ES2244210T3 - Pirrolobenzodiazepinas. - Google Patents

Abstract

Compuesto de fórmula Ia o Ib: en el que: A es CH2, o un enlace simple; R2 se selecciona entre: R, OH, OR, CO2H, CO2R, COH, COR, SO2R, CN; R6, R7 y R9 se seleccionan de manera independiente entre H, R, OH, OR, halo, amino, NHR, nitro, Me3Sn; donde R es un grupo alquilo inferior que tiene 1 a 10 átomos de carbono, o un grupo aralquil de hasta 12 átomos de carbono, de los cuales el grupo alquil contiene opcionalmente uno o más enlaces dobles o triples carbono-carbono, que pueden formar parte de un sistema conjugado, o un grupo arilo de hasta 12 átomos de carbono; y se sustituye opcionalmente por uno o más grupos halo, hidroxi, amino, o nitro, y conteniendo opcionalmente uno o más átomos hetero que pueden formar parte, o ser, un grupo funcional; y R8 se selecciona entre H, R, OH, OR, halo, amino, NHR, nitro, Me3Sn, donde R es como se ha definido anteriormente, o el compuesto es un dímero con cada monómero siendo el mismo o diferente y siendo de fórmula Ia o Ib, donde los grupos R8 de monómerosforman juntos un puente que tiene la fórmula -X-R¿-X- enlazando los monómeros, donde R¿ es una cadena de alquileno que contiene entre 3 y 12 átomos de carbono, cuya cadena se puede interrumpir mediante uno o más átomos hetero y/o anillos aromáticos y puede contener uno o más enlaces dobles o triples carbono-carbono, y cada X se selecciona de manera independiente entre O, S, o N; o R7 y R8 juntos forman un grupo -O-(CH2)p-O-, 0; donde p es 1 ó 2; excepto que en un compuesto de fórmula Ia cuando A es un enlace simple, entonces R2 no es CH=CRARB, donde RA y RB se seleccionan de manera independiente entre H, RC, CORC, CONH2, CONHRC, CONRC2, ciano o fosfonato, donde RC es un grupo alquil no sustituido que tiene 1 a 4 átomos de carbono.

Description

Pirrolobenzodiazepinas.

La presente invención se refiere a pirrolobenzodiacepinas (PBDs).

Antecedentes de la invención

Algunas pirrolobenzodiacepinas (PBDs) tienen la habilidad de reconocer y unirse a secuencias específicas de ADN; la secuencia preferida es PuGPu. El primer antibiótico antitumor PBD, antramicina, se descubrió en 1965 (Leimgruber et al., 1965 J. Am. Chem. Soc., 87, 5793-5795; Leimgruber et al., 1965 J. Am. Chem. Soc., 87, 5791-5793). Desde entonces, se ha informado de un número de PBDs producidas naturalmente, y se han desarrollado más de 10 rutas sintéticas para una variedad de análogos (Thurston et al., 1994 Chem. Rev. 1994, 433-465). Los miembros de la familia incluyen abeimicina (Hochlowski et al., 1987 J. Antibiotics, 40, 145-148), chicamicina (Konishi et al., 1984 J. Antibiotics, 37, 200-206), DC-81 (Patente Japonesa 58-180 487; Thurston et al., 1990, Chem. Brit., 26, 767-772; Bose et al., 1992 Tetrahedron, 48, 751-758), macetramicina (Kuminoto et al., 1980, J. Antibiotics, 33, 665-667), neotramicinas A y B (Takeuchi et al., 1976, J. Antibiotics, 29, 93-96), porotramicina (Tsunakawa et al., 1988, J. Antibiotics, 41, 1366-1373), protracarcina (Shimizu et al., 1982, J. Antibiotics, 29, 2492-2503; Langley y Thurson, 1987, J. Org. Chem., 52, 91-97), sibanomicina (DC-102)(Hara et al., 1988, J. Antibiotics, 41, 702-704; Itoh et al., 1988 J. Antibiotics, 41, 1281-1284), sibiromicina (Leber et al., 1988, J. Am. Chem. Soc., 110, 2992-2993) y tomamicina (Arima et al., 1972 J. Antibiotics, 25, 437-444). Las PBDs son de estructura general:

1

Difieren en el número, tipo y composición de los sustituyentes, tanto en sus anillos aromáticos A y en sus anillos pirrólicos C, en el grado de saturación del anillo C. En el anillo B se encuentra ya sea una imina (N=C), una carbinolamina (NH-CH(OH)), o un éter metil carbinolamina (NH-CH(OMe)) en la posición N10-C11 que es el centro electrofílico responsable de alquilar el ADN. Todos los productos naturales tienen una configuración (S) en la posición quiral C11a que los proporciona con un giro hacia la derecha cuando se ve desde el anillo C hacia el anillo A. Esto les da la forma tridimensional apropiada para isohelicidad con la ranura menor del ADN de forma B, proporcionando un encaje ajustado en el sitio de unión (Kohn, 175 In Antibiotics III. Springer-Verlag, Nueva Cork, pp. 3-11; Hurley y Needham-VanDevanter, 1986 Acc. Chem. Res., 19, 230-237). Su capacidad para formar un aducto en la ranura menor, permitiéndoles interferir con el procesamiento de ADN, y así su uso como agentes antitumorales.

Descripción de la invención

Un primer aspecto de la presente invención es un compuesto de fórmula Ia o Ib:

2

en el que:

A es CH_{2}, o un enlace simple;

R_{2} se selecciona entre: R, OH, OR, CO_{2}H, CO_{2}R, COH, COR, SO_{2}R, CN;

R_{6}, R_{7} y R_{9} se seleccionan de manera independiente entre H, R, OH, OR, halo, amino, NHR, nitro, Me_{3}Sn;

donde R es un grupo alquilo inferior que tiene 1 a 10 átomos de carbono, o un grupo aralquil de hasta 12 átomos de carbono, de los cuales el grupo alquil contiene opcionalmente uno o más enlaces dobles o triples carbono-carbono, que pueden formar parte de un sistema conjugado, o un grupo arilo de hasta 12 átomos de carbono; y se sustituye opcionalmente por uno o más grupos halo, hidroxi, amino, o nitro, y conteniendo opcionalmente uno o más átomos hetero que pueden formar parte, o ser, un grupo funcional;

y R_{8} se selecciona entre H, R, OH, OR, halo, amino, NHR, nitro, Me_{3}Sn, donde R es como se ha definido anteriormente, o el compuesto es un dímero con cada monómero siendo el mismo o diferente y siendo de fórmula Ia o Ib, donde los grupos R_{8} de monómeros forman juntos un puente que tiene la fórmula -X-R'-X- enlazando los monómeros, donde R' es una cadena de alquileno que contiene entre 3 y 12 átomos de carbono, cuya cadena se puede interrumpir mediante uno o más átomos hetero y/o anillos aromáticos y puede contener uno o más enlaces dobles o triples carbono-carbono, y cada X se selecciona de manera independiente entre O, S, o N; o R_{7} y R_{8} juntos forman un grupo -O-(CH_{2})_{p}-O-, donde p es 1 ó 2;

excepto que en un compuesto de fórmula Ia cuando A es un enlace simple, entonces R_{2} no es CH=CR^{A}R^{B}, donde R^{A} y R^{B} se seleccionan de manera independiente entre H, R^{C}, COR^{C}, CONH_{2}, CONHR^{C}, CONR^{C}_{2}, ciano o fosfonato, donde R^{C} es un grupo alquil no sustituido que tiene 1 a 4 átomos de carbono.

Si A es un enlace simple entonces R_{2} está unido directamente al anillo C del PBD.

Si R es un grupo arilo, y contiene un átomo hetero, entonces R es un grupo heterocíclico. Si R es una cadena alquilo, y contiene un átomo hetero, el átomo hetero puede estar situado en cualquier sitio en la cadena alquilo, por ejemplo, -O-C_{2}H_{5}, -CH_{2}-S-CH_{3}, o puede formar parte o ser un grupo funcional, por ejemplo carbonil, hidroxi.

R se selecciona preferiblemente entre un grupo alquil inferior que tiene de 1 a 10 átomos de carbono, o un grupo aralquil, preferiblemente de hasta 12 átomos de carbono, opcionalmente sustituido por uno o más grupos halo, hidroxi, amino o nitro. Se prefiere más que R se seleccione entre un grupo alquil inferior que tenga de 1 a 10 átomos de carbono opcionalmente sustituidos por uno o más grupos halo, hidroxi, amino o nitro. Se prefiere particularmente que R sea un alquil de cadena recta o ramificada no sustituido, que tenga de 1 a 10, preferiblemente de 1 a 6, y más preferiblemente de 1 a 4, átomos de carbono, por ejemplo metil, etil, n-propil, n-butil o t-butil.

Se puede preferir que A sea CH, y/o que R_{2} sea CO_{2}H, CO_{2}R, CH_{2}OH, o CH_{2}OR. También se puede preferir que R_{2} sea CO_{2}Me, CO_{2}^{t}Bu, CH_{2}OH, o CH_{2}OAc.

R_{6}, R, y R_{9} y, a menos que el compuesto sea un dímero, R_{8} se selecciona de manera independiente entre H y OR, y más particularmente H, OMe y COH_{2}Ph. También se prefiere que R_{7} y, a menos que el compuesto sea un dímero, R_{8} sean OR, más preferiblemente OMe o OCH_{2}Ph, y R_{6} y R_{9} son H.

Si A es un enlace simple, entonces R_{2} es preferiblemente un grupo aril, por ejemplo Ph, p-MeO-Ph, o un grupo alquil o alcaril que contiene por lo menos un doble enlace que forma parte de un sistema conjugado con el doble enlace del anillo C, por ejemplo, CH=CH_{2}, CH=CH-CH_{3}.

Los compuestos del primer aspecto de la invención son preferiblemente de fórmula Ia.

Si el compuesto de fórmula Ia o Ib es un dímero, el puente de dímero puede ser de fórmula -O-(CH_{2})_{p}-O-, donde p está comprendido entre 3 y 12, más preferiblemente entre 3 y 9.

Un segundo aspecto de la presente invención es un compuesto con la fórmula II:

\vskip1.000000\baselineskip

3

\vskip1.000000\baselineskip

en el que:

R'2 es CH_{2};

R_{6}, R_{7}, R_{8} y R_{9} se seleccionan de manera independiente entre H, R, OH, OR, halo, amino, NHR, nitro, Me_{3}Sn;

donde R es un grupo alquilo inferior que tiene 1 a 10 átomos de carbono, o un grupo aralquil de hasta 12 átomos de carbono, de los cuales el grupo alquil contiene opcionalmente uno o más enlaces dobles o triples carbono-carbono, que pueden formar parte de un sistema conjugado, o un grupo arilo de hasta 12 átomos de carbono; y se sustituye opcionalmente por uno o más grupos halo, hidroxi, amino, o nitro, y conteniendo opcionalmente uno o más átomos hetero que pueden formar parte, o ser, un grupo funcional; o R_{7} y R_{8} juntos forman un grupo -O-(CH_{2})_{p}-O-, donde p es 1 ó 2.

Si R es un grupo arilo, y contiene un átomo hetero, entonces R es un grupo heterocíclico. Si R es una cadena alquilo, y contiene un átomo hetero, el átomo hetero puede estar situado en cualquier sitio en la cadena alquilo, por ejemplo, -O-C_{2}H_{5}, -CH_{2}-S-CH_{3}, o puede formar parte o ser un grupo funcional, por ejemplo carbonil, hidroxi.

R se selecciona preferiblemente entre un grupo alquil inferior que tiene de 1 a 10 átomos de carbono, o un grupo aralquil, preferiblemente de hasta 12 átomos de carbono, opcionalmente sustituido por uno o más grupos halo, hidroxi, amino o nitro. Se prefiere más que R se seleccione entre un grupo alquil inferior que tenga de 1 a 10 átomos de carbono opcionalmente sustituidos por uno o más grupos halo, hidroxi, amino o nitro. Se prefiere particularmente que R sea un alquil de cadena recta o ramificada no sustituido, que tenga de 1 a 10, preferiblemente de 1 a 6, y más preferiblemente de 1 a 4, átomos de carbono, por ejemplo metil, etil, n-propil, n-butil o t-butil.

R'_{2} es preferiblemente O, CH_{2} o CHCH_{3}, y más preferiblemente CH_{2} o CHCH_{3}.

R_{6}, R, y R_{9} y, a menos que el compuesto sea un dímero, R_{8} se selecciona de manera independiente entre H y OR, y más particularmente H, OMe, COH_{2}Ph y I. También se prefiere que R_{7} y, a menos que el compuesto sea un dímero, R_{8} sean OR, más preferiblemente OMe, OCH_{2}Ph o I, y R_{6} y R_{9} son H.

Compuesto de fórmula II:

4

\vskip1.000000\baselineskip

en el que:

R'2 es CH_{2};

R_{6}, R_{7}, R_{8} y R_{9} se seleccionan de manera independiente entre H, R, OH, OR, halo, amino, NHR, nitro, Me_{3}Sn;

donde R es un grupo alquilo inferior que tiene 1 a 10 átomos de carbono, o un grupo aralquil de hasta 12 átomos de carbono, de los cuales el grupo alquil contiene opcionalmente uno o más enlaces dobles o triples carbono-carbono, que pueden formar parte de un sistema conjugado, o un grupo arilo de hasta 12 átomos de carbono; y se sustituye opcionalmente por uno o más grupos halo, hidroxi, amino, o nitro, y conteniendo opcionalmente uno o más átomos hetero que pueden formar parte, o ser, un grupo funcional;

y R_{8} se selecciona entre H, R, OH, OR, halo, amino, NHR, nitro, Me_{3}Sn, donde R es como se ha definido anteriormente, o el compuesto es un dímero con cada monómero siendo el mismo o diferente y siendo de fórmula Ia o Ib, donde los grupos R_{8} de monómeros forman juntos un puente que tiene la fórmula -X-R'-X- enlazando los monómeros, donde R' es una cadena de alquileno que contiene entre 3 y 12 átomos de carbono, cuya cadena se puede interrumpir mediante uno o más átomos hetero y/o anillos aromáticos y puede contener uno o más enlaces dobles o triples carbono-carbono, y cada X se selecciona de manera independiente entre O, S, o N.

Si R es un grupo arilo, y contiene un átomo hetero, entonces R es un grupo heterocíclico. Si R es una cadena alquilo, y contiene un átomo hetero, el átomo hetero puede estar situado en cualquier sitio en la cadena alquilo, por ejemplo, -O-C_{2}H_{5}, -CH_{2}-S-CH_{3}, o puede formar parte o ser un grupo funcional, por ejemplo carbonil, hidroxi.

R se selecciona preferiblemente entre un grupo alquil inferior que tiene de 1 a 10 átomos de carbono, o un grupo aralquil, preferiblemente de hasta 12 átomos de carbono, opcionalmente sustituido por uno o más grupos halo, hidroxi, amino o nitro. Se prefiere más que R se seleccione entre un grupo alquil inferior que tenga de 1 a 10 átomos de carbono opcionalmente sustituidos por uno o más grupos halo, hidroxi, amino o nitro. Se prefiere particularmente que R sea un alquil de cadena recta o ramificada no sustituido, que tenga de 1 a 10, preferiblemente de 1 a 6, y más preferiblemente de 1 a 4, átomos de carbono, por ejemplo metil, etil, n-propil, n-butil o t-butil.

R'_{2} es preferiblemente O, CH_{2} o CHCH_{3}, y más preferiblemente CH_{2} o CHCH_{3}.

R_{6}, R, y R_{9} y, a menos que el compuesto sea un dímero, R_{8} se selecciona de manera independiente entre H y OR, y más particularmente H, OMe y COH_{2}Ph. También se prefiere que R_{7} y, a menos que el compuesto sea un dímero, R_{8} sean OR, más preferiblemente OMe o OCH_{2}Ph, y R_{6} y R_{9} son H.

Si el compuesto de fórmula II es un dímero, el puente de dímero puede ser de fórmula -O-(CH_{2})_{p}-O-, donde p está comprendido entre 3 y 12, más preferiblemente entre 3 y 9, y más preferiblemente de 3 a 5.

Un cuarto aspecto de la presente invención es un compuesto con la fórmula III:

5

en el que:

R_{6}, R_{7} y R_{9} se seleccionan de manera independiente entre H, R, OH, OR, halo, amino, NHR, nitro, Me_{3}Sn;

donde R es un grupo alquilo inferior que tiene 1 a 10 átomos de carbono, o un grupo aralquil de hasta 12 átomos de carbono, de los cuales el grupo alquil contiene opcionalmente uno o más enlaces dobles o triples carbono-carbono, que pueden formar parte de un sistema conjugado, o un grupo arilo de hasta 12 átomos de carbono; y se sustituye opcionalmente por uno o más grupos halo, hidroxi, amino, o nitro, y conteniendo opcionalmente uno o más átomos hetero que pueden formar parte, o ser, un grupo funcional;

en donde R_{8} es NH_{2}.

Si R es un grupo arilo, y contiene un átomo hetero, entonces R es un grupo heterocíclico. Si R es una cadena alquilo, y contiene un átomo hetero, el átomo hetero puede estar situado en cualquier sitio en la cadena alquilo, por ejemplo, -O-C_{2}H_{5}, -CH_{2}-S-CH_{3}, o puede formar parte o ser un grupo funcional, por ejemplo carbonil, hidroxi.

R se selecciona preferiblemente entre un grupo alquil inferior que tiene de 1 a 10 átomos de carbono, o un grupo aralquil, preferiblemente de hasta 12 átomos de carbono, opcionalmente sustituido por uno o más grupos halo, hidroxi, amino o nitro. Se prefiere más que R se seleccione entre un grupo alquil inferior que tenga de 1 a 10 átomos de carbono opcionalmente sustituidos por uno o más grupos halo, hidroxi, amino o nitro. Se prefiere particularmente que R sea un alquil de cadena recta o ramificada no sustituido, que tenga de 1 a 10, preferiblemente de 1 a 6, y más preferiblemente de 1 a 4, átomos de carbono, por ejemplo metil, etil, n-propil, n-butil o t-butil.

Un quinto aspecto de la presente invención proporciona un compuesto con la fórmula IV:

6

en el que:

R_{6}, R_{7} y R_{9} se seleccionan de manera independiente entre H, R, OH, OR, halo, amino, NHR, nitro, Me_{3}Sn;

donde R es un grupo alquilo inferior que tiene 1 a 10 átomos de carbono, o un grupo aralquil de hasta 12 átomos de carbono, de los cuales el grupo alquil contiene opcionalmente uno o más enlaces dobles o triples carbono-carbono, que pueden formar parte de un sistema conjugado, o un grupo arilo de hasta 12 átomos de carbono; y se sustituye opcionalmente por uno o más grupos halo, hidroxi, amino, o nitro, y conteniendo opcionalmente uno o más átomos hetero que pueden formar parte, o ser, un grupo funcional;

R'_{8} y R''_{8} se seleccionan de manera independiente entre H, R o juntos forman una amina cíclica; y

n está comprendida entre 1 y 7.

Si R'_{8} y R''_{8} forma una amina cíclica, entonces es usualmente un átomo N simple en un anillo que es por el contrario carbocíclico y es preferiblemente de 5- o 6- miembros y puede ser saturado o insaturado. El anillo puede estar funsionado con otro sistema de anillo que puede ser aromático, por ejemplo puede ser un anillo de benceno. De esta manera, por ejemplo la amina cíclica puede ser un grupo indolil o isoindolil. También es posible que la amina cíclica contenga uno o más átomos hetero, además de N en el anillo de amina y/o en un anillo fusionado y también puede sustituirse por uno o más grupos R.

Si R es un grupo arilo, y contiene un átomo hetero, entonces R es un grupo heterocíclico. Si R es una cadena alquilo, y contiene un átomo hetero, el átomo hetero puede estar situado en cualquier sitio en la cadena alquilo, por ejemplo, -O-C_{2}H_{5}, -CH_{2}-S-CH_{3}, o puede formar parte o ser un grupo funcional, por ejemplo carbonil, hidroxi.

R se selecciona preferiblemente entre un grupo alquil inferior que tiene de 1 a 10 átomos de carbono, o un grupo aralquil, preferiblemente de hasta 12 átomos de carbono, opcionalmente sustituido por uno o más grupos halo, hidroxi, amino o nitro. Se prefiere más que R se seleccione entre un grupo alquil inferior que tenga de 1 a 10 átomos de carbono opcionalmente sustituidos por uno o más grupos halo, hidroxi, amino o nitro. Se prefiere particularmente que R sea un alquil de cadena recta o ramificada no sustituido, que tenga de 1 a 10, preferiblemente de 1 a 6, y más preferiblemente de 1 a 4, átomos de carbono, por ejemplo metil, etil, n-propil, n-butil o t-butil.

Se puede preferir que uno de R'8 o R''8 sea un grupo de protección de nitrógeno, tal como Fmoc.

R_{7} es preferiblemente un grupo donador de electrones, y es más preferiblemente de fórmula OR; se prefieren particularmente los grupos OMe, OEt y OBn. El término "grupo donador de electrones" significa una fracción fijada de manera covalente a un compuesto que es capaz de aumentar la densidad de electrones en otras partes del compues-
to.

Además, R_{6} y R_{9} se seleccionan más preferiblemente entre H y OR; se prefieren particularmente OMe, OEt y OBn.

n está preferiblemente comprendido entre 1 y 3, y más preferiblemente es 1.

Un aspecto de la presente invención es la utilización de un compuesto como se ha descrito en el primer, segundo, tercer, cuarto o quinto aspectos de la invención en un procedimiento de terapia. Las condiciones que se pueden tratar incluyen enfermedades basadas en genes, que incluyen, por ejemplo enfermedades neoplásticas y la Enfermedad de Alzheimer, y también infecciones bacteriales, parasíticas y virales. Cualquier condición que se pueda tratar mediante la regulación de la expresión de los genes se puede tratar usando los compuestos de la invención. Según este aspecto de la presente invención, los compuestos proporcionados se pueden administrar a individuos. La administración es preferiblemente en una "cantidad terapéuticamente efectiva", siendo suficiente para mostrar beneficios a un paciente. Este beneficio puede ser por lo menos la mejora de por lo menos un síntoma. La cantidad real administrada, y el índice y periodo de la administración dependerán de la naturaleza y la severidad de lo que se trate. La prescipición del tratamiento, por ejemplo las decisiones de dosis, están dentro de la responsabilidad de los practicantes generales y de otros doctores médicos.

Un compuesto se puede administrar en solitario o en combinación con otros tratamientos, ya sea de manera simultánea o secuencial, dependiendo de la condición a tratar.

Las composiciones farmacéuticas según la presente invención, y para su uso según la presente invención, pueden comprender, además del ingrediente activo, es decir, un compuesto de fórmula Ia, Ib, II, III o IV, un excipiente, portador, tampón, estalizador u otros materiales farmacéuticamente aceptables bien conocidos por los técnicos en la materia. Estos materiales han de ser no tóxicos y no han de interferir con la eficacia del ingrediente activo. La naturaleza precisa del portador u otro material dependerá de la ruta de administración, que puede ser oral, o por inyección, por ejemplo cutánea, subcutánea, o intravenosa.

Las composiciones farmacéuticas para administración oral pueden ser en forma de tabletas, cápsulas, polvos o líquido. Una tableta puede comprender un portador sólido o un adyuvante. Las composiciones farmacéuticas líquidas generalmente comprenden un portador líquido tal como agua, petróleo, aceites animales o vegetales, aceite mineral o aceite sintético. También se puede incluir una solución salina fisiológica, dextrosa u otra solución sacárida o glicoles tales como etileno glicol, propileno glicol o polietileno glicol. Una cápsula puede comprender un portador sólido tal como una gelatina.

Para inyección intravenosa, cutánea o subcutánea, o inyección en el lugar de aflicción, el ingrediente activo será en forma de solución acuosa parenteralmente aceptable que esté libre de pirógeno y que tenga un pH, una isotonicidad y una estabilidas adecuados. Los técnicos en la materia podrán preparar soluciones adeucadas usando, por ejemplo, vehículos isotónicos tales como inyección de Cloruro Sódico, Inyección de Ringer, Inyección de Ringer Lactada. Se pueden incluir, si se requiere, preservativos, estabilizadores, tampones, antioxidantes y/o otros aditivos.

Un séptimo aspecto de la presente invención es una composición farmacéutica que contiene un compuesto de una cualquiera de las fórmulas Ia, Ib, II, III o IV tal como se ha descrito anteriormente, y un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable. La preparación de las composiciones farmacéuticas se describe en relación con el quinto aspecto de la invención anterior.

Un octavo aspecto de la presente invención proporciona el uso de un compuesto de una cualquiera de las fórmulas Ia, Ib, II, III o IV tal como se han descrito anteriormente, para preparar un medicamento para el tratamiento de una enfermedad proliferativa. El compuesto de fórmula Ia, Ib, II, III o IV se pueden proporcionar junto con un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable. Los compuestos se pueden usar para matar de manera selectiva células tumorales óxicas o hipóxicas en procedimientos para el tratamiento de cánceres, por ejemplo leucemias y particularmente cánceres sólidos que incluyen tumores de colon, CNS, renales y de pulmón, incluyendo pequeños carcinomas de células del pulmón, y melanomas. En particular, se pueden usar dímeros de fórmula II para matar de manera selectiva tumores y melanomas del pulmón, colon y CNS. Los compuestos de fórmula III y IV se pueden usar de manera selectiva contra melanomas.

Otro aspecto de la presente invención proporciona el uso de un compuesto de una cualquiera de las fórmulas Ia, Ib, II, III o IV tal como se han descrito anteriormente para preparar un medicamento para el tratamiento de infecciones víricas, parasíticas o bacteriales. La preparación de un medicamento se describe en relación con el sexto aspecto de la invención anterior.

En otros aspectos, la invención proporciona procedimiento para preparar compuestos según el primer, segundo, tercero o cuarto aspectos de la presente invención.

Ahora se describirán más aspectos de la invención con referencia a los dibujos adjuntos, en los que:

Las figuras 1 a 6a/b son rutas de síntesis para compuestos de fórmula Ia de la presente invención;

Las figuras 7 a 12 son rutas de síntesis para compuestos de fórmula II de la presente invención;

La figura 13 es una ruta sintética para un compuesto de fórmula III de la presente invención;

La figura 14 es una ruta de síntesis para un compuesto de fórmula IV;

La figura 15 es una síntesis de un intermedio en la preparación de compuestos de fórmula IV de la presente invención;

La figura 16 es una ruta de síntesis para compuestos de fórmula IV de la presente invención; y

Las figuras 17 a 20 son gráficos que representan los resultados de citotoxicidad de los ejemplos 5 a 8 respectivamente.

Estrategias Sintéticas Generales Preferidas

Una etapa clave en una ruta preferida de compuestos de fórmula Ia, Ib, II, III o IV es la ciclización para producir el anillo B, implicando la generación de un aldehído (o equivalente funcional del mismo) en que será la posición 11, y ataque sobre el mismo mediante el nitrógeno PRO-N10.

\vskip1.000000\baselineskip

7

\vskip1.000000\baselineskip

En esta estructura, no se muestra ninguna sustitución o instauración de anillo C. R_{8} representa O(CH_{2})_{n}CH_{2}COR'_{8} en compuestos de fórmula IV. R_{10} es un grupo de protección de nitrógeno, preferiblemente con un carbamato funcionalmente unido al nitrógeno del PBD. El "aldehído enmascarado" -CPQ puede ser un acetal o un tioacetal (posiblemente cíclico), en cuyo caso la ciclización implica el desenmascarado. Alternativamente, el aldehído enmascarado puede ser un precursor de aldehído, tal como alcohol-CHOH, en cuyo caso la reacción implica la oxidación, por ejemplo mediante TPAP o DMSO (oxidación Swern).

El compuesto aldehído enmascarado se puede producir mediante la condensación de una pirrolidina 2-sustituida correspondiente con un ácido 2-nitrobenzoico:

\vskip1.000000\baselineskip

8

\vskip1.000000\baselineskip

El grupo nitro se puede reducir a continuación a-NH_{2} y protegido mediante reacción con un reagente adecuado, por ejemplo un cloroformato, que proporciona el grupo de protección de nitrógeno removible en la ruta de síntesis.

Un procedimiento que implica el procedimiento de oxidación-ciclización se representa en el esquema 1 (un tipo alternativo de ciclización se describirá más tarde con referencia al esquema 2).

Esquema 1

9

La unión imina/carbinolamina en el PBD(A) se puede desproteger mediante procedimientos estándar para producir el compuesto deseado, por ejemplo si R_{10} es Alloc, a continuación la desprotección se realiza usando paladio para retirar el grupo de protección N10, seguida por la eliminación de agua para dar la imina.

La exposición del alcohol (B) (en el que el nitrógeno Pro-N10 se protege generalmente como carbamato) a perrutenato de pilamonio (TPAP)/N-metilmorfolina N-óxido (NMO) sobre tamices A4 produce la oxidación acompañada por el cierre espontáneo del anillo B para conseguir el producto deseado. El procedimiento de oxidación TPAP/NMO se encuentra que es particularmente conveniente para reacciones a pequeña escala, mientras que el uso de procedimientos de oxidación basados en DMSO, particularmente oxidación Swern, se prueba superior para trabajo a mayor escala (por ejemplo > 1 g).

El alcohol no ciclizado (B) se puede preparar mediante la reacción de un reagente de protección de nitrógeno de fórmula D, que es preferiblemente un cloroformato o un cloruro ácido, a una solución del alcohol amino C, generalmente en solución, generalmente en presencia de una base tal como piridina (preferiblemente 2 equivalentes) a una temperatura moderada (por ejemplo a 0ºC). Bajo estas condiciones se observa una pequeña acilación O o ninguna.

El alcohol amino C clave se puede preparar mediante reducción del correspondiente compuesto nitro E, eligiendo un procedimiento que dejará el resto de la molécula intacta. El tratamiento de E con cloruro de estaño (II) en un solvente adecuado, por ejemplo metanol de reflujo, generalmente consigue, después de la retirada de las sales del estaño, el producto deseado en alta producción.

La exposición de E a hidracina/níquel Raney evita la producción de sales de estaño y puede producir una mayor producción de C, aunque este procedimiento es menos compatible con el rango de posibles sustituyentes de anillo C y A. Por ejemplo, si hay una instauración en el anillo C (en el propio anillo, o en R_{2} o R_{3}), esta técnica puede ser inadecuada.

El compuesto nitro de fórmula E se puede preparar acoplando el cloruro de o-nitrobenzoilo apropiado a un compuesto de fórmula F, por ejemplo en presencia de K_{2}CO_{3} a -25ºC bajo una atmósfera N_{2}. Se pueden preparar fácilmente compuesto de fórmula F, por ejemplo mediante olefinación de la quetona derivada de prolina L-trans-hidroxi. La quetona intermedia también se puede explotar mediante conversión al enol triflato para su uso en reacciones de acoplamiento mediadas con paladio.

El cloruro de o-nitrobenzoilo se sintetiza a partir del ácido o-nitrobenzoico (o alquil éster después de hidrólisis) de fórmula G, que sí mismo se prepara a partir del derivado H de ácido vaníllico (o alquil éster). Muchos de estos están comercialmente disponibles y algunos se describen en Althuis, T.H. y Hess, H.J., J. Medicinal Chem., 20(1), 146-266 (1977).

Ciclización Alternativa (Esquema 2)

Esquema 2

\vskip1.000000\baselineskip

10

\vskip1.000000\baselineskip

En el esquema 1, la etapa final o penúltima era una ciclización oxidativa. Una alternativa, usando acoplamiento tioacetal, se muestra en el esquema 2. Mercurio mediado no enmascarado produce la ciclización al compuesto PBD protegido (A).

El compuesto tioacetal se puede preparar como se muestra en el esquema 2: el anillo C protegido de tioacetal [preparado a través de un procedimiento de literatura: Langley, D.R. & Thurston, D.E., J. Organic chemistry, 52, 91-97 (1987)] se acopla al ácido o-nitrobenzoico (o alquil éster después de hidrólisis) (G) usando un procedimiento de literatura. El compuesto nitro resultante no se puede reducir mediante hidrogenación, debido al grupo tioacetal, de manera que se usa el procedimiento de cloruro de estaño (II) para conseguir la amina. Este está entonces N-protegido, por ejemplo mediante reacción con un cloroformato o cloruro ácido, tal como 2,2,2-tricloroetilcloroformato.

Se pueden usar anillos C que contienen acetal como alternativa en este tipo de ruta con la desprotección que implican otros procedimientos, incluyendo el uso de condiciones ácidas.

\newpage

Síntesis de Dímeros (Esquema 3)

Esquema 3

\vskip1.000000\baselineskip

11

\vskip1.000000\baselineskip

Se pueden sintetizar dímeros PDB usando la estrategia desarrollada por la síntesis de los monómeros PBD protegidos. Las rutas de síntesis representadas en el esquema 3 muestran compuestos cuando el enlace de dímeros en de fórmula -O-(CH_{2})_{n}-O-. La etapa de formación de dímeros se realiza normalmente para formar un bis(ácido nitro) G'. Este compuesto se puede tratar a continuación como compuesto G en el esquema 1 o en el esquema 2 anterior.

El bis(ácido nitro) G' se puede obtener mediante nitración (por ejemplo usando ácido nítrico al 70%) el bis(ácido carboxílico). Este se puede sintetizar mediante alquilación de dos equivalentes del ácido benzoico relevante con el diiodoalcano apropiado bajo condiciones básicas. Muchos ácidos benzoicos están comercialmente disponibles y otros se pueden sintetizar mediante procedimientos convencionales. Alternativamente, los ésteres de ácido benzoico relevantes se pueden unir juntos mediante una eterificación Mitsunobo con un alcanediol apropiado, seguida por nitración, y a continuación hidrólisis (no representada).

Una síntesis alternativa del bis(ácido nitro) implica la oxidación del bis(nitro aldehído), por ejemplo con permanganato de potasio. Este se puede obtener a su vez mediante nitración directa del bis(aldehído), por ejemplo con HNO_{3} al 70%. Finalmente, el bis(aldehído) se puede obtener a través de la eterificación Mitsunobu de dos equivalentes del aldehído benzoico con el alcanediol apropiado.

Una aproximación de síntesis alternativa a las detalladas anteriormente es proteger la posición pro N10 en el componente que formará en anillo A, antes de unir el componente que formará en anillo C.

Estrategias Sintéticas Preferidas para Compuestos de fórmula Ia

La ruta de síntesis del esquema 1 generalmente es aplicable a compuestos de fórmula Ia.

PBDs C2/C3-endo-insaturadas de fórmula Ia pueden sintetizarse a partir de sus precursores protegidos N10-carbamato. Típicamente, la extracción catalizada con paladio de un alil carbamato puede utilizarse para generar la imina N10-C11 sin afectar la insaturación clave C2. Por ejemplo, si la imina/carbinolamina N10-C11 está protegida mediante un grupo aloc, la endo insaturación C2/C3 se mantiene durante la reacción de división Alloc.

La reducción del compuesto nitro E tal como se muestra en el esquema 1 con cloruro de estaño (II) en metanol de reflujo deja sin afectar la insaturación C2/C3. El procedimiento hidracina/níquel Raney no sería adecuado debido al doble enlace.

El compuesto de fórmula F puede utilizarse en su forma protegida TBDMS, y por lo tanto debe incluirse una etapa de desprotección para producir el compuesto E amino-alcohol.

El éter TBDMS, que es el producto del acoplamiento del compuesto TBDMS protegido con el cloruro o-nitrobenzoil, puede tratarse con AcOH:THF:H_{2}O (3:1:1). Se encontró que el TBAF es inadecuado para esta transformación debido a la rápida degeneración de los productos de reacción.

Una clase de anillo C requerido que proporciona componentes F puede obtenerse como se muestra en el esquema 4.

Esquema 4

\vskip1.000000\baselineskip

12

\vskip1.000000\baselineskip

La trans-4-hidroxi-prolina F8 comercialmente disponible puede estar protegida N-aloc para dar el alil carbamato F7 que puede esterificarse luego utilizando condiciones estándar. La reducción de hidruro del éster F6 proporciona el diol F5. La protección selectiva del TBDMS del diol brinda un silil éter F4, el cual puede luego oxidarse utilizando ya sea oxidación Swern o TPAP, para proporcionar la cetona F3.

La cetona F3 puede someterse a una reacción Wittig para producir una mezcla de los EZ exo-ésteres F2 que pueden luego convertirse en el compuesto endo C2/C3 F1(Ia) siguiendo un tratamiento con hidruro de sodio en exceso. La división mediante paladio del grupo protegido N-alloc (Dangles, O.; Guibé, F.; Balavoine, G.; Lavielle, S.; Marquet, A.; J. Org. Chem. 1987, 52, 4984) produce el compuesto F(Ia).

Ruta alternativa para compuestos de fórmula Ia

Se ha desarrollado una ruta sintética más lineal para el compuesto B del esquema 1 que permite una producción a mayor escala de las PBDs C2/C3 endo insaturadas, y se muestra en el esquema 5.

\newpage

Esquema 5

\vskip1.000000\baselineskip

13

\vskip1.000000\baselineskip

El grupo silil protector puede dividirse con buen rendimiento mediante el tratamiento de B1(Ia) con AcOH:THF:
H_{2}O (3:1:1). La endo-insaturación C2/C3 clave presente en B1(Ia) puede introducirse directamente mediante la realización de la reacción Horner-Emmons sobre una cetona del tipo B2. A diferencia de la ruta anterior (Esquema 4), la adición de NaH extra para asegurar una migración de dobles enlaces no fue necesaria para este sustrato. La oxidación Swern del alcohol secundario B3 puede utilizarse para proporcionar la cetona B2. La anilina protegida de carbamato B3 puede prepararse a partir del compuesto nitro B5 en dos etapas. Primeramente, el grupo nitro puede reducirse a la anilina mediante el empleo del procedimiento de níquel Raney/hidracina porque un compuesto de tipo B5 carece de insaturación C2. Este procedimiento es más ventajoso que el procedimiento de cloruro de estaño (II) debido a que el producto es más fácil de aislar. La anilina B4 puede entonces protegerse del N-carbamato con alto rendimiento sin una formación significativa de carbonato en el oxígeno C2.

Puede sintetizarse una amida del tipo B5 mediante el acoplamiento de un cloruro ácido de tipo G a la amina clave KEC5 (Esquema 6).

\newpage

Esquema 6

\vskip1.000000\baselineskip

14

\vskip1.000000\baselineskip

En términos generales, esta ruta tiene varias ventajas sobre la ruta anterior que resultan en una producción a mayor escala de las PBDs endo-insaturadas C2/C3. Primeramente, la hidrogenación catalítica de KEC4 permite una preparación a gran escala de intermediario KEC5. En segundo lugar, esta etapa más eficiente de reducción de nitro puede llevarse a cabo en un intermediario carente de insaturación C2. Lo que es más importante es que la migración de doble enlaces durante la reacción Horner-Emmons es espontánea, por lo que no es necesario sodio excedente. Otros trabajadores también han observado esta migración del doble enlace (Leimgruber, W.; Batcho, A. D.; Czajkowski, R. C. J. Am. Chem. Soc. 1968, 90, 5641).

La parr-hidrogenación de KEC4, para dividir el grupo protector Cbz, permite la síntesis a gran escala del intermediario amino clave KEC5. El éter TBDMS KEC4 se preparó en una forma análoga a la correspondiente al intermediario protegido Alloc F4 (Esquema 4). La sililiación del alcohol primario KEC3 se logró utilizando como un agente de transferencia DBU. El diol KEC3 se obtuvo a partir de la reducción de hidruro del éster KEC2 que a su vez se sintetizó a partir de ácido carboxílico KEC1. La protección N-Cbz de trans-4-hidroxi-L-prolina (F4) se logró mediante la adopción de un procedimiento informado en la literatura (Bridges, R. J.; Stanley, M. S.; Anderson, M. W.; Cotman, C. W.; Chamberlain, R. A. J. Med. Chem. 1991, 34, 717).

Ciertos grupos R_{2} pueden requerir protección durante las rutas de síntesis antes mencionadas, por ejemplo los alcoholes pueden protegerse mediante el uso de un grupo protector acetato (ver ejemplo 1(d)).

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(Esquema pasa a página siguiente)

\newpage

Ruta alternativa adicional para el compuesto de la fórmula Ia

Esquema 7

15

La siguiente ruta es particularmente adecuada para un compuesto de fórmula Ia donde A es un enlace simple, y R_{2} es un grupo alilo o contiene un doble enlace que está conjugado con aquel del anillo C. Sin embargo, elementos de la síntesis, por ejemplo la protección SEM, pueden ser útiles en una ruta de otros compuestos.

Las PBDs objetivo se prepararon mediante reducción de dilactamo SEM protegido (Q) con tetraborohidruro de sodio seguido por un tratamiento con gel sílice. El tetraborohidruro de sodio, inicialmente, convierte el dilactamo en una carbinolamina protegida. Sin embargo, esta especie es muy inestable y el tratamiento con gel de sílice es suficiente para provocar la fragmentación del grupo protector SEM acompañado por la formación de imina.

Los dilactamos SEM protegidos (Q) se prepararon mediante reacciones de acoplamiento de Suzuki y Stille sobre el intermediario de enol triflato (P). La reacción de Suzuki es particularmente útil ya que puede usarse para instalar tanto sustituyentes aril como vinil en la posición C2 de la PBD. Más de 70 ácidos borónicos se hallan comercialmente disponibles permitiendo la introducción de una gran diversidad en el sistema PBD. También pueden realizarse sin problemas reacciones Heck sobre el intermediario de enol triflate.

El enol triflato (P) se preparó a partir del precursor de cetona (O) utilizando anhídrido tríflico en DCM en presencia de piridina. La cetona (O) se preparó a partir del precursor de alcohol secundario (N) mediante oxidación de Swern. Otros procedimientos de oxidación que involucran TPAP o el reactivo Dess Martin proporcionan la cetona con rendimientos igualmente buenos. El alcohol secundario se obtuvo mediante una extracción selectiva de un grupo TBDMS de un compuesto M en presencia del grupo protector SEM N10. El grupo SEM se instaló mediante el enfriado del anión dilactamo N10 (de L) con SEM-C1; este es un procedimiento general y puede utilizarse para instalar grupos protegidos relacionados tales como MOM. Para evitar que el hidroxi C2 del compuesto K interfiera con la etapa de protección N10 si se protegió como un éter TBDMS. El 2-hidroxi dilactam (K) se formó mediante la hidrogenación de un grupo nitro de anillo A del compuesto J y acoplándolo con el anillo C del metil éster. El compuesto anillo A nitro anillo C éster (J) se preparó mediante el acoplamiento de ácido comercialmente disponible (G) a metil-4-hidroxi-prolinato.

Las rutas alternativas de síntesis son igualmente aplicables a la síntesis de dímeros.

Estrategias de Síntesis Preferidas para Compuestos de fórmula II

La ruta de síntesis del esquema 1 es generalmente aplicable a los compuestos de fórmula II.

Las PBDs C2 insaturadas de fórmula II pueden sintetizarse a partir de sus precursores de N10-carbamato protegidos. Típicamente, la extracción catalizada con paladio de un alil carbamato puede utilizarse para generar la imina N10-C11 sin afectar la insaturación clave C2. Alternativamente, el par cadmio-plomo puede emplearse para dividir un N10-2,2,2-tricloroetil carbamato de la PBD protegida.

La reducción del compuesto nitro E como se muestra en el esquema 1 con cloruro de estaño (II) mantiene la insaturación C2, a pesar de que aislar la anilina C de las sales de estaño puede ser problemática.

El compuesto de fórmula F puede utilizarse en su forma protegida TBDMS, y por lo tanto debe incluirse una etapa de desprotección para producir el compuesto amino alcohol E.

El éster TBDMS de tipo E, que es el producto del acoplamiento del compuesto TBDMS protegido con el cloruro o-nitrobenzoil adecuado, puede tratarse con AcOH:THF:H_{2}O (3:1:1). Se encontró que el TBAF es inadecuado para esta transformación debido a la rápida degeneración de los productos de reacción.

Los compuestos que proporcionan el anillo C F(II) pueden obtenerse como se muestra en el esquema 8.

Esquema 8

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

16

\vskip1.000000\baselineskip

La trans-4-hidroxi-L-prolina F8 comercialmente disponible puede estar N-alloc protegida para dar el alil carbamato F7 que puede luego esterificarse utilizando las condiciones estándar. La reducción de hidruro del éster F6 proporciona el diol F5. La protección selectiva del TBDMS del diol da un silil éter F4, que puede entonces oxidarse, utilizando tanto la oxidación Swern o TPAP, para proporcionar la cetona F3.

La funcionalidad C2-olefínica presente en F2 puede introducirse mediante la realización de la reacción de Wittig sobre la cetona F3. La división mediada por paladio del grupo protector N-alloc (Dangles O.; Guibé, F.; Balavoine, G.; Lavielle, S.; Marquet, A.; J. Org. Chem. 1987, 52, 4984) produce el compuesto F(II).

Ruta alternativa para el compuesto C

Esquema 9

\vskip1.000000\baselineskip

17

\vskip1.000000\baselineskip

Se ha desarrollado una ruta alternativa para el compuesto C (Esquema 9). La amida de fórmula C1 puede sintetizarse mediante la formación de cloruro ácido de un ácido antranílico N-troc protegido de tipo C2. No deja de ser interesante que los ácidos antranílicos N-troc no generan anhídridos isatóicos, permitiendo así las reacciones de formación de amida con aminas del tipo F(II). La separación mediada por TBAF de los grupos 2,2,2-tricloroetil carbamato y TBDMS del C1 puede proporcionar el amino alcohol clave C.

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(Esquema pasa a página siguiente)

\newpage

Ruta alternativa para compuestos de fórmula II

Esquema 10

18

Se ha desarrollado una ruta sintética más lineal para el compuesto B del esquema 1 que permite una producción a mayor escala de las PBDs C2 insaturadas, y se muestra en el esquema 10. La división mediada por TBAF del grupo TBDMS puede utilizarse para producir B(II) a partir de B1(II). La insaturación C2 clave presente en B1(II) puede introducirse mediante la realización de la reacción de olefinación de Wittig sobre una cetona de tipo B2. La oxidación se Swern del alcohol secundario B3 puede utilizarse para proporcionar la cetona B2. La anilina protegida de carbamato B3 puede prepararse a partir del compuesto nitro B5 en dos etapas. Primeramente, el grupo nitro puede reducirse a la anilina mediante el empleo del procedimiento de níquel Raney/hidracina porque un compuesto de tipo B5 carece de insaturación C2. Este procedimiento es más ventajoso que el procedimiento de cloruro de estaño (II) debido a que el producto es más fácil de aislar. La anilina B4 puede entonces protegerse de N-carbamato con un alto rendimiento sin una formación significativa de carbonato en el oxígeno C2.

Una amida de tipo B5 puede sintetizarse mediante el acoplamiento de un cloruro ácido de tipo G a la amina clave KEC5 (ver el esquema 6). En general, esta ruta tiene diversas ventajas sobre la ruta convergente que permite una producción a mayor escala de las PBDs C2 insaturadas. Primeramente, la hidrogenación catalítica de KEC4 permite una preparación a mayor escala del intermediario clave KEC5. En segundo lugar, la etapa de nitro reducción puede llevarse a cabo sobre un intermediario carente de insaturación C2. Finalmente, puede realizarse la olefinación de Wittig en las últimas etapas de la ruta sintética donde se toleran limitaciones a mayor escala.

En la síntesis del dímero, las rutas antes establecidas pueden utilizarse en preferencia a aquellas establecidas en las estrategias sintéticas generales. En particular, el grupo nitrógeno protector puede ventajosamente ser un carbamato, ya que grupos protectores de este tipo pueden extraerse en la etapa final mediante una variedad de procedimientos que, en general, no afectan la insaturación clave C2.

Procedimientos Experimentales Generales

Los puntos de fusión (mp) se determinaron en un aparato digital de punto de fusión Gallenkamp P1384 y no están corregidos. El espectro infrarrojo (IR) se registró utilizando un espectrofotómetro Perkin-Elmer 297. Los espectros ^{1}H- y ^{13}C-NMR se registraron en un espectrofotómetro Jeol GSX 270 MHZ FT-NMR funcionando a 20ºC +/- 1ºC. Los cambios químicos se registran en partes por millón (\delta) campo abajo desde tetrametilsilano (TMS). Las multiplicidades de rotación se describen como: s (simple), bs (simple ancho), d (doblete), dd (doblete o dobletes), t (triplete), q (cuarteto), p (péntuple) o m (múltiple). Los espectros de masa (MS) se registraron utilizando un Espectrómetro de Masa Jeol JMS-DX 303 GC (Modo EI: 79 eV, fuente 117-147ºC). Las masas moleculares exactas (HRMS) se determinaron mediante una correspondencia de picos utilizando perfluoroqueroseno (PFK) como un marcador interno de masa, y los espectros de masa FAB se obtuvieron a partir de una matriz de glicerol/tioglicerol/ácido trifluoro acético (1:1:0,1) con una temperatura fuente de 180ºC. Las rotaciones ópticas en la línea Na-D se obtuvieron a temperatura ambiente utilizando un Polarímetro Perkin-Elmer 141. Los resultados analíticos estuvieron generalmente entre +/- 0,2% de los valores teóricos. La cromatografía por desorción súbita se realizó utilizando "Silica Gel-60" Aldrich de cromatografía por desorción súbita (E. Merck, mezcla 230-400). La cromatografía de capa fina (TLC) se realizó utilizando GF_{254} (con indicador fluorescente) sobre placas de vidrio. Todos los solventes y reactivos, a menos que se indique otra cosa, fueron suministrados por Aldrich Chemical Company Ltd. y se utilizaron como se suministraron sin purificación adicional. Los solventes anhidros se prepararon mediante destilación bajo una atmósfera de nitrógeno seco en presencia de un agente conductor adecuado, y se almacenaron sobre cedazos moleculares 4\ring{A} o cable de sodio. El éter de petróleo se refiere a la fracción que hierve a 40-60ºC.

Ejemplos Ejemplo 1(a) Síntesis del 2-cianometil PBD (10, SB-A67) (Ver la Figura 1)

19

Síntesis del Nitro Alcohol (3)

Una destilación del ácido 1 (3,03 g, 10 mmol, 1 equiv) en CH_{2}Cl_{2} (50 mL) recién destilado se trató con oxalil cloruro (1,05 mL, 12 mmol, 1,2 equiv) bajo una atmósfera de nitrógeno y se agitó. Se añadió DMF (0,1 mL) y la solución produjo efervescencia. Se permitió que la reacción se agitara toda la noche a RT. Al día siguiente la solución de cloruro ácido se añadió en forma de gotas durante 2 horas a una mezcla agitada de la amina 2 (2,31 g, 10 mmol, 1 equiv) y TEA (3,48 mL, 25 mmol, 2,5 equiv) en CH_{2}Cl_{2} (30 mL) recién destilado mientras se mantuvo la temperatura bajo 0ºC, bajo una atmósfera de nitrógeno. Se permitió entonces que la mezcla de la reacción se calentara a RT y se agitó toda la noche. La solución se lavó con NaHCO_{3} (100 mL), NH_{4}Cl saturado (100 mL), salmuera (100 mL), (MgSO_{4}) seco, filtrado y evaporado en vacío para dar un aceite marrón que se purificó mediante cromatografía por desorción súbita (SiO_{2}, EtOAc) y proporcionó el compuesto acoplado 3 (3,24 g, 6,28 mmol, 62,8%) como un cristal amarillo: rotámeros ^{1}H NMR (CDCl_{3}, 270 MHz): \delta -0,10 (s, 6H, Si(CH_{3})_{2}), 0,8 (s, 9H, SiC(CH_{3})_{3}), 2,04-2,55 (m, 3H, 1-H, OH), 3,05-4,60 (m, 9H, 11-H, 11a-H, OMe, 3-H, 2-H), 5,20 (br s, 2H, OBn), 6,78 y 6,85 (2xs, 1H, 6-H), 7,27-7,47 (m, 5H, Ph), 7,73 y 7,76 (2xs, 1H, 9-H); ^{13}C NMR (CDCl_{3}, 270 MHz); \delta -5,5, -5,4, 18,2, 25,7, 25,8, 36,3, 56,6, 62,6, 70,2, 71,3, 109,0, 109,4, 127,6-128,8, 135,2, 137,3, 147,9, 154,7, 166,6; IR (neto): 3401, 3065, 3033, 2951, 2856, 2739, 2628, 1956, 1743, 1620, 1578, 1522, 1462, 1434, 1378, 1336, 1277, 1221, 1075, 1051, 1002, 914, 836, 779, 752, 697, 669, 650, 615; EIMS m/z (intensidad relativa) 516 (M^{+-}, 0,6), 460 (29,8), 459 (92,6), 368 (7,9), 286 (49,6), 91 (100,0), 73 (9,5); FAB m/z (intensidad relativa) 517 (M^{+-}, +1, 15,1), 385 (9,2), 286 (19,3), 92 (9,3), 91 (100,0), 75 (14,0), 73 (42,2).

Reducción al Amino Alcohol (4)

Una solución de hidracina (3,11 mL, 100 mmol, 5 equiv) en MeOH (50 mL) se añadió en forma de gotas a una solución de reflujo del compuesto nitro 3 (10,32 g, 20 mmol, 1 equiv), gránulos anti aglomerantes y Ni Raney (3,5 g) en MeOH (150 mL). Después de una hora a TLC de reflujo (SiO_{2}, 5% MeOH-CHCl_{3}) reveló el consumo total de material inicial. La mezcla se trató entonces con suficiente Ni Raney para descomponer cualquier hidracina que no hubiera reaccionado. Después de enfriar a RT se filtró la mezcla a través de Celite y el filtrado se evaporó in vacuo. El residuo resultante se disolvió en CH_{2}Cl_{2} (300 mL), se secó (MgSO_{4}), filtró y evaporó in vacuo para proporcionar 4 (6,80 g, 14 mmol, 70%) como un aceite rosa que se llevó a través de la siguiente etapa sin purificación: rotámeros ^{1}H NMR (CDCl_{3}, 270 MHz): \delta -0,001 (s, 6H, Si(CH_{3})_{2}), 0,88 (br s, 9H, SiC(CH_{3})_{3}), 1,96-2,23 (m, 2H, 1-H), 3,44-4,48 (m, 12H, 11-H, 3-H, OMe, NH_{2}, OH, 2-H, 11a-H), 5,09 (br s, 2H, OBn), 6,25 y 6,27 (2xs, 1H, 6-H), 6,68 y 6,73 (2*s, 1H, 9-H), 7,26-7,42 (m, 5H, Ph); ^{13}C NMR (CDCl_{3}, 270 MHz): \delta -5,4, 18,2, 25,9, 35,7, 56,9, 57,2, 70,4, 70,7, 103,2, 112,9, 113,4, 127,2, 127,4, 127,9, 128,6, 128,6, 136,7, 141,6; IR (neto): 3356,80, 2930,13, 2857,36, 2247,82, 1622,19, 1514,60, 1463,60, 1408,95, 1261,43, 1176,55, 1118,48, 1003,88, 911,00, 836,61, 778,15, 733,59, 697,72,
646,32.

Síntesis del Aloc Pro-N10-Protegido C2-Alcohol (5)

Una solución de alil cloro formato (1,54 mL, 14,48 mmol, 1,05 equiv) en CH_{2}Cl_{2} destilado de nuevo (30 mL) se añadió gota a gota a una mezcla agitada de la amina 4 (6,70 g, 13,79 mmol, 1 equiv), piridina (2,45 mL, 30,34 mmol, 2,2 equiv) en CH_{2}Cl_{2} destilado de nuevo (200 mL), a 0ºC bajo una atmósfera de nitrógeno. La mezcla se dejó que se calentara a RT y se agitó de un día para el otro. Al día siguiente el TLC (SiO_{2}, 5% MeOH-CHCl_{3}) reveló el acabado de la reacción. La mezcla se limpió con CuSO_{4} saturado (100 mL), H_{2}O (100 mL), salmuera (100 mL), secado (MgSO_{4}), filtrado y evaporado in vacuo para dar un aceite amarillo oscuro. La cromatografía por desorción súbita (SiO_{2}, 30% EtOAc-éter petróleo) ofreció el compuesto Alloc puro 5 (6,70 g, 11,75 mmol, 85,2%) como un aceite amarillo; rotámeros ^{1}H NMR (CDCl_{3}, 270 MHz): \delta 0,03 y 0,04 (2xs, 6H, Si(CH_{3})_{2}), 0,89 (br s, 9H, SiC(CH_{3})_{3}),
1,99-2,40 (m, 2H, 1-H), 3,56 (br s, 4H, 11-H, 3-H), 3,79 (s, 3H, OMe), 4,05-4,20 (m, 1H, 11a-H), 4,38 (s, 1H, 2-H), 4,58-4,62 (m, 3H, OH, Alloc), 5,16-5,37 (m, 4H, OBn, Alloc), 5,86-6,00 (m, 1H, Alloc), 6,80 (s, 1H, 6-H), 7,30-7,48 (m, 5H, Ph), 7,80 (s, 1H, 9-H), 8,86 (br s, 1H, NH); ^{13}C NNR (CDCl_{3}, 270 MHz): \delta -5,5, -5,4, 18,1, 25,8, 35,6, 56,4, 57,2, 60,4, 65,8, 70,5, 70,7, 106,4, 111,7, 116,4, 118,0, 127,7-128,6, 132,5, 136,3, 144,3, 150,2, 153,8, 169,4; IR (net): 3336, 3067, 2953, 2931, 2858, 1732, 1600, 1525, 1464, 1408, 1327, 1225, 1175, 1121, 1048, 1028, 1002, 937, 837, 812, 778, 744, 698, 671, 636, 608, 562; EIMS m/z (intensidad relativa) 570 (M^{+}., 35,0), 513 (27,2), 340 (19,3), 149 (24,3), 91 (24,1), 77 (16,4), 58 (33,0), 57 (100,0), 44 (27,2), 39 (39,8); [\alpha]^{23}D = -55,94 (c = 1,010, CHCl_{3}).

Oxidación a la C2-Quetona (6)

Una solución de DMSO (2,50 mL, 35,25 mmol, 3 equiv) en CH_{2}Cl_{2} recién destilado (200 mL) se añadió en forma de gotas durante 1,5 horas a una solución agitada de oxalil cloruro (8,81 mL de una solución 2M en CH_{2}Cl_{2}, 17,62 mmol, 1,5 equiv) a -55/-60ºC (nitrógeno líquido/CHCl_{3}) bajo una atmósfera de nitrógeno. Después de 30 minutos de agitado a -55ºC, se añadió una solución del alcohol secundario 5 (6,70 g, 11,75 mmol, 1 equiv) en CH_{2}Cl_{2} (150 mL) en forma de gotas a la mezcla de reacción durante 1,5 h. A continuación del agitado a -55/-60ºC durante 45 minutos se trató la reacción en forma de gota con una solución de TEA (11,14 mL, 79,90 mmol, 6,8 equiv) en CH_{2}Cl_{2} (50 mL) durante un período de 40 minutos. La mezcla se agitó durante otros 45 minutos a -30ºC y luego se permitió que se calentara hasta RT. La reacción se trató entonces con salmuera (150 mL), se enfrió a 0ºC y se acidificó a pH=2 con HCl concentrado. La fase orgánica se lavó con H_{2}O (150 mL), salmuera (150 mL), se secó (MgSO_{4}), filtró y evaporó en vacío para dar la cetona 6 como un aceite naranja oscuro (6,18 g, 10,88 mmol, 93%), suficientemente puro mediante TLC (SiO_{2}, 40% EtOAc-éter de petróleo) para ser llevado a la siguiente etapa sin purificación adicional: rotámeros ^{1}H NMR (CDCl_{3}, 270 MHz): \delta 0,04 y 0,05 (2xs, 6H, Si(CH_{3})_{2}), 0,87 (s, 9H, SiC(CH_{3})_{3}), 2,47-2,78 (m, 2H, 1-H), 3,66-4,10 (m, 8H, 3-H, OMe, 11-H, 11a-H), 4,62-4,65 (m, 2H, Alloc), 4,80-5,40 (m, 4H, OBn, Alloc), 5,88-6,03 (m, 1H, Alloc), 6,76 (s, 1H, 6-H), 7,27-7,49 (m, 5H, Ph), 7,90 (s, 1H, 9-H), 8,62 (br s, 1H, NH); ^{13}C NMR (CDC3, 270 MHz): \delta -5,8, -5,7, 18,0, 25,6, 25,7, 56,5, 65,8, 68,0, 70,7, 106,4, 111,0, 118,2, 127,7-128,6, 132,4, 136,1, 150,6, 153,4, 208,9; IR (neto): 3510, 3332, 2957, 2870, 2740, 1959, 1771, 1738, 1633, 1537, 1428, 1274, 1233, 1120, 1029, 844, 785, 700; EIMS m/z (intensidad relativa) 568 (M^{+}., 90,6), 512 (28,7), 511 (79,8), 453 (12,1), 340 (38,6), 298 (12,7), 282 (16,9), 172 (23,9), 91 (100,0), 41 (15,1); [\alpha]^{23}_{D}=-1.98º (c=1.010, CHCl_{3}).

Inserción del Grupo C2-cianometil (7)

Se agitó hidruro de sodio (0,70 g de una dispersión al 60% aceite inminuteseral, 17,60 mmol, 2,5 equiv) en éter de petróleo durante 10 minutos. Se permitió que la suspensión se asentara y el solvente se transfirió bajo nitrógeno desde el matraz a través de una jeringuilla de dos puntas. El residuo remanente se suspendió en THF anhidro recién destilado (50 mL), enfriado a 0ºC y se trató por goteo con una solución del dietil cianometilfosfonato (11,14 mL, 79,90 mmol, 6,8 equiv) en THF (60 mL) bajo una atmósfera de nitrógeno. Se permitió que la mezcla se caliente hasta RT y se agitó durante 1,5 h. Después del enfriado a 0ºC la mezcla de reacción se trató por goteo con una solución de la cetona 6 (11,14 mL, 79,90 mmol, 6,8 equiv) en THF (40 mL). Después de agitarlo toda la noche TLC (SiO_{2}, 30% EtOAc-éter de petróleo) reveló el consumo casi completo del material inicial. THF se evaporó en vacío y el residuo resultante se trató con una solución saturada de NaHCO_{3} (100 mL) y EtOAc (100 mL). La capa acuosa se lavó con EtOAc (100 mL) y las capas orgánicas combinadas se lavaron entonces con H_{2}O (100 mL), salmuera (100 mL), secadas (MgSO_{4}), filtradas y evaporadas in vacuo para dar un cristal marrón que se sometió a cromatografía por desorción súbita (SiO_{2}, 30% EtOAc-éter de petróleo) para proporcionar el compuesto ciano puro 7 (2,6 g, 4,40 mmol, 63%) como un cristal amarillo: ^{1}H NMR (CDCl_{3}, 270 MHz): \delta 0,03-0,09 (m, 6H, Si(CH_{3})_{2}), 0,88 (m, 9H, SiC(CH_{3})_{3}), 2,68-2,91 (m, 2H, 1-H), 3,12-3,13 (m, 2H, 12-H), 3,72-3,76 (m, 2H, 11-H), 3,82 (s, 3H, OMe), 4,62-4,65 (m, 2H, Alloc), 4,75 (m, 1H, 11a-H), 5,19 (s, 2H, OBn), 5,22-5,39 (m, 2H, Alloc), 5,88-6,02 (m, 1H, Alloc), 6,59 (s, 1H, 3-H), 6,68 (s, 1H, 6-H), 7,32-7,50 (m, 5H, Ph), 7,95 (s, 1H, 9-H), 8,72 (s, 1H, NH); ^{13}C NMR (CDCl_{3}, 270 MHz): \delta -5,4, 17,5, 18,1, 25,6-25,7, 34,0, 56,6, 59,8, 62,3, 65,8, 70,7, 106,1, 111,8, 114,0, 116,2, 118,1, 127,7-129,3, 132,4, 132,8, 136,1, 144,2, 150,9, 153,4, 166,1; IR (neto): 3337, 3067, 3034, 2954, 2930, 2857, 2253, 1732, 1622, 1599, 1524, 1495, 1464, 1408, 1362, 1336, 1259, 1205, 1166, 1116, 1051, 1026, 992, 914, 839, 778, 735, 698, 647; EIMS m/z (intensidad relativa) 591 (M^{+}., 20,1), 534 (15,0), 340 (67,5), 282 (20,9), 252 (25,6), 195 (32,4), 91 (100,0); HRMS m/z Calculado para 591,2765 (C_{32}H_{41}N_{3}O_{6}Si), Encontrado 591,2758; [\alpha]^{23}_{D}= -83,25º (c=1,015, CHCl_{3}).

Alcohol desprotegido (8)

Se añadió AcOH glacial (15 mL) a una solución agitada de silil éter 7 (2,10 g, 3,55 mmol) en THF (10 mL) y H_{2}O (15 mL). La mezcla de reacción se agitó a RT y se monitoreó cada hora mediante TLC (SiO_{2}, 30% EtOAc-éter de petróleo). En el transcurso de 3 horas se añadieron AcOH (10 mL) en dos porciones adicionales. La mezcla se agitó por un total de 4 horas, momento en que la reacción se había completado. La mezcla se enfrió entonces a 0ºC y se trató con un goteo con una solución al 10% de NaHCO_{3} en H_{2}O (50 mL). La solución acuosa se extrajo con EtOAc (3x20 mL) y las capas orgánicas combinadas se lavaron con H_{2}O (20 mL), salmuera (20 mL), secadas (MgSO_{4}), filtradas y evaporadas in vacuo para dar un aceite amarillo. La cromatografía por desorción súbita (SiO_{2}, 5% MeOH-CHCl_{3}) ofreció el alcohol libre 8 (1,40 g, 2,93 mmol, 83%) como un cristal amarillo: ^{1}H NMR (CDCl_{3}, 270 MHz): \delta 2,41-3,02 (m, 2H, 1-H), 3,13 (s, 2H, 12-H), 3,70-4,10 (m, 6H, 11-H, OMe, OH), 4,61-4,64 (m, 2H, Alloc), 4,76 (m, 1H, 11a-H), 5,16 (s, 2H, OBn), 5,23-5,28 (m, 2H, Alloc), 5,87-6,02 (m, 1H, Alloc), 6,53 (s, 1H, 3-H), 6,78 (s, 1H, 6-H), 7,27-7,48 (m, 5H, Ph), 7,75 (s, 1H, 9-H), 8,45 (s, 1H, NH); ^{13}C NMR (CDCl_{3}, 270 MHz): \delta 17,4, 34,8, 56,8, 61,5, 65,1, 65,9, 70,8, 106,9, 111,8, 114,4, 116,1, 118,2, 127,7-129,1, 132,1, 132,4, 136,0, 144,8, 151,1, 153,7, 167,3; IR (neto): 3340, 3067, 2934, 2856, 2252, 1732, 1601, 1523, 1455, 1407, 1374, 1336, 1226, 1167, 1111, 1048, 1028, 996, 938, 869, 838, 768, 745, 698, 668, 636, 608; EIMS m/z (intensidad relativa) 477 (M^{+}., 14,6), 340 (46,9), 282 (13,0), 91 (100,0); HRMS m/z Calculado para 477,1900 (C_{26}H_{27}N_{3}O_{6}, Encontrado 477,1962; [\alpha]^{23}_{D}=-67,42 (c=1,068, CHCl_{3}).

PBD Ciclizada N10 Protegida (9)

Una solución de DMSO (0,75 mL, 10,5 mmol, 3,6 equiv) en CH_{2}Cl_{2} recién destilado (40 mL) se añadió en forma de gota a una tasa rápida a una solución agitada de oxalil cloruro (2,64 mL de una solución 2M en CH_{2}Cl_{2}, 5,27 mmol, 1,8 equiv) a -40/-50ºC (nitrógeno líquido /clorobenceno) bajo una atmósfera de nitrógeno. Después de 5 minutos de agitado a -45ºC, se añadió una solución del alcohol primario 8 (1,40 g, 2,93 mmol, 1 equiv) en CH_{2}Cl_{2} (30 mL) en forma de gotas a la mezcla de reacción durante 45 minutos. A continuación del agitado a -45ºC durante 45 minutos se trató la reacción por goteo con una solución de TEA (1,72 mL, 12,31 mmol, 4,2 equiv) en CH_{2}Cl_{2} (20 mL) durante un período de 30 minutos. La mezcla se agitó durante otros 40 minutos a -45ºC y luego se dejó calentar a RT y se diluyó con 20 mL CH_{2}Cl_{2}. La reacción se enfrió a 0ºC y se lavó con HCl 1N (200 mL), H_{2}O (100 mL), salmuera (100 mL), se secó (MgSO_{4}), filtró y evaporó in vacuo para dar una espuma amarilla que se sometió a cromatografía por desorción súbita (SiO_{2}, 5% MeOH-CHCl_{3}) para proporcionar el compuesto puro de anillo cerrado 9 (0,95 g, 2,00 mmol, 68%) como un leve cristal amarillo: ^{1}H NMR (CDCl_{3}, 270 MHz): \delta 2,69-3,14 (m, 2H, 1-H), 3,24 (s, 2H, 12-H), 3,84-3,98 (m, 6H, 11-H, OMe, OH), 4,46 (m, 2H, Alloc), 5,07-5,18 (m, 4H, OBn, Alloc), 5,60-5,80 (m, 2H, Alloc, 11a-H), 6,74 (s, 1H, 3-H), 7,04 (s, 1H, 6-H), 7,24-7,43 (m, 6H, Ph, 9-H); ^{13}C NMR (CDCl_{3}, 270 MHz): \delta 17,5, 36,5, 56,2, 59,6, 66,9, 71,1, 85,7, 111,0, 113,2, 114,7, 116,1, 118,3, 124,6, 127,3-128,7, 131,7, 136,0, 149,2, 150,6, 163,6; IR (neto): 3396, 3089, 2938, 2615, 2251, 1707, 1602, 1513, 1432, 1308, 1219, 1113, 1045, 918, 869, 790, 735, 698, 648; EIMS m/z (intensidad relativa) 475 (M^{+}., 34,2), 340 (25,4), 339 (35,0), 279 (10,3), 134 (10,6), 91 (100,0); HRMS m/z Calculado para 475,1743 (C_{26}H_{25}N_{3}O_{6}), Encontrado 475,1883; [\alpha]^{23}_{D} =+101,46 (c 1,030, CHCl_{3}).

PBD C2-cianometil (10, SB-A67)

Trifenilfosfina (25 mg, 0,095 mmol, 0,05 equiv), pirrolidina (167 \mul, 2,0 mmol, 1,05 equiv) y Pd(PPh_{3})_{4} (56 mg, 0,048 mmol, 0,025 equiv) se añadieron secuencialmente a una solución agitada del compuesto Alloc 9 (900 mg, 1,90 mmol, 1 equiv) en CH_{2}Cl_{2} seco recién destilado (100 mL). La mezcla de reacción se dejó agitar a RT bajo una atmósfera de nitrógeno durante 2 horas, tiempo en que la TLC (SiO_{2}, 1% MeOH-CHCl_{3}) reveló la finalización de la reacción. La mezcla se evaporó in vacuo y el residuo se aplicó a una columna de cromatografía por gravedad (SiO_{2}, 1% MeOH-CHCl_{3}) para aislar la PBD SB-A67 (720 mg, 1.93 mmol, 100%) como un cristal amarillo: ^{1}H NMR (CDCl_{3}, 270 MHz): 3,05-3,40 (m, 4H, 1-H, 12-H), 3,95 (s, 3H, OMe), 4,38 (m, 1H, 11a-H), 5,21 (s, 2H, OBn), 6,84 (s, 1H, 6-H), 7,06 (s, 1H, 3-H), 7,27-7,70 (m, 6H, Ph, 9-H), 7,80 (d, 1H, 11a-H, J = 3 Hz); ^{13}C NMR (CDCl_{3}, 270 MHz): \delta 17,4, 36,8, 53,9, 56,3, 70,9, 111,7, 111,9, 112,8, 116,0, 118,7, 120,7, 127,1-128,7, 132,0, 136,0, 140,2, 148,3, 151,2, 161,8; IR (neto): 3353, 2931, 2251, 2222, 1604, 1508, 1437, 1247, 1120, 1000, 913, 874, 724, 697, 542; EIMS m/z (intensidad relativa) 373 (M^{+}., 9,8), 371 (24,4), 280 (12,5), 91 (100,0); HRMS m/z Calculada para 373,1426 (C_{22}H_{19}N_{3}O_{3}), Encontrada 373,1364; [\alpha]^{23}_{D}=254,5 (c=1,045, CHCl_{3}).

