DE69529932T2

DE69529932T2 - Tränendrüsenspezifische Emulsionen zur topischen Anwendung an okuläre Gewebe

Info

Publication number: DE69529932T2
Application number: DE69529932T
Authority: DE
Inventors: Shulin Ding; Orest Olejnik; Walter L. Tien
Original assignee: Allergan Sales LLC
Current assignee: Allergan Sales LLC
Priority date: 1994-05-17
Filing date: 1995-05-17
Publication date: 2003-12-18
Anticipated expiration: 2015-05-18
Also published as: DE69522104T2; KR100450703B1; BR9507664A; EP0759773B1; US5474979A; DE69522104D1; AU2640995A; PT1044678E; CN1198587C; CN1288722A; ATE203911T1; EP1044678B1; JP4119284B2; CA2190485A1; ES2194670T3; JP3441462B2; AU693213B2; ATE234076T1; DK0759773T3; JPH10500414A

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft im Allgemeinen neuartige ophthalmische wässrige Emulsionszusammensetzungen, die Chemikalien (wie beispielsweise Cyclosporin) enthalten können, die in Wasser schlecht löslich sind und betrifft insbesondere eine neue ophthalmische Emulsion mit hohem Komfortniveau und geringem Irritationspotential, die Polysorbat 80 enthält.
Cyclosporine sind eine Gruppe unpolarer zyklischer Oligopeptide mit einer bekannten immunsuppressiven Aktivität bzw. Wirksamkeit. Es wurde herausgefunden, wie es im US- Patent Nr. 4 839 342 dargelegt ist, dass Cyclosporin (das in der Literatur manchmal als "Cyclosporine" bezeichnet wird) sich bei der Behandlung einer Immun-vermittelten Keratoconjunctivitis sicca (KCS oder Trockenes Auge-Krankheit) bei einem darunter leidenden Patienten als wirksam erwiesen hat.
Wie hierin vorstehend erwähnt umfasst Cyclosporin eine Gruppe zyklischer Oligopeptide und der Hauptbestandteil hiervon ist Cyclosporin A (C&sub6;&sub2;H&sub1;&sub1;&sub1;N&sub1;&sub1;O&sub1;&sub2;), das zusammen mit mehreren anderen kleineren Metaboliten, nämlich Cyclosporin B bis I identifiziert wurde. Zusätzlich wurden mehrere synthetische Analoga hergestellt.
Im Allgemeinen können im Handel erhältliche Cyclosporine ein Gemisch mehrerer individueller Cyclosporine enthalten, die alle eine zyklische Peptidstruktur teilen, die aus elf Aminosäureresten bestehen, mit einem Gesamtmolekulargewicht von ungefähr 1.200, die jedoch unterschiedliche Substituenten oder Konfigurationen einiger der Aminosäuren aufweisen.
Es sollte erwähnt werden, dass eine Bezugnahme auf den Begriff "Cyclosporin" oder "Cyclosporine" in der gesamten Beschreibung verwendet wird, um den Cyclosporin-Bestandteil in der Zusammensetzung in der vorliegenden Erfindung zu bezeichnen.
Jedoch soll diese spezielle Bezugnahme jedes individuelle Element der Cyclosporin-Gruppe ebenso wie Mischungen zweier oder mehrerer einzelner Gyclosporine einschließen, egal ob natürlich oder synthetisch.
Die Aktivität der Cyclosporine wie hierin vorstehend erwähnt, ist die eines immunsuppressiven Mittels und liegt in der Steigerung oder Wiederherstellung der Tränenbildung bzw. des Tränenträufelns der Tränendrüsen. Diese Aktivität kann erhöht werden, wenn es möglich ist, die Absorption des Cyclosporins in die Tränendrüse zu steigern.
Leider ist die Löslichkeit von Cyclosporin in Wasser extrem gering und wie im US-Patent Nr. 5 051 402 herausgearbeitet wurde, wurde es nicht nur als schwierig, sondern als praktisch unmöglich angesehen, eine pharmazeutische Zusammensetzung herzustellen, die Cyclosporin in einem wässrigen Medium gelöst enthält.
Wie berichtet wurde liegt die Löslichkeit von Cyclosporin in Wasser zwischen ungefähr 20 ug/ml bis 30 ug/ml für Cyclosporin A. Daher wurden bis jetzt hergestellte Zubereitungen, die Cyclosporin enthalten, als ölige Lösungen hergestellt, die Ethanol enthalten. Jedoch begrenzen diese Zubereitungen die Bioverfügbarkeit oraler Zubereitungen und es wird angenommen, dass dies auf die Abtrennung von Cyclosporin als Feststoff zurückzuführen ist, kurz nachdem es mit Wasser in Berührung kommt, wie beispielsweise im Mund oder Auge eines Patienten.
Im Falle von injizierbaren Zubereitungen von Cyclosporin müssen diese zunächst vor intravenöser Verabreichung mit physiologischer Salzlösung verdünnt werden, dies hat jedoch wahrscheinlich die Präzipitation von Cyclosporin zur Folge und kann deswegen als zur intravenösen Verabreichung unerwünscht angesehen werden.
Oberflächenaktive Mittel, wie beispielsweise polyoxyethyliertes Rizinusöl wurden als Solubilisatoren bzw. Lösungsvermittler zum Injizieren von Zubereitungen verwendet, um eine Abtrennung des Cyclosporins zu vermeiden. Dies kann jedoch Sicherheitsprobleme entstehen lassen (siehe US-Patent Nr. 5 051 402).
Die praktische Nützlichkeit von Cyclosporin würde in hohem Maße gesteigert werden, wenn dessen Verabreichung effektiv sein könnte; beispielsweise die Effektivität der Cyclosporine in der Behandlung von okularen Symptomen des Behcet's Syndroms. Wenn es zur Behandlung dieser Symptome jedoch oral verabreicht wird, können die begleitenden Nebenwirkungen aufgrund einer systemischen Zirkulation nachteilige Reaktionen wie beispielsweise Hypertrichose oder eine renale Dysfunktion verursachen.
