CZ308010B6 - Chlorovaný derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy, kompozice, která jej obsahuje, a použití - Google Patents

Chlorovaný derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy, kompozice, která jej obsahuje, a použití Download PDF

Info

Publication number
CZ308010B6
CZ308010B6 CZ2018-426A CZ2018426A CZ308010B6 CZ 308010 B6 CZ308010 B6 CZ 308010B6 CZ 2018426 A CZ2018426 A CZ 2018426A CZ 308010 B6 CZ308010 B6 CZ 308010B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
hyaluronan
chloramide
hyaluronic acid
preparation
acid
Prior art date
Application number
CZ2018-426A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ2018426A3 (cs
Inventor
Radovan Buffa
Ivana Basarabová
Martina Hermannová
Kateřina Knotková
Jaromír Kulhánek
Josef CHMELAŘ
Tomáš Pitucha
Drahomíra Chládková
Helena KrejÄŤĂ­
Hana Vágnerová
Martin Sojka
Luboš Sobotka
Vladimír Velebný
Original Assignee
Contipro A.S.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Contipro A.S. filed Critical Contipro A.S.
Priority to CZ2018-426A priority Critical patent/CZ2018426A3/cs
Priority to EP19773732.3A priority patent/EP3841128B1/en
Priority to PCT/CZ2019/050034 priority patent/WO2020038500A1/en
Priority to JP2021509833A priority patent/JP7366448B2/ja
Priority to US17/270,693 priority patent/US11427652B2/en
Priority to KR1020217006382A priority patent/KR20210049110A/ko
Priority to BR112021001463-2A priority patent/BR112021001463A2/pt
Priority to ARP190102393A priority patent/AR115999A1/es
Publication of CZ308010B6 publication Critical patent/CZ308010B6/cs
Publication of CZ2018426A3 publication Critical patent/CZ2018426A3/cs

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A61K31/726—Glycosaminoglycans, i.e. mucopolysaccharides
    • A61K31/728—Hyaluronic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L15/00—Chemical aspects of, or use of materials for, bandages, dressings or absorbent pads
    • A61L15/16—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons
    • A61L15/22—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons containing macromolecular materials
    • A61L15/28—Polysaccharides or their derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L15/00—Chemical aspects of, or use of materials for, bandages, dressings or absorbent pads
    • A61L15/16—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons
    • A61L15/42—Use of materials characterised by their function or physical properties
    • A61L15/46—Deodorants or malodour counteractants, e.g. to inhibit the formation of ammonia or bacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/14—Macromolecular materials
    • A61L27/20—Polysaccharides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/10—Antimycotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
    • C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
    • C08B37/0072—Hyaluronic acid, i.e. HA or hyaluronan; Derivatives thereof, e.g. crosslinked hyaluronic acid (hylan) or hyaluronates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
    • C08L1/00—Compositions of cellulose, modified cellulose or cellulose derivatives
    • C08L1/02—Cellulose; Modified cellulose
    • C08L1/04—Oxycellulose; Hydrocellulose, e.g. microcrystalline cellulose
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
    • C08L1/00—Compositions of cellulose, modified cellulose or cellulose derivatives
    • C08L1/08—Cellulose derivatives
    • C08L1/26—Cellulose ethers
    • C08L1/28—Alkyl ethers
    • C08L1/284—Alkyl ethers with hydroxylated hydrocarbon radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
    • C08L1/00—Compositions of cellulose, modified cellulose or cellulose derivatives
    • C08L1/08—Cellulose derivatives
    • C08L1/26—Cellulose ethers
    • C08L1/28—Alkyl ethers
    • C08L1/286—Alkyl ethers substituted with acid radicals, e.g. carboxymethyl cellulose [CMC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
    • C08L5/00—Compositions of polysaccharides or of their derivatives not provided for in groups C08L1/00 or C08L3/00
    • C08L5/04—Alginic acid; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
    • C08L5/00—Compositions of polysaccharides or of their derivatives not provided for in groups C08L1/00 or C08L3/00
    • C08L5/08—Chitin; Chondroitin sulfate; Hyaluronic acid; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/10—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices containing or releasing inorganic materials
    • A61L2300/106—Halogens or compounds thereof, e.g. iodine, chlorite
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/20—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices containing or releasing organic materials
    • A61L2300/23—Carbohydrates
    • A61L2300/236—Glycosaminoglycans, e.g. heparin, hyaluronic acid, chondroitin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/40—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices characterised by a specific therapeutic activity or mode of action
    • A61L2300/404—Biocides, antimicrobial agents, antiseptic agents

Abstract

Vynález se týká přípravy a použití různých forem obsahujících derivát kyseliny hyaluronové - chloramid hyalurononanu, ve kterém je většina atomů vodíků amidické skupiny −NH−CO− nahrazena za atomy chloru −NCl−CO−. Kompozice obsahující chloramid hyaluronanu vykazují širokospektrální antimikrobiální a antivirovou aktivitu a díky své biokompatibilitě jsou vhodné pro aplikace v oblasti krytů ran nebo na přípravu široké škály implantabilních zdravotnických prostředků.

