DK169969B1 - Isoindolinonderivater, fremgangsmåder til deres fremstilling og farmaceutiske præparater deraf - Google Patents

Description

i DK 169969 B1

Den foreliggende opfindelse angår hidtil ukendte isoindolinonderivater med den almene formel

O

5 JL

I N-Het (I)

ίο I

OCO-R

hvori Het betyder en naphthyridinylgruppe, som er substitueret med et halogenatom, med en alkylgruppe med 1-4 car-15 bonatomer eller med en alkyloxygruppe med 1-4 carbonatomer, og R betyder en alkylgruppe, som er usubstitueret eller substitueret med en alkyloxy-, dialkylamino-, alkylcarbonyl-amino- (hvis aminodel eventuelt er substitueret med en alkylgruppe) , piperidyl- eller piperidinogruppe, eller R betyd-20 er en 4-piperidylgruppe, idet alkylgrupperne er ligekædede eller forgrenede og har 1-10 carbonatomer, og idet piperi-dino- og 4-piperidylgrupperne er usubstituerede eller substituerede med en eller flere alkylgrupper, samt farmaceutisk acceptable salte og optiske isomere af forbindelserne med 25 formlen I, når sådanne eksisterer.

Opfindelsen angår også en fremgangsmåde til fremstilling af forbindelserne ifølge opfindelsen, hvori Het har den ovenfor angivne betydning, bortset fra en 1,8-naphthyri-din-2-yl-gruppe substitueret i 7-stilling med en alkyloxy-30 gruppe, og R har den ovenfor angivne betydning, hvilken fremgangsmåde er ejendommelig ved, at en syre med den almene formel 35 R-COOH (II) eller et alkalimetalsalt af denne syre, hvori R har den ovenfor angivne betydning, omsættes med en forbindelse 40 med den almene formel DK 169969 B1 2 0 5 [<ίίίίί'Χγ/^ΝΝνΝ-;^' (III)

Cl 10 hvori Het* har samme betydning som den, der er angivet for Het ovenfor, bortset fra en l,8-naphthyridin-2-ylgruppe substitueret i 7-stilling med en alkyloxygruppe, hvorefter den dannede forbindelse isoleres og i påkommende tilfælde even- 15 tuelt omdannes til et farmaceutisk acceptabelt salt.

Reaktionen gennemføres sædvanligvis i nærværelse af et kondensationsmiddel, såsom 1,8-diazabicyclo[5.4.0]- 7-undecen eller l,5-diazabicyclo[5.3.0]-5-nonen, eller et kvaternært ammoniumhydroxid, såsom triethylbenzylam- 20 moniumhydroxid, i et organisk opløsningsmiddel, såsom dimethylformamid, ved en temperatur mellem 20 og 100°C.

Når der anvendes et alkalimetalsalt af syren* gennemføres reaktionen simpelt hen i dimethylformamid ved en temperatur på 20°C.

25 Forbindelserne med den almene formel III kan frem stilles ved chlorering af en forbindelse med den almene formel 0

30 </\A

I N-H.t' UV')

OH

f 35 hvori Het' har de ovenfor angivne betydninger.

Denne reaktion gennemføres sædvanligvis med et chloreringsmiddel, såsom sulfinylchlorid eller phosphor-oxychlorid, i nærværelse af katalytiske mængder dimethyl-formamid ved en temperatur mellem 20°C og reaktionsblandingens tilbagesvalingstemperatur, eller reaktionen gen DK 169969 B1 3 nemføres med et hvilket som helst andet middel, som man ved kan omdanne en hydroxygruppe til et chloratom, uden at resten af molekylet påvirkes.

Forbindelserne med den almene formel IV kan frem-5 stilles ved tillempning eller tilpasning af de metoder, som beskrives i de belgiske patentskrifter nr. 815.019 og nr. 835.325.

Opfindelsen angår også en fremgangsmåde til fremstilling af forbindelserne ifølge opfindelsen, hvilken frem-10 gangsmåde er ejendommelig ved, at en forbindelse med den almene formel RCO-X (V) hvori R har den ovenfor angivne betydning, og X betyder 15 et halogenatom, såsom et chloratom, eller en aktiveret

rest, såsom en 1-imidazolylgruppe eller en gruppe R"C0-0-, hvori R" betyder en alkylgruppe, omsættes med en forbindelse med den almene formel IV

20 O

(IV) I N-Het WÅ/

OH

25 hvori Het har de ovenfor angivne betydninger, hvorefter den dannede forbindelse isoleres og i påkommende tilfælde eventuelt omdannes til et farmaceutisk acceptabelt salt.

Reaktionen gennemføres sædvanligvis i et organisk 30 opløsningsmiddel, såsom chloroform eller methylenchlorid eller en ether, f.eks. tetrahydrofuran eller dioxan, eller dimethylformamid, ved en temperatur mellem 0°C og reaktionsblandingens tilbagesvalingstemperatur og i nærværelse af en base, såsom natriumhydrid, eller en syreacceptor, 35 såsom triethylamin eller pyridin.

DK 169969 B1 4

Opfindelsen angår også en fremgangsmåde til fremstilling af forbindelserne ifølge opfindelsen, hvilken fremgangsmåde er ejendommelig ved, at et alkalimetalsalt af en syre med den almene formel II

5 R-COOH (II) hvori R har den ovenfor angivne betydning, omsættes med en s forbindelse med den almene formel 10 u>·· y (vi) O-F (OR4 ) II 2 0 15 4 hvori R betyder en ligekædet eller forgrenet alkylgruppe indeholdende 1-4 carbonatomer eller en pheny1gruppe, og Het har de ovenfor angivne betydninger, hvorefter den dannede forbindelse isoleres og i påkommende tilfælde eventuelt 20 omdannes til et farmaceutisk acceptabelt salt.

Reaktionen gennemføres sædvanligvis i et organisk opløsningsmiddel, såsom dimethylformamid, ved en temperatur mellem 0 og 25°C.

Forbindelserne med den almene formel VI kan frem-25 stilles ved, at en forbindelse med den almene formel

Cl-P(OR4K (VII)

II 2 O

30 hvori R4 betyder en ligekædet eller forgrenet alkylgruppe indeholdende 1-4 carbonatomer eller en phenylgruppe, .

omsættes med en forbindelse med den almene formel IV, hvori Het har de ovenfor angivne betydninger.

Reaktionen gennemføres sædvanligvis i et organisk 35 opløsningsmiddel, såsom dimethylformamid, i nærværelse af en base, såsom et alkalimetalhydrid, f.eks. natrium-

O

5 DK 169969 B1 hydrid, ved en temperatur mellem -5 og +25°C.

Det er ikke nødvendigt at isolere forbindelsen med den almene formel VI før gennemførelse af fremgangsmåden ifølge opfindelsen. Det er tilstrækkeligt at gennemføre 5 reaktionen mellem forbindelserne med formlen VII og IV på den ovenfor angivne måde og derefter sætte alkalimetalsaltet af syren med den almene formel II til reaktionsblandingen .

De hidtil ukendte forbindelser med den almene for-10 mel I kan renses ifølge sædvanlige kendte metoder, f.eks. ved krystallisation, chromatografi eller successive ekstraktioner i surt og basisk medium.

De hidtil ukendte forbindelser med den almene formel I kan omdannes til syreadditionssalte ved omsætning 15 med en syre i et organisk opløsningsmiddel, såsom en alkohol, en keton, en ether eller et chloreret opløsningsmiddel. Det dannede salt udfælder, eventuelt efter koncentrering af opløsningen, og fraskilles ved filtrering eller dekantering.

20 Forbindelserne med den almene formel I udviser meget interessante farmakologiske egenskaber på grund af anxiolytisk, hypnotisk, antikonvulsiv, antiepileptisk og muskelafslappende virkning. Forbindelserne udviser således in vitro en god affinitet til receptorsteder for 25 benzodiazepiner i koncentrationer mellem 0,4 og 200 nM ifølge metoden beskrevet af J.A. Blanchard og L. Julou, J. of Neurochemistry, 40, 601 (1983). Denne metode er baseret på det, som er beskrevet af Squires og Braestrup,

Nature, 266, 732 (1977).

30 Ved oral indgivelse til dyr (mus) har forbindelser ne vist sig virksomme i doser på mellem 0,3 og 200 mg/-kg over for kramper fremkaldt med pentetrazol ifølge en teknik, der ligner den, der er beskrevet af Everett og Richards, J. Pharmacol., 81, 402 (1944).

35 Fra GB patentskrift nr. 1.468.497 kendes forbindelser, som er nært beslægtede med forbindelserne ifølge opfindelsen, DK 169969 B1 6 og som ligesom forbindelserne ifølge opfindelsen udviser en god affinitet til benzodiazepinreceptorsteder og en god virkning mod pentetrazolfremkaldte kramper. Forbindelserne ifølge opfindelsen har den væsentlige fordel i forhold til de kendte 5 forbindelser, at de kun udviser en ringe sedativ virkning og således er praktisk taget uden neuromuskulært depressiv ak- * tivitet, samtidig med at de har de ovennævnte beroligende virkninger.

De hidtil ukendte forbindelser med den almene for-10 mel I og deres salte udviser desuden en lav giftighed.

Ved oral indgivelse til mus er LD^Q-værdien sædvanligvis på mellem 300 og 900 mg/kg.

Til medicinsk anvendelse kan de hidtil ukendte forbindelser med den almene formel I anvendes enten som 15 sådanne eller i form af farmaceutisk acceptable salte, dvs. salte, som er ugiftige i de anvendte doser.

Som eksempel på farmaceutisk acceptable salte kan nævnes additionssalte med uorganiske syrer, såsom hydro-chlorider, sulfater, nitrater og phosphater, og additi-20 onssalte med organiske syrer, såsom acetater, propiona-ter, succinater, benzoater, fumarater, maleater, methan-sulfonater, isethionater, theophyllinacetater, salicylater, phenolphtaleinater, methylen-bis-3-oxynaphtoater, og substitutionsderivater af disse forbindelser.

25 Særligt interessante er de forbindelser med den almene formel I, hvor Het betyder en 1,8-naphthyrindin-2-ylgruppe substitueret med et halogenatom eller med en alkoxygruppe indeholdende 1-4 carbonatomer, og hvori R betyder en lige-kædet eller forgrenet alkylgruppe indeholdende 1-6 carbon-30 atomer, som enten er usubstitueret eller substitueret med en alkoxy-, dialkylamino-, alkylcarbonylamino- eller pipe-ridinogruppe, eller hvori R betyder en 4-piperidylgruppe, idet alkylgrupperne er ligekædede eller forgrenede og in-deholder 1-10 carbonatomer, og idet piperidino- og 4-piperi-35 dylgrupperne er usubstituerede eller substituerede med en eller flere alkylgrupper.

DK 169969 B1 7

Specielt interessante er de følgende forbindelser: 2-(7-chlor-l,8-naphthyridin-2-yl)-3-oxo-l-isoindo-linyl-(RS)-4-acetamidobutyrat, 2-(7-chlor-l,8-naphthyridin-2-yl)-3-oxo-l-isoindo-5 liny1-(RS)-(1-propiony1-4-piperidy1)-carboxylat, 2-(7-methoxy-l,8-naphthyridin-2-yl)-3-oxo-l-isoin-dolinyl-(RS)-5-methylhexanoat, 2-(7-chlor-l,8-naphthyridin-2-yl)-3-oxo-l-isoindo-linyl-(RS)-3-diisopropylaminopropionat.

