CN118679169A - Ras抑制剂 - Google Patents

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E·S·科尔屯
刘阳
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Abstract

本发明的特征在于能够抑制Ras蛋白的大环化合物以及其药物组合物和蛋白质复合物，以及它们在癌症治疗中的用途。

Description

RAS抑制剂
背景技术
绝大多数的小分子药物是通过结合靶标蛋白上功能重要的口袋，由此调节该蛋白质的活性来起作用。例如，称为他汀类药物(statins)的降胆固醇药结合HMG-CoA还原酶的酶活性位点，由此防止该酶与其底物接合。事实上，已知许多此类药物/靶标相互作用对，可能误导人们相信能够发现针对大多数(如果不是全部的话)蛋白质的小分子调节剂进而提供合理量的时间、努力和资源。但情况远非如此。目前，据估计，所有人体蛋白质中仅约10％可作为小分子的靶标。Bojadzic和Buchwald,Curr Top Med Chem 18:674-699(2019)。其余90％当前被认为是以上提到的小分子药物发现难以治愈或难处理的。此类靶标通常称为“不可入药(undruggable)”的。这些不可入药的靶标包括医学上重要的人体蛋白质的大部分且通常未开发的储库。因此，人们对发现能够调节此类不可入药靶标的功能的新颖分子模态非常感兴趣。
文献中已充分确定，Ras蛋白(K-Ras、H-Ras及N-Ras)在多种人类癌症中起到至关重要的作用，并因此成为抗癌疗法的适当靶标。实际上，在美国，所有人类癌症中有约30％是由Ras蛋白突变引起，这些癌症中有许多是致命的。由活化突变、过度表达或上游活化引起的Ras蛋白失调在人类肿瘤中较为常见，并且在人类癌症中常常发现Ras的活化突变。例如，在Ras蛋白中密码子12处的活化突变通过抑制GTP酶活化蛋白(GAP)依赖性和固有GTP水解速率，明显使Ras突变蛋白群偏向“开启”(GTP结合)状态(Ras(ON))，导致致癌性MAPK信号传导来起作用。值得注意的是，Ras对GTP展现皮摩尔浓度的亲和力，使得Ras即便是在低浓度这一核苷酸存在下也能够活化。在Ras中密码子13(例如G13D)和61(例如Q61K)处的突变也引起在一些癌症中的致癌活性。
尽管在过去数十年中，针对Ras进行了广泛的药物发现尝试，但只有靶向K-RasG12C突变体的药物得到批准(索托拉西布(sotorasib))。需要付出更多的努力来发现针对由其它Ras突变驱动的癌症的其它医药。
发明内容
本文提供Ras抑制剂。本文所描述的方法需要在合成配体与两种细胞内蛋白质之间形成高亲和力三组分复合物，该两种细胞内蛋白在正常生理条件下不会相互作用：所关注的靶标蛋白(例如Ras)，以及在细胞中广泛表达的细胞质伴侣蛋白(呈现蛋白)(例如亲环蛋白A)。更具体点说，在一些实施方案中，本文所描述的Ras抑制剂通过驱动在Ras蛋白与广泛表达的细胞质伴侣蛋白亲环蛋白A(CYPA)之间形成高亲和力三重复合物或缀合物而在Ras中诱导新结合口袋。不受理论束缚，本发明者相信，本发明化合物以及其形成的复合物或缀合物对Ras发挥抑制作用的一种方式是在空间上阻塞Ras与传播致癌信号所需的下游效应分子如RAF和PI3K之间的相互作用位点。
因此，在一些实施方案中，本发明的特征在于一种结构式I的化合物或其药学上可接受的盐：
其中A是任选被取代的3至6元亚杂环烷基、任选被取代的3至6元亚环烷基、任选被取代的6元亚芳基或任选被取代的5至10元亚杂芳基；
X1、X2和X3各自独立地选自CH2、CF2、C＝O或O；
m是1或2；
n是0或1；
R1是氢、任选被取代的C1-C6杂烷基或任选被取代的3至10元杂环烷基；
R2是任选被取代的C1-C6烷基；并且
R3是任选被取代的C1-C6烷基、任选被取代的3至6元环烷基或任选被取代的杂环烷基，
并且其中每个氢独立地任选富集同位素氘。
在一些实施方案中，本发明的特征在于一种具有结构式II的化合物或其药学上可接受的盐：
其中A是任选被取代的3至6元亚杂环烷基、任选被取代的3至6元亚环烷基、任选被取代的6元亚芳基或任选被取代的5至10元亚杂芳基；
R2是任选被取代的C1-C6烷基；并且
R3是任选被取代的C1-C6烷基、任选被取代的3至6元环烷基或任选被取代的杂环烷基，
并且其中每个氢独立地任选富集同位素氘。
在一些实施方案中，本发明的特征在于一种具有结构式V的化合物或其药学上可接受的盐：
其中A是任选被取代的3至6元亚杂环烷基、任选被取代的3至6元亚环烷基、任选被取代的6元亚芳基或任选被取代的5至10元亚杂芳基；
R2是任选被取代的C1-C6烷基；并且
R3是任选被取代的C1-C6烷基、任选被取代的3至6元环烷基或任选被取代的杂环烷基，
并且其中每个氢独立地任选富集同位素氘。
在一些实施方案中，本发明的特征在于一种具有结构式VI的化合物或其药学上可接受的盐：
其中A是任选被取代的3至6元亚杂环烷基、任选被取代的3至6元亚环烷基、任选被取代的6元亚芳基或任选被取代的5至10元亚杂芳基；
R2是任选被取代的C1-C6烷基；并且
R3是任选被取代的C1-C6烷基、任选被取代的3至6元环烷基或任选被取代的杂环烷基，
并且其中每个氢独立地任选富集同位素氘。
在一些实施方案中，本发明的特征在于一种具有结构式VII的化合物或其药学上可接受的盐：
其中A是任选被取代的3至6元亚杂环烷基、任选被取代的3至6元亚环烷基、任选被取代的6元亚芳基或任选被取代的5至10元亚杂芳基；
R2是任选被取代的C1-C6烷基；并且
R3是任选被取代的C1-C6烷基、任选被取代的3至6元环烷基或任选被取代的杂环烷基，
并且其中每个氢独立地任选富集同位素氘。
在一些实施方案中，本发明的特征还在于一种选自表1或表2的化合物或其药学上可接受的盐。
还提供药物组合物，所述药物组合物包含式I、式II、式V、式VI或式VII的化合物或其药学上可接受的盐，和药学上可接受的赋形剂。还提供药物组合物，所述药物组合物包含表1或表2的化合物或其药学上可接受的盐，和药学上可接受的赋形剂。
还提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的本发明化合物或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，提供一种治疗有需要的受试者的Ras蛋白相关病症的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的本发明化合物或其药学上可接受的盐。
还提供了一种抑制细胞中的Ras蛋白的方法，该方法包括使该细胞与有效量的本发明化合物或其药学上可接受的盐接触。
具体地说，经审慎考虑，所论述的关于本发明一个实施方案的任何限制可适用于本发明的任何其它实施方案。另外，本发明的任何化合物或组合物均可用于本发明的任何方法中，并且本发明的任何方法均可用于制造或利用本发明的任何化合物或组合物。
定义和化学术语
在本申请中，除非自上下文另有清晰说明，否则(i)术语“a(一)”意思指“一或多”；(ii)术语“或”用于指“和/或”，除非明确指示该术语是指替代选择为唯一的或该替代选择是相互排斥的，不过，本发明支持的定义是指唯一替代选择以及“和/或”；(iii)术语“包含”和“包括”应理解为涵盖列出的组分或步骤，无论仅呈现所述组分或步骤自身还是呈现所述组分或步骤与一种或多种额外组分或步骤的组合；以及(iv)在提供范围时，端点包括在内。
如本文所使用，术语“约”用于指示一个值包括用于确定该值的装置或方法的误差的标准偏差。在某些实施方案中，术语“约”是指值的沿任一方向(大于或小于)在所述值的25％、20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％或更低百分比内的范围，除非另外规定或自上下文另外显而易见(例如在该数字将超过可能值的100％时)。
如本文所使用，在描述相邻原子的情形中，术语“相邻”是指由共价键直接连接的二价原子。
如本文所使用，“本发明化合物”和类似术语，无论明确指示与否，均是指本文所描述的Ras抑制剂，包括式I至式VII或其子式中任一式的化合物，以及表1或表2的化合物，以及其盐(例如药学上可接受的盐)、溶剂化物、水合物、立体异构体(包括阻转异构体)和互变异构体。
术语“野生型”是指具有在自然界中在“正常”(与突变、患病、改变等相对)状态或情形中所见的结构或活性的实体。本领域技术人员应理解，野生型基因和多肽通常以多种不同形式(例如等位基因)存在。
本领域技术人员应了解，本文所描述的某些化合物可以呈一种或多种不同异构形式(例如立体异构体、几何异构体、阻转异构体、互变异构体)或同位素形式(例如其中一个或多个原子被该原子的不同的同位素取代，如氢被氘取代)存在。除非另外指示或自上下文清楚可见，所描绘的结构可理解为表示个别或组合的任何此类异构或同位素形式。
本文所描述的化合物可以是不对称的(例如具有一个或多个立体中心)。除非另外指示，否则涵盖所有立体异构体，如对映异构体和非对映异构体。含有不对称取代的碳原子的本发明化合物可以呈光学活性形式或外消旋形式分离。本领域中已知由光学活性起始物质制备光学活性形式的方法，如通过拆分外消旋混合物或通过立体选择性合成方法制备。烯烃、C＝N双键等许多几何异构体也可存在于本文所描述的化合物中，并且所有此类稳定异构体均涵盖在本发明中。本发明的化合物的顺式和反式几何异构体已有描述，并且可以呈异构体混合物形式或以分开的异构形式分离。
在一些实施方案中，本文所描绘的一种或多种化合物可以呈不同互变异构形式存在。自上下文将清楚可见，除非明确地排除，否则提到此类化合物涵盖所有此类互变异构形式。在一些实施方案中，互变异构形式是由一个单键与相邻双键交换且伴随质子的迁移得到。在某些实施方案中，互变异构形式可以是质子转移互变异构体，该互变异构体是具有与参考形式相同的经验式和总电荷的异构体质子化状态。具有质子转移互变异构形式的部分的实例有酮-烯醇对、酰胺-亚胺酸对、内酰胺-内酰亚胺对、酰胺-亚胺酸对、烯胺-亚胺对以及环状形式，在所述环状形式中，质子可占据杂环系统的两个或更多个位置，如1H-咪唑和3H-咪唑、1H-三唑、2H-三唑和4H-1,2,4-三唑、1H-异吲哚和2H-异吲哚，以及1H-吡唑和2H-吡唑。在一些实施方案中，互变异构形式可处于平衡状态或通过适当取代而在空间上锁定于一种形式。在某些实施方案中，互变异构形式是由缩醛相互转化得到。
除非另外规定，否则本文所描绘的结构也意欲包括仅因一个或多个同位素富集的原子的存在而不同的化合物。可并入本发明化合物中的例示性同位素包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、氯及碘的同位素，如2H、3H、11C、13C、14C、13N、15N、15O、17O、18O、32P、33P、35S、18F、36Cl、123I及125I。同位素标记的化合物(例如标记3H和14C的化合物)可用于化合物或底物组织分布测定中。氚化(即，3H)和碳-14(即，14C)同位素因其易于制备和检测而可用。另外，用较重同位素，如氘(即，2H)取代可由于代谢稳定性增强(例如体内半衰期增加或剂量需求减小)而提供某些治疗益处。在一些实施方案中，一个或多个氢原子被2H或3H置换，或者一个或多个碳原子被13C或14C富集的碳置换。正电子发射同位素，如15O、13N、11C及18F可用于正电子发射断层扫描(PET)研究中以检查底物受体占有情况。同位素标记的化合物的制备是本领域技术人员所知的。例如，同位素标记的化合物一般可遵循与所公开的关于本文所描述的本发明化合物的程序类似的程序，通过用同位素标记的试剂取代未同位素标记的试剂制备。
如本文可互换使用的，“氘取代”、“氘化”或“富集氘”是指本发明化合物或其部分的氘(D或2H)水平已富集超过氘的天然丰度0.015％。在某些实施方案中，本发明的组合物的最小同位素富集因子是至少5(0.075％氘并入量)，例如至少10(0.15％氘并入量)。在其它实施方案中，组合物的同位素富集因子是至少50(0.75％氘并入量)、至少500(7.5％氘并入量)、至少2000(30％氘并入量)、至少3000(45％氘并入量)、至少4000(60％氘并入量)、至少4500(67.5％氘并入量)、至少5000(75％氘并入量)、至少5500(82.5％氘并入量)、至少6000(90％氘并入量)或至少6600(99％氘并入量)。
可在本发明化合物中含有一个或多个氘取代的部分的非限制性实例包括以下，其中任何位置“R”都可以是氘(D)：
另外的实例包括如以下部分：
以及类似R1型部分的氘化，其中R1的定义见于本文中(例如在式I-VII中任一者的化合物中)。也涵盖在本发明化合物中交联基团(例如任选被取代的氮杂环丙烷部分)内的部分的氘化，其中所述交联基团如本文所定义(参见例如通式I-VII和其子式，以及本文所描述的W的具体实例，例如
)。此外，还涵盖在本文所描述各式的化合物的任何A部分中可用位置的氘化，例如
另外，氘取代也可在本发明化合物中本文所描述各式的化合物的连接体位置处发生，例如
在另一实施方案中，也涵盖硅烷基化取代，例如在如下连接体位置中的取代：
硅烷基化的其它实例包括例如以下部分：
以及类似R1型部分的硅烷基化取代，其中R1的定义见于本文中(例如在式I-VII中任一者的化合物中)。
如本领域中所知的，许多化学实体可呈现多种不同的固体形式，如非晶形或结晶形式(例如多晶型物、水合物、溶剂化物)。在一些实施方案中，本发明化合物可以呈任何此类形式使用，包括任何固体形式。在一些实施方案中，本文所描述或描绘的化合物可以呈水合物形式或溶剂化物形式提供。
在本说明书中各处，本发明的化合物的取代基是以群组或以范围公开。确切地说，预期本发明包括所述群组和范围各成员的每一个别子组合。例如，术语“C1-C6烷基”特定地意欲个别地公开甲基、乙基、C3烷基、C4烷基、C5烷基及C6烷基。此外，在一种化合物包括多个位置，并且在这些位置处，取代基是以群组或以范围公开时，除非另外指示，否则本发明意欲涵盖在每个位置处含有成员的每一个别子组合的个别化合物和化合物群组(例如种类和子类)。
术语“任选被取代的X”(例如“任选被取代的烷基”)意欲等效于“X，其中X任选被取代”(例如“烷基，其中该烷基任选被取代”)。并非意欲指特征“X”(例如烷基)本身是任选的。如本文所描述，某些所关注化合物可含有一个或多个“任选被取代”的部分。一般而言，术语“被取代”无论前面是否加有术语“任选地”，均意谓指定部分的一个或多个氢被适合取代基，例如本文所描述的取代基或基团中的任一者置换。除非另外指示，否则“任选被取代”的基团可在该基团的每一可取代位置处具有适合取代基，并且当在任何给定结构中的不止一个位置可被选自指定群组的不止一个取代基取代时，在每个位置处的取代基可相同或不同。例如，在术语“任选被取代的C1-C6烷基-C2-C9杂芳基”中，该烷基部分、该杂芳基部分或两者可任选被取代。本发明所设想的取代基的组合优选是形成稳定或化学上可行的化合物的取代基组合。如本文所使用，术语“稳定”是指化合物当经历允许该化合物产生、检测且在某些实施方案中，允许该化合物回收、纯化以及用于一个或多个本文所公开的目的的条件时大体上不改变。
“任选被取代”的基团的可取代碳原子上的适合单价取代基可独立地为氘；卤素；-(CH2)0-4Ro；-(CH2)0-4ORo；-O(CH2)0-4Ro；-O-(CH2)0-4C(O)ORo；-(CH2)0-4CH(ORo)2；-(CH2)0- 4SRo；-(CH2)0-4Ph，该基团可被Ro取代；-(CH2)0-4O(CH2)0-1Ph，该基团可被Ro取代；-CH＝CHPh，该基团可被Ro取代；-(CH2)0-4O(CH2)0-1-吡啶基，该基团可被Ro取代；4至8元饱和或不饱和杂环烷基(例如吡啶基)；3至8元饱和或不饱和环烷基(例如环丙基、环丁基或环戊基)；-NO2；-CN；-N3；-(CH2)0-4N(Ro)2；-(CH2)0-4N(Ro)C(O)Ro；-N(Ro)C(S)Ro；-(CH2)0-4N(Ro)C(O)NRo 2；-N(Ro)C(S)NRo 2；-(CH2)0-4N(Ro)C(O)ORo；-N(Ro)N(Ro)C(O)Ro；-N(Ro)N(Ro)C(O)NRo 2；-N(Ro)N(Ro)C(O)ORo；-(CH2)0-4C(O)Ro；-C(S)Ro；-(CH2)0-4C(O)ORo；-(CH2)0-4-C(O)-N(Ro)2；-(CH2)0-4-C(O)-N(Ro)-S(O)2-Ro；-C(NCN)NRo 2；-(CH2)0-4C(O)SRo；-(CH2)0-4C(O)OSiRo 3；-(CH2)0-4OC(O)Ro；-OC(O)(CH2)0-4SRo；-SC(S)SRo；-(CH2)0-4SC(O)Ro；-(CH2)0-4C(O)NRo 2；-C(S)NRo 2；-C(S)SRo；-(CH2)0-4OC(O)NRo 2；-C(O)N(ORo)Ro；-C(O)C(O)Ro；-C(O)CH2C(O)Ro；-C(NORo)Ro；-(CH2)0-4SSRo；-(CH2)0-4S(O)2Ro；-(CH2)0-4S(O)2ORo；-(CH2)0-4OS(O)2Ro；-S(O)2NRo 2；-(CH2)0-4S(O)Ro；-N(Ro)S(O)2NRo 2；-N(Ro)S(O)2Ro；-N(ORo)Ro；-C(NORo)NRo 2；-C(NH)NRo 2；-P(O)2Ro；-P(O)Ro 2；-P(O)(ORo)2；-OP(O)Ro 2；-OP(O)(ORo)2；-OP(O)(ORo)Ro；-SiRo 3；-(C1-C4直链或分支链亚烷基)O-N(Ro)2；或-(C1-C4直链或分支链亚烷基)C(O)O-N(Ro)2，其中各Ro可如下文所定义被取代且独立地为氢、-C1-C6脂肪族基团、-CH2Ph、-O(CH2)0-1Ph、-CH2-(5至6元杂芳基环)，或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3至6元饱和、部分不饱和或芳基环，或尽管有以上定义，但两个独立存在的Ro与其插入原子一起形成具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3至12元饱和、部分不饱和或芳基单环或双环，其可如下文所定义被取代。
Ro(或由两个独立存在的Ro与其插入原子一起形成的环)上的适合单价取代基可独立地为卤素、-(CH2)0-2R·、-(卤代R·)、-(CH2)0-2OH、-(CH2)0-2OR·、-(CH2)0-2CH(OR·)2、-O(卤代R·)、-CN、-N3、-(CH2)0-2C(O)R·、-(CH2)0-2C(O)OH、-(CH2)0-2C(O)OR·、-(CH2)0-2SR·、-(CH2)0- 2SH、-(CH2)0-2NH2、-(CH2)0-2NHR·、-(CH2)0-2NR· 2、-NO2、-SiR· 3、-OSiR· 3、-C(O)SR·、-(C1-4直链或分支链亚烷基)C(O)OR·或-SSR·，其中各R·未被取代或在前面加有“卤代”的情况下仅被一个或多个卤素取代，并且独立地选自C1-C4脂肪族基团、-CH2Ph、-O(CH2)0-1Ph或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5至6元饱和、部分不饱和或芳基环。Ro的饱和碳原子上的适合二价取代基包括＝O和＝S。
“任选被取代”的基团的饱和碳原子上的适合二价取代基包括以下：＝O、＝S、＝NNR* 2、＝NNHC(O)R*、＝NNHC(O)OR*、＝NNHS(O)2R*、＝NR*、＝NOR*、-O(C(R* 2))2-3O-或-S(C(R* 2))2-3S-，其中R*在每次独立出现时选自氢；C1-C6脂肪族基团，该基团可如下文所定义被取代；或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的未被取代的5至6元饱和、部分不饱和或芳基环。结合至“任选被取代”的基团的邻近可取代碳的适合二价取代基包括：-O(CR* 2)2- 3O-，其中R*在每次独立出现时选自氢；C1-C6脂肪族基团，该基团可如下文所定义被取代；或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的未被取代的5至6元饱和、部分不饱和或芳基环。
R*的脂肪族基团上的适合取代基包括卤素、-R·、-(卤代R·)、-OH、-OR·、-O(卤代R·)、-CN、-C(O)OH、-C(O)OR·、-NH2、-NHR·、-NR· 2或-NO2，其中各R·未被取代或在前面加有“卤代”的情况下仅被一个或多个卤素取代，并且独立地为C1-C4脂肪族基团、-CH2Ph、-O(CH2)0-1Ph或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5至6元饱和、部分不饱和或芳基环。
“任选被取代”的基团的可取代氮上的适合取代基包括 其中各独立地为氢；C1-C6脂肪族基团，该基团可如下文所定义被取代；未被取代的-OPh；或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的未被取代的3至6元饱和、部分不饱和或芳基环，或尽管有以上定义，但两个独立存在的与其插入原子一起形成具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3至12元饱和、部分不饱和或芳基单环或双环。
的脂肪族基团上的适合取代基独立地为卤素、-R·、-(卤代R·)、-OH、-OR·、-O(卤代R·)、-CN、-C(O)OH、-C(O)OR·、-NH2、-NHR·、-NR· 2或-NO2，其中各R·未被取代或在前面加有“卤代”的情况下仅被一个或多个卤素取代，并且独立地为C1-C4脂肪族基团、-CH2Ph、-O(CH2)0-1Ph或具有0-4个独立地选氮、氧或硫的杂原子的5至6元饱和、部分不饱和或芳基环。的饱和碳原子上的适合二价取代基包括＝O及＝S。
如本文所使用，术语“乙酰基”是指基团-C(O)CH3。
如本文所使用，术语“烷氧基”是指-O-C1-C20烷基，其中该烷氧基通过氧原子连接至化合物的其余部分。
如本文所使用，术语“烷基”是指含有1至20个(例如1至10个或1至6个)碳的饱和、直链或分支链单价烃基。在一些实施方案中，烷基是非分支链的(即，是线性的)；在一些实施方案中，烷基是分支链的。烷基是例如但不限于甲基、乙基、正丙基和异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基和叔丁基，以及新戊基。
如本文所使用，术语“亚烷基”表示由直链或分支链饱和烃通过移除两个氢原子得到的饱和二价烃基，并且其实例有亚甲基、亚乙基、亚异丙基等。术语“Cx-Cy亚烷基”表示具有在x与y个之间的碳的亚烷基。例示性x值是1、2、3、4、5及6，并且例示性y值是2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、16、18或20(例如C1-C6、C1-C10、C2-C20、C2-C6、C2-C10或C2-C20亚烷基)。在一些实施方案中，亚烷基可进一步被1、2、3或4个如本文所定义的取代基取代。
除非另外具体说明，否则如本文所使用，术语“烯基”表示含有一个或多个碳-碳双键的具有2至20个碳(例如2至6个或2至10个碳)的单价直链或分支链基团，并且其实例是乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、2-甲基-1-丙烯基、1-丁烯基及2-丁烯基。烯基包括顺式和反式异构体两种。除非另外具体说明，否则如本文所使用，术语“亚烯基”表示含有一个或多个碳-碳双键的具有2至20个碳(例如2至6个或2至10个碳)的二价直链或分支链基团。
如本文所使用，术语“炔基”表示含有碳-碳三键的具有2至20个碳(例如2至4个、2至6个或2至10个碳)的单价直链或分支链基团，并且其实例有乙炔基及1-丙炔基。
如本文所使用，术语“氨基”表示例如-NH2和-N(CH3)2。
如本文所使用，术语“氨基烷基”表示一个或多个碳原子被一个或多个氨基部分取代的烷基部分。
如本文所描述，术语“氨基酸”是指具有侧链、氨基和酸基(例如-CO2H或-SO3H)的分子，其中该氨基酸通过所述侧链、氨基或酸基(例如侧链)连接至母分子基团。如本文所使用，术语“氨基酸”在最广泛意义上是指可例如通过形成一个或多个肽键并入多肽链中的任何化合物或物质。在一些实施方案中，氨基酸具有通用结构H2N-C(H)(R)-COOH。在一些实施方案中，氨基酸是天然存在的氨基酸。在一些实施方案中，氨基酸是合成氨基酸；在一些实施方案中，氨基酸是D-氨基酸；在一些实施方案中，氨基酸是L-氨基酸。“标准氨基酸”是指天然存在的肽中常见的二十种标准L-氨基酸中的任一种。例示性氨基酸包括丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、组氨酸、任选被取代的羟基正缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、正缬氨酸、鸟氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、吡咯赖氨酸、硒代半胱氨酸、丝氨酸、牛磺酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸及缬氨酸。
如本文所使用，术语“芳基”表示由碳原子形成的单价单环、双环或多环系统，其中连接至侧接基团的环是芳香环。芳基的实例有苯基、萘基、菲基和蒽基。芳环可在产生稳定结构的任何杂原子或碳环原子处连接至其侧接基团，并且除非另外具体说明，否则任何环原子可任选被取代。
如本文所使用，术语“C0”表示键。例如，术语-N(C(O)-(C0-C5亚烷基-H)-的一部分包括-N(C(O)-(C0亚烷基-H)-，也表示为-N(C(O)-H)-。
如本文所使用，术语“碳环”和“碳环基”是指单价、任选被取代的3至12元单环、双环或三环结构，该环结构可以是桥接环、稠合环或螺环，其中所有环均由碳原子形成，并且至少一个环是非芳香环。碳环结构包括环烷基、环烯基和环炔基。碳环基的实例有环己基、环己烯基、环辛炔基、1,2-二氢萘基、1,2,3,4-四氢萘基、芴基、茚基、二氢茚基、十氢萘基等。碳环可在产生稳定结构的任何环原子处连接至其侧接基团，并且除非另外具体说明，否则任何环原子可任选被取代。
如本文所使用，术语“羰基”表示C(O)基团，该基团也可表示为C＝O。
如本文所使用，术语“羧基”意思指-CO2H、(C＝O)(OH)、COOH或C(O)OH，或未质子化的对应物。
如本文所使用，术语“氰基”表示-CN基团。
如本文所使用，术语“环烷基”表示单价饱和环状烃基，除非另外具体说明，否则该基团可以是具有三至八个环碳的桥接环、稠合环或螺环，并且其实例有环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基及环庚基。
如本文所使用，术语“环烯基”表示单价、非芳香族饱和环状烃基，除非另外具体说明，否则该基团可以是具有三至八个环碳且含有一个或多个碳-碳双键的桥接环、稠合环或螺环。
如本文所使用，术语“非对映异构体”意思指不互为镜像且彼此不可重叠的立体异构体。
如本文所使用，术语“对映异构体”意思指具有至少80％(即，至少90％的一种对映异构体和至多10％的另一种对映异构体)、优选至少90％且更优选至少98％的光学纯度或对映异构体过量(如通过本领域中的标准方法确定)的本发明化合物的每一个别光学活性形式。
如本文所使用，术语“卤代乙酰基”是指至少一个氢被卤素置换的乙酰基。
如本文所使用，术语“卤烷基”表示一个或多个碳原子被一个或多个相同或不同的卤素部分取代的烷基部分。
如本文所使用，术语“卤素”表示选自溴、氯、碘或氟的卤素。
如本文所使用，术语“杂烷基”是指至少一个碳原子被杂原子(例如O、N或S原子)置换的如本文所定义的“烷基”。杂原子可出现在基团的中间或末端。
如本文所使用，术语“杂芳基”表示含有至少一个完全芳香环的单价、单环或多环结构：即，它在该单环或多环系统内含有4n+2个π电子，并且在该芳香环中含有至少一个选自N、O或S的杂原子。例示性未被取代的杂芳基具有1至12个(例如1至11个、1至10个、1至9个、2至12个、2至11个、2至10个或2至9个)碳。术语“杂芳基”包括任一上述杂芳香环与一个或多个芳环或碳环，例如苯基环或环己烷环稠合的双环、三环和四环基团。杂芳基的实例包括但不限于吡啶基、吡唑基、苯并噁唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、咪唑基、噻唑基、喹啉基、四氢喹啉基及4-氮杂吲哚基。杂芳基环可在产生稳定结构的任何环原子处连接至其侧接基团，并且除非另外具体说明，否则任何环原子可任选被取代。在某一实施方案中，杂芳基被1、2、3或4个取代基取代。
如本文所使用，术语“杂环烷基”表示至少一个环是非芳香环且其中该非芳香环含有一个、两个、三个或四个独立地选自由氮、氧和硫组成的组的杂原子的单价、单环、双环或多环系统，该环系统可以是桥接环、稠合环或螺环。5元环具有零至两个双键，并且6元环和7元环具有零至三个双键。例示性未被取代的杂环烷基具有1至12个(例如1至11个、1至10个、1至9个、2至12个、2至11个、2至10个或2至9个)碳。术语“杂环烷基”也表示具有桥接多环结构的杂环化合物，其中一个或多个碳或杂原子桥接单环的不相邻成员，例如奎宁环基。术语“杂环烷基”包括任一上述杂环与一个或多个芳香环、碳环、杂芳香环或杂环，例如芳基环、环己烷环、环己烯环、环戊烷环、环戊烯环、吡啶环或吡咯烷环稠合的双环、三环和四环基团。杂环烷基的实例有吡咯烷基、哌啶基、1,2,3,4-四氢喹啉基、十氢喹啉基、二氢吡咯并吡啶基及十氢萘啶基。杂环烷基环可在产生稳定结构的任何环原子处连接至其侧接基团，并且除非另外具体说明，否则任何环原子可任选被取代。
如本文所使用，术语“羟基”表示-OH基团。
如本文所使用，术语“羟基烷基”表示一个或多个碳原子被一个或多个-OH部分取代的烷基部分。
如本文所使用，术语“异构体”意思指本发明的任何化合物的任何互变异构体、立体异构体、阻转异构体、对映异构体或非对映异构体。应认识到，本发明化合物可具有一个或多个手性中心或双键，并因此，以立体异构体形式，如以双键异构体(即，E/Z几何异构体)或非对映异构体(例如对映异构体(即，(+)或(-))或顺/反异构体)形式存在。根据本发明，本文所描绘的化学结构且因此本发明化合物涵盖所有相应立体异构体，即，立体异构纯(例如几何异构纯、对映异构体纯或非对映异构体纯)形式以及对映异构体和立体异构体混合物，例如外消旋物。本发明化合物的对映异构体和立体异构体混合物可典型地通过众所周知的方法，如手性相气相色谱法、手性相高效液相色谱法、使化合物以手性盐络合物形式结晶或使化合物在手性溶剂中结晶来拆分成其组分对映异构体或立体异构体。对映异构体和立体异构体也可由立体异构纯或对映异构纯的中间体、试剂和催化剂，通过众所周知的不对称合成方法获得。
如本文所使用，“单价有机部分”小于500kDa。在一些实施方案中，“单价有机部分”小于400kDa。在一些实施方案中，“单价有机部分”小于300kDa。在一些实施方案中，“单价有机部分”小于200kDa。在一些实施方案中，“单价有机部分”小于100kDa。在一些实施方案中，“单价有机部分”小于50kDa。在一些实施方案中，“单价有机部分”小于25kDa。在一些实施方案中，“单价有机部分”小于20kDa。在一些实施方案中，“单价有机部分”小于15kDa。在一些实施方案中，“单价有机部分”小于10kDa。在一些实施方案中，“单价有机部分”小于1kDa。在一些实施方案中，“单价有机部分”小于500g/mol。在一些实施方案中，“单价有机部分”在500g/mol与500kDa之间的范围内。
如本文所使用，术语“立体异构体”是指一种化合物(例如本文所描述的任何式的化合物)可能具有所有可能的不同异构以及构形形式，特别是基础分子结构的所有可能的立体化学和构形异构形式、所有非对映异构体、对映异构体或构形异构体，包括阻转异构体。本发明的一些化合物可以呈不同互变异构形式存在，所有这些互变异构形式均包括在本发明的范围内。
如本文所使用，术语“磺酰基”表示-S(O)2-基团。
如本文所使用，术语“硫代羰基”是指-C(S)-基团。
本领域技术人员阅读本发明将理解，本文所描述的某些化合物可以呈多种形式中的任一种提供或利用，如盐形式、被保护的形式、前药形式、酯形式、异构形式(例如光学或结构异构体)、同位素形式等。在一些实施方案中，提到的特定化合物可指该化合物的特定形式。在一些实施方案中，提到的特定化合物可指呈任何形式的该化合物。在一些实施方案中，例如，一种化合物的单一立体异构体的制剂可视为该化合物的不同形式而非该化合物的外消旋混合物；一种化合物的特定盐可视为与该化合物的另一种盐不同的形式；含有双键的一种构形异构体((Z)或(E))的制剂可视为与含有该双键的另一种构形异构体((E)或(Z))的制剂不同的形式；一个或多个原子的同位素不同于参考制剂中存在的同位素的制剂可视为呈不同形式。
附图简述
图1显示，作为本发明化合物的代表的共价KRAS G12D抑制剂化合物A和化合物B在人胰腺腺癌HPAC KRASG12D/wt小鼠异种移植模型中展示出较强且持久的RAS路径调节作用。RAS/ERK信号传导路径调节是通过在qPCR测定中测量人DUSP6的mRNA水平评估。化合物A和化合物B在给药后4小时都引起HPAC异种移植肿瘤中DUSP6 mRNA水平的抑制，表明较强的RAS路径调节作用。
图2显示，化合物A和化合物B在4小时和长达24小时的时候展示较强的肿瘤交联，这与显著DUSP6抑制作用一致。将从图1的测定中收集的肿瘤样品均质化以提取蛋白质。利用Ras兔mAb(Abcam ab108602)和β-肌动蛋白mAb(CST-4967)对蛋白质溶解产物进行蛋白质印迹。检测肿瘤样品中较高分子量(MW)谱带(交联的KRAS G12D谱带)的出现，在此情况下，化合物共价结合至KRAS G12D蛋白。
图3A显示，在具有杂合型KRAS G12D的HPAC CDX小鼠异种移植模型中，每天以100mg/kg口服施用的单药化合物A和化合物B在治疗结束(开始治疗后第28天)时引起所有肿瘤的消退(消退定义为相对于基线>10％肿瘤消退)。
图3B显示，未观察到化合物A(100mg/kg po qd)或化合物B(100mg/kg po qd)引起的体重减轻，表明在人胰腺腺癌HPAC KRASG12D/wt小鼠异种移植模型中100mg/kg的两种化合物是良好耐受的。
图3C显示，在人胰腺腺癌HPAC KRASG12D/wt小鼠异种移植模型中，化合物A组(100mg/kg po qd)和化合物B组(100mg/kg po qd)中分别有8/10的肿瘤和9/10的肿瘤在第28天实现完全消退(完全消退定义为相对于基线>85％肿瘤消退)。
具体实施方式
化合物
本文提供Ras抑制剂。本文所描述的方法需要在合成配体与两种细胞内蛋白质之间形成高亲和力三组分复合物或缀合物，该两种细胞内蛋白在正常生理条件下不会相互作用：所关注的靶标蛋白(例如Ras)，以及在细胞中广泛表达的细胞质伴侣蛋白(呈现蛋白)(例如亲环蛋白A)。更具体点说，在一些实施方案中，本文所描述的Ras抑制剂通过驱动在Ras蛋白与广泛表达的细胞质伴侣蛋白亲环蛋白A(CYPA)之间形成高亲和力三重复合物或缀合物，在Ras中诱导新结合口袋。不受理论束缚，本发明人相信，本发明化合物以及其形成的复合物或缀合物对Ras发挥抑制作用的一种方式是在空间上阻塞Ras与传播致癌信号所需的下游效应分子如RAF之间的相互作用位点。
不受理论束缚，本发明人假定，本发明化合物与Ras和伴侣蛋白(例如亲环蛋白A)的共价和非共价相互作用可促成对Ras活性的抑制。在一些实施方案中，本发明化合物与Ras蛋白的侧链(例如在突变Ras蛋白12位或13位处的天冬氨酸的-CH2-COOH或-CH2-COO-侧链)形成共价加合物。也可与Ras的其它侧链形成共价加合物。另外或替代地，非共价相互作用可起作用：例如，范德华(van der Waals)相互作用、疏水相互作用、亲水相互作用和氢键相互作用，以及其组合可促成本发明化合物形成复合物并充当Ras抑制剂的能力。因此，本发明化合物可抑制多种Ras蛋白(例如K-Ras、N-Ras、H-Ras以及其在12位、13位及61位突变的突变体，如G12C、G12D、G12V、G12S、G13C、G13D及Q61L，以及本文所描述的其它突变体)。
确定共价加合物形成的方法是本领域中已知的。一种确定共价加合物形成的方法是执行“交联”测定，如下文中所描述的测定：
注意：以下方案描述用于监测K-Ras G12D(GMP-PNP)与本发明化合物的交联的程序。这一方案也可改用其它Ras蛋白或核苷酸来实施。
这一生物化学测定的目的是测量测试化合物共价标记载有核苷酸的K-Ras同功型的能力。在含有12.5mM HEPES pH 7.4、75mM NaCl、1mM MgCl2、5μM亲环蛋白A及2μM测试化合物的测定缓冲液中，将5μM载有GMP-PNP的K-Ras(1-169)G12D的储备液稀释10倍达到0.5μM最终浓度；并且最终样品体积是100μL。
在25℃下，将样品培育至多24小时的时间，随后通过添加10μL的5％甲酸淬灭。淬灭的样品在台式离心机中以15000rpm离心15分钟，随后将10μL等分试样注入至反相C4柱上并用流动相中递增的乙腈梯度洗脱至质谱仪中。原始数据的分析可使用Waters MassLynxMS软件进行，其中结合％是由被标记和未标记的K-Ras的解卷积蛋白质峰计算。
因此，本文提供一种具有式0结构的化合物或其药学上可接受的盐：
其中A是任选被取代的3至6元亚杂环烷基、任选被取代的3至6元亚环烷基、任选被取代的6元亚芳基或任选被取代的5至10元亚杂芳基；
X1、X2和X3各自独立地选自CH2、CF2、C＝O或O；
m是1或2；
n是0或1；
R1是氢、任选被取代的C1-C6杂烷基或任选被取代的3至10元杂环烷基；
R2是任选被取代的C1-C6烷基；并且
R3是任选被取代的C1-C6烷基、任选被取代的3至6元环烷基或任选被取代的杂环烷基，
并且其中每个氢独立地任选富集同位素氘。
在一些实施方案中，本发明化合物具有式I的结构，或其药学上可接受的盐：
其中A是任选被取代的3至6元亚杂环烷基、任选被取代的3至6元亚环烷基、任选被取代的6元亚芳基或任选被取代的5至10元亚杂芳基；
X1、X2和X3各自独立地选自CH2、CF2、C＝O或O；
m是1或2；
n是0或1；
R1是氢、任选被取代的C1-C6杂烷基或任选被取代的3至10元杂环烷基；
R2是任选被取代的C1-C6烷基；并且
R3是任选被取代的C1-C6烷基、任选被取代的3至6元环烷基或任选被取代的杂环烷基，
并且其中每个氢独立地任选富集同位素氘。
在一些实施方案中，本发明化合物具有式Ia、式Ib、式Ic的结构，或其药学上可接受的盐：
其中每个D指示氘的同位素富集因子是至少5的氢。
在一些实施方案中，本发明化合物具有式II的结构，或其药学上可接受的盐：
其中A是任选被取代的3至6元亚杂环烷基、任选被取代的3至6元亚环烷基、任选被取代的6元亚芳基或任选被取代的5至10元亚杂芳基；
R2是任选被取代的C1-C6烷基；并且
R3是任选被取代的C1-C6烷基、任选被取代的3至6元环烷基或任选被取代的杂环烷基，
并且其中每个氢独立地任选富集同位素氘。
在一些实施方案中，本发明化合物具有式V的结构，或其药学上可接受的盐：
其中A是任选被取代的3至6元亚杂环烷基、任选被取代的3至6元亚环烷基、任选被取代的6元亚芳基或任选被取代的5至10元亚杂芳基；
R2是任选被取代的C1-C6烷基；并且
R3是任选被取代的C1-C6烷基、任选被取代的3至6元环烷基或任选被取代的杂环烷基，
并且其中每个氢独立地任选富集同位素氘。
在一些实施方案中，本发明化合物具有式VI的结构，或其药学上可接受的盐：
其中A是任选被取代的3至6元亚杂环烷基、任选被取代的3至6元亚环烷基、任选被取代的6元亚芳基或任选被取代的5至10元亚杂芳基；
R2是任选被取代的C1-C6烷基；并且
R3是任选被取代的C1-C6烷基、任选被取代的3至6元环烷基或任选被取代的杂环烷基，
并且其中每个氢独立地任选富集同位素氘。
在一些实施方案中，本发明化合物具有式VII的结构，或其药学上可接受的盐：
其中A是任选被取代的3至6元亚杂环烷基、任选被取代的3至6元亚环烷基、任选被取代的6元亚芳基或任选被取代的5至10元亚杂芳基；
R2是任选被取代的C1-C6烷基；并且
R3是任选被取代的C1-C6烷基、任选被取代的3至6元环烷基或任选被取代的杂环烷基，
并且其中每个氢独立地任选富集同位素氘。
在一些实施方案中，本发明化合物具有式Va、式Vb、式Vc的结构，或其药学上可接受的盐：
其中每个D指示氘的同位素富集因子是至少5的氢。
在一些实施方案中，本发明化合物具有式Vd、式Ve、式Vf的结构，或其药学上可接受的盐：
其中每个D指示氘的同位素富集因子是至少5的氢。
在一些实施方案中，A是任选被取代的噻唑-二基、任选被取代的噁唑-二基、任选被取代的吗啉-二基、任选被取代的吡咯烷-二基、任选被取代的哌啶-二基或任选被取代的亚苯基。在一些实施方案中，A是任选被取代的噻唑-二基或任选被取代的吗啉-二基。在本发明化合物的一些实施方案中，A是任选被取代的5至10元亚杂芳基。在一些实施方案中，A是：在一些实施方案中，A是
在本发明化合物的一些实施方案中，A是任选被取代的亚苯基。在一些实施方案中，A是： 在一些实施方案中，A是
在本发明化合物的一些实施方案中，A是任选被取代的3至6元亚杂环烷基。在一些实施方案中，A是任选被取代的6元亚杂环烷基。在一些实施方案中，A选自以下各物或其立体异构体： 在一些实施方案中，A选自以下各物或其立体异构体：
在本发明化合物的一些实施方案中，R1是氢或任选被取代的3至10元杂环烷基。在本发明化合物的一些实施方案中，R1是任选被取代的3至10元杂环烷基。在本发明化合物的一些实施方案中，R1是：
在本发明化合物的一些实施方案中，R1是： 其中每个D指示氘的同位素富集因子是至少5的氢。
在本发明化合物的一些实施方案中，R2是：
在本发明化合物的一些实施方案中，R2是： 并且其中每个D指示氘的同位素富集因子是至少5的氢。
在本发明化合物的一些实施方案中，R3是任选被取代的C1-C6烷基或任选被取代的3至6元环烷基。在本发明化合物的一些实施方案中，R3是任选被取代的C1-C6烷基。在一些实施方案中，R3是： 在一些实施方案中，R3是：在一些实施方案中，R3是：并且其中每个D指示氘的同位素富集因子是至少5的氢。
在本发明化合物的一些实施方案中，R3是或任选被取代的3至6元环烷基。在一些实施方案中，R3是：在一些实施方案中，R3是：
在本发明化合物的一些实施方案中，R2是R3是并且A是
在一些实施方案中，R2是R3是 并且A是
在本发明化合物的一些实施方案中，m是1。在一些实施方案中，n是1。在一些实施方案中，X1是CH2。在一些实施方案中，X2是CH2。在一些实施方案中，X3是CH2。在一些实施方案中，m是1，n是1，并且X1、X2和X3各自是CH2。
在一些实施方案中，本发明化合物选自表1或其药学上可接受的盐或立体异构体。在一些实施方案中，本发明化合物选自表1或其药学上可接受的盐或阻转异构体。
表1：某些本发明化合物
应注意，一些化合物中的键以平直线或楔形线显示。在一些情况下，立体异构体的相对立体化学已确定；在一些情况下，绝对立体化学已确定。在一些情况下，单一实施例编号对应于立体异构体混合物。上表化合物的所有立体异构体均涵盖在本发明中。在特定实施方案中，涵盖上表化合物的阻转异构体。
在一些实施方案中，提供表2的化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，本发明化合物选自表2或其药学上可接受的盐或阻转异构体。
表2：本发明某些化合物
应注意，一些化合物中的键以平直线或楔形线显示。在一些情况下，单一实施例编号对应于立体异构体混合物。上表化合物的所有立体异构体均涵盖在本发明中。在特定实施方案中，涵盖上表化合物的阻转异构体。
在一些实施方案中，本发明化合物是选自表3的化合物或其药学上可接受的盐或立体异构体。在一些实施方案中，本发明化合物是选自表3的化合物或其药学上可接受的盐或阻转异构体。
在一些实施方案中，本发明化合物不是选自表3的化合物。本发明化合物不是选自表3的化合物或其药学上可接受的盐或立体异构体。在一些实施方案中，本发明化合物不是选自表3的化合物或其药学上可接受的盐或阻转异构体。
表3.某些化合物
在一些实施方案中，本发明化合物包括结合至有机部分的交联基团(例如任选被取代的氮杂环丙烷部分)，该有机部分是Ras结合部分，其中在化合物与Ras蛋白接触后，所述化合物结合至Ras蛋白形成缀合物。例如，所述化合物的交联基团(例如任选被取代的氮杂环丙烷部分)可与Ras蛋白的氨基酸结合，例如交联，以形成缀合物。在一些实施方案中，Ras结合部分是K-Ras结合部分。在一些实施方案中，K-Ras结合部分结合至K-Ras蛋白的K-Ras Switch-II结合袋的残基。在一些实施方案中，Ras结合部分是H-Ras结合部分，它结合至H-Ras蛋白的H-Ras Switch-II结合袋的残基。在一些实施方案中，Ras结合部分是N-Ras结合部分，它结合N-Ras蛋白的N-Ras Switch-II结合袋的残基。Ras结合部分的分子量典型地低于1200Da。关于Ras蛋白各结构域的描述，参见例如Johnson等人,292:12981-12993(2017)，该文献以引用的方式并入本文中。
在一些实施方案中，本发明化合物是或用作前药，如用于施用至细胞或有需要的受试者。
也提供药物组合物，该药物组合物包含本发明化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的赋形剂。
还提供一种缀合物或其盐，该缀合物或其盐包含式III的结构：
M-P1
式III
其中P1是单价有机部分；并且
M具有式IV的结构：
其中A是任选被取代的3至6元亚杂环烷基、任选被取代的3至6元亚环烷基、任选被取代的6元亚芳基或任选被取代的5至10元亚杂芳基；
X1、X2和X3各自独立地选自CH2、CF2、C＝O或O；
m是1或2；
n是0或1；
R1是氢、任选被取代的C1-C6杂烷基或任选被取代的3至10元杂环烷基；
R2是任选被取代的C1-C6烷基；并且
R3是任选被取代的C1-C6烷基、任选被取代的3至6元环烷基或任选被取代的杂环烷基，
并且其中式IV的每个氢独立地任选富集同位素氘。
在本发明的缀合物的一些实施方案中，单价有机部分是蛋白质。在一些实施方案中，所述蛋白质是Ras蛋白。在一些实施方案中，所述Ras蛋白是K-Ras G12D或K-Ras G13D。在本发明的缀合物的一些实施方案中，M结合至单价有机部分的氨基酸残基。
在一些实施方案中，相较于本领域中已知的化合物，本发明化合物具有改良的口服生物利用率(％F)。测量口服生物利用率的方法是本领域中已知的，并且一种此类方法提供于下：
口服生物利用率可以在BALB/c小鼠中确定。在静脉内(IV)团注和经口管饲(PO)施用测试化合物后，在指定时间点将约30μL全血样品收集至含有K2EDTA的试管中。对于一些化合物，将血液样品在4℃下以4600rpm离心约5分钟并将血浆样品在-80℃储存，随后进行生物分析。通过蛋白质沉淀提取血液或血浆样品，并在例如AB Sciex Triple Quad 6500+质谱仪联合Acquity UPLC系统上，通过串联质谱法(UPLC MS/MS)，使用正离子电喷雾电离进行分析。
所有PK参数都可利用非房室分析，使用WinNonlin，由血液(或血浆)浓度随时间变化的数据得到。生物利用率(F％，又写为％F)是使用以下公式估算：
AUCinf,PO是在PO施用后从时间零到无限长的时间内的血液(或血浆)浓度曲线下面积。
AUCinf,IV是在IV施用后从时间零到无限长的时间内的血液(或血浆)浓度曲线下面积。
剂量IV是IV施用的总剂量
剂量PO是PO施用的总剂量
一般来说，F％(或％F)值超过10％是优选的。
在本文所描述的测试口服生物利用率的表1的19种化合物中，除三种化合物外的所有化合物的％F都大于10％。另外，在本文所描述的生物化学交联测定中，除三种化合物外的所有化合物在6小时的时间段内交联超过60％的K-Ras G12D残基。测试的化合物中有十三种具有大于10％的％F并且交联超过60％的K-Ras G12D残基。不受理论束缚，本案发明人提出，本文所描述的化合物的N-甲基氮杂环丙烷部分主要负责这一出乎意料的活性。
在一些实施方案中，相较于本领域中已知的化合物，相对于其它Ras突变体或野生型，本发明化合物对一种或多种特定Ras突变体具有选择性。测量此选择性的方法是本领域中已知的，如Ras-Raf结合测定，即此处提供的方案：
这一生物化学测定的目的是测量测试化合物促进在载有核苷酸的Ras同功型与亲环蛋白A之间形成三元复合物的能力；由此得到的三元复合物破坏与BRAFRBD构建体的结合，抑制Ras通过RAF效应子进行的信号传导。
在含有25mM HEPES pH 7.3、0.002％Tween20、0.1％BSA、100mM NaCl及5mM MgCl2的测定缓冲液中，将无标记亲环蛋白A、His6-K-Ras-GMPPNP(或其它Ras变体)及GST-BRAFRBD分别以25μM、12.5nM及50nM的最终浓度组合于384孔测定板中。所述板各孔中存在的化合物是自30μM最终浓度起始，经历10点3倍连续稀释的稀释液。在25℃下培育3小时之后，接着将抗His Eu-W1024和抗GST别藻蓝蛋白的混合物添加至测定样品孔中分别达到10nM和50nM的最终浓度，并将反应再培育1.5小时。在微孔板读取器(Ex320nm，Em 665/615nm)上读取TR-FRET信号。促进K-Ras:RAF复合物破坏的化合物被鉴别为使TR-FRET比率相对于DMSO对照孔降低的化合物。
因此，在一些实施方案中，相对于Ras突变体或相对于野生型，本发明化合物对KRASG12D具有选择性。本发明化合物还对本文所公开的其它RAS突变体或其组合展现较大选择性。
在一些实施方案中，相较于本领域中已知的化合物，本发明化合物对一种或多种特定Ras突变体比对其它Ras突变体或野生型更强效。测量此效力的方法是本领域中已知的，例如pERK测定，其方案提供于以下实施例中。因此，在一些实施方案中，相较于本领域中已知的化合物，本发明化合物对KRASG12D展现出较高的效力。本发明化合物也可对本文所公开的其它RAS突变体或其组合展现较高效力。
在一些实施方案中，相较于本领域中已知的化合物，相对于其它Ras突变体或野生型，本发明化合物针对一种或多种特定Ras突变体展现出对细胞活力的较强有害作用。测量细胞活力的方法是本领域中已知的，例如此处所描述的CellTiter-细胞活力测定：
注意–以下方案描述用于监测响应于本发明化合物的K-Ras突变型癌细胞系的细胞活力的程序。也可采用其它RAS同功型，但接种的细胞数量将根据所用细胞系而变化。
这一细胞测定的目的是通过使用CellTiter-2.0试剂(Promega)定量终点时存在的ATP的量来确定在5天治疗期内测试化合物对人Ras癌细胞系(例如NCI-H358(K-RasG12C)、AsPC-1(K-Ras G12D)和Capan-1(K-Ras G12V))增殖的影响。
将细胞在40μL生长培养基中以250个细胞/孔接种于384孔测定板中，并在37℃下，在含5％CO2的潮湿气氛中培育过夜。测定当天，首先，用100％DMSO将测试化合物的10mM储备溶液稀释成3mM溶液。将充分混合的化合物溶液(15μL)转移至含有30μL 100％DMSO的下一批孔中，并重复此操作，直至制备出9种浓度的3倍连续稀释液(起始测定浓度是10μM)。将测试化合物(132.5nL)直接施配至含有细胞的测定板中。将各板以300rpm振荡15秒，离心并在37℃下，在含5％CO2的潮湿气氛中培育5天。第5天，将测定板和其内含物平衡至室温，保持约30分钟。添加CellTiter-2.0试剂(25μL)，并将板内含物在回旋振荡器上混合2分钟，随后在室温下培育10分钟。使用PerkinElmer Enspire测量冷光。利用下式将数据归一化：(样品信号/平均DMSO)*100。使用四参数逻辑拟合来拟合数据。
因此，在一些实施方案中，相较于本领域中已知的化合物，本发明化合物针对KRASG12D展现较明显的细胞活力降低。本发明化合物还可对本文所公开的其它RAS突变体或其组合展现较明显的细胞活力降低。
在一些实施方案中，相较于本领域中已知的化合物，本发明化合物可展现较高的代谢稳定性、渗透性或溶解性，或者其组合。本发明化合物可例如在模拟胃液稳定性测定中展现改善的酸稳定性。用于测量这些特性的方法是本领域中已知的。相较于本领域中已知的化合物，本发明化合物可展现较佳的Ras交联。用于测量Ras交联的方法提供于本文中。在一些实施方案中，相较于本领域中已知的化合物，本发明化合物可展现以下特性中的任一者或其组合的改善：选择性、效力、细胞活力、代谢稳定性、酸稳定性、交联、渗透性或溶解性。
还提供了一种治疗有需要受试者的癌症的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的本发明化合物，或其药学上可接受的盐。所述癌症可例如为胰腺癌、结肠直肠癌、非小细胞肺癌、急性骨髓性白血病、多发性骨髓瘤、甲状腺腺癌、骨髓发育不良综合征或鳞状细胞肺癌。在一些实施方案中，所述癌症包含Ras突变，如K-Ras G12D或K-Ras G13D。其它Ras突变在本文中也有描述。
还提供了一种治疗有需要受试者的Ras蛋白相关病症的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的本发明化合物，或其药学上可接受的盐。
还提供了一种抑制细胞中的Ras蛋白的方法，该方法包括使该细胞与有效量的本发明化合物或其药学上可接受的盐接触。例如，所述Ras蛋白是K-Ras G12D或K-Ras G13D。其它Ras蛋白在本文中也有描述。所述细胞可以是癌细胞，如胰腺癌细胞、结肠直肠癌细胞、非小细胞肺癌细胞、急性骨髓性白血病细胞、多发性骨髓瘤细胞、甲状腺腺癌细胞、骨髓发育不良综合征细胞或鳞状细胞肺癌细胞。其它癌症类型在本文中也有描述。所述细胞可以是体内或体外的。
对于本发明化合物而言，一种立体异构体展现的抑制作用可优于另一种立体异构体。例如，一种阻转异构体可展现抑制作用，而另一种阻转异构体可展现极低或不展现抑制作用。
在一些实施方案中，本文所描述的方法或用途另外包括施用额外抗癌疗法。在一些实施方案中，所述额外抗癌疗法是EGFR抑制剂、第二Ras抑制剂、SHP2抑制剂、SOS1抑制剂、Raf抑制剂、MEK抑制剂、ERK抑制剂、PI3K抑制剂、PTEN抑制剂、AKT抑制剂、mTORC1抑制剂、BRAF抑制剂、PD-L1抑制剂、PD-1抑制剂、CDK4/6抑制剂、HER2抑制剂或其组合。在一些实施方案中，所述额外抗癌疗法是SHP2抑制剂。其它额外抗癌疗法在本文中也有描述。
合成方法
本文所描述的化合物可由市售起始物质制备或使用已知的有机、无机或酶方法合成。
本发明化合物可通过有机合成领域的技术人员众所周知的多种方式制备。例如，本发明化合物可使用以下方案中所描述的方法，以及合成有机化学技术中已知的合成方法或本领域技术人员所理解的关于所述方法的修改来合成。所述方法包括但不限于以下方案中所描述的方法。
本文中表1的化合物是使用本文所公开的方法制备，或使用本文所公开的方法结合本领域技术人员的知识制备。表2的化合物可使用本文所公开的方法制备，或可使用本文所公开的方法结合本领域技术人员的知识制备。
方案1.含氮杂环丙烷的大环的一般合成方法
如方案1中所示，这一类化合物可以通过以下方式制备：使适当胺(1)与含受保护胺的羧酸(2)在标准酰胺偶合试剂存在下反应以得到3，随后使胺脱保护以产生4。氮杂环丙烷羧酸酯(5)在标准酰胺偶合试剂存在下偶合，得到最终化合物(6)。
药物组合物和使用方法
药物组合物和施用方法
本发明所涉及的化合物是Ras抑制剂，并且可用于治疗癌症。因此，本发明的一个实施方案提供含本发明化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的赋形剂的药物组合物，以及使用本发明化合物制备此类组合物的方法。
如本文所使用，术语“药物组合物”是指与药学上可接受的赋形剂一起配制的化合物，如本发明化合物，或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，化合物是以适于在治疗方案中施用的单位剂量的量存在于药物组合物中，该化合物当施用给相关群体时显示出统计显著的实现预定治疗效果的可能性。在一些实施方案中，药物组合物可特定地配制成以固体或液体形式施用，包括适于以下方式施用者：口服施用，例如药水(水性或非水性溶液或悬浮液)、片剂(例如旨在经颊、舌下和全身吸收者)、大丸剂、散剂、颗粒剂、供施用于舌部的糊剂；肠胃外施用，例如通过皮下、肌肉内、静脉内或硬膜外注射，如例如无菌溶液或悬浮液，或持续释放配制物；表面施用，例如施用于皮肤、肺或口腔的乳霜、软膏剂或控制释放贴片或喷雾剂；阴道内或直肠内施用，例如子宫托、乳霜或泡沫剂；舌下施用；经眼施用；经皮施用；或经鼻、肺施用和施用至其它粘膜表面。
如本文所使用，“药学上可接受的赋形剂”是指在受试者体内无毒且无发炎性的任何无活性成分(例如能够将活性化合物悬浮或溶解的媒剂)。典型赋形剂包括例如：抗粘附剂、抗氧化剂、粘合剂、包衣剂、压缩助剂、崩解剂、染料(色素)、软化剂、乳化剂、填充剂(稀释剂)、成膜剂或包衣剂、调味剂、芳香剂、助流剂(流动增强剂)、润滑剂、防腐剂、印刷油墨、吸附剂、悬浮剂或分散剂、甜味剂或水合用水。赋形剂包括但不限于：任选被取代的丁基化羟基甲苯(BHT)、碳酸钙、磷酸氢钙、硬脂酸钙、交联羧甲基纤维素、交联聚乙烯基吡咯烷酮、柠檬酸、交联聚维酮、半胱氨酸、乙基纤维素、明胶、任选被取代的羟丙基纤维素、任选被取代的羟丙基甲基纤维素、乳糖、硬脂酸镁、麦芽糖醇、甘露糖醇、甲硫氨酸、甲基纤维素、对羟基苯甲酸甲酯、微晶纤维素、聚乙二醇、聚乙烯基吡咯烷酮、聚维酮、预胶化淀粉、对羟基苯甲酸丙酯、棕榈酸视黄酯、虫胶、二氧化硅、羧甲基纤维素钠、柠檬酸钠、羟基乙酸淀粉钠、山梨糖醇、淀粉(玉米淀粉)、硬脂酸、硬脂酸、蔗糖、滑石、二氧化钛、维生素A、维生素E、维生素C及木糖醇。本领域技术人员了解可用作赋形剂的多种试剂和材料。参见例如Ansel等人,Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems.Philadelphia:Lippincott,Williams&Wilkins,2004；Gennaro等人,Remington:The Science andPractice of Pharmacy.Philadelphia:Lippincott,Williams&Wilkins,2000；及Rowe,Handbook of Pharmaceutical Excipients.Chicago,Pharmaceutical Press,2005。在一些实施方案中，组合物包括至少两种不同的药学上可接受的赋形剂。
除非清楚地作相反陈述，否则本文所描述的化合物，无论是否清楚地陈述，均可以呈盐形式，例如呈药学上可接受的盐形式提供或使用。如本文所使用，术语“药学上可接受的盐”是指在合理医学判断的范围内，适于与人体组织接触使用而无过度毒性、刺激、过敏反应等，并且与合理效益/风险比相称的本文所描述的化合物的盐。药学上可接受的盐是本领域中众所周知的。例如，药学上可接受的盐描述于：Berge等人,J.PharmaceuticalSciences 66:1-19,1977及Pharmaceutical Salts:Properties,Selection,and Use,(P.H.Stahl及C.G.Wermuth编辑),Wiley-VCH,2008中。所述盐可在本文所描述的化合物的最终分离和纯化期间原位制备，或通过使游离碱性基团与适合有机酸反应来分离。
本发明化合物可具有可离子化基团，由此能够制备成药学上可接受的盐形式。这些盐可以是涉及无机酸或有机酸的酸加成盐，或在本发明化合物呈酸形式的情况下，所述盐可由无机碱或有机碱制备。在一些实施方案中，所述化合物被制备为药学上可接受的盐形式或以药学上可接受的盐形式使用，所述药学上可接受的盐形式是作为药学上可接受的酸或碱的加成产物制备。适合药学上可接受的酸和碱是本领域中众所周知的，如盐酸、硫酸、氢溴酸、乙酸、乳酸、柠檬酸或酒石酸，用于形成酸加成盐；以及氢氧化钾、氢氧化钠、氢氧化铵、咖啡因、各种胺等，用于形成碱盐。用于制备适当盐的方法是本领域中公认的。
代表性酸加成盐包括乙酸盐、己二酸盐、海藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙烷磺酸盐、反丁烯二酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢溴酸盐、盐酸盐、氢碘酸盐、2-任选被取代的羟基-乙烷磺酸盐、乳糖酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、顺丁烯二酸盐、丙二酸盐、甲烷磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐、十一烷酸盐、戊酸盐等。代表性碱金属或碱土金属盐包括钠盐、锂盐、钾盐、钙盐、镁盐等，以及无毒铵、季铵和胺阳离子，包括但不限于铵、四甲基铵、四乙基铵、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、乙胺等。
如本文所使用，术语“受试者”是指动物王国的任何成员。在一些实施方案中，“受试者”是指处于任何发育阶段的人类。在一些实施方案中，“受试者”是指人类患者。在一些实施方案中，“受试者”是指非人类动物。在一些实施方案中，非人类动物是哺乳动物(例如啮齿动物、小鼠、大鼠、兔、猴、犬、猫、绵羊、牛、灵长类动物或猪)。在一些实施方案中，受试者包括但不限于哺乳动物、鸟类、爬行动物、两栖动物、鱼或虫类。在一些实施方案中，受试者可以是转基因动物、基因工程改造的动物或克隆。
如本文所使用，术语“剂型”是指供施用给受试者的化合物(例如本发明化合物)的物理离散单元。每个单元含有预定量的化合物。在一些实施方案中，所述量是适于根据剂量方案施用的单位剂量的量(或其整体部分)，该量当施用给相关群体(即，根据治疗剂量方案)时确定与所希望或有益的结果相关。本领域技术人员应理解，施用给特定受试者的治疗组合物或化合物的总量是由一位或多位主治医师决定，并且可涉及施用多种剂型。
如本文所使用，术语“剂量方案”是指个别地施用给受试者的一组单位剂量(典型地超过一个单位剂量)，所述单位剂量典型地间隔一定时间段。在一些实施方案中，给定治疗化合物(例如本发明化合物)具有推荐的剂量方案，该方案可涉及一次或多次剂量。在一些实施方案中，剂量方案包含多次剂量，所述剂量各自彼此间隔相同长度的时间段；在一些实施方案中，剂量方案包含多次剂量且至少两个不同时间段分开个别剂量。在一些实施方案中，剂量方案内的所有剂量均为相同单位剂量的量。在一些实施方案中，剂量方案内的不同剂量是不同量。在一些实施方案中，剂量方案包含呈第一剂量的量的第一次剂量，随后是呈不同于该第一剂量的量的第二剂量的量的一次或多次额外剂量。在一些实施方案中，剂量方案包含呈第一剂量的量的第一次剂量，随后是呈与该第一剂量的量相同的第二剂量的量的一次或多次额外剂量。在一些实施方案中，剂量方案当施用给相关群体(即，是治疗性剂量方案)时，与所希望或有益结果相关。
“治疗方案”是指在相关群体中的施用与期望或有益治疗结果相关的剂量方案。
术语“治疗”(“treatment/treat/treating”)在其最广泛意义上是指部分或完全缓解、改善、减轻、抑制特定疾病、病症或疾患的一种或多种症状、特征或成因；延迟其发作；降低其严重程度；或减少其发生的物质(例如本发明化合物)的任何施用。在一些实施方案中，此类治疗可施用给未展现相关疾病、病症或疾患的体征的受试者或仅展现该疾病、病症或疾患的早期体征的受试者。替代地或另外地，在一些实施方案中，治疗可施用给展现相关疾病、病症或疾患的一种或多种确定的体征的受试者。在一些实施方案中，治疗可用于被诊断为罹患相关疾病、病症或疾患的受试者。在一些实施方案中，治疗可用于已知具有一个或多个在统计上与发展相关疾病、病症或疾患的风险增加相关的易感因素的受试者。
术语“治疗有效量”意谓当根据治疗性剂量方案施用给罹患或易患疾病、病症或疾患的群体时足以治疗该疾病、病症或疾患的量。在一些实施方案中，治疗有效量是降低该疾病、病症或疾患的一种或多种症状的发生率或严重程度或延迟其发作的量。本领域技术人员应理解，术语“治疗有效量”实际上不需要在特定个体中实现所需的成功治疗。事实上，治疗有效量可以是当施用给需要该治疗的患者时在相当大量受试者中提供特定所希望的药理学反应的量。特别需要了解的是，特定受试者实际上可以是“治疗有效量”“难治”的。在一些实施方案中，提到的治疗有效量可指如在一个或多个特定组织(例如受疾病、病症或疾患影响的组织)或流体(例如血液、唾液、血清、汗液、泪液、尿液)中所测量的量。本领域技术人员应理解，在一些实施方案中，治疗有效量可配制为单一剂量或以单一剂量施用。在一些实施方案中，治疗有效量可配制为多次剂量，例如配制为剂量方案的一部分，或以多次剂量施用。
为用作受试者的治疗，本发明化合物或其药学上可接受的盐可配制为药物组合物或兽医学组合物形式。取决于待治疗的受试者、施用模式及所希望的治疗类型，例如预防、防治或治疗，所述化合物或其药学上可接受的盐是以与所述参数相符的方式配制。关于此类技术的概述可见于Remington:The Science and Practice of Pharmacy,第21版,Lippincott Williams&Wilkins,(2005)；及Encyclopedia of Ph armaceuticalTechnology,J.Swarbrick及J.C.Boylan编辑,1988-1999,Marcel Dekker,New York，所述文献各自以引用的方式并入本文中。
组合物可分别根据常规混合、制粒或包覆方法制备，并且本发明的药物组合物以重量或体积计可含有约0.1％至约99％、约5％至约90％或约1％至约20％本发明化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，本文所描述的化合物或其药学上可接受的盐的存在量以重量计可占组合物，如药物组合物总量总计1-95％。
所述组合物可以呈适于以下施用的剂型提供：关节内、口服、肠胃外(例如静脉内、肌肉内)、直肠、皮肤、皮下、表面、经皮、舌下、经鼻、阴道、囊内、尿道内、鞘内、硬膜外、耳或眼施用，或通过注射、吸入或与鼻、泌尿生殖器、生殖器或口腔粘膜直接接触。因此，药物组合物可呈例如片剂、胶囊、丸剂、散剂、颗粒剂、悬浮液、乳液、溶液、凝胶(包括水凝胶)、糊剂、软膏、乳霜、硬膏剂、药水、渗透递送装置、栓剂、灌肠剂、注射剂、植入物、喷雾剂、适于离子电渗递送的制剂或气雾剂。所述组合物可根据常规医药实践配制。
如本文所使用，术语“施用”是指将一种组合物(例如化合物或包括如本文所描述的化合物的制剂)施用给受试者或系统。向动物受试者(例如向人类)施用可通过任何适当的途径进行。例如，在一些实施方案中，施用可以是支气管(包括通过支气管滴注)、经颊、经肠、真皮内、动脉内、真皮内、胃内、髓内、肌肉内、鼻内、腹膜内、鞘内、静脉内、囊内、经粘膜、经鼻、口服、直肠、皮下、舌下、表面、气管(包括通过气管内滴注)、经皮、阴道或玻璃体施用。
配制物可以通过适于全身施用或者表面或局部施用的方式制备。全身配制物包括设计用于注射(例如肌肉内、静脉内或皮下注射)的配制物或可制备用于经皮、经粘膜或口服施用。配制物一般将包括稀释剂，并且在一些情况下，包括佐剂、缓冲剂、防腐剂等。化合物或其药学上可接受的盐也可以呈脂质体组合物或以微乳液形式施用。
为进行注射，可将配制物制备为常规形式，如液体溶液或悬浮液，或适于在注射之前于液体中制备为溶液或悬浮液的固体形式，或乳液形式。适合赋形剂包括例如水、生理盐水、右旋糖、甘油等。这些组合物也可含有一定量无毒辅助物质，如润湿剂或乳化剂、pH缓冲剂等，如乙酸钠、去水山梨糖醇单月桂酸酯等等。
也已设计出各种持续释放药物系统。参见例如美国专利第5,624,677号。
全身施用也可包括相对无创的方法，如使用栓剂、经皮贴片、经粘膜递送及鼻内施用。口服施用也适于本发明化合物或其药学上可接受的盐。本领域中应了解，适合形式包括糖浆、胶囊和片剂。
本文所描述的每种化合物或其药学上可接受的盐可以通过本领域中已知的多种方式配制。例如，组合疗法中的第一药剂和第二药剂可一起或分开配制。本文也描述组合疗法的其它模式。
个别或分开配制的药剂可一起包装为试剂盒形式。非限制性实例包括但不限于含有例如两粒丸剂、一粒丸剂和散剂、栓剂或在小瓶中的液体、两种表面乳霜等的试剂盒。所述试剂盒可包括有助于将单位剂量施用给受试者的任选使用的组件，如用于使粉末形式复原的小瓶、注射用注射器、定制IV递送系统、吸入器等。另外，单位剂量试剂盒可含有关于所述组合物的制备和施用的说明书。试剂盒可制造为用于一名受试者的一次性单位剂量、用于特定受试者的多次使用(在恒定剂量下，或其中个别化合物或其药学上可接受的盐的效力可随治疗进展而变化)；或试剂盒可含有适于施用多名受试者的多次剂量(“整体包装”)。所述试剂盒组件可组装于纸盒、泡罩包装、瓶、管等中。
供口服使用的配制物包括含活性成分与无毒药学上可接受的赋形剂的混合物的片剂。所述赋形剂可以是例如惰性稀释剂或填充剂(例如蔗糖、山梨糖醇、糖、甘露糖醇、微晶纤维素、包括马铃薯淀粉在内的淀粉、碳酸钙、氯化钠、乳糖、磷酸钙、硫酸钙或磷酸钠)；制粒剂及崩解剂(例如纤维素衍生物，包括微晶纤维素、包括马铃薯淀粉在内的淀粉、交联羧甲基纤维素钠、海藻酸盐或海藻酸)；粘合剂(例如蔗糖、葡萄糖、山梨糖醇、阿拉伯胶、海藻酸、海藻酸钠、明胶、淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、硅酸镁铝、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、任选被取代的羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮或聚乙二醇)；及润滑剂、助流剂及抗粘着剂(例如硬脂酸镁、硬脂酸锌、硬脂酸、二氧化硅、氢化植物油或滑石)。其它药学上可接受的赋形剂可以是着色剂、调味剂、塑化剂、保湿剂、缓冲剂等。
两种或更多种化合物可一起混合于片剂、胶囊或其它媒剂中，或可隔开。在一个实施例中，第一化合物是包含在片剂的内侧上，并且第二化合物是在外侧上，由此使该第二化合物的绝大部分在第一化合物释放之前释放。
供口服使用的配制物也可以呈咀嚼片形式提供，或呈硬明胶胶囊形式提供，其中活性成分与惰性固体稀释剂(例如马铃薯淀粉、乳糖、微晶纤维素、碳酸钙、磷酸钙或高岭土)混合；或呈软明胶胶囊形式提供，其中活性成分与水或油介质，例如花生油、液体石蜡或橄榄油混合。粉末、颗粒及细圆粒可使用以上关于片剂和胶囊所提到的成分，以常规方式，使用例如混合器、流体床装置或喷雾干燥设备制备。
