CZ2015166A3 - Samonosný, biodegradabilní film na bázi hydrofobizované kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy a použití - Google Patents

Samonosný, biodegradabilní film na bázi hydrofobizované kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy a použití Download PDF

Info

Publication number
CZ2015166A3
CZ2015166A3 CZ2015-166A CZ2015166A CZ2015166A3 CZ 2015166 A3 CZ2015166 A3 CZ 2015166A3 CZ 2015166 A CZ2015166 A CZ 2015166A CZ 2015166 A3 CZ2015166 A3 CZ 2015166A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
film
film according
hours
range
derivative
Prior art date
Application number
CZ2015-166A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ309295B6 (cs
Inventor
Marcela Foglarová
Gloria Huerta-Angeles
Kristina Nešporová
Klára Šlesingrová
Antonín Minařík
Josef Chmelař
Romana Šuláková
Karel Sergej
Vladimír Velebný
Original Assignee
Contipro Biotech S.R.O.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Contipro Biotech S.R.O. filed Critical Contipro Biotech S.R.O.
Priority to CZ2015166A priority Critical patent/CZ309295B6/cs
Priority to KR1020177026609A priority patent/KR102561551B1/ko
Priority to HUE16720697A priority patent/HUE055009T2/hu
Priority to PCT/CZ2016/000027 priority patent/WO2016141903A1/en
Priority to US15/556,370 priority patent/US10689464B2/en
Priority to DK16720697.8T priority patent/DK3268414T3/da
Priority to BR112017018431-1A priority patent/BR112017018431B1/pt
Priority to ES16720697T priority patent/ES2877528T3/es
Priority to RU2017130206A priority patent/RU2712174C2/ru
Priority to PL16720697T priority patent/PL3268414T3/pl
Priority to EP16720697.8A priority patent/EP3268414B1/en
Priority to JP2017547385A priority patent/JP6796075B2/ja
Publication of CZ2015166A3 publication Critical patent/CZ2015166A3/cs
Publication of CZ309295B6 publication Critical patent/CZ309295B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
    • C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
    • C08B37/0072—Hyaluronic acid, i.e. HA or hyaluronan; Derivatives thereof, e.g. crosslinked hyaluronic acid (hylan) or hyaluronates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A61K31/726—Glycosaminoglycans, i.e. mucopolysaccharides
    • A61K31/728—Hyaluronic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/14—Macromolecular materials
    • A61L27/20—Polysaccharides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/50—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
    • A61L27/54—Biologically active materials, e.g. therapeutic substances
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
    • C08J3/00—Processes of treating or compounding macromolecular substances
    • C08J3/02—Making solutions, dispersions, lattices or gels by other methods than by solution, emulsion or suspension polymerisation techniques
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
    • C08J3/00—Processes of treating or compounding macromolecular substances
    • C08J3/02—Making solutions, dispersions, lattices or gels by other methods than by solution, emulsion or suspension polymerisation techniques
    • C08J3/09—Making solutions, dispersions, lattices or gels by other methods than by solution, emulsion or suspension polymerisation techniques in organic liquids
    • C08J3/091—Making solutions, dispersions, lattices or gels by other methods than by solution, emulsion or suspension polymerisation techniques in organic liquids characterised by the chemical constitution of the organic liquid
    • C08J3/095—Oxygen containing compounds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
    • C08J5/00—Manufacture of articles or shaped materials containing macromolecular substances
    • C08J5/18—Manufacture of films or sheets
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
    • C08J7/00—Chemical treatment or coating of shaped articles made of macromolecular substances
    • C08J7/08—Heat treatment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
    • C08L5/00—Compositions of polysaccharides or of their derivatives not provided for in groups C08L1/00 or C08L3/00
    • C08L5/08—Chitin; Chondroitin sulfate; Hyaluronic acid; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
    • C08J2305/00—Characterised by the use of polysaccharides or of their derivatives not provided for in groups C08J2301/00 or C08J2303/00
    • C08J2305/08—Chitin; Chondroitin sulfate; Hyaluronic acid; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
    • C08L2201/00—Properties
    • C08L2201/06—Biodegradable
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
    • C08L2203/00—Applications
    • C08L2203/02—Applications for biomedical use

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
  • Manufacturing & Machinery (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Thermal Sciences (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
  • Materials For Medical Uses (AREA)
  • Manufacture Of Macromolecular Shaped Articles (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

Řešení se týká samonosného, biodegradabilního filmu obsahujícího C.sub.10.n.-C.sub.22.n.- acylovaný derivát kyseliny hyaluronové podle obecného vzorce (I), kde R je H.sup.+.n.nebo Na.sup.+.n., a kde R.sup.1.n.je H nebo –C(=O)C.sub.x.n.H.sub.y.n., kde x je celé číslo v rozmezí 5 až 21 a y je celé číslo v rozmezí 11 až 43 a C.sub.x.n.H.sub.y .n.je lineární nebo rozvětvený, nasycený nebo nenasycený řetězec C.sub.9.n.-C.sub.21.n., přičemž alespoň v jedné opakující se jednotce jeden nebo více R.sup.1.n.je tvořen C(=O)C.sub.x.n.H.sub.y.n.a kde n je v rozmezí 12 až 4000. Dále se řízení týká způsobu jeho přípravy a použití.

