAC 1351 ACAGATGAAA CCTTTAAGAC TCGTGAAGCT ATTCAGCATG AATCAGGAAT 1401 CTTGGGACCT TTACTTTATG GGGAAGTTGG AGACACACTG TTGATTATAT 1451 TTAAGAATCA AGCAAGCAGA CCATATAACA TCTACCCTCA CGGAATCACT 1501 GATGTCCGTC CTTTGTATTC AAGGAGATTA CCAAAAGGTG TAAAACATTT 1551 GAAGGATTTT CCAATTCTGC CAGGAGAAAT ATTCAAATAT AAATGGACAG 1601 TGACTGTAGA AGATGGGCCA ACTAAATCAG ATCCTCGGTG CCTGACCCGC 1651 TATTACTCTA GTTTCGTTAA TATGGAGAGA GATCTAGCTT CAGGACTCAT 1701 TGGCCCTCTC CTCATCTGCT ACAAAGAATC TGTAGATCAA AGAGGAAACC 1751 AGATAATGTC AGACAAGAGG AATGTCATCC TGTTTTCTGT ATTTGATGAG 1801 AACCGAAGCT GGTACCTCAC AGAGAATATA CAACGCTTTC TCCCCAATCC 1851 AGCTGGAGTG CAGCTTGAGG ATCCAGAGTT CCAAGCCTCC AACATCATGC 1901 ACAGCATCAA TGGCTATGTT TTTGATAGTT TGCAGTTGTC AGTTTGTTTG 1951 CATGAGGTGG CATACTGGTA CATTCTAAGC ATTGGAGCAC AGACTGACTT 2001 CCTTTCTGTC TTCTTCTCTG GATATACCTT CAAACACAAA ATGGTCTATG 2051 AAGACACACT CACCCTATTC CCATTCTCAG GAGAAACTGT CTTCATGTCG 2101 ATGGAAAACC CAGGTCTATG GATTCTGGGG TGCCACAACT CAGACTTTCG 2151 GAACAGAGGC ATGACCGCCT TACTGAAGGT TTCTAGTTGT GACAAGAACA 2201 CTGGTGATTA TTACGAGGAC AGTTATGAAG ATATTTCAGC ATACTTGCTG 2251 AGTAAAAACA ATGCCATTGA ACCAAGAAGC TTCTCTCAAA ACCCACCAGT 2301 CTTGAAACGC CATCAACGGG AAATAACTCG TACTACTCTT CAGTCAGATC 2351 AAGAGGAAAT TGACTATGAT GATACCATAT CAGTTGAAAT GAAGAAGGAA 2401 GATTTTGACA TTTATGATGA GGATGAAAAT CAGAGCCCCC GCAGCTTTCA 2451 AAAGAAAACA CGACACTATT TTATTGCTGC AGTGGAGAGG CTCTGGGATT 2501 ATGGGATGAG TAGCTCCCCA CATGTTCTAA GAAACAGGGC TCAGAGTGGC 2551 AGTGTCCCTC AGTTCAAGAA AGTTGTTTTC CAGGAATTTA CTGATGGCTC 2601 CTTTACTCAG CCCTTATACC GTGGAGAACT AAATGAACAT TTGGGACTCC 2651 TGGGGCCATA TATAAGAGCA GAAGTTGAAG ATAATATCAT GGTAACTTTC 2701 AGAAATCAGG CCTCTCGTCC CTATTCCTTC TATTCTAGCC TTATTTCTTA 2751 TGAGGAAGAT CAGAGGCAAG GAGCAGAACC TAGAAAAAAC TTTGTCAAGC 2801 CTAATGAAAC CAAAACTTAC TTTTGGAAAG TGCAACATCA TATGGCACCC 2851 ACTAAAGATG AGTTTGACTG CAAAGCCTGG GCTTATTTCT CTGATGTTGA 2901 CCTGGAAAAA GATGTGCACT CAGGCCTGAT TGGACCCCTT CTGGTCTGCC 2951 ACACTAACAC ACTGAACCCT GCTCATGGGA GACAAGTGAC AGTACAGGAA 3001 TTTGCTCTGT TTTTCACCAT CTTTGATGAG ACCAAAAGCT GGTACTTCAC 3051 TGAAAATATG GAAAGAAACT GCAGGGCTCC CTGCAATATC CAGATGGAAG 3101 ATCCCACTTT TAAAGAGAAT TATCGCTTCC ATGCAATCAA TGGCTACATA 3151 ATGGATACAC TACCTGGCTT AGTAATGGCT CAGGATCAAA GGATTCGATG 3201 GTATCTGCTC AGCATGGGCA GCAATGAAAA CATCCATTCT ATTCATTTCA 3251 GTGGACATGT GTTCACTGTA CGAAAAAAAG AGGAGTATAA AATGGCACTG 3301 TACAATCTCT ATCCAGGTGT TTTTGAGACA GTGGAAATGT TACCATCCAA 3351 AGCTGGAATT TGGCGGGTGG AATGCCTTAT TGGCGAGCAT CTACATGCTG 3401 GGATGAGCAC ACTTTTTCTG GTGTACAGCA ATAAGTGTCA GACTCCCCTG 3451 GGAATGGCTT CTGGACACAT TAGAGATTTT CAGATTACAG CTTCAGGACA 3501 ATATGGACAG TGGGCCCCAA AGCTGGCCAG ACTTCATTAT TCCGGATCAA 3551 TCAATGCCTG GAGCACCAAG GAGCCCTTTT CTTGGATCAA GGTGGATCTG 3601 TTGGCACCAA TGATTATTCA CGGCATCAAG ACCCAGGGTG CCCGTCAGAA 3651 GTTCTCCAGC CTCTACATCT CTCAGTTTAT CATCATGTAT AGTCTTGATG 3701 GGAAGAAGTG GCAGACTTAT CGAGGAAATT CCACTGGAAC CTTAATGGTC 3751 TTCTTTGGCA ATGTGGATTC ATCTGGGATA AAACACAATA TTTTTAACCC 3801 TCCAATTATT GCTCGATACA TCCGTTTGCA CCCAACTCAT TATAGCATTC 3851 GCAGCACTCT TCGCATGGAG TTGATGGGCT GTGATTTAAA TAGTTGCAGC 3901 ATGCCATTGG GAATGGAGAG TAAAGCAATA TCAGATGCAC AGATTACTGC 3951 TTCATCCTAC TTTACCAATA TGTTTGCCAC CTGGTCTCCT TCAAAAGCTC 4001 GACTTCACCT CCAAGGGAGG AGTAATGCCT GGAGACCTCA GGTGAATAAT 4051 CCAAAAGAGT GGCTGCAAGT GGACTTCCAG AAGACAATGA AAGTCACAGG 4101 AGTAACTACT CAGGGAGTAA AATCTCTGCT TACCAGCATG TATGTGAAGG 4151 AGTTCCTCAT CTCCAGCAGT CAAGATGGCC ATCAGTGGAC TCTCTTTTTT 4201 CAGAATGGCA AAGTAAAGGT TTTTCAGGGA AATCAAGACT CCTTCACACC 4251 TGTGGTGAAC TCTCTAGACC CACCGTTACT GACTCGCTAC CTTCGAATTC 4301 ACCCCCAGAG TTGGGTGCAC CAGATTGCCC TGAGGATGGA GGTTCTGGGC 4351 TGCGAGGCAC AGGACCTCTA CGACAAAACT CACACATGCC CACCGTGCCC 4401 AGCTCCAGAA CTCCTGGGCG GACCGTCAGT CTTCCTCTTC CCCCCAAAAC 4451 CCAAGGACAC CCTCATGATC TCCCGGACCC CTGAGGTCAC ATGCGTGGTG 4501 GTGGACGTGA GCCACGAAGA CCCTGAGGTC AAGTTCAACT GGTACGTGGA 4551 CGGCGTGGAG GTGCATAATG CCAAGACAAA GCCGCGGGAG GAGCAGTACA 4601 ACAGCACGTA CCGTGTGGTC AGCGTCCTCA CCGTCCTGCA CCAGGACTGG 4651 CTGAATGGCA AGGAGTACAA GTGCAAGGTC TCCAACAAAG CCCTCCCAGC 4701 CCCCATCGAG AAAACCATCT CCAAAGCCAA AGGGCAGCCC CGAGAACCAC 4751 AGGTGTACAC CCTGCCCCCA TCCCGGGATG AGCTGACCAA GAACCAGGTC 4801 AGCCTGACCT GCCTGGTCAA AGGCTTCTAT CCCAGCGACA TCGCCGTGGA 4851 GTGGGAGAGC AATGGGCAGC CGGAGAACAA CTACAAGACC ACGCCTCCCG 4901 TGTTGGACTC CGACGGCTCC TTCTTCCTCT ACAGCAAGCT CACCGTGGAC 4951 AAGAGCAGGT GGCAGCAGGG GAACGTCTTC TCATGCTCCG TGATGCATGA 5001 GGCTCTGCAC AACCACTACA CGCAGAAGAG CCTCTCCCTG TCTCCGGGTA 5051 AATGA
Secuencia de proteína de<p>SYNFVIII 010-(FVIIIF<c>cadena doble) (SEQ ID NO: 163)
1 MQIELSTCFF LCLLRFCFSA TRRYYLGAVE LSWDYMQSDL GELPVDARFP 51 PRW KSFPFN TSVVYKKTLF VEFTDHLFM AKPRPPWMGL LGPTIQAEVY
101 DTVVITLKNM ASHPVSLHAV GVSYWKASEG AEYDDQTSQR EKEDDKVFPG 151 GSHTYVWQVL KENGPMASDP LCLTYSYLSH VDLVKDLNSG LIGALLVCRE 201 GSLAKEKTQT LHKFILLFAV FDEGKSWHSE TKNSLMQDRD AASARAWPKM 251 HTVNGYVNRS LPGLIGCHRK SVYWHVIGMG TTPEVHSIFL EGHTFLVRNH 301 RQASLEISPI TFLTAQTLLM DLGQFLLFCH ISSHQHDGME AYVKVDSCPE 351 EPQLRMKNNE EAEDYDDDLT DSEMDVVRFD DDNSPSFIQI RSVAKKHPKT 401 WVHYIAAEEE DWDYAPLVLA PDDRSYKSQY LNNGPQRIGR KYKKVRFMAY 451 TDETFKTREAIQHESGILGP LLYGEVGDTL LIIFKNQASR PYNIYPHGIT
501 DVRPLYSRRL PKGVKHLKDF PILPGEIFKY KWTVTVEDGP TKSDPRCLTR
551 YYSSFVNMER DLASGLIGPL LICYKESVDQ RGNQIMSDKR NVILFSVFDE
601 NRSWYLTENI QRFLPNPAGV QLEDPEFQAS MMHSINGYV FDSLQLSVCL
651 HEVAYWYILS IGAQTDFLSV FFSGYTFKHK MVYEDTLTLF PFSGETVFMS 701 MENPGLWILG CHNSDFRNRG MTALLKVSSC DKNTGDYYED SYEDISAYLL 751 SKNNAIEPRS FSQNPPVLKR HQREITRTTL QSDQEEIDYD DTISVEMKKE
801 DFDIYDEDEN QSPRSFQKKT RHYFIAAVER LWDYGMSSSP HVLRNRAQSG 851 SVPQFKKVVF QEFTDGSFTQ PLYRGELNEH LGLLGPYIRA EVEDMMVTF 901 RNQASRPYSF YSSLISYEED QRQGAEPRKN FVKPNETKTY FWKVQHHMAP 951 TKDEFDCKAW AYFSDVDLEK DVHSGLIGPL LVCHTNTLNP AHGRQVTVQE 1001 FALFFTIFDE TKSWYFTENM ERNCRAPCNI QMEDPTFKEN YRFHAINGYI 1051 MDTLPGLVMA QDQRIRWYLL SMGSNENIHS IHFSGHW TV RKKEEYKMAL 1101 YNLYPGVFET VEMLPSKAGI WRVECLIGEH LHAGMSTLFL VYSNKCQTPL 1151 GMASGHIRDF QITASGQYGQ WAPKLARLHY SGSINAWSTK EPFSWIKVDL 1201 LAPMIIHGIK TQGARQKFSS LYISQFIIMY SLDGKKWQTY RGNSTGTLMV 1251 FFGNVDSSGI KHNIFNPPII ARYIRLHPTH YSIRSTLRME LMGCDLNSCS
1301 MPLGMESKAI SDAQITASSY FTNMFATWSP SKARLHLQGR SNAWRPQVNN 1351 PKEWLQVDFQ KTMKVTGVTT QGVKSLLTSM YVKEFLISSS QDGHQWTLFF 1401 QNGKVKVFQG NQDSFTPVVN SLDPPLLTRY LRIHPQSWVH QIALRMEVLG 1451 CEAQDLYDKT HTCPPCPAPE LLGGPSVFLF PPKPKDTLMI SRTPEVTCVV
1501 VDVSHEDPEV KFNWYVDGVE VHNAKTKPRE EQYNSTYRVV SVLTVLHQDW 1551 LNGKEYKCKV SNKALPAPIE KTISKAKGQP REPQVYTLPP SRDELTKNQV 1601 SLTCLVKGFY PSDIAVEWES NGQPENNYKT TPPVLDSDGS FFLYSKLTVD 1651 KSRWQQGNVF SCSVMHEALH NHYTQKSLSL SPGK*
Secuencia de proteína de FVIII 195 (FVIIIFc cadena doble con dos XTEN 144 AE en Ios aminoácidos 1656 y 1900) (SEQ ID NO: 73)
1 MQIELSTCFF LCLLRFCFSA TRRYYLGAVE LSWDYMQSDL GELPVDARFP
51 PRWKSFPFN TSVVYKKTLF VEFTDHLFNIAKPRPPWMGL LGPTIQAEVY 101 DTVVITLKNM ASHPVSLHAV GVSYWKASEG AEYDDQTSQR EKEDDKVFPG 151 GSHTYVWQVL KENGPMASDP LCLTYSYLSH VDLVKDLNSG LIGALLVCRE 201 GSLAKEKTQT LHKFILLFAV FDEGKSWHSE TKNSLMQDRD AASARAWPKM 251 HTVNGYVNRS LPGLIGCHRK SVYWHVIGMG TTPEVHSIFL EGHTFLVRNH 301 RQASLEISPI TFLTAQTLLM DLGQFLLFCH ISSHQHDGME AYVKVDSCPE 351 EPQLRMKNNE EAEDYDDDLT DSEMDVVRFD DDNSPSFIQIRSVAKKHPKT 401 WVHYIAAEEE DWDYAPLVLA PDDRSYKSQY LNNGPQRIGR KYKKVRFMAY 451 TDETFKTREAIQHESGILGP LLYGEVGDTL LIIFKNQASR PYMYPHGIT
501 DVRPLYSRRL PKGVKHLKDF PILPGEIFKY KWTVTVEDGP TKSDPRCLTR 551 YYSSFVNMER DLASGLIGPL LICYKESVDQ RGNQIMSDKR NVILFSVFDE 601 NRSWYLTEM QRFLPNPAGV QLEDPEFQAS NIMHSINGYV FDSLQLSVCL 651 HEVAYWYILS IGAQTDFLSV FFSGYTFKHK MVYEDTLTLF PFSGETVFMS 701 MENPGLWILG CHNSDFRNRG MTALLKVSSC DKNTGDYYED SYEDISAYLL 751 SKNNAIEPRS FSQNPPVLKR HQREITRTTL QGAPGTPGSG TASSSPGASP 801 GTSSTGSPGA SPGTSSTGSP GASPGTSSTG SPGSSPSAST GTGPGTPGSG 851 TASSSPGASP GTSSTGSPGA SPGTSSTGSP GASPGTSSTG SPGSSTPSGA
901 TGSPGSSTPS GATGSPGASP GTSSTGSPAS SSDQEEIDYD DTISVEMKKE 951 DFDIYDEDEN QSPRSFQKKT RHYFIAAVER LWDYGMSSSP HVLRNRAQSG 1001 SVPQFKKVW QEFTDGSFTQ PLYRGELNEH LGLLGPYIRA EVEDMMVTF 1051 RNQASRPYSF YSSLISYEED QRQGAEPRKN FVKPNETKTY FWKVQHHMAP 1101 TKDEFDCKAW AYFSDVDLEK DVHSGLIGPL LVCHTNTLNP AHGRQVTVQE 1151 FALFFTIFDE TKSWYFTENM ERNCRGAPTS ESATPESGPG SEPATSGSET 1201 PGTSESATPE SGPGSEPATS GSETPGTSES ATPESGPGTS TEPSEGSAPG 1251 TSESATPESG PGSPAGSPTS TEEGSPAGSP TSTEEGSPAG SPTSTEEGTS
1301 ESATPESGPG TSTEPSEGSA PGASSAPCNI QMEDPTFKEN YRFHAINGYI 1351 MDTLPGLVMA QDQRIRWYLL SMGSNEMHS IHFSGHWTV RKKEEYKMAL 1401 YNLYPGVFET VEMLPSKAGI WRVECLIGEH LHAGMSTLFL VYSNKCQTPL 1451 GMASGHIRDF QITASGQYGQ WAPKLARLHY SGSINAWSTK EPFSWIKVDL 1501 LAPMIIHGIK TQGARQKFSS LYISQFIIMY SLDGKKWQTY RGNSTGTLMV 1551 FFGNVDSSGI KHMFNPPIIARYIRLHPTH YSIRSTLRME LMGCDLNSCS 1601 MPLGMESKAI SDAQITASSY FTNMFATWSP SKARLHLQGR SNAWRPQVNN 1651 PKEWLQVDFQ KTMKVTGVTT QGVKSLLTSM YVKEFLISSS QDGHQWTLFF 1701 QNGKVKVFQG NQDSFTPVVN SLDPPLLTRY LRIHPQSWVH QIALRMEVLG 1751 CEAQDLYDKT HTCPPCPAPE LLGGPSVFLF PPKPKDTLMI SRTPEVTCVV 1801 VDVSHEDPEV KFNWYVDGVE VHNAKTKPRE EQYNSTYRVV SVLTVLHQDW 1851 LNGKEYKCKV SNKALPAPIE KTISKAKGQP REPQVYTLPP SRDELTKNQV 1901 SLTCLVKGFY PSDIAVEWES NGQPENNYKT TPPVLDSDGS FFLYSKLTVD 1951 KSRWQQGNVF SCSVMHEALH NHYTQKSLSL SPGK*
Seouenoiaoión de proteína madura pSYN-FVIII-173 (SEQ ID NO: 72):
1 ATRRYYLGAV ELSW DYM QSD LGELPVDARF PPRVPKSFPF NTSVVYKKTL 51 FV EFTD H LFN IA K PRPPW M G LLGPTIQAEV YDTVVITLKN M ASHPVSLHA 101 VGVSYWKASE GAEYDDQTSQ REKEDDKVFP GGSHTYVW QV LKENGPMASD 151 PLCLTYSYLS HVDLVKDLNS GLIGALLVCR EGSLAKEKTQ TLHKFILLFA
201 W D EG K SW H S ETKNSLMQDR DAASARAWPK M HTVNGYVNR SLPGLIGCHR 251 KSVYW HVIGM GTTPEVHSIF LEGHTFLVRN HRQASLEISP ITFLTAQTLL
301 MDLGQFLLFC HISSHQHDGM EAYVKVDSCP EEPQLRMKNN EEAEDYDDDL 351 TDSEMDVVRF DDDNSPSFIQ IRSVAKKHPK TWVHYIAAEE EDWDYAPLVL 401 APDDRSYKSQ YLNNGPQRIG RKYKKVRFMA YTDETFKTRE AIQHESGELG
451 PLLYGEVGDT LLIIFKNQAS RPYM YPHGI TDVRPLYSRR LPKGVKHLKD
501 FPILPGEIFK YKWTVTVEDG PTKSDPRCLT RYYSSFVNME RDLASGLIGP
551 LLICYKESVD QRGNQIMSDK R N V ILFSW D ENRSW YLTENIQRFLPNPAG
601 VQLEDPEFQA SN1MHSINGY VFDSLQLSVC LHEVAYWYIL SIGAQTDFLS
651 W FSG Y TFK H KMVYEDTLTL FPFSG ETW M SMENPGLWIL GCHNSDFRNR 701 GMTALLKVSS CDKNTGDYYE DSYEDISAYL LSKNNAIEPR SFSQNGAPGT
751 SESATPESGP GSEPATSGSE TPGTSESATP ESGPGSEPAT SGSETPGTSE
801 SATPESGPGT STEPSEGSAP GSPAGSPTST EEGTSESATP ESGPGSEPAT
851 SGSETPGTSE SATPESGPGS PAGSPTSTEE GSPAGSPTST EEGTSTEPSE
901 GSAPGTSESA TPESGPGTSE SATPESGPGT SESATPESGP GSEPATSGSE
951 TPGSEPATSG SETPGSPAGS PTSTEEGTST EPSEGSAPGT STEPSEGSAP
1001 GSEPATSGSE TPGTSESATP ESGPGTSTEP SEGSAPASSP PVLKRHQREI
1051 TRTTLQSDQE EIDYDDTISV EMKKEDFDIY DEDENQSPRS FQKKTRHYFI 1101 AAVERLW DYG MSSSPHVLRN RAQSGSVPQF KKVVFQEFTD GSFTQPLYRG 1151 ELNEHLGLLG PYIRAEVEDNIM VTFRNQAS RPYSFYSSLI SYEEDQRQGA
1201 EPRKNFVKPN ETKTYFWKVQ HHMAPTKDEF DCKAWAYFSD VDLEKDVHSG 1251 LIGPLLVCHT NTLNPAHGRQ VTVQEFALFF TIFDETKSWY FTENMERNCR 1301 APCNIQMEDP TFKENYRFHA INGYIMDTLP GLVMAQDQRI RW YLLSMGSN 1351 EM HSIH FSG H W TV R K K EE YKMALYNLYP G W ETV EM LP SKAGIWRVEC 1401 LIGEHLHAGM STLFLVYSNK CQTPLGMASG HIRDFQITAS GQYGQWAPKL 1451 ARLHYSGSIN AWSTKEPFSW IKVDLLAPM IIHGIKTQGAR QKFSSLYISQ
1501 FIIMYSLDGK KWQTYRGNST G TLM W FG N V DSSGIKHM F NPPIIARYIR
1551 LHPTHYSIRS TLRMELMGCD LNSCSMPLGM ESKAISDAQI TASSYFTNMF 1601 ATWSPSKARL HLQGRSNAW R PQVNNPKEWL QVDFQKTMKV TGVTTQGVKS 1651 LLTSMYVKEF LISSSQDGHQ W TLFFQNGKV KVFQGNQDSF TPVVNSLDPP 1701 LLTRYLRIHP QSW VHQIALR MEVLGCEAQD LYDKTHTCPP CPAPELLGGP 1751 SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTC VVVDVSH EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK 1801 TKPREEQYNS TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL PAPIEKTISK 1851 AKGQPREPQV YTLPPSRDEL TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE 1901 NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ Q G N W SCSV M HEALHNHYTQ 1951 KSLSLSPGK
Secuencia de proteína de FVIII 196 (FVIIIF<c>cadena doble con tres XTEN 144 AE en I<os>aminoácidos 26, 1656 y 1900) (SEQ ID NO: 74)
1 MQIELSTCFF LCLLRFCFSA TRRYYLGAVE LSWDYMQSDL GELPVGAPGS
51 SPSASTGTGP GSSPSASTGT GPGASPGTSS TGSPGASPGT SSTGSPGSST
101 PSGATGSPGS SPSASTGTGP GASPGTSSTG SPGSSPSAST GTGPGTPGSG
151 TASSSPGSST PSGATGSPGS STPSGATGSP GASPGTSSTG SPASSDARFP
201 PRVPKSFPFN TSVVYKKTLF VEFTDHLFNIAKPRPPWMGL LGPTIQAEVY
251 DTVVITLKNM ASHPVSLHA V GVSYWKASEG AEYDDQTSQR EKEDDKVFPG 301 GSHTYVWQVL KENGPMASDP LCLTYSYLSH VDLVKDLNSG LIGALLVCRE 351 GSLAKEKTQT LHKFILLFAV FDEGKSWHSE TKNSLMQDRD AASARAWPKM 401 HTVNGYVNRS LPGLIGCHRK SVYWHVIGMG TTPEVHSIFL EGHTFLVRNH
451 RQASLEISPI TFLTAQTLLM DLGQFLLFCH ISSHQHDGME AYVKVDSCPE
501 EPQLRMKNNE EAEDYDDDLT DSEMDVVRFD DDNSPSFIQI RSVAKKHPKT
551 WVHYIAAEEE DWDYAPLVLA PDDRSYKSQY LNNGPQRIGR KYKKVRFMAY
601 TDETFKTREA IQHESGILGP LLYGEVGDTL LIIFKNQASR PYNIYPHGIT
651 DVRPLYSRRL PKGVKHLKDF PILPGEIFKY KWTVTVEDGP TKSDPRCLTR
