CN106290829A - 一种四合一联合检测试纸盒及制备工艺 - Google Patents

一种四合一联合检测试纸盒及制备工艺 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种四合一联合检测试纸盒，其试纸条的包被膜自上而下依次设有质控区和检测区，所述质控区和检测区上分别设有质控线和检测线，所述检测线由自上而下依次排列的艾滋病毒1/2型抗体检测线、乙型肝炎表面抗原检测线、丙型肝炎抗体检测线、梅毒螺旋体抗体检测线组成；本发明还涉及上述试纸盒制备工艺，包括标记垫制备、检测线制备、质控线制备、样品垫制备、样品稀释液制备。本发明产品可在一根试纸条上一次完成四项传染病的同时检测，样本需求量少，检测快速、准确。

Description

一种四合一联合检测试纸盒及制备工艺
技术领域
本发明属于医学检验领域，涉及一种艾滋病毒1/2型(HIV1/2)抗体、梅毒螺旋体抗体、丙型肝炎抗体和乙型肝炎表面抗原的四合一联合检测试纸盒及制备工艺。
背景技术
1971年Engvall和Perlmann发表了ELISA(enzyme linked immunosorbent assay，酶联免疫吸附剂测定)用于IgG定量测定的文章，使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法，其基本原理是：1、使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性；2、使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。
在测定时，把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应，用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析。由于酶的催化频率很高，故可极大地地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。
酶联免疫吸附剂测定的主要试剂为固相的抗原或抗体、酶标记的抗原或抗体和与标记酶直接关联的酶反应底物。在建立某一酶联免疫吸附剂测定中，应对包被抗原或抗体的浓度和酶标抗原或抗体的浓度予以选择，以达到最合适的测定条件和节省测定费用。要使酶联免疫吸附剂测定得到准确的结果，不论是定性的还是定量的，必须严格按照规定的方法制备试剂和实施测定，其他一般性试剂，如包被缓冲液、洗涤液、标本稀释液、结合物稀释液、底物工作液和酶反应终止液等，配制时也不可掉以轻心。缓冲液可于冰箱中短期保存，使用前应观察是否变质，蒸馏水的质量在酶联免疫吸附剂测定中也至关重要，最好使用新鲜重蒸馏的。
上述测定过程反应时间较长，反应条件比较局限，操作繁琐，需要仪器辅助测量，价格昂贵，一次测试只能完成一种抗原或抗体的检测。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于提供一种检测简单、低成本，可一次联合检测艾滋病毒1/2型抗体、梅毒抗体、丙肝等抗体和乙肝表面抗原的四合一联合检测试纸盒及制备工艺。
为解决上述技术问题，本发明提供的一种四合一联合检测试纸盒，包括检测板、样本稀释液和一次性塑料吸管三个部分，所述检测板包括塑料模具和位于塑料模具内的试纸条，所述试纸条包括吸收垫、包被膜、标记垫、样品垫，其特征在于，所述包被膜为硝酸纤维素膜，自上而下依次设有质控区和检测区，所述质控区和检测区上分别设有质控线和检测线，所述检测线由自上而下依次排列的艾滋病毒1/2型抗体检测线、乙型肝炎表面抗原检测线、丙型肝炎抗体检测线、梅毒螺旋体抗体检测线组成。
优选地，所述试纸条长度为60mm以上，宽度为3mm以上，所述艾滋病毒1/2型抗体检测线、乙型肝炎表面抗原检测线、丙型肝炎抗体检测线、梅毒螺旋体抗体检测线距离试纸条底边的距离分别为35.5mm、32.5mm、29.5mm、26.5mm。
所述的四合一联合检测试纸盒的制备工艺包括以下步骤：