Description

Samonosný, bíodegradabilní film na bázi hydrofobizované kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy a použití
Oblast techniky
Vynález se týká samonosného biodegradabilního filmu na bázi hydrofobizované kyseliny hyaluronové, způsobu jeho přípravy a použití zejména v medicínských aplikacích díky své řízené rozpustnosti, biodegradovatelnosti, povrchové morfologii, mechanickým a dalším vlastnostem.
Dosavadní stav techniky
Kyselina hyaluronová nebo její sůl (HA) je lineární polysacharid, který je složen z opakujících se disacharidických jednotek tvořených kyselinou glukuronovou, která je β-1,3 glykosidickou vazbou spojena s N-acetyl-glukosaminem.
Jedná se o látku, která se přirozeně nachází v organismu, kde je součástí extracelulámí matrix, plní lubrikační funkci v kloubech, očích apod. Interaguje rovněž s receptory buněk, čímž dokáže buňky také regulovat. Díky svým vlastnostem je HA předurčena k využití v řadě medicínských aplikací (Nečas, Bartošíkova et al. 2008). Protože je HA velmi rychle rozpustná v prostředí vody či tělních tekutin, je nutněji pro řadu aplikací modifikovat. Typů modifikací je celá řada, za všechny lze uvést např. přípravu rozpustné formy HA derivatizované tyraminem, která po přidání síťovacích činidel vytvoří nerozpustnou hydrogelovou síť (Calabro, Darr et al. 2004, Wolfova, Pravda et al. 2013). Rozpustnost HA řetězce lze také snížit navázáním hydrofobních skupin (Valle and Romeo 1987, Smejkalova, Huerta-Angeles et al. 2014, Ščudlová. Běťák et al. 2014). Takový derivát je pak nerozpustný ve vodném prostředí a rozpustný povětšinou ve směsi vody a organického rozpouštědla (dle stupně substituce hydrofobním řetězcem v kombinaci s molekulovou hmotností).
Mezinárodní patentová přihláška (Smejkalova, Huerta-Angeles et al. 2014) se vztahuje k přípravě hydrofobizované kyseliny hyaluronové jako nosiči biologicky aktivních hydrofobních látek. Hydrofobizace hyaluronanu je provedena esterifikační reakcí hyaluronanu s karboxylovou kyselinou disponující dlouhým řetězcem, přičemž aktivace je provedena pomocí 2,4,6-trichlorbenzoové kyseliny (TCBA) nebo jiným organickým chloridem.
Jednou se zajímavých aplikačních forem hydrofbbizovaného hyaluronanu je příprava tenkých filmů pro externí či interní využití. Filmy, které jsou použitelné v medicínských aplikacích, jsou známy, např. Seprafilm byl použit k prevenci srůstu při opakování laparotomie. Seprafilm je průhlédná adhezní bariéra složená ze dvou anionických polysacharidů, HA a karboxymetylcelulozy, které byly dohromady zesítěny l-(32 dimethylaminopropyl)-3- ethylcarbodiimide hydrochloridein (EDC) (Altuntas, Kement et al.
2008, Beck 2008).
Na bázi experimentální pak bylo připraveno několik filmů obsahujících HA např. Luo, Y. et al. (2000). Rovněž některé patentové dokumenty popisují přípravu filmu z nerozpustného nebo zesítěného hyaluronanu, příp. hyaluronanu ve směsi s dalším polymerem (Becker. Dayton et al. 1996, Beck 2008) Vrstva hyaluronanu byla použita i v patentovém dokumentu CN202822230, kde se však nejedná o samonosný film a navíc je uveden pouze nativní hyaluronan. Nativní hyaluronan spolu s lecitinem přidaným ke zvýšení hydrofobicity byl popsán v článku (Biatopiotrowicz et al., 2006). Dalším filmem, použitým pro přípravu mimo jiné i antiadhezní bariéry je film epoxidového derivátu hyaluronanu, který je připraven srážením v organickém rozpouštědle (EP2644623).
Filmy dle US přihlášky vynálezu 20100092545 jsou připraveny z ve vodě rozpustných, či nerozpustných polymerů, s výhodou polyethylenoxidu, jejich předpokládaným použitím je alternativa orálních lékových forem. Z toho důvodu je velmi důležité, aby distribuce léčiva byla homogenní (rozdíl mezi vzorky do 10%) a během přípravy filmu nedocházelo k agregaci a redistribuci léčiva. Toho je dosaženo především tím, že je polymer je dávkován ve vysoké viskozitě (ta může být dále zvýšena přídavkem dalších látek jako alginátu, karagenanu, guarové gumy a dalších) a přidány mohou být i stabilizátory, které právě agregaci a migraci léčiva zabraňují. Dále část rozpouštědla musí být odstraněna během prvních 10 minut, aby z polymemího roztoku vznikl viskoelastický film, ve kterém již migrace a agregace léčiv dle autorů probíhat nemůže. Toho je dosaženo aplikací vysoké teploty, která však u hyaluronanu a jeho derivátů nemůže být použita, protože by vedla k degradaci filmu. V US20100092545 není řešen výsledný vzhled filmu, který je ovlivněn adhezí filmu k podložce během sušení a po vysušení. Hrubost povrchu filmu není také stanovována a ovlivňována. Takto modulovatelné vlastnosti filmu jako je bobtnavost a rychlost degradace se v tomto dokumentu nepopisují. Preferencí autorů, vzhledem k aplikaci je. aby se filmy ve vodném prostředí rozpustily.
Patentový dokument JP06025306 popisuje syntézu vysokosubstituovaných acylovaných derivátů hyaluronanu a jejich použití pro přípravu vláken a filmů. Syntéza zahrnuje přípravu suspenze polysacharidu v organické kyselině. Jelikož se jedná o suspenzi, je polysacharid v systému rozpuštěn nedokonale a tím dochází k nehomogenním reakcím a ztrátě kompatibility polysacharidu v systému. Autoři uvádí, že reakce je katalyzována superkyselinou - tomto případě superelektrotilním anhydridem kyseliny trifluoroctové, který bouřlivě reaguje s vodou. Riziko v případě industriálních procesů je tedy značné. Rezidua kyseliny trifluoroctové, která vzniká hydrolýzou anhydridu při kontaktu se vzdušnou vlhkostí mohou byt v produktech zachyceny a představují vysoké nebezpečí při použití derivátů v biomedicínských aplikacích (Maeda N. et al., 2014). Navíc se při syntéze derivátu používají chlorovaná rozpouštědla, jejichž použití FDA ve zdravotnických prostředcích nedoporučuje z důvodu vysokého rizika přenosu jejich reziduí do vláken a filmů. Patentový dokument zmiňuje přípravu vláken a filmů jen velmi obecně a nezabývá se stanovením jejich vlastností.
Dle další US přihlášky vynálezu US20120088832 je popisována příprava porézního filmu na bázi hyaluronanu a alginátu, přičemž film by měl být využit v medicíně zejména jako antiadhezní přípravek. Jedná se o zesítěnou interpenetrující síť porézního charakteru. V příkladech tohoto dokumentu není zmíněno nic o botnavosti, biodegradaci, rozpustnosti filmu a není uvedeno stanovení zbytkových rozpouštědel.
K přípravě filmů v patentovém dokumentu EP0216453 byl použit hydrofobizovaný hyaluronan s esterifikovanými karboxylovými skupinami kyseliny glukuronové, které jsou tímto blokované a tudíž nedostupné pro vazbu na receptor CD44. K esterifikaci byly použity nízkomolekulámí nebo aromatické alkoholy. Postup přípravy samonosného filmu zahrnuje rozpuštění esteru HA v dimetylsulfoxidu (DMSO), po rozpuštění je nanesen na sklo, sklo je ponořeno do etanolu, který' extrahuje DMSO (v etanolu není film rozpustný) a film je posléze sloupnut ze skleněné podložky, promyt etanolem, vodou a opět etanolem. Výsledný film je sušen po dobu 48 hodin při 30° C v kompresním zatížení.
Rovněž v patentovém dokumentu US20040192643 jsou uvedeny filmy z hydrofobizovaného hyaluronanu, výhodně benzoyl derivátu HA. Opět je provedena substituce na karboxylu, kdy je za účelem dosažení nerozpustnosti hyaluronanu zablokováno až 80-100 % všech karboxylových skupin HA. Postup přípravy filmu v podstatě odpovídá již zmiňovanému postupu uvedenému v EP216453 výše. Nicméně sušení filmu probíhá při 63°C po dobu 30 minut ve vakuu.
Extrakcí DMSO do jiného rozpouštědla mohou vznikat nekontrolovatelné povrchové defekty, které v některých aplikacích mohou být nepřijatelné. Navíc, při nutnosti použití extrakčního rozpouštědla nelze zaručit nízkou koncentraci zbytkových rozpouštědel v konečném produktu. V již zmíněném patentovém dokumentu EP0216453 ani v US20040192643 není zde zmínka o mechanických, fyzikálních ani biologických vlastnostech filmů.
Patentový dokument WO2010137374 popisuje samonosnou polymemí permeabilní membránu zahrnující blokový kopolymer, ve kterém jsou vzájemně kovalentně spojeny hydrofilní polymemí a hydrofobní polymemí složky, přičemž hydrofilní polymemí složka vytváří kolmo orientované válcovité struktury a hydrofobní polymemí složka je zesíťovatelná. Membrána je tedy tvořena kovalentně zesíťovaným blokovým polymerem. Není zde žádná zmínka o kyselině hyaluronové. Pokud jde o postup tvorby takovéto membrány, nutná je přítomnost tzv. „sacrificing layer“ na podložku, na který se nanese roztok blokového polymeru, přičemž po odpaření rozpouštědla se provede fotozesítění hydrofobní polymemí složky blokového kopolymeru a následně je třeba „sacrificing layer“ ze vzniklé membrány odstranit rozpuštěním nejlépe v rozpouštědle, ve kterém není vlastní membrána rozpustná.
Jak již bylo uvedeno výše, mezi nevýhody dosud známých filmů na bázi kyseliny hyaluronové patří zejména jejich vícestupňová komplikovaná příprava nebo proces přípravy, který nelze využít pro hyaluronan a jeho deriváty. Autoři některých patentů či přihlášek neuvádějí možnost ovlivnit rozpustnost, botnavost a biodegradabilitu filmu, což je při aplikaci ve zdravotnických prostředích žádoucí. Vzhled filmu a jeho mechanické vlastnosti mohou být ovlivněny opakovaným stykem s rozpouštědlem v případě postupu dle patentu EP0216453 či US20040192643 (etanol, kterým je DMSO extrahován, je srážedlem hyaluronanu). Dále pak je používáno např. DMSO, které nelze v přijatelné době odstranit sušením. Další nevýhodou je používání velkého množství rozpouštědel a dále pak možnost výskytu zbytkových rozpouštědel v produktu. Některé postupy kromě hyaluronanu používají další polymery, aby se zvýšila nerozpustnost výsledného materiálu či aby ovlivnily vlastnosti výchozího roztoku polymeru.
Podstata vynálezu
Výše uvedené nevýhody dosavadních řešení překonává samonosný film na bázi esteru kyseliny hyaluronové podle vynálezu, jehož podstata spočívá v tom, že obsahuje C10-C22acylovaný derivát kyseliny hyaluronové podle obecného vzorce (I)
kde R je H+ nebo Na+, a kde R1 je H nebo -C(=O)CxHy, kde x je celé číslo v rozmezí 9 až 21 a y je celé číslo v rozmezí 11 až 43 a CxHy je lineární nebo rozvětvený, nasycený nebo nenasycený řetězec C9-C21, přičemž alespoň v jedné opakující se jednotce jeden nebo více R1 je tvořen -C(=O)CxHy a kde n je v rozmezí 250 až 1000. S výhodou film podle vynálezu obsahuje palmitoyl hyaluronan, neboť kyselina palmitová je v těle odbourávána β-oxidací mastných kyselin.
Film podle vynálezu obsahuje C10-C22 acylovaný derivát hydrofobizovaného hyaluronanu, přičemž jedna či více vazeb v Cio — C22 acylech může být nenasycených a kde C)o - C22 acyl je s výhodou vázán pouze na primárním alkoholu v pozici 6 N-acetyl glukosaminu. Nejsou tedy modifikovány karboxylové skupiny, jejichž zachování je nezbytné k ovlivnění interakce hyaluronanu s receptorem CD44, který zprostředkovává interakci, adhezi a migraci buněk a také se podílí na interakci buňky s hyaluronanem. Bylo prokázáno, že čím vyšší stupeň substituce karboxylu hyaluronanu, tím hůře probíhá interakce buněk s hyaluronanem (Qiu, Li et al. 2014). Z tohoto pohledu je výhodné modifikaci karboxylu neprovádět a zaměřit se na další reakční místa, což jsou alkoholové primární a/nebo sekundární skupiny, a to zejména při požadavku vyšších stupňů substituce, které jsou pro většinu aplikací nezbytné.
Film podle vynálezu, tedy v podstatě fyzikálně sítěný hydrogel, připravený z C10-C22acylovaného derivátu kyseliny hyaluronové podle vzorce I výše, je necytotoxický vůči buňkám, je biokompatibilní a biodegradabilní i v případě použití vysoce substituovaného derivátu (až okolo 100% stupně substituce acylem). Pro aplikace v medicíně, kde je předpokladem, že film bude mechanicky zatěžován (antiadheze, tkáňové inženýrství aj.) je výhodnější použít namísto kovalentně zesítěné formy, která je po nabotnání často křehká, formu nerozpustnou ve vodném prostředí, tedy film podle vynálezu. Ten po hydrataci vytvoří odolnou pružnou membránu, kterou lze do určité míry mechanicky namáhat (protažením, ohybem, kompresí).
Vůči buňkám jsou filmy netoxické (testování in vitró).
Podle výhodného provedení vynálezu film obsahuje hydrofobizované deriváty kyseliny hyaluronové o molekulové hmotnosti 1 x 103 až 1 x 106 g/mol, s výhodou I x 10’ až 5x10 g/mol, výhodněji 2 x 103 až 3 x 105 g/mol.
Podle dalšího výhodného provedení vynálezu film obsahuje hydrofobizované deriváty kyseliny hyaluronové mající stupeň substituce v rozsahu 15 až 160%, s výhodou 50 až 100%, výhodněji 80 až 100%.
Stupeň substituce 100% znamená, že každá primární alkolická skupina (-C6) dimeru hyaluronanu je substituována jedním alifatickým řetězcem. Stupeň substituce nad 100% znamená, že kromě každé primární alkoholické skupiny (-C6) dimeru je náhodně substituován také sekundární alkohol (-C4 na N-acetylglukosaminu) či (-C2 nebo -C3 kyseliny glukuronové).
S překvapením bylo zjištěno, že film podle vynálezu je biodegradabilní i v případě použití derivátu s vysokým stupněm substituce, který se pohybuje v rozsahu 80 až 100% a dokonce až 160%.
Podle ještě dalšího výhodného provedení vynálezu film má tloušťku v rozsahu 2 až 100 pm, s výhodou v rozsahu 5 až 25 pm a Youngův modul pevnosti v rozsahu 1 až 5000 MPa v suchém stavu, s výhodou v rozsahu 500 - 5000 MPa.
V případě suchých, nehydratovaných filmů dle tohoto vynálezu je Youngův modul pevnosti nezávislý na stupni substituce, substituentu a molekulové hmotnosti HA. V hydratováném stavu je z technických důvodů velmi obtížné Youngův modul pevnosti kvantifikovat, avšak pomocí vizuálních testů lze vyhodnotit, že se snižující se molekulovou hmotností klesá houževnatost filmu, film se stává křehčím. Rovněž se zvyšujícím se stupněm substituce se zvyšuje Youngův modul pevnosti v hydratovaném stavu.
Podle ještě dalšího výhodného provedení vynálezu povrchová hrubost RMS (střední kvadratická hodnota) alespoň jedné z ploch filmu je v rozsahu 0,5 až 100 nm, s výhodou v rozsahu 0,5 až 2 nm.
Roztok může být s výhodou různě upravován, mohou být do něho vmíchány biologicky aktivní látky, léčiva a další komponenty, přičemž biologicky aktivní látka je vybrána ze skupiny zahrnující farmaceuticky a kosmeticky aktivní látky, s výhodou vitamíny, léčiva s výhodou cytostatika, steroidy, dále fytoextrakty, lytokomplexy nebo fytoaktivní látky apod.. Jedinečné rysy filmu podle tohoto vynálezu jsou: 1) film je složen pouze z hydrofobizovaného hyaluronanu, 2) nejsou využity syntetické polymery, 3) neobsahuje žádná toxická rozpouštědla, 4) případná zbytková rozpouštědla jsou netoxická a jsou pod limity pro medicínské použití, 5) modifikací stupně substituce hyaluronanu lze řídit botnavost a rozpustnost filmu, 6) modifikací stupně substituce hyaluronanu lze řídit rychlost degradace filmu, 7) film není povrchově deformován a je homogenní, co se tloušťky týče (okraje filmu 0,5 cm z každé strany jsou vždy odstraněny, z důvodu přilnavosti ke stěně sušícího zařízení jsou tlustší, hodnocen je pak zbytek filmu), 8) lze řídit povrchový vzhled filmu, 9) lze řídit mechanické vlastnosti filmu, zejména pak v hydratovaném stavu 10) hrubost RMS může být pod 2 nm, 11) lze řídit tloušťku filmu, 12) film je neadherentní pro buňky, 13) film neobsahuje tzv. skin surface. Skin surface je povrchová krusta, díky které by se film deformoval, kroutil a pod níž by se mohly formovat bubliny. Vzniká při sušení polymemího roztoku na vzduchu, kdy v blízkosti povrchu se často objevuje vrstva vysoce koncentrovaného polymeru. Tato vrstva má velmi odlišné reologické vlastnosti od zbytku filmu. Sušení filmu dle tohoto vynálezu probíhá tak, že film není otevřen svému okolí, tedy suší se pomaleji, existuje vyšší tenze par rozpouštědla nad roztokem. Toto uspořádání napomáhá tomu, aby povrchová krusta nevznikla. S překvapením bylo zjištěno že i když byla míra vlhkosti v uzavřeném prostoru při sušení filmu nízká, k tvorbě povrchové krusty nedocházelo.
Ve filmech podle vynálezu nebyla nalezena rezidua hydrofobizačních činidel, která by mohla pocházet z podložky, na které je film připravován.
Oproti postupům dle stavu techniky je způsob přípravy filmu podle vynálezu velmi jednoduchý a spočívá v rozpuštění hydrofobizovaného hyaluronanu (jakékoliv popsané molekulové hmotnosti a jakémkoliv popsaném stupni substituce) v příslušném rozpouštědle, nadávkování na definovanou podložku a odpaření rozpouštědla v uspořádání, kdy je vyšší tenze par rozpouštědla nad sušeným roztokem v uzavřeném prostoru a lze získat film o definovaném vzhledu. Odpaření rozpouštědla je provedeno buď volným odpařením rozpouštědla nebo zahříváním spodní plochy filmu spočívající na podložce za současného zahřívání nebo chlazení horní plochy filmu (sušení v teplotním gradientu a uzavřeném systému) . Způsob přípravy filmu podle vynálezu je tedy velmi levný a jednoduchý. Důležité také je, že povrch filmu podle vynálezu je na ploše, kterou přiléhal k podložce (tj. spodní plocha filmu) velmi hladký (RMS do 2 nm), na protilehlé straně filmu (tj. horní plocha filmu) je pak hrubší dle podmínek sušení a typu derivátu.
Podle dalšího aspektu se dále vynález týká způsobu přípravy filmu podle vynálezu, který spočívá v tom, že se připraví roztok obsahující Cio-Cii-acylovaný derivát kyseliny hyaluronové podle obecného vzorce (1) výše ve směsi vody a Cj-Cé alkoholu, s výhodou propan-2-olu, který se míchá, načež se nanese na podložku a suší se v uzavřeném prostoru.
Podle dalšího výhodného provedení způsobu podle vynálezu je v roztoku množství C|0-C22-acylovaného derivátu kyseliny hyaluronové v rozsahu 0,5 až 3 hmotn.%, obsah CiC6 alkoholu, s výhodou propan-2-olu, je v rozsahu 25 až 55 obj.% a obsah vody v roztoku je v rozmezí 45 až 75 obj.%. Připravovaný roztok má poměrně nízkou viskozitu, čímž se zamezí vzniku bublin při míchání a dávkování roztoku.
Podle ještě dalšího výhodného provedení způsobu podle vynálezu se roztok míchá po dobu 20 až 72 hodin, s výhodou 20 až 48 hodin.
Podle dalšího výhodného provedení způsobu podle vynálezu je, že sušení filmu probíhá v uzavřeném prostoru při teplotě 20°C až 50°C, s výhodou 30°C až 40°C; po dobu 3 až 6 hodin, s výhodou 4 až 5 hodin.
Podle dalšího výhodného provedení způsobu podle vynálezu platí, že se sušení v teplotním gradientu provede zahříváním spodní plochy filmu spočívající na podložce na teplotu, která je alespoň o 1°C vyšší, než je teplota, na kterou se zahřívá nebo chladí protilehlá horní plocha filmu. S výhodou se spodní plocha filmu spočívající na podložce zahřívá na teplotu v rozsahu 20°C až 60°C a protilehlá horní plocha filmu se zahřívá nebo chladí v rozsahu 10°C až 59°C. Ještě výhodněji se spodní plocha filmu spočívající na podložce zahřívá na teplotu 50°C a protilehlá horní plocha filmu se chladí na teplotu 20°C. Při aplikaci teplotního gradientu se film suší v uzavřeném prostoru.
Podle ještě dalšího výhodného provedení způsobu podle vynálezu se roztok v teplotním gradientu suší po dobu 6 až 12 hodin, s výhodou 6 hodin.
Výhodou přípravy filmu dle tohoto vynálezu je to, že je ve vodném prostředí nerozpustný a je tvořen jen samotným acylovaným hyaluronanem podle obecného vzorce T, definovaném výše, bez nutnosti přídavku síťovacích činidel a dalšího zpracování.
Roztok může být s výhodou různě upravován, mohou být do něho vmíchány biologicky aktivní látky, léčiva a další komponenty, přičemž biologicky aktivní látka je vybrána ze skupiny zahrnující farmaceuticky a kosmeticky aktivní látky, s výhodou vitamíny, léčiva s výhodou cytostatika, steroidy, dále fytoextrakty, fytokomplexy nebo fytoaktivní látky apod..
Podle ještě dalšího výhodného provedení způsobu podle vynálezu je podložkou polymer vybraný ze skupiny obsahující polyvinylalkohol. polypropylen, polyethylen, polyoxymetylen nebo polystyren. Dále pak je podložkou sklo nebo hydrofobizované sklo. Ve výhodném provedení je použito hydrofobizované sklo. Kontaktní úhel smáčení povrchu podložky demi vodou je v rozsahu 30° až 120°. s výhodou 50° až 70°.
Výhodou výše popsaného způsobu podle vynálezu je kromě jednoduchosti také možnost připravit ze strany podložky (tj. spodní plochy filmu) velmi hladký povrch filmu díky výběru podložky, který je sám o sobě hladký.
Jako velmi užitečná se jeví možnost ovlivnit deformaci a celkový vzhled filmu tím, že je ovlivňována adheze (interakce) polymeru, sušícího se a suchého filmu k podložce, na kterou je roztok dávkován a na které probíhá sušení. Ideální je, pokud je polymemí film na podložku zcela naadherován, nedochází k samovolnému sloupnutí filmu a přitom ho lze z podložky sejmout jen s použitím minimální síly.
Dobrá smáčivost povrchu podložky roztokem polymeru je prvním stádiem adheze. Adhezi sušícího se a suchého filmu podle vynálezu k podložce a tím i vzhled filmu lze ovlivnit výběrem podložky s různou smáčivostí povrchu vyjádřenou kontaktním úhlem. Pro každý typ derivátu (různá modifikace, různá molekulová hmotnost a různý stupeň substituce) lze pak s výhodou využít podložky se zcela konkrétní hodnotou smáčivosti. V případě dobře naadherovaných filmuje po sloupnutí jejich povrch rovný, v případě méně naadherovaných či neadherujících filmuje pak jejich povrch více či méně zdeformován či smrštěn. S výhodou se jako podložky použijí hydrofobizovaná skla.
Film je připraven odpařením směsi organického rozpouštědla (typicky alkoholu) s vodou. Povrch takto připraveného filmu má povrchový vzhled a hrubost RMS řízenou dle výběru optimálních rozpouštědel, derivátu, podmínek sušení a podložky a může být připraven jako transparentní. Tloušťka filmu se pohybuje od 2 až 100 pm, s výhodou pak mezí 5 až 25 pm. Díky způsobu přípravy filmu na podložce s modulovatelnou smáčivostí lze ovlivnit adhezi filmu k podložce a tím i morfologii povrchu filmu.
Příprava filmu probíhá tak, že roztok acylovaného derivátu hyaluronanu o poměrně nízké viskozitě je po dostatečném rozmíchání nadávkován na vhodnou podložku a usušen. Nízkou viskozitou roztoku nadávkovaného na podložku je zamezeno vzniku bublin při míchání a dávkování roztoku. Posléze je film z podložky sejmut. Doba sušení filmu se pohybuje dle objemu a koncentrace roztoku a dále dle nastavených teplot a použitého rozpouštědla od 5 do 12 hodin. Film obsahuje méně než 0,02% rozpouštědla, např. isopropanolu, čímž bezpečně naplňuje požadavky na množství zbytkových rozpouštědel pro lékařské použití. Takový materiál lze použít ke konstrukci zdravotnického prostředku. Výhodou způsobu přípravy takového filmu podle vynálezu je to, že je ve vodném prostředí nerozpustný a je tvořen jen samotným modifikovaným hyaluronanem bez nutnosti přídavku síťovacích činidel a dalšího zpracování.
Film podle vynálezu se může podle vynálezu použít například pro výrobu antiadhezních bariér a k dalším aplikacím v humánní i veterinární medicíně. Degradace filmu v lidském těle je modulovatelná dle použité molekulové hmotnosti derivátu a stupni substituce hyaluronanu alkylem a pohybuje se od několika hodin po několik měsíců. Acylované deriváty HA i folie z nich připravená jsou degradovatelné in vitro.
Botnavost filmu, příp. jeho rozpustnost je řízena také použitou molekulovou hmotností derivátu a stupněm substituce hyaluronového řetězce C10-C22 alkylem.
Důležité je, že oproti derivátům popsaným v patentových spisech dle stávajícího stavu techniky, že film podle vynálezu obsahuje pouze C10-C22 — acylovaný derivát kyseliny hyaluronové, který má zachovány veškeré karboxylové skupiny kyseliny glukuronové, což jsou skupiny odpovědné za biologické vlastnosti hyaluronanu.
Dalším aspektem vynálezu je ovlivnění povrchového vzhledu filmu tím, že je ovlivněna adheze vysušeného polymeru k podložce, na které je film připravován. Výsledkem může být velmi rovný film bez vrásnění a smrštění.
Podle ještě dalšího provedení se film podle vynálezu, jak je definovaný výše, použije v medicínských aplikacích, biotechnologických aplikacích nebo jako podklad pro depozici aktivních komponent.ke konstrukci zdravotnického prostředku, jako jsou například antiadhezní bariéry, neboť na ně neadherují buňky. Dále mezí výhodné medicínské aplikace, ve kterých lze film podle vynálezu použít, patří například medicínské farmaceutické aplikace, jako například léčba chronických a akutních ran; dále např. dentální aplikace..
Definice pojmů
Termínem „stupeň substituce“ se rozumí počet C10-C22 acylů připojených na 100 dimerů hyaluronanu. Např. stupeň substituce 2% znamená, že 2 z každých 100 dimerů hyaluronanu je substituováno C]0-C22 acyly. Při substituci je atom vodíku z primární hydroxylové skupiny Nacetyl-glukosaminu nebo ze sekundárních OH skupin kyseliny glukuronové nahrazen C10 C22 acylem.
Termín „film“ znamená samonosnou tenkou polymemí folii, plošný útvar.
Termín „plocha filmu“ znamená obsah filmu vypočtený z jeho rozměrů (v m2).
Termín „zdravotnický prostředek“ znamená pomůcku použitou samostatně nebo v kombinaci s jakýmkoliv příslušenstvím ke specifickému použití pro diagnostické nebo léčebné účely, například antiadhezní bariéra.
Termín „uzavřený prostor“ znamená prostor, ve kterém probíhá sušení filmu za určité teploty nebo v teplotním gradientu a který je uzavřený bez volného přístupu okolního vzduchu .
Termín kondiciované médium znamená THP-1 kondiciované médium, což je standardní RPMI médium obohacené o 10% fetální bovinní sérum, ve kterém byly kontinuálně kultivovány buňky lidské linie THP-1 po dobu 7 dní. Buňky THP-1 jsou používány jako model lidských monocytů a produkují kromě řady růstových faktorů a cytokinů i enzymy způsobující degradaci složek extracelulámí matrix, především matrix metaloproteinázy, hyaluronidázy či esterázy. Před použitím či zamražením bylo médium centrifugováno a filtrováno přes 0,22 (tm filtr, pro zajištění čistoty a sterility.
Přehled obrázků na výkresech:
Obr. 1: vliv adheze filmu (a,b) na bázi oleyl derivátu hyaluronanu sodného na jeho povrchový vzhled (c)
Obr. 2: vliv adheze filmu na bázi palmitoyl derivátu hyaluronanu sodného na jeho povrchový vzhled
Obr. 3: porovnání filmů připravených dle Příkladů 2 (b) a 18 (a) po třech týdnech degradace v kondiciovaném médiu
Obr. 4: potvrzení přítomnosti oligosacharidů na bázi HA pomocí HPLC. Plná černá čára = film dle příkladu 2 (D2) degradovaný v přítomnosti BSA, šedá tečkovaná čára = film dle příkladu 2 (D2) degradovaný bez přídavku BSA; šedá přerušovaná čára= standard HA4 (íR = 8,9 min), HA6 (7R = 14,6 min).
Obr. 5: potvrzení přítomnosti oligosacharidů na bázi HA pomocí HPLC. Plná černá čára = derivát o stupni substituce 100% a MW 2,04 x 103 g/mol (TP 11) degradovaný v přítomnosti BSA, šedá tečkovaná čára = derivát o stupni substituce 100% a MW 2,04 x 105 g/mol (TP 11) degradovaný bez přídavku BSA; šedá přerušovaná čára = standard HA4 (rR = 8,9 min), HA6 (řR= 14,6 min).
Obr. 6: morfologie filmu připraveného dle příkladu 16 ze strany podložky
Obr. 7: viabilita suspenzních buněk THP-1 po 24 a 72hod inkubaci s filmem připraveným dle Příkladu 1 na bázi palmitoyl derivátu hyaluronanu sodného
Obr. 8: indukce buněčné smrti po 24 hod inkubace s filmem připraveným dle Příkladu 1 na bázi palmitoyl derivátu hyaluronanu sodného
Obr. 9: indukce buněčné smrti po 72 hod inkubace s filmem připraveným dle Příkladu 1 na bázi palmitoyl derivátu hyaluronanu sodného
Obr. 10: indukce buněčné smrti po 72 hod inkubace s filmem připraveným dle Příkladu 1 na bázi palmitoyl derivátu hyaluronanu sodného
Obr. 11: : buněčné antiadhezní vlastnosti filmu. A- film připravený dle Příkladu 17, líc, B- film připravený dle Příkladu 17, rub, C - film připravený dle příkladu 2, líc, D - film připravený dle příkladu 2, rub, CTRL - kontrola
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1. Příprava filmu na bázi palmitoyl derivátu hyaluronanu sodného
Navážka 100 mg palmitoyl derivátu hyaluronanu sodného o stupni substituce 100% a molekulové hmotnosti 2,8x 105 g/mol byla rozpuštěna v 20 ml 55% roztoku isopropylalkoholu a nechána míchat min. 72 hodin. Roztok byl po rozmíchání nadávkován na hydrofobizované sklo o hodnotě smáčivosti demi vodou 61° (+/- 2°) a usušen v uzavřeném prostoru, v teplotním gradientu při teplotě spodní desky 50°C a teplotě horní desky 40°C po dobu 12 hodin. Po usušení byla folie zhodnocena, sejmuta z hydrofobizovaného skla a charakterizována. Tloušťka takto připraveného filmu byla stanovena na přibližně 15pm. Sušina byla stanovena na hodnotu okolo 92%.
Příklad 2. Příprava filmu na bázi palmitoyl derivátu hyaluronanu sodného
Navážka 100 mg palmitoyl derivátu hyaluronanu sodného o stupni substituce 100% a molekulové hmotnosti 2,12 x 105 g/mol byla rozpuštěna v 20 ml 55% roztoku isopropylalkoholu a nechána míchat min. 48 hodin. Roztok byl po rozmíchání nadávkován na hydrofobizované o hodnotě smáčivosti demi vodou 61° (+/- 2°) a usušen v uzavřeném prostoru, v teplotním gradientu při teplotě spodní desky 50°C a teplotě horní desky 20°C po dobu 6 hodin. Po usušení byla folie zhodnocena, sejmuta z hydrofobizovaného skla a charakterizována. Tloušťka takto připraveného filmu byla stanovena na přibližně 15 pm.