701 YYSSFVNMER DLASGLIGPL LICYKESVDQ RGNQIMSDKR NVILFSVFDE
751 NRSWYLTENI QRFLPNPAGV QLEDPEFQAS MMHSINGYV FDSLQLSVCL
801 HEVAYWYILS IGAQTDFLSV FFSGYTFKHK MVYEDTLTLF PFSGETW MS
851 MENPGLWILG CHNSDFRNRG MTALLKVSSC DKNTGDYYED SYEDISAYLL 901 SKNNAIEPRS FSQNPPVLKR HQREITRTTL QGAPGTPGSG TASSSPGASP
951 GTSSTGSPGA SPGTSSTGSP GASPGTSSTG SPGSSPSAST GTGPGTPGSG
1001 TASSSPGASP GTSSTGSPGA SPGTSSTGSP GASPGTSSTG SPGSSTPSGA
1051 TGSPGSSTPS GATGSPGASP GTSSTGSPAS SSDQEEIDYD DTISVEMKKE
1101 DFDIYDEDEN QSPRSFQKKT RHYFIAAVER LWDYGMSSSP HVLRNRAQSG 1151 SVPQFKKVVF QEFTDGSFTQ PLYRGELNEH LGLLGPYIRA EVEDMMVTF 1201 RNQASRPYSF YSSLISYEED QRQGAEPRKN FVKPNETKTY FWKVQHHMAP 1251 TKDEFDCKAW AYFSDVDLEK DVHSGLIGPL LVCHTNTLNP AHGRQVTVQE 1301 FALFFTIFDE TKSWYFTENM ERNCRGAPTS ESATPESGPG SEPATSGSET
1351 PGTSESATPE SGPGSEPATS GSETPGTSES ATPESGPGTS TEPSEGSAPG
1401 TSESATPESG PGSPAGSPTS TEEGSPAGSP TSTEEGSPAG SPTSTEEGTS
1451 ESATPESGPG TSTEPSEGSA PGASSAPCNI QMEDPTFKEN YRFHAINGYI
1501 MDTLPGLVMA QDQRIRWYLL SMGSNEMHS IHFSGHVFTV RKKEEYKMAL 1551 YNLYPGVFET VEMLPSKAGI WRVECLIGEH LHAGMSTLFL VYSNKCQTPL 1601 GMASGHIRDF QITASGQYGQ WAPKLARLHY SGSINAWSTK EPFSWIKVDL 1651 LAPMIIHGIK TQGARQKFSS LYISQFIIMY SLDGKKWQTY RGNSTGTLMV 1701 FFGNVDSSGI KHMFNPPIIARYIRLHPTH YSIRSTLRME LMGCDLNSCS
1751 MPLGMESKAI SDAQITASSY FTNMFATWSP SKARLHLQGR SNAWRPQVNN 1801 PKEWLQVDFQ KTMKVTGVTT QGVKSLLTSM YVKEFLISSS QDGHQWTLFF 1851 QNGKVKVFQG NQDSFTPVVN SLDPPLLTRY LRIHPQSWVH QIALRMEVLG 1901 CEAQDLYDKT HTCPPCPAPE LLGGPSVFLF PPKPKDTLMI SRTPEVTCVV 1951 VDVSHEDPEV KFNWYVDGVE VHNAKTKPRE EQYNSTYRVV SVLTVLHQDW 2001 LNGKEYKCKV SNKALPAPIE KTISKAKGQP REPQVYTLPP SRDELTKNQV 2051 SLTCLVKGFY PSDIAVEWES NGQPENNYKT TPPVLDSDGS FFLYSKLTVD 2101 KSRWQQGNVF SCSVMHEALH NHYTQKSLSL SPGK*
S e cu e n c ia de p ro te ín a de FVIII 199 (F V IIIF<c>ca d e n a se n c illa con tre s X T E N 144 A E en I<os>a m in o á c id o s 1656 y 1900) (S E Q ID NO : 75)
1 MQIELSTCFF LCLLRFCFSA TRRYYLGAVE LSWDYMQSDL GELPVDARFP
51 PRW KSFPFN TSVVYKKTLF VEFTDHLFNIAKPRPPWMGL LGPTIQAEVY
101 DTVVITLKNM ASHPVSLHAV GVSYWKASEG AEYDDQTSQR EKEDDKWPG 151 GSHTYVWQVL KENGPMASDP LCLTYSYLSH VDLVKDLNSG LIGALLVCRE 201 GSLAKEKTQT LHKFILLFAV FDEGKSWHSE TKNSLMQDRD AASARAWPKM 251 HTVNGYVNRS LPGLIGC'HRK SVYWHVIGMG TTPEVHSIFL EGHTFLVRNH
301 RQASLEISPI TFLTAQTLLM DLGQFLLFCH ISSHQHDGME AYVKVDSCPE
351 EPQLRMKNNE EAEDYDDDLT DSEMDVVRFD DDNSPSFIQI RSVAKKHPKT 401 WVHYIAAEEE DWDYAPLVLA PDDRSYKSQY LNNGPQRIGR KYKKVRFMAY 451 TDETFKTREAIQHESGILGP LLYGEVGDTL LIIFKNQASR PYNIYPHGIT
501 DVRPLYSRRL PKGVKHLKDF PILPGEIFKY KWTVTVEDGP TKSDPRCLTR
551 YYSSFVNMER DLASGLIGPL LICYKESVDQ RGNQIMSDKR NVILFSVFDE
601 NRSWYLTENI QRFLPNPAGV QLEDPEFQAS NIMHSINGYV FDSLQLSVCL
651 HEVAYWYILS IGAQTDFLSV FFSGYTFKHK MVYEDTLTLF PFSGETVFMS
701 MENPGLWILG CHNSDFRNRG MTALLKVSSC DKNTGDYYED SYEDISAYLL 751 SKNNAIEPRS FSQNPPVLKR HQAEITRTTL QGAPGTPGSG TASSSPGASP
801 GTSSTGSPGA SPGTSSTGSP GASPGTSSTG SPGSSPSAST GTGPGTPGSG
851 TASSSPGASP GTSSTGSPGA SPGTSSTGSP GASPGTSSTG SPGSSTPSGA
901 TGSPGSSTPS GATGSPGASP GTSSTGSPAS SSDQEEIDYD DTISVEMKKE
951 DFDIYDEDEN QSPRSFQKKT RHYFIAAVER LWDYGMSSSP HVLRNRAQSG 1001 SVPQFKKVVF QEFTDGSFTQ PLYRGELNEH LGLLGPYIRA EVEDMMVTF 1051 RNQASRPYSF YSSLISYEED QRQGAEPRKN FVKPNETKTY FWKVQHHMAP 1101 TKDEFDCKAW AYFSDVDLEK DVHSGLIGPL LVCHTNTLNP AHGRQVTVQE 1151 FALFFTIFDE TKSWYFTENM ERNCRGAPTS ESATPESGPG SEPATSGSET
1201 PGTSESATPE SGPGSEPATS GSETPGTSES ATPESGPGTS TEPSEGSAPG
1251 TSESATPESG PGSPAGSPTS TEEGSPAGSP TSTEEGSPAG SPTSTEEGTS
1301 ESATPESGPG TSTEPSEGSA PGASSAPCNI QMEDPTFKEN YRFHAINGYI
1351 MDTLPGLVMA QDQRIRWYLL SMGSNEMHS IHFSGHVFTV RKKEEYKMAL 1401 YNLYPGVFET VEMLPSKAGI WRVECLIGEH LHAGMSTLFL VYSNKCQTPL 1451 GMASGHIRDF QITASGQYGQ WAPKLARLHY SGSINAWSTK EPFSWIKVDL 1501 LAPMIIHGIK TQGARQKFSS LYISQFIIMY SLDGKKWQTY RGNSTGTLMV 1551 FFGNVDSSGI KHMFNPPIIARYIRLHPTH YSIRSTLRME LMGCDLNSCS
1601 MPLGMESKAI SDAQITASSY FTNMFATWSP SKARLHLQGR SNAWRPQVNN 1651 PKEWLQVDFQ KTMKVTGVTT QGVKSLLTSM YVKEFLISSS QDGHQWTLFF 1701 QNGKVKVFQG NQDSFTPVVN SLDPPLLTRY LRIHPQSWVH QIALRMEVLG 1751 CEAQDLYDKT HTCPPCPAPE LLGGPSVFLF PPKPKDTLMI SRTPEVTCVV
1801 VDVSHEDPEV KFNWYVDGVE VHNAKTKPRE EQYNSTYRVV SVLTVLHQDW 1851 LNGKEYKCKV SNKALPAPIE KTISKAKGQP REPQVYTLPP SRDELTKNQV 1901 SLTCLVKGFY PSDIAVEWES NGQPENNYKT TPPVLDSDGS FFLYSKLTVD
1951 KSRWQQGNVF SCSVMHEALH NHYTQKSLSL SPGK*
Secuencia de proteína de FVIII 201 (FVIIIF<c>cadena sencilla con 3 XTEN 144 AE en el aminoácido 26, 1656 y1900) (SEQ ID NO: 76)
1 MQIELSTCFF LCLLRFCFSA TRRYYLGAVE LSWDYMQSDL GELPVGAPGS 51 SPSASTGTGP GSSPSASTGT GPGASPGTSS TGSPGASPGT SSTGSPGSST
101 PSGATGSPGS SPSASTGTGP GASPGTSSTG SPGSSPSAST GTGPGTPGSG
151 TASSSPGSST PSGATGSPGS STPSGATGSP GASPGTSSTG SPASSDARFP
201 PRVPKSFPFN TSVVYKKTLF VEFTDHLFNIAKPRPPWMGL LGPTIQAEVY 251 DTVVITLKNM ASHPVSLHAV GVSYWKASEG AEYDDQTSQR EKEDDKVFPG 301 GSHTYVWQVL KENGPMASDP LCLTYSYLSH VDLVKDLNSG LIGALLVCRE 351 GSLAKEKTQT LHKFILLFAV FDEGKSWHSE TKNSLMQDRD AASARAWPKM 401 HTVNGYVNRS LPGLIGCHRK SVYWHVIGMG TTPEVHSIFL EGHTFLVRNH 451 RQASLEISPI TFLTAQTLLM DLGQFLLFCH ISSHQHDGME AYVKVDSCPE 501 EPQLRMKNNE EAEDYDDDLT DSEMDVVRFD DDNSPSFIQI RSVAKKHPKT 551 WVHYIAAEEE DWDYAPLVLA PDDRSYKSQY LNNGPQRIGR KYKKVRFMAY 601 TDETFKTREAIQHESGILGP LLYGEVGDTL LIIFKNQASR PYMYPHGIT
651 DVRPLYSRRL PKGVKHLKDF PILPGEIFKY KWTVTVEDGP TKSDPRCLTR 701 YYSSFVNMER DLASGLIGPL LICYKESVDQ RGNQIMSDKR NVILFSVFDE
751 NRSWYLTENI QRFLPNPAGV QLEDPEFQAS MMHSINGYV FDSLQLSVCL 801 HEVAYWYILS IGAQTDFLSV FFSGYTFKHK MVYEDTLTLF PFSGETVFMS 851 MENPGLWILG CHNSDFRNRG MTALLKVSSC DKNTGDYYED SYEDISAYLL 901 SKNNAIEPRS FSQNPPVLKR HQAEITRTTL QGAPGTPGSG TASSSPGASP
951 GTSSTGSPGA SPGTSSTGSP GASPGTSSTG SPGSSPSAST GTGPGTPGSG
1001 TASSSPGASP GTSSTGSPGA SPGTSSTGSP GASPGTSSTG SPGSSTPSGA
1051 TGSPGSSTPS GATGSPGASP GTSSTGSPAS SSDQEEIDYD DTISVEMKKE
1101 DFDIYDEDEN QSPRSFQKKT RHYFIAAVER LWDYGMSSSP HVLRNRAQSG 1151 SVPQFKKVVF QEFTDGSFTQ PLYRGELNEH LGLLGPYIRA EVEDNIMVTF 1201 RNQASRPYSF YSSLISYEED QRQGAEPRKN FVKPNETKTY FWKVQHHMAP 1251 TKDEFDCKAW AYFSDVDLEK DVHSGLIGPL LVCHTNTLNP AHGRQVTVQE 1301 FALFFTIFDE TKSWYFTENM ERNCRGAPTS ESATPESGPG SEPATSGSET
1351 PGTSESATPE SGPGSEPATS GSETPGTSES ATPESGPGTS TEPSEGSAPG
1401 TSESATPESG PGSPAGSPTS TEEGSPAGSP TSTEEGSPAG SPTSTEEGTS
1451 ESATPESGPG TSTEPSEGSA PGASSAPCNI QMEDPTFKEN YRFHAINGY1
1501 MDTLPGL VMA QDQRIRWYLL SMGSNEMHSIHFSGHVFTV RKKEEYKMAL 1551 YNLYPGVFET VEMLPSKAGI WRVECLIGEH LHAGMSTLFL VYSNKCQTPL 1601 GMASGHIRDF QITASGQYGQ WAPKLARLHY SGSINAWSTK EPFSWIKVDL 1651 LAPMIIHGIK TQGARQKFSS LYISQFIIMY SLDGKKWQTY RGNSTGTLMV 1701 FFGNVDSSGI KHMFNPPII ARYIRLHPTH YSIRSTLRME LMGCDLNSCS
1751 MPLGMESKAI SDAQITASSY FTNMFATWSP SKARLHLQGR SNAWRPQVNN 1801 PKEWLQVDFQ KTMKVTGVTT QGVKSLLTSM YVKEFLISSS QDGHQWTLFF 1851 QNGKVKVFQG NQDSFTPVVN SLDPPLLTRY LRIHPQSWVH QIALRMEVLG 1901 CEAQDLYDKT HTCPPCPAPE LLGGPSVFLF PPKPKDTLMI SRTPEVTCVV 1951 VDVSHEDPEV KFNWYVDGVE VHNAKTKPRE EQYNSTYRVV SVLTVLHQDW 2001 LNGKEYKCKV SNKALPAPIE KTISKAKGQP REPQVYTLPP SRDELTKNQV 2051 SLTCLVKGFY PSDIAVEWES NGQPENNYKT TPPVLDSDGS FFLYSKLTVD 2101 KSRWQQGNVF SCSVMHEALH NHYTQKSLSL SPGK*
de p ro te ín a de FVIII 203 (F V IIIF<c>ca d e n a se n c illa con dos X T E N A E ; un X T E N 288A E en el d o m in io B y un X T E N 144 A E en e l a m in o á c id o 1900) (S E Q ID NO : 77)
1 MQIELSTCFF LCLLRFCFSA TRRYYLGAVE LSWDYMQSDL GELPVDARFP 51 PRW KSFPFN TSVVYKKTLF VEFTDHLFM AKPRPPWMGL LGPTIQAEVY
101 DTVVITLKNM ASHPVSLHAV GVSYWKASEG AEYDDQTSQR EKEDDKVFPG 151 GSHTYVWQVL KENGPMASDP LCLTYSYLSH VDLVKDLNSG LIGALLVCRE 201 GSLAKEKTQT LHKFILLFAV FDEGKSWHSE TKNSLMQDRD AASARAWPKM 251 HTVNGYVNRS LPGLIGCHRK SVYWHVIGMG TTPEVHSIFL EGHTFLVRNH 301 RQASLEISPI TFLTAQTLLM DLGQFLLFCH ISSHQHDGME AYVKVDSCPE 351 EPQLRMKNNE EAEDYDDDLT DSEMDVVRFD DDNSPSFIQI RSVAKKHPKT 401 WVHYIAAEEE DWDYAPLVLA PDDRSYKSQY LNNGPQRIGR KYKKVRFMAY 451 TDETFKTREAIQHESGILGP LLYGEVGDTL LIIFKNQASR PYNIYPHGIT
501 DVRPLYSRRL PKGVKHLKDF PILPGEIFKY KWTVTVEDGP TKSDPRCLTR 551 YYSSFVNMER DLASGLIGPL LICYKESVDQ RGNQIMSDKR NVILFSW DE
601 NRSWYLTENI QRFLPNPAGV QLEDPEFQAS NIMHSINGYV FDSLQLSVCL 651 HEVAYWYILS IGAQTDFLSV FFSGYTFKHK MVYEDTLTLF PFSGETVFMS 701 MENPGLWILG CHNSDFRNRG MTALLKVSSC DKNTGDYYED SYEDISAYLL 751 SKNNAIEPRS FSQNGAPGTS ESATPESGPG SEPATSGSET PGTSESATPE
801 SGPGSEPATS GSETPGTSES ATPESGPGTS TEPSEGSAPG SPAGSPTSTE
851 EGTSESATPE SGPGSEPATS GSETPGTSES ATPESGPGSP AGSPTSTEEG
901 SPAGSPTSTE EGTSTEPSEG SAPGTSESAT PESGPGTSES ATPESGPGTS
951 ESATPESGPG SEPATSGSET PGSEPATSGS ETPGSPAGSP TSTEEGTSTE
1001 PSEGSAPGTS TEPSEGSAPG SEPATSGSET PGTSESATPE SGPGTSTEPS
1051 EGSAPASSPP VLKRHQAEIT RTTTQSDQEE IDYDDTISVE MKKEDFDIYD
1101 EDENQSPRSF QKKTRHYFIA AVERLWDYGM SSSPHVLRNR AQSGSVPQFK 1151 KVW QEFTDG SFTQPLYRGE LNEHLGLLGP YIRAEVEDM MVTFRNQASR 1201 PYSFYSSLIS YEEDQRQGAE PRKNFVKPNE TKTYFWKVQH HMAPTKDEFD 1251 CKAWAYFSDV DLEKDVHSGL IGPLLVCHTN TLNPAHGRQV TVQEFALFFT 1301 IFDETKSWYF TENMERNCRG APTSESATPE SGPGSEPATS GSETPGTSES
1351 ATPESGPGSE PATSGSETPG TSESATPESG PGTSTEPSEG SAPGTSESAT
1401 PESGPGSPAG SPTSTEEGSP AGSPTSTEEG SPAGSPTSTE EGTSESATPE
1451 SGPGTSTEPS EGSAPGASSA PCNIQMEDPT FKENYRFHAI NGYIMDTLPG
1501 LVMAQDQRIR WYLLSMGSNE MHSIHFSGH VFTVRKKEEY KMALYNLYPG 1551 VFETVEMLPS KAGIWRVECL IGEHLHAGMS TLFLVYSNKC QTPLGMASGH 1601 IRDFQITASG QYGQWAPKLA RLHYSGSINA WSTKEPFSWI KVDLLAPMII 1651 HGIKTQGARQ KFSSLYISQF IIMYSLDGKK WQTYRGNSTG TLMVFFGNVD
1701 SSGIKHNIFN PPIIARYIRL HPTHYSIRST LRMELMGCDL NSCSMPLGME
1751 SKAISDAQIT ASSYFTNMFA TWSPSKARLH LQGRSNAWRP QVNNPKEWLQ 1801 VDFQKTMKVT GVTTQGVKSL LTSMYVKEFL ISSSQDGHQW TLFFQNGKVK 1851 VFQGNQDSFT PVVNSLDPPT LTRYLRIHPQ SWVHQIALRM EVLGCEAQDL 1901 YDKTHTCPPC PAPELLGGPS VFLFPPKPKD TLMISRTPEV TCVVVDVSHE 1951 DPEVKFNWYV DGVEVHNAKT KPREEQYNST YRVVSVLTVL HQDWLNGKEY 2001 KCKVSNKALP APIEKTISKA KGQPREPQVY TLPPSRDELT KNQVSLTCLV
2051 KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPVLD SDGSFFLYSK LTVDKSRWQQ 2101 GNVFSCSVMH EALHNHYTQK SLSLSPGK*
S e cu e n c ia de p ro te ín a de FVIII 204 (F V IIIF<c>ca d e n a s e n c illa con dos X T E N A E ; un X T E N 288 A E en e l d o m in io B y un X T E N 144 A E en el a m in o á c id o 403 ) (S E Q ID NO : 78)
1 MQIELSTCFF LCLLRFCFSA TRRYYLGAVE LSWDYMQSDL GELPVDAJRFP 51 PRVPKSFPFN TSVVYKKTLF VEFTDHLFNIAKPRPPWMGL LGPTIQAEVY
101 DTVVITLKNM ASHPVSLHAV GVSYWKASEG AEYDDQTSQR EKEDDKVFPG 151 GSHTYVWQVL KENGPMASDP LCLTYSYLSH VDLVKDLNSG LIGALLVCRE 201 GSLAKEKTQT LHKFILLFAV FDEGKSWHSE TKNSLMQDRD AASARAWPKM 251 HTVNGYVNRS LPGLIGCHRK SVYWHVIGMG TTPEVHSIFL EGHTFLVRNH 301 RQASLEISPI TFLTAQTLLM DLGQFLLFCH ISSHQHDGME AYVKVDSCPE
351 EPQLRMKNNE EAEDYDDDLT DSEMDVVRFD DDNSPSFIQI RSVAKKHPKT 401 WVHYIAAEEE DWDYAPLVLA PDGAPTSTEP SEGSAPGSPA GSPTSTEEGT
451 STEPSEGSAP GTSTEPSEGS APGTSESATP ESGPGTSTEP SEGSAPGTSE
501 SATPESGPGS EPATSGSETP GTSTEPSEGS APGTSTEPSE GSAPGTSESA
551 TPESGPGTSE SATPESGPGA SSDRSYKSQY LNNGPQRIGR KYKKVRFMAY 601 TDETFKTREAIQHESGILGP LLYGEVGDTL LIIFKNQASR PYNIYPHGIT
651 DVRPLYSRRL PKGVKHLKDF PILPGEIFKY KWTVTVEDGP TKSDPRCLTR
701 YYSSFVNMER DLASGLIGPL LICYKESVDQ RGNQIMSDKR NVILFSVFDE
751 NRSWYLTENI QRFLPNPAGV QLEDPEFQAS NIMHSINGYV FDSLQLSVCL
801 HEVAYWYILS IGAQTDFLSV FFSGYTFKHK MVYEDTLTLF PFSGETVFMS 851 MENPGLWILG CHNSDFRNRG MTALLKVSSC DKNTGDYYED SYEDISAYLL 901 SKNNAIEPRS FSQNGAPGTS ESATPESGPG SEPATSGSET PGTSESATPE
951 SGPGSEPATS GSETPGTSES ATPESGPGTS TEPSEGSAPG SPAGSPTSTE
1001 EGTSESATPE SGPGSEPATS GSETPGTSES ATPESGPGSP AGSPTSTEEG
1051 SPAGSPTSTE EGTSTEPSEG SAPGTSESAT PESGPGTSES ATPESGPGTS
1101 ESATPESGPG SEPATSGSET PGSEPATSGS ETPGSPAGSP TSTEEGTSTE
1151 PSEGSAPGTS TEPSEGSAPG SEPATSGSET PGTSESATPE SGPGTSTEPS
1201 EGSAPASSPP VLKRHQAEIT RTTLQSDQEE IDYDDTISVE MKKEDFDIYD
1251 EDENQSPRSF QKKTRHYFIA AVERLWDYGM SSSPHVLRNR AQSGSVPQFK 1301 KVVFQEFTDG SFTQPL YRGE LNEHLGLLGP YIRAEVEDM MVTFRNQASR 1351 PYSFYSSLIS YEEDQRQGAE PRKNFVKPNE TKTYFWKVQH HMAPTKDEFD 1401 CKAWAYFSDV DLEKDVHSGL IGPLLVCHTN TLNPAHGRQV TVQEFALFFT 1451 IFDETKSWYF TENMERNCRA PCMQMEDPT FKENYRFHAINGYIMDTLPG 1501 LVMAQDQRIR WYLLSMGSNE NIHSIHFSGH VFTVRKKEEY KMALYNLYPG 1551 VFETVEMLPS KAGIWRVECL IGEHLHAGMS TLFLVYSNKC QTPLGMASGH 1601 IRDFQITASG QYGQWAPKLA RLHYSGSINA WSTKEPFSWI KVDLLAPMII 1651 HGIKTQGARQ KFSSLYISQF IIMYSLDGKK WQTYRGNSTG TLMVFFGNVD 1701 SSGIKHNIFN PPIIARYIRL HPTHYSIRST LRMELMGCDL NSCSMPLGME
1751 SKAISDAQIT ASSYFTNMFA TWSPSKARLH LQGRSNAWRP QVNNPKEWLQ 1801 VDFQKTMKVT GVTTQGVKSL LTSMYVKEFL ISSSQDGHQW TLFFQNGKVK 1851 VFQGNQDSFT PVVNSLDPPL LTRYLRIHPQ SWVHQIALRM EVLGCEAQDL 1901 YDKTHTCPPC PAPELLGGPS VFLFPPKPKD TLMISRTPEV TCVVVDVSHE
1951 DPEVKFNWYV DGVEVHNAKT KPREEQYNST YRVVSVLTVL HQDWLNGKEY
2001 KCKVSNKALP APIEKTISKA KGQPREPQVY TLPPSRDELT KNQVSLTCL V 2051 KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPVLD SDGSFFLYSK LTVDKSRWQQ 2101 GNVFSCSVMH EALHNHYTQK SLSLSPGK*
S e cu e n c ia de p ro te ín a de FVIII 205 (F V IIIF<c>ca d e n a s e n c illa con dos X T E N A E ; un X T E N 288 A E en e l d o m in io B y un X T E N 144 A E en el a m in o á c id o 18) (S E Q ID NO : 79)