溶出或扩散控制性释放可通过适当地包覆化合物的片剂、胶囊、细圆粒或颗粒状配制物，或通过将所述化合物或其药学上可接受的盐并入适当基质中来实现。控制释放包衣可包括一种或多种以上提到的包覆物质，例如虫胶、蜂蜡、糖蜡(glycowax)、蓖麻蜡、巴西棕榈蜡、硬脂醇、单硬脂酸甘油酯、二硬脂酸甘油酯、棕榈硬脂酸甘油酯、乙基纤维素、丙烯酸树脂、dl-聚乳酸、乙酸丁酸纤维素、聚氯乙烯、聚乙酸乙烯酯、乙烯基吡咯烷酮、聚乙烯、聚甲基丙烯酸酯、甲基丙烯酸甲酯、2-任选被取代的羟基甲基丙烯酸酯、甲基丙烯酸酯水凝胶、1,3丁二醇、乙二醇甲基丙烯酸酯或聚乙二醇。在控制释放基质配制物中，基质材料也可包括例如水合甲基纤维素、巴西棕榈蜡和硬脂醇、卡波普(carbopol)934、硅酮、三硬脂酸甘油酯、丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸甲酯、聚氯乙烯、聚乙烯或卤化氟碳化合物。
供口服施用的可并入本发明化合物或其药学上可接受的盐和组合物的液体形式包括水性溶液、适当调味的糖浆、水性或油性悬浮液以及用如棉籽油、芝麻油、椰子油或花生油之类食用油调味的乳液，以及酏剂和类似医药媒剂。
一般而言，当施用给人类时，任何本发明化合物或其药学上可接受的盐的口服剂量将取决于该化合物的性质，并且可容易地由本领域技术人员确定。剂量可以是例如每天约0.001mg至约2000mg、每天约1mg至约1000mg、每天约5mg至约500mg、每天约100mg至约1500mg、每天约500mg至约1500mg、每天约500mg至约2000mg或其中衍生的任何范围。在一些实施方案中，供口服施用的每日剂量范围例如可以在每公斤人体体重约0.001mg至约2000mg范围内，以单次剂量或分次剂量施用。另一方面，在一些情况下，可能需要使用在这些限值外的剂量。
在一些实施方案中，药物组合物可进一步包含具有抗增殖活性的额外化合物。取决于投药模式，化合物或其药学上可接受的盐将配制成适合组合物以便于递送。组合疗法中的每种化合物或其药学上可接受的盐均可以通过本领域中已知的多种方式配制。例如，组合疗法中的第一药剂和第二药剂可一起或分开配制。合意地，所述第一药剂和所述第二药剂是一起配制，以便同时或接近同时地施用所述药剂。
应理解，本发明化合物和药物组合物可被配制并用于组合疗法中，即，所述化合物和药物组合物可与一种或多种其它所需治疗剂或医疗程序一起配制或在施用该一种或多种其它所需治疗剂或医疗程序的同时、之前或之后施用。用于组合方案中的每种疗法(治疗剂或程序)的特定组合应考虑所需治疗剂或程序与待实现的所需治疗效果的相容性。还应理解，所采用的疗法可针对相同病症实现所需作用，或这些疗法可实现不同作用(例如控制任何不良作用)。
如本文所描述，组合疗法中每种药物的施用可独立地为每日一至四次，持续一天至一年，甚至可持续受试者的一生。长期(Chronic/long-term)施用也可适用。
使用方法
在一些实施方案中，本发明公开一种治疗以Ras突变体引起的异常Ras活性为特征的疾病或病症的方法。在一些实施方案中，所述疾病或病症是癌症。
因此，也提供一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的本发明化合物或其药学上可接受的盐或包含此类化合物或盐的药物组合物。在一些实施方案中，癌症是结肠直肠癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、胰腺癌、阑尾癌、黑色素瘤、急性骨髓性白血病、小肠癌、壶腹癌、生殖细胞癌、子宫颈癌、未知原发部位的癌症、子宫内膜癌、食管胃癌、GI神经内分泌癌、卵巢癌、性索基质瘤癌、肝胆癌症或膀胱癌。在一些实施方案中，癌症是阑尾癌、子宫内膜癌或黑色素瘤。也提供一种治疗有需要的受试者的Ras蛋白相关病症的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的本发明化合物或其药学上可接受的盐或包含此类化合物或盐的药物组合物。
在一些实施方案中，本发明化合物或其药学上可接受的盐、包含此类化合物或盐的药物组合物以及本文所提供的方法可用于治疗多种癌症，包括肿瘤，如肺癌、前列腺癌、乳癌、脑癌、皮肤癌、子宫颈癌、睾丸癌等。更具体点说，可通过本发明化合物或其盐、包含此类化合物或盐的药物组合物以及方法治疗的癌症包括但不限于如以下肿瘤类型：星形细胞、乳房、子宫颈、结肠直肠、子宫内膜、食道、胃、头颈部、肝细胞、喉、肺、口腔、卵巢、前列腺以及甲状腺癌瘤和肉瘤。其它癌症包括例如：
心脏，例如：肉瘤(血管肉瘤、纤维肉瘤、横纹肌肉瘤、脂肪肉瘤)、粘液瘤、横纹肌瘤、纤维瘤、脂肪瘤及畸胎瘤；
肺，例如：支气管肺癌(鳞状细胞肺癌、未分化小细胞肺癌、未分化大细胞肺癌、肺腺癌)、肺泡(细支气管)癌、支气管腺瘤、肉瘤、淋巴瘤、软骨瘤性错构瘤、间皮瘤；
胃肠，例如：食道(鳞状细胞癌、腺癌、平滑肌肉瘤、淋巴瘤)、胃(癌瘤、淋巴瘤、平滑肌肉瘤)、胰腺(导管腺癌、胰岛瘤、胰高血糖素瘤、胃泌素瘤、类癌瘤、血管活性肠肽瘤)、小肠(腺癌、淋巴瘤、类癌瘤、卡波西氏肉瘤(Kaposi's sarcoma)、平滑肌瘤、血管瘤、脂肪瘤、神经纤维瘤、纤维瘤)、大肠(腺癌、管状腺瘤、绒毛状腺瘤、错构瘤、平滑肌瘤)；
泌尿生殖道，例如：肾(腺癌、威尔姆氏肿瘤(Wilm's tumor)(肾母细胞瘤)、淋巴瘤、白血病)、膀胱和尿道(鳞状细胞癌、移行细胞癌、腺癌)、前列腺(腺癌、肉瘤)、睾丸(精原细胞瘤、畸胎瘤、胚胎癌、畸胎癌、绒毛膜癌、肉瘤、间质细胞癌、纤维瘤、纤维腺瘤、腺瘤样瘤、脂肪瘤)；
肝，例如：肝细胞瘤(肝细胞癌)、胆管癌、肝母细胞瘤、血管肉瘤、肝细胞腺瘤、血管瘤；
胆道，例如：胆囊癌、壶腹癌、胆管癌；
骨骼，例如：骨原性肉瘤(骨肉瘤)、纤维肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、软骨肉瘤、尤文氏肉瘤(Ewing's sarcoma)、恶性淋巴瘤(网状细胞肉瘤)、多发性骨髓瘤、恶性巨细胞瘤、脊索瘤、骨性软骨瘤(骨软骨外生性骨疣)、良性软骨瘤、软骨母细胞瘤、软骨粘液样纤维瘤、骨样骨瘤及巨细胞肿瘤；
神经系统，例如：颅骨(骨瘤、血管瘤、肉芽肿、黄色瘤、畸形性骨炎)、脑脊膜(脑膜瘤、脑膜肉瘤、胶质瘤病)、脑(星形细胞瘤、髓母细胞瘤、神经胶质瘤、室管膜瘤、生殖细胞瘤(松果体瘤)、多形性胶质母细胞瘤、寡树突神经胶细胞瘤、神经鞘瘤、视网膜母细胞瘤、先天性肿瘤)、脊髓神经纤维瘤、1型神经纤维瘤病、脑膜瘤、神经胶质瘤、肉瘤)；
妇科，例如：子宫(子宫内膜癌、子宫癌、子宫体内膜癌)、子宫颈(子宫颈癌、子宫颈癌前非典型性增生)、卵巢(卵巢癌(浆液性囊腺癌、粘液性囊腺癌、未分类癌)、颗粒-卵泡膜细胞肿瘤、塞莱二氏细胞肿瘤(Sertoli-Leydig cell tumors)、无性细胞瘤、恶性畸胎瘤)、外阴(鳞状细胞癌、上皮内癌、腺癌、纤维肉瘤、黑色素瘤)、阴道(透明细胞癌、鳞状细胞癌、葡萄状肉瘤(胚胎性横纹肌肉瘤)、输卵管(癌瘤)；
造血系统，例如：血液(骨髓性白血病(急性和慢性)、急性淋巴母细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、骨髓增生性疾病(例如骨髓纤维化和骨髓增生性赘瘤)、多发性骨髓瘤、骨髓发育不良综合征)、霍奇金氏病(Hodgkin's disease)、非霍奇金氏淋巴瘤(恶性淋巴瘤)；
皮肤，例如：恶性黑色素瘤、基底细胞癌、鳞状细胞癌、卡波西氏肉瘤、痣发育不良痣、脂肪瘤、血管瘤、皮肤纤维瘤、瘢痕疙瘩、牛皮癣；以及
肾上腺，例如：神经母细胞瘤。
在一些实施方案中，Ras蛋白是野生型的(RasWT)。因此，在一些实施方案中，本发明化合物被用于治疗患有含RasWT(例如K-RasWT、H-RasWT或N-RasWT)的癌症的患者的方法中。在一些实施方案中，Ras蛋白是Ras扩增(例如K-Rasamp)。因此，在一些实施方案中，本发明化合物被用于治疗患有含Rasamp(K-Rasamp、H-Rasamp或N-Rasamp)的癌症的患者的方法中。在一些实施方案中，癌症包含Ras突变，如本文所描述的Ras突变。在一些实施方案中，突变选自：
(a)以下K-Ras突变体：G12D、G12V、G12C、G13D、G12R、G12A、Q61H、G12S、A146T、G13C、Q61L、Q61R、K117N、A146V、G12F、Q61K、L19F、Q22K、V14I、A59T、A146P、G13R、G12L或G13V，及其组合；
(b)以下H-Ras突变体：Q61R、G13R、Q61K、G12S、Q61L、G12D、G13V、G13D、G12C、K117N、A59T、G12V、G13C、Q61H、G13S、A18V、D119N、G13N、A146T、A66T、G12A、A146V、G12N或G12R，及其组合；
(c)以下N-Ras突变体：Q61R、Q61K、G12D、Q61L、Q61H、G13R、G13D、G12S、G12C、G12V、G12A、G13V、G12R、P185S、G13C、A146T、G60E、Q61P、A59D、E132K、E49K、T50I、A146V或A59T，及其组合；
或前述任一者的组合。在一些实施方案中，化合物可抑制K-Ras G12C和K-RasG12D。在一些实施方案中，化合物可抑制K-Ras G12D和K-Ras G13D两者。在一些实施方案中，化合物可抑制K-Ras G12V和K-Ras G12S两者。在一些实施方案中，本发明化合物抑制RasWT以及一个或多个额外Ras突变(例如K、H或N-RasWT以及K-Ras G12D)。在一些实施方案中，本发明化合物抑制Rasamp以及一个或多个额外Ras突变(例如K-、H-或N-Rasamp以及K-RasG12D)。
检测Ras突变的方法是本领域中已知的。此类方式包括但不限于直接测序以及利用高灵敏度诊断测定(利用CE-IVD标记)，例如以全文引用的方式并入本文中的Domagala等人,Pol J Pathol 3:145-164(2012)中所述的方法，包括TheraScreen PCR；AmoyDx；PNAClamp；RealQuality；EntroGen；LightMix；StripAssay；Hybcell plexA；Devyser；Surveyor；Cobas；以及TheraScreenPyro。也参见例如WO 2020/106640。
在一些实施方案中，癌症是非小细胞肺癌，并且Ras突变包含K-Ras突变，如K-RasG12D。在一些实施方案中，癌症是结肠直肠癌，并且Ras突变包含K-Ras突变，如K-Ras G12D。在一些实施方案中，癌症是胰腺癌，并且Ras突变包含K-Ras突变，如K-Ras G12D。在一些实施方案中，癌症是胰腺癌，并且Ras突变包含N-Ras突变，如N-Ras G12D。在前述任一者中，如果未具体说明，则化合物也可抑制RasWT(例如K-、H-或N-RasWT)或Rasamp(例如K-、H-或N-Rasamp)。
也提供一种抑制细胞中的Ras蛋白的方法，该方法包括使该细胞与有效量的本发明化合物或其药学上可接受的盐接触。化合物或其药学上可接受的盐可抑制细胞中不止一种类型的Ras蛋白。还提供一种抑制RAF-Ras结合的方法，该方法包括使该细胞与有效量的本发明化合物或其药学上可接受的盐接触。所述细胞可以是癌细胞。所述癌细胞可属于本文所描述的任一类型的癌症。所述细胞可在体内或体外。
组合疗法
本发明的方法可包括单独使用或与一种或多种额外疗法(例如非药物治疗或治疗剂)组合使用的本发明化合物。当单独施用时，所述额外疗法(例如非药物治疗或治疗剂)中一种或多种的剂量可相对于标准剂量有所降低。例如，剂量可根据药物组合和排列凭经验确定，或可通过等辐射测定推断(例如Black等人,Neurology 65:S3-S6(2005))。
本发明化合物可在施用所述额外疗法中的一种或多种之前、之后或同时施用。当组合时，本发明化合物的剂量和所述一种或多种额外疗法(例如非药物治疗或治疗剂)的剂量提供治疗作用(例如协同或加合治疗作用)。本发明化合物和额外疗法，如抗癌剂，可一起施用，如以单一药物组合物形式施用，或分开施用，并且当分开施用时，所述施用可同时或依序发生。此类依序施用可在时间上接近或远离。
在一些实施方案中，所述额外疗法是施用副作用限制剂(例如意欲减少治疗副作用的发生或严重程度的药剂)。例如，在一些实施方案中，本发明化合物也可与治疗恶心的治疗剂组合使用。可用于治疗恶心的药剂的实例包括：屈大麻酚(dronabinol)、格拉司琼(granisetron)、甲氧氯普胺(metoclopramide)、昂丹司琼(ondansetron)及丙氯拉嗪(prochlorperazine)，或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述一种或多种额外疗法包括非药物治疗(例如手术或放射疗法)。在一些实施方案中，所述一种或多种额外疗法包括治疗剂(例如作为抗血管生成剂、信号转导抑制剂、抗增生剂、糖分解抑制剂或自噬抑制剂的化合物或生物制剂)。在一些实施方案中，所述一种或多种额外疗法包括非药物治疗(例如手术或放射疗法)和治疗剂(例如作为抗血管生成剂、信号转导抑制剂、抗增生剂、糖分解抑制剂或自噬抑制剂的化合物或生物制剂)。在其它实施方案中，所述一种或多种额外疗法包括两种治疗剂。在又其它实施方案中，所述一种或多种额外疗法包括三种治疗剂。在一些实施方案中，所述一种或多种额外疗法包括四种或更多种治疗剂。
在本组合疗法部分中，所有参考文献就所描述的药剂或者其药学上可接受之盐、溶剂化物、异构体(例如立体异构体)、前药或互变异构体而言均以引用的方式并入，无论是否如此明确地陈述。
非药物疗法
非药物治疗的实例包括但不限于放射疗法、冷疗法、高温处理、手术(例如手术切除肿瘤组织)以及T细胞过继性转移(ACT)疗法。
在一些实施方案中，本发明化合物可作为术后辅助疗法使用。在一些实施方案中，本发明化合物可作为术前新辅助疗法使用。
放射疗法可用于在受试者(例如哺乳动物(例如人类))中抑制异常细胞生长或治疗过度增生性病症，如癌症。施用放射疗法的技术是本领域中已知的。放射疗法可通过若干方法中的一种或方法组合施用，包括但不限于外射束疗法、内放射疗法、植入放射、立体定向放射手术、全身放射疗法、放射疗法以及持久或短暂地插种近接疗法。如本文所使用，术语“近接疗法”是指通过插入体内肿瘤或其它增生性组织疾病部位处或附近的空间上限定的放射性物质递送的辐射疗法。这一术语意欲但不限于包括暴露于放射性同位素(例如At-211、I-131、I-125、Y-90、Re-186、Re-188、Sm-153、Bi-212、P-32以及Lu的放射性同位素)。用作本发明的细胞调理剂的适合放射源包括固体和液体。作为非限制性实例，放射源可以是放射性核素，如I-125、I-131、Yb-169、作为固体来源的Ir-192、作为固体来源的I-125，或发射光子的其它放射性核素、β粒子、γ放射或其它治疗射线。放射性物质也可以是由任何放射性核素溶液制造的流体，例如I-125或I-131的溶液，或放射性流体可使用含有如Au-198或Y-90之类固体放射性核素小粒子的适合流体的浆液制备。此外，放射性核素可包埋于凝胶或放射性微球中。
在一些实施方案中，本发明化合物可使异常细胞对放射治疗变得敏感，以达到杀灭或抑制此类细胞的生长的目的。因此，本发明另外涉及一种用于使哺乳动物体内的异常细胞对放射治疗敏感的方法，该方法包括向该哺乳动物施用一定量本发明化合物，该量有效使异常细胞对放射治疗敏感。所述方法中化合物的量可根据用于确定本文所描述的所述化合物的有效量的方式确定。在一些实施方案中，本发明化合物可用作放射疗法之后的辅助疗法或用作放射疗法之前的新辅助疗法。
在一些实施方案中，所述非药物治疗是T细胞过继性转移(ACT)疗法。在一些实施方案中，所述T细胞是活化T细胞。所述T细胞可修饰成表达嵌合抗原受体(CAR)。CAR修饰的T(CAR-T)细胞可通过本领域中已知的任何方法产生。例如，CAR-T细胞可通过将编码CAR的适合表达载体引入T细胞中来产生。在对T细胞进行扩增和基因修饰之前，自受试者获得T细胞的来源。T细胞可自多种来源获得，包括外周血单核细胞、骨髓、淋巴结组织、脐带血、胸腺组织、来自感染部位的组织、腹水、胸腔积液、脾组织及肿瘤。在本发明的某些实施方案中，可使用本领域中可获得的多种T细胞系。在一些实施方案中，所述T细胞是自体T细胞。在将T细胞基因修饰成表达所需蛋白质(例如CAR)之前或之后，这些T细胞可一般使用如例如以下美国专利中所描述的方法进行活化和扩增：6,352,694；6,534,055；6,905,680；6,692,964；5,858,358；6,887,466；6,905,681；7,144,575；7,067,318；7,172,869；7,232,566；7,175,843；7,572,631；5,883,223；6,905,874；6,797,514；及6,867,041。
治疗剂
治疗剂可以是用于治疗癌症或其相关症状的化合物。本发明化合物可与第二治疗剂、第三治疗剂或第四治疗剂，或者更多治疗剂组合。本发明化合物可与一种或多种治疗剂以及一种或多种非药物疗法组合。
例如，治疗剂可以是类固醇。类固醇是本领域中已知的。因此，在一些实施方案中，所述一种或多种额外疗法包括类固醇。适合类固醇可包括但不限于21-乙酰氧基孕烯醇酮(acetoxypregnenolone)、阿氯米松(alclometasone)、阿尔孕酮(algestone)、安西奈德(amcinonide)、倍氯米松(beclomethasone)、倍他米松(betamethasone)、布地奈德(budesonide)、氯泼尼松(chloroprednisone)、氯倍他索(clobetasol)、氯可托龙(clocortolone)、氯泼尼醇(cloprednol)、皮质酮(corticosterone)、可的松(cortisone)、可的伐唑(cortivazol)、地夫可特(deflazacort)、地奈德(desonide)、去羟米松(desoximetasone)、地塞米松(dexamethasone)、二氟拉松(diflorasone)、二氟可龙(diflucortolone)、二氟孕甾丁酯(difuprednate)、甘草次酸(enoxolone)、氟扎可特(fluazacort)、氟氯奈德(fiucloronide)、氟米松(flumethasone)、氟尼缩松(flunisolide)、氟西奈德(fluocinolone acetonide)、醋酸氟轻松(fluocinonide)、氟可丁丁酯(fluocortin butyl)、氟可龙(fluocortolone)、氟米龙(fluorometholone)、醋酸氟培龙(fluperolone acetate)、醋酸氟泼尼定(fluprednidene acetate)、氟泼尼龙(fluprednisolone)、氟氢缩松(flurandrenolide)、丙酸氟替卡松(fluticasonepropionate)、福莫可他(formocortal)、哈西奈德(halcinonide)、丙酸卤倍他索(halobetasol propionate)、卤米松(halometasone)、氢化可的松(hydrocortisone)、依碳酸氯替泼诺(loteprednol etabonate)、马泼尼酮(mazipredone)、甲羟松(medrysone)、甲泼尼松(meprednisone)、甲泼尼龙(methylprednisolone)、糠酸莫米他松(mometasonefuroate)、帕拉米松(paramethasone)、泼尼卡酯(prednicarbate)、泼尼松龙(prednisolone)、25-二乙基氨基乙酸泼尼松龙、泼尼松龙磷酸钠、泼尼松(prednisone)、戊酸泼尼松龙(prednival)、泼尼立定(prednylidene)、利美索龙(rimexolone)、替可的松(tixocortol)、曲安西龙(triamcinolone)、曲安奈德(triamcinolone acetonide)、苯曲安奈德(triamcinolone benetonide)、己曲安奈德(triamcinolone hexacetonide)，以及其盐或衍生物。
可与本发明化合物一起用于组合疗法中的治疗剂的其它实例包括以下专利中所描述的化合物：美国专利第6,258,812号、第6,630,500号、第6,515,004号、第6,713,485号、第5,521,184号、第5,770,599号、第5,747,498号、第5,990,141号、第6,235,764号及第8,623,885号，以及国际专利申请WO01/37820、WO01/32651、WO02/68406、WO02/66470、WO02/55501、WO04/05279、WO04/07481、WO04/07458、WO04/09784、WO02/59110、WO99/45009、WO00/59509、WO99/61422、WO00/12089和WO00/02871。
治疗剂可以是用于治疗癌症或其相关症状的生物制剂(例如细胞因子(例如干扰素或白细胞介素，如IL-2))。生物制剂是本领域中已知的。在一些实施方案中，所述生物制剂是基于免疫球蛋白的生物制剂，例如使靶标激动以刺激抗癌反应或拮抗对于癌症很重要的抗原的单克隆抗体(例如人源化抗体、完全人类抗体、Fc融合蛋白或其功能片段)。也包括抗体-药物缀合物。
治疗剂可以是T细胞检查点抑制剂。这些检查点抑制剂是本领域中已知的。在一个实施方案中，所述检查点抑制剂是抑制剂性抗体(例如单特异性抗体，如单克隆抗体)。抗体可以是例如人源化或完全人类抗体。在一些实施方案中，检查点抑制剂是融合蛋白，例如Fc-受体融合蛋白。在一些实施方案中，检查点抑制剂是与检查点蛋白质相互作用的药剂，如抗体。在一些实施方案中，检查点抑制剂是与检查点蛋白质的配体相互作用的药剂，如抗体。在一些实施方案中，检查点抑制剂是CTLA-4的抑制剂(例如抑制性抗体或小分子抑制剂)(例如抗CTLA-4抗体或融合蛋白)。在一些实施方案中，检查点抑制剂是PD-1抑制剂或拮抗剂(例如抑制性抗体或小分子抑制剂)。在一些实施方案中，检查点抑制剂是PD-L1抑制剂或拮抗剂(例如抑制性抗体或小分子抑制剂)。在一些实施方案中，检查点抑制剂是PD-L2抑制剂或拮抗剂(例如抑制性抗体或Fc融合物或小分子抑制剂)(例如PD-L2/Ig融合蛋白)。在一些实施方案中，检查点抑制剂是B7-H3、B7-H4、BTLA、HVEM、TIM3、GAL9、LAG3、VISTA、KIR、2B4、CD160、CGEN-15049、CHK 1、CHK2、A2aR、B-7家族配体或其组合的抑制剂或拮抗剂(例如抑制性抗体或小分子抑制剂)。在一些实施方案中，检查点抑制剂是派姆单抗(pembrolizumab)、纳武单抗(nivolumab)、PDR001(NVS)、REGN2810(Sanofi/Regeneron)、PD-L1抗体如阿维鲁单抗(avelumab)、德瓦鲁单抗(durvalumab)、阿特珠单抗(atezolizumab)、匹地利珠单抗(pidilizumab)、JNJ-63723283(JNJ)、BGB-A317(BeiGene&Celgene)或Preusser,M.等人(2015)Nat.Rev.Neurol.中所公开的检查点抑制剂，包括但不限于伊匹单抗(ipilimumab)、曲美目单抗(tremelimumab)、纳武单抗、派姆单抗、AMP224、AMP514/MEDI0680、BMS936559、MEDl4736、MPDL3280A、MSB0010718C、BMS986016、IMP321、利瑞鲁单抗(lirilumab)、IPH2101、1-7F9及KW-6002。
治疗剂可以是抗TIGIT抗体，如MBSA43、BMS-986207、MK-7684、COM902、AB154、MTIG7192A或OMP-313M32(艾替利单抗(etigilimab))。其它抗TIGIT抗体是本领域中已知的。
治疗剂可以是治疗癌症或其相关症状的药剂(例如细胞毒性剂、非肽小分子或可用于治疗癌症或其相关症状的其它化合物，统称为“抗癌剂”)。抗癌剂可以是例如化学治疗剂或靶向治疗剂。这些剂是本领域中已知的。
抗癌剂包括有丝分裂抑制剂、插入性抗生素、生长因子抑制剂、细胞周期抑制剂、酶、拓扑异构酶抑制剂、生物反应调节剂、烷化剂、抗代谢物、叶酸类似物、嘧啶类似物、嘌呤类似物及相关抑制剂、长春花生物碱(vinca alkaloid)、表鬼臼毒素、抗生素、L-天冬酰胺酶、拓扑异构酶抑制剂、干扰素、铂配位络合物、蒽二酮取代的尿素、甲基肼衍生物、肾上腺皮质抑制剂、肾上腺皮质类固醇、黄体素、雌激素、抗雌激素、雄激素、抗雄激素以及促性腺激素释放激素类似物。其它抗癌剂包括甲酰四氢叶酸(leucovorin，LV)、伊立替康(irenotecan)、奥沙利铂(oxaliplatin)、卡培他滨(capecitabine)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)及多西他赛(doxetaxel)。在一些实施方案中，所述一种或多种额外疗法包括两种或更多种抗癌剂。所述两种或更多种抗癌剂可用于混合液中以组合施用或分开施用。组合抗癌剂的适合给药方案是本领域中已知的且描述于例如Saltz等人,Proc.Am.Soc.Clin.Oncol.18:233a(1999)，以及Douillard等人,Lancet 355(9209):1041-1047(2000)中。
抗癌剂的其它非限制性实例包括(甲磺酸伊马替尼(ImatinibMesylate))；(卡非佐米(carfilzomib))；(硼替佐米(bortezomib))；Casodex(比卡鲁胺(bicalutamide))；(吉非替尼(gefitinib))；烷化剂，如噻替哌(thiotepa)和环磷酰胺；烷基磺酸酯，如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)和哌泊舒凡(piposulfan)；氮杂环丙烷，如苯佐替哌(benzodopa)、卡波醌(carboquone)、美妥替哌(meturedopa)和乌瑞替哌(uredopa)；乙烯亚胺和甲基蜜胺，包括六甲蜜胺(altretamine)、三乙烯蜜胺、三乙烯磷酰胺、三乙烯硫代磷酰胺及三羟甲基蜜胺；多聚乙酰(尤其是布拉他辛(bullatacin)和布拉他辛酮(bullatacinone))；喜树碱(camptothecin)(包括合成类似物拓扑替康(topotecan))；苔藓抑素(bryostatin)；卡利他汀(callystatin)；CC-1065(包括其阿多来新(adozelesin)、卡折来新(carzelesin)和比折来新(bizelesin)合成类似物)；念珠藻素(cryptophycin)(特别是念珠藻素1和念珠藻素8)；海兔毒素(dolastatin)；倍癌霉素(duocarmycin)(包括合成类似物、KW-2189和CB1-TM1)；伊斯罗宾(eleutherobin)；水鬼蕉碱(pancratistatin)；匍枝珊瑚醇A(sarcodictyinA)；海绵抑素(spongistatin)；氮芥，如苯丁酸氮芥(chlorambucil)、萘氮芥(chlornaphazine)、胆磷酰胺(cholophosphamide)、雌莫司汀(estramustine)、异环磷酰胺(ifosfamide)、甲氮芥(mechlorethamine)、氧化甲氮芥盐酸盐(mechlorethamine oxidehydrochloride)、美法仑(melphalan)、新恩比兴(novembichin)、苯芥胆甾醇(phenesterine)、泼尼莫司汀(prednimustine)、曲磷胺(trofosfamide)、乌拉莫司汀(uracil mustard)；亚硝基脲，如卡莫司汀(carmustine)、氯脲霉素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)及雷诺莫司汀(ranimustine)；抗生素，如烯二炔类抗生素(例如刺孢霉素(calicheamicin)，如刺孢霉素γll和刺孢霉素ωll(参见例如Agnew,Chem.Intl.Ed Engl.33:183-186(1994))；达内霉素(dynemicin)，如达内霉素A；双膦酸盐，如氯屈膦酸盐(clodronate)；埃斯波霉素(esperamicin)；新制癌菌素发色团(neocarzinostatin chromophore)和相关色蛋白烯二炔抗生素发色团、阿克拉霉素(aclacinomysin)、放线菌素(actinomycin)、安曲霉素(authramycin)、氮杂丝氨酸(azaserine)、博来霉素(bleomycin)、放线菌素C(cactinomycin)、刺孢霉素(calicheamicin)、卡拉比星(carabicin)、卡米诺霉素(caminomycin)、洋红霉素(carminomycin)、嗜癌菌素(carzinophilin)、色霉素(chromomycins)、放线菌素D(dactinomycin)、道诺霉素(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6-重氮-5-氧代-L-正亮氨酸、阿德力霉素(adriamycin)(多柔比星)、N-吗啉基多柔比星、氰基吗啉代多柔比星、(2-吡咯啉基-多柔比星、去氧多柔比星、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、伊达比星(idarubicin)、麻西罗霉素(marcellomycin)、丝裂霉素(mitomycin)(如丝裂霉素C)、霉酚酸(mycophenolic acid)、诺拉霉素(nogalamycin)、橄榄霉素(olivomycin)、培洛霉素(peplomycin)、泊非霉素(potfiromycin)、嘌呤霉素(puromycin)、三铁阿霉素(quelamycin)、罗多比星(rodorubicin)、链黑霉素(streptonigrin)、链佐星(streptozocin)、杀结核菌素(tubercidin)、乌苯美司(ubenimex)、净司他丁(zinostatin)、左柔比星(zorubicin)；抗代谢物，如氨甲蝶呤(methotrexate)和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物，如二甲叶酸(denopterin)、蝶罗呤(pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate)；嘌呤类似物，如氟达拉滨(fludarabine)、6-巯基嘌呤、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫鸟嘌呤(thioguanine)；嘧啶类似物，如安西他滨(ancitabine)、阿扎胞苷(azacitidine)、6-硫唑嘧啶、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、双去氧尿苷、去氧氟尿苷(doxifluridine)、依诺他滨(enocitabine)、氟尿苷(floxuridine)；雄激素，如卡普睪酮(calusterone)、丙酸屈他雄酮(dromostanolone propionate)、环硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睪内酯(testolactone)；抗肾上腺素，如胺鲁米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)；叶酸补充剂，如亚叶酸(frolinic acid)；醋葡醛内酯(aceglatone)；醛磷酰胺糖苷(aldophosphamide glycoside)；氨基乙酰丙酸(aminolevulinic acid)；恩尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶(amsacrine)；阿莫司汀(bestrabucil)；比生群(bisantrene)；伊达曲沙(edatraxate)；地磷酰胺(defofamine)；秋水仙胺(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；依氟米星(elfomithine)；依利醋铵(elliptinium acetate)；艾普塞隆(epothilone)，如艾普塞隆B；依托格鲁(etoglucid)；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖(lentinan)；氯尼达明(lonidamine)；类美登醇(maytansinoids)，如美登素(maytansine)和安丝菌素(ansamitocins)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫哌达醇(mopidamol)；尼曲吖啶(nitracrine)；喷司他丁(pentostatin)；蛋胺氮芥(phenamet)；比柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；鬼臼酸(podophyllinic acid)；(2-乙基酰肼；丙卡巴肼(procarbazine)；多醣复合物(JHS Natural Products,Eugene,OR)；雷佐生(razoxane)；根瘤菌素(rhizoxin)；西佐喃(sizofiran)；锗螺胺(spirogermanium)；细交链孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亚胺醌(triaziquone)；2,2',2”-三氯三乙胺；单端孢霉烯族毒素(trichothecenes)，如T-2毒素、疣孢霉素A(verracurinA)、漆斑菌素A(roridin A)和蛇形菌素(anguidine)；乌拉坦(urethane)；长春地辛(vindesine)；达卡巴嗪(dacarbazine)；甘露莫司汀(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴卫矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；加西托肽(gacytosine)；阿拉伯糖苷(arabinoside)(“Ara-C”)；环磷酰胺；噻替哌；类紫杉醇(taxoid)，例如(太平洋紫杉醇)、(不含聚氧乙烯氢化蓖麻油、白蛋白工程改造的太平洋紫杉醇的纳米粒子配制物)及(多西他赛)；苯丁酸氮芥(chloranbucil)；他莫昔芬(tamoxifen)(NolvadexTM)；拉洛昔芬(raloxifene)；芳香酶抑制性4(5)-咪唑；4-羟基他莫昔芬；曲沃昔芬(trioxifene)；科沃昔芬(keoxifene)；LY117018；奥那斯酮(onapristone)；托瑞米芬(toremifene)氟他胺(flutamide)、尼鲁胺(nilutamide)、比卡鲁胺(bicalutamide)、亮丙立德(leuprolide)、戈舍瑞林(goserelin)；苯丁酸氮芥；吉西他宾(gemcitabine)；6-硫鸟嘌呤；巯基嘌呤；铂配位络合物，如顺铂(cisplatin)、奥沙利铂(oxaliplatin)及卡铂(carboplatin)；长春花碱(vinblastine)；铂；依托泊苷(etoposide)(VP-16)；异环磷酰胺；米托蒽醌；长春新碱(vincristine)；(长春瑞宾(vinorelbine))；能灭瘤(novantrone)；替尼泊苷(teniposide)；依达曲沙(edatrexate)；道诺霉素(daunomycin)；氨基喋呤(aminopterin)；伊班膦酸盐(ibandronate)；伊立替康(irinotecan)(例如CPT-11)；拓扑异构酶抑制剂RFS2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；类视黄醇，如视黄酸；埃斯波霉素(esperamicins)；卡培他滨(例如)；及上述任一者的药学上可接受的盐。
抗癌剂的额外非限制实例包括曲妥珠单抗(trastuzumab)贝伐珠单抗(bevacizumab)西妥昔单抗(cetuximabv)利妥昔单抗(rituximab) ABVD、勒欓碱(avicine)、阿巴伏单抗(abagovomab)、吖啶甲酰胺(acridine carboxamide)、阿德木单抗(adecatumumab)、17-N-烯丙基氨基-17-去甲氧基格尔德霉素(demethoxygeldanamycin)、阿法拉丁(alpharadin)、艾沃昔布(alvocidib)、3-氨基吡啶-2-甲醛硫代半卡巴腙(thiosemicarbazone)、胺萘非特(amonafide)、蒽二酮(anthracenedione)、抗CD22免疫毒素、抗肿瘤药(例如细胞周期非特异性抗肿瘤剂以及其它本文所描述的抗肿瘤剂)、抗肿瘤发生草药、阿帕齐醌(apaziquone)、阿替莫德(atiprimod)、硫唑嘌呤(azathioprine)、贝洛替康(belotecan)、苯达莫司汀(bendamustine)、BIBW 2992、比立考达(biricodar)、溴他立辛(brostallicin)、苔藓抑素(bryostatin)、丁硫氨酸亚砜亚胺(buthionine sulfoximine)、CBV(化学疗法)、海绵诱癌素(calyculin)、二氯乙酸、盘皮海绵内酯(discodermolide)、依沙芦星(elsamitrucin)、依诺他滨(enocitabine)、艾日布林(eribulin)、依沙替康(exatecan)、依昔舒林(exisulind)、弥罗松酚(ferruginol)、呋咯地辛(forodesine)、磷雌酚(fosfestrol)、ICE化学疗法方案、IT-101、伊美克(imexon)、咪喹莫特(imiquimod)、吲哚并咔唑(indolocarbazole)、伊洛福芬(irofulven)、兰尼奎达(laniquidar)、拉洛他赛(larotaxel)、雷利米得(lenalidomide)、甲硫蒽酮(lucanthone)、勒托替康(lurtotecan)、马磷酰胺(mafosfamide)、米托唑胺(mitozolomide)、萘克沙朵(nafoxidine)、奈达铂(nedaplatin)、奥拉帕尼(olaparib)、奥他赛(ortataxel)、PAC-1、木瓜、匹杉琼(pixantrone)、蛋白酶体抑制剂、蝴蝶霉素(rebeccamycin)、瑞喹莫德(resiquimod)、鲁比替康(rubitecan)、SN-38、盐孢菌素A(salinosporamide A)、沙帕他滨(sapacitabine)、Stanford V、苦马豆素(swainsonine)、他拉泊芬(talaporfin)、他立喹达(tariquidar)、替加氟-尿嘧啶(tegafur-uracil)、替莫达(temodar)、替西他赛(tesetaxel)、四硝酸三铂(triplatin tetranitrate)、三(2-氯乙基)胺、曲沙他滨(troxacitabine)、乌拉莫司汀(uramustine)、伐地美生(vadimezan)、长春氟宁(vinflunine)、ZD6126及唑喹达(zosuquidar)。
抗癌剂的其它非限制性实例包括天然产品，如长春花生物碱类(例如长春花碱、长春新碱及长春瑞宾)、表鬼臼毒素(例如依托泊苷和替尼泊苷)、抗生素(例如放线菌素D(dactinomycin/actinomycin D))、道诺霉素及伊达比星)、蒽环霉素(anthracycline)、米托蒽醌、博来霉素(bleomycins)、光神霉素(plicamycin)(米拉霉素(mithramycin))、丝裂霉素、酶(例如L-天冬酰胺酶，其全身性代谢L-天冬酰胺并除去自身不能合成天冬酰胺的细胞)、抗血小板剂、抗增生/抗有丝分裂烷化剂如氮芥(例如甲氮芥、环磷酰胺以及类似物美法仑(melphalan)和苯丁酸氮芥)、乙烯亚胺和甲基蜜胺(例如六甲基蜜胺和噻替哌)、CDK抑制剂(例如CDK4/6抑制剂，如阿贝西利(abemaciclib)、瑞博西利(ribociclib)、帕博西利(palbociclib)、塞利西利(seliciclib)、UCN-01、P1446A-05、PD-0332991、迪纳西利(dinaciclib)、P27-00、AT-7519、RGB286638及SCH727965)、烷基磺酸酯(例如白消安)、亚硝基脲(例如卡莫司汀(BCNU)及类似物，以及链佐星(streptozocin))、四氮烯-氮烯唑胺(trazenes-dacarbazinine)(DTIC)、抗增生/抗有丝分裂抗代谢物(如叶酸类似物)、嘧啶类似物(例如氟尿嘧啶、氮尿苷和阿糖胞苷)、嘌呤类似物和相关抑制剂(例如巯基嘌呤、硫鸟嘌呤、喷司他丁及2-氯去氧腺苷)、芳香酶抑制剂(例如阿那曲唑(anastrozole)、依西美坦(exemestane)及来曲唑(letrozole))以及铂配位络合物(例如顺铂及卡铂)、丙卡巴肼(procarbazine)、羟基脲、米托坦、胺鲁米特、组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂(例如曲古抑菌素(trichostatin)、丁酸钠、艾匹丹(apicidan)、辛二酰苯胺异羟肟酸(suberoylanilide hydroamic acid)、伏立诺他(vorinostat)、贝利司他(belinostat)、LBH 589、罗米地辛(romidepsin)、ACY-1215及帕比司他(panobinostat))、mTOR抑制剂(例如维托塞布(vistusertib)、西罗莫司(temsirolimus)、依维莫司(everolimus)、地磷莫司(ridaforolimus)及西罗莫司(sirolimus))、KSP(Eg5)抑制剂(例如Array 520)、DNA结合剂(例如)、PI3K抑制剂如PI3Kδ抑制剂(例如GS-1101和TGR-1202)、PI3Kδ和γ抑制剂(例如CAL-130)、库潘尼西(copanlisib)、阿博利布(alpelisib)及艾代拉里斯(idelalisib)；多激酶抑制剂(例如TG02和索拉非尼(sorafenib))、激素(例如雌激素和激素激动剂，如促黄体激素释放激素(LHRH)激动剂(例如戈舍瑞林、亮丙瑞林(leuprolide)及曲普瑞林(triptorelin))、BAFF中和抗体(例如LY2127399)、IKK抑制剂、p38MAPK抑制剂、抗IL-6(例如CNT0328)、端粒酶抑制剂(例如GRN 163L)、极光激酶抑制剂(例如MLN8237)、细胞表面单克隆抗体(例如抗CD38(HUMAX-CD38))、抗CSl(例如埃罗妥珠单抗(elotuzumab))、HSP90抑制剂(例如17AAG和KOS 953)、P13K/Akt抑制剂(例如哌立福新(perifosine))、Akt抑制剂(例如GSK-2141795)、PKC抑制剂(例如恩扎妥林(enzastaurin))、FTI(例如ZarnestraTM)、抗CD138(例如BT062)、Torcl/2特异性激酶抑制剂(例如INK128)、ER/UPR靶向剂(例如MKC-3946)、cFMS抑制剂(例如ARRY-382)、JAK1/2抑制剂(例如CYT387)、PARP抑制剂(例如奥拉帕尼和维利帕尼(veliparib)(ABT-888))及BCL-2拮抗剂。
在一些实施方案中，抗癌剂选自甲氮芥、喜树碱、异环磷酰胺、他莫昔芬、雷洛昔芬、吉西他宾、索拉非尼(sorafenib)或前述的任何类似物或衍生物变体。
在一些实施方案中，抗癌剂是HER2抑制剂。HER2抑制剂是本领域中已知的。HER2抑制剂的非限制性实例包括单克隆抗体，如曲妥珠单抗和帕妥珠单抗(pertuzumab)小分子酪氨酸激酶抑制剂，如吉非替尼埃罗替尼皮利替尼(pilitinib)、CP-654577、CP-724714、卡奈替尼(canertinib)(CI1033)、HKI-272、拉帕替尼(lapatinib)(GW-572016；)、PKI-166、AEE788、BMS-599626、HKI-357、BIBW 2992、ARRY-334543及JNJ-26483327。
在一些实施方案中，抗癌剂是ALK抑制剂。ALK抑制剂是本领域中已知的。ALK抑制剂的非限制性实例包括色瑞替尼(ceritinib)、TAE-684(NVP-TAE694)、PF02341066(克唑替尼(crizotinib)或1066)、阿来替尼(alectinib)；布加替尼(brigatinib)；恩曲替尼(entrectinib)；恩沙替尼(ensartinib)(X-396)；劳拉替尼(lorlatinib)；ASP3026；CEP-37440；4SC-203；TL-398；PLB1003；TSR-011；CT-707；TPX-0005；及AP26113。ALK激酶抑制剂的额外实例描述于WO05016894的实施例3-39中。
在一些实施方案中，抗癌剂是受体酪氨酸激酶(RTK)/生长因子受体下游成员的抑制剂(例如SHP2抑制剂(例如SHP099、TNO155、RMC-4550、RMC-4630、JAB-3068、JAB-3312、RLY-1971、ERAS-601、SH3809、PF-07284892或BBP-398，或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、异构体(例如立体异构体)、前药或互变异构体)、SOS1抑制剂(例如BI-1701963、BI-3406、SDR5、BAY-293或RMC-5845，或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、异构体(例如立体异构体)、前药或互变异构体)、Raf抑制剂、MEK抑制剂、ERK抑制剂、PI3K抑制剂、PTEN抑制剂、AKT抑制剂或mTOR抑制剂(例如mTORC1抑制剂或mTORC2抑制剂)。在一些实施方案中，抗癌剂是JAB-3312。
在一些实施方案中，抗癌剂是SOS1抑制剂。SOS1抑制剂是本领域中已知的。在一些实施方案中，SOS1抑制剂选自WO 2022146698、WO 2022081912、WO 2022058344、WO2022026465、WO 2022017519、WO 2021173524、WO 2021130731、WO 2021127429、WO2021092115、WO 2021105960、WO 2021074227、WO 2020180768、WO 2020180770、WO2020173935、WO 2020146470、WO 2019201848、WO 2019122129、WO 2018172250和WO2018115380中所公开者，或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、异构体(例如立体异构体)、前药或互变异构体。在一些实施方案中，本公开化合物与SOS1抑制剂组合使用以治疗K-RasG13D癌症。
在一些实施方案中，抗癌剂是额外Ras抑制剂或Ras疫苗，或设计成直接或间接地降低Ras的致癌活性的另一种治疗方式。这些剂是本领域中已知的。在一些实施方案中，抗癌剂是额外Ras抑制剂。在一些实施方案中，Ras抑制剂靶向呈活性或GTP结合的状态的Ras。在一些实施方案中，Ras抑制剂靶向呈无活性或GDP结合状态的Ras。在一些实施方案中，Ras抑制剂是例如K-Ras G12C抑制剂，例如AMG 510(索托拉西布)、MRTX1257、MRTX849(阿达格拉西布(adagrasib))、JNJ-74699157、LY3499446、ARS-1620、ARS-853、BPI-421286、LY3537982、JDQ443、AZ4625、JAB-21822、JAB-21000、IBI351、ERAS-3490、RMC-6291或GDC-6036，或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、异构体(例如立体异构体)、前药或互变异构体。在一些实施方案中，Ras抑制剂是K-Ras G12D抑制剂，例如MRTX1133或JAB-22000，或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、异构体(例如立体异构体)、前药或互变异构体。在一些实施方案中，Ras抑制剂是K-Ras G12V抑制剂，例如JAB-23000或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、异构体(例如立体异构体)、前药或互变异构体。在一些实施方案中，Ras抑制剂是RMC-6236或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、异构体(例如立体异构体)、前药或互变异构体。在一些实施方案中，Ras抑制剂选自以下以全文引用的方式并入本文中的专利中所公开的Ras(ON)抑制剂，或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、异构体(例如立体异构体)、前药或互变异构体：WO 2021091982、WO 2021091967、WO 2021091956和WO 2020132597。Ras抑制剂的其它实例是本领域中已知的，例如以下以全文引用的方式并入本文中的专利中所公开的：WO 20220133038、WO 2022133345、WO 2022132200、WO 2022119748、WO 2022109485、WO2022109487、WO 2022066805、WO 2021190467、WO 2021185233、WO 2021180181、WO2021175199、2021173923、WO 2021169990、WO 2021169963、WO 2021168193、WO2021158071、WO 2021155716、WO 2021152149、WO 2021150613、WO 2021147967、WO2021147965、WO 2021143693、WO 2021142252、WO 2021141628、WO 2021139748、WO2021139678、WO 2021129824、WO 2021129820、WO 2021127404、WO 2021126816、WO2021126799、WO 2021124222、WO 2021121371、WO 2021121367、WO 2021121330、WO2020050890、WO 2020047192、WO 2020035031、WO 2020028706、WO 2019241157、WO2019232419、WO 2019217691、WO 2019217307、WO 2019215203、WO 2019213526、WO2019213516、WO 2019155399、WO 2019150305、WO 2019110751、WO 2019099524、WO2019051291、WO 2018218070、WO 2018217651、WO 2018218071、WO 2018218069、WO2018206539、WO 2018143315、WO 2018140600、WO 2018140599、WO 2018140598、WO2018140514、WO 2018140513、WO 2018140512、WO 2018119183、WO 2018112420、WO2018068017、WO 2018064510、WO 2017201161、WO 2017172979、WO 2017100546、WO2017087528、WO 2017058807、WO 2017058805、WO 2017058728、WO 2017058902、WO2017058792、WO 2017058768、WO 2017058915、WO 2017015562、WO 2016168540、WO2016164675、WO 2016049568、WO 2016049524、WO 2015054572、WO 2014152588、WO2014143659和WO 2013155223，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、异构体(例如立体异构体)、前药或互变异构体。
在一些实施方案中，可与本发明化合物组合的治疗剂是MAP激酶(MAPK)路径抑制剂(或“MAPK抑制剂”)。这些剂是本领域中已知的。MAPK抑制剂包括但不限于Cancers(Basel)2015年9月；7(3):1758-1784中所述的一种或多种MAPK抑制剂。例如，MAPK抑制剂可选自以下中的一者或多者：曲美替尼(trametinib)、比美替尼(binimetinib)、司美替尼(selumetinib)、考比替尼(cobimetinib)、LErafAON(NeoPharm)、ISIS 5132；维罗非尼(vemurafenib)、匹马色替(pimasertib)、TAK733、RO4987655(CH4987655)；CI-1040；PD-0325901；CH5126766；MAP855；AZD6244；瑞法替尼(refametinib)(RDEA 119/BAY 86-9766)；GDC-0973/XL581；AZD8330(ARRY-424704/ARRY-704)；RO5126766(Roche，描述于PLoSOne.2014年11月25日；9(11)中)；及GSK1120212(或JTP-74057，描述于Clin CancerRes.2011年3月1日；17(5):989-1000中)。MAPK抑制剂可以是PLX8394、LXH254、GDC-5573或LY3009120。
在一些实施方案中，抗癌剂是破坏剂或RAS-RAF-ERK或PI3K-AKT-TOR或PI3K-AKT信号传导路径抑制剂。这些剂是本领域中已知的。PI3K/AKT抑制剂可包括但不限于Cancers(Basel)2015年9月；7(3):1758-1784中所述的一种或多种PI3K/AKT抑制剂。例如，PI3K/AKT抑制剂可选自以下中的一者或多者：NVP-BEZ235；BGT226；XL765/SAR245409；SF1126；GDC-0980；PI-103；PF-04691502；PKI-587；GSK2126458。
在一些实施方案中，抗癌剂是PD-1或PD-L1拮抗剂。这些剂是本领域中已知的。
在一些实施方案中，额外治疗剂包括ALK抑制剂、HER2抑制剂、EGFR抑制剂、IGF-1R抑制剂、MEK抑制剂、PI3K抑制剂、AKT抑制剂、TOR抑制剂、MCL-1抑制剂、BCL-2抑制剂、SHP2抑制剂、蛋白酶体抑制剂及免疫疗法。在一些实施方案中，额外治疗剂包括FGFR抑制剂、PARP抑制剂、BET抑制剂、PRMT5i抑制剂、MAT2A抑制剂、VEGF抑制剂和HDAC抑制剂。在一些实施方案中，治疗剂可以是泛RTK抑制剂，如阿法替尼(afatinib)。
IGF-1R抑制剂是本领域中已知的，并且包括林西替尼(linsitinib)或其药学上可接受的盐。
EGFR抑制剂是本领域中已知的，并且包括但不限于小分子拮抗剂、抗体抑制剂或特异性反义核苷酸或siRNA。EGFR的有用抗体抑制剂包括西妥昔单抗(cetuximab)帕尼单抗(panitumumab)扎鲁目单抗(zalutumumab)、尼妥珠单抗(nimotuzumab)及马妥珠单抗(matuzumab)。其它基于抗体的EGFR抑制剂包括可部分或完全地阻断天然配体对EGFR的活化的任何抗EGFR抗体或抗体片段。基于抗体的EGFR抑制剂的非限制性实例包括Modjtahedi等人,Br.J.Cancer 1993,67:247-253；Teramoto等人,Cancer 1996,77:639-645；Goldstein等人,Clin.Cancer Res.1995,1:1311-1318；Huang等人,1999,Cancer Res.15:59(8):1935-40；以及Yang等人,Cancer Res.1999,59:1236-1243中所描述的EGFR抑制剂。EGFR抑制剂可以是单克隆抗体Mab E7.6.3(Yang,1999，同上文)或Mab C225(ATCC登录号HB-8508)或对EGFR具有结合特异性的抗体或抗体片段。
EGFR的小分子拮抗剂包括吉非替尼埃罗替尼和拉帕替尼参见例如Yan等人,Pharmacogenetics and Pharmacogenomics InOncology Therapeutic Antibody Development,BioTechniques 2005,39(4):565-8；以及Paez等人,EGFR Mutations In Lung Cancer Correlation With Clinical Response ToGefitinib Therapy,Science 2004,304(5676):1497-500。在一些实施方案中，EGFR抑制剂是奥西替尼(osimertinib)小分子EGFR抑制剂的其它非限制性实例包括以下专利公开案中所述的任何EGFR抑制剂，以及此类EGFR抑制剂的所有药学上可接受的盐：EP 05722；EP 0566226；WO96/33980；美国专利第5,747,498号；WO96/30347；EP 0787772；WO97/30034；WO97/30044；WO97/38994；WO97/49688；EP 837063；WO98/02434；WO97/38983；WO95/19774；WO95/19970；WO97/13771；WO98/02437；WO98/02438；WO97/32881；DE19629652；WO98/33798；WO97/32880；WO97/32880；EP 682027；WO97/02266；WO97/27199；WO98/07726；WO97/34895；WO96/31510；WO98/14449；WO98/14450；WO98/14451；WO95/09847；WO97/19065；WO98/17662；美国专利第5,789,427号；美国专利第5,650,415号；美国专利第5,656,643号；WO99/35146；WO99/35132；WO99/07701；及WO92/20642。小分子EGFR抑制剂的其它非限制性实例包括Traxler等人,Exp.Opin.Ther.Patents 1998,8(12):1599-1625中所描述的任何EGFR抑制剂。在一些实施方案中，EGFR抑制剂是ERBB抑制剂。在人类中，ERBB家族含有HER1(EGFR、ERBB1)、HER2(NEU、ERBB2)、HER3(ERBB3)及HER(ERBB4)。
MEK抑制剂是本领域中已知的，并且包括但不限于皮马色替、司美替尼、考比替尼曲美替尼及比美替尼在一些实施方案中，MEK抑制剂靶向MEK突变，所述突变是选自以下的第I类MEK1突变：D67N、P124L、P124S及L177V。在一些实施方案中，MEK突变是选自以下的第II类MEK1突变：ΔE51-Q58、ΔF53-Q58、E203K、L177M、C121S、F53L、K57E、Q56P及K57N。
PI3K抑制剂是本领域中已知的，并且包括但不限于沃特曼宁(wortmannin)；WO06/044453中所述的17-羟基沃特曼宁类似物；4-[2-(1H-吲唑-4-基)-6-[[4-(甲基磺酰基)哌嗪-1-基]甲基]噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基]吗啉(又称为匹替利昔(pictilisib)或GDC-0941，并且描述于WO09/036082和WO09/055730中)；2-甲基-2-[4-[3-甲基-2-氧代-8-(喹啉-3-基)-2,3-二氢咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]苯基]丙腈(又称为BEZ 235或NVP-BEZ 235，并且描述于WO06/122806中)；(S)-l-(4-((2-(2-氨基嘧啶-5-基)-7-甲基-4-吗啉代噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-羟基丙-1-酮(描述于WO08/070740中)；LY294002(2-(4-吗啉基)-8-苯基-4H-l-苯并吡喃-4-酮(购自Axon Medchem)；PI 103盐酸盐(3-[4-(4-吗啉基吡啶并[3',2':4,5]呋喃并[3,2-d]嘧啶-2-基]苯酚盐酸盐(购自AxonMedchem)；PIK 75(2-甲基-5-硝基-2-[(6-溴咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)亚甲基]-1-甲基酰肼-苯磺酸单盐酸盐)(购自Axon Medchem)；PIK 90(N-(7,8-二甲氧基-2,3-二氢-咪唑并[l,2-c]喹唑啉-5-基)-烟酰胺(购自Axon Medchem)；AS-252424(5-[l-[5-(4-氟-2-羟基-苯基)-呋喃-2-基]-甲-(Z)-亚基]-噻唑啶-2,4-二酮(购自Axon Medchem)；TGX-221(7-甲基-2-(4-吗啉基)-9-[1-(苯基氨基)乙基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(购自AxonMedchem)；XL-765；及XL-147。其它PI3K抑制剂包括去甲氧基绿胶霉素(demethoxyviridin)、哌立福辛(perifosine)、CAL101、PX-866、BEZ235、SF1126、INK1117、IPI-145、BKM120、XL147、XL765、Palomid 529、GSK1059615、ZSTK474、PWT33597、IC87114、TGI 00-115、CAL263、PI-103、GNE-477、CUDC-907及AEZS-136。
AKT抑制剂是本领域中已知的，并且包括但不限于Akt-1-1(抑制Aktl)(Barnett等人,Biochem.J.2005,385(Pt.2):399-408)；Akt-1-1,2(抑制Akl和2)(Barnett等人,Biochem.J.2005,385(Pt.2):399-408)；API-59CJ-Ome(例如Jin等人,Br.J.Cancer 2004,91:1808-12)；1-H-咪唑并[4,5-c]吡啶基化合物(例如WO 05/011700)；吲哚-3-甲醇及其衍生物(例如美国专利第6,656,963号；Sarkar和Li J Nutr.2004,134(12增刊):3493S-3498S)；哌立福辛(例如干扰Akt膜定位；Dasmahapatra等人,Clin.Cancer Res.2004,10(15):5242-52)；磷脂酰肌醇醚脂质类似物(例如Gills和DennisExpert.Opin.Investig.Drugs 2004,13:787-97)；以及曲西立滨(triciribine)(TCN或API-2或NCI标识符：NSC 154020；Yang等人,Cancer Res.2004,64:4394-9)。
mTOR抑制剂是本领域中已知的，并且包括但不限于ATP竞争性mTORC1/mTORC2抑制剂，例如PI-103、PP242、PP30；Torin 1；FKBP12增强剂；4H-1-苯并吡喃-4-酮衍生物；以及雷帕霉素(rapamycin)(又称为西罗莫司)和其衍生物，包括：替西罗莫司(temsirolimus)依维莫司(WO94/09010)；地磷莫司(又称为地伏莫司(deforolimus)或AP23573)；雷帕霉素类似物(rapalogs)，例如WO98/02441和WO01/14387中所公开的雷帕霉素类似物，例如AP23464和AP23841；40-(2-羟乙基)雷帕霉素；40-[3-羟基(羟甲基)甲基丙酸酯]-雷帕霉素(又称为CC1779)；40-表-(四唑基)-雷帕霉素(又称为ABT578)；32-去氧雷帕霉素；16-戊炔氧基-32(S)-二氢雷帕霉素；WO05/005434中所公开的衍生物；美国专利第5,258,389号、第5,118,677号、第5,118,678号、第5,100,883号、第5,151,413号、第5,120,842号和第5,256,790号中，以及WO94/090101、WO92/05179、WO93/111130、WO94/02136、WO94/02485、WO95/14023、WO94/02136、WO95/16691、WO96/41807、WO96/41807和WO2018204416中所公开的衍生物；以及含磷的雷帕霉素衍生物(例如WO05/016252)。在一些实施方案中，mTOR抑制剂是双重空间抑制剂(bisteric inhibitor)(参见例如WO2018204416、WO2019212990和WO2019212991)，如RMC-5552，具有以下结构
可与本发明化合物组合使用的BRAF抑制剂是本领域中已知的，并且包括例如维罗非尼、达拉非尼(dabrafenib)及康奈非尼(encorafenib)。BRAF可包含第3类BRAF突变。在一些实施方案中，第3类BRAF突变选自人类BRAF中以下氨基酸取代中的一者或多者：D287H；P367R；V459L；G466V；G466E；G466A；S467L；G469E；N581S；N581I；D594N；D594G；D594A；D594H；F595L；G596D；G596R；及A762E。
MCL-1抑制剂是本领域中已知的，并且包括但不限于AMG-176、MIK665和S63845。骨髓细胞白血病-1(MCL-1)蛋白质是B细胞淋巴瘤-2(BCL-2)蛋白质家族的关键抗细胞凋亡成员中的一种。MCL-1的过度表达与肿瘤进展以及对不仅传统化学疗法而且包括如ABT-263之类BCL-2抑制剂在内的靶向治疗剂的抗性密切相关。
在一些实施方案中，额外治疗剂是SHP2抑制剂。SHP2抑制剂是本领域中已知的。SHP2是由PTPN11基因编码的非受体蛋白质酪氨酸磷酸酶，它促成多种细胞功能，包括增殖、分化、细胞周期维持和迁移。SHP2具有两个N末端Src同源2结构域(N-SH2及C-SH2)、一个催化结构域(PTP)及一个C末端尾。所述两个SH2结构域控制SHP2的亚细胞定位和功能调控。所述分子以通过涉及来自N-SH2和PTP结构域的残基的结合网络稳定的无活性、自我抑制性构型存在。利用例如经受体酪氨酸激酶(RTK)起作用的细胞因子或生长因子刺激会引起催化位点暴露，引起SHP2的酶活化。
SHP2参与通过RAS-促分裂原活化的蛋白质激酶(MAPK)，即JAK-STAT或磷酸肌醇3-激酶-AKT路径进行的信号传导。已在以下中鉴别出PTPN11基因中且随后SHP2中的突变：若干人类发育病，如努南综合征(Noonan Syndrome)和莱帕德综合征(Leopard Syndrome)，以及人类癌症，如青少年型骨髓单核细胞白血病、神经母细胞瘤、黑色素瘤、急性骨髓性白血病以及乳癌、肺癌和结肠癌。所述突变中有一些使SHP2的自抑制性构型不稳定，并且促进SHP2的自活化或增强的生长因子驱动型活化。因此，SHP2表示开发用于治疗包括癌症在内的各种疾病的新颖疗法的特别值得关注的靶标。已经显示，SHP2抑制剂(例如RMC-4550或SHP099)与RAS路径抑制剂(例如MEK抑制剂)的组合可在体外抑制多种癌细胞系(例如胰腺癌、肺癌、卵巢癌及乳癌)的增殖。因此，涉及SHP2抑制剂和RAS路径抑制剂的组合疗法可以是用于预防多种恶性病中的肿瘤耐药性的一般策略。
本领域中已知的此类SHP2抑制剂的非限制性实例包括：Chen等人,MolPharmacol.2006,70,562；Sarver等人,J.Med.Chem.2017,62,1793；Xie等人,J.Med.Chem.2017,60,113734；及Igbe等人,Oncotarget,2017,8,113734；及PCT申请：WO2022135568、WO 2021176072、WO 2021171261、WO 2021149817、WO 2021148010、WO2021147879、WO 2021143823、WO 2021143701、WO 2021143680、WO 2021121397、WO2021119525、WO 2021115286、WO 2021110796、WO 2021088945、WO 2021073439、WO2021061706、WO 2021061515、WO 2021043077、WO 2021033153、WO 2021028362、WO2021033153、WO 2021028362、WO 2021018287、WO 2020259679、WO 2020249079、WO2020210384、WO 2020201991、WO 2020181283、WO 2020177653、WO 2020165734、WO2020165733、WO 2020165732、WO 2020156243、WO 2020156242、WO 2020108590、WO2020104635、WO 2020094104、WO 2020094018、WO 2020081848、WO 2020073949、WO2020073945、WO 2020072656、WO 2020065453、WO 2020065452、WO 2020063760、WO2020061103、WO 2020061101、WO 2020033828、WO 2020033286、WO 2020022323、WO2019233810、WO 2019213318、WO 2019183367、WO 2019183364、WO 2019182960、WO2019167000、WO 2019165073、WO 2019158019、WO 2019152454、WO 2019051469、WO2019051084、WO 2018218133、WO 2018172984、WO 2018160731、WO 2018136265、WO2018136264、WO 2018130928、WO 2018129402、WO 2018081091、WO 2018057884、WO2018013597、WO 2017216706、WO 2017211303、WO 2017210134、WO 2017156397、WO2017100279、WO 2017079723、WO 2017078499、WO 2016203406、WO 2016203405、WO2016203404、WO 2016196591、WO 2016191328、WO 2015107495、WO 2015107494、WO2015107493、WO 2014176488、WO 2014113584、US 20210085677、US10858359、US10934302、US10954243、US 10988466、US11001561、US11033547、US11034705或US11044675，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、异构体(例如立体异构体)、前药或互变异构体，各文献以引用的方式并入本文中。