Příklad 3. Příprava filmu na bázi palmitoyl derivátu hyaluronanu sodného
Navážka 100 mg palmitoyl derivátu hyaluronanu sodného o stupni substituce 55% a molekulové hmotnosti 6,0 x 105 g/mol byla rozpuštěna v 20 ml 50% roztoku etylakoholu a nechána míchat min. 20 hodin. Roztok byl po rozmíchání nadávkován na polyethylenovou podložku o hodnotě smáčivosti demi vodou 79° (+/- 4°) a usušen v uzavřeném prostoru, v teplotním gradientu při teplotě spodní desky 30°C a teplotě horní desky 29°C po dobu 12 hodin. Po usušení byla folie zhodnocena, sejmuta z podložky a charakterizována. Tloušťka takto připraveného filmu byla stanovena na přibližně 15 pm.
Příklad 4. Příprava filmu na bázi palmitoyl derivátu hyaluronanu sodného mg palmitoyl derivátu hyaluronanu sodného o stupni substituce 31% a molekulové hmotnosti 9,9 x 105 g/mol bylo rozpuštěno v 20 ml 45 % roztoku etylalkoholu a necháno míchat min. 20 hodin. Roztok byl po rozmíchání nadávkován na hydrofobizované sklo o hodnotě smáčivosti demi vodou 61° (+/- 2°) a usušen v uzavřeném prostoru odpařením rozpouštědla při teplotě 30°C po dobu 4 hodin. Po usušení byla folie zhodnocena, sejmuta z podložky a charakterizována. Tloušťka takto připraveného filmu byla stanovena na přibližně 8 pm.
Příklad 5. Příprava filmu na bázi palmitoyl derivátu hyaluronanu sodného
Navážka 100 mg palmitoyl derivátu hyaluronanu sodného o stupni substituce 35% a molekulové hmotnosti 0,83 x 105 g/mol bylo rozpuštěna v 20 ml 25 % roztoku etylaikoholu a necháno míchat min. 20 hodin. Roztok byl po rozmíchání nadávkován na polystyrénovou podložku o hodnotě smáčivosti demi vodou 102° (+/- 4°) a usušen v uzavřeném prostoru, v teplotním gradientu při teplotě spodní desky 50°C a teplotě horní desky 20°C po dobu 12 hodin. Po usušení byla folie zhodnocena, sejmuta z podložky a charakterizována. Tloušťka takto připraveného filmu byla stanovena na přibližně 15 μηι.
Příklad 6. Příprava filmu na bázi erukoyl derivátu hyaluronanu sodného
Navážka 100 mg erukoyl derivátu hyaluronanu sodného o stupni substituce 160 % a molekulové hmotnosti 2,04 x 105 g/mol byla rozpuštěna v 20 ml 60% roztoku isopropylalkoholu a nechána míchat min. 20 hodin. Roztok byl po rozmíchání nadávkován na polypropylenovou podložku o hodnotě smáčivosti demi vodou 105° (+/- 2°) a usušen v uzavřeném prostoru odpařením rozpouštědla při teplotě 50 °C 3 hodin. Po usušení byla folie zhodnocena, sejmuta z podložky a charakterizována. Tloušťka takto připraveného filmu byla stanovena na přibližně 15 pm.
Příklad 7. Příprava filmu na bázi erukoyl derivátu hyaluronanu sodného
Navážka 100 mg erukoyl derivátu hyaluronanu sodného o stupni substituce 8% a molekulové hmotnosti 6,4 x 105 g/mol byla rozpuštěna ve 20 ml 30% roztoku isopropylalkoholu a nechána míchat min. 20 hodin. Roztok byl po rozmíchání nadávkován na hydrofobizované sklo o hodnotě smáčivosti demi vodou 61° (+/-2°) a usušen v uzavřeném prostoru, v teplotním gradientu při teplotě spodní desky 50°C a teplotě horní desky 20°C po dobu 12 hodin. Po usušení byla folie zhodnocena, sejmuta z podložky a charakterizována. Tloušťka takto připraveného filmu byla stanovena na přibližně 15 pm.
Příklad 8. Příprava filmu na bázi lauroyl derivátu hyaluronanu sodného
Navážka 100 mg lauroyl derivátu hyaluronanu o stupni substituce 90% a molekulové hmotnosti 1,88 x 105 g/mol byla rozpuštěna v 20 ml 50% isopropylalkoholu a ponechána míchat po dobu min. 20 hodin. Roztok byl po rozmíchání nadávkován na hydrofobizované sklo o hodnotě smáčivosti demi vodou 61° (+/- 2°) a usušen v uzavřeném prostoru odpařením rozpouštědla při teplotě 20°C po dobu 6 hodin. Po usušení byla folie zhodnocena, sejmuta z podložky a charakterizována. Tloušťka takto připraveného filmu byla stanovena na přibližně 15 pm.
Příklad 9. Příprava filmu na bázi oleyl derivátu hyaluronanu sodného
Navážka 100 mg oleyl derivátu hyaluronanu sodného o stupni substituce 20% a molekulové hmotnosti 2,8 x 105 g/mol byla rozpuštěna v 20 ml 50% isopropylalkoholu a ponechána míchat po dobu min. 20 hodin. Roztok byl po rozmíchání nadávkován na polyvinylchloridovou podložku o hodnotě smáčivosti demi voda 95° (+/- 5°) a usušen v uzavřeném prostoru, v teplotním gradientu při teplotě spodní desky 50°C a teplotě horní desky 20°C po dobu 6 hodin. Po usušení byla folie zhodnocena, sejmuta z podložky a charakterizována. Tloušťka takto připraveného filmu byla stanovena na přibližně 15 pm.
Příklad 10. Příprava filmu na bázi oleyl derivátu hyaluronanu sodného
Navážka 300 mg oleyl derivátu hyaluronanu sodného o stupni substituce 17% a molekulové hmotnosti 0,83 x 105 g/mol byla rozpuštěna v 20 ml 30% isopropylalkoholu a ponechána míchat po dobu min. 48 hodin. Roztok byl po rozmíchání nadávkován na hydrofobizované sklo o hodnotě smáčivosti demi vodou 57° (+/- 3°) a usušen v uzavřeném prostoru, v teplotním gradientu při teplotě spodní desky 50°C a teplotě horní desky 20°C po dobu 12 hodin. Po usušení byla folie zhodnocena, sejmuta z podložky a charakterizována. Tloušťka folie se pohybovala okolo 40 pm.
Příklad 11. Příprava filmu na bázi oleyl derivátu hyaluronanu sodného
Navážka 300 mg oleyl derivátu hyaluronanu sodného o stupni substituce 17% a molekulové hmotnosti 0,83 x 105 g/mol byla rozpuštěna v 20 ml 30% isopropylalkoholu a ponechána míchat po dobu min. 20 hodin. Roztok byl po rozmíchání nadávkován na hydrofobizované sklo o hodnotě smáčivosti demi vodou 107° (+/- 1°) a usušen v uzavřeném prostoru, v teplotním gradientu při teplotě spodní desky 50°C a teplotě horní desky 20°C po dobu 12 hodin. Po usušení byla folie zhodnocena, sejmuta z podložky a charakterizována. Tloušťka folie se pohybovala okolo 40 pm.
Příklad 12. Příprava filmu na bázi kaprilyl (C10) derivátu hyaluronanu sodného
Navážka 100 mg kaprilyl (C10) derivátu hyaluronanu sodného o stupni substituce 87% a molekulové hmotnosti 2,50 x 105 g/mol byla rozpuštěna v 20 ml 50% etylalkoholu a ponechána míchat po dobu min. 20 hodin. Roztok byl po rozmíchání nadávkován na hydrofobizované sklo o hodntě smáčivosti demi vodou 61° (+/- 2°) a usušen v uzavřeném prostoru, v teplotním gradientu při teplotě spodní desky 60°C a teplotě horní desky 40°C po dobu 10 hodin. Po usušení byla folie zhodnocena, sejmuta z podložky a charakterizována. Tloušťka takto připraveného filmu se pohybovala okolo 15pm, sušina pak byla stanovena na hodnotu okolo 92%. Botnavost takového filmu byla stanovena na více než 100% (měřena změna plochy filmu) v rovnovážném stavu.
Příklad 13. Příprava filmu na bázi behenoyl derivátu hyaluronanu sodného
Navážka 100 mg behenoyl hyaluronanu o stupni substituce 7% a molekulové hmotnosti 6,4 x 105 g/mol byla rozpuštěna v 20 ml 50% roztoku isopropylalkoholu a nechána míchat min. 20 hodin. Roztok byl po rozmíchání nadávkován na polypropylenovou podložku o hodnotě smáčivosti demi vodou 105° (+/- 2°) a usušen v uzavřeném prostoru, v teplotním gradientu při teplotě spodní desky 50°C a teplotě horní desky 20°C po dobu 6 hodin. Po usušení byla folie zhodnocena a sejmuta z podložky a charakterizována. Tloušťka filmu byla stanovena na 15 pm.
Příklad 14. Příprava filmu na bázi behenoyl derivátu hyaluronanu sodného
Navážka 100 mg behenoyl hyaluronanu o stupni substituce 11% a molekulové hmotnosti 1,15 x 10? e/mol byla rozpuštěna v 20 ml 50% roztoku isopropylalkoholu a nechána míchat min. 20 hodin. Roztok byl po rozmíchání nadávkován na hydrofobizované sklo o hodnotě smáčivosti demi vodou 61° (+/- 2°) a usušen v uzavřeném prostoru, v teplotním gradientu při teplotě spodní desky 50°C a teplotě horní desky 20°C po dobu 7 hodin. Po usušení byla folie zhodnocena a sejmuta z podložky a charakterizována. Tlouštka filmu byla stanovena na 15 pm.
Příklad 15. Příprava filmu na bázi oleyl derivátu hyaluronanu sodného
Navážka 100 mg oleyl derivátu hyaluronanu sodného o stupni substituce 15% a molekulové hmotnosti 2,8 x 105 g/mol byla rozpuštěna v 20 ml 50% isopropylalkoholu a ponechána míchat po dobu min. 48 hodin. Roztok byl po rozmíchání nadávkován na hydrofobizované sklo o hodnotě smáčivosti demi vodou 61° (+/- 2°) a usušen v uzavřeném prostoru, v teplotním gradientu při teplotě spodní desky 50°C a teplotě horní desky 20 C po dobu 12 hodin. Po usušení byla folie zhodnocena, sejmuta z podložky a charakterizována. Tloušťka folie se pohybovala okolo 15 pm.
Příklad 16. Příprava filmu na bázi palmitoyl derivátu hyaluronanu sodného
Navážka 100 mg palmitoyl derivátu hyaluronanu sodného o stupni substituce 34% a molekulové hmotnosti 2,67 x 105 g/mol bylo rozpuštěna v 20 ml 50 % roztoku etylalkoholu a necháno míchat min. 48 hodin. Roztok byl po rozmíchání nadávkován na hydrofobizované sklo o hodnotě smáčivosti demi vodou 61° (+/- 2°) a usušen v uzavřeném prostoru, v teplotním gradientu při teplotě spodní desky 50°C a teplotě horní desky 20°C po dobu 12 hodin. Po usušení byla folie zhodnocena, sejmuta z podložky a charakterizována. Tloušťka takto připraveného filmu byla stanovena na přibližně 15 pm.
Příklad 17. Příprava filmu na bázi palmitoyl derivátu hyaluronanu sodného
Navážka 100 mg palmitoyl derivátu hyaluronanu sodného o stupni substituce 60% a molekulové hmotnosti 2,8 x 10 g/mol bylo rozpuštěna v 20 ml 50 % roztoku etylalkoholu a necháno míchat min. 48 hodin. Roztok byl po rozmíchání nadávkován na hydrofobizované sklo o hodnotě smáčivosti demi vodou 61° (+/- 2°) a usušen v uzavřeném prostoru, v teplotním gradientu při teplotě spodní desky 50°C a teplotě horní desky 20°C po dobu 12 hodin. Po usušení byla folie zhodnocena, sejmuta z podložky a charakterizována. Tloušťka takto připraveného filmu byla stanovena na přibližně 15 pm.
Příklad 18. Příprava filmu na bázi palmitoyl derivátu hyaluronanu sodného
Navážka 100 mg palmitoyl derivátu hyaluronanu sodného o stupni substituce 31 % a molekulové hmotnosti 2,7 x 105 g/mol byla rozpuštěna v 20 ml 50 % roztoku isopropylakoholu a necháno míchat min. 20 hodin. Roztok byl po rozmíchání nadávkován na hydrofobizované sklo o hodnotě smáčivosti demi vodou 61° (+/- 2°) a usušen v uzavřeném prostoru, v teplotním gradientu při teplotě spodní desky 50°C a teplotě horní desky 20°C po dobu 12 hodin. Po usušení byla folie zhodnocena, sejmuta z podložky a charakterizována. Tloušťka takto připraveného filmu byla stanovena na přibližně 15 pm.
Příklad 19. Příprava filmu na bázi lauroyl derivátu hyaluronanu sodného
Navážka 100 mg lauroyl derivátu hyaluronanu sodného o stupni substituce 58 % a molekulové hmotnosti 1,88 x 105 g/mol byla rozpuštěna v 20 ml 50 % roztoku isopropylalkoholu a necháno míchat min. 48 hodin. Roztok byl po rozmíchání nadávkován na hydrofobizované sklo o hodnotě smáčivosti demi vodou 61° (+/- 2°) a usušen v uzavřeném prostoru, v teplotním gradientu při teplotě spodní desky 20°C a teplotě horní desky 10°C po dobu 12 hodin. Po usušení byla folie zhodnocena, sejmuta z podložky a charakterizována. Tloušťka takto připraveného filmu byla stanovena na přibližně 15 pm.
Příklad 20. Porovnání smáčivostipodložky s využitím různých hydrofobizačních činidel Sklo určené k hydrofobizaci bylo nejprve důkladně očištěno tak, aby výsledná smáčivost demi vodou nepřesáhla hodnotu 10°. Následně byla provedena hydrofobizace skel. Pro hydrofobizaci skel byly použity tyto hydrofobizační činidla: chlortrimethylsilan (CTMS), (3aminopropyl)trimetoxysilan (APTMS) a oktadecyltrichlorsilan (OIS). Výsledné hodnoty smáčivosti skel (při koncentraci Činidla 1%) jsou uvedeny v Tabulce 1. Pro CTMS byly vyzkoušeny různé koncentrace činidla v hexanu. Výsledné hodnoty naměřených smáčivosti skel jsou uvedeny v Tabulce 2.
Tabulka 1: smáčivost skel vyjádřená kontaktním úhlem při hydrofobizaci činidlem v koncentraci 1%
Činidlo (1%) Rozpouštědlo KÚ
CTMS hexan cca 70°
APTMS hexan cca 90°
aceton cca 70°
dichlormetan cca 90°
OTS etanol (96%) cca 66°
toluen cca 105°
isopropanol cca 103°
KU znamená kontaktní úhel
Tabulka 2: smáčivost skel vyjádřená kontaktním úhlem při hydrofobizaci různými koncentracemi CTMS rozpuštěném v hexanu
Koncentrace CTMS KÚ
0,10% cca 50°
0,50% cca 60°
1% cca 70°
3-5% <80°
KU znamená kontaktní úhel
Příklad 21. Stanovení rezidua hydrofobizačního činidla ve filmu připraveného dle příkladu 1
Trimethylsilanol byl analyzován jako reziduum trimethylsilylchloridu po jeho reakci s -OH skupinami derivátu HA. Analýza byla provedena na plynovém chromatografů vybaveném headspace samplerem a hmotnostně spektrometrickým detektorem ve formě jednoduchého kvadrupólu. Vzorek filmu připraveného dle příkladu 1 byl rozpuštěn na koncentraci 6 mg/ml do 50 % (obj./obj.) isopropanolu a po rozpuštění bylo do vialky pipetováno 4,75 ml vzorku a 0,25 ml n-butanolu (1 mg/ml), který’ plnil funkci vnitřního standardu. Do 50 % isopropanolu byl také připraven zásobní roztok trimethylsilylchloridu (1 mg/ml), který okamžitě zreagoval na trimethylsilanol. Z tohoto roztoku byla připravena kalibrační řada v rozmezí 0.5 - 15,0 pg/ml, s přídavkem n-butanolu jako vnitřního standardu. V žádném z analyzovaných vzorků folie nebyla potvrzena přítomnost trimetylsilanolu ve vyšší koncentraci než měl první kalibrační bod, tzn., že obsah trimethylsilanolu, ve vzorcích fólií byl nižší než 0,008 % (hmotn./hmotn.).
Příklad 22. Vliv adheze filmu na bázi oleyl derivátu hyaluronanu sodného na jeho povrchový vzhled
Filmy připravené dle příkladu 10 a 11 byly připraveny na dvou sklech o odlišné smáčivosti, a to 57° (+/- 3°) a 107° (+/- 1°). Po usušení byl zhodnocen povrchový vzhled filmu a korelován s adhezí. V případě dobré přilnavosti filmu k podložce je povrch filmu rovný bez povrchových deformací. Film byl zcela adherován na podložce o nižším kontaktním úhlu, na podložce s vyšším kontaktním úhlem byl částečně sloupnutý a deformovaný. Výsledek je dokumentován na Obr. la, 1b, 1c. Z obrázku vyplývá, že pokud je film zcela naadherován na povrchu, je po sloupnutí rovný bez povrchových deformací. Naopak v případě nedokonalé adheze je film více či méně deformován.
Příklad 23. Vliv adheze filmu na bázi palmitoyl derivátu hyaluronanu sodného na jeho povrchový vzhled
Byl zhodnocen film na palmitoyl derivátu hyaluronanu sodného připraveného dle příkladu 2 na skle se smáčivosti 61 (+/- 2°). Po usušení byl zhodnocena adheze a vzhled filmu. Film byl dobře naadherován a povrch byl zcela rovný bez deformací. Výsledek adheze je dokumentován na Obr. 2.
Příklad 24. Stanovení zbytkového isopropylalkoholu ve filmech
Ve filmech připravených dle Příkladů 1. 8 a 12 byla stanovena zbytková koncentrace organického rozpouštědla - isopropylalkoholu technikou plynové chromatografie. Podstatou stanovení rozpouštědla je jeho převedení do plynné fáze za zvýšené teploty, jeho separace na plynovém chromatografu a následná detekce plamenově ionizačním detektorem. Koncentrace isopropanolu ve filmu byla prováděna vždy stanovením na dvou vzorcích a byla odečítána z kalibrační křivky. Navážka vzorků byla vždy 50 mg. Po provedení analýzy byla koncentrace zbytkového isopropanolu u všech filmů stanovena nižší než nejnižší bod kalibrační křivky a vyjádřena jako < 0.02 % (hmotn./hmotn.). Tato hodnota bezpečně naplňuje požadavky na množství zbytkových rozpouštědel třídy 3 dle EU lékopisu.
Příklad 25. Stanovení hmotnosti - homogenita v ploše
Film připravený dle Příkladu 1 byl rozstříhán na 55 čtverců o ploše 1 cm . Před měřením byly jednotlivé vzorky ponechány v pokojové vlhkosti a teplotě po dobu 5 hodin. Dále pak byly jednotlivé čtverce zváženy na analytických vahách. Výsledky hmotnosti jednotlivých čtverců jsou uvedeny v Tabulce 3. Ze všech hodnot v tabulce byl vypočítán průměr, směrodatná odchylka a variační koeficient. Vypočítané hodnoty: průměr - 2,35 mg, směrodatná odchylka - 0,18 mg, variační koeficient - 7,51%.
Tabulka 3: stanovení hmotnostní homogenity filmu
2,6 2,3 2,4 2,6 2,4 2 2 2,1 2,6 2,1 2,1 2,5
2,5 2,3 2,7 2,6 2,5 2,6 2,0 2,6 2,1 2,5 2,4
2,5 2,2 2,3 2,4 2,3 9 9 2,3 2,6 2,2 2,2 2,3
2,3 2,4 2,2 2,2 2,5 2,7 2,5 2,3 2,3 2,5 2,3
2,1 2,1 2,1 2,3 2,3 2,3 2,4 2,2 2,2 2,3 2,4
Příklad 26. Stanovení tloušťky - homogenita v ploše
Na filmu připraveném dle příkladu 15 byl nakreslen čtverečkovaný rastr o ploše jednoho čtverce 1 cm2 a celkovém počtu Čtverců 35. Na každém čtverci byla změřena tloušťka folie pomocí mechanického tloušťkoměru Mytutoyo VL-50. Měření bylo provedeno ve stabilním prostředí o vlhkosti 50% a teplotě 25 °C. Změřené hodnoty jsou uvedeny v Tabulce 4. Ze všech hodnot v tabulce byl vypočítán průměr, směrodatná odchylka a variační koeficient. Vypočítané hodnoty: průměr - 14,61 pm. směrodatná odchylka - 1,17 pm, variační koeficient - 8,02%.
Tabulka 4: stanovení homogenity tloušťky
16,24 16,65 16,15 15,15 13,83 13,82 14,7
13,93 13,91 13.85 13,73 13,4 13,22 14,25
14,77 13.93 14,11 13,26 12,79 13,53 14,61
16,93 16,15 16,63 15,72 15,6 15,01 16,2
14,68 14,9 15 14,7 13,72 12,47 13,76
Příklad 27. Srovnání botnavostí filmů připravených z palmitoyl hyaluronanu sodného s různým stupněm substituce v 0,lMfosfi pufru, pH 7,4
Filmy připravené dle Příkladů 2, 16 a 17 byly po přípravě nastříhány na přesně definované čtverce, zváženy, změřeny a vloženy do O,1M PBS, pH 7,4. Při 37°C byla sledována bobtnavost folií, každý pokus byl dělán v trojím opakování. Vyhodnocována byla změna hmotnosti a rozmění filmu - výsledky jsou uvedeny v Tabulce 5. Z této Tabulky je patrné, že film bobtná tím více, čím nižší je stupeň substituce, v případě vysokých stupňů substituce lze dosáhnout malé změny plochy filmu, což může být v řadě aplikací velmi důležité.
Tabulka 5: botnavost filmů z palmitoyl derivátů s různým stupněm substituce
změna plochy po 5 dnech v O,1M PBS, pH 7,4 o (%)
Film připravený dle příkladu 16 69
Film připravený dle příkladu 17 32
Film připravený dle příkladu 2 15
Příklad 28. Degradace folií připravených z palmitoyl derivátu hyaluronanu sodného v kondiciovaném médiu - porovnání dvou stupňů substituce
Filmy připravené dle příkladů 2 a 18 byly po přípravě nastříhány na přesně definované čtverce, zváženy, změřeny a vloženy do kondiciovaného média. Veškerá příprava probíhala v laminárním boxu, aby nedošlo ke kontaminaci a nežádoucím reakcím media. Při 37°C byla po stanovených intervalech kontrolována změna plochy filmu a jeho vizuální vzhled, což jsou vlastnosti, které lze spojit s degradací. Kondiciované medium bylo v pravidelných intervalech obměňováno, experiment byl dělán v trojím provedení. Film připravený dle Příkladu 2 se začal degradovat výrazněji později než film připravený dle Příkladu 18. Výsledky jsou uvedeny na Obr. 3 a,b, kde je znázorněn vzhled filmu po 3 týdnech degradace v kondiciovaném médiu. V
Tabulce 6 je dokumentována změna plochy po jednom týdnu degradace pro film dle Příkladu 2 i 18 a po třech týdnech pro film z Příkladu 2 (film dle příkladu 18 byl po třech týdnech degradován na kusy až rozpuštěn). Z výsledku je patrné, že rychlost degradace je velmi závislá na stupni substituce hyaluronanu sodného acylovým řetězcem. V případě vysoce substituovaného filmu připraveného dle Příkladu 2 probíhala degradace v řádu několika měsíců.
Tabulka 6: změna plochy filmu po 1 týdnu v kondiciovaném médiu - porovnání dvou stupňů substituce
změna plochy filmu po 1 týdnu v kondiciovaném médiu o (%)
Film připravený dle příkladu 2 13
Film připravený dle příkladu 18 125
Příklad 29. Degradace filmu na bázi palmitoyl derivátu hyaluronanu sodného
Vzorky filmu připraveného dle příkladu 2 byly degradovány v 0,01 M octanovém pufru s přídavkem 0.03M NaCl s pH = 5,3 pomocí enzymu bovinní testikulární hyaluronidáza (Finepharm). Na degradaci bylo použito 300 IU enzymu na 1 mg filmu. Kromě standardní enzymatické hydrolýzy byla provedena i hydrolýza v přítomnosti BSA (40 mg na 5 mg folie). Degradace probíhala při 37°C a vzorky byly odebírané na analýzu po 24. 48, 72, 96, 120 a 144 hodinách. Analýza vzorků byla prováděna na HPLC systému Alliance (Waters) dle vnitřního standardního operačního postupu. Z výsledků vyplynulo, že folie nedegraduje bez přítomnosti BSA vůbec. I po 144 hodinách nebylo možné detekovat žádné oligosacharidy hyaluronanu. V přítomnosti BSA degradace probíhá, avšak velmi pomalu. V odběrech po 24, 48 a 72 hodinách je možné ještě stále pozorovat nezdegradované kousky filmu. V delších časových intervalech se film v roztoku rozpustil. Výsledky degradace filmu po 72 hodinách jsou uvedeny na Obr. 4.
Příklad 30. Degradace erukoyl derivátu hyaluronanu sodného
Vzorky derivátu HA s navázaným erukoylem o stupni substituce 100% a molekulové hmotnosti 204 kDa byly degradovány v 0,01M octanovém pufru s přídavkem 0,03M NaCl s pH = 5,3 pomocí enzymu bovinní testikulární hyaluronidáza (Finepharm). Na degradaci bylo použito 300 IU enzymu na 1 mg derivátu. Kromě standardní enzymatické hydrolýzy byla provedena i hydrolýza v přítomnosti BSA (40 mg na 5 mg folie). Degradace probíhala při 37°C a vzorky byly odebírané na analýzu po 24. 48, 72, 96, 120 a 144 hodinách. Analýza vzorků byla prováděna na HPLC systému Alliance (Waters) dle vnitřního standardního operačního postupu. Z výsledků vyplynulo, že derivát nedegraduje bez přítomnosti BSA vůbec. 1 po 144 hodinách nebylo možné detekovat žádné oligosacharidy hyaluronanu. V přítomnosti BSA degradace probíhá, avšak velmi pomalu. Výsledky degradace derivátu po 72 hodinách jsou uvedeny na Obr. 5.
Příklad 31. Charakterizace filmů pomocí Youngova modulu pevnosti
U filmů připravených dle příkladů 10, 15, 16 a 19 byl stanoven Youngův modul pevnosti v suchém stavu. Filmy byly testovány na mechanické vlastnosti pomocí jednostupňového trhacího stroje INSTRON3343 se 100N hlavou. Youngův modul byl vypočítán z průměrné hodnoty alespoň 9 platných měření. Z Tabulky 7 lze vidět, že Youngův modul suchých, nehydratovaných filmů nezávisí na molekulové hmotnosti, substituentu nebo stupni substituce.
Tabulka 7: Youngův modul pevnosti filmů
Youngův modul (MPa)
Film připravený dle Příkladu 10 2772 (+/- cca 10%)
Film připravený dle Příkladu 15 2409(+/-cca 10%)
Film připravený dle Příkladu 16 1800 (+/- cca 10%)
Film připravený dle Příkladu 19 2636 (+/- cca 10%)
Příklad 32. Charakterizace morfologie povrchu folií a stanovení RMS pomocí AFM
Film připravený dle Příkladu 16 byl charakterizován pomocí metody Atomic force microscopy (AFM), přičemž byl sledován především vzhled a charakter povrchu. Byla stanovována především hrubost RMS - root mean square roughness. Bylo zjištěno, že ze strany podložky lze získat velmi hladký povrch, RMS do 2 nm - Obr. 6. Strana filmu, která byla při sušení vystavena vzduchu je vždy hrubší - RMS se pohybuje okolo 54 i více nm.
Příklad 33. Srovnánífilmů sušených v teplotním gradientu a v uzavřeném prostoru
Filmy připravené dle příkladů 8 a 19 byly po usušení vizuálně srovnány. Povrch obou filmů nebyl deformován, ani na jednom z nich se nevytvořila povrchová krusta. Kvalitativně byly oba filmy stejné (vizuální srovnání).
Příklad 34. Viabilita suspenzních buněk THP-1 po 24 a 72hod inkubaci s filmem připraveným dle příkladu 1 na bázi palmitoyl derivátu hyaluronanu sodného
Buněčná linie THP-1 byla kultivována v médiu s přídavkem 10% fetálního bovinního séra. Po dosažení dostatečné hustoty a viability (změřené automatickým počítadlem buněk ČASY TT, Roche) byly buňky nasazeny do šesti jamkového panelu do 2 ml 10% média. K buňkám byl přidán testovaný film v množství 1 a 0,5 mg/ ml. Po 24 a 72 hod inkubaci byly buňky promyty a byla detekována jejich viabilita a výskyt buněčné smrti pomocí detekčního kitu ApoFlowEx® FITC Kit (Exbio) na průtokovém cytometru MACSQuant® (Miltenyi Biotec). Buňky byly vyhodnoceny jako viabilní v případě, že nebyla detekována fluorescence propidium jodidu. Na obrázku 7 lze pozorovat zanedbatelné snížení viability po 24 hod inkubaci, které již nebylo pozorováno po 72 hod. Testovaný film je tedy hodnocen v těchto koncentracích jako necytotoxický.
Příklad 35. Viabilita suspenzních buněk THP-1 po 24 a 72hod inkubaci s filmem připraveným dle příkladu 1 na bázi palmitoyl derivátu hyaluronanu sodného
Buněčná linie THP-1 byla kultivována v médiu s přídavkem 10% fetálního bovinního séra. Po dosažení dostatečné hustoty a viability (změřené automatickým počítadlem buněk ČASY TT, Roche) byly buňky nasazeny do ójamkového panelu do 2 ml 10% média. K buňkám byl přidán testovaný film v množství 1 a 0,5 mg/ ml. Po 24 a 72 hod inkubaci byly buňky promyty a byla detekována jejich viabilita a výskyt buněčné smrti pomocí detekčního kitu ApoFlowEx® FITC Kit (Exbio) na průtokovém cytometru MACSQuant® (Miltenyi Biotec). Hodnocení přítomnosti buněčné smrti (apoptózy a nekrózy) byly provedeno de doporučení výrobce kitu. Ve stručnosti: populace jednotlivých buněk byla rozdělena na základě intenzity fluorescence propidium jodidu a Annexin V-FITC do 3 skupin: negativní v obou kanálech (buňky živé), pozitivní pouze v kanálu pro Annexin V-FITC (buňky apoptotické) a buňky pozitivní pro kanál propidium jodid +/- Annexin V-FITC (buňky nekrotické).
Z obrázku 8 a 9 vyplývá, že po 24 i 72 hod nedochází k většímu vzrůstu podílu apoptotických či nekrotický buněk v kultuře a testovaný materiál lze tedy hodnotit jako nevyvolávající buněčnou smrt.
Příklad 36. Kontaktní inhihice růstu myších 3T3 Swiss fibroblast ů
Myší fíbroblastová linie 3T3 Swiss byla kultivována v médiu s přídavkem 10% fetálního bovinního séra. V exponenciální fázi růstu byly buňky nasazeny do šestijamkového panelu do 2 ml 10% média. Po dosažení konfluence byla přidána testovaná fólie o ploše 1 cm2, která byla zatížena silikonovým sterilním kroužkem, aby nedošlo k výraznému pohybu fólie na monokultuře. Současně byly inkubovány kontrolní buňky bez ovlivnění a pouze se silikonovým kroužkem. Po 72 hod inkubaci byly odstraněny vzorky fólie i silikonové kroužky, buňky byly promyty PBS a fixovány 4% formaldehydem (10 min/pokojová teplota). Po promytí deionizovanou vodou byly buňky obarveny krystalovou violetí (0.1% ve vodě, 30 min/pokojová teplota) a po odmytí barvy byla plocha buněk vyfocena a pozorována pod světelným mikroskopem. Hodnocena byla plocha buněk pod testovaným materiálem, rozsah poškození buněk a velikost poškozené zóny.
Makro fotografie (Obrázek 10) jasně ukazují, že zóna poškození monovrstvy je ohraničená a došlo pouze k poškození buněk přímo pod fólií, s největší pravděpodobností mírným třením, na detailech ze světelného mikroskopu lze též pozorovat, že buňky měly tendenci znovu pod fólii prorůstat. Nebylo též pozorováno poškození ani změny v morfologii buněk na hranici testované fólie. Lze tedy předpokládat, že materiál nevykazuje kontaktní inhibici růstu buněk.
Příklad 37. Buněčné antiadhezní vlastnosti filmu
Filmy připravené dle Příkladů 2 a 17 (deriváty se dvěma různými stupni substituce) byly sterilně nastříhány na části o rozměrech lem2. Tyto části byly umístěny do ójamkového kultivačního panelu lícem či rubem nahoru. Následně byly zatíženy sterilními silikonovými kroužky a na takto připravené vzorky bylo pipetováno kultivační médium (2ml) pro primární lidské fíbroblasty (NHDF) s obsahem 10% fetálního bovinního séra. Mezitím byla připravena suspenze NHDF a ta byla pipetována do středu silikonového kroužku na povrch filmu v množství 100 000 buněk/vzorek. Vzorky s buňkami byly inkubovány 72 hod a kontrolovány v 24hodinových intervalech pod světelným mikroskopem. Jako pozitivní kontrola byl použit polystyren upravený pro buněčné kultury s dobrými adhezními vlastnostmi. Po ukončení inkubace byly vyjmuty silikonové kroužky, filmy i s buňkami zafixovány 4% formaldehydem po dobu 10 minut a následně obarveny 1% krystalovou violetí ve vodě (10 min). Po důkladném odmytí nenavázané krystalové violeti (2x 5min oplach destilovanou vodou) byly vzorky vyfotografovány s použitím invertovaného mikroskopu Nikon se zvětšením lOOx. Na obrázku CTRL lze vidět téměř konfluentní vrstvu buněk. Na snímcích filmů (A-D) je patrná určitá struktura, pravděpodobně vzniklá dlouhou inkubací v médiu a zviditelněná krystalovou violetí. Na filmech ale nejsou přítomné žádné buňky. Lze tedy konstatovat, že filmy jsou v tomto systému zcela neadherentní a adhezi nepodpořila ani přítomnost proteinů v kultivačním médiu.
Příklad 38. Příprava filmu s octenidin dihydrochloridem
Ve 20 ml 50% isopropylalkoholu bylo rozmícháno 4.36 pl octenidin dihydrochloridu (dávkováno ze zásobního roztoku 10% octenidin dihydrochloridu v etanolu, před použitím protřepáno). Po důkladném rozmíchání byla k roztoku přidána navážka 100 mg derivátu palmitoyl hyaluronanu o stupni substituce 57% a molekulové hmotnosti 2,67x 10’ g/mol. Roztok byl ponechán míchat po dobu 72 hodin a po rozmíchání byl nadávkován na hydrofobizované sklo o hodnotě smáčivosti 65 (+/- 3°) a usušen v uzavřeném prostoru, v teplotním gradientu při teplotě spodní desky 50°C a teplotě horní desky 20°C po dobu 6 hodin. Po usušení byla folie zhodnocena a sejmuta z podložky a charakterizována. Tloušťka filmu byla stanovena na 15 pm.