1 MQIELSTCFF LCLLRFCFSA TRRYYLGAVE LSWDYMQGAP TSESATPESG
51 PGSEPATSGS ETPGTSESAT PESGPGSEPA TSGSETPGTS ESATPESGPG
101 TSTEPSEGSA PGSPAGSPTS TEEGTSESAT PESGPGSEPA TSGSETPGTS
151 ESATPESGPG SPAGSPTSTE EGSPAGSPTS TEEGASSSDL GELPVDARFP
201 PRVPKSFPFN TSVVYKKTLF VEFTDHLFM AKPRPPWMGL LGPTIQAEVY
251 DTVVITLKNM ASHPVSLHAV GVSYWKASEG AEYDDQTSQR EKEDDKVFPG 301 GSHTYVWQVL KENGPMASDP LCLTYSYLSH VDLVKDLNSG LIGALLVCRE 351 GSLAKEKTQT LHKFILLFAV FDEGKSWHSE TKNSLMQDRD AASARAWPKM 401 HTVNGYVNRS LPGLIGCHRK SVYWHVIGMG TTPEVHSIFL EGHTFLVRNH
451 RQASLEISPI TFLTAQTLLM DLGQFLLFCH ISSHQHDGME AYVKVDSCPE
501 EPQLRMKNNE EAEDYDDDLT DSEMDVVRFD DDNSPSFIQI RSVAKKHPKT 551 WVHYIAAEEE DWDYAPLVLA PDDRSYKSQY LNNGPQRIGR KYKKVRFMAY 601 TDETFKTREAIQHESGILGP LLYGEVGDTL LIIFKNQASR PYNIYPHGIT
651 DVRPLYSRRL PKGVKHLKDF PILPGEIFKY KWTVTVEDGP TKSDPRCLTR
701 YYSSFVNMER DLASGLIGPL LICYKESVDQ RGNQIMSDKR NVILFSVFDE
751 NRSWYLTENI QRFLPNPAGV QLEDPEFQAS MMHSINGYV FDSLQLSVCL
801 HEVAYWYILS IGAQTDFLSV FFSGYTFKHK MVYEDTLTLF PFSGETVFMS 851 MENPGLWILG CHNSDFRNRG MTALLKVSSC DKNTGDYYED SYEDISAYLL 901 SKNNAIEPRS FSQNGAPGTS ESATPESGPG SEPATSGSET PGTSESATPE
951 SGPGSEPATS GSETPGTSES ATPESGPGTS TEPSEGSAPG SPAGSPTSTE
1001 EGTSESATPE SGPGSEPATS GSETPGTSES ATPESGPGSP AGSPTSTEEG
1051 SPAGSPTSTE EGTSTEPSEG SAPGTSESAT PESGPGTSES ATPESGPGTS
1101 ESATPESGPG SEPATSGSET PGSEPATSGS ETPGSPAGSP TSTEEGTSTE
1151 PSEGSAPGTS TEPSEGSAPG SEPATSGSET PGTSESATPE SGPGTSTEPS
1201 EGSAPASSPP VLKRHQAEIT RTTLQSDQEE IDYDDTISVE MKKEDFDIYD
1251 EDENQSPRSF QKKTRHYFIA AVERLWDYGM SSSPHVLRNR AQSGSVPQFK 1301 KVVFQEFTDG SFTQPLYRGE LNEHLGLLGP YIRAEVEDNIMVTFRNQASR 1351 PYSFYSSLIS YEEDQRQGAE PRKNFVKPNE TKTYFWKVQH HMAPTKDEFD 1401 CKAWAYFSDV DLEKDVHSGL IGPLLVCHTN TLNPAHGRQV TVQEFALFFT 1451 IFDETKSWYF TENMERNCRA PCMQMEDPT FKENYRFHAINGYIMDTLPG
1501 LVMAQDQRIR WYLLSMGSNE MHSIHFSGH VFTVRKKEEY KMALYNLYPG 1551 VFETVEMLPS KAGIWRVECL IGEHLHAGMS TLFLVYSNKC QTPLGMASGH 1601 IRDFQITASG QYGQWAPKLA RLHYSGSINA WSTKEPFSWI KVDLLAPMII
1651 HGIKTQGARQ KFSSLYISQF IIMYSLDGKK WQTYRGNSTG TLMVFFGNVD 1701 SSGIKHNIFN PPIIARYIRL HPTHYSIRST LRMELMGCDL NSCSMPLGME
1751 SKAISDAQIT ASSYFTNMFA TWSPSKARLH LQGRSNAWRP QVNNPKEWLQ 1801 VDFQKTMKVT GVTTQGVKSL LTSMYVKEFL ISSSQDGHQW TLFFQNGKVK 1851 VFQGNQDSFT PVVNSLDPPL LTRYLRIHPQ SWVHQIALRM EVLGCEAQDL 1901 YDKTHTCPPC PAPELLGGPS WLFPPKPKD TLMISRTPEV TCVVVDVSHE
1951 DPEVKFNWYV DGVEVHNAKT KPREEQYNST YRVVSVLTVL HQDWLNGKEY 2001 KCKVSNKALP APIEKTISKA KGQPREPQVY TLPPSRDELT KNQVSLTCL V
2051 KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPVLD SDGSFFLYSK LTVDKSRWQQ 2101 GNWSCSVMH EALHNHYTQK SLSLSPGK*
Secuencia de proteína de pSYN FVIII 266 (FVIII F<c>con XTEN 42 AE en el aminoácido 18 XTEN y 288 AE en el dominio B) SEQ ID NO: 80)
1 MQIELSTCFF LCLLRFCFSA TRRYYLGAVE LSWDYMQGAP GSPAGSPTST
51 EEGTSESATP ESGPGSEPAT SGSETPASSS DLGELPVDAR FPPRVPKSFP
101 FNTSVVYKKT LFVEFTDHLF MAKPRPPWM GLLGPTIQAE VYDTVVITLK
151 NMASHPVSLH AVGVSYWKAS EGAEYDDQTS QREKEDDKVF PGGSHTYVWQ 201 VLKENGPMAS DPLCLTYSYL SHVDLVKDLN SGLIGALLVC REGSLAKEKT 251 QTLHKFILLF AVFDEGKSWH SETKNSLMQD RDAASARAWP KMHTVNGYVN 301 RSLPGLIGCH RKS VYWHVIG MGTTPEVHSIFLEGHTFL VR NHRQASLEIS
351 PITFLTAQTL LMDLGQFLLF CHISSHQHDG MEAYVKVDSC PEEPQLRMKN
401 NEEAEDYDDD LTDSEMDVVR FDDDNSPSFI QIRSVAKKHP KTWVHYIAAE 451 EEDWDYAPL V LAPDDRSYKS QYLNNGPQRI GRKYKKVRFM AYTDETFKTR 501 EAIQHESGIL GPLLYGEVGD TLLIIFKNQA SRPYNIYPHG ITDVRPLYSR
551 RLPKGVKHLK DFPILPGEIF KYKWTVTVED GPTKSDPRCL TRYYSSFVNM
601 ERDLASGLIG PLLICYKESV DQRGNQIMSD KRNVILFSW DENRSWYLTE
651 NIQRFLPNPA GVQLEDPEFQ ASMMHSING YVFDSLQLSV CLHEVAYWYI
701 LSIGAQTDFL SVFFSGYTFK HKMVYEDTLT LFPFSGETW MSMENPGLWI
751 LGCHNSDFRN RGMTALLKVS SCDKNTGDYY EDSYEDISAY LLSKNNAIEP 801 RSFSQNGAPG TSESATPESG PGSEPATSGS ETPGTSESAT PESGPGSEPA
851 TSGSETPGTS ESATPESGPG TSTEPSEGSA PGSPAGSPTS TEEGTSESAT
901 PESGPGSEPA TSGSETPGTS ESATPESGPG SPAGSPTSTE EGSPAGSPTS
951 TEEGTSTEPS EGSAPGTSES ATPESGPGTS ESATPESGPG TSESATPESG
1001 PGSEPATSGS ETPGSEPATS GSETPGSPAG SPTSTEEGTS TEPSEGSAPG
1051 TSTEPSEGSA PGSEPATSGS ETPGTSESAT PESGPGTSTE PSEGSAPASS
1101 PPVLKRHQAE ITRTTLQSDQ EEIDYDDTIS VEMKKEDFDI YDEDENQSPR
1151 SFQKKTRHYF IAAVERLWDY GMSSSPHVLR NRAQSGSVPQ FKKVVFQEFT 1201 DGSFTQPLYR GELNEHLGLL GPYIRAEVED NMVTFRNQA SRPYSFYSSL
1251 ISYEEDQRQG AEPRKNFVKP NETKTYFWKV QHHMAPTKDE FDCKAWAYFS 1301 DVDLEKDVHS GLIGPLLVCH TNTLNPAHGR QVTVQEFALF FTIFDETKSW
1351 YFTENMERNC RAPCMQMED PTFKENYRFH AINGYIMDTL PGLVMAQDQR 1401 ERWYLLSMGS NEMHSIHFS GHVFTVRKKE EYKMALYNLY PGVFETVEML 1451 PSKAGIWRVE CLIGEHLHAG MSTLFLVYSN KCQTPLGMAS GHIRDFQITA 1501 SGQYGQWAPK LARLHYSGSI NAWSTKEPFS WIKVDLLAPM IIHGIKTQGA 1551 RQKFSSLYIS QFIIMYSLDG KKWQTYRGNS TGTLMVFFGN VDSSGIKHNI 1601 FNPPIIARYIRLHPTHYSIR STLRMELMGC DLNSCSMPLG MESKAISDAQ
1651 ITASSYFTNM FAT WSPSKAR LHLQGRSNAW RPQVNNPKEW LQVDFQKTMK 1701 VTGVTTQGVK SLLTSMYVKE FLISSSQDGH QWTLFFQNGK VKVFQGNQDS 1751 FTPVVNSLDP PLLTRYLRIH PQSWVHQIAL RMEVLGCEAQ DLYDKTHTCP 1801 PCPAPELLGG PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW
1851 YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA 1901 LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSRDE LTKNQVSLTC LVKGFYPSDI
1951 AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV 2001 MHEALHNHYT QKSLSLSPGK *
Secuencia de proteína de pSYN FVIII 267 (FVIII Fc con XTEN 72 AE en el aminoácido 18 y 288 AE XTEN en el dominio B) SEQ ID NO: 81)
1 MQIELSTCFF LCLLRFCFSA TRRYYLGAVE LSWDYMQGAP TSESATPESG 51 PGSEPATSGS ETPGTSESAT PESGPGSEPA TSGSETPGTS ESATPESGPG
101 TSTEPSEGSA PGASSSDLGE LPVDARFPPR VPKSFPFNTS VVYKKTLFVE 151 FTDHLFM AK PRPPWMGLLG PTIQAEVYDT VVITLKNMAS HPVSLHAVGV 201 SYWKASEGAE YDDQTSQREK EDDKVFPGGS HTYVWQVLKE NGPMASDPLC 251 LTYSYLSHVD LVKDLNSGLI GALLVCREGS LAKEKTQTLH KFILLFAVFD 301 EGKSWHSETK NSLMQDRDAA SARAWPKMHT VNGYVNRSLP GLIGCHRKSV 351 YWHVIGMGTT PEVHSIFLEG HTFLVRNFTRQ ASLEISPITF LTAQTLLMDL 401 GQFLLFCHIS SHQHDGMEAY VKVDSCPEEP QLRMKNNEEA EDYDDDLTDS 451 EMDVVRFDDD NSPSFIQIRS VAKKHPKTWV HYIAAEEEDW DYAPLVLAPD 501 DRSYKSQYLN NGPQRIGRKY KKVRFMAYTD ETFKTREAIQ HESGILGPLL 551 YGEVGDTLLIIFKNQASRPY NIYPHGITDV RPLYSRRLPK GVKHLKDFPI 601 LPGEIFKYKW TVTVEDGPTK SDPRCLTRYY SSFVNMERDL ASGLIGPLLI 651 CYKESVDQRG NQIMSDKRNVILFSVFDENR SWYLTEMQR FLPNPAGVQL 701 EDPEFQASNIMHSINGYVFD SLQLSVCLHE VAYWYILSIG AQTDFLSW F 751 SGYTFKHKMV YEDTLTLFPF SGETVFMSME NPGLWILGCH NSDFRNRGMT 801 ALLKVSSCDK NTGDYYEDSY EDISAYLLSK NNAIEPRSFS QNGAPGTSES 851 ATPESGPGSE PATSGSETPG TSESATPESG PGSEPATSGS ETPGTSESAT 901 PESGPGTSTE PSEGSAPGSP AGSPTSTEEG TSESATPESG PGSEPATSGS 951 ETPGTSESAT PESGPGSPAG SPTSTEEGSP AGSPTSTEEG TSTEPSEGSA 1001 PGTSESATPE SGPGTSESAT PESGPGTSES ATPESGPGSE PATSGSETPG 1051 SEPATSGSET PGSPAGSPTS TEEGTSTEPS EGSAPGTSTE PSEGSAPGSE 1101 PATSGSETPG TSESATPESG PGTSTEPSEG SAPASSPPVL KRHQAEITRT 1151 TLQSDQEEID YDDTISVEMK KEDFDIYDED ENQSPRSFQK KTRHYFIAAV 1201 ERLWDYGMSS SPHVLRNRAQ SGSVPQFKKV VFQEFTDGSF TQPLYRGELN 1251 EHLGLLGPYI RAEVEDNIMV TFRNQASRPY SFYSSLISYE EDQRQGAEPR 1301 KNFVKPNETK TYFWKVQHHM APTKDEFDCK AWAYFSDVDL EKDVHSGLIG 1351 PLLVCHTNTL NPAHGRQVTV QEFALFFTIF DETKSWYFTE NMERNCRAPC 1401 MQMEDPTFK ENYRFHAING YIMDTLPGLVMAQDQRIRWY LLSMGSNEM 1451 HSIHFSGHVF TVRKKEEYKM ALYNLYPGVF ETVEMLPSKA GIWRVECLIG 1501 EHLHAGMSTL FLVYSNKCQT PLGMASGHIR DFQITASGQY GQWAPKLARL 1551 HYSGSINAWS TKEPFSWIKV DLLAPMIIHG IKTQGARQKF SSLYISQFII 1601 MYSLDGKKWQ TYRGNSTGTL MVFFGNVDSS GIKHMFNPP IIARYIRLHP 1651 THYSIRSTLR MELMGCDLNS CSMPLGMESK AISDAQITAS SYFTNMFATW 1701 SPSKARLHLQ GRSNAWRPQV NNPKEWLQVD FQKTMKVTGV TTQGVKSLLT 1751 SMYVKEFLIS SSQDGHQWTL FFQNGKVKVF QGNQDSFTPV VNSLDPPLLT 1801 RYLRIHPQSW VHQIALRMEV LGCEAQDLYD KTHTCPPCPA PELLGGPSVF 1851 LFPPKPKDTL MISRTPEVTC VVVDVSHEDP EVKFNWYVDG VEVHNAKTKP 1901 REEQYNSTYR VVSVLTVLHQ DWLNGKEYKC KVSNKALPAP IEKTISKAKG 1951 QPREPQVYTL PPSRDELTKN QVSLTCLVKG FYPSDIAVEW ESNGQPENNY 2001 KTTPPVLDSD GSFFLYSKLT VDKSRWQQGN VFSCSVMHEA LHNHYTQKSL 2051 SLSPGK*
Secuencia de proteína de pSYN FVIII 268 (FVIII F<c>con XTEN 144 AE en el aminoácido 18) SEQ ID NO: 82)
1 MQIELSTCFF LCLLRFCFSA TRRYYLGAVE LSWDYMQGAP TSESATPESG 51 PGSEPATSGS ETPGTSESAT PESGPGSEPA TSGSETPGTS ESATPESGPG 101 TSTEPSEGSA PGSPAGSPTS TEEGTSESAT PESGPGSEPA TSGSETPGTS 151 ESATPESGPG SPAGSPTSTE EGSPAGSPTS TEEGASSSDL GELPVDARFP 201 PRVPKSFPFN TSVVYKKTLF VEFTDHLFNIAKPRPPWMGL LGPTIQAEVY 251 DTVVITLKNM ASHPVSLHAV GVSYWKASEG AEYDDQTSQR EKEDDKVFPG 301 GSHTYVWQVL KENGPMASDP LCLTYSYLSH VDLVKDLNSG LIGALLVCRE 351 GSLAKEKTQT LHKFILLFAV FDEGKSWHSE TKNSLMQDRD AASARAWPKM 401 HTVNGYVNRS LPGLIGCHRK SVYWHVIGMG TTPEVHSIFL EGHTFLVRNH 451 RQASLEISPI TFLTAQTLLM DLGQFLLFCH ISSHQHDGME AYVKVDSCPE 501 EPQLRMKNNE EAEDYDDDLT DSEMDVVRFD DDNSPSFIQIRSVAKKHPKT 551 WVHYIAAEEE DWDYAPLVLA PDDRSYKSQY LNNGPQRIGR KYKKVRFMAY 601 TDETFKTREAIQHESGILGP LLYGEVGDTL LIIFKNQASR PYMYPHGIT 651 DVRPLYSRRL PKGVKHLKDF PILPGEIFKY KWTVTVEDGP TKSDPRCLTR 701 YYSSFVNMER DLASGLIGPL LICYKESVDQ RGNQIMSDKR NVILFSVFDE 751 NRSWYLTENI QRFLPNPAGV QLEDPEFQAS MMHSINGYV FDSLQLSVCL 801 HEVAYWYILS IGAQTDFLSV FFSGYTFKHK MVYEDTLTLF PFSGETVFMS 851 MENPGLWILG CHNSDFRNRG MTALLKVSSC DKNTGDYYED SYEDISAYLL 901 SKNNAIEPRS FSQNPPVLKR HQAEITRTTL QSDQEEIDYD DTISVEMKKE 951 DFDIYDEDEN QSPRSFQKKT RHYFIAAVER LWDYGMSSSP HVLRNRAQSG 1001 SW Q FK K V W QEFTDGSFTQ PLYRGELNEH LGLLGPYIRA EVEDMMVTF 1051 RNQASRPYSF YSSLISYEED QRQGAEPRKN FVKPNETKTY FWKVQHHMAP 1101 TKDEFDCKAW AYFSDVDLEK DVHSGLIGPL LVCHTNTLNP AHGRQVTVQE 1151 FALFFTIFDE TKSWYFTENM ERNCRAPCNI QMEDPTFKEN YRFHAINGYI 1201 MDTLPGLVMA QDQRIRWYLL SMGSNEMHS IHFSGHVFTV RKKEEYKMAL 1251 YNLYPGVFET VEMLPSKAGI WRVECLIGEH LHAGMSTLFL VYSNKCQTPL 1301 GMASGHIRDF QITASGQYGQ WAPKLARLHY SGSINAWSTK EPFSWIKVDL 1351 LAPMIIHGIK TQGARQKFSS LYISQFIIMY SLDGKKWQTY RGNSTGTLMV 1401 FFGNVDSSGI KHMFNPPIIARYIRLHPTH YSIRSTLRME LMGCDLNSCS 1451 MPLGMESKAI SDAQITASSY FTNMFATWSP SKARLHLQGR SNAWRPQVNN 1501 PKEWLQVDFQ KTMKVTGVTT QGVKSLLTSM YVKEFLISSS QDGHQWTLFF 1551 QNGKVKVFQG NQDSFTPVVN SLDPPLLTRY LRIHPQSWVH QIALRMEVLG 1601 CEAQDLYDKT HTCPPCPAPE LLGGPSVFLF PPKPKDTLMI SRTPEVTCVV 1651 VDVSHEDPEV KFNWYVDGVE VHNAKTKPRE EQYNSTYRVV SVLTVLHQDW 1701 LNGKEYKCKV SNKALPAPIE KTISKAKGQP REPQVYTLPP SRDELTKNQV 1751 SLTCLVKGFY PSDIAVEWES NGQPENNYKT TPPVLDSDGS FFLYSKLTVD 1801 KSRWQQGNVF SCSVMHEALH NHYTQKSLSL SPGK*
Secuencia de proteína de pSYN FVIII 269 (FVIII Fc con XTEN 72 AE en el aminoácido18) SEQ ID NO: 83)
1 MQIELSTCFF LCLLRFCFSA TRRYYLGAVE LSWDYMQGAP TSESATPESG 51 PGSEPATSGS ETPGTSESAT PESGPGSEPA TSGSETPGTS ESATPESGPG 101 TSTEPSEGSA PGASSSDLGE LPVDARFPPR VPKSFPFNTS VVYKKTLFVE 151 FTDHLFNIAK PRPPWMGLLG PTIQAEVYDT VVITLKNMAS HPVSLHAVGV 201 SYWKASEGAE YDDQTSQREK EDDKVFPGGS HTYVWQVLKE NGPMASDPLC 251 LTYSYLSHVD LVKDLNSGLI GALLVCREGS LAKEKTQTLH KFILLFAW D 301 EGKSWHSETK NSLMQDRDAA SARAWPKMHT VNGYVNRSLP GLIGCHRKSV 351 YWHVIGMGTT PEVHSIFLEG HTFLVRNHRQ ASLEISPITF LTAQTLLMDL 401 GQFLLFCHIS SHQHDGMEAY VKVDSCPEEP QLRMKNNEEA EDYDDDLTDS 451 EMDVVRFDDD NSPSFIQIRS VAKKHPKTWV HYIAAEEEDW DYAPLVLAPD 501 DRSYKSQYLN NGPQRIGRKY KKVRFMAYTD ETFKTREAIQ HESGILGPLL 551 YGEVGDTLLIIFKNQASRPY MYPHGITDV RPLYSRRLPK GVKHLKDFPI 601 LPGEIFKYKW TVTVEDGPTK SDPRCLTRYY SSFVNMERDL ASGLIGPLLI 651 CYKESVDQRG NQIMSDKRNVILFSVFDENR SWYLTEMQR FLPNPAGVQL 701 EDPEFQASNIMHSINGYVFD SLQLSVCLHE VAYWYILSIG AQTDFLSVFF 751 SGYTFKHKMV YEDTLTLFPF SGETVFMSME NPGLWILGCH NSDFRNRGMT 801 ALLKVSSCDK NTGDYYEDSY EDISAYLLSK NNAIEPRSFS QNPPVLKRHQ 851 AEITRTTLQS DQEEIDYDDT ISVEMKKEDF DIYDEDENQS PRSFQKKTRI4 901 YFIAAVERLW DYGMSSSPHV LRNRAQSGSV PQFKKVVFQE FTDGSFTQPL 951 YRGELNEHLG LLGPYIRAEV EDMMVTFRN QASRPYSFYS SLISYEEDQR 1001 QGAEPRKNFV KPNETKTYFW KVQHHMAPTK DEFDCKAWAY FSDVDLEKDV 1051 HSGLIGPLLV CHTNTLNPAH GRQVTVQEFA LFFTIFDETK SWYFTENMER 1101 NCRAPCNIQM EDPTFKENYR FHAINGYIMD TLPGLVMAQD QRIRWYLLSM 1151 GSNENIHSIH FSGHVFTVRK KEEYKMALYN LYPGVFETVE MLPSKAGIWR 1201 VECLIGEHLH AGMSTLFLVY SNKCQTPLGM ASGHIRDFQI TASGQYGQWA 1251 PKLARLHYSG SINAWSTKEP FSWIKVDLLA PMIIHGIKTQ GARQKFSSLY
1301 ISQFIIMYSL DGKKWQTYRG NSTGTLMVFF GNVDSSGIKH NIFNPPIIAR
1351 YIRLHPTHYS IRSTLRMELM GCDLNSCSMP LGMESKAISD AQITASSYFT
1401 NMFATWSPSK ARLHLQGRSN AWRPQVNNPK EWLQVDFQKT MKVTGVTTQG 1451 VKSLLTSMYV KEFLISSSQD GHQWTLFFQN GKVKVFQGNQ DSFTPVVNSL 1501 DPPLLTRYLR IHPQSWVHQIALRMEVLGCE AQDLYDKTHT CPPCPAPELL 1551 GGPSVFLFPP KPKDTLMISR TPEVTCVVVD VSHEDPEVKF NWYVDGVEVH 1601 NAKTKPREEQ YNSTYRVVSV LTVLHQDWLN GKEYKCKVSN KALPAPIEKT 1651 ISKAKGQPRE PQVYTLPPSR DELTKNQVSL TCLVKGFYPS DIAVEWESNG 1701 QPENNYKTTP PVLDSDGSFF LYSKLTVDKS RWQQGNVFSC SVMHEALHNH 1751 YTQKSLSLSP GK*
Secuencia de proteína de pSYNFVIII 271 (FVIII Fc con XTEN 42AE en el aminoácido 18) SEQ ID NO: 84)
1 MQIELSTCFF LCLLRFCFSA TRRYYLGAVE LSWDYMQGAP GSPAGSPTST
51 EEGTSESATP ESGPGSEPAT SGSETPASSS DLGELPVDAR FPPRVPKSFP
101 FNTSVVYKKT LFVEFTDHLF MAKPRPPWM GLLGPTIQAE VYDTVVITLK
