CN103558385A - 人类丙肝病毒(hcv)唾液/尿液抗体胶体金检测技术及其制备方法 - Google Patents

人类丙肝病毒(hcv)唾液/尿液抗体胶体金检测技术及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种人类丙肝病毒(HCV)唾液／尿液抗体胶体金检测技术及其制备方法，包括以下系列技术方案：(1)唾液／尿液抗体检测的胶体金平台系统；(2)唾液抗体检测的目标抗体保护系统(唾液标本稀释液)；(3)唾液／尿液抗体检测的封闭系统；(4)唾液／尿液抗体检测的抗原筛选系统；(5)唾液／尿液抗体检测干燥系统。本发明提高了对于目标抗体的检出率，并保证了产品的特异性，有效地避免了漏检和假阴性现象。且操作简单，安全，无污染，适合个体检测，家庭检测和床边检测。本发明取样方便易操作，对于操作者没有二次感染的风险，有益于患者或者高危人群自己操作检测。

Description

人类丙肝病毒(HCV)唾液/尿液抗体胶体金检测技术及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种人类丙肝病毒(HCV)唾液／尿液抗体胶体金检测技术及其制备方法，属于医疗检测技术领域。 
背景技术
1974年，Golafield首先报告输血后非甲非乙型肝炎。1989年Choc等应用分子克隆技术获得本病毒基因克隆，并命名本病及其病毒为丙型肝炎(Hepatitis C)和丙型肝炎病毒(HCV)。由于HCV基因组在结构和表型特征上与人黄病毒和瘟病毒相类似，将其归为黄病毒科HCV。HCV病毒体呈球形，直径小于80nm(在肝细胞中为36～40nm，在血液中为36～62nm)，为单股正链RNA病毒，在核衣壳外包绕含脂质的囊膜，囊膜上有刺突。HCV体外培养尚未找到敏感有效的细胞培养系统，但黑猩猩对HCV很敏感。 
丙型肝炎发病机理仍未十分清楚，当HCV在肝细胞内复制引起肝细胞结构和功能改变或干扰肝细胞蛋白合成，可造成肝细胞变性坏死，表明HCV直接损害肝脏，导致发病起一定作用。但多数学者认为细胞免疫病理反应可能起重要作用，发现丙型肝炎与乙型肝炎一样，其组织浸润细胞以CD3+为主，细胞毒T细胞(TC)特异攻击HCV感染的靶细胞，可引起肝细胞损伤。 
HCV的传播途径主要通过肠道外传播：(1)输血及血制品传播：曾是最主要的传播途径，在20世纪80年代后期至90年代中期，输血后肝炎70％以上是丙型肝炎。随着筛查方法的改善，此传播方式已得到明显控制，但抗HCV阴性的HCV携带供血员尚不能筛除，输血仍有传播丙型肝炎的可能，特别是反复输血、血制品者。(2)注射、针刺、器官移植、血液透析传播：国内报道80％以上静脉毒瘾者为抗HCV阳性。血液透析者及骨髓移植者亦是高危人群。生活密切接触传播：散发的HCV感染者中约40％无明显的输血及血制品、注射史，称为社区获得性，其中的大部分由生活密切接触传播。(3)性传播：精液和唾液中存在HCV，性接触传播不容忽视。多个性伴侣及同性恋者属高危人群。(4)母婴传播：母亲为HCV感染者的婴儿，感染HCV的几率约10％。 
HCV的发病率居高不下，危害较大。最新的权威统计资料表明，目前肝脏疾病是继心脏病、卒中、胸部疾病和癌症之后的第5位最常见死因，而且病发率还在上升。病毒性肝炎是引起肝脏疾病如肝硬化、肝衰竭、肝癌等的最主要原因之一，全球HCV感染者人数十分庞大，大约在1.3亿左右。我国也是丙型肝炎高流行区，HCV感染者约7000万例，并以每年10～15万例的速度增长。丙型肝炎发病隐匿、慢性化，较HBV 感染更易发展为肝硬化和肝癌。由于目前丙型肝炎尚无疫苗可供预防，加之近年来我国人群中静脉内滥用毒品、人群流动性加大、器官移植和介入性检查及治疗等机会增多，我国丙型肝炎病毒感染呈上升趋势。因此，病毒性肝炎的防治形势十分严峻，是一项长期、艰苦而又具有重大挑战意义的工作。作为传染性疾病，实验室诊断水平对于病毒性肝炎的预防、诊断和治疗具有不可替代的关键作用。高灵敏度、高通量的快速筛查技术，有利于及时发现传染源、切断传播途径，促进预防和控制蔓延。高特异性、高灵敏度、早期的病原学检测试验，是做到病毒性肝炎早诊断、早治疗的依据和前提。 
目前，HCV临床检测技术主要有以下一些： 
(1)病毒性肝炎的基因分型检测技术： 
HCV存在不同基因型，且分布有地域特性。公认的HCV基因型有6个型和50多个亚型。我国HCV基因型主要以1b、2a型为主。目前HCV基因分型主要采用对HCV RNA进行核苷酸序列分析、特异性探针杂交技术等，但技术要求高，操作复杂，不易常规开展。HCV血清学分型技术是根据HCV某些区域表达抗原具有与基因型对应的型别差异，合成型特异性多肽作为包被抗原，对HCV血清抗体进行分型检测。陈瑜等采用MumxHCV血清分型试验结果显示，HCV血清型与基因型之间有很高的符合率(96.8％)。HCV血清分型以1型为主(占78.9％)，对应的基因型以1b型为主(占78.3％)，1a型仅占21.7％。血清分型为2型的占19.2％，对应的基因型均为2a型。血清分型为混合型(1+2型)1例，占1.9％，基因分型为1b型。1b型与非1b型对干扰素的应答率和长期有效性具有显著性差异，1b型HCV对IFN.Of.治疗的持续有效率最低。血清分型试验虽不能区分亚型，但对基因1b型的间接推断有一定的可信度，对干扰素治疗的病例选择及疗效判定具有一定的参考价值。血清分型方法简便易行、适合推广，且对因各种原因引起的HCV RNA阴性而抗HCV抗体阳性的丙型肝炎患者血清标本也可进行分型。 