(1)将硝酸纤维素膜粘在塑料大卡上面，然后用蛋白质稳定剂将检测用抗体/抗原配进行标记，配制成溶液，并通过机器将溶液均匀的喷在粘好的硝酸纤维素膜上，烘干后，得到处理好的含有质控区和检测区的片材备用；
(2)将抗体/抗原和胶体金/乳胶颗粒联结在一起，并配制成溶液，通过机器将溶液处理到载体上，最后烘干，得到处理好的标记垫备用；
(3)用样品垫处理溶液处理玻璃纤维，烘干后，得到处理好的样品垫备用；
(4)配置样本稀释液；
(5)将上述处理好的片材、标记垫、样品垫组装在一起，并加上滤纸，最后用切割机将其切割成所需宽度的单人份试纸条，用塑料模具包装成检测板，放入样本稀释液和一次性塑料吸管，封口，待检，待检品抽检其灵敏度、特异性和稳定性等合格后入库。
所述标记垫的制备方法为：
(1)丙型肝炎重组抗原-胶体金结合物制备：
将氯金酸用纯水稀释至0.01％～0.04％，采用还原法制备成带负电的紫红色疏水的、金颗粒大小在30～60nm之间胶体金溶液，加入丙型肝炎重组抗原后使用搅拌机搅拌均匀，经离心机离心，取沉淀物经金标浓缩系统制备成金标浓缩原液即得到丙型肝炎重组抗原-胶体金结合物；
(2)梅毒螺旋体重组抗原-乳胶结合物制备：
将乳胶颗粒用纯水稀释至1％，加入梅毒螺旋体重组抗原和蛋白偶联剂后，室温下旋转混合反应8h～23h，经离心机离心，取沉淀物经乳胶浓缩系统制备成乳胶颗粒重悬液即得到梅毒螺旋体重组抗原-乳胶结合物；
(3)艾滋病毒重组抗原-乳胶结合物制备：
将乳胶颗粒用纯水稀释至1％，分别加入HIV-1型和HIV-2型艾滋病毒重组抗原和蛋白偶联剂后，分别室温下旋转混合反应8h～24h，经离心机离心，取沉淀物经乳胶浓缩系统制备成乳胶颗粒重悬液即得到HIV-1型和HIV-2型艾滋病毒重组抗原-乳胶结合物；
(4)鼠IgG-胶体金溶液制备：
将氯金酸用纯水稀释至0.01％～0.04％，采用还原法制备成带负电的紫红色疏水的、金颗粒大小在30～60nm之间胶体金溶液，加入鼠IgG后使用搅拌机搅拌均匀，经离心机离心，取沉淀物经金标浓缩系统制备成金标浓缩原液即得到鼠IgG-胶体金溶液；
(5)抗乙肝表面抗原抗体-胶体金结合物制备：
将氯金酸用纯水稀释至0.01％～0.04％，采用还原法制备成带负电的紫红色疏水的、金颗粒大小在30～60nm之间胶体金溶液，加入抗乙肝表面抗原抗体后使用搅拌机搅拌均匀，经离心机离心，取沉淀物经金标浓缩系统制备成金标浓缩原液即得到抗乙肝表面抗原抗体-胶体金结合物；
(6)将上述胶体金结合物或乳胶结合物包被：
将梅毒螺旋体重组抗原-乳胶结合物用Tris缓冲液稀释成0.025～0.3mg/ml、HIV-1型艾滋病毒重组抗原-乳胶结合物用Tris缓冲液稀释成0.1～0.5mg/ml、HIV-2型艾滋病毒重组抗原-乳胶结合物用Tris缓冲液稀释成0.05～0.3mg/ml、鼠IgG-胶体金溶液用Tris缓冲液稀释成0.01～1.0mg/ml，并加入蛋白质稳定剂一和蛋白质稳定剂二，包被到聚酯膜上，于37℃环境下恒温干燥2h～24h；
将丙型肝炎重组抗原-胶体金结合物、抗乙肝表面抗原抗体-胶体金结合物加入蛋白稳定剂一和蛋白稳定剂二，并用羊血清释成分别稀释成0.1～0.35mg/ml、0.05～0.3mg/ml，包被到聚酯膜上，37℃恒温干燥2h～24h；
所述Tris缓冲液稀释液是含有三羟甲基氨基甲烷6g/L、酪蛋白钠盐5g/L、聚乙烯吡咯烷酮10g/L、防腐剂0.2-0.4g/L的纯化水溶液。
所述检测线的制备方法为：将HIV-1型重组抗原、HIV-2型重组抗原分别加入蛋白质稳定剂一，用磷酸缓冲液一分别稀释成0.1～2.0mg/ml、0.05～1.0mg/ml；将抗乙肝表面抗原抗体加入蛋白质稳定剂一，用磷酸缓冲液二稀释成0.5～3.0mg/ml；将丙型肝炎重组抗原加入蛋白质稳定剂二，用磷酸缓冲液二稀释成0.1～2.0mg/ml；将梅毒螺旋体重组抗原加入蛋白质稳定剂一，用磷酸缓冲液二稀释成0.1～1.0mg/ml，然后用点膜划膜设备机依次包被于硝酸纤维素膜的检测区的艾滋病毒1/2型抗体检测线、乙型肝炎表面抗原检测线、丙型肝炎抗体检测线、梅毒螺旋体抗体检测线上，将包被以上原料的硝酸纤维素膜在45℃环境下恒温干燥2h～24h。
优选地，所述磷酸缓冲液一含有氯化钠8.775gl/L、磷酸氢二钠2.13g/L、聚乙二醇2.5g/L、聚乙烯吡咯烷酮3g/L。
