KR101587385B1

KR101587385B1 - 사이클로스포린 함유 무자극성의 안약조성물 및 편리한 제조방법

Info

Publication number: KR101587385B1
Application number: KR1020150107237A
Authority: KR
Inventors: 이동우; 배현주; 김영관
Original assignee: 국제약품공업주식회사
Priority date: 2015-07-29
Filing date: 2015-07-29
Publication date: 2016-01-21
Also published as: EP3329940A1; EP3329940A4; US20180214510A1; WO2017018760A1; CN108025080A

Abstract

유효성분으로서 사이클로스포린; 및 가용화제로서 폴리옥시에틸렌 스테아레이트를 포함하는 수성 매질의 안약 조성물이 제공된다.

Description

사이클로스포린 함유 무자극성의 안약조성물 및 편리한 제조방법 {Non-irritating cyclosporin ophthalmic solution and convenient manufacturing process}

본 발명은 사이클로스포린을 함유하는 안약 조성물에 관한 것이다.

안구건조증은 노령 인구에서 유병률이 매우 높은 특성을 가지며, 최근에는 스마트 기기와 컴퓨터의 사용 시간 증가로 인하여 청년층에서도 유병률이 증가하는 추세이다.

안구건조증의 치료 요법은 매우 제한적이어서, 현재 안구건조증의 치료 활성을 가지는 약물로는 사이클로스포린, 디쿠아포솔 나트륨, 히알루론산 정도만이 알려져 있는 실정이며, 특히 히알루론산은 치료제가 아니라 보조요법제에 가깝다. 이 중에서 사이클로스포린은 경증 내지 중증의 안구건조증에 폭넓게 사용될 수 있고, 안전성이 높은 것으로 알려져 있다.

그러나 사이클로스포린은 물에 대한 용해도가 매우 낮아(용해도 0.004% w/w), 점안제로 조제하는 것이 어려운 것으로 알려져 있었다.

이러한 문제를 해결하기 위하여 가용화제로서 피마자유와 유화제로서 폴리소르베이트 80을 사용하여 유제(emulsion)를 제조하는 기술이 개발되었다(한국 특허 제368181호 및 제450703호). 그러나 이 기술은 고압식 호모게나이저 또는 고속전단기를 사용하여야 하므로 설비가 복잡하고, 제조비용이 상승하며, 유화시 온도 상승이 발생한다. 특히, 조성물을 안정화시키기 위하여 카보머와 같은 중합체를 사용하기 때문에 고압멸균법을 사용하여야 하므로, 열에 약한 성분을 사용할 수 없는 문제가 있다.

이러한 문제를 해결하기 위하여, 폴리옥실 35 피마자유(크레모포 EL)와 같은 폴리에톡실레이티드 피마자유(polyethoxylated castor oil) 및 프로필렌 글리콜 디카프릴로카프레이트와 같은 계면활성제를 사용하여 나노 에멀젼을 제조하거나(한국 특허 제1151235호), 폴리에톡실레이티드 피마자유와 용해보조제로서 에탄올을 사용하여 나노 에멀젼을 제조하는 기술이 개발되었다(한국 등록특허 제1211902호).

상기 기술들은 모두 수난용성인 사이클로스포린을 용해시키기 위하여 피마자유 또는 폴리옥실 35 피마자유를 사용하는데, 이러한 오일 또는 계면활성제들은 결막세포에 세포독성을 나타내거나, 내피 세포 또는 상피 세포에 대하여 독성을 나타내는 것으로 보고되었다(Investigative Ophthalmology & Visual Science, Nov 2007, vol 48, No. 11; European Journal of pharmaceutical science 45 (2012) 492-498; J. Pharmacol Exp Ther 1977 Apr; 201(1): 259-266; Agent Actions 12, 64-80, 1982; 등).

이에 피마자유 또는 폴리에톡실레이티드 피마자유를 사용하지 아니하면서 사이클로스포린 유제를 제조하기 위한 기술이 연구되어, 프로필렌글리콜, 폴리솔르베이트 80 및 고주파 처리한 정제수를 사용하여 사이클로스포린 점안제를 제조하는 기술이 개발되었다(한국 등록특허 제1510764호).