(2)新型的联合检测技术在病毒性肝炎诊断中的应用： 
主要有核酸联合检测和抗原抗体联合检测。包括HBV、HCV、HIV等多项病毒核酸联合检测技术已应用于血液筛查中，如Roche COBAS Ampli Screen HBV／HCV／HIV检测系统，能够达到很高的灵敏度，减少常规酶联免疫检测“窗口期”所致的漏检，提高血液安全。但目前检测成本较高，对于发展中国家普遍开展还不现实。 
(3)微生物学诊断： 
放射免疫诊断(RIA)或酶联免疫试验(ELISA)检测血清中抗HCV，1989年Kuo等建立了抗～C～100放射免疫试验方法(RIA)，随后Ortho公司又研制成功酶联免疫试验方法(ELISA)检测抗～C～100。这两种方法均用重组酵母表达的病毒抗原(C～ 100～3，为NS4编码的蛋白，含363个氨基酸)，经纯化后包被微量塑料板孔，然后加被检血清，该病毒抗原即与被检血清中抗～C～100结合，最后加同位素或酶标记的鼠抗人lgG单克隆抗体，加底物显色判断结果。由于HCV核心抗体出现较早，因此，最近美国第二代酶联免疫试验法(ELISA)检测抗HCV。该试剂盒采用HCVC区编码蛋白C～22～3和非结构区NS3编码蛋白C～33～3和C～100～3包被载体。用本法检测抗HCV，其检出率可提高25～30％，且检出抗HDV的时间也可提早16～42天。 
我国HCV感染诊断试剂的研制基本是与国外同步的，自1991年开始丙型肝炎试剂研究，已过了“八五”和“九五”两次国家攻关，1992年合成了3个多肽，1994年及1996年成功地表达了NS3区的HCV C33c抗原及NS5a蛋白，从而研制成功了我国第一代，第二代和第三代抗2型HCV EIA诊断试剂。因为有偿献血员中有较高的抗2型HCV阳性者，卫生部自1991年起要求对每一个献血员进行抗2HCV的筛选，以国产抗2型HCV试剂筛查后，因输血导致的丙型肝炎发生率下降了80％；血制品中抗2型HCV和HCV RNA的阳性率也分别为由1917％和1316％降至114％，成为对社会作为巨大贡献的典型范例。在“八五”成功研制了国产抗2HCV试剂的基础上，“九五”期间通过去除融合基因，可溶性表达，并以各种基因片段和片段组合进行不同方法的基因表达，找出丙肝试剂所需抗原最佳配比，提高了抗原纯化的纯度。提高了国产抗2HCV试剂中HCV NS3抗原活性，同时弥补了国外试剂核心抗体检测灵敏度低的缺点，使我们所研制的新一代丙肝试剂既赶上了国外第三代试剂对丙肝NS3抗体的检出力度，同时又避免了国外试剂所暴露的对丙肝核心抗体检出力弱的缺点。 
(4)HCV RNA检测技术： 
本法是将HDV RNA逆转录为HCV DNA，选用高度保守的5′非编码区引物扩增放大后作电泳观察结果，本法较灵敏。由于肝和血清中HCV RNA出现较抗～HCV为早，一些HCV感染者抗HCV尚未阳转时，其肝和血清中已可测到HDV RNA。HCV RNA阳性，说明病毒在体内复制；HCV RNA阴转，说明病毒被清除。因此，RT～PCR可作为丙型肝炎的早期诊断和献血员筛查的出现指标，也可作为丙型肝炎预后的一个指标。 
为了对ELISA筛查实验阳性的样品进行确认，Chiron公司又推出了相应的补充／确认实验～～重组免疫印迹实验(Recombinant immunoblot assay，RIBA)，该实验是以待测血清中的HCV抗体和分别固定在硝酸纤维素膜载体上的不同HCV抗原之间的特异性结合反应为基础、通过再加入酶(一般为ALP)标记的二抗来确认样品中抗～HCV的存在和有无；目前，该项技术已经得到了美国食品及药品监督管理局(Food and Drug Administration，FDA)的认可，成为HCV抗体确认的国际标准。因为HCV的各种抗原 分别被单独固化在载体的不同位置上，因此，该项检测又可以区分待测样品对HCV不同抗原的不同反应性。目前，RIBA HCV在全球由OCD公司供货及提供相关的技术服务。 
(5)胶体金快速诊断的研究进展： 
免疫胶体金技术作为一种近年来免疫类新技术发展十分迅速，在生物医学各研究领域特别是在医学检验中得到了日益广泛的应用，成为四大免疫标记技术之一(荧光素、酶、胶乳和胶体金)。胶体金能通过物理作用稳定又迅速地吸附蛋白，而不改变蛋白的生物活性。 
国内外科学工作者致力于丙肝病毒抗体的胶体金检测技术，通过对于丙肝重组抗原的不断开发，开发出了能够覆盖丙肝全位点的重组抗原并建立了基因文库和细胞株。这使得丙肝抗体胶体金诊断试剂盒的开发成为可能。我国已经开发出用于血液的丙肝抗体胶体金试剂盒，其灵敏度和特异性已经非常接近了酶免试剂盒的水平。但对于采血的安全性和患者对于采血的恐惧心理的问题还没有得到很好地解决。并且灵敏度和特异性有待提高。 
很多外国学者已经开始研究在唾液和尿液中检测滤过性病毒抗体的可能性，通过对于唾液和尿液的成分分析，他们找到了制成的理论依据。并且在HIV抗体检测中得到应用，使这种理论得到具体的实现。本发明已经成功的试验开发了适用于唾液和尿液抗体检测的胶体金平台体系在此基础上开发出具有高灵敏度高特异性的人类免疫缺陷病毒(HIV～1／2)唾液和尿液的胶体金试剂盒。HIV唾液／尿液抗体检测产品的成功，使得我们在HCV病毒唾液／尿液抗体诊断试剂盒的研究取得巨大进展。 