151 NMASHPVSLH AVGVSYWKAS EGAEYDDQTS QREKEDDKVF PGGSHTYVWQ 201 VLKENGPMAS DPLCLTYSYL SHVDLVKDLN SGLIGALLVC REGSLAKEKT 251 QTLHKFILLF AVFDEGKSWH SETKNSLMQD RDAASARAWP KMHTVNGYVN 301 RSLPGLIGCH RKSVYWHVIG MGTTPEVHSIFLEGHTFLVR NHRQASLEIS
351 PITFLTAQTL LMDLGQFLLF CHISSHQHDG MEAYVKVDSC PEEPQLRMKN 401 NEEAEDYDDD IYDSEMDVVR FDDDNSPSFI QIRSVAKKHP KTWVHYIAAE 451 EEDWDYAPLV LAPDDRSYKS QYLNNGPQRI GRKYKKVRFM AYTDETFKTR 501 EAIQHESGIL GPLL YGEVGD TLLIIFKNQA SRPYNIYPHG ITDVRPL YSR
551 RLPKGVKHLK DFPILPGEIF KYKWTVTVED GPTKSDPRCL TRYYSSFVNM
601 ERDLASGLIG PLLICYKESV DQRGNQIMSD KRNVILFSVF DENRSWYLTE
651 MQRFLPNPA GVQLEDPEFQ ASNIMHSING YVFDSLQLSV CLHEVAYWYI 701 LSIGAQTDFL SVFFSGYTFK HKMVYEDTLT LFPFSGETVF MSMENPGLWI 751 LGCHNSDFRN RGMTALLKVS SCDKNTGDYY EDSYEDISAY LLSKNNAIEP 801 RSFSQNPPVL KRHQAEITRT TLQSDQEEID YDDTISVEMK KEDFDIYDED
851 ENQSPRSFQK KTRHYFIAAV ERLWDYGMSS SPHVLRNRAQ SGSVPQFKKV 901 VFQEFTDGSF TQPLYRGELN EHLGLLGPYI RAEVEDNIMV TFRNQASRPY
951 SFYSSLISYE EDQRQGAEPR KNFVKPNETK TYFWKVQHHM APTKDEFDCK 1001 AWAYFSDVDL EKDVHSGLIG PLLVCHTNTL NPAHGRQVTV QEFALFFTIF 1051 DETKSWYFTE NMERNCRAPC MQMEDPTFK ENYRFHAING YIMDTLPGLV 1101 MAQDQRIRWY LLSMGSNENI HSIHFSGHVF TVRKKEEYKM ALYNLYPGVF 1151 ETVEMLPSKA GIWRVECLIG EHLHAGMSTL FLVYSNKCQT PLGMASGIIIR 1201 DFQITASGQY GQWAPKLARL HYSGSINAWS TKEPFSWIKV DLLAPMIIHG 1251 IKTQGARQKF SSLYISQFII MYSLDGKKWQ TYRGNSTGTL MVFFGNVDSS 1301 GIKHNIFNPP IIARYIRLF1P THYSIRSTLR MELMGCDLNS CSMPLGMESK
1351 AISDAQITAS SYFTNMFATW SPSKARLHLQ GRSNAWRPQV NNPKEWLQVD 1401 FQKTMKVTGV TTQGVKSLLT SMYVKEFLIS SSQDGHQWTL FFQNGKVKVF 1451 QGNQDSFTPV VNSLDPPLLT RYLRIHPQSW VHQIALRMEV LGCEAQDLYD 1501 KTHTCPPCPA PELLGGPSVF LFPPKPKDTL MISRTPEVTC VVVDVSHEDP
1551 EVKFNWYVDG VEVHNAKTKP REEQYNSTYR VVSVLTVLHQ DWLNGKEYKC 1601 KVSNKALPAP IEKTISKAKG QPREPQVYTL PPSRDELTKN QVSLTCLVKG 1651 FYPSDIAVEW ESNGQPENNY KTTPPVLDSD GSFFLYSKLT VDKSRWQQGN 1701 VFSCSVMHEA LHNHYTQKSL SLSPGK*
Secuencia de proteína de pSYN FVIII 272 (FVIII con XTEN 144 AE en el aminoácido 18 y XTEN 244 AE en el dominio B-no Fc) SEQ ID NO: 85)
1 MQIKLSTCKF I.CI.I.RKCKSA TRRYYI.GAVK LSWDYMQGAP TSKSATPHSG
51 PGSEPATSGS ETPGTSESAT PESGPGSEPA TSGSETPGTS ESATPESGPG
101 TSTEPSEGSA PGSPAGSPTS TEEGTSE.SAT PESGPGSEPA TSGSETPGTS
15 L ESATPESGPG SPAGSPTSTE EGSPAGSPTS TEEGASSSDL GELPVDARPP
20 i PRVPKSFPFN TSVVYKKTLF VEFTDIILFNI AKPRPPWMGL LGPTIQAEVY
251 DTVVITLKNM ASI IPVSLIIAV GVSYWKASEG AEYDDQTSQR EKEDDKVFPG 301 GSHTYVWQVE KKNGPMASDP I.CLTYSYI.SH VDLVKDLNSG LIGALI.VCRE 351 GSLAKEKTQT LHKFELLFAV FDEGKSWHSE TKNSLMQDRD AASARAWPKM 401 I ITVNGYVNRS LPGLIGCIIRK SVYWIIVIGMG TTPEVIISIFL EGIITFLVRNII 451 RQ ASI .HISPI TFT.TAQTELM DLGQFT.EFCII TSSTTQUDGMF. AYVKVDSCPE
501 EPQLRMKNNE EAEDYDDDLT DSEMDVVRFD DDNSPSFIQIRSVAKKIIPKT 551 WVHY1AAEEE DWDYAP1.VEA PDDRSYKSQY LNNGPQR1GR KYKKVRFMAY 601 TDETEKTREA 1QHESG1EGP 1,1, YGEVGDTI, LIIFKNQASR PYNIYPHGIT
651 DVRPLYSRRL PKGVKHLKDF PILPGEIFKY KWTVTVEDGP TKSDPRCLTR
701 YYSSFVNMHR DI.ASGUGPI, EICYKKSVDQ RGNQIMSDKR NVILFSVFDH 751 NRSWY1.THNI QRFI.PNPAGV Ql.KDPKFQAS N1MI1SINGYV FDS1.Q1.SVC1.
801 HEVAYWYILS1GAQTDFLSV FFSG YTFKHK MVYEDTLTLF PFSGETVFMS 851 MENPGLWILG CTINSDFRNRG MTALLKVSSC DKNTGDYYED SYEDISAYLL 901 SKNNAIi ;PRS F’SQNGAPGTS ESATPESGPG SEPATSGSET PGTSESATPE
951 SGPGSEPATS GSETPGTSES ATPESGPGTS TEPSEGSAPG SPAGSPTSTE
1001 PGTSESATPE SGPGSEPATS GSETPGTSES ATPESGPGSP AGSP'l'S I'IÍEG
1051 SPAGSPTSTE EGTSTEPSEG SAPGTSESAT PESGPGTSES ATPESGPGTS
1101 ESATPESGPG SEPATSGSET PGSEPATSGS ETPGSPAGSP TSTEEGTSTE
1151 PSEGSAPGTS FEPSEGSAI’G SEPATSGSET PGTSESA TPE SGPGTSTEPS
1201 EGSAPASSPP VI,KRHQAEIT RTTLQSDQEE IDYDDTISVE MKKEDFDIYD 1251 EDENQSPRSF QKKTRHYFIA AVERLWDYGM SSSPHVLRNR AQSGSVPQFK 1301 KVVFQEFTDG SFTQPL YRGE LNEHLGLLGP YIRAEVEDNIMVTFRNQASR 1351 PYSFYSSLIS YEEDQRQGAE PRKNFVKPNE TKTYFV'TCVQH HMAPTKDEFD 1401 CKAWAYFSDV DI.HKDVI [SOI. 1GPI.EVCI ITN TLNPAl IGRQV TVQKFAI.FFT 1451 IFDKTKSWYF TKNMHRNCRA PCNIQMKDPT FKKNYRF1IA1 NGYIMDTI.PG 1501 1.VMAQDQR1R WYI.ESMGSNH NI 1IS111FSGI1 VFTVRKKKHY KMAFYNEYPG 1551 VFETVEMLPS KAGIWRVECL IGEHLHAGMS TLFLVYSNKC QTPLGMASGH 1601 IRDFQITASG QYGQWAPKLA RLIIYSGSINA WSTKEPFSWI KVDLLAPMII 1651 HGIK l’QGARQ KFSSLY1SQ11’ IIMYSI.IXIKK WQTYRGNSTG 'l'LMVFFGNVl) 1701 SSGIKHNIFN PPI1ARYIRI. HPTHYS1RST LRMELMGCD1. NSCSMPLGME
1751 SKAISDAQIT ASSYFTNMFA TWSPSKARLH LQGRSNAARP QVNNPKEWLQ 1801 VDFQKTMKVT GVTTQGVKSI, ETSMYVKFi.FI, (SSSQDG11QW TEFFQNGKVK 1851 VFQGNQDSFT PVVNSI.DPPI, ETRYI.RI1 IPQ SWVIIQ1AI.RM EVI.GCHAQDI, 1901 Y*
Secuencia de proteína de<p>SYN-FVIII-161 (SEQ ID NO: 69) (Secuencia de aminoácidos de FVIII posiciones 1-1457; la región subrayada representa la región Fc; el subrayado curvilíneo representa el conector escindible entre la primera Fc y el fragmento de VWF; la región con doble subrayado representa el fragmento de VWF; la región en negrita representa el conector escindible entre el fragmento de VWF y Fc).
1 MQIKLSTCFF I.CLI.RFCFSA TRRYYI.GAVK I.SWDYMQSDI, GHl.PVDARFP 5 1 PRVPKSFPFN TSVVYKKTLF VEFTDHLFNI AKPRPPWMGL LGPTIQAEVY
101 DTVVITLKNM ASI IPVSI.I IAV GVSYWKASHG AKYDDQTSQR HKEDDKVFPG 151 GSHTYVWQVL KENCPMASDP LCLTYSYLSH VDLVKDLNSG LICALLVCRE 201 GSLAKEKTQT LHKFELLFAV FDEGKSWIISE TKNSLMQDRD AASARAWPKM 251 HTVNGYVNRS LPGL1GCHRK SVYWHV1GMG TTPEVHSIFL KGHTFLVRNH 301 RQASLKISPl TFFTAQTLLM DLGQFLLFCH ISSHQHDGML AYVKVDSCPE .15 I l p q l r m k n n e e a e d y d d d l t d s l m d v v r f d d d n s p s f iq i r s v a k k h p k t 401 WVHYIAAEEE DWDYAPLVLA PDDRSYKSQY LNNGPQRiGR KYKKVRFMAY 451 TDETFKTREA IQHESGILGP LLYGEVGDTL LIEFKNQASR PYNIYPHGIT 501 DVRPLYSRRL PKGVKIILKDF PILPGEIFKY KWTVTVEDGP TKSDPRCLTR 551 YYSSFVNMER DFASGUGPl, LICYKHSVDQ RGNQ1MSDKR NV1LFSVFDE 601 NRSWYLTENI QRFLPNPAGV QLEDPEFQAS MMHSINGYV FDSLQLSVCL 651 HEVAYWYILSIGAQTDFLSV FFSGYTFKHK MVYEDTLTLF PFSGETVFMS 701 MENPGLWILG CIINSDFRNRG MTALLKVSSC DKNTGDYYKD SYHD1SAYLI, 751 SKNNAIEPRS FSQNPPVLKR HQREITRTTL QSDQEEIDYD DTISVEMKKE 801 DFDIYDEDEN QSPRSFQKKT RIIYFIAAVER LWDYGMSSSP IIVLRNRAQSG 851 SVPQFKKVW QEFTDGSFTQ PLYRGELNEII LGLLGPYIRA EVEDMMVTF 901 RNQASRPYSP' YSSLISYHED QRQGAKPRKN FVKPNETKTY FWKVQHHMAP 951 TKDEFDCKAW AYFSDVDLEK DVHSGL1GPL LVCHTNTI.NP AHGRQVTVQE 1001 FALFFTIFDE TKSWYFTENM ERNCRAPCNI QMEDPTFKEN YRFIIAINGYI 1051 MDTLPGLVMA QDQRIRWYLL SMGSNI-N1HS ÍHI-'SGH Vl-'TV RKKKHYKMAL 1101 YNLYPGVFET VEMLPSKAGIWRVECLIGEH LHAGMSTLFL VYSNKCQTPL 1151 GMASGHIRDF QITASGQYGQ WAPKI.ARLHY SGSINAWS'IK EPFSW1KVDL 1201 FAPM11HG1K TQGARQKFSS EYISQFI1MY SLDGKKWQ'IY RGNSTGTLMV 1251 FFGNVDSSGI KHMFNPPIIARY1RLHPTH YSIRSTLRME LMGCDLNSCS 1301 MPLGMKSKAI SDAQITASSY FTNMFATWSP SKARLI ILQGR SNAWRPQVNN 1351 PKEWI.QVDFQ KTMK VTGVTT QGVKSLLTSM YVKEFLISSS QDGIIQWTLFF 1401 QNGKVKVFQG NQDSFTPVVN SLDPPLLTRY LRIHPQSWVH QIALRMEVLG 1451 CEAQDLYDKT HTCPPCPAPE LLGGPSVFLF PPKPKDTLMI SRTPEVTCW 1501 VDVSIIEDPEV KFNWYVDGVE VIINAKTKPRE EQYNSTYRVV SVLTVLIIQDW 1551 LNGKEYKCKV SNKALPAPIE KTISKAKGQP REPQVYTLPP SRDELTKNOV 1601 SLTCLVKGFY PSDIAVHWES NGOPKNNYKT TPPVLDSDGS FFLYSKLTVD 1651 KSRWOOGNVF SCSVMHEALH NHYTOKSLSL SPGKRRRRSG GGGSGGGGSG 1701 GGGSGGGGSG GGGSGGGGSR KRRKRSLSCR PPMVKL VCTA DM.RAEGLEC 1751 TKTCONYDLF. CMSMGCVSGC LCPPGMVRIIF, NRCVALF.RCP CFIIOGKEYAP 1801 GETVKIGCNT CVCRDRKWNC TDHVCDATCS TIGMAH YLTF DGLKYLFPGE 1851 CQYVLVQDYC GSNPGTFRIL VGNKGCSHPS VKCKKRVTIL VEGGEIELFD 1901 GHVNVKRPMK DETHFEVVHS GRYI1LLLGK ALSVVWDRF1L S1SVVLKOTY 1951 QEKVCGLCGN FDGIQNNDLT SSNLQVEEDP VDFGNSWKVS SQCADTRKVP 2001 LDSSPATCIIN NIMKOTMVDS SCR1LTSDVF ODCNKI.VDPK PYLDVCIYDT 2051 CSCE8ÍGDCA AFCDTTAAYA HVCAOfíC.KVV TWRTATT.CPO SCEERNT.REN 2101 GYHAHWRYNS CAPACOVTCO 11PHPI.ACPVO CVHGCI1A11CP PGKILDKLLO 2151 TC VDPEDCPV CEVAGRRTAS GKKVTLNPSD PEHCOICHCD VVNLTCEACO 2201EEISGTSESA TPESGPGSEP ATSGSETPGT SESATPESGP GSEPATSGSE2251TPGTSESATP ESGPGTSTEP SEGSAPGSPA CSPTSTEEGT SESATPESGP2301GSEPATSGSE TPGTSESATP ESGPGSPAGS PTSTEEGSPA GSPTSTEEGT2351STEPSEGSAP GTSESATPES GPGTSESATP ESGPGTSESA TPESGPGSEP2401ATSGSETPGS EPATSGSETP GSPAGSPTST EEGTSTEPSE GSAPGTSTEP2451SEGSAPGSEP ATSGSETPGT SESATPESGP GTSTEPSEGS APDSGGGGSG2501GGGSGGGGSG GGGSGGGGSL VPRGSGGDKTHTCPPCPAPE LLGGPSVFLF 2551 PPKPKDTLMI SRTPEVTCW VDVSIIEDPEV KFNWYVDGVK VI INAKTKPRE 2601 EQYNSTYRVV SVLTVLHODW LNGKEYKCKV SNKALPAPIE KTISKAKGQP 2651 REPQVYTLPP SRDELTKNOV SLTCLVKGKY PSPIAVKWKS NGQPHNNYKT 2701 TPPVLDSDGS FFLYSKLTVD KSRWOOGNVF SCSVMHEALH NHYTOKSLSL 2751
m
Secuencia de proteína de<p>SYN-FVIII-170 (SEQ ID NO: 71)
1 SLSCRPPMVK LVCPADNLRA EGLECTKTCQ NYDLECMSMG CVSGCLCPPG
51 M VRIIENRCVA LERCPCFIIQG KEYAPGETVK IGCNTCVCRD RKW NCTDIIVC 101 DATCSTIGMA H Yl/l'l DGEKY I.FPGHCQYVL VQDYCGSNPG l’PRll.VGNKG 151 CSHPSVKCKK RVTILVIiGGK IHEPDGEVNV KRPMKDIi THP HVVKSGRYI1
201 LLLGKALSVV W DRHLSISVVLKQTYQEKVC GLCGNFDGIQ NNDLTSSNLQ 251 VEEDPVDFGN SWKVSSQCAD TRKVPLDSSP ATCIINNIM KQ TMVDSSCRIL 301 TSDVFQDCNK. I.VDPFPYLDV C1YDTCSCHS ÍGIXIAAFCDT IAAYAHVCAQ 351 HGKVVTWRTA 1LCPQSCEER NLRENGYEAE WRYNSCAPAC QVTCQHPFPF 401 ACPVQCVEGC HAHCPPGKIL DELLQTCVDP EDCPVCEVAG RRFASGKKVT 451 LNPSDPEF1CQICHCDVVNLT GEACOEPISG TSESATPESG PGSEPATSGS
501 HTPGTSKSAT PHSGPGSHPA TSGSHTPGTS HSATPHSGPG TSTHPSHGSA
551 PGSPAGSPTS TKKGTSKSAT PHSGPGSHPA TSGSHTPGTS HSATPHSGPG
601 SPAGSPTSTE EGSPAGSPTS TEEGTSTEPS EGSAPGTSES ATPESGPGTS
651 ESATPESGPG TSESATPESG PGSEPATSGS ETPGSEPATS GSETPGSPAG
701 SPTSTEEGTS TEPSEGSAPG TSTEPSEGSA PGSEPATSGS ETPGTSESAT
751 PFSGPGTSTF PSEGSAPDSG GGGSGGGGSG GGGSGGGGSG GGGSLVPRGS 801 GGASATRRYY LGAVELSW DY MOSDLGELPV DARFPPRVPK SFPFN T SW Y 851 KKTLFVEFTDIILFN1AKPRP PWMGLLGPTI QAEVYDTVV1 TLKNM ASIIPV 901 SI.HAVGVSYW KASEGAEYDD QTSQRPXEDI) K VFPGGSHTY VWQVLKENGP 951 MASDPLCLTY SYLSHVDLVK DLNSGLIGAL LVCREGSL<t>YK EKTQTLHKFI 1001 LLFAVFDEGK SWHSETKNSL MQDRDAASAR AW TKMHTVNG YVNRSLPGLI 1051 GC1IRKSVYWII VIGMGTTPHV 1ISIF1.KG11TP LVRNIIRQASI. KISPITKLTA 1101 QTFI.M DI.GQF 1,1.FC111SSI1Q 11DGMHAYVKV DSCPKKPQI.R MKNNHKAKDY 1151 DDDLTDSEMD VVRFDDDNSP SFIQIRSVAK KHPKTW VHYIAAEEEDW DYA 1201 PLVLAPDDRS YKSQYLNNGP QRIGRKYKKV RFMAYTDETF KTREAIQIIES 1251 GELGPLLYGE VGDTLLIIFK N QASRPYM Y PIIGITDVRPL YSRRLPKGVK
1301 H1.KDFP1I.PG ElFKYKW rVT VKDGPTKSDP RCPTRYYSSF VNMERDLASG 1351 LIGPLLICYK ESVDQRGNQIMSDKRNV1LF SW D EN RSW Y LTENIQRFLP 1401 NPAGVQLEDP EFQASNIMIIS INGYVFDSLQ LSVCLIIEVAY WYILSIGAQT 1451 DFLSVFFSGY TFKIEKMVYED TLTLFPFSGE TVFMSMENPG LW ILGCIINSD 1501 l'RNRGMTALE KVSSCDKN JG DYYEDSYl-DI SAYU.SKNNA 1EPRSFSQNP 1551 PVLKRHQREI TRTTLQSDQE EEDYDDTIS V EM KKEDFDIY DEDENQSPRS 1601 l'QKK 1'RHYl'l AAVERI.WDYG MSSSPHVLRN RAQSGSVPQF KKVVFQEF1D 1651 GSFTQPLYRG ELNEHLGLLG PY1RAEVEDNIMVTFRNQAS RPYSFYSSLI 1701 SYHEDQRQGA KPRKNFVKPN HTKTYFWKVQ 1IIIMAPTKDKF DCKAWAYFSD 1751 VDLEKDVHSG LIGPLLVCHT NTLNPAHGRQ VTVQEFALFF TIFDETKSWY 1801 FTENP4ERNCR APCM QM EDP TFKENYRFHAINGYIM DTLP GLVK4AQDQRI 1851 RW YLLSM GSN ENIIISIIDFSGIIW TVRKKEE YKMAL YNLYP G W ETV EM LP 1901 SKAGIWRVFC LIGFHI.HAGM STLI'I.VYSNK CQTPIAÍMASG HIRDP'QITAS 1951 GQYGQWAPKL ARFHYSGSIN AW STKPPFSW IKVDFLAPM1 1HG1KTQGAR 2001 QKFSSLYISQ FIIMYSLDGK KWQTYRGNST GTLMVFFGNV DSSGIKHNIF 2051 NPPIIARYIR I-HPTHYSIRS ri-RM EI.MGCD FNSCSMPI.GM ESKA1SDAQ1
2101 TASSYFTNMF ATWSPSKARL HLQGRSNAV^7R PQVNNPKEWL QVDFQKTMKV 2151 TGVTTQGVKS LLTSMYVKIÍF FISSSQDGHQ WTFFFQNGKV KV1-QGNQDSF 2201 TPVVNSLDPP LLTRYLRIHP QSWVHQIALR MEVLGCEAQD LY
Secuencia de nucleótidos de pSYN FVIII 310 (que codifica FVIII con deleción del dominio B completo excepto 2 residuos de aminoácidos y Xt En 288 AE insertado después del aa 742) (SEQ ID NO:170)