Description

Vynález se týká derivátu kyseliny hyaluronové, ve kterém je většina atomů vodíků amidické skupiny -NH-CO- nahrazena za atomy chloru -NC1-CO-. Takto modifikovaný polymer chloramid hyaluronanu vykazuje zvýšenou reaktivitu v oxidačních i redukčních reakcích.
Dále se vynález týká způsobu přípravy chloramidu hyaluronanu, kde je chemická modifikace uskutečněna ve vodném prostředí pomocí trichlorisokyanurové kyseliny nebo pomocí solí kyseliny dichlorisokyanurové. Příprava finálních kompozic dále zahrnuje tvorbu forem s obsahem chloramidu hyaluronanu. Pod pojmem „forma“ se rozumí typy materiálů jako například tenký film, lyofilizát, vrstva ze staplových vláken, nekonečné vlákno, tkanina, splétaná textilie nebo nanovlákenná vrstva.
Dále se vynález týká finálních kompozic s obsahem chloramidu hyaluronanu a jejich použití v oblastech, kde jsou vyžadovány následující vlastnosti, nebo jejich libovolné kombinace:
- oxidační nebo redukční nebo antimikrobiální nebo antifůngální nebo antivirální aktivita
- biokompatibilita a biodegradovatelnost
- možnost přípravy různých forem s vyhovující stabilitou
- možnost regulace rychlosti biodegradace
- možnost regulace rychlosti oxidačních nebo redukčních reakcí
- významná podpora procesu hoj ení
Dosavadní stav techniky
Kyselina hyaluronová
Kyselina hyaluronová nebo její sodná sůl je nesulfatovaný glykosaminoglykan, který je složený ze dvou opakujících se jednotek D-glukuronové kyseliny a A-acetyl-D-glukosaminu.
kde
R1 je vodík nebo sodík.
Molekulová hmotnost nativní kyseliny hyaluronové se pohybuje v rozsahu 5.104 až 5.106 g.mol1. Tento hydrofilní polysacharid hraje významnou roli v řadě biologických procesů jako je organizace proteoglykanů, hydratace a diferenciace buněk a tvoří významnou součást kůže, synoviální tekutiny kloubů a pojivových tkání. Tento polymer se v biologických systémech přirozeně vyskytuje, tudíž je možné ho charakterizovat jako biodegradovatelný a biokompatibilní. Proto je vhodným substrátem pro oblast nosičů biologicky aktivních látek v široké škále biomedicinských aplikací.
Chemické modifikace kyseliny hyaluronové a její formy
Je známo mnoho způsobů, jak chemicky modifikovat kyselinu hyaluronovou za účelem změny jejích fyzikálních a biologických vlastností (Burdick J. A. a Prestwich G. D. Adv. Mater. 23, 4156, 2011). V případě, že je pro určitou aplikaci žádaná zásadní změna v rozpustnosti, nejčastější řešení je kovalentní navázání hydrofobního řetězce formou biodegradovatelné esterové vazby na strukturu polymeru (Kettou S. a kol. PV 2009-399, Buffa R. a kol. W02010105582). Z takto modifikovaných materiálů lze pak vytvářet různé formy, jako jsou například vlákna (Sčudlová J. a kol. EP2925916 AI), pleteniny a splétané textilie (Pitucha T. a kol., CZ 306354), samonosné filmy (Foglarová M. a kol. PV2015-166; Foglarová M. a kol. Carbohydrate Polymers, 144, 6875, 2016) nebo vrstvy z nanovláken (Růžičková J. a kol. PV2013-913). Další možností jsou netkané textilie tvořené spojením staplových mikrovláken, která jsou připravována metodou mokrého zvlákňování v nestacionární koagulační lázni (Zápotocký V. a kol. Intemational Joumal of Biological Macromolecules, 95, 903-909, 2017).
Oxidace s trichlorisokyanurovou kyselinou nebo s dichlorisokyanurátem sodným
Trichlorisokyanurová kyselina (TCC) se často používá na N-chloraci strukturně jednodušších amidů na N-chloramidy (Hiegel G. A. a kol, Synthetic Communications, 35, 2099-2105, 2005) většinou v nevodných rozpouštědlech. V přítomnosti vody je zase TCC často zmiňována v kombinaci se stabilními radikály typu piperidinyloxy (TEMPO) na selektivní oxidaci primárních hydroxylových skupin. Pro kyselinu hyaluronovou bylo například použití TCC s TEMPO ve vodě popsáno v patentu (Buffa R. a kol. WO2011069475A3), kde nebyla pozorována tvorba žádných chloramidů, ale jenom oxidace primární hydroxylové skupiny na aldehyd a karboxylovou kyselinu. Takže v případě substrátů obsahujících velké množství sekundárních i primárních alkoholů (polysacharidy) se při použití TCC a jeho analogů dají očekávat reakce na hydroxylových skupinách. Monosodná sůl TCC známá jako dichlorisokyanurát sodný (DCC-Na) je méně reaktivní analog TCC, který je ale lépe rozpustný ve vodě. Bylo popsáno použití DCCNa na oxidaci několika aminů a amidů, které ale neobsahují hydroxylové skupiny (Sun X. a kol., Ind. Eng. Chem. Res., 49, 22, 2010). Výsledné chloroaminy byly pak polymerizovány a finální substráty byly úspěšně testovány jako antibakteriální, antifůngální a antivirální substance ve formě latexové emulze (Cao Z. a kol, App. Mat. Inter. 1, 2, 494-504, 2009).
Z těchto výstupů lze usoudit, že použití TCC nebo jeho analogů na selektivní přípravu Nchlorovaného amidu hyaluronanu ve vodě není očekávatelné z důvodů předpokládané reakce s hydroxy skupinami hyaluronanu.
Oxidace polysacharidů s chlornanem nebo kyselinou chlomou.
Kyselina chlomá nebo její soli se často používají na oxidaci hydroxylových skupin polysacharidů zejména v kombinaci s radikály typu piperidinyloxy (TEMPO) (Bragd P. a kol, WO2002/48197, Buffa R. a kol., WO2011/069475A3). Obecně lze konstatovat, že v případě polysacharidů obsahujících amidickou skupinu, vznik příslušných chloramidů nebyl pozorován v drtivé většině případů. Starší zdroje přítomnost chloramidů hyaluronanu vůbec nezmiňují (Green S. P. a kol., J. Rheumatology, 17, 1670-5, 1990, Lindvall S. a kol., Chem.-Biol. Interac. 90, 1-12, 1994, Baker M. S. a kol., Arthritis and Rheumatism, 32, 4, 461-7, 1989). Jedná se o publikace, kde byly studovány degradace hyaluronanu s kyselinou chlomou nebo jejími solemi vznikajícími reakcí myeloperoxidázy (MPO) s peroxidem vodíku a s chloridy. Existují i práce, kde byly studovány degradace hlavně glykosaminoglykanů obsažených v extracelulámí matrixu, za účelem simulace zánětlivých procesů. Hlavním výstupem měly být informace o samotném procesu a chemických strukturách, jejichž přítomnost se dá očekávat in vivo. V novějších zdrojích se už zmínky o chloramidech hyaluronanu vyskytují. Například v publikaci (Hawkins C. L. a kol., Free Radical Biology & Medicine, 24, 9, 1396-1410, 1998) byl studován mechanizmus degradace kyseliny hyaluronové, chondroitin sulfátu a jiných i nízkomolekulových substrátů obsahujících amidickou skupinu. Jako oxidační činidlo byl použit HOCFCIO. Autoři předpokládají vznik chloramidů hyaluronanu jenom jako nestabilního intermediátu, který ale nebyl přímo detekován. Důvodem je jeho rychlé homolytické nebo redukční štěpení v obou případech za vzniku radikálů, které pak
-2CZ 308010 B6 dál reagují cestou vedoucí k degradaci polymeru. V dalším článku (Parsons B. J. a kol., Biochem. J., 381, 175-184, 2004) je popsán vznik chloramidů hyaluronanu, chondroitin sulfátu a jiných substrátů pomocí MPO (enzymu myeloperoxidázy), peroxidu vodíku a chloridů. Autoři předpokládají, že příslušné chloramidy mají určitou životnost a detailně popisují jejich degradaci pomocí dalších činidel. Velmi zajímavý je článek (Rees M. D. a kol., J. Am. Chem. Soc., 125, 13719-13733, 2003), kde se popisují reakce mono, oligo i polysacharidů obsahujících amidickou skupinu s NaClO. Detailně je rozebrána stabilita chloramidů hyaluronanu a chondroitin sulfátu se stupněm modifikace 35% respektive 16% bez a s přítomností dalších činidel jako Cu2+ i v kombinaci s kyslíkem. Bylo zjištěno, že přítomnost některých kovů výrazně urychluje degradaci. I bez kovů byla pozorována rychlá degradace polymemích chloramidů hyaluronanu a chondroitin sulfátu při 50 °C. Při nižších teplotách byla degradace významně pomalejší. Bylo taky přímo pozorováno, že MPO v přítomnosti peroxidu vodíku a fyziologického množství chloridů generuje s glykosaminoglykany malé množství jejich chloramidů, z čehož autoři usuzují, že tyto chloramidy jsou generovány i in vivo.
Z těchto výstupů lze předpokládat, že chloramid hyaluronanu o nízkém stupni modifikace sice je známý, ale neočekává se jeho dostatečná stabilita k tomu, aby měl tento materiál potenciál na přípravu nějakých kompozic pro použití v biomedicinských aplikacích.
Aplikace N-halogenováných polymerů
V této části jsou zmíněny výstupy, kde byly popsány i vybrané konkrétnější aplikace chloraminů nebo chloramidů.
Přehledný článek (Hui F. a kol., Biomacromolecules, 14, 585-601, 2013) popsal přípravu, analýzu i aplikace různých materiálů obsahujících vazbu -N-halogen. Kyselina hyaluronová ale nebyla zmíněna v tomto přehledu, mezi materiály strukturně nejbližší byl popsán chitosan. Mezi chloračními činidly byly zmíněny i kyselina trichlorisokyanurová a její méně reaktivní analog dichlorisokanurát sodný. Obecnou aplikační výhodou popsaných materiálů je efektivnost vůči široké škále mikroorganismů, dlouhodobá stabilita, regenerovatelnost, bezpečnost pro člověka a přírodu a také nízká cena. Většina popsaných aplikací používala N-chloro deriváty, kde byla obecně pozorována dobrá stabilita hlavně v případech, kdy vedle N-hal skupiny není uhlík s vodíkem (alfa vodík). Je-li alfa vodík přítomen, může docházet k eliminaci halogenovodíku a vzniku násobné iminové vazby -NHal- CH- —> -N=C-. Kyselina hyaluronová nebo chitosan takový alfa vodík obsahuje, takže tyto typy substrátů (aminosacharidy) mají strukturní fragment potenciálně problematický z pohledu stability.
Příprava, analýza a testovaní chlorovaného chitosanu byla popsána i v článku (Cao Z, a kol,, Journal of Biomedical Materials Research Part A, 85, 99-107, 2008). Materiál ve formě filmu byl úspěšně testován proti mikroorganismům Staphylococcus aureus a Escherichia coli. Bylo také pozorováno, že významně potlačuje tvorbu biofilmu. Sledována byla i stabilita při 25 °C, kde byl zaznamenán významný pokles množství aktivního chloru po jednom měsíci skladování až na 15 % původní hodnoty.
N-chlorovaný polyuretan ve formě filmu, připravený reakcí s roztokem Ch (Luo J. a kol., J Bioact Compat Polym, 30, 157-166, 2015), byl úspěšně testován proti Staphylococcus aureus (Gram-pozitivní bakterie), Escherichia coli (Gram-negativní bakterie) a Candida albicans (houba). Materiál výrazně potlačoval růst bakterií a taky významně inhiboval tvorbu biofilmu.
Příprava a použití N-chloraminů široké škály substrátů byly nárokovány v tomto patentu (Heller A. a kol., WO 2008/094664). Mezi substráty byly zahrnuty i biopolymery: N-chlorovaný chitosan, N-chlorovaný polylysin a N-chlorovaná deacetylovaná kyselina hyaluronová, kde chlor se nenachází na amidu hyaluronanu, ale na jeho deacetylovaném aminu. Jako formy byly použity roztoky nebo bandáže obsahující příslušné chloraminy. Tyto materiály po topické aplikaci výrazně snižovaly bolest a svědění. Pro přípravu chloraminů byla zmíněna činidla typu HOC1,
-3 CZ 308010 B6
NaClO, HCIO2, N-chlorosukcinimid, soli N-chlorsulfonamidů, molekulární chlor, thionylchlorid, fosgen, PCI3 a PCI5.
Obecně lze konstatovat, že chloramidy kyseliny hyaluronové s vyšším stupněm modifikace (víc než 50 %) nebyly doposud popsány. Zmíněny byly jenom chloramidy s nižším stupněm modifikace (maximálně 35 %), kde nebyla popsána žádná aplikace z důvodů souvisejících s nevyhovující stabilitou. Přitom tento materiál by byl unikátní tím, že by současně splňoval následující požadavky:
- biokompatibilita a biodegradovatelnost (v těle se vyskytuje například při určitých zánětlivých procesech)
- inhibice růstu široké škály mikroorganismů, hub nebo virů (analog chloramidů a chloraminů).
- pozitivní účinky na procesy spojené s hojením (přítomnost kyseliny hyaluronové)
- možnost přípravy široké škály forem (aktivní složka je kovalentně vázaná na nosný polymer)
Tato kombinace je obecně žádoucí pro vnější i vnitřní aplikace vyžadující antimikrobiální, antivirální a současně biokompatibilní kryty ran, výplně, antiadhezní přepážky, membrány, kapsy nebo obaly.