Wenn andererseits ölige Zubereitungen, die Cyclosporin enthalten, direkt an die Augen verabreicht werden, kann sich eine Irritation oder eine Trübung des Sehfeldes ergeben. Dies plus der Schwierigkeit der Formulierung von Cyclosporin schränkt dessen Verwendung in Zubereitungen ein, die während einer Keratoplastie von Nutzen sein würden, ebenso wie bei der Behandlung der Herpes-Keratitis und des Frühjahrskatarrhs.
Deswegen wurden, wie beispielsweise im US-Patent Nr. 5 051 402, Versuche unternommen, ausreichend Cyclosporin in einem wässrigen Lösungsmittelsystem zu lösen, um eine effektive Konzentration zur Behandlung zu erreichen. Dieses Lösungsmittelsystem enthält notwendigerweise keine oberflächenaktiven Mittel wie beispielsweise polyoxyethyliertes Rizinusöl.
Konzeptionell ist das Ziel des Auflösens des Cyclosporins in einem wässrigen Lösungsmittelsystem, eine Berührung mit Körperflüssigkeiten zu ermöglichen, die lediglich eine Verdünnung eines wässrigen Lösungsmittelsystems ergeben könnten, das hoffentlich die sofortige Präzipitation bzw. Ausfällung von Cyclosporin vermeiden würde, wenn es mit dem Wassergehalt der Körperflüssigkeiten in Berührung gebracht wird.
Zur direkten Verwendung im Auge wurde Cyclosporin mit mehreren pharmazeutisch verträglichen Trägerstoffen formuliert, beispielsweise mit tierischen Ölen, pflanzlichen Ölen, einem geeigneten organischen oder wässrigen Lösungsmittel, einer künstlichen Tränenlösung oder einem natürlichen oder synthetischen Polymer oder einer geeigneten Membran.
Spezielle Beispiele für diese pharmazeutisch verträglichen Trägerstoffe, die alleine oder in Kombination verwendet werden können sind unter anderem Olivenöl, Erdnussöl, Rizinusöl, Mineralöl, Vaseline, Dimethylsulfoxid, Chremophor, Liposome oder liposomartige Produkte oder eine Silikon-Flüssigkeit.
Zusammenfassend wurde ein großer Aufwand betrieben, um eine pharmazeutische Zusammensetzung herzustellen, die Cyclosporin in einem wässrigen Medium gelöst enthält oder Cyclosporin, das als eine ölige Lösung hergestellt wurde. Jedoch müssen erfolgreiche Formulierungen noch erreicht werden, wie es durch das Fehlen von Handelsprodukten klar gezeigt wird.
Wie hierin vorstehend erwähnt wurde berichtet, dass Cyclosporin eine gewisse Löslichkeit in öligen Zubereitungen gezeigt hat, die höhere Fettsäureglyceride enthalten, wie beispielsweise Olivenöl, Erdnussöl und/oder Rizinusöl. Diese Zubereitungen erzeugen häufig eine unangenehme Empfindung, wenn sie auf das Auge aufgebracht werden, wegen der Stimulation oder der Viskosität, die für diese Öle charakteristisch ist.
Ein weiterer Nachteil dieser Zubereitungen besteht darin, dass sie eine hohe Konzentration an Ölen enthalten und Ölen, die die Symptome bestimmten Augenoberflächenerkrankungen, wie beispielsweise trockene Augen, für die Cyclosporin indiziert ist, verschlimmern. Deswegen können diese öligen Zubereitungen klinisch nicht akzeptiert werden. Zusätzlich leiden diese Zubereitungen oftmals unter einer physikalischen Instabilität, die auf die Neigung des Cyclosporins zurückzuführen ist, eine Konformationsänderung durchzumachen und auszukristallisieren. Das Kristallisationsproblem wurde in Zubereitungen bemerkt, die Maisöl oder mittelkettige Triglyceride enthalten. Letztendlich weisen diese Zubereitungen eine geringe thermodynamische Aktivität (Sättigungsgrad) von Cyclosporin auf, was zu einer schlechteren Arzneistoff-Bioverfügbarkeit führt.
Es kann möglich sein, die mit einer unangenehmen Empfindung und der Syndrom- Verschlimmerung durch Reduzieren des Ölgehalts und Dispergieren der Ölphase in Wasser zu einer Emulsion verbundenen Probleme zu minimieren. Es ist jedoch keine einfache Aufgabe, eine ophthalmische Emulsion zu formulieren, weil eine unverzichtbare Klasse an Inhaltsstoffen in einem Emulsionssystem Emulgatoren sind, und die Mehrzahl der Emulgatoren für die Augen hoch reizend ist.
Die vorliegende Erfindung betrifft ein Emulsionssystem, das höhere Fettsäureglyceride verwendet, jedoch in Kombination mit Polysorbat 80, was eine Emulsion mit einem hohen Komfortniveau und einer geringen Irritation zur Folge hat, zur Abgabe von Medikationen an das Augengewebe. Die Emulsionen der Erfindung enthalten einen vernetzten Polyacrylat- Polyelektrolyten zusätzlich zu Polysorbat 80.
EP 0 480 690 offenbart ophthalmische Zusammensetzungen, die Tepoxalin enthalten, es scheint jedoch keine Offenbarung in diesem Dokument von Zusammensetzungen zu geben, die Polyelektrolyte enthalten.
Die EP 0 608 831 offenbart Zusammensetzungen, die Argatroban-Analoge enthalten. Obwohl die Zusammensetzungen Polysorbat 80 enthalten können, gibt es keine Offenbarung der Verwendung von Polyelektrolyten.
Die EP 0 028 110 offenbart autoklavierbare Emulsionen, die ein Polyacrylat als Polyelektrolyt enthalten. Obwohl Zusammensetzungen offenbart sind, in denen Polysorbat 80 vorhanden ist, werden diese jedoch immer durch einen anderen Emulgator begleitet, um ein erwünschtes Gleichgewicht hydrophiler und lipophiler Eigenschaften bereitzustellen.

