TW202102506A - 苯二氮平衍生物 - Google Patents

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Abstract

本發明係關於具有抗增生活性之新穎苯二氮平衍生物且更特定言之係關於式(I)、(II)、(III)、(T1)或(T2)之新穎苯二氮平化合物。本發明亦提供連接至細胞結合劑之該等苯二氮平化合物的結合物。本發明進一步提供使用本發明之化合物或結合物可用於抑制哺乳動物之異常細胞生長或治療其增生性病症之組成物及方法。

Description

苯二氮平衍生物
本發明係關於新穎細胞毒性化合物，及包含此等細胞毒性化合物及細胞結合劑之細胞毒性結合物。更特定言之，本發明係關於新穎苯二氮平化合物、其衍生物、其中間物、其結合物及其醫藥學上可接受之鹽，其適用作藥劑，詳言之適用作抗增生劑。
苯二氮平衍生物為適用於治療多種病症之化合物，且包括諸如抗癲癇藥(咪唑并[2,1-b][1,3,5]苯并硫雜二氮平，美國專利第4,444,688號；美國專利第4,062,852號)、抗細菌藥(嘧啶并[1,2-c][1,3,5]苯并硫雜二氮平，GB 1476684)、利尿劑及降血壓藥(吡咯并(1,2-b)[1,2,5]苯并硫雜二氮平5,5二氧化物，美國專利第3,506,646號)、降血脂藥(WO 03091232)、抗抑鬱劑(美國專利第3,453,266號)；骨質疏鬆症(JP 2138272)之藥劑。
動物腫瘤模型中已顯示出，諸如吡咯并苯二氮平(PBD)之苯二氮平衍生物用作抗腫瘤劑(N-2-咪唑基烷基取代之1,2,5-苯并硫雜二氮平-1,1-二氧化物，美國專利第6,156,746號)、苯并-吡啶并或二吡啶并硫雜二氮平(WO 2004/069843)、吡咯并[1,2-b] [1,2,5]苯并硫雜二氮平及吡咯并[1,2-b][1,2,5]苯二氮平衍生物(WO2007/015280)、茅層黴素衍生物(例如，吡咯并[1,4]苯二氮平)，諸如WO 00/12508、WO2005/085260、WO2007/085930及EP 2019104中描述之彼等。亦已知苯二氮平影響細胞生長及分化(Kamal A.等人, Bioorg. Med. Chem., 2008年8月15日;16(16):7804-10 (及其中引用之參考文獻)；Kumar R, Mini Rev Med Chem. 2003年6月; 3(4):323-39 (及其中引用之參考文獻)；Bednarski J. J.等人, 2004；Sutter A. P等人, 2002；Blatt N B等人, 2002)，Kamal A.等人, Current Med. Chem., 2002; 2; 215-254，Wang J-J., J. Med. Chem., 2206; 49:1442-1449，Alley M.C.等人, Cancer Res. 2004; 64:6700-6706，Pepper C. J., Cancer Res 2004; 74:6750-6755，Thurston D.E.及Bose D.S., Chem. Rev., 1994; 94:433-465；及Tozuka, Z.等人, Journal of Antibiotics, (1983) 36; 1699-1708。PBD之一般結構描述於美國公開案第20070072846號中。PBD在取代基之數目、類型及位置方面，在其芳族A環及吡咯并C環方面，且在該C環之飽和程度方面不同。其在小溝中形成加合物且使DNA交聯之能力使其能夠干擾DNA加工，因此其可能用作抗增生劑。
首先進入臨床之吡咯并苯二氮平SJG-136 (NSC 694501)係引起DNA鏈間交聯之有效細胞毒性劑(S.G Gregson等人, 2001,J. Med. Chem ., 44: 737-748；M.C. Alley等人, 2004,Cancer Res ., 64: 6700-6706；J.A. Hartley等人, 2004,Cancer Res ., 64: 6693-6699；C. Martin等人, 2005,Biochemistry ., 44: 4135-4147；S. Arnould等人, 2006,Mol. Cancer Ther ., 5: 1602-1509)。來自SJG-136之I期臨床評估的結果揭露了此藥物在極低劑量下具毒性(45 μg/m2 之最大耐受劑量，且注意到數種不良效應，包括血管滲漏症候群、外周性水腫、肝臟毒性及疲勞。在所有劑量下均在循環淋巴細胞中注意到DNA損傷(D. Hochhauser等人, 2009,Clin. Cancer Res ., 15: 2140-2147)。
因此，需要具較少毒性且在治療上仍有效用於治療諸如癌症之多種增生性疾病之經改良苯二氮平衍生物。
本發明提供新穎苯二氮平二聚體化合物及其細胞結合劑結合物。在一些實施例中，該等苯二氮平二聚體化合物具有經亞胺還原(亦即，N與C原子之間的單鍵)之苯二氮平作為單體之一。本發明之二聚體化合物經由在經還原苯二氮平單體之N-10胺處的自降解連接體共價連接至細胞結合劑，其可引起相應細胞結合劑結合物之經改良代謝、效能、耐受性及/或溶解度。
詳言之，本發明之二聚體化合物具有亞胺苯二氮平作為另一單體，其可經亞胺反應性試劑(例如亞硫酸氫鈉)修飾以產生經修飾(例如磺化)二聚體化合物(例如本文所述之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中N與C之間的雙線
Figure 02_image003
表示單鍵，X為H且Y為-OH或-SO3 H，較佳地Y為-SO3 H)，其在水溶液中具有增加之溶解度。由於抗體結合反應一般地在水溶液或水溶液與有機共溶劑之混合物中進行，該二聚體化合物之溶解度增加可改良結合產率且引起所得結合物的較高DAR及/或單體百分率。相比而言，在亞胺苯二氮平單體之N-10位置處具有自降解連接體之比較物苯二氮平二聚體化合物難以結合於抗體，這至少部分地歸因於其在水溶液中之低溶解度。另外，如與本發明結合物相比，該比較物化合物之抗體結合物具有較低DAR及單體百分率(實例47)。
在第一態樣中，本發明係有關細胞毒性化合物，其由下式表示：
Figure 02_image001
(I)；
Figure 02_image006
(II)；
Figure 02_image008
(TI)；
Figure 02_image010
(T2)；
Figure 02_image012
(Im )；
Figure 02_image014
(IIm )；
Figure 02_image016
(TIm )；或
Figure 02_image018
(T2m )； 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： N與C之間的雙線
Figure 02_image003
表示單鍵或雙鍵，限制條件在於當其為雙鍵時，X不存在且Y為H或C1-4 烷基，且當其為單鍵時，X為H且Y為-OH或-SO3 H； W為-C(=O)-或-C(Y’)-； Y’為H或C1-4 烷基； R1a 、R2a 、R3a 、R4a 、R1b 、R2b 、R3b 及R4b 係各自獨立地選自由H、C1-10 烷基、-(OCH2 CH2 )n ORc 、鹵素、-NH(C=NH)NH2 、-OR、-NR’R’’、-NO2 、-NR’COR’’、-SR、-SOR’、-SO2 R’、-SO3 H、-OSO3 H、-SO2 NR’R’’、-CN、-N3 、-COR’、-OCOR’及-OCONR’R’’組成之群； Rc 為H或C1-4 烷基； n為整數1至24； R在每次出現時係獨立地選自由H、-(CH2 CH2 O)n -Rc 、C1-10 烷基、C3-8 環烷基、6員至18員芳基、含有一或多個獨立地選自N、O及S之雜原子的5員至18員雜芳環或含有1至6個獨立地選自O、S、N及P之雜原子的3員至18員雜環組成之群； R’及R’’係各自獨立地選自-H、-OH、-OR、-NHR、-NR2 、-COR、C1-10 烷基、-(CH2 CH2 O)n -Rc 及具有1至6個獨立地選自O、S、N及P之雜原子的3員至18員雜環； R5 為C3-12 伸烷基，該鏈可由一或多個選自-O-、-S-、-NH-、-NMe-、苯環、4員至7員雜芳環及4員至7員雜環之基團中斷，其中該苯、該4員至7員雜芳環及該4員至7員雜環經1至4個R6 取代； R6 在每次出現時係獨立地選自H、C1-10 烷基、-(CH2 CH2 O)n -Rc 、鹵素、-NH(C=NH)NH2 、-OR、-NR’R’’、-NO2 、-NCO、-NR’COR’’、-SR、-SOR’、-SO2 R’、-SO3 H、-OSO3 H、-SO2 NR’R’’、-CN、-N3 、-COR’、-OCOR’及-OCONR’R’’；且 RL 係包含可與細胞結合劑形成共價鍵之反應性基團的自降解連接體，限制條件在於式(I)化合物不為：
Figure 02_image020
；或
Figure 02_image022
； 且限制條件在於式(Im )化合物不為：
Figure 02_image024
。
在第二態樣中，本發明係有關細胞結合劑-細胞毒性劑結合物，其由下式表示：
Figure 02_image026
， 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： CBA為細胞結合劑； Cy為細胞毒性劑，其由下式表示：
Figure 02_image028
(V)；
Figure 02_image030
(VI)；
Figure 02_image032
(TC1)；或
Figure 02_image034
(TC2)， 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： N與C之間的雙線
Figure 02_image003
表示單鍵或雙鍵，限制條件在於當其為雙鍵時，X不存在且Y為H或C1-4 烷基，且當其為單鍵時，X為H且Y為-OH或-SO3 H； W為-C(=O)-或-C(Y’)-； Y’為H或C1-4 烷基； R1a 、R2a 、R3a 、R4a 、R1b 、R2b 、R3b 及R4b 係各自獨立地選自由H、C1-10 烷基、-(OCH2 CH2 )n -ORc 、鹵素、-NH(C=NH)NH2 、-OR、-NR’R’’、-NO2 、-NR’COR’’、-SR、-SOR’、-SO2 R’、-SO3 H、-OSO3 H、-SO2 NR’R’’、-CN、-N3 、-COR’、-OCOR’及-OCONR’R’’組成之群； Rc 為H或C1-4 烷基； n為整數1至24； R在每次出現時係獨立地選自由H、-(CH2 CH2 O)n -Rc 、C1-10 烷基、C3-8 環烷基、6員至18員芳基、含有一或多個獨立地選自N、O及S之雜原子的5員至18員雜芳環或含有1至6個獨立地選自O、S、N及P之雜原子的3員至18員雜環組成之群； R’及R’’係各自獨立地選自-H、-OH、-OR、-NHR、-NR2 、-COR、C1-10 烷基、-(CH2 CH2 O)n -Rc 及具有1至6個獨立地選自O、S、N及P之雜原子的3員至18員雜環； R5 為C3-12 伸烷基，該鏈可由一或多個選自-O-、-S-、-NH-、-NMe-、苯環、4員至7員雜芳環及4員至7員雜環之基團中斷，其中該苯、該4員至7員雜芳環及該4員至7員雜環經1至4個R6 取代； R6 在每次出現時係獨立地選自H、C1-10 烷基、-(CH2 CH2 O)n -Rc 、鹵素、-NH(C=NH)NH2 、-OR、-NR’R’’、-NO2 、-NCO、-NR’COR’’、-SR、-SOR’、-SO2 R’、-SO3 H、-OSO3 H、-SO2 NR’R’’、-CN、-N3 、-COR’、-OCOR’及-OCONR’R’’；且 RL1 係共價連接至CBA之自降解連接體，限制條件在於式(V)結合物不為：
Figure 02_image036
。
本發明亦包括一種組成物(例如醫藥組成物)，其包含本文所述之本發明之細胞毒性化合物或結合物及載劑(醫藥學上可接受之載劑)。本發明化合物、結合物或組成物適用於抑制哺乳動物(例如人類)之異常細胞生長或治療其增生性病症(例如癌症)、自體免疫病症、破壞性骨病症、傳染病、病毒性疾病、纖維變性疾病、神經退化性病症、胰臟炎或腎病。
本發明亦包括本發明之細胞毒性化合物、結合物或組成物用於製造用於抑制哺乳動物(例如人類)之異常細胞生長或治療其增生性病症(例如癌症)、自體免疫病症、破壞性骨病症、傳染病、病毒性疾病、纖維變性疾病、神經退化性病症、胰臟炎或腎病的藥劑之用途。
相關申請案
本申請案根據35 U.S.C. §119(e)主張2019年3月29日申請之美國臨時申請案第62/825,954號的申請日權益，該案之完整內容以引用之方式倂入本文中。
現將詳細地參考本發明之某些實施例，其實例說明於伴隨結構及式子中。雖然本發明將聯合所列舉之實施例來描述，但應理解其不意欲將本發明局限於彼等實施例。相反，本發明意欲涵蓋所有替代物、修改及相等物，其可包括於如申請專利範圍所界定之本發明範圍內。熟習此項技術者應認識到與本文所述之彼等相似或相等之多種方法及材料，其可能用於本發明之實踐。
應理解，除非明確地否認或不適當，否則本文所述之任何實施例，包括在本發明之不同態樣及該說明書之不同部分下描述的彼等(包括僅在實例中描述之實施例)均可與本發明之一或多個其他實施例組合。實施例之組合不限於經由多個附屬項提出申請之彼等特定組合。 定義
如本文所用，術語「烷基」或「直鏈或分支鏈烷基」係指飽和直鏈或分支鏈單價烴基。在較佳實施例中，直鏈或分支鏈烷基具有三十個或三十個以下碳原子(例如，關於直鏈烷基為C1 -C30 且關於分支鏈烷基為C3 -C30 )，且更佳地二十個或二十個以下碳原子。甚至更佳地，直鏈或分支鏈烷基具有十個或十個以下碳原子(亦即，關於直鏈烷基為C1 -C10 且關於分支鏈烷基為C3 -C10 )。在其他實施例中，直鏈或分支鏈烷基具有六個或六個以下碳原子(亦即，關於直鏈烷基為C1 -C6 且關於分支鏈烷基為C3 -C6 )。烷基之實例包括但不限於甲基、乙基、1-丙基、2-丙基、1-丁基、2-甲基-1-丙基、-CH2 CH(CH3 )2 )、2-丁基、2-甲基-2-丙基、1-戊基、2-戊基3-戊基、2-甲基-2-丁基、3-甲基-2-丁基、3-甲基-1-丁基、2-甲基-1-丁基、1-己基)、2-己基、3-己基、2-甲基-2-戊基、3-甲基-2-戊基、4-甲基-2-戊基、3-甲基-3-戊基、2-甲基-3-戊基、2,3-二甲基-2-丁基、3,3-二甲基-2-丁基、1-庚基、1-辛基及其類似基團。此外，如本說明書、實例及申請專利範圍中所用之術語「烷基」意欲包括「未經取代烷基」及「經取代烷基」，其中後者係指具有置換烴骨架之一或多個碳上的氫之取代基之烷基部分。如本文所用，(Cx -Cxx )烷基或Cx-xx 烷基意謂具有x-xx個碳原子之直鏈或分支鏈烷基。
如本文所用，術語「伸烷基」係指飽和直鏈或分支鏈二價烴基。在較佳實施例中，直鏈或分支鏈伸烷基具有三十個或三十個以下碳原子(例如，關於直鏈伸烷基為C1 -C30 且關於分支鏈伸烷基為C3 -C30 )，且更佳地二十個或二十個以下碳原子。甚至更佳地，直鏈或分支鏈伸烷基具有十個或十個以下碳原子(亦即，關於直鏈伸烷基為C1 -C10 且關於分支鏈伸烷基為C3 -C10 )。在其他實施例中，直鏈或分支鏈伸烷基具有六個或六個以下碳原子(亦即，關於直鏈伸烷基為C1 -C6 且關於分支鏈伸烷基為C3 -C6 )。如本文所用，(Cx -Cxx )伸烷基或Cx-xx 伸烷基意謂具有x-xx個碳原子之直鏈或分支鏈伸烷基。
術語「烯基」或「直鏈或分支鏈烯基」係指具有兩個至二十個碳原子且具有至少一個不飽和位點(亦即，碳-碳雙鍵)之直鏈或分支鏈單價烴基，其中烯基包括具有「順式」及「反式」取向或替代地「E」及「Z」取向之基團。實例包括但不限於乙烯基(-CH=CH2 )、烯丙基(-CH2 CH=CH2 )及其類似基團。較佳地，烯基具有兩個至十個碳原子。更佳地，烷基具有兩個至四個碳原子。
術語「炔基」或「直鏈或分支鏈炔基」係指具有兩個至二十個碳原子且具有至少一個不飽和位點(亦即，碳-碳三鍵)之直鏈或分支鏈單價烴基。實例包括但不限於乙炔基、丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、1-戊炔基、2-戊炔基、3-戊炔基、己炔基及其類似基團。較佳地，炔基具有兩個至十個碳原子。更佳地，炔基具有兩個至四個碳原子。
術語「環狀烷基」及「環烷基」可互換使用。如本文所用，該術語係指飽和碳環之基團。在較佳實施例中，環烷基在其環結構中具有3至10個碳原子，且更佳地在環結構中具有5至7個碳原子。在一些實施例中，該兩個環可共同具有兩個或兩個以上原子，例如該等環為「稠環」。合適環烷基包括但不限於環庚基、環己基、環戊基、環丁基及環丙基。在一些實施例中，環烷基為單環基團。在一些實施例中，環烷基為二環基團。在一些實施例中，環烷基為三環基團。
術語「環烷基烷基」係指經環烷基取代之上述烷基。
術語「環狀烯基」係指在環結構中具有至少一個雙鍵之碳環基團。
術語「環狀炔基」係指在環結構中具有至少一個三鍵之碳環基團。
如本文所用，術語「芳基」或「芳環」包括經取代或未經取代單環芳族基團，其中該環之每一個原子均為碳。較佳地，該環為5至7員環，更佳地6員環。芳基包括但不限於苯基、苯酚、苯胺及其類似基團。術語「芳基」亦包括「多環基」、「多環」及「多環狀」環系統，其具有兩個或兩個以上環，其中兩個或兩個以上原子為兩個鄰接環所共有，例如該等環為「稠環」，其中該等環中之至少一者為芳族，例如其他環可為環烷基、環烯基、環炔基或芳環。在一些較佳實施例中，多環具有2-3個環。在某些較佳實施例中，多環系統具有兩個環，其中該等環均為芳族。多環之每一個環均可經取代或未經取代。在某些實施例中，多環之每一個環在環中含有3至10個碳原子，較佳地5至7個。例如，芳基包括但不限於苯基、甲苯基、蒽基、茀基、茚基、薁基及萘基，以及苯并稠合碳環部分，諸如5,6,7,8-四氫萘基及其類似基團。在一些實施例中，芳基為單環芳族基團。在一些實施例中，芳基為雙環芳族基團。在一些實施例中，芳基為三環芳族基團。
如本文所用，術語「雜環(heterocycle)」、「雜環基」及「雜環(heterocyclic ring)」係指3員至18員環、較佳地3員至10員環、更佳地3員至7員環之經取代或未經取代非芳環結構，其環結構包括至少一個雜原子，較佳地一至四個雜原子，更佳地一或兩個雜原子。在某些實施例中，該環結構可具有兩個環。在一些實施例中，該兩個環可共同具有兩個或兩個以上原子，例如該等環為「稠環」。雜環基包括例如哌啶、哌嗪、吡咯啶、嗎啉、內酯、內醯胺及其類似基團。雜環描述於Paquette, Leo A.; 「Principles of Modern Heterocyclic Chemistry」 (W. A. Benjamin, New York, 1968)，尤其第1、3、4、6、7及9章；「The Chemistry of Heterocyclic Compounds, A series of Monographs」 (John Wiley & Sons, New York, 1950年至今)，尤其第13、14、16、19及28卷；及J. Am. Chem. Soc. (1960) 82:5566中。雜環之實例包括但不限於四氫呋喃、二氫呋喃、四氫噻吩、四氫哌喃、二氫哌喃、四氫噻喃、硫代嗎啉、噻噁烷、高哌嗪、氮雜環丁烷、氧雜環丁烷、硫雜環丁烷、高哌啶、哌啶、哌嗪、吡咯啶、嗎啉、氧雜環庚烷、硫雜環庚烷、氧氮雜卓、二氮雜卓、硫氮雜卓、2-吡咯啉、3-吡咯啉、吲哚啉、2H-哌喃、4H-哌喃、二噁烷、1,3-二氧戊環、吡唑啉、二噻烷、二硫戊環、二氫哌喃、二氫噻吩、二氫呋喃、吡唑啶基咪唑啉、咪唑啶、3-氮雜雙環[3.1.0]己烷、3-氮雜雙環[4.1.0]庚烷及氮雜雙環[2.2.2]己烷。螺部分亦包括於此定義之範圍內。其中環原子經側氧基(=O)部分取代之雜環基團的實例為嘧啶酮及1,1-二側氧基-硫代嗎啉。
如本文所用，術語「雜芳基(heteroaryl)」或「雜芳環(heteroaromatic ring)」係指經取代或未經取代芳族單環結構，較佳地6員至18員環，較佳地5員至7員環，更佳地5員至6員環，其環結構包括至少一個雜原子(例如，O、N或S)，較佳地一至四個或一至三個雜原子，更佳地一或兩個雜原子。當兩個或兩個以上雜原子存在於雜芳基環中時，其可為相同或不同的。術語「雜芳基」亦包括「多環基」、「多環」及「多環狀」環系統，其具有兩個或兩個以上環，其中兩個或兩個以上環原子為兩個鄰接環所共有，例如該等環為「稠環」，其中該等環中之至少一者為雜芳族，例如其他環可為環烷基、環烯基、環炔基、芳基、雜芳族及/或雜環基。在一些較佳實施例中，多環雜芳基具有2-3個環。在某些實施例中，較佳多環雜芳基具有兩個環，其中該等環均為芳族。在某些實施例中，多環之每一個環在環中含有3至10個原子，較佳地在環中含有5至7個原子。例如，雜芳基包括但不限於吡咯、呋喃、噻吩、咪唑、噁唑、噻唑、吡唑、吡啶、吡嗪、噠嗪、喹啉、嘧啶、吲嗪、吲哚、吲唑、苯并咪唑、苯并噻唑、苯并呋喃、苯并噻吩、噌啉、酞嗪、喹唑啉、咔唑、吩噁嗪、喹啉、嘌呤及其類似物。在一些實施例中，雜芳基為單環芳族基團。在一些實施例中，雜芳基為雙環芳族基團。在一些實施例中，雜芳基為三環芳族基團。
在可能的情況下，雜環或雜芳基可為碳(碳連接)或氮(氮連接)附接的。舉例而言且非限制，碳鍵結之雜環或雜芳基鍵結於吡啶之2、3、4、5或6位、噠嗪之3、4、5或6位、嘧啶之2、4、5或6位、吡嗪之2、3、5或6位、呋喃、四氫呋喃、硫代呋喃、噻吩、吡咯或四氫吡咯之2、3、4或5位、噁唑、咪唑或噻唑之2、4或5位、異噁唑、吡唑或異噻唑之3、4或5位、氮丙啶之2或3位、氮雜環丁烷之2、3或4位、喹啉之2、3、4、5、6、7或8位或異喹啉之1、3、4、5、6、7或8位。
舉例而言且非限制，氮鍵結之雜環或雜芳基鍵結於氮丙啶、氮雜環丁烷、吡咯、吡咯啶、2-吡咯啉、3-吡咯啉、咪唑、咪唑啶、2-咪唑啉、3-咪唑啉、吡唑、吡唑啉、2-吡唑啉、3-吡唑啉、哌啶、哌嗪、吲哚、吲哚啉、1H-吲唑之1位、異吲哚或異吲哚啉之2位、嗎啉之4位及咔唑或O-咔啉之9位。
存在於雜芳基或雜環基中之雜原子包括經氧化形式，諸如NO、SO及SO2 。
在一些實施例中，雜芳環為5至18員環。
術語「鹵基」或「鹵素」係指氟(F)、氯(Cl)、溴(Br)或碘(I)。在一些實施例中，該鹵素為氟。在一些實施例中，該鹵素為氯。在一些實施例中，該鹵素為溴。在一些實施例中，該鹵素為碘。如本文所用，術語「鹵烷基」係指如本文所定義之烷基，其由如本文所定義之一或多個鹵基取代。該鹵烷基可為單鹵烷基、二鹵烷基或聚鹵烷基。單鹵烷基可具有一個氟、氯、溴或碘取代基。二鹵烷基或聚鹵烷基可經兩個或兩個以上相同鹵原子或不同鹵基之組合取代。鹵烷基之實例包括但不限於氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、氯甲基、二氯甲基、三氯甲基、五氟乙基、七氟丙基、二氟氯甲基、二氯氟甲基、二氟乙基、二氟丙基、二氯乙基及二氯丙基。
本文所用之術語「烷氧基」係指烷基-O-，其中烷基定義於上文中。烷氧基之實例包括但不限於甲氧基、乙氧基、丙氧基、2-丙氧基、丁氧基、第三丁氧基、戊氧基、己氧基及其類似基團。
上文所述之烷基、鹵烷基、烷氧基、烯基、炔基、環狀烷基、環狀烯基、環狀炔基、碳環基、芳基、雜環基及雜芳基可視情況經一或多個(例如，2、3、4、5、6個或6個以上)取代基取代。
除非特定地陳述為「未經取代」，否則本文中對化學部分之提及應理解為亦包括經取代變異體。例如，對「烷基」或部分之提及暗含包括經取代及未經取代變異體。化學部分上之取代基的實例包括但不限於鹵素、羥基、羰基(諸如羧基、烷氧羰基、甲醯基或醯基)、硫羰基(諸如硫酯、硫代乙酸酯或硫代甲酸酯)、烷氧基、烷硫基、醯氧基、磷醯基、磷酸酯、膦酸酯、胺基、醯胺基、脒、亞胺、氰基、硝基、疊氮基、巰基、烷硫基、硫酸酯、磺酸酯、胺磺醯基、磺醯胺基、磺醯基、雜環基、芳烷基或芳族或雜芳基部分。
「視情況選用之」或「視情況」意謂隨後描述之情形可或可不發生，使得該申請案包括其中該情形發生之情況及其中該情形不發生之情況。例如，措辭「視情況經取代」意謂非氫取代基可或可不存在於既定原子上，且因此該申請案包括其中存在非氫取代基之結構及其中不存在非氫取代基之結構。
術語「經取代」係指具有置換一或多個碳、氮、氧或硫原子上的氫之取代基之部分。應理解，「取代」或「經取代」包括暗含限制條件，即該取代與經取代原子及取代基之允許價態一致，且該取代產生穩定化合物，例如該化合物不會自發地經歷諸如藉由重排、環化、消除等導致之轉化。如本文所用，術語「經取代」預期包括有機化合物之所有可允許取代基。在一廣泛態樣中，該等可允許取代基包括有機化合物之無環及環狀、分支及未分支、碳環及雜環、芳族及非芳族取代基。該等可允許取代基可為用於適當有機化合物之一或多者且相同或不同。出於本發明之目的，諸如氮之雜原子可具有氫取代基及/或本文所述之有機化合物的滿足雜原子價態之任何可允許取代基。取代基可包括本文所述之任何取代基，例如鹵素、羥基、羰基(諸如羧基、烷氧羰基、甲醯基或醯基)、硫羰基(諸如硫酯、硫代乙酸酯或硫代甲酸酯)、烷氧基、烷硫基、醯氧基、磷醯基、磷酸酯、膦酸酯、胺基、醯胺基、脒、亞胺、氰基、硝基、疊氮基、巰基、烷硫基、硫酸酯、磺酸酯、胺磺醯基、磺醯胺基、磺醯基、雜環基、芳烷基或芳族或雜芳族部分。為了說明，單氟烷基係經一個氟取代基取代之烷基，且二氟烷基係經兩個氟取代基取代之烷基。應認識到，若取代基上存在超過一個取代，則各非氫取代基可為一致或不同的(除非另外規定)。
若取代基之碳經描述為視情況經取代基清單中之一或多者取代，則該碳上的一或多個氫(就存在一些而言)可獨立地及/或合起來經獨立選擇之視情況選用之取代基置換。若取代基之氮經描述為視情況經取代基清單中之一或多者取代，則該氮上的一或多個氫(就存在一些而言)可各自經獨立選擇之視情況選用之取代基置換。一種例示性取代基可經描繪為-NR’R’’，其中R’及R’’與其所附接之氮原子一起可形成雜環。由R’及R’’與其所附接之氮原子一起形成之雜環可部分地或完全地飽和。在一些實施例中，該雜環由3至7個原子組成。在其他實施例中，該雜環係選自吡咯基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、異噁唑基、吡啶基及噻唑基。
此說明書可互換地使用術語「取代基」、「基團(radical)」及「基團(group)」。
若取代基之基團共同地經描述為視情況由取代基清單中之一或多者取代，則該基團可包括：(1)無法取代之取代基，(2)可取代之取代基，其未由視情況選用之取代基取代，及/或(3)可取代之取代基，其由視情況選用之取代基中的一或多者取代。
若取代基經描述為視情況經多達特定數目之非氫取代基取代，則彼取代基可(1)未經取代；或(2)由彼特定數目之非氫取代基或由該取代基上的多達最大數目之可取代位置(取較小者)取代。因此，舉例而言，若取代基經描述為視情況經多達3個非氫取代基取代之雜芳基，則具有少於3個可取代位置之任何雜芳基均將視情況經多達僅與該雜芳基具有之可取代位置同樣多的非氫取代基取代。在非限制性實例中，該等取代基可選自具有1至10個碳原子之直鏈、分支鏈或環狀烷基、烯基或炔基、芳基、雜芳基、雜環基、鹵素、胍鹽[-NH(C=NH)NH2 ]、-OR100 、NR101 R102 、-NO2 、-NR101 COR102 、-SR100 、由-SOR101 表示之亞碸、由-SO2 R101 表示之碸、磺酸酯基-SO3 M、硫酸酯基-OSO3 M、由-SO2 NR101 R102 表示之磺醯胺、氰基、疊氮基、-COR101 、-OCOR101 、-OCONR101 R102 及聚乙二醇單元(-OCH2 CH2 )n R101 ，其中M為H或陽離子(諸如Na+ 或K+ )；R101 、R102 及R103 各自獨立地選自H、具有1至10個碳原子之直鏈、分支鏈或環狀烷基、烯基或炔基、聚乙二醇單元(-OCH2 CH2 )n -R104 (其中n為整數1至24)、具有6至10個碳原子之芳基、具有3至10個碳原子之雜環及具有5至10個碳原子之雜芳基；且R104 為H或具有1至4個碳原子之直鏈或分支鏈烷基，其中該等基團中由R100 、R101 、R102 、R103 及R104 表示之烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基及雜環基視情況經獨立地選自鹵素、-OH、-CN、-NO2 及具有1至4個碳原子之未經取代直鏈或分支鏈烷基的一或多個(例如，2、3、4、5、6個或6個以上)取代基取代。較佳地，用於上文所述之視情況經取代烷基、烯基、炔基、環狀烷基、環狀烯基、環狀炔基、碳環基、芳基、雜環基及雜芳基的取代基包括鹵素、-CN、-NR102 R103 、-CF3 、-OR101 、芳基、雜芳基、雜環基、-SR101 、-SOR101 、-SO2 R101 及-SO3 M。
基團中之碳原子數目在本文中可由字首「Cx-xx 」或「Cx -Cxx 」規定，其中x及xx為整數。例如，「C1-4 烷基」或「C1-C4烷基」為具有1至4個碳原子之烷基。
術語「化合物」或「細胞毒性化合物」、「細胞毒性二聚體」及「細胞毒性二聚體化合物」可互換使用。其意欲包括如下化合物，其結構或式子或任何衍生物已揭示於本發明中或其結構或式子或任何衍生物已以引用之方式倂入。該術語亦包括本發明中揭示之所有式子之化合物的立體異構體、幾何異構體、互變異構體、溶劑合物、代謝物、鹽(例如，醫藥學上可接受之鹽)及前藥以及前藥鹽。該術語亦包括前述任一者之任何溶劑合物、水合物及多晶型物。在此申請案中描述之本發明的某些態樣中，特定陳述「立體異構體」、「幾何異構體」、「互變異構體」、「溶劑合物」、「代謝物」、「鹽」「前藥」、「前藥鹽」、「結合物」、「結合物鹽」、「溶劑合物」、「水合物」或「多晶型物」不應解釋為在其中使用術語「化合物」而未陳述此等其他形式的本發明之其他態樣中意欲省略此等形式。
如本文所用，術語「結合物」係指連接至細胞結合劑之本文所述化合物或其衍生物。
術語「對掌性」係指具有鏡像搭配物之不可重疊特性之分子，而術語「非對掌性」係指在其鏡像搭配物上可重疊之分子.
