CN101175996A - 半定量免疫色谱装置 - Google Patents

Abstract

本发明提供了包括能够提供横向流动的一种或多种支撑材料的装置。所述一种或多种支撑材料包括用于接收包含目标分析物的生物样品的部位，具有能够与所述目标分析物形成复合物的可移动地容纳的检测配体的部位，具有预定数量的固定捕捉剂的第一捕获区，其中，所述固定捕捉剂能够特异性地结合所述复合物，具有所述固定捕捉剂的第二捕获区，和裂解剂。一般，用于接收所述生物样品的部位、具有可移动地容纳的检测配体的部位、第一捕获区和第二捕获区排列在所述一种或多种支撑材料中，以便样品能够依次横向流动通过这些部位。

Description

半定量免疫色谱装置

相关申请

本申请要求申请日为2005年4月20日的美国临时专利申请流水号60/673218的优先权。该临时申请的内容被收作本文参考。

发明领域

本发明涉及用于样品的目标分析物的半定量分析的装置和方法。

发明背景

在以下讨论中，将披露某些文章和方法作为背景和引言。其中所包含的任何内容都不被理解成是对现有技术的″承认″。申请人明确保留在必要时说明本文所涉及到的文章和方法不构成适用的法定条款下的现有技术的权利。

业已发现，各种免疫反应可以用作分析技术。免疫化学分析一般分成多种不同类型。两种最常见的类型是竞争分析法和夹心分析法。在竞争分析法中，让有限数量的结合材料与含有分析物和已知浓度的标记分析物的溶液接触。标记过的和未标记过的分析物竞争结合结合材料上的结合位点。与结合材料结合的标记过的分析物的数量可能与存在于测试溶液中的分析物的浓度相关。定量一般是通过参照校正曲线，目测比较通过所述反应引起的颜色变化程度，或用测试仪器评估完成的。

夹心分析法包括让结合材料与含有分析物的溶液接触，以便使所述分析物与结合材料结合，然后让该复合物与标记过的结合材料接触，该材料一般是能够与结合的分析物起反应的抗体。因此，结合的标记过的结合材料的数量直接与结合的分析物的数量成正比。定量一般是通过比较通过与标准物或参照物起反应引起的颜色变化，参照校正曲线，或通过试验仪器检查完成的。

不过，取决于所述技术的常规技术和装置业已表现出各种缺陷。例如，尽管业已开发出相对简单的测试条装置，它们通常缺乏至少立即对分析结果进行定量的能力。就此而言，很多这样的装置只能指示存在高于或低于特定阈值的分析物的阳性或阴性结果。另外，所述装置一般需要洗涤步骤，或需要混合一种或多种试剂和样品。出于进行所述洗涤或混合步骤的需要，使所述分析方法具有不理想的复杂性，这使得它不适合外行人员甚至是受过较低水平的医学训练的人员使用。

因此，需要对所述测试的改进和新的用途。

发明概述

根据第一方面，本发明提供了包括能够提供横向流动的一种或多种支撑材料的装置。所述一种或多种支撑材料包括用于接收包含目标分析物的生物样品的部位，具有能够与所述目标分析物形成复合物的可移动地容纳的检测配体部位，具有预定数量的固定捕捉剂的第一捕获区，其中，所述固定捕捉剂能够特异性地结合所述复合物，具有所述固定捕捉剂和裂解剂的第二捕获区。一般，用于接收所述生物样品的部位、具有可移动地容纳的检测配体的部位、第一捕获区和第二捕获区排列在所述一种或多种支撑材料中，以便样品能够依次横向流动通过所述部位。

根据另一方面，所述目标分析物是存在于CD4淋巴细胞中的CD4抗原。因此，一种或多种材料包含具有能够与CD4抗原形成复合物的可移动地容纳的检测配体的部位，具有预定数量的能够特异性地结合所述复合物的固定捕捉剂的第一捕获区，和包括所述固定捕捉剂的第二捕获区。一般，用于接收所述生物样品的部位、具有可移动地容纳的检测配体的部位、第一捕获区和第二捕获区排列在所述一种或多种支撑材料中，以便样品能够依次横向流动通过所述部位。

本发明还提供了使用所述装置的方法。

附图的简要说明

通过以下说明，所述权利要求书和在附图中示出的典型实施方案，可以了解本发明的上述和其他特征，方面和优点，下面将对所述附图进行简要说明。应当理解的是，除非另有说明，类似的部件具有相同的附图标记。

图1是按照本发明原理制作的装置的透视图。

图2是按照本发明另一种实施方案制作的装置的透视图。

图3A-3D是按照本发明的其他实施方案制作的装置的透视图。

图4是按照本发明原理制作的装置的另一种实施方案。

发明的详细说明

下面将通过对某些典型实施方案的讨论并且结合上述附图对本发明的原理作进一步说明。除非另有说明，用在多个附图中的相同的附图标记或符号用于在多个附图中表示相同或相似的部件。

