DK200500290U1 - Test til diagnostik af analysanter i en prøve - Google Patents

Description

DK 2005 00290 U4

Teststrimmel til diagnostik af analysander i en prøve

Baggrund for opfindelsen Opfindelsens område

Den foreliggende opfindelse angår en hurtig visuel test med lateral strømning til detektering af analysander i en prøve.

Beskrivelse af beslægtet teknik

Testindretninger med lateral strømning kendes inden for fagområdet og anvendes i klinisk diagnosticering til at bestemme forekomst af en analysand af interesse i en prøve, såsom en legemsvæske. Imidlertid har sådanne indretninger typisk forudsat en relativt stor prøvevolumen og store mængder konjugat. De har også været forbundet med lang ventetid, inden resultaterne af testen kan aflæses.

US 20010023076 beskriver en testindretning som indeholder en prøvemodtagelseszone placeret opstrøms i forhold til en reaktionszone. Prøven kan migrere lateralt mod den prøvemodtagende ende. US 5656503 beskriver en konventionel teststrimmel, i hvilken to forskellige antistoffer anvendes til at identificere det samme antigen. Derved skal den prøvemodtagende ende være placeret opstrøms i forhold til et konjugat område, for at opnå' et ensrettet flow af prøvevæske sekventielt henover et første antistof område og efterfølgende et andet antistof område.

Kort beskrivelse af opfindelsen

Ifølge et aspekt tilvejebringes der en immunodiagnostisk teststrimmel til detektering af en analysand af interesse i en prøve. Ifølge nogle 2 DK 2005 00290 U4 udførelsesformer er analysanden et antistof, såsom et anti-human immundefekt virus (HIV) -antistof eller et anti-hepatitis C virus (HCV) -antistof. Ifølge andre udførelsesformer er analysanden et antigen, såsom et human chorion gonadotropin (hCG).

Den diagnostiske teststrimmel omfatter fortrinsvis et konjugatkildeområde omfattede et konjugat udformet til at binde den analysand, som er genstand for interesse; et prøveapplikationsområde anbragt nedstrøms for konjugatkildeområdet og udformet til at modtage væskeprøven; samt et testområde. Testområdet befinder sig nedstrøms for konjugatkildeområdet og omfatter et immobiliseret bindemiddel, som er i stand til at binde specifikt til den relevante analysand. Hvis den relevante analysand for eksempel er et antistof, omfatter det positive testområde fortrinsvis immobiliseret antigen. Hvis den relevante analysand er et antigen, omfatter det positive testområde fortrinsvis et immobiliseret antistof. Konjugatet omfatter en første bindekomponent, som er i stand til at binde den relevante analysand, samt en anden visualiseringskomponent.

Den i testen anvendte prøve kan være en hvilken som helst væske. Foretrukne prøver omfatter f.eks. blod, serum, plasma, spyt og urin. Prøven påføres det positive testområde, og konjugat bringes efterfølgende til at strømme fra konjugatkildeområdet. Konjugatet strømmer hen over membranen og kommer i kontakt med eventuelt forekommende analysander, som måtte være bundet til det positive testområde, hvorved der frembringes et visuelt signal.

Ifølge en foretrukken udførelsesform omfatter teststrimlen et testområde med immobiliseret HIV-antigen og anvendes til detektering af anti-HIV-antistoffer. I denne udførelsesform er testen anvendelig til at diagnosticere, om en patient har HIV-infektion. Ifølge en anden udførelsesform omfatter teststrimlen et testområde med et immobiliseret HCV-antigen og anvendes til detektering af 3 DK 2005 00290 U4 anti-HCV-antistoffer i en prøve. I denne udførelsesform er testen velegnet til at diagnosticere, om en patient har HCV-infektion. Ifølge en yderligere udførelsesform omfatter teststrimlen et testområde med immobiliserede anti-hCG-antistoffer. I den udførelsesform er testen velegnet til at bestemme, om et individ er gravid.

Konjugatkildeområdet omfatter fortrinsvis tørret konjugat. For eksempel kan konjugatkildeområdet være en konjugatpude, hvorpå konjugat er tørret. Konjugatpuden er fortrinsvis i strømningsmæssig forbindelse med membranen. I nogle udførelsesformer flyttes konjugatpuden, så den kommer i strømningsmæssig forbindelse med membranen, efter tilsætning af prøven til prøveapplikationsområdet. Ifølge en anden udførelsesform er konjugatkildeområdet en del af den membran, hvorpå konjugatet er tørret.

Tørret konjugat resuspenderes fortrinsvis og bringes til at strømme ved at bringe konjugatkildeområdet i kontakt med vaskebuffer. Ifølge en udførelsesform omfatter vaskebufferen ca. 0,1 % blokeringsmiddel, fortrinsvis et blokeringsprotein såsom casein. Vaskebufferen omfatter også fortrinsvis ca. 0,1 % detergent, fortrinsvis et ikke-ionisk detergent, såsom Triton X100™. Ifølge en udførelsesform omfatter vaskebufferen ca. 0,025 % HEPES, ca. 0,85 % natriumchlorid, ca. 0,1 % EDTA, ca. 1 % mannitol, ca. 0,1 % casein og ca. 1 % Triton X100™-detergent.

Ifølge en yderligere udførelsesform er konjugatet opløst i en buffer. Konjugatet bringes til at strømme hen til testområdet ved tilsætning af bufferen, der omfatter konjugatet, til konjugatkildeområdet.

Ifølge en særlig udførelsesform omfatter konjugatet protein A konjugeret til kolloid guld. I andre udførelsesformer omfatter konjugatet et antistof, fortrinsvis et monoklonalt antistof konjugeret til kolloidt guld. Fortrinsvis har det kolloide guld en partikelstørrelse på mellem ca. 20 og 80 nanometer.

4 DK 2005 00290 U4

Ifølge en yderligere udførelsesform omfatter teststrimlen yderligere et kontrolområde, der befinder sig på membranen nedstrøms for testområdet. Kontrolområdet omfatter fortrinsvis et kontrolbindemiddel, som er i stand til at binde konjugatet. Hvis den relevante analysand f.eks. er et antistof og konjugatet omfatter et antistof-bindemiddel, såsom protein A, kan kontrolbindemidlet være kanin-lgG, Hvis den relevante analysand er et antigen og konjugatet omfatter et monoklonalt antistof, som er specifikt for antigenet, kan kontrolbindemidlet f.eks. være protein A.

Teststrimlen kan omfatte en eller flere yderligere komponenter. En bufferpude kan være i strømningsmæssig forbindelse med konjugatkildeområdet, således at tilsætning af vaskebuffer til bufferpuden bringer konjugat til at strømme fra konjugatkildeområdet og hen over membranen for at komme i kontakt med testområdet. En absorbentstrimmel og en absorbentpude kan befinde sig nedstrøms for membranen med henblik på at absorbere overskydende buffer, efterhånden som det passerer hen over membranen. En tablet med tørremiddel kan også være anbragt i nærheden af membranen med henblik på at absorbere overskydende væske og fugt.

Teststrimlen kan eventuelt være tilvejebragt i et hus, såsom et plasthus. Huset omfatter fortrinsvis et prøvevindue, som befinder sig over test- og kontrolområderne, samt et buffervindue, der befinder sig opstrøms for testområdet.

Teststrimleme i henhold til den foreliggende opfindelse har flere fordele i forhold til kendt teknik. De muliggør detektion af analysander med brug af relativt mindre prøve volumen samt mindre mængde af konjugat. De muliggør ligeledes aflæsning af test resultat efter kortere tid.

5 DK 2005 00290 U4

Kort beskrivelse aftegningen

Fig. 1 viser et testkort ifølge et aspekt ved den foreliggende opfindelse.

Fig. 2 viser et testkort set fra oven, ifølge et aspekt ved opfindelsen.

Fig. 3 viser et testkort, set fra siden, ifølge et aspekt ved opfindelsen.

Fig, 4 viser et snitbillede af de komponenter, som udgør en teststrimmel ifølge en udførelsesform;

Fig. 5 viser et testkort med positivt resultat, som angiver, at den relevante analysand detekteredes i prøven.

Fig. 6 viser et testkort med negativt resultat, som angiver at den relevante analysand ikke detekteredes i prøven.

Fig. 7 viser en teststrimmel med et prøvebæger ifølge et yderligere aspekt ved opfindelsen.

Detaljeret beskrivelse af foretrukne udførelsesformer

Diagnostikindretninger tilvejebringes til hurtig bestemmelse af, om en analysand er til stede i en prøve. Om end den foreliggende opfindelse beskrives generelt som en immunodiagnostisk indretning til detektering af et antistof eller et antigen i en prøve, vil fagmanden forstå, at den nemt kan modificeres til detektering af en hvilken som helst relevant analysand.

Hidtil har immunodiagnostiske indretninger typisk involveret indledede blanding af et konjugat med den prøve, som skal analyseres for forekomst af et antistof. For eksempel skulle tørret konjugat i forbindelse med nogle indretninger opløses ved tilsætning af en væskeprøve, hvorved prøven og konjugatet kunne blandes forudgående. Det antistof, som skal detekteres, vil, hvis det er til stede binde sig til konjugatet og visualiseredes ved et nedstrøms testområde, der omfatter et immobiliseret antigen. Imidlertid skete der det i dette system en ikke-specifik interaktion mellem konjugatet og andre antistoffer, eller andre forbindelser i prøven førte til undertrykkelse af 6 DK 2005 00290 U4 konjugatsignalet. Som følge heraf var det nødvendigt med en stor mængde konjugat. På grund af den store mængde konjugat, der anvendtes, var reaktionen længe om at blive klar, hvorved den periode, som var nødvendig for at opnå testresultatet, blev forlænget. Dertil kommer, at testens følsomhed var sådan, et det var nødvendigt med en betydelig mængde antigen ved testområdet for at frembringe et synligt positivt signal.

Med den foreliggende opfindelse overkommes problemerne ved den kendte teknik, i og med at testområdet bringes i direkte kontakt med prøven, hvorved en hvilken som helst relevant analysand kan binde sig specifikt til immobiliseret bindemiddel. For eksempel kan et relevant antistof binde sig til immobiliseret antigen. Efterfølgende leveres konjugat til testområdet med bufferopløsning. Opløsningsmiddelfronten af bufferopløsningen skubber ikke bundne forbindelser ud ved testområdet og reducerer dermed ikke-specifikke interaktioner med konjugatet. Som følge heraf reduceres den krævede mængde konjugat betydeligt og reaktionshastigheden øges dermed. Dertil kommer, at reaktionens følsomhed øges, hvilket medfører, at det er muligt at bruge mindre antigen ved testområdet.

