ES2765240T3 - Nanopartículas poliméricas cargadas de fármaco y procedimientos de fabricación y uso de las mismas - Google Patents

Nanopartículas poliméricas cargadas de fármaco y procedimientos de fabricación y uso de las mismas Download PDF

Info

Publication number
ES2765240T3
ES2765240T3 ES14150948T ES14150948T ES2765240T3 ES 2765240 T3 ES2765240 T3 ES 2765240T3 ES 14150948 T ES14150948 T ES 14150948T ES 14150948 T ES14150948 T ES 14150948T ES 2765240 T3 ES2765240 T3 ES 2765240T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
polymer
nanoparticles
peg
phase
emulsion
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES14150948T
Other languages
English (en)
Inventor
Gregory Troiano
Michael Figa
Abhimanyu Sabnis
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Pfizer Inc
Original Assignee
Pfizer Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=41507660&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=ES2765240(T3) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Pfizer Inc filed Critical Pfizer Inc
Application granted granted Critical
Publication of ES2765240T3 publication Critical patent/ES2765240T3/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61J—CONTAINERS SPECIALLY ADAPTED FOR MEDICAL OR PHARMACEUTICAL PURPOSES; DEVICES OR METHODS SPECIALLY ADAPTED FOR BRINGING PHARMACEUTICAL PRODUCTS INTO PARTICULAR PHYSICAL OR ADMINISTERING FORMS; DEVICES FOR ADMINISTERING FOOD OR MEDICINES ORALLY; BABY COMFORTERS; DEVICES FOR RECEIVING SPITTLE
    • A61J3/00—Devices or methods specially adapted for bringing pharmaceutical products into particular physical or administering forms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/337—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having four-membered rings, e.g. taxol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/4355—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system containing a five-membered ring having oxygen as a ring hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/436—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system containing a six-membered ring having oxygen as a ring hetero atom, e.g. rapamycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/437—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system containing a five-membered ring having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. indolizine, beta-carboline
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/439—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom the ring forming part of a bridged ring system, e.g. quinuclidine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/475—Quinolines; Isoquinolines having an indole ring, e.g. yohimbine, reserpine, strychnine, vinblastine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
    • A61K31/7034—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
    • A61K31/704—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin attached to a condensed carbocyclic ring system, e.g. sennosides, thiocolchicosides, escin, daunorubicin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7068—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
    • A61K33/24—Heavy metals; Compounds thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/34—Macromolecular compounds obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyesters, polyamino acids, polysiloxanes, polyphosphazines, copolymers of polyalkylene glycol or poloxamers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6905—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion
    • A61K47/6911—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion the form being a liposome
    • A61K47/6915—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion the form being a liposome the form being a liposome with polymerisable or polymerized bilayer-forming substances, e.g. polymersomes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6921—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere
    • A61K47/6925—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a microcapsule, nanocapsule, microbubble or nanobubble
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6921—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere
    • A61K47/6927—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores
    • A61K47/6929—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores the form being a nanoparticle, e.g. an immuno-nanoparticle
    • A61K47/6931—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores the form being a nanoparticle, e.g. an immuno-nanoparticle the material constituting the nanoparticle being a polymer
    • A61K47/6935—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores the form being a nanoparticle, e.g. an immuno-nanoparticle the material constituting the nanoparticle being a polymer the polymer being obtained otherwise than by reactions involving carbon to carbon unsaturated bonds, e.g. polyesters, polyamides or polyglycerol
    • A61K47/6937—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores the form being a nanoparticle, e.g. an immuno-nanoparticle the material constituting the nanoparticle being a polymer the polymer being obtained otherwise than by reactions involving carbon to carbon unsaturated bonds, e.g. polyesters, polyamides or polyglycerol the polymer being PLGA, PLA or polyglycolic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/107—Emulsions ; Emulsion preconcentrates; Micelles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
    • A61K9/1605—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/1629—Organic macromolecular compounds
    • A61K9/1641—Organic macromolecular compounds obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyethylene glycol, poloxamers
    • A61K9/1647—Polyesters, e.g. poly(lactide-co-glycolide)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/513—Organic macromolecular compounds; Dendrimers
    • A61K9/5146—Organic macromolecular compounds; Dendrimers obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyethylene glycol, polyamines, polyanhydrides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/513—Organic macromolecular compounds; Dendrimers
    • A61K9/5146—Organic macromolecular compounds; Dendrimers obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyethylene glycol, polyamines, polyanhydrides
    • A61K9/5153—Polyesters, e.g. poly(lactide-co-glycolide)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B82—NANOTECHNOLOGY
    • B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
    • B82Y5/00—Nanobiotechnology or nanomedicine, e.g. protein engineering or drug delivery
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C59/00—Compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms and containing any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, groups, groups, or groups
    • C07C59/01—Saturated compounds having only one carboxyl group and containing hydroxy or O-metal groups
    • C07C59/08—Lactic acid
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S977/00—Nanotechnology
    • Y10S977/70—Nanostructure
    • Y10S977/773—Nanoparticle, i.e. structure having three dimensions of 100 nm or less

Abstract

Un procedimiento de preparación de nanopartículas terapéuticas usando un procedimiento de nanoemulsión en el que: un agente terapéutico, un primer polímero y, opcionalmente, un segundo polímero se combinan con una solución orgánica para formar una primera fase orgánica, en el que el primer polímero es un copolímero de dibloque PLGA-PEG o dibloque PLA-PEG y en el que el primer polímero o el segundo polímero está unido opcionalmente a un ligando que tiene un peso molecular de menos de aproximadamente 1000 g/mol; la primera fase orgánica se combina con una primera fase acuosa para formar una segunda fase; la segunda fase se emulsiona para formar una emulsión primaria (gruesa); la emulsión primaria se emulsiona para formar una emulsión fina; la emulsión fina se diluye con un medio de enfriamiento acuoso, al menos parcialmente a una temperatura de 5 ºC o menor; y las nanopartículas se recuperar por filtración