Tento vynález řeší přípravu a použití stabilních, biokompatibilních a biodegradovatelných kompozic obsahujících chloramid hyaluronanu, které vykazují antimikrobiální, antivirální a současně i hojivé účinky. Dále popisuje přípravu široké škály forem s velkou variabilitou velikostí povrchu, mechanických, případně Teologických vlastností a doby degradace.
Podstata vynálezu
Předmětem vynálezu je chlorovaný derivát kyseliny hyaluronové nebo modifikované kyseliny hyaluronové, nazývaný také chloramid hyaluronanu, který má vodík amidické skupiny -NH-COsubstituovaný atomem chloru podle strukturního vzorce -NC1-CO-, přičemž stupeň substituce je 50 až 100 %. Modifikovaná kyselina hyaluronová má některé -OH skupiny nahrazeny skupinou -O-CO-R2 a/nebo některé -CH2-OH skupiny nahrazeny za skupinu -CH=O a/nebo některé COOH skupiny nahrazeny skupinou -CO-OR2, kde R2 je lineární nebo aromatický řetězec s obsahem uhlíků Ci - C17. S výhodou je derivát kyseliny hyaluronové vybrán ze skupiny zahrnující ethylester, benzyl ester, formyl, lauroyl (C12), palmitoyl (C16), kaproyl (C6), kde molekulová hmotnost derivátu je s výhodou v rozmezí 5 až 500 kg.mol1 a stupeň modifikace je v rozsahu 1 až 100 %.
Dále se vynález týká způsobu přípravy chloramidů hyaluronanu, kde je chemická modifikace uskutečněna činidly obsahujícími chlor vázaný na dusík, s výhodou pomocí trichlorisokyanurové kyseliny nebo pomocí solí dichlorisokyanurové kyseliny. Konkrétně způsob podle vynálezu spočívá v tom, že se připraví vodný roztok výchozí kyseliny hyaluronové nebo jejího derivátu o molekulové hmotnosti v rozmezí 40 až 2200 kg.mol1, jehož koncentrace je v rozmezí 0,5 až 5 % hmotn., upraví se pH na rozmezí 2,5 až 7,5, s výhodou na rozmezí 4 až 6, například prostřednictvím kyseliny octové v množství 0,2 až 7 ekvivalentů na disacharid hyaluronanu, s výhodou 2-4 ekv. na disacharid hyaluronanu, a pak se přidá chlorační činidlo v množství 0,3 až
1,5 ekvivalentů na disacharid hyaluronanu a směs se nechá reagovat 5 až 72 hodin při teplotě 5 až 40 °C, načež se vzniklý chloramid izoluje vysrážením. Jako výchozí substrát lze použít kyselinu hyaluronovou, nebo její chemicky modifikovaný derivát o molekulové hmotnosti 40 až 2200 kg.mol1.
Předmětem vynálezu jsou i kompozice obsahující chloramid hyaluronanu, ve kterém je většina atomů vodíků amidické skupiny nahrazena za atomy chloru, tudíž vykazuje zvýšenou reaktivitu v oxidačních i redukčních reakcích. Finální kompozice můžou zahrnovat i modifikovanou kyselinu hyaluronovou s chemickou modifikaci na karboxylové a/nebo hydroxylové skupině. Kompozice
-4CZ 308010 B6 podle vynálezu se vyznačuje antimikrobiální, antifungální a antivirovou účinností. Chloramid je v kompozici přítomen v koncentraci 10 až 99 % hmota, a kompozice dále obsahuje aditivum vybrané ze skupiny zahrnující vodu, chlorid sodný, chlorid vápenatý, glycerol, kyselinu hyaluronovou, chondroitin sulfát, alginát sodný, oxycelulózu, karboxymethylcelulózu, hydroxyethylcelulózu nebo modifikovanou kyselinu hyaluronovou, která má některé -OH skupiny nahrazeny skupinou -O-CO-R2 a/nebo některé -CH2-OH skupiny nahrazeny skupinou CH=O a/nebo některé -CO-OH skupiny nahrazeny skupinou -CO-OR2, kde R2 je lineární nebo aromatický řetězec s obsahem uhlíků Ci - C17. Kompozice může být například ve formě roztoku nebo gelu ve vodném rozpouštědle, přičemž zastoupení chloramidu hyluronanu ve finální kompozici v přepočtu na suchý materiál je v rozsahu 10 až 100 %. Kompozice může být také ve formě pevného substrátu vybraného ze skupiny zahrnující samonosný film, lyofilizát, vrstvu ze staplových vláken (netkanou textilii), nekonečné vlákno, tkaninu, pleteninu, splétanou textilii nebo vrstvu nanovláken, přičemž zastoupení chloramidu hyaluronanu ve finální kompozici v přepočtu na suchý materiál je v rozsahu 10 až 100 %.
Chlorovaný derivát podle vynálezu, jakož i kompozici podle vynálezu lze použít pro přípravu krytů ran nebo pro přípravu implantabilních zdravotnických prostředků. Neomezujícími příklady pro tyto aplikace jsou přípravky pro prevenci vzniku srůstů po provedení anastomóz, nebo přípravky působící preventivně proti dehiscencím, nebo v kombinaci s jinými látkami prostředky pro plastiky defektů břišní stěny, nebo jako součást složení implantabilních obalů zdravotnických prostředků.
Příprava finálních kompozic pak dále zahrnuje tvorbu forem s obsahem chloramidu hyaluronanu, které můžou být připraveny v podobě:
- pevných forem, jako například samonosné filmy, lyofilizáty, vrstva ze staplových vláken (netkaná textilie), nekonečné vlákno, tkanina, pletenina, splétaná textilie nebo vrstva nanovláken, ve všech případech volitelně s obsahem dalších aditiv.
- kapalných forem, zejména vodných roztoků chloramidu, volitelně s obsahem dalších aditiv.
Neomezujícími příklady aditiv jsou například polyethylen oxid, kyselina hyaluronová, chondroitin sulfát, kyselina hyaluronová modifikovaná ve formě esterů, kyselina hyaluronová modifikovaná ve formě aldehydů, alginát sodný, karboxymethyl celulóza, oxycelulóza, hydroxyethyl celulóza, estery mastných kyselin, chlorid sodný, chlorid draselný nebo chlorid vápenatý.
Dále se vynález týká použití tohoto materiálu hlavně v oblastech, kde jsou vyžadovány následující vlastnosti, nebo jejich libovolné kombinace:
- oxidační nebo redukční nebo antimikrobiální nebo antifungální nebo antivirální aktivita
- biokompatibilita a biodegradovatelnost
- možnost přípravy různých forem s vyhovující stabilitou
- možnost řízení rychlosti biodegradace
- možnost řízení rychlosti oxidačních nebo redukčních reakcí
- významná podpora procesu hoj ení
Stabilní kapalné kompozice na bázi chloramidu hyaluronanu by neměly obsahovat aditiva, která s chloramidem hyaluronanu reagují. Jedná se především o sloučeniny citlivé na oxidaci (chloramid hyaluronanu se redukuje a funguje jako oxidant) anebo o silná oxidační činidla například s obsahem kyslíkových radikálů (chloramid hyaluronanu se oxiduje a funguje jako reduktant). U stabilních tuhých kompozic je možné kombinovat chloramid hyaluronanu i s aditivy, která s chloramidem hyaluronanu reagují. Jedná se ale jenom o případy, kde v procesu přípravy nepřijdou do kontaktu roztok chloramidu hyaluronanu a roztok aditiva.
Kontrolu řízení rychlosti biodegradace finální kompozice lze docílit buď kombinací chloramidu
-5 CZ 308010 B6 hyaluronanu s aditivy s pomalejší degradabilitou, například s alginátem sodným nebo karboxymethyl celulózou nebo s chemicky modifikovanou kyselinou hyaluronovou, a/nebo síťováním samotného chloramidu hyaluronanu například pomocí vícevalentních kationtů typu Ca2+.
Kontrolu řízení rychlosti uvolňování oxidující složky lze docílit změnou fyzikálních vlastností finální kompozice, jako například bobtnání, a to pomocí přídavku aditiv, která jsou méně polární. Jako neomezující příklad méně polárního aditiva je chemicky modifikovaný derivát kyseliny hyaluronové, který má některé -OH skupiny nahrazeny skupinou -O-CO-R2, a/nebo -CO-OH skupiny nahrazeny skupinou -CO-OR2, kde R2 ie - lineární nebo aromatický řetězec s obsahem uhlíků Ci - Civ.
Finální kompozice lze použít v biomedicínských aplikacích například jako kryty ran, přípravky proti akné, antibakteriální výplně, antiadhezní přepážky, membrány, kapsy nebo obaly.
Tento vynález řeší přípravu a použití stabilních, biokompatibilních a biodegradovatelných kompozic obsahujících chloramid hyaluronanu, které vykazují antimikrobiální, antivirální a současně i hojivé účinky. Stabilita materiálu je popsána v příkladu 16. Dále popisuje přípravu široké škály forem s velkou variabilitou velikosti povrchu, mechanických případně Teologických vlastností a doby degradace.
Realizace řešení popsaného v tomto vynálezu není technologicky komplikované a nevyžaduje použití méně dostupných chemikálií, rozpouštědel nebo izolačních postupů.
Objasnění výkresů
Obr. ΙΑ, 1B - Antimikrobiální aktivita kompozice ve formě lyofilizátu na bázi chloramidu hyaluronanu připraveného podle Příkladu 25.
Obrázky zobrazují inhibici růstu mikroorganismů Bacillus subtilis, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Candida Albicans, Pseudomona aeruginosa, Staphylolococus epidermis v přítomnosti rozpustných lyofilizátů na bázi chloramidu hyaluronanu připravených podle příkladu 25 (Obr. 1A) v porovnání s kontrolou, kterou byl lyofilizát z nativní kyseliny hyaluronové (Obr. 1B).
Postup stanovení antimikrobiální aktivity je popsán v příkladu 43.
Obr. 2 - Antimikrobiální aktivita kompozice ve formě filmu na bázi chloramidu hyaluronanu připraveného podle Příkladu 32.
Obrázky zobrazují inhibici růstu mikroorganismů Bacillus subtilis, Escherichia coli a Staphylococcus aureus v přítomnosti nerozpustného filmu na bázi chloramidu hyaluronanu s aditivem, jímž je hyaluronan esterifikovaný laurovou kyselinou, film připravený podle příkladu 32, v porovnání s kontrolou připravenou podle příkladu 31.
Postup stanovení antimikrobiální aktivity je popsán v příkladu 43.
Příklady uskutečnění vynálezu
DS = stupeň substituce = 100 % * (molámí množství modifikovaných jednotek polymeru) / (molámí množství všech jednotek polymeru)
Zde používaný výraz ekvivalent (ekv) se vztahuje, není-li uvedeno jinak, na opakující se jednotku
-6CZ 308010 B6 příslušného polysacharidu, například na disacharid kyseliny hyaluronové. Procenta se uvádějí jako hmotnostní procenta, pokud není uvedeno jinak. Molekulová hmotnost polymerů je hmotnostně střední stanovená pomocí metody SEC-MALLS.
Příklad 1
Příprava ethylesteru hyaluronanu
Do roztoku hyaluronanu (1 g, 300 kg.mol1) ve 40 ml vody se přidal NaOH až do pH = 9. Pak se přidalo 20 ml dimethylsulfoxidu a 0,08 ml ethyljodidu a směs se míchala 3 dny při 45 °C. Výsledná směs pak byla srážena 140 ml 100% isopropanolu, odfiltrovaná tuhá látka byla promyta isopropanolem a sušena ve vakuu. Produkt (897 mg) byl analyzován pomocí NMR. DS esteru 6 % (stanoveno NMR, lit. Kettou S. a kol. CZ PV 2009-399).
Příklad 2
Příprava benzylesteru hyaluronanu
Do roztoku hyaluronanu (1 g, 300 kg.mol1) ve 40 ml vody se přidal NaOH až do pH = 9. Pak se přidalo 20 ml dimethylsulfoxidu a 0,08 ml benzylbromidu a směs se míchala 4 dny při 20 °C. Výsledná směs pak byla srážena 140 ml 100% isopropanolu, odfiltrovaná tuhá látka byla promyta isopropanolem a sušena ve vakuu. Finální produkt získaný v množství 920 mg byl analyzován pomocí NMR. DS esteru 3 % (stanoveno NMR, lit. Kettou a kol. PV 2009-399).
Příklad 3
Příprava lauroyl hyaluronanu
Do roztoku hyaluronanu (5 g, 250 kg.mol1) ve 100 ml destilované vody bylo přidáno 70 ml tetrahydrofuranu, 4 ekvivalenty triethylaminu a 0,1 ekvivalentu 4-dimetylaminopyridinu. Paralelně byla rozpuštěna kyselina laurová (4 ekvivalenty) v 30 ml tetrahydrofuranu a 7 ml triethylaminu a do tohoto roztoku bylo přidáno 4,8 ml ethylchloroformiátu při 0-5 °C po dobu 15 minut. Vniklá suspenze byla přefiltrována do roztoku hyaluronanu a reakční směs byla míchána 5 hodin při 20 °C. Výsledný roztok byl pak srážen přídavkem 400 ml 100% isopropanolu, promyt 80% isopropanolem, pak 100% isopropanolem. Sraženina byla pak sušena při 40 °C, 2 dny. Stupeň substituce byl stanoven z NMR na 37 %.
Příklad 4
Příprava formy! hyaluronanu
Do jednoprocentního vodného roztoku HA (1 g, 200 kg.mol1) s obsahem NaCl 1%, KBr 1%, Nacetylamino-TEMPO (0,01 ekv) a NaHCOs (20 ekv.) se postupně přidával vodný roztok NaClO (0,5 ekv) pod dusíkem. Směs se míchala 12 h při teplotě 10 °C, pak se přidal 0,1 g etanolu a směs byla míchána ještě 1 hodinu. Výsledný roztok pak byl zředěn destilovanou vodou na 0,2% a dialyzován oproti směsi (0,1% NaCl, 0,1% NHCOs) 3-krát 5 litrů (1 x denně) a pak oproti destilované vodě 7-krát 5 litrů (2 x denně). Výsledný roztok byl pak odpařen a analyzován. DS 9 % (stanoveno z NMR)
Příklad 5
Příprava chloramidu hyaluronanu g hyaluronanu (Mw 2200 kg.mol1) bylo rozpuštěno ve 250 ml destilované vody. Pak byly přidány 2 ml kyseliny octové a po 15 minutách míchání při 20 °C bylo přidáno 3,2 g (1 ekv.)
