CS235018B2

CS235018B2 - Method of 9-/6 1,3-hydroxy-2-propoxymethyl/p-guanine preparation

Info

Publication number: CS235018B2
Application number: CS823735A
Authority: CS
Inventors: Julien P Verheyden; John C Martin
Original assignee: Syntex Inc
Priority date: 1981-05-21
Filing date: 1982-05-20
Publication date: 1985-04-16
Also published as: FI73682C; ES520849A0; CS235042B2; NL930022I1; RO87387A; JPS57203086A; ES8500276A1; PL236521A1; NO821676L; MY8700793A; ES524899A0; PL136637B1; DE3266644D1; LU88334I2; IE53731B1; SU1176841A3; PT74934B; ES8601204A1; HK67088A; ES524900A0

Description

Vynález se týká způsobu přípravy 9-(1,3-dihydroxy-2-propoxymethyl]guaninu a jeho farmaceuticky vhodných . solí, které jsou vhodné jako protivirové látky. Vynález se také týká farmaceutických prostředků, které obsahují shora uvedenou sloučeninu ve směsi se vhodným netoxickým excipientem, přičemž se těchto prostředků používá k potlačování virových infekcí.

Virové infekce jsou široce rozšířené a vedou k nejrůznějším symptomům. Některým virovým infekcím se snadno předchází obranným mechanismem těla, zatímco jiné mají mnohem závažnější . povahu a vedou k trvalým následkům, například k oslepnutí nebo dokonce k úmrtí. Jedním takovým rodem virů, které způsobují závažné infekce, je skupina virů Herpes.

V současné době používaná léčiva pro ošetřování virových infekcí jsou v mnoha případech neúčinná, nebo pokud jsou účinná, musejí se podávat ve velkých a/nebo v trvalých dávkách, čímž dochází k závažným vedlejším účinkům a/nebo k toxicitě. Proto je potřebný účinný protivirový prostředek, který by byl účinným v menších dávkách než dosud dostupná léčiva a tak by snižoval nebezpečí vedlejších účinků a toxicitu.

Americký patentový spis číslo 4 199 574 popisuje sloučeniny obecného vzorce A

R¹

kde znamená

X atom síry nebo atom kyslíku,

R¹ atom vodíku, atom halogenu, hydroxyskupinu, alkoxyskupinu, azidoskupinu, thioskupinu, alkylthioskupinu, aminoskupinu, alkylaminoskupinu nebo dialkylaminoskupinu,

R2 atom vodíku, atom halogenu, alkylthioskupinu, acylaminoskupinu, aminoskupinu nebo azidoskupinu,

R³ atom vodíku, alkylovou skupinu s přímým, rozvětveným nebo cyklickým řetězcem, hydroxyalkylovou skupinu, benzyloxyalkylovou skupinu nebo fenylovou skupinu,

R4 atom vodíku, hydroxyskupinu nebo alkylovou skupinu,

R⁵ atom vodíku, hydroxyskupinu, aminoskupinu, alkylovou skupinu, hydroxyalkylovou skupinu, benzyloxyskupinu, henzoyloxyskupinu, benzoyloxymethylovou skupinu, sulfamoyloxyskupinu, fosfátovou skupinu, karboxypropiamyloxyskupinu, acyloxyskupinu s přímým nebo s cyklickým řetězcem s 1 až 8 atomy uhlíku, jako například acetoxyskupinu nebo . substituovanou karbamoylovou skupinu obecného vzorce —NHCO—Z kde. znamená

Z alkylovou skupinu, arylovou skupinu nebo aralkylovou skupinu, popřípadě substituovanou alespoň . jednou skupinou sulfonylovou, aminoskupinou, karbamoylovou skupinou nebo atomem halogenu,

R⁶ atom vodíku nebo alkylovou skupinu, za podmínky, že v případě, kdy X znamená atom kyslíku a R-, R3, R4 a R6 znamenají atom vodíku, pak R¹ neznamená aminoskupinu nebo methylaminoskupinu, jestliže R5 znamená atom vodíku nebo hydroxyskupinu nebo jejich soli.

O třídě sloučenin shora uvedeného obecného vzorce A a o jejich farmaceuticky vhodných adičních solích s kyselinami se . udává, že . mají protivirovou účinnost. Viz například Tetrahedron Letters, 21, str. 327 až 330 (1980).

Nyní se s překvapením zjistilo, že 9-(1,3-dihydroxy-2-propoxymethyl)guanin a jeho soli jsou obzvláště účinnými protivirovými · prostředky. Selektivní účinnost této sloučeniny je zřejmá, jestliže se tato sloučenina porovná se strukturálně nejpodobnější sloučeninou známou z amerického patentového spisu čís. 4 199 574 při protivirových zkouškách, podrobně popsaných v příkladu 5.