De beskrevne indretninger kan eksempelvis anvendes til at diagnosticere en sygdom eller en lidelse hos en patient, såsom human immundefekt virus (HIV) eller hepatitis virus. De kan også anvendes til at bestemme, hvorvidt et individ er gravidt. Andre anvendelser vil gå op for fagmanden ved læsning af nedenstående.

Definitioner

Medmindre de defineres anderledes, vil alle tekniske og videnskabelige termer, der anvendes heri have samme betydning, som den, der sædvanligvis vil blive forstået af fagmanden inden for det fagområde, som den foreliggende opfindelse henhører under. Samtlige fremgangsmåder, 7 DK 2005 00290 U4 indretninger og materialer, som måtte ligne eller være ækvivalente med de heri beskrevne kan anvendes i udøvelsen af den foreliggende opfindelse.

En "relevant analysand” er et hvilket som helst molekyle eller forbindelse, hvis forekomst skal identificeres i en prøve. Analysander kan omfatte, uden begrænsning: virale antigener, bakterielle antigener, hormoner, såsom insulin, follikelstimulerende hormon (FSH), thyrotropin, relaxin, somatotropin og gonadotropin, enzymer, immunoglobuliner, cytokiner, medikamenter, cancer-antigener, antigene polysaccharider og nucleinsyrer. Andre analysander, som kan identificeres i prøver, under anvendelse af de tilvejebragte metoder og det tilvejebragte apparat vil være åbenlyse for den almindelige fagmand. Særligt foretrukne relevante analysander omfatter anti-HlV-antistoffer, anti-HCV-antistoffer samt human chorion gonadotropin (hCG).

Betegnelsen "konjugat” henviser til en sammensætning, der er udformet til at binde sig til en relevant analysand og frembringe et detekterbart signal. Konjugatet omfatter typisk en bindekomponent konjugeret til en label. Bindekomponenten tillader konjugatet at binde sig til den relevante analysand og eventuelt til en kontrolforbindelse. Labelen frembringer et detekterbart signal, fortrinsvist et visuelt signal. Ifølge en udførelsesform frembringes det visuelle signal kun efter, at konjugatet har bundet sig til analysanden. Ifølge en foretrukken udførelsesform er den relevante analysand et antistof, og konjugatet omfatter en bindekomponent, som er i stand til at binde antistoffer. For eksempel kan den første bindekomponent være protein A, om end der kan anvendes andre molekyler, som er i stand til binde antistoffer. Ifølge en anden udførelsesform er den relevante analysand et antistof, og bindingskomponenten af konjugatet omfatter et antistof, som er i stand til at binde antigenet. Fortrinsvis er antistoffet et monoklonalt antistof.

8 DK 2005 00290 U4

Labelen er et hvilket som helst molekyle eller forbindelse, som kan fastgøres til eller konjugeres til bindekomponenten og som kan frembringe et detekterbart signal. En foretrukken label er kolloid guld. Alternativt kan labelen være f.eks. farvede latex partikler, kolloid sølv eller andre kolloide metaller, kolloid sort, eller andre komponenter, som kendes inden for fagområdet. Fortrinsvis har labelen en sådan partikelstørrelse, at den ikke interfererer med bindekomponentens evne til at binde den relevante analysand. For eksempel når bindekomponenten er protein A, har labelen en foretrukken partikelstørrelse på fra ca. 5 til ca. 120 nanometer, mere fortrinsvis fra ca. 20 til ca. 80 nanometer.

Konjugatet fremstilles fortrinsvis i en "konjugatbuffer", som kan stabilisere og bevare konjugatet. Ifølge en udførelsesform kan konjugatet, efter fremstilling i konjugatbuffer, tørres på en "konjugatpude”, som vil blive beskrevet mere detaljeret nedenfor. Konjugat, som tørres på et substrat anses for at være "diffusionsbundet". Konjugatet er "diffu sio nsbund et", hvis det er i stand til at bringes til at diffundere eller strømme, f.eks. derved at det bringes i kontakt med en buffer. For eksempel kan konjugat, der er blevet diffusionsbundet til konjugatkildeområdet ved tørring, gøres opløseligt med buffer og dermed bringes til at strømme langs teststrimlens membran.

Et "kontrolkonjugat” er et konjugat, hvor bindekomponenten er specifik for en kontrolkomponent. Et kontrolkonjugat anvendes fortrinsvis, når det er sandsynligt, at hele konjugatet vil blive bundet til analysand på testlinien og ikke er til rådighed som kontrol. Kontrolforbindelse er typisk en forbindelse, som vides at være til stede i prøven, som er under analyse, og som er i stand til at binde kontrolbindemidlet på kontrolstriben. Eventuelt kan bindekomponenten af kontrolkonjugatet være specifik for en forbindelse, som befinder sig i testmembranens kontrolområde.

9 DK 2005 00290 U4

Konjugatet er fortrinsvis tilstede i et "konjugatkildeområde”. Konjugatkildeområdet omfatter typisk konjugat, som er diffusionsbundet dertil, såsom tørret konjugat. Alternativt kan konjugatkildeområdet omfatte konjugat, som er opløst i bufferopløsning, såsom vaskebuffer eller konjugatbuffer. Ifølge en udførelsesform er konjugatkildeområdet en konjugatpude, omfattende tørret konjugat, som er i strømningsmaessig forbindelse med testmembranen. Ifølge en yderligere udførelsesform er konjugatkildeområdet en portion af testmembranen, hvorpå konjugatet er blevet tørret. I en yderligere udførelsesform er konjugatkildeområdet en bufferpude, hvortil der kan sættes buffer omfattende konjugat, som er i strømningsmæssig forbindelse med testmembranen. Konjugatkildeområdet er typisk anbragt opstrøms for testområdet på testmembranen, således at konjugatet efter tilførsel af en opløsning omfattende konjugat eller efter, at det diffusionsbundne konjugat er blevet gjort opløseligt, strømmer hen over testmembranen for at komme i kontakt med testmembranen.

Konjugatet gøres fortrinsvist opløseligt med "vaskebuffer" som beskrevet mere detaljeret nedenfor. Kort fortalt er vaskebuffer en bufferopløsning, der fortrinsvis omfatter et "blokeringsmiddel”. Blokeringsmidler er velkendte inden for fagområdet og omfatter et hvilket som helst molekyle eller en hvilken som helst forbindelse, der reducerer ikke-specifikke interaktioner, såsom ikke-specifik antistofbinding. Foretrukne blokeringsmidler er proteiner, såsom casein og bovin serum albumin (BSA). Andre anvendelige blokeringsmidler er kommercielt tilgængelige og vil være åbenlyse for den almindelige fagmand.

"Prøvebuffer" er en bufferopløsning, der fortrinsvis ikke omfatter konjugat. I nogle udførelsesformer omfatter prøvebufferen et blokeringsmiddel, medens den i andre udførelsesformer ikke gør. Prøvebuffer kan eventuelt påføres membranen inden tilsætning til prøven, som det vil blive beskrevet mere detaljeret nedenfor.

10 DK 2005 00290 U4

En "testmembran" er en faststofbærer omfattende et testområde og eventuelt et kontrolområde. Den prøve, som skal analyseres, påføres typisk direkte på testmembranen, således at det kommer i kontakt med testområdet og kontrolområdet. Testmembranen kan være en hvilken som helst faststofbærer, hvortil et analysandbindemiddel og et kontrolbindemiddel kan fastgøres. Fortrinsvis er testmembranen nitrocellulose.

Med testmembranen tilvejebringes en lateral strømningsbane for væsker. Testmembranen og øvrige komponenter i teststrimlen siges at være i "strømningsmæssig forbindelse”, hvis væske, såsom en væskeprøve eller en buffer, kan strømme fra én komponent til en anden. Hvis komponenterne i teststrimlen er i kontakt med hinanden er de i strømningsmæssig forbindelse. Som det vil være fagmanden bekendt er direkte kontakt mellem to specifikke komponenter imidlertid ikke en forudsætning for strømningsmæssig forbindelse.

"Testområde”, "teststribe” og "testlinie” bruges i samme betydning og henviser til et område på testmembranen, hvorpå et analysandbindemiddel er fastgjort.

Et "analysandbindemiddel”, "specifik bindepartner” eller "bindekomponent” er et hvilket som helst molekyle eller en hvilken som helst forbindelse, som er udformet til at binde sig specifikt til en relevant analysand. Som eksempel og ikke begrænsende kan analysandbindemidlet omfatte antigener, antistoffer, receptorer, øvrige polypeptider, peptider, haptener, lectiner, nucleinsyre, herunder oligonucleotider, eller små molekyler. Ifølge en udførelsesform er analysandbindemidlet et antigen, som er specifikt for et antistof, som skal detekteres i en prøve. I en anden udførelsesform er analysandbindemidlet et antistof, som er specifikt for et relevant antigen.

11 DK 2005 00290 U4 "Kontrolområde", "kontrolstribe" og "kontrollinie" bruges i samme betydning og henviser til et område på membranen, hvortil et kontrolbindemiddel er anbragt.

"Kontrolbindemiddel" er et hvilket som helst molekyle eller en hvilken som helst forbindelse, som er i stand til at binde sig specifikt til. konjugatet eller til et kontrolkonjugat.

"Teststrimmel” henviser til et fuldstændigt apparat, som kan anvendes til at detektere forekomst af en analysand i en prøve. Teststrimlen omfatter fortrinsvis mindst en testmembran med et testområde og et kontrolområde. Som beskrevet ovenfor kan teststrimlen være til stede i et hus, såsom et plasthus. Alternativt kan teststrimlen anvendes uden et hus. Hvis den er i et hus kan teststrimlen og huset samlet betegnes et "testkort".

"Testkortvindue" og "prøvevindue” betegner et hul i plasthuset af et testkort, hvorigennem der kan påføres en prøve. Testkortvinduet befinder sig fortrinsvis oven over testområdet og kontrolområdet. Testkortvinduet tillader også fortrinsvis en visualisering af testresultaterne.

"Buffervindue” henviser til et hul i et plasthus på et testkort, hvorigennem der kan påføres buffer. Ifølge en udførelsesform befinder buffervinduet sig fortrinsvis således, at det er muligt at påføre buffer på en bufferpude. I en anden udførelsesform befinder buffervinduet sig således, at det tillader påføring af buffer direkte på testmembranen.

"Volumenindikatorvindue” henviser til en åbning i plasthuset af et testkort, hvorigennem man kan se en synlig prøvevolumenindikator. Volumenindikatorvinduet befinder sig nedstrøms for prøvevinduet.