所述质控线的制备方法为：取羊抗鼠IgG加入蛋白稳定剂一，并用磷酸缓冲液二稀释成0.1-3.0mg/ml，然后用点膜划膜设备机包被于硝酸纤维素膜的质控区的质控线上，将包被羊抗鼠IgG后的硝酸纤维素膜在45℃环境下恒温干燥2h～24h。
优选地，所述磷酸缓冲液二含有氯化钠8.775g/L、磷酸氢二钠2.13g/L。
所述样品垫的制备方法为：取48.5ml±2ml含0.2g/L～20g/L表面活性剂的样品垫处理溶液喷洒在玻璃纤维材料上，然后将其放置于37℃环境下恒温干燥8h～24h，备用。所述样品垫处理液是添加抗-RBC和碳酸钠的母液，其母液是含有三羟甲基氨基甲烷、酪蛋白钠盐、聚乙烯吡咯烷酮、防腐剂Proclin-300的纯化水溶液。
所述样本稀释液是含有氯化钠、磷酸氢二钠、酪蛋白钠盐、防腐剂Proclin300的的纯化水溶液。
本发明的有益效果在于：
1、通过对本发明的四合一检测试纸进行产品检验(检验国家参考品或标化的企业参考品)，本发明试纸盒可在一根试纸条上一次能完成四项传染病(艾滋病毒1/2型抗体，梅毒螺旋体抗体，丙型肝炎抗体和乙型肝炎表面抗原)的同时检测，灵敏度和特异性都符合要求。
2、与单项检测相比，将四项传染病检测统一于一个试纸条上，节约玻纤、NC膜和滤纸等材料，样本需求量少。
附图说明
下面结合附图和实施方式对本发明作进一步详细的说明。
图1为四合一联合检测试纸盒的各部件结构示意图。
图2为检测板的结构示意图。
图3为试纸条的结构示意图。
图4为试纸条的侧视示意图。
图5为四合一联合检测试纸盒的制备工艺流程图。
图6为四合一联合检测试纸盒的加样及检测结果示意图。
具体实施方式
(一)四合一联合检测试纸盒的结构
如图1-4所示，四合一联合检测试纸盒，包括检测板1、样本稀释液2和一次性塑料吸管3三个部分，所述检测板1包括塑料模具4和位于塑料模具4内的试纸条5。
如图3-4所示，所述试纸条5包括吸收垫6、包被膜7、标记垫8、样品垫9，所述包被膜为硝酸纤维素膜，自上而下依次设有质控区和检测区，所述质控区和检测区上分别设有质控线C和检测线T，所述检测线由自上而下依次排列有T1、T2、T3、T4四条检测线。所述试纸条长度为60mm以上，宽度为3mm以上。
(二)四合一联合检测试纸盒的制备工艺流程
四合一联合检测试纸盒的制备工艺流程包括以下步骤：
(1)将硝酸纤维素膜粘在塑料大卡上面，然后用蛋白质稳定剂将检测用抗体/抗原配进行标记，配制成溶液，并通过机器将溶液均匀的喷在粘好的硝酸纤维素膜上，烘干后，得到处理好的含有质控区和检测区的片材备用；
(2)将抗体/抗原和胶体金/乳胶颗粒联结在一起，并配制成溶液，通过机器将溶液处理到载体上，最后烘干，得到处理好的标记垫备用；
(3)用样品垫处理溶液处理玻璃纤维，烘干后，得到处理好的样品垫备用；
(4)配置样本稀释液；
(5)将上述处理好的片材、标记垫、样品垫组装在一起，并加上滤纸，最后用切割机将其切割成所需宽度的单人份试纸条，用塑料模具包装成检测板，放入样本稀释液和一次性塑料吸管，封口，待检，待检品抽检其灵敏度、特异性和稳定性等合格后入库。
工艺流程如图5所示，其中灰色标记的流程为质量关键控制点。
1、标记垫制备方法
标记垫各组分如下表所示：
标记垫制备方法如下：
1)丙型肝炎重组抗原-胶体金结合物制备：
将氯金酸胶体金颗粒用纯水稀释至0.01％～0.04％，采用还原法制备成带负电的紫红色疏水的、金颗粒大小在30～60nm之间胶体金溶液，加入丙型肝炎重组抗原后使用搅拌机搅拌均匀，经离心机离心，取沉淀物经金标浓缩系统制备成金标浓缩原液即得到丙型肝炎重组抗原-胶体金结合物；
2)梅毒螺旋体重组抗原-乳胶结合物制备：
将乳胶颗粒用纯水稀释至1％，加入梅毒螺旋体重组抗原和蛋白偶联剂后，室温下旋转混合反应8h～23h，经离心机离心，取沉淀物经乳胶浓缩系统制备成乳胶颗粒重悬液即得到梅毒螺旋体重组抗原-乳胶结合物；
3)艾滋病毒重组抗原-乳胶结合物制备：
将乳胶颗粒用纯水稀释至1％，分别加入HIV-1型和HIV-2型艾滋病毒重组抗原和蛋白偶联剂后，分别室温下旋转混合反应8h～24h，经离心机离心，取沉淀物经乳胶浓缩系统制备成乳胶颗粒重悬液即得到HIV-1型和HIV-2型艾滋病毒重组抗原-乳胶结合物；
