ES2199200T3 - Pirrolobenzodiacepinas. - Google Patents
Pirrolobenzodiacepinas.Info
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Abstract
Pirrolobenzodiacepinas. Un primer aspecto de la presente invención hace referencia a un compuesto de fórmula: donde p es 3. Este compuesto es 1, l¿-[(Propano-1, 3 -diil) dioxi]bis [ (11as) -7-metoxi¿2-metilideno-1, 2, 3, 11, -tetrahidro-5H-pirrolo(2, 1-c) [1, 4]benzodiazepin-5-ona] . Un segundo aspecto de la presente invención es un compuesto tal y como se ha descrito en el primer aspecto de la invención para ser utilizado en un procedimiento de tratamiento por terapia. Las condiciones que se pueden tratar son las afecciones genéticas, tales como las afecciones neoplásicas y la enfermedad de Alzheimer, así como infecciones bacterianas, parasíticas y virales.
Description
Pirrolobenzodiacepinas.
Algunas pirrolobenzodiazepinas (PBD) tienen la
capacidad de reconocer y unirse a secuencias específicas de ADN; la
secuencia preferida es PuGPu. El primer antibiótico antitumoral de
PBD, antramicina, se descubrió en 1965 (Leimgruber et al.,
1965 J. Am. Chem. Soc., 87,
5793-5795; Leimgruber et al., 1965 J. Am.
Chem. Soc., 87, 5791-5793). Desde
entonces, han salido a la luz varias PBD que se encuentran en
estado natural y se han desarrollado más de 10 vías sintéticas para
conseguir distintos análogos (Thurston et al., 1994 Chem.
Rev. 1994, 433-465). Son miembros de la
misma familia la abeimicina (Hochlowski et al., 1987 J.
Antibiotics, 40, 145-148), la quicamicina
(Konishi et al., 1984 J. Antibiotics, 37,
200-206), el DC81 (patente japonesa
58-180 487; Thurston et al., 1990, Chem.
Brit., 26, 767-772; Bose et al.,
1992 Tetrahedron, 48, 751-758), la
macetramicina (Kuminoto et al., 1980 J. Antibiotics,
33, 665-667), las neotramicinas A y B
(Takeuchi et al., 1976 J. Antibiotics, 29,
93-96), la porotramicina (Tsunakawa et al.,
1988 J. Antibiotics, 41, 1366-1373),
la protracarcina (Shimizu et al., 1982 J.
Antibiotics, 29, 2492-2503; Langley y Thurston,
1987 J. Org. Chem., 52, 91-97), la
sibanomicina (DC-102) (Hara et al., 1988 J.
Antibiotics, 41, 702-704; Itoh et
al., 1988 J. Antibiotics, 41,
1281-1284), la sibiromicina (Leber et al.,
1988 J. Am. Chem. Soc., 110,
2992-2993) y la tomamicina (Arima et al.,
1972 J. Antibiotics, 25, 437-444).
Las PBD tienen la estructura general:
Se distinguen por el número, tipo y posición de
los sustituyentes, tanto en los anillos A aromáticos como en los
anillos C de pirrol, y en el grado de saturación del anillo C. En
el anillo B hay una imina (N=C), una carbinolamina
(NH-CH(OH)) o un metil éter de carbinolamina
(NH-CH(OMe)) en la posición
N10-CL1, que es el centro electrofílico responsable
de la alquilación del ADN. Todos los productos naturales conocidos
tienen una configuración en (S) en la posición C11a quiral, lo que
les confiere un giro hacia la derecha cuando se visualizan desde el
anillo C hacia el anillo A. Esto les confiere la forma
tridimensional adecuada para la isohelicidad con el surco menor del
ADN de forma B, lo que comporta un encaje perfecto en la zona de
unión (Kohn, 1975 en Antibiotics III.
Springer-Verlag, Nueva York, pp.
3-11; Hurley y Needham-VanDevanter,
1986 Acc. Chem. Res. , 19, 230-237).
Su capacidad para formar un complejo de inclusión en el surco menor
les permite interferir en el procesamiento del ADN, de donde se
deriva su uso como agentes antitumorales.
Un primer aspecto de la presente invención hace
referencia a un compuesto de fórmula:
donde p es
3.
Este compuesto es
1,l'-[(Propano-1,3 -diil) dioxi]bis [ (11as)
-7-metoxi--2-metilideno-1,
2, 3,
11,-tetrahidro-5H-pirrolo(2,
1-c) [1,
4]benzodiazepin-5-ona] .
Un segundo aspecto de la presente invención es un
compuesto tal y como se ha descrito en el primer aspecto de la
invención para ser utilizado en un procedimiento de tratamiento por
terapia. Las condiciones que se pueden tratar son las afecciones
genéticas, tales como las afecciones neoplásicas y la enfermedad de
Alzheimer, así como infecciones bacterianas, parasíticas y virales.
Toda condición que pueda tratarse mediante regulación de la
expresión genética podrá tratarse mediante los compuestos de la
invención. De acuerdo con este aspecto de la presente invención,
los compuestos contemplados pueden ser administrados a individuos.
La administración se realiza preferiblemente en una "cantidad
terapéuticamente eficaz", siendo esta suficiente para presentar
ventajas para el paciente. Estas ventajas pueden ser al menos la
mejora de al menos un síntoma. La cantidad real administrada, así
coma la frecuencia y el periodo de administración, dependerán de la
naturaleza y gravedad de lo que se trate. La prescripción del
tratamiento, por ejemplo, las decisiones sobre la dosificación, son
responsabilidad del facultativo y demás doctores en medicina.
Los compuestos pueden administrarse por separado
o junto con otros tratamientos, ya sea simultáneamente o
secuencialmente en función de la condición a tratar.
Las composiciones farmacéuticas según la presente
invención, y para ser utilizadas según la presente invención,
pueden comprender, además del principio activo, es decir, un
compuesto del primer aspecto, un excipiente 5 farmacéuticamente
aceptable, un portador, un tampón, un estabilizador u otros
materiales bien conocidos por los expertos en la materia. Estos
materiales no deben ser tóxicos y no deben interferir en la
eficacia del principio activo. La naturaleza precisa del portador u
otro material 0 dependerá de la vía de administración, que puede
ser oral o por inyección, por ejemplo, cutánea, subcutánea o
intravenosa.
Las composiciones farmacéuticas para
administración oral pueden adoptar la forma de comprimido, cápsula,
5 polvos o liquido. Los comprimidos pueden incluir un portador
sólido o un adyuvante. Las composiciones farmacéuticas liquidas
generalmente comprenden un portador liquido tal como agua,
petróleo, aceites animales o vegetales, aceite mineral o aceite
sintético. Pueden incluirse una solución salina fisiológica,
dextrosa u otra solución de sacáridos, o glicoles tales como
etilenglicol, propilenglicol o polietilenglicol. Las cápsulas
pueden incluir un portador sólido tal como gelatina.
Para inyección intravenosa, cutánea o subcutánea,
o inyección en la zona afectada, el principio activo adoptará la
forma de una solución acuosa parenteralmente aceptable que esté
exenta de pirógeno y tenga un pH, isotonicidad y estabilidad
adecuados. El experto en la materia estará capacitado para preparar
soluciones adecuadas mediante, por ejemplo, vehículos isotónicos
tales como inyección de cloruro sódico, inyección de Ringer o
inyección de lactato de Ringer. Pueden incluirse, según sea
necesario, conservantes, estabilizantes, tampones, antioxidantes u
otros aditivos.
Un tercer aspecto de la presente invención es una
composición farmacéutica que contiene un compuesto del primer
aspecto y un portador farmacéuticamente aceptable o diluyente. La
preparación de composiciones farmacéuticas se describe en relación
con el segundo aspecto de la invención anterior.
Un cuarto aspecto de la presente invención
proporciona el uso de un compuesto del primer aspecto para preparar
un medicamento para el tratamiento de una enfermedad genética,
preferiblemente una enfermedad proliferativa. El compuesto de la
fórmula puede prepararse junto con un portador farmacéuticamente
aceptable o diluyente. Los compuestos pueden utilizarse para la
eliminación selectiva de células tumorales óxicas e hipóxicas en
métodos para el tratamiento de cánceres, por ejemplo, leucemias y,
en particular, cánceres sólidos tales como tumores de colon, del
SNC, renales y pulmonares, incluidos el carcinoma pulmonar
microcítico y los melanomas. Los compuestos del primer aspecto
pueden utilizarse especialmente para la eliminación selectiva de
tumores pulmonares, de colon y del SNC y melanomas.
Otro aspecto de la presente invención proporciona
el uso de un compuesto del primer aspecto para preparar un
medicamento para el tratamiento de una infección viral, parasítica
o bacteriana. La preparación de medicamentos se describe en
relación con el segundo aspecto de la invención anterior.
En otros aspectos, la invención proporciona
procedimientos para preparar compuestos según el primer aspecto de
la presente invención.
Los distintos aspectos de la invención se
describirán a continuación con mayor detalle y haciendo referencia
a las figuras adjuntas, donde:
Las figuras 1 a 3a/b son vías de síntesis para
los compuestos de la presente invención.
Una etapa clave de una vía preferida para
conseguir un compuesto de la presente invención es una ciclización
para producir el anillo B, que conlleva la generación de un
aldehído (o un equivalente funcional del mismo) en lo que será la
posición 11, y un ataque en el mismo por el nitrógeno
Pro-N10.
En esta estructura no se muestra sustitución del
anillo C. R_{6} representa el puente de dímero. R_{10} es un
grupo protector de nitrógeno, preferiblemente con una funcionalidad
de carbamato, enlazado con el nitrógeno de la PBD. El "aldehído
enmascarado" -CPQ puede ser un acetal o tioacetal (posiblemente
cíclico), en cuyo caso la ciclización conlleva enmascaramiento.
Alternativamente, el aldehído enmascarado puede ser un precursor de
aldehído, tal como alcohol -CHOH, en cuyo caso la reacción conlleva
oxidación, por ejemplo, por medio de TPAP o DMSO (oxidación de
Swern).
El compuesto de aldehído enmascarado puede
producirse mediante la condensación de una pirrolidona
correspondiente sustituida en la posición 2 con un ácido
2-nitrobenzoico.
A continuación, el grupo nitro puede reducirse a
-NH_{2} y protegerse mediante reacción con un reactivó adecuado,
por ejemplo, un cloroformato, lo que proporciona el grupo protector
de nitrógeno eliminable en la vía de síntesis.
En el esquema 1 se muestra un procedimiento que
comprende el procedimiento de oxidación-ciclización
en relación con los monómeros que no forman parte de la presente
invención (más adelante se describirá una ciclización alternativa
en relación con el esquema 2).
ESQUEMA
1
El enlace de imina-carbinolamina
en la PBD (A) puede desprotegerse mediante métodos estándar para
dar el compuesto deseado, por ejemplo, si Rio es aliloxicarbonilo,
la desprotección se lleva a cabo con paladio para eliminar el grupo
protector N10, seguido de la eliminación de agua para dar la
imina.
La exposición del alcohol (B) (en el que el
nitrógeno Pro-N10 generalmente está protegido como
carbamato) a tetrapropilamonio perrutenato (TPAP)/
N-metilmorfolina N-oxido (NMO) en
tamices A4 produce oxidación acompañada de cierre espontáneo del
anillo B para conseguir el producto deseado. El procedimiento de
oxidación con TPAP/NMO resulta especialmente adecuado para las
reacciones a pequeña escala, mientras que los métodos de oxidación
a base de DMSO, especialmente la oxidación de Swern, son más
adecuados para los trabajos a gran escala (por ejemplo > 1
g).
\newpage
El alcohol no ciclizado (B) puede
prepararse mediante la reacción de un reactivo protector de
nitrógeno de fórmula D, que es preferiblemente un
cloroformato o cloruro de ácido, en una solución del aminoalcohol
C, generalmente en solución, generalmente en presencia de
una base tal como piridina (preferiblemente 2 equivalentes), a una
temperatura moderada (por ejemplo a 0°C). En estas condiciones
generalmente se observa poca o ninguna
O-acilación.
El aminoalcohol clave C puede prepararse
reduciendo el compuesto nitro E correspondiente mediante un
procedimiento que deje el resto de la molécula intacta. El
tratamiento de E con cloruro de estaño (II) en un disolvente
adecuado, por ejemplo, metanol bajo reflujo, generalmente da,
después de retirar las sales de estaño, el producto deseado con un
gran rendimiento.
La exposición de E a hidracina/níquel
Raney evita la producción de sales de estaño y puede dar un mayor
rendimiento de C, aunque este procedimiento es menos
compatible con la gama de posibles sustituyentes de los anillos C y
A. Por ejemplo, si existe insaturación del anillo C (ya sea en el
propio anillo o en R_{2} o R_{3}), esta técnica puede ser
inadecuada.
El compuesto nitro de fórmula E puede
prepararse por acoplamiento del cloruro de
o-nitrobenzoílo adecuado a un compuesto de fórmula
F, por ejemplo en presencia de K_{2}CO{3} a -25°C en una
atmósfera de N_{2}. Los compuestos de fórmula F pueden
prepararse fácilmente, por ejemplo, I mediante olefinación de la
cetona derivada de L- transhidroxiprolina. El producto intermedio
de cetona también puede emplearse mediante conversión al triflato
de enol en las reacciones de acoplamiento por medio de
paladio.
El cloruro de o-nitrobenzoílo se
sintetiza a partir del ácido o-nitrobenzoico (o
alquil éster después de hidrólisis) de fórmula G, que a su
vez se prepara a partir del derivado H de ácido vanilico (o alquil
éster). Muchos de estos compuestos están comercialmente disponibles
y algunos de ellos se describen en Althuis, T.H. y Hess,
H.J., J. Medicinal Chem., 20(1),
146-266 (1977).
ESQUEMA
2
En el esquema 1, la última o penúltima etapa era
una ciclización oxidativa. En el esquema 2 se muestra una
alternativa mediante acoplamiento de tioacetal. El enmascaramiento
por medio de mercurio provoca la ciclización del compuesto de PBD
protegido (A).
El compuesto de tioacetal puede prepararse como
se indica en el esquema 2: el anillo C protegido de tioacetal
[preparado según un procedimiento de la literatura: Langley, D.R. y
Thurston, D.E., J. Organic Chemistry, 52,
91-97 (1987)] se acopla al ácido
o-nitrobenzoico (o alquil éster después de
hidrólisis) (G) según un procedimiento de la literatura. El
compuesto nitro resultante no puede ser reducido por hidrogenación
debido al grupo tioacetal, de manera que se utiliza el
procedimiento del cloruro de estaño (II) para obtener la amina. A
continuación, esta se protege con N, por ejemplo, mediante reacción
con un cloroformato o un cloruro de ácido, tal como 2,2,
2-tricloroetilcloroformato.
En esta vía pueden utilizarse como alternativa
anillos C que contienen acetal con desprotección por otros
procedimientos, tales como el uso de condiciones acídicas.
ESQUEMA
3
Los dímeros de PBD de la invención pueden
sintetizarse mediante la estrategia desarrollada para la síntesis
de los monómeros de PBD protegidos. Las vías de síntesis ilustradas
en el esquema 3 muestran compuestos cuando el enlace del dímero
tiene la fórmula -0- (CH_{2})_{n}-0- La
etapa de formación del dímero generalmente se realiza para formar
un bis(ácido nitro) G'. A continuación, este compuesto puede
tratarse como compuesto G en los esquemas 1 ó 2 anteriores.
El bis(ácido nitro) G' puede obtenerse por
nitración (por ejemplo, con 70% de ácido nítrico) de bis(ácido
carboxílico). Este puede sintetizarse mediante alquilación de dos
equivalentes del ácido benzoico relevante con el diyodoalcano
adecuado en condiciones básicas. Muchos ácidos benzoicos están
comercialmente disponibles y otros pueden sintetizarse mediante
procedimientos convencionales. Alternativamente, los ésteres del
ácido benzoico relevante pueden juntarse mediante una eterificación
de Mitsunobo con un alcanodiol adecuado, seguido de nitración y
posteriormente de hidrólisis (no ilustrado).
Una síntesis alternativa del bis(ácido nitro)
comprende la oxidación del bis(aldehído nitro), por ejemplo,
con permanganato de potasio. A su vez, este puede obtenerse por
nitración directa del bis(aldehído), por ejemplo, con 70% de
HNO_{3}. Finalmente, el bis(aldehído) puede obtenerse
mediante la eterificación de Mitsunobu de dos equivalentes del
aldehído benzoico con el alcanodiol adecuado.
Una vía de síntesis alternativa a las descritas
anteriormente consiste en proteger la posición
Pro-N10 del componente que formará el anillo A
antes de juntar el componente que formará el anillo C.
La vía de síntesis del esquema 1 generalmente se
puede aplicar a los compuestos de la presente invención.
Las PBD insaturadas C2 pueden sintetizarse a
partir de sus precursores protegidos de carbamato N10.
Generalmente, puede utilizarse la eliminación catalizada por
paladio de un alilcarbamato para generar la imina
N10-C11 sin que ello afecte a la insaturación C2
clave. Alternativamente, puede utilizarse un par
cadmio-plomo para escindir un
N10-2,2,2-tricloroetilcarbamato de
la PBD protegida.
La reducción del compuesto nitro E tal y
como se muestra en el esquema 1 con cloruro de estaño (II)
mantiene la insaturación C2, aunque el aislamiento de la anilina C
de las sales de estaño puede ser problemático.
El compuesto de fórmula F puede utilizarse
en su forma protegida con TBDMS y, en consecuencia, debe incluirse
una etapa de desprotección para producir el compuesto de
aminoalcohol E.
El éter TBDMS de tipo E, que es el producto del
acoplamiento del compuesto protegido con TBDMS con el cloruro de o-
nitrobenzoílo adecuado, puede tratarse con AcOH:THF:H_{2}O
(3:1:1). TBAF resultó ser inadecuado para esta transformación
debido a la rápida degradación de los productos de reacción.
Los compuestos F(II) que
proporcionan el anillo C pueden obtenerse como se muestra en el
esquema 4.
ESQUEMA
4
La
trans-4-hidroxi-L-prolina
F8 comercialmente disponible puede protegerse con
N-aliloxicarbonilo para dar el alilcarbamato
F7 que posteriormente puede esterificarse mediante
condiciones estándar. La reducción con hidruro del éster F6
da el diol F5. La protección selectiva con TBDMS del dial da
un silil éter F4 que posteriormente puede oxidarse mediante
la oxidación de Swern o TPAP para dar la cetona F3.
La función olefínica C2 presente en F2
puede introducirse mediante la reacción de Wittig en la cetona F3.
La escisión por paladio del grupo protector de N- aliloxicarbonilo
(Dangles, O.; Guibé, F.; Balavoine, G.; Lavielle, S.; Marquet, A.;
J. Org. Chem. 1987, 52, 4984) da el compuesto
F(II).