Prøvevolumenindikatoren signalerer, at en acceptabel mængde prøvevolumen er kommet i kontakt med testområdet. En 12 DK 2005 00290 U4 prøvevolumenindikator kan f.eks. være methylenblå eller anden farvet forbindelse, som er blevet påført membranen lige opstrøms for volumenindikatorvinduet. Prøvevolumenindikatoren bæres hen over volumenindikatorvinduet ved bevægelse af prøven, hvorved der frembringes et visuelt signal i vinduet. I andre udførelsesformer er prøvevolumenindikatoren en forbindelse, som skifter farve, når den bringes i kontakt med prøven, såsom en pH-indikator. Typisk anvendes der en prøvevolumenindikator, når en stor prøvevolumen er nødvendig, såsom når en relevant analysand menes at være til stede i en lav koncentration i en prøve. For eksempel anvendes der fortrinsvis en prøvevolumenindikator, når urin analyseres for forekomst af hCG.

"Prøve" henviser til et hvilket som helst materiale, der skal analyseres for forekomst af en relevant analysand. Prøven foreligger fortrinsvis på væskeform. Eksempler på prøver omfatter, men er ikke begrænset til, legemsvæsker, såsom helt blod, plasma, serum, spyt og urin. Som det vil blive beskrevet mere detaljeret nedenfor kan prøven være et faststof. I dette tilfælde gøres prøven imidlertid fortrinsvis opløselig eller ekstraheres inden anvendelse i testen.

"Prøveapplikationsområdef er den lokalitet på membranen, hvorpå der påføres prøve. Prøveapplikationsområdet befinder sig fortrinsvis nedstrøms for konjugatkildeområdet og opstrøms for testområdet. Mere fortrinsvis omfatter prøveapplikationsområdet testområdet. Prøven kan påføres direkte på prøveapplikationsområdet, såsom med pipette, eller indirekte, såsom gennem en væge, der er i kontakt med membranen.

Betegnelsen "antistof bruges i sin bredeste betydning og omfatter som ikke begrænsende eksempel hele antistoffer såvel som enkelt-kæde antistoffer, antistoffragmenter og kimære antistoffer, når blot de har bevaret den ønskede bindingsspecificitet.

13 DK 2005 00290 U4

Testkortet

De heri beskrevne diagnostiske indretninger omfatter fortrinsvis et testkort 1, som vist i fig. 1-3. På fig. 1 vises et testkort 1 omfattende et plasthus 10, med en øvre del 15 og en nedre del 18, som snappersammen. Der er to åbninger inden i den øvre del 15 af plasthuset 10: Et prøvevindue 20 og et buffervindue 30. Prøvevinduet 20 tillader påføring af en prøve på prøveapplikationsområdet af en membran, der befinder sig inden i plasthuset 10. Prøveapplikationsområdet omfatter fortrinsvis et testområde 140. Et kontrolområde 150 befinder sig fortrinsvis nedstrøms for testområdet 140 på membranen. Buffervinduet 30 tillader applikation af buffer på konjugatkildeområdet 50. Membranen er en del af en teststrimmel, som vil blive beskrevet detaljeret nedenfor.

Et yderligere valgfrit volumenindikatorvindue (ikke vist) befinder sig nedstrøms for testområdet i nogle udførelsesformer. Volumenindikatorvinduet vil, hvis det er til stede, tillade brugeren at se en indikator, såsom en farveændring, på membranen nedstrøms for testområdet. Indikatoren signalerer, at en tilstrækkelig mængde prøve har kontaktet testområdet, og at brugeren kan fortsætte med at bringe testområdet i kontakt med konjugat med henblik på at detektere bunden analysand som beskrevet nedenfor, f.eks. ved at påføre buffer på konjugatkildeområdet.

På fig. 2 vises et billede set fra oven af testkortet 1, som viser prøvevinduet 20 og buffervinduet 30 inden i plasthuset 10. Membranens 140 testområdet er tilgængeligt gennem prøvevinduet 20 og konjugatkildeområdet 50 er tilgængeligt gennem buffervinduet 30. Nedstrøms for testområdet 140 er anbragt et kontrolområde 150. Selvom vinduerne er vist med et prøvevindue 40, som er rektangulært og et buffervindue 30, som er cirkulært, kan de have 14 DK 2005 00290 U4 en hvilken som helst form eller størrelse. De er imidlertid fortrinsvis udformet og dimensioneret således, at de dirigerer prøven hen til membranens 40 prøveapplikationsområde og bufferen til konjugatkildeområdet 50. Dertil kommer, at prøvevinduet er udformet til at tillade visualiseringen af testområdet 140, hvis der opnås et positivt resultat, og kontrolområdet 150.

Figur 3 illustrerer et eksempel på et testkort 1, set fra siden. Den øverste del s 15 og den nederste del 18 af plasthuset 10 vises. Den forstørrede ende (60) af den øverste del 15 af plasthuset 10, som er distalt i forhold til buffervinduet (ikke vist), tillader anbringelse af absorbentmateriale, såsom en absorbentpude eller en tablet med tørremiddel inden i testkortet (1). Størrelsen af den forstørrede ende (60) vil variere alt efter, hvilken mængde absorbentmateriale, der anvendes, hvilket til gengæld vil afhænge af prøvens volumen og den i testen anvendte buffer.

Teststrimlen

En teststrimmel omfatter en testmembran med mindst et testområde. Et analysandbindemiddel, som er specifikt for en relevant analysand, bindes eller immobiliseres på anden måde ved testområdet. Mindst en del af testområdet bliver synligt efter færdiggørelse af testen, hvis den pågældende analysand er til stede i prøven. I en særiig udførelsesform omfatter testområdet immobiliseret antigen, og testen tillader identifikation af særlige antistoffer i en prøve, såsom et biologisk fluidum. Ifølge en yderligere udførelsesform omfatter testområdet bundet antistof, og testen tillader identifikation af et særligt antigen i en prøve.

Prøven påføres et prøveapplikationsområde, der befinder sig nedstrøms i forhold til konjugatkildeområdet, f.eks. nedstrøms for konjugatpuden. I den foretrukne udførelsesform omfatter prøveapplikationsområdet testområdet. Imidlertid befinder prøveapplikationsområdet sig i andre udførelsesformer 15 DK 2005 00290 U4 opstrøms for testområdet og prøven strømmer fra prøveapplikationsområdet til testområdet.

En foretrukken udførelsesform af teststrimlen vises i diagramform på fig. 4. En teststrimmel 100 til testning af en prøve for forekomst af en relevant analysand, såsom et antistof, omfatter fortrinsvis en bufferpude 110 i kontakt med en konjugatpude 120. Konjugatpuden 120 er til gengæld i kontakt med en testmembran 130, der omfatter et testområde 140 og et kontrolområde 150. Membranen 130 er til gengæld i kontakt med en absorbentpude 160. Absorbentpuden 160 er eventuelt i kontakt med et yderligere absorbentpapir 170. Absorbentpuden 160 og/eller det valgfrie absorbentpapir 170 kan være i yderligere kontakt med et valgfrit tørremiddel . 180, såsom en tørremiddeltablet.

I nogle udførelsesformer er en aftagelig filterholder 190 fastgjort til teststrimlen 100. Filterholderen 190 omfatter et filterpapir 200. Når filterholderen 190 er fastgjort til teststrimlen 100, befinder filterpapiret 200 sig direkte over prøveapplikationsområdet, der fortrinsvis omfatter testområdet 140 og kontrolområdet 150.

Der skal tilvejebringes tilstrækkeligt med prøve på testområdet til at være sikker på, at der opnås en synlig positiv aflæsning efter færdiggørelse af testen, hvis den pågældende analysand er til stede i prøven. Det gælder således, at analysander, som mistænkes for at være til stede i lav koncentration i prøven, for eksempel antigener, såsom hCG i urin, at der kræves et større prøvevolumen. Teststrimlen 100 kan være udformet til at acceptere sådanne større prøvevolumener. Et eksempel på en sådan udførelsesform er vist på fig. 7, hvor et prøvebæger 500 er fastgjort til teststrimlen 100. Prøvebægeret 500 omfatter en beholder til at rumme en mængde væskeprøve. Typisk vil prøvebægeret 500 have en åbning i bunden, som tillader prøven at strømme ud af prøvebægeret 500 og komme i 16 DK 2005 00290 U4 kontakt med testmembranen 130. Prøvebægeret 500 er anbragt således, at prøve strømmer fra prøvebægeret 500 til prøveapplikationsområdet af testmembranen 130 og kontakter testområdet 140 og kontrolområdet 150. Fortrinsvis omfatter prøveapplikationsmrådet testområdet 140 og kontrolområdet 150, og prøvebægeret 500 befinder sig direkte over testområdet 140 og kontrolområdet 150. Prøvebægeret 500 kan eventuelt omfatte et filter, hvorigennem prøven passerer, inden den kommer i kontakt med testmembranen.

Prøven kan være anbragt i prøvebægeret, medens dette er fastgjort til testkortet. I en anden udførelsesform anbringes prøven i testbægeret, og testbægeret fastgøres efterfølgende til testkortet, og prøven kan da flyde til prøveapplikationsområdet.

Det er ønskeligt at sikre, at et prøvevolumen omfattende en detekterbar mængde af en eventuelt tilstedeværende analysand er kommet i kontakt med testområdet 140, inden konjugatet bringes til at flyde til testområdet 140. En prøvevolumenindikator, såsom en indikatorfarve, der befinder sig nedstrøms i forhold til testområdet 140, og et kontrolområde 150 kan anvendes til at bestemme, om en tilstrækkelig mængde af prøven er kommet i kontakt med testområdet 140 og kontrolområdet 150. F.eks. kan en indikatorfarve, såsom methylenblåt, påføres absorbentpuden 160 eller absorbentpapiret 170 nedstrøms for testmembranen. Strømmen af væskeprøve langs absorbentpuden 160 eller absorbentpapiret bringer farven til at flyde, hvorved der skabes et visuelt signal, f.eks. en synlig blå farve. Signalet kan ses gennem et volumenindikatorvindue i et vindue i testkortet (ikke vist).

Ifølge nogle udførelsesformer, især de, hvor der skal påføres en større prøvevolumen (større end ca. 50 μΙ), er konjugatpuden 120 ikke i strømningsmæssig forbindelse med testmembranen 130. En sådan udførelsesform er vist på fig. 7. Adskillelse af konjugatpude 120 og 17 DK 2005 00290 U4 testmembran 130 forhindrer sammenblanding af konjugat og prøve, inden prøven kommer i kontakt med testområdet 140. Efter at prøven er kommet i kontakt med testområdet 140 og kontrolområdet 150, flyttes konjugatpuden 120, så den kommer i strømningsmæssig kontakt med testmembranen 130. Der påføres derefter buffer til bufferpuden 110 med henblik på at igangsætte testen. Der kan påføres buffer til bufferpuden 110 direkte gennem et buffervindue, ved at en ampul 300, hvor bufferen befinder sig, brydes, hvorved bufferen bringes til at strømme til bufferpuden 110. Ifølge én udførelsesform påføres bufferen på bufferpuden 110, inden konjugatpuden 120 bringes i strømningsmæssig forbindelse med membranen 130. Ifølge alternative udførelsesformer påføres bufferen direkte på konjugatpuden 120.