Description

DESCRIPCIÓN
Nanopartículas poliméricas cargadas de fármaco y procedimientos de fabricación y uso de las mismas
Antecedentes
Se ha reconocido como beneficiosos los sistemas que entregan ciertos fármacos a un paciente (por ejemplo, dirigidos a un tipo particular de tejido o célula, o dirigidos a un tejido enfermo específico pero no al tejido normal), o que controlan la liberación de fármacos.
Por ejemplo, los productos terapéuticos que contienen un principio activo y que están dirigidos, por ejemplo, a un tipo particular de tejido o célula, o dirigidos a un tejido enfermo específico, pero no al tejido normal, pueden reducir la cantidad de fármaco en los tejidos corporales a los que no se dirigen. Esto es particularmente importante en el tratamiento de una afección tal como el cáncer, donde es deseable la entrega de una dosis citotóxica del fármaco a las células cancerosas sin destruir el tejido circundante no canceroso. El direccionamiento de fármacos eficaz puede disminuir los efectos secundarios indeseables y a veces mortales, habituales en la terapia antineoplásica. Además, dichos productos terapéuticos pueden permitir que los fármacos lleguen a ciertos tejidos que de lo contrario serían incapaces de alcanzar.
La solicitud de patente internacional publicada WO 2003/086369 desvela un procedimiento para preparar nanoesferas biodegradables poliméricas furtivas a partir de una emulsión, comprendiendo el procedimiento las etapas de:
(i) preparar una fase interna orgánica que comprende un compuesto farmacéutico, un multibloque poliésterpolietileno de acuerdo con la invención y/o una mezcla de polímeros y un poliéster;
(ii) preparar una fase externa acuosa;
(iii) inyectar tanto la fase interna orgánica de la etapa (i) como la fase externa acuosa de la etapa (ii) en una cámara de homogeneización que tiene una salida, con o sin un tensioactivo, produciendo de esta manera una emulsión a la salida de la cámara;
(iv) evaporar y/o extraer las fases de la etapa (iii) para producir nanoesferas poliméricas furtivas; y
(v) recoger las nanoesferas poliméricas furtivas obtenidas en la etapa (iv) por centrifugación o diálisis.
Los productos terapéuticos que ofrecen liberación controlada y/o terapia dirigida también deben ser capaces de entregar una cantidad eficaz de fármaco, que es una limitación conocida en otros sistemas de entrega de nanopartículas. Por ejemplo, puede ser un desafío preparar sistemas de nanopartículas que tengan una cantidad apropiada de fármaco asociada a cada nanopartícula, manteniendo al mismo tiempo el tamaño de las nanopartículas lo suficientemente pequeño para que tengan propiedades de entrega ventajosas. Sin embargo, si bien es deseable cargar una nanopartícula con una alta cantidad de un agente terapéutico, las preparaciones de nanopartículas que usan una carga de fármaco que es demasiado alta darán como resultado nanopartículas que son demasiado grandes para el uso terapéutico práctico.
En consecuencia, existe la necesidad de productos terapéuticos en nanopartículas y procedimientos de fabricación de dichas nanopartículas, que sean capaces de entregar niveles terapéuticos de fármacos para tratar enfermedades tales como el cáncer, reduciendo al mismo tiempo los efectos secundarios en el paciente.
Sumario
La invención proporciona un procedimiento de preparación de nanopartículas terapéuticas usando un proceso de nanoemulsión en el que: un agente terapéutico, un primer polímero y, opcionalmente, un segundo polímero se combinan con una solución orgánica para formar una primera fase orgánica, en la que el primer polímero es un copolímero dibloque PLGA PEG o dibloque PLA-PEG y en la que el primer polímero o el segundo polímero se une opcionalmente a un ligando que tiene un peso molecular de menos de 1000 g/mol; la primera fase orgánica se combina con una primera fase acuosa para formar una segunda fase; la segunda fase se emulsifica para formar una emulsión primaria (gruesa); la emulsión primaria se emulsifica para formar una emulsión fina; la emulsión fina se diluye con un medio de enfriamiento acuoso, al menos parcialmente a una temperatura de 5 °C o menor; y las nanopartículas se recuperar por filtración.
El alcance de la invención se define mediante las reivindicaciones. Cualquier referencia en la descripción a procedimientos de tratamiento se refiere a los dispositivos, compuestos, composiciones farmacéuticas y medicamentos de la presente invención para su uso en un procedimiento para el tratamiento del cuerpo humano o animal mediante terapia.
En un aspecto, la invención proporciona una nanopartícula terapéutica que incluye un principio activo o agente terapéutico, por ejemplo, taxano y uno, dos o tres polímeros biocompatibles. Por ejemplo, en el presente documento se desvela una nanopartícula terapéutica que comprende de aproximadamente el 0,2 a aproximadamente el 35 por ciento en peso de un agente terapéutico; de aproximadamente el 10 a aproximadamente el 99 por ciento en peso de copolímero ácido poli(láctico)-Wogue-poli(etilen)glicol o copolímero ácido poli(láctico)-co-poli(glicólico)-bloquepoli(etilen)glicol; y de aproximadamente el 0 a aproximadamente el 50 por ciento en peso de ácido poli(láctico) o ácido poli(láctico)-co-ácido poli(glicólico). Los agentes terapéuticos de ejemplos incluyen agentes antineoplásicos tales como taxanos, por ejemplo, docetaxel y pueden incluir de aproximadamente el 10 a aproximadamente el 30 por ciento en peso de un agente terapéutico, por ejemplo, un taxano.
En el presente documento se proporciona, en parte, un procedimiento de preparación de una pluralidad de nanopartículas terapéuticas desveladas, que comprende combinar un agente terapéutico, un primer polímero y opcionalmente un segundo polímero, con un disolvente orgánico (por ejemplo, un disolvente elegido entre: acetato de etilo, alcohol bencílico, cloruro de metileno, dimetilformamida, Tween 80 y Span 80 y las combinaciones de dos o más de éstos) para formar una primera fase orgánica que contenga del 5 al 50 % de sólidos; combinar la primera fase orgánica con una primera solución acuosa (que puede, en algunas realizaciones, incluir un reactivo elegido entre: colato de sodio, acetato de etilo, alcohol bencílico o sus combinaciones) para formar una segunda fase; emulsionar la segunda fase para formar una fase en emulsión; enfriar la fase en emulsión para formar una fase enfriada; añadir un solubilizante de fármacos a la fase enfriada para formar una fase solubilizada de un agente terapéutico no encapsulado; y filtrar la fase solubilizada para recuperar las nanopartículas furtivas específicas para la diana, formando de este modo una suspensión de nanopartículas terapéuticas con un diámetro de aproximadamente 80 nm a aproximadamente 150 nm. En algunas realizaciones, emulsionar la segunda fase puede implicar emulsionar la segunda fase para formar una emulsión gruesa y emulsionar la emulsión gruesa para formar una fase en emulsión fina. La emulsión de la segunda fase se puede realizar, por ejemplo, utilizando un homogeneizador de rotor y estator, una sonda de ultrasonidos, una barra de agitación o un mezclador de alta presión. La emulsión de la emulsión gruesa se puede realizar utilizando, por ejemplo, un homogeneizador de alta presión que puede tener múltiples cámaras de interacción (2, 3, 4 o más) y con, por ejemplo, una presión de alimentación de aproximadamente 2000 a aproximadamente 8000, por ejemplo, de aproximadamente 2000 a aproximadamente 6000, por cámara de interacción.
El enfriamiento se realiza al menos parcialmente a una temperatura de aproximadamente 5°C o menos, por ejemplo, de aproximadamente 0 °C a aproximadamente 5 °C. Una relación de enfriamiento:emulsión puede ser de aproximadamente 8:1 a aproximadamente 5:1, o de aproximadamente 2:1 a aproximadamente 40:1.
Los solubilizantes de fármacos de ejemplos para su uso en los procedimientos desvelados pueden incluir Tween 80, Tween 20, polivinilpirrolidona, ciclodextrano, dodecilsulfato de sodio o colato de sodio. En algunas realizaciones, un solubilizante de fármacos se selecciona entre el grupo que consiste en dietilnitrosamina, acetato de sodio, urea, glicerina, propilenglicol, glicofurol, poli(etilen)glicol, bis(polioxietilenglicoldodecil)éter, benzoato de sodio y salicilato de sodio. La relación entre solubilizante de fármacos y agente terapéutico puede ser de aproximadamente 100:1 a aproximadamente 10:1.
En una realización, un procedimiento puede incluir filtrar la fase solubilizada que contiene nanopartículas usando por ejemplo un sistema de filtración de flujo tangencial. La filtración se puede realizar, por ejemplo, a una primera temperatura de aproximadamente 0 °C a aproximadamente 5 °C y después a una segunda temperatura de aproximadamente 20 °C a aproximadamente 30 °C. Como alternativa, la filtración se puede realizar, por ejemplo, a una primera temperatura de aproximadamente 20 °C a aproximadamente 30 °C y después a una segunda temperatura de aproximadamente 0 °C a aproximadamente 5 °C. En algunas realizaciones, la filtración comprende procesar de aproximadamente 1 a aproximadamente 6 diavolúmenes a una temperatura de aproximadamente 0 °C a aproximadamente 5 °C y procesar al menos un diavolumen a una temperatura de aproximadamente 20 °C a aproximadamente 30 °C, por ejemplo, la filtración puede implicar procesar de aproximadamente 1 a aproximadamente 6 diavolúmenes a una temperatura de aproximadamente 0 °C a aproximadamente 5 °C y procesar de aproximadamente 1 diavolumen a aproximadamente 15 diavolúmenes a una temperatura de aproximadamente 20 °C a aproximadamente 30 °C. En una realización, la filtración puede implicar procesar diferentes diavolúmenes a diferentes temperaturas definidas. La fase solubilizada se puede purificar antes de dicha filtración para eliminar sustancialmente dicho disolvente orgánico, agente terapéutico no encapsulado y/o solubilizante de fármacos.
Los procedimientos desvelados pueden comprender la filtración esterilizante de la suspensión de nanopartículas terapéuticas utilizando un tren de filtración a una velocidad controlada. Por ejemplo, se puede usar un tren de filtración que comprenda un filtro de profundidad y un filtro esterilizante.
También se desvela en el presente documento un procedimiento de preparación de una pluralidad de nanopartículas terapéuticas que comprende combinar un agente terapéutico, un primer polímero y opcionalmente un segundo polímero, con un disolvente orgánico para formar una primera fase orgánica, combinar la primera fase orgánica con una primera solución acuosa para formar una segunda fase; emulsionar la segunda fase para formar una fase en emulsión; enfriar la fase en emulsión para formar una fase enfriada; añadir un solubilizante de fármacos a la fase enfriada para formar una fase solubilizada de agente terapéutico no encapsulado; y filtrar la fase solubilizada utilizando filtración de flujo tangencial con diafiltración de volumen constante en la que al menos un diavolumen se expone a aproximadamente 25 °C después de haber expuesto un diavolumen diferente a una temperatura de aproximadamente -5 °C a aproximadamente 10 °C. Por ejemplo, filtrar puede implicar procesar de aproximadamente 2 a aproximadamente 5 diavolúmenes a una temperatura de aproximadamente 0 °C a aproximadamente 5 °C y después procesar al menos un diavolumen a 25 °C durante al menos un período de tiempo.
En el presente documento se proporcionan procedimientos de formación de nanopartículas terapéuticas que pueden ser estables durante al menos 2 días a 25 °C a una concentración de aproximadamente 10mg/ml. Las nanopartículas terapéuticas formadas utilizando los procedimientos desvelados pueden liberar menos del 10% en peso de agente terapéutico en al menos 5 días a 25 °C. En algunas realizaciones, una nanopartícula terapéutica formada utilizando un procedimiento desvelado puede, por ejemplo, encapsular de aproximadamente el 2 a aproximadamente el 30 % del agente terapéutico.
En algunas realizaciones, se proporcionan procedimientos de preparación de una pluralidad de nanopartículas terapéuticas desveladas que comprenden combinar un agente terapéutico, un primer polímero (copolímero en dibloque PLGA-PEG o dibloque PLA-PEG), un segundo polímero opcional (por ejemplo, homopolímero PLA) y opcionalmente un tercer polímero (por ejemplo, PLA) en los que el primer polímero o el segundo polímero pueden estar unidos opcionalmente a un ligando con un peso molecular menor de aproximadamente 1000 g/mol, por ejemplo, un ligando de bajo peso molecular, por ejemplo, un ligando de PSMA. Dicho ligando de PSMA de bajo peso molecular se puede seleccionar entre el grupo que consiste en los compuestos I, II, III y IV:
Figure imgf000004_0001
que
m y n cada uno, independientemente, es 0, 1, 2 o 3;
p es 0 o 1;
R1, R2, R4 y R5 cada uno, independientemente, se selecciona entre el grupo que consiste en alquilo sustituido o sin sustituir, arilo sustituido o sin sustituir y cualquier combinación de los mismos; y
R3 es H o CH3;
en los que R1, R2, R4 o R5 comprenden un punto de unión covalente a la nanopartícula. Por ejemplo, R1, R2, R4 y R5 pueden ser cada uno, independientemente, alquilo C1-6 o fenilo, o cualquier combinación de alquilo C1-6 o fenilo, que están independientemente sustituidos una o más veces con OH, SH, NH2 o CO2H y en los que el grupo alquilo puede estar interrumpido por N(H), S u O. En otra realización, por ejemplo, R1, R2, R4 y R5 cada uno, independientemente, es CH2-Ph, (CH2)2-SH, CH2-SH, (CH2)2C(H)(NH2)CO2H, CH2C(H)(NH2)CO2H, CH(NH2)CH2CO2H, (CH2)2C(H)(SH)CO2H, CH2-N(H)-Ph, O-CH2-Ph o O-(CH2)2-Ph, en los que cada Ph puede estar independientemente sustituido una o más veces con OH, NH2, CO2H o SH. El ligando de PSMA de bajo peso molecular de ejemplo se puede seleccionar entre el grupo que consiste en
Figure imgf000004_0002
y los enantiómeros, estereoisómeros, rotámeros, tautómeros, diastereoisómeros o racematos de los mismos; y en los que los grupos NH2, OH o SH sirven como el punto de unión covalente a la primera partícula, o se pueden seleccionar entre el grupo que consiste en
Figure imgf000004_0003
y
Figure imgf000005_0001
y los enantiómeros, estereoisómeros, rotámeros, tautómeros, diastereoisómeros o racematos de los mismos; en los que R se elige independientemente entre el grupo que consiste en NH2, SH, OH, CO2H, alquilo C1-6 que está sustituido con NH2, SH, OH o CO2H y fenilo que está sustituido con NH2, SH, OH o CO2H,
y en los que R sirve como el punto de unión covalente al primer polímero. Los ligandos de ejemplo incluyen
Figure imgf000005_0002
y los enantiómeros, estereoisómeros, rotámeros, tautómeros, diastereoisómeros o racematos de los mismos; cualquiera de los cuales puede estar sustituido además con NH2, SH, OH, CO2H, alquilo C1-6 que está sustituido con NH2, SH, OH o CO2H, o fenilo que está sustituido con NH2, SH, OH o CO2H, en los que estos grupos funcionales sirven como el punto de unión covalente al primer polímero, por ejemplo, un ligando de PSMA de bajo peso molecular puede ser
Figure imgf000005_0003
y los enantiómeros, estereoisómeros, rotámeros, tautómeros, diastereoisómeros o racematos de los mismos; en los que los grupos NH2 sirven como el punto de unión covalente al primer polímero.
En algunas realizaciones, se proporcionan procedimientos de preparación de una pluralidad de nanopartículas terapéuticas desveladas que comprenden combinar un agente terapéutico, un primer polímero (por ejemplo, PLGA-PeG o PLA- PEG) y opcionalmente un segundo polímero (por ejemplo PLA, PLGA o PEG, o sus copolímeros) y un tercer polímero opcional (por ejemplo PLA o PLGA no unido a un ligando). En algunas realizaciones, el agente terapéutico es docetaxel. En otras realizaciones, el agente terapéutico se selecciona entre el grupo que consiste en antineoplásicos tales como doxorrubicina (adriamicina), mitoxantrona, gemcitabina (gemzar), daunorrubicina, procarbazina, mitomicina, citarabina, etopósido, metotrexato, 5-fluorouracilo (5-FU), vinblastina, vincristina, bleomicina, paclitaxel (taxol), docetaxel (taxotere), aldesleucina, asparaginasa, busulfán, carboplatino, cladribina, camptotecina, CPT-11, 10-hidroxi-7-etilcamptotecina (SN38), dacarbazina, S-I capecitabina, ftorafur, 5'desoxiflurouridina, UFT, eniluracilo, desoxicitidina, 5-azacitosina, 5-azadesoxicitosina, alopurinol, 2-cloroadenosina, trimetrexato, aminopterina, metileno-10-deazaaminopterina (MDAM), oxaplatino, picoplatino, tetraplatino, satraplatino, platino-DACH, ormaplatino, CI-973, JM-216 y sus análogos, epirrubicina, fosfato de etopósido, 9-aminocamptotecina, 10,11-metilenodioxicamptotecina, karenitecina, 9-nitrocamptotecina, TAS 103, vindesina, mostaza de L-fenilalanina, ifosfamidamefosfamida, perfosfamida, trofosfamida, carmustina, semustina, epotilones A-E, tomudex, 6-mercaptopurina, 6-tioguanina, amsacrina, fosfato de etopósido, karenitecina, aciclovir, valaciclovir, ganciclovir, amantadina, rimantadina, lamivudina, zidovudina, bevacizumab, trastuzumab, rituximab y 5-fluorouracilo, metotrexato, budesonida, sirolimus, vincristina y sus combinaciones, o el agente terapéutico puede ser un ARNip.
También se proporcionan en el presente documento procedimientos para tratar el cáncer de próstata en un sujeto que lo necesita, que comprenden administrar al sujeto una cantidad eficaz de la nanopartícula preparada por los procedimientos desvelados.
En una realización, también se proporciona en el presente documento una nanopartícula terapéutica preparada mediante: la emulsión de una primera fase orgánica que comprende un primer polímero y un agente terapéutico y una segunda fase que forma una fase en emulsión; en la que la fase en emulsión se enfría después a una temperatura de aproximadamente 0 °C a aproximadamente 5 °C formando una fase enfriada; y la filtración de la fase enfriada a una primera temperatura de aproximadamente -5 °C a arpxo 10 °C; y la filtración de la fase enfriada a una segunda temperatura de aproximadamente 25 °C; formando de este modo nanopartículas terapéuticas que son estables durante al menos 5 días a 25 °C.
También se proporciona en una realización, un procedimiento de estabilización de nanopartículas terapéuticas que tienen un agente terapéutico que comprende: proporcionar una suspensión que contenga un agente terapéutico encapsulado por nanopartículas y un solubilizante de fármacos; filtrar la suspensión a una primera temperatura de aproximadamente -5 °C a aproximadamente 10 °C; filtrar la suspensión a una segunda temperatura de aproximadamente 25 °C.
Breve descripción de las figuras
La figura 1 describe una representación gráfica de una realización de una nanopartícula desvelada.
La figura 2 describe un esquema de síntesis de ejemplo para una nanopartícula desvelada.
La figura 3 es un diagrama de flujo para un procedimiento de emulsión para formar la nanopartícula desvelada. La figura 4 es un diagrama de flujo para un procedimiento de emulsión desvelado.
La figura 5 describe el efecto de la preparación de la emulsión gruesa sobre el tamaño de la partícula enfriada. Se usó placebo orgánico con el 30% de sólidos, emulsionado a 5:1 W:O usando fase acuosa convencional (colato de sodio al 1 %, alcohol bencílico al 2 %, acetato de etilo al 4 %).
La figura 6 describe el efecto de la presión de alimentación sobre el tamaño de partícula resultante.
La figura 7 describe la dependencia del tamaño de partícula con la escala.
La figura 8 describe el efecto de la concentración de sólidos sobre el tamaño de partícula.
La figura 9 describe el efecto de la concentración de sólidos sobre la carga de fármaco.
La figura 10 describe el efecto del homopolímero PLA con PLGA-PEG o PLA-PEG sobre la carga de DTXL (docetaxel).
La figura 11 describe el efecto del homopolímero PLA como parte de una nanopartícula sobre la velocidad de liberación del fármaco desde una nanopartícula.
La figura 12 describe el efecto del alcohol cetílico sobre la velocidad inicial de liberación del fármaco desde una nanopartícula.
La figura 13 describe la liberación in vitro de docetaxel desde las nanopartículas desveladas en comparación con docetaxel convencional.
La figura 14 describe el efecto de la concentración de sólidos y el homopolímero poli(láctico) sobre el porcentaje de carga de sirolimus (rapamicina).
La figura 15 describe la liberación in vitro de sirolimus en el tiempo para las nanopartículas desveladas.
La figura 16 describe los efectos del homopolímero poli(láctico) sobre el porcentaje de carga de temsirolimus. La figura 17 describe el efecto de la concentración de sólidos sobre el tamaño de las partículas que contienen temsirolimus.
La figura 18 describe la liberación in vitro de temsirolimus en el tiempo para las nanopartículas desveladas. La figura 19 describe las propiedades de liberación in vitro de una nanopartícula desvelada de ejemplo que incluye vinorelbina.
La figura 20 describe las propiedades de liberación in vitro de las nanopartículas desveladas que incluyen vincristina o docetaxel.
La figura 21 describe la farmacocinética de vincristina y vincristina PTNP en ratas.
La figura 22 describe el volumen promedio del tumor después de la administración de las nanopartículas desveladas que incluyen docetaxel en un modelo de xenoinjerto MX-1 de cáncer de mama en ratón.
La figura 23 describe la concentración de docetaxel en tumores de ratón en un modelo de xenoinjerto MX-1 de cáncer de mama en ratón, 24 horas después de una dosis intravenosa de las nanopartículas desveladas que incluyen docetaxel.
La figura 24 describe la distribución en el tumor de próstata de las nanopartículas desveladas que tienen docetaxel, después de la administración a ratones inoculados con células LNCaP de cáncer de próstata humano. La figura 25 muestra la supresión del crecimiento tumoral en ratones inoculados con células LNCaP de cáncer de próstata humano después de la administración de las nanopartículas desveladas con docetaxel.
Descripción detallada
La presente invención se refiere en general a nanopartículas poliméricas que incluyen un agente activo o terapéutico o fármaco y a procedimientos de fabricación y de uso de dichas nanopartículas terapéuticas. En general, una "nanopartícula" se refiere a cualquier partícula que tenga un diámetro menor de 1000 nm, por ejemplo, de aproximadamente 10 nm a aproximadamente 200 nm. Las nanopartículas terapéuticas desveladas pueden incluir nanopartículas que tengan un diámetro de aproximadamente 60 a aproximadamente 120 nm, o de aproximadamente 70 a aproximadamente 130 nm, o de aproximadamente 60 a aproximadamente 140 nm.
Las nanopartículas desveladas pueden incluir de aproximadamente el 0,2 a aproximadamente el 35 % en peso, de aproximadamente el 3 a aproximadamente el 40 % en peso, de aproximadamente el 5 a aproximadamente el 30 % en peso, de aproximadamente el 10 a aproximadamente el 30% en peso, de aproximadamente el 15 y 25% en peso, o incluso de aproximadamente el 4 a aproximadamente el 25 % en peso de un agente activo, tal como un agente antineoplásico, por ejemplo un agente taxano (por ejemplo docetaxel).
Las nanopartículas desveladas en el presente documento incluyen uno, dos, tres o más polímeros biocompatibles y/o biodegradables. Por ejemplo, una nanopartícula contemplada puede incluir de aproximadamente el 10 a aproximadamente el 99 por ciento en peso de uno o más copolímeros en bloque que incluyan un polímero biodegradable y polietilenglicol y de aproximadamente el 0 a aproximadamente el 50 % en peso de un homopolímero biodegradable.
En una realización, las nanopartículas terapéuticas desveladas pueden incluir un ligando para administración dirigida, por ejemplo, un ligando de PSMA de bajo peso molecular eficaz para el tratamiento de una enfermedad o un trastorno, tal como el cáncer de próstata, en un sujeto que lo necesita. En ciertas realizaciones, el ligando de bajo peso molecular se conjuga con un polímero y la nanopartícula comprende una cierta relación de polímero conjugado con ligando (por ejemplo, PLA-PEG-Ligando) a polímero no funcionalizado (por ejemplo PLA-PEG o PLGA-PEG). La nanopartícula puede tener una relación optimizada de estos dos polímeros de manera que una cantidad eficaz de ligando se asocie a la nanopartícula para el tratamiento de una enfermedad o un trastorno, tal como el cáncer. Por ejemplo, una mayor densidad de ligando puede aumentar la unión a la diana (unión a la célula/absorción por la diana) haciendo que la partícula sea "específica para la diana". Como alternativa, una cierta concentración de polímero no funcionalizado (por ejemplo, copolímero PLGA-PEG no funcionalizado) en la nanopartícula puede controlar la inflamación y/o la inmunogenia (es decir, la capacidad de provocar una respuesta inmunitaria) y permitir que la nanopartícula tenga una vida media de circulación que sea adecuada para el tratamiento de una enfermedad o un trastorno (por ejemplo, cáncer de próstata). Además, el polímero no funcionalizado puede, en algunas realizaciones, reducir la velocidad de aclaramiento del sistema circulatorio a través del sistema reticuloendotelial (RES). Por tanto, el polímero no funcionalizado puede proporcionar la nanopartícula con características que pueden permitir a la partícula desplazarse a través del organismo después de su administración. En algunas realizaciones, un polímero no funcionalizado puede equilibrar la concentración de ligando, de lo contrario elevada, que de otra manera puede acelerar el aclaramiento por el sujeto, dando como resultado una menor entrega a las células que son la diana.
Por ejemplo, en el presente documento se desvelan nanopartículas que pueden incluir polímeros funcionalizados conjugados con un ligando que constituye aproximadamente el 0,1 - 30, por ejemplo, el 0,1 - 20, por ejemplo, el 0,1 -10 por ciento en moles de toda la composición polimérica de la nanopartícula (es decir, polímero funcionalizado no funcionalizado). También se desvelan en el presente documento, en otra realización, nanopartículas que incluyen un polímero conjugado (por ejemplo, covalentemente con (es decir a través de un engarce (por ejemplo un engarce alquileno) o un enlace) con uno o más ligandos de bajo peso molecular, en las que el porcentaje en peso de ligando de bajo peso molecular con respecto al polímero total es de entre aproximadamente el 0,001 y el 5, por ejemplo, entre aproximadamente el 0,001 y el 2, por ejemplo, entre aproximadamente el 0,001 y el 1.
También se proporcionan en el presente documento nanopartículas poliméricas que incluyen de aproximadamente el 2 a aproximadamente el 20 por ciento en peso de agente activo. Por ejemplo, una composición que comprende dichas nanopartículas puede ser capaz de administrar una cantidad eficaz por ejemplo la zona corporal diana de un paciente.
Por ejemplo, las partículas desveladas pueden ser capaces de unirse eficientemente o asociarse de otra manera a una entidad biológica, por ejemplo, un componente de membrana particular o un receptor de superficie celular. El direccionamiento de un agente terapéutico (por ejemplo, a un tipo de tejido o célula particular, a un tejido enfermo específico pero no al tejido normal, etc.) es deseable para el tratamiento de enfermedades tisulares específicas tales como cánceres de tumor sólido (por ejemplo, cáncer de próstata). Por ejemplo, en contraste con la administración sistémica de un anticancerígeno citotóxico, las nanopartículas desveladas en el presente documento pueden evitar en gran medida que el agente provoque la muerte de células sanas. Además, las nanopartículas desveladas pueden permitir la administración de una dosis menor del agente (en comparación con una cantidad eficaz de un agente administrado sin las nanopartículas o formulaciones desveladas) lo que puede reducir los efectos secundarios indeseables habitualmente asociados a la quimioterapia tradicional.
Polímeros
En algunas realizaciones, las nanopartículas de la invención comprenden una matriz de polímeros y un agente terapéutico. En algunas realizaciones, un agente terapéutico y/o un resto de direccionamiento (es decir un ligando de PSMA de bajo peso molecular) se pueden asociar al menos a parte de la matriz polimérica. Por ejemplo, en algunas realizaciones, un resto de direccionamiento (por ejemplo un ligando) se puede asociar covalentemente a la superficie de una matriz polimérica. En algunas realizaciones, la asociación covalente está mediada por un engarce.
El agente terapéutico puede asociarse a la superficie de, ser encapsulado dentro de, ser rodeado por y/o dispersarse en toda, la matriz polimérica.
Se conoce una amplia diversidad de polímeros y procedimientos para formar partículas a partir de ellos en la técnica de la entrega de fármacos. En algunas realizaciones, la divulgación se refiere a nanopartículas con al menos dos macromoléculas, en las que la primera macromolécula comprende un primer polímero unido a un ligando de bajo peso molecular (por ejemplo, un resto de direccionamiento); y la segunda macromolécula comprende un segundo polímero que no está unido a un resto de direccionamiento. La nanopartícula puede incluir opcionalmente uno o más polímeros no funcionalizados adicionales.
Se puede usar cualquier polímero de acuerdo con la presente invención. Los polímeros pueden ser naturales o no naturales (sintéticos). Los polímeros pueden ser homopolímeros o copolímeros que comprenden dos o más monómeros. En términos de secuencia, los copolímeros pueden ser aleatorios, en bloque o comprender una combinación de secuencias aleatorias y en bloque. Normalmente, los polímeros de acuerdo con la presente invención son polímeros orgánicos.
Al término "polímero", como se usa en el presente documento, se le da su significado habitual como se usa en la técnica, es decir, una estructura molecular que comprende una o más unidades de repetición (monómeros) conectadas por enlaces covalentes. Las unidades de repetición pueden ser todas idénticas, o en algunos casos, puede haber presente más de un tipo de unidades de repetición dentro del polímero. En algunos casos, el polímero puede ser un derivado biológico, es decir, un biopolímero. Los ejemplos no limitantes incluyen péptidos o proteínas. En algunos casos, también pueden estar presentes en el polímero restos adicionales, por ejemplo, restos biológicos tales como los que se describen a continuación. Si está presente más de un tipo de unidades de repetición dentro del polímero, entonces se dice que el polímero es un "copolímero". Se debe entender que en cualquier realización que emplee un polímero, el polímero que se emplee puede ser, en algunos casos, un copolímero. Las unidades de repetición que forman el copolímero pueden estar dispuestas de cualquier manera. Por ejemplo, las unidades de repetición se pueden disponer en un orden aleatorio, en un orden alternante, o como un copolímero en bloque, es decir, que comprende una o más regiones, cada una de las cuales contiene una primera unidad de repetición (por ejemplo, un primer bloque) y una o más regiones que cada una contiene una segunda unidad de repetición (por ejemplo un segundo bloque), etc. Los copolímeros en bloque pueden tener dos (copolímero en dibloque), tres (copolímero en tribloque) o un mayor número de bloques diferentes.
Las partículas desveladas pueden incluir copolímeros, los que, en algunas realizaciones, describen dos o más polímeros (tales como los que se describen en el presente documento) que se han asociado entre sí, por lo general mediante unión covalente de los dos o más polímeros. Por tanto, un copolímero puede comprender un primer polímero y un segundo polímero, que se han conjugado para formar un copolímero en bloque en el que el primer polímero puede ser un primer bloque del copolímero en bloque y el segundo polímero puede ser un segundo bloque del copolímero en bloque. Por supuesto, los expertos en la materia entenderán que un copolímero en bloque puede, en algunos casos, contener múltiples bloques de polímero y que un "copolímero en bloque", como se usa en el presente documento, no está limitado solo a copolímeros en bloque que tengan únicamente un único primer bloque y un único segundo bloque. Por ejemplo, un copolímero en bloque puede comprender un primer bloque que comprenda un primer polímero, un segundo bloque que comprenda un segundo polímero y un tercer bloque que comprenda un tercer polímero o el primer polímero, etc. En algunos casos, los copolímeros en bloque pueden contener cualquier cantidad de primeros bloques de un primer polímero y segundos bloques de un segundo polímero (y en ciertos casos, terceros bloques, cuartos bloques, etc.). Además, se debe destacar que los copolímeros en bloque también se pueden formar, en algunos casos, a partir de otros copolímeros en bloque. Por ejemplo, un primer copolímero en bloque se puede conjugar con otro polímero (que puede ser un homopolímero, un biopolímero, otro copolímero en bloque, etc.), para formar un nuevo copolímero en bloque que contenga múltiples tipos de bloques y/o con otros restos (por ejemplo, con restos no poliméricos).
En algunas realizaciones, el polímero (por ejemplo, copolímero, por ejemplo, copolímero en bloque) puede ser anfifílico, es decir tener una porción hidrófila y una porción hidrófoba, o una porción relativamente hidrófila y una porción relativamente hidrófoba. Un polímero hidrófilo puede ser uno que generalmente atrae agua y un polímero hidrófobo puede ser uno que generalmente repele el agua. Se puede identificar un polímero hidrófilo o un polímero hidrófobo, por ejemplo, preparando una muestra del polímero y midiendo su ángulo de contacto con el agua (normalmente, el polímero hidrófilo tendrá un ángulo de contacto menor de 60°, en tanto el polímero hidrófobo tendrá un ángulo de contacto mayor de aproximadamente 60 °). En algunos casos, la hidrofilia de dos o más polímeros se puede medir en uno con respecto al otro, es decir, un primer polímero puede ser más hidrófilo que un segundo polímero. Por ejemplo, el primer polímero puede tener un ángulo de contacto menor que el segundo polímero.
En un conjunto de realizaciones, un polímero (por ejemplo copolímero, por ejemplo copolímero en bloque) contemplado en el presente documento incluye un polímero biocompatible, es decir, el polímero que normalmente no induce una respuesta adversa cuando se lo introduce o inyecta en un sujeto vivo, por ejemplo, sin una inflamación significativa y/o un rechazo agudo del polímero por el sistema inmunitario, por ejemplo, a través de la respuesta de los linfocitos T. En consecuencia, las partículas terapéuticas contempladas en el presente documento pueden ser no inmunógenas. La expresión no inmunógeno como se usa en el presente documento se refiere al factor de crecimiento endógeno en su estado nativo que normalmente no produce, o produce solo niveles mínimos de, anticuerpos circulantes, linfocitos T o células inmunorreactivas y que normalmente no produce en el individuo una respuesta contra sí mismo.
Biocompatibilidad se refiere normalmente al rechazo agudo de un material por al menos una porción del sistema inmunitario, es decir, un material no biocompatible implantado en un sujeto provoca una respuesta inmunitaria en el sujeto que puede ser lo suficientemente grave para que el rechazo del material por el sistema inmunitario no pueda ser controlado adecuadamente y con frecuencia es de tal magnitud que el material debe ser retirado del sujeto. Una prueba simple para determinar la biocompatibilidad puede ser exponer un polímero a las células in vitro; los polímeros biocompatibles son polímeros que generalmente no producen una muerte celular significativa a concentraciones moderadas, por ejemplo, a concentraciones de 50 microgramos/106 células. Por ejemplo, un polímero biocompatible puede provocar menos de aproximadamente el 20 % de muerte celular cuando se expone a células tales como fibroblastos o células epiteliales, incluso si es fagocitado o absorbido de otra manera por dichas células. Los ejemplos no limitantes de polímeros biocompatibles que pueden ser útiles en diversas realizaciones de la presente invención incluyen polidioxanona (PDO), polihidroxialcanoato, polihidroxibutirato, poli(sebacato de glicerol), poliglicólido, poliláctido, PLGA, policaprolactona o copolímeros o derivados que incluyen éstos y otros polímeros.
En ciertas realizaciones, los polímeros biocompatibles contemplados pueden ser biodegradables, es decir el polímero es capaz de degradarse, química y/o biológicamente en un ambiente fisiológico, tal como dentro del organismo. Como se usa en el presente documento, polímeros "biodegradables" son los que, cuando se introducen en las células, son escindidos por la maquinaria celular (biológicamente degradables) y/o por un proceso químico, tal como la hidrólisis, (químicamente degradables) en componentes que las células pueden reutilizar o desechar sin un efecto tóxico significativo sobre las células. En una realización, el polímero biodegradable y sus subproductos de degradación pueden ser biocompatibles.
Por ejemplo, un polímero contemplado puede ser uno que se hidrolice espontáneamente tras la exposición al agua (por ejemplo, dentro de un sujeto), el polímero se puede degradar al exponerse al calor (por ejemplo, a temperaturas de aproximadamente 37 °C). La degradación de un polímero puede ocurrir a diversas velocidades, dependiendo del polímero o copolímero utilizado. Por ejemplo, la vida media del polímero (el tiempo al cual el 50 % del polímero se puede degradar en monómeros y/u otros restos no poliméricos) puede ser del orden de días, semanas, meses o años, dependiendo del polímero. Los polímeros pueden ser degradados biológicamente, es decir mediante actividad enzimática o la maquinaria celular, en algunos casos, por ejemplo, a través de la exposición a una lisozima (por ejemplo, que tiene un pH relativamente bajo). En algunos casos, los polímeros se pueden escindir en monómeros y/u otros restos no poliméricos que las células pueden reutilizar o desechar sin efecto tóxico significativo sobre las células (por ejemplo, el poliláctido se puede hidrolizar para formar ácido láctico, el poliglicólido se puede hidrolizar para formar ácido glicólico, etc.).
En algunas realizaciones, los polímeros pueden ser poliésteres, incluidos los copolímeros que comprenden unidades de ácido láctico y ácido glicólico, tales como poli(ácido láctico-co-ácido glicólico) y poli(láctido-co-glicólido), denominados colectivamente en el presente documento "PLGA"; y homopolímeros que comprenden unidades de ácido glicólico, denominados en el presente documento "PGA" y unidades de ácido láctico, tales como ácido poli-L-láctico, ácido poli-D-láctico, ácido poli-D,L-láctico, poli-L-láctido, poli-D-láctido y poli-D,L-láctido, denominados colectivamente en el presente documento "PLA". En algunas realizaciones, los poliésteres de ejemplo incluyen, por ejemplo, polihidroxiácidos; polímeros PEGilados y copolímeros de láctido y glicólido (por ejemplo, PLA PEGilado, pGa PEGilado, PLGA PEGilado y derivados de los mismos. En algunas realizaciones, los poliésteres incluyen, por ejemplo, polianhídridos, poli(orto éster), poli(orto éster) PEGilado, poli(caprolactona), poli(caprolactona) PEGilada, polilisina, polilisina PEGilada, poli(etilenimina), poli(etilenimina) PEGilada, poli(L-láctido-co-L-lisina), poli(éster serina), poli(éster 4-hidroxi-L-prolina), poli[ácido a-(4-aminobutil)-L-glicólico] y derivados de los mismos.
En algunas realizaciones, un polímero puede ser PLGA. PLGA es un copolímero biocompatible y biodegradable de ácido láctico y ácido glicólico y diversas formas de PLGA se pueden caracterizar mediante la relación ácido láctico:ácido glicólico. El ácido láctico puede ser ácido L-láctico, ácido D-láctico, o ácido D,L-láctico. La velocidad de degradación de PLGA se puede ajustar alterando la relación ácido láctico-ácido glicólico. En algunas realizaciones, el PLGA que se va a usar de acuerdo con la presente invención se puede caracterizar por una relación ácido láctico:ácido glicólico de aproximadamente 85:15, aproximadamente 75:25, aproximadamente 60:40, aproximadamente 50:50, aproximadamente 40:60, aproximadamente 25:75 o aproximadamente 15:85. En algunas realizaciones, la relación entre los monómeros de ácido láctico y ácido glicólico en el polímero de la partícula (por ejemplo, el copolímero en bloque PLGA o copolímero en bloque PLGA-PEG), se puede seleccionar para optimizar diversos parámetros tales como la absorción de agua; se pueden optimizar la liberación del agente terapéutico y/o la cinética de degradación del polímero.
En algunas realizaciones, los polímeros pueden ser uno o más polímeros acrílicos. En ciertas realizaciones, los polímeros acrílicos incluyen, por ejemplo, copolímeros de ácido acrílico y ácido metacrílico, copolímeros de metacrilato de metilo, metacrilatos de etoxietilo, metacrilato de cianoetilo, copolímero de amino alquil metacrilato, poli(ácido acrílico), poli(ácido metacrílico), copolímero de ácido metacrílico alquilamida, poli(metacrilato de metilo), poli(ácido metacrílico poliacrilamida, copolímero de amino alquil metacrilato, copolímeros de metacrilato de glicidilo, policianoacrilatos y combinaciones que comprenden uno o más de los polímeros anteriores. El polímero acrílico puede comprender copolímeros totalmente polimerizados de ésteres de ácido acrílico y metacrílico con un bajo contenido de grupos amonio cuaternario.
En algunas realizaciones, los polímeros pueden ser polímeros catiónicos. En general, los polímeros catiónicos son capaces de condensar y/o proteger cadenas de ácidos nucleicos cargadas negativamente (por ejemplo, ADN, ARN o sus derivados). Se contemplan polímeros que contienen amina tale como poli(lisina), polietileno imina (PEI) y dendrímeros poli(amidoamina) para su uso, en algunas realizaciones, en una partícula desvelada.
En algunas realizaciones, los polímeros pueden ser poliésteres degradables que tienen cadenas laterales catiónicas. Los ejemplos de estos poliésteres incluyen poli(L-láctido-co-L-lisina), poli(éster serina), poli(éster 4-hidroxi-L-prolina). Las partículas desveladas en el presente documento pueden, o no, contener PEG. Además, ciertas realizaciones pueden referirse a copolímeros que contienen poli(éster-éter), por ejemplo, polímeros que tienen unidades de repetición unidas por enlaces éster (por ejemplo, enlaces R-C(O)-O-R') y enlaces éter (por ejemplo, enlaces R-OR'). En algunas realizaciones de la invención, un polímero biodegradable, tal como un polímero hidrolizable que contiene grupos ácido carboxílico, se puede conjugar con unidades de repetición de poli(etilenglicol) para formar un poli(ésteréter). Un polímero (por ejemplo, copolímero, por ejemplo, copolímero en bloque) que contiene unidades de repetición poli(etilenglicol) también se puede denominar un polímero "PEGilado".
Se contempla que PEG puede incluir un grupo en el extremo terminal, por ejemplo, cuando PEG no está conjugado con un ligando. Por ejemplo, PEG puede terminar en un hidroxilo, un metoxi u otro grupo alcoxilo, un grupo metilo u otro grupo alquilo, un grupo arilo, un ácido carboxílico, una amina, una amida, un grupo acetilo, un grupo guanidino o un imidazol. Otros grupos terminales contemplados incluyen grupos azida, alquino, maleimida, aldehído, hidrazida, hidroxilamina, alcoxiamina o tiol.
Los expertos en la materia conocerán procedimientos y técnicas para PEGilar un polímero, por ejemplo, utilizando EDC (clorhidrato de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida) y NHS (N-hidroxisuccinimida) para hacer reaccionar un polímero con un grupo PEG que termina en una amina, mediante técnicas de polimerización de apertura del anillo (ROMP, por sus siglas en inglés), o análogas.
En una realización, el peso molecular de los polímeros se puede optimizar para un tratamiento eficaz como el desvelado en el presente documento. Por ejemplo, el peso molecular de un polímero puede influir en la velocidad de degradación de la partícula (tal como cuando el peso molecular de un polímero biodegradable se puede ajustar), la solubilidad, la absorción de agua y la cinética de liberación del fármaco. Por ejemplo, el peso molecular del polímero se puede ajustar de modo que la partícula se biodegrade en el sujeto en tratamiento en un período razonable de tiempo (que varíe de unas pocas horas a 1-2 semanas, 3-4 semanas, 5-6 semanas, 7-8 semanas, etc.). Una partícula desvelada puede, por ejemplo, comprender un copolímero en dibloque de PEG y PL(G)A, en el que por ejemplo, la porción PEG puede tener un peso molecular promedio en número de aproximadamente 1.000-20.000, por ejemplo, de aproximadamente 2.000-20.000, por ejemplo, de aproximadamente 2 a aproximadamente 10.000 y la porción PL(G)A puede tener un peso molecular promedio en número de aproximadamente 5.000 a aproximadamente 20.000, o de aproximadamente 5.000 y 100.000, por ejemplo, de aproximadamente 20.000 y 70.000, por ejemplo, de aproximadamente 15.000 y 50.000.
Por ejemplo, en el presente documento se desvela una nanopartícula terapéutica de ejemplo que incluye de aproximadamente el 10 a aproximadamente el 99 por ciento en peso de copolímero ácido poli(láctico)-bloquepoli(etilen)glicol o copolímero ácido poli(láctico)-co-poli(glicólico)-bloque-poli(etilen)glicol, o de aproximadamente el 20 a aproximadamente el 80 por ciento en peso, de aproximadamente el 40 a aproximadamente el 80 por ciento en peso, o de aproximadamente el 30 y alrededor 50 por ciento en peso, o de aproximadamente el 70 a aproximadamente el 90 por ciento en peso de copolímero ácido poli(láctico)-poli(etilen)glicol o copolímero ácido poli(láctico)-co-poli(glicólico)-poli(etilen)glicol. Los copolímeros de ácido poli(láctico)-poli(etilen)glicol de ejemplo pueden incluir un peso molecular promedio en número de aproximadamente 15 a aproximadamente 20 kDa, o de aproximadamente 10 a aproximadamente 25 kDa de ácido poli(láctico) y un peso molecular promedio en número de aproximadamente 4 a aproximadamente 6, o de aproximadamente 2 kDa a aproximadamente 10 kDa de poli(etilen)glicol.
Las nanopartículas desveladas pueden incluir opcionalmente de aproximadamente el 1 a aproximadamente el 50 por ciento en peso de ácido poli(láctico) o ácido poli(láctico)-co-ácido poli(glicólico) (que no incluya PEG), o pueden opcionalmente incluir de aproximadamente el 1 a aproximadamente el 50 por ciento en peso, o de aproximadamente el 10 a aproximadamente el 50 por ciento en peso o de aproximadamente el 30 a aproximadamente el 50 por ciento en peso de ácido poli(láctico) o ácido poli(láctico)-co-ácido poli(glicólico). Por ejemplo, el ácido poli(láctico) o el ácido poli(láctico)-co-poli(glicólico) puede tener un peso molecular promedio en número de aproximadamente 5 a aproximadamente 15 kDa, o de aproximadamente 5 a aproximadamente 12 kDa. El PLA de ejemplo puede tener un peso molecular promedio en número de aproximadamente 5 a aproximadamente 10 kDa. El PLGA de ejemplo puede tener un peso molecular promedio en número de aproximadamente 8 a aproximadamente 12 kDa.
En ciertas realizaciones, los polímeros de las nanopartículas pueden estar conjugados con un lípido. El polímero puede ser, por ejemplo, PEG terminado en lípido. Como se ha descrito anteriormente, la porción lipídica del polímero se puede usar para el autoensamblaje con otro polímero, facilitando la formación de una nanopartícula. Por ejemplo, se podría conjugar un polímero hidrófilo con un lípido que se autoensamblará con un polímero hidrófobo.
En algunas realizaciones, los lípidos son aceites. En general, cualquier aceite conocido en la técnica se puede conjugar con los polímeros utilizados en la invención. En algunas realizaciones, un aceite puede comprender uno o más grupos ácido graso o sales de los mismos. En algunas realizaciones, un grupo ácido graso puede comprender, hidrocarburos digeribles de cadena larga (por ejemplo, C8-C50), sustituidos o sin sustituir. En algunas realizaciones, un grupo ácido graso puede ser un ácido graso C10-C20 o una sal del mismo. En algunas realizaciones, un grupo ácido graso puede ser un ácido graso C15-C20 o una sal del mismo. En algunas realizaciones, un ácido graso puede estar insaturado. En algunas realizaciones, un grupo ácido graso puede estar monoinsaturado. En algunas realizaciones, un grupo ácido graso puede estar poliinsaturado. En algunas realizaciones, un doble enlace de un grupo ácido graso insaturado puede estar en la conformación cis. En algunas realizaciones, un doble enlace de un grupo ácido graso insaturado puede estar en la conformación trans.
En algunas realizaciones, un grupo ácido graso puede ser uno más de entre ácido butírico, caproico, caprílico, cáprico, láurico, mirístico, palmítico, esteárico, araquídico, behénico o lignocérico. En algunas realizaciones, un grupo ácido graso puede ser uno o más de entre ácido palmitoleico, oleico, vaccénico, linoleico, alfa-linolénico, gamma-linoleico, araquidónico, gadoleico, araquidónico, eicosapentaenoico, docosahexaenoico o erúcico.
En una realización particular, el lípido tiene la fórmula V:
Figure imgf000011_0001
y sales de la misma, en la que cada R es, independientemente, alquilo C1-30. En una realización de fórmula V, el lípido es 1,2 diestearoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina (DSPE) y sales de la misma, por ejemplo, la sal de sodio.
En una realización, los restos de direccionamiento de molécula pequeña opcionales están unidos, por ejemplo, unidos covalentemente, al componente lipídico de la nanopartícula. Por ejemplo, en el presente documento se proporciona una nanopartícula que comprende un agente terapéutico, una matriz polimérica que comprende polímeros funcionalizados y no funcionalizados y lípido y un ligando de direccionamiento de PSMA de bajo peso molecular, en los que el ligando de direccionamiento está unido, por ejemplo, unido covalentemente, al componente lipídico de la nanopartícula. En una realización, el componente lipídico que está unido al resto de direccionamiento de bajo peso molecular tiene la fórmula V. En otra realización, la invención proporciona una nanopartícula específica para la diana que comprende un agente terapéutico, una matriz polimérica, DSPE y un ligando de direccionamiento de PSMA de bajo peso molecular, en la que el ligando está unido, por ejemplo, unido covalentemente, a DSPE. Por ejemplo, la nanopartícula de la invención puede comprender una matriz polimérica constituida por PLGA-DSPE-PEG-Ligando.
Una nanopartícula contemplada puede incluir una relación entre polímero unido a ligando y polímero no funcionalizado eficaz para el tratamiento del cáncer de próstata, en la que el polímero hidrófilo unido al ligando, se conjuga con un lípido que se autoensamblará con el polímero hidrófobo, de modo que los polímeros hidrófobo e hidrófilo que constituyen la nanopartícula no estén unidos covalentemente. "Autoensamblaje" se refiere a un procedimiento de ensamblaje espontáneo de una estructura de orden superior que depende de la atracción natural de los componentes de la estructura de orden superior (por ejemplo, moléculas) entre sí. Se produce normalmente a través de movimientos aleatorios de las moléculas y la formación de enlaces basándose en el tamaño, la forma, la composición o las propiedades químicas. Por ejemplo, un procedimiento de este tipo consiste en proporcionar un primer polímero que se hace reaccionar con un lípido para formar un conjugado polímero/lípido. El conjugado polímero/lípido se hace reaccionar después con el ligando de bajo peso molecular para preparar un conjugado polímero unido a ligando/lípido; y se mezcla el conjugado polímero unido a ligando/lípido con un segundo polímero no funcionalizado y el agente terapéutico; de modo que se forme la nanopartícula. En ciertas realizaciones, el primer polímero es PEG, de modo que se forma un PEG terminado en lípido. En una realización, el lípido tiene la fórmula V, por ejemplo, 1,2-diestearoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina (DSPE) y sales de la misma, por ejemplo, la sal de sodio. Después el PEG terminado en lípido se puede, por ejemplo, mezclar con PLGA para formar una nanopartícula.
Restos de direccionamiento