10 Den foreliggende opfindelse angår også et farmaceutisk præparat, som er ejendommeligt ved, at det indeholder mindst én forbindelse med formlen I i kombination med et eller flere kombinerbare og farmaceutisk acceptable fortyndingsmidler.

Disse præparater kan anvendes oralt, rektalt, parenteralt 15 eller percutant.

Som faste præparater til oral indgivelse kan der anvendes tabletter, piller, pulver (sædvanligvis i gelatinekapsler) eller granulater. I disse præparater er den aktive forbindelse ifølge opfindelsen blandet med ét eller 20 flere indifferente fortyndingsmidler, såsom saccharose, lactose eller stivelse. Disse præparater kan også indeholde andre materialer end fortyndingsmidler, f.eks. et smøremiddel, såsom magnesiumstearat.

Som flydende præparater til oral indgivelse kan 25 der anvendes farmaceutisk acceptable emulsioner, opløsninger, suspensioner, sirupper og eliksirer indeholdende indifferente fortyndingsmidler, såsom vand eller paraffinolie. Disse præparater kan også indeholde andre materialer end fortyndingsmidler, f.eks. befugtningsmidler, sødemidler 30 eller aromastoffer.

Præparaterne ifølge opfindelsen til parenteral indgivelse kan være sterile vandige opløsninger eller ikke-vandige opløsninger, suspensioner eller emulsioner. Som opløsningsmiddel eller bærestof kan der anvendes propylen-35 glycol, en polyethylenglycol, vegetabilske olier, især olivenolie, eller injicerbare organiske estere, f.eks.

DK 169969 B1 8 ethyloleat. Disse præparater kan også indeholder adjuvanser, især befugtningsmidler, emulgeringsmidler og dispergerings-midler. Steriliseringen kan ske på flere måder, f.eks. ved hjælp af et bakteriologisk filter, ved iblanding af 5 steriliseringsmiddel i præparatet, ved bestråling eller ved opvarmning. Der kan også anvendes sterile, faste præparater, som på anvendelsestidspunktet kan opløses i sterilt vand eller et andet injicerbart sterilt medium.

Præparater til rektal indgivelse er suppositorier, 10 som foruden den aktive forbindelse kan indeholde excipi-enser, såsom kakaosmør eller suppositorievoks.

Præparater til percutan indgivelse er cremer, salver, lotioner og linimenter, hvori den aktive forbindelse er kombineret med flydende eller pastaagtige excipienser, 15 fortrinsvis i kombination med en bærer, som fremmer den percutane migrering.

Præparaterne ifølge opfindelsen er især anvendelige inden for humanterapi på grund af deres anxiolytiske, hypnotiske, antikonvulsive, antiepileptiske og muskelafslappende 20 virkning.

Inden for humanterapi afhænger doserne af den ønskede virkning og af behandlingens varighed. Doserne er sædvanligvis på mellem 10 og 500 mg pr. døgn ved oral indgivelse til et voksent individ.

25 Lægen bestemmer på sædvanlig måde den dosis, som han anser for at være den mest passende under hensyntagen til patientens alder og kropsvægt og andre faktorer af betydning.

Opfindelsen illustreres i de følgende eksempler.

30

Eksempel 1

Til en opløsning af 16,5 g 3-chlor-2-(7-chlor-l,8- -naphthyridin-2-yl)-l-isoindolinon i 100 ml vandfrit 35 dimethylformamid, som holdes under argonatmosfære, sættes 9,2 g 3-dimethylaminopropionsyre-hydrochlorid og 16,7 g 0

O

DK 169969 B1 9 1,8-diazabicyclo[5.4.0]-7-undecen ved en temperatur nær 20°C. Den dannede suspension omrøres i 24 timer ved en temperatur nær 20°C, hvorefter der tilsættes 200 ml destilleret vand og 200 ml dichlormethan. Vandfasen fra-5 skilles ved dekantering og ekstraheres med 3 x 50 ml dichlormethan. De organiske faser forenes, vaskes med · 2 x 50 ml destilleret vand, tørres over magnesiumsulfat, filtreres og koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 80°C. Remanensen opløses i 100 ml 10 dichlormethan, og den dannede opløsning ekstraheres med 2 x 100 ml 1 N saltsyre. Vandfaserne forenes, vaskes med 50 ml dichlormethan, alkaliseres med en 10 N natriumhydroxidopløsning til en pH-værdi nær 11 og ekstraheres med 2 x 150 ml dichlormethan. De organiske faser forenes, 15 vaskes med 2 x 30 ml destilleret vand, tørres over magnesiumsulfat, filtreres og koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 60°C. Efter to successive omkrystallisationer af produktet i ethanol fås 2,9 g 2-(7-chlor-l,8-naphthyridin-2-yl)-3-oxo-l-isoindolinyl-20 -3-dimethylaminopropionat med et smeltepunkt på 150°C.

3-Dimethylaminopropionsyre-hydrochlorid kan fremstilles ifølge metoden beskrevet af H.T. Clarke, H.B. Gillespie, S.Z. Weisshaus, J. Am. Chem. Soc., 55, 4571 (1933).

25 3-Chlor-2-(7-chlor-l,8-naphthyridin-2-yl)-1-iso- indolinon kan fremstilles på den følgende måde. Til 15,5 g 3-hydroxy-2-(7-methoxy-l,8-naphthyridin-2-yl)-1-iso-indolinon sættes 200 ml sulfinylchlorid dråbevis under omrøring. Reaktionsblandingen koges under tilbagesvaling 30 og under omrøring i 1 time, hvorefter der tilsættes 10,5 ml dimethylformamid, og kogningen under tilbagesvaling fortsættes i 3 timer. Efter afkøling til en temperatur nær 60°C koncentreres reaktionsblandingen til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 60°C. Til remanensen 35 sættes 100 ml dichlormethan, og blandingen koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 60°C.

i

O

10 DK 169969 B1

Til det tilbageværende faste stof sættes 100 ml dichlormethan, og blandingen omrøres i 10 minutter. Det uopløselige produkt fraskilles ved filtrering, vaskes med 15 ml dichlormethan og derpå med 2 x 25 ml diisopropyl-5 ether samt tørres i luft. Herved fås 12,4 g 3-chlor--2-(7-chlor-l,8-naphthyridin-2-yl)-1-isoindolinon, som er usmeltelig ved 300°C.

3-Hydroxy-2-(7-chlor-l,8-naphthyridin-2-yl)-1--isoindolinon kan fremstilles ifølge metoden beskrevet 10 i belgisk patentskrift nr. 815.019.

Eksempel 2

Der arbejdes på samme måde som beskrevet i eksempel 1, men gås ud fra 8,25 g 3-chlor-2-(7-chlor-l,8-naphthy-15 ridin-2-yl)-1-isoindolinon, 4,25 g 4-dimethylaminobutan-syre-hydrochlorid og 7,6 g 1,8-diazabicyclo[ 5.4.0]-7--undecen. Herved fås 4,1 g 2-(7-chlor-l,8-naphthyridin--2-yl)-3-oxo-l-isoindolinyl-4-dimethylaminobutanoat med et smeltepunkt på 148°C.

20 4-Dimethylaminobutansyre kan fremstilles ifølge metoden beskrevet af C. Harries, F. Duvel, Liebigs Ann.

Chem. (1945), 410, 54.

Eksempel 3

Til en opløsning af 6,6 g 3-chlor-2-(7-chlor-l,8-25 -naphthyridin-2-yl)-1-isoindolinon i 60 ml vandfrit dimethylformamid, som holdes under argonatmosfære, sættes 2,4 g 4-methylpentansyre og 3,05 g 1,8-diazabi-cyclo[5.4.0]-7-undecen ved en temperatur nær 20°C. Den dannede suspension omrøres i 24 timer ved en temperatur 30 nær 20°C, og derefter tilsættes 500 ml destilleret vand og 150 ml dichlormethan. Vandfasen fraskilles ved dekan- 1 tering og ekstraheres med 2 x 150 ml dichlormethan. De organiske faser forenes, vaskes med 3 x 50 ml destilleret * vand, tørres over magnes.iumsulfat, filtreres og koncen-35 ‘ treres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 60°C. Den olieagtige remanens renses ved chromatografi DK 169969 B1 o 11 på 150 g silicagel i en kolonne med en diameter på 3,5 cm, idet der elueres med en blanding af dichlorraethan og methanol i volumenforholdet 98:2. Der elueres først’ med 200 ml opløsningsmiddel, og det dannede eluat bort-5 kastes. Dernæst elueres der med 900 ml opløsningsmiddel, og det herved dannede eluat koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 40°C. Efter omkrystalli-sation i ethanol fås 4 g 2-(7-chlor-l,8-naphthyridin--2-yl)-3-oxo-l-isoindolinyl-4-methylpentanoat med et 10 smeltepunkt på 147°C.

Eksempel 4

Der arbejdes på samme måde som i eksempel 1, men gås ud fra 9,9 g 3-chlor-2-(7-chlor-l,8-naphthyridin-2-15 -yl)-1-isoindolinon i 100 ml vandfrit dimethylformamid, 5,4 g 1-methy1-3-piperidincarboxylsyre-hydrochlorid og 10,7 g 1,8-diazabicyclo[5.4.0]-7-undecen. Produktet udfældes i 1000 ml vand, frafiltreres og tørres i luft.

Herved fås 11,3 g af et produkt med et smeltepunkt nær 20 70°C. Det dannede faste stof opløses i 40 ml ethanol.

Til den dannede varme opløsning sættes en opløsning af 3 g fumarsyre i 30 ml ethanol. Det dannede krystalliserede produkt fraskilles ved filtrering, vaskes med 15 ml ethanol og tørres under formindsket tryk (0,07 kPa) 25 ved 45°C. Herved fås 9,8 g surt fumarat af 2-(7-chlor--1,8-naphthyridin-2-yl)-3-oxo-l-isoindolinyl-l-methyl--3-piperidincarboxylat med et smeltepunkt på 211°C.

(1-Methy1-3-piperidin)-carboxylsyre-hydrochlorid kan fremstilles på følgende måde. 17,1 g Ethyl-(1-methyl-30 -3-piperidin)-carboxylat opløses i 67 ml 6 N saltsyre.

Efter kogning ved tilbagesvaling i 6 timer koncentreres opløsningen til tørhed, og remanensen omkrystalliseres i acetone. Herved fås 15,7 g (1-methy1-3-piperidin)-carboxylsyre-hydrochlorid med et smeltepunkt på 186°C.

35 DK 169969 B1 o 12

Eksempel 5

Der arbejdes på samme måde som i eksempel 1, men gås ud fra 9,9 g 3-chlor-2-(7-chlor-l,8-naphthyridin-2--yl)-1-isoindolinon i 100 ml vandfrit dimethylformamid, 5 5,4 g l-methyl-4-piperidincarboxylsyre-hydrochlorid og 10,7 g l,8-diazabicyclo[5.4.0]-7-undecen. Remanensen f omkrystalliseres først i ethanol og derpå i acetonitril, hvorved fås 5,6 g 2-(7-chlor-l,8-naphthyridin-2-yl)-3--oxo-l-isoindolinyl-l-methyl-4-piperidincarboxylat, som 10 smelter ved 136°C og derefter ved 157°C.