ESQUEMA
5
Se ha desarrollado una vía alternativa para
obtener el compuesto C (esquema 5). La amida de fórmula
CL puede sintetizarse formando el cloruro de ácido de un
ácido antranílico de tipo C2 protegido con
N-tricloroetiloxicarbonilo. Cabe destacar que los
ácidos antranílicos de N-tricloroetiloxicarbonilo
no generan anhídridos isatoicos, lo que permite las reacciones de
formación de amidas con aminas de tipo F(II). La
escisión simultánea por TBAF de los grupos 2,2,2- tricloroetil
carbamato y TBDMS de CL puede proporcionar el aminoalcohol
C clave.
ESQUEMA
6
Se ha desarrollado una vía sintética más lineal
para obtener el compuesto B del esquema 1 que permite una
producción a mayor escala de las PBD insaturadas C2, la cual se
muestra en el esquema 6. Puede utilizarse la escisión por TBAF del
grupo TBDMS para producir B(II) a partir de
B1(II). La insaturación C2 clave presente en
B1(II) puede introducirse mediante la reacción de
olefinación de Wittig en una cetona de tipo B2. La oxidación
de Swern del alcohol secundario B3 puede utilizarse para dar
la cetona B2. La anilina B3 protegida con carbamato
puede prepararse a partir del compuesto nitro B5 en dos
etapas. En primer lugar, el grupo nitro puede reducirse a anilina
mediante el método níquel Raney/hidracina porque un compuesto de
tipo B5 carece de 5 C2. Este método es más ventajoso que el
procedimiento de cloruro de estaño (II) ya que el producto resulta
más fácil de aislar. A continuación, la anilina B4 puede
protegerse con N-carbamato a gran escala sin
formación significativa de carbonato en el oxígeno C2.
Puede sintetizarse una amida de tipo B5
acoplando un cloruro de ácido de tipo G a la amina KEC5
clave (esquema 7).
ESQUEMA
7
En líneas generales, esta vía presenta varias
ventajas respecto a la vía anterior, lo que conduce a una
producción a mayor escala de las PBD
endo-insaturadas C2/C3. En primer lugar, la
hidrogenación catalítica de KEC4 permite la preparación a
gran escala del producto intermedio KEC5 clave. En segundo
lugar, esta etapa de reducción de nitro más eficaz puede llevarse a
cabo en un producto intermedio desprovisto de insaturación C2. Hay
que recalcar que la migración de doble enlace observada en la
reacción de Horner-Emmons es espontánea, por lo que
no es necesario un exceso de hidruro de sodio. Esta migración del
doble enlace también ha sido apuntada por otros autores
(Leimgruber, W.; Batcho, A.D.; Czajkowski, R.C. J. Am. Chem.
Soc. 1968, 90, 5641).
La hidrogenación Parr de KEC4, con el fin
de escindir el grupo protector Cbz, permitió la síntesis a gran
escala del producto intermedio amino KEC5 clave. El éter
TBDMS KEC4 se preparó por sililación selectiva del alcohol
primario KEC3, que se consiguió utilizando DBU como agente
de transferencia de sililo. El diol KEC3 se obtuvo por
reducción con hidruro del éster KEC2 que a su vez se
sintetizó del ácido carboxílico KECL. La protección con
N-Cbz de la
trans-4-hidroxi-L-prolina
(F4) se consiguió adoptando un procedimiento mencionado en
la literatura (Bridges, R.J.; Stanley, M.S.; Anderson, M.W;
Cotman, C.W; Chamberlain, R.A. J. Med. Chem. 1991, 34,
717).
En la síntesis de dímeros, las vías especificadas
más arriba pueden utilizarse de forma preferente a las
especificadas en las estrategias sintéticas generales. En
particular, el grupo protector de nitrógeno puede ser
ventajosamente un carbamato, ya que los grupos protectores de este
tipo pueden eliminarse en la etapa final por distintos
procedimientos que, por lo general, no afectan a la insaturación C2
clave.
Los puntos de fusión (mp) se determinaron en un
aparato digital Gallenkamp P1384 para puntos de fusión y no están
rectificados. Los espectros de infrarrojos (IR) se registraron con
un espectrofotómetro Perkin-Elmer 297. Los
espectros de RMN ^{1}H y ^{13}C se registraron en un
espectrómetro de RMN JEOL GSX FT de 270 MHz que funcionaba a 20°C
\pm 1°C. Los desplazamientos químicos se dan en partes por millón
(\sigma) en campos menores al del tetrametilsilano (TMS). La
multiplicidad de spin se describe de la siguiente manera: s
(singlete), bs (singlete ancho), d (doblete), dd (doblete de
dobletes), t (triplete), q (cuadruplete), p (quintuplete) o m
(multiplete). El espectro de masas (MS) se registró con un
espectrómetro de masas JEOL JMS-DX 303 GC (modo EI:
70 eV, fuente 117-147°C). Las masas moleculares
precisas (HRMS) se determinaron por comparación de picos utilizando
perfluorokeroseno (PFK) como marcador interno de masas, y se
obtuvieron espectros de masas FAB a partir de una matriz de
glicerol/tioglicerol/ácido trifluoroacético (1:1:0,1) con una
temperatura fuente de 180°C. Las rotaciones ópticas en la línea
Na-D se obtuvieron a temperatura ambiente con un
polarímetro Perkin-Elmer 141. Los resultados
analíticos se encontraban por regla general dentro de \pm 0,2% de
los valores teóricos. Se realizó cromatografía flash con "Silica
Gel-60" de Aldrich (E. Merck,
230-400 mallas). Se realizó cromatografía en capa
fina (TLC) mediante gel de sílice GF254 (con indicador
fluorescente) en placas de vidrio. Todos los disolventes y
reactivos, a menos que se indique lo contrario, fueron
suministrados por Aldrich Chemical Company Ltd. y se utilizaron tal
cual sin purificación adicional. Se prepararon disolventes anhidros
por destilación en atmósfera de nitrógeno seco en presencia de un
agente secante adecuado, y se almacenaron en tamices moleculares
de 4 \ring{A} o hilo de sodio. El éter de petróleo se refiere a
la fracción que hierve a 40-60°C.
Se añadió gota a gota
ter-butóxido de potasio (41,0 ml de una solución
0,5 M en THF, 20,5 mmol) a una suspensión de bromuro de
metiltrifenilfosfonio (7,29 g, 20,4 mmol) en THF-(20 ml) a 0°C
(hielo/acetona) bajo nitrógeno. Después de agitación durante 2
horas a 0°C, se añadió gota a gota una solución de la cetona 16
(ejemplo 1 (b)) (3,20 g, 10,2 mmol) in THF (10 ml) y se dejó
calentar la mezcla hasta temperatura ambiente. Después de agitación
durante 30 minutos más, se diluyó la mezcla de reacción con EtOAc
(150 ml) y agua (150 ml) y la capa orgánica se separó, se lavó con
salmuera, se secó (MgSO_{4}), se filtró y se evaporó al vacío
para dar un aceite amarillo en el que se formaron cristales (TPO)
al dejarlo en el congelador. La purificación por cromatografía
flash (5% EtOAc/éter de petróleo) aisló la olefina pura 57
como aceite incoloro (2,76 g, 87%): [\alpha]^21_{D} =
-22.2° (c = 0.25, CHCl_{3}); RMN ^{1}H (270 MH_{z},
CDCl^{3}) (rotámeros) \sigma 6.02-5.87 (m,
^{1}H, NCO_{2}CH_{2}CH=CH2), 5.31 (ddd, ^{1}H, J =
1.65, 3.11, 17.20 Hz, NCO_{2}CH2CH=CH2), 5.21 (dd, ^{1}H,
J = 1.46, 10.40 Hz, NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}),
4.99-4.61 (m, 2H, NCH_{2}C=CH_{2}), 4.60 (d,
2H, J = 4.94 Hz, MCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}),
4.19-3.98 (m, 2H, NCHCH_{2}OTBDMS),
3,93-3,87 (m, ^{1}H, NCHCH_{2}OTBDMS),
3.66-3.42 (m, 2H, NCH_{2}C=CH_{2}),
2.80-2.56 (m, 2H, NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}),
0.87 (s, 9H, SiC (CH_{3}) 3), 0.03-0.02 (m, 6H,
Si (CH_{3}) 2) ; RMN ^{13}c (67.8 MHz, CDCL_{3}) (rotámeros)
\sigma 154.4 (NC=O), 145.1 y 144.1 (NCH_{2}C=CH_{2}), 133.1
(NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 117.5 y 117.2
(NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 107.5 y 106.9 (NCH_{2}C=CH_{2}),
65.8 y 65.6 (NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 63.7 y 63.1
(NCHCH_{2}OTBDMS), 58.7 y 58.3 (NCHCH_{2}OTBDMS), 51.1
(NCH_{2}C=CH_{2}), 34.9 y 34.2 (NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}),
25.8 (SiC (CH_{3})_{3}), 18.2 (SiC(CH_{3})
_{3}), -5.5 (Si(CH_{3})_{2}); MS (CI),
m/z (intensidad relativa) 312 (M^{+} + 1,82), 296 (9),
279 (5), 255 (20), 254 (M-OC_{3}H_{5} o
M-^{t}Bu, 100), 168 (8), 122 (14); IR (neat) 3083
(C=CH_{2}), 2954, 2847, 1709 (NC=O), 1533, 1467, 1404
(SiCH_{3}), 1360, 1310, 1252 (SiCH_{3}), 1207, 1174, 1103,
1076, 1006, 836, 776, 680 cm^{-1}.
Se añadió una cantidad catalítica de
PdCl_{2}(PPh_{3})_{2} (92 mg, 0,131 mmol) a una
solución del alilcarbamato 57 (1,0 g, 3,22 mmol) y H_{2}O
(0,34 ml, 18,9 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (30 ml). Después de
agitación durante 5 minutos a temperatura ambiente, se añadió
Bu_{3}SnH (0,96 ml, 1,04 g, 3,57 mmol) rápidamente en una sola
vez. Inmediatamente se produjo una reacción ligeramente exotérmica
con evolución vigorosa de gas. La mezcla se agitó durante 16 horas
a temperatura ambiente bajo nitrógeno en cuyo punto la TLC (50%
EtOAc/éter de petróleo) mostró la formación de amina. Después de
dilución con CH_{2}Cl_{2} (30 ml), la solución orgánica se secó
(MgSO_{4}), se filtró y se evaporó al vacío para dar un aceite
naranja que se purificó por cromatografía flash
(50-100% EtOAc/éter de petróleo) para dar la amina
58 en forma de aceite anaranjado (0,56 g, 77%) :
[\alpha]^{21}_{D} = -3. 9° (c = 5.0, CHCl_{3}); RMN
^{1}H (270 MHz, CDCl_{3}) \sigma 4.93 (t, ^{1}H, J
= 2.02 Hz, NCH_{2}C=CH_{2}), 4.90 (t, ^{1}H, J = 2.02
Hz, NCH_{2}C=CH_{2}), 3.68-3.46 (m, 4H,
NCHCH_{2}OTBDMS y NCH_{2}C=CH_{2}), 3.30-3.21
(m, ^{1}H, NCHCH_{2}OTBDMS), 2.53-2.41 (m, 2H,
NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2} y NH), 2.26-2.17 (m,
^{1}H, NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}), 0.90 (s, 9H, SiC (CH_{3})
_{3}), 0.06 (s, 6H, Si (CH_{3}) 2); RMN ^{13}c (67.8 MHz,
CDCL_{3}) \sigma 150.0 (NCH_{2}C=CH_{2}), 104.7
(NCH_{2}C=CH_{2}), 64.7 (NCHCH_{2}OTBDMS), 60.5
(NCHCH_{2}OTBDMS), 51.3 (NCH_{2}C=CH_{2}), 34.9
(NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}), 25.9 (SiC (CH_{3}) _{3}), 18.3
(SiC(CH_{3}) _{3}), -5.4 (Si(CH_{3})2);
MS (EI), m/z (intensidad relativa) 227 (M^{+}, 8), 212
(6), 170 (M-_{t}Bu, 36), 96 (8), 82
(M-CH_{2}OTBDMS, 100), 75 (11) ; IR (neat)
3550-3100 (br, NH), 3074 (C=CH_{2}), 2929, 2857,
1664 (C=C), 1472, 1424, 1391, 1380, 1361, 1255, 1190, 1101, 1006,
939, 880, 838, 777, 723, 668 cm^{-1}.
Se añadió gota a gota una solución de
diyodopropano (8,79 g, 29,7 mmol) en THF (50 ml) durante un periodo
de 4 horas a una solución agitada vigorosamente de ácido vanílico
(10 g, 59,5 mmol) en THF (100 ml) y NaOH acuoso (225 ml, 0,5 M) a
65°C en ausencia de luz (matraz envuelto en papel de aluminio).
Después de calentamiento bajo reflujo durante 48 horas en la
oscuridad, la suspensión se enfrió, se lavó con hexano (3 x 100 ml)
y se eliminó el THE por evaporación al vacío. El residuo acuoso se
acidificó hasta pH 1 con HCl concentrado y el precipitado
resultante se recogió por filtración, se secó y se recristalizó a
partir de ácido acético glacial para dar el ácido
bis-carboxílico correspondiente (143) en
forma de sólido cristalino blanco (9,4 g, 84%). mp
238-240 °C; RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}):
\sigma 2.23 (t, 2H, J = 6.0 Hz, H13), 3.80 (s, 6H,
CH_{3}0), 4.20 (t, 4H, J = 6.0 Hz, H12), 7.09 (d,
2H, J = 8.4 Hz, H10), 7.45 (d, 2H, J = 1.8 Hz,
H6) 7.54 (dd, 2H, J = 8.4 Hz, 1.8 Hz, H9), 12.76 (bs,
2H, CO_{2}H) ; RMN ^{13}C (DMSO-d_{6})
\sigma
\break28.4 (C13), 55.4 (CH_{3}0), 64.8 (C12), 111.9 (C9), 112.0 (C6), 122.9 (C10), 123.0 (Q), 148.3 (Q), 151.6 (Q), 167.0 (C=O). IR (KBr): v = 3600- 2000, 1680 (0=0), 1600 (C=C), 1515, 1465, 1430, 1345, 1310, 1270, 1225 (C-0-C), 1180, 1140, 1115, 1030, 990, 970, 950, 925, 875, 850, 825, 765, 725, 645 cm^{-1}. MS (El): m/z (intensidad relativa) 376 (M^{+}, 28), 360 (3), 249 (2), 209 (45), 165 (29), 153 (16), 151 (19), 137 (19), 121 (7), 78 (15), 44 (100) ; HRMS: Calculado para CL_{19}H_{20}O_{8} = 37 6.1158 encontrado 376.1168.
El diácido 43 (2,0 g, 5,30 mmol) se añadió
por porciones a HNO_{3} concentrado (40 ml) a -10°C y se agitó
hasta temperatura ambiente durante 12 h. La mezcla de reacción se
vertió sobre hielo (400 ml) y el precipitado resultante se recogió
por filtración, se lavó con éter (3 x 50 ml) y se secó para dar el
ácido nitro (121) en forma de sólido amarillo (1,73 g, 70%).
m.p. 243-246°C. RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}):
8 2.25 (t, 2H, J = 5.9 Hz, H13), 3.90 (s, 6H,
CH_{3}O), 4.27 (t, 4H, J = 5.9 Hz, H12), 7.29
(s, 2H, H6), 7.62 (s, 2H, H9), 13.6 (bs, 2H,
CO_{2}H). RMN ^{13}C (DMSO-d_{6})
\sigma 28.0 (C13), 56.3 (CH_{3}O), 65.7
(C12), 108.0 (C9), 111.2 (C6), 121.1
(C5), 141.3 (Q), 149.1 (C8), 151.7 (Q),
165.9 (C=0). IR (KBr): v = 3620-2280, 1700
(C=0), 1595 (C=C)11570, 1515 (NO_{2}), 1460, 1415, 1350
(NO_{2}), 1270, 1210, 1180, 1135, 1045, 930, 880, 810, 750, 730,
645 cm^{-1}. MS (El): m/z (intensidad relativa) 467
(MH^{*}, 1), 450 (1), 436 (3), 423 (8), 378 (4), 268 (1), 255
(4), 236 (4), 210 (7),194 (2), 182 (7), 164 (14), 153 (2), 123 (3),
91 (6), 77 (3), 55 (5), 44 (100). HRMS (EI) m/z calculado
para C_{19}H_{18}N_{2}O_{12} = 466.0860 encontrado 466.0871
.
Se añadió una cantidad catalítica de DMF (2
gotas) a una solución del ácido dimérico 44 (0,66 g, 1,42
mmol) y cloruro de oxalilo (0,31 ml, 0,45 g, 3,55 mmol) en THE (12
ml). La mezcla de reacción se agitó durante 16 horas bajo
nitrógeno, se concentró al vacío y se redisolvió en THE (10 ml). La
solución resultante de cloruro de bis-ácido se añadió gota a gota a
la amina 58 (0,65 g, 2,86 mmol), H_{2}O (0,84 ml) y TEA (0,83 ml,
0,60 g, 5,93 mmol) en THE (2 ml) a 0°C (hielo/acetona) bajo
nitrógeno. La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura
ambiente y se agitó durante 2 horas más en cuyo momento la TLC
(EtOAc) mostró la finalización de la reacción. Después de
eliminación del THE por evaporación al vacío, el residuo se dividió
entre H_{2}O (100 ml) y EtOAc (100 ml). La capa acuosa se lavó
con EtOAc (3 x 50 ml) y las capas orgánicas combinadas se lavaron
con NH_{4}4Cl saturado (100 ml), salmuera (100 ml), se secaron
(MgSO_{4}), se filtraron y se concentraron al vacío para dar el
producto crudo en forma de aceite naranja oscuro. La purificación
por cromatografía flash (50% EtOAc/éter de petróleo) dio la amida
pura 75 en forma de vidrio amarillo claro (0,93 g, 74%):
[\alpha]^{21}_{D} = -51.1° (c = 0.08,
CHCl_{3}); RMN ^{1}H (270 MHz, CDCl_{3}) (rotámeros)
\sigma 7.77 y 7.74 (s x 2, 2H_{arom}), 6.81 y 6.76 (s x 2,
2_{arom}), 5.09-4.83 (m, 4H, NCH_{2}C=CH_{2}),
4.60 (m, 2H, NCHCH_{2}OTBDMS), 4.35-4.31 (m, 4H,
OCH_{2}CH_{2}CH_{2}O), 4.08-3.74 (m, 14H,
NCHCH_{2}OTBDMS, NCH_{2}C=CH_{2} y OCH_{3}), 2.72- 2.45 (m,
6H, NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2} y OCH_{2}CH_{2}CH_{2}O), 0.91
y 0.79 (s x 2, 18H, SiC(CH_{3})_{3}3), 0.09,
-0.09, y -0.12 (s x 3, 12H, Si (CH_{3})_{2}); RMN
^{13}C (67.8 MHz, CDCL_{3}) (rotámeros) \sigma 166.2 (NC=O),
154.7 y 154.5 (C_{cuat}), 148.4 y 148.2 (C_{cuat}), 144.1 y
143.2 (C_{cuat}), 137.2 (C_{cuat}), 128.2 y 127.4 (C_{cuat}),
110.1 y 108.6 (C-H_{arom}), 109.1 y 108.3
(C-H_{arom}), 107.5 (NCHZC=CH_{2}), 65.7 y 65.5
(OCH_{2}CH_{2}CH_{2}O), 63.9 y 62.6 (NCHCH_{2}OTBDMS), 60.2
(NCHCHZOTBDMS), 58.1 y 56.6 (OCH_{3}), 52.8 y 50.5
(NCH_{2}C=CH_{2}), 35.0 y 33.9 (NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}),
30.8 y 28.6 (OCH_{2}CH_{2}CH_{2}O), 25.8 y 25.7 (SiC
(CH_{3})_{3}), 18.2 (SiC(CH_{3}) _{3}), -
5.5 y -5.6 (Si(CH_{3})_{2}); MS (EI),
m/z (intensidad relativa) 885 (M ^{+}, 7), 828 (M-
^{t} Bu, 100), 740 (M-CH_{2}OTBDMS, 20), 603
(3), 479 (26), 391 (27), 385 (25), 301 (7), 365 (10), 310 (14), 226
(8), 222 (13), 170 (21), 168 (61), 82 (39), 75 (92); IR (NUJOL®)
2923, 2853, 2360, 1647, 1587, 1523 (NO_{2}) 1461, 1429, 1371,
1336 (NO_{2}), 1277, 1217, 1114, 1061, 1021, 891, 836, 772, 739
cm ^{-1}.