En el presente documento se proporcionan nanopartículas que pueden incluir un resto de direccionamiento opcional, es decir un resto capaz de unirse o asociarse de otra manera a una entidad biológica, por ejemplo, un componente de membrana, un receptor de superficie celular, un antígeno prostético específico de membrana o similares. Un resto de direccionamiento presente en la superficie de la partícula puede permitir que la partícula se localice en un sitio particular que es la diana, por ejemplo, un tumor, un sitio de enfermedad, un tejido, un órgano, un tipo de célula, etc. como tal, la nanopartícula puede ser entonces "específica para la diana". El fármaco, o carga útil, puede después, en algunos casos, ser liberado de la partícula y habilitado a interactuar localmente con el sitio particular que es la diana.
En una realización, una nanopartícula desvelada incluye un resto de direccionamiento que es un ligando de bajo peso molecular, por ejemplo, un ligando de PSMA de bajo peso molecular. El término "unirse" o "que se une", como se usa en el presente documento, se refiere a la interacción entre un par correspondiente de moléculas o sus porciones que tienen afinidad mutua o capacidad de unión, normalmente debido a una unión o interacción específica o no específica, incluidas, pero no exclusivamente, las interacciones bioquímicas, fisiológicas y/o químicas. "Unión biológica" define un tipo de interacción que se produce entre pares de moléculas que incluyen proteínas, ácidos nucleicos, glucoproteínas, hidratos de carbono, hormonas o similares. La expresión "compañero de unión" se refiere a una molécula que puede unirse a otra molécula particular. "Unión específica" se refiere a moléculas, como polinucleótidos, que son capaces de unirse o reconocer a un compañero de unión (o a un número limitado de compañeros de unión) en mayor medida que a otras entidades biológicas similares En un conjunto de realizaciones, el resto de direccionamiento tiene una afinidad (medida a través de la constante de disociación) menor de aproximadamente 1 micromolar, al menos de aproximadamente 10 micromolar, o al menos de aproximadamente 100 micromolar.
Por ejemplo, una porción de direccionamiento puede hacer que las partículas se localicen en un tumor (por ejemplo un tumor sólido), un sitio de enfermedad, un tejido, un órgano, un tipo de célula, etc. en el organismo de un sujeto, dependiendo del resto de direccionamiento utilizado. Por ejemplo, un ligando de PSMA de bajo peso molecular se puede localizar en un tumor sólido, por ejemplo, tumores de mama o próstata, o células cancerosas. El sujeto puede ser un ser humano o un animal no humano. Los ejemplos de sujetos incluyen, pero no exclusivamente, un mamífero tal como un perro, un gato, un caballo, un burro, un conejo, una vaca, un cerdo, una oveja, una cabra, una rata, un ratón, una cobaya, un hámster, un primate, un ser humano o similares.
Los restos de direccionamiento contemplados incluyen moléculas pequeñas. En ciertas realizaciones, la expresión "molécula pequeña" se refiere a compuestos orgánicos, ya sean naturales o creados artificialmente (por ejemplo, por síntesis química) que tienen un peso molecular relativamente bajo y que no son proteínas, polipéptidos ni ácidos nucleicos. Las moléculas pequeñas tienen normalmente múltiples enlaces carbono-carbono. En ciertas realizaciones, las moléculas pequeñas tienen menos de aproximadamente 2000 g/mol de tamaño. En algunas realizaciones, las moléculas pequeñas tienen menos de aproximadamente 1500 gramos/mol o menos de aproximadamente 1000 g/mol. En algunas realizaciones, las moléculas pequeñas tienen menos de aproximadamente 800 g/mol o menos de aproximadamente 500 g/mol, por ejemplo de aproximadamente 100 g/mol a aproximadamente 600 g/mol, o de aproximadamente 200 g/mol a aproximadamente 500 g/mol.
Por ejemplo un resto de direccionamiento puede dirigirse a tumores de cáncer prostático, por ejemplo un resto de direccionamiento puede ser el inhibidor de la PSMA peptidasa. Estos restos también se denominan en el presente documento "ligandos de PSMA de bajo peso molecular". Cuando se compara con la expresión en tejidos normales, la expresión del antígeno prostático específico de membrana (PSMA, de inglés prostate specific membrane antigen) está al menos sobreexpresada 10 veces en el tumor de próstata con respecto al tejido normal y el nivel de expresión de PSMA aumenta aún más a medida que la enfermedad progresa a las fases metastásicas (Silver y col. 1997, Clin. CancerRes., 3:81).
En algunas realizaciones, el ligando de PSMA de bajo peso moleculartiene lasfórmulas I, II, III o IV:
Figure imgf000012_0001
y los enantiómeros, estereoisómeros, rotámeros, tautómeros, diastereoisómeros o racematos de los mismos; en los que m y n cada uno, independientemente, es 0, 1,2 o 3; pes 0 o 1;
R1, R2, R4 y R5, cada uno, independientemente, se selecciona entre el grupo que consiste en alquilo sustituido o sin sustituir (por ejemplo, C1-1o-alquilo, alquilo C1-6 o alquilo C1-4), arilo sustituido o sin sustituir (por ejemplo, fenilo o piridinilo) y cualquier combinación de los mismos; y R3 es H o alquilo C1-6 (por ejemplo, CH3).
Para los compuestos de fórmulas I, II, III y IV, R1, R2, R4 o R5 comprenden puntos de unión a la nanopartícula, por ejemplo, un punto de unión a un polímero que forma parte de una nanopartícula desvelada, por ejemplo, PEG. El punto de unión puede estar formado por un enlace covalente, un enlace iónico, un enlace de hidrógeno, un enlace formado por adsorción incluidas la adsorción química y la adsorción física, un enlace formado a partir de enlaces de van der Waals, o fuerzas de dispersión. Por ejemplo, si R1, R2, R4 o R5 se definen como una anilina o un grupo C1-6-alquil-NH2, podría eliminarse cualquier hidrógeno (por ejemplo, un hidrógeno de amino) de estos grupos funcionales de forma que el ligando de PSMA de bajo peso molecular se una covalentemente a la matriz polimérica (por ejemplo, el bloque PEG de la matriz polimérica) de la nanopartícula. Como se usa en el presente documento, la expresión "enlace covalente" se refiere a un enlace entre dos átomos formado compartiendo al menos un par de electrones.
En realizaciones particulares de las fórmulas I, II, III o IV, R1, R2, R4 y R5 cada uno, independientemente, es alquilo C1-6 o fenilo, o cualquier combinación de alquilo C1-6 o fenilo, que están independientemente sustituidos una o más veces con OH, SH, NH2 o CO2H, y en las que el grupo alquilo puede estar interrumpido por N(H), S o O. En otra realización, por ejemplo, R1, R2, R4 y R5 cada uno, independientemente, es CH2-Ph, (CH2)2-SH, CH2-SH, (CH2)2C(H)(NH2)CO2H, CH2C(H)(NH2)CO2H, CH(NH2)CH2CO2H, (CH2)2C(H)(SH)CO2H, CH2-N(H)-Ph, O-CH2-Ph o O-(CH2)2-Ph, en los que cada Ph puede estar independientemente sustituido una o más veces con OH, NH2, CO2H o SH. Para estas fórmulas, los grupos NH2, OH o SH sirven como el punto de unión covalente a la nanopartícula (por ejemplo, -N(H)-PEG, -O-PEG o -S-PEG).
En otra realización más, el ligando de PSMA de bajo peso molecular se selecciona entre el grupo que consiste en
Figure imgf000013_0001
y los enantiómeros, estereoisómeros, rotámeros, tautómeros, diastereoisómeros o racematos de los mismos y en los que los grupos NH2, OH o SH sirven como el punto de unión covalente a la nanopartícula (por ejemplo, -N(H)-PEG, -O-PEG o -S-PEG).
En otra realización, el ligando de PSMA de bajo peso molecular se selecciona entre el grupo que consiste en
Figure imgf000013_0002
y los enantiómeros, estereoisómeros, rotámeros, tautómeros, diastereoisómeros o racematos de los mismos; en los que R se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en NH2, SH, OH, CO2H, alquilo C1-6 que está sustituido con NH2, SH, OH o CO2H y fenilo que está sustituido con NH2, SH, OH o CO2H y en los que R sirve como el punto de unión covalente a la nanopartícula (por ejemplo, -N(H)-PEG, -S-PEG, -O-PEG o CO2-PEG).
En otra realización, el ligando de PSMA de bajo peso molecular se selecciona entre el grupo que consiste en
Figure imgf000014_0001
y los enantiomeros, estereoisomeros, rotameros, tautomeros, diastereoisomeros o racematos de los mismos y en los que los grupos NH2 o CO2H sirven como el punto de unión covalente a la nanopartícula (por ejemplo, -N(H)-PEG o CO2-PEG). Estos compuestos se pueden sustituir adicionalmente con NH2, SH, OH, CO2H, alquilo C1-6 que está sustituido con NH2, SH, OH o CO2H, o fenilo que está sustituido con NH2, SH, OH o CO2H, en los que estos grupos funcionales pueden también servir como el punto de unión covalente a la nanopartícula.
En otra realización, el ligando de PSMA de bajo peso molecular es
Figure imgf000014_0002
y los enantiómeros, estereoisómeros, rotámeros, tautómeros, diastereoisómeros o racematos de los mismos y en los que n es 1,2, 3, 4, 5 o 6. Para este ligando, el grupo NH2 sirve como punto de unión covalente a la nanopartícula (por ejemplo, -N(H)-PEG).
En otra realización más, el ligando de PSMA de bajo peso molecular es
Figure imgf000014_0003
y los enantiómeros, estereoisómeros, rotámeros, tautómeros, diastereoisómeros o racematos de los mismos. En particular, el compuesto butilamina tiene la ventaja de una síntesis fácil, especialmente debido a la falta de un anillo benceno. Además, sin desear quedar ligado a teoría alguna, el compuesto de butilamina se escindirá probablemente en las moléculas de origen natural (es decir, lisina y ácido glutámico) minimizando de este modo los problemas de toxicidad.
En algunas realizaciones, los restos de direccionamiento de molécula pequeña que se pueden usar para dirigirse a células asociadas a tumores sólidos tales como los tumores del cáncer de próstata o mama incluyen inhibidores de la PSMA peptidasa tal como 2-PMPA, GPI5232, VA-033, fenilalquilfosfonamidatos y/o sus análogos y derivados. En algunas realizaciones, los restos de direccionamiento de molécula pequeña que se pueden usar para tratar células asociadas a tumores de cáncer prostático incluyen derivados de tiol e indol tiol, tales como 2-MPPA y derivados del ácido 3-(2-mercaptoetil)-1H-indol-2-carboxílico. En algunas realizaciones, los restos de direccionamiento de molécula pequeña que se pueden usar para dirigirse a células asociadas a tumores de cáncer prostático incluyen derivados de hidroxamato. En algunas realizaciones, los restos de direccionamiento de molécula pequeña que se pueden usar para dirigirse a células asociadas a tumores de cáncer prostático incluyen inhibidores a base de urea y PBDA, tales como ZJ 43, ZJ 11, ZJ 17, ZJ 38 y/o análogos y derivados de los mismos, agentes dirigidos a receptores de andrógenos (ARTA), poliaminas, tales como putrescina, espermina y espermidina e inhibidores de la enzima glutamato carboxilasa II (GCPII), también conocida como peptidasa NAAG o NAALADasa.
En otra realización de la invención actual, el resto de direccionamiento puede ser un ligando dirigido a Her2, EGFR o receptores toll.
Por ejemplo, los restos de direccionamiento contemplados pueden incluir un ácido nucleico, un polipéptido, una glucoproteína, un hidrato de carbono o un lípido. Por ejemplo, un resto de direccionamiento puede ser un resto de direccionamiento ácido nucleico (por ejemplo, un aptámero, por ejemplo, el aptámero A10) que se une a un marcador específico de un tipo de células. En general, un aptámero es un oligonucleótido (por ejemplo, AdN, ARN o un análogo o derivado de los mismos) que se une a una diana particular, tal como un polipéptido. En algunas realizaciones, un resto de direccionamiento puede ser un ligando natural o sintético para un receptor de la superficie celular, por ejemplo, un factor de crecimiento, una hormona, LDL, transferrina, etc. Un resto de direccionamiento puede ser un anticuerpo, término que pretende incluir fragmentos de anticuerpo, porciones características de anticuerpos, los restos de direccionamiento de una sola cadena se pueden identificar, por ejemplo, usando procedimientos tales como presentación en fago.
Los restos de direccionamiento que pueden ser un péptido de direccionamiento o peptidomimético de direccionamiento que tenga una longitud de hasta aproximadamente 50 restos. Por ejemplo, un resto de direccionamiento puede incluir la secuencia de aminoácidos AKERC, CREKA, ARYLQKLN o AXYLZZLN, en los que X y Z son aminoácidos variables, o variantes conservadoras o peptidomiméticos de los mismos. En realizaciones particulares, el resto de direccionamiento es un péptido que incluye la secuencia de aminoácidos AKERC, CREKA, ARYLQKLN o AXYLZZLN, en los que X y Z son aminoácidos variables y tiene una longitud de menos de 20, 50 o 100 restos. El péptido CREKA (Cys Arg Glu Lys Ala) o un péptidomimético del mismo o el octapéptido AXYLZZLN también se contemplan como restos de direccionamiento, así como los péptidos, o variantes conservadoras o péptidomiméticos de los mismos, que se unen o forman un complejo con colágeno IV, o la membrana basal de los tejidos diana (por ejemplo, la membrana basal de un vaso sanguíneo), se puede usar como un resto de direccionamiento. Los restos de direccionamiento de ejemplo incluyen péptidos que se dirigen a ICAM (molécula de adhesión intercelular, por ejemplo ICAM-1).
Los restos de direccionamiento desvelados en el presente documento se conjugan normalmente con un polímero o copolímero desvelado (por ejemplo PLA-PEG) y dicho conjugado polimérico puede formar parte de una nanopartícula desvelada. Por ejemplo, una nanopartícula terapéutica desvelada puede incluir opcionalmente de aproximadamente el 0,2 a aproximadamente el 10 por ciento en peso de un PLA-PEG o PLGA-PEG, en los que el PEG está funcionalizado con un ligando de direccionamiento (por ejemplo PLA-PEG-Ligando). Las nanopartículas terapéuticas contempladas pueden incluir, por ejemplo, de aproximadamente el 0,2 a aproximadamente el 10 por ciento en moles de PLA-PEG-GL2 o ácido poli(láctico)-co-ácido poli(glicólico)-PEG-GL2. Por ejemplo, PLA-PEG-GL2 puede incluir un peso molecular promedio en número de aproximadamente 10 kDa a aproximadamente 20 kDa y un peso molecular promedio en número de aproximadamente 4.000 a aproximadamente 8.000.
Un ligando de direccionamiento de este tipo puede estar, en algunas realizaciones, unido covalentemente al PEG, por ejemplo, unido al PEG a través de un engarce alquileno, por ejemplo PLA-PEG-alquileno-GL2. Por ejemplo, una nanopartícula desvelada puede incluir de aproximadamente 0,2 a aproximadamente 10 por ciento en moles de pLA-PEG-GL2 o ácido poli(láctico)-co-ácido poli(glicólico)-PEG-GL2. Se debe entender que la referencia a PLA-PEG-GL2 o PLGA-PEG-GL2 se refiere a grupos que pueden incluir un engarce alquileno (por ejemplo C1-C20, por ejemplo, (CH2)s) que una un PLA-PEG o PLGA-PEG a GL2.
Los ejemplos de conjugados poliméricos incluyen:
Figure imgf000016_0001
en los que Ri se selecciona entre el grupo que consiste en H y un grupo alquilo C1-C20 opcionalmente sustituido con uno, dos, tres o más halógenos;
R2 es un enlace, una unión éster o una unión amida;
R3 es un alquileno C1-C10 o un enlace;
x es de 50 a aproximadamente 1500, o de aproximadamente 60 a aproximadamente 1000;
y es 0 a aproximadamente 50; y
z es de aproximadamente 30 a aproximadamente 200, o de aproximadamente 50 a aproximadamente 180.
En una realización diferente, x representa de 0 a aproximadamente 1 fracción molar; e y puede representar de aproximadamente 0 a aproximadamente 0,5 fracción molar. En una realización de ejemplo, x+y puede ser de aproximadamente 20 a aproximadamente 1720 y/o z puede ser de aproximadamente 25 a aproximadamente 455.
Por ejemplo, una nanopartícula desvelada puede incluir un grupo de direccionamiento polimérico representado por la fórmula VI:
Figure imgf000016_0002
en la que n es de aproximadamente 200 a aproximadamente 300, por ejemplo, aproximadamente 222 y m es de aproximadamente 80 a aproximadamente 130, por ejemplo aproximadamente 114. Las nanopartículas desveladas, en ciertas realizaciones, pueden incluir de aproximadamente el 0,1 a aproximadamente el 4% en peso de, por ejemplo, un conjugado polimérico de fórmula VI, o de aproximadamente el 0,1 a aproximadamente el 2% o de aproximadamente el 0,1 a aproximadamente el 1 %, o de aproximadamente el 0,2 % a aproximadamente el 0,8 % en peso de, por ejemplo, un conjugado polimérico de fórmula VI.
En una realización de ejemplo, una nanopartícula desvelada comprende una nanopartícula que tiene un conjugado PLA-PEG-alquileno-GL2, en el que, por ejemplo, PLA tiene un peso molecular promedio en número de aproximadamente 16.000 Da, PEG tiene un peso molecular promedio en número de aproximadamente 5.000 Da y por ejemplo, el engarce alquileno es un alquileno C1-C20, por ejemplo (CH2)5.
Por ejemplo, una nanopartícula desvelada puede incluir un conjugado representado por:
Figure imgf000017_0001
en el que y es aproximadamente 222 y z es aproximadamente 114.
Un conjugado polimérico desvelado se puede formar usando cualquier técnica de conjugación adecuada. Por ejemplo, dos compuestos tales como un resto de direccionamiento y un polímero biocompatible, un polímero biocompatible y un poli(etilenglicol), etc., se pueden conjugar entre sí usando técnicas tales como química de EDC-NHS (clorhidrato de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida y N-hidroxisuccinimida) o una reacción que implique una maleimida o un ácido carboxílico, que se pueden conjugar con un extremo de un tiol, una amina o un poliéter similarmente funcionalizado. La conjugación de dichos polímeros, por ejemplo, la conjugación de un poli(éster) y un poli(éter) para formar un poli(éster-éter), se puede realizar en un disolvente orgánico, tal como, pero no limitado a, diclorometano, acetonitrilo, cloroformo, dimetilformamida, tetrahidrofurano, acetona o similares. Las condiciones de reacción específicas pueden ser determinadas por los expertos en la materia utilizando simplemente la experimentación habitual.
En otro conjunto de realizaciones, se puede realizar una reacción de conjugación haciendo reaccionar un polímero que comprende un grupo funcional ácido carboxílico (por ejemplo, un compuesto poli(ester-éter)) con un polímero u otro resto (tal como un resto de direccionamiento) que comprenda una amina. Por ejemplo, un resto de direccionamiento, tal como un ligando de PSMA de bajo peso molecular, se puede hacer reaccionar con una amina para formar un resto que contenga amina, que después se puede conjugar con el ácido carboxílico del polímero. Una reacción de este tipo se puede producir como una reacción de un solo paso, es decir, la conjugación se realiza sin utilizar productos intermedios tales como N-hidroxisuccinimida o una maleimida. La reacción de conjugación entre el resto que contiene amina y el polímero terminado en ácido carboxílico (tal como un compuesto poli(esteréter)) se puede lograr, en un conjunto de realizaciones, añadiendo el resto que contiene amina solubilizado en un disolvente orgánico tal como (pero no limitado a) diclorometano, acetonitrilo, cloroformo, tetrahidrofurano, acetona, formamida, dimetilformamida, piridinas, dioxano o dimetilsulfóxido, a una solución que contiene el polímero terminado en ácido carboxílico. El polímero terminado en ácido carboxílico puede estar contenido en un disolvente orgánico tal como, pero no limitado a, diclorometano, acetonitrilo, cloroformo, dimetilformamida, tetrahidrofurano o acetona. La reacción entre el resto que contiene amina y el polímero terminado en ácido carboxílico puede, en algunos casos, producirse espontáneamente. Los reactivos no conjugados se pueden retirar por lavado después de dichas reacciones y el polímero se puede precipitar en disolventes tales como, por ejemplo, éter etílico, hexano, metanol o etanol.
Como ejemplo específico, un ligando de PSMA de bajo peso molecular se puede preparar como un resto de direccionamiento en una partícula de la manera siguiente. Se puede conjugar poli(láctido-co-glicólido) (PLGA-COOH) modificado con ácido carboxílico con un poli(etilenglicol) (NH2-PEG-COOH) heterobifuncional modificado con amina para formar un copolímero PLGA-PEG-COOH. Utilizando un ligando de PSMA de bajo peso molecular modificado con amina (NH2-Lig), se puede formar un polímero en tribloque de PLGA-PEG-Lig conjugando el extremo ácido carboxílico del PEG con el grupo funcional amina del ligando. El polímero multibloque después se puede usar, por ejemplo, como se trató antes, por ejemplo, para aplicaciones terapéuticas.
Como se usa en el presente documento, el término "alquilo" comprende grupos alifáticos saturados, incluidos grupos alquilo de cadena lineal (por ejemplo, metilo, etilo, propilo, butilo, pentilo, hexilo, heptilo, octilo, nonilo, decilo, etc.), grupos alquilo de cadena ramificada (isopropilo, terc-butilo, isobutilo, etc.), grupos cicloalquilo (alicíclicos) (ciclopropilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, ciclooctilo), grupos cicloalquilo sustituidos con alquilo y grupos alquilo sustituidos con cicloalquilo.
El término "arilo" comprende grupos, incluidos grupos aromáticos de un solo anillo de 5 y 6 miembros que pueden tener de cero a cuatro heteroátomos, por ejemplo, fenilo, pirrol, furano, tiofeno, tiazol, isotiazol, imidazol, triazol, tetrazol, pirazol, oxazol, isoxazol, piridina, pirazina, piridazina, pirimidina y análogos. Además, el término "arilo" incluye grupos arilo multicíclicos, por ejemplo, tricíclicos, bicíclicos, como naftaleno, benzoxazol, benzodioxazol, benzotiazol, bencimidazol, benzotiofeno, metilenodioxifenilo, quinolina, isoquinolina, antrilo, fenantrilo, naftridina, indol, benzofurano, purina, benzofurano, deazapurina o indolizina. Los grupos arilo que tienen heteroátomos en la estructura del anillo también se pueden denominar "aril heterociclos", "heterociclos", "heteroarilos" o "heteroaromáticos". El anillo aromático puede estar sustituido en una o más posiciones del anillo con sustituyentes tales como los descritos anteriormente, por ejemplo, alquilo, halógeno, hidroxilo, alcoxi, alquilcarboniloxi, arilcarboniloxi, alcoxicarboniloxi, ariloxicarboniloxi, carboxilato, alquilcarbonilo, alquilaminocarbonilo, aralquilaminocarbonilo, alquenilaminocarbonilo, alquilcarbonilo, arilcarbonilo, aralquilcarbonilo, alquenilcarbonilo, alcoxicarbonilo, aminocarbonilo, alquiltiocarbonilo, fosfato, fosfonato, fosfinato, ciano, amino (incluidos alquilamino, dialquilamino, arilamino, diarilamino y alquilarilamino), acilamino (incluidos alquilcarbonilamino, arilcarbonilamino, carbamoilo y ureido), amidino, imino, sulfhidrilo, alquiltio, ariltio, tiocarboxilato, sulfatos, alquilsulfinilo, sulfonato, sulfamoilo, sulfonamido, nitro, trifluorometilo, ciano, azido, heterociclilo, alquilarilo, o un resto aromático o heteroaromático. Los grupos arilo también se pueden condensar o unir por puentes anillos alicíclicos o heterocíclicos que no sean aromáticos para formar un policiclo (por ejemplo, tetralina).
Los restos de direccionamiento pueden estar, por ejemplo, sustituidos adicionalmente con un grupo funcional que se puede hacer reaccionar con un polímero de la invención (por ejemplo, PEG) para producir un polímero conjugado con un resto de direccionamiento. Los grupos funcionales incluyen cualquier resto que se pueda usar para crear un enlace covalente con un polímero (por ejemplo, PEG), tal como amino, hidroxi y tio. En una realización particular, las moléculas pequeñas pueden estar sustituidas con NH2, SH u OH, los cuales están unidos directamente a la molécula pequeña, o unidos a la molécula pequeña a través de un grupo adicional, por ejemplo, alquilo o fenilo. En un ejemplo no limitante, las moléculas pequeñas desveladas en las patentes, solicitudes de patentes y la bibliografía no de patentes citada en el presente documento, se pueden unir a anilina, alquil-NH2 (por ejemplo, (CH2)1-aNH2), o alquil-SH (por ejemplo, (CH2)i-aNH2), en los que los grupos NH2 y SH se pueden hacer reaccionar con un polímero (por ejemplo, p Eg ), para formar un enlace covalente con ese polímero, es decir, formar un conjugado polimérico.
Por ejemplo, en el presente documento se desvela una nanopartícula que tiene un agente terapéutico; y una primera macromolécula que comprende un copolímero PLGA-PEG o un copolímero PLA-PEG conjugado con un ligando que tiene un peso molecular de aproximadamente 100g/mol y 500 g/mol en la que el copolímero PLGA-PEG o el copolímero PLA-PEG que está conjugado con el ligando, representa de aproximadamente el 0,1 a aproximadamente el 30 por ciento en moles del contenido total de polímero, o de aproximadamente el 0,1 a aproximadamente el 20 por ciento en moles, o de aproximadamente el 0,1 a aproximadamente el 10 por ciento en moles o de aproximadamente el 1 a aproximadamente el 5 por ciento en moles del contenido total de polímero de una nanopartícula. Una nanopartícula de este tipo puede incluir además una segunda macromolécula que comprenda un copolímero PLGA-PEG o un copolímero PLA-PEG, en los que el copolímero no está unido a un resto de direccionamiento; y un excipiente farmacéuticamente aceptable. Por ejemplo, el primer copolímero puede tener de aproximadamente el 0,001 al 5 por ciento en peso del ligando con respecto al contenido total de polímero.
Las nanopartículas de ejemplo pueden incluir un agente terapéutico; y una composición polimérica, en las que la composición polimérica comprende: una primera macromolécula que comprende un primer polímero unido a un ligando; y una segunda macromolécula que comprende un segundo polímero no unido a un resto de direccionamiento; en las que la composición polimérica comprende de aproximadamente el 0,001 a aproximadamente el 5,0 por ciento en peso de dicho ligando. Dichos ligandos pueden tener un peso molecular de aproximadamente 100 g/mol a aproximadamente 6000 g/mol, o menos de aproximadamente 1000 g/mol, por ejemplo de aproximadamente 100 g/mol a aproximadamente 500 g/mol. En otra realización, se proporciona en el presente documento una composición farmacéutica, que comprende una pluralidad de nanopartículas poliméricas específicas para la diana comprendiendo cada una un agente terapéutico; y una composición polimérica, en la que la composición polimérica contiene de aproximadamente el 0,1 a aproximadamente el 30 por ciento en moles, o de aproximadamente el 0,1 a aproximadamente el 20 por ciento en moles, o de aproximadamente el 0,1 a aproximadamente el 10 por ciento en moles de una primera macromolécula que comprende un primer polímero unido a un ligando; y una segunda macromolécula que comprende un segundo polímero no unido a un resto de direccionamiento; y un excipiente farmacéuticamente aceptable.
Nanopartículas
Las nanopartículas desveladas pueden tener una configuración sustancialmente esférica (es decir las partículas parecen en general ser esféricas), o no esférica. Por ejemplo, las partículas, después de hincharse o encogerse, pueden adoptar una configuración no esférica. En algunos casos, las partículas pueden incluir mezclas poliméricas. Por ejemplo, se puede formar una mezcla polimérica de modo que incluya un primer polímero que comprenda un resto de direccionamiento (es decir, un ligando de PSMA de bajo peso molecular) y un polímero biocompatible y un segundo polímero que comprenda un polímero biocompatible pero no comprenda el resto de direccionamiento. Controlando la relación entre el primer y segundo polímeros en el polímero final, la concentración y la ubicación del resto de direccionamiento en el polímero final pueden controlarse fácilmente en cierto grado.
Las nanopartículas desveladas pueden tener una dimensión característica de menos de aproximadamente 1 micrómetro, en las que la dimensión característica de la partícula es el diámetro de una esfera perfecta que tiene el mismo volumen que una partícula. Por ejemplo, la partícula puede tener una dimensión característica de partícula que puede ser inferior a aproximadamente 300 nm, inferior a aproximadamente 200 nm, inferior a aproximadamente 150 nm, inferior a aproximadamente 100 nm, inferior a aproximadamente 50 nm, inferior a aproximadamente 30 nm, inferior a aproximadamente 10 nm, inferior a aproximadamente 3 nm o inferior a aproximadamente 1 nm en algunos casos. En realizaciones particulares, la nanopartícula de la presente invención tiene un diámetro de aproximadamente 80 nm y 200 nm, de aproximadamente 60 nm a aproximadamente 150 nm o de aproximadamente 70 nm a aproximadamente 200 nm.
En un conjunto de realizaciones, las partículas pueden tener un interior y una superficie, en las que la superficie tiene una composición diferente del interior, es decir, puede haber al menos un compuesto presente en el interior que no está presente en la superficie (o vice versa) y/o al menos un compuesto está presente en el interior y en la superficie a concentraciones diferentes. Por ejemplo, en una realización, un compuesto, tal como un resto de direccionamiento (es decir, un ligando de bajo peso molecular) de un conjugado polimérico de la presente invención, puede estar presente tanto en el interior como en la superficie de la partícula, pero a una concentración mayor en la superficie que en el interior de la partícula, aunque en algunos casos, la concentración en el interior de la partícula puede ser esencialmente distinta de cero, es decir, existe una cantidad detectable del compuesto presente en el interior de la partícula.
En algunos casos, el interior de la partícula es más hidrófobo que la superficie de la partícula. Por ejemplo, el interior de la partícula puede ser relativamente hidrófobo con respecto a la superficie de la partícula, y un fármaco, u otra carga útil, puede ser hidrófobo y asociarse fácilmente al centro relativamente hidrófobo de la partícula. El fármaco, u otra carga útil, puede entonces estar contenido en el interior de la partícula, que lo puede resguardar del entorno externo que rodea la partícula (o vice versa). Por ejemplo, un fármaco, u otra carga útil, contenido en la partícula administrada a un sujeto estará protegido del organismo del sujeto y el sujeto también estará aislado del fármaco. Otro aspecto de la invención se refiere a partículas poliméricas que tienen más de un polímero o una macromolécula presente y bibliotecas que implican dichos polímeros o macromoléculas. Por ejemplo, en un conjunto de realizaciones, las partículas pueden contener más de un polímero distinguible (por ejemplo, copolímeros como copolímeros en bloque) y las relaciones entre los dos (o más) polímeros pueden controlarse independientemente, lo que permite controlar las propiedades de la partícula. Por ejemplo, un primer polímero puede ser un conjugado polimérico que comprenda un resto de direccionamiento y una porción biocompatible y un segundo polímero puede comprender una porción biocompatible, pero no contener el resto de direccionamiento, o el segundo polímero puede contener una porción biocompatible distinguible del primer polímero. El control de las cantidades de estos polímeros dentro de la partícula polimérica se puede usar entonces para controlar diversas propiedades físicas, biológicas o químicas de la partícula, por ejemplo, el tamaño de la partícula (por ejemplo, variando los pesos moleculares de uno o ambos polímeros), la carga superficial (por ejemplo, controlando las relaciones entre los polímeros si los polímeros tienen cargas o grupos terminales diferentes), la hidrofilia superficial (por ejemplo, si los polímeros tienen pesos moleculares y/o hidrofilias diferentes), la densidad superficial del resto de direccionamiento (por ejemplo, controlando las relaciones entre los dos o más polímeros), etc.
Como ejemplo específico, una partícula puede comprender un primer polímero en dibloque que comprenda un poli(etilenglicol) y un resto de direccionamiento conjugado con el poli(etilenglicol) y un segundo polímero que comprenda el poli(etilenglicol) pero no el resto de direccionamiento, o comprender tanto el poli(etilenglicol) como el resto de direccionamiento, en los que el poli(etilenglicol) del segundo polímero tiene una longitud diferente (o número de unidades de repetición) que el poli(etilenglicol) del primer polímero. Como otro ejemplo, una partícula puede comprender un primer polímero que comprenda una primera porción biocompatible y un resto de direccionamiento y un segundo polímero que comprenda una segunda porción biocompatible diferente de la primera porción biocompatible (por ejemplo, que tenga una composición diferente, un número sustancialmente diferente de unidades de repetición, etc.) y el resto de direccionamiento. Como otro ejemplo más, un primer polímero puede comprender una porción biocompatible y un primer resto de direccionamiento y un segundo polímero puede comprender una porción biocompatible y un segundo resto de direccionamiento diferente del primer resto de direccionamiento.
Por ejemplo, en el presente documento se desvela una nanopartícula polimérica terapéutica capaz de unirse a una diana, que comprende un primer polímero no funcionalizado; un segundo polímero no funcionalizado opcional; un polímero funcionalizado que comprende un resto de direccionamiento; y un agente terapéutico; en el que dicha nanopartícula comprende de aproximadamente 15 a aproximadamente 300 moléculas de polímero funcionalizado, o de aproximadamente 20 a aproximadamente 200 moléculas, o de aproximadamente 3 a aproximadamente 100 moléculas de polímero funcionalizado.
En una realización particular, el polímero de las macromoléculas primera o segunda de la nanopartícula de la invención es PLA, PLGA o PEG, o copolímeros de los mismos. En una realización específica, el polímero de la primera macromolécula es un copolímero PLGA-PEG y la segunda macromolécula es un copolímero PLGA-PEG o un copolímero PLA-PEG. Por ejemplos, una nanopartícula de ejemplo puede tener una 3corona de PEG con una densidad de aproximadamente 0,065 g/cm3, o de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 0,10 g/cm3.
Las nanopartículas desveladas pueden ser estables (por ejemplo conservar sustancialmente todo el agente activo) por ejemplo en una solución que puede contener un sacárido, durante al menos 3 días, aproximadamente 4 días o al menos aproximadamente 5 días a temperatura ambiente, o a 25 °C.
En algunas realizaciones, las nanopartículas desveladas también pueden incluir un alcohol graso, que puede aumentar la velocidad de liberación del fármaco. Por ejemplo, las nanopartículas desveladas pueden incluir un alcohol C8-C3ütal como alcohol cetílico, octanol, alcohol estearílico, alcohol araquidílico, docosonal u octasonal. Las nanopartículas pueden tener propiedades de liberación controlada, por ejemplo, pueden ser capaces de administrar una cantidad de agente activo a un paciente, por ejemplo, a un sitio específico del paciente, durante un período de tiempo prolongado, por ejemplo durante 1 día, 1 semana, o más. En algunas realizaciones, las nanopartículas desveladas liberan sustancialmente inmediatamente (por ejemplo de aproximadamente 1 minuto a aproximadamente 30 minutos) menos de aproximadamente el 2 %, menos de aproximadamente el 5 % o menos de aproximadamente el 10% de un agente activo (por ejemplo un taxano), por ejemplo, por ejemplo cuando están colocados en una solución tampón de fosfato a temperatura ambiente y/o a 37 °C.
Por ejemplo, las nanopartículas desveladas que incluyen un agente terapéutico, pueden, en algunas realizaciones, liberar el agente terapéutico cuando están colocadas en una solución acuosa, por ejemplo a 25 °C con una velocidad que corresponde sustancialmente a: a) de aproximadamente el 0,01 a aproximadamente el 20% del agente terapéutico total se libera después de aproximadamente 1 hora; b) de aproximadamente el 10 a aproximadamente el 60 % del agente terapéutico se libera después de aproximadamente 8 horas; c) de aproximadamente el 30 a aproximadamente el 80% del agente terapéutico total se libera después de aproximadamente 12 horas; y d) no menos de aproximadamente el 75 % del total se libera después de aproximadamente 24 horas.
En algunas realizaciones, después de la administración a un sujeto o paciente de una nanopartícula desvelada o una composición que incluye una nanopartícula desvelada, la concentración plasmática máxima (Cmáx) del agente terapéutico en el paciente es sustancialmente mayor en comparación con la Cmáx del agente terapéutico si se administra solo (por ejemplo, no como parte de una nanopartícula).
En otra realización, una nanopartícula desvelada que incluye un agente terapéutico, cuando se administra a un sujeto, puede tener un tmáx del agente terapéutico sustancialmente más prolongado en comparación con el tmáx del agente terapéutico administrado solo.
También se pueden formar bibliotecas de dichas partículas. Por ejemplo, variando las relaciones entre los dos (o más) polímeros en la partícula, estas bibliotecas pueden ser útiles para pruebas de cribado, ensayos de alto rendimiento o similares. Las entidades de la biblioteca pueden variar en propiedades tales como las que se han descrito anteriormente y en algunos casos, más de una propiedad de las partículas puede variar dentro de la biblioteca. En consecuencia, una realización de la invención se refiere a una biblioteca de nanopartículas que tienen diferentes relaciones entre polímeros con propiedades distintas. La biblioteca puede incluir cualquier relación o relaciones adecuadas entre los polímeros.
La figura 1 ilustra que se pueden producir bibliotecas usando polímeros tales como los que se han descrito anteriormente. Por ejemplo, en la figura 1, se pueden usar partículas poliméricas que comprenden una primera macromolécula que comprende un polímero hidrófobo biocompatible, un polímero hidrófilo biocompatible y un ligando de PSMA de bajo peso molecular y una segunda macromolécula que comprende un polímero hidrófobo biocompatible y un polímero hidrófilo biocompatible para crear una biblioteca de partículas con diferentes relaciones entre la primera y la segunda macromoléculas.
Una biblioteca de este tipo puede ser útil para lograr partículas que tengan cualquier número de propiedades deseables, por ejemplo, propiedades tales como funcionalidad superficial, carga superficial, tamaño, potencial zeta (5), hidrofobia, capacidad para controlar la inmunogenia, o similares.
Como ejemplos específicos, en algunas realizaciones de la presente invención, la biblioteca incluye partículas que comprenden conjugados poliméricos de un polímero biocompatible y un ligando de bajo peso molecular, como se trató en el presente documento. En referencia ahora a la figura 1, se muestra una de dichas partículas como un ejemplo no limitante. En esta figura, un conjugado polimérico de la divulgación se usa para formar una partícula 10. El polímero que forma la partícula 10 incluye un ligando de bajo peso molecular 15, presente en la superficie de la partícula y una porción biocompatible 17. En algunos casos, como se muestra en el presente documento, el resto de direccionamiento 15 se puede conjugar con la porción biocompatible 17. Sin embargo, no toda la porción biocompatible 17 se muestra conjugada con el resto de direccionamiento 15. Por ejemplo, en algunos casos, las partículas tales como la partícula 10 se pueden formar usando un primer polímero que comprenda una porción biocompatible 17 y un ligando de bajo peso molecular 15 y un segundo polímero que comprenda la porción biocompatible 17 pero no el resto de direccionamiento 15. Controlando la relación entre el primer y el segundo polímeros, se pueden formar partículas con propiedades diferentes y en algunos casos, se pueden formar bibliotecas de dichas partículas. Además, contenido en el centro de la partícula 10 se encuentra el fármaco 12. En algunos casos, el fármaco 12 puede estar contenido dentro de la partícula debido a efectos hidrófobos. Por ejemplo, el interior de la partícula puede ser relativamente hidrófobo con respecto a la superficie de la partícula y el fármaco puede ser un fármaco hidrófobo, que se asocia al centro relativamente hidrófobo de la partícula. En una realización, el agente terapéutico se asocia a la superficie de, se encapsula dentro de, es rodeado por, o está dispersado en toda, la nanopartícula. En otra realización, el agente terapéutico está encapsulado dentro del centro hidrófobo de la nanopartícula.
Como ejemplo específico, la partícula 10 puede contener polímeros que incluyen un polímero biocompatible relativamente hidrófobo y un resto de direccionamiento relativamente hidrófilo 15, de manera que, durante la formación de la partícula, una mayor concentración del resto de direccionamiento hidrófilo se expone en la superficie y una mayor concentración del polímero biocompatible hidrófobo está presente en el interior de la partícula.
En algunas realizaciones, el polímero biocompatible es un polímero hidrófobo. Los ejemplos no limitantes de polímeros biocompatibles incluyen poliláctido, poliglicólido y/o poli(láctido-co-glicólido).
En una realización diferente, la presente divulgación proporciona una nanopartícula que comprende 1) una matriz polimérica; 2) opcionalmente, un compuesto, o capa, anfifílico que rodea o está disperso dentro de la matriz polimérica formando una coraza continua o discontinua para la partícula; 3) un polímero no funcionalizado que puede formar parte de la matriz polimérica y 4) un ligando de PSMA de bajo peso molecular unido covalentemente a un polímero que puede formar parte de la matriz polimérica. Por ejemplo, una capa anfifílica puede reducir la penetración de agua en la nanopartícula, aumentando la eficiencia de encapsulación del fármaco y retardando la liberación del mismo.
Como se usa en el presente documento, el término "anfifílico" se refiere a una propiedad en la que la molécula tiene tanto una porción polar como una porción no polar. Con frecuencia, un compuesto anfifílico tiene una cabeza polar unida a una cola hidrófoba larga. En algunas realizaciones, la porción polar es soluble en agua en tanto la no polar es insoluble en agua. Además, la porción polar puede tener una carga positiva formal o una carga negativa formal.
Como alternativa, la porción polar puede tener tanto una carga positiva formal como una carga negativa formal y ser un zwitterion o sal interna. A los efectos de la invención, el compuesto anfifílico puede ser, pero no limitarse a, uno o una pluralidad de los siguientes: lípidos derivados naturalmente, tensioactivos o compuestos sintetizados con grupos tanto hidrófilos como hidrófobos.
Los ejemplos específicos de compuestos anfifílicos incluyen, pero no se limitan a, fosfolípidos, como 1,2 diestearoilsn-glicero-3-fosfoetanolamina (DSPE), dipalmitoilfosfatidilcolina (DPPC), diestearoilfosfatidilcolina (DSPC), diaraquidoilfosfatidilcolina (DAPC), dibehenoilfosfatidilcolina (DBPC), ditricosanoilfosfatidilcolina (DTPC) y dilignoceroilfatidilcolina (DLPC), incorporado en una relación entre 0,01 y 60 (peso de lípido/peso de polímero), más preferentemente entre 0,1 y 30 (peso de lípido/peso de polímero). Los fosfolípidos que se pueden usar incluyen, pero no se limitan a, ácidos fosfatídicos, fosfatidilcolinas tanto con lípidos saturados como insaturados, fosfatidiletanolaminas, fosfatidilgliceroles, fosfatidilserinas, fosfatidilinositoles, derivados lisofosfatidilo, cardiolipina y p-acil-y-alquil fosfolípidos. Los ejemplos de fosfolípidos incluyen, pero no se limitan a, fosfatidilcolinas como dioleoilfosfatidilcolina, dimiristoilfosfatidilcolina, dipentadecanoilfosfatidilcolina, dilauroilfosfatidilcolina, dipalmitoilfosfatidilcolina (DPPC), diestearoilfosfatidilcolina (DSPC), diaraquidoilfosfatidilcolina (DAPC), dibehenoilfosfatidilcolina (DBPC), ditricosanoilfosfatidilcolina (DTPC), dilignoceroilfatidilcolina (DLPC); y fosfatidiletanolaminas como dioleoilfosfatidiletanolamina o 1-hexadecil-2-palmitoilglicerofosfoetanolamina. También se pueden utilizar fosfolípidos sintéticos con cadenas de acilo asimétricas (por ejemplo, con una cadena de acilo de 6 carbonos y otra cadena acilo de 12 carbonos).
En una realización particular, un componente anfifílico que se puede usar para formar una capa anfifílica es lecitina y en particular, fosfatidilcolina. La lecitina es un lípido anfifílico y como tal, forma una bicapa fosfolipídica que tiene las cabezas hidrófilas (polares) enfrentando sus alrededores, que la mayor parte de las veces son acuosos y las colas hidrófobas enfrentándose entre sí. La lecitina tiene la ventaja de ser un lípido natural que se encuentra, por ejemplo, en la soja y que ya tiene la aprobación de la FDA para su uso en otros dispositivos de administración. Además, una mezcla de lípidos como lecitina es más ventajosa que un único lípido puro.
En ciertas realizaciones una nanopartícula desvelada tiene una monocapa anfifílica, lo que significa que la capa no es una bicapa fosfolipídica, sino que existe como una única capa continua o discontinua alrededor, o dentro, de la nanopartícula. La capa anfifílica está "asociada a" la nanopartícula de la invención, lo que significa que está ubicada en la proximidad de la matriz polimérica, como rodeando el exterior de la carcasa polimérica o dispersa en los polímeros que constituyen la nanopartícula.
Preparación de las nanopartículas
Otro aspecto de la presente divulgación se refiere a sistemas y procedimientos para elaborar las nanopartículas desveladas. En algunas realizaciones, utilizando dos o más polímeros diferentes (por ejemplo, copolímeros, por ejemplo, copolímeros en bloque) en diferentes proporciones y produciendo partículas a partir de los polímeros (por ejemplo, copolímeros, por ejemplo, copolímeros en bloque), se pueden controlar las propiedades de las partículas.
Por ejemplo, un polímero (por ejemplo, copolímero, por ejemplo, copolímeros en bloque) puede, o no, incluir un ligando de PSMA de bajo peso molecular, aunque se puede elegir otro polímero opcional (por ejemplo, copolímero, por ejemplo, copolímero en bloque) por su biocompatibilidad y/o su capacidad para controlar la inmunogenia de la partícula resultante.
En un conjunto de realizaciones, las partículas se forman proporcionando una solución que contiene uno más polímeros y poniendo en contacto la solución con un polímero no disolvente para producir la partícula. La solución puede ser miscible o inmiscible con el polímero no disolvente. Por ejemplo, un líquido miscible con agua tal como acetonitrilo puede contener los polímeros y las partículas se forman a medida que el acetonitrilo se pone en contacto con agua, un polímero no disolvente, por ejemplo, vertiendo el acetonitrilo en el agua a una velocidad controlada. El polímero contenido en la solución, después del contacto con el polímero no disolvente, se puede entonces precipitar para formar partículas tales como las nanopartículas. Se dice que dos líquidos son "inmiscibles" o no miscibles, entre sí cuando uno no es soluble en el otro en una medida de hasta al menos el 10 % en peso a presión y temperatura ambientes. Normalmente, una solución orgánica (por ejemplo, diclorometano, acetonitrilo, cloroformo, tetrahidrofurano, acetona, formamida, dimetilformamida, piridinas, dioxano, dimetilsulfóxido, etc.) y un líquido acuoso (por ejemplo, agua o agua que contenga sales disueltas u otras especies, medios celulares o biológicos, etanol, etc.) son inmiscibles entre sí. Por ejemplo, la primera solución se puede verter en la segunda solución (a una velocidad adecuada). En algunos casos, se pueden formar partículas tales como nanopartículas a medida que la primera solución se pone en contacto con el segundo líquido inmiscible, por ejemplo, la precipitación del polímero después del contacto causa que el polímero forme nanopartículas mientras la primera solución se vierte en el segundo líquido y en algunos casos, por ejemplo, cuando la velocidad de introducción es cuidadosamente controlada y mantenida a una velocidad relativamente lenta, se pueden formar nanopartículas. El control de dicha formación de partículas puede ser fácilmente optimizada por un experto en la materia usando simplemente la experimentación de rutina.
Propiedades tales como funcionalidad superficial, carga superficial, tamaño, potencial zeta (£), hidrofobia, capacidad para controlar la inmunogenia y similares; pueden ser altamente controladas usando un procedimiento desvelado. Por ejemplo, se puede sintetizar una biblioteca de partículas y cribar para identificar las partículas que tienen una relación particular entre los polímeros que permita que las partículas tengan una densidad específica de restos (por ejemplo, ligandos de PSMA de bajo peso molecular) presentes en la superficie de la partícula. Esto permite preparar partículas que tengan una o más propiedades específicas, por ejemplo, un tamaño específico y una densidad superficial específica de restos, sin un esfuerzo indebido. En consecuencia, ciertas realizaciones de la invención apuntan a técnicas de cribado utilizando dichas bibliotecas, así como a todas las partículas identificadas utilizando dichas bibliotecas. Además, la identificación se puede realizar mediante cualquier procedimiento adecuado. Por ejemplo, la identificación puede ser directa o indirecta, o proceder cuantitativa o cualitativamente.
En algunas realizaciones, se funcionalizan nanopartículas ya formadas con un resto de direccionamiento utilizando procedimientos análogos a los descritos para producir conjugados ligando-polímero funcionalizado. Por ejemplo, se mezcla un primer copolímero (PLGA-PEG, poli(láctido-co-glicólido) y poli(etilenglicol)) con un agente terapéutico para formar partículas. Después las partículas se asocian a un ligando de bajo peso molecular para formar nanopartículas que se puedan usar para el tratamiento del cáncer. Las partículas se pueden asociar a diversas cantidades de ligando de bajo peso molecular para controlar la densidad superficial de ligando de la nanopartícula, alterando de ese modo las características terapéuticas de dicha nanopartícula. Además, por ejemplo, controlando parámetros tales como el peso molecular, el peso molecular de PEG y la carga superficial de la nanopartícula, se pueden obtener partículas controladas muy precisamente.
Se proporciona un procedimiento de nanoemulsión, que está representado en las figuras 3 y 4. Un agente terapéutico, un primer polímero (un copolímero en dibloque tal como PLA-PEG o PLGA-PEG, cualquiera de los cuales puede estar opcionalmente unido a un ligando, por ejemplo, GL2) y un segundo polímero opcional (por ejemplo (PL(G)A-PEG o PLA), se combinan con una solución orgánica para formar una primera fase orgánica. Dicha primera fase puede incluir de aproximadamente el 5 a aproximadamente el 50 % de sólidos en peso, de aproximadamente el 5 a aproximadamente el 40 % de sólidos o de aproximadamente el 10 a aproximadamente el 30 % de sólidos. La primera fase orgánica se combina con una primera solución acuosa para formar una segunda fase. La solución orgánica puede incluir, por ejemplo, tolueno, metil etil cetona, acetonitrilo, tetrahidrofurano, acetato de etilo, alcohol isopropílico, acetato de isopropilo, dimetilformamida, cloruro de metileno, diclorometano, cloroformo, acetona, alcohol bencílico, Tween 80, Span 80, o similares y combinaciones. En una realización, la fase orgánica puede incluir alcohol bencílico, acetato de etilo y combinaciones de los mismos. La segunda fase puede tener entre aproximadamente el 1 y el 50 % en peso, por ejemplo, aproximadamente el 5-40 % en peso de sólidos. La solución acuosa puede ser agua, opcionalmente en combinación con uno o más de entre colato de sodio, acetato de etilo, acetato de polivinilo y alcohol bencílico.
Por ejemplo, la fase oleosa u orgánica puede utilizar disolvente que sea solo parcialmente miscible con el no disolvente (agua). Por consiguiente, cuando se mezcla en proporciones suficientemente bajas y/o cuando se usa agua presaturada con los disolventes orgánicos, la fase oleosa permanece líquida. La fase oleosa se puede emulsionar en una solución acuosa y, como gotitas líquidas, cizallar en nanopartículas utilizando, por ejemplo, sistemas de dispersión de alta energía, tales como homogeneizadores o sondas de ultrasonido. La porción acuosa de la emulsión, conocida también como "fase acuosa", puede ser una solución tensioactiva consistente en colato de sodio y presaturada con acetato de etilo y alcohol bencílico.