Vynález se tedy týká způsobu přípravy 9- [ 1,3-dihydr oxy-2-pr opoxymethyl) guaninu vzorce I

O

CH,OCMCH,OH

CHyOH ÍH a jeho farmaceuticky vhodných solí tak, že se hydrolyzuje sloučenina obecného vzorce IX

O

CH_LOh (IX) nebo její sůl, přičemž R znamená acylovou skupinu obecného vzorce

kde (

R“ znamená uhlovodíkovou skupinu s 1 až 10 atomy uhlíku s přímým nebo rozvětveným řetězcem, například skupinu methylovou, ethylovou, iso-propylovou, n-propylovou, n-butylovou, iso-butylovou, terc.-butylovou, n-hexylovou, iso-hexylovou, n-oktylovou, iso-oktylovou, n-nonylovou, iso-nonylovou, n-decylovou nebo iso-decylovou, a vzniklý 9-[l,3-dlhydroxy-2-propoxymethyljguanin se popřípadě převádí na farmaceuticky vhodnou sůl, nebo se sůl 9-(1,3-dihydroxy-2-propoxymethyl Jguaninu převádí na 9-(l,3-dihydroxy-2-propoxymethyl)guanin nebo se sůl 9-(l,3-dihydroxy-2-propox^j^ť^e^l^^^lljguaninu převádí na farmaceuticky vhodnou sůl.

Pokud není jinak uvedeno, rozumí se vždy výrazem „farmaceuticky vhodné soli“ soli, které mají biologickou účinnost a vlastnosti volné sloučeniny a které nejsou biologicky . nebo jinak nežádoucí. Solemi mohou být buď adicní soli s kyselinou, nebo to mohou být soli anorganické s kovy, s výhodou to jsou soli s kovy alkylických zemin. Vhodnými kyselinami pro přípravu solí jsou anorganické kyseliny, jako je kyselina chlorovodíková, bromovodíková, kyselina sírová, kyselina dusičná, kyselina fosforečná a jako jsou podobné kyseliny a organické kyseliny, jako je kyselina trifluoroctová, kyselina methansulfonová, ethansulfonová, p-toluensulfonová a jako jsou podobné kyseliny. Vhodnými zásadami pro přípravu solí jsou organické zásady, anorganické kovové zásady, jako zásadité sloučeniny mědi stříbra a zásadité sloučeniny alkalických kovů, jako jsou například hydroxidy alkalických kovů, například hydroxid sodný, hydroxid draselný a jako jsou podobné sloučeniny.

Sloučeniny vzorce I, připravené způsobem podle vynálezu . a jejich farmaceuticky vhodné soli jsou založeny na objevu, že substitucí l,3-dihydroxy-2-propo.xymethylovou skupinou v poloze 9 guaninového jádra se získají překvapivě vysoce účinné sloučeniny.

Sloučenina vzorce I a její farmaceuticky vhodné soli mají potenciální protivirové působení při podávání živočichům, zvláště savcům (zvířatům nebo lidem], studenokrevným živočichům, jako jsou ryby, a ptákům, zvláště však při podávání lidem. Například sloučenina vzorce I má vynikající působení proti virům Herpes Simplex virus I a II a příbuzným virům jako je cytomegalovirus, Epstein Barr virus a varicella Zoster virus.

Farmaceutické · prostředky jak pro veterinární, tak pro humánní medicínu, obsahující sloučeninu vzorce I, vhodnou pro protivirové použití, se připravují o sobě známými způsoby a mohou obsahovat o sobě znáβ mé excipienty. Obecně · uznávaný soubor takových způsobů a takových složek je popsán v publikaci Remington‘s Pharmaceutical Sciences, E. W. Martin (Mark Publ. Co.,

15. vydání, 1975).

Farmaceutické prostředky podle vynálezu mohou také obsahovat další protivirově účinné látky. Obecně má farmaceutický prostředek obsahovat hmotnostně 0,1 až 90 % účinných látek.

Sloučenina obecného vzorce I se může podávat parenterálně (například intravenózní, mtraptritontálm nebo intramuskulární injekcí), orálně, topicky nebo rektálně, · v závislosti na tom, zda se prostředku používá pro ošetření vnitřní nebo zevní virové infekce.

V případě vnitřních infekcí se prostředky podávají orálně nebo parenterálně ve · formě dávek, přepočtených na volnou zásadu, přibližně 0,1 až 300 mg/kg tělesné hmotnosti savce, s výhodou 1,0 · až 30 mg/kg tělesné hmotnosti savce a v případě lidí se může používat jednotkové · dávkovači formy podávané jednou až čtyřikrát denně při množství 1 až 250 mg na · dávkovači jednotku. Pro orální podání mohou jemné · prášky nebo granule obsahovat zřeďovací, dispergační a/ /nebo povrchově aktivní látky a mohou být obsaženy v doušku vody nebo v sirupu; dále mohou být v kapslích nebo v sáčcích v suchém stavu nebo ve formě nevodného roztoku nebo suspenze, přičemž může · být obsaženo suspenzační činidlo; účinná látka může být v tabletách, které mohou obsahovat také pojidla a mazadla, nebo mohou být ve formě suspenzí ve vodě nebo v sirupu. Popřípadě nebo nutně mohou takové farmaceutické prostředky obsahovat chuťové látky, konzervační látky, suspenzační činidla, zahušťovadla nebo emulgátory. Výhodné jsou tablety a granule, přičemž mohou · být povlečeny.