Zusammenfassung der Erfindung

Erfindungsgemäß wird eine ophthalmische wässrige Emulsion bereitgestellt, die eine emulgierende Menge eines höheren Fettsäureglycerids, ein vernetztes Polyacrylat-Polyelektrolyt und Polysorbat 80 umfasst, dadurch gekennzeichnet, dass das vernetzte Polyacrylat- Polyelektrolyt und Polysorbat 80 die einzigen vorliegenden Emulgatoren sind.
Das Fettsäure-Glycerid umfasst vorzugsweise Rizinusöl.
Die Emulsionen können Cyclosporin enthalten.
Vorzugsweise ist das Gewichtsverhältnis von Rizinusöl zu Polysorbat 80 zwischen ungefähr 0,3 bis ungefähr 30 und das Gewichtsverhältnis des Cyclosporins zum Rizinusöl beträgt weniger als 0,16. Besonders bevorzugt ist das Gewichtsverhältnis von Rizinusöl zu Polysorbat 80 zwischen 0,5 und 12,5 und das Gewichtsverhältnis von Cyclosporin zu Rizinusöl liegt zwischen 0,12 und 0,02.
Wenn Cyclosporin in der Ölphase gemäß der vorliegenden Erfindung gelöst wird erweist sich die Emulsion nach Langzeitlagerung als physikalisch stabil. Keine Kristallisation von Cyclosporin wurde nach neun Monaten bei Raumtemperatur bemerkt. Darüber hinaus ist die Cyclosporin-Emulsion in einer solchen Weise formuliert, dass der Arzneistoff eine vernünftig hohe thermodynamische Aktivität aufweist, und dies ohne das Kristallisationsproblem.
Bedeutenderweise liegt ein Vorteil der Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung darin, dass sie, wenn sie mit Cyclosporin formuliert wird, eine erhöhte Absorption des Cyclosporins in der Tränendrüse des Auges bereitstellt. In dieser Weise wird die Aktivität bzw. Wirksamkeit des Cyclosporins bei der Wiederherstellung der Tränenbildung in der Tränendrüse erhöht. Das heißt, weil eine größere Menge an Cyclosporin in der Tränendrüse absorbiert wird, ist eine größere Menge des Cyclosporins bei der Produktion einer Tränenbildung in der Tränendrüse wirksam als dies bis jetzt möglich war.