Claims (18)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Samonosný film na bázi esteru kyseliny hyaluronové, vyznačující se tím, že obsahuje CioC22-acylovaný derivát kyseliny hyaluronové podle obecného vzorce (I)
    (I), kde R je H+ nebo Na+, a kde R1 je H nebo -C(=O)CxHy, kde x je celé číslo v rozmezí 5 až 21 a y je celé číslo v rozmezí 11 až 43 a CxHy je lineární nebo rozvětvený, nasycený nebo nenasycený řetězec C9-C21, přičemž alespoň v jedné opakující se jednotce jeden nebo více R1 je tvořen -C(=O)CxHy a kde n je v rozmezí 12 až 4000.
  2. 2. Film podle nároku 1, vyznačující se tím, že obsahuje palmitoyl hyaluronan.
  3. 3. Film podle nároku 1 anebo nároku 2, vyznačující se tím, že Cio-C22-acylovaný derivát kyseliny hyaluronové má molekulovou hmotnost 1 x 105 až 1 x 106 g/mol, s výhodou 1 x 105 až 5x105 g/mol, výhodněji 2 x 105 až 3 x 105 g/mol.
  4. 4. Film podle kteréhokoliv předcházejících z nároků 1 až 3, vyznačující se tím, že C10-C22acylovaný derivát kyseliny hyaluronové má stupeň substituce v rozsahu 15 až 160%, s výhodou 50 až 100%, výhodněji 80 až 100%.
  5. 5. Film podle kteréhokoliv předcházejících z nároků 1 až 4, vyznačující se tím, že má tloušťku v rozsahu 2 až 100 pm, s výhodou v rozsahu 5 až 25 pm.
  6. 6. Film podle kteréhokoliv předcházejících z nároků 1 až 5, vyznačující se tím, že povrchová hrubost RMS alespoň jedné z ploch filmuje v rozsahu 0,5 až 100 nm, s výhodou v rozsahu 0,5 až 2 nm.
  7. 7. Film podle kteréhokoliv předcházejících z nároků 1 až 6, vyznačující se tím, že dále obsahuje biologicky aktivní látku vybranou ze skupiny zahrnující farmaceuticky aktivní látky a kosmeticky aktivní látky, s výhodou vitamíny, léčiva, s výhodou cytostatika, dále steroidy, fytoextrakty, fytokomplexy nebo fytoaktivní látky.
  8. 8. Způsob přípravy filmu podle kteréhokoliv z předcházejících nároků 1 až 7, vyznačující se tím, že se připraví roztok obsahující C10-C22 acylovaný derivát kyseliny hyaluronové podle obecného vzorce (I) ve směsi vody a Ci-Cý alkoholu, s výhodou propan-2-olu, který se míchá, načež se nanese na podložku a suší se v uzavřeném prostoru.
  9. 9. Způsob přípravy filmu podle nároku 8, vyznačující se tím, že množství C10-C22 acylovaného derivátu kyseliny hyaluronové v roztoku je v rozsahu 0,5 až 3 hmotn.%, obsah Ci-Cg alkoholu, s výhodou propan-2-olu, je v rozsahu 25 až 55 obj.% a obsah vody v roztoku je v rozmezí 45 až 75 obj.%.
  10. 10. Způsob přípravy filmu podle nároku 8 nebo nároku 9, vyznačující se tím, že se míchá po dobu 20 až 72 hodin, s výhodou 20 až 48 hodin.
  11. 11. Způsob přípravy filmu podle kteréhokoliv z nároků 8 až 10, vyznačující se tím, že se suší při teplotě v rozsahu 20 °C až 50 °C, s výhodou 30 °C až 40 °C; po dobu 3 až 6 hodin, s výhodou 4 až 5 hodin.
  12. 12. Způsob přípravy filmu podle kteréhokoliv z nároků 8 až 10, vyznačující se tím, že se suší v teplotním gradientu, kde se spodní plocha filmu spočívající na podložce zahřívá na teplotu, která je alespoň o 1 °C vyšší, než je teplota, na kterou se zahřívá nebo chladí protilehlá, horní plocha filmu.
  13. 13. Způsob přípravy filmu podle nároku 12, vyznačující se tím, že se teplota spodní plochy filmu spočívající na podložce zahřívá na teplotu v rozsahu 20°C až 60°C a protilehlá horní plocha filmu se zahřívá nebo chladí na teplotu v rozsahu 10°C až 59°C.
  14. 14. Způsob přípravy filmu podle nároku 12 nebo nároku 13, vyznačující se tím, že se roztok v teplotním gradientu suší podobu 6 až 12 hodin, s výhodou 6 hodin.
  15. 15. Způsob přípravy filmu podle kteréhokoliv z nároků 8 až 14, vyznačující se tím, že se do roztoku vmíchá biologicky aktivní látka vybraná ze skupiny zahrnující farmaceuticky a kosmeticky aktivní látky, s výhodou vitamíny, léčiva jako cytostatika, steroidy, dále fýtoextrakty, fýtokomplexy nebo fytoaktivní látky.
  16. 16. Způsob přípravy filmu podle kteréhokoliv z nároků 8 až 15, vyznačující se tím, že podložkou je polymer vybraný ze skupiny obsahující polymery vybrané ze skupiny obsahující polyvinylalkohol, polypropylen, polyethylen, polyoxymetylen nebo polystyren, sklo nebo hydrofobizované sklo, přičemž kontaktní úhel smáčení povrchu podložky demi vodou je v rozsahu 30° až 120°, s výhodou 50° až 70°.
  17. 17. Film podle kteréhokoliv z nároků 1 až 7 pro použití v medicínských aplikacích nebo biotechnologických aplikacích.
  18. 18. Film podle kteréhokoliv z nároků 17 pro použití ke konstrukci zdravotnického prostředku, s výhodou antiadhezní bariéry.
CZ2015166A 2015-03-09 2015-03-09 Samonosný, biodegradabilní film na bázi hydrofobizované kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy a použití CZ309295B6 (cs)