그러나 위 기술에서는 사이클로스포린이 용해된 프로필렌글리콜과 계면활성제를 혼합한 용액을 고주파가 적용된 정제수에 넣는 동안 그리고 넣은 후에 5~10분 동안 3000~5000rpm의 속도로 강한 교반을 계속하여 전단력을 가하여야 하기 때문에, 제조시 설비가 복잡하고, 제조비용이 상승하는 문제가 있다.

한국 등록특허공보 제368181호 한국 등록특허공보 제450703호 한국 등록특허공보 제1151235호 한국 등록특허공보 제1211902호 한국 등록특허공보 제1510764호

본 발명의 해결과제는 인체에 유해한 피마자유 또는 폴리에톡실레이티드 피마자유를 사용하지 아니하면서도 수난용성인 사이클로스포린을 용해, 유화시켜 용이하게 안약 조성물을 제조하여, 의약품의 안전성을 향상시키기 위한 것이다.

상기 과제를 해결하는 수단으로서, 본 발명에서는 유효성분으로서 사이클로스포린; 및 가용화제로서 폴리옥시에틸렌 스테아레이트(바람직하게는 폴리옥실 40 스테아레이트)를 포함하는 안약 조성물을 개시한다.

본 발명에 의하면, 인체에 무해한 성분을 사용하여 사이클로스포린을 가용화시키기 때문에 매우 안전하다. 특히 안전성이 담보되는 물질들 중에서 사이클로스포린의 가용화 또는 사이클로스포린 함유 점안제의 안정화에 효과가 우수한 물질만을 사용함으로써, 사이클로스포린의 가용성, 안전성 및 안정성을 향상시킬 수 있으며, 눈에 적용시 자극감을 감소시킬 수 있다. 또한 본 발명에 따른 안약 조성물의 제조 시, 가열 또는 고주파 처리 등의 공정이 필요하지 아니하며, 고압 호모게나이저 또는 고속 전단식 기계를 사용하지 아니하면서도 계면활성제와 수성 매질의 단순 교반(교반 속도는 500 내지 700 rpm 이하)에 의하여 사이클로스포린 입경이 50nm 이하인 나노 에멀젼의 안약 조성물을 제조할 수 있기 때문에 제조 시 복잡한 설비가 필요하지 아니하여 비용을 낮출 수 있다. 또한 본 발명에 따른 안약 조성물은 용해보조제로서 에탄올을 사용할 필요가 없고, 멸균 여과가 가능하며, 안정성이 우수하고, 자극이 적다.

도 1은 실험예 1에서 본 발명에 따라 제조한 안약 조성물(실시예 4-C)의 입자크기 분포를 측정한 결과이다.
도 2는 실험예 1에서 대조군의 입자크기 분포를 측정한 결과이다.

본 발명은 유효성분으로서 사이클로스포린; 및 가용화제로서 폴리옥시에틸렌 스테아레이트, (바람직하게는 폴리옥실 40 스테아레이트(Myrj 52)를 포함하는 안약 조성물에 관한 것이다.

본 발명에서 상기 사이클로스포린의 함량은 안약 조성물 총 중랑에 대하여 0.01 내지 1 중량%, 바람직하게는 0.05 내지 0.1 중량%이다. 본 발명에서 상기 폴리옥실에틸렌 스테아레이트의 함량은 안약 조성물 총 중량에 대하여 3.0 내지 7.0 중량%, 바람직하게는 4.0 내지 5.0중량%인 것이 바람직하다.

또한 본 발명의 안약 조성물은 계면활성제로서 폴록사머 등을 더 포함할 수 있다. 폴록사머의 함량은 안약 조성물 총 중량에 대하여 0.01 내지 0.04 중량%인 것이 바람직하다.

본 발명의 안약 조성물은 추가로 증점제를 더 포함할 수 있다. 증점제로는 히드록시프로필메틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 히드록시에틸셀룰로오스, 메틸셀룰로오스, 폴리비닐피롤리돈, 폴리비닐알콜, 폴리에틸렌 등으로부터 1종 이상 선택될 수 있다. 바람직하게는 폴리비닐피롤리돈(포비돈)을 증점제로 사용한다. 증점제는 조성물 총 중량에 대하여 0.01 내지 1.8 중량%의 범위로 사용하는 것이 바람직하다.

또한 본 발명의 안약 조성물은 안정화제로서 프로필렌글리콜 등을 더 포함할 수 있다. 프로필렌글리콜은 조성물 총 중량에 대하여 0.5 내지 1.5 중량%의 범위로 사용하는 것이 바람직하다.