術語「立體異構體」係指如下化合物，其具有一致化學組成及連接性，但其原子在空間中之不同取向無法藉由繞單鍵旋轉而互變。
術語「非對映異構體」係指具有兩個或兩個以上對掌性中心且分子彼此不為鏡像之立體異構體。非對映異構體具有不同的物理特性，例如熔點、沸點、光譜特性及反應性。非對映異構體之混合物可根據高解析度分析程序，諸如結晶、電泳及層析來分離。
術語「對映異構體」係指化合物之兩種立體異構體，其彼此為不可重疊鏡像。
本文所使用之立體化學定義及慣例一般地遵循S. P. Parker編, McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (1984) McGraw-Hill Book Company, New York；及Eliel, E.及Wilen, S., 「Stereochemistry of Organic Compounds,」 John Wiley & Sons, Inc., New York, 1994。本發明化合物可含有非對稱或對掌性中心，且因此以不同立體異構體形式存在。預期本發明化合物之所有立體異構體形式形成本發明之一部分，包括但不限於非對映異構體、對映異構體及位阻異構體，以及其混合物，諸如外消旋混合物。多種有機化合物以光學活性形式存在，亦即，其具有使平面-偏振光之平面旋轉的能力。在描述光學活性化合物時，字首D及L或R及S用於表示該分子繞其對掌性中心之絕對組態。字首d及I或(+)及(-)用於指示該化合物使平面-偏振光旋轉之符號，其中(-)或1意謂該化合物為左旋的。字首為(+)或d之化合物為右旋的。關於既定化學結構，此等立體異構體為一致的，只是其彼此為鏡像。特定立體異構體亦可稱作對映異構體，且該等異構體之混合物通常稱作對映異構體混合物。對映異構體之50:50混合物係稱作外消旋混合物或外消旋體，其可在化學反應或過程中無立體選擇或立體特異性之情況下出現。術語「外消旋混合物」及「外消旋體」係指兩種對映異構體物質之等莫耳濃度混合物，其缺乏光學活性。
術語「互變異構體」或「互變異構體形式」係指可經由低能障壁互變之具有不同能量之結構異構體。例如，質子互變異構體(亦稱作質子移變互變異構體)包括經由質子遷移實現之互變，諸如酮-烯醇及亞胺-烯胺異構化。價互變異構體包括藉由一些鍵結電子之重組實現之互變。
如本文所用，術語「醫藥學上可接受之鹽」係指本發明化合物之醫藥學上可接受之有機或無機鹽。例示性鹽包括但不限於硫酸鹽、檸檬酸鹽、乙酸鹽、草酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、硝酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、酸性磷酸鹽、異菸鹼酸鹽、乳酸鹽、水楊酸鹽、酸性檸檬酸鹽、酒石酸鹽、油酸鹽、鞣酸鹽、泛酸鹽、酒石酸氫鹽、抗壞血酸鹽、丁二酸鹽、順丁烯二酸鹽、龍膽酸鹽、反丁烯二酸鹽、葡糖酸鹽、葡糖醛酸鹽、糖質酸鹽、甲酸鹽、苯甲酸鹽、麩胺酸鹽、甲烷磺酸鹽「甲磺酸鹽」、乙烷磺酸鹽、苯磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽、雙羥萘酸鹽(亦即，1,1’-亞甲基-雙-(2-羥基-3-萘甲酸鹽))、鹼金屬(例如，鈉及鉀)鹽、鹼土金屬(例如，鎂)鹽及銨鹽。醫藥學上可接受之鹽可涉及包括另一分子，諸如乙酸鹽離子、丁二酸鹽離子或其他相對離子。該相對離子可為使親本化合物上之電荷穩定化的任何有機或無機部分。此外，醫藥學上可接受之鹽可在其結構中具有超過一個帶電原子。其中多個帶電原子為醫藥學上可接受之鹽的一部分之情況可具有多個相對離子。因此，醫藥學上可接受之鹽可具有一或多個帶電原子及/或一或多個相對離子。
若本發明化合物為鹼，則所需醫藥學上可接受之鹽可藉由此項技術中可獲得之任何合適方法製備，例如用諸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、甲烷磺酸、磷酸及其類似物之無機酸，或用諸如乙酸、順丁烯二酸、丁二酸、扁桃酸、反丁烯二酸、丙二酸、丙酮酸、草酸、乙醇酸、水楊酸、哌喃糖酸(諸如葡糖醛酸或半乳糖醛酸)、α羥基酸(諸如檸檬酸或酒石酸)、胺基酸(諸如天冬胺酸或麩胺酸)、芳香酸(諸如苯甲酸或肉桂酸)、磺酸(諸如對甲苯磺酸或乙烷磺酸)或其類似物之有機酸處理游離鹼。
若本發明化合物為酸，則所需醫藥學上可接受之鹽可藉由任何合適方法製備，例如用諸如胺(一級、二級或三級)、鹼金屬氫氧化物或鹼土金屬氫氧化物或其類似物之無機或有機鹼處理游離酸。合適鹽之說明性實例包括但不限於源於諸如甘胺酸及精胺酸之胺基酸、氨水、一級、二級及三級胺及諸如哌啶、嗎啉及哌嗪之環狀胺的有機鹽，及源於鈉、鈣、鉀、鎂、錳、鐵、銅、鋅、鋁及鋰之無機鹽。
如本文所用，術語「溶劑合物」意謂如下化合物，其進一步包括藉由非共價分子間力結合之化學計量或非化學計量之量的溶劑，諸如水、異丙醇、丙酮、乙醇、甲醇、DMSO、乙酸乙酯、乙酸及乙醇胺二氯甲烷、2-丙醇或其類似物。該等化合物之溶劑合物或水合物容易藉由向該化合物中添加至少一莫耳當量之羥基溶劑(諸如甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇或水)以產生亞胺部分之溶劑化或水合來製備。
措辭「醫藥學上可接受」指示該物質或組成物必須可在化學上及/或在毒物學上與構成該調配物之其他成分及/或用其治療之哺乳動物相容。
術語「離去基」係指在取代或置換期間離去之帶電或不帶電部分之基團。該等離去基為此項技術中熟知的且包括但不限於鹵素、酯、烷氧基、羥基、甲苯磺酸酯、三氟甲磺酸酯、甲磺酸酯、腈、疊氮化物、胺基甲酸酯、二硫化物、硫酯、硫醚及重氮化合物。
術語「反應性酯」係指具有可容易置換之離去基之酯，該離去基可容易與胺基反應以形成醯胺鍵。反應性酯之實例包括但不限於N-羥基丁二醯亞胺酯、N-羥基磺基丁二醯亞胺酯、硝基苯基(例如，2-硝基苯基或4-硝基苯基)酯、二硝基苯基(例如，2,4-二硝基苯基)酯、磺基-四氟苯基(例如，4磺基-2,3,5,6-四氟苯基)酯或五氟苯基酯。
術語「反應性基團」係指可與位於另一分子(諸如細胞結合劑或細胞毒性化合物)上之部分反應以形成共價鍵之基團。反應性基團包括但不限於胺反應性基團及硫醇反應性基團。
術語「胺反應性基團」係指可與胺基反應以形成共價鍵之基團。例示性胺反應性基團包括但不限於反應性酯基、醯基鹵、磺醯基鹵化物、醯亞胺酯或反應性硫酯基。在某些實施例中，該胺反應性基團為反應性酯基。在一實施例中，該胺反應性基團為N-羥基丁二醯亞胺酯或N-羥基磺基-丁二醯亞胺酯。
術語「硫醇反應性基團」係指可與硫醇(-SH)基團反應以形成共價鍵之基團。例示性硫醇反應性基團包括但不限於順丁烯二醯亞胺、鹵基乙醯基、鹵基乙醯胺、乙烯基碸、乙烯基磺醯胺或乙烯基吡啶。在一實施例中，該硫醇反應性基團為順丁烯二醯亞胺。
術語「雙官能交聯劑」、「雙官能連接體」或「交聯劑」係指具有兩個反應性基團之修飾劑；該等反應性基團之一能夠與細胞結合劑反應，而另一者與細胞毒性化合物反應以使該兩個部分連接在一起。該等雙官能交聯劑為此項技術中熟知的(參見例如Isalm及DentBioconjugation 第5章, 第218-363頁, Groves Dictionaries Inc. New York, 1999)。例如，使得能夠經由硫醚鍵連接之雙官能交聯劑包括N -丁二醯亞胺基-4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)-環己烷-1-甲酸酯(SMCC)以引入順丁烯二醯亞胺基，或N -丁二醯亞胺基-4-(碘乙醯基)-胺基苯甲酸酯(SIAB)以引入碘乙醯基。在細胞結合劑上引入順丁烯二醯亞胺基或鹵基乙醯基之其他雙官能交聯劑為此項技術中熟知的(參見美國專利申請案2008/0050310、20050169933，可獲自Pierce Biotechnology Inc. P.O. Box 117, Rockland, IL 61105, USA)且包括但不限於雙-順丁烯二醯亞胺基聚乙二醇(BMPEO)、BM(PEO)2 、BM(PEO)3 、N-(β-順丁烯二醯亞胺基丙氧基)丁二醯亞胺酯(BMPS)、γ-順丁烯二醯亞胺基丁酸N-丁二醯亞胺酯(GMBS)、ε-順丁烯二醯亞胺基己酸N-羥基丁二醯亞胺酯(EMCS)、5-順丁烯二醯亞胺基戊酸NHS、HBVS、N-丁二醯亞胺基-4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)-環己烷-1-羧基-(6-醯胺基己酸酯) (其為SMCC之「長鏈」類似物(LC-SMCC))、間順丁烯二醯亞胺基苯甲醯基-N-羥基丁二醯亞胺酯(MBS)、4-(4-N-順丁烯二醯亞胺基苯基)-丁酸醯肼或HCl鹽(MPBH)、N-丁二醯亞胺基3-(溴乙醯胺基)丙酸酯(SBAP)、N-丁二醯亞胺基碘乙酸酯(SIA)、κ順丁烯二醯亞胺基十一酸N-丁二醯亞胺酯(KMUA)、N-丁二醯亞胺基4-(對順丁烯二醯亞胺基苯基)-丁酸酯(SMPB)、丁二醯亞胺基-6-(β-順丁烯二醯亞胺基丙醯胺基)己酸酯(SMPH)、丁二醯亞胺基-(4-乙烯基磺醯基)苯甲酸酯(SVSB)、二硫雙-順丁烯二醯亞胺基乙烷(DTME)、1,4-雙-順丁烯二醯亞胺基丁烷(BMB)、1,4雙順丁烯二醯亞胺基-2,3-二羥基丁烷(BMDB)、雙-順丁烯二醯亞胺基己烷(BMH)、雙-順丁烯二醯亞胺基乙烷(BMOE)、磺基丁二醯亞胺基4-(N-順丁烯二醯亞胺基-甲基)環己烷-1-甲酸酯(磺基-SMCC)、磺基丁二醯亞胺基(4-碘-乙醯基)胺基苯甲酸酯(磺基-SIAB)、間順丁烯二醯亞胺基苯甲醯基-N-羥基磺基丁二醯亞胺酯(磺基-MBS)、N-(γ-順丁烯二醯亞胺基丁醯基氧基)磺基丁二醯亞胺酯(磺基-GMBS)、N-(ε-順丁烯二醯亞胺基己醯基氧基)磺基丁二醯亞胺酯(磺基-EMCS)、N-(κ-順丁烯二醯亞胺基十一醯基氧基)磺基丁二醯亞胺酯(磺基-KMUS)及磺基丁二醯亞胺基4-(對順丁烯二醯亞胺基苯基)丁酸酯(磺基-SMPB)。
雜雙官能交聯劑係具有兩個不同反應性基團之雙官能交聯劑。含有胺反應性N -羥基丁二醯亞胺基(NHS基團)及羰基反應性肼基兩者之雜雙官能交聯劑亦可用於使本文所述之細胞毒性化合物與細胞結合劑(例如，抗體)連接。該等市售雜雙官能交聯劑之實例包括丁二醯亞胺基6-肼基菸鹼醯胺丙酮腙(SANH)、丁二醯亞胺基4-肼基對苯二甲酸酯鹽酸鹽(SHTH)及丁二醯亞胺基金井菸鹼酸酯鹽酸鹽(SHNH)。具有酸不穩定鍵之結合物亦可使用本發明之具有肼的苯二氮平衍生物來製備。可使用之雙官能交聯劑之實例包括丁二醯亞胺基-對甲醯基苯甲酸酯(SFB)及丁二醯亞胺基-對甲醯基苯氧基乙酸酯(SFPA)。
使得能夠經由二硫鍵使細胞結合劑與細胞毒性化合物連接之雙官能交聯劑為此項技術中已知的且包括N -丁二醯亞胺基-3-(2-吡啶基二硫基)丙酸酯(SPDP)、N -丁二醯亞胺基-4-(2-吡啶基二硫基)戊酸酯(SPP)、N -丁二醯亞胺基-4-(2-吡啶基二硫基)丁酸酯(SPDB)、N -丁二醯亞胺基-4-(2-吡啶基二硫基)2-磺基丁酸酯(磺基-SPDB)以引入二硫基吡啶基。可用於引入二硫基之其他雙官能交聯劑為此項技術中已知的且揭示於美國專利6,913,748、6,716,821及美國專利公開案20090274713及20100129314中，其均以引用之方式倂入本文中。或者，亦可使用引入硫醇基之交聯劑，諸如2-亞胺基硫雜戊環、高半胱胺酸硫內酯或S-乙醯基丁二酸酐。
如本文所定義，術語「連接體」、「連接體部分」或「連接基團」係指使諸如細胞結合劑及細胞毒性化合物之兩個基團連接在一起之部分。典型地，該連接體在連接其所連接之兩個基團的條件下實質上呈惰性。雙官能交聯劑可包含兩個反應性基團，在連接體部分之各末端處一個基團，以致一個反應性基團可首先與細胞毒性化合物反應以提供具有該連接體部分及第二反應性基團之化合物，該第二反應性基團可接著與細胞結合劑反應。或者，該雙官能交聯劑之一末端可首先與細胞結合劑反應以提供具有連接體部分及第二反應性基團之細胞結合劑，其可接著與細胞毒性化合物反應。該連接部分可含有允許在特定位點處釋放該細胞毒性部分之化學鍵。合適化學鍵為此項技術中熟知的且包括二硫鍵、硫醚鍵、酸不穩定鍵、光不穩定鍵、肽酶不穩定鍵及酯酶不穩定鍵(參見例如美國專利5,208,020；5,475,092；6,441,163；6,716,821；6,913,748；7,276,497；7,276,499；7,368,565；7,388,026及7,414,073)。較佳為二硫鍵、硫醚及肽酶不穩定鍵。可用於本發明之其他連接體包括不可裂解連接體，諸如詳細描述於美國公開案第20050169933號中之彼等，或描述於US 2009/0274713、US 2010/01293140及WO 2009/134976中之帶電連接體或親水性連接體，該等公開案中每一者均明確地以引用之方式倂入本文中，該等公開案中每一者均明確地以引用之方式倂入本文中。
術語「自降解連接體」係指當遠端位點經活化時將允許細胞毒性化合物之釋放之連接體。在某些實施例中，該連接體包含對胺基苯甲基單元。在一些該等實施例中，對胺基苯甲基醇經由醯胺鍵附接至胺基酸單元，且在苯甲基醇與藥物之間產生胺基甲酸酯、甲基胺基甲酸酯或碳酸酯(Hamann等人 (2005) Expert Opin. Ther. Patents (2005) 15:1087-1103)。在一些實施例中，該連接體包含對胺基苯甲氧基羰基(PAB)。自降解連接體之其他實例包括但不限於在電子上類似於PAB基團之芳族化合物，諸如2-胺基咪唑-5-甲醇衍生物(美國專利第7,375,078號；Hay等人 (1999) Bioorg. Med. Chem. Lett. 9:2237)及鄰或對胺基苯甲基縮醛。在一些實施例中，可使用在醯胺鍵水解時經受環化之間隔劑，諸如經取代及未經取代4-胺基丁酸醯胺(Rodrigues等人 (1995) Chemistry Biology 2:223)、經適當取代之雙環[2.2.1]及雙環[2.2.2]環系統(Storm等人 (1972) J. Amer. Chem. Soc. 94:5815)及2-胺基苯基丙酸醯胺(Amsberry等人 (1990) J. Org. Chem. 55:5867)。藥物與甘胺酸殘基之α-碳之連接係可適用於ADC的自降解連接體之另一實例(Kingsbury等人 (1984) J. Med. Chem. 27:1447)。
術語「胺基酸」係指天然存在之胺基酸或非天然存在之胺基酸。在一些實施例中，胺基酸由NH2 -C(Raa’ Raa )-C(=O)OH表示，其中Raa 及Raa’ 各自獨立地為H、視情況經取代的具有1至10個碳原子之直鏈、分支鏈或環狀烷基、烯基或炔基、芳基、雜芳基或雜環基或Raa 及N端氮原子可合起來形成雜環(例如，如在脯胺酸中)。術語「胺基酸殘基」係指當一個氫原子自胺基酸之胺及/或羧基末端移除時之相應殘基，諸如-NH-C(Raa’ Raa )-C(=O)-。
術語「肽」係指藉由肽(醯胺)鍵連接之胺基酸單體的短鏈。在一些實施例中，該等肽含有2至20個胺基酸殘基。在其他實施例中，該等肽含有2至10個或2至8個胺基酸殘基。在其他實施例中，該等肽含有2至5個胺基酸殘基。如本文所用，當肽為本文所述之細胞毒性劑或連接體中由胺基酸之特定序列表示的一部分時，該肽可沿兩個方向連接至該細胞毒性劑或該連接體之剩餘部分。
術語「陽離子」係指具有正電荷之離子。該陽離子可為單價(例如，Na+ 、K+ 等)、二價(例如，Ca2+ 、Mg2+ 等)或多價(例如，Al3+ 等)。較佳地，該陽離子為單價。
除非另外指示，否則如本文中可互換使用之術語「(人類) IL-3Rα」、「介白素-3受體α」或「CD123」係指任何原生(人類) IL-3Rα或CD123。CD123蛋白係雜二聚細胞因子受體(IL-3受體或IL-3R)之介白素3特異性次單元。IL-3R包含配位體特異性α次單元，及由介白素3 (IL3)、群落刺激因子2 (CSF2/GM-CSF)及介白素5 (IL5)之受體共享的信號轉導通用β次單元(亦稱作CD131)。CD123/IL-3Rα與IL3之結合取決於該β次單元。該β次單元藉由配位體結合來活化，且係IL3之生物活性所需的。
關於CD123之所有此等上述術語均可指如本文所指示之蛋白質或核酸序列。術語「CD123/IL-3Rα」涵蓋「全長」未加工CD123/IL-3Rα，以及由細胞內之加工產生的任何形式之CD123/IL-3Rα。該術語亦涵蓋CD123/IL-3Rα蛋白或核酸之天然存在之變異體，例如剪接變異體、等位基因變異體及同功異型物。本文所述之CD123/IL-3Rα多肽及聚核苷酸可自多種來源，諸如自人類組織類型或自另一來源分離，或藉由重組或合成方法製備。CD123/IL-3Rα序列之實例包括但不限於NCBI參考編號NP_002174及NM_002183 (針對人類CD123變異體1之蛋白質及核酸序列)，及NP_001254642及NM_001267713 (針對人類CD123變異體2之蛋白質及核酸序列)。
術語「ADAM9」係指含有去整合素及金屬蛋白酶域之蛋白9，其為ADAM分子家族之成員。其經合成為無活性形式，該無活性形式經蛋白水解裂解以產生活性酶。上游處之加工對於酶原之活化而言尤其重要。ADAM9表現於纖維母細胞(Zigrino, P.等人 (2011) 「The Disintegrin-Like And Cysteine-Rich Domains Of ADAM-9 Mediate Interactions Between Melanoma Cells And Fibroblasts ,」 J. Biol. Chem. 286:6801-6807)、經活化血管平滑肌細胞(Sun, C.等人(2010) 「ADAM15 Regulates Endothelial Permeability And Neutrophil Migration Via Src/ERK1/2 Signalling ,」 Cardiovasc. Res. 87:348-355)、單核細胞(Namba, K.等人(2001) 「Involvement Of ADAM9 In Multinucleated Giant Cell Formation Of Blood Monocytes ,」 Cell. Immunol. 213:104-113)及經活化巨噬細胞(Oksala, N.等人 (2009) 「ADAM-9, ADAM-15, And ADAM-17 Are Upregulated In Macrophages In Advanced Human Atherosclerotic Plaques In Aorta And Carotid And Femoral Arteries - Tampere Vascular Study ,」 Ann. Med. 41:279-290)中。代表性人類ADAM9多肽為NCBI序列NP_003807。在ADAM9多肽之819個胺基酸殘基中，殘基1-28為信號序列，殘基29-697為細胞外域，殘基698-718為跨膜域，且殘基719-819為細胞內域。三個結構域位於細胞外域內：Reprolysin (M12B)家族鋅金屬蛋白酶域(在大約殘基212-406處)；去整合素域(在大約殘基423-497處)；及EGF樣域(在大約殘基644-697處)。多種轉譯後修飾及同功異型物已經鑒別且該蛋白質在其到達質膜以產生成熟蛋白質之前在反面高爾基體網路中經蛋白水解裂解。前域之移除經由兩個不同位點處之裂解而發生。加工最有可能在前域與催化域之間的邊界處(Arg-205/Ala-206)藉由諸如弗林之原蛋白轉化酶而發生。額外上游裂解原蛋白轉化酶位點(Arg-56/Glu-57)在ADAM9之活化中具有重要作用。代表性食蟹獼猴ADAM9多肽為NCBI序列XM_005563126.2，包括可能28個胺基酸殘基之信號序列。該蛋白質之Reprolysin (M12B)家族鋅金屬蛋白酶域在大約殘基212-406處)；該蛋白質之去整合素域在大約殘基423-497處。
術語「抗體」意謂免疫球蛋白分子，其經由該免疫球蛋白分子之可變區內的至少一個抗原識別位點識別且特異性地結合於標靶，諸如蛋白質、多肽、肽、碳水化合物、聚核苷酸、脂質或前述各物之組合。如本文所用，術語「抗體」涵蓋完整多株抗體、完整單株抗體、抗體片段(諸如Fab、Fab’、F(ab’)2 及Fv片段)、單鏈Fv (scFv)突變體、多特異性抗體(諸如雙特異性抗體)、嵌合抗體、人類化抗體、人類抗體、包含抗體之抗原決定部分的融合蛋白及包含抗原識別位點之任何其他經修飾免疫球蛋白分子，只要該等抗體展現所需生物活性即可。抗體基於其重鏈恆定域之身份(分別稱作α、δ、ε、γ及μ)可為免疫球蛋白之五種主要類別中的任一者：IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，或其亞類(同型) (例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl及IgA2)。免疫球蛋白之不同類別具有不同且熟知之次單元結構及三維組態。抗體可為裸的或結合於其他分子，諸如毒素、放射性同位素等。
在一些實施例中，抗體為非天然存在之抗體。在一些實施例中，抗體自天然組分經純化。在一些實施例中，抗體係重組產生的。在一些實施例中，抗體係藉由融合瘤產生的。
術語「抗CD123抗體」、「抗IL-3Rα抗體」或「(特異性地)結合於CD123/IL-3Rα之抗體」係指能夠以充足親和力結合CD123/IL-3Rα的抗體，以致該抗體適用作靶向性CD123/IL-3Rα之診斷及/或治療劑。除非另外規定，否則抗CD123/IL-3Rα抗體與無關、非CD123/IL-3Rα蛋白之結合程度小於該抗體與CD123/IL-3Rα之結合的約10%，如例如藉由放射性免疫分析(RIA)所量測。在某些實施例中，結合於CD123/IL-3Rα之抗體具有≤0.5 nΜ、≤0.3 nM、≤0.1 nM、≤0.05 nM或≤0.01 nM之解離常數(Kd )。在一實施例中，抗CD123/IL-3Rα抗體不結合通用β鏈CD131。在一實施例中，抗CD123/IL-3Rα抗體不結合CD123中由諸如7G3 (小鼠IgG2a )、6H6 (小鼠IgG1 )及9F5 (小鼠IgG1 )之已知且市售CD123抗體結合之相同抗原決定基(Sun等人,Blood 87(1): 83-92, 1996)。
本文提供本發明之抗CD123/IL-3Rα抗體及其抗原結合片段之序列。
術語「抗體片段」係指完整抗體之一部分且係指完整抗體之抗原決定可變區。抗體片段之實例包括但不限於Fab、Fab'、F(ab’)2 及Fv 片段、線性抗體、單鏈抗體及由抗體片段形成之多特異性抗體。術語抗體之「抗原結合片段」包括抗體中保持特異性地結合於抗原之能力的一或多個片段。已顯示抗體之抗原結合功能可藉由全長抗體之某些片段執行。涵蓋於術語抗體之「抗原結合片段」內的結合片段之實例包括(但不限於)：(i) Fab片段，即由VL 、VH 、CL 及CH1 域組成之單價片段(例如，藉由木瓜蛋白酶消化之抗體產生三個片段：兩個抗原結合Fab片段及一個不結合抗原之Fc片段)；(ii) F(ab’)2 片段，即包含由鉸鏈區處之二硫橋連接的兩個Fab片段之二價片段(例如，藉由胃蛋白酶消化之抗體產生兩個片段：二價抗原結合F(ab’)2 片段及不結合抗原之pFc’片段)及其相關F(ab’)單價單元；(iii) Fd 片段，其由VH 及CH1 域組成(亦即，重鏈中包括於Fab中的彼部分)；(iv) Fv 片段，其由抗體單臂之VL 及VH 域組成，及相關二硫化物連接之Fv ；(v) dAb (域抗體)或sdAb (單域抗體)片段(Ward等人,Nature 341:544-546, 1989)，其由VH 域組成；及(vi)經分離互補決定區(CDR)。
術語「單株抗體」係指牽涉於單一抗原決定子或抗原決定基之高度特異性識別及結合中的均質抗體群體。此與多株抗體形成對照，多株抗體典型地包括針對不同抗原決定子之不同抗體。術語「單株抗體」涵蓋完整及全長單株抗體，以及抗體片段(諸如Fab、Fab’、F(ab’)2 、Fv )、單鏈(scFv)突變體、包含抗體部分之融合蛋白及包含抗原識別位點之任何其他經修飾免疫球蛋白分子。此外，「單株抗體」係指以多種方式製得之該等抗體，該等方式包括但不限於藉由融合瘤、噬菌體選擇、重組表現及轉殖基因動物。
術語「人類化抗體」係指非人類(例如鼠科動物)抗體之形式，該等形式係含有最小非人類(例如鼠科動物)序列之特異性免疫球蛋白鏈、嵌合免疫球蛋白或其片段。典型地，人類化抗體係其中來自互補決定區(CDR)之殘基由來自具有所需特異性、親和力及能力之非人類物種(例如小鼠、大鼠、兔、倉鼠)之CDR的殘基置換之人類免疫球蛋白(Jones等人, Nature 321:522-525, 1986；Riechmann等人Nature 332:323-327, 1988；Verhoeyen等人,Science 239:1534-1536, 1988)。
在一些情況下，人類免疫球蛋白之Fv 構架區(FR)殘基經來自具有所需特異性、親和力及能力之非人類物種之抗體中的相應殘基置換。該人類化抗體可藉由Fv 構架區中及/或經置換非人類殘基內額外殘基之取代進一步經修飾以細化及最佳化抗體特異性、親和力及/或能力。一般而言，人類化抗體將包含至少一個且典型地兩個或三個可變域中之實質上全部，該等可變域含有全部或實質上全部的對應於非人類免疫球蛋白之CDR區，而全部或實質上全部FR區為人類免疫球蛋白共有序列之彼等。人類化抗體亦可包含免疫球蛋白恆定區或域(Fc ) (典型地，人類免疫球蛋白之恆定區或域)的至少一部分。用於產生人類化抗體之方法之實例描述於美國專利5,225,539及5,639,641，Roguska等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91(3):969-973, 1994；及Roguska等人, Protein Eng. 9(10):895-904, 1996 (均以引用之方式倂入本文中)中。在一些實施例中，「人類化抗體」為表面重塑抗體。在一些實施例中，「人類化抗體」為CDR移植抗體。
術語抗體之「可變區」係指抗體輕鏈之可變區或抗體重鏈之可變區，單獨或組合。重鏈及輕鏈之可變區各自由四個藉由三個互補決定區(CDR) (亦稱作高變區)連接之構架區(FR)組成。各鏈中之CDR藉由FR緊密地保持在一起且與來自另一鏈之CDR一起促進形成抗體之抗原結合位點。存在至少兩種用於測定CDR之技術：(1)基於交叉物種序列變異性之方法(亦即，Kabat等人Sequences of Proteins of Immunological Interest , 第5版, 1991, National Institutes of Health, Bethesda Md.)；及(2)基於抗原-抗體複合物之結晶學研究的方法(Al-lazikani等人, J. Molec. Biol. 273:927-948, 1997)。此外，此兩種方法之組合有時在此項技術中用於測定CDR。
當提及可變域中之殘基(大致為輕鏈之殘基1-107及重鏈之殘基1-113)時，一般使用Kabat編號系統(例如Kabat等人, Sequences of Immunological Interest , 第5版, Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991))。
如Kabat中之胺基酸位置編號係指在Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest , 第5版, Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991) (以引用之方式倂入本文中)中用於抗體之彙編的重鏈可變域或輕鏈可變域之編號系統。使用此編號系統，實際線性胺基酸序列可含有較少或額外胺基酸，其對應於可變域之FR或CDR的縮短或插入其中。例如，重鏈可變域可包括在H2之殘基52後面的單一胺基酸插入(根據Kabat之殘基52a)及在重鏈FR殘基82後面插入之殘基(例如，根據Kabat的殘基82a、82b及82c等)。殘基之Kabat編號可針對既定抗體藉由在該抗體之序列的同源區處與「標準」Kabat編號序列比對來測定。Chothia反而提及結構環之位置((Chothia及Lesk,J. Mol. Biol. 196:901-917,1987)。當使用Kabat編號慣例編號時，Chothia CDR-H1環之末端在H32與H34之間變化，視該環之長度而定。此係因為Kabat編號方案將插入置於H35A及H35B處—若35A及35B均不存在，則該環在32處結束；若僅35A存在，則該環在33處結束；若35A及35B均存在，則該環在34處結束。AbM高變區表示在Kabat CDR與Chothia結構環之間的折衷，且藉由Oxford Molecular之AbM抗體模型化軟體使用。
環 Kabat AbM Chiothia
L1 L24-L34 L24-L34 L24-L34
L2 L50-L56 L50-L56 L50-L56
L3 L89-L97 L89-L97 L89-L97
H1 H31-H35B H26-H35B H26-H32..34
   (Kabat 編號 )
H1 H31-H35 H26-H35 H26-H32
   (Chothia 編號 )
H2 H50-H65 H50-H58 H52-H56
H3 H9S-H102 H95-H102 H95-H102
如Kabat或EU編號方案中之EU指數或EU指數係指基於Edelman等人, 1969, Proc Natl Acad Sci USA 63:78-85 (以引用之方式倂入本文中)之人類IgG1 Eu抗體的編號系統。
術語「人類抗體」意謂由人類產生之抗體，或使用此項技術中已知之任何技術製得的具有對應於由人類產生之抗體之胺基酸序列的抗體。在某些實施例中，該人類抗體不具有非人類序列。人類抗體之此定義包括完整或全長抗體，或其抗原結合片段。
術語「嵌合抗體」係指其中免疫球蛋白分子之胺基酸序列係源於兩種或兩種以上物種之抗體。典型地，輕鏈及重鏈之可變區對應於源於具有所需特異性、親和力及能力之一種哺乳動物物種(例如小鼠、大鼠、兔等)的抗體之可變區，而恆定區與源於另一物種(通常為人類)之抗體中的序列同源以避免或減少在彼物種(例如人類)中引發免疫反應之機會。在某些實施例中，嵌合抗體可包括包含至少一種人類重及/或輕鏈多肽之抗體或其抗原結合片段，諸如包含鼠科動物輕鏈及人類重鏈多肽之抗體。
術語「抗原決定基」或「抗原決定子」在本文中可互換使用且係指抗原中能夠由特定抗體識別且特異性地結合之彼部分。當該抗原為多肽時，抗原決定基可由連續胺基酸及藉由蛋白質之三重折疊並置之非連續胺基酸形成。由連續胺基酸形成之抗原決定基在蛋白質變性時典型地經保持，而藉由三重折疊形成之抗原決定基在蛋白質變性時典型地喪失。抗原決定基典型地包括呈獨特空間構形之至少3個且更通常地至少5個或8-10個胺基酸。
「結合親和力」一般係指在分子(例如抗體)之單一結合位點與其結合搭配物(例如抗原)之間的非共價相互作用之合計強度。除非另外指示，否則如本文所用，「結合親和力」係指反映結合對之成員(例如，抗體及抗原)之間的1:1相互作用之固有結合親和力。分子X對其搭配物Y之親和力一般可由解離常數(Kd )或半最大有效濃度(EC50 )表示。親和力可藉由此項技術中已知之常見方法，包括本文所述之彼等來量測。低親和力抗體一般緩慢地結合抗原且傾向於快速地解離，而高親和力抗體一般更快結合抗原且傾向於保持更久結合。此項技術中已知多種量測結合親和力之方法，其中任一者均可用於本發明之目的。本文描述特定說明性實施例。
「特異性地結合」一般意謂抗體經由其抗原結合域結合於抗原決定基，且該結合使得該抗原結合域與該抗原決定基之間需要一些互補性。根據此定義，與抗體將結合於隨機、無關抗原決定基相比，當抗體更快速地經由其抗原結合域結合於一抗原決定基時，據說該抗體「特異性地結合」於彼抗原決定基。術語「特異性」在本文中用於限定特定抗體結合於特定抗原決定基時之相關親和力。例如，抗體「A」可被認為與抗體「B」相比對既定抗原決定基具有較高特異性，或據說與抗體「A」對相關抗原決定基「D」之特異性相比，抗體「A」可以較高特異性結合於抗原決定基「C」。
如本文所用，術語「免疫結合物」、「結合物」或「ADC」係指連接至細胞結合劑(例如抗體或其抗原結合片段)之化合物或其衍生物。
術語「經半胱胺酸工程改造之抗體」包括具有通常未存在於抗體輕鏈或重鏈之既定殘基處的至少一個Cys之抗體。該等Cys亦可稱作「經工程改造之Cys」，可使用任何習知分子生物學或重組DNA技術(例如，藉由用Cys之編碼序列置換在標靶殘基處的非Cys殘基之編碼序列)經工程改造。例如，若初始殘基為具有編碼序列5’-UCU-3’之Ser，則該編碼序列可突變(例如，藉由定點突變誘發)為5’-UGU-3’，其編碼Cys。在某些實施例中，經Cys工程改造之本發明抗體在重鏈中具有經工程改造之Cys。在某些實施例中，經工程改造之Cys在重鏈之CH3域中或附近。在某些實施例中，經工程改造之Cys在重鏈之殘基442處(EU/OU編號)。C442殘基可經由C442殘基之游離硫醇基，諸如經由與細胞毒性藥物之硫醇反應劑(例如，順丁烯二醯亞胺基)反應而與該細胞毒性藥物/劑結合。
術語「癌症」及「癌的」係指或描述哺乳動物中之生理學病狀，其中細胞群體之特徵在於未調節細胞生長。「腫瘤」及「贅瘤」係指由於過度細胞生長或增生而產生之一或多種細胞，其為良性(非癌的)或惡性(癌的)，包括癌前病變。
癌症之實例包括子宮內膜癌、肺癌(例如非小細胞肺癌)、大腸直腸癌、膀胱癌、胃癌、胰臟癌、腎細胞癌、前列腺癌、食道癌、乳癌、頭頸部癌、子宮癌、卵巢癌、肝癌、子宮頸癌、甲狀腺癌、睾丸癌、骨髓癌、黑色素瘤及淋巴癌。在某些實施例中，該癌症為非小細胞肺癌、大腸直腸癌、胃癌或胰臟癌。在某些實施例中，該癌症為非小細胞肺癌(鱗狀細胞、非鱗狀細胞、腺癌或大細胞未分化癌)、大腸直腸癌(腺癌、胃腸類癌腫瘤、胃腸基質腫瘤、原發性大腸直腸淋巴瘤、平滑肌肉瘤或鱗狀細胞癌)或乳癌(例如三陰性乳癌(TNBC))。在某些實施例中，癌症為淋巴瘤及白血病。在某些實施例中，癌症之實例包括AML、CML、ALL (例如B-ALL)、CLL、骨髓發育不良症候群、母細胞性漿細胞樣DC贅瘤(BPDCN)白血病、B細胞淋巴瘤(包括非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin lymphoma，NHL))、前驅體B細胞淋巴母細胞性白血病/淋巴瘤及成熟B細胞贅瘤(諸如B細胞慢性淋巴球性白血病(B-CLL) /小淋巴球性淋巴瘤(SLL))、B細胞前淋巴球性白血病、淋巴漿細胞性淋巴瘤、套細胞淋巴瘤(MCL)、濾泡性淋巴瘤(FL) (包括低級、中間級及高級FL)、皮膚濾泡中心淋巴瘤、邊緣區B細胞淋巴瘤(MALT類型、淋巴結及脾類型)、毛細胞白血病(HCL)、彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、伯奇氏淋巴瘤(Burkitt’s lymphoma)、漿細胞瘤、漿細胞骨髓瘤、移植後淋巴增生性病症、華氏巨球蛋白血症、退行性大細胞淋巴瘤(ALCL)及霍奇金氏白血病(HL)。在某些實施例中，該癌症為BPDCN白血病。在某些實施例中，該癌症為ALL。在其他實施例中，該癌症為AML。
術語「個體」係指欲為特定治療之接受者的任何動物(例如哺乳動物)，包括但不限於人類、非人類靈長類動物、齧齒動物及其類似動物。典型地，術語「個體」及「患者」在本文中關於人類個體可互換使用。
術語「醫藥組成物」係指呈允許活性成分之生物活性有效之形式，且不含對將投與該組成物之個體具有不可接受之毒性的額外組分之製劑。該組成物可為無菌的。
如本文所揭示之免疫結合物的「治療有效量」為足以進行特定陳述之目的的量。「治療有效量」可關於所陳述之目的憑經驗且以常規方式測定。
術語「亞胺反應性試劑」係指能夠與亞胺基團反應之試劑。較佳地，亞胺反應性試劑係選自亞硫酸鹽、羥胺、脲及肼。更佳地，亞胺反應性試劑為NaHSO3 或KHSO3 。 本發明化合物
在第一態樣中，本發明係有關本文所述之細胞毒性化合物。在某些實施例中，本發明之細胞毒性化合物為苯二氮平二聚體化合物，其在經還原苯二氮平單體之N-10胺處具有可連接至細胞結合劑(CBA)之自降解連接體。
在第一實施例中，本發明化合物係由式(I)、(II)、(TI)、(T2)、(Im )、(IIm )、(TIm )或(T2m )或其醫藥學上可接受之鹽表示，其中： N與C之間的雙線
Figure 02_image003
表示單鍵或雙鍵，限制條件在於當其為雙鍵時，X不存在且Y為H或C1-4 烷基，且當其為單鍵時，X為H且Y為-OH或-SO3 H； W為-C(=O)-或-C(Y’)-； Y’為H或C1-4 烷基； R1a 、R2a 、R3a 、R4a 、R1b 、R2b 、R3b 及R4b 係各自獨立地選自由H、C1-10 烷基、-(OCH2 CH2 )n ORc 、鹵素、-NH(C=NH)NH2 、-OR、-NR’R’’、-NO2 、-NR’COR’’、-SR、-SOR’、-SO2 R’、-SO3 H、-OSO3 H、-SO2 NR’R’’、-CN、-N3 、-COR’、-OCOR’及-OCONR’R’’組成之群； Rc 為H或C1-4 烷基； n為整數1至24； R在每次出現時係獨立地選自由H、-(CH2 CH2 O)n -Rc 、C1-10 烷基、C3-8 環烷基、6員至18員芳基、含有一或多個獨立地選自N、O及S之雜原子的5員至18員雜芳環或含有1至6個獨立地選自O、S、N及P之雜原子的3員至18員雜環組成之群； R’及R’’係各自獨立地選自-H、-OH、-OR、-NHR、-NR2 、-COR、C1-10 烷基、-(CH2 CH2 O)n -Rc 及具有1至6個獨立地選自O、S、N及P之雜原子的3員至18員雜環； R5 為C3-12 伸烷基，該鏈可由一或多個選自-O-、-S-、-NH-、-NMe-、苯環、4員至7員雜芳環及4員至7員雜環之基團中斷，其中該苯、該4員至7員雜芳環及該4員至7員雜環經1至4個R6 取代； R6 在每次出現時係獨立地選自H、C1-10 烷基、-(CH2 CH2 O)n -Rc 、鹵素、-NH(C=NH)NH2 、-OR、-NR’R’’、-NO2 、-NCO、-NR’COR’’、-SR、-SOR’、-SO2 R’、-SO3 H、-OSO3 H、-SO2 NR’R’’、-CN、-N3 、-COR’、-OCOR’及-OCONR’R’’；且 RL 係包含可與細胞結合劑形成共價鍵之反應性基團的自降解連接體，限制條件在於式(I)化合物不為：
Figure 02_image020
；或
Figure 02_image022
； 且限制條件在於式(Im )化合物不為：
Figure 02_image024
。
在第二實施例中，本發明化合物係由表A中的以下各式之一表示：
Figure 02_image041
(IIIa)
Figure 02_image043
(IIIb)
Figure 02_image045
(IIIc)
Figure 02_image047
(IIId)
Figure 02_image049
(IVa)
Figure 02_image051
(IVb)
Figure 02_image053
(IVc)
Figure 02_image055
(IVd)
Figure 02_image057
(T1a)
Figure 02_image059
(T1b)
Figure 02_image061
(T1c)
Figure 02_image063
(T1d)
Figure 02_image065
(T2a)
Figure 02_image067
(T2b)
Figure 02_image069
(T2c)
Figure 02_image071
(T2d)
或其醫藥學上可接受之鹽，其中： AA1 及AA2 各自獨立地為胺基酸殘基； a1為整數1至19； a2為整數1至5； Ra 為H或C1-4 烷基； q為1、2或3； Rs1 及Rs2 各自獨立地為H或C1-4 烷基，或Rs1 及Rs2 與其所附接之碳原子合起來形成3員至5員環烷基環，限制條件在於當q為1時，Rs1 及Rs2 與其所附接之碳原子合起來無法形成3員環烷基環； V為C(=O)或CH2 ； Z1 為-C(=O)-或-SO2 -NH-C(=O)-，其中-SO2 -NH-C(=O)-中之-SO2 -基團連接至P1 ； Rx 為C1-10 伸烷基、C3-8 環烷基、-(CH2 CH2 O)m1 -C1-10 伸烷基-或C1-10 伸烷基-(OCH2 CH2 )m2 -； m1及m2各自獨立地為整數1至24； Z2 係不存在、-C(=O)NH-或-NH-C(=O)-； Ry 係不存在、C1-10 伸烷基、-(CH2 CH2 O)m3 -C1-10 伸烷基-或C1-10 伸烷基-(OCH2 CH2 )m4 -； m3及m4各自獨立地為整數1至24； Zs 係具有經由二硫鍵或硫醚鍵共價連接至該細胞毒性化合物之反應性基團的雙官能交聯劑； J係包含能夠與細胞結合劑形成共價鍵之反應性基團(較佳地，胺反應性基團或硫醇反應性基團)的部分；且剩餘變數係如第一實施例中所定義。
在一特定實施例中，關於式(IIId)、(IVd)、(T1d)或(T2d)，q為1。在一更特定實施例中，關於式(IIId)、(IVd)、(T1d)或(T2d)，q為1；且Rs1 及Rs2 均為甲基。
在一特定實施例中，關於式(IIIb)、(IIIc)、(IVb)、(IVc)、(T1b)、(T1c)、(T2b)或(T2c)，Ra 為H、甲基或乙基。在一更特定實施例中，Ra 為H。在一更特定實施例中，Ra 為甲基。
在第三實施例中，本發明化合物係由第一或第二實施例中所述之式子或其醫藥學上可接受之鹽表示，其中R1a 、R2a 、R3a 、R4a 、R1b 、R2b 、R3b 及R4b 均為H；且剩餘變數係如第一或第二實施例或其中所述之任何特定實施例中所定義。
在第四實施例中，本發明化合物係由第一或第二實施例中所述之式子或其醫藥學上可接受之鹽表示，其中R5 為C3-7 伸烷基；且剩餘變數係如第一、第二或第三實施例或其中所述之任何特定實施例中所定義。在一特定實施例中，R5 為-(CH2 )3 -、-(CH2 )5 -或-(CH2 )7 -。在一更特定實施例中，R5 為-(CH2 )7 -。在一更特定實施例中，R5 為-(CH2 )5 -。在一更特定實施例中，R5 為-(CH2 )3 -。
在第五實施例中，本發明化合物係由第一或第二實施例中所述之式子或其醫藥學上可接受之鹽表示，其中R5 係由下式表示：
Figure 02_image073
或
Figure 02_image075
， 其中X1 、X2 、X3 及X4 各自獨立地為N或CR6 ，限制條件在於X1 、X2 、X3 及X4 中之至少一者為CR6 ；且剩餘變數係如第一、第二或第三實施例或其中所述之任何特定實施例中所定義。
在一特定實施例中，R5 為
Figure 02_image077
或
Figure 02_image079
。
在一更特定實施例中，R5 為
Figure 02_image081
，其中n為整數1至8。在一更特定實施例中，n為1、2、3或4。在一更特定實施例中，n為1。在一更特定實施例中，n為2。在一更特定實施例中，n為3。在一更特定實施例中，n為4。在一更特定實施例中，R5 為
Figure 02_image083
。在一更特定實施例中，R5 為
Figure 02_image085
。在另一特定實施例中，R5 為
Figure 02_image087
。
在第六實施例中，本發明化合物係由表B中的以下各式之一表示：
Figure 02_image089
(IIIaA)
Figure 02_image091
(IIIaB)
Figure 02_image093
(IIIaC)
Figure 02_image095
(IIIaD)
Figure 02_image097
(IIIbA)
Figure 02_image099
(IIIbB)
Figure 02_image101
(IIIbC)
Figure 02_image103
(IIIbD)
Figure 02_image105
(IIIcA)
Figure 02_image107
(IIIcB)
Figure 02_image109
(IIIcC)
Figure 02_image111
(IIIcD)
Figure 02_image113
(IIIdA)
Figure 02_image115
(IIIdB)
Figure 02_image117
(IIIdC)
Figure 02_image119
(IIIdD)
Figure 02_image121
(IVaA)
Figure 02_image123
(IVaB)
Figure 02_image125
(IVaC)
Figure 02_image127
(IVaD)
Figure 02_image129
(IVbA)
Figure 02_image131
(IVbB)
Figure 02_image133
(IVbC)
Figure 02_image135
(IVbD)
Figure 02_image137
(IVcA)
Figure 02_image139
(IVcB)
Figure 02_image141
(IVcC)
Figure 02_image143
(IVcD)
Figure 02_image145
(IVdA)
Figure 02_image147
(IVdB)
Figure 02_image149
(IVdC)
Figure 02_image151
(IVdD)
Figure 02_image153
(T1aA)
Figure 02_image155
(T1aB)
Figure 02_image157
(T1aC)
Figure 02_image159
(T1aD)
Figure 02_image161
(TIbA)
Figure 02_image163
(TIbB)
Figure 02_image165
(TIbC)
Figure 02_image167
(TIbD)
Figure 02_image169
(T1cA)
Figure 02_image171
(T1cB)
Figure 02_image173
(T1cC)
Figure 02_image175
(T1cD)
Figure 02_image177
(T1dA)
Figure 02_image179
(T1dB)
Figure 02_image181
(T1dC)
Figure 02_image183
(T1dD)
Figure 02_image185
(T2aA)
Figure 02_image187
(T2aB)
Figure 02_image189
(T2aC)
Figure 02_image191
(T2aD)
Figure 02_image193
(T2bA)
Figure 02_image195
(T2bB)
Figure 02_image197
(T2bC)
Figure 02_image199
(T2bD)
Figure 02_image201
(T2cA)
Figure 02_image203
(T2cB)
Figure 02_image205
(T2cC)