在一些实施方案中，SHP2抑制剂结合于活性位点。在一些实施方案中，SHP2抑制剂是混合型不可逆抑制剂。在一些实施方案中，SHP2抑制剂结合别构位点，例如非共价别构抑制剂。在一些实施方案中，SHP2抑制剂是共价SHP2抑制剂，如靶向位于磷酸酶活性位点外的半胱氨酸残基(C333)的抑制剂。在一些实施方案中，SHP2抑制剂是可逆抑制剂。在一些实施方案中，SHP2抑制剂是不可逆抑制剂。在一些实施方案中，SHP2抑制剂是SHP099。在一些实施方案中，SHP2抑制剂是具有以下结构的TNO155：
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、异构体(例如立体异构体)、前药或互变异构体。在一些实施方案中，SHP2抑制剂是具有以下结构的RMC-4550：
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、异构体(例如立体异构体)、前药或互变异构体。在一些实施方案中，SHP2抑制剂是具有以下结构的RMC-4630：
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、异构体(例如立体异构体)、前药或互变异构体。在一些实施方案中，SHP2抑制剂是具有以下结构的JAB-3068：
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、异构体(例如立体异构体)、前药或互变异构体。在一些实施方案中，SHP2抑制剂是JAB-3312。在一些实施方案中，SHP2抑制剂是以下化合物：
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、异构体(例如立体异构体)、前药或互变异构体。在一些实施方案中，SHP2抑制剂是具有以下结构的RLY-1971：
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、异构体(例如立体异构体)、前药或互变异构体。在一些实施方案中，SHP2抑制剂是ERAS-601，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、异构体(例如立体异构体)、前药或互变异构体。在一些实施方案中，SHP2抑制剂是BBP-398，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、异构体(例如立体异构体)、前药或互变异构体。在一些实施方案中，SHP2抑制剂是SH3809。在一些实施方案中，SHP2抑制剂是PF-07284892，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、异构体(例如立体异构体)、前药或互变异构体。
在一些实施方案中，额外治疗剂选自由以下组成的组：MEK抑制剂、HER2抑制剂、SHP2抑制剂、CDK4/6抑制剂、mTOR抑制剂、SOS1抑制剂及PD-L1抑制剂。在一些实施方案中，额外治疗剂选自由以下组成的组：MEK抑制剂、SHP2抑制剂和PD-L1抑制剂。参见例如Hallin等人,Cancer Discovery,DOI:10.1158/2159-8290(2019年10月28日)，以及Canon等人,Nature,575:217(2019)。在一些实施方案中，本发明的Ras抑制剂是与MEK抑制剂和SOS1抑制剂组合使用。在一些实施方案中，本发明的Ras抑制剂是与PD-L1抑制剂和SOS1抑制剂组合使用。在一些实施方案中，本发明的Ras抑制剂是与PD-L1抑制剂和SHP2抑制剂组合使用。在一些实施方案中，本发明的Ras抑制剂是与MEK抑制剂和SHP2抑制剂组合使用。在一些实施方案中，本发明的Ras抑制剂是与SHP2抑制剂和抑制多种Ras同功型和/或突变体的Ras抑制剂(例如RMC-6236)组合使用。在一些实施方案中，癌症是结肠直肠癌，并且治疗包含施用本发明的Ras抑制剂与第二或第三治疗剂的组合，所述第二或第三治疗剂例如为SHP2抑制剂和抑制多种Ras同功型和/或突变体的Ras抑制剂。在一些实施方案中，癌症是胆管癌并且治疗包括施用本发明的Ras抑制剂、索拉非尼和化学治疗剂。在一些实施方案中，癌症是胃癌并且治疗包括施用本发明的Ras抑制剂和FGFR抑制剂(例如FGFR2i或FGFR4i)。在一些实施方案中，本发明的Ras抑制剂是与免疫疗法组合使用，任选地与化学治疗剂组合使用。
蛋白酶体抑制剂是本领域中已知的，并且包括但不限于卡非佐米(carfilzomib)硼替佐米(bortezomib)和奥普佐米(oprozomib)。
免疫疗法包括但不限于单克隆抗体、免疫调节性酰亚胺(IMiD)、GITR激动剂、基因工程改造的T细胞(例如CAR-T细胞)、双特异性抗体(例如BiTE)以及抗PD-1剂、抗PD-L1剂、抗CTLA4剂、抗LAGl剂及抗OX40剂。其它免疫疗法是本领域中已知的。
免疫调节剂(IMiD)是一类含有酰亚氨基的免疫调节药物(调节免疫反应的药物)。IMiD类药物包括沙立度胺(thalidomide)和其类似物(来那度胺(lenalidomide)、泊马度胺(pomalidomide)及阿普司特(apremilast))。
例示性抗PD-1抗体及其使用方法描述于Goldberg等人,Blood2007,110(1):186-192；Thompson等人,Clin.Cancer Res.2007,13(6):1757-1761；及WO06/121168A1)中，并且在本文别处也有描述。
FGFR抑制剂是本领域中已知的，例如佩米替尼(pemigatinib)和厄达替尼(erdafitinib)，包括FGFR2抑制剂和FGFR4抑制剂。参见例如Cancers(Basel),2021年6月；13(12)2968。
BET抑制剂是本领域中已知的，例如罗米地辛、帕比司他和贝利司他。参见例如British J.Cancer 124:1478(2021)。
PRMT5i抑制剂是本领域中已知的，例如PF-0693999、PJ-68和MRTX1719。参见例如Biomed.Pharmacotherapy 144:112252(2021)。
MAT2A抑制剂是本领域中已知的，例如AG-270和IDE397。参见例如Exp Opin TherPatents(2022)DOI:10.1080/13543776.2022.2119127。
GITR激动剂是本领域中已知的，并且包括但不限于GITR融合蛋白以及抗GITR抗体(例如二价抗GITR抗体)，如美国专利第6,111,090号、美国专利第8,586,023号、WO2010/003118和WO2011/090754中所述的GITR融合蛋白；或例如美国专利第7,025,962号、EP1947183、美国专利第7,812,135号；美国专利第8,388,967号；美国专利第8,591,886号；美国专利第7,618,632号、EP 1866339及WO2011/028683、WO2013/039954、WO05/007190、WO07/133822、WO05/055808、WO99/40196、WO01/03720、WO99/20758、WO06/083289、WO05/115451及WO2011/051726中所述的抗GITR抗体。
可与本发明化合物组合使用的治疗剂的另一个实例是抗血管生成剂。抗血管生成剂是本领域中已知的，并且包括但不限于体外合成制备的化学组合物、抗体、抗原结合区、放射性核素以及其组合和缀合物。抗血管生成剂可以是激动剂、拮抗剂、别构调节剂、毒素，或更通常可用于抑制或刺激其靶标(例如受体或酶活化或抑制)，并由此促进细胞死亡或使细胞生长停滞。在一些实施方案中，所述一种或多种额外疗法包括抗血管生成剂。
抗血管生成剂可以是MMP-2(基质金属蛋白酶2)抑制剂、MMP-9(基质金属蛋白酶9)抑制剂和COX-II(环加氧酶11)抑制剂。抗血管生成剂的非限制性实例包括雷帕霉素、替西罗莫司(CCI-779)、依维莫司(RAD001)、索拉非尼、舒尼替尼及贝伐珠单抗(bevacizumab)。有用COX-II抑制剂的实例包括阿来昔布(alecoxib)、伐地昔布(valdecoxib)和罗非昔布(rofecoxib)。有用的基质金属蛋白酶抑制剂的实例描述于WO96/33172、WO96/27583、WO98/07697、WO98/03516、WO98/34918、WO98/34915、WO98/33768、WO98/30566、WO90/05719、WO99/52910、WO99/52889、WO99/29667、WO99007675、EP0606046、EP0780386、EP1786785、EP1181017、EP0818442、EP1004578和US20090012085，以及美国专利第5,863,949号和第5,861,510号中。优选的MMP-2和MMP-9抑制剂是具有极低或不具有MMP-1抑制活性的抑制剂。更优选是相对于其它基质金属蛋白酶(即，MAP-1、MMP-3、MMP-4、MMP-5、MMP-6、MMP-7、MMP-8、MMP-10、MMP-11、MMP-12及MMP-13)选择性抑制MMP-2或AMP-9的抑制剂。MMP抑制剂的一些具体实例有AG-3340、RO 32-3555和RS13-0830。
其它例示性抗血管生成剂包括激酶结构域KDR(激酶结构域受体)抑制剂(例如特异性结合至激酶结构域受体的抗体和抗原结合区)、抗VEGF剂(例如特异性结合VEGF的抗体或抗原结合区(例如贝伐珠单抗)或可溶性VEGF受体或其配体结合区)，如VEGF-TRAPTM，以及抗VEGF受体剂(例如特异性结合至VEGF受体的抗体或抗原结合区)、VEGF抑制剂、EGFR抑制剂(例如特异性结合至EGFR的抗体或抗原结合区)，如(帕尼单抗(panitumumab))、埃罗替尼抗Angl剂和抗Ang2剂(例如特异性结合至Angl和Ang2或其受体，例如Tie2/Tek的抗体或抗原结合区)，以及抗Tie2激酶抑制剂(例如特异性结合至Tie2激酶的抗体或抗原结合区)。其它抗血管生成剂包括坎帕斯(Campath)、IL-8、B-FGF、Tek拮抗剂(US2003/0162712；US6,413,932)、抗TWEAK剂(例如特异性结合的抗体或抗原结合区，或可溶性TWEAK受体拮抗剂；参见US6,727,225)、拮抗整合素与其配体的结合的ADAM解整合素结构域(US2002/0042368)、特异性结合的抗eph受体或抗蝶素抗体或抗原结合区(美国专利第5,981,245号、第5,728,813号、第5,969,110号、第6,596,852号、第6,232,447号、第6,057,124号及其专利家族成员)，和抗PDGF-BB拮抗剂(例如特异性结合的抗体或抗原结合区)，以及特异性结合至PDGF-BB配体的抗体或抗原结合区，和PDGFR激酶抑制剂(例如特异性结合至PDGFR激酶的抗体或抗原结合区)。额外抗血管生成剂包括：SD-7784(Pfizer,USA)；西仑吉肽(cilengitide)(Merck KGaA,Germany,EPO 0770622)；哌加他尼八钠(pegaptanib octasodium)(Gilead Sciences,USA)；阿法他汀(Alphastatin)(BioActa,UK)；M-PGA(Celgene,USA,US 5712291)；伊洛马司他(ilomastat)(Arriva,USA,US5892112)；恩沙尼(emaxanib)(Pfizer,USA,US 5792783)；瓦他拉尼(vatalanib)(Novartis,Switzerland)；2-甲氧基雌二醇(EntreMed,USA)；TLC ELL-12(Elan,Ireland)；乙酸阿奈可他(anecortave acetate)(Alcon,USA)；α-D148 Mab(Amgen,USA)；CEP-7055(Cephalon,USA)；抗Vn Mab(Crucell,Netherlands)、DAC抗血管生成剂(ConjuChem,Canada)；安格西丁(Angiocidin)(InKine Pharmaceutical,USA)；KM-2550(Kyowa Hakko,Japan)；SU-0879(Pfizer,USA)；CGP-79787(Novartis,Switzerland,EP 0970070)；ARGENT技术(Ariad,USA)；YIGSR-Stealth(Johnson&Johnson,USA)；纤维蛋白原-E片段(BioActa,UK)；血管形成抑制剂(Trigen,UK)；TBC-1635(Encysive Pharmaceuticals,USA)；SC-236(Pfizer,USA)；ABT-567(Abbott,USA)；米塔斯他汀(Metastatin)(EntreMed,USA)；丝抑蛋白(maspin)(Sosei,Japan)；2-甲氧基雌二醇(Oncology Sciences Corporation,USA)；ER-68203-00(IV AX,USA)；BeneFin(Lane Labs,USA)；Tz-93(Tsumura,Japan)；TAN-1120(Takeda,Japan)；FR-111142(Fujisawa,Japan,JP 02233610)；血小板因子4(RepliGen,USA,EP 407122)；血管内皮生长因子拮抗剂(Borean,Denmark)；贝伐珠单抗(pINN)(Genentech,USA)；血管生成抑制剂(SUGEN,USA)；XL 784(Exelixis,USA)；XL 647(Exelixis,USA)；第二代α5β3整合素MAb(Applied Molecular Evolution,USA及Medlmmune,USA)；盐酸恩扎妥林(enzastaurin hydrochloride)(Lilly,USA)；CEP 7055(Cephalon,USA及Sanofi-Synthelabo,France)；BC 1(Genoa Institute of CancerResearch,Italy)；rBPI 21和BPI源性抗血管生成剂(XOMA,USA)；PI 88(Progen,Australia)；西仑吉肽(Merck KGaA,German；Munich Technical University,Germany,Scripps Clinic and Research Foundation,USA)；AVE 8062(Ajinomoto,Japan)；AS1404(Cancer Research Laboratory,New Zealand)；SG 292,(Telios,USA)；内皮抑素(Endostatin)(Boston Childrens Hospital,USA)；ATN 161(Attenuon,USA)；2-甲氧基雌二醇(Boston Childrens Hospital,USA)；ZD 6474(AstraZeneca,UK)；ZD 6126(AngiogenePharmaceuticals,UK)；PPI 2458(Praecis,USA)；AZD 9935(AstraZeneca,UK)；AZD 2171,(AstraZeneca,UK)；瓦他拉尼(pINN)(Novartis,Switzerland及Schering AG,Germany)；组织因子路径抑制剂(EntreMed,USA)；哌加他尼(Pinn)(Gilead Sciences,USA)；束骨姜黄醇(xanthorrhizol)(Yonsei University,South Korea)；基于基因的VEGF-2疫苗(ScrippsClinic and Research Foundation,USA)；SPV5.2,(Supratek,Canada)；SDX 103(University of California,San Diego,USA)；PX 478(ProlX,USA)；METASTATIN(EntreMed,USA)；肌钙蛋白I(Harvard University,USA)；SU 6668(SUGEN,USA)；OXI 4503(OXiGENE,USA)；o-胍(Dimensional Pharmaceuticals,USA)；莫妥拉明C(motuporamine C)(British Columbia University,Canada)；CDP 791(Celltech Group,UK)；阿替莫德(atiprimod)(pINN)(GlaxoSmithKline,UK)；E 7820(Eisai,Japan)；CYC 381(HarvardUniversity,USA)；AE 941(Aeterna,Canada)；血管生成疫苗(EntreMed,USA)；尿激酶纤维蛋白溶酶原活化物抑制剂(Dendreon,USA)；奥谷法奈(oglufanide)(pINN)(Melmotte,USA)；HIF-lα抑制剂(Xenova,UK)；CEP 5214(Cephalon,USA)；BAY RES2622(Bayer,Germany)；安古西丁(InKine,USA)；A6(Angstrom,USA)；KR 31372(Korea ResearchInstitute of Chemical Technology,South Korea)；GW 2286(GlaxoSmithKline,UK)；EHT0101(ExonHit,France)；CP 868596(Pfizer,USA)；CP 564959(OSI,USA)；CP 547632(Pfizer,USA)；786034(GlaxoSmithKline,UK)；KRN 633(Kirin Brewery,Japan)；药物递送系统，眼内2-甲氧基雌二醇；安格尼斯(anginex)(Maastricht University,Netherlands，及Minnesota University,USA)；ABT 510(Abbott,USA)；AAL 993(Novartis,Switzerland)；VEGI(ProteomTech,USA)；肿瘤坏死因子-α抑制剂；SU 11248(Pfizer,USA及SUGEN USA)；ABT 518(Abbott,USA)；YH16(Yantai Rongchang,China)；S-3APG(BostonChildrens Hospital,USA和EntreMed,USA)；MAb,KDR(ImClone Systems,USA)；MAb,α5β(Protein Design,USA)；KDR激酶抑制剂(Celltech Group,UK和Johnson&Johnson,USA)；GFB 116(South Florida University,USA和Yale University,USA)；CS 706(Sankyo,Japan)；考布他汀(combretastatin)A4前药(Arizona State University,USA)；软骨素酶AC(IBEX,Canada)；BAY RES2690(Bayer,Germany)；AGM 1470(Harvard University,USA,Takeda,Japan，及TAP,USA)；AG 13925(Agouron,USA)；四硫钼酸盐(University ofMichigan,USA)；GCS100(Wayne State University,USA)；CV 247(Ivy Medical,UK)；CKD732(Chong Kun Dang,South Korea)；伊索拉定(irsogladine)(Nippon Shinyaku,Japan)；RG 13577(Aventis,France)；WX 360(Wilex,Germany)；角鲨胺(Genaera,USA)；RPI 4610(Sirna,USA)；肝素酶抑制剂(InSight,Israel)；KL 3106(Kolon,South Korea)；和厚朴酚(Honokiol)(Emory University,USA)；ZK CDK(Schering AG,Germany)；ZK Angio(Schering AG,Germany)；ZK 229561(Novartis,Switzerland，和Schering AG,Germany)；XMP 300(XOMA,USA)；VGA 1102(Taisho,Japan)；VE-钙粘蛋白-2拮抗剂(ImClone Systems,USA)；血管抑制因子(Vasostatin)(National Institutes ofHealth,USA)；Flk-1(ImCloneSystems,USA)；TZ 93(Tsumura,Japan)；TumStatin(Beth Israel Hospital,USA)；截短的可溶性FLT 1(血管内皮生长因子受体1)(Merck&Co,USA)；Tie-2配体(Regeneron,USA)；以及凝血栓蛋白1抑制剂(Allegheny Health,Education and Research Foundation,USA)。
可与本发明化合物组合使用的治疗剂的其它实例包括特异性结合并抑制生长因子活性的药剂(例如抗体、抗原结合区或可溶性受体)，如肝细胞生长因子(HGF，又称为离散因子(Scatter Factor))的拮抗剂，以及特异性结合受体c-Met的抗体或抗原结合区。这些剂是本领域中已知的。
可与本发明化合物组合使用的治疗剂的另一个实例是自噬抑制剂。自噬抑制剂是本领域中已知的，并且包括但不限于氯喹、3-甲基腺嘌呤、羟基氯喹(PlaquenilTM)、巴佛洛霉素A1(bafilomycin A1)、5-氨基-4-咪唑甲酰胺核糖苷(AICAR)、软海绵酸、抑制第2A型或第1型蛋白质磷酸酶的自噬抑制性藻毒素、cAMP类似物和增加cAMP含量的药物，如腺苷、LY204002、N6-巯基嘌呤核糖苷及长春新碱。此外，也可使用抑制蛋白质，包括但不限于ATG5(参与自噬)的表达的反义RNA或siRNA。在一些实施方案中，所述一种或多种额外疗法包括自噬抑制剂。
可与本发明化合物组合使用的治疗剂的另一个实例是抗肿瘤剂，所述抗肿瘤剂是本领域中已知的。在一些实施方案中，所述一种或多种额外疗法包括抗肿瘤剂。抗肿瘤剂的非限制性实例包括醋孟南(acemannan)、阿柔比星(aclarubicin)、阿地白介素(aldesleukin)、阿仑单抗(alemtuzumab)、阿曲诺英(alitretinoin)、六甲蜜胺、胺磷汀(amifostine)、胺柔比星(amrubicin)、安吖啶(amsacrine)、阿那格雷(anagrelide)、阿那曲唑(anastrozole)、安塞尔(ancer)、安塞司亭(ancestim)、阿格拉宾(arglabin)、三氧化砷、BAM-002(Novelos)、贝沙罗汀(bexarotene)、比卡鲁胺(bicalutamide)、溴尿苷(broxuridine)、卡培他滨、西莫白介素(celmoleukin)、西曲瑞克(cetrorelix)、克拉屈滨(cladribine)、克霉唑(clotrimazole)、阿糖胞苷烷磷酯(cytarabine ocfosfate)、DA3030(Dong-A)、达克珠单抗(daclizumab)、地尼白介素(denileukin diftitox)、地洛瑞林(deslorelin)、右雷佐生(dexrazoxane)、地拉齐普(dilazep)、多西他赛、多可沙诺(docosanol)、度骨化醇(doxercalciferol)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、多柔比星(doxorubicin)、溴麦角环肽(bromocriptine)、卡莫司汀、阿糖胞苷、氟尿嘧啶、HIT双氯芬酸、干扰素α、道诺霉素、多柔比星、维A酸(tretinoin)、依地福新(edelfosine)、依决洛单抗(edrecolomab)、依氟鸟氨酸(eflornithine)、乙嘧替氟(emitefur)、表柔比星(epirubicin)、贝他依伯汀(epoetin beta)、磷酸依托泊苷(etoposide phosphate)、依西美坦(exemestane)、依昔舒林(exisulind)、法屈唑(fadrozole)、非格司亭(filgrastim)、非那雄胺(finasteride)、磷酸氟达拉滨(fludarabine phosphate)、福美坦(formestane)、福莫司汀(fotemustine)、硝酸镓、吉西他宾(gemcitabine)、吉妥珠单抗奥唑米星(gemtuzumab zogamicin)、吉美拉西(gimeracil)/奥特拉西(oteracil)/替加氟(tegafur)组合、glycopine、戈舍瑞林、庚铂(heptaplatin)、人绒毛膜促性腺素、人胎儿甲胎蛋白、伊班膦酸(ibandronic acid)、伊达比星(idarubicin)、咪喹莫特(imiquimod)、干扰素α、天然干扰素α、干扰素α-2、干扰素α-2a、干扰素α-2b、干扰素α-Nl、干扰素α-n3、复合干扰素-1、天然干扰素α、干扰素β、干扰素β-la、干扰素β-lb、干扰素γ、天然干扰素γ-la、干扰素γ-lb)、白细胞介素-1β、碘苄胍(iobenguane)、伊立替康、伊索拉定(irsogladine)、兰瑞肽(lanreotide)、LC 9018(Yakult)、来氟米特(leflunomide)、来格司亭(lenograstim)、硫酸香菇多糖(lentinan sulfate)、来曲唑、白血球α干扰素、亮丙瑞林、左旋咪唑(levamisole)+氟尿嘧啶、利阿唑(liarozole)、洛铂(lobaplatin)、氯尼达明(lonidamine)、洛伐他汀(lovastatin)、马索罗酚(masoprocol)、美拉胂醇(melarsoprol)、甲氧氯普胺(metoclopramide)、米非司酮(mifepristone)、米替福新(miltefosine)、米立司亭(mirimostim)、错配双股RNA、米托胍腙、二溴卫矛醇、米托蒽醌、莫拉司亭(molgramostim)、那法瑞林(nafarelin)、纳洛酮(naloxone)+喷他佐辛(pentazocine)、那托司亭(nartograstim)、奈达铂、尼鲁胺、那可丁(noscapine)、新颖促红细胞生成蛋白、NSC631570奥曲肽(octreotide)、奥普瑞白介素(oprelvekin)、奥沙特隆(osaterone)、奥沙利铂、太平洋紫杉醇、帕米膦酸(pamidronic acid)、培门冬酶(pegaspargase)、聚乙二醇干扰素α-2b、戊聚糖聚硫酸钠(pentosan polysulfate sodium)、喷司他丁、毕西巴尼(picibanil)、比柔比星、兔抗胸腺细胞多株抗体、聚乙二醇干扰素α-2a、卟吩姆钠(porfimer sodium)、雷洛昔芬(raloxifene)、雷替曲赛(raltitrexed)、rasburiembodiment、羟乙膦酸铼Re 186、RII异维A酰胺(retinamide)、利妥昔单抗(rituximab)、罗莫肽(romurtide)、来昔决南钐(153Sm)(samarium lexidronam)、沙格司亭(sargramostim)、西佐喃(sizofiran)、索布佐生(sobuzoxane)、索纳明(sonermin)、氯化锶-89、舒拉明(suramin)、他索那明(tasonermin)、他扎罗汀(tazarotene)、替加氟、替莫泊芬(temoporfin)、替莫唑胺(temozolomide)、替尼泊苷(teniposide)、四氯十氧化物(tetrachlorodecaoxide)、沙立度胺、胸腺法新(thymalfasin)、促甲状腺素α(thyrotropinalfa)、拓扑替康(topotecan)、托瑞米芬(toremifene)、托西莫单抗-碘131(tositumomab-iodine 131)、曲妥珠单抗、曲奥舒凡(treosulfan)、维A酸、曲洛司坦(trilostane)、三甲曲沙(trimetrexate)、曲普瑞林(triptorelin)、天然肿瘤坏死因子α、乌苯美司、膀胱癌疫苗、Maruyama疫苗、黑色素瘤溶解产物疫苗、戊柔比星(valrubicin)、维替泊芬(verteporfin)、长春瑞宾、维鲁利秦(virulizin)、净司他丁斯酯(zinostatin stimalamer)或唑来膦酸；阿倍瑞克(abarelix)；AE 941(Aeterna)、胺莫司汀(ambamustine)、反义寡核苷酸、bcl-2(Genta)、APC 8015(Dendreon)、地西他滨(decitabine)、去氨基格鲁米特(dexaminoglutethimide)、地吖醌(diaziquone)、EL 532(Elan)、EM 800(Endorecherche)、恩尿嘧啶(eniluracil)、依他硝唑(etanidazole)、芬维A胺(fenretinide)、非格司亭(filgrastim)SD01(Amgen)、氟维司群(fulvestrant)、加洛他滨(galocitabine)、胃泌素17免疫原、HLA-B7基因疗法(Vical)、颗粒球巨噬细胞群落刺激因子(granulocytemacrophage colony stimulating factor)、组织胺二盐酸盐、替伊莫单抗(ibritumomabtiuxetan)、伊洛马司他(ilomastat)、IM 862(Cytran)、白细胞介素-2、伊普昔芬(iproxifene)、LDI 200(Milkhaus)、勒瑞斯亭(leridistim)、林妥珠单抗(lintuzumab)、CA125MAb(Biomira)、癌症MAb(Japan Pharmaceutical Development)、HER-2及Fc MAb(Medarex)、独特型105AD7 MAb(CRC Technology)、独特型CEA MAb(Trilex)、LYM-1-碘131MAb(Techni clone)、多形性上皮黏蛋白-钇90MAb(Antisoma)、马立马斯他(marimastat)、美诺立尔(menogaril)、米妥莫单抗(mitumomab)、莫特沙芬钆(motexafingadolinium)、MX 6(Galderma)、奈拉滨(nelarabine)、诺拉曲塞(nolatrexed)、P 30蛋白、培维索孟(pegvisomant)、培美曲塞(pemetrexed)、泊非霉素(porfiromycin)、普啉司他(prinomastat)、RL 0903(Shire)、鲁比特康(rubitecan)、赛特铂(satraplatin)、苯乙酸钠、斯帕福斯酸(sparfosic acid)、SRL 172(SRPharma)、SU 5416(SUGEN)、TA 077(Tanabe)、四硫代钼酸盐、塞班斯汀(thaliblastine)、血小板生成素、锡乙基初红紫素(tinethyletiopurpurin)、替拉扎明(tirapazamine)、癌症疫苗(Biomira)、黑色素瘤疫苗(NewYork University)、黑色素瘤疫苗(Sloan Kettering Institute)、黑色素瘤肿瘤溶解产物疫苗(New York Medical College)、病毒黑色素瘤细胞溶解产物疫苗(Royal NewcastleHospital)或戊司泊达(valspodar)。
可与本发明化合物组合使用的治疗剂的额外实例包括伊匹单抗曲美目单抗；加利昔单抗(galiximab)；纳武单抗(nivolumab)，又称为BMS-936558派姆单抗阿维鲁单抗AMP224；BMS-936559；MPDL3280A，又称为RG7446；MEDI-570；AMG557；MGA271；IMP321；BMS-663513；PF-05082566；CDX-1127；抗OX40(Providence Health Services)；huMAbOX40L；阿特昔普(atacicept)；CP-870893；鲁卡木单抗(lucatumumab)；达西珠单抗(dacetuzumab)；莫罗单抗(muromonab)-CD3；易普木单抗(ipilumumab)；MEDI4736MSB0010718C；AMP224；阿达木单抗(adalimumab)ado-曲妥珠单抗美坦新(ado-trastuzumabemtansine)阿柏西普(aflibercept)阿仑单抗(alemtuzumab)巴利昔单抗(basiliximab)贝利木单抗(belimumab)巴利昔单抗(basiliximab)贝利木单抗维布妥昔单抗(brentuximab vedotin)卡那津单抗(canakinumab)聚乙二醇结合赛妥珠单抗(certolizumab pegol)达克珠单抗达雷木单抗(daratumumab)地诺单抗(denosumab)依库珠单抗(eculizumab)依法利珠单抗(efalizumab)吉妥珠单抗奥唑米星(gemtuzumab ozogamicin)戈利木单抗(golimumab)替伊莫单抗(ibritumomab tiuxetan)英夫利昔单抗(infliximab)莫维珠单抗(motavizumab)那他株单抗(natalizumab)奥滨尤妥珠单抗(obinutuzumab)奥法木单抗(ofatumumab)奥马珠单抗(omalizumab)帕利珠单抗(palivizumab)帕妥珠单抗(pertuzumab)帕妥珠单抗兰尼单抗(ranibizumab)瑞西巴库单抗(raxibacumab)托珠单抗(tocilizumab)托西莫单抗(tositumomab)；托西莫单抗-i-131；托西莫单抗及托西莫单抗-i-131优特克单抗(ustekinumab)AMG 102；AMG 386；AMG 479；AMG 655；AMG 706；AMG745；及AMG 951。
取决于所治疗的疾患，本文所描述的化合物可与本文所公开的药剂或其它适合药剂组合使用。因此，在一些实施方案中，本发明的一种或多种化合物将与本文所描述的其它疗法共同施用。当用于组合疗法中时，本文所描述的化合物可与第二药剂同时或分开施用。此组合施用可包括以同一剂型同时施用两种药剂、以独立剂型同时施用及分开施用。也就是说，本文所描述的化合物与本文所描述的任何药剂可一起配制成相同剂型并同时施用。或者，本发明化合物与本文所描述的任何疗法可同时施用，其中两种药剂是存在于独立配制物中。在另一个替代方案中，本发明的化合物可先施用，随后施用本文所描述的任何疗法，或反之亦然。在分开施用方案的一些实施方案中，本发明化合物与本文所描述的任何疗法是间隔数分钟或间隔数小时或间隔数天施用。
在本文所描述的任何方法的一些实施方案中，第一疗法(例如本发明化合物)和一种或多种额外疗法是同时施用或以任一次序依序地施用。第一治疗剂可在施用所述一种或多种额外疗法之前或之后立即、至多1小时、至多2小时、至多3小时、至多4小时、至多5小时、至多6小时、至多7小时、至多8小时、至多9小时、至多10小时、至多11小时、至多12小时、至多13小时、14小时、至多16小时、至多17小时、至多18小时、至多19小时、至多20小时、至多21小时、至多22小时、至多23小时、至多24小时或至多1-7天、1-14天、1-21天或1-30天施用。
本发明的特征还在于试剂盒，该试剂盒包括(a)包括本文所描述的药剂(例如本发明化合物)的药物组合物以及(b)带有关于执行本文所描述的任何方法的说明的包装插页。在一些实施方案中，试剂盒包括(a)包括本文所描述的药剂(例如本发明化合物)的药物组合物、(b)一种或多种额外疗法(例如非药物治疗或治疗剂)以及(c)带有关于执行本文所描述的任何方法的说明的包装插页。
由于本发明的一个方面涵盖用可分开施用的药物活性化合物的组合治疗疾病或其相关症状，故本发明另外涉及以试剂盒形式组合独立药物组合物。所述试剂盒可包含两种独立药物组合物：本发明化合物和一种或多种额外疗法。所述试剂盒可包含用于容纳所述独立组合物的容器，如分装瓶或分装箔包装。容器的额外实例包括注射器、盒和袋。在一些实施方案中，所述试剂盒可包含关于独立组分的使用的指导。当所述独立组分优选地以不同剂型施用(例如口服或肠胃外施用)、以不同剂量间隔施用时，或当处方健康护理人员希望调定该组合中的个别组分时，试剂盒形式是特别有利的。
编号的实施方案
1.一种化合物或其药学上可接受的盐，具有式I的结构：
其中A是任选被取代的3至6元亚杂环烷基、任选被取代的3至6元亚环烷基、任选被取代的6元亚芳基或任选被取代的5至10元亚杂芳基；
X1、X2和X3各自独立地选自CH2、CHF、CF2、C＝O或O；
m是1或2；
n是0或1；
R1是氢、任选被取代的C1-C6杂烷基或任选被取代的3至10元杂环烷基；
R2是任选被取代的C1-C6烷基；并且
R3是任选被取代的C1-C6烷基、任选被取代的C1-C6杂烷基、任选被取代的3至6元环烷基或任选被取代的杂环烷基，
并且其中每个氢独立地任选富集同位素氘。
2.一种化合物或其药学上可接受的盐，具有式I的结构：
其中A是任选被取代的3至6元亚杂环烷基、任选被取代的3至6元亚环烷基、任选被取代的6元亚芳基或任选被取代的5至10元亚杂芳基；
X1、X2和X3各自独立地选自CH2、CF2、C＝O或O；
m是1或2；
n是0或1；
R1是氢、任选被取代的C1-C6杂烷基或任选被取代的3至10元杂环烷基；
R2是任选被取代的C1-C6烷基；并且
R3是任选被取代的C1-C6烷基、任选被取代的3至6元环烷基或任选被取代的杂环烷基，
并且其中每个氢独立地任选富集同位素氘。
3.如实施方案1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐，具有式Ia、式Ib或式Ic中任一者的结构：
其中每个D指示氘的同位素富集因子是至少5的氢。
4.如实施方案1至3中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1是氢或任选被取代的3至10元杂环烷基。
5.如实施方案1至4中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1是任选被取代的3至10元杂环烷基。
6.如实施方案5所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1是：
7.如实施方案5所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1是：并且其中每个D指示氘的同位素富集因子是至少5的氢。
8.如实施方案1至7中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中m是1。
9.如实施方案1至8中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中n是1。
10.如实施方案1至9中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中X1、X2和X3各自是CH2。
11.如实施方案1所述的化合物或其药学上可接受的盐，具有式II的结构：
12.如实施方案1所述的化合物或其药学上可接受的盐，具有式V的结构：
13.如实施方案12所述的化合物或其药学上可接受的盐，具有式Va、式Vb或式Vc中任一者的结构：
其中每个D指示氘的同位素富集因子是至少5的氢。
14.如实施方案12所述的化合物或其药学上可接受的盐，具有式Vd、式Ve或式Vf中任一者的结构：
其中每个D指示氘的同位素富集因子是至少5的氢。
15.如实施方案1所述的化合物或其药学上可接受的盐，具有式VI的结构：
16.如实施方案1所述的化合物或其药学上可接受的盐，具有式VII的结构：
17.如实施方案1至16中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中A是任选被取代的噻唑-二基、任选被取代的噁唑-二基、任选被取代的吗啉-二基、任选被取代的吡咯烷-二基、任选被取代的哌啶-二基或任选被取代的亚苯基。
18.如实施方案17所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中A是任选被取代的噻唑-二基或任选被取代的吗啉-二基。
19.如实施方案1至16中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中A是任选被取代的5至10元亚杂芳基。
20.如实施方案19所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中A是：
21.如实施方案20所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中A是：
22.如实施方案1至16中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中A是任选被取代的亚苯基。
23.如实施方案22所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中A是：
24.如实施方案23所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中A是：
25.如实施方案1至16中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中A是任选被取代的3至6元亚杂环烷基。
26.如实施方案25所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中A是任选被取代的6元亚杂环烷基。
27.如实施方案25所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中A选自以下各物或其立体异构体：
28.如实施方案26所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中A选自以下各物或其立体异构体：
29.如实施方案1至28中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2是：
30.如实施方案1至28中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2是：并且其中每个D指示氘的同位素富集因子是至少5的氢。
31.如实施方案1至30中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3是任选被取代的C1-C6烷基或任选被取代的3至6元环烷基。
32.如实施方案1至31中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3是任选被取代的C1-C6烷基。
33.如实施方案32所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3是：
34.如实施方案33所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3是：
35.如实施方案32所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3是：并且其中每个D指示氘的同位素富集因子是至少5的氢。
36.如实施方案1至31中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3是或任选被取代的3至6元环烷基。
37.如实施方案36所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3是：
38.如实施方案36所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3是或任选被取代的5元环烷基。
39.如实施方案38所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3是：
40.如实施方案11至16中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：
R2是
R3是并且
A是
41.如实施方案11至16中任一项所述的化合物，其中：
R2是
R3是并且
A是
42.如实施方案1至41中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物不是表3的化合物。
43.一种化合物或其药学上可接受的盐，具有表1或表2的化合物的结构。
44.一种药物组合物，包含实施方案1至43中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，和药学上可接受的赋形剂。
45.一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的实施方案1至43中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，或实施方案44所述的药物组合物。
46.如实施方案45所述的方法，其中所述癌症是胰腺癌、非小细胞肺癌、结肠直肠癌或子宫内膜癌。
47.如实施方案45或46所述的方法，其中所述癌症包含Ras突变。
48.如实施方案47所述的方法，其中所述Ras突变是K-Ras G12D或K-Ras G13D。
49.一种治疗有需要的受试者的Ras蛋白相关病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的实施方案1至43中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，或实施方案44所述的药物组合物。
50.一种抑制细胞中的Ras蛋白的方法，所述方法包括使所述细胞与有效量的实施方案1至43中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，或实施方案44所述的药物组合物接触。
51.如实施方案49或50所述的方法，其中所述Ras蛋白是K-Ras G12D或K-RasG13D。
52.如实施方案50或51所述的方法，其中所述细胞是癌细胞。
53.如实施方案52所述的方法，其中所述癌细胞是胰腺癌细胞、非小细胞肺癌细胞、结肠直肠癌细胞或子宫内膜细胞。
54.如实施方案45至53中任一项所述的方法或用途，其中所述方法还包括施用额外抗癌疗法。
55.如实施方案54所述的方法，其中所述额外抗癌疗法是EGFR抑制剂、第二Ras抑制剂、SHP2抑制剂、SOS1抑制剂、Raf抑制剂、MEK抑制剂、ERK抑制剂、PI3K抑制剂、PTEN抑制剂、AKT抑制剂、mTORC1抑制剂、BRAF抑制剂、PD-L1抑制剂、PD-1抑制剂、CDK4/6抑制剂、HER2抑制剂或其组合。
56.如实施方案54或55所述的方法，其中所述额外抗癌疗法是SHP2抑制剂。
57.一种缀合物或其盐，包含式III的结构：
M-P1
式III
其中P1是单价有机部分；并且
M具有式IV的结构：
其中A是任选被取代的3至6元亚杂环烷基、任选被取代的3至6元亚环烷基、任选被取代的6元亚芳基或任选被取代的5至10元亚杂芳基；
X1、X2和X3各自独立地选自CH2、CHF、CF2、C＝O或O；
m是1或2；
n是0或1；
R1是氢、任选被取代的C1-C6杂烷基或任选被取代的3至10元杂环烷基；
R2是任选被取代的C1-C6烷基；并且
R3是任选被取代的C1-C6烷基、任选被取代的3至6元环烷基、任选被取代的C1-C6杂烷基或任选被取代的杂环烷基，
并且其中式IV的每个氢独立地任选富集同位素氘。
58.如实施方案57所述的缀合物或其盐，其中A是任选被取代的噻唑-二基、任选被取代的噁唑-二基、任选被取代的吗啉-二基、任选被取代的吡咯烷-二基、任选被取代的哌啶-二基或任选被取代的亚苯基。
59.如实施方案57或58所述的缀合物或其盐，其中R1是：
60.如实施方案57至59中任一项所述的缀合物或其盐，其中m是1、n是1，并且X1、X2和X3各自是CH2。
61.如实施方案57至60中任一项所述的缀合物或其盐，其中所述单价有机部分是蛋白质。
62.如实施方案61所述的缀合物或其盐，其中所述蛋白质是Ras蛋白。
63.如实施方案62所述的缀合物或其盐，其中所述Ras蛋白是K-Ras G12D或K-RasG13D。
64.如实施方案57至63中任一项所述的缀合物，其中M结合至所述单价有机部分的氨基酸残基。
实施例
本发明将通过以下实施例和合成实施例进一步说明，所述实施例不应解释为将本发明的范围或精神限制于本文所描述的特定程序。应了解，提供的实施例旨在说明某些实施方案且不打算由此限制本发明的范围。还应了解，也可在不脱离本发明的精神或所附权利要求书的范围的情况下，诉诸于本领域技术人员可想到的各种其它实施方案、其修改和等效物。
化学合成
以下实施例和本文中别处中使用的定义如下：
CH2Cl2，DCM 亚甲基氯，二氯甲烷
CH3CN，MeCN 乙腈
CuI 碘化铜(I)
DIPEA 二异丙基乙胺
DMF N,N-二甲基甲酰胺
EtOAc 乙酸乙酯
h 小时
H2O 水
HCl 盐酸
K3PO4 磷酸钾(三碱式)
MeOH 甲醇
Na2SO4 硫酸钠
NMP N-甲基吡咯烷酮
Pd(dppf)Cl2 [1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)
合成中间体
中间体1：合成3-(5-溴-1-乙基-2-[2-[(1S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙-1-醇
步骤1：合成1-(5-溴-1H-吲哚-3-基)-3-((叔丁基二苯基硅烷基)氧基)-2,2-二甲基丙-1-酮
在N2气氛下，在0℃下向3-((叔丁基二苯基硅烷基)氧基)-2,2-二甲基丙酰氯(65g，137mmol，粗品)于DCM(120mL)中的混合物中缓慢添加1M SnCl4的DCM溶液(137mL，137mmol)。在0℃下将混合物搅拌30分钟，接着逐滴添加5-溴-1H-吲哚(26.8g，137mmol)于DCM(40mL)中的溶液。在0℃下将混合物搅拌45分钟，接着用EtOAc(300mL)稀释，用盐水(4×100mL)洗涤，经Na2SO4干燥并过滤。减压浓缩滤液，并将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，得到产物(55g，75％产率)。LCMS(ESI)C29H32BrNO2SiNa的m/z[M+Na]计算值556.1；实验值：556.3。
步骤2：合成1-(5-溴-1H-吲哚-3-基)-3-((叔丁基二苯基硅烷基)氧基)-2,2-二甲基丙-1-酮
在N2气氛下，在0℃下向1-(5-溴-1H-吲哚-3-基)-3-((叔丁基二苯基硅烷基)氧基)-2,2-二甲基丙-1-酮(50g，93.6mmol)于THF(100mL)中的混合物中添加LiBH4(6.1g，281mmol)。将混合物加热至60℃并搅拌20小时，接着添加MeOH(10mL)和EtOAc(100mL)，并将混合物用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩滤液。将残余物用DCM(50mL)稀释，冷却至10℃并添加二氢吡啶(9.5g，37.4mmol)和TsOH·H2O(890mg，4.7mmol)。在10℃下将混合物搅拌2小时，过滤，减压浓缩滤液，并将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，得到产物(41g，84％产率)。LCMS(ESI)C29H34BrNOSi的m/z[M+H]计算值：519.2；实验值：520.1。
步骤3：合成5-溴-3-(3-((叔丁基二苯基硅烷基)氧基)-2,2-二甲基丙基)-2-碘-1H-吲哚
在室温下，向1-(5-溴-1H-吲哚-3-基)-3-((叔丁基二苯基硅烷基)氧基)-2,2-二甲基丙-1-酮(1.5g，2.9mmol)和I2(731mg，2.9mmol)于THF(15mL)中的混合物中添加AgOTf(888mg，3.5mmol)。在室温下将混合物搅拌2小时，接着用EtOAc(200mL)稀释并用饱和Na2S2O3水溶液(100mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥并过滤。减压浓缩滤液，并将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，得到呈固体状的产物(900mg，72％产率)。
步骤4：合成(1S)-1-(3-溴吡啶-2-基)乙醇
在Ar气氛下，在0℃下向HCO2H(66.3g，1.44mol)于Et3N(728mL，7.2mol)中的搅拌的混合物中逐份添加(4S,5S)-2-氯-2-甲基-1-(4-甲基苯磺酰基)-4,5-二苯基-1,3-二氮杂-2-钌环戊烷异丙基甲苯(3.9g，6.0mmol)。将混合物加热至40℃并搅拌15分钟，接着冷却至室温并分数份添加1-(3-溴吡啶-2-基)乙酮(120g，600mmol)。将混合物加热至40℃并再搅拌2小时，接着减压浓缩溶剂。将盐水(2L)添加至残余物中，将混合物用EtOAc(4×700mL)萃取，经无水Na2SO4干燥并过滤。减压浓缩滤液，并将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，得到呈油状的产物(100g，74％产率)。LCMS(ESI)C7H8BrNO的m/z[M+H]计算值：201.98；实验值：201.9。
步骤5：合成3-溴-2-[(1S)-1-甲氧基乙基]吡啶
在0℃下，向(1S)-1-(3-溴吡啶-2-基)乙醇(100g，495mmol)于DMF(1L)中的搅拌的混合物中分数份添加NaH于油中的60％分散液(14.25g，594mmol)。在0℃下将混合物搅拌1小时。在0℃下逐滴添加MeI(140.5g，990mmol)，并使混合物升温至室温，并搅拌2小时。将混合物冷却至0℃并添加饱和NH4Cl水溶液(5L)。将混合物用EtOAc(3×1.5L)萃取，经无水Na2SO4干燥并过滤。减压浓缩滤液，并将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，得到呈油状的产物(90g，75％产率)。LCMS(ESI)C8H10BrNO的m/z[M+H]计算值：215.99；实验值：215.9。
步骤6：合成2-[(1S)-1-甲氧基乙基]-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶
在Ar气氛下，在室温下向3-溴-2-[(1S)-1-甲氧基乙基]吡啶(90g，417mmol)于甲苯(900mL)中的搅拌的混合物中添加双(频哪醇)二硼(127g，500mmol)、KOAc(81.8g，833mmol)和Pd(dppf)Cl2(30.5g，41.7mmol)。将混合物加热至100℃并搅拌3小时。减压浓缩滤液，并将残余物通过Al2O3柱色谱法纯化，得到呈半固体状的产物(100g，63％产率)。LCMS(ESI)C14H22BNO3的m/z[M+H]计算值：264.17；实验值：264.1。
步骤7：合成5-溴-3-[3-[(叔丁基二苯基硅烷基)氧基]-2,2-二甲基丙基]-2-[2-[(1S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]-1H-吲哚
在Ar气氛下，在室温下向5-溴-3-[3-[(叔丁基二苯基硅烷基)氧基]-2,2-二甲基丙基]-2-碘-1H-吲哚(140g，217mmol)和2-[(1S)-1-甲氧基乙基]-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶(100g，380mmol)于二噁烷(1.4L)中的搅拌的混合物中分数份添加K2CO3(74.8g，541mmol)、Pd(dppf)Cl2(15.9g，21.7mmol)和H2O(280mL)。将混合物加热至85℃并搅拌4小时，接着添加冷H2O(5L)并用EtOAc(3×2L)萃取混合物。将合并的有机层用盐水(2×1L)洗涤，经无水Na2SO4干燥并过滤。减压浓缩滤液，并将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，得到呈固体状的产物(71g，45％产率)。LCMS(ESI)C37H43BrN2O2Si的m/z[M+H]计算值：655.23；实验值：655.1。
步骤8：合成5-溴-3-[3-[(叔丁基二苯基硅烷基)氧基]-2,2-二甲基丙基]-1-乙基-2-[2-[(1S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]吲哚
在N2气氛下，在0℃下向5-溴-3-[3-[(叔丁基二苯基硅烷基)氧基]-2,2-二甲基丙基]-2-[2-[(1S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]-1H-吲哚(71g，108mmol)于DMF(0.8L)中的搅拌的混合物中分数份添加Cs2CO3(70.6g，217mmol)和EtI(33.8g，217mmol)。将混合物升温至室温并搅拌16小时，接着添加H2O(4L)并将混合物用EtOAc(3×1.5L)萃取。将合并的有机层用盐水(2×1L)洗涤，经无水Na2SO4干燥并过滤。减压浓缩滤液，并将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，得到呈油状的产物(66g，80％产率)。LCMS(ESI)C39H47BrN2O2Si的m/z[M+H]计算值：683.26；实验值：683.3。
步骤9：合成3-(5-溴-1-乙基-2-[2-[(1S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙-1-醇
在N2气氛下，在室温下向TBAF(172.6g，660mmol)于THF(660mL)中的搅拌的混合物中分数份添加5-溴-3-[3-[(叔丁基二苯基硅烷基)氧基]-2,2-二甲基丙基]-1-乙基-2-[2-[(1S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]吲哚(66g，97mmol)。将混合物加热至50℃并搅拌16小时，冷却，用H2O(5L)稀释并用EtOAc(3×1.5L)萃取。将合并的有机层用盐水(2×1L)洗涤，经无水Na2SO4干燥并过滤。过滤后，减压浓缩滤液，并将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，得到呈固体状的产物(30g，62％产率)。LCMS(ESI)C23H29BrN2O2的m/z[M+H]计算值：445.14；实验值：445.1。
中间体2：经由费舍尔吲哚途径(Fisher Indole Route)进行的替代合成。
步骤1：合成5-[2-[(1S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]-2,2-二甲基-5-氧代戊酸
在N2气氛下，在-10℃下经15分钟向i-PrMgCl的混合物(2M的THF溶液，0.5L)中逐滴添加2.5M n-BuLi的己烷溶液(333mL，833mmol)。在-10℃下将混合物搅拌30分钟，接着在-10℃下，经30分钟逐滴添加于THF(0.5L)中的3-溴-2-[(1S)-1-甲氧基乙基]吡啶(180g，833mmol)。将所得混合物升温至-5℃并搅拌1小时，接着在-5℃下，经30分钟逐滴添加于THF(1.2L)中的3,3-二甲基噁烷-2,6-二酮(118g，833mmol)。将混合物升温至0℃并搅拌1.5小时，接着在0℃下，通过添加预先冷却的4M HCl的二噁烷溶液(0.6L)将pH值调至约5来淬灭。在0℃下，将混合物用H2O(3L)稀释并用EtOAc(3×2.5L)萃取。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩滤液，并将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，得到呈固体状的产物(87g，34％产率)。LCMS(ESI)C15H21NO4的m/z[M+H]计算值：280.15；实验值：280.1。
步骤2：合成3-(5-溴-2-[2-[(1S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酸及(S)-3-(5-溴-2-(2-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酸乙酯
在N2气氛下，在室温下向5-[2-[(1S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]-2,2-二甲基-5-氧代戊酸(78g，279mmol)于EtOH(0.78L)中的混合物中分数份添加(4-溴苯基)肼盐酸盐(68.7g，307mmol)。将混合物加热至85℃并搅拌2小时，冷却至室温，接着逐滴添加4M HCl的二噁烷溶液(69.8mL，279mmol)。将混合物加热至85℃并再搅拌3小时，接着减压浓缩并将残余物溶解于TFA(0.78L)中。将混合物加热至60℃并搅拌1.5小时，减压浓缩并用饱和NaHCO3水溶液将残余物调至约pH 5，接着用EtOAc(3×1.5L)萃取。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩滤液，并将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，得到产物(78g，粗品)。LCMS(ESI)C21H23BrN2O3的m/z[M+H]计算值：430.1且C23H27BrN2O3的m/z[M+H]计算值：459.12；实验值：431.1(羧酸)和459.1。
步骤3：合成3-(5-溴-1-乙基-2-[2-[(1S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酸乙酯
在N2气氛下，在0℃下向3-(5-溴-2-[2-[(1S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酸和(S)-3-(5-溴-2-(2-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酸乙酯(198g，459mmol)于DMF(1.8L)中的混合物中分数份添加Cs2CO3(449g，1.38mol)。接着，在0℃下逐滴添加于DMF(200mL)中的EtI(215g，1.38mmol)。将混合物升温至室温并搅拌4小时，接着用盐水(5L)稀释并用EtOAc(3×2.5L)萃取。将合并的有机层用盐水(2×1.5L)洗涤，经无水Na2SO4干燥并过滤。减压浓缩滤液，并将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，得到呈固体状的产物(160g，57％产率)。LCMS(ESI)C25H31BrN2O3的m/z[M+H]计算值：487.17；实验值：487.2。
步骤4：合成3-(5-溴-1-乙基-2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙-1-醇
在N2气氛下，在0℃下向3-(5-溴-1-乙基-2-[2-[(1S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酸乙酯(160g，328mmol)于THF(1.6L)中的混合物中添加LiBH4(28.6g，1.3mol)。将混合物加热至60℃，保持16小时，冷却，并用预先冷却(0℃)的饱和NH4Cl水溶液(5L)淬灭。将混合物用EtOAc(3×2L)萃取，并将合并的有机层用盐水(2×1L)洗涤，经无水Na2SO4干燥并过滤。减压浓缩滤液，并将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，得到呈固体状的3-(5-溴-1-乙基-2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙-1-醇的两种阻转异构体(呈单一阻转异构体形式)(60g，38％产率)和(40g，26％产率)。LCMS(ESI)m/z：C23H29BrN2O2的[M+H]计算值：445.14；实验值445.2。
中间体3：合成(63S,4S)-4-氨基-11-乙基-12-(2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-5,7-二酮
步骤1：合成(S)-3-(3-溴苯基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸甲酯
在室温下，向(2S)-3-(3-溴苯基)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]丙酸(100g，290mmol)于DMF(1L)中的溶液中添加NaHCO3(48.8g，581.1mmol)和MeI(61.9g，435.8mmol)。将反应混合物搅拌16小时，接着用H2O(1L)淬灭并用EtOAc(3×1L)萃取。将合并的有机层用盐水(3×500mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(13％EtOAc/石油醚)纯化，得到终产物(109g，粗品)。LCMS(ESI)C15H20BrNO4的m/z[M+Na]计算值380.05；实验值：380.0。
步骤2：合成(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)丙酸甲酯
向(2S)-3-(3-溴苯基)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]丙酸甲酯(108g，301.5mmol)和双(频哪醇)二硼(99.53g，391.93mmol)于二噁烷(3.2L)中的搅拌的溶液中添加KOAc(73.97g，753.70mmol)和Pd(dppf)Cl2(22.06g，30.15mmol)。将反应混合物加热至90℃，保持3小时，接着冷却至室温并用EtOAc(2×3L)萃取。将合并的有机层用盐水(3×800mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(5％EtOAc/石油醚)纯化，得到产物(96g，78.6％产率)。LCMS(ESI)C21H32BNO6的m/z[M+Na]计算值428.22；实验值：428.1。
步骤3：合成(S)-3-(3-(3-(3-乙酰氧基-2,2-二甲基丙基)-1H-吲哚-5-基)苯基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸甲酯
向(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-[3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]丙酸甲酯(94g，231.9mmol)和乙酸3-(5-溴-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯(75.19g，231.93mmol)于二噁烷(1.5L)和H2O(300mL)中的混合物中添加K2CO3(64.11g，463.85mmol)和Pd(DtBPF)Cl2(15.12g，23.19mmol)。将反应混合物加热至70℃并搅拌4小时。将反应混合物用EtOAc(2×2L)萃取并将合并的有机层用盐水(3×600mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(20％EtOAc/石油醚)纯化，得到产物(130g，粗品)。LCMS(ESI)C30H38N2O6的m/z[M+H]计算值523.28；实验值：523.1。
步骤4：合成(S)-3-(3-(3-(3-乙酰氧基-2,2-二甲基丙基)-2-碘-1H-吲哚-5-基)苯基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸甲酯
在-10℃下，向(2S)-3-(3-[3-[3-(乙酰基氧基)-2,2-二甲基丙基]-1H-吲哚-5-基]苯基)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]丙酸甲酯(95.0g，181.8mmol)和碘(36.91g，145.41mmol)于THF(1L)中的溶液中添加AgOTf(70.0g，272.7mmol)和NaHCO3(22.9g，272.65mmol)。将反应混合物搅拌30分钟，接着通过在0℃下添加Na2S2O3饱和水溶液(100mL)淬灭。将所得到的混合物用EtOAc(3×1L)萃取并将合并的有机层用盐水(3×500mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(50％EtOAc/石油醚)纯化，得到所需产物(49.3g，41.8％产率)。LCMS(ESI)C30H37IN2O6的m/z[M+H]计算值：649.18；实验值：649.1。
步骤5：合成(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3-(3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-2-碘-1H-吲哚-5-基)苯基)丙酸
向(2S)-3-(3-[3-[3-(乙酰基氧基)-2,2-二甲基丙基]-2-碘-1H-吲哚-5-基]苯基)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]丙酸甲酯(60g，92.5mmol)于THF(600mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(19.41g，462.5mmol)于H2O(460mL)中的溶液。将所得到的溶液搅拌过夜，接着用HCl(1M)将pH值调至6。将所得到的溶液用EtOAc(2×500mL)萃取并将合并的有机层用盐水(2×500mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到产物(45g，82.1％产率)。LCMS(ESI)C27H33IN2O6的m/z[M+Na]计算值615.13；实验值：615.1。
步骤6：合成(S)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3-(3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-2-碘-1H-吲哚-5-基)苯基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯
向(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-[3-[3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-2-碘-1H-吲哚-5-基]苯基]丙酸(30g，50.6mmol)和(3S)-1,2-二氮杂环己烷-3-甲酸甲酯(10.9g，75.9mmol)于DCM(400mL)中的溶液中添加NMM(40.97g，405.08mmol)、HOBt(2.05g，15.19mmol)和EDCI(19.41g，101.27mmol)。将反应混合物搅拌过夜，接着将混合物用NH4Cl饱和水溶液(2×200mL)和盐水(2×200mL)洗涤，并将混合物经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到产物(14g，38.5％产率)。LCMS(ESI)C33H43IN4O6的m/z[M+H]计算值718.23；实验值：719.4。
步骤7：合成(S)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3-(3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-2-碘-1H-吲哚-5-基)苯基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸
在0℃下，向(S)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3-(3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-2-碘-1H-吲哚-5-基)苯基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯(92g，128.0mmol)于THF(920mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(26.86g，640.10mmol)于H2O(640mL)中的溶液。将反应混合物搅拌2小时，接着减压浓缩，得到产物(90g，粗品)。LCMS(ESI)C32H41IN4O6的m/z[M+H]计算值705.22；实验值：705.1。
步骤8：合成((63S,4S)-12-碘-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸叔丁酯
在0℃下，向(3S)-1-[(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-[3-[3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-2-碘-1H-吲哚-5-基]苯基]丙酰基]-1,2-二氮杂环己烷-3-甲酸(90g，127.73mmol)于DCM(10L)中的溶液中添加HOBt(34.52g，255.46mmol)、DIPEA(330.17g，2554.62mmol)和EDCI(367.29g，1915.96mmol)。将反应混合物搅拌16小时，接着减压浓缩。将混合物用DCM(2×2L)萃取并将合并的有机层用盐水(3×1L)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(50％EtOAc/石油醚)纯化，得到产物(70g，79.8％产率)。LCMS(ESI)C32H39IN4O5的m/z[M+H]计算值687.21；实验值：687.1。
步骤9：合成((63S,4S)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-12-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸叔丁酯
在室温下，向1L圆底烧瓶中装入((63S,4S)-12-碘-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸叔丁酯(22.0g，32.042mmol)、甲苯(300.0mL)、Pd2(dba)3(3.52g，3.845mmol)、S-Phos(3.95g，9.613mmol)和KOAc(9.43g，96.127mmol)。在搅拌下，在室温下向混合物中逐滴添加4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(26.66g，208.275mmol)。在60℃下，将所得到的溶液搅拌3小时。将所得到的混合物过滤，并将滤饼用EtOAc洗涤。将滤液减压浓缩并将剩余残余物通过硅胶柱色谱法纯化，得到呈固体状的产物(22g，90％产率)。LCMS(ESI)C38H51BN4O7的m/z[M+H]计算值687.3；实验值：687.4。
步骤10：合成((63S,4S)-12-(2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸叔丁酯
在N2气氛下，将((63S,4S)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-12-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸叔丁酯(2.0g，2.8mmol)、3-溴-2-[(1S)-1-甲氧基乙基]吡啶(0.60g，2.8mmol)、Pd(dppf)Cl2(0.39g，0.5mmol)和K3PO4(1.2g，6.0mmol)于二噁烷(50mL)和H2O(10mL)中的混合物加热至70℃并搅拌2小时。将混合物用H2O(50mL)稀释并用EtOAc(3×50mL)萃取。将合并的有机层用盐水(3×50mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，并过滤。将滤液减压浓缩并将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，得到呈固体状的产物(1.5g，74％产率)。LCMS(ESI)C40H49N5O6的m/z[M+H]计算值695.4；实验值：696.5。
步骤11：合成((63S,4S)-11-乙基-12-(2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸叔丁酯
在0℃下，向((63S,4S)-12-(2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸叔丁酯(20g，28.7mmol)和Cs2CO3(18.7g，57.5mmol)于DMF(150mL)中的溶液中添加EtI(13.45g，86.22mmol)于DMF(50mL)中的溶液。在35℃下，将所得到的混合物搅拌过夜，接着用H2O(500mL)稀释。将混合物用EtOAc(2×300mL)萃取并将合并的有机层用盐水(3×100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，得到呈固体状的产物(4.23g，18.8％产率)和阻转异构体(5.78g，25.7％产率)。LCMS(ESI)C42H53N5O6的m/z[M+H]计算值724.4；实验值：724.6。
步骤12：合成(63S,4S)-4-氨基-11-乙基-12-(2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-5,7-二酮
在0℃下，将((63S,4S)-11-乙基-12-(2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸叔丁酯(1.3g，1.7mmol)于TFA(10mL)和DCM(20mL)中的混合物搅拌2小时。将混合物减压浓缩，得到呈固体状的产物(1.30g，粗品)。LCMS(ESI)C37H45N5O4的m/z[M+H]计算值623.3；实验值：624.4。
中间体4：合成((63S,4S,Z)-11-乙基-12-(2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸叔丁酯
步骤1：合成(S)-3-(4-溴噻唑-2-基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸
在室温下，向(2S)-3-(4-溴-1,3-噻唑-2-基)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]丙酸甲酯(110g，301.2mmol)于THF(500mL)和H2O(200mL)中的溶液中添加LiOH(21.64g，903.6mmol)。将所得溶液搅拌1小时，接着减压浓缩。用1M HCl将所得残余物调至pH 6，接着用DCM(3×500mL)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩，得到所需产物(108g，粗品)。LCMS(ESI)C11H15BrN2O4S的m/z[M+H]计算值：351.00；实验值：351.0。
步骤2：合成(S)-1-((S)-3-(4-溴噻唑-2-基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯
在0℃下，向(S)-3-(4-溴噻唑-2-基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸(70g，199.3mmol)于DCM(500mL)中的溶液中添加(3S)-1,2-二氮杂环己烷-3-甲酸甲酯双(三氟乙酸)盐(111.28g，298.96mmol)、NMM(219.12mL.1993.0mmol)、EDCI(76.41g，398.6mmol)和HOBt(5.39g，39.89mmol)。将所得溶液升温至室温并搅拌1小时。接着用H2O(500mL)淬灭反应并用EtOAc(3×500mL)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(0→50％EtOAc/石油醚)纯化，得到所需产物(88.1g，93％产率)。LCMS(ESI)C17H25BrN4O5S的m/z[M+H]计算值：477.08；实验值：477.1。
步骤3：合成(S)-3-(1-乙基-2-(2-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙-1-醇
在室温下，向3-(5-溴-1-乙基-2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙-1-醇(60g，134.7mmol)于甲苯(500mL)中的溶液中添加双(频哪醇)二硼(51.31g，202.1mmol)、Pd(dppf)Cl2(9.86g，13.48mmol)和KOAc(26.44g，269.4mmol)。接着，将反应混合物加热至90℃并搅拌2小时。接着，将反应溶液冷却至室温并减压浓缩。通过硅胶柱色谱法(0→50％EtOAc/石油醚)纯化，得到所需产物(60.6g，94％产率)。LCMS(ESI)C29H41BN2O4的m/z[M+H]计算值：493.32；实验值：493.3。
步骤4：合成(S)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(4-(1-乙基-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-5-基)噻唑-2-基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯
在室温下，向(S)-3-(1-乙基-2-(2-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙-1-醇(30g，60.9mmol)于甲苯(600mL)、二噁烷(200mL)和H2O(200mL)中的溶液中添加(S)-1-((S)-3-(4-溴噻唑-2-基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯(43.62g，91.4mmol)、K3PO4(32.23g，152.3mmol)和Pd(dppf)Cl2(8.91g，12.18mmol)。将所得溶液加热至70℃并搅拌过夜。接着，将反应混合物冷却至室温并用H2O(200mL)淬灭。将所得混合物用EtOAc(3×1000mL)萃取，并将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(0→90％EtOAc/石油醚)纯化，得到所需产物(39.7g，85％产率)。LCMS(ESI)m/z：C40H54N6O7S的[M+H]计算值：763.39；实验值763.3。
步骤5：合成(S)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(4-(1-乙基-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-5-基)噻唑-2-基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸
在室温下，向(S)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(4-(1-乙基-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-5-基)噻唑-2-基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯(39.7g，52.0mmol)于THF(400mL)和H2O(100mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(3.74g，156.2mmol)。将所得混合物搅拌1.5小时，接着减压浓缩。用1M HCl将残余物酸化至pH 6并用DCM(3×1000mL)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩，得到所需产物(37.9g，粗品)。LCMS(ESI)C39H52N6O7S的m/z[M+H]计算值：749.37；实验值：749.4。
步骤6：合成((63S,4S,Z)-11-乙基-12-(2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑-1(5,3)-吲哚-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸叔丁酯
在0℃下，向(S)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(4-(1-乙基-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-5-基)噻唑-2-基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸(37.9g，50.6mmol)、HOBt(34.19g，253.0mmol)和DIPEA(264.4mL，1518mmol)于DCM(4L)中的溶液中添加EDCI(271.63g，1416.9mmol)。将所得混合物升温至室温并搅拌过夜。接着，将反应混合物用H2O淬灭并用1M HCl(4×1L)洗涤。分离有机层并减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(0→70％EtOAc/石油醚)纯化，得到所需产物(30g，81％产率)。LCMS(ESI)C39H50N6O6S的m/z[M+H]计算值：731.36；实验值：731.3。
中间体5：合成(63S)-4-氨基-11-乙基-12-(2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-21,22,23,26,61,62,63,64,65,66-十氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(5,1)-吡啶杂环十一蕃-5,7-二酮
步骤1：合成2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙烯酸甲酯
向(叔丁氧基羰基)-L-丝氨酸甲酯(10g，45mmol)于无水MeCN(150mL)中的溶液中添加DIPEA(17g，137mmol)。在45℃下，将反应混合物搅拌2小时，得到呈溶液形式的产物。LCMS(ESI)C9H15NO4的m/z[M+Na]计算值201.1；实验值：224.1。
步骤2：合成2-(双(叔丁氧基羰基)氨基)丙烯酸甲酯
在0℃下，向2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙烯酸甲酯(12g，60mmol)于无水MeCN(150mL)中的溶液中添加DMAP(13g，90mmol)和(Boc)2O(26g，120mmol)。搅拌反应6小时，接着用H2O(100mL)淬灭并用DCM(3×200mL)萃取。将合并的有机层用盐水(150mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，得到呈固体状的产物(12.5g，65％产率)。LCMS(ESI)C14H23NO6的m/z[M+Na]计算值301.2；实验值：324.1。
步骤3：合成2-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-3-(5-溴-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)丙酸甲酯
在Ar气氛下，向5-溴-1,2,3,6-四氢吡啶(8.0g，49mmol)于MeOH(120mL)中的混合物中添加2-{双[(叔丁氧基)羰基]氨基}丙-2-烯酸甲酯(22g，74mmol)。将混合物搅拌16小时，接着减压浓缩并将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，得到呈油状的产物(12g，47％产率)。LCMS(ESI)C19H31BrN2O6的m/z[M+H]计算值462.1；实验值：463.1。
步骤4：合成3-(5-溴-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸
向2-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-3-(5-溴-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)丙酸甲酯(14g，30mmol)于二噁烷(30mL)和H2O(12mL)中的混合物中添加LiOH(3.6g，151mmol)。将混合物加热至35℃并搅拌12小时，接着添加1M HCl并将pH至调至约3-4。将混合物用DCM(2×300mL)萃取并将合并的有机层经无水Na2SO4干燥并过滤。将滤液减压浓缩，得到呈固体状的产物(10g，85％产率)。LCMS(ESI)C13H21BrN2O4的m/z[M+H]计算值348.1；实验值：349.0。
步骤5：合成(3S)-1-(3-(5-溴-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯
在Ar气氛下，在0℃下向3-(5-溴-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸(10g，30mmol)、DIPEA(12g，93mmol)和(3S)-1,2-二氮杂环己烷-3-甲酸甲酯(5.4g，37mmol)于DMF(100mL)中的混合物中添加HATU(13g，34mmol)。在0℃下，将混合物搅拌2小时，接着添加H2O并将混合物用EtOAc(2×300mL)萃取。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，将滤液减压浓缩并将残余物通过反相色谱法纯化，得到呈固体状的产物(9.0g，55％产率)。LCMS(ESI)C19H31BrN4O5的m/z[M+H]计算值474.1；实验值：475.1。
步骤6：合成(3S)-1-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(5-(1-乙基-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-5-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯
在Ar气氛下，将(3S)-1-(3-(5-溴-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯(9.0g，18mmol)、K2CO3(4.5g，32mmol)、Pd(dppf)Cl2.DCM(1.4g，2mmol)、3-(1-乙基-2-{2-[(1S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基}-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙-1-醇(9.8g，20mmol)于二噁烷(90mL)和H2O(10mL)中的混合物加热至75℃并搅拌2小时。添加H2O并将混合物用EtOAc(3×200mL)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤，将滤液减压浓缩并将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，得到呈固体状的产物(4.0g，25％产率)。LCMS(ESI)C42H60N6O7的m/z[M+H]计算值760.5；实验值：761.4。
步骤7：合成(3S)-1-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(5-(1-乙基-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-5-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸
在0℃下，向(3S)-1-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(5-(1-乙基-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-5-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯(4.1g，5.0mmol)于THF(35mL)中的混合物中添加LiOH(0.60g，27mmol)。在0℃下，将混合物搅拌1.5小时，接着添加1M HCl以将pH值调至约6-7并将混合物用EtOAc(3×200mL)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并将滤液减压浓缩，得到呈固体状的产物(3.6g，80％产率)。LCMS(ESI)C41H58N6O7的m/z[M+H]计算值746.4；实验值：747.4。
步骤8：合成((63S)-11-乙基-12-(2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-21,22,23,26,61,62,63,64,65,66-十氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(5,1)-吡啶杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸叔丁酯
在Ar气氛下，向(3S)-1-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(5-(1-乙基-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-5-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸(3.6g,5.0mmol)和DIPEA(24g，190mmol)于DCM(700mL)中的混合物中添加EDCI●HCl(28g，140mmol)和HOBt(6.5g，50mmol)。将混合物加热至30℃并在30℃下搅拌16小时，接着减压浓缩。将残余物用EtOAc(200mL)稀释并用H2O(2×200mL)、盐水(200mL)洗涤，经Na2SO4干燥并过滤。将滤液减压浓缩并将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，得到呈固体状的产物(1.45g，40％产率)。LCMS(ESI)C41H56N6O6的m/z[M+H]计算值728.4；实验值：729.4。
步骤9：合成(63S)-4-氨基-11-乙基-12-(2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-21,22,23,26,61,62,63,64,65,66-十氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(5,1)-吡啶杂环十一蕃-5,7-二酮
在0℃下，向((63S)-11-乙基-12-(2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-21,22,23,26,61,62,63,64,65,66-十氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(5,1)-吡啶杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸叔丁酯(130mg，0.20mmol)于DCM(1.0mL)中的混合物中添加TFA(0.3mL)。将混合物升温至室温并搅拌2小时，接着减压浓缩，得到产物，将其不经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LCMS(ESI)C36H48N6O4的m/z[M+H]计算值628.4；实验值：629.4。
中间体6：合成(22S,63S,4S)-4-氨基-11-乙基-12-(2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-5,7-二酮
步骤1：合成(2R)-2-甲酰基吗啉-4-基甲酸叔丁酯
在室温下，向(2R)-2-(羟基甲基)吗啉-4-基甲酸叔丁酯(50g，230mmol)于EtOAc(1L)中的溶液中添加TEMPO(715mg，4.6mmol)和NaHCO3(58g，690mmol)。将混合物冷却至-50℃，接着经30分钟逐滴添加于EtOAc(100mL)中的TCCA(56g，241mmol)。将反应混合物升温至5℃，保持2小时，接着用10％Na2S2O3(200mL)淬灭并搅拌20分钟。将所得到的混合物过滤并分离有机相。将水相用EtOAc(2×100mL)萃取。将合并的有机层用H2O(100mL)和盐水(100mL)洗涤，接着经无水Na2SO4干燥。将有机层减压浓缩，得到呈油状的产物(50g，粗品)。
步骤2：合成得到(S,Z)-2-(2-(((苯甲氧基)羰基)氨基)-3-甲氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基)吗啉-4-甲酸叔丁酯
在0-10℃下，向(2R)-2-甲酰基吗啉-4-基甲酸叔丁酯(49g，153mmol)和2-{[(苯甲氧基)羰基]氨基}-2-(二甲氧基磷酰基)乙酸甲酯(60g，183mmol)于MeCN(300mL)中的溶液中添加四甲基胍(35g，306mmol)。在10℃下，将反应混合物搅拌30分钟，接着升温至室温，保持2小时。将反应混合物用DCM(200mL)稀释并用10％柠檬酸(200mL)和10％NaHCO3水溶液(200mL)洗涤。将有机相减压浓缩，并通过硅胶柱色谱法纯化，得到呈固体状的产物(36g，90％产率)。LCMS(ESI)C21H28N2O4的m/z[M+Na]计算值420.2；实验值：443.1
步骤3：合成(S)-2-((S)-2-(((苯甲氧基)羰基)氨基)-3-甲氧基-3-氧代丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯
向(S,Z)-2-(2-(((苯甲氧基)羰基)氨基)-3-甲氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基)吗啉-4-甲酸酯(49g，0.12mol)于MeOH(500mL)中的溶液中添加(S,S)-Et-DUPHOS-Rh(500mg，0.7mmol)。在H2(60psi)气氛下，在室温下将混合物搅拌48小时。将反应物浓缩并通过硅胶柱色谱法纯化，得到呈固体状的产物(44g，90％产率)。LCMS(ESI)C21H30N2O7的m/z[M+Na]计算值422.2；实验值：445.2。
步骤4：合成(S)-2-(((苯甲氧基)羰基)氨基)-3-((S)-吗啉-2-基)丙酸甲酯
在15℃下，向(S)-2-((S)-2-(((苯甲氧基)羰基)氨基)-3-甲氧基-3-氧代丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(2.2g，5.2mmol)于EtOAc(2mL)中的搅拌的溶液中添加HCl/EtOAc(25mL)。在15℃下，搅拌反应2小时，接着减压浓缩，得到呈油状的产物(1.51g，90％产率)。LCMS(ESI)C16H22N2O5的m/z[M+H]计算值322.1；实验值：323.2。
步骤5：合成(S)-5-溴-3-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-2,2-二甲基丙基)-1-乙基-2-(2-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1H-吲哚
在0℃下，向3-(5-溴-1-乙基-2-{2-[(1S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基}吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙-1-醇(100g，0.22mol)和咪唑(30.6g，0.45mol)于DCM(800mL)中的溶液中添加于DCM(200mL)中的TBSCl(50.7g，0.34mol)。在室温下搅拌反应2小时。将所得到的溶液用H2O(3×300mL)和盐水(2×200mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将残余物用硅胶柱色谱法纯化，得到呈固体状的产物(138g，90％产率)。LCMS(ESI)C29H43BrN2O2Si的m/z[M+H]计算值558.2；实验值：559.2。
步骤6：合成(2S)-2-{[(苯甲氧基)羰基]氨基}-3-[(2S)-4-(3-{3-[(叔丁基二甲基硅烷基)氧基]-2,2-二甲基丙基}-1-乙基-2-{2-[(1S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基}吲哚-5-基)吗啉-2-基]丙酸甲酯
向(S)-5-溴-3-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-2,2-二甲基丙基)-1-乙基-2-(2-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1H-吲哚(50g，89.3mmol)于二噁烷(500mL)中的搅拌的溶液中添加(2S)-2-{[(苯甲氧基)羰基]氨基}-3-[(2S)-吗啉-2-基]丙酸甲酯(31.7g，98.2mmol)、RuPhos(16.7g，35.7mmol)、二-μ-氯代双(2-氨基-1,1-联苯-2-基-C,N)二钯(II)(2.8g，4.4mmol)和碳酸铯(96g，295mmol)，随后在N2气氛下，在105℃下添加RuPhos-Pd-G2(3.5g，4.4mmol)。在N2气氛下，在105℃下将反应混合物搅拌6小时。将所得到的混合物过滤，并将滤液减压浓缩。将残余物通过制备型TLC色谱法纯化，得到呈固体状的产物(55g，73％产率)。LCMS(ESI)C45H64N4O7Si的m/z[M+H]计算值800.5；实验值：801.5。
步骤7：合成(2S)-2-{[(苯甲氧基)羰基]氨基}-3-[(2S)-4-(3-{3-[(叔丁基二甲基硅烷基)氧基]-2,2-二甲基丙基}-1-乙基-2-{2-[(1S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基}吲哚-5-基)吗啉-2-基]丙酸
在室温下，向(2S)-2-{[(苯甲氧基)羰基]氨基}-3-[(2S)-4-(3-{3-[(叔丁基二甲基硅烷基)氧基]-2,2-二甲基丙基}-1-乙基-2-{2-[(1S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基}吲哚-5-基)吗啉-2-基]丙酸甲酯(10g，12mmol)于THF(270mL)中的溶液中添加于H2O(45mL)中的LiOH(1.3g，31mmol)。在室温下搅拌反应2小时，接着在0～5℃下用1N HCl处理将pH值调至4～5。将所得到的混合物用EtOAc(2×50mL)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤并经无水Na2SO4干燥。接着，将有机相减压浓缩，得到呈固体状的产物(9.5g，97％产率)。LCMS(ESI)C44H62N4O7Si的m/z[M+H]计算值786.4；实验值：787.4。
步骤8：合成(S)-1-((S)-2-(((苯甲氧基)羰基)氨基)-3-((S)-4-(3-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-2,2-二甲基丙基)-1-乙基-2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-5-基)吗啉-2-基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯
向(2S)-2-{[(苯甲氧基)羰基]氨基}-3-[(2S)-4-(3-{3-[(叔丁基二甲基硅烷基)氧基]-2,2-二甲基丙基}-1-乙基-2-{2-[(1S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基}吲哚-5-基)吗啉-2-基]丙酸(10g，12.7mmol)于DMF(150mL)中的搅拌的溶液中添加(S)-六氢哒嗪-3-甲酸甲酯(2g，14mmol)，接着冷却至0℃，添加DIPEA(32.8g，254mmol)，随后在0～5℃下添加HATU(9.7g，25.4mmol)。在0～5℃下，将反应混合物搅拌1小时。将所得到的混合物用EtOAc(500mL)和H2O(200mL)稀释。将有机层分离并用H2O(2×100mL)和盐水(100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥。将溶液过滤并减压浓缩，并将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，得到产物。LCMS(ESI)C50H72N6O8Si的m/z[M+H]计算值912.5；实验值：913.4。
步骤9：合成(S)-1-((S)-2-(((苯甲氧基)羰基)氨基)-3-((S)-4-(1-乙基-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-5-基)吗啉-2-基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯
在室温下，向(S)-1-((S)-2-(((苯甲氧基)羰基)氨基)-3-((S)-4-(3-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-2,2-二甲基丙基)-1-乙基-2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-5-基)吗啉-2-基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯(8.5g，9mmol)于THF(8mL)中的溶液添加四丁基氟化铵(1M于THF中，180mL，180mmol)和AcOH(11g，200mmol)的混合物。在75℃下，将反应混合物搅拌3小时。将所得到的混合物用EtOAc(150mL)稀释并用H2O(6x20mL)洗涤。将有机相减压浓缩，得到呈固体状的产物(7.4g，100％产率)。LCMS(ESI)C44H58N6O8的m/z[M+H]计算值799.4；实验值：798.4。
步骤10：合成(S)-1-((S)-2-(((苯甲氧基)羰基)氨基)-3-((S)-4-(1-乙基-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-5-基)吗啉-2-基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸
向(S)-1-((S)-2-(((苯甲氧基)羰基)氨基)-3-((S)-4-(1-乙基-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-5-基)吗啉-2-基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯(8g，10mmol)于THF(200mL)中的溶液中添加于H2O(30mL)中的LiOH(600mg，25mmol)。在室温下，将反应混合物搅拌1小时，接着在0～5℃下用1N HCl处理以将pH值调至4～5，并用EtOAc(2×500mL)萃取。将有机相用盐水洗涤并减压浓缩，得到呈固体状的产物(8g，粗品)。LCMS(ESI)C43H56N6O8的m/z[M+H]计算值784.4；实验值：785.4。
步骤11：合成得到((22S,63S,4S)-11-乙基-12-(2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸苯甲酯
在氩气氛下，在室温下向(S)-1-((S)-2-(((苯甲氧基)羰基)氨基)-3-((S)-4-(1-乙基-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-5-基)吗啉-2-基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸(8g，10.2mmol)和DIPEA(59g，459mmol)于DCM(800mL)中的搅拌的溶液中添加EDCI(88g，458mmol)和HOBt(27.6g，204mmol)。在室温下，将反应混合物搅拌16小时。将所得到的混合物减压浓缩，并将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，得到呈固体状的产物(5g，66％产率)；LCMS(ESI)C43H54N6O7的m/z[M+H]计算值766.4；实验值：767.4。
步骤12：合成(22S,63S,4S)-4-氨基-11-乙基-12-(2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-5,7-二酮
在H2气氛下，在室温下向((22S,63S,4S)-11-乙基-12-(2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸苯甲酯(400mg，0.5mmol)于MeOH(20mL)中的溶液中添加Pd/C(200mg)和乙酸铵(834mg，16mmol)并将混合物搅拌2小时。将所得到的混合物过滤并减压浓缩。将残余物再溶解于DCM(20mL)中并用H2O(5mL×2)洗涤，接着减压浓缩，得到呈固体状的产物(320mg，97％产率)。LCMS(ESI)C35H48N6O5的m/z[M+H]计算值632.4；实验值：633.3。
中间体7：合成((63S,4S,Z)-11-乙基-12-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸叔丁酯
步骤1：合成(S)-(5-溴-6-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)硼酸
在氩气氛下，向(S)-3-溴-2-(1-甲氧基乙基)吡啶(80.0g，370.24mmol)和双(频哪醇合)二硼(141.03g，555.3mmol)于THF(320mL)中的搅拌溶液中添加dtbpy(14.91g，55.5mmol)和氯(1,5-环辛二烯)铱(I)二聚体(7.46g，11.1mmol)。将所得混合物在75℃下搅拌16小时。减压浓缩混合物并将所得残余物溶解于EtOAc(200mL)中，并用Na2CO3(40g)和NaOH(10g)于H2O(600mL)中的溶液调至pH 10。用EtOAc(800mL)萃取水层，接着用HCl(6N)将水相酸化至pH 6，沉淀得到呈固体状的所需产物(50g，52％产率)。LCMS(ESI)C8H11BBrNO3的m/z[M+H]计算值：260.01；实验值：260.0。
步骤2：合成(S)-3-溴-5-碘-2-(1-甲氧基乙基)吡啶
在室温下，向(S)-(5-溴-6-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)硼酸(23.0g，88.5mmol)于MeCN(230mL)中的搅拌溶液中添加NIS(49.78g，221.2mmol)。在氩气氛下，将所得混合物在80℃下搅拌过夜。减压浓缩混合物并将残余物溶解于DCM(2.1L)中并用Na2S2O3(3×500mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩滤液。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，得到所需产物(20g，66％产率)。LCMS(ESI)C8H9BrINO的m/z[M+H]计算值：341.90；实验值：341.7。
步骤3：合成(S)-4-(5-溴-6-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯
向用惰性氩气氛吹扫并维持该气氛的3L 3颈圆底烧瓶中放入3-溴-5-碘-2-[(1S)-1-甲氧基乙基]吡啶(147g，429.8mmol)、哌嗪-1-甲酸苯甲酯(94.69g，429.8mmol)、Pd(OAc)2(4.83g，21.4mmol)、BINAP(5.35g，8.6mmol)、Cs2CO3(350.14g，1074.6mmol)、甲苯(1L)。在油浴中，在100℃下将所得到的溶液搅拌过夜。接着，将反应混合物冷却至室温。将所得到的混合物减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(50％EtOAc/己烷)纯化，得到呈固体状的产物(135g，65％产率)。LCMS(ESI)C20H24BrN3O3的m/z[M+H]计算值433.1；实验值：434.1。
步骤4：合成(S)-4-(6-(1-甲氧基乙基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯
向用惰性氩气氛吹扫并维持该气氛的3-L 3颈圆底烧瓶中放入4-[5-溴-6-[(1S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(135g，310.8mmol)、双(频哪醇)二硼(86.82g，341.9mmol)、Pd(dppf)Cl2(22.74g，31.0mmol)、KOAc(76.26g，777.5mmol)、甲苯(1L)。在油浴中，在90℃下将所得到的溶液搅拌2天。将反应混合物冷却至室温。将所得到的混合物减压浓缩。将残余物通过中性氧化铝柱色谱法(30％EtOAC//己烷)纯化，得到呈固体状的产物(167g，粗品)。LCMS(ESI)C26H36BN3O5的m/z[M+H]计算值481.3；实验值：482.1。
步骤5：合成(S)-4-(5-(5-溴-3-(3-((叔丁基二苯基硅烷基)氧基)-2,2-二甲基丙基)-1H-吲哚-2-基)-6-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯
向用惰性氩气氛吹扫并维持该气氛的3-L 3颈圆底烧瓶中放入(S)-4-(6-(1-甲氧基乙基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸酯(167g，346.9mmol)、5-溴-3-[3-[(叔丁基二苯基硅烷基)氧基]-2,2-二甲基丙基]-2-碘-1H-吲哚(224.27g，346.9mmol)、Pd(dppf)Cl2(25.38g，34.6mmol)、二噁烷(600mL)、H2O(200mL)、K3PO4(184.09g，867.2mmol)、甲苯(200mL)。在油浴中，在70℃下将所得到的溶液搅拌过夜。接着，将反应混合物冷却至室温。将所得到的混合物减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(50％EtOAc/己烷)纯化，得到呈固体状的产物(146g，48％产率)。LCMS(ESI)C49H57BrN4O4Si的m/z[M+H]计算值872.3；实验值：873.3。
步骤6：合成(S)-4-(5-(5-溴-3-(3-((叔丁基二苯基硅烷基)氧基)-2,2-二甲基丙基)-1-乙基-1H-吲哚-2-基)-6-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯
在N2气氛下，在0℃下向(S)-4-(5-(5-溴-3-(3-((叔丁基二苯基硅烷基)氧基)-2,2-二甲基丙基)-1H-吲哚-2-基)-6-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(146g，167.0mmol)和Cs2CO3(163.28g，501.1mmol)于DMF(1200mL)中的搅拌的混合物中分数份添加碘乙烷(52.11g，334.0mmol)。在室温下，将最终反应混合物搅拌12小时。将所得到的混合物用EtOAc(1L)稀释并用盐水(3×1.5L)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩，得到呈固体状的产物(143g，粗品)，将其不经进一步纯化即直接用于下一步骤。LCMS(ESI)C51H61BrN4O4Si的m/z[M+H]计算值900.4；实验值：901.4。
步骤7：合成(S)-4-(5-(5-溴-1-乙基-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-1H-吲哚-2-基)-6-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯
向(S)-4-(5-(5-溴-3-(3-((叔丁基二苯基硅烷基)氧基)-2,2-二甲基丙基)-1-乙基-1H-吲哚-2-基)-6-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(143g，158.5mmol)于DMF(1250mL)中的搅拌的混合物中添加CsF(72.24g，475.5mmol)。接着，在N2气氛下，在60℃下将反应混合物搅拌2天。将所得到的混合物用EtOAc(1L)稀释并用盐水(3×1L)洗涤。接着，将有机相减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(30％EtOAc/石油醚)纯化，得到两种阻转异构体A(38g，36％产率)和B(34g，34％产率)，二者均呈固体状。LCMS(ESI)C35H43BrN4O4的m/z[M+H]计算值663.2；实验值：662.2。
步骤8：合成(S)-4-(5-(1-乙基-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲哚-2-基)-6-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯
向用惰性氮气氛吹扫并维持该气氛的500-mL 3颈圆底烧瓶中放入(S)-4-(5-(5-溴-1-乙基-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-1H-吲哚-2-基)-6-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(14g，21.1mmol)、双(频哪醇)二硼(5.89g，23.21mmol)、Pd(dppf)Cl2(1.54g，2.1mmol)、KOAc(5.18g，52.7mmol)、甲苯(150mL)。在油浴中，在90℃下将所得到的溶液搅拌5小时。将反应混合物冷却至室温，接着减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(30％EtOAc/石油醚)纯化，得到呈固体状的产物(12g，76％产率)。LCMS(ESI)C41H55BN4O6的m/z[M+H]计算值710.4；实验值：711.3。
步骤9：合成(S)-1-((S)-3-(4-(2-(5-(4-((苯甲氧基)羰基)哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-乙基-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-1H-吲哚-5-基)噻唑-2-基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯
向用惰性氩气氛吹扫并维持该气氛的250-mL圆底烧瓶中放入(S)-4-(5-(1-乙基-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲哚-2-基)-6-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(10.8g，15.2mmol)、(3S)-1-[(2S)-3-(4-溴-1,3-噻唑-2-基)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]丙酰基]-1,2-二氮杂环己烷-3-甲酸甲酯(7.98g，16.7mmol)、Pd(dtbpf)Cl2(0.99g，1.52mmol)、K3PO4(8.06g，37.9mmol)、甲苯(60mL)、二噁烷(20mL)、H2O(20mL)。在油浴中，在70℃下将所得到的溶液搅拌3小时。将反应混合物冷却至室温。将所得到的溶液用EtOAc(2×50mL)萃取并减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(10％EtOAc/己烷)纯化。减压移除溶剂，得到呈固体状的产物(8g，51％产率)。LCMS(ESI)C52H68N8O9S的m/z[M+H]计算值980.5；实验值：980.9。
步骤10：合成(S)-1-((S)-3-(4-(2-(5-(4-((苯甲氧基)羰基)哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-乙基-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-1H-吲哚-5-基)噻唑-2-基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸
在N2气氛下，向(S)-1-((S)-3-(4-(2-(5-(4-((苯甲氧基)羰基)哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-乙基-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-1H-吲哚-5-基)噻唑-2-基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯(12g，12.23mmol)于THF(100mL)/H2O(100mL)中的搅拌的混合物中添加LiOH(2.45g，61.1mmol)并在室温下将所得到的混合物搅拌2小时。减压移除THF。在0℃下，将水相的pH值用1N HCl酸化至5。将水层用DCM(3×100mL)萃取。将有机相减压浓缩，得到呈固体状的产物(10g，85％产率)。LCMS(ESI)C51H66N8O9S的m/z[M+H]计算值966.5；实验值：967.0。
步骤11：合成4-(5-((63S,4S,Z)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)-11-乙基-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-12-基)-6-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯
向用惰性氮气氛吹扫并维持该气氛的3-L圆底烧瓶中放入(S)-1-((S)-3-(4-(2-(5-(4-((苯甲氧基)羰基)哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-乙基-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-1H-吲哚-5-基)噻唑-2-基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸(18g，18.61mmol)、MeCN(1.8L)、DIPEA(96.21g，744.4mmol)、EDCI(107.03g，558.3mmol)和HOBt(25.15g，186.1mmol)。在室温下，将所得到的溶液搅拌过夜，接着减压浓缩。将所得到的溶液用DCM(1L)稀释并用1M HCl(3×1L)和H2O(3×1L)洗涤。接着，将有机层减压浓缩并通过硅胶柱色谱法(50％EtOAc/己烷)纯化，得到呈固体状的产物(10.4g，55％产率)。LCMS(ESI)C51H64N8O8S的m/z[M+H]计算值948.5；实验值：949.3。
步骤12：合成((63S,4S,Z)-11-乙基-12-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸叔丁酯
向用惰性氮气氛吹扫并维持该气氛的250-mL圆底烧瓶中放入4-(5-((63S,4S,Z)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)-11-乙基-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-12-基)-6-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(10.40g，10.9mmol)、Pd(OH)2/C(5g，46.9mmol)、MeOH(100mL)。在2atm H2气氛下，在室温下将所得到的溶液搅拌3小时。过滤出固体并将滤饼用MeOH(3×100mL)洗涤。将合并的有机相减压浓缩，得到呈固体状的产物(8.5g，90％产率)。LCMS(ESI)C43H58N8O6S的m/z[M+H]计算值814.4；实验值：815.3。
步骤13：合成((63S,4S,Z)-11-乙基-12-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸叔丁酯
向用惰性氮气氛吹扫并维持该气氛的1000-mL圆底烧瓶中放入((63S,4S,Z)-11-乙基-12-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸叔丁酯(8.5g，10.4mmol)、MeOH(100mL)、AcOH(1.88g，31.2mmol)。将溶液搅拌15分钟，接着在室温下添加HCHO(1.88g，23.15mmol，37％水溶液)和NaBH3CN(788mg，12.5mmol)。将所得到的溶液搅拌3小时。接着，将混合物用H2O(100mL)淬灭并减压浓缩以移除MeOH。将所得到的溶液用DCM(300mL)稀释并用H2O(3×100mL)洗涤。将溶液减压浓缩，得到呈固体状的产物(8.2g，90％产率)。LCMS(ESI)C44H60N8O6S的m/z[M+H]计算值828.4；实验值：829.3。
中间体8：合成(63S,4S,Z)-4-氨基-11-乙基-12-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-5,7-二酮
步骤1：合成乙酸(S)-3-(5-溴-1-乙基-2-(2-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯
在氩气氛下，在0℃下向(S)-3-(5-溴-1-乙基-2-(2-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙-1-醇(100g，224.517mmol)和Et3N(45.44g，449.034mmol)于DCM(1L)中的搅拌的溶液中分数份添加DMAP(2.74g，22.452mmol)和Ac2O(27.50g，269.420mmol)。在室温下，将所得到的混合物搅拌3小时。将所得到的混合物减压浓缩，接着用EtOAc(1000mL)稀释。将所得到的混合物用1M HCl(500mL)洗涤，接着用饱和NaHCO3(500mL)和盐水(500mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩。将残余物通过用石油醚(500mL)研磨进行纯化，得到呈白色固体状的产物(93.3g，85％产率)。LCMS(ESI)C25H31BrN2O3的m/z[M+H]计算值：487.16；实验值：489.2
步骤2：合成(S)-(5-(3-(3-乙酰氧基-2,2-二甲基丙基)-5-溴-1-乙基-1H-吲哚-2-基)-6-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)硼酸
在氩气氛下，在室温下向乙酸(S)-3-(5-溴-1-乙基-2-(2-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯(93.3g，191.409mmol)和B2PIN2(72.91g，287.113mmol)于THF(370mL)中的搅拌的溶液中分数份添加dtbpy(7.71g，28.711mmol)和氯(1,5-环辛二烯)铱(I)二聚体(6.43g，9.570mmol)。在75℃下，将所得到的混合物搅拌过夜。将所得到的混合物减压浓缩，得到呈油状的产物(190g，粗品)。LCMS(ESI)C25H32BBrN2O5的m/z[M+H]计算值：531.17；实验值：533.3
步骤3：合成乙酸(S)-3-(5-溴-1-乙基-2-(5-碘-2-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯
在空气气氛下，在0℃下向(S)-(5-(3-(3-乙酰氧基-2,2-二甲基丙基)-5-溴-1-乙基-1H-吲哚-2-基)-6-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)硼酸(110g，207.059mmol)和三水合氯胺-T(349.96g，1242.354mmol)于THF(550mL)中的搅拌的溶液中分数份添加NaI(186.22g，1242.354mmol)于H2O(225mL)中的溶液。在氩气氛下，在50℃下将所得到的混合物搅拌过夜。将所得到的混合物减压浓缩，接着用CHCl3(500mL)洗涤。将所得到的混合物过滤，将滤饼用CHCl3(3×250mL)洗涤。将滤液用CHCl3(3×500mL)萃取。将合并的有机层用Na2S2O3(500mL)洗涤，用盐水(2×200mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(18％EtOAc/石油醚)纯化，得到呈固体状的产物(24g，18％产率)。LCMS(ESI)m/z[M+H]；C25H30BrIN2O3的计算值：613.06；实验值：614.7
步骤4：合成乙酸3-(5-溴-1-乙基-2-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯
在氩气氛下，在室温下向乙酸3-(5-溴-1-乙基-2-{5-碘-2-[(1S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基}吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯(9g，14.674mmol)、(S)-八氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪(2.469g，17.609mmol)、Cs2CO3(11.953g，36.685mmol)和BINAP(456.9mg，0.734mmol)于甲苯(63mL)中的搅拌的溶液中添加Pd(OAc)2(329.44mg，1.467mmol)。在100℃下，将所得到的混合物搅拌6小时。过滤后，将滤饼用EtOAc(100mL)洗涤。将滤液减压浓缩。将残余物通过制备型TLC(8％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的产物(6.9g，75％产率)。LCMS(ESI)C32H43BrN4O4的m/z[M+H]计算值：627.25；实验值：627.4。
步骤5：合成乙酸3-(1-乙基-2-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯
在氩气氛下，在室温下向乙酸3-(5-溴-1-乙基-2-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯(3.2g，5.115mmol)、KOAc(1.51g，15.345mmol)和4,4,5,5-四甲基-2-(四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(2.60g，10.230mmol)于甲苯(48mL)中的搅拌的溶液中分数份添加Pd(dppf)Cl2(0.37g，0.512mmol)。在90℃下，将所得到的混合物搅拌1.5小时。将所得到的混合物过滤，将滤饼用EtOAc(100mL)洗涤。将滤液减压浓缩。将残余物通过制备型TLC(8％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的产物(3.0g，88％产率)。LCMS(ESI)C38H55BN4O6的m/z[M+H]计算值：675.43；实验值：675.1
步骤6：合成(S)-1-((S)-3-(4-(3-(3-乙酰氧基-2,2-二甲基丙基)-1-乙基-2-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-5-基)噻唑-2-基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯
在氩气氛下，在室温下向乙酸3-(1-乙基-2-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯(5g，7.433mmol)和K3PO4(4.26g，20.067mmol)于甲苯(54mL)中的搅拌的混合物中添加二噁烷(17.82mL，210.307mmol)和H2O(17.82mL)。在70℃下，将所得到的混合物搅拌2小时。将所得到的混合物过滤，将滤饼用EtOAc(100mL)洗涤。将滤液减压浓缩。将所得到的混合物用EtOAc(200mL)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩。将残余物通过制备型TLC(8％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的产物(4.6g，66％产率)。LCMS(ESI)C49H68N8O9S的m/z[M+H]计算值：945.49；实验值：945.7
步骤7：合成(S)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(4-(1-乙基-2-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-1H-吲哚-5-基)噻唑-2-基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸
在0℃下，向(S)-1-((S)-3-(4-(3-(3-乙酰氧基-2,2-二甲基丙基)-1-乙基-2-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-5-基)噻唑-2-基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯(6g，6.361mmol)于THF(43mL)中的搅拌的溶液中添加LiOH●H2O(573.92mg，13.677mmol)。在室温下，将所得到的混合物搅拌16小时。将混合物用HCl(水溶液)酸化至pH 6。将所得到的混合物用EtOAc(3×100mL)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩，得到呈固体状的产物(4g，粗品)。LCMS(ESI)C45H60N8O9S的m/z[M+H]计算值：889.43；实验值：889.7
步骤8：合成((63S,4S,Z)-11-乙基-12-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸叔丁酯
在氩气氛下，在0℃下向(S)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(4-(1-乙基-2-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-1H-吲哚-5-基)噻唑-2-基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸(4g，4.51mmol)、HOBt(6.09g，45.09mmol)和DIPEA(23.31g，180.36mmol)于DCM(200mL)中的搅拌的溶液中逐滴添加于DCM(200mL)中的EDCI(25.93g，135.27mmol)。在室温下，将所得到的混合物搅拌16小时，接着减压浓缩。在0℃下用H2O淬灭反应并用EtOAc(500mL)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩。将残余物通过制备型TLC(8％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的产物(2.0g，52％产率)。LCMS(ESI)C46H62N8O7S的m/z[M+H]计算值：870.4；实验值：871.8
步骤9：合成(63S,4S,Z)-4-氨基-11-乙基-12-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-5,7-二酮
在氩气氛下，在0℃下向((63S,4S,Z)-11-乙基-12-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸叔丁酯(316mg，0.345mmol)于DCM(3mL)中的搅拌的溶液中逐滴添加TFA(1mL)。在室温下，将所得到的混合物搅拌2小时。将混合物用NaHCO3饱和水溶液碱化至pH 8。将所得到的混合物用EtOAc(3×80mL)萃取。将合并的有机层用盐水(3×40mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩。将粗产物混合物不经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LCMS(ESI)C41H54N8O5S的m/z[M+H]计算值：771.4；实验值：771.6
中间体9：合成(63S,4S,Z)-4-氨基-11-乙基-12-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((R)-八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-5,7-二酮
步骤1：合成乙酸3-(5-溴-1-乙基-2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((R)-八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯
在氩气氛下，在室温下向乙酸3-(5-溴-1-乙基-2-{5-碘-2-[(1S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基}吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯(9g，14.674mmol)、(R)-八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪(2.469g，17.609mmol)、Cs2CO3(11.9523g，36.685mmol)和BINAP(456.85mg，0.734mmol)于甲苯(63mL)中的搅拌的溶液中分数份添加Pd(OAc)2(329.44mg，1.467mmol)。在100℃下，将所得到的混合物搅拌6小时，接着将混合物过滤，将滤饼用EtOAc(100mL)洗涤。将滤液减压浓缩。将残余物通过制备型TLC(8％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的产物(6g，65％产率)。LCMS(ESI)C33H45BrN4O3的m/z[M+H]计算值：625.28；实验值：627.4。