国际唾液蛋白研究进展：早在90年代末世界的科学家对于唾液是否可以检测疾病并代替血液用人类疾病的早期诊断进行了初步的研究。通过多年的研究科学家们分析了人类唾液中的全蛋白图谱，科学家们惊喜的发现很多疾病的特异性蛋白均存在于唾液中，他们的检测可以代替大部分血液检测，使得人们不用忍受抽血带来的痛苦和二次感染的风险。美国的研究人员在2008年在《蛋白质组学研究》杂志上发表了相关文章，在论文中他们绘制了人类唾液蛋白质组图，并勾画出了未来“人类吐口水检测疾病”。研究人员相信随着研究的深入进行以及科学的迅猛发展，唾液检测有望成为改进版的抽血化验。本发明人在人类免疫缺陷病毒唾液尿液抗体胶体金检测试纸条研发成功后，又取得的最新进展，目前国内外还没有关于本发明同类产品的报道。 
本发明所述的人类丙肝病毒(HCV)唾液／尿液抗体胶体金试纸条即是采用胶体金免疫层析和侧向横流技术制备，实现科学家对于在唾液中检测出产染病和疾病的又一个 重大愿望，使得丙型肝炎病毒的检测上得以实现，并且本发明的唾液尿液检测的平台系统未来开发出更多的唾液尿液检测产品，方便患者进行自我筛查，有利于国家对于传染病，癌症，毒品等监测和控制。 
传统的丙肝血液检测技术对于试验者和受试者都存在着不安全因素，为了克服这些因素唾液和尿液检测成为必须，同时也是科学家关注的途径。很多外国学者对于唾液尿液检测技术作了大量研究。通过研究唾液和尿液检测在未来完全可以取代血液检测。 
为了寻找更快捷、更方便和更安全HCV检测方法，HCV唾液和尿液抗体检测技术的研究和开发势在必行。这样可以有效的阻断HCV病毒的血液传播，使试验者减少因接触患者血液而造成感染的机会，使患者可以在家庭中进行检测成为可能。 
本发明所述的人类丙型肝病毒(HCV)唾液抗体胶体金试纸条即是采用胶体金免疫层析和侧向横流技术制备。 
在中国专利200910101036中提供了一种人类丙型肝炎病毒唾液抗体胶体金检测方法，此方法用HCV抗原标记胶体金，胶体金标记兔IgG单克隆抗体。硝基纤维素膜的检测区包被HCV抗原，质控线包被羊抗兔IgG多抗。由于唾液抗体中抗体含量较少，这种双抗原夹心法很难保证检测的灵敏度，另外它还需要胶体金标记兔IgG单克隆抗体然后按照比例混合包被。这就增加了检测的非特异性，而且抗原标记非常困难并且不稳定，所以也增加了产品的质量不稳定性，总之容易出现漏检和假阳性。并且此方法只能检测唾液标本不能检测尿液标本。 
发明内容
本发明目的在于解决现有技术中存在的唾液中HCV抗体浓度低，抗体样本的保护和避免降解化以及检测结果不明显，无法进行尿液检测的缺陷，而提供一种新的人类丙型肝炎病毒唾液／尿液抗体胶体金检测技术平台技术及其产品。 
为了实现上述目的，本发明的技术方案如下： 
一种人类丙肝病毒(HCV)唾液／尿液抗体胶体金检测技术及其制备方法，包括以下系列技术方案：(1)唾液／尿液抗体检测的胶体金平台系统；(2)唾液抗体检测的目标抗体保护系统(唾液标本稀释液)；(3)唾液／尿液抗体检测的封闭系统；(4)唾液／尿液抗体检测的抗原筛选系统；(5)唾液／尿液抗体检测干燥系统。 
一种检测HCV唾液／尿液抗体的试纸条包括已经封闭的样品垫和与之重叠的胶体金结合物垫，与胶体金结合物垫重叠的已包被硝基纤维素膜和与硝基纤维素膜重叠的吸水垫。所属已封闭样品垫，胶体金结合物垫，硝基纤维素膜和吸水垫均黏贴于底板之上。所属的硝基纤维素膜上检测区包被有HCV，质控区包被羊抗人IgG。 
所属的胶体金蛋白A结合物用量：8.0～12.0ug／mm； 
所属的HCV用量30ug／mm～60ug／mm； 
所属的羊抗人IgG(2mg／ml)用量：120ug／mm～180ug／mm。 
一种人类丙肝病毒(HCV)唾液／尿液抗体胶体金检测技术及其制备方法，基于下述平台系统： 
(1)唾液／尿液抗体检测的胶体金平台系统： 
(1a)胶体金的制备体系： 
与传统的胶体金制备工艺相比，本发明工艺体系质量更容易控制，批间差更小，金颗粒更稳定均一。传统工艺主要依靠操作的经验制备，靠外观控制质量，影响产品不稳定的因素较多，本发明系统以数据控制金颗粒的大小、稳定性和均一性。因为胶体金制备是产品质量和稳定性的关键性一步，所以在整个胶体金产品工艺中至关重要。而且本发明的制金方法更适合于唾液／尿液产品的研究，开发和生产。 
其具体步骤为：量取300毫升超纯水(在纯化水的基础上再过率，电阻率：18.2兆欧／立方厘米)，放置一个含有搅拌子的1000毫升锥形瓶中加热，盖上一个25毫升的锥形瓶，防止水分蒸发。称取柠檬酸三钠0.105g至小烧杯中，待锥形瓶中的水完全沸腾前吸取6.3ml溶解柠檬酸三钠待用，完全沸腾时小档搅拌加入4％氯化金溶液1.5～2.0ml。完全沸腾时一次快速加入已溶解的柠檬酸三钠。反应10分钟，放置至室温待用。取样进行可见光检测，合格范围为OD520～530=1.7～1.9nm，超过合格范围废弃重新制备。 
(1b)胶体金结合物的制备： 
在搅拌状态用碳酸钾溶液调节PH值至6.5～7.0之间，加入6～8ug／ml蛋白A继续搅拌30分钟，检测吸光度：OD525～530nm=1.7～2.0；搅拌下加入10％牛血清白蛋白搅拌30分钟，检测吸光度：OD525～530nm＝1.7～2.0。 