1-Methy1-4-piperidincarboxyIsyre-hydrochlorid kan fremstilles på samme måde som beskrevet i eksempel 4 til fremstilling af l-methyl-3-piperidincarboxylsyre--hydrochlorid, idet der gås ud fra 8,6 g ethyl-l-methyl-15 -4-piperidincarboxylat og 33 ml 6 N saltsyre. Efter omkrystallisation i acetone fås 6,5 g l-methyl-4-piperi-dincarboxylsyre-hydrochlorid med et smeltepunkt på 231°C.

Ethyl-l-methyl-4-piperidincarboxylat kan fremstilles på følgende måde. Til en opløsning af 15,7 g ethyl-2° -4-piperidincarboxylat i 8 ml vand, som holdes ved en temperatur nær 5°C, sættes 20,3 ml af en 37%*s (vægt/-volumen) opløsning af formaldehyd i løbet af 15 minutter ved den samme temperatur, og derefter tilsættes 11,5 g myresyre i løbet af 15 minutter. Reaktionsblan-25 dingen koges under tilbagesvaling i 4 timer, hvorpå den afkøles, og blandingens pH-værdi indstilles på ca. 10 ved hjælp af en 10 N vandig natriumhydroxidopløsning.

Efter ekstraktion med 3 x 150 ml methylenchlorid vaskes de organiske ekstrakter med vand, hvorpå de tørres og 30 koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 70°C. Herved fås 13,5 g ethyl-l-methyl-4-pipe-ridincarboxylat i form af en olie, som anvendes i uren tilstand i efterfølgende syntesetrin.

35 13 DK 169969 B1

O

Eksempel 6

Der arbejdes på samme måde som i eksempel 1, men gås ud fra 6,9 g 3-chlor-2-(7-chlor-l,8-naphthyridin--2-yl)-1-isoindolinon i 70 ml vandfrit dimethylformamid, 5 4,4 g 3-diisopropylaminopropionsyre-hydrochlorid og 7,45 g 1,8-diazabicyclo[5.4.0]-7-undecen. Remanensen omkrystalliseres først i acetonitril og dernæst i ethanol, hvorved fås 2,7 g 2-(7-chlor-l,8-naphthyridin-2-yl)-3- ' -oxo-l-isoindolinyl-3-diisopropylaminopropionat med et 10 smeltepunkt på 135°C.

3-Diisopropylaminopropionsyre-hydrochlorid kan fremstilles på samme måde som beskrevet i eksempel 4 til fremstilling af l-methyl-3-piperidincarboxylsyre, idet der gås ud fra 5 g ethyl-3-diisopropylaminopropionat 15 og 35 ml 6 N saltsyre. Efter omkrystallisation af produktet i acetone fås 2,3 g 3-diisopropylaminopropionsyre--hydrochlorid med et smeltepunkt på 170°C.

Ethyl-3-diisopropylaminopropionat kan fremstilles på følgende måde. Til en opløsning af 28,5 ml diisopro-20 pylamin og 40 ml ethanol, som holdes ved en temperatur på 25°C, sættes dråbevis 18,1 g ethyl-3-brompropionat i løbet af 30 minutter. Den dannede suspension koges under tilbagesvaling i 4 timer. Efter afkøling optages reaktionsblandingen i 100 ml vand og 70 ml 4 N saltsyre.

25 Efter vaskning med 100 ml ethylether alkaliseres blandingen til en pH-værdi nær 9 med en 4 N vandig natriumhydroxidopløsning. Den dannede olie ekstraheres med 3 x 150 ml methylenchlorid. Methylenchloridekstrakterne vaskes med 2 x 100 ml vand, tørres og koncentreres til 30 tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 40°C. Herved fås 11,6 g ethyl-3-diisopropylaminopropionat i form af en olie, som anvendes i uren tilstand i efterfølgende syntesetrin.

35 o 14 DK 169969 B1

Eksempel 7

Til en opløsning af 12,3 g 2-(7-methoxy-l,8-naph-thyridin-2-yl)-3-hydroxy-l-isoindolinon i 200 ml methy-lenchlorid, som holdes ved en temperatur nær 20°C, sæt-5 tes 27 ml triethylamin. Derefter tilsættes 10,8 g 4- -methylpentanoylchlorid og 50 mg 4-dimethylaminopyridin dråbevis i løbet af 20 minutter, og den fremkomne reaktionsblanding koges under tilbagesvaling i 19 timer.

Den dannede suspension hældes i 800 ml vand, og det dan-10 nede faste stof fraskilles ved filtrering og bortkastes.

Den organiske fase dekanteres, vaskes med vand, tørres· og koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa). Den dannede olieagtige remanens renses ved chroma-tografi på 150 g silicagel (0,063-0,2 mm) i en kolonne 15 med en diameter på 2,7 cm. Der elueres med methylenchlo-rid og opsamles fraktioner med et volumen på 50 ml. Fraktionerne 6-18 forenes og koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 40°C. Efter omkrystallisation af det faste stof i acetonitril fås 4,9 g 20 2-(7-methoxy-l,8-naphthyridin-2-yl)-3-oxo-l-isoindolinyl- -4-methylpentanoat med et smeltepunkt på 133°C.

4-Methylpentanoylchlorid kan fremstilles ifølge metoden beskrevet af F. Kogl og C.A. Salemink, Rec. Trav. Chim, 71, 779-797 (1952).

25

Eksempel 8

Der arbejdes på samme måde som i eksempel 1, men gås ud fra 9,9 g 3-chlor-2-(7-chlor-l,8-naphthyridin-2--yl)-l-isoindolinon i 100 ml vandfrit dime thy lf ormamid, 30 5,1 g l-acetyl-4-piperidincarboxylsyre og 4,6 g 1,8-di- azabicyclo[5.4.0]-7-undecen. Efter omkrystallisation i en blanding af acetone og vand i volumenforholdet 2:1 og derefter i ethanol fås 7,5 g 2-(7-chlor-l,8-naphthy-ridin-2-yl)-3-oxo-1-isoindolinyl-(1-acetyl-4-piperidyl)-35 -carboxylat med et smeltepunkt på 101°C.

O

15 DK 169969 B1

Eksempel 9

Der arbejdes på samme måde som i eksempel 1, men gås ud fra 9,9 g 3-chlor-2-(7-chlor-l,8-naphthyridin-2-yl)--1-isoindolinon i 100 ml vandfrit dimethylformamid, 3,9 5 g 5-methylhexansyre og 4,6 g 1,8-diazabicyclo[5.4.0]-7--undecen. Efter omkrystallisation i ethanol fås 8 g 2-(7-chlor-l,8-naphthyridin-2-yl)-3-oxo-l-isoindolinyl--5-methylhexanoat med et smeltepunkt på 132°C.

10 Eksempel 10

Der arbejdes på samme måde som i eksempel 7, men gås ud fra 6,8 g 2-(7-methoxy-l,8-naphthyridin-2-yl)-3-' -hydroxy-l-isoindolinon i 100 ml methylenchlorid, 10,1 g triethylamin, 6,4 g 5-methylhexanoylchlorid og 50 mg 15 4-dimethylaminopyridin. Remanensen dannet efter behandling renses ved chromatografi på 100 g silicagel (0,063-0,2 mm) i en kolonne med en diameter på 2,8 cm. Der elueres med methylenchlorid og opsamles fraktioner med et volumen på 30 ml. Fraktionerne 19-94 forenes og koncentreres til 20 tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa). Efter omkrystallisation af remanensen i 75 ml heptan fås 5,6 g 2-(7--methoxy-1,8-naphthyridin-2-yl)-3-oxo-l-isoindolinyl--5-methylhexanoat med et smeltepunkt på 105°C.

25 Eksempel 11

Der arbejdes på samme måde som i eksempel 1, men gås ud fra 9,9 g 3-chlor-2-(7-chlor-l,8-naphthyridin-2--yl)-1-isoindolinon i 100 ml vandfrit dimethylformamid, 5,5 g l-propionyl-4-piperidincarboxylsyre og 4,6 g 1,8-30 -diazabicyclo[5.4.0]-7-undecen. Efter omkrystallisation i ethanol fås 4,9 g 2-(7-chlor-l,8-naphthyridin-2-yl)--3-oxo-1-isoindolinyl-(l-propionyl-4-piperidyl)-carboxy-lat med et smeltepunkt på 189°C.

l-Propionyl-4-piperidincarboxylsyre kan fremstilles 35 på følgende måde. En blanding af 25,8 g 4-piperidincar-boxylsyre og 100 ml propionsyreanhydrid opvarmes i 2

O

16 DK 169969 B1 timer og 30 minutter ved en temperatur nær 135°C. Dernæst koncentreres reaktionsblandingen til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa), og den olieagtige remanens optages i 200 ml methylenchlorid. Methylenchloridopløs-5 ningen vaskes med 4 x 80 ml vand, tørres og koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa). Den dannede olie krystalliseres ved omrøring i 50 ml ethylether. Herved fås 5,8 g l-propionyl-4-piperidincarboxylsyre med .et smeltepunkt på 91-94°C.

10

Eksempel 12

Der arbejdes på samme måde som i eksempel 1, men gås ud fra 29,7 g 3-chlor-2-(7-chlor-l,8-naphthyridin--2-yl)-1-isoindolinon i 300 ml vandfrit dimethylform-15 amid, 13,1 g 4-acetamido-smørsyre og 13,7 g 1,8-diaza-bicyclo[5.4.0]-7-undecen. Efter omkrystallisation i acetonitril fås 18 g 2-(7-chlor-l,8-naphthyridin-2-yl)--3-oxo-l-isoindolinyl-4-acetamidobutyrat med et smeltepunkt på 186°C.

20

Eksempel 13

Der arbejdes på samme måde som i eksempel 1, men gås ud fra 4,95 g 3-chlor-2-(7-chlor-l,8-naphthyridin-2-yl)--1-isoindolinon i 60 ml vandfrit dimethylformamid, 25 2,05 g phenyleddikesyre og 2,25 g 1,8-diazabicyclo- [5.4.0]-7-undecen. Efter omkrystallisation i ethylacetat fås 4,4 g 2-(7-chlor-l,8-naphthyridin-2-yl)-3-oxo-1-iso-indolinyl-phenylacetat med et smeltepunkt på 222-224°C.

30 Eksempel 14

Der arbejdes på samme måde som i eksempel 1, men gås ud fra 9,9 g 3-chlor-2-(7-chlor-l,8-naphthyridin-2-yl)--1-isoindolinon i 100 ml vandfrit dimethylformamid, 3,9 g DL-pyroglutaminsyre og 4,6 g 1,8-diazabicyclo[5.4.0]-35 -7-undecen. Efter omkrystallisation i dimethylformamid fås 8,8 g 2-(7:-chlor-l, 8-naphthyridin-2-yl)-3-oxo-l-iso-

O

17 DK 169969 B1 indolinyl-5-oxo-2-pyrrolidincarboxylat, som smelter ved 255°C under sønderdeling.

Eksempel 15 5 Der arbejdes på samme måde som i eksempel 1/ men gås ud fra 9,9 g 3-chlor-2-(7-chlor-l,8-naphthyridin-2-yl)--1-isoindolinon i 100 ml vandfrit dimethylformamid, 5,55 g Ν,Ν-pentamethylensuccinamsyre og 4,6 g 1,8-diazabicyclo- [5.4.0]-7-undecen. Efter omkrystallisation i acetonitril 10 og derefter i ethanol fås 7,5 g 2-(7-chlor-l,8-naphthyri-din-2-yl)-3-oxo-l-isoindolinyl-N,N-pentamethylensuccina-mat med et smeltepunkt på 199°C.