Se añadió una solución de TABF (3,98 ml de una
solución 1 M en THF, 3,98 mmol) al bis-silil éter 75 (1,41
g, 1,59 mmol) en THF (35 ml) a 0°C (hielo/acetona). La mezcla de
reacción se dejó calentar hasta temperatura ambiente y al cabo de
30 minutos se añadió NH _{4} Cl saturado (120 ml). La solución
acuosa se extrajo con EtOAc (3 x 80 ml), se lavó con salmuera (80
ml), se secó (MgSO_{4}), se filtró y se evaporó al vacío para dar
un aceite naranja oscuro que se purificó por cromatografía flash
(97% CHCl_{3}/MeOH) para dar el diol puro 76 en forma de
sólido naranja claro (0,98 g, 94%): [\alpha] 19^{D} = -31.9° (c
= 0.09, CHCl_{3}); RMN ^{1}H (270 MHz, CDCl_{3}) (rotámeros)
\sigma 7.75 y 7.71 (s x 2, 2H_{arom}), 6.96 y 6.84 (s x 2,
2H_{arom}), 5.08, 5.02 y 4.88 (br s x 3, 4H,
NCH_{2}C=CH_{2}), 4.61-4.50 (m, 2H,
NCHCH_{2}OH), 4.35-4.33 (m, 4H,
OCH_{2}CH_{2}CH_{2}O), 4.02-3.65 (m, 14H,
NCHCH_{2}OH, NCH_{2}C=CH_{2} y OCH_{3}),
2.88-2.43 (m, 6H, NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2} y
OCH_{2}CH_{2}CH_{2}O) ; RMN ^{13}C (67.8 MHz, CDCl_{3})
(rotámeros) \sigma 167.9 y 166.9 (NC=O), 154.9 y 154.3
(C_{cuat}), 148.4 y 148.2 (C_{cuat}), 143.3 y 142.6
(C_{cuat}), 137.2 y 137.0 (C_{cuat}), 127.6 y 127.3
(C_{cuat}), 109.1 (C-H_{arom}), 108.4
(NCH_{2}C=CH_{2}), 108.2 (C-H_{arom}), 65.6 y
65.4 (OCH_{2}CH_{2}CH_{2}O), 64.5 y 63.3 (NCHCH_{2}OH),
60.5 y 60.0 (NCHCH_{2}OH), 56.8 y 56.7 (OCH_{3}), 52.9
(NCH_{2}C=CH_{2}), 35.0 y 34.3 (NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}),
29.6 y 28.6 (OCH_{2}CH_{2}CH_{2}O) ; MS (FAB) (intensidad
relativa) 657 (M^{+} + 1, 10), 639 (M-OH, 2), 612
(1), 544 (M- NCH_{2}CCH_{2}CH_{2}CHCH_{2}OH, 4), 539 (1),
449 (16), 433 (9), 404 (8), 236 (32), 166 (65), 151 (81), 112 (82),
82 (100); IR (NUJOL®) 3600-3200 (br, OH), 2923,
2853, 2360, 1618, 1582, 1522 (NO_{2}) 1459, 1408, 1375, 1335
(NO_{2}) 1278, 1218, 1061, 908, 810, 757 cm^{-1}.
Se calentó una mezcla del diol 76 (0,98 g,
1,49 mmol) y SnCl_{2}.2H_{2}O (3,36 g, 14,9 mmol) en MeOH (35
ml) bajo reflujo y la evolución de la reacción se monitorizó por
TLC (90% CHCl_{3}/MeOH). Al cabo de 45 minutos, el MeOH se
evaporó al vacío y el residuo resultante se enfrío (hielo) y se
trató cuidadosamente con NaHCO_{3} saturado (120 ml). Se diluyó
la mezcla con EtOAc (120 ml) y al cabo de 16 horas de agitación a
temperatura ambiente el precipitado inorgánico se eliminó por
filtración con celita. La capa orgánica se separó, se lavó con
salmuera (100 ml), se secó (MgSO_{4}), se filtró y se evaporó al
vacío para dar un sólido marrón. La cromatografía flash (95%
CHCl_{3}/MeOH) dio la bis-amina 77 pura en
forma de sólido naranja (0,54 g, 61%):
[\alpha]^{19}_{D} = -31.8° ( c = 0.30, CHCl_{3});
RMN ^{-1}H (270 MHz, CDCl_{3}) \sigma 6.74 (s, 2H_{arom}),
6.32 (s, 2H_{arom}), 5.00 (br s, 2H, NCH_{2}C=CH_{2}), 4.93
(br s, 2H, NCH_{2}C=CH_{2}), 4.54 (br s, 2H, NCHCH_{2}OH),
4.24-4.14 (m, 4H, OCH_{2}CH_{2}CH_{2}O),
3.98-3.50 (m, 14H, NCHCH_{2}OH,
NCH_{2}C=CH_{2} y OCH_{3}), 2.76 (dd, 2H, J = 8.61,
15.91 Hz, NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}), 2.46-2.41
(m, 2H, NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}), 2.33-2.28 (m,
2H, OCH_{2}CH_{2}CH_{2}O); RMN ^{13}c (67.8 MHz,
CDCL_{3}) \sigma 171.0 (NC=O), 151.0 (C_{cuat}), 143.5
(C_{cuat}) 141.3 (C_{cuat}), 140.6 (C_{cuat}), 112.4
(C-H_{arom}), 111.9 (C_{cuat}), 107.8
(NCH_{2}C=CH_{2}), 102.4 (C-H_{arom}), 65.2
(OCH_{2}CH_{2}CH_{2}O), 65.0 (NCHCH_{2}OH), 59.8
(NCHCH_{2}OH), 57.1 (OCH_{3}), 53.3 (NCH_{2}C=CH_{2}),
34.4 (NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}), 29.0 (OCH_{2}
CH_{2}CH_{2}O); MS (FAB) (intensidad relativa) 596 (M^{+},
13), 484 (M- NCH_{2}CCH_{2}CH_{2}CHCH_{2}OH, 14), 389 (10),
371 (29), 345 (5), 224 (8), 206 (44), 166 (100), 149 (24), 112
(39), 96 (34), 81 (28); IR (NUJOL®) 3600-3000 (br,
OH), 3349 (NH_{2}), 2922, 2852, 2363, 1615, 1591 (NH_{2}), 1514,
1464, 1401, 1359, 1263, 1216, 1187, 1169, 1114, 1043, 891, 832, 761
cm^{-1}.
Se añadió gota a gota una solución de hidracina
(23 mg, 23 \mul, 0.72 mmol) en MeOH (5 ml) a una solución del
dial 76 (95 mg, 0,145 mmol) y se calentó Ni Raney (20 mg) en
MeOH (15 ml) bajo reflujo. Después de 1 hora bajo reflujo, la TLC
(90% CHCl_{3}/MeOH) mostró formación de amina. La mezcla de
reacción se trató con más Ni Raney (20 mg) e hidracina (23 mg, 23
\mul, 0.72 mmol) en MeOH (5 ml) y se calentó bajo reflujo durante
30 minutos adicionales, en cuyo punto la TLC mostró la reacción
completa. A continuación, la mezcla de reacción se trató con 3
suficiente Ni Raney para descomponer la hidracina restante y se
calentó bajo reflujo durante 1,5 horas más. Después de enfriamiento
hasta temperatura ambiente, la mezcla se filtró a través de un
aglomerado y el filtrado resultante se evaporó al vacío. El residuo
resultante se trató con CH_{2}CL_{2} (30 ml), se secó
(MgSO_{4}), se filtró y se evaporó al vacío para dar la
bis-amina (77) en forma de aceite amarillo
(54 mg, 63%): RMN ^{1}H (270 MHz, CDCl_{3}) (diastereoisómeros)
\sigma 6.73 (s, 2H_{arom}), 6.32 (s, 2H_{arom})
4.60-4.30 (m, 2H, NCHCH_{2}OH), 4.19 (t, 4H,
J = 5.87 Hz, OCH_{2}CH_{2}CH_{2}O),
3.78-3.50 (m, 14H, NCHCH_{2}OH,
NCH_{2}CHCH_{3} y OCH_{3}), 2.40-1.55 (m, 8H,
NCH_{2}CHCH_{3}, OCH_{2}CH_{2}CH_{2}O y
NCH_{2}CHCH_{3}CH_{2}), 1.00-0.95 (m, 6H,
NCH_{2}CHCH_{3}) ; MS (El), m/z (intensidad relativa)
600 (M^{+}, 16), 459 (46), 345 (16), 206 (13), 186 (17), 180
(31), 166 (37), 149 (6), 142 (76), 100 (6), 98 (13), 97 (29), 84
(81), 69 (7), 55 (100).
Se añadió piridina (0,47 ml, 0,46 g, 5,82 mmol) a
una solución agitada de la bis-amina 77
(0,857 g, 1,44 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (30 ml) a 0°C
(hielo/acetona). A continuación, la mezcla fría se trató gota a
gota con una solución de cloroformato de alilo (0,33 ml, 0,38 g,
3,15 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (10 ml). Después de 2,5 horas de
agitación a temperatura ambiente, la mezcla se diluyó con
CH_{2}CL_{2} (60 ml), se lavó con HCl IN (2 x 50 ml), H_{2}O
(80 ml), salmuera (80 ml), se secó (MgSO_{4}), se filtró y se
evaporó al vacío. El residuo crudo se purificó por cromatografía
flash (70-100% EtOAc/éter de petróleo) para dar el
compuesto carbamato de alilo 78 en forma de vidrio
anaranjado (0,548 g, 50%) : RMN ^{1}H (270 MHz, CDCl_{3})
\sigma 8.58 (br s, 2H, NH), 7.56 (s, 2H_{arom}), 6.78 (s,
2H_{arom}), 6.03-5.88 (m, 2H,
NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 5.39-5.21 (m, 4H,
NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 5.00 (br s, 2H,
NCH_{2}C=CH_{2}), 4.93 (br s, 2H, NCH_{2}C=CH_{2}),
4.70-4.57 (m, 4H, NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}),
4.30-4.25 (m, 4H, OCH_{2}CH_{2}CH_{2}O),
4.17-3.90 (m, 8H, NCHCH_{2}OH y
NCH_{2}C=CH_{2}), 3.81-3.54 (m, 8H,
NCHCH_{2}OH y OCH_{3}), 2.76 (dd, 2H, J = 8.52, 15.85 Hz,
NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}), 2.49-2.44 (m, 2H,
NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}), 2.36-2.28 (m, 2H,
OCH_{2}CH_{2}CH_{2}O) ; RMN ^{13}C (67.8 MHz, CDCl_{3})
\sigma 170.3 (N C=O_{amida}), 153.8 (N C=O_{carbamato}),
150.5 (C_{cuat}), 144.8 (C_{cuat}), 143.1 (C_{cuat}), 132.5
(NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 130.7 (C_{cuat}), 118.1 1
(NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 116.8 (C_{cuat}), 110.9
(C-H_{arom}), 108.1 (NCH_{2}C=CH_{2}), 106.9
(C-H_{arom}), 65.7
(NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 65.4 (OCH_{2}CH_{2}CH_{2}O),
65.1 (NCHCH_{2}OH), 59.8 (NCHCH_{2}OH), 56.5 (OCH_{3}), 53.9
(NCH_{2}C=CH_{2}), 34.2
(NCH_{2}
\breakC=CH_{2}CH_{2}), 29.7 y 29.2 (OCH_{2}CH_{2}CH_{2}O); MS (FAB) (intensidad relativa) 765 (M^{+} + 1,10), 652 (M-NCH_{2}CCH_{2}CH_{2}
\breakCHCH_{2}OH, 32), 594 (4), 539 (2),481 (51), 441 (31), 290 (3), 249 (13), 232 (38), 192 (83), 166 (49), 149 (32), 114 (100).
Se trató una solución del compuesto
bis-aliloxicarbonilo 78 (150 mg, 0,196 mmol)
en CH_{2}Cl_{2}/CH_{3}CN (12 ml, 3:1) con tamices moleculares
en polvo de 4 A (0,2 g) y NMO (70 mg, 0,598 mmol). Después de 15
minutos de agitación a temperatura ambiente, se añadió TPAP (7 mg,
19,9 \mumol) y continuó la agitación durante 2 horas más en cuyo
punto la TLC (95% CHCl_{3}/MeOH) indicó formación del producto
totalmente ciclizado junto con el producto 79 supuestamente
semiciclizado, y presencia de material de partida 78 sin
reaccionar en la mezcla de reacción. A continuación se trató la
mezcla con una cantidad adicional de NMO (35 mg, 0,299 mmol) y TPAP
(3,5 mg, 9,96 \mumol), y se dejó en agitación durante 0,5 horas
más, momento en que la TLC indicó la finalización de la reacción.
El disolvente se evaporó al vacío y el residuo negro se sometió a
cromatografía flash (98% CHCl_{3}/MeOH) para dar la,
carbinolamina protegida pura 79 en forma de sólido blanco
(47 mg, 32%) : RMN ^{1}H (270 MHz, CDCl_{3}) \sigma 7.23
\hbox{(s, 2H _{arom} )}6.74 (s, 2H_{arom})), 5.90-5.65 (m, 2H, NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 5.57 (d, 2H, J = 8.24 Hz, NCHCHOH), 5.26-5.07 (m, 8H, NCH_{2}C=CH_{2} y NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 4.67-4.10 (m, 14H, NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}, NCH_{2}C=CH_{2}, OCH_{2}CH_{2}CH_{2}O y OH), 3.89 (s, 6H, OCH_{3}), 3.63 (m, 2H, NCHCHOH), 2.91 (dd, 2H, J = 8.79, 15.76 Hz, NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}), 2.68 (d, 2H, J = 16.10 Hz, NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}), 2.42-2.24 (m, 2H, OCH_{2}CH_{2}CH_{2}O) ; RMN ^{13}C (67.8 MHz, CDCl_{3}) \sigma 166.7 (NC=O_{amida}) ) 150.1 (C_{cuat}), 149.0 (C_{cuat}), 141.7 (C_{cuat}), 131.7 (NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 130.6 (C_{cuat}), 128.9 (C_{cuat}), 128.8 (C_{cuat}) 118.3 (NCO_{2}CH_{2}CH=CH_{2}), 114.7 (C-H_{arom}), 110.7 (C-H_{arom}), 109.8 (NCH_{2}C=CH_{2}), 85.9 (NCHCHOH), 66.9 (NCO_{2} CH_{2}CH=CH_{2}), 66.0 (OCH_{2}CH_{2}CH_{2}O), 59.7 (NCHCHOH), 56.1 (OCH_{3}), 50.7 (NCH_{2}C=CH_{2}), 35.0 (NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}), 29.7 y 29.1 (OCH_{2}CH_{2}CH_{2}O); MS (FAB) (intensidad relativa) 743 (M^{+} - 17, 16), 725 (17), 632 (13), 574 (8), 548 (13), 490 (10), 481 (9), 441 (7), 425 (6), 257 (12), 232 (20), 192 (46), 166 (52), 149 (100), 91 (59); IR (NUJOL®) 3234 (br, OH), 2923, 2853, 2361, 1707, 1604, 1515, 1464, 1410, 1377, 1302, 1267, 1205, 1163, 1120, 1045, 999, 955, 768, 722 cm^{-1}.