(1c)胶体金结合物的纯化系统：初步纯化：低温冷冻离心机上进行初步纯化；时间50～60分钟，转数：8000～10000转／分钟，温度：4～10度；小心吸取上清，收集沉淀物。完全纯化：收集后的沉淀物复溶至胶体金浓度25至300D／ml，用0.22um的滤膜过滤，进一步过滤未结合的胶体金颗粒和蛋白，使得胶体金结合物达到90％以上。 
胶体金结合物保护液系统：本系统用独特的化学组分做大限度的保护了胶体金结合物的稳定性。在磷酸盐缓冲液加入一定浓度的表面活性剂(千分之一到千分之五的终浓度)和保护性蛋白(1％～5％)制备而成。 
(1d)胶体金结合物的包被和干燥系统： 
精确量取胶体金结合物体积，加入20％～25％的糖类蛋白保护剂充分溶解后千分之一到千分之三的表面活性剂进行喷金操作。 
喷金的喷量：0.7ul／mm～1.0um／mm蛋白A结合物用量：8.0～12.0ug／mm； 
然后进行本发明特有初步干燥和完全干燥：温度40～50度，湿度低于10％初步干燥2～3小时，完全干燥18～20小时，放入双层干燥保护箱内待用。 
(2)唾液抗体检测的目标抗体保护系统(唾液标本稀释保护液)： 
唾液标本中的抗体数量相当于血液抗体数量的1／800～1／1000，所以唾液抗体的活性保护和防止降解是唾液检测的关键一步。本发明研制了专用的唾液样品保护系统(样品稀释液系统)。它主要包括：磷酸盐缓冲体系下加入表面活性剂千分之一到千分之三，生物素：3～5％亲和素：3～5％，血清：15％～20％和特有防腐剂配制而成。生物素和亲和素的作用是结合目标抗体提高检测的灵敏度，起到信号的放大作用。 
(3)唾液／尿液抗体检测的封闭系统： 
唾液抗体检测的封闭系统是用特有的封闭液封闭进口玻璃纤维膜。 
(3a)封闭液配制操作：在磷酸钾缓冲液体系下加入血清30～40％，加入表面活性剂千分之一道千分之三。0.45um滤膜过滤后待用。 
(3b)封闭后的样品垫干燥体系： 
初步干燥：湿度30％干燥8～10小时； 
完全干燥：温度：50度，湿度低于10％干燥18～20小时； 
双层干燥箱保护在湿度30％以下保存待用。 
(4)唾液／尿液抗体检测的抗原筛选系统和包被后硝基纤维素膜的干燥体系： 
独特的抗体筛查选体系，筛选出适合唾液／尿液抗体检测的高纯度高活性高识别性的HCV人工重组抗原(进口抗原)。主要包括包被保护液体系，喷膜体系和干燥体系： 
(4a)包被保护液体系：主要功能保护抗原抗体活性，在蛋白脱水后依然保持低能高活性状态，从而提高识别性和稳定性。主要包括：在磷酸盐缓冲体系下加入保护性糖类：1％～5％；表面活性剂：千分之一至千分之三，醇类保护剂：1～3％；HCV浓度：30ug／mm～60ug／mm；羊抗人浓度：120ug／mm～180ug／mm。 
(4b)喷膜体系：与传统的喷膜相比本发明非接触式喷膜抗原用量更少，更经济，更均一，更易于清洁喷头和管路较少交叉污染。 
喷量范围在：0.05～0.08ul／mm硝基纤维素膜的质量标准：180s／4cm，带背衬，孔径0.8um，宽度25mm。 
(4c)干燥体系：①初步干燥：喷膜后的硝基纤维素膜在温度40度，湿度低于10％的环境下初步干燥2～3小时。②完全干燥：在湿度10％以下，温度40度环境下完全干燥18～20小时。双层干燥箱保护在湿度30％以下保存待用。 
本发明利用免疫间接法原理制备而成，在测试时将试纸条插入待测样本中，液体样本由于侧向横流和层析作用向试纸条上部移动，当液体遇到已经固化在专用聚酯膜上的胶体金结合物结合形成目标免疫球蛋白-胶体金结合物复合物，并继续往上移动至硝酸纤维膜的检测区。如果样品中有HCV抗体存在，包被在检测线上的HCV抗原和胶体金蛋白A结合物与样本中的HCV抗体和检测区预包被的HCV全片段重组抗原结合形成免疫复合物而堆积显色，在检测区形成一条深红色线或者淡红色条带，即表示为HCV阳性；如果样本中没有HCV抗体，检测线上就没有红色条带出现。样本和金标混合物继续往上移动至对照线，包被在对照线上的羊抗人抗体将会同金标混合物结合，在对照线上形成一条红色条带，表明该试纸条有效。本发明和传统检测手段相比具有操作简单，肉眼观测，检测时间短，降低二次感染的风险，保护隐私权等优点，灵敏度和特异性均已接近传统的初筛方法(灵敏度和特异性均大于99％以上)。 
该发明的有益效果在于： 
(1)本发明在现有检测纸条基础上，创建了用于唾液／尿液抗体检测的胶体金平台系统，唾液抗体保护系统(成份中包括生物素和亲和素的放大作用)，唾液／尿液抗体检测的封闭系统，唾液／尿液抗体检测的抗原筛选系统和独特的中间体干燥系统，以上系统的联合作用提高了对于目标抗体的检出率，并保证了产品的特异性，有效地避免了漏检和假阴性现象。 
(2)本发明操作简单，安全，无污染，适合个体检测，家庭检测和床边检测，检测时间10分钟左右可出结果，检测结果通过目测完成不用借助任何辅助设备。 
(3)本发明所取唾液样品为口腔上下牙龈渗出液，是从牙龈毛细血管渗出的抗体，来源更直接，干扰因素更少。所取尿液标本来源直接，干扰因素更少。 
(4)本发明取样方便易操作，对于操作者没有二次感染的风险。由于唾液／尿液中不含有HIV病毒抗原所以没有传染性，有益于患者或者高危人群自己操作检测。 
附图说明
图1、本发明实施例一试纸条结构示意图。 
图2、本发明实施例四试纸条阳性结果示意图。 
图3、本发明实施例四试纸条阴性结果示意图。 
图4、本发明实施例四试纸条无效试验示意图。 
图5、本发明实施例一结果示意图。 
图6、本发明尿液试剂盒组成和操作方法及结果示意图。 