-7 CZ 308010 B6 sodné soli dichlorisokyanurové kyseliny. Směs byla pak 24 hodin míchána při 20 °C, pak srážena
2,5 litrem isopropanolu a filtrována. Tuhý podíl byl promyt 2 litry isopropanolu a sušen ve vakuu 20 hodin. DS 82 % (stanoveno z NMR).
Příklad 6
Příprava chloramidu hyaluronanu g hyaluronanu (Mw 40 kg.mol1) bylo rozpuštěno ve 100 ml destilované vody. Pak byly přidány 2 ml kyseliny octové a po 15 minutách míchání při 20 °C bylo přidáno 3,2 g (1 ekv.) sodné soli dichlorisokyanurové kyseliny. Směs byla pak 24 hodin míchána při 20 °C, pak srážena 2,5 litrem isopropanolu a filtrována. Tuhý podíl byl promyt 2 litry isopropanolu a sušen ve vakuu 20 hodin. DS 83 % (stanoveno z NMR).
Příklad 7
Příprava chloramidu hyaluronanu g hyaluronanu (Mw 2200 kg.mol1) bylo rozpuštěno v 1000 ml destilované vody. Pak byly přidány 2 ml kyseliny octové a po 15 minutách míchání při 20 °C bylo přidáno 3,2 g (1 ekv.) sodné soli dichlorisokyanurové kyseliny. Směs byla pak 24 hodin míchána při 20 °C, pak srážena
2,5 litrem isopropanolu a filtrována. Tuhý podíl byl promyt 2 litry isopropanolu a sušen ve vakuu 20 hodin. DS 72 % (stanoveno z NMR).
Příklad 8
Příprava chloramidu hyaluronanu g hyaluronanu (Mw 2200 kg.mol1) bylo rozpuštěno ve 250 ml destilované vody. Pak bylo přidáno 0,14 ml kyseliny octové (0,2 ekv) a po 15 minutách míchání při 20 °C bylo přidáno 3,2 g (1 ekv.) sodné soli dichlorisokyanurové kyseliny. Směs byla pak 24 hodin míchána při 20 °C, pak srážena 2,5 litrem isopropanolu a filtrována. Tuhý podíl byl promyt 2 litry isopropanolu a sušen ve vakuu 20 hodin. DS 53% (stanoveno z NMR).
Příklad 9
Příprava chloramidu hyaluronanu g hyaluronanu (Mw 180 kg.mol1) bylo rozpuštěno ve 250 ml destilované vody. Pak byly přidány 3 ml kyseliny octové a po 15 minutách míchání při 20 °C bylo přidáno 3,2 g (1 ekv.) sodné soli dichlorisokyanurové kyseliny. Směs byla pak 24 hodin míchána při 20 °C, pak srážena
2,5 litrem isopropanolu a filtrována. Tuhý podíl byl promyt 2 litry isopropanolu a sušen ve vakuu 20 hodin. DS 53 % (stanoveno z NMR).
Příklad 10
Příprava chloramidu hyaluronanu g hyaluronanu (Mw 2200 kg.mol1) bylo rozpuštěno ve 250 ml destilované vody. Pak bylo přidáno 5 ml kyseliny octové (7 ekv) a po 15 minutách míchání při 20 °C bylo přidáno 3,2 g (1 ekv.) sodné soli dichlorisokyanurové kyseliny. Směs byla pak 24 hodin míchána při 20 °C, pak srážena 2,5 litrem isopropanolu a filtrována. Tuhý podíl byl promyt 2 litry isopropanolu a sušen ve vakuu 20 hodin. DS 95 % (stanoveno z NMR).
-8CZ 308010 B6
Příklad 11
Příprava chloramidu hyaluronanu g hyaluronanu (Mw 2200 kg.mol1) bylo rozpuštěno ve 250 ml destilované vody. Pak byly přidány 2 ml kyseliny octové a po 15 minutách míchání při 20 °C bylo přidáno 1,07 g (0,33 ekv.) sodné soli dichlorisokyanurové kyseliny. Směs byla pak 24 hodin míchána při 20 °C, pak srážena
2,5 litrem isopropanolu a filtrována. Tuhý podíl byl promyt 2 litry isopropanolu a sušen ve vakuu 20 hodin. DS 51 % (stanoveno z NMR).
Příklad 12
Příprava chloramidu hyaluronanu g hyaluronanu (Mw 2200 kg.mol1) bylo rozpuštěno ve 250 ml destilované vody. Pak byly přidány 2 ml kyseliny octové a po 15 minutách míchání při 20 °C bylo přidáno 4,8 g (1,5 ekv.) sodné soli dichlorisokyanurové kyseliny. Směs byla pak 24 hodin míchána při 20 °C, pak srážena
2,5 litrem isopropanolu a filtrována. Tuhý podíl byl promyt 2 litry isopropanolu a sušen ve vakuu 20 hodin. DS 96 % (stanoveno z NMR).
Příklad 13
Příprava chloramidu hyaluronanu g hyaluronanu (Mw 2200 kg.mol1) bylo rozpuštěno ve 250 ml destilované vody. Pak byly přidány 2 ml kyseliny octové a po 15 minutách míchání při 20 °C bylo přidáno 2,91 g (1 ekv.) trichlorisokyanurové kyseliny. Směs byla pak 24 hodin míchána při 20 °C, pak srážena 2,5 litrem isopropanolu a filtrována. Tuhý podíl byl promyt 2 litry isopropanolu a sušen ve vakuu 20 hodin. DS 97 % (stanoveno z NMR).
Příklad 14
Příprava chloramidu hyaluronanu g hyaluronanu (Mw 2200 kg.mol1) bylo rozpuštěno ve 250 ml destilované vody. Pak byly přidány 2 ml kyseliny octové a po 15 minutách míchání při 20 °C bylo přidáno 0,87 g (0,3 ekv.) trichlorisokyanurové kyseliny. Směs byla pak 24 hodin míchána při 20 °C, pak srážena 2,5 litrem isopropanolu a filtrována. Tuhý podíl byl promyt 2 litry isopropanolu a sušen ve vakuu 20 hodin. DS 71 % (stanoveno z NMR).
Příklad 15
Příprava chloramidu hyaluronanu g hyaluronanu (Mw 2200 kg.mol1) bylo rozpuštěno ve 250 ml destilované vody. Pak byly přidány 2 ml kyseliny octové a po 15 minutách míchání při 20 °C bylo přidáno 3,2 g (1 ekv.) sodné soli dichlorisokyanurové kyseliny. Směs byla pak 5 hodin míchána při 20 °C, pak srážena
2,5 litrem isopropanolu a filtrována. Tuhý podíl byl promyt 2 litry isopropanolu a sušen ve vakuu 20 hodin. DS 52 % (stanoveno z NMR).
Příklad 16
Příprava chloramidu hyaluronanu
-9CZ 308010 B6 g hyaluronanu (Mw 2200 kg.mol-1) bylo rozpuštěno ve 250 ml destilované vody. Pak byly přidány 2 ml kyseliny octové a po 15 minutách míchání při 20 °C bylo přidáno 3,2 g (1 ekv.) sodné soli dichlorisokyanurové kyseliny. Směs byla pak 48 hodin míchána při 20 °C, pak srážena
2,5 litrem isopropanolu a filtrována. Tuhý podíl byl promyt 2 litry isopropanolu a sušen ve vakuu 20 hodin. DS 85% (stanoveno z NMR). NMR roztok (7 mg produktu v 0,7 ml D2O) byl měřen po dalších 5 dnech stání při 20 °C. DS bylo stanoveno na 84%. Tuhý podíl ve formě prášku stál při 20 °C 100 dnů, pak byl vzorek rozpuštěn v D2O. DS bylo stanoveno na 84 %.
Příklad 17
Příprava chloramidu hyaluronanu g hyaluronanu (Mw 2200 kg.mol1) bylo rozpuštěno ve 250 ml destilované vody. Pak byly přidány 2 ml kyseliny octové a po 15 minutách míchání při 20 °C bylo přidáno 3,2 g (1 ekv.) sodné soli dichlorisokyanurové kyseliny. Směs byla pak 72 hodin míchána při 5 °C, pak srážen litrem isopropanolu a filtrována. Tuhý podíl byl promyt 2 litry isopropanolu a sušen ve vakuu 20 hodin. DS 64 % (stanoveno z NMR).
Příklad 18
Příprava chloramidu hyaluronanu g hyaluronanu (Mw 2200 kg.mol1) bylo rozpuštěno ve 250 ml destilované vody. Pak byly přidány 2 ml kyseliny octové a po 15 minutách míchání při 20 °C bylo přidáno 3,2 g (1 ekv.) sodné soli dichlorisokyanurové kyseliny. Směs byla pak 5 hodin míchána při 40 °C, pak srážena litrem isopropanolu a filtrována. Tuhý podíl byl promyt 2 litry isopropanolu a sušen ve vakuu 20 hodin. DS 75 % (stanoveno z NMR).
Příklad 19
Příprava chloramidu hyaluronanu g hyaluronanu (Mw 300 kg.mol1) bylo rozpuštěno ve 250 ml destilované vody. Pak byly přidány 2 ml kyseliny octové a po 15 minutách míchání při 20 °C bylo přidáno 2,56 g (0,8 ekv.) sodné soli dichlorisokyanurové kyseliny. Směs byla pak 24 hodin míchána při 20 °C, pak srážena
2,5 litrem isopropanolu a filtrována. Tuhý podíl byl promyt 2 litry isopropanolu a sušen ve vakuu 20 hodin. DS 79 % (stanoveno z NMR).
Příklad 20
Příprava chloramidu hyaluronanu g hyaluronanu (Mw 300 kg.mol1) bylo rozpuštěno ve 350 ml destilované vody. Pak byly přidány 2 ml kyseliny octové a po 5 minutách míchání při 20 °C bylo přidáno 2,56 g (0,8 ekv.) sodné soli dichlorisokyanurové kyseliny. Směs byla pak 22 hodin míchána při 17 °C, pak srážena
2,5 litrem isopropanolu a filtrována. Tuhý podíl byl promyt 2 litry isopropanolu a sušen ve vakuu 20 hodin. DS 66 % (stanoveno z NMR).
Příklad 21
Příprava chloramidu hyaluronanu g hyaluronanu (Mw 300 kg.mol1) bylo rozpuštěno ve 250 ml destilované vody. Pak byly přidány 2 ml kyseliny octové a po 15 minutách míchání při 5 °C bylo přidáno 2,56 g (0,8 ekv.) sodné soli dichlorisokyanurové kyseliny. Směs byla pak 24 hodin míchána při 5 °C, pak srážena
- 10CZ 308010 B6
2,5 litrem isopropanolu a filtrována. Tuhý podíl byl promyt 2 litry isopropanolu a sušen ve vakuu 20 hodin. DS 50 % (stanoveno z NMR).
Příklad 22
Příprava chloramidu ethyl esteru hyaluronanu
0,5 g ethylesteru hyaluronanu připraveného podle příkladu 1 bylo rozpuštěno ve 25 ml destilované vody. Pak byly přidány 0,2 ml kyseliny octové a po 15 minutách míchání při 20 °C bylo přidáno 0,32 g (1 ekv.) sodné soli dichlorisokyanurové kyseliny. Směs byla pak 24 hodin míchána při 20 °C, pak srážen 250 ml isopropanolu a filtrována. Tuhý podíl byl promyt 0,2 litry isopropanolu a sušen ve vakuu 20 hodin. DS 80 % (stanoveno z NMR).
Příklad 23
Příprava chloramidu benzyl esteru hyaluronanu
0,5 g benzylesteru hyaluronanu připraveného podle příkladu 2 bylo rozpuštěno ve 25 ml destilované vody. Pak byly přidány 0,2 ml kyseliny octové a po 15 minutách míchání při 20 °C bylo přidáno 0,32 g (1 ekv.) sodné soli dichlorisokyanurové kyseliny. Směs byla pak 24 hodin míchána při 20 °C, pak srážena 0,25 litru isopropanolu a filtrována. Tuhý podíl byl promyt 0,2 litry isopropanolu a sušen ve vakuu 20 hodin. DS 78 % (stanoveno z NMR).
Příklad 24
Příprava chloramidu formy! hyaluronanu
0,5 g formylu hyaluronanu připraveného podle příkladu 4 bylo rozpuštěno ve 25 ml destilované vody. Pak byly přidány 0,2 ml kyseliny octové a po 15 minutách míchání při 20 °C bylo přidáno 0,32 g (1 ekv.) sodné soli dichlorisokyanurové kyseliny. Směs byla pak 24 hodin míchána při 20 °C, pak srážena 0,25 litru isopropanolu a filtrována. Tuhý podíl byl promyt 0,2 litry isopropanolu a sušen ve vakuu 20 hodin. DS 75 % (stanoveno z NMR).
Příklad 25
Příprava lyofilizátu chloramidu hyaluronanu
Roztok 0,2 g chloramidu hyaluronanu připraveného podle příkladu 5 v 10 ml destilované vody byl po homogenizaci hned zamražen při -50 °C a lyofilizován. DS bylo stanoveno pomocí NMR na 70 %.
Příklad 26
Příprava lyofilizátu chloramidu ethyl esteru hyaluronanu
Roztok 0,2 g chloramidu ethyl esteru hyaluronanu připraveného podle příkladu 22 v 10 ml destilované vody byl po homogenizaci hned zamražen při -50 °C a lyofilizován. DS bylo stanoveno pomocí NMR na 68 %.
Příklad 27
Příprava lyofilizátu chloramidu benzyl esteru hyaluronanu
Roztok 0,2 g chloramidu benzyl esteru hyaluronanu připraveného podle příkladu 23 v 10 ml destilované vody byl po homogenizaci hned zamražen při -50 °C a lyofilizován. DS bylo
- 11 CZ 308010 B6 stanoveno pomocí NMR na 67 %.
Příklad 28
Příprava netkané textilie ze staplových vláken z chloramidů hyaluronanu
K přípravě 2 % roztoku byl použit chloramid hyaluronanu (příklad 14) se stupněm substituce 71 % NMR. Tato složka byla navážena a v potřebném množství doplněna destilovanou vodou. Celá směs byla promíchávána na míchačce při pokojové teplotě, při nastavených otáčkách 500 RPM po dobu míchání 24 hodin. Výsledný roztok byl čirý, mírně viskózní. Způsob přípravy staplových vláken je založen na srážení polymerniho roztoku v proudu mobilní koagulační lázně obsahující 100 % isopropanol. Roztok byl dávkován při pokojové teplotě skrz extruzní trysky do proudu koagulační lázně skrz zvlákňovací trubice (1 trubice/průměr 8 mm), při nastavené průtočné rychlosti lázně 1,15 m/s. Srážením bylo docíleno tvorby staplových vláken. Vzniklá vlákna byla unášena v proudu lázně a zachytávána na separačních hřebíncích, přenesena do zračí lázně s obsahem 100 % isopropanolu. Surová vlákna ve zračí lázni byla hned pomleta v mixéru s rotujícími čepelemi při poměru 0,5 g vláken na 350 ml zračí lázně. Výsledná vlákenná disperze byla přefiltrována přes porézní substrát přes filtrační rám. V daném experimentu byl použit rám o velikosti 64 cm2. Přefiltrovaná vlákna byla pomocí PAD pleteniny přenesena na sušicí zařízení s fixací netkané textilie. Před vložením na sušicí zařízení byly pomocí válečku odstraněny zbytky srážedla. Netkaná textilie byla sušena při teplotě 40 °C po dobu 30 minut. Výsledná vrstva byla ze substrátu oddělena jako samostatná vrstva a zvážena na analytických vahách. Plošná hmotnost textilie činila 50,2 g/m2. Stupeň substituce byl u vzniklé netkané textilie stanoven pomocí NMR na 64 %.
Příklad 29
Příprava nanovlákenné vrstvy z chloramidů hyaluronanu
Pro přípravu nanovlákenné vrstvy s obsahem kyseliny hyaluronové byl připraven vodný roztok s následujícím složením. Koncentrace chloramidů hyaluronanu připraveného postupem 5 v sušině byla 37,5 %, koncentrace nativního hyaluronanu o molekulové hmotnosti 80 kg.mol1 byla