1 ATGCAAATAG AGCTCTCCAC CTGCTTCTTT CTGTGCCTTT TGCGATTCTG 51 CTTTAGTGCC ACCAGAAGAT ACTACCTGGG TGCAGTGGAA CTGTCATGGG 101 ACTATATGCA AAGTGATCTC GGTGAGCTGC CTGTGGACGC AAGATTTCCT 151 CCTAGAGTGC CAAAATCTTT TCCATTCAAC ACCTCAGTCG TGTACAAAAA 201 GACTCTGTTT GTAGAATTCA CGGATCACCT TTTCAACATC GCTAAGCCAA 251 GGCCACCCTG GATGGGTCTG CTAGGTCCTA CCATCCAGGC TGAGGTTTAT 301 GATACAGTGG TCATTACACT TAAGAACATG GCTTCCCATC CTGTCAGTCT 351 TCATGCTGTT GGTGTATCCT ACTGGAAAGC TTCTGAGGÜA GCTGAATATG 401 ATGATCAGAC CAGTCAAAGG GAGAAAGAAG ATGATAAAGT CTTCCCTGGT 451 GGAAGCCATA CATATGTCTG GCAGGTCCTG AAAGAGAATG GTCCAATGGC 501 CTCTGACCCA CTGTGCCTTA CCTACTCATA TCTTTCTCAT GTGGACCTGG 551 TAAAAGACTT GAATTCAGGC CTCATTGGAG CCCTACTAGT ATGTAGAGAA 601 GGGAGTCTGG CCAAGGAAAA GACACAGACC TTGCACAAAT TTATACTACT 651 TTTTGCTGTA TTTGATGAAG GGAAAAGTTG GCACTCAGAA ACAAAGAACT 701 CCTTGATGCA GGATAGGGAT GCTGCATCTG CTCGGGCCTG GCCTAAAATG 751 CACACAGTCA ATGGTTATGT AAACAGGTCT CTGCCAGGTC TGATTGGATG 801 CCACAGGAAA TCAGTCTATT GGCATGTGAT TGGAATGGGC ACCACTCCTG 851 AAGTGCACTC AATATTCCTC GAAGGTCACA CATTTCTTGT GAGGAACCAT 901 CGCCAGGCGT CCTTGGAAAT CTCGCCAATA ACTTTCCTTA CTGCTCAAAC 951 ACTCTTGATG GACCTTGGAC AGTTTCTACT GTTTTGTCAT ATCTCTTCCC 1001 ACCAACATGA TGGCATGGAA GCTTATGTCA AAGTAGACAG CTGTCCAGAG 1051 GAACCCCAAC TACGAATGAA AAATAATGAA GAAGCGGAAG ACTATGATGA 1101 TGATCTTACT GATTCTGAAA TGGATGTGGT CAGGTTTGAT GATGACAACT 1151 CTCCTTCCTT TATCCAAATT CGCTCAGTTG CCAAGAAGCA TCCTAAAACT 1201 TGGGTACATT ACATTGCTGC TGAAGAGGAG GACTGGGACT ATGCTCCCTT 1251 AGTCCTCGCC CCCGATGACA GAAGTTATAA AAGTCAATAT TTGAACAATG 1301 GCCCTCAGCG GATTGGTAGG AAGTACAAAA AAGTCCGATT TATGGCATAC 1351 ACAGATGAAA CCTTTAAGAC TCGTGAAGCT ATTCAGCATG AATCAGGAAT 1401 CTTGGGACCT TTACTTTATG GGGAAGTTGG AGACACACTG TTGATTATAT 1451 TTAAGAATCA AGCAAGCAGA CCATATAACA TCTACCCTCA CGGAATCACT 1501 GATGTCCGTC CTTTGTATTC AAGGAGATTA CCAAAAGGTG TAAAACATTT 1551 GAAGGATTTT CCAATTCTGC CAGGAGAAAT ATTCAAATAT AAATGGACAG 1601 TGACTGTAOA AGATGGGCCA ACTAAATCAG ATCCTCÜGTG CCTÜACCCGC 1651 TATTACTCTA GTTTCGTTAA TATGGAGAGA GATCTAGCTT CAGGACTCAT 1701 TGGCCCTCTC CTCATCTGCT ACAAAGAATC TGTAGATCAA AGAGGAAACC 1751 AGATAATGTC AGACAAGAGG AATGTCATCC TGTTTTGTGT ATTTGATGAG 1801 AACCGAAGCT GGTACCTCAC AGAGAATATA CAACGCTTTC TCCCCAATCC 1851 AGCTGGAGTG CAGCTTGAGG ATCCAGAGTT CCAAGCCTCC AACATCATGC 1901 ACAGCATCAA TGGCTATGTT TTTGATAGTT TGCAGTTGTC AGTTTGTTTG 1951 CATGAGGTGG CATACTGGTA CATTCTAAGC ATTGGAGCAC AGACTGACTT 2001 CCTTTCTGTC TTCTTCTCTG GATATACCTT CAAACACAAA ATGGTCTATG 2051 AAGACACACT CACCCTATTC CCATTCTCAG GAGAAACTGT CTTCATGTCG 2101 ATGGAAAACC CAGGTCTATG GATTCTGGGG TGCCACAACT CAGACTTTCG 2151 GAACAGAGGC ATGACCGCCT TACTGAAGGT TTCTAGTTGT GACAAGAACA 2201 CTGGTGATTA TTACGAGGAC AGTTATGAAG ATATTTCAGC ATACTTGCTG 2251 AGTAAAAACA ATGCCATTGA ACCAAGAAGC TTCGGTACCT CAGAGTCTGC 2301 TACCCC’CGAG TCAGGGCCAG GATCAGAGCC AGCCACCTCC GGGTCTGAGA 2351 CACCCGGGAC TTCCGAGAGT GCCACCCCTG AGTCCGGACC CGGGTCCGAG 2401 CCCGCCACTT CCGGCTCCGA AACTCCCGGC ACAAGCGAGA GCGCTACCCC 2451 AGAGTCAGGA CCAGGAACAT CTACAGAGCC CTCTGAAGGC TCCGCTCCAG 2501 GGTCCCCAGC CGGCAGTCCC ACTAGCACCG AGGAGGGAAC CTCTGAAAGC 2551 GCCACACCCG AATCAGGGCC AGGGTCTGAG CCTGCTACCA GCGGCAGCGA 2601 GACACCAGGC ACCTCTGAGT CCGCCACACC AGAGTCCGGA CCCGGATCTC 2651 CCGCTGGGAG CCCCACCTCC ACTGAGGAGG GATCTCCTGC TGGCTCTCCA 2701 ACATCTACTG AGGAAGGTAC CTCAACCGAG CCATCCGAGG GATCAGCTCC 2751 CGGCACCTCA GAG1CGGCAA CCCCGGAGTC TGGACCCGGA ACTTCCGAAA 2801 GTGCCACACC AGAGTCCGGT CCCGGGACTT CAGAATCAGC AACACCCGAG 2851 TCCGGCCCTG GGTCTGAACC CGCCACAAGT GGTAGTGAGA CACCAGGATC 2901 AGAACCTGCT ACCTCAGGGT CAGAGACACC CGGATCTCCG GCAGGCTCAC 2951 CAACCTCCAC TGAGGAGGGC ACCAGCACAG AACCAAGCGA GGGCTCCGCA 3001 CCCGGAACAA GCACTGAACC CAGTGAGGGT TCAGCACCCG GCTCTGAGCC 3051 GGCCACAAGT GGCAGTGAGA CACCCGGCAC TTCAGAGAGT GCCACCCCCG 3101 AGAGTGGCCC AGGCACTAGT ACCGAGCCCT CTGAAGGCAG TGCGCCAGCC 3151 TCGAGCGAAA TAACTCGTAC TACTCTTCAG TCAGATCAAG AGGAAATCGA 3201 TTATGATGAT ACCATATCAG TTGAAAI’GAA ÜAAGÜAAGAT TTTGACATTT 3251 ATGATGAGGA TGAAAATCAG AGCCCCCGCA GCTTTCAAAA GAAAACACGA 3301 CACTATTTTA TTGCTGCAGT GGAGAGGCTC TGGGATTATG GGATGAGTAG 3351 CTCCCCACAT GTTCTAAGAA ACAGGGCTCA GAÜTGGCAÜT GTCCCTCAGT 3401 TCAAGAAAGT TGTTTTCCAG GAATTTACTG ATGGCTCCTT TACTCAGCCC 3451 TTATACCGTG GAGAACTAAA TGAACATTTG GGACTCCTGG GGCCATATAT 3501 AAGAGCAGAA GITGAAÜATA ATATCATGGT AACTTTCAGA AATCAGÜCCT 3551 CTCGTCCCTA TTCCTTCTAT TCTAGCCTTA TTTCTTATGA GGAAGATCAG 3601 AGGCAAGGAG CAGAACCTAG AAAAAACTTT GTCAAGCCTA ATGAAACCAA 3651 AACTTACTTT TGGAAAGTGC AACATCATAT GGCACCCACT AAAGATGAGT 3701 TTGACTGCAA AGCCTGGGCT TATTTCTCTG ATGTTGACCT GGAAAAAGAT 3751 GTGCACTCAG GCCTGATTGG ACCCCTTCTG GTCTGCCACA CTAACACACT 3801 GAACCCTGCT CATÜGGAGAC AAGTGACAGT ACAGGAATTT GCTCTGTITT 3851 TCACCATCTT TGATGAGACC AAAAGCTGGT ACTTCACTGA AAATATGGAA 3901 AGAAACTGCA GGGCTCCCTG CAATATCCAG ATGGAAGATC CCACTTTTAA 3951 AGAGAATTAT CÜCTTCCATÜ CAATCAATGG CTACATAATG GATACACTAC 4001 CTGGCTTAGT AATGGCTCAG GATCAAAGGA TTCGATGGTA TCTGCTCAGC 4051 ATGGGCAGCA ATGAAAACAT CCATTCTATT CATTTCAGTG GACATGTGTT 4101 CACTGTACGA AAAAAAGAGG AGTATAAAAT GGCACTÜTAC AATCTCTAl'C 4151 CAGGTGTTTT TGAGACAGTG GAAATGTTAC CATCCAAAGC TGGAATTTGG 4201 CGGGTGGAAT GCCTTATTGG CGAGCATCTA CATGCTGGGA TGAGCACACT 4251 TTTTCTGGTG TACAGCAATA AGTGTCAGAC TCCCCTGGGA ATGGCTTCTG 4301 GACACATTAG AGATTTTCAG ATTACAGCTT CAGGACAATA TGGACAGTGG 4351 GCCCCAAAGC TGGCCAGACT TCATTATTCC GGATCAATCA ATGCCTGGAG 4401 CACCAAGGAG CCCTTTTCTT GGATCAAGGT ÜGATCTGTTG GCACCAATGA 4451 TTATTCACGG CATCAAGACC CAGGGTGCCC GTCAGAAGTT CTCCAGCCTC 4501 TACATCTCTC AGTTTATCAT C'ATGTATAGT CTTGATGGGA AGAAGTGGCA 4551 GACTTATCGA GGAAATTCCA CTGGAACCTT AATGGTCTTC TTTGGCAATG 4601 TGGATTCATC TGGGATAAAA CACAATATTT TTAACCCTCC AATTATTGCT 4651 CGATACATCC GTTTGCACCC AACTCATTAT AGCATTCGCA GCACTCTTCG 4701 CATGGAGTTG ATGGGCTGTG ATTTAAATAG TTGCAÜCATG CCATTGGGAA 4751 TGGAGAGTAA AGCAATATCA GATGCACAGA TTACTGCTTC ATCCTACTTT 4801 ACCAATATGT TTGCCACCTG GTCTCCTTCA AAAGCTCGAC TTCACCTCCA 4851 AGGGAGGAGT AATGCCTGGA GACCTCAGGT GAATAATCCA AAAGAGTGGC 4901 TGCAAGTGGA CTTCCAGAAG ACAATGAAAG TCACAGGAGT AACTACTCAG 4951 GGAGTAAAAT CTCTGCTTAC CAGCATGTAT GTGAAGGAGT TCCTCATCTC 5001 CAGCAGTCAA GATGGCCATC AGTGGACTCT CTTTTTTCAG AATGGCAAAG 5051 TAAAGGTTTT TCAGGGAAAT CAAGACTCCT TCACACCTGT GGTGAACTCT 5101 CTAGACCCAC CGTTACTGAC TCGCTACCTT CGAATTCACC CCCAGAGTTG 5151 GGTGCACCAG ATTGCCCTGA GGATGGAGGT TCTGGGCTGC GAGGCACAGG 5201 ACCTCTACGA CAAAACTCAC ACATGCCCAC CGTGCCCAGC TCCAGAACTC 5251 CTGGGCGGAC CGTCAGTCTT CCTCTTCCCC CCAAAACCCA AGGACACCCT 5301 CATGATCTCC CGÜACCCCTG AGGTCACATG CGTGGTGGTG GACGTGAGCC 5351 ACGAAGACCC TGAGGTCAAG TTCAACTGGT ACGTGGACGG CGTGGAGGTG 5401 CATAATGCCA AGACAAAGCC GCGGGAGGAG CAGTACAACA GCACGTACCG 5451 TGTGGTCAGC GTCCTCACCG TCCTGCACCA GGACTGGCTG AATGGCAAGG 5501 AGTACAAGTG CAAGGTCTCC AACAAAGCCC TCCCAGCCCC CATCGAGAAA 5551 ACCATCTCCA AAGCCAAAGG GCAGCCCCGA GAACCACAGG TGTACACCCT 5601 GCCCCCATCC CGGGATGAGC TGACCAAGAA CCAGGTCAGC CTGACCTGCC 5651 TGGTCAAAGG CTTCTATCCC AGCGACATCG CCGTGGAGTG GGAGAGCAAT 5701 GGGCAGCCGG AGAACAACTA CAAGACCACG CCTCCCGTGT TGGACTCCGA 5751 CGGCTCCTTC TTCCTCTACA GCAAGCTCAC CGTGGACAAG AGCAGGTGGC 5801 AGCAGGGGAA CGTCTTCTCA TGCTCCGTGA TGCATGAGGC TCTGCACAAC 5851 CACTACACGC AGAAGAGCCT CTCCCTGTCT CCGGGTAAAT GA
Secuencia de proteína de pSYN FVIII 310 (FVIII con deleción del dominio B completo excepto 2 residuos de aminoácidos y XTEN 288 AE insertado después del aa 742) (SEQ ID NO:171)
1 ATRRYYEGAV HESWDYMQSD EGEEPVDARF PPRVPKSFRK NTSVVYKKTE 51 FVHFTDHEFN 1AKPRPPWMG EEGPTIQAKV YDTVVITEKN MASHPVS1.HA 101 VGVSYWKASE GAHYDDQTSQ REKHDDKVFP GGSHIYVWQV EKHNGPMASn 151 PLCLTYSYLS HVDLVKDLNS GLIGALL VCR EGSLAKEKTQ TLHKFILLFA
201 VFDEGKSWHS ETKNSLMQDR DAASARAWPK MHTVNGYVNR SLPGLIGCHR 251 KSVYWHVTGM GTTPEVHSTF LF.GHTFLVRN HRQASLEISP ITFETAQTEE
301 MDLGQFLLFC 1I1SS11QI1DGM HAYVKVDSCT EEPQLRMKNN EEAEDYDDDL 351 TDSEMDVVRF DDDNSPSIOQ IRSVAKKHPK TWVHYIAAEli EDWDYAPEVE 401 APDDRSYKSQ YLNNGPQRIG RKYKKVRFMA YTDETFKTRE AIQHESGILG 451 PLLYGEVGDT LLIIFKNQAS RPYN1YPHGI TDVRPL YSRR LPKCVKHLKD
501 FPILPGEIFK YKWTVTVEDG PTKSDPRCLT RYYSSFVNME RDLASGLIGP
551 EEICYKESVD QRGNQIMSDK RNVIEFSVFI) ENRSWYETEN IQRFEPNPAG
601 VQLEDPEFQA SNÍMHSINGY VFDSEQESVC FFTFVAYWYIE S1GAQTDFES 651 VFFSGYTFKH KMVYEDTETE FPFSGHTVFM SMENPGEWH, GCHNSDFRNR 701 GMTALLKVSS CDKNTGDYYE DSYEDISAYL LSKNNA1EPR SFGTSESATP 751 ESGPGSEPAT SGSETPGTSE SATPESGPGS EPATSGSETP GTSESATPES
801 GPGTSTEPSE GSAPGSPAGS PTSTEEGTSE SATPESGPGS EPATSGSETP
851 GTSESATPES GPGSPAGSPT STEEGSPAGS PTSTEEGTST EPSEGSAPGT
901 SESATPESGP GTSESATPES GPÜTSESATP ESGPGSEPAT SGSETPGSEP
951 ATSGSGTPGS PAGSPTSTEE G i’STEPSEGS Al^GiSTEPSE G SAPO SEP A E
1001 SGSETPGTSE SATPESGPGT STEPSEGSAP ASSEITRTTL QSDQEEIDYD
1051 D TISVEMKKF DFD1YDHDKN QSPRSFQKKT RIIYF1AAVER EWDYGMSSSP 1101 HVI,RNRAQSG SVPQFKKVVF QEFTDGSFTQ PEYRGEENEH EGEEGPYTRA 1151 EVEDN1MVTF RNQASRPYSF YSS1JSYEIÍD QRQGAEPRKN FVKPNETKTY 1201 FV^TCVQHHM/YP TKDEFDCKAW AYFSDVDLEK DVHSGLIGPL LVCHTNTLNP 1251 AI IGRQVTVQE FALFFTIFDE TKSWYFTENM ERNCRAPCNI QMEDPTFKEN 1301 YRFIIAINGYI MDTEPGEVMA QDQR1RWYEE SMGSNKNI11S II1FSGIIVFTV 1351 RKKHKYKMAE YNEYPGVFHT VFMEPSKAGI WRVECEIGEII El IAGMSTEFE 1401 VYSNKCQTPL GMASGHIRDF QITASGQYGQ WAPKLARLHY SGSINAWSTK 1451 EPFSWKVDL LAPMIIHGIK TQGARQKFSS LYISQFIIMY SLDGKKWQTY
1501 RGNSTGTLMV FFGNVDSSGI KIINIFNPPIIARYIRLIIPTII YSIRSTLRME
1551 LMGCDLNSCS MPLGMESKAI SDAQITASSY FTNMFATWSP SKARLIILQGR 1601 SNAWRPQVNN PKKWEQVDFQ KTMKVTGVTT QGVKSI.l l'SM YVKKFEISSS 1651 QDGHQWTLFF Q N G K W W Q G NQDSFTPVVN SLDPPLLTRY LRIHPQSWVH 1701 QlAERMEVIXi CEAQDT. YDKT HTCPPCPAPE EEGGPSVFEF PPKPKDTEMI 1751 SRTPEVTCVV VDVSHEDPEV KFNWYVDGVE VHNAKTKPRE EQYNSTYRW 1801 SVLTVLIIQDW LNGKEYKCKV SNKALPAPIE KTISKAKGQP REPQVYTLPP 1851 SRDEETKNQV SETCEVKGF'Y PSDIAVEWES NGQPENNYKT TPPVI.DSIXIS 1901 FFEYSKETVD KSRWQQGNVF SCSVMIIFAEII NI IYTQKSESE SPGK*
Secuencia de nucleótidos de pSYN FVIII 312 (que codifica FVIII con deleción del dominio B completo excepto 5 residuos de aminoácidos y XTEN 288 AE insertado después del aa 745- versión B5) (SEQ ID NO:172)
1 ATGCAAATAG AGCTCTCCAC CTGCTTCTTT CTGTGCCTTT TGCGATTCTG 51 CTTTAGTGCC ACCAGAAGAT ACTACCTGGG TGCAGTGGAA CTGTCATGGG 101 ACTATATÜCA AAGTGATCTC GGTGAGCTGC CTGTGGACGC AAGATTTCCT 151 CCTAGAGTGC CAAAATCTTT TCCATTCAAC ACCTCAGTCG TGTACAAAAA 201 GACTCTGTTT GTAGAATTCA CGGATCACCT TTTCAACATC GCTAAGCCAA 251 GGCCACCCTG GATGGGTCTG CTAGGTCCTA CCATCCAGGC TGAGGTTTAT 301 GATACAGTGG TCATTACACT TAAGAACATG GCTTCCCATC CTGTCAGTCT 351 TCATGCTGT'r GGTGTATCCT ACTGGAAAGC 1TCTGAGGGA GCTGAATATG 401 ATGATCAGAC CAGTCAAAGG GAGAAAGAAG ATGATAAAGT CTTCCCTGGT 451 GGAAGCCATA CATATGTCTG GCAGGTCCTG AAAGAGAATG GTCCAATGGC 501 CTCTGACCCA C'TGTGCL'TTA CCTACTCATA TCTTTCTCAT GTGGACCTGG 551 TAAAAGACTT GAATTCAGGC CTCATTGGAG CCCTACTAGT ATGTAGAGAA 601 GGGAGTCTGG CCAAGGAAAA GACACAGACC TTGCACAAAT TTATACTACT 651 TTTTGCTGTA TTTGATGAAG GGAAAAGTTG GCACTCAGAA ACAAAGAACT 701 CCTTGATGCA GGATAGGGAT GCTGCATCTG CTCGGGCCTG GCCTAAAATG 751 CACACAGTCA ATGGTTATGT AAACAGGTCT CTGCCAGGTC TGATTGGATG 801 CCACAGGAAA TCAGTCTATT GGCATGTGAT TÜGAATGGGC ACCACTCCTG 851 AAGTGCACTC AATATTCCTC GAAGGTCACA CATTTCTTGT GAGGAACCAT 901 CGCCAGGCGT CCTTGGAAAT CTCGCCAATA ACTTTCCTTA CTGCTCAAAC 951 ACTCTTGATG GACCTTGGAC AGTTTCTACT GTTTTGTCAT ATCTCTTCCC 1001 ACCAACATGA TGGCATGGAA GCTTATGTCA AAGTAGACAG CTGTCCAGAG 1051 GAACCCCAAC TACGAAT GAA AAATAATGAA G7VAGCGGAAG ACTATGATGA 1101 TGATCTTACT GATTCTGAAA TGGATGTGGT CAGGTTTGAT GATGACAACT 1151 CTCCTTCCTT TATCCAAATT CGCTCAGTTG CCAAGAAGCA TCCTAAAACT 1201 TGÜÜTACATT ACATTGCTÜC TGAAÜAÜGAG GACTGGGACT ATÜCTCCCTT 1251 AGTCCTCGCC CCCGATGACA GAAGTTATAA AAGTCAATAT TTGAACAATG 1301 GCCCTCAGCG GATTGGTAGG AAGTACAAAA AAGTCCGATT TATGGCATAC 1351 ACAGATGAAA CCTTTAAGAC TCGTGAAGCT ATTCAGCATG AATCAGGAAT 1401 CTTGGGACCT TTACTTTATG GGGAAGTTGG AGACACACTG TTGATTATAT 1451 TTAAGAATCA AGCAAGCAGA CCATATAACA TCTACCCTCA CGGAATCACT 1501 GATGTCCGTC CTTTGTATTC AAGGAGATTA CCAAAAGGTG TAAAACATTT 1551 GAAGGATTTT CCAATTCTGC CAGGAGAAAT ATTCAAATAT AAATGGACAG 1601 TGACTGTAGA AGATGGGCCA ACTAAATCAü ATCCTCGGTG CCTGACCCGC 1651 TATTACTCTA GTTTCGTTAA TATGGAGAGA GATCTAGCTT CAGGACTCAT 1701 TGGCCCTCTC CTCATCTGCT ACAAAGAATC TGTAGATCAA AGAGGAAACC 1751 AGATAATGTC AGACAAGAGG AATGTCATCC TGTTTTCTGT ATTTGATGAG 1801 AACCGAAGCT GGTACCTCAC AGAGAATATA CAACGCTTTC TCCCCAATCC 1851 AGCTGGAGTG CAGCTTGAGG ATCCAGAGTT CCAAGCCTCC AACATCATGC 1901 ACAGCATCAA TGGCTATGTT TTTGATAGTT TGCAGTTGTC AGTTTGTTTG 1951 CATGAGGTGG CATACTGGTA CATTCTAAGC ATTGGAGCAC AGACTGACTT 2001 CCTTTCTGTC TTCTTCTCTG GATATACCTT CAAACACAAA ATGGTCTATG 2051 AAGACACACT CACCCTATTC CCATTCTCAG GAGAAACTGT CTTCATGTCG 2101 ATGGAAAACC CAGGTCTATG GATTCTGGGG TGCCACAACT CAGACTTTCG 2151 GAACAGAGGC ATGACCGCCT 1ACTGAAGGT TTCI’AGTTGT (xACAAGAACA 2201 CTGGTGATTA TTACGAGGAC AGTTATGAAG ATATTTCAGC ATACTTGCTG 2251 AGTAAAAACA ATGCCATTGA ACCAAGAAGC TTCTCTCAAA ACGGTACCTC 2301 AGAGTCTGCT ACCCCCGAGT CAGGGCCAGG ATCAGAGCCA GCCACCTCCG 2351 GGTCTGAGAC ACCCGGGACT TCCGAGAGTG CCACCCCTGA GTCCGGACCC 2401 GGGTCCGAGC CCGCCACTTC CGGCTCCGAA ACTCCCGGCA CAAGCGAGAG 2451 CGCTACCCCA GAGTCAGGAC CAGGAACATC TACAGAGCCC TCTGAAGGCT 2501 CCGCTCCAGG GTCCCCAGCC GGCAGTCCCA CTAGCACCGA GGAGGGAACC 2551 TC 1GAAAGCG CCACACCCGA ATCAGGGCCA GGGTCTGAGC CTGCTACCAG 2601 CGGCAGCGAG ACACCAGGCA CCTCTGAGTC CGCCACACCA GAGTCCGGAC 2651 CCGGATCTCC CGCTGGGAGC CCCACCTCCA CTGAGGAGGG ATCTCCTGCT 2701 GGCTCTCCAA CATCTACTGA GGAAGGTACC TCAACCGAGC CATCCGAGGG 2751 ATCAGCTCCC GGCACCTCAG AGTCGGCAAC CCCGGAGTCT GGACCCGGAA 2801 CTTCCGAAAG TGCCACACCA GAGTCCGGTC CCGGGACn’C AGAA1CAGCA 2851 ACACCCGAGT CCGGCCCTGG GTCTGAACCC GCCACAAGTG GTAGTGAGAC 2901 ACCAGGATCA GAACCTGCTA CCTCAGGGTC AGAGACACCC GGATCTCCGG 2951 CAGGCICACC AACCTCCACT GAGGAGGGCA CCAGCACAGA ACCAAGCGAG 3001 GGCTCCGCAC CCGGAACAAG CACTGAACCC AGTGAGGGTT CAGCACCCGG 3051 CTCTGAGCCG GCCACAAGTG GCAGTGAGAC ACCCGGCACT TCAGAGAGTG 3101 CCACCCC'CGA GAGTGGC'CCA GGCACTAGTA CCGAGCCCTC TGAAGGCAGT 3151 GCGCCAGCCT CGAGCGAAAT AACTCGTACT ACTCTTCAGT CAGATCAAGA 3201 GGAAATCGAT TATGATGATA CCATATCAGT TGAAATGAAG AAGGAAGATT 3251 TTGACATTTA TGATGAGGAT GAAAATCAGA GCCCCCGCAG CTTTCAAAAG 3301 AAAACACGAC ACTATTTTAT TGCTGCAGTG GAGAGGCTCT GGGATTATGG 3351 GATGAGTAGC TCCCCACATG TTCTAAGAAA CAGGGCTCAG AGTGGCAGTG 3401 TCCCTCAGTT CAAGAAAGTT GTTTTCCAGG AATTTACTGA TGGCTCCTTT 3451 ACTCAGCCCT TATACCGTGG AGAACTAAAT GAACATTTGG GACTCCTGGG 3501 GCCATATATA AGAGCAGAAG TTGAAGATAA TATCATGGTA