Den fremgangsmåde, hvormed konjugatpuden 120 bringes til at komme i strømningsmæssig forbindelse med membranen 130, er ikke begrænset i nogen henseender. Ifølge en udførelsesform forskyder brugeren en bevægelig del af huset, som konjugatpuden 120 og eventuelt bufferpuden 110 er fastgjort til, og bringer således konjugatpuden 120 i kontakt med membranen 130, Mekanismen til at bevæge konjugatpuden 120 i strømningsmæssig forbindelse med testmembranen 110 får også fortrinsvis bufferampullen 300 til at blive brudt. Mekanismen kan også bruges til at fjerne prøvebægeret 500 fra teststrimlen 110.

En tablet af tørremiddel 180 befinder sig fortrinsvis i strømningsmæssig forbindelse med det absorberende papir 170. Størrelsen af tørremiddeltabletten 180 vælges efter, at den skal kunne absorbere det totale prøvevolumen, som påføres testmembranen 130. Tørremiddeltabletten og et hvilket som helst andet absorberende materiale befinder sig nedenstrøms for prøveapplikationsområdet og letter prøvens strømning hen over testområdet.

Ifølge andre udførelsesformer erstattes prøvebægeret af en væge, der bringes i kontakt med en væskeprøve. Prøven strømmer ad vægen til 18 DK 2005 00290 U4 prøveapplikationsområdet af testmembranen og kommer i kontakt med testområdet og kontrolområdet. Ifølge en særlig udførelsesform anbringes vægen i urinstrømmen for at analysere urinen for forekomst af en analysand, såsom hCG. I disse udførelsesformer er konjugatpuden fortrinsvis ikke i strømningsmæssig forbindelse med testmembranen i den periode, hvor prøven påføres vægen. Efter at en tilstrækkelig mængde prøve er kommet i kontakt med testområdet, flyttes konjugatpuden, så den kommer i kontakt med testmembranen. Mekanismen til at flytte konjugatpuden kan også have den funktion at fjerne vægen. Buffer påføres efterfølgende bufferpuden gennem et buffervindue som beskrevet ovenfor. Alternativt kan bufferen befinde sig i en ampul inden i testkortet bringes til at strømme til bufferpuden og/eller konjugatpuden ved, at ampullen brydes eller på anden måde åbnes.

Teststrimlen befinder sig fortrinsvis inde i et hus, som vist på fig. 2 og som beskrevet ovenfor.

På fig. 5 vises et positivt testresultat, som angiver forekomst af den relevante analysand i en prøve. Membranens 130 testområde 140 er synligt som en linie på tværs af prøvevinduet 20. Derudover er kontrolområdet 150 synligt som en linie tværs over prøvevinduet 20, som indikerer, at konjugatet er strømmet fra konjugatkildeområdet 50 og hen over testområdet 140. I modsætning hertil vises et negativt resultat på fig. 6. Med et negativt resultat er det kun kontrolområdet 150, der er synligt som en linie tværs over prøvevinduet 20. Igen angiver kontrollen, at konjugat er strømmet fra konjugatkildeområdet 50 og hen over testområdet 140. Således betyder fravær af en linie i testområdet 140 fravær af bunden relevant analysand.

Anvendelse af teststrimlen

En prøve, som skal testes for nærvær af en særlig analysand, som er genstand for interesse, påføres prøveapplikationsområdet på 19 DK 2005 00290 U4 testmembranen, således at det kommer i kontakt med testområdet. Ifølge den foretrukne udførelsesform påføres prøven på membranen og bringes i kontakt med testområdet, inden konjugatet kommer i kontakt med testområdet. Således vil den relevante analysand, hvis den er til stede i prøven, få lejlighed til at binde sig til analysandbindemidlet i testområdet, inden konjugatbindingen.

Hvis teststrimlen befinder sig i et hus, påføres prøven fortrinsvis gennem et prøvevindue. I det tilfælde omfatter membranen et prøveapplikationsområde, som der er adgang til gennem prøvevinduet. Fortrinsvis omfatter prøveapplikationsområdet mindst ét positivt testområde. Mere fortrinsvis omfatter prøveapplikationsområdet et testområde og et kontrolområde. Alternativt kan prøven påføres ved hjælp af en væge eller et bæger, så den strømmer til membranens prøveapplikationsområde og kontakter test- og kontrolområderne.

Hvis teststrimlen ikke befinder sig i et hus, kan prøven påføres direkte på membranens prøveapplikationsområde, fortrinsvis omfattede testområdet og kontrolområdet. Alternativt kan prøven påføres på membranen på et prøveapplikationsområde opstrøms i forhold til testområdet og bringes til at strømme hen over membranen for at komme i kontakt med testområdet. Imidlertid bringes prøven fortrinsvis i kontakt med testområdet inden tilsætning af konjugatet til membranen.

Ifølge en udførelsesform opsamles prøven eller anbringes i et prøvebæger. Bægeret fastgøres til huset og gør det muligt for prøven at strømme til membranens prøveapplikationsområde og komme i kontakt med testområdet og kontrolområdet. Et prøvebæger anvendes fortrinsvis, hvis der skal anvendes et prøvevolumen på over ca. 10μΙ. Prøvebægeret kan eventuelt omfatte et filter, hvorigennem prøven passerer, inden den kommer i kontakt med membranen.

20 DK 2005 00290 U4

Ifølge en yderligere udførelsesform påføres prøven på en væge, som er i kontakt med membranen. Vægen tillader prøven at nå frem til membranens prøveapplikationsområde og komme i kontakt med test- og kontrolområderne. Vægen består fortrinsvis af glaspapir, polyester, cellulose eller andet materiale, som vil tillade prøven at migrere til membranen, der omfatter testområdet. Hvis testkortet befinder sig i et hus, kan vægen rage ud i forhold til huset og derved tillade adgang til vægen for påføring af prøven. Hvis for eksempel der skal detekteres forekomst af en særlig analysand i urin, f.eks. hCG, kan vægen anbringes i urinstrømmen af det individ, der skal testes. Ifølge en yderligere udførelsesform kan vægen bringes i kontakt med den prøve, der skal analyseres, f.eks. legemsvæsker, såsom spyt.

Den prøve, som skal testes, påføres fortrinsvis prøveapplikationsområdet af membranen på flydende form. Eksempler på prøver, som kan analyseres omfatter, men er ikke begrænset til, serum, plasma, fuldblod, spyt og urin. Hel- eller halvfaste prøver kan bringes i opløsning og påføres membranen eller ekstra heres inden applikation.

Ifølge andre udførelsesformer påføres der prøvebuffer, der fortrinsvis ikke indeholder konjugat, på membranen inden påføring af prøven. I nogle udførelsesformer omfatter prøvebufferen et blokeringsmiddel. Fortrinsvis påføres prøvebufferen på membranen i prøveapplikationsområdet. Fra ca. 1 til ca. 25 μΙ prøvebuffer påføres fortrinsvis membranen, mere fortrinsvis fra ca. 1 til ca. 10 μΙ, yderligere foretrukket ca. 1 til 5 μΙ. Ifølge en særlig udførelsesform påføres der 5 μΙ prøvebuffer til membranens prøveapplikationsområde, efterfulgt af 5 μΙ serum, plasma, fuldblod eller anden flydende prøve. Tilførsel af prøvebuffer inden påføring af vaskebufferen foretrækkes specielt, når der testes for HCV som beskrevet nedenfor, og når der anvendes viskøse prøver. Ved anvendelse af 21 DK 2005 00290 U4 prøvebuffer øges følsomheden af testen og viskøse prøver bringes til at strømme hurtigere.

Prøvebuffer omfatter fortrinsvis et buffermiddel og et konserveringsmiddel. Det kan eventuelt også omfatte en eller flere detergenter og/eller sukkerarter. Et hvilket som helst buffermiddel kan anvendes, fortrinsvis i en mængde der opretholder det ønskede pH af- prøvebufferen. Fortrinsvis ligger pH af prøvebufferen på fra ca. 7,2 til 7,6. For eksempel og uden begrænsning kan bufferen udvælges blandt gruppen bestående af HEPES, Tris- og phosphat-buffere. Ifølge en foretrukken udførelsesform omfatter prøvebufferen fra ca. 0,01 % til ca. 0,5 % HEPES, mere fortrinsvis fra ca. 0,02 til ca. 0,05 % HEPES. Ifølge en yderligere udførelsesform omfatter prøvebufferen fra ca. 0,01 % til ca. 0,5 % phosphat, mere fortrinsvis fra ca. 0,02 til ca. 0,05 % phosphat. En fagmand vil være i stand til at justere mængden af buffermiddel, så den ønskede pH opretholdes.

Prøvebufferen omfatter også fortrinsvis et konserveringsmiddel, såsom natriumazid eller Proclin. Ifølge en foretrukken udførelsesform omfatter prøvebufferen fra ca. 0,1 % til ca. 1,0 % natriumazid, mere fortrinsvis fra ca. 0,1 % til ca. 0,2 %, yderligere fortrinsvis ca. 0,2 %.

Alt efter arten af den prøve, som skal testes, påføres prøven eventuelt på membranen gennem et filter. Eksempler på prøvematerialer, der fortrinsvis filtreres, omfatter fuldblod, afføringsprøver, urin, levnedsmiddelekstrakter og smudsekstrakter. Ifølge en udførelsesform påføres fuldblod gennem et membranfilter. Filtret fjerner kontaminerende stoffer og tillader analysander, som f.eks. antistoffer, at passere, hvorved testes følsomhed øges. Filtret er fortrinsvis lukket inde i en holder, der kan fastgøres til testkortet eller teststrimlen, alt efter hvad der er nødvendigt. Hvis det fastgøres til et testkort, fastgøres filtret fortrinsvis direkte over prøvevinduet. Filtermediet vælges på basis af, hvilken type prøve, der skal filtreres. Et sådant valg ligger inden for 22 DK 2005 00290 U4 en fagmands kompetencer. For eksempel kan filtermaterialet til fuldblodsprøver være, men er ikke begrænset til Pall BTS-SP300®.