步骤2：合成乙酸3-(1-乙基-2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((R)-八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯
在氩气氛下，在室温下向乙酸3-(5-溴-1-乙基-2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((R)-八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯(3.2g，5.115mmol)、KOAc(1.51g，15.345mmol)和4,4,5,5-四甲基-2-(四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(2.60g，10.230mmol)于甲苯(48mL)中的搅拌的溶液中分数份添加Pd(dppf)Cl2(0.37g，0.512mmol)。在90℃下，将所得到的混合物搅拌1.5小时。将所得到的混合物过滤，将滤饼用EtOAc(100mL)洗涤。将滤液减压浓缩并通过制备型TLC(8％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的产物(3.1g，81％产率)。LCMS(ESI)C39H57BN4O5的m/z[M+H]计算值：673.45；实验值：673.4
步骤3：合成(S)-1-((S)-3-(4-(3-(3-乙酰氧基-2,2-二甲基丙基)-1-乙基-2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((R)-八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-5-基)噻唑-2-基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯
在氩气氛下，在室温下向乙酸3-(1-乙基-2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((R)-八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯(5g，7.433mmol)、(S)-1-((S)-3-(4-溴噻唑-2-基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯(3.89g，8.176mmol)和K3PO4(4.26g，20.067mmol)于甲苯(54mL)、二噁烷(18mL)和H2O(18mL)中的搅拌的混合物中添加Pd(dtbpf)Cl2(969mg，1.486mmol)。在70℃下，将所得到的混合物搅拌2小时。将混合物过滤，将滤饼用EtOAc(100mL)洗涤。将滤液减压浓缩并将所得到的混合物用EtOAc(200mL)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩。将残余物通过制备型TLC(8％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的产物(6.8g，83％产率)。LCMS(ESI)C50H70N8O8S的m/z[M+H]计算值：943.51；实验值：943.4
步骤4：合成(S)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(4-(1-乙基-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((R)-八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-5-基)噻唑-2-基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸
在氩气氛下，在0℃下向(S)-1-((S)-3-(4-(3-(3-乙酰氧基-2,2-二甲基丙基)-1-乙基-2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((R)-八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-5-基)噻唑-2-基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯(6g，6.361mmol)于THF(43mL)中的搅拌的溶液中逐滴添加LiOH●H2O(573.92mg，13.677mmol)。在室温下，将所得到的混合物搅拌16小时。将混合物用HCl(水溶液)酸化至pH6。将所得到的混合物用EtOAc(3×150mL)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩，得到呈固体状的产物(4g，粗品)。LCMS(ESI)C47H66N8O7S的m/z[M+H]计算值：887.49；实验值：887.6
步骤5：合成((63S,4S,Z)-11-乙基-12-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((R)-八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸叔丁酯
在氩气氛下，在0℃下向(S)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(4-(1-乙基-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((R)-八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-5-基)噻唑-2-基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸(4g，4.509mmol)、HOBt(6.09g，45.090mmol)和DIPEA(23.31g，180.360mmol)于DCM(200mL)中的搅拌的溶液中逐滴添加于DCM(200mL)中的EDCI(25.93g，135.270mmol)。在室温下，将所得到的混合物搅拌16小时。将所得到的混合物减压浓缩并在0℃下用H2O淬灭，并用EtOAc(500mL)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩。将残余物通过制备型TLC(8％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的产物(2.0g，49％产率)。LCMS(ESI)C47H64N8O6S的m/z[M+H]计算值：869.47；实验值：869.8
步骤6：合成(63S,4S,Z)-4-氨基-11-乙基-12-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((R)-八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-5,7-二酮
在0℃下，向((63S,4S,Z)-11-乙基-12-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((R)-八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸叔丁酯(900mg，1.035mmol)于DCM(9mL)中的搅拌的溶液中逐滴添加TFA(3mL)。在室温下，将所得到的混合物搅拌2小时。将混合物用NaHCO3饱和水溶液碱化至pH＝8，并用EtOAc(3×100mL)萃取。将合并的有机层用盐水(3×50mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩，得到产物(800mg)，将其不经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LCMS(ESI)C42H56N8O4S的m/z[M+H]计算值：769.42；实验值：769.5
中间体10：合成(63S,4S)-4-氨基-12-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-5,7-二酮
步骤1：合成乙酸(S)-3-(5-溴-2-(2-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯
在氩气氛下，在0℃下向(S)-3-(5-溴-2-(2-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙-1-醇(60g，0.12mol)和Et3N(24.33g，0.24mol)于DCM(600mL)中的搅拌的溶液中逐滴添加DMAP(1.46g，0.012mol)和乙酸酐(14.7g，144mmol)。在室温下，将所得到的混合物搅拌2小时。将所得到的混合物减压浓缩并用HCl(500mL)洗涤。将所得到的混合物用NaHCO3饱和水溶液(500mL)洗涤。将合并的有机层用盐水(500mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩，得到呈油状的产物(59.6g，92％产率)。LCMS(ESI)C25H28BrF3N2O3的m/z[M+H]计算值：541.13；实验值：543.2
步骤2：合成(S)-(5-(3-(3-乙酰氧基-2,2-二甲基丙基)-5-溴-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-2-基)-6-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)硼酸
在氩气氛下，在室温下向乙酸(S)-3-(5-溴-2-(2-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯(55.1g，101.771mmol)和4,4,5,5-四甲基-2-(四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(38.77g，152.656mmol)于THF(40mL)中的搅拌的混合物中分数份添加dtbpy(4.10g，15.266mmol)和氯(1,5-环辛二烯)铱(I)二聚体(3.42g，5.089mmol)。在75℃下，将所得到的混合物搅拌5小时。将所得到的混合物减压浓缩，得到呈油状的产物(102.4g，粗品)。LCMS(ESI)C25H29BBrF3N2O5的m/z[M+H]计算值：585.14；实验值：585.2
步骤3：合成乙酸(S)-3-(5-溴-2-(5-碘-2-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯
在氩气氛下，在0℃下向(S)-(5-(3-(3-乙酰氧基-2,2-二甲基丙基)-5-溴-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-2-基)-6-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)硼酸(51.2g，87.487mmol)和氯[(4-甲基苯)磺酰基]亚胺基钠(197g，699.896mmol)于THF(258mL)中的搅拌的溶液中逐滴添加于H2O(129mL)中的NaI(104.91g，699.896mmol)。在55℃下，将所得到的混合物搅拌16小时。将所得到的混合物减压浓缩并用CH3Cl(2×200mL)萃取。将合并的有机层用盐水(2×20mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(20％EtOAc/石油醚)纯化，得到呈固体状的产物(15.3g，26％产率)。LCMS(ESI)C32H40BrF3N4O4的m/z[M+H]计算值：666.0；实验值：667.3
步骤4：合成(S)-1-((S)-3-(3-(3-(3-乙酰氧基-2,2-二甲基丙基)-2-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-5-基)苯基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯
在氩气氛下，在室温下向乙酸(S)-3-(5-溴-2-(5-碘-2-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯(2.70g，4.046mmol)和(S)-八氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪二盐酸盐(1.044g，4.855mmol)于甲苯(18.9mL)中的搅拌的混合物中分数份添加Cs2CO3(5932.38mg，18.207mmol)和BINAP(125.97mg，0.202mmol)。向以上混合物中分数份添加Pd(OAc)2(90.84mg，0.405mmol)。在90℃下，将所得到的混合物再搅拌16小时。将混合物冷却至室温，接着过滤，将滤饼用EtOAc(2×20mL)洗涤。将滤液减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(10％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的产物(2.3g，83％产率)。LCMS(ESI)C32H40BrF3N4O4的m/z[M+H]计算值：681.23；实验值：681.4
步骤5：合成(S)-1-((S)-3-(3-(3-(3-乙酰氧基-2,2-二甲基丙基)-2-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-5-基)苯基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯
在空气气氛下，在室温下向250mL的3颈圆底烧瓶中添加(S)-1-((S)-3-(3-(3-(3-乙酰氧基-2,2-二甲基丙基)-2-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-5-基)苯基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯(2.33g，4.512mmol)和K3PO4(1.59g，7.490mmol)。在室温下，向H2O(8.20mL)和二噁烷(8.20mL)于甲苯中的搅拌的混合物中分数份添加Pd(dtbpf)Cl2(0.29g，0.451mmol)。在65℃下，将所得到的混合物搅拌3小时。将所得到的混合物过滤，将滤饼用EtOAc(2×100mL)洗涤。将滤液减压浓缩。将所得到的混合物用EtOAc(2×100mL)萃取。将合并的有机层用盐水(2×150mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(3→4％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的产物(2.7g，90％产率)。LCMS(ESI)C52H68F3N7O9的m/z[M+H]计算值：991.5；实验值：992.7
步骤6：合成(S)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3-(2-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-5-基)苯基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸
在室温下，向100mL的3颈圆底烧瓶中添加(S)-1-((S)-3-(3-(3-(3-乙酰氧基-2,2-二甲基丙基)-2-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-5-基)苯基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯(3g，3.024mmol)和THF(30mL)。随后，在0℃下分数份添加于H2O(12.7mL)中的LiOH(0.30g，12.701mmol)。在室温下，将所得到的混合物搅拌16小时。将混合物用1N HCl酸化至pH 5。将所得到的混合物用EtOAc(2×100mL)萃取。将合并的有机层用盐水(2×100mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩，得到呈固体状的产物(2.7g，粗品)。LCMS(ESI)C49H64F3N7O8的m/z[M+H]计算值：936.48；实验值：936.7
步骤7：合成((63S,4S)-12-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸叔丁酯
在室温下，向2L的3颈圆底烧瓶中添加(S)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3-(2-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-5-基)苯基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸(3.12g，3.333mmol)和DCM(624mL)。在0℃下，向以上混合物中分数份添加DIPEA(17.23g，133.320mmol)和HOBt(4.50g，33.330mmol)。将所得到的混合物再搅拌30分钟。在室温下，经16小时向以上混合物中分数份添加EDCI(19.17g，99.990mmol)。将所得到的混合物减压浓缩。在0℃下，用H2O淬灭反应。将所得到的混合物用EtOAc(3×100mL)萃取。将合并的有机层用盐水(3×100mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(3→4％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的产物(3g，98％产率)。LCMS(ESI)C49H62F3N7O7的m/z[M+H]计算值：918.47；实验值：918.8
步骤8：合成(63S,4S)-4-氨基-12-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-5,7-二酮
在氩气氛下，在0℃下向((63S,4S)-12-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸叔丁酯(930mg，1.013mmol)于DCM(15mL)中的搅拌的溶液中逐滴添加溶解于DCM(5mL)中的TFA(5mL，67.315mmol)。在0℃下，将所得到的混合物搅拌2小时。将残余物用NaHCO3饱和水溶液碱化至pH 8。将所得到的混合物用DCM萃取，并将合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩，得到呈固体状的产物(880mg，粗品)。LCMS(ESI)C44H54F3N7O5的m/z[M+H]计算值：818.42；实验值：818.6
中间体11：合成(63S,4S)-4-氨基-12-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((R)-八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-5,7-二酮
步骤1：合成(S)-(5-(3-(3-乙酰氧基-2,2-二甲基丙基)-5-溴-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-2-基)-6-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)硼酸
在室温下，向100mL的3颈圆底烧瓶中添加乙酸3-(5-溴-2-{2-[(1S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基}-1-(2,2,2-三氟乙基)吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯(10g，18.470mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-(四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(8.44g，33.25mmol)和dtbpy(0.89g，3.325mmol)。向以上混合物中添加氯(1,5-环辛二烯)铱(I)二聚体(0.74g，1.108mmol)和THF(40mL)。在80℃下，将所得到的混合物再搅拌16小时。将所得到的混合物减压浓缩。将粗产物不经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LCMS(ESI)C25H29BBrF3N2O5的m/z[M+H]计算值：585.14；实验值：585.0
步骤2：合成乙酸(S)-3-(5-溴-2-(5-碘-2-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯
在氮气氛下，在0℃下向(S)-(5-(3-(3-乙酰氧基-2,2-二甲基丙基)-5-溴-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-2-基)-6-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)硼酸(17.9g，30.586mmol)于THF(89.5mL)中的搅拌的溶液中逐滴添加于H2O(44.75mL)中的氯[(4-甲基苯)磺酰基]亚胺基钠(68.93g，244.688mmol)和NaI(36.68g，244.688mmol)。在室温下，将所得到的混合物再搅拌20分钟，接着加热至50℃，保持16小时。将所得到的混合物减压浓缩并用CHCl3(300mL)洗涤。过滤后，将滤饼用CHCl3(3×100mL)洗涤。将滤液用CHCl3(3×200mL)萃取。将合并的有机层用Na2S2O3(300mL)和盐水(2×150mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(16％EtOAc/石油醚)纯化，得到呈固体状的产物(6.6g，32％产率)。LCMS(ESI)C25H27BrF3IN2O3的m/z[M+H]计算值：667.03；实验值：668.7
步骤3：合成乙酸3-(5-溴-2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((R)-八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯
向乙酸(S)-3-(5-溴-2-(5-碘-2-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯(1.4g，2.098mmol)和(R)-八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪(353.04mg，2.518mmol)于甲苯(10mL)中的搅拌的混合物中添加Cs2CO3(3076.05mg，9.441mmol)、BINAP(65.32mg，0.105mmol)和Pd(OAc)2(47.10mg，0.210mmol)。在氩气氛下，在90℃下将所得到的混合物搅拌过夜。用H2O(100mL)淬灭反应。将所得到的混合物用DCM(3×100mL)萃取。将合并的有机层用H2O(3×100mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(5％MeOH/DCM)纯化，得到呈油状的产物(1g，49％产率)。LCMS(ESI)C33H42BrF3N4O3的m/z[M+H]计算值：679.25；实验值：679.5
步骤4：合成(S)-1-((S)-3-(3-(3-(3-乙酰氧基-2,2-二甲基丙基)-2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((R)-八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-5-基)苯基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯
向乙酸3-(5-溴-2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((R)-八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯(1g，1.471mmol)和(S)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯(913.62mg，1.765mmol)于甲苯(9mL)中的搅拌的混合物中添加二噁烷(6mL)、H2O(3mL)、K3PO4(780.82mg，3.678mmol)和Pd(dtbpf)Cl2(95.90mg，0.147mmol)，在氮气氛下，在70℃下将所得到的混合物搅拌2小时。将混合物用NaHCO3饱和水溶液碱化至pH 8。将所得到的混合物用DCM(3×30mL)萃取。将合并的有机层用H2O(3×30mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(20％EtOAc/石油醚)纯化，得到呈固体状的产物(1.2g，74％产率)。LCMS(ESI)C53H70F3N7O8的m/z[M+H]计算值：990.53；实验值：990.8
步骤5：合成(S)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3-(3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((R)-八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-5-基)苯基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸
在0℃下，向(S)-1-((S)-3-(3-(3-(3-乙酰氧基-2,2-二甲基丙基)-2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((R)-八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-5-基)苯基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯(1.2g，1.212mmol)和LiOH(252mg，10.523mmol)于THF(6mL)中的搅拌的混合物中分数份添加H2O(6mL)。在0℃下，将所得到的混合物搅拌过夜。将混合物用1N HCl(水溶液)酸化至pH 7。将水层用DCM(3×30mL)萃取。将合并的有机层用H2O(30mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩，得到呈固体状的产物(1.2g，84％产率)。LCMS(ESI)C50H66F3N7O7的m/z[M+H]计算值：934.51；实验值：935.0
步骤6：合成((63S,4S)-12-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((R)-八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸叔丁酯
在0℃下，向(S)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3-(3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((R)-八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-5-基)苯基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸(1.2g，1.285mmol)和DIPEA(7.83mL，44.975mmol)于DCM(100mL)中的搅拌的混合物中分数份添加HOBt(0.87g，6.425mmol)和EDCI●HCl(5.58g，35.980mmol)。在0℃下，将所得到的混合物搅拌过夜。将混合物用DCM(30mL)稀释。将合并的有机层用H2O(3×30mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(5％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的产物(850mg，65％产率)。LCMS(ESI)C50H64F3N7O6的m/z[M+H]计算值：916.49；实验值：917.0
步骤7：合成(63S,4S)-4-氨基-12-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((R)-八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-5,7-二酮
在0℃下，向((63S,4S)-12-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((R)-八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸叔丁酯(1000mg，1.092mmol)于DCM(4mL)中的搅拌的混合物中添加TFA(4mL)。在氮气氛下，在0℃下将所得到的混合物搅拌1小时。将所得到的混合物减压浓缩。将残余物用NaHCO3饱和水溶液碱化至pH 8。将水层用DCM(3×30mL)萃取。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩，得到呈固体状的产物(800mg，80％产率)。LCMS(ESI)C45H56F3N7O4的m/z[M+H]计算值：816.44实验值：816.6
中间体12：合成(63S,4S)-4-氨基-11-乙基-12-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-5,7-二酮
步骤1：合成(S)-1-((S)-3-(3-(3-(3-乙酰氧基-2,2-二甲基丙基)-1-乙基-2-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-5-基)苯基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯
在氩气氛下，在室温下向500mL的3颈圆底烧瓶中添加乙酸3-(5-溴-1-乙基-2-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯(14.2g，22.625mmol)、(S)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯(17.56g，33.938mmol)、含H2O(30mL)的二噁烷(150mL)、Pd(dtbpf)Cl2(1.47g，2.263mmol)。在65℃下，将所得到的混合物搅拌3小时，接着冷却至室温。将混合物过滤，将滤饼用EtOAc(2×200mL)洗涤。将滤液减压浓缩，接着用EtOAc(2×200mL)萃取。将合并的有机层用盐水(2×250mL)洗涤并经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(3→4％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的产物(17.2g，81％产率)。LCMS(ESI)C52H71N7O9的m/z[M+H]计算值：938.54；实验值：938.8
步骤2：合成(S)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3-(1-乙基-2-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-1H-吲哚-5-基)苯基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸
在室温下，向250mL的3颈圆底烧瓶中添加(S)-1-((S)-3-(3-(3-(3-乙酰氧基-2,2-二甲基丙基)-1-乙基-2-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-5-基)苯基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯(17.2g，18.33mmol)和THF(175mL)。在0℃下，分数份向LiOH(1.88g，78.343mmol)于H2O(78.34mL，4348.526mmol)中的搅拌的混合物中。在室温下，将所得到的混合物搅拌16小时。将混合物用1N HCl酸化至pH 5。将所得到的混合物用EtOAc(2×200mL)萃取。将合并的有机层用盐水(2×200mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩。将呈固体状的粗混合物(17g，粗品)不经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LCMS(ESI)C49H67N7O8的m/z[M+H]计算值：882.51；实验值：882.8。
步骤3：合成((63S,4S)-11-乙基-12-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸叔丁酯
在室温下，向5L的3颈圆底烧瓶中添加(S)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3-(1-乙基-2-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-1H-吲哚-5-基)苯基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸(16.8g，19.045mmol)和DCM(2.52L)。在0℃下，向以上混合物中分数份添加DIPEA(98.46g，761.800mmol)和HOBt(25.73g，190.450mmol)。在0℃下，将所得到的混合物再搅拌30分钟。随后，在0℃下分数份添加EDCI(109.53g，571.350mmol)。在室温下，将混合物搅拌16小时，接着减压浓缩。在0℃下，用冷H2O(500mL)淬灭反应并用EtOAc(3×500mL)萃取。将合并的有机层用盐水(3×500mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩并通过硅胶柱色谱法(3→4％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的产物(13.4g，81％产率)。LCMS(ESI)C49H65N7O7的m/z[M+H]计算值：864.50；实验值：864.8。
步骤4：合成(63S,4S)-4-氨基-11-乙基-12-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-5,7-二酮
向100mL圆底烧瓶中添加((63S,4S)-11-乙基-12-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸叔丁酯丁基(300mg，0.347mmol)和DCM(3mL)，并在0℃下，将TFA(1.5mL)添加至以上溶液中。1小时后，将混合物用NaHCO3饱和水溶液碱化至pH9。将所得到的混合物用DCM(3×50mL)萃取。将合并的有机层用盐水(3×50mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩，得到呈固体状的产物(242mg，粗品)。将粗产物不经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LCMS(ESI)C44H57N7O5的m/z[M+H]计算值：764.45；实验值：764.4
中间体13：合成(63S,4S)-4-氨基-11-乙基-12-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((R)-八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-5,7-二酮
步骤1：合成(S)-1-((S)-3-(3-(3-(3-乙酰氧基-2,2-二甲基丙基)-1-乙基-2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((R)-八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-5-基)苯基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯
在室温下，向40mL小瓶中添加乙酸3-(5-溴-1-乙基-2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((R)-八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯(2g，3.196mmol)、(3S)-1-[(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-[3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]丙酰基]-1,2-二氮杂环己烷-3-甲酸甲酯(1.98g，3.836mmol)和含H2O(5mL)的二噁烷(20mL)。向以上混合物中分数份添加K2CO3(883mg，6.392mmol)和Pd(dtbpf)Cl2(208mg，0.32mmol)。在65℃下，将所得到的混合物再搅拌4小时，接着过滤，并将滤饼用EtOAc(2×200mL)洗涤。将滤液减压浓缩。将所得到的混合物用EtOAc(3×100mL)萃取。将合并的有机层用盐水(2×100mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩。将残余物通过制备型TLC(50％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的产物(2.11g，70％产率)。LCMS(ESI)C53H73N7O8的m/z[M+H]计算值：936.56；实验值：936.7
步骤2：合成(S)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3-(1-乙基-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((R)-八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-5-基)苯基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸
在室温下，向100mL的3颈圆底烧瓶中添加(S)-1-((S)-3-(3-(3-(3-乙酰氧基-2,2-二甲基丙基)-1-乙基-2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((R)-八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-5-基)苯基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯(2.1g，2.245mmol)和THF(21mL)。在0℃下，向以上混合物中分数份添加于H2O(7mL)中的LiOH●H2O(283mg，6.735mmol)。在室温下，将所得到的混合物搅拌过夜。将混合物用1N HCl酸化至pH 5。将所得到的混合物用EtOAc(3×150mL)萃取。将合并的有机层用盐水(2×150mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩，得到产物(1.8g，粗品)。LCMS(ESI)C50H69N7O7的m/z[M+H]计算值：880.53；实验值：880.8
步骤3：合成((63S,4S)-11-乙基-12-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((R)-八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)苯基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸叔丁酯
在室温下，向2L的3颈圆底烧瓶中添加(S)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3-(1-乙基-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((R)-八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-5-基)苯基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸(1.8g，2.09mmol)和DCM(360mL)，随后在0℃下分数份添加DIPEA(24.28mL，139.394mmol)和HOBt(4.71g，34.857mmol)。在0℃下，将所得到的混合物再搅拌30分钟。在0℃下，经5分钟向以上混合物中分数份添加EDCI(8.67g，37.63mmol)。在室温下，将所得到的混合物搅拌过夜，接着减压浓缩。在0℃下，用H2O淬灭反应。将所得到的混合物用EtOAc(3×300mL)萃取。将合并的有机层用盐水(2×250mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(10％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的产物(623mg，34％产率)。LCMS(ESI)C51H68N6O6的m/z[M+H]计算值：861.53；实验值：862.8
步骤4：合成(63S,4S)-4-氨基-11-乙基-12-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((R)-八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-5,7-二酮
在0℃下，向100mL圆底烧瓶中添加((63S,4S)-11-乙基-12-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((R)-八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)苯基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸叔丁酯(350mg，0.406mmol)和DCM(4mL)。接着，将TFA(1mL)添加至以上混合物中。1小时后，将混合物用NaHCO3饱和水溶液碱化至pH 9。将所得到的混合物用DCM(3×5mL)萃取。将合并的有机层用盐水(3×30mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩，得到产物(300mg，粗品)。LCMS(ESI)C45H59N7O4的m/z[M+H]计算值：762.47；实验值：762.3
中间体14：合成(63S,4S)-4-氨基-11-乙基-12-(5-((R)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-5,7-二酮
步骤1：合成乙酸3-(5-溴-1-乙基-2-(5-((R)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯
在室温下，向100mL的3颈圆底烧瓶中添加于甲苯(100mL)中的乙酸(S)-3-(5-溴-1-乙基-2-(5-碘-2-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯(10g，16.304mmol)、K3PO4(8.65g，40.760mmol)、(R)-八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪(2.67g，21.195mmol)。经1分钟向以上混合物中分数份添加RuPhos-Pd-G2(2.53g，3.261mmol)、RuPhos(2.28g，4.891mmol)。在90℃下，将所得到的混合物再搅拌3小时。通过在室温下添加H2O(50mL)淬灭反应。将水层用EtOAc(3×600mL)萃取。将所得到的混合物减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(12％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的产物(7g，70％产率)。LCMS(ESI)C32H43BrN4O3的m/z[M+H]计算值：611.26；实验值：611.3
步骤2：合成(S)-1-((S)-3-(3-(3-(3-乙酰氧基-2,2-二甲基丙基)-1-乙基-2-(5-((R)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-5-基)苯基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯
向乙酸3-(5-溴-1-乙基-2-(5-((R)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯(5g，8.175mmol)和(3S)-1-[(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-[3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]丙酰基]-1,2-二氮杂环己烷-3-甲酸甲酯(5.07g，9.81mmol)于二噁烷(125mL)和H2O(25mL)中的溶液中添加K2CO3(2824mg，20.438mmol)和Pd(dppf)Cl2(1196mg，1.635mmol)。在氮气氛下，在70℃下搅拌2小时后。将沉淀的固体通过过滤收集起来并用EtOAc(3×100mL)洗涤。将所得到的混合物减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(13％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的产物(4g，53％产率)。LCMS(ESI)C52H71N7O8的m/z[M+H]计算值：922.54；实验值：922.6
步骤3：合成(S)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3-(1-乙基-2-(5-((R)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-1H-吲哚-5-基)苯基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸
在0℃下，向100mL圆底烧瓶中添加(S)-1-((S)-3-(3-(3-(3-乙酰氧基-2,2-二甲基丙基)-1-乙基-2-(5-((R)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-5-基)苯基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯(3g，3.2501mmol)以及THF(30mL)和LiOH●H2O(0.55g，13.012mmol)。在氩气氛下，在室温下将所得到的混合物搅拌过夜。将混合物用HCl(水溶液)酸化至pH 6。将水层用EtOAc(3×100mL)萃取。将所得到的混合物减压浓缩，得到呈固体状的产物(2.96g，92％产率)。LCMS(ESI)C49H67N7O7的m/z[M+H]计算值：866.52；实验值：866.6
步骤4：合成((63S,4S)-11-乙基-12-(5-((R)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸叔丁酯
在0℃下，向500mL圆底烧瓶中添加(S)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3-(1-乙基-2-(5-((R)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-1H-吲哚-5-基)苯基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸(2.9g，3.348mmol)、DCM(200mL)和DIPEA(8.65g，66.960mmol)。在0℃下，经5分钟向以上混合物中分数份添加HOBt(2.26g，16.740mmol)、EDCI(6.42g，33.480mmol)。在室温下，将所得到的混合物搅拌过夜。将所得到的混合物用H2O(3×200mL)洗涤。将水层用EtOAc(3×20mL)萃取。将所得到的混合物减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(10％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的产物(1.2g，42％产率)。LCMS(ESI)C49H65N7O6的m/z[M+H]计算值：848.51；实验值：847.6
步骤5：合成(63S,4S)-4-氨基-11-乙基-12-(5-((R)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-5,7-二酮
在0℃下，向40mL小瓶中添加((63S,4S)-11-乙基-12-(5-((R)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸叔丁酯(400mg，0.472mmol)、DCM(8mL)和TFA(4mL)。在0℃下，将所得到的混合物搅拌3小时。将所得到的混合物减压浓缩，得到呈固体状的产物(300mg，85％产率)。LCMS(ESI)C44H57N7O4的m/z[M+H]计算值：747.4；实验值：748.4
中间体15：合成(22S,63S,4S)-4-氨基-11-乙基-12-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((R)-八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-5,7-二酮
步骤1：合成(S)-1-((S)-3-((S)-1-(3-(3-乙酰氧基-2,2-二甲基丙基)-1-乙基-2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((R)-八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-5-基)哌啶-3-基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯
在氮气氛下，在室温下向乙酸3-(5-溴-1-乙基-2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((R)-八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯(13g，20.778mmol)和(S)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((S)-吗啉-2-基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯(10.82g，27.011mmol)于二噁烷(130mL)中的搅拌的溶液中添加氯(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯)[2-(2'-氨基-1,1'-联苯)]钯(II)(1.61g，2.078mmol)、RuPhos(1.94g，4.156mmol)和Cs2CO3(13.54g，41.556mmol)。在80℃下，将所得到的混合物搅拌3小时。将所得到的混合物用H2O(300mL)稀释并用EtOAc(3×200mL)萃取。将合并的有机层用盐水(2×100mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(8％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的产物(18.8g，95％产率)。LCMS(ESI)C52H78N8O8的m/z[M+H]计算值：945.58；实验值：945.5
步骤2：合成(S)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((S)-4-(1-乙基-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((R)-八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-5-基)吗啉-2-基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸
在0℃下，向(S)-1-((S)-3-((S)-1-(3-(3-乙酰氧基-2,2-二甲基丙基)-1-乙基-2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((R)-八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-5-基)哌啶-3-基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯(18.8g，19.890mmol)于THF(85mL)和H2O(85mL)中的搅拌的溶液中添加LiOH●H2O(4.17g，99.450mmol)。在室温下，将所得到的混合物搅拌，接着用H2O(300mL)稀释。将所得到的混合物用MTBE(3×100mL)洗涤并用DCM(3×200mL)萃取。将合并的有机层用H2O(200mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩，得到呈固体状的产物(11.2g，粗品)。将粗产物不经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LCMS(ESI)C48H72N8O8的m/z[M+H]计算值：889.56；实验值：889.5
步骤3：合成((22S,63S,4S)-11-乙基-12-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((R)-八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸叔丁酯
在氮气氛下，在0℃下向(S)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((S)-4-(1-乙基-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((R)-八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-5-基)吗啉-2-基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸(5.57g，6.264mmol)和DIPEA(64.77g，501.120mmol)于DMF(557mL)中的搅拌的溶液中添加HOBt(33.86g，250.560mmol)和EDCI(72.05g，375.840mmol)。在室温下，将所得到的混合物搅拌过夜。将所得到的混合物用H2O(1L)稀释。将所得到的混合物用EtOAc(3×1L)萃取。将合并的有机层用盐水(5×1L)洗涤，经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(10％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的产物(4g，73％产率)。LCMS(ESI)C48H70N8O7的m/z[M+H]计算值：871.54；实验值：871.6
步骤4：合成(22S,63S,4S)-4-氨基-11-乙基-12-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((R)-八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-5,7-二酮
在0℃下，向((22S,63S,4S)-11-乙基-12-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((R)-八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸叔丁酯(750mg，0.861mmol)于DCM(5mL)中的搅拌的混合物中逐滴添加HCl(4M于二噁烷中)(5mL)。在室温下，将所得到的混合物搅拌2小时，接着减压浓缩。由此得到呈固体状的产物(830mg，粗品)。LCMS(ESI)C43H62N8O5的m/z[M+H]计算值：771.49；实验值：771.7
中间体16：合成(63S,4S)-4-氨基-11-乙基-12-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-21,22,23,26,61,62,63,64,65,6-十氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(5,1)-吡啶杂环十一蕃-5,7-二酮
步骤1：合成乙酸3-(1-乙基-2-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯
向乙酸3-(5-溴-1-乙基-2-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯(2.16g，3.45mmol)于甲苯(40mL)中的搅拌的溶液中添加KOAc(0.78g，7.967mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-联(1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷)(1.314g，5.175mmol)和Pd(dppf)Cl2(0.23g，0.319mmol，0)。在氮气氛下，在90℃下将所得到的混合物搅拌2小时。将混合物用NaHCO3饱和水溶液碱化至pH 8。将所得到的混合物用DCM(3×100mL)萃取并将合并的有机层用盐水(3×40mL)洗涤，并经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(2％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的产物(2g，86％产率)。LCMS(ESI)C38H55BN4O6的m/z[M+H]计算值：675.43；实验值：675.5
步骤2：合成(S)-1-((S)-3-(5-(3-(3-乙酰氧基-2,2-二甲基丙基)-1-乙基-2-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-5-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯
向乙酸3-(1-乙基-2-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯(2g，2.964mmol)和(S)-1-((S)-3-(5-溴-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯(2.25g，4.742mmol)于甲苯(12.5mL)、二噁烷(8.3mL)和H2O(4.1mL)中的搅拌的溶液中添加K2CO3(1.02g，7.410mmol)、X-Phos(0.57g，1.186mmol)和Pd2(dba)3(0.81g，0.889mmol)。在氮气氛下，在70℃下将所得到的混合物搅拌2小时。将混合物用NaHCO3饱和水溶液碱化至pH 8。将所得到的混合物用DCM(3×100mL)萃取。并将合并的有机层用盐水(3×100mL)洗涤并经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(2％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的产物(1.7g，55％产率)。LCMS(ESI)C51H74N8O9的m/z[M+H]计算值：943.57；实验值：943.7
步骤3：合成(S)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(5-(1-乙基-2-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-1H-吲哚-5-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸
在0℃下，向(S)-1-((S)-3-(5-(3-(3-乙酰氧基-2,2-二甲基丙基)-1-乙基-2-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-5-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯(1.7g，1.802mmol)于THF(9mL)和H2O(9mL)中的搅拌的溶液中添加LiOH(0.19g，8.109mmol)。在0℃下，将所得到的混合物搅拌2小时。将混合物用浓HCl酸化至pH 6。接着，将混合物用DCM(3×50mL)萃取并经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩，得到呈固体状的粗产物(1.2g，67％产率)，将其不经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LCMS(ESI)C48H70N8O8的m/z[M+H]计算值：887.54；实验值：887.6
步骤4：合成((63S,4S)-11-乙基-12-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-21,22,23,26,61,62,63,64,65,66-十氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(5,1)-吡啶杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸叔丁酯
在氮气氛下，在0℃下向(S)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(5-(1-乙基-2-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-1H-吲哚-5-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸(1.2g，1.353mmol)和HOBt(0.91g，6.765mmol)于DCM(120mL)中的搅拌的溶液中逐滴添加EDC●HCl(7.26g，37.884mmol)和DIPEA(6.12g，47.355mmol)。在0℃下，将所得到的混合物搅拌2小时。将混合物用NaHCO3饱和水溶液碱化至pH 8。将所得到的混合物用DCM(3×100mL)萃取。将合并的有机层用盐水(3×100mL)洗涤并经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(3％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的产物(880mg，67％产率)。LCMS(ESI)C48H68N8O7的m/z[M+H]计算值：869.53；实验值：869.4
步骤5：合成(63S,4S)-4-氨基-11-乙基-12-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-21,22,23,26,61,62,63,64,65,66-十氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(5,1)-吡啶杂环十一蕃-5,7-二酮
在0℃下，向((63S,4S)-11-乙基-12-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-21,22,23,26,61,62,63,64,65,66-十氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(5,1)-吡啶杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸叔丁酯(880mg，1.013mmol)于DCM(8mL)中的搅拌的溶液中逐滴添加TFA(8mL)。在0℃下，将所得到的混合物搅拌1小时。将混合物用NaHCO3饱和水溶液碱化至pH 8。将所得到的混合物用DCM(3×50mL)萃取并将合并的有机层用盐水(3×50mL)洗涤，并经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩，得到呈固体状的粗产物(720mg，83％产率)，将其不经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LCMS(ESI)C43H60N8O5的m/z[M+H]计算值：769.48；实验值：769.6
中间体17：合成(63S,4S)-4-氨基-11-乙基-12-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((R)-八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-21,22,23,26,61,62,63,64,65,66-十氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(5,1)-吡啶杂环十一蕃-5,7-二酮
步骤1：合成乙酸3-(1-乙基-2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((R)-八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯
向乙酸3-(5-溴-1-乙基-2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((R)-八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯(1g，1.598mmol)和B2Pin2(0.81g，3.196mmol)于甲苯(20mL)中的搅拌的溶液中添加KOAc(0.39g，3.995mmol)和Pd(dppf)Cl2(0.12g，0.16mmol)。在氮气氛下，在90℃下将混合物搅拌2小时。接着，将混合物用NaHCO3饱和水溶液碱化至pH 8。将所得到的混合物用DCM(3×40mL)萃取并将合并的有机层用盐水(3×40mL)洗涤，并经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(2％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的产物(0.9g，83％产率)。LCMS(ESI)C39H57BN4O5的m/z[M+H]计算值：673.45；实验值：673.6
步骤2：合成(S)-1-((S)-3-(5-(3-(3-乙酰氧基-2,2-二甲基丙基)-1-乙基-2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((R)-八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-5-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯
向乙酸3-(1-乙基-2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((R)-八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯(0.9g，1.338mmol)、(3S)-1-[(2S)-3-(3-溴-5,6-二氢-2H-吡啶-1-基)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]丙酰基]-1,2-二氮杂环己烷-3-甲酸甲酯(1.02g，2.141mmol)、K2CO3(0.46g，3.345mmol)和X-Phos(0.26g，0.535mmol)于甲苯(13.5mL)、二噁烷(90mL)和H2O(4.5mL)中的搅拌的溶液中添加Pd2(dba)3(0.37g，0.401mmol)。在氮气氛下，在70℃下将混合物搅拌2小时。接着，将混合物用NaHCO3饱和水溶液碱化至pH 8。将所得到的混合物用DCM(3×100mL)萃取并将合并的有机层用盐水(3×100mL)洗涤，并经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(2％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的产物(1.1g，87％产率)。LCMS(ESI)C52H76N8O8的m/z[M+H]计算值：941.59；实验值：941.8
步骤3：合成(S)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(5-(1-乙基-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((R)-八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-5-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸
在氮气氛下，在0℃下向(S)-1-((S)-3-(5-(3-(3-乙酰氧基-2,2-二甲基丙基)-1-乙基-2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((R)-八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-5-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯(1.1g，1.169mmol)于THF(8mL)中的搅拌的溶液中逐滴添加LiOH(0.14g，5.845mmol)于H2O(8mL)中的溶液。将反应混合物搅拌16小时。接着，将混合物用浓HCl酸化至pH 6。将所得到的混合物用DCM(3×50mL)萃取并经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩，得到呈固体状的产物(1.0g，96％产率)，将其不经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LCMS(ESI)C49H72N8O7的m/z[M+H]计算值：885.56；实验值：885.5
步骤4：合成((63S,4S)-11-乙基-12-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((R)-八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-21,22,23,26,61,62,63,64,65,66-十氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(5,1)-吡啶杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸叔丁酯
在氮气氛下，在0℃下向(S)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(5-(1-乙基-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((R)-八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-5-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸(1.0g，1.13mmol)和HOBt(0.76g，5.65mmol)于DCM(100mL)中的搅拌的溶液中逐滴添加EDC●HCl(6.06g，31.64mmol)和DIPEA(5.11g，39.55mmol)。将反应混合物搅拌16小时。接着，将混合物用NaHCO3饱和水溶液碱化至pH 8。将所得到的混合物用DCM(3×100mL)萃取并将合并的有机层用盐水(3×100mL)洗涤，并经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(3％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的产物(650mg，66％产率)。LCMS(ESI)C49H70N8O6的m/z[M+H]计算值：867.55；实验值：867.5
步骤5：合成(63S,4S)-4-氨基-11-乙基-12-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((R)-八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-21,22,23,26,61,62,63,64,65,66-十氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(5,1)-吡啶杂环十一蕃-5,7-二酮
在氮气氛下，在0℃下向((63S,4S)-11-乙基-12-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((R)-八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-21,22,23,26,61,62,63,64,65,66-十氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(5,1)-吡啶杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸叔丁酯(300mg，0.346mmol)于DCM(3mL)中的搅拌的溶液中逐滴添加TFA(3mL)。在0℃下，将所得到的混合物搅拌1小时。接着，将混合物用NaHCO3饱和水溶液碱化至pH 8。将所得到的混合物用DCM(3×50mL)萃取并将合并的有机层用盐水(3×50mL)洗涤，并经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩，得到呈固体状的产物(260mg，98％产率)，将其不经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LCMS(ESI)C44H62N8O4的m/z[M+H]计算值：767.50；实验值：767.2
中间体18：合成(22S,63S,4S)-4-氨基-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-5,7-二酮
步骤1：合成(S)-5-溴-3-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-2,2-二甲基丙基)-2-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-乙基-1H-吲哚
向(S)-5-溴-3-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-2,2-二甲基丙基)-1-乙基-2-(2-(1-甲氧基乙基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶-3-基)-1H-吲哚(20g，29.2mmol)于MeCN(100mL)中的溶液中添加1-环丙基哌嗪(5.53g，43.8mmol)、吡啶(6.93g，87.6mmol)和Cu(OAc)2(10.61g，58.4mmol)，随后添加MS(20g)。在O2下，在60℃下搅拌反应16小时。接着，将混合物过滤并减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(EtOAc/石油醚2:1，接着EtOAc/MeOH 10:1)纯化，得到呈固体状的所希望的产物(6g，30％产率)。LCMS(ESI)C36H55BrN4O2Si的m/z[M+H]计算值：683.34；实验值：683.3。
步骤2：合成(S)-2-(((苯甲氧基)羰基)氨基)-3-((S)-4-(3-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-2,2-二甲基丙基)-2-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-乙基-1H-吲哚-5-基)吗啉-2-基)丙酸甲酯
向(S)-5-溴-3-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-2,2-二甲基丙基)-2-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-乙基-1H-吲哚(4g，5.8mmol)于二噁烷(40mL)中的溶液中添加(S)-2-(((苯甲氧基)羰基)氨基)-3-((S)-吗啉-2-基)丙酸甲酯(2.8g，8.7mmol)、RuPhos(0.81g，1.7mmol)、Cs2CO3(5.67g，17.4mmol)、Ruphos Pd G2(0.45g，0.6mmol)和Pd(OAc)2(0.13g，0.6mmol)。在N2下，在105℃下搅拌反应4小时。将混合物减压浓缩并将残余物通过柱色谱法(碱性Al2O3，EtOAc/石油醚1:1)纯化，得到呈固体状的所希望的产物(2g，38％产率)。LCMS(ESI)C52H76N6O7Si的m/z[M+H]计算值：925.56；实验值：925.5。
步骤3：合成(S)-2-(((苯甲氧基)羰基)氨基)-3-((S)-4-(3-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-2,2-二甲基丙基)-2-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-乙基-1H-吲哚-5-基)吗啉-2-基)丙酸
在0℃下，向(S)-2-(((苯甲氧基)羰基)氨基)-3-((S)-4-(3-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-2,2-二甲基丙基)-2-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-乙基-1H-吲哚-5-基)吗啉-2-基)丙酸甲酯(2g，2.2mmol)于THF(20mL)和H2O(6mL)中的溶液中添加LiOH(0.26g，11mmol)。在室温下搅拌反应3小时。将混合物用1N HCl调到pH 6并用EtOAc(2×30mL)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到呈固体状的(1.8g粗品)，将其不经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LCMS(ESI)C51H74N6O7Si的m/z[M+H]计算值：911.55；实验值：911.5。
步骤4：合成(S)-1-((S)-2-(((苯甲氧基)羰基)氨基)-3-((S)-4-(3-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-2,2-二甲基丙基)-2-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-乙基-1H-吲哚-5-基)吗啉-2-基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯
在0℃下，向(S)-2-(((苯甲氧基)羰基)氨基)-3-((S)-4-(3-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-2,2-二甲基丙基)-2-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-乙基-1H-吲哚-5-基)吗啉-2-基)丙酸(1.8g，2.0mmol)于DMF(15mL)中的溶液中添加(3S)-1,2-二氮杂环己烷-3-甲酸甲酯(0.43g，3mmol)和DIPEA(1.3g，10mmol)于DMF(5mL)中的溶液，随后添加HATU(0.91g，2.4mmol)。在0℃下搅拌反应2小时。将混合物用EtOAc(40mL)稀释并用H2O(30mL)淬灭。将有机层用H2O(2×30mL)和盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过正相柱色谱法(EtOAc/MeOH 20:1)纯化，得到呈固体状的所希望的产物(1.8g，85％产率)。LCMS(ESI)C57H84N8O8Si的m/z[M/2+H]计算值：519.32；实验值：519.4。
步骤5：合成(S)-1-((S)-2-(((苯甲氧基)羰基)氨基)-3-((S)-4-(2-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-乙基-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-1H-吲哚-5-基)吗啉-2-基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯
向(S)-1-((S)-2-(((苯甲氧基)羰基)氨基)-3-((S)-4-(3-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-2,2-二甲基丙基)-2-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-乙基-1H-吲哚-5-基)吗啉-2-基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯(1.8g，1.7mmol)于MeOH(20mL)中的溶液中添加NH4F(2.52g，67.9mmol)。在80℃下搅拌反应16小时。将混合物减压浓缩，并将残余物用DCM(30mL)稀释。过滤后，将滤液减压浓缩，得到呈固体状的所希望的产物(1.7g粗品)，将其不经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LCMS(ESI)C51H70N8O8的m/z[M+H]计算值：923.54；实验值：923.4。
步骤6：合成(S)-1-((S)-2-(((苯甲氧基)羰基)氨基)-3-((S)-4-(2-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-乙基-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-1H-吲哚-5-基)吗啉-2-基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸
在0℃下，向(S)-1-((S)-2-(((苯甲氧基)羰基)氨基)-3-((S)-4-(2-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-乙基-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-1H-吲哚-5-基)吗啉-2-基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯(1.8g，1.9mmol)于THF(20mL)和H2O(5mL)中的溶液中添加LiOH(0.23g，9.5mmol)。在室温下搅拌反应3小时。将混合物用1NHCl调到约pH 7。将所得到的溶液减压浓缩，得到呈固体状的所希望的产物(1.8g粗品)，将其不经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LCMS(ESI)C50H68N8O8的m/z[M+H]计算值：909.53；实验值：909.5。
步骤7：合成((22S,63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸苯甲酯
向(S)-1-((S)-2-(((苯甲氧基)羰基)氨基)-3-((S)-4-(2-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-乙基-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-1H-吲哚-5-基)吗啉-2-基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸(1.6g，1.8mmol)于DCM(160mL)中的溶液中添加DIPEA(6.98g，54mmol)、HOBt(2.43g，18mmol)和EDCI(10.4g，54mmol)。在30℃下搅拌反应16小时。将混合物减压浓缩，将残余物用EtOAc(50mL)稀释。将有机层用H2O(2×40mL)和盐水(40mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过正相柱色谱法(EtOAc/MeOH 10:1)纯化，得到呈固体状的所希望的产物(0.8g，50％产率)。LCMS(ESI)C50H66N8O7的m/z[M+H]计算值：891.52；实验值：891.6。
步骤8：合成(22S,63S,4S)-4-氨基-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-5,7-二酮
向((22S,63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸苯甲酯(700mg，0.79mmol)于THF(10mL)中的溶液中添加10％Pd/C(350mg)。在H2(1atm)下搅拌反应6小时。将混合物过滤并减压浓缩。将残余物通过正相柱色谱法(EtOAc(1％NH3H2O)/MeOH(1％NH3H2O)10:1)纯化，得到呈固体状的所希望的产物(420mg，71％产率)。LCMS(ESI)C42H60N8O5的m/z[M+H]计算值：757.48；实验值：757.5。
中间体19：合成(63S,4S)-4-氨基-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-21,22,23,26,61,62,63,64,65,66-十氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(5,1)-吡啶杂环十一蕃-5,7-二酮
步骤1：合成(S)-3-(5-溴-2-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-乙基-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙-1-醇
在80℃下，将(S)-5-溴-3-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-2,2-二甲基丙基)-2-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-乙基-1H-吲哚(3g，4mmol)和NH4F(6.5g，176mmol，40eq)于MeOH(30mL)中的溶液搅拌16小时。将反应混合物用EtOAc(50mL)稀释并用H2O(2×50mL)洗涤。将有机相减压浓缩，得到呈固体状的(4.2g，95％产率)。LCMS(ESI)C30H41BrN4O2的m/z[M+H]计算值：569.25；实验值：569.3。
步骤2：合成(S)-3-(2-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-乙基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙-1-醇
向(S)-3-(5-溴-2-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-乙基-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙-1-醇(3g，5.3mmol)和4,4,5,5-四甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(1.5g，5.8mmol)于1,4-二噁烷(30mL)中的溶液中添加KOAc(1g，10.5mmol)，随后在N2气氛下添加Pd(dppf)Cl2●DCM(860mg，1.1mmol)。在85℃下，将所得到的混合物搅拌6小时。将混合物减压浓缩，得到残余物。将残余物通过正相柱色谱法(EtOAc/石油醚5:1)纯化，得到呈油状的所希望的产物(2g，61％产率)。LCMS(ESI)C36H53BN4O4的m/z[M+H]计算值：617.43；实验值：617.3。
步骤3：合成(S)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(5-(2-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-乙基-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-1H-吲哚-5-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯
向(S)-3-(2-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-乙基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙-1-醇(1.7g，2.8mmol)和(S)-1-((S)-3-(5-溴-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯(1.4g，3mmol)于甲苯(20mL)、EtOH(4mL)和H2O(1mL)中的溶液中添加K2CO3(1.2g，8.4mmol)，随后在N2气氛下添加Pd(dppf)Cl2●DCM(230mg，0.28mmol)。在N2气氛下，在85℃下将所得到的混合物搅拌6小时。将混合物减压浓缩，得到残余物。将残余物通过正相柱色谱法(EtOAc/石油醚5:1)纯化，得到呈固体状的所希望的产物(1g，40％产率)。LCMS(ESI)C49H72N8O7的m/z[M+H]计算值：885.56；实验值：885.5。
步骤4：合成(S)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(5-(2-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-乙基-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-1H-吲哚-5-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸
向(S)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(5-(2-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-乙基-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-1H-吲哚-5-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯(900mg，1mmol)于THF(4mL)中的溶液中添加氢氧化锂(260mg，6.1mmol)于H2O(1mL)中的溶液。将所得到的混合物搅拌3小时。在0℃下，将反应混合物用1N HCl处理到pH 4。将混合物用DCM(2×20mL)萃取并将有机层用盐水洗涤。将溶液减压浓缩，得到呈固体状的所希望的产物(1.0g)，将其直接用于下一步骤中。LCMS(ESI)C48H70N8O7的m/z[M+H]计算值：871.55；实验值：871.5。
步骤5：合成((63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-5,7-二氧代-21,22,23,26,61,62,63,64,65,66-十氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(5,1)-吡啶杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸叔丁酯
向(S)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(5-(2-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-乙基-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-1H-吲哚-5-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸(900mg，1mmol)和DIPEA(4g，30mmol)于DCM(100mL)中的搅拌的溶液中添加EDCI(5.9g，30mmol)和HOBt(1.4g，10mmol)。在氩气氛下，在35℃下将所得到的混合物搅拌16小时。将所得到的混合物减压浓缩并将残余物通过正相柱色谱法(石油醚/EtOAc/NH3●H2O(1:5:0.05)纯化，得到呈固体状的所希望的产物(450mg，53％产率)。LCMS(ESI)C48H68N8O6的m/z[M+H]计算值：853.54；实验值：853.4。
步骤6：合成(63S,4S)-4-氨基-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-21,22,23,26,61,62,63,64,65,66-十氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(5,1)-吡啶杂环十一蕃-5,7-二酮
向((63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-5,7-二氧代-21,22,23,26,61,62,63,64,65,66-十氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(5,1)-吡啶杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸叔丁酯(230mg，0.024mmol)于DCM(1.5mL)中的溶液中添加TFA(0.5mL)。将溶液搅拌1小时，接着减压浓缩，得到所希望的产物(280mg)。LCMS(ESI)C43H60N8O4的m/z[M+H]计算值：753.48；实验值：753.5。
中间体20：合成(63S,4S,Z)-4-氨基-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-5,7-二酮
步骤1：合成乙酸(S)-3-(5-溴-2-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯
在氧气氛下，向(S)-(5-(3-(3-乙酰氧基-2,2-二甲基丙基)-5-溴-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-2-基)-6-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)硼酸(40g，61.514mmol)和NEt3(12.45g，123.028mmol)于MeCN(1000mL)中的搅拌的溶液中分数份添加MS(8g)和1-环丙基哌嗪(38.82g，307.570mmol)。在氧气氛下，在室温下将所得到的混合物搅拌1小时。向以上混合物中添加Cu(OAc)2(22.35g，123.028mmol)，接着将容器抽空，并回填氧气，接着在室温下搅拌过夜。将所得到的混合物过滤并减压浓缩。将残余物用EtOAc(300mL)稀释并将有机层用NH3●H2O(4×100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并减压浓缩。将残余物通过柱色谱法(50％EtOAc/石油醚)纯化，得到呈固体状的所希望的产物(23.7g，56％产率)。LCMS(ESI)C32H40BrF3N4O3的m/z[M+H]计算值665.23；实验值：666.0。
步骤2：合成乙酸(S)-3-(2-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯
向乙酸(S)-3-(5-溴-2-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯(26g，39.063mmol)和KOAc(13.42g，136.721mmol)于二噁烷(260mL)中的溶液中添加B2Pin2(37.7g,148.4mmol)和Pd(dppf)Cl2(2.86g，3.906mmol)。将所得到的混合物抽空并回填氩气，接着在90℃下搅拌3小时。将所得到的混合物过滤，将滤饼用EtOAc(2×200mL)洗涤并将滤液减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(80％EtOAc/石油醚)纯化，得到呈固体状的所希望的产物(17g，61％产率)。LCMS(ESI)C38H52BF3N4O5的m/z[M+H]计算值713.41；实验值：713.3。
步骤3：合成(S)-1-((S)-3-(4-(3-(3-乙酰氧基-2,2-二甲基丙基)-2-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-5-基)噻唑-2-基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯
在氩气氛下，向乙酸(S)-3-(2-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯(17g，23.854mmol)、(S)-1-((S)-3-(4-溴噻唑-2-基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯(13.66g，28.625mmol)和K3PO4(12.66g，59.635mmol)于甲苯(170mL)、二噁烷(57mL)和H2O(57mL)中的溶液中分数份添加1,1'-双(二-叔丁基膦基)二茂铁二氯化钯(1.55g，2.385mmol)。向混合物中添加。在70℃下，将所得到的混合物搅拌2小时。将混合物过滤，将滤饼用EtOAc(3×100mL)洗涤。将水层用EtOAc(3×200mL)萃取，并将合并的有机层用盐水(2×200mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(3％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的所希望的产物(20.4g，87％产率)。LCMS(ESI)C49H65F3N8O8S的m/z[M+H]计算值983.47；实验值：983.6。
步骤4：合成(S)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(4-(2-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-5-基)噻唑-2-基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸
在0℃下，向(S)-1-((S)-3-(4-(3-(3-乙酰氧基-2,2-二甲基丙基)-2-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-5-基)噻唑-2-基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯(20g，20.343mmol)于THF(200mL)中的溶液中添加LiOH(2.56g，61.029mmol)于H2O(61mL)中的溶液。在室温下，将所得到的混合物搅拌过夜。接着，将混合物用1N HCl(水溶液)酸化至pH 6，接着用EtOAc(3×100mL)萃取。将合并的有机层用盐水(2×100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物(18.8g)，将其不经纯化即直接用于下一步骤中。LCMS(ESI)C46H61F3N8O7S的m/z[M+H]计算值927.44；实验值：927.3。
步骤5：合成((63S,4S,Z)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸叔丁酯
在0℃下，向(S)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(4-(2-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-5-基)噻唑-2-基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸(15g，16.179mmol)、DIPEA(112.73mL，647.160mmol)和HOBt(43.72g，323.580mmol)于DCM(768mL)中的溶液中添加EDCI(93.05g，485.370mmol)。在室温下，将所得到的混合物搅拌过夜。通过添加冷H2O(500mL)将反应混合物淬灭。将所得到的混合物用EtOAc(3×500mL)萃取，并将合并的有机层用盐水(2×500mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(3％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的所希望的产物(7.5g，51％产率)。LCMS(ESI)C46H59F3N8O6S的m/z[M+H]计算值909.43；实验值：909.3。
步骤6：合成(63S,4S,Z)-4-氨基-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-5,7-二酮
在0℃下，向((63S,4S,Z)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸叔丁酯(8.2g，9.02mmol)于DCM(80mL)中的溶液中添加TFA(40mL，538.52mmol)。在室温下，将所得到的混合物搅拌2小时。接着，将混合物减压浓缩并将残余物用饱和NaHCO3(水溶液)调至pH8。将所得到的混合物用EtOAc(3×300mL)萃取，并将合并的有机层用盐水(300mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到呈固体状的所希望的产物(8.0g，98％产率)。LCMS(ESI)C41H51F3N8O4S的m/z[M+H]计算值809.38；实验值：809.5。
中间体21：合成(22S,63S,4S)-4-氨基-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-5,7-二酮
步骤1：合成(S)-1-((S)-3-((S)-4-(3-(3-乙酰氧基-2,2-二甲基丙基)-2-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-5-基)吗啉-2-基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯
向乙酸3(S)-3-(5-溴-2-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯(65.0g，97.66mmol)和(S)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((S)-吗啉-2-基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯(78.2g，0.195mol)于二噁烷(650mL)中的溶液中添加RuPhos(27.3g，58.60mmol)、RuPhos-G2-Pd(22.7g，29.30mmol)和Cs2CO3(95.5g，0.29mol)。在80℃下，将所得到的混合物搅拌过夜。接着，过滤反应混合物，将滤饼用EtOAc(3×300mL)洗涤并将滤液减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，得到呈固体状的所希望的产物(63g，65％产率)。LCMS(ESI)C50H71F3N8O9的m/z[M+H]计算值985.54；实验值：985.8。
步骤2：合成(S)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((S)-4-(2-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-5-基)吗啉-2-基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸
在0℃下，向(S)-1-((S)-3-((S)-4-(3-(3-乙酰氧基-2,2-二甲基丙基)-2-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-5-基)吗啉-2-基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯(79g，80.19mmol)于THF(700mL)中的溶液中添加LiOH●H2O(16.7g，0.398mol)于H2O(150mL)中的溶液。在室温下，将所得到的混合物搅拌5小时。接着，将混合物用1M HCl酸化至pH 5。将水层用DCM(3×500mL)萃取并将有机层经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到呈固体状的所希望的产物(70g，粗品)。LCMS(ESI)C47H67F3N8O8的m/z[M+H]计算值929.51；实验值：929.4。
步骤3：合成((22S,63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸叔丁酯
在0℃下，向(S)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((S)-4-(2-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-5-基)吗啉-2-基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸(55.7g，59.95mmol)和DIPEA(208.8mL，1.199mol)于DCM(6500mL)中的溶液中添加EDCI(229.9g，1.199mol)和HOBt(40.5g，0.299mol)。在室温下，将所得到的混合物搅拌过夜。通过添加冷H2O(500mL)将反应混合物淬灭并将水层用EtOAc(3×800mL)萃取。将合并的有机层用盐水(2×500mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，得到呈固体状的所希望的产物(35.0g，64％产率)。LCMS(ESI)C47H65F3N8O7的m/z[M+H]计算值911.50；实验值：911.3。
步骤4：合成(22S,63S,4S)-4-氨基-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-5,7-二酮
在0℃下，向((22S,63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸叔丁酯(33g，36.07mmol)于DCM(180mL)中的溶液中添加HCl的1,4-二噁烷溶液(180mL)。在室温下，将所得到的混合物搅拌2小时，接着将混合物减压浓缩，得到呈固体状的所希望的产物(33g，粗品)。LCMS(ESI)C42H57F3N8O5的m/z[M+H]计算值811.45；实验值：811.3。
中间体24：合成(63S,4S)-4-氨基-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-5,7-二酮
步骤1：合成(S)-1-((S)-3-(3-(3-(3-乙酰氧基-2,2-二甲基丙基)-2-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-5-基)苯基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯
向乙酸3(S)-3-(5-溴-2-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯(1g，1.502mmol)、(S)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯(1.14g，2.253mmol)于1,4-二噁烷(10mL)和H2O(2mL)中的溶液中添加K2CO3(415.28mg，3.004mmol)和Pd(dtbpf)Cl2(97.92mg，0.150mmol)。在65℃下，将所得到的混合物搅拌3小时。将沉淀的固体通过过滤收集起来并用DCM(30mL)洗涤。将所得到的混合物用EtOAc(3×50mL)萃取。将合并的有机层用盐水(2×20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(10％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的所希望的产物(860mg，90％产率)。LCMS(ESI)C52H68F3N7O8的m/z[M+H]计算值976.52；实验值：976.9。
步骤2：合成(S)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3-(2-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-5-基)苯基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸
在0℃下，向(S)-1-((S)-3-(3-(3-(3-乙酰氧基-2,2-二甲基丙基)-2-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-5-基)苯基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯(6.8g，6.963mmol)于THF(68mL)中的溶液中添加LiOH●H2O(4.096mmol)于H2O(13.9mL)中的溶液。将所得到的混合物搅拌过夜，接着用1M HCl酸化至pH 5。将所得到的混合物用DCM(3×50mL)萃取并将合并的有机层用盐水(2×50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到呈固体状的所希望的产物(6g，90％产率)。LCMS(ESI)C49H64F3N7O7的m/z[M+H]计算值920.49；实验值：920.9。
步骤3：合成((63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸叔丁酯
在0℃下，向(S)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3-(2-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-5-基)苯基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸(5g，5.434mmol)于DCM(40mL)中的溶液中添加DIPEA(28.09g，217.360mmol)和HOBt(7.34g，54.34mmol)。向混合物中添加EDCI(31.25g，163.020mmol)于DCM(10mL)中的溶液。将所得到的混合物升温至室温并搅拌过夜。将混合物减压浓缩并将残余物溶解于EtOAc(100mL)中。将有机层用盐水(2×100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(3％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的所希望的产物(4.2g，79％产率)。LCMS(ESI)C49H62F3N7O6的m/z[M+H]计算值902.48；实验值：902.1。
步骤4：合成(63S,4S)-4-氨基-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-5,7-二酮
在0℃下，向((63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸叔丁酯(1.8g，1.995mmol)于DCM(16mL)中的溶液中添加TFA(4mL)。在0℃下，将所得到的混合物搅拌1小时，接着将混合物用饱和NaHCO3(水溶液)中和至pH 7。将所得到的混合物用DCM(100mL)萃取并将合并的有机层用盐水(2×100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到呈固体状的所希望的产物(1.5g，89％产率)。LCMS(ESI)C44H54F3N7O4的m/z[M+H]计算值802.43；实验值：802.8。
中间体25：合成(63S,4S,Z)-4-氨基-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-5,7-二酮
步骤1：合成((63S,4S,Z)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸叔丁酯
在室温下，向((63S,4S,Z)-11-乙基-12-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸叔丁酯(2g，2.454mmol)和(1-乙氧基环丙氧基)三甲基硅烷(0.86g，4.908mmol)于2-丙醇(20mL)中的溶液中添加NaBH3CN(0.46g，7.362mmol)和AcOH(0.28mL，4.908mmol)。在50℃下，将所得到的混合物搅拌16小时，接着将反应混合物冷却至0℃并添加饱和NH4Cl(30mL)。将所得到的混合物用EtOAc(2×20mL)萃取并将合并的有机层用盐水(2×20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(3％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的所希望的产物(1.5g，71％产率)。LCMS(ESI)C46H62N8O6S的m/z[M+H]计算值855.46；实验值：856.4。
步骤2：合成(63S,4S,Z)-4-氨基-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-5,7-二酮
在室温下，将((63S,4S,Z)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸叔丁酯(1.56g，1.824mmol)和TFA(4mL)于DCM(16mL)中的溶液搅拌2小时，接着减压浓缩。将残余物溶解于EtOAc(30mL)中并将混合物用饱和NaHCO3(水溶液)碱化至pH 8。将水层用EtOAc(3×40mL)萃取并将合并的有机层用盐水(2×20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到呈固体状的所希望的产物(1.36g，粗品)。LCMS(ESI)C41H54N8O4S的m/z[M+H]计算值755.41；实验值：755.3。
中间体26：合成(22S,63S,4S)-4-氨基-11-乙基-12-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-5,7-二酮
步骤1：合成(S)-1-((S)-3-((S)-4-(3-(3-乙酰氧基-2,2-二甲基丙基)-1-乙基-2-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-5-基)吗啉-2-基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯
向乙酸3-(5-溴-1-乙基-2-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯(15g，23.900mmol)和(S)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((S)-吗啉-2-基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯(12.44g，31.070mmol)于二噁烷(150mL)中的溶液中添加RuPhos(2.23g，4.780mmol)、RuPhos-G2-Pd(1.86g，2.390mmol)和Cs2CO3(3.64g，47.800mmol)。在90℃下，将所得到的混合物搅拌过夜。接着，过滤反应混合物，将滤饼用EtOAc(3×100mL)洗涤并将滤液减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(9％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的所希望的产物(15.3g，33％产率)。LCMS(ESI)C50H74N8O10的m/z[M+H]计算值947.56；实验值：947.4。
步骤2：合成(S)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((S)-4-(1-乙基-2-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-1H-吲哚-5-基)吗啉-2-基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸
向(S)-1-((S)-3-((S)-4-(3-(3-乙酰氧基-2,2-二甲基丙基)-1-乙基-2-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-5-基)吗啉-2-基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯(7.6g，8.024mmol)于THF(34mL)和H2O(34)中的溶液中添加LiOH●H2O(0.96g，40.120mmol)。在室温下，将所得到的混合物搅拌过夜。接着，将混合物用HCl(1M)酸化至pH 5。将水层用DCM(3×100mL)萃取并将有机层用盐水(3×100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到呈固体状的所希望的产物(6.4g，89％产率)。LCMS(ESI)C47H70N8O9的m/z[M+H]计算值891.54；实验值：891.5。
步骤3：合成((22S,63S,4S)-11-乙基-12-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸叔丁酯
在0℃下，向(S)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((S)-4-(1-乙基-2-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-1H-吲哚-5-基)吗啉-2-基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸(6.4g，7.182mmol)和NMM(58.11g，574.560mmol)于DCM(640mL)中的溶液中添加EDCI(82.61g，430.920mmol)和HOBt(14.6g，75.9mmol)。在室温下，将所得到的混合物搅拌过夜。将反应混合物减压浓缩并溶解于EtOAc(3×300mL)中。将有机层用盐水(3×200mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(8％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的所希望的产物(3.2g，51％产率)。LCMS(ESI)C47H68N8O8的m/z[M+H]计算值873.53；实验值：873.4。
步骤4：合成(22S,63S,4S)-4-氨基-11-乙基-12-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-5,7-二酮
在0℃下，向((22S,63S,4S)-11-乙基-12-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸叔丁酯(1g，1.145mmol)于DCM(20mL)中的溶液中添加TFA(10mL)。在0℃下，将所得到的混合物搅拌3小时，接着减压浓缩，得到呈固体状的所希望的产物。LCMS(ESI)C42H60N8O6的m/z[M+H]计算值773.47；实验值：773.5。
中间体27：合成(63S,4S)-4-氨基-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-5,7-二酮
步骤1：合成(S)-1-((S)-3-(3-(3-(3-乙酰氧基-2,2-二甲基丙基)-2-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-乙基-1H-吲哚-5-基)苯基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯
向乙酸(S)-3-(5-溴-2-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-乙基-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯(10g，16.350mmol)和(S)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯(12.69g，24.525mmol)于1,4-二噁烷(110mL)和H2O(20mL)中的溶液中添加K2CO3(4.52g，32.700mmol)和Pd(dtbpf)Cl2(1.07g，1.635mmol)。在70℃下，将所得到的混合物搅拌3小时。将沉淀的固体通过过滤收集起来并用DCM(2×200mL)洗涤。将所得到的混合物用EtOAc(100mL)萃取。将合并的有机层用盐水(2×100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(10％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的所希望的产物(8.5g，56％产率)。LCMS(ESI)C52H71N7O8的m/z[M+H]计算值922.55；实验值：922.7。
步骤2：合成(S)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3-(2-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-乙基-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-1H-吲哚-5-基)苯基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸
在0℃下，向(S)-1-((S)-3-(3-(3-(3-乙酰氧基-2,2-二甲基丙基)-2-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-乙基-1H-吲哚-5-基)苯基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯(7g，7.591mmol)于THF(70mL)中的溶液中添加LiOH●H2O(0.96g，22.773)于H2O(22mL)中的溶液。将所得到的混合物搅拌过夜，接着用1M HCl酸化至pH 6。将所得到的混合物用DCM(2×100mL)萃取并将合并的有机层用盐水(2×100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到呈固体状的所希望的产物。LCMS(ESI)C49H67N7O7的m/z[M+H]计算值866.52；实验值：866.4。
步骤3：合成((63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸叔丁酯
在0℃下，向(S)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3-(2-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-乙基-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-1H-吲哚-5-基)苯基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸(6g，6.927mmol)于DCM(240mL)中的溶液中添加DIPEA(35.81g，277.080mmol)和HOBt(9.36g，69.270mmol)。向混合物中添加EDCI(39.84g，207.810mmol)于DCM(240mL)中的溶液。将所得到的混合物升温至室温并搅拌过夜。将混合物减压浓缩并将残余物溶解于EtOAc(200mL)中。将有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过制备型TLC(8％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的所希望的产物(43.8g，64％产率)。LCMS(ESI)C49H65N7O6的m/z[M+H]计算值848.51；实验值：848.7。
步骤4：合成(63S,4S)-4-氨基-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-5,7-二酮
在0℃下，向((63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸叔丁酯(1.5g，1.769mmol)于DCM(15mL)中的溶液中添加TFA(7mL)。在0℃下，将所得到的混合物搅拌1小时，接着将混合物用饱和NaHCO3(水溶液)中和至pH 8。将所得到的混合物用DCM(3×100mL)萃取并将合并的有机层用盐水(3×100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到呈固体状的所希望的产物。LCMS(ESI)C44H57N7O4的m/z[M+H]计算值748.45；实验值：748.4。
中间体28：合成(63S,4S,Z)-4-氨基-12-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-5,7-二酮
步骤1：合成乙酸3-(2-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯
在氩气氛下，在室温下向乙酸3-(5-溴-2-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯(26.5g，38.879mmol)、KOAc(9.54g，97.197mmol)和4,4,5,5-四甲基-2-(四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(19.75g，77.758mmol)于甲苯(300mL)中的溶液中分数份添加Pd(dppf)Cl2(2.84g，3.888mmol)。在90℃下，将所得到的混合物搅拌3小时。将所得到的混合物过滤，将滤饼用DCM(3×500mL)洗涤。将滤液减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(20％EtOAc/石油醚)纯化，得到呈固体状的产物(325g，83％产率)。LCMS(ESI)C38H52BF3N4O6的m/z[M+H]计算值：729.40；实验值：729.5。
步骤2：合成(S)-1-((S)-3-(4-(3-(3-乙酰氧基-2,2-二甲基丙基)-2-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-5-基)噻唑-2-基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯
向乙酸3-(2-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯(25g，34.310mmol)、(S)-1-((S)-3-(4-溴噻唑-2-基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯(19.65g，41.172mmol)和K2CO3(11.85g，85.775mmol)于甲苯(200mL)中的搅拌的混合物中添加二噁烷(100mL)并添加H2O(50mL)、Pd(dtbpf)Cl2(2.24g，3.431mmol)。在70℃下，将所得到的混合物搅拌2小时。将所得到的混合物过滤，将滤饼用DCM(3×500mL)洗涤。将滤液减压浓缩。将所得到的混合物用DCM(3×200mL)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(20％EtOAc/石油醚)纯化，得到呈固体状的所希望的产物(32g，84％产率)。LCMS(ESI)C49H65F3N8O9S的m/z[M+H]计算值：999.46；实验值：999.8。
步骤3：合成(S)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(4-(2-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-5-基)噻唑-2-基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸
在0℃下，向(S)-1-((S)-3-(4-(3-(3-乙酰氧基-2,2-二甲基丙基)-2-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-5-基)噻唑-2-基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯(32g，32.027mmol)于THF(320mL)和H2O(300mL)中的溶液中添加LiOH●H2O(5.38g，128.108mmol)。在室温下，将所得到的混合物搅拌过夜。将混合物用HCl(水溶液)中和至pH7。将所得到的混合物用DCM(3×500mL)萃取。将合并的有机层用盐水(3×500mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩，得到呈固体状的产物(30g，89％产率)。LCMS(ESI)C46H61F3N8O8S的m/z[M+H]计算值：943.43；实验值：943.8
步骤4：合成((63S,4S,Z)-12-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸叔丁酯
在氩气氛下，在0℃下向(S)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(4-(2-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-5-基)噻唑-2-基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸(30g，31.810mmol)、HOBt(25.79g，190.860mmol)和DIPEA(164.45g，1272.400mmol)于DCM(3L)中的溶液中添加EDCI(182.94g，954.300mmol)。在室温下，将所得到的混合物搅拌过夜，接着添加冷H2O(5L)。接着，将混合物用DCM(3×1L)萃取并将合并的有机层用盐水(3×1L)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(20％EtOAc/石油醚)纯化，得到呈固体状的所希望的产物(20g，64％产率)。LCMS(ESI)C46H59F3N8O7S的m/z[M+H]计算值：925.43；实验值：925.5
步骤5：合成(63S,4S,Z)-4-氨基-12-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-5,7-二酮
在氩气氛下，在0℃下向((63S,4S,Z)-12-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸叔丁酯(977mg，0.843mmol)于DCM(8mL)中的溶液中逐滴添加TFA(8mL)。在0℃下，将所得到的混合物搅拌1小时。将混合物用NaHCO3饱和水溶液碱化至pH 8。将所得到的混合物用DCM(3×50mL)萃取。将合并的有机层用盐水(3×50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到呈固体状的所希望的产物(766mg，88％产率)。LCMS(ESI)C41H51F3N8O5S的m/z[M+H]计算值：825.38；实验值：825.6。
中间体29：合成(22S,63S,4S)-4-氨基-12-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-5,7-二酮
步骤1：合成(S)-1-((S)-3-((S)-4-(3-(3-乙酰氧基-2,2-二甲基丙基)-2-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-5-基)吗啉-2-基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯
向乙酸3-(5-溴-2-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯(9.5g，13.938mmol)和(S)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((S)-吗啉-2-基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯(11.16g，27.876mmol)于二噁烷(95mL)中的溶液中添加RuPhos(1.30g，2.788mmol)、RuPhos-G2-Pd(1.08g，1.394mmol)和Cs2CO3(9.08g，27.876mmol)。在80℃下，将所得到的混合物3小时。接着，过滤反应混合物，将滤饼用EtOAc(3×300mL)洗涤并将滤液用盐水(3×100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(5％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的所希望的产物(10g，70％产率)。LCMS(ESI)C50H71F3N8O10的m/z[M+H]计算值1001.53；实验值：1001.7。
步骤2：合成(S)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((S)-4-(2-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-5-基)吗啉-2-基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸
在0℃下，向(S)-1-((S)-3-((S)-4-(3-(3-乙酰氧基-2,2-二甲基丙基)-2-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-5-基)吗啉-2-基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯(10g，9.988mmol)于THF(50mL)和H2O(50mL)中的溶液中添加LiOH●H2O(2.10g，49.940mmol)。在室温下，将所得到的混合物搅拌过夜，接着添加H2O(100mL)。将水层用MTBE(3×300mL)萃取，接着将水层用HCl(1M)酸化至pH 6并用DCM(3×500mL)萃取。将合并的有机层用盐水(3×200mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到呈固体状的所希望的产物(7.1g)。LCMS(ESI)C47H67F3N8O9的m/z[M+H]计算值945.51；实验值：945.3。
步骤3：合成((22S,63S,4S)-12-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸叔丁酯