37,5 %, polyethylenoxid o molekulové hmotnosti 600 kg.mol1 tvořil 25 %. Celková koncentrace sušiny byla 5 %. Roztok byl naplněn do stříkačky a elektrostaticky zvlákněn na deskový kolektor za použití bezjehlové lineární trysky, napětí 50 kV a vzdálenosti 16 cm mezi emitorem a kolektorem. Vlákna mají rozměr 110 ± 27 nm. DS bylo stanoveno pomocí NMR na 30 %.
Příklad 30
Příprava samonosného filmu z chloramidů hyaluronanu
Příprava filmu probíhala ve specializovaném sušicím zařízení, kde byl film sušen v uzavřeném prostoru. Zařízení je vybaveno spodní a horní deskou s regulovatelnou teplotou. Zařízení je blíže popsáno v (Foglarová a kol. PV2015-166; Foglarová M. a kol. Carbohydrate Polymers 2016, 144, 68-75). Navážka 200 mg chloramidů hyaluronanu popsaného v příkladu 5 byla rozpuštěna ve 20 ml demi-vody a nechána míchat 2 hodiny. Poté byl roztok nadávkován do sušicího zařízení na podložku (hydrofobizované sklo) a usušen v uzavřeném prostoru při teplotě spodní desky 50 °C a teplotě horní desky 20 °C. Doba sušení byla 18 hodin. Po usušení byl film sejmut z podložky a uchován pro další použití. DS bylo stanoveno pomocí NMR na 60 %.
Příklad 31
Příprava samonosného filmu z lauroyl hyaluronanu a nativního hyaluronanu (4/1)
Příprava filmu probíhala v zařízení popsaném v příkladu 30. Navážka 160 mg lauroyl derivátu
- 12CZ 308010 B6 hyaluronanu sodného popsaného v příkladu 3 byla rozpuštěna v 16 ml vodného roztoku 2-propanolu (50 % w/w) a nechána míchat 18 hodin. Navážka 40 mg nativního hyaluronanu o molekulové hmotnosti 330 kg.mol1 byla rozpuštěna ve 4 ml demi-vody a nechána míchat 18 hodin. Oba roztoky byly poté smíseny a nechány míchat 30 minut. Poté byl výsledný směsný roztok nadávkován do sušicího zařízení na podložku (hydrofobizované sklo) a usušen v uzavřeném prostoru při teplotě spodní desky 50 °C a teplotě horní desky 20 °C. Doba sušení byla 7 hodin. Po usušení byl film sejmut z podložky a uchován pro další použití.
Příklad 32
Příprava samonosného filmu z lauroyl hyaluronanu a chloramidu hyaluronanu (3/1)
Příprava filmu probíhala v zařízení popsaném v příkladu 30. Navážka 150 mg lauroyl derivátu hyaluronanu sodného popsaného v příkladu 3 byla rozpuštěna v 15 ml vodného roztoku 2-propanolu (50 % w/w) a nechána míchat 18 hodin. Navážka 50 mg chloramidu hyaluronanu popsaného v příkladu 5 byla rozpuštěna v 5 ml demi-vody a nechána míchat 2 hodiny. Oba roztoky byly poté smíseny a nechány míchat 30 minut. Poté byl výsledný směsný roztok nadávkován do sušicího zařízení na podložku (hydrofobizované sklo) a usušen v uzavřeném prostoru při teplotě spodní desky 50 °C a teplotě horní desky 20 °C. Doba sušení byla 7 hodin. Po usušení byl film sejmut z podložky a uchován pro další použití. DS chloramidu hyaluronanu ve výsledném materiálu bylo stanoveno pomocí NMR na 25 %.
Příklad 33
Příprava samonosného filmu z lauroyl hyaluronanu a chloramidu hyaluronanu (4/1)
Příprava filmu probíhala v zařízení popsaném v příkladu 30. Navážka 160 mg lauroyl derivátu hyaluronanu sodného popsaného v příkladu 3 byla rozpuštěna v 16 ml vodného roztoku 2-propanolu (50 % w/w) a nechána míchat 18 hodin. Navážka 40 mg chloramidu hyaluronanu popsaného v příkladu 5 byla rozpuštěna ve 4 ml demi-vody a nechána míchat 2 hodiny. Oba roztoky byly poté smíseny a nechány míchat 30 minut. Poté byl výsledný směsný roztok nadávkován do sušicího zařízení na podložku (hydrofobizované sklo) a usušen v uzavřeném prostoru při teplotě spodní desky 50 °C a teplotě horní desky 20 °C. Doba sušení byla 7 hodin. Po usušení byl film sejmut z podložky a uchován pro další použití. DS chloramidu hyaluronanu ve výsledném materiálu bylo stanoveno pomocí NMR na 20 %.
Příklad 34
Příprava pleteniny z vláken z chloramidu hyaluronanu
Pro tvorbu vlákna byl jako vstupní surovina použit chloramid hyaluronanu připravený dle postupu 14. Rozpuštěním tohoto polymeru v demineralizované vodě byl připraven roztok o koncentraci 4,7 %. Po rozpuštění byl roztok převeden do injekční stříkačky a odplyněn pomocí centrifugy. Roztok byl dávkován rychlostí 200 μΙ/min do srážecí lázně složené ze směsi kyselina mléčná a isopropanol 1:4. Vlákno bylo navíjeno rychlostí 1,45 m/min. Následně bylo vlákno promyto v isopropylalkoholu a zasušeno. Jemnost vlákna byla 9 tex, pevnost 1,0 N a tažnost 11 %. DS chloramidu bylo stanoveno pomocí NMR na 34 %. Pro tvorbu pleteniny byla sdružena a zakroucena tři vlákna na prstencovém stroji při podávání 10 m/min a otáčkách vřetene 3000 min výsledný zákrut měl hodnotu 300 m1. Z nití byla na dvoulůžkovém osnovním pletacím stroji vyrobena oboulícní pletenina v trikotové vazbě s uzavřenými očky. Výsledný pruh pleteniny měl šířku 10 mm, plošnou hmotnost 99 g.m-2 a hustotu oček 36 cm'2.
Příklad 35
Příprava pleteniny z vláken z lauroyl hyaluronanu a chloramidu hyaluronanu (4/1)
- 13 CZ 308010 B6
Pro tvorbu vlákna byla jako vstupní surovina použita kombinace 400 mg lauroyl hyaluronanu připraveného podle příkladu 3 a 100 mg chloramidu hyaluronanu připraveného dle příkladu 14. Navážka chloramidu hyaluronanu byla rozpuštěna v 6 mL demi vody, následně bylo přilito 5,1 mL isopropanolu a přidána navážka lauroyl hyaluronanu (DS dle NMR 91 %, MW 300350 kDa). Byl připraven roztok o koncentraci 4,5 %, který byl převeden do injekční stříkačky a odplyněn pomocí centrifugy. Následně byl roztok dávkován rychlostí 200 μΐ/min do srážecí lázně složené ze směsi kyselina mléčná a isopropanol 1:4. Vlákno bylo navíjeno rychlostí 1,32 m/min. Následně bylo vlákno promyto v isopropylalkoholu, stabilizováno v acetonu a zasušeno. Jemnost vlákna byla 8 tex, pevnost 0,7 N a tažnost 16 %. Pro tvorbu pleteniny byla sdružena a zakroucena tri vlákna na prstencovém stroji při podávání 10 m/min a otáčkách vřetene 3000 min1; výsledný zákrut měl hodnotu 300 m1. Z nití byla na dvoulůžkovém osnovním pletacím stroji vyrobena oboulícní pletenina v trikotové vazbě s uzavřenými očky. Výsledný pruh pleteniny měl šířku 10 mm, plošnou hmotnost 91 g.m-2 a hustotu oček 36 cm'2.
Příklad 36
Příprava lyofilizátu oxycelulóza/chloramid hyaluronanu
Roztok oxycelulózy (0,3 g, Mw 50 kg.mol1) a chloramidu hyaluronanu (0,1 g) připraveného podle postupu 5 ve 100 ml destilované vody byl po homogenizaci hned zamražen při -50 °C a lyofilizován. DS chloramidu hyaluronanu bylo stanoveno pomocí NMR na 24 %.
Příklad 37
Příprava lyofilizátu alginát/ chloramid hyaluronanu
Roztok alginátu (0,3 g, Mw 40 kg.mol-1) a chloramidu hyaluronanu (0,1 g) připraveného podle postupu 5 ve 100 ml destilované vody byl po homogenizaci hned zamražen při -50 °C a lyofilizován. DS chloramidu hyaluronanu bylo stanoveno pomocí NMR na 26 %.
Příklad 38
Příprava lyofilizátu karboxymethylcelulóza/ chloramid hyaluronanu
Roztok karboxymethyl celulózy (0,3 g, Mw 30 kg.mol-1) a chloramidu hyaluronanu (0,03 g) připraveného podle postupu 5 ve 100 ml destilované vody byl po homogenizaci hned zamražen při -50 °C a lyofilizován. DS chloramidu hyaluronanu bylo stanoveno pomocí NMR na 3 %.
Příklad 39
Příprava lyofilizátu chondroitin sulfát/ chloramid hyaluronanu
Roztok chondroitin sulfátu (0,03 g, Mw 45 kg.mol-1) a chloramidu hyaluronanu (0,3 g) připraveného podle postupu 5 ve 100 ml destilované vody byl po homogenizaci hned zamražen při -50 °C a lyofilizován. DS chloramidu hyluronanu bylo stanoveno pomocí NMR na 75 %.
Příklad 40
Příprava lyofilizátu hydroxyethyl celulóza/ chloramid hyaluronanu
Roztok hydroxyethyl celulózy (0,3 g, Mw 45 kg.mol-1) a chloramidu hyaluronanu (0,1 g) připraveného podle postupu 5 ve 100 ml destilované vody byl po homogenizaci hned zamražen při -50 °C a lyofilizován. DS chloramidu hyaluronanu bylo stanoveno pomocí NMR na 25 %.
- 14CZ 308010 B6
Příklad 41
Příprava lyofilizátu formy! hyaluronan / chloramid hyaluronanu
Roztok formyl hyaluronanu (0,3 g, Mw 45 kg.mol1) připraveného podle příkladu 4 a chloramidu hyaluronanu (0,1 g) připraveného podle příkladu 5, ve 100 ml destilované vody byl po homogenizaci hned zamražen při -50 °C a lyofilizován. DS chloramidu hyaluronanu bylo stanoveno pomocí NMR na 25 %.
Příklad 42
Příprava lyofilizátu chloramid hyaluronanu síťovaného s CaCl2
Do roztoku chloramidu hyaluronanu (0,1 g) připraveného podle postupu 5 ve 100 ml destilované vody bylo přidáno 0,0Ig CaCl2.2H2O a směs se míchala 1 hodinu při 20 °C. Po homogenizaci byl výsledný viskózní roztok zamražen při -50 °C a lyofilizován. DS chloramidu hyaluronanu bylo stanoveno pomocí NMR na 64 %.
Příklad 43
Testování antimikrobiální a antifúngální aktivity in vitro (obrázek 1 a 2):
Suspenze jednotlivých testovaných mikroorganismů byly připraveny o přibližné koncentraci 105 CFU/ml. Na povrch tryptonsojového agaru v Petriho miskách bylo vyočkováno 100 μΐ suspenze (přibližný počet mikroorganismů aplikovaných na misku byl 104 CFU). Suspenze byla rovnoměrně rozetřena po povrchu celé misky sterilní kličkou. Po vsáknutí suspenze do agaru byly na jeho povrch sterilně přeneseny testované vzorky ve formě čtverečků. Misky s testovacími kmeny bakterií byly uloženy ke kultivaci při 37 °C na dobu 24 hodin. Byly testovány lyofilizáty s chloramidem hyaluronanu připravené podle příkladu 25 a samonosné filmy s obsahem chloramidu hyaluronanu připravené podle příkladu 32, přičemž jako kontroly byly použity analogické čtverečky bez obsahu chloramidu hyaluronanu. Byly připraveny čtverečky o hmotnosti 8-12 mg a přibližných rozměrech 15 mm x 15 mm. Pro testování účinnosti byla zvolena difúzní plotnová metoda (2D uspořádání). Ke kultivaci byla použita neselektivní půda (trypton-sojový agar). Vzorky čtverečků byly testovány na mikroorganismech - Bacillus subtilis, Escherichia coli, Staphylococcus aureiis, Candida Albicans (plíseň), Pseudomona aeruginosa, Staphylolococus epidermis. Z Obrázků 1 a 2 je patrná výrazně vyšší inhibice růstu bakterii u kompozic podle vynálezu s obsahem chloramidu hyaluronanu ve srovnání s kontrolou bez chloramidu hyaluronanu.
Příklad 44
Testování antivirální aktivity jako test redukce plaků:
Počet opakování - 5, testovaná látka připravena podle příkladu 19, testovaný vir CVB3 (Nancy) v koncentraci 3x10E7, 5 PFU/ml, buňkový substrát VĚRO
Postup:
Na buňkový substrát na Petriho miskách byl po dobu 30 minut adsorbován vir naředěný 107 krát v objemu 1,5 mL, v negativních kontrolách bylo použito PBS bez viru. Vir byl odsát a buňky převrstveny testovanou látkou (případně HA a PBS v negativních kontrolách), inkubace 5 hodin při 37 °C a 5 % CO2. Buňky byly opláchnuty PBS a převrstveny mediem EMEM s 5 % inaktivovaného FBS a 0,75 % agarózy. Inkubace 4 dny 37 °C a 5 % CO2. Médium bylo odstraněno a buňky barveny krystalovou violetí, pak byly spočítány plaky. Antivirová aktivita je v testu úměrná redukci počtu plaků.
- 15 CZ 308010 B6
popis skupiny inkubace s testovanou látkou PFU na PM průměr SD
kontrola buněk s PBS PBS 0 0 0 0 0 0 0
kontrola buněk s HA HA 1 % v PBS 0 0 0 0 0 0 0
kontrola toxicity Chloramid HA 1 % v PBS 0 0 0 0 0 0 0
kontrola viru sPBS PBS 13 9 7 14 10 10,6 2,88
kontrola viru sHA HA 1 % v PBS 10 6 14 12 10 10,4 2,97
test 1 Chloramid HA 0,1% v PBS 5 7 10 8 9 7,8 1,92
test 2 Chloramid HA 0,5 % v PBS 8 5 8 7 8 7,2 1,3
test 3 Chloramid HA 1 % v PBS 4 1 2 3 3 2,6 1,14
FBS - fetální bovinní sérum, VĚRO - stabilizovaná buňková linie derivovaná z ledviny Cercopithecus aethiops, EMEM - Eaglovo minimální esenciální médium, 3xlOE7,5 PFU/ml je koncentrace viru použitého na přípravu infekční suspenze - 3x 10 na 7,5 plak tvořících jednotek na ml, PFU/ml je jednotka množství viru, kde PFU jsou plak tvořící jednotky, PM - Petriho miska, SD - směrodatná odchylka.
Z výsledků je patrné, že přítomnost chloramidu hyaluronanu inhibuje růst virů (test 1, 2 a 3) v porovnání se standardem „kontrola virů s HA“, přičemž vyšší koncentrace chloramidu inhibuje intenzivněji.
PATENTOVÉ NÁROKY