Ejemplo 1(b) Síntesis de la 2-Metoxicaronilmetil PBD (24, SJG-245) (ver la Figura 2)

20

Ácido (2S,4R)-N-(aliloxicarbonil)-4-hidroxipirrolidina-2-carboxílico (12)

Una solución de alil cloroformato (29,2 mL, 33,2 g, 275 mmol) en THF (30 mL) se añadió en forma de gotas a una suspensión de trans-4-hidroxi-L-prolina (11) (30 g, 229 mmol) en una mezcla de THF (150 mL) y H_{2}O (150 mL) a 0ºC (hielo/acetona), manteniendo al mismo tiempo el pH a 9 con NaOH 4 N. Después de agitar a 0ºC durante 1 hora a pH 9, la capa acuosa se saturó con NaCl, y la mezcla de diluyó con EtOAc (100 mL). Se separó la capa acuosa, se lavó con EtOAc (100 mL) y se ajustó el pH a 2 con HCl concentrado. La emulsión lechosa resultante se extrajo con EtOAc (2 x 100 mL), se lavó con salmuera (200 mL), se secó (MgSO_{4}), se filtró y evaporó in vacuo para dar el alil carbamato 12 como un aceite claro viscoso (42,6 g, 87%) [\alpha]^{20}_{D}= -62.1º (c = 0,69, MeOH); ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}+DMSO-d_{6}) (Rotámeros) \delta 5,98-5,81 (m, 1H, NCO_{2}CH_{2}CH=CH2), 5,40-5,14 (m, 2H, NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 4,64-4,42 (m, 4H, NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}, NCH_{2}CHOHCH_{2} y CHCO_{2}H), 3,82-3,51 (m, 2H, NCH_{2}CHOHCH_{2}), 2,34-2,08 (m, 2H, NCH_{2}CHOHCH_{2}); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}+DMSO) (Rotámeros) \delta 175,0 y 174,5 (CO_{2}H), 155,1 y 154,6 (NC=O), 132,9 y 132,8 (NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 117,6 y 116,7 (NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 69,5 y 68,8 (NCH_{2}CHOH), 65,9 y 65,8 (NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 58,0 y 57,7 (CHCO_{2}H), 55,0 y 54,5 (NCH_{2}CHOH), 39,3 y 38,3 (NCH_{2}CHOHCH_{2}); MS (EI), m/z (intensidad relativa) 215 (M^{+}., 10) 197 (12), 170 (M-CO_{2}H, 100), 152 (24), 130 (M-CO_{2}C_{3}H_{5}, 97), 126 (34), 112 (50), 108 (58), 86 (11), 68 (86), 56 (19); IR (Neto) 3500-2100 (br, OH), 2950, 1745 y 1687 (br, C=O), 1435, 1415, 1346, 1262, 1207, 1174, 1133, 1082, 993, 771 cm^{-1}; masa exacta calculada para C_{9}H_{13}NO_{5}, m/e 215,0794, observada m/e 215,0791.

Metil (2S, 4R)-N-(aliloxicarbonil)-4-hidroxipirrolidina-2-carboxilato (13)

Una cantidad catalítica de H_{2}SO_{4} concentrado (4,5 mL) se añadió a una solución de Aloc-hidroxiprolina (12) (43 g, 200 mmol) en MeOH (300 mL) a 10ºC (hielo) y la mezcla de reacción se calentó entonces a reflujo durante 2 horas. Después del enfriado a temperatura ambiente la mezcla de reacción se trató con TEA (43 mL) y se evaporó el MeOH in vacuo. El residuo se disolvió en EtOAc (300 mL), se lavó con salmuera (200 mL), se secó (MgSO_{4}), se filtró y se concentró in vacuo para dar un aceite viscoso. La purificación por cromatografía por desorción súbita (40% EtOAc/ éter de petróleo) extrajo la alta impureza R_{f} para proporcionar un éster puro 13 como un aceite amarillo transparente (19,6 g, 43%): [\alpha]^{23}_{D}= 79,0º (c = 0,35, CHCl_{3}); ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) (Rotámeros) \delta 5,98-5,78 (m, 1H, NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 5,35=5,16 (m, 2H, NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 4,65-4,45 (m, 4H, NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}, NCH_{2}CHOHCH_{2} y NCHCO_{2}CH_{3}), 3,75 y 3,72 (s x 2, 3H, OCH_{3}), 3,70-3,54 (m, 2H, NCH_{2}CHOHCH_{2}), 3,13 y 3,01 (br s x 2, 1H, OH), 2,39-2,03 (m, 2H, NCH_{2}CHOHCH_{2}); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) (Rotámeros) \delta 173,4 y 173,2 (CO_{2}CH_{3}), 155,0 y 154,6 (NC=O), 132,6 y 132,4 (NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 117,6 y 117,3 (NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 70,0 y 69,2 (NCH_{2}CHOH), 66,2 (NCO_{2}CH,CH=CH_{2}), 57,9 y 57,7 (NCHCO_{2}CH_{3}), 55,2 y 54,6 (NCH_{2}CHOH), 52,4 (OCH_{3}), 39,1 y 38,4 (NCH_{2}CHOHCH_{2}); MS (EI), m/z (intensidad relativa) 229 (M^{+}., 7), 170 (M-CO_{2}Me, 100), 144 (M-CO_{2}C_{3}H_{5}, 12), 126 (26), 108 (20), 68 (7), 56 (8); IR (Neto) 3438 (br, OH), 2954, 1750 y 1694 (br, C=O), 1435, 1413, 1345, 1278, 1206, 1130, 1086, 994, 771 cm^{-1}; masa exacta calculada para C_{10}H_{15}NO_{5} m/e 229,0950, observada m/e 229,0940.

(2S,4R)-N-(Aliloxicarbonil)-4-hidroxi-2-(hidroximetil)pirrolidina (14)

Una solución del éster 13 (19,5 g, 85 mmol) em THF (326 mL) se enfrió hasta 0ºC (hielo/ acetona) y se trató con LiBH_{4} (2,78 g, 128 mmol) en porciones. La mezcla de reacción se dejó calentar hasta temperatura ambiente y se agitó bajo una atmósfera de nitrógeno durante 2,5 horas, momento en que la TLC (50% EtOAc-éter de petróleo) reveló el consumo total del éster 13. La mezcla se enfrió a 0ºC y se añadió agua (108 mL) cuidadosamente seguida por HCl 2 N (54 mL). Después de la evaporación del THF in vacuo, la mezcla se neutralizó hasta pH 7 con NaOH 10 N y se saturó con NaCl sólido. La solución acuosa saturada se extrajo entonces con EtOAc (5 x 100 mL), se lavaron las capas orgánicas combinadas con salmuera (200 mL), se secaron (MgSO_{4}), filtraron y evaporaron in vacuo para producir el diol 14 puro como un aceite claro incoloro (16,97 g, 99%): [\alpha]^{24}_{D}=-57,0º (c= 0,61, CHCl_{3}); ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 6,01-5,87 (m, 1H, NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 5,36-5,20 (m, 2H, NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 4,84 (br s, 1H, NCHCH_{2}OH), 4,60 (d, 2H, J = 5,31 Hz, NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 4,39 (br s, 1H, NCHCH_{2}OH), 4,18-4,08 (m, 1H, 3,35, NCH_{2}CHOH), 3,90-3,35 (m, 4H, NCH_{2}CHOH, NCHCH_{2}OH, y OH), 3,04 (br s, 1H, OH), 2,11-2,03 (m, 1H, NCH_{2}CHOHCH_{2}), 1,78-1,69 (m, 1H, NCH_{2}CHOHCH_{2}); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 157,1 (NC=O), 132,6 (NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 117,7 (NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 69,2 (NCH_{2}CHOH), 66,4 y 66,2 (NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2} y NCHCH_{2}OH), 59,2 (NCHCH_{2}OH), 55,5 (NCH_{2}CHOH), 37,3 (NCH_{2}CHOHCH_{2}); MS (EI), m/z (intensidad relativa) 201 (M^{+}., 2), 170 (M-CH_{2}OH, 100), 144 (M-OC_{3}H_{5}, 6), 126 (26), 108 (20), 68 (9); IR (Neto) 3394 (br, OH), 2946, 2870, 1679 (C=O), 1413, 1339, 1194, 1126, 1054, 980, 772 cm^{-1}; masa exacta calculada para C_{9}H_{11}NO_{4} m/e 201,1001, observada m/e 201,1028.

(2S,4R)-N-(Aliloxicarbonil)-2-(tert-butilmetil sililoximetil)-4-hidroxipirrolidina (15)

Una solución del diol 14 (16,97 g, 84 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (235 mL) se trató con TEA (11,7 mL, 8,5 g, 84 mmol) y se agitó durante 15 minutos a temperatura ambiente. Se añadieron TBDMSCI (9,72 g, 64 mmol) y DBU (16,8 mmol, 2,51 mL, 2,56 g) y la mezcla de reacción se agitó durante 16 horas más bajo una atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (500 mL), se lavó con NH4Cl saturado (160 mL), salmuera (160 mL), se secó (MgSO_{4}), filtró y evaporó in vacuo para dar un aceite que era una mezcla del producto requerido (componente principal), diol sin reaccionar y el supuesto compuesto disiliatado mediante TLC (50% EtOAc-éter de petróleo). La cromatografía por desorción súbita (20-100% EtOAc-éter de petróleo) aisla los 3 componentes, para proporcionar el compuesto monosililated 15 como un aceite transparente ligeramente amarillo (13,85 g, 52%): [\alpha]^{21}_{D}= -58,6º (c = 1,14, CHCl_{3}); ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) (Rotámeros) \delta 6,01-5,86 (m, 1H, NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 5,34-5,18 (m, 2H, NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 4,59-4,49 (m, 3H, NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2} y NCHCH_{2}OTBDMS), 4,06-3,50 (m, 5H, NCH_{2}CHOH, NCH_{2}CHOH y NCHCH_{2}OTBDMS), 2,20-2,01 (m, 2H, NCH_{2}CHOHCH_{2}), 0,87 (s, 9H, SiC(CH_{3})_{3}), 0,0 (s, 6H, Si(CH_{3})_{2}); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) (Rotámeros) \delta 155,0 (NC=O), 133,1 (NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 117,6 y 117,1 (NCO_{2}CH_{2}CH=C-H_{2}), 70,3 y 69,7 (NCH_{2}CHOH), 65,9 y 65, 6 (NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 63,9 y 62,8 (NCHCH_{2}OTBDMS), 57,8 y 57,4 (NCHCH_{2}OTBDMS), [delta] 5, 7 y 55,2 (NCH_{2}CHOH), 37,3 y 36,6 (NCH_{2}CHOHCH_{2}), 25,9 (SiC(CH_{3})_{3}), 18,2 (SiC(CH_{3})_{3}), -5,5 (Si(CH_{3})_{2}); MS (EI), m/z (intensidad relativa) 316 (M^{+},+1, 29), 315 (M^{+}, 4), 300 (M-CH_{3}, 26), 284 (4), 261 (8), 260 (50), 259 (100), 258 (M-OC_{3}H, o M-^{t}Bu, 100), 218 (13), 215 (10), 214 (52), 200 (12), 170 (M-CH_{2}OTBDMS, 100), 156 (40), 126 (58), 115 (33), 108 (41), 75 (35); IR (Neto) 3422 (br, OH), 2954, 2858, 1682 (C=O), 1467, 1434, 1412 (SiCH_{3}), 1358, 1330, 1255 (SiCH_{3}), 1196, 1180, 1120, 1054, 995, 919, 837, 776, 669 cm^{-1}; masa exacta calculada para C_{15}H_{29}NO_{4}Si m/e 315,1866, observado m/e 315,1946.

(2S)-N-(Aliloxicarbonil)-2-(tert-butildimetilsililoximetil)-4-oxopirrolidina (16)

Procedimiento A: Una solución de DMSO (12,0 mL, 14,3 g, 183 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (90 mL) se añadió en forma de gotas a una solución de oxalil cloruro (45,1 mL de una solución 2,0 M en CH_{2}Cl_{2}, 90,2 mmol) a -60ºC (hielo seco/acetona) bajo una atmósfera de nitrógeno. Después de agitar a -70ºC durante 30 minutos, se añadió una solución del alcohol 15 (25,8 g, 81,9 mmol) disuelto en CH_{2}Cl_{2} (215 mL) en forma de gotas a -60ºC. Después de 1,5 horas a -70ºC, se trató la mezcla en forma de gotas con TEA (57,2 mL, 41,5 g, 410 mmol) y se dejó calentar hasta 10ºC. La mezcla de reacción se trató con salmuera (150 mL) y se acidificó hasta pH 3 con HCl concentrado. Se separaron las capas y la fase orgánica se lavó con salmuera (200 mL), se secó (MgSO_{4}), filtró y se concentró in vacuo para dar un aceite naranja. La purificación mediante cromatografía por desorción súbita (40% EtOAc/éter de petróleo) proporciona la cetona 16 como un aceite amarillo pálido (24,24 g, 95%):

Procedimiento B: Una solución del alcohol 15 (4,5 g, 14,3 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (67,5 mL) se trató con CH_{3}CN (7,5 mL), cedazos moleculares potenciados 4 \ring{A} (3,45 g) y NMO (2,4 g, 20,5 mmol). Después de 15 minutos de agitado a temperatura ambiente, se añadió TPAP (0,24 g, 0,7 mmol) a la mezcla de reacción y se observó un cambio de color (verde - negro). Se continuó agitando la mezcla de reacción por otras 2,5 horas en el cual se observó el consumo completo del material inicial mediante TLC (50% EtOAc-éter de petróleo 40º-60º). La mezcla negra se concentró in vacuo y se obtuvo la cetona 16 pura mediante cromatografía por desorción súbita (50% EtOAc-éter de petróleo) como un aceite dorado (4,1 g, 92%): [\alpha]^{22}_{D}=+1,25º (c = 10,0, CHCl_{3}); ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) (Rótameros) \delta 6,0-5,90 (m, 1H, NCO_{2}CH_{2}CH-CH_{2}), 5,35-5,22 (m, 2H, NCO_{2}CH_{2}CH-CH_{2}), 4,65-4,63 (m, 2H, NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 4,48-4,40 (m, 1H, NCHCH_{2}OTBDMS), 4,14-3,56 (m, 4H, NCH_{2}C=O y NCHCH_{2}OTBDMS), 2,74-2,64 (m, 1H, NCH_{2}C=OCH_{2}), 2,46 (d, 1H, J = 18,69 Hz, NCH_{2}C=OCH_{2}), 0,85 (s, 9H, SiC(CH_{3})_{3}), 0,0 (s, 6H, Si(CH_{3})_{2}); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) (Rótameros) \delta 210,1 (C=O), 154,1 (NC=O), 132,7 (NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 118,0 y 117,7 (NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 66,0 y 65,8 (NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 65,0 (NCHCH_{2}OTBDMS), 55,7 (NCHCH_{2}OTBDMS), 53,6 (NCH_{2}C-O), 40,8 y 40,1 (NCH_{2}C-OCH_{2}), 25,7 (SiC(CH_{3})_{3}), 18,1 (SiC(CH_{3})_{3}), -5,7 y -5,8 (Si(CH_{3})_{2}); MS (CI), m/z (intensidad relativa) 314 (M^{+}.1, 100), 256 (M-OC_{3}H_{5} o M-^{t}Bu, 65); IR (neto) 2930, 2858, 1767 (C=O), 1709 (NC=O), 1409 (SiCH_{3}), 1362, 1316, 1259 (SiCH_{3}), 1198, 1169, 1103, 1016, 938, 873, 837, 778, 683 cm^{-1}; masa exacta calculada para C_{15}H_{27}NO_{4}Si m/e 313,1710, observado m/e 313,1714.

(2S)-N-(Aliloxicarbonil)-2-(tert-butildimetilsilioximetil)-4-(metonicarboxilmetil)-2,3-dihidropirrol (17)

Se añadió éter de petróleo 40º-60º (100 mL) a una muestra de NaH (0,80 g de una dispersión al 60% en aceite, 20,12 mmol) y se agitó a temperatura ambiente bajo una atmósfera de nitrógeno. Después de 0,5 horas se permitió que la mezcla se asiente y el éter de petróleo se transfirió desde el matraz a través de una aguja de doble punta bajo nitrógeno. THF (100 mL) se añadieron al residuo remanente y la mezcla se enfrió a 0ºC (hielo/acetona). La solución fría se trató por goteo con una solución de metildietilfosfonoacetato (3,69 mL, 4,23 g, 20,12 mmol) en THF (100 mL) bajo nitrógeno. Después de una hora a temperatura ambiente, la mezcla se enfrió a 0ºC y se trató por goteo con una solución de la cetona 16 (3,0 g, 9,58 mmol) en THF (30 mL) bajo nitrógeno. Después de 16 horas a temperatura ambiente, TLC (50% EtOAc/éter de petróleo) reveló el consumo completo de la cetona y otra TLC (5% EtOAc/éter de petróleo) reveló principalmente la formación del exo-producto. La mezcla de reacción se enfrió a 0ºC (hielo/acetona) y se transfirió a través de una aguja de doble punta bajo nitrógeno a otro matraz que contenía NaH (0,40 g de una dispersión al 60% en aceite, 10,1 mmol) a 0ºC, recién lavado como se describe con anterioridad. La mezcla de reacción se mantiene a 0ºC, y después de 40 minutos la TLC reveló la conversión casi completa del endo-producto. El THF se evaporó in vacuo y la mezcla se particionó entre NaHCO_{3} saturado (100 mL), y EtOAc (100 mL). Las capas se separaron y la capa acuosa extraída con EtOAc (2 x 50 mL). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (100 mL), se secaron (MgSO_{4}), se filtraron y concentraron in vacuo para dar un aceite naranja. La purificación mediante cromatografía por desorción súbita (5% EtOAc-éter de petróleo) proporciona el endo-éster 17 (2,22 g, 63%): [\alpha]^{21}_{D} = -97,7º (c = 2,78, CHCl_{3}); ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) (Rotámeros) \delta 6,47 y 6,42 (br s x 2, 1H, NCH=CCH_{2}CO_{2}CH_{3}), 5,98-5,86 (m, 1H, NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 5,31 (d, 1H, J = 16,85 Hz, NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 5,22 (d, 1H, J = 10,62 Hz, NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 4,65-4,49 (m, 2H, NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 4,37-4,18 (m, 1H, NCHCH_{2}OTBDMS), 3,76-3,69 (m, 5H, NCHCH_{2}OTBDMS y CO,_{2}H_{3}), 3,09 (br s, 2H, NCH=CCH_{2}CO_{2}CH_{3}), 2,86-2,80 (m, 1H, NCH=CCH_{2}C_{2}OCH_{3}CH_{2}), 2,59 (d, 1H, J = 17,40 Hz, NCH=CCH_{2}CO_{2}CH_{3}CH_{2}), 0,87 (s, 9H, SiC(CH_{3})_{3}), 0,04 y 0,03 (s x 2, 6H, Si(CH_{3})_{2}); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) (Rótameros) \delta 171,2 (CO_{2}CH_{3}), 151,9 (NC=O), 132,8 (NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 127,1 y 126,4 (NCH=CCH_{2}CO_{2}CH_{3}), 118,0 y 117,7 (NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 114,6 (NCH=CCH_{2},CO_{2}H_{3}), 65,9 (NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 63,4 y 62,6 (NCHCH_{2}OTBDMS), 59,0 y 58,7 (NCHCH_{2}OTBDMS), 51,9 (CO_{2}CH_{3}), 36,0 y 34,8 (NCH=CCH_{2}CO_{2}CH_{3}CH_{2}), 34,2 y 33,9 (NCH=CCH_{2}COCH_{3}), 25,8 (SiC(CH_{3})_{3}), 18,2 (SiC(CH_{3})_{3}), -5,4 y -5,5 (Si(CH_{3})_{2}); MS (EI), m/z (intensidad relativa) 369 (M^{+}., 58), 354 (28), 326 (31), 312 (M-OC3H, or M-^{t}Bu, 100), 268 (80), 236 (21), 227 (86), 210 (22), 192 (22), 168 (93), 152 (55), 138 (22), 120 (79), 89 (70), 73 (75); IR (Neto) 3086, 2954, 2930, 2885, 2857, 1744, 1709, 1670, 1463, 1435, 1413, 1362, 1337, 1301, 1253, 1195, 1107, 1064, 1014, 983, 937, 887, 838, 778, 758, 680, 662 555 cm^{-1}; masa exacta calculada para C_{18}H_{31}NO_{5}Si m/e 369,1972, observada m/e 369,1868.

(2S)-2-(tert-butildimetilsilioximetil)-4-(metoxicarbonilmetil)-2,3-dihidropirrol (18)

Se añadió una cantidad catalítica de PdCl_{2}(PPh_{3})_{2} (84 mg, 0,12 mmol) a una solución agitada del carbamato alil 17 (1,10 g, 2,98 mmol) y H_{2}O (0,32 mL, 17,8 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (36 mL). Después de 5 minutos de agitación a temperatura ambiente, se añadió Bu_{3}SnH (0,89 mL, 0,96 g, 3,30 mmol) rápidamente en una porción. Seguida inmediatamente una reacción ligeramente exotérmica con evolución de gas vigorosa. La mezcla se agitó durante 16 horas a temperatura ambiente bajo nitrógeno en cuyo tiempo TLC (50% EtOAc/Éter Petróleo) reveló la formación de la amina a lo largo con el consumo completo de material inicial. Después de diluir con CH_{2}Cl_{2} (30 mL), la solución orgánica se secó (MgSO_{4}), filtró y evaporó in vacuo para dar un aceite naranja que se purificó mediante cromatografía por desorción súbita (50% EtOAc/Éter de petróleo) para conseguir la enamina 18 como un aceite ligeramente naranja (0,57 g, 67%): ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,53 y 7,48 (br s x 2, 1H, NCH=CCH_{2}CO_{2}CH_{3}), 4,35-4,13 (m, 1H, NCHCH_{2}OTBDMS), 3,82-3,17 (m, 7H, NCH=CCH_{2}CO_{2}CH_{3}, NCHCH_{2}OTBDMS y CO_{2}CH_{3}), 2,64-2,04 (m, 2H, NCH=CCH_{2}CO_{2}CH_{3}CH_{2}), 0,90-0,88 (m, 9H, SiC(CH_{3})_{3}), 0,09-0,00 (m, 6H, Si(CH_{3})_{2}); MS (EI), m/z (intensidad relativa) 285 (M^{+}., 1), 270 (M-CH_{3}, 7), 254 (6), 242 (4), 230 (6), 228 (M-^{t}Bu, 100), 212 (4), 196 (3), 168 (13), 115 (3), 89 (10), 80 (4), 73 (13); MS (CI), m/z (intensidad relativa) 342 (M^{+}.57, 7), 302 (M^{+}. +17, 7), 286 (M^{+}. +1, 100), 228 (M-^{t}Bu, 100).

(2S)-N-(4-Benciloxi-5-metoxi-2-nitrobenzoil)-2-(tert-butildimetilsililoximetil)-4-(metoxicarbonilmetil)-2,3-dihidropirrol (19)

Una cantidad catalítica de DMF (2 gotas) se añadió a una solución agitada del ácido 1 (0,506 g, 1,67 mmol) y oxalil cloruro (0,17 mL, 0,25 g, 1,98 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (33 mL). Después de 16 horas a temperatura ambiente, la solución de cloruro ácido se añadido gota a gota a una mezcla agitada de la enamina 18 (0,524 g, 1,84 mmol) y TEA (0,47 g, 0,65 mL, 4,60 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (12 mL) a 0ºC (hielo/acetona) bajo una atmósfera de nitrógeno. Se dejó que la mezcla de reacción se calentara a temperatura ambiente y se agitó durante otras 2,5 h. La mezcla se diluyó con CH_{2}Cl_{2} (50 mL), se limpió con NaHCO_{3} saturado (50 mL), NH_{4}Cl saturado (50 mL), H_{2}O (50 mL), salmuera (50 mL), secada (MgSO_{4}), filtrada y evaporada in vacuo para al producto crudo como un aceite naranja oscuro. La purificación mediante cromatografía por desorción súbita (25% EtOAc/Éter de petróleo) aisló la enamida pura 19 como un aceite naranja (0,55 g, 58%): ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,77 (s, 1H_{arom}), 7,45-7,28 (m, 5H_{arom}), 6,81 (s, 1H_{arom}), 5,80 (S, 1H, NCH=CCH_{2}CO_{2}CH_{3}), 5,22 (s, 2H, PhCH_{2}O), 4,76-4,64 (m, 1H, NCHCH_{2}OTBDMS), 3,97 (s, 3H, OCH_{3}), 3,72-3,66 (m, 5H, NCHCH_{2}OTBDMS y CO_{2}CH_{3}), 3,02 (s, 2H, NCH=CCH_{2}CO_{2}CH_{3}), 3,01-2,63 (m, 2H, NCH=CCH_{2}CO_{2}CH_{3}CH_{2}), 0,90 (s, 9H, SiC(CH_{3})_{3}), 0,11 (s, 6H, Si(CH_{3})_{2}); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 170,7 (CO_{2}CH_{3}), 154,6 (NC=O), 148,3 (C_{arom}), 137,6 (C_{arom}), 135,2 (C_{arom}), 128,8, 128,5 y 127,6 (BnC-H_{arom}), 126,7 (C_{arom}), 126,1 (NCH=CCH_{2}CO_{2}CH_{3}), 118,8 (NCH=CCH_{2}CO_{2}CH_{3}), 109,9 (C-H_{arom}), 109,0 (C-H_{arom}) 71,3 (PhCH_{2}O), 60,7 (NCHCH_{2}OTBDMS), 59,0 (NCHCH_{2}OTBDMS), 56,7 (OCH_{3}), 52,0 (CO_{2}CH_{3}), 35,1 (NCH=CCH_{2}CO_{2}CH_{3}), 33,8 (NCH=CCH_{2}CO_{2}CH_{3}CH_{2}), 25,8 (SiC(CH_{3})_{3}), 18,2 (SiC(CH_{3})_{3}), -5,3 y -5,4 (Si(CH_{3})_{2}).

(2S)-N-(4-Benciloxi-5-metoxi-2-nitrobenzoil)-2-(hidroximetil)-4-(metoxicarbonilmetil)-2,3-dihidropirrol (20)

Una solución del compuesto 274 protegido con silil (0,45 g, 0,79 mmol) en THF (8 mL) se trató con H_{2}O (8 mL) y ácido acético glacial (24 mL). Después de 5 horas agitando a temperatura ambiente el TLC (50% EtOAc/Éter de petróleo) mostró el consumo completo de material inicial. La mezcla se añadió cuidadosamente gota a gota a una solución agitada de NaHCO_{3} (64 g) en H_{2}O (640 mL) y se extrajo en EtOAc (3 X 100 mL). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con H_{2}O (100 mL), salmuera (100 mL), se secaron (MgSO_{4}), filtraron y concentraron in vacuo para dar el producto crudo como un vidrio naranja. La purificación mediante purificación flash (80% EtOAc/Éter de petróleo) proporcionó el alcohol puro 20 como un vidrio naranja brillante (0,35 g, 98%); ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,78 (s, 1H_{arom}), 7,48-7,33 (m, 5H_{arom}), 6,86 (s, 1H_{arom}), 5,82 (s, 1H, NCH=CCH_{2}CO_{2}CH_{3}), 5,22 (s, 2H, PhCH_{2}O), 4,81-4,71 (m, 1H, NCHCH_{2}OH), 3,98-3,92 (m, 5H, NCHCH_{2}OH y OCH_{3}), 3,72 (s, 3H, CO_{2}CH_{3}), 3,10-2,22 (m, 3H, NCH=CCH_{2}CO_{2}CH_{3} y NCH=CCH_{2}CO_{2}CH_{3}CH_{2}), 2,50-2,35 (m, 1H, NCH=CCH_{2}CO_{2}CH_{3}CH_{2}); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 170,6 (CO_{2}CH_{3}), 154,8 (NC=O), 148,5 (C_{arom}), 137,5 (C_{arom}), 135,1 (C_{arom}), 128,9, 128,6 y 127,6 (BnC-H_{arom}), 126,2 (NCH=CCH_{2}CO_{2}CH_{3}), 119,4 (NCH=CCH_{2}CO_{2}CH_{3}), 109,8 (C-H_{arom}), 109,0 (C-H_{arom}), 71,4 (PhCH_{2}O), 61,5 (NCHCH_{2}OH), 61,4 (NCHCH_{2}OH), 56,8 (OCH_{3}), 52,1 (CO_{2}CH_{3}), 35,6 (NCH=CCH_{2}CO_{2}CH_{3}), 33,5 (NCH=CCH_{2}CO_{2}CH_{3}CH_{2}); MS (EI), m/z (intensidad relativa) 456 (M^{+}., 7), 286 (M-NCHC=CH_{2}CO_{2}CH_{3}CH_{2}CHCH_{2}OH, 25), 270 (NCHC=CH_{2}CO_{2}CH_{3}CH_{2}CHCH_{2}OH, 6), 91 (PhCH_{2}, 100), 80 (6); masa exacta calculada para C_{23}H_{24}N_{2}O_{8} m/e 456,1533, observada m/e 456,1557.

(2S)-N-(2-Amino-4-benciloxi-5-metoxibenzoil)-2-(hidroximetil)-4-(metoxicarbonilmetil)-2,3-dihidropirrol (21)

Una solución de nitro-alcohol 20 (0,35 g, 0,77 mmol) y SnCl_{2}/2H_{2}O (0,87 g, 3,86 mmol) en metanol (16 mL) se calentó a reflujo y se monitorizó mediante TLC (90% CHCl_{3}/MeOH). Después de 1 hora, el MeOH se evaporó in vacuo y el residuo resultante se enfrió (hielo), y se trató cuidadosamente con NaHCO_{3} saturado (65 mL). La mezcla se diluyó con EtOAc (65 mL), y después de 16 horas agitándose a temperatura ambiente el precipitado inorgánico se retiró mediante filtración a través de celita. La capa orgánica se separó, se lavó con salmuera (100 mL), se seco (MgSO_{4}), filtró y evaporó in vacuo para dar la amina cruda 21 como un vidrio naranja pálido (0,29 g, 88%) que se realizó a través de la siguiente etapa sin más purificación o análisis debido a la inestabilidad de la amina.

(2S)-N-[(2-Aliloxicarbonilamino)-4-benciloxi-5-metoxibenzoil]-2-(hidroximetil)-4-(metoxicarbonilmetil)-2,3-dihidropirrol (22)

Una solución del amino-alcohol 21 (0,29 g, 0,68 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (12 mL) se enfrió a 0ºC (hielo/acetona) y se trató con piridina (0,11 mL, 0,11 g, 1,39 mmol). Una solución de alil cloroformato (79 \muL, 90 mg, 0,75 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (10 mL) se añadió a continuación gota a gota a la mezcla agitada. La mezcla de reacción se dejó que se calentara a temperatura ambiente y se agitó durante otras 2,5 h, en cuyo punto el TLC (EtOAc) reveló un consumo completo de la amina 21. La mezcla se diluyó con CH_{2}Cl_{2} (30 mL) y se lavó con CuSO_{4} saturado (20 mL), H_{2}O (20 mL), salmuera (20 mL), se secó (MgSO_{4}), filtró y evaporó in vacuo. El residuo crudo se purificó mediante cromatografía por desorción súbita (70% EtOAc/Éter de petróleo) para conseguir el compuesto aloc-amino puro 22 como un vidrio incoloro (0,14 g, 40%): ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,58 (br s, 1H, NH), 7,88 (br s, 1H_{arom}), 7,50-7,29 (m, 5H_{arom}), 6,83 (s, 1H_{arom}), 6,42 (br s, 1H, NCH=CCH_{2}CO_{2}CH_{3}), 6,03-5,89 (m, 1H, NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 5,39-5,22 (m, 2H, NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 5,18 (s, 2H, PhCH_{2}O), 4,77-4,73 (m, 1H, NCHCH_{2}OH), 4,65-4,62 (m, 2H, NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 4,32-3,84 (m, 5H, NCHCH_{2}OH y OCH_{3}), 3,69 (s, 3H, CO_{2}CH_{3}), 3,09 (s, 2H, NCH=CCH_{3}CO_{2}CH_{3}), 3,05-2,95 (m, 1H, NCH=CCH_{2}CO_{2}CH_{3}CH_{2}), 2,35 (dd, 1H, J = 3,76, 16,72 Hz, NCH=CCH_{2}CO_{2}CH_{3}CH_{2}); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 170, 6 (CO_{2}CH_{3}), 167,4 (NC=O_{amida}), 153,5 (NC=O_{carbamato}), 151,1 (C_{arom}), 144,4 (C_{arom}), 136,1 (C_{arom}), 132,6 (C_{arom}), 132,4 (NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 128,6, 128,1 y 127,7 (BnC-H_{arom}), 118,5 (NCH=CCH_{2}CO_{2}CH_{3}), 118,2 (NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 112,1 (C-H_{arom}), 106,3 (C-H_{arom}), 70,7 (PhCH_{2}O), 66,5 (NCHCH_{2}OH), 65,9 (NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 61,9 (NCHCH_{2}OH), 56,7 (OCH_{3}), 52,1 (CO_{2}CH_{3}), 35,6 (NCH=CCH_{2}CO_{2}CH_{3}), 33,6 (NCH=CCH_{2}CO_{2}CH_{3}CH_{2}); MS (FAB), m/z (intensidad relativa) 618 (M^{+}.+Tioglicerol, 2), 511 (M^{+}.+1, 5), 510 (M^{+}., 1), 340 (M-NCH=CCH_{2}CO_{2}CH_{3}CH_{2}CHCH_{2}OH, 20), 300 (3), 282 (14), 256 (7), 192 (6), 171 (16), 149 (22), 140 (12), 112 (4), 91 (PhCH_{2}, 100), 80 (6), 65 (1), 57 (3).

(11S,11aS)-10-Aliloxicarbonil-8-benciloxi-11-hidroxi-7-metoxi-2-(metoxicarbonilmetil)-1,10,11,11a-tetrahidro-5H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiacepin-5-ona (23)

Una solución del alcohol 22 (0,14 g,028 mmol) en CH_{2}Cl_{2}/CH_{3}CN(12 mL, 3:1) se trató con cedazos moleculares potenciados 4 \ring{A} (0,15 g) y NMO (49 mg, 0,42 mmol). Después de 15 minutos agitando a temperatura ambiente, se añadió TPAP (4,90 mg, 14 \mumol) y se continuó agitando durante otra hora y 30 minutos, momento en que TLC (80% EtOAc-éter de petróleo) mostró la formación de producto junto con algún material inicial no oxidado. La mezcla se trató entonces con una cantidad adicional de NMO (49 mg, 0,42 mmol) y TPAP (4,9 mg, 14 \mumol), y se siguió agitando durante 0,5 horas cuando la TLC reveló la finalización de la reacción. La mezcla se evaporó in vacuo sobre sílice y se sometió a cromatografía por desorción súbita (60% EtOAc-éter de petróleo) para proporcionar la carbinolamina protegida 23 como un cristal incoloro (39 mg, 28%): ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,43-7,25 (m, 6H_{arom}), 6,90 (br s, 1H_{arom}) 6,74 (s, 1H, NCH=CCH_{2}CO_{2}CH_{3}), 5,79-5,64 (m, 1H, NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 5,77 (d, 1H, J = 10,26 Hz, NCHCHOH), 5,19-5,06 (m, 4H, NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2} y PhCH_{2}O), 4,64-4,45 (m, 2H, NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 4,18-3,83 (m, 4H, OCH_{3} y NCHCHOH), 3,71 (s, 3H, CO_{2}CH_{3}), 3,19 (s, 2H, NCH=CCH_{2}CO_{2}CH_{3}), 3,09 (dd, 1H, J = 11,09, 16,70 Hz, NCH=CCH_{2}CO_{2}CH_{2}CH_{2}), 2,74 (d, 1H, J = 17,03 Hz, NCH=CCH_{2}CO_{2}CH_{3}CH,); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 170,7 (CO_{2}CH_{3}), 163,3 (NC=O_{amida}) 155,9 (NC=O_{carbamato}), 150,3 (C_{arom}), 149,1 (C_{arom}), 136,1 (C_{arom}), 131,8 (NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 128,7, 128,2 y 127,3 (BnC-H_{arom}), 126,2 (NCH=CCH_{2}CO_{2}CH_{3}), 125,1 (C_{arom}), 118,1 (NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 117,7 (NCH=CCH_{2}CO_{2}CH_{3}), 114,7 (C-H_{arom}), 111,0 (C-H_{arom}), 85,9 (NCHCHOH), 71,1 (PhCH_{2}O), 66,8 (NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 59,5 (NCHCHOH), 56,2 (OCH_{3}), 52,1 (CO_{2}CH_{3}), 37,0 (NCH=CCH_{2}CO_{2}CH_{3}), 33,7 (NCH=CCH_{2}CO_{2}CH_{3}CH_{2}); MS (EI), m/z (intensidad relativa) 508 (M^{+}., 16), 449 (3), 422 (3), 404 (2), 368 (3), 340 (19), 324 (2), 282 (6), 255 (2), 225 (1), 206 (2), 192 (3), 169 (4), 152 (2), 140 (10), 131 (5), 108 (5), 91 (PhCH_{2}, 100), 80 (9), 57 (9), IR (NUJOL®) 3600-2500 (br, OH), 2924, 2853, 2360, 1715, 1602, 1514, 1462, 1377, 1271, 1219, 1169, 1045, 722, 699; masa exacta calculada para C_{27}H_{28}N_{2}O_{8}, m/e 508,1846, observada m/e 508,1791.

(11S,11aS)&(11R,11aS)-8-Benciloxi-7,11-dimetoxi-2-(metoxicarbonilmetil)-1,10,11,11a-tetrahidro-5H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiacepin-5-ona (24, SJG-245)

Una cantidad catalítica de tetraquis (trifenilfosfina) paladio (5,9 mg, 4,33 \mumol) se añadió a una solución agitada de la carbinolamina aloc protegida 23 (88 mg, 0,17 mmol), trifenilfosfina (2,27 mg, 8,65 \mumol) y pirrolidina (13 mg, 0,18 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (15 mL). Después de dos horas de agitado a temperatura ambiente bajo una atmósfera de nitrógeno la TLC (80% EtOAc-éter de petróleo) reveló el consumo completo del material inicial. El solvente se evaporó in vacuo y el residuo crudo se purificó mediante cromatografía por desorción súbita (60% EtOAc-éter de petróleo) para ofrecer PBD original (SJG-245) como un cristal incoloro (54 mg, 77%) que fue repetidamente evaporado in vacuo con CHCl_{3} para proporcionar la forma imina N10-C11 24: ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) (imina) \delta 7,80 (d, 1H, J = 4,03 Hz, HC-N), 7,50 (s, 1H_{arom}), 7,45-7,26 (m, 5H_{arom}), 6,91 (br s, 1H, NCH=CCH_{2}OC_{2}CH_{3}), 6,83 (s, 1H_{arom}), 5,21-5,12 (m, 2H, PhCH_{2}O), 3,94 (s, 3H, OCH_{3}), 3,73 (s, 3H, CO_{2}CH_{3}), 3,23 (s, 2H, NCH=CCHCO_{2}CH_{3}), 3,15 (m, 2H, NCH=CCH_{2}CO_{2}CH_{3}CH,); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) (imina) \delta 170,7 (CO_{2}CH_{3}), 162,7 (HC-N), 161,4 (NC-O), 150,9 (C_{arom}), 148,1 (C_{arom}), 140,1 (C_{arom}), 136,0 (C_{arom}), 128,7, 128,2 and 127,3 (BnC-H_{arom}), 127,3 (NCH=CCH_{2}CO_{2}CH_{3}), 119,2 (C_{arom}), 117,5 (NCH=CCH_{2}CO_{2}CH_{3}), 111,8 (C-H_{arom}), 111,5 (C-H_{arom}), 70,8 (PhCH_{2}O), 56,2 (OCH,), 53,8 (NCHHC=N), 52,0 (CO_{2}CH_{3}), 37,4 (NCH=CCH_{2}CO_{2}CH_{3}), 33,6 (NCH=CCH_{2}CO_{2}CH_{3}CH_{2}).

La evaporación repetida in vacuo de 24 con CH_{3}OH proporcionó las formas N10-C11 metil éter 25: ^{1}H NMR (270 MHz, CD3OD) (11S,11aS isómero) \delta 7,44-7,25 (m, 5H_{arom}), 7,16 (s, 1H_{arom}), 6,85 (br s, 1H, NCH=CCH_{2}CO_{2}CH_{3}), 6,62 (s, 1H_{arom}), 5,09 (s, 2H, PhCH_{2}O), 4,52 (d, 1H, J = 8,80 Hz, NCHCHOCH_{3}), 4,00-3,85 (m, 1H, NCHCHOCH_{3}), 3,80 (s, 3H, OCH_{3}), 3,69 (s, 3H, CO_{2}CH_{3}), 3,41 (s, 3H, NCHCHOCH_{3}), 3,24 (br s, 2H, NCH=CCH_{2}CO_{2}CH_{3}), 3,20-3,00 (m, 1H, NCH=CCH_{2}COCH_{3}CH_{2}), 2,60-2,50 (m, 1H, NCH=CCH_{2}CO_{2}CH_{3}CH_{2}); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CD_{3}OD) (11S,11aS isómero) \delta 172,7 (CO_{2}CH_{3}), 166,8 (C_{arom}), 153,3 (NC=O), 146,4 (C_{arom}), 139,7 (C_{arom}), 138,0 (C_{arom}), 132,4 (C_{arom}), 129,6, 129,1 y 128,8 (BnC-H_{arom}), 127,0 (NCH=CCH_{2}CO_{2}CH_{3}), 120,8 (NCH=CCH_{2}CO_{2}CH_{3}), 113,7 (C-H_{arom}), 109,2 (C-H_{arom}), 97,1 (NCHCHOCH_{3}), 71,7 (PhCH_{2}O), 60,2 (NCHCHOCH_{3}), 56,8 (OCH_{3}), 55,2 (NCHCHOCH_{3}), 52,5 (CO_{2}CH_{3}), 38,7 (NCH=CCH_{2}CO_{2}CH_{3}), 34,1 (NCH=CCH_{2}CO_{2}CH_{3}CH_{2}); MS (EI), m/z (intensidad relativa) 420 (M^{+}., metil éter, 1), 418 (metil éter -2, 2), 406 (M^{+}., imina, 23), 404 (41), 375 (2), 345 (6), 333 (7), 313 (22), 299 (10), 285 (6), 253 (6), 242 (4), 225 (2), 214 (2), 198 (2), 183 (4), 168 (2), 155 (6), 136 (3), 105 (3), 91 (PhCH_{2}, 100), 80 (4), 65 (7); IR (NUJOL(R)) 3318 (br, OH de forma carbinolamina), 2923, 2853, 1737, 1692, 1658, 1627, 1601, 1552, 1511, 1501, 1464, 1461, 1452, 1378, 1244, 1072, 1006, 786, 754, 698 cm^{-1}; masa exacta calculada para C_{23}H_{22}N_{2}O_{5} m/e 406,1529, observada m/e 406,1510.

Ejemplos 1 (c y d)

Síntesis de SJG-301 (31, UP2051) y SJG-303 (33, UP2052) (ver figura 3)

21

(2S)-N-[(2-Aliloxicarbonilamino)-4-benciloxi-5-metoxibenzoil]-2-(tert-butildimetilsililoetitil)-4-(metoxicarbonil- metil)-2,3-dihidropirrol (26)

Se añadió Éter de petróleo (100 mL) a una muestra de NaH (1,41 g de una dispersión al 60% en aceite, 35,25 mmol) y se agitó a temperatura ambiente bajo una atmósfera de nitrógeno. Después de 0,5 horas, se dejó cuajar la mezcla y el Éter de petróleo se transfirió desde el frasco a través de una aguja de doble punta bajo nitrógeno. Se añadió THF (80 mL) al residuo restante y la mezcla se enfrió a 0º (hielo/acetona). La solución fría se trató gota a gota con una solución de metildietilfosfonoacetato (6,47 mL, 7,41 g, 35,25 mmol) en THF (80 mL) bajo nitrógeno. Después de 1,5 horas a temperatura ambiente, la mezcla se enfrió a 0º y se trató gota a gota con una solución de la quetona 6 (8,0 g, 14,1 mmol) en THF (50 mL) bajo nitrógeno. Después de 16 horas a temperatura ambiente, el TLC (20% EtOAc-éter de petróleo) reveló el acabado de la reacción. El THF se evaporó in vacuo y la mezcla partida entre NaHCO_{3} (200 mL) y EtOAc (220 mL). Las capas se separaron y la capa acuosa extraída con EtOAc (2 X 200 mL). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con H_{2}O (20 mL), salmuera (200 mL), secadas (MgSO_{4}), filtradas y concentradas in vacuo para dar un aceite rojo oscuro. La purificación mediante cromatografía por desorción súbita (15% EtOAc-éter de petróleo) proporcionó el endo-éster 26 (7.02 g, 80%): [\alpha]^{22}_{D}= -93,0º (c = 1,04, CHCl_{3}); ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,78 (br s, 1H), 7,95 (s, 1H), 7,50-7,29 (m, 5H), 6,82 (s, 1H), 6,46 (br s, 1H), 6,02-5,88 (m, 1H), 5,35 (dd, 1H, J = 2,93, 17,22 Hz), 5,24 (d, 1H, J = 10,44 Hz), 5,18 (s, 2H), 4,70-4,61 (m, 3H), 3,96-3,82 (m, 5H), 3,68 (s, 3H), 3,08 (s, 2H), 2,91-2,82 (m, 1H), 2,71-2,65 (m, 1H), 0,88 (s, 9H), 0,06 y 0,04 (s x 2, 6H); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 170,7, 165,8, 153,5, 150,6, 144,0, 136,2, 132,7, 132,5, 128,6, 128,2, 128,1, 127,7, 118,1, 118,0, 114,4, 112,0, 106,0, 70,6, 65,7, 62,3, 59,4, 56,6, 52,0, 34,6, 33,9, 25,8, 18,1, -5,4; MS (EI), m/z (intensidad relativa) 626 (M^{+}.+1, 3), 625 (M^{+}.+1, 7), 624 (M^{+}., 14), 568 (5), 567 (11), 509 (3), 476 (3), 341 (5), 340 (17), 339 (4), 299 (3), 286 (18), 285 (87), 282 (11), 256 (4), 242 (3), 229 (3), 228 (14), 226 (11), 168 (10), 166 (3), 152 (6), 141 (5), 140 (50), 139 (9), 108 (3), 92 (10), 91 (100), 89 (6), 80 (11), 75 (11), 73 (10), 65 (5), 57 (6), 41 (12); IR (neto) 3332 (br, NH), 3019, 2953, 2930, 2857, 1733, 1622, 1599, 1524, 1491, 1464, 1408, 1362, 1335, 1258, 1205, 1171, 1113, 1051, 1027, 938, 839, 757, 697, 666 cm^{-1}; masa exacta calculada para C_{33}H_{44}N_{2}O_{8}Si m/e 624,2867, observada m/e 624,2936.

(2S)-N-[(2-Alliloxicarbonilamino)-4-benciloxi-5-metoxibenzoil]-2-(tert-butildimetilsililoximetil)-4-(hidroxi-2-etil)-2,3-dihidropirrol (27)

Se enfrió una solución el éster 26 (4,0 g, 6,41 mmol) en THF (55 mL) a 0ºC (hielo/acetona) y se trató con LiBH_{4} (0,21 g, 9,62 mmol) en porciones. La mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó bajo una atmósfera de nitrógeno durante 26 horas en cuyo punto el TLC (50% EtOAc-éter de petróleo) reveló el consumo completo del material inicial. La mezcla se enfrió a 0ºC (hielo/acetona) y se añadió agua (14 mL) cuidadosamente. Después de la evaporación del THF in vacuo, la mezcla se enfrió y a continuación se neutralizó con HCl 1 N. La solución se diluyó a continuación con H_{2}O (100 mL) y se extrajo con EtOAc (3 X 100 mL), las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (100 mL), fueron secadas (MgSO_{4}), filtradas y evaporadas in vacuo. El aceite crudo se purificó mediante cromatografía por desorción súbita (30-40% EtOAc-éter de petróleo) para hacer el endo-alcohol puro 27 como aceite amarillo transparente (2,11 g, 55%): [\alpha]^{22}_{D} = -86,43 (c = 1,38, CHCl_{3}); ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,76 (br s, 1H), 7,92 (br s, 1H), 7,50-7,28 (m, 5H), 6,82 (s, 1H), 6,36 (br s, 1H), 6,02-5,87 (m, 1H), 5,35 (d, 1H, J = 17,22 Hz), 5,24 (d, 1H, J = 11,72 Hz), 5,18 (s, 2H), 4,64-4,61 (m, 3H), 4,10-3,99 (m, 1H), 3,80 (s, 3H), 3,79-3,66 (m, 3H), 2,85-2,75 (m, 1H), 2,64-2,60 (m, 1H), 2,30 (t, 2H, J = 6,23 Hz), 1,74 (br s, 1H), 0,88 (s, 9H), 0,06 y 0,04 (s x 2, 6H); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 165,3, 153,5, 150,5, 144,2, 136,3, 132,5, 128,6, 128,1, 127,7, 126,7, 122,8, 118,0, 114,3, 112,0, 106,1, 70,7, 65,7, 62,8, 60,4, 59,1, 56,6, 34,4, 31,7, 25,8, 18,2, -5,4; MS (EI), m/z (intensidad relativa) 598 (M^{+}.2, 3), 597 (M^{+}.+ 1,5), 596 (M^{+}., 13), 581 (2), 541 (2), 540 (4), 539 (9), 448 (2), 341 (2), 340 (12), 282 (7), 259 (5), 258 (20), 257 (100), 256 (3), 227 (3), 226 (12), 200 (5), 168 (6), 124 (3), 113 (3), 112 (50), 111(4), 94 (10), 91 (25), 73 (3); IR (NETO) 3340 (br), 3066, 3033, 2930, 2857, 1732, 1598, 1520, 1456, 1409, 1328, 1205, 1166, 1113, 1049, 1023, 938, 839, 778, 744, 697, 677, 637 cm^{-1}.

(2S)-N-[(2-Aliloxicarbonilamino)-4-benciloxi-5-metoxibenzoil]-4-(aciloxi-2-etil)-2-(tert-butildimetilsililoximetil)-2,3-dihidropirrol (28)

Se añadieron anhídrido acético (8,17 g, 7,55 mL, 80 mmol) y piridina (30,2 mL) al alcohol 27 (0,953 g, 1,60 mmol) y la solución se agitó durante 16 horas bajo nitrógeno en cuyo punto el TLC reveló el acabado de la reacción (50% EtOAc-éter de petróleo). La mezcla de reacción se enfrió a 0ºC (hielo/acetona) y se trató gota a gota con MeOH (15 mL). Después de agitar a temperatura ambiente durante 1 hora, la mezcla se trató gota a gota con H_{2}O (30,2 mL) y se permitió agitarse durante otras 16 horas. Después de la disolución con EtOAc (56 mL), la solución se enfrió a 0ºC y se trató gota a gota con 6 N HCl (56 mL). Las capas se separaron y la fase orgánica se lavó con 6N HCl (2 X 28 mL) y las capas acuosas combinadas se extrajeron a continuación con EtOAc (70 mL). Las fases orgánicas combinadas se lavaron a continuación con H_{2}O (60 mL), salmuera (60 mL), fueron secadas (MgSO_{4}), filtradas y evaporadas in vacuo. El aceite crudo era una mezcla del producto 28 deseado y el compuesto separado TBDMS tal como se juzgó mediante TLC. La purificación mediante cromatografía por desorción súbita (20-100% EtOAc-éter de petróleo) proporcionó 29 y el compuesto acil-TBDMS 28 deseado (0,59 g, 58%) como aceite sin color: [\alpha]^{22}_{D} = -87,04º (c = 4,91, CHCl_{3}); ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) (Rotámeros) \delta 8,77 (br s, 1H), 7,94 (br s, 1H), 7,49-7,31 (m, 5H), 6,80 (s, 1H), 6,37 (br s, 1H), 6,02-5,89 (m, 1H), 5,35 (dd, 1H, J = 17,22, 1,65 Hz), 5,24 (d, 1H, J = 10,30 Hz), 5,19 (s, 2H), 4,64-4,61 (m, 3H), 4,12 (t, 2H, J = 6,78 Hz), 4,03-3,95 (m, 1H), 3,83-3,75 (m, 4H), 2,85-2,75 (m, 1H), 2,64-2,60 (m, 1H), 2,40-2,26 (m, 2H,), 2,03 (s, 3H), 0,88 (s, 9H), 0,04, 0,01 y -0,01(s x 3, 6H); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 170,9, 165,5, 153,5, 150,6, 144,1, 136,3, 132,7, 132,5, 128,6, 128,1, 127,7, 126,5, 122,2, 118,0, 114,3, 112,2, 106,1, 70,7, 65,7, 62,4, 60,4, 59,2, 56,7, 34,6, 31,7, 27,9, 25,8, 20,9, 18,2, -5,4; MS (EI), m/z (intensidad relativa) 640 (M^{+}. + 2, 3), 639 (M^{+}. + 1, 7), 638 (M^{+}., 15), 623 (2), 583 (3), 582 (6), 581 (14), 539 (2), 523 (3), 490 (3), 341 (5), 340 (22), 301 (5), 300 (18), 299 (75), 283 (3), 282 (14), 256 (4), 242 (7), 241 (5), 240 (16), 239 (62), 226 (6), 192 (3), 182 (8), 181 (5), 180 (3), 168 (5), 166 (5), 154 (10), 131 (3), 106 (3), 95 (4), 94 (48), 93 (5), 92 (8), 91 (100), 89 (5), 75 (6), 73 (8), 65 (3), 57 (3); IR (NETO) 3324 (br, NH), 3066, 3018, 2954, 2930, 2857, 1737, 1622, 1598, 1523, 1489, 1464, 1409, 1363, 1327, 1230, 1205, 1168, 1115, 1080, 1030, 994, 937, 839, 756, 697, 667, 638, 606, 472, 459, 443 cm^{-1}; masa exacta calculada para C_{34}H_{46}N_{2}O_{8}Si m/e 638,3024, observado m/e 638,3223.

(2S)-N-[2-Aliloxicarbonilamino)-4-benciloxi-5-methoxibenzoil]-4-(aciloxi-2-etil)-2-(hidroximetil)-2,3-dihidropirrol (29)

Una solución de silil éter 28 (0,83 g, 1,30 mmol) en THF (14 mL) se trató con H_{2}O (14 mL) y ácido acético glacial (42 mL). Después de 2 horas agitándose a temperatura ambiente el TLC (50% EtOAc-éter de petróleo) mostró el consumo completo del material inicial. La mezcla se enfrió (hielo) y se trató gota a gota con una solución de NaHCO_{3} (64 g) en H_{2}O (640 mL). La solución acuosa se extrajo con EtOAc (3 X 100 mL) y las capas orgánicas combinadas se lavaron con H_{2}O (150 mL), salmuera (100 mL), secadas (MgSO_{4}), filtradas y concentradas in vacuo para dar al producto crudo como un aceite naranja. La purificación mediante cromatografía por desorción súbita (60% EtOAc-éter de petróleo) proporcionó el alcohol puro 29 como un vidrio blanco (0,537 g, 81%): [\alpha]^{21}_{D} = -83,60º (c = 0,25, CHCl_{3}); ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,56 (br s, 1H), 7,89 (br s, 1H), 7,49-7,29 (m, 5H), 6,81 (s, 1H), 6,28 (br s, 1H), 6,03-5,89 (m, 1H), 5,35 (ddd, 1H, J = 17,22, 3,11, 1,46, Hz), 5,25 (d, 1H, J = 10,44 Hz), 5,19 (s, 2H), 4,80-4,70 (m, 1H), 4,65-4,62 (m, 2H), 4,41-4,31 (m, 1H), 4,20-4,06 (m, 2H,), 3,84-3,77 (m, 5H), 2,98-2,88 (m, 1H), 2,39 (t, 2H, J = 6,51 Hz), 2,33-2,25 (m, 1H,), 2,03 (s, 3H); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 170,8, 167,1, 153,5, 151,0, 144,3, 136,1, 132,6, 132,4, 128,6, 128,1, 127,7, 126,3, 122,6, 118,1, 112,2, 106,3, 70,7, 66,5, 65,8, 62,0, 61,7, 56,8, 35,4, 31,7, 27,8, 20,9; MS (EI), m/z (intensidad relativa) 525 (M^{+}. + 1,5), 524 (M^{+}., 14), 341 (5), 340 (16), 299 (2), 283 (3), 282 (14), 256 (4), 227 (5), 208 (2), 192 (3), 190 (2), 186 (9), 185 (60), 168 (2), 167 (5), 166 (2), 164 (2), 163 (2), 154 (3), 136 (3), 131 (3), 126 (7), 125 (53), 108 (2), 107 (2), 106 (2), 105 (3), 95 (3), 94 (19), 93 (3), 92 (9), 91 (100), 83 (2), 69 (2), 68 (3), 67 (3), 65 (5), 58 (6), 57 (17); IR (CHCl_{3}) 3335 (br), 2933, 1732, 1599, 1524, 1455, 1434, 1408, 1231, 1170, 1112, 1029, 995, 932, 868, 765, 698, 638, 606 cm^{-1}; masa exacta calculada para C_{28}H_{32}N_{2}O, m/e 524,2159, observada m/e 524,2074.

(11S,11aS)-2-(Aciloxi-2-etil)-10-aliloxicarbonil-8-benciloxi-11-hidroxi-7-metoxi-1,10,11,11a-tetrahidro-5H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiacepin-5-ona (30)

Procedimiento A: Se añadió una solución de DMSO (0,25 mL, 0,27 g, 3,49 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (10 mL) gota a gota durante 35 minutos a una solución de oxalil cloruro (0,87 mL de una solución 2,0 M en CH_{2}Cl_{2}, 1,75 mmol) a -45ºC (liq. N_{2}/Clorobenzeno) bajo una atmósfera de nitrógeno. Después de agitar a -45ºC durante 40 minutos, se añadió una solución del alcohol 29 (0,51 g, 0,97 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (7 mL) gota a gota durante 35 minutos a -45ºC. Después de 55 minutos a-45ºC, la mezcla se trató gota a gota con una solución de TEA (0,57 mL, 0,41 g, 4,10 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (5 mL) durante 40 minutos a -45ºC. Después de otros 45 minutos, se dejó que la mezcla de reacción se calentara a temperatura ambiente y se diluyó con CH_{2}Cl_{2} (60 mL), se limpió con 1N HCl (60 mL), H_{2}O (60 mL), salmuera (30 mL), se secó (MgSO_{4}), filtró y evaporó in vacuo. El TLC (80% EtOAc-éter de petróleo) del material en crudo reveló la reacción completa. La purificación mediante cromatografía por desorción súbita (50% EtOAc-éter de petróleo) proporcionó la carbinolamina 30 protegida como un vidrio cremoso (0,25 g, 49%).

Procedimiento B: Una solución de alcohol 29 (0,21 g, 0,40 mmol) en CH_{2}Cl_{2}/CH3CN (30 mL; 3:1) se trató con tamices moleculares en polvo de 4 \ring{A} (0,15 g) y NMO (69 mg, 0,59 mmol). Después de 15 minutos agitándose a temperatura ambiente, se añadió TPAP (6,9 mg, 19,8 \mumol) y se agitó de manera continuada durante otra hora, en cuyo punto el TLC (80% EtOAc-éter de petróleo) mostró la formación del producto junto con algún material inicial no oxidado. La mezcla se trató a continuación con otra cantidad de NMO (35 mg, 0,30 mmol) y TPAP (3,50 mg, 10 \mumol), y se permitió agitarse durante otras 1,5 horas, después de cuyo tiempo el TLC reveló una reacción completa. La mezcla se evaporó in vacuo sobre sílice y se sometió a cromatografía por desorción súbita (50% EtOAc-éter de petróleo) para proporcionar la carbinolamina 30 protegida como un vidrio cremoso (95 mg, 46%): [\alpha]^{20}_{D} = +113,85º (c = 0,95, CHCl_{3}); ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,49-7,26 (m, 6H), 6,80 (s, 1H), 6,76 (s, 1H), 5,79-5,59 (m, 1H), 5,75 (d, 1H, J = 10,08 Hz), 5,19-5,05 (m, 4H), 4,52-4,29 (m, 2H), 4,28-4,08 (m, 3H), 3,95-3,80 (m, 4H), 2,99 (dd, 1H, J = 10,72, 16,94 Hz), 2,66 (d, 1H, J = 16,86 Hz), 2,46 (t, 2H, J = 6,41 Hz), 2,06 (s, 3H); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 171,1, 163,1, 155,9, 150,3, 149,1, 136,1, 131,8, 128,7, 128,6, 128,2, 127,3, 125,3, 124,4, 121,6, 118,0, 114,8, 111,0, 85,9, 71,1, 66,8, 62,0, 70,7, 59,4, 56,2, 37,0, 27,9, 21,0; MS (EI), m/z (intensidad relativa) 522 (M^{+}., 13), 463 (9), 462 (13), 341 (8), 340 (32), 282 (11), 256 (3), 183 (5), 154 (3), 123 (8), 94 (20), 91 (100), 65 (4), 57 (15); masa exacta calculada para C_{28}H_{30}N_{2}O_{8} m/e 522,2002, observado m/e 522,2008.

Ejemplo 1(c) (11aS)-2-(Aciloxi-2-etil)-8-benciloxi-7-metoxi-1,2,3,11a-tetrahidro-5H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiacepin-5-ona (31, UP2051, SJG-301)

Se añadió una cantidad catalítica de tetraquis (trifenilfosfina) paladio (5,26 mg, 4,55 \mumol) a una solución agitada de carbinolamina 30 protegida con Alloc (95 mg, 0,18 mmol), trifenilfosfina (2,39 mg, 9,10 \mumol) y pirrolidina (13,6 mg, 0,19 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (10 mL). Después de 1 hora agitando a temperatura ambiente bajo una atmósfera de nitrógeno, el TLC (97% CHCl_{3}/MeOH) reveló el consumo completo del material inicial. El solvente se evaporó in vacuo y el residuo crudo se purificó mediante cromatografía por desorción súbita (99,5% CHCl_{3}/MeOH) para conseguir el PBD (31, SJG-301, UP2051) como un vidrio naranja que se evaporó repetidamente in vacuo con CHCl_{3} para proporciona la forma imina N10-C11 (66,3 mg, 87%): [\alpha]^{21}_{D} = +741,67º (c = 0,66, CHCl_{3}); ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) (imina) \delta 7,78 (d, 1H, J = 4,03 Hz), 7,70-7,28 (m, 6H), 6,83 (s, 1H), 6,82 (s, 1H), 5,19-5,18 (m, 2H), 4,27-4,16 (m, 2H), 3,94 (s, 3H), 3,44-3,35 (m, 1H), 3,28-3,15 (m, 1H), 3,04-2,97 (m, 1H), 2,52-2,47 (m, 2H), 2,06 (s, 3H); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) (Rotámeros) \delta 170,9, 162,6, 161,1, 150,9, 148,2, 140,1, 136,1, 132,1, 132,0, 128,7, 128,6, 128,1, 127,3, 124,7, 121,4, 111,9, 111,6, 70,8, 61,9, 56,2, 53,6, 37,4, 27,9, 21,0; MS (EI), m/z (intensidad relativa) 421 (M^{+}.+ 1,4), 420 (M^{+}., 14), 419 (12), 418 (36), 361 (6), 360 (20), 328 (3), 313 (8), 270 (4), 269 (7), 268 (9), 267 (22), 256 (4), 129 (3), 105 (3), 94 (4), 93 (3), 92 (12), 91 (100), 83 (3), 80 (3), 73 (5), 71 (3), 69 (3), 65 (5), 60 (4), 57 (5), 55 (4); IR (CHCl_{3}) 3313 (br), 2957, 2934, 1 736, 1598, 1509, 1455, 1437, 1384, 1243, 1179, 1120, 1096, 1037, 753, 696, 666, 542 cm^{-1}; masa exacta calculada para C_{24}H_{24}N_{2}O_{5} m/e 420,1685, observado m/e 420,1750.

(11S,11aS)-10-Aliloxicarbonil-8-benciloxi-11-hidroxi-2-(hidroxi-2-etil)-7-muetoxi-1,10,11,11a-tetrahidro-5H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiacepin-5-ona (32)

Se añadió una solución de K_{2}CO_{3} (328 mg, 2,38 mmol) en H_{2}O (6 mL) gota a gota a una solución agitada del compuesto acil 30 (0,248 g, 0,475 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (3 mL) y MeOH (8 mL). Después de agitarla durante 16 horas a temperatura ambiente el TLC (EtOAc) relevó la reacción completa. El MeOH/CH_{2}Cl_{2} se evaporó in vacuo para dar una solución acuosa turbia que se diluyó con H_{2}O (30 mL) y se extrajo con EtOAc (3 X 30 mL). Las capas orgánicas combinadas se lavaron a continuación con salmuera (30 mL), se secaron (MgSO_{4}), filtraron y evaporaron in vacuo para proporcionar un aceite cremoso. La purificación mediante cromatografía por desorción súbita (97% CHCl_{3}/MeOH) proporcionó el alcohol homoalílico 32 como vidrio sin color transparente (178 mg, 78%): [\alpha]^{21}_{D} = 48,43º (c = 1,56, CHCl_{3}); ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,43-7,24 (m, 6H), 6,84 (s, 1H), 6,73 (s, 1H), 5,74-5,55 (m, 1H), 5,73 (d, 1H, J = 8,79 Hz), 5,19-5,06 (m, 4H), 4,46-4,23 (m, 2H), 3,92-3,70 (m, 6H), 3,07-2,97 (m, 1H), 2,67 (d, 1H, J = 16,49 Hz), 2,40-2,17 (m, 2H); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 163,1, 155,8, 150,3, 149,1, 136,1, 131,8, 128,6, 128,1, 127,7, 127,4, 125,3, 124,1, 124,0, 123,1, 123,0, 117,9, 114,9, 110,9, 86,0, 71,1, 66,7, 60,3, 59,6, 56,2, 37,1, 31,5; MS (EI), m/z (intensidad relativa) 482 (M^{+}. + 2, 4), 481 (M^{+}. +1, 10), 480 (M^{+}., 26), 449 (4), 378 (12), 347 (7), 341 (7), 340 (25), 339 (4), 284 (4), 282 (10), 143 (4), 141 (13), 131 (6), 112 (24), 110 (4), 94 (10), 92 (9), 91 (100), 80 (4), 70 (5), 69 (7), 65 (4), 58 (11), 57 (29); masa exacta calculada para C_{26}H_{28}N_{2}O_{7} m/e 480,1897, observado m/e
480,1886.

Ejemplo 1(d) (11aS)-8-Benciloxi-2-(hidroxi-2-etil)-7-metoxi-1,2,3,11a-tetrahidro-5H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiacepin-5-ona (33, UP2052, SJG-303)

Se añadió una cantidad catalítica de tetraquis (trifenilfosfina) paladio (9,39 mg, 8,13 \mumol) a una solución agitada de la carbinolamina 30 protegida con Alloc (156 mg, 0,33 mmol), trifenilfosfina (4,26 mg, 16,3 \mumol) y pirrolidina (24,3 mg, 0,34 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (15 mL). Después de 1 hora 50 minutos agitando a temperatura ambiente bajo una atmósfera de nitrógeno, el TLC (90% CHCl_{3}/MeOH) reveló el consumo completo de material inicial. El solvente se evaporó in vacuo y el residuo crudo se purificó mediante cromatografía por desorción súbita (98% CHCl_{3}/MeOH) para conseguir el PBD (33, SJG-303, UP2052) como vidrio naranja que se evaporó repetidamente in vacuo con CHCl_{3} para proporcionar la forma N10-C11 imina (103 mg, 84%): ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) (Rotámeros) \delta 7,75 (d, 1H, J = 4,03 Hz), 7,58-7,22 (m, 6H), 6,82-6,80 (m, 2H), 5,17-4,88 (m, 2H), 4,65-4,20 (m, 2H), 3,91 (s, 3H), 3,35-3,25 (m, 1H), 3,18-3,15 (m, 1H), 3,04-2,97 (m, 1H), 2,52-2,47 (m, 2H); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) (Rotámeros) \delta 162,8, 161,1, 152,3, 150,9, 148,1, 142,3, 138,3, 136,4, 128,7, 128,6, 128,2, 127,4, 124,2, 123,1, 111,8, 111,6, 70,8, 60,4, 56,2, 53,6, 37,7, 31,5; MS (EI), m/z (intensidad relativa) 380 (13), 379 (11), 378 (M^{+}., 42), 377 (36), 376 (77), 375 (6), 347 (8), 345 (5), 334 (5), 333 (19), 288 (14), 287 (14), 286 (36), 285 (50), 272 (6), 271 (22), 269 (6), 268 (6), 267 (5), 259 (5), 257 (13), 255 (24), 243 (15), 155 (6), 136 (5), 124 (7), 106 (6), 93 (6), 92 (38), 91 (100), 65 (16), 63 (5), 51 (5); IR (CHCl_{3}) 3313, 2918, 1623, 1598, 1568, 1509, 1455, 1436, 1386, 1328, 1243, 1218, 1175, 1130 1061, 1007, 870, 831, 792, 752, 697, 662 cm^{-1}; masa exacta calculada para C_{22}H_{22}N_{2}O_{4} m/e 378,1580, observado m/e 378,1576.

La evaporación repetida in vacuo de UP2052 con CH3OH proporcionó las formas metil éter N10-C11: ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) (Rotámeros) \delta 7,66-7,22 (m, 6H), 6,82-6,81 (m, 2H), 5,21-4,76 (m, 2H), 4,61-4,15 (m, 1H), 4,03-3,71 (m, 5H), 3,44 (s, 3H), 3,35-1,92 (m, 7H).