Priority Applications (12)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ2015166A CZ309295B6 (cs) 2015-03-09 2015-03-09 Samonosný, biodegradabilní film na bázi hydrofobizované kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy a použití
KR1020177026609A KR102561551B1 (ko) 2015-03-09 2016-03-09 소수성화된 히알루론산을 주성분으로 하는 자립형 생분해성 필름, 그 제조 방법 및 그 용도
HUE16720697A HUE055009T2 (hu) 2015-03-09 2016-03-09 Önhordó, biológiailag lebomló, hidrofóbizált hialuronsavon alapuló film, eljárás elõállítására és alkalmazása
PCT/CZ2016/000027 WO2016141903A1 (en) 2015-03-09 2016-03-09 Self-supporting, biodegradable film based on hydrophobized hyaluronic acid, method of preparation and use thereof
US15/556,370 US10689464B2 (en) 2015-03-09 2016-03-09 Self-supporting, biodegradable film based on hydrophobized hyaluronic acid, method of preparation and use thereof
DK16720697.8T DK3268414T3 (da) 2015-03-09 2016-03-09 Selvbærende bionedbrydelig film baseret på hydrofobiseret hyaluronsyre, fremgangsmåde til fremstilling og anvendelse deraf
BR112017018431-1A BR112017018431B1 (pt) 2015-03-09 2016-03-09 Película a base de um éster de ácido hialurônico, método de preparação da película e uso de película
ES16720697T ES2877528T3 (es) 2015-03-09 2016-03-09 Película biodegradable autoportante a base de ácido hialurónico hidrofobizado, procedimiento de preparación y utilización de la misma
RU2017130206A RU2712174C2 (ru) 2015-03-09 2016-03-09 Самоподдерживающая биоразлагаемая пленка на основе гидрофобизованной гиалуроновой кислоты, способ ее получения и применение
PL16720697T PL3268414T3 (pl) 2015-03-09 2016-03-09 Samonośna, biodegradowalna folia na bazie hydrofobizowanego kwasu hiauluronowego, sposób jej przygotowania i stosowania
EP16720697.8A EP3268414B1 (en) 2015-03-09 2016-03-09 Self-supporting, biodegradable film based on hydrophobized hyaluronic acid, method of preparation and use thereof
JP2017547385A JP6796075B2 (ja) 2015-03-09 2016-03-09 疎水化ヒアルロン酸をベースとする生分解性自己支持性フィルム，その調製法及びその使用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ2015166A CZ309295B6 (cs) 2015-03-09 2015-03-09 Samonosný, biodegradabilní film na bázi hydrofobizované kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy a použití