Figure 02_image207
(T2cD)
Figure 02_image209
(T2dA)
Figure 02_image211
(T2dB)
Figure 02_image213
(T2dC)
Figure 02_image215
(T2dD)
或其醫藥學上可接受之鹽，其中剩餘變數係如第二實施例或其中所述之任何特定實施例所定義。
在第七實施例中，本發明化合物係由第二或第六實施例中所述之式子或其醫藥學上可接受之鹽表示，其中Z1 為-C(=O)-；且剩餘變數係如第二、第三、第四、第五或第六實施例或其中所述之任何特定實施例中所定義。
在第八實施例中，本發明化合物係由第二或第六實施例中所陳述之式子或其醫藥學上可接受之鹽表示，其中Rx 為C1-6 伸烷基；Z2 及Ry 均不存在；且剩餘變數係如第二、第三、第四、第五、第六或第七實施例或其中所述之任何特定實施例中所定義。在另一實施例中，Rx 、Z2 及Ry 不存在；且剩餘變數係如第二、第三、第四、第五、第六或第七實施例或其中所述之任何特定實施例中所定義。
在第九實施例中，本發明化合物係由第二或第六實施例中所述之式子或其醫藥學上可接受之鹽表示，其中Rx 為-(CH2 CH2 O)m1 -C1-6 伸烷基-；Z2 為-NH-C(=O)-或-C(=O)-NH-；Ry 為C1-6 伸烷基；且剩餘變數係如第二、第三、第四、第五、第六或第七實施例或其中所述之任何特定實施例中所定義。
在第十實施例中，本發明化合物係由第二或第六實施例中所陳述之式子或其醫藥學上可接受之鹽表示，其中Rx 為C1-6 伸烷基；Z2 為-NH-C(=O)-或-C(=O)-NH-；Ry 為-(CH2 CH2 O)m2 -C1-6 伸烷基-；且剩餘變數係如第二、第三、第四、第五、第六或第七實施例或其中所述之任何特定實施例中所定義。
在第十一實施例中，本發明化合物係由表C中的以下各式之一表示：
Figure 02_image217
(IIIa1A)
Figure 02_image219
(IIIa2A)
Figure 02_image221
(IIIa3A)
Figure 02_image223
(IIIa4A)
Figure 02_image225
(IIIa5A)
Figure 02_image227
(IIIa6A)
Figure 02_image229
(IIIa1B)
Figure 02_image231
(IIIa2B)
Figure 02_image233
(IIIa3B)
Figure 02_image235
(IIIa4B)
Figure 02_image237
(IIIa5B)
Figure 02_image239
(IIIa6B)
Figure 02_image241
(IIIa1C)
Figure 02_image243
(IIIa2C)
Figure 02_image245
(IIIa3C)
Figure 02_image247
(IIIa4C)
Figure 02_image249
(IIIa5C)
Figure 02_image251
(IIIa6C)
Figure 02_image253
(IIIa1D)
Figure 02_image255
(IIIa2D)
Figure 02_image257
(IIIa3D)
Figure 02_image259
(IIIa4D)
Figure 02_image261
(IIIa5D)
Figure 02_image263
(IIIa6D)
Figure 02_image265
(IIIb1A)
Figure 02_image267
(IIIb2A)
Figure 02_image269
(IIIb3A)
Figure 02_image271
(IIIb4A)
Figure 02_image273
(IIIb5A)
Figure 02_image275
(IIIc1A)
Figure 02_image277
(IIIc2A)
Figure 02_image279
(IIIc3A)
Figure 02_image281
(IIIc4A)
Figure 02_image283
(IIIc5A)
Figure 02_image285
(IIId1A)
Figure 02_image287
(IIIb1B)
Figure 02_image289
(IIIb2B)
Figure 02_image291
(IIIb3B)
Figure 02_image293
(IIIb4B)
Figure 02_image295
(IIIb5B)
Figure 02_image297
(IIIc1B)
Figure 02_image299
(IIIc2B)
Figure 02_image301
(IIIc3B)
Figure 02_image303
(IIIc4B)
Figure 02_image305
(IIIc5B)
Figure 02_image307
(IIId1B)
Figure 02_image309
(IIIb1C)
Figure 02_image311
(IIIb2C)
Figure 02_image313
(IIIb3C)
Figure 02_image315
(IIIb4C)
Figure 02_image317
(IIIb5C)
Figure 02_image319
(IIIc1C)
Figure 02_image321
(IIIc2C)
Figure 02_image323
(IIIc3C)
Figure 02_image325
(IIIc4C)
Figure 02_image327
(IIIc5C)
Figure 02_image329
(IIId1C)
Figure 02_image331
(IIIb1D)
Figure 02_image333
(IIIb2D)
Figure 02_image335
(IIIb3D)
Figure 02_image337
(IIIb4D)
Figure 02_image339
(IIIb5D)
Figure 02_image341
(IIIc1D)
Figure 02_image343
(IIIc2D)
Figure 02_image345
(IIIc3D)
Figure 02_image347
(IIIc4D)
Figure 02_image349
(IIIc5D)
Figure 02_image351
(IIId1D)
或其醫藥學上可接受之鹽，其中： R6 為-C(=O)OR6a 或NR6b (CH2 CH2 O)n CH2 CH2 OR6c ； R6a 、R6b 及R6c 各自獨立地為H或C1-4 烷基； n為整數1至8； Ra 及Rb 在每次出現時獨立地為H或C1-4 烷基； r、r1及r2各自獨立地為整數2至6； s為整數2至12；且剩餘變數係如第六實施例中所定義。
第十一實施例中亦包括以下化合物，其由下式表示：
Figure 02_image353
(III)；
Figure 02_image355
(TI’)；或
Figure 02_image357
(T2’)； 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： N與C之間的雙線
Figure 02_image003
表示單鍵或雙鍵，限制條件在於當其為雙鍵時，X不存在且Y為H或C1-4 烷基，且當其為單鍵時，X為H且Y為-SO3 H； RL 係由下式中之任一者表示：
Figure 02_image359
(RLa )
Figure 02_image361
(RLb )
Figure 02_image363
(RLc )
Figure 02_image365
(RLd )
Figure 02_image367
(RLe )
Figure 02_image369
(RLf )
Figure 02_image371
(RLg )
Figure 02_image373
(RLh )
Figure 02_image375
(RLi )
Figure 02_image377
(RLj )
Figure 02_image379
(RLk )
Figure 02_image381
(RLl )
Figure 02_image383
(RLm )
Figure 02_image385
(RLn )
Figure 02_image387
(RLo )
Figure 02_image389
(RLp )
Figure 02_image391
(RLq )		   
R5 係由以下各式之一表示：
Figure 02_image393
(R5a )；
Figure 02_image395
；
Figure 02_image397
(R5c )；或
Figure 02_image399
(R5d )。
RL 及R5 之任何組合均包括於本發明中。
在第十二實施例中，關於第十一實施例中所述之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，變數經定義為： R6a 及R6c 均為Me； R6b 為H； n為1、2、3或4； Ra 及Rb 在每次出現時獨立地為H或Me； r為4； r1為4； r2為2； s為1、2、3或4；且剩餘變數係如第十一實施例中所定義。
在第十三實施例中，關於第二至第十二實施例中所述之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，J為-COORd 或由COE表示之反應性酯，其中Rd 為H或C1-4 烷基；且剩餘變數係如第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一或第十二實施例或其中所述之任何特定實施例中所定義。
在一特定實施例中，J係選自N-羥基丁二醯亞胺酯、N-羥基磺基丁二醯亞胺酯、硝基苯基(例如2-硝基苯基或4-硝基苯基)酯、二硝基苯基(例如2,4-二硝基苯基)酯、磺基-四氟苯基(例如4-磺基-2,3,5,6-四氟苯基)酯及五氟苯基酯之反應性酯。
在一更特定實施例中，J為N-羥基丁二醯亞胺酯。
在第十四實施例中，關於第二至第十二實施例中之任一者中所述的化合物或其醫藥學上可接受之鹽，J為
Figure 02_image401
；且剩餘變數係如第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一或第十二實施例或其中所述之任何特定實施例中所定義。
在第十五實施例中，關於第二至第十二實施例中之任一者中所述的化合物或其醫藥學上可接受之鹽，J為-SZs ；Zs 為H、SRe ，或係選自以下各式：
Figure 02_image403
(a1)
Figure 02_image405
(a2)
Figure 02_image407
(a3)
Figure 02_image409
(a4)
Figure 02_image411
(a5)
Figure 02_image413
(a6)
Figure 02_image415
(a7)
Figure 02_image417
(a8)
Figure 02_image419
(a9)
Figure 02_image421
(a10)
Figure 02_image423
(a11)
Figure 02_image425
(a12)
Figure 02_image427
(a13)
Figure 02_image429
(a14)
Figure 02_image431
(a15)
Figure 02_image433
(a16)
Figure 02_image435
(a17)		   
其中： q為整數1至5； n’為整數2至6； U為-H或SO3 H； Re 為具有1至6個碳原子之直鏈或分支鏈烷基或係選自苯基、硝基苯基(例如2-硝基苯基或4-硝基苯基)、二硝基苯基(例如2,4-二硝基苯基)、羧基硝基苯基(例如3-羧基-4-硝基苯基)、吡啶基或硝基吡啶基(例如4-硝基吡啶基)；且 剩餘變數係如第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一或第十二實施例或其中所述之任何特定實施例中所定義。
在一特定實施例中，Zs 為H。在另一特定實施例中，Zs 為-SRe ，其中Re 為甲基。在另一特定實施例中，Zs 係由式(a7)或(a9)表示。在另一特定實施例中，Zs 係由式(a16)或(a17)表示。
在第十六實施例中，關於第一至第十五實施例中之任一者中所述的化合物或其醫藥學上可接受之鹽，N與C之間的雙線
Figure 02_image003
表示雙鍵，X不存在且Y為H；且剩餘變數係如第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四或第十五實施例或其中所述之任何特定實施例中所定義。
在第十七實施例中，關於第一至第十五實施例中之任一者中所述的化合物或其醫藥學上可接受之鹽，N與C之間的雙線
Figure 02_image003
表示單鍵，X為H且Y為-SO3 H；且剩餘變數係如第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四或第十五實施例或其中所述之任何特定實施例中所定義。在一特定實施例中，該醫藥學上可接受之鹽為鈉鹽或鉀鹽。在另一特定實施例中，該醫藥學上可接受之鹽為鈉鹽。
在第十八實施例中，關於第二至第十七實施例中之任一者中所述的化合物或其醫藥學上可接受之鹽，a1為整數1至7；且剩餘變數係如第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六或第十七實施例或其中所述之任何特定實施例中所定義。
在一特定實施例中，AA1 及AA2 各自獨立地選自精胺酸(Arg)、組胺酸(His)、離胺酸(Lys)、天冬胺酸(Asp)、麩胺酸(Glu)、絲胺酸(Ser)、酥胺酸(Thr)、天冬醯胺(Asn)、麩醯胺(Gln)、半胱胺酸(Cys)、硒並半胱胺酸(Sec)、甘胺酸(Gly)、脯胺酸(Pro)、丙胺酸(Ala)、纈胺酸(Val)、異白胺酸(Ile)、白胺酸(Leu)、甲硫胺酸(Met)、苯丙胺酸(Phe)、酪胺酸(Tyr)及色胺酸(Trp)。
在第十九實施例中，關於第十八實施例中所述之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，AA1 -(AA2 )a1 係選自Gly-Gly-Gly、Ala-Val、Val-Ala、Val-Cit、Val-Lys、Phe-Lys、Lys-Lys、Ala-Lys、Phe-Cit、Leu-Cit、Lle-Cit、Phe-Ala、Phe-N9 -甲苯磺醯基-Arg、Phe-N9 -硝基-Arg、Phe-Phe-Lys、D-Phe-Phe-Lys、Gly-Phe-Lys、Leu-Ala-Leu、Ile-Ala-Leu、Val-Ala-Val、Ala-Leu-Ala-Leu、β-Ala-Leu-Ala-Leu、Gly-Phe-Leu-Gly、Val-Arg、Arg-Val、Arg-Arg、Val-D-Cit、Val-D-Lys、Val-D-Arg、D-Val-Cit、D-Val-Lys、D-Val-Arg、D-Val-D-Cit、D-Val-D-Lys、D-Val-D-Arg、D-Arg-D-Arg、Ala-Ala、Ala-D-Ala、D-Ala-Ala、D-Ala-D-Ala、Ala-Met、Met-Ala、Thr-Thr、Thr-Met、Met-Thr、Leu-Ala、Cit-Val、Gln-Val、Ser-Val、Leu-Gln、Gln-Leu、Phe-Arg、Arg-Phe、Tyr-Arg、Arg-Tyr、Phe-Gln、Gln-Phe、Val-Thr、Thr-Val、Met-Tyr及Tyr-Met；且剩餘變數係如第十八實施例中所定義。
在一特定實施例中，AA1 -(AA2 )a1 為Ala-Ala、L-Ala-L-Ala、Ala-Val、L-Ala-L-Val、Gln-Val、L-Gln-L-Val、Gln-Leu、L-Gln-L-Leu、Ser-Val或L-Ser-L-Val。
在第二十實施例中，本發明化合物係由表D中之下式：
Figure 02_image437
Figure 02_image439
Figure 02_image441
Figure 02_image443
Figure 02_image445
Figure 02_image447
Figure 02_image447
Figure 02_image450
Figure 02_image452
Figure 02_image454
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Figure 02_image500
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Figure 02_image530
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Figure 02_image540
Figure 02_image542
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Figure 02_image550
Figure 02_image552
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Figure 02_image560
Figure 02_image562
Figure 02_image564
Figure 02_image566
Figure 02_image568
Figure 02_image570
Figure 02_image572
Figure 02_image574
Figure 02_image576
Figure 02_image578
Figure 02_image580
Figure 02_image582
Figure 02_image584
Figure 02_image586
Figure 02_image588
Figure 02_image590
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Figure 02_image596
Figure 02_image598
Figure 02_image600
Figure 02_image602
Figure 02_image604
Figure 02_image606
Figure 02_image608
Figure 02_image610
Figure 02_image612
Figure 02_image614
Figure 02_image616
Figure 02_image618
Figure 02_image620
Figure 02_image622
Figure 02_image624
Figure 02_image626
Figure 02_image628
   
或其醫藥學上可接受之鹽表示，其中： R100 為-OH、-OMe或
Figure 02_image630
； Zs 為H、SRe ，或係選自以下各式：
Figure 02_image403
(a1)；
Figure 02_image405
(a2)；
Figure 02_image407
(a3)；
Figure 02_image409
(a4)；
Figure 02_image411
(a5)；
Figure 02_image413
(a6)；
Figure 02_image415
(a7)；
Figure 02_image417
(a8)；
Figure 02_image419
(a9)；
Figure 02_image421
(a10)；
Figure 02_image423
(a11)；
Figure 02_image425
(a12)；
Figure 02_image427
(a13)；
Figure 02_image429
(a14)；
Figure 02_image431
(a15)，
Figure 02_image433
(a16)或
Figure 02_image435
(a17) 其中： q為整數1至5； n’為整數2至6； U為-H或SO3 H； Re 為具有1至6個碳原子之直鏈或分支鏈烷基或係選自苯基、硝基苯基(例如2-硝基苯基或4-硝基苯基)、二硝基苯基(例如2,4-二硝基苯基)、羧基硝基苯基(例如3-羧基-4-硝基苯基)、吡啶基或硝基吡啶基(例如4-硝基吡啶基)；且剩餘變數係如第一實施例中所定義。
在一特定實施例中，R100 為
Figure 02_image630
。在一更特定實施例中，U為H。
在第二十一實施例中，關於上文所述之化合物(例如，第一態樣或其中所述之任何實施例或第一至第二十實施例或其中所述之任何實施例或特定實施例中所述的化合物)，其醫藥學上可接受之鹽為鈉鹽或鉀鹽。在一實施例中，該醫藥學上可接受之鹽為鈉鹽。在一實施例中，該醫藥學上可接受之鹽為鉀鹽。 本發明結合物
在第二態樣中，本發明提供細胞結合劑-細胞毒性劑結合物，其包含共價連接至本文所述之細胞毒性化合物的本文所述之細胞結合劑。
在第二十二實施例中，本發明結合物係由下式表示：
Figure 02_image026
， 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： CBA為細胞結合劑； Cy為細胞毒性劑，其由下式表示：
Figure 02_image028
(V)；
Figure 02_image030
(VI)；
Figure 02_image032
(TC1)；或
Figure 02_image034
(TC2)， 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： N與C之間的雙線
Figure 02_image003
表示單鍵或雙鍵，限制條件在於當其為雙鍵時，X不存在且Y為H或C1-4 烷基，且當其為單鍵時，X為H且Y為-OH或-SO3 H； W為-C(=O)-或-C(Y’)-； Y’為H或C1-4 烷基； R1a 、R2a 、R3a 、R4a 、R1b 、R2b 、R3b 及R4b 係各自獨立地選自由H、C1-10 烷基、-(OCH2 CH2 )n -ORc 、鹵素、-NH(C=NH)NH2 、-OR、-NR’R’’、-NO2 、-NR’COR’’、-SR、-SOR’、-SO2 R’、-SO3 H、-OSO3 H、-SO2 NR’R’’、-CN、-N3 、-COR’、-OCOR’及-OCONR’R’’組成之群； Rc 為H或C1-4 烷基； n為整數1至24； R在每次出現時係獨立地選自由H、-(CH2 CH2 O)n -Rc 、C1-10 烷基、C3-8 環烷基、6員至18員芳基、含有一或多個獨立地選自N、O及S之雜原子的5員至18員雜芳環或含有1至6個獨立地選自O、S、N及P之雜原子的3員至18員雜環組成之群； R’及R’’係各自獨立地選自-H、-OH、-OR、-NHR、-NR2 、-COR、C1-10 烷基、-(CH2 CH2 O)n -Rc 及具有1至6個獨立地選自O、S、N及P之雜原子的3員至18員雜環； R5 為C3-12 伸烷基，該鏈可由一或多個選自-O-、-S-、-NH-、-NMe-、苯環、4員至7員雜芳環及4員至7員雜環之基團中斷，其中該苯、該4員至7員雜芳環及該4員至7員雜環經1至4個R6 取代； R6 在每次出現時係獨立地選自H、C1-10 烷基、-(CH2 CH2 O)n -Rc 、鹵素、-NH(C=NH)NH2 、-OR、-NR’R’’、-NO2 、-NCO、-NR’COR’’、-SR、-SOR’、-SO2 R’、-SO3 H、-OSO3 H、-SO2 NR’R’’、-CN、-N3 、-COR’、-OCOR’及-OCONR’R’’；且 RL1 係共價連接至CBA之自降解連接體，限制條件在於式(V)結合物不為：
Figure 02_image036
。
在第二十三實施例中，關於第二十二實施例中所述之式(V)、(VI)、(TC1)或(TC2)結合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中Cy係由表E中的以下各式之一表示：
Figure 02_image643
(VIIa)
Figure 02_image645
(VIIb)
Figure 02_image647
(VIIc)
Figure 02_image649
(VIId)
Figure 02_image651
(VIIIa)
Figure 02_image653
(VIIIb)
Figure 02_image655
(VIIIc)
Figure 02_image657
(VIIId)
Figure 02_image659
(TC1a)
Figure 02_image661
(TC1b)
Figure 02_image663
(TC1c)
Figure 02_image665
(TC1d)
Figure 02_image667
(TC2a)
Figure 02_image669
(TC2b)
Figure 02_image671
(TC2c)
Figure 02_image673
(TC2d)
或其醫藥學上可接受之鹽，其中： AA1 及AA2 各自獨立地為胺基酸殘基； a1為整數1至19； a2為整數1至5； Ra 為H或C1-4 烷基； q為1、2、3或4； Rs1 及Rs2 各自獨立地為H或C1-4 烷基，或Rs1 及Rs2 與其所附接之碳原子合起來形成3員至5員環烷基環，限制條件在於當q為1時，Rs1 及Rs2 與其所附接之碳原子合起來形成4員或5員環烷基環； V為C(=O)或CH2 ； Z1 為-C(=O)-或-SO2 -NH-C(=O)-，其中-SO2 -NH-C(=O)-中之-SO2 -基團連接至P1 ； Rx 係不存在、C1-10 伸烷基、C3-8 環烷基、-(CH2 CH2 O)m1 -C1-10 伸烷基-或C1-10 伸烷基-(OCH2 CH2 )m2 -； m1及m2各自獨立地為整數1至24； Z2 係不存在、-C(=O)NH-或-NH-C(=O)-； Ry 係不存在、C1-10 伸烷基、-(CH2 CH2 O)m3 -C1-10 伸烷基-或C1-10 伸烷基-(OCH2 CH2 )m4 -； m3及m4各自獨立地為整數1至24； Zs1 係共價連接至該CBA及該細胞毒性化合物之雙官能交聯劑，其中該交聯劑經由二硫鍵或硫醚鍵共價連接至該細胞毒性化合物； J1 係藉由使該細胞毒性劑之胺反應性基團或硫醇反應性基團與位於CBA上之胺基或硫醇基反應而形成的部分；且 剩餘變數係如第二態樣或第二十二實施例中所定義。
在一特定實施例中，關於式(VIId)、(VIIId)、(TC1d)或(TC2d)，q為1。在一更特定實施例中，關於式(VIId)、(VIIId)、(TC1d)或(TC2d)，q為1；且Rs1 及Rs2 均為甲基。
在另一特定實施例中，關於式(VIIb)、(VIIc)、(VIIIb)、(VIIIc)、(TC1b)、(TC1c)、(TC2b)或(TC2c)，Ra 為H、甲基或乙基。在一更特定實施例中，Ra 為H。在一更特定實施例中，Ra 為甲基。
在第二十四實施例中，關於第二十二實施例中所述之結合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R1a 、R2a 、R3a 、R4a 、R1b 、R2b 、R3b 及R4b 均為H；且剩餘變數係如第二態樣或第二十二或第二十三實施例或其中所述之任何特定實施例中所定義。
在第二十五實施例中，關於第二十二或第二十三實施例之結合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R5 為C3-7 伸烷基；且剩餘變數係如第二態樣或第二十二、第二十三或第二十四實施例或其中所述之任何特定實施例中所定義。在一特定實施例中，R5 為-(CH2 )3 -、-(CH2 )5 -或-(CH2 )7 -。在一更特定實施例中，R5 為-(CH2 )7 -。在一更特定實施例中，R5 為-(CH2 )5 -。在一更特定實施例中，R5 為-(CH2 )3 -。
在第二十六實施例中，關於第二十二或第二十三實施例之結合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R5 係由下式表示：
Figure 02_image675
或
Figure 02_image075
， 其中X1 、X2 、X3 及X4 各自獨立地為N或CR6 ，限制條件在於X1 、X2 、X3 及X4 中之至少一者為CR6 ；且剩餘變數係如第二態樣或第二十二、第二十三或第二十四實施例或其中所述之任何特定實施例中所定義。
在一特定實施例中，R5 為
Figure 02_image077
或
Figure 02_image079
。
在一更特定實施例中，R5 為
Figure 02_image081
，其中n為整數1至8。在一更特定實施例中，n為1、2、3或4。在一更特定實施例中，n為1。在一更特定實施例中，n為2。在一更特定實施例中，n為3。在一更特定實施例中，n為4。在一更特定實施例中，R5 為
Figure 02_image083
。在一更特定實施例中，R5 為
Figure 02_image085
。在另一更特定實施例中，R5 為
Figure 02_image087
。
在第二十七實施例中，關於第二十三實施例之結合物或其醫藥學上可接受之鹽，Cy係由表F中的以下各式之一表示：
Figure 02_image679
(VIIaA)
Figure 02_image681
(VIIaB)
Figure 02_image683
(VIIaC)
Figure 02_image685
(VIIaD)
Figure 02_image687
(VIIbA)
Figure 02_image689
(VIIbB)
Figure 02_image691
(VIIbC)
Figure 02_image693
(VIIbD)
Figure 02_image695
(VIIcA)
Figure 02_image697
(VIIcB)
Figure 02_image699
(VIIcC)
Figure 02_image701
(VIIcD)
Figure 02_image703
(VIIdA)
Figure 02_image705
(VIIdB)
Figure 02_image707
(VIIdC)
Figure 02_image709
(VIIdD)
Figure 02_image711
(VIIIaA)
Figure 02_image713
(VIIIaB)
Figure 02_image715
(VIIIaC)
Figure 02_image717
(VIIIaD)
Figure 02_image719
(VIIIbA)
Figure 02_image721
(VIIIbB)
Figure 02_image723
(VIIIbC)
Figure 02_image725
(VIIIbD)
Figure 02_image727
(VIIIcA)
Figure 02_image729
(VIIIcB)
Figure 02_image731
(VIIIcC)
Figure 02_image733
(VIIIcD)
Figure 02_image735
(VIIIdA)
Figure 02_image737
(VIIIdB)
Figure 02_image739
(VIIIdC)
Figure 02_image741
(VIIIdD)
Figure 02_image743
(TC1aA)
Figure 02_image745
(TC1aB)
Figure 02_image747
(TC1aC)
Figure 02_image749
(TC1aD)
Figure 02_image751
(TC1bA)
Figure 02_image753
(TC1bB)
Figure 02_image755
(TC1bC)
Figure 02_image757
(TC1bD)
Figure 02_image759
(TC1cA)
Figure 02_image761
(TC1cB)
Figure 02_image763
(TC1cC)
Figure 02_image765
(TC1cD)
Figure 02_image767
(TC1dA)
Figure 02_image769
(TC1dB)
Figure 02_image771
(TC1dC)
Figure 02_image773
(TC1dD)
Figure 02_image775
(TC2aA)
Figure 02_image777
(TC2aB)
Figure 02_image779
(TC2aC)
Figure 02_image781
(TC2aD)
Figure 02_image783
(TC2bA)
Figure 02_image785
(TC2bB)
Figure 02_image787
(TC2bC)
Figure 02_image789
(TC2bD)
Figure 02_image791
(TC2cA)
Figure 02_image793
(TC2cB)
Figure 02_image795
(TC2cC)
Figure 02_image797
(TC2cD)
Figure 02_image799
(TC2dA)
Figure 02_image801
(TC2dB)
Figure 02_image803
(TC2dC)
Figure 02_image805
(TC2dD)
或其醫藥學上可接受之鹽，其中剩餘變數係如第二態樣或第二十三實施例或其中所述之任何特定實施例中所定義。
在第二十八實施例中，關於第二十三至第二十七實施例中所述之結合物或其醫藥學上可接受之鹽，Z1 為-C(=O)-；且剩餘變數係如第二態樣或第二十三、第二十四、第二十五、第二十六或第二十七實施例或其中所述之任何特定實施例中所定義。
在第二十九實施例中，關於第二十三至第二十八實施例中所述之結合物或其醫藥學上可接受之鹽，Rx 為C1-6 伸烷基；Z2 及Ry 均不存在；且剩餘變數係如第二態樣或第二十三、第二十四、第二十五、第二十六、第二十七或第二十八實施例或其中所述之任何特定實施例中所定義。在另一實施例中，Rx 、Z2 及Ry 不存在；且剩餘變數係如第二十三、第二十四、第二十五、第二十六、第二十七或第二十八實施例或其中所述之任何特定實施例中所定義。
在第三十實施例中，關於第二十三至第二十八實施例中所述之結合物或其醫藥學上可接受之鹽，Rx 為-(CH2 CH2 O)m1 -C1-6 伸烷基-；Z2 為-NH-C(=O)-或-C(=O)-NH-；Ry 為C1-6 伸烷基；且剩餘變數係如第二態樣或第二十三、第二十四、第二十五、第二十六、第二十七或第二十八實施例或其中所述之任何特定實施例中所定義。
在第三十一實施例中，關於第二十三至第二十八實施例中所述之結合物或其醫藥學上可接受之鹽，Rx 為C1-6 伸烷基；Z2 為-NH-C(=O)-或-C(=O)-NH-；Ry 為-(CH2 CH2 O)m2 -C1-6 伸烷基-；且剩餘變數係如第二態樣或第二十三、第二十四、第二十五、第二十六、第二十七或第二十八實施例或其中所述之任何特定實施例中所定義。
在第三十二實施例中，關於第二十七實施例之結合物或其醫藥學上可接受之鹽，Cy係由表G中的以下各式之一表示：
Figure 02_image807
(VIIa1A)
Figure 02_image809
(VIIa2A)
Figure 02_image811
(VIIa3A)
Figure 02_image813
(VIIa4A)
Figure 02_image815
(VIIa5A)
Figure 02_image817
(VIIa6A)
Figure 02_image819
(VIIa1B)
Figure 02_image821
(VIIa2B)
Figure 02_image823
(VIIa3B)
Figure 02_image825
(VIIa4B)
Figure 02_image827
(VIIa5B)
Figure 02_image829
(VIIa6B)
Figure 02_image831
(VIIa1C)
Figure 02_image833
(VIIa2C)
Figure 02_image835
(VIIa3C)
Figure 02_image837
(VIIa4C)
Figure 02_image839
(VIIa5C)
Figure 02_image841
(VIIa6C)
Figure 02_image843
(VIIa1D)
Figure 02_image845
(VIIa2D)
Figure 02_image847
(VIIa3D)
Figure 02_image849
(VIIa4D)
Figure 02_image851
(VIIa5D)
Figure 02_image853
(VIIa6D)
Figure 02_image855
(VIIb1A)
Figure 02_image857
(VIIb2A)
Figure 02_image859
(VIIb3A)
Figure 02_image861
(VIIb4A)
Figure 02_image863
(VIIb5A)
Figure 02_image865
(VIIc1A)
Figure 02_image867
(VIIc2A)
Figure 02_image869
(VIIc3A)
Figure 02_image871
(VIIc4A)
Figure 02_image873
(VIIc5A)
Figure 02_image875
(VIId1A)
Figure 02_image877
(VIIb1B)
Figure 02_image879
(VIIb2B)
Figure 02_image881
(VIIb3B)
Figure 02_image883
(VIIb4B)
Figure 02_image885
(VIIb5B)
Figure 02_image887
(VIIc1B)
Figure 02_image889
(VIIc2B)
Figure 02_image891
(VIIc3B)
Figure 02_image893
(VIIc4B)
Figure 02_image895
(VIIc5B)
Figure 02_image897
(VIId1B)
Figure 02_image899
(VIIb1C)
Figure 02_image901
(VIIb2C)
Figure 02_image903
(VIIb3C)
Figure 02_image905
(VIIb4C)
Figure 02_image907
(VIIb5C)
Figure 02_image909
(VIIc1C)
Figure 02_image911
(VIIc2C)
Figure 02_image913
(VIIc3C)
Figure 02_image915
(VIIc4C)
Figure 02_image917
(VIIc5C)
Figure 02_image919
(VIId1C)
Figure 02_image921
(VIIb1D)
Figure 02_image923
(VIIb2D)
Figure 02_image925
(VIIb3D)
Figure 02_image927
(VIIb4D)
Figure 02_image929
(VIIb5D)
Figure 02_image931
(VIIc1D)
Figure 02_image933
(VIIc2D)
Figure 02_image935
(VIIc3D)
Figure 02_image937
(VIIc4D)
Figure 02_image939
(VIIc5D)
Figure 02_image941
(VIId1D)
或其醫藥學上可接受之鹽，其中： R6 為-C(=O)OR6a 或-NR6b (CH2 CH2 O)n CH2 CH2 OR6c ； R6a 、R6b 及R6c 各自獨立地為H或C1-4 烷基； n為整數1至8； Ra 及Rb 在每次出現時獨立地為H或C1-4 烷基； r、r1及r2各自獨立地為整數2至6； s為整數2至12；且 剩餘變數係如第二態樣或第二十七實施例中所定義。
第三十二實施例中亦包括第二態樣之結合物，其中Cy係由下式表示：
Figure 02_image943
(VI’)；
Figure 02_image945
(TC1’)；或
Figure 02_image947
(TC2’)， 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： N與C之間的雙線
Figure 02_image003
表示單鍵或雙鍵，限制條件在於當其為雙鍵時，X不存在且Y為H或C1-4 烷基，且當其為單鍵時，X為H且Y為-SO3 H； RL1 係由下式中之任一者表示：
Figure 02_image949
(RL1a )
Figure 02_image951
(RL1b )
Figure 02_image953
(RL1c )
Figure 02_image955
(RL1d )
Figure 02_image957
(RL1e )
Figure 02_image959
(RL1f )
Figure 02_image961
(RL1g )
Figure 02_image963
(RL1h )
Figure 02_image965
(RL1i )
Figure 02_image967
(RL1j )
Figure 02_image969
(RL1k )
Figure 02_image971
(RL1l )
Figure 02_image973
(RL1m )
Figure 02_image975
(RL1n )
Figure 02_image977
(RL1o )
Figure 02_image979
(RL1p )
Figure 02_image981
(RL1q )		   
R5 係由以下各式之一表示：
Figure 02_image393
(R5a )；
Figure 02_image395
；
Figure 02_image397
(R5c )；或
Figure 02_image399
(R5d )。
RL1 及R5 之任何組合均包括於本發明中。
在第三十三實施例中，關於第三十二實施例之結合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中： R6a 及R6c 均為Me； R6b 為H； n為1、2、3或4； Ra 及Rb 在每次出現時獨立地為H或Me； r為4； r1為4； r2為2； s為1、2、3或4；且 剩餘變數係如第二態樣或第三十二實施例中所定義。
在第三十四實施例中，關於第二十三至第三十三實施例中所述之結合物或其醫藥學上可接受之鹽，J1 為-C(=O)-；且剩餘變數係如第二態樣或第二十三、第二十四、第二十五、第二十六、第二十七、第二十八、第二十九、第三十、第三十一、第三十二或第三十三實施例或此中所述之任何特定實施例中所定義。
在第三十五實施例中，關於第二十三至第三十三實施例中所述之結合物或其醫藥學上可接受之鹽，J1 為
Figure 02_image983
，其中s1係連接至CBA之位點且s2係連接至該細胞毒性化合物之其餘部分的位點；且剩餘變數係如第二態樣或第二十三、第二十四、第二十五、第二十六、第二十七、第二十八、第二十九、第三十、第三十一、第三十二或第三十三實施例或此中所述之任何特定實施例中所定義。
在第三十六實施例中，關於第二十三至第三十三實施例中所述之結合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中J1 為-SZs1 ，其中Zs1 係選自以下各式：
Figure 02_image985
(b1)
Figure 02_image987
(b2)
Figure 02_image989
(b3)
Figure 02_image991
(b4)
Figure 02_image993
(b5)
Figure 02_image995
(b6)
Figure 02_image997
(b7)
Figure 02_image999
(b8)
Figure 02_image1001
(b9)
Figure 02_image1003
(b10)
Figure 02_image1005
(b11)
Figure 02_image1007
(b12)
Figure 02_image1009
(b13)
Figure 02_image1011
(b14)
Figure 02_image1013
(b15)
Figure 02_image1015
(b16)
Figure 02_image1017
(b17)		   
其中： q為整數1至5； n’為整數2至6； s1係連接至CBA之位點； s2係連接至該細胞毒性化合物之其餘部分的位點；且 剩餘變數係如第二態樣或第二十三、第二十四、第二十五、第二十六、第二十七、第二十八、第二十九、第三十、第三十一、第三十二或第三十三實施例或此中所述之任何特定實施例中所定義。
在一特定實施例中，Zs1 係由式(b7)或(b9)表示。在另一特定實施例中，Zs1 係由式(b16)或(b17)表示。
在第三十七實施例中，關於第二十二至第三十六實施例之結合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中N與C之間的雙線
Figure 02_image003
表示雙鍵，X不存在且Y為H；且剩餘變數係如第二態樣或第二十二、第二十三、第二十四、第二十五、第二十六、第二十七、第二十八、第二十九、第三十、第三十一、第三十二、第三十三、第三十四、第三十五或第三十六實施例或此中所述之任何特定實施例中所定義。
在第三十八實施例中，關於第二十二至第三十六實施例之結合物或其醫藥學上可接受之鹽，N與C之間的雙線
Figure 02_image003
表示單鍵，X為H且Y為-SO3 H；且剩餘變數係如第二態樣或第二十二、第二十三、第二十四、第二十五、第二十六、第二十七、第二十八、第二十九、第三十、第三十一、第三十二、第三十三、第三十四、第三十五或第三十六實施例或此中所述之任何特定實施例中所定義。在一特定實施例中，該醫藥學上可接受之鹽為鈉鹽或鉀鹽。在另一特定實施例中，該醫藥學上可接受之鹽為鈉鹽。
在第三十九實施例中，關於第二十三至第三十八實施例中所述之結合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中a1為整數1至7；且剩餘變數係如第二態樣或第二十三、第二十四、第二十五、第二十六、第二十七、第二十八、第二十九、第三十、第三十一、第三十二、第三十三、第三十四、第三十五、第三十六、第三十七或第三十八實施例或此中所述之任何特定實施例中所定義。
在一特定實施例中，AA1 及AA2 各自獨立地選自 在一特定實施例中，AA1 及AA2 各自獨立地選自精胺酸(Arg)、組胺酸(His)、離胺酸(Lys)、天冬胺酸(Asp)、麩胺酸(Glu)、絲胺酸(Ser)、酥胺酸(Thr)、天冬醯胺(Asn)、麩醯胺(Gln)、半胱胺酸(Cys)、硒並半胱胺酸(Sec)、甘胺酸(Gly)、脯胺酸(Pro)、丙胺酸(Ala)、纈胺酸(Val)、異白胺酸(Ile)、白胺酸(Leu)、甲硫胺酸(Met)、苯丙胺酸(Phe)、酪胺酸(Tyr)及色胺酸(Trp)。