또한 본 발명의 안약 조성물은 완충제를 더 포함할 수 있는데, 완충제로는 시트르산, 시트르산 나트륨, 에데트산 나트륨, 또는 아미노카프론산 등을 사용할 수 있다.

또한 본 발명의 안약 조성물은 등장화제로서 염화나트륨, 글리세린 등을 사용할 수 있다.

본 발명에 따른 안약 조성물은 사이클로스포린의 나노 에멀젼으로서, 사이클로스포린의 평균 입경 크기는 약 50nm 이하이다(실험예 1 참조)

본 발명의 안약 조성물은, (a) 폴리옥실 40 스테아레이트에 사이클로스포린을 용해시켜 제1용액을 제조하는 단계; (b) 폴록사머 407, 프로필렌글리콜, 증점제, 등장화제, 완충제 등을 정제수에 용해시켜 제2용액을 제조하는 단계; 및 (c) 제1용액에 제2용액을 가하여 단순 교반하는 단계를 포함한다. 본 발명의 제조방법 중 단계 (c)에서 제1용액에 제2용액을 가할 때 또는 가하고 난 후에는 호모게나이저 또는 고속전단기를 사용하지 않고, 단순히 500~700rpm 이하의 속도로 교반하기만 하여도 나노 에멀젼을 제조할 수 있다.

본 발명에서는 안전성이 담보되는 물질들 중에서 사이클로스포린의 가용화 또는 사이클로스포린 함유 점안제의 안정화에 효과가 우수한 물질만을 사용하고, 부작용이 알려져 있는 성분들(예를 들어 피마자유, 개질된 피마자유, 크레모포어, 인산염 등)은 배제함으로써, 사이클로스포린의 가용성, 안전성 및 안정성을 향상시킬 수 있으며, 눈에 적용시 자극감을 감소시킬 수 있다.

이하, 본 발명을 하기 실시예에 의거하여 상세하게 설명하고자 한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐 발명의 범위가 이에 한정되는 것은 아니다.

[실시예]

<실시예 1> 나노 에멀젼 안약 조성물 제조

하기 표 1과 같은 조성에 따라 사이클로스포린을 가용화제인 폴리옥실 40 스테아레이트에 용해시킨다. 나머지 부형제(즉 폴록사머 407, 폴리비닐피롤리돈, 프로필렌글리콜, 시트르산, 시트르산나트륨)를 정제수에 용해시킨다. 상기 사이클로스포린이 용해된 폴리옥실 40 스테아레이트에 상기 부형제들이 용해된 정제수 용액을 가하고, 이를 교반하여 나노 에멀젼을 제조한다. 이후 전체 조성물의 중량이 100g이 조금 안 되도록 정제수를 가하였다. 이후 NaOH 또는 HCl 수용액을 가하여 pH를 7.2 내지 7.6으로 맞추고, 다시 정제수를 가하여 총 중량이 100g이 되도록 표선하였다

성분	실시예 1-A	실시예 1-B
사이클로스포린	0.05g	0.05g
폴리옥실 40 스테아레이트	5g	4g
폴록사머 407	0.04g	0.04g
프로필렌글리콜	1.0g	1.0g
포비돈 K90	0.5g	0.5g
시트르산	0.016g	0.016g
시트르산나트륨	1.26.g	1.26g
정제수	적량 (총 중량이 100g이 되도록)	적량 (총 중량이 100g이 되도록)

<실시예 2> 완충제 종류별 나노 에멀젼 조성물

하기 표 2와 같이 완충제의 종류, 분량, 비율을 조절하여, 상기 실시예 1과 유사한 방법으로 나노 에멀젼 조성물을 제조하였다.

성분	2-A	2-B	2-C	2-D	2-E
사이클로스포린	0.05g	0.05g	0.05g	0.05g	0.05g
폴리옥실 40 스테아레이트	5g	5g	5g	5g	5g
폴록사머 407	0.04g	0.04g	0.04g	0.04g	0.04g
프로필렌글리콜	1.0g	1.0g	1.0g	1.0g	1.0g
포비돈 K90	1.14g	1.14g	1.14g	1.14g	1.14g
시트르산	0.016	0.01g
시트르산나트륨	1.26	0.9g
에데트산나트륨			0.05g	0.02g
아미노카프론산					0.2g
정제수	적량	적량	적량	적량	적량

<실시예 3> 증점제 종류별 나노 에멀젼 조성물

하기 표 3과 같이 증점제의 종류, 분량, 비율을 조절하여, 상기 실시예 1과 유사한 방법으로 나노 에멀젼 조성물을 제조하였다.