Ejemplo 1(e) Síntesis de C7,C8-Dimetoxi-C2-Metoxicarbonilmetil PBD AN-SJG (42, UP2065) (Ver la figura 4)

22

(2S)(4R)-N-(4,5-Dimetoxi-2-nitrobenzoil)-2-(tert-butildimetilsililoximetil)-4-hidroxipirrolidina (35)

Se añadió una cantidad catalítica de DMF (2 gotas) a una solución agitada del nitro-ácido 34 (12,45 g, 54,8 mmol) y oxalil cloruro (5,75 mL, 8,37 g, 65,9 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (300 mL). Después de 16 horas a temperatura ambiente, la solución de cloruro ácido se añadió gota a gota durante 4,5 horas a una mezcla agitada de la amina 2 (12,65 g, 54,8 mmol) y TEA (13,86 g, 19,1 mL, 137 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (300 mL) a 0ºC (hielo/acetona) bajo una atmósfera de nitrógeno. La mezcla de la reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante otras 2,5 h. La mezcla se lavó con NaHCO_{3} saturado (300 mL), NH_{4}Cl saturado (300 mL), H_{2}O (250 mL), salmuera (300 mL), se secó (MgSO_{4}), filtro y evaporó in vacuo para dar al producto en crudo como un aceite naranja oscuro. La purificación mediante cromatografía por desorción súbita (80% EtOAc-éter de petróleo) aisló la amida pura 35 como un aceite naranja pegajoso (18,11 g, 75%): [\alpha]^{22}_{D} = -105,7º (c = 1,17, CHCl_{3}); ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) (Rotámeros) \delta 7,71 y 7,68 (s x 2, 1H), 6,86 y 6,79 (s x 2, 1H), 4,50 y 4,38 (br s x 2, 2H), 4,13-4,10 (m, 1H), 3,98 (s, 3H), 3,94 (s, 3H), 3,78-3,74 (m, 1H), 3,35-3,27 (m, 1H), 3,07 (d, 1H, J = 11,17 Hz), 3,01-2,79 (br s, 1H), 2,35-2,26 (m, 1H), 2,11-2,04 (m, 1H), 0,91 y 0,81 (s x 2, 9H), 0,10, 0,09, -0,07, y -0,10 (s x 4, 6H); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) (Rotámeros) \delta 166,6, 154,2 y 154,1, 149,3 y 148,9, 137,5, 128,0, 109,2, 107,1, 70,1 y 69,4, 64,7 y 62,5, 59,0 y 54,9, 57,3, 56,6, 56,5, 37,4 y 36,3, 25,9 y 25,7, 18,2, -5,4, -5,5 y -5,7; MS (EI), m/z (intensidad relativa) 440 (M^{+}., 2), 426 (9), 386 (4), 385 (20), 384 (65), 383 (100), 367 (4), 320 (4), 308 (7), 295 (8), 286 (5), 211 (15), 210 (100), 194 (12), 180 (4), 165 (17), 164 (8), 137 (4), 136 (25), 121 (4), 93 (6), 91 (9), 82 (6), 75 (15), 73 (15), 59 (4), 57 (4); IR (NETO) 3391 (br, OH), 3012, 2952, 2931, 2857, 1616, 1578, 1522, 1456, 1436, 1388, 1338, 1279, 1225, 1183, 1151, 1074, 1053, 1029, 1004, 939, 870, 836, 816, 785, 757, 668, 650, 620 cm^{-1}; masa exacta calculada para C_{20}H_{32}N_{2}OSi m/e 440,1979, observado m/e 440,1903.

(2S) (4R)-N-(2-Amino-4,5-dimetoxibenzoil)-2-(tert-butildimetilsililoximetil)-4-hidroxipirrolidina (36)

Se añadió una solución de hidracina (6,59 g, 6,40 mL, 205,5 mmol) en MeOH (110 mL) gota a gota a una solución del nitro-compuesto 35 (18,1 g, 41,1 mmol), sobre gránulos de anti-golpeo y Raney Ni (2,6 g) en MeOH (325 mL) y se calentó a reflujo. Después de 1 hora a reflujo, el TLC (95% CHCl_{3}/MeOH) reveló alguna formación de amina. La mezcla de la reacción se trató con más Raney Ni (2,6 g) e hidracina (6,40 mL) en MeOH (50 mL) y se trató a reflujo durante 30 minutos adicionales en cuyo punto el TLC reveló el acabado de la reacción. La mezcla de la reacción se trató a continuación con suficiente Raney Ni para descomponer cualquier hidracina restante y se calentó a reflujo durante otra 1,5 h. Después de enfriarse a temperatura ambiente, la mezcla se filtró a través de un sínter y el filtrado resultante se evaporó in vacuo. El residuo resultante se trató a continuación con CH_{2}Cl_{2} (300 mL), se secó (MgSO_{4}), se filtró y se evaporó in vacuo para proporcionar la amina 36 como aceite verde (16,03 g, 95%): [\alpha]^{22}_{D} = -116,32 (c = 0,31, CHCl_{3}); ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) (Rotámeros) \delta 6,70 (s, 1H), 6,28 (s, 1H), 4,51-4,49 (m, 1H), 4,36-4,34 (m, 1H), 4,06-3,77 (m, 10H), 3,61-3,50 (m, 3H), 2,23-2,21 (m, 1H), 2,01-1,98 (m, 1H), 0,89 (s, 9H), 0,04 (s, 6H); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) (Rotámeros) \delta 170,2, 151,5, 141,2, 140,5, 112,2, 112,0, 101,1, 70,4, 62,6, 59,0, 56,9, 56,6, 55,8, 35,7, 25,9 y 25,7, 18,2, -5,4 y -5,5; MS (EI), m/z (intensidad relativa) 412 (M^{+}.+2, 3), 411 (M^{+}. + 1, 10), 410 (M^{+}., 32), 354 (6), 353 (23), 263 (3), 212 (5), 181 (11), 180 (100), 179 (3), 165 (3), 164 (6), 152 (10), 137 (4), 136 (4), 125 (5), 120 (3), 100 (3), 94 (6), 75 (9), 73 (7), 57 (3); IR (CHCl_{3}) 3353 (br), 2953, 2930, 2857, 1623, 1594, 1558, 1517, 1464, 1435, 1404, 1260, 1234, 1215, 1175, 1119, 1060, 1005, 915, 836, 777, 755, 666 cm^{-1}; masa exacta calculada para C_{20}H_{34}N_{2}O_{5}Si m/e 410,2237, observado m/e 410,2281.

(2S)(4R)-N-[(2-Aliloxicarbonilamino)-4,5-dimetoxibenzoil]-2-(tert-butildimetilsililoximetil)-4-hidroxipirrolidina (37)

Una solución de la amina 36 (16,03 g, 39 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (450 mL) se enfrió a 0ºC (hielo/acetona) y se trató con piridina (6,94 mL, 6,78 g, 85,8 mmol). Una solución de alil cloroformato (4,35 mL, 4,94 g, 40,95 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (90 mL) se añadió a continuación gota a gota a la mezcla agitada. La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante otra 1,5 h, en cuyo punto el TLC (EtOAc) relevó el consumo completo de la amina 36. La mezcla de la reacción se lavó con CuSO_{4} saturado (300 mL), H_{2}O (300 mL), salmuera (300 mL), secado (MgSO_{4}), filtrado y evaporado in vacuo. El residuo crudo se purificó mediante cromatografía por desorción súbita (35% EtOAc-éter de petróleo) para conseguir el compuesto alloc-amino puro 37 como aceite claro (16,78 g, 87%): [\alpha]^{23}_{D} = -93,35º (c = 0,27, CHCl_{3}); ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) (Rotámeros) \delta 8,93 (br s, 1H), 7,72 (S, 1H), 6,77 (S, 1H), 6,01-5,87 (m, 1H), 5,34 (dd, 1H, J = 17,22, 3,12 Hz), 5,23 (dd, 1H, J = 10,44, 1,29 Hz), 4,63-4,55 (m, 3H), 4,40-4,38 (m, 1H), 4,15-4,08 (m, 1H), 3,91 (S, 3H), 3,81 (s, 3H), 3,62-3,55 (m, 3H), 2,34-2,24 (m, 2H), 2,07-1,99 (m, 1H), 0,89 (s, 9H), 0,05 y 0,04 (s x 2, 6H); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) (Rotámeros) \delta 169,5, 153,8, 150,9, 143,8, 132,5, 118,0, 115,9, 111,0, 104,6, 70,5, 65,8, 62,2, 59,0, 57,2, 56,2, 56,0, 35,7 y 31,1, 25,8, 18,1, -5,4 y -5,5; MS (EI), m/z (intensidad relativa) 496 (M^{+}.+2, 6), 495 (M^{+}. + 1, 18), 494 (M^{+}., 50), 439 (11), 438 (29), 437 (100), 380 (4), 379 (14), 337 (13), 336(4), 265 (15), 264 (91), 263 (4), 258 (6), 224 (4), 223 (15), 220 (11), 212 (7), 208 (4), 207 (11), 206 (75), 192 (5), 180 (20), 179 (18), 174 (15), 172 (4), 164 (7), 156 (5), 152 (5), 150 (6), 136 (4), 99 (9), 86 (16), 75 (10), 73 (11), 57 (6); IR (CHCl_{3}) 3337 (br), 2952, 2930, 2857, 1733, 1600, 1522, 1458, 1420, 1399, 1327, 1288, 1261, 1229, 1203, 1165, 1121, 1039, 1004, 931, 836, 777, 668 cm^{-1}; masa exacta calculada para C_{24}H_{38}N_{2}O_{7}Si m/e 494,2448, observado m/e 494,2365.

(2S)-N-[(2-Aliloxicarbonilamino)-4,5-dimetoxibenzoil]-2-(tert-butildimetilsililoximetil)-4-oxopirrolidina (38)

Se añadió una solución de DMSO (7,24 mL, 7,97 g, 102 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (150 mL) gota a gota durante 2 horas a una solución de oxalil cloruro (25,5 mL de una solución 2,0 M en CH_{2}Cl_{2}, 51,0 mmol) a -60ºC (líq. N_{2}/CHCl_{3}) bajo una atmósfera de nitrógeno. Después de agitar a -50ºC durante 1 hora, se añadió una solución del alcohol 37 (16,75 g, 33,9 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (250 mL) gota a gota durante un periodo de 2 h. Después de 1 hora a -55ºC, la mezcla se trató gota a gota con una solución de TEA (32,2 mL, 23,4 g, 231 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (100 mL) y se dejó enfriar a temperatura ambiente. La mezcla de la reacción se trató con salmuera (250 mL) y se lavó con 1N HCl (2 X 300 mL) frío. El análisis del TLC (50% EtOAc-éter de petróleo) de la capa de CH_{2}Cl_{2} reveló la reacción completa. Las capas se separaron y la fase orgánica se lavó con H2O (300 mL), salmuera (300 mL), se secó (MgSO_{4}), filtró y concentró in vacuo para dar la quetona 38 como un vidrio naranja (16,37 g, 98%): [\alpha]^{21}_{D} = -9,96º (c = 1,51, CHCl_{3}); ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,69 (s, 1H), 7,82 (s, 1H), 6,75 (s, 1H), 6,01-5,89 (m, 1H), 5,36 (dd, 1H, J = 17,22, 3,11 Hz), 5,28-5,23 (m, 1H), 5,20-4,95 (m, 1H), 4,65-4,62 (m, 2H), 4,20-3,83 (m, 9H), 3,67-3,56 (m, 1H), 2,74 (dd, 1H, J = 17,86, 9,44 Hz), 2,52 (d, 1H, J = 17,95 Hz), 0,87 (s, 9H), 0,05 (s, 6H); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) (Rotámeros) \delta 208,9, 169,1, 153,5, 151,3, 143,9, 132,4, 118,2, 114,4, 110,1, 104,6, 66,1, 65,8, 56,2, 56,0, 39,7, 25,6, 18,0, -5,7 y -5,8; MS (EI), m/z (intensidad relativa) 494 (M^{+}. + 2, 6), 493 (M^{+}. + 1, 16), 492 (M^{+}., 43), 437 (8), 436 (22), 435 (74), 377 (11), 336 (6), 335 (21), 334 (8), 294 (8), 265 (9), 264 (50), 250 (5), 223 (17), 220 (18), 208 (7), 207 (15), 206 (100), 192 (9), 180 (23), 179 (28), 172 (33), 171 (10), 164 (16), 155 (7), 152 (9), 150 (16), 136 (13), 115 (14), 108 (6), 88 (6), 75 (20), 73 (33), 59 (13), 58 (6), 57 (62), 56 (14); IR (NETO) 3337 (br, NH), 3086, 3019, 2954, 2932, 2858, 1766, 1732, 1623, 1603, 1520, 1464, 1398, 1362, 1332, 1313, 1287, 1262, 1204, 1166, 1110, 1052, 1038, 1004, 938, 870, 838, 810, 756, 666, 621, 600 cm^{-1}; masa exacta calculada para C_{24}H_{36}N_{2}O_{7}Si m/e 492,2292, observado m/e 492,2349.

(2S)-N-[(2-Aliloxicarbonilamino)-4,5-dimetoxibenzoil]-2-(tert-butildimetilsililoximetil)-4-(metoxicarbonilmetil)-2,3-dihidropirrol (39)

Se añadió éter de petróleo (70 mL) a una muestra de NaH (0,41 g de una dispersión al 60% en aceite, 10,16 mmol) y se agitó a temperatura ambiente bajo una atmósfera de nitrógeno. Después de 0,5 horas, se dejó que la mezcla cuajara y el Éter de Petróleo se transfirió desde el frasco a través de una aguja de doble punta bajo nitrógeno. Se añadió THF (60 mL) al residuo restante y la mezcla se enfrió a 0ºC (hielo/acetona). La solución fría se trató gota a gota con una solución de metildietilfosfonoacetato (1,86 mL, 2,14 g, 10,16 mmol) en THF (60 mL) bajo nitrógeno. Después de 1,5 horas a temperatura ambiente, la mezcla se enfrió a 0ºC y se trató gota a gota con una solución de la quetona 38 (2,0 g, 4,07 mmol) en THF (36 mL) bajo nitrógeno. Después de 16 horas a temperatura ambiente, el TLC (20% EtOAc-éter de petróleo) reveló el acabado de la reacción. El THF se evaporó in vacuo y la mezcla se partió entre NaHCO_{3} saturado (100 mL) y EtOAc (100 mL). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (2 X 100 mL). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con H_{2}O (100 mL), salmuera (100 mL), se secaron (MgSO_{4}), filtraron y concentraron in vacuo para dar un aceite rojo oscuro. La purificación mediante cromatografía por desorción súbita (15% EtOAc-éter de petróleo) proporcionó el endo-éster 39 como aceite dorado (1,63 g, 73%): ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) (Rotámeros) \delta 8,82 (br s, 1H), 7,86 (s, 1H), 6,79 (s, 1H), 6,46 (br s, 1H), 6,03-5,89 (m, 1H), 5,39-5,32 (m, 1H), 5,24 (dd, 1H, J = 10,44, 1,28 Hz), 4,70-4,59 (m, 3H), 3,99-3,61 (m, 11H), 3,08 (s, 2H), 2,91-2,82 (m, 1H), 2,75-2,66 (m, 1H), 0,92-0,79 (m, 9H), 0,12-0,03 (m, 6H); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) (Rotámeros) \delta 170,7, 165,8, 153,5, 151,3, 143,7, 132,8, 132,5, 128,2, 118,1, 118,0, 117,9, 111,3, 104,3, 65,7, 62,3, 59,5 y 59,4, 56,4, 56,0, 52,0, 34,7, 33,9, 25,8, 18,1, -5,4; MS (EI), m/z (intensidad relativa) 549 (M^{+}. + 1, 7), 548 (M^{+}., 17), 525 (13), 507 (14), 492 (6), 491 (18), 489 (8), 449 (7), 347 (11), 287 (6), 286 (20), 285 (82), 265 (10), 264 (51), 263 (9), 244 (9), 242 (7), 228 (19), 227 (8), 226 (18), 224 (6), 223 (22), 220 (12), 208 (6), 207 (18), 206 (100), 192 (7), 180 (18), 179 (21), 168 (16), 164 (10),152 (13), 150 (8), 141 (8), 140 (73), 139 (13), 136 (6), 108 (6), 89 (9), 80 (15), 75 (15), 73 (19), 57 (6); masa exacta calculada para C_{27}H_{40}N_{2}O_{8}Si m/e 548,2554, observado m/e 548,2560.

(2S)-N-[(2-Aliloxicarbonilamino)-4,5-dimetoxibenzoil]-2-(hidroximetil)-4-(metoxicarbonilmetil)-2,3-dihidropi- rrol (40)

Una solución del silil éter 39 (1,63 g, 2,97 mmol) en THF (12,6 mL) se trató con H_{2}O (12,6 mL) y ácido acético glacial (38 mL). Después de 2 horas agitándose a temperatura ambiente el TLC (60% EtOAc-éter de petróleo) mostró el consumo completo de material inicial. La mezcla se enfrió (hielo) y se trató gota a gota con una solución de NaHCO_{3} (61,6 g) en H_{2}O (616 mL). La solución acuosa se extractó con EtOAc (3 X 150 mL) y las capas orgánicas combinadas se lavaron con H_{2}O (150 mL), salmuera (100 mL), se secaron (MgSO_{4}), filtraron y concentraron in vacuo para dar el alcohol crudo 40 como aceite naranja (1,27 g, 98%): MS (EI), m/z (intensidad relativa) 435 (M^{+}. + 1, 6), 434 (M^{+}., 23), 347 (5), 317 (4), 281 (6), 265 (8), 264 (44), 263 (8), 224 (5), 223 (24), 222 (5), 220 (9) 207 (15), 206 (94), 192 (5), 180 (18), 179 (18), 172 (12), 171 (100), 164 (12), 152 (7), 150 (7), 141 (6), 140 (53), 136 (9), 112 (11), 108 (6), 80 (12), 69 (7); masa exacta calculada para C_{21}H_{26}N_{2}O_{8} m/e 434,1689, observado m/e 434,1606.

(11S,11aS)-10-Aliloxicarbonil-7,8-dimetoxi-11-hidroxi-2-(metoxicarbonilmetil)-1,10,11,11a-tetrahidro-5H-pi- rrolo[2,1-c][1,4]benzodiacepin-5-ona (41)

Se añadió una solución de DMSO (0,75 mL, 0,82 g, 10,5 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (22 mL) gota a gota durante 1 hora 20 minutos a una solución de oxalil cloruro (2,63 mL de una solución 2,0 M en CH_{2}Cl_{2}, 5,26 mmol) a -45ºC (líq. N_{2}/Clorobenzeno) bajo una atmósfera de nitrógeno. Después de agitar a -45ºC durante 1 hora, se añadió una solución del alcohol 40 (1,27 g, 2,92 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (22 mL) gota a gota durante un periodo de 1 h a -45ºC. Después de 50 minutos a -45ºC, la mezcla se trató gota a gota con una solución de TEA (1,71 mL, 1,24 g, 12,29 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (11 mL) durante 30 minutos a -45ºC. Después de otros 30 minutos, la mezcla de la reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se diluyó con CH_{2}Cl_{2} (20 mL), se lavó con 1N HCl (100 mL), H_{2}O (100 mL), salmuera (100 mL), se secó (MgSO_{4}), filtró y concentró in vacuo. El TLC (80% EtOAc-éter de petróleo) del material crudo reveló el acabado de la reacción. La purificación mediante cromatografía por desorción súbita (55% EtOAc-éter de petróleo) proporcionó la carbinolamina 41 protegida como vidrio blanco (0,68 g, 54%): [\alpha]^{22}_{D} = +219,78º (c = 0,12, CHCl_{3}); ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) [delta] 7,23 (s, 1H), 6,91 (s, 1H), 6,70 (s, 1H), 5,90-5,80 (m, 2H), 5,17-5,13 (m, 2H), 4,70 (dd, 1H, J = 13,37, 5,31 Hz), 4,50-4,43 (m, 1H), 3,98-3,75 (m, 8H), 3,71 (s, 3H), 3,20-3,05 (m, 3H), 2,75 (d, 1H, J = 17,04 Hz); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 170,7, 163,3, 155,9, 151,1, 148,5, 131,7, 128,3, 126,2, 124,7, 118,1, 117,6, 112,6, 110,6, 86,0, 66,8, 59,4, 56,2, 52,1, 37,0, 33,7; MS (EI), m/z (intensidad relativa) 434 (M^{+}. + 2, 6), 433 (M^{+}. + 1, 21), 432 (M^{+}., 74), 414 (8), 373 (14), 329 (7), 293 (20), 292 (20), 265 (19), 264 (100), 263 (33), 248 (25), 224 (6), 223 (25), 220 (14), 209 (8), 208 (52), 207 (24), 206 (92), 192 (15), 191 (6), 190 (7), 180 (18), 179 (23), 169 (23), 165 (10), 164 (17), 152 (12), 150 (14), 149 (8), 141 (9), 140 (60), 136 (11), 125 (6), 120 (5), 110 (8), 108 (15), 81 (9), 80 (45), 57 (7); IR (CHCl_{3}) 3385 (br), 2918, 2849, 1707, 1625, 1605, 1516, 1457, 1436, 1405, 1311, 1282, 1245, 1217, 1172, 1116, 1046, 1001, 968, 933, 874, 855, 666 cm^{-1}.

(11aS)-7,8-Dimetoxi-2-(metoxicarbonilmetil)-1,2,3,11a-tetrahidro-5H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiacepin-5-ona (42, UP2065, AN-SJG)

Una cantidad catalítica de tetraquis (trifenilfosfina) paladio (44,0 mg, 38,0 \mumol) se añadió a una solución agitada de la carbinolamina 41 protegida con Alloc (0,66 g, 1,53 mmol), trifenilfosfina (20,0 mg, 77,0 \mumol) y pirrolidina (114 mg, 1,60 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (100 mL). Después de 2 horas agitándose a temperatura ambiente bajo una atmósfera de nitrógeno, el TLC (99% CHCl_{3}/MeOH) reveló el consumo completo de material inicial. El solvente se evaporó in vacuo y el residuo crudo se purificó mediante cromatografía por desorción súbita (98% CHCl_{3}/MeOH) para conseguir el PBD (42, AN-SJG, UP2065) como vidrio naranja que se evaporó repetidamente in vacuo con CHCl_{3} para proporcionar la forma imina N10-C11 (481 mg, 95%): [\alpha]^{22}_{D} = +401,84 (c = 1,00, CHCl_{3}); ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,87-7,85 (m, 1H), 7,49 (s, 1H), 6,93 (s, 1H), 6,81 (s, 1H), 4,34-4,27 (m, 1H), 3,95 (s, 3H), 3,93 (s, 3H), 3,74 (s, 3H), 3,34 (d, 1H, J = 16,85 Hz), 3,24 (s, 2H), 3,19-3,10 (m, 1H); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 170,6, 162,7, 161,4, 151,8, 147,7, 140,4, 126,5, 119,0, 117,4, 111,5, 109,8, 56,2, 56,1, 53,8, 52,1, 37,4, 33,6; MS (EI), m/z (intensidad relativa) 332 (M^{+}. + 2, 5), 331 (M^{+}. + 1, 9), 330 (M^{+}., 41), 329 (28), 328 (100), 313 (18), 272 (8), 271 (24), 270 (14), 269 (27), 262 (7), 257 (12), 255 (5), 242 (6), 225 (7), 197 (4), 192 (16), 191 (16), 183 (6), 164 (14), 136 (11), 135 (9), 106 (9), 80 (17), 53 (5); IR (CHCl_{3}) 3329 (br), 3112, 2952, 2842, 1737, 1626, 1602, 1512, 1453, 1436, 1381, 1356, 1246, 1213, 1173, 1096, 1069, 1008, 875, 840, 786, 666, 620, 574, 537 cm^{-1}; masa exacta calculada para C_{17}H_{18}N_{2}O, m/e 330,1216, observado m/e 330,1237.

Ejemplo 1(f) Síntesis de KEC-570 (56, UP-2053) (ver figura 5)

23

1',3'-Bis(4-carboxi-2-metoxifenoxi)propano (43)

Se añadió una solución de diiodopropano (8,79 g, 29,7 mmol) en THF (50 mL) gota a gota durante un periodo de 4 horas a una solución agitada vigorosamente de ácido vinílico (10 g, 59,5 mmol) en THF (100 mL) y NaOH acuoso (225 mL, 0,5 M) a 65ºC en ausencia de luz (frasco envuelto en lámina). Después de calentar a reflujo durante 48 horas en oscuridad, la suspensión se enfrió, se lavó con hexano (3 X 100 mL) y el THF se retiró mediante evaporación in vacuo. El residuo acuoso se acidificó a un pH de 1 con HCl concentrado y el precipitado resultante recogido mediante filtración, secado y recristalizado a partir de ácido acético glacial para conseguir el correspondiente ácido bis-carboxílico (143) como sólido cristalino blanco (9,4 g, 84%). mp 238-240ºC; ^{1}H-NMR (DMSO-d_{6}): \delta 2,23 (t, 2H, J = 6,0 Hz, H13), 3,80 (s, 6H, CH_{3}O), 4,20 (t, 4H, J = 6,0 Hz, H12), 7,09 (d, 2H, J = 8,4 Hz, H10), 7,45 (d, 2H, J = 1,8 Hz, H6) 7,54 (dd, 2H, J = 8,4 Hz, 1,8 Hz, H9), 12,76 (bs, 2H, CO_{2}H); ^{13}C-NMR (DMSO-d_{6}) \delta 28,4 (C13), 55,4 (CH_{3}O), 64,8 (C12), 111,9 (C9), 112,0 (C6), 122,9 (C10), 123,0 (Q), 148,3 (Q), 151,6 (Q), 167,0 (C=O). IR (KBr):
\nu = 3600-2000, 1680 (C=O), 1600 (C=C), 1515, 1465, 1430, 1345, 1310, 1270, 1225 (C-O-C), 1180, 1140, 1115, 1030, 990, 970, 950, 925, 875, 850, 825, 765, 725, 645 cm^{-1}. MS (EI): m/z (intensidad relativa) 376 (M^{+}., 28), 360 (3), 249 (2), 209 (45), 165 (29), 153 (16), 151 (19), 137 (19), 121 (7), 78 (15), 44 (100); HRMS: Calculado para C_{19}H_{20}O_{8} = 376,1158 encontrado 376,1168.

1',3'-Bis(4-carboxi-2-metoxi-5-nitrofenoxi)propano (44)

El diácido 43 (2,0 g, 5,30 mmol) se añadió gota a gota a HNO_{3} concentrado (40 mL) a -10ºC y se agitó a temperatura ambiente durante 12 h. La mezcla de la reacción se vertió sobre hielo (400 mL) y el precipitado resultante se recogió mediante filtración, se lavó con éter (3 x 50 mL) y se secó para conseguir el nitro ácido (121) como sólido amarillo (1,73 g, 70%). m.p. 243-246ºC. ^{1}H-NMR (DMSO-d_{6}): \delta 2,25 (t, 2H, J = 5,9 Hz, H13), 3,90 (s, 6H, CH_{3}O), 4,27 (t, 4H, J = 5,9 Hz, H12), 7,29 (s, 2H, H6), 7,62 (s, 2H, H9), 13,6 (bs, 2H, CO_{2}H). ^{13}C-NMR (DMSO-d_{6}) \delta 28,0 (C13), 56,3 (CH_{3}O), 65,7 (C12), 108,0 (C9), 111,2 (C6), 121,1 (C5), 141,3 (Q), 149,1 (C8), 151,7 (Q), 165,9 (C=O). IR (KBr): \nu = 3620-2280, 1700 (C=O), 1595 (C=C), 1570, 1515 (NO_{2}), 1460, 1415, 1350 (NO_{2}), 1270, 1210, 1180, 1135, 1045, 930, 880, 810, 750, 730, 645 cm^{-1}. MS (EI): m/z (intensidad relativa) 467 (MH^{+-}, 1), 450 (1), 436 (3), 423 (8), 378 (4), 268 (1), 255 (4), 236 (4), 210 (7), 194 (2), 182 (7), 164 (14), 153 (2), 123 (3), 91 (6), 77 (3), 55 (5), 44 (100). HRMS (EI) m/z calculado para C_{19}H_{18}N_{2}O_{12} = 466,0860 encontrado 466,0871.

(2S,4R)-N-(Benzoxicarbonil)-2-carboxi-4-hidroxipirrolidina (45)

Se añadió una solución de bencil cloroformato (12,5 mL, 87,7 mL) en tolueno (40 mL) a una solución de trans-4-hidroxi-L-prolina 11 (10 g, 76,3 mmol) y NaHCO_{3} (16 g, 190 mmol) en H_{2}O (165 mL) durante un período de 15 minutos. Después de agitar a temperatura ambiente durante 12 horas se permitió que las dos fases se separaran. La fase acuosa se lavó con dietil éter (4 x 50 mL), se enfrió en un baño de hielo, y luego se acidificó a pH 2 con HCl concentrado. El producto resultante se extrajo con etil acetato (5 x 50 mL) y los extractos orgánicos combinados se secaron (MgSO_{4}) y el exceso de solvente se evaporó in vacuo para obtener un aceite viscoso incoloro (20,30 g, 100%). [\alpha]^{27}_{D} = -565º (c 0,1, MeOH), ^{1}H NMR (CDCl_{3}): \delta 2,07-2,31 (m, 3H, H1), 3,52-3,59 (m, 2H, H3), 4,43-4,53 (m, 2H, H2, H11a), 5,8 y 5,11 (s, 2H, rotámeros menores y mayores de H6, 1:2), 6,0 (bs, 2H, OH), 7,26-7,29 y 7,32-7,34 (m, 5H, rotámeros menores y mayores H arom, 1:2), IR (película fina): \nu =3414 (OH), 2940 (OH), 1682 (C=O), 1495, 1429, 1359 (CO_{2}^{-}), 1314, 1269, 1205, 1180, 1174, 1127, 1082, 1051, 993, 914, 866, 826, 769, 741, 697 cm^{-1}, MS (EI): m/e (intensidad relativa): 266 (M^{+}., 1), 265 (6), 220 (5), 176 (15), 130 (34), 108 (2). 91 (100), 86 (4), 68 (11). HRMS calculado para C_{13}H_{11}NO_{5}= 265,0950 hallado 265,0976.

(2S,4R)-N-(Bezoxicarbonil)-2-metioxicarbonil-4-hidroxiprolina (46)

Una solución de (2S,4R)-N-(Benzoxicarbonil)-2-carboxi-4-hidroxipirrolidina (45) (20,30 g, 76,3 mmol) en metanol seco (300 mL) se calentó a reflujo durante 18 horas en presencia de una cantidad catalítica de H_{2}SO_{4} concentrado (2,20 mL, 7,63 mmol). La mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y se neutralizó con Et_{3}N (3,0 mL, 76,3 mmol). La mezcla de reacción de concentró in vacuo y el residuo se redisolvió en etil acetato (200 mL), se lavó con salmuera (1 x 50 mL), secó (MgSO_{4}) y se retiró el exceso de solvente bajo presión reducida para obtener una goma incolora (21,17 g, 99%). [\alpha]^{20}_{D}= -59,4º (c 0,014, CHCl_{3}). ^{1}H NMR (CDCl_{3}): \delta 2,04-2,08 y 2,24-2,35(m, 1H, Rótameros de H1, 1:1), 2,64 (bs, 1H, OH), 3,54 y 3,74 (s, 3H, Rótameros de OMe, 1:1), 3,66-3,69 (m, 2H, H3), 4,47-4,50 (m, 2H, H2, H11a), 5,07-5,13 (m, 2H, H6), 7,26-7,35 (m, 5H, H arom), ^{13}C NMR (CDCl_{3}): relación de rotámeros 1:1, \delta 37,8 y 38,5 Rótameros de (C1), 51,8 y 52,0 Rótameros de (OMe), 54,1 y 54,7 Rótameros de (C3), 57,4 y 57,7 Rótameros de (C2), 66,9 y 67,0 Rótameros de (C6), 68,6 y 69,3 Rótameros de (C11a), 127,0, 127,3, 127,4, 127,7, 127,8, 128,0 y 128,1 Rótameros de (C arom). IR (película fina): \nu =3435 (OH), 3033, 2953 (OH), 1750 (éster), 1680 (C-O), 1586, 1542, 1498, 1422, 1357 (CO_{2}H), 1170, 1124, 1084, 1052 (C-O), 1004, 963, 916, 823, 770, 750, 699, 673 cm^{-1}. MS (FAB) m/z (intensidad relativa): 280 (M^{+}., 24), 236 (20), 234 (4), 216 (8), 214 (4), 213 (2), 206 (2), 204 (7), 203 (4), 202 (10), 201 (2), 181 (5), 144 (16), 102 (23), 91 (100). HRMS calculada. para C_{14}H_{11}NO_{5}= 279,1107 hallado 279,1192.

(2S,4R)-N-(Benzoxicarbonil)-2-hidroximetil-4-hidroxiprolina (47)

Se añadió borohidruro de litio (1,57 g, 73 mmol) en porciones a una solución de (2S,4R)-N-(benzoxicarbonil)-2-metioxicaronil-4-hidroxiprolina (46) (20,17 g, 73 mmol) en THF (350 mL) a 0ºC. La mezcla de reacción se dejó entibiar hasta temperatura ambiente y se agitó toda la noche. La suspensión resultante se enfrió a 0ºC y se apagó con agua (2-3 mL) hasta que la efervescencia cesó, momento en que se añadió HCl 2 M (15 mL) para disolver el precipitado. El producto se extrajo con etil acetato (3 x 150 mL) y las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (1 x 100 mL) y luego se secaron (MgSO_{4}). La concentración in vacuo produjo una goma blanca (18,25 g, 100%). [\alpha]^{22,3}_{D}= -404º (C = 0.043, CHCl_{3}). ^{1}H NMR (CDCl_{3}): \delta 1,24-1,26 (m, 1H, H1), 1,73-2,08 (m, 1H, H1), 3,40-4,30 (m, 6H, H2, H3, H11, H11a), 5,06 (bs, 1H, OH), 5,09 (s, 2H, H6) 7,25-7,31 (m, 5H, H arom), ^{13}C NMR (CDCl_{3}): \delta 36,7 (C1), 55,2 (C3), 58,7 (C2), 65,0 (C11), 67,0 (C6), 68,7 (C11a), 127,0, 127,5 (C arom), 127,8 (C arom), 128,2 (C arom), IR (película fina): \nu=3390 (OH), 3065, 3033, 2953 (OH), 1681 (C=O carbamato), 1586, 1538, 1498, 1454, 1192, 1122, 978, 914, 862, 770, 698, 673 cm^{-1}. MS (FAB) m/z (intensidad relativa): 252 (M^{+}., 58), 208 (33), 176 (5), 144 (6), 118 (8), 116 (7), 92 (13), 91 (100). HRMS calculada para C_{13}H_{17}NO_{4}= 251,1158 hallado 251,1230.

(2S,4R)-N-(Benzoxicarbonil)-2-t-butildimetilsililoximetil-4-hidroxipirrolidina (48)

Se añadieron t-butildimetilsilil cloruro (5,78 g, 38,3 mmol) y 1,8-diazabiciclo [5,4,0] undec-7-eno (1,44 mL, 9,6 mmol) a una solución de alcohol (47) (12,51 g, 49, 8 mmol) y trietilamina (7,0 mL, 49,8 mmol) en DCM seco (200 mL) que se agitó durante 15 minutos a temperatura ambiente. La mezcla resultante se dejó agitar a temperatura ambiente durante 18 horas y luego se diluyó con etil acetato (300 mL). La fase orgánica se lavó con cloruro de amonio acuoso saturado (2 x 100 mL) y salmuera (1 x 100 mL), secó (MgSO_{4}) y se extrajo el solvente bajo presión reducida para producir un aceite viscoso incoloro (9,84 g, 70%). [\alpha]^{22,3}_{D}= -263º (c 0,70, CHCl_{3}), ^{1}H NMR (CDCl_{3}): \delta -0,05 y -0,06 (s, 6H, rotámeros de H1', H2', 1:1), 0,83 y 0,85 (s, 9H, rotámeros de H3', H5', H6', 1:1), 1,95-2,22 (m, 2H, H1,), 2,78 (bs, 1H, OH), 3,44-3,68 (m, 3H, H3, H11), 3,99-4,10 (m, 1H, H2), 4,43-4,46 (m, 1H, H11a), 5,11-5,16 (m, 2H, H6) 7,34-7,35 (m, 5H, H arom) ^{13}C NMR (CDCl_{3}): relación de rotámeros de 1:1, 5-5,50 (C3', C5', C6'), 18,15 (C4'), 25,83 (C1', C2'), 36,55 y 37,27 rotámeros de (C1), 55,2 y 55,7 rotámeros de (C3), 57,3 y 57,8 rotámeros de (C2), 62,8 y 63,9 rotámeros de (C11), 66,6 y 67,0 rotámeros de (C6), 69,7 y 70,3 rotámeros de (C11a), 127,8 (C arom), 127,9 (C arom), 128,0 (C arom), 128,4 (C arom), 128,5 (C arom), 136,5 y 136,8 rotámeros de (C7), 154,9 y 155,2 rotámeros de (C5). IR (película fina): \nu= 3415 (OH), 3066, 3034, 2953 (OH), 2930, 2884, 2857, 1703 (C=O carbamato), 1587, 1498, 1424, 1360 (C-CH3), 1288 (CH_{3}Si), 1255 (t-Bu), 1220, 1195 (t-Bu), 1118 (Si-O), 1057, 1003, 917, 836, 774, 751, 698, 670 cm^{-1}. MS (EI/CI) m/e (intensidad relativa): 366 (M^{+}., 100), 308 (14), 258 (2), 91 (2).

(2S,4R)-2-t-butildimetilsililoximetil-4-hidroxipirrolidina (2)

Un gel de 10% Pd/C (190 mg) en etil acetato (20 mL) se añadió a una solución de TBDMS éter (48) (1,90 g, 5,19 mmol) en etanol (100 mL). La mezcla de reacción se hidrogenó (aparato Parr) durante 16 horas. Se extrajo el catalizador mediante filtración por vacío a través de Celita y el exceso de solvente se evaporó bajo presión reducida para dar un aceite amarillo en rendimiento cuantitativo (1,20 g, 100%). [\alpha]^{22}_{D} = +35,6º (c 0,042, CHCl_{3}), ^{1}H NMR (CDCl_{3}): \delta -(0,07-0,08) (m, 6H, H1', H2'), 0,82 (s, 9H, H3', H4', H5'), 1,68-1,73 (m, 2H, H1,), 2,99-3,11 (m, 2H, H11), 3,47-3,50 (m, 3H, H11a, H3), 4,09 (bs, 1H, NH o OH), 4,32 (bs, 1H, NH o OH), ^{13}C NMR (CDCl_{3}): \delta -5,4 (C3', C5', C6'), 18,1 (C4'), 25,8 (C1', C2'), 37,4 (C1), 54,6 (C11), 58,1 (C2), 64,6 (C3), 72,2 (C11a). IR (película fina): \nu= 3330 (OH), 2928, 2857, 1557, 1421, 1331 (C-CH3), 1249 (CH3-Si), 1204 (t-Bu), 1191 (t-Bu), 1100 (Si-O), 1073, 993, 713 cm^{-1}. MS (CI) m/e (intensidad relativa): 232 (M^{+}., 100), 230 (13), 174 (5), 133 (6), 86 (6).

1,1'-[[(Propano-1,3-diil)dioxi]bis[2-nitro-5-metoxi-1,4-fenileno)carbonil]]-bis[(2S,4R)-2-t-butildimetilsililoximetil-4-hidroxipirrolidina (49)

Una cantidad catalítica de DMF (2 gotas) se añadió a una suspensión agitada de bis-nitroácido (44) (2,00 g, 4,28 mmol) y oxalil cloruro (0,94 mL, 10,70 mmol) en THF seco (20 mL), y la mezcla de reacción se dejó agitar durante 4 horas. Después de la evaporación del exceso de THF in vacuo, el residuo amarillo resultante se disolvió en THF seco (20 mL) y se añadió en forma de gotas durante un período de 25 minutos a una suspensión agitada vigorosamente de amina (2) (2,47 g, 10,70 mmol), Et_{3}N (2,50 mL, 17,9 mmol) y se enfrió en hielo/agua (0,6 mL) en un baño de hielo. La mezcla se dejó entibiar a temperatura ambiente durante otra 1,5 hora. Después de extraer el THF mediante evaporación in vacuo, el residuo se diluyó con agua (100 mL) y se extrajo con etil acetato (3 x 100 mL). La fase orgánica combinada se lavó con agua (3 x 25 mL) y salmuera (3 x 25 mL), secó (MgSO_{4}), y el solvente se extrajo in vacuo para producir un aceite amarillo que se purificó mediante cromatografía por desorción súbita (3% MeOH/CHCl_{3}) para producir la bis-amida (49) como un sólido amarillo (2,05 g, 54%), [\alpha]^{23,8}_{D} = -993º (c 0,033, CHCl_{3}), ^{1}H NMR (CDCl_{3}): \delta -0,05 (s, 12H, H1', H2'), 0,80 (s, 18H, H3', H5', H6'), 1,96-1,99 (m, 2H, H1), 2,14-2,16(m, 2H, H1), 2,19-2,24 (m, 2H, H13), 2,85-2,89 (m, 2H, H2) 3,16-3,19 (m, 4H, H11), 3,63-3,66 (m, 4H, H3), 3,81 (s, 6H, OMe), 3,99-4,10 (m, 2H, H3), 4,23 (t, 4H, J = 5,3 Hz, H12), 4,38 (bs, 2H, OH); 5,20-5,25 (m, 2H, H11a), 6,65 (s, 2H, H6), 7,55 (s, 2H, H9), ^{13}C-NMR (CDCl_{3}): 5-5,35 (C1', C2'), 18,2 (C4'), 25,8 (C3', C5', C6'), 28,9 (C13), 36,1 (C1), 54,9 (CH3O), 56,6 (C4), 57,3 (C12), 65,0 (C3), 70,0 (C2), 108,0 (C6), 109,4 (C9), 128,2 (Q), 137,2 (Q), 148,1 (Q), 148,5 (Q), 154,5 (Q), 166,5 (Q). IR (película fina): \nu= 3392 (OH), 2950, 2856, 1623 (C=O), 1577 (C arom), 1524 (NO_{2}), 1459, 1432, 1381, 1338 (C-CH_{3}), 1278 (CH_{3}-Si), 1219 (t-Bu), 1184 (t-Bu), 1075 1053, 1004, 938, 914, 837, 778, 724, 668, 649, cm^{-1}. MS (FAB) m/z (intensidad relativa): 894 (M^{+}., 8), 893 (19), 878 (6), 835 (2), 779 (9), 761 (6), 517 (3), 459 (5), 258 (7), 100 (3), 86 (4), 75 (29), 73 (100), 59 (17), 58 (6).

1,1'-[[(Propano-1,3-diil)dioxi]bis[2-amino-5-metoxi-1,4-fenileno)carbonil]]-bis[(2S,4R)-2-t-butildimetilsililoximetil-4-hidroxipirrolidina (50)

Un gel de 10% Pd/C (155 mg) en etil acetato (20 mL) se añadió a una solución de la bis-amida (49) (1,55 g, 1,73 mmol) en etanol (100 mL). La mezcla de reacción se hidrogenó (aparato Parr) durante 16 horas. La mezcla de reacción se filtró a través de Celita y el solvente se extrajo bajo presión reducida para dar un aceite amarillo (50) en rendimiento cuantitativo (1,44 g, 100%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}): \delta 0,00 (s, 12H, H1', H2'), 0,88 (s, 18H, H3', H5', H6'), 2,00-2,25 (m, 6H, H1, H13), 3,50-3,72 (m, 12H, H2, H3, H11, H11a), 3,74 (s, 6H, OMe), 4,16-4,20 (m, 4H, H3), 4,30-4,35 (m, 4H, H12), 4,49 (bs, 2H, OH); 6,23 (S, 2H, H9), 6,64 (s, 2H, H6) ^{13}C-NMR (CDCl_{3}): 3-5,5 (C1', C2'), 18,1 (C4'), 25,8 (C3', C5', C6'), 29,6 (C13), 35,2 (C1), 56,7 (CH_{3}O), 62,2 (C4), 64,1 (C3), 70,0 (C2), 102,2 (C9), 112,6 (C6), 140,4 (Q), 141,1 (Q), 150,6 (Q), 170,1 (Q); IR (neto): v =3359 (OH), 2929, 2856, 1621 (C=O), 1591 (C arom), 1469, 1433, 1406, 1358, 1346 (C-CH3), 1261 (CH3-Si), 1232 (t-Bu), 1175 (t-Bu), 1117, 1056, 1006, 866, 835, 776 cm^{-1}, MS (FAB) m/z (intensidad relativa): 834 (M^{+}., 13), 833 (18), 773 (9), 602 (13), 399 (7), 371 (34), 232 (9), 206 (22), 192 (14), 176 (13), 166 (44), 150 (8), 100 (10), 73 (100).

1,1'-[[(Propano-1,3-diil)dioxi]bis [2-amino-N-aliloxicarbonil-5-metoxi-1,4-fenil-eno)-carbonil]]-bis[(2S,4R)-2-t-butildimetilsililoximetil-4-hidroxi-pirrolidina (51)

Una solución de la bis-amida (50) (2,76 g, 3,31 mmol) y piridina (1,10 mL, 13,60 mmol) en DCM seco (100 mL) se enfrió a 0ºC. Se añadió alil cloroformato (0,80 mL, 7,53 mmol) en DCM (50 mL) en forma de gota y la mezcla resultante se dejó entibiar a temperatura ambiente y se agitó durante 16 horas. La mezcla de reacción se diluyó con DCM (200 mL) y se lavó con CuSo_{4} 1 M (3 x 50 mL), agua (1 x 50 mL) y salmuera (1 x 50 mL) antes de secarlo (MgSO_{4}). La evaporación del solvente bajo presión reducida seguida por una cromatografía de columna por desorción súbita (2,5% MeOH/DCM) produjo (51) como un sólido amarillo (3,24 g, 97%). [\alpha]^{20,1}_{D}= -571º (c 0,007, CHCl_{3}), ^{1}H NMR (CDCl_{3}): \delta 0,00 (s, 12H, H1', H2'), 0,89 (s, 18H, H3', H5', H6'), 2,03-2,36 (m, 6H, H1, H13), 3,51-3,58 (m, 6H, H2, H3), 3,77 (s, 6H, OMe), 4,20-4,26 (m, 8H, H11, H12), 4,28-4,30 (m, 2H, H11a), 4,56-4,60 (m, 6H, H8', OH), 5,25 (dd, J1,2=1,5 Hz, J1,3=15,0 Hz, 4H, H10'), 5,90-5,95 (m, 2H, H9'), 6,73 (s, 2H, H6), 7,63 (s, 2H, H9), 8,80 (s, 2H, NH), ^{13}C NMR (CDCl_{3}): 5-5,42 (C1', C2'), 25,8 (C3', C5', C6'), 29,2 (C13), 35,4 (C1), 56,3 (CH_{3}O), 57,1 (C11a), 59,8 (C11), 62,2 (C3), 65,1 (C12), 65,7 (C8'), 70,5 (C2), 106,3 (C9), 111,5 (C6), 116,5 (Q), 118,1 (C10'), 131,7 (Q), 132,5 (C9'), 144,3 (Q), 150,3 (Q), 153,8 (Q), 169,5 (Q), IR (neto): \nu=3351 (OH), 2931, 2857, 1762 (Aloc C=O), 1722, 1603 (C=O), 1521 (C arom), 1463, 1404, 1264 (CH,-Si), 1222 (t-Bu), 1106 (t-Bu), 1053, 1015, 936, 872, 837, 775, 629, cm^{-1}.

1,1'-[[(Propano-1,3-diil)dioxi]bis[2-amino-N-aliloxicarbonil-5-metoxi-1,4-fenileno)-carbonil]]-bis[(2S)-2-t-butildimetilsililoximetil-4-oxo-pirrolidine (52)

Una solución de dimetil sulfoxido (2,10 mL, 28,5 mmol) en DCM seco (20 mL) se añadió en forma de gotas durante un período de 15 minutos a una solución agitada, enfriada (-45ºC) de oxalil cloruro (1,27 mL, 14,60 mmol) en DCM (30 mL). Después de 35 minutos, una solución de alcohol (51) (2,54 g, 2,53 mmol) en DCM (20 mL) se añadió en forma de gotas durante un período de 15 minutos a la mezcla de reacción a -45ºC. Después de 45 minutos se añadió una solución de trietilamina (5,75 mL, 40,3 mmol) en DCM (20 mL) durante un período de 15 minutos y la mezcla de reacción se agitó a -45ºC durante 30 minutos antes de entibiarla a temperatura ambiente durante 45 minutos. La mezcla se lavó entonces con CuSO_{4} 1 M (3 x 50 mL) y salmuera (1 x 50 mL) antes de secarla (MgSO_{4}) y se concentró in vacuo para dar (52) como un sólido líquido (2,46 g, 97%), ^{1}H NMR (CDCl_{3}): \delta 0,00 (s, 12H, H1', H2'), 0,86 (s, 18H, H3', H5', H6'), 2,50-2,63 (m, 6H, H1, H13), 3,63-3,70 (m, 4H, H3), 3,80 (s, 6H, OMe), 3,93-3,97 (m, 6H, H11, H11a), 4,29-4,32 (m, 4H, H12), 4,62 (d, 4H, J = 5,7 Hz, H8'), 5,27-5,32 (m, 4H, H10'), 5,98-6,03 (m, 2H, H9'), 6,74 (s, 2H, H6), 7,74 (s, 2H, H9), 8,80 (s, 2H, NH), ^{13}C NMR (CDCl_{3}): \delta -5,76 (C1', C2'), 18,0 (C4'), 25,7 (C3', C5', C6'), 28,8 (C13), 39,6 (C1), 55,0 (C3), 56,4 (CH_{3}O), 65,3 (C12), 65,8 (C8'), 105,9 (C9), 110,7 (C6), 118,2 (C10'), 132,4 (C9'), 150,7 (Q), 153,5 (Q), 169,1 (Q), 210,0 (C2), IR (neto): \nu= 3308 (OH), 2931, 2856, 1765 (Alloc C=O), 1730, 1624 (C=O), 1602 (C=O), 1522 (C arom), 1468, 1407, 1332, 1259 (CH_{3}-Si), 1204 (t-Bu), 1105 (t-Bu), 1053, 1010, 937, 870, 837, 808, 778, 674, 657 cm^{-1}.

1,1'-[[(Propano-1,3-diil)dioxi]bis[2-amino-N-aliloxicarbonil-5-metoxi-1,4-fenilene)-carbonil]]-bis[(2S)-2-t-butildimetilsililoximetil-4-metoxicarbonil metil-2,3-dihiidropirrol (53)

Se añadió una solución de dietilmetilfosfonoacetato (0,80 mL, 4,21 mmol) en THF (50 mL) a una suspensión de NaH (343 mg, 4,21 mmol, dispersión al 60% en aceite mineral, lavada con éter de petróleo) en THF seco (50 mL) a 0ºC bajo una atmósfera de nitrógeno. Después de agitarse a temperatura ambiente durante 1 h, se añadió una solución del dímer quetona (52) (2,04 g, 2,00 mmol) en THF (50 mL) gota a gota a 0ºC. La mezcla de la reacción se dejó calentar a temperatura ambiente durante 18 h. Se retiró el THF en exceso bajo presión reducida y el residuo se enfrió en un baño de hielo antes de añadir NaHCO_{3} (50 mL) seguido por EtOAc (50 mL). Las capas se separaron y la capa acuosa se lavó con EtOAc (2 x 50 mL). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (1 x 50 mL), se secaron (MgSO_{4}) y se retiró el solvente in vacuo para dar un aceite amarillo. La cromatografía por desorción súbita de columna (2,5% MeOH/CH_{2}Cl_{2}) consiguió el producto (53) como un sólido amarillo (2,00 g, 88%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}): \delta -0,01 (s, 12H, H1', H2'), 0,83 (s, 18H, H3', H5', H6'), 2,35-2,40 (m, 2H, H13), 2,65-2,86 (m, 4H, H1), 3,03-3,09 (m, 4H, H14), 3,62 (s, 3H, OMe), 3,75 (s, 6H, H16), 3,95-4,10 (m, 4H, H11), 4,24-4,35 (m, 4H, H12), 4,58-4,70 (m, 6H, H8', H11a), 5,25-5,33 (m, 4H, H10'), 5,93-5,97 (m, 2H, H9'), 6,33-6,40 (m, 2H, H3), 6,74 (s, 2H, H6), 7,80 (s, 2H, H9), 8,75 (s, 2H, NH). ^{13}C NMR (CDCl_{3}): 5-5,52 (C1', C2'), 18,0 (C4'), 25,7 (C3', C5', C6'), 28,7 (C13), 33,8 (C14), 34,6 (C1), 51,9 (CH_{3}O), 56,5 (C16), 62,2 (C11), 65,2 (C12), 65,6 (C8'), 105,4 (C9), 111,9 (C6), 117,9 (C10'), 128,2 (C3), 132,5 (C9'), 143,9 (Q), 150,7 (Q), 153,4 (Q), 165,7 (Q), 170,6 (Q). IR (neto): \nu = 3402 (OH), 2954, 2857, 1735 (éster), 1726 (Alloc C=O), 1642, 1600, 1526 (C arom), 1469, 1435, 1354, 1256 (CH_{3}-Si), 1221, 1201 (t-Bu), 1112 (t-Bu), 1048, 1010, 934, 866, 836, 776 cm^{-1}. MS (FAB) m/z (intensidad relativa): Sin ión pariente, 496 (10), 482 (9), 455 (11), 441 (13), 232 (12), 206 (19), 204 (10), 200 (14), 192 (34), 188 (23), 172 (33), 165 (18), 152 (17), 150 (16), 149 (100), 147 (17), 140 (20), 131 (18), 103 (22), 91 (47), 89 (27), 87 (36), 80 (33), 75 (42), 73 (77), 61 (39), 57 (53).

1,11-[[(Propano-1,3-diil)dioxi]bis[2-amino-N-aliloxicarbonil-5-metoxi-1,4-fenileno)-carbonil]]-bis[(2S)-2-hidroximetil-4-metoxicarbonilmetil-2,3-dihidropirrol (54)

Se añadió un complejo de ácido hidrofluórico piridina (3,5 mL) a una solución de dímer éster (53) (740 mg, 0,67 mmol) en THF (10 mL) bajo una atmósfera de nitrógeno a 0ºC. Se dejó agitar la reacción durante 30 minutos a 0ºC y a continuación calentar a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla de la reacción se neutralizó con NaHCO_{3} hasta que cesó la evolución del CO_{2}. El producto se extrajo con DCM (3 x 30 mL), se lavó con salmuera (1 x 20 mL) y a continuación se seco (MgSO_{4}). La retirada del solvente bajo presión reducida dio el producto como goma amarilla (530 mg, 90%). ^{2}H NMR (CDCl_{3}): \delta 2,39 (m, 2H, H13), 2,95-2,99 (m, 4H, H1), 3,09-3,12 (m, 4H, H14), 3,68 (s, 3H, OMe), 3,74-3,78 (m, 4H, H11), 3,81 (s, 6H, H16), 4,28-4,34 (m, 4H, H12), 4,62 (d, J = 5,5 Hz, 4H, H8'), 4,73-4,75 (m, 2H, H11a), 5,31-5,38 (m, 4H, H10'), 5,96-6,02 (m, 2H, H9'), 6,39-6,50 (m, 2H, H3), 6,80 (s, 2H, H6), 7,72 (s, 2H, H9), 8,57 (s, 2H, NH). ^{13}C NMR (CDCl_{3}): \delta 28,8 (C13), 33,5 (C14), 35,5 (C1), 52,1 (CH_{3}O), 56,6 (C16), 65,3 (C12), 66,0 (C8'), 105,6 (C9), 111,8 (C6), 118,1 (C10'), 128,1 (C3), 132,5 (C9'), 144,4 (Q), 151,0 (Q),153,6 (Q), 167,3 (Q), 170,7 (Q). IR (neto): \nu = 3416 (OH), 2953, 1731 (éster), 1726 (Aloc C=O), 1606, 1525 (C arom), 1467, 1434, 1358, 1224, 1048, 938, 870, 768 cm^{-1}. MS (FAB) m/z (intensidad relativa): 881 (M^{+}., 0,2), 496 (12), 482 (15), 456 (14), 442 (13), 232 (23), 206 (35), 192 (63), 190 (21), 188 (17), 180 (19), 178 (25), 152 (39), 150 (23), 149 (100), 140 (50), 136 (21), 112 (23), 108 (23), 94 (29), 91 (32), 87 (24), 80 (70), 73 (28), 57 (30).

1,1-[[(Propano-1,3-diil)dioxi]bis[(11aS)-7-metoxi-10-aliloxicarbonil-(2S)-2-metoxicarbonilmetil-2,3-dihidropirrol-1,3,11a-trihidro-5H-pirrolo[2,1-c][1,4]bezodiacepin-5-ona (55)

Se añadió una solución de dimetil sulfóxido (0,27 mL, 3,82 mmol) en DCM seco (20 mL) en forma de gotas durante un período de 15 minutos a una solución agitada, enfriada (-45ºC) de oxalil cloruro (0,17 mL, 1,92 mmol) en DCM (10 mL). Después de 35 minutos, una solución de substrato (54) (600 mg, 0,68 mmol) en DCM (10 mL) se añadió en forma de gotas durante un período de 15 minutos a la mezcla de reacción a -45ºC. Después de 45 minutos una solución de trietilamina (0,78 mL, 5,42 mmol) en DCM (10 mL) se añadió durante un período de 15 minutos y la mezcla de reacción se agitó a -45ºC durante 30 minutos antes de dejarla entibiarse a temperatura ambiente durante 45 minutos. La mezcla se diluyó entonces con agua (10 mL) y se separaron las capas. La capa orgánica se lavó con HCl 1M (3 x 50 mL), y salmuera (1 x 50 mL) antes de secarse (MgSO_{4}) y concentrarse in vacuo. La cromatografía por desorción súbita de columna (1,5% MeOH/CH_{2}Cl_{2}) produjo un cristal amarillo (457 mg, 78%). [\alpha]^{20,3}_{D} = +69º (c 0,484, CHCl_{3}), ^{1}H NMR (CDCl_{3}): \delta 2,35-2,63 (m, 2H, H13), 2,75-3,10 (m, 4H, H1), 3,14-3,19 (m, 4H, H14), 3,71 (s, 3H, OMe), 3,88 (s, 6H, H16), 4,21-4,40 (m, 4H, H12), 4,45-4,50 (m, 2H, H11a), 4,60-4,62 (m, 4H, H8'), 5,26-5,30 (m, 4H, H10'), 5,77 (d, J = 8,61 Hz, 4H, H11) 5,90-5,96 (m, 2H, H9'), 6,75-6,80 (m, 2H, H3), 6,89 (s, 2H, H9), 7,22 (s, 2H, H6), ^{13}C NMR (CDCl_{3}): \delta 28,8 (C13), 33,5 (C14), 35,5 (C1), 52,1 (CH_{3}O) 56,6 (C16), 65,3 (C12), 66,0 (C8'), 105,6 (C9), 111,8 (C6), 118,1 (C10'), 128,1 (C3), 132,5 (C9'), 144,4 (Q), 151,0 (Q),153,6 (Q), 167,3 (Q), 170,7 (Q). IR (neto): \nu=3583, 3412 (OH), 1730 (éster), 1713 (Alloc C=O), 1644, 1421, 1362, 1273, 1223, 1092, 902, 757, 737, 702, 667 cm^{-1}. MS (FAB) m/z (intensidad relativa): 907 (M^{+}., 1), 456 (6), 245 (7), 232 (16), 218 (13), 206 (23), 205 (10), 204 (14), 192 (42), 190 (17), 178 (22), 177 (10), 176 (16), 166 (17), 165 (10), 164 (16), 152 (23), 151 (12), 150 (18), 149 (100), 140 (16), 93 (18), 91 (22), 89 (13), 87 (26), 80 (58), 75 (19), 73 (28),
57 (25).

1,1'-[[(Propano-1,3-diil)dioxibis[(11aS)-7-metoxi-(2S)-2-metoxicarbonilmetil-2,3-dihidropirrole-1,3,11a-trihidro-5H-pirrolo[2,1-c][1,4]bezodiacepin-5-ona (56)

Una cantidad catalítica de tetraquistrifenilfosfinapaladio(0) (16 mg, 0,014 mmol) se añadió a una solución de carbinolamina (55) (219 mg, 0,25 mmol), trifenilfosfina (7 mg, 0,025 mmol) y pirrolidina (0,05 mL, 0,80 mmol) en DCM seco (30 mL) a 0ºC. La mezcla de reacción se agitó durante 2 horas antes de dejarla entibiarse a temperatura ambiente durante 1 hora. Se extrajo el solvente in vacuo y el residuo se sometió a cromatografía de columna por desoción súbita (2% MeOH/CH_{2}Cl_{21} R_{f}= 0,25) para obtener un cristal amarillo (109 mg, 66%). [\alpha]^{19,5}_{D}= +500º (c 0,043, CHCl_{3}), ^{1}H NMR (CDCl_{3}): \delta 2,17-2,42 (m, 2H, H13), 3,15-3,32 (m, 8H, H1, H14), 3,73 (s, 3H, OMe), 3,91 (s, 6H, H16), 4,26-4,30 (m, 6H, H12, H11a), 6,84 (s, 2H, H9), 6,92-7,06 (m, 2H, H3), 7,47 (s, 2H, H6), 7,83 (d, J = 4,0 Hz, 4H, H11), 130 NMR (CDCl_{3}): \delta 28,7 (C13), 33,6 (C14), 37,4 (C1), 52,2 (CH_{3}O), 53,8 (C11), 56,2 (C16), 65,4 (C12), 110,9 (C9), 111,8 (C6), 126,5 (C3), 140,2 (Q), 148,0 (Q), 151,0 (Q), 161,4 (Q), 162,6 (C11a), 170,7 (Q). IR (neto): \nu= 3583, 3394, 2997, 2950, 1736 (éster), 1717 (Alloc C=O), 1628, 1596, 1511, 1483, 1451, 1431, 1382, 1273, 1245, 1197, 1152, 1068, 995, 963, 914, 842, 753 cm^{-1}. FABMS m/z (intensidad relativa): 673 (M^{+}., 2), 279 (6), 277 (4), 201 (7), 185 (55), 181 (7), 110 (5), 93 (100), 91 (24), 75 (28), 73 (20), 61 (12), 57 (33).

Ejemplo 1(g) Síntesis de (11aS)-1,11a-dihidro-7,8-dimetoxi-2-etenil-5H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiacepin-5-ona (Ver Figuras 6a/b)

24

DRH360 N-(4,5-dimetoxi-2-nitrobenzoil)hidroxiprolina Metil Éster (169)

Se añadió oxalil cloruro (15,38 g, 121,11 mmol) en una porción a una suspensión agitada de 2-nitro-4,5-dimetoxibenzoico (34) (25,01 g, 110,10 mmol) en DCM anhidro (100 mL) a temperatura ambiente. Se añadió una cantidad catalítica de DMF (2 gotas) (¡CUIDADO! - incremento en el desarrollo de gas) y se permitió que la mezcla de reacción se agite durante 16 horas bajo una atmósfera inerte. La solución de cloruro ácido se añadió en forma de gotas a una solución agitada vigorosamente del pirrolo anillo C (168) (34,90 g, 110,10 mmol, JOC 5, 13, 1994, 3621) y TEA (45,95 mL, 33,36 g, 330,29 mmol) en DCM anhidro (100 mL) a -20ºC. La mezcla de reacción se agitó durante 16 horas a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se lavó con NaHCO_{3} saturado (2 x 200 mL), NH_{4}Cl saturado (2 x 200 mL), agua (2 x 200 mL), salmuera (2 x 200 mL) y se secó sobre MgSO_{4} anhidro. La filtración y la evaporación del solvente in vacuo produjo el producto crudo (169) que se purificó mediante cromatografía de columna utilizando EtOAc como eluyente. Las fracciones puras se combinaron y la evaporación del exceso de eluente in vacuo proporcionó el producto como una espuma (33,26 g, 93,9 mmol, 85%). ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) d 7,69 (s, 1H), 6,87 (s, 1H), 5,31 (s, 2H), 4,97-4,82 (m, 1H), 4,44 (br s, 1H), 3,99 (s, 3H), 3,98 (s, 3H), 3,81 (s, 3H), 3,54-3,48 (m, 1H), 3,18 (d, 1H, J = 2,02 Hz), 2,87 (br s, 1H), 2,45-2,16 (m, 2H); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) d 172,6, 172,5, 167,5, 166,8, 154,4, 154,0, 149,3, 137,5, 137,4, 127,0, 126,2, 109,5, 107,2, 107,1, 69,9, 69,1, 59,2, 57,4, 56,9, 56,8, 56,6, 56,4, 54,6, 53,5, 52,5, 52,4, 39,4, 38,0.

(11aS)-6,7-dimetoxi-2(R)-hidroxi-2,3,5,10,11,11a-hexahidro-5,11-dioxo-1H-pirrolo[2,1-c][1,4-]benzodiacepina (170)

Catalizador Pd/C 10% (3,3 g) se añadió a una solución de 169 (33,0 g, 93,1 mmol) en EtOH absoluto (250 mL). La mezcla de reacción se hidrogenó bajo presión utilizando un hidrogenador Parr a 55 psi H_{2} durante 18 horas. Se filtró la mezcla de reacción a través de celita, y la celita se lavó con MeOH caliente, teniendo cuidado de no permitir que la torta de masa filtrante se secara. La extracción del exceso de solvente proporcionó el producto crudo (20,14 g). El producto crudo se agitó en HCl 1 N (200 mL), y CHCl_{3} (200 mL) durante 30 minutos. La capa orgánica se lavó con HCl 1 N (100 mL) y las capas acuosas se combinaron y neutralizaron con NaHCO_{3} acuoso saturado. Dejando el extracto acuoso durante toda la noche, se formó un precipitado fino blanco (170) que se recogió mediante filtración y se secó (7,81 g, 26,72 mmol, 29%). ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) d 10,06 (s, 1H, NH), 7,61 (s, 1H, ArH), 7,36 (s, 1H, ArH), 4,49-4,41 (m, 1H, 2), 4,22-4,17 (m, 1H, hla), 3,88 (s, 6H), 3,82-3,55 (m, 2H, 3), 3,20 (br s, 1H, OH), 2,87-2,77 (m, 1H, 1), 2,10-2,05 (m, 1H, 1); ^{13}C NMR (CDCl_{3}) d 170,2, 165,9, 152,0, 145,7, 130,7, 118,2, 111,9, 104,2, 68,1, 56,0, 55,6, 54,2, 34,6, 18,8.

(11aS)-6,7-dimetoxi-2(R)-[(tert-butildimetilsilil)oxi]-2,3,5,10,11,11a-hexahidro-5,11-dioxo-1H-pirrolo[2,1-c][1,4-]benzodiacepina (171)

Cloruro sólido de TBDMS (8,22 g, 54,44 mmol) se añadió en una porción a una solución de 170 (7,23 g, 24,74 mmol) e imidazol (8,42 g, 123,72 mmol) en DHF anhidro (75 mL) y se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. La mezcla de reacción se volcó en agua (500 mL) y se filtró para obtener el producto crudo (171), que se purificó mediante recristalización a partir de EtO (800 mL) como finas agujas blancas (6,995 g, 17,21 mmol, 70%). ^{1}HNMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 10,06 (s, 1H, NH), 7,37 (s, 1H, ArH), 6,68 (s, 1H, ArH), 4,19-4,14 (m, 1H, 2), 4,06-4,01 (m, 1H, 11a), 3,90 (s, 3H, OMe), 3,88 (s, 3H, OMe), 3,69-3,63 (m, 2H, 3), 2,85-2,80 (m, 1H, 1), 2,05-2,01 (m, 1H, 1); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 170,4, 170,2, 165,9, 152,1, 145,8, 145,6, 131,1, 130,7, 118,1, 111,9, 104,3, 104,1, 69,2, 69,1, 56,0, 55,9, 55,7, 54,3, 54,0, 35,0, 25,8, 25,7, 25,6, 17,9, -3,0, -3,5, -4,9, -5,0.

(11aS)-6,7-dimetoxi-2(R)-[(tert-butildimetilsilil)oxi]-2,3,5,10,11,11a-hexahidro-10-[2-(trimetilsilil)etoximetil]-5,11-dioxo-1H-pirrolo[2,1-c][1,4-]benzodiacepina (172)

Una solución de 171 (6,50 g, 15,99 mmol) en DMF anhidro (27,5 mL) se añadió en forma de gotas a una suspensión agitada de NaH (0,422 g, 0,704 g de una dispersión al 60% en aceite mineral, 18,34 mmol) a 0ºC y la mezcla de reacción se agitó durante 30 minutos. Una solución de cloruro SEM (3,11 mL, 2,93 g, 17,59 mmol) en DMF anhidro (5 mL) se añadió en forma de gotas a la mezcla de reacción agitada a 0ºC y se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. La mezcla de reacción se vertió en agua (200 mL) para obtener un precipitado blanco, que se extrajo con dietil éter (4 x 300 mL). La capa orgánica se lavó con agua (2 x 50 mL), salmuera (2 x 50 mL) y se secó sobre MgSO_{4} anhidro. La filtración y la evaporación del solvente in vacuo proporcionó el producto crudo, que se purificó mediante cromatografía por desorción súbita de columna utilizando una mezcla 80:20 de éter de petróleo:EtOAc como eluyente. Las fracciones puras se combinaron y evaporaron in vacuo para proporcionar el producto (172) como un aceite amarillo (7,01 g, 13,1 mmol, 82%), ^{1}HNMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,35 (s, 1H, ArH), 7,24 (s, 1H, ArH), 5,52 (d, 2H, J = 9,89 Hz, SEM amino acetal CH_{2}), 4,65 (d, 2H, J = 9,90 Hz, SEM amino acetal CH_{2}), 4,61-4,56 (m, 1H, 2), 4,23 (dd, 1H,
J = 4,40 Hz, 8,24 Hz, 11a), 3,94 (s, 3H, OMe), 3,92 (s, 3H, OMe), 3,68 (m, 4H, SEM 1' CH_{2}+ 3), 2,86 (m, 1H, 1), 2,02 (m, 1H, 1), 0,98 (t, 2H, J = 8,25 Hz, SEM 2' CH_{2}), 0,88 (s, 9H, TBDMS t-Bu CH_{3}), 0,10 (s, 6H, 2* TBDMS SiCH_{3}), 0,03 (s, 9H, 3* SEM SiCH_{3}); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 170,0, 165,6, 151,8, 147,1, 133,9, 121,5, 111,2, 105,5, 78,1, 69,6, 67,0, 56,5, 56,2, 56,1, 53,6, 35,5, 25,7, 18,4, -1,3, -4,8.

(11aS)-6,7-dimetoxi-2(R)-hidroxi-2,3,5,10,11,11a-hexahidro-10-[2-(trimetilsilil)etoximetil]-5,11-dioxo-1H-pirrolo[2,1-c][1,4-]benzodiacepina (173)

Una solución de TBAF 1 N en THF (19,85 mL, 19,85 mmol) se añadió a una solución agitada de 172 (7,0 g, 13,05 mmol) en THF (50 mL). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas y se diluyó con DCM (200 mL), se lavó con agua (2 x 200 mL), salmuera (2 x 200 mL) y se secó sobre MgSO_{4} anhidro. La filtración y la extracción del exceso de solvente proporcionó el producto crudo, que se purificó mediante cromatografía por desorción súbita de columna utilizando 50:50 éter de petróleo como eluyente.

La evaporación in vacuo de las fracciones puras proporcionó el producto (173) (5,9 g). ^{1}HNMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,30 (s, 1H, ArH), 7,24 (s, 1H, ArH), 5,52 (d, 1H, J = 9,9 Hz, SEM amino acetal CH_{2}), 4,68-4,64 (m, 2H, SEM amino acetal CH_{2}+ 2), 4,30 (dd, 1H, J = 5,86, 8,24 Hz), 3,91 (s, 3H, OMe), 3,90 (s, 3H, OMe), 3,87-3,51 (m, 4H, SEM 1' CH_{2}+ 3), 2,95 (dt, 1H, J = 5,31, 13,56 Hz, 1), 2,17-2,08 (m, 1H, 1), 1,02-0,93 (m, 2H, SEM 2' CH_{2}), 0,03 (s, 9H, 3 x SiCH_{3}); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 169,7, 165,9, 151,9, 147,1, 134,0, 121,1, 111,2, 105,5, 78,2, 69,1, 67,1, 56,5, 56,1, 53,9, 34,9, 18,4, -1,3.