图7、本发明实施例二的工艺流程图。 
图中标记说明：1、箭头胶；2、检测区；3、不干胶保护膜；4、吸水区；5、吸水垫；6、NC膜；7、C线；8、T线；9、金结合物垫；10、样品垫；11、底板；12、加样区；A、质控线；B、检测线；C、加样处。 
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明的具体实施方式进行描述，以便更好的理解本发明。 
实施例一： 
本发明检测人类丙型肝炎病毒(HCV)唾液／尿液抗体胶体金试纸条：如图1所示，包括底板11，在底板11上设置有NC膜6，NC膜6设置有C线7和T线8，C线7和T线8构成检测区2；底板11上一侧设置有金结合物垫9，另一侧设置有吸水垫5；金结合物垫9上设置有样品垫10，构成加样区12；加样区12上设置有箭头胶1；吸水垫5设置有不干胶保护膜3；吸水垫5一端为吸水区4。 
其中，已包被硝基纤维素膜和所述已封闭的胶体金结合物垫9重叠(2～3mm)，和所述的胶体金结合物垫9重叠的已封闭的样品垫10，和所述已包被的硝基纤维素膜重叠的(3～4mm)吸水垫5和手柄胶，与所述的样品垫10和胶体金结合物垫9覆盖的箭头胶1(在胶体金结合物与硝基纤维素膜的上边沿重叠2～3mm)。将以上几项黏贴与塑料地板上。 
所述样品垫为已封闭的玻璃纤维膜；所属胶体金结合物垫预包被胶体金标记的蛋白A；所述的硝基纤维素膜上预包被了全片段高活性高识别性HCV人工重组抗原检测区和预包被羊抗人质控区，检测结果见图5。 
本发明检测人类丙型肝炎病毒(HCV)唾液抗体胶体金试纸条，胶体金结合物的喷量为：0.7ul／mm～～1.0um／mm；检测线和质控线的喷量：0.05～0.08ul／mm；蛋白A结 合物用量：8.0～12.0ug／mm；人工重组抗原HCV用量：30ug／mm～60ug／mm；羊抗人用量：120ug／mm～180ug／mm。 
实施例二： 
本发明纸条的制备方法： 
本发明检测人类丙型肝炎病毒(HCV)唾液／尿液抗体胶体金试纸条采用皎体金颗粒标记的方法，胶体金颗粒的直径30～40nm。胶体金的吸附机理是静电吸附，胶体金颗粒是在还原剂的作用下将氯化金还原为带负电的胶体状态，和带正电的蛋白质结合成胶体金结合物。本发明尿液试剂盒组成和操作方法及结果示意图见图6；人类丙型肝炎病毒(HCV)唾液／尿液抗体胶体金试纸条制备步骤如下，见图7： 
(1)胶体金的制备：量取300毫升超纯水(在纯化水的基础上再过滤，电阻率：18.2兆欧／立方厘米)放置一个含有搅拌子的1000毫升锥形瓶中加热，盖一个25毫升的锥形瓶，防止水分蒸发。称取柠檬酸三钠0.105g至小烧杯中，待锥形瓶中的超纯水完全沸腾前吸取6.3ml溶解柠檬酸三钠待用，完全沸腾时小档搅拌加入4％氯化金溶液1.5～2.0ml。完全沸腾时一次快速加入已溶解的柠檬酸三钠。反应10分钟，放置至室温待用。取样进行可见光检测，合格范围为OD520～530=1.7～1.9nm，超过合格范围废弃重新制备。 
(2)胶体金结合物标记：取合格的胶体金小档搅拌用碳酸钾溶液调节PH值至6.5～7.0之间，小档搅拌下加入6～8ug／ml蛋白A继续搅拌30分钟，检测吸光度：OD525～530nm=1.7～2.0；加入10％牛血清白蛋白搅拌30分钟，检测吸光度：OD525～530nm=1.7～2.0： 
(3)胶体金结合物的纯化：①初步纯化：低温冷冻离心机上进行初步纯化；时间50～60分钟，转数：8000～10000转／分钟，温度：4～10度；小心吸取上清，收集沉淀物。②完全纯化：收集后的沉淀物用专用复溶液复溶至胶体金结合物浓度25至300D／ml，用0.22um的滤膜过滤，进一步过滤未结合的胶体金颗粒和蛋白，使得胶体金结合物达纯度到90％以上。 
(4)胶体金结合物的包被和干燥：胶体金结合物垫是筛选进口的经过特殊处理的聚酯膜，喷今后吸收得好，释放彻底，有效的保护胶体金结合物和目标蛋白。精确量取胶体金结合物体积，加入20％～25％的糖类蛋白保护剂充分溶解后千分之一到千分之三的表面活性剂进行喷金操作。喷金的喷量：0.7ul／mm～～1.0um／mm蛋白A结合物用量：8.0～12.0ug／mm；然后进行本发明特有初步干燥和完全干燥：温度40～50度，湿度低于10％初步干燥2～3小时，完全干燥18～20小时，放入双层干燥保护箱内待用。 
(5)检测线和质控线的制备：用专用包被液(磷酸盐，糖类，醇类及表面活性剂等保护剂)分别稀释HCV重组抗原和羊人多抗，振荡器充分混和。HCV重组抗原浓度：30ug／mm～60ug／mm；羊抗人浓度：120ug／mm～180ug／mm。 
(6)硝基纤维素膜的包被和干燥：喷量范围在：0.05～0.08ul／mm；硝基纤维素膜的质量标准：120～180s／4cm，带背衬，孔径0.8um，宽度25mm。初步干燥：喷膜后的硝基纤维素膜在温度40度，湿度低于10％的环境下初步干燥2～3小时。完全干燥：在湿度10％以下，温度40度环境下完全干燥18～20小时。双层干燥箱保护在湿度30％以下保存待用。 
(7)样品垫封闭液的制备，样品垫处理和干燥：唾液／尿液抗体检测的封闭系统是用特有的封闭液封闭进口玻璃纤维膜。封闭液配制操作：在磷酸钾缓冲液体系下加入血清30～40％，加入表面活性剂千分之一道千分之三。0.45um滤膜过滤后待用。样品垫处理和干燥：是样品垫处于过饱和状态，去除多余的封闭液干燥。每条样品垫25mm*300mm需要3～5毫升封闭液。已封闭样品垫初步干燥：湿度低于30％干燥8～10小时。已封闭样品垫完全干燥：温度：50度，湿度低于10％干燥18～20小时。已封闭样品垫保存：双层干燥箱保护在湿度30％以下保存待用。 