La emulsión de la segunda fase para formar una fase en emulsión se realiza en uno o dos pasos de emulsión. Se prepara una emulsión primaria y después emulsionar para formar una emulsión fina. La emulsión primaria se puede formar, por ejemplo, utilizando mezcla simple, un homogeneizador de alta presión, una sonda de ultrasonido, una barra de agitación o un homogeneizador de rotor y estator. La emulsión primaria se puede convertir en una emulsión fina a través del uso, por ejemplo, de una sonda de ultrasonido o un homogeneizador de alta presión, por ejemplo, usando 1, 2, 3 o más pases a través de un homogeneizador. Por ejemplo, cuando se usa un homogeneizador de alta presión, la presión puede ser de aproximadamente 6894 a aproximadamente 55158 kPa, o de aproximadamente 13789 a aproximadamente 27579 kPa, o de aproximadamente 27579 a aproximadamente 55158 kPa o de aproximadamente 27579 a aproximadamente 34473 kPa, por ejemplo de aproximadamente 13789, 17237, 27579 o 34473 kPa.
Puede ser necesaria la evaporación del disolvente o la dilución para completar la extracción del disolvente y solidificar las partículas. Para un mayor control de la cinética de extracción y un procedimiento más escalable, se puede usar una dilución del disolvente a través de medio de enfriamiento acuoso. Por ejemplo, la emulsión se puede diluir en agua fría hasta una concentración suficiente para disolver todo el disolvente orgánico para formar una fase enfriada. El enfriamiento se realiza al menos parcialmente a una temperatura de aproximadamente 5 °C o menos. Por ejemplo, el agua utilizada en el enfriamiento puede estar a una temperatura menor que la temperatura ambiente (por ejemplo, de aproximadamente 0 a aproximadamente 10 °C, o de aproximadamente 0 a aproximadamente 5 °C).
En algunas realizaciones, no todo el agente terapéutico (por ejemplo, docetaxel) se encapsula en las partículas en esta etapa y se agrega un solubilizante de fármacos a la fase enfriada para formar una fase solubilizada. El solubilizante de fármacos puede ser, por ejemplo, Tween 80, Tween 20, polivinilpirrolidona, ciclodextrano, dodecilsulfato de sodio o colato de sodio. Por ejemplo, se puede añadir Tween 80 a la suspensión de nanopartículas enfriada para solubilizar el fármaco libre y evitar la formación de cristales de fármaco. En algunas realizaciones, una relación entre solubilizante de fármaco y agente terapéutico (por ejemplo docetaxel) es de aproximadamente 100:1 a aproximadamente 10:1.
La fase solubilizada se filtra para recuperar las nanopartículas. Por ejemplo, se pueden utilizar membranas de ultrafiltración para concentrar la suspensión de nanopartículas y eliminar sustancialmente el disolvente orgánico, el fármaco libre y otros adyuvantes del procedimiento (tensioactivos). Un ejemplo de filtración se puede realizar usando un sistema de filtración de flujo tangencial. Por ejemplo, utilizando una membrana con un tamaño de poro adecuado para retener nanopartículas mientras se permite pasar solutos, micelas y disolvente orgánico, las nanopartículas se pueden separar selectivamente. Se pueden usar membranas de ejemplo con pesos moleculares de corte de aproximadamente 300-500 kDa (~5-25 nm).
Se puede realizar una diafiltración usando un enfoque de volumen constante, lo que significa que el diafiltrado (agua desionizada fría, por ejemplo de aproximadamente 0 a aproximadamente 5 °C, o entre 0 a aproximadamente 10 °C) se puede añadir a la suspensión de alimentación a la misma velocidad que se retira el filtrado de la suspensión. En algunas realizaciones, el filtrado puede incluir una primera filtración utilizando una primera temperatura de aproximadamente 0 a aproximadamente 5 °C, o entre 0 a aproximadamente 10 °C y una segunda temperatura de aproximadamente 20 a aproximadamente 30 °C, o entre 15 a aproximadamente 35 °C. Por ejemplo, el filtrado puede incluir procesar de aproximadamente 1 a aproximadamente 6 diavolúmenes a una temperatura de aproximadamente 0 a aproximadamente 5°C y procesar al menos un diavolumen (por ejemplo de aproximadamente 1 a aproximadamente 3 o de aproximadamente 1 y 2 diavolúmenes) a una temperatura de aproximadamente 20 a aproximadamente 30 °C.
Después de purificar y concentrar la suspensión de nanopartículas, las partículas se pueden pasar a través de uno, dos o más filtros esterilizantes y/o de profundidad, por ejemplo, usando un prefiltro de profundidad de ~0,2 pm.
En otra realización de preparación de nanopartículas, se forma una fase orgánica compuesta por una mezcla de un agente terapéutico, por ejemplo docetaxel y un polímero (homopolímero, copolímero y copolímero con ligando). La fase orgánica se mezcla con una fase acuosa a una relación de aproximadamente 1:5 (fase oleosa:fase acuosa, (O:W)) en la que la fase acuosa está compuesta por un tensioactivo y algo de disolvente disuelto. La emulsión primaria se forma combinando las dos fases por mezcla simple o mediante el uso de un homogeneizador de rotor y estator. La emulsión primaria se convierte después en una emulsión fina mediante el uso de un homogeneizador de alta presión. La emulsión fina se enfría después añadiendo agua desionizada mientras se mezcla. La relación medio de enfriamiento:emulsión (Q:E) es aproximadamente 8,5:1. Después se agrega una solución de Tween (por ejemplo, Tween 80) al medio de enfriamiento para conseguir aproximadamente el 2 % de Tween total. Esto sirve para disolver el fármaco libre no encapsulado. Después las nanopartículas se aíslan por centrifugación o ultrafiltración/diafiltración.
Se apreciará que las cantidades de polímero y agente terapéutico o agente activo que se usan en la preparación de la formulación pueden diferir de una formulación final. Por ejemplo, algo de agente activo puede no quedar completamente incorporado en una nanopartícula y dicho agente terapéutico libre puede, por ejemplo, retirarse por filtración. Por ejemplo, en una realización, se puede usar aproximadamente el 20 % de agente activo (por ejemplo docetaxel) a aproximadamente el 80 % de polímero (por ejemplo el polímero puede incluir aproximadamente el 2,5 por ciento en moles de PLA-PEG-GL2 y aproximadamente el 97,5 por ciento en moles de PLA-PEG), en la preparación de una formulación que da como resultado una nanopartícula final que comprende aproximadamente el 10 por ciento en peso del agente activo (por ejemplo docetaxel) a aproximadamente el 90 por ciento en peso de polímero (en la que el polímero puede incluir aproximadamente el 1,25 por ciento en moles de PLA-PEG-GL2 a aproximadamente el 98,75 por ciento en moles de PLA-PEG). Dichos procedimientos pueden proporcionar nanopartículas finales adecuadas para la administración a un paciente que contengan de aproximadamente el 2 a aproximadamente el 20 por ciento en peso de agente terapéutico, por ejemplo, aproximadamente el 5, aproximadamente el 8, aproximadamente el 10, aproximadamente el 15 por ciento en peso de agente terapéutico.
Agentes terapéuticos
De acuerdo con la presente invención, todos los agentes, incluidos, por ejemplo, agentes terapéuticos (por ejemplo antineoplásicos), agentes de diagnóstico (por ejemplo agentes de contraste; radionúclidos y grupos fluorescentes, luminiscentes y magnéticos), agentes profilácticos (por ejemplo vacunas) y/o agentes nutracéuticos (por ejemplo vitaminas, minerales, etc.) se pueden administrar mediante las nanopartículas desveladas. Los agentes de ejemplo que se pueden administrar de acuerdo con la presente invención incluyen, pero no se limitan a, moléculas pequeñas (por ejemplo citotóxicos), ácidos nucleicos (por ejemplo, ARNip, ARNi y micro ARN), proteínas (por ejemplo anticuerpos), péptidos, lípidos, hidratos de carbono, hormonas, metales, elementos y compuestos radiactivos, fármacos, vacunas, agentes inmunológicos, etc. y/o combinaciones de los mismos. En algunas realizaciones, el agente que se va administrar es un agente útil en el tratamiento del cáncer (por ejemplo, cáncer de próstata).
Por ejemplo, un resto de direccionamiento, si se usa, se puede dirigir a, o hacer que la partícula se localice en, porciones específicas dentro de un sujeto y la carga útil puede entregarse a esas porciones. En una realización particular, el fármaco, u otra carga útil, se libera de manera controlada desde una partícula y se permite que interaccione localmente con el sitio particular que es la diana (por ejemplo, un tumor). La expresión "liberación controlada" (y las variantes de ese término) como se usa en el presente documento (por ejemplo, en el contexto de "sistema de liberación controlada") pretende abarcar en general la liberación de una sustancia (por ejemplo, un fármaco) en un sitio seleccionado, o de lo contrario controlable en la velocidad, el intervalo y/o la cantidad. La liberación controlada abarca, pero no está necesariamente limitada a, sustancialmente la administración continua, la entrega según un patrón (por ejemplo, administración intermitente en un período de tiempo que es interrumpida a intervalos regulares o irregulares) y la administración de un bolo de una sustancia seleccionada (por ejemplo, como una cantidad discreta, predeterminada, si es una sustancia durante un período de tiempo relativamente corto (por ejemplo, unos pocos segundos o minutos)).
El agente activo o fármaco puede ser un agente terapéutico tal como un antineoplásico tal como los inhibidores de mTor (por ejemplo, sirolimus, temsirolimus, o everolimus), alcaloides de la vinca tales como vincristina, un derivado diterpénico o un taxano tal como paclitaxel (o sus derivados tales como DHA-paclitaxel o PG-paclitaxel) o docetaxel.
En un conjunto de realizaciones, la carga útil es un fármaco o una combinación de más de un fármaco. Dichas partículas pueden ser útiles, por ejemplo, en realizaciones en las que un resto de direccionamiento se puede usar para dirigir una partícula que contenga un fármaco a una ubicación localizada particular dentro de un sujeto, por ejemplo, para permitir que se produzca la entrega localizada del fármaco. Los agentes terapéuticos de ejemplo incluyen antineoplásicos tales como doxorrubicina (adriamicina), gemcitabina (gemzar), daunorrubicina, procarbazina, mitomicina, citarabina, etopósido, metotrexato, vinorelbina, 5-fluorouracilo (5-FU), alcaloides de la vinca como vinblastina o vincristina; bleomicina, paclitaxel (taxol), docetaxel (taxotere), aldesleucina, asparaginasa, busulfán, carboplatino, cladribina, camptotecina, CPT-11, 10-hidroxi-7-etilcamptotecina (SN38), dacarbazina, S-I capecitabina, ftorafur, 5'desoxiflurouridina, UFT, eniluracilo, desoxicitidina, 5-azacitosina, 5-azadesoxicitosina, alopurinol, 2-cloroadenosina, trimetrexato, aminopterina, metileno-10-deazaaminopterina (MDAM), oxaplatino, picoplatino, tetraplatino, satraplatino, platino-DACH, ormaplatino, CI-973, JM-216 y análogos de los mismos, epirrubicina, fosfato de etopósido, 9-aminocamptotecina, 10,11-metilenodioxicamptotecina, karenitecina, 9-nitrocamptotecina, TAS 103, vindesina, mostaza de L-fenilalanina, ifosfamidamefosfamida, perfosfamida, trofosfamida, carmustina, semustina, epotilones A-E, tomudex, 6-mercaptopurina, 6-tioguanina, amsacrina, fosfato de etopósido, karenitecina, aciclovir, valaciclovir, ganciclovir, amantadina, rimantadina, lamivudina, zidovudina, bevacizumab, trastuzumab, rituximab, 5-fluorouracilo y combinaciones de los mismos.
Los ejemplos no limitantes de fármacos potencialmente adecuados incluyen antineoplásicos, incluyendo, por ejemplo, docetaxel, mitoxantrona y clorhidrato de mitoxantrona. En otra realización, la carga útil puede ser un anticancerígeno tal como 20-epi-1, 25 dihidroxivitamina D3, 4-ipomeanol, 5-etiniluracilo, 9-dihidrotaxol, abiraterona, acivicina, aclarrubicina, clorhidrato de acodazol, acronina, acilfiilveno, adecipenol, adozelesina, aldesleucina, todos los antagonistas de tk, altretamina, ambamustina, ambomicina, acetato de ametantrona, amidox, amifostina, aminoglutetimida, ácido aminolevulínico, amrrubicina, amsacrina, anagrelida, anastrozol, andrografolida, inhibidores de la angiogénesis, antagonista D, antagonista G, antarelix, antramicina, proteína morfogenética-1 antidorsalización, antiestrógeno, antineoplastón, oligonucleótidos antisentido, glicinato de afidicolina, moduladores del gen de la apoptosis, reguladores de la apoptosis, ácido apurínico, ARA-CDP-DL-PTBA, arginina desaminasa, asparaginasa, asperlina, asulacrina, atamestano, atrimustina, axinastatina 1, axinastatina 2, axinastatina 3, azacitidina, azasetrón, azatoxina, azatirosina, azetepa, azotomicina, derivados de la bacatina III, balanol, batimastat, benzoclorinas, benzodepa, benzoilestaurosporina, derivados de la beta lactama, beta-aletina, betaclamicina B, ácido betulínico, inhibidor de BFGF, bicalutamida, bisantreno, clorhidrato de bisantreno, bisazuidinilespermina, bisnafida, dimesilato de bisnafida, bistrateno A, bizelesina, bleomicina, sulfato de bleomicina, antagonistas de BRC/ABL, breflato, brequinar sódico, bropirimina, budotitano, busulfán, butionina sulfoximina, cactinomicina, calcipotriol, calfostina C, calusterona, derivados de camptotecina, canaripox IL-2, capecitabina, caraceraide, carbetimero, carboplatino, carboxamida-amino-triazol, carboxiamidotriazol, carest M3, carmustina, earn 700, inhibidor derivado del cartílago, clorhidrato de carrubicina, carzelesina, inhibidores de la caseína cinasa, castanoespermina, cecropina B, cedefingol, cetrorelix, clorambucilo, clorinas, cloroquinoxalina sulfonamida, cicaprost, cirolemicina, cisplatino, cisporfirina, cladribina, análogos de clomifeno, clotirimazol, colismicina A, colismicina B, combretastatina A4, análogos de combretastatina, conagenina, crambescidina 816, crisnatol, mesilato de crisnatol, criptoficina 8, derivados de criptoficina A, curacina A, ciclopentaantraquinonas, ciclofosfamida, cicloplatam, cipemicina, citarabina, ocfosfato de citarabina, factor citolítico, citostatina, dacarbazina, dacliximab, dactinomicina, clorhidrato de daunorrubicina, decitabina, deshidrodidemnina B, deslorelina, dexifosfamida, dexormaplatino, dexrazoxano, dexverapamilo, dezaguanina, mesilato de dezaguanina, diaziquona, didemnina B, didox, dietihiorspermina, dihidro-5-azacitidina, dioxamicina, difenil espiromustina, docetaxel, docosanol, dolasetrón, doxifluridina, doxorrubicina, clorhidrato de doxorrubicina, droloxifeno, citrato de droloxifeno, propionato de dromostanolona, dronabinol, duazomicina, duocanicina SA, ebseleno, ecomustina, edatrexato, edelfosina, edrecolomab, eflomitina, clorhidrato de eflomitina, elemeno, elsamitrucina, emitefur, enloplatino, enpromato, epipropidina, epirrubicina, clorhidrato de epirrubicina, epristerida, erbulozol, sistema vector de terapia génica de eritrocitos, clorhidrato de esorrubicina, estramustina, análogos de estramustina, fosfato sódico de estramustina, agonistas de estrógenos, antagonistas de estrógenos, etanidazol, etopósido, fosfato de etopósido, etoprina, exemestano, fadrozol, clorhidrato de fadrozol, fazarabina, fenretinida, filgrastim, finasterida, flavopiridol, flezelastina, floxuridina, fluasterona, fludarabina, fosfato de fludarabina, clorhidrato de fluorodaunorrubicina, fluorouracilo, flurocitabina, forfenimex, formestano, fosquidona, fostriecina, fostriecina sódica, fotemustina, texafirina de gadolinio, nitrato de galio, galocitabina, ganirelix, inhibidores de la gelatinasa, gemcitabina, clorhidrato de gemcitabina, inhibidores del glutatión, hepsulfam, heregulina, bisacetamida de hexametileno, hidroxiurea, hipericina, ácido ibandrónico, idarrubicina, clorhidrato de idarrubicina, idoxifeno, idramantona, ifosfamida, ihnofosina, ilomastat, imidazoacridonas, imiquimod, péptidos inmunoestimulantes, inhibidor del receptor de factor de crecimiento-1 similar a la insulina, agonistas del interferón, interferón alfa-2A, interferón alfa-2B, interferón alfa-N1, interferón alfa-N3, interferón beta-IA, interferón gamma-IB, interferones, interleucinas, iobenguano yododoxorrubicina, iproplatm, irinotecán, clorhidrato de irinotecán, iroplact, irsogladina, isobengazol, isohomohalicondrina B, itasetrón, jasplakinolida, kahalalida F, triacetato de lamelarina-N, lanreotida, acetato de lanreotida, leinamicina, lenograstim, sulfato de lentinano, leptolestatina, letrozol, factor de inhibición de la leucemia, interferón alfa de leucocito, acetato de leuprolida, leuprolida/estrógeno/progesterona, leuprorelina, levamisol, liarozol, clorhidrato de liarozol, análogos lineales de poliamina, péptido disacárido lipófilo, compuestos de platino lipófilos, lisoclinamida, lobaplatino, lombricina, lometrexol, lometrexol sódico, lomustina, lonidamina, losoxantrona, clorhidrato de losoxantrona, lovastatina, loxoribina, lurtotecán, texafirina de lutecio, lisofilina, péptidos líticos, maitansina, manostatina A, marimastat, masoprocol, maspina, inhibidores de matrilisina, inhibidores de metaloproteinasa de matriz, maitansina, clorhidrato de mecloretamina, acetato de megestrol, acetato de melengestrol, melfalán, menogaril, merbarona, mercaptopurina, meterelina, metioninasa, metotrexato, metotrexato sódico, metoclopramida, metoprina, meturedepa, inhibidores de la proteína cinasa C microalgal, inhibidor de MIF, mifepristona, miltefosina, mirimostim, ARN bicatenario mal apareado, mitindomida, mitocarcina, mitocromina, mitogilina, mitoguazona, mitolactol, mitomalcina, mitomicina-saporina, análogos de mitomicina, mitonafida, mitosper, mitotano, mitotoxina, factor de crecimiento de fibroblastos, mitoxantrona, clorhidrato de mitoxantrona, mofaroteno, molgramostim, anticuerpo monoclonal, gonadotrofina coriónica humana, monofosforil lípido del esqueleto de la pared celular de micobacteria, mopidamol, inhibidor del gen de multirresistencia a fármacos, terapia a base de supresor tumoral múltiple 1, anticancerígeno de mostaza, micaperoxida B, extracto de pared celular micobacteriana, ácido micofenólico, miriaporona, n-acetildinalina, nafarelina, nagrestip, naloxona/pentazocina, napavina, nafterpina, nartograstim, nedaplatino, nemorrubicina, ácido neridrónico, endopeptidasa neutra, nilutamida, nisamicina, moduladores del óxido nítrico, antioxidante nitróxido, nitrulina, nocodazol, nogalamicina, benzamidas n-sustituidas, O6-benzilguanina, octreotida, oquiicenona, oligonucleótidos, onapristona, ondansetrón, oracina, inductor de citosina oral, ormaplatino, osaterona, oxaliplatino, oxaunomicina, oxisurano, paclitaxel, análogos de paclitaxel, derivados de paclitaxel, palauamina, palmitoilrizoxina, ácido pamidrónico, panaxitriol, panomifeno, parabactina, pazeliptina, pegaspargasa, peldesina, peliomicina, pentamustina, polisulfato sódico de pentosano, pentostatina, pentrozol, sulfato de peplomicina, perflubrón, perfosfamida, alcohol perilílico, fenazinomicina, fenilacetato, inhibidores de la fosfatasa, picibanilo, clorhidrato de pilocarpina, pipobromano, piposulfano, pirarrubicina, piritrexim, clorhidrato de piroxantrona, placetina A, placetina B, inhibidor del activador de plasminógeno, complejo de platino, compuestos de platino, complejo platino-triamina, plicamicina, plomestano, porfímero sódico, porfiromicina, prednimustina, clorhidrato de procarbazina, propil bis-acridona, prostaglandina J2, antiandrógeno de carcinoma prostático, inhibidores del proteasoma, modulador inmunitario a base de proteína A, inhibidor de la proteína cinasa C, inhibidores de la proteína tirosina fosfatasa, inhibidores de la purina-nucleósido fosforilasa, puromicina, clorhidrato de puromicina, purpurinas, pirazorurina, pirazoloacridina, conjugado de hemoglobina piridoxilada-polioxietileno, antagonistas de RAF, raltitrexed, ramosetrón, inhibidores de la proteína farnesil transferasa RAS, inhibidores de RAS, inhibidor de RAS-GAP, reteliptina desmetilada, etidronato de renio RE 186, rizoxina, riboprina, ribozimas, RH retinarnida, ARNi, rogletimida, rohituquina, romurtida, roquinimex, rubiginona B1, ruboxil, safingol, clorhidrato de safingol, saintopina, sarcnu, sarcofitol A, sargramostim, miméticos de SDI1, semustina, derivado del inhibidor 1 de la senescencia, oligonucleótidos sentido, inhibidores de la transducción de señales, moduladores de la transducción de señales, simtrazeno, proteína de unión al antígeno de una sola cadena, sizofirano, sobuzoxano, borocaptato de sodio, fenilacetato de sodio, solverol, proteína de unión a somatomedina, sonermina, esparfosato sódico, ácido esparfósico, esparsomicina, espicamicina D, clorhidrato de espirogermanio, espiromustina, espiroplatino, esplenopentina, espongistatina 1, escualamina, inhibidor de células madre, inhibidores de la división de células madre, estipiamida, estreptonigrina, estreptozocina, inhibidores de la estromelisina, sulfinosina, sulofenur, antagonistas del péptido intestinal vasoactivo superactivo, suradista, suramina, swainsonina, glucosaminoglucanos sintéticos, talisomicina, talimustina, metyoduro de tamoxifeno, tauromustina, tazaroteno, tecogalán sódico, tegafur, telurapirilio, inhibidores de la telomerasa, clorhidrato de teloxantrona, temoporfina, temozolomida, tenipósido, teroxirona, testolactona, tetraclorodecaóxido, tetrazomina, taliblastina, talidomida, tiamiprina, tiocoralina, tioguanina, tiotepa, trombopoyetina, miméticos de trombopoyetina, timalfasina, agonista del receptor de timopoyetina, timotrinano, hormona estimulante de la tiroides, tiazofurina, etiopurpurina de etilo de estaño, tirapazamina, dicloruro de titanoceno, clorhidrato de topotecán, topsentina, toremifeno, citrato de toremifeno, factor de células madre totipotentes, inhibidores de la traducción, acetato de trestolona, tretinoina, triacetiluridina, triciribina, fosfato de triciribina, trimetrexato, trimetrexato glucuronato, triptorelina, tropisetrón, clorhidrato de tubulozol, turosterida, inhibidores de la tirosina cinasa, tirfostinas, inhibidores de UBC, ubenimex, mostaza de uracilo, uredepa, factor inhibidor del crecimiento derivado del seno urogenital, antagonistas del receptor de urocinasa, vapreotida, variolina B, velaresol, veramina, verdinas, verteporfina, sulfato de vinblastina, sulfato de vincristina, vindesina, sulfato de vindesina, sulfato de vinepidina, sulfato de vinglicinato, sulfato de vinleurosina, vinorelbina o tartrato de vinorelbina, sulfato de vinrosidina, vinxaltina, sulfato de vinzolidina, vitaxina, vorozol, zanoterona, zeniplatino, zilascorb, zinostatina, zinostatina, estimalamero o clorhidrato de zorrubicina.
Formulaciones farmacéuticas
Las nanopartículas desveladas en el presente documento se pueden combinar con vehículos farmacéuticamente aceptables para formar una composición farmacéutica, de acuerdo otro aspecto de la invención. Como apreciarán los expertos en la materia, los vehículos se pueden elegir basándose en la vía de administración como se describe a continuación, la ubicación del problema que es la diana, el fármaco que se va entregar, el tiempo de entrega del fármaco, etc.
Las composiciones farmacéuticas de la presente invención se pueden administrar a un paciente mediante cualquier medio conocido en el área incluidas las vías oral y parenteral. El término "paciente", como se usa en el presente documento, se refiere a seres humanos así como no humanos, incluidos, por ejemplo, mamíferos, aves, reptiles, anfibios y peces. Por ejemplo, los no humanos pueden ser mamíferos (por ejemplo un roedor, un ratón, una rata, un conejo, un mono, un perro, un gato, un primate o un cerdo). En ciertas realizaciones las rutas parenterales son deseables puesto que evitan el contacto con las enzimas digestivas que se encuentran en el canal alimentario. De acuerdo con dichas realizaciones, las composiciones de la invención se pueden administrar mediante inyección (por ejemplo, inyección intravenosa, subcutánea, intramuscular o peritoneal), por vía rectal, vaginal, tópica (por ejemplo mediante polvos, cremas, pomadas o gotas), o por inhalación (por ejemplo mediante pulverizaciones).
En una realización particular, las nanopartículas de la presente invención se administran a un sujeto que lo necesita sistémicamente, por ejemplo, mediante infusión o inyección IV.
Las preparaciones inyectables, por ejemplo, las suspensiones estériles inyectables acuosas u oleosas se pueden formular de acuerdo con las técnicas conocidas usando agentes dispersantes o agentes humectantes y agentes de suspensión adecuados. La preparación estéril inyectable también puede ser una solución, suspensión o emulsión estéril inyectable en un diluyente o disolvente atóxico aceptable para su uso parenteral, por ejemplo, como una solución en 1,3-butanodiol. Entre los vehículos y disolventes aceptables que se pueden emplear se encuentran el agua, la solución de Ringer U.S.P. y la solución de cloruro de sodio isotónica. Además, convencionalmente se emplean aceites no volátiles estériles como disolvente o medio de suspensión. Para este fin se puede utilizar cualquier aceite no volátil suave incluyendo mono o diglicéridos sintéticos. Además, en la preparación de inyectables se usan ácidos grasos tales como el ácido oleico. En una realización, el conjugado de la invención se suspende en un fluido vehículo que comprende el 1 % (p/v) de carboximetilcelulosa de sodio y el 0,1 % (v/v) de TWEEN™ 80. Las formulaciones inyectables se pueden esterilizar, por ejemplo, por filtración a través de un filtro que retenga bacterias, o mediante la incorporación de agentes esterilizante en forma de composiciones sólidas estériles que se pueden disolver o dispersar en agua estéril o cualquier otro medio inyectable estéril antes de su uso.
Las formas farmacéuticas sólidas para la administración oral incluyen cápsulas, comprimidos, píldoras, polvos y gránulos. En dichas formas farmacéuticas sólidas, el conjugado encapsulado o no encapsulado se mezcla con al menos un excipiente o vehículo inerte, farmacéuticamente aceptable tal como citrato de sodio o fosfato dicálcico y/o (a) cargas o expansores tales como almidones, lactosa, sacarosa, glucosa, manitol y ácido silícico, (b) aglutinantes tales como por ejemplo carboximetilcelulosa, alginatos, gelatina, polivinilpirrolidona, sacarosa y goma arábiga, (c) humectantes tales como glicerol, (d) agentes disgregantes tales como agar-agar, carbonato de calcio, almidón de patata o tapioca, ácido algínico, ciertos silicatos y carbonato de sodio; (e) agentes retardantes de la solución tales como parafina; (f) aceleradores de la absorción tales como compuestos de amonio cuaternario, (g) agentes humectantes tales como, por ejemplo, alcohol cetílico y monoestearato de glicerol, (h) absorbentes como caolín y bentonita y (i) lubricantes tales como talco, estearato de calcio, estearato de magnesio, polietilenglicoles sólidos, laurilsulfato de sodio y mezclas de los mismos. En el caso de las cápsulas, los comprimidos y las píldoras, las formas farmacéuticas también pueden contener tampones.
Se apreciará que la dosis exacta de la partícula dirigida al PSMA es elegida por el médico individual a la vista del paciente que se va a tratar; en general, la dosis y la administración se ajustan para proporcionar una cantidad eficaz de la partícula dirigida al PSMA al paciente en tratamiento. Como se usa en el presente documento, la "cantidad eficaz" de una partícula dirigida al PSMA se refiere a la cantidad necesaria para producir una respuesta biológica deseada. Como apreciarán los expertos en la materia, la cantidad eficaz de partícula dirigida al PSMA puede variar dependiendo de factores tales como el criterio de valoración biológico deseado, el fármaco que se va a administrar, el tejido que es la diana, la vía de administración, etc. Por ejemplo, la cantidad eficaz de partícula dirigida al PSMA que contiene un antineoplásico podría ser la cantidad que produzca una reducción en el tamaño del tumor en una cantidad deseada en un determinado período de tiempo. Otros factores que se pueden tener en cuenta incluyen la gravedad del estado patológico; la edad, el peso y el género del paciente en tratamiento; la dieta, el tiempo y la frecuencia de administración; las combinaciones de fármacos; las reacciones de sensibilidad; y la tolerancia/respuesta al tratamiento.
Las nanopartículas de la invención se pueden formular en formas farmacéuticas unitarias para facilitar la administración y la uniformidad de dosis. La expresión "forma farmacéutica unitaria" como se usa en el presente documento se refiere a una unidad físicamente discreta de nanopartícula apropiada para el paciente que se va a tratar. Se comprenderá, sin embargo, que el uso diario total de las composiciones de la presente invención será decidido por el médico tratante según su criterio profesional. Para cualquier nanopartícula, la dosis terapéuticamente eficaz se puede calcular inicialmente en ensayos de cultivo celular o en modelos animales, generalmente en ratones, conejos, perros o cerdos. El modelo animal también se usa para conseguir un intervalo de concentración y una vía de administración deseables. Dicha información se puede usar después para determinar las dosis y las vías útiles para la administración en los seres humanos. La eficacia terapéutica y la toxicidad de las nanopartículas se puede determinar mediante procedimientos farmacéuticos convencionales en cultivos celulares o animales de experimentación, por ejemplo, la DE50 (la dosis terapéuticamente eficaz en el 50 % de la población) y la DL50 (la dosis letal para el 50 % de la población). La relación de dosis entre los efectos tóxicos y terapéuticos es el índice terapéutico y se puede expresar como el cociente, DL50/DE50. Las composiciones farmacéuticas que tienen índices terapéuticos grandes pueden ser útiles en algunas realizaciones. Los datos obtenidos de esos ensayos de cultivos celulares y estudios en animales se pueden usar para formular un intervalo de dosis para su uso en humanos.
En una realización, las composiciones desveladas en el presente documento pueden incluir menos de aproximadamente 10 ppm de paladio, o menos de aproximadamente 8 ppm, o menos de aproximadamente 6 ppm de paladio. Por ejemplo, en el presente documento se proporciona una composición que incluye nanopartículas que tienen un conjugado polimérico PLA-PEG-GL2 en las que la composición tiene menos de aproximadamente 10 ppm de paladio.
En una realización de ejemplo, se desvela una composición farmacéutica que incluye una pluralidad de nanopartículas cada una de las cuales comprende un agente terapéutico; de aproximadamente el 0,1 a aproximadamente el 30 por ciento en moles del contenido total de polímero, o de aproximadamente el 0,1 a aproximadamente el 20 por ciento en moles, o de aproximadamente el 0,1 a aproximadamente el 10 por ciento en moles, o de aproximadamente el 1 a aproximadamente el 5 por ciento en moles del contenido total de polímero de una nanopartícula de una primera macromolécula que comprende un copolímero PLGA-PEG o un copolímero PLA-PEG conjugado con un ligando que tiene un peso molecular promedio de aproximadamente 100 g/mol y 500 g/mol; y una segunda macromolécula que comprende un copolímero PLGA-PEG o un copolímero PLA-PEG, en los que el copolímero no está unido a un resto de direccionamiento; y un excipiente farmacéuticamente aceptable. Por ejemplo, el primer copolímero puede tener de aproximadamente el 0,001 y el 5 por ciento en peso del ligando con respecto al contenido total de polímero.
En algunas realizaciones, se considera una composición adecuada para congelación, que incluye nanopartículas desveladas en el presente documento y una solución adecuada para congelación, por ejemplo, se añade una solución de sacarosa a la suspensión de nanopartículas. La sacarosa puede actuar, por ejemplo, como un crioprotector para evitar que las partículas se agreguen al congelarlas. Por ejemplo, en el presente documento se proporciona una formulación de nanopartículas que comprenden una pluralidad de nanopartículas desveladas, sacarosa y agua; en los que la relación nanopartículas/sacarosa/agua es de aproximadamente el 3-30 %/10-30 %/50-90 % (p/p/p) o aproximadamente el 5-10 %/10-15 %/80-90 % (p/p/p).
Procedimientos de tratamiento
En algunas realizaciones, las partículas dirigidas de acuerdo con la presente invención se pueden usar para tratar, aliviar, mejorar, mitigar, retrasar el inicio de, inhibir el avance de, reducir la gravedad de y/o reducir la incidencia de, uno o más síntomas o características de una enfermedad, un trastorno y/o una afección. En algunas realizaciones, las partículas dirigidas de la invención se pueden usar para tratar tumores sólidos por ejemplo cáncer y/o células cancerosas. En ciertas realizaciones, las partículas dirigidas de la invención se pueden usar para tratar cualquier cáncer en el que se exprese el PSMA sobre la superficie de células cancerosas o la neovasculatura del tumor en un sujeto que lo necesita, incluida la neovasculatura de tumores sólidos de próstata o no prostáticos. Los ejemplos de indicaciones relacionadas con PSMA incluyen, pero no se limitan a, cáncer de próstata, cáncer de mama, carcinoma pulmonar no microcítico, carcinoma colorrectal y glioblastoma.
El término "cáncer" incluye cánceres premalignos así como malignos. Los cánceres incluyen, pero no se limitan a, cáncer de próstata, cáncer gástrico, cáncer colorrectal, cáncer de piel, por ejemplo, melanomas o carcinomas de células basales, cáncer de pulmón, cáncer de mama, cánceres de cabeza y cuello, cáncer bronquial, cáncer pancreático, cáncer de vejiga urinaria, cáncer cerebral o del sistema nervioso central, cáncer de sistema nervioso periférico, cáncer esofágico cáncer de la cavidad oral o la faringe, cáncer de hígado, cáncer de riñón, cáncer testicular, cáncer del tracto biliar, cáncer de intestino delgado o apéndice, cáncer de glándula salival, cáncer de glándula tiroides, cáncer de glándula suprarrenal, osteosarcoma, condrosarcoma, cáncer de tejidos hematológicos y similares. Las "células cancerosas" pueden estar en forma de un tumor, existir solas en un sujeto (por ejemplo células de leucemia), o ser líneas celulares derivadas de un cáncer.
El cáncer se puede asociar a una diversidad de síntomas físicos. Los síntomas del cáncer dependen generalmente del tipo y la ubicación del tumor. Por ejemplo, el cáncer de pulmón puede provocar tos, falta de aliento y dolor torácico, mientras que el cáncer de colon con frecuencia causa diarrea, estreñimiento y sangre en las heces. Sin embargo, para proporcionar unos pocos ejemplos, los síntomas siguientes se asocian en general, con frecuencia, a muchos tipos de cáncer: fiebre, escalofríos, sudoración nocturna, tos, disnea, pérdida de peso, pérdida del apetito, anorexia, náuseas, vómitos, diarrea, anemia, ictericia, hepatomegalia, hemoptisis, fatiga, malestar general, disfunción cognitiva, depresión, trastornos hormonales, neutropenia, dolor, úlceras que no cicatrizan, ganglios linfáticos agrandados, neuropatía periférica y disfunción sexual.
En un aspecto de la invención, se proporciona un procedimiento para el tratamiento del cáncer (por ejemplo el cáncer de próstata o de mama). En algunas realizaciones, el tratamiento del cáncer comprende administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de las partículas dirigidas de la invención a un sujeto que lo necesita, en tales cantidades y durante tal tiempo como sea necesario para conseguir el resultado deseado. En ciertas realizaciones de la presente invención una "cantidad terapéuticamente eficaz" de una partícula dirigida de la invención es la cantidad eficaz para tratar, aliviar, mejorar, mitigar, retrasar el inicio de, inhibir el avance de, reducir la gravedad de y/o reducir la incidencia de, uno o más síntomas o características del cáncer.
En un aspecto de la invención, se proporciona un procedimiento para administrar composiciones de la invención a un sujeto que sufre de cáncer (por ejemplo de cáncer de próstata). En algunas realizaciones, se proporcionan partículas a un sujeto en tales cantidades y portal tiempo como sea necesario para lograr el resultado deseado (es decir, el tratamiento del cáncer). En ciertas realizaciones de la presente invención una "cantidad terapéuticamente eficaz" de una partícula dirigida de la invención es la cantidad eficaz para tratar, aliviar, mejorar, mitigar, retrasar el inicio de, inhibir el avance de, reducir la gravedad de y/o reducir la incidencia de, uno o más síntomas o características del cáncer.
Los protocolos terapéuticos de la invención implican administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de una partícula dirigida de la invención a un individuo sano (es decir, un sujeto que no presenta ningún síntoma de cáncer y/o al que no se le ha diagnosticado cáncer). Por ejemplo, los individuos sanos pueden ser "vacunados" con una partícula dirigida de la invención antes de padecer cáncer y/o el inicio de los síntomas del cáncer; los individuos que corren riesgo (por ejemplo, pacientes que tienen antecedentes familiares de cáncer; pacientes que tienen una o más mutaciones genéticas asociadas a la aparición de cáncer; pacientes que tienen un polimorfismo genético asociado a la aparición de cáncer; pacientes infectados por un virus asociado a la aparición de cáncer; pacientes con hábitos y/o estilos de vida asociados a la aparición de cáncer; etc.) se pueden tratar sustancialmente contemporáneamente con (por ejemplo, dentro de las 48 horas, dentro de las 24 horas o dentro de las 12 horas ) el inicio de los síntomas del cáncer. Por supuesto los individuos que se sabe que padecen cáncer pueden recibir el tratamiento de la invención en cualquier momento.
En otras realizaciones, las nanopartículas de la presente invención se pueden usar para inhibir el crecimiento de células cancerosas, por ejemplo de células de cáncer prostático. Como se usa en el presente documento, la expresión "inhibe el crecimiento de células cancerosas" o "inhibe el crecimiento de células cancerosas" se refiere a reducir la velocidad de la proliferación y/o la migración de células cancerosas, detener la proliferación y/o la migración de células cancerosas, o provocar la muerte de las células cancerosas, de modo que la velocidad de crecimiento de las células cancerosas se reduzca en comparación con la velocidad observada o prevista de crecimiento de células cancerosas de control sin tratar. La expresión "inhibe el crecimiento" también se puede referir a una reducción en el tamaño o a la desaparición de una célula cancerosa o un tumor, así como a la reducción de su potencial metastásico. Preferentemente, dicha inhibición a nivel celular puede reducir el tamaño, impedir el crecimiento, reducir la agresividad, o prevenir o inhibir las metástasis de un cáncer en un paciente. Los expertos en la materia pueden determinar fácilmente, mediante cualquiera de una diversidad de indicios adecuados, si el crecimiento de las células cancerosas es inhibido.
La inhibición del crecimiento de células cancerosas puede ser evidenciada, por ejemplo, por detención de las células cancerosas en una fase particular del ciclo celular, por ejemplo, detener en la fase G2/M del ciclo celular. La inhibición del crecimiento de células cancerosas también se puede evidenciar por medición directa o indirecta del tamaño de las células cancerosas o el tumor. En pacientes humanos con cáncer, dichas mediciones se hacen generalmente usando procedimientos de formación de imágenes bien conocidos tales como resonancia magnética, tomografía computarizada axial y radiografías. El crecimiento de células cancerosas también se puede determinar indirectamente, determinando los niveles circulantes de antígeno carcinoembrionario, antígeno prostático específico u otros antígenos específicos del cáncer que se correlacionan con el crecimiento de células cancerosas. La inhibición del crecimiento del cáncer también se correlaciona generalmente con una supervivencia prolongada y/o mayor salud y bienestar del sujeto.
También se proporcionan en el presente documento procedimientos de administración a un paciente de una nanopartícula desvelada que incluye un agente activo, en los que, después de la administración al paciente, dichas nanopartículas reducen sustancialmente el volumen de distribución y/o reducen sustancialmente la Cmáx libre, en comparación con la administración del agente activo solo (es decir, no como una nanopartícula desvelada).
Ejemplos
La invención que se describe ahora en general, se comprenderá más fácilmente por referencia a los siguientes ejemplos, que se incluyen meramente con fines de ilustración de ciertos aspectos y realizaciones de la presente invención y no pretenden limitar la invención en modo alguno.
Ejemplo 1: Síntesis de un ligando de PSMA de bajo peso molecular (GL2)
Figure imgf000029_0001
Se disolvieron 5 g (10,67 mmol) del compuesto de partida en 150 ml de DMF anhidra. A esta solución se le añadió bromuro de alilo (6,3 ml, 72 mmol) y K2CO3 (1,47 g, 10,67 mmol). La reacción se agitó durante 2 h, se retiró el disolvente, el material en bruto se disolvió en AcOEt y se lavó con H2O hasta pH neutro. La fase orgánica se secó con MgSO4 (anhidro) y se evaporó para proporcionar 5,15 g (95 %) del material. (CCF en CH2Ch:MeOH 20:1 Rf = 0,9, comenzó Rf compuesto = 0,1, se reveló con ninhidrina y luz UV).
Figure imgf000029_0002
A una solución del compuesto (5,15 g, 10,13 mmol) en CH3CN (50 ml) se le añadió Et2NH (20 ml, 0,19 mol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 40 min. El disolvente se retiró y el compuesto se purificó por cromatografía en columna (hexano:AcOEt 3:2) para proporcionar 2,6 g (90 %). (CCF en CH2Ch:MeOH 10:1 Rf = 0,4, se reveló con ninhidrina (el compuesto tiene un color violeta). RMN-1H (CDCl3, 300 MHz) 8 5,95-5,85 (m, 1H, -CH2CHCH2), 5,36-5,24 (m, 2H, -CH2CHCH2), 4,62-4,60 (m, 3H, -CH2CHCH2, NHBoc), 3,46 (t, 1H, CH(Lys)), 3,11­ 3,07 (m, 2H, CH2NHBoc), 1,79 (s a, 2H, NH2), 1,79-1,43 (m, 6 H, 3 CH2(Lys)), 1,43 (s, 9H, Boc).
Figure imgf000030_0001
A una solución agitada de glutamato de dialilo (3,96 g, 15 mmol) y trifosgeno (1,47 g, 4,95 mmol) en CH2Ch(143 ml) a -78 °C se le añadió Et3N (6,4 ml, 46 mmol) en CH2Ch (28 ml). Se permitió que la mezcla de reacción se calentara a temperatura ambiente y se agitó durante 1,5 h. Después se añadió el derivado de lisina (2,6 g, 9,09 mmol) en una solución de CH2CI2 (36 ml) a -78 °C y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 12 h. La solución se diluyó con CH2Cl2, se lavó dos veces con H2O, se secó en MgSO4 (anh.) y se purificó por cromatografía en columna (hexano:AcOEt 3:1^2:1^AcOEt) para proporcionar 4 g (82 %) (c Cf en CH2Ch:MeoH 20:1 Rf = 0,3, se reveló con ninhidrina). RMN-1H (EDCls, 300 MHz) 8 5,97-5,84 (m, 3H, 3 -CH2CHCH2), 5,50 (t a, 2H, 2NHurea), 5,36-5,20 (m, 6H, 3-CH2CHCH2), 4,81 (s a, 1H, NHBoc), 4,68-4,40 (m, 8H, 3-CH2CHCH2, CH(Lys), CH(glu)), 3,09-3,05 (m, 2H, CH2NHBoc), 2,52-2,39 (m, 2H, CH2(glu.)), 2,25-2,14 y 2,02-1,92 (2m, 2H, CH2(glu.)), 1,87-1,64 (m, 4H, 2CH2(Lys)), 1,51-1,35 (m, 2H, CH2(Lys)), 1,44 (s, 9H, Boc).
Figure imgf000030_0002
A una solución del compuesto (4 g, 7,42 mmol) en CH2O 2 seco (40 ml) se le añadió TFA (9 ml) a 0 °C. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. El disolvente se retiró al vacío a sequedad total para proporcionar 4,1 g (cuantitativo). (CCF en CH2Ch:MeOH 20:1 Rf = 0,1, se reveló con ninhidrina). RMN-1H (CDCb, 300 MHz) 86,27-6,16 (2d, 2H, 2NHurea), 5,96-5,82 (m, 3H, 3-CH2CHCH2), 5,35-5,20 (m, 6H, 3-CH2CHCH2), 4,61-4,55 (m, 6H, 3-CH2CHCH2), 4,46-4,41 (m, 2H, CH(Lys), CH(glu)), 2,99 (m, 2H, CH2NHBoc), 2,46 (m, 2H, CH2(glu.)), 2,23-2,11 y 2,01-1,88 (2m, 2H, CH2(glu.)), 1,88-1,67 (m, 4H, 2CH2(Lys)), 1,45 (m, 2H, CH2(Lys)).
Figure imgf000030_0003
A una solución del compuesto (2 g, 3,6 mmol) en DMF (anh.) (62 ml) en atmósfera de argón se le añadió Pd(PPh3)4 (0,7 g, 0,6 mmol) y morfolina (5,4 ml, 60,7 mmol) a 0 °C. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. El disolvente se retiró. Después el producto en bruto se lavó dos veces con CH2Cl2 y después se disolvió en H2O. A esta solución se le añadió una solución diluida de NaOH (0,01 N) hasta que el pH fue muy básico. El disolvente se retiró a presión reducida. El sólido se volvió a lavar con CH2Cl2, AcOEt y una mezcla de MeOH-CH2Cl2 (1:1), se disolvió en H2O y se neutralizó con resina Amberlite IR-120 H+. El disolvente se evaporó y el compuesto se precipitó con MeOH, para proporcionar 1 g (87 %) de GL2. RMN-1H (D2O, 300 MHz) 84,07 (m, 2H, CH(Lys), CH(glu)), 2,98 (m, 2H, CH2NH2), 2,36 (m, 2H, CH2(glu.)), 2,08-2,00 (m, 1H, CH2(glu)), 1,93-1,60 (m, 5H, CH2(glu.), 2CH2(Lys)), 1,41 (m, 2H, CH2(Lys)). IEN de masas: 320,47 [M H+], 342,42 [M Na+].
Ejemplo 2: Síntesis de un ligando de PSMA de bajo peso molecular (GL1)
Figure imgf000031_0001
Se disolvieron 130 mg (0,258 mmol) del compuesto de partida en 3 ml de DMF anhidra. A esta solución se le añadió bromuro de alilo (150 pl, 1,72 mmol) y K2CO3 (41 mg, 0,3 mmol). La reacción se agitó durante 1 h, se retiró el disolvente, el producto en bruto se disolvió en AcOEt y se lavó con H2O hasta pH neutro. La fase orgánica se secó con MgSO4 (anhidro) y se evaporó para proporcionar 130 mg (93 %). (CCF en CH2Ch:MeOH 20:1 Rf = 0,9, comenzó Rf del compuesto = 0,1, se reveló con ninhidrina y luz UV).RMN-1H (CdCl3, 300 MHz) 87,81-7,05 (12H, aromáticos), 6,81 (s a, 1H, NHFmoc), 5,93-5,81. (m, 1H, -CH2CHCH2), 5,35-5,24 (m, 2H, -CH2CHCH2), 5,00 (d a, 1H, NHboc), 4,61-4,53 (m, 5H, -CH2CHCH2, CH2(Fmoc), CH(pheaIa.)), 4,28 (t, 1H, CH(Fmoc)), 3,12-2,98 (m, 2H, CH2(pheaIa.), 1,44 (s, 9H, Boc).
Figure imgf000031_0002
A una solución del compuesto (120 mg, 0,221 mmol) en CH2Cl2 seco (2 ml) se le añadió TFA (1 ml) a 0 °C. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. El disolvente se retiró al vacío, se añadió agua y se volvió a retirar, se añadió CH2O 2 y se volvió a retirar a sequedad total para proporcionar 120 mg (cuantitativo). (CCF en CH2Cl2:MeOH 20:1 Rf = 0,1, se reveló con ninhidrina y luz UV). RMN-1H (CDCI3, 300 MHz) 8 7,80-7,00 (13H, aromáticos, NHFmoc), 5,90-5,75 (m, 1H, -CH2CHCH2), 5,35-5,19 (m, 3H, -CH2CHCH2, NHboc), 4,70-4,40 (2m, 5H, -CH2CHCH2, CH2(Fmoc), CH(pheala.)), 4,20 (t, 1H, CH(Fmoc)), 3,40-3,05 (m, 2H, CH2(pheala.)).
Figure imgf000031_0003
A una solución agitada de glutamato de dialilo (110 mg, 0,42 mmol) y trifosgeno (43 mg, 0,14 mmol) en CH2Ch(4 ml) a -78 °C se le añadió Et3N (180 pl, 1,3 mmol) en CH2CI2 (0,8 ml). Se permitió que la mezcla de reacción se calentara a temperatura ambiente y se agitó durante 1,5 h. Después se añadió el derivado de fenilalanina (140 mg, 0,251 mmol) en una solución de CH2CI2 (1 ml) y Et3N (70 pl, 0,5 mmol) a -78 °C y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 12 h. La solución se diluyó con CH2CI2, se lavó dos veces con H2O, se secó en MgSo4 (anh.) y se purificó por cromatografía en columna (hexano:AcOEt 3:1) para proporcionar 100 mg (57 %) (CCF en CH2Ch:MeOH 20:1 Rf = 0,3, se reveló con ninhidrina y luz UV). RMN-1H (CDCI3, 300 MHz) 8 7,80-6,95 (13H, aromáticos, NHFmoc), 5,98-5,82 (m, 3H, 3 -CH2CHCH2), 5,54 (d a, 1H, NHurea),5,43-5,19 (m, 7H, 3 -CH2CHCH2, NHurea), 4,85­ 4,78 (m, 1H, CH(pheaIa.)), 4,67-4,50 (m, 9H, 3-CH2CHCH2, CH2(Fmoc), CH(gIu.)), 4,28 (t, 1H, CH(Fmoc)), 3,05 (d, 2H, CH2(pheaIa.)), 2,53-2,33 (m, 2H, CH2(gIu.)), 2,25-2,11 y 1,98-1,80 (2m, 2H, CH2(gIu.)).
Figure imgf000032_0001
A una solución del compuesto de partida (60 mg, 0,086 mmol) en CH3CN (1 ml) se le añadió Et2NH (1 ml, 10 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 40 min. El disolvente se retiró y el compuesto se purificó por cromatografía en columna (hexano:AcOEt 2:1) para proporcionar 35 mg (85 %). (CCF en CH2CI2:MeOH 10:1 Rf = 0,5, comenzó Rf compuesto = 0,75, se reveló con ninhidrina (el compuesto tiene color violeta) y luz UV). RMN-1H (CDCI3, 300 MHz) 86,85 y 6,55 (2d, 4H, aromáticos), 5,98-5,82 (m, 3H, 3-CH2CHCH2), 5,56 (d a, 1H, NHurea), 5,44­ 5,18 (m, 7H, 3-CH2CHCH2, NHurea), 4,79-4,72 (m, 1H, CH(pheaIa.)), 4,65-4,49 (m, 7H, 3 -CH2CHCH2, CH(gIu.)), 3,64 (s a, 2H, NH2), 3,02-2,89 (m, 2H, CH2(pheaIa.)), 2,49-2,31 (m, 2H, CH2(gIu.)), 2,20-2,09 y 1,91-1,78 (2m, 2H, CH2(gIu.)).
Figure imgf000032_0002
A una solución del compuesto (50 mg, 0,105 mmol) en DMF (anh., 1,5 ml) en atmósfera de argón se le añadió Pd(PPh3)4 (21 mg, 0,018 mmol) y morfolina (154 |jl, 1,77 mmol) a 0 °C. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. Se retiró el disolvente. El material en bruto se lavó dos veces con CH2O 2 y después se disolvió en H2O. A esta solución se le añadió una solución diluida de NaOH (0,01 N) hasta que el pH fue muy básico. El disolvente se retiró a presión reducida. El sólido se volvió a lavar con CH2Cl2, AcOEt y mezcla de MeOH-CH2Cl2 (1:1), se disolvió en H2O y se neutralizó con resina Amberlite IR-120 H+. El disolvente se evaporó y el compuesto se precipitó con MeOH, para proporcionar 25 mg (67 %) de GL1. RMN-1H (D2O, 300 MHz) 87,08 y 6,79 (2d, 4H, aromáticos), 4,21 (m, 1H, CH(pheala.)), 3,90 (m, 1H, CH(glu.)), 2,99 y 2,82 (2dd, 2H, CH2(pheala.)), 2,22-2,11 (m, 2H, CH2(glu.)), 2,05­ 1,70 (2m, 2H, CH2(glu.)). RMN-13C (D2O, 75 MHz) 8 176,8, 174,5, 173,9 (3 COO), 153,3 (NHCONH), 138,8 (H2N-C(Ph)), 124,5, 122,9, 110,9 (aromáticos), 51,3 (CH(pheala.)), 49,8 (CH(glu.)), 31,8 (CH2(pheala.)), 28,4 y 23,6 (2CH2-glu.)). IEN de masas: 354,19 [M H+], 376,23 [M Na+].
Ejemplo 3: Preparación de PLA-PEG
La síntesis se realizó mediante polimerización de apertura del anillo de d, 1 -láctido con a-hidroxi-wmetoxipoli(etilenglicol) como el iniciador macro y se realizó a una temperatura elevada usando 2-etilhexanoato de estaño (II) como catalizador, como se muestra a continuación (PEG Pn (peso molecular promedio en número) “ 5.000 Da; PLA Pn « 16.000 Da; PEG-PLA Pn « 21.000 Da)
Figure imgf000032_0003
El polímero se purificó disolviéndo el polímero en diclorometano y precipitándolo en una mezcla de hexano y éter dietílico. El polímero recuperado de este paso se debe secar en una estufa.
Ejemplo 4: Preparación de PLA-PEG-Ligando
La síntesis, que se muestra en la figura 2, comienza con la conversión de FMOC, BOC lisina en FMOC, BOC, alil lisina haciendo reaccionar FMOC, BOC lisina con bromuro de alilo y carbonato de potasio en dimetilformamida, seguido de tratamiento con dietilamina en acetonitrilo. Después se hace reaccionar BOC, alil lisina con trifosgeno y glutamato de dialilo, seguido de tratamiento con ácido trifluoroacético en cloruro de metileno para proporcionar el compuesto "GL2P".
La cadena lateral amina de la lisina en GL2P se pegila después mediante adición de hidroxil-PEG-ácido carboxílico con EDC y NHS. La conjugación de GL2P a PEG es a través de una unión amida. La estructura de este compuesto resultante es etiquetada "HO-PEG-GL2P". Después de la pegilación, se usa polimerización por apertura del anillo (ROP, del inglés ring opening polymerization) de d, 1 -láctido con el grupo hidroxilo de HO-PEG-GL2P como iniciador para unir un polímero en bloque de poliláctido a HO-PEG-GL2P a través de un enlace éster para proporcionar "PLA-PEG-GL2P". Se usa 2-etilhexanoato de estaño (II) como catalizador para la polimerización de apertura del anillo. Finalmente, se retiran los grupos alilo de PLA-PEG-GL2P usando morfolina y tetraquis(trifenilfosfina)paladio (como catalizador) en diclorometano, para proporcionar el producto final PLA-PEG-Ligando. El compuesto final se purifica por precipitación en éter dietílico/hexano 30/70 % (v/v).
Ejemplo 5: Preparación de nanopartículas -Nanoprecipitación
Se pueden preparar nanopartículas utilizando ligando GL1 o GL2. El inhibidor de PSMA a base de urea GL2, que tiene un grupo amino libre ubicado en una región no crítica para la unión de PSMA, se sintetiza a partir de materiales de partida disponibles en el mercado Boc-Phe(4NHFmoc)-OH y ácido dialil glutámico de acuerdo con el procedimiento que se muestra en el esquema 1. Las nanopartículas se forman usando nanoprecipitación. El conjugado polímero-ligando se disuelve en un disolvente orgánico miscible con agua junto con un fármaco u otro agente para seguir la absorción de la partícula. Se puede incluir un polímero no funcionalizado adicional para modular la densidad superficial del ligando. La solución de polímero se dispersa en una fase acuosa y las partículas resultantes se recogen por filtración. Las partículas se pueden secar o analizar inmediatamente con relación a la absorción celular in vitro o la actividad antitumor prostético in vivo.
Figure imgf000033_0001
Ejemplo 6: Preparación de nanopartículas - Procedimiento de emulsión
Se forma una fase orgánica compuesta por un 5 % de sólidos (% en peso) que incluye un 2 % de copolímero en dibloque poli(láctido-co-glicólido)-poli(etilenglicol) (PLGA-PEG; 45 kDa-5 kDa), un 2% de poli(D, L-láctido) (PLA; 8,5 kDa) y un 1 % de docetaxel (DTXL) en los que el docetaxel tiene la estructura
Figure imgf000034_0001