Ν,Ν-Pentamethylenravsyre kan fremstilles ifølge metoden beskrevet af D. Pressman, J.M. Bryden, L. Pauling, 15 J. Am. Chem. Soc., 70, 1352 (1948).

Eksempel 16

Der arbejdes på samme måde som i eksempel 1, men 20 gås ud fra 9,9 g 3-chlor-2-(7-chlor-l,8-naphthyridin-2--yl)-1-isoindolinon i 100 ml vandfrit dimethylformamid, 6/7 g 3- (2,6-dimethylpiperidino)-propionsyre-hydrochlorid og 10,7 g l,8-diazabicyclo[5.4.0]-7-undecen. Efter omkrystallisation i ethanol fås 6 g 2-(7-chlor-l,8-naphthy-25 ridin-2-yl)-3-oxo-l-isoindolinyl-3-(2,6-dimethylpiperidi-no)-propionat med et smeltepunkt på 159°C.

3-(2,6-Dimethylpiperidino)-propionsyre-hydrochlorid kan fremstilles på samme måde som beskrevet i eksempel 4 til fremstilling af l-methyl-3-piperidincarboxylsyre-30 -hydrochlorid, idet der gås ud fra 12,5 g ethyl-3-(2,6--dimethylpiperidino)-propionat-hydrochlorid og 35 ml 6 N saltsyre. Herved fås 3-(2,6-dimethylpiperidino)-propionsyre-hydrochlorid med et smeltepunkt på 215°C.

Ethyl-3-(2,6-dimethylpiperidino)-propionat-hydro-35 chlorid kan fremstilles ifølge metoden beskrevet i eksempel 6 til fremstilling af ethyl-3-diisopropylaminopropio-nat, idet der gås ud fra 18,1 g ethyl-3-brompropionat, o 18 DK 169969 B1 27 ml 2,6-dimethylpiperidin og 30 ml ethanol. Reaktionsblandingen koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa), og remanensen optages i 50 ml vand og ; 30 ml 4 N saltsyre. Vandfasen vaskes med 2 x 80 ml ethyl-5 ether og neutraliseres med 40 ml af en 4 N vandig natriumhydroxidopløsning. Den uopløselige olie ekstraheres med 3 x 120 ml ethylether. De organiske ekstrakter vaskes med 2 x 80 ml vand og koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 40°C. Remanensen opløses i ' 10 100 ml ethylether. Til den dannede opløsning sættes 13,4 ml af en 4,5 N opløsning af hydrogenchlorid i ethylether.

Herved dannes et bundfald, som fraskilles ved filtrering, vaskes og tørres i luft. Der fås 14,4 g ethyl-3-(2,6-di-methylpiperidino)-propionat-hydrochlorid med et smelte-15 punkt på 146°C.

Eksempel 17

Der arbejdes på samme måde som i eksempel 1, men 20 gås ud fra 9,9 g 3-chlor-2-(7-chlor-l,8-naphthyridin-2--yl)-1-isoindolinon i 100 ml vandfrit dimethylformamid, 6,2 g 4-piperidinosmørsyre-hydrochlorid og 10,7 g 1,8--diazabicyclo[5.4.0]-7-undecen. Efter omkrystallisation i ethanol fås 9,4 g 2-(7-chlor-l,8-naphthyridin-2-yl)-3-25 -oxo-l-isoindolinyl-4-piperidinobutyrat med et smeltepunkt på 166°C.

4-Piperidinosmørsyre-hydrochlorid kan fremstilles på samme måde som beskrevet i eksempel 4 til fremstilling af l-methyl-3-piperidincarboxylsyre-hydrochlorid, idet 30 der gås ud fra 19,9 g ethyl-4- piperidinobutyrat og 66,5 ml 6 N saltsyre. Reaktionsblandingen koges under tilbagesvaling i 24 timer. Der fås herved 16,3 g 4--piperidinosmørsyre-hydrochlorid med et smeltepunkt på 190°C.

35 Ethyl-4-piperidinobutyrat kan fremstilles på samme måde som beskrevet i eksempel 6 til fremstilling af ethyl-3-diisopropylaminopropionat, idet der gås ud fra

O

19 DK 169969 B1 48,8 g ethyl-4-brombutyrat, 42,5 g piperidin og 75 ml ethanol. Reaktionsblandingen optages i 200 ml vand og 120 ml 4 N saltsyre. Vandfasen vaskes med 150 ml ethylether og alkaliseres til en pH-værdi nær 9 med en 4 N vandig 5 opløsning af natriumhydroxid. Den dannede olie ekstraheres med 3 x 150 ml methylenchlorid. De organiske ekstrakter forenes, vaskes med vand, tørres og koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 70°C. Herved fås 47 g ethyl-4-piperidinobutyrat i form af en olie, 10 som anvendes i uren tilstand i efterfølgende syntesetrin.

Eksempel 18

Der arbejdes på samme måde som i eksempel 1, men gås ud fra 4,3 g 3-chlor-2-(7-chlor-l,8-naphthyridin-2-yl)-l-15 -isoindolinon i 40 ml vandfrit dimethylformamid, 2,2 g 3-(2-oxopiperidino)-propionsyre og 2 g 1,8-diazabicyclo- [5.4.0]-7-undecen. Reaktionsblandingen optages i vand og ekstraheres med methylenchlorid. Efter afdampning af opløsningsmidlet omkrystalliseres remanensen i acetonitril.

20 Det herved dannede produkt renses ved chromatografi på 100 g siliciumdioxid (0,063-0,2 mm) i en kolonne med en diameter på 2,3 cm. Der elueres med methylenchlorid og opsamles fraktioner med et volumen på 50 ml. Fraktionerne 56-64 forenes og koncentreres til tørhed under formind-25 sket tryk (2,7 kPa) ved 20°C. Remanensen omkrystalliseres i acetonitril. Herved fås 2,8 g 2-(7-chlor-l,8-naphthyri-din-2-yl)-3-oxo-l-isoindolinyl-3-(2-oxopiperidino)-pro-pionat med et smeltepunkt på 175°C.

3-(2-Oxopiperidino)-propionsyre kan fremstilles 30 på følgende måde. En opløsning af 3,8 g kaliumhydroxid i 15 ml vand sættes til en opløsning af 9,2 g methyl-3--(2-oxopiperidino)-propionat i 40 ml ethanol. Reaktionsblandingen omrøres i 20 timer ved en temperatur nær 20°c og inddampes til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa).

35 Remanensen optages i 100 ml vand. Den dannede opløsning vaskes med 50 ml ethylether og gøres dernæst sur til en

O

20 DK 169969 B1 pH-værdi nær 1 med 4 N saltsyre. Derefter ekstraheres opløsningen med 3 x 100 ml methylenchlorid. Methylen-chloridopløsningen vaskes med vand, tørres og koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa). Herved 5 fås 2,3 g 3-(2-oxopiperidino)-propionsyre med et smeltepunkt på 105-110°C.

Methyl-3-(2-oxopiperidino)-propionat kan fremstilles ifølge metoden beskrevet af H. Takahata et al., Chem. Pharm. Bull., 28 (12), 3632-3638 (1980).

10

Eksempel 19

Der arbejdes på samme måde som beskrevet i eksempel 1, men gås ud fra 9,9 g 5-chlor-6-(7-chlor-l,8-naphthyri-din-2-yl)-7-ΟΧΟ-6,7-dihydro-5H-pyrrolo[3,4-b]pyrazin, 9,6 15 g l,8-diazabicyclo[5.4.0]-7-undecen og 4,8 g 3-dimethyl-aminopropionsyre-hydrochlorid. Efter omkrystallisation i acetonitril fås 2,2 g 6-(7-chlor-l,8-naphthyridin-2--yl)-7-OXO-6,7-dihydro-5H-pyrrolo[3,4-b]-5-pyrazinyl-3--dimethylaminopropionat med et smeltepunkt på 200°C.

20 5-Chlor-6-(7-chlor-l,8-naphthyridin-2-yl)-7-oxo- -6,7-dihydro-5H-pyrrolo[3,4-b]pyrazin kan fremstilles på følgende måde. Til 23,2 g 5-hydroxy-6-(7-methoxy-l,8--naphthyridin-2-yl)-7-oxo-6,7-dihydro-5H-pyrrolo[3,4-b]-pyrazin sættes 300 ml sulfinylchlorid dråbevis under om-25 røring. Reaktionsblandingen koges under tilbagesvaling og under omrøring i 1 time, hvorefter der tilsættes 1 ml dimethylformamid. Tilbagesvalingskogningen fortsættes i yderligere 3 timer, hvorpå reaktionsblandingen afkøles til en temperatur nær 60°C og koncentreres til tørhed 30 under formindsket tryk (2,7 kPa). Til den dannede remanens sættes 100 ml dichlormethan, og blandingen koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa). Til det tilbageværende faste stof sættes 100 ml dichlormethan, og blandingen omrøres i 10 minutter. Det uopløselige produkt 35 fraskilles ved filtrering, vaskes med 15 ml dichlormethan og med 2 x 25 ml diisopropylether samt tørres i luft. Her-

O

21 DK 169969 B1 ved fås 21 g 5-chlor-6-(7-chlor-l,8-naphthyridin-2-yl)--7-oxo-6,7-dihydro-5H-pyrrolo[3,4-b]pyrazin med et smeltepunkt på 264°C.

5-Hydroxy-6-(7-methoxy-l,8-naphthyridin-2-yl)-7-5 -oxo-6,7-dihydro-5H-pyrrolo[3,4-b]pyrazin kan fremstilles ifølge metoden beskrevet i det belgiske patentskrift nr. 815.019.

3-Dimethylaminopropionsyre-dihydrochlorid kan fremstilles ifølge metoden beskrevet af H.T. Clarke et al., 10 J. Am. Chem. Soc., 55, 4571 (1933).

Eksempel 20

Til en opløsning af 6,6 g 3-chlor-2-(7-chlor-l,8--naphthyridin-2-yl)-1-isoindolinon i 60 ml vandfrit di-15 methylformamid, som holdes ved en temperatur nær 20°C, sættes 4,2 g natrium-(4-acetyl-l-piperazinyl)-acetat, hvorpå reaktionsblandingen holdes i 15 timer ved en temperatur nær 20°C. Derefter tilsættes 3 g 1,8-diazabicyclots. 4.0] -7-undecen, og reaktionsblandingen omrøres yder-20 ligere 24 timer ved en temperatur nær 20°C. Reaktionsblandingen optages dernæst i 250 ml vand og ekstraheres med 3 x 150 ml methylenchlorid. Den organiske fase vaskes med vand og koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa), og remanensen omkrystalliseres i ethanol.