Pro parenterální podání nebo pro podání ve · formě kapek, jako při ošetřování očních infekcí, mohou být účinné látky ve formě · vodného roztoku o koncentraci hmotnostně 0,1 až 10 °/o, s výhodou· o koncentraci přibližně hmotnostně 0,1 až 7 %. Roztok může obsahovat antioxydanty, pufry a podobné složky.

Nebo se pro oční infekce nebo pro jiné venkovní tkáně, například pro ošetření úst a pokožky, účinná látka s výhodou nanáší na infikované místo na těle nemocného topicky ve formě masti, krému, aerosolu nebo prášku, s výhodou však ve formě masti nebo krému. Účinná látka vzorce I může být obsažena v masti například spolu s ve vodě rozpustnou masťovou látkou nebo v krému, například v krémové hmotě na bázi oleje ve vodě, v koncentraci přibližně 0,01 až 10 procent, s výhodou v množství 0,1 až 7 % a především v množství 0,5 % hmotnosťobjem. Kromě toho při virové infekci oka, jako je herpetická keratitis, se · může ošetření provádět použitím systému uvolňujícího léčivo popsaného v americkém patentovém spise číslo 4 217 898.

Prostředky podle . vynálezu ' jsou také vhodné při ošetřování nehumánních savců, ptáků, například kuřat a krůt a studenokrevných živočichů, jako jsou ryby. Virovým onemocněním ptáků, jako je nemoc New Castle, Marekova nemoc a jako jsou podobné nemoci lze předcházet a/nebo je lze léčit sloučeninou vzorce I, připravenou způsobem podle vynálezu, a to o sobě známými způsoby z veterinární praxe, jako máčením nenasezených vajec do roztoku obsahujícího sloučeninu vzorce I, vstřikováním sloučeniny vzorce I ptákům, přičemž sloučenina vzorce I je ve formě vhodného farmaceutického prostředku nebo přidáváním sloučeniny vzorce I do krmivá nebo do napájecí vody.

Ryby, které jsou ve vymezených prosto rách, jako jsou bazény, akvária nebo pěstovací nádrže, se také mohou ošetřovat pro zdolávání virové infekce, jako je infekce herpesovitým virem, jako je virus vodních dravých ryb (CCVj salomony působené herpesovým virem, onemocnění Nerka virem a jako jsou podobná onemocnění, přidáváním sloučeniny vzorce I přímo do vody bazénu, akvária nebo nádrže pro pěstování ryb nebo vnášením této sloučeniny do krmivá.

Přesný režim podávání sloučeniny vzorce I nebo farmaceutických prostředků, které ji obsahují, závisí na potřebách jednotlivce, na typu ošetření a na úsudku ošetřujícího.

Sloučenina vzorce I se může připravovat podle následujícího reakčního schéma, přičemž R znamená acylovou skupinu obecného vzorce

kde R“ znamená uhlovodíkovou skupinu s 1 až 10 atomy uhlíku s přímým nebo rozvětveným řetězcem, jako například skupinu methylovou, ethylovou, iso-propylovou, n-propylovou, n-butylovou, iso-butylovou, nheptylovou, iso-heptylovou, n-oktylovou, iso-oktylovou, n-nonylovou, iso-nonylovou, n-decylovou a iso-decylovou a R‘ znamená chránící skupinu, jako je benzylová skupina popřípadě substituovaná jednou nebo dvěma alkoxyskupinami nebo alkylovými skupinami vždy s 1 až 4 atomy uhlíku, s výskupinou.

O .../ \ , .....

chjchch, a —> c h.or -* (llCHtOH

CH-OR' uo,

CH₂OR^>CH0№‘

Сносна ----> CH.,OCH₂^OCCW₅ >

CH^R' CH^OR^{1 0}

()V)

O

(V)) o

^H (Vij) R

(Vil l)

íd

CHhOCHCHhOH c í г

CH^OH

Sloučenina vzorce III se připraví přidáním epichlorhydrinu vzorce II po kapkách do roztoku soli alkalického kovu, s výhodou do roztoku sodné soli, benzylalkoholu popřípadě substituovaného shora definovaným způsobem v rozpouštědle, jako jsou například dimethylformamid, dimethylacetamid, hexaméthylfosforamid, dimethylsulfoxid, sulfolan, tetrahydrofuran a dioxan, při teplotě přibližně 0 až 100 °C, s výhodou při teplotě 15 až 40 °C. Reakční směs se míchá po dobu přibližně 10 až 24 hodin, s výhodou po dobu přibližně 12 až 18 hodin při teplotě přibližně 0 až 100 °C, s výhodou přibližně 20 až 50 °C.