4)鼠IgG-胶体金溶液制备：
将氯金酸胶体金颗粒用纯水稀释至0.01％～0.04％，采用还原法制备成带负电的紫红色疏水的、金颗粒大小在30～60nm之间胶体金溶液，加入鼠IgG后使用搅拌机搅拌均匀，经离心机离心，取沉淀物经金标浓缩系统制备成金标浓缩原液即得到鼠IgG-胶体金溶液；
5)抗乙肝表面抗原抗体-胶体金结合物制备：
将氯金酸胶体金颗粒用纯水稀释至0.01％～0.04％，采用还原法制备成带负电的紫红色疏水的、金颗粒大小在30～60nm之间胶体金溶液，加入抗乙肝表面抗原抗体后使用搅拌机搅拌均匀，经离心机离心，取沉淀物经金标浓缩系统制备成金标浓缩原液即得到抗乙肝表面抗原抗体-胶体金结合物；
6)将上述胶体金结合物或乳胶结合物包被：
将梅毒螺旋体重组抗原-乳胶结合物用Tris缓冲液稀释成0.025～0.3mg/ml、HIV-1型艾滋病毒重组抗原-乳胶结合物用Tris缓冲液稀释成0.1～0.5mg/ml、HIV-2型艾滋病毒重组抗原-乳胶结合物用Tris缓冲液稀释成0.05～0.3mg/ml、鼠IgG-胶体金溶液用Tris缓冲液稀释成0.01～1.0mg/ml，并加入200g/L的蛋白质稳定剂蔗糖和50g/L的蛋白质稳定剂海藻糖，包被到聚酯膜上，于37℃环境下恒温干燥2h～24h；
将丙型肝炎重组抗原-胶体金结合物、抗乙肝表面抗原抗体-胶体金结合物加入200g/L的蛋白稳定剂蔗糖和50g/L的蛋白稳定剂海藻糖，并用羊血清释成分别稀释成0.1～0.35mg/ml、0.05～0.3mg/ml，包被到聚酯膜上，37℃恒温干燥2h～24h；
所述Tris缓冲液稀释液是含有三羟甲基氨基甲烷6g/L、酪蛋白钠盐5g/L、聚乙烯吡咯烷酮10g/L、防腐剂0.2-0.4g/L的纯化水溶液。
2、检测线制备方法
各检测线组分如下：
1)HIV抗体检测线组分含量：
2)乙型肝炎表面抗原检测线组分含量
3)丙型肝炎病毒抗体检测线组分含量
4)梅毒螺旋体抗体检测线组分含量
检测线的制备方法如下：
将HIV-1型重组抗原、HIV-2型重组抗原分别加入10g/L的蛋白质稳定剂蔗糖，用磷酸缓冲液一分别稀释成0.1～2.0mg/ml、0.05～1.0mg/ml；将抗乙肝表面抗原抗体加入10g/L的蛋白质稳定剂蔗糖，用磷酸缓冲液二稀释成0.5～3.0mg/ml；将丙型肝炎重组抗原加入蛋白质稳定剂30g/L的海藻糖，用磷酸缓冲液二稀释成0.1～2.0mg/ml；将梅毒螺旋体重组抗原加入10g/L的蛋白质稳定剂蔗糖，用磷酸缓冲液二稀释成0.1～1.0mg/ml，然后用点膜划膜设备机按喷量0.8ul/cm依次包被于硝酸纤维素膜的检测区的艾滋病毒1/2型抗体检测线、乙型肝炎表面抗原检测线、丙型肝炎抗体检测线、梅毒螺旋体抗体检测线上，将包被以上原料的硝酸纤维素膜在45℃环境下恒温干燥2h～24h。
上述磷酸缓冲液一含有氯化钠8.775gl/L、磷酸氢二钠2.13g/L、聚乙二醇2.5g/L、聚乙烯吡咯烷酮3g/L。
上述磷酸缓冲液二含有氯化钠8.775g/L、磷酸氢二钠2.13g/L。
3、质控线的制备方法
质控线组分含量：
质控线制备方法：
取羊抗鼠IgG加入10g/L的蛋白稳定剂蔗糖，并用磷酸缓冲液二稀释成0.1-3.0mg/ml，然后用点膜划膜设备机按喷量0.8ul/cm包被于硝酸纤维素膜的质控区的质控线上，将包被羊抗鼠IgG后的硝酸纤维素膜在45℃环境下恒温干燥2h～24h。
上述磷酸缓冲液二含有氯化钠8.775g/L、磷酸氢二钠2.13g/L。
4、样品垫的制备方法
样品垫各组分含量：
样品垫制备方法：
取48.5ml±2ml含0.2g/L～20g/L表面活性剂的样品垫处理溶液喷洒在玻璃纤维材料上，然后将其放置于37℃环境下恒温干燥8h～24h，备用。
样品垫处理液是添加1％～10％抗-RBC和1.1g/L碳酸钠的母液，其母液是含有6g/L三羟甲基氨基甲烷、5g/L酪蛋白钠盐、10gL聚乙烯吡咯烷酮、0.2g/L～0.4g/L防腐剂Proclin-300的纯化水溶液。
5、样本稀释液组分：
原料名称 使用浓度
纯化水 溶剂
氯化钠 8.775g/L