Se añadió una cantidad catalítica de
tetrakis(trifenilfosfina)paladio (11 mg, 9,52
\mumol) a una solución agitada de la
bis-aliloxicarbonil-carbinolamina
79 (139 mg, 0,183 mmol), trifenilfosfina (4,8 mg, 18,3
\mumol) y pirrolidina (27 mg, 0.380 mmol) en
CH_{2}Cl_{2}/CH_{3}CN (13 ml, 10:3) a 0ºC (hielo/acetona) en
atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se dejó calentar
hasta temperatura ambiente y se monitorizó su evolución por TLC
(95% CHCl_{3}/MeOH). Al cabo de 2 horas y 15 minutos, la TLC
indicó que la reacción había finalizado, procediendo con el
supuesto producto semiimina 261, para dar un punto de TLC que
presentó una fluorescencia brillante bajo UV. El disolvente se
evaporó al vacío y el residuo resultante se sometió a cromatografía
flash (98% CHCl_{3}/MeOH) para dar la molécula buscada de
bis-imina 80 (SJG-136) en
forma de vidrio naranja claro (78 mg, 77%) que se evaporó
repetidamente al vacío con CHCl_{3} para dar la forma de imina:
[\alpha]^{21}_{D} = +357.7° (c = 0.07, CHCl_{3});
HPLC en fase inversa (fase estacionaria C_{4}, fase móvil 65%
MeOH/H_{2}O, 254 nm), tiempo de retención = 6.27 minutos, % área
de los picos = 97.5%; RMN ^{1}H (270 MHz, CDCl_{3}) (forma de
imina) \sigma 7.68 (d, 2H, J = 4.4 Hz, HC=N), 7.49 (s,
2H_{arom}), 6.85 (s, 2H_{arom}), 5.20 (s, 2H,
NCH_{2}C=CH_{2}), 5.17 (s, 2H, NCH_{2}C=CH_{2}),
4.46-4.19 (m, 4H, OCH_{2}CH_{2}CH_{2}O), 3.92
(s, 6H, OCH_{3}), 3.89- 3.68 (m, 6H, NCH_{2}C=CH_{2} y
NCHHC=N), 3.12 (dd, 2H, J = 8.61, 16.21 Hz,
NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}), 2.68 (d, 2H, J = 16.30 Hz,
NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}), 2.45-2.38 (m, 2H,
OCH_{2}CH_{2}CH_{2}O); RMN ^{13}c (67.8 MHz, CDCl_{3})
(forma de imina) \sigma 164.7 (NC=O), 162.6 (HC=N), 150.7
(C_{cuat}), 147.9 (C_{cuat}), 141.5 (C_{cuat}), 140.6
(C_{cuat}) 119.8 (C_{cuat}), 111.5
(C-H_{arom}), 110.7
(C-H_{arom}), 109.4 (NCH_{2}C=CH_{2}), 65.4
(OCH_{2}CH_{2}CH_{2}O), 56.1 (OCH_{3}), 53.8 (NCHHC=N),
51.4 (NCH_{2}C=CH_{2}), 35.4 (NCH_{2}C=CH_{2}CH_{2}), 28.8
(OCH_{2}CH_{2}CH_{2}O); MS (FAB) (intensidad relativa) (forma
de imina) 773 (M^{+} + 1 + (complejo de inclusión de tioglicerol
x 2), _{3}), 665 (M^{+} + 1 + complejo de inclusión de
tioglicerol, 7), 557 (M^{+} + 1, 9), 464 (3), 279 (12), 257 (5),
201 (5), 185 (43), 166 (6), 149 (12), 93 (100); IR (NUJOL®)
3600-3100 (br, OH de forma carbinolamina), 2923,
2849, 1599, 1511, 1458, 1435, 1391, 1277, 1228, 1054, 1011, 870,
804, 761, 739 cm^{-1}.
Se añadió una solución de cloroformato de bencilo
(12,5 ml, 87,7 ml) en tolueno (40 ml) a una solución de
trans-4-hidroxi-L-prolina
11 (10 g, 76,3 mmol) y NaHCO_{3} (16 g, 190 mmol) en H_{2}O
(165 ml) durante un periodo de 15 minutos. Después de 12 horas a
temperatura ambiente con agitación, se dejó que las dos fases se
separaran. La fase acuosa se lavó con dietil éter (4 x 50 ml), se
enfrío en un baño de hielo y, a continuación, se acidificó hasta pH
2 con HCl concentrado. El producto resultante se extrajo con
acetato de etilo (5 x 50 ml) y los extractos orgánicos combinados
se secaron (MgSO_{4}) y el exceso de disolvente se evaporó al
vacío para dar un aceite viscoso incoloro (20,30 g, 100%).
[\alpha]^{27}_{D} = -565° (c 0,1, MeOH). RMN ^{1}H
(CDCl_{3}): \sigma 2.07-2.31 (m, 3H, H1),
3.52-3.59 (m, 2H, H3),
4.43-4.53 (m, 2H, H2, H11a), 5.8 y
5.11 (s, 2H, rotámeros menor y mayor de H6, 1:2), 6.0 (bs,
2H, OH), 7.26-7.29 y
7.32-7.34 (m, 5H, rotámeros menor y mayor de H
arom, 1:2). IR (película delgada): v = 3414 (OH), 2940 (OH),
1682 (C=O), 1495, 1429, 1359 (CO_{2}-), 1314, 1269, 1205, 1180,
1174, 1127, 1082, 1051, 993, 914, 866, 826, 769, 741, 697
cm^{-1}. MS (El): m/e (intensidad relativa) : 266 (M^{+}, -1),
265 (6), 220 (5), 176 (15), 130 (34), 108 (2), 91 (100), 86 (4), 68
(11). HRMS calculado para C_{13}H_{15}NO_{5} = 265.0950
encontrado 265.0976
Se calentó una solución de
(2S,4R)-N-(Benzoxicarbonil)
-2-carboxi-4-hidroxipirrolidina
(45) (20,30 g, 76,3 mmol) en metanol seco (300 ml) bajo reflujo
durante 18 horas en presencia de una cantidad catalítica de
H_{2}SO_{4} concentrado (2,20 ml, 7,63 mmol). La mezcla de
reacción se dejó enfriar hasta temperatura ambiente y se neutralizó
con Et_{3}N (3,0 ml, 76,3 mmol). La mezcla de reacción se
concentró al vacío y el residuo se redisolvió en acetato de etilo
(200 ml), se lavó con salmuera (1 x 50 ml), se secó (MgSO_{4}) y
se extrajo el exceso de disolvente a presión reducida para dar una
goma incolora (21,17 g, 99%). [\alpha]^{20}_{D} =
-59.4° (c 0.014, CHCl_{3}). RMN ^{1}H (CDCl_{3}): \sigma
2.04-2.08 y 2.24-2.35 (m, ^{1}H,
rotámeros de H1, 1:1), 2.64 (bs, ^{1}H, OH), 3.54 y
3.74 (s, 3H, rotámeros de OMe, 1:1),
3.66-3.69 (m, 2H, H3),
4.47-4.50 (m, 2H, H2, H11a),
5.07-5.13 (m, 2H, H6),
7.26-7.35 (m, 5H, H arom). RMN ^{13}c
(CDCl_{3}): relación de rotámeros 1:1, \sigma 37.8 y 38.5
rotámeros de (C1), 51.8 y 52.0 rotámeros de (OMe), 54.1 y
54.7 rotámeros de (C3), 57.4 y 57.7 rotámeros de (C2),
66.9 y 67.0 rotámeros de (C6), 68.6 y 69.3 rotámeros de
(C11a), 127.0, 127.3, 127.4, 127.7, 127.8, 128.0 y 128.1
rotámeros de (C arom). IR (película delgada): v = 3435 (OH),
3033, 2953 (OH), 1750 (éster), 1680 (C=0), 1586, 1542, 1498, 1422,
1357 (CO_{2}H), 1170, 1124, 1084, 1052 (C-O),
1004, 963, 916, 823, 770, 750, 699, 673 cm^{-1}. MS (FAB)
m/z (intensidad relativa): 280 (M^{+}, 24), 236 (20), 234
(4), 216 (8), 214 (4), 213 (2), 206 (2), 204 (7), 203 (4), 202
(10), 201 (2), 181 (5), 144 (16), 102 (23), 91 (100). HRMS calculado
para C_{14}H_{17}N0_{5} = 279, 1107 encontrado 279, 1192
Se añadió borohidrato de litio (1,57 g, 73 mmol)
por porciones a una solución de (2S,4R)
-N-(benzoxicarbonil)-2-metioxicarbonil-4-hidroxiprolina
(46) (20,17 g, 73 mmol) en THF (350 ml) a 0°C. La mezcla de
reacción se dejó calentar hasta temperatura ambiente y se agitó
durante toda la noche. La suspensión resultante se enfrío hasta 0°C
y se templó con agua (2-3 ml) hasta que desapareció
la efervescencia, en cuyo punto se añadió HCl 2M (15 ml) para
disolver el precipitado. El producto se extrajo con acetato de
etilo (3 x 150 ml) y las fases orgánicas combinadas se lavaron con
salmuera (1 x 100 ml) y se secaron (MgSO_{4}). La concentración
al vacío dio una goma blanca (18,25 g, 100%).
[\alpha]^{22,3}_{D} = -404 0 (C = 0.043, CHCl_{3}).
RMN ^{1}H (CDCl_{3}): \sigma 1.24-1.26 (m,
^{1}H, H1), 1.73-2.08 (m, 1H, H1),
3.40-4.30 (m, 6H, H2, H3, H11,
H11a), 5.06 (bs, 1H, OH), 5.09 (s, 2H, H6),
7.25-7.31 (m, 5H, H arom). RMN ^{13}c
(CDCl_{3}): \sigma 36.7 (Cl), 55.2 (C3), 58.7
(C2), 65.0 (C11), 67.0 (C6), 68.7
(C11a), 127.0, 127.5 (C arom), 127.8 (C arom), 128.2
(C arom). IR (película delgada): v = 3390 (OH), 3065, 3033, 2953
(OH), 1681 (C=0 carbamato), 1586, 1538, 1498, 1454, 1192, 1122,
978, 914, 862, 770, 698, 673 cm^{-1}. MS (FAB) m/z
(intensidad relativa): 252 (M^{+}, 58), 208 (33), 176 (5), 144
(6), 118 (8), 116 (7), 92 (13), 91 (100). HRMS calculado para
C_{13}H_{17}NO_{4} = 251.1158 encontrado 251.1230.
Se añadieron t-butildimetilsilil cloruro
(5,78 g, 38,3 mmol) y
1,8-diazabiciclo[5,4,0]undec-7-eno
(1,44 ml, 9.6 mmol) a una solución de alcohol (47) (12,51 g,
49,8 mmol) y trietilamina (7,0 ml, 49.8 mmol) en DCM seco (200 ml)
que se había agitado durante 15 minutos a temperatura ambiente. La
mezcla resultante se dejó agitar a temperatura ambiente durante 18
horas y a continuación se diluyó con acetato de etilo (300 ml). La
fase orgánica se lavó con cloruro de amonio saturado acuoso (2 x
100 ml) y salmuera (1 x 100 mL), se secó (MgSO_{4}) y el
disolvente se extrajo a presión reducida para dar un aceite viscoso
incoloro (9,84 g, 70%). [\alpha]^{22,3}_{D} = -263° (c
0.70, CHCl_{3}). RMN ^{1}H (CDCl_{3}): \sigma -0.05 y -0.06
(s, 6H, rotámeros de H1', H2', 1:1), 0.83 y 0.85 (s, 9H,
rotámeros de H3', H5', H6', 1:1),
1.95-2.22 (m, 2H, H1), 2.78 (bs, ^{1}H,
OH), 3.44-3.68 (m, 3H, H3,
H11), 3.99-4.10 (m, ^{1}H, H2),
4.43-4.46 (m, ^{1}H, H11a),
5.11-5.16 (m, 2H, H6),
7.34-7.35 (m, 5H, H arom). RMN ^{13}c
(CDCl_{3}) : relación de rotámeros de 1:1, \sigma -5.50
(C3, C5', C6'), 18.15 (C4'), 25.83
(Cl', C2'), 36.55 y 37.27 rotámeros de (C1),
55.2 y 55.7 rotámeros de (C3), 57.3 y 57.8 rotámeros de
(C2), 62.8 y 63.9 rotámeros de (C11), 66.6 y 67.0
rotámeros de (C6), 69.7 y 70.3 rotámeros de (C11a), 127.8
(C arom), 127.9 (C arom), 128.0 (C arom),
128.4 (C arom), 128.5 (C arom), 136.5 y 136.8
rotámeros de (C7), 154.9 y 155.2 rotámeros de (C5). IR
(película delgada): v = 3415 (OH), 3066, 3034, 2953 (OH), 2930,
2884, 2857, 1703 (C=0 carbamato), 1587, 1498, 1424, 1360
(C-CH_{3}), 1288 (CH_{3}Si), 1255
(t-Bu), 1220, 1195 (t-Bu), 1118
(Si-O), 1057, 1003, 917, 836, 774, 751, 698, 670
cm^{-1}. MS (EI/CI) m/e (intensidad relativa): 366 (M^{+},
100), 308 (14), 258 (2), 91 (2).
Se añadió una suspensión de Pd/C al 10% (190 mg)
en acetato de etilo (20 ml) a una solución de éter de TBDMS
(48) (1,90 g, 5,19 mmol) en etanol (100 ml). La mezcla de
reacción se hidrogenó (aparato Parr) durante 16 h. El catalizador
se extrajo por filtración al vacío con celita y el exceso de
disolvente se evaporó a presión reducida para dar un aceite
amarillo en rendimiento cuantitativo (1, 20 g, 100%).
[\alpha]^{22'2}_{D} = +35,6° (c 0,042, CHCl_{3}). RMN
^{1}H (CDCl_{3}): \sigma -(0.07-0.08) (m,
6H, H1', H2'), 0.82 (s, 9H, H3', H4',
H5'), 1.68-1.73 (m, 2H, H1),
2.99-3.11 (m, 2H, H1l), 3.47-3.50
(m, 3H, H11a, H3), 4.09 (bs, ^{1}H, NH o OH), 4.32
(bs, ^{1}H, NH o OH). RMN ^{13}c (CDCl_{3}) :
\sigma -5,4 (C3', C5',C6'), 18.1
(C4'), 25.8 (C1, C2'), 37.4 (C1), 54.6
(C11), 58.1 (C2), 64.6 (C3), 72.2
(C11a). IR (película delgada): v = 3330 (OH), 2928, 2857,
1557, 1421, 1331 (C-CH_{3}), 1249
(CH_{3}-Si), 1204 (t-Bu), 1191
(t-Bu), 1100 (Si-O), 1073, 993, 713
cm^{-1}. MS (Cl) m/e (intensidad relativa): 232 (M^{+}, 100),
230 (13), 174 (5), 133 (6), 86 (6).
Se añadió una cantidad catalítica de DMF (2
gotas) a una suspensión agitada de bis-ácido nitro (44)
(2,00 g, 4,28 mmol) y cloruro de oxalilo (0,94 ml, 10,70 mmol) en )
THF seco (20 ml), y se agitó la mezcla de reacción durante 4 h.
Después de evaporación del exceso de THF al vacío, el residuo
amarillo resultante se disolvió en THF seco (20 ml) y se añadió
gota a gota durante 25 minutos a una suspensión vigorosamente
agitada de amina (2) (2,47 g, 10,70 mmol), Et_{3}N (2,50 ml, 17,9
mmol) e hielo/agua (0,6 ml) enfriada en un baño de hielo. A
continuación se dejó calentar la mezcla hasta temperatura ambiente
durante 1,5 h más. Después de eliminación del THE por evaporación
al vacío, se diluyó el residuo con agua (100 ml) y se extrajo con
acetato de etilo (3 x 100 ml). La fase orgánica combinada se lavó
con agua (3 x 25 ml) y salmuera (3 x 25 ml), se secó (MgSO_{4}) y
el disolvente se extrajo al vacío para dar un aceite amarillo que
se purificó por cromatografía flash (3% MeOH/CHCl_{3}) para dar
la bis-amida (49) en forma de sólido
amarillo (2,05 g, 54%). [\alpha]^{23.8}_{D} =-993° (c
0.033, CHCl_{3}). RMN ^{1}H (CDCl_{3}): \sigma -0.05 (s,
12H, H1', H2'), 0.80 (s, 18H, H3', H5',
H6'), 1.96-1.99 (m, 2H, H1),
2.14-2.16 (m, 2H, H1),
2.19-2.24 (m, 2H, H13), 2.85 -2.89 (m, 2H,
H2), 3.16-3.19 (m, 4H, H11),
3.63-3.66 (m, 4H, H3), 3.81 (s, 6H,
OMe), 3.99-4.10 (m, 2H, H3), 4.23 (t,
4H, J = 5.3 Hz, H12), 4.38 (bs, 2H, OH);
5.20-5.25 (m, 2H, H11a), 6.65 (s, 2H,
H6), 7.55 (s, 2H, H9). RMN ^{13}c (CDCL_{3}):
\sigma -5.35 (Cl', C2'), 18.2 (C4'), 25.8
(C3', C5',C6'), 28.9 (C13), 36.1
(C1), 54.9 (CH_{3}O), 56.6 (C4), 57.3
(C12), 65.0 (C3), 70.0 (C2), 108.0 (C6),
109.4 (C9), 128.2 (Q), 137.2 (Q), 148.1
(Q), 148.5 (Q), 154.5 (Q), 166.5 (Q).
IR (película delgada): v = 3392 (OH), 2950, 2856, 1623 (0=0), 1577
(C arom), 1524 (NO_{2}), 1459, 1432, 1381, 1338
(C-CH_{3}), 1278 (CH_{3}-Si),
1219 (t-Bu), 1184 (t-Bu), 1075, 1053, 1004, 938, 914,
837, 778, 724, 668, 649, cm^{-1}. MS (FAB) m/z (intensidad
relativa): 894 (M^{+}, 8), 893 (19), 878 (6), 835 (2), 779 (9),
761 (6), 517 (3), 459 (5), 258 (7), 100 (3), 86 (4), 75 (29), 73
(100), 59 (17), 58 (6).
Se añadió una suspensión de Pd/C al 10% (155 mg)
en acetato de etilo (20 ml) a una solución de
bis-amida (49) (1,55 g, 1,73 mmol) en etanol
(100 ml). La mezcla de reacción se hidrogenó (aparato Parr) durante
16 h. La mezcla de reacción se filtró con celita y el disolvente se
extrajo a presión reducida para dar un aceite amarillo (50) en
rendimiento cuantitativo (1,44 g, 1000. RMN ^{1}H (CDCl_{3}):
\sigma0.00 (s, 12H, H1', H2'), 0.88 (s, 18H,
H3', H5', H6'), 2.00-2.25 (m,
6H, H1, H13), 3.50-3.72 (m, 12H,
H2, H3, H11, H11a), 3.74 (s, 6H,
OMe), 4.16-4.20 (m, 4H, H3),
4.30-4.35 (m, 4H, H12), 4.49 (bs, 2H,
OH); 6.23 (s, 2H, H9), 6.64 (s, 2H, H6). RMN
^{13}c (CDCL_{3}) :\sigma-5,5
(C1',C2'), 18,1 (C4'), 25.8
(C3',C5', C6'), 29.6 (C13), 35.2
(C1), 56.7 (CH_{3}O), 62.2 (C4), 64.1
(C3), 70.0 (C2), 102.2 (C9), 112.6
(C6), 140.4 (Q), 141.1 (Q), 150.6 (Q),
170.1 (Q); IR (neat): v = 3359 (OH), 2929, 2856, 1621
(C=O)11591 (C arom), 1469, 1433, 1406, 1358, 1346
(C-CH_{3}), 1261 (CH_{3}-Si),
1232 (t-Bu), 1175 (t-Bu), 1117, 1056, 1006, 866, 835,
776 cm^{-1}. MS (FAB) m/z (intensidad relativa): 834
(M^{+}, 13), 833 (18), 773 (9), 602 (13), 399 (7), 371 (34), 232
(9), 206 (22), 192 (14), 176 (13), 166 (44), 150 (8), 100 (10), 73
(100).
Se enfrió una solución de la
bis-amida (50) (2,76 g, 3,31 mmol) y
piridina (1,10 ml, 13,60 mmol) en DCM seco (100 ml) hasta 0°C. Se
añadió cloroformato de alilo (0,80 ml, 7,53 mmol) en DCM (50 ml)
gota a gota y la mezcla resultante se dejó calentar hasta
temperatura ambiente y se agitó durante 16 h. La mezcla de reacción
se diluyó con DCM (200 ml) y se lavó con CuSO_{4} 1M (3 x 50 ml),
agua (1 x 50 ml) y salmuera (1 x 50 ml) antes de secarla (MgSO9).