Sloučenina obecného vzorce III se chlormethyluje za vzniku sloučeniny obecného vzorce IV probubláváním suchého chlorovodíkového plynu roztokem sloučeniny a paraformaldehydu, rozpuštěných v halogenovaném uhlovodíkovém rozpouštědle, jako je dichlorethan, chloroform, dichlormethan a 1,1,2-trichlorethan, ochlazeným na teplotu přibližně 0 až 25 °C, s výhodou na teplotu přibližně 0°C. Chlorovodíkový plyn se zavádí po dobu 30 minut až 3 hodiny, s výhodou po dobu 1 až 2 hodiny až do rozpuštění paraformaldehydu. Roztok se udržuje na teplotě přibližně 0 až 10 °C po dobu přibliž ně 12 až 48 hodin, s výhodou po dobu přibližně 16 až 24 hodin se udržuje na teplotě 0 až 5 °C.

Sloučenina obecného vzorce V se připraví reakcí acetátu alkalického kovu, například acetátu sodného, se sloučeninou obecného vzorce IV, rozpuštěnou v rozpouštědle, jako je dimethylformamid, tetrahydrofuran, dimethylacetamid, hexamethylfosforamid, dimethylsulfoxid, sulfolan a dioxan, při teplotě přibližně 0 °C až 45 °C, s výhodou při teplotě přibližně 0 až 25 °C. Roztok se míchá po dobu přibližně 5 až 24 hodin, s výhodou po dobu přibližně 10 až 18 hodin při teplotě přibližně 10 až 30 °C a s výhodou při teplotě přibližně 15 až 25 °C.

Sloučenina obecného vzorce VII se připraví zahříváním guaninu vzorce VI s anhydridem' karboxylové kyseliny se 2 až 20 atomy uhlíku, jako je acetanhydrid, anhydrid kyseliny máselné, anhydrid kyseliny valerové, anhydrid kyseliny kaprylové, s výhodou acetanhydrid, při teplotě varu po dobu přibližně 10 až 24 hodin, s výhodou po dobu přibližně 12 až 18 hodin.

N²,9-diacylguanin obecného vzorce VII se nechává reagovat se sloučeninou obecného vzorce V za vzniku sloučeniny obecného vzorce VIII, popřípadě v rozpouštědle, jako je dioxan, sulfolan a jako jsou podobná rozpouštědla, v přítomnosti katalytického množství kyseliny, jako bis-fp-nitrofenyl)fosfátu, toluensulfonové kyseliny, methylfosfonové kyseliny . · nebo dichloroctové kyseliny, s výhodou v přítomnosti bis-(p-nitrof enyl) fosfátu, při teplotě přibližně 75 až 200 °C, s výhodou při teplotě přibližně 110 až 180 °C. Reakce se obecně provádí za použití 0,8 molu až 1,2 molu sloučeniny obecného vzorce V na mol sloučeniny obecného vzorce VII.

Chránící skupiny se mohou odstranit obě najednou, nebo popřípadě substituovaná benzylová skupina a potom acylová skupina nebo acylová ' skupina. a potom popřípadě substituovaná benzylová skupina.

Benzylové chránící skupiny (skupiny symbolu R‘) se mohou odstranit nejdříve ze sloučeniny obecného vzorce VIII jedním z několika způsobů: katalytickou hydrogenací, reakcí s Lewisovými kyselinami nebo acetolýzou za vzniku sloučeniny obecného vzorce IX.

Katalytická hydrogenace se zpravidla provádí v přítomnosti hydrogenačního katalyzátoru, jako je palladium, platina, rhodium nebo nikl na nosiči, jako je uhlík a v přítomnosti inertního rozpouštědla pro sloučeninu obecného vzorce IX. Vodík se zavádí do roztoku pod tlakem 105 až 1400 kPa, t, výhodou pod tlakem 210 až 560 kPa. Reakční teplota je zpravidla 0 až 50 °C. Za uvedených podmínek tlaku se palladium na uhlí přidá ve formě suspenze do roztoku sloučeniny obecného vzorce VIII, rozpuštěné v rozpouštědle, jako je například vodný nižší alkylalkohol, přičemž alkylem je přímý nebo rozvětvený uhlovodíkový řetězec s 1 až 4 atomy uhlíku, s výhodou vodný methanol.