25 Herved fås 3,7 g 2-(7-chlor-l,8-naphthyridin-2-yl)-3--oxo-l-isoindoliny1-(4-acetyl-l-piperazinyl)-acetat med et smeltepunkt på 192°C.

Natrium-(4-acetyl-l-piperazinyl)-acetat kan fremstilles på følgende måde. 4,3 g Ethyl-(4-acetyl-l-pipe-30 razinyl)-acetat sættes til en blanding af 20 ml ethanol og 20 ml 1 N vandig natriumhydroxidopløsning. Reaktionsblandingen omrøres i 20 timer ved en temperatur nær 20°C og koncentreres dernæst til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 80°C. Det dannede faste stof suspenderes i 35 80 ml isopropylether. Efter omrøring frafiltreres det faste stof og tørres. Herved fås 4,3 g natrium-(4-acetyl-

O

22 DK 169969 B1 -1-piperazinyl)-acetat med et smeltepunkt på 100-105°C.

Ethyl-(4-acetyl-l-piperazinyl)-acetat kan fremstilles ifølge metoden beskrevet af D. Nardi og E. Massarani, J. Med. Chem. 14 (7), 635 (1971).

5

Eksempel 21

Der arbejdes på samme måde som i eksempel 1, men gås ud fra 9,9 g 3-chlor-2-(7-chlor-l,8-naphthyridin-2--yl)-l-isoindolinon i 100 ml vandfrit dimethylformamid, 10 4,8 g 4-propionamidobutansyre og 4,6 g 1,8-diazabicyclo- [5.4.0]-7-undecen. Efter omkrystallisation i acetonitril fås 6,6 g 2-(7-chlor-l,8-naphthyridin-2-yl)-3-oxo-l-iso-indolinyl-4-propionamidobutyrat med et smeltepunkt på 179°C.

15 4-Propionamidobutansyre kan fremstilles på følgende måde. I løbet af 15 minutter sættes 10,3 g 4-aminosmør-syre til 10 ml propionsyreanhydrid ved en temperatur nær 20°C. Derpå tilsættes 5 dråber koncentreret svovlsyre (d=l,83), og reaktionsblandingen opvarmes ved en tempera-20 tur nær 100°C i 2 timer. Efter afkøling fraskilles det krystalliserede faste stof ved filtrering, hvorpå det vaskes med 5 x 100 ml ethylether og tørres. Herved fås 9,8 g 4-propionamidobutansyre med et smeltepunkt på 85-90°C.

25

Eksempel 22

Til en opløsning af 9,2 g 2-(7-methoxy-l,8-naphthy-ridin-2-yl)-3-hydroxy-l-isoindolinon og 20 ml triethyl-amin i 150 ml 1,2-dichlorethan, som holdes ved en tempe-30 ratur nær 20°C, sættes en opløsning af 9 g 2-methylpro-poxyacetylchlorid i 20 ml 1,2-dichlorethan i løbet af 20 minutter. Derefter tilsættes 50 mg 4-dimethylamino-pyridin, og den dannede reaktionsblanding koges under tilbagesvaling i 16 timer. Reaktionsblandingen hældes 35 dernæst i 250 ml vand og ekstraheres med 100 ml methylen-chlorid. Den organiske fase vaskes med vand, tørres og

O

23 DK 169969 B1 koncentreres til tørhed under formindsket tryk (3 kPa). Remanensen renses ved to successive omkrystallisationer i ethanol. Herved fås 7,9 g 2-(7-methoxy-l,8-naphthyri-din-2-yl)-3-oxo-l-isoindolinyl-2-methylpropoxyacetat 5 med et smeltepunkt på 114°C.

2-Methylpropoxyacetylchlorid kan fremstilles på følgende måde. I løbet af 15 minutter sættes 5 ml thio-nylchlorid til en opløsning af 8,3 g 2-methylpropoxy-eddikesyre i 50 ml chloroform. Blandingen koges under 10 tilbagesvaling i 5 timer og inddampes dernæst til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa). Herved fås 7,5 g 2--methylpropoxyacetylchlorid i form af en olie, som anvendes i uren tilstand i efterfølgende syntesetrin.

2-Methylpropoxyeddikesyre kan fremstilles på følgen-15 de måde. Til 200 ml isobutylalkohol, som holdes ved en temperatur nær 100°C, sættes 12,7 g natrium, og blandingen opvarmes, indtil natriumet er fuldstændigt forsvun det. I løbet af 1 time tilsættes derefter 23,6 g chlor-eddikesyre, og opvarmningen fortsættes i 2 timer. Efter 20 afkøling hældes reaktionsblandingen i 250 ml vand. Vandfasen vaskes med 200 ml ethylether, koncentreres til det halve volumen under formindsket tryk (3 kPa) og gøres dernæst sur til en pH-værdi nær 1 med 1 N saltsyre. Den dannede olie ekstraheres med 3 x 150 ml ethylether. Den 25 organiske fase vaskes med vand, tørres og koncentreres til tørhed under formindsket tryk (3 kPa). Remanensen destilleres under formindsket tryk, hvorved fås 21,8 g 2--methylpropoxyeddikesyre med et kogepunkt på 92-96°C under et tryk på 0,93 kPa.

30

Eksempel 23

Der arbejdes på samme måde som i eksempel 1, men gås ud fra 6,6 g 3-chlor-2-(7-chlor-l,8-naphthyridin-2--yl)-l-isoindolinon i 60 ml vandfrit dimethylformamid, 35 4,3 g l-isopropyl-4-piperidincarboxylsyre-hydrochlorid og 7,1 g 1,8-diazabicyclo[5.4.0]-7-undecen. Efter om-

O

24 DK 169969 B1 krystallisation i acetonitril fås 4,1 g af et fast stof, som opløses i 120 ml tilbagesvalende ethanol. Derpå tilsættes en opløsning af 1,03 g fumarsyre i 20 ml etha- ·, nol. Efter krystallisation i acetonitril fås 4,9 g 5 surt fumarat af 2-(7-chlor-l,8-naphthyridin-2-yl)-3-oxo--1-isoindolinyl-(l-isopropyl-4-piperidyl)-carboxylat med et smeltepunkt på 184°C.

l-Isopropyl-4-piperidincarboxylsyre-hydrochlorid kan fremstilles ifølge metoden beskrevet i eksempel 4 10 til fremstilling af l-methyl~3-piperidincarboxylsyre- -hydrochlorid, idet der gås ud fra 6,5 g ethyl-l-isopro-pyl-4-piperidincarboxylat-hydrochlorid og 18,6 ml 6 N saltsyre. Herved fås 4,5 g l-isopropyl-4-piperidincar-boxylsyre-hydrochlorid med et smeltepunkt på 260-265°C.

15 Ethyl-l-isopropyl-4-piperidincarboxylat-hydrochlorid kan fremstilles på følgende måde. Til en opløsning af 6,15 g 2-brompropan i 50 ml propanol sættes 15,7 g ethyl-4--piperidincarboxylat i løbet af 10 minutter ved en temperatur nær 25°C. Reaktionsblandingen koges under til-20 bagesvaling i 48 timer og koncentreres dernæst til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa). Remanensen optages i 150 ml 1,5 N saltsyre, og den dannede opløsning vaskes med 2 x 100 ml ethylether. Vandfasen alkaliseres til en pH-værdi nær 9 med en 4 N vandig opløsning af natriumhy-25 droxid og ekstraheres med 3 x 100 ml methylenchlorid. Den organiske fase vaskes med vand, tørres og koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 40°C.

Remanensen opløses i 30 ml ethanol. Til den dannede opløsning sættes 12 ml af en 4,5 N opløsning af hydrogen-30 chlorid i ethylether. Det dannede bundfald fraskilles ved filtrering, vaskes og tørres. Herved fås 6,9 g ethyl- ' -l-isopropyl-4-piperidylcarboxylat-hydrochlorid med et smeltepunkt på 195-200°C.

35

O

25 DK 169969 B1

Eksempel 24

Til en opløsning af 3,9 g N-acetyl-3-alanin i 66 ml dimethylformamid sættes 6,6 g 3-chlor-2-(7-chlor-l,8--naphthyridin-2-yl)-1-isoindolinon. Til den dannede beige-5 farvede suspension sættes 3,8 g 1,8-diazabicyclo[5.4.0]--7-undecen dråbevis, hvorpå reaktionsblandingen omrøres ved en temperatur nær 20°C i 18 timer. Efter tilsætning af yderligere 1 g N-acetyl-3-alanin og 1 g 1,8-diazabi-cyclo[5.4.0]-7-undecen fortsættes omrøringen ved en tem-10 peratur nær 20°C i 24 timer. Reaktionsblandingen hældes dernæst i 130 ml vand. Det dannede faste stof fraskilles ved filtrering, vaskes med 3 x 25 ml vand og renses ved chromatografi under tryk (50 kPa) på 500 g siliciumdioxid i en kolonne med en diameter på 5 cm. Der elueres med en 15 blanding af dichlormethan og methanol i volumenforholdet 95:5 og opsamles fraktioner med et volumen på 75 ml. Fraktionerne 7-9 forenes og koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa). Det faste stof omkrystalliseres i acetonitril, hvorved fås 3,9 g 2-(7-chlor-l,8-naph-20 thyridin-2-yl)-S-oxo-l-isoindolinyl-S-acetamidopropanoat med et smeltepunkt på 220°C.

N-Acetyl-3-alanin kan fremstilles ifølge metoden beskrevet i eksempel 21 til fremstilling af 4-propion-amidobutansyre, idet der gås ud fra 8,9 g 3-alanin og 25 9,6 g eddikesyreanhydrid. Herved fås 12,9 g N-acetyl- -3-alanin i form af en olie, som anvendes i uren tilstand i efterfølgende syntesetrin.

Eksempel 25 30 Der arbejdes på samme måde som i eksempel 24, men gås ud fra 5 g 5-acetamidopentansyre i 66 ml dimethylformamid, 6,6 g 3-chlor-2-(7-chlor-l,8-naphthyridin-2--yl)-1-isoindolinon og 4,7 ml 1,8-diazabicyclo[5.4.0]--7-undecen. Efter omkrystallisation i acetonitril fås 35 3,3 g 2-(7-chlor-l,8-naphthyridin-2-yl)-3-oxo-l-isoin- dolinyl-5-acetamidopentanoat med et smeltepunkt på 185°C.

O

26 DK 169969 B1 5-Acetamidopentansyre kan fremstilles ifølge metoden beskrevet i eksempel 21 til fremstilling af 4--propionamidobutansyre, idet der gås ud fra 11,7 g 5--aminopentansyre og 12,6 g eddikesyreanhydrid. Reaktions-5 blandingen koncentreres til tørhed under formindsket tryk (0,05 kPa). Herved fås 6 g 5-acetamidopentansyre i form af en olie, som anvendes i uren tilstand i efterfølgende syntesetrin.