Som omtalt ovenfor er filtret fortrinsvis fastgjort til teststrimlen med en aftagelig filterholder, om end filtret til særlige anvendelser kunne være permanent fastgjort. Filterholderen er typisk en indretning, som snappes fast på-testkortets hus. Udformningen og typen af indretningen kan variere, men den fremstilles typisk af polystyren, polyethylen, polypropylen eller andet plastmateriale.

Testområdet er en del af membranen, der er dækket med et bindemiddel, fortrinsvis et protein, som er i stand til at binde sig specifikt til den relevante analysand. For eksempel kan det positive testområde belægges med antigen, som er specifikt for et relevant antigen. Ifølge særlige udførelsesformer omfatter testområdet bundet HIV-antistof eller hepatitisantistof, som beskrevet mere detaljeret i nedenstående eksempler. Når testområdet omfatter antigen, anvendes der fortrinsvis fra ca. 0,025 til ca. 0,4 pg antigen.

Ifølge andre udførelsesformer tmmobiliseres et antistof, som er specifikt for et relevant antigen, i testområdet. Antistoffet kan være et polyklonalt eller monoklonalt antistof. Når testområdet omfatter antistof, påføres der fortrinsvis fra ca. 0,1 til ca. 20 pg antistof, mere fortrinsvis fra ca. 0,2 til ca. 2 pg, yderligere foretrukket fra ca. 0,5 til ca. 1 pg. Ifølge en særlig udførelsesform omfatter testområdet et antistof over for hCG, fortrinsvis et monoklonalt antistof over for hCG.

Bindemidlet kan påføres membranen i et hvilket som helst ønsket mønster og det følger deraf, at det synlige resultat af en positiv test kan have en hvilken som helst facon. Ifølge en foretrukken udførelsesform er testområdet lineært og danner en linie, der strækker sig fra en side af membranen til den 23 DK 2005 00290 U4 anden, således at der fremkommer en lodret linie hen over prøvevinduet, hvis der opnås et positivt resultat, hvorved forekomsten af en analysand i prøven angives. Ifølge andre udførelsesformer er testområdet udformet som et symbol, såsom et

Det er muligt at teste for mere end én type analysand med en enkelt teststrimmel. I det tilfælde tilvejebringes yderligere positive testområder på testmembranen. For eksempel kan et andet positivt testområde omfatte antigen overfor en anden type antistof eller et antistof over for en anden type antigen. Bindemidlet ved et yderligere positivt testområde behøver ikke være af samme type som bindemidlet ved et første testområde. Således kan bindemidlet ved et første testområde være et antistof, medens et bindemiddel ved et andet testområde kan være et antigen. På denne måde kan en prøve analyseres for forekomst af mere end én type analysand.

Hvert yderligere positivt testområde kan have en anden facon i forhold til det første testområde for at gøre det nemt for brugeren at skelne mellem arten af de positive resultater. Alt efter hvilken type yderligere analysand, der skal testes for, kan det være nødvendigt med yderligere konjugater, der binder de forskellige analysander. Hvis de relevante analysander f.eks. er to forskellige antistoffer, kan der anvendes et enkelt konjugat omfattende protein A. Hvis en analysand imidlertid er et antistof og en anden analysand er et antigen, vil det være nødvendigt med to forskellige konjugater: et der specifikt binder til antistoffet, og et der specifikt binder antigenet.

Kontrolområdet omfatter fortrinsvis et kontrolbindemiddel, der vil bindes til konjugatet. Ved at anbringe kontrolområdet nedstrøms i forhold til det positive testområde, vil en reaktion ved kontrolområdet angive, at konjugatet migrerede forbi testområdet, hvor det var til rådighed og kunne reagere, hvis den relevante analysand var til stede. Hvis konjugatet udformes til at genkende et antistof, omfatter kontrolområdet fortrinsvis et immunoglobulin,

H

24 DK 2005 00290 U4 såsom kanin IgG. Hvis konjugatet omfatter et antistof, omfatter kontrolområdet fortrinsvis et antistofbindemiddel, såsom protein A. Kontrolområdet kan være af en hvilken som helst ønsket form, såsom en linie eller et symbol, f.eks.

5

Ifølge andre udførelsesformer omfatter kontrolområdet et kontrolbindemiddel, som binder til et kontrolkonjugat. For eksempel kan kontrolområdet omfatte β-gal og kontrolkonjugatet kan omfatte β-galactosidase konjugeret til guld.

10 Bindemidlet og kontrolbindemidlet kan påføres testmembranen ved en hvilken som helst inden for fagområdet kendt fremgangsmåde. De påføres typisk ved at bringe testmembranen i kontakt med bindemidlet, såsom ved sprøjtning eller kontakt med testmembranen under anvendelse af et pumpedoseringssystem. Sådanne systemer er kommercielt tilgængelige 15 f.eks. fra Kinematic Automation.

Når prøven er i kontakt med kontaktområdet vil den relevante analysand, hvis den er til stede i prøven, binde sig til bindemidlet på testområdet. Overskydende ikke-bundet analysand vaskes bort fra testområdet ved 20 bufferens migration langs membranen som beskrevet nedenfor.

Efter at prøven er påført membranen, påføres vaskebufferen på testmembranen. Fortrinsvis fra ca. 1 til ca. 20, mere fortrinsvis fra ca. 1 til ca 5 dråber vaskebuffer påføres indledningsvist. Yderligere vaskebuffer kan 25 efterfølgende påføres, hvis det er nødvendigt for at klare reaktionen.

Vaskebufferen bærer fortrinsvis konjugatet til testområdet. Vaskebuffer kan påføres testmembranen direkte. Imidlertid vil vaskebuffer ifølge den foretrukne udførelsesform blive påført en opstrøms bufferpude, hvorfra den 30 strømmer til testmembranen. Bufferpuden kan fremstilles af et hvilket som helst materiale, der kan indeholde bufferen, og tillader den at strømme 25 DK 2005 00290 U4 gennem til membranen ved ønsket hastighed. For eksempel kan bufferpuden udgøres af et eller flere materialer udvalgt blandt gruppen bestående af glaspapir, cellulose og polyester. Ifølge en foretrukken udførelsesform er bufferpuden et Whatman GF/DVA glaspapir. Fagmanden vil være i stand til at vælge et hensigtsmæssigt materiale til bufferpuden på basis af faktorer, såsom udformning af det hus, som teststrimlen med lateral strømning befinder sig i, den ønskede strømningshastighed, samt den mængde buffer, som bufferpuden skal kunne indeholde.

Vaskebufferen kan påføres bufferpuden direkte, f.eks. med en pipette eller dråbetæller. Imidlertid befinder den hensigtsmæssige mængde vaskebuffer sig ifølge en anden udførelsesform i en beholder hosliggende bufferpuden. For eksempel kan vaskebufferen befinde sig i en glas- eller plastampul. Efter tilførsel af testprøven, brydes den beholder, der indeholder bufferen, eller den åbnes på anden måde, hvorved vaskebufferen kan komme i kontakt med bufferpuden.

Sammensætningen af vaskebufferen kan varieres, så den øger testens følsomhed. Fortrinsvis omfatter vaskebufferen et buffermiddel, et konserveringsmiddel, en detergent, sukker samt andre materialer, der bevirker at baggrunds- og/eller uspecifik binding reduceres.

Et hvilket som helst buffermiddel kan anvendes, når blot det opretholder den ønskede pH af bufferen, fortrinsvis fra ca. 7,2 til ca. 7,6. For eksempel og ikke-begrænsende kan bufferen udvælges blandt gruppen bestående af HEPES, Tris og phosphatbuffer. Ifølge en foretrukken udførelsesform omfatter vaskebufferen fra ca. 0,01 % til ca. 0,5 % HEPES, mere fortrinsvis fra ca. 0,02 til ca. 0,2 % HEPES, og yderligere foretrukket fra ca. 0,02 til ca. 0,05 % HEPES. Ifølge en særligt foretrukken udførelsesform omfatter vaskebufferen 0,025 % HEPES, 26 DK 2005 00290 U4

Vaskebufferen kan også omfatte et konserveringsmiddel, såsom natriumazid eller Proclin. Ifølge en foretrukken udførelsesform omfatter vaskebufferen fra ca. 0,1 til ca. 0,5 % natriumazid, mere fortrinsvis ca. 0,1 til ca. 0,2 %.

Natriumchlorid eller et sammenligneligt salt er fortrinsvis til stede i en koncentration på ca. 1 %, mere fortrinsvis ca. 0,85 %. EDTA kan være til stede fortrinsvis i en koncentration på ca. 0,1 %. En sukkerart, såsom mannitol, kan også være til stede. Foretrukne mannitolkoncentrationer ligger på fra ca. 1 % til ca. 5 %. Ifølge en foretrukken udførelsesform ligger mannitolkoncentrationen på ca. 1 %.

Fortrinsvis indeholder vaskebufferen også et blokeringsmiddel. Blokeringsmidlet kan være et hvilket som helst inden for fagområdet kendt blokeringsmiddel. Fortrinsvis er blokeringsmidlet et protein, såsom casein eller bovin serum albumin (BSA). Blokeringsmidlet er fortrinsvis til stede i vaskebufferen i en koncentration på fra ca. 0,01 til ca. 0,5 %, mere fortrinsvis fra ca. 0,02 til ca. 0,2 %. Ifølge en særligt foretrukken udførelsesform er casein til stede i vaskebufferen i en koncentration på ca. 0,1 %.

Vaskebufferen omfatter typisk også en detergent, fortrinsvis en ikke-ionisk detergent såsom Triton X100™ eller Tween. Fortrinsvis er detergenten til stede i en koncentration på ca. 0,05 til ca. 1 %, mere fortrinsvis fra ca. 0,1 til ca. 0,5 %. Ifølge en særligt foretrukken udførelsesform omfattede bufferen Triton X100 i en koncentration på ca. 0,1 %.

pH af vaskebufferen justeredes til mellem ca. 7 og 8, mere fortrinsvis til mellem ca. 7,2 og 7,6. Ifølge en særligt foretrukken udførelsesform ligger pH afvaskebufferen på ca. 7,2.

Teststrimien omfatter også et konjugatkildeområde. Ifølge en foretrukken udførelsesform omfatter teststrimlen en konjugatpude, hvorpå konjugat er 27 DK 2005 00290 U4 tørret som beskrevet nedenfor. Vaskebuffer strømmer fra bufferpuden til konjugatpuden, som den er i kontakt med. Konjugatpuden er til gengæld i kontakt med testmembranen. Ifølge nogle udførelsesformer bringes konjugatpuden imidlertid i kontakt med membranen efter tilførsel af prøven. Især når der anvendes et stort prøvevolumen, bringes konjugatpuden fortrinsvis i kontakt med membranen, efter at prøven er kommet i kontakt med testområdet. ·.