磷酸氢二钠 7.1g/L
酪蛋白钠盐 5g/L
防腐剂Proclin300 0.2g/L～0.4g/L
样本稀释液是含有氯化钠8.775g/L、磷酸氢二钠7.1g/L、酪蛋白钠盐5g/L、防腐剂Proclin300 0.2g/L～0.4g/L的纯化水溶液。
6、检验
检验标准(检验国家参考品或标化的企业参考品)：
三、具体实施例
具体实施例1：
1、制备过程：按上述制备工艺流程制备四合一联合检测试纸盒，试纸条长度为60mm，宽度为3mm，质控线和检测线距底边的距离为C/T1/T2/T3/T4：38.5mm/35.5mm/32.5mm/29.5mm/26.5mm，各组分如下：
(1)标记垫各组分主要原料如下：
(2)检测线各组分主要原料如下：
1)HIV抗体检测线组分含量：
2)乙型肝炎表面抗原检测线组分含量
3)丙型肝炎病毒抗体检测线组分含量
4)梅毒螺旋体抗体检测线组分含量
(3)质控线各组分主要原料如下：
(4)样品垫各组分主要原料如下：
(5)样本稀释液组分：
2、加样：
2滴血清/血浆(约80ul)+1滴样本稀释液(约40ul)；3滴全血(约120ul)+1滴样本稀释液，加样及检测结果示意图如图6所示。
分别对下述检测线组合的试纸盒进行灵敏度和特异性检测。
表1检测线位置关系组合试验
组合 T1 T2 T3 T4
① HCV HBsAg HIV SYP
② HBsAg HIV SYP HCV
③ HIV SYP HCV HBsAg
④ SYP HCV HBsAg HIV
⑤ HIV HBsAg SYP HCV
⑥ HIV HBsAg HCV SYP
组合①的检测结果如下：
组合②的检测结果如下：
组合③的检测结果如下：
组合④的检测结果如下：
组合⑤的检测结果如下：
组合⑥的检测结果如下：
以上实验结果的汇总数据如下：
组合 T1 T2 T3 T4 状态
① HCV HBsAg HIV SYP 易出假阳
② HBsAg HIV SYP HCV 易出假阳
③ HIV SYP HCV HBsAg 易出假阳
④ SYP HCV HBsAg HIV 易出假阳
⑤ HIV HBsAg SYP HCV 少量假阳
⑥ HIV HBsAg HCV SYP 最佳
从上表汇总数据看出，第⑥种组合为最佳组合，灵敏度和特异性都符合要求，因此，检测线的最佳组合为T1：艾滋病毒1/2型抗体检测线(HIV)、T2乙型肝炎表面抗原检测线(HBsAg)、T3丙型肝炎抗体检测线(HCV)、T4梅毒螺旋体抗体检测线(SYP)。质控线和检测线距底边的距离为C/T1/T2/T3/T4：38.5mm/35.5mm/32.5mm/29.5mm/26.5mm；该间距与模板窗口大小相关，对灵敏度影响不大，但间距过小，点膜的挑战性增加，产品设计也不美观。
对组合⑥的四合一检测试纸进行产品检验(检验国家参考品或标化的企业参考品)，结果如下：
具体实施例2：
1、制备过程：按上述制备工艺流程制备四合一联合检测试纸盒，检测线组合为T1：艾滋病毒1/2型抗体检测线(HIV)、T2乙型肝炎表面抗原检测线(HBsAg)、T3丙型肝炎抗体检测线(HCV)、T4梅毒螺旋体抗体检测线(SYP)，试纸条长度为65mm，宽度为5mm，质控线和检测线距底边的距离为C/T1/T2/T3/T4：38.5mm/35.5mm/32.5mm/29.5mm/26.5mm，各组分如下：
(1)标记垫各组分主要原料如下：
(2)检测线各组分主要原料如下：
1)HIV抗体检测线组分含量：
2)乙型肝炎表面抗原检测线组分含量
3)丙型肝炎病毒抗体检测线组分含量
4)梅毒螺旋体抗体检测线组分含量
(3)质控线各组分主要原料如下：
(4)样品垫各组分主要原料如下：
(5)样本稀释液组分：
原料名称 使用浓度
纯化水 溶剂
氯化钠 8.775g/L
磷酸氢二钠 7.1g/L
酪蛋白钠盐 5g/L
防腐剂Proclin300 0.2g/L
2、加样：
2滴血清/血浆(约80ul)+1滴样本稀释液(约40ul)；3滴全血(约120ul)+1滴样本稀释液，加样及检测结果示意图如图6所示。
灵敏度和特异性检测结果如下：
产品检验(检验国家参考品或标化的企业参考品)，结果如下：
具体实施例3：