在本文中，术语″分析物″表示要在所述试样中检测或测量的化合物或组合物。分析物具有至少一个抗体或它的免疫学活性片段可以识别的表位。分析物可以包括任何抗原物质，半抗原，抗体和它们的组合。分析方法中的感兴趣的目标分析物可以是，例如，蛋白，肽，氨基酸，核酸，激素，类固醇，维生素，可以产生针对它的多克隆和/或单克隆抗体的致病微生物，天然或合成化学物质，污染物，药物，包括出于治疗目的而施用的药物和出于违法目的而施用的药物。以及上述任何物质的代谢物或抗体。该术语所包含的一种特殊例子是存在于CD4淋巴细胞中的CD4抗原。

在本文中，术语″生物样品″表示能够包含用于检测的分析物的任何样品。优选的是，所述生物样品是液体形式的或者能够变成液体形式。所述生物样品可以包括全血，尿液，唾液，或其他体液和分泌物。术语生物样品的来源并不是特定的。因此，所述样品可以从任何来源获得，如人类或其他动物。

在本文中，术语″样品接收部位″表示分析装置首先与生物样品接触的部分，即，它接收要分析相关分析物的样品。

术语″横向流动″表示样品成分被携带横向通过所述材料的流动。例如，当所述分析装置是片状或条状形式时，所述横向方向平行于由所述装置的主要表面形成的平面。

在本文中，术语″材料″表示能够提供横向流动的任何物质。其中包括诸如纤维素酯，硝酸纤维素，硝酸纤维素与聚酯或纤维素的混合物，未处理过的纸张，多孔纸，多孔聚乙烯，多孔聚丙烯，人造纤维，玻璃纤维，丙烯腈共聚物或尼龙。本领域技术人员可以理解允许横向流动的其他多孔材料。

本文所提到的术语″可移动的″表示扩散性地或非扩散性地结合或浸泡。可移动的物质或制剂能够与所述样品一起扩散，并且可以通过所述横向流动携带。

在本文中，术语″不可移动的″表示与支撑材料连接的物质或试剂，以便液体样品的横向流动不影响所述不可移动的颗粒在所述材料中的定位。例如，所述结合可以是通过共价或离子方式实现。本领域技术人员可以理解使各种物质或制剂固定化的连接方式。

在本文中，术语″检测配体″表示能够识别或结合相关分析物，并且业已通过化学，共价，非共价，离子，或非离子方式使它与能够产生可检测信号的任何物质连接缀合或结合的任何颗粒，蛋白或分子。能够产生可检测信号的所述物质包括色原，催化剂，荧光化合物，胶体状金属和/或非金属颗粒，染料颗粒，酶或底物，有机聚合物，胶乳颗粒，带有在美国专利号4,703,017中所披露类型的产生信号的物质的脂质体，该专利的完整内容被收作本文参考。能识别所述分析物的颗粒或分子可以是天然或非天然的。根据典型实施方案，所述检测配体包括与胶体金颗粒或与含有可见染料的脂质体缀合的配体。

在本文中，术语″可检测信号″表示用肉眼和/或可以将它转换成视觉指示的光学读出仪器可以看到的任何指示。″肉眼可见″意在包括使用校正透镜和放大装置。所述可检测信号可以是立即和连续可见的，或只有在与其他制剂起反应时可见。例如，胶体金属，如金，一般是立即和连续可见的。另外，能够产生信号的物质可以包括第一反应剂，如酶，和能在另一个部位提供的第二反应剂，以便在所述酶移动到所述另一个部位时，发生化学反应，并且改变在所述另一个部位产生的颜色。

在本文中，术语″检测配体部位″表示应用了可移动检测配体的装置的部位。

在本文中，术语″对照试剂″表示能够与配体检测器结合，但是不能识别或结合目标分析物的任何颗粒或分子。例如，所述检测配体可以是与能够产生信号的物质缀合的配体。所述对照试剂是颗粒或分子，当分析物没有与它结合时，它能识别或结合检测配体的配体部分。优选的是，所述对照试剂是能识别所述配体的单克隆或多克隆抗体。所述对照试剂是不可移动的。因此，一旦它与未结合的标记试剂结合，它就使所述标记试剂固定化，并且防止它继续横向流动。

在本文中，术语″对照线″表示固定了对照试剂的装置的部位。

在本文中，术语″捕捉剂″表示能识别或结合感兴趣的分析物的任何颗粒或分子，或与所述分析物结合的检测配体。所述捕捉剂是不可移动的，因此，所述捕捉剂一旦与分析物-检测配体复合物结合，它就能阻止所述复合物继续横向流动。所述捕捉剂可以包括任何合适配体，如抗体，抗原结合片段，肽，适体等。根据一种典型实施方案，所述捕捉剂包括存在于CD4淋巴细胞中的CD4抗原的抗体。

在本文中，术语″捕获区″表示其中在所述材料中固定了捕捉剂的所述装置的区域。

在本文中，术语″特异性结合″表示通过受体，或捕捉剂等实现的，并且只能任选地与特定试剂或物质结合的结合机制。

下面将结合图1和2说明按照本发明原理设计的第一种实施方案。装置10一般包括支撑材料15，它能产生横向流动，它是沿箭头LF方向流动的。

参见图1，支撑材料15能够成形为条状形式，并且在以下说明中将它称之为条。或者，支撑材料15能够以多种形状或形式提供，只要所述特定形式允许本文所披露的各种功能就行。