在第四十實施例中，關於第三十九實施例之結合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中AA1 -(AA2 )a1 係選自Gly-Gly-Gly、Ala-Val、Val-Ala、Val-Cit、Val-Lys、Phe-Lys、Lys-Lys、Ala-Lys、Phe-Cit、Leu-Cit、Lle-Cit、Phe-Ala、Phe-N9 -甲苯磺醯基-Arg、Phe-N9 -硝基-Arg、Phe-Phe-Lys、D-Phe-Phe-Lys、Gly-Phe-Lys、Leu-Ala-Leu、Ile-Ala-Leu、Val-Ala-Val、Ala-Leu-Ala-Leu、β-Ala-Leu-Ala-Leu、Gly-Phe-Leu-Gly、Val-Arg、Arg-Val、Arg-Arg、Val-D-Cit、Val-D-Lys、Val-D-Arg、D-Val-Cit、D-Val-Lys、D-Val-Arg、D-Val-D-Cit、D-Val-D-Lys、D-Val-D-Arg、D-Arg-D-Arg、Ala-Ala、Ala-D-Ala、D-Ala-Ala、D-Ala-D-Ala、Ala-Met、Met-Ala、Thr-Thr、Thr-Met、Met-Thr、Leu-Ala、Cit-Val、Gln-Val、Ser-Val、Leu-Gln、Gln-Leu、Phe-Arg、Arg-Phe、Tyr-Arg、Arg-Tyr、Phe-Gln、Gln-Phe、Val-Thr、Thr-Val、Met-Tyr及Tyr-Met；且剩餘變數係如第二態樣或第三十九實施例中所定義。
在一特定實施例中，AA1 -(AA2 )a1 為Ala-Ala、L-Ala-L-Ala、Ala-Val、L-Ala-L-Val、Gln-Val、L-Gln-L-Val、Gln-Leu、L-Gln-L-Leu、Ser-Val或L-Ser-L-Val。
在第四十一實施例中，本發明結合物係選自表H中的以下各式之一：
Figure 02_image1019
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Figure 02_image1267
   
或其醫藥學上可接受之鹽，其中：
Figure 02_image1269
係經由位於該CBA上之胺基共價連接至該細胞毒性化合物之細胞結合劑；
Figure 02_image1271
係經由位於該CBA上之硫醇基共價連接至該細胞毒性化合物之細胞結合劑； wL 為整數1至20； wC 為整數1至4；且 剩餘變數係如第二態樣或第二十二實施例中所定義。
在第四十二實施例中，關於上文所述之結合物(例如，第二態樣或其中所述之任何實施例或第二十二至第四十一實施例或其中所述之任何實施例或特定實施例中所述的結合物)，其醫藥學上可接受之鹽為鈉鹽或鉀鹽。在一實施例中，該醫藥學上可接受之鹽為鈉鹽。在一實施例中，該醫藥學上可接受之鹽為鉀鹽。細胞結合劑
本發明之免疫結合物中的細胞結合劑可為目前已知或變成已知之任何種類，包括肽及非肽。一般而言，此等細胞結合劑可為抗體(諸如多株抗體及單株抗體，尤其單株抗體)、淋巴激素、激素、生長因子、維生素(諸如葉酸鹽等，其可結合於其細胞表面受體，例如葉酸受體)、營養物-轉運分子(諸如轉鐵蛋白)或任何其他細胞結合分子或物質。
在某些實施例中，細胞結合劑為抗體、單鏈抗體、特異性地結合於標靶細胞之抗體片段、單株抗體、單鏈單株抗體、特異性地結合於標靶細胞之單株抗體片段(或「抗原結合部分」或「抗原結合片段」)、嵌合抗體、特異性地結合於標靶細胞之嵌合抗體片段(或「抗原結合部分」或「抗原結合片段」)、域抗體(例如，sdAb)或特異性地結合於標靶細胞之域抗體片段。
在某些實施例中，細胞結合劑為人類化抗體、人類化單鏈抗體或人類化抗體片段(或「抗原結合部分」或「抗原結合片段」)。
在某些實施例中，細胞結合劑為表面重塑抗體、表面重塑單鏈抗體或表面重塑抗體片段(或「抗原結合部分」或「抗原結合片段」)。
在某些實施例中，細胞結合劑為抗體或其抗原結合部分(包括抗體衍生物)，CBA可結合於標靶細胞上之配位體，諸如細胞-表面配位體，包括細胞-表面受體。
在某些實施例中，細胞結合劑(CBA)結合於選自以下之標靶細胞：腫瘤細胞、病毒感染細胞、微生物感染細胞、寄生蟲感染細胞、自體免疫細胞、活化細胞、骨髓細胞、活化T細胞、B細胞或黑色素細胞；表現CA6、CAK1、CD4、CD5、CD6、CD19、CD20、CD22、CD30、CD33、CD37、CD38、CD40、CD44、CD56、CD123、CD138、EpCAM、CanAg、CALLA、CEACAM5、FGFR3、LAMP1、p-鈣黏蛋白、Her-2或Her-3抗原之細胞；或表現胰島素生長因子受體、表皮生長因子受體及葉酸鹽受體之細胞。
在某些實施例中，細胞結合劑為經半胱胺酸工程改造之抗體或其抗原結合片段。在某些實施例中，經半胱胺酸工程改造之抗體或其抗原結合片段為抗葉酸鹽受體抗體或其抗原結合片段、抗EGFR抗體或其抗原結合片段、抗CD33抗體或其抗原結合片段、抗CD19抗體或其抗原結合片段、抗Muc1抗體或其抗原結合片段、抗CD37抗體或其抗原結合片段、抗cMet抗體或其抗原結合片段或抗EpCAM抗體或其抗原結合片段。
在某些實施例中，細胞結合劑為如下抗體或其抗原結合片段，其：(a)結合人類CD123/IL3-Rα抗原之胺基酸101-346內的抗原決定基，及(b)抑制抗原陽性TF-1細胞中之IL3依賴性增生(參見WO2017/004026，以引用之方式整體倂入本文中)。
在某些實施例中，細胞結合劑係如WO2017/004026 (其以引用之方式倂入本文中)中所述之抗CD123抗體或其抗原結合片段。
在某些實施例中，抗CD123抗體或其抗原結合片段可包含：a)至少一個輕鏈可變區或其片段，其分別包含三個連續互補決定區(CDR) CDRL 1、CDRL 2及CDRL 3，其中CDRL 1具有胺基酸序列RASQDINSYLS (SEQ ID NO:1)，CDRL 2具有胺基酸序列RVNRLVD (SEQ ID NO:2)，且CDRL 3具有胺基酸序列LQYDAFPYT (SEQ ID NO:3)；及b)至少一個重鏈可變區或其片段，其分別包含三個連續互補決定區(CDR) CDRH 1、CDRH 2及CDRH 3，其中CDRH 1具有胺基酸序列SSIMH (SEQ ID NO:4)，CDRH 2具有胺基酸序列YIKPYNDGTKYNEKFKG (SEQ ID NO:5)，且CDRH 3具有胺基酸序列EGGNDYYDTMDY (SEQ ID NO:6)。
在某些實施例中，抗CD123抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區(VH )，其具有胺基酸序列 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYIFT SSIMH WVRQAPGQGLEWIG YIKPYNDGTKYNEKFKG RATLTSDRSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR EGGNDYYDTMDY WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:7) 及輕鏈可變區(VL )，其具有胺基酸序列 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQDINSYLS WFQQKPGKAPKTLIY RVNRLVD GVPSRFSGSGSGNDYTLTISSLQPEDFATYYC LQYDAFPYT FGQGTKVEIKR (SEQ ID NO:9)。
在某些實施例中，抗CD123抗體具有重鏈全長序列 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYIFT SSIMH WVRQAPGQGLEWIG YIKPYNDGTKYNEKFKG RATLTSDRSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR EGGNDYYDTMDY WGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLCLSPG (SEQ ID NO:8) 及輕鏈全長序列 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQDINSYLS WFQQKPGKAPKTLIY RVNRLVD GVPSRFSGSGSGNDYTLTISSLQPEDFATYYC LQYDAFPYT FGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:10)
在某些實施例中，細胞結合劑係如美國專利第7,342,110號及第7,557,189號(其以引用之方式倂入本文中)中所述之抗CD3抗體或其抗原結合片段。
在某些實施例中，抗CD33抗體或其抗原結合片段可包含：a)至少一個輕鏈可變區或其片段，其分別包含三個連續互補決定區(CDR) CDRL 1、CDRL 2及CDRL 3，其中CDRL 1具有胺基酸序列KSSQSVFFSSSQKNYLA (SEQ ID NO:11)，CDRL 2具有胺基酸序列WASTRES (SEQ ID NO:12)，且CDRL 3具有胺基酸序列HQYLSSRT (SEQ ID NO:13)；及b)至少一個重鏈可變區或其片段，其分別包含三個連續互補決定區(CDR) CDRH 1、CDRH 2及CDRH 3，其中CDRH 1具有胺基酸序列SYYIH (SEQ ID NO:14)，CDRH 2具有胺基酸序列VIYPGNDDISYNQKFQG (SEQ ID NO:15)，且CDRH 3具有胺基酸序列EVRLRYFDV (SEQ ID NO:16)。
在某些實施例中，抗CD33抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區(VH )，其具有胺基酸序列 QVQLQQPGAEVVKPGASVKMSCKASGYTFT SYYIH WIKQTPGQGLEWVG VIYPGNDDISYNQKFQG KATLTADKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYYCAR EVRLRYFDV WGQGTTVTVSS  (SEQ ID NO:17) 及輕鏈可變區(VL )，其具有胺基酸序列 EIVLTQSPGSLAVSPGERVTMSC KSSQSVFFSSSQKNYLA WYQQIPGQSPRLLIY WASTRES GVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQPEDLAIYYC HQYLSSRT FGQGTKLEIKR (SEQ ID NO:19)。
在某些實施例中，抗CD33抗體具有重鏈全長序列 QVQLQQPGAEVVKPGASVKMSCKASGYTFT SYYIH WIKQTPGQGLEWVG VIYPGNDDISYNQKFQG KATLTADKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYYCAR EVRLRYFDV WGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO:18) 及輕鏈全長序列 EIVLTQSPGSLAVSPGERVTMSC KSSQSVFFSSSQKNYLA WYQQIPGQSPRLLIY WASTRES GVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQPEDLAIYYC HQYLSSRT FGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:20)。
在某些實施例中，該抗CD33抗體為huMy9-6抗體。
在某些實施例中，細胞結合劑係如WO2018/119196及美國臨時申請案第62/690052號及第62/691342號(其各自以引用之方式倂入本文中)中所述之抗ADAM9抗體或其抗原結合片段。
在某些實施例中，抗ADAM9抗體或其抗原結合片段係特異性地結合於人類ADAM9及cyno ADAM9之人類化抗ADAM9抗體或其抗原結合片段。
在某些實施例中，人類化抗ADAM9抗體或其ADAM9結合片段係經最佳化以具有對cyno ADAM9之結合親和力的至少100倍增強且如與嵌合或鼠科動物親本抗體相比，保持對人類ADAM9之高親和力結合。
在某些實施例中，抗ADAM9抗體或其抗原結合片段(例如，人類化抗ADAM9抗體或其抗原結合片段)包含：a)至少一個輕鏈可變區或其片段，其分別包含三個連續互補決定區(CDR) CDRL 1、CDRL 2及CDRL 3，其中CDRL 1具有胺基酸序列KASQSVDYSGDSYMN (SEQ ID NO:21)，CDRL 2具有胺基酸序列AASDLES (SEQ ID NO:22)，且CDRL 3具有胺基酸序列QQSHEDPFT (SEQ ID NO:23)；及b)至少一個重鏈可變區或其片段，其分別包含三個連續互補決定區(CDR) CDRH 1、CDRH 2及CDRH 3，其中CDRH 1具有胺基酸序列SYWMH (SEQ ID NO:24)，CDRH 2具有胺基酸序列EIIPIFGHTNYNEKFKS (SEQ ID NO:25)，且CDRH 3具有胺基酸序列GGYYYYPRQGFLDY (SEQ ID NO:26)。
在某些實施例中，抗ADAM9抗體或其抗原結合片段(例如，人類化抗ADAM9抗體或其抗原結合片段)包含重鏈可變區(VH )，其具有胺基酸序列 EVQLVESGGG LVKPGGSLRLSCAASGFTFS SYWMH WVRQA PGKGLEWVG E IIPIFGHTNY NEKFKS RFTI SLDNSKNTLY LQMGSLRAED TAVYYCAR GG YYYYPRQGFL DY WGQGTTVT VSS (SEQ ID NO:27) 及輕鏈可變區(VL )，其具有胺基酸序列 DIVMTQSPDSLAVSLGERATISC KASQSVDYSGDSYMN WYQQKPGQPPKLLIY AASDLES GIPARFSGSG SGTDFTLTIS SLEPEDFATYYC QQSHEDPFT FGQGTKLEI K (SEQ ID NO:28)。
在某些實施例中，抗ADAM9抗體具有重鏈全長序列 EVQLVESGGG LVKPGGSLRL SCAASGFTFS SYWMH WVRQA PGKGLEWVG E IIPIFGHTNY NEKFKS RFTI SLDNSKNTLY LQMGSLRAED TAVYYCAR GG YYYYPRQGFL DY WGQGTTVT VSSASTKGPS VFPLAPSSKS TSGGTAALGC LVKDYFPEPV TVSWNSGALT SGVHTFPAVL QSSGLYSLSS VVTVPSSSLG TQTYICNVNH KPSNTKVDKR VEPKSCDKTH TCPPCPAPEL LGGPSVFLFP PKPKDTL Y I T R E PEVTCVVV DVSHEDPEVK FNWYVDGVEV HNAKTKPREE QYNSTYRVVS VLTVLHQDWL NGKEYKCKVS NKALPAPIEK TISKAKGQPR EPQVYTLPPS REEMTKNQVS LTCLVKGFYP SDIAVEWESN GQPENNYKTT PPVLDSDGSF FLYSKLTVDK SRWQQGNVFS CSVMHEALHN HYTQKSLC LS PG  (SEQ ID NO:29) 及輕鏈全長序列 DIVMTQSPDSLAVSLGERATISC KASQSVDYSGDSYMN WYQQKPGQPPKLLIY AASDLES GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFATYYC QQSHEDPFT FGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:30)。
在某些實施例中，細胞結合劑係如美國臨時申請案第62/751,530號(其以引用之方式倂入本文中)中所述之抗EpCAM抗體或其抗原結合片段。
在某些實施例中，抗EpCAM抗體或其抗原結合片段可包含：a)至少一個輕鏈可變區或其片段，其分別包含三個連續互補決定區(CDR) CDRL 1、CDRL 2及CDRL 3，其中CDRL 1具有胺基酸序列RSSRSLLHSDGFTYLY (SEQ ID NO:31)，CDRL 2具有胺基酸序列QTSNLAS (SEQ ID NO:32)，且CDRL 3具有胺基酸序列AQNLELPNT (SEQ ID NO:33)；及b)至少一個重鏈可變區或其片段，其分別包含三個連續互補決定區(CDR) CDRH 1、CDRH 2及CDRH 3，其中CDRH 1具有胺基酸序列NYYIH (SEQ ID NO:34)，CDRH 2具有胺基酸序列WIYPGNVYIQYNEKFKG (SEQ ID NO:35)，且CDRH 3具有胺基酸序列DGPWFAY (SEQ ID NO:36)。
在某些實施例中，抗EpCAM抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區(VH )，其具有胺基酸序列 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT NYYIH WVRQAPGQRLEYIG WIYPGNVYIQYNEKFKG RATLTADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR DGPWFAY WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:37) 及輕鏈可變區(VL )，其具有胺基酸序列 DIVLTQTPLSLSVTPGQPASISC RSSRSLLHSDGFTYLY WFLQKPGQSPQLLIY QTSNLAS GVPDRFSSSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC AQNLELPNT FGQGTKLEIK (SEQ ID N:38)。
在某些實施例中，抗EpCAM抗體具有重鏈全長序列 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT NYYIH WVRQAPGQRLEYIG WIYPGNVYIQYNEKFKG RATLTADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR DGPWFAY WGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO:39) 及輕鏈全長序列 DIVLTQTPLSLSVTPGQPASISC RSSRSLLHSDGFTYLY WFLQKPGQSPQLLIY QTSNLAS GVPDRFSSSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC AQNLELPNT FGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:40)。
在某些實施例中，該細胞結合劑為抗葉酸鹽受體抗體。在某些實施例中，細胞結合劑係如美國專利8,709,432、美國專利第8,557,966號及WO2011106528 (其均以引用之方式倂入本文中)中所述之抗人類葉酸鹽受體1 (FOLR1)抗體或其抗原結合片段。
在某些實施例中，抗FOLR1抗體或其抗原結合片段可包含：a)至少一個輕鏈可變區或其片段，其分別包含三個連續互補決定區(CDR) CDRL 1、CDRL 2及CDRL 3，其中CDRL 1具有胺基酸序列KASQSVSFAGTSLMH (SEQ ID NO:41)，CDRL 2具有胺基酸序列RASNLEA (SEQ ID NO:42)，且CDRL 3具有胺基酸序列QQSREYPYT (SEQ ID NO:43)；及b)至少一個重鏈可變區或其片段，其分別包含三個連續互補決定區(CDR) CDRH 1、CDRH 2及CDRH 3，其中CDRH 1具有胺基酸序列GYFMN (SEQ ID NO:44)或GYTFTGYFMN (SEQ ID NO:47)，CDRH 2具有胺基酸序列RIHPYDGDTFYNQKFQG (SEQ ID NO:45)或RIHPYDGDTF (SEQ ID NO:48)，且CDRH 3具有胺基酸序列YDGSRAMDY (SEQ ID NO:46)。在某些實施例中，抗FOLR1抗體或其抗原結合片段包含a)輕鏈可變區，其包含具有以SEQ ID NO:41陳述之胺基酸序列的CDRL 1、具有以SEQ ID NO:42陳述之胺基酸序列的CDRL 2及具有以SEQ ID NO:43陳述之胺基酸序列的CDRL 3；及b)重鏈可變區，其包含具有以SEQ ID NO:44陳述之胺基酸序列的CDRH 1、具有以SEQ ID NO:45陳述之胺基酸序列的CDRH 2及具有以SEQ ID NO:46陳述之胺基酸序列的CDRH 3。在某些實施例中，抗FOLR1抗體或其抗原結合片段包含a)輕鏈可變區，其包含具有以SEQ ID NO:41陳述之胺基酸序列的CDRL 1、具有以SEQ ID NO:42陳述之胺基酸序列的CDRL 2及具有以SEQ ID NO:43陳述之胺基酸序列的CDRL 3；及b)重鏈可變區，其包含具有以SEQ ID NO:47陳述之胺基酸序列的CDRH 1、具有以SEQ ID NO:48陳述之胺基酸序列的CDRH 2及具有以SEQ ID NO:46陳述之胺基酸序列的CDRH 3。
在某些實施例中，抗FOLR1抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區(VH )，其具有胺基酸序列 QVQLVQSGAEVVKPGASVKISCKAS GYTFTGYFMN WVKQSPGQSLEWIG RIHPYDGDTFYNQKFQG KATLTVDKSSNTAHMELLSLTSEDFAVYYCTR YDGSRAMDY WGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:49) 及輕鏈可變區(VL )，其具有胺基酸序列 DIVLTQSPLSLAVSLGQPAIISC KASQSVSFAGTSLMH WYHQKPGQQPRLLIY RASNLEA GVPDRFSGSGSKTDFTLNISPVEAEDAATYYC QQSREYPYT FGGGTKLEIKR (SEQ ID NO:50)，或 DIVLTQSPLSLAVSLGQPAIISC KASQSVSFAGTSLMH WYHQKPGQQPRLLIY RASNLEA GVPDRFSGSGSKTDFTLTISPVEAEDAATYYC QQSREYPYT FGGGTKLEIKR (SEQ ID NO:51)。
在某些實施例中，抗FOLR1抗體具有重鏈全長序列 QVQLVQSGAEVVKPGASVKISCKAS GYTFTGYFMN WVKQSPGQSLEWIG RIHPYDGDTFYNQKFQG KATLTVDKSSNTAHMELLSLTSEDFAVYYCTR YDGSRAMDY WGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO:52) 及輕鏈全長序列 DIVLTQSPLSLAVSLGQPAIISC KASQSVSFAGTSLMH WYHQKPGQQPRLLIY RASNLEA GVPDRFSGSGSKTDFTLNISPVEAEDAATYYC QQSREYPYT FGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:53)，或 DIVLTQSPLSLAVSLGQPAIISC KASQSVSFAGTSLMH WYHQKPGQQPRLLIY RASNLEA GVPDRFSGSGSKTDFTLTISPVEAEDAATYYC QQSREYPYT FGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:54)。
在某些實施例中，該抗FOLR1抗體為huMov19或M9346A抗體。
在某些實施例中，本文所述之抗體為鼠科動物、非人類哺乳動物、嵌合、人類化或人類抗體。例如，該人類化抗體可為CDR移植抗體或表面重塑抗體。在某些實施例中，該抗體為全長抗體。在某些實施例中，其抗原結合片段為Fab、Fab’、F(ab’)2 、Fd 、單鏈Fv或scFv、二硫化物連接之Fv 、V-NAR域、IgNar、內體、IgGΔCH2 、微型抗體、F(ab’)3 、四功能抗體、三功能抗體、雙功能抗體、單域抗體、DVD-Ig、Fcab、mAb2 、(scFv)2 或scFv-Fc。
在某些實施例中，該細胞結合劑為替代蛋白質骨架，諸如Centyrin (基於纖維連接蛋白III型(FN3)重複序列之共有序列的蛋白質骨架；參見美國專利公開案2010/0255056、2010/0216708及2011/0274623，以引用之方式倂入本文中)、錨蛋白重複蛋白(例如經設計之錨蛋白重複蛋白，稱作DARPin；參見美國專利公開案第2004/0132028號、第2009/0082274號、第2011/0118146號及第2011/0224100號，以引用之方式倂入本文中，且亦參見C. Zahnd等人,Cancer Res. (2010) 70:1595-1605；Zahnd等人,J. Biol. Chem. (2006) 281(46):35167-35175；及Binz, H.K., Amstutz, P.及Pluckthun, A.,Nature Biotechnology (2005) 23:1257-1268，以引用之方式倂入本文中)、錨蛋白樣重複蛋白或合成肽(參見例如美國專利公開案第2007/0238667號；美國專利第7,101,675號；WO 2007/147213；及WO 2007/062466，以引用之方式倂入本文中)、纖連蛋白(纖維連接蛋白域骨架蛋白；參見美國專利公開案第2007/0082365號；第2008/0139791號，以引用之方式倂入本文中)、Avibody (包括雙功能抗體、三功能抗體及四功能抗體；參見美國公開案第2008/0152586號及第2012/0171115號)、雙重受體再靶向(DART)分子(P.A. Moore等人, Blood, 2011; 117(17):4542-4551；Veri MC等人, Arthritis Rheum, 2010年3月30日; 62(7):1933-43；Johnson S等人 J Mol Biol, 2010年4月9日;399(3):436-49)及細胞滲透超電荷蛋白(Methods in Enzymol. 502, 293-319 (2012)。 細胞結合劑-藥物結合物之產生
為了使本發明之細胞毒性化合物或其衍生物連接至細胞結合劑，該細胞毒性化合物可包含具有鍵結至其之反應性基團之連接部分。此等化合物可直接連接至細胞結合劑。用於使具有鍵結至其之反應性基團之細胞毒性化合物與細胞結合劑連接以產生細胞結合劑-細胞毒性劑結合物之代表性製程描述於實例s32-36中。
在一些實施例中，雙官能交聯劑可首先與該細胞毒性化合物反應以提供含有具有鍵結至其之一反應性基團的連接部分之化合物(亦即，藥物-連接體化合物)，其可接著與細胞結合劑反應。或者，該雙官能交聯試劑之一末端可首先與細胞結合劑反應以提供含有具有鍵結至其之一反應性基團的連接部分之細胞結合劑，其可接著與細胞毒性化合物反應。該連接部分可含有允許在特定位點處釋放該細胞毒性部分之化學鍵。合適化學鍵為此項技術中熟知的且包括二硫鍵、硫醚鍵、酸不穩定鍵、光不穩定鍵、肽酶不穩定鍵及酯酶不穩定鍵(參見例如美國專利5,208,020；5,475,092；6,441,163；6,716,821；6,913,748；7,276,497；7,276,499；7,368,565；7,388,026及7,414,073)。較佳為二硫鍵、硫醚及肽酶不穩定鍵。可用於本發明之其他連接體包括不可裂解連接體，諸如詳細描述於美國公開案第2005/0169933號中之彼等，或描述於US 2009/0274713、US 2010/01293140及WO 2009/134976中之帶電連接體或親水性連接體，該等公開案中每一者均明確地以引用之方式倂入本文中，該等公開案中每一者均明確地以引用之方式倂入本文中。
在一些實施例中，細胞結合劑(例如，抗體)於水性緩衝液中之溶液可用莫耳過量之雙官能交聯劑，諸如N -丁二醯亞胺基-4-(2-吡啶基二硫基)戊酸酯(SPP)、N -丁二醯亞胺基-4-(2-吡啶基二硫基)丁酸酯(SPDB)、N -丁二醯亞胺基-4-(2-吡啶基二硫基)2-磺基丁酸酯(磺基-SPDB)培育以引入二硫基吡啶基。經修飾細胞結合劑(例如，經修飾抗體)接著與本文所述之含硫醇細胞毒性化合物反應，以產生本發明之二硫鍵連接之細胞結合劑-細胞毒性劑結合物。
在另一實施例中，本文所述之含硫醇細胞毒性化合物可與雙官能交聯劑，諸如N -丁二醯亞胺基-4-(2-吡啶基二硫基)戊酸酯(SPP)、N -丁二醯亞胺基-4-(2-吡啶基二硫基)丁酸酯(SPDB)、N -丁二醯亞胺基-4-(2-吡啶基二硫基) 2-磺基丁酸酯(磺基-SPDB)反應以形成細胞毒性劑-連接體化合物，其可接著與細胞結合劑反應以產生本發明之二硫鍵連接之細胞結合劑-細胞毒性劑結合物。該細胞毒性劑-連接體化合物可當場製備而無需純化，接著與細胞結合劑反應。或者，該細胞毒性劑-連接體化合物可在與細胞結合劑反應之前經純化。
該細胞結合劑-細胞毒性劑結合物可使用此項技術中已知之任何純化方法，諸如描述於美國專利第7,811,572號及美國公開案第2006/0182750號(均以引用之方式倂入本文中)中之彼等來純化。例如，該細胞結合劑-細胞毒性劑結合物可使用切向流過濾、吸附層析、吸附過濾、選擇性沉澱、非吸收過濾或其組合來純化。較佳地，切向流過濾(TFF，亦稱作交叉流過濾、超濾及透濾)及/或吸附層析樹脂用於該等結合物之純化。
每個抗體分子結合之細胞毒性分子的數目可以分光光度法藉由量測在280 nm及330 nm下之吸光度的比率來測定。在一些實施例中，平均1-10個細胞毒性化合物/抗體分子可藉由上述方法連接。在一些實施例中，每個抗體分子連接之細胞毒性化合物的平均數目(DAR)為2-5，且更特定言之為2.5-4.0。在一些實施例中，包含本發明結合物之組成物(例如醫藥組成物)具有在2與8之間、在2與5之間、更特定言之在2.5與4.0之間的DAR值。
在一些實施例中，當該抗體經由半胱胺酸硫醇基連接至細胞毒性劑時，該結合物具有每個抗體分子1至4個細胞毒性化合物。在一些實施例中，該結合物具有每個抗體分子1或2個細胞毒性化合物。在一些實施例中，該結合物具有每個抗體分子2個細胞毒性化合物。在一些實施例中，每個抗體分子連接之細胞毒性化合物的平均數目(DAR)為1.5-2.5，更特定言之為1.8-2.2。在一些實施例中，包含本發明結合物之組成物(例如醫藥組成物)具有在1.0與2.5之間、在1.5與2.5之間、更特定言之在1.8與2.2之間或在1.9與2.1之間的DAR值。
用於製備本發明之細胞結合劑-藥物結合物的代表性製程描述於8,765,740及美國申請公開案第2012/0238731號中。此等參考文獻之完整教示以引用之方式倂入本文中。 組成物及使用方法
本發明包括包含本文所述之細胞毒性化合物、其衍生物或其結合物(及/或其溶劑合物、水合物及/或鹽)及載劑(醫藥學上可接受之載劑)的組成物(例如，醫藥組成物)。
本文所述之醫藥組成物可以多種方式經投與以用於局部或全身性治療。投與可為表面(諸如至黏膜，包括陰道及直腸遞送)，諸如經皮貼片、軟膏、洗劑、乳膏、凝膠、滴劑、栓劑、噴霧劑、液體及散劑；肺(例如藉由散劑或氣霧劑之吸入或吹入，包括藉由噴霧器；氣管內、鼻內、表皮及經皮)；經口；或非經腸，包括靜脈內、動脈內、皮下、腹膜內或肌肉內注射或輸注；或顱內(例如鞘內或室內)投與。在一些特定實施例中，該投與為靜脈內。本文所述之醫藥組成物亦可活體外或離體使用。
本發明組成物適用於抑制哺乳動物(例如，人類)之異常細胞生長或治療其增生性病症。
本發明包括一種抑制哺乳動物(例如，人類)之異常細胞生長或治療其增生性病症、自體免疫病症、破壞性骨病症、傳染病、病毒性疾病、纖維變性疾病、神經退化性病症、胰臟炎或腎病之方法，該方法包含向該哺乳動物投與治療有效量的本文所述之細胞毒性化合物、其衍生物或其結合物(及/或其溶劑合物及鹽)或其組成物。
在某些實施例中，哺乳動物之增生性病症為癌症，包括血液科癌症、白血病或淋巴瘤。在某些實施例中，該增生性病症為淋巴器之癌症，或血液學惡性腫瘤。
例如，該癌症可選自由以下組成之群：急性骨髓性白血病(AML，包括CD33低AML、P-醣蛋白陽性AML、復發性AML或難治性AML)、慢性骨髓性白血病(CML) (包括CML之母細胞危象及與CML相關之Abelson致癌基因(Bcr-ABL易位))、骨髓發育不良症候群(MDS)、急性淋巴母細胞性白血病(ALL) (包括但不限急性B淋巴母細胞性白血病或B細胞急性淋巴母細胞性白血病(B-ALL))、慢性淋巴球性白血病(CLL) (包括Richter氏症候群或Richter氏CLL轉化)、毛細胞白血病(HCL)、急性前骨髓細胞性白血病(APL)、B細胞慢性淋巴增生性疾病(B-CLPD)、非典型慢性淋巴球性白血病(較佳地具有經標記CD11c表現)、彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、母細胞性漿細胞樣樹突狀細胞贅瘤(BPDCN)、非霍奇金淋巴瘤(NHL) (包括套細胞白血病(MCL)及小淋巴球性淋巴瘤(SLL)、霍奇金氏淋巴瘤、全身性肥胖細胞增多症及伯奇氏淋巴瘤)。
在某些實施例中，該癌症可選自由肺癌(例如非小細胞肺癌)、大腸直腸癌、膀胱癌、胃癌、胰臟癌、腎細胞癌、前列腺癌、食道癌、乳癌、頭頸部癌、子宮癌、卵巢癌、肝癌、子宮頸癌、甲狀腺癌、睾丸癌、骨髓癌、黑色素瘤及淋巴癌組成之群。在某些實施例中，該癌症為非小細胞肺癌、大腸直腸癌、胃癌、乳癌(例如三陰性乳癌(TNBC))或胰臟癌。在進一步實施例中，本發明之免疫結合物可適用於治療非小細胞肺癌(鱗狀細胞、非鱗狀細胞、腺癌或大細胞未分化癌)、大腸直腸癌(腺癌、胃腸類癌腫瘤、胃腸基質腫瘤、原發性大腸直腸淋巴瘤、平滑肌肉瘤或鱗狀細胞癌)或乳癌(例如三陰性乳癌(TNBC))
合適的醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑及賦形劑為熟知的且可作為臨床表現憑證由熟習此項技術者測定。合適載劑、稀釋劑及/或賦形劑之實例包括：(1)杜氏磷酸鹽緩衝生理食鹽水，約pH 7.4，含有或不含約1 mg/mL-25 mg/mL人類血清白蛋白，(2) 0.9%生理食鹽水(0.9% w/v NaCl)，及(3) 5% (w/v)右旋糖；且亦可含有諸如色胺之抗氧化劑及諸如Tween 20之穩定劑。 例證實例 1. 合成化合物 18 及化合物 19
Figure 02_image1273
化合物1 (1 g，3.40 mmol)溶解於二甲基甲醯胺(22.65 ml)中。添加1,5-二碘戊烷(3.66 ml，23.78 mmol)及碳酸鉀(1.174 g，8.49 mmol)。該反應避光且在室溫下攪拌隔夜。該反應用二氯甲烷稀釋且用氯化銨水溶液及鹽水洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且在真空中濃縮。粗材料藉由乙酸乙酯/二氯甲烷中之矽膠層析純化以生成化合物2 (1.05 g，y=63%) MS (m/z): 491.1 (M + 1)+ 。UPLC =4.93 min (10 min方法)。
Figure 02_image1275
(S)-9-(苯甲氧基)-8-甲氧基-12a,13-二氫-6H-苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-a]吲哚-6-酮(4.3 g，11.19 mmol)在氮氣下溶解於無水1,2-二氯乙烷(102 ml)中且添加三乙醯氧基硼氫化鈉(7.11 g，33.6 mmol)。該反應在室溫下攪拌持續4小時。該混合物冷卻至0℃且用飽和氯化銨淬滅且接著用二氯甲烷萃取。經組合之有機物用鹽水洗滌，經無水硫酸鎂乾燥，過濾且濃縮。粗化合物4無需進一步純化繼續使用，假定100%產率。MS (m/z): 387.2 (M + 1)+ 。UPLC = 1.65 min (2.5 min方法)。 (UPLC 2.5 min方法)分析型BEH Phenyl HPLC方法： 管柱：                Acquity UPLC BEH- C18 2.1 × 50 mm，1.7 µm粒徑， P/N 186002350，SN 02743604615173 流動速率：        0.8 mL/min 溫度：                環境 移動相A：        去離子水+ 0.1%甲酸 移動相B：        乙腈 梯度：                時間            % B 0                  5 1.8               98 2                  98 2.1               5 2.5               5
Figure 02_image1277
在室溫下向化合物4 (4.32 g，11.19 mmol)之溶液中添加胡尼西氏鹼(2.339 ml，13.43 mmol)，隨後添加氯甲酸4-硝基苯酯(2.58 g，12.31 mmol)於二氯甲烷中之溶液。4小時之後，該反應用水淬滅，且分離各層。有機層用水、飽和碳酸氫鈉及鹽水洗滌。其經硫酸鎂乾燥，過濾且經汽提。粗固體藉由乙酸乙酯/己烷中之矽膠層析純化以生成呈淡黃色蓬鬆固體狀之化合物5 (4.4 g，y=71%) MS (m/z): 552.5 (M + 1)+ 。UPLC =1.87min (2.5 min方法)。
Figure 02_image1279
化合物6 (3.0 g，11.94 mmol)及化合物7 (1.907 g，13.13 mmol)溶解於二甲基甲醯胺(23.88 mL)中。EDC·HCl (2.52 g，13.13 mmol)及HOBt (2.011 g，13.13 mmol)添加至反應混合物中，隨後添加DIEA (4.59 ml，26.3 mmol)。該反應在室溫下在Ar下攪拌隔夜。反應混合物用二氯甲烷稀釋且用飽和碳酸氫鈉、飽和氯化銨、水及鹽水洗滌。有機層經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮。粗殘餘物藉由矽膠急驟層析(乙酸乙酯/己烷)純化以獲得呈白色固體狀之化合物8 (3.68 g，81%產率)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ): δ 7.39-7.29 (m, 5H), 6.29 (bd, 1H,J = 6.9 Hz), 5.34 (bd, 1H,J = 8.4 Hz), 5.11 (s, 2H), 4.45 (p, 1H,J = 7.2 Hz), 4.02-3.98 (m, 1H), 2.18-2.09 (m, 1H), 1.56 (s, 9H), 1.37 (d, 3H,J = 7.0 Hz), 0.98 (d, 3H,J = 6.8 Hz), 0.93 (d, 3H,J = 6.8 Hz)。LCMS = 5.571 min (8 min方法)。所觀察到之質量(ESI+ )：323.25 (M-t Bu+H)。
Figure 02_image1281
化合物8 (3.68 g，9.72 mmol)溶解於甲醇(30.9 mL)及水(1.543 mL)中。該溶液用Ar淨化且經脫氣持續5分鐘。Pd/C (10%，濕，0.517 g)緩慢地添加至反應混合物中。H2 接著鼓泡持續一分鐘。停止鼓泡且該反應接著在H2 氣球下攪拌隔夜。反應混合物經由矽藻土過濾且濾餅用甲醇(30 mL)洗滌且經濃縮以獲得呈白色固體狀之化合物9 (2.35 g，99%產率)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ): δ 7.79-7.77 (m, 1H), 4.50 (p, 1H,J = 7.3 Hz), 3.27 (d, 1H,J = 3.9 Hz), 2.34-2.26 (m, 1H), 1.49 (s, 9H), 1.40 (d, 3H,J = 7.1 Hz), 1.01 (d, 3H,J = 7.0 Hz), 0.86 (d, 3H,J = 6.9 Hz)。
Figure 02_image1283
化合物9 (2.35 g，9.62 mmol)及己二酸單甲酯(1.69 g，10.58 mmol)溶解於二甲基甲醯胺(32.1 mL)中。EDC·HCl (1.94 g，10.10 mmol)及HOBt (1.47 g，9.62 mmol)添加至反應混合物中，隨後添加DIEA (3.36 ml，19.24 mmol)。該反應在室溫下攪拌隔夜。反應混合物用二氯甲烷/甲醇(20 mL，5:1)稀釋且用飽和氯化銨、飽和碳酸氫鈉、水及鹽水洗滌。有機層經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮。粗產物藉由矽膠急驟層析(乙酸乙酯/己烷，梯度0%至50%)純化以獲得呈白色固體狀之化合物11 (2.77 g，75%產率)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ): δ 6.29 (d, 1H,J = 7.2 Hz), 6.12 (d, 1H,J = 8.6 Hz), 4.43(p, 1H,J = 7.2 Hz), 4.27 (dd, 1H,J = 6.4, 8.6 Hz), 3.66 (s, 3H), 2.35-2.31 (m, 2H), 2.26-2.23 (m, 2H), 2.12-2.03 (m, 1H), 1.70-1.63 (m, 4H), 1.46 (s, 9H), 1.36 (d, 3H,J = 7.1 Hz), 0.95 (表觀t, 6H,J = 6.6 Hz)。
Figure 02_image1285
TFA (8.28 ml，108.0 mmol)及水(0.56 mL)在室溫下添加至純化合物11 (2.77 g，7.17 mmol)中且經攪拌持續2.5 h。乙腈(30 mL)添加至反應混合物中且經濃縮。此再重複2次以獲得呈淡黃色固體狀之化合物12 (2.0 g，84%產率)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ): δ 8.11 (bs, 1H), 7.29 (d, 1H,J = 8.9 Hz), 7.14 (d, 1H, 6.8 Hz), 4.58 (p, 1H,J = 7.1 Hz), 4.37 (t, 1H,J = 8.7 Hz), 3.68 (s, 3H), 2.37-2.32 (m, 4H), 2.03-1.99 (m, 2H), 1.69-1.63 (m, 4H), 1.49 (d, 3H,J = 7.2 Hz), 0.97 (d, 3H,J = 4.8 Hz), 0.96 (d, 3H,J = 4.8 Hz)。
Figure 02_image1287
(6-甲氧基-6-側氧基己醯基)-L-纈胺醯基-L-丙胺酸(4.93 g，14.92 mmol)懸浮於無水二氯甲烷(49.7 ml)及無水甲醇(24.87 ml)中。相繼添加EEDQ (6.64 g，26.9 mmol)及(4-胺基苯基)甲醇(2.205 g，17.91 mmol)且該反應在室溫下攪拌隔夜。反應混合物經濃縮且用二氯甲烷共蒸發。粗材料藉由二氯甲烷/甲醇中之矽膠層析純化以生成化合物13 (2.04 g，y=31%) MS (m/z): 434.3 (M - 1)- 。UPLC =1.23min (2.5 min方法)。
Figure 02_image1289
在0C下向化合物13 (805 mg，1.848 mmol)於無水THF (3501 µl)及無水二甲基乙醯胺(7001 µl)中之溶液中添加雙(三甲基矽烷基)胺化鋰(1M於THF中) (1848 µl，1.848 mmol)。該反應經攪拌持續15分鐘，接著添加含化合物5 (850 mg，1.540 mmol)之無水THF (3501 µl)。反應混合物在0 C下攪拌且使其溫至室溫隔夜。該反應在0 C下用飽和氯化銨淬滅，使得形成沉澱物。該溶液用二氯甲烷萃取。經組合之有機物用水洗滌(2次)。有機物經硫酸鎂乾燥，過濾且濃縮。其藉由矽膠層析(二氯甲烷/甲醇)純化以生成化合物14 (430 mg，y=33%)。MS (m/z): 848.7 (M + 1)+ 。UPLC =1.74 min (2.5 min方法)。
Figure 02_image1291
向經氬氣脫氣之化合物14 (0.38 g，0.448 mmol)於無水甲醇(6.40 ml)中之溶液中添加鈀/碳10% (0.048 g)。該溶液再次經脫氣且接著在氫氣氛圍下在室溫下攪拌且藉由UPLC監測直至完全。1小時30分鐘之後，反應混合物經由矽藻土過濾，用二氯甲烷/甲醇沖洗。粗固體藉由二氯甲烷/甲醇中之矽膠層析純化且收集純部分以生成化合物15 (263 mg，y=77%)。MS (m/z): 758.6 (M + 1)+ 。UPLC =1.52 min (2.5 min方法)。
Figure 02_image1293
化合物15 (414 mg，0.0546 mmol)及化合物2 (321 mg，0.656 mmol)溶解於無水二甲基乙醯胺(5463 µl)中。添加碳酸鉀(151 mg，1.093 mmol)且該反應在室溫下在氮氣下攪拌隔夜。該反應用水沉澱，經攪拌持續五分鐘且過濾。所得固體溶解於20%甲醇/二氯甲烷中，轉移至分液漏斗，用水洗滌，經無水硫酸鎂乾燥且在真空中濃縮且經由二氯甲烷/甲醇中之矽膠層析純化。純部分之蒸發生成化合物16 (329 mg，y= 54%)。MS (m/z): 1121.3 (M + 1)+ 。UPLC =1.88 min (2.5 min方法)。
Figure 02_image1295
化合物16 (0.329 g，0.294 mmol)溶解於無水四氫呋喃(11.01 ml)及去離子水(3.67 ml)中。添加氫氧化鋰(0.021 g，0.881 mmol)且該反應藉由UPLC監測直至完全轉化為所需產物。在室溫下攪拌持續1小時30分鐘之後，其用30%甲醇/二氯甲烷及去離子水稀釋，接著用0.5 M HCl緩慢地酸化至pH約為3。經酸化水層用30%甲醇/二氯甲烷萃取兩次。經組合之有機物用水洗滌至pH=5，經硫酸鎂乾燥，經矽藻土過濾，濃縮且用二氯甲烷共蒸發以生成呈黃色固體狀之化合物17，其無需進一步純化即使用。(290 mg，y= 89%)。MS (m/z): 1107.2 (M + 1)+ 。UPLC =1.78 min (2.5 min方法)。