ACTTTCAGAA 3551 ATCAGGCCTC TCGTCCCTAT TCCTTCTATT CTAGCCTTAT TTCTTATGAG 3601 GAAGATCAGA GGCAAGGAGC AGAACCTAGA AAAAACTTTG TCAAGCCTAA 3651 TGAAACCAAA ACTTACTTTT GGAAAGTGCA ACATCA iATG GCACCCACTA 3701 AAGATGAGTT TGACTGCAAA GCCTGGGCTT ATTTCTCTGA TGTTGACCTG 3751 GAAAAAGATG TGCACTCAGG CCTGATTGGA CCCCTTCTGG TCTGCCACAC 3801 TAACACACTG AACCCTGCTC ATGGGAGACA AGTGACAGTA CAGGAATTTG 3851 CTCTGTTTTT CACCATCTTT GATGAGACCA AAAGCTGGTA CTTCACTGAA 3901 AATATGGAAA GAAAC-TGCAG GGCTCCCTGC AATATCCAGA TGGAAGATCC 3951 CACTTTTAAA GAGAATTATC GCTTCCATGC AATCAATGGC TACATAATGG 4001 ATACACTACC TGGCTTAGTA ATGGCTCAGG ATCAAAGGAT TCGATGGTAT 4051 CTGCTCAGCA TÜGGCAGCAA TGAAAACATC CATTCTATTC ATTTCAGTGG 4101 ACATGTGTTC ACTGTACGAA AAAAAGAGGA GTATAAAATG GCACTGTACA 4151 ATCTCTATCC AGGTGTTTTT GAGACAGTGG AAATGTTACC ATCCAAAGCT 4201 GGAATTTGGC C1GGTGGAATG CCTTATTGGC GAGCATCTAC ATGCTGGGAT 4251 GAGCACACTT TTTCTGGTGT ACAGCAATAA GTGTCAGACT CCCCTGGGAA 4301 TGGCTTCTGG ACACATTAGA GATTTTCAGA TTACAGCTTC AGGACAATAT 4351 C1GACAGTGGG CCCCAAAGCT GGCCAGACTT CATTATTCCG GATCAATCAA 4401 TGCCTGGAGC ACCAAGGAGC CCTTTTCTTG GATCAAGGTG GATCTGTTGG 4451 CAC'CAATGAT TATTCACGGC ATCAAGACCC AGGGTGCC'CG TCAGAAGTTC 4501 TCCAGCCTCT ACATCTCTCA GTTTATCATC ATGTATAGTC TTGATGGGAA 4551 GAAGTGGCAG ACTTATCGAG GAAATTCCAC TGGAACCTTA ATGGTCTTCT 4601 TTGGCAATGT GGATTCATCT GGGAT AAA AC ACAATATTTT TAACCCTCCA 4651 ATTATTGCTC GATACATCCG TTTGCACCCA ACTCATTATA GCATTCGCAG 4701 CACTCTTCGC ATGGAGTTGA TGGGCTGTGA TTTAAATAGT TGCAGCATGC 4751 CATTGGGAAT GGAGAGTAAA GCAATATCAG ATGCAC’AGAT TACTGCTTCA 4801 TCCTACTTTA CCAATATGTT TGCCACCTGG TCTCCTTCAA AAGCTCGACT 4851 TCACCTCCAA GGGAGGAGTA ATGCCTGGAG ACCTCAGGTG AATAATCCAA 4901 AAGAGTGGCT GCAAGTGGAC TTCCAGAAGA CAATGAAAGT CACAGGAGTA 4951 ACTACTCAGG GAGTAAAATC TCTGCTTACC AGCATGTATG TGAAGGAGTT 5001 CCTCATCTCC AGCAGTCAAG ATGGCCATCA GTGGACTCTC TTTTTTCAGA 5051 ATGGCAAAGT AAAGGTTTTT CAGGGAAATC AAGACTCCTT CACACCTGTG 5101 GTGAACTCTC TAGACCCACC GTTACTGACT CGCTACCTTC GAATTCACCC 5151 CCAGAGTTGG GTGCACCAGA TTGCCCTGAG GATGGAGGTT CTGGGCTGCG 5201 AGGCACAGGA CCTCTACGAC AAAACTCACA CATGCCCACC GTGCCCAGCT 5251 CCAGAACTCC TGGGCGGACC GTCAGTCTTC CTCTTCCCCC CAAAACCCAA 5301 GGACACCCTC ATGATCTCCC GGACCCCTGA GGTCACATGC GTGGTGGTGG 5351 ACGTGAGCCA CGAAGACCCT GAGGTCAAGT TCAACTGGTA CGTGGACGGC 5401 GTGGAGGTGC ATAATGCCAA GACAAAGCCG CGGGAGÜAGC AGTACAACAG 5451 CACGTACCGT GTGGTCAGCG TCCTCACCGT CCTGCACCAG GACTGGCTGA 5501 ATGGCAAGGA GTACAAGTGC AAGGTCTCCA ACAAAGCCCT CCCAGCCCCC 5551 ATCGAGAAAA CCATCTCCAA AGCCAAAGGG CAGCCCCGAG AACCACAGGT 5601 GTACACCCTG CCCCCATCCC GGGATGAGCT GACCAAGAAC CAGGTCAGCC 5651 TGACCTGCCT GGTCAAAGGC TTCTATCCCA GCGACATCGC CGTGGAGTGG 5701 GAGAGCAATG GGCAGCCGGA GAACAACTAC AAGACCACGC CTCCCGTGTT 5751 GGACTCCGAC GGCTCCTTCT TCCTCTACAG CAAGCTCACC GTGGACAAGA 5801 GCAGGTGGCA GCAGGGGAAC GTCTTCTCAT GCTCCGTGAT GCATGAGGCT 5851 CTGCACAACC ACTACACGCA GAAGAGCG'TC TCCCTGTCTC CGGGTAAATG
Secuencia de proteína de pSYN FVIII 312 (FVIII con deleción del dominio B completo excepto 5 residuos de aminoácidos y XTEN 288 AE insertado después del aa 745- versión B5) (SEQ ID NO:173)
1 ATRRYYLÜAV ELSWDYMQSD LGELPVDARF PPRVPKSFPF' NTSVVYKKTL 51 FVEFTDHLFN IAKPRPPWMG PI.GPTIQAPV YDTVVI11.KN MASHPVSl.HA 101 VGVSYWKASE GAEYDDQTSQ REKEDDKVFP GGSHTYVWQV LKENGPMASD 151 PLCLTYSYLS HVDLVKDLNS GLIGALLVCR EGSLAKEKTQ TLHKFILLFA
201 VFDEGKSWHS ETKNSLMQDR DAASARAWPK MHTVNGYVNR SLPGLIGCHR 251 KSVYWHVTGM GTTPEVHSIF LEGHTFLVRN HRQASLEISPITFLTAQTLL
301 MDLGQFLLFC IIÍSS1IQIIDGM EAYVKVDSCP EEPQLRMKNN EEAEDYDDDL 351 TDSEMDVVRF DDDNSPSF1Q ÍRSVAKKHPK TWVH YIAAEE EDWDYAPLVL 401 APDDRSYKSQ YLNNGPQR1G RKYKKVRFMA YTDETFKTRE AIQilESGILG 451 PEI.YGEVGDT FI.I1FKNQAS RPYN1YP1IGI TDVRPFYSRR FPKGVK1 ll.KD
501 FPITPGETFK YKWTVTVEDG PTKSDPRCLT RYYSSFVNME RDLASGLIGP
551 LLIC YKESVD QRGNQIMSDK RNVTLFSVFD ENRSWYLTENIQRFLPNPAG
601 VQLEDPEFQA SNIMHSINGY VFDSLQLSVC LHEVAYWYIL SIGAQTDFLS 651 VFFSGYTFKIIKMVYEDTLTL FPFSGETVFM SMENPGLWIL GCIINSDFRNR 701 GMTAI4.KVSS CDKNTGDYYH DSYHD1SAY1, 1.SKNNA1HPR SFSQNGTSHS 751 ATPESGPGSE PATSGSETPG TSESATPESG PGSEPATSGS ETPGTSESAT
801 PESGPGTSTE PSEGSAPGSP AGSPTSTEEG TSESATPESG PGSEPATSGS
851 ETPGTSESAT PESGPGSPAG SPTSTEEGSP AGSPTSTEEG TSTEPSEGSA
901 PGTSESATPE SGPG'l'SHSAT PKSGPGTSKS ATPESGPGSE PATSGSE'ITG
951SEPATSGSET PGSPAGSl’TS TEEGTS'I’EPS EGSAPG'I STE PSEGSAPGSE
1001 PA TSGSETPG TSESATPESG PGTSTEPSEGSAPASSEITRTTEQSDQEE1
1051 DYDDTISVEM KKEDFDIYDE DENQSPRSFQ KKTRHYFIAA VERLVvT»YGMS 1101 SSPHVLRNR7V QSGSVPQFKK VVFQEFTDGS FTQPLYRGEL NEHLGLLGPY 1151 IRAEVEDNIM VTFRNQASRP YSFYSSI.TSY EEDQRQGAEP RKNFVKPNET 1201 KTWUTCVQHH MAPTKDEFDC KAWAYFSDVD LEKDVHSGLI GPLLVCHTNT 1251 LNPAHGRQVT VQEFAT.FFTT FDETKSWYFT ENMERNCRAP CNIQMEDPTF 1301 KENYRFIIAIN GYIMDTLPGL VMAQDQRIRW YLLSMGSNEN IIISIHFSGIIV 1351 FTVRKKEEYK MALYNÍ.YPGV FETVEMI.PSK AGIWRVECIJ GEIIEIIAGMST 1401 LFLVYSNKCQ TPLGMASGHI RDFQITASGQ YGQWAPKLAR LHYSGSINAW 1451 STKEPFSWIK VDLLAPMIIH GIKTQGARQK FSSLYISQFIIMYSLDGKKW
1501 QTYRGNSTGT LMVFFGNVDS SGEECHNIFNP PIIARYERLH PTHYSIRSTL
1551 RMELMGCDLN SCSMPLGMES KAISDAQITA SSYFTNMFAT WSPSKARLIIL 1601 QGRSNAWRPQ VNNPKEWI,QV DT’QKTMKVTG VTTQGVKSIT, TSMYVKEFI.l 1651 SSSQIX<t>I 1QWT EFFQNGKVKV FQGNQDSFTP VVNSEDPPL1, TRYLR1IIPQS 1701 WVHQIALRME VLGCEAQDLY DKTHTCPPCP APELLOGPSV FLFPPKPKDT 1751 LMISRTPEVT CVVVDVSF1ED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY 1801 RVVSVLTVL1IQDWLNGKEYK CKVSNKALPA P1EK T1SKAK GQPREPQVYT 1851 LPPSRDELTK NQVSLTCLVK GF YPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS 1901 DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPGK*
Secuencia de nucleótidos de pSYN VWF059 (que codifica VWF D’D3-F<c>con región áoida 2 (a2) del sitio de trombina en el conector) (SEQ ID NO: 196)
1 ATGATTCCTG CCAGATTTGC CGGGGTGCTG CTTGCTCTGG CCCTCATTTT 51 GCCAGGGACC CTTTGTGCAG AAGGAACTCG CGGCAGGTCA TCCACGGCCC 101 GATGCAGCCT TTTCGGAAGT GACTTCGTCA ACACCTTTGA TGGGAGCATG 151 TACAÜCTTTG CGGGAI ACTO CAGTTACCTC CTGGCAGGGG GCTGCCAGAA 201 ACGCTCCTTC FCGATTATTG GGGACTTCCA GAATGGCAAG AGAGTGAGCC 251 TCTCCGTGTA TCTTGGGGAA TTTTTTGACA TCCATTTGTT TGTCAATGGT 301 ACCGTGACAC AGGGGGACCA AAGAGTCTCC ATGCCCTATG CCTCCAAAGG 351 GCTGTATCTA GAAAC l'GAGG CTGGGTACTA CAAGCTGTCC GGTGAGGCCT 401 ATGGCTTTGT GGCCAGGATC GATGGCAGCG GCAACTTTCA AGTCCFGCTG 451 TCAGACAGAT ACTTCAACAA GACCTGCGGG CTGTGTGGCA ACTTTAACAT 501 CTTTGCTGAA GATGACTTTA TGACCCAAGA AGGGACCTTG ACCTCGGACC 551 CTTATGACTT TGCCAACTCA TGGGCTCTGA GCAGTGGAGA ACAGTGGTGT 601 GAACGGGCAT CTCCTCCCAG CAGCTCATGC AACATCTCCT CTGGGGAAAT 651 GCAGAAGGGC CTGTGGGAGC AGTGCCAGCT ICTGAAGAGC ACCTCGGTGT 701 TTGCCCGCTG CCACCCTCTG GTGGACCCCG AGCCTTTTGT GGCCCTGTGT 751 GAGAAGACTT TGTGTGAGTG TGCTGGGGGG CTGGAGTGCG CCTGCCCTGC 801 CCTCCTGGAG TACGCCCGGA CCTGTGCCCA GGAGGGAATG GTGCTGTACG 851 GCTGÜACCGA CCACAGCGCG TGCAGCCCAG TGTGCCCTGC TGGTATGÜAG 901 TATAGGCAGT GTGTGTCCCC TTGCGCCAGG ACCTGCCAGA GCCTGCACAT 951 CAATGAAATG TÜTCAGGAGC GATGCGTGGA TGGCTGCAGC TGCCCTGAGG 1001 GACAGCTCCT GGATGAAGGC CTCTGCGTGG AGAGCACCGA GTGTCCCTGC 1051 GTGCATTCCG GAAAGCGCTA CCCTCCCGGC ACCTCCCTCT CTCGAGACTG 1101 CAACACCTGC ATTTGCCGAA ACAGCCAGTG GATCTGCAGC AATGAAGAAT 1151 GTCCAGGGGA GTGCCTTGTC ACTGGTCAAT CCCACTTCAA GAGCTTTGAC 1201 AACAGATACT TCACCTTCAG TGGGATCTGC CAGTACCTGC TGGCCCGGGA 1251 TTGCCAGGAC CACTCCTTCT CCATTGTCAT TGAGACTGTC CAGTGTGCTG 1301 ATGACCGCGA CGCTGTGTGC ACCCGCTCCG TCACCGTCCG GCTGCCTGGC 1351 CTGCACAACA GCCTTGTGAA ACTGAAGCAT GGGGCAGGAG TTGCCATGGA 1401 TGGCCAGGAC ATCCAGCTCC CCCTCCIGAA AGGTGACCTC CGCATCCAÜC 1451 ATACAGTGAC GGCCTCCGTG CGCCTCAGCT ACGGGGAGGA CCTGCAGATG 1501 GACTGGGATG GCCGCGGGAG GCTGCTGGTG AAGCTGTCCC CCGTCTATGC 1551 CGGGAAGACC TGCGGCCTGT GTGGGAATTA CAATGGCAAC CAGGGCGACG 1601 ACTTCCITAC CCCCTCTGGG CTGGCGGAGC CCCGGGTGGA GGACTTCGGG 1651 AACGCCTGGA AGCTGCACGG GGACTGCCAG GACCTGCAGA AGCAGCACAG 1701 CGATCCCTGC GCCCTCAACC CGCGCATGAC CAGGTTCTCC GAGGAGGCGT 1751 GCGCGGTCCT GACGTCCCCC ACATTCGAGG CCTGCCATCG TGCCGTCAGC 1801 CCGCTGCCCT ACCTGCGGAA CTGCCGCTAC GACGTGTGCT CCTGCTCGGA 1851 CGGCCGCGAG TGCCTGTGCG GCGCCCTGGC CAGCTATGCC GCGGCCTGCG 1901 CGGGGAGAGG CGTGCGCGTC GCGTGGCGCG AGCCAGGCCG CTGTGAGCTG 1951 AACTGCCCGA AAGGCCAGGT GTACCTGCAG TGCGGGACCC CCTGCAACCT 2001 GACCTGCCGC TCTCTCTCTT ACCCGGATGA ÜÜAATGCAAT ÜAGGCCTÜCC 2051 TGGAGGGCTG CFTCTGCCCC CCAGGGCTC-T ACATGGATGA GAGGGGGGAC 2101 TGCGTGCCCA AGGCCCAGTG CCCCTÜTTAC TATGACGGTG AGATCTTCCA 2151 GCCAGAAGAC ATCTTCTCAG ACCATCACAC CATGTGCTAC TGTGAGGATG 2201 GCTTCATGCA CTGTACCATG AGTGGAGTCC CCGGAAGCTT GCTGCCTGAC 2251 GCTGTCCTCA GCAGTCCCCT GTCTCATCGC AGCAAAAGGA GCCTATCCTG 2301 TCGGCCCCCC ATGGTCAAGC TGGTGTGTCC CGCTGACAAC CTGCGGGCTG 2351 AAGGGCTCGA GTGTACCAAA ACGTGCCAGA ACTATGACCT GGAGTGCATG 2401 AGCATGGGCT GTGTCTCTGG CTGCCTCTGC CCCCCGGGCA TGGTCCGGCA 2451 TGAGAACAGA TGTGTGGCCC TGGAAAGGTG TCCCTGCTTC CATCAGGGCA 2501 AGGAGTATGC CCCTGGAGAA ACAGTGAAGA TTGGCTGCAA CACTTGTGTC 2551 TGTCGGGACC GGAAGTGGAA CTGCACAGAC CATGTGTGTG ATGCCACGTG 2601 CTCCACGATC GGCATGGCCC ACTACCTCAC CTTCGACGGG CTCAAATACC 2651 TGTTCCCCGG GGAGTGCCAG TACGTTCTGG TGCAGGATTA CTGCGGCAGT 2701 AACCCTGGGA CCTTTCGGAT CCTAGTGGGG AATAAGGGAT GCAGCCACCC 2751 CTCAGTGAAA TGCAAGAAAC GGGTCACCAT CCTGGTGGAG GGAGGAGAGA 2801 TTGAGCTGTT TGACGGGGAG GTGAATGTGA AGAGGCCCAT GAAGGATGAG 2851 ACTCACTTTG AGGTGGTGGA GTCTGGCCGG TACATCATTC TGCTGCTGGG 2901 CAAAGCCCTC TCCGTGGTCT GGGACCGCCA CCTGAGCATC TCCGTGGTCC 2951 TGAAGCAGAC ATACCAGGAG AAAGTGTGTG GCCTGTGTGG GAATTTTGAT 3001 GGCATCCAGA ACAATGACCT CACCAGCAGC AACCTCCAAG TGGAGGAAGA 3051 CCCTGTGGAC TTTGGGAACT CCTGGAAAGT GAGCTCGCAG TGTGCTGACA 3101 CCAGAAAAGT GCCTCTGGAC TCATCCCCTG CCACCTGCCA TAACAACATC 3151 ATGAAGCAGA CGATGGTGGA TTCCTCCTGT AGAATCCTTA CCAGTGACGT 3201 CTTCCAGGAC TGCAACAAGC TGGTGGACCC CGAGCCATAT CTGGATGTCT 3251 GCATTTACGA CACCTGCTCC TGTGAGTCCA TTGGGGACTG CGCCGCATTC 3301 TGCGACACCA TTGCTGCCTA TGCCCACGTG TGTGCCCAGC ATGGCAAGGT 3351 GGTGACCTGG AGGACGGCCA CATTGTGCCC CCAGAGCTGC GAGGAGAGGA 3401 ATCTCCÜGGA GAACGGGTAT GAÜGCTGAGI GGCGCTATAA CAGCTGTGCA 3451 CCTGCCTGTC AAGTCACGTG TCAGCACCCT GAGCCACTGG CCTGCCCTGT 3501 GCAGTGTGTG GAGGGCTGCC ATGCCCACTG CCCTCCAGGG AAAATCCTGG 3551 ATGAGCTTTT GCAGACCTGC GTTGACCCTG AAGACTGTCC AGTGTGTGAG 3601 GTGGCTGGCC GGCGTTTTGC C-TCAGGAAAG AAAGTCACCT TGAATCCCAG 3651 TGACCCTGAG CACTGCCAGA TTTGCCACTG TGATGTTGTC AACCTCACCT 3701 GTGAAGCCTG CCAGGAGCCG ATATCGGGCG CGCCAACATC AGAGAGCGCC 3751 ACCCCTGAAA GTGGTCCCGG GAGCGAGCCA GCCACATCTG GGTCGGAAAC 3801 GCCAGGCACA AÜTGAGTCTG CAACTCCCÜA GTCCGGACCT GÜCTCCGAÜC 3851 CTGCCACTAG CGGCTCCGAG ACTCCGGGAA CTTCCGAGAG CGCTACACCA 3901 GAAAGCGGAC CCGGAACCAG TACCGAACCT AGCGAGGGCT CTGCTCCGGG 3951 CAGCCCAGCC GGCTCTCCTA CATCCACGGA GGAGGGCACT TCCGAATCCG 4001 CCACCCCGGA GTCAGGGCCA GGATCTGAAC CCGCTACCTC AGGCAGTGAG 4051 ACGCCAGGAA CGAGCGAGTC CGCTACACCG GAGAGTGGGC CAGGGAGCCC 4101 TGCTGGATCT CCTACGTCCA CTGAGGAAGG GTCACCAGCG GGCTCGCCCA 4151 CCAGCACTGA AGAAGGTGCC TCGATATCTG ACAAGAACAC TGGTGATTAT 4201 TACGAGGACA GTTATGAAGA TATTTCAGCA TACTTGCTGA GTAAAAACAA 4251 TGCCATTGAA CCAAGAAGCT TCTCTGACAA AACTCACACA TGCCCACCGT 4301 GCCCAGCTCC AGAACTCCTG GGCGGACCGT CAGTCTTCCT CTTCCCCCCA 4351 AAACCCAAGG ACACCCTCAT GATCTCCCGG ACCCCTGAGG TCACATGCGT 4401 GGTGGTGGAC GTGAGCCACG AAGACCCTGA GGTCAAGTTC AACTGGTACG 4451 TGGACGGCGT GGAGGTGCAT AATGCCAAGA CAAAGCCGCG GGAGGAGCAG 4501 TACAACAGCA CGTACCGTGT GGTCAGCGTC CTCACCGTCC TGCACCAGGA 4551 CTGGCTGAAT GGCAAGGAGT ACAAGTGCAA GGTCTCCAAC AAAGCCCTCC 4601 CAGCCCCCAT CGAGAAAACC ATCTCCAAAG CCAAAGGGCA GCCCCGAGAA 4651 CCACAGGTGT ACACCCTGCC CCCATCCCGG GATGAGCTGA CCAAGAACCA 4701 GGTCAGCCTG ACCTGCCTGG TCAAAGGCTT CTATCCCAGC GACATCGCCG 4751 TGGAGTGGGA GAGCAATGGG CAGCCGGAGA ACAACTACAA GACCACGCCT 4801 CCCGTGTTGG ACTCCGACGG CTCCTTCTTC CTCTACAGCA AGCTCACCGT 4851 GGACAAGAGC AGGTGGCAGC AGGGGAACGT CTTCTCATGC TCCGTGATGC 4901 ATGAGGCTCT GCACAACCAC TACACGCAGA AGAGCCTCTC CCTGTCTCCG 4951 GGTAAATGA
Secuencia de proteína de pSYN VWF059 (VWF D’D3-Fc con región a2 del sitio de trombina de FVIII en el conectar) -la zona en negrita subrayada muestra la región a2 (SEQ ID NO: 197)
1 MIPARFAGVL LALALILPGT LCAEGTRGRS STARCSLFGS DFVNTFDGSM
51 YSFAGYCSYL LAGGCQKRSF SIIGDFQNGK RVSLSVYLGE FFDIHLFVNG
101 TVTQGDQRVS MPYASKGLYL ETEAGYYKLS GE AYGF VARI DGSGNFQVLL 151 SDRYFNKTCG LCGNFNIFAE DDFMTQEGTL TSDP YDFANS WALSSGEQWC 201 ERASPPSSSC NISSGEMQKG LWEQCQLLKS TSVFARCHPL VDPEPFVALC 251 HK'l'I.CHCAGG FHCACPAI.1, HYARTCAQEGM VLYGWTD1 ISA CSPVCPAGMH 301 YRQCVSPCAR TCQST.HINEM CQFRCVDGCS CPEGQT.LDEG LCVESTECPC 351 VHSGKRYFPG TSLSRDCNTC ICRNSQWICS NHECPGHCLV TGQSHFKSFD
4 01 NRYFTFSGIC QYLLARDCQD HSFSIVIETV QCADDRDAVC TRSVTVRLPG