支撑装置15还可以用多种不同的合适材料制成，只要所述材料能够实现上述横向流动功能。例如，所述材料可以包括：玻璃纤维，纤维素酯，尼龙，交联葡聚糖等。根据一种实施方案，所述材料包括硝酸纤维素。正如在下面的实施例中所指出的，除了单一的条之外，所述支撑装置还可以包括一种或多种不同支撑材料。

在示意性装置10上，在条15上提供了生物样品接收部位20。尽管在所示出的实施方案中，仅示出唯一的位于条15的末端的样品接收部位20，本领域技术人员应当理解的是，可以提供多个样品接收部位。另外，所述样品接收部位的位置可以与所示出的实施方案不同。装置10还包括包含检测配体的部位25。所述检测配体以可移动的方式容纳在部位25内部。换句话说，所述检测配体能够通过上述横向流动从检测部位25带走。根据这种示意性的，非限定性实施例，将3-7μL，优选5μL检测配体涂在部位25的每cm宽度上并且干燥。在每毫升悬浮液中，检测配体优选包括10-200μg，优选50μg的抗体，所述抗体缀合10-100nm，优选40nm的胶体金颗粒。在所示出的实施方案中，包括检测配体的部位25和生物样品接收部位20是作为条15上的单独并不同部位说明的。不过，在本发明的范围内，这两个部位可以组合，以便形成条15的单一的不易区分的部位。

还可以任选在条15上提供对照线30。当存在时，对照线30限定了包括对照试剂的部位。对照线30中包含的对照试剂是不可移动的。根据说明性的，非限定性实施例，在对照线30的每cm宽度上施加0.1-10μg，优选1μg对照试剂。

在所示出的实施方案中提供了第一捕获区35，并且与前面所提到的条15的部位形成横向流动连通。第一捕获区35中包括捕捉剂。所述捕捉剂被固定容纳在第一捕获区35内。在可用于CD4测定的实施方案中，在第一捕获区35的每cm宽度上施加2ng的捕捉剂(假设每个细胞60,000 CD4分子，100μL样品血液，捕获区以100个CD4细胞/μl饱和，5mm宽度的条，抗体的摩尔量为150,000g/mol)。

根据本发明的另一个可选特征，可以将裂解剂添加到条状材料15的各个部位。例如，所述裂解剂可以包含在所述样品接收部位20内部，或位于所述样品接收部位20和第一捕获区35之间的条15的任何部位。合适的裂解剂包括，例如，两性离子3-10和3-14，皂草苷，TritonX100，Tween 20，SDS(十二烷基硫酸钠)和CTAB。

根据所示出的实施方案，分别在条15额外提供第二，第三和第四捕获区40，45和50。应当理解的是，在本发明范围内，条15至少包括一个捕获区。根据另一种实施方案，条15可以包括至少两个捕获区。根据另一个实施方案，条15可以包括至少四个捕获区。

根据所示出的实施方案，所述捕获区是不同的并且在横向流动方向LF上是彼此分离的。不过，本发明可以理解的是，一个或多个捕获区可以组合和/或以其他方式融合。另外，捕获区的位置，形状，大小和结构还可以与所示出的实施方案不同。

图2所示出的实施方案大体上相当于图1所示实施方案，不过，它还包括任选的壳体55。壳体55可以用任何合适材料制成。例如，所述壳体可以用塑料，如Mylar制成。壳体55至少部分封闭或环绕条15。参见图2，所述壳体可以具有样品接收部位窗口60，对照线窗口62，和捕获区窗口65。根据所示出的实施方案，包含检测配体的部位因为壳体55而使得用户看不清楚。当然，应当理解的是，包含检测配体的部位可以使用户通过所述壳体看见。另外，壳体55可以用透明的或半透明的塑料材料制成。

壳体55可任选地设有标记70，它可以识别确定存在于装置10的生物样品中的目标分析物浓度的各种降解。从图2中所示出的标记70可以看出，可以确定存在于生物样品中的分析物浓度的特定范围内的值，正如本文将要进一步说明的。

图3A-3D所示出的实施方案包括结合图1和2所示出的实施方案披露的很多特征。一般来说，图3所示出的实施方案与前面所披露的实施方案的差别在于，每一个条包括用于指示目标分析物的阈值浓度水平的单一的捕获区。只有在生物样品中存在特定的，预定浓度的分析物时才会在捕获区内提供阳性标记。

因此，上述说明，以及以下说明同样适用于在图3A-3D所示出的条。

根据图3A所示出的实施方案，装置100a是由支撑材料115a提供的，大体上制成条状。条115a包括样品接收部位120a，包含检测配体125a的部位，和任选的对照线130a。包含在部位125a中的检测配体是可移动的，因此可以通过横向流动从部位125a转移走。对照线130a形成了包含至少一种对照试剂的部位。所述对照试剂固定包含在对照线130a内。所示出的第一捕获区134a为分离的形式，并与上述条115a上的部位横向流动连通。当然，如结合上述实施方案进行解释的，条115a的各个部位的位置数量和排列可以与所示出的实施方案不同。因此，可以参见前面结合图1和2所作的说明。捕获区140a包括特定的以预定数量提供的捕捉剂。