Kurze Beschreibung der Zeichnungen

Die Vorteile und Merkmale der vorliegenden Erfindung werden durch die nachfolgende Beschreibung besser verständlich werden, wenn sie in Verbindung mit den begleitenden Zeichnungen betrachtet werden, bei denen:
Fig. 1 ein Balkendiagramm der konjunktivalen Konzentration von Cyclosporin A nach einer einzigen topischen Instillation bzw. Einträufelung verschiedener Formulierungen in ein Kaninchenauge darstellt;
Fig. 2 ein Balkendiagramm der Cornea-Konzentration von Cyclosporin A nach einer einzigen topischen Instillation verschiedener Zubereitungen in ein Kaninchenauge darstellt;
Fig. 3 ein Balkendiagramm der Ziliarkörperkonzentration von Cyclosporin A nach einer einzigen topischen Instillation verschiedener Zubereitungen in ein Kaninchenauge darstellt; und
Fig. 4 ein Balkendiagramm der Tränendrüsen-Konzentration von Cyclosporin A nach einer einzigen topischen Instillation verschiedener Formulierungen in ein Kaninchenauge darstellt.

Ausführliche Beschreibung

Wie hierin vorstehend erwähnt ist Cyclosporin als Gemisch verfügbar, bei dem der Hauptbestandteil Cyclosporin A ist, mit signifikanten, jedoch kleineren Mengen anderer Cyclosporine wie beispielsweise Cyclosporin B bis I. Jedoch kann, wie ebenfalls hierin vorstehend erwähnt, die vorliegende Erfindung auf entweder reines Cyclosporin oder auf ein Gemisch einzelner Cyclosporine angewendet werden.
Die Entdeckung, auf der die vorliegende Erfindung basiert, betrifft eine Kombination von höherem Fettsäure-Glycerid und einem Emulgator und Dispersionsmittel, Polysorbat 80, zusammen mit einem vernetzten Polyacrylat-Polyelektrolyt. Die Auswahl dieser Komponenten konnte auf Basis herkömmlichen Denkens nicht vorweggenommen werden.
Obwohl beispielsweise wohl bekannt ist, dass Cyclosporin in Kombination mit Rizinusöl verwendet werden kann, ist diese Kombination gegenüber empfindlichen Geweben wie beispielsweise dem Auge, reizend. Somit führt die herkömmliche Lehre in der Technik von einer Formulierung weg, die ein höheres Fettsäure-Glycerid, wie beispielsweise Rizinusöl und Cyclosporin verwendet.
Anders dargestellt existiert kein Weg zu folgern, dass die Verwendung eines Emulgators und eines Dispersionsmittels, wie beispielsweise Polysorbat 80, das Irritationspotential einer Emulsion, die Rizinusöl verwendet, reduzieren wird. Es existieren keine Beispiele für Polysorbat in Kombination mit Rizinusöl, das, wenn es mit Cyclosporin vermischt wird, eine Emulsion mit hohem Komfortniveau und geringem Reizungspotential produziert, das zur Abgabe einer Medikation an empfindliche Bereiche, wie beispielsweise Augengewebe, geeignet ist.
Die Emulsionen der vorliegenden Erfindung sind, wenn sie Cyclosporin enthalten, dahingehend von Vorteil, dass sie einen stabilen Lösungszustand von Cyclosporin erreichen. Dieser stabile Lösungszustand ist eine weitere bedeutende Leistungseigenschaft, die die vorliegende Erfindung von den herkömmlichen Ölsystemen unterscheidet. Cyclosporin ist für seine Neigung bekannt, in konventionellen Ölsystemen auszufallen, in denen es anfänglich vollständig gelöst ist.
Gemäß der vorliegenden Erfindung werden die Emulsionen weiter unter Verwendung eines Polyelektrolyts oder von Polyelektrolyten, falls mehr als einer vorliegt, aus der Familie vernetzter Polyacrylate stabilisiert, wie beispielsweise Carbomere und Permulen®.
Permulen® ist ein Polymer-Emulgator mit dem CTFA-Namen Acrylates/C10-30 Alkyl Acrylate Cross-Polymer und wird in der "Carbomer 1342" Monographie des USPXXII/NPXVII beschrieben.
Zusätzlich kann die Tonizität der Emulsionen weiter unter Verwendung von Glycerin, Mannitol oder Sorbitol eingestellt werden, falls dies erwünscht ist. Der pH der Emulsionen kann in einer herkömmlichen Weise unter Verwendung von Natriumhydroxid auf einen nahezu physiologisches pH-Niveau eingestellt werden, und während Puffermittel nicht erforderlich sind, können geeignete Puffer Phosphate, Citrate, Acetate und Borate einschließen.
Während die ophthalmischen wässrigen Emulsionen gemäß der vorliegenden Erfindung Cyclosporin einschließen können, können andere Chemikalien, die in Wasser schlecht löslich sind, wie beispielsweise Indomethacin und Steroide wie beispielsweise Androgene, Prednisolon, Prednisolonacetat, Fluormetholon und Dexamethasone ebenfalls mit den Emulsionen formuliert werden, die beispielsweise Rizinusöl und Polysorbat 80 enthalten, was eine Zusammensetzung mit einem ähnlich geringen Reizungspotential zur Folge hat.
Die Erfindung wird weiter durch die nachfolgenden Beispiele veranschaulicht, wobei alle Teile und Prozentsätze auf das Gewicht bezogen ausgedrückt sind. Das in den Beispielen verwendete Cyclosporin wurde von Sandoz geliefert.