451 I.HNSLVKLKH GAGVAMDGQD 1QLPLLKGDL RIQHTV'IASV RI.SYGEDFQM 501 DWDGRGRLL V KLSPVYAGKT CCLCGNYNGN QGDDFLTPSG LAEPRVEDFG 551 NAWKT.HGDCQ DT.QKQHSDPC ALNPRMTRFS EEACA VLTSP TFEACHRAVS 601 PLPYLRNCRY DVCSCSDGRE CLCGALASYA AACAGRGVRV AWREPGRCEL 651 NCPKGQVYLQ CGTPCNLTCR SLSYPDEECN EACLEGCFCP PGLYMDERGD 701 CVPKAQCPCY YDGEIFQPED IFSDITTTTMCY CEDGFMITCTM SGVPGSLLPD 751 AVFSSPFSI IR SKRSLSCRPP MVKI.VCPADN LRAKGI.KCTK TCQNYDLHCM 801 SMGCVSGCLC PPGMVRHENR CVALERCPCF HQGKEYAPGE TVKIGCNTCV 851 CRDRKWNCT1) IIVCDATCSTI GMAI IYLTFDG FKYFFPGECQ YVLVQDYCGS 901 NPGTFRILVG NKGCS1IPS VK CKKRVTIL VE GGEIELFDGE VNVKRPMKDE 951 I Hl'EVVESGR YIII.ELGKAI.. SVVWDRHLSI SVVLKQTYQE KVCG.LCGNFD 1001 GIQNNDLTSS NLQVEEDPVD FGNSU^KVSSQ CADTRKW LD SSPATCHNNI 1051 MKQTMVDSSC RILTSDVFQD CNKLVDPEPY LDVCIYDTCS CESIGDCAAF 1101 CDTIAAYAHV CAQHGKVVTW RTATLCPQSC EERNLRENGY EAEVrRYNSCA 1151 PA C Q V TCQ 1EPLA CPV Q C V EGCIIA1ICPPG KIL DELL Q IC VDPEDCP VCE 1201 VAGRRFASGK KVTLNPSDPE HCQICHCDVV NLFCEACQLP ISGAPTSESA 1251 TPESGPGSEP ATSGSETPGT SESAl'PESGP GSEPATSGSE TPG TSESATP
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1351 TPGTSESATP ESGPGSPAGS PTSTEEGSPA GSPTSTEEGA SISDKNTGDY
1401YEDSYED1SA YLLSKNN SFSDKTI l'F CPPCPAPELL GGPSVFLF1T
1451 KPKDTLMISR TPEVTCVVVD VSIIEDPEVKF NWYVDGVEVII NAKTKPREEQ 1501 YNSTYRVVSV LTVLHQDWLN GKEYKCKVSN KALPAPIEKT ISKAKGQPRE 1551 PQVYTLPPSR DELTKNQVSL TCLVKGFYPS DIAVEWESNC QPENNYKTTP 1601 PVLDSDGSFF LYSKLTVDKS RWQQGNVFSC SVMHEALHNH YTQKSLSLSP 1651 GK*
Secuencia de nucleótidos de pSYN VWF062 (que codifica VWF D’D3-F<c>sin sitio de trombina en el conector) (SEQ ID NO: 198)
1 ATGATTCCTG CCAGATTTGC CGGGGTGCTG CTTGCTCTGG CCCTCATTTT 51 GCCAGGGACC CTTTGTGCAG AAGGAACTCG CGGCAGGTCA TCCACGGCCC 101 GATGCAGCCT TTTCGGAAGT GACTTCGTCA ACACCTTTGA 1'GGGAGCA rG 151 TACAGCTTTG CGGGATACTG CAGTTACCTC CTGGCAGGGG GC’TGCCAGAA 201 ACGCTCCTTC TCGATTATTG GGGACTTCCA GAATGGCAAG AGAGTGAGCC 251 TCTCCGTGTA TCTTGGGGAA TTTTTTGACA TCCATTTGTT TGTCAATGGT 301 ACCGTGACAC AGGGGGACCA AAGAGTCTCC ATGCCCTATG CC1CCAAAGG 351 GCTGTATCTA GAAACTGAGG CTGGGTACTA CAAGCTGTCC GGTGAGGCCT 401 ATGGCTTTGT GGCCAGGATC GATGGCAGCG GCAACTTTCA AGTCCTGCTG 451 TCAGACAGAT ACTTCAACAA GACCTGCGGG CTGTGTGGCA ACTTTAACAT 501 CTTTGCTGAA GATGACTTTA TGACCCAAGA AGGGACCTTG ACCTCGGACC 551 CTTATGACTT TGCCAACTCA TGGGCTCTGA GCAGTGGAGA ACAGTGGTGT 601 GAACGGGCAT CTCCTCCCAG CAGCTCATGC AACATCTCCT CTGGGGAAAT 651 GCAGAAGGGC CTGTGGGAGC AGTGCCAGCT TCTGAAGAGC ACCTCGGTGT 701 TTGCCCGCTG CCACCCTCTG GTGGACCCCG AGCCTTTTGT GGCCCTGIÜT 751 GAGAAGACTT TGTGTGAGTG TGCTGGGGGG CTGGAGTGCG CCTGCCCTGC 801 CCTCCTGGAG TACGCCCGGA CCTGTGCCCA GGAGGGAATG GTGCTGTACG 851 GCTGGACCGA CCACAGCGCG TGCAGCCCAG TGTGCCCTGC TGGTATGGAG 901 TATAGGCAÜT GTGTGTCCCC TTGCGCCAGG ACCTGCCAGA GCCTGCACAT 951 CAATGAAATG TGTCAGGAGC GATGCGTGGA TGGCTGCAGC TGCCCTGAGG 1001 GACAGCTCCT GGATGAAGGC CTCTGCGTGG AGAGCACCGA GTGTCCCTGC 1051 GTGCATTCCG GAAAGCGCTA CCCTCCCGGC ACCTCCCTCT CTCGAGACTG 1101 CAACACCTGC ATTTGCCGAA ACAGCCAGTG GATCTGCAGC AATGAAGAAT 1151 GTCCAGGGGA GTGCCTTGTC ACTGGTCAAT CCCACTTCAA GAGCTTTGAC 1201 AACAGATACT TGACCTTCAG TGGGATCTGC CAGTACCTGC TGGCCCGGGA 1251 TTGCCAGGAC CACTCCTTCT CCATTGTCAT TGAGACTGTC CAGTGTGCTG 1301 ATGACCGCGA CGCTGTGTGC ACCCGCTCCG TCACCGTCCG GCTGCCTGGC 1351 CTGCACAACA GCCTTGTGAA ACTGAAGCAT GGGGCAGGAG TTGCCATGGA 1401 TGGCCAGGAC ATCCAGCTCC CCCTCCTGAA AGGTGACCTC CGCATCCAGC 1451 ATACAGTGAC GGCCTCCGTG CGCCTCAGCT ACGGGGAGGA CCTGCAGATG 1501 GACTGGGATG GCCGCGGGAG GCTGCTGGTG AAGCTGTCCC CCGTCTATGC 1551 CGGGAAGACC TGCGGCCTGT GTGGGAATTA CAATGGCAAC CAGGGCGACG 1601 ACTTCCTTAC CCCCTCTGGG CTGGCGGAGC CCCGGGTGGA GGACTTCGGG 1651 AACGCCTGGA AGCTGCACGG 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Secuencia de proteína de pSYN VWF062 (VWF D’D3-F<c>sin sitio de trombina en el conector) (SEQ ID NO: 199)
1M1PARFAGVL LALALILPGT LCAEGTRGRS STARCSLFGS DF VNTFDGSM51YSl'AGYCSYL LAGGCQK.RSF S11GI9FQNGK RVSLSVYLG1Í1-EDIHI.FVNG101TVTQGDQRVS MPYASKGl.YL1-TliAGYYKLS GKAYGEVARI IXiSGNKQVlA.
151SDRYFNKTCG LCGNFMFAE DDFMTQEGTL TSDPYDFANS WALSSGEQWC201ERASPPSSSC NISSGEMQKG LWEQCQLLKS TSVFARCHPL VDPEPFVALC251EKTLCECAGG LECACPALLE YARTCAQEGM VLYGWTDHSA CSPVCPAGME301YRQCVSPCAR TCQSLHINEM CQERCVDGCS CPEGQLLDEG LCVESTECPC351VHSCKRYPPG TSLSRDCNTC ICRNSQWICS NEECPGECLV TGQSHFKSFD401NRYFTFSGIC QYLLARDCQD HSFSIV1ETV QCADDRDAVC TRSVTVRLPG451LHNSLVKLKH GAGVAMDGQDIQLPLLKGDL RIQHTVTASV RLSYGEDLQM501D WÜGRGRLLV KLSPVYAGKT CGLCGNYNGN QGDDFLTPSG LAEPRVEDFG551NAW KLIIGDCQ DLQKQIISDPC ALNPRMTRFS EEACAVLTSP IFEACIIRAVS601P1PYI.RNCRY DVCSCS1XÍRH CLCGALASYA AACAGRGVRV AWRliPGRCHE651NCPKGQVYI.Q CGTPCNl/l’CR SESYPDKHCN EACLHGCFCP PGLYMDHRGI)701 CVPKAQCPCY YDGEIFQPHD IFSDIIIITMCY CKDGFMí ICTM SGVPGSI.LPI) 751 AVLSSPLSHR SKRSLSCRPP MVKLVCPADN LRAECLECTK TC'QNYDLECM 801 SMGCVSGCLC PPGMVRHENR CVALERCPCF HQGKEYAPGE TVKIGCNTCV 851 CRDRKWNCTI) IIVCDATCSTI GMAI IYLTFIXí I.KY1.FPGHCQ YV1.VQDYCGS 901 NPGTFRIEVG NKGCSIIPSVK CKKRVT1I.VH GGKIEFFDGE VNVKRPMKDH 951 TI IFEVVESGR YIIFU.GKAF SVVWDRIII.SI SVVLKQTYQH KVCGI.CCfNFH 1001 GIQNNDLTSS NLQVEEDPVD FGNSWKVSSQ CADTRKVPLD SSPATCHNM 1051 MKQTMVDSSC RII.TSDVFQD CNKT,VDPEPY LDVC1YDTCS CESIGDCAAF 1101 CDTIAAYAHV CAQHGKVVTW RTATLGPQSC EERNLRENGY EAEWRYNSCA 1151 PACQVTCQIIP HPI.ACPVQCV HGCIIAIICPPG KII.DEI.I.QTC VDPHDCPVCE 1201 VAGRRFASGK KVTLNPSDPE HCQICHCDVV NLTCEACQEP ISGAPTSESA 1251 TPESGPGSEP ATSGSETPGT SESATPESGP GSEPATSGSE TPGTSESATP
1301 ESGPGTSTEP SEGSAPGSPA GSPTSTEEGT SESATPESGP GSEPATSGSE
1351 TPGTSESATP ESGPGSPAGS PTSTEKGSPA GSPTSTKHGA SSDKT1ITCPP
1401 CPAPELLGGP SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSH EDPEVKFNWY 1451 VDGVEVHNAK TKPREEQ YNS TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL 1501 PAPEEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSRDEL TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA
1551 VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ QGNVFSCSVM 1601 HEALHNHYTQKSLSLSPGK*
Secuencia de nucleótidos de pSYN VWF073 - (que codifica VWFD1D2D’D3- XTEN 144 AE - sitio de trombina a2 truncado de FVIII-Fc) (SEQ ID NO:174)
1 ATGATTCCTG CCAGATTTGC CGGGGTGCTG CTTGCTCTGG CCCTCATTTT 51 GCCAGGGACC CTTTGTGCAG AAGGAACTCG CGGCAGGTCA TCCACGGCCC 101 GATGCAGCCT TTTCGGAAGT GACTTCGTCA ACACCTTTGA TGGGAGCATG 151 TACAGCTTTG CGGGATACTG CAGTTACCTC CTGGCAGGGG GCTGCCAGAA 201 ACGCTCCTTC TCGATTATTG GGGACTTCCA GAATGGCAAG AGAGTGAGCC 251 TCTCCGTGTA TCTTGGGGAA TTTTTTGACA TCCATTTGTT TGTCAATGGT 301 ACCGTGACAC AGGGGGACCA AAGAGTCTCC ATGCCCTATG CCTCCAAAGG 351 GCTGTATCTA GAAACTGAGG CTGGGTACTA CAAGCTGTCC GGTGAGGCCT 401 ATGGCTTTGT GGCCAGGATC GATGGCAGCG GCAACTTTCA AGTCCTGCTG 451 TCAGACAGAT ACTTCAACAA GACCTGCGGG CTGTGTGGCA ACTTTAACAT 501 CTTTGCTGAA GATGACTT1A TGACCCAAGA AGGGACCTTG ACCTCGGACC 551 CTTATGACTT TGCCAACTCA TGGGCTCTGA GCAGTGGAGA ACAGTGGTGT 601 GAACGGGCAT’ CTCCTCCCAG CAGCT’CATGC AACAT’CT’CCT CTGGGGAAAT 651 GCAGAAGGGC CTGTGGGAGC AGTGCCAGCT TCTGAAGAGC ACCTCGGTGT 701 TTGCCCGCTG CCACCCTCTG GTGGACCCCG AGCCTTTTGT GGCCCTGTGT 751 GAGAAGACTT TGTGTGAGTG TGCTGGGGGG CTGGAGTGCG CCTGCCCTGC 801 CCTCCTGGAG TACGCCCGGA CCTGTGCCCA GGAGGGAATG GTGCTGTACG 851 GCTGGACCGA CCACAGCGCG TGCAGCCCAG TGTGCCCTGC TGGTATGGAG 901 TATAGGCAGT GTGTGTCCCC TTGCGCCAGG ACCTGCCAGA GCCTGCACAT 951 CAATGAAATG TGTCAGGAGC GATGCGTGGA TGGCTGCAGC TGCCCTGAGG 1001 GACAGCTCCT GGATGAAGGC CTCTGCGTGG AGAGCACCGA GTGTCCCTGC 1051 GTGCATTCCG GAAAGCGCTA CCCTCCCGGC ACCTCCCTCT CTCGAGACTG 1101 CAACACCTGC ATTTGCCGAA ACAGCCAGTG GATCTGCAGC AATGAAGAAT 1151 GTCCAGGGGA GTGCCTTGTC ACTGGTCAAT CCCACTTCAA GAGCTTTGAC 1201 AACAGATACT TCACCTTCAG TGGGATCTGC CAGTACCTGC TGGCCCGGGA 1251 TTGCCAGGAC CACTCCTTCT CCATTGTCAT TGAGACTGTC CAGTGTGCTG 1301 ATGACCGCGA CGCTGTGTGC ACCCGCTCCG TCACCGTCCG GCTGCCTGGC 1351 CTGCACAACA GCCTTGTGAA ACTGAAGCAT GGGGCAGGAG TTGCCATGGA 1401 TGGCCAGGAC ATCCAGCTCC CCCTCCTGAA AGGTGACCTC CGCATCCAGC 1451 ATACAGTGAC GGCCTCCGTG CGCCTCAGCT ACGGGGAGGA CCTGCAGATG 1501 GACTGGGATG GCCGCGGGAG GCTGCTGGTG AAGCTGTCCC CCGTCTATGC 1551 CGGGAAGACC TGCGGCCTGT GTGGGAATTA CAATGGCAAC CAGGGCGACG 1601 ACTTCCTTAC CCCCTCTGGG CTGGCGGAGC CCCGGGTGGA GGACTTCGGG 1651 AACGCCTGGA AGCTGCACÜG 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AGGAGTATGC CCCTGGAGAA ACAGTGAAGA TTGGCTGCAA CACTTGTGTC 2551 TGTCGGGACC GGAAGTGGAA CTGCACAGAC CATGTGTGTG ATGCCACGTG 2601 CTCCACGATC GGCATGGCCC ACTACCTCAC CTTCGACGGG CTCAAATACC 2651 TGTTCCCCGG GGAGTGCCAG TACGTTCTGG TGCAGGATTA CTGCGGCAGT 2701 AACCCTGGGA CCTTTCGGAT CCTAGTGGGG AATAAGGGAT GCAGCCACCC 2751 CTCAGTGAAA TGCAAGAAAC GGGTCACCAT CCTGGTGGAG GGAGGAGAGA 2801 TTGAGCTGTT TGACGGGGAG GTGAATGTGA AGAGGCCCAT GAAGGATGAG 2851 ACTCACTTTG AGGTGGTGGA GTCTGGCCGG TACATCATTC TGCTGCTGGG 2901 CAAAGCCCTC TCCGTGGTCT GGGACCGCCA CCTGAGCATC TCCGTGGTCC 2951 TGAAGC'AGAC ATACCAGGAG AAAGTGTGTG GCCTGTGTGG GAATTTTGAT 3001 GGCATCCAGA ACAATGACCT CACCAGCAGC AACCTCCAAG TGGAGGAAGA 3051 CCCTGTGGAC TTTGGGAACT CCTGGAAAGT GAGCTCGCAG TGTGCTGACA 3101 CCAGAAAAGT GCCTCTGGAC TCATCCCCTü CCACCTGCCA TAACAACATC 3151 ATGAAGCAGA CGATGGTGGA TTCCTCCTGT AGAATCCTTA CCAGTGACGT 3201 CTTCCAGGAC TGCAACAAGC TGGTGGACCC CGAGCCATAT CTGGATGTCT 3251 GCATTTACGA CACCTGCTCC TGTGAGTCC'A TTGGGGACTG CGCCGCATTC 3301 TGCGACACCA TTGCTGCCTA TGCCCACGTG 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TGCCTCGAGC GGCGGTGGAG GATCCGGTGG CGGGGGATCC 4201 GGTGGCGGGG GATCCGGTGG CGGGGGATCC GGTGGCGGGG GATCCGGTGG 4251 CGGGGGATCC ATTGAACCAA GAAGCTTCTC TGGCAGCGGA GGCGACAAAA 4301 CTCACACATG CCCACCGTGC CCAGCTCCAG AACTCCTGGG CGGACCGTCA 4351 GTCTTCCTCT TCCCCCCAAA ACCCAAGGAC ACCCTCATGA TCTCCCGGAC 4401 CCCTGAGGTC ACATGCGTGG TGGTGGACGT GAGCCACGAA GACCCTGAGG 4451 TCAAG ITCAA CTGGIACGTG GACGGCGTGG AGGTGCATAA TGCCAAGACA 4501 AAGCCGCGGG AGGAGCAGTA CAACAGCACG TACCGTGTGG TCAGCGTCCT 4551 CACC’GTCCTG CACCAGGACT GGCTGAATGG CAAGGAGTAC AAGTGCAAGG 4601 TCTCCAACAA AGCCCTCCCA GCCCCCATCG AGAAAACCAT CTCCAAAGCC 4651 AAAGGGCAGC CCCGAGAACC ACAGGTGTAC ACCCTGCCCC CATCCCGGGA 4701 TGAGCTGACC AAGAACCAGG TCAGCCTGAC CTGCCTGGTC AAAGGCTTCT 4751 ATCCCAGCGA CATCGCCGTG GAGTGGGAGA GCAATGGGCA GCCGGAGAAC 4801 AACTACAAGA CCACGCCTCC CGTGTTGGAC TCCGACGGCT CCTTCTTCCT 4851 CTACAGCAAG CTCACCGTGG ACAAGAGCAG GTGGCAGCAG GGGAACGTCT 4901 TCTCATGCTC CGTGATGCAT GAÜGCTCTÜC ACAACCACTA CACGCAGAAG 4951 AGCCTCTCCC TGTCTCCGGG TAAATGA
Secuencia de proteína de pSYN VWF073 - (VWFD1 D2D’D3- XTEN 144 AE - sitio de trombina a2 trunoado-Fo} (SEQ ID NO:175)
1 N4IPARFAGVL LALALILPGT LCAEGTRGRS STARCSLFGS DFVNTFDGSM 51 YSFAGYCSYL LAGGCQKRSF SIIGDFQNGK RVSLSVYLGE FFDIHLFVNG 101 TVTQGDQRVS MPYASKGLYL ETEAGYYKLS GEAYGFVARI DGSGNFQVLL 151 SDRYFNK I CG LCGNFNIFAK DDFMTQKGTl, TSDPYDFANS WALSSGKQWC 201 ERASPPSSSC NISSGEMQKG LWEQCQLLKS TSVFARCHPL VDPEPFVALC 251 EKTLCECAGG LECACPALLE YARTCAQEGM VLYGWTDIISA CSPVCPAGME 30! YRQCVSPCAR TCQSEH1NKM CQIÍRCVDGCS CPKGQ1LDEG LC VESTI ¡CPC 351 VHSGKRYPPG TSLSRDCNTC ICRNSQWICS NEECPGECLV TGQSHFKSFD 401 NRYFTFSGIC QYFFARDCQm 1SFS1VIHTV QCADDRDAVC TRSV I VRFPG 451 El INSLVKLKI1 GAGVAMIX1QD IQFPILKGDF R1QI1TVTASV RESYGEDI.QM 501 DWDGRGRLL V KLSPVYAGKT CGLCGNYNGN QGDDFLTPSG LAEPRVEDFG 551 NAWKI4 1GIDCQ IDLQKQI1SDPC ALNPRMTRKS KKACAV1.TSP l'FHACI IRA VS 601 PLPYLRNCRY DVCSCSDGRE CL COALAS YA AACAGRGVRV AWREPGRCEL 651 NCPKGQVYI.Q CGTPCN1.TCR SFSYPDKKCN EACI.EGCFCP PGLYMDHRGD 701 CVPKAQCPCY YDGEIFQPEDIFSDHHTMCY CEDGFMHCTM SGVPGSLLPD 751 AVLSSPLSITR SKRSESCRPP MVKLVCPADNLRAEGLECTK TCQNYDEECM 801 SMGCVSGC1.C PPGMVRHENR CVALERCPCF HQGKEYAPGF TVKIGCNTCV 851 CRDRKWNCTD HVCDATCSTI GMAHYLTFDG LKYLFPGECQ YVLVQDYCGS 901 NPÜ l'FRILVG NKGCSI1PSVK CKKRVT1LVE GGE1ELFDGE VNVKRPMKDE 951 TIIF’EVVESGR YIILLLGKAL SVVWDRIILS1 SVVLKQTYQE KVCGLCGNFD i 001 GIQNNDTJSSNFQVEEDPVD FGNSW4CVSSQ CADTRKVPFD SSPATCHNNI 1051 MKQTMVDSSC RILTSDYTQD CNKLVDPEPY LDVCIYDTCS CESIGDCAAF 1101 CDTIAAYAIIV CAQIIGKVVTW RTATLCPQSC EERNLRENGY EAEWRYNSCA 1351 PACQVTCQHP EPLACPVQCV EGCHAHCPPG KELDELLQTC VDPEDCPVCE 1201 VAGRRFASGK KVTLNPSDPEIICQICIICDVV NLTCEACQEP GAPTSESATP 1251 ESGPGSEPAT SGSETPG I SE SATPESGPGS EPATSGSliTP GTSESA I PES i 301 GPGTSTEPSE GSAPGSPAGS PTSTEEGTSE SATPESGPGS EPATSGSETP
1351 GTSESATPES GPGSPAGSPT STEEGSPAGS PTSTEEGASS GGGGSGGGGS 1401 GGGGSGGGGS GGGGSGGGGS 1EPRSI-SGSG GDKTHTCPPC PAPE1.LGGPS 1451 VFLFPPKPKD TLMISRTPEV TCW VD V SH E DPEVKFNWYVDGVEVHNAKT 1501 KPREEQYNST YRW SVLTVL HQDWLNGKEY KCKVSNKALP APIEKTISKA 155 i KGQPREPQVY TLPPSRDELT KNQVSLTCLV KGFYPSDIAV EWESNGQPEN 1601 NYKTTPPVLD SDGSEELYSK LTVDKSRWQQ GNVESCSVM1IEALI1N1IYTQK 1651 SI.SLSPGK*
Tabla 18: Secuencias de polipéptidos quiméricos de ejemplo
1 ATGCAAATAG AGCTCTCCAC CTGCTTCTTT CTGTGCCTTT TGCGATTCTG
51 CTTTAGTGCC ACCAGñAGAT ACTñCCTGGG TGCAGTGGAA CTGTCATGGG
101 ACTATATGCA AAGTGATCTC GGTGAGCTGC CTGTGGACGC AAGATTTCCT
151 CCTAGAGTGC CAAAATCTTT TCCATTCAAC ACCTCAGTCG TGTACAAAAA
201 GACTCTGTTT GTñGAATTCñ CGGATCACCT TTTCAACATC GCTAAGCCAA
251 GGCCACCCTG GATGGGTCTG CTAGGTCCTA CCATCCAGGC TGAGGTTTAT
301 GATACAGTGG TCATTACACT TñAGAACñTG GCTTCCCATC CTGTCñGTCT
351 TCATGCTGTT GGTGTATCCT ACTGGAAAGC TTCTGAGGGA GCTGAATATG
401 ATGATCAGAC CAGTCAAAGG GAGAAAGAAG ATGATAAAGT CTTCCCTGGT
451 GGAAGCCATA CATATGTCTG GCAGGTCCTG AAAGAGAATG GTCCAATGGC
501 CTCTGACCCñ CTGTGCCTTñ CCTACTCATA TCTTTCTGAT GTGGACCTGG