La evaporación del disolvente a presión reducida seguida de
cromatografía de columnas flash (2,5% McOH/DCM) dio (51) en
forma de sólido amarillo (3,24 g, 97%).
[\alpha]^{20'1}_{D} = -571° (c 0,007,
CHCl_{3}). RMN ^{1}H (CDCl_{3}): \sigma 0.00 (s, 12H,
Hl', H2'), 0.89 (s, 18H,
H3,H5',H6'), 2.03-2.36 (m, 6H,
H1, H13), 3.51-3.58 (m, 6H,
H2, H3), 3.77 (s, 6H, OMe),
4.20-4.26 (m, 8H, H11, H12),
4.28-4.30 (m, 2H, H11a),
4.56-4.60 (m, 6H, H8',OH), 5.25 (dd,
J_{1,2} = 1.5 Hz, J_{1,3} = 15.0 Hz,4H,
H10'), 5.90-5.95 (m, 2H, H9'), 6.73
(s, 2H, H6), 7.63 (s, 2H, H9), 8.80 (s, 2H,
NH). RMN ^{13}c (CDCl_{3}): \sigma-5,42
(Cl', C2'), 25.8 (C3',C5', C6'),
29.2 (C13), 35.4 (C1), 56.3 (CH_{3}O), 57.1
(C11a), 59.8 (C11), 62.2 (C3), 65.1
(C12), 65.7 (C8'), 70.5 (C2), 106.3
(C9), 111.5 (C6), 116.5 (Q), 118.1
(C10'), 131.7 (Q), 132.5 (C9'), 144.3
(Q), 150.3 (Q), 153.8 (Q), 169.5 (Q). IR
(neat): v = 3351 (OH), 2931, 2857, 1762 (aliloxicarbonilo C=O),
1722, 1603 (C=O), 1521 (C arom), 1463, 1404, 1264
(CH_{3}-Si), 1222 (t-Bu), 1106
(t-Bu), 1053, 1015, 936, 872, 837, 775, 629 cm^{-1}.
Se añadió una solución de sulfóxido de dimetilo
(2,10 ml, 28,5 mmol) en DCM seco (20 ml) gota a gota durante 15
minutos a una solución agitada y enfriada (-45°C) de cloruro de
oxalilo (1,27 ml, 14,60 mmol) en DCM (30 ml). Al cabo de 35
minutos, se añadió una solución de alcohol (51) (2,54 g,
2,53 mmol) en DCM (20 ml) gota a gota durante 15 minutos a la
mezcla de reacción a -45°C. Al cabo de 45 minutos, se añadió una
solución de trietilamina (5,75 ml, 40,3 mmol) en DCM (20 ml)
durante 15 minutos y se agitó la mezcla de reacción a -45°C
durante 30 minutos antes de calentarla a temperatura ambiente
durante 45 minutos. A continuación se lavó la mezcla con CuSO_{4}
1M (3 x 50 ml), agua (2 x 50 ml) y salmuera (1 x 50 ml) antes de
secarla (MgSO_{4}) y concentrarla al vacío para dar (52) en forma
de sólido amarillo (2.46 g, 97%). RMN ^{1}H (CDCl_{3}):
\sigma0.00 (s, 12H, H1', H2'), 0.86 (s, 18H,
H3, H5', H6'), 2.50-2.63 (m,
6H, H1, H13), 3.63-3.70 (m,
4H, H3), 3.80 (s, 6H, OMe),
3.93-3.97 (m, 6H, H11, H11a),
4.29-4.32 (m, 4H, H12), 4.62 (d, 4H,
J = 5.7 Hz, H8'), 5.27-5.32 (m, 4H,
H10'), 5.98-6.03 (m, 2H, H9'), 6.74
(s, 2H, H6), 7.74 (s, 2H, H9), 8.80 (s, 2H,
NH). RMN ^{13}c (CDCl_{3}) :\sigma -5,76 (C1',
C2'), 18,0 (C4'), 25.7 (C3', C5',
C6'), 28,8 (C13), 39,6 (C1), 55.0 (C3),
56.4 (CH_{3}O), 65.3 (C12), 65.8 (C8'), 105.9
(C9), 110.7 (C6), 118.2 (C10'), 132.4
(C9'), 150.7 (Q), 153.5 (Q), 169.1 (Q),
210.0 (C2). IR (neat): v = 3308 (OH), 2931, 2856, 1765
(aliloxicarbonilo C=O), 1730, 1624 (C=0), 1602 (C=O), 1522 (C
arom), 1468, 1407, 1332, 1259 (CH_{3}-Si), 1204
(t-Bu), 1105 (t-Bu), 1053, 1010, 937, 870, 837, 808,
778, 674, 657 cm^{-1}.
Se añadió una solución de t-butóxido de
potasio en THE seco (0,5 M, 4,00 ml, 2,00 mmol) a una suspensión de
bromuro de metiltrifenilfosfonio (0,716 g, 2,00 mmol) en THE seco
(2,00 ml). La suspensión de iluro amarilla resultante se agitó a
0°C durante 2 horas antes de la adición de una solución de
bis-cetona 52 (0,50 g, 0,50 mmol) en THE (10
ml) a 10°C. La mezcla de reacción se dejó calentar hasta
temperatura ambiente y se prosiguió la agitación durante una hora
más.
La mezcla de reacción se dividió en acetato de
etilo (15 ml) y agua (15 ml) y la capa orgánica se lavó con cloruro
sódico saturado (20 ml) y se secó sobre sulfato de magnesio. La
eliminación del exceso de disolvente dio un aceite marrón que se
sometió a cromatografía de columnas flash (50% acetato de etilo,
50% éter de petróleo 40-60°) para dar el producto
en forma de vidrio amarillo 206 (250 mg, 51 %).
[\alpha]^{23,4}_{D} = -32° (c 0,265, CHCl_{3}) . RMN
^{1}H (CDCl_{3}): \sigma 0.00 (s, 12H), 0,88 (s, 18H),
2,37-2,40 (m, 2H), 2.69-2.75 (m,
4H), 3.80-4.62 (m, 20H), 4.61-4.63
(m, 4H), 4.98 (bs, 4H), 5.30-5.38 (m, 4H),
5.94-6.00 (m, 2H), 6.81 (s, 2H), 7.84 (s, 2H), 8.80
(bs, 2H).
Se añadió una parte alícuota de complejo de
fluoruro de hidrógeno/piridina (0,8 ml, 70% HF, 30% piridina) a una
solución de éter de bis-sililo 206 (285 mg, 0,287
mmol) en THF (10 ml) a 0°C bajo atmósfera de nitrógeno. La
agitación continuó a 0°C durante 30 minutos y la mezcla de reacción
se dejó que aumentara hasta temperatura ambiente durante 1 hora. La
mezcla de reacción se neutralizó con bicarbonato sódico y se
extrajo con diclorometano (3 x 30 ml). La fase orgánica combinada
se lavó con salmuera y se secó sobre sulfato de magnesio. La
eliminación del exceso de disolvente a presión reducida dio el
producto 78 en forma de goma amarilla (218 mg).
\break11,11a-hexahidro-5H-pirrolo [2,1-c][1,4]benzodiacepin-5-ona] (79)
Se añadió una solución de sulfóxido de dimetilo
(0,55 ml, 7,75 mmol) en diclorometano seco (10 ml) gota a gota
durante 15 minutos a una solución agitada de cloruro de oxalilo
(0,32 ml, 3,67 mmol) en diclorometano (10 ml) a -45°C bajo
atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se agitó durante 35
minutos a -45°C, seguido de adición del diol 78 (1,01 g, 1,32 mmol)
en diclorometano (10 ml), a la misma temperatura, durante 15
minutos. Al cabo de 45 minutos más, se añadió una solución de
trietilamina (1,50 ml, 10,76 mmol) en diclorometano (10 ml) durante
un periodo de 15 minutos.
La mezcla de reacción se agitó a -45°C durante 30
minutos antes de dejar que se calentara hasta temperatura ambiente
durante 45 minutos. La mezcla de reacción se diluyó con agua y se
dejó que las fases se separaran. La fase orgánica se lavó con HCl
1M (3 x 50 ml), cloruro sódico saturado (50 ml) y se secó sobre
sulfato de magnesio.
La eliminación del exceso de disolvente dio el
producto crudo, que se purificó por cromatografía de columnas flash
(1,5% metanol, 98,5% cloroformo) para dar el producto 79
(0,785 g, 77%).
Se añadió una cantidad catalítica de
tetrakis(trifenilfosfina)paladio (21 mg, 0,018 mmol) a
una solución agitada de la
bis-aliloxicarbonil-carbinolamina 79
(250 mg, 0,33 mmol), trifenilfosfina (10 mg, 0,033 mmol) y
pirrolidina (0,05 ml, 0,66 mmol) en CH_{2}Cl_{2} seco (30 ml) a
0°C (hielo/acetona) en atmósfera de nitrógeno. La mezcla de
reacción se agitó durante 2 horas antes de calentarla hasta
temperatura ambiente durante 1 hora. El disolvente se evaporó a
presión reducida y el residuo resultante se sometió a cromatografía
flash (98% CHCl_{3}/MeOH) para dar la molécula 80 buscada
de bis-imina (SJG-136). La mezcla
de reacción se agitó durante 1 hora a 0°C, se extrajo el baño de
hielo y se dejó calentar la mezcla de reacción hasta temperatura
ambiente. En esta etapa se produjo una exotermia suave,
aproximadamente 40 °C, acompañada de la evolución de NO_{2}. Una
vez que la exotermia amainó, la agitación a temperatura ambiente
continuó durante 2 horas. La mezcla de reacción se vertió en agua
de hielo y se agitó la suspensión acuosa durante 1 hora. El
precipitado amarillo resultante se recogió por filtración al vacío
y se secó en aire para dar el compuesto bis-nitro
deseado (209) (14,23 g, 98%): RMN ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3} +
DMSO) \sigma 7.45 (s, 2H), 7.09 (s, 2H), 4.14 (t, 4H, J =
6.31 Hz), 3.97 (s, 6H), 3.90 (s, 6H), 2.20-1.94 (m,
4H), 1.75-1.70 (m, 2H).
Se agitó una suspensión del éster 209 (9,0
g, 17,2 mmol) en hidróxido sódico acuoso (1 M, 180 ml) y THF (180
ml) hasta que se obtuvo una solución homogénea (2 días). El THF se
evaporó a presión reducida y la suspensión acuosa resultante se
filtró para eliminar el material de partida no reaccionado. El
filtrado se ajustó a pH 1, el producto precipitado se recogió por
filtración y se secó con aire para dar el bis-ácido deseado
(210) (8,88 g). Se obtuvo un rendimiento superior al teórico
debido a la inclusión de la sal sódica de ácido. La sal puede
extraerse disolviendo todo el material en THF y extrayendo el
material insoluble por filtración: RMN ^{1}H (400 MHz,
CDCl_{3}) \sigma 07.39 (s, 2H), 7.16 (s, 2H), 4.12 (t, 4H,
J =6.59 Hz), 3.95 (s, 6H), 2.00-1.85 (m, 4H),
1.75-1.67 (m, 2H).
\newpage
Se añadió una cantidad catalítica de DMF (5
gotas) a una suspensión agitada del ácido 210 (5,39 g, 10,9 mmol)
y oxalilo.
Se añadió una cantidad catalítica de DMF (5
gotas) a una solución agitada del ácido 210 (5,39 g, 10,9 mmol) y
cloruro de oxalilo (2,38 ml, 3,47 g, 21,3 mmol) en THF anhidro (50
ml). Se observó una efervescencia inicial seguida de la formación
de una solución homogénea; sin embargo, después de agitación
durante toda la noche, se formó una suspensión del cloruro de ácido
recién formado. Se eliminó el exceso de THE y el cloruro de oxalilo
por evaporación rotativa a presión reducida y se formó una nueva
suspensión con el cloruro de ácido en THE nuevo (49 ml). La
solución de cloruro de ácido se añadió gota a gota a una solución
de la (2S,
4R)-2-t-butildimetilsililoximetil-4-hidroxipirrolidina
(2) (6,3 g, 27,3 mmol), trietilamina (4,42 g, 6,09 ml, 43,7 mmol) y
agua (1,47 ml) en THE (33 ml) a 0°C en atmósfera de nitrógeno. La
mezcla de reacción se dejó calentar hasta temperatura ambiente y se
continuó la agitación durante 3 horas. El exceso de THE se eliminó
por evaporación rotativa a presión reducida y el residuo resultante
se dividió entre agua (300 ml) y acetato de etilo (300 ml). Se
dejó que las capas se separaran y la capa acuosa se extrajo con
acetato de etilo (3 x 150 ml). A continuación, las capas orgánicas
combinadas se lavaron con cloruro de amonio (150 ml), bicarbonato
sódico saturado (150 ml), salmuera (150 ml) y se secaron sobre
sulfato de magnesio. La filtración seguida de evaporación rotativa
a presión reducida dio el producto crudo en forma de aceite oscuro.
El producto crudo se sometió a cromatografía de columnas flash (3%
metanol, 97% cloroformo) y se aisló el exceso de eluyente
(211) (3,70 g, 37% rendimiento): RMN ^{1}H (270 MHz,
CDCl_{3}) \sigma 7.65 (s, 2H), 6.77 (s, 2H), 4.52 (bs, 2H), 4.40
(bs, 2H), 4.17-4.10 (m, 6H), 3.92 (s, 6H), 3.77 (d,
2H, J = 10.26 Hz), 3.32 (td, 2H, J = 4.40, 11.35 Hz),
3.08 (d, 2H, J= 11.35 Hz), 2.37-2.27 (m,
2H), 2.10-2.00 (m, 6H), 1.75-1.60
(m, 2H), 0.91 (s, 18H), 0.10 (s, 12H).
Se añadió gota a gota una solución metanólica de
hidrato de hidracina (1,25 ml, 1,29 g, 40,2 mmol de hidracina, 20
ml de metanol) a una solución del compuesto
bis-nitro 211 (3,6 g, 3,91 mmol) en metanol
(68 ml) bajo reflujo suave sobre níquel Raney (510 mg de una
suspensión espesa). Al cabo de 5 minutos bajo reflujo, la TLC (10%
MeOH, 90% cloroformo) mostró el consumo incompleto del material de
partida. La mezcla de reacción se trató con níquel Raney adicional
(aproximadamente 510 mg) e hidracina (1,25 ml) en metanol (20 ml),
de manera que el material de partida se consumió por completo. Se
añadió exceso de níquel Raney a la mezcla de reacción para
descomponer el hidrato de hidracina no reaccionado y, a
continuación, la mezcla de reacción se dejó enfriar. La mezcla de
reacción se filtró con celita para eliminar el exceso de níquel
Raney y el tampón de filtro se lavó con metanol adicional (atención:
el níquel Raney es pirofórico; no dejar que el tampón de filtro se
seque; utilícese HCl concentrado para destruir el níquel). El
filtrado combinado se evaporó por evaporación rotativa a presión
reducida y el residuo se redisolvió en diclorometano. La solución
de diclorometano se secó sobre sulfato de magnesio (para eliminar
el agua asociada a la hidracina), se filtró y se evaporó para dar
el producto (212) en forma de espuma (3,37 g, 91%): RMN
^{1}H (270 MHz, CDCl_{3}) \sigma6.69 (s, 2H), 6.24 (s, 2H),
4.40-3.40 (m, 28H), 2.40-1.60 (m,
10H), 0.88 (s, 18H), 0.03 (s, 12H).
Se añadió gota a gota una solución de
cloroformato de alilo (0,806 ml, 0,916 g, 7,6 mmol) en
diclorometano seco (63 ml) a una solución de la
bis-amina 212 (3,27 g, 3,8 mmol) y piridina
(1,26 g, 1,29 ml, 15,9 mmol) en diclorometano (128 ml) a 0°C en
atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se dejó calentar
hasta temperatura ambiente y se agitó durante 16 horas, en cuyo
momento la TLC (10% MeOH, 90% cloroformo) mostró que la reacción
había finalizado. La mezcla de reacción se diluyó con diclorometano
(40 ml) y se lavó con sulfato de cobre II saturado (2 x 140 ml),
agua (120 ml) y cloruro sódico saturado (120 ml). La fase orgánica
se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se evaporó a presión
reducida para dar 213 en forma de espuma (3,60 g, 92%) : RMN
^{1}H (270 MHz, CDCl_{3}) \sigma 8.87 (bs, 2H), 7.66 (s, 2H),
6.77 (s, 2H), 6.05-5.80 (m, 2H),
5.40-5.15 (m, 4H), 4.70-4.50 (m,
6H), 4.38 (bs, 2H), 4.20-4.00 (m, 4H), 3.78 (s,
6H), 3.70-3.40 (m, 8H), 2.40-2.20
(m, 2H), 2.10-1.80 (m, 6H),
1.75-1.55 (m, 2H), 0.89 (s, 18H), 0.04 (s,
12H).
Se añadió una solución de sulfóxido de dimetilo
(1,47 ml, 1,62 g, 20,7 mmol) en diclorometano seco (32 ml) gota a
gota durante 45 minutos a una solución agitada de cloruro de
oxalilo (5,18 ml de una solución 2M en diclorometano, 10,35 mmol) a
-60°C en atmósfera de nitrógeno. Después de agitación a -50°C
durante 30 minutos, se añadió gota a gota una solución del
bis-alcohol 213 (3,55 g, 3,45 mmol) en
diclorometano (53 ml) durante un periodo de 50 minutos. La mezcla
de reacción se agitó a -60°C durante 30 minutos antes de la adición
gota a gota de una solución de trietilamina (4,75 g, 6,54 ml, 46,9
mmol) en diclorometano (27 ml). La agitación prosiguió a -60°C
durante 45 minutos y, a continuación, se dejó calentar hasta 0°C.
La mezcla de reacción se diluyó con diclorometano (20 ml), se lavó
con HCl 1M frío (2 x 100 ml), cloruro sódico saturado (100 ml) y se
secó sobre sulfato de magnesio. La extracción del exceso de
disolvente dio la bis-cetona cruda que se purificó
por cromatografía de columnas flash (50% acetato de etilo, 50%
éter de petróleo 40-60°) para dar la
bis-cetona pura (214) ; en forma de espuma de color
amarillo claro (2,54 g, 72%): RMN ^{1}H (270 MHz, CDCl_{3})
\sigma8.69 (bs, 2H), 7.78 (s, 2H), 6.75 (s, 2H),
6.05-5.80 (m, 2H), 5.40-5.20 (m,
4H), 4.65- 4.60 (m, 4H), 4.20-3.60 (m, 20H), 2.74
(dd, 2H, J = 9.25, 18.1 Hz), 2.51 (d, 2H, J = 17.4
Hz), 2.00-1.90 (m, 4H), 1.75-1.65
(m, 2H), 0.87 (s, 18H), 0.05 (s, 12H).