(11aS)-6,7-dimetoxi-2,3,5,10,11,11a-hexahidro-10-[2-(trimetilsilil)etoximetil]-2,5,11-trioxo-1H-pirrolo[2,1-c] [1,4-]benzodiacepina (174)

DMSO anhidro (3,28 g, 41,94 mmol) en DCM seco (20 mL) se añadió en forma de gotas durante 5 minutos a una solución agitada de oxalil cloruro (10,48 mL de una solución 2 N en DCM, 20,97 mmol) bajo una atmósfera de nitrógeno a -50ºC. Después de agitar durante 5 minutos, se añadió una solución 173 (5,90 g, 13,98 mmol), en DCM seco (45 mL) en forma de gotas durante 45 minutos a la mezcla de reacción, que se agitó entonces durante 45 minutos más a -50ºC. TEA (9,89 g, 97,87 mmol) se añadió en forma de gotas a la mezcla durante 15 minutos seguido por un agitado durante 15 minutos más. La mezcla de reacción se dejó entibiar a temperatura ambiente, se diluyó con H_{2}O (150 mL) y DCM (100 mL). La fase orgánica se lavó con HCl 1 N (2 x 100 mL), agua (2 x 100 mL), salmuera (2 x 100 mL) y se secó sobre MgSO_{4}. La filtración y la evaporación proporcionaron el producto crudo (174), que se purificó mediante cromatografía por desorción súbita de columna utilizando 50:50 éter de petróleo (40-60º):EtOAc como eluyente. La evaporación de las fracciones puras in vacuo proporcionó el producto (4,33 g, 10,3 mmol, 74%). ^{1}HNMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,30 (s, 1H, ArH), 7,24 (s, 1H, ArH), 5,60 (d, 1H, J = 9,89 Hz, SEM amino acetal CH_{2}), 4,69 (d, 1H, J = 9,89 Hz, SEM amino acetal CH{2}), 4,62 (dd, 1H, J = 9,89, 3,12 Hz, 11a), 4,26-4,19 (m, 1H, 3), 3,95 (s, 3H, Ome), 3,94 (s, 3H, OMe), 3,81-3,49 (m, 4H, SEM 1' CH_{2}+ 1 + 3), 2,82-2,71 (m, 1H, 1), 0,95 (t, 2H, J = 2,01 Hz, SEM 2' CH_{2}), -0,04 (s, 9H, SEM CH_{3}); ^{13}C NNR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 206,8, 168,8, 165,9, 152,4, 147,5, 134,0, 120,4, 111,1, 105,6, 78,2, 67,2, 56,2, 54,8, 52,3, 37,3, 18,3, -1,3.

(11aS)-5,10,11,11a-tetrahidro-7,8-dimetoxi-10-[2-trimetilsilil)etoximetil]-2-[[(trifluorometil)sulfonil]oxi]-5,11-dioxo-1H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiacepina (175)

Piridina anhidra (0,46 mL, 0,452 g, 5,73 mmol) se añadió en una porción a una solución vigorosamente agitada de 174 (2,0 g, 4,77 mmol) en DCM anhidro (100 mL) y se dejó agitar la mezcla durante 10 minutos a temperatura ambiente. Anhídrido trifílico anhidro (1,25 mL, 1,48 g, 5,25 mmol) se añadió rápidamente, en una porción, y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4,5 horas. La mezcla de reacción oscura, homogénea se vertió en NaHCO_{3} saturado frío (200 mL) y la mezcla se extrajo con DCM (3 x 50 mL). Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con agua (2 x 200 mL), salmuera (2 x 200 mL) y se secaron sobre MgSO_{4} anhidro. La filtración y evaporación proporcionaron el producto crudo, que se purificó mediante cromatografía por desorción súbita de columna utilizando 80:20 éter de petróleo:EtOAc como eluyente. La evaporación de las fracciones puras in vacuo proporcionó el producto (175) como un aceite amarillo (1,79 g, 3,25 mmol, 68%), ^{1}HNMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,29 (s, 1H, ArH), 7,23 (s, 1H, ArH), 7,15 (t, 1H, J = 2,01 Hz, H3), 5,53 (d, 1H, J = 10,07 Hz, SEM amino acetal CH_{2}), 4,68 (d, 1H, J = 9,89 Hz, SEM amino acetal CH_{2}).

(11aS)-7,8-dimetoxi-2-etenil-5,10,11,11a-tetrahidro-10-(2-(trimetilsilil)etoximetil)-5,11-dioxo-1H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiacepina (176)

Una cantidad catalítica de tetraquistrifenilfosfina paladio [0](4 mol%, 0,142 g, 0,123 mmol) se añadió a una mezcla agitada de 175 (1,69 g, 3,06 mmol), Lic. (0,39 g, 9,19 mmol) y tributilviniltina (1,16 mL, 1,26 g, 3,98 mmol) en THF anhidro (100 mL) y se calentó por reflujo durante 2,5 horas. La mezcla de reacción enfriada se diluyó con DCM (100 mL) y la mezcla se lavó con 10% de hidróxido de amonio acuoso (200 mL). La capa orgánica se lavó con salmuera (2 x 200 mL) y se secó sobre sobre MgSO_{4} anhidro. La filtración y evaporación del solvente in vacuo proporcionó el producto crudo, que se purificó adicionalmente mediante cromatografía por desorción súbita de columna utilizando una mezcla 80:20 de éter de petróleo:EtOAc como eluyente. Las fracciones puras se combinaron y la evaporación del solvente in vacuo proporcionó el producto (176) como un aceite incoloro (0,992 g, 2,312 mmol, 75,5%), %), ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,32 (s, 1H, ArH), 7,22 (s, 1H, ArH), 6,94 (s, 1H, H3), 6,51 (dd, 1H, J = 10,62, 17,22 Hz, alqueno CH), 5,51 (d, 1H, J = 10,07 Hz, SEM amino acetal CH_{2}), 5,20 (d, 1H, J = 8,24 Hz, alqueno CH_{2}), 5,15 (s, 1H, alqueno CH_{2}), 4,66 (d, 1H, J = 9,89 Hz, SEM amino acetal CH_{2}), 4,54 (dd, 1H, J = 3,30, 10,62 Hz, H11a), 3,90 (s, 3H, OMe), 3,89 (s, 3H, OMe), 3,82-3,60 (m, 3H, SEM 1' CH_{2}+ H1), 2,91-2,82 (m, 1H, H1), 0,96 (t, 2H, J = 8,42 Hz, SEM 2' CH_{2}), -0,04 (s, 9H, SEM CH_{3}); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 169,3, 161,8, 152,1, 147,3, 133,8, 129,8, 126,0, 125,1, 121,2, 115,1, 111,4, 105,9, 78,5, 67,1, 57,6, 56,2, 56,2, 29,6, 18,4, -1,34.

(11aS)-1,11a-dihidro-7,8-dimetoxi-2-etenil-5H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiacepin-5-ona (177)

Tetraborohidruro de sodio sólido (NaBH_{4}, 81 mg, 2,175 mmol) se añadió en una porción a una solución rápidamente agitada de 176 (101 mg, 0,233 mmol) en una mezcla de EtOAc anhidro (2 mL) y THF anhidro (4 mL) a temperatura ambiente y se agitó durante 4 horas. La mezcla de reacción se diluyó con agua (5 mL) y se extrajo con CHCl_{3} (3 x 5 mL). Las capas orgánicas se lavaron con salmuera (10 mL) y se secaron sobre MgSO_{4} anhidro. La filtración y evaporación proporcionaron el producto crudo, que se agitó durante 30 minutos con gel de sílice (0,25 g) en MeOH (5 mL). Se estrajo el metanol excedente mediante evaporación rotativa, provocando que el producto crudo se absorba sobre el gel de sílice. Se añadió un tapón de gel de sílice sobre la parte superior de la columna de gel de sílice y el producto se purificó mediante cromatografía por desorción súbita de columna eluyendo con una mezcla 60:40 de éter de petróleo:EtOAc. Las fracciones puras se combinaron y mediante la evaporación del solvente in vacuo proporcionaron el producto (177) como un sólido amarillo (33 mg, 0,116 mmol, 50%). ^{1}HNMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,86 (d, 1H, J = 3,84 Hz, imina CH), 7,50 (s, 1H, ArH), 7,05 (br s, 1H, H3), 6,82 (s, 1H, ArH), 6,58 (dd, 1H, J = 10,62, 17,22 Hz, alqueno CH), 5,20-5,05 (m, 2H, alqueno CH_{2}), 4,39-4,31 (m, 1H, H11a), 3,96 (s, 3H, OMe), 3,94 (s, 3H, OMe), 3,39-3,12 (m, 2H, Hl); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 162,7, 161,5, 151,9, 147,8, 140,4, 129,9, 126,9, 123,9, 118,9, 114,4, 111,6, 109,8, 77,3, 56,2, 53,9, 33,7.

Ejemplo 1(h) Síntesis de (11aS)-1,11a-dihidro-7,8-dimethoxi-2-(4-methoxihenil)-5H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiacepin-5-ona (Ver Figuras 6a/b)

25

(11aS)-7,8-dimetoxi-2-(4-metoxipenil)-5,10,11,11a-tetrahidro-10-(2-(trimetilsilil)etoximetil)-5,11-dioxo-1H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiacepina (178)

Una solución de ácido para-metoxifenilborónico (301 mg, 1,98 mmol) en DME (10 mL) se añadió a una solución agitada de vinil triflato (175 - ver ejemplo 1(g)) (715 mg, 1,29 mmol) en DME (10 mL) bajo una atmósfera de ni-
trógeno. Una solución acuosa de Na_{2}CO_{3} (2 N, 9,9 mL) se añadió seguida por LiCl (178 mg, 4,185 mmol) y tetrakis(trifenilfosfina)paladio(0) (5 mol%, 81 mg) y la mezcla se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente seguido por un calentamiento a reflujo durante 1 hora. Después de la concentración in vacuo, el residuo se resuspendió en una mezcla de DCM (50 mL), Na_{2}CO_{3} 2 N acuoso (50 mL) y solución de NH_{4}OH concentrado (3 mL). Se extrajo la capa acuosa con DCM (3 x 20 mL) y los extractos orgánicos combinados se secaron sobre MgSO_{4} anhidro. La filtración y evaporación dieron un residuo que se purificó mediante cromatografía por desorción súbita de columna sobre gel de sílice eluyendo con 60:40 éter de petróleo:EtOAc. Las fracciones puras se combinaron y la evaporación del solvente in vacuo proporcionó el producto (178) como un sólido amarillo (559 mg, 1,095 mmol, 85%). ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,40-7,35 (m, 3H, ArH + Suzuki ArH), 7,33 (t, 1H, J = 2,01 Hz, H3), 7,27 (s, 1H, ArH), 6,88 (d, 2H, J = 6,93 Hz, Suzuki ArH), 5,56 (d, 1H, J = 9,89 Hz, SEM amino acetal CH_{2}), 4,71 (d, 1H, J = 9,89 Hz, SEM amino acetal CH2), 4,63 (dd, 1H, J = 3,30, 10,62 Hz, H11a), 3,95 (s, 3H, Ode), 3,94 (s, 3H, OMe), 3,87-3,65 (m, 6H, SEM 1' CH_{2} + Hi + Suzuki ArOMe), 3,14 (ddd, 1H, J = 2,38, 10,62, 16,12 Hz, H1), 0,96 (t, 2H, J = 8,42 Hz, SEM 2' CH_{2}), -0,04 (s, 9H, SEM CH_{3}); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) d 168,4, 161,6, 160,2, 153,0, 147,3, 133,7, 126,5, 126,1, 125,4, 121,3, 120,2, 114,1, 111,3, 105,8, 78,4, 67,1, 57,5, 56,2, 56,2, 55,3, 31,5, 18,4, -1,34.

(11aS)-1,11a-dihidro-7,8-dimetoxi-2-(4-metoxifenil)-5H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiacepin-5-ona (179)

Se añadió tetraborohidruro de sodio sólido (NaBH_{4}, 70 mg, 1,88 mmol) en una porción a una solución rápidamente agitada de 178 (100 mg, 0,2 mmol) en una mezcla de EtOH anhidro (2 mL) y THF anhidro (4 mL) y se dejó agitar a temperatura ambiente durante 9 horas. La mezcla de reacción se diluyó con agua (10 mL) y se agitó durante 30 minutos con gel de sílice (2,0 g). La mezcla se extrajo con EtOAc (3 x 10 mL). Las capas orgánicas se lavaron con salmuera (10 mL) y se secó sobre MgSO_{4} anhidro. La filtración y evaporación proporcionaron el producto crudo (179), que se purificó mediante cromatografía por desorción súbita de columna eluída con una mezcla 50:50 de éter de petróleo:EtOAc. Las fracciones puras se combinaron y la evaporación del solvente in vacuo proporcionó el producto como un cristal amarillo (28 mg, 0,08 mmol, 38%). ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,89 (d, 1H, J = 4,03 Hz, Imine CH), 7,53 (s, 1H, ArH), 7,39 (t, 1H, J = 1,83 Hz, H3), 7,33 (d, 2H, J = 8,97 Hz, metoxifenil ArH), 6,91 (d, 2H, J = 8,98 Hz, metoxifenil ArH), 6,83 (s, 1H, ArH), 4,44-4,36 (m, 1H, H11a), 3,97 (s, 3H, OMe), 3,94 (s, 3H, OMe), 3,91-3,79 (m, 4H, H1 + Suzuki ArOMe), 3,64-3,34 (m, 1H, H1); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 162,7, 161,3, 159,2, 151,8, 147,8, 140,4, 126,3, 126,2, 126,0, 125,9, 123,2, 121,9 114,3, 114,1, 111,6, 109,8, 56,2, 56,1, 55,6, 35,6.

Ejemplo 1(i) Síntesis de (11aS)-1,11a-dihidro-7,8-dimetoxi-2-fenil-5H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiacepin-5-ona (Ver Figuras 6a/b)

26

(11aS)-7,8-dimetoxi-2-fenil-5,10,11,11a-tetrahidro-10-(2-(trimethilsilil)etoximetil)-5,11-dioxo-1H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiacepina (180)

Ácido fenilborónico (334 mg, 2,74 mmol, 2,54 equiv.), Na_{2}CO_{3} (343,4 mg, 3,24, 3 equiv) y tetrakis (trifenilfosfina) paladio (0) (49,9 mg, 2%mmol) se añadieron a una solución del triflato (175 - ver ejemplo 1(g)) (600 mg, 1,08 mmol) en etanol (21,6 mL) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla de reacción se diluyó con etil acetato (200 mL), lavada con agua (2 x 200 mL), salmuera (200 mL) y secada sobre sulfato de magnesio. La filtración y evaporación del exceso de solvente proporciona el producto crudo, que se sometió a cromatografía por desorción súbita de columna sobre gel de sílice (70% 40-60º éter de petróleo; 30% etil acetato) para proporcionar después de la extracción del exceso de eluyente, el compuesto 180 (405 mg, 0,84 mmol, rendimiento 78%). ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,5-7,1 (m, 8H), 5,53 (d, 1H, J = 10,08 Hz), 4,67 (d, 1H, J = 10,08 Hz) 4,65-4,59 (m, 1H) 4,0-3,60 (m 9H), 3,12 (dd, 1H, J = 10,63, 16,12 Hz), 0,99-0,93 (m, 2H) 0,00 (s, 9H); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 168,3, 161,9, 152,1, 147,3, 133,9, 132,7, 128,7, 127,6, 125,7, 121,8, 121,1, 111,3, 105,8, 78,4, 67,2, 57,6, 56,2, 31,3, 18,4, -1,3.

(11aS)-1,11a-dihidro-7,8-dimetoxi-2-fenil-5H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiacepin-5-ona (181)

Tetraborohidruro de sodio sólido (287 mg, 7,6 mmol, 10 equiv.) se añadió en una sola porción a una solución rápidamente agitada de 180 (365 mg, 0,76 mmol) en una mezcla de EtOH anhidro (8 mL) y THF anhidro (8 mL) a 0ºC. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora a temperatura ambiente, momento en que la TLC (5% metanol; 95% cloroformo) reveló el consumo completo del material inicial. La mezcla de reacción se diluyó con etil acetato (100 mL), se lavó con agua (2 x 100 mL), salmuera (100 mL) y se secó sobre sulfato de magnesio. La filtración y evaporación del exceso de solvente proporcionó el producto crudo como un aceite marrón viscoso. La cromatografía por desorción súbita (gel de sílice, 70% 40-60º éter de petróleo, 30% etil acetato) proporcionó el producto final (181) (271 mg, 0,77 mmol, 74%). ^{1}HNMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,89 (d, 1H, J = 4,03 Hz), 7,53 (s, 1H), 7,51 (s, 1H), 7,40-7,20 (m, 5H), 6,83 (s, 1H), 4,50-4,35 (m, 1H), 3,96 (s, 3H), 3,94 (s, 3H), 3,66-3,36 (m, 2H), ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 162,6, 161,5, 151,9, 147,8, 140,4, 133,3, 128,8, 127,6, 127,1, 124,9, 123,6, 119,0, 111,6, 109,8, 56,2, 53,9, 35,4, HRMS (FAB) calculado para C_{20}H_{19}N_{2}O_{3} (M^{+-} +1) 335,1398, hallado 335,1396.

Ejemplo 2(a) Síntesis del C7-Iodo-C2-metileno PBD Monómero BSD-SJG (64, UP-2023) (Ver Figura 7)

27

(S)-N-(Aliloxicarbonil)-2-(tert-butildimetilsililoximetil)-4-metilidenepirrolidina (57)

Se añadió tert-butóxido de potasio (41,0 mL de una solución 0,5 M en THF, 20,5 mmol) gota a gota a una suspensión de bromuro de metiltrifenilfosfonio (7,29 g, 20,4 mmol) en THF (20 mL) a 0ºC (hielo/acetona) bajo nitrógeno. Después de agitarla durante 2 horas a 0ºC, se añadió una solución de la quetona 16 (ejemplo 1(b) (3,20 g, 10,2 mmol) en THF (10 mL) gota a gota y la mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente. Después de agitar durante otros 30 minutos se diluyó la mezcla de la reacción con EtOAc (150 mL) y capa orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó (MgSO_{4}), se filtró y se evaporó in vacuo para dar un aceite amarillo en el cual se formaron cristales (TPO) después de estar en el congelador. La purificación mediante cromatografía por desorción súbita (5% EtOAc/éter de petróleo) aisló la olefina pura 57 como un aceite incoloro (2,76 g, 87%): [\alpha]^{21}_{D}= -22,2º (c=0,25, CHCl_{3}); ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) (Rotámeros) \delta 6,02-5,87 (m, 1H, NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 5,31 (ddd, 1H, J = 1,65, 3,11, 17,20 Hz, NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 5,21 (dd, 1H, J = 1,46, 10,40 Hz, NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 4,99-4,61 (m, 2H, NCH_{2}C=CH_{2}), 4,60 (d, 2H, J = 4,94 Hz, NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 4,19-3,98 (m, 2H, NCHCH_{2}OTBDMS), 3,93-3 3,87 (m, 1H, NCHCH_{2}OTBDMS), 3,66-3,42 (m, 2H, NCH_{2}C=CH_{2}), 2,80-2,56 (m, 2H, NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}), 0,87 (s, 9H, SiC(CH_{3})_{3}), 0,03-0,02 (m, 6H, Si(CH_{3})_{2}); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) (Rotámeros) \delta 154,4 (NC=O), 145,1 y 144,1 (NCH_{2}C=CH_{2}), 133,1 (NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 117,5 and 117,2 (NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 107,5 y 106,9 (NCH_{2}C=CH_{2}), 65,8 y 65,6 (NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 63,7 y 63,1 (NCHCH_{2}OTBDMS), 58,7 and 58,3 (NCHCH_{2}OTBDMS), 51,1 (NCH_{2}C=CH_{2}), 34,9 y 34,2 (NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}), 25,8 (SiC(CH_{3})_{3}), 18,2 (SiC(CH_{3})_{3}), -5,5 (Si(CH_{3})_{2}); MS (CI), m/z (intensidad relativa) 312 (M^{+}. +1, 82), 296 (9), 279 (5), 255 (20), 254 (M-OC3H5 or M-^{t}Bu, 100), 168 (8), 122 (14); IR (Neto) 3083 (C=CH_{2}), 2954, 2847, 1709 (NC-O), 1533, 1467, 1404 (SiCH_{3}), 1360, 1310, 1252 (SiCH_{3}), 1207, 1174, 1103, 1076, 1006, 836, 776, 680 cm^{-1}.

(2S)-2-(tert-butildimetilsililoximetil)-4-metilidenopirrolidina (58)

Una cantidad catalítica de PdCl_{2}(PPh_{3})_{2} (92 mg, 0,131 mmol) se añadió a una solución del alil carbamato 57 (1,0 g, 3,22 mmol) y H_{2}O (0,34 mL, 18,9 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (30 mL). Después de 5 minutos agitando a temperatura ambiente, se añadió Bu_{3}SnH (0,96 mL, 1,04 g, 3,57 mmol) rápidamente en una porción. Una reacción ligeramente exotérmica con enérgica evolución de gas tiene lugar a continuación. La mezcla se agito durante 16 horas a temperatura ambiente bajo nitrógeno, momento en que la TLC (50% EtOAc/éter de petróleo) reveló la formación de amina. Después de diluir con CH_{2}Cl_{2} (30 mL), la solución orgánica se secó (MgSO_{4}), filtró y evaporó in vacuo para dar un aceite naranja que se purificó mediante cromatografía por desorción súbita (50-100% EtOAc/éter de petróleo) para proporcionar la amina 58 como un aceite levemente naranja (0,56 g, 77%): [\alpha]^{21}_{D}= -3,9º (c = 5,0, CHCl_{3}); ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 4,93 (t, 1H, J = 2,02 Hz, NCH_{2}C=CH_{2}), 4,90 (t, 1H, J = 2,02 Hz, NCH_{2}C=CH_{2}), 3,68-3,46 (m, 4H, NCHCH_{2}OTBDMS y NCH_{2}C=CH_{2}), 3,30-3,21 (m, 1H, NCHCH_{2}OTBDMS), 2,53-2,41 (m, 2H, NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2} y NH), 2,26-2,17 (m, 1H, NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}), 0,90 (S, 9H, SiC(CH_{3})_{3}), 0,06 (S, 6H, Si(CH_{3})_{2}); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 150,0 (NCH_{2}C=CH_{2}), 104,7 (NCH_{2}C=CH_{2}), 64,7 (NCHCH_{2}OTBDMS), 60,5 (NCHCH_{2}OTBDMS), 51,3 (NCH_{2}C=CH_{2}), 34,9 (NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}), 25,9 (SiC(CH_{3})_{3}), 18,3 (SiC(CH_{3})_{3}), -5,4 (Si(CH_{3})_{2}); MS (EI), m/z (intensidad relativa) 227 (M^{+}., 8), 212 (6), 170 (M-^{t}Bu, 36), 96 (8), 82 (M-CH_{2}OTBDMS, 100), 75 (11); IR (Neto) 3550-3100 (br, NH), 3074 (C=CH_{2}), 2929, 2857, 1664 (C=C), 1472, 1424, 1391, 1380, 1361, 1255, 1190, 1101, 1006, 939, 880, 838, 777, 723, 668 cm^{-1}.

(2S)-N-[5-Iodo-2-(2,2,2-tricloroetiloxicarbonilamino) benzoil]-2-(tert-butildimetilsililoximetil)-4-metilidinepirrolidina (60)

Una cantidad catalítica de DMF (3 gotas) se añadieron a una solución agitada del ácido antranílico Troc protegido 59 (0,46 g, 1,04 mmol) y oxalil cloruro (0,10 mL, 0,15 g, 1,15 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (10 mL). Después de 16 horas a temperatura ambiente la solución de ácido clorhídrico resultante se añadió en forma de gotas durante 30 minutos a una mezcla agitada de la amina 58 (0,26 g, 1,15 mmol) y TEA (0,26 g, 0,36 mL, 2,58 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (15 mL) a -20ºC (CCl_{4}/N_{2} líquido) bajo una atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se dejó entibiar a temperatura ambiente y se agitó durante 45 minutos más. En este punto, los análisis TLC (50% EtOAc/éter de petróleo) revelaron la finalización de la reacción. La mezcla se lavó con NaHCO_{3} saturado (30 mL), NH_{4}Cl saturado (30 mL), H_{2}O (25 ml), salmuera (30 mL), se secó (MgSO_{4}), filtró y evaporó in vacuo para dar la amida 60 como un aceite oscuro (0,65 g, 96%): ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) (Rotámeros) \delta 8,92 (br s, 1H), 8,05-7,88 (m, 1H), 7,74-7,64 (m, 1H), 7,56-7,46 (m, 1H), 5,08-4,95 (m, 2H), 4,84 (d, 1H, J = 11,91 Hz), 4,75 (d, 1H, J = 11,91 Hz), 4,74-4,65 (m, 1H), 4,21-3,68 (m, 4H), 2,96-2,65 (m, 2H), 0,95-0,87 (m, 9H), 0,1-0,03 (m, 6H).

(2S)-N-(2-Amino-5-iodobenzoil)-2-(hidroximetil)-4-metilidenpirrolidina (61)

Una solución de TBAF (1,24 mL de una solución 1 M en THF, 1,24 mmol) se añadió al silil-éter 60 (0,64 g, 0,99 mmol) en THF (15 mL) a 0ºC (hielo/acetona). La mezcla de reacción se dejó entibiar a temperatura ambiente y después de 45 minutos la TLC (50% EtOAc/Pet-éter 40º - 60º) reveló la completa desaparición del material inicial. Se añadió NH_{4}Cl saturado (75 mL) y la mezcla de reacción se extrajo con EtOAc (3 x 30 mL), se lavó con salmuera (30 mL), secó (MgSO_{4}), filtró y evaporó in vacuo para dar un aceite naranja. La purificación mediante cromatografía por desorción súbita (50% EtOAc/Pet-éter 40º - 60º) proporciona el amino-alcohol puro 61 como un aceite viscoso (0,18
g, 51%): ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,72-7,61 (m, 1H), 7,55-7,40 (m, 1H), 6,51-6,49 (m, 1H), 5,02-4,94 (m, 2H), 4,80-3,80 (m, 8H), 2,81-2,79 (m, 1H), 2,43-2,40 (m, 1H); MS (EI), m/z (intensidad relativa) 359 (M^{+}. + 1, 5), 358 (M^{+}., 33), 328 (3), 327 (10), 254 (3), 247 (11), 246 (100), 218 (18), 164 (2), 127 (4), 120 (4), 119 (10), 113 (9), 112 (91), 94 (2), 91 (20), 90 (5), 82 (10), 67 (2), 64 (3), 63 (3), 52 (3).

(2S)-N-[5-Iodo-2-(2,2,2-tricloroetiloxicarbonilamino) benzoil]-2-(hidroximetil)-4-metilidinepirrolidina (62)

Una solución de la amina 61 (179 mg, 0,50 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (15 mL) se enfrió a 0ºC (hielo/acetona) y se trató con piridina (81 \muL, 79 mg, 1,0 mmol). Una solución de 2,2,2-tricloroetilcloroformato (76 \muL, 117 mg, 0,55 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (5 mL) se añadió en forma de gotas a la mezcla agitada.

La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura y se agitó durante 2 horas más, punto en que la TLC (EtOAc) reveló el consumo completo de la amina 61. La mezcla de reacción se lavó con CuSO_{4} saturado (25 mL), H_{2}O (25 mL), salmuera (25 mL), secó (MgSO_{4}), filtró y evaporó in vacuo. El residuo crudo se purificó mediante cromatografía por desorción súbita (50% EtOAc/éter de petróleo) para proporcionar el compuesto troc-amino puro 62 como un aceite (189 mg, 71%): ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,90 (br s, 1H), 7,75-7,66 (m, 3H), 5,02-4,92 (m, 3H), 4,87 (d, 1H, J = 12,09 Hz), 4,72 (d, 1H, J = 12,09 Hz), 4,15-4,08 (m, 2H), 3,90-3,85 (m, 2H), 3,65-3,63 (m, 1H), 2,80-2,71 (m, 1H), 2,50 (d, 1H, J = 14,83 Hz); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 167,7, 151,9, 142,7, 139,6, 135,6, 134,8, 127,7, 123,4, 108,4, 95,1, 86,6, 74,3, 63,9, 59,0, 53,5, 33,7; MS (EI), m/z (intensidad relativa) 536 (5), 535 (3), 534 (15), 533 (M^{+}., 3), 532 (15), 503 (2), 501 (2), 422 (4), 420 (5), 385 (8), 384 (8), 366 (3), 353 (11), 290 (9), 273 (8), 272 (76), 246 (6), 245 (18), 218 (4), 217 (5), 216 (8), 146 (4), 145 (10), 133 (4), 131 (4), 119 (6), 117 (7), 115 (11), 113 (17), 112 (39), 97 (4), 96 (3), 95 (12), 90 (5), 84 (5), 83 (7), 82 (100), 79 (7), 77 (21), 67 (2), 63 (4), 61 (3), 51 (6); masa exacta calculada para C_{16}H_{11}N_{2}O_{4}Cl_{3}I m/e 531,9221, observada m/e 531,9155.

(11S,11aS)-11-Hidroxi-7-iodo-2-metilideno-10-(2,2,2-tricloroetiloxicarbonilamino)-1,2,3,10,11,1la-hexahidro-5H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiacepin-5-ona (63)

Una solución del alcohol 62 (189 mg, 0,35 mmol) en CH_{2}Cl_{2}/CH_{3}CN (12 mL, 3:1) se trató con cedazos moleculares potenciados 4 \ring{A} (100 mg) y NMO (62 mg, 0,53 mmol). Después de 15 minutos agitando a temperatura ambiente, se añadió TPAP (6,2 mg, 17,7 \mumol) y continuó el agitado durante 1 hora más, punto en que la TLC (50% EtOAc/éter de petróleo) mostró la formación del producto junto con algún material inicial no oxidado. La mezcla se trató entonces con una cantidad adicional de NMO (62 mg, 0,53 mmol) y TPAP (6,2 mg, 17,7 \mumol) y se agitó durante 30 minutos más después de este tiempo la TLC revela la finalización de la reacción. La mezcla se evaporó in vacuo sobre sílice y se sometió a cromatografía por desorción súbita (40% EtOAc/éter de petróleo) para proporcionar la carbinolamina protegida 63 como un cristal blanco (93 mg, 49%): ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,09 (d, 1H, J = 2,01 Hz), 7,80 (dd, 1H, J = 8,43, 2,20 Hz), 7,10 (d, 1H, J = 8,43 Hz), 5,60 (d, 1H, J = 9,71 Hz), 5,20-5,04 (m, 3H), 4,79-4,50 (m, 1H), 4,32-4,08 (m, 3H), 3,63 (t, 1H, J = 8,79 Hz), 2,99-2,89 (m, 1H), 2,72 (d, 1H, J = 15,94 Hz); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl3) \delta 165,0, 154,1, 141,0, 140,2, 137,7, 134,5, 133,6, 132,0, 110,4, 94,7, 93,4, 85,7, 75,0, 59,4, 50,7, 35,0; MS (EI), m/z (intensidad relativa) 533 (6), 532 (22), 531 (M^{+}., 8), 530 (17), 529 (10), 449 (5), 383 (6), 354 (7), 353 (5), 338 (6), 325 (5), 290 (5), 274 (15), 273 (8), 272 (43), 254 (5), 245 (8), 218 (5), 216 (12), 147 (5), 146 (6), 145 (9), 133 (10), 131 (9), 128 (5), 127 (15), 119 (11), 117 (5), 97 (6), 95 (9), 92 (6), 91 (6), 90 (6), 83 (11), 82 (100), 81 (7), 80 (8), 75 (5), 63 (7), 53 (5); masa exacta calculada para C_{16}H_{14}N_{2}O_{4}ICl_{3} m/e 531,9037, observada m/e 531,8988.

(11aS)-7-Iodo-2-metilideno-1,2,3,11a-tetrahidro-5H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiacepin-5-ona (64, UP2023, BSD-SJG)

Un par de cadmio-plomo 10% (109 mg, 0,875 mmol) se añadió a una solución agitada de la carbinolamina troc-protegida 63 (93 mg, 0,175 mmol) en THF (1 mL) y acetato de amonio acuoso 1 N (1 mL). Después de 45 minutos a temperatura ambiente, la TLC reveló la finalización de la reacción (70% EtOAc/éter de petróleo). La mezcla se diluyó con EtOAc (30 mL), se secó (MgSO_{4}), filtró y evaporó in vacuo. El residuo crudo se purificó mediante cromatografía por desorción súbita (70% EtOAc/éter de petróleo) para proporcionar el PBD original (64, BSD-SJG, UP2023) como un sólido blanco (27 mg, 46%): mp ºC; ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}+ CD_{3}OD) (11S, 11aS isómero) \delta 8,10 (d, 1H,
J = 1,46 Hz), 7,65 (d, 1H, J = 8,79 Hz), 6,86 (d, 1H, J = 8,06 Hz), 5,14-5,10 (m, 2H), 4,66 (d, 1H, J = 5,13 Hz), 4,34 (d, 1H, J = 16,12 Hz), 4,23 (d, 1H, J = 16,12 Hz), 3,80-3,71 (m, 1H), 3,34 (s, 3H), 3,03-2,86 (m, 1H), 2,65 (d, 1H, J = 16,02 Hz); MS (ET), m/z (intensidad relativa) (N10-C11 forma imina) 339 (M^{+}., +1, 20), 338 (M^{+}., 100), 337 (17), 323 (5), 311 (4), 310 (5), 257 (5), 230 (4), 229 (13), 211 (4), 203 (4), 202 (8), 184 (8), 183 (4), 103 (5), 82 (17), 81 (4), 80 (5), 76 (6), 75 (16), 74 (5), 55 (4), 53 (4); IR (NUJOL®) 3295 (br), 2923, 2853, 1716, 1615, 1506, 1457, 1377, 1317, 1278, 1238, 1169, 1118, 1063, 999, 895, 818, 751, 718 cm^{-1}; masa exacta calculada para C_{13}H_{11}N_{2}OI m/e 337,9916, observado m/e 337,9870.

Ejemplo 2(b) Síntesis del C8-Bencil-C7-Metoxi-C2-metleno PBD Monómero SJG-244 (70) (Ver Figura 8)

28

(2S)-N-(4-Benciloxi-5-metoxi-2-nitrobenzoil)-2-(tert-butildimetilsililoximetil)-4-metilidenpirrolidina (65)

Una cantidad catalítica de DMF (2 gotas) se añadió a una solución agitada del nitro ácido 1 (0,645 g, 2,13 mmol) y oxalil cloruro (0,23 mL, 0,33 g, 2,60 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (40 mL). Después de 16 horas a temperatura ambiente la solución resultante de ácido clorhídrico se añadió en forma de gotas a una mezcla agitada de la amina 58 (0,522 g, 2,30 mmol) y TEA (0,58 g, 0,80 mL, 5,73 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (5 mL) a 0ºC (hielo/acetona) bajo una atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se dejó entibiar a temperatura ambiente y se agitó durante 2,5 horas más. La mezcla se diluyó con CH_{2}Cl_{2} (50 mL), se lavó con NaHCO_{3} saturado (50 mL), NH_{4}Cl saturado (50 mL), H_{2}O (50 mL), salmuera (50 mL), se secó (MgSO_{4}), filtró y evaporó in vacuo para dar el producto crudo como un aceite naranja oscuro. La purificación mediante cromatografía por desorción súbita (20% EtOAc/éter de petróleo) aisló la amida pura 65 como un aceite pegajoso naranja (0,86 g, 79%): [\alpha]^{22}_{D}= -47,2º (c = 2,79, CHCl_{3}); ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) (Rotámeros) \delta 7,78 y 7,77 (s x 2, 1H_{arom}), 7,48-7,35 (m, 5H_{arom}), 6,82 y 6,78 (s x 2, 1H_{arom}), 5,23 y 5,21 (s x 2, 2H, PhCH_{2}O), 5,09-4,83 (m, 2H, NCH_{2}C=CH_{2}), 4,59-4,49 (m, 1H, NCHCH_{2}OTBDMS), 4,03-3,08 (m, 7H, NCHCH_{2}OTBDMS, NCH_{2}C=CH_{2} y OCH_{3}), 2,80-2,56 (m, 2H, NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}), 0,89 y 0,79 (s x 2, 9H, SiC(CH_{3})_{3}), 0,122, -0,11 y -0,14 (s x 3, 6H, Si(CH_{3})_{2}); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) (Rotámeros) \delta 166,2 (NC=O), 154,8 y 154,6 (C_{cuat}), 148,2 y 148,0 (C_{cuat}), 144,1 y 143,2 (C_{cuat}), 137,1 (C_{cuat}), 135,3 (C_{cuat}), 128,8 y 128,5 (BnC-H_{arom}), 128,2 (C_{cuat}), 127,6 (BnC-H_{arom}), 110,1 y 109,2 (C-H_{arom}), 109,0 y 108,5 (C-H_{arom}), 107,5 (NCH_{2}C=CH_{2}), 71,3 (PhCH_{2}O), 63,7 (NCHCH_{2}OTBDMS), 60,2 (NCHCH_{2}OTBDMS), 58,1 y 56,6 (OCH_{3}), 52,8 y 50,5 (NCH_{2}C_{2}=CH_{2}), 34,9 y 33,9 (NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}), 25,8 y 25,7 (SiC(CH_{3})_{3}), 18,2 (SiC(CH_{3})_{3}), -5,4 y -5,6 (Si(CH_{3})_{2}); MS (EI), m/z (intensidad relativa) 512 (M^{+}., 3), 497 (M-CH3, 4), 455 (M-^{t}Bu, 100), 380 (2), 364 (5), 286 (M-NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}CHCH_{2}OTBDMS, 40), 279 (9), 226 (NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}CHCH_{2}OTBDMS, 5), 168 (10), 149 (27), 91 (PhCH_{2}, 62), 73 (8), 57 (9); IR (NETO) 3066, 3034, 2953, 2856, 2245, 1644 (NC=O), 1578, 1520, 1454, 1426, 1379, 1335, 1276, 1220, 1186, 1106, 1059, 1016, 910, 836, 815, 779, 734, 697, 655, 614 cm^{-1}.

(2S)-N-(4-Benciloxi-5-metoxi-2-nitrobenzoil)-2-(hidroximetil)-4-metilidenpirrolidina (66)

Una solución de TBAF (2,10 mL de una solución 1 M en THF, 2,10 mmol) se añadió al silil éter 65 (0,85 g, 1,68 mmol) en THF (20 mL) a 0ºC (hielo/acetona). La mezcla de reacción se dejó entibiar a temperatura ambiente seguido por un cambio de color (amarillo-rojo oscuro). Después de 40 minutos TLC (50% EtOAc/Pet-éter 40º-60º) reveló la completa desaparición del material inicial. Se añadió NH_{4}Cl saturado (100 mL) y la mezcla de reacción se extrajo con EtOAc (3 x 40 mL), se lavó con salmuera (30 mL), secó (MgSO_{4}), filtró y evaporó in vacuo para dar un aceite naranja oscuro que se purificó mediante cromatografía por desorción súbita (60% EtOAc/éter de petróleo) para proporcionar el alcohol puro 66 como un sólido blanco (0,64 g, 96%): [\alpha]^{19}_{D} = -22,9º (c = 0,20, MeOH); ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) (Rotámeros) \delta 7,78 y 7,76 (s x 2, 1H_{arom}), 7,49-7,33 (m, 5H_{arom}), 6,91 y 6,82 (s x 2, 1H_{arom}), 5,22 (s, 2H, PhCH_{2}O), 5,10 (m, 1H, OH), 5,03-5,01 (m, 1H, NCH_{2}C=CH_{2}), 4,90-4,85 (m, 1H, NCH_{2}C=CH_{2}), 4,65-4,55 (m, 1H, NCHCH_{2}OH), 3,99 y 3,95 (s*2, 3H, OCH_{3}), 3,90-3,72 (m, 4H, NCHCH_{2}OH y NCH_{2}C=CH2), 2,90-2,87 (m, 1H, NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}), 2,53-2,47 (m, 1H, NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) (Rotámeros) \delta 177,4 (NC-O), 155,1 (C_{cuat}), 148,3 (C_{cuat}), 142,6 (C_{cuat}), 137,0 (C_{cuat}), 135,2 (C_{cuat}), 128,9, 128,6 y 127,6 (BnC-H_{arom}), 109,1 (C-H_{arom}), 108,5 (C-H_{arom}), 108,3 (NCH_{2}C=CH_{2}), 71,4 (PhCH_{2}O), 65,2 y 63,7 (NCHCH_{2}OH), 60,4 (NCHCH_{2}OH), 56,8 y 56,7 (OCH_{3}), 53,0 y 50,1 (NCH_{2}C=CH_{2}), 35,1 y 34,4 (NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}); MS (EI), m/z (intensidad relativa) 398 (M^{+}., 2), 380 (3), 368 (4), 354 (1), 286 (M-NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}CHCH_{2}OH, 54), 270 (2), 256 (1), 164 (2), 136 (4), 135 (3), 121 (4), 112 (NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}CHCH_{2}OH, 3), 91 (PhCH_{2}, 100), 82 (3), 69 (4), 65 (6); IR (NUJOL®) 3600-3200 (br, OH), 2923, 2853, 1718, 1663, 1611 (NC-O), 1577, 1517, 1460, 1376, 1332, 1275, 1224, 1176, 1052, 990, 925, 886, 862, 796, 759, 723, 702 615 cm^{-1}; masa exacta calculada para C_{21}H_{22}N_{2}O_{6} m/e 398,1478, observado m/e 398,1490.

(2S)-N-(2-Amino-4-benciloxi-5-metoxibenzoil)-2-(hidroximetil)-4-metilidenpirrolidina (67)

El nitro alcohol 66 (0,637 g, 1,60 mmol), SnCl_{2}2H_{2}O (1,81 g, 8,0 mmol) y metanol (36 mL) se calentaron a reflujo y se monitorizó mediante TLC (90% CHCl_{3}/MeOH). Después de 1 hora el MeOH se evaporó in vacuo y el residuo resultante se enfrió (hielo) y se trató cuidadosamente con NaHCO_{3} saturado (120 mL). La mezcla se diluyó con EtOAc (120 mL) y después de 16 horas agitando a temperatura ambiente el precipitado inorgánico se retiró mediante filtración a través de celita. Se separó la capa orgánica, se lavó con salmuera (100 mL), secó (MgSO_{4}), filtró y evaporó in vacuo para dar un cristal naranja. La cromatografía por desorción súbita (EtOAc) proporcionó la amina pura 67 como un cristal amarillo pálido (0,37 g, 63%): [\alpha]^{23}_{D}= -42,7º (c = 3,7, CHCl_{3}); ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,44-7,29 (m, 5H_{arom}), 6,77 (s, 1H_{arom}) 6,27 (s, 1H_{arom}), 5,12 (s, 2H, PhCH_{2}O), 5,06-5,00 (m, 1H, NCH_{2}C=CH_{2}), 4,99-4,92 (m, 1H, NCH_{2}C=CH_{2}), 4,63-4,53 (m, 1H, NCHCH_{2}OH), 4,25-3,60 (m, 10H, NCHCH_{2}OH, NCH_{2}C=CH_{2}, OCH_{3}, OH y NH_{2}), 2,77 (dd, 1H, J = 8,52, 15,85 Hz, NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}), 2,43-2,39 (m, 1H, NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 171,4 (NC=O), 151,0 (C_{cuat}), 143,3 (C_{cuat}), 141,5 (C_{cuat}), 140,6 (C_{cuat}), 136,5 (C_{cuat}), 128,6 y 128,0 (BnC-H_{arom}), 127,8 (C_{cuat}), 127,1 (BnC-H_{arom}), 112,5 (C-H_{arom}), 107,8 (NCH_{2}C=CH_{2}), 103,0 (C-H_{arom}), 70,6 (PhCH_{2}O), 65,9 (NCHCH_{2}OH), 60,0 (NCHCH_{2}OH), 57,1 (OCH_{3}), 53,3 (NCH_{2}C=CH_{2}), 34,4 (NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}); MS (EI), m/z (intensidad relativa) 368 (M^{+}., 100), 353 (M-CH_{3}, 2), 340 (1), 286 (2), 273 (4), 256 (M-NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}CHCH_{2}OH, 59), 249 (8), 226 (4), 200 (2), 196 (2), 166 (5), 138 (17), 112 (NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}CHCH_{2}OH, 39), 91 (PhCH_{2}, 70), 82 (5), 65 (5); IR (NETO) 3600-3000 (br, NH2 y OH), 3065, 3052, 2932, 2869, 2246, 1668, 1620, 1592, 1513, 1454, 1408, 1264, 1229, 1197, 1176, 1113, 1079, 1002, 909, 733, 698, 645 cm^{-1}; masa exacta calculada para C_{21}H_{24}N_{2}O_{4} m/e 368,1736, observada m/e 368,1662.

(2S)-N-[(2-Aliloxicarbonilamino)-4-benciloxi-5-metoxibenzoil]-2-(hidroximetil)-4-metilidenopirrolidina (68)

Una solución del amino-alcohol 67 (0,33 g, 0,90 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (20 mL) se enfrió a 0ºC (hielo/acetona) y se trató con piridina (0,14 mL, 0,14 g, 1,77 mmol). Se añadió a continuación una solución de alil cloroformato (87 \muL, 99 mg, 0,82 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (7 mL) gota a gota a la mezcla agitada. La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante otras 2,5 h, en cuyo punto el TLC (EtOAc) reveló el consumo completo de la amina 67. La mezcla de reacción se diluyó con CH_{2}Cl_{2} (30 mL) y se lavó con CuSO_{4} saturado (40 mL), H_{2}O (40 mL), salmuera (40 mL), se secó (MgSO_{4}), filtró y evaporó in vacuo. El residuo crudo se purificó mediante cromatografía de desorción súbita (80% EtOAc/Éter de Petróleo) para conseguir el compuesto alloc-amino puro 68 como un sólido blanco (0,34 g, 84%): [\alpha]^{22}_{D} = 22,4º (c = 3,4, CHCl_{3}); ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,52 (br s, 1H, NH), 7,82 (br s, 1H_{arom}), 7,49-7,29 (m, 5H_{arom}), 6,84 (s, 1H_{arom}), 6,02-5,88 (m, 1H, NCO_{2}CH_{2}CH=CH2), 5,39-5,22 (m, 2H, NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 5,17 (s, 2H, PhCH_{2}O), 5,01 (br s, 1H, NCH_{2}C=CH_{2}), 4,94 (br s, 1H, NCH_{2}C=CH_{2}), 4,64-4,59 (m, 3H, NCHCH_{2}OH y NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 4,21-3,60 (m, 8H, NCHCH_{2}OH, NCH_{2}C=CH_{2}, OCH_{3} y OH), 2,77 (dd, 1H, J = 8,61, 15,94 Hz, NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}), 2,46 (d, 1H, J = 15,94 Hz, NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 171,4 (NC=O_{amida}), 153,7 (NC=O_{carbamato}), 150,3 (C_{cuat}), 144,5 (C_{cuat}), 143,0 (C_{cuat}), 136,2 (C_{cuat}), 132,4 (NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 131,3 (C_{cuat}), 128,6, 128,1, y 127,7 (BnC-H_{arom}), 118,1 (NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 111,1 (C-H_{arom}), 108,1 (NCH_{2}C=CH_{2}), 106,5 (C-H_{arom}), 70,7 (PhCH_{2}O), 65,8 (NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 65,5 (NCHCH_{2}OH), 59,9 (NCHCH_{2}OH), 56,7 (OCH_{3}), 54,0 (NCH_{2}C=CH_{2}), 34,1 (NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}); MS (EI), m/z (intensidad relativa) 452 (M^{+}., 38), 395 (M-OC_{3}H_{5}, 4), 394 (10), 340 (M-NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}CHCH_{2}OH, 20), 298 (7), 282 (22), 255 (8), 206 (2), 192 (2), 163 (3), 136 (3), 114 (6), 112 (NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}CHCH_{2}OH, 12), 91 (PhCH_{2}, 100), 82 (10), 65 (4), 57 (OC_{3}H_{5}, 7); IR (NUJOL®) 3600-2000 (br, OH), 3335, 3242, 2922, 2854, 1724, 1614, 1537, 1463, 1407, 1378, 1349, 1280, 1214, 1178, 1117, 1054, 1028, 995, 947, 908, 892, 853, 821, 768, 735, 697, 629, 601, 514 cm^{-1}; masa exacta calculada para C_{25}H_{28}N_{2}O_{6} m/e 452,1947, observado m/e 452,1923.

(11S,11aS)-10-Aliloxicarbonil-8-benciloxi-11-hidroxi-7-metoxi-2-metilideno-1,2,3,10,11,11a-hexahidro-5H-pirrolo [2,1-c][1,4]benzodiacepin-5-ona (69)

Se añadió una solución de DMSO (0,18 mL, 0,20 g, 2,56 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (4 mL) gota a gota durante 30 minutos a una solución de oxalil cloruro (0,63 mL de una solución 2,0 M en CH_{2}Cl_{2}, 1,26 mmol) a -45ºC (hielo seco/CH_{3}CN) bajo una atmósfera de nitrógeno. Después de agitarla a -45ºC durante 30 minutos, se añadió una solución del alcohol 68 (0,42 g, 0,93 mmol) disuelto en CH_{2}Cl_{2} (8 mL) durante 35 minutos a -45ºC. Después de 45 minutos a -45ºC, la mezcla se trató gota a gota con TEA (0,50 mL, 0,36 g, 3,56 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (4 mL) durante 30 minutos a -45ºC. Después de 35 minutos, la mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se diluyó con CH_{2}Cl_{2} (30 mL), se lavó con HCl 1N (20 mL), H_{2}O (20 mL), salmuera (30 mL), se secó (MgSO_{4}), se filtró y se evaporó in vacuo. El TLC (80% EtOAc/Éter de Petróleo) del material crudo reveló la suficiente formación de producto y una traza de material inicial no oxidado. La purificación mediante cromatografía de desorción súbita (50% EtOAc/Éter de Petróleo) produjo la carbinolamina protegida 69 como vidrio blanco (0,172 g, 41%): ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,48-7,27 (m, 5H_{arom}) 7,25 (s, 1H_{arom}), 6,74 (br s, 1H_{arom}), 5,65-5,53 (m, 1H, NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 5,56 (d, 1H, J = 9,89 Hz, NCHCHOH), 5,22-5,04 (m, 6H, NCH_{2}C=CH_{2}, NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2} y PhCH_{2}O), 4,64-4,42 (m, 3H, NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2} y OH), 4,28 (d, 1H, J = 15,94 Hz, NCH_{2}C=CH_{2}), 4,09 (d, 1H, J = 15,94 Hz, NCH_{2}C=CH_{2}), 3,92 (s, 3H, OCH13), 3,62 (t, 1H, J = 8,79 Hz, NCHCHOH), 2,90 (dd, 1H, J = 8,97, 16,03 Hz, NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}), 2,67 (d, 1H, J = 16,03 Hz, NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 166,8 (NC=O_{amida}), 156,0 (NC=O_{carbamato}), 150,1 (C_{cuat}), 149, 0 (C_{cuat}), 141,8 (C_{cuat}), 136, 1 (C_{cuat}), 131,8 (NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2},), 128,6, 128,1 y 127,3 (BnC-H_{arom}), 125,6 (C_{cuat}), 118,0 (NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 14,6 (C-H_{arom}), 110,6 (C-H_{arom}), 109,8 (NCH_{2}C=CH_{2}), 85,8 (NCHCHOH), 71,0 (PhCH_{2}O), 66,7 (NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 59,8 (NCHCHOH), 56,2 (OCH3), 50,7 (NCH_{2}C=CH_{2}), 35,0 (NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}); MS (EI), m/z (intensidad relativa) 450 (M^{+}., 24), 422 (1), 392 (1), 364 (1), 348 (3), 340 (12), 298 (6), 282 (8), 257 (2), 229 (2), 192 (3), 178 (2), 164 (4), 136 (3), 110 (3), 91 (PhCH_{2}, 100), 82 (17), 65 (7); IR (NUJOL®) 3600-2500 (br, OH), 2923, 2854, 1711, 1619, 1601, 1513, 1463, 1405, 1377, 1300, 1278, 1202, 1119, 1045, 993, 956, 909, 790, 768, 724, 697, 637 cm^{-1}; masa exacta calculada para C_{25}H_{26}N_{2}O_{6} m/e 450,1791, observada m/e 450,1790.

Síntesis Alternativa de (11S,11aS)-10-Aliloxicarbonil-8-benciloxi-11-hidroxi-7-metoxi-2-metiliden-1,2,3,10,11, 11a-hexahidro-5H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiacepin-5-ona (69)

Una solución del alcohol 68 (0,32 g, 0,71 mmol) en CH_{2}Cl/CH_{3}CN (30 mL, 3:1) se trató con cedazos moleculares potenciados 4 \ring{A} (0,2 g) y NMO (126 mg, 1,08 mmol). Después de 15 minutos agitando a temperatura ambiente, se añadió TPAP (12,6 mg, 35,9 \mumol) y se siguió agitando durante 1 hora 20 minutos más, punto en el que la TLC (80% EtOAc/éter de petróleo) reveló la formación de producto junto con algún material inicial no oxidado. La mezcla se trató entonces con una cantidad adicional de NMO (126 mg, 1,08 mmol) y TPAP (12,6 mg, 35,9 \mumol), y se dejó agitando durante 0,5 horas más después de lo cual TLC reveló la finalización de la reacción. La mezcla se evaporó in vacuo sobre sílice y se sometió a cromatografía por desorción súbita (50% EtOAc/éter de petróleo) para proporcionar la carbinolamina protegida 69 como un cristal blanco (153 mg, 48%): [\alpha]^{23}_{D}= +129,8º (c = 1,5, CHCl_{3}); ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,48-7,27 (m, 5H_{arom}), 7,25 (s, 1H_{arom}), 6,74 (br s, 1H_{arom}), 5,65-5,53 (m, 1H, NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 5,56 (d, 1H, J = 9,89 Hz, NCHCHOH), 5,22-5,04 (m, 6H, NCH_{2}C=CH_{2}, NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2} y PhCH_{2}O), 4,64-4,42 (m, 3H, NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2} y OH), 4,28 (d, 1H, J = 15,94 Hz, NCH_{2}C=CH_{2}), 4,09 (d, 1H, J = 15,94 Hz, NCH_{2}C=CH_{2}), 3,92 (s, 3H, OCH_{3}), 3,62 (t, 1H, J = 8,79 Hz, NCHCHOH), 2,90 (dd, 1H, J = 8,97, 16,03 Hz, NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}), 2,67 (d, 1H, J = 16,03 Hz, NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 166,8 (NC=O_{amida}), 156,0 (NC=O_{carbamato}), 150,1 (C_{quat}), 149,0 (C_{cuat}), 141,8 (C_{cuat}), 136,1 (C_{cuat}), 131,8 (NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 128,6, 128,1 y 127,3 (BnC-H_{arom}), 125,6 (C_{cuat}), 118,0 (NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 114,6 (C-H_{arom}), 110,6 (C-H_{arom}), 109,8 (NCH_{2}C=CH_{2}), 85,8 (NCHCHOH), 71,0 (PhCH_{2}O), 66,7 (NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 59,8 (NCHCHOH), 56,2 (OCH_{3}), 50,7 (NCH_{2}C=CH_{2}), 35,0 (NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}); MS (EI), m/z (intensidad relativa) 450 (M^{+}. , 24), 422 (1), 392 (1), 364 (1), 348 (3), 340 (12), 298 (6), 282 (8), 257 (2), 229 (2), 192 (3), 178 (2), 164 (4), 136 (3), 110 (3), 91 (PhCH_{2}, 100), 82 (17), 65 (7); IR (NUJOL®) 3600-2500 (br, OH), 2923, 2854, 1711, 1619, 1601, 1513, 1463, 1405, 1377, 1300, 1278, 1202, 1119, 1045, 993, 956, 909, 790, 768, 724, 697, 637 cm^{-1}; masa exacta calculada para C_{25}H_{26}N_{2}O_{6} m/e 450,1791, observada m/e 450,1790.

(11aS)-8-Benciloxi-7-metoxi-2-metiliden-1,2,3,11a-tetrahidro-5H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiacepin-5-ona (70, SJG-244)

Una cantidad catalítica de tetraquis (trifenilfosfina) paladio (12,0 mg, 10,4 \mumol) se añadió a una solución agitada de carbinolamina Aloc-protegida 69 (0,18 g, 0,40 mmol), trifenilfosfina (5,25 mg, 20 \mumol) y pirrolidina (29 mg, 0,41 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (15 mL). Después de dos horas de agitado a temperatura ambiente bajo una atmósfera de nitrógeno, TLC (98% CHCl_{3}/MeOH) reveló el consumo completo del material inicial. El solvente se evaporó in vacuo y el residuo crudo se purificó mediante cromatografía por desorción súbita (60% EtOAc/éter de petróleo) para proporcionar 70 (SJG-244) como un cristal blanco (116 mg, 83%) que se evaporó repetidamente in vacuo con CHCl_{3} en un intento por proporcionar la forma imina N10-C11: [\alpha]^{22}_{D}= +754,2º (c = 0,54, CHCl_{3}); ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) (principalmente imina, más trazas de la forma carbinol amina) \delta 7,70-7,30 (m, 7H, HC-N y 6H_{arom}), 6,84 (s, 1H_{arom}), 5,25-5,13 (m, 4H, NCH_{2}C=CH_{2} y PhCH_{2}O), 4,42 (br s, 2H, NCH_{2}C=CH_{2}), 3,95 (s, 3H, OCH_{3}), 3,88-3,66 (m, 1H, NCHHC=N), 3,09 (dd, 1H, J 8,98, 16,12 Hz, NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}), 2,94-2,87 (m, 1H, NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 164,7 (NC=O), 162,6 (HC=N), 150,6 (C_{cuat}), 148,1 (C_{cuat}), 141,6 (C_{cuat}), 140,5 (C_{cuat}), 136,1 (C_{cuat}), 132,0, 128,7, 128,6, 128,1 y 127,3 (BnC-H_{arom}), 120,1 (C_{cuat}), 111,5 (C-H_{arom}), 111,2 (C-H_{arom}), 109,4 (NCH_{2}C=CH_{2}), 70,8 (PhCH_{2}O), 56,2 (OCH3), 53,7 (NCHHC=N), 51.3 (NCH_{2}C=CH_{2}), 35.4 (NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}); MS (EI), m/z (intensidad relativa) (forma imina) 348 (M^{+}., 100), 333 (M-CH_{3}, 42), 319 (3), 269 (5), 257 (M-PhCH_{2}, 25), 241 (11), 229 (56), 227 (11), 213 (5), 186 (4), 156 (6), 136 (22), 122 (4), 91 (PhCH_{2}, 85), 82 (5), 65 (22); IR (NUJOL®) 3318 (br, OH de forma carbinol amina), 2923, 2853, 1722, 1668, 1600, 1557, 1504, 1462, 1377, 1261, 1216, 1120, 1003, 892, 789, 722, 695, 623, 542 cm^{-1}; masa exacta calculada para C_{21}H_{20}N_{2}O_{3} m/e 348,1474, observada m/e 348,1469.

Ejemplo 2(c) Síntesis de MMY-SJG (74, UP2064) (Ver Figura 9)

29

(2s)-N-[(2-Aliloxicarbonilainino)-4,5-dimetoxibenzoil]-2-(tert-butildimetilsililoximetil)-4-metilidinepirrolidina (71)

Tert-butóxido de potasio (21,2 mL de una solución 0,5 M en THF, 10,6 mmol) se añadió en forma de gotas a una suspensión de bromuro de metiltrifenilfosfonio (3,78 g, 10,6 mmol) en THF (11 mL) a 0ºC (hielo/acetona) bajo nitrógeno. Después de agitar durante 2 horas a 0ºC, se añadió una solución de cetona 38 (Ejemplo 1(e)) (2,0 g, 4,07 mmol) en THF (7 mL) se añadió en forma de gotas y la mezcla se dejó entibiar a temperatura ambiente. Después de agitar durante 45 minutos más la mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (60 mL) y agua (60 mL). Se separó la capa orgánica, se lavó con salmuera, se secó (MgSO_{4}), filtró y evaporó in vacuo para dar un aceite oscuro. La purificación mediante cromatografía por desorción súbita (20% EtOAc/éter de petróleo) aisló la olefina pura 71 como un aceite transparente (1,71 g, 86%): [\alpha]^{22}_{D}= -44,55 (c = 0,20, CHCl_{3}); ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) (Rotámeros) \delta 8,85 (br s, 1H), 7,86 (s, 1H), 6,82 (s, 1H), 6,03-5,89 (m, 1H), 5,35 (ddd, 1H, T=17,22, 3,11, 1,47 Hz), 5,24 (ddd, 1H, J = 10,44, 2,75, 1,28 Hz), 4,99-4,92 (m, 2H), 4,70-4,57 (m, 3H), 4,23-3,57 (m, 10H), 2,72-2,68 (m, 2H), 0,96-0,85 (m, 9H), 0,09-0,03 (m, 6H); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) (Rotámeros) \delta 168,7, 153,6, 150,9, 143,6, 132,5, 132,2, 118,1, 115,3, 110,6, 107,1, 104,3, 65,7, 63,6, 56,3, 56,0, 33,1, 25,8, 18,1, -5,5 y -5,6; MS (EI), m/z (intensidad relativa) 492 (M^{+}.+2, 7), 491 (M^{+}.+1, 20), 490 (M^{+}., 50), 475 (4), 435 (10), 447 (3), 434 (29), 433 (94), 376 (4), 375 (13), 348 (5), 333 (11), 332 (6), 294 (3), 265 (16), 264 (100), 227 (8), 226 (24), 224 (5), 223 (18), 220 (15), 210 (4), 208 (5), 207 (13), 206 (96), 192 (7), 180 (18), 179 (25), 170 (21), 169 (8), 168 (28), 164 (13), 152 (7), 150 (13), 136 (10), 108 (5), 96 (5), 95 (12), 94 (7), 89 (8), 82 (25), 75 (20), 73 (30), 59 (7), 58 (5), 57 (41), 56 (7), 55 (4); IR (NETO) 3324 (br, NH), 3082, 2953, 2930, 2857, 1732, 1600, 1523, 1490, 1464, 1419, 1397, 1360, 1333, 1287, 1259, 1228, 1203, 1172, 1115, 1039, 1004, 939, 837, 814, 777 666 cm^{-1}.

(2S)-N-[(2-Aliloxicarbonilamino)-4,5-dimetoxibenzoil]-2-(hidroximetil)-4-metilidinepirrolidina (72)

Una solución de TBAF (4,29 mL de una solución 1 M en THF, 4,29 mmol) se añadió al silil éter 71 (1,68 g, 3,43 mmol) en THF (45 mL) a 0ºC (hielo/acetona). La mezcla de reacción se dejó entibiar a temperatura ambiente y después de 1 hora, la TLC (50% EtOAc/Pet-éter 40º-60º) reveló la completa desaparición del material inicial. Se añadió NH_{4}Cl saturado (110 mL) y la mezcla de reacción se extrajo con EtOAc (3 x 50 mL), se lavó con salmuera (100 mL), se secó (MgSO_{4}), filtró y evaporó in vacuo para dar un aceite naranja oscuro. La purificación mediante cromatografía por desorción súbita (99% CHCl_{3}/MeOH) proporcionó el alcohol puro 72 como un sólido blanco (1,15 g, 89%): [\alpha]^{21}_{D}= -13,17º (c = 0,15, CHCl_{3}); ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,59 (br s, 1H), 7,69 (s, 1H), 6,82 (s, 1H), 6,03-5,89 (m, 1H), 5,35 (ddd, 1H, J = 17,22, 3,11, 1,65 Hz), 5,24 (ddd, 1H, J = 10,44, 2,75, 1,28 Hz), 5,02-4,94 (m, 2H), 4,66-4,62 (m, 3H), 4,23-3,57 (m, 11H), 2,77 (dd, 1H, J = 15,94, 8,42 Hz), 2,48 (d, 1H, J = 15,94 Hz); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl) \delta 170,3, 153,8, 151,0, 144,2, 143,1, 132,5, 131,2, 118,1, 115,9, 110,4, 108,1, 104,9, 65,8, 65,1, 59,8, 56,4, 56,0, 54,2, 34,1; MS (EI), m/z (intensidad relativa) 378 (M^{+}.+2, 3), 377 (M^{+}.+1, 14), 376 (M^{+}., 51), 319 (3), 265 (10), 264 (62), 263 (4), 259 (8), 224 (4), 223 (18), 220 (17), 208 (5), 207 (14), 206 (100), 192 (8), 190 (5), 180 (27), 179 (29), 178 (4), 164 (23), 163 (4), 152 (12), 151 (6), 150 (19), 137 (5), 136 (22), 135 (6), 125 (6), 120 (6), 113 (6), 112 (31), 109 (6), 108 (11), 95 (4), 94 (9), 82 (28), 80 (8), 67 (5), 57 (5), 54 (7), 53 (7); IR (NUJOL®) 3341 y 3245 (br, OH y NH), 3115, 2918, 2850, 1727, 1616, 1540, 1464, 1399, 1378, 1351, 1283, 1264, 1205, 1179, 1117, 1055, 1040, 996, 946, 909, 894, 855, 823, 768, 754, 722, 696, 623, 602 cm^{-1}; masa exacta calculada para C_{11}H_{24}N_{2}O_{6} m/e 376,1634, observada m/e; 376,1614.

(11S,11aS)-10-Aliloxicarbonil-7,8-dimetoxi-11-hidroxi-2-metiliden-1,2,3,10,11,11a-hexahidro-5H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiacepin-5-ona (73)

Una solución de DMSO (0,75 mL, 0,82 g, 10,5 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (27 mL) se añadió en forma de gotas durante 38 minutos a una solución de oxalil cloruro (2,64 mL de una solución 2,0 M en CH_{2}Cl_{2}, 5,27 mmol) a -45ºC (N2 líquido/clorobenceno) bajo una atmósfera de nitrógeno. Después de agitar a -45ºC durante 1 hora, una solución del alcohol 72 (1,10 g, 2,93 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (27 mL) se añadió en forma de gotas durante 1 hora a -45ºC. Después de una hora a -45ºC, se trató la mezcla en forma de gotas con una solución de TEA (1,71 mL, 1,24 g, 12,29 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (15 mL) durante 40 minutos a -45ºC. Después de otros 30 minutos, la mezcla de reacción se dejó entibiar a temperatura ambiente y se diluyó con CH_{2}Cl_{2} (50 mL), se lavó con HCl 1 N, H_{2}O (50 mL), salmuera (50 mL) y se secó (MgSO_{4}), filtró y evaporó in vacuo. La TLC (80% EtOAc/éter de petróleo) del material crudo reveló la finalización de la reacción. La purificación mediante cromatografía por desorción súbita (60% EtOAc/éter de petróleo) proporcionó la carbinolamina protegida 73 como un cristal blanco (0,45 g, 41%): [\alpha]^{22}_{D}= +236,51º (c = 0,14, CHCl_{3}); ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,23 (s, 1H), 6,69 (s, 1H), 5,83-5,81 (m, 1H), 5,60-5,58 (m, 1H), 5,34-5,23 (m, 4H), 4,74-4,66 (m, 1H), 4,50-4,40 (m, 1H), 4,30 (d, 1H, J = 15,94 Hz), 4,15 (d, 1H, J = 15,93 Hz), 3,96-3,86 (m, 7H), 3,65 (t, 1H,
J = 8,61 Hz), 2,92 (dd, 1H, 16,21, 9,07 Hz), 2,70 (d, 1H, J = 15,94 Hz); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 166,7, 156,0, 150,8, 148,4, 141,8, 131,7, 128,5, 125,2, 118,1, 112,4, 110,3, 109,8, 85,9, 66,8, 59,6, 56,3, 56,1, 50,7, 35,0; MS (EI), m/z (intensidad relativa) 376 (M^{+}.+2, 6), 375 (Me^{+}.1, 22), 374 (M^{+}., 100), 346 (5), 293 (8), 288 (10), 271 (5), 265 (11), 264 (67), 248 (5), 237 (5), 223 (10), 220 (9), 209 (6), 208 (42), 207 (14), 206 (70), 192 (7), 190 (5), 180 (17), 179 (16), 165 (8), 164 (15), 153 (5), 152 (10), 150 (12), 149 (7), 137 (6), 136 (10), 135 (5), 125 (8), 110 (8), 108 (5), 94 (5), 83 (5), 82 (59), 80 (7), ; IR (CHCl_{3}) 3275 (br, OH), 3075, 2936, 2851, 1706, 1624, 1604, 1516, 1457, 1436, 1403, 1368, 1312, 1301, 1278, 1262, 1218, 1119, 1074, 1045, 940, 916, 893, 867, 851, 666, 637 cm^{-1}; masa exacta calculada para C_{19}H_{22}N_{2}O_{6} m/e 374,1478, observada m/e 374,1687.

(11aS)-7,8-Dimetoxi-2-metiliden-1,2,3,11a-tetrahidro-5H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiacepin-5-ona (74, UP2064, MMY-SJG)

Una cantidad catalítica de tetraquis (trifenilfosfina) paladio (32,4 mg, 28,1 \mumol) se añadió a una solución agitada de carbinolamina Aloc-protegida 73 (0,42 g, 1,12 mmol), trifenilfosfina (14,7 mg, 56,2 \mumol) y pirrolidina (83,9 mg, 1,18 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (55 mL). Después de 2,5 horas de agitado a temperatura ambiente bajo una atmósfera de nitrógeno, TLC (95% CHCl_{3}/MeOH) reveló el consumo completo del material inicial. Se evaporó el solvente in vacuo y el residuo crudo se purificó mediante cromatografía por desorción súbita (CHCl_{3}) para proporcionar la PBD original (74, MMY-SJG, UP2064) como un aceite amarillo que se evaporó repetidamente in vacuo con CHCl_{3} para proporcionar la forma imina N10-C11 (259 mg, 85%): [\alpha]^{22}_{D}= +583,14 (c = 1,42, CHCl_{3}); ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,69 (d, 1H, J = 4,39 Hz), 7,51 (s, 1H), 6,82 (s, 1H), 5,21-5,17 (m, 2H), 4,44-4,23 (m, 2H), 3,96-3,81 (m, 7H), 3,17-3,08 (m, 1H), 2,95 (d, 1H, J = 14,29 Hz); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 164,7, 162,6, 151,5, 147,6, 141,6, 140,8, 119,8, 111,2, 109,4, 109,4, 56,2, 56,1, 53,8, 51,4, 35,5; MS (EI), m/z (intensidad relativa) 273 (M^{+}.+1, 16), 272 (M^{+}., 100), 271 (35), 270 (9), 255 (5), 243 (7), 241 (7), 230 (6), 228 (6), 226 (5), 212 (3), 192 (4), 191 (16), 165 (4), 164 (19), 163 (4), 136 (22), 93 (6), 82 (7), 80 (3), 53 (3); IR (NETO) 3312 (br), 3083, 2936, 2843, 1624, 1603, 1505, 1434, 1380, 1264, 1217, 1180, 1130, 1096, 1069, 1007, 935, 895, 837, 786, 696, 666, 594, 542 cm^{-1}; masa exacta calculada para C_{11}H_{16}N_{2}O_{3} m/e 272,1161, observada m/e 272,1154.