551 TAAAAGACTT GAATTCAGGC CTCATTGGAG CCCTACTAGT ATGTAGAGAA
601 GGGAGTCTGG CCAAGGAAAA GACACAGACC TTGCACAAAT TTATACTACT
651 TTTTGCTGTA TTTGATGAAG GGAAAAGTTG GCACTCAGAA ACAAAGAACT
701 CCTTGATGCA GGATAGGGAT GCTGCATCTG CTCGGGCCTG GCCTAAAATG
751 CACACAGTCA ATGGTTATGT AAACAGGTCT CTGCCAGGTC TGATTGGATG
801 CCACAGGAAA TCAGTCTATT GGCATGTGAT TGGAATGGGC ACCACTCCTG
851 AAGTGCACTC AATATTCCTC GAAGGTCACA CATTTCTTGT GAGGAACCAT
901 CGCCAGGCGT CCTTGGAAAT CTCGCCAATA ACTTTCCTTA CTGCTCAAAC
951 ACTCTTGATG GACCTTGGAC AGTTTCTACT GTTTTGTCAT ATCTCTTCCC 1001 ACCAACATGA TGGCATGGAA GCTTATGTCA AAGTAGACAG CTGTCCAGAG 1051 GAACCCCAAC TACGAATGAA AAATAATGAA GAAGCGGAAG ACTATGATGA 1101 TGATCTTACT GATTCTGAAA TGGATGTGGT CAGGTTTGAT GATGACAACT 1151 CTCCTTCCTT TATCCAAATT CGCTCAGTTG CCAAGAAGCA TCCTAAAACT 1201 TGGGTACATT ACATTGCTGC TGAAGAGGAG GACTGGGACT ATGCTCCCTT 1251 AGTCCTCGCC CCCGATGACA GAAGTTATAA AAGTCAATAT TTGAACAATG 1301 GCCCTCAGCG GATTGGTAGG AAGTACAAAA AAGTCCGATT TATGGCATAC 1351 AGAGATGAAA CCTTTflñGAC TCGTGAAGGT flTTCAGCATG AATCAGGAAT 1401 CTTGGGACCT TTACTTTATG GGGAAGTTGG AGACACACTG TTGATTATAT 1451 TTAAGAATCA AGCAAGCAGA CCATATAACA TCTACCCTCA CGGAATCACT 1501 GATGTCCGTC CTTTGTATTC AAGGAGATTA CCAAAAGGTG TñAAACATTT 1551 GAAGGATTTT CCAATTCTGC CAGGAGAAAT ATTCAAATAT AAATGGACAG 1601 TGACTGTAGA AGATGGGCCA ACTAAATCAG ATCCTCGGTG CCTGACCCGC 1651 TATTACTCTA GTTTCGTTAA TATGGAGAGA GATCTAGCTT CAGGACTCAT 1701 TGGCCCTCTC CTCATCTGCT ACAAAGAATC TGTAGATCAA AGAGGAAACC 1751 AGATAATGTC AGACAAGAGG AATGTCATCC TGTTTTCTGT ATTTGATGAG 1801 AACCGAAGCT GGTACCTCAC AGAGAATATA CAACGCTTTC TCCCCAATCC 1851 AGCTGGAGTG CAGCTTGAGG ATCCAGAGTT CCAAGCCTCC AACATCATGC 1901 ACAGCATCAA TGGCTATGTT TTTGATAGTT TGCAGTTGTC AGTTTGTTTG 1951 CATGAGGTGG CATACTGGTA CATTCTAAGC ATTGGAGCñC AGACTGACTT 2001 CCTTTCTGTC TTCTTCTCTG GATATACCTT CñAACACAAA ATGGTCTATG 2051 AAGACACACT CACCCTATTC CCATTCTCAG GAGAAACTGT CTTCATGTCG 2101 ATGGAAAACC CAGGTCTATG GATTCTGGGG TGCCACAACT CAGACTTTCG 2151 GAACAGAGGC ATGACCGCCT TACTGAAGGT TTCTAGTTGT GACAAGAACA 2201 CTGGTGATTA TTACGAGGAC AGTTATGAAG ATATTTCAGC ATACTTGCTG 2251 AGTAAAAACA ATGCCATTGA ACCAAGAAGC TTCTCTCAAA ACGGTACCTC 2301 AGAGTCTGCT ACCCCCGAGT CAGGGCCAGG ATCAGAGCCA GCCACCTCCG 2351 GGTCTGAGAC ACCCGGGACT TCCGAGAGTG CCACCCCTGA GTCCGGACCC 2401 GGGTCCGAGC CCGCCACTTC CGGCTCCGAA ACTCCCGGCA CAAGCGAGAG 2451 CGCTACCCCA GAGTCAGGAC CAGGAACATC TACAGAGCCC TCTGAAGGCT 2501 CCGCTCCAGG GTCCCCAGCC GGCAGTCCCA CTAGCACCGA GGAGGGAACC
1 ATGATTCCTG CCAGATTTGC CGGGGTGCTG CTTGCTCTGG CCCTCATTTT
51 GCCAGGGACC CTTTGTGCAG AAGGfiACTCG CGGCAGGTCA TCCACGGCCC
101 GATGCAGCCT TTTCGGAAGT GACTTCGTCA ACACCTTTGA TGGGAGCATG
151 TACAGCTTTG CGGGATACTG CAGTTACCTC CTGGCAGGGG GCTGCCAGAA
201 ACGCTCCTTC TCGATTATTG GGGACTTCCA GAATGGCAAG AGAGTGAGCC
251 TCTCCGTGTA TCTTGGGGAA TTTTTTGACA TGCATTTGTT TGTCAATGGT
301 ACCGTGACAC AGGGGGACCA AAGAGTCTCC ATGCCCTATG CCTCCAAAGG
351 GCTGTATCTA GAAACTGAGG CTGGGTACTA CAAGCTGTCC GGTGAGGGCT
401 ATGGCTTTGT GGCCAGGATC GATGGCAGCG GCAACTTTCA AGTCCTGCTG
451 TCAGACAGAT ACTTCAACAA GACCTGCGGG CTGTGTGGCA ACTTTAACAT
501 CTTTGCTGAA GATGACTTTA TGACCCAAGA AGGGACCTTG ACCTCGGACC
551 CTTATGACTT TGCCAACTCA TGGGCTCTGA GCAGTGGAGA ACAGTGGTGT
601 GAACGGGCAT CTCCTCCCAG CAGCTCATGC AACATCTCCT CTGGGGAAAT
651 GCAGAAGGGC CTGTGGGAGC AGTGCCAGCT TCTGAAGAGCACCTCGGTGT
701 TTGCCCGCTG CCACCCTCTG GTGGACCCCG AGCCTTTTGT GGCCCTGTGT
751 GAGAAGACTT TGTGTGAGTG TGCTGGGGGG CTGGAGTGCG CCTGCCCTGC
801 CCTCCTGGAG TACGCCCGGA CCTGTGCCCA GGAGGGAATG GTGCTGTACG
851 GCTGGACCGA CCACAGCGCG TGCAGCCCAG TGTGCCCTGC TGGTATGGAG
SOI TATAGGCAGT GTGTGTCCCC TTGCGCCAGG ACCTGCCAGA GCCTGCACAT
951 CAATGAAATG TGTCAGGAGC GATGCGTGGA TGGCTGCAGC TGCCCTGAGG
1001 GAGAGCTGCT GGATGAAGGC CTCTGGGTGG AGAGCACCGA GTGTCCGTGC
1051 GTGCATTCCG GAAAGCGCTA CCCTCCCGGC ACCTCCCTCT CTCGAGACTG
1101 CAACACCTGC ATTTGCCGAA ACAGCCAGTG GATCTGCAGC AATGAAGAAT
1151 GTCCAGGGGA GTGCCTTGTC ACTGGTCAAT CCCACTTCAA GAGCTTTGAC
1201 AACAGATACT TCACCTTCAG TGGGATCTGC CAGTACCTGC TGGCCCGGGA
1251 TTGCCAGGAC CACTCCTTCT CCATTGTCAT TGAGACTGTC CAGTGTGCTG
1301 ATGACCGCGA CGCTGTGTGC ACCCGCTCCG TCACCGTCCG GCTGCCTGGC
1351 CTGCACAACA GCCTTGTGAA ACTGAAGCAT GGGGCAGGAG TTGCCATGGA
1401 TGGCCAGGAC ATCCAGCTCC CCCTCCTGAA AGGTGACCTC CGCATCCAGC
1451 ATACAGTGAC GGCCTCCGTG CGCCTCAGCT ACGGGGAGGA CCTGCAGATG
1501 GACTGGGATG GCCGCGGGAG GCTGCTGGTG AAGCTGTCCC CCGTCTATGC
1551 CGGGAAGACC TGCGGCCTGT GTGGGAATTA CAATGGCAAC CAGGGCGACG
1601 ACTTCCTTAC CCCCTCTGGG CTGGCGGAGC CCCGGGTGGA GGACTTCGGG
1651 AACGCCTGGA AGCTGCACGG GGACTGCCAG GACCTGCAGA AGCAGCACAG
1701 CGATCCCTGC GCCCTCAACC CGCGCATGAC CAGGTTCTCC GAGGAGGCGT
1751 GCGCGGTCCT GACGTCCCCC ACATTCGAGG CCTGCCATCG TGCCGTCAGC
1801 CCGCTGCCCT ACCTGCGGAA CTGCCGCTAC GACGTGTGCT CCTGCTCGGA
1851 CGGCCGCGAG TGCCTGTGCG GCGCCCTGGC CAGCTATGCC GCGGCCTGCG
1901 CGGGGAGAGG CGTGCGCGTC GCGTGGCGCG AGCCAGGCCG CTGTGAGCTG
1951 AACTGCCCGA AAGGCCAGGT GTACCTGCAG TGCGGGACCC CCTGCAACCT
2001 GACCTGCCGC TCTCTCTCTT ACCCGGATGA GGAATGCAAT GAGGCCTGCC
2051 TGGAGGGCTG CTTCTGCCCC CCAGGGCTCT ACATGGATGA GAGGGGGGAC
2101 TGCGTGCCCA AGGCCCAGTG CCCCTGTTAC TATGACGGTG AGATCTTCCA
2151 GCCAGAAGAC ATCTTCTCAG ACCATCACAC CATGTGCTAC TGTGAGGATG
2201 GCTTCATGCA CTGTACCATG AGTGGAGTCC CCGGAAGCTT GCTGCCTGAC
2251 GCTGTCCTCA GCAGTCCCCT GTCTCATCGC AGCAAAAGGA GCCTATCCTG
2301 TCGGCCCCCC ATGGTCAAGC TGGTGTGTCC CGCTGACAAC CTGCGGGCTG
2351 AAGGGCTCGA GTGTACCAAA ACGTGCCAGA ACTATGACCT GGAGTGCATG
2401 AGCATGGGCT GTGTCTCTGG CTGCCTCTGC CCCCCGGGCA TGGTCCGGCA
2451 TGAGAACAGA TGTGTGGCCC TGGAAAGGTG TCCCTGCTTC CATCAGGGCA
2501 AGGAGTATGC CCCTGGAGAA ACAGTGñAGA TTGGCTGCAA CACTTGTGTC
2551 TGTCGGGACC GGAAGTGGAA CTGCACAGAC CATGTGTGTGATGCCACGTG
2601 CTCCACGATC GGCATGGCCC ACTACCTCAC CTTCGACGGG CTCAAATACC
2651 TGTTCCCCGG GGAGTGCCAG TACGTTCTGG TGCAGGATTA CTGCGGCAGT 2701 AACCCTGGGA CCTTTCGGAT CCTAGTGGGG AATAAGGGAT GCAGCCACCC 2751 CTCAGTGAAA TGCAAGAAAC GGGTCACCAT CCTGGTGGAG GGAGGAGAGA 2801 TTGAGCTGTT TGACGGGGAG GTGAATGTGA AGAGGCCCAT GAAGGATGAG 2851 ACTCACTTTG AGGTGGTGGA GTCTGGCCGG TACATCATTC TGCTGCTGGG 2901 CAAAGCCCTC TCCGTGGTCT GGGACCGCCA CCTGAGCATC TCCGTGGTCC 2951 TGAAGCAGAC ATACCAGGAG AAAGTGTGTG GCCTGTGTGG GAATTTTGAT 3001 GGCATCCAGA ACAATGACCT CACCAGCAGC AACCTCCAAG TGGAGGñAGA 3051 CCCTGTGGAC TTTGGGAACT CCTGGAAAGT GAGCTCGCAG TGTGCTGñCA 3101 CCAGAAAAGT GCCTCTGGAC TCATCCCCTG CCACCTGCCA TAACAACATC 3151 ATGAAGCAGA CGATGGTGGA TTCCTCCTGT AGAATCCTTA CCAGTGACGT 3201 CTTCCAGGAC TGCAACAAGC TGGTGGACCC CGAGCCATAT CTGGATGTCT 3251 GCATTTACGA CACCTGCTCC TGTGAGTCCA TTGGGGACTG CGCCGCATTC 3301 TGCGACACCA TTGCTGCCTA TGCCCACGTG TGTGCCCAGC ATGGCAAGGT 3351 GGTGACCTGG AGGACGGCCA CATTGTGCCC CCAGAGCTGC GAGGAGAGGA 3401 ATCTCCGGGA GAACGGGTAT GAGGCTGAGT GGCGCTATAA CAGCTGTGCA 3451 CCTGCCTGTC AAGTCACGTG TCAGCACCCT GAGCCACTGG CCTGCCCTGT 3501 GCAGTGTGTG GAGGGCTGCC ATGCCCACTG CCCTCCAGGG AAAATCCTGG 3551 ATGAGCTTTT GCAGACCTGC GTTGACCCTG AAGACTGTCC AGTGTGTGAG 3601 GTGGCTGGCC GGCGTTTTGC CTCAGGAAAG AAAGTCACCT TGAATCCCAG 3651 TGACCCTGAG CACTGCCAGA TTTGCCACTG TGATGTTGTC AACCTCACCT 3701 GTGAAGCCTG CCAGGAGCCG GGTACATGAG AGAGCGCCAC CCCTGAAAGT 3751 GGTCCCGGGA GCGAGCCAGC CACATCTGGG TCGGñAACGC CAGGCACATC 3801 CGAGTCTGCA ACTCCCGAGT CCGGACCTGG CTCCGAGCCT GCCACTAGCG 3851 GCTCCGAGAC TCCGGGAACT TCCGAGAGCG CTACACCAGA AAGCGGACCC 3901 GGAACCAGTA CCGAACCTAG CGAGGGCTCT GCTCCGGGCA GCCCAGCCGG 3951 CTCTCCTACA TCCACGGAGG AGGGCACTTC CGAATCCGCC ACCCCGGAGT 4001 CAGGGCCAGG ATCTGAACCC GCTACCTCAG GCAGTGAGAC GCCAGGAACG 4051 AGCGAGTCCG CTACACCGGA GAGTGGGCCA GGGAGCCCTG CTGGATCTCC 4101 TACGTCCACT GAGGAAGGGT CACCAGCGGG CTCGCGCACC AGCACTGAAG 4151 AAGGTGCCTC GTCTGACAAG AACACTGGTG ATTATTACGA GGACAGTTAT 4201 GAAGATATTT CAGCATACTT GCTGAGTAAA AACAATGCCA TTGAACCAAG 4251 AAGCTTCTCT GACAAAACTC ACACATGCCC ACCGTGCCCA GCTCCAGAAC 4301 TCCTGGGCGG ACCGTCAGTC TTCCTCTTCC CCCCfiAAACC CAAGGACACC 4351 CTCATGATCT CGCGGACCCC TGAGGTCACA TGCGTGGTGG TGGACGTGAG 4401 CCACGAAGAC CCTGAGGTCñ AGTTCAACTG GTATGTGGAC GGCGTGGAAG 4451 TGCATAATGC CAAGACAAAG CCGCGGGAGG AGCAGTACAA CAGCACGTAC 4501 CGTGTGGTCA GCGTCCTCAC CGTCCTGCAC CAAGACTGGC TGAATGGCAA 4551 GGAGTACAAG TGCAAGGTCT CCAACAAAGC CCTCCCAGCC CCCATCGAGA 4601 AAACCATCTC CAAAGCCAAA GGGCAGCCCC GAGAACCACA GGTGTACACC 4651 CTGCCCCCAT CCCGGGATGñ GCTGACCAAG AACCAAGTTA GCCTGACCTG 4701 CCTGGTCAAA GGCTTCTATC CCAGCGACAT CGCCGTGGAG TGGGAGAGCA 4751 ATGGGCAGCC GGAGAACAAC TACAAGACCA CGCCTCCCGT GTTGGACTCC 4801 GACGGCTCCT TCTTCCTCTA CTCCAAGCTC ACCGTGGACA AGAGCAGGTG 4851 GCAGCñGGGG AACGTCTTCT CATGCTCCGT GATGCATGAG GCTCTGCACA 4901 ACCACTACAC GCAGAAGAGC CTCTCCCTGT CTCCGGGTTG A
A-FVIII(XTEN)-Fc: SEQ ID NO: 207
���
���
���
���
���

Claims (15)

REIVINDICACIONES
1. Un polipéptido quimérico que comprende
(í) una proteína del factor VIII (FVIII) que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 207; y (ii) una proteína del factor de von Willebrand (VWF) que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 202<,>
para uso en el tratamiento de la hemofilia A en un sujeto humano que lo necesite,
en el que el polipéptido quimérico se administra por vía intravenosa en dosis múltiples de 45 UI/kg a 55 UI/kg, con un intervalo de dosificación de al menos 7 días, y en el que la proteína del FVIII está asociada a la proteína del VWF mediante un enlace covalente.
2. El polipéptido quimérico para uso según la reivindicación 1, en el que el enlace covalente es un enlace disulfuro.
3. El polipéptido quimérico para uso según la reivindicación 1 o 2, en el que cada dosis múltiple es de 50 UI/kg, con un intervalo de dosificación de 7 días.
4. El polipéptido quimérico para uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que el polipéptido quimérico es para el tratamiento profiláctico.
5. El polipéptido quimérico para uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que el sujeto padece hemofilia A grave.
6<. El polipéptido quimérico para uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que el sujeto tiene menos>de 1 UI/dl de FVIII endógeno.
7. El polipéptido quimérico para uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que el sujeto ha recibido previamente tratamiento para la hemofilia A con cualquier FVIII recombinante, FVIII plasmático, o crioprecipitado, durante al menos 150 días de exposición (DE).
8<. El polipéptido quimérico para uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que el sujeto>
(a) está actualmente en tratamiento profiláctico con un producto de FVIII comercializado y ha tenido al menos cuatro episodios hemorrágicos en los doce meses previos a la administración del polipéptido quimérico; o (b) está actualmente en tratamiento a demanda con un producto de FVIII comercializado y ha tenido al menos doce episodios hemorrágicos en los doce meses previos a la administración del polipéptido quimérico.
9. El polipéptido quimérico para uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en el que el sujeto tiene un recuento de plaquetas de al menos 100.000 células/pl.
10. El polipéptido quimérico para uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que el sujeto no presenta otros trastornos de la coagulación además de la hemofilia A.
11. El polipéptido quimérico para uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en el que el sujeto no tiene antecedentes de desarrollar inhibidores de un producto de FVIII.
12. El polipéptido quimérico para uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, en el que las dosis múltiples se administran durante al menos aproximadamente 1 mes, al menos aproximadamente 2 meses, al menos aproximadamente 3 meses, al menos aproximadamente 4 meses, al menos aproximadamente 5 meses, al menos aproximadamente 6 meses, al menos aproximadamente 12 meses, al menos aproximadamente 18 meses, al menos aproximadamente 2 años, al menos aproximadamente 3 años, al menos aproximadamente 4 años, al menos aproximadamente 5 años, al menos aproximadamente 10 años, al menos aproximadamente 15 años, al menos aproximadamente 20 años, o durante al menos aproximadamente 25 años.
13. Un polipéptido quimérico para uso en el tratamiento profiláctico de la hemofilia A grave en un sujeto que lo necesite, en el que el polipéptido quimérico comprende
(<í>) una proteína del FVIII que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NO: 207; y
(ii) una proteína del VWF que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NO: 202;
en el que se administran dosis múltiples del polipéptido quimérico por vía intravenosa en una dosis semanal de 50 UI/kg.
14. El polipéptido quimérico para uso según la reivindicación 13, en el que las dosis múltiples se administran durante al menos aproximadamente 6 meses.
15. El polipéptido quimérico para uso según la reivindicación 13, en el que las dosis múltiples se administran durante al menos aproximadamente 52 semanas.
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