1° Eksempel 26

Der arbejdes på samme måde som beskrevet i eksempel 1, men gås ud fra 9,9 g 3-chlor-2-(7-chlor-l,8-naph-thyridin-2-yl)-1-isoindolinon i 100 ml vandfrit dimethyl-formamid, 5,2 g 4-isobutyrylaminosmørsyre og 4,6 g 15 1,8-diazabicyclo[5.4.0]-7-undecen. Remanensen omkrystal- liseres i acetonitril og renses dernæst ved chromatografi på 130 g siliciumdioxid (0,063-0,2 mm) i en kolonne med en diameter på 3 cm. Der elueres med en blanding af me-thylenchlorid og methanol i volumenforholdet 98:2 og op-20 samles fraktioner med et volumen på 25 ml. Fraktionerne 79-85 forenes og koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa). Remanensen krystalliseres ved omrøring i isopropylether. Herved fås 5,5 g 2-(7-chlor-l,8--naphthyridin-2-yl)-3-oxo-l-isoindolinyl-4-isobutyryl-25 aminobutyrat med et smeltepunkt på 208°C.

4-Isobutyrylaminosmørsyre kan fremstilles ifølge metoden beskrevet i eksempel 21 til fremstilling af 4--propionamidobutansyre, idet der gås ud fra 10,3 g 4--aminosmørsyre og 15,8 g isosmørsyreanhydrid. Herved fås 30 15,5 g 4-isobutyrylaminosmørsyre i form af en olie, som anvendes i uren tilstand i efterfølgende syntesetrin. s 35

O

27 DK 169969 B1

Eksempel 27

Der arbejdes på samme måde som i eksempel 1, men gås ud fra 9,9 g 3-chlor-2-(7-chlor-l,8-naphthyridin-2--yl)-1-isoindolinon i 100 ml vandfrit dimethylformamid, 5 6 g l-butyryl-4-piperidin-carboxylsyre og 4,6 g 1,8-dia- zabicyclo[5.4.0]-7-undecen. Remanensen renses ved chro-matografi på 250 g siliciumdioxid (0,063-0,2 mm) i en kolonne med en diameter på 4,2 cm. Der elueres med en blanding af methylenchlorid og methanol i volumenforhol-10 det 99:1 og opsamles fraktioner med et volumen på 70 ml. Fraktionerne 82-110 forenes og koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa). Det dannede faste stof optages under omrøring i isopropylether, hvorpå det fraskilles ved filtrering og tørres. Herved fås 6 g 2-(7-15 -chlor-1,8-naphthyridin-2-yl)-3-oxo-l-isoindolinyl-l--butyryl-4-piperidin-carboxylat med et smeltepunkt på 165°C.

(l-Butyryl-4-piperidyl)-carboxylsyre kan fremstilles ifølge metoden beskrevet i eksempel 21 til fremstil-20 ling af 4-propionamidobutansyre, idet der gås ud fra 12,9 g 4-piperidylcarboxylsyre og 15,8 g smørsyreanhydrid.

Herved fås 16 g (l-butyryl-4-piperiddn)~carboxylsyre i form af en olie, som anvendes i uren tilstand i efterfølgende syntesetrin.

25

Eksempel 28

Til en suspension af 9,9 g 3-chlor-2-(7-chlor-l,8--naphthyridin-2-yl)-1-isoindolinon og 6,7 g 4-diisopro-pylaminosmørsyre-hydrochlorid i 100 ml dimethylformamid 30 sættes dråbevis 10,7 g l,8-diazabicyclo[ 5.4.0]-7-undecen. Reaktionsblandingen omrøres i 20 timer ved en temperatur nær 20°C og hældes dernæst i 130 ml vand. Det dannede faste stof fraskilles ved filtrering og opløses i 200 ml methylenchlorid. De organiske ekstrakter vaskes med 35 2 x 35 ml 0,1 N saltsyre, med 35 ml 0,5 N saltsyre og til slut med 2 x 35 ml vand. Den organiske fase tørres

O

28 DK 169969 B1 over magnesiumsulfat, filtreres og koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa). Remanensen optages 1 200 ml methylenchlorid. Den organiske fase vaskes med , 2 x 50 ml af en mættet vandig natriumhydrogencarbonat-5 opløsning, tørres over magnesiumsulfat, filtreres og * koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa). Remanensen omkrystalliseres i isopropylether. Herved fås 7,1 g 2-(7-chlor-l,8-naphthyridin-2-yl)-3-oxo-l-isoindo-linyl-4-diisopropylaminobutyrat med et smeltepunkt på 10 118°C.

4-Diisopropylaminosmørsyre-hydrochlorid kan fremstillet på samme måde som beskrevet i eksempel 4 til fremstilling af (l-methyl-3-piperidin)-carboxylsyre-hydrochlorid, idet der gås ud fra 9,2 g ethyl-4-diisopro-15 pylaminobutyrat og 28,5 ml 6 N saltsyre, og reaktionsblandingen koges under tilbagesvaling i 6 timer. Herved fås 8 g 4-diisopropylaminosmørsyre-hydrochlorid med et smeltepunkt på 136°C.

Ethyl-4-diisopropylaminobutyrat kan fremstilles på 20 følgende måde. Til en opløsning af 39 g ethyl-4-brombu-tyrat i 80 ml ethanol sættes dråbevis 40,4 g diisopropyl-amin. Den dannede opløsning koges under tilbagesvaling i 6 timer. Efter filtrering af det dannede uopløselige stof koncentreres filtratet til tørhed under formindsket tryk 25 (2,7 kPa). Remanensen optages i 15 ml destilleret vand og 100 ml 4 N saltsyre. Vandfasen vaskes med 3 x 75 ml ethylether og alkaliseres med en 10 N vandig natriumhydroxidopløsning. Den dannede olie ekstraheres med 3 x 75 ml ethylether. Den organiske fase koncentreres til 30 tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa). Herved fås 9,2 g ethyl-4-diisopropylaminobutyrat i form af en olie, som anvendes i uren tilstand i efterfølgende syntesetrin.

35

O

29 DK 169969 B1

Eksempel 29

Til en suspension af 12,5 g 2-(7-chlor-l,8-naph-thyridin-2-yl)-3-hydroxy-l-isoindolinon i 600 ml methylen-chlorid sættes 12,2 g triethylamin, 90 ml pyridin og 5 9,7 g 3-methylbutyrylchlorid, medens temperaturen holdes ved ca. 25°C. Efter omrøring i 4 timer ved en temperatur nær 25°C tilsættes yderligere 9,7 g 3-methylbutyrylchlorid, og omrøringen fortsættes i yderligere 16 timer ved den samme temperatur. Reaktionsblandingen koncentreres dernæst 10 til tørhed under formindsket tryk (3 kPa), og remanensen optages i 500 ml vand. Det dannede uopløselige produkt fraskilles ved filtrering, vaskes, tørres og omkrystalliseres i en blanding af lige volumendele isopropylether og ethylacetat. Herved fås 7,9 g 2-(7-chlor-l,8-naphthy-15 ridin-2-yl)-3-oxo-l-isoindolinyl-3-methylbutyrat med et smeltepunkt på 154°C.

Eksempel 30

Til en opløsning af 3,2 g 2-(7-chlor-l,8-naphthyri-20 din-2-yl)-3-hydroxy-l-isoindolinon i 160 ml methylenchlo-rid sættes 24 ml pyridin. Derefter tilsættes 5,5 g propio-nylchlorid i løbet af 30 minutter ved en temperatur nær 25°C. Reaktionsblandingen omrøres i 3 timer ved denne temperatur, hvorefter der tilsættes 100 ml vand. Den 25 organiske fase dekanteres, vaskes med vand, tørres og koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa). Remanensen krystalliseres i isopropylether og omkrystalliseres derefter i en blanding af isopropylether og ethylacetat i volumenforholdet 25:75. Herved fås 1 g 2-(7-30 -chlor-1,8-naphthyridin-2-yl)-3-oxo-l-isoindolinyl-pro-pionat med et smeltepunkt på 160°C.

35 0 DK 169969 B1 30

Eksempel 31

Der arbejdes på samme måde som i eksempel 30, men gås ud fra 6,4 g 2-(7-chlor-l,8-naphthyridin-2-yl)-3--hydroxy-l-isoindolinon i 320 ml methylenchlorid, 48 ml 5 pyridin og 12,8 g butyrylchlorid. Efter én omkrystal- * lisation i diisopropylether og to omkrystallisationer i acetonitril fås 3,4 g 2-(7-chlor-l,8-naphthyridin-2--yl)-3-oxo-1-isoindolinyl-butyrat med et smeltepunkt på 140°C.

10

Eksempel 32

Der arbejdes på samme måde som i eksempel 1, men gås ud fra 9,9 g 3-chlor-2-(7-chlor-l,8-naphthyridin--2-yl)-1-isoindolinon i 100 ml vandfrit dimethylformamid, 15 4,25 g 4-cyclohexanoncarboxylsyre og 4,6 g 1,8-diaza- bicyclo[5.4.0]-7-undecen. Efter omkrystallisation i acetonitril fås 8,5 g 2-(7-chlor-l,8-naphthyridin-2-yl)--3-oxo-l-isoindolinyl-4-oxocyclohexan-carboxylat med et smeltepunkt på 203°C.

20

Eksempel 33

Der arbejdes på samme måde som i eksempel 7, men gås ud fra 8,55 g 2-(7-brom-l,8-naphthyridin-2-yl)-3-hy-droxy-l-isoindolinon i 110 ml methylenchlorid, 11,1 g 25 triethylamin, 7 g 5-methylhexanoylchlorid og 50 mg 4- -dimethylaminopyridin. Efter krystallisation i hexan og omkrystallisation i ethanol fås 7,5 g 2-(7-brom-l,8-naph-thyridin-2-yl)-3-oxo-l-isoindolinyl-5-methylhexanoat med et smeltepunkt på 136°C.

30 2-(7-Brom-l,8-naphthyridin-2-yl)-3-hydroxy-l-isoindo- linon kan fremstilles som beskrevet i belgisk patentskrift nr. 815.019.

35

O

31 DK 169969 B1

Eksempel 34

Der arbejdes på samme måde som i eksempel 7, men gås ud fra 6,3 g 5-hydroxy-6-(7-chlor-l,8-naphthyridin--2-yl)-7-oxo-6,7-dihydro-5H-pyrrolo[3,4-b]pyrazin i 80 5 ml methylenchlorid, 5,05 g triethylamin, 3,14 g metha-cryloylchlorid og 50 mg 4-dimethylaminopyridin. Den dannede remanens renses ved omkrystallisation i aceto-nitril og derefter ved chromatografi på 50 g neutralt aluminiumoxid i en kolonne med en diameter på 1,5 cm.

10 Der elueres med methylenchlorid og opsamles fraktioner med et volumen på 15 ml. Fraktionerne 12-34 forenes og koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 40°C. Herved fås 1,4 g 6-(7-chlor-l,8-naphthyridin--2-yl)-7-OXO-6,7-dihydro-5H-pyrrolo[3,4-b]-5-pyrazinyl-15 -methacrylat med et smeltepunkt på 255°C.

5-Hydroxy-6-(7-chlor-l,8-naphthyridin-2-yl)-7-oxo--6,7-dihydro-5H-pyrrolo[3,4-b]pyrazin kan fremstilles på den måde, der beskrives i det belgiske patentskrift nr. 815.019.