(8)中间体的组装：在底板的中间部分黏贴已包被的硝基纤维素膜，在地板的下端黏贴吸水垫和手柄胶(重叠2～3mm)，在硝基纤维素膜膜的下端黏贴胶体金结合物垫，与硝基纤维素膜重叠2～3mm，在胶体金结合物垫下端黏贴已处理的样品垫，在样品垫和胶体金结合物垫上覆盖箭头胶(MAX线箭头朝下)上端与硝基纤维素膜重叠2～3mm。 
已组装的底板的保存：双层干燥箱保护在湿度30％以下保存待用。 
(9)唾液样品专用稀释液的配制和分装(适用于HICV唾液抗体胶体金试纸条)：本发明研制了专用的唾液样品保护系统(样品稀释液系统)。它主要包括：磷酸盐缓冲体系下加入表面活性剂千分之一到千分之三，生物素：3～5％亲和素(信号放大剂)：3～5％，血清：15％～20％和特有防腐剂配制而成。PH值校正为8.2～8.5。定容后用0.45mm+0.22mm过滤滤器过滤待用，用专用的分装设备分装为0.8～1.0ml／瓶待用。 
(10)试剂盒装组装： 
本发明的人类丙型肝炎(HCV)唾液抗体胶体金试纸条组装：经过切条(大于3.8mm／条)，装袋和口腔取样拭子，样品稀释液管(0.8～1.0ml／瓶)和说明书组装成试剂盒使用。 
本发明的人类丙型肝炎病毒尿液抗体胶体金试纸条组装：经过切条(大于3.8mm／条)，装袋，一次性尿杯.1毫升移液管、3毫升检测试管和说明书组装成试剂盒使用。 
实施例三： 
本发明人类丙型肝炎病毒(HCV)唾液／尿液抗体胶体金试纸条检测的取样和检测说明。本发明利用实施例一和例二的人类丙型肝炎病毒(HCV)唾液抗体胶体金试纸条检测。唾液取样的具体步骤如下： 
(1)将单人份口腔取样拭子打开，沿着上牙龈左右～由右向左反复擦拭5～6秒钟，翻转口腔取样拭子沿着下牙龈左右～由右向左反复擦拭5～6秒钟。 
(2)将取样拭子插入样品稀释液中上下左右搅动5～10秒充分释放唾液中的样品，在试管边沿拧干后取出。样品采集后可以进行检测，两次取样间隔应大于30分钟，饮水，饮料，喝酒，用餐后取样应大于30分钟，否则将影响检测结果。 
(3)将试纸条取出，禁止触摸硝基纤维素膜部分，握住手柄插入已经取样的样品稀释液试管中。 
(4)计时15分钟观测结果。 
本发明利用实施例一和例二的人类丙型肝炎病毒(HCV)尿液抗体胶体金试纸条检测。尿液取样的具体步骤如下： 
1)打开试剂盒，取出一次性尿杯取样，用1毫升移液管移取1毫升尿液标本加入3毫升试管中。 
2)将试纸条取出，禁止触摸硝基纤维素膜部分，握住手柄插入已经取样的样品稀释液试管中。 
3)计时15分钟观测结果。 
实施例四： 
本发明人类丙型肝炎病毒(HCV)唾液／尿液抗抗体胶体金试纸条检测的结果判定及说明： 
(1)阳性结果的判定：加样处C加样后3～5分种可观测阳性结果，弱阳性结果应在15～30分钟观测，过三十分钟结果无效。在硝基纤维素膜检测区可见一条酒红色或者淡红色的条带即为HCV阳性，且只要检测线B有一条淡红色或者微红色的条带即可判定为HCV弱阳性，如图2所示。 
(2)阴性结果的判读：检测区没有条带显色或者微弱红的条带即可判定为HCV阴性，如图3所示。 
(3)质控线A：不论阴性和阳性质控区都有一条酒红色条带，此条预示着检测的有效性。如果质控区没有红色条带出现不论检测区是否显色均判定为无效需要重新检测。 
(4)无效检测结果判读：质控区没有红色条带出现不论检测区是否显色均判定为 无效，需要重新检测，如图4所示。 
本发明人类丙型肝炎病毒(HCV)唾液／尿液抗体胶体金试纸条的测试结果： 
(1)本发明质控品的制备方法： 
(a)阳性质控品(8)：HCV阳性血清(1：100)，HCV2血清标本，HCV4血清标本，HCV8血清标本，临检中心的室间质空品：8NCU，4NCU，2NCU，1NCU： 
(b)阴性标本：中国生物制品检测研究院的阴性质控品唾液质控品20个，尿液质控品20个。正常人唾液10个，辫子血(10)，尿液标本(10)，分别用稀释液稀释50倍，分装(100ul／支)低温保存备用。 
(c)最低检出量质控品(3／9)： 
8NCU10倍(+)，50倍(+)； 
4NCU10倍(+)，50倍(+)； 
2NCU10倍(+/-)； 
1NCU10倍(+／-)； 
HCV(1：100)10倍(+)； 
HCV(1：100)100倍(+)； 
HCV(1：100)500倍(+／-)； 
(d)用样品稀释液按以上倍数稀释标本，分装(100ul／支)低温保存备用。 
(e)阳性标本HCV2血清标本，HCV4血清标本，HCV8血清标本用样品稀释液分别稀释1000倍模拟唾液标本，分装(100ul／支)低温保存备用。 
(2)测试本发明人类丙型肝炎病毒(HCV)唾液／尿液抗体胶体金试纸条，测试结果见表一和表二。 
表一：本发明人类丙型肝炎病毒(HCV)唾液／尿液抗体胶体金试纸条的阳性测试结果 
Figure BSA0000097670330000131
表二：本发明人类丙型肝炎病毒(HCV)唾液／尿液抗体胶体金试纸条阴性性测试结果 
Figure BSA0000097670330000141