参见图3B-3D，条115b-d可以分别具有第一和第二捕获区134b-d和140b-d。在捕获区134b-d上提供的捕捉剂的数量被用于捕捉包含在所述生物样品中的预定的特定目标分析物的数量。第一捕获区134b-d本身不被用于提供与样品中所包含的目标分析物数量相关的任何标记。根据所示出的实施方案，将第二捕获区140b-d用于这一目的。第二捕获区140b-d其中还包括特定的预定数量的捕捉剂。所述捕捉剂同样固定容纳在第二捕获区140b-d中。不过，在本发明范围内，所述捕获区的数量，位置和排列可以改变。

图4是本发明的另一种实施方案的示意图，其中，装置100具有上文结合图3A-3D所述实施方案相同的特征，不过还包括一个可选的壳体部件155。壳体155可以用任何合适材料制成。例如，壳体155可以用塑料，如Mylar制成。任选的壳体155可以设有样品接收部位窗口160，对照线窗口162，捕获区窗口165和标记170。根据所示出的实施方案，因为壳体155的存在而看不见第一捕获区。其中，第一捕获区134对于包含在生物样品中的分析物的数量来说没有提供有用的标记，该部位勿需被用户看见。不过，可以理解的是，壳体155可以改进，以便至少条115的该额外部位是用户可以看见的。或者，壳体155可以用透明的或半透明的塑料材料制成。

上述装置可以用本领域所熟悉的技术制作。上述试剂可任选地以液体形式制备，以便施加到支撑材料中和/或之上。一旦与所述支撑材料接触，所述液体制剂会干燥并且附着在所述支撑材料上。如果需要的话，可以将常用填料，粘接剂，表面活性剂等掺入所述液体制剂。另外，还可以将粘接剂材料掺入液体制剂组合物，以便有利于与所述支撑材料粘接。

理想的是，精确控制导入任何特定部位的支撑材料中的试剂的体积。因此，本发明包括使用移液管，微量移液管等控制所导入的试剂的体积。另外，可能需要隔离或限制引入特定试剂的部位。该部位可以按照本领域技术人员所公知的技术控制。例如，在本发明的范围内，本发明上述条的一个或多个部位可以通过非吸附性和/或疏水性部位隔离。这种隔离可以通过在所述区间面积处理所述支撑材料实现，或引入能赋予所需特性的不同材料的部分或片段。

从上文对图1-4所示实施方案的说明可以看出，以使它们固定在里面的方式将某些试剂引入支撑材料是理想的。所述固定可以通过任何常规技术实现，如蒸发性沉积，吸附，共价结合或免疫固定。所述技术可以详细参见，例如，美国专利号4,517,288和4,186,146，以上专利的完整内容被以全文形式收作本文参考。同样希望能够以使它们在支撑材料中保持可移动的方式将某些试剂引入所述支撑材料。这一目的可以通过简单地通过移液管将小体积的液体试剂溶液吸移到所需部位实现。这些技术为本领域技术人员所熟知。

根据本发明的另一方面，将披露用于分析目标分析物的方法和技术。为了进行说明，参见图1-4所示实施方案。不过，应当理解的是，本发明的方法和技术不一定局限于图1-4所示实施方案的机械结构和配置。

下面将更详细地说明按照本发明原理进行的分析的典型实施方案，并且通过夹心类型的分析方法进行说明。不过，本发明可以理解的是，本领域普通技术人员在掌握了本发明所包含的技术之后，可以通过实施竞争类型和/或抑制类型的分析实现相同的目的。因此，本发明的方法不一定被理解成局限于夹心类型的分析方法。

按照本发明进行的分析方法始于收集合适的生物样品(仅仅是出于方便目的，结合图1和3B进行说明)。合适的样品体积可以有很大的变化。例如，可以使用1-100μl的样品。根据本发明的一种实施方案，所述生物样品包括全血。将生物样品添加到测试条(15，115b)的样品接收部位(20，120b)。测试条材料能够促进所述材料内生物样品的横向流动(LF)。所述生物样品流入包含检测配体(25，125b)的部位。所述检测配体被设计成能特异性地结合被研究的特定的目标分析物。因此，当目标分析物通过横向流动穿过包含检测配体的部位时，所述目标分析物被特异性地结合并且以复合物形式移动离开上述部位。

任选含有上述复合物的生物样品通过横向流动被携带到含有对照试剂的对照线部位(30，130b)。在该区域，对照线部位起着内部方法对照的作用，并且该部位信号的检测，证实业已发生了毛细管流动，以及保持了所述装置的功能完整性。

它里面所包含的所述生物样品和复合物随后横向流向第一捕获区(35，134b)。第一捕获区包含固定捕捉剂，它被设计用于特异性地结合含有目标分析物的复合物。因此，当所述复合物通过第一捕获区时，它被固定结合在所述捕捉剂上。在所述生物样品包含的目标分析物的数量超出了第一捕获区包含的捕捉剂的能力，任何多余的目标分析物，和由此形成的复合物在所述横向流动的影响下持续转移，从而到达一个或多个任选的额外提供的捕获区。