Se añadió una solución de t-butóxido de
potasio en THE seco (0,5 M, 25,2 ml, 12,6 mmol) gota a gota a una
suspensión de bromuro de metiltrifenilfosfonio (4,50 g, 12,6 mmol)
en THE seco (15 ml). La suspensión de iluro amarilla resultante se
agitó a 0°C durante 2 horas antes de la adición de una solución de
bis-cetona 214 (2,48 g, 2,42 mmol) en THE (10
ml) a 10°C. La mezcla de reacción se dejó calentar hasta
temperatura ambiente y se prosiguió la agitación durante una hora
más. La mezcla de reacción se dividió en acetato de etilo (100 ml)
y agua (100 ml) y la capa orgánica se lavó con cloruro sódico
saturado (200 ml) y se secó sobre sulfato de magnesio. La
eliminación del exceso de disolvente dio un aceite marrón que se
sometió a cromatografía de columnas flash (50% acetato de etilo,
50% éter de petróleo 40-60°) para dar el producto
(215) en forma de vidrio amarillo (865 mg, 35%). RMN ^{1}H
(400 MHz, CDCl_{3}) \sigma 8.90 (bs, 2H), 7.83 (s, 2H), 6.82 (s,
2H), 6.05-5.90 (m, 2H), 5.40-5.20
(m, 4H), 4.99 (bs, 2H), 4.91 (bs, 2H), 4.65-4.60
(m, 4H), 4.20-3.60 (m, 20H), 2.70 (bs, 4H),
2.00-1.90 (m, 4H), 1.75-1.63 (m,
2H), 0.88 (s, 18H), 0.03 (s, 12H).
Se añadió una solución de TBAF (3,02 ml de una
solución 1M en THF, 3,02 mmol) al bis-silil éter
(215) (1,23 g, 1,21 mmol) en THF (30 ml) a 0°C
(hielo/acetona). La mezcla de reacción se dejó calentar hasta
temperatura ambiente y se agitó durante toda la noche; al día
siguiente, la TLC (50:50 EtOAc/éter de petróleo 40°-60°) mostró que
el material de partida había desaparecido por completo. Se añadió
NH_{4}CL saturado (150 ml) y la mezcla de reacción se extrajo con
EtOAc (3 x 60 ml), se lavó con cloruro sódico saturado (150 ml), se
secó (MgSO_{4}), se filtró y se evaporó al vacío para dar un
aceite amarillo. La purificación por cromatografía flash (97%
CHCl_{3}, 3% MeOH) dio el alcohol puro (216) (916 mg,
96%): RMN ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}) \sigma 8.61 (bs, 2H),
7.58 (s, 2H), 6.79 (s, 2H), 6.05-5.90 (m, 2H),
5.40-5.20 (m, 4H), 5.01 (bs, 2H), 4.93 (bs, 2H),
4.65-4.60 (m, 4H), 4.20-3.60 (m,
20H), 2.76 (dd, 2H, J = 8.42, 15.74 Hz), 2.47 (d, 2H,
J = 15.93 Hz), 2.00- 1.90 (m, 4H), 1.80-1.63
(m, 2H).
\break11a-hexahidro-5H-pirrolo [2,1-c][1,4-benzodiacepin-5-ona] (217)
Se añadió una solución de sulfóxido de dimetilo
(0,57 ml, 0,63 g, 8,07 mmol) en diclorometano seco (17 ml) gota a
gota durante 40 minutos a una solución agitada de cloruro de
oxalilo (2,02 ml de una solución 2M, 4,04 mmol) a 45°C en atmósfera
de nitrógeno. La mezcla de reacción se agitó durante 40 minutos a
-45°C, seguido de adición del diol 216 (0,89 g, 1,12 mmol)
en diclorometano (17 ml), a la misma temperatura, durante 15
minutos. Al cabo de 60 minutos más, se añadió una solución de
trietilamina (1,31 ml, 9,42 mmol) en diclorometano (9 ml) durante
un periodo de 40 minutos. La mezcla de reacción se agitó a -45°C
durante 40 minutos antes de dejar que se calentara hasta
temperatura ambiente durante 45 minutos. La mezcla de reacción se
diluyó con agua y se dejó que las fases se separaran. La fase
orgánica se lavó con HCl 1M (2 x 40 ml), agua (40 ml), cloruro
sódico saturado (40 ml) y se secó sobre sulfato de magnesio. La
eliminación del exceso de disolvente dio el producto crudo, que se
purificó por cromatografía de columnas flash (1% metanol, 99%
cloroformo) para dar el producto 217 (0,175 g, 20%). RMN
^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}) \sigma7.22 (s, 2H), 6.65 (s, 2H),
5.82-5.70 (m, 2H), 5.58 (d, 2H, J = 9.70 Hz),
5.25-5.00 (m, 8H), 5.75-4.35 (m,
4H), 4.30 (d, 2H, J = 16.10 Hz), 4.15 (d, 2H, J =
17.03 Hz), 4.01 (t, 4H, J = 6.32 Hz), 3.90 (s, 6H), 3.64 (t,
2H, J = 8.70 Hz), 3.00-2.85 (m, 5 2H), 2.71
(d, 2H, J = 16.29 Hz), 2.00-1.85 (m, 4H),
1.70- 1.60 (m, 2H).
Se añadió una cantidad catalítica de
tetrakis(trifenilfosfina)paladio (13 mg, 11,2 mmol) a
una solución agitada de la
bis-aliloxicarbonil-carbinolamina
(217) (170 mg, 0,22 mmol), trifenilfosfina (5,7 mg, 21,6
mmol) y pirrolidina (31 mg, 37,3 ml, 0,45 mmol) en DCM (13 ml) a
0ºC (hielo/acetona) en atmósfera de nitrógeno. La mezcla de
reacción se dejó calentar hasta temperatura ambiente y se
monitorizó su evolución por TLC (95% CHCl_{3}/MeOH). Al cabo de 2
horas, la TLC mostró que la reacción había finalizado para dar un
punto que presentó una fluorescencia brillante bajo UV. El
disolvente se evaporó a presión reducida y el residuo resultante se
sometió a cromatografía flash (99% a 98 CHCl_{3}/MeOH) para dar
la molécula buscada de bis-imina 218 en forma
de vidrio amarillo claro (84,5 mg, 75%) que se evaporó
repetidamente al vacío con CHCl_{3} para dar la forma de imina:
RMN ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}) \sigma 7,68 (d, 2H, J =
4.39 Hz), 7.49 (s, 2H), 6.80 (s, 2H), 5.19 (bs, 2H), 5.16 (bs,
2H), 4.28 (bs, 4H), 4.15-4.00 (m, 4H), 3.92 (s, 6H),
3.90 -3.80 (m, 2H), 3.12 (dd, 2H, J = 8.97, 15.93 Hz), 2.95
(d, 2H, J = 15.93 Hz), 2.00-1.85 (m, 4H),
1.72-1.67 (m, 2H).
El National Cancer Institute (NCI), Bethesda,
Maryland, EE.UU., dispone de una criba de citotoxicidad in
vitro que consta de aproximadamente 60 líneas celulares
tumorales humanas en las que se prueban los compuestos con un
mínimo de cinco concentraciones, que variaban en potencias de 10.
Se utiliza un protocolo de exposición continua de 48 horas en el
que se estima la viabilidad o el crecimiento celular en un ensayo
de proteínas con SRB.
Los compuestos del ensayo se evaluaron con
aproximadamente 60 líneas celulares tumorales humanas. Los
procedimientos de cribado del NCI los describen detalladamente
Monks y sus colaboradores (Monks, A. et al., Journal of the
National Cancer Institute, 1991, 83, 757). Resumiendo, las
suspensiones celulares se diluyeron según el tipo de célula en
particular y la densidad celular esperada
(5.000-40.000 células por pocillo según las
características de crecimiento celular) y se añadieron mediante
pipeta (100 \mul) en placas de microtitulación de 96 pocillos. Se
dejó un periodo de preincubación de las células de 24 horas a 37°C
para estabilización. Las diluciones al doble de la concentración
buscada en el ensayo se añadieron a los pocillos en el momento 0 en
partes alícuotas de 100 \mul. Los compuestos del ensayo se
evaluaron con cinco diluciones, que aumentaban en potencias de 10
(10^{-4}, 10^{-5}, 10^{-6}, 10^{-7} y 10^{-8} \muM).
Los compuestos del ensayo se incubaron durante 48 horas en una
atmósfera de 5% de CO_{2} y 100% de humedad. A continuación, las
células se sometieron al ensayo con sulforodamina B. Se utilizó un
lector de placas para tomar las densidades ópticas y un ordenador
pasó las lecturas a valores LC_{50}, que es la dosis necesaria
para matar la mitad de las células.
Los resultados mostrados en los ejemplos 2 a 4
son valores LC_50 que se encuentran por debajo de 10 \muM, que
se considera la línea divisoria entre citotoxicidad y ausencia de
citotoxicidad.
La sección de ensayos biológicos del Programa de
Terapéutica del Desarrollo del NCI ha adoptado una herramienta de
cribado preliminar in vivo para determinar la actividad
anticancerígena potencial de los compuestos identificados por la
criba celular in vitro a gran escala. Para estos ensayos,
las células tumorales humanas se cultivan en fibras huecas de
polivinilideno (PVDF) y se implanta una muestra de cada línea
celular en cada uno de los dos compartimentos fisiológicos
(intraperitoneal y subcutáneo) de los ratones. Cada ratón del
ensayo recibió un total de 6 fibras (3 intraperitonealmente y 3
subcutáneamente) que representan 3 líneas celulares cancerosas
distintas. Estos ratones se tratan con compuestos antitumorales
potenciales en cada una de las dos dosis del ensayo por vía
intraperitoneal según un tratamiento diario durante 4 días. Los
controles del vehículo consisten en 6 ratones que reciben solo el
diluyente del compuesto. Los cultivos de las fibras se recogen el
día después del último día de tratamiento. Para valorar los efectos
anticancerígenos, se determina la masa celular viable de cada una
de las líneas celulares mediante un ensayo de conversión con
colorante formacina (MTT). A continuación, se puede calcular el
%T/C a partir de la densidad óptica media de las muestras tratadas
de compuesto dividida por la densidad óptica media de los
controles del vehículo. Además, se puede determinar el aumento neto
de masa celular de cada muestra, ya que el día de implantación en
los ratones se calcula la masa celular viable de una muestra de los
cultivos de fibras. Así pues, se puede valorar la capacidad
citostática y citocida del compuesto del ensayo.
Por regla general, cada compuesto se prueba con
un mínimo de 12 líneas celulares cancerosas humanas. Esto
representa un total de 4 experimentos, puesto que cada experimento
contiene 3 líneas celulares. Los datos se expresan en %T/C y
corresponden a cada una de las 2 dosis del compuesto utilizadas en
cada línea celular con valores separados calculados para las
muestras intraperitoneales (IP) y subcutáneas (SC).
Los compuestos se seleccionan para ensayos in
vivo adicionales en modelos estándar de xenoinjertos
subcutáneos según distintos criterios de ensayos con fibras huecas.
Se incluyen: (1) un %T/C de 50 o menos en 10 de las 48
combinaciones posibles del ensayo (12 líneas celulares x 2 zonas x
2 dosis de compuesto); (2) actividad a una distancia (fármaco
intraperitoneal/cultivo subcutáneo) en un mínimo de 4 de las 24
combinaciones posibles; y/o (3) una mortalidad celular neta de 1 o
más de las líneas celulares en una zona de implante. Para
simplificar la evaluación, se ha adoptado un sistema de puntos que
permite valorar rápidamente la actividad de un compuesto
determinado. Para ello, se asigna un valor de 2 a cada dosis de
compuesto que da una reducción del 50% o superior de la masa celular
viable. Las muestras intraperitoneales y subcutáneas se valoran por
separado de manera que puedan evaluarse los criterios (1) y (2).
Los compuestos con una puntuación combinada IP + SC igual a 20,
una puntuación SC igual a 8 o una mortalidad celular neta de una o
más líneas celulares, se remiten a los ensayos de xenoinjerto. Esta
comparativa indicó que existía una probabilidad muy baja de omisión
de un compuesto activo si se utiliza el ensayo de fibra hueca como
sistema inicial de cribado in vivo. Además de estos
criterios, existen otros factores (por ejemplo, estructura única,
mecanismo de acción) que pueden hacer que se remita un compuesto a
los ensayos de xenoinjerto sin que el compuesto cumpla estos
criterios.
\newpage
Se llevan a cabo en ratones atímicos con un
sistema inmunitario deficiente. El tejido tumoral humano del
ensayo se les implanta en la ijada y, mientras que los ratones de
control no reciben ningún tratamiento, los demás se someten a
diferentes dosis del compuesto, el cual se administra
intraperitonealmente. Los resultados expresan la toxicidad del
compuesto, la cantidad de crecimiento tumoral y la inhibición del
crecimiento.
El compuesto 80 se sometió al estudio de
citotoxicidad in vitro del NCI. Los resultados (LC_{50};
\muM) se indican a continuación:
Tipo de tumor | Designación de línea celular | UP2001 (80) |
LC_{50} (\muM) | ||
Pulmón | NCI-H460 | 2,7 |
Colon | HCC-2998 | 0,099 |
SNC | SNB-75 | 7,5 |
Melanoma | MALME-3M | 0,073 |
UACC-62 | 0,077 |
El dímero de PBD UP2001 (80) presentó una
actividad de citotoxicidad potente y selectiva contra la línea
celular NCI-H460 de cáncer pulmonar, la línea
celular HCC-2998 de colon, la línea celular
SNB-75 de cáncer del SNC y las líneas celulares
MALME-3M (muy potente, 0,08 \muM) y
UACC-62 (muy potente, 0,07 \muM) de melanoma, que
podría atribuirse a su capacidad para reticular ADN.
Los compuestos 80 se sometieron al ensayo de
fibra hueca del NCI y los resultados se presentan a
continuación.
UP2001 (80) | |
Puntuación IP | 40 |
Puntuación SC | 14 |
Puntuación total | 54 |
Mortalidad celular | Y |
UP2001 ha sido seleccionado para los estudios de
xenoinjertos por su puntuación IP + SC combinada (54), que superó
con creces el valor de 20, y su puntuación SC, que fue superior a
8.
Se realizaron estudios de xenoinjertos tumorales
humanos en UP2001 por parte de la sección de ensayos biológicos del
NCI, tal y como se ha descrito anteriormente.
Se trataron ratones atímicos con xenoinjertos
MDA-MB-435 (tumor mamario humano),
Ovcar-3 (tumor ovárico humano),
UACC-62 (melanoma humano) u OVCAR-5
(tumor ovárico humano) a dosis de 0,67 (alta), 0,45 (media) y 0,3
(baja) mg/kg/inyección administradas cada 4 días y con un total de
3 dosis (6 ratones por nivel de dosis y 20 controles).
UP2001 (80) se evaluó midiendo la toxicidad del
fármaco y su capacidad para retrasar el crecimiento tumoral.
Tumor | Toxicidad | %T/C | % retraso crecim. | ||||||
Alta | Media | Baja | Alto | Medio | Bajo | Alto | Medio | Bajo | |
MDA-MB-435 | 3/6 | 1/6 | 2/6 | Tóxico | 3 | 3 | 41 | 41 | 41 |
OVCAR-3 | 0/6 | 0/6 | 0/6 | 7 | 20 | 46 | 73 | 73 | 9 |
UACC-62 | 0/6 | 0/6 | 0/6 | 22 | 28 | 67 | 43 | 43 | 43 |
OVCAR-5 | 0/6 | 0/6 | 0/6 | 52 | 45 | 38 | 16 | 28 | 32 |
La toxicidad representa el número de ratones que
murieron como resultado del tratamiento. %T/C representa la anchura
de los tumores en los ratones "tratados" (T) (medida con un
calibrador) comparada con la de los ratones de control (C) no
tratados y expresada como porcentaje. % de retraso de crecimiento
representa el aumento del periodo de tiempo necesario para que los
tumores alcancen un tamaño arbitrario de 250 mg.
En los xenoinjertos
MDA-MB-435, UP2001 redujo el
crecimiento tumoral en los ratones tratados solo un 3% del
crecimiento tumoral observado en la población de control. Además,
también se observó un retraso del 41% en el periodo de tiempo
necesario para alcanzar la masa tumoral de 250 mg. Se observó
cierta toxicidad hacia los huéspedes incluso a dosis pequeñas. Se
observó una buena respuesta a las dosis de UP2001 (80) en
los xenoinjertos de Ovcar-3. A dosis elevadas, el
crecimiento tumoral en los sujetos tratados fue tan solo del 7% del
observado en la población de control. A dosis medias, el valor fue
del 20% y, a dosis bajas, el tamaño de los tumores en los ratones
tratados era el 46% del tamaño de los tumores de control. A dosis
elevadas, se observó un retraso del crecimiento del 73% para
alcanzar una masa tumoral de 250 mg. No murió ningún ratón como
resultado de la exposición a UP2001 (80).
Se observó una respuesta similar a las dosis de
UP2001 (80) en el crecimiento tumoral de los xenoinjertos
UACC-62. A dosis elevadas, los tumores tratados
fueron un 22% del tamaño de los tumores de control. A dosis medias,
los tumores tratados fueron un 28% del tamaño de los tumores de
control y, a dosis bajas, los tumores tratados fueron un 67% del
tamaño de los tumores de control. De nuevo, no murió ningún ratón
como resultado de la exposición a UP2001 (80).
Los resultados del tumor ovárico humano
OVCAR-5 no eran tan evidentes; se observó una
reducción del tamaño del tumor de aproximadamente el 50%, así como
cierto retraso de su crecimiento, pero aparentemente la actividad
era mayor a concentraciones menores. Sin embargo, murieron ratones
como resultado de la exposición a UP2001 (80).
El compuesto UP2001 (80) también se evaluó
en el tumor SF-295 del SNC humano. Se trataron
ratones atímicos que llevaban el SF-295 a dosis de
0,40, 0,27 y 0,18 mg/kg por inyección intravenosa administrada una
vez al día con un total de 5 dosis.
Toxicidad | %T/C | Sin tumor | ||||||
Alta | Media | Baja | Alto | Medio | Bajo | Alto | Medio | Bajo |
2/6 | 1/6 | 2/6 | 0% | 0% | 0% | 4/4 | 5/5 | 3/4 |
El compuesto UP2001 (80) mostró
propiedades curativas en los xenoinjertos SF-295. A
dosis elevadas y medias, todos los ratones que sobrevivieron no
tenían el tumor el día 27 del experimento. A dosis pequeñas, 3 de
cada 4 ratones no tenían el tumor el día 27. Se asoció cierta
toxicidad al tratamiento, muriendo 2 ratones a dosis elevada, 1 a
dosis media y 2 a dosis pequeña. Las mayores intensidades del
programa de inyecciones quedaron reflejadas en la mayor mortalidad
observada.