Figure 02_image1297
化合物17 (0.29 g，0.262 mmol)懸浮於無水二氯甲烷(6.55 ml)中。添加N-羥基丁二醯亞胺(0.091 g，0.786 mmol)及EDC.HCl (0.251 g，1.311 mmol)且起始材料變得可溶。該反應在室溫下攪拌持續1小時且完成。該反應用二氯甲烷稀釋且用水洗滌。有機物經硫酸鎂乾燥，過濾且經汽提以生成310 mg粗材料，該粗材料藉由RP-HPLC (C18 Kromasil，去離子水/乙腈)純化。含有所需材料之部分經冷凍且凍乾以生成純的最終化合物18 (140 mg，y=56%*基於經純化之量之回收)。MS (m/z): 1204.4 (M + 1)+ 。UPLC =1.86 min (2.5 min方法)。
Figure 02_image1299
化合物18 (96.6 mg，0.080 mmol)溶解於無水二氯甲烷(3211 µl)中。添加1-(2-胺基乙基)-1H-吡咯-2,5-二酮鹽酸鹽(18.29 mg，0.096 mmol)，隨後添加無水DIPEA (28.0 µl，0.161 mmol)。該反應藉由UPLC監測且在1小時30分鐘之後濃縮至乾。粗固體再溶解於乙腈/去離子水及數滴甲酸中且藉由RP-HPLC (C18 Kromasil，去離子水/乙腈)純化。含有所需材料之部分經冷凍且凍乾以生成純的最終化合物19 (54 mg，y=55%)。MS (m/z): 1229.4 (M + 1)+ 。UPLC =1.78 min (2.5 min方法)。實例 2. 合成化合物 23
Figure 02_image1301
化合物1 (0.173 g，0.588 mmol)溶解於二甲基甲醯胺(3.92 ml)中且添加2,6-雙(溴甲基)吡啶(1.090 g，4.11 mmol)及碳酸鉀(0.203 g，1.470 mmol)。該反應經攪拌持續4小時30分鐘，此時化合物1經消耗。該反應用乙酸乙酯稀釋且用飽和氯化銨、水及鹽水洗滌。粗材料溶解於二氯甲烷中且藉由矽膠層析(二氯甲烷/乙酸乙酯)純化。純部分經組合以生成化合物20 (193 mg，y= 68%)。MS (m/z): 478.3 (M + 1)+ 。UPLC =1.6 min (2.5 min方法)。
Figure 02_image1303
化合物15 (86 mg，0.113 mmol)及化合物20 (65.1 mg，0.136 mmol)溶解於無水二甲基乙醯胺(1135 µl)中。添加碳酸鉀(31.4 mg，0.227 mmol)且該反應在室溫下攪拌隔夜。該反應用水沉澱，經攪拌持續5分鐘，且過濾。所得固體溶解於20%甲醇/二氯甲烷中，轉移至分液漏斗，用水洗滌，經無水硫酸鎂乾燥且濃縮。粗材料經由矽膠管柱層析(二氯甲烷/甲醇)純化以生成化合物21 (96 mg，y=73%)。MS (m/z): 1156.2 (M + 1)+ 。UPLC =1.84 (2.5 min方法)。
Figure 02_image1305
化合物22與化合物17相似地經製備。粗材料無需進一步純化即使用以生成(94 mg，y=99%)。MS (m/z): 1142.2 (M + 1)+ 。UPLC =1.76 (2.5 min方法)。
Figure 02_image1307
Figure 02_image1309
化合物23與化合物18相似地經製備。粗材料經由RPHPLC (C18管柱，乙腈/水)純化以生成最終化合物23 (41 mg，y=40%)。MS (m/z): 1239.3 (M + 1)+ 。UPLC =1.82 min (2.5 min方法)。實例 3. 合成化合物 25 及 26
Figure 02_image1311
化合物18 (49 mg，0.041 mmol)溶解於無水二氯甲烷(1629 µl)中。在室溫下添加1-胺基-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧雜二十七烷-27-酸(19.78 mg，0.045 mmol)及DIPEA (10.64 µl，0.061 mmol)。該反應經攪拌持續1小時30分鐘且接著濃縮至乾。粗殘餘物藉由二氯甲烷/甲醇中之矽膠層析純化。收集純部分且用二氯甲烷共蒸發以生成呈蓬鬆白色固體狀之化合物24 (39 mg，y=63%)。UPLC =1.60 min (2.5 min方法)。
Figure 02_image1313
化合物25與化合物18相似地經製備。粗材料直接地用於下一反應或經由RPHPLC (C18管柱，乙腈/水)純化以生成最終純化合物25 (10 mg，y=49%)。MS (m/z): 1627.2 (M + 1)+ 。UPLC =1.66 min (2.5 min方法)。
Figure 02_image1315
化合物26與化合物19相似地經製備。粗材料經由RPHPLC (C18管柱，乙腈/水)純化以生成最終純化合物26 (12 mg，y=48%)。MS (m/z): 1652.2 (M + 1)+ 。UPLC =1.60 min (2.5 min方法)。實例 4. 合成化合物 36 及化合物 37
Figure 02_image1317
(第三丁氧羰基)-L-纈胺酸(10.58 g，48.7 mmol)溶解於二氯甲烷(97 ml)中。在室溫下分成數份添加CDI (9.48 g，58.4 mmol)。該混合物在室溫下在氬氣下攪拌持續2.5小時且該反應已變成黃色。添加L-丙胺酸甲酯鹽酸鹽(7.00 g，50.2 mmol)且該混合物變成淡黃色。其繼續在氬氣下攪拌隔夜。該混合物用二氯甲烷稀釋，用1 M HCl水溶液(2次)、飽和碳酸氫鈉水溶液及鹽水洗滌。有機物經無水硫酸鎂乾燥，過濾且濃縮以生成呈白色固體狀之化合物29，其無需進一步純化作為粗物質使用(12.85 g，y=87%)。
Figure 02_image1319
化合物29 (12.85 g，42.5 mmol)溶解於甲醇(42.5 ml)中且冷卻至0C。1 M氫氧化鈉(47.8 ml，47.8 mmol)添加至反應中且該反應藉由使用溴甲酚綠染色之TLC監測。2.5小時之後，添加水以使渾濁溶液澄清。該溶液接著在冰浴中用1M HCl酸化至pH約為3-4，使得形成沉澱物。其自冰浴中移出且用乙酸乙酯萃取三次，用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且經汽提以生成白色黏性固體。粗材料置於高真空下且無需進一步純化即使用以生成化合物30 (12.05 g，y=98%)。
Figure 02_image1321
化合物30 (12.05 g，41.8 mmol)懸浮於無水二氯甲烷(139 ml)及甲醇(69.7 ml)中。相繼添加EEDQ (18.60 g，75 mmol)及(4-胺基苯基)甲醇(6.18 g，50.1 mmol)且該反應在室溫下在氬氣下攪拌隔夜。反應混合物經濃縮且用二氯甲烷共蒸發。固體用乙酸乙酯濕磨且接著藉由矽膠層析(二氯甲烷/甲醇)純化以生成化合物31 (5.45 g，y= 33%)。
Figure 02_image1323
化合物31及化合物5與化合物14之形成相似地發生反應。材料藉由矽膠層析(二氯甲烷/甲醇)純化以生成化合物32 (507 mg，y=54%)。MS (m/z): 806.5 (M + 1)+ 及804.5 (M - 1)- 。UPLC =1.86 min (2.5 min方法)。
Figure 02_image1325
化合物33與化合物15相似地經製備。粗材料藉由矽膠層析純化以生成(213 mg，y=47%)。MS (m/z): 716.6 (M + 1)+ 及714.5 (M - 1)- 。UPLC =1.61 min (2.5 min方法)。
Figure 02_image1327
化合物2及化合物33與化合物16之製備相似地發生反應。粗材料藉由矽膠層析(二氯甲烷/甲醇)純化以生成化合物34 (140 mg，y=94%)。MS (m/z): 1078.7 (M + 1)+ 。UPLC =1.84 min (2.5 min方法)。
Figure 02_image1329
化合物34 (70 mg，0.065 mmol)溶解於無水二氯甲烷(600 µl)中且在冰浴中冷卻至0C。添加無水二氯甲烷(600 µl)及TFA (601 µl)之新鮮混合溶液且該溶液變成亮黃色。該反應藉由UPLC監測且在氬氣下在0C下攪拌持續50分鐘，直至起始材料之完全消耗。其用二氯甲烷稀釋且傾入冰/飽和碳酸氫鈉溶液中。經分離之有機物用鹽水洗滌，經硫酸鎂乾燥，過濾且經汽提以生成呈淡黃色固體狀之化合物35 (55 mg，y=87%)，該化合物無需進一步純化直接地加以使用。MS (m/z): 978.7 (M + 1)+ 。UPLC =1.44 min (2.5 min方法)。
Figure 02_image1331
化合物35 (55 mg，0.056 mmol)及1-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-3-側氧基-7,10,13,16,19,22,25,28-八氧雜-4-氮雜三十一烷-31-酸(33.3 mg，0.056 mmol)溶解於無水二氯甲烷(3514 µl)中。添加EDC (10.78 mg，0.056 mmol)且該反應經脫氣三次且在室溫下在氬氣下攪拌。其藉由UPLC監測且1小時之後，該反應用二氯甲烷稀釋且用水及鹽水洗滌。有機物經硫酸鎂乾燥，過濾且經汽提以生成65 mg粗物質。粗材料經由RPHPLC (C18管柱，乙腈/水)純化以生成最終純化合物36 (48 mg，y=55%)。MS (m/z): 1553.7 (M + 1)+ 。UPLC =1.63 min (2.5 min方法)。
Figure 02_image1333
4,7,10,13,16,19,22,25,28-九氧雜三十一烷二酸雙(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)酯(34.8 mg，0.049 mmol)溶解於無水二甲基甲醯胺(981 µl)中且直接地添加至化合物35 (48 mg，0.049 mmol)中。添加三乙胺(10.26 µl，0.074 mmol)且接著使該反應脫氣且在室溫下在氬氣下攪拌。再添加40 µl三乙胺且該反應加熱至35C持續2.5小時且接著在室溫下攪拌隔夜。該反應用水及二氯甲烷稀釋。水溶液含有所有所需產物。添加乙腈至經分離之水溶液中，冷凍且凍乾。將粗凍乾材料溶解於二甲基乙醯胺中且經由RPHPLC (水/乙腈)純化。冷凍且凍乾純部分以生成化合物37 (8 mg，y=10%)。MS (m/z): 1572.4 (M + 1)+ 。UPLC =1.70 min (2.5 min方法)。實例 5. 合成化合物 46 及化合物 47
Figure 02_image1335
向苯胺38 (339 mg，1.1 mmol)於無水四氫呋喃(4.0 mL)中之經攪拌溶液中添加Boc酐(272 mg，1.2 mmol)。該混合物繼續在室溫下攪拌持續三天。反應混合物在減壓下濃縮且殘餘物藉由矽膠層析(二氯甲烷/甲醇)純化以生成呈無色油狀物之化合物39 (405 mg，y = 90%)。1 H NMR (400 Hz, CDCl3 ): δ 7.00 (s, 2H), 6.97 (s, 1H), 4.38 (s, 4H), 4.12 (s, 2h), 3.64 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.48-3.44 (m, 8H), 3.40-3.38 (m, 2H), 3.21 (s, 3H), 1.31 (s, 9H)；13 C NMR (400 Hz, CDCl3 ): δ 154.65, 142.3, 142.1, 124.1, 122.7, 80.2, 71.6, 70.3, 70.1, 69.9, 68.5, 63.9, 58.65, 49.4, 28.1。
Figure 02_image1337
化合物39 (3 g，7.51 mmol)溶解於無水二氯甲烷(75 ml)中且在丙酮/乾冰浴中冷卻至-5℃。添加三乙胺(5.23 ml，37.5 mmol)，隨後添加甲烷磺酸酐(3.27 g，18.77 mmol)且所得混合物在-5℃下攪拌持續兩小時。該反應用冷乙酸乙酯稀釋且用冰水洗滌兩次。濾液經無水硫酸鎂乾燥，過濾且在真空中濃縮以生成化合物40 (3.58 g，y=86%產率)。粗材料置於高真空下且接著無需進一步純化直接地加以使用。MS (m/z): 556.2 (M + 1)+ 。UPLC =1.48 min (2.5 min方法)。
Figure 02_image1339
化合物40 (3.58 g，6.44 mmol)溶解於二甲基甲醯胺(32.2 ml)中。添加溴化鈉(3.31 g，32.2 mmol)且該反應在室溫下攪拌隔夜以藉由UPLC發現生成一個新的峰。用水稀釋反應混合物且用乙酸乙酯萃取。用水洗滌有機物且經無水硫酸鎂乾燥，過濾且經汽提以生成化合物41 (3.01 g，y=89%)，其無需進一步純化繼續使用。UPLC =1.79 min (2.5 min方法)。
Figure 02_image1341
化合物1 (0.241 g，0.819 mmol)及化合物41 (3.01 g，5.73 mmol)溶解於二甲基甲醯胺(5.46 ml)中。添加碳酸鉀(0.283 g，2.047 mmol)且該反應在室溫下攪拌持續2.5小時，直至化合物1之完全消耗。該反應用乙酸乙酯稀釋且用飽和氯化銨、水及鹽水洗滌。粗材料溶解於二氯甲烷中且藉由矽膠層析(二氯甲烷/乙酸乙酯)純化。收集純的單偶合材料以生成化合物42 (322 mg，y=53%)。MS (m/z): 738.3 (M + 1)+ 。UPLC =1.80 min (2.5 min方法)。
Figure 02_image1343
化合物42 (94 mg，0.127 mmol)及化合物15 (88 mg，0.116 mmol)溶解於無水二甲基乙醯胺(1157 µl)中。添加碳酸鉀(32.0 mg，0.231 mmol)且該反應在室溫下攪拌隔夜。該反應用水沉澱，經攪拌持續5分鐘且過濾。所得固體溶解於具有少量甲醇之二氯甲烷中，經無水硫酸鎂乾燥，過濾，且在真空中濃縮。粗材料經由矽膠管柱(二氯甲烷/甲醇)純化以生成呈蓬鬆固體狀之化合物43 (110 mg，y=67%)。MS (m/z): 1416.2 (M + 1)+ 。UPLC =1.84 min (2.5 min方法)。
Figure 02_image1345
化合物43 (110 mg，0.078 mmol)溶解於無水二氯甲烷(700 µl)中且在冰浴中冷卻至0C。添加無水二氯甲烷(700 µl)及TFA (719 µl)之新鮮混合溶液。該反應在0C下攪拌持續45分鐘。其用二氯甲烷稀釋反應，傾入冰/飽和碳酸氫鈉溶液中，且接著經分離之有機物用鹽水洗滌，經硫酸鎂乾燥，過濾且經汽提。粗物質藉由二氯甲烷/甲醇中之矽膠層析純化以生成化合物44 (84 mg，y=82%)。MS (m/z): 1316.2 (M + 1)+ 。UPLC =1.72 min (2.5 min方法)。
Figure 02_image1347
化合物44 (84 mg，0.064 mmol)溶解於無水四氫呋喃(2395 µl)及去離子水(798 µl)中。添加氫氧化鋰(4.59 mg，0.192 mmol)且該反應在室溫下攪拌持續1小時。其用30%甲醇/二氯甲烷及去離子水稀釋，接著用0.5 M HCl緩慢地酸化至pH約為3。水溶液用30%甲醇/二氯甲烷再萃取兩次。經組合之有機物用水洗滌至pH=5，經硫酸鎂乾燥，經矽藻土過濾，濃縮且用二氯甲烷共蒸發以獲得89 mg粗化合物45。假定100%用於下一反應質量。MS (m/z): 1302.4 (M + 1)+ 。UPLC = 1.64 min (2.5 min方法)。
Figure 02_image1349
化合物45 (83 mg，0.064 mmol)溶解於無水二氯甲烷(1594 µl)中。添加N-羥基丁二醯亞胺(22.02 mg，0.191 mmol)及EDC.HCl (61.1 mg，0.319 mmol)且該反應在氬氣下攪拌持續50分鐘。其用二氯甲烷稀釋且用水洗滌。有機物經硫酸鎂乾燥，過濾且經汽提。粗固體直接地用於下一反應或藉由RP-HPLC (C18 Kromasil，乙腈/去離子水)純化。純部分經冷凍且凍乾以生成化合物46 (51 mg，y=57%)。MS (m/z): 1399.3 (M + 1)+ 。UPLC=1.70 min (2.5 min方法)。
Figure 02_image1351
化合物46 (53.7 mg，0.038 mmol)溶解於無水二氯甲烷(1536 µl)中。添加1-(2-胺基乙基)-1H-吡咯-2,5-二酮鹽酸鹽(8.02 mg，0.042 mmol)，隨後添加無水N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(13.38 µl，0.077 mmol)。該反應藉由UPLC監測且1.5小時之後濃縮至乾。粗固體溶解於乙腈/去離子水/四氫呋喃及數滴甲酸中且藉由RP-HPLC (C18，水/乙腈)純化。純部分經組合且經冷凍且凍乾以生成純化合物47 (20.4 mg，37%)。MS (m/z): 1424.7 (M + 1)+ 。UPLC=1.65 min (2.5 min方法)。實例 6. 合成化合物 55 及化合物 56
Figure 02_image1353
向(6-甲氧基-6-側氧基己醯基)-L-白胺醯基-L-麩醯胺(0.83 g，2.067 mmol)及(4-胺基苯基)甲醇(0.306 g，2.481 mmol)於無水二氯甲烷(9.19 ml)及無水甲醇(4.59 ml)中之溶液(亮黃色溶液)中添加EEDQ (1.023 g，4.13 mmol)且反應混合物在環境溫度下在氮氣下攪拌持續18小時。反應混合物經濃縮且所得殘餘物用乙酸乙酯濕磨。灰白色固體經過濾，用乙酸乙酯洗滌且乾燥以生成呈白色固體狀之6-(((S)-1-(((S)-5-胺基-1-((4-(羥基甲基)苯基)胺基)-1,5-二側氧基戊-2-基)胺基)-4-甲基-1-側氧基戊-2-基)胺基)-6-側氧基己酸甲酯(0.5 g，y = 48%)。MS (m/z): 508.05 (M + 1)+ 。LC = 3.72 min
Figure 02_image1355
在0℃下向6-(((S)-1-(((S)-5-胺基-1-((4-(羥基甲基)苯基)胺基)-1,5-二側氧基戊-2-基)胺基)-4-甲基-1-側氧基戊-2-基)胺基)-6-側氧基己酸甲酯(450 mg，0.888 mmol)於無水四氫呋喃(1.68 ml)及無水N,N-二甲基乙醯胺(3.36 ml)中之溶液中添加雙(三甲基矽烷基)胺化鋰(1M於四氫呋喃中，0.888 ml，0.888 mmol)。澄清黃色反應經攪拌持續15分鐘，接著添加含化合物5 (408 mg，0.740 mmol)之無水四氫呋喃(1.68 ml)。反應混合物在0℃下攪拌且經18小時使其溫至室溫。該混合物在0℃下用飽和氯化銨水溶液淬滅反應且用二氯甲烷(3 × 50 mL)萃取。經組合之有機層用水(2× 50 mL)洗滌且接著經無水硫酸鎂乾燥，過濾且濃縮。粗材料藉由ISCO (24 g矽石管柱，甲醇/二氯甲烷)純化以生成呈白色固體狀之化合物50 (95 mg，14%產率)。MS (m/z): 919.8 (M + 1)+ 。UPLC = 5.54 min (10 min方法)。
Figure 02_image1357
使(S)-9-(苯甲氧基)-8-甲氧基-6-側氧基-12a,13-二氫-6H-苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-a]吲哚-11(12H)-甲酸4-((S)-5-胺基-2-((S)-2-(6-甲氧基-6-側氧基己醯胺基)-4-甲基戊醯胺基)-5-側氧基戊醯胺基)苯甲酯(91 mg，0.099 mmol)於無水甲醇(1.5 ml)中之溶液脫氣且添加鈀/碳10% (10.54 mg，0.099 mmol)。該混合物在氫氣球(1 atm)下在室溫下攪拌持續四小時，之後其經由矽藻土過濾，用甲醇沖洗。蒸發濾液以獲得呈白色固體狀之DP (83 mg，100%)。MS (m/z): 829.6 (M + 1)+ 827.5 (M - 1)- UPLC = 4.25 min (10 min方法)。
Figure 02_image1359
化合物42 (215 mg，0.291 mmol)及化合物51 (201 mg，0.242 mmol)溶解於無水二甲基乙醯胺(2425 µl)中。添加碳酸鉀(67.0 mg，0.485 mmol)且該反應在室溫下攪拌隔夜。該反應用水沉澱，經攪拌持續5分鐘且過濾。所得黃色固體溶解於二氯甲烷/5%甲醇中且用水洗滌。有機物經無水硫酸鎂乾燥，過濾且經汽提。材料藉由矽膠層析(二氯甲烷/甲醇)純化以生成所需產物化合物52 (323 mg，y=64%)。MS (m/z): 1487.6 (M + 1)+ 。UPLC = 1.77 min (2.5 min方法)。
Figure 02_image1361
化合物53與化合物44相似地經製備。粗產物藉由矽膠層析(二氯甲烷/甲醇)純化。MS (m/z): 1387.7 (M + 1)+ 。UPLC =1.8 (2.5 min方法)。
Figure 02_image1363
化合物54與化合物45相似地經製備。粗產物藉由矽膠層析(二氯甲烷/甲醇)純化(117 mg，y = 45.5%)。MS (m/z): 1373.9 (M + 1)+ 。UPLC =1.71 (2.5 min方法)。
Figure 02_image1365
化合物55與化合物46相似地經製備。粗產物直接地用於下一反應或藉由RPHPLC (水/乙腈)純化(34.5 mg，y = 49%)。MS (m/z): 1470.8 (M + 1)+ 。UPLC =1.74 (2.5 min方法)。
Figure 02_image1367
化合物56與化合物47相似地經製備。粗產物藉由RPHPLC (水/乙腈)純化(26 mg，y = 47%)。MS (m/z): 1495.9 (M + 1)+ 。UPLC =1.71 (2.5 min方法)。實例 7. 合成化合物 65
Figure 02_image1369
氫氧化鈉(2.065 g，51.6 mmol)添加至苯-1,3,5-三甲酸三甲酯(6.2 g，24.58 mmol)於甲醇(82 ml)及水(16.39 ml)中之經攪拌溶液中。反應混合物在氬氣下回流(85℃油浴)持續3小時且形成白色沉澱物。該反應冷卻至室溫且用水稀釋，直至所有固體均溶解。該溶液用5N HCl水溶液酸化至pH約為2-3。在真空中移除甲醇且所得水溶液用乙酸乙酯萃取三次。經組合之有機物經硫酸鈉乾燥，過濾且經汽提。白色產物溶解於熱乙酸乙酯中且接著使其冷卻。該溶液經過濾(沉澱物為副產物)且蒸發濾液以生成所需化合物58 (4.34 g，y=79%)。MS (m/z): 225.0 (M + 1)+ 及224.0 (M - 1)- 。UPLC =1.07 min (2.5 min方法)。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ): δ 13.62 (bs, 2H), 8.65 (s, 3H), 3.93 (s, 3H)。
Figure 02_image1371
化合物58 (1.94 g，8.65 mmol)溶解於THF (34.6 ml)中且冷卻至0℃。在氬氣下緩慢地添加BH3.DMS (2M於THF中，17.31 ml，34.6 mmol)，引起劇烈鼓泡。該反應溫至室溫且攪拌隔夜。其用甲醇緩慢地淬滅直至氣泡形成之強度減輕且接著添加水，直至氣體逸出停止且所有固體均已溶解。該溶液用乙酸乙酯萃取兩次。經組合之有機物依序用75 ml約3% H2 O2 溶液、150 ml 0.5M檸檬酸水溶液及鹽水洗滌。有機物經乾燥，濃縮且藉由矽膠層析(己烷/乙酸乙酯)純化以生成化合物59 (0.82 g，y=32%)。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ): δ 7.81 (s, 2H), 7.52 (s, 1H), 5.33 (bs, 2H), 4.56 (s, 4H), 3.86 (s, 3H)。
Figure 02_image1373
化合物59 (0.82 g，4.18 mmol)溶解於無水二氯甲烷(41.8 ml)中且在丙酮/冰浴中冷卻至-5℃。添加三乙胺(2.91 ml，20.90 mmol)，隨後添加甲烷磺酸酐(1.820 g，10.45 mmol)且所得混合物在-5℃下攪拌持續1.5小時。其用冷乙酸乙酯及水稀釋且再用乙酸乙酯萃取兩次。經組合之有機物用水洗滌，經無水硫酸鎂乾燥，過濾且在真空中濃縮(＜25 C)以生成化合物60 (1.12 g，y=76 %)，其直接地用於下一反應中。
Figure 02_image1375
化合物60 (1.12 g，3.18 mmol)溶解於無水二甲基甲醯胺(15.89 ml)中且添加溴化鈉(1.635 g，15.89 mmol)。該反應在室溫下攪拌隔夜。其用水稀釋且用乙酸乙酯萃取。有機物用水洗滌且經無水硫酸鎂乾燥，過濾且經汽提。粗材料置於高真空下直至乾燥以生成化合物61 (0.97 g，y=94%)，其無需進一步純化即使用。UPLC =1.66 min (2.5 min方法)。
Figure 02_image1377
化合物1 (0.126 g，0.429 mmol)及化合物61 (0.967 g，3.00 mmol)溶解於無水二甲基甲醯胺(4.29 ml)中且添加碳酸鉀(0.148 g，1.073 mmol)。1小時20分鐘之後，所有化合物1均已經消耗且該反應用乙酸乙酯稀釋且用飽和氯化銨、水及鹽水洗滌。有機物經硫酸鎂乾燥，過濾，且經汽提。純化合物62藉由矽膠層析經分離(133 mg，y=58%)。UPLC =1.71 min (2.5 min方法)。
Figure 02_image1379
化合物33 (63.6 mg，0.089 mmol)及化合物62 (63 mg，0.098 mmol)溶解於無水二甲基乙醯胺(888 µl)中。添加碳酸鉀(24.54 mg，0.178 mmol)且該反應在氬氣下攪拌隔夜。該反應用水沉澱，經攪拌持續5分鐘且過濾。所得白色固體溶解於二氯甲烷中，轉移至分液漏斗，用水洗滌，經無水硫酸鎂乾燥，過濾且經汽提。粗物質經由管柱純化以生成化合物63 (79 mg，y=76%)。MS (m/z): 1171.0 (M + 1)+ 。UPLC = 1.89 min (2.5 min方法)。
Figure 02_image1381
化合物64與化合物35相似地經製備。粗材料無需純化直接地加以使用(54 mg，y=75%)。MS (m/z): 1171.1 (M + 1)+ 。UPLC =1.51 min (2.5 min方法)。
Figure 02_image1383
化合物64 (54 mg，0.050 mmol)及1-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-3-側氧基-7,10,13,16-四氧雜-4-氮雜十九烷-19-酸(21.01 mg，0.050 mmol)溶解於無水二氯甲烷(3154 µl)中。添加EDC (9.67 mg，0.050 mmol)且該反應經脫氣且在室溫下在氬氣下攪拌。在1小時之時，該反應用二氯甲烷稀釋且用水及鹽水洗滌。有機物經硫酸鎂乾燥，過濾且經汽提。粗材料溶解於乙腈及四氫呋喃加上數滴甲酸中且藉由半製備型RP-HPLC (C18，水/乙腈)純化。純部分經冷凍且凍乾以提供化合物65 (29.5 mg，y=40%)。MS (m/z): 1469.6 (M + 1)+ 。UPLC =1.68 min (2.5 min方法)。實例 8. 合成化合物 73
Figure 02_image1385
向2-甲基-2-(甲基二硫基)丙醛(1 g，6.66 mmol)於無水甲醇(44.4 ml)中之溶液中添加硼氫化鈉(0.252 g，6.66 mmol)。該反應在室溫下攪拌90分鐘，此時其用鹽酸水溶液(0.5M)淬滅且用乙酸乙酯(100 ml)稀釋。添加飽和碳酸氫鈉水溶液直至pH約為10且接著用乙酸乙酯(2 × 50 ml)萃取。有機萃取物經組合，用鹽水洗滌，經無水硫酸鎂乾燥，過濾且濃縮。粗物質無需進一步純化繼續使用，假定100%產率。
Figure 02_image1387
在0℃下向2-甲基-2-(甲基二硫基)丙-1-醇(1.2 g，7.88 mmol)於無水二氯甲烷(52.5 ml)中之經冷卻溶液中添加甲烷磺酸鈉(4.65 g，39.4 mmol)及二溴(1.009 ml，19.70 mmol)。在環境溫度下攪拌持續90分鐘之後，反應混合物經由矽藻土過濾且用二氯甲烷沖洗。濾液經濃縮且藉由ISCO (40 g矽石管柱，乙酸乙酯/己烷)純化以生成甲烷硫代磺酸S-(1-羥基-2-甲基丙-2-基)酯(1.1 g，y= 76%)。1 H NMR (400 Hz, d6 -DMSO): δ 5.39 (t, J=5.6Hz, 1H), 3.54 (d, J=5.6Hz, 2H), 3.50 (s, 3H), 1.44 (s, 6H)
Figure 02_image1389
向甲烷硫代磺酸S-(1-羥基-2-甲基丙-2-基)酯(47 mg，0.255 mmol)及三光氣(26.5 mg，0.089 mmol)於無水二氯甲烷(1.27 ml)中之溶液中添加吡啶(19.60 µl，0.242 mmol)。該反應在環境溫度下攪拌持續四小時，之後其用二氯甲烷稀釋且用水洗滌。有機層經無水硫酸鎂乾燥，過濾且濃縮以獲得澄清無色油狀物。粗化合物69無需進一步純化繼續使用，假定100%產率。
Figure 02_image1391
向(S)-第三丁基(8-甲氧基-6-側氧基-11,12,12a,13-四氫-6H-苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-a]吲哚-9-基)碳酸酯(40 mg，0.101 mmol)及甲烷硫代磺酸S-(1-((氯羰基)氧基)-2-甲基丙-2-基)酯(62.2 mg，0.252 mmol)於無水1,2-二氯乙烷(1.00 ml)中之溶液中添加三乙胺(56.3 µl，0.404 mmol)。該混合物在環境溫度下攪拌持續30分鐘且接著用二氯甲烷稀釋。有機層用鹽水洗滌，乾燥且濃縮。粗材料藉由乙酸乙酯/己烷中之矽膠層析純化以獲得呈白色固體狀之化合物71 (50 mg，y = 82%)。MS (m/z): 607.6 (M + 1)+ 。UPLC = 1.81 min (2.5 min方法)。
Figure 02_image1393
向(S)-9-((第三丁氧羰基)氧基)-8-甲氧基-6-側氧基-12a,13-二氫-6H-苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-a]吲哚-11(12H)-甲酸2-甲基-2-((甲基磺醯基)硫基)丙酯(0.910 g，1.5 mmol)於無水二氯甲烷(15.00 ml)中之溶液中緩慢地添加三氟乙酸(1.733 ml，22.50 mmol)。使該混合物在環境溫度下攪拌持續五小時，之後其用二氯甲烷稀釋且用飽和碳酸氫鈉水溶液及鹽水洗滌。有機層經無水硫酸鎂乾燥，過濾且濃縮。粗材料藉由乙酸乙酯/二氯甲烷中之矽膠層析純化以獲得呈白色結晶固體狀之化合物72 (0.68 g，y =89%)。MS (m/z): 507.1 (M + 1)+ 505.1 (M - 1)- UPLC = 1.51 min (2.5 min方法)。
Figure 02_image1395
化合物62 (69.6 mg，0.130 mmol)及化合物72 (59 mg，0.108 mmol)溶解於無水二甲基乙醯胺(1083 µl)中。添加碳酸鉀(29.9 mg，0.217 mmol)且該反應在室溫下攪拌隔夜。該反應用水成漿且過濾。所得固體溶解於具有少量甲醇之二氯甲烷中，經無水硫酸鎂乾燥且濃縮以獲得0.114 mg呈粗黃色固體狀之化合物73 (70%純，y=76%)。藉由RP-HPLC (C18，去離子水/乙腈)獲得純材料。MS (m/z): 961.7 (M + 1)+ 。UPLC =1.85 min (2.5 min方法)。實例 9. 合成化合物 75
Figure 02_image1397
二甲基半胱胺HCl (500 mg，3.53 mmol)溶解於甲醇(11.765 mL)中。添加Aldrithiol (1166 mg，5.29 mmol)且攪拌黃色溶液隔夜。LCMS指示在0.394分鐘時形成產物。添加三乙胺(0.492 ml，3.53 mmol)且攪拌持續5分鐘且接著濃縮反應混合物。粗殘餘物藉由矽膠層析(二氯甲烷/甲醇)純化以生成呈灰白色黏性固體狀之化合物74 (700 mg，93%)。
Figure 02_image1399
化合物23 (10 mg，8.08 µmol)溶解於無水二氯甲烷(0.25 ml)中。相繼添加化合物74 (2.077 mg，9.69 µmol)及DIPEA (2.81 µl，0.016 mmol)。該反應經攪拌持續1小時且濃縮至乾。粗材料溶解於具有2滴甲酸之乙腈/H2O中且藉由RP-HPLC (C18，去離子水/乙腈)純化。所需部分經冷凍且凍乾以生成化合物75 (8 mg，y=74%)。MS (m/z): 1338.5 (M + 1)+ 。UPLC =1.88 min (2.5 min方法)。實例 10. 合成化合物 79
Figure 02_image1401
化合物1 (250 mg，0.807 mmol)溶解於無水二甲基甲醯胺(4035 µl)中。添加1,3-二碘丙烷(1399 µl，12.10 mmol)及碳酸鉀(335 mg，2.421 mmol)。該反應在室溫下攪拌隔夜。其用乙酸乙酯及水稀釋。有機物經分離且用水洗滌三次。其經乾燥，濃縮，且藉由矽膠層析(己烷/乙酸乙酯)純化以提供化合物76 (215 mg，57%)。
Figure 02_image1403
化合物15及76與化合物16相似地發生反應。粗材料藉由矽膠層析(二氯甲烷/甲醇)純化以生成化合物77 (54.3 mg，85%純，y=30%)。MS (m/z): 1093.0 (M + 1)+ 。UPLC =1.83 min (2.5 min方法)。
Figure 02_image1405
化合物78與化合物17相似地經製備。粗材料直接地用於下一反應中，假定100%產率。MS (m/z): 1078.8 (M + 1)+ 。UPLC =1.74 (2.5 min方法)。
Figure 02_image1407
化合物79與化合物18相似地經製備。粗材料經由RPHPLC (C18管柱，水/乙腈)純化以生成最終化合物79 (38 mg，y=65%)。MS (m/z): 1175.8 (M + 1)+ 。UPLC =1.80 min (2.5 min方法)。實例 11. 合成化合物 83
Figure 02_image1409
化合物1 (250 mg，0.807 mmol)溶解於無水二甲基甲醯胺(4035 µl)中。添加1,3-雙(溴甲基)苯(1704 mg，6.46 mmol)及碳酸鉀(335 mg，2.421 mmol)。該反應在室溫下攪拌隔夜。其用水崩解且過濾。固體藉由矽膠層析純化以移除過量起始材料且化合物80立即用於下一反應中。MS (m/z): 477.4 (M + 1)+ 。UPLC =1.77 (2.5 min方法)。
Figure 02_image1411
化合物80 (64.6 mg，0.135 mmol)溶解於無水二甲基乙醯胺(3260 µl)中。依序添加碳酸鉀(45.1 mg，0.326 mmol)及化合物15 (124 mg，0.163 mmol)且該反應在室溫下在氬氣下繼續進行至完成(12-15 h)。該反應用水沉澱且過濾。所收集之固體溶解於二氯甲烷中，轉移至分液漏斗，用水、鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥且在真空中濃縮。其經由矽膠層析(二氯甲烷/甲醇)純化以生成化合物81 (93.7 mg，y=50%)。MS (m/z): 1154.8 (M + 1)+ 。UPLC =1.92 (2.5 min方法)。
Figure 02_image1413
化合物82與化合物17 相似地經製備。粗材料無需進一步純化即使用。假定100%產率。MS (m/z): 1140.9(M + 1)+ 。UPLC =1.85 (2.5 min方法)。
Figure 02_image1415
化合物83與化合物18相似地經製備。粗材料經由RPHPLC (C18管柱，水/乙腈)純化以生成最終化合物83 (13.8 mg，y=14%)。MS (m/z): 1237.7 (M + 1)+ 。UPLC =1.92 min (2.5 min方法)。實例 12. 合成化合物 95
Figure 02_image1417
(S)-2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)丙酸(5 g，22.40 mmol)及2-胺基丙酸(S)-第三丁酯鹽酸鹽(4.48 g，24.64 mmol)溶解於無水N,N -二甲基甲醯胺(44.8 ml)中。添加3-(3-二甲基胺基丙基)-1-乙基-碳化二亞胺鹽酸鹽(4.72 g，24.64 mmol)、1-羥基苯并三唑水合物(3.43 g，22.40 mmol)及二異丙基乙胺(9.75 ml，56.0 mmol)。該反應在氬氣下在室溫下攪拌隔夜。反應混合物用二氯甲烷稀釋且接著用飽和氯化銨、飽和碳酸氫鈉、水及鹽水洗滌。有機物經硫酸鈉乾燥且濃縮。粗油狀物經由矽膠層析(己烷/乙酸乙酯)純化以生成化合物86 (6.7 g，y=85%)1 H NMR (400 Hz, CDCl3 ): δ 7.38-7.31 (m, 5H), 6.53-6.42 (m, 1H), 5.42-5.33 (m, 1H), 5.14 (s, 2H), 4.48-4.41 (m, 1H), 4.32-4.20 (m, 1H), 1.49 (s, 9H), 11.42 (d, J=6.8Hz, 3H), 1.38 (d, J=7.2Hz, 3H)。
Figure 02_image1419
化合物86 (6.7 g，19.12 mmol)溶解於甲醇(60.7 ml)及水(3.03 ml)中。該溶液用氬氣淨化持續五分鐘。緩慢地添加鈀/碳(濕，10%) (1.017 g，0.956 mmol)。該反應在氫氣氛圍下攪拌隔夜。該溶液經由矽藻土過濾，用甲醇沖洗且濃縮。其與甲醇及乙腈共沸且所得油狀物直接地置於高真空下以生成化合物87 (4.02 g，y=97%)，其直接地用於下一步驟中。1 H NMR (400 Hz, CDCl3 ): δ 7.78-7.63 (m, 1H), 4.49-4.42 (m, 1H), 3.55-3.50 (m, 1H), 1.73 (s, 2H), 1.48 (s, 9H), 1.39 (d, J=7.2Hz, 3H), 1.36 (d, J=6.8Hz, 3H)。
Figure 02_image1421
化合物87 (4.02 g，18.59 mmol)及己二酸單甲酯(3.03 ml，20.45 mmol)溶解於無水N,N -二甲基甲醯胺(62.0 ml)中。添加3-(3-二甲基胺基丙基)-1-乙基-碳化二亞胺鹽酸鹽(3.92 g，20.45 mmol)及1-羥基苯并三唑水合物( (2.85 g，18.59 mmol)及二異丙基乙胺(6.49 ml，37.2 mmol)。該混合物在室溫下攪拌隔夜。該反應用二氯甲烷/甲醇(150 mL，5:1)稀釋且用飽和氯化銨、飽和碳酸氫鈉及鹽水洗滌。其經硫酸鈉乾燥，過濾且經汽提。該化合物與乙腈共沸(5次)，接著在35℃下在高真空下經泵送以生成化合物88 (6.66 g，y=100%)。粗材料無需純化即帶入下一步驟。1 H NMR (400 Hz, CDCl3 ): δ 6.75 (d, J=6.8Hz, 1H), 6.44 (d, J=6.8Hz, 1H), 4.52-4.44 (m, 1H), 4.43-4.36 (m, 1H), 3.65 (s, 3H), 2.35-2.29 (m, 2H), 2.25-2.18 (m, 2H), 1.71-1.60 (m, 4H), 1.45 (s, 9H), 1.36 (t, J=6Hz, 12.8Hz, 6H)
Figure 02_image1423
化合物88 (5.91 g，16.5mmol)在室溫下在三氟乙酸(28.6 ml，372 mmol)及去離子水(1.5 ml)中經攪拌持續三小時。其與乙腈一起經旋轉蒸發且置於高真空下直至溶劑經移除以生成呈黏性固體狀之粗化合物89 (5.88 g y=105%)。1 H NMR (400 Hz, CDCl3 ): δ 7.21 (d, J=6.8Hz, 1H), 6.81 (d, J=7.6Hz, 1H), 4.69-4.60 (m, 1H), 4.59-4.51 (m, 1H), 3.69 (s, 3H), 2.40-2.33 (m, 2H), 2.31-2.24 (m, 2H), 1.72-1.63 (m, 4H), 1.51-1.45 (m, 3H), 1.42-1.37 (m, 3H)
Figure 02_image1425
化合物90與化合物13相似地經製備。粗材料用乙酸乙酯成漿且過濾。(800 mg，y=81%)。LCMS=3.1 min (8 min方法)。
Figure 02_image1427
化合物91與化合物14相似地經製備。粗材料藉由矽膠層析(二氯甲烷/甲醇)純化(52 mg，y=17.5%)。MS (m/z): 820.6 (M + 1)+ 。MS (m/z): 818.7 (M - 1)- 。UPLC=5.5 min (10 min方法)。
Figure 02_image1429
向化合物91 (10 mg，0.012 mmol)於乙醇(47.7 µl，0.817 mmol)中之溶液中添加環己-1,4-二烯(1.745 µl，0.018 mmol)、(二甲基-l3-硫基)-l1-氧烷(0.077 µl，1.085 µmol)，隨後添加鈀(1.953 mg，0.018 mmol)。該反應在45C下攪拌隔夜，此時存在約50%轉化。使用與前例相似之比率及量添加額外Pd/Alox、DMSO、環己二烯。該反應在4 h之後完成。Pd接著在矽藻土上過濾且粗溶液經蒸發。經過濾產物無需進一步純化即用於下一步驟中。
Figure 02_image1431
化合物92及化合物2與化合物16之合成相似地發生反應。化合物93無需純化即用於下一反應中。(52 mg，y=67%)。MS (m/z): 1093.2 (M + 1)+ 。UPLC =5.78 min (10 min方法)。
Figure 02_image1433
化合物94與化合物17相似地經製備。粗材料無需進一步純化即使用(33 mg，y=96%)。MS (m/z): 1079.2 (M + 1)+ 。UPLC =1.76 (2.5 min方法)。
Figure 02_image1435
在室溫下向化合物94 (33 mg，0.031 mmol)於無水二氯甲烷(1 ml)中之溶液中添加N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(8.23 µl，0.046 mmol)，隨後添加碳酸雙(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)酯(10.19 mg，0.040 mmol)。該反應經攪拌，直至起始材料經消耗。其接著用水淬滅，分離各層，且水層用二氯甲烷萃取一次。經組合之有機層用鹽水洗滌，經硫酸鎂乾燥且過濾。移除溶劑且粗材料藉由RPHPLC (水/乙腈)純化以生成最終化合物95 (12 mg，y= 33%)。MS (m/z): 1176.4 (M + 1)+ 。UPLC =1.84 (2.5 min方法)。實例 13. 合成化合物 99
Figure 02_image1437
向(S)-3-((5-碘戊基)氧基)-2-甲氧基-7,12-二氫苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-b]異喹啉-14(6aH)-酮(51.1 mg，0.101 mmol)及(S)-9-羥基-8-甲氧基-6-側氧基-12a,13-二氫-6H-苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-a]吲哚-11(12H)-甲酸4-((S)-2-((S)-2-(6-甲氧基-6-側氧基己醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)丙醯胺基)苯甲酯(64 mg，0.084 mmol)於無水N,N-二甲基乙醯胺(845 µl)中之溶液中添加碳酸鉀(23.34 mg，0.169 mmol)且該反應在氬氣下在環境溫度下攪拌持續18小時。去離子水(10 mL)添加至該反應中且所得白色固體經過濾，接著再溶解於二氯甲烷中，轉移至分液漏斗，且用水洗滌。有機層經無水硫酸鎂乾燥，過濾，且在真空中濃縮。粗固體經由甲醇/二氯甲烷中之矽膠層析純化以獲得呈白色固體狀之化合物97(80 mg，y = 84%)。MS (m/z): 1135.1 (M + 1)+ 。UPLC = 5.91 min (10 min方法)。
Figure 02_image1439
向(S)-8-甲氧基-9-((5-(((S)-2-甲氧基-14-側氧基-6a,7,12,14-四氫苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-b]異喹啉-3-基)氧基)戊基)氧基)-6-側氧基-12a,13-二氫-6H-苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-a]吲哚-11(12H)-甲酸4-((S)-2-((S)-2-(6-甲氧基-6-側氧基己醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)丙醯胺基)苯甲酯(62 mg，0.055 mmol)於無水四氫呋喃(2.0 ml)及去離子水(683 µl)中之經冷卻溶液(0℃)中添加氫氧化鋰(3.93 mg，0.164 mmol)。該反應在環境溫度下在氬氣下攪拌持續90 min，之後該混合物用20%甲醇/二氯甲烷(10 ml)及去離子水(5 ml)稀釋。該混合物用鹽酸水溶液(0.5M，1 mL)酸化至pH = 3且用20%甲醇/二氯甲烷(2 × 20 mL)萃取。有機層用去離子水洗滌，經無水硫酸鎂乾燥，經由矽藻土過濾且濃縮。粗材料藉由甲醇/二氯甲烷中之矽膠層析純化以生成DP (36 mg，y = 58%)。MS (m/z): 1121.3 (M + 1)+ 。UPLC = 1.66 min (2.5 min方法)。