Claims (11)

1. Chlorovaný derivát kyseliny hyaluronové nebo modifikované kyseliny hyaluronové nazývaný chloramid, který má vodík amidické skupiny -NH-CO- substituovaný atomem chloru podle strukturního vzorce -NC1-CO-, přičemž stupeň substituce je 50 až 100 %, a přičemž modifikovaná kyselina hyaluronová je kyselina hyaluronová, která má -OH skupiny z části nahrazeny skupinou -O-CO-R2 a/nebo -CH2-OH skupiny z části nahrazeny skupinou -CH=O a/nebo -CO-OH skupiny z části nahrazeny skupinou -CO-OR2, kde R2 je lineární řetězec s obsahem uhlíků Ci - C17 nebo aromatický řetězec s maximálním obsahem uhlíků C17.
2. Chlorovaný derivát podle nároku 1, kde modifikovaná kyselina hyaluronová je vybrána ze skupiny zahrnující ethylester, benzyl ester, formyl, lauroyl (C12), palmitoyl (C16), kaproyl (C6).
3. Chlorovaný derivát podle kteréhokoli z nároků 1 až 2, kde jeho molekulová hmotnost je v rozmezí 5 až 500 kg.mol1.
4. Způsob přípravy chloramidu hyaluronanu nebo chloramidu modifikované kyseliny hyaluronové definovaného v kterémkoli z nároků 1 až 3, vyznačující se tím, že se připraví vodný roztok výchozí kyseliny hyaluronové nebo jejího modifikovaného derivátu o molekulové
- 16CZ 308010 B6 hmotnosti v rozmezí 40 až 2200 kg.mol1, jehož koncentrace je v rozmezí 0,5 až 5 % hmotn., upraví se pH na rozmezí 2,5 až 7,5 a pak se přidá kyselina trichlorisokyanurová nebo sodná sůl kyseliny dichlorisokyanurové v množství 0,3 až 1,5 ekvivalentů na disacharid hyaluronanu a směs se nechá reagovat 5 až 72 hodin při teplotě 5 až 40 °C, načež se vzniklý chloramid izoluje vysrážením.
5. Způsob přípravy podle nároku 4, vyznačující se tím, že se pH upraví na rozmezí 4 až 6.
6. Způsob přípravy podle nároku 4, vyznačující se tím, že úprava pH se provede přidáním kyseliny octové v množství 0,2 až 7 ekvivalentů na disacharid hyaluronanu.
7. Antimikrobiální, antifůngální a antivirová kompozice, vyznačující se tím, že obsahuje derivát definovaný v kterémkoli z nároků 1 až 3 v koncentraci 10 až 99 % hmotn. a aditivum vybrané ze skupiny zahrnující vodu, chlorid sodný, chlorid vápenatý, glycerol, kyselinu hyaluronovou, chondroitin sulfát, alginát sodný, oxycelulózu, karboxymethylcelulózu, hydroxyethylcelulózu nebo modifikovanou kyselinu hyaluronovou, která má -OH skupiny z části nahrazeny skupinou -O-CO-R2 a/nebo -CH2-OH skupiny z části nahrazeny skupinou -CH=O a/nebo -CO-OH skupiny z části nahrazeny skupinou -CO-OR2, kde R2 je lineární řetězec s obsahem uhlíků Ci - C17 nebo aromatický řetězec s maximálním obsahem uhlíků C17.
8. Kompozice podle nároku 7, vyznačující se tím, že je ve formě roztoku nebo gelu ve vodném rozpouštědle.
9. Kompozice podle nároku 7, vyznačující se tím, že je ve formě pevného substrátu vybraného ze skupiny zahrnující samonosný film, lyofilizát, vrstvu ze staplových vláken - netkanou textilii, nekonečné vlákno, tkaninu, pleteninu, splétanou textilii nebo vrstvu nanovláken.
10. Použití chlorovaného derivátu definovaného v kterémkoli z nároků 1 až 3 pro přípravu krytů ran nebo pro přípravu implantabilních zdravotnických prostředků.
11. Použití kompozice definované v nárocích 7 až 9 pro přípravu krytů ran nebo pro přípravu implantabilních zdravotnických prostředků.
CZ2018-426A 2018-08-23 2018-08-23 Chlorovaný derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy, kompozice, která jej obsahuje, a použití CZ2018426A3 (cs)