以上所述是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也视为本发明的保护范围。 

Claims (5)

1.一种人类丙肝病毒(HCV)唾液／尿液抗体胶体金检测技术及其制备方法，其特征在于：包括以下体系：(1)唾液／尿液抗体检测的胶体金平台系统；(2)唾液抗体检测的目标抗体保护系统(唾液标本稀释液)；(3)唾液／尿液抗体检测的封闭系统；(4)唾液／尿液抗体检测的抗原筛选系统；(5)唾液／尿液抗体检测干燥系统；其中，检测HCV唾液／尿液抗体的试纸条包括已经封闭的样品垫和与之重叠的胶体金结合物垫，与胶体金结合物垫重叠的已包被硝基纤维素膜和与硝基纤维素膜重叠的吸水垫，所述已封闭样品垫，胶体金结合物垫，硝基纤维素膜和吸水垫均黏贴于底板之上，所述的硝基纤维素膜上检测区包被有HCV人工重组抗原，质控区包被羊抗人IgG多抗；所述胶体金蛋白A结合物用量：8.0～12.0ug／mm；所述HCV用量：30ug／mm～60ug／mm；所属的羊抗人IgG(2mg／ml)用量：120ug／mm～180ug/mm。
2.根据权利要求1所述的人类丙肝病毒(HCV)唾液／尿液抗体胶体金检测技术及其制备方法，其特征在于：所述唾液／尿液抗体检测的胶体金平台系统包括：
(1a)胶体金的制备体系：具体实施步骤为：量取300毫升超纯水(在纯化水的基础上再过率，电阻率：18.2兆欧／立方厘米)，放置一个含有搅拌子的1000毫升锥形瓶中加热，盖上一个25毫升的锥形瓶，防止水分蒸发；称取柠檬酸三钠0.105g至小烧杯中，待锥形瓶中的水完全沸腾前吸取6.3ml溶解柠檬酸三钠待用，完全沸腾时小档搅拌加入4％氯化金溶液1.5～2.0ml；完全沸腾时一次快速加入已溶解的柠檬酸三钠；反应10分钟，放置至室温待用；取样进行可见光检测，合格范围为OD520～530＝1.7～1.9nm，超过合格范围废弃重新制备；
(1b)胶体金结合物的制备：在搅拌状态用碳酸钾溶液调节PH值至6.5～7.0之间，加入6～8ug／ml蛋白A继续搅拌30分钟，检测吸光度：OD525～530nm=1.7～2.0；搅拌下加入10％牛血清白蛋白搅拌30分钟，检测吸光度：OD525～530nm＝1.7～2.0；
(1c)胶体金结合物的纯化系统：初步纯化：低温冷冻离心机上进行初步纯化；时间50～60分钟，转数：8000～10000转／分钟，温度：4～10度；小心吸取上清，收集沉淀物；完全纯化：收集后的沉淀物复溶至胶体金浓度25至30OD／ml，用0.22um的滤膜过滤，进一步过滤未结合的胶体金颗粒和蛋白，使得胶体金结合物纯度达到90％以上；
(1d)胶体金结合物保护液系统：本系统用独特的化学组分最大限度的保护了胶体金结合物的稳定性，在磷酸盐缓冲液加入一定浓度的表面活性剂(千分之一到千分之五的终浓度)和保护性蛋白(1％～5％)制备而成；
(1e)胶体金结合物的包被和干燥系统：精确量取胶体金结合物体积，加入20％～25％的糖类蛋白保护剂充分溶解后加入千分之一到千分之三的表面活性剂进行喷金操作；喷金的喷量：0.7ul／mm～1.0ul／mm蛋白A结合物用量：8.0～12.0ug／mm；然后进行本发明特有初步干燥和完全干燥：温度40～50度，湿度低于10％初步干燥2～3小时，完全干燥18～20小时，放入双层干燥保护箱内待用。
3.根据权利要求1所述的人类丙肝病毒(HCV)唾液／尿液抗体胶体金检测技术及其制备方法，其特征在于：所述唾液抗体检测的目标抗体保护系统(唾液标本稀释保护液)包括磷酸盐缓冲体系下加入表面活性剂千分之一到千分之三，生物素：3～5％，亲和素：3～5％，血清：15％～20％和特有防腐剂，配制而成。
4.根据权利要求1所述的人类丙肝病毒(HCV)唾液／尿液抗体胶体金检测技术及其制备方法，其特征在于：所述唾液／尿液抗体检测的封闭系统，采用特有的封闭液封闭进口玻璃纤维膜，具体包括：
(3a)封闭液配制操作：在磷酸钾缓冲液体系下加入血清30～40％，加入表面活性剂千分之一道千分之三，0.45um滤膜过滤后待用；
(3b)封闭后的样品垫干燥体系：初步干燥：湿度30％以下干燥8～10小时；完全干燥：温度：50度，湿度低于10％干燥18～20小时；双层干燥箱保护在湿度30％以下保存待用。
5.根据权利要求1所述的人类丙肝病毒(HCV)唾液／尿液抗体胶体金检测技术及其制备方法，其特征在于：所述唾液／尿液抗体检测的抗原筛选系统和包被后硝基纤维素膜的干燥体系：采用独特的抗体筛查选体系，筛选出适合唾液/尿液抗体检测的高纯度高活性高识别性的HCV人工重组抗原(进口抗原)，主要包括包被保护液体系，喷膜体系和干燥体系：
(4a)所述包被保护液体系：在磷酸盐缓冲体系下加入保护性糖类：1％～5％；表面活性剂：千分之一至千分之三，醇类保护剂：1～3％；HCV浓度：30ug／mm～60ug／mm；羊抗人浓度：120ug／mm～180ug／mm；
(4b)所述喷膜体系：喷量范围在：0.05～0.08ul／mm硝基纤维素膜的质量标准：180s／4cm，带背衬，孔径0.8um，宽度25mm；
(4c)所述干燥体系：包括：①初步干燥：喷膜后的硝基纤维素膜在温度40度，湿度低于10％的环境下初步干燥2～3小时：②完全干燥：在湿度10％以下，温度40度环境下完全干燥18～20小时，双层干燥箱保护在湿度30％以下保存待用。