通过以上说明可以看出，控制包含在第一捕获区内的捕捉剂的数量可用于限定超过它包含在生物样品中的目标分析物的数量和浓度不能通过的屏障。在超过该最小阈值的情况下，多余的目标分析物在横向流动的作用下自由移动到一个或多个捕获区，它们被再建立以增加接受分析的目标分析物的最小阈值水平。就此而言，在每一个捕获区内提供的捕捉剂的数量彼此可以是相同的数量。或者，包含在每一个捕获区内的捕捉剂的数量可以逐渐增加或减少。按照非限定性说明实施例，在第一捕获区内可以提供2ng的捕捉剂，在第二捕获区内可以提供2ng的捕捉剂，在第三捕获区内可以提供4ng的捕捉剂，在第四捕获区内可以提供8ng的捕捉剂。

足够数量的目标分析物，和由目标分析物和检测配体形成的复合物在上述一个或多个捕获区内的存在是通过可检测信号的产生指示的。该可检测信号能够以本领域技术人员熟知的多种不同方式产生。根据一种实施例，所述检测配体可以包括肉眼能够立即和连续看见的物质。因此，仅仅是目标分析物和检测配体之间形成的复合物在所述一个或多个捕获区内的物理存在就足以产生需要的可检测信号。或者，所述检测配体可以包括第一反应物，它可以与和目标分析物形成的复合物结合，不过，它是不可见的。然后可以在所述一个或多个捕获区内提供第二种反应物，它在与第一反应物组合和相互作用时能产生可检测信号。所述可检测信号可以是肉眼可见的，或者可以借助于独立的装置，如分光计，荧光计，或显微镜等读出或分析。作为按照本发明原理进行的分析的另一个可选方面，可以将裂解剂导入所述条状材料，它能与生物样品相互作用，以便释放目标分析物物质。显而易见的，本发明的装置和方法可用于多种不同用途，并且用于多种不同的目的。一般，当需要以简单的，精确的，快速的和低成本的方式进行测定时，本发明的装置和方法可用于对包含在生物样品中的目标分析物的数量进行半定量分析。合适的，非限定性的用途可以包括血糖监测，以及病毒性疾病，如HIV/AIDS的诊断和治疗。业已发现，CD4细胞数量的减少是HIV作用的结果，而CD4细胞的耗尽是免疫缺陷的指标。就此而言，疾病控制中心(CDC)业已设计出HIV感染的分类系统，它强调了CD4细胞数量的临床重要性。所述CDCs分类系统基于表明威胁生命的条件性疾病的发展和CD4细胞数量之间的密切联系的研究。就此而言，随着CD4细胞数量减少，条件性疾病的危险和严重性增加。因此，CD4细胞数量被用于指导HIV-感染个体的临床和治疗控制。CDC表明抗逆转录病毒治疗应当被考虑用于CD4数量低于500细胞/μl的所有个体，并且，推荐对CD4细胞数量低于200细胞/μl的所有患者进行抗卡氏肺囊虫性肺炎(PCP)的预防性治疗。

CD4淋巴细胞细胞计数的三种CDC类型如下：

类型1：大于或等于500细胞/μl；

类型2：200-499细胞/μl；和

类型3：少于200细胞/μl。

通过以上说明可以很容易看出，本发明的装置和技术可用于确定患者的CD4细胞数量属于哪一种CDC类型。例如，根据本发明，第一捕获区可以具有特定数量的捕捉剂，以便只有在存在于生物样品中的CD4细胞数量接近100细胞/μl或以上时才在第一捕获区产生可检测信号。可以提供第二捕获区，以便只有在CD4细胞浓度接近200细胞/μl或以上时才能产生可检测信号。可以提供第三捕获区，在它里面含有合适数量的捕捉剂，以便只有在生物样品中存在大约400个CD4细胞/μl时才能在第三捕获区产生可检测信号。可以在第四捕获区提供合适数量的捕捉剂，以便只有在存在大约800个CD4细胞/μl时才会产生可检测信号。在本发明的范围内，可以根据要求改变所提供的捕获区的特定浓度和/或数量，以便实现特定的诊断目的。CD4细胞数量可广泛认可为重要的诊断工具，用于确定患者应当开始抗病毒治疗的过程，以及作为监测所述抗病毒治疗效力和效果的重要工具。因此，应当进行CD4细胞数量的频繁确定。本发明的装置和方法提供了经常以半定量方式测定CD4细胞数量的简单的，精确的，快速的和节省成本的方法。