1、制备过程：按上述制备工艺流程制备四合一联合检测试纸盒，检测线组合为T1：艾滋病毒1/2型抗体检测线(HIV)、T2乙型肝炎表面抗原检测线(HBsAg)、T3丙型肝炎抗体检测线(HCV)、T4梅毒螺旋体抗体检测线(SYP)，试纸条长度为68mm，宽度为6mm，质控线和检测线距底边的距离为C/T1/T2/T3/T4：38.5mm/35.5mm/32.5mm/29.5mm/26.5mm，各组分如下：
(1)标记垫各组分主要原料如下：
(2)检测线各组分主要原料如下：
1)HIV抗体检测线组分含量：
2)乙型肝炎表面抗原检测线组分含量
3)丙型肝炎病毒抗体检测线组分含量
4)梅毒螺旋体抗体检测线组分含量
(3)质控线各组分主要原料如下：
(4)样品垫各组分主要原料如下：
(5)样本稀释液组分：
原料名称 使用浓度
纯化水 溶剂
氯化钠 8.775g/L
磷酸氢二钠 7.1g/L
酪蛋白钠盐 5g/L
防腐剂Proclin300 0.4g/L
2、加样：
2滴血清/血浆(约80ul)+1滴样本稀释液(约40ul)；3滴全血(约120ul)+1滴样本稀释液，加样及检测结果示意图如图6所示。
灵敏度和特异性检测结果如下：
项目 全血样本1# 全血样本2# 全血样本3# 全血样本4# 全血样本5#
T1(HIV) 阴性，清晰 阴性，清晰 阴性，清晰 阴性，清晰 阴性，清晰
T2(HBsAg) 阴性，清晰 阴性，清晰 阴性，清晰 阴性，清晰 阴性，清晰
T3(HCV) 阴性，清晰 阴性，清晰 阴性，清晰 阴性，清晰 阴性，清晰
T4(SYP) 阴性，清晰 阴性，清晰 阴性，清晰 阴性，清晰 阴性，清晰
产品检验(检验国家参考品或标化的企业参考品)，结果如下：
上述说明是示例性的而非限制性的。通过上述说明本领域技术人员可以意识到本发明的许多种改变和变形，其也将落在本发明的实质和范围之内。

Claims (10)

1.一种四合一联合检测试纸盒，包括检测板、样本稀释液和一次性塑料吸管三个部分，所述检测板包括塑料模具和位于塑料模具内的试纸条，所述试纸条包括吸收垫、包被膜、标记垫、样品垫，其特征在于，所述包被膜为硝酸纤维素膜，自上而下依次设有质控区和检测区，所述质控区和检测区上分别设有质控线和检测线，所述检测线由自上而下依次排列的艾滋病毒1/2型抗体检测线、乙型肝炎表面抗原检测线、丙型肝炎抗体检测线、梅毒螺旋体抗体检测线组成。
2.根据权利要求1所述的四合一联合检测试纸盒，其特征在于，所述试纸条长度为60mm以上，宽度为3mm以上，所述艾滋病毒1/2型抗体检测线、乙型肝炎表面抗原检测线、丙型肝炎抗体检测线、梅毒螺旋体抗体检测线距离试纸条底边的距离分别为35.5mm、32.5mm、29.5mm、26.5mm。
3.一种根据权利要求1所述的四合一联合检测试纸盒的制备工艺，其特征在于，制备工艺流程包括以下步骤：
(1)将硝酸纤维素膜粘在塑料大卡上面，然后用蛋白质稳定剂将检测用抗体/抗原配进行标记，配制成溶液，并通过机器将溶液均匀的喷在粘好的硝酸纤维素膜上，烘干后，得到处理好的含有质控区和检测区的片材备用；
(2)将抗体/抗原和胶体金/乳胶颗粒联结在一起，并配制成溶液，通过机器将溶液处理到载体上，最后烘干，得到处理好的标记垫备用；
(3)用样品垫处理溶液处理玻璃纤维，烘干后，得到处理好的样品垫备用；
(4)配置样本稀释液；
(5)将上述处理好的片材、标记垫、样品垫组装在一起，并加上滤纸，最后用切割机将其切割成所需宽度的单人份试纸条，用塑料模具包装成检测板，放入样本稀释液和一次性塑料吸管，封口，待检，待检品抽检其灵敏度、特异性和稳定性等合格后入库。
4.根据权利要求3所述的四合一联合检测试纸盒的制备工艺，其特征在于，所述标记垫的制备方法为：
(1)丙型肝炎重组抗原-胶体金结合物制备：
将氯金酸用纯水稀释至0.01％～0.04％，采用还原法制备成带负电的紫红色疏水的、金颗粒大小在30～60nm之间胶体金溶液，加入丙型肝炎重组抗原后使用搅拌机搅拌均匀，经离心机离心，取沉淀物经金标浓缩系统制备成金标浓缩原液即得到丙型肝炎重组抗原-胶体金结合物；
(2)梅毒螺旋体重组抗原-乳胶结合物制备：