Beispiel 3

Rizinusöl 2,50%
Polysorbat 80 0,75%
Carbomer® 1382 0,05%
Glycerin 2,20%
NaOH qs
Gereinigtes Wasser qs
pH 7,2 7,6

Beispiel 4

Rizinusöl 5,00%
Polysorbat 80 0,75%
Carbomer® 981 0,05%,
Glycerin 2,20%
NaOH qs
Gereinigtes Wasser qs
pH 7,2-7,6
Die in den Beispielen 1-4 dargelegten Zubereitungen wurden zur Behandlung des Keratoconjunctivitis sicca (Trockenes Auge)-Syndroms hergestellt, wobei die Beispiele 2, 3 und 4 ohne den aktiven Inhaltsstoff Cyclosporin zur Bestimmung der Toxizität der emulgierten Bestandteile verwendet wurden.
Die Formulierungen in den Beispielen 1-4 wurden auf Kaninchenaugen acht Mal am Tag für sieben Tage aufgebracht und verursachten ein geringes bis mildes Unbehagen und eine leichte Hyperämie in den Kaninchenaugen. Schlitzlampen-Überprüfung zeigte keine Veränderungen in der Gewebsoberfläche. Zusätzlich wurde die Cyclosporin enthaltende Rizinusölemulsion, wie hierin vorstehend in Beispielen 1A-1D dargelegt, ebenfalls auf ihre okulare Bioverfügbarkeit in Kaninchen getestet; und das therapeutische Niveau von Cyclosporin wurde in den interessierenden Geweben nach der Dosierung aufgefunden. Dies substanziiert, dass Cyclosporin in einem ophthalmischen Abgabesystem zur Behandlung des trockenen Auges von Nutzen ist, wie dies im US-Patent Nr. 4 839 342 dargelegt ist.
Zusätzlich wurde kein Unterschied in der Toxizität zwischen Formulierungen mit Cyclosporin (Beispiele 1A-1D) und zwischen Formulierungen ohne Cyclosporin (Beispiele 2-4) vorgefunden.
Die Zubereitungen, die in den Beispielen 1-4 dargelegt sind, erwiesen sich über Langzeitlagerung hinweg als physikalisch stabil. Bezüglich der Formulierungen 1A-1D wurde keine Kristallisation von Cyclosporin nach neun Monaten bei Raumtemperatur bemerkt.
Weiterhin können andere höhere Fettsäure-Glyceride, wie beispielsweise Olivenöl, Erdnussöl und dergleichen mit dem Polysorbat 80 mit ähnlichen Ergebnissen bezüglich der Biotoxizität verwendet werden.
Die nachfolgenden Beispiele zeigen die Wirksamkeit der Zusammensetzung gemäß der vorliegenden Erfindung zur gesteigerten Absorption von Cyclosporin A in der Tränendrüse.