Los disolventes orgánicos son acetato de etilo (EA) y alcohol bencílico (BA) en los que BA constituye el 20 % (% en peso) de la fase orgánica. Se usa BA en parte para solubilizar el docetaxel. La fase orgánica se mezcla con una fase acuosa en una relación de aproximadamente 1:5 (fase oleosa:fase acuosa) en la que la fase acuosa está compuesta por un 0,5 % de colato de sodio, un 2 % de BA y un 4 % de EA (% en peso) en agua. La emulsión primaria se forma combinando las dos fases por mezcla simple o mediante el uso de un homogeneizador de rotor y estator. La emulsión primaria se convierte después en una emulsión fina mediante el uso de una sonda de ultrasonido o un homogeneizador de alta presión.
Después la emulsión fina se enfría añadiendo un medio de enfriamiento enfriado (0-5 °C) de agua desionizada mientras se mezcla. La relación medio de enfriamiento:emulsión es de aproximadamente 8,5:1. Después se añade una solución del 25 % (% en peso) de Tween 80 al medio de enfriamiento para obtener aproximadamente el 2 % de Tween 80 total. Después las nanopartículas se aíslan por centrifugación o ultrafiltración/diafiltración. Posteriormente, la suspensión de nanopartículas se puede congelar con un crioprotector, tal como sacarosa al 10 % en peso.
Se encontró que la adición de PLA además del copolímero PLGA-PEG aumentaba significativamente la carga de fármaco. Es posible el uso de BA por sí mismo también sirva para aumentar la eficiencia de la encapsulación, aumentando la eficiencia de la encapsulación aun cuando el BA no fuera necesario para solubilizar el DTXL. Se encontró que la temperatura del medio de enfriamiento tenía un papel fundamental en la carga de fármaco. El uso de un medio de enfriamiento frío (generalmente mantenido a 0-5 °C) aumentó significativamente la carga de fármaco en comparación con la carga de fármaco cuando se usó un medio de enfriamiento a temperatura ambiente.
El DTXL tiene una solubilidad muy baja en agua y se encontró que el DTXL no encapsulado con frecuencia formaba cristales que eran difíciles de aislar de las nanopartículas formadas. Se añadió solubilizante de fármaco (Tween 80) después de que se hubiera enfriado la emulsión fina. El Tween 80 es capaz de solubilizar eficazmente los cristales de DTXL y permitir el aislamiento de nanopartículas de DTXL no encapsulado evitando la formación de cristales de DTXL y/o solubilizando eficazmente todos los cristales de DTXL que se formaron cuando se templó la emulsión fina. Un conjunto convencional de condiciones de nanoemulsión fueron las siguientes:
Control:
Figure imgf000034_0002
La adición de homopolímero como aditivo produjo una mayor carga de fármaco si bien el tamaño de partícula es menor, como se muestra a continuación:
Figure imgf000035_0002
Temperatura de enfriamiento
En este caso el control utilizado para la comparación es diferente del control anterior, ya que éste ya se realizó a temperatura de enfriamiento fría.
Figure imgf000035_0001
Parámetros de ejemplo
Figure imgf000036_0001
Ejemplo 7: Procedimiento de emulsión
El procedimiento que se describe a continuación usa un aumento en el contenido de sólidos de la fase oleosa Un diagrama de flujo general del procedimiento se describe en la figura 3 y un diagrama de flujo del procedimiento se representa en la figura 4. Reduciendo el contenido de disolvente de la fase oleosa emulsionada, se pierde menos fármaco en el líquido de enfriamiento cuando las nanopartículas se endurecen. Se elige un sistema de sólidos y disolvente para evitar que sea excesivamente viscoso, que puede limitar la capacidad de emulsionarse en gotitas de ~100 nm. El uso de un copolímero de peso molecular relativamente bajo (PLA-PEG de ~16 kDa-5 kDa) y homopolímero de bajo peso molecular (PLA de ~7 kDa) permite que la formulación mantenga una viscosidad suficientemente baja con un elevado contenido de sólidos. Se elige un sistema de disolventes que tenga un poder de solvatación adecuado para mantener el fármaco en solución a concentraciones altas. El uso de un sistema cosolvente (normalmente acetato de etilo:alcohol bencílico 79:21) permite una solución continua de hasta el 50 % de sólidos con una mezcla polímero:docetaxel 80:20.
Se forma una fase orgánica compuesta por una mezcla de docetaxel (DTXL) y polímero (homopolímero, copolímero y copolímero con ligando). La fase orgánica se mezcla con una fase acuosa a una relación de aproximadamente 1:5 (fase oleosa:fase acuosa) en la que la fase acuosa está compuesta por un tensioactivo y algo de disolvente disuelto. Para conseguir una carga de fármaco elevada, se usa aproximadamente el 30 % de sólidos en la fase orgánica. Se forma una fase orgánica compuesta por una mezcla de docetaxel (DTXL) y polímero (homopolímero, copolímero y copolímero con ligando). Las composiciones y disolventes orgánicos se enumeran en la tabla. La fase orgánica se mezcla con una fase acuosa a una relación de aproximadamente 1:5 (fase oleosa:fase acuosa) en la que la fase acuosa está compuesta por un tensioactivo y algo de disolvente disuelto. La emulsión primaria se forma combinando las dos fases por mezcla simple o mediante el uso de un homogeneizador de rotor y estator. La emulsión primaria se convierte después en una emulsión fina mediante el uso de un homogeneizador de alta presión. Después la emulsión fina se enfría añadiendo agua desionizada a una temperatura dada (enumerada en la tabla) mientras se mezcla. La relación medio de enfriamiento:emulsión es de aproximadamente 8,5:1. Después se añade una solución del 25 % (% en peso) de Tween 80 al medio de enfriamiento para obtener aproximadamente el 2 % de Tween 80 total. Esto sirve para disolver el fármaco libre, no encapsulado y hace factible el procedimiento de aislamiento de la nanopartícula. Después las nanopartículas se aíslan por centrifugación o ultrafiltración/diafiltración.
Control
A continuación se proporciona un conjunto convencional de condiciones de nanoemulsión. Se forman partículas que no contienen ligando (nanopartículas no dirigidas).
Figure imgf000037_0002
10 % de sólidos
Figure imgf000037_0001
20 % de sólidos
Figure imgf000038_0001
40 % de sólidos
Figure imgf000038_0002
30 % de sólidos con mayor concentración de tensioactivo para la reducción del tamaño de partícula; lote de nanopartícula dirigida.
Figure imgf000039_0001
Ejemplo 8: Preparación de nanopartículas - Procedimiento de emulsión 2
Se forma una fase orgánica compuesta por una mezcla de docetaxel (DTXL) y polímero (homopolímero, copolímero y copolímero con ligando). La fase orgánica se mezcla con una fase acuosa a una relación de aproximadamente 1:5 (fase oleosa:fase acuosa) en la que la fase acuosa está compuesta por un tensioactivo y algo de disolvente disuelto. Para lograr una carga de fármaco elevada, se usa aproximadamente el 30 % de sólidos en la fase orgánica.
La emulsión gruesa primaria se forma combinando las dos fases por mezcla simple o mediante el uso de un homogeneizador de rotor y estator. El rotor/estator produjo una solución lechosa homogénea, mientras que la barra de agitación produjo una emulsión gruesa visiblemente más grande. Se observó que el procedimiento de la barra de agitación dio como resultado gotitas de fase oleosa significativas que se adhirieren al lateral del vaso de alimentación, lo que sugiere que si bien el tamaño de la emulsión gruesa no es un parámetro crítico del procedimiento para la calidad, se debe hacer suficientemente fina para evitar pérdidas de rendimiento o separación de fase. Por tanto, el rotor y estator se usan como el procedimiento convencional de formación de la emulsión gruesa, aunque puede ser adecuado un mezclador de alta velocidad a una escala mayor.
La emulsión primaria se convierte después en una emulsión fina mediante el uso de un homogeneizador de alta presión. El tamaño de la emulsión gruesa no afecta significativamente al tamaño de partícula después de los pases sucesivos (103) a través del homogeneizador. M-110-EH (Figura 5).
Se encontró que la presión de alimentación del homogeneizador tenía un impacto significativo sobre el tamaño de partícula resultante. En los homogeneizadores tanto neumáticos como eléctricos M-110EH, se encontró que reducir la presión de alimentación también reducía el tamaño de partícula (Figura 6). Por tanto, la presión operativa convencional utilizada para el M-110EH es 27,57-34,46 MPa por cámara de interacción, que es la presión de procesamiento mínima de la unidad. El M-110EH también tiene la opción de una o dos cámaras de interacción. Viene por defecto con una cámara Y restrictiva, en serie con una cámara Z menos restrictiva de 200 |jm. Se encontró que el tamaño de partícula se redujo realmente cuando se retiró la cámara Y y se la reemplazó por una cámara de blanco. Además, retirar la cámara Y aumentó significativamente la velocidad de flujo de emulsión durante el procesamiento.
Después de 2-3 pases el tamaño de partícula no se redujo significativamente y los pases sucesivos incluso pueden provocar un aumento del tamaño de partícula. Los resultados se resumen en la figura 7, en la que la fase orgánica placebo consistía en un 25,5% de polímero combinado de 50:50 16,5/5 PLA/PEG:8,2 PLA. La fase orgánica se emulsionó 5:1 O:W con fase acuosa convencional y se realizaron múltiples pases discretos, enfriando una pequeña porción de la emulsión después de cada pase. La escala indicada representa los sólidos totales de la formulación. El efecto de la escala sobre el tamaño de partícula mostró una sorprendente dependencia de la escala. La tendencia muestra que en el intervalo de tamaño del lote de 2-10 g, los lotes más grandes producen partículas más pequeñas. Se demostró que esta dependencia de la escala se elimina al considerar lotes a escala superior a 10 g. La cantidad de sólidos utilizados en la fase oleosa fue de aproximadamente el 30 %. Las figuras 8 y 9 representan los efectos de la concentración de sólidos sobre el tamaño de partícula y la carga de fármaco; con la excepción de las series 15­ 175, todos los lotes son placebo. Para los lotes de placebo el valor de % de sólidos representa el % de sólidos cuando el fármaco está presente en el 20 % p/p convencional.
La tabla A resume los parámetros del procedimiento de emulsión.
TABLA A
Figure imgf000040_0001
Después la emulsión fina se enfría añadiendo agua desionizada a una temperatura dada mientras se mezcla. En la operación de la unidad de enfriamiento, la emulsión se añade a un medio de enfriamiento acuoso frío en agitación. Esto sirve para extraer una porción significativa de los disolventes de la fase oleosa, endureciendo eficazmente las nanopartículas para la filtración posterior. Enfriar el medio de enfriamiento mejoró significativamente la encapsulación del fármaco. La relación medio de enfriamiento:emulsión es de aproximadamente 5:1.
Se añade una solución del 35 % (% en peso) de Tween 80 al medio de enfriamiento para lograr aproximadamente el 2 % de Tween 80 total. Una vez que se enfría la emulsión se añade una solución de Tween 80 que actúa como solubilizante del fármaco, permitiendo la eliminación eficaz del fármaco no encapsulado durante la filtración. La tabla B indica cada uno de los parámetros del procedimiento de enfriamiento.
Figure imgf000040_0002
La temperatura debe mantenerse lo suficientemente fría con una suspensión suficientemente diluida (concentración suficientemente baja de disolventes) para mantenerse debajo de Tg de las partículas. Si la relación Q:E no es suficientemente alta, entonces la mayor concentración de disolvente plastifica las partículas y permite la filtración del fármaco. A la inversa, temperaturas menores permiten una elevada encapsulación del fármaco a bajas relaciones Q:E (~3:1), haciendo posible que el procedimiento tenga lugar más eficientemente.
Después las nanopartículas se aíslan a través de un procedimiento de filtración de flujo tangencial para concentrar la suspensión de nanopartículas y el intercambio de los disolventes, el fármaco libre y el solubilizante de fármacos de la solución de enfriamiento en agua. Se usa una membrana de celulosa regenerada con un peso molecular de corte (MWCO, del inglés molecular weight cutoff) de 300.
Se realiza una diafiltración (DF) de volumen constante para retirar los disolventes del medio de enfriamiento, el fármaco libre y el Tween-80. Para realizar una DF de volumen constante, se añade tampón al recipiente del retenido a la misma velocidad que se retira el filtrado. Los parámetros del procedimiento para las operaciones TFF se resumen en la tabla C. La velocidad de flujo cruzado se refiere a la velocidad de flujo de la solución a través de los canales de alimentación y a través de la membrana. Este flujo proporciona la fuerza para barrer las moléculas que pueden ensuciar la membrana y restringir el flujo de filtrado. La presión transmembrana es la fuerza que conduce las moléculas permeables a través de la membrana.
Figure imgf000041_0001
La suspensión de nanopartículas filtrada se cicla térmicamente a una temperatura elevada durante el tratamiento. Una porción pequeña (normalmente el 5-10%) del fármaco encapsulado se libera desde las nanopartículas muy rápidamente después de su exposición a 25 °C. Debido a este fenómeno, los lotes que se mantienen fríos durante todo el tratamiento son susceptibles de liberar fármaco o cristales de fármaco que se forman durante la administración o cualquier porción del almacenamiento no congelado. Exponiendo la suspensión de nanopartículas a temperatura elevada durante el tratamiento, se puede eliminar este fármaco "encapsulado libremente" y mejorar la estabilidad del producto a expensas de una gota más pequeña al cargar el fármaco. La tabla D resume dos ejemplos de procesamiento a 25 °C. Otros experimentos demostraron que el producto es suficientemente estable después de ~2-4 diavolúmenes para exponerlo a 25 °C sin perder la mayor parte del fármaco encapsulado. Se usan 5 diavolúmenes como la cantidad para el procesamiento en frío antes del tratamiento a 25 °C.
Tabla D:
Figure imgf000042_0001
Después del procedimiento de filtración la suspensión de nanopartículas se hace pasar a través de un filtro de grado esterilizante (0,2 |jm absoluto). Se usan prefiltros para proteger el filtro de grado esterilizante para usar una relación área de filtración/tiempo razonable para el procedimiento. Los valores se resumen en la tabla E.
Tabla E:
Figure imgf000042_0003
El tren de filtración es Ertel Alsop Micromedia XL filtro de profundidad M953P membrana (0,2 jm Nominal); Pall SUPRAcap con Seitz EKSP medio de filtración en profundidad (0,1 - 0,3 jm Nominal); Pall Life Sciences Supor EKV 0,65/ 0,2 micrómetros filtro PES de grado esterilizante.
Se pueden usar 0,2 m2 de superficie de filtración por kg de nanopartículas para los filtros de profundidad y 1,3 m2 de superficie de filtración por kg de nanopartículas para los filtros de grado esterilizante.
Ejemplo 9
Se pueden preparar nanopartículas específicas para la diana que incluyan un conjugado de polímero biocompatible con, por ejemplo, PEG, los quimioterápicos descritos en el presente documento y opcionalmente conjugado con GL1 o GL2. Las nanopartículas de ejemplo se muestran en la tabla 1 a continuación:
Figure imgf000042_0002
continuación
Figure imgf000043_0001
continuación
Figure imgf000044_0001
continuación
Figure imgf000045_0001
Ejemplo 10
Las nanopartículas que se muestran en la tabla 2 se preparan utilizando el procedimiento del ejemplo 8. Las nanopartículas que comprenden macromoléculas de PLGA-PEG y macromoléculas de PLGA-PEG-ligando de molécula pequeña (SML, del inglés small molecule ligand) se prepararon como se muestra en los estudios 1 y 2, a continuación. En los estudios 3 y 4, se prepararon nanopartículas que comprendían macromoléculas de PLA-PEG, macromoléculas de PLGA-PEG-SML y macromoléculas de PLA (DB = copolímero en dibloque).
La relación entre macromoléculas funcionalizadas con restos de direccionamiento de molécula pequeña y macromoléculas no funcionalizadas se puede ajustar y usando el estudio 1, se pueden preparar nanopartículas con composiciones poliméricas que son aproximadamente el 0,94 % en moles, el 4,63 % en moles y el 9,01 % en moles de macromoléculas funcionalizadas (véase "% en moles de DB-GL2 del Polím. total"). Además, usando esos procedimientos, se pueden preparar nanopartículas que comprenden aproximadamente el 0,015, el 0,073 y el 0,143 % en peso de ligando de molécula con respecto al polímero total (véase "% en peso de GL2 polim. w rt"). También se pueden preparar nanopartículas con polímeros funcionalizados que constituyen aproximadamente el 0,1 - 30, por ejemplo, el 0,1 - 20, por ejemplo, el 0 ,1-10 por ciento en moles de toda la composición polimérica de la nanopartícula, así como nanopartículas que tienen un porcentaje en peso de ligando de bajo peso molecular respecto al polímero total entre 0,001 y 5, por ejemplo, entre 0,001 y 2, por ejemplo, entre 0,001 y 1.
Figure imgf000046_0001
Figure imgf000046_0002
continuación
Figure imgf000047_0001
Ejemplo 11
Se forman diversas formulaciones de nanopartículas usando el procedimiento del ejemplo 8 como se describe y compara en la tabla F:
Tabla F:
Figure imgf000047_0002
continuación
Figure imgf000048_0001
Se puede lograr un tamaño de partícula óptimo sin usar homopolímero PLA y sin sacrificar significativamente la carga de fármaco, como se muestra en la figura 10. Los lotes con homopolímero PLA liberan el fármaco significativamente más rápido que los lotes fabricados usando copolímero solo (Figura 11). Los diversos tipos de polímero y pesos moleculares no añadieron valor adicional en la optimización de la carga de fármaco y el tamaño de partícula. Al contrario, al 15% de sólidos totales con "polímero alternativo" los tamaños de partícula fueron normalmente más grandes que un tamaño buscado de 100-120 nm. La incorporación de alcohol cetílico al 5 % en peso aumentó en general la velocidad de liberación in vitro (Figura 12).
Ejemplo 12 Crioprotector
La congelación de una suspensión de una nanoemulsión de nanopartículas en agua desionizada sola da como resultado la agregación de partículas. Se cree que esto se debe a la cristalización y enredo de las cadenas de PEG en la superficie de las nanopartículas (Jaeghere y col.; Pharmaceutical Research 16(6), págs. 859-852). Los excipientes a base de azúcar (sacarosa, trehalosa o manitol) pueden actuar como crioprotectores de las nanopartículas en condiciones de congelación/descongelación, a una concentración tan baja como del 1 % en peso para suspensiones de nanopartículas diluidas (~10 mg/ml). Una formulación incluye sacarosa al 10 % en peso, que contiene sacarosa en exceso a la necesaria y es la misma osmolalidad que la solución salina fisiológica
La tabla G muestra que el copolímero 16/5 PLA-PEG es menos susceptible a la agregación por congelacióndescongelación.
Tabla G
Figure imgf000048_0002
Ejemplo 13 Retirada del paladio
Basándose en un nivel de dosis (pg/día) en ensayos clínicos humanos, un nivel máximo aceptable de paladio en una composición PLA-PEG-GL2 es aproximadamente 10 ppm. Se cargaron soluciones de polímero (PLA-PEG-GL2) (20 o 35 mg/ml) en diclorometano (DCM) en columnas de 5 g de resina (presolvatadas con 10 ml de DCM) y posteriormente se eluyeron usando 30 ml de DCM por gravedad. El polímero se recuperó mediante retirada del disolvente usando evaporación rotatoria seguida de secado al vacío a temperatura ambiente. La recuperación del polímero se determinó gravimétricamente y el contenido de paladio residual se determinó por espectroscopía con plasma acoplado inductivamente (ICP, del inglés Inductively Coupled Plasma) en Galbraith Laboratories Inc.
Tabla H
Figure imgf000049_0001
Como se ve en la tabla H, las funcionalidades tiol, TMT, urea y tiourea llevaron los niveles de paladio por debajo de 50 ppm, a la carga de polímero por unidad de peso de resina evaluada. Sin embargo, solo la resina de TMT (trimecaptotriazina) produjo una buena recuperación del polímero (>90 %). Además, la resina de TMT también produjo contenidos de paladio por debajo del umbral de aceptación de 10 ppm. Pareció haber alguna variabilidad de los resultados dependiendo de las condiciones experimentales utilizadas. En particular, la retirada del paladio fue más eficaz cuando la columna de 5 g de resina de TMT se cargó con 1050 mg de polímero. Esto puede deberse al mayor tiempo de residencia de la especie polimérica y el catalizador de paladio en esas condiciones experimentales. Ejemplo 14 Formulación
Una formulación que incluya nanopartículas de PLA-PEG-ligando, PLA, PLA-PEG y docetaxel, en una composición de sacarosa/agua está formada por:
Figure imgf000049_0002
Ejemplo 15 - Liberación in vitro
Se usa un procedimiento de liberación in vitro para determinar la fase de aceleración inicial de la liberación desde esas nanopartículas, tanto a temperatura ambiente como a 37 °C. Para mantener las condiciones de libre saturación y evitar que las nanopartículas ingresen en las muestras de liberación, se diseñó un sistema de diálisis. Después de obtener una ultracentrífuga capaz de sedimentar partículas de 100 nm, se retiraron las membranas de diálisis y se usó centrifugación para separar el fármaco liberado del fármaco encapsulado.
El sistema de diálisis es como se indica a continuación: se colocan por pipeteo 3 ml de suspensión de nanopartículas de docetaxel (aprox 250 |jg/ml de nanopartículas de fármaco/PLGA/PLA, correspondientes a una concentración de sólido de 2,5 mg/ml) en agua DI, en un tubo interior de un dializador de un MWCO de 300 kDa. La nanopartícula se suspende en este medio. El dializador se coloca en frascos de vidrio que contienen 130 ml de medio de liberación (hidroxil beta ciclodextrina al 2,5 % en PBS), que es continuamente agitado a 150 rpm usando un agitador para evitar la formación de una capa de agua sin agitar en la superficie de contacto de membrana/solución externa. A tiempos predeterminados, se extrajeron alícuotas de las muestras (1 ml) de la solución externa (dializado) y se analizaron para determinar la concentración de docetaxel por HPLC.
El sistema centrífugo se opera usando condiciones similares, a menores volúmenes de suspensión, sin bolsas de diálisis. Las muestras se centrifugan a 60.000 g durante 30 minutos y el sobrenadante se somete a ensayo para determinar el contenido de fármaco respecto al fármaco liberado medido.
Ejemplo 16 Liberación in vitro de nanopartículas de docetaxel
Una suspensión de nanopartículas de docetaxel preparada como en el ejemplo 8 (docetaxel al 10% en peso y polímero al 90 % en peso (PLA-PEG-GL2 al 1,25 % en peso y PLA-PEG al 98,75 % en peso, Pn de PLA = 16 Da; Pn de PEG = 5 Da) se colocó en un módulo de diálisis y se incubó en un depósito de PBS a 37 °C con agitación. Se recogieron muestras del dializado y se analizaron para determinar docetaxel utilizando HPLC de fase inversa. A efectos comparativos, se sometió docetaxel convencional al mismo procedimiento. La figura 13 describe el perfil de liberación in vitro de las nanopartículas en comparación con el docetaxel convencional. La liberación del docetaxel encapsulado de la matriz polimérica fue esencialmente lineal en las primeras 24 horas siendo el resto liberado gradualmente de las partículas en un período de aproximadamente 96 horas.
Ejemplo 17 Nanopartículas de sirolimus
Se prepararon lotes de nanopartículas usando el procedimiento general del ejemplo 8, con polímero-PEG o polímero-PEG al 80 % (p/p) con homopolímero de PLA al 40 % (p/p) cada uno, con un lote de porcentaje total de sólidos del 5 %, el 15 % y el 30 %. Los disolventes utilizados fueron: alcohol bencílico al 21 % y acetato de etilo al 79 % (p/p). Para cada lote de 2 g de tamaño, se usaron 400 mg de fármaco y 1,6 g de 16-5 polímero-PEG o 0,8 g de 16-5 polímero-PEG 0,8 g de PLA (homopolímero) de 10 kDa. Se usó el polímero en dibloque 16-5 PLA-PEG o PLGA-PEG (50:50 L:G) y cuando se usó, el homopolímero: PLA con un Pn = 6,5 kDa, Pm (peso molecular promedio en masa) =10 kDa y Pm/Pn =1,55.
La fase orgánica (fármaco y polímero) se preparó en lotes de 2 g: añadir fármaco y polímero o polímeros a un vial de centelleo de 20 ml. La masa de disolventes necesaria a la concentración en % de sólidos, se muestra a continuación:
i. 5 % de sólidos: 7,98 g de alcohol bencílico 30,02 g de acetato de etilo
ii. 15 % de sólidos: 2,38 g de alcohol bencílico 8,95 g de acetato de etilo
iii. 30 % de sólidos: 0,98 g de alcohol bencílico 3,69 g de acetato de etilo
Se prepara una solución acuosa con colato de sodio al 0,5 %, alcohol bencílico al 2 % y acetato de etilo al 4 % en agua. A un frasco de 2 l añadir 7,5 g de colato de sodio, 1402,5 g de agua DI, 30 g de alcohol bencílico y 60 g de acetato de etilo y mezclar sobre placa de agitación hasta disolución.
Para formar la emulsión, se usa una relación entre fase acuosa y fase oleosa de 5:1. La fase orgánica se vierte en la solución acuosa y se homogeniza usando IKA durante 10 segundos a temperatura ambiente para formar una emulsión gruesa. La solución se introduce a través del homogeneizador (110S) a 62,05 MPa (0,06 MPa de manómetro) para 2 pases discretos para formar la nanoemulsión.
La emulsión se vierte en el medio de enfriamiento (agua D.I.) a <5 °C mientras se agita sobre la placa de agitación. La relación de medio de enfriamiento a emulsión es de 8:1. Se añade Tween 80 al 35 % (p/p) en agua al medio de enfriamiento en una relación de 25:1 de Tween 80 a fármaco. Las nanopartículas se concentran a través de TFF y el medio de enfriamiento se concentra en TFF con módulo Pall de.500 kDa (membrana 2) hasta ~100 ml. Se usa diafiltración utilizando ~20 diavolúmenes (2 litros) de agua DI fría y el volumen se reduce hasta un volumen mínimo y después se recoge la suspensión final, ~100 ml. Se determina la concentración de sólidos de la suspensión final sin filtrar, usando un vial de centelleo de 20 ml tarado, añadiendo 4 ml de suspensión final y secando al vacío en liofilizador/estufa y se determina el peso de las nanopartículas en los 4 ml de suspensión seca. Se añade sacarosa concentrada (0,666 g/g) a la muestra de suspensión final para obtener sacarosa al 10 %.
La concentración de sólidos de la suspensión final filtrada por 0,45 um se determinó filtrando aproximadamente 5 ml de muestra de suspensión final antes de añadir la sacarosa a través de un filtro de jeringa de 0,45 jm; a un vial de centelleo de 20 ml tarado se le añadieron 4 ml de muestra filtrada y se secó al vacío en liofilizador/estufa.
La muestra restante de la suspensión final sin filtrar se congeló con sacarosa. Formulaciones de rapamicina (sirolimus):
Figure imgf000051_0001
El efecto del contenido de sólidos y las inclusiones de homopolímero de ácido poli(láctico) se muestran en la figura 14.
Se estudian experimentos de liberación in vitro dispersando nanopartículas en PBS que contienen el 10 %(p/p) de Tween 20 (T20) a 37 °C. Se usó T20 para aumentar la solubilidad de la rapamicina en PBS hasta niveles bien detectables por HPLC así como manteniendo las condiciones de libre saturación. Se redispersaron 3 ml de nanopartículas cargadas de fármaco en 130 ml de medio de liberación en un frasco a una concentración conocida (aproximadamente 250 |jg/ml). Estos volúmenes se eligieron para asegurar que la máxima concentración del fármaco en el medio de liberación siempre sería menor del 10 % de la solubilidad máxima es decir, las condiciones de libre saturación. El medio y la suspensión de nanopartículas se agitaron a 150 rpm. A tiempos predeterminados, se centrifugaron alícuotas de 4 ml a 50.000 rpm (236.000 g) durante 1 h para separar las nanopartículas del medio de elución. El medio de elución se inyectó en un HPLC para determinar el fármaco liberado de las nanopartículas. La liberación de rapamicina mostró una liberación lenta y sostenida, como se muestra en la figura 15.
Ejemplo 18 - Temsirolimus
Se prepararon nanopartículas como en los ejemplos 17 y 8, excepto por que se usó temsirolimus con un 30% de contenido de sólidos en la fase orgánica antes de la emulsión:
Figure imgf000051_0002
La figura 16 representa el % en peso de temsirolimus y la figura 17 describe la nanopartícula para las diferentes nanopartículas poliméricas que tienen temsirolimus. Los resultados de un experimento de liberación in vitro como en el ejemplo 17 muestran la liberación lenta y sostenida de temsirolimus como se muestra en la figura 18.
Ejemplo 19 Nanopartículas de vinorelbina
Se prepararon lotes de nanopartículas usando el procedimiento general del ejemplo 8, con 80 % (p/p) de polímero-PEG o polímero-PEG con homopolímero PLA a 40 % (p/p) cada uno, con un lote del % total de sólidos del 5 %, el 15 % y el 30 %. Los disolventes utilizados fueron: alcohol bencílico al 21 % y acetato de etilo al 79 % (p/p). Para cada lote de 2 g de tamaño, se usaron 400 mg de vinorelbina y 1,6 g de 16-5 polímero-PEG o 0,8 g de 16-5 polímero-PEG 0,8 g de PLA (homopolímero) de 10 kDa. Se usó el polímero en dibloque 16-5 PLA-PEG o PLGA-PEG (50:50 L:G) y cuando se usó, el homopolímero: PLA con un Pn = 6,5 kDa, Pm=10 kDa y Pm/Pn=1,55.
La fase orgánica (fármaco y polímero) se preparó en lotes de 2 g: a un vial de centelleo de 20 ml añadir fármaco y polímero o polímeros. La masa de disolventes necesaria al % de sólidos se muestra a continuación:
i. 5 % de sólidos: 7,98 g de alcohol bencílico 30,02 g de acetato de etilo
ii. 15 % de sólidos: 2,38 g de alcohol bencílico 8,95 g de acetato de etilo
iii. 30 % de sólidos: 0,98 g de alcohol bencílico 3,69 g de acetato de etilo
Se prepara una solución acuosa con colato de sodio al 0,5 %, alcohol bencílico al 2 % y acetato de etilo al 4 % en agua. Añadir al frasco 7,5 g de colato de sodio, 1402,5 g de agua DI, 30 g de alcohol bencílico y 60 g de acetato de etilo y mezclar sobre placa de agitación hasta disolución.
Para la formación de la emulsión, se usa una relación entre fase acuosa y fase oleosa de 5:1. La fase orgánica se vierte en la solución acuosa y se homogeniza usando IKA durante 10 segundos a temperatura ambiente para formar una emulsión gruesa. La solución se introduce a través del homogeneizador (110S) a 62,05 MPa (0,06 MPa de manómetro) para 2 pases discretos para formar la nanoemulsión.
La emulsión se vierte en el medio de enfriamiento (agua D.I.) a <5 °C mientras se agita sobre la placa de agitación. La relación entre medio de enfriamiento y emulsión es 8:1. Se añade Tween 80 al 35 % (p/p) en agua al medio de enfriamiento en una relación de 25:1 entre Tween 80 y fármaco. Las nanopartículas se concentran a través de TFF y el medio de enfriamiento se concentra en TFF con módulo Pall de.500 kDa (membrana 2) hasta ~100 ml. Se usa diafiltración utilizando ~20 diavolúmenes (2 litros) de agua DI fría, el volumen se reduce hasta un volumen mínimo y después se recoge la suspensión final, ~100 ml. La concentración de sólidos de la suspensión final sin filtrar, se determina usando un vial de centelleo de 20 ml tarado y añadiendo 4 ml de suspensión final y secando al vacío en liofilizador/estufa y se determina el peso de las nanopartículas en los 4 ml de suspensión seca. Se añade sacarosa concentrada (0,666 g/g) a la muestra de suspensión final para conseguir sacarosa al 10 %.
Se determinó la concentración de sólidos de suspensión final filtrada por 0,45 |jm, filtrando aproximadamente 5 ml de muestra de suspensión final antes de añadir la sacarosa a través de un filtro de jeringa de 0,45 jm; a un vial de centelleo de 20 ml tarado añadir 4 ml de muestra filtrada y secar al vacío en liofilizador/estufa.
La muestra restante de la suspensión final sin filtrar se congeló con sacarosa. Formulaciones de vinorelbina:
Figure imgf000052_0001
La liberación in vitro se realizó en tres formulaciones con un 30 % de sólidos totales: 16-5 PLA-PEG; 16-5 PLA-PEG PLA; y 16-5 PLGA-PEG PLA y los datos de liberación in vitro se recogieron a 37 °C en una cámara de aire utilizando urea al 10 % en solución de PBS como medio de liberación. La tabla siguiente y la figura 19 describen los resultados:
Figure imgf000052_0002
Ejemplo 20 - Vincristina
Las formulaciones de nanopartículas que incluyen vincristina se prepararon usando el procedimiento general del ejemplo 8.
Formulaciones de vincristina:
Figure imgf000053_0002
Caracterización analítica de las formulaciones de vincristina:
Figure imgf000053_0001
Se realizó la liberación in vitro en las formulaciones de vincristina y se obtuvieron los datos de liberación in vitro a 37 °C en una cámara de aire, usando urea al 10% en solución de PBS como medio de liberación. La figura 20 describe la liberación in vitro para varios de los lotes a los que se hace referencia.
Ejemplo 21 Farmacocinética
Se determinó la farmacocinética (FC) de las nanopartículas que tienen vincristina preparadas como en el ejemplo 20 y que tienen docetaxel preparadas como en el ejemplo 8 en ratas Sprague-Dawley (SD). Se administró a las ratas (Sprague Dawley machos, de aproximadamente 300 g con cánula yugular) una única dosis intravenosa de 0,5 mg/kg de fármaco libre o nanopartículas dirigidas pasivamente que encapsulaban fármaco (10% en peso de fármaco, 90 % en peso de polímero (PLA-PEG, Pn de PLA=16 Da; Pn de pEG=5 Da, PTNP) con 5 mg/kg y PTNP en el tiempo = 0. Se extrajeron muestras de sangre de la cánula yugular, a diversos tiempos después de la administración, en tubos que contenían heparina de litio y se preparó el plasma. Los niveles plasmáticos se determinaron mediante extracción de los fármacos del plasma seguida de análisis LCMS.
La figura 21 describe los perfiles farmacocinéticos de vincristina y vincristina PTNP y de docetaxel y docetaxel PTNP.
Ejemplo 22 Análisis del tamaño de partícula
El tamaño de partículas se analiza por dos técnicas: dispersión dinámica de la luz (DLS, del ingles dynamic light scattering) y difracción láser. La DLS se realiza utilizando un instrumento Brookhaven ZetaPals a 25 °C en suspensión acuosa diluida utilizando un láser de 660 nm dispersado a 90 ° y se analiza utilizando los procedimientos Cumulants y NNLS (TP008). La difracción láser se realiza con un instrumento Horiba LS950 en suspensión acuosa diluida utilizando tanto un láser de HeNe a 633 nm como un LED a 405 nm, dispersados a 90 ° y se analiza usando el procedimiento óptico Mie (TP009). El resultado de la DLS se asocia al radio hidrodinámico de las partículas, que incluye la 'corona' de PEG, mientras que el instrumento de difracción láser está más estrechamente asociado al tamaño geométrico del 'centro' de la partícula de PLA.
Ejemplo 23 - Densidad de ligando
Suponiendo que el diámetro general de partícula es equivalente al diámetro hidrodinámico medido con el dimensionador de partículas Brookhaven, las nanopartículas son esferas perfectas y todo el PEG hidrófilo y el ligando se expresan sobre la superficie así como todo el PEG está totalmente hidratado, se puede construir un modelo de la superficie de la partícula como se muestra en la tabla I:
Tabla I: Modelo de la superficie de la nanopartícula para partículas de 100 nm de 16/5 copolímero y homopolímero de 65 kDa
Figure imgf000054_0001
Ejemplo 24 - Direccionamiento al tumor de cáncer de mama
Se evaluó la capacidad de las nanopartículas administradas por vía intravenosa preparadas como en el ejemplo 8 (docetaxel al 10 % en peso, polímero al 90 % en peso (PLA-PEG-GL2 al ~1,25 % en peso; y PLA-PEG al -98J5 %, Pn de PLA = 16 Da; Pn de PEG = 5 Da) (etiquetadas como BIND-14) para inhibir el crecimiento del tumor no prostético en comparación con docetaxel convencional y partículas de control no dirigidas que tenían la misma composición férmaco/polímero (PTNP) en ratones a los que se les implantaron xenoinjertos MX-1. Cuando los tumores alcanzaron un volumen promedio de 300 mm3, a los ratones se les administraron los artículos de ensayo (sacarosa, docetaxel, PTNP, BIND-14) cada 4 días por 3 dosis. Los volúmenes tumorales promedio con el paso del tiempo para cada grupo de tratamiento se muestran en la figura 22.
Se evaluó la capacidad de las partículas dirigidas (BIND-14) para potenciar la entrega de docetaxel a los tumores después de la administración intravenosa en ratones que tenían xenoinjertos de cáncer de mama humano MX-1, con un volumen promedio de tumor de 1700 mm3. Se analizaron las concentraciones de docetaxel (ng/mg) en tumores extirpados 24 horas después de la dosis IV, de animales a los que se les administró BIND-14, PTNP y docetaxel convencional, para determinar el contenido de docetaxel utilizando CL/EM/M y se presentan en la figura 23.
Ejemplo 25 - Direccionamiento al tumor de cáncer de próstata
Se evaluó la entrega de nanopartículas de docetaxel utilizando nanopartículas preparadas como en el ejemplo 8 (docetaxel al 10 % en peso, polímero al 90 % en peso (PLA-PEG-GL2 al ~1,25 % en peso; y PLA-PEG al -98J5 %, Pn PLA = 16 Da; Pn PEG = 5 Da; BIND-14) a tumores, después de la administración intravenosa en ratones SCID machos con xenoinjertos de LNCaP de cáncer de próstata humano. Los ratones SCID machos se inocularon por vía subcutánea con células LNCaP de cáncer de próstata humano. Tres a cuatro semanas después de la inoculación, se administró una única dosis IV de 5 mg/kg de docetaxel como BIND-014 o como docetaxel convencional. Los ratones se sacrificaron 2 h o 12 h post administración. Se extirparon y analizaron los tumores de cada grupo para determinar docetaxel mediante un procedimiento CL-EM.
Doce horas después de una única dosis de 50 mg/kg de BIND-14, la concentración de docetaxel en el tumor en animales que recibieron BIND-014 fue aproximadamente 7 veces mayor que en los animales que recibieron DTXL convencional, lo que indica que las nanopartículas dirigidas a PSMA de circulación prolongada entrgan más DTXL al sitio del tumor como se muestra la figura 24.
También se evaluó la capacidad de dosis repetidas de BIND-014 para suprimir el crecimiento del tumor en el modelo de xenoinjerto de tumor LNCaP como se muestra en la figura 25. Los ratones SCID machos se inocularon por vía subcutánea con células LNCaP de cáncer prostático humano. Tres a cuatro semanas después de la inoculación, los ratones se trataron día por medio por cuatro dosis con BIND-014, docetaxel (DTXL) convencional, DTXL encapsulado en nanopartículas no dirigidas (PTNP) y vehículo (Control). Después de las cuatro dosis de 5 mg/kg, la reducción del volumen del tumor fue mayor en los animales que recibieron BIND-014 en comparación con el docetaxel convencional o las partículas no dirigidas (PTNP). El aumento en la concentración de docetaxel en el tumor resultó en un efecto citotóxico más pronunciado.
En un aspecto, la invención proporciona nanopartículas terapéuticas que incluyen un agente activo o agente terapéutico, por ejemplo taxano y uno, dos o tres polímeros biocompatibles. Por ejemplo, en el presente documento se desvela una nanopartícula terapéutica que comprende aproximadamente el 0,2 a aproximadamente el 35 por ciento en peso de un agente terapéutico; de aproximadamente el 10 a aproximadamente el 99 por ciento en peso de copolímero ácido poli(láctico)-poli(etilen)glicol o copolímero ácido poli(láctico)-co-poli(glicólico)-poli(etilen)glicol; y de aproximadamente el 0 a aproximadamente el 50 por ciento en peso de ácido poli(láctico) o ácido poli(láctico)-coácido poli(glicólico). Los agentes terapéuticos de ejemplo incluyen antineoplásicos tales como taxanos, por ejemplo docetaxel y pueden incluir de aproximadamente el 10 a aproximadamente el 30 por ciento en peso de un agente terapéutico, por ejemplo, un agente taxano.
En el presente documento se proporciona, en parte, un procedimiento para preparar una pluralidad de nanopartículas terapéuticas desveladas, que comprende combinar un agente terapéutico, un primer polímero y un segundo polímero, con un disolvente orgánico (por ejemplo, un disolvente elegido entre: acetato de etilo, alcohol bencílico, cloruro de metileno, dimetilformamida, Tween 80 y Span 80 y combinaciones de dos o más de éstos) para formar una primera fase orgánica que tenga de aproximadamente el 5 a aproximadamente el 50 % de sólidos; combinar la primera fase orgánica con una primera solución acuosa (que en algunas realizaciones, puede incluir un reactivo elegido entre: colato de sodio, acetato de etilo, alcohol bencílico o combinaciones de los mismos) para formar una segunda fase; emulsionar la segunda fase para formar una fase en emulsión; enfriar la fase en emulsión para formar una fase enfriada; añadir un solubilizante de fármaco a la fase enfriada para formar una fase solubilizada de agente terapéutico no encapsulado; y filtrar la fase solubilizada para recuperar las nanopartículas furtivas específicas para la diana, formando de este modo una suspensión de nanopartículas terapéuticas con un diámetro de aproximadamente 80 nm a aproximadamente 150 nm. En algunas realizaciones, emulsionar la segunda fase puede implicar emulsionar la segunda fase para formar una emulsión gruesa y emulsionar la emulsión gruesa para formar una fase en emulsión fina. La emulsión de la segunda fase se puede realizar, por ejemplo, utilizando un homogeneizador de rotor y estator, una sonda de ultrasonidos, una barra de agitación o un mezclador de alta presión. La emulsión de la emulsión gruesa se puede realizar utilizando, por ejemplo, un homogeneizador de alta presión que puede tener múltiples cámaras de interacción (2, 3, 4 o más) y con, por ejemplo, una presión de alimentación de aproximadamente 27,57 MPa a aproximadamente 55,14 MPa por cámara de interacción.
En algunas realizaciones, el enfriamiento se puede realizar por lo menos parcialmente a una temperatura de aproximadamente 5°C o menos, por ejemplo, de aproximadamente 0°C a aproximadamente 5 °C. Una relación medio de enfriamiento:emulsión puede ser de aproximadamente 8:1 a aproximadamente 5:1, o de aproximadamente 2:1 a aproximadamente 40:1.
Los solubilizantes de fármaco de ejemplo para su uso en los procedimientos desvelados pueden incluir Tween 80, Tween 20, polivinilpirrolidona, ciclodextrano, dodecilsulfato de sodio o colato de sodio. En algunas realizaciones, un solubilizante de fármacos se selecciona entre el grupo que consiste en dietilnitrosamina, acetato de sodio, urea, glicerina, propilenglicol, glicofurol, poli(etilen)glicol, bis(polioxietilenglicoldodecil) éter, benzoato de sodio y salicilato de sodio. La relación entre solubilizante de fármacos y agente terapéutico puede ser de aproximadamente 100:1 a aproximadamente 10:1.
En una realización, un procedimiento puede incluir filtrar la fase solubilizada que contiene nanopartículas usando por ejemplo un sistema de filtración de flujo tangencial. La filtración se puede realizar, por ejemplo, a una primera temperatura de aproximadamente 0°C a aproximadamente 5°C y después a una segunda temperatura de aproximadamente 20 °C a aproximadamente 30 °C. Como alternativa, la filtración se puede realizar por ejemplo, a una primera temperatura de aproximadamente 20 °C a aproximadamente 30 °C y después a una segunda temperatura de aproximadamente 0°C a aproximadamente 5 °C. En algunas realizaciones, la filtración comprende procesar de aproximadamente 1 a aproximadamente 6 diavolúmenes a una temperatura de aproximadamente 0 °C a aproximadamente 5°C y procesar al menos un diavolumen a una temperatura de aproximadamente 20 °C a aproximadamente 30 °C, por ejemplo, filtrar puede implicar procesar de aproximadamente 1 a aproximadamente 6 diavolúmenes a una temperatura de aproximadamente 0 °C a aproximadamente 5 °C y procesar de aproximadamente 1 diavolumen a aproximadamente 15 diavolúmenes a una temperatura de aproximadamente 20 °C a aproximadamente 30 °C. En una realización, filtrar puede incluir procesar diferentes diavolúmenes a diferentes temperaturas definidas. La fase solubilizada se puede purificar anteriormente de dicha filtración para retirar sustancialmente dicho disolvente orgánico, agente terapéutico no encapsulado y/o solubilizante de fármacos.
Los procedimientos desvelados pueden comprender la filtración esterilizante de la suspensión de nanopartículas terapéuticas utilizando un tren de filtración a una velocidad controlada. Por ejemplo, se puede usar un tren de filtración que comprenda un filtro de profundidad y un filtro esterilizante.
También se desvela en el presente documento un procedimiento de preparación de una pluralidad de nanopartículas terapéuticas que comprende combinar un agente terapéutico, un primer polímero y un segundo polímero, con un disolvente orgánico para formar una primera fase orgánica, combinar la primera fase orgánica con una primera solución acuosa para formar una segunda fase; emulsionar la segunda fase para formar una fase en emulsión; enfriar la fase en emulsión para formar una fase enfriada; añadir un solubilizante de fármacos a la fase enfriada para formar una fase solubilizada de agente terapéutico no encapsulado; y filtrar la fase solubilizada utilizando filtración de flujo tangencial con diafiltración de volumen constante en la que al menos un diavolumen se expone a aproximadamente 25 °C después de haber expuesto un diavolumen diferente a una temperatura de aproximadamente - 5 °C a aproximadamente 10 °C. Por ejemplo, filtrar puede incluir procesar de aproximadamente 2 a aproximadamente 5 diavolúmenes a una temperatura de aproximadamente 0°C a aproximadamente 5°C y después procesar al menos un diavolumen a 25 °C durante al menos un período de tiempo.
En el presente documento se proporcionan procedimientos de fabricación de nanopartículas terapéuticas que pueden ser estables durante al menos 2 días a 25 °C a una concentración de aproximadamente 10mg/ml. Las nanopartículas terapéuticas formadas utilizando los procedimientos desvelados, pueden liberar menos del 10 % en peso de agente terapéutico en al menos 5 días a 25 °C. En algunas realizaciones, una nanopartícula terapéutica formada utilizando un procedimiento desvelado puede, por ejemplo, encapsular de aproximadamente el 2 a aproximadamente el 30 por ciento de agente terapéutico.
En algunas realizaciones, se proporcionan procedimientos de preparación de una pluralidad de nanopartículas terapéuticas desveladas que comprenden combinar un agente terapéutico, un primer polímero (por ejemplo, copolímero PLGA-PEG o PLA) y un segundo polímero (por ejemplo PLA, PLGA o PEG, o copolímeros de los mismos) y opcionalmente un tercer polímero (por ejemplo PLA o PLGA no unido a un ligando) en los que el primer polímero está unido a un ligando que tiene un peso molecular de menos de aproximadamente 1000 g/mol, por ejemplo, un ligando de bajo peso molecular, por ejemplo, un ligando de PSMA. Dicho ligando de PSMA de bajo peso molecular se puede seleccionar entre el grupo que consiste en los compuestos I, II, III y IV:
Figure imgf000056_0001
y los enantiómeros, estereoisómeros, rotámeros, tautómeros, diastereoisómeros o racematos de los mismos; en los que
m y n cada uno, independientemente, es 0, 1,2 o 3;
p es 0 o 1;
R1, R2, R4 y R5 cada uno, independientemente, se selecciona entre el grupo que consiste en alquilo sustituido o sin sustituir, arilo sustituido o sin sustituir y cualquier combinación de los mismos; y
R3 es H o CH3;
en los que R1, R2, R4 o R5 comprenden un punto de unión covalente a la nanopartícula. Por ejemplo, R1, R2, R4 y R5 puede ser cada uno, independientemente, alquilo C1-6 o fenilo, o cualquier combinación de alquilo C1-6 o fenilo, que están independientemente sustituidos una o más veces con OH, SH, NH2 o CO2H y en los que el grupo alquilo puede estar interrumpido por N(H), S u O. En otra realización, por ejemplo, R1, R2, R4 y R5 cada uno, independientemente, es CH2-Ph, (CH2)2-SH, CH2-SH, (CH2)2C(H)(NH2)CO2H, CH2C(H)(NH2)CO2H, CH(NH2)CH2CO2H, (CH2)2C(H)(SH)CO2H, CH2-N(H)-Ph, O-CH2-Ph o O-(CH2)2-Ph, en los que cada Ph puede estar independientemente sustituido una o más veces con OH, NH2, CO2H o SH. El ligando de PSMA de bajo peso molecular de ejemplo se puede seleccionar entre el grupo que consiste en
Figure imgf000056_0002
y los enantiómeros, estereoisómeros, rotámeros, tautómeros, diastereoisómeros o racematos de los mismos; y en los que los grupos NH2, OH o SH sirven como el punto de unión covalente a la primera partícula, o se pueden seleccionar entre el grupo que consiste en
Figure imgf000057_0001
y los enantiómeros, estereoisómeros, rotámeros, tautómeros, diastereoisómeros o racematos de los mismos; en los que R se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en NH2, SH, OH, CO2H, alquilo C1-6 que está sustituido con NH2, SH, OH o CO2H y fenilo que está sustituido con NH2, SH, OH o CO2H,
y en los que R sirve como el punto de unión covalente al primer polímero. Los ligandos de ejemplo incluyen
Figure imgf000057_0002
y los enantiómeros, estereoisómeros, rotámeros, tautómeros, diastereoisómeros o racematos de los mismos; cualquiera de los cuales puede estar sustituido además con NH2, SH, OH, CO2H, alquilo C1-6 que está sustituido con NH2, SH, OH o CO2H, o fenilo que está sustituido con NH2, SH, OH o CO2H, en los que estos grupos funcionales sirven como el punto de unión covalente al primer polímero, por ejemplo, un ligando de PSMA de bajo peso molecular puede ser
Figure imgf000057_0003
y los enantiómeros, estereoisómeros, rotámeros, tautómeros, diastereoisómeros o racematos de los mismos; en los que los grupos NH2 sirven como el punto de unión covalente al primer polímero.
En algunas realizaciones, se proporcionan procedimientos de preparación de una pluralidad de nanopartículas terapéuticas desveladas que comprenden combinar un agente terapéutico, un primer polímero (por ejemplo, copolímero PLGA-PEG o PLA) y un segundo polímero (por ejemplo, PLA, PLGA o PEG, o copolímeros de los mismos) y opcionalmente un tercer polímero (por ejemplo PLA o PLGA no unido a un ligando). En algunas realizaciones, el agente terapéutico es docetaxel. En otras realizaciones, el agente terapéutico se selecciona entre el grupo que consiste en agentes antineoplásicos tales como doxorrubicina (adriamicina), mitoxantrona, gemcitabina (gemzar), daunorrubicina, procarbazina, mitomicina, citarabina, etopósido, metotrexato, 5-fluorouracilo (5-FU), vinblastina, vincristina, bleomicina, paclitaxel (taxol), docetaxel (taxotere), aldesleucina, asparaginasa, busulfán, carboplatino, cladribina, camptotecina, CTP-11, 10-hidroxi-7-etilcamptotecina (SN38), dacarbazina, S-I capecitabina, ftorafur, 5'desoxiflurouridina, UFT, eniluracilo, desoxicitidina, 5-azacitosina, 5-azadesoxicitosina, alopurinol, 2-cloroadenosina, trimetrexato, aminopterina, metileno-10-deazaaminopterina (MDAM), oxaplatino, picoplatino, tetraplatino, satraplatino, platino-DACH, ormaplatino, CI-973, JM-216 y análogos de los mismos, epirrubicina, fosfato de etopósido, 9-aminocamptotecina, 10,11-metilenodioxicamptotecina, karenitecina, 9-nitrocamptotecina, TAS 103, vindesina, mostaza de L-fenilalanina, ifosfamidamefosfamida, perfosfamida, trofosfamida, carmustina, semustina, epotilones A-E, tomudex, 6-mercaptopurina, 6-tioguanina, amsacrina, fosfato de etopósido, karenitecina, aciclovir, valaciclovir, ganciclovir, amantadina, rimantadina, lamivudina, zidovudina, bevacizumab, trastuzumab, rituximab y 5­ fluorouracilo, metotrexato, budesonida, sirolimus, vincristina y combinaciones de los mismos, o el agente terapéutico puede ser un ARNip.
También se proporcionan en el presente documento procedimientos para tratar el cáncer de próstata en un sujeto que lo necesita, que comprenden administrar al sujeto una cantidad eficaz de la nanopartícula preparada por los procedimientos desvelados.
En una realización, también se proporciona en el presente documento una nanopartícula terapéutica preparada mediante: la emulsión de una primera fase orgánica que comprende un primer polímero y un agente terapéutico y una segunda fase que forma una fase en emulsión; en la que la fase en emulsión se enfría después a una temperatura de aproximadamente 0 °C a aproximadamente 5 °C formando una fase enfriada; y la filtración de la fase enfriada a una primera temperatura de aproximadamente -5 ° C a aproximadamente 10 °C; y la filtración de la fase enfriada a una segunda temperatura de aproximadamente 25 °C; formando de este modo nanopartículas terapéuticas que son estables durante al menos 5 días a 25 °C.
También se proporciona en una realización, un procedimiento de estabilización de nanopartículas terapéuticas que tienen un agente terapéutico que comprende: proporcionar una suspensión que comprenda un agente terapéutico encapsulado por nanopartículas y un solubilizante de fármacos; filtrar la suspensión a una primera temperatura de aproximadamente -5 °C a aproximadamente 10 °C; filtrar la suspensión a una segunda temperatura de aproximadamente 25 °C.