下面将说明本发明原理所包含的特定非限定性实施例，以便进一步说明本发明的构思。

实施例1

在本实施例中，可以对人体血液中的CD4淋巴细胞的数量进行半定量测定。通过用刺血针对手指进行点刺从试验对象体内获得一滴血液，并且涂在横向流动装置上的接收生物样品的部位。然后在所述接收部位添加两滴合适的缓冲液，如磷酸盐缓冲盐水，以便促进横向流动。所述装置由垫组成，例如，人造纤维或玻璃纤维，用于接收血液样品。裂解剂被浸渗入所述垫中，以便裂解血液细胞。在同一个垫中还有检测抗体(对CD4抗原特异的单克隆抗体)，它是与胶体金缀合的。在该垫下面是一条硝酸纤维素带，一般为5mm宽和30mm长，所述垫位于该条的一个末端。在该条的另一个末端，有一个吸收垫与该条接触，以便促进并且维持液体的毛细管流动。所述血液样品中的流体会因为毛细管作用而向所述条的上方(″上游″)移动，在本实施例中，固定沉积在硝酸纤维素条上的是四个捕捉抗体区域，它们能够与CD4-检测复合物形成夹心复合物。最靠近样品沉积区的捕捉区包括足够的捕捉抗体，以便被来自100 CD4淋巴细胞/μL样品的当量的CD4抗原饱和。第二，第三和第四捕捉区同样包含能分别被相当于每μL样品200，400和800 CD4淋巴细胞饱和。让所述条显影15分钟，此时，统计所述条上可见带的数量。在血液样品之后，通过使用洗涤溶液清除由血红蛋白引起的任何背景颜色，可增强所述测试条的可读性。带的数量表示了血液样品中CD4细胞的数量。如果只出现了第一条带，CD4细胞的含量为50-100细胞/μL。如果只出现了第一和第二条带，细胞水平为大约200细胞/μL。如果出现了前三条带，细胞水平为大约400细胞/μL，如果所有四条带都出现了，细胞水平大约800细胞/μL。

尽管通过多种不同形式的实施方案对本发明进行了充分说明，正如结合本发明的优选实施方案所作的详细说明，应当理解的是，应当被视为本发明原理的典范，而不是要将本发明局限于本文所示出的和披露的特定实施方案。本领域技术人员在不超出本发明构思的前提下，可以作出各种改进。

Claims (57)

1.一种装置，包括：

能够提供横向流动的一种或多种支撑材料，所述一种或多种支撑材料包括：

用于接收包含目标分析物的生物样品的部位；

包括可移动地容纳的检测配体的部位，其中，所述检测配体能够与所述目标分析物形成复合物，并且，其中，包括所述可移动地容纳的检测配体的部位和用于接收所述生物样品的部位可以是分开的部位，相同部位，或部分相同部位；

第一捕获区，包括预定数量的固定捕捉剂，所述固定捕捉剂能够特异性地结合所述复合物；

第二捕获区，包括所述固定捕捉剂；和

裂解剂。

2.如权利要求1的装置，其中，所述用于接收所述生物样品的部位、包括所述可移动地容纳的检测配体的部位、第一捕获区和第二捕获区排列在所述一种或多种支撑材料中，以便样品能够依次横向流动通过用于接收所述生物样品的部位，包括所述可移动地容纳的检测配体的部位，第一捕获区，和第二捕获区。

3.如权利要求1的装置，其中，所述一种或多种支撑材料包括纤维素酯，DEAE，玻璃，尼龙，颗粒二氧化硅，聚苯乙烯，聚乙烯，聚酰胺，聚丙烯酰胺，聚乙烯，聚丙烯，纤维素琼脂糖，或葡聚糖。

4.如权利要求1的装置，其中，所述一种或多种支撑材料包括一个条，它包括用于接收所述生物样品的部位、包括所述可移动地容纳的检测配体的部位、第一捕获区、第二捕获区，和裂解剂。

5.如权利要求1的装置，其中，所述目标分析物是存在于CD4淋巴细胞中的CD4抗原。

6.如权利要求1的装置，其中，所述固定捕捉剂包括能够特异性地结合所述存在于CD4淋巴细胞中的CD4抗原的抗体。

7.如权利要求1的装置，其中，所述检测配体包括与抗体缀合的胶体金。

8.如权利要求1的装置，其中，所述存在于第一捕获区内的预定数量足以以特定水平结合所述复合物。

9.如权利要求8的装置，其中，所述第二捕获区包括预定数量的所述固定捕捉剂，其足以以第二特定水平结合所述复合物。

10.如权利要求9的装置，其中，所述第二捕获区能够指示至少第二数量的目标分析物在所述样品中的存在。

11.如权利要求10的装置，其中，所述一种或多种支撑材料还包括第三捕获区，它包括预定数量的所述固定捕捉剂。

12.如权利要求11的装置，其中，所述一种或多种支撑材料还包括第四捕获区，它包括预定数量的所述固定捕捉剂。

13.如权利要求12的装置，其中，所述第三捕获区能够指示至少第三数量的目标分析物存在于所述样品中，而第四捕获区能够指示至少第四数量的目标分析物存在于所述样品中，其中，所述第三数量大于第二数量，而第四数量大于第三数量。

14.如权利要求1的装置，还包括：

含有固定对照试剂的对照线。

15.如权利要求13的装置，其中，所述目标分析物是存在于CD4淋巴细胞中的CD4抗原，所述可移动地容纳的检测配体能够与CD4抗原形成复合物，所述固定捕捉剂能特异性地结合所述复合物，并且，第一捕获区能够指示在所述样品中存在至少大约100个CD4细胞/μl。