Materialien

Das [Mebmt-³H]-Cyclosporin-A (Chargennummer TRQ6553) wurden von Amersham International (Buckinghamshire, England) mit einer radiochemischen Reinheit von bis zu 98% (durch Umkehrphasen HPLC) und einer spezifischen Aktivität von 2,6 Ci/mmol (2,16 mCi/mg) hergestellt. Die 3H-Markierung ist eine metabolisch stabile Position, wie durch das Sternchen dargestellt ist. Das radiomarkierte CSA wurde als eine Ethanollösung (1 mCi/ml) zugeführt. Alle organischen Lösungsmittel, die in den Verfahren, die in dieser Studie beschrieben wurden, verwendet wurden, waren von "HPLC Güte". Alle anderen Chemikalien und Reagenzien waren von analytischer Güte, soweit nichts anderes angemerkt ist.
Die Zusammensetzungen der sechs Zubereitungen, die getestet wurden, sind in Tabelle A aufgelistet. Tabelle A
Die radiomarkierten Zubereitungen wurden formuliert um sicherzustellen, dass die Radioaktivität durch den Träger hindurch homogen war. Die erwarteten Radioaktivitätskonzentrationen der radiomarkierten Arzneistoffzubereitungen waren 1-2 mCi/ml. Die erwartete spezifische Aktivität von radiomarkiertem Cyclosporin A (CsA)-Formulierungen betrug 0,5-2 mCi/mg. Alle Testartikel wurden bei Umgebungstemperatur aufbewahrt.

Analyse von Testarzneistoff-Formulierungen

Die Testformulierungen wurden dreifach durch HPLC analysiert, um die Konzentration von CsA und die radiochemische Reinheit der CsA Dosierungslösungen (> 93%) vor der Dosierung zu bestimmen. Die radioaktiven Konzentrationen der Testformulierungen wurden durch Flüssigkeitsszintillations-Zählung (liquid scintillation counting = LSC) quantifiziert.
Chromatographische Bedingungen
Pumpe Beckman Modell 126 (Beckman Instruments, San Ramon, CA)
Mobile Phase Acetonitril: 0,03% H&sub3;PO&sub4; in Wasser, pH 3 (65 : 35 v/v)
Durchflussgeschwindigkeit 1,0 ml/min
Säule Supercosil C8, 7,5 cm · 4,6 mm, 3 um (Supelco, Bellefonte, PA) Superguard LC-8 (Supelco) Säulenheizgerät (Biorad, Richmond, CA) bei 60-70ºC
Injektor WISP 712B (Waters Associates, Milford, MA)
¹&sup4;C Detektor Radioisotop 171 Detektor (Beckman Instruments)
Scintillant Ready Flow III (Beckman Instruments) Durchflussgeschwindigkeit 4 ml/min
UV Detektor Modell 166 (Beckman Instruments), 202 nm
Datenprozessor Beckman System Gold (Beckman Instruments)
Laufzeit 15 min
Retentionszeit 6 min (Cyclosporin A)

Tiere

Weibliche New Zealand Albinokaninchen wurden bezogen und für zumindest fünf Tage vor dem Verfahren unter Quarantäne gesetzt. Die Tiere wurden in Temperatur und Feuchtigkeit kontrollierten Räumen gehalten. Nahrung und Leitungswasser wurden ad libitum bereitgestellt. Achtundfünfzig Kaninchen (2-3 kg) wurden aus der Kolonie ausgewählt, um eine Verzerrung bzw. einen Bias zu minimieren. Sie wurden individuell durch Ohrenanhänger identifiziert und schienen gesund zu sein.

Dosierung

Die Tiere wurden in sechs Gruppen von neun Kaninchen eingeteilt; jede Gruppe wurde mit einer der sechs CsA Formulierungen behandelt. Während der Dosierung wurde das untere Augenlid jedes Kaninchens sanft vom Auge weggezogen und 35 ul der Zubereitung wurden dem unteren Bindehautsack jedes Auges verabreicht. Nach der Dosierung wurde das obere und untere Augenlid für S Sekunden per Hand geschlossen und wieder freigegeben. Die Tiere wurden visuell für jedes Anzeichen einer Tränenbildung oder eines okularen Unbehagens überwacht.