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ2015166A3 true CZ2015166A3 (cs) 2016-09-21
CZ309295B6 CZ309295B6 (cs) 2022-08-10

Family

ID=55913412

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ2015166A CZ309295B6 (cs) 2015-03-09 2015-03-09 Samonosný, biodegradabilní film na bázi hydrofobizované kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy a použití

Country Status (12)

Country Link
US (1) US10689464B2 (cs)
EP (1) EP3268414B1 (cs)
JP (1) JP6796075B2 (cs)
KR (1) KR102561551B1 (cs)
BR (1) BR112017018431B1 (cs)
CZ (1) CZ309295B6 (cs)
DK (1) DK3268414T3 (cs)
ES (1) ES2877528T3 (cs)
HU (1) HUE055009T2 (cs)
PL (1) PL3268414T3 (cs)
RU (1) RU2712174C2 (cs)
WO (1) WO2016141903A1 (cs)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11425907B2 (en) 2018-08-23 2022-08-30 Contipro A.S. Composition comprising an iodide and a derivative of hyaluronic acid with an oxidative effect, method of preparation thereof and use thereof

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CZ2016826A3 (cs) 2016-12-22 2018-07-04 Contipro A.S. Léčivý prostředek s nosičem na bázi hyaluronanu a/nebo jeho derivátů, způsob výroby a použití
KR20190138907A (ko) * 2018-06-07 2019-12-17 주식회사 에스엔비아 히알루론산 필름의 제조방법
CZ2018426A3 (cs) * 2018-08-23 2019-10-16 Contipro A.S. Chlorovaný derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy, kompozice, která jej obsahuje, a použití
KR102372213B1 (ko) 2019-09-09 2022-03-08 한국화학연구원 히알루론산 또는 그의 염 및 폴리페놀 화합물을 포함하는 수분해성 필름
CZ308980B6 (cs) * 2020-01-24 2021-11-03 Contipro A.S. Dentální přípravek z vláken na bázi kyseliny hyaluronové s regulovatelnou biodegradabilitou
JP7413872B2 (ja) 2020-03-24 2024-01-16 住友電装株式会社 電気接続箱
US12109540B1 (en) 2024-05-08 2024-10-08 Imam Mohammad Ibn Saud Islamic University Multifunctional diselenide-based polyimide membrane for gas separation and purification