Tilstrækkeligt med vaskebuffer påføres bufferpuden for at opløse konjugatet, som er diffusionsbundet til konjugatpuden, og bringe konjugatet til at strømme langs testmembranen hen til testlinien og kontrollinien. Den mængde buffer, der skal anvendes, kan bestemmes af den almindelige fagmand på basis af visse faktorer såsom mængden af konjugat bundet på konjugatpuden, membranens størrelse og mængden af prøve, der skal analyseres. Fortrinsvis påføres der fra 1 til 10 dråber bufferopløsning til bufferpuden, når bufferpuden er ca. 2 cm x 5 mm, mere fortrinsvis fra 2 til 5 dråber, yderligere foretrukket 3 til 4 dråber.

Ifølge alternative udførelsesformer tilvejebringes der ikke nogen konjugatpude. Ifølge én alternativ udførelsesform er konjugatpuden tilstede i vaskebufferen i en koncentration, der spænder fra ca. 0,2 OD til ca. 1,0 OD/ml. Den vaskebuffer, der indeholder konjugatet, kan påføres bufferpuden. Konjugatet strømmer dermed med vaskebufferen fra bufferpuden til membranen, hvor det kommer i kontakt med testområdet og kontrolområdet. Ifølge en anden udførelsesform, vil vaskebuffer indeholdende konjugat blive påført direkte på testmembranen. Vaskebuffer indeholdende konjugatet kan tilvejebringes i en ampul og bringes til at strømme til membranen ved at bryde eller på anden måde åbne ampullen. Vaskebufferen indeholdende konjugatet påføres fortrinsvis membranen i et punkt opstrøms for testområdet. Imidlertid vil vaskebufferen omfattende konjugatet i nogle 28 DK 2005 00290 U4 udførelsesformer blive påført direkte på testområdet, efter at prøven er blevet påført.

Ifølge en yderligere udførelsesform diffusionsbindes konjugatet, såsom ved tørring, direkte på membranen, der omfatter testområdet og kontrolområdet. Vaskebuffer kan derefter påføres på en bufferpude, som er i kontakt med membranen eller direkte på testmembranen. Vaskebufferen opløser det tørrede konjugat og bærer det ad testmembranen til testområdet og kontrolområdet.

Vaskebufferen indeholdende konjugat kontakter fortrinsvis testområdet, efter at prøven er blevet påført, en enhver analysand, der måtte være tilstede i prøven, har haft lejlighed til at binde det immobiliserede bindemiddel. Således påføres vaskebufferen fortrinsvis på teststrimlen, efter at prøven er påført testområdet.

Det ovenfor i detaljer beskrevne konjugat forberedes til brug i testen ved fortynding i konjugatbuffer. Fortrinsvis forberedes arbejdskonjugat, ved at konjugatet fortyndes i konjugatbufferen til ca. 3 OD/mL. Sammensætningen af konjugatbufferen kan varieres alt efter konjugatets art. Eksempler på konjugatbuffer omfatter en buffer, såsom HEPES, Tris, phosphat eller anden lignende buffer, som kendes inden for fagområdet. En foretrukken konjugatbuffer omfatter mellem ca. 0,02 og 0,2 % HEPES buffer, mere fortrinsvis ca. 0,025 % HEPES. Konjugatbufferen kan også omfatte et salt, fortrinsvis natriumchlorid. Natriumchlorid tilsættes indtil opnåelse af en koncentration på ca. 0,1 %, mere fortrinsvis 0,85 %. Der kan også tilsættes et konserveringsmiddel til konjugatbufferen, såsom et natriumazid eller Proclin, i en koncentration på mellem ca. 0,1 og 0,2 %.

Konjugatbufferen omfatter også fortrinsvis EDTA (ca. 0,1 %), casein i en koncentration på mellem ca. 0,02 og ca. 0,2 %, mere fortrinsvis ca. 0,15 %, 29 DK 2005 00290 U4 bovinserumalbumin (BSA) i en koncentration på mellem 0,5 % og ca. 3 %, mere fortrinsvis ca. 1 %, mannitol i en koncentration på mellem ca. 1 % til ca. 5 %, mere fortrinsvis ca. 1 %, saccharose i en koncentration på mellem ca. 1 % og ca. 5 %, mere fortrinsvis ca. 1 %. Triton X100 kan indgå i bufferen, fortrinsvis i en koncentration på mellem ca. 0,1 og ca. 0,5 %, mere fortrinsvis ca. 0,1 %.

Konjugatbufferen justeres fortrinsvis til en pH på mellem ca. 7,2 og ca. 7,6, mere fortrinsvis til en pH på ca. 7,2.

Ifølge en udførelsesform bliver arbejdskonjugatet, efter tilberedning af arbejdskonjugatet ved fortynding af konjugatet i konjugatbufferen, tørret på en konjugatpude, f.eks. ved vakuumtørring. Konjugatpuden udskæres fortrinsvis i en hensigtsmæssig størrelse strimler til anvendelse i forbindelse med teststrimlen. I den nedenstående eksempler bliver konjugatpuden opskåret i strimler på 5 mm x 5 mm.

Konjugatpuden omfatter fortrinsvis glasfibre, glaspapir, polyester eller cellulosepapir. Disse materialer er velkendte inden for fagområdet og er f.eks. tilgælgelige fra Millipore, S&S og Whatman. Ifølge en foretrukken udførelsesform er konjugatpuden en kommercielt tilgængelig glasfiberkonjugatpude GFCP203000 (Millipore).

Som beskrevet ovenfor opløser vaskebufferen det tørrede konjugat og bringer det til at strømme fra konjugatpuden og langs testmembranen forbi testområdet og kontrolområdet.

Testmembranen kan være et hvilket som helst materiale, hvortil der kan bindes et protein eller andet bindemiddel, enten co-valent eller ikke co-valent, og konjugatet kan strømme med vaskebufferen langs det. Testmembranen er fortrinsvis en nitrocellulosemembran. Andre membraner med højere eller 30 DK 2005 00290 U4 lavere strømningshastigheder kan vælges til anvendelse som testmembran af fagmanden på basis af faktorer som f.eks. den ønskede følsomhed og testtider og omkostninger.

Når konjugatet strømmer med vaskebufferen hen over membranen, kommer det i kontakt med testområdet. Hvis den relevante analysand er tilstede og bindes til bindemidlet på testområdet,1 vil konjugat i bufferen binde til analysanden.

Vaskebufferen omfattende konjugat, som ikke blev bundet ved testområdet, vil fortsætte med at strømme hen over membranen til kontrolområdet. Konjugat vil binde sig til kontrolbindemidlet. Vaskebufferen vil også bære ubundet prøve fra testområdet og kontrolområdet.

Vaskebuffer omfattende ikke-bundet konjugat og ikke-bundet prøve vil da strømme til en absorbentpude, som er i kontakt med den nedstrøms ende af membranen. Absorbentpuden kan fremstilles af et hvilket som helst absorbentmateriale, der kendes inden for fagområdet. Fortrinsvis er absorbentpuden et absorbentpapir, såsom S&S 900™ papir. Andre typer absorbentpapir er velkendte inden for fagområdet og kan vælges af fagmanden alt efter den endelige udformning af teststrimien.

Vaskebufferen kan fortsætte med at strømme gennem absorbentpuden og ind i et absorbentpapir, som er i kontakt med absorbentpuden. Absorbentpapiret anvendes fortrinsvis, hvis der skal absorberes en stor mængde buffer.

En molekylsi-tørremiddeltablet kan også inkorporeres i teststrimlen. Ifølge en udførelsesform strømmer bufferen med ubundet konjugat fra absorbentpapiret ind i tabletten med tørremidlet, som papiret er i kontakt 31 DK 2005 00290 U4 med. Tørremiddeltabletten fastholder det absorberede fluidum og forhindrer tilbagestrømning i teststrimlen.

Tørremiddeltabletten kan også holde teststrimlen tør indtil brug. En foretrukken tørrem iddelta blet er en 0,395g Tri-Sorb-tablet, som kan fås fra Sud-Chemie (produktnr. 43-01).

Fagmanden kan vælge hensigtsmæssig størrelse og hensigtsmæssigt materiale til absorbentpuden, absorbentpapiret og tørremiddeltabletten alt efter den endelige udformning af teststrimlen, herunder det totale volumen af prøve og buffer, der skal bruges.

Hele teststrimlen befinder sig fortrinsvis inde i et hus, f.eks. et plasthus. Som beskrevet ovenfor omfatter huset ifølge en udførelsesform et prøvevindue, hvor igennem prøven kan påføres membranen, der indeholder test- og kontrolområderne. Huset kan også omfatte et buffervindue, hvor igennem buffer kan påføres bufferpuden eller membranen. Huset kan også omfatte et volumen-indikatorvindue, hvor igennem et signal kan aflæses, som angiver, at en tilstrækkelig mængde af prøven er kommet i kontakt med testområdet. En tilstrækkelig mængde af prøven er en prøvemængde, der vurderes at indeholde nok af den relevante analysand til, hvis den er til stede, at der vil frembringes et synligt signal ved testområdet efter færdiggørelse af testen, hvis analysanden er til stede i prøven. Hvis en test f.eks. skal kunne detektere hCG i urin vil et tilstrækkeligt prøvevolumen være ca. 200 μΙ urin.

Testresultaterne aflæses fortrinsvis mellem ca. 1 og 5 minutter efter tilsætning af vaskebuffer til teststrimlen. Ifølge en udførelsesform aflæses resultaterne fra ca. 2 til 4 minutter efter tilsætning af vaskebuffer, mere fortrinsvis fra ca. 3 til 4 minutter efter tilsætning af vaskebuffer. Ifølge en særligt foretrukken udførelsesform aflæses resultaterne 1 minut efter tilsætning af vaskebuffer. Som det vises på fig. 7, vil testlinien (300) blive 32 DK 2005 00290 U4 synlig som angivelse af et positivt resultat. En synlig kontrolstribe (400) angiver, at testen fungerede korrekt. Som vist på fig. 6 angives et negativt resultat ved, at kontrollinien (400) er synlig, medens testlinien ikke er.

Eksempel 1: Opbygnina af et HIV-testkort

Der fremstilledes en test med lateral strømning og hurtig synlig visning til detektering af antistoffer over for human immundefekt virus. Teststrimlerne opbyggedes i det væsentlige som vist på fig. 1.

Teststrimlerne omfattede en bagbeklædning af plast (6 cm x 5 cm) med klæbemiddel på begge sider. Plastbagbeklædningen var mellem ca. 2 μιτι og ca. 20 μιτι i tykkelse.