Probennahme

Die Gewebe wurden bei 20 Minuten, 6 Stunden und 24 Stunden nach Dosierung für jede Gruppe gesammelt. Drei Kaninchen (sechs Augen) wurden zu jedem Zeitpunkt verwendet. Zu den spezifischen Probenahmezeiten wurden die Tiere durch eine intravenöse Injektion von 0,5-1 ml Eutha-6 (Western Supply Co., Arcadia, California) über die am Rande befindliche Ohrenvene getötet. Jedes Auge wurde dann mit normaler bzw. physiologischer Salzlösung gespült. Die wässrige Flüssigkeit (200 ul) wurde mittels einer 0,5 ml Tuberculin-Spritze entfernt. Die orbitale Tränendrüse (ungefähr 400 mg) die obere und untere bulbäre Conjunctiva (ungefähr jeweils 50 mg), der Cornea- (ungefähr 50 mg) und Irisziliarkörper (ungefähr SO mg) wurden präpariert. Die präparierten Gewebe wurden trocken geblottet und gewogen. Das Augengewebe und die wässrigen Flüssigkeitsproben von beiden Augen wurden von unbehandelten Tieren gesammelt um als Leerproben verwendet zu werden.

Analyse der Radioaktivität

Eine Teilmenge der wässrigen Flüssigkeit (50-175 ul) wurde direkt in 10 ml Ready-Solv HP durch LSC gezählt. Gewebs- und Blutproben wurden in Verbrennungsdüsen vor Verbrennung in einem Modell 307 Packard Tissue Oxuduzer (Packard Col., Downers Grove, Illinois) eingewogen. Nach Verbrennung dieser Gewebsproben wurde ³H&sub2;O in der Monophasen-S- Lösung (Packard) eingefangen und die Radioaktivität der Proben wurde durch LSC in einem Beckman Model 1801 oder 3801 Szintillationszähler (Beckman Instruments, San Ramon, California) bestimmt.

Datenanalysen

Eine Excel-Software (Version 4.0, Microsoft Corp, Redmond, Washington) wurde zur Datenanalyse verwendet. Die Konzentrationen der Gesamtradioaktivität in den Gewebsproben wurde als dpm/g oder dpm/ml ausgedrückt und in ng-Äquivalenten (äq) von CsA/g oder ml unter Verwendung der spezifischen Aktivität der Dosierungsformulierungen umgewandelt. Der Durchschnitt, die Standardabweichung (SD) oder die Standardabweichung des Mittelwerts (standard error of the mean = SEM) wurden gemäß Standardverfahren berechnet. Die Radioaktivitätsniveaus wurden nicht als signifikant erachtet, solange das DPM nicht größer als zwei Mal dasjenige des Hintergrundes von b = (Leerproben) betrug.
Vergleiche von Gewebsarzneistoffkonzentrationen zu jedem Zeitpunkt für die Formulierungen wurden durch Ein-Faktor ANOVA bestimmt. Alle statistischen Vergleiche wurden unter Verwendung von StatView® (Version 1.03, Abacus Concepts, Inc., Berkeley, California) vorgenommen. Die Fisher- und Scheffe F-Tests wurden zur Bestimmung signifikanter Unterschiede zwischen den Formulierungen auf dem 95% Niveau (α = 0,05) verwendet. Die Zurückweisungskriterien zum Ausschluss aller Ausreißerdaten basierten auf Standardausreißer- Tests. Nicht mehr als ein Ausreißer wurde aus jedem Datensatz eliminiert.