16.如权利要求15的装置，其中，所述第二捕获区能够指示在所述样品中存在至少大约200个CD4细胞/μl。

17.如权利要求16的装置，其中，所述第三捕获区能够指示在所述样品中存在至少大约400个CD4细胞/μl。

18.如权利要求17的装置，其中，所述第四捕获区能够指示在所述样品中存在至少大约800个CD4细胞/μl。

19.如权利要求1的装置，还包括至少部分覆盖所述一种或多种支撑材料的壳体。

20.如权利要求1的装置，其中，所述裂解剂位于所述样品接收部位。

21.如权利要求1的装置，其中，所述裂解剂横向位于所述样品接收部位和第一捕获区之间，以便从所述样品接收部位横向流过的样品在到达第一捕获区之前能够接触所述裂解剂。

22.一种装置，包括：

能够提供横向流动的一种或多种支撑材料，所述一种或多种支撑材料包括：

用于接收包含存在于CD4淋巴细胞中的CD4抗原的生物样品的部位；

包括可移动地容纳的检测配体的部位，其中，所述检测配体能够与所述CD4抗原形成复合物，并且，其中，包括所述可移动地容纳的检测配体的部位和用于接收所述生物样品的部位可以是分开的部位，相同部位，或部分相同部位；

第一捕获区，包括预定数量的固定捕捉剂，所述固定捕捉剂能够特异性地结合所述复合物；和

包括所述固定捕捉剂的第二捕获区。

23.如权利要求22的装置，其中，所述用于接收所述生物样品的部位、包括所述可移动地容纳的检测配体的部位、第一捕获区和第二捕获区排列在所述一种或多种支撑材料中，以便样品能够依次横向流动通过用于接收所述生物样品的部位，包括所述可移动地容纳的检测配体的部位，第一捕获区，和第二捕获区。

24.如权利要求22的装置，其中，所述一种或多种支撑材料包括纤维素酯， DEAE，玻璃，尼龙，颗粒二氧化硅，聚苯乙烯，聚乙烯，聚酰胺，聚丙烯酰胺，聚乙烯，聚丙烯，纤维素琼脂糖，或葡聚糖。

25.如权利要求22的装置，其中，所述一种或多种支撑材料包括一个条，它包括用于接收所述生物样品的部位，包括所述可移动地容纳的检测配体的部位，第一捕获区，和第二捕获区。

26.如权利要求22的装置，其中，所述固定捕捉剂包括能够特异性地结合所述存在于CD4淋巴细胞中的CD4抗原的抗体。

27.如权利要求22的装置，其中，所述检测配体包括与抗体缀合的胶体金，所述抗体能识别CD4抗原，并且能够与所述固定捕捉剂和CD4抗原形成夹心复合物。

28.如权利要求22的装置，其中，所述第二捕获区包括预定数量的所述固定捕捉剂，并且能够指示至少第二种数量的CD4抗原存在于所述样品中。

29.如权利要求28的装置，其中，所述一种或多种支撑材料还包括第三捕获区，它包括预定数量的所述固定捕捉剂。

30.如权利要求29的装置，其中，所述一种或多种支撑材料还包括第四捕获区，它包括预定数量的所述固定捕捉剂。

31.如权利要求30的装置，其中，所述第三捕获区能够指示至少第三数量的CD4抗原存在于所述样品中，第四捕获区能够指示至少第四数量的CD4抗原存在于所述样品中，其中，所述第三数量大于第二数量，而第四数量大于第三数量。

32.如权利要求22的装置，还包括：

含有固定对照试剂的对照线。

33.如权利要求22的装置，其中，所述第一捕获区能够指示在所述样品中存在至少大约100个CD4细胞/μl。

34.如权利要求28的装置，其中，所述第二捕获区能够指示在所述样品中存在至少大约200个CD4细胞/μl。

35.如权利要求31的装置，其中，所述第三捕获区能够指示在所述样品中存在至少大约400个CD4细胞/μl。

36.如权利要求35的装置，其中，所述第四捕获区能够指示在所述样品中存在至少大约800个CD4细胞/μl。

37.如权利要求2 2的装置，还包括至少部分覆盖所述一种或多种支撑材料的壳体。

38.一种用于测定生物样品中目标分析物的数量的方法，包括以下步骤：

提供一种装置，包括：

能够提供横向流动的一种或多种支撑材料，所述一种或多种支撑材料包括：

用于接收所述生物样品的部位；

包括可移动地容纳的检测配体的部位，其中，所述检测配体能够与所述目标分析物形成复合物，并且，其中，包括所述可移动地容纳的检测配体的部位和用于接收所述生物样品的部位可以是分开的部位，相同部位，或部分相同部位；