20

Eksempel 35

Der arbejdes på samme måde som i eksempel 7, men gås ud fra 6,3 g 5-hydroxy-6-(7-chlor-l,8-naphthyridin--2-yl)-7-OXO-6,7-dihydro-5H-pyrrolo[3,4-b]pyrazin i 80 25 ml methylenchlorid, 5,05 g triethylamin, 4,25 g isobu- tyrylchlorid og 50 mg 4-dimethylaminopyridin. Det dannede faste stof vaskes med tetrahydrofuran. Der fås 2,3 g 6-(7-chlor-l,8-naphthyridin-2-yl)-7-oxo-6,7-dihydro-5H--pyrrolo[3,4-b]-5-pyrazinyl-isobutyrat med et smelte-30 punkt på 260-262°C.

5-Hydroxy-6-(7-chlor-l,8-naphthyridin-2-yl)-7-oxo--6,7-dihydro-5H-pyrrolo[3,4-b]pyrazin kan fremstilles på den måde, der beskrives i det belgiske patentskrift nr. 815.019.

35

O

32 DK 169969 B1

Eksempel 36

Til en suspension af 6,15 g 3-hydroxy-2-(7-methoxy--1,8-naphthyridin-2-yl)-1-isoindolinon i 50 ml vandfrit dimethylformamid sættes 0,96 g af en oliesuspension 5 (50 vægt-%) af natriumhydrid i løbet af 15 minutter ved en temperatur på ca. 0°C. Reaktionsblandingen omrøres i 30 minutter ved 0°C, og derefter tilsættes 2,9 ml di-ethylchlorphosphat dråbevis i løbet af 30 minutter, medens temperaturen holdes ved ca. 0°C. Til den dannede opløs-10 ning sættes ved en temperatur nær 0°C en opløsning af natrium-4-acetylaminobutanoat fremstillet ud fra 2,9> g 4-acetamidosmørsyre i 30 ml vandfrit dimethylformamid og 0,96 g af en oliesuspension (50 vægt-%) af natriumhydrid. Reaktionsblandingen omrøres i 1 time ved 0°C, dernæst i 15 20 timer ved en temperatur nær 20°C og til slut i 4 timer ved 80°C. Reaktionsblandingen hældes dernæst i 300 ml vand og ekstraheres med 3 x 200 ml methylenchlorid. De organiske faser forenes, vaskes med vand, tørres og koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa).

20 Remanensen renses ved chromatografi på 350 g siliciumdioxid (0,063-0,2 mm) i en kolonne med en diameter på 5 cm.

Der elueres med en blanding af methylenchlorid og methanol i volumenforholdet 99:1 og opsamles fraktioner med et volumen på 100 ml. Fraktionerne 23-39 forenes og koncen-25 treres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 40°C. Remanensen omkrystalliseres i acetonitril. Herved fås 2 g 2-(7-methoxy-l,8-naphthyridin-2-yl)-3-oxo-l-iso-indolinyl-4-acetylaminobutyrat med et smeltepunkt på 190°C.

30

Eksempel 37

Der arbejdes på samme måde som i eksempel 7, men gås ud fra 3,7 g 2-(7-methyl-l,8-naphthyridin-2-yl)-3--hydroxy-l-isoindolinon, 7,8 g 5-methylhexanoylchlorid, 35 12 ml triethylamin og 50 mg 4-dimethylaminopyridin. Det efter behandling dannede faste stof omkrystalliseres i methylcyclohexan, hvorved fås 3,8 g 2-(7-methyl-l,8-

O

33 DK 169969 B1 -naphthyridin-2-yl)-3-oxo-l-isoindolinyl-5-methylhexanoat med et smeltepunkt på 144°C.

3-Hydroxy-2-(7-methyl-l,8-naphthyridin-2-yl)-1--isoindolinon kan fremstilles ifølge metoden beskrevet 5 i det tyske patentskrift nr. 2.423.650.

5-Methylhexanoylchlorid kan fremstilles ifølge metoden beskrevet af G.L. Goerner et al., J. Org. Chem., 24, 1561 (1959).

10 Eksempel 38

Der arbejdes på samme måde som i eksempel 1, men gås ud fra 9,9 g 3-chlor-2-(7-chlor-l,8-naphthyridin-2--yl)-1-isoindolinon i 100 ml vandfrit dimethylformamid, 4,8 g 4-(N-methylacetamido)-butansyre og 4,6 g 1,8-diaza-15 bicyclo[5.4.0]-7-undecen. Den dannede olieagtige remanens renses ved chromatografi på 150 g siliciumdioxid (0,063-0,2 mm) i en kolonne med en diameter på 3 cm. Der elue-res med en blanding af methylenchlorid og methanol i volumenforholdet 99:1 og opsamles fraktioner med et vo-20 lumen på 30 ml. Fraktionerne 76-175 koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 60°C. Efter krystallisation i ethylether fås 3,1 g 2-(7-chlor-l,8--naphthyridin-2-yl)-3-oxo-l-isoindolinyl-4-(N-methylacetamido) -bu ty rat med et smeltepunkt på 170°C.

25 4-(N-Methylacetamido)-butansyre kan fremstilles på følgende måde.

Til en opløsning af 15,4 g 4-(N-methylamino)-butansyre--hydrochlorid i 200 ml af en 2,5 N vandig opløsning af natriumhydroxid, som holdes ved en temperatur nær 5°C, 30 sættes 11,8 g acetylchlorid i løbet af 1 time. Reaktionsblandingen omrøres i yderligere 30 minutter ved ca. 5°C og gøres derefter sur til en pH-værdi nær 1 ved hjælp af 12 N saltsyre. Blandingen koncentreres dernæst til tørhed ved 80°C under formindsket tryk (2,7 kPa), og rema-35 nensen optages i 150 ml ethanol. Et fast stof fraskilles ved filtrering, og filtratet koncentreres til tørhed ved 60°C under formindsket tryk. Remanensen optages i 150 ml

O

34 DK 169969 B1 methylenchlorid. Den organiske fase tørres over magnesium-sulfat og koncentreres til tørhed ved 60°C under formindsket tryk (2,7 kPa) . Herved fås 19 g 4-(N-methylacetami-do)-butansyre i form af en olie, som anvendes i uren til-5 stand i efterfølgende syntesetrin.

Eksempel 39

Der arbejdes på samme måde som i eksempel 7, men gås ud fra 5 g 2-(7—fluor-1,8-naphthyridin-2-yl)-3-hydroxy-10 -1-isoindolinon i 60 ml methylenchlorid, 6,5 g triethyl-amin, 3,66 g 4-methylpentanoylchlorid og 10 mg 4-dime-thylaminopyridin. Efter omkrystallisation i ethanol fås 1,2 g 2-(7-fluor-1,8-naphthyridin-2-yl)-3-oxo-l-isoindo-linyl-4-methylpentanoat med et smeltepunkt på 154°C.

15 2-(7-Fluor-l,8-naphthyridin-2-yl)-3-hydroxy-l-iso- indolinon kan fremstilles på følgende måde. Til en suspension af 16,6 g 2-(7-fluor-1,8-naphthyridin-2-yl)-isoindo-lin-l,3-dion i en blanding af 90 ml vandfrit methanol og 90 ml dioxan sættes 2,3 g kaliumtetrahydridoborat i små 20 portioner ved en temperatur nær 20°C. Den dannede suspension omrøres i 3 timer ved en temperatur nær 20°C. Reaktionsblandingen hældes dernæst i en blanding af 120 g is og 240 ml vand. Det uopløselige produkt fraskilles ved filtrering, vaskes med 3 x 50 ml vand, tørres i luft og 25 omkrystalliseres i acetonitril. Herved fås 10,3 g 2-(7--fluor-1,8-naphthyridin-2-yl)-3-hydroxy-l-isoindolinon med et smeltepunkt på 246°C.

2-(7-Fluor-1,8-naphthyridin-2-yl)-isoindolin-1,3--dion kan fremstilles på følgende måde. Til en suspension 30 af 20,6 g 2-(7-chlor-l,8-naphthyridin-2-yl)-isoindolin--1,3-dion i 270 ml vandfrit nitrobenzen, som holdes under argonatmosfære, sættes 15 g kaliumfluorid. Reaktionsblandingen koges under tilbagesvaling og under omrøring i 22 timer. Efter afkøling til en temperatur nær 80°C 35 koncentreres reaktionsblandingen til tørhed under formindsket tryk (0,13 kPa) ved 80°C. Remanensen optages i 170 ml ethylacetat. Det uopløselige produkt fraskilles ved DK 169969 B1 35 filtrering, vaskes med 30 ml ethylacetat og med 6 x 30 ml vand samt tørres i luft. Herved fås 16,9 g 2-(7-fluor-1,8--naphthyridin-2-yl)-isoindolin-1,3-dion med et smeltepunkt på 264°C.

5 2-(7-Chlor-l,8-naphthyridin-2-yl)-isoindolin-1,3- -dion kan fremstilles ifølge metoden beskrevet i belgisk patentskrift nr. 835.325.

Eksempel 40 10 En opløsning af 25 mg 2-(7-chlor-l,8-naphthyridin-2- yl)-3-oxo-l-isoindolinyl-4-acetamidobutyrat i 10 cm3 af en blanding af hexan og ethanol i volumenforholdet 50:50 chro-matograferes på en stationær fase bestående af (tris-phenyl-carbamat)-cellulose adsorberet på makroporøst siliciumdioxid 15 indeholdt i en søjle med en diameter på 2,2 cm og en længde på 25 cm. Elueringen gennemføres med en blanding af hexan og ethanol i volumenforholdet 50:50 og følges ved ultraviolet detektion ved 360 nm. Elueringen gennemføres med en hastighed på 9 cm3 pr. minut. Den venstredrejende isomer elueres efter 20 20 minutter og efterfølges af den højredrejende isomer. De tilsvarende eluater koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 45eC. Der fås på denne 8 mg (-)-2-(7-chlor-1,8-naphtyridin-2-yl)-3-oxo-l-isoindolinyl-4-acetami-dobutyrat med et smeltepunkt på 199°C og 7 mg (+)-2-(7-chlor-25 1,8-naphtyridin-2-yl)-3-oxo-l-isoindolinyl-4-acetamidobutyrat med et smeltepunkt på 200“C.

Det racemiske 2-(7-chlor-l,8-naphtyridin-2-yl)-3-oxo-l-isoindolinyl-4-acetamidobutyrat kan fremstilles som beskrevet i eksempel 12.

30

Eksempel 41

Der gås frem som i eksempel 40, men gås ud fra 25 mg 2-(7-chlor-l,8-naphtyridin-2-yl)-3-oxo-l-isoindolinyl-4-pro-pionamidobutyrat, og fås på denne måde 8 mg (-)-2-(7-chlor-35 1,8-naphtyridin-2-yl) -3-oxo-l-isoindolinyl-4-propionamidobu- tyrat med et smeltepunkt på 205°C og 8 mg (+)-2-(7-chlor-l,8- DK 169969 B1 36 naphtyridin-2-yl)-3-oxo-l-isoindolinyl-4-propionamidobutyrat med et smeltepunkt på 204°C.

Racemisk 2-(7-chlor-l, 8-naphtyridin-2-yl)-3-oxo-l-isoindolinyl-4-propionamidobutyrat kan fremstilles som be-5 skrevet i eksempel 21.