Ejemplo 2(d) Síntesis del Dímero PBD SJG-136 (UP2001) (Ver Figura 10)

30

(2S)-1,1'-[[(Propano-1,3-diil)dioxi]bis[(2-nitro-5-metoxi-1,4-fenilen)carbonil]]bis[2-(tert-butildimetilsililoximetil)-4-metilidenpirrolidina] (75)

Una cantidad catalítica de DMF (2 gotas) se añadió a una solución del dímero ácido 44 (0,66 g, 1,42 mmol) y oxalil cloruro (0,31 mL, 0,45 g, 3,55 mmol) en THF (12 mL). La mezcla de reacción se agitó durante 16 horas bajo nitrógeno, concentrado in vacuo, y se volvió a disolver en THF (10 mL). La solución resultante de cloruro bis-ácido se añadió gota a gota en la amina 58 (0,65 g, 2,86 mmol), H_{2}O (0,84 mL) y TEA (0,83 mL, 0,60 g, 5,93 mmol) en THF (2 mL) a 0ºC (hielo/acetona) bajo nitrógeno. La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante otras 2 horas, en cuyo momento el TLC (EtOAc) reveló el acabado de la reacción. Después de la retirada del THF mediante evaporación in vacuo, el residuo se separó entre H_{2}O (100 mL) y EtOAc (100 mL). La capa acuosa se lavó con EtOAc (3 x 50 mL), y las capas orgánicas combinadas se lavaron con NH_{4}Cl saturado (100 mL), salmuera (100 mL), se secaron (MgSO_{4}), se filtraron y concentraron in vacuo para dar el producto crudo como un aceite naranja oscuro. La purificación mediante cromatografía por desorción súbita (50% EtOAc/éter de petróleo) consiguió la amida pura 75 como un vidrio amarillo pálido (0,93 g, 74%): [\alpha]^{21}_{D} = -51,1º (c = 0,08, CHCl_{3}); ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) (Rotámeros) \delta 7,77 y 7,74 (s x 2, 2H_{arom}), 6,81 y 6,76 (s x 2, 2H_{arom}), 5,09-4,83 (m, 4H, NCH2C=CH2), 4,60 (m, 2H, NCHCH_{2}OTBDMS), 4,35-4,31 (m, 4H, OCH_{2}CH_{2}CH_{2}O), 4,08-3,74 (m, 14H, NCHCH_{2}OTBDMS, NCH_{2}C=CH_{2} y OCH_{3}), 2,72-2,45 (m, 6H, NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2} y OCH_{2}CH_{2}CH_{2}O), 0,91 y 0,79 (s x 2, 18H, SiC(CH_{3})_{3}), 0,09, -0,09, y -0,12 (s x 3, 12H, Si(CH_{3})_{2}); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) (Rotámeros) \delta 166,2 (NC=O), 154,7 y 154,5 (C_{cuat}), 148,4 y 148,2 (C_{cuat}), 144,1 y 143,2 (C_{cuat}), 137,2 (C_{cuat}), 128,2 y 127,4 (C_{cuat}), 110,1 y 108,6 (C-H_{arom}), 109,1 y 108,3 (C-H_{arom}), 107,5 (NCH_{2}C=CH_{2}), 65,7 y 65,5 (OCH_{2}CH_{2}CH_{2}O), 63,9 y 62,6 (NCHCH_{12}TBDMS), 60,2 (NCHCH_{2}OTBDMS), 58,1 y 56,6 (OCH_{3}), 52,8 y 50,5 (NCH_{2}C=CH_{2}), 35,0 y 33,9 (NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}), 30,8 y 28,6 (OCH_{2}CH_{2}CH_{2}O), 25,8 y 25,7 (SiC(CH_{3})_{3}), 18,2 (SiC(CH_{3})_{3}), -5,5 y -5,6 (Si(CH_{3})_{2}); MS (EI), m/z (intensidad relativa) 885 (M^{+}., 7), 828 (M^{-t}Bu, 100), 740 (M-CH_{2}OTBDMS, 20), 603 (3), 479 (26), 391 (27), 385 (25), 301 (7), 365 (10), 310 (14), 226 (8), 222 (13), 170 (21), 168 (61), 82 (39), 75 (92); IR (NUJOL®) 2923, 2853, 2360, 1647, 1587, 1523 (NO_{2}), 1461, 1429, 1371, 1336 (NO_{2}), 1277, 1217, 1114, 1061, 1021, 891, 836 772, 739 cm^{-1}.

(2S)-1,1'-[[(Propano-1,3-diil)dioxi]bis[(2-nitro-5-metoxi-1,4-fenileno)carbonil]]bis[2-(hidroximetil)-4-metilidenopirrolidina] (76)

Se añadió una solución de TBAF (3,98 mL de una solución 1M en THF, 3,98 mmol) al bis-silil éter 75 (1,41 g, 1,59 mmol) en THF (35 mL) a 0ºC (hielo/acetona). La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y después de otros 30 minutos se añadió NH_{4}Cl saturado (120 mL). La solución acuosa se extrajo con EtOAc (3 x 80 mL), se lavó con salmuera (80 mL), se secó (MgSO_{4}), se filtró y evaporó in vacuo para dar un aceite naranja oscuro que se purificó mediante cromatografía por desorción súbita (97% CHCl_{3}/MeOH) para proporcionar el diol puro 76 como un sólido naranja brillante (0,98 g, 94%): [\alpha]^{19}_{D} = -31,9º (c = 0,09, CHCl_{3}); ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) (Rotámeros) \delta 7,75 y 7,71 (s x 2, 2H_{arom}), 6,96 y 6,84 (s x 2, 2H_{arom}), 5,08, 5,02 y 4,88 (br s x 3, 4H, NCH_{2}C=CH_{2}), 4,61-4,50 (m, 2H, NCHCH_{2}OH), 4,35-4,33 (m, 4H, OCH_{2}CH_{2}CH_{2}O), 4,02-3,65 (m, 14H, NCHCH_{2}OH, NCH_{2}C=CH_{2} y OCH,), 2,88-2,43 (m, 6H, NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2} y OCH_{2}CH_{2}CH_{2}O); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) (Rotámeros) \delta 167,9 y 166,9 (NC=O), 154,9 y 154,3 (C_{cuat}), 148,4 y 148,2 (C_{cuat}), 143,3 y 142,6 (C_{cuat}), 137,2 y 137,0 (C_{cuat}), 127,6 y 127,3 (C_{cuat}), 109,1 (C-H_{arom}), 108,4 (NCH_{2}C=CH_{2}), 108,2 (C-H_{arom}), 65,6 y 65,4 (OCH_{2}CH_{2}CH_{2}O), 64,5 y 63,3 (NCHCH_{2}OH), 60,5 y 60,0 (NCHCH_{2}OH), 56,8 y 56,7 (OCH_{3}), 52,9 (NCH_{2}C=CH_{2}), 35,0 y 34,3 (NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}), 29,6 y 28,6 (OCH_{2}CH_{2}CH_{2}O); MS (FAB) (Intensidad Relativa) 657 (M^{+}. + 1, 10), 639 (M-OH, 2), 612 (1), 544 (M-NCH_{2}CCH_{2}CH_{2}CHCH_{2}OH, 4), 539 (1), 449 (16), 433(9), 404 (8), 236 (32), 166 (65), 151 (81), 112 (82), 82 (100); IR (NUJOL®) 3600-3200 (br, OH), 2923, 2853, 2360, 1618, 1582, 1522 (NO_{2}), 1459, 1408, 1375, 1335 (NO2), 1278, 1218, 1061, 908, 810, 757 cm^{-1}.

(2S)-1,1'-[[(Propano-1,3-diil)dioxi]bis[(2-amino-5-metoxi-1,4-fenileno)carbonil]]bis[2-(hidroximetil)-4-metilidenopirrolidina] (77)

Una mezcla del diol 76 (0,98 g, 1,49 mmol) y SnCl_{2}.2H_{2}O (3,36 g, 14,9 mmol) en MeOH (35 mL) se calentó a reflujo y el progreso de la reacción se monitorizó mediante TLC (90% CHCl_{3}/MeOH). Después de 45 minutos, el MeOH se evaporó in vacuo y el residuo resultante se enfrió (hielo), y se trató cuidadosamente con NaHCO_{3} saturado (120 mL). La mezcla se diluyó con EtOAc (120 mL), y después de 16 horas agitándose a temperatura ambiente, el precipitado inorgánico se retiró mediante filtración a través de celita. La capa orgánica se separó, se lavó con salmuera (100 mL), se secó (MgSO_{4}), se filtró y se evaporó in vacuo para dar un sólido marrón. La cromatografía por desorción súbita (95% CHCl_{3}/MeOH) consiguió la bis-amina pura 77 como un sólido naranja (0,54 g, 61%): [\alpha]^{19}_{D} = -31,8º (c = 0,30, CHCl_{3}); ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 6,74 (s, 2H_{arom}), 6,32 (s, 2H_{arom}), 5,00 (br s, 2H, NCH_{2}C=CH_{2}), 4,93 (br s, 2H, NCH_{2}C=CH_{2}), 4,54 (br s, 2H, NCHCH_{2}OH), 4,24-4,14 (m, 4H, OCH_{2}CH_{2}CH_{2}O), 3,98-3,50 (m, 14H, NCHCH_{2}OH, NCH_{2}C=CH_{2} y OCH_{3}), 2,76 (dd, 2H, J = 8,61, 15,91 Hz, NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}), 2,46-2,41 (m, 2H, NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}), 2,33-2,28 (m, 2H, OCH_{2}CH_{2}CH_{2}O); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 171,0 (NC=O), 151,0 (C_{cuat}), 143,5 (C_{cuat}), 141,3 (C_{cuat}), 140,6 (C_{cuat}), 112,4 (C-H_{arom}), 111,9 (C_{cuat}), 107,8 (NCH_{2}C=CH_{2}), 102,4 (C-H_{arom}), 65,2 (OCH_{2}CH_{2}CH_{2}O), 65,0 (NCHCH_{2}OH), 59,8 (NCHCH_{2}OH), 57,1 (OCH_{3}), 53,3 (NCH_{2}C=CH_{2}), 34,4 (NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}), 29,0 (OCH_{2}CH_{2}CH_{2}O); MS (FAB) (Intensidad Relativa) 596 (M^{+}., 13), 484 (M-NCH_{2}CCH_{2}CH_{2}CHCH_{2}OH, 14), 389 (10), 371 (29), 345 (5), 224 (8), 206 (44), 166 (100), 149 (24), 112 (39), 96 (34), 81 (28); IR (NUJOL®) 3600-3000 (br, OH), 3349 (NH_{2}), 2922, 2852, 2363, 1615, 1591 (NH2), 1514, 1464, 1401, 1359, 1263, 1216, 1187, 1169, 1114, 1043, 891, 832, 761 cm^{-1}.

(2S,4R)&(2S,4S)-1,1'-[[(Propano-1,3-diil)dioxi]bis[(2-amino-5-metoxi-1,4-fenileno)carbonil]]bis[2-(hidroxi- metil)-4-metilpirrolidina] (77)

Una solución de hidracina (23 mg, 23 \muL, 0,72 mmol) en MeOH (5 mL) se añadió gota a gota a una solución del diol 76 (95 mg, 0,145 mmol) y Ni Raney (20 mg) en MeOH (15 mL) calentada a reflujo. Después de 1 hora a reflujo, el TLC (90% CHCl_{3}/MeOH) reveló alguna formación de amina. La mezcla de reacción se trató con más Ni Raney (20 mg) e hidracina (23 mg, 23 \muL, 0,72 mmol) en MeOH (5 mL) y se calentó a reflujo durante unos 30 minutos adicionales en cuyo punto el TLC reveló la reacción completa. La mezcla de reacción se trató a continuación con suficiente Ni Raney para descomponer cualquier hidracina restante y se calentó a reflujo durante otras 1,5 horas. Después de enfriarse a temperatura ambiente, la mezcla se filtró a través de un sínter y el filtrado resultante se evaporó in vacuo. El residuo resultante se trató a continuación con CH_{2}Cl_{2} (30 mL), se secó (MgSO_{4}), filtró y evaporó in vacuo para proporcionar la bis-amina (77) como aceite amarillo (54 mg, 63%): ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) (diastereoisómeros) \delta 6,73 (s, 2H_{arom}), 6,32 (s, 2H_{arom}), 4,60-4,30 (m, 2H, NCHCH_{2}OH), 4,19 (t, 4H, J = 5,87 Hz, OCH_{2}CH_{2}CH_{2}O), 3,78-3,50 (m, 14H, NCHCH_{2}OH, NCH_{2}CHCH_{3} y OCH_{3}), 2,40-1,55 (m, 8H, NCH_{2}CHCH_{3}, OCH_{2}CH_{2}CH_{2}O y NCH_{2}CHCH_{3}CH_{2}), 1,00-0, 95 (m, 6H, NCH_{2}CHCH_{3}); MS (EI), m/z (intensidad relativa) 600 (M^{+}., 16), 459 (46), 345 (16), 206 (13), 186 (17), 180 (31), 166 (37), 149 (6), 142 (76), 100 (6), 98 (13), 97 (29), 84 (81), 69 (7), 55 (100).

(2S)-1,1'-[[(Propano-1,3-diil)dioxi]bis[(2-aliloxicarbonilamino-5-metoxi-1,4-fenileno)carbonil]]bis[2-(hidroxi- metil)-4-metilidenpirrolidina] (78)

Se añadió piridina (0,47 mL, 0,46 g, 5,82 mmol) a una solución agitada de la bis-amina 77 (0,857 g, 1,44 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (30 mL) a 0ºC (hielo/acetona). La mezcla fría se trató a continuación gota a gota con una solución de alil cloroformato (0,33 mL, 0,38 g, 3,15 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (10 mL). Después de 2,5 horas agitando a temperatura ambiente, la mezcla se diluyó con CH_{2}Cl_{2} (60 mL), se lavó con HCl 1N (2 x 50 mL), H_{2}O (80 mL), salmuera (80 mL), se secó (MgSO_{4}), filtró y evaporó in vacuo. El residuo crudo se purificó mediante cromatografía por desorción súbita (70-100% EtOAc/éter de petróleo) para conseguir el compuesto de alil cartamato 78 como un vidrio ligeramente naranja (0,548 g, 50%): ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,58 (br s, 2H, NH), 7,56 (s, 2H_{arom}), 6,78 (s, 2H_{arom}), 6,03-5,88 (m, 2H, NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 5,39-5,21 (m, 4H, NCO_{2}CH_{2}CH=CH,), 5,00 (br s, 2H, NCH_{2}C=CH_{2}), 4,93 (br s, 2H, NCH2_{C}-CH_{2}), 4,70-4,57 (m, 4H, NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 4,30-4,25 (m, 4H, OCH_{2}CH_{2}CH_{2}O), 4,17-3,90 (m, 8H, NCHCH_{2}OH y NCH_{2}C-CH_{2}), 3,81-3,54 (m, 8H, NCHCH_{2}OH y OCH_{3}), 2,76 (dd, 2H, J = 8,52, 15,85 Hz, NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}), 2,49-2,44 (m, 2H, NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}), 2,36-2,28 (m, 2H, OCH_{2}CH_{2}CH_{2}O); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 170,3 (NC-O_{amida}), 153,8 (NC-O_{carbamato}), 150,5 (C_{cuat}), 144,8 (C_{cuat}), 143,1 (C_{cuat}) 132,5 (NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 130,7 (C_{cuat}), 118,1 (NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 116,8 (C_{cuat}), 110,9 (C-H_{arom}), 108,1 (NCH_{2}C=CH_{2}), 106,9 (C-H_{arom}), 65,7 (NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 65,4 (OCH_{2}CH_{2}CH_{2}O), 65,1 (NCHCH_{2}OH), 59,8 (NCHCH_{2}OH), 56,5 (OCH_{3}), 53,9 (NCH_{2}C=CH_{2}), 34,2 (NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}), 29,7 y 29,2 (OCH_{2}CH_{2}CH_{2}O); MS (FAB) (intensidad relativa) 765 (M^{+}. +1, 10), 652 (M-NCH_{2}CCH_{2}CH_{2}CHCH_{2}OH, 32), 594 (4), 539 (2), 481 (51), 441 (31), 290 (3), 249 (13), 232 (38), 192 (83), 166 (49), 149 (32), 114 (100).

1,1'-[[(Propano-1,3-diil)dioxo]bis[(11S,1aS)-10-(aliloxicarbonil)-11-hidroxi-7-metoxi-2-metiliden-1,2,3,10,11, 11a-hexahidro-5H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiacepin-5-ona] (79)

Una solución del compuesto bis-alloc 78 (150 mg, 0,196 mmol) en CH_{2}Cl/CH_{3}CN (12 mL, 3:1) se trató con cedazos moleculares potenciados 4 \ring{A} (0,2 g) y NMO (70 mg, 0,598 mmol). Después de 15 minutos agitando a temperatura ambiente, se añadió TPAP (7 mg, 19,9 \mumol) y se siguió agitando durante 2 horas más, punto en el que la TLC (95% CHCl_{3}/MeOH) reveló la formación de producto totalmente ciclado junto con el producto supuestamente semi ciclado 79 y material inicial sin reaccionar. La mezcla se trató entonces con una cantidad adicional de NMO (35 mg, 0,299 mmol) y TPAP (3,5 mg, 9,96 \mumol), y se dejó agitando durante 0,5 horas más después de lo cual TLC reveló la finalización de la reacción. El solvente se evaporó in vacuo y el residuo negro se sometió a cromatografía por desorción súbita (98% CHCl_{3}/MeOH) para proporcionar la carbinolamina protegida pura 79 como un sólido blanco (47 mg, 32%): ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,23 (s, 2H_{arom}), 6,74 (s, 2Ha,), 5,90-5,65 (m, 2H, NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 5,57 (d, 2H, J = 8,24 Hz, NCHCHOH), 5,26-5,07 (m, 8H, NCH_{2}C=CH_{2} y NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 4,67-4,10 (m, 14H, NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}, NCH_{2}C-CH_{2}, OCH_{2}CH_{2}CH_{2}O y OH), 3,89 (S, 6H, OCH_{3}), 3,63 (m, 2H, NCHCHOH), 2,91 (dd, 2H, J = 8,79, 15,76 Hz, NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}), 2,68 (d, 2H, J = 16,10 Hz, NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}), 2,42-2,24 (m, 2H, OCH_{2}CH_{2}CH_{2}O); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 166,7 (NC=O_{amida}), 150,1 (C_{cuat}), 149,0 (C_{cuat}), 141,7 (C_{cuat}), 131,7 (NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 130,6 (C_{cuat}), 128,9 (C_{cuat}), 128,8 (C_{cuat}), 118,3 (NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 114,7 (C-H_{arom}), 110,7 (C-H_{arom}), 109,8 (NCH_{2}C=CH_{2}), 85,9 (NCHCHOH), 66,9 (NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 66,0 (OCH_{2}CH_{2}CH_{2}O), 59,7 (NCHCHOH), 56,1 (OCH_{3}), 50,7 (NCH_{2}C=CH_{2}), 35,0 (NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}), 29,7 y 29,1 (OCH_{2}CH_{2}CH_{2}O); MS (FAB) (intensidad relativa) 743 (M^{+}. -17, 16), 725 (17), 632 (13), 574 (8), 548 (13), 490 (10), 481 (9), 441 (7), 425 (6), 257 (12), 232 (20), 192 (46), 166 (52), 149 (100), 91 (59); IR (NUJOL®) 3234 (br, OH), 2923, 2853, 2361, 1707, 1604, 1515, 1464, 1410, 1377, 1302, 1267, 1205, 1163, 1120, 1045, 999, 955, 768, 722 cm^{-1}.

1,1'-[[(Propano-1,3-diil)dioxi]bis[(11aS)-7-metoxi-2-metiliden-1,2,3,11a-tetrahidro-5H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiacepin-5-ona] (80, SJG-136)

Una cantidad catalítica de tetrakis (trifenilfosfina)paladio (11 mg, 9,52 \mumol) se añadió a una solución agitada de bis-alloc-carbinolamina 79 (139 mg, 0,183 mmol), trifenilfosfina (4,8 mg, 18,3 \mumol) y pirrolidina (27 mg, 0,380 mmol) en CH_{2}Cl_{2}/CH_{3}CN (13 Ml, 10:3) a 0ºC (hielo/acetona) bajo una atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se dejó entibiar a temperatura ambiente y se monitorizó el progreso mediante TLC (95% CHCl_{3}/MeOH). Después de 2 horas 15 minutos la TLC reveló que la reacción se había completado, procediendo a través del supuesto producto medio-imina 261, para dar una mancha de TLC con una brillante fluorescencia bajo UV. El solvente se evaporó in vacuo y el residuo resultante se sometió a cromatografía por desorción súbita (98% CHCl_{3}/MeOH) para dar la molécula objetivo bis-imina 80 (SJG-136) como un cristal naranja pálido (78 mg, 77%) que se evaporó repetidamente in vacuo con CHCl_{3} para proporcionar la forma imina: [\alpha]^{21}_{D} = +357,7º (c = 0,07, CHCl_{3}); Fase Reversa HPLC (C, fase estacionaria, 65% MeOH/H_{2}O fase móvil, 254 nm), Tiempo de retención 6,27 minutos, % Peak area =97,5%; ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) (forma imina) \delta 7,68 (d, 2H, J = 4,4 Hz, HC=N), 7,49 (S, 2H_{arom}), 6,85 (s, 2H_{arom}), 5,20 (s, 2H, NCH_{2}C=CH_{2}), 5,17 (s, 2H, NCH_{2}C=CH_{2}), 4,46-4,19 (m, 4H, OCH_{2}CH_{2}CH_{2}O), 3,92 (S, 6H, OCH_{3}), 3,89-3,68 (m, 6H, NCH_{2}C=CH_{2} y NCHHC=N), 3,12 (dd, 2H, J = 8,61, 16,21 Hz, NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}), 2,68 (d, 2H, J = 16,30 Hz, NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}), 2,45-2,38 (m, 2H, OCH_{2}CH_{2}CH_{2}O); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) (forma imina) \delta 164,7 (NC=O), 162,6 (HC=N), 150,7 (C_{cuat}), 147,9 (C_{cuat}), 141,5 (C_{cuat}), 140,6 (C_{cuat}), 119,8 (C_{cuat}), 111,5 (C-H_{arom}), 110,7 (C-H_{arom}), 109,4 (NCH_{2}C=CH_{2}), 65,4 (OCH_{2}CH_{2}CH_{2}O), 56,1 (OCH_{3}), 53,8 (NCHHC=N), 51,4 (NCH_{2}C=CH_{2}), 35,4 (NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}), 28,8 (OCH_{2}CH_{2}CH_{2}O); MS (FAB) (intensidad relativa) (forma imina) 773 (M^{+}.+ 1 + (Tioglicerol aducto X 2), 3), 665 (M^{+}.+ 1 + Tioglicerol aducto, 7), 557 (M^{+}.+ 1, 9), 464 (3), 279 (12), 257 (5), 201 (5), 185 (43), 166 (6), 149 (12), 93 (100); IR (NUJOL®) 3600-3100 (br, OH de forma carbinolamina), 2923, 2849, 1599, 1511, 1458, 1435, 1391, 1277, 1228, 1054, 1011, 870, 804, 761, 739 cm^{-1}.

Síntesis Alternativa de UP2001, SJG-136 (80) (Ver Figura 11)

UP2001 también se preparó mediante una síntesis alternativa basada en la bis-cetona 52 (ver Ejemplo 11(f)).

1,1'-[[(Propano-1,3-diil)dioxi]bis[2-amino-N-aliloxicarbonil-5-metoxi-1,4-fenileno)carbonil]]-bis[(2S)-2-t-butildimetilsililoximetil-4-metilideno-2,3-dihidropirrol] (206)

Una solución de potasio-t-butóxido en THF seco (0,5 M, 4,00 mL, 2,00 mmol) se añadió a una suspensión de bromuro de metiltrifenilfosfonio (0,716 g, 2,00 mmol) en THF seco (2,00 mL). La suspensión de iluro amarilla resultante se dejó agitar a 0ºC durante 2 horas antes de la adición de una solución de la bis-cetona 52 (0,50 g, 0,50 mmol) en THF (10 mL) a 10ºC. La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y la agitación se continuó durante otra hora. La mezcla de reacción se dividió entre etil acetato (15 mL) y agua (15 mL) y la capa orgánica lavó la sal, cloruro de sodio (20 mL) y se secó sobre sulfato de magnesio. La retirada del solvente en exceso dio un aceite marrón que se sometió a cromatografía por desorción súbita de columna (50% etil acetato, 50% éter de petróleo 40-60º) para conseguir el producto como un vidrio amarillo 206 (250 mg, 51%): [a]^{23,4}_{D} = -32º (c 0,265, CHCl_{3}). ^{1}H NMR (CDCl_{3}): \delta 0,00 (s, 12H), 0,88 (s, 18H), 2,37-2,40 (m, 2H) 2,69-2,75 (m, 4H), 3,80-4,62 (m, 20H), 4,61-4,63 (m, 4H), 4,98 (bs, 4H), 5,30-5,38 (m, 4H), 5,94-6,00 (m, 2H), 6,81 (S, 2H), 7,84 (s, 2H), 8,80 (bs, 2H).

1,1'-[(Propano-1,3-diil)dioxi]bis[2-amino-N-aliloxicarbonil-5-metoxi-1,4-fenileno)carbonil]]-bis[(2S)-2-hidroximetil-4-metilideno-2,3-dihidropirrol] (78)

Una porción alícuota del complejo fluoruro de hidrógeno/piridina (0,8 mL, 70% HF, 30% piridina) se añadió a una solución del bis-silil éter 206 (285 mg, 0,287 mmol) en THF (10 mL) a 0ºC bajo una atmósfera de nitrógeno. Se continuó agitando a 0ºC durante 30 minutos y la mezcla de reacción se dejó a continuación que subiera a temperatura ambiente durante un periodo de 1 hora. La mezcla de reacción se neutralizó con bicarbonato de sodio y se extrajo con diclorometano (3 x 30 mL). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera y se secó sobre sulfato de magnesio. La retirada del solvente en exceso bajo una presión reducida consiguió el producto 78 como una goma amarilla (218 mg).

1,1'[[(Propano-1,3-diil)dioxi]bis(11S,11aS)-10-(aliloxicarbonil)-11-hidroxi-7-metoxi-2-metilideno-1,2,3,10,11, 11a-hexahidro-5H-pirrolo[2,1-c][1,4-benzodiacepin-5-ona] (79)

Una solución de dimetil sulfóxido (0,55 mL, 7,75 mmol) en diclorometano seco (10 mL) se añadió gota a gota, durante un periodo de 15 minutos, a una solución agitada de oxalil cloruro (0,32 mL, 3,67 mmol) en diclorometano (10 mL) a -45ºC bajo una atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se dejó agitar durante 35 minutos a -45ºC seguido por la adición del diol 78 (1,01 g, 1,32 mmol) en diclorometano (10 mL), a la misma temperatura, durante 15 minutos. Después de otros 45 minutos, se añadió una solución de trietilamina (1,50 mL, 10,76 mmol) en diclorometano (10 mL) durante un periodo de 15 minutos. La mezcla de reacción se dejó agitar a -45ºC durante 30 minutos antes de dejar que se calentara a temperatura ambiente durante 45 minutos. La mezcla de reacción se diluyó con agua y las fases se dejaron separar. La fase orgánica se lavó con HCl 1M (3 x 50 mL), sal, cloruro de sodio (50 mL) y se secó sobre sulfato de magnesio. La retirada del solvente en exceso produjo el producto crudo, que se purificó mediante cromatografía por desorción súbita de columna (1,5% metanol, 98,5% cloroformo) para conseguir el producto 79 (0,785 g, 77%).

1,1'[[(propano-1,3-diil)dioxi]bis[(11aS)-7-metoxi-2-metilideno-1,2,3,11a-tetrahidro-5H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazein-5-ona] (80, SJG-136)

Una cantidad catalítica de tetraquis (trifenilfosfina) paladio (21 mg, 0,018 mmol) se añadió a una solución agitada de la bis-alloc-carbinolamina 79 (250 mg, 0,33 mmol), trifenilfosfina (10 mg, 0,033 mmol) y pirrolidina (0,05 mL, 0,66 mmol) en CH_{2}Cl_{2} seco (30 mL) a 0ºC (hielo/acetona) bajo una atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se dejó agitar durante 2 horas antes de calentarse a temperatura ambiente durante 1 hora. El solvente se evaporó bajo una presión reducida y el residuo resultante se sometió a cromatografía por desorción súbita (98% CHCl_{3}/MeOH) para dar la molécula objetivo bis-imina 80 (SJG-136).

Ejemplo 2(e) Síntesis de 1,1'[[(rentano-1,5-diil)dioxilbis[(11aS)-7-metoxi-2-metilideno-1,2,3,11a-tetrahidro-5H-pirrolo[2,1-c][1, 4]benzodiacepin-5-ona] (218) (Ver las figuras 12a/b)

31

Preparación del Núcleo de Dímero Nitro 1',5'-Bis[2-metoxi-4-(metoxicarbonyl)fenoxi]pentano (208)

Se añadió dietil acidodicarboxilato neto (19,02 mL, 21,04 g, 120,8 mmol) gota a gota durante 30 minutos a una solución agitada de metil vanillato (206) (20 g, 109,8 mmol) y trifenilfosfina (43,2 g, 164,7 mmol) en THF anhidro (400 mL) y la mezcla de reacción se dejó agitar a 0ºC durante 1h. La mezcla de reacción fría se trató gota a gota durante 20 minutos con una solución de 1,5-pentanodiol (207) (3,83 mL, 4,03 g, 53,0 mmol) en THF (4 mL). La mezcla de reacción se dejó agitar de un día al otro a temperatura ambiente y el producto precipitado (208) se recogió mediante filtración en vacío. La disolución del filtrado con metanol precipitó más producto (208). El precipitado combinado (12,3 g, 52% basado en pentanodiol) se uso en la siguiente etapa son más purificación: ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,65 (dd, 2H, J = 2,01, 8,42 Hz), 7,54 (d, 2H, J = 2,01 Hz), 6,87 (d, 2H, J = 8,42 Hz), 4,10 (t, 4H, J = 6,59 Hz), 3,90 (s, 6H), 3,89 (s, 6H), 2,10-1,90 (m, 4H), 1,85-1,26 (m, 2H).

1',5'-Bis[2-metoxi-4-(metoxicarbonil)-5-nitrofenoxi] pentano (209)

Se añadió trihidrato nitrato de cobre (II) sólido (16,79 g, 69,5 mmol) lentamente a una solución agitada del bis-éster (208) (12 g, 27,8 mmol) en anhídrido acético (73 mL) a 0ºC. La mezcla de reacción se dejó agitar durante 1 hora a 0ºC, se retiró el baño de hielo y la mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente una temperatura exotérmica suave, c. 40ºC, acompañada por la evolución del NO_{2} producida en esta etapa. Después de que hubo bajado la temperatura exotérmica, se continuó agitando a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla de reacción se vertió en agua helada y la suspensión acuosa se dejó agitar durante 1 h. El precipitado amarillo resultante se recogió mediante filtración en vacío y se secó al aire para conseguir el compuesto bis nitro deseado (209) (14,23 g, 98%): ^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3} + DMSO) \delta 7,45 (s, 2H), 7,09 (s, 2H), 4,14 (t, 4H, J = 6,31 Hz), 3,97 (s, 6H), 3,90 (s, 6H), 2,20-1,94 (m, 4H), 1,75-1,70 (m, 2H).

1',5'-Bis(4-carboxi-2-metoxi-5-nitrofenoxi)pentano (210)

Una suspensión del éster 209 (9,0 g, 17,2 mmol) en hidróxido de sodio acuoso (1 M, 180 mL) y THF (180 mL) se dejó agitar hasta que se obtuvo una solución homogénea (2 días). El THF se evaporó bajo una presión reducida y la suspensión acuosa resultante se filtró para retirar cualquier material inicial sin reaccionar. El filtrado se ajustó a un pH de 1, el producto precipitado se recogió mediante filtración y se secó al aire para conseguir el bis-ácido deseado (210) (8,88 g). Se obtuvo un rendimiento más alto que el teórico debido a la inclusión de la sal de sodio del ácido. La sal se puede retirar disolviendo el volumen del material en THF y retirando el material insoluble mediante filtración: ^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,39 (S, 2H), 7,16 (s, 2H), 4,12 (t, 4H, J = 6,59 Hz), 3,95 (s, 6H), 2,00-1,85 (m, 4H), 1,75-1,67 (m, 2H).

Montaje de la Bis Cetona Intermedia 1,1'-[[(Pentano-1,5-diil)dioxi]bis[2-nitro-5-metoxi-1,4-fenileno)carbonil]]-bis[(2S,4R)-2-t-butildimetilsililoximetil-4-hidroxipirrolidina] (211)

Una cantidad catalítica de DMF (5 gotas) se añadió a una suspensión agitada del ácido 210 (5,39 g, 10,9 mmol) y oxalil cloruro (3,47 g, 2,38 mL, 27,3 mmol) en THF anhidro (50 mL). Se observó una efervescencia inicial seguida por la formación de una solución homogénea, sin embargo después de agitar de un día al día se formó una suspensión del cloruro ácido formado de nuevo. El exceso de THF y oxalil cloruro se retiró mediante evaporación giratoria bajo una presión reducida y el cloruro ácido se resuspendió en THF fresco (49 mL). La solución de cloruro ácido se añadió gota a gota a una solución del (2S,4R)-2-t-butildimetilsililoximetil-4-hidroxipirrolidina (2) (6,3 g, 27,3 mmol), trietilamina (4,42 g, 6,09 mL, 43,7 mmol) y agua (1,47 mL) en THF (33 mL) a 0ºC bajo una atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se continuó la agitación durante 3 h. El exceso de THF se retiró mediante evaporación giratoria bajo una presión reducida y el residuo resultante se separó entre agua (300 mL) y etil acetato (300 mL). Las capas se dejaron separar y la capa acuosa se extrajo con etil acetato (3 x 150 mL). Las capas orgánicas combinadas se lavaron a continuación con cloruro de amonio (150 mL), bicarbonato de sodio saturado (150 mL), salmuera (150 mL) y se secó sobre sulfato de magnesio. La filtración seguida por evaporación giratoria bajo una presión reducida consiguió el producto crudo como un aceite oscuro. El producto crudo se sometió a cromatografía por desorción súbita de columna (3% metanol, 97% cloroformo) y la retirada del exceso de eluyente aislado (211) (3,70 g, 37% producción): ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,65 (s, 2H), 6,77 (s, 2H), 4,52 (bs, 2H), 4,40 (bs, 2H), 4,17-4,10 (m, 6H), 3,92 (s, 6H), 3,77 (d, 2H, J = 10,26 Hz), 3,32 (td, 2H, J = 4,40, 11,35 Hz), 3,08 (d, 2H, J = 11,35 Hz), 2,37-2,27 (m, 2H), 2,10-2,00 (m, 6H), 1,75-1,60 (m, 2H), 0,91 (s, 18H), 0,10 (s, 12H).

1,1'-[[(Pentano-1,5-diil)dioxi]bis[2-amino-5-metoxi-1,4-fenileno)carbonil]]-bis[(2S,4R)-2-t-butildimetilsililoximetil-4-hidroxipirrolidina] (212)

Una solución metanólica de hidrato de hidracina (1,25 mL, 1,29 g, 40,2 mmol de hidracina, 20 mL de metanol) se añadió gota a gota a una solución del compuesto bis-nitro 211 (3,6 g, 3,91 mmol) en metanol (68 mL) a reflujo suave sobre níquel Raney (510 mg de lodo grueso). Después de 5 minutos a reflujo, el TLC (10% MeOH, 90% cloroformo) reveló el consumo incompleto de material inicial. La mezcla de reacción se trató con níquel Raney adicional (c 510 mg) e hidracina (1,25 mL) en metanol (20 mL) resultando en el consumo completo de material inicial. El exceso de níquel Raney se añadió a la mezcla de reacción para descomponer el hidrato de hidracina sin reaccionar y la mezcla de reacción se dejó enfriar a continuación. La mezcla de reacción se filtró a través de celita para retirar el exceso de níquel Raney y la almohadilla de filtro se lavó con metanol adicional (¡Precaución! El níquel Raney es pirofórico, no dejar que la almohadilla del filtro se seco, use HCl concentrado para destruir el níquel). El filtrado combinado se evaporó mediante evaporación giratoria bajo una presión reducida y el residuo se redisolvió en diclorometano. La solución de diclorometano se secó sobre sulfato de magnesio (para retirar el agua asociada con la hidracina), se filtró y se evaporó para conseguir el producto (212) como una espuma (3,37 g, 91%): ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 6,69 (s, 2H), 6,24 (s, 2H), 4,40-3,40 (m, 28H), 2,40-1,60 (m, 10H), 0,88 (s, 18H), 0,03 (s, 12H).

1,1'-[[(Pentano-1,5-diil)dioxi]bis[2-amino-N-aliloxicarbonil-5-metoxi-1,4-fenileno)carbonil]]-bis[(2S,4R)-2-t-butildimetilsililoximetil-4-hidroxipirrolidina] (213)

Una solución de alil cloroformato (0,806 mL, 0,916 g, 7,6 mmol) en diclorometano seco (63 mL) se añadió gota a gota, a una solución de la bis-amina 212 (3,27 g, 3,8 mmol) y piridina (1,26 g, 1,29 mL, 15,9 mmol) en diclorometano (128 mL) a 0ºC bajo una atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 16 h. En cuyo momento el TLC (10% MeOH, 90% cloroformo) reveló que la reacción estaba completa. La mezcla de reacción se diluyó con diclorometano (40 mL) y se lavó con sulfato de cobre II saturado (2 x 140 mL), agua (120 mL) y cloruro de sodio saturado (120 mL). La fase orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se evaporó bajo una presión reducida para conseguir 213 como una espuma (3,60 g, 92%): ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,87 (bs, 2H), 7,66 (s, 2H), 6,77 (s, 2H), 6,05-5,80 (m, 2H), 5,40-5,15 (m, 4H), 4,70-4,50 (m, 6H), 4,38 (bs, 2H), 4,20-4,00 (m, 4H), 3,78 (s, 6H), 3,70-3,40 (m, 8H), 2,40-2,20 (m, 2H), 2,10-1,80 (m, 6H), 1,75-1,55 (m, 2H), 0,89 (s, 18H), 0,04 (s, 12H).

1,1'-[[(Pentano-1,5-diil)dioxi]bis[2-amino-N-aliloxicarbonil-5-metoxi-1,4-fenileno)carbonil]]-bis[(2s)-2-t-butildimetilsililoximetil-4-oxo-pirrolidina] (214)

Una solución de dimetil sulfóxido (1,47 mL, 1,62 g, 20,7 mmol) en diclorometano seco (32 mL) se añadió en forma de gotas durante 45 minutos a una solución agitada de oxalil cloruro (5,18 mL de una solución 2 M en diclorometano, 10,35 mmol) a -60ºC bajo una atmósfera de nitrógeno. Después de agitar a -50ºC durante 30 minutos, se añadió una solución del bis-alcohol 213 (3,55 g, 3,45 mmol) en diclorometano (53 mL) en forma de gotas durante un período de 50 minutos. La mezcla de reacción se agitó a -60ºC durante 30 minutos antes de la adición en forma de gotas de una solución de trietilamina (4,75 g, 6,54 mL, 46,9 mmol) en diclorometano (27 mL). Se continuó agitando a -60ºC durante 45 minutos y luego se dejó entibiar a 0ºC. La mezcla de reacción se diluyó con diclorometano (20 mL), se lavó con HCl 1 M frío (2 x 100 mL), cloruro de sodio saturado (100 mL) y se secó sobre sulfato de magnesio. La extracción del exceso de solvente proporcionó la biscetona cruda que se purificó mediante cromatografía por desorción súbita de columna (50% etil acetato, 50% éter de petróleo 40-60º) para lograr la bis-cetona pura (214) como una espuma amarillo pálido (2,54 g, 72%): ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,69 (bs, 2H), 7,78 (s, 2H), 6,75 (s, 2H), 6,05-5,80 (m, 2H), 5,40-5,20 (m, 4H), 4,65-4,60 (m, 4H), 4,20-3,60 (m, 20H), 2,74 (dd, 2H, J = 9,25, 18,1 Hz), 2,51 (d, 2H, J = 17,4 Hz), 2,00-1,90 (m, 4H), 1,75-1,65 (m, 2H), 0,87 (s, 18H), 0,05 (s, 12H).

Elaboración de la bis-cetona y Preparación de la Molécula Objetivo 1,1'-[[(Pentano-1,5-diil)dioxi]bis[2-amino-N-aliloxicarbonil-5-metoxi-1,4-fenilen)carbonil]]-bis[(25)-2-t-butildimetilsililoximetil-4-metiliden-2,3-dihidropirrola] (215)

Una solución de butóxido-t de potasio en THF seco (0,5 M, 25,2 mL, 12,6 mmol) se añadió en forma de gotas a una suspensión de bromuro de metilfenilfosfonio (4,50 g, 12,6 mmol) en THF seco (15 mL). La suspensión de iluro amarillo resultante se dejó agitar a 0ºC durante 2 horas antes de la adición de una solución de la bis-cetona 214 (2,48 g, 2,42 mmol) en THF (10 mL) a 10ºC. La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y la agitación continuó durante otra hora. La mezcla de reacción se dividió entre etil acetato (100 mL) y agua (100 mL) y la capa orgánica se lavó con cloruro de sodio saturado (200 mL) y se secó sobre sulfato de magnesio. La retirada del solvente en exceso dio un aceite marrón que se sometió a cromatografía por desorción súbita de columna (50% etil acetato, 50% éter de petróleo 40-60º) para conseguir el producto (215) como un vidrio amarillo (865 mg, 35%): ^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,90 (bs, 2H), 7,83 (s, 2H), 6,82 (s, 2H), 6,05-5,90 (m, 2H), 5,40-5,20 (m, 4H), 4,99 (bs, 2H), 4,91 (bs, 2H), 4,65-4,60 (m, 4H), 4,20-3,60 (m, 20H), 2,70 (bs, 4H), 2,00-1,90 (m, 4H), 1,75-1,63 (m, 2H), 0,88 (s, 18H), 0,03 (s, 12H).

1,1'-[[(Pentano-1,5-diil)dioxilbis[2-amino-N-aliloxiCarbonil-5-metoxi-1,4-fenileno)carbonil]]-bis[(2S)-2-hidroximetil-4-metilideno-2,3-dihidropirrola] (216)

Una solución de TBAF (3,02 mL de una solución 1 M en THF, 3,02 mmol) se añadió al éter bis-silil (215) (1,23 g, 1,21 mmol) en THF (30 mL) a 0ºC (hielo/acetona). La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó de un día al otro, al día siguiente el TLC (50:50 EtOAc/éter de petróleo 40º-60º) reveló la completa desaparición de material inicial. Se añadió NH_{4}Cl saturado (150 mL) y la mezcla de reacción se extrajo con EtOAc (3 x 60 mL), se lavó con cloruro de sodio saturado (150 mL), se secó (MgSO_{4}), se filtró y se evaporó in vacuo para dar un aceite amarillo. La purificación mediante cromatografía por desorción súbita (97% CHCl_{3}/3% MeOH) proporcionó el alcohol puro (216) (916 mg, 96%): ^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,61 (bs, 2H), 7,58 (s, 2H), 6,79 (s, 2H), 6,05-5,90 (m, 2H), 5,40-5,20 (m, 4H), 5,01 (bs, 2H), 4,93 (bs, 2H), 4,65-4,60 (m, 4H), 4,20-3,60 (m, 20H), 2,76 (dd, 2H, , J = 8,42, 15,74 Hz), 2,47 (d, 2H, J = 15,93 Hz), 2,00-1,90 (m, 4H), 1,80-1,63 (m, 2H).

1,1'[[(Pentano-1,5-diil)dioxi]bis(11S,11aS)-10-(aliloxicarbonil)-11-hidroxi-7-metoxi-2-metilideno-1,2,3,10,11, 11a-hexahidro-5H-pirrolo[2,1-c][1,4-benzodiacepin-5-ona] (217)

Una solución de dimetil sulfóxido (0,57 mL, 0,63 g, 8,07 mmol) en diclorometano seco (17 mL) se añadió gota a gota, durante un periodo de 40 minutos, a una solución agitada de oxalil cloruro (2,02 mL, de una solución 2 M, 4,04 mmol) a -45ºC bajo una atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se dejó agitar durante 40 minutos a -45ºC seguida por la adición del diol 216 (0,89 g, 1,12 mmol) en diclorometano (17 mL), a la misma temperatura, durante 15 minutos. Después de otros 60 minutos, una solución de trietilamina (1,31 mL, 9,42 mmol) en diclorometano (9 mL) se añadió durante un periodo de 40 minutos. La mezcla de reacción se dejó agitar a -45ºC durante 40 minutos antes de dejar que se calentara a temperatura ambiente durante 45 minutos. La mezcla de reacción se diluyó con agua y las fases se dejaron separar. La fase orgánica se lavó con HCl 1 M (2 x 40 mL), agua (40 mL), cloruro de sodio saturado (40 mL) y se secó sobre sulfato de magnesio. La retirada del exceso de solvente produjo el producto crudo, que se purificó mediante cromatografía por desorción súbita de columna (1% metanol, 99% cloroformo) para conseguir el producto 217 (0,175 g, 20%): ^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,22 (s, 2H), 6,65 (s, 2H), 5,82-5,70 (m, 2H), 5,58 (d, 2H, J = 9,70 Hz), 5,25-5,00 (m, 8H), 5,75-4,35 (m, 4H), 4,30 (d, 2H, J = 16,10 Hz), 4,15 (d, 2H, J = 17,03 Hz), 4,01 (t, 4H, J = 6,32 Hz), 3,90 (s, 6H), 3,64 (t, 2H, J = 8,70 Hz), 3,00-2,85 (m, 2H), 2,71 (d, 2H, J = 16,29 Hz), 2,00-1,85 (m, 4H), 1,70-1,60 (m, 2H).

1,1'[[(pentano-1,5-diil)dioxi]bis[(11aS)-7-metoxi-2-metilideno-1,2,3,11a-tetrahidro-5H-pirrolo[2,1-c][1,4] benzodiacepin-5-ona] (218)

Una cantidad catalítica de tetraquis (trifenilfosfina) paladio (13 mg, 11,2 mmol) se añadió a una solución agitada de la bis-alloc-carbinolamina (217) (170 mg, 0,22 mmol), trifenilfosfina (5,7 mg, 21,6 mmol) y pirrolidina (31 mg, 37,3 mL, 0,45 mmol) en DCM (13 mL) a 0ºC (hielo/acetona) bajo una atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y el progreso de la reacción se monitorizó mediante TLC (95% CHCl_{3}/MeOH). Después de 2 horas, el TLC reveló que la reacción se completó para dar una mota, que se iluminaba de manera fluorescente y brillante bajo luz UV. El solvente se evaporó bajo una presión reducida y el residuo resultante se sometió a cromatografía por desorción súbita (99% a 98 CHCl_{3}/MeOH) para dar la molécula objetivo bis-imina como un vidrio amarillo pálido (84,5 mg, 75%) que se evaporó repetidamente in vacuo con CHCl_{3} para proporcionar la forma imina: ^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,68 (d, 2H, J = 4,39 Hz), 7,49 (s, 2H), 6,80 (s, 2H), 5,19 (bs, 2H), 5,16 (bs, 2H), 4,28 (bs, 4H), 4,15-4,00 (m, 4H), 3,92 (s, 6H), 3,90-3,80 (m, 2H), 3,12 (dd, 2H, , J = 8,97, 15,93 Hz), 2,95 (d, 2H, J = 15,93 Hz), 2,00-1,85 (m, 4H), 1,72-1,67 (m, 2H).

32

(2S)-N-[4-benciloxi-5-metoxi-2-(2',2',2'-tricloroetoxi)carbonil amino]-2-(tert-butildimetilsililoximetil)-4-oxopirrolidina (169)

Una solución de DMS (7,80 g, 99,8 mmol) en diclorometano seco (18 mL) se añadió gota a gota, durante 30 minutos, a una solución de oxalil cloruro (6,34 g, 49,9 mmol) en diclorometano seco (25 mL) a -45ºC bajo una atmósfera de nitrógeno y la mezcla de reacción se dejó agitar durante otros 15 minutos. Una solución del substrato 168 (22,01 g, 33,3 mmol) en diclorometano (50 mL) se añadió gota a gota durante 40 minutos a la mezcla de reacción, que a continuación se dejó agitar durante 45 minutos a -45ºC. Finalmente, se añadió trietilamina neta (23,52 g, 232,9 mmol) gota a gota durante 30 minutos y la mezcla de reacción se dejó agitar a -45ºC durante 15 minutos. La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente, se diluyó con agua (150 mL) y la fase orgánica se lavó con HCl diluido (1N, 100 mL), agua (100 mL) y salmuera (100 mL). La fase orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró in vacuo para conseguir el producto crudo que se sometió a cromatografía de columna (etil acetato/éter de petróleo 40-60, 50:50). La retirada del exceso de eluyente consiguió el producto (20,15 g, 92% rendimiento). ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,88 (bs, 1H); 7,49-7,28 (m, 5H); 6,80 (s, 1H); 5,22 (d, J = 12,1 Hz, 1H); 5,17 (d, J = 12,1 Hz, 1H); 4,80 (bs, 2H); 4,10-3,60 (m, 8H); 2,75 (dd, J 18,0, 9,5 Hz, 1H); 2,52 (d, J = 18,0 Hz, 1H); 0,87 (s, 9H); 0,06 (s, 3H); 0,05 (s, 3H). ^{13}C NMR (67,8 MHz) \delta 208,7, 168,8, 151,8, 150,6, 144,7, 136,0, 128,5, 128,1, 127,7, 110,9, 106,4, 95,2, 74,4, 70,7, 66,0, 56,8, 56,4, 39,4, 25,8, 18,0, -5,7.

(2S)-N-[4-benciloxi-5-metoxi-2-(2',2',2'-tricloroetoxi) carbonil amino]-2-(hidroximetil)-4-oxopirrolidina (170)

Se añadieron ácido acético glacial (60 mL) y agua (20 mL) a una solución de cetona 169 (9,44 g, 14,3 mmol) en THF (20 mL) y la mezcla de reacción se dejó agitar durante 3 horas (reacción completa mediante TLC). La mezcla de reacción se diluyó con diclorometano (200 mL) y se neutralizó en forma de gotas con bicarbonato de sodio saturado (1,5 L) en un matraz de 5 L (efervescencia!). Se permitió que las fases se separaran y la capa acuosa se extrajo con diclorometano (2 x 100 mL). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera y se secaron sobre sulfato de magnesio. La extracción del exceso de solvente proporcionó el producto crudo que se sometió a cromatografía de columna sobre sílice (etil acetato/éter de petróleo 40-60, 50:50) para dar el producto puro (6,44 g, 83%), ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,77 (bs, 1H); 7,57 (s, 1H); 7,46-7,28 (m, 5H); 6,83 (s, 1H), 5,13 (s, 2H); 4,85-4,70 (m, 3H); 4,07-3,60 (m, 7H); 2,77 (dd, J = 18,5, 9,5 Hz, 1H); 2,54 (d, J = 18,5 Hz, 1H), ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 209,0, 169,4, 152,3, 150,6, 145,5, 136,0, 130,0, 128,6, 128,3, 127,6, 110,9, 107,4, 95,2, 74,5, 70,8, 64,4, 60,4, 56,6, 55,9, 39,5.

(11s,11aS)-4-benciloxi-11-hidroxi-5-metoxi-4-oxo-10-(2',2',2'-tricloroetoxi)carbonil-amino 1,10,11,11a-tetrahidro-5H-pirrolo-[2,1-c][1,4]benzodiacepin-5-ona (171)

Una solución de DMSO (4,45 g, 4,04 mL, 56,9 mmol) en diclorometano seco (25 mL) se añadió en forma de gotas, durante 5 minutos, a una solución de oxalil cloruro (3,58 g, 49,9 mmol) en diclorometano seco (14 mL) a -60ºC bajo una atmósfera de nitrógeno y la mezcla de reacción se dejó agitar durante 15 minutos más. Una solución del sustrato 170 (10,93 g, 20,0 mmol) en diclorometano (25 mL) se añadió en forma de gotas durante 30 minutos a la mezcla de reacción, que se dejó agitar entonces durante 30 minutos a -60ºC. Finalmente, trietilamina pura (11,15 g, 232,9 mmol) se añadió en forma de gotas durante 30 minutos y la mezcla de reacción se agitó a -60ºC durante 15 minutos. La mezcla de reacción se dejó entibiar a temperatura ambiente, se diluyó con agua (150 mL) y la fase orgánica se lavó con HCl diluido (1 N, 100 mL), agua (100 mL) y salmuera (100 mL). La fase orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y concentró in vacuo para proporcionar el producto crudo que se sometió a cromatografía de columna (etil acetato/éter de petróleo 40-60, 50:50). La extracción del exceso de eluyente proporcionó el producto 171 (9,66 g, 89% rendimiento), ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,45-7,33 (m, 5H); 7,27 (s, 1H); 6,95 (s, 1H); 5,76 (d, J = 9,9 Hz, 1H); 5,52-5,00 (m, 3H), 4,33 (d, J = 6,8 Hz, 1H); 4,30 (d, J = 19,2 Hz, 1H); 4,00-3,70 (m, 5H); 2,98 (dd, J = 20,0, 10,4 Hz, 1H); 2,94 (d, J = 20,0 Hz, 1H), ^{13}C NMR (67,8 MHz) \delta 207,7, 167,5, 154,5, 152,6, 150,8, 149,6, 135,8, 128,9-127,3, 124,0, 114,5, 110,8, 95,0, 86,6, 75,0, 71,1, 56,8, 56,2, 52,6, 40,2.

(11aS)-4-benciloxi-5-metoxi-4-oxo-1,10,11,11a-tetrahidro-5H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiacepin-5-ona (172)

Se añadió el par cadmio/plomo (1,15 g) a una solución de cetona ciclada (1 g, 1,84 mmol) en THF (5 mL) y acetato de amonio acuoso (1 N, 15 mL). La mezcla de reacción se dejó agitar durante 90 minutos y luego se filtró a través de celita. La almohadilla de celita se lavó con etil acetato (2 x 25 mL) y se separó la capa orgánica. La capa orgánica se lavó con salmuera (50 mL) y se secó sobre sulfato de magnesio. La extracción del exceso de solvente seguida por la cromatografía de columna proporcionó la pirrolobenzodiacepina 172 (0,324 g, 0,93 mmol), ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,75 (d, J = 4,4 Hz, 1H); 7,51 (s, 1H); 7,46-7,27 (m, 5H); 5,23 (d, J = 12,3 Hz, 1H); 5,17 (d, J = 12,3 Hz, 1H), 4,24-4,40 (m, 3H), 3,96 (s, 3H), 3,12 (dd, J = 19,6, 8,8 Hz, 1H); 2,99 (dd, J = 5,0 Hz, 1H), ^{13}C NMR (67,8 MHz) \delta 206,7, 165,5, 161,4, 151,1, 148,5, 140 ,5, 136,0, 128,7-127,1, 118,9, 111,7, 111,3, 70,9, 56,4, 53,4, 51,0, 40,0.

Ejemplo 2(g) Síntesis de (11aS)-8-Benciloxi-7-metoxi-2-(4-metoxibenciliden-1,2,3,11a,-tetrahidro-5H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiacepin-5-ona (185) (Ver Figura 14)

\vskip1.000000\baselineskip

33

\vskip1.000000\baselineskip

(2S)-N-[(2-aliloxicarbanilamino)-4-benciloxi-5-metoxi]-2-(tert butildimetilsililoximetil)-4-metilidenpirrolidina (182)

El reactivo de Wittig, bromuro de 4-metoxibencilfosfonio (3,686 g, 0,88 mmol) se añadió en forma de porciones a una suspensión de hidruro de sodio (352 mg de una suspensión al 60%, 8,80 mmol) en tolueno anhidro (25 mL) bajo una atmósfera de nitrógeno a 0ºC. La mezcla se dejó entibiar a temperatura ambiente y luego se calentó a reflujo durante 30 minutos. El color de la mezcla de reacción se oscureció progresivamente desde el amarillo hasta el naranja. En esta etapa se añadió una solución de cetona (6 - ver Ejemplo 1a) (0,5 g, 0,88 mmol) en tolueno seco (25 mL) en forma de gotas a la mezcla de reacción a reflujo. Después de 10 minutos TLC (50% etil acetato, 50% éter de petróleo 40-60º) reveló el consumo completo de la cetona. El exceso de tolueno se extrajo mediante evaporación rotativa bajo presión reducida para producir un residuo marrón, que se separó entre etil acetato (100 mL) y carbonato de hidrógeno de sodio saturado (100 mL). La capa orgánica se lavó con salmuera (100 mL) y se secó sobre sulfato de magnesio. La extracción del exceso de solvente mediante evaporación rotativa bajo presión reducida da un aceite oscuro, que se sometió a cromatografía por desorción súbita sobre gel de sílice (20% etil acetato, 70% éter de petróleo 40-60º). La extracción del exceso de eluyente proporcionó el producto (182) como un aceite que se solidificó en reposo (420 mg, 0,62 mmol, 71%). [\alpha]^{21}_{D}= -7,48º (c = 1,002 CHCl_{3}), ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) mezcla cis/trans, rotámeros 5 8,90 (bs, 1H), 7,95 (s, 1H), 7,76-7,65 (m, 2H), 7,55 (m, 7H), 6,9 (s, 1H), 6,4) y 6,30 (2 x bs, 1H), 6,02-5,88 (m, 1H), 5,40-5,17 (s, 4H), 4,64-4,59 (m, 2H), 3,91-3,70 (m, 9H), 3,00-2,95 (m, 2H), HRMS (FAB) 673 (M+1), Anal. Calculado para C_{38}H_{48}N_{2}O_{7}Si: C, 67,83; H, 7,19; N, 4,16, Hallado C, 67,64; H, 7,33; N, 4,03.

(2S)-N-(2-aliloxicarnoilamino)-4-benciloxi-5-metoxi]-2-(hidroximetil)-4-(4-metoxibenciliden)pirrolidina (183)

Una solución de TBAF en THF (1,21 mL, solución 1 m, 1,21 mmol) se añadió a una solución de 182 (0,65 g, 0,97 mmol) en THF (15 mL) a 0ºC. La mezcla de reacción se dejó entibiar a temperatura ambiente y se agitó toda la noche. El exceso de THF se extrajo mediante evaporación rotativa bajo presión reducida y el residuo se dividió entre etil acetato (100 mL) y cloruro de amonio saturado (1 mL). La fase orgánica se lavó con salmuera (100 mL) y se secó sobre sulfato de magnesio. El exceso de solvente se evaporó bajo presión reducida y el residuo resultante se sometió a cromatografía de columna por desorción súbita (gel de sílice, 50% etil acetato y 50% éter de petróleo 40-60º). La extracción del exceso de eluyente mediante evaporación rotativa bajo presión reducida proporcionó el compuesto 183 (0,9 g, 1,61 mmol, 65%), ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) mezcla cis/trans \delta 8,55 (bs, 1H), 7,50-7,10 (m, 8H), 6,80-6,90 (m, 3H), 6,40 y 6,29 (2 x bs, 1H), 6,02-5,88 (m, 1H), 5,40-5,10 (m, 4H), 4,55-4,70 (m, 2H),4,50-4,30 (m, 1), 3,95-3,80 (m, 8H), 3,10-3,90 (m, 1H), 3,50-3,70 (m, 1H), HRMS (FAB) Calculado para C_{32}H_{35}N_{2}O_{7} (M+H) 559,2444; Hallado 559,2462.

(11S,11aS)-10-aliloxicarbonil-8-benciloxi-11-hidroxi-7-metoxi-2-(4-metoxibenciliden)-1,2,3,10,11,11a-hexahidro-5H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiacepin-5-ona (184)

Una solución de DMSO (0,41 mL, 5,80 mmol) en DCM seco (50 mL) se añadió en forma de gotas a una solución agitada de oxalil cloruro (1,45 ml de una solución 2 M, 2,90 mmol) a -40ºC bajo una atmósfera de nitrógeno. Después de 45 minutos de agitado a -45ºC, se añadió una solución 183 (0,9 g, 1,61 mmol) en DCM (50 mL) en forma de gotas a la mezcla durante 45 minutos. Después de agitar a -45ºC durante 45 minutos la mezcla de reacción se trató en forma de gotas con una solución de TEA (0,94 mL, 6,76 mmol) en DCM (20 mL) durante 30 minutos. Después de agitar a -45ºC durante otros 40 minutos la mezcla de reacción se dejó entibiar a temperatura ambiente y luego se diluyó con DCM (30 mL). La mezcla de reacción diluida se lavó con ácido clorhídrico diluido (1 N, 300 mL), agua (150 mL) y se secó sobre sulfato de magnesio. La extracción del exceso de solvente proporcionó el producto crudo, que se sometió a cromatografía de columna (gel de sílice, 50% etil acetato y 50% éter de petróleo 40-60º). La extracción del exceso de eluyente proporcionó el producto 184 como un aceite (0,62 g, 1,11 mmol, 69%), ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) mezcla cis/trans 5 7,50-7,10 (m, 8H), 6,90-6,85 (m, 2H), 6,74 (s, 1H), 6,50 y 6,45 (2 x bs, 1H), 6,70-5,00 (m, 6H), 4,70-4,20 (m, 4H), 3,98 (s, 3H), 3,90-3,70 (m, 4H), 3,10-2,80 (m, 2H), HRMS (FAB) Calculado para C_{32}H_{33}N_{2}O_{7} (M+H) 557,2288; Hallado 559,2277.

(11aS)-8-Benciloxi-7-metoxi-2-(4-metoxibenciliden-1,2,3,11a,-tetrahidro-5H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiacepin-5-ona (185)

Trifenilfosfina, pirrolidina y tetraquistrifenilfosfina paladio se añadieron secuencialmente a una solución agitada de sustrato en DCM seco. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente bajo una atmósfera de nitrógeno durante 2 horas, momento en que la TLC (50% etil acetato y 50% éter de petróleo 40-60º) reveló el consumo completo del material inicial. La mezcla de reacción se evaporó hasta sequedad y el residuo resultante se sometió a cromatografía de columna por gravedad (gel de sílice, gradiente de elusión: 30% etil acetato, 70% éter de petróleo 40-60º a 70% etil acetato, 30% éter de petróleo 40-60º). La extracción del exceso de eluyente proporcionó la PBD (185) como un cristal amarillo que se reprecipitó desde etil acetato con éter de petróleo 40-60º. ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) mezcla cis/trans \delta 7,69 (d, 1H, J = 4,39 Hz), 7,52 (s, 1H), 7,46-7,30 (m, 5H), 7,20-7,16 (m, 2H), 6,92-6,88 (m, 2H), 6,84 (s, 1H), 6,53 (bs, 1H), 5,20-5,17 (m, 2H), 4,52 (m, 2H), 3,96 (s, 3H), 3,90-3,75 (m, 4H), 3,34-3,26 (m, 1H), 3,12-3,00 (m, 1H).

Ejemplo 3 Síntesis de Compuestos de fórmula III Perspectiva general de la Síntesis

La PBD 8-amino (151) se preparó mediante la extracción de un grupo troc-protector de la carbinolamina protegida amino sustituida 150. La amina libre se obtuvo mediante la extracción de un grupo protector Fmoc bajo condiciones estándar (piperidina/DMF) de la carbinolamina protegida 149. La oxidación Swern del alcohol primario 148 proporcionó 149 con buen rendimiento, el sustrato de la reacción se preparó mediante la protección Fmoc de la anilina 147. La reducción del compuesto nitro 146, con cloruro de estaño proporcionó la anilina, la hidrogenación no habría podido emplearse para reducir el grupo nitro ya que el sistema Troc no soporta estas condiciones. El compuesto nitro 146 se preparó mediante el acoplamiento del ácido clorhídrico derivado de 145 con pirrolidinmetanol en presencia de la base. Finalmente, el ácido antranílico protegido 145 se proporcionó mediante la exposición del ácido nitro antranílico 4 comercialmente disponible 144 a cloroformato Troc.

Las PBDs 96, 113, 120 y 194 se obtuvieron mediante idéntica forma a partir de los ácidos 2-nitrobenzoicos 19, 108, 115 y 186.

El dímero 90 se preparó en una forma análoga a partir del compuesto nitro central 85; el centro se acopló mediante la unión de dos unidades de fenol 84 a través de la eterificación de Mitsonobu. El fenol 84 se derivó a partir de ácido siríngico 83 en una síntesis de tres etapas, siendo la etapa crucial la nitración de 82 que se realizó con un 70% de ácido nítrico.

La PBD fenólica 130 se preparó mediante una ruta análoga a la utilizada para la síntesis de PBD 143, sin embargo el requerimiento de incorporar un grupo fenólico da lugar al uso de un grupo protector diferente, Teoc. La PBD libre se obtuvo mediante el tratamiento de la carbinolamina Teoc protegida 129 con TBAF en acetonitrilo tibio. El fenol 129 se desenmascaró mediante la hidrogenólisis de la fracción benciloxi de 128 en presencia del grupo protector Teoc (Troc no sobreviviría bajo estas condiciones). El compuesto benciloxi 128 se obtuvo mediante oxidación Swern del alcohol primario 127 que se preparó mediante tratamiento del amino alcohol 126 con cloroformato Teoc en presencia de una base.

Ejemplo 3(a) Síntesis del Dímero C9/C9'-Dimetoxi PBD (90, DRH-165) (Ver Figura 15)

34

Ácido O-acetisiríngico (82)

Una suspensión de ácido siríngico 81 (10,0 g, 50,5 mmol) en anhídrido acético (30,0 g, 27,7 mL, 294,1 mmol) se calentó suavemente hasta que se obtuvo una solución transparente. Se añadió acetato de sodio fundido (0,5 g, 6,10 mmol) a la solución que se agitó durante 16 horas a temperatura ambiente. La solución se vertió en agua (100 mL) y se agitó a fondo para asegurar la hidrólisis de cualquier exceso de anhídrido. El ácido O-acetil-siríngico se recristalizó desde el agua para proporcionar el producto como un polvo color hueso (11,2 g, 46,7 mmol). H^{1}NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,36 (s, 2H), 5,94 (br s, 1H), 3,87 (s, 6H), 2,35 (s, 3H), HRMS calculado para 240,0634, hallado 240,0637.

Ácido 4-Acetoxi-3,5-dimetoxi-2-nitrobenzoico (83)

Ácido nítrico fumante (5,2 mL) se añadió, cuidadosamente, a una solución de ácido o-acetilsiríngico 82 (11,1 g, 46,2 mmol) en anhídrido acético (33 g, mmol) a 5ºC y la mezcla de reacción se agitó durante 3 horas a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se vertió sobre hielo (300 mL) y el precipitado amarillo se recogió mediante filtración, se lavó con agua (3 x 100 mL) y se secó in vacuo para proporcionar el producto como un sólido amarillo pálido (12,4 g). H^{1}NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,37 (s, 1H), 3,92 (s, 3H), 3,90 (s, 3H), 2,39 (s, 3H).

Metil 3,5-dimetoxi-4-hidroxi-2-nitrobenzoato (84)

Una cantidad catalítica de DMF (5 gotas) se añadió a una solución de oxalil cloruro (6,3 g, 49,8 mmol) y ácido o-nitrobenzoico 83 (12,4 g, 45,2 mmol) en THF anhidro (100 mL) y se agitó la mezcla de reacción a temperatura durante 16 horas. El ácido clorhídrico resultante se neutralizó en forma de gotas con metanol anhidro (100 mL) a 0ºC. La mezcla de reacción se trató con carbonato de potasio y se agitó a temperatura durante 3 horas. El exceso de solvente se extrajo mediante evaporación rotativa a presión reducida y el residuo se disolvió en agua. La solución acuosa se acidificó a pH 8 y el precipitado blanco resultante se recogió mediante filtración, se lavó con agua (2 x 100 mL) y se secó para obtener el producto como un sólido color hueso (10,6 g, 83%). H^{1} NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 10,07 (br s, 1H), 7,26 (s, 1H), 3,97 (s, 3H), 3,91 (s, 3H), 3,85 (s, 3H).

1',3'-Bis(4-carboxi-2,6-dimetoxi-5-nitrofenoxi)propano (85)

Dietilazidodicarboxilato (7,19 g, 41,3 mmol) se añadió en forma de gotas durante 0,5 horas a una solución enfriada, agitada del fenol 84 (10,61 g, 41,3 mmol) y TPP (16,24 g, 61,9 mmol) en THF anhidro (100 mL), y se agitó durante 1 hora. Una solución de 1,3-propanodiol (1,57 g, 20,6 mmol) en THF (30 mL) se añadió en forma de gotas y la mezcla de reacción se agitó durante 16 horas. La mezcla de reacción se trató entonces con NaOH acuoso 1 N (200 mL) y se calentó a reflujo durante 3 horas. El exceso de solvente se extrajo mediante evaporación rotativa bajo presión reducida para proporcionar una suspensión acuosa que se extrajo con EtOAc (3 x 300 mL). El extracto acuoso se acidificó mediante HCl concentrado y el precipitado se recogió mediante filtración por vacío. El precipitado se suspendió en agua (500 mL), y después de agitar durante 10 minutos, se filtró la suspensión para producir el producto como un sólido naranja (6,11 g, 60%), H^{1} NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,32 (s, 2H), 4,36 (t, 4H,), 3,92 (s, 6H) 3,90 (s, 6H), 2,20 (t, 2H).

(2S)-1,1'-[[(propano-1,3-diil)dioxi]bis[2-nitro-3,5-dimetoxi-1,4-fenilen)carbonil]]bis[2-(hidroximetilpirrolidina] (86)

Una cantidad catalítica de DMF (3 gotas) se añadió a una solución del ácido 85 (6,1 g, 12,4 mmol) y oxalil cloruro (2,37 mL, 27,7 mmol) en DCM anhidro (60 mL) y se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 16 horas. El ácido clorhídrico resultante se añadió en forma de gotas durante 0,5 horas a una solución agitada de TEA (6,26 g, 61,8 mmol) y pirrolidina metanol (2,75 g, 27,2 mmol) en DCM anhidro (60 mL) a -10ºC. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 6 horas. La mezcla de reacción se lavó con HCl 1 N(3 x 100 mL), agua (3 x 100 mL), NaHCO_{3} saturado (3 x 100 mL), y se secó sobre MgSO_{4}. La extracción del exceso de solvente mediante evaporación rotativa bajo presión reducida proporcionó el producto como un cristal amarillo (8,25 g, 11,9 mmol). H^{1}NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 6,66 (s, 2H), 4,32-4,26 (m, 6H), 3,98 (s, 6H), 3,90 (s, 6H), 3,86-3,67 (m, 4H), 3,41-3,27 (m, 4H), 2,23-2,12 (m, 2H), 2,11-1,72 (m, 8H).

(2S)-1,1'-[[(propano-1,3-diil)dioxi]bis[2-amino-3,5-dimetoxi-1,4-fenilen)carbonil]]bis[2-(hidroximetilpirrolidi- na] (87)

Se añadió hidracina (3,45 g, 107,9 mmol) en forma de gotas a una solución de 86 (1 g, 1,45 mmol) en metanol anhidro (40 mL) calentado a reflujo sobre níquel Raney (5 g, gel). Se continuó calentando durante 3 horas más después de lo cual la mezcla de reacción se dejó enfriar y se filtró a través de celita para extraer el exceso de níquel Raney. El filtrado se evaporó hasta sequedad y se disolvió en DCM (200 mL) y la solución orgánica se lavó con agua (2 x 100 mL), salmuera (2 x 100 mL) y se secó sobre MgSO_{4}. La filtración y evaporación del exceso de solvente in vacuo proporcionó el producto como un cristal rosa (5,59 g, 8,9 mmol, 98%). H^{1} NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 6,54 (s, 2H), 4,35 (br s, 2H), 4,29 (t, 4H), 3,85 (s, 3H), 3,83-3,46 (m, 14H), 2,20-2,13 (m, 2H), 1,97-1,66 (m, 8H).

(2S)-1,1'-[[(propano-1,3-diil)dioxi]bis[2-(2',2',2'-tricloroetoxicarbonil)amino-3,5-metoxi-1,4-fenilen)carbonil]]bis[2-(hidroximetilpirrolidina] (88)

Una solución de 2,2,2-tricloroetilcloroformato (1,45 g, 6,86 mmol, 1,9 eq) en DCM seco (10 mL) se añadió en forma de gotas durante un espacio de 0,5 horas a una solución de 87 (2,28 g, 3,6 mmol) y piridina (1,14 g, 14,4 mmol, 4 eq) en DCM seco (50 mL) y se agitó durante 16 horas a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluyó con DCM (200 mL) y se lavó con HCl 1 N (3 x 200 mL), H_{2}O (3 x 200 mL), salmuera (2 x 300 mL) y se secó sobre MgSO_{4} anhidro. La purificación mediante cromatografía por desorción súbita (gel de sílice, EtOAc) proporcionó el producto como un cristal amarillo pálido (1,43 g). H^{1} NMR (270 MHz, CDCl_{3}) Rótameros \delta 9,21 y 8,40 (2 x br s, 2H), 6,49 y 6,54 (2 x s, 2H), 5,08-3,59 (m, 26H), 3,33-3,30 (m, 4H), 2,04-1,69 (m, 10H).