성분	3-A	3-B	3-C	3-D	3-E	3-F	3-G
사이클로스포린	0.05g	0.05g	0.05g	0.05g	0.05g	0.05g	0.05g
폴리옥실 40 스테아레이트	5g	5g	5g	5g	5g	5g	5g
프로필렌글리콜	1.0g	1.0g	1.0g	1.0g	1.0g	1.0g	1.0g
폴록사머 407	0.04g	0.04g	0.04g	0.04g	0.04g	0.04g	0.04g
포비돈 K90	1.14g
포비돈 K25	-	1.14g
히드록시프로필 메틸셀룰로오스			1.14g
히드록시프로필 셀룰로오스				1.14g
히드록시에틸 셀룰로오스					1.14g
메틸셀룰로오스						1.14g
폴리비닐알콜							1.14g
시트르산	0.016g	0.016g	0.016g	0.016g	0.016g	0.016g	0.016g
시트르산나트륨	1.26g	1.26g	1.26g	1.26g	1.26g	1.26g	1.26g
정제수	적량	적량	적량	적량	적량	적량	적량

<실시예 4> 사이클로스포린 농도별 나노 에멀젼 조성물

하기 표 4와 같이 사이클로스포린, 가용화제의 분량을 조절하여, 상기 실시예 1과 유사한 방법으로 나노 에멀젼 조성물을 제조하였다:

성분	4-A	4-B	4-C	4-D	4-E	4-F	4-G
사이클로스포린	0.05g	0.05g	0.05g	0.1g	0.1g	0.1g	0.1g
폴리옥실 40 스테아레이트	5g	5g	5g	6g	6g	7g	7g
폴록사머 407	0.01g	0.02g	0.04g	0.02g	0.04g	0.02g	0.04g
프로필렌글리콜	1.0g	1.0g	1.0g	1.0g	1.0g	1.0g	1.0g
포비돈 K90	1.14g	1.14g	1.14g	1.14g	1.14g	1.14g	1.14g
시트르산	0.016g	0.016g	0.016g	0.016g	0.016g	0.016g	0.016g
시트르산나트륨	1.26g	1.26g	1.26g	1.26g	1.26g	1.26g	1.26g
정제수	적량	적량	적량	적량	적량	적량	적량

[실험예]

<실험예 1> 나노 에멀젼의 입경 크기 측정

상기 실시예 1 내지 4에서 제조한 나노 에멀젼의 입자 크기 분포 및 평균입자경을 ELSZ-1000(오츠카, 독일) 기기를 사용하여 희석 없이 측정하였다. 측정 결과는 하기 표 5와 도 1 및 2에 나타내었다:

평균입자경

	1-B	4-A	4-C	시판 제품
평균입자경(nm)	13.2	14.8	14.5	335.3

상기 실시예 4-A의 조성물의 입자 크기를 도시한 도 1을 참조하면, 입자 크기가 14.8nm로서 매우 작고, 입도 분포도 균일하게 고르게 나타났다. 반면, 현재 시판 중인 제품의 평균 입자 크기를 측정한 결과, 335.8nm로서 입자 크기가 크고, 입자 분포도 도 2에 도시되어 있는 바와 같이 매우 넓다.

이와 같이 본 발명의 안약 조성물에서 사이클로스포린 입자의 크기가 작기 때문에, 본 발명의 조성물은 안정성이 우수하고, 투여시 이물감 및 자극감도 적으며, 멸균 여과도 가능하다.

<실험예 2> 안정성 시험

상기 실시예에서 제조한 조성물로 가속 조건(40±2°C, 상대습도(RH) 25%)에서 6개월간 보관하면서, pH 및 함량을 시험하였다. 함량은 다음 조건으로 HPLC를 사용하여 분석하였다:

HPLC 분석 조건: 210nm 파장, C8 컬럼

이동상: 테트라하이드로퓨란 0.03M 인산용액 (40:60)

유속: 1ml/min.