Ergebnisse und Diskussion

Die Radioaktivitätskonzentrationen in okularen Geweben bei 20 Minuten, 6 Stunden und 24 Stunden nach einfacher topischer Verabreichung verschiedener Zubereitungen sind in den Fig. 1-4 dargestellt. Im Allgemeinen waren die Konzentrationen in den Augengeweben zum Zeitpunkt 20 Minuten am höchsten, wie es in früheren Einfachdosis-Studien berichtete wurde (2, 3). Die Radioaktivitätskonzentration war in der Bindehaut und Cornea für jede Zubereitung am höchsten. Die relativ geringe wässrige Flüssigkeit und Irisziliarkörperkonzentrationen legen eine niedrige intraokulare Absorption von CsA nahe, was mit der geringen CsA Comea-Permeabilität von -1,0 · 10&supmin;&sup6; cm/sec (6) konsistent ist. Die Abnahme der Radioaktivitätskonzentrationen von der Cornea war geringer als diejenigen aus der Conjunctiva, der Tränendrüse und der wässrigen (Körper)Flüssigkeit. Die beobachtete Blutradioaktivitätskonzentrationen (< 3 ng-äq/ml) waren viel niedriger als die Tiefpunkt-Plasma CsA- Konzentrationen von 80-250 ng/ml, die nach einer oralen Verabreichung an Menschen (1) beobachtet wurden.
Die Abhängigkeit der CsA Comea- und Conjunctiva-Penetration von der Zubereitung wurde bezüglich der CsA-Konzentration in einer Formulierung interpretiert und bezüglich der Freisetzungsgeschwindigkeit von CsA aus der Formulierung in den Tränenfilm. Die wässrigen Zubereitungen zeigten eine größere Neigung, CsA zur Diffusion durch Oberflächengewebsepithelien hindurch freizusetzen. Das 0,2% reine Rizinusöl wurde unterhalb der CsA- Solubilität bzw. Löslichkeit formuliert und deswegen konnte die Freisetzungsgeschwindigkeit durch die weniger als maximale thermodynamische CsA Aktivität (5) erschwert werden.
Die okularen Oberflächengewebe enthielten eine höhere Fraktion der CsA Dosis als die anderen Gewebe und wurden zur Unterscheidung zwischen den wässrigen, Emulsions- und reinen Rizinusöl-Formulierungen verwendet. Die Polyoxyl 40 Formulierung erzeugte höhere Augenoberflächengewebskonzentrationen als die Emulsionen und das reine Rizinusöl. Die Emulsionen waren in der Abgabe von CsA an die interessierenden Gewebe ebenso effektiv, nämlich die Tränendrüse, Cornea und Conjunctiva. Die Rizinusöl-Emulsion zeigte höhere Tränendrüsenkonzentrationen als die modifizierte Santen und die Miglyol-Emulsion. Das reine Rizinusöl zeigte die geringsten Konzentrationen der Oberflächenaugengewebe. Offensichtlich sind die Faktoren, die die CsA Penetration in die Tränendrüse und die Oberflächengewebe beeinflussen, unterschiedlich.

Claims

1. Wässrige ophthalmische Emulsion mit einer emulgierenden Menge eines höheren Fettsäureglycerids, einem Acrylat/C10-30 Alkylacrylat-Crosspolymer-Polyelektrolyt und Polysorbat 80, dadurch gekennzeichnet, dass der Acrylat/C10-30 Alkylacrylat-Crosspolymer-Polyelektrolyt und das Polysorbat 80 die einzig vorhandenen Emulgatoren sind.

2. Wässrige ophthalmische Emulsionszusammensetzung nach Anspruch 1, bei der das höhere Fettsäureglycerid aus Olivenöl, Erdnussöl und Rizinusöl ausgewählt ist.

3. Wässrige ophthalmische Emulsionszusammensetzung nach Anspruch 2, bei der das höhere Fettsäureglycerid Rizinusöl ist.

4. Wässrige ophthalmische Emulsionszusammensetzung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, die weiterhin ein Mittel zur Einstellung der Tonizität umfasst, das aus Glycerin, Mannitol und Sorbitol ausgewählt ist.

5. Wässrige ophthalmische Emulsionszusammensetzung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, bei der der pH der Zusammensetzung auf ein annähernd physiologisches Niveau eingestellt wurde.

6. Wässrige ophthalmische Emulsionszusammensetzung nach Anspruch 5, wobei die Zusammensetzung ein Puffermittel enthält.

7. Wässrige ophthalmische Emulsionszusammensetzung nach Anspruch 2 und nach jedem Anspruch, der hiervon abhängig ist, die eine schlecht wasserlösliche pharmazeutisch wirksame Substanz außer Cyclosporin enthält.

8. Wässrige ophthalmische Emulsionszusammensetzung nach Anspruch 7, wobei die pharmazeutisch wirksame Substanz aus Indomethacin und Steroiden ausgewählt ist.

9. Wässrige ophthalmische Emulsionszusammensetzung nach Anspruch 8, die ein Steroid enthält, das aus Androgenen, Prednisolon, Prednisolonacetat, Fluormetholon und Dexamethason ausgewählt ist.

10. Wässrige ophthalmische Emulsionszusammensetzung nach Anspruch 1, die eine wie in der nachfolgenden Tabelle dargelegte Formel aufweist:

11. Wässrige ophthalmische Emulsionszusammensetzung nach Anspruch 1, die eine wie in der nachfolgenden Tabelle dargelegte Formel aufweist:

Rizinusöl 2,50%

Polysorbat 800,75

Vernetztes Polacrylat Carbomer® 13820,05%

Glycerin 2,20

NaOH qs

Gereinigtes Wasser qs

pH 7,2-7,6

12. Wässrige ophthalmische Emulsionszusammensetzung nach Anspruch 1 mit einer wie in der nachfolgenden Tabelle dargelegten Formel:

Rizinusöl 5,00%

Polysorbat 800,75%

Vernetztes Polyacrylat (Carbomer® 981) 0,05%

Glycerin 2,20%

NaOH qs

Gereinigtes Wasser qs

pH 7,2-7,6