Ejemplo 3(b) Síntesis de la C7-Metoxi PBD (96, DRH-271) (Ver Figura 16)

\vskip1.000000\baselineskip

35

\vskip1.000000\baselineskip

N-(3-Metoxi-2-nitrobenzoil)pirrolidin-2-metanol (92)

Una cantidad catalítica de DMF (2 gotas) se añadió a una solución agitada de ácido 3-metoxi-2-nitro-benzoico 91 (5,01 g, 25,5 mmol) y oxalil cloruro (3,54 g, 27,9 mmol) en CHCl_{2} seco (50 mL) bajo una atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se agitó toda la noche, antes de usarla directamente en la preparación de 92. Una solución del ácido clorhídrico en CHCl_{2} anhidro (50 mL) se añadió en forma de gotas durante 1 hora a una solución agitada vigorosamente de pirrolidinmetanol (2,57 g, 25,4 mmol) y TEA (6,42 g, 63,6 mmol) en CHCl_{2} anhidro bajo una atmósfera de nitrógeno a 0ºC y se dejó agitar de un día al otro a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se lavó con HCl 1N (1 x 100 mL), H_{2}O (3 x 100 mL) y salmuera (3 x 100 mL). La capa orgánica se secó sobre MgSO_{4} anhidro, y la evaporación del solvente consiguió un aceite marrón (6,37 g, 22,7 mmol, 89%).

N-(2-Amino-3-Metoxibenzoil)pirrolidin-2-metanol (93)

Se añadió hidrato de hidracina (4,37 g, 136,4 mmol) gota a gota a una solución de 92 (6,37 g, 22,7 mmol) en metanol a reflujo suave (100 mL) sobre níquel Raney (2,4 g, lodo). La evolución vigorosa resultante del gas hidrógeno disminuyó después de 10 minutos aproximadamente y la reacción se consideró completa mediante TLC después de 2 h. La mezcla de reacción se filtró a través de celita y el solvente se evaporó. Se añadió agua destilada (100 mL) al residuo, y la mezcla acuosa se extrajo con EtOAc (3 x 100 mL) y se lavó con H_{2}O (3 x 100 mL) y salmuera (3 x 100 mL) y se secó sobre MgSO_{4} anhidro. La evaporación del solvente consiguió un vidrio marrón (5,49 g, 21,8 mmol) como una simple gota mediante TLC.

N-(3-Methoxi-2-((2',2',2'-tricloroetoxi) carbonilaminobenzoil)pirrolidin-2-metanol (94)

Una solución de 2,2,2-tricloroetil cloroformato (4,61 g, 21,8 mmol) en diclorometano destilado (50 mL) se añadió gota a gota durante 0,5 horas a una solución agitada del sustrato, 93 (5,46 g, 21,8 mmol) y piridina anhidro (3,44 g, 43,5 mmol) en diclorometano destilado (100 mL) a 0ºC. La mezcla de reacción se dejó agitar durante 2,5 horas, en cuyo momento el TLC mostró la reacción completa. La mezcla de reacción se diluyó con DCM anhidro (100 mL) y se lavó con HCl 1N (2 x 200 mL), H_{2}O (200 mL), salmuera (200 mL) y se secó sobre MgSO_{4} anhidro. La evaporación del solvente consiguió un aceite marrón que se purificó mediante cromatografía de columna por desorción súbita eluyendo con EtOAc para conseguir el producto como un sólido amarillo (6,14 g, 14,4 mmol); ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,75-2,25 (m, 4H), 3,4-3,75 (m, 2H), 3,8 (s, 3H), 3,85-4,2 (m, 2H), 4,40 (m, 1H), 4,73-4,86 (m, 2H), 6,86-6,97 (m, 2H), 7,85 (br d, 1H, J = 9 Hz); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 169,9, 155,6, 152,4, 128,2, 127,8, 123,6, 116,0, 113,0, 95,4, 74,4, 65,9, 60,9, 55,7, 51,0, 28,3, 24,9.

(11S,11aS)-10-(2',2',2'-tricloroethoxi)carbonil-7-metoxi-11-hidroxi-1,2,3,10,11,-11a-hexahidro-5H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiacepin-5-ona (95)

Se añadió DMSO anhidro (3,14 g, 40,2 mmol) en DCM seco (25 mL) gota a gota durante 5 minutos a una solución agitada de oxalil cloruro (2,53 g, 9,96 mL de una solución 2 N en DCM) bajo una atmósfera de nitrógeno a -50ºC. Después de agitar durante 5 minutos, el sustrato 94 (6,03 g, 14,2 mmol) en DCM seco (25 mL) se añadió gota a gota durante 45 minutos a la mezcla de reacción, que a continuación se dejó agitar durante otros 45 minutos a -50ºC, después de la adición del sustrato. Se añadió TEA seco (5,72 g, 56,64 mmol) gota a gota a la mezcla durante 0,5 horas y la mezcla de reacción se dejó agitar durante otros 15 minutos. La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se diluyó con H_{2}O (100 mL). La fase orgánica se lavó con HCl 1N (2 x 200 mL), H_{2}O (2 x 200 mL), salmuera (2 x 200 mL) y se secó sobre MgSO_{4} anhidro. El solvente se evaporó para conseguir un aceite amarillo (6,68 g). El aceite se sometió a cromatografía por desorción súbita con EtOAc como eluyente para conseguir el producto como un sólido amarillo (5,87 g, 13,9 mmol); ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,99-2,14 (m, 4H), 3,45-3,77 (m, 2H), 3,85 (s, 3H), 4,19 (br s, 1H), 4,28 (d, 1H, J = 11,91 Hz), 5,14 (d, 1H, J = 11,91 Hz), 5,66 (d, 1H, J = 9,71 Hz), 6,97-7,02 (m, 1H), 7,23-7,27 (m, 2H); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) d 166,8, 159,1, 154,7, 134,3, 131,5, 129,9, 126,6, 118,106, 112,5, 112,3, 95,0, 86,0, 75,2, 75,1, 59,8, 55,7, 46,7, 46,4, 28,7, 23,0, 21,0, 14,2.

7-metoxi-1,2,3,11a-tetrahidro-5H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiacepin-5-ona (96)

Se añadió el par Cd/Pb 10% (2,50 g, 20 mmol Cd) a una solución agitada rápidamente de 95 (1,71 g, 4,03 mmol) en una mezcla de THF (30 mL) y NH40Ac 1N (30 mL). Con la adición, la solución se volvió turbia y después de 2 horas el TLC mostró la reacción completa. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (150 mL) y se secó sobre MgSO_{4} anhidro. Los sólidos se filtraron y aclararon con EtOAc (50 mL). La retirada del exceso de solvente mediante evaporación giratoria bajo una presión reducida consiguió el producto como un sólido amarillo (0,84 g, 3,6 mmol, 90%).

Ejemplo 3(c) Síntesis del C7-Metoxi PBD (101, AG/140) (ver figura 17)

36

Ácido 3-metoxi-2-(2',2',2'-tricloroetoxicarbonilamino)benzoico (98)

Ácido 2-amino-3-metoxibenzoico 97 (1 g, 6,0 mmol) y piridina (0,97 mL, 12,0 mmol) se disolvieron en diclorometano seco (30 mL). La mezcla resultante se enfrió y se añadió Troc-Cl (0,9 mL, 6,6 mmol) gota a gota. La mezcla de reacción se dejó agitar de un día al otro a temperatura ambiente, a continuación se lavó con HCl (1N, 50 mL), agua (50 mL) y salmuera (50 mL). La fase orgánica se lavó sobre MgSO_{4} y se evaporó para producir 1,42 g de producto crudo, que se usó en la siguiente etapa sin más purificación.

N-(3-metoxi-2-(2',2',2'-tricloroetoxicarbonilamino)benzoil)-pirrolidina-2-metanol (99)

Se añadió oxalil cloruro (0,57 mL, 6,58 mmol) junto con 2 gotas de DMF seco a una solución del producto crudo obtenido a partir de la reacción previa en diclorometano seco (20 mL). Después de la fuerte efervescencia inicial, la mezcla se dejó agitar a temperatura ambiente de un día al otro. El cloruro ácido resultante se añadió gota a gota, durante 30 minutos a una solución de 2S-(+)-pirrolidinametanol (0,66 g, 6,58 mmol) y TEA (2,1 mL, 14,95 mmol) en diclorometano seco (20 mL) a -16ºC. Una vez se completó el acoplamiento, la mezcla de reacción se diluyó con etil acetato (20 mL), y se lavó con HCl 1N (2 x 25 mL), NaHCO_{3} acuoso saturado (2 x 25 mL), agua (25 mL) y salmuera (25 mL). La capa orgánica se secó sobre MgSO_{4} y se evaporó para dar un aceite amarillo. El producto crudo se purificó mediante cromatografía por desorción súbita (éter de petróleo/etil acetato, 50/50) para conseguir 0,54 g de un aceite amarillo pálido: ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,6-1,8 (m, 1H); 1,81-2,0 (m, 2H); 2,02-2,21 (m, 1H); 3,4 (m, 1H); 3,6 (m, 2H); 3,86 (m, 4H); 4,22 (dd, J = 5,1, J = 12,3 Hz, 1H); 4,72 (d, J = 12 Hz, 1H); 4,79 (d, J = 12 Hz, 1H); 4,86 (m, 1H); 6,91 (s, 1H); 6,94 (s, 1H); 7,2 (dd, J = 7,5, J = 8,4 Hz, 1H); 7,36 (bs, 1H). ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 24,6; 28,8; 50,7; 55,9; 61,3; 66,5; 74,8; 75,3; 111,7; 111,9; 119,1; 122,3; 126,3; 132,9; 152,7; 170,3 IR (Nujol): cm^{-1} 3410, 2969, 1738, 1613, 1583, 1514, 1429, 1268, 1218, 1109, 1079, 1049, 809, 759. MS: m/e (intensidad relativa) 425 (M+, 10), 394 (20), 323 (30), 276 (35), 245 (100), 176 (100), 149 (45), 120 (40), 106 (20), 77 (30), 70 (100). HRMS Calculado para C_{16}H_{19}C_{13}N_{2}O_{5}: 424,0357. Encontrado: 424,0359. [\alpha]^{25}_{D} = -45,1º (c = 0,63, CHCl_{3}).

(11S,11aS)-11-hidroxi-9-metoxi-10-N-(2',2',2'-tricloroetoxicarbonil)-1,2,-3,10,11,11a-hexahidro-5H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiacepin-5-ona (100)

Una solución de DMSO (0,46 ml, 6,63 mmol) en diclorometano seco (10 mL) se añadió gota a gota durante 30 minutos a una solución de oxalil cloruro (3,30 mmol) en diclorometano seco (11,65 mL) a -40ºC. La mezcla se dejó agitar durante otros 30 minutos, una solución de 99 (1 g, 2,37 mmol) en diclorometano (15 mL) se añadió a continuación gota a gota durante 1 hora. Después del final de la adición, la mezcla se dejó agitar a -45ºC durante 60 minutos, a continuación se añadió una solución de TEA (1,31 mL) en diclorometano (6 mL) gota a gota y la mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se lavó con agua (50 mL), HCl 1N (2 x 25 mL), NaHCO_{3} acuoso saturado (2 x 25 mL), y salmuera (50 mL). La solución orgánica se secó sobre MgSO_{4} y se evaporó. El producto crudo se purificó mediante cromatografía por desorción súbita (gel de sílice EtOAc/éter de petróleo 1/1) para dar un aceite sin color (0,64 g, 63%): ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 2,01-2,15 (m, 4H); 3,43-3,58 (m, 2H); 3,73 (m, 2H); 3,83 (s, 3H); 4,35 (d, J = 12, 1H); 4,98 (d, J = 12, 1H); 5,66 (dd, J = 3,8, J = 9,6 Hz, 1H); 7,02 (dd, J = 2,2, J = 7,5 Hz, 1H); 7,35 (m, 2H). ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 23,0; 28,6; 46,2; 56,1; 59,9; 75,3; 86,2; 94,8; 113,4; 120,2; 123,1; 129,4; 134,9; 154,7; 155,4; 166,7. IR (Nujol): cm^{-1} 3291, 2924, 1724, 1616, 1580, 1463, 1318, 1278, 1075, 945, 812, 739. MS: m/e (intensidad relativa) 422 (M-1, 40), 387 (3), 275 (10), 245 (15), 217 (10), 176 (100), 150 (8), 120 (6), 70 (95). HRMS Calculado para C_{16}H_{17}C_{13}N_{2}O_{5}: 422,0202. Encontrado: 422,0203. [\alpha]^{25}_{D} = +136,5º (c = 0,19, CHCl_{3}).

(11aS)-9-metoxi-1,2,3,11a-tetrahidro-5H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiacepin-5-ona (101)

Se añadió el par Cd/Pb finamente molido (1,02 g) en pequeñas porciones a una solución agitada de 100 (0,64 g, 1,51 mmol) en THF (10 mL) y NH_{4}OAc 1M (10 mL). La reacción fue seguida mediante TLC (EtOAc), cuando no se observó más material inicial, la mezcla se vertió en etil acetato (200 mL). La fase orgánica se secó sobre MgSO_{4} y se evaporó para proporcionar el producto como un aceite amarillo pálido (0,28 g, 80%): ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 2,15 (m, 4H); 3,52 (m, 2H); 3,87 (s, 3H); 5,15 (m, -H); 6,8-7,2 (m, 3H); 7,8 (d, J = 4,7 Hz, 1H, imina H11). IR (Nujol): cm^{-1} 3373, 2975, 1621, 1576, 1440, 1419, 1250, 1075, 750. MS: m/e (intensidad relativa) 230 (M^{+}., 100), 215 (45), 201 (20), 187 (5), 160 (5), 146 (4), 133 (20), 105 (10), 76 (25), 70 (45), 63 (3), 51 (3). HRMS Calculada para C_{13}H_{14}N_{2}O_{2}: 230,1055. Hallada: 230,1055. [\alpha]^{25}_{D}= +455,30 (c=0,6, CHCl_{3}).

Ejemplo 3(d) Síntesis de la 7,8-Dimetoxi PBD (106, AG/105) (Ver Figura 18)

37

Ácido 4,5-dimetoxi-2-(2',2',2'-tricloroetoxicarbonilamino)benzoico (103)

Una solución de Troc-Cl (0,76 ml, 5,56 mmol) en diclorometano seco (10 mL) se añadió en forma de gotas a ácido 2-amino-4,5-dimetoxibenzoico 102 (1 g, 5,1 mmol) y piridina (0,82 ml, 10,1 mmol) en diclorometano seco (20 ml) a 0ºC. La mezcla de reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente y luego se lavó con HCl diluido (1 N, 2 x 25 ml), agua (2 x 25 ml) y salmuera (20 ml). La fase orgánica se secó sobre MgSO_{4} y se evaporó para obtener el producto crudo (1,6 g) que se utilizó en la siguiente etapa sin purificación adicional.

N-(4,5-dimetoxi-2'-(2'',2'',2''-tricloroetoxi carbonil amino)benzoil)-pirrolidina-2-metanol (104)

Oxalil cloruro (0,38 mL, 4,33 mmol) se añadió al ácido antranílico troc-protegido crudo, preparado en la reacción anterior, junto con 2 gotas de DMF seco en diclorometano seco (30 mL). Después de una efervescencia inicial fuerte, se agitó la mezcla a temperatura ambiente toda la noche. El ácido clorhídrico resultante se añadió en forma de gotas, durante 30 minutos, a una solución de 2S-(+)-pirrolidienmetanol (0,44 g, 4,33 mmol) y TEA (1,37 ml, 9,85 mmol) de diclorometano seco (15 mL) a -16ºC. La mezcla de reacción se diluyó con etil acetato (20 mL), y se lavó con HCl diluido (1 N, 2 x 30 mL), NaHCO_{3} saturado acuoso (2 x 30 mL), agua (30 mL) y salmuera (30 mL). La capa orgánica se secó sobre MgSO_{4} y se evaporó para dar un aceite amarillo. El producto crudo se purificó mediante cromatografía por desorción súbita (éter de petróleo/etil acetato = 50/50) para proporcionar el producto (1,2 g, 70%) como un aceite amarillo pálido: ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,75 (m, 2H); 1,92 (m, 1H); 2,17 (m, 1H); 3,53 (m, 2H); 3,72 (m, 1H); 3,86 (S, 3H); 3,93 (s, 3H); 4,19 (m, 1H); 4,43 (m, 1H); 4,77 (d, J = 12 Hz, 1H); 4,85 (d, J = 12 Hz, 1H); 6,85 (s, 1H); 7,69 (S, 1H); 9,08 (bs, 1H), ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 25,1; 28,2; 51,4; 56,0; 56,4; 60,8; 65,9; 74,4; 95,3; 104,7; 110,7; 116,3; 130,8; 144,4; 151,0; 152,1; 170,4. MS: m/e (intensidad relativa) 454 (M-1, 5), 356 (3), 306 (10), 275 (5), 206 (100), 179 (15), 150 (10), 136 (3), 70 (45). HRMS Calculada para C_{17}H_{21}C_{13}N_{2}O_{6}: 454,0465. Hallada: 454,0464. [\alpha]^{25}_{D}= -72,2º (c = 0,18, CHCl_{3}).

(11S,11aS)-7,8-dimetoxi-11-hidroxi-10-N-(2',2',2'-tricloro etoxicarbonil)-1,2,3,10,11,11a-hexahidro-5H-pirrolo [2,1-c][1,4]benzodiacepin-5-ona (105)

Una solución de DMSO (0,9 ml, 12,9 mmol) en diclorometano seco (15 mL) se añadió en forma de gotas durante 30 minutos a una solución de oxalil cloruro (6,4 mmol) de diclorometano (15 mL) manteniendo la temperatura por debajo de -40ºC. La mezcla de reacción se agitó durante 30 minutos más, punto en el cual una solución de 104 (2,1 g, 4,61 mmol) en diclorometano (35 mL) se añadió en forma de gotas durante 1 hora. Después de la adición del sustrato la mezcla de reacción se agitó a -45ºC durante 60 minutos, y luego se trató con una solución de TEA (2,56 mL) en diclorometano (10 mL) que se añadió en forma de gotas y la mezcla se dejó entibiar a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se lavó con agua (75 mL), HCl diluido (1 N, 75 mL), agua (75 mL), salmuera (75 mL), se secó sobre MgSO_{4} y se evaporó. El producto crudo se purificó mediante cromatografía por desorción súbita (EtOAc/éter de petróleo 40/60) para dar un aceite incoloro (1,19 g, 57%): ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 2,04 (m, 2H); 2,11 (m, 2H); 3,47-3,59 (m, 2H); 3,68-3,75 (m, 1H); 3,91 (s, 3H); 3,94 (s, 3H); 4,21 (d, J = 12,1 Hz, 1H); 4,43 (d, J = 4,76 Hz, 1H); 5,27 (d, J = 12,1 Hz, 1H); 5,65-5,7 (dd, J = 4,58, J = 9,71 Hz, 1H); 6,82 (s, 1H); 7,26 (s, 1H), ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 23,1; 28,6; 46,4; 56,0; 56,1; 60,0; 74,9; 86,4; 95,1; 110,3; 112,7; 125,6; 148,6; 150,8; 154,5; 167,0. MS: m/e (intensidad relativa) 452 (M^{-1}, 30), 424 (7), 354 (10), 276 (25), 206 (100), 180 (10), 150 (10), 70 (100). HRMS Calculado para C_{17}H_{19}C_{13}N_{2}O_{6}: 452,0308. Hallado: 452,0309. [\alpha]^{25}_{D}= +104,7º (c = 0,27, CHCl_{3}).

(11aS)-7,8-dimetoxi-1,2,3,11a-tetrahidro-5H-pirrolo [2,1-c][1,4]benzodiacepin-5-ona (106, AG/105)

El par Cd/Pb finamente molido (3,12 g) se añadió en forma de porciones a una solución de 105 (1 g, 2,2 mmol) THF (10 mL) y NH_{4}OAc (1 M, 10 mL). La reacción se siguió mediante TLC (EtOAc), cuando ya no hubo material inicial presente, la mezcla se vertió en etil acetato (400 mL). La fase orgánica se secó sobre MgSO_{4} y se evaporó para proporcionar el producto crudo, que se purificó mediante cromatografía por desorción súbita (EtOAc) para dar el compuesto puro como un aceite amarillo pálido (0,45 g, 78%): ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 2,08 (m, 2H); 2,29 (m, 2H); 3,53-3,63 (m, 1H); 3,72 (m, 1H); 3,79-3,85 (m, 1H); 3,93 (s, 3H); 3,96 (s, 3H); 6,82 (s, 1H); 7,52 (s, 1H); 7,68 (d, J = 4,4, 1H), ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 24,2; 29,6; 46,7; 53,7; 56,0; 56,1; 109,4; 111,2; 140,7; 147,5; 151,3; 162,5; 164,6, IR (Nujol): cm^{-1} 3000-2800, 1601, 1450, 1434, 1500, 1453, 1263, 1217, 1010, 908, 735. MS: m/e (intensidad relativa) 260 (M^{+}, 100), 245 (50), 231 (25), 217 (10), 191 (20), 164 (25), 136 (20), 121 (5), 93 (8), 70 (10). HRMS Calculado para C_{14}H_{16}N_{2}O_{3}: 260,1160. Hallado: 260,1161. [\alpha]^{25}_{D}= +1004,7º (c = 0,17, CHCl_{3}).

Ejemplo 3(e) Síntesis de la 6,7,8-Trimetoxi PBD (113, DRH-NA7) (Ver Figura 19)

38

Ácido 2,3,4-Trimetoxi-6-nitrobenzoico (108)

Ácido 2,3,4-trimetoxibenzoico 107 (25 g, 117,8 mmol) se añadió en forma de porciones a una solución agitada de 70% de ácido nítrico a 0ºC durante 30 minutos. La mezcla de reacción se vertió en agua fría (1250 mL) y se continuó agitando durante 30 minutos. La mezcla de reacción se extrajo con EtOAc (2 x 200 mL) y las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (2 x 200 mL) y se secaron sobre MgSO_{4} anhidro. La evaporación del exceso de solvente in vacuo proporcionó el producto como un sólido cristalino puro (18,67 g, 60%): R_{f}= 0,5 (sílice, EtOAc); IR (Nujol) 2922, 1713, 1618, 1570, 1504, 1464, 1401, 1308, 1246, 1168, 1111, 1028, 920, 852, 789, 773, 728, 689 cm^{-1}; ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,76 (1H, s), 4,0 (3H, s), 3,95 (3H, s), 3,90 (3H, s); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 166,0, 153,2, 150,1, 147,79, 139,6, 120,8, 103,6, 62,2, 61,1, 56,5; MS (EI) m/z 258 (M+1), 240, 214.

N-(2-Nitro-4,5,6-trimetoxibenzoil)pirrolidina-2-metanol (109)

Una cantidad catalítica de DMF (2 gotas) se añadió a una solución agitada de 108 (10 g, 38,9 mmol) y oxalil cloruro (5,87 g, 46,2 mmol) en CHCl_{2} seco (100 mL) bajo una atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se agitó toda la noche, y el producto se utilizó directamente en la siguiente etapa de la reacción. El ácido clorhídrico recién formado se añadió en forma de gotas a una solución agitada de pirrolidinmetanol (3,92 g, 38,8 mmol) y trietilamina anhidra (12,4 mL, 9,8 g, 97,0 mmol) en DCM anhidro (50 mL) a 0ºC bajo nitrógeno. Una vez que la adición estaba completa, la mezcla de reacción se dejaba entibiar a temperatura ambiente y se agitaba toda la noche. La mezcla de reacción se lavó con HCl 1 N (100 mL), agua (100 mL) y salmuera (2 x 100 mL). Las capas orgánicas combinadas se secaron (MgSO_{4}) y el solvente se extrajo in vacuo para proporcionar 109 (12,1 g, 91%) como un aceite amarillo pálido R_{f}=0,39 (sílice, EtOAc); [\alpha]^{21}_{D}+135º (c = 0,1, DCM); IR (neto) 3400, 3105, 2947, 2878, 1652, 1568, 1538, 1455, 1348, 1250, 1195, 1115, 975, 922, 849, 822, 792, 758, 733, 646 cm^{-1}; ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,59 (1H, s), 4,46 (2H, d, J = 2,93 Hz), 4,07 (3H, s), 4,03 (3H, s), 4,01 (3H, s), 3,89 (3H, t), 3,45-3,29 (2H, m), 2,24-2,17 (2H, m), 2,00-1,84 (2H, m); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}, rotámeros) \delta 165,7, 165,1, 153,3, 149,2, 148,1, 138,8, 122,5, 104,1, 66,4, 65,5, 62,4, 62,3, 61,3, 56,6, 49,2, 49,0, 28,7 24,3; MS (EI) m/z 341 (M+1), 324, 309, 293, 277, 264, 254.

N-(2-Amino-4,5,6-trimetoxibenzoil) pirrolidina Metanol (110)

Hidrato de hidracina (5,67 g, 177,2 mmol) se añadió en forma de gotas a una solución de 109 (12,1 g, 35,47 mmol) en metanol a reflujo suave (142 mL) sobre níquel Raney (3,45 g, gel). La vigorosa evolución resultante del gas hidrógeno disminuye después de aproximadamente 10 minutos y la reacción se consideró completa mediante TLC después de 3 h. La mezcla de reacción se filtró a través de celita y el solvente se evaporó. Se añadió agua destilada (200 mL) al residuo, y la mezcla acuosa se extrajo con DCM (2 x 100 mL) y la fase orgánica combinada se lavó con H_{2}O (3 x 100 mL) y salmuera (3 x 100 mL) y se secó sobre MgSO_{4} anhidro. La evaporación del solvente consiguió 110 (11,24 g) como un aceite amarillo. R_{f} = 0,14 (sílice, EtOAc); [\alpha]^{21,8}_{D} = +100º (c = 0,1, DCM); IR (neto) cm^{-1} 3355, 2940, 2879, 2843, 1614, 1498, 1463, 1428, 1410, 1365, 1339, 1240, 1199, 1123, 1078, 1039, 997, 915, 817, 731, 646; ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 6,10 (1H, s), 4,37 (2H, d, J = 3,67 Hz), 3,93 (3H, s), 3,88 (3H, s), 3,86 (3H, s), 3,67 (2H, t), 2,17-2,02 (2H, m), 1,87-1,82 (2H, m) ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 168,8, 154,7, 150,9, 149,6, 140,6, 133,8, 95,8, 66,5, 61,8, 61,4, 61,3, 61,1, 49,2, 28,6, 24,4; MS (EI) m/z 310 (M^{+}), 294, 279, 229, 210, 194, 180, 149, 124, 102, 83, 70, 57.

N-(2-[2',2',2'-Tricloroetoxicarbonilamino]-4,5,6-trimetoxibenzoil)pirrolidina-2-metanol (111)

Una solución agitada de 110 (11,24 g, 36,3 mmol) en DCM (150 mL) y piridina (5,86 mL, 5,73 g, 72,5 mmol) se trató gota a gota con 2,2,2-tricloroetil cloroformato (5 mL, 7,61 g, 35,9 mmol) en DCM (50 mL) bajo una atmósfera de nitrógeno a 0ºC. Una hora después de la adición de 2,2,2-tricloroetil cloroformato, la mezcla de reacción se diluyó con DCM (100 mL) y se lavó con HCl 1N (100 mL), agua (2 x 150 mL), salmuera (2 x 100 mL) y se secó (MgSO_{4}). El solvente se retiró in vacuo para conseguir 111 (15,44 g, 88%) como un aceite marrón claro: R_{f} = 0,44 (sílice, EtOAc); IR (neto) cm^{-1} 3437, 2948, 1738, 1628, 1497, 1458, 1422, 1397, 1238, 1115, 1027, 1008, 823, 760, 624; ^{1}H NMR (270 MHz, DMSO) \delta 6,82 (1H, s), 5,06 (2H, s), 4,04 (2H, d, J = 6,83 Hz), 3,85 (3H, s), 3,84 (3H, s), 3,79 (3H, s), 3,67 (2H, t), 2,00-1,97 (2H, m), 1,96-1,88 (2H, m) ^{13}C NMR (67,8 MHz, DMSO) \delta 164,2, 153,5, 149,6, 139,6, 129,4, 121,3, 96,2, 73,9, 61,4, 60,9, 58,7, 56,2, 47,9, 27,5, 23,7; HRMS (FAB) calculado para C_{18}H_{23}N_{2}O_{7}Cl_{3} (M^{+}\cdot) 484,0571, encontrado 484,0944.

6,7,8-Trimetoxi-10-(2',2',2'-tricloroetoxicarbonil)-1,2,3,10,11,11a-hexahidro-5H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiacepin-5-ona (112)

Una solución de oxalil cloruro en DCM (22,3 mL de una solución 2N, 44,7 mmol) diluida con DCM anhidro (42 mL) a -45ºC se trató gota a gota con una solución de DMSO anhidro (6,39 mL, 90,2 mmol) en DCM anhidro (16,24 mL) durante un periodo de 15 minutos. La mezcla de reacción se agitó a -45ºC durante 15 minutos y se trató con una solución de 111 (15,44 g, 31,7 mmol) y se agitó a -45ºC durante 45 minutos. Se añadió trietilamina (17,7 mL, 127,1 mmol) gota a gota a la mezcla de reacción durante 0,5 horas, y luego se agitó durante 15 minutos más. La mezcla de reacción se dejó entibiar a temperatura ambiente y se diluyó con agua (100 mL). La capa orgánica se lavó con HCl 1 N (200 mL), agua (200 mL), salmuera (200 mL) y se secó (MgSO_{4}). La mezcla de reacción se evaporó y se purificó mediante cromatografía de columna por desorción súbita (EtOAc) para proporcionar el producto 112 (8,27 g, 54%) como un cristal amarillo transparente: R_{f}= 0,48 (sílice, EtOAc); [\alpha]^{22,2}_{D} +190º (c 0,15, DCM); IR (neto) cm^{-1} 3262, 2979, 2943, 2885, 1732, 1613, 1493, 1456, 1399, 1372, 1334, 1299, 1264, 1244, 1201, 1118, 1059, 1014, 969, 926, 888, 838, 784, 756, 720, 693, 624; ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 6,64 (1H, s), 5,58 (1H, s), 5,31 (1H, s), 4,34 (1H, d, J = 19,78 Hz), 4,15-4,00 (1H, m), 3,95 (3H, s), 3,91 (3H, s), 3,90 (3H, s), 3,77 (2H, t), 3,55 (1H, t), 2,17-2,14 (2H, m), 2,14-2,10 (2H, m), ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 163,49, 154,32, 152,30, 142,69, 129,51, 121,16, 109,35, 95,20, 85,63, 62,30, 61,36, 60,48, 56,09, 45,56, 28,44, 22,85; MS (EI) m/z 485 (M+1), 467, 398, 384, 350, 291, 254, 236, 222, 194, 131, 102, 82, 70, 57.

6,7,8-Trimetoxi-1,2,3,10,11,11a-hexahidro-5H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiacepin-5-ona (113)

El par Cd/Pb 10% (2,57 g, 20,6 mmol Cd) se añadió a una solución agitada de 112 (2,00 g, 4,1 mmol) en THF (20 mL) y tampón NH_{4}OAc 1 N (20 mL) y se dejó a temperatura ambiente durante 4 horas. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (200 mL) y se lavó con agua (2 x 100 mL). La capa orgánica se lavó con salmuera (2 x 100 mL) y se secó (MgSO_{4}). El solvente se extrajo in vacuo para dar 113 (0,76 g, 64%) como un cristal amarillo: R_{f}=0,1 (sílice, EtOAc); [\alpha]^{20,7}_{D}= +505º (c= 0,1, DCM); IR (neto) cm^{-1} 3339, 2976, 2939, 1614, 1455, 1428, 1392, 1359, 1275, 1245, 1203, 1113, 1052, 1035, 1000, 926, 804, 751, 665; ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta (1H, d, J = 4,39 Hz), 6,61 (1H, s), 6,14 (1H, d, J = 8,24 Hz), 4,36 (1H, d, J = 8,79 Hz), 4,01 (3H, s), 3,98 (3H, s), 3,84 (3H, s), 3,48-3,46 (2H, m) 2,26-2,23 (2H, m), 2,16-1,93 (2H, m); HRMS (FAB) calculado para C_{15}H_{18}N_{2}O_{4} (M+1) 290,1266, hallado 290,1208.

Ejemplo 3(f) Síntesis del 7,8,9-Trimetoxi PBD (120, DRH-69) (ver figura 20)

39

3,4,5-Trimetoxi-2-ácido nitrobenzoico (115)

Se añadió metil 3,4,5-trimetoxi-2-nitrobenzoico 114 (24,37 g, 89,9 mmol) a una solución al 5% de KOH (18 g) en MeOH (357 mL). La mezcla se calentó a reflujo durante 50 minutos. La evaporación del solvente consiguió un residuo gris, que se disolvió en H_{2}O (200 mL). La solución alcalina resultante se acidificó a un pH de 1 con HCl concentrado, y se extrajo con CHCl_{3} (3 x 100 mL). La capa orgánica se lavó con H_{2}O (3 x 100 mL), salmuera (3 x 100 mL) y se secó sobre MgSO_{4} anhidro. La filtración y la evaporación del solvente consiguió un sólido cristalino blanco puro (20,67 g, 80,4 mmol): ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 3,9 (s, 3H), 4,0 (s, 3H), 4,1 (s, 3H), 7,4 (s, 1H), 12,4 (br s, 1H).

N-(2-Nitro-3,4,5-trimetoxibenzoil)pirrolidina-2-metanol (116)

Una cantidad catalítica de DMF (2 gotas) se añadió a una solución agitada de 115 (2,57 g, 10 mmol) y oxalil cloruro (1,40 g, 11 mmol) en CH_{2}Cl_{2} seco (40 mL) bajo una atmósfera inerte. La mezcla de la reacción se dejó que se agitara de un día para el otro, la solución resultante del cloruro ácido, (2,76 g, 10 mmol) en CH_{2}Cl_{2} anhidro (40 mL) se añadió gota a gota durante 1 hora a una solución agitada vigorosamente de pirrolidinametanol (1,11 g, 11 mmol) y TEA (2,52 g, 25 mmol) en CH_{2}Cl_{2} anhidro (40 mL) bajo una atmósfera de nitrógeno a 0ºC y se dejó agitándose de un día para el otro a temperatura ambiente. La mezcla de la reacción se lavó con HCl 1N (1 x 50 mL), NaOH 1N (1 x 50 mL), H_{2}O (3 x 50 mL) y salmuera (3 x 50 mL) y se secó sobre MgSO_{4} anhidro. La filtración y la evaporación del solvente consiguió un aceite amarillo (2,81 g, 8,3 mmol): R_{f} = 0,47 (5% MeOH/CHCl_{3}); ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,7-2,0 (m, 3H), 2,1-2,2 (m, 1H), 3,3-3,5 (m, 2H), 3,7-3,9 (m, 2H), 3,9-4,0 (2 x s, 6H), 4,0-4,1 (s, 3H), 4,2-4,3 (m, 1H), 6,7 (s, 1H); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 167,3, 156,5, 147,9, 143,5, 128,8, 104,8, 65,8, 62,6, 61,4, 61,2, 56,6, 50,2, 28,4, 28,1, 24,5, 14,2.

N-(2-Amino-3,4,5-trimetoxibenzoil)pirrolidina-2-metanol (117)

Se añadió hidrato de hidracina (1,33 mL, 41,5 mmol) gota a gota a una solución de 116 (2,83 g, 8,3 mmol) en metanol (142 mL) en reflujo suave sobre níquel Raney (500 mg, lodo). La evolución vigorosa resultante de gas hidrógeno disminuido después de 10 minutos aproximadamente y la reacción se consideró completa mediante TLC después de 2 h. La mezcla de la reacción se filtró a través de celita y el solvente se evaporó. Se añadió agua destilada (100 mL) al residuo, y la mezcla acuosa se extrajo con EtOAc (3 x 100 mL) y la fase orgánica combinada se lavó con H_{2}O (3 x 100 mL) y salmuera (3 x 100 mL) y se secó sobre MgSO_{4} anhidro. La evaporación del solvente consiguió el producto (2,18 g, 6,5 mmol) como aceite marrón: ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,6-2,0 (m, 3H), 2,1-2,2 (m, 1H), 3,4-3,7 (m, 4H), 3,8 (s, 3H), 3,8-3,9 (2 x s, 6H), 4,4 (br s, 1H), 4,7-4,3 (br s, 1H), 6,6 (s, 1H); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 144,7, 144,5, 141,6, 134,6, 107,1, 66,9, 61,0, 60,9, 60,5, 56,8, 50,9, 28,6, 24,9, 21,1,
14,2.

N-2-(Tricloroetoxicarbonilamino)-3,4,5-trimetoxibenzoil)pirrolidina-2-metanol (118)

Una solución de 2,2,2-tricloroetilcloroformato (1,37 g, 6,5 mmol) en diclorometano destilado (40 mL) se añadió gota a gota durante 0,5 horas a una solución de piridina anhidro (0,93 g, 11,8 mmol) y el sustrato 117 (1,82 g, 5,9 mmol) en diclorometano destilado (60 mL) a 4ºC. Después de 1,5 h, la mezcla de la reacción se diluyó con DCM anhidro (100 mL) y se lavó con HCl 1N (2 x 100 mL), H_{2}O (100 mL), salmuera (100 mL) y se secó sobre MgSo_{4} anhidro. La evaporación del solvente produjo un aceite marrón que se purificó mediante cromatografía por desorción súbita de columna eluyendo con 1% MeOH/99% CHCl_{3} para conseguir el producto como aceite amarillo (1,83 g, 3,8 mmol): ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,6-1,9 (m, 3H), 2,1-2,2 (m, 1H), 3,3-3,6 (m, 2H), 3,6-3,85 (m, 2H), 3,8-3,9 (m, 9H), 4,2-4,3 (m, 1H), 4,7-4,8 (br s, 1H), 4,8 (s, 2H), 6,6 (s, 1H); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 169,9, 153,2, 151,9, 143,1, 128,5, 120,1, 105,2, 95,3, 74,6, 66,3, 61,2, 61,2, 61,0, 56,3, 50,6, 28,7, 24,6.

(11S,11aS)7,8,9-trimetoxi-11-hidroxi-10-N-(2',2',21-tricloroetoxicarbonil)-1,2,3,10,11,11a-hexahidro-5H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiacepin-5-ona (119)

Se añadió DMSO anhidro (3,15 mL, 44,3 mmol) en DCM seco (8,2 mL) gota a gota durante 20 minutos a una solución agitada de oxalil cloruro (2,79 g, 11,0 mL de una solución 2N en DCM; 22,0 mmol) en DCM seco (20,6 mL) bajo una atmósfera inerte a -45ºC (variado entre -38ºC y -48ºC). Después de agitar durante 15 minutos, el sustrato (7,59 g, 15,6 mmol) en DCM seco (17 mL) se añadió gota a gota durante 45 minutos a la mezcla de la reacción, que se agitó a continuación durante otros 45 minutos a-45ºC después de la adición final del sustrato. Se añadió TEA seco (4,84 g, 48,0 mmol, 4 eq) gota a gota a la mezcla durante 0,5 horas y se agitó durante otros 15 minutos. La mezcla de la reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y la mezcla de la reacción se diluyó con H_{2}O (80 mL). Se separó la fase orgánica, se lavó con salmuera (2 x 100 mL) y se secó sobre MgSO_{4} anhidro. El solvente se evaporó para conseguir el producto como un sólido crema (4,39 g, 9,1 mmol): ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,95-2,2 (m, 4H), 3,4-3,8 (m, 2H), 3,8-3,9 (m, 9H), 4,05 (d, 1H), 4,5-4,8 (dd, 2H), 5,6-5,7 (q, 1H), 7,1 (s, 1H); ^{13}C NMR (CDCl_{3}) rotámeros \delta 166,7, 166,5, 155,2, 153,5, 153,3, 150,0, 144,5, 129,5, 129,0, 121,7, 106,4, 106,2, 94,6, 86,1, 85,9, 75,7 75,2, 61,5, 61,3, 60,9, 60,1 59,8, 56,2, 56,1, 46,5, 46,3, 28,7, 28,6, 23,0.

7,8,9-Trimetoxi-1,2,3,11a-tetrahidro-5H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiacepin-5-ona (120, DRH-69)

Se añadió el par 10% Cd/Pb (1,25 g, 10 mmol Cd) a una solución que se agitaba rápidamente del carbamato Troc 119 (1,00 g, 2,1 mmol) en una mezcla de THF (13 mL) y NH_{4}OAc 1N (8 mL). Al añadirlo, la mezcla de la reacción se volvió turbia. Después de 40 minutos, el TLC mostró que la reacción estaba completa y la mezcla de la reacción se diluyó con EtOAc (200 mL). La solución se secó sobre MgSO_{4} anhidro y los sólidos se filtraron y se sumergieron con EtOAc (50 mL). La evaporación del solvente produjo el producto como vidrio amarillo (0,581 g, 2,0 mmol). ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,73 (d, 1H, J = 4,57 Hz), 7,08 (s, 1H), 4,0-3,4 (m, 12H), 2,4-1,8 (m, 4H).

Ejemplo 3(g) 8-Hidroxi-7,9-dimetoxi-1,2,3,11a-tetrahidropirrolo[2,1-c][1,4]benzodiacepin-5-ona (130, DRH-168) (Ver la figura 21) Metil 4-hidroxi-3,5-dimetoxibenzoato (121)

Se añadió ácido sulfúrico concentrado (3 mL) gota a gota a una solución de 81 (20,24 g, 102,1 mmol) en metanol en reflujo (70 mL). La mezcla de la reacción se calentó a reflujo durante otras 5 horas y a continuación se enfrió a temperatura ambiente y se concentró a un tercio de su volumen original. El concentrado se vertió sobre hielo machacado (c. 150 mL) y se dejó estar durante 30 minutos. La mezcla acuosa se extrajo con etil acetato (3 x 100 mL) y la fase orgánica combinada se lavó con agua destilada (3 x 100 mL), salmuera (3 x 100 mL) y se secó sobre MgSO_{4} anhidro. La retirada del solvente en exceso bajo una presión reducida consiguió el producto como un sólido amarillo, 121 (18,39 g, 86,7 mmol); ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 3,9 (s, 3H), 3,95 (s, 3H), 3,975 (s, 3H), 6,1 (s, 1H), 7,3 (s, 2H); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) 3 166,9, 146,6, 139,2, 121,0, 106,6, 56,4, 52,1.

Metil 4-Benciloxi-3,5-dimetoxibenzoato (122)

Se añadió bencil cloruro (11,04 g, 86,9 mmol) a una solución agitada de 121 (19,22 g, 90,8 mmol) sobre K_{2}CO_{3} (6,59 g, 47,7 mmol) en MeOH anhidro (175 mL) y la mezcla se calentó a reflujo durante 12 h. El solvente en exceso se retiró bajo presión reducida y el residuo se extrajo con benceno (3 x 100 mL). La capa orgánica se lavó con H_{2}O (3 x 100 mL), salmuera (3 x 100 mL) y se secó sobre MgSO_{4} anhidro. La evaporación del solvente consiguió un aceite naranja que cristalizó en posición. El sólido se volvió a disolver en EtOAc, y se lavó brevemente con NaOH 1N (100 mL), H_{2}O (100 mL), salmuera (100 mL) y se secó sobre MgSO_{4}. La evaporación del solvente en exceso produjo el producto como un sólido amarillo 122 (19,20 g, 63,6 mmol); ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 3,8 (s, 3H), 3,85 (s, 3H), 3,9 (s, 3H), 5,1 (s, 2H), 7,3-7,5 (m, 7H); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 166,7, 153,2, 140,8, 137,3, 128,7, 128,6, 128,4, 128,4, 128,2, 128,0, 127,7, 125,3, 106,7, 74,9, 56,1, 52,2.

Metil 2-nitro-4-benciloxi-3,5-dimetoxibenzoato (123)

Se añadió nitrato de cobre molido de manera fina (Cu(NO_{3})_{2}, 14,79 g, 78,7 mmol) porción por porción a una solución agitada vigorosamente del sustrato (19,00 g, 62,9 mmol) en anhídrido acético (120 mL) mientras se mantenía la temperatura de reacción por debajo de 40ºC. La mezcla de la reacción se agitó durante 1 hora y se vertió a continuación sobre hielo (800 mL). La mezcla acuosa se dejó agitándose durante 1 hora y el producto se recogió mediante filtración para conseguir un sólido amarillo (18,7 g); ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 3,85 (s, 3H), 3,95 (s, 3H), 3,96 (s, 3H), 5,19 (s, 2H), 7,3-7,5 (m, 6H); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 163,2, 154,3, 146,0, 145,2, 136,2, 128,7, 128,5, 128,4, 128,3, 117,8, 108,52, 75,5, 62,7, 56,5, 53,0.

2-Nitro-4-benciloxi-3,5-ácido dimetoxibenzoico (124)

Se añadió hidróxido de potasio (10,84 g, 193,6 mmol) a una solución agitada del sustrato (18,7 g, 53,9 mmol) en metanol anhidro (220 mL) y la mezcla de la reacción se calentó en reflujo durante 2 h. La mezcla de la reacción se dejó enfriar y acidificar a un pH de 2 con HCl 1N y se extrajo con cloroformo (3 x 100 mL). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (3 x 200 mL), salmuera (3 x 200 mL) y se secaron sobre MgSO_{4}. La evaporación del solvente en exceso mediante evaporación giratoria bajo presión reducida consiguió el producto como un sólido amarillo (17,01 g, 51,1 mmol, 95%); ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 3,9 (br s, 3H), 3,9 (br s, 3H), 5,1 (br s, 2H), 7,2-7,5 (m, 6H).

N-(4-Benciloxi-3,5-dimetoxi-2-nitrobenzoil)pirrolidina-2-metanol (125)

Se añadió una cantidad catalítica de DMF (5 gotas) a una solución agitada de 124 (10 g, 30,0 mmol) y oxalil cloruro (4,65 g, 36,00 mmol) en CH_{3}CN seco (115 mL) bajo una atmósfera de nitrógeno. La mezcla de la reacción se dejó agitándose de un día para el otro y el cloruro ácido resultante se usó directamente en la siguiente parte del procedimiento. Se añadió 4-benciloxi-3,5-dimetoxi-2-nitro-benzoil cloruro en CH_{3}CN anhidro (115 mL) gota a gota durante 0,5 horas a una solución agitada de pirrolidina metanol (3,34 g, 33,03 mmol, 1,1 eq) y TEA (7,58 g, 75,1 mmol, 2,5 eq) en DCM anhidro (100 mL) a 0ºC bajo una atmósfera de nitrógeno y la mezcla de la reacción se dejó agitándose de un día para el otro a temperatura ambiente. La mezcla de la reacción se lavó con HCl 1N (2 x 100 mL) y la capa orgánica se lavó con H_{2}O destilada (2 x 100 mL), salmuera (2 x 100 mL) y se secó sobre MgSO_{4} anhidro. La evaporación del solvente produjo un vidrio marrón (8,71 g, 20,9 mmol, 70%); ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,7-2,2 (m, 4H), 3,3-3,5 (m, 2H), 3,7-3,9 (m, 2H), 3,9 (s, 3H), 4,0 (s, 3H), 4,2-4,3 (m, 1H), 5,1 (s, 2H), 6,85 (s, 1H), 7,3-7,5 (m, 5H); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 167,3, 156,8, 148,2, 142,3, 136,4, 136,0, 129,0, 128,5, 128,4, 104,8, 75,6, 65,7, 62,8, 61,4, 56,6, 50,2, 28,3, 24,5.

N-(2-Amino-4-Benciloxi-3,5-dimetoxibenzoil)pirrolidina-2-metanol (126)

Se añadió hidrato de hidracina (2,31 g, 72,2 mmol) gota a gota a una solución de 125 (6,01 g, 14,4 mmol) en metanol (60 mL) a reflujo suave sobre níquel Raney (1,1 g, lodo). La evolución vigorosa resultante del gas hidrógeno disminuyó después de 10 minutos aproximadamente y la reacción se consideró completa mediante TLC después de 2 h. La mezcla de la reacción se filtró a través de celita y el solvente se evaporó. Se añadió agua destilada (100 mL) al residuo, y la mezcla acuosa se extrajo con EtOAc (3 x 100 mL) y la fase orgánica combinada se lavó con H_{2}O (3 x 100 mL) y salmuera (3 x 100 mL) y se secó sobre MgSO_{4} anhidro. La evaporación del solvente consiguió en producto como aceite marrón (3,97 g, 10,3 mmol, 73%): ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,6-2,2 (m, 4H), 3,5-3,8 (m, 4H), 3,8 (s, 3H), 3,9 (s, 3H), 4,4 (br s, 1H), 5,1 (s, 2H), 6,6 (s, 1H), 7,3-7,6 (m, 5H); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 171,5, 144,9, 143,5, 141,9, 137,5, 134,6, 128,6, 128,5, 128,3, 128,2, 128,0, 115,1, 107,3, 75,1, 66,9, 61,0, 60,6, 60,4, 56,9, 50,9, 28,5, 24,9, 21,1, 14,2.

N-(4-Benciloxi-3,5-dimetoxi-2-[(2'-trimetilsililetoxi)carbonilamino[benzoil)pirrolidina-2-metanol (127)

Se añadió una solución de piridina anhidro (0,21 g, 2,6 mmol) en DCM anhidro (10 mL) gota a gota durante 15 minutos a una solución agitada de 2-(trimetilsilil)etanol (0,92 g, 7,8 mmol) y trifosgeno (0,77 g, 2,6 mmol) en DCM anhidro (30 mL). La mezcla de la reacción se dejó agitándose de un día para el otro y la solución resultante de 2-(trimetilsilil) etil cloroformato se añadió gota a gota durante 0,5 horas a la amina 126 (1,98 g, 5,1 mmol) y la piridina anhidro (1,22 g, 15,4 mmol) en diclorometano destilado (70 mL) a 0ºC. La mezcla de la reacción se dejó agitándose de un día al otro a temperatura ambiente, se diluyó con DCM anhidro (100 mL), se lavó con HCl 1N (3 x 100 mL), H_{2}O (3 x 100 mL), salmuera (3 x 100 mL) y se secó sobre MgSO_{4} anhidro. La filtración y la evaporación del solvente produjo el producto como un vidrio sin color (1,43 g, 2,7 mmol, 53%); ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) 5-0,05 (s, 9H), 0,94-0,99 (m, 2H), 1,66-2,12 (m, 4H), 3,32-3,54 (m, 2H), 3,74-3,88 (m, 8H), 4,05-4,22 (m, 3H), 4,69 (br s, 1H), 4,97 (s, 2H), 6,57 (s, 1H), 6,64 (br s, 1H), 7,23-7,43 (m, 5H); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 170,1, 155,1, 151,4, 148,1, 142,0, 137,1, 128,4, 128,3, 128,1, 121,2, 105,6, 75,3, 66,1, 64,0, 61,3, 61,0, 56,3, 50,6, 28,7, 24,7, 17,6, -1,5.

(11S,11aS)-8-benciloxi-7,9-dimetoxi-11-hidroxi-10-N-(2'-trimetilsililetoxicarbonil)-1,2,3,10,11,11a-hexahidro-5H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiacepin-5-ona (128)

Se añadió DMSO anhidro (0,57 g, 7,2 mmol) en DCM seco (5 mL) gota a gota durante 30 minutos a una solución agitada de oxalil cloruro (0,46 g, 3,6 mmol) en DCM seco (5 mL) bajo una atmósfera de nitrógeno a -45ºC. Después de agitar durante 15 minutos, el sustrato (1,35 g, 2,6 mmol) en DCM seco (15 mL) se añadió gota a gota durante 45 minutos a la mezcla de la reacción, que se agitó a continuación durante otros 45 minutos a -45ºC. Se añadió TEA (1,0 g, 10,2 mmol) gota a gota a la mezcla durante 0,5 horas y se agitó durante otros 15 minutos. La mezcla de la reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y la mezcla de la reacción se diluyó con H_{2}O (100 mL) y se separaron las fases. La fase orgánica se lavó con HCl 1N (3 x 50 mL), agua (3 x 50 mL), salmuera (3 x 50 mL) y se secó sobre MgSO_{4}. La filtración y evaporación del solvente en exceso consiguió el producto como un vidrio crema (1,24 g, 2,3 mmol, 92%); ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta -0,05 (s, 9H), 0,88-0,95 (m, 2H), 2,06-2,23 (m, 4H), 3,46-3,64 (m, 2H), 3,75-4,02 (m, 7H), 4,11-4,27 (m, 2H), 5,13 (s, 2H), 5,65 (d, 1H, J = 9,71 Hz), 7,11 (s, 1H), 7,34-7,54 (m, 5H); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 166,8, 157,2, 153,1, 150,5, 143,4, 137,1, 129,2, 128,4, 128,3, 128,3, 128,1, 123,0, 106,2, 85,7, 75,0, 64,7, 61,7, 59,8, 56,1, 46,4, 28,6, 23,0, 17,5, -1,5, -1,6.

(11S,11aS)-8,11-dihidroxi-7,9-dimetoxi-10-N-(2'-trimethylsililetoxicarbonil)-1,2,3,10,11,11a-hexahidro-5H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiacepin-5-ona (129)

Se añadió catalizador 10% Pd/C (0,22 g) a una solución del sustrato 128 (0,95 g, 2,1 mmol) en absoluto EtOH (200 mL). La mezcla de la reacción se hidrógeno bajo presión usando un hidrogenador Parr a 55 psi H_{2} durante 18 h. La mezcla de la reacción se filtró a través de celita, y la celita se lavó con EtOH caliente, teniendo cuidado de no permitir el secado de la almohadilla de filtración. La retirada del solvente en exceso consiguió el producto como vidrio sin color (0,84 g, 1,9 mmol, 92%); ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,07 (s, 9H), 0,91-0,97 (m, 2H), 2,07-2,20 (m, 4H), 3,52-3,75 (m, 2H), 3,98-4,26 (m, 9H), 5,65 (d, 1H, J = 9,71 Hz), 6,26 (br s, 1H), 7,14 (s, 1H); ^{13}C NMR (CDCl_{3}) \delta 167,0, 157,3, 146,8, 143,4, 141,3, 124,9, 123,5, 105,5, 105,2, 85,8, 64,8, 64,6, 64,5, 61,2, 60,0, 56,4, 46,4, 28,9, 28,7, 23,1, 23,0, 17,3, -1,3, -1,5, -1,7.

7,9-dimetoxi-8-Hidroxi-1,2,3,11a-tetrahidropirrolo[2,1-c][1,4]benzodiacepin-2-ona (130)

Se añadió una solución de TBAF en THF (4,3 mL de una solución 1N, 4,3 mmol) a una solución agitada rápidamente de 129 (0,37 g, 0,9 mmol) en THF (10 mL) y la mezcla de la reacción se calentó a 35ºC durante 2 h. La mezcla de la reacción se diluyó con EtOAc (50 mL), se secó sobre MgSO_{4} anhidro, se filtró y la retirada de solvente en exceso consiguió el producto como aceite marrón (0,18 g, 0,7 mmol, 78%). H^{1}NMR (CDCl_{3}) mezcla de C11/C11'R/S éteres metil carbinolamina \delta 7,08 (s, 1H), 4,43 (d, 1H, J = 8,79 Hz), 4,05-3,23 (m, 12H), 2,3-1,48 (m, 4H).

Ejemplos 3(h) a (j)

Síntesis de 7-Fenil PBDs (ver la figura 22) Síntesis f del 7-Yodo-N10-Troc-PBD Intermedio (134, AG/91) ácido 5-Iodo-2-(2',2',2'-tricloroetoxicarbonilamino) benzoico (132)

Se añadió una solución de Troc-Cl (2,88 mL, 20,9 mmol) en diclorometano seco (20 mL) gota a gota a una solución de ácido 5-iodoantranílico 131 (5 g, 19 mmol) y piridina (3,1 mL, 38 mmol) en diclorometano seco (30 mL) a 0ºC. La solución se agitó durante 5 horas a temperatura ambiente y a continuación se lavó con HCl 1N (2 x 25 mL), agua (1 x 25 mL) y salmuera (1 x 25 mL). La fase orgánica se secó sobre MgSO_{4} y se evaporó, el residuo se recristalizó a partir de etil acetato para conseguir el compuesto del título como un sólido amarillo (6,2 g, 75%): m.p. 248 C (etil acetato). ^{1}H NMR (CDCl_{3}, DMSO-d_{6}) \delta 4,83 (s, 2H); 7,78-7,82 (dd, J = 9,2,
J = 2,2 Hz, 1H); 8,18 (d, J = 9 Hz, 1H); 8,38 (d, J = 2,2 Hz, 1H); 9,0-10,5 (bs, 1H); 11,04 (s, 1H). ^{13}C NMR (CDCl_{3}, DMSO-d_{6}) \delta 74,4, 84,6, 95,2, 117,7, 120,7, 140, 140,8, 142,8, 151,5, 169. MS: m/e (intensidad relativa) 437 (M-1, 60), 289 (55), 272 (37), 245 (100), 218 (27). HRMS Calculado para C_{10}H_{7}Cl_{3}INO_{4}: 436,8485. Encontrado: 436,8485.

N-(5-Iodo-(2',2',2'-tricloroetoxicarbonilamino)benzoil)pirrolidina-2-metanol (133)

Se añadió oxalil cloruro (0,88 mL, 10 mmol) a una suspensión de 132 (4 g, 9,1 mmol) en diclorometano seco (50 mL), seguido por 3-4 gotas de DMF como catalizador. La solución se agitó a temperatura ambiente durante 12 horas, y a continuación se usó directamente en la siguiente etapa. El cloruro ácido formado de nuevo se añadió gota a gota, durante 1 hora, a una solución de 2S-(+)-pirrolidinametanol (1,01 g, 10 mmol) y trietilamina (3,16 mL, 22,7 mmol) en diclorometano seco (50 mL) a -20ºC. La mezcla de la reacción se dejó agitándose durante otra hora a -20ºC y a continuación se lavó con HCl diluido (1N, 2 x 50 mL), agua (50 mL) y salmuera (50 mL), se secó sobre MgSO_{4} y se evaporó. El producto crudo se sometió a cromatografía por desorción súbita de columna para conseguir el compuesto del título como aceite amarillo pálido (3,8 g, 81%): ^{1}H NMR (CDCl_{3}, DMSO-d_{6}) \delta 1,77-2,28 (m, 4H); 3,48 (bs, 2H); 3,7 (dd, J = 11,4, J = 6,2, 1H); 3,94 (d, J = 11,4 Hz, 1H); 4,40 (bs, 1H); 4,75 (d, J = 12 Hz, 1H); 4,84 (d, J = 12 Hz, 1H); 7,66-7,72 (m, 2H); 7,85 (d, J = 8,6 Hz, 1H); 8,91 (bs, 1H). ^{13}C NMR (CDCl_{3}, DMSO-d_{6}) \delta 25,0, 28,1, 51,2, 60,7, 65,3, 74,5, 86,1, 95,1, 123,0, 128,0, 135,6, 136,1, 139,8, 151,8, 168,4. IR (Nujol): cm^{-1} 3415, 3215, 1745, 1605, 1527, 1445, 1377, 1221, 1101, 1056, 822, 733. MS: m/e (intensidad relativa) 522 (M^{+}., 3), 521 (M^{+}., 1), 520 (M^{+}., 3), 491 (3), 490 (1), 489 (3), 372 (7), 341 (28), 272 (80), 245 (14), 216 (14), 83 (15), 70 (100). HRMS Calculado para C_{15}H_{16}Cl_{3}IN_{2}O_{4}: 521,9193. Encontrado: 521,9125. [\alpha]^{25}_{D} = +123,4º (c = 2,8, CHCl_{3}).

7-Iodo-10-N-(2',2',2'-tricloroetoxicarbonil)-1,2,3,10,11,11a-hexahidro-5H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiacepin-5-ona (134)

Una solución de DMSO (1,79 mL, 25,67 mmol) en diclorometano seco (35 mL) se añadió lentamente (30 minutos) a una solución de oxalil cloruro (12,8 mmol) en diclorometano seco (41,4 mL) a -45ºC. La mezcla se dejó agitándose durante 25 minutos y a continuación se trató con una solución de 133 (4,78 g, 9,2 mmol), en diclorometano seco (80 mL), manteniendo la temperatura por debajo de -40ºC. Después de otros 60 minutos a -45ºC, se añadió una solución de trietilamina (5,1 mL) en diclorometano (25 mL), y la mezcla de la reacción se dejó calentar a temperatura ambiente. La fase orgánica se lavó con agua (180 mL), HCl diluido (1N, 2 x 100 mL) y salmuera (200 mL). La retirada del solvente en exceso consiguió el producto crudo que se purificó mediante cromatografía por desorción súbita (etil acetato/éter de petróleo 70/30) para dar un aceite amarillo pálido (3,6 g, 76%): ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 2,02-2,15 (m, 4H); 3,37-3,60 (m, 2H); 3,70-3,77 (m, 1H); 4,19 (bs, 1H); 4,28 (d, J = 12 Hz, 1H); 5,17 (d, J = 12 Hz, 1H); 5,66 (d, J = 9,7 Hz, 1H); 7,10 (d, J = 8,3 Hz, 1H); 7,79 (dd, J = 8,3, J = 2,2 Hz, 1H); 8,10 (d, J = 2,2 Hz, 1H). ^{13}C NMR (CDCl_{3}) \delta 23,0, 28,8, 46,5, 59,6, 75,1, 86,0, 93,2, 94,8, 132,0, 133,6, 135,0, 137,9, 140,1, 154,1, 165,2. IR (Nujol): cm^{-1} 3500-3000, 1716, 1619, 1458, 1376, 1312, 1075, 720. MS: m/e (intensidad relativa) 520 (M^{+}., 62), 519 (22), 518 (62), 491 (15), 371 (19), 342 (39), 272 (84), 216 (31), 119 (27), 70 (100). HRMS Calculado para C_{15}H_{14}Cl_{3}IN_{2}O_{4}: 519,9036. Encontrado: 519,9037. [\alpha]^{25}_{D} = +137,4º (c = 1,15, CHCl_{3}).

Ejemplo 3(h) Síntesis del 7-Fenil-PBD (136, AG/129)

40

7-Fenyl-10-N-(2',2',2'-tricloroetoxicarbonil)-1,2,3,10,11,11a-hexahidro-5-H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiacepin-5-ona (135)

Una suspensión de 134 (0,5 g, 1,0 mmol), ácido bencenoborónico (0,15 g, 1,22 mmol), Pd(PPh_{3})_{4} y Na_{2}CO_{3} anhidro (0,16 g, 1,48 mmol) en benceno destilado (20 mL), agua (2 ml) y etanol (2 mL) se calentó a reflujo de un día para el otro. La mezcla de la reacción se diluyó con etil acetato (20 mL) y se lavó con agua (2 x 20 mL). La fase orgánica se secó sobre MgSO_{4} y se evaporó para producir un aceite amarillo crudo. La purificación mediante cromatografía por desorción súbita (etil acetato/éter de petróleo 30/70 a 70/30) proporcionó el compuesto del título (0,43 g, 95%): ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,98-2,09 (m, 2H); 2,12-2,15 (m, 2H); 3,51-3,62 (m, 2H); 3,7-3,79 (m, 1H); 4,28 (d, J = 12,1 Hz, 1H); 4,73 (d, J = 4,4 Hz, 1H); 5,18 (d, J = 12,1 Hz, 1H); 5,66-5,73 (dd, J = 4,8, J = 9,8 Hz, 1H); 7,33-7,48 (m, 4H); 7,61-7,70 (m, 3H); 8,02 (d, J = 2,2 Hz, 1H). ^{13}C NMR (CDCl_{3}) \delta 22,9, 28,7, 46,4; 59,8; 75,0; 77,3; 86,0; 94,9; 127,0; 127,3; 128,0; 128,9; 129,6; 130,8; 132,9; 133,5; 139,2; 141,1; 154,4; 166,9. MS: m/e (intensidad relativa) 468 (H^{+}., 10), 292 (25), 222 (100), 195 (10), 166 (35), 140 (10), 70 (70). HRMS Calculado para C_{21}H_{19}C_{13}N_{2}O_{4}: 468,0411. Encontrado: 468,0410. [\alpha]^{25}_{D} = +103,80 (c=0,42, CHCl_{3}).

(11aS)-7-Fenil-1,2,3,11a-tetrahidro-5H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiacepin-5-ona (136, AG/129)

Se añadió el par Cd/Pb (0,47 g) porción a porción a una solución agitada vigorosamente de 135 (0,33 g, 0,7 mmol) en THF (5 mL) y de acetato de amonio ac. (1M, 5 mL). La suspensión se dejó agitándose a temperatura ambiente durante 2 horas, a continuación se vertió en etil acetato (200 mL), se secó con MgSO_{4} y se filtró. El filtrado se evaporó y el residuo se purificó mediante cromatografía por desorción súbita de columna (etil acetato) para conseguir el compuesto del título como aceite sin color (0,19 g, 98%): ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 2,0-2,12 (m, 2H); 2,29-2,37 (m, 2H); 3,53-3,63 (m, 1H); 3,76-3,92 (m, 2H); 7,36-7,79 (m, 8H); 8,28 (d, J = 2,2 Hz, 1H). ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 24,4; 29,8; 46,9; 53,8; 126,9; 127,3; 127,7; 128,0; 128,2; 128,8; 128,9; 129,1; 130,1; 130,5; 139,5; 145,0; 164,5; 165,1. IR (Nujol): cm^{-1} 3000-2800, 1620, 1455, 1377, 1239, 1239, 1014, 990, 761,728, 697. HRMS Calculado para C_{18}H_{16}N_{2}O: 276,1261. Encontrado: 276,1262. [\alpha]^{25}_{D} + 131,4º (c = 0,19, CHCl_{3}).

Ejemplo 3(i) Síntesis del 7-(4'-Metoxifenil)-PBD (138, AG/135)

\vskip1.000000\baselineskip

41

\vskip1.000000\baselineskip

(11S,11aS)-7-(4'-Metoxi)fenil-11-hidroxi-10-N-(2'',2'',2''-tricloroetoxicarbonil)-1,2,3,10,11a-hexahidro-5H-pirrolo[2,1-c]-[1,4]benzodiacepin-5-ona (137)

134 (0,5 g, 1,0 mmol), 4-metoxibenzenobórico (0,19 g, 1,2 mmol), Pd(PPh_{3})_{4} (15 mg) y Na_{2}CO_{3} anhidro (0,16 g, 1,48 mmol) se calentaron a reflujo, de un día para el otro, en una mezcla de benceno destilado (20 mL), etanol (2 mL) y agua (2 mL). La mezcla de la reacción se diluyó con etil acetato (20 mL) y se lavó con agua (2 x 20 mL). La fase orgánica se seco sobre MgSO_{4} y se evaporó para producir un aceite amarillo crudo. La purificación mediante desorción súbita (etil acetato/éter de petróleo 50/50) consiguió el compuesto puro (0,34 g, 71%): ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 1,96-2,16 (m, 4H); 3,54-3,63 (m, 2H); 3,71-3,79 (m, 1H); 3,85 (s, 3H); 4,18 (d, J = 4,8 Hz, 1H); 4,29 (d, J = 12,1 Hz, 1H); 5,20 (d, J = 12,1 Hz, 1H); 5,66-5,72 (dd, J = 4,5, J = 9,8 Hz, 1H); 6,97 (d, J = 8,8 Hz, 2H); 7,37 (d, J = 8,2 Hz, 1H); 7,57 (d, J = 8,8 Hz, 2H); 7,64 (dd, J = 2,4, J = 8,2 Hz, 1H); 7,97 (d, J = 2 Hz, 1H). ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 23,0; 28,7; 46,4; 55,4; 59,6; 75,1; 86,1; 94,9; 114,3; 126,8; 129,1; 130,6; 131,7; 132,0; 132,2; 132,3; 133,5; 140,7; 154,5; 159,6; 166,9. IR (Nujol): cm^{-1} 3000-2800, 1740, 1620, 1462, 1378, 1247, 1082, 816, 721. MS: m/e (intensidad relativa) 498 (M^{+}., 15), 350 (20), 321 (15), 252 (100), 196 (22), 182 (5), 126 (7), 70 (28). HRMS Calculado para C_{22}H_{21}Cl_{3}N_{2}O_{5}: 498,0515. Encontrado: 498,0513. [\alpha]^{25}_{D} = +149,4º (0,25, CHCl_{3}).

(11aS)-7-(4'-Metoxifenil)-1,2,3,11a-tetrahidro-5H-pirrolo[2,1-c]-[1,4]benzodiacepin-5-ona (138, AG/135)

Se añadió el par Cd/Pb (0,51 g) porción a porción a una solución agitada vigorosamente de 137 (0,34 g, 0,76 mmol) en THF (5 mL) y de acetato de amonio ac. (1M, 5 mL). La suspensión se dejó agitándose a temperatura ambiente durante 2 horas, a continuación se vertió en etil acetato (200 mL), se secó con MgSO_{4} y se filtró. La solución orgánica se evaporó y el residuo se purificó mediante cromatografía por desorción súbita de columna (etil acetato) para conseguir el compuesto del título como aceite sin color (0,1 g, 70%): ^{1}H NMR (CDCl_{3}, DMSO-d6) \delta 2,1 (m, 2H); 2,3-2,4 (m, 2H); 3,5-3,62 (m, 1H); 3,85 (m, 5H); 7,0 (d, J = 8,8 Hz, 2H); 7,36 (d, J = 8,3 Hz, 2H); 7,6 (d, J = 8,8 Hz, 2H); 7,72 (dd, J = 2,2, J = 8,2 Hz 1H); 7,8 (d, J = 4,4 Hz, 1H,); 8,2 (d, J = 2,2 Hz, 1H). ^{13}C NMR (270 MHz, CDCl_{3}, DMSO-d_{6}) \delta 24,1; 29,5; 46,7; 53,6; 55,3; 77,3; 114,1; 114,3; 127,4; 127,6; 127,8; 128,0; 129,3; 131,9; 138,7; 144,3; 159,4; 164,2; 164,8. IR (Nujol): cm^{-1} 3000-2800, 1662, 1607, 1491, 1454, 1245, 1069, 823, 759. MS: m/e (intensidad relativa) 306 (M^{+}., 100), 277 (15), 237 (10), 182 (12), 153 (10), 132 (5), 70 (10). HRMS Calculado para C_{19}H_{18}N_{2}O_{2}: 306,1367. Encontrado: 306,1365. [\alpha]^{25}_{D} = +773,1º (c = 0,11, CH3OH).

Ejemplo 3(j) Síntesis del 7-(3'-Nitrofenil)-PBID (140, AG/150)

\vskip1.000000\baselineskip

42

\vskip1.000000\baselineskip

(11S,11aS)-7-(3'-Nitro)fenil-11-hidroxi-10-N-(2'',2'',2''-tricloroetoxicarbonil)-1,2,3,10,11a-hexahidro-5H-pirrolo[2,1-c]-[1,4]benzodiacepin-5-ona (139)

135 (0,5 g, 1,0 mmol), 3-metoxibenzenobórico (0,2 g, 1,2 mmol), Pd(PPh_{3})_{4} (25 mg) y Na_{2}CO_{3} anhidro (0,16 g, 1,48 mmol) se calentaron a reflujo, de un día para el otro, en una mezcla de benceno destilado (20 mL), etanol (2 mL) y agua (2 mL). La mezcla de la reacción se diluyó con etil acetato (20 mL) y se lavó con agua (2 x 20 mL). La fase orgánica se secó sobre MgSO_{4} y se evaporó para producir un aceite amarillo crudo. La purificación mediante desorción súbita (etil acetato/éter de petróleo 50/50) consiguió el compuesto puro (0,45 g, 90%): ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 2,0-2,2 (m, 4H); 3,6 (m, 2H); 3,76 (m, 1H); 4,31 (d, J = 12 Hz, 1H); 5,19 (d, J = 12 Hz, 1H); 5,76 (d, J = 10 Hz, 1H); 7,5-8,5 (m, 8H). ^{13}C NMR (68,7 MHz, CDCl_{3}) \delta 22,9, 28,7, 46,4, 59,7, 75,0, 86,0, 94,8, 121,7, 122,6, 127,5, 129,4, 129,9, 131,2, 132,0, 132,8, 133,9, 138,3, 140,7, 148,6, 154,1, 166,3. IR (Nujol): cm^{-1} 3000-2800, 1721, 1626, 1530, 1455, 1349, 1062, 821, 759. MS: m/e (intesidad relativa) 513 (M^{+}.), 336 (55), 321 (100), 292 (15), 267 (54), 221 (16), 197 (18), 164 (15), 70 (22). HRMS Calculado para C_{21}H_{18}C_{13}N_{3}O_{6}: 515,0233. Encontrado: 515,0235.
[\alpha]^{25}_{D} = +129,6º (c = 0,1, CH_{3}OH).