그 결과는 하기 표 6과 같다:

		1-B	2-B	4-A	4-C
pH	초기	7.17	7.19	7.19	7.38
pH	6개월 경과	7.06	7.10	7.00	7.31
함량(%)	초기	103.8	100.7	100.7	101.5
함량(%)	6개월 경과	104.5	101.1	101.1	100.2
평균입자경(nm)	초기	13.2	13.4	14.8	14.5
평균입자경(nm)	6개월 경과	11.2	12.9	11.6	13.8
성상	초기	무색투명 석출없음	무색투명 석출없음	무색투명 석출없음	무색투명 석출없음
성상	6개월 경과	무색투명 석출없음	무색투명 석출없음	무색투명 석출없음	무색투명 석출없음

<실험예 3>

하기 표 7과 같은 조성으로, 상기 실시예 1과 유사한 방법을 사용하여 나노 에멀젼 조성물을 제조하고, 실험예 2의 가속 조건으로 안정성 시험을 수행하였다:

기능	성분	7-A	7-B
활성성분	사이클로스포린	0.05g	0.05g
가용화제	폴리옥실 40 스테아레이트	4g	5g
증점제	포비돈 K90	1.14g	1.14g
안정화제	프로필렌글리콜	1g	1g
계면활성제	폴록사머 407	0.04g	0.04g
완충제	시트르산	0.01g	0.01g
완충제	시트르산 나트륨	0.9g	0.9g
초기	pH 함량(%) 삼투압(mOsm)	7.28 102.5 298	7.25 101.0 310
가속 2개월	pH 함량(%)	7.30 101.0	7.20 100.5
가속 4개월	pH 함량(%)	7.25 101.5	7.21 100.8
가속 6개월	pH 함량(%) 삼투압(mOsm)	7.15 102.0 308	7.10 100.7 318

상기 결과들로부터, 본 발명의 조성물은 약사법에서 규정된 반투과 용기의 가속시험 조건에서 매우 우수한 안정성을 나타냄을 알 수 있다.

한편 대조군으로서 가용화제, 안정화제, 계면활성제 등을 달리하여 하기 표 8의 조성으로 정제 수 내에서 3000~5000rpm의 고속으로 교반하여 제조한 안약 조성물(비교예 8-B, 8-C 및 8-D; 각각 총 중량 100g)은 가속 30일 시험시 함량이 현저하게 떨어져 있었고, 침전이 석출되어 있었다.

성분		실시예 8-A	비교예 8-B	비교예 8-C	비교예 8-D
활성 성분	사이클로스포린	0.05g	0.05g	0.05g	0.05g
가용화제	폴리옥실 40 스테아레이트	5g	-	1g	-
	폴리옥실-20-세틸에테르	-	-	-	0.125g
	PEG-400	-	-	-	0.25g
	폴리소르베이트 80	-	1g	-	-
용해보조제	에탄올	-	-	0.1g	-
계면활성제	폴록사머 407	0.04g	-	-	-
계면활성제	폴록사머 188	-	-	-	0.25g
안정화제	프로필렌글리콜	1.0g	2g	-	-
안정화제	부틸화히드록시톨루엔	-	-	0.0001g	-
점증제	포비돈 K90	1.14g
점증제	히드록시프로필 메틸셀룰로오스			0.3g
완충제	Na₂HPO₄ .H₂O	-	0.42g		2.72g
	NaH₂PO₄ .H₂O	-	0.14g	0.2g	0.84g
	나트륨 에데테이트			0.1
	시트르산	0.016g
	시트르산나트륨	1.260g
등장화제	NaCl	적량	0.14g	0.73g
매질	정제수	적량	적량	적량	적량
가혹시험 40°C 가열 진탕	초기 함량	102.1%	99.4%	100.6%	99.8%
	10일 함량	102.0%	87.3% 부적합	84.9% 부적합	35.1% 부적합
	30일 함량	102.5%	7.1%	-	-
	최종 성상	무색 투명	침전석출	침전석출	침전석출

<실험예 4> 안점막자극시험

본 발명에 따라 얻어진 조성물 4-C에 대하여 토끼를 이용한 안점막 자극시험을 수행하였다. 세안군 및 미세안군에 수컷 New Zealand White계 토끼를 배정하고 Draize 방법에 따라 적용부위당 시험물질 0.1mL를 적용했다. 하기 표 9의 안구병변 등급에 따라 평가하여 판정일 각 마리 총점(I.I>o.I., The individual Index of Ocular Irritation, 0~110점)의 합을 마리수로 나눈 평균값인 M.I.O.I.(Mean Index of Ocular Irritation), 관찰기간 중 M.I.O.I의 최대 값인 I.A.O.A(The Index of Acute Ocular irritation) 및 7일 째 I.O.I(Individual Ocular irritation Index: 7일째의 각각 동물의 득점) 등의 값으로 안점막자극성의 강도를 안점막자극표에 의해 구분하여 평가하였다.