Det følgende eksempel illustrerer et præparat ifølge opfindelsen.

Eksempel A

10 Tabletter indeholdende 10 mg aktiv forbindelse frem stilles ifølge sædvanlig teknik. Tabletterne har den følgende sammensætning: 2-(7-Chlor-l,8-naphthyridin-2-yl)-3-oxo-l- -isoindolinyl-3-dimethylaminopropionat ........ 0,010 g 15 Stivelse ...................................... 0,200 g

Udfældet siliciumdioxid ....................... 0,036 g

Magnesiumstearat .............................. 0,004 g Rå samme måde kan der fremstilles tabletter, hvis aktive bestanddel er en af de følgende forbindelser: 20 2-(7-chlor-l,8-naphthyridin-2-yl)-3-oxo-l-isoindo- linyl-(RS)-4-acetamidobutyrat, 2-(7-chlor-l,8-naphthyridin-2-yl)-3-oxo-l-isoindo-linyl-(RS)-(l-propionyl-4-piperidyl)-carboxylat, 2- (7-methoxy-l,8-naphthyridin-2-yl) -3-oxo-l-isoindo-25 linyl-(RS)-5-methylhexanoat, 2-(7-chlor-l,8-naphthyridin-2-yl)-3-oxo-l-isoindo-linyl-(RS)-3-diisopropylaminopropionat.

30 Sammenlianincsforsøg.

Beskrivelse af de anvendte forsøg.

Toksicitet.

Der bestemmes den maksimale dosis af forbindelsen (DL50), som ved oral indgivelse til mus bevirker, at 50% af 35 disse dør.

DK 169969 B1 37

Prøve af affinitet over for centrale benzodiazeoin-recep-torsteder.

Metoden, som er inspireret af metoden beskrevet af Squires og Braestrup - Nature, 266. 732-734 (1977), består 5 i at måle, i nærværelse af den undersøgte forbindelse, den specifikke binding af en ligand for benzodiazepinreceptorer, nemlig tritieret flunitrazepam.

Hvis forbindelsen har en affinitet til benzodiazepin-receptorsteder, formindskes den specifikke binding af ligan-10 den.

Forsøgsmetoden er følgende: Et vasket homogenisat (to centrifugeringer ved 50.000 g) af hel hjernebark fra hanrotter (CD, COBS, Charles River France) i en 50 mM tris-HCl-puffer med en pH-værdi på 7,4 (slutkoncentration 0,1 mg 15 protein pr. ml) blandes med forbindelsen, der skal undersøges, i forskellige koncentrationer og tritieret flunitrazepam (slutkoncentration 1,5 nM). Den uspecifikke binding bestemmes i nærværelse af diazepam (10 μΜ). Efter 120 minutters inkubering ved 0°C filtreres hver prøve på et glas-20 fiberfilter ("WHATMAN GF/B"-filter), og radioaktiviteten tilbageholdt på filteret måles ved væskescintillation.

På denne måde bestemmes CI50, dvs. den koncentration af den undersøgte forbindelse, som inhiberer den specifikke binding af liganden 50%.

25 Prøve med kramper fremkaldt af pentetrazol

Der anvendes mus på 18-22 g.

Musene modtager alle subcutant en fast dosis på 150 mg/kg pentetrazol (enhedsdosis indeholdt i 25 ml opløsning pr. kg mus). Forbindelserne, der skal undersøges, indgives 30 oralt 45 minutter eller 1 time og 30 minutter før pentetrazol, idet enhedsdoserne er indeholdt i et volumen på 25 ml pr. kg mus.

Der anvendes 5 mus pr. dosis og tre doser pr. forbindelse.

35 Efter injektion af pentetrazol anbringes musene i en kasse opdelt i 15 rum med en sidelængde på 13 cm, således DK 169969 B1 38 at hver mus er isoleret under hele observationstiden. Disse kasser dækkes med en gennemsigtig plastplade. Alle kontrolmus, som har modtaget en subcutan dosis på 150 mg/kg pen-tetrazol, udviser på mindre end 15 minutter mere eller mindre 5 voldsomme kramper, som hurtigt er dødelige. Musene observeres i 30 minutter efter injektionen af pentetrazol. Mus, som i dette tidsrum på 30 minutter ikke udviser nogen kramper, betragtes som beskyttet mod kramper. DA5o af en forbindelse er den dosis, der på højdepunktet af sin virkning undertryk-10 ker kramper fremkaldt af pentetrazol hos 50% af dyrene.

Qphænqninqsforsøq

Denne metode består i at ophænge mus ved forpoterne på en vandret udspændt metaltråd. Dyr, som ikke bliver hængende efter tre forsøg, eller som efter at have hængt på 15 tråden falder i løbet af 5 sekunder eller mindre end 5 sekunder, betragtes som underkastet en neuromuskulært depressiv virkning. Alle kontroldyrene griber let fast i tråden, forbliver ophængte og udfører i løbet af 5 sekunder eller mindre end 5 sekunder en bevægelse, som bevirker, at mindst én af 20 deres bagpoter berører tråden.

Der anvendes 6 mus pr. dosis og 4-5 doser pr. forbindelse.

DA50 af en forbindelse er den dosis, der på højdepunktet af sin virkning udøver en neuromuskulært depressiv 25 aktivitet hos 50% af dyrene.

30 9 35 DK 169969 B1 39

\rP

bO O

Ό C N m rP ·ρ cd -voooooooonvooooJiHinLncno ^ ·

o p p mrt'i»'COrt<f®riHinorUt'<fwM<t fe C

43 bD .p r~l H i—I Η H fO Η H CO O

0 § ® Al Al Al Al Al Λ Al Λ VI Al Al =P

fe Λ S L

fem 5 op- 3 o -- -p

C

• o o . w 1 p, fe mm ' bo p bo b

p g X X

-p ^ \ oomomooooooooorootnoo o B bo ©OmOmOOOOOOOOOrOOCOOO m fe bO bO g <3\ H tM (il -POnOnOnOnOnOnCMOn m O'SON CM gi al w O Al Al P Al Al Al A Al A A P VI P P P Al Al cm o

i k m «J §SSS

ρ o w C pccc fe O fe Q g ————— ......— 1 /-s

• i—I

i !-l O »*> B i 0 1 ø 6 fe p fe P- O S i

fe cti bO in ^ ^ Λ S

τ) fe P Ai in in in in cooNin r-ι fe

<u i—i ^ s, - - - - - - N

go wbo ocninmoifevocMmomcocMcoOr-iocMcM o ni

N 0 p £ CM CM I"- CM rP fe CM P

(1) te 4-1 g <u > Ρ Ό ^ O fe e fe --i m ρ ø cd w fe Οιμ,ϋ Q ^ --—---c 0

P -P

fe O G fe

•P (J-| .p O

fe fe fe PØ „fe 4jøn in oo in ro rom i ø p cd - - - - - - <1" fe o *p S corPmoooooovocMOONCMomoomocMONto o ^

.p 4) t) C rP CMOOfOfO O <t ro O O fe fe fe I

p p o fe P P m •P ø N . 1 fe O p Λ fe 0 0 fe C fe Æ >">

---------CM

C

o ooooooooooooooooo O *H

O OOOOOOOOOOOOOOOOO O Ό bO O Ο ·Η M _0 fe 0\ΡΌοτ) 4J bO g (D CO <D 0)4d S !> . > > -p 0-0 „ ife

.p - · bO O bO W) P

m o o ·ρ fe ·ρ fe 2

Al m · fe fe fe β O hJ fe fe fe fe '

Pp Q .p .p = = = = = = = = = = = = = = = = fe CO

bO bO

p p 2 fe ---—...............—- u v s ON ,ρ iP ι-p -cf o ø ø oo i p, . p no rv EP COMt'Or'.ONOCMOfeCMMj'Or— ONfOOr^-OOCJN £ m -tf N^ Øp -HrMfeCMCMCMCMCMCMCOrOrOrOrO o P H i

03 M CM

J2 as «

S W U /-M

----—-- cd

Claims (5)

1. Isoindolinonderivater, kendetegnet ved, at de har den almene formel 0 5 11 (I) OCO-R hvori Het betyder en naphthyridinylgruppe, som er substitu-15 eret med et halogenatom, med en alkylgruppe med 1-4 car-bonatomer eller med en alkyloxygruppe med 1-4 carbonatomer, og R betyder en alkylgruppe, som er usubstitueret eller substitueret med en alkyloxy-, dialkylamino-, alkylcarbonyl-amino- (hvis aminodel eventuelt er substitueret med en al-20 kylgruppe), piperidyl- eller piperidinogruppe, eller R betyder en 4-piperidylgruppe, idet alkylgrupperne er ligekædede eller forgrenede og har 1-10 carbonatomer, og idet piperi-dino- og 4-piperidylgrupperne er usubstituerede eller substituerede med en eller flere alkylgrupper, 25 samt farmaceutisk acceptable salte og optiske isomere af forbindelserne med formlen I, når sådanne eksisterer.

2. Fremgangsmåde til fremstilling af en forbindelse ifølge krav 1, hvori Het har den i krav 1 angivne betydning, bortset fra en l,8-naphthyridin-2-yl-gruppe substitueret i 30 7-stilling med en alkyloxygruppe, kendetegnet ved, at en syre med den almene formel R-COOH (II) eller et alkalimetalsalt af denne syre, hvori R har den i krav 1 angivne betydning, omsættes med en forbindelse med 35 den almene formel Λ DK 169969 B1 41 O II 5 ^N-Het' (III) ^ I Cl 10 hvori Het' har den samme betydning som Het i krav i, bortset fra en l,8-naphthyridin-2-yl-gruppe substitueret i 7-stilling med en alkyloxygruppe, hvorefter den dannede forbindelse isoleres og i påkommende tilfælde eventuelt omdannes til et 15 farmaceutisk acceptabelt salt.

3. Fremgangsmåde til fremstilling af en forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at en forbindelse med den almene formel RCO-X (V) 20 hvori R har den i krav l angivne betydning, og X betyder et halogenatom eller en aktiveret rest, omsættes med en forbindelse med den almene formel O 25 (IV) il H-Het kJy OH 30 hvori Het har de i krav 1 angivne betydninger, hvorefter den dannede forbindelse isoleres og i påkommende tilfælde eventuelt omdannes til et farmaceutisk acceptabelt salt.

4. Fremgangsmåde til fremstilling af en forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at et alkalimetal- 35 salt af en syre med den almene formel R-COOH (II) hvori R har den i krav 1 angivne betydning, omsættes med en forbindelse med den almene formel DK 169969 B1 42 r^Jl II N~Het (VI) 5 vy

0-P{0R4), n 2 o hvori R4 betyder en ligekædet eller forgrenet alkylgruppe 10 indeholdende 1-4 carbonatomer eller en phenylgruppe, og Het har de i krav 1 angivne betydninger, hvorefter dan dannede forbindelse isoleres og i påkommende tilfælde eventuelt omdannes til et farmaceutisk acceptabelt salt.

5. Farmaceutisk præparat, kendetegnet 15 ved, at de indeholder mindst én forbindelse ifølge krav 1 i kombination med et eller flere kombinerbare og farmaceutisk acceptable fortyndingsmidler. 20 25 30 35