Sloučenina vzorce I se může připravit deacylací sloučeniny vzorce IX odstraněním chránící . skupiny symbolu R o sobě známým způsobem. Toto odstranění chránící skupiny je možné za solvolytických podmínek, přičemž vhodné rozpouštědlo obnovuje aminofunkci v poloze 2 guaninového kruhového systému. Taková rozpouštědla zahrnují vodu nebo nižší alkanoly s 1 až 4 atomy uhlíku. Solvolysa se může provádět za kyselých nebo za zásaditých podmínek. Reakční teplota je zpravidla 0 až 50 °C, s výhodou 10 až 30 °C. Nejvýhodněji je reakční . teplota 15 až 25 °C. Výhodnou je zásaditá solvolysa. Jakožto vhodné zásady se uvádějí alkalické hydroxidy, alkalické uhličitany nebo amoniak. Výhodnými rozpouštědly jsou nižší alkanoly a zvláště methanol. Za výhodných podmínek se míchá roztok sloučeniny vzorce IX a zásady po dobu přibližně 1 hodinu až 36 hodin, s výhodou po dobu 10 až 24 ' hodin při teplotě přibližně 10 až 30 stupňů Celsia, s výhodou při teplotě přibližně 15 až 25 °C.

Farmaceuticky vhodné soli sloučeniny vzorce I se připravují reakcí sloučeniny vzorce I se vhodnou zásadou nebo se vhodnou kyselinou, jak shora uvedeno. Tato konverze se může provádět v rozpouštědle, přičemž se přidává přibližně stechiometricky ekvivalentní množství zásady nebo kyseliny do sloučeniny vzorce I rozpuštěné ve vhodném rozpouštědle, při teplotě 0 až 50 'C.

Podobně se sloučeniny vzorce I mohou uvolňovat ze solí sloučenin vzorce I přidáním stechiometricky ekvivalentního množství zásady do adiční soli s kyselinou, nebo přidáním kyseliny do adiční soli se zásadou sloučeniny vzorce I rozpuštěné v rozpouštědle při teplotě 0 až 50 °C.

Podobně se sůl sloučeniny vzorce I může převádět na farmaceuticky vhodnou sůl sloučeniny vzorce I například běžným podvojným rozkladem soli, přičemž se anlont nebo kationt výchozí soli nahrazuje farmaceuticky vhodným aniontem nebo kationtem. Podvojný rozklad soli zpravidla využívá výhody skutečnosti, že se připravuje méně rozpustná sůl z více rozpustné soli při teplotě podvojného rozkladu 0 až 50 °C.

Následující specifický popis příkladů je určen pro pracovníky v oboru k lepšímu porozumění provádění způsobu podle vynálezu. Není míněn jako jakékoliv omezení vynálezu, pouze vynález objasňuje,

Příprava I

Příprava

Hydrid sodíku (100 g) (50 % · disperze v minerálním oleji) (2,08 molu) se dvakrát promyje jedním litrem hexanu a potom se usuší v prostředí dusíku. Přidá se suchý dimethylformamid (1,5 litrů). Benzylalkohol (400 ml) se potom přidává takovou rychlostí, aby se udržela teplota pod 50 °C. Toto přidávání trvá dvě hodiny. Potom se po kapkách přidává epichlorhydrin [92,5 g, 1 mol) v průběhu půl hodiny za chlazení ledem k udržení teploty pod 40 °C. Roztok se potom míchá po dobu 16 hodin při teplotě 21 °C a potom po dobu 2,5 hodiny při teplotě 50 °C. Dimethylformamid se potom odstraní za sníženého tlaku. Olejovitý zbytek se rozpustí ve 2,5 litru diethyletheru. Organický roztok se promyje dvěma litry vody, dvěma litry 2% chlorovodíkové kyseliny, dvěma litry 1 proč, roztoku hydrogenuhličitanu sodného a jedním litrem solanky, vysuší se síranem sodným a /koncentruje se na hnědý olej. Destilací se získá 147,8 g 1,3-di O-benzylglycerinu (teplota varu 170 až 180 °C/0,1332 kPa).

Příprava II

Příprava l,3-di-O-benzyl-2-O-chlormethylglycerinu

Suchý chlorovodíkový plyn se probublává po dobu jedné a půl hodiny roztokem 1,3-di-O-benzylglycerlnu připraveného · způsobem podle- odstavce „Příprava I“ (15 g, 55 mmol) a paraformaldehydu (3,3 g, 110 mmol) ve 175 ml 1,2-dichlorethanu při teplotě 0 ^CC. Roztok se potom uloží v uzavřené láhvi po dobu 21 hodin při teplotě 4 °C. Potom se roztok vysuší síranem horečnatým za zahřívání na teplotu 21^DC, potom se zfiltruje a zkoncentruje se za získání 17,5 g 1,3-di-O-benzyl-2-O-chlormethylglycerinu.