Figure 02_image1441
向化合物98 (36 mg，0.032 mmol)及N-羥基丁二醯亞胺(11.10 mg，0.096 mmol)於無水二氯甲烷(321 µl)中之溶液中添加1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(30.8 mg，0.161 mmol)。該反應在氮氣下在環境溫度下攪拌持續兩小時，此時其用二氯甲烷稀釋且用水洗滌。有機層經無水硫酸鎂乾燥，過濾且在真空中濃縮。粗產物藉由RP-HPLC (Kromasil C18，乙腈/去離子水，經30 min 50-65%)純化且含有產物之部分經冷凍且凍乾以生成呈白色固體狀之化合物99 (18 mg，y = 46%)。MS (m/z): 1218.1 (M + 1)+ 。UPLC = 1.75 min (2.5 min方法)。實例 14. 合成化合物 106
Figure 02_image1443
向(S)-3-(苯甲氧基)-2-甲氧基-7,12-二氫苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-b]異喹啉-14(6aH)-酮(1.1 g，2.76 mmol)於無水1,2-二氯乙烷(18.40 ml)中之懸浮液中添加三乙醯氧基硼氫化鈉(1.755 g，8.28 mmol)且該混合物在環境溫度下攪拌持續20小時。該混合物用飽和氯化銨水溶液淬滅且用二氯甲烷萃取。有機萃取物用鹽水溶液洗滌，經無水硫酸鎂乾燥，過濾且濃縮以獲得呈淡黃色固體狀之粗物質(S)-3-羥基-2-甲氧基-6,6a,7,12-四氫苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-b]異喹啉-14(5H)-酮，其無需純化即用於下一反應(1.1 g，y= 99%)。MS (m/z): 401.6 (M + 1)+ 。UPLC = 1.69 min (2.5 min方法)。
Figure 02_image1445
向(S)-3-(苯甲氧基)-2-甲氧基-6,6a,7,12-四氫苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-b]異喹啉-14(5H)-酮(1.1 g，2.75 mmol)於無水二氯甲烷(12.21 ml)中之懸浮液中添加N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(0.591 ml，3.30 mmol)。接著添加氯甲酸4-硝基苯酯(0.634 g，3.02 mmol)於無水二氯甲烷(6.10 ml)中之溶液。白色漿液變成澄清黃色且在環境溫度下繼續攪拌持續20小時。該反應用二氯甲烷及水稀釋且分離各層。有機層用水(50 ml)、飽和碳酸氫鈉水溶液(50 ml)、鹽水溶液(50 mL)洗滌，經無水硫酸鎂乾燥，過濾且濃縮。所得固體在ISCO (乙酸乙酯/己烷，40 g矽石管柱)上純化以生成化合物102 (1.2 g，77%產率)。MS (m/z): 566.5 (M + 1)+ 。UPLC = 1.94 min (2.5 min方法)。
Figure 02_image1447
在0℃下向6-(((S)-1-(((S)-1-((4-(羥基甲基)苯基)氨基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)胺基)-6-側氧基己酸甲酯(410 mg，0.941 mmol)於無水四氫呋喃(1.78 ml)及無水N,N-二甲基乙醯胺(3.56 ml)中之溶液中添加雙(三甲基矽烷基)胺化鋰(1M於四氫呋喃中，0.94 ml，0.941 mmol)。該澄清黃色反應經攪拌持續15 min，接著添加含(S)-3-(苯甲氧基)-2-甲氧基-14-側氧基-6,6a,7,12-四氫苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-b]異喹啉-5(14H)-甲酸4-硝基苯酯(444 mg，0.785 mmol)之無水四氫呋喃(1.78 ml)。
反應混合物在氮氣下自0℃至環境溫度經攪拌持續18小時，此時其在冰浴中冷卻且用飽和氯化銨水溶液淬滅。該混合物用二氯甲烷萃取且經組合之有機層用水及鹽水洗滌，接著經無水硫酸鎂乾燥，過濾且在高真空下乾燥以移除N,N-二甲基乙醯胺。粗黃色油狀物藉由甲醇/二氯甲烷中之矽膠層析純化以生成(S)-3-(苯甲氧基)-2-甲氧基-14-側氧基-6,6a,7,12-四氫苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-b]異喹啉-5(14H)-甲酸4-((S)-2-((S)-2-(6-甲氧基-6-側氧基己醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)丙醯胺基)苯甲酯(81 mg，y = 27%)。MS (m/z): 862.8 (M + 1)+ 860.5 (M - 1)- 。UPLC = 1.82 min (2.5 min方法)。
Figure 02_image1449
用氮氣使(S)-3-(苯甲氧基)-2-甲氧基-14-側氧基-6,6a,7,12-四氫苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-b]異喹啉-5(14H)-甲酸4-((S)-2-((S)-2-(6-甲氧基-6-側氧基己醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)丙醯胺基)苯甲酯(197 mg，0.229 mmol)於無水甲醇(2.28 ml)中之溶液脫氣且添加鈀/碳(10%，24.32 mg，0.229 mmol)。該混合物抽真空且在環境溫度下在氫氣球(1 atm)下攪拌持續兩小時。反應混合物經過濾，用20%甲醇/二氯甲烷沖洗。濾液經濃縮且藉由甲醇/二氯甲烷中之矽膠層析純化以獲得呈亮白色固體狀之化合物104 (111 mg，y = 63%)。MS (m/z): 772.8 (M + 1)+ , 770.7 (M - 1)- 。UPLC = 1.52 min (2.5 min方法)。
Figure 02_image1451
化合物105以與化合物15經兩個步驟轉化為化合物17相似之方法自化合物104製備。
Figure 02_image1453
向6-(((S)-1-(((S)-1-((4-((((S)-2-甲氧基-3-((5-(((S)-8-甲氧基-6-側氧基-12a,13-二氫-6H-苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-a]吲哚-9-基)氧基)戊基)氧基)-14-側氧基-5,6,6a,7,12,14-六氫苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-b]異喹啉-5-羰基)氧基)甲基)苯基)胺基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)胺基)-6-側氧基己酸(70 mg，0.062 mmol)及N-羥基丁二醯亞胺(21.57 mg，0.187 mmol)於無水二氯甲烷(1.25 ml)中之溶液中添加1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(59.9 mg，0.312 mmol)。該反應在環境溫度下在氮氣下攪拌持續90分鐘，此時其用二氯甲烷稀釋且用水洗滌。有機層經無水硫酸鎂乾燥，過濾且濃縮。粗白色固體藉由RP-HPLC (C18 Kromasil，乙腈/去離子水，經30 min 50-65%)純化。含有產物之部分經冷凍且凍乾以生成呈亮白色固體狀之純化合物106(48 mg，y = 63%產率)。MS (m/z): 1121.2 (M + 1)+ 。UPLC = 1.94 min (2.5 min方法)。實例 15. 合成化合物 108
Figure 02_image1455
向化合物2 (48.7 mg，0.099 mmol)及(S)-3-羥基-2-甲氧基-6,6a,7,12-四氫苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-b]異喹啉-14(5H)-酮(28 mg，0.090 mmol)於無水N,N-二甲基乙醯胺(601 µl)中之溶液中添加無水碳酸鉀(18.70 mg，0.135 mmol)。該混合物在室溫下攪拌持續18小時。在反應完成時添加水且所得固體經過濾，再溶解於二氯甲烷中，且用水洗滌。有機層經無水硫酸鎂乾燥，過濾且濃縮。粗材料藉由甲醇/二氯甲烷中之矽膠層析純化以獲得化合物108 (31 mg，y=50%)。MS (m/z): 673.4 (M + 1)+ 。UPLC = 1.63 min (2.5 min方法)。實例 16. 合成化合物 110
Figure 02_image1457
向化合物20 (101 mg，0.212 mmol)及(S)-9-羥基-8-甲氧基-6-側氧基-12a,13-二氫-6H-苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-a]吲哚-11(12H)-甲酸2-(吡啶-2-基二硫基)乙酯(90 mg，0.177 mmol)於無水N,N-二甲基乙醯胺(1.76 ml)中之溶液中添加碳酸鉀(48.8 mg，0.353 mmol)且該反應在環境溫度下在氮氣下攪拌持續18小時。反應混合物用水稀釋且所得白色固體經過濾。接著該固體溶解於二氯甲烷中，轉移至分液漏斗且用水洗滌。有機層經無水硫酸鎂乾燥且在真空中濃縮。粗材料之三分之一經由RP-HPLC (C18 Kromasil，乙腈/去離子水，經30 min 50-65%)純化。含有產物之部分經冷凍且凍乾以獲得呈白色固體狀之化合物110 (18 mg，y= 33%)。MS (m/z): 907.9 (M + 1)+ 。UPLC = 1.91 min (2.5 min方法)。實例 17. 合成化合物 117
Figure 02_image1459
向4-(乙醯基硫基)丁酸甲酯(2.6 g，14.75 mmol)於甲醇(369 ml)中之溶液中添加甲醇鈉(0.895 g，16.23 mmol)且所得澄清橙色溶液在室溫下攪拌持續3.5小時。該混合物濃縮至乾，接著再溶解於二氯甲烷中。有機層用水洗滌三次且接著經無水硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮以獲得呈黃色油狀物之2:1硫醇/二硫化物混合物(0.82 g，40%)，其無需進一步純化即使用。1 H NMR (400 Hz, CDCl3 ): δ 33.67 (s, 6H), 2.71 (t, J=7.2Hz, 2H), 2.61-54 (m, 2H), 2.48-2.42 (m, 4H), 2.05-1.99 (m, 2H), 1.98-1.91 (m, 2H), 1.33 (t, J=8.0 Hz, 1H)。
Figure 02_image1461
向(S)-9-羥基-8-甲氧基-6-側氧基-12a,13-二氫-6H-苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-a]吲哚-11(12H)-甲酸2-甲基-2-((甲基磺醯基)硫基)丙酯(670 mg，1.323 mmol)於無水二氯甲烷(13 mL)中之溶液中添加二異丙基乙胺(0.461 ml，2.65 mmol)及3-巰基丙酸甲酯(477 mg，1.984 mmol)。該混合物在室溫下在氮氣下經18小時攪拌且接著用二氯甲烷稀釋且用水洗滌。有機層經無水硫酸鎂乾燥，過濾且濃縮。粗材料藉由乙酸乙酯/己烷)中之矽膠層析純化以生成呈白色結晶固體狀之化合物114 (0.54 g，y=73%)。MS (m/z): 561.3 (M + 1)+ 559.3 (M -1)- UPLC = 1.67 min (2.5 min方法)。1 H NMR (400 Hz, d6 -DMSO): δ 9.85 (s, 1H), 8.02 (d, J=8.0Hz, 1H), 7.28 (d, J=7.2Hz, 1H), 7.22 (t, J=7.6Hz, 1H), 7.12 (s, 1H), 7.06 (t, J=7.2Hz, 1H), 6.77 (bs, 1H), 4.38-4.29 (m, 1H), 4.02 (t, J=12.4Hz, 2H), 3.82 (s, 3H), 3.57 (s, 3H), 3.39-3.33 (m, 1H), 2.89 (d, J=16.0Hz, 1H), 2.59 (t, J=6.8Hz, 2H), 2.35 (t, J=7.2Hz, 2H), 1.81-1.76 (m, 2H), 1.17-1.05 (m, 6H)。
Figure 02_image1463
在室溫下在氮氣下向化合物2 (105 mg，0.193 mmol)及(S)-9-羥基-8-甲氧基-6-側氧基-12a,13-二氫-6H-苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-a]吲哚-11(12H)-甲酸2-((4-甲氧基-4-側氧基丁基)二硫基)-2-甲基丙酯(90 mg，0.161 mmol)於無水N,N-二甲基乙醯胺(1.60 ml)中之懸浮液中添加碳酸鉀(44.4 mg，0.321 mmol)。該混合物經攪拌持續18小時，之後其用水淬滅。所得白色固體經過濾且接著再溶解於二氯甲烷中，轉移至分液漏斗且用水洗滌。有機層經無水硫酸鎂乾燥，過濾，且在真空中濃縮。粗材料藉由甲醇/二氯甲烷中之矽膠層析純化以獲得化合物115 (0.15 g，y = 100%)。MS (m/z): 941.7 (M + 1)+ UPLC = 1.95 min (2.5 min方法)。
Figure 02_image1465
在0℃下向(S)-8-甲氧基-9-((5-(((S)-8-甲氧基-6-側氧基-12a,13-二氫-6H-苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-a]吲哚-9-基)氧基)戊基)氧基)-6-側氧基-12a,13-二氫-6H-苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-a]吲哚-11(12H)-甲酸2-((4-甲氧基-4-側氧基丁基)二硫基)-2-甲基丙酯--甲烷(180 mg，0.167 mmol)於無水四氫呋喃(6.25 ml)及去離子水(2.08 ml)中之經冷卻溶液中添加氫氧化鋰(19.97 mg，0.834 mmol)。該反應經三小時自0℃至室溫經攪拌，此時其用二氯甲烷及去離子水稀釋。該混合物用鹽酸(0.5 M水溶液，1 mL)酸化至pH=3且用二氯甲烷(2 × 20 ml)萃取。有機層用水洗滌，經無水硫酸鎂乾燥，過濾且濃縮。粗物質無需進一步純化繼續使用，假定100%產率。MS (m/z): 927.6 (M + 1)+ 925.6 (M - 1)- 。UPLC =1.76 min (2.5 min方法)。
Figure 02_image1467
向4-((1-(((S)-8-甲氧基-9-((5-(((S)-8-甲氧基-6-側氧基-12a,13-二氫-6H-苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-a]吲哚-9-基)氧基)戊基)氧基)-6-側氧基-11,12,12a,13-四氫-6H-苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-a]吲哚-11-羰基)氧基)-2-甲基丙-2-基)二硫基)丁酸(150 mg，0.165 mmol)及N-羥基丁二醯亞胺(57.0 mg，0.495 mmol)於無水二氯甲烷(3.30 ml)中之溶液中添加1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(158 mg，0.825 mmol)且該混合物在室溫下在氮氣下攪拌持續三小時。該反應用二氯甲烷稀釋且用水洗滌。有機層經無水硫酸鎂乾燥，過濾且濃縮。粗材料之一半藉由RP-HPLC (C18，乙腈/去離子水)純化。含有DP之部分經冷凍且凍乾以獲得呈白色固體狀之化合物117 (38 mg，y = 46%)。MS (m/z): 1006.7 (M + 1)+ 。UPLC =1.89 min (2.5 min方法)。實例 18. 合成化合物 118
Figure 02_image1469
向化合物2 (116 mg，0.213 mmol)及(S)-9-羥基-8-甲氧基-6-側氧基-12a,13-二氫-6H-苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-a]吲哚-11(12H)-甲酸2-甲基-2-((甲基磺醯基)硫基)丙酯(90 mg，0.178 mmol)於無水N,N-二甲基乙醯胺(1.77 ml)中之懸浮液中添加無水碳酸鉀(49.1 mg，0.355 mmol)且該反應在室溫下在氮氣下攪拌持續18小時。水添加至反應混合物中且所得白色固體經過濾，再溶解於二氯甲烷中，轉移至分液漏斗，且用水洗滌。有機層經無水硫酸鎂乾燥且在真空中濃縮。粗材料之一半經由RP-HPLC (C18 Kromasil，乙腈/去離子水，經30 min 55-65%)純化。純部分用二氯甲烷萃取，經無水硫酸鎂乾燥，過濾且濃縮以獲得呈白色固體狀之化合物118 (45 mg，y = 58%)。 MS (m/z): 869.6 (M + 1)+ 。UPLC =1.85 min (2.5 min方法)。實例 19. 合成化合物 121
Figure 02_image1471
向化合物20 (132 mg，0.235 mmol)及(S)-9-羥基-8-甲氧基-6-側氧基-12a,13-二氫-6H-苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-a]吲哚-11(12H)-甲酸2-((4-甲氧基-4-側氧基丁基)二硫基)-2-甲基丙酯(110 mg，0.196 mmol)於無水N,N-二甲基乙醯胺(1.96 ml)中之懸浮液中添加無水碳酸鉀(54.2 mg，0.392 mmol)且該反應在室溫下在氮氣下攪拌持續18小時。水添加至反應混合物中且所得白色固體經過濾，再溶解於二氯甲烷中且用水洗滌。有機層經無水硫酸鎂乾燥且在真空中濃縮。粗材料藉由急驟層析(甲醇/二氯甲烷)純化以生成化合物119 (172 mg，y = 90%)。MS (m/z): 976.7 (M + 1)+ 。UPLC =1.91 min (2.5 min方法)。
Figure 02_image1473
無水四氫呋喃(6.62 ml)及水(2.20 ml)中之化合物119 (200 mg，0.177 mmol)在冰浴中冷卻至0℃且添加氫氧化鋰(21.14 mg，0.883 mmol)。該反應自0℃至室溫經攪拌持續三小時，之後其用二氯甲烷及去離子水稀釋。該混合物用鹽酸(0.5 M水溶液，1 ml)酸化至pH=3且接著用二氯甲烷(2 × 20 ml)萃取。有機層用水洗滌，經無水硫酸鎂乾燥，過濾且濃縮以獲得粗化合物120，其無需純化即用於下一步驟中。MS (m/z): 962.6 (M + 1)+ 960.7 (M - 1)- 。UPLC =1.73 min (2.5 min方法)。
Figure 02_image1475
向4-((1-(((S)-8-甲氧基-9-((6-((((S)-8-甲氧基-6-側氧基-12a,13-二氫-6H-苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-a]吲哚-9-基)氧基)甲基)吡啶-2-基)甲氧基)-6-側氧基-11,12,12a,13-四氫-6H-苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-a]吲哚-11-羰基)氧基)-2-甲基丙-2-基)二硫基)丁酸(155 mg，0.164 mmol)及N-羥基丁二醯亞胺(56.7 mg，0.493 mmol)於無水二氯甲烷(3284 µl)中之溶液中添加1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(157 mg，0.821 mmol)。該反應在室溫下攪拌持續三小時且接著用二氯甲烷稀釋且用水洗滌。有機層經無水硫酸鎂乾燥，過濾且濃縮。所得粗材料之一半藉由RP-HPLC (Kromasil C18，乙腈/去離子水)純化。含有產物之部分經冷凍且凍乾以獲得呈白色固體狀之化合物121 (43.5 mg，y = 50%)。MS (m/z): 1041.7 (M + 1)+ 。UPLC =1.85 min (2.5 min方法)。實例 20. 合成化合物 122
Figure 02_image1477
向化合物20 (71.4 mg，0.149 mmol)及(S)-9-羥基-8-甲氧基-6-側氧基-12a,13-二氫-6H-苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-a]吲哚-11(12H)-甲酸2-甲基-2-((甲基磺醯基)硫基)丙酯(63 mg，0.124 mmol)於無水N,N-二甲基乙醯胺(1.24 ml)中之懸浮液中添加無水碳酸鉀(34.4 mg，0.249 mmol)且該反應在室溫下在氮氣下攪拌持續18小時。水添加至反應混合物中且所得白色固體經過濾，再溶解於二氯甲烷中，轉移至分液漏斗，且用水洗滌。有機層經無水硫酸鎂乾燥，過濾且在真空中濃縮。粗物質經由RP-HPLC (C18 Kromasil，乙腈/去離子水，經30 min 50-70%)純化。含有DP之部分經冷凍且凍乾以獲得呈白色固體狀之化合物122 (64 mg，y = 57%)。MS (m/z): 904.6 (M + 1)+ 。UPLC =1.85 min (2.5 min方法)。實例 21. 合成化合物 123
Figure 02_image1479
向化合物96及(S)-9-羥基-8-甲氧基-11,12,12a,13-四氫-6H-苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-a]吲哚-6-酮(78 mg，0.262 mmol)於無水N,N-二甲基乙醯胺(1.58 ml)中之溶液中添加碳酸鉀(49.3 mg，0.357 mmol)。該反應在室溫下經攪拌持續18小時，之後其用水稀釋。所得固體經過濾且接著再溶解於二氯甲烷中且用水洗滌。有機層經無水硫酸鎂乾燥，過濾且濃縮。粗材料藉由RP-HPLC (乙腈/去離子水，經30 min 55-75%)純化含有產物之部分經組合且用二氯甲烷萃取。有機層經無水硫酸鎂乾燥，過濾且濃縮以生成化合物123 (75 mg，y = 46%)。MS (m/z): 673.6 (M + 1)+ 。UPLC = 1.66 min (2.5 min方法)。實例 22. 合成化合物 126
Figure 02_image1481
向(S)-9-羥基-8-甲氧基-6-側氧基-12a,13-二氫-6H-苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-a]吲哚-11(12H)-甲酸4-((S)-5-胺基-2-((S)-2-(6-甲氧基-6-側氧基己醯胺基)-4-甲基戊醯胺基)-5-側氧基戊醯胺基)苯甲酯(80 mg，0.097 mmol)及化合物2 (56.8 mg，0.116 mmol)於無水N,N-二甲基乙醯胺(965 µl)中之溶液中添加碳酸鉀(26.7 mg，0.193 mmol)且該反應在室溫下在氮氣下攪拌持續18小時。水添加至反應混合物中且所得固體經過濾，接著再溶解於20%甲醇/二氯甲烷中，轉移至分液漏斗，且用水洗滌。有機層經無水硫酸鎂乾燥且在真空中濃縮。粗材料經由矽膠層析(12 g矽石管柱，甲醇/二氯甲烷)純化以獲得化合物124 (70 mg，y= 61%)。MS (m/z): 1192.0 (M + 1)+ 。UPLC = 5.55 min (10 min方法)。
Figure 02_image1483
向(S)-8-甲氧基-9-((5-(((S)-8-甲氧基-6-側氧基-12a,13-二氫-6H-苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-a]吲哚-9-基)氧基)戊基)氧基)-6-側氧基-12a,13-二氫-6H-苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-a]吲哚-11(12H)-甲酸4-((S)-5-胺基-2-((S)-2-(6-甲氧基-6-側氧基己醯胺基)-4-甲基戊醯胺基)-5-側氧基戊醯胺基)苯甲酯(60 mg，0.050 mmol)於無水四氫呋喃(1.88 ml)及去離子水(630 µl)中之溶液中添加氫氧化鋰(3.62 mg，0.151 mmol)。在室溫下攪拌持續90分鐘之後，該混合物用30%甲醇/二氯甲烷及去離子水稀釋且用鹽酸(0.5 M水溶液)酸化至pH=3。該混合物用30%甲醇/二氯甲烷(3 × 50 mL)萃取。有機層用水洗滌，經無水硫酸鎂乾燥，經由矽藻土過濾且蒸發。粗產物125無需進一步純化繼續使用，假定100%產率。MS (m/z): 1178.0 (M + 1)+ 。UPLC = 5.53 min (10 min方法)。
Figure 02_image1485
向化合物125 (58.9 mg，0.05 mmol)及N-羥基丁二醯亞胺(17.26 mg，0.150 mmol)於無水二氯甲烷(750 µl)及無水N,N-二甲基甲醯胺(250 µl)中之溶液中添加1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(47.9 mg，0.250 mmol)。使該反應在室溫下在氮氣下攪拌持續三小時，此時該混合物經濃縮以移除二氯甲烷。添加乙腈及去離子水且該混合物經冷凍且凍乾。粗材料藉由RP-HPLC (C18 Kromasil，乙腈/去離子水)純化。含有DP之部分經冷凍且凍乾為純化合物126 (32 mg，y = 51%，經2個步驟)。MS (m/z): 1275.0 (M + 1)+ 。UPLC = 5.77 min (10 min方法)。實例 23. 合成化合物 134
Figure 02_image1487
向(S)-9-羥基-8-甲氧基-6-側氧基-12a,13-二氫-6H-苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-a]吲哚-11(12H)-甲酸4-((S)-2-((S)-2-((第三丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)丙醯胺基)苯甲酯(0.28 g，0.391 mmol)及第三丁基二甲基矽烷氯(0.077 g，0.509 mmol)於無水二甲基甲醯胺(2.61 ml)中之溶液中添加咪唑(0.067 g，0.978 mmol)。反應混合物在環境溫度下攪拌持續20小時，此時其用乙酸乙酯萃取。有機層用水及鹽水溶液洗滌，接著經無水硫酸鎂乾燥，過濾且濃縮。粗材料藉由乙酸乙酯/己烷中之矽膠層析純化以生成呈白色結晶固體狀之化合物127 (0.30 g，y = 92%)。MS (m/z): 830.8 (M + 1)+ 。UPLC = 2.04 min (2.5 min方法)。
Figure 02_image1489
(S)-9-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-8-甲氧基-6-側氧基-12a,13-二氫-6H-苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-a]吲哚-11(12H)-甲酸4-((S)-2-((S)-2-((第三丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)丙醯胺基)苯甲酯(0.30 g，0.361 mmol)於無水二氯甲烷(2.5 ml)中之溶液在冰浴中冷卻至0℃。添加三氟乙酸(1.807 ml)於二氯甲烷(2.5 ml)中之新鮮混合物。在0℃下在氮氣下攪拌持續30分鐘之後，該反應傾入冰/碳酸氫鈉混合物中且接著用二氯甲烷萃取。萃取物用鹽水洗滌，經無水硫酸鎂乾燥，過濾且濃縮。粗化合物128無需進一步純化繼續使用，假定100%產率。MS (m/z): 730.6 (M + 1)+ 。UPLC = 1.53 min (2.5 min方法)。
Figure 02_image1491
向(S)-9-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-8-甲氧基-6-側氧基-12a,13-二氫-6H-苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-a]吲哚-11(12H)-甲酸4-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)丙醯胺基)苯甲酯(0.23 g，0.315 mmol)於無水N,N-二甲基乙醯胺(1.050 ml)中之溶液中添加二異丙基乙胺(0.137 ml，0.788 mmol)。該反應在冰浴中冷卻至0℃，接著添加含胺磺醯氯(0.073 g，0.630 mmol)之無水N,N-二甲基乙醯胺(0.25 ml)。該混合物在0℃下攪拌持續20 min，接著在室溫下攪拌持續20小時，之後其用飽和碳酸氫鈉水溶液淬滅。該混合物用乙酸乙酯萃取且萃取物用水及鹽水洗滌。有機層經無水硫酸鎂乾燥，過濾且濃縮。粗物質無需進一步純化繼續使用，假定100%產率。MS (m/z): 809.8 (M + 1)+ 807.8 (M - 1)- 。UPLC = 1.84 min (2.5 min方法)。
Figure 02_image1493
向(S)-9-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-8-甲氧基-6-側氧基-12a,13-二氫-6H-苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-a]吲哚-11(12H)-甲酸4-((S)-2-((S)-3-甲基-2-(胺磺醯基胺基)丁醯胺基)丙醯胺基)苯甲酯(0.23 g，0.284 mmol)及己二酸單甲酯(0.063 ml，0.426 mmol)於無水二氯甲烷(1.895 ml)中之溶液中添加添加1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(0.082 g，0.426 mmol)、4-二甲基胺基吡啶(0.017 g，0.142 mmol)及二異丙基乙胺(0.059 ml，0.341 mmol)。反應混合物在環境溫度下攪拌持續20小時，此時其用二氯甲烷稀釋且用水及鹽水洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。粗材料藉由甲醇/二氯甲烷)中之矽膠層析純化以生成(S)-9-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-8-甲氧基-6-側氧基-12a,13-二氫-6H-苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-a]吲哚-11(12H)-甲酸4-((S)-2-((S)-2-((N-(6-甲氧基-6-側氧基己醯胺基)胺磺醯基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)丙醯胺基)苯甲酯(86 mg，y = 29%，經4個步驟)。MS (m/z): 952.0 (M + 1)+ 949.9 (M - 1)- 。UPLC = 1.92 min (2.5 min方法)。
Figure 02_image1495
(S)-9-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-8-甲氧基-6-側氧基-12a,13-二氫-6H-苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-a]吲哚-11(12H)-甲酸4-((S)-2-((S)-2-((N-(6-甲氧基-6-側氧基己醯胺基)胺磺醯基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)丙醯胺基)苯甲酯(86 mg，0.090 mmol)於無水四氫呋喃(904 µl)中之溶液在冰浴(0℃)中冷卻且添加四丁基氟化銨溶液(1M於四氫呋喃中，181 µl，0.181 mmol)。該混合物在0℃下在氮氣下攪拌持續兩小時。反應混合物用飽和氯化銨水溶液淬滅且用乙酸乙酯萃取。有機萃取物用鹽水洗滌，經無水硫酸鎂乾燥，過濾且濃縮。粗材料藉由甲醇/二氯甲烷)中之矽膠層析純化以生成(S)-9-羥基-8-甲氧基-6-側氧基-12a,13-二氫-6H-苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-a]吲哚-11(12H)-甲酸4-((S)-2-((S)-2-((N-(6-甲氧基-6-側氧基己醯胺基)胺磺醯基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)丙醯胺基)苯甲酯(59 mg，y =78%)。MS (m/z): 837.8 (M + 1)+ 835.7 (M - 1)- 。UPLC = 1.54 min (2.5 min方法)。
Figure 02_image1497
向(S)-9-((5-碘戊基)氧基)-8-甲氧基-12a,13-二氫-6H-苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-a]吲哚-6-酮(44.9 mg，0.092 mmol) E003650-18及(S)-9-羥基-8-甲氧基-6-側氧基-12a,13-二氫-6H-苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-a]吲哚-11(12H)-甲酸4-((S)-2-((S)-2-((N-(6-甲氧基-6-側氧基己醯胺基)胺磺醯基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)丙醯胺基)苯甲酯(59 mg，0.070 mmol)於無水N,N-二甲基乙醯胺(705 µl)中之溶液中添加無水碳酸鉀(19.49 mg，0.141 mmol)且該反應在室溫下攪拌持續18小時。
反應混合物用水稀釋且用二氯甲烷萃取。萃取物用水洗滌，經無水硫酸鎂乾燥且在真空中濃縮。粗材料藉由甲醇/二氯甲烷中之矽膠層析純化以獲得呈白色固體狀之化合物132 (42 mg，y = 50%)。MS (m/z): 1200.2 (M + 1)+ UPLC = 1.74 min (2.5 min方法)。
Figure 02_image1499
(S)-8-甲氧基-9-((5-(((S)-8-甲氧基-6-側氧基-12a,13-二氫-6H-苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-a]吲哚-9-基)氧基)戊基)氧基)-6-側氧基-12a,13-二氫-6H-苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-a]吲哚-11(12H)-甲酸4-((S)-2-((S)-2-((N-(6-甲氧基-6-側氧基己醯胺基)胺磺醯基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)丙醯胺基)苯甲酯(28 mg，0.023 mmol)於無水四氫呋喃(875 µl)及去離子水(292 µl)中之溶液在冰浴中冷卻且添加氫氧化鋰(1.677 mg，0.070 mmol)。該反應自0℃至室溫經攪拌持續三小時，之後其用二氯甲烷及去離子水稀釋。該混合物用鹽酸(0.5 M水溶液，1 mL)酸化至pH=3且用20%甲醇/二氯甲烷(2×約20 ml)萃取。有機層用水洗滌，經無水硫酸鎂乾燥，過濾且濃縮以獲得化合物133 (17.6 mg，y = 63%)，該化合物無需進一步純化即使用。MS (m/z): 1186.3 (M + 1)+ UPLC = 1.67 min (2.5 min方法)。
Figure 02_image1501
向6-((N-((S)-1-(((S)-1-((4-((((S)-8-甲氧基-9-((5-(((S)-8-甲氧基-6-側氧基-12a,13-二氫-6H-苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-a]吲哚-9-基)氧基)戊基)氧基)-6-側氧基-11,12,12a,13-四氫-6H-苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-a]吲哚-11-羰基)氧基)甲基)苯基)胺基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)胺磺醯基)胺基)-6-側氧基己酸(18 mg，0.015 mmol)於無水二氯甲烷(607 µl)中之溶液中添加N-羥基丁二醯亞胺(5.24 mg，0.046 mmol)及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(14.56 mg，0.076 mmol)。反應混合物在室溫下在氮氣下攪拌持續90分鐘且接著用二氯甲烷稀釋且用水洗滌。有機層經無水硫酸鎂乾燥，過濾且濃縮。粗材料藉由RP-HPLC (乙腈/水中之C18，經30 min 50-70%)純化含有產物之部分經組合，經冷凍且凍乾以獲得化合物134 (5.3 mg，y = 27%)。MS (m/z): 1283.3 (M + 1)+ UPLC = 1.75 min (2.5 min方法)。實例 24. 合成化合物 147
Figure 02_image1503
在室溫下向(第三丁氧羰基)-L-纈胺酸(8.5 g，39.1 mmol) (Boc-Val-OH)於二氯甲烷(78 ml)中之溶液中分成數份添加添加1,1'-羰基二咪唑(7.61 g，46.9 mmol)。該反應在室溫下在氮氣下攪拌持續30分鐘。添加含O-苯甲基-L-絲胺酸甲酯(9.90 g，40.3 mmol) ChemImpex之二氯甲烷(19.56 ml)且該混合物在室溫下在氮氣下再攪拌持續18小時。該反應用二氯甲烷稀釋，用鹽酸(1 M水溶液)、飽和碳酸氫鈉水溶液及鹽水洗滌。有機層經無水硫酸鎂乾燥，過濾且濃縮以生成呈白色固體狀之O-苯甲基-N-((第三丁氧羰基)-L-纈胺醯基)-L-絲胺酸甲酯17.8 g。粗物質無需進一步純化繼續使用，假定100%產率。MS (m/z): 409.6 (M + 1)+ UPLC = 1.60 min (2.5 min方法)。
Figure 02_image1505
向O-苯甲基-N-((第三丁氧羰基)-L-纈胺醯基)-L-絲胺酸甲酯(12.7 g，31.1 mmol)於無水甲醇(120 ml)中之溶液中添加乾燥鈀/碳(10%，1.654 g，1.554 mmol)。使黑色懸浮液脫氣且用氫氣淨化三次。該混合物在室溫下在氫氣球(1 atm)下攪拌持續18小時，之後其經由矽藻土過濾且用甲醇沖洗以獲得呈黏性白色固體狀之(第三丁氧羰基)-L-纈胺醯基-L-絲胺酸甲酯(10.6 g)。粗物質無需進一步純化繼續使用，假定100%產率。
Figure 02_image1507
向(第三丁氧羰基)-L-纈胺醯基-L-絲胺酸甲酯(4 g，12.56 mmol)於無水二甲基甲醯胺(100 ml)中之溶液中添加三異丙基矽烷氯(4.16 ml，18.85 mmol)及4-二甲基胺基吡啶(4.60 g，37.7 mmol)。該混合物在室溫下在氬氣下攪拌持續18小時。接著用乙酸乙酯稀釋且用水及鹽水洗滌。有機層經無水硫酸鎂乾燥，過濾且濃縮。粗物質藉由乙酸乙酯/己烷中之矽膠層析純化以獲得呈白色固體狀之N-((第三丁氧羰基)-L-纈胺醯基)-O-(三異丙基矽烷基)-L-絲胺酸甲酯(5.9 g，y = 99%)。
Figure 02_image1509
N-((第三丁氧羰基)-L-纈胺醯基)-O-(三異丙基矽烷基)-L-絲胺酸甲酯(5.9 g，12.43 mmol)於四氫呋喃(237 ml)及去離子水(118 ml)中之溶液在冰浴中冷卻至0℃。添加氫氧化鋰(0.893 g，37.3 mmol)且該反應在0℃下攪拌持續2.5小時。該混合物用水稀釋且用鹽酸(1M水溶液)酸化。接著其用乙酸乙酯萃取。萃取物用鹽水洗滌，經無水硫酸鎂乾燥，過濾且濃縮以獲得呈白色結晶固體狀之((S)-1-(((S)-1-((4-(羥基甲基)苯基)胺基)-1-側氧基-3-((三異丙基矽烷基)氧基)丙-2-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)胺基甲酸第三丁酯(5.5 g，96%)，其無需進一步純化即使用。
Figure 02_image1511
((S)-1-(((S)-1-((4-(羥基甲基)苯基)胺基)-1-側氧基-3-((三異丙基矽烷基)氧基)丙-2-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)胺基甲酸第三丁酯及EEDQ (5.62 g，22.74 mmol)於無水二氯甲烷(196 ml)中之溶液在室溫下攪拌持續一小時。接著添加(4-胺基苯基)甲醇(1.4 g，11.37 mmol)且該混合物在室溫下再攪拌持續18小時。該反應濃縮至乾，接著再溶解於二氯甲烷中且經由矽藻土過濾。濾液經蒸發且藉由乙酸乙酯/己烷中之矽膠層析純化以獲得呈結晶白色固體狀之((S)-1-(((S)-1-((4-(羥基甲基)苯基)胺基)-1-側氧基-3-((三異丙基矽烷基)氧基)丙-2-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)胺基甲酸第三丁酯(1.47 g，y = 23%)。MS (m/z): 566.7 (M + 1)+ 564.7 (M - 1)- UPLC = 1.92 min (2.5 min方法)。
Figure 02_image1513
((S)-1-(((S)-1-((4-(羥基甲基)苯基)胺基)-1-側氧基-3-((三異丙基矽烷基)氧基)丙-2-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)胺基甲酸第三丁酯(1.436 g，2.54 mmol)於無水四氫呋喃(5.77 ml)及無水N,N-二甲基乙醯胺(11.54 ml)中之溶液在冰浴中冷卻至0℃。添加雙(三甲基矽烷基)胺化鋰(1M於四氫呋喃中，3.05 ml，3.05 mmol)且該混合物在氬氣下攪拌持續20分鐘，接著添加含(S)-9-(苯甲氧基)-8-甲氧基-6-側氧基-12a,13-二氫-6H-苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-a]吲哚-11(12H)-甲酸4-硝基苯酯(1.4 g，2.54 mmol)之無水四氫呋喃(5.77 ml)。反應混合物在氬氣下自0℃至室溫經攪拌持續18小時，接著用飽和氯化銨溶液淬滅。該混合物用乙酸乙酯萃取且有機層用水及鹽水洗滌。有機層經無水硫酸鎂乾燥，過濾且濃縮。粗材料藉由乙酸乙酯/二氯甲烷中之矽膠層析純化以獲得呈白色固體狀之(S)-9-(苯甲氧基)-8-甲氧基-6-側氧基-12a,13-二氫-6H-苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-a]吲哚-11(12H)-甲酸4-((S)-2-((S)-2-((第三丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-3-((三異丙基矽烷基)氧基)丙醯胺基)苯甲酯(0.91 g，y=36%)。MS (m/z): 979.2 (M + 1)+ UPLC = 2.24 min (2.5 min方法)。
Figure 02_image1515
(S)-9-(苯甲氧基)-8-甲氧基-6-側氧基-12a,13-二氫-6H-苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-a]吲哚-11(12H)-甲酸4-((S)-2-((S)-2-((第三丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-3-((三異丙基矽烷基)氧基)丙醯胺基)苯甲酯(0.5 g，0.511 mmol)於無水四氫呋喃(5.11 ml)中之溶液在冰浴中冷卻至0℃且添加四丁基氟化銨溶液(1M於四氫呋喃中，1.022 ml，1.022 mmol)。反應混合物在0℃下在氬氣下攪拌持續兩小時且在完成時用飽和氯化銨溶液淬滅。該混合物用乙酸乙酯萃取。萃取物用鹽水洗滌，經無水硫酸鎂乾燥，過濾且濃縮。粗材料藉由乙酸乙酯/二氯甲烷中之矽膠層析純化以獲得呈白色固體狀之化合物143 (356 mg，y = 85%)。MS (m/z): 822.9 (M + 1)+ UPLC = 1.82 min (2.5 min方法)。
Figure 02_image1517
(S)-8-甲氧基-9-((5-(((S)-8-甲氧基-6-側氧基-12a,13-二氫-6H-苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-a]吲哚-9-基)氧基)戊基)氧基)-6-側氧基-12a,13-二氫-6H-苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-a]吲哚-11(12H)-甲酸4-((S)-2-((S)-2-((第三丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-3-羥基丙醯胺基)苯甲酯(90 mg，0.082 mmol)於無水二氯甲烷(0.8 ml)中之溶液在冰浴中冷卻至0℃。添加三氟乙酸(411 µl)於無水二氯甲烷(0.4 ml)中之新鮮混合物。該反應在0℃下在氬氣下攪拌持續一小時且在完成時，該混合物傾入冰/飽和碳酸氫鈉混合物中。此混合物用二氯甲烷萃取，用鹽水洗滌且經無水硫酸鎂乾燥，過濾且濃縮以獲得呈黃色固體狀之化合物146 (63 mg，y = 77%)。MS (m/z): 995.2 (M + 1)+ UPLC = 1.51 min (2.5 min方法)。