Priority Applications (8)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ2018-426A CZ2018426A3 (cs) 2018-08-23 2018-08-23 Chlorovaný derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy, kompozice, která jej obsahuje, a použití
EP19773732.3A EP3841128B1 (en) 2018-08-23 2019-08-17 Chlorinated derivative of hyaluronic acid, method of preparation thereof, a composition containing the derivative, and use thereof
PCT/CZ2019/050034 WO2020038500A1 (en) 2018-08-23 2019-08-17 Chlorinated derivative of hyaluronic acid, method of preparation thereof, a composition containing the derivative, and use thereof
JP2021509833A JP7366448B2 (ja) 2018-08-23 2019-08-17 ヒアルロン酸の塩素化誘導体，その調製法，該誘導体を含む組成物及びその使用
US17/270,693 US11427652B2 (en) 2018-08-23 2019-08-17 Chlorinated derivative of hyaluronic acid, method of preparation thereof, a composition containing the derivative, and use thereof
KR1020217006382A KR20210049110A (ko) 2018-08-23 2019-08-17 히알루론산의 염소화 유도체, 그 제조 방법, 유도체를 포함하는 조성물 및 그 용도
BR112021001463-2A BR112021001463A2 (pt) 2018-08-23 2019-08-17 derivado clorado de ácido hialurônico ou de um ácido hialurônico modificado, método de preparação da cloramida de ácido hialurônico ou de um ácido hialurônico modificado, composição antimicrobiana, antifúngica e antiviral e uso
ARP190102393A AR115999A1 (es) 2018-08-23 2019-08-22 Derivado clorado del ácido hialurónico, método de preparación del mismo, una composición que contiene el derivado y el uso del mismo