Příprava III

Příprava 2-O-acetoxymethyl-l,3-dí-O-benzylglycerinu

Do roztoku l,3-di-O-benzyl-2-O-chlormethylglycerinu, připraveného způsobem podle odstavce · „Příprava II“ (17,5 g, 55 mmol) ve 400 ml dimethylformamidu při teplotě 0° Celsia pod sušicí trubicí se přidá octan sodný (6 g). Roztok se potom ohřeje na teplotu 21 °C a magneticky se míchá po dobu 15 hodin. Rozpouštědlo se odstraní odpařením za sníženého tlaku a olejovitý zbytek se rozpustí v 0,45 kg diethyletheru. Etherový roztok se promyje jednou 750 ml vody, dvakrát 250 ml vody a jednou 250 ml solanky, vysuší se síranem sodným a zkoncentruje se, čímž se získá 19 g 2-O-acetoxymethyl-l,3-di-O-benzylglycerinu ve formě oleje.

Příprava IV

Příprava N2,9-diacetylguaninu

Guanin (20 g, 0,132 mol) se smísí s 300 mililitry acetanhydridu a směs se udržuje na teplotě varu po dobu 16 hodin. · Směs se ochladí a nadbytek acetanhydridu se odstraní odpařením za sníženého tlaku. Zbytek se překrystaluje z dimethylsulfoxidu, čímž se získá 25,6 g N2,9-diacetylguaninu.

Přikladl

A) Příprava N2-acetyl-9-(l,3-dibenzyloxy-

-2-propyloxymethyl] guaninu

N2,9-diace'tylguanm, připravený způsobem podle odstavce „Příprava IV“ (15,61 g, 66 mmi^l), 2-0iacetΌxymethyl-l,3-di-0-benzylglycerin, připravený způsobem · podle odstavce „Příprava III“ (19 g, 55 mmol) a bis-(p-nitrofenylfosfát (0,5 g) se míchají společně se 150 ml diethyletheru. Rozpouštědlo se odstraní odpařením a zbytek se zahřívá v olejové lázni o teplotě 175 °C po dobu 1,5 hodiny pod proudem dusíku. Sloupcovou chromatografií za eluování systémem methanol — methylenchlorid v poměru 1 : 9 a následným překrystalováním z ethylacetátu se získá 4,76 g N2-acetyl-9-(l,3-dibenzyloxy-2-propoxymethyl) guaninu o teplotě tání 145 až 146 °C.

B) Příprava N2-acetyl-9-(1,3-dihydroxy-2-^-^i?o^o^^^i^u^1^]^^^1 ) guaninu

Do roztoku N2-acetyl-9-( 1,3-dibenzyloxy-2-pIΌpoxymethyl) guaninu (4,62 g, 9,67 mmol) ve 150 ml methanolu plus 40 ml vody se přidá 20% hydroxid palladia na uhlí ve formě suspenze v 10 ml vody. Směs se hydrogenuje v Parrově hydroxygenerátoru za tlaku 420 kPa vodíku po dobu 38 h, potom se zfiltruje přes celit a zkoncentruje se za vzniku pevné bílé látky. Překrystalováním ze systému methanol — ethylacetát se získá 1,4 g N2-acetyl-9-(l,3-dihydroxy-2-propoxymethyl)guanlnu o teplotě tání 205 až 208 °C.

Matečný louh se dále redukuje 10% palladiem na uhlí (1 gj ve 150 ml methanolu plus 50 ml vody při tlaku 420 kPa po dobu 47 hodin. Celkový výtěžek N2-acetyl-9-(l,3-dihydroxy-2-propoxymethyl)guaninu je 2,11 gramu.

C) Příprava 9-(1,3-dihydroxy-2-

-propoxymethyl ] guaninu

N2-acetyl-9- (l,3-dihydroxy-2-propoxyrnethyl) guaninu [721,9 mg, 2,4 mmol) se míchá s 50 ml methanolického roztoku amoniaku (methanol nasycený amoniakem při .teplotě 0°C) po dobu 17 hodin při teplotě 21 °C. Roztok se zkoncentruje za vzniku bílé pevné látky a zbytek se překrystaluje z methanolu, čímž se získá 582,3 mg 9-(1,3-dihydroxy-2-^j^iropox^^i^(^1^]hyl]guaninu o teplotě tání 250 °G za rozkladu.

Příklad 2

9- (l,3-dihydroxy-2-p3ropoxymethyl )guanin se rozpustí v roztoku vody obsahující jeden molekvivalent hydroxidu sodného. . Roztok se potom lyofilizuje, čímž se získá 9- (l,3-dihydroxy-0-propoxymethyl) guanin ve formě sodné soli jakožto bílý prášek.

Příklad 3

Sodná sůl 9-(l,3-dihydroxy-2-propoxymethyl)guaninu se rozpustí v minimálním množství vody a přidá se zředěná chlorovodíková kyselina k nastavení hodnoty pH 7. Z roztoku vykrystaluje 9-(l,3-dihydroxy-2-propox^i^ť^l^l^^^ljguanin o teplotě tání 250° Celsia za rozkladu.