将乳胶颗粒用纯水稀释至1％，加入梅毒螺旋体重组抗原和蛋白偶联剂后，室温下旋转混合反应8h～23h，经离心机离心，取沉淀物经乳胶浓缩系统制备成乳胶颗粒重悬液即得到梅毒螺旋体重组抗原-乳胶结合物；
(3)艾滋病毒重组抗原-乳胶结合物制备：
将乳胶颗粒用纯水稀释至1％，分别加入HIV-1型和HIV-2型艾滋病毒重组抗原和蛋白偶联剂后，分别室温下旋转混合反应8h～24h，经离心机离心，取沉淀物经乳胶浓缩系统制备成乳胶颗粒重悬液即得到HIV-1型和HIV-2型艾滋病毒重组抗原-乳胶结合物；
(4)鼠IgG-胶体金溶液制备：
将氯金酸用纯水稀释至0.01％～0.04％，采用还原法制备成带负电的紫红色疏水的、金颗粒大小在30～60nm之间胶体金溶液，加入鼠IgG后使用搅拌机搅拌均匀，经离心机离心，取沉淀物经金标浓缩系统制备成金标浓缩原液即得到鼠IgG-胶体金溶液；
(5)抗乙肝表面抗原抗体-胶体金结合物制备：
将氯金酸用纯水稀释至0.01％～0.04％，采用还原法制备成带负电的紫红色疏水的、金颗粒大小在30～60nm之间胶体金溶液，加入抗乙肝表面抗原抗体后使用搅拌机搅拌均匀，经离心机离心，取沉淀物经金标浓缩系统制备成金标浓缩原液即得到抗乙肝表面抗原抗体-胶体金结合物；
(6)将上述胶体金结合物或乳胶结合物包被：
将梅毒螺旋体重组抗原-乳胶结合物用Tris缓冲液稀释成0.025～0.3mg/ml、HIV-1型艾滋病毒重组抗原-乳胶结合物用Tris缓冲液稀释成0.1～0.5mg/ml、HIV-2型艾滋病毒重组抗原-乳胶结合物用Tris缓冲液稀释成0.05～0.3mg/ml、鼠IgG-胶体金溶液用Tris缓冲液稀释成0.01～1.0mg/ml，并加入蛋白质稳定剂一和蛋白质稳定剂二，包被到聚酯膜上，于37℃环境下恒温干燥2h～24h；
将丙型肝炎重组抗原-胶体金结合物、抗乙肝表面抗原抗体-胶体金结合物加入蛋白稳定剂一和蛋白稳定剂二，并用羊血清释成分别稀释成0.1～0.35mg/ml、0.05～0.3mg/ml，包被到聚酯膜上，37℃恒温干燥2h～24h；
所述Tris缓冲液稀释液是含有三羟甲基氨基甲烷6g/L、酪蛋白钠盐5g/L、聚乙烯吡咯烷酮10g/L、防腐剂0.2-0.4g/L的纯化水溶液。
5.根据权利要求3所述的四合一联合检测试纸盒的制备工艺，其特征在于，所述检测线的制备方法为：
将HIV-1型重组抗原、HIV-2型重组抗原分别加入蛋白质稳定剂一，用磷酸缓冲液一分别稀释成0.1～2.0mg/ml、0.05～1.0mg/ml；将抗乙肝表面抗原抗体加入蛋白质稳定剂一，用磷酸缓冲液二稀释成0.5～3.0mg/ml；将丙型肝炎重组抗原加入蛋白质稳定剂二，用磷酸缓冲液二稀释成0.1～2.0mg/ml；将梅毒螺旋体重组抗原加入蛋白质稳定剂一，用磷酸缓冲液二稀释成0.1～1.0mg/ml，然后用点膜划膜设备机依次包被于硝酸纤维素膜的检测区的艾滋病毒1/2型抗体检测线、乙型肝炎表面抗原检测线、丙型肝炎抗体检测线、梅毒螺旋体抗体检测线上，将包被以上原料的硝酸纤维素膜在45℃环境下恒温干燥2h～24h。
6.根据权利要求5所述的四合一联合检测试纸盒的制备工艺，其特征在于，所述磷酸缓冲液一含有氯化钠8.775g/L、磷酸氢二钠2.13g/L、聚乙二醇2.5g/L、聚乙烯吡咯烷酮3g/L。
7.根据权利要求3所述的四合一联合检测试纸盒的制备工艺，其特征在于，所述质控线的制备方法为：
取羊抗鼠IgG加入蛋白稳定剂一，并用磷酸缓冲液二稀释成0.1-3.0mg/ml，然后用点膜划膜设备机包被于硝酸纤维素膜的质控区的质控线上，将包被羊抗鼠IgG后的硝酸纤维素膜在45℃环境下恒温干燥2h～24h。
8.根据权利要求5或7所述的四合一联合检测试纸盒的制备工艺，其特征在于，所述磷酸缓冲液二含有氯化钠8.775g/L、磷酸氢二钠2.13g/L。
9.根据权利要求1所述的四合一联合检测试纸盒，其特征在于，所述样品垫的制备方法为：
取48.5ml±2ml含0.2g/L～20g/L表面活性剂的样品垫处理溶液喷洒在玻璃纤维材料上，然后将其放置于37℃环境下恒温干燥8h～24h，备用；
所述样品垫处理液是添加抗-RBC和碳酸钠的母液，其母液是含有三羟甲基氨基甲烷、酪蛋白钠盐、聚乙烯吡咯烷酮、防腐剂Proclin-300的纯化水溶液。