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Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106290863A (zh) * 2016-08-11 2017-01-04 王勇 一种人类丙肝病毒（hcv）唾液/尿液抗体胶体金检测试剂盒及其制备方法
CN107271676A (zh) * 2017-07-14 2017-10-20 河南爱微迪生物技术有限公司 一种丙型肝炎病毒抗体唾液检测试剂盒
CN108732347A (zh) * 2018-05-23 2018-11-02 江苏维尔生物科技有限公司 一种检测唾液中hcv抗体的检测试剂盒及其制备方法
CN109738648A (zh) * 2018-12-29 2019-05-10 山东莱博生物科技有限公司 稳定高效表达丙型肝炎病毒核心抗原抗体的工程细胞株及其应用
CN114935648A (zh) * 2022-04-19 2022-08-23 谱瑞前海(深圳)智能科技有限公司 一种流行病病毒免疫检测结果生成电信号的方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2001095784A2 (en) * 2000-06-14 2001-12-20 J.Mitra & Co. Ltd. Diagnostic kit for invitro detection of hepatitis c
CN1902489A (zh) * 2003-06-06 2007-01-24 优势诊疗技术公司 对样品中分析物的诊断试验
CN201053964Y (zh) * 2007-05-21 2008-04-30 四川省迈克科技有限责任公司 疫苗保护性抗体快速检测试剂盒
CN101495865A (zh) * 2005-05-20 2009-07-29 克利普特生物医药公司 口腔流体快速免疫层析检测
CN103033613A (zh) * 2012-12-25 2013-04-10 北京玛诺生物制药有限公司 一种口腔粘膜渗出液快速检测方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2001095784A2 (en) * 2000-06-14 2001-12-20 J.Mitra & Co. Ltd. Diagnostic kit for invitro detection of hepatitis c
CN1902489A (zh) * 2003-06-06 2007-01-24 优势诊疗技术公司 对样品中分析物的诊断试验
CN101495865A (zh) * 2005-05-20 2009-07-29 克利普特生物医药公司 口腔流体快速免疫层析检测
CN201053964Y (zh) * 2007-05-21 2008-04-30 四川省迈克科技有限责任公司 疫苗保护性抗体快速检测试剂盒
CN103033613A (zh) * 2012-12-25 2013-04-10 北京玛诺生物制药有限公司 一种口腔粘膜渗出液快速检测方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
STEPHEN R. LEE,ET AL: "Evaluation of a new, rapid test for detecting HCV infection, suitable for use with blood or oral fluid", 《JOURNAL OF VIROLOGICAL METHODS》, vol. 172, 31 December 2011 (2011-12-31) *
张悦等: "酶联免疫吸附法与胶体金法抗-HCV检测对比分析", 《中国误诊学杂志》, vol. 03, no. 09, 20 September 2003 (2003-09-20), pages 1329 - 1330 *

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106290863A (zh) * 2016-08-11 2017-01-04 王勇 一种人类丙肝病毒（hcv）唾液/尿液抗体胶体金检测试剂盒及其制备方法
CN107271676A (zh) * 2017-07-14 2017-10-20 河南爱微迪生物技术有限公司 一种丙型肝炎病毒抗体唾液检测试剂盒
CN108732347A (zh) * 2018-05-23 2018-11-02 江苏维尔生物科技有限公司 一种检测唾液中hcv抗体的检测试剂盒及其制备方法
CN109738648A (zh) * 2018-12-29 2019-05-10 山东莱博生物科技有限公司 稳定高效表达丙型肝炎病毒核心抗原抗体的工程细胞株及其应用
CN109738648B (zh) * 2018-12-29 2021-09-17 山东莱博生物科技有限公司 稳定高效表达丙型肝炎病毒核心抗原抗体的工程细胞株及其应用
CN114935648A (zh) * 2022-04-19 2022-08-23 谱瑞前海(深圳)智能科技有限公司 一种流行病病毒免疫检测结果生成电信号的方法

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