En testlinie og en kontrollinie fremstilledes på nitrocellulosemembran (Millipore HF09004) ved sprøjtning med et pumpedoseringssystem (Kinematic Automation). Testlinien omfattede en lodret linie af HIV-antigen. Hiv-antigenet var en blanding af HIV-1 rekombinant glycoprotein antigener (GP120 (ca. 0,15 mg/ml) og P24 (ca. 0,1 mg/ml)), og HIV-2 rekombinant glyco-protein antigen (GP36 (ca. 0,5 mg/ml) i en koncentration på fra ca. 0,5 til ca. 1,0 mg/ml fremstillet i PBS omfattende 5 % trehalose. En total mængde på fra ca. 0,1 til ca. 0,5 μg antigen påførtes testområdet i lodret linie.

Andre teststrimler fremstilledes under anvendelse af et enkelt HIV-1 eller HIV-2 antigen på testlinien.

Det gælder for samtlige teststrimler, at kontrolområdet omfattede en lodret linie af kontrolantistof. Kontrolantistoffet var kanin IgG fortyndet til 1 mg/mL i PBS omfattende 5 % Trehalose. En total mænde kontrolantigen, som er tilstrækkelig til at frembringe en synlig kontrollinie efter konjugatbinding påførtes kontrolområdet.

33 DK 2005 00290 U4

For hver teststrimmel blev passende nitrocellulosemembran afskåret til en størrelse på ca. 2,5 cm x 5 mm og fastgjort til plastbagbeklædningen.

Protein A fastgjort til kolloidt guld, der forhandles af Sigma, anvendtes som konjugat til testen. Konjugatet fortyndedes i konjugatbuffer til en koncentration på ca. 3 OD/ml. Konjugatbufferen omfattede 0,25 % HEPES; 0,85 % natriumchlorid, 0,1 % natriumazid, 0,1 % EDTA, 0,1 % casein, 1 % bovin serumalbumin, 1 % mannitol, 5 % saccharose samt 0,1 % Triton X100. Bufferen justeredes til en pH på 7,2.

Konjugatet påførtes på en glasfiberkonjugatpude (Millipore GFCP203000), der tørredes og blev opskåret i 5 mm x 5 mm strimler. En strimmel blev fastgjort til enden af nitrocellulosemembranen nærmest ved testområdet af hver teststrimmel.

En Whatman GF/DVA glaspapirbufferpude (2 cm x 5 mm) fastgjordes derefter til den tørrede konjugatpude af hver teststrimmel med henblik på at tjene som bufferpude.

En absorbentpude (2 cm x 5 mm) fremstillet af S&S 900 papir fastgjordes til enden af nitrocellulosemembranen nærmest kontrolområdet og et yderligere absorbentpapir (2,5 cm x 5 mm, S&S 470) fastgjordes ti) absorbentpuden. Absorbentpapiret blev til gengæld bragt i kontakt med en 0,395 g tørremiddeltablet (Tri-Sorb, Sud-Chemie).

Teststrimlen anbragtes i et plasthus til frembringelse af et testkort lignende det på fig. 1-6 viste. Plasthuset (10) omfattede et testvindue (20), som eksponerede testområdet (140) og kontrolområdet (150), såvel som et buffervindue (30) direkte oven over en bufferpude. Plasthuset forsynedes også med en markering til angivelse af testliniens og kontrolliniens placering.

34 DK 2005 00290 U4

Testkortene indpakkedes individuelt i folie.

Eksempel 2: Test for HIV

Serum eller plasma fremstilledes fra en fuldblodsprøve opnået fra en patient, der skal testes for HIV, under anvendelse af korrekte venepunkturteknikker. Prøverne opbevaredes ved mellem 2°C og 8°C og anvendtes inden for 24 timer eller blev nedfrosset ved -20°C til anvendelse inden for to uger. Frosne prøver optøedes inden brug.

Et HIV testkort som beskrevet i Eksempel 1, omfattende en blanding af HIV-1 og HIV-2 antigener på kontrolområdet blev udtaget af foliepakningen.

Ca. 5 μ! prøvebuffer omfattende 0,025 % HEPES og 0,2 % natriumazid påførtes membranen gennem midten af testkortets vindue.

En prøvepipette indeholdende det serum eller den plasma, der skal undersøges, holdes i lodret stilling over testvinduet på testkortet og 5 μΙ prøve anbringes på membranen midt i vinduet.

Fire dråber af vaskebufferopløsning (0,025 % HEPES, 0,85 % natriumchlorid, 0,1 % EDTA, 1 % mannitol, 0,1 % casein, 1 % Triton X100, pH 7,2) tilsattes til bufferpuden. Efter tre minutter tilsattes der yderligere én dråbe buffer til bufferpuden, hvis reaktionen ikke var blevet klar.

Resultaterne af testen aflæstes fra 1 til 5 minutter efter tilsætning af den første buffer.

Som det vil fremgå af fig. 5 omfatter et positivt resultat to synlige linier hen over prøvevinduet: en testlinie (140) og en kontrollinie (150), Et positivt er 35 DK 2005 00290 U4 opnået, hvis der er to linier synlige, selv hvis en af linierne er mørkere end den anden. Et negativt resultat angives ved, at der er en enkelt kontrollinie synlig hen over vinduet, som det vil fremgå af fig. 6.

Eksempel 3: HCV testkort

En teststrimmel til diagnosticering af hepatitis C virus fremstilledes på samme måde som i Eksempel 1. Dog blev der påsprøjtet en hepatitis C antigenblanding omfattende kerne (0,3 mm/ml), NS3 (0,4 mg/ml), og NS4 (0,1 mg/ml) i en testlinie på membranen til frembringelse af testområdet i stedet for HIV antigen. En total på ca. 0,4 pg HCV antigenblanding påførtes testlinien. Kanin IgG fortyndet til 1 mg/ml påsprøjtedes i en kontrollinie.

Eksempel 4: Test for HCV

Et HCV testkort som beskrevet i eksempel 3 omfattende et HCV antigen på testområdet blev taget ud af sin folieindpakning,

Ca. 5 μΙ prøvebuffer omfattende phosphatbuffer og 0,2 % natriumazid påførtes membranen gennem midten af testkortets vindue.

Serum eller plasma frembragtes ud fra en fuldblodsprøve. En prøvepipette indeholdende serum eller plasma, der skal testes, holdes i lodret stilling over testvinduet på testkortet, og 5 μΙ prøve anbragtes på membranen i vinduets midte.

Fire dråber af vaskebufferopløsning (0,025 % phosphat, 0,85 % natriumchlorid, 0,1 % EDTA, 1 % mannitol, 0,1 % casein, 1 % Triton X100, pH 7,2) tilsattes bufferpuden. Efter 3 minutter tilsattes yderligere 2 dråber buffer til bufferpuden, hvis reaktionen ikke var klaret.

36 DK 2005 00290 U4

Resultatet af testen aflæstes 1 til 5 minutter efter tilsætning af den første buffer.

Som vist på fig. 5 omfatter et positivt resultat to synlige linier tværs over prøvevinduet: en testlinie (140) og en kontrollinie (150). Et positivt resultat er opnået, hvis der er to linier synligt, selv hvis den ene linie er mørkere end den anden. Et negativt resultat vises med en enkelt kontrollinie synlig tværs over prøvevinduet som vist på fig. 6.

Eksempel 5: Graviditetstest

Der fremstilledes en hurtig visuel graviditetstest med lateral strømning. Indretningen af teststrimleme er i alt væsentligt som vist på fig. 7.

Hver teststrimmel omfatter en bagbeklædning af plast (6 cm x 5 mm) med klæbemiddel på begge sider. Plastbagbeklædningen er mellem ca. 2 pm og ca. 20 pm i tykkelse.

En testlinie og en kontrollinie fremstilledes på en nitrocellulosemembran (Millipore HF09004) ved sprøjtning med et pumpedoseringssystem (Kinematic Automation). Testlinien omfatter en lodret linie af et antistof over for human chorion gonadotropin (hCG), fortrinsvist et monoklonait antistof. Antistoffer over for hCG er udbredt kommercielt tilgængelige, f.eks. fra Research Diagnostics Inc. (RDI-CBL74; New Jersey, USA), Charles River Labs eller andre kilder eller vil kunne fremstilles i overensstemmelse med standardprocedurer. En total mængde på fra ca. 0,2 til ca. 1 pg antistof påføres testområdet i lodret linie.

Kontrollinien omfatter en lodret linie af Protein A. En total mængde protein A, som er tilstrækkelig til at frembringe et synligt signal efter konjugatbinding, påføres kontrollinien, typisk ca. 0,25 pg.

37 DK 2005 00290 U4

For hver teststrimmel opskæres den hensigtsmæssige nitrocellulosemembran til en størrelse på ca. 2,5 cm x 5 mm og fastgøres på plastbagbeklædningen.

5

Et andet antistof over for hCG fastgøres til kolloidt guld til testens konjugat. Kolloidt guld-hCG-antistofkonjugater er kommercielt tilgængelige f.eks. fra Research Diagnostics Inc. Alternativt kan der fremstilles hCG-antistofkonjugater ved velkendte fremgangsmåder (se f.eks. US patent nr. 10 6.485.982, der medtages heri ved nærværende henvisning). Konjugatet fortyndes i konjugatbuffer til en koncentration på ca. 3 OD/ml. Konjugatbufferen omfatter fortrinsvis 0,25 % HEPES, 0,85 % natriumchlorid, 0,1 % natriumazid, 0,1 % EDTA, 0,1 % casein, 1 % bovin serumalbumin, 1 % mannitol, 5 % saccharose og 0,1 % Triton X100. Bufferen justeres til en pH 15 på 7,2.

Konjugatet påføres en glasfiberkonjugatpude (Millipore GFCP203000), der tørredes og blev opskåret i strimler på 5 mm x 5 mm.

20 En Whatman GF/DVA glasfiberbufferpude (2 cm x 5 mm) fastgjordes til den tørrede konjugatpude på hver teststrimmel som bufferpude.

An absorbentpude (2 cm x 5 cm) fremstillet af S&S papir fastgjordes til enden af nitrocellulosemembranen nærmest kontrolområdet og et yderligere 25 absorbentpapir (2,5 cm x 5 mm; S&S 470) fastgjordes til absorbentpuden. Absorbentpapiret kommer til gengæld i kontakt med en tørremiddeltablet (f.eks. Tri-Sorb, Sud-Chemie), som er i stand til at absorbere en væsentlig mængde af prøvevolumenet og dermed trække prøve og analysand hen over testområdet.

30 38 DK 2005 00290 U4

Methylenblåt eller anden indikator aflejres på enten absorbentpuden eller absorbentpapiret nedstrøms for testområdet. Bevægelsen af denne volumenindikator er et signal om, at en tilstrækkelig mængde prøve er kommet i kontakt med testområdet, til at testen bliver nøjagtig.