Figure 02_image1519
向(S)-8-甲氧基-9-((5-(((S)-8-甲氧基-6-側氧基-12a,13-二氫-6H-苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-a]吲哚-9-基)氧基)戊基)氧基)-6-側氧基-12a,13-二氫-6H-苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-a]吲哚-11(12H)-甲酸4-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)-3-羥基丙醯胺基)苯甲酯(36 mg，0.036 mmol)於無水N,N-二甲基甲醯胺(724 µl)中之溶液中添加添加己二酸雙(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)酯(24.65 mg，0.072 mmol)及三乙胺(15.14 µl，0.109 mmol)。該反應在室溫下在氬氣下攪拌持續一小時且接著用二氯甲烷稀釋且用水洗滌。有機層經乾燥，過濾且用乙腈共蒸發。粗材料藉由RP-HPLC (乙腈/水中之C18，經30 min 50-70%)純化以生成化合物147。MS (m/z): 1220.4 (M + 1)+ UPLC = 1.75 min (2.5 min方法)。實例 25. 合成化合物 148
Figure 02_image1521
向(S)-(3-(溴甲基)-5-(((8-甲氧基-6-側氧基-12a,13-二氫-6H-苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-a]吲哚-9-基)氧基)甲基)苯基)(2-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)乙基)胺基甲酸第三丁酯(119 mg，0.161 mmol)及(S)-9-羥基-8-甲氧基-6-側氧基-12a,13-二氫-6H-苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-a]吲哚-11(12H)-甲酸2-((4-甲氧基-4-側氧基丁基)二硫基)-2-甲基丙酯(75 mg，0.134 mmol)於無水N,N-二甲基乙醯胺(1.34 ml)中之懸浮液中添加碳酸鉀(37.0 mg，0.268 mmol)且該反應在室溫下在氮氣下攪拌持續18小時。水添加至該反應中且所得白色固體經過濾，接著再溶解於二氯甲烷中，轉移至分液漏斗，用水洗滌，經無水硫酸鎂乾燥且在真空中濃縮。粗材料經由RP-HPLC (C18 Kromasil，乙腈/水)純化。純部分用二氯甲烷萃取。經硫酸鎂乾燥，過濾且濃縮以生成化合物148。實例 26. 合成化合物 150
Figure 02_image1523
在-5至-10℃下在15分鐘內向1,3-苯二甲醇(11 mg，0.08 mmol)於無水二氯甲烷(0.8 mL)中之經攪拌溶液中逐滴添加三乙胺(33 µl，0.24 mmol)，接著添加甲烷磺醯氯(16 µl，0.21 mmol)。該溶液在-5至-10℃下再攪拌持續60分鐘且用冰/水淬滅，用冷乙酸乙酯稀釋。分離該混合物且有機層用冷水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥。其經過濾且濾液藉由在真空中旋轉蒸發而經蒸發(溫度＜ 35℃)。所獲得之二甲磺酸酯經抽高真空持續數小時，接著溶解於無水二甲基甲醯胺(1.5 mL)中。隨後添加化合物1 (94 mg，0.32 mmol)、無水碳酸鉀(50 mg，0.36 mmol)及碘化鉀(27 mg，0.16 mmol)。該混合物在室溫下攪拌持續17小時(藉由質譜檢查)且用二氯甲烷稀釋。其用鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥且過濾。濾液在減壓下蒸發且殘餘物藉由逆相HPLC (C18管柱，乙腈/H2 O，用乙腈/H2 O裝載管柱，3:1，攪拌持續30 min且離心，接著注射)純化以提供呈白色固體狀之二聚體化合物149 (6.6 mg)。1 H NMR (400 Hz, CDCl3 ): δ 8.21 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.79 (d, J = 4.4 Hz, 2H), 7.51 (s, 2H), 7.46 (s, 1H), 7.36 (bs, 3H), 7.23-7.18 (m, 4H), 7.06-7.03 (m, 2H), 6.79 (s, 2H), 5.20 (d, J = 12.4 Hz, 2H), 5.14 (d, J = 12.4 Hz, 2H), 4.41 (ddd, J1 = 10.8 Hz, J2 = 4.4 Hz, J3 = 4.0 Hz, 2H), 3.92 (s, 6H), 3.64 (dd, J1 = 17.2 Hz, J2 = 11.2 Hz, 2H), 3.42 (dd, J1 = 16.8 Hz, J2 = 4.0 Hz, 2H)；HRMS (ESI, m/z):計算值691.2557 (M + H)+ ，實驗值691.2570。
Figure 02_image1525
化合物149 (60 mg，0.043 mmol)溶解於二氯甲烷(0.25 ml)及乙醇(0.5 ml)之無水混合物中且在冰浴中冷卻至0℃。接著添加溶解於乙醇(50 ul)中之硼氫化鈉(0.493 mg，0.013 mmol)溶液且該混合物經攪拌持續5分鐘且移出冰浴。使該反應攪拌持續3小時，在低溫下藉由添加飽和氯化銨及二氯甲烷淬滅，經分離且有機層用鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且在真空中濃縮。殘餘物藉由半製備型RP-HPLC (C18管柱，乙腈/H2 O純化且含有所需產物之部分用二氯甲烷萃取且濃縮以生成單-亞胺化合物150 (20 mg，33%)。MS (m/z), 預期值: 692.7, 實驗值: 715.2 (M + Na)+ , 733.2 (M + H2 O + Na)+ , 749.2 (M + H2 O + K)+ 。實例 27. 合成化合物 155
Figure 02_image1527
向化合物151 (339 mg，1.1 mmol)於無水四氫呋喃(4.0 mL)中之經攪拌溶液中添加Boc酐(272 mg，1.2 mmol)。該混合物繼續在室溫下攪拌持續三天。反應混合物在減壓下濃縮且殘餘物藉由矽膠層析(二氯甲烷/甲醇)純化以生成呈無色油狀物之化合物152 (405 mg，y = 90%)。1H NMR (400 Hz, CDC13 ): δ 7.00 (s, 2H), 6.97 (s, 1H), 4.38 (s, 4H), 4.12 (s, 2h), 3.64 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.48-3.44 (m, 8H), 3.40-3.38 (m, 2H), 3.21 (s, 3H), 1.31 (s, 9H)；13 C NMR (400 Hz, CDC13 ): δ 154.65, 142.3, 142.1, 124.1, 122.7, 80.2, 71.6, 70.3, 70.1, 69.9, 68.5, 63.9, 58.65, 49.4, 28.1。
Figure 02_image1529
在-5-10℃下向化合物152 (51 mg，0.128 mmol)於無水二氯甲烷中之經攪拌溶液中添加三乙胺(0.053 ml，0.383 mmol)。接著在15分鐘內用注射器緩慢地添加甲烷磺醯氯(0.026 ml，0.332 mmol)。該混合物在-5-10℃下經攪拌持續1小時(TLC，二氯甲烷/甲醇10:1)。該反應用冰/水淬滅，用冷AcOEt稀釋，經分離且有機層用冷水洗滌，經無水Na2 SO4 /MgSO4 乾燥，過濾且經汽提。殘餘物轉移至具有二氯甲烷之小反應燒瓶中，經汽提且抽高真空。其溶解於無水二甲基甲醯胺(0.8 mL)中，隨後添加化合物1 (90 mg，0.31 mmol)及鉀(53 mg，0.38 mmol)。該混合物在室溫下攪拌隔夜。其用二氯甲烷稀釋，用鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾且經汽提。殘餘物藉由逆相HPLC (CI 8，乙腈/水)純化以生成呈微黃色固體狀之化合物32b (56 mg，46%)。1H NMR (400 Hz, CDC13 ): δ 8.29 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.87 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 7.60 (s, 2H), 7.38-7.36 (m, 3H), 7.33- 7.27 (m, 4H), 7.13 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 6.88 (s, 2H), 5.21 (dd, = 20.0 Hz, J2 = 12.4 Hz, 4H), 4.49 (dt, Jj = 11.2 Hz, J2 = 4.0 Hz, 2H), 3.99 (s, 6H), 3.83 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.76- 3.48 (m, 14H), 3.35 (s, 3H), 1.43 (s, 9H)；MS (m/z):實驗值992.2 (M + H2 O + Na)+ , 101+ 。
Figure 02_image1531
在0℃下向化合物153 (56 mg，0.059 mmol)於無水二氯甲烷(0.3 mL)及無水乙醇(0.9 mL)中之經攪拌溶液中添加NaBH4 (2.7 mg，0.07 mmol)。移出冰浴且該混合物在室溫下攪拌持續3小時且接著用飽和氯化銨淬滅，用二氯甲烷稀釋，經分離且有機層用鹽水洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥且經由矽藻土過濾且經汽提。所有含有純產物之部分均用二氯甲烷萃取且經汽提以生成呈淺黃色固體狀之化合物154 (20.7 mg，y = 37%)。MS (m/z):實驗值954.2 (M + H)+ 。
Figure 02_image1533
(3-((((S)-8-甲氧基-6-側氧基-11,12,12a,13-四氫-6H-苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-a]吲哚-9-基)氧基)甲基)-5-((((S)-8-甲氧基-6-側氧基-12a,13-二氫-6H-苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-a]吲哚-9-基)氧基)甲基)苯基)(2-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)乙基)胺基甲酸第三丁酯(273 mg，0.286 mmol)溶解於2.65 ml無水二氯甲烷中且在冰浴中冷卻至0C。添加2.65 ml無水二氯甲烷及三氟乙酸(2649 µl)之新鮮混合溶液。該反應在0C下在氬氣下攪拌持續55分鐘。其用二氯甲烷稀釋，傾入冰/飽和碳酸氫鈉中。經分離之有機物用鹽水洗滌且經硫酸鎂乾燥，過濾且經汽提以生成210 mg淡黃色固體。移出46 mg且藉由RPHPLC (水/乙腈)純化。含有所需化合物之部分經冷凍且凍乾以生成最終化合物155 (32 mg，y= 60%)。MS (m/z): 854.8 (M + 1)+ 。UPLC =1.65 (2.5 min方法)。實例 28. 合成化合物 157
Figure 02_image1535
化合物60 (180 mg，0.511 mmol)及化合物1 (336 mg，1.073 mmol)溶解於二甲基甲醯胺(2554 µl)中。在室溫下添加碳酸鉀(176 mg，1.277 mmol)，使顏色變化為亮橙色。該反應在Ar下攪拌隔夜。該反應用二氯甲烷稀釋且用水洗滌(2次)。有機物經乾燥，濃縮，且藉由矽膠層析(乙酸乙酯/己烷且接著5%甲醇/二氯甲烷)純化。收集純產物以生成化合物156 (300 mg，y= 78%)。MS (m/z): 849.5 (M + 1)+ 。LCMS =8.2 (15 min方法)。
Figure 02_image1537
化合物156 (45 mg，0.060 mmol)溶解於1, 2-二氯乙烷(601 µl)中。在室溫下添加三乙醯氧基硼氫化鈉(11.46 mg，0.054 mmol)且攪拌持續1小時。再添加約2 mg STAB且攪拌持續15分鐘。該反應用乙酸乙酯及數滴甲醇稀釋且用檸檬酸水溶液淬滅。分離各層且有機物用鹽水洗滌，乾燥且濃縮。粗固體稀釋於二甲基甲醯胺/乙腈/水/甲酸中且藉由逆相C18 HPLC純化。含有單還原產物之純部分經冷凍且凍乾以生成作為所需產物之化合物157 (10 mg，y= 21%)。MS (m/z): 751.7 (M + 1)+ 。LCMS =5.8 (8 min方法)。實例 29. 合成化合物 159
Figure 02_image1539
化合物1 (120 mg，0.407 mmol)及2,6-雙(溴甲基)吡啶(50 mg，0.185 mmol)溶解於無水二甲基甲醯胺(1233 µl)中且添加碳酸鉀(77 mg，0.555 mmol)。該反應在室溫下攪拌持續5小時且完成。添加水以使產物沉澱。過濾所得固體且用水洗滌。該固體再溶解於二氯甲烷/甲醇中。有機物經硫酸鎂乾燥，過濾，且濃縮以生成163 mg粗化合物158。粗材料無需進一步純化繼續使用，假定100%產率。MS (m/z): 692.5 (M + 1)+ 。UPLC =1.68 (2.5 min方法)。
Figure 02_image1541
(12aS,12a'S)-9,9'-((吡啶-2,6-二基雙(亞甲基))雙(氧基))雙(8-甲氧基-12a,13-二氫-6H-苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-a]吲哚-6-酮) (128 mg，0.185 mmol)溶解於1,2-二氯乙烷(1850 µl)中且在室溫下添加三乙醯氧基硼氫化鈉(39.2 mg，0.185 mmol)。該反應在45分鐘時經檢查。再添加15 mg STAB且使其攪拌30分鐘。該反應用二氯甲烷稀釋且用飽和氯化銨淬滅。有機物用鹽水洗滌且經硫酸鎂乾燥，過濾且經汽提以生成165 mg粗材料。粗材料之約一半溶解於四氫呋喃/乙腈/水中且藉由RPHPLC (水/乙腈)純化。含有單還原產物之部分經冷凍且凍乾以生成所需化合物159 (19.5 mg，y=30%)。MS (m/z): 694.6 (M + 1)+ 。UPLC =1.77 (2.5 min方法)。實例 30. 合成化合物 161
Figure 02_image1543
向化合物1 (147 mg，0.5 mmol)及1,3-二碘丙烷(23 ul, 0.2 mmol)於無水二甲基甲醯胺(1.0 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(111 mg，0.8 mmol)。該混合物在室溫下攪拌隔夜(16小時)且用二氯甲烷稀釋。其用飽和氯化銨及鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥且過濾。濾液在減壓下蒸發且殘餘物經由製備型逆相HPLC (C18管柱，乙腈/水)純化以生成呈白色固體狀之化合物160 (18.9 mg，15%)。1 H NMR (400 Hz, CDCl3 ): δ 8.26 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.87 (d, J = 4.4 Hz, 2H), 7.55 (s, 2H), 7.26 (s, 4H), 7.12-7.08 (m, 2H), 6.88 (s, 2H), 4.45 (ddd, J1 = 10.8 Hz, J2 = 4.4 Hz, J3 = 4.0 Hz, 2H), 4.36-4.26 (m, 4H), 3.94 (s, 6H), 3.70 (dd, J1 = 16.8 Hz, J2 = 10.8 Hz, 2H), 3.50 (dd, J1 = 16.8 Hz, J2 = 4.0 Hz, 2H), 2.45 (p, J = 6.0 Hz, 2H)；HRMS (ESI, m/z):計算值629.2400 (M + H)+ ,實驗值629.2400。
Figure 02_image1545
程序：向化合物160 (331 mg，0.527 mmol)於無水1,2-二氯乙烷(3.5 ml)中之經攪拌溶液中添加三乙醯氧基硼氫化鈉(117 mg，0.527 mmol)且該混合物在室溫下再氮氣下攪拌持續90分鐘。用甲醇(約1 mL)及飽和碳酸氫鈉淬滅該反應且用DCM稀釋，經分離且有機層用鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾且經汽提。粗物質藉由半製備型HPLC (C18管柱，乙腈/去離子水)純化以獲得呈白色固體狀之化合物161 (4.2 mg y = 12%)。MS (m/z): 630.9 (M + 1)+ 。UPLC =2.5 min (7 min方法，30-98%) Agilent。實例 31. 合成化合物 162
Figure 02_image1547
化合物162以與實例30中所述之兩步驟程序相似的方式製備以獲得化合物62 (0.055 g，0.083 mmol, 34.3%產率)。MS (m/z): 659.1 (M+1)+ 。實例 32. 製備化合物 18 之抗 FRα 結合物 ( 抗 FRα-18)
含有在50 mM HEPES (4-(2-羥基乙基)-1-哌嗪乙烷磺酸) pH 8.5緩衝液及10% v/v二甲基乙醯胺(N,N -二甲基乙醯胺)共溶劑中之2.0 mg/mL抗FRα抗體及3.4莫耳當量化合物18 (在25℃下用5%二甲基乙醯胺水溶液中5倍過量之亞硫酸氫鈉預處理持續6小時)的反應在25℃下經培育持續8小時。反應後，該結合物使用NAP去鹽管柱(Illustra Sephadex G-25 DNA Grade, GE Healthcare)經純化且緩衝液交換至10 mM組胺酸、250 mM甘胺酸、1.0% w/v蔗糖、0.01% Tween-20、50 µM亞硫酸氫鈉pH 5.5調配緩衝液中。在室溫下在相同緩衝液中執行透析持續4小時且接著在4℃下使用Slide-a-Lyzer透析卡匣(ThermoScientific 30,000 MWCO)執行透析隔夜。
發現經純化結合物具有1.2 mg/ml之最終蛋白質濃度及每個抗體所連接之平均2.6個化合物18分子(藉由UV-Vis，關於化合物18使用莫耳消光係數ε330 nm = 11, 971 cm-1 M-1 及ε280 nm = 30, 188 cm-1 M-1 ，且關於抗FRα抗體使用ε280 nm = 201,400 cm-1 M-1 )；97.5%單體(藉由尺寸排阻層析)；及＜1.1%未結合化合物18 (藉由雙重管柱、逆相HPLC分析)。實例 33. 製備化合物 79 之抗 EGFR 結合物 ( 抗 EGFR-79)
含有在50 mM HEPES (4-(2-羥基乙基)-1-哌嗪乙烷磺酸) pH 8.5緩衝液及10% v/v二甲基乙醯胺(N,N -二甲基乙醯胺)共溶劑中之2.0 mg/mL抗EGFR抗體及4.5莫耳當量化合物79 (在25℃下用5%二甲基乙醯胺水溶液中5倍過量之亞硫酸氫鈉預處理持續6小時)的反應在25℃下經培育持續8小時。反應後，該結合物使用NAP去鹽管柱(Illustra Sephadex G-25 DNA Grade, GE Healthcare)經純化且緩衝液交換至10 mM組胺酸、250 mM甘胺酸、1.0% w/v蔗糖、0.01% Tween-20、50 µM亞硫酸氫鈉pH 5.5調配緩衝液中。在室溫下在相同緩衝液中執行透析持續4小時且接著在4℃下使用Slide-a-Lyzer透析卡匣(ThermoScientific 30,000 MWCO)執行透析隔夜。
發現經純化結合物具有1.2 mg/ml之最終蛋白質濃度及每個抗體所連接之平均3.4個化合物79分子(藉由UV-Vis，關於化合物79使用莫耳消光係數ε330 nm = 11, 971 cm-1 M-1 及ε280 nm = 30, 188 cm-1 M-1 ，且關於抗EGFR抗體使用ε280 nm = 201,400 cm-1 M-1 )；96.3%單體(藉由尺寸排阻層析)；及＜1.0%未結合化合物79 (藉由雙重管柱、逆相HPLC分析)。實例 34. 製備化合物 46 之抗 FRα 結合物 ( 抗 FRα-46)
含有在50 mM HEPES (4-(2-羥基乙基)-1-哌嗪乙烷磺酸) pH 8.5緩衝液及10% v/v二甲基乙醯胺(N,N -二甲基乙醯胺)共溶劑中之2.0 mg/mL抗FRα抗體及5莫耳當量化合物46 (在25℃下用5%二甲基乙醯胺水溶液中5倍過量之亞硫酸氫鈉預處理持續6小時)的反應在25℃下經培育持續8小時。反應後，該結合物使用NAP去鹽管柱(Illustra Sephadex G-25 DNA Grade, GE Healthcare)經純化且緩衝液交換至10 mM組胺酸、250 mM甘胺酸、1.0% w/v蔗糖、0.01% Tween-20、50 µM亞硫酸氫鈉pH 5.5調配緩衝液中。在室溫下在相同緩衝液中執行透析持續4小時且接著在4℃下使用Slide-a-Lyzer透析卡匣(ThermoScientific 30,000 MWCO)執行透析隔夜。
發現經純化結合物具有1.2 mg/ml之最終蛋白質濃度及每個抗體所連接之平均3.3個化合物46分子(藉由UV-Vis，關於化合物46使用莫耳消光係數ε330 nm = 15,280 cm-1 M-1 及ε280 nm = 30, 115 cm-1 M-1 ，且關於抗FRα抗體使用ε280 nm = 201,400 cm-1 M-1 )；95.1%單體(藉由尺寸排阻層析)；及＜0.8%未結合化合物46 (藉由雙重管柱、逆相HPLC分析)。實例 35. 製備化合物 55 之抗 FRα 結合物 ( 抗 FRα-55)
含有在50 mM HEPES (4-(2-羥基乙基)-1-哌嗪乙烷磺酸) pH 8.5緩衝液及10% v/v二甲基乙醯胺(N,N -二甲基乙醯胺)共溶劑中之2.0 mg/mL抗FRα抗體及5莫耳當量化合物55 (在25℃下用5%二甲基乙醯胺水溶液中5倍過量之亞硫酸氫鈉預處理持續6小時)的反應在25℃下經培育持續8小時。反應後，該結合物使用NAP去鹽管柱(Illustra Sephadex G-25 DNA Grade, GE Healthcare)經純化且緩衝液交換至10 mM組胺酸、250 mM甘胺酸、1.0% w/v蔗糖、0.01% Tween-20、50 µM亞硫酸氫鈉pH 5.5調配緩衝液中。在室溫下在相同緩衝液中執行透析持續4小時且接著在4℃下使用Slide-a-Lyzer透析卡匣(ThermoScientific 30,000 MWCO)執行透析隔夜。
發現經純化結合物具有2.5 mg/ml之最終蛋白質濃度及每個抗體所連接之平均2.4個化合物55分子(藉由UV-Vis，關於化合物55使用莫耳消光係數ε330 nm = 15,280 cm-1 M-1 及ε280 nm = 30, 115 cm-1 M-1 ，且關於抗FRα抗體使用ε280 nm = 201,400 cm-1 M-1 )；95.1%單體(藉由尺寸排阻層析)；及＜0.8%未結合化合物55 (藉由雙重管柱、逆相HPLC分析)。實例 36. 化合物 19 ( 抗 FR α -19 、抗 EGFR-19) 及化合物 47 ( 抗 FR α -47 、抗 EGFR-47) 之抗 FR α -C442 或抗 EGFR-C442 結合物的一般製備
根據標準程序製備攜帶兩個未配對半胱胺酸殘基之抗體。
向此中間物於15 mM磷酸鉀、5 mM N,N,N’,N’-乙二胺四乙酸(EDTA) pH 6.0中之溶液中添加丙二醇及作為N,N-二甲基乙醯胺(二甲基乙醯胺)中之儲備溶液的5-10 eq順丁烯二醯亞胺(化合物19或化合物47)以生成反應混合物，其最終溶劑組成為15 mM磷酸鉀、5 mM EDTA pH 6.0中之約48%丙二醇及約2%二甲基乙醯胺。使該反應在25℃下繼續進行隔夜。該結合物使用Sephadex G-25去鹽管柱經純化至20 mM組胺酸、8.5%蔗糖、0.01% Tween-20、50M亞硫酸氫鈉pH 4.2中。需要時重複純化以移除殘餘未結合藥物。
發現經純化結合物具有約2.5 mg/ml之最終蛋白質濃度及一般每個抗體所連接之平均約1.8個IGN分子(藉由UV-Vis，使用如上文之莫耳消光係數；約94%單體(藉由尺寸排阻層析)；及＜1%未結合IGN (藉由雙重管柱、逆相HPLC分析)。實例 37. 細胞毒性分析
以下細胞株用於該等研究：KB (子宮頸癌，ATCC)、NCI-H2110 (非小細胞肺癌，ATCC)、Namalwa (伯奇氏淋巴瘤，ATCC)及T47D (乳房上皮癌，ATCC)。該等細胞維持於由製造商推薦之培養基中且經塗板用於細胞毒性實驗。細胞以1,000個細胞/孔(KB、Namalwa)或2,000個細胞/孔(NCI H2110、T47D)之接種密度經塗板於96孔平底培養盤中。結合物或游離藥物化合物稀釋於補充有熱不活化10% FBS (Life Technologies)及0.1 mg/ml慶大黴素(Life Technologies)之RPMI-1640 (Life Technologies)中，且添加至經塗板細胞中。為了測定該等結合物之細胞毒性活性的特異性，將過量未結合抗體添加至經稀釋結合物之獨立集合中(+阻斷樣品，IC50 表)。該等培養盤在37℃、5% CO2 下經培育持續4天(T47D細胞)或5天(KB、NCI H2110細胞)。使用阿爾瑪藍分析(Invitrogen)來測定T47D細胞之變異性，且將WST-8分析(Donjindo Molecular Technologies, Inc.)應用於KB、NCI H2110、Namalwa細胞之變異性。該等分析根據製造商之方案來執行。使用S型劑量-反應非線性迴歸曲線擬合(GraphPad Software Inc.)來產生殺死曲線及IC50 。如表1-3中所示，本發明之細胞毒性化合物及結合物在活體外細胞毒性分析中高度有效抵抗多種癌細胞。表 1. 藉由活體外細胞毒性分析測定之游離細胞毒性化合物的IC50 值(莫耳濃度，M)
IGN 分解代謝物 KB Namalwa
150 8.00E-12 1.00E-12
162 2.00E-11 3.00E-12
157 3.00E-12 1.00E-12
155 2.00E-11 2.00E-12
161 2.50E-10 3.00E-11
159 3.00E-12 1.00E-12
123 3.00E-12 1.00E-12
108 5.00E-11 1.00E-11
表 2. 藉由活體外細胞毒性分析測定之抗FRα-結合物的IC50 值(莫耳濃度，M)
肽連接體 化合物 # KB KB T47D T47D
-阻斷 + 阻斷 - 阻斷 + 阻斷
Ala-Ala 95 2.00E-11 2.00E-9 3.00E-10 4.00E-9
Ala-Val 18 3.00E-11 3.00E-9 1.00E-10 1.00E-8
Ala-Val 79 1.00E-10 ＞3.00E-8      
Ala-Val 83 7.00E-12 2.00E-9 7.00E-11 1.00E-8
Gln-Leu 126 1.00E-11 ＞3.50E-9 5.00E-11 1.00E-8
Ala-Val 23 2.00E-12 4.00E-10 6.00E-12 2.00E-9
Gln-Leu 55 1.00E-11 2.00E-9 2.00E-10 7.00E-9
Ala-Val 26 2.00E-11 ＞3.50E-9 3.00E-11 9.00E-9
Ala-Val 46 2.00E-11 3.50E-9 3.00E-10 2.00E-8
Ala-Val 65 1.00E-12 7.00e-10 8.00E-12 7.00e-9
-- 110 2.00E-11 6.00E-11 2.00E-10 8.00E-10
-- 121 1.00E-11 1.00E-10 5.00E-10 2.00E-9
-- 117 1.00E-10 9.00E-10 3.00E-9 3.00E-9
-- 148 3.00E-11 4.00E-10 5.00E-9 5.00E-9
Ala-Val 99 2.00E-12 6.00E-10 1.00E-11 3.00E-9
Ala-Val 106 7.00E-11 ＞3.50E-9 2.00E-10 3.00E-8
表 3. 藉由活體外細胞毒性分析測定之抗EGFR-結合物的IC50 值(莫耳濃度，M)
肽連接體 化合物# HSC2 HSC2 KB KB H2110 H2110
-阻斷 + 阻斷 -阻斷 + 阻斷 - 阻斷 + 阻斷
Ala-Val 18 6.00E-12 1.00E-9 4.00E-11 3.50E-9 4.00E-10 8.00E-9
Ala-Val 79 3.00E-10 ＞3.50E-9 3.00E-9 ＞3.50E-9 ＞1.00E-8 ＞3.50E-8
Gln-Leu 55 4.00E-12 9.00E-10 3.00E-11 2.00E-9 1.00E-10 6.00E-9
Ala-Val 46 6.00E-12 1.00E-9 4.00E-11 2.00E-9 1.00E-10 1.00E-8
Ala-Val 65 1.50E-12 1.20E-9 4.80E-12 1.50E-9      
Ala-Val 134 9.00E-11 8.00E-9 6.00E-10 1.00E-8      
Ser-Val 147 5.00E-11 5.00E-9 2.50E-10 7.00E-9      
實例 38. 攜帶 OV90 異種移植物之 SCID 小鼠中之抗 FRα-55 的抗腫瘤活性 ( 中值腫瘤體積， mm3 ) 。
自Charles River Laboratories接受6週齡雌性CB.17 SCID小鼠。小鼠藉由在右側腹中進行皮下注射而接種懸浮於0.1 ml 50% matrigel/無血清培養基中之1 × 107 個OV-90腫瘤細胞。當腫瘤體積達到大約100 mm3 時(接種後第7天)，動物基於腫瘤體積經隨機化至每組六隻小鼠之4個組中。小鼠在第0天(接種後第7天)接受媒劑對照物(0.15 ml/小鼠)或0.7、1.4或2.7 mg/kg之抗FRα-55之單一IV投與。
每週兩次至三次使用測徑規量測三維中之腫瘤尺寸。腫瘤體積使用式子V =長度 × 寬度 × 高度 × ½以mm3 表述。當腫瘤體積降低50%或更高時，小鼠被視為具有部分衰退(PR)，當無法偵測到可觸知腫瘤時，小鼠被視為具有完全腫瘤衰退(CR)。腫瘤體積藉由StudyLog軟體來測定。
腫瘤生長抑制(T/C值)使用下式來測定： T/C (%) = 經治療之中值腫瘤體積/對照物之中值腫瘤體積×100。
當媒劑對照物之腫瘤體積達到1000 mm3 之預定尺寸時，同時針對經治療(T)及媒劑對照物(C)組測定腫瘤體積。測定各經治療組之每日中值腫瘤體積，包括無腫瘤小鼠(0 mm3 )。根據NCI標準，T/C ≤ 42%係抗腫瘤活性之最低水準。T/C ＜10%被視為高抗腫瘤活性水準。
如圖1所示，抗FRα-55結合物在所測試之所有劑量下均具高度活性。實例 39. 攜帶 NCI-H2110 異種移植物之 SCID 小鼠中之抗 FRα-18 的抗腫瘤活性 ( 中值腫瘤體積， mm3 ) 。
自Charles River Laboratories接受6週齡雌性CB.17 SCID小鼠。小鼠藉由在右側腹中進行皮下注射而接種懸浮於0.1 ml 50% matrigel/無血清培養基中之1 × 107 個NCI-H2110腫瘤細胞。當腫瘤體積達到大約100 mm3 時(接種後第6天)，動物基於腫瘤體積經隨機化至每組六隻小鼠之3個組中。小鼠在第0天(接種後第6天)接受媒劑對照物(0.15 ml/小鼠)或1.1或2.2 mg/kg之抗FRα-18之單一IV投與。
每週兩次至三次使用測徑規量測三維中之腫瘤尺寸。腫瘤體積使用式子V =長度 × 寬度 × 高度 × ½以mm3 表述。當腫瘤體積降低50%或更高時，小鼠被視為具有部分衰退(PR)，當無法偵測到可觸知腫瘤時，小鼠被視為具有完全腫瘤衰退(CR)。腫瘤體積藉由StudyLog軟體來測定。
腫瘤生長抑制(T/C值)使用下式來測定： T/C (%) = 經治療之中值腫瘤體積/對照物之中值腫瘤體積×100。
當媒劑對照物之腫瘤體積達到1000 mm3 之預定尺寸時，同時針對經治療(T)及媒劑對照物(C)組測定腫瘤體積。測定各經治療組之每日中值腫瘤體積，包括無腫瘤小鼠(0 mm3 )。根據NCI標準，T/C ≤ 42%係抗腫瘤活性之最低水準。T/C ＜10%被視為高抗腫瘤活性水準。
如圖2所示，抗FRα-18結合物在所測試之所有劑量下均具高度活性。實例 40. 攜帶 FaDu 異種移植物之 SCID 小鼠中之抗 EGFR-79 的抗腫瘤活性 ( 中值腫瘤體積， mm3 ) 。
自Charles River Laboratories接受6週齡雌性CB.17 SCID小鼠。小鼠藉由在右側腹中進行皮下注射而接種懸浮於0.1 ml 50% matrigel/無血清培養基中之1 × 107 個FaDu腫瘤細胞。當腫瘤體積達到大約100 mm3 時(接種後第6天)，動物基於腫瘤體積經隨機化至每組六隻小鼠之4個組中。小鼠在第0天(接種後第6天)接受媒劑對照物(0.15 ml/小鼠)或3.7、7.4或14.9 mg/kg之抗EGFR-79之單一IV投與。
每週兩次至三次使用測徑規量測三維中之腫瘤尺寸。腫瘤體積使用式子V =長度 × 寬度 × 高度 × ½以mm3 表述。當腫瘤體積降低50%或更高時，小鼠被視為具有部分衰退(PR)，當無法偵測到可觸知腫瘤時，小鼠被視為具有完全腫瘤衰退(CR)。腫瘤體積藉由StudyLog軟體來測定。
腫瘤生長抑制(T/C值)使用下式來測定： T/C (%) = 經治療之中值腫瘤體積/對照物之中值腫瘤體積×100。
當媒劑對照物之腫瘤體積達到1000 mm3 之預定尺寸時，同時針對經治療(T)及媒劑對照物(C)組測定腫瘤體積。測定各經治療組之每日中值腫瘤體積，包括無腫瘤小鼠(0 mm3 )。根據NCI標準，T/C ≤ 42%係抗腫瘤活性之最低水準。T/C ＜10%被視為高抗腫瘤活性水準。
如圖3所示，抗EGFR-79結合物在所測試之所有劑量下均具高度活性。實例 41. 攜帶 Ishikawa 異種移植物之 SCID 小鼠中之抗 FRα-46 的抗腫瘤活性 ( 中值腫瘤體積， mm3 ) 。
自Charles River Laboratories接受6週齡雌性CB.17 SCID小鼠。小鼠藉由在右側腹中進行皮下注射而接種懸浮於0.1 ml 50% matrigel/無血清培養基中之1 × 107 個Ishikawa腫瘤細胞。當腫瘤體積達到大約100 mm3 時(接種後第23天)，動物基於腫瘤體積經隨機化至每組六隻小鼠之4個組中。小鼠在第0天(接種後第23天)接受媒劑對照物(0.15 ml/小鼠)或0.5、0.9及1.9 mg/kg之抗FRα-46之單一IV投與。
每週兩次至三次使用測徑規量測三維中之腫瘤尺寸。腫瘤體積使用式子V =長度 × 寬度 × 高度 × ½以mm3 表述。當腫瘤體積降低50%或更高時，小鼠被視為具有部分衰退(PR)，當無法偵測到可觸知腫瘤時，小鼠被視為具有完全腫瘤衰退(CR)。腫瘤體積藉由StudyLog軟體來測定。
腫瘤生長抑制(T/C值)使用下式來測定： T/C (%) = 經治療之中值腫瘤體積/對照物之中值腫瘤體積×100。
當媒劑對照物之腫瘤體積達到1000 mm3 之預定尺寸時，同時針對經治療(T)及媒劑對照物(C)組測定腫瘤體積。測定各經治療組之每日中值腫瘤體積，包括無腫瘤小鼠(0 mm3 )。根據NCI標準，T/C ≤ 42%係抗腫瘤活性之最低水準。T/C ＜10%被視為高抗腫瘤活性水準。
如圖4所示，抗FRα-46結合物在所測試之所有劑量下均具活性。實例 42. 攜帶 KB 異種移植物之 SCID 小鼠中之抗 FRα-18 的抗腫瘤活性 ( 中值腫瘤體積， mm3 ) 。
自Charles River Laboratories接受6週齡雌性CB.17 SCID小鼠。小鼠藉由在右側腹中進行皮下注射而接種懸浮於0.1 ml 50% matrigel/無血清培養基中之1 × 107 個Ishikawa腫瘤細胞。當腫瘤體積達到大約100 mm3 時(接種後第6天)，動物基於腫瘤體積經隨機化至每組六隻小鼠之3個組中。小鼠在第0天(接種後第6天)接受媒劑對照物(0.15 ml/小鼠)或1.3及2.7 mg/kg之抗FRα-18之單一IV投與。
每週兩次至三次使用測徑規量測三維中之腫瘤尺寸。腫瘤體積使用式子V =長度 × 寬度 × 高度 × ½以mm3 表述。當腫瘤體積降低50%或更高時，小鼠被視為具有部分衰退(PR)，當無法偵測到可觸知腫瘤時，小鼠被視為具有完全腫瘤衰退(CR)。腫瘤體積藉由StudyLog軟體來測定。
腫瘤生長抑制(T/C值)使用下式來測定： T/C (%) = 經治療之中值腫瘤體積/對照物之中值腫瘤體積×100。
當媒劑對照物之腫瘤體積達到1000 mm3 之預定尺寸時，同時針對經治療(T)及媒劑對照物(C)組測定腫瘤體積。測定各經治療組之每日中值腫瘤體積，包括無腫瘤小鼠(0 mm3 )。根據NCI標準，T/C ≤ 42%係抗腫瘤活性之最低水準。T/C ＜10%被視為高抗腫瘤活性水準。
如圖5所示，抗FRα-18結合物在所測試之所有劑量下均具高度活性。實例 43. 攜帶 KB 異種移植物之 SCID 小鼠中之抗 FRα-46 的抗腫瘤活性 ( 中值腫瘤體積， mm3 ) 。
自Charles River Laboratories接受6週齡雌性CB.17 SCID小鼠。小鼠藉由在右側腹中進行皮下注射而接種懸浮於0.1 ml 50% matrigel/無血清培養基中之1 × 107 個KB腫瘤細胞。當腫瘤體積達到大約100 mm3 時(接種後第6天)，動物基於腫瘤體積經隨機化至每組六隻小鼠之4個組中。小鼠在第0天(接種後第6天)接受媒劑對照物(0.15 ml/小鼠)或0.5、0.9及1.9 mg/kg之抗FRα-46之單一IV投與。
每週兩次至三次使用測徑規量測三維中之腫瘤尺寸。腫瘤體積使用式子V =長度 × 寬度 × 高度 × ½以mm3 表述。當腫瘤體積降低50%或更高時，小鼠被視為具有部分衰退(PR)，當無法偵測到可觸知腫瘤時，小鼠被視為具有完全腫瘤衰退(CR)。腫瘤體積藉由StudyLog軟體來測定。
腫瘤生長抑制(T/C值)使用下式來測定： T/C (%) = 經治療之中值腫瘤體積/對照物之中值腫瘤體積×100。
當媒劑對照物之腫瘤體積達到1000 mm3 之預定尺寸時，同時針對經治療(T)及媒劑對照物(C)組測定腫瘤體積。測定各經治療組之每日中值腫瘤體積，包括無腫瘤小鼠(0 mm3 )。根據NCI標準，T/C ≤ 42%係抗腫瘤活性之最低水準。T/C ＜10%被視為高抗腫瘤活性水準。
如圖6所示，抗FRα-46結合物在所測試之所有劑量下均具高度活性。實例 44. 攜帶OCI-Ly18異種移植物之SCID小鼠中之huCD19-55的抗腫瘤活性(中值腫瘤體積，mm3 )。
自Charles River Laboratories接受6週齡雌性CB.17 SCID小鼠。小鼠藉由在右側腹中進行皮下注射而接種懸浮於0.1 ml 50% matrigel/無血清培養基中之1 × 107 個OCI-Ly18腫瘤細胞。當腫瘤體積達到大約100 mm3 時(接種後第14天)，動物基於腫瘤體積經隨機化至每組六隻小鼠之4個組中。小鼠在第0天(接種後第14天)接受媒劑對照物(0.15 ml/小鼠)或1.1及2.1 mg/kg之huCD19-55之單一IV投與。
每週兩次至三次使用測徑規量測三維中之腫瘤尺寸。腫瘤體積使用式子V =長度 × 寬度 × 高度 × ½以mm3 表述。當腫瘤體積降低50%或更高時，小鼠被視為具有部分衰退(PR)，當無法偵測到可觸知腫瘤時，小鼠被視為具有完全腫瘤衰退(CR)。腫瘤體積藉由StudyLog軟體來測定。
腫瘤生長抑制(T/C值)使用下式來測定： T/C (%) = 經治療之中值腫瘤體積/對照物之中值腫瘤體積×100。
當媒劑對照物之腫瘤體積達到1000 mm3 之預定尺寸時，同時針對經治療(T)及媒劑對照物(C)組測定腫瘤體積。測定各經治療組之每日中值腫瘤體積，包括無腫瘤小鼠(0 mm3 )。根據NCI標準，T/C ≤ 42%係抗腫瘤活性之最低水準。T/C ＜10%被視為高抗腫瘤活性水準。
如圖7所示，huCD19-55結合物在所測試之所有劑量下均具高度活性。實例 45. 所選擇之抗 EGFR-IGN 結合物之旁觀者活性
細胞在補充有熱不活化10% FBS (Thermo Fisher)及0.1 mg/ml慶大黴素(Thermo Fisher)之RPMI-1640 (Thermo Fisher)中以1000個MDA-MB-468細胞/孔或500個Namalwa細胞/孔之接種密度塗板於96孔U型底、低叢集培養盤(Costar)中。抗原陽性MDA-MDA-468細胞及抗原陰性Namalwa細胞之混合培養物(或分別培養之各細胞)暴露於相同培養基中之連續稀釋結合物且添加至經塗板細胞中。細胞經培育持續5天，且藉由Cell Titer Glo (Promega)根據製造商之方案測定總細胞活力之抑制作用。如表4所示，結果指示所有結合物均證明對抗原陰性細胞之旁觀者活性。表 4. 藉由活體外總細胞活力分析測定之抗EGFR-結合物的IC50 值(莫耳濃度，M)
化合物 # 對照物， IC50 ， M 旁觀者
Namalwa MDA-MB-468 (MDA-MB-468 + Namalwa)
18 2.00E-9 2.30E-11 3.00E-11
79 6.00E-9 1.70E-10 2.70E-10
46 3.00E-9 1.00E-11 1.00E-11
實例 46. 本發明化合物之分解代謝物與 DNA 之結合
使用競爭ELISA來量測本發明化合物之分解代謝物與經長葉毛地黃配質標記之髮夾寡核苷酸的結合，其中在數種濃度下之分解代謝物與經生物素標記之參考分子預混合，隨後用經長葉毛地黃配質標記之髮夾寡核苷酸培育。藉由ELISA來評估在本發明之競爭性分解代謝物存在下經生物素標記之參考化合物與經長葉毛地黃配質標記之髮夾寡核苷酸的結合。該ELISA方法使用經塗佈抗生蛋白鏈菌素用於捕捉且使用抗長葉毛地黃配質抗體-辣根過氧化酶(HRP)結合物用於偵測。結果係如圖8所示。實例 47. 關於結合效率之比較數據
比較物吲哚啉并苯二氮平化合物(化合物A )使用與WO2013/177481中所述之彼等相似的程序來合成。
化合物A 在經遮蔽亞胺苯二氮平單體之N-10位置處具有自降解連接體(亦即，該自降解連接體之裂解導致在N10-C11位置處形成亞胺鍵)。相比之下，本發明化合物(諸如化合物18 )在經還原亞胺苯二氮平單體之N-10位置處具有自降解連接體。本發明化合物在未攜帶自降解連接體之苯二氮平單體中具有亞胺官能基。亞胺官能基可藉由用亞硫酸氫鈉處理該化合物以形成具有增加之溶解度之磺化化合物，接著用抗體進行結合反應而經修飾。
Figure 02_image1549
；
Figure 02_image1551
合成化合物 A
Figure 02_image1553
(12S,12aS)-12-羥基-8-甲氧基-9-((5-(((S)-8-甲氧基-6-側氧基-11,12,12a,13-四氫-6H-苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-a]吲哚-9-基)氧基)戊基)氧基)-6-側氧基-12a,13-二氫-6H-苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-a]吲哚-11(12H)-甲酸4-((S)-2-((S)-2-(6-甲氧基-6-側氧基己醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)丙醯胺基)苯甲酯(30 mg，0.026 mmol) (化合物A-1 )使用與WO2013/177481中所述之彼等相似的程序來製備。化合物A-1 溶解於無水四氫呋喃(988 µl)及DI水(329 µl)中。添加氫氧化鋰(3.16 mg，0.132 mmol)。反應混合物藉由LCMS監測。在室溫下攪拌持續90 min之後，其用30% MeOH/DCM及DI水稀釋，接著用0.5 M HCl (約1 mL)酸化至pH約為3。形成白色沉澱物。該溶液用30% MeOH/DCM萃取2次。有機層用水洗滌，經硫酸鎂乾燥，經由矽藻土過濾且濃縮以獲得20 mg呈灰白色固體狀之粗產物化合物A-2 。
Figure 02_image1555
6-(((S)-1-(((S)-1-((4-((((12S,12aS)-12-羥基-8-甲氧基-9-((5-(((S)-8-甲氧基-6-側氧基-11,12,12a,13-四氫-6H-苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-a]吲哚-9-基)氧基)戊基)氧基)-6-側氧基-11,12,12a,13-四氫-6H-苯并[5,6][1,4]二氮平并[1,2-a]吲哚-11-羰基)氧基)甲基)苯基)胺基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)胺基)-6-側氧基己酸化合物A-2 (20 mg，0.018 mmol)及N-羥基丁二醯亞胺(6.14 mg，0.053 mmol)溶解於無水二氯甲烷(356 µl)中。添加EDC●HCl (17.05 mg，0.089 mmol)且反應混合物在室溫下攪拌持續90 min。在反應完成時，該混合物用DCM稀釋且用水洗滌。有機層經無水硫酸鎂乾燥，過濾且濃縮。粗產物藉由RP-HPLC (C18 Kromasil，ACN/DI水，經30 min 50-65%)純化。含有產物之部分經組合，經冷凍且凍乾以生成化合物A 。製備化合物 A 之抗體結合物
化合物A 之抗體結合物藉由在室溫下在含有50 mM HEPES pH 8.5及共溶劑(15%或30% v/v二甲基乙醯胺(DMA)或40%丙二醇(PG))之緩衝溶液中使該抗體與過量化合物A 反應持續24小時或更久來製備。下表 5 顯示結合產率、單體百分率及DAR值。表 5.