Family Cites Families (201)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3075527A (en) 1960-06-02 1963-01-29 Chemway Corp Sterile medicated strips
US3720662A (en) 1971-09-13 1973-03-13 Nat Starch Chem Corp Preparation of starch esters
US3728223A (en) 1971-10-08 1973-04-17 Amano Pharma Co Ltd Production of hyaluronidase from a strain of streptomyces
GB1527592A (en) 1974-08-05 1978-10-04 Ici Ltd Wound dressing
CH628088A5 (en) 1975-09-17 1982-02-15 Dresden Arzneimittel Process for obtaining streptococcal metabolic products
US4205025A (en) 1975-12-22 1980-05-27 Champion International Corporation Synthetic polymeric fibrids, fibrid products and process for their production
JPS6033474B2 (ja) 1978-05-11 1985-08-02 藤沢薬品工業株式会社 新規なヒアルロニダ−ゼｂｍｐ−８２３１およびその製造法
US4716224A (en) 1984-05-04 1987-12-29 Seikagaku Kogyo Co. Ltd. Crosslinked hyaluronic acid and its use
US4713448A (en) 1985-03-12 1987-12-15 Biomatrix, Inc. Chemically modified hyaluronic acid preparation and method of recovery thereof from animal tissues
US4851521A (en) 1985-07-08 1989-07-25 Fidia, S.P.A. Esters of hyaluronic acid
GB8519416D0 (en) 1985-08-01 1985-09-04 Unilever Plc Oligosaccharides
JPS62104579A (ja) 1985-10-30 1987-05-15 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd ヒアルロニダ−ゼの製造法
JPH0751064B2 (ja) 1986-08-13 1995-06-05 生化学工業株式会社 新規なヒアルロニダ−ゼｓｄ−６７８およびその製造法
CA1328324C (en) 1987-12-09 1994-04-05 Dow Corning Corporation Precured silicone emulsion
IT1219587B (it) 1988-05-13 1990-05-18 Fidia Farmaceutici Polisaccaridi carbossiilici autoreticolati
JPH0214019A (ja) 1988-06-30 1990-01-18 Tonen Corp 繊維状成形物及びその製造方法
JPH0755961B2 (ja) 1989-04-18 1995-06-14 工業技術院長 新規なヒアルロン酸誘導体及びその製造方法
IT1248666B (it) * 1990-05-30 1995-01-26 Fidia Spa Gel in forma di film autosupportanti altamente idrati, processo per laloro preparazione e impiego nella terapia di lesioni e/o patologie cutanee
US5522879A (en) 1991-11-12 1996-06-04 Ethicon, Inc. Piezoelectric biomedical device
IT1254704B (it) 1991-12-18 1995-10-09 Mini Ricerca Scient Tecnolog Tessuto non tessuto essenzialmente costituito da derivati dell'acido ialuronico
US5824335A (en) 1991-12-18 1998-10-20 Dorigatti; Franco Non-woven fabric material comprising auto-crosslinked hyaluronic acid derivatives
JP2855307B2 (ja) 1992-02-05 1999-02-10 生化学工業株式会社 光反応性グリコサミノグリカン、架橋グリコサミノグリカン及びそれらの製造方法
FR2689131B1 (fr) 1992-03-30 1994-05-20 Oreal Procede de preparation de monoesters majoritairement en position 6' du d-maltose et leur utilisation dans les domaines cosmetique, bucco-dentaire, pharmaceutique et alimentaire.
JPH0625306A (ja) 1992-04-21 1994-02-01 Shiseido Co Ltd 溶媒不溶化ヒアルロン酸及びその製造方法
IT1263316B (it) 1993-02-12 1996-08-05 Fidia Advanced Biopolymers Srl Tessuto non tessuto multistrato in cui uno degli strati e' costituito essenzialmente da esteri dell'acido ialuronico
WO1995007085A1 (en) * 1993-09-07 1995-03-16 Escalon Ophthalmics, Inc. Surface active viscoelastic solutions for ocular use
NL9700003A (nl) 1993-09-28 1997-07-01 House Foods Corp Werkwijze voor het inoculeren van Fistulina hepatica.
US5616568A (en) 1993-11-30 1997-04-01 The Research Foundation Of State University Of New York Functionalized derivatives of hyaluronic acid
AU697739B2 (en) 1994-03-14 1998-10-15 Seikagaku Corporation Material to be worn on the eyeball
US5455349A (en) 1994-05-13 1995-10-03 Polaroid Corporation Vinylbenzyl thymine monomers
DK0783325T3 (da) 1994-09-27 2000-05-01 Nycomed Imaging As Kontrastmiddel
US6025444A (en) 1994-11-17 2000-02-15 Seikagaku Kogyo Kabushiki Kaisha (Seikagaku Corporation) Cinnamic acid derivative
JP3308742B2 (ja) 1994-11-17 2002-07-29 生化学工業株式会社 光架橋性ヒアルロン酸誘導体とその架橋体およびそれらの製造方法
US5690961A (en) 1994-12-22 1997-11-25 Hercules Incorporated Acidic polysaccharides crosslinked with polycarboxylic acids and their uses
ATE220691T1 (de) 1995-03-07 2002-08-15 Novartis Erfind Verwalt Gmbh Fotochemisch vernetzte polysaccharidderivate zur chromatographischen trennung von enantiomeren
IT1281877B1 (it) 1995-05-10 1998-03-03 Fidia Advanced Biopolymers Srl Sali di metalli pesanti di succinil derivati dell'acido ialuronico e loro impiego come potenziali agenti terapeutici
IT1281886B1 (it) 1995-05-22 1998-03-03 Fidia Advanced Biopolymers Srl Processo per la preparazione di idrogel ottenuti da derivati chimici dell'acido ialuronico mediante irradiazioni ultraviolette e loro
IL123500A (en) 1995-08-29 2003-06-24 Fidia Advanced Biopolymers Srl Composite biomaterials for preventing post-surgical adhesions of tissues
US5789462A (en) 1995-09-13 1998-08-04 Seikagaku Kogyo Kabushiki Kaisha (Seikagaku Corporation) Photocured crosslinked-hyaluronic acid contact lens
DE19604706A1 (de) 1996-02-09 1997-08-14 Merck Patent Gmbh Vernetzungsprodukte von Aminogruppen-haltigen Biopolymeren
CA2244664C (en) * 1996-02-09 2008-06-03 Amgen Inc. Composition comprising interleukin-1 inhibitor and controlled release polymer
DE19616010C2 (de) 1996-04-23 1998-07-09 Seitz Filter Werke Verfahren und Vorrichtung zur Herstellung von Fibrets (Fibriden) aus Zellulosederivaten
IT1287698B1 (it) 1996-08-29 1998-08-18 Fidia Advanced Biopolymers Srl Fili da sutura essenzialmente costituiti da derivati esterei dello acido ialuronico
US6632802B2 (en) 1996-08-29 2003-10-14 Fidia Advanced Biopolymers S.R.L. Hyaluronic acid esters, threads and biomaterials containing them, and their use in surgery
US6162537A (en) 1996-11-12 2000-12-19 Solutia Inc. Implantable fibers and medical articles
JP4247846B2 (ja) 1997-07-03 2009-04-02 デュピュイ・スパイン・インコーポレーテッド 架橋ポリサッカリド薬物キャリア
ITPD980037A1 (it) 1998-02-25 1999-08-25 Fidia Advanced Biopolymers Srl Acido ialuronico solfatato e i suoi derivati legati covalentemente a polimeri sintetici pe la preparazione di biomateriali e per il rivesti
AU758575C (en) 1998-04-30 2003-11-20 Maruha Corporation Compounds having glucuronic acid derivative and glucosamine derivative in structure thereof, method for producing the compounds, and uses of the compounds
HUP0101777A3 (en) 1998-05-07 2003-04-28 Tno Process for selective oxidation of primary alcohols
US6630457B1 (en) 1998-09-18 2003-10-07 Orthogene Llc Functionalized derivatives of hyaluronic acid, formation of hydrogels in situ using same, and methods for making and using same
US6472541B2 (en) 1998-11-20 2002-10-29 The Regents Of The University Of California Protecting groups with increased photosensitivities
IT1302534B1 (it) 1998-12-21 2000-09-05 Fidia Advanced Biopolymers Srl Composizioni iniettabili, biocompatibili e biodegradabili comprendentialmeno un derivato dell'acido ialuronico, cellule condrogeniche, per
ES2203230T3 (es) 1998-12-23 2004-04-01 Esparma Gmbh Hialuronatoliasa como promotor de penetracion en agentes topicos.
DE19917614C2 (de) 1999-04-19 2001-07-05 Thueringisches Inst Textil Verfahren zur Herstellung von cellulosischen Formkörpern mit hohem Adsorptionsvermögen
US6288043B1 (en) 1999-06-18 2001-09-11 Orquest, Inc. Injectable hyaluronate-sulfated polysaccharide conjugates
US7033603B2 (en) 1999-08-06 2006-04-25 Board Of Regents The University Of Texas Drug releasing biodegradable fiber for delivery of therapeutics
US6592794B1 (en) 1999-09-28 2003-07-15 Organogenesis Inc. Process of making bioengineered collagen fibrils
WO2001034657A1 (en) 1999-11-08 2001-05-17 Sca Hygiene Products Zeist B.V. Process of oxidising primary alcohols
US6180087B1 (en) 2000-01-18 2001-01-30 Mallinckrodt Inc. Tunable indocyanine dyes for biomedical applications
DE10003397A1 (de) 2000-01-27 2001-08-09 Hartmann Paul Ag Polyelektrolyt-Feststoffsystem, Verfahren zur Herstellung desselben sowie Wundverband
DE10009996B4 (de) 2000-03-02 2005-10-13 Cognis Ip Management Gmbh Feststoffgranulate mit monodisperser Korngrößenverteilung, ein Verfahren zu ihrer Herstellung sowie ihre Verwendung
IT1317359B1 (it) 2000-08-31 2003-06-16 Fidia Advanced Biopolymers Srl Polisaccaridi percarbossilati, quali l'acido ialuronico, processo perla loro preparazione e loro impiego in campo farmaceutico e
IT1317358B1 (it) 2000-08-31 2003-06-16 Fidia Advanced Biopolymers Srl Derivati cross-linkati dell'acido ialuronico.
US6669926B1 (en) 2000-10-16 2003-12-30 Mallinckrodt, Inc. Hydrophilic light absorbing indole compounds for determination of physiological function in critically ill patients
US6498269B1 (en) 2000-10-17 2002-12-24 The University Of Connecticut Method for the oxidation of aldehydes, hemiacetals and primary alcohols
WO2002048197A1 (en) 2000-12-13 2002-06-20 Sca Hygiene Products Zeist B.V. Process for oxidising primary alcohols
EP1217008B1 (en) 2000-12-19 2006-03-01 Seikagaku Corporation Photocurable hyaluronic acid derivative and process for producing the same, and photocured crosslinked hyaluronic acid derivative and medical material using the same
FR2819808B1 (fr) 2001-01-19 2003-04-18 Simafex Compositions stabilisees d'acide o-iodoxybenzoique et leur procede de preparation
CA2435491C (en) 2001-01-31 2010-02-02 Seikagaku Corporation Crosslinked polysaccharide sponge
US6902548B1 (en) 2001-03-19 2005-06-07 Ed Schuler Use of Streptomyces hyalurolyticus enzyme in ophthalmic treatments
US6673919B2 (en) 2001-03-30 2004-01-06 Chisso Cororation Chemically modified hyaluronic acid or salts thereof, and a process for producing thereof
US7666337B2 (en) 2002-04-11 2010-02-23 Monosol Rx, Llc Polyethylene oxide-based films and drug delivery systems made therefrom
US6946284B2 (en) 2001-11-16 2005-09-20 University Of Massachusetts Solubilizing cross-linked polymers with photolyase
FR2833493B1 (fr) 2001-12-18 2005-09-23 Ioltechnologie Production Forme galenique solide et soluble pour l'administration occulaire de principes actifs et procede de fabrication d'un insert ophtalmique solide et soluble
US20060189516A1 (en) 2002-02-19 2006-08-24 Industrial Technology Research Institute Method for producing cross-linked hyaluronic acid-protein bio-composites
ITPD20020064A1 (it) 2002-03-12 2003-09-12 Fidia Advanced Biopolymers Srl Derivati esterei dell'acido ialuronico per la preparazione di idrogelda utilizzare in campo biomedico, sanitario e chirurgico e come sistem
JP3975267B2 (ja) 2002-06-03 2007-09-12 独立行政法人産業技術総合研究所 多糖物質のアシル化方法
US20040101546A1 (en) 2002-11-26 2004-05-27 Gorman Anne Jessica Hemostatic wound dressing containing aldehyde-modified polysaccharide and hemostatic agents
JP4323148B2 (ja) 2002-09-30 2009-09-02 チッソ株式会社 ｎ−アルカノイル化ヒアルロン酸もしくはその塩およびその製造法
US6965040B1 (en) 2002-11-04 2005-11-15 Xiaolian Gao Photogenerated reagents
US20040116018A1 (en) 2002-12-17 2004-06-17 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Method of making fibers, nonwoven fabrics, porous films and foams that include skin treatment additives
US7550136B2 (en) 2002-12-20 2009-06-23 University Of Massachusetts Photo-reactive polymers and devices for use in hair treatments
US7465766B2 (en) 2004-01-08 2008-12-16 The Cleveland Clinic Foundation Hydroxyphenyl cross-linked macromolecular network and applications thereof
US6982298B2 (en) 2003-01-10 2006-01-03 The Cleveland Clinic Foundation Hydroxyphenyl cross-linked macromolecular network and applications thereof
US20050126338A1 (en) 2003-02-24 2005-06-16 Nanoproducts Corporation Zinc comprising nanoparticles and related nanotechnology
FR2852012B1 (fr) 2003-03-04 2006-06-23 Oreal Procede de preparation de derives o-acyles du glucose
EP1607405B1 (en) 2003-03-11 2011-05-04 Seikagaku Corporation Photocrosslinked polysaccharide composition and process for producing the same
EP1610838A1 (en) * 2003-04-04 2006-01-04 Bayco Tech Limited Vascular stent
US7947766B2 (en) 2003-06-06 2011-05-24 The Procter & Gamble Company Crosslinking systems for hydroxyl polymers
ES2226567B1 (es) 2003-06-20 2006-07-01 Universidad De Santiago De Compostela Nanoparticulas de acido hialuronico.
DE10331342B4 (de) 2003-07-11 2009-03-12 Thüringisches Institut für Textil- und Kunststoff-Forschung e.V. Thermostabile Form- oder Spinnmasse
WO2005014655A2 (en) 2003-08-08 2005-02-17 Fresenius Kabi Deutschland Gmbh Conjugates of hydroxyalkyl starch and a protein
US7235295B2 (en) 2003-09-10 2007-06-26 Laurencin Cato T Polymeric nanofibers for tissue engineering and drug delivery
CA2538793C (en) * 2003-09-19 2011-01-11 Colorado State University Research Foundation (Csurf) Hyaluronan (ha) esterification via acylation technique for moldable devices
US8313765B2 (en) 2003-12-04 2012-11-20 Industrial Technology Research Institute Biodegradable hyaluronic acid derivative, biodegradable polymeric micelle composition and pharmaceutical or bioactive composition
GB2408741B (en) 2003-12-04 2008-06-18 Ind Tech Res Inst Hyaluronic acid derivative with urethane linkage
US20100330143A1 (en) 2003-12-04 2010-12-30 University Of Utah Research Foundation Modified macromolecules and methods of making and using thereof
GB0406013D0 (en) 2004-03-17 2004-04-21 Chiron Srl Analysis of saccharide vaccines without interference
CA2560507C (en) 2004-03-26 2011-08-16 Surmodics, Inc. Composition and method for preparing biocompatible surfaces
ITMI20040605A1 (it) 2004-03-29 2004-06-29 Coimex S C R L United Companie Esteri butirrici dell'acido ialuronico a basso grado di sostituzione procedimento per la loro preparazione ed uso
JP2008505716A (ja) 2004-07-09 2008-02-28 ザ クリーヴランド クリニック ファウンデーション ヒドロキシフェニル架橋高分子ネットワーク及びその用途
US7323425B2 (en) 2004-08-27 2008-01-29 Stony Brook Technology And Applied Research Crosslinking of hyaluronan solutions and nanofiberous membranes made therefrom
EP1790665B1 (en) 2004-09-07 2014-11-05 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Process for producing water-soluble modified hyaluronic acid
DK1817347T3 (en) 2004-11-24 2017-08-14 Albumedix As Process for Crosslinking Hyaluronic Acid with Divinyl Sulfone
US7214759B2 (en) 2004-11-24 2007-05-08 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Biologically absorbable coatings for implantable devices based on polyesters and methods for fabricating the same
US8053415B2 (en) 2005-01-21 2011-11-08 Washington University In St. Louis Compounds having RD targeting motifs
AU2006227112A1 (en) 2005-03-22 2006-09-28 Tyco Healthcare Group Lp Bioactive wide-weave mesh
US7680038B1 (en) 2005-04-25 2010-03-16 Electronic Arts, Inc. Dynamic bandwidth detection and response for online games
GB0513552D0 (en) 2005-07-01 2005-08-10 Bristol Myers Squibb Co Bandage
WO2007004675A1 (ja) 2005-07-06 2007-01-11 Seikagaku Corporation 薬剤導入光架橋ヒアルロン酸誘導体ゲル
ITPD20050206A1 (it) 2005-07-07 2007-01-08 Fidia Advanced Biopolymers Srl Biomateriali in forma di fibra da impiegarsi come dispositivi medici nel trattamento delle ferite e loro processi di produzione
ITMI20051415A1 (it) 2005-07-22 2007-01-23 Fidia Advanced Biopolymers Srl Biomateriali a base di corbossimetilcellulosa salificata con zinco associata a derivati dell'acido ialuronico da impiegarsi come dispositivi medici con attivita' antimicrobica ed antifungina e loro processo di produzione
CA2622947C (en) 2005-09-21 2014-10-28 Kode Biotech Limited Cell surface coating with hyaluronic acid oligomer derivative
US7993678B2 (en) 2005-09-26 2011-08-09 Novozymes Biopolymer A/S Hyaluronic acid derivatives
EP1968499A1 (en) 2005-12-14 2008-09-17 Anika Therapeutics Inc. Bioabsorbable implant of hyaluronic acid derivative for treatment of osteochondral and chondral defects
EP1826274A1 (en) 2006-02-24 2007-08-29 Kikkoman Corporation Enzyme composition, low molecular weight hyaluronan and process for preparing the same
US20100273734A1 (en) 2006-02-28 2010-10-28 Novozymes Biopolymer A/S Derivatives of Hyaluronic Acids
JP4892679B2 (ja) 2006-03-27 2012-03-07 国立大学法人弘前大学 ゲル紡糸によるヒアルロン酸繊維およびその製造方法
KR20070118730A (ko) 2006-06-13 2007-12-18 주식회사 코오롱 보습성이 우수한 창상피복재 및 그의 제조방법
US20080124395A1 (en) 2006-06-22 2008-05-29 Weiliam Chen Formulations and devices for treatment or prevention of neural ischemic damage
WO2008008481A2 (en) 2006-07-12 2008-01-17 Georgia Tech Research Corporation Deprotection of functional groups by multi-photon induced electron transfer
CN101501075B (zh) 2006-08-04 2013-07-10 诺维信生物制药丹麦公司 支化透明质酸和制造方法
US20080063617A1 (en) 2006-09-07 2008-03-13 Abrahams John M Cosmetics formulations
ITMI20061726A1 (it) 2006-09-11 2008-03-12 Fidia Farmaceutici Derivati crosslinkati a base di acido ialuronico reticolato via click chemistry
CZ302856B6 (cs) 2006-09-27 2011-12-14 Cpn Spol. S R. O. Zpusob prípravy derivátu polysacharidu
US8979931B2 (en) 2006-12-08 2015-03-17 DePuy Synthes Products, LLC Nucleus replacement device and method
RU2432181C2 (ru) 2006-12-22 2011-10-27 Кромафарма Гезельшафт М.Б.Х. Применение полимеров
KR20080062092A (ko) 2006-12-29 2008-07-03 주식회사 핸슨바이오텍 세포전달체로서의 히알루론산 유도체 및 이의 제조 방법
EP1942117A1 (en) 2006-12-29 2008-07-09 Sigea S.R.L. Derivatives of acid polysaccharides
JP5329767B2 (ja) 2007-02-26 2013-10-30 帝人株式会社 芳香族コポリアミド繊維の製造装置
WO2008115799A1 (en) 2007-03-21 2008-09-25 William Marsh Rice University Novel gene delivery vectors for human mesenchymal stem cells
CZ2007299A3 (cs) 2007-04-24 2009-02-04 Cpn Spol. S R. O. Príprava nanovláken z polysacharidu a jejich smesí s polyvinylalkoholem
JP5165281B2 (ja) 2007-06-01 2013-03-21 株式会社バイオベルデ ２反応剤型の医療用含水ゲル形成剤、及び、これより得られるヒアルロン酸ゲル
RU2471867C2 (ru) 2007-06-19 2013-01-10 Тамара П. Уваркина Гиалуронидаза и способ ее применения
KR101226851B1 (ko) 2007-06-20 2013-01-25 (주)엘지하우시스 이중노즐을 이용한 나노섬유의 제조방법
JP5393662B2 (ja) 2007-06-22 2014-01-22 イノベイティブ サーフェイス テクノロジーズ， インコーポレイテッド 潜在反応基を含有するナノ繊維
US8268638B2 (en) 2007-07-18 2012-09-18 Advantageous Systems, Llc Methods and apparatuses for detecting analytes in biological fluid of an animal
FR2920786B1 (fr) 2007-09-07 2010-09-10 Univ Claude Bernard Lyon Fibres creuses, notamment multi membranaires, leur procede de preparation par filage et dispositif pour la mise en oeuvre dudit procede
FR2921675B1 (fr) 2007-09-28 2010-03-19 Univ Claude Bernard Lyon Filament a base d'acide hyaluronique et son procede d'obtention.
US20130136784A1 (en) 2007-10-11 2013-05-30 Robert J. Staab Methods for delivery of medication using dissolvable devices
US7976825B2 (en) 2007-12-06 2011-07-12 Janos Borbely Cancer cell diagnosis by targeting delivery of nanodevices
BRPI0908352A2 (pt) 2008-02-11 2015-07-28 Basf Se Processo para produzir estruturas porosas, estrutura porosa, e, uso da mesma
US20110028062A1 (en) 2008-02-14 2011-02-03 Chester Stephen O Bicomponent fibers, textile sheets and use thereof
WO2009108100A1 (en) 2008-02-29 2009-09-03 Ipr-Systems Sweden Ab Composition for the formation of gels
WO2009139972A2 (en) 2008-03-31 2009-11-19 University Of Louisville Research Foundation, Inc. Site specific fluorescence marking and contrast marker for same
JP5563563B2 (ja) 2008-06-05 2014-07-30 エージェンシー フォー サイエンス， テクノロジー アンド リサーチ ペルオキシダーゼおよび低濃度の過酸化水素の存在下でのヒドロゲルの形成方法
JP2010014784A (ja) 2008-07-01 2010-01-21 Fuji Xerox Co Ltd 光書込型表示装置、書込装置、及び光書き込み方法
IT1391734B1 (it) 2008-07-29 2012-01-27 Anika Therapeutics Srl Nuovi biomateriali, loro preparazione per elettrospinning e loro uso in campo biomedico e chirurgico.
FR2934999B1 (fr) 2008-08-13 2011-07-29 Adocia Polysaccharides fonctionnalises par des derives du tryptophane
US9228027B2 (en) 2008-09-02 2016-01-05 Allergan Holdings France S.A.S. Threads of Hyaluronic acid and/or derivatives thereof, methods of making thereof and uses thereof
CZ301555B6 (cs) 2008-11-06 2010-04-14 Cpn S. R. O. Zpusob prípravy DTPA sítovaných derivátu kyseliny hyaluronové a jejich modifikace
ITRM20080636A1 (it) 2008-11-28 2010-05-29 Univ Palermo Procedimento per la produzione di derivati funzionalizzati dell acido ialuronico e relativi idrogeli.
JP2010138276A (ja) 2008-12-11 2010-06-24 Nipro Corp ヒアルロン酸単糸の製造方法
US9273191B2 (en) 2009-02-21 2016-03-01 Sofradim Production Medical devices with an activated coating
AU2010215199B2 (en) 2009-02-21 2015-01-15 Sofradim Production Compounds and medical devices activated with solvophobic linkers
WO2010095049A1 (en) 2009-02-21 2010-08-26 Sofradim Production Crosslinked fibers and method of making same by extrusion
CZ2009168A3 (cs) 2009-03-17 2010-07-21 Contipro C, A.S. Zpusob prípravy derivátu kyseliny hyaluronové pomocí O-acyl-O´-alkylkarbonátu v prítomnosti substituovaného pyridinu
US8551378B2 (en) 2009-03-24 2013-10-08 North Carolina State University Nanospinning of polymer fibers from sheared solutions
US20120219554A2 (en) 2009-05-14 2012-08-30 Fidia Farmaceutici S.P.A. Extracellular yaluronidase from streptomyces koganeiensis
JP5679253B2 (ja) 2009-05-26 2015-03-04 国立大学法人東京工業大学 自立性高分子薄膜
WO2010138074A1 (en) 2009-05-29 2010-12-02 Hilborn Joens Hyaluronic acid based delivery systems
JP2012529509A (ja) 2009-06-09 2012-11-22 ラックス・バイオサイエンシーズ・インコーポレイテッド 眼科用用途のための局所薬物送達システム
SG178146A1 (en) 2009-07-30 2012-03-29 Carbylan Biosurgery Inc Modified hyaluronic acid polymer compositions and related methods
KR101103423B1 (ko) 2009-09-04 2012-01-06 아주대학교산학협력단 생체 주입형 조직 접착성 하이드로젤 및 이의 생의학적 용도
US9132201B2 (en) 2009-11-11 2015-09-15 University Of Twente, Institute For Biomedical And Technical Medicine (Mira) Hydrogels based on polymers of dextran tyramine and tyramine conjugates of natural polymers
EP2498830B1 (en) 2009-11-11 2016-09-21 University of Twente, Institute for Biomedical Technology and Technical Medicine (MIRA) Dextran-hyaluronic acid based hydrogels
US20110111012A1 (en) 2009-11-12 2011-05-12 Hemcon Medical Technologies, Inc. Nanomaterial wound dressing assembly
CZ302503B6 (cs) 2009-12-11 2011-06-22 Contipro C A.S. Zpusob prípravy derivátu kyseliny hyaluronové oxidovaného v poloze 6 glukosaminové cásti polysacharidu selektivne na aldehyd a zpusob jeho modifikace
CZ2009836A3 (cs) 2009-12-11 2011-06-22 Contipro C A.S. Derivát kyseliny hyaluronové oxidovaný v poloze 6 glukosaminové cásti polysacharidu selektivne na aldehyd, zpusob jeho prípravy a zpusob jeho modifikace
US8197849B2 (en) 2010-02-12 2012-06-12 National Health Research Institutes Cross-linked oxidated hyaluronic acid for use as a vitreous substitute
US20110229551A1 (en) 2010-03-17 2011-09-22 Notus Laboratories, Inc. Drug delivery compositions and methods using nanofiber webs
IT1399202B1 (it) * 2010-03-30 2013-04-11 Corbelli Metodo per la produzione di manufatti elastomerici funzionalizzati e manufatti cosi' ottenuti
WO2011163568A1 (en) 2010-06-24 2011-12-29 University Of Kansas Conjugates comprising an n-oxime bond and associated methods
CN101897976A (zh) 2010-07-16 2010-12-01 沈阳药科大学 一种药物增溶载体及其制备方法和应用
CZ305040B6 (cs) 2010-09-14 2015-04-08 Contipro Biotech S.R.O. Způsob přípravy vysoce substituovaných amidů kyseliny hyaluronové
EP2624874A4 (en) 2010-10-08 2014-04-02 Univ Texas Anti-adhesive barrier membrane using alginate and hyaluronic acid for biomedical applications
CZ302994B6 (cs) 2010-12-31 2012-02-08 Cpn S.R.O. Hyaluronová vlákna, zpusob jejich prípravy a použití
US9200271B2 (en) 2011-02-03 2015-12-01 Empire Technology Development Llc Selective 3D biopatterning
KR101201412B1 (ko) 2011-04-19 2012-11-14 한양대학교 에리카산학협력단 다공성 코어쉘 나노웹의 제조방법
CZ304072B6 (cs) 2011-04-26 2013-09-25 Contipro Biotech S.R.O. Amfoterní materiál na bázi sítované kyseliny hyaluronové, zpusob jeho prípravy, materiály obsahující aktivní cinidla uzavrené v síti hyaluronanu, zpusob jejich prípravy a jejich pouzití
CN102154738B (zh) 2011-05-10 2012-08-01 青岛大学 一种红藻琼胶纤维的制备方法
ITTO20110428A1 (it) 2011-05-13 2012-11-14 Rottapharm Spa Esteri dell'acido ialuronico, loro preparazione ed uso in dermatologia
BR112014009292B1 (pt) 2011-10-18 2021-06-15 Heiq Pty Ltd Processo para a preparação de fibras
KR20130085294A (ko) 2012-01-19 2013-07-29 충남대학교산학협력단 림프노드 탐지용 형광 고분자 나노젤 및 이를 이용한 림프노드 확인 방법
CZ303879B6 (cs) 2012-02-28 2013-06-05 Contipro Biotech S.R.O. Deriváty na bázi kyseliny hyaluronové schopné tvorit hydrogely, zpusob jejich prípravy, hydrogely na bázi techto derivátu, zpusob jejich prípravy a pouzití
KR101240518B1 (ko) 2012-03-26 2013-03-11 주식회사 제네웰 생체 적합성 고분자를 이용한 이식용 재료
CZ2012282A3 (cs) 2012-04-25 2013-11-06 Contipro Biotech S.R.O. Zesítovaný derivát hyaluronanu, zpusob jeho prípravy, hydrogel a mikrovlákna na jeho bázi
WO2013171764A2 (en) 2012-04-30 2013-11-21 Rubicon Research Private Limited Ophthalmic formulations
CZ304651B6 (cs) 2012-05-11 2014-08-20 Contipro Biotech S.R.O. Způsob přípravy mikrovláken, způsob výroby krytů ran, kryty ran a zařízení pro přípravu polysacharidových vláken
CZ304512B6 (cs) 2012-08-08 2014-06-11 Contipro Biotech S.R.O. Derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy, způsob jeho modifikace a použití
CN202822230U (zh) 2012-10-10 2013-03-27 深圳兰度生物材料有限公司 疤痕贴
CZ304266B6 (cs) 2012-11-27 2014-02-05 Contipro Biotech S.R.O. Nekonečná vlákna na bázi hyaluronanu selektivně oxidovaného v poloze 6 N-acetyl-D-glukosaminové části, jejich příprava, použití, nitě, střiže, příze, textilie a způsob jejich úpravy
CZ2012842A3 (cs) 2012-11-27 2014-08-20 Contipro Biotech S.R.O. Nanomicelární kompozice na bázi C6-C18-acylovaného hyaluronanu, způsob přípravy C6-C18-acylovaného hyaluronanu, způsob přípravy nanomicelární kompozice a stabilizované nanomicelární kompozice a použití
CZ2012844A3 (cs) 2012-11-27 2014-02-05 Contipro Biotech S.R.O. Fotoreaktivní derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy, 3D síťovaný derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy a použití
CZ304303B6 (cs) * 2012-11-27 2014-02-19 Contipro Biotech S.R.O. Vlákna založená na hydrofobizovaném hyaluronanu, způsob jejich přípravy a použití, textilie na jejich bázi a použití
JP6084833B2 (ja) * 2012-12-07 2017-02-22 大日精化工業株式会社 ヒアルロン酸フィルムの製造方法、及び、ヒアルロン酸フィルム
KR101386096B1 (ko) 2013-02-28 2014-04-21 강원대학교산학협력단 음이온성 단백질 약물 전달을 위한 키토산 나노섬유, 그 제조방법 및 그 키토산 나노섬유를 포함하는 경점막 투여제
CN103505736A (zh) 2013-09-23 2014-01-15 天津大学 基于改性透明质酸的高分子脂质体及其制备方法
CN103789874B (zh) 2014-01-23 2016-02-10 北京化工大学常州先进材料研究院 平行电场诱导相分离法制备核壳结构天然聚电解质纳米纤维
EP2899214A1 (en) 2014-01-27 2015-07-29 Basf Se Ethylenically unsaturated polysaccharides, method for their production and their use
CZ2014150A3 (cs) 2014-03-11 2015-05-20 Contipro Biotech S.R.O. Konjugáty oligomeru kyseliny hyaluronové nebo její soli, způsob jejich přípravy a použití