10.根据权利要求1或3所述的四合一联合检测试纸盒，其特征在于，所述样本稀释液是含有氯化钠、磷酸氢二钠、酪蛋白钠盐、防腐剂Proclin300的的纯化水溶液。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107202889A (zh) * 2017-07-21 2017-09-26 苏州华益美生物科技有限公司 四病原体同步检测试剂盒及其应用和制备
CN114236119A (zh) * 2021-11-08 2022-03-25 润和生物医药科技(汕头)有限公司 新冠总抗体和中和抗体胶体金快速检测试纸及其制备方法

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1405322A (zh) * 2001-08-09 2003-03-26 上海博华基因芯片技术有限公司 一种对丙肝、乙肝、爱滋和梅毒病毒进行共检的基因芯片及其检测方法
CN1414389A (zh) * 2002-08-19 2003-04-30 上海华冠生物芯片有限公司 Hcv和torch蛋白芯片及其制备和应用方法
WO2005003732A2 (en) * 2003-06-06 2005-01-13 Advantage Diagnostics Corporation Diagnostic test for analytes in a sample
CN101373187A (zh) * 2008-08-25 2009-02-25 深圳市菲鹏生物股份有限公司 一种同时筛查多种重大传染病的免疫层析试剂盒
CN201413322Y (zh) * 2009-06-12 2010-02-24 郑州安图绿科生物工程有限公司 传染病多项联合检测卡
CN104198702A (zh) * 2014-06-13 2014-12-10 成都领御生物技术有限公司 能定量检测血液传染病多指标的量子点标记试条及其方法

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1405322A (zh) * 2001-08-09 2003-03-26 上海博华基因芯片技术有限公司 一种对丙肝、乙肝、爱滋和梅毒病毒进行共检的基因芯片及其检测方法
CN1414389A (zh) * 2002-08-19 2003-04-30 上海华冠生物芯片有限公司 Hcv和torch蛋白芯片及其制备和应用方法
WO2005003732A2 (en) * 2003-06-06 2005-01-13 Advantage Diagnostics Corporation Diagnostic test for analytes in a sample
CN101373187A (zh) * 2008-08-25 2009-02-25 深圳市菲鹏生物股份有限公司 一种同时筛查多种重大传染病的免疫层析试剂盒
CN201413322Y (zh) * 2009-06-12 2010-02-24 郑州安图绿科生物工程有限公司 传染病多项联合检测卡
CN104198702A (zh) * 2014-06-13 2014-12-10 成都领御生物技术有限公司 能定量检测血液传染病多指标的量子点标记试条及其方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
刘萍等: "患者术前乙肝、丙肝、艾滋及梅毒现患率分析", 《哈尔滨医药》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107202889A (zh) * 2017-07-21 2017-09-26 苏州华益美生物科技有限公司 四病原体同步检测试剂盒及其应用和制备
CN114236119A (zh) * 2021-11-08 2022-03-25 润和生物医药科技(汕头)有限公司 新冠总抗体和中和抗体胶体金快速检测试纸及其制备方法

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