El compuesto 80 se sometió a ensayos
adicionales.
El primer ensayo, descrito en G.B. Jones, et
al., Anti-Cancer Drug Dic., 1990,
5, 249, incorporado a título de referencia, determina el
efecto del compuesto del ensayo en la temperatura de fusión de la
hélice de ADN. Este ensayo está diseñado para dar una indicación de
la fuerza y la extensión de la reticulación de las hebras de ADN
conferida por el compuesto del ensayo (es decir, una medida de la
estabilización del ADN al realizarse la unión de ligandos).
La temperatura de fusión se determinó para una
relación molar 1:5 de [ligando]:[ADN], donde la concentración de
ADN de timo de ternera es 100 mM en tampón de fosfato sódico acuoso
(fosfato sódico 10 mM + EDTA 1 mM, pH 7,00\pm0,01). Para ADN de
timo de ternera a pH 7,00\pm0,01, la temperatura de fusión es de
67,83\pm0,06°C (valor medio de 30 determinaciones distintas).
Para una relación molar 1:5 de [PBD]:[ADN], el
dímero de PBD 80 eleva la temperatura de fusión de la hélice
(\triangleT_{m}) del ADN de timo de ternera un valor
inesperado de 33,6°C después de incubación durante 18 horas a 37°C.
En condiciones idénticas, el dímero DSB-120 no
sustituido en el anillo C:
proporciona un \triangleT_{m} de 15,
1°C, lo que demuestra el efecto extraordinario de la introducción
de insaturación C2/C2'. Al igual que otros dímeros de PBD,
80 ejerce la mayor parte de su efecto en las regiones ricas
en uniones GC o de temperatura elevada de las curvas de fusión del
ADN. De forma similar al DSB-120, proporciona un
60-80% de su efecto estabilizador sin incubación
previa, lo que sugiere un efecto cinético en el perfil de
reactividad de la PBD. Sin embargo, las curvas comparativas de
\triangleT_{m} indican que, considerando únicamente la
concentración, el SJG-136 es \geq 10 veces más
eficaz que el DSB-120. Incluso a una relación molar
1:100 de [PBD]:[ADN], el SJG-136 sigue presentando
una afinidad con la unión de ADN significativamente mejor que el
monómero tomamicina a una relación molar 1:5 de [PBD] :
[ADN].
Tomamicina
Los resultados de una relación molar 1:5 de
[PBD]:[ADN] se resumen en la tabla siguiente (todos los valores de
\triangleT_{m} \pm 0,1-0,2°C).
Compuesto | \triangleT_{m} inducido (°C) después de incubación a 37°C durante | ||
0 h | 4 h | 18 h | |
SJG-136 (80) | 25,7 | 31,9 | 33,6 |
DSB-120 | 10,2 | 13,1 | 15,1 |
Tomamicina | \hskip10pt 0,97 | \hskip10pt 2,38 | \hskip10pt 2,56 |
Los datos mostrados en la tabla anterior indican
que el SJG-136 (80) es el agente
estabilizador de ADN más potente conocido hasta la fecha según este
ensayo en particular.
En el segundo ensayo se determinó la
citotoxicidad del SJG-136 (80) en la línea
celular A2780 del carcinoma ovárico humano y su sublínea A2780cisR
resistente a la cisplatina, y se compararon estos datos con la
citotoxicidad del dímero relacionado DSB-120 (véase
más 0 arriba) y la cisplatina. En relación con la línea parental,
se sabe que la sublínea A2780cisR tiene niveles de GSH elevados, un
nivel elevado de reparación de complejos de inclusión de
ADN-cisplatina, y una capacidad reducida para
absorber cisplatina (M. Smellie, et al., Br. J.
Cancer, 1994, 70, 48).
Los resultados, que se obtuvieron incubando las
células con los compuestos durante 96 horas a 37°C y valorando el
número de células con sulforodamina B, se presentan en la tabla
siguiente:
IC_{50}ª (\muM) para | |||
A2780 | A2780cis^{R} | RF^{b} | |
SJG-136 (80) | 0,000023 | 0,000024 | 1,1 |
DSB-120 | 0,0072 | 0,21 | 29,2 |
Cisplatina | 0,265 | 8,4 | 32 |
^{a} Dosis de compuestos necesaria para inhibir el crecimiento celular un 50% en comparación con el control. | |||
^{b}RF es el factor de resistencia (IC_{50} resistente/padre). |
El valor de IC_{50} para 80 en la línea
celular A2780 es solo de 23 pM, lo que representa un aumento de 320
veces la citotoxicidad en comparación con el DSB-120
(IC_{50} = 7,2 nM). Resulta más interesante el hecho de que, 0
mientras que el DSB-120 tiene una potencia reducida
en la sublínea A2780cisR resistente a la cisplatina (IC_{50} =
0,21 mM), el SJG-136 es casi 9.000 veces más
potente en esta línea celular con un valor IC_{50} similar (24
pM) al de la línea A2780 normal, lo que da un factor de resistencia
de 1,1. El hecho de que tanto el DSB-120 como la
cisplatina den factores de resistencia de 29,2 y 32,
respectivamente, en este par de líneas celulares, sugiere que el
SJG-136 puede ser útil para el tratamiento de una
enfermedad refractaria a la cisplatina.
Se evaluó la actividad citotóxica del compuesto
80 (y la antramicina como comparación) en líneas celulares
ováricas por parte del grupo del Dr. Lloyd R. Kelland del Institute
of Cancer Research, Sutton, R.U. Las cinco líneas celulares que se
investigaron fueron SKOV-3, A2780/A2780cisR y
CH1/CH1cisR (cisR indica que la línea celular es resistente a la
cisplatina).
Se sembraron células viables individuales en
medio de cultivo (160 \mul) en placas de microtitulación de 96
pocillos y se dejó que se unieran durante toda la noche. A
continuación, se disolvieron las PBD en DMSO (para dar
concentraciones del fármaco de 20 mM) inmediatamente antes de
añadirlas a las células en pocillos cuadruplicados. La
concentración final del fármaco en los pocillos se encontraba entre
100 \muM y 2,5 nM, como se indica a continuación: 100, 25, 10,
2,5, 1 \muM, 250, 100, 25, 10, 2,5 nM (los fármacos se diluyeron
en medio de cultivo y se añadieron 40 \mul al volumen de pocillos
existente de 160 \mul para dar las concentraciones finales
indicadas más arriba). Al cabo de 96 horas, se extrajo el medio y
el resto de células se fijaron por exposición a ácido
tricloroacético al 10% en hielo durante 30 minutos. A continuación,
se lavaron los pocillos 3 ó 4 veces con agua de grifo, se secaron
con aire durante toda la noche y se trataron con 100 \mu de
sulforodamina B (0,4%) disuelta en ácido acético al 1%. Se dejó que
la tinción continuara durante 10-15 minutos, se
lavaron los pocillos 3 ó 4 veces 5 con ácido acético al 1%, secaron
con aire y se añadieron a una base Tris (100 \mul de 10 mM). Se
agitaron las placas y se tomaron las lecturas de absorbancia a 540
nm mediante un lector de placas. Mediante el paquete de software
Quattro-Pro, se calcularon los valores de IC_{50}
a partir de 0 gráficas de concentración en función del porcentaje de
absorbancia (en comparación con 8 pocillos no tratados).
IC_{50}/\muM | |||||
N° UP | A2780 | A2780cis | CH1 | CH1cisR | Skov3 |
Antramicina | 0,155 | 0,16 | 0,062 | 0,05 | 0,16 |
UP2001 | 0,000023 | 0,000024 | 0,00012 | 0,0006 | 0,0091 |
(80) |
UP2001 (80) presenta citotoxicidad a
niveles picomolares/subnanomolares en el panel de líneas celulares
ováricas. La potencia de la molécula probablemente es debida a sus
propiedades de reticulación junto con el efecto de
exosaturación.
Claims (7)
1. Compuesto de fórmula:
donde p es
3.
2. Composición farmacéutica que comprende un
compuesto según la reivindicación 1 y un portador o diluyente
farmacéuticamente aceptable.
3. Compuesto según la reivindicación 1 para ser
utilizado en un procedimiento de tratamiento terapéutico.
4. Uso de un compuesto según la reivindicación 1
para preparar un medicamento para el tratamiento de una enfermedad
proliferativa.
5. Uso de un compuesto según la reivindicación 1
para preparar un medicamento para el tratamiento de una infección
viral, parasítica o bacteriana.
6. Procedimiento para preparar un compuesto según
la reivindicación 1.
7. Uso de un compuesto según la reivindicación 1
para preparar un medicamento para el tratamiento de una enfermedad
refractaria a la cisplatina.
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WO2005040172A1 (ja) * | 2003-10-29 | 2005-05-06 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | 三環性プロリン誘導体 |
AU2003300720A1 (en) * | 2003-12-31 | 2005-07-21 | Council Of Scientific And Industrial Research | C-8 linked pyrrolo(2,1-c)(1,4)benzodiazepine-acridone/acridine hybrids |
GB2424883B (en) * | 2003-12-31 | 2008-10-22 | Council Scient Ind Res | Process for preparing pyrrolo[2, 1-c] [1,4] benzodiazepine hybrids |
PL2270010T3 (pl) * | 2004-03-01 | 2012-07-31 | Medimmune Ltd | Pochodne 11-hydroksy-5h-pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-5-onu jako kluczowe związki pośrednie do otrzymywania c2 podstawionych pirolobenzodiazepin |
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US7056913B2 (en) | 2004-03-30 | 2006-06-06 | Council Of Scientific And Industrial Research | C8—linked pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepine-acridone/acridine hybrids |
US6951853B1 (en) | 2004-03-30 | 2005-10-04 | Council Of Scientific And Industrial Research | Process for preparing pyrrolo[2, 1-c] [1,4] benzodiazepine hybrids |
FR2869231B1 (fr) * | 2004-04-27 | 2008-03-14 | Sod Conseils Rech Applic | Composition therapeutique contenant au moins un derive de la pyrrolobenzodiazepine et la fludarabine |
GB0410725D0 (en) * | 2004-05-13 | 2004-06-16 | Spirogen Ltd | Pyrrolobenzodiazepine therapeutic agents |
ES2338696T3 (es) * | 2005-04-21 | 2010-05-11 | Spirogen Limited | Pirrolobenzodiazepinas. |
GB0508084D0 (en) * | 2005-04-21 | 2005-06-01 | Spirogen Ltd | Pyrrolobenzodiazepines |
US8637664B2 (en) * | 2005-10-05 | 2014-01-28 | Spirogen Sarl | Alkyl 4- [4- (5-oxo-2,3,5, 11a-tetrahydo-5H-pyrrolo [2, 1-c] [1,4] benzodiazepine-8-yloxy)-butyrylamino]-1H-pyrrole-2-carboxylate derivatives and related compounds for the treatment of a proliferative disease |
DK1813614T3 (da) | 2006-01-25 | 2012-01-23 | Sanofi Sa | Cytotoksiske midler, der omfatter nye tomaymycinderivater |
DE102006013678A1 (de) * | 2006-03-24 | 2007-09-27 | Bayerische Motoren Werke Ag | Gleit- oder Schmiermittel und Verfahren zum Aufziehen eines Fahrzeugreifens auf eine Felge |
WO2008010101A2 (en) | 2006-07-18 | 2008-01-24 | Sanofi-Aventis | Antagonist antibody against epha2 for the treatment of cancer |
GB0619325D0 (en) | 2006-09-30 | 2006-11-08 | Univ Strathclyde | New compounds |
EP1914242A1 (en) | 2006-10-19 | 2008-04-23 | Sanofi-Aventis | Novel anti-CD38 antibodies for the treatment of cancer |
SI2019104T1 (sl) | 2007-07-19 | 2013-12-31 | Sanofi | Citotoksična sredstva, ki obsegajo nove tomaimicinske derivate, in njihova terapevtska uporaba |
KR101892411B1 (ko) | 2008-04-30 | 2018-08-27 | 이뮤노젠 아이엔씨 | 가교제 및 그 용도 |
GB0813432D0 (en) | 2008-07-22 | 2008-08-27 | Spirogen Ltd | Pyrrolobenzodiazepines |
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GB0819095D0 (en) * | 2008-10-17 | 2008-11-26 | Spirogen Ltd | Pyrrolobenzodiazepines |
MX368362B (es) | 2009-02-05 | 2019-09-30 | Immunogen Inc | Derivados novedosos de benzodiacepina. |
AU2015224492B2 (en) * | 2009-02-05 | 2017-04-20 | Immunogen, Inc. | Novel benzodiazepine derivatives |
LT2437790T (lt) | 2009-06-03 | 2019-06-10 | Immunogen, Inc. | Konjugavimo būdai |
FR2949469A1 (fr) * | 2009-08-25 | 2011-03-04 | Sanofi Aventis | Derives anticancereux, leur preparation et leur application en therapeutique |
AR078470A1 (es) | 2009-10-02 | 2011-11-09 | Sanofi Aventis | Anticuerpos que se unen especificamente al receptor epha2 |
WO2011130616A1 (en) * | 2010-04-15 | 2011-10-20 | Spirogen Limited | Pyrrolobenzodiazepines used to treat proliferative diseases |
WO2011130613A1 (en) | 2010-04-15 | 2011-10-20 | Seattle Genetics, Inc. | Targeted pyrrolobenzodiazapine conjugates |
SI2528625T1 (sl) | 2010-04-15 | 2013-11-29 | Spirogen Sarl | Pirolobenzodiazepini in njihovi konjugati |
GB201006340D0 (en) * | 2010-04-15 | 2010-06-02 | Spirogen Ltd | Synthesis method and intermediates |
FR2963007B1 (fr) | 2010-07-26 | 2013-04-05 | Sanofi Aventis | Derives anticancereux, leur preparation et leur application therapeutique |
EP3666289A1 (en) | 2011-02-15 | 2020-06-17 | ImmunoGen, Inc. | Cytotoxic benzodiazepine derivatives |
FR2972006B1 (fr) | 2011-02-24 | 2016-03-25 | Centre Nat Rech Scient | Nouveaux fragments d'il-33 superactifs et leurs utilisations |
US20130058947A1 (en) | 2011-09-02 | 2013-03-07 | Stem Centrx, Inc | Novel Modulators and Methods of Use |
EP2751120B1 (en) | 2011-09-20 | 2018-08-22 | MedImmune Limited | Pyrrolobenzodiazepines as unsymmetrical dimeric pbd compounds for inclusion in targeted conjugates |
EP3388435B1 (en) | 2011-10-14 | 2023-05-03 | Seagen Inc. | Pyrrolobenzodiazepines and targeted conjugates |
WO2013053872A1 (en) | 2011-10-14 | 2013-04-18 | Spirogen Sàrl | Synthesis method and intermediates useful in the preparation of pyrrolobenzodiazepines |
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PL2750713T3 (pl) | 2011-10-14 | 2016-03-31 | Medimmune Ltd | Pirolobenzodiazepiny i ich koniugaty |
ES2645272T3 (es) | 2012-02-24 | 2017-12-04 | Abbvie Stemcentrx Llc | Moduladores de DLL3 y procedimientos de utilización |
EP2817339B1 (en) | 2012-02-24 | 2019-05-15 | AbbVie Stemcentrx LLC | Anti sez6 antibodies and methods of use |
AR090549A1 (es) | 2012-03-30 | 2014-11-19 | Genentech Inc | Anticuerpos anti-lgr5 e inmunoconjugados |
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WO2013165940A1 (en) | 2012-05-01 | 2013-11-07 | Genentech, Inc. | Anti-pmel17 antibodies and immunoconjugates |
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EP2906296B1 (en) | 2012-10-12 | 2018-03-21 | ADC Therapeutics SA | Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates |
EP2922818B1 (en) | 2012-11-24 | 2018-09-05 | Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd | Hydrophilic linkers and their uses for conjugation of drugs to cell binding molecules |
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US9562049B2 (en) | 2012-12-21 | 2017-02-07 | Medimmune Limited | Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof |
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US9821074B2 (en) | 2013-03-13 | 2017-11-21 | Genentech, Inc. | Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof |
US9562099B2 (en) | 2013-03-14 | 2017-02-07 | Genentech, Inc. | Anti-B7-H4 antibodies and immunoconjugates |
EP3299391B1 (en) | 2013-03-14 | 2019-12-04 | Genentech, Inc. | Anti-b7-h4 antibodies and immunoconjugates |
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SG11201601424PA (en) | 2013-08-28 | 2016-03-30 | Stemcentrx Inc | Site-specific antibody conjugation methods and compositions |
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WO2015052535A1 (en) | 2013-10-11 | 2015-04-16 | Spirogen Sàrl | Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates |
EP3065776A4 (en) | 2013-11-06 | 2017-04-19 | AbbVie Stemcentrx LLC | Novel anti-claudin antibodies and methods of use |
US9493413B2 (en) | 2013-11-27 | 2016-11-15 | Redwood Bioscience, Inc. | Hydrazinyl-pyrrolo compounds and methods for producing a conjugate |
CN109575136A (zh) | 2013-12-12 | 2019-04-05 | 艾伯维施特姆森特克斯有限责任公司 | 新型抗dpep3抗体和使用方法 |
AR098743A1 (es) | 2013-12-13 | 2016-06-08 | Genentech Inc | Anticuerpos e inmunoconjugados anti-cd33 |
CA2929565A1 (en) | 2013-12-16 | 2015-06-25 | Genentech, Inc. | 1-(chloromethyl)-2,3-dihydro-1h-benzo[e]indole dimer antibody-drug conjugate compounds, and methods of use and treatment |
CR20160437A (es) | 2014-02-21 | 2017-02-20 | Abbvie Stemcentrx Llc | Conjugados de anticuerpos anti-drosophila similar a delta 3 (anti-dll3) y medicamentos para uso en el tratamiento contra melanoma |
CN114262344A (zh) | 2014-02-28 | 2022-04-01 | 杭州多禧生物科技有限公司 | 带电荷链接体及其在共轭反应上的应用 |
GB201407816D0 (en) * | 2014-05-02 | 2014-06-18 | King S College London | Pyrrolobenzodiazepine Compounds |
MX2016015162A (es) | 2014-05-22 | 2017-03-03 | Genentech Inc | Anticuerpos anti - gpc3 e inmunoconjugados. |