Teststrimlen anbringes i et plasthus med henblik på at frembringe et testkort. Plasthuset omfatter et testvindue oven over testområdet og kontrolområdet for at muliggøre visualisering af testresultaterne. Huset omfatter også et volumenindikatorvindue, hvor igennem man kan observere volumenindikatorens bevægelse.

Ved nogle testkort fastgøres der et prøvebæger over testvinduet. Prøvebægeret omfatter en beholder, hvori prøven skal opbevares og omfattende et udløb, så prøven kan strømme hen til prøveapplikationsområdet på testmembranen gennem prøvevinduet.

Prøvebægeret kan også omfatte et filter i udløbet. Efter tilsætning af prøve til membranen, fjernes bægeret, så resultatet af testen kan aflæses.

Ved andre testkort er der tilvejebragt en væge, der udrager fra enden eller siden af huset. Vægen tilvejebringer en bane, som prøven kan strømme ad hen til prøveapplikationsområdet og testområdet.

Huset har også en mekanisme, der tillader konjugatpuden at blive bevæget således, at den kommer i strømningsforbindelse med membranen.

Ved nogle testkort befinder der sig også en ampul indeholdende vaskebuffer i huset opstrøms for konjugatpuden. Ved andre testkort tilsættes buffer til bufferpuden gennem et buffervindue.

Aktivering den mekanisme, der bevæger konjugatpuden, så den kommer i kontakt med testmembranen, bryder ampullen, hvorved buffer bliver i stand til 39 DK 2005 00290 U4 at strømme til konjugatpuden. Fortrinsvis kommer ca. 5 dråber vaskebuffer i kontakt med konjugatpuden. Aktivering af mekanismen fjerner også prøvebægeret eller vægen fra huset.

5 Plasthuset forsynes med markeringer for at angive, hvor testlinien og kontrollinien befinder sig i prøvevinduet.

Eksempel 6: Anvendelse af qraviditetstest med prøvebæoer 10 Hurtige, visuelle graviditetstests med lateral strømning omfattende et prøvebæger fremstilledes som beskrevet i eksempel 5.

Urin fra individet opsamles og ca. 500 μΙ tilsættes et prøvebæger, der er fastgjort til testkortet over prøvevinduet. Når der iagttages en blå farve i 15 volumenindikatorvinduet, aktiveres mekanismen, hvorved konjugatpuden bringes i strømningsmæssig forbindelse med membranen. Herved brydes ampullen, der indeholder buffer, og testen begynder. Prøvebægeret fjernes og resultatet af testen kan aflæses i prøvevinduet fra 1 til 5 minuttersenere.

20 Som det vil fremgå af fig. 5 omfatter et positivt resultat to synlige linier tværs over prøvevinduet: en testlinie 140 og en kontrollinie 150. Et positivt resultat er opnået, hvis der er to linier synlige, selvom én af linierne er mørkere end den anden. Et negativt resultat angives ved, at der er en enkelt kontrollinie 150 synlig tværs over prøvevinduet, som vist på fig. 6.

25

Eksempel 6: Anvendelse af qraviditetstest med væge

Hurtige, visuelle graviditetstester med lateral strømning omfattende en væge fremstilledes som beskrevet i eksempel 5.

30 40 DK 2005 00290 U4

Individet anbringer vægen i sin urinstrøm. Når der kan ses en blå farve i volumenindikatorvinduet, er en tilstrækkelig mængde prøvevolumen kommet i kontakt med testområdet.

En mekanisme på huset aktiveres, hvorved konjugatpuden bringes i strømningsmæssig forbindelse med membranen. Herved brydes også den ampul, der indeholder buffer, inde i huset, og testen igangsættes ved at buffer bringes til at strømme til konjugatpuden. Vægen fjernes og prøveresultaterne kan aflæses i prøvevinduet mellem 1 og 5 minutter senere.

Som vist på fig. 5 omfatter et positivt resultat to synlige linier tværs over prøvevinduet: en testlinie 140 og en kontrollinie 150. Et positivt resultat er opnået, hvis der er to linier synlige, selv hvis en af linierne er mørkere end den anden. Et negativt resultat angives med en enkelt kontrollinie tværs over prøvevinduet, som vist på fig. 6.

Om end opfindelsen er beskrevet under henvisning til givne, fortrukne udførlesesformer, vil det forstås af fagmanden, at der kan udføres diverse ændringer, og at ækvivalenter kan erstatte elementer deraf uden at afvige fra omfanget af opfindelsen. Dertil kommer, at der kan udføres mange modificeringer for at tilpasse det heri beskrevne til en specifik situation, uden at afvige fra materien i opfindelsen. Det er følgelig hensigten, at opfindelsen ikke skal begrænses til nogen specifik beskrevet udførelsesform, men at opfindelsen indbefatter samtlige udførelsesformer, som falder inden for omfanget af omstående krav.

Claims (36)

41 41DK 2005 00290 U4 Bruasmodelkrav

1. Diagnostisk teststrimmel til detektering af en relevant analysand i en væskeprøve, hvilken teststrimmel omfatter: - et konjugatkildeområde omfattende et konjugat udformet til at binde den relevante analysand; - et prøveapplikationsområde, der befinder sig nedstrøms for konjugatkildeområdet og er udformet til at modtage væskeprøven; og - et testområde, der befinder sig nedstrøms for konjugatkildeområdet og omfatter immobiliseret bindemiddel, der er specifikt for den pågældende analysand.

2. Teststrimmel ifølge krav 1, hvor prøveapplikationsområdet omfatter testområdet.

3. Teststrimmel ifølge krav 1, hvor den relevante analysand er et antistof.

4. Teststrimmel ifølge krav 3, hvor den relevante analysand er et antistof over for human immundefekt virus (HIV).

5. Teststrimmel ifølge krav 3, hvor den relevante analysand er et antistof over for hepatitis C virus (HCV).

6. Teststrimmel ifølge krav 1, hvor den relevante analysand er et antigen.

7. Teststrimmel ifølge krav 6, hvor den relevante analysand er human chorion gonadotropin (hCG).

8. Teststrimmel ifølge krav 1, hvor konjugatkildeområdet omfatter tørret konjugat. 42 DK 2005 00290 U4

9. Teststrimmel ifølge krav 8, hvor konjugatkildeområdet omfatter en konjugatpude, der omfatter tørret konjugat og er i strømningsmæssig forbindelse med teststrimlen.

10. Teststrimmel ifølge krav 8, hvor konjugatkildeområdet er en del af teststrimlen.

11. Teststrimmel ifølge krav 1, hvor konjugatkildeområdet bringes til at strømme til testområdet ved at konjugatkildeområdet bringes i kontakt med vaske buffer.

12. Teststrimmel ifølge krav 11, hvor vaskebufferen omfatter et blokeringsmiddelprotein og en ikke-ionisk detergent.

13. Teststrimmel ifølge krav 12, hvor vaskebufferen omfatter 0,1 % casein og 1 % Triton X100.

14. Teststrimmel ifølge krav 1, hvor konjugatet omfatter en bindingskomponent og en label.

15. Teststrimmel ifølge krav 14, hvor bindingskomponenten er protein A.

16. Teststrimmel ifølge krav 14, hvor labelen udvælges blandt gruppen bestående af kolloidt guld, koiloidt sølv, kolloidt sort og farvede latexpartikler.

17. Teststrimlen ifølge krav 16, hvor labelen er kolloidt guld.

18. Teststrimmel ifølge krav 17, hvor kolloidt guld har en partikelstørrelse på fra ca. 20 til ca. 80 nm. 43 DK 2005 00290 U4

19. Teststrimmel ifølge krav 3, hvor konjugatet omfatter protein A konjugeret til kolloidt guld.

20. Teststrimmel ifølge krav 6, hvor konjugatet omfatter et antistof konjugeret til kolloidt guld.

21. Teststrimmel ifølge krav 1, hvor teststrimlen omfatter en nitrocellulosemembran.

22. Teststrimmel ifølge krav 1, hvor teststrimlen yderligere omfatter et kontrolområde, der befinder sig nedstrøms for testområdet, hvilket kontrolområdet omfatter et immobiliseret kontrolbindemiddel, som er i stand til at binde konjugatet.

23. Teststrimmel ifølge krav 22, hvor kontrolområdet omfatter immobiliseret kanin IgG.

24. Teststrimmel ifølge krav 22, hvor kontrolområdet omfatter immobiliseret protein A.

25. Teststrimmel ifølge krav 1, der yderligere omfatter en bufferpude, som er i strømningsmæssig forbindelse med konjugatkildeområdet.

26. Teststrimmel ifølge krav 1, der yderligere omfatter en absorbentpude i strømningsmæssig forbindelse med membranen i en position nedstrøms for testområdet.

27. Teststrimmel ifølge krav 1, der yderligere omfatter et prøvefilter, der befinder sig direkte over prøveapplikationsområdet.

28. Teststrimmel til detektering af anti-HIV antistof i en prøve omfattende: 44 DK 2005 00290 U4 - et testområde og et konjugatkildeområde, der befinder sig opstrøms for testområdet; - immobiliseret antigen bundet ved testområdet, hvor det immobiliserede antigen omfatter fra ca. 0,1 til ca. 0,5 pg HIV antigen; og - et konjugat, der er diffusionsbundet til konjugatkildeområdet, hvor konjugatet er udformet til at binde et antistof.

29. Teststrimmel ifølge krav 28, hvor HIV-antigenet omfatter et eller flere antigener udvalgt blandt gruppen bestående af GP120, P24 og GP36.

30. Teststrimmel ifølge krav 28, hvor konjugatet omfatter protein A.

31. Teststrimmel ifølge krav 28, hvor protein A er konjugeret til kolloidt guld.

32. Immundiagnostisk graviditetsteststrimmel omfattende: - et prøveapplikationsområde til modtagelse af en væskeprøve; - et testområde omfattende et immobiliseret første anti-hCG antistof; og - et konjugatkildeområde omfattende konjugat udformet til at binde hCG hvor konjugatkildeområdet befinder sig opstrøms for prøveapplikationsområdet og testområdet.

33. Graviditetstest ifølge krav 32, der yderligere omfatter en væge, som er i strømningsmæssig forbindelse med prøveapplikationsområdet.

34. Graviditetstest ifølge krav 32, der yderligere omfatter et bæger til opsamling af en urinprøve.

35. Graviditetstest ifølge krav 32, hvor konjugatet omfatter et andet hCG antistof. DK 2005 00290 U4 45

36. Graviditetstest ifølge krav 35, hvor det andet hCG antistof er konjugeret til kolloidt guld.