第一捕获区，包括预定数量的固定捕捉剂，所述固定捕捉剂能够特异性地结合所述复合物；

包括所述固定捕捉剂的第二捕获区；和

裂解剂；

将所述样品放置在用于接收所述生物样品的部位；和

使用由所述检测配体提供的视觉指示，确定有关样品中目标分析物数量的信息。

39.如权利要求38的方法，其中，所述用于接收所述生物样品的部位、包括所述可移动地容纳的检测配体的部位、第一捕获区和第二捕获区排列在所述一种或多种支撑材料中，以便所述生物样品依次并且横向流过用于接收所述生物样品的部位，包括所述可移动地容纳的检测配体的部位，第一捕获区，和第二捕获区。

40.如权利要求38的方法，其中，所述目标分析物是存在于CD4淋巴细胞中的CD4抗原，所述捕捉剂包括能够特异性地结合呈递所述CD4抗原的CD4淋巴细胞的抗体。

41.如权利要求38的方法，其中，存在于第一捕获区内的所述预定数量足以以特定水平结合所述复合物。

42.如权利要求38的方法，其中，所述第二捕获区包括预定数量的所述固定捕捉剂，足以以第二特定水平结合所述复合物，并且，其中，第二捕获区内的所述检测配体能指示在所述样品中存在至少第二数量的目标分析物。

43.如权利要求42的方法，其中，所述一种或多种支撑材料还包括第三捕获区，它包括预定数量的所述固定捕捉剂，其中，所述一种或多种支撑材料还包括第四捕获区，它包括预定数量的所述固定捕捉剂，并且，其中，所述第三捕获区能够指示在所述样品中至少存在第三数量的目标分析物，而第四捕获区能够指示在所述样品中至少存在第四数量的目标分析物，其中，所述第三数量大于第二数量，第四数量大于第三数量。

44.如权利要求38的方法，其中，所述目标分析物是存在于CD4淋巴细胞中的CD4抗原，所述可移动地容纳的检测配体能够与所述CD4抗原形成复合物，所述固定捕捉剂能特异性地结合所述复合物，并且，第一区能够指示在所述样品中存在至少大约100个CD4细胞/μl。

45.如权利要求4 4的方法，其中，所述第二捕获区能够指示在所述样品中存在至少大约200个CD4细胞/μl。

46.如权利要求45的方法，其中，所述第三捕获区能够指示在所述样品中存在至少大约400个CD4细胞/μl。

47.如权利要求46的方法，其中，所述第四捕获区能够指示在所述样品中存在至少大约800个CD4细胞/μl。

48.用于测定生物样品中CD4淋巴细胞数量的方法，包括以下步骤：

提供一种装置，包括：

一种或多种能够提供横向流动的支撑材料，所述一种或多种支撑材料包括：

用于接收所述生物样品的部位；

包括可移动地容纳的检测配体的部位，其中，所述检测配体能够与CD4淋巴细胞上的CD4抗原形成复合物，并且，其中，包括所述可移动地容纳的检测配体的部位和用于接收所述生物样品的部位可以是分开的部位，相同部位，或部分相同部位；

第一捕获区，包括预定数量的固定捕捉剂，所述固定捕捉剂能够特异性地结合所述复合物；和

包括所述固定捕捉剂的第二捕获区；

将所述样品施加在用于接收所述生物样品的部位；和

使用由所述检测配体提供的视觉指示确定有关所述样品中CD4淋巴细胞数量的信息。

49.如权利要求38的方法，其中，所述用于接收所述生物样品的部位、包括所述可移动地容纳的检测配体的部位、第一捕获区和第二捕获区排列在所述一种或多种支撑材料中，以便所述生物样品依次并且横向流过用于接收所述生物样品的部位，包括所述可移动地容纳的检测配体的部位，第一捕获区，和第二捕获区。

50.如权利要求38的方法，其中，所述目标分析物是存在于CD4淋巴细胞中的CD4抗原，并且，所述捕捉剂包括能够特异性地结合呈递所述CD4抗原的CD4淋巴细胞的抗体。

51.如权利要求48的方法，其中，存在于第一捕获区内的所述预定数量足以以特定水平结合所述复合物。

52.如权利要求48的方法，其中，所述第二捕获区包括预定数量的所述固定捕捉剂，其足以以第二特定水平结合所述复合物，并且，其中，第二捕获区内的所述检测配体能指示在所述样品中存在至少第二数量的CD4淋巴细胞。

53.如权利要求52的方法，其中，所述一种或多种支撑材料还包括第三捕获区，它包括预定数量的所述固定捕捉剂，其中，所述一种或多种支撑材料还包括第四捕获区，它包括预定数量的所述固定捕捉剂，并且，其中，所述第三捕获区能够指示在所述样品中存在第三数量的CD4淋巴细胞，并且第四捕获区能够指示在所述样品中存在第四数量的CD4淋巴细胞，其中，所述第三数量大于第二数量，第四数量大于第三数量。

54.如权利要求48的方法，其中，所述第一区能够指示在所述样品中存在至少大约100个CD4细胞/μl。

55.如权利要求52的方法，其中，所述第二捕获区能够指示在所述样品中存在至少大约200个CD4细胞/μl。

56.如权利要求55的方法，其中，所述第三捕获区能够指示在所述样品中存在至少大约400个CD4细胞/μl。

57.如权利要求56的方法，其中，所述第四捕获区能够指示在所述样品中存在至少大约800个CD4细胞/μl。

Images