KR20230172625A (ko) | 2014-08-28 | 2023-12-22 | 바이오아트라, 인코퍼레이티드 | 변형된 t 세포에 대한 조건부 활성 키메라 항원 수용체 |
LT3189056T (lt) | 2014-09-03 | 2020-09-25 | Immunogen, Inc. | Citotoksiniai benzodiazepinai |
US9381256B2 (en) | 2014-09-03 | 2016-07-05 | Immunogen, Inc. | Cytotoxic benzodiazepine derivatives |
TW201617368A (zh) | 2014-09-05 | 2016-05-16 | 史坦森特瑞斯公司 | 新穎抗mfi2抗體及使用方法 |
WO2016037644A1 (en) | 2014-09-10 | 2016-03-17 | Medimmune Limited | Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof |
AR101846A1 (es) | 2014-09-12 | 2017-01-18 | Genentech Inc | Anticuerpos anti-cll-1 e inmunoconjugados |
CN113698488A (zh) | 2014-09-12 | 2021-11-26 | 基因泰克公司 | 抗-b7-h4抗体及免疫缀合物 |
GB201416112D0 (en) | 2014-09-12 | 2014-10-29 | Medimmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof |
ES2830385T3 (es) | 2014-09-12 | 2021-06-03 | Genentech Inc | Anticuerpos e inmunoconjugados anti-HER2 |
US10077318B2 (en) | 2014-09-12 | 2018-09-18 | Genentech, Inc. | Cysteine engineered antibodies and conjugates |
JP6730261B2 (ja) | 2014-09-17 | 2020-07-29 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | 抗her2抗体を含む免疫複合体 |
CA2968447A1 (en) | 2014-11-25 | 2016-06-02 | Adc Therapeutics Sa | Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates and their use to treat neoplasms |
US10766959B2 (en) | 2014-12-11 | 2020-09-08 | Pierre Fabre Medicament | Anti-C10ORF54 antibodies and uses thereof |
ES2747386T3 (es) | 2015-01-14 | 2020-03-10 | Bristol Myers Squibb Co | Dímeros de benzodiacepina unidos por heteroarileno, conjugados de los mismos y métodos de preparación y uso |
ES2783624T3 (es) | 2015-01-14 | 2020-09-17 | Bristol Myers Squibb Co | Dímeros de benzodiacepina, conjugados de los mismos y métodos de preparación y uso |
GB201506411D0 (en) | 2015-04-15 | 2015-05-27 | Bergenbio As | Humanized anti-axl antibodies |
GB201506402D0 (en) | 2015-04-15 | 2015-05-27 | Berkel Patricius H C Van And Howard Philip W | Site-specific antibody-drug conjugates |
GB201510010D0 (en) | 2015-06-09 | 2015-07-22 | King S College London | PDD and BPD compounds |
EA201792516A1 (ru) | 2015-06-23 | 2018-05-31 | Бристол-Маерс Сквибб Компани | Макроциклические димеры бензодиазепина, их конъюгаты, получение и применение |
WO2015151081A2 (en) | 2015-07-12 | 2015-10-08 | Suzhou M-Conj Biotech Co., Ltd | Bridge linkers for conjugation of a cell-binding molecule |
US9839687B2 (en) | 2015-07-15 | 2017-12-12 | Suzhou M-Conj Biotech Co., Ltd. | Acetylenedicarboxyl linkers and their uses in specific conjugation of a cell-binding molecule |
SG10202106529XA (en) | 2015-07-21 | 2021-07-29 | Immunogen Inc | Methods of preparing cytotoxic benzodiazepine derivatives |
GB201514928D0 (en) | 2015-08-21 | 2015-10-07 | King S College London | PDD compounds |
US20180339985A1 (en) | 2015-08-21 | 2018-11-29 | Femtogenix Limited | Pdd compounds |
MA43345A (fr) | 2015-10-02 | 2018-08-08 | Hoffmann La Roche | Conjugués anticorps-médicaments de pyrrolobenzodiazépine et méthodes d'utilisation |
MA43354A (fr) | 2015-10-16 | 2018-08-22 | Genentech Inc | Conjugués médicamenteux à pont disulfure encombré |
GB201601431D0 (en) | 2016-01-26 | 2016-03-09 | Medimmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepines |
GB201602359D0 (en) | 2016-02-10 | 2016-03-23 | Medimmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepine Conjugates |
GB201602356D0 (en) | 2016-02-10 | 2016-03-23 | Medimmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepine Conjugates |
WO2017161206A1 (en) | 2016-03-16 | 2017-09-21 | Halozyme, Inc. | Conjugates containing conditionally active antibodies or antigen-binding fragments thereof, and methods of use |
JP6735355B2 (ja) | 2016-04-15 | 2020-08-05 | バイオアトラ、エルエルシー | 抗Axl抗体、抗体断片およびそれらの免疫コンジュゲートならびにそれらの使用 |
JP2019522960A (ja) | 2016-04-21 | 2019-08-22 | アッヴィ・ステムセントルクス・エル・エル・シー | 新規の抗bmpr1b抗体及び使用方法 |
GB201607478D0 (en) | 2016-04-29 | 2016-06-15 | Medimmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepine Conjugates |
WO2017196847A1 (en) | 2016-05-10 | 2017-11-16 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Variable new antigen receptor (vnar) antibodies and antibody conjugates targeting tumor and viral antigens |
TW201808336A (zh) | 2016-05-11 | 2018-03-16 | 賽諾菲公司 | 用抗muc1類美登素免疫綴合物抗體治療腫瘤的治療方案 |
AU2017263568B2 (en) | 2016-05-13 | 2024-01-18 | Bioatla, Llc | Anti-Ror2 antibodies, antibody fragments, their immunoconjugates and uses thereof |
CN109313200B (zh) | 2016-05-27 | 2022-10-04 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 用于表征位点特异性抗体-药物缀合物的生物分析性方法 |
WO2017214182A1 (en) | 2016-06-07 | 2017-12-14 | The United States Of America. As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services | Fully human antibody targeting pdi for cancer immunotherapy |
WO2018026533A1 (en) | 2016-08-02 | 2018-02-08 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Monoclonal antibodies targeting glypican-2 (gpc2) and use thereof |
JP2019530434A (ja) | 2016-08-05 | 2019-10-24 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | アゴニスト活性を有する多価及び多重エピトープ抗体ならびに使用方法 |
JP7093767B2 (ja) | 2016-08-11 | 2022-06-30 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | ピロロベンゾジアゼピンプロドラッグ及びその抗体コンジュゲート |
CN109862919A (zh) | 2016-10-11 | 2019-06-07 | 免疫医疗有限公司 | 抗体-药物缀合物联合免疫介导的治疗剂 |
GB201617466D0 (en) | 2016-10-14 | 2016-11-30 | Medimmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepine conjugates |
KR102459469B1 (ko) | 2016-11-14 | 2022-10-26 | 항저우 디에이씨 바이오테크 씨오, 엘티디 | 결합 링커, 그러한 결합 링커를 함유하는 세포 결합 분자-약물 결합체, 링커를 갖는 그러한 결합체의 제조 및 사용 |
AU2017361887B2 (en) | 2016-11-21 | 2019-08-15 | Cureab Gmbh | Anti-GP73 antibodies and immunoconjugates |
FR3059550B1 (fr) | 2016-12-01 | 2020-01-03 | Universite De Rouen Normandie | Traitement des troubles causes par l'alcoolisation foetale (tcaf) |
CA3045902A1 (en) | 2016-12-21 | 2018-06-28 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Human monoclonal antibodies specific for flt3 and uses thereof |
GB201702031D0 (en) | 2017-02-08 | 2017-03-22 | Medlmmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates |
SI3544636T1 (sl) | 2017-02-08 | 2021-08-31 | Adc Therapeutics Sa | Konjugati pirolobenzodiazepin-protitelo |
DK3612537T3 (da) * | 2017-04-18 | 2022-08-08 | Medimmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepinkonjugater |
CN110536703B (zh) | 2017-04-20 | 2024-07-12 | Adc治疗有限公司 | 使用抗axl抗体-药物缀合物的组合疗法 |
US20180346488A1 (en) | 2017-04-20 | 2018-12-06 | Immunogen, Inc. | Cytotoxic benzodiazepine derivatives and conjugates thereof |
WO2018213064A1 (en) | 2017-05-19 | 2018-11-22 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Human monoclonal antibody targeting tnfer2 for cancer immunotherapy |
CA3064804A1 (en) | 2017-06-14 | 2018-12-20 | Adc Therapeutics Sa | Dosage regimes for the administration of an anti-cd19 adc |
CA3066953A1 (en) | 2017-06-30 | 2019-01-03 | Lentigen Technology, Inc. | Human monoclonal antibodies specific for cd33 and methods of their use |
WO2019005208A1 (en) | 2017-06-30 | 2019-01-03 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | ANTIBODIES TO HUMAN MESOTHELIN AND USES IN ANTICANCER THERAPY |
SI3668874T1 (sl) | 2017-08-18 | 2022-04-29 | Medimmune Limited | Pirolobenzodiazepinski konjugati |
AU2018342527B2 (en) | 2017-09-29 | 2024-06-27 | Daiichi Sankyo Company, Limited | Antibody-pyrrolobenzodiazepine derivative conjugate |
US20200289660A1 (en) | 2017-11-14 | 2020-09-17 | Medimmune Limited | Pyrrolobenzodiazepine conjugates |
US12006356B2 (en) | 2017-12-15 | 2024-06-11 | Juno Therapeutics, Inc. | Anti-CCT5 binding molecules and chimeric antigen receptors comprising the same |
TW202413360A (zh) | 2017-12-28 | 2024-04-01 | 美商伊繆諾金公司 | 苯二氮平衍生物 |
GB201803342D0 (en) * | 2018-03-01 | 2018-04-18 | Medimmune Ltd | Methods |
GB201806022D0 (en) | 2018-04-12 | 2018-05-30 | Medimmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof |
CN112203696A (zh) | 2018-05-25 | 2021-01-08 | 免疫医疗有限公司 | 吡咯并苯并二氮杂*缀合物 |
FR3081707A1 (fr) | 2018-05-30 | 2019-12-06 | Universite De Rouen Normandie | Traitement des troubles neurologiques causes par l'alcoolisation foetale |
CA3105694A1 (en) | 2018-07-12 | 2020-01-16 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Affinity matured cd22-specific monoclonal antibody and uses thereof |
CA3106544A1 (en) | 2018-08-08 | 2020-02-13 | Mitchell Ho | High affinity monoclonal antibodies targeting glypican-2 and uses thereof |
US20210316006A1 (en) | 2018-10-19 | 2021-10-14 | Medimmune Limited | Pyrrolobenzodiazepine conjugates |
US20210380605A1 (en) | 2018-10-19 | 2021-12-09 | Medimmune Limited | Pyrrolobenzodiazepine conjugates |
EP3898693A4 (en) | 2018-12-21 | 2022-09-21 | Avidity Biosciences, Inc. | ANTI-TRANSFERRIN RECEPTOR ANTIBODIES AND USES THEREOF |
US20220064324A1 (en) | 2019-01-08 | 2022-03-03 | The U.S.A., As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Cross species single domain antibodies targeting mesothelin for treating solid tumors |
US20220098323A1 (en) | 2019-01-22 | 2022-03-31 | The United States Of America,As Represented By The Secretary,Department Of Health And Human Services | High affinity monoclonal antibodies targeting glypican-1 and methods of use |
KR20210124308A (ko) | 2019-01-30 | 2021-10-14 | 트루바인딩 아이엔씨. | 항-gal3 항체 및 이의 용도 |
CA3130174A1 (en) | 2019-03-15 | 2020-09-24 | Medimmune Limited | Azetidobenzodiazepine dimers and conjugates comprising them for use in the treatment of cancer |
MA55520A (fr) | 2019-03-29 | 2022-02-09 | Immunogen Inc | Dérivés de bis-benzodiazépine cytotoxiques et leurs conjugués avec des agents de liaison à une cellule pour inhiber la croissance cellulaire anormale ou pour traiter des maladies prolifératives |
CA3156761A1 (en) | 2019-10-22 | 2021-04-29 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | High affinity nanobodies targeting b7h3 (cd276) for treating multiple solid tumors |
EP4041769A1 (en) | 2019-12-12 | 2022-08-17 | The United States of America, as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services | Antibody-drug conjugates specific for cd276 and uses thereof |
TW202144572A (zh) | 2020-03-19 | 2021-12-01 | 美商亞維代堤生物科學公司 | 治療臉肩胛肱骨肌肉失養症之組合物及方法 |
EP4126066A4 (en) | 2020-03-27 | 2024-04-24 | Avidity Biosciences, Inc. | COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING MUSCULAR DYSTROPHY |
WO2022093745A1 (en) | 2020-10-26 | 2022-05-05 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Single domain antibodies targeting sars coronavirus spike protein and uses thereof |
US20240218055A1 (en) | 2021-04-29 | 2024-07-04 | The U.S.A., As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Lassa virus-specific nanobodies and methods of their use |
CN117500831A (zh) | 2021-06-09 | 2024-02-02 | 美国政府(由卫生和人类服务部的部长所代表) | 用于治疗实体瘤的靶向pd-l1的跨物种单结构域抗体 |
JP2024526764A (ja) | 2021-07-13 | 2024-07-19 | トゥルーバインディング,インコーポレイテッド | タンパク質凝集を防止する方法 |
CA3231330A1 (en) | 2021-09-16 | 2023-03-23 | Avidity Biosciences, Inc. | Compositions and methods of treating facioscapulohumeral muscular dystrophy |
WO2023215737A1 (en) | 2022-05-03 | 2023-11-09 | Genentech, Inc. | Anti-ly6e antibodies, immunoconjugates, and uses thereof |
Family Cites Families (38)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3523941A (en) | 1967-03-06 | 1970-08-11 | Hoffmann La Roche | Benzodiazepine compounds and process for their preparation |
US3524849A (en) | 1967-10-27 | 1970-08-18 | Hoffmann La Roche | Process for the preparation of pyrrolo-benzodiazepine acrylamides and intermediates useful therein |
IL33558A (en) * | 1968-12-30 | 1973-10-25 | Fujisawa Pharmaceutical Co | Antibiotic pyrrolo-benzodiazepine compound,its derivatives and processes for their production |
DE1965304A1 (de) | 1968-12-30 | 1970-07-23 | Fujisawa Pharmaceutical Co | Benzdiazepinon-Verbindungen und Verfahren zu ihrer Herstellung |
JPS6053033B2 (ja) | 1976-12-28 | 1985-11-22 | 財団法人微生物化学研究会 | 新制癌抗生物質マゼスラマイシン及びその製造方法 |
JPS585916B2 (ja) | 1977-12-27 | 1983-02-02 | 株式会社ミドリ十字 | 新規ベンゾジアゼピン系化合物 |
JPS5615289A (en) | 1979-07-17 | 1981-02-14 | Green Cross Corp:The | Novel benzodiazepinnbased compound 3 |
JPS57131791A (en) * | 1980-12-31 | 1982-08-14 | Fujisawa Pharmaceut Co Ltd | Benzodiazepine derivative and its preparation |
JPS58180487A (ja) | 1982-04-16 | 1983-10-21 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | 抗生物質dc−81およびその製造法 |
US4427588A (en) * | 1982-11-08 | 1984-01-24 | Bristol-Myers Company | Process for conversion of oxotomaymycin to tomaymycin |
FR2586683B1 (fr) | 1985-08-29 | 1988-07-01 | Centre Nat Rech Scient | Nouveaux derives de neothramycine, leur procede de preparation et leur application en tant que medicaments |
GB8607679D0 (en) | 1986-03-27 | 1986-04-30 | Winter G P | Recombinant dna product |
EP0340243B1 (en) | 1986-12-19 | 1994-09-28 | The Upjohn Company | Cc-1065 analogs |
GB8705477D0 (en) | 1987-03-09 | 1987-04-15 | Carlton Med Prod | Drug delivery systems |
GB8809616D0 (en) | 1988-04-22 | 1988-05-25 | Cancer Res Campaign Tech | Further improvements relating to drug delivery systems |
US5143854A (en) * | 1989-06-07 | 1992-09-01 | Affymax Technologies N.V. | Large scale photolithographic solid phase synthesis of polypeptides and receptor binding screening thereof |
JPH05508394A (ja) | 1990-04-25 | 1993-11-25 | ファルマシア・アンド・アップジョン・カンパニー | 新規なcc―1065アナログ |
FR2676230B1 (fr) | 1991-05-07 | 1993-08-27 | Centre Nat Rech Scient | Nouveaux derives de pyrrolo [1,4]-benzodiazepines, leur procede de preparation et medicaments les contenant. |
EP0540263A1 (en) | 1991-10-23 | 1993-05-05 | Cancer Research Campaign Technology Limited | Bacterial nitroreductase for the reduction of CB 1954 and analogues thereof to a cytotoxic form |
GB9205051D0 (en) | 1992-03-09 | 1992-04-22 | Cancer Res Campaign Tech | Pyrrolobenzodiazepine derivatives,their preparation,and compositions containing them |
US5288514A (en) * | 1992-09-14 | 1994-02-22 | The Regents Of The University Of California | Solid phase and combinatorial synthesis of benzodiazepine compounds on a solid support |
US5502068A (en) | 1995-01-31 | 1996-03-26 | Synphar Laboratories, Inc. | Cyclopropylpyrroloindole-oligopeptide anticancer agents |
WO1997001560A1 (en) | 1995-06-29 | 1997-01-16 | Pharmacopeia, Inc. | Combinatorial 1,4-benzodiazepin-2,5-dione library |
GB9516943D0 (en) | 1995-08-18 | 1995-10-18 | Cancer Soc Auckland Div Nz Inc | Novel cyclopropylindoles and their secoprecursors,and their use as prodrugs |
EP0938474B1 (en) | 1996-09-12 | 2005-11-23 | Auckland Uniservices Limited | Cyclopropylindole compounds and their use as prodrugs |
JPH1087666A (ja) | 1996-09-18 | 1998-04-07 | Kyorin Pharmaceut Co Ltd | デュオカルマイシンsa及びその誘導体の製造中間体と製造方法 |
CA2313231A1 (en) | 1997-12-08 | 1999-06-17 | The Scripps Research Institute | Synthesis of cc-1065/duocarmycin analogs |
AU2713799A (en) | 1998-03-12 | 1999-09-27 | Novo Nordisk A/S | Modulators of protein tyrosine phosphatases (ptpases) |
PT1109812E (pt) | 1998-08-27 | 2005-09-30 | Spirogen Ltd | Pirrolobenzodiazepinas |
GB9818730D0 (en) | 1998-08-27 | 1998-10-21 | Univ Portsmouth | Collections of compounds |
GB9818731D0 (en) * | 1998-08-27 | 1998-10-21 | Univ Portsmouth | Compounds |
GB9818732D0 (en) | 1998-08-27 | 1998-10-21 | Univ Portsmouth | Collection of compounds |
GB9909612D0 (en) | 1999-04-26 | 1999-06-23 | Cancer Res Campaign Tech | N-protected amines and their use as prodrugs |
US6660856B2 (en) | 2002-03-08 | 2003-12-09 | Kaohsiung Medical University | Synthesis of pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepine analogues |
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