在0℃下，向(S)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((S)-4-(2-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-5-基)吗啉-2-基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸(7.1g，7.512mmol)和NMM(12.16g，120.192mmol)于DCM(710mL)中的溶液中添加EDCI(11.52g，60.096mmol)和HOBt(4.06g，30.048mmol)。在室温下，将所得到的混合物搅拌过夜，接着添加H2O(500mL)。将所得到的混合物用DCM(3×500mL)萃取并将合并的有机层用盐水(3×1L)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(8％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的所希望的产物(3g，48％产率)。LCMS(ESI)C47H65F3N8O8的m/z[M+H]计算值927.50；实验值：927.3。
步骤4：合成(22S,63S,4S)-4-氨基-12-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-5,7-二酮
在0℃下，向((22S,63S,4S)-12-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸叔丁酯(3g，3.236mmol)于DCM(30mL)中的溶液中添加TFA(15mL)。在0℃下，将所得到的混合物搅拌2小时，接着用饱和NaHCO3(水溶液)碱化至pH 8。将所得到的混合物用DCM(3×100mL)萃取。将合并的有机层用盐水(3×100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到呈固体状的所希望的产物。LCMS(ESI)C42H57F3N8O6的m/z[M+H]计算值827.45；实验值：827.5。
中间体30：合成(63S,4S)-4-氨基-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-11-(2,2,2-三氟乙基)-21,22,23,26,61,62,63,64,65,66-十氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(5,1)-吡啶杂环十一蕃-5,7-二酮
步骤1：合成(S)-1-((S)-3-(5-(3-(3-乙酰氧基-2,2-二甲基丙基)-2-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-5-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯
向乙酸(S)-3-(5-溴-2-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯(9g，13.522mmol)、(S)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯(7.14g，16.226mmol)和K2CO3(8.41g，60.849mmol)于甲苯(90mL)、二噁烷(60mL)和H2O(30mL)中的溶液中添加和Pd(dtbpf)Cl2(2.97g，4.057mmol)。在70℃下，将所得到的混合物搅拌3小时，接着冷H2O(1L)。将所得到的混合物用DCM(3×500mL)萃取并将合并的有机层用盐水(3×300mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(5％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的所希望的产物(9g，67％产率)。LCMS(ESI)C51H71F3N8O8的m/z[M+H]计算值：981.54；实验值：981.3。
步骤2：合成(S)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(5-(2-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-5-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸
在0℃下，向(S)-1-((S)-3-(5-(3-(3-乙酰氧基-2,2-二甲基丙基)-2-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-5-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸甲酯(9g，9.173mmol)于THF(70mL)和H2O(50mL)中的溶液中添加LiOH●H2O(0.88g，36.692mmol)。在室温下，将所得到的混合物搅拌过夜，接着用HCl(水溶液)中和至pH 7。将所得到的混合物用DCM(3×200mL)萃取并将合并的有机层用盐水(3×200mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到呈固体状的所希望的产物(7.5g，88％产率)。LCMS(ESI)C48H67F3N8O7的m/z[M+H]计算值：925.52；实验值：925.6。
步骤3：合成((63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-21,22,23,26,61,62,63,64,65,66-十氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(5,1)-吡啶杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸叔丁酯
在0℃下，向(S)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(5-(2-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-5-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)丙酰基)六氢哒嗪-3-甲酸(7.5g，8.107mmol)和DIPEA(41.91g，324.280mmol)于DCM(750mL)中的溶液中添加EDCI(46.62g，243.210mmol)和HOBt(16.57g，48.642mmol)。在室温下，将所得到的混合物搅拌过夜，接着添加冷H2O(1L)。将所得到的混合物用DCM(3×500mL)萃取并将合并的有机层用盐水(3×500mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(20％EtOAc/石油醚)纯化，得到呈固体状的所希望的产物(6g，73％产率)。LCMS(ESI)C48H65F3N8O6的m/z[M+H]计算值：907.51；实验值：907.6
步骤4：合成(63S,4S)-4-氨基-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-11-(2,2,2-三氟乙基)-21,22,23,26,61,62,63,64,65,66-十氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(5,1)-吡啶杂环十一蕃-5,7-二酮
在0℃下，向((63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-21,22,23,26,61,62,63,64,65,66-十氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(5,1)-吡啶杂环十一蕃-4-基)氨基甲酸叔丁酯(2g，2.205mmol)于DCM(15mL)中的溶液中添加TFA(15mL)。在0℃下，将所得到的混合物搅拌1小时，接着将混合物用饱和NaHCO3(水溶液)碱化至pH8。将所得到的混合物用DCM(3×100mL)萃取并将合并的有机层用盐水(3×100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到呈固体状的所希望的产物(1.65g，83％产率)。LCMS(ESI)C43H57F3N8O4的m/z[M+H]计算值：807.46；实验值：807.7。
中间体31.合成(3-(3-乙酰氧基-2,2-二甲基丙基)-2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((8R,9aS)-八氢吡啶并[2,1-c][1,4]噁嗪-8-基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-5-基)硼酸
步骤1：合成(S)-2-(吗啉-3-基)乙酸甲酯
在室温下，向(S)-2-(4-(叔丁氧羰基)吗啉-3-基)乙酸(41.5g，169.198mmol)于MeOH(415mL)中的溶液中逐滴添加SOCl2(415mL，5721.251mmol)。将反应混合物搅拌2小时，接着减压浓缩，得到呈固体状的所需产物(38g，粗品)。LCMS(ESI)C7H13NO3的m/z[M+H]计算值：160.10；实验值：160.0。
步骤2：合成(S)-3-(3-(2-甲氧基-2-氧代乙基)吗啉代)丙酸甲酯
在室温下，向(S)-2-(吗啉-3-基)乙酸甲酯(38g，238.716mmol)和NEt3(72.47g，716.148mmol)于MeOH(380mL)中的溶液中逐滴添加丙烯酸甲酯(41.10g，477.432mmol)。将反应混合物升温至40℃并搅拌过夜。接着，将反应混合物减压浓缩，得到呈固体状的所需产物(75g，粗品)。LCMS(ESI)C11H20NO5的m/z[M+H]计算值：246.13；实验值：246.0。
步骤3：合成(9aS)-8-氧代八氢吡啶并[2,1-c][1,4]噁嗪-7-甲酸甲酯
在-78℃下，向(S)-3-(3-(2-甲氧基-2-氧代乙基)吗啉代)丙酸甲酯(75g，305.779mmol)于750mL THF中的溶液中逐滴添加LiHMDS(611mL，611.558mmol)。将所得到的混合物在-78℃下再搅拌3小时。通过在0℃下添加饱和NH4Cl(500mL)淬灭反应。用EtOAc(3×500mL)萃取所得到的混合物并将合并的有机层用盐水(3×200mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩，得到呈固体状的所需产物(38g，粗品)。LCMS(ESI)C10H16NO4的m/z[M+H]计算值：214.11；实验值：214.0。
步骤4：合成(S)-六氢吡啶并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-酮
在100℃下，将(9aS)-8-氧代八氢吡啶并[2,1-c][1,4]噁嗪-7-甲酸甲酯(38g，178.209mmol，1当量)于4M HCl(380mL)中的溶液搅拌3小时。将反应混合物冷却至室温，接着用NaHCO3(水溶液)中和至pH7。用EtOAc(4×500mL)萃取所得到的混合物并将合并的有机层用盐水(3×200mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩，得到呈固体状的所需产物(22.4g，粗品)。LCMS(ESI)C8H14NO2的m/z[M+H]计算值：156.10；实验值：155.9。
步骤5：合成(S,E)-N'-(亚六氢吡啶并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-4-甲氧基苯磺酰肼
向(S)-六氢吡啶并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-酮(22.4g，144.333mmol)于甲苯(224mL)中的溶液中添加4-甲氧基苯磺酰肼(29.19g，144.333mmol)。将反应混合物加热至110℃并搅拌1小时，接着冷却至室温并减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(50％EtOAc/石油醚)纯化，得到呈油状的所需产物(31g，66％产率)。LCMS(ESI)C15H21N3O4S的m/z[M+H]计算值：340.13；实验值：340.0。
步骤6：合成乙酸3-(5-溴-2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((8R,9aS)-八氢吡啶并[2,1-c][1,4]噁嗪-8-基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯和乙酸3-(5-溴-2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((8S,9aS)-八氢吡啶并[2,1-c][1,4]噁嗪-8-基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯
向(S,E)-N'-(亚六氢吡啶并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-4-甲氧基苯磺酰肼(31g，100.174mmol)和Cs2CO3(48.96g，150.261mmol)于二噁烷(290mL)中的溶液中添加(S)-(5-(3-(3-乙酰氧基-2,2-二甲基丙基)-5-溴-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-2-基)-6-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)硼酸(117.25g，200.348mmol)。将反应混合物在110℃下搅拌过夜。接着，将反应混合物冷却至室温并用H2O(500mL)淬灭。用EtOAc(3×500mL)萃取混合物并将合并的有机层用盐水(3×200mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(20％MeOH/DCM)纯化，得到呈油状的非对映异构体混合物(38g，61％产率)。将残余物通过反相色谱法(10→50％MeCN/H2O(10mmol/LNH4HCO3))纯化，得到呈油状的乙酸3-(5-溴-2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((8R,9aS)-八氢吡啶并[2,1-c][1,4]噁嗪-8-基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯(26g)和乙酸3-(5-溴-2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((8S,9aS)-八氢吡啶并[2,1-c][1,4]噁嗪-8-基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯(11g)。LCMS(ESI)C33H42BrF3N3O4的m/z[M+H]计算值：680.23；实验值：680.3。
步骤7：合成(3-(3-乙酰氧基-2,2-二甲基丙基)-2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((8R,9aS)-八氢吡啶并[2,1-c][1,4]噁嗪-8-基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-5-基)硼酸
在室温下，向乙酸3-(5-溴-2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((8R,9aS)-八氢吡啶并[2,1-c][1,4]噁嗪-8-基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯(4.29g，6.303mmol)和B2(OH)4(0.68g，7.564mmol)于2-甲基四氢呋喃(26.4mL)和MeOH(8.8mL)中的溶液中添加XPhos Pd G3(0.16g，0.189mmol)和KOPiv(1.77g，12.606mmol)。在室温下，将所得到的混合物搅拌2小时。接着，将反应混合物用H2O(3×100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩，得到呈固体状的所需产物(5.2g，粗品)。LCMS(ESI)C33H43BF3N3O6的m/z[M+H]计算值：646.33；实验值：646.0。
中间体32.合成(S)-(3-(3-乙酰氧基-2,2-二甲基丙基)-2-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基-2,2,3,3,5,5,6,6-d8)-2-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-5-基)硼酸
步骤1：合成(S)-4-(5-(3-(3-乙酰氧基-2,2-二甲基丙基)-5-溴-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-2-基)-6-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯-2,2,3,3,5,5,6,6-d8
在室温下，向乙酸(S)-3-(5-溴-2-(5-碘-2-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯(5g，7.493mmol)和哌嗪-1-甲酸叔丁酯-2,2,3,3,5,5,6,6-d8(1.31g，6.744mmol)和Pd(OAc)2(168.22mg，0.749mmol)于甲苯(35mL)中的溶液中添加BINAP(233.28mg，0.375mmol)和Cs2CO3(8.54g，26.226mmol)。将所得到的混合物在82℃下搅拌过夜。接着，将混合物冷却至室温，在0℃下用H2O(300mL)淬灭，将用DCM(3×100mL)萃取所得到的混合物。将合并的有机层用盐水(3×100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(70％EtOAc/石油醚)纯化，得到呈固体状的所需产物(4.2g，69％产率)。LCMS(ESI)C34H36D8BrF3N4O5的m/z[M+H]计算值：733.30；实验值：735.2
步骤2：合成乙酸(S)-3-(5-溴-2-(2-(1-甲氧基乙基)-5-(哌嗪-1-基-2,2,3,3,5,5,6,6-d8)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯
在0℃下，向(S)-4-(5-(3-(3-乙酰氧基-2,2-二甲基丙基)-5-溴-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-2-基)-6-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯-2,2,3,3,5,5,6,6-d8(2g，2.726mmol)于DCM(14mL)中的溶液中添加TFA(7mL)。将所得到的混合物搅拌30分钟，接着用饱和NaHCO3(水溶液)碱化至pH 8。用DCM(3×50mL)萃取所得到的混合物并将合并的有机层用H2O(3×30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩，得到呈固体状的所需粗产物(1.8g，70％产率)，，所述粗产物不经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LCMS(ESI)C29H28D8BrF3N4O3的m/z[M+H]计算值：633.25；实验值：633.3
步骤3：合成乙酸(S)-3-(5-溴-2-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基-2,2,3,3,5,5,6,6-d8)-2-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯
在0℃下，向乙酸(S)-3-(5-溴-2-(2-(1-甲氧基乙基)-5-(哌嗪-1-基-2,2,3,3,5,5,6,6-d8)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯(1.6g，2.525mmol)于MeOH(16mL)中的溶液中添加AcOH(0.45g，7.575mmol)和(1-乙氧基环丙氧基)三甲基硅烷(1.10g，6.313mmol)。将溶液在0℃下搅拌1小时，接着添加NaBH3CN(0.48g，7.575mmol)。将所得到的混合物在0℃下搅拌2小时，接着添加饱和NH4Cl。用DCM(3×50mL)萃取所得到的混合物并将合并的有机层用H2O(3×50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(5％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的所需产物(1.4g，82％产率)。LCMS(ESI)C32H32D8BrF3N4O3的m/z[M+H]计算值：673.28；实验值：673.3。
步骤4：合成(S)-(3-(3-乙酰氧基-2,2-二甲基丙基)-2-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基-2,2,3,3,5,5,6,6-d8)-2-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-5-基)硼酸
在室温下，向乙酸(S)-3-(5-溴-2-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基-2,2,3,3,5,5,6,6-d8)-2-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯(1.56g，2.316mmol)和B2(OH)4(249.13mg，2.779mmol)于MeOH(3mL)和2-甲基四氢呋喃(9mL)中的溶液中添加XPhos Pd G3(117.61mg，0.139mmol)和KOPiv(648.41mg，4.632mmol)。将所得到的混合物在室温下搅拌2小时，接着通过在0℃下添加H2O(10mL)淬灭。用DCM(3×50mL)萃取所得到的混合物并将合并的有机层用H2O(3×30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(2％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的所需产物(1.72g,70％产率)。LCMS(ESI)C32H34D8BF3N4O5的m/z[M+H]计算值：639.38；实验值：639.4。
中间体33.合成乙酸(S)-3-(5-溴-2-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基-2,2,3,3,5,5,6,6-d8)-2-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-乙基-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯
步骤1：合成(S)-4-(5-(3-(3-乙酰氧基-2,2-二甲基丙基)-5-溴-1-乙基-1H-吲哚-2-基)-6-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯-2,2,3,3,5,5,6,6-d8
在室温下，向乙酸(S)-3-(5-溴-1-乙基-2-(5-碘-2-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯(5g，7.493mmol)和哌嗪-1-甲酸叔丁酯-2,2,3,3,5,5,6,6-d8(0.51g，2.609mmol)和Pd(OAc)2(0.03g，0.130mmol)于甲苯(16mL)中的溶液中添加BINAP(0.16g，0.261mmol)和Cs2CO3(2.55g，7.827mmol)。将反应混合物在75℃下搅拌3小时，接着冷却至室温，在0℃下用H2O(500mL)淬灭，并用DCM(3×200mL)萃取。将合并的有机层用盐水(2×200mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩。将残余物通过制备型TLC(8％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的所需产物(1.20g，62％产率)。LCMS(ESI)C34H39D8BrN4O5的m/z[M+H]计算值：679.33；实验值：379.3。
步骤2：合成乙酸(S)-3-(5-溴-1-乙基-2-(2-(1-甲氧基乙基)-5-(哌嗪-1-基-2,2,3,3,5,5,6,6-d8)吡啶-3-基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯
在0℃下，向(S)-4-(5-(3-(3-乙酰氧基-2,2-二甲基丙基)-5-溴-1-乙基-1H-吲哚-2-基)-6-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯-2,2,3,3,5,5,6,6-d8(1.2g，1.765mmol)于DCM(6mL)中的溶液中添加TFA(2.7mL)。将所得到的混合物搅拌3小时，接着减压浓缩。将残余物用饱和NaHCO3(水溶液)碱化至pH 8。用DCM(3×50mL)萃取所得到的混合物并将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩。通过制备型TLC(9％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的所需产物(1.0g，88％产率)。LCMS(ESI)C29H31D8BrN4O3的m/z[M+H]计算值：579.28；实验值：579.3。
步骤3：合成乙酸(S)-3-(5-溴-2-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基-2,2,3,3,5,5,6,6-d8)-2-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-乙基-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯
在0℃下，向乙酸(S)-3-(5-溴-1-乙基-2-(2-(1-甲氧基乙基)-5-(哌嗪-1-基-2,2,3,3,5,5,6,6-d8)吡啶-3-基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯(1.2g，2.070mmol)于MeOH(12mL)中的溶液中添加AcOH(1.24g，20.70mmol)、(1-乙氧基环丙氧基)三甲基硅烷(541.34mg，3.105mmol)和NaBH3CN(1.30g，20.700mmol)。将所得到的混合物在室温下搅拌4小时，接着在0℃下添加饱和NH4Cl。用EtOAc(3×200mL)萃取所得到的混合物并将合并的有机层用盐水(1200mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩。将残余物通过制备型TLC(9％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的所需产物(1.0g，78％产率)。LCMS(ESI)C32H35D8BrN4O3的m/z[M+H]计算值：619.31；实验值：619.3。
中间体A-1和中间体A-2：合成(S)-2-((R)-7-(叔丁氧基羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-2-环戊基乙酸和(S)-2-((S)-7-(叔丁氧基羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-2-环戊基乙酸
步骤1：合成(R)-2-环戊基-2-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)乙酸苯甲酯
在N2下，在0℃下向(R)-2-环戊基-2-羟基乙酸苯甲酯(3g，12.8mmol)于DCM(50mL)中的溶液中添加Tf2O(3.79g，13.44mmol)和2,6-二甲基吡啶(1.51g，14.09mmol)并在0℃下将混合物搅拌2小时。将残余物用H2O(30mL)稀释并用DCM(3×50mL)萃取。将合并的有机层用盐水(2×50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并将滤液减压浓缩，得到产物，将其不经进一步纯化即直接使用。
步骤2：合成7-((S)-2-(苯甲氧基)-1-环戊基-2-氧代乙基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁酯
向(R)-2-环戊基-2-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)乙酸苯甲酯(4.86g，13.26mmol)于THF(20mL)中的溶液中添加2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁酯(2g，8.84mmol)和Cs2CO3(8.64g，26.51mmol)。在室温下，将混合物搅拌30分钟。将残余物用H2O(30mL)稀释并用EtOAc(3×30mL)萃取，并将合并的有机层用盐水(2×40mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(20→100％EtOAc/石油醚)纯化，得到呈固体状的产物(2.6g，66％产率)。LCMS(ESI)C26H38N2O4的m/z[M+H]计算值：443.3；实验值：443.2。
步骤3：合成(S)-2-((R)-7-(叔丁氧基羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-2-环戊基乙酸和(S)-2-((S)-7-(叔丁氧基羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-2-环戊基乙酸
在N2气氛下，向7-((S)-2-(苯甲氧基)-1-环戊基-2-氧代乙基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁酯(2.6g，5.87mmol)于MeOH(30mL)中的溶液中添加Pd/C(0.5g，10％/碳w/w)。使悬浮液脱气并用H2吹扫。在H2(15psi)下，在室温下将混合物搅拌4小时。将混合物过滤并将滤液减压浓缩，得到残余物。将残余物溶解于EtOAc(5mL)中并将混合物搅拌10分钟。接着，过滤混合物并将滤饼减压干燥。将固体通过SFC分离(CO2/MeOH(0.1％NH4OH))纯化，得到(S)-2-((R)-7-(叔丁氧基羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-2-环戊基乙酸(450mg，22％产率)和(S)-2-((S)-7-(叔丁氧基羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-2-环戊基乙酸(450mg，22％产率)。
中间体A-3和中间体A-4：(S)-2-((S)-7-(叔丁氧基羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-3-甲基丁酸和(S)-2-((R)-7-(叔丁氧基羰基)-2,7二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-3-甲基丁酸
步骤1：合成(R)-2-羟基-3-甲基丁酸苯甲酯
在N2下，在室温下向苯甲醇(19.22g，177.77mmol)于甲苯(200mL)中的搅拌的溶液中分数份添加TsOH●H2O(2.92g，16.93mmol)。在80℃下，将混合物搅拌30分钟，接着将混合物冷却至室温并添加(R)-2-羟基-3-甲基丁酸(20g，169.30mmol，1eq)。在80℃下，将所得到的混合物搅拌3小时。将反应混合物减压浓缩，得到呈无色油状的粗产物。将粗产物通过硅胶柱色谱法(20→100％EtOAc/石油醚)纯化，得到呈油状的产物(25g，71％产率)。
步骤2：合成(R)-3-甲基-2-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)丁酸苯甲酯
将(R)-2-羟基-3-甲基丁酸苯甲酯(15g，72.03mmol)于DCM(225mL)中的溶液冷却至0℃，接着在N2下用Tf2O(21.34g，75.63mmol)和2,6-二甲基吡啶(8.49g，79.23mmol)处理。在0℃下，将所得到的混合物搅拌1小时。将反应混合物添加至H2O(300mL)中。将混合物用DCM(3×100mL)萃取并将合并的有机层用盐水(400mL)洗涤，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过硅胶柱色谱法(5→10％EtOAc/石油醚:EtOAc)纯化，得到呈油状的产物(20g，82％产率)。
步骤3：合成7-((S)-1-(苯甲氧基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁酯
在0℃下，向(R)-3-甲基-2-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)丁酸苯甲酯(20g，58.77mmol)和2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁酯(11.08g，48.97mmol)、Cs2CO3(47.87g，146.92mmol)于THF(300mL)中的溶液中。在室温下，将所得到的混合物搅拌2小时。过滤反应混合物并将滤饼用THF(3×100mL)洗涤。接着，将滤液减压浓缩，得到呈油状的粗产物。将油状物通过硅胶柱色谱法(10→30％EtOAc/石油醚)纯化，得到产物(13.2g，64％产率)。LCMS(ESI)C24H37N2O4的m/z[M+H]计算值：417.27；实验值：417.2
步骤4：合成(S)-7-((S)-1-(苯甲氧基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁酯和(R)-7-((S)-1-(苯甲氧基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁酯
将7-((S)-1-(苯甲氧基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁酯(10g)通过SFC分离纯化，得到(S)-7-((S)-1-(苯甲氧基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁酯(3.4g)和(R)-7-((S)-1-(苯甲氧基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁酯(3.9g)。
步骤5：合成(S)-2-((R)-7-(叔丁氧基羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-3-甲基丁酸
在Ar下，向(R)-7-((S)-1-(苯甲氧基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁酯(2.5g，6.00mmol)于MeOH(25mL)中的溶液中添加Pd/C(1.5g，10％纯度)。在减压下使悬浮液脱气并用H2吹扫数次。在H2(15psi)下，在室温下将混合物搅拌1小时。将反应混合物过滤，接着将滤液减压浓缩，得到呈固体状的产物(1.9g，粗品)。
步骤6：合成(S)-2-((S)-7-(叔丁氧基羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-3-甲基丁酸
在Ar下，向(S)-7-((S)-1-(苯甲氧基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁酯(3g，7.20mmol)于MeOH(5mL)中的溶液中添加Pd/C(1g，10％纯度)。在减压下使悬浮液脱气并用H2吹扫数次。在H2(15psi)下，在室温下将混合物搅拌1小时。将反应混合物过滤，接着将滤液减压浓缩，得到呈固体状的产物(2.3g，98％产率)。
中间体B-1：合成(2R,3R)-3-环丙基氮杂环丙烷-2-甲酸锂
步骤1：合成(R,E)-N-(环丙基亚甲基)-4-甲基苯亚磺酰胺
在N2下，在室温下向环丙烷甲醛(6g，85.60mmol)于THF(120mL)中的溶液中添加(R)-4-甲基苯亚磺酰胺(13.29g，85.60mmol)和Ti(OEt)4(39.05g，171.21mmol)。在75℃下，将混合物搅拌2小时。在0-15℃下，将反应混合物倒入盐水/H2O(1:1，600mL)中。将混合物过滤通过硅藻土垫过滤并将该垫用EtOAc(6×200mL)洗涤。将合并的滤液用EtOAc(2×200mL)萃取。将合并的有机层用盐水(200mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。将粗产物通过硅胶柱色谱法(0→10％EtOAc/石油醚)纯化，得到呈固体状的产物(14.6g，82％产率)。
步骤2：合成(2R,3R)-3-环丙基-1-((R)-对甲苯基亚磺酰基)氮杂环丙烷-2-甲酸乙酯
在N2下，在-70℃下经10分钟向2-溴乙酸乙酯(23.52g，140.86mmol)于THF(700mL)中的溶液中添加LiHMDS(1M，140.86mL)。在-70℃下，将混合物搅拌20分钟。在-70℃下，将(R,E)-N-(环丙基亚甲基)-4-甲基苯亚磺酰胺(14.6g，70.43mmol)于THF(150mL)中的溶液添加至反应溶液中，保持10分钟。接着，在N2下，在-70℃下将混合物搅拌1小时20分钟。将反应混合物倒入冷H2O(1.2L)并在室温下搅拌5分钟。将水层用EtOAc(3×300mL)萃取。将合并的有机层用盐水(300mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。将粗产物通过硅胶柱色谱法(0→10％EtOAc/石油醚)纯化，得到呈油状的产物(11g，53％产率)。LCMS(ESI)C15H20NO3S的m/z[M+H]计算值：294.11；实验值：294.1。
步骤3：合成(2R,3R)-3-环丙基氮杂环丙烷-2-甲酸乙酯
将(2R,3R)-3-环丙基-1-[(R)-对甲苯基亚磺酰基]氮杂环丙烷-2-甲酸乙酯(6g，20.45mmol)溶解于无水THF(300mL)中。在N2下，在-65℃下经40分钟逐滴添加MeMgBr(3M，13.63mL)。将反应混合物搅拌5分钟。在-65℃下，逐滴添加NH4Cl饱和水溶液(90mL)。移开冷却浴，并将反应混合物升温至室温。添加EtOAc(300mL)并将有机层分离，并减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(0→50％EtOAC/石油醚)纯化，得到呈油状的产物。
步骤4：(2R,3R)-3-环丙基-1-甲基氮杂环丙烷-2-甲酸乙酯
向(2R,3R)-3-环丙基氮杂环丙烷-2-甲酸乙酯(400mg，2.58mmol)于DCE(8mL)中的溶液中添加甲基硼酸(462.85mg，7.73mmol)、2,2'-联吡啶(402.54mg，2.58mmol)、Cu(OAc)2(468.14mg，2.58mmol)和Na2CO3(819.54mg，7.73mmol)。在45℃下，将反应混合物搅拌40小时。将混合物倒入NH4Cl水溶液(15mL)中并用DCM(3×15mL)萃取，将合并的有机相用盐水(20mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(0→50％EtOAc/石油醚)纯化，得到呈油状的产物(230mg，53％产率)。LCMS(ESI)C9H16NO2的m/z[M+H]计算值：170.1；实验值：170.1。
步骤5：(2R,3R)-3-环丙基-1-甲基氮杂环丙烷-2-甲酸锂
向(2R,3R)-3-环丙基-1-甲基氮杂环丙烷-2-甲酸乙酯(230mg，1.36mmol)于THF(2mL)中的溶液中添加LiOH●H2O(114.07mg，2.72mmol)于H2O(1mL)中的溶液。在室温下，将反应混合物搅拌1小时。在0℃下，用0.5N HCl将pH值调到约8，并将溶液直接冻干，得到呈固体状的产物(230mg，粗品)。
中间体B-2：合成(2R,3R)-3-环丙基-1-(甲基-d3)氮杂环丙烷-2-甲酸锂
步骤1：合成(2R,3R)-3-环丙基-1-((R)-对甲苯亚磺酰基)氮杂环丙烷-2-甲酸苯甲酯(2R,3R)-3-环丙基-1-((R)-对甲苯亚磺酰基)氮杂环丙烷-2-甲酸苯甲酯的制备可使用与关于中间体B-1步骤2所描述相当的程序，使用可商购的起始物质实现。
在-60℃下，经30分钟向(R)-N-(环丙基亚甲基)-4-甲基苯亚磺酰基(100g，482.4mmol)和2-溴乙酸苯甲酯(143.66g，627.1mmol)于THF(1L)中的溶液中逐滴添加LiHMDS(627.1mL，627.1mmol)。将所得到的混合物在-40℃下搅拌1.5小时，接着添加冷H2O(1.5L)。用EtOAc(2×1L)萃取水层并将合并的有机层用H2O(2×2L)和盐水(2L)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(5％EtOAc/石油醚)纯化，得到呈油状的所需产物(137g，80％产率)。
步骤2：合成(2R,3R)-3-环丙基氮杂环丙烷-2-甲酸苯甲酯
在0℃下，向(2R,3R)-3-环丙基-1-((R)-对甲苯亚磺酰基)氮杂环丙烷-2-甲酸苯甲酯(60g，168.80mmol)于丙酮(786mL)、H2O(131mL)和MeOH(102mL)中的溶液中添加TFA(96.24g，844.0mmol)。将所得到的混合物在0℃下搅拌60分钟，接着在0℃下，将反应混合物添加至NH3●H2O(500mL的28％NH3●H2O于1L H2O中)中。用EtOAc(3×700mL)萃取所得到的混合物并将合并的有机层用H2O(3×400mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(9％EtOAc/石油醚)纯化，得到所需产物。LCMS(ESI)C13H15NO2的m/z[M+H]计算值218.12；实验值：218.3。
步骤3：合成(2R,3R)-3-环丙基-1-(甲基-d3)氮杂环丙烷-2-甲酸苯甲酯
在0℃下，向(2R,3R)-3-环丙基氮杂环丙烷-2-甲酸苯甲酯(3.0g，13.81mmol)于THF(50mL)中的溶液中添加MS(3g)和Ag2CO3(9.45g，34.54mmol)、CD3I(5.0g，34.54mmol)。将所得到的混合物在室温下搅拌16小时。接着，用EtOAc(3×100mL)萃取所得到的混合物并将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩。将残余物通过反相色谱法(20→60％MeCN/H2O)纯化，得到呈油状的所需产物(1.80g，56％产率)。LCMS(ESI)C14H14D3NO2的m/z[M+H]计算值235.15；实验值：235.2。
步骤4：合成(2R,3R)-3-环丙基-1-(甲基-d3)氮杂环丙烷-2-甲酸锂
在0℃下，向(2R,3R)-3-环丙基-1-(甲基-d3)氮杂环丙烷-2-甲酸苯甲酯(1.80g，7.69mmol)于THF(20mL)中的溶液中添加LiOH●H2O(0.48g，11.54mmol)于H2O(20mL)中的溶液。将所得到的混合物在室温下搅拌2小时，接着H2O(40mL)。将混合物用DCM(3×100mL)萃取，接着将有机相减压浓缩，得到呈固体状的所需产物(1.0g，87％产率)。LCMS(ESI)C7H8D3NO2的m/z[M+H]计算值145.11；实验值：145.2。
中间体B-3：合成(2R,3R)-3-环丙基-1-甲基氮杂环丙烷-2-甲酸锂-3-d
步骤1：合成环丙基甲-d2-醇
在-19℃下，经2.5小时向环丙烷甲酸甲酯(20g，199.77mmol)于THF(200mL)中的溶液中添加LiAlD4(10.30mL，199.77mmol)。将反应混合物在-19℃下搅拌1小时，接着添加H2O(20mL)和15％NaOH溶液(20mL)。再添加H2O(60mL)，接着过滤混合物。将滤液用DCM(1000mL)萃取，并将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩，得到呈油状的所需产物(12.3g，83％产率)。
步骤2：合成环丙烷甲醛-d
在0℃下，向环丙基甲-d2-醇(12g，161.90mmol)于DCM(120mL)中的溶液中添加PCC(52.35g，242.86mmol)。将反应混合物在16℃下搅拌18小时，接着过滤，并减压浓缩，得到呈油状的所需产物(5g，粗品)。
步骤3：合成(R,E)-N-(环丙基亚甲基-d)-4-甲基苯亚磺酰胺
向MS(3.6g)于DCM(18mL)中的悬浮液中添加环丙烷甲醛-d(4.95g，69.58mmol)，随后添加吡咯烷(96.80μL，1.16mmol)和(R)-4-甲基苯亚磺酰胺(3.6g，23.19mmol)。将混合物在室温下搅拌17小时。接着，过滤反应混合物，并将合并的有机相减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(0→17％EtOAc/石油醚)纯化，得到呈固体状的所需产物(4.42g，92％产率)。LCMS(ESI)C11H12DNOS的m/z[M+H]计算值：209.09；实验值：209.1。
步骤4：合成(2R,3R)-3-环丙基-1-((R)-对甲苯亚磺酰基)氮杂环丙烷-2-甲酸苯甲酯-3-d
在N2下，在-70℃下经20分钟向2-溴乙酸苯甲酯(879.78mg，3.84mmol)于THF(16.4mL)中的溶液中添加LiHMDS(1M，3.84mL)，接着将混合物在-70℃下搅拌1小时。在-70℃下，经20分钟将(R,E)-N-(环丙基亚甲基-d)-4-甲基苯亚磺酰胺(0.4g，1.92mmol)于THF(3.6mL)中的溶液添加至反应混合物中。将混合物在-70℃下搅拌1小时，接着倒入冷H2O(10mL)中并在室温下搅拌5分钟。用EtOAc(3×10mL)萃取水层并将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩，得到残余物。将粗产物通过硅胶柱色谱法(0→17％EtOAc/石油醚)纯化，得到呈油状的所需产物(354.7mg，52％产率)。LCMS(ESI)C20H20DNO3S的m/z[M+H]计算值：357.14；实验值：357.2。
步骤5：合成(2R,3R)-3-环丙基氮杂环丙烷-2-甲酸苯甲酯-3-d
在0℃下，向(2R,3R)-3-环丙基-1-((R)-对甲苯亚磺酰基)氮杂环丙烷-2-甲酸苯甲酯-3-d(350mg，854.24μmol)于丙酮(4mL)和H2O(662μL)中的溶液中添加TFA(316.2μL，4.27mmol)。将混合物在0℃下搅拌1.5小时，接着添加NH3●H2O(0.92mL，25％)。用EtOAc(3×5mL)萃取混合物，并将合并的有机层用盐水(3×10mL)洗涤，过滤，用Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(0→17％EtOAc/石油醚)纯化，得到呈油状的所需产物(133mg，65％产率)。LCMS(ESI)C13H14DNO2的m/z[M+H]计算值：219.12；实验值：219.2。
步骤6：合成(2R,3R)-3-环丙基-1-甲基氮杂环丙烷-2-甲酸苯甲酯-3-d
向(2R,3R)-3-环丙基氮杂环丙烷-2-甲酸苯甲酯-3-d(100mg，458.15μmol)于MeCN(2mL)中的溶液中添加甲基硼酸(82.27mg，1.37mmol)、2,2'-联吡啶(71.56mg，458.15μmol)、Cu(OAc)2(83.22mg，458.15μmol)、Na2CO3(145.68mg，1.37mmol)及MS(400mg)。将反应混合物在45℃下搅拌10小时。将混合物倒入NH4Cl水溶液(5mL)中并用DCM(3×5mL)萃取，将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(1→14％EtOAc/石油醚)纯化，得到呈油状的所需产物(72mg，63％产率)。LCMS(ESI)C14H16DNO2的m/z[M+H]计算值：233.14；实验值：233.2。
步骤7：合成(2R,3R)-3-环丙基-1-甲基氮杂环丙烷-2-甲酸锂-3-d
向(2R,3R)-3-环丙基-1-甲基氮杂环丙烷-2-甲酸苯甲酯-3-d(0.77g，2.92mmol)于THF(5.85mL)和H2O(1.85mL)中的溶液中添加LiOH●H2O(244.81mg，5.83mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15小时，接着添加H2O(5mL)。将混合物直接冻干，得到呈固体状的产物(570mg，粗品)。
实施例A22：合成(2S)-2-环戊基-2-((S)-7-((2R,3R)-3-环丙基-1-甲基氮杂环丙烷-2-羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-N-((63S,4S,Z)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)乙酰胺
步骤1：合成(5S)-7-((1S)-1-环戊基-2-(((63S,4S,Z)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)氨基)-2-氧代乙基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁酯
在0℃下，向(63S,4S,Z)-4-氨基-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-5,7-二酮(1.0g，1.236mmol)和DIPEA(798.84mg，6.18mmol)于DMF(10mL)中的搅拌溶液中添加(S)-2-((S)-7-(叔丁氧羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-2-环戊基乙酸(653.5mg，1.854mmol)和HATU(611mg，1.61mmol)。将所得到的混合物在室温下搅拌2小时。用EtOAc(3×30mL)萃取混合物，并将合并的有机层用盐水(40mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩。将残余物通过制备型TLC(6％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的所需产物(1.27g，90％产率)。LCMS(ESI)C60H81F3N10O7S的m/z[M+H]计算值1143.61；实验值：1143.3。
步骤2：合成(2S)-2-环戊基-N-((63S,4S,Z)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)-2-((S)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)乙酰胺
在0℃下，向(5S)-7-((1S)-1-环戊基-2-(((63S,4S,Z)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)氨基)-2-氧代乙基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁酯(1.27g，1.11mmol)于DCM(15mL)中的溶液中添加TFA(7mL，71.4mmol)。将混合物搅拌2小时，接着减压浓缩。将残余物溶解于EtOAc(30mL)并用饱和NaHCO3(水溶液)调至pH 8。用EtOAc(3×30mL)萃取所得到的混合物，并将合并的有机层用盐水(40mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩，得到呈固体状的所需产物(1.1g，95％产率)。LCMS(ESI)C55H73F3N10O5S的m/z[M+H]计算值1043.55；实验值：1043.7。
步骤3：合成(2S)-2-环戊基-2-((S)-7-((2R,3R)-3-环丙基-1-甲基氮杂环丙烷-2-羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-N-((63S,4S,Z)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)乙酰胺
在0℃下，向(2S)-2-环戊基-N-((63S,4S,Z)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)-2-((S)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)乙酰胺(610mg，0.585mmol)和(2R,3R)-3-环丙基-1-甲基氮杂环丙烷-2-甲酸锂(169mg，1.150mmol)于DMF(6mL)中的搅拌溶液中添加DIPEA(755mg，5.85mmol)和HATU(267mg，0.702mmol)。将所得到的混合物在室温下搅拌1小时。通过添加冷H2O(30mL)淬灭反应并用EtOAc(3×20mL)萃取所得到的混合物。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩。将残余物通过反相色谱法(MeCN/H2O)纯化，得到呈固体状的所需产物(350mg，51％产率)。LCMS(ESI)C62H82F3N11O6S的m/z[M+H]计算值1166.62；实验值：1166.7。
实施例A26：合成(2S)-2-环戊基-2-((S)-7-((2R,3R)-3-环丙基-1-甲基氮杂环丙烷-2-羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-N-((22S,63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)乙酰胺
步骤1：合成(5S)-7-((1S)-1-环戊基-2-(((22S,63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)氨基)-2-氧代乙基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁酯
在0℃下，向(22S,63S,4S)-4-氨基-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-5,7-二酮(28g，34.43mmol)和(S)-2-((S)-7-(叔丁氧羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-2-环戊基乙酸(18.27g，51.76mmol)于DMF(300mL)中的溶液中添加DIPEA(240.4mL，1.381mol)和COMU(19.21g，44.88mmol)。将所得到的混合物在室温下搅拌1小时。用H2O淬灭反应并用EtOAc(2×500mL)萃取混合物。将合并的有机层用盐水(2150mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩。将残余物通过制备型TLC(10％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的所需产物(24.4g，62％产率)。LCMS(ESI)C61H87F3N10O8的m/z[M+H]计算值1145.68；实验值：1145.5。
步骤2：合成(2S)-2-环戊基-N-((22S,63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)-2-((S)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)乙酰胺
在0℃下，向(5S)-7-((1S)-1-环戊基-2-(((22S,63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)氨基)-2-氧代乙基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁酯(27.2g，23.76mol)于DCM(200mL)中的溶液中添加HCl的1,4-二噁烷溶液(240mL)。将所得到的混合物在室温下搅拌2小时，接着将混合物减压浓缩，得到呈固体状的所需产物(28g，粗品)。LCMS(ESI)C56H79F3N10O6的m/z[M+H]计算值1045.62；实验值：1045.5。
步骤3：合成(2S)-2-环戊基-2-((S)-7-((2R,3R)-3-环丙基-1-甲基氮杂环丙烷-2-羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-N-((22S,63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)乙酰胺
在0℃下，向(2S)-2-环戊基-N-((22S,63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)-2-((S)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)乙酰胺(22g，21.05mmol)、DIPEA(13.57g，0.105mol)和(2R,3R)-3-环丙基-1-甲基氮杂环丙烷-2-甲酸锂(6.18g，42.1mmol)于DMF(400mL)中的溶液中添加HATU(8.79g，23.15mmol)。将所得到的混合物在0℃下搅拌1小时。接着，用10％MeOH/DCM(3×20mL)萃取混合物并将合并的有机层用盐水(3×20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩。将残余物通过反相色谱法(MeCN/H2O)纯化，得到呈固体状的所需产物(10.1g，41％产率)。LCMS(ESI)C63H88F3N11O7的m/z[M+H]计算值1168.69；实验值：1168.8。
实施例A6：合成(2S)-2-环戊基-2-((S)-7-((2R,3R)-3-环丙基-1-甲基氮杂环丙烷-2-羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-N-((63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-4-基)乙酰胺
步骤1：合成(5S)-7-((1S)-1-环戊基-2-(((63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-4-基)氨基)-2-氧代乙基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁酯
在0℃下，向(S)-2-((S)-7-(叔丁氧羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-2-环戊基乙酸(534.46mg，1.517mmol)和DIPEA(734.89mg，5.688mmol)于MeCN(10mL)中的溶液中添加(63S,4S)-4-氨基-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-5,7-二酮(760mg，0.948mmol)于MeCN(5mL)中的溶液。向混合物中添加HATU(468.44mg，1.232mmol)于MeCN(5mL)中的溶液。将所得到的混合物在室温下搅拌3小时。接着，用EtOAc(150mL)萃取混合物并将合并的有机层用盐水(2×50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩。将残余物通过制备型TLC(10％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的所需产物(1.06g，93％产率)。LCMS(ESI)C63H84F3N9O7的m/z[M+H]计算值1136.65；实验值：1136.4。
步骤2：合成(2S)-2-环戊基-N-((63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-4-基)-2-((S)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)乙酰胺
在0℃下，向(5S)-7-((1S)-1-环戊基-2-(((63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-4-基)氨基)-2-氧代乙基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁酯(1.03g，0.906mmol)于DCM(16mL)中的溶液中添加TFA(4mL)。将所得到的混合物在0℃下搅拌1小时，接着用饱和NaHCO3(水溶液)中和至pH 7。用DCM(50mL)萃取所得到的混合物并将合并的有机层用盐水(2×50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩，得到呈固体状的所需产物(890mg，粗品)。LCMS(ESI)C58H76F3N9O5的m/z[M+H]计算值1036.60；实验值：1036.6。
步骤3：合成(2S)-2-环戊基-2-((S)-7-((2R,3R)-3-环丙基-1-甲基氮杂环丙烷-2-羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-N-((63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-4-基)乙酰胺
在0℃下，向(2R,3R)-3-环丙基-1-甲基氮杂环丙烷-2-甲酸锂(113.48mg，0.772mmol)和DIPEA(299.32mg，2.316mmol)于DMF(4mL)中的溶液中添加HATU(190.79mg，0.502mmol)于DMF(4mL)中的溶液。向混合物中添加(2S)-2-环戊基-N-((63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-4-基)-2-((S)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)乙酰胺(400mg，0.386mmol)于DMF(4mL)中的溶液。将所得到的混合物在0℃下搅拌3小时。接着，用EtOAc(100mL)萃取混合物并将合并的有机层用盐水(2×50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩。将残余物通过制备型TLC(6％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的所需产物(183mg，67％产率)。LCMS(ESI)C65H85F3N10O6的m/z[M+H]计算值1159.67；实验值：1159.8。
实施例A5：合成(2S)-2-((S)-7-((2R,3R)-3-环丙基-1-甲基氮杂环丙烷-2-羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-N-((63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-4-基)-3-甲基丁酰胺
步骤1：合成(5S)-7-((2S)-1-(((63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-4-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁酯
在0℃下，向(63S,4S)-4-氨基-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-5,7-二酮(500mg，0.668mmol)和DIPEA(863.94mg，6.680mmol)于MeCN(5mL)中的溶液中添加(S)-2-((S)-7-(叔丁氧羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-3-甲基丁酸(327.32mg，1.002mmol)和HATU(330.42mg，0.868mmol)。将所得到的混合物在室温下搅拌4小时。用EtOAc(2×20mL)萃取所得到的混合物并将合并的有机层用盐水(3×10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩。将残余物通过制备型TLC(10％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的所需产物(620mg，87％产率)。LCMS(ESI)C61H85N9O7的m/z[M+H]计算值1056.67；实验值：1056.9。
步骤2：合成(2S)-N-((63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-4-基)-3-甲基-2-((S)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)丁酰胺
在0℃下，将(5S)-7-((2S)-1-(((63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-4-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁酯(610mg，0.577mmol)和TFA(6.00mL)于DCM(12mL)中的溶液搅拌2小时。将所得到的混合物减压浓缩。将残余物用饱和NaHCO3(水溶液)中和至pH 8并用DCM(2×100mL)萃取水层。将合并的有机层用盐水(3×100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩，得到呈固体状的所需产物(620mg，粗品)。LCMS(ESI)C56H77N9O5的m/z[M+H]计算值956.61；实验值：956.8。
步骤3：合成(2S)-2-((S)-7-((2R,3R)-3-环丙基-1-甲基氮杂环丙烷-2-羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-N-((63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-4-基)-3-甲基丁酰胺
在0℃下，向(2S)-N-((63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-4-基)-3-甲基-2-((S)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)丁酰胺(400mg，0.418mmol)和DIPEA(270.30mg，2.090mmol)于DCM(8mL)中的溶液中添加(2R,3R)-3-环丙基-1-甲基氮杂环丙烷-2-甲酸锂(184.59mg，1.254mmol)和COMU(232.88mg，0.543mmol)于DCM(4mL)中的溶液。将所得到的混合物在0℃下搅拌2小时。用EtOAc(3×20mL)萃取混合物并将合并的有机层用盐水(3×20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩。将残余物通过制备型TLC(10％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的所需产物(127.4mg，28％产率)。LCMS(ESI)C63H86N10O6的m/z[M+H]计算值1079.68；实验值：1079.9。
实施例A27：合成(2S)-2-环戊基-2-((S)-7-((2R,3R)-3-环丙基-1-甲基氮杂环丙烷-2-羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-N-((22S,63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)乙酰胺
步骤1：合成(5S)-7-((1S)-1-环戊基-2-(((22S,63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)氨基)-2-氧代乙基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁酯