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11425907B2 (en) 2018-08-23 2022-08-30 Contipro A.S. Composition comprising an iodide and a derivative of hyaluronic acid with an oxidative effect, method of preparation thereof and use thereof

Also Published As

Publication number Publication date
RU2712174C2 (ru) 2020-01-24
EP3268414B1 (en) 2021-04-14
BR112017018431A2 (pt) 2018-04-17
HUE055009T2 (hu) 2021-10-28
BR112017018431B1 (pt) 2021-08-17
US20180105610A1 (en) 2018-04-19
WO2016141903A1 (en) 2016-09-15
KR102561551B1 (ko) 2023-07-28
US10689464B2 (en) 2020-06-23
CZ309295B6 (cs) 2022-08-10
JP2018511377A (ja) 2018-04-26
PL3268414T3 (pl) 2021-11-08
JP6796075B2 (ja) 2020-12-02
RU2017130206A (ru) 2019-04-09
DK3268414T3 (da) 2021-06-28
RU2017130206A3 (cs) 2019-08-28
KR20170128351A (ko) 2017-11-22
ES2877528T3 (es) 2021-11-17
EP3268414A1 (en) 2018-01-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ2015166A3 (cs) Samonosný, biodegradabilní film na bázi hydrofobizované kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy a použití
Antinori et al. Advanced mycelium materials as potential self-growing biomedical scaffolds
Wang et al. Reduced mouse fibroblast cell growth by increased hydrophilicity of microbial polyhydroxyalkanoates via hyaluronan coating
Seda Tığlı et al. In vitro characterization of chitosan scaffolds: influence of composition and deacetylation degree
Sima et al. Levan nanostructured thin films by MAPLE assembling
Zhao et al. Hyaluronic acid/chondroitin sulfate-based hydrogel prepared by gamma irradiation technique
Wali et al. Electrospinning of non-ionic cellulose ethers/polyvinyl alcohol nanofibers: Characterization and applications
Tardajos et al. Chitosan functionalized poly-ε-caprolactone electrospun fibers and 3D printed scaffolds as antibacterial materials for tissue engineering applications
Mishra et al. Synthesis and characterization of pectin/PVP hydrogel membranes for drug delivery system
Azevedo et al. In vitro assessment of the enzymatic degradation of several starch based biomaterials
Zhu et al. Adhesion dynamics, morphology, and organization of 3T3 fibroblast on chitosan and its derivative: the effect of O-carboxymethylation
Shi et al. Characterization of ph-and thermosensitive hydrogel as a vehicle for controlled protein delivery
de Souza et al. Mechanically-enhanced polysaccharide-based scaffolds for tissue engineering of soft tissues
Gaudière et al. Genipin-cross-linked layer-by-layer assemblies: biocompatible microenvironments to direct bone cell fate
Islam et al. Fabrication and performance characteristics of tough hydrogel scaffolds based on biocompatible polymers
Apte et al. Effect of different crosslinking strategies on physical properties and biocompatibility of freestanding multilayer films made of alginate and chitosan
Foglarová et al. Water-insoluble thin films from palmitoyl hyaluronan with tunable properties
Kraskouski et al. Polyvinyl alcohol and pectin blended films: Preparation, characterization, and mesenchymal stem cells attachment
Bettini et al. Physicochemical and cell adhesion properties of chitosan films prepared from sugar and phosphate-containing solutions
Jasenská et al. Conducting composite films based on chitosan or sodium hyaluronate. Properties and cytocompatibility with human induced pluripotent stem cells
Aljawish et al. Adhesion and growth of HUVEC endothelial cells on films of enzymatically functionalized chitosan with phenolic compounds
Rusen et al. In vitro evaluation of poly (ethylene glycol)-block-poly (ɛ-caprolactone) methyl ether copolymer coating effects on cells adhesion and proliferation
Zou et al. Modified n-HA/PA66 scaffolds with chitosan coating for bone tissue engineering: cell stimulation and drug release
Chu et al. Sprayable agarose-derived dopamine-grafted microgels for promoting tissue adhesion in skin regeneration
Dinca et al. Excimer laser texturing of natural composite polymer surfaces for studying cell-to-substrate specific response