(11aS)-7-(3'-Nitrofenil)-1,2,3,11a-tetrahidro-5H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiacepin-5-ona (140, AG-150)

Se añadió una solución de TBAF en THF (solución 1M, 7,6 mL, 7,6 mmol) a una solución 139 (0,39 g, 0,8 mmol) en THF (20 mL) y la mezcla de la reacción se dejó agitándose durante 2 horas a temperatura ambiente. La solución se diluyó con etil acetato (50 mL) y se lavó con agua (3 x 50 mL) para retirar el TBAF en exceso. La fase orgánica se secó sobre MgSO4 y se evaporó a sequedad. El residuo se purificó mediante cromatografía mediante desorción súbita de columna (CHCl_{3}), para conseguir el compuesto del título como un aceite sin color (0,15 g, 63%): ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,8-2,2 (m, 3H); 3,5-4,0 (m, 3H); 7,3-8,5 (m, 7H). IR (Nujol): cm^{-1} 3000-2850, 1624, 1527, 1466, 1349, 1244, 757, 740. MS: m/e (intensidad relativa) 321 (M^{+}., 100), 292 (8), 265 (5), 224 (5), 197 (7), 151 (5), 70 (5). HRMS Calculado para C_{18}H_{15}N_{3}O_{3}: 321,1115. Encontrado: 321,1113. [\alpha]^{25}_{D} = +129,6º (c = 0,1, CH_{3}OH).

Ejemplo 3(k) 8-Benciloxi-7,9-dimetoxi-1,2,3,11a-tetrahidropirrolo[2,1-c][1,4]benzodiacepin-5-ona (143, DRH-105) (Ver la figura 23)

43

N-(4-Benciloxi-3,5-dimetoxi-2-[tricloroetiloxicarbonilamino]benzoil)pirrolidina-2-metanol (141)

Una solución de 2,2,2-tricloroetilcloroformato (1,08 g, 4,8 mmol) en diclorometano destilado (10 mL) se añadió gota a gota durante 0,5 horas a una solución de piridina anhidro (0,80 g, 10,1 mmol) y 126 (Ejemplo 3(g)) (1,95 g, 5,1 mmol) en diclorometano destilado (20 mL) a 0ºC. Después de 1 h, la mezcla de la reacción se diluyó con DCM anhidro (100 mL) y se lavó con HCl 1N (2 x 100 mL), H_{2}O (100 mL), salmuera (100 mL) y se secó sobre MgSo_{4} anhidro. La evaporación del solvente produjo un aceite marrón que se purificó mediante cromatografía por desorción súbita de columna (gel de sílice,EtOAc) para conseguir el producto como vidrio amarillo (2,65 g, 4,7 mmol, 94%); ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,6-2,2 (m, 4H), 3,3-3,6 (m, 2H), 3,6-3,9 (m, 2H), 3,8 (s, 3H), 3,9 (s, 3H), 4,2-4,3 (m, 1H), 4,8 (s, 2H), 5,1 (s, 2H), 6,6 (s, 1H), 7,2 (br s, 1H), 7,3-7,5 (m, 5H); ^{13}C NMR (67,8 MHZ, CDCl_{3}) \delta 171,5, 153,1, 142,0, 137,023, 128,3, 128,3, 128,2, 120,1, 105,3, 95,4, 75,3, 74,6, 66,5, 61,4, 61,3, 56,3, 50,7, 28,7, 24,6.

(11S,11aS)-8-benciloxi-7,9-dimetoxi-11-hidroxi-10-N-(2',2',2'-tricloroetoxilcarbonil)-1,2,3,10,11,11a-hexahidro-5H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiacepin-5-ona (142)

Se añadió DMSO anhidro (0,97 mL, 12,5 mmol) en DCM seco (10 mL) gota a gota durante 30 minutos a una solución agitada de oxalil cloruro (3,08 mL de una solución 2N en DCM; 6,2 mmol) en DCM seco (10 mL) bajo una atmósfera de nitrógeno a -45ºC. Después de agitar durante 15 minutos, el sustrato (2,46 g, 4,38 mmol) en DCM seco (25 mL) se añadió gota a gota durante 45 minutos a la mezcla de la reacción, que se agitó a continuación durante otros 45 minutos a-45ºC. Se añadió TEA seco (1,77 g, 17,5 mmol) gota a gota a la mezcla durante 0,5 horas y se agitó durante otros 15 minutos. La mezcla de la reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y la mezcla de la reacción se diluyó con H_{2}O (100 mL) y se dejó que se separar las fases. La fase orgánica se lavó con HCl 1N (2 x 50 mL), agua (2 x 50 mL), salmuera (2 x 50 mL) y se secó sobre MgSO_{4}. El solvente se evaporó para conseguir el producto como un vidrio crema (3,92 g, 11,7 mmol; 97%): ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 2,01-2,17 (m, 4H), 3,44-3,77 (m, 2H), 3,87-3,90 (m, 1H), 3,88 (s, 3H), 3,91 (s, 3H), 4,68 (dd, 2H), 5,01 (s, 2H), 5,62 (d, 1H), 7,08 (s, 1H), 7,27-7,48 (m, 5H); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 166,7, 155,2, 153,6, 150,5, 143,6, 137,1, 129,8, 129,3, 128,4, 128,3, 128,2, 128,1, 121,8, 106,5, 106,3, 94,7, 86,2, 85,9, 75,6, 75,4, 75,2, 75,0, 61,8, 61,5, 60,2, 59,870, 56,1, 56,0, 46,5, 46,3, 45,8, 28,7, 28,6, 23,0.

Se añadió el par 10% Cd/Pb (1,2 g; 10 mmol Cd) a una solución rápidamente agitada de 142 (1,08 g; 1,9 mmol) en una mezcla de THF (15 mL) y NH_{4}OAc 1N (15 mL). Después de 3,5 h, el TLC reveló que la reacción estaba todavía incompleta y se añadió más par 10% Cd/Pb (500 mg). Después de otra 1 hora, la mezcla de la reacción se diluyó con EtOAc (150 mL). La solución se secó sobre MgSO_{4} anhidro y los sólidos se filtraron y sumergieron con EtOAc (50 mL). La retirada del solvente en exceso produjo el producto como un vidrio amarillo (0,48 g, 1,3 mmol, 68%). H1 NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,73 (d, 1H, J = 4,4 Hz), 7,36 (s, 2H), 7,31.

Ejemplo 3 Síntesis del C8-NH2 PBD (151, AG/149) (ver la figura 13)

44

Ácido 4-Nitro-2-(2',2',2'-tricloroetoxicarbonilamino)benzoico (145)

Se añadió una solución de 2,2,2-tricloroetilcloroformato (Troc-Cl) (1,66 mL, 12,1 mmol) en diclorometano seco (25 mL) gota a gota a una solución de ácido 4-nitroantranílico 144 (2 g, 11 mmol) y piridina (1,78 mL, 22 mmol) en diclorometano (25 ml) a 0ºC. La solución se dejó agitándose a 25ºC durante 5 horas. La mezcla de la reacción se lavó con HCl diluido (1N, 2 x 50 mL), agua (1 x 50 mL), salmuera (1 x 25 mL) y se secó sobre MgSO_{4}. La retirada del solvente en exceso mediante evaporación giratoria bajo una presión reducida consiguió el producto crudo que se usó en la reacción posterior sin más purificación.

N-[4-nitro-(2',2',2'-tricloroetoxicarbonilamino)benzoil]pirrolidina-2-metanol (146)

Se añadió oxalil cloruro (1 mL, 12,1 mmol) y una cantidad catalítica de DMF seco a una suspensión del producto crudo a partir de la reacción previa en diclorometano seco (50 mL) y la mezcla de la reacción se dejó agitándose a temperatura ambiente durante 12 horas. El cloruro ácido formado de nuevo se añadió gota a gota, durante 1 hora, a una solución de 2S-(+)-pirrolidinametanol (1,22 g, 12,1 mmol) y trietilamina (3,8 mL, 27,5 mmol) en diclorometano (50 mL) a -20ºC (CCl_{4}-hielo seco). La mezcla de la reacción se agitó durante otra hora a -20ºC y se dejó calentar a continuación a temperatura ambiente. La mezcla de la reacción se lavó con HCl diluido (1N, 2 x 50 mL), agua (50 mL) y salmuera (50 mL), se secó sobre MgSO_{4} y se evaporó bajo una presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía por desorción súbita (EtOAC/éter de petróleo 50/50), la retirada del eluyente en exceso consiguió un aceite amarillo (1,34 g, 30%, sobre dos etapas): ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,7-2,3 (m, 4H); 3,45 (m, 2H); 3,71 (dd, J = 5,5, J = 11, 1H); 4,06 (m, 2H); 4,43 (bs, 1H); 4,85 (d, J = 13, 1H); 4,89 (d, J = 13 Hz, 1H); 7,56 (d, J = 8,4 Hz, 1H); 7,96 (dd, J = 2,2, J = 8,4 Hz, 1H); 8,94 (d, J = 2,2 Hz, 1H); 9,2 (bs, 1H). ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 24,9; 27,9; 50,8; 60,5; 64,3; 74,6; 94,9; 115,9; 117,9; 128,6; 130,5; 136,9; 149,0; 151,8; 167,7. MS: m/e (intensidad relativa) 441 ([M+1], 1), 291 (10), 260 (12), 191 (30), 164 (15), 154 (8), 113 (20), 77 (20), 70 (100). HRMS Calculado para C_{15}H_{16}C_{13}N_{3}O_{6}: 439,0104. Encontrado: 439,0105. [\alpha]^{25}_{D}= -110,6º (c = 0,13, CHCl_{3}).

N-[4-amino(2',2',2'-tricloroetoxicarbonilamino)benzoil]pirrolidina-2-metanol (147)

Una solución de 146 (1 g, 2,3 mmol) y SnCl_{2} 2H_{2}O (2,56 g, 11,4 mmol) en metanol (20 mL) se calentó a reflujo durante 6 horas (la reacción se monitorizó mediante TLC (3% metanol, etil acetato). La mezcla de la reacción se redujo a 1/3 de su volumen original y el pH se ajustó a 8-9 con NaHCO_{3} acuoso saturado. Se añadió etil acetato (100 mL) y la mezcla se agitó vigorosamente durante 12 horas, a continuación se filtró a través de Celita para retirar las sales de estaño. La fase orgánica se secó sobre MgSO_{4} y se evaporó para conseguir el producto como aceite amarillo (0,94 g, 97%) que se usó en la siguiente reacción sin más purificación: ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,6-1,8 (m, 2H); 1,9 (m, 1H); 2,17 (m, 1H); 3,48-3,58 (m, 1H); 3,62-3,72 (m, 2H); 3,84 (m, 1H); 4,44 (m, 1H); 4,77 (d, J = 12,1 Hz , 1H); 4,83 (d, J = 12,1 Hz, 1H); 6,32 (dd, J = 2,2, J = 8,43 Hz, 1H); 7,18 (d, J = 8,43 Hz, 1H); 7,52 (d, J = 2,2 Hz, 1H); 9,62 (bs, 1H). ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 21,1; 25,2; 28,2; 51,9; 60,9; 66,5; 74,3; 95,3; 105,5; 108,3; 112,6; 130,1; 138,9; 149,7; 151,8; 171,5. IR (Nujol): cm^{-1} 3346, 3000-2800, 1738, 1620, 1463, 1196, 1046, 963, 820 760. MS: m/e (intensidad relativa) 409 ([M-1], 15), 309 (20), 179 (25), 161 (100), 134 (8), 113 (25), 77 (35), 70 (85). HRMS Calculado para C_{15}H_{18}C_{13}N_{3}O_{4}: 409,0362. Encontrado: 409,0363. [\alpha]^{25}_{D} = -60,1º (c = 0,3, CHCl_{3}).

N-[4-(Fmoc)amino(2',2',2'-tricloroetoxicarbonilamino)benzoil]pirrolidina-2-metanol (148)

Una solución acuosa de NaHCO_{3} (0,6 g, 5,67 mmol, en mL de H_{2}O) se añadió a una solución de 147 (0,94 g, 2,3 mmol) en THF (20 mL). La mezcla de la reacción se enfrió a 0ºC y se añadió Fmoc-Cl (0,65 g, 2,5 mmol) en pequeñas porciones. Después de la adición, la mezcla de la reacción se dejó agitándose durante 2 horas a temperatura ambiente. (TLC: etil acetato/éter de petróleo 50/50). La mezcla de la reacción se acidificó con HCl diluido (1N) y se extrajo con etil acetato purificado mediante cromatografía por desorción súbita para conseguir el producto (1,03 g, 72%): ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,68 (m, 2H); 1,84 (m, 1H); 2,11 (m, 1H); 3,48 (m, 2H); 3,71 (m, 1H); 3,87 (m, 1H); 4,19 (t, J = 6,8 Hz, 1H); 4,40 (m, 2H); 4,45 (d, J = 6,78 Hz, 2H); 4,73 (d, J = 12,1, 1H); 4,78 (d, J = 12,1 Hz, 1H); 7,2-7,8 (m, 11H); 8,04 (bs, 1H). ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 25,1; 28,1; 46,8; 51,6; 60,8; 65,7; 67,1; 74,3; 95,2; 109,9; 112,3; 118,3; 120,0; 124,9; 127,1; 127,8; 129,3; 137,5; 140,9; 141,2; 143,6; 151,8; 153,2; 170,3. IR (Nujol): cm^{-1} 3301, 3000-2800, 1738, 1599, 1525, 1451, 1224, 1056, 985, 758, 740, 667. MS: m/e (intensidad relativa) 632 (M^{+}.), 409 (15), 309 (20), 179 (25), 161 (100), 134 (8), 113 (25), 77 (35), 70 (85). [\alpha]^{25}_{D} = -70,3º (c = 0,25, CHCl_{3}).

(11S,11aS)-8-(Fmoc)amino-11-hidroxi-10-N-(2',2',2'-tricloroetoxicarbonil)-1,2,3,10,11,11a-hexahidro-5H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiacepin-5-ona (149)

Una solución de DMSO (0,31 ml, 4,4 mmol) en diclorometano seco (10 mL) se añadió lentamente (durante 30 minutos) a una solución de oxalil cloruro (2,2 mmol) en diclorometano seco (11,1 mL) a -45ºC. La mezcla se dejó agitándose durante 15 minutos, seguida por la adición de una solución de 148 (1 g, 1,58 mmol) en diclorometano seco (15 ml), manteniendo la temperatura por debajo de -40ºC. Después de otros 60 minutos a -45ºC, se añadió una solución de trietilamina (0,88 ml, 6,32 mmol) en diclorometano (6 mL) y la mezcla de la reacción se dejó calentar a temperatura ambiente. La mezcla de la reacción se lavó con agua (50 mL), HCl diluido (1N, 50 mL) y salmuera (50 mL). La evaporación del solvente consiguió el producto crudo que se purificó mediante cromatografía por desorción súbita (etil acetato/éter de petróleo 50/50). La retirada del eluyente en exceso produjo el producto como aceite amarillo pálido (0,81 g, 82%): ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 1,96-2,16 (m, 4H); 3,47-3,56 (m, 3H); 3,6 (m, 1H); 4,1-4,28 (m, 3H); 4,46 (d, J = 6,15 Hz, 2H); 5,01 (d, J = 12,1 Hz, 1H); 5,64 (d, J = 12,1 Hz 1H); 7,22-7,76 (m, 11H). ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 22,9; 28,7; 46,4; 46,9; 59,9; 67,0; 75,1; 86,0; 94,8; 117,7; 119,6; 120,1; 124,9; 127,9; 129,8; 134,9; 140,8; 141,3; 143,5; 153,0; 154,1; 166,7. IR (Nujol): cm^{-1} 3282, 3000-2800, 1713, 1610, 1533, 1451, 1220, 1058, 908, 735, 647 MS: m/e (intensidad relativa) 631 ([M+2], 1), 196 (5), 178 (100), 152 (5), 89 (7), 70 (10). HRMS Calculado para C_{30}H_{26}C_{l3}N_{3}O_{6}: 629,0887. Encontrado: 629,0887. [\alpha]^{25}_{D} = +58,7º (c = 0,5,
CHCl_{3}).

(11S,11aS)-8-amino-11-hidroxi-10-N-(2',2',2'-tricloroetoxicarbonil)-1,2,3,10,11,11a-hexahidro-5H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiacepin-5-ona (150)

Se añadió la carbinolamina protegida 149 (0,8 g, 1,3 mmol) a una solución al 5% del piperidina en CH3CH (12 mL, 5 ec. de piperidina). La mezcla se dejó agitándose durante 12 horas, se extrajo con agua (2 x 50 mL) y la fase orgánica se evaporó bajo una presión reducida para producir un aceite amarillo pálido (0,24 g, 50%): ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,9-2,2 (m, 4H); 3,45-3,7 (m, 3H); 4,26 (d, J = 12,1 Hz, 1H); 4,55 (m, 3H); 5,18 (d, J = 12,1 Hz, 1H); 5,61 (d, J = 10,3 Hz, 1H); 6,61 (s, 1H); 6,69 (d, J = 7,3 Hz, 1H); 7,56 (d, J = 8,2 Hz, 1H). ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 23,0; 28,7; 46,3; 59,8; 74,9; 95,1; 114,8; 116,5; 130,4; 135,3; 154,4; 167,3. IR (Nujol): cm^{-1} 3340, 3224, 3000-2800, 1714, 1602, 1460, 1311, 1208, 1141, 1061, 826, 759, 665. MS: m/e (intensidad relativa) 407 (M^{+}.,40), 381 (5), 340 (10), 309 (25), 161 (100), 134 (15), 105 (15), 70 (80). HRMS Calculado para C_{15}H_{16}C_{l3}N_{3}O_{4}: 407,0206. Encontrado: 407,0206. [\alpha]^{25}_{D}= +47,8º (c = 0,5, CHCl_{3}).

Preparación del par Cd/Pb al 10%

Se disolvió óxido de plomo amarillo (litargirio, 1,8 g, 4,9 mmol) en AcOH tibio acuoso al 50% (50 mL) y la solución se añadió lentamente a una suspensión agitada vigorosamente de polvo de Cd (Aldrich, 100 malla, 5,46 g, 49 mmol) en agua desionizada (100 mL). El Cd oscurecido como Pb se depositó en su superficie, y se formaron agregados que se rompieron suavemente con una varilla de vidrio. El par Cd/Pb no pirofórico oscuro se filtró, se lavó con agua, acetona, se rompió y se seco antes de su almacenamiento y uso.

Síntesis de (11aS)-8-amino-1,2,3,11a-tetrahidro-5H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiacepin-5-ona (151)

Se añadió el par Cd/Pb (5 ec, 0,34 g) porción a porción a una solución agitada vigorosamente de 150 (0,2 g, 0,5 mmol) en THF (10 mL) y acetato de amonio acuoso (10 mL). Se dejó que continuara agitándose durante otras 2 horas a temperatura ambiente y la mezcla de reacción se vertió en etil acetato (100 mL). La fase orgánica se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se evaporó para producir el producto crudo que se sometió a cromatografía por desorción súbita (gel de sílice, 5% MeOH, 95% CHCl_{3}). La retirada del eluyente en exceso consiguió el producto como un sólido blanco (26 mg, 53% producción): ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}, CD_{3}OD) \delta 1,6-2,2 (m, 4H); 3,2-3,4 (m, 2H); 3,5 (m, 1H); 5,0 (m, 2H); 6,05 (m, 1H); 6,25 (m, 1H); 7,43 (m, 1H), 7,75 (m, 1H). IR (Nujol): cm-1 3304, 3000-2800, 1613, 1457, 1377, 1244, 1202, 1122, 1072, 825, 759, 721. MS: m/e (intensidad relativa) 215 (M^{+}., 100), 186 (15), 178 (10), 146 (10), 119 (25), 91 (15),70 (30), 65 (5). HRMS Calculado para C_{12}H_{13}N_{3}O: 215,1058. Encontrado: 215,1059.
[\alpha]^{25}_{D} = +163,30 (c = 0,2, CHCl_{3}) durante 2 horas y a continuación se vertió sobre hielo resquebrajado (800 mL). La mezcla acuosa se dejó agitándose durante 1 hora y el producto se recogió mediante filtración para conseguir un sólido amarillo (188) (4,88 g, 18,945 mmol); ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 163,70, 159,01, 150,89, 140,08, 127,06, 121,54, 106,98, 62,88, 56,21, 52,98, 9,82.

Ácido 2-Nitro-4-metil-3,5-dimetoxibenzoico (189)

Se añadió hidróxido de potasio (3,71 g, 66,31 mmol) a una solución agitada de 188 (4,83 g, 18,95 mmol) en metanol anhidro (80 mL) y la mezcla de reacción se dejó enfriar y acidificar a un pH de 2 con HCl 1 N y el precipitado sólido se filtró y lavó con agua (50 mL) y se dejó secar al aire para conseguir el producto como un sólido amarillo-beige (189) (3,69 g, 15,31 mmol, 81%); ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 13,88 (br s, 1H), 7,23 (s, 1H), 3,90 (s, 3H), 3,75 (s, 3H), 2,14 (s, 3H); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 164,09, 158,65, 150,09, 139,38, 125,70, 122,50, 107,24, 62,78, 56,34, 9,62.

N-(4-Metil-3,5-dimetoxi-2-nitrobenzoil)pirrolidina-2-metanol (190)

Una cantidad catalítica de DMF (2 gotas) se añadió a una solución agitada de 189 (3,96 g, 15,32 mmol) y oxalil cloruro (2,14 g, 16,85 mmol) en CH_{2}Cl_{2} seco (50 mL) bajo una atmósfera inerte. La mezcla de la reacción se dejó que se agitara de un día para el otro, la solución resultante del cloruro ácido se usó directamente en la siguiente etapa del procedimiento. Se añadió 4-metil-3,5-dimetoxi-2-nitro-benzoil cloruro en DCM anhidro (50 mL) gota a gota durante 0,5 horas a una solución agitada de pirrolidina metanol (1,55 g, 15,32 mmol, 1,1 ec) y TEA (3,87 g, 38,3 mmol, 2,5 ec) en DCM anhidro (40 mL) bajo una atmósfera de nitrógeno a 0ºC y se dejó agitándose de un día para el otro a temperatura ambiente. La mezcla de la reacción se lavó con HCl 1N (2 x 100 mL), y la capa orgánica se lavó con H_{2}O destilada (2 x 100 mL), salmuera (2 x 100 mL) y se secó sobre MgSO_{4} anhidro. La evaporación del solvente en exceso produjo un vidrio amarillo (190) (2,13 g, 6,56 mmol, 43%-2 etapas); ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 6,61 (s, 1H), 4,30-4,28 (m, 1H), 3,91 (s, 3H), 3,89 (s, 3H), 3,83-3,68 (m, 2H), 3,46-3,26 (m, 2H), 2,19 (s, 3H), 1,94-1,68 (m, 4H); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 167,85, 161,15, 152,62, 135,70, 132,32, 123,17, 103,70, 65,87, 62,61, 61,37, 56,36, 50,20, 28,41, 24,50, 9,34.

N-(2-Amino-4-metil-3,5-dimetoxibenzoil)pirrolidina-2-metanol (191)

Se añadió hidrato de hidracina (1,26 mL, 39,37 mmol) gota a gota a una solución de 190 (2,13 g, 6,56 mmol) en metanol (50 mL) en reflujo suave sobre níquel Raney (1 g, lodo). La evolución vigorosa resultante de gas hidrógeno disminuido después de 10 minutos aproximadamente y la reacción se consideró completa mediante TLC después de 2 h. La mezcla de la reacción se filtró a través de celita y el solvente se evaporó. Se añadió agua destilada (100 mL) al residuo, y la mezcla acuosa se extrajo con EtOAc (3 x 100 mL) y la fase orgánica combinada se lavó con H_{2}O (3 x 100 mL) y salmuera (3 x 100 mL) y se secó sobre MgSO_{4} anhidro. La evaporación del solvente consiguió el producto como un vidrio marrón (191) (1,91 g, 6,50 mmol) que se protegió directamente como el troc-carbamato.

N-(4-Metil-3,5-dimetoxi-2-[tricloroetiloxicarbonilamino]-benzoil)pirrolidina-2-metanol (192)

Una solución de 2,2,2-tricloroetil cloroformato (1,38 g, 6,5 mmol) en DCM destilado (25 mL) se añadió gota a gota durante 0,5 horas a una solución de piridina anhidro (1,03 g, 13 mmol) y 191 (1,91 g, 6,5 mmol) en DCM destilado (25 mL) a 0ºC. Después de 6 h a temperatura ambiente, la mezcla de la reacción se diluyó con DCM anhidro (100 mL) y se lavó con HCl 1N (2 x 100 mL), H_{2}O (100 mL), salmuera (100 mL) y se secó sobre MgSo_{4} anhidro. La evaporación del solvente produjo un aceite marrón que se purificó mediante cromatografía por desorción súbita de columna (gel de sílice, EtOAc) para conseguir el producto (192) como un vidrio amarillo (2,13 g, 4,53 mmol, 70%): ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,59 (br s, 1H), 6,56 (s, 1H), 4,78 (br s, 2H), 4,25-4,23 (m, 1H), 3,82-3,79 (m, 3H+1H), 3,69-3,63 (m, 3H+1H), 3,52 (m, 1H), 3,42-3,33 (m, 1H), 2,13-2,06 (m, 3H+1H), 1,88-1,64 (m, 3H); ^{13}C NMR (67,8 MHZ, CDCl_{3}) \delta 169,95, 156,82, 156,67, 154,02, 153,34, 131,92, 121,74, 119,33, 103,94, 95,43, 74,42, 66,04, 61,01, 60,60, 60,27, 55,73, 50,46, 28,53, 24,47, 9,13.

(11S,11aS)-8-Metil-7,9-dimetoxi-11-hidroxi-10-N-(2',2',2'-tri-cloroetoxilcarbonil)-1,2,3,10,11,11a-hexahidro-5H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiacepin-5-ona (193)

Se añadió DMSO anhidro (1,006 g, 12,87 mmol) en DCM seco (10 mL) gota a gota durante 5 minutos a una solución agitada de oxalil cloruro (3,19 mL de una solución 2N en DCM; 6,373 mmol) bajo una atmósfera de nitrógeno a -50ºC. Después de agitar durante 5 minutos, una solución de 192 (2,13 g, 4,53 mmol) en DCM seco (10 mL) se añadió gota a gota durante 45 minutos a la mezcla de la reacción, que se agitó a continuación durante otros 45 minutos a -50ºC. Se añadió TEA (1,83 g, 18,13 mmol) gota a gota a la mezcla durante 0,5 horas y se agitó durante otros 15 minutos. La mezcla de la reacción se dejó calentar a temperatura ambiente, se diluyó con H_{2}O (100 mL) y se dejaron separar las fases. La fase orgánica se lavó con HCl 1 N (2 x 50 mL), agua (2 x 50 mL), salmuera (2 x 50 mL) y se secó sobre MgSO_{4}. El solvente se evaporó para conseguir el producto (193) como un vidrio crema (1,84 g, 3,93 mmol; 87%): ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,05 (s, 1H) (rotámero menor 1:4, visible a d 7,06), 5,58 (dd, J = 3,84 Hz, J = 9,89, 1H) (rotámero menor 1:4, visible a d 5,68, J = 4,21 Hz, J = 9,53), 4,71 (d, J = 11,72 Hz, 1H), 4,56 (d, J = 11,73 Hz, 1H), 4,11 (d, J = 3,85 Hz, 1H), 3,88 (s, 3H), 3,76 (s, 3H), 3,79-3,47 (m, 2H), 2,21-1,99 (m, 4H), 2,16 (S, 3H); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) rotámeros \delta 166,82, 158,31, 157,92, 155,65, 155,43, 131,52, 124,17, 123,99, 121,62, 105,90, 105,64, 105,38, 94,53, 86,17, 85,93, 75,80, 75,23, 61,77, 61,65, 59,98, 59,58, 59,40, 55,88, 55,79, 46,56, 46,38, 28,70, 28,62, 22,94, 10,14, 9,75.

8-Metil-7,9-dimetoxi-1,2,3,11a-tetrahidropirrolo[2,1-c][1,4]benzodiacepin-5-ona (194)

Se añadió el par 10% Cd/Pb (1,34 g; 10,7 mmol Cd) a una solución agitada rápidamente de 193 (1 g; 2,14 mmol) en una mezcla de THF (15 diluido con EtOAc (150 mL). La solución se dejó secar sobre MgSO_{4} anhidro y los sólidos se filtraron y sumergieron con EtOAc (50 mL). La retirada del solvente en exceso producto el producto (194) como un vidrio blanco (554 mg, 2,021 mmol, 94%). ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) (mezcla de formas imina y metil éter) \delta 7,72 (imina, d, J = 4,39, 1H), 7,29 (s, 1H), 3,90 (s, 3H), 3,88-3,51 (m, 3H+2H+1H), 2,37-2,04 (m, 4H), 2,22 (s, 3H); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}) \delta 164,65, 161,41, 156,79, 153,47, 133,87, 126,29, 124,27, 105,71, 60,98, 55,80.

Ejemplo 4 Síntesis de las C8-Aminas Síntesis de 3-(11-Hidroxi-5-oxo-10-(2,2,2-tricloroetiloxocarbonilamino)-(11aS)-2,3,5,10,11,11a-hexahidro-1H-benzo[e]pirrolo[2,1-a][1,4]diacepin-8-iloxi-2-propenilpropanoato (159) (Ver la figura 15)

45

Di-ácido Nitro (153)

Se añadieron 14,63 g de ácido (4-carboxi-2-metoxi-5hidroxi-fenoxi)propanoico 152 (61 mmol) porción a porción a ácido nítrico a 70% (100 mL) agitado a 0ºC. La reacción se agitó durante 1 hora a 0ºC y a continuación se dejó que volviera a rt. La mezcla de la reacción se vertió a continuación sobre hielo y se dejó agitar durante 18 h. Los sólidos se recogieron a continuación mediante filtración y se lavaron con agua. La capa acuosa se extrajo a continuación con etil acetato (3 x 150 mL). La parte orgánica se lavó con agua y salmuera y se secó con sulfato de sodio. El solvente se retiró a continuación para dar 153 como un sólido amarillo, producción = 14,01 g (83%) mp 141ºC. ^{1}H NMR (CDCl_{3}): \delta 8,51 (bs, 2H, COOH), 7,57 (s, 1H, CHCNO_{2}), 7,15 (s, 1H, CH_{3}OCCH), 4,35 (t, 2H, J = 6,41 Hz, CH_{2}CH_{2}O), 3,99 (s, 1H, OCH_{3}), 2,86 (t, 2H, J = 6,41 Hz, CH_{2}CH_{2}O). ^{13}C-NMR (CDCl_{3}): \delta 33,93 (CH_{2}CH_{2}O), 56,42 (OCH_{3}), 65,20 (CH_{2}CH_{2}O), 108,27 (NO_{2}CCH), 111,26 (CH_{3}OCCH), 122,50 (CCOOH), 141,14(CNO_{2}), 149,21 (CH_{2}CH_{2}OC), 152,40 (CH_{3}OC), 166,93 (COOH arom.), 172,24 (COOH alif.). IR (Nujol) \nu 2860, 2620, 1740, 1720, 1590, 1540, 1480, 1390, 1350, 1290, 1230, 1250, 1200, 1060 cm^{-1}. EIMS m/e (intensidad relativa): 286 (M^{+}., 20), 241 (10), 213 (100), 169 (20), 152 (5), 111 (20), 96 (5), 79 (5), 73 (15), 55 (10). HRMS Calculado para C_{11}H_{14}NO_{8} = 285,0511 encontrado = 285,0538.

2-Propeno 3-(4-carboxi-2-metoxi-5-nitrofenoxi)propanoato (154)

Una mezcla de ácido 3-(4-carboxi-2-metoxi-5-nitrofenoxi) propanoico (153) (20 g, 74,3 mmol) y monohidrato ácido sulfónico p-tolueno (2,3 g, 7,4 mmol) en alil alcohol (240 mL, 3,5 mmol) se reflujo durante 7 horas y a continuación se dejó enfriar. El alil alcohol se retiró a continuación in vacuo, y el residuo se trituró con ácido HCl diluido y se recogió mediante filtración. El sólido se tomó con EtOAc, y la solución resultante se lavó con agua y salmuera y se secó sobre sulfato de sodio. La evaporación in vacuo consiguió 154 como un sólido blanco (19,27 g, 84%): mp 128-130ºC; ^{1}H-NMR (CDCl_{3}): \delta 2,92 (t, 2H, J = 6,35 Hz; 3,94 (s, 3H); 4,38 (t, 2H, J = 6,41 Hz); 4,65 (d, 2H, J = 5,61 Hz); 5,27 (dd, 1H, J_{1} = 1,28 Hz, J_{2} = 19,42 Hz); 5,33 (dd, 1H, J_{1} = 1,28 Hz, J_{2} = 17,04 Hz); 5,92 (m, 1H); 7,45 (s, 1H); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}): \delta 34,1, 56,5, 65,0, 65,4, 108,5, 111,3, 118,3, 122,9, 131,8, 141,1, 149,1, 152,6, 167,1, 170,0; IR (Nujol); \nu 1730, 1630, 1550, 1430, 1390, 1290, 1230, 1190, 1170, 1030, 1010 cm^{-1}; MS (EI) m/z (intensidad relativa): 325 (M^{+-}, 19), 251 (3), 213 (2), 196 (3), 211 (3), 113 (19), 91 (4), 71 (9), 55 (6); HRMS: calculado para C_{14}H_{15}NO_{8} 325,0798, encontrado 232,0773.

Prop-2-enil 4-(N-2S-Dietiltiometilpirrolidinacarboxi)-2-metoxi-5-nitrofenoxi)propanoato (155)

2-Propeno 3-(4-carboxi-2-metoxi-5-nitrofenoxi)propanoato (154): 5 g, 15,34 mmol), oxalil cloruro (2 mL, 23 mmol) y 5 gotas de DMF se agitaron en THF seco (100 mL) durante 18 h. El solvente se retiró a continuación in vacuo y el residuo se disolvió en THF seco (50 mL). Este se añadió gota a gota a una mezcla vigorosamente agitada de (2s)-pirrolidona-2-caroxaldehído dietil tioacetato (3,15 g, 15,34 mmol) y trietilamina (1,86 g, 18,41 mmol). La agitación continuó durante 18 h. El solvente se retiró a continuación in vacuo y el producto se purificó mediante cromatografía por delución súbita eluyendo con etil acetato para dar 155 (7,48 g, 95%) como un aceite amarillo: ^{1}H NMR (CDCl_{3}): \delta 7,74 (s, 1H, OCCHC), 6,83 (s, 1H, MeOCCHC), 5,98-5,86 (m, 1H, CH_{2}CHCH_{2}, 5,33 (d, 1H, J = 26,56 Hz, OCH_{2}CHCH_{2}), 5,28 (d, 1H, J = 20,24 Hz, OCH_{2}CHCH_{2}), 4,88 (d, 1H, J = 3,85 Hz, NCHCH), 4,74-4,65 (m, 2H, OCH_{2}CHCH_{2}) 4,42 (t, 2H, J = 7,69 Hz, CH_{2}CH_{2}OC), 3,94 (s, 3H, OCH_{3}), 3,29-3,21 (m, 2H, NCH_{2}), 2,96 (p, 2H, J = 3,12 Hz, CH_{2}CH_{2}O), 2,87-2,67 (m, 4H, SCH_{2}CH_{3}), 2,32-1,78 (m, 4H, NCH_{2}CH_{2}CH_{2}) 1,38-1,31 (m, 6H, SCH_{2}CH_{3}). ^{13}C-NMR (CDCl_{3}): \delta 15,00, 15,13 (SCH_{2}CH_{3}), 24,63 (NCH_{2}CH_{2}CH_{2}), 26,28, 26,59, 27,22 (NCH_{2}CH_{2}CH_{2}), 34,13 (CH_{2}CH_{2}O), 50,19 (NCH_{2}), 52,80 (NCHCH), 56,60 (OCH_{3}), 61,08 (NCH), 65,13 (CH_{2}CH_{2}O), 65,64 (OCH_{2}CHCH_{2}), 108,70 (CH arom.), 109,47 (CH arom.), 118,55 (OCH_{2}CHCH_{2}), 128,58 (CCON), 131,73 (OCH_{2}CHCH_{2}), 137,17 (CNO_{2}), 147,98 (CH_{2}CH_{2}OC), 154,57 (COCH_{3}), 166,61 (CON), 170,14 (COO) IR (Nujol) \nu = 3550-2720, 3000, 2630, 2200, 1740, 1640, 1580, 1530, 1340, 1280, 1220, 1180, 1050 cm^{-1}. MS (EI): m/e (intensidad relativa): 527 (M^{+}., 1), 377 (10), 310 (12), 309 (72), 308 (94), 268 (20), 142 (4). HRMS calculado para C_{24}H_{35}O_{7}N_{2}S_{2} = 527,1875, encontrado = 527,1885.

5-Amino-3-(4-(2-dietiltiometil-(2S)-perhidro-1-pirroloilcarbonil)-2-metoxifeniloxi)2-propenilpropanoato (156)

8 (7,21 g, 14,05 mmol) y cloruro de estaño (II) (15,85 g, 76 mmol) se mantuvieron a reflujo durante 40 minutos en etil acetato (100 mL), a continuación se dejaron enfriar. El solvente se retiró a continuación in vacuo y el residuo se trituró con una solución de bicarbonato saturado a 0ºC. Se añadió EtOAc (50 mL) y la reacción se agitó de un día para el otro. La mezcla de reacción se filtró a continuación a través de Celita y la corona del filtro se lavó con etil acetato. Las partes orgánicas combinadas se lavaron a continuación con agua y salmuera, se secaron con sulfato de sodio y el solvente se retiró in vacuo. El producto se purificó usando cromatografía por desorción súbita eluyendo con MeOH 5% en diclorometano para dar un aceite amarillo, producción = 5,87 g (86%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}): \delta 6,82 (s, 1H, CH arom.), 6,28 (s, 1H, CH arom.), 5,99-5,85 (m, 1H, OCH_{2}CHCH_{2}), 5,31 (dd, 1H, J = 1,28 Hz, 27,66 Hz, OCH_{2}CHCH_{2}), 5,26 (dd, 1H, J = 1,28 Hz, 20,70 Hz, OCH_{2}CHCH_{2}), 4,71-4,62 (m, 5H, incluyendo doblete a 4,62, 2H, J = 5,49 Hz, NH_{2} + NCHCH, OCH_{2}CHCH_{2}), 4,27 (t, 2H, J = 6,59 Hz, CH_{2}CH_{2}O), 3,92, (m, 1H, NCH), 3,74 (s, 3H, OCH_{3}), 3,66-3,57 (m, 2H, NCH_{2}) 2,89 (t, 2H, J = 6,6 Hz, CH_{2}CH_{2}O), 2,83-2,64 (m, 4H, SCH_{2}CH_{3}), 2,28-1,80 (m, 4H, NCH_{2}CH_{2}CH_{2}), 1,25 (m, 6H, SCH_{2}CH_{3}); ^{13}C NMR (CDCl_{3}) \delta 14,20 (SCH_{2}CH_{3}), 26,55, 27,23 (NCH_{2}CH_{2}CH_{2}), 34,27 (CH_{2}CH_{2}O), 53,20 (NCHCH), 56,08 (OCH_{3}), 60,10 (NCH), 60,39 (NCH_{2}), 64,20 (CH_{2}CH_{2}O), 64,41 (OCH_{2}CHCH_{2}), 102,26 (CH arom.), 113,71 (CH arom.), 118,40 (OCH_{2}CHCH_{2}), 131,93 (OCH_{2}CHCH_{2}), 141,03 (CNH2), 141,74 (CH_{2}CH_{2}OC), 154,56 (COCH_{3}), 169,69 (CON), 170,53 (COO). IR (película líquida neta) 3500-3000, 3460, 3400, 2970, 1740, 1650, 1535, 1470, 1345, 1290, 1225, 1190 cm^{-1}; MS (EI): m/e (intensidad relativa): 482 (M^{+}., 4), 347 (2), 278 (31), 137 (1), 70 (3); HRMS calculado para C_{23}H_{34}O_{3}N_{2}S_{2} = 482,1909, encontrado = 482,1925.

3-(4-(2-Dietiltiometil-(2S)-perhidro-1-pirrolilcarbonil)-2-metoxi-5-(2,2,2-tricloroetiloxicarbonilamino)feniloxi)2-propenilpropanoato (157)

A una solución de 156 (5,67 g, 11,74 mmol) en diclorometano (200 mL) se añadió piridina (2,02 mL, 23,48 mmol). A esta se añadió gota a gota a 0ºC una solución de tricloroetil cloroformato (1,616 mL, 11,74 mmol). La solución se agitó durante 1 hora más a 0ºC. La parte orgánica se lavó con HCl 1 N (3 x 100 mL), agua (3 x 100 mL), salmuera (100 mL), se secó sobre sulfato de magnesio y el solvente se retiró in vacuo para dar un aceite marrón (6,8 g, 88%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}): \delta 9,14 (bs, 1H, NH), 7,88 (bs, 1H, CHCNH), 6,93 (s, 1H, MeOCCHC), 5,99-5,86 (m, 1H, OCH_{2}CHCH_{2}), 5,31 (dt, 1H, J = 1,47 Hz, 27,84 Hz OCH_{2}CHCH_{2}), 5,25 (dt, 1H, J = 1,29 Hz, 21,61 Hz, CH_{2}CHCH_{2}),4,89-4,77 (m, 4H, incluyendo doblete 1H, J = 1,28 Hz, CHCHSEt, NH, CH_{2}-TrOC), 4,62 (d, 2H, J = 1,28 Hz, OCH_{2}CHCH_{2}), 3,81 (s, 3H, OCH_{3}), 3,60 (m, 2H, NCH_{2}), 2,91 (d, 2H, J = 6,42 Hz, CH_{2}CH_{2}O), 2,84-2,61 (m, 4H, SCH_{2}CH_{3}), 1,37-1,23 (m, 6H, SCH_{2}CH_{3}); ^{13}C NMR (CDCl_{3}): \delta 170,33 (éster CO), 168,50 (CON), 151,94 (OCO), 150,29 (COCH_{3}), 144,52 (COCH_{2}CH_{2}), 131,93 (OCH_{2}CHCH_{2}), 131,35 (CNH), 118,29 (OCH_{2}CHCH_{2}), 112,21 (CH arom.), 105,51 (CH arom.), 95,27 (CCl_{3}), 76,24 (CH_{2}TrOC), 74,39 (CH_{2}TrOC), 65,42 (CH_{2}CH_{2}O), 61,14 (NCH), 56,30 (OCH_{3}), 53,00 (NCHCHSEt), 34,27 (CH_{2}CH_{2}O), 27,30, 26,71, 26,43, 25,24 (NCH_{2}CH_{2}CH_{2}), 15,27, 14,87, 14,18 (SCH_{2}CH_{3}). MS (EI): m/e (intensidad relativa): 658, 656 (M^{+}., 1), 508 (1), 373 (6), 305 (5), 304 (27), 192 (5), 70 (12).

3-(11-Hidroxi-5-oxo-10-(2,2,2-tricloroetiloxocarbonilamino)-(11aS)-2,3,5,10,11,11a-hexahidro-1H-benzo[e]pirrolo[2,1-a][1,4]diacepin-8-iloxi-2-propenilpropanoato (158)

Una solución de 157 (6,8 g, 10,34 mmol) en acetonitrilo/agua (4:1, 200 mL) se trató con carbonato de calcio (2,585 g, 25,85 mmol) y cloruro mercúrico (II) (7,00 g, 25,85 mmol) y la solución se agitó durante 18 h. La reacción se filtró a continuación a través de Celita y la almohadilla de filtro se lavó con etil acetato. Las partes orgánicas se recogieron y se lavaron con agua (3 x 50 mL), salmuera (100 mL) y se secaron sobre sulfato de magnesio. El solvente se retiró in vacuo y el producto resultante se purificó mediante cromatografía por desorción súbita eluyendo con etil acetato para dar el producto como un aceite amarillo (3,67 g, 64%) ^{1}H NMR (CDCl_{3}): \delta 7,25 (CH arom.), 6,86 (s, 1H, CH arom.), 6,00-5,85 (m, 1H, CH_{2}CHCH_{2}), 5,67 (d, 1H, J = 9,71 Hz, TrOC-CH_{2}) 5,37-5,20 (m, 3H, TrOC-CH_{2}+ OCH_{2}CHCH_{2}), 4,65 (d, 2H, J = 5,67 Hz, CH_{2}CHCH_{2}O), 4,36-4,22 (m, 3H, CH_{2}CH_{2}O + NCHOH), 3,90 (s, 3H, OCH_{3}), 3,72-3,47 (m, 3H, NCH + NCH_{2}), 2,91 (t, J = 6,41 Hz, CH_{2}CH_{2}O) 2,29-2,00 (m, 4H, NCH_{2}CH_{2}CH_{2}) ^{13}C NMR (CDCl_{3}): \delta 170,33 (éster carbonil CO), 166,17 (CON), 154,4 (OCO), 149,88 (COCH_{3}), 148,93 (COCH_{2}CH_{2}), 131,86 (CH_{2}CHCH_{2}), 127,48 (CN arom.), 126,24 (CCON), 118,42 (OCH_{2}CHCH_{2}), 114,48 (CH arom.), 110,82 (CH arom.), 95,09 (CCl_{3}), 86,42 (NCHOH), 74,96 (TrOC-CH_{2}), 65,47 (OCH_{2}CHCH_{2}), 64,43 (CH_{2}CH_{2}O), 60,13 (NCH), 56,14 (OCH_{3}), 46,44 (NCH_{2}), 34,26 (CH_{2}CH_{2}O), 28,64 (NCH_{2}CH_{2}CH_{2}),MS (EI) m/z (intensidad relativa): =552 (M + 10), 550 (10), 374 (2), 368 (5), 304 (15), 192 (8), 70 (24), 55(24). HRMS calculado para C_{22}H_{25}N_{2}O_{8}Cl_{3} = 552,0651, encontrados 3 picos debido al cloro 552,0646, 550,676, 554,0617.

Ácido 3-(11-Hidroxi-5-oxo-7-metoxi-10-(2,2,2-tricloroetiloxocarbonilamino)-(11aS)-2,3,5,10,11,11a-hexahidro-1H-benzo[e]pirrolo[2,1-a][1,4]diacepin-8-iloxipropanoico (159)

Una solución de 158 (3,5 g, 6,35 mmol) se disolvió en etanol (100 mL). A esta se añadió Tetraquis (trifenilfosfina) paladio (0) (350 mg, 0,303 mmol) y la solución estuvo a reflujo durante 30 minutos hasta que se completó la reacción mediante monitorización TLC. La reacción se dejó enfriar a continuación y se filtró a través de Celita. El EtOH se retiró a continuación in vacuo para dar el material crudo como un sólido amarillo que se usó directamente en las siguientes etapas. ^{1}H-NMR (CDCl_{3}): \delta 7,22 (s, 1H, OCCHCN), 7,01 (s, 1H, MeOCCHC), 6,27 (bs, COOH), 5,67 (d, 1H, J = 9,5 Hz, TrOC-CH_{2}), 5,06 (d, 1H, J = 12,09 Hz, TrOC-CH_{2}), 4,29-4,11 (m, 2H, CHOH), 3,85 (s, 3H, OCH_{3}), 3,71 (t, 2H, J = 6,97 Hz, CH_{2}CH_{2}O), 3,51 (m, 1H, NCH), 2,80 (m, 2H, NCH_{2}), 2,12-1,99 (m, 4H, NCH_{2}CH_{2}CH_{2}), 1,21 (t, 2H, J = 6,96 Hz, CH_{2}CH_{2}O) ^{13}C NMR (CDCl_{3}): \delta = 174,27 (CH ácido), 167,34 (CON), 154,20 (OCO), 149,78 (COCH_{3}), 148,74 (COCH_{2}CH_{2}), 133,79 (CH arom.), 132,16 (CH arom.), 128,66 (CN arom.), 125,87 (CCON), 95,06 (CCl_{3}), 86,53 (NCHCHOH), 74,95 (CH_{2}-TrOC), 60,67 (NCH), 58,24 (CH_{2}CH_{2}O), 56,04 (OCH_{3}), 46,44 (NCH_{2}), 35,24 (NCH_{2}CH_{2}CH_{2}), 28,59 (NCH_{2}CH_{2}CH_{2}), 23,08 (CH_{2}CH_{2}O).

Ejemplo 4(a) 3-(7-metoxi-5-oxi(11aS)-2,3,5,11a-tetrahidro-1H-benzo[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diacepin-8-iloxi)-1-perhidro-1-pirrolil-1-propanona (161) (Ver figura 16)

46

3-(11-Hidroxi-7-metoxi-5-oxo-10-(2,2,2-tricloroetiloxocarbonilamino)-(11aS)-2,3,5,10,11,11a-hexahidro-1H-benzo[e]pirrolo[2,1-a][1,4]diacepin-8-iloxi-1-perhidro-1-pirrolil-1-propanona (160)

A una solución de 159 (100 mg, 0,196 mmol) en diclorometano se añadió hidrocloruro de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etil-carbodiimida (44 mg, 0,23 mmol) y 4-(dimetilamino) piridina (5 mg, 0,04 mmol) y la solución se agitó durante 1 h. A la reacción se añadió pirrolidina (16,36 mg, 0,23 mmol) y la reacción se agitó otras 2 h. El solvente se retiró a continuación in vacuo y el compuesto se purificó mediante cromatografía por desorción súbita eluyendo con metanol 5% en diclorometano para dar el producto como un aceite amarillo, producción = 56 mg, 51%. ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 7,25 (OCCH), 6,90 (s, 1H, MeOCCHC), 5,66 (d, 1H, J = 5,49 Hz, TrOC-CH_{2}), 5,16 (d, 1H, J = 12,09 Hz, TrOC-CH_{2}), 4,84-4,74 (m, 2H, CHOH, C11aH), 4,35-4,23 (m, 2H, CH_{2}CH_{2}O), 3,90 (s, 3H, OCH3), ), 3,73-3,67 (m, 1H, NCH), 3,53-3,44 (m, 6H anillo C NCH_{2}, pirrolidina-N(CH_{2})2), 2,92-2,76 (m, 2H CH_{2}CH_{2}O), 2,11-1,85 (8H, anillo C NCH_{2}CH_{2}CH_{2}+ pirrolidina-NCH_{2}CH_{2}CH_{2}); ^{13}C-NMR (CDCl_{3}): \delta 168,62 (CO amida), 167,05 (CON), 154,31 (OCO), 149,94 (COCH_{3}), 148,56 (COCH_{2}CH_{2}), 127,76 (CN arom.), 125,95 (CCON), 114,14 (CH arom.), 110,49 (CH arom.), 95,04 (CCl_{3}), 86,48 (NCHCHOH), 74,98 (CH_{2}-TROC), 65,15 (CH_{2}CH_{2}O), 60,20 (NCH), 56,13 (OCH_{3}), 46,85, 46,44, 45,76, 34,47, 28,60, 26,02, 24,42 (N-(X)CH_{2} varios), 23,04 (CH_{2}CH_{2}O); FABMS m/z (intensidad relativa) 564 (M^{+} 1), 550(3), 549 (2), 548 (8), 547 (2), 546 (8), 279 (2), 192 (4), 126 (18), 98 (6).

3-(7-metoxi-5-oxi(11aS)-2,3,5,11a-tetrahidro-1H-benzo[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diacepin-8-iloxi)-1-perhidro-1-pirrolil-1-propanona (161)

Procedimiento A: A una solución de 160 (100 mg, 0,164 mmol) en diclorometano (5 mL) se añadió hidrocloruro de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (38 mg, 0,2 mmol) y pirrolidina (14 mg, 0,2 mmol) y la reacción se agitó durante 18 h. La mezcla se diluyó a continuación con diclorometano (100 mL) y se lavó con agua (3 x 50 mL), una solución de bicarbonato de sodio saturado (3 x 50 mL) y salmuera (50 mL). El solvente se retiró in vacuo y el producto se purificó mediante cromatografía por desorción súbita eluyendo con metanol 5% en diclorometano para dar el producto 161 como un sólido blanco (producción 26,3 mg, 40%).

Procedimiento B: A una solución de 160 (100 mg, 0,164 mmol) en diclorometano (5 mL) se añadió hidrocloruro de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (38 mg, 0,2 mmol) y la reacción se agitó durante 18 h. La reacción se trató a continuación con fluoruro de tetrabutilamonio (200 \muL de una solución 1,0 M en THF, 0,2 mmol) y se agitó durante 30 minutos. La reacción se trató a continuación con pirrolidina (14 mg, 0,2 mmol) y se agitó durante 18 h. La mezcla se diluyó a continuación con diclorometano (100 mL) y se lavó con agua (3 x 50 mL), una solución de bicarbonato de sodio saturado (3 x 50 mL) y salmuera (50 mL). El solvente se retiró in vacuo y el producto se purificó mediante cromatografía por desorción súbita eluyendo con metanol 5% en diclorometano para dar el producto 161 como un sólido blanco (producción = 54,2 mg, 82%).

Procedimiento C: A una solución de 160 (56 mg, 0,1 mmol) en THF (3 mL) se añadió una solución de acetato de amonio 1 M (2 mL) y la mezcla de reacción se agitó. A la solución se añadió el par Cd/Pb 10% (0,5 mmol, 62,4 mg) y la reacción se agitó durante 90 minutos. La reacción se filtró y diluyó con etil acetato (20 mL). La solución se secó con sulfato de magnesio y el solvente se retiró in vacuo, el producto se purificó a continuación mediante cromatografía por desorción súbita eluyendo con metanol 5% en diclorometano para dar el compuesto como un sólido blanco (producción = 21 mg, 56%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}): \delta 7,66 (m, 1H, J = 4,39 Hz, N-CH), 7,50 (s, 1H, CH arom.), 6,88 (s, 1H CH arom.), 4,42 (t, 2H, J = 6,96 Hz, OOCCH_{2}CH_{2}), 3,92 (s, 3H, OCH_{3}), 3,90-3,44 (m, 5H, pirrolidina CH_{2} + NCH), 2,87 (t, 2H, 5,96 Hz, OOCCH_{2}CH_{2}), 2,28-2,33 (m, 2H, NCH_{2}CH_{2}), 2,10-1,87 (m, 8H, anillo C + pirrolidina CH_{2}). 168,58 (CO amida), 164,65 (CON), 162,43 (CH imina), 150,52 (COCH_{3}), 147,61 (COCH_{2}CH_{2}), 140,76 (CN arom.), 120,33 (CCON), 111,54 (CH arom.), 110,61 (CH arom.), 65,20 (COCH_{2}CH_{2}), 56,21 (COCH_{3}), 53,7 (NCH), 46,77, 46,67, 45,69, 34,40, 29,62, 26,06, 24,54, (CH_{2}), 24,19 (COCH_{2}CH_{2}) MS (EI): m/e (intensidad relativa): 371 (M^{+}., 10), 246 (10), 245 (5), 231 (3), 126 (18), 98 (2), 70 (5), 55 (3); HRMS calculado para C_{20}H_{15}O_{4}N_{3} = 371,1845, encontrado 371,1788.

Ejemplo 4(b) 3-(7-metoxi-5-oxi(11aS)-2,3,5,11a-tetrahidro-1H-benzo[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diacepin-8-iloxi)-1-piperidino-1-propanona (163) (Ver figura 16)

47

3-(11-Hidroxi-7-metoxi-5-oxo-10-(2,2,2-tricloroetiloxocarbonilamino)-(11aS)-2,3,5,10,11,11a-hexahidro-1H-benzo[e]pirrolo[2,1-a][1,4]diacepin-8-iloxi-1-perhidro-1-giperidino-1-propanona (162)

A una solución de 159 (100 mg, 0,196 mmol) en diclorometano se añadió hidrocloruro de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiiminda (44 mg, 0,23 mmol) y 4-(dimetilamino) piridina (5 mg, 0,04 mmol) y la solución se agitó durante 1 h. A la reacción se añadió piperidina (25 \muL, 0,23 mmol) y la reacción se agitó durante otras 2 h. El solvente se retiró a continuación in vacuo y el compuesto se purificó mediante cromatografía por desorción súbita eluyendo con metanol 5% en diclorometano para dar el producto como un aceite amarillo, producción = 94 mg, 84%). ^{1}H-NMR (CDCl_{3}): \delta 7,25 (s, 1H, OCCHCN), 6,90 (s, 1H, MeOCCHC), 5,65 (d, 1H, J = 9,71 Hz, TrOC-CH_{2}), 5,17 (d, 1H, J = 11,94 Hz, TrOC-CH_{2}), 4,37-4,24 (m, 4H, CHOH + CH_{2}CH_{2}O), 3,91 (s, 3H, OCH_{3}), 3,73-3,67 (m, 1H, NCH), 3,54-3,45 (m, 6H, NCH_{2}, piperidina-N(CH_{2})_{2}), 2,99-2,83 (m, 2H, CH_{2}CH_{2}O), 2,13-2,00 (m, 4H, NCH_{2}CH_{2}CH_{2}) 1,67-1,56 (m, 6H, piperidina-CH_{2}); ^{13}C NMR (CDCl_{3}): \delta 168,22 (CO amida), 167,11 (CON), 154,38 (OCO), 149,96 (COCH_{3}), 148,57 (COCH_{2}CH_{2}), 127,74 (CN arom.), 125,94 (CCON), 114,19 (CH arom.), 110,44 (CH arom.), 95,02 (CCl_{3}), 86,38 (NCHCHOH), 74,96 (CH_{2}-TROC), 65,38 (CH_{2}CH_{2}O), 60,33 (NCH), 56,08 (OCH_{3}), 46,77 , 46,44, 42,75, 32,73, 28,60, 26,33, 25,48, 24,44 (N-(X)CH_{2} varios), 23,05 (CH_{2}CH_{2}O); MS (EI) m/z (intensidad relativa): =579 (1), 577 (1), 331 (1), 278 (1), 246 (1), 192 (4), 140 (32), 113 (2), 112 (2), 97 (1), 84 (3), 77 (3), 70 (7), 69 (4), 55 (4), HRMS calculado para C_{24}H_{30}N_{3}O_{7}Cl_{3} = 579,1120 encontrado 579,1066.

3-(7-metoxi-5-oxi(11aS)-2,3,5,11a-tetrahidro-1H-benzo[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diacepin-8-iloxi)-1-piperidino-1-propanona (163)

A una solución de 162 (94 mg, 0,162 mmol) en THF (3 mL) se añadió una solución de acetato de amonio 1 M (2 mL) y la mezcla de reacción se agitó. A la solución se añadió el par Cd/Pb 10% (0,81 mmol, 100 mg) y la reacción se agitó durante 90 minutos. La reacción se filtró y diluyó con etil acetato (20 mL). La solución se secó con sulfato de magnesio y el solvente se retiró in vacuo, a continuación se purificó el producto mediante cromatografía por desorción súbita eluyendo con metanol 5% en diclorometano para dar el compuesto como un sólido blanco (producción = 25 mg, 39%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}): \delta 7,67 (d, 1H, J = 4,4 Hz, N=CH), 7,51 (s, 1H, OCCHCN), 6,89 (s, 1H, MeOCCHC), 4,42 (t, 2H, J = 7,14 Hz, CH_{2}CH_{2}O), 3,93 (s, 3H, OCH_{3}), 3,90-3,44 (m, 5H, NCH, NCH_{2}, piperidina-N(CH_{2})_{2}), 2,73 (t, 2H, J = 7,32 Hz CH_{2}CH_{2}O), 2,33-2,29 (m, 2H, anillo C CH_{2}), 2,11-2,02 (m, 2H, anillo C CH_{2}), 1,62-1,59 (m, 6H, piperidina CH_{2}), ^{13}C NMR (CDCl_{3}): \delta 168,19 (CO amida), 164,66 (CH imina), 162,43 (CON), 150,52 (COCH_{3}), 147,61 (COCH_{2}CH_{2}), 140,70 (CN arom.), 120,31 (CCON), 111,51 (CH arom.), 110,58 (CH arom.), 65,44 (CH_{2}CH_{2}O), 56,11 (OCH_{3}), 53,73 (NCH), 46,70, 46,39, 42,69, 32,72, 29,62, 26,38, 25,52, 24,40 (N-(X)CH_{2} varios), 24,19 (CH_{2}CH_{2}O); MS (EI): m/e (intensidad relativa): 385 (M^{+}., 6), 246 (8), 245 (3), 231 (3), 140 (15), 138 (5), 97 (5), 84 (3); HRMS calculada para C_{21}H_{27}O_{4}N_{3} = 385,2002, encontrado 385,2058.

Ejemplo 4(c) 1,(2,3-dihidro-1H-indolol)-3-(7-metoxi-5-oxi(11aS)-2,3,5,11a-tetrahidro-1H-benzo[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diacepin-8-iloxi)-1-pronanona (165) (ver figura 16)

48

1-(2,3-Dihidro-1H-1-indolil)-3-(11-hidroxi-7-metoxi-5-oxo-10-(2,2,2-tricloroetiloxocarbonilamino)-(11aS)-2,3, 5,10,11,11a-hexahidro-1H-benzo[e]pirrolo[2,1-a][1,4]diacepin-8-iloxi-1-propanona (164)

A una solución de 159 (100 mg, 0,196 mmol) en DMF se añadió hidrocloruro de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarboimida (44 mg, 0,23 mmol) y 4-(dimetilamino) piridina (5 mg, 0,04 mmol) y la solución se agitó durante 1 h. A la reacción se añadió indolina (27,4 mg, 0,23 mmol) y la reacción se agitó durante otras 8 h. El solvente se retiró a continuación in vacuo y el compuesto se purificó mediante cromatografía por desorción súbita eluyendo con metanol 5% en diclorometano para dar el producto como un aceite amarillo (producción = 71 mg, 61%). ^{1}H-NMR (CDCl_{3}): \delta 1,99-2,12 (m, 4H, NCH_{2}CH_{2}CH_{2}), 3,20 (t, J = 8,42 Hz, CH_{2}CH_{2}O), 3,71-5,00, (m, 4H, NCH_{2}, NCH, CHOH), 3,89 (s, 3H, OCH_{3}), 4,18-4,09 (m, 2H, indol-CH_{2}), 4,27 (d, 2H, J = 11,90 Hz, indol-CH_{2}), 4,43 (t, J = 6,23 Hz, CH_{2}CH_{2}O), 5,16 (d, 1H, J = 11,91 Hz, TrOC-CH_{2}), 5,30 (s, 1H, OH), 5,66 (d, 1H, J = 9,89 Hz, TrOC-CH_{2}), 7,20-6,93 (m, 5H, indol-CH, CH arom), 8,18 (d, 1H, J = 8,25 Hz, indol-CH); ^{13}C-NMR (CDCl_{3}): \delta 168,24 (CON), 166,97 (CON), 154,36 (OCO), 149,91, COCH_{3}), 148,65 (COCH_{2}CH_{2}), 132,14, 131,99 (unión anillo indolil), 128,61, 128,43 (indol-CH), 127,52, (CN arom.), 124,61 (CCON), 114,20 (CH arom.), 110,58 (CH arom.) 95,02 (CCl_{3}), 86,43 (NCHCHOH), 75,01 ((TrOC-CH), 64,89 (CH_{2}CH_{2}O), 60,13 (NCH), 56,11 (OCH_{3}), 48,11 (indol-CH_{2}), 46,43 (NCH_{2}), 35,64, 28,64, 27,97, (CH_{2}), 23,03 (CH_{2}CH_{2}O); MS (EI) m/z (intensidad relativa): = 595 (M^{+} 1), 415 (1), 365 (1), 246 (2), 192 (13), 174 (11), 173 (7), 119 (17), 118 (10), 70 (13).

Iso-indolina (2,3,-dihidro-1H-isoindol)^{1}H NMR (CDCl_{3}): \delta 7,22 (m, 4H, CH arom), 4,26 (S, 4H, CH_{2}), 4,08 (bs, 1H, NH), ^{13}C NMR (CDCl_{3}): \delta 140,37, 140,36 (unions de anillo), 127,15, 126,90, 122,60, 122,51, 122,33 (CH arom.), 52,31 (CH_{2}).

1,(2,3-dihidro-1H-indolil)-3-(7-metoxi-5-oxi(11aS)-2,3,5,11a-tetrahidro-1H-benzo[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diacepin-8-iloxi)-1-propanona (165)

A una solución de 164 (71 mg, 0,116 mmol) en THF (3 mL) se añadió una solución de acetato de amonio 1 M (2 mL) y la mezcla de reacción se agitó. A la solución se añadió el par Cd/Pb 10% (0,58 mmol, 72 mg) y la reacción se agitó durante 90 minutos. La reacción se filtró y diluyó con etil acetato (20 mL). La solución se secó con sulfato de magnesio y el solvente se retiró in vacuo. El producto se purificó a continuación mediante cromatografía por desorción súbita eluyendo con metanol 5% en diclorometano para dar el compuesto como un sólido blanco (producción = 26 mg, 54%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}): \delta 7,66 (d, 1H, J = 4,58 Hz, CH=N), 7,50 (s, CH arom.), 7,19 (m, 4H indolil CH arom.), 6,91 (s, 1H, CH arom.), 4,48 (m, 2H, CH_{2}CH_{2}O), 4,18-4,19 (m, 2H, indolil CH_{2}), 3,91 (s, 3H, OCH_{3}), 3,88-3,44 (m, 3H, NCH, +indolil CH_{2}), 3,02 (t, 2H, J = 6,6 Hz, CH_{2}CH_{2}O), 2,30-2,28 (m, 2H, NCH_{2}), 2,17-2,05 (m, 4H, NCH_{2}CH_{2}CH_{2}); ^{13}C NMR (CDCl_{3}): \delta 168,31 (CO amida), 164,61 (CON), 162,47, (CH imina), 147,59 (COCH_{2}CH_{2}), 140,70 (CN arom.), 127,53, 124,59, 123,87, (indolil CH arom.), 120,44 (CCON), 117,03 (indolil CH arom.), 11,56 (CH arom.), 110,61 (CH arom.), 64,80 (COCH_{2}CH_{2}), 56,14 (COCH_{3}), 53,70 (NCH), 48,11, 46,69, 35,50, 29,60, 28,67, 28,00 (CH_{2}), 24,19 (COCH_{2}CH_{2}).

Ejemplo 4(d) 1,(2,3-dihidro-1H-2-isoindolil)-3-(7-metoxi-5-oxi(11aS)-2,3,5,11a-tetrahidro-1H-benzo[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diacepin-8-iloxi)-1-propanona (167) (Ver figura 16)

49

1-(2,3-dihidro-1H-2-isoindolil)-3-(11-hidroxi-7-metoxi-5-oxo-10-(2,2,2-tricloroetiloxocarbonilamino)-(11aS)-2,3,5,10,11,11a-hexahidro-1H-benzo[e]pirrolo[2,1-a][1,4]diacepin-8-iloxi-1-propanona (166)

A una solución de 159 (100 mg, 0,196 mmol) en DMF se añadió hidrocloruro de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (44 mg, 0,23 mmol) y 4-(dimetilamino) piridina (5 mg, 0,04 mmol) y la solución se agitó durante 1 h. A la reacción se añadió indolina (27,4 mg, 0,23 mmol) y la reacción se agitó durante otras 8 h. El solvente se retiró a continuación in vacuo y el compuesto se purificó mediante cromatografía por desorción súbita eluyendo con metanol 5% en diclorometano para dar el producto como un aceite amarillo (producción = 75 mg, 64%). ^{1}H-NMR (CDCl_{3}): \delta 7,29-7,20 (m, 5H, isoindol arom. + CH arom.), 6,91 (s, 1H, CH arom.), 5,66 (d, 1H, J = 9,7 Hz, TrOC-CH_{2}) 5,30 (s, 1H, OH), 5,19 (d, 1H, J = 9,7 Hz, TrOC-CH_{2}), 4,94 (m, 2H, isoindolil CH_{2}), 4,79 (s, 2H, isoindolil CH_{2}), 4,38 (t, 2H, J = 6,42 Hz, CH_{2}CH_{2}O), 4,25, (d, 1H, J = 11,91 Hz, C11-H), 3,81-3,40 (2H, NCH_{2}), 3,03-2,85 (m, 2H, CH_{2}CH_{2}O), 2,11-1,98 (m, 4H, NCH_{2}CH_{2}CH_{2}); ^{13}C-NMR (CDCl_{3}): \delta 169,17 (CON), 167,02 (CON), 154,27 (OCO), 149,91 (COCH_{3}), 148,64 (COCH_{2}CH_{2}), 136,19, 136,11 (unión anillo isoindolil), 128,61, 127,88 (isoindolil CH), 127,78 (CN arom.), 127,58, (CCON), 114,28 (CH arom.), 110,54 (CH arom.), 95,09 (CCl_{3}), 86,51 (NCHCHOH), 74,98 (TrOC-CH_{2}), 65,21 (CH_{2}CH_{2}O), 60,23 (NCH), 56,05 (OCH_{3}), 52,14, 52,81 (isoindolil CH_{2}), 46,43, (NCH_{2}), 34,31, 29,68, 28,60 (NxCH_{2}), 23,03 (CH_{2}CH_{2}O); FABMS m/z (intensidad relativa): =612 (1), 596 (1), 594 (1), 279 (1), 192 (1), 174 (8), 146 (5), 118 (13), 91 (2), 55 (3). FABHRMS encontrado compuesto menos OH es decir C_{27}H_{27}N_{3}O_{6}Cl_{3} = 595,1044.

1,(2,3-dihidro-1H-2-isoindolil)-3-(7-metoxi-5-oxi(11aS)-2,3,5,11a-tetrahidro-1H-benceno]pirrolo[1,2-a][1,4]diacepin-8-iloxi)-1-propanona (167)

A una solución de 166 (75 mg, 0,122 mmol) en THF (3 mL) se añadió una solución de acetato de amonio 1 M (2 mL) y la mezcla de reacción se agitó. A la solución se añadió el par Cd/Pb 10% (0,61 mmol, 76 mg) y la reacción se agitó durante 90 minutos. La reacción se filtró y se diluyó con etil acetato (20 mL). La solución se secó con sulfato de magnesio y el solvente se retiró in vacuo. El producto se purificó a continuación mediante cromatografía por desorción súbita eluyendo con metanol 5% en diclorometano para dar el compuesto como un sólido blanco (producción = 42,6 mg, 83%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}): \delta 7,66 (d, 2H, J = 4,39 Hz, N=CH), 7,48 (S, 1H, CH arom.), 7,30 (s, 4H, CH indolil arom.), 6,89 (s, 1H, CH arom.), 4,48 (t, 3H, J = 6,59 Hz, COCH_{2}CH_{2}), 3,84 (s, 3H, OCH_{3}), 3,81-3,69 (m, 2H, indolil CH_{2}), 3,61-3,51 (m, 1H, NCH), 2,97 (p, 5H, J = 6,9 Hz, CH_{2}CH_{2}O), 2,32-2,28 (m, 2H, NCH_{2}), 2,30-2,01 (m, 4H, NCH_{2}CH_{2}CH_{2}); ^{13}C NMR (CDCl_{3}): \delta 169,29 (amida CO), 164,66 (imina CH), 162,52 (CON), 150,45 (COCH_{3}), 147,63 (COCH_{2}CH_{2}), 140,57, (CN arom.), 127,86, 127,56, 123,04, 122,62 (CH indolil arom.), 120,38 (CCON), 111,52 (CH arom.), 110,53 (CH arom.), 65,16 (COCH_{2}CH_{2}), 56,06 (COCH_{3}), 53,73 (NCH), 52,16, 50,64, 46,70, 34,22, 29,57 (CH_{2}), 24,18 (COCH_{2}CH_{2}); MS (EI): m/e (intensidad relativa): 419 (M^{+}., 21), 416 (2), 415 (2), 246 (10), 245 (3), 231 (3), 174 (4); HRMS calculado para C_{24}H_{25}O_{4}N_{3} = 419,1845, encontrado 419,1821.