Claims (15)

REIVINDICACIONES
1. Un procedimiento de preparación de nanopartículas terapéuticas usando un procedimiento de nanoemulsión en el que:
un agente terapéutico, un primer polímero y, opcionalmente, un segundo polímero se combinan con una solución orgánica para formar una primera fase orgánica, en el que el primer polímero es un copolímero de dibloque PLGA-PEG o dibloque PLA-PEG y en el que el primer polímero o el segundo polímero está unido opcionalmente a un ligando que tiene un peso molecular de menos de aproximadamente 1000 g/mol;
la primera fase orgánica se combina con una primera fase acuosa para formar una segunda fase;
la segunda fase se emulsiona para formar una emulsión primaria (gruesa);
la emulsión primaria se emulsiona para formar una emulsión fina;
la emulsión fina se diluye con un medio de enfriamiento acuoso, al menos parcialmente a una temperatura de 5 °C o menor; y
las nanopartículas se recuperar por filtración
2. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que la solución orgánica en la primera fase orgánica incluye tolueno, metil etil cetona, acetonitrilo, tetrahidrofurano, acetato de etilo, alcohol isopropílico, acetato de isopropilo, dimetilformamida, cloruro de metileno, diclorometano, cloroformo acetona, alcohol bencílico, polisorbato 80, monooleato de sorbitán, o combinaciones de los mismos.
3. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que la primera fase acuosa es agua, opcionalmente en combinación con uno o más de colato de sodio, acetato de etilo, acetato de polivinilo y alcohol bencílico.
4. El procedimiento de la reivindicación 3, en el que la primera fase acuosa es una solución acuosa de colato de sodio pre-saturada con acetato de etilo y alcohol bencílico.
5. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que la emulsión primaria se forma simplemente por mezclado, usando un homogeneizador de alta presión, una sonda de ultrasonido, una barra de agitación o un homogeneizador de rotor y estator.
6. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que la emulsión primaria se emulsiona para formar una emulsión fina mediante el uso de una sonda de ultrasonido o un homogeneizador de alta presión.
7. El procedimiento de la reivindicación 6, en el que se usan 1, 2 o 3 pases a través del homogeneizador de alta presión.
8. El procedimiento de la reivindicación 6, en el que se usa un homogeneizador de alta presión y la presión usada es de 6895 a 55158 kPa, o de 13790 a 27579 kPa o de 27579 a 55158 kPa o de 27579 a 34474 kPa, por ejemplo 13790 kPa, 17237 kPa, 27579 kPa o 34474 kPa.
9. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que el medio de enfriamiento acuoso está a una temperatura de 0 a 5 °C.
10. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que se usan membranas de ultrafiltración para concentrar la suspensión de nanopartículas.
11. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que las nanopartículas se recuperan usando un sistema de filtración de flujo tangencial.
12. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que las nanopartículas se recuperan por diafiltración usando un enfoque de volumen constante en el que se añade agua desionizada fría de 0 a 5 °C a la suspensión de alimentación a la misma velocidad que se retira el filtrado de la suspensión.
13. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que las nanopartículas se recuperan por diafiltración en la que se procesan de 1 a 6 diavolúmenes de 0 a 5 °C y se procesa al menos un diavolumen de 20 a 30 °C.
14. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que el segundo polímero es PL(G)A-PEG o PLA.
15. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que la primera fase orgánica incluye del 5 al 50% en peso de sólidos.
ES14150948T 2008-06-16 2009-06-16 Nanopartículas poliméricas cargadas de fármaco y procedimientos de fabricación y uso de las mismas Active ES2765240T3 (es)