평가구분	평가치
평가구분	I.A.O.I	M.I.O.I	Day-7 I.O.I
무자극물 (None irritating)	0-5	0 (48시간 후)
경도자극물 (Milld irritating)	5-15	≤5 (48시간 후)
자극물 (Moderately irritating)	15-30	≤5 (4일 후)
중등도자극물 (Severe irritating)	30-60	≤20 (7일 후)	≤30 (6마리 토끼 전부) ≤10 (6마리 중 4마리 이상)
중강도자극물 (Extremely irritating)	60-80	≤40 (7일 후)	≤60 (6마리 토끼 전부) ≤30 (6마리 중 4마리 이상)
강도자극물 (Maximally irritating)	80-110

상기와 같이 안자극성을 평가한 결과, 전 시험기간 동안 시험물질과 관련한 사망동물, 일반증상 및 체중변화는 관찰되지 않았다. 시험물질 적용 후 안반응 관찰 결과, 세안군 및 미세안군 모두 급성안자극지수 I.A.O.I는 모두 0으로 무작극성으로 평가되었다. 따라서 이상의 결과를 통해 본 조성은 무자극물로 평가되었다.

본 발명에 의하면, 인체에 유해한 부형제가 없는 안전한 사이클로스포린 함유 안약 조성물을 용이하게 제조할 수 있다. 특히 본 발명은 안전성이 입증된 성분들로만 구성되어 있고 자극감이 없이 안전한 조성물이기에 종래의 조성물에 비해 우수하다. 또한 안정성이 우수하고, 제조가 용이하여 비용 절감 측면에서 유리하다.

Claims

삭제
삭제
삭제
유효성분으로서 사이클로스포린;
가용화제로서 폴리옥실 40 스테아레이트;
폴록사머;
폴리비닐피롤리돈; 및
프로필렌글리콜
을 수성 매질 중에 포함하되,
용해보조제로서 에탄올은 포함되어 있지 아니한 안약 조성물.
제4항에 있어서, 상기 폴록사머로는 폴록사머 407을 사용하고, 폴리비닐피롤리돈으로는 포비돈 K90을 사용한 것을 특징으로 하는 안약 조성물.
제4항에 있어서, 추가로 완충제를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 안약 조성물.
제6항에 있어서, 상기 완충제는 시트르산, 시트르산 나트륨, 에데트산 나트륨 및 아미노카프론산으로 이루어진 군으루부터 1종 이상 선택된 것임을 특징으로 하는 안약 조성물.
제6항에 있어서, 추가로 등장화제를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 안약 조성물.
제4항에 있어서, 폴리옥실 40 스테아레이트의 함량은 3~7중량%이고, 폴록사머의 함량은 0.01~0.04중량%이며, 폴리비닐피롤리돈의 함량은 0.01~1.8중량%이고, 프로필렌글리콜의 함량은 0.5~1.5중량%인 것을 특징으로 하는 안약 조성물.
제9항에 있어서, 사이클로스포린의 함량은 0.05~0.1중량%인 것을 특징으로 하는 안약 조성물.
폴리옥시에틸렌 스테아레이트에 사이클로스포린을 용해시켜 제1용액을 제조하는 단계(a);
폴록사머 407, 프로필렌글리콜, 증점제, 등장화제 및 완충제를 물에 용해시켜 제2용액을 제조하는 단계(b); 및
제1용액에 제2용액을 가하여 교반하는 단계(c)
를 포함하는 것을 특징으로 하는, 제4항의 사이클로스포린 함유 안약 조성물의 제조 방법.
제11항에 있어서, 단계(c)에서 호모게나이저 또는 고속 전단기를 사용하지 아니하는 것을 특징으로 하는, 제4항의 사이클로스포린 함유 안약 조성물의 제조 방법.