條件 單體 DAR 產率
50 mM HEPES，pH 8.5，15% DMA，RT，24 h 61% 1.3 45%
50 mM HEPES，pH 8.5，30% DMA，RT，24-72 h 87% 約1.0 NA
50 mM HEPES，pH 8.5，40% PG，RT，24-72 h 79% 約1.1 NA
部分地歸因於化合物A 之低溶解度，發現該結合物中化合物A 之倂入程度比本發明結合物低得多，如藉由顯著較低DAR值所指示。相比而言，化合物18 之抗體結合物之DAR值為約2.6 (參見上文實例32)。另外，圖 9 顯示有大量未結合抗體(D0)存在於所得結合物中。亦觀察到化合物A 之結合物的單體百分率比本發明結合物低得多。相比而言，化合物18 之抗體結合物具有97.5%單體百分率；而化合物A 之結合物具有61%至87%之間的單體百分率，視所用之反應條件而定。增加用於結合反應中以溶解化合物A 之共溶劑之量不會引起DAR值增加。
圖 1 顯示攜帶OV90異種移植物之SCID小鼠中之抗FRα-55結合物的抗腫瘤活性。圖 2 顯示攜帶NCI-H2110異種移植物之SCID小鼠中之抗FRα-18結合物的抗腫瘤活性。圖 3 顯示攜帶FaDu異種移植物之SCID小鼠中之抗EGFR-79結合物的抗腫瘤活性。圖 4 顯示攜帶Ishikawa異種移植物之SCID小鼠中之抗FRα-46結合物的抗腫瘤活性。圖 5 顯示攜帶KB異種移植物之SCID小鼠中之抗FRα-18結合物的抗腫瘤活性。圖 6 顯示攜帶KB異種移植物之SCID小鼠中之抗FRα-46結合物的抗腫瘤活性。圖 7顯示攜帶OCI-Ly18異種移植物之SCID小鼠中之huCD19-55結合物的抗腫瘤活性。圖 8 顯示本發明之例示性化合物的DNA結合親和力。圖 9 係比較物化合物A 之抗體結合物的質譜分析(MS)數據，顯示大量D0 (未結合抗體)物質存在。
Figure 109110599-A0101-11-0002-1

Claims (66)

  1. 一種細胞毒性化合物，其由下式表示：
    Figure 03_image001
    (I)；
    Figure 03_image006
    (II)；
    Figure 03_image008
    (TI)；
    Figure 03_image010
    (T2)；
    Figure 03_image012
    (Im )；
    Figure 03_image014
    (IIm )；
    Figure 03_image016
    (TIm )；或
    Figure 03_image018
    (T2m )； 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： N與C之間的雙線
    Figure 03_image003
    表示單鍵或雙鍵，限制條件在於當其為雙鍵時，X不存在且Y為H或C1-4 烷基，且當其為單鍵時，X為H且Y為-OH或-SO3 H； W為-C(=O)-或-C(Y’)-； Y’為H或C1-4 烷基； R1a 、R2a 、R3a 、R4a 、R1b 、R2b 、R3b 及R4b 係各自獨立地選自由H、C1-10 烷基、-(OCH2 CH2 )n ORc 、鹵素、-NH(C=NH)NH2 、-OR、-NR’R’’、-NO2 、-NR’COR’’、-SR、-SOR’、-SO2 R’、-SO3 H、-OSO3 H、-SO2 NR’R’’、-CN、-N3 、-COR’、-OCOR’及-OCONR’R’’組成之群； Rc 為H或C1-4 烷基； n為整數1至24； R在每次出現時係獨立地選自由H、-(CH2 CH2 O)n -Rc 、C1-10 烷基、C3-8 環烷基、6員至18員芳基、含有一或多個獨立地選自N、O及S之雜原子的5員至18員雜芳環或含有1至6個獨立地選自O、S、N及P之雜原子的3員至18員雜環組成之群； R’及R’’係各自獨立地選自-H、-OH、-OR、-NHR、-NR2 、-COR、C1-10 烷基、-(CH2 CH2 O)n -Rc 及具有1至6個獨立地選自O、S、N及P之雜原子的3員至18員雜環； R5 為C3-12 伸烷基，該鏈可由一或多個選自-O-、-S-、-NH-、-NMe-、苯環、4員至7員雜芳環及4員至7員雜環之基團中斷，其中該苯、該4員至7員雜芳環及該4員至7員雜環經1至4個R6 取代； R6 在每次出現時係獨立地選自H、C1-10 烷基、-(CH2 CH2 O)n -Rc 、鹵素、-NH(C=NH)NH2 、-OR、-NR’R’’、-NO2 、-NCO、-NR’COR’’、-SR、-SOR’、-SO2 R’、-SO3 H、-OSO3 H、-SO2 NR’R’’、-CN、-N3 、-COR’、-OCOR’及-OCONR’R’’；且 RL 係包含可與細胞結合劑形成共價鍵之反應性基團的自降解連接體，限制條件在於該式(I)化合物不為：
    Figure 03_image020
    ；或
    Figure 03_image022
    ； 且限制條件在於該式(Im )化合物不為：
    Figure 03_image024
    。
  2. 如請求項1之化合物，其中該細胞毒性化合物係由描繪於表A中的各式之一或其醫藥學上可接受之鹽表示，其中： AA1 及AA2 各自獨立地為胺基酸殘基； a1為整數1至19； a2為整數1至5； Ra 為H或C1-4 烷基； q為1、2或3； Rs1 及Rs2 各自獨立地為H或C1-4 烷基，或Rs1 及Rs2 與其所附接之碳原子合起來形成3員至5員環烷基環，限制條件在於當q為1時，Rs1 及Rs2 與其所附接之碳原子合起來無法形成3員環烷基環； V為C(=O)或CH2 ； Z1 為-C(=O)-或-SO2 -NH-C(=O)-，其中-SO2 -NH-C(=O)-中之-SO2 -基團連接至P1 ； Rx 係不存在、C1-10 伸烷基、C3-8 環烷基、-(CH2 CH2 O)m1 -C1-10 伸烷基-或C1-10 伸烷基-(OCH2 CH2 )m2 -； m1及m2各自獨立地為整數1至24； Z2 係不存在、-C(=O)NH-或-NH-C(=O)-； Ry 係不存在、C1-10 伸烷基、-(CH2 CH2 O)m3 -C1-10 伸烷基-或C1-10 伸烷基-(OCH2 CH2 )m4 -； m3及m4各自獨立地為整數1至24； Zs 係具有經由二硫鍵或硫醚鍵共價連接至該細胞毒性化合物之反應性基團的雙官能交聯劑； J係包含能夠與細胞結合劑形成共價鍵之反應性基團(較佳地，胺反應性基團或硫醇反應性基團)之部分。
  3. 如請求項1或2之化合物，其中R1a 、R2a 、R3a 、R4a 、R1b 、R2b 、R3b 及R4b 均為H。
  4. 如請求項1至3中任一項之化合物，其中R5 為C3-7 伸烷基。
  5. 如請求項4之化合物，其中R5 為-(CH2 )3 -、-(CH2 )5 -或-(CH2 )7 -。
  6. 如請求項4之化合物，其中R5 為-(CH2 )5 -。
  7. 如請求項1至3中任一項之化合物，其中R5 係由下式表示：
    Figure 03_image073
    或
    Figure 03_image075
    ， 其中： X1 、X2 、X3 及X4 各自獨立地為N或CR6 ，限制條件在於X1 、X2 、X3 及X4 中之至少一者為CR6 。
  8. 如請求項7之化合物，其中R5 為：
    Figure 03_image077
    或
    Figure 03_image079
    。
  9. 如請求項8之化合物，其中R5 為：
    Figure 03_image081
    或
    Figure 03_image087
    ， 其中n為整數1至8。
  10. 如請求項9之化合物，其中n為1、2、3或4。
  11. 如請求項2之化合物，其中該化合物係由描繪於表B中的各式或其醫藥學上可接受之鹽表示。
  12. 如請求項2至11中任一項之化合物，其中Z1 為-C(=O)-。
  13. 如請求項2至12中任一項之化合物，其中Rx 為C1-6 伸烷基，Z2 及Ry 均不存在。
  14. 如請求項2至12中任一項之化合物，其中Rx 為-(CH2 CH2 O)m1 -C1-6 伸烷基-；Z2 為-NH-C(=O)-或-C(=O)-NH-；Ry 為C1-6 伸烷基。
  15. 如請求項2至12中任一項之化合物，其中Rx 為C1-6 伸烷基；Z2 為-NH-C(=O)-或-C(=O)-NH-；且Ry 為-(CH2 CH2 O)m2 -C1-6 伸烷基-。
  16. 如請求項11之化合物，其中該化合物係由描繪於表C中的各式之一或其醫藥學上可接受之鹽表示，其中： R6 為-C(=O)OR6a 或NR6b (CH2 CH2 O)n CH2 CH2 OR6c ； R6a 、R6b 及R6c 各自獨立地為H或C1-4 烷基； n為整數1至8； Ra 及Rb 在每次出現時獨立地為H或C1-4 烷基； r、r1及r2各自獨立地為整數2至6，且 s為整數2至12。
  17. 如請求項16之化合物，其中： R6a 及R6c 均為Me； R6b 為H； n為1、2、3或4； Ra 及Rb 在每次出現時獨立地為H或Me； r為4； r1為4； r2為2； s為1、2、3或4。
  18. 如請求項2至17中任一項之化合物，其中J為-COORd 或由COE表示之反應性酯，其中Rd 為H或C1-4 烷基。
  19. 如請求項18之化合物，其中J係選自N-羥基丁二醯亞胺酯、N-羥基磺基丁二醯亞胺酯、硝基苯基(例如2-硝基苯基或4-硝基苯基)酯、二硝基苯基(例如2,4-二硝基苯基)酯、磺基-四氟苯基(例如4-磺基-2,3,5,6-四氟苯基)酯及五氟苯基酯之反應性酯。
  20. 如請求項18之化合物，其中J為N-羥基丁二醯亞胺酯。
  21. 如請求項2至17中任一項之化合物，其中J為
    Figure 03_image401
    。
  22. 如請求項2至17中任一項之化合物，其中J為-SZs ，其中Zs 為H、SRe ，或係選自以下各式：
    Figure 03_image403
    (a1)；
    Figure 03_image405
    (a2)；
    Figure 03_image407
    (a3)；
    Figure 03_image409
    (a4)；
    Figure 03_image411
    (a5)；
    Figure 03_image413
    (a6)；
    Figure 03_image415
    (a7)；
    Figure 03_image417
    (a8)；
    Figure 03_image419
    (a9)；
    Figure 03_image421
    (a10)；
    Figure 03_image423
    (a11)；
    Figure 03_image425
    (a12)；
    Figure 03_image427
    (a13)；
    Figure 03_image429
    (a14)；
    Figure 03_image431
    (a15)，
    Figure 03_image433
    (a16)或
    Figure 03_image435
    (a17) 其中： q為整數1至5； n’為整數2至6； U為-H或SO3 H； Re 為具有1至6個碳原子之直鏈或分支鏈烷基或係選自苯基、硝基苯基(例如2-硝基苯基或4-硝基苯基)、二硝基苯基(例如2,4-二硝基苯基)、羧基硝基苯基(例如3-羧基-4-硝基苯基)、吡啶基或硝基吡啶基(例如4-硝基吡啶基)。
  23. 如請求項1至22中任一項之化合物，其中N與C之間的雙線
    Figure 03_image003
    表示雙鍵，X不存在且Y為H。
  24. 如請求項1至22中任一項之化合物，其中N與C之間的雙線
    Figure 03_image003
    表示單鍵，X為H且Y為-SO3 H。
  25. 如請求項2至24中任一項之化合物，其中a1為整數1至7。
  26. 如請求項25之化合物，其中AA1 -(AA2 )a1 係選自Gly-Gly-Gly、Ala-Val、Val-Ala、Val-Cit、Val-Lys、Phe-Lys、Lys-Lys、Ala-Lys、Phe-Cit、Leu-Cit、Lle-Cit、Phe-Ala、Phe-N9 -甲苯磺醯基-Arg、Phe-N9 -硝基-Arg、Phe-Phe-Lys、D-Phe-Phe-Lys、Gly-Phe-Lys、Leu-Ala-Leu、Ile-Ala-Leu、Val-Ala-Val、Ala-Leu-Ala-Leu、β-Ala-Leu-Ala-Leu、Gly-Phe-Leu-Gly、Val-Arg、Arg-Val、Arg-Arg、Val-D-Cit、Val-D-Lys、Val-D-Arg、D-Val-Cit、D-Val-Lys、D-Val-Arg、D-Val-D-Cit、D-Val-D-Lys、D-Val-D-Arg、D-Arg-D-Arg、Ala-Ala、Ala-D-Ala、D-Ala-Ala、D-Ala-D-Ala、Ala-Met、Met-Ala、Thr-Thr、Thr-Met、Met-Thr、Leu-Ala、Cit-Val、Gln-Val、Ser-Val、Leu-Gln、Gln-Leu、Phe-Arg、Arg-Phe、Tyr-Arg、Arg-Tyr、Phe-Gln、Gln-Phe、Val-Thr、Thr-Val、Met-Tyr及Tyr-Met。
  27. 如請求項26之化合物，其中AA1 -(AA2 )a1 為Ala-Ala、L-Ala-L-Ala、Ala-Val、L-Ala-L-Val、Gln-Val、L-Gln-L-Val、Gln-Leu、L-Gln-L-Leu、Ser-Val或L-Ser-L-Val。
  28. 如請求項1之化合物，其中該化合物係選自描繪於表D中的各式之一或其醫藥學上可接受之鹽，其中： R100 為-OH、-OMe或
    Figure 03_image630
    ； Zs 為H、SRe ，或係選自以下各式之一：
    Figure 03_image403
    (a1)；
    Figure 03_image405
    (a2)；
    Figure 03_image407
    (a3)；
    Figure 03_image409
    (a4)；
    Figure 03_image411
    (a5)；
    Figure 03_image413
    (a6)；
    Figure 03_image415
    (a7)；
    Figure 03_image417
    (a8)；
    Figure 03_image419
    (a9)；
    Figure 03_image421
    (a10)；
    Figure 03_image423
    (a11)；
    Figure 03_image425
    (a12)；
    Figure 03_image427
    (a13)；
    Figure 03_image429
    (a14)；
    Figure 03_image431
    (a15)，
    Figure 03_image433
    (a16)或
    Figure 03_image435
    (a17) 其中： q為整數1至5； n’為整數2至6； U為-H或SO3 H； Re 為具有1至6個碳原子之直鏈或分支鏈烷基或係選自苯基、硝基苯基(例如2-硝基苯基或4-硝基苯基)、二硝基苯基(例如2,4-二硝基苯基)、羧基硝基苯基(例如3-羧基-4-硝基苯基)、吡啶基或硝基吡啶基(例如4-硝基吡啶基)。
  29. 如請求項1至28中任一項之化合物，其中該醫藥學上可接受之鹽為鈉鹽或鉀鹽。
  30. 如請求項1至28中任一項之化合物，其中該醫藥學上可接受之鹽為鈉鹽。
  31. 一種細胞結合劑-細胞毒性劑結合物，其包含共價連接至細胞毒性劑之細胞結合劑(CBA)，其中該結合物係由下式表示：
    Figure 03_image026
    ， 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： CBA為細胞結合劑； Cy為細胞毒性劑，其由下式表示：
    Figure 03_image028
    (V)；
    Figure 03_image030
    (VI)；
    Figure 03_image032
    (TC1)；或
    Figure 03_image034
    (TC2)， 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： N與C之間的雙線
    Figure 03_image003
    表示單鍵或雙鍵，限制條件在於當其為雙鍵時，X不存在且Y為H或C1-4 烷基，且當其為單鍵時，X為H且Y為-OH或-SO3 H； W為-C(=O)-或-C(Y’)-； Y’為H或C1-4 烷基； R1a 、R2a 、R3a 、R4a 、R1b 、R2b 、R3b 及R4b 係各自獨立地選自由H、C1-10 烷基、-(OCH2 CH2 )n -ORc 、鹵素、-NH(C=NH)NH2 、-OR、-NR’R’’、-NO2 、-NR’COR’’、-SR、-SOR’、-SO2 R’、-SO3 H、-OSO3 H、-SO2 NR’R’’、-CN、-N3 、-COR’、-OCOR’及-OCONR’R’’組成之群； Rc 為H或C1-4 烷基； n為整數1至24； R在每次出現時係獨立地選自由H、-(CH2 CH2 O)n -Rc 、C1-10 烷基、C3-8 環烷基、6員至18員芳基、含有一或多個獨立地選自N、O及S之雜原子的5員至18員雜芳環或含有1至6個獨立地選自O、S、N及P之雜原子的3員至18員雜環組成之群； R’及R’’係各自獨立地選自-H、-OH、-OR、-NHR、-NR2 、-COR、C1-10 烷基、-(CH2 CH2 O)n -Rc 及具有1至6個獨立地選自O、S、N及P之雜原子的3員至18員雜環； R5 為C3-12 伸烷基，該鏈可由一或多個選自-O-、-S-、-NH-、-NMe-、苯環、4員至7員雜芳環及4員至7員雜環之基團中斷，其中該苯、該4員至7員雜芳環及該4員至7員雜環經1至4個R6 取代； R6 在每次出現時係獨立地選自H、C1-10 烷基、-(CH2 CH2 O)n -Rc 、鹵素、-NH(C=NH)NH2 、-OR、-NR’R’’、-NO2 、-NCO、-NR’COR’’、-SR、-SOR’、-SO2 R’、-SO3 H、-OSO3 H、-SO2 NR’R’’、-CN、-N3 、-COR’、-OCOR’及-OCONR’R’’；且 RL1 係共價連接至該CBA之自降解連接體，限制條件在於該式(V)結合物不為：
    Figure 03_image036
    。
  32. 如請求項31之結合物，其中Cy係由描繪於表E中的各式之一或其醫藥學上可接受之鹽表示，其中： AA1 及AA2 各自獨立地為胺基酸殘基； a1為整數1至19； a2為整數1至5； Ra 為H或C1-4 烷基； q為1、2、3或4； Rs1 及Rs2 各自獨立地為H或C1-4 烷基，或Rs1 及Rs2 與其所附接之碳原子合起來形成3員至5員環烷基環，限制條件在於當q為1時，Rs1 及Rs2 與其所附接之碳原子合起來形成4員或5員環烷基環； V為C(=O)或CH2 ； Z1 為-C(=O)-或-SO2 -NH-C(=O)-，其中-SO2 -NH-C(=O)-中之-SO2 -基團連接至P1 ； Rx 係不存在、C1-10 伸烷基、C3-8 環烷基、-(CH2 CH2 O)m1 -C1-10 伸烷基-或C1-10 伸烷基-(OCH2 CH2 )m2 -； m1及m2各自獨立地為整數1至24； Z2 係不存在、-C(=O)NH-或-NH-C(=O)-； Ry 係不存在、C1-10 伸烷基、-(CH2 CH2 O)m3 -C1-10 伸烷基-或C1-10 伸烷基-(OCH2 CH2 )m4 -； m3及m4各自獨立地為整數1至24； Zs1 係共價連接至該CBA及該細胞毒性化合物之雙官能交聯劑，其中該交聯劑經由二硫鍵或硫醚鍵共價連接至該細胞毒性化合物；且 J1 係藉由使該細胞毒性劑之胺反應性基團或硫醇反應性基團與位於CBA上之胺基或硫醇基反應而形成的部分。
  33. 如請求項31或32之結合物，其中R1a 、R2a 、R3a 、R4a 、R1b 、R2b 、R3b 及R4b 均為H。
  34. 如請求項31至33中任一項之結合物，其中R5 為C3-7 伸烷基。
  35. 如請求項34之結合物，其中R5 為-(CH2 )3 -、-(CH2 )5 -或-(CH2 )7 -。
  36. 如請求項34之結合物，其中R5 為-(CH2 )5 -。
  37. 如請求項31至33中任一項之結合物，其中R5 係由下式表示：
    Figure 03_image675
    或
    Figure 03_image075
    ， 其中： X1 、X2 、X3 及X4 各自獨立地為N或CR6 ，限制條件在於X1 、X2 、X3 及X4 中之至少一者為CR6 。
  38. 如請求項37之結合物，其中R5 為：
    Figure 03_image077
    或
    Figure 03_image079
    。
  39. 如請求項38之結合物，其中R5 為：
    Figure 03_image081
    或
    Figure 03_image087
    ， 其中n為整數1至8。
  40. 如請求項39之結合物，其中n為1、2、3或4。
  41. 如請求項32之結合物，其中Cy係由描繪於表F中的各式之一或其醫藥學上可接受之鹽表示。
  42. 如請求項32至41中任一項之結合物，其中Z1 為-C(=O)-。
  43. 如請求項32至42中任一項之結合物，其中Rx 為C1-6 伸烷基，Z2 及Ry 均不存在。
  44. 如請求項32至42中任一項之結合物，其中Rx 為-(CH2 CH2 O)m1 -C1-6 伸烷基-；Z2 為-NH-C(=O)-或-C(=O)-NH-；Ry 為C1-6 伸烷基。
  45. 如請求項32至42中任一項之結合物，其中Rx 為C1-6 伸烷基；Z2 為-NH-C(=O)-或-C(=O)-NH-；且Ry 為-(CH2 CH2 O)m2 -C1-6 伸烷基-。
  46. 如請求項41之結合物，其中Cy係由描繪於表G中的各式之一或其醫藥學上可接受之鹽表示，其中： R6 為-C(=O)OR6a 或-NR6b (CH2 CH2 O)n CH2 CH2 OR6c ； R6a 、R6b 及R6c 各自獨立地為H或C1-4 烷基； n為整數1至8； Ra 及Rb 在每次出現時獨立地為H或C1-4 烷基； r、r1及r2各自獨立地為整數2至6，且 s為整數2至12。
  47. 如請求項46之結合物，其中： R6a 及R6c 均為Me； R6b 為H； n為1、2、3或4； Ra 及Rb 在每次出現時獨立地為H或Me； r為4； r1為4； r2為2； s為1、2、3或4。
  48. 如請求項32至47中任一項之結合物，其中J1 為-C(=O)-。
  49. 如請求項32至47中任一項之結合物，其中J1 為
    Figure 03_image983
    ，其中s1係連接至CBA之位點且s2係連接至該細胞毒性化合物之其餘部分的位點。
  50. 如請求項32至47中任一項之結合物，其中J1 為-SZs1 ，其中Zs1 係選自以下各式：
    Figure 03_image985
    (b1)；
    Figure 03_image987
    (b2)；
    Figure 03_image989
    (b3)；
    Figure 03_image991
    (b4)；
    Figure 03_image993
    (b5)；
    Figure 03_image995
    (b6)；
    Figure 03_image997
    (b7)；
    Figure 03_image999
    (b8)；
    Figure 03_image1001
    (b9)；
    Figure 03_image1003
    (b10)；
    Figure 03_image1005
    (b11)；
    Figure 03_image1007
    (b12)；
    Figure 03_image1009
    (b13)；
    Figure 03_image1011
    (b14)；
    Figure 03_image1013
    (b15)，
    Figure 03_image1015
    (b16)或
    Figure 03_image1017
    (b17) 其中： q為整數1至5； n’為整數2至6； s1係連接至CBA之位點；且 s2係連接至該細胞毒性化合物之其餘部分的位點。
  51. 如請求項31至50中任一項之結合物，其中N與C之間的雙線
    Figure 03_image003
    表示雙鍵，X不存在且Y為H。
  52. 如請求項31至50中任一項之結合物，其中N與C之間的雙線
    Figure 03_image003
    表示單鍵，X為H且Y為-SO3 H。
  53. 如請求項32至52中任一項之結合物，其中a1為整數1至7。
  54. 如請求項53之結合物，其中AA1 -(AA2 )a1 係選自Gly-Gly-Gly、Ala-Val、Val-Ala、Val-Cit、Val-Lys、Phe-Lys、Lys-Lys、Ala-Lys、Phe-Cit、Leu-Cit、Lle-Cit、Phe-Ala、Phe-N9 -甲苯磺醯基-Arg、Phe-N9 -硝基-Arg、Phe-Phe-Lys、D-Phe-Phe-Lys、Gly-Phe-Lys、Leu-Ala-Leu、Ile-Ala-Leu、Val-Ala-Val、Ala-Leu-Ala-Leu、β-Ala-Leu-Ala-Leu及Gly-Phe-Leu-Gly、Val-Arg、Arg-Val、Arg-Arg、Val-D-Cit、Val-D-Lys、Val-D-Arg、D-Val-Cit、D-Val-Lys、D-Val-Arg、D-Val-D-Cit、D-Val-D-Lys、D-Val-D-Arg、D-Arg-D-Arg、Ala-Ala、Ala-D-Ala、D-Ala-Ala、D-Ala-D-Ala、Ala-Met、Met-Ala、Thr-Thr、Thr-Met、Met-Thr、Leu-Ala、Cit-Val、Gln-Val、Ser-Val、Val-Gln、Gln-Val、Leu-Gln、Gln-Leu、Phe-Arg、Arg-Phe、Tyr-Arg、Arg-Tyr、Phe-Gln、Gln-Phe、Val-Thr、Thr-Val、Val-Met、Met-Val、Leu-Met、Met-Leu、Met-Tyr、Tyr-Met、Ala-Asn、Asn-Ala、Phe-Met、Met-Phe、Gly-Gly-Arg及Arg-Gly-Gly。
  55. 如請求項54之結合物，其中AA1 -(AA2 )a1 為Ala-Ala、L-Ala-L-Ala、Ala-Val、L-Ala-L-Val、Gln-Val、L-Gln-L-Val、Gln-Leu、L-Gln-L-Leu、Ser-Val或L-Ser-L-Val。
  56. 如請求項31之結合物，其中該結合物係選自描繪於表H中的結合物之一或其醫藥學上可接受之鹽，其中
    Figure 03_image1269
    係經由位於該CBA上之胺基共價連接至該細胞毒性化合物之該細胞結合劑；
    Figure 03_image1271
    係經由位於該CBA上之硫醇基共價連接至該細胞毒性化合物之該細胞結合劑；wL 為整數1至20；且wC 為整數1至4。
  57. 如請求項31至56中任一項之結合物，其中該醫藥學上可接受之鹽為鈉鹽或鉀鹽。
  58. 如請求項31至56中任一項之結合物，其中該醫藥學上可接受之鹽為鈉鹽。
  59. 如請求項31至58中任一項之結合物，其中該細胞結合劑(CBA)為抗體、單鏈抗體、特異性地結合於標靶細胞之抗體片段、單株抗體、單鏈單株抗體或特異性地結合於標靶細胞之單株抗體片段、嵌合抗體、特異性地結合於標靶細胞之嵌合抗體片段、域抗體、特異性地結合於標靶細胞之域抗體片段、probody、奈米抗體、淋巴激素、激素、維生素、生長因子、群落刺激因子或營養物轉運分子。
  60. 如請求項31至59中任一項之結合物，其中該細胞結合劑(CBA)結合於選自以下之標靶細胞：腫瘤細胞、病毒感染細胞、微生物感染細胞、寄生蟲感染細胞、自體免疫細胞、活化細胞、骨髓細胞、活化T細胞、B細胞或黑色素細胞；表現CA6、CAK1、CD4、CD5、CD6、CD19、CD20、CD22、CD30、CD33、CD37、CD38、CD40、CD44、CD56、CD123、CD138、EpCAM、CanAg、CALLA、CEACAM5、FGFR3、LAMP1、p-鈣黏蛋白、Her-2或Her-3抗原之細胞；或表現胰島素生長因子受體、表皮生長因子受體及葉酸鹽受體之細胞。
  61. 如請求項31至58中任一項之結合物，其中該細胞結合劑為抗葉酸鹽受體抗體或其抗體片段、抗EGFR抗體或其抗體片段、抗CD33抗體或其抗體片段、抗CD19抗體或其抗體片段、抗Muc1抗體或其抗體片段或抗CD37抗體或其抗體片段。
  62. 一種醫藥組成物，其包含醫藥學上可接受之載劑及如請求項31至61中任一項之結合物，或其醫藥學上可接受之鹽。
  63. 一種抑制哺乳動物之異常細胞生長或治療其增生性病症、自體免疫病症、破壞性骨病症、傳染病、病毒性疾病、纖維變性疾病、神經退化性病症、胰臟炎或腎病之方法，其包含向該哺乳動物投與治療有效量的如請求項1至30中任一項之化合物或如請求項31至61中任一項之結合物，及視情況選用之化學治療劑。
  64. 如請求項63之方法，其中該方法係用於治療癌症。
  65. 如請求項64之方法，其中該癌症為子宮內膜癌、肺癌(例如非小細胞肺癌)、大腸直腸癌、膀胱癌、胃癌、胰臟癌、腎細胞癌、前列腺癌、食道癌、乳癌、頭頸部癌、子宮癌、卵巢癌、肝癌、子宮頸癌、甲狀腺癌、睾丸癌、骨髓癌、黑色素瘤及淋巴癌。
  66. 如請求項64之方法，其中該癌症為急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、骨髓發育不良症候群(MDS)、急性淋巴母細胞性白血病(ALL)、急性B淋巴母細胞性白血病或B細胞急性淋巴母細胞性白血病(B-ALL)、慢性淋巴球性白血病(CLL)、毛細胞白血病(HCL)、急性前骨髓細胞性白血病(APL)、B細胞慢性淋巴增生性疾病(B-CLPD)、非典型慢性淋巴球性白血病、彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、母細胞性漿細胞樣樹突狀細胞贅瘤(BPDCN)、非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin lymphoma，NHL)、套細胞白血病(MCL)、小淋巴球性淋巴瘤(SLL)、霍奇金氏淋巴瘤(Hodgkin's lymphoma)、全身性肥胖細胞增多症及伯奇氏淋巴瘤(Burkitt's lymphoma)。
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