Applications Claiming Priority (15)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US6170408P 2008-06-16 2008-06-16
US6169708P 2008-06-16 2008-06-16
US6176008P 2008-06-16 2008-06-16
US8815908P 2008-08-12 2008-08-12
US10591608P 2008-10-16 2008-10-16
US10677708P 2008-10-20 2008-10-20
US16954109P 2009-04-15 2009-04-15
US16951409P 2009-04-15 2009-04-15
US16951909P 2009-04-15 2009-04-15
US17378409P 2009-04-29 2009-04-29
US17379009P 2009-04-29 2009-04-29
US17520909P 2009-05-04 2009-05-04
US17522609P 2009-05-04 2009-05-04
US17521909P 2009-05-04 2009-05-04
US18230009P 2009-05-29 2009-05-29

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2765240T3 true ES2765240T3 (es) 2020-06-08

Family

ID=41507660

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES14150948T Active ES2765240T3 (es) 2008-06-16 2009-06-16 Nanopartículas poliméricas cargadas de fármaco y procedimientos de fabricación y uso de las mismas
ES09794915.0T Active ES2462090T5 (es) 2008-06-16 2009-06-16 Nanopartículas poliméricas cargadas de fármaco y procedimientos de fabricación y uso de las mismas

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES09794915.0T Active ES2462090T5 (es) 2008-06-16 2009-06-16 Nanopartículas poliméricas cargadas de fármaco y procedimientos de fabricación y uso de las mismas

Country Status (18)

Country Link
US (14) US8420123B2 (es)
EP (3) EP2309990B2 (es)
JP (5) JP6363320B2 (es)
KR (3) KR20160116062A (es)
CN (1) CN104997732A (es)
AU (1) AU2009268923B2 (es)
CA (1) CA2728176C (es)
DK (1) DK2774608T3 (es)
EA (2) EA020954B1 (es)
ES (2) ES2765240T3 (es)
HK (1) HK1211492A1 (es)
HU (1) HUE047004T2 (es)
IL (1) IL210024A (es)
MX (1) MX2010014018A (es)
PL (1) PL2774608T3 (es)
PT (1) PT2774608T (es)
SI (1) SI2774608T1 (es)
WO (2) WO2010005721A2 (es)

Families Citing this family (249)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007001448A2 (en) * 2004-11-04 2007-01-04 Massachusetts Institute Of Technology Coated controlled release polymer particles as efficient oral delivery vehicles for biopharmaceuticals
WO2007070682A2 (en) 2005-12-15 2007-06-21 Massachusetts Institute Of Technology System for screening particles
CA2648099C (en) 2006-03-31 2012-05-29 The Brigham And Women's Hospital, Inc System for targeted delivery of therapeutic agents
US20110052697A1 (en) * 2006-05-17 2011-03-03 Gwangju Institute Of Science & Technology Aptamer-Directed Drug Delivery
WO2007150030A2 (en) 2006-06-23 2007-12-27 Massachusetts Institute Of Technology Microfluidic synthesis of organic nanoparticles
WO2008019142A2 (en) * 2006-08-04 2008-02-14 Massachusetts Institute Of Technology Oligonucleotide systems for targeted intracellular delivery
WO2008147456A2 (en) * 2006-11-20 2008-12-04 Massachusetts Institute Of Technology Drug delivery systems using fc fragments
EP2134830A2 (en) 2007-02-09 2009-12-23 Massachusetts Institute of Technology Oscillating cell culture bioreactor
WO2008124639A2 (en) * 2007-04-04 2008-10-16 Massachusetts Institute Of Technology Poly (amino acid) targeting moieties
HUE047200T2 (hu) 2007-08-17 2020-04-28 Purdue Research Foundation PSMA kötõ ligandum-linker konjugátumok és azok alkalmazási módszerei
EP2436376B1 (en) 2007-09-28 2014-07-09 BIND Therapeutics, Inc. Cancer cell targeting using nanoparticles
ES2627292T3 (es) 2007-10-12 2017-07-27 Massachusetts Institute Of Technology Nanotecnología de vacunas
US8613951B2 (en) 2008-06-16 2013-12-24 Bind Therapeutics, Inc. Therapeutic polymeric nanoparticles with mTor inhibitors and methods of making and using same
ES2721850T3 (es) 2008-06-16 2019-08-05 Pfizer Nanopartículas poliméricas terapéuticas que comprenden alcaloides vinca y procedimientos de fabricación y uso de las mismas
EP2309990B2 (en) * 2008-06-16 2017-03-15 Pfizer Inc. Drug loaded polymeric nanoparticles and methods of making and using same
US8277812B2 (en) 2008-10-12 2012-10-02 Massachusetts Institute Of Technology Immunonanotherapeutics that provide IgG humoral response without T-cell antigen
US8591905B2 (en) 2008-10-12 2013-11-26 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Nicotine immunonanotherapeutics
US8563041B2 (en) 2008-12-12 2013-10-22 Bind Therapeutics, Inc. Therapeutic particles suitable for parenteral administration and methods of making and using same
JP2012512175A (ja) * 2008-12-15 2012-05-31 バインド バイオサイエンシズ インコーポレイテッド 治療薬を徐放するための長時間循環性ナノ粒子
US20110262490A1 (en) * 2009-03-30 2011-10-27 Jerry Zhang Polymer-agent conjugates, particles, compositions, and related methods of use
WO2010117668A1 (en) * 2009-03-30 2010-10-14 Cerulean Pharma Inc. Polymer-agent conjugates, particles, compositions, and related methods of use
WO2010114768A1 (en) * 2009-03-30 2010-10-07 Cerulean Pharma Inc. Polymer-epothilone conjugates, particles, compositions, and related methods of use
WO2010114770A1 (en) * 2009-03-30 2010-10-07 Cerulean Pharma Inc. Polymer-agent conjugates, particles, compositions, and related methods of use
BRPI1011836A2 (pt) * 2009-04-21 2017-05-16 Selecta Biosciences Inc imunonanoterapêuticos que fornecem uma resposta induzida por th1
AU2010254551B2 (en) 2009-05-27 2016-10-20 Selecta Biosciences, Inc. Immunomodulatory agent-polymeric compounds
US8357401B2 (en) 2009-12-11 2013-01-22 Bind Biosciences, Inc. Stable formulations for lyophilizing therapeutic particles
EA201290498A1 (ru) * 2009-12-15 2013-01-30 Байнд Байосайенсиз, Инк. Терапевтические полимерные наночастицы, включающие эпотилон, и способы их получения и применения
ES2780156T3 (es) 2009-12-15 2020-08-24 Pfizer Composiciones terapéuticas de nanopartículas poliméricas con alta temperatura de transición vítrea o copolímeros de alto peso molecular
WO2011084518A2 (en) * 2009-12-15 2011-07-14 Bind Biosciences, Inc. Therapeutic polymeric nanoparticles comprising corticosteroids and methods of making and using same
US9951324B2 (en) 2010-02-25 2018-04-24 Purdue Research Foundation PSMA binding ligand-linker conjugates and methods for using
JP2013522653A (ja) 2010-03-24 2013-06-13 ノースイースタン ユニヴァーシティ 早期癌病巣のための多重モード診断技術
US20110237686A1 (en) 2010-03-26 2011-09-29 Cerulean Pharma Inc Formulations and methods of use
US8207290B2 (en) 2010-03-26 2012-06-26 Cerulean Pharma Inc. Methods and systems for generating nanoparticles
WO2011123479A1 (en) * 2010-03-29 2011-10-06 Academia Sinica Quantitative measurement of nano / micro particle endocytosis with cell mass spectrometry
CN101804021B (zh) * 2010-04-21 2012-05-09 山东大学 载多烯紫杉醇纳米粒混合胶束制剂及冻干剂的制备方法
CN102232927A (zh) * 2010-04-30 2011-11-09 中南大学 长春新碱-peg-plga嵌段共聚物纳米粒及其制备方法和用途
CA2798323A1 (en) 2010-05-26 2011-12-01 Selecta Biosciences, Inc. Dose selection of adjuvanted synthetic nanocarriers
US9101647B2 (en) * 2010-06-04 2015-08-11 Hough Ear Institute Composition and method for inner ear sensory hair cell regeneration and replacement
EP3578205A1 (en) 2010-08-06 2019-12-11 ModernaTX, Inc. A pharmaceutical formulation comprising engineered nucleic acids and medical use thereof
WO2012026316A1 (ja) * 2010-08-23 2012-03-01 株式会社 島津製作所 スイッチング型蛍光ナノ粒子プローブ及びそれを用いた蛍光分子イメージング法
CA2813466A1 (en) 2010-10-01 2012-04-05 Moderna Therapeutics, Inc. Modified nucleosides, nucleotides, and nucleic acids that disrupt major groove binding partner interactions
US20120101390A1 (en) * 2010-10-20 2012-04-26 Iftimia Nicusor V Multi-Modal Imaging for Diagnosis of Early Stage Epithelial Cancers
WO2012054923A2 (en) * 2010-10-22 2012-04-26 Bind Biosciences, Inc. Therapeutic nanoparticles with high molecular weight copolymers
WO2012059936A1 (en) 2010-11-03 2012-05-10 Padma Venkitachalam Devarajan Pharmaceutical compositions for colloidal drug delivery
US9994443B2 (en) 2010-11-05 2018-06-12 Selecta Biosciences, Inc. Modified nicotinic compounds and related methods
RU2018102375A (ru) 2010-11-18 2019-02-21 Зе Дженерал Хоспитал Корпорейшен Новые композиции и применения антигипертензивных средств для терапии рака
WO2012103182A1 (en) 2011-01-28 2012-08-02 Cerulean Pharma Inc. Method for fabricating nanoparticles
WO2012109363A2 (en) 2011-02-08 2012-08-16 The Johns Hopkins University Mucus penetrating gene carriers
CA2831613A1 (en) 2011-03-31 2012-10-04 Moderna Therapeutics, Inc. Delivery and formulation of engineered nucleic acids
CN103517707A (zh) 2011-04-29 2014-01-15 西莱克塔生物科技公司 从合成纳米载体中控制释放免疫抑制剂
US20140308363A1 (en) * 2011-05-31 2014-10-16 Bind Therapeutics, Inc. Drug loaded polymeric nanoparticles and methods of making and using same
US20130028857A1 (en) 2011-07-29 2013-01-31 Selecta Biosciences, Inc. Synthetic nanocarriers comprising polymers comprising multiple immunomodulatory agents
US8865796B2 (en) * 2011-08-09 2014-10-21 University Of South Carolina Nanoparticles with multiple attached polymer assemblies and use thereof in polymer composites
US9464124B2 (en) 2011-09-12 2016-10-11 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
JP2014531456A (ja) * 2011-09-22 2014-11-27 バインド セラピューティックス インコーポレイテッド 治療用ナノ粒子と癌を治療する方法
CN110511939A (zh) 2011-10-03 2019-11-29 现代泰克斯公司 修饰的核苷、核苷酸和核酸及其用途
US9498471B2 (en) 2011-10-20 2016-11-22 The Regents Of The University Of California Use of CDK9 inhibitors to reduce cartilage degradation
RU2631599C2 (ru) * 2011-12-14 2017-09-25 Дзе Джонс Хопкинс Юниверсити Наночастицы, легче проникающие в слизистую оболочку или вызывающие меньше воспаления
EP2791160B1 (en) 2011-12-16 2022-03-02 ModernaTX, Inc. Modified mrna compositions
EP2811980A4 (en) * 2012-01-31 2015-12-23 Cerulean Pharma Inc POLYMER-AGENT CONJUGATES, PARTICLES, COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF
US9618501B2 (en) * 2012-02-23 2017-04-11 University Of South Florida Three-dimensional fibrous scaffolds for cell culture
US9624473B2 (en) * 2012-02-23 2017-04-18 Subhra Mohapatra Three-dimensional fibrous scaffolds for cell culture
US9572897B2 (en) 2012-04-02 2017-02-21 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
US9878056B2 (en) 2012-04-02 2018-01-30 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cosmetic proteins and peptides
US9283287B2 (en) 2012-04-02 2016-03-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
EP2833923A4 (en) 2012-04-02 2016-02-24 Moderna Therapeutics Inc MODIFIED POLYNUCLEOTIDES FOR THE PRODUCTION OF PROTEINS
CN108949772A (zh) 2012-04-02 2018-12-07 现代泰克斯公司 用于产生与人类疾病相关的生物制剂和蛋白质的修饰多核苷酸
AU2013299641A1 (en) 2012-08-10 2015-03-19 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Drug delivery vehicle comprising conjugates between targeting polyamino acids and fatty acids
US9095625B2 (en) 2012-08-31 2015-08-04 University Of Massachusetts Graft-copolymer stabilized metal nanoparticles
BR112015005940A2 (pt) * 2012-09-17 2017-07-04 Bind Therapeutics Inc processo para a preparação de nanopartículas terapêuticas
MX363147B (es) * 2012-09-17 2019-03-11 Pfizer Inc Star Nanoparticulas terapeuticas que comprenden un agente terapeutico y metodos para realizarlas y usarlas.
CN102871966B (zh) * 2012-10-19 2013-11-20 东南大学 用于改善雷帕霉素生物利用度的纳米载药颗粒及其制备方法
WO2014066002A1 (en) * 2012-10-23 2014-05-01 The Johns Hopkins University Novel self-assembling drug amphiphiles and methods for synthesis and use
JP6892218B2 (ja) 2012-11-15 2021-06-23 エンドサイト・インコーポレイテッドＥｎｄｏｃｙｔｅ， Ｉｎｃ． 薬物送達結合体およびｐｓｍａ発現細胞によって引き起こされる疾患の治療方法
PT2922554T (pt) 2012-11-26 2022-06-28 Modernatx Inc Arn modificado nas porções terminais
GB2528404A (en) 2013-03-11 2016-01-20 Univ North Carolina State Functionalized environmentally benign nanoparticles
EP2971010B1 (en) 2013-03-14 2020-06-10 ModernaTX, Inc. Formulation and delivery of modified nucleoside, nucleotide, and nucleic acid compositions
US8980864B2 (en) 2013-03-15 2015-03-17 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods of altering cholesterol levels
US9283285B2 (en) * 2013-03-28 2016-03-15 Bbs Nanotechnology Ltd. Stable nanocomposition comprising docetaxel, process for the preparation thereof, its use and pharmaceutical compositions containing it
KR20220025909A (ko) 2013-05-03 2022-03-03 셀렉타 바이오사이언시즈, 인크. 면역 관용의 유도를 위한 특정된 약역학적 유효 수명을 갖는 면역억제제 및 항원의 전달
KR20160022370A (ko) 2013-06-24 2016-02-29 넥스이뮨 면역요법을 위한 조성물 및 방법
WO2014210485A1 (en) * 2013-06-28 2014-12-31 Bind Therapeutics, Inc. Docetaxel polymeric nanoparticles for cancer treatment
AU2014287009B2 (en) 2013-07-11 2020-10-29 Modernatx, Inc. Compositions comprising synthetic polynucleotides encoding CRISPR related proteins and synthetic sgRNAs and methods of use
US20160166507A1 (en) * 2013-07-25 2016-06-16 Nemucore Medical Innovations, Inc. Nanoemulsions of hydrophobic platinum derivatives
EP3041938A1 (en) 2013-09-03 2016-07-13 Moderna Therapeutics, Inc. Circular polynucleotides
JP2016530294A (ja) 2013-09-03 2016-09-29 モデルナ セラピューティクス インコーポレイテッドＭｏｄｅｒｎａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ． キメラポリヌクレオチド
MX370490B (es) 2013-09-16 2019-12-16 Astrazeneca Ab Nanopartículas poliméricas terapéuticas y métodos para su elaboración y uso.
WO2015048744A2 (en) 2013-09-30 2015-04-02 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding immune modulating polypeptides
SG11201602503TA (en) 2013-10-03 2016-04-28 Moderna Therapeutics Inc Polynucleotides encoding low density lipoprotein receptor
WO2015058111A1 (en) * 2013-10-17 2015-04-23 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Cationic nanoparticles for co-delivery of nucleic acids and thereapeutic agents
PE20160678A1 (es) 2013-10-18 2016-08-06 Deutsches Krebsforsch Inhibidores marcados de antigeno prostatico especifico de membrana (psma), su uso como agentes formadores de imagenes y agentes farmaceuticos para el tratamiento de cancer de prostata
US20150110814A1 (en) 2013-10-18 2015-04-23 Psma Development Company, Llc Combination therapies with psma ligand conjugates
JP6908964B2 (ja) * 2013-10-18 2021-07-28 ピーエスエムエー ディベロップメント カンパニー，エルエルシー Ｐｓｍａリガンドコンジュゲートによる併用療法
WO2015073896A2 (en) 2013-11-15 2015-05-21 Psma Development Company, Llc Biomarkers for psma targeted therapy for prostate cancer
SI3071696T1 (sl) 2013-11-22 2019-11-29 Mina Therapeutics Ltd C/EBP alfa kratko delujoči RNA sestavki in postopki uporabe
CA2933579A1 (en) 2013-12-11 2015-06-18 University Of Massachusetts Compositions and methods for treating disease using salmonella t3ss effector protein (sipa)
EP3104838B1 (en) 2014-02-13 2020-01-01 Pfizer Inc. Therapeutic nanoparticles comprising a therapeutic agent and methods of making and using same
US10556980B2 (en) 2014-03-03 2020-02-11 University Of South Carolina Poly alkyl (meth)acrylates grafted nanoparticles and their methods of manufacture and use
MX2016012009A (es) * 2014-03-14 2016-12-05 Pfizer Nanoparticulas terapeuticas que comprenden un agente terapeutico, y metodos para su elaboracion y uso.
US10022360B2 (en) 2014-03-17 2018-07-17 Merck Sharp & Dohme Corp. Polymeric nanoparticles and methods of making and using same
EP3131542A1 (en) * 2014-04-18 2017-02-22 Pfizer Inc. Methods of treating cancers with therapeutic nanoparticles
WO2015164779A1 (en) * 2014-04-24 2015-10-29 Rensselaer Polytechnic Institute Matrix-free polymer nanocomposites and related products and methods thereof
PL3140269T3 (pl) 2014-05-09 2024-03-11 Yale University Cząstki pokryte hiperrozgałęzionym poliglicerolem oraz sposoby ich wytwarzania i zastosowania
US11918695B2 (en) 2014-05-09 2024-03-05 Yale University Topical formulation of hyperbranched polymer-coated particles
WO2015175545A1 (en) 2014-05-12 2015-11-19 The Johns Hopkins University Highly stable biodegradable gene vector platforms for overcoming biological barriers
LT3766916T (lt) 2014-06-25 2023-01-10 Acuitas Therapeutics Inc. Nauji lipidai ir lipidų nanodalelių kompozicijos, skirtos nukleorūgščių tiekimui
CA2953996A1 (en) * 2014-07-03 2016-01-07 Pfizer Inc. Targeted therapeutic nanoparticles and methods of making and using same
US10660861B2 (en) 2014-07-09 2020-05-26 The Johns Hopkins University Glutaminase inhibitor discovery and nanoparticle-enhanced delivery for cancer therapy
WO2016008401A1 (zh) * 2014-07-15 2016-01-21 腾鑫 一种含多西他赛的药物组合物
US20170204152A1 (en) 2014-07-16 2017-07-20 Moderna Therapeutics, Inc. Chimeric polynucleotides
IL282559B (en) 2014-07-17 2022-07-01 Univ California Self-reinforced and controllable microgel particles for biomedical applications
US20170210788A1 (en) 2014-07-23 2017-07-27 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of intrabodies
WO2016025922A1 (en) * 2014-08-14 2016-02-18 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Coated particles for drug delivery
BR112017001470A2 (pt) 2014-09-07 2018-02-20 Selecta Biosciences Inc métodos e composições para atenuar as respostas imunes do vetor de transferência anti-viral de terapia genética
US10583091B2 (en) * 2014-10-23 2020-03-10 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Amphiphile-polymer particles
FI3834823T3 (fi) * 2014-11-05 2024-04-02 Cartesian Therapeutics Inc Menetelmiä ja koostumuksia liittyen alhaisen hlb:n omaavien pinta-aktiivisten aineiden käyttöön rapalogin käsittävien synteettisten nanokantajien valmistuksessa
CA2969263C (en) * 2014-12-01 2022-11-29 Innoup Farma, S.L. Nanoparticles for encapsulating compounds, the preparation and uses thereof
AU2015371265B2 (en) 2014-12-24 2021-06-03 Neximmune, Inc Nanoparticle compositions and methods for immunotherapy
US10188759B2 (en) 2015-01-07 2019-01-29 Endocyte, Inc. Conjugates for imaging
US10370488B2 (en) 2015-04-08 2019-08-06 The Regents Of The University Of California Stimulus-responsive poly(lactic-co-glycolic)-based polymers and nanoparticles formed therefrom
EP3313829B1 (en) 2015-06-29 2024-04-10 Acuitas Therapeutics Inc. Lipids and lipid nanoparticle formulations for delivery of nucleic acids
US11364292B2 (en) 2015-07-21 2022-06-21 Modernatx, Inc. CHIKV RNA vaccines
TW201718638A (zh) 2015-07-21 2017-06-01 現代治療公司 傳染病疫苗
MA44833A (fr) * 2015-08-17 2018-06-27 Phosphorex Inc Nanoparticules extrêmement petites de polymères dégradables
WO2017034991A1 (en) * 2015-08-21 2017-03-02 Pfizer Inc. Therapeutic nanoparticles comprising a therapeutic agent and methods of making and using same
PT3350157T (pt) 2015-09-17 2022-03-18 Modernatx Inc Compostos e composições para administração intracelular de agentes terapêuticos
US20170128592A1 (en) * 2015-10-01 2017-05-11 Indian Institute Of Technology, Bombay Targeted polymeric nano-complexes as drug delivery system
CN117731769A (zh) 2015-10-22 2024-03-22 摩登纳特斯有限公司 用于水痘带状疱疹病毒(vzv)的核酸疫苗
MA45209A (fr) 2015-10-22 2019-04-17 Modernatx Inc Vaccins contre les maladies sexuellement transmissibles
KR20180096592A (ko) 2015-10-22 2018-08-29 모더나티엑스, 인크. 호흡기 세포융합 바이러스 백신
EP4349404A2 (en) 2015-10-22 2024-04-10 ModernaTX, Inc. Respiratory virus vaccines
EP3364950A4 (en) 2015-10-22 2019-10-23 ModernaTX, Inc. VACCINES AGAINST TROPICAL DISEASES
TN2018000155A1 (en) 2015-10-22 2019-10-04 Modernatx Inc Herpes simplex virus vaccine
JP6921833B2 (ja) 2015-10-22 2021-08-18 モデルナティーエックス， インコーポレイテッド ヒトサイトメガロウイルスワクチン
BR112018008078A2 (pt) 2015-10-22 2018-11-13 Modernatx Inc vacina de vírus influenza de amplo espectro
LT3368507T (lt) 2015-10-28 2023-03-10 Acuitas Therapeutics Inc. Nauji lipidai ir lipidų nanodalelių kompozicijos, skirtos nukleorūgščių tiekimui
CA3004849A1 (en) 2015-11-16 2017-05-26 Georges Gaudriault A method for morselizing and/or targeting pharmaceutically active principles to synovial tissue
JP2018535228A (ja) 2015-11-25 2018-11-29 ファイザー・インク 抗生物質を含む治療用ナノ粒子ならびにそれを作製および使用する方法
US20180271998A1 (en) 2015-12-04 2018-09-27 Merrimack Pharmaceuticals, Inc. Disulfide-stabilized fabs
ES2924407T3 (es) 2015-12-10 2022-10-06 Modernatx Inc Composiciones y procedimientos para el suministro de agentes terapéuticos
WO2017106630A1 (en) 2015-12-18 2017-06-22 The General Hospital Corporation Polyacetal polymers, conjugates, particles and uses thereof
ES2913626T3 (es) 2015-12-22 2022-06-03 Modernatx Inc Compuestos y composiciones para la administración intracelular de agentes
PT3394093T (pt) 2015-12-23 2022-05-30 Modernatx Inc Métodos de utilização de polinucleotídeos que codificam ligandos ox40
MA43587A (fr) 2016-01-10 2018-11-14 Modernatx Inc Arnm thérapeutiques codant pour des anticorps anti-ctla-4
WO2017138983A1 (en) * 2016-02-10 2017-08-17 Pfizer Inc. Therapeutic nanoparticles having egfr ligands and methods of making and using same
US20210188979A1 (en) * 2016-02-10 2021-06-24 Pfizer Inc. Therapeutic Nanoparticles Comprising A Therapeutic Agent And Methods of Making and Using Same
WO2017142879A1 (en) 2016-02-16 2017-08-24 The Regents Of The University Of California Methods for immune system modulation with microporous annealed particle gels
CA3014708A1 (en) * 2016-02-18 2017-08-24 University Of South Florida Methods of screening drugs for cancer treatment using cells grown on a fiber-inspired smart scaffold
US10548881B2 (en) 2016-02-23 2020-02-04 Tarveda Therapeutics, Inc. HSP90 targeted conjugates and particles and formulations thereof
CN105748440B (zh) * 2016-03-14 2019-05-03 杭州普施康生物科技有限公司 一种包括胆盐的药物组合物及其制备方法和用途
US20170266187A1 (en) * 2016-03-15 2017-09-21 Pfizer Inc. Pemetrexed Polymeric Nanoparticles And Methods Of Making And Using Same
ES2847249T3 (es) * 2016-03-23 2021-08-02 Academia Sinica Nanopartículas poliméricas de envoltura delgada y usos de las mismas
WO2018038267A1 (ja) * 2016-08-26 2018-03-01 株式会社 先端医療開発 ポリラクチドグリコライド共重合体ナノ粒子及びポリラクチドグリコライド共重合体ナノ粒子の製造方法
EP3512560A4 (en) * 2016-09-13 2020-05-27 Rasna Research Inc. DACTINOMYCIN COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING MYELODYSPLASTIC SYNDROME AND ACUTE MYELOID LEUKEMIA
JP2019535660A (ja) * 2016-10-20 2019-12-12 ファイザー・インク 脂質を含む治療用ポリマーナノ粒子ならびにその作製および使用方法
WO2018089540A1 (en) 2016-11-08 2018-05-17 Modernatx, Inc. Stabilized formulations of lipid nanoparticles
EP3538146A4 (en) 2016-11-11 2020-07-15 ModernaTX, Inc. INFLUENZA VACCINE
EP3808380A1 (en) 2016-12-08 2021-04-21 CureVac AG Rna for treatment or prophylaxis of a liver disease
WO2018104540A1 (en) 2016-12-08 2018-06-14 Curevac Ag Rnas for wound healing
US11103578B2 (en) 2016-12-08 2021-08-31 Modernatx, Inc. Respiratory virus nucleic acid vaccines
CN117582559A (zh) * 2016-12-29 2024-02-23 泰普治疗公司 用于治疗医疗植入物部位的方法和系统
CN110612122A (zh) 2017-03-11 2019-12-24 西莱克塔生物科技公司 与用抗炎剂和包含免疫抑制剂之合成纳米载体进行的组合治疗相关的方法和组合物
US11576961B2 (en) 2017-03-15 2023-02-14 Modernatx, Inc. Broad spectrum influenza virus vaccine
US11045540B2 (en) 2017-03-15 2021-06-29 Modernatx, Inc. Varicella zoster virus (VZV) vaccine
WO2018170322A1 (en) 2017-03-15 2018-09-20 Modernatx, Inc. Crystal forms of amino lipids
WO2018170256A1 (en) 2017-03-15 2018-09-20 Modernatx, Inc. Herpes simplex virus vaccine
WO2018170260A1 (en) 2017-03-15 2018-09-20 Modernatx, Inc. Respiratory syncytial virus vaccine
ES2940259T3 (es) 2017-03-15 2023-05-04 Modernatx Inc Compuesto y composiciones para la administración intracelular de agentes terapéuticos
MA48047A (fr) 2017-04-05 2020-02-12 Modernatx Inc Réduction ou élimination de réponses immunitaires à des protéines thérapeutiques administrées par voie non intraveineuse, par exemple par voie sous-cutanée
US10369230B2 (en) 2017-04-06 2019-08-06 National Guard Health Affairs Sustained release of a therapeutic agent from PLA-PEG-PLA nanoparticles for cancer therapy
CN116693411A (zh) 2017-04-28 2023-09-05 爱康泰生治疗公司 用于递送核酸的新型羰基脂质和脂质纳米颗粒制剂
EP3621598A4 (en) * 2017-05-08 2020-05-13 Purdue Research Foundation CHINIC ACID-MODIFIED NANOPARTICLES AND USES THEREOF
EP3625345B1 (en) 2017-05-18 2023-05-24 ModernaTX, Inc. Modified messenger rna comprising functional rna elements
CA3063723A1 (en) 2017-05-18 2018-11-22 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding tethered interleukin-12 (il12) polypeptides and uses thereof
WO2018232006A1 (en) 2017-06-14 2018-12-20 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding coagulation factor viii
US11446267B2 (en) 2017-06-15 2022-09-20 Dignity Health Nanoparticle compositions, methods of fabrication, and use for drug delivery
MA49421A (fr) 2017-06-15 2020-04-22 Modernatx Inc Formulations d'arn
PL3641730T3 (pl) 2017-06-22 2021-08-23 SNBioScience Inc. Cząstka i kompozycja farmaceutyczna zawierająca nierozpuszczalną pochodną kamptotecyny z podwójną strukturą rdzenia i powłoki oraz sposób ich wytwarzania
US11666527B2 (en) 2017-07-17 2023-06-06 Medincell Biodegradable block copolymer drug delivery composition
US11744801B2 (en) 2017-08-31 2023-09-05 Modernatx, Inc. Methods of making lipid nanoparticles
EP3453385A1 (de) * 2017-09-07 2019-03-13 Justus-Liebig-Universität Gießen Erfindung betreffend nanopartikel enthaltend taxane zur inhalativen applikation
WO2019048645A1 (en) 2017-09-08 2019-03-14 Mina Therapeutics Limited STABILIZED COMPOSITIONS OF SMALL ACTIVATOR RNA (PARNA) FROM CEBPA AND METHODS OF USE
CA3075219A1 (en) 2017-09-08 2019-03-14 Mina Therapeutics Limited Hnf4a sarna compositions and methods of use
EP3681514A4 (en) 2017-09-14 2021-07-14 ModernaTX, Inc. RNA VACZINE AGAINST ZIKA VIRUS
CA3079428A1 (en) 2017-11-22 2019-05-31 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding ornithine transcarbamylase for the treatment of urea cycle disorders
MA50802A (fr) 2017-11-22 2020-09-30 Modernatx Inc Polynucléotides codant pour des sous-unités alpha et bêta de propionyl-coa carboxylase pour le traitement de l'acidémie propionique
MA50801A (fr) 2017-11-22 2020-09-30 Modernatx Inc Polynucléotides codant pour la phénylalanine hydroxylase pour le traitement de la phénylcétonurie
EP3735270A1 (en) 2018-01-05 2020-11-11 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding anti-chikungunya virus antibodies
US11911453B2 (en) 2018-01-29 2024-02-27 Modernatx, Inc. RSV RNA vaccines
WO2019157200A1 (en) * 2018-02-07 2019-08-15 Lovelace Respiratory Research Institute Inhalable dry powder cytidine analogue composition and method of use as a treatment for cancer
AU2019247655A1 (en) 2018-04-03 2020-10-01 Vaxess Technologies, Inc. Microneedle comprising silk fibroin applied to a dissolvable base
WO2019200171A1 (en) 2018-04-11 2019-10-17 Modernatx, Inc. Messenger rna comprising functional rna elements
EP4242307A3 (en) 2018-04-12 2023-12-27 MiNA Therapeutics Limited Sirt1-sarna compositions and methods of use
CN112566673A (zh) * 2018-04-23 2021-03-26 加利福尼亚大学董事会 局部递送cdk9抑制剂的缓释制剂
EP3790607B1 (en) 2018-05-11 2023-12-27 Lupagen, Inc. Systems for closed loop, real-time modifications of patient cells
MA52709A (fr) 2018-05-23 2021-03-31 Modernatx Inc Administration d'adn
US20220184185A1 (en) 2018-07-25 2022-06-16 Modernatx, Inc. Mrna based enzyme replacement therapy combined with a pharmacological chaperone for the treatment of lysosomal storage disorders
WO2020033791A1 (en) 2018-08-09 2020-02-13 Verseau Therapeutics, Inc. Oligonucleotide compositions for targeting ccr2 and csf1r and uses thereof
WO2020047201A1 (en) 2018-09-02 2020-03-05 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding very long-chain acyl-coa dehydrogenase for the treatment of very long-chain acyl-coa dehydrogenase deficiency
MA53609A (fr) 2018-09-13 2021-07-21 Modernatx Inc Polynucléotides codant la glucose-6-phosphatase pour le traitement de la glycogénose
US20220243182A1 (en) 2018-09-13 2022-08-04 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding branched-chain alpha-ketoacid dehydrogenase complex e1-alpha, e1-beta, and e2 subunits for the treatment of maple syrup urine disease
AU2019339430A1 (en) 2018-09-14 2021-04-29 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding uridine diphosphate glycosyltransferase 1 family, polypeptide A1 for the treatment of Crigler-Najjar Syndrome
US20220152225A1 (en) 2018-09-27 2022-05-19 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding arginase 1 for the treatment of arginase deficiency
WO2020097409A2 (en) 2018-11-08 2020-05-14 Modernatx, Inc. Use of mrna encoding ox40l to treat cancer in human patients
RU2681933C1 (ru) * 2018-11-28 2019-03-14 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр "Курчатовский институт" Способ получения полимерных противоопухолевых частиц в проточном микрореакторе и лиофилизата на их основе
SG11202106987WA (en) 2019-01-11 2021-07-29 Acuitas Therapeutics Inc Lipids for lipid nanoparticle delivery of active agents
US11351242B1 (en) 2019-02-12 2022-06-07 Modernatx, Inc. HMPV/hPIV3 mRNA vaccine composition
WO2020208361A1 (en) 2019-04-12 2020-10-15 Mina Therapeutics Limited Sirt1-sarna compositions and methods of use
JP2022532078A (ja) 2019-05-08 2022-07-13 アストラゼネカ アクチボラグ 皮膚及び創傷のための組成物並びにその使用の方法
AU2020283956A1 (en) * 2019-05-28 2021-12-16 Cytodigm, Inc. Microparticles and nanoparticles having sulfate groups on the surface
WO2020263985A1 (en) 2019-06-24 2020-12-30 Modernatx, Inc. Messenger rna comprising functional rna elements and uses thereof
US20220251577A1 (en) 2019-06-24 2022-08-11 Modernatx, Inc. Endonuclease-resistant messenger rna and uses thereof
CN114728887A (zh) 2019-09-19 2022-07-08 摩登纳特斯有限公司 用于治疗剂的细胞内递送的支链尾端脂质化合物和组合物
CN114391040A (zh) 2019-09-23 2022-04-22 欧米茄治疗公司 用于调节载脂蛋白b(apob)基因表达的组合物和方法
WO2021061815A1 (en) 2019-09-23 2021-04-01 Omega Therapeutics, Inc. COMPOSITIONS AND METHODS FOR MODULATING HEPATOCYTE NUCLEAR FACTOR 4-ALPHA (HNF4α) GENE EXPRESSION
WO2021127407A1 (en) * 2019-12-18 2021-06-24 Forwardvue Pharma, Inc. Cai nanoemulsions
KR102327606B1 (ko) * 2020-02-28 2021-11-17 한국과학기술연구원 수중유형 에멀젼 혼합법을 이용한 스테레오컴플렉스 폴리락트산 복합체의 제조방법, 이를 이용한 약물전달용 조성물의 제조방법 및 이에 의해 제조된 약물전달용 조성물
JP2023517326A (ja) 2020-03-11 2023-04-25 オメガ セラピューティクス， インコーポレイテッド フォークヘッドボックスｐ３（ｆｏｘｐ３）遺伝子発現をモジュレートするための組成物および方法
CA3169441A1 (en) * 2020-04-13 2021-10-21 US Nano Food & Drug INC Basic chemotherapeutic intratumour injection formulation
JP2023527875A (ja) 2020-06-01 2023-06-30 モダーナティエックス・インコーポレイテッド フェニルアラニンヒドロキシラーゼバリアント及びその使用
WO2022040006A1 (en) * 2020-08-19 2022-02-24 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Targeting cartilage egfr pathway for osteoarthritis treatment
WO2022066636A1 (en) * 2020-09-22 2022-03-31 Goldilocks Therapeutics, Inc. Nanoparticles and methods of use thereof
CN114262428A (zh) * 2020-09-25 2022-04-01 亭创生物科技(上海)有限公司 一种官能化双嵌段共聚物及其制备方法和用途
EP4243776A1 (en) 2020-11-13 2023-09-20 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding cystic fibrosis transmembrane conductance regulator for the treatment of cystic fibrosis
WO2022108934A1 (en) * 2020-11-17 2022-05-27 Phosphorex, Inc. Novel drug delivery composition and process for blood-brain barrier crossing
RU2756757C1 (ru) * 2020-12-10 2021-10-05 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр "Курчатовский институт" Способ получения суспензии, содержащей наноразмерные частицы лекарства
US11524023B2 (en) 2021-02-19 2022-12-13 Modernatx, Inc. Lipid nanoparticle compositions and methods of formulating the same
JP2024512026A (ja) 2021-03-24 2024-03-18 モデルナティエックス インコーポレイテッド オルニチントランスカルバミラーゼ欠損症の治療を目的とした脂質ナノ粒子及びオルニチントランスカルバミラーゼをコードするポリヌクレオチド
WO2022204369A1 (en) 2021-03-24 2022-09-29 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding methylmalonyl-coa mutase for the treatment of methylmalonic acidemia
WO2022204390A1 (en) 2021-03-24 2022-09-29 Modernatx, Inc. Lipid nanoparticles containing polynucleotides encoding phenylalanine hydroxylase and uses thereof
WO2022204371A1 (en) 2021-03-24 2022-09-29 Modernatx, Inc. Lipid nanoparticles containing polynucleotides encoding glucose-6-phosphatase and uses thereof
WO2022204380A1 (en) 2021-03-24 2022-09-29 Modernatx, Inc. Lipid nanoparticles containing polynucleotides encoding propionyl-coa carboxylase alpha and beta subunits and uses thereof
KR20230160872A (ko) 2021-03-26 2023-11-24 미나 테라퓨틱스 리미티드 Tmem173 sarna 조성물 및 사용 방법
EP4337177A1 (en) 2021-05-11 2024-03-20 Modernatx, Inc. Non-viral delivery of dna for prolonged polypeptide expression in vivo
WO2022266083A2 (en) 2021-06-15 2022-12-22 Modernatx, Inc. Engineered polynucleotides for cell-type or microenvironment-specific expression
WO2022271776A1 (en) 2021-06-22 2022-12-29 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding uridine diphosphate glycosyltransferase 1 family, polypeptide a1 for the treatment of crigler-najjar syndrome
WO2023283359A2 (en) 2021-07-07 2023-01-12 Omega Therapeutics, Inc. Compositions and methods for modulating secreted frizzled receptor protein 1 (sfrp1) gene expression
CA3171750A1 (en) 2021-07-30 2023-02-02 Tim SONNTAG Mrnas for treatment or prophylaxis of liver diseases
WO2023056044A1 (en) 2021-10-01 2023-04-06 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding relaxin for the treatment of fibrosis and/or cardiovascular disease
WO2023099884A1 (en) 2021-12-01 2023-06-08 Mina Therapeutics Limited Pax6 sarna compositions and methods of use
WO2023144193A1 (en) 2022-01-25 2023-08-03 CureVac SE Mrnas for treatment of hereditary tyrosinemia type i
WO2023161350A1 (en) 2022-02-24 2023-08-31 Io Biotech Aps Nucleotide delivery of cancer therapy
WO2023170435A1 (en) 2022-03-07 2023-09-14 Mina Therapeutics Limited Il10 sarna compositions and methods of use
WO2023183909A2 (en) 2022-03-25 2023-09-28 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding fanconi anemia, complementation group proteins for the treatment of fanconi anemia
WO2023196399A1 (en) 2022-04-06 2023-10-12 Modernatx, Inc. Lipid nanoparticles and polynucleotides encoding argininosuccinate lyase for the treatment of argininosuccinic aciduria
WO2023215498A2 (en) 2022-05-05 2023-11-09 Modernatx, Inc. Compositions and methods for cd28 antagonism
WO2023250117A2 (en) 2022-06-24 2023-12-28 Vaxess Technologies, Inc. Applicator for medicament patch
CN115317515A (zh) * 2022-07-19 2022-11-11 沈阳药科大学 氯尼达明/牛血清白蛋白/磷酸铁多效协同仿生矿化纳米制剂及制备方法和应用
WO2024026254A1 (en) 2022-07-26 2024-02-01 Modernatx, Inc. Engineered polynucleotides for temporal control of expression