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ2018-426A CZ2018426A3 (cs) 2018-08-23 2018-08-23 Chlorovaný derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy, kompozice, která jej obsahuje, a použití

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ308010B6 true CZ308010B6 (cs) 2019-10-16
CZ2018426A3 CZ2018426A3 (cs) 2019-10-16

Family

ID=68062781

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ2018-426A CZ2018426A3 (cs) 2018-08-23 2018-08-23 Chlorovaný derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy, kompozice, která jej obsahuje, a použití

Country Status (8)

Country Link
US (1) US11427652B2 (cs)
EP (1) EP3841128B1 (cs)
JP (1) JP7366448B2 (cs)
KR (1) KR20210049110A (cs)
AR (1) AR115999A1 (cs)
BR (1) BR112021001463A2 (cs)
CZ (1) CZ2018426A3 (cs)
WO (1) WO2020038500A1 (cs)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2020038501A1 (en) * 2018-08-23 2020-02-27 Contipro A.S. Composition comprising an iodide and a derivative of hyaluronic acid with an oxidative effect, method of preparation thereof and use thereof
WO2021148066A1 (en) * 2020-01-24 2021-07-29 Contipro A.S. Dental preparation comprising fibers based on hyaluronic acid with regulated biodegradability

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2007507306A (ja) 2003-09-30 2007-03-29 ジンテーズ　アクチエンゲゼルシャフト　クール 整形外科用インプラントの抗微生物ヒアルロン酸被覆物
EP2111252A4 (en) * 2007-01-31 2010-12-01 Adam Heller MANAGEMENT OF PAIN BY ELECTROCHEMICAL PATHWAY
CZ2009835A3 (cs) 2009-12-11 2011-06-22 Contipro C A.S. Zpusob prípravy derivátu kyseliny hyaluronové oxidovaného v poloze 6 glukosaminové cásti polysacharidu selektivne na aldehyd a zpusob jeho modifikace
CZ309295B6 (cs) 2015-03-09 2022-08-10 Contipro A.S. Samonosný, biodegradabilní film na bázi hydrofobizované kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy a použití

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
A. Akeel. et al.: "Chlorination and oxidation of heparin and hyaluronan by hypochlorous acid and hypochlorite anions: effect of sulfate groups on reaction pathways and kinetics" Free Radical Biology and Medicine 56 (2013) 72-88. *
M.D. Rees et al: "Hypochlorite-mediated fragmentation of hyaluronan, chyndoitin sulfates, and related N-acetyl glycosamines: evidence for chloramide intermediates, free radical transfer reactions, and site-specific fragmentation: J. Am. Chem. Soc. 2003, 125 (45) 13719-33 *
M.D. Ress et al.: "Hypochlorite and superoxide radicals can act synergistically to induce fragmentation of hyaluronan and chyndroitin sulphates" Biochem. J. 381(2004) 175-184 *
S. Sibanda et al: "Efficiencies of fragmentation of glycosaminoglycan chloramides of the extracellular matrix by oxidizing and reducing radicals: potential site-specific targets in inflamation?" Free Radical Biology and Medicine 65 (2013) 280-290 *
S. Sibanda et al: "One-electron oxidation and reduction of glycosaminoglycan chloramides: A kinetic study" Free Radical Biology and Medicines 63 (2013) 126-134 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2020038501A1 (en) * 2018-08-23 2020-02-27 Contipro A.S. Composition comprising an iodide and a derivative of hyaluronic acid with an oxidative effect, method of preparation thereof and use thereof
US11425907B2 (en) 2018-08-23 2022-08-30 Contipro A.S. Composition comprising an iodide and a derivative of hyaluronic acid with an oxidative effect, method of preparation thereof and use thereof
WO2021148066A1 (en) * 2020-01-24 2021-07-29 Contipro A.S. Dental preparation comprising fibers based on hyaluronic acid with regulated biodegradability

Also Published As

Publication number Publication date
EP3841128B1 (en) 2024-03-20
EP3841128A1 (en) 2021-06-30
JP7366448B2 (ja) 2023-10-23
AR115999A1 (es) 2021-03-25
JP2021535245A (ja) 2021-12-16
US20210332161A1 (en) 2021-10-28
KR20210049110A (ko) 2021-05-04
BR112021001463A2 (pt) 2021-04-27
US11427652B2 (en) 2022-08-30
CZ2018426A3 (cs) 2019-10-16
WO2020038500A1 (en) 2020-02-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Yang et al. Recent progress on cellulose‐based ionic compounds for biomaterials
Hussein et al. Electrospun PVA/hyaluronic acid/L-arginine nanofibers for wound healing applications: Nanofibers optimization and in vitro bioevaluation
Dumont et al. Processing and antibacterial properties of chitosan-coated alginate fibers
Zhang et al. Carboxyl-modified poly (vinyl alcohol)-crosslinked chitosan hydrogel films for potential wound dressing
US7651702B2 (en) Crosslinking hyaluronan and chitosanic polymers
Sedghi et al. Preparation of novel chitosan derivative nanofibers for prevention of breast cancer recurrence
Li et al. A covalently crosslinked polysaccharide hydrogel for potential applications in drug delivery and tissue engineering
ITMI982440A1 (it) Acidi ialuronici reticolati e loro usi medici.
Rivero-Buceta et al. Anti-staphylococcal hydrogels based on bacterial cellulose and the antimicrobial biopolyester poly (3-hydroxy-acetylthioalkanoate-co-3-hydroxyalkanoate)
Xie et al. Biocompatible, antibacterial and anti-inflammatory zinc ion cross-linked quaternized cellulose‑sodium alginate composite sponges for accelerated wound healing
CZ2012841A3 (cs) Vlákna založená na hydrofobizovaném hyaluronanu, způsob jejich přípravy a použití, textilie na jejich bázi a použití
Lucyszyn et al. Physicochemical and in vitro biocompatibility of films combining reconstituted bacterial cellulose with arabinogalactan and xyloglucan
Jaberifard et al. A novel insoluble film based on crosslinked-starch with gelatin containing ZnO-loaded halloysite nanotube and bacterial nanocellulose for wound healing applications
US11427652B2 (en) Chlorinated derivative of hyaluronic acid, method of preparation thereof, a composition containing the derivative, and use thereof
Aynali et al. Production and characterization of non-leaching antimicrobial and hydrophilic polycaprolactone based nanofiber mats
Wei et al. A novel approach for efficient fabrication of chitosan nanoparticles-embedded bacterial nanocellulose conduits
CN109734937B (zh) Va@plga-cs-ha/ohpmc-ha抗菌可注射水凝胶的制备方法
JP7337406B2 (ja) ヨウ化物及びヒアルロン酸誘導体を含む酸化作用を有する組成物，その調製方法及びその使用
US20200179445A1 (en) Antimicrobial composition comprising a polysaccharide, a stabilizing agent and triiodide, method of preparation thereof and use thereof
ES2927979T3 (es) Composición que comprende un yoduro y un derivado del ácido hialurónico con efecto oxidante, método de preparación y uso de la misma
Yan et al. Sodium carboxymethylation-functionalized chitosan fibers for cutaneous wound healing application
Patel et al. Nanocellulose-assisted mechanically tough hydrogel platforms for sustained drug delivery
PL236961B1 (pl) Sposób modyfikacji powierzchni wilgotnych płatów BNC, wielowarstwowy, hydrożelowy mikrostrukturalny bioaktywny materiał opatrunkowy