Příklad 4

Následující příklad objasňuje způsob přípravy reprezentativních farmaceutických prostředků obsahujících . účinnou látku vzorce I

A. Topický.prostředek

Účinná látka 0,2 až 2 g

Spán 60 (Sorbitan monostearát) 2g

Tween 60 (polysorbát 60) 2g

Minerální olej 5g

Petrolatum 10g

Meehylparaben 0,Иg

Propylparaben 0,05g

BHA (butylovaný hydroxyanisol) 0,01g

Voda do 100 ml

Všechny shora uvedené složky s výjimkou vody se smíchají a udržují se na teplotě 60 °C za míchání. Potom se přidá dostatečné množství vody o teplotě 60 °C za intenzivního míchání, čímž se získá 100 ' g krémového prostředku, který se potom ochladí na teplotu místnosti.

Následující prostředek je vhodný pro intraptritontάlní a intramuskulární vstřikování.

B. Prostředek pro intrаptritontální a intramuskulární vstřikování

Účinná látka 0,5g

Propylenglykol 20g

Polyethylenglykol 20g 'Tween 80 (polysorbát 80) 1g

0,9% fyziologický roztok do 100 ml

Účinná látka se rozpustí v propylenglykolu, polyethylenglykolu 400 a Tweenu 80. Potom se přidá dostatečné množství fyziologického roztoku 0,9% za míchání, . k získání 100 ml roztoku pro intraperitoneální nebo intramuskulární vstřikování, který se zfiltruje 0,2 mikrometrovým membránovým filtrem a balí se za sterilních podmínek.

Následující prostředek je vhodný pro intravenozní vstřikování.

C. Prostředek pro intravenózní vstřikování

Účinná látka 0,5 g

0,9% fyziologický roztok 100 g

Účinná látka se přidá do 100 ml 0,9% fyziologického roztoku za míchání k získání 100 ml roztoku pro intravenozní vstřikování, který se zfiltruje 0,2 mikrometrovým membránovým filtrem a balí se za sterilních podmínek.

D. Tablety

Hmotnostní díly

Účinná látka200

Stearát horečnatý3

Škrob30

Laktóza116

Polyvinylpyrrolidon (PVP)3

Shora uvedené složky se smíchají a granulují se za použití methanolu jakožto. rozpouštědla. Prostředek .se potom suší a zpracuje se na tablety (obsahující 200 mg účinné látky) za použití vhodného tabletovacího stroje.

Příklad 5

Mimořádná protivirová účinnost sloučeniny obecného vzorce I, připravené způsobem podle vynálezu, je doložena tímto způsobem:

Virus Herpes simplex 2, kmen G se pro infekci připravuje v HEp-2 buněčných kulturách. Virus se adsorbuje po dobu jedné hodiny, čerstvé prostředí se umístí na buňky a potom se inkubuje při teplotě 35 °C tak dlouho, až jsou všechny buňky infikovány. Buněčná suspenze se zmrazí na teplotu —70 stupňů Celsia, nechá se roztát a odstředí se k odstranění zlomků buněk. Kapalina nad buňkami se dělí na alikvotní podíly a uloží se ve zmrazeném stavu —70 °C až do použití. Zředění 10⁶⁷ kapaliny nad buňkami vytváří 50% infekční dávku buněčné kultury (CCIDso) v HEp-2 buňkách a zředění 10^vvytváří 50% letální dávku (LCsoj pro myši.

Skupina 20 myších samiček Swiss Webster (o hmotnosti 15 až 17 g) se ošetří intraperitoneálně použitím 0,2 ml EMEM obsahujícím 10 LCso/myš viru. Myš ošetřená o

1_C0'5 více nebo méně viry, než je dávka 10

LDso, slouží jako kontrola virulence.

Ošetření zkoušenou sloučeninou začíná 6 hodin po infikování. Myším, rozděleným do skupin po 20 jedincích, se podávají sloučeniny ve fyziologickém roztoku s. c. v dávce 5 mg/kg, 10 mg/kg a 20 mg/kg. Jedna skupina 20 myší se použije jako skupina kontrolní a podává se jim · jen fyziologický roztok s. c. Ošetření se opakuje 24, 48, 72 a 96 hodin po podání.

Zkoušenými sloučeninami jsou sloučenina podle vynálezu a tři sloučeniny podle amerického patentového spisu čís. 4 199 574, které jsou strukturálně podobné částem sloučeniny podle vynálezu.