Ejemplo 4(e) Síntesis de (11aS) 8-(N-9-fluorenilmetoxicarbonil)aminopropiloxi-7-metoxi-1,2,3,11a-tetrahidro-5H-pirrolo[2,1-c] [1,4]benzodiacepin-5-ona (205) (Ver figura 14) Síntesis de N-(tert-butoxicarbonil)-3-hidroxipropilamina (196)

Una solución de (Boc)_{2}O (25,0 g, 114,5 mmol) en DCM anhidro (50 mL) se añadió gota a gota a una solución agitada de 3-amino-1-propanol (195) (7,8 g, 104,5 mmol) en DCM anhidro (100 mL), bajo una atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se dejó agitar durante 12 horas, después de cuyo tiempo el TLC (50% pet-éter/EtOAc) reveló la pérdida completa de material inicial. La solución se diluyó con Et_{2}O (150 mL) y se lavó con tampón de fosfato 0,5 M, pH 5,4 (2 x 70 mL), NaHCO_{3} acuoso saturado (70 mL), salmuera (2 x 70 mL) y se secó sobre MgSO_{4}. El exceso de solvente se retiró mediante evaporación bajo una presión reducida para dar un aceite viscoso sin color (196) (18,3 g, 100%). ^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}): \delta 1,44 (s, 9H, CH_{3}), 1,67 (m, 2H, H2'), 3,26 (q, 2H, J = 6,23 Hz, H3'), 3,65 (dd, 2H, J = 5,86, 5,68 Hz, H1'), 3,78 (dt, 1H, J = 6,04, 5,87 Hz, OH), 5,18 (br, 1H, NH); ^{13}C NMR (67,8 MHz, CDCl_{3}): \delta 28,4 (CH_{3}), 32,6 (C2'), 37,1 (C3'), 59,3 (C1'), 79,4 (C_{cuater}), 157,1 (C=O); MS (E/I) m/z (intensidad relativa): 176 (M^{+}., 30), 120 (100), 119 (31), 102 (49), 83 (33), 76 (67), 74 (36); HRMS (E/I) masa exacta calculada para C_{8}H_{17}O_{3}N: m/e 175,1200, observado m/e 175,1208; IR (Nujolº) n: (cm^{-1}) 3355, 2976, 2936, 2878, 1810, 1694, 1531, 1455, 1392, 1366, 1278, 1253, 1173, 1072, 996, 914, 870, 781, 752, 638.

Síntesis de Metil 4-[N-(tert-butoxicarbonil)]aminopropiloxi-3-metoxibenzoato (198)

Una solución de DEAD (18,3 g, 105,3 mmol) en THF destilado de nuevo (50 mL) se añadió gota a gota a una solución agitada mecánicamente de trifenilfosfina (27,6 g, 105,3 mmol), metil vanillato 197 (19,2 g, 105,3 mmol) y Boc-amino-1-propanol (196) (18,4 g, 105,3 mmol) en THF destilado de nuevo (250 mL), a 0ºC bajo una atmósfera de nitrógeno. Después de añadir el DEAD, la mezcla de reacción se dejó agitar a temperatura ambiente de un día para el otro y el progreso de la reacción se monitorizó mediante TLC (50% EtOAc/pet-éter). El solvente se retiró mediante evaporación bajo una presión reducida y el residuo se trituró con Et_{2}O (300 mL) para precipitar algo de TPO y dietil hidrazinadicarboxilato, que se retiró mediante filtración. El filtrado se lavó con NaOH acuoso 1 N (150 mL), H_{2}O (2 x 150 mL), salmuera (2 x 150 mL) y se secó sobre MgSO_{4}. El exceso de solvente se retiró mediante evaporación bajo una presión reducida y el producto crudo (198) se purificó mediante cromatografía de columna (80% pet-éter/EtOAc) para conseguir un sólido beige (30 g, 85%). mp = 79-82ºC; ^{1}H-NMR (CDCl_{3}, 270 MHz): \delta 1,46 (s, 9H, CH_{3}), 2,0-2,08 (m, 2H, H2'), 3,38 (dd, 2H, J = 5,68, 6,04 Hz H3'), 3,90 (s, 3H, OCH_{3exter}), 3,93 (s, 3H, OCH_{3éter}), 4,14 (t, 2H, J = 5,95 Hz, H3'), 5,58 (br, 1H, NH), 6,86 (d, 1H, J = 8,42 Hz, H5), 7,55 (d, 1H, J = 1,83 Hz, H2), 7,65 (dd, 1H, J = 2,02, 8,42 Hz, H6); ^{13}C-NMR (CDCl_{3}, 68,7 MHz): \delta 28,5 (C_{prima}), 29,2 (C2'), 38,9 (C3') 52,0 (OCH_{3ester}), 55-8 (OCH_{3éter}), 68,1 (C1'), 78,9 (C_{cuater}), 111,3 (C5), 112,0 (C2), 122,84 (C_{arom}), 123,5 (C6), 148,8 (C_{arom}), 152,1 (C_{arom}), 156,1 (NC=O), 166,8 (C=O); MS (E/I) m/z (intensidad relativa): 339 (M^{+}., 11), 266 (13), 182 (42), 151 (27), 102 (100); HRMS (E/I) masa exacta calculada para C_{17}H_{25}NO_{6},: m/e 339,1682, observado m/e 339,1733; IR (Nujol^{\delta}) n: (cm^{-1}) 3362, 2923, 2854, 1712, 1684, 1599, 1520, 1464, 1377, 1272, 1217, 1132, 1045, 1022, 872, 780, 762, 722.

Síntesis de Metil 4-Aminopropiloxi-5-metoxi-2-nitrobenzoato (199)

El éster 198 (4,0 g, 11,8 mmol) se añadió en pequeñas porciones a una solución agitada de HNO_{3} 70% (2 mL ácido/g de sustrato) a temperatura ambiente y la mezcla de reacción se dejó agitar de un día al otro. Después de 16 horas, el TLC (CHCl_{3}) reveló la pérdida completa de material inicial. La mezcla de reacción se enfrió en un baño de hielo, y se añadieron 15 g de agua helada, precipitando el producto. El precipitado se recogió mediante filtración en vacío y se lavó con una pequeña cantidad de agua helada. El filtrado se enfrió y una segunda masa de precipitado se recogió mediante filtración en vacío y se lavó con agua helada. El precipitado combinado se secó in vacuo para proporcionar el compuesto 199 como un sólido amarillo, que no se purificó más, sino que se usó directamente en la reacción posterior (2,3 g, 70%). mp = 101-103ºC; ^{1}H-NMR (CDCl_{3}/DMSO-d_{6}, 270 MHz): \delta 2,31 (m, 2H, H2'), 3,20 (br, 2H, H3'), 3,95 (s, 3H, OCH_{3éter}), 3,98 (s, 3H, OCH_{3ester}), 4,24 (t, 2H, J = 5,95 Hz, H1'), 7,11 (s, 1H, H6), 7,49 (s, 1H, H3), 8,21 (s, 3H, NH); ^{13}C-NMR (CDCl_{3}, 68,7 MHz): \delta 26,5 (C2'), 37,0 (C3'), 53,0 (OCH_{3ester}), 56,0 (OCH_{3eter}), 66,7 (C1'), 108,3 (C3), 111,0 (C6), 121,6 (C_{arom}), 140,9 (C2), 149,3 (C_{arom}), 152,6 (C_{arom}), 166,8 (C=O); MS (E/I) m/z (intensidad relativa): 284 (M^{+}., 90), 237 (70), 227 (93), 196 (47), 181 (38), 137 (100), 122 (81), 93 (52), 79 (44); HRMS (E/I) masa exacta calculada para C_{12}H_{17}N_{2}O_{6}: m/e 284,1008, observado m/e 284,1018; IR (Nujolº) n: (cm^{-1}) 3472, 2937, 2911, 2855, 1733, 1532, 1516, 1462, 1377, 1292, 1224, 1143, 1052, 884, 812, 792, 773, 756, 724, 646.

Síntesis de Metil ácido 4-(N-9-fluorenilmetoxicarbonil)aminopropiloxi-5-metoxi-2-nitrobenzoico (200)

Una solución de 199 (3,9 g, 11,2 mmol) y KOH (1,9 g, 33,4 mmol) en metanol acuoso (77 mL, MeOH; 15 mL, H_{2}O) se calentó a reflujo durante 90 minutos. En cuyo momento el TLC (EtOAc/MeOH/TEA 100:10:1) reveló el consumo completo del material inicial. El exceso de MeOH se retiró mediante evaporación bajo una presión reducida y el concentrado se diluyó con H_{2}O (20 mL). La solución acuosa se neutralizó con HCl concentrado, se diluyó con THF (100 mL) y se añadió carbonato de sodio (2,9 g, 27,9 mmol) para ajustar la solución a un pH de 9. Se añadió fluorenilmetil cloroformato (3,0 g, 11,6 mmol) por porciones durante 30 minutos a la solución básica y la mezcla de reacción se dejó agitar durante 12 horas. El exceso de THF se retiró mediante evaporación bajo una presión reducida y la fracción acuosa se extrajo con EtOAc (3 x 100 mL) para retirar el exceso de fluorenilmetil cloroformato y los productos relacionados. La capa acuosa se acidificó a continuación con HCl concentrado y se extrajo otra vez con EtOAc (3 x 100 mL). La fase orgánica se lavó con H_{2}O (2 x 100 mL), salmuera (100 mL), se secó sobre MgSO_{4}, y el solvente en exceso se retiró mediante evaporación bajo una presión reducida para conseguir 200 como un sólido beige que no se purificó más, sino que se usó directamente en la reacción posterior (4,7 g, 86%). mp = 145-146ºC; ^{1}H-NMR (CDCl_{3}, 270 MHz) \delta 1,81 (m, 2H, H2'), 3,43 (m, 2H, H3'), 3,78 (s, 3H, OCH_{3}), 4,08-4,23 (m, 3H, H1' + Fmoc CH), 4,49 (d, 2H, J = 6,41, Fmoc CH_{2}), 5,70 (br, 1H, NH), 7,14 (s, 1H, H6), 7,26-7,41 (m, 5H, Fmoc_{aril} + H3), 7,59 (d, 2H, J = 7,51 Hz, Fmoc_{aril}), 7,74 (d, 2H, J = 7,15 Hz, Fmoc_{aril}), 9,62 (s, 1H, CO_{2}H); ^{13}C-NMR (CDCl_{3}, 68,7 MHz): \delta 28,8 (C2'), 39,1 (C3'), 47,2 (CH Fmoc), 56,4 (OCH_{3}), 66,3 (CH_{2} Fmoc), 68,5 (C1'), 107,9 (C3), 111,1 (C6), 120,0, 124,9, 127,1 y 127,7 (CH Fmoc_{aril}), 128,0 (C_{arom}), 137,0 (C_{arom}), 141,3 (C Fmoc_{aril}), 143,8 (C Fmoc_{aril}), 148,2 (C_{arom}), 154,7 (C_{arom}), 156,8 (NC=O) 171,5 (CO_{2}H); MS (FAB) m/z (intensidad relativa): 493 (M^{+}. + 1, 3), 297 (6), 271 (4), 191 (18), 180 (21), 179 (100), 178 (67), 165 (30), 102 (17), 93 (13); HRMS (FAB) masa exacta calculada para C_{26}H_{25}N_{2}O_{8} (M+H): m/e 493,1532, observado m/e 493,1536; IR (Nujolº) n: (cm^{-1}) 1712, 1535, 1463, 1377, 1277, 1219, 1081, 970, 762, 722, 656.

Síntesis de (2S)-N-[4-(N-9-fluorenilmetoxicarbonil)aminopropiloxi-5-metoxi-2-nitrobenzoil)]pirrolidina-2-metanol (201)

Una cantidad catalítica de DMF (2 gotas) se añadió a una solución del ácido nitrobenzoico 200 (8,0 g, 16,3 mmol) y oxalil cloruro (2,3 g, 17,9 mmol) en DCM anhidro (120 mL), a temperatura ambiente bajo una atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se agitó durante 16 horas y la solución resultante de cloruro ácido se enfrió a 0ºC (hielo/acetona) bajo una atmósfera de nitrógeno. Una solución de pirrolidinametanol (1,8 g, 17,9 mmol) y DIPEA (4,6 g, 35,77 mmol) en DCM anhidro (40 mL) se añadió gota a gota durante 30 minutos. Una vez se completó la adición, la mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente. La agitación continuó durante otras 2 horas, en cuyo momento el TLC (95% EtOAc/MeOH) reveló la reacción completa. La mezcla de reacción se lavó con HCl acuoso 1 N (2 x 100 mL), H_{2}O (2 x 100 mL), salmuera (100 mL), y se secó sobre MgSO_{4}. El solvente en exceso se retiró mediante evaporación bajo una presión reducida para conseguir el compuesto crudo como un aceite marrón. La purificación mediante cromatografía de columna por desorción súbita (99% CHCl_{3}/MeOH) consiguió 201 como un sólido beige (5,6 g, 82%). [\alpha]^{20}_{D}= -53,3º (c = 1,03, CHCl_{3}); mp = 78-81ºC; ^{1}H-NMR (CDCl_{3}, 270 MHz): \delta 1,69-1,88 (m, 4H, H4 + H3), 2,04-2,12 (m, 2H, H2'), 3,16 (m, 2H, H3'), 3,45 (m, 2H, H5), 3,81 (s, 3H, OCH_{3}), 3,86-3,91 (m, 2H, CH2-OH), 4,08-4,24 (m, 3H, H1' + Fmoc CH), 4,38-4,48 (m, 3H, H2 + Fmoc CH_{2}), 5,65 (br, 1H, NH), 6,78 (s, 1H, H6_{arom}), 7,27-7,42 (m, 5H, H3_{arom} + Fmoc_{aril}), 7,61 (d, 2H, J = 7,32 Hz, Fmoc_{aril}), 7,76 (d, 2H, J = 7,32 Hz, Fmoc_{aril}); ^{13}C-NMR (CDCl_{3}, 68,7 MHz): \delta 24,4 (C4), 28,4 (C3), 28,9 (C2'), 39,1 (C3'), 47,3 (CH Fmoc), 49,5 (C5), 56,6 (OCH_{3}), 60,4 (C2), 61,5 (CH2-OH), 66,2 (CH_{2} Fmoc), 68,5 (C1'), 108,0 (C3_{arom}), 108,9 (C6_{arom}), 120,0, 124,9, 127,0 y 127,7 (CH Fmoc_{aril}), 128,0 (C_{arom}), 137,0 (C_{arom}), 141,3 (C Fmoc_{aril}), 143,9 (C Fmoc_{aryl}), 148,2 (C_{arom}), 154,7 (C_{arom}), 156,5 (NC=O_{carbamato}) 171,2 (C=O_{amida}); MS (FAB) m/z (intensidad relativa): 576 (M^{+}. + 1, 32), 191 (18), 179 (100), 165 (25), 102 (33); HRMS (FAB) masa exacta calculada para C_{31}H_{34}N_{3}O (M+H): m/e 576,2268 observado m/e 576,2257; IR (Nujolº) n: (cm^{-1}) 2626, 1714, 1615, 1576, 1520, 1452, 1434, 1333, 1276, 1218, 1147, 1059, 869, 818, 759, 742.

Síntesis de (2S)-N-[4-(N-9-fluorenilmetoxicarbonil)amino propiloxi-5-metoxi-2-aminobenzoil]pirrolidina-2-metanol (202)

Una mezcla del compuesto nitro 201 (5,5 g, 9,5 mmol) y SnCl_{2}/2H_{2}O (10,2 g, 45,4 mmol) en MeOH (100 mL) se calentó a reflujo y el progreso de la reacción se monitorizó mediante TLC (95% CHCl_{3}/MeOH). Después de 2 horas, el exceso de MeOH se retiró mediante evaporación bajo una presión reducida, el residuo resultante se enfrió (hielo), y se trató cuidadosamente con NaHCO_{3} acuoso saturado (170 mL). La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (170 mL) y después de 16 horas agitándose a temperatura ambiente, el precipitado inorgánico se retiró mediante filtración a través de Celita. La capa orgánica se separó, se lavó con salmuera (150 mL), se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se evaporó in vacuo para dar un sólido marrón. La purificación mediante cromatografía de columna por desorción súbita (95% CHCl_{3}/MeOH) consiguió la amina pura 202 como un sólido rosa grisáceo (4,3 g, 82%). [\alpha]^{20}_{D} = -78,6º (c = 1,02, CHCl_{3}); mp 83-86ºC; ^{1}H-NMR (CDCl_{3}, 270 MHz) \delta 1,68-1,85 (m, 4H, H4 + H3), 2,00-2,04 (m, 2H, H2'), 3,43-3,45 (m, 2H, H3'), 3,49-3,58 (m, 2H, H5), 3,67 (s, 3H, OCH_{3}), 3,72-3,78 (m, 2H, CH2-OH), 4,04 (t, 2H, J = 5,58 Hz, H1'), 4,22 (t, 1H, J = 6,86 Hz, Fmoc CH), 4,41-4,44 (m, 3H, H1 + Fmoc CH_{2}), 5,92 (br, 1H, NH), 6,23 (s, 1H, H3_{arom}), 6,71 (s, 1H, H6_{arom}), 7,27-7,41 (m, 4H, Fmoc_{aril}), 7,62 (d, 2H, J = 7,32 Hz, Fmoc_{aril}), 7,75 (d, 2H, J = 7,33 Hz, Fmoc_{aril}); ^{13}C-NMR (CDCl_{3}, 68,7 MHz): \delta 24,9 (C4), 28,6 (C3), 29,1 (C2'), 39,5 (C3'), 47,3 (CH Fmoc), 51,0 (C5), 56,6 (OCH33), 60,4 (C2), 61,1 (CH2-OH), 66,4 (CH_{2} Fmoc), 68,0 (C1'), 102,0 (C3_{arom}), 111,6 (C6_{arom}), 120,0, 125,1, 127,0 y 127,7 (CH Fmoc_{aril}), 128,0 (C_{arom}), 137,8 (C_{arom}), 141,3 (C Fmoc_{aril}), 144,0 (CFmoc_{aril}), 148,2 (C_{arom}), 150,8 (C_{arom}), 156,6 (NC=O_{carbamato}), 171,9 (C=O_{amida}); MS (FAB) m/z (intensidad relativa): 546 (M^{+}. + 1, 11), 445 (10), 191 (14), 179 (100), 166 (51), 102 (70); HRMS (FAB) masa exacta calculada para C_{31}H_{37}N_{3}O_{6} (M+H) m/e 546,2526 observado m/e 546,2532; IR (Nujolº) n: (cm^{-1}) 1698, 1622, 1588, 1506, 1476, 1404, 1228, 1173.

Síntesis de (2S)-N-[4-(N-9-fluorenilmetoxicarbonil)aminopropiloxi-5-metoxi-2-(N-2,2,2-tricloroetiloxicarbonil)aminobenzoil]pirrolidina-2-metanol (203)

Una solución de la amina 202 (1,1 g, 2,0 mmol) en DCM (40 mL) se enfrió a 0ºC (baño de hielo/acetona) y se trató con piridina (0,33 mL, 0,3 g, 4,1 mmol). Una solución de tricloroetil cloroformato (0,27 mL, 0,41 g, 1,9 mmol) en DCM (10 mL) se añadió gota a gota durante 30 minutos a la mezcla agitada. La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante otras 3 horas, en cuyo momento el TLC (EtOAc) reveló la pérdida completa de material inicial. La mezcla de reacción se lavó con una solución de HCl 1 N (50 mL), H_{2}O (2 x 50 mL), salmuera (50 mL), se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se evaporó in vacuo. El residuo crudo se purificó mediante cromatografía de columna por desorción súbita (98% CHCl_{3}/MeOH) para conseguir el tricloroetil-carbamato puro 203 como un sólido marrón (1,1 g, 74%). [\alpha]^{20}_{D} = -35,7º (c = 0,87, CHCl_{3}); mp = 54-57ºC; ^{1}H-NMR (CDCl_{3}, 270 MHz): \delta 1,73-1,89 (m, 2H, H4), 2,00-2,04 (m, 2H, H2'), 2,18 (m, 2H, H3), 3,44-3,54 (m, 4H, H3' + H5), 3,72 (s, 3H, OCH_{3}), 3,81-3,90 (m, 2H, CH2-OH), 4,14-4,25 (m, 3H, H1' + Fmoc CH), 4,43-4,45 (m, 3H, Fmoc CH_{2} + H2), 4,76 (d, 1H, J = 12,00 Hz, Troc CH_{2}), 4,83 (d, 1H, J = 12,00 Hz, Troc CH_{2}), 5,89 (br, 1H, Fmoc NH), 6,82 (s, 1H, H6_{arom}), 7,26-7,41 (m, 4H, Fmoc_{aril}), 7,62 (d, 2H, J = 7,33 Hz, Fmoc_{aril}), 7,69 (s, 1H, H3_{arom}), 7,75 (d, 2H, J = 7,51 Hz, Fmoc_{aril}), 9,06 (br s, 1H, Troc NH); ^{13}C-NMR (CDCl_{3}, 68,7 MHz): \delta 25,0 (C4), 28,2 (C3), 28,9 (C2'), 39,5 (C3'), 47,3 (CH Fmoc), 51,4 (C5), 56,1 (OCH_{3}), 60,8 (C2), 66,0 (CH2-OH), 66,3 (CH, Fmoc), 68,2 (C1'), 74,4 (CH_{2} Troc), 95,3 (C_{cuat}), 105,6 (C3_{arom}), 110,7 (C6_{arom}), 120,0, 125,1, 127,0 y 127,7 (C-H_{aril} Fmoc), 130,7 (C_{arom}), 141,3 (C_{aril} Fmoc), 144,0 (C_{aril} Fmoc), 144,5 (C_{arom}), 150,0 (C_{arom}), 152,1 (NC=O_{carbamato} Troc), 156,5 (NC=O_{carbamato} Fmoc), 170,4 (NC=O_{amida}); MS (FAB) m/z (intensidad relativa): 720 (M^{+}. + 1, 2), 275 (4), 192 (29), 179 (100), 166 (13), 102 (48), 70 (10); IR (Nujolº) n: (cm^{-1}) 3338, 1742, 1714, 1599, 1520, 1464, 1378, 1215, 1170, 1119, 1024, 817, 759, 740.

Síntesis de (11S,11aS)-10-N-2,2,2-tricloroetiloxicarbonil-11-hidroxi-8-(N-9-fluorenilmetoxicarbonil)aminopropiloxi-7-metoxi-1,2,3,6,9,11a-hexahidro-5H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiacepin-5-ona (204)

Todos los objetos de vidrio, agujas y cánulas usados para este procedimiento se secaron previamente de un día al otro en un horno, y se montaron mientras estaban todavía calientes y el recipiente cerrado se roció con nitrógeno y se evacuó tres veces. Se transfirió DCM destilado de nuevo (6,6 mL) al recipiente de reacción muy la temperatura se bajó a -45ºC (hielo seco/CH_{3}CN) bajo una atmósfera de nitrógeno. Se transfirió oxalil cloruro (1,0 mL de una solución 2 M en DCM, 2,0 mmol) al recipiente de reacción, seguido por la adición gota a gota durante 30 minutos de DMSO anhidro (0,3 mL, 0,3 g, 3,9 mmol) en DCM seco (4,2 mL). Después de agitar a -45ºC durante 30 minutos, una solución del alcohol 203 (0,79 g, 1,1 mmol) disuelta en DCM seco (6,6 mL) se añadió gota a gota durante 50 minutos. La mezcla de reacción se dejó agitar a -45ºC durante 45 minutos, la mezcla se trató a continuación gota a gota con DIPEA (1,9 mL, 1,4 g, 10,8 mmol) en DCM seco (4,2 mL) durante 30 minutos a -45ºC. Después de 35 minutos, el TLC (97% CHCl_{3}/MeOH) reveló el consumo completo de material inicial. La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente, se diluyó con DCM (30 mL), se lavó con una solución de HCl 1 N (30 mL), H_{2}O (30 mL), salmuera (40 mL), se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se evaporó in vacuo. La purificación mediante cromatografía de columna por desorción súbita (97% CHCl_{3}/MeOH) consiguió la carbinolamina protegida 204 como un sólido marrón (0,48 g, 78%). [\alpha]^{20}_{D} = +62,3º (c = 0,83, CHCl_{3}); mp = 76-79ºC; ^{1}H-NMR (CDCl_{3}, 270 MHz) \delta 2,00-2,17 (m, 6H, H2 + H2' + H1), 3,43-3,60 (m, 3H, H3' + H11a), 3,66-3,73 (m, 2H, H3), 3,78 (S, 3H, OCH_{3}), 4,20-4,32 (m, 4H, H1' + Fmoc CH + 1H Troc CH_{2}), 4,44 (d, 2H, J = 6,78 Hz, Fmoc CH_{2}), 5,25 (d, 1H, J = 12,00 Hz, Troc CH_{2}), 5,65 (d, 1H, J = 9,71 Hz, H11), 5,87 (br, 1H, NH), 6,82 (s, 1H, H6), 7,23-7,41 (m, 5H, H9 + Fmoc_{aril}), 7,61 (d, 2H, J = 7,32 Hz, Fmoc_{aril}), 7,75 (d, 2H, J = 7,51 Hz, Fmoc_{aril}); ^{13}C-NMR (CDCl_{3}, 68,7 MHz) \delta 23,0 (C2), 28,6 (C1), 29,0 (C2'), 39,5 (C3'), 46,4 (C3), 47,3 (CH Fmoc), 56,0 (OCH_{3}), 60,0 (C11a), 66,4 (CH_{2} Fmoc), 68,3 (C1'), 74,9 (CH_{2} Troc), 86,4 (C1), 95,1 (C_{cuat}) 110,5 (C6), 113,8 (C9), 120,0, 125,1, 127,0 y 127,7 (C-H_{aril} Fmoc), 128,8 (C_{arom}) 130,9 (C_{arom}), 141,3 (C_{aril} Fmoc), 143,9 (C_{aril} Fmoc), 148,8 (C_{arom}), 149,9 (C_{arom}), 154,4 (NC=O_{carbamato} Troc), 156,6 (NC=O_{carbamato} Fmoc), 167,0 (C4_{amida}); MS (FAB) m/z (intensidad relativa): 702 (6), 275 (3), 192 (16), 179 (100), 165 (18), 102 (21), 70 (15); IR (Nujolº) n: (cm^{-1}) 3383, 2970, 2946, 2880, 2844, 1713, 1602, 1513, 1464, 1377, 1218, 1034, 908, 723, 645.

Síntesis de (11aS) 8-(N-9-fluorenilmetoxicarbonil)aminopropiloxi-7-metoxi-1,2,3,11a-tetrahidro-5H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiacepin-5-ona (205)

Se disolvió óxido de plomo (II) amarillo (500 mg, 2,24 mmol) en ácido acético acuoso 50% (5 mL) y la solución se añadió lentamente a una suspensión agitada vigorosamente de polvo de cadmio (2,5 g, 22,4 mmol) en H_{2}O desionizada (10 mL). El cadmio oscurecido como plomo se depositó sobre la superficie y los paquetes se rompieron cuidadosamente. Después de 20 minutos, el par sólido se filtró bajo vació, se lavó con H_{2}O y acetona y se secó in vacuo. Los grumos se partieron y se guardaron en un vial cerrado.

El par cadmio/plomo (0,62 g, equiv. 0,56 g, 4,94 mmol Cd) se añadió en una porción de una solución de la carbinolamina protegida con Troc 204 (0,71 g, 0,99 mmol) y acetato de amonio (1,0 M, 9 mL) en THF (9 mL) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó durante 4 horas, durante cuyo tiempo la mezcla de reacción se volvió turbia y opaca con un precipitado blanco suave. Cuando la reacción se completó tal como se indicó mediante TLC (95% CHCl_{3}/MeOH), los sólidos se retiraron mediante filtración a través de Celita, y el THF se retiró mediante evaporación bajo una presión reducida. El pastel de filtro se lavó con varias porciones alícuotas de EtOAc. La capa acuosa se extrajo con EtOAc (3 x 15 mL), y la fase orgánica se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se evaporó in vacuo. La purificación mediante cromatografía de columna por desorción súbita (97% CHCl_{3}/MeOH) obtuvo el compuesto objetivo 205 como un sólido marrón (0,47 g, 90%) que se evaporó repetidamente in vacuo con CHCl_{3} para obtener la imina N10-C11 del compuesto. [\alpha]^{20}_{D} + 385,1º (c = 0,47, CHCl_{3}); mp = 73-760ºC; ^{1}H-NMR (CDCl_{3}, 270 MHz): \delta 2,04-2,06 (m, 4H, H2 + H1), 2,27-2,29 (m, 2H, H2'), 3,45-3,47 (m, 2H, H3'), 3,67-3,73 (m, 2H, H3), 3,80 (s, 3H, OCH3),), 3,84-4,23 (m, 4H, H11a + H1' + Fmoc CH), 4,43-4,46 (m, 2H, Fmoc CH_{2}), 5,92 (br, 1H, NH), 6,82 (s, 1H, H6), 7,29-7,41 (m, 4H, Fmoc_{aril}), 7,5 (s, 1H, H9), 7,61 (d, 2H, J = 7,14 Hz, Fmoc_{aril}), 7,67 (d, 1H, J = 4,40 Hz, H11_{imina}), 7,75 (d, 2H, J = 7,33 Hz, Fmoc_{aril}); ^{13}C-NMR (CDCl_{3}, 68,7 MHz): \delta 22,3 (C2), 29,3 (C1), 29,6 (C2'), 39,6 (C3'), 46,7 (C3), 47,4 (CH Fmoc), 53,7 (OCH_{3}), 56,0 (C11a), 66,3 (CH_{2} Fmoc), 68,3 (C1'), 110,2 (C6), 111,4 (C9), 120,0 (C-H_{aril} Fmoc), 120,5 (C_{arom}), 125,1, 127,0, y 127,7 (C-H_{aril} Fmoc), 140,6 (C_{arom}), 141,3 (C_{aril} Fmoc), 144,0 (C_{aril} Fmoc), 147,7 (C_{arom}), 150,3 (C_{arom}), 156,6 (NC=O_{carbamato}), 162,5 (C11), 164,5 (C4_{amida}); MS (FAB) m/z (intensidad relativa): 526 (M^{+}. 1, 15), 348 (7), 330 (4), 304 (4), 247 (12), 191 (15), 179 (100), 165 (17), 102 (40), 91 (10), 70 (13); HRMS (FAB) masa exacta calculada para C_{31}H_{32}N_{3}O, (M+H): m/e 526,2264 observado m/e 526,2198; IR (Nujolº) n: (cm^{-1}) 3327, 1729, 1690, 1601, 1509, 1427, 1261, 1217, 1023, 759, 740,
699.

Ejemplos 5 a 8

Datos de Citotoxicidad Estudios de Citotoxicidad In Vitro del NCI

El "National Cancer Institute" (NCI), Bethesda, Maryland, USA tiene disponible un tamizado de citotoxicidad in vitro que consiste en aproximadamente en 60 líneas de células tumorales humanas con las que se prueban los compuestos con un mínimo de cinco concentraciones, cada una difiriendo en 10 pliegues. Se usa un protocolo de exposición continua de 48 horas, donde se estima la viabilidad o el crecimiento de las células con un ensayo de proteína SRB.

Procedimiento

Los compuestos de prueba se evaluaron con aproximadamente 60 líneas de células tumorales humanas. Los procedimientos de tamizado con NCl se describe en detalle por parte de Monks y colaboradores (Monks, A et al., "Journal of the National Cancer Institute", 1991, 83, 757). En resumen, se diluyeron suspensiones de células según el tipo de célula particular y la densidad de la célula objetivo esperada (5000-40.000 células por pocillo basadas en las características de crecimiento de las células), y se añadieron mediante pipeta (100 \muL) en placas de microtitulación de 96 pocillos. Las células se dejaron en un periodo de preincubación de 24 horas a 37ºC para su estabilización. Se añadieron disoluciones con el doble de la concentración de prueba deseada en el momento cero en porciones alícuotas de 100 \muL a los pocillos. Los compuestos de prueba se evaluaron en cinco disoluciones de 10 pliegues (10^{-4}, 10^{-5}, 10^{-6}, 10^{-7} y 10^{-8} \muM). Los compuestos de prueba se incubaron durante 48 horas en una atmósfera de CO_{2} 5% y 100% de humedad. Las células se ensayaron a continuación usando en ensayo de sulforhodamina B. Se usó un lector de placas para leer las densidades ópticas y un microprocesador procesó las lecturas en valores LC_{50}, que es la dosis requerida para matar a la mitad de las células.

Los resultados presentados en los ejemplos 5 a 8 son los valores LC_{50} que están por debajo de 10 \muM, que se toma como la línea de división entre citotoxicidad y no citotoxicidad.

Ensayo de Fibra Hueca del NCI para Prueba Preliminar In Vivo

La Rama de pruebas Biológicas del Programa Terapéutico de Desarrollo del NCI ha adoptado una herramienta de tamizado in vivo preliminar para determinar la actividad potencial anticáncer de compuestos identificados mediante el tamizado de células in vivo a gran escala. Para estos ensayos, se cultivan células tumorales humanas en fibras huecas de polivinilideno (PVDF), y una muestra de cada línea de células se implanta en cada uno de los dos compartimentos fisiológicos (intraperitoneal y subcutáneo) en ratones. Cada ratón de prueba recibió un total de 6 fibras (3 intraperitonealmente y 3 subcutáneamente) que representan 3 líneas de células cancerosas distintas. Estos ratones se trataron con potenciales compuestos antitumorales en cada una de 2 dosis de prueba mediante la ruta intraperitoneal usando una programación de tratamiento QD x 4. Los controles de vehículo consisten en 6 ratones que reciben solemente el diluyente del compuesto. Los cultivos de las fibras se recogen el día siguiente al último día de tratamiento. Para determinar los efectos anticáncer, se determinó la masa de células viable para cada una de las líneas de células usando un ensayo de conversión de tinte de formacina (MTT). A partir del mismo, se puede calcular el %T/C usando la densidad óptica promedio de las muestras tratadas del compuesto divido por la óptica promedio; la densidad de los controles de vehículo. Además, se puede determinar el aumento neto en la masa de células para cada muestra, como una muestra de cultivos de fibras se determina para la masa de células viable en el día de implantación en los ratones. De esta manera, se puede determinar las capacidades citostáticas y citocidales del compuesto de prueba.

Generalmente, cada compuesto se prueba con un mínimo de 12 líneas de células cancerígenas humanas. Esto representa un total de 4 experimentos, ya que cada experimento contiene 3 líneas de células. Los datos se indican como %T/C para cada una de las 2 dosis de compuesto respecto a cada una de las líneas de células con valores separados calculados para las muestras intraperitoneales y subcutáneas.

Los compuestos se seleccionan para otras pruebas in vivo en modelos de injertos heterólogos subcutáneos estándar sobre la base de varios criterios de ensayo de fibras huecas. Estos incluyen: (1) un %T/C de 50 o menos en 10 de las 48 posibles combinaciones de prueba (12 líneas de células X 2 sitios X 2 dosis de compuesto); (2) actividad a una distancia (medicamento intraperitoneal/cultivo subcutáneo) en un mínimo de 4 de las 24 posibles combinaciones; y/o (3) una muerte de células neta de 1 o más de las líneas de células en cada sitio del implante. Para simplificar la evaluación, se ha adoptado un sistema de puntos que permite una rápida evaluación de la actividad de un compuesto dado. Para esto, se asigna un valor de 2 para cada dosis de compuesto que produce una reducción del 50% o mayor en masa de células viable. Las muestras intraperitoneales y subcutáneas se puntúan de manera separada de manera que se pueden evaluar los criterios (1) y (2). Los compuestos con una puntación combinada IP + SC de 20, una puntuación SC de 8 o una muerte de células neta de una o más líneas de células se indican para la prueba de injertos heterólogos. Esta comparación indicó que había una baja probabilidad de perder un compuesto activo si se usaba el ensayo de fibras huecas como la herramienta de tamizado inicial in vivo. Además de estos criterios, otros factores (por ejemplo, estructura única, mecanismo de acción) pueden producir referencia a un compuesto para pruebas de injertos heterólogos sin que el compuesto satisfaga estos criterios.

Estudios de Injertos Heterólogos Humanos del NCI

Se realizaron sobre ratones nucle atímicos con un sistema inmune discapacitado. El tejido tumoral humano que se tenía que probar se implantó en sus ijadas, y mientras el ratón de contro no recibía ningún tratamiento, los otros se sometieron a dosis variadas del compuesto de prueba, que se administró de manera intraperitoneal. Los resultados se expresan como la toxicidad del compuesto, la cantidad de crecimiento del tumor, y la inhibición del crecimiento.

Ejemplo 5 Citotoxicidad In Vitro de los compuestos de fórmula I

Algunos de los compuestos sintetizados en el ejemplo 1 se sometieron al estudio de Citotoxicidad In Vitro del NCI. Los resultados (LC_{50}:\muM) se indican a continuación, y se representan en la figura 17.

Tipo de tumor	Designación línea de células	UP2003 (24)	UP2051 (31)	UP2052 (33)	UP2065 (42)
		LC_{50} (\muM)
Pulmón	NCI-H23		9,3
	NCI-H460	7,6		3,0
	NCI-H522			3,1
Colon	COLO 205	1,4			4,0
	HCC-2998	5,2	5,2	0,8
	HCT-116			1,1
	KM12	9,5
CNS	SNB-75	6,0
Melanoma	MALME-3M	0,7	5,1		4,7
	M14			2,7
	SK-MEL-2		7,6	0,5	3,5
	UACC-62	0,7
Renal	786-0			3,0
	RXF 393		0,8		0,8
Mama	MDA-MB-435				0,8

De los compuestos probados, los anteriores mostraron citotoxicidad contra líneas de células de cáncer humano de pulmón, colon, CNS, melanoma, renal y de mama. Reemplazando el grupo benciloxi C-8 en UP2003 (24) con un sustituyente metoxi (UP2065, 42) se cambió de manera significativa el perfil de citoxicidad, se perdió actividad contra las líneas de cálulas de cáncer de pulmón, CNS y colon (solemente permaneció una actividad reducida contra Colo 205). Sin embargo, se ganó actividad citotóxica adicional contra las líneas de células de melanoma SKMEL-2 y MALME-3M, la línea de células renales RXF-393 y la línea de células de mama MDA-MB-435. La reducción de la fracción de éster en UP2003 (24) para conseguir el alcohol UP2052 (33) produjo una actividad aumentada en la línea de células de cáncer de pulmo NCI-460 y la línea de células de colon HCC-2998. Se registró actividad adicional contra la línea de células de pulmón NCI-H522, la línea de célulsa de colon HCT-116, la línea de células de melanoma M14 y la línea de células de cáncer renal 786-0. De manera interesante, el UP2051 (31) análogo acetilado presentó una actividad atenuada o abolida en estas líneas de células (por ejemplo, 7,6 \muM contra 0,5 \muM para UP2052 en la línea de células de melanoma SK-MEL-2.

Ejemplo 6(a) Citotoxicidad In Vitro de compuestos de Fórmula II

Algunos de los compuestos sintetizados en el ejemplo 2 se sometieron al estudio de Citotoxicidad In Vitro del NCI. Los resultados (LC_{50}:\muM) se indican a continuación, y se representan en la figura 18.

Tipo de tumor	Designación línea de células	UP2064 (74)	UP2001 (80)	UP2004 (70)	UP2023 (64)
		LC_{50} (\muM)
Pulmón	NCI-H23			7,6
	NCI-H226				9,1
	NCI-H460		2,7
	NCI-H522				5,2
Colon	COLO 205	0,6		2,9	5,8
	HCC-2998		0,099	5,5	7,0
	KM12				7,1
CNS	SF-539				9,4
	SNB-75		7,5
Melanoma	MALME-3M	0,9	0,073		7,8
	M14
	SK-MEL-2	1,7			7,4
	SK-MEL-28	2,6			8,4
	SK-MEL-5			7,8	6,0
	UACC-62	0,6	0,077	5,3	7,2
Renal	RFX 393	0,8			6,1
Mama	MDA-MB-435	2,3			7,6
	MDA-N			9,0	6,6

De los compuestos probados, los listados anteriormente ejercieron su efecto citotóxico (LC_{50}) de una manera más fuerte en los paneles de líneas de células de Pulmón, Colon, CNS, Melanoma, Renal y Mama. Dentro del grupo, es evidente que intercambiando un sustituyente benciloxi C-8 (UP2004, 70) por un grupo metoxi (UP2064, 74) produce una actividad aumentada en el panel de Melanoma. El análogo metoxi es más potente y actúa contra un número mayor de líneas de células. El análogo metoxi también exhibe una actividad mejorada contra la línea de células de cáncer de colon Colo 205 y, además, el análogo metoxi exhibe actividad contra la línea de células renales RXF-393, que no se observa con el compuesto benciloxi. Reemplazando el anillo A dimetoxi rico en electrones con un anillo aromático sustituido de yodo (UP2023, 64) se produjo una ligera atenuación de la actividad en algunas líneas de células, pero el análogo mostró actividad contra una extensión más amplia de líneas de células (es decir, 5 líneas de células de melanoma contra solemente 3 para el análogo benciloxi).

El dímero PBD UP2001 (80) presentó una actividad de citoxicidad potente y selectiva contra la línea de células de cáncer de pulmón NCI-H460, la línea de células de colon HCC-2998, la línea de células de cáncer de CNS SNB-75 y las líneas de células de melanoma MALME-3M (muy potente, 0,08 \muM) y UACC-62 (muy potente, 0,07 \muM), que puede ser atribuible a su capacidad para reticular ADN.

Ejemplo 6(b) Ensayo de Fibra Hueca sobre Compuestos de Fórmula II

Dos de los compustos probados sufrieron el Ensayo de Fibra Hueca del NCI, y los resultados se presentan a continuación.

\vskip1.000000\baselineskip

	UP2001 (80)	UP2004 (70)
Puntuación IP	40	8
Puntuación SC	14	10
Puntuación total	54	18
Muerte de Células	Si	No

\vskip1.000000\baselineskip

UP2001 (80) y UP2004 (70) se sometieron al ensayo de Fibra Hueca del NCI descrito anteriormente. Se seleccionó UP2001 para estudios de injertos heterólogos basados en su puntuación IP + SC combinada que era generalmente de más de 20, y su puntuación SC que era mayor de 8. Se seleccionó UP2004 sobre la base de su puntuación SC, siendo mayor de 8.

Ejemplo 6(c) Estudios de Injertos Heterólogos Humanos sobre el Compuesto 80 (UP 2001)

Se realizaron estudios de injertos heterólogos tumorales humanos mediante la Rama de Pruebas Biológicas del NCI tal como se ha descrito anteriormente.

Ratones atímicos desnudos que llevaban injertos heterólogos MDA-MB-435 (tumor mamario humano), Ovcar-3 (tumor ovárico humano), UACC-62 (melanoma humano) o OVCAR-5 (tumor ovárico humano) se trataron con dosis de 0,67 (alta), 0,45 (media) y 0,3 (baja) mg/kg/inyección dadas una vez cada 4 días para un total de 3 dosis (6 ratones por nivel de dosis con 20 controles).

Se evaluó UP2001 (80) midiendo la toxicidad del medicamento y su capacidad para retardar el crecimiento del tumor.

\vskip1.000000\baselineskip

Tumor	Toxicidad	%T/C	%Retraso crecimiento
	Alta	Med.	Baja	Alta	Med.	Baja	Alta	Med.	Baja
MDA-MB-435	3/6	1/6	2/6	Tóxico	3	3	41	41	41
OVCAR-3	0/6	0/6	0/6	7	20	46	73	73	9
UACC-62	0/6	0/6	0/6	22	28	67	43	43	43
OVCAR-5	0	0/6	0/6	52	45	38	16	28	32

\newpage

La toxicidad representa el número de ratones que murieron como resultado del tratamiento. %T/C representa la anchura de los tumores en los ratones de "prueba" (T) (tal como se mide con calibres) comparados con los ratones de control sin tratamiento (C) y presentado como porcentaje. % Retraso Crecimiento representa el aumento en la cantidad de tiempo tomado para que los tumores alcancen un tamaño arbitrario de 250 mg.

En los injertos heterólogos MDA-MB-435, UP2001 restringió el crecimiento de los tumores en ratones tratados a solamente el 3% del crecimiento del tumor observado en la población de control. Además, también se observó un retraso del 41% en el tiempo tomado para alcanzar la masa de tumor de 250 mg. Alguna toxicidad hacia los huéspedes se observó incluso con dosis bajas.

Una buena respuesta a la dosis se observó para UP2001 (80) en los injertos heterólogos Ovcar-3. En la dosis alta, el crecimiento del tumor en los sujetos tratados fue solamente del 7% del observado en la población de control. En la dosis media, el valor fue del 20% y en la dosis baja los tumores en los ratones tratados fueron del 46% en tamaño de los tumores de control.

Con la dosis alta se observó un retraso del crecimiento del 73% para alcanzar una masa del tumor de 250 mg. Ningún ratón murió como resultado de exposición a UP2001 (80).

Una respuesta a la dosis similar se observó en los injertos heterólogos UACC-62 para UP2001 (80). Con la dosis alta, los tumores tratados fueron un 22% del tamaño de los tumores de control. Con la dosis media, los tumores tratados fueron un 28% del tamaño de los tumores de control y con la dosis baja fueron un 67% del tamaño de los tumores de control. Otra vez, ningún ratón murió como resultado de exposición a UP2001 (80).

Los resultados para el tumor ovárico humano OVCAR-5 fueron menos claros; se observó aproximadamente una reducción del 50% del tamaño del tumor y se observó algún retraso del crecimiento, pero la actividad pareció mayor a concentraciones menores. Sin embargo, otra vez, ningún ratón murió como resultado de exposición al UP2001
(80).

También se evaluó UP2001 (80) respecto al tumor de CNS humano SF-295. Ratones atímicos desnudos con SF-295 se trataron con dosis de 0,40, 0,27 y 0,18 mg/Kg mediante inyección intravenosa diariamente una vez por un total de 5 dosis.

\vskip1.000000\baselineskip

Toxicidad	% T/C	Libre de tumor
Alta	Media	Baja	Alta	Media	Baja	Alta	Media	Baja
2/6	1/6	2/6	0%	0%	0%	4/4	5/5	3/4

\vskip1.000000\baselineskip

UP2001 (80) mostró propiedades curativas contra injertos heterólogos de SF-295. A dosis altas y medias todos los ratones supervivientes estaban libres de tumor el día 27 del experimento. Con la dosis baja 3 de 4 ratones estaban libres de tumor el día 27. Se asoció alguna toxicidad con el tratamiento, 2 ratones murieron con la dosis alta, 1 con la dosis media y dos con la dosis baja. Las intensidades más altas de la agenda de inyecciones puede reflejarse en la más alta mortalidad observada.

Ejemplo 7 Citotoxicidad in Vitro de los compuestos de Fórmula III

El compuesto sintetizado en el ejemplo 3 se sometió a la criba de la Citotoxicidad in Vitro del NCI. Los resultados (LC_{50}; \muM) se indican a continuación y se ilustran en la Figura 19.

\newpage

Tipo de tumor	Designación de línea de célula	UP2028 (151)
		LC_{50} (\muM)
Pulmón	NCI-H522	0,8
Colon	COLO 205	5,0
	HCC-2998
	KM12	8,8
CNS	SNB-75	8,2
Melanoma	MALME-3M	5,7
	LOX IMVI
	M14
	SK-MEL-2	5,4
	SK-MEL-28	8,1
	SK-MEL-5
	UACC-257
	UACC-62
Renal	RXF 393	0,7
Mama	HS 578T	9,2
	MDA-MB-435	7,2
	MDA-N

\vskip1.000000\baselineskip

La PBD C8 amino sustituida (UP2028, 151) mostró buena actividad en los paneles de líneas de células de pulmón, colon, CNS, melanoma, renal y mama.

Ejemplo 8 Citotoxicidad In Vitro de compuestos de Fórmula IV

Los ejemplos sintetizados en el ejemplo 4 se sometieron al estudio de Citotoxicidad In Vitro del NCI. Los resultados (LC_{50}; \muM) se indican a continuación y se ilustran en la Figura 20.

\newpage

Tipo de tumor	Designación línea de células	UP2005 (161)	UP2008 (167)
		LC50 (\muM)
Pulmón	NCI-H23		8,9
	NCI-H522	8,7
Colon	HCC-2998		8,1
CNS	SF-295	8,8
	SF-539	7,7
Melanoma	MALME-3M	7,5	6,8
	LOX IMVI	9,2
	M14	6,2	8,4
	SK-MEL-2	7,6	6,5
	SK-MEL-28	6,5
	UACC-257		7,1
Renal	RXF 393	6,8

Dos de las cuatro amidas C8 PBD, UP2005 (161) y UP2008 (167) demostraron la citotoxicidad (LC_{50}) en el ensayo del NCI. UP2005 (161) mostró selectividad para cáncer de pulmón, CNS, melanoma y renal en paneles. El compuesto fue particularmente activo en el panel de melanoma, presentando una citotoxicidad contra 5 fuera de las 8 líneas de células de melanoma. UP2008 (167) reveló un perfil ligeramente diferente que es activo en los paneles de pulmón, colon y melanoma. Otra vez, la molécula fue particularmente activa en el panel de melanoma.

Ejemplo 9 Otros resultados para el dímero PBD SJG-136 (UP2001, 80)

El compuesto sintetizado en ejemplo 2(d) (SJG-136, 80) sufrió varios ensayos adicionales.

El primer ensayo, que se describe en G.B. Jones et al., AntiCancer Drug Des., 1990, 5, 249, que se incorpora aquí como referencia, determina el efecto del compuesto de prueba sobre la temperatura de fusión de hélice del ADN. Este ensayo está diseñado para dar una indicación de la resistencia y la extensión de la reticulación de los hilos de ADN mediante el compuesto de prueba (es decir, una medición de la estabilización del ADN bajo unión de ligando).

La temperatura de fusión se determinó para una relación molar 1:5 de [ligando][ADN], donde la concentración de ADN de timo de ternero es de 100 mM en tampón de fosfato de sodio acuoso (fosfato de sodio 10 mM + 1 mM EDTA, pH 7,00 \pm 0,01). Para ADN de timo de ternero con un pH de 7,00 \pm 0,01, la temperatura de fusión es de 67,83 \pm
0,06ºC (valor medio a partir de 30 determinaciones separadas).

Para una relación molar 1:5 de [PBD]:[ADN], el dímero PBD 80 eleva la temperatura de fusión de hélice (\DeltaT_{m}) de ADN de timo de ternero mediante unos 33,6ºC sin precedentes después de incubación durante 18 horas a 37ºC. Bajo condiciones idénticas, el dímero DSB-120 de anillo C no sustituido:

\vskip1.000000\baselineskip

50

\newpage

proporciona una \DeltaT_{m} de 15,1ºC, demostrando el efecto extraordinario de introducir insaturación C2/C2'. En común con otros dímeros PBD, 80 ejerce la mayor parte de su efecto en zonas ricas en GC o de alta temperatura de las curvas de fusión del ADN. De una forma similar al DSB-120, proporciona un 60-80% de su efecto de estabilización sin incubación previa, sugiriendo un efecto cinético en el perfil de reactividad PBD. Sin embargo, las curvas comparativas de \DeltaT_{m} muestran que, solo sobre una base de concentración, SJG-136 es \geq 10 pliegues más efectivas que DSB-120. Incluso con una relación molar [PBD]:[ADN] de 1:100, SJG-136 todavía presenta una afinidad de unión con el ADN significativamente mejor que la tomaimicina monómero con una relación molar 1:5 [PBD][ADN].

51

Los resultados para una relación [PBD]:[ADN] de 1:5 se resumen en la tabla adjunta (Todos los valores de \DeltaT_{m} \pm 0,1-0,2ºC).

Compuesto	\DeltaT_{m} Inducida (ºC) después de incubación a 37ºC durante
	0 h	4 h	18 h
SJG-136 (80)	25,7	31,9	33,6
DSB-120	10,2	13,1	15,1
Tomamicina	0,97	2,38	2,56

Los datos presentados en la tabla anterior muestran que SJG-136 (80) es el agente de estabilización de ADN más potente conocido hasta la fecha según este ensayo particular.

El segundo ensayo determinó la citotoxicidad de SJG-136 (80) en la línea de células de carcinoma ovárico humano A2780 y su sublínea resistente a la cisplatina A2780cisR, y comparados estos datos con la citotoxicidad del dímero relacionado DSB-120 (ver anteriormente) y Cisplatina. Respecto a la línea parental, la sublínea A2780cisR es conocida por tener unos niveles de GSH elevados, un nivel aumentado de reparación de aductos de ADN-cisplatina, y una capacidad disminuida de responder a la cisplatina (M. Smellie, et al., Br. J. Cancer, 1994, 70, 48).

Los resultados, que se obtuvieron incubando las células con los compuestos durante 96 horas a 37ºC, y la determinación del número de células usando Sulforhodamina B, se presentan en la tabla adjunta:

	IC_{50}^{a} (\muM) para
	A2780	A2780cis^{R}	RF^{b}
SJG-136 (80)	0,000023	0,000024	1,1
DSB-120	0,0072	0,21	29,2
Cisplatina	0,265	8,4	32
a Dosis de compuestos requerida para inhibir el crecimiento de las células mediante 50% comparado con control
b RF es el factor de resistencia (IC_{50} resistente/genitor)

El valor IC_{50} para 80 en la línea de célula A2780 es solamente 23 pM, representando un aumento de 320 pliegues en la citotoxicidad comparada con DSB-120 (IC_{50} = 7,2 nM). De una manera más interesante, mientras que DSB-120 tiene una potencia reducida en la A2780cisR resistente a la cisplatina (IC_{50} = 0,21 mM), SJG-136 es casi 9.000 pliegues más potente en esta línea de célula con un valor de IC_{50} similar (24 pM) que el del A2780 normal, dando un Factor de Resistencia de 1,1. El hecho de que DSB-120 y la cisplatina dan Factores de Resistencia de 29,2 y 32, respectivamente, a través de este par de líneas de célula sugiere que SGJ-136 puede tener un potencial en el tratamiento de enfermedades refractarias de cisplatina.

Ejemplo 10 Ensayo de Citotoxicidad de Carcinoma Ovárico

Los compuestos de la invención (y Antramicina como comparación) se evaluaron para su actividad citotóxica en líneas de células ováricas por parte del grupo del Dr. Lloyd R. Kelland en "The Institute of Cancer Research", Sutton, UK. Las cinco líneas de células investigadas fueron SKOV-3, A2780/A2780cisR y CHI/CHIcisR (cisR indica que la línea de células es resistente a la cisplatina).

Se sembraron células viables simples en medio de crecimiento (160 \muL) en placas de microtitulación de 96 pocillos y se dejó fijar de un día al otro. Los PBDs se disolvieron a continuación en DMSO (para dar concentraciones de medicamentos de 20 mM) inmediatamente antes de añadir a las células en pocillos cuadriplicados. Las concentraciones de medicamentos finales en los pocillos variaban entre 100 \muM y 2,5 nM como sigue: 100, 25, 10, 2,5, 1 \muM, 250, 100, 25, 10, 2,5 nM (los medicamentos se diluyeron en medio de crecimiento y a continuación se añadieron 40 \muL al volumen de pocillos existente de 160 \muL para dar las concentraciones anteriores). Después de 96 horas, el medio se retiró y las células restantes se fijaron mediante exposición a ácido tricloroacético al 10% sobre hielo durante 30 minutos. Los pocillos se lavaron a continuación 3-4 veces con agua del grifo, se secaron al aire de un día al otro y se trataron con 100 \muL de sulforhodamina B (0,4%) disuelta en ácido acético al 1%. Se dejó que el tintado continuara durante 10-15 minutos, a continuación los pocillos se lavaron 3-4 veces con ácido acético al 1%, se secaron al aire y se añadieron a continuación a una base Tris (100 \muL de 10 mM). Las placas se agitaron a continuación se determinaron las lecturas de absorción a 540 nm usando un lector de placas. Usando el paquete de software Quattro-Pro, se calcularon los valores IC_{50} a partir de los trazados de concentración respecto al porcentaje de absorción (comparados con 8 pocillos no tratados).

\vskip1.000000\baselineskip

(a) Compuestos de F
	IC_{50} (\muM)
Compuesto	A2780	A2780cisR	CH1	CH1cisR	Skov3
Antramicina	0,155	0,16	0,062	0,05	0,16
UP2003 (24)	0,0145	0,12	0,016	0,04	0,012
UP2051 (31)	0,1	0,27	0,105	0,16	0,46
UP2052 (33)	0,07	0,105	0,09	0,037	0,105
UP2053 (56)	0,0054	0,058	0,0115	0,011	0,1
UP2065 (42)	0,36	0,46	0,115	0,15	0,45
UP2074 (10)	0,155	0,43	0,105	0,27	0,52
UP2089 (177)	0,0022	0,0042	<0,0025	0,0023	0,0054
UP2092 (179)	0,004	0,007	0,0016	0,0082	0,0098
UP2095 (181)	<0,05	<0,05	<0,05	<0,05	<0,05

\vskip1.000000\baselineskip

Los elementos más potentes de este grupo de compuestos son aquellos PBDs que poseen sustitución aril o vinil en la posición 2 del PBD: UP2089 (177), UP2092 (179) y UP2095 (181). Sin desear encontrarse por teoría, la potente actividad de estas moléculas se puede imputar a la presencia de insaturación conjugada endo-exo en estas moléculas. La insaturación endo-exo puede mejorar el ajuste de la molécula en la ranura menor de ADN, aunque el sistema conjugado también puede afectar indirectamente la potencia de las moléculas a través de efectos electrónicos y de conformación. UP2089 (177) y UP2092 (181) son hasta 100 veces más potentes que la antramicina de producto natural, que también posee insaturación conjugada endo exo.

Los dímeros de PDB son capaces de reticular ADN y bloquear la replicación de células tumorales y, de esta manera, generalmente muestran una alta citotoxicidad. El dímero PBD UP2053, que posee solamente insaturación endo, presenta una potente actividad en estas líneas de células ováricas. El dímero es marcadamente más citotóxico que la antramicina, pero no tan potente como los monómeros UP2089 y 2092.

Las moléculas restantes de Fórmula I son monómeros que poseen solamente insaturación endo, estas moléculas son ampliamente comparables con la antramicina. Sin embargo, el éster UP2003 y el alcohol UP2053 son más potentes que la antramicina contra estas líneas de células de tumores ováricos.

(b) Compuestos de Fórmula II

	IC_{50}/\muM
UP No.	A2780	A22780cisR	CHl	CHlcisR	Skov3
Antramicina	0,155	0,160	0,062	0,05	0,16
UP2001 (80)	0,000023	0,000024	0,00012	0,0006	0,0091
UP2004 (70)	0,029	0,2	0,017	0,082	0,35
UP2023 (64)	0,49	1,45	0,37	0,43	16
UP2064 (74)	0,15	0,36	0,066	0,084	0,39
UP2100 (207)	<0,05	0,066	<0,05	<0,05	0,081

El compuesto UP2100 (207) tiene la fórmula estructural:

52

y se sintetizó mediante la misma ruta que el compuesto 70.

UP2001 (80) presenta citotoxicidad en niveles picomolares/sub nanomolares a través del panel de línea de células de tumores ováricos. La potencia de la molécula es probablemente debida a sus propiedades de reticulación acopladas con el efecto de saturación exo. UP2001 es marcadamente más potente que UP2053.

Los monómeros UP2004 (70) y UP2100 (206) presentan una buena actividad contra las líneas de células tumorales ováricas comparables con aquellas para antramicina. UP2023 (64), que posee un sustituyente 7-yodo, es significativamente menos activo que UP2004 (70), que contiene dos grupos alcoxi en las posiciones 7 y 8.

(c) Compuestos de Fórmula IV
	IC50/\muM
Compuesto	A2780	A2780cisR	CH1	CH1cisR	Skov3
UP2005 (161)	1,5	4,3	1,4	1,85	5,4
UP2006 (163)	3,2	14,5	4,9	7,9	23,5
UP2007 (165)	1,55	4,9	1,5	3,0	5,8
UP2008 (167)	0,23	0,94	0,24	0,42	1,45
UP2088 (205)	11	8,5	12	16	14

Claims (35)

1. Compuesto de fórmula Ia o Ib:

53

\vskip1.000000\baselineskip

en el que:

A es CH_{2}, o un enlace simple;

R_{2} se selecciona entre: R, OH, OR, CO_{2}H, CO_{2}R, COH, COR, SO_{2}R, CN;

R_{6}, R_{7} y R_{9} se seleccionan de manera independiente entre H, R, OH, OR, halo, amino, NHR, nitro, Me_{3}Sn;

donde R es un grupo alquilo inferior que tiene 1 a 10 átomos de carbono, o un grupo aralquil de hasta 12 átomos de carbono, de los cuales el grupo alquil contiene opcionalmente uno o más enlaces dobles o triples carbono-carbono, que pueden formar parte de un sistema conjugado, o un grupo arilo de hasta 12 átomos de carbono; y se sustituye opcionalmente por uno o más grupos halo, hidroxi, amino, o nitro, y conteniendo opcionalmente uno o más átomos hetero que pueden formar parte, o ser, un grupo funcional;

y R_{8} se selecciona entre H, R, OH, OR, halo, amino, NHR, nitro, Me_{3}Sn, donde R es como se ha definido anteriormente, o el compuesto es un dímero con cada monómero siendo el mismo o diferente y siendo de fórmula Ia o Ib, donde los grupos R_{8} de monómeros forman juntos un puente que tiene la fórmula -X-R'-X- enlazando los monómeros, donde R' es una cadena de alquileno que contiene entre 3 y 12 átomos de carbono, cuya cadena se puede interrumpir mediante uno o más átomos hetero y/o anillos aromáticos y puede contener uno o más enlaces dobles o triples carbono-carbono, y cada X se selecciona de manera independiente entre O, S, o N; o R_{7} y R_{8} juntos forman un grupo -O-(CH_{2})_{p}-O-, donde p es 1 ó 2;

excepto que en un compuesto de fórmula Ia cuando A es un enlace simple, entonces R_{2} no es CH=CR^{A}R^{B}, donde R^{A} y R^{B} se seleccionan de manera independiente entre H, R^{C}, COR^{C}, CONH_{2}, CONHR^{C}, CONR^{C}_{2}, ciano o fosfonato, donde R^{C} es un grupo alquil no sustituido que tiene 1 a 4 átomos de carbono.

2. Compuesto según la reivindicación 1, en donde A es CH_{2}.

3. Compuesto según la reivindicación 2, en donde R_{2} es CO_{2}H, CO_{2}R, CH_{2}OH, o CH_{2}OR.

4. Compuesto según la reivindicación 3, en donde R2 es CO_{2}Me, CO_{2}^{t}Bu, CH_{2}OH, o CH_{2}OAc.

5. Compuesto según la reivindicación 1, en donde A es un enlace simple, y R_{2} es un grupo aril, o un grupo alquil o alcaril que contiene por lo menos un doble enlace que forma parte de un sistema conjugado con el doble enlace del anillo C.

6. Compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde R_{6}, R, y R_{9} y, a menos que el compuesto sea un dímero, R_{8} se selecciona de manera independiente entre H y OR.

7. Compuesto según la reivindicación 6, en donde R_{6}, R_{7} y R_{9} y, a menos que el compuesto sea un dímero, R_{8} son OR, y R_{6} y R_{9} son H.

8. Compuesto según la reivindicación 6, en donde R_{7} y, a menos que el compuesto sea un dímero, R_{8} son OR, y R_{6} y R_{9} son H.

9. Compuesto según la reivindicación 6, en donde R_{7} y, a menos que el compuesto sea un dímero, R_{8} son de manera independiente OMe o OCH_{2}Ph.

10. Compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores de fórmula Ia.

11. Compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores que es un dímero, en el que el puente de dímero es de fórmula -O-(CH_{2})_{p}-O-, donde p es entre 3 y 12.

12. Compuesto según la reivindicación 1, que es (11aS)-1,11a-dihidro-7,8-dimetoxi-2-(4-metoxifenil)-5H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiacepin-5-ona.

13. Compuesto de fórmula II:

54

en el que:

R'2 es CH_{2};

R_{6}, R_{7}, R_{8} y R_{9} se seleccionan de manera independiente entre H, R, OH, OR, halo, amino, NHR, nitro, Me_{3}Sn;

donde R es un grupo alquilo inferior que tiene 1 a 10 átomos de carbono, o un grupo aralquil de hasta 12 átomos de carbono, de los cuales el grupo alquil contiene opcionalmente uno o más enlaces dobles o triples carbono-carbono, que pueden formar parte de un sistema conjugado, o un grupo arilo de hasta 12 átomos de carbono; y se sustituye opcionalmente por uno o más grupos halo, hidroxi, amino, o nitro, y conteniendo opcionalmente uno o más átomos hetero que pueden formar parte, o ser, un grupo funcional; o R_{7} y R_{8} juntos forman un grupo -O-(CH_{2})_{p}-O-, donde p es 1 ó 2.

14. Compuesto de fórmula II:

55

en el que:

R'2 es CH_{2};

R_{6}, R_{7}, R_{8} y R_{9} se seleccionan de manera independiente entre H, R, OH, OR, halo, amino, NHR, nitro, Me_{3}Sn;

donde R es un grupo alquilo inferior que tiene 1 a 10 átomos de carbono, o un grupo aralquil de hasta 12 átomos de carbono, de los cuales el grupo alquil contiene opcionalmente uno o más enlaces dobles o triples carbono-carbono, que pueden formar parte de un sistema conjugado, o un grupo arilo de hasta 12 átomos de carbono; y se sustituye opcionalmente por uno o más grupos halo, hidroxi, amino, o nitro, y conteniendo opcionalmente uno o más átomos hetero que pueden formar parte, o ser, un grupo funcional;

y R_{8} se selecciona entre H, R, OH, OR, halo, amino, NHR, nitro, Me_{3}Sn, donde R es como se ha definido anteriormente, o el compuesto es un dímero con cada monómero siendo el mismo o diferente y siendo de fórmula Ia o Ib, donde los grupos R_{8} de monómeros forman juntos un puente que tiene la fórmula -X-R'-X- enlazando los monómeros, donde R' es una cadena de alquileno que contiene entre 3 y 12 átomos de carbono, cuya cadena se puede interrumpir mediante uno o más átomos hetero y/o anillos aromáticos y puede contener uno o más enlaces dobles o triples carbono-carbono, y cada X se selecciona de manera independiente entre O, S, o N.

15. Compuesto según una cualquiera de las reivindicación 14 que es un dímero, en el que el puente de dímero es de fórmula -O-(CH_{2})_{p}-O-, donde p es entre 3 y 12.

16. Compuesto según las reivindicaciones 13, 14 y 15, en el que R_{6}, R_{7} y R_{9} y, a menos que el compuesto sea un dímero, R_{8} se seleccionan de manera independiente entre H, OR o un átomo halógeno.

17. Compuesto según la reivindicación 16, en el que R_{6}, R_{7} y R_{9} y, a menos que el compuesto sea un dímero, R_{8} se seleccionan de manera independiente entre H, OMe y OCH_{2}Ph, y I.

18. Compuesto según la reivindicación 16, en el que R_{7} y, a menos que el compuesto sea un dímero, R_{8} son de manera independiente OR o un átomo halógeno y R_{6} y R_{9} son H.

19. Compuesto según la reivindicación 18, en el que R_{7} y, a menos que el compuesto sea un dímero, R_{8} se seleccionan de manera independiente entre OMe, OCH_{2} o I.

20. Compuesto de fórmula III:

56

en el que:

R_{6}, R_{7} y R_{9} se seleccionan de manera independiente entre H, R, OH, OR, halo, amino, NHR, nitro, Me_{3}Sn;

donde R es un grupo alquilo inferior que tiene 1 a 10 átomos de carbono, o un grupo aralquil de hasta 12 átomos de carbono, de los cuales el grupo alquil contiene opcionalmente uno o más enlaces dobles o triples carbono-carbono, que pueden formar parte de un sistema conjugado, o un grupo arilo de hasta 12 átomos de carbono; y se sustituye opcionalmente por uno o más grupos halo, hidroxi, amino, o nitro, y conteniendo opcionalmente uno o más átomos hetero que pueden formar parte, o ser, un grupo funcional;

en donde R_{8} es NH_{2}.

21. Compuesto según la reivindicación 20, que es (11aS)-8-amino-1,2,3,11a-tetrahidro-5H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiacepin-5-ona.

22. Compuesto de fórmula IV:

57

en el que:

R_{6}, R_{7} y R_{9} se seleccionan de manera independiente entre H, R, OH, OR, halo, amino, NHR, nitro, Me_{3}Sn;

donde R es un grupo alquilo inferior que tiene 1 a 10 átomos de carbono, o un grupo aralquil de hasta 12 átomos de carbono, de los cuales el grupo alquil contiene opcionalmente uno o más enlaces dobles o triples carbono-carbono, que pueden formar parte de un sistema conjugado, o un grupo arilo de hasta 12 átomos de carbono; y se sustituye opcionalmente por uno o más grupos halo, hidroxi, amino, o nitro, y conteniendo opcionalmente uno o más átomos hetero que pueden formar parte, o ser, un grupo funcional;

R'_{8} y R''_{8} se seleccionan de manera independiente entre H, R o juntos forman una amina cíclica; y

n está comprendida entre 1 y 7.

23. Compuesto según la reivindicación 22, en el que uno de R'_{8} y R''_{8} es un grupo de protección de nitrógeno.

24. Compuesto según la reivindicación 22 ó 23, en el que R_{7} es un grupo de retirada de electrones.

25. Compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 22 a 24, en el que R_{6} y R_{9} se seleccionan entre H y OR.

26. Compuesto según la reivindicación 25, en el que R_{6} y R_{9} se seleccionan entre OMe, OEt y OBn.

27. Compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 22 a 26, en el que n está comprendido entre 1 y 3.

28. Compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que R se selecciona entre un grupo alquil inferior que tiene de 1 a 10 átomos de carbono, o un grupo aralquil de hasta 12 átomos de carbono, o un grupo aril de hasta 12 átomos de carbono, opcionalmente sustituidos por uno o más grupos halo, hidroxi, amino o nitro.

29. Compuesto según la reivindicación 28, en el que R se selecciona entre un grupo alquil inferior que tiene de 1 a 10 átomos de carbono opcionalmente sustituidos por uno o más grupos halo, hidroxi, amino o nitro.

30. Compuesto según la reivindicación 29, en el que R es un alquil recto o de cadena ramificada no sustituido que tiene de 1 a 10 átomos de carbono.

31. Composición farmacéutica que comprende un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 30 y un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable.

32. Utilización de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 30 para preparar un medicamento para el tratamiento de una enfermedad proliferativa.

33. Utilización de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 30 para preparar un medicamento para el tratamiento de una infección viral, parasítica o bacterial.

34. Procedimiento para la preparación de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 30.

35. Compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 30 para su uso en un procedimiento de terapia.