Family Cites Families (156)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0394265B1 (en) 1987-07-29 1994-11-02 The Liposome Company, Inc. Method for size separation of particles
US5542935A (en) 1989-12-22 1996-08-06 Imarx Pharmaceutical Corp. Therapeutic delivery systems related applications
US5766635A (en) 1991-06-28 1998-06-16 Rhone-Poulenc Rorer S.A. Process for preparing nanoparticles
KR0131678B1 (ko) 1991-12-09 1998-04-17 유미꾸라 레이이찌 파라티로이드 호르몬류의 안정화 조성물
US5302401A (en) * 1992-12-09 1994-04-12 Sterling Winthrop Inc. Method to reduce particle size growth during lyophilization
US5543158A (en) * 1993-07-23 1996-08-06 Massachusetts Institute Of Technology Biodegradable injectable nanoparticles
US5565215A (en) 1993-07-23 1996-10-15 Massachusettes Institute Of Technology Biodegradable injectable particles for imaging
GB9412273D0 (en) * 1994-06-18 1994-08-10 Univ Nottingham Administration means
US6007845A (en) 1994-07-22 1999-12-28 Massachusetts Institute Of Technology Nanoparticles and microparticles of non-linear hydrophilic-hydrophobic multiblock copolymers
JPH10511957A (ja) 1995-01-05 1998-11-17 ザ ボード オブ リージェンツ オブ ザ ユニヴァーシティ オブ ミシガン 表面改質ナノ微粒子並びにその製造及び使用方法
JP4979843B2 (ja) 1995-03-10 2012-07-18 ロッシュ ディアグノスティクス ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 微粒子の形のポリペプチド含有投薬形
US6902743B1 (en) 1995-05-22 2005-06-07 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army Therapeutic treatment and prevention of infections with a bioactive material(s) encapuslated within a biodegradable-bio-compatable polymeric matrix
US7422902B1 (en) 1995-06-07 2008-09-09 The University Of British Columbia Lipid-nucleic acid particles prepared via a hydrophobic lipid-nucleic acid complex intermediate and use for gene transfer
FR2742357B1 (fr) * 1995-12-19 1998-01-09 Rhone Poulenc Rorer Sa Nanoparticules stabilisees et filtrables dans des conditions steriles
US5792477A (en) 1996-05-07 1998-08-11 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Ii Preparation of extended shelf-life biodegradable, biocompatible microparticles containing a biologically active agent
US8038994B2 (en) * 1996-05-15 2011-10-18 Quest Pharmatech Inc. Combination therapy for treating disease
JP2942508B2 (ja) 1997-01-14 1999-08-30 順也 藤森 温度感受性徐放性基剤及び温度感受性徐放性システム
JPH1192468A (ja) * 1997-09-17 1999-04-06 Yakult Honsha Co Ltd 新規なタキサン誘導体
US6201072B1 (en) 1997-10-03 2001-03-13 Macromed, Inc. Biodegradable low molecular weight triblock poly(lactide-co- glycolide) polyethylene glycol copolymers having reverse thermal gelation properties
US6254890B1 (en) 1997-12-12 2001-07-03 Massachusetts Institute Of Technology Sub-100nm biodegradable polymer spheres capable of transporting and releasing nucleic acids
US6541606B2 (en) 1997-12-31 2003-04-01 Altus Biologics Inc. Stabilized protein crystals formulations containing them and methods of making them
JP2002519333A (ja) 1998-06-30 2002-07-02 アムジエン・インコーポレーテツド 生物学的に活性な物質の徐放運搬のための感熱性生分解性ヒドロゲル
US6395718B1 (en) 1998-07-06 2002-05-28 Guilford Pharmaceuticals Inc. Pharmaceutical compositions and methods of inhibiting angiogenesis using naaladase inhibitors
US6265609B1 (en) 1998-07-06 2001-07-24 Guilford Pharmaceuticals Inc. Thio-substituted pentanedioic acid derivatives
KR100274842B1 (ko) * 1998-10-01 2001-03-02 김효근 미립구를 이용한 레티노익산의 서방형 약물방출 시스템
DE19856432A1 (de) 1998-12-08 2000-06-15 Basf Ag Nanopartikuläre Kern-Schale Systeme sowie deren Verwendung in pharmazeutischen und kosmetischen Zubereitungen
US6194006B1 (en) 1998-12-30 2001-02-27 Alkermes Controlled Therapeutics Inc. Ii Preparation of microparticles having a selected release profile
US7311924B2 (en) 1999-04-01 2007-12-25 Hana Biosciences, Inc. Compositions and methods for treating cancer
US6528499B1 (en) 2000-04-27 2003-03-04 Georgetown University Ligands for metabotropic glutamate receptors and inhibitors of NAALADase
AU6132700A (en) 1999-09-30 2001-04-05 Chienna B.V. Polymers loaded with bioactive agents
US6136846A (en) 1999-10-25 2000-10-24 Supergen, Inc. Formulation for paclitaxel
US20050037086A1 (en) 1999-11-19 2005-02-17 Zycos Inc., A Delaware Corporation Continuous-flow method for preparing microparticles
KR100416242B1 (ko) 1999-12-22 2004-01-31 주식회사 삼양사 약물전달체용 생분해성 블록 공중합체의 액체 조성물 및이의 제조방법
US6890946B2 (en) 1999-12-23 2005-05-10 Indiana University Research And Technology Corporation Use of parthenolide to inhibit cancer
US7217770B2 (en) 2000-05-17 2007-05-15 Samyang Corporation Stable polymeric micelle-type drug composition and method for the preparation thereof
US6495164B1 (en) 2000-05-25 2002-12-17 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. I Preparation of injectable suspensions having improved injectability
KR100418916B1 (ko) 2000-11-28 2004-02-14 한국과학기술원 생분해성 고분자와 항암제의 접합체를 이용한 서방형미셀제제의 제조방법
KR100446101B1 (ko) 2000-12-07 2004-08-30 주식회사 삼양사 수난용성 약물의 서방성 제형 조성물
DE60128261T3 (de) 2000-12-21 2016-06-30 Alrise Biosystems Gmbh Verfahren umfassend einen induzierten phasenübergang zur herstellung von hydrophobe wirkstoffe enthaltenden mikropartikeln
US6623761B2 (en) * 2000-12-22 2003-09-23 Hassan Emadeldin M. Method of making nanoparticles of substantially water insoluble materials
SI1345597T1 (sl) * 2000-12-27 2007-12-31 Ares Trading Sa Amfifilni lipidni nanodelci za vgradnjo peptidov in/ali proteinov
DE60214134T2 (de) 2001-02-07 2007-07-19 Beth Israel Deaconess Medical Center, Boston Modifizierte psma-liganden und deren verwendung
WO2002080846A2 (en) 2001-04-03 2002-10-17 Kosan Biosciences, Inc. Epothilone derivatives and methods for making and using the same
WO2003000014A2 (en) 2001-06-21 2003-01-03 Altus Biologics, Inc. Spherical protein particles and methods of making and using them
US7498045B2 (en) 2001-08-31 2009-03-03 Thomas M. S. Chang Biodegradable polymeric nanocapsules and uses thereof
US6592899B2 (en) 2001-10-03 2003-07-15 Macromed Incorporated PLA/PLGA oligomers combined with block copolymers for enhancing solubility of a drug in water
ES2541908T3 (es) * 2001-10-10 2015-07-28 Pierre Fabre Medicament Microesferas biodegradables de liberación prolongada y su procedimiento de preparación
CN1592607A (zh) 2001-10-15 2005-03-09 克里蒂泰克公司 水溶性差药物的组合物、其给药方法和治疗方法
IL162183A0 (en) 2001-12-21 2005-11-20 Celator Technologies Inc Polymer-lipid delivery vehicles and methods for the preparation thereof
US20030235619A1 (en) 2001-12-21 2003-12-25 Christine Allen Polymer-lipid delivery vehicles
EP1472541B1 (en) 2002-01-10 2009-09-16 The Johns Hopkins University Imaging agents and methods of imaging naaladase of psma
WO2003086369A2 (en) 2002-04-05 2003-10-23 Valorisation-Recherche, Societe En Commandite Stealthy polymeric biodegradable nanospheres and uses thereof
US20030232887A1 (en) 2002-04-10 2003-12-18 Johnson Douglas Giles Preparation and use of a stable formulation of allosteric effector compounds
AU2003223600A1 (en) * 2002-04-11 2003-10-27 Altarex Medical Corporation Binding agents and their use in targeting tumor cells
US6890950B2 (en) 2002-04-23 2005-05-10 Case Western Reserve University Lapachone delivery systems, compositions and uses related thereto
JP2003342168A (ja) 2002-05-24 2003-12-03 Nano Career Kk 注射用薬物含有ポリマーミセル製剤の製造方法
US7767803B2 (en) 2002-06-18 2010-08-03 Archemix Corp. Stabilized aptamers to PSMA and their use as prostate cancer therapeutics
US7879351B2 (en) 2002-10-29 2011-02-01 Transave, Inc. High delivery rates for lipid based drug formulations, and methods of treatment thereof
CA2504268A1 (en) 2002-10-30 2004-11-18 Spherics, Inc. Nanoparticulate bioactive agents
CA2508279A1 (en) 2002-12-23 2004-07-22 Vical Incorporated Method for freeze-drying nucleic acid/block copolymer/cationic surfactant complexes
US6841547B2 (en) 2003-02-28 2005-01-11 Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshevia University Method for decreasing low density lipoprotein
US20040185170A1 (en) 2003-03-21 2004-09-23 Shubha Chungi Method for coating drug-containing particles and formulations and dosage units formed therefrom
EP1974726B1 (en) 2003-03-26 2010-01-13 Egalet A/S Matrix compositions for controlled delivery of drug substances
JP2006521367A (ja) 2003-03-26 2006-09-21 株式会社Ｌｔｔバイオファーマ ターゲッティングと徐放を目的とした静脈注射用ナノ粒子
WO2004089291A2 (en) 2003-04-03 2004-10-21 Au Jessie L-S Tumor-targeting drug-loaded particles
US20040247624A1 (en) 2003-06-05 2004-12-09 Unger Evan Charles Methods of making pharmaceutical formulations for the delivery of drugs having low aqueous solubility
US7727969B2 (en) * 2003-06-06 2010-06-01 Massachusetts Institute Of Technology Controlled release nanoparticle having bound oligonucleotide for targeted delivery
US20050256071A1 (en) 2003-07-15 2005-11-17 California Institute Of Technology Inhibitor nucleic acids
US20050142205A1 (en) 2003-07-18 2005-06-30 Julia Rashba-Step Methods for encapsulating small spherical particles prepared by controlled phase separation
CA2533592C (en) 2003-07-23 2015-11-10 Pr Pharmaceuticals, Inc. Controlled release compositions
WO2005020989A1 (en) 2003-09-02 2005-03-10 Novartis Ag Cancer treatment with epothilones
US7311901B2 (en) 2003-10-10 2007-12-25 Samyang Corporation Amphiphilic block copolymer and polymeric composition comprising the same for drug delivery
WO2005039622A2 (en) * 2003-10-21 2005-05-06 Medtronic Minimed, Inc. Modulation of socs expression in the therapeutic regimens
US7846412B2 (en) 2003-12-22 2010-12-07 Emory University Bioconjugated nanostructures, methods of fabrication thereof, and methods of use thereof
US20070053845A1 (en) 2004-03-02 2007-03-08 Shiladitya Sengupta Nanocell drug delivery system
WO2005084710A2 (en) 2004-03-02 2005-09-15 Massachusetts Institute Of Technology Nanocell drug delivery system
US8043631B2 (en) 2004-04-02 2011-10-25 Au Jessie L S Tumor targeting drug-loaded particles
US20080124400A1 (en) 2004-06-24 2008-05-29 Angiotech International Ag Microparticles With High Loadings Of A Bioactive Agent
EP1768692B8 (en) 2004-07-01 2015-06-17 Yale University Targeted and high density drug loaded polymeric materials
US7473678B2 (en) 2004-10-14 2009-01-06 Biomimetic Therapeutics, Inc. Platelet-derived growth factor compositions and methods of use thereof
US20060094676A1 (en) * 2004-10-29 2006-05-04 Ronit Lahav Compositions and methods for treating cancer using compositions comprising an inhibitor of endothelin receptor activity
JP2006131577A (ja) 2004-11-09 2006-05-25 Ltt Bio-Pharma Co Ltd 異なる粒子径を有する薬物封入ナノ粒子の作製方法および当該方法で得られたナノ粒子
EA011594B1 (ru) 2004-12-30 2009-04-28 Синвеншен Аг Композиция, включающая агент, обеспечивающий сигнал, имплантируемый материал и лекарство
WO2006093991A1 (en) 2005-03-02 2006-09-08 The Cleveland Clinic Foundation Compounds which bind psma and uses thereof
CN101189016B (zh) 2005-04-04 2013-03-27 因特尔赛克特耳鼻喉公司 治疗鼻窦病症的装置
JP2006321763A (ja) * 2005-05-20 2006-11-30 Hosokawa Funtai Gijutsu Kenkyusho:Kk 生体適合性ナノ粒子及びその製造方法
AU2006282042B2 (en) 2005-06-17 2011-12-22 The University Of North Carolina At Chapel Hill Nanoparticle fabrication methods, systems, and materials
KR20080031379A (ko) 2005-07-11 2008-04-08 와이어쓰 글루타메이트 아그레카나제 저해제
CA2615122A1 (en) 2005-08-03 2007-02-15 Immunogen, Inc. Immunoconjugate formulations
AU2006284657B2 (en) * 2005-08-31 2012-07-19 Abraxis Bioscience, Llc Compositions and methods for preparation of poorly water soluble drugs with increased stability
JP2009507049A (ja) 2005-09-09 2009-02-19 北京徳科瑞医薬科技有限公司 リン脂質のポリエチレングリコール誘導体に包み込まれたビンカアルカロイド系制癌剤のナノミセル製剤
US20090022806A1 (en) 2006-12-22 2009-01-22 Mousa Shaker A Nanoparticle and polymer formulations for thyroid hormone analogs, antagonists and formulations and uses thereof
US20080267876A1 (en) 2005-09-20 2008-10-30 Yissum Research Development Company Nanoparticles for Targeted Delivery of Active Agent
JP5806444B2 (ja) 2005-12-02 2015-11-10 ノバルティス アーゲー 免疫原性組成物で使用するためのナノ粒子
US8916206B2 (en) 2005-12-26 2014-12-23 Ltt Bio-Pharma Co., Ltd. Nanoparticles containing water-soluble non-peptide low-molecular weight drug
US7842312B2 (en) 2005-12-29 2010-11-30 Cordis Corporation Polymeric compositions comprising therapeutic agents in crystalline phases, and methods of forming the same
US20090155349A1 (en) 2006-02-23 2009-06-18 Jonathan Daniel Heller Methods of treating influenza viral infections
DE102006013531A1 (de) 2006-03-24 2007-09-27 Lts Lohmann Therapie-Systeme Ag Polylactid-Nanopartikel
CA2648099C (en) 2006-03-31 2012-05-29 The Brigham And Women's Hospital, Inc System for targeted delivery of therapeutic agents
CA2652280C (en) * 2006-05-15 2014-01-28 Massachusetts Institute Of Technology Polymers for functional particles
US8232245B2 (en) 2006-07-26 2012-07-31 Sandoz Ag Caspofungin formulations
EP2056793A4 (en) 2006-07-31 2011-08-17 Neurosystec Corp NANOPARTICLES WITH FREE BASE OF GACYCLIDINE
WO2008019142A2 (en) 2006-08-04 2008-02-14 Massachusetts Institute Of Technology Oligonucleotide systems for targeted intracellular delivery
US20080057102A1 (en) 2006-08-21 2008-03-06 Wouter Roorda Methods of manufacturing medical devices for controlled drug release
KR100946275B1 (ko) * 2006-09-26 2010-03-08 주식회사 삼양사 수 난용성 캄토테신 유도체의 미세 나노입자 및 그의제조방법
EP2097111B1 (en) * 2006-11-08 2015-07-15 Molecular Insight Pharmaceuticals, Inc. Heterodimers of glutamic acid
WO2008147456A2 (en) 2006-11-20 2008-12-04 Massachusetts Institute Of Technology Drug delivery systems using fc fragments
CN1957911A (zh) 2006-12-01 2007-05-09 济南康泉医药科技有限公司 一种抗实体肿瘤缓释剂
CN101396340A (zh) 2006-12-12 2009-04-01 济南帅华医药科技有限公司 一种含埃坡霉素衍生物的抗癌缓释注射剂
CN101433520A (zh) 2006-12-12 2009-05-20 济南帅华医药科技有限公司 含埃坡霉素的抗癌缓释剂
CN101396342A (zh) 2006-12-12 2009-04-01 济南帅华医药科技有限公司 含埃坡霉素衍生物的抗癌缓释注射剂
CN1969816A (zh) 2006-12-12 2007-05-30 济南帅华医药科技有限公司 一种含埃坡霉素的抗癌缓释剂
CN1969818A (zh) 2006-12-12 2007-05-30 济南帅华医药科技有限公司 一种含埃坡霉素衍生物的抗癌缓释注射剂
CN1961864A (zh) 2006-12-12 2007-05-16 济南帅华医药科技有限公司 一种抗癌的组合物
WO2008091465A2 (en) 2006-12-21 2008-07-31 Wayne State University Peg and targeting ligands on nanoparticle surface
DK2481409T3 (en) 2007-03-07 2018-08-06 Abraxis Bioscience Llc Nanoparticle comprising rapamycin and albumin as anticancer agent
CN101053553B (zh) 2007-03-16 2011-04-20 吉林大学 一种生物可降解氟尿嘧啶聚酯载药纳米球及其制备方法
WO2008124639A2 (en) 2007-04-04 2008-10-16 Massachusetts Institute Of Technology Poly (amino acid) targeting moieties
WO2008124634A1 (en) 2007-04-04 2008-10-16 Massachusetts Institute Of Technology Polymer-encapsulated reverse micelles
EP2156848A4 (en) 2007-05-14 2012-11-28 Ltt Bio Pharma Co Ltd NANOPARTICLE CONTAINING A LOW MOLECULAR WEIGHT DRUG HAVING A NEGATIVELY PROLONGED RELEASE GROUP
US8486423B2 (en) 2007-08-21 2013-07-16 Board Of Regents, The University Of Texas System Thermo-kinetic mixing for pharmaceutical applications
US20090061009A1 (en) 2007-08-29 2009-03-05 Joseph Schwarz Composition and Method of Treatment of Bacterial Infections
EP2436376B1 (en) 2007-09-28 2014-07-09 BIND Therapeutics, Inc. Cancer cell targeting using nanoparticles
US20090306120A1 (en) 2007-10-23 2009-12-10 Florencia Lim Terpolymers containing lactide and glycolide
US8974814B2 (en) 2007-11-12 2015-03-10 California Institute Of Technology Layered drug delivery polymer monofilament fibers
WO2009070302A1 (en) 2007-11-30 2009-06-04 The Johns Hopkins University Prostate specific membrane antigen (psma) targeted nanoparticles for therapy of prostate cancer
DE102007059752A1 (de) 2007-12-10 2009-06-18 Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft Funktionalisierte, feste Polymernanopartikel enthaltend Epothilone
WO2009084801A1 (en) 2007-12-31 2009-07-09 Samyang Corporation Amphiphilic block copolymer micelle composition containing taxane and manufacturing process of the same
EP2106806A1 (en) 2008-03-31 2009-10-07 Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der Angewandten Forschung e.V. Nanoparticles for targeted delivery of active agents to the lung
US20090312402A1 (en) 2008-05-20 2009-12-17 Contag Christopher H Encapsulated nanoparticles for drug delivery
ES2721850T3 (es) 2008-06-16 2019-08-05 Pfizer Nanopartículas poliméricas terapéuticas que comprenden alcaloides vinca y procedimientos de fabricación y uso de las mismas
EP2309990B2 (en) 2008-06-16 2017-03-15 Pfizer Inc. Drug loaded polymeric nanoparticles and methods of making and using same
US8613951B2 (en) * 2008-06-16 2013-12-24 Bind Therapeutics, Inc. Therapeutic polymeric nanoparticles with mTor inhibitors and methods of making and using same
JP2011525180A (ja) 2008-06-16 2011-09-15 バインド バイオサイエンシズ インコーポレイテッド 治療的標的化ナノ粒子の製作に用いるためのジブロックコポリマーで官能化された標的薬の製造方法
RU2559525C2 (ru) 2008-07-08 2015-08-10 Эббви Инк Белки, связывающие простагландин е2, и их применение
WO2010030763A2 (en) 2008-09-10 2010-03-18 Bind Biosciences, Inc. High throughput fabrication of nanoparticles
US8563041B2 (en) 2008-12-12 2013-10-22 Bind Therapeutics, Inc. Therapeutic particles suitable for parenteral administration and methods of making and using same
JP2012512175A (ja) 2008-12-15 2012-05-31 バインド バイオサイエンシズ インコーポレイテッド 治療薬を徐放するための長時間循環性ナノ粒子
WO2010114770A1 (en) 2009-03-30 2010-10-07 Cerulean Pharma Inc. Polymer-agent conjugates, particles, compositions, and related methods of use
WO2010114768A1 (en) 2009-03-30 2010-10-07 Cerulean Pharma Inc. Polymer-epothilone conjugates, particles, compositions, and related methods of use
WO2010117668A1 (en) 2009-03-30 2010-10-14 Cerulean Pharma Inc. Polymer-agent conjugates, particles, compositions, and related methods of use
CA2763456C (en) 2009-05-27 2017-10-24 Alkermes Pharma Ireland Limited Reduction of flake-like aggregation in nanoparticulate active agent compositions
US8357401B2 (en) 2009-12-11 2013-01-22 Bind Biosciences, Inc. Stable formulations for lyophilizing therapeutic particles
WO2011084518A2 (en) 2009-12-15 2011-07-14 Bind Biosciences, Inc. Therapeutic polymeric nanoparticles comprising corticosteroids and methods of making and using same
ES2780156T3 (es) 2009-12-15 2020-08-24 Pfizer Composiciones terapéuticas de nanopartículas poliméricas con alta temperatura de transición vítrea o copolímeros de alto peso molecular
EA201290498A1 (ru) 2009-12-15 2013-01-30 Байнд Байосайенсиз, Инк. Терапевтические полимерные наночастицы, включающие эпотилон, и способы их получения и применения
CN102740895B (zh) 2009-12-23 2016-02-24 伊利诺伊大学董事会 纳米轭合物以及纳米轭合物配制品
US20110237686A1 (en) 2010-03-26 2011-09-29 Cerulean Pharma Inc Formulations and methods of use
WO2012040513A1 (en) 2010-09-22 2012-03-29 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Compositions and methods for the delivery of beta lapachone
WO2012054923A2 (en) 2010-10-22 2012-04-26 Bind Biosciences, Inc. Therapeutic nanoparticles with high molecular weight copolymers
US20140308363A1 (en) 2011-05-31 2014-10-16 Bind Therapeutics, Inc. Drug loaded polymeric nanoparticles and methods of making and using same
JP2014531456A (ja) 2011-09-22 2014-11-27 バインド セラピューティックス インコーポレイテッド 治療用ナノ粒子と癌を治療する方法
JP6229666B2 (ja) 2012-02-29 2017-11-15 メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツングＭｅｒｃｋ Ｐａｔｅｎｔ Ｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ ｍｉｔ ｂｅｓｃｈｒａｅｎｋｔｅｒ Ｈａｆｔｕｎｇ 活性化合物を取り込んだナノ粒子の製造プロセス
MX363147B (es) 2012-09-17 2019-03-11 Pfizer Inc Star Nanoparticulas terapeuticas que comprenden un agente terapeutico y metodos para realizarlas y usarlas.
BR112015005940A2 (pt) 2012-09-17 2017-07-04 Bind Therapeutics Inc processo para a preparação de nanopartículas terapêuticas
WO2014210485A1 (en) 2013-06-28 2014-12-31 Bind Therapeutics, Inc. Docetaxel polymeric nanoparticles for cancer treatment

Also Published As

Publication number Publication date
US9393310B2 (en) 2016-07-19
JP2012501964A (ja) 2012-01-26
JP2016041756A (ja) 2016-03-31
EP2774608A1 (en) 2014-09-10
HUE047004T2 (hu) 2020-04-28
IL210024A0 (en) 2011-02-28
WO2010005723A3 (en) 2010-03-11
US20130236500A1 (en) 2013-09-12
JP2015134759A (ja) 2015-07-27
KR20160116062A (ko) 2016-10-06
AU2009268923B2 (en) 2015-09-17
EA021422B1 (ru) 2015-06-30
US20160338959A1 (en) 2016-11-24
US20130280339A1 (en) 2013-10-24
CA2728176C (en) 2017-07-04
US8206747B2 (en) 2012-06-26
MX2010014018A (es) 2011-06-21
US20140356444A1 (en) 2014-12-04
US8609142B2 (en) 2013-12-17
US8617608B2 (en) 2013-12-31
EP2309990B2 (en) 2017-03-15
US20130230567A1 (en) 2013-09-05
US9579386B2 (en) 2017-02-28
EP2774608B1 (en) 2019-11-20
CA2728176A1 (en) 2010-01-14
US8652528B2 (en) 2014-02-18
AU2009268923A1 (en) 2010-01-14
EP2309989A4 (en) 2011-08-10
WO2010005723A2 (en) 2010-01-14
ES2462090T3 (es) 2014-05-22
US20120288541A1 (en) 2012-11-15
US9872913B2 (en) 2018-01-23
EA020954B1 (ru) 2015-03-31
US9375481B2 (en) 2016-06-28
DK2774608T3 (da) 2020-01-13
EP2309990A4 (en) 2012-02-22
IL210024A (en) 2017-03-30
US20130251757A1 (en) 2013-09-26
PL2774608T3 (pl) 2020-05-18
US8603534B2 (en) 2013-12-10
EP2309990A2 (en) 2011-04-20
US20110274759A1 (en) 2011-11-10
WO2010005721A3 (en) 2010-03-11
US20100068285A1 (en) 2010-03-18
HK1211492A1 (en) 2016-05-27
SI2774608T1 (sl) 2020-02-28
JP2018065862A (ja) 2018-04-26
US8613954B2 (en) 2013-12-24
KR20110036810A (ko) 2011-04-11
US8293276B2 (en) 2012-10-23
ES2462090T5 (es) 2017-07-12
WO2010005721A2 (en) 2010-01-14
US20130243827A1 (en) 2013-09-19
US20130302433A1 (en) 2013-11-14
EP2309989A2 (en) 2011-04-20
US8663700B2 (en) 2014-03-04
JP6363320B2 (ja) 2018-07-25
US20120276162A1 (en) 2012-11-01
JP2012501965A (ja) 2012-01-26
US20100068286A1 (en) 2010-03-18
EA201170039A1 (ru) 2011-12-30
US8420123B2 (en) 2013-04-16
KR20170127069A (ko) 2017-11-20
PT2774608T (pt) 2020-01-17
EP2309990B1 (en) 2014-01-15
JP6104289B2 (ja) 2017-03-29
EP2309989B1 (en) 2016-09-07
EA201170038A1 (ru) 2011-08-30
US20130302432A1 (en) 2013-11-14
US8318208B1 (en) 2012-11-27
KR101706178B1 (ko) 2017-02-15
CN104997732A (zh) 2015-10-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2765240T3 (es) Nanopartículas poliméricas cargadas de fármaco y procedimientos de fabricación y uso de las mismas
US20140308363A1 (en) Drug loaded polymeric nanoparticles and methods of making and using same
ES2847894T3 (es) Nanopartículas terapéuticas dirigidas y procedimientos de fabricación y uso de las mismas
BRPI0915166B1 (pt) nanopartículas compreendendo pla-peg e pla-plga carreadoras de agentes para o tratamento do câncer e seus usos