Zkoušená sloučenina	Dávka mg/kg	12	Přežilé (z 20 myší) dny ' po podání 14	21
Neošetřené kontroly		0	0	0
9-(l,3-ciihydroxy-2-	5	2	2	2
-propoxymethyl jadenin	10	1	0	0
	20	1	1	1
9- (l,3-dibenzoxy-2-	5	2	0	0
-propoxymethyl )-6-	10	0	0	0
-merkaptopurin	20	1	0	0
9-(l-hydroxy-2-	5	1	1	1
-ethoxymethy 1) guanin	10	3	3	3
	20	5	4	4
9-(l,3-di.hydroxy-2-	5	15	14	14
-propox¹^i^^t^l^l^'/]Í) guanin	10	19	18	18
	20	19	18	15
Shora uvedené výsledky,	porovnání počtu	Příklad	6

přežilých zvířat, kterým byla podána sloučenina vzorce I a počet přežilých zvířat, kterým byly podány tři účinné látky známé ze stavu techniky jasně dokládají výrazně vyšší protivirové působení sloučeniny vzorce I, připravené způsobem podle vynálezu.

Převedení sodné soli 9-(l,3-dihydroxy-2-propoxymethyljguaninu na draselnou sůl

ch^chch^oh

CH^OH сн^снсно ch_íoh

Do roztoku sodné soli 9-(l,3-dihydroxy-2propoxymethyl)guanmu (0,83 g, 3 mmolu) ve vodě (10 ml) se přidá chlorid amonný (0,48 g, 9 mmolu) a vzniklý roztok se ochladí na teplotu 0 °C. Krystaly se odfiltrují a vysuší se. Potom se rozpustí ve vodě (100 mililitrů) obsahující hydroxid draselný (0,17 gramu, 3 mmolu). Vzniklý roztok se zmrazí a potom se lyofilizuje, čímž se získá draselná sůl 9-(l,3-dihydroxy-2-propoxymethyljguaninu.

Příklad 7

Příprava 9- (l,3-dihydroxy-2-propoxymethyl) -N2-isobutyrylguaninu

Do roztoku sodné soli 9-(l,3-dihydroxy-2-propoxymethyy jguaninu (0,83 g, 3 mmolu) ve vodě (10 ml) se přidá chlorid amonný (0,48 g, 9 mmolu) a vzniklý roztok se ochladí na teplotu 0 °C. Krystaly se oddělí filtrací, usuší se ve vakuu a potom se překrysta lují z N,N-dimethylformamidu (10 ml]. Zbytek se zpracovává hexamethyldisilazanem (5 ml) v N,N-dimethylformamidu (10 ml) po dobu 5 hodin, potom se přidá pyridin (10 ml) a anhydrid iso-máselné kyseliny (10 ml). Vzniklý roztok se míchá po dobu 18 hodin a potom se přidá methanol (20 mililitrů). Roztok se odpaří přibližně na objem 15 ml a produkt se vysráží přidáním roztoku diethyletheru a hexanu v poměru 1 : 1 (50 ml). Sraženina se překrystaluje ze systému methanol — voda v poměru 2 : 1, čímž se získá 9-(l,3-dihydroxy-2-propoxymethyl) -N²-isobutyrylguanin.

Příklad 8

Příprava sodné soli 9-(l,3-dihydroxy-2-propoxymethyl) guaninu

Roztok N²-acety 1-9- (l,3-dihydroxy-2-propoxymethyljguaninu (0,89 g, 3 mmoly) v methanolu (40 ml) se míchá s hydroxidem amonným koncentrovaným (10 ml) po dobu 24 hodin při teplotě místnosti, potom se zkoncentruje a zbytek se vysuší ve vakuu. Zbytek se potom rozpustí ve vodě (100 ml) obsahující hydroxid sodný (0,12 g, 3 mmol). Vzniklý roztok se zmrazí a lyofilizuje se, čímž se získá sodná sůl 9-(l,3-dihydroxy-2-propoxymethyl) guaninu.

Claims

Způsob přípravy 9-(l,3-dihydroxy-2-propoxymethyl) guaninu vzorce I

VYNÁLEZU kde znamená R acylovou skupinu obecného vzorce

CHOCHCHJM i I i сн^он <l>

a jeho farmaceuticky vhodných solí, vyznačený tím, že se hydrolyzuje sloučenina obecného vzorce IX ^HA^ř>

^H СН^ОСНСН OH

CH.OH (IX} kde^

R“ znamená uhlovodíkovou skupinu s 1 až 10 atomy uhlíku s přímým nebo s rozvětveným řetězcem, například skupinu methylovou, ethylovou, iso-propylovou, n-propylovou, n-butylovou, Iso-butylovou, terc.butylovou, n-hexylovou, iso-hexylovou, noktylovou, iso-oktylovou, n-nonylovou, isononylovou, n-decylovou a isodecylovou, a vzniklý 9-(l,3-dihydroxy-2-propoxymethyl))guanin se popřípadě převádí na farmaceuticky vhodnou sůl nebo se sůl 9-(1,3-dihydroxy-2-propoxymethyl) guaninu převádí na 9-(l,3-dihydroxy-2-propoxymethyl)guanin nebo se sůl 9-(l,3-dihydroxy-2-propoxymethyl)guaninu převádí na farmaceuticky vhodnou sůl.