在0℃下，向(S)-2-((S)-7-(叔丁氧羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-2-环戊基乙酸(236.07mg，0.670mmol)和DIPEA(332.93mg，2.575mmol)于DMF(5mL)中的溶液中添加HATU(235.07mg，0.618mmol)。将所得到的混合物在0℃下搅拌10分钟。向混合物中添加(22S,63S,4S)-4-氨基-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-5,7-二酮(390mg，0.515mmol)。将混合物在0℃下搅拌1小时，接着减压浓缩。将残余物通过反相色谱法(0→100％MeCN/含NH4HCO3的H2O)纯化，得到呈固体状的所需产物(400mg，71％产率)。LCMS(ESI)C61H90N10O8的m/z[M+H]计算值1091.70；实验值：1091.5。
步骤2：合成(2S)-2-环戊基-N-((22S,63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)-2-((S)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)乙酰胺
在0℃下，向(5S)-7-((1S)-1-环戊基-2-(((22S,63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)氨基)-2-氧代乙基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁酯(400mg，0.366mmol)于DCM(3mL)中的溶液中添加TFA(1.5mL)。将所得到的混合物在0℃下搅拌1小时。将混合物减压浓缩，接着用饱和NaHCO3(水溶液)中和至pH 7。用10％MeOH/DCM(3×20mL)萃取所得到的混合物并将合并的有机层用盐水(3×10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩，得到呈固体状的所需产物(350mg，96％产率)。LCMS(ESI)C56H82N10O6的m/z[M+H]计算值991.65；实验值：991.5。
步骤3：合成(2S)-2-环戊基-2-((S)-7-((2R,3R)-3-环丙基-1-甲基氮杂环丙烷-2-羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-N-((22S,63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)乙酰胺
在0℃下，向(2S)-2-环戊基-N-((22S,63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)-2-((S)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)乙酰胺(350mg，0.353mmol)、DIPEA(456.30mg，3.530mmol)和(2R,3R)-3-环丙基-1-甲基氮杂环丙烷-2-甲酸锂(103.87mg，0.706mmol)于DMF(7mL)中的溶液中添加HATU(201.37mg，0.529mmol)。将所得到的混合物在0℃下搅拌1小时。将残余物通过反相色谱法(0→100％MeCN/含NH4HCO3的H2O)纯化，得到呈固体状的所需产物(93mg，21％产率)。LCMS(ESI)C63H91N11O7的m/z[M+H]计算值1114.72；实验值：1114.8。
实施例A25：合成(2S)-2-((S)-7-((2R,3R)-3-环丙基-1-甲基氮杂环丙烷-2-羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-N-((22S,63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)-3-甲基丁酰胺
步骤1：合成(5S)-7-((2S)-1-(((22S,63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁酯
在0℃下，向(22S,63S,4S)-4-氨基-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-5,7-二酮(4g，4.932mmol)和(S)-2-((S)-7-(叔丁氧羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-3-甲基丁酸(2.42g，7.398mmol)于DMF(50mL)中的溶液中添加DIPEA(12.89mL，73.980mmol)和HATU(2.25g，5.918mmol)。将所得到的混合物在室温下搅拌1小时。接着，用EtOAc(3×100mL)萃取混合物并将合并的有机层用盐水(3×100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩。将残余物通过制备型TLC纯化，得到呈固体状的所需产物(3.2g，58％产率)。LCMS(ESI)C59H85F3N10O8的m/z[M+H]计算值1119.66；实验值：1119.4。
步骤2：合成(2S)-N-((22S,63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)-3-甲基-2-((S)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)丁酰胺
在0℃下，向(5S)-7-((2S)-1-(((22S,63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁酯(500mg，0.447mmol)于DCM(5mL)中的溶液中添加HCl的1,4-二噁烷溶液(5mL，164.679mmol)。将所得到的混合物在室温下搅拌2小时。将所得到的混合物减压浓缩，得到所需产物。LCMS(ESI)C54H77F3N10O6的m/z[M+H]计算值1019.61；实验值：1019.7。
步骤3：合成(2S)-2-((S)-7-((2R,3R)-3-环丙基-1-甲基氮杂环丙烷-2-羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-N-((22S,63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)-3-甲基丁酰胺
在0℃下，向(2S)-N-((22S,63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)-3-甲基-2-((S)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)丁酰胺(700mg，0.687mmol)和(2R,3R)-3-环丙基-1-甲基氮杂环丙烷-2-甲酸锂(202.05mg，1.374mmol)于DMF(7mL)中的溶液中添加DIPEA(4.78mL，27.480mmol)和HATU(391.69mg，1.030mmol)。将所得到的混合物在室温下搅拌1小时。接着，将混合物用EtOAc(100mL)稀释并将有机层用盐水(2×80mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩。将残余物通过制备型TLC(6％MeOH/DCM)纯化，随后通过反相色谱法(18→20％MeCN/含0.1％甲酸的H2O)纯化，得到所需产物(175.6mg，22％产率)。LCMS(ESI)C61H86F3N11O7的m/z[M+H]计算值1142.68；实验值：1142.7。
实施例A23：合成(2S)-2-环戊基-2-((S)-7-((2R,3R)-3-环丙基-1-甲基氮杂环丙烷-2-羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-N-((63S,4S,Z)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)乙酰胺
步骤1：合成(5S)-7-((1S)-1-环戊基-2-(((63S,4S,Z)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)氨基)-2-氧代乙基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁酯
在0℃下，向(S)-2-((S)-7-(叔丁氧羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-2-环戊基乙酸(245.10mg，0.696mmol)和DIPEA(599.14mg，4.640mmol)于DMF(3mL)中的溶液中添加HATU(229.15mg，0.603mmol)和(63S,4S,Z)-4-氨基-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-5,7-二酮(350mg，0.464mmol)。将所得到的混合物在室温下搅拌2小时，接着添加冷H2O。用EtOAc(3×30mL)萃取所得到的混合物并将合并的有机层用盐水(2×10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩。将残余物通过制备型TLC(6％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的所需产物(440mg，87％产率)。LCMS(ESI)C60H84N10O7S的m/z[M+H]计算值1089.63；实验值：1089.5。
步骤2：合成(2S)-2-环戊基-N-((63S,4S,Z)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)-2-((S)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)乙酰胺
将(5S)-7-((1S)-1-环戊基-2-(((63S,4S,Z)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)氨基)-2-氧代乙基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁酯(420mg，0.386mmol)于DCM(4.5mL)中的溶液添加TFA(1.5mL)。将反应混合物在室温下搅拌2小时。接着，将混合物用饱和NaHCO3(水溶液)碱化至pH 8。用EtOAc(3×40mL)萃取混合物并将合并的有机层用盐水(2×15mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩，得到呈固体状的所需产物(400mg，粗品)。LCMS(ESI)C55H76N10O5S的m/z[M+H]计算值989.58；实验值：990.0。
步骤3：合成(2S)-2-环戊基-2-((S)-7-((2R,3R)-3-环丙基-1-甲基氮杂环丙烷-2-羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-N-((63S,4S,Z)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)乙酰胺
在0℃下，向(2S)-2-环戊基-N-((63S,4S,Z)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)-2-((S)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)乙酰胺(350mg，0.354mmol)和(2R,3R)-3-环丙基-1-甲基氮杂环丙烷-2-甲酸锂(104.08mg，0.708mmol)于DMF(4mL)中的溶液中添加DIPEA(457.23mg，3.540mmol)和COMU(227.26mg，0.531mmol)。将所得到的混合物在室温下搅拌2小时，接着添加冷H2O。用EtOAc(3×20mL)萃取所得到的混合物并将合并的有机层用盐水(2×20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩。将残余物通过制备型TLC(8％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的所需产物(130mg，33％产率)。LCMS(ESI)C62H85N11O6S的m/z[M+H]计算值1112.65；实验值：1112.7。
实施例A11：合成(2S)-2-((S)-7-((2R,3R)-3-环丙基-1-甲基氮杂环丙烷-2-羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-N-((63S,4S,Z)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)-3-甲基丁酰胺
步骤1：合成(5S)-7-((2S)-1-(((63S,4S,Z)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁酯
在0℃下，向(63S,4S,Z)-4-氨基-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-5,7-二酮(400mg，0.530mmol)和(S)-2-((S)-7-(叔丁氧羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-3-甲基丁酸(259.42mg，0.795mmol)于DMF(4mL)中的溶液中添加DIPEA(2.74g，21.200mmol)和HATU(261.88mg，0.689mmol)。将所得到的混合物在室温下搅拌2小时，接着添加冷H2O。用EtOAc(3×30mL)萃取所得到的混合物并将合并的有机层用盐水(2×20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩。将残余物通过制备型TLC(6％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的所需产物(520mg，92％产率)。LCMS(ESI)C58H82N10O7S的m/z[M+H]计算值1063.62；实验值：1063.5。
步骤2：合成(2S)-N-((63S,4S,Z)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)-3-甲基-2-((S)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)丁酰胺
在室温下，将(5S)-7-((2S)-1-(((63S,4S,Z)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁酯(500mg，0.470mmol)和TFA(2mL)于DCM(6mL)中的溶液搅拌2小时。接着，将所得到的混合物减压浓缩并将残余物溶解于EtOAc(20mL)中。用饱和NaHCO3(水溶液)将混合物碱化至pH 8。用EtOAc(3×20mL)萃取水层并将合并的有机层用盐水(2×30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩，得到呈固体状的所需产物(483mg，粗品)。LCMS(ESI)C53H74N10O5S的m/z[M+H]计算值963.57；实验值：963.6。
步骤3：合成(2S)-2-((S)-7-((2R,3R)-3-环丙基-1-甲基氮杂环丙烷-2-羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-N-((63S,4S,Z)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)-3-甲基丁酰胺
在0℃下，向(2S)-N-((63S,4S,Z)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)-3-甲基-2-((S)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)丁酰胺(400mg，0.415mmol)和(2R,3R)-3-环丙基-1-甲基氮杂环丙烷-2-甲酸锂(122.16mg，0.830mmol)于DMF(4mL)中的溶液中添加DIPEA(536.67mg，4.150mmol)和COMU(231.18mg，0.539mmol)。将所得到的混合物在室温下搅拌2小时，接着添加冷H2O(40mL)。用EtOAc(3×20mL)萃取所得到的混合物并将合并的有机层用盐水(2×30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩。将残余物通过制备型TLC(8％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的所需产物(151.7mg，34％产率)。LCMS(ESI)C60H83N11O6S的m/z[M+H]计算值1086.63；实验值：1086.6。
实施例A10：合成(2S)-2-((S)-7-((2R,3R)-3-环丙基-1-甲基氮杂环丙烷-2-羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-N-((63S,4S,Z)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)-3-甲基丁酰胺
步骤1：合成(5S)-7-((2S)-1-(((63S,4S,Z)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁酯
在0℃下，向(63S,4S,Z)-4-氨基-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-5,7-二酮(1g，1.236mmol)和(S)-2-((S)-7-(叔丁氧羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-3-甲基丁酸(605.28mg，1.854mmol)于DMF(11mL)中的溶液中添加DIPEA(1.60g，12.360mmol)和HATU(611.03mg，1.607mmol)。将所得到的混合物在室温下搅拌2小时，接着添加冷H2O(50mL)。用EtOAc(3×25mL)萃取所得到的混合物并将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(6％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的所需产物(1.2g，87％产率)。LCMS(ESI)C58H79F3N10O7S的m/z[M+H]计算值1117.59；实验值：1117.8。
步骤2：合成(2S)-N-((63S,4S,Z)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)-3-甲基-2-((S)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)丁酰胺
在0℃下，将(5S)-7-((2S)-1-(((63S,4S,Z)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁酯(1.2g，1.074mmol)和TFA(6mL)于DCM(12mL)中的溶液搅拌2小时。将所得到的混合物减压浓缩并用饱和NaHCO3(水溶液)将残余物碱化至pH 8。用DCM(3×50mL)萃取所得到的混合物并将合并的有机层用盐水(3×50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩，得到呈固体状的所需产物(987mg，粗品)。LCMS(ESI)C53H71F3N10O5S的m/z[M+H]计算值1017.54；实验值：1017.3。
步骤3：合成(2S)-2-((S)-7-((2R,3R)-3-环丙基-1-甲基氮杂环丙烷-2-羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-N-((63S,4S,Z)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)-3-甲基丁酰胺
在0℃下，向(2S)-N-((63S,4S,Z)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)-3-甲基-2-((S)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)丁酰胺(977mg，0.960mmol)和(2R,3R)-3-环丙基-1-甲基氮杂环丙烷-2-甲酸锂(282.55mg，1.920mmol)于DMF(10mL)中的溶液中添加DIPEA(1.24g，9.600mmol)和HATU(438.22mg，1.152mmol)。将所得到的混合物在室温下搅拌2小时，接着添加冷H2O(50mL)。用EtOAc(3×30mL)萃取所得到的混合物并将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩。将残余物通过反相色谱法(5→30％MeCN/H2O)纯化，得到呈固体状的所需产物(413mg，38％产率)。LCMS(ESI)C60H80F3N11O6S的m/z[M+H]计算值1140.61；实验值：1140.7。
实施例A31：合成(2S)-2-环戊基-2-((S)-7-((2R,3R)-3-环丙基-1-(甲基-d3)氮杂环丙烷-2-羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-N-((22S,63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)乙酰胺
在0℃下，向(2S)-2-环戊基-N-((22S,63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)-2-((S)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)乙酰胺(350mg，0.335mmol)和(2R,3R)-3-环丙基-1-(甲基-d3)氮杂环丙烷-2-甲酸锂(57.4mg，0.38mmol)于DMF(6mL)中的溶液中添加DIPEA(216.38mg，1.675mmol)和HATU(140.05mg，0.369mmol)。将所得到的混合物在0℃下搅拌1小时，接着用DCM(3×20mL)萃取。将合并的有机层用盐水(3×20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩。将残余物通过反相色谱法(11→17％MeCN/H2O)纯化，得到呈固体状的所需产物(150mg，37％产率)。LCMS(ESI)C63H85D3F3N11O7的m/z[M+H]计算值1171.71；实验值：1172.0。
实施例A35：合成(2S)-2-环戊基-2-((S)-7-((2R,3R)-3-环丙基-1-(甲基-d3)氮杂环丙烷-2-羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-N-((63S,4S,Z)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)乙酰胺
在0℃下，向(2S)-2-环戊基-N-((63S,4S,Z)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)-2-((S)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)乙酰胺(300mg，0.303mmol)和(2R,3R)-3-环丙基-1-(甲基-d3)氮杂环丙烷-2-甲酸锂(87.44mg，0.606mmol)于DMF(3mL)中的溶液中添加DIPEA(195.96mg，1.515mmol)和HATU(138.36mg，0.364mmol)。将所得到的混合物在室温下搅拌1小时，接着用EtOAc(3×10mL)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩。将残余物通过反相色谱法(20→25％MeCN/H2O)纯化，得到呈固体状的所需产物(156.3mg，46％产率)。LCMS(ESI)C62H82D3N11O6S的m/z[M+H]计算值1115.67；实验值：1115.8。
实施例A34：合成(2S)-2-环戊基-2-((S)-7-((2R,3R)-3-环丙基-1-(甲基-d3)氮杂环丙烷-2-羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-N-((63S,4S,Z)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)乙酰胺
在0℃下，向(2S)-2-环戊基-N-((63S,4S,Z)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)-2-((S)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)乙酰胺(300mg，0.288mmol)和(2R,3R)-3-环丙基-1-(甲基-d3)氮杂环丙烷-2-甲酸锂(82.92mg，0.576mmol)于DMF(3mL)中的溶液中添加DIPEA(185.82mg，1.440mmol)和HATU(131.20mg，0.346mmol)。将所得到的混合物在室温下搅拌1小时，接着用EtOAc(3×10mL)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩。将残余物通过反相色谱法(20→25％MeCN/H2O)纯化，得到呈固体状的所需产物(147.6mg，44％产率)。LCMS(ESI)C62H79D3F3N11O6S的m/z[M+H]计算值1169.64；实验值：1169.7。
实施例A30：合成(2S)-2-((S)-7-((2R,3R)-3-环丙基-1-(甲基-d3)氮杂环丙烷-2-羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-N-((22S,63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)-3-甲基丁酰胺
在0℃下，向(2S)-2-((S)-7-((2R,3R)-3-环丙基-1-甲基氮杂环丙烷-2-羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-N-((22S,63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)-3-甲基丁酰胺(330mg，0.324mmol)和(2R,3R)-3-环丙基-1-(甲基-d3)氮杂环丙烷-2-甲酸锂(93.37mg，0.648mmol)于DMF(3mL)中的溶液中添加DIPEA(209.23mg，1.620mmol)和HATU(147.73mg，0.389mmol)。将所得到的混合物在0℃下搅拌30分钟，接着用EtOAc(3×10mL)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩。将残余物通过反相色谱法(20→30％MeCN/H2O)纯化，得到呈固体状的所需产物(218.1mg，58％产率)。LCMS(ESI)C61H83D3F3N11O7的m/z[M+H]计算值1145.70；实验值：1145.8。
实施例A33：合成(2S)-2-((S)-7-((2R,3R)-3-环丙基-1-(甲基-d3)氮杂环丙烷-2-羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-N-((63S,4S,Z)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)-3-甲基丁酰胺
在0℃下，向(2S)-N-((63S,4S,Z)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)-3-甲基-2-((S)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)丁酰胺(300mg，0.311mmol)和(2R,3R)-3-环丙基-1-(甲基-d3)氮杂环丙烷-2-甲酸锂(93.50mg，0.622mmol)于DMF(5mL)中的溶液中添加DIPEA(195.9mg，1.515mmol)和HATU(142.10mg，0.373mmol)。将所得到的混合物在室温下搅拌2小时，接着用EtOAc(3×30mL)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩。将残余物通过制备型TLC(7％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的所需产物(147mg，43％产率)。LCMS(ESI)C60H80D3N11O6S的m/z[M+H]计算值1089.65；实验值：1089.8。
实施例A32：合成(2S)-2-((S)-7-((2R,3R)-3-环丙基-1-(甲基-d3)氮杂环丙烷-2-羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-N-((63S,4S,Z)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)-3-甲基丁酰胺
在0℃下，向(2S)-N-((63S,4S,Z)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-噻唑杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)-3-甲基-2-((S)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)丁酰胺(300mg，0.295mmol)和(2R,3R)-3-环丙基-1-(甲基-d3)氮杂环丙烷-2-甲酸锂(88.54mg，0.590mmol)于DMF(4mL)中的溶液中添加DIPEA(762.32mg，5.900mmol)和HATU(134.56mg，0.354mmol)于DMF(1mL)中的溶液。将所得到的混合物在室温下搅拌2小时，用H2O稀释，接着用EtOAc(3×20mL)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩。将残余物通过制备型TLC(7％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的所需产物(139mg，40％产率)。LCMS(ESI)C60H77D3F3N11O6S的m/z[M+H]计算值1143.63；实验值：1143.8。
实施例A15：合成(2S)-2-环戊基-2-((S)-7-((2R,3R)-3-环丙基-1-甲基氮杂环丙烷-2-羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-N-((22S,63S,4S)-11-乙基-12-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)乙酰胺
步骤1：合成(5S)-7-((1S)-1-环戊基-2-(((22S,63S,4S)-11-乙基-12-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)氨基)-2-氧代乙基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁酯
在0℃下，向(S)-2-((S)-7-(叔丁氧羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-2-环戊基乙酸(547.19mg，1.552mmol)于DMF(6mL)中的溶液中添加DIPEA(5.40mL，30.993mmol)和HATU(442.70mg，1.164mmol)，随后添加(22S,63S,4S)-4-氨基-11-乙基-12-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-5,7-二酮(600mg，0.776mmol)。将混合物搅拌3小时，接着添加H2O。用EtOAc(3×100mL)萃取所得到的混合物并将合并的有机层用盐水(3×70mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩。将残余物通过制备型TLC(6％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的所需产物(700mg，81％产率)。LCMS(ESI)C61H90N10O9的m/z[M+H]计算值1107.70；实验值：1107.7。
步骤2：合成(2S)-2-环戊基-N-((22S,63S,4S)-11-乙基-12-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)-2-((S)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)乙酰胺
在0℃下，将(5S)-7-((1S)-1-环戊基-2-(((22S,63S,4S)-11-乙基-12-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)氨基)-2-氧代乙基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁酯(700mg，0.632mmol)和TFA(3mL)于DCM(7mL)中的溶液搅拌3小时。将所得到的混合物减压浓缩并用饱和NaHCO3(水溶液)将残余物碱化至pH 8。用DCM(3×50mL)萃取所得到的混合物并将合并的有机层用盐水(3×50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩，得到呈固体状的所需产物(700mg，粗品)。LCMS(ESI)C56H82N10O7的m/z[M+H]计算值1007.65；实验值：1007.7。
步骤3：合成(2S)-2-环戊基-2-((S)-7-((2R,3R)-3-环丙基-1-甲基氮杂环丙烷-2-羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-N-((22S,63S,4S)-11-乙基-12-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)乙酰胺
在0℃下，向(2S)-2-环戊基-N-((22S,63S,4S)-11-乙基-12-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)-2-((S)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)乙酰胺(600mg，0.596mmol)和(2R,3R)-3-环丙基-1-甲基氮杂环丙烷-2-甲酸锂(175.23mg，1.192mmol)于DMF(6mL)中的溶液中添加DIPEA(769.81mg，5.960mmol)和HATU(271.77mg，0.715mmol)。将所得到的混合物在0℃下搅拌3小时，接着添加冷H2O(50mL)。用EtOAc(2×50mL)萃取所得到的混合物并将合并的有机层用盐水(2×100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩。将残余物通过制备型TLC(8％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的所需产物(150mg，22％产率)。LCMS(ESI)C63H91N11O8的m/z[M+H]计算值1130.72；实验值：1130.8。
实施例A14：合成(2S)-2-环戊基-2-((S)-7-((2R,3R)-3-环丙基-1-甲基氮杂环丙烷-2-羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-N-((22S,63S,4S)-12-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)乙酰胺
步骤1：合成(5S)-7-((1S)-1-环戊基-2-(((22S,63S,4S)-12-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)氨基)-2-氧代乙基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁酯
在0℃下，向(S)-2-((S)-7-(叔丁氧羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-2-环戊基乙酸(1.8g，5.107mmol)于DMF(22mL)中的溶液中添加DIPEA(3.4g，26.306mmol)和HATU(1.5g，3.945mmol)，随后添加(22S,63S,4S)-4-氨基-12-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-5,7-二酮(2.2g，2.660mmol)。将混合物搅拌1小时，接着添加H2O。用EtOAc(3×100mL)萃取所得到的混合物并将合并的有机层用盐水(3×100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，得到呈固体状的所需产物(2g，61％产率)。LCMS(ESI)C61H87F3N10O9的m/z[M+H]计算值1161.67；实验值：1161.8。
步骤2：合成(2S)-2-环戊基-N-((22S,63S,4S)-12-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)-2-((S)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)乙酰胺
在0℃下，将(5S)-7-((1S)-1-环戊基-2-(((22S,63S,4S)-12-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)氨基)-2-氧代乙基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁酯(1.8g，1.550mmol)和TFA(10mL)于DCM(20mL)中的溶液搅拌2小时，接着用饱和NaHCO3(水溶液)碱化至pH 8。用DCM(3×300mL)萃取所得到的混合物。将合并的有机层用盐水(3×80mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩，得到呈固体状的所需产物。LCMS(ESI)C56H79F3N10O7的m/z[M+H]计算值1061.62；实验值：1061.4。
步骤3：合成(2S)-2-环戊基-2-((S)-7-((2R,3R)-3-环丙基-1-甲基氮杂环丙烷-2-羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-N-((22S,63S,4S)-12-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)乙酰胺
在0℃下，向(2S)-2-环戊基-N-((22S,63S,4S)-12-(5-((S)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-2(4,2)-吗啉杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂环十一蕃-4-基)-2-((S)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)乙酰胺(600mg，0.565mmol)和(2R,3R)-3-环丙基-1-甲基氮杂环丙烷-2-甲酸锂(207.90mg，1.412mmol)于DMF(6mL)中的溶液中添加DIPEA(730.67mg，5.650mmol)和HATU(257.95mg，0.678mmol)。将所得到的混合物在0℃下搅拌1小时，接着添加冷H2O(50mL)。用EtOAc(3×50mL)萃取所得到的混合物并将合并的有机层用盐水(3×50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩。将残余物通过制备型TLC(8％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的所需产物(150mg，19％产率)。LCMS(ESI)C63H88F3N11O8的m/z[M+H]计算值1184.69；实验值：1184.7。
实施例A24：合成(2S)-2-环戊基-2-((S)-7-((2R,3R)-3-环丙基-1-甲基氮杂环丙烷-2-羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-N-((63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-21,22,23,26,61,62,63,64,65,66-十氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(5,1)-吡啶杂环十一蕃-4-基)乙酰胺
步骤1：合成(5S)-7-((1S)-1-环戊基-2-(((63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-21,22,23,26,61,62,63,64,65,66-十氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(5,1)-吡啶杂环十一蕃-4-基)氨基)-2-氧代乙基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁酯
在0℃下，向(S)-2-((S)-7-(叔丁氧羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-2-环戊基乙酸(332.54mg，0.944mmol)、HATU(310.89mg，0.818mmol)和DIPEA(812.89mg，6.290mmol)于MeCN(10mL)中的溶液中添加(63S,4S)-4-氨基-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-11-(2,2,2-三氟乙基)-21,22,23,26,61,62,63,64,65,66-十氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(5,1)-吡啶杂环十一蕃-5,7-二酮(500mg，0.629mmol)。将混合物在0℃下搅拌1小时，接着减压浓缩。将残余物通过反相色谱法(0→100％MeCN/H2O)纯化，得到呈固体状的所需产物(600mg，78％产率)。LCMS(ESI)C62H87F3N10O7的m/z[M+H]计算值1141.68；实验值：1141.9。
步骤2：合成(2S)-2-环戊基-N-((63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-21,22,23,26,61,62,63,64,65,66-十氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(5,1)-吡啶杂环十一蕃-4-基)-2-((S)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)乙酰胺
在0℃下，向(5S)-7-((1S)-1-环戊基-2-(((63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-21,22,23,26,61,62,63,64,65,66-十氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(5,1)-吡啶杂环十一蕃-4-基)氨基)-2-氧代乙基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁酯(600mg，0.526mmol)于DCM(6mL)中的溶液中添加TFA(6mL)。将所得到的混合物在0℃下搅拌1小时。将混合物减压浓缩，接着用饱和NaHCO3(水溶液)碱化至pH 8。用DCM(3×100mL)萃取所得到的混合物并将合并的有机层用盐水(3×100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩，得到呈固体状的所需产物(503mg，92％产率)。LCMS(ESI)C57H79F3N10O5的m/z[M+H]计算值1041.63；实验值：1041.8。
步骤3：合成(2S)-2-环戊基-2-((S)-7-((2R,3R)-3-环丙基-1-甲基氮杂环丙烷-2-羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-N-((63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-21,22,23,26,61,62,63,64,65,66-十氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(5,1)-吡啶杂环十一蕃-4-基)乙酰胺
在0℃下，向(2S)-2-环戊基-N-((63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-21,22,23,26,61,62,63,64,65,66-十氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(5,1)-吡啶杂环十一蕃-4-基)-2-((S)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)乙酰胺(300mg，0.288mmol)、DIPEA(372.34mg，2.880mmol)和(2R,3R)-3-环丙基-1-甲基氮杂环丙烷-2-甲酸锂(63.5mg，0.432mmol)于DMF(6mL)中的溶液中添加HATU(142.41mg，0.374mmol)。将混合物在0℃下搅拌1小时，接着减压浓缩。将残余物通过反相色谱法(8→23％MeCN/H2O)纯化，得到呈固体状的所需产物(100mg，27％产率)。LCMS(ESI)C64H88F3N11O6的m/z[M+H]计算值1164.70；实验值：1164.9。
实施例A1：合成(2S)-2-环戊基-2-((S)-7-((2R,3R)-3-环丙基-1-甲基氮杂环丙烷-2-羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-N-((63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-5,7-二氧代-21,22,23,26,61,62,63,64,65,66-十氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(5,1)-吡啶杂环十一蕃-4-基)乙酰胺
步骤1：合成(2S)-2-环戊基-N-((63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌啶-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-5,7-二氧代-21,22,23,26,61,62,63,64,65,66-十氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(5,1)-吡啶杂环十一蕃-4-基)-2-((S)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)乙酰胺
在0℃下，向(5S)-7-((1S)-1-环戊基-2-(((63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-5,7-二氧代-21,22,23,26,61,62,63,64,65,66-十氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(5,1)-吡啶杂环十一蕃-4-基)氨基)-2-氧代乙基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁酯(900mg，0.828mmol)于DCM(9mL)中的溶液中添加TFA(4.5mL)。将所得到的混合物在0℃下搅拌30分钟。将混合物减压浓缩，接着用饱和NaHCO3(水溶液)碱化至pH 8。用DCM(3×150mL)萃取所得到的混合物并将合并的有机层用盐水(3×120mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩，得到呈固体状的所需产物(750mg，92％产率)。LCMS(ESI)C58H83N9O5的m/z[M+H]计算值986.66；实验值：987.5。
步骤2：合成(2S)-2-环戊基-2-((S)-7-((2R,3R)-3-环丙基-1-甲基氮杂环丙烷-2-羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-N-((63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-5,7-二氧代-21,22,23,26,61,62,63,64,65,66-十氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(5,1)-吡啶杂环十一蕃-4-基)乙酰胺
在0℃下，向(2S)-2-环戊基-N-((63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌啶-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-5,7-二氧代-21,22,23,26,61,62,63,64,65,66-十氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(5,1)-吡啶杂环十一蕃-4-基)-2-((S)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)乙酰胺(300mg，0.304mmol)、DIPEA(196.35mg，1.520mmol)和(2R,3R)-3-环丙基-1-甲基氮杂环丙烷-2-甲酸锂(89.39mg，0.608mmol)于DMF(4mL)中的溶液中添加HATU(150.19mg，0.395mmol)。将混合物在0℃下搅拌1小时并在0℃下用H2O(3mL)淬灭。用DCM/MeOH(10/1；3×20mL)萃取水层并将合并的有机层用盐水(3×20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩。将残余物通过制备型TLC(9％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的所需产物(155mg，43％产率)。LCMS(ESI)C64H91N11O6的m/z[M+H]计算值1110.73；实验值：1110.8。
实施例A36：合成(2S)-2-((S)-7-((2R,3R)-3-环丙基-1-甲基氮杂环丙烷-2-羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-N-((63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-21,22,23,26,61,62,63,64,65,66-十氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(5,1)-吡啶杂环十一蕃-4-基)-3-甲基丁酰胺
步骤1：合成(5S)-7-((2S)-1-(((63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-21,22,23,26,61,62,63,64,65,66-十氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(5,1)-吡啶杂环十一蕃-4-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁酯
在0℃下，向(S)-2-((S)-7-(叔丁氧羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-3-甲基丁酸(318.6mg，1.40mmol)、HATU(451.0mg，1.19mmol)和DIPEA(1393.6mg，10.78mmol)于DMF(20mL)中的溶液中添加(63S,4S)-4-氨基-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-11-(2,2,2-三氟乙基)-21,22,23,26,61,62,63,64,65,66-十氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(5,1)-吡啶杂环十一蕃-5,7-二酮(800.00mg，1.08mmol)。将混合物在室温下搅拌1小时，接着在0℃下用H2O(3mL)淬灭反应。用DCM(3×100mL)萃取水层并将合并的有机层用盐水(3×100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩。将残余物通过制备型TLC(9％EtOAc/石油醚)纯化，得到呈固体状的所需产物(800mg，78％产率)。LCMS(ESI)C60H85F3N10O7的m/z[M+H]计算值1115.66；实验值：1115.6。
步骤2：合成(2S)-N-((63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-21,22,23,26,61,62,63,64,65,66-十氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(5,1)-吡啶杂环十一蕃-4-基)-3-甲基-2-((S)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)丁酰胺
在0℃下，向(5S)-7-((2S)-1-(((63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-21,22,23,26,61,62,63,64,65,66-十氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(5,1)-吡啶杂环十一蕃-4-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁酯(560mg，0.528mmol)于DCM(6mL)中的溶液中添加TFA(6mL)。将所得到的混合物在室温下搅拌1小时。将混合物减压浓缩，接着用饱和NaHCO3(水溶液)碱化至pH 7。用DCM(3×100mL)萃取所得到的混合物并将合并的有机层用盐水(3×10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩，得到呈固体状的所需产物(486mg，96％产率)。LCMS(ESI)C55H77F3N10O5的m/z[M/2+H]计算值508.31；实验值：508.5。
步骤3：合成(2S)-2-((S)-7-((2R,3R)-3-环丙基-1-甲基氮杂环丙烷-2-羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-N-((63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-21,22,23,26,61,62,63,64,65,66-十氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(5,1)-吡啶杂环十一蕃-4-基)-3-甲基丁酰胺
在0℃下，向(2S)-N-((63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-21,22,23,26,61,62,63,64,65,66-十氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(5,1)-吡啶杂环十一蕃-4-基)-3-甲基-2-((S)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)丁酰胺(250mg，0.246mmol)、DIPEA(159.12mg，1.230mmol)和(2R,3R)-3-环丙基-1-甲基氮杂环丙烷-2-甲酸锂(52.14mg，0.369mmol)于DMF(5mL)中的溶液中添加HATU(121.71mg，0.320mmol)。将混合物在0℃下搅拌1小时，接着在0℃下用H2O(3mL)淬灭。用DCM/MeOH(10/1；3×50mL)萃取水层并将合并的有机层用盐水(3×50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩。将残余物通过制备型TLC(9％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的所需产物(140mg，47％产率)。LCMS(ESI)C62H86F3N11O6的m/z[M+H]计算值1138.68；实验值：1138.8。
实施例A12：合成(2S)-2-环戊基-2-((S)-7-((2R,3R)-3-环丙基-1-甲基氮杂环丙烷-2-羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-N-((63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-4-基)乙酰胺
步骤1：合成(5S)-7-((1S)-1-环戊基-2-(((63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-4-基)氨基)-2-氧代乙基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁酯
在0℃下，向(63S,4S)-4-氨基-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-5,7-二酮(420mg，0.562mmol)和DIPEA(725.71mg，5.620mmol)于DMF(4.5mL)中的溶液中添加(S)-2-((S)-7-(叔丁氧羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-2-环戊基乙酸(296.88mg，0.843mmol)和HATU(312.62mg，0.731mmol)。将所得到的混合物在室温下搅拌1.5小时，接着在0℃下用H2O(100mL)淬灭。用EtOAc(3×20mL)萃取水层并将合并的有机层用盐水(2×10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩。将残余物通过制备型TLC(6％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的所需产物(600mg，98％产率)。LCMS(ESI)C63H87N9O7的m/z[M+H]计算值1082.68；实验值：1082.7。
步骤2：合成(2S)-2-环戊基-N-((63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-4-基)-2-((S)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)乙酰胺
在0℃下，向(5S)-7-((1S)-1-环戊基-2-(((63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-4-基)氨基)-2-氧代乙基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁酯(680mg，0.628mmol)于DCM(7mL)中的溶液中添加TFA(2.5mL)。将反应混合物在室温下搅拌2小时，接着将所得到的混合物减压浓缩。用饱和NaHCO3(水溶液)将残余物中和至pH 8并用EtOAc(3×30mL)萃取水层。将合并的有机层用盐水(2×15mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩，得到呈固体状的所需产物(600mg，粗品)。LCMS(ESI)C58H79N9O5的m/z[M+H]计算值982.63；实验值：982.6。
步骤3：合成(2S)-2-环戊基-2-((S)-7-((2R,3R)-3-环丙基-1-甲基氮杂环丙烷-2-羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-N-((63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-4-基)乙酰胺
在0℃下，向(2S)-2-环戊基-N-((63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-11-乙基-10,10-二甲基-5,7-二氧代-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-4-基)-2-((S)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)乙酰胺(440mg，0.448mmol)和DIPEA(578.90mg，4.480mmol)于DMF(4mL)中的溶液中添加(2R,3R)-3-环丙基-1-甲基氮杂环丙烷-2-甲酸锂(131.78mg，0.896mmol)和HATU(221.40mg，0.582mmol)的溶液。将所得到的混合物在室温下搅拌1.5小时，接着在0℃下用H2O(40mL)淬灭。用EtOAc(3×20mL)萃取水层并将合并的有机层用盐水(2×10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩。将残余物通过制备型TLC(8％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的所需产物(200.3mg，40％产率)。LCMS(ESI)C65H88N10O6的m/z[M/2+H]计算值553.36；实验值：553.7。
实施例A4：合成(2S)-2-((S)-7-((2R,3R)-3-环丙基-1-甲基氮杂环丙烷-2-羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-N-((63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-4-基)-3-甲基丁酰胺
步骤1：合成(5S)-7-((2S)-1-(((63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-4-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁酯
在0℃下，向(S)-2-((S)-7-(叔丁氧羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-3-甲基丁酸(610.58mg，1.871mmol)和DIPEA(966.96mg，7.482mmol)于MeCN(20mL)中的溶液中添加(63S,4S)-4-氨基-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-5,7-二酮(760mg，0.948mmol)于MeCN(10mL)中的溶液。向混合物中添加COMU(694.24mg，1.621mmol)于MeCN(10mL)中的溶液。将所得到的混合物在0℃下搅拌1小时，接着在0℃下用H2O(20mL)淬灭。接着，用DCM(3×20mL)萃取混合物并将合并的有机层用盐水(2×10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(8％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的所需产物(952mg，63％)。LCMS(ESI)C61H82F3N9O7的m/z[M+H]计算值1110.64；实验值：1110.6。
步骤2：合成(2S)-N-((63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-4-基)-3-甲基-2-((S)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)丁酰胺
在0℃下，向(5S)-7-((2S)-1-(((63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-4-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁酯(490mg，0.441mmol)于DCM(9mL)中的溶液中添加TFA(3mL)。将所得到的混合物在0℃下搅拌2小时，接着用饱和NaHCO3(水溶液)中和至pH 7。用DCM(3×30mL)萃取所得到的混合物并将合并的有机层用盐水(2×30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩，得到呈固体状的所需产物(410mg，粗品)。LCMS(ESI)C56H74F3N9O5的m/z[M+H]计算值1010.58；实验值：1010.6。
步骤3：合成(2S)-2-((S)-7-((2R,3R)-3-环丙基-1-甲基氮杂环丙烷-2-羰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-N-((63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-4-基)-3-甲基丁酰胺
在0℃下，向(2R,3R)-3-环丙基-1-甲基氮杂环丙烷-2-甲酸锂(111.79mg，0.792mmol)和DIPEA(307.03mg，2.376mmol)于DMF(4mL)中的溶液中添加HATU(195.71mg，0.515mmol)于DMF(4mL)中的溶液。向混合物中添加(2S)-N-((63S,4S)-12-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二氧代-11-(2,2,2-三氟乙基)-61,62,63,64,65,66-六氢-11H-8-氧杂-1(5,3)-吲哚杂-6(1,3)-哒嗪杂-2(1,3)-苯杂环十一蕃-4-基)-3-甲基-2-((S)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)丁酰胺(400mg，0.396mmol)于DMF(4mL)中的溶液。将所得到的混合物在0℃下搅拌3小时，接着在0℃下用H2O(20mL)淬灭。接着，用EtOAc(2×50mL)萃取混合物并将合并的有机层用盐水(2×20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩。将残余物通过制备型TLC(6％MeOH/DCM)纯化，得到呈固体状的所需产物(98.9mg，20％产率)。LCMS(ESI)C63H83F3N10O6的m/z[M+H]计算值1133.65；实验值：1133.8。
表4：通过本发明方法制备的例示性化合物
生物测定
本文中的所有化合物在以下所描述的AsPC-1(K-Ras G12D)pERK效力测定中展现出1.1μM或更低的IC50。
效力测定：pERK
本测定的目的是测量测试化合物抑制细胞中的K-Ras的能力。活化的K-Ras诱导ERK在苏氨酸202和酪氨酸204处的磷酸化(pERK)增加。这一程序测量细胞pERK响应于测试化合物的降低。下文以AsPC-1细胞描述的程序适用于K-Ras G12D。
注意：本方案可改用其它细胞系执行以表征其它RAS变体抑制剂，包括例如H358(K-Ras G12C)、Capan-1(K-Ras G12V)或NCI-H1355(K-Ras G13C)。
使用ATCC推荐的培养基和程序使AsPC-1细胞生长和维持。在添加化合物前一天，将细胞涂铺于384孔细胞培养板(每孔40μl)中并使其在37℃、5％CO2培育器中生长过夜。在DMSO中制备测试化合物的10点3倍稀释液，其中最高浓度为10mM。测定当天，使用Echo550液体处理器将40nL测试化合物添加至细胞培养板各孔中。一式两份，对测试化合物的浓度进行测试。添加完化合物后，在37℃、5％CO2下培育细胞4小时。培育后，取出细胞培养基并用磷酸盐缓冲盐水洗涤细胞一次。
细胞pERK水平是使用AlphaLISA SureFire Ultra p-ERK1/2测定试剂盒(PerkinElmer)确定。室温下，在以600RPM振荡下，将细胞溶解于25μL溶解缓冲液中。将溶解产物(10μL)转移至384孔Opti板(PerkinElmer)中并添加5μL受体混合物。在暗处培育2小时后，添加5μL供体混合物，密封板并在室温下培育2小时。在Envision读板器(PerkinElmer)上，使用标准AlphaLISA设定来读取信号。原始数据的分析是在Excel(Microsoft)及Prism(GraphPad)中进行。将信号对化合物浓度的以10为底的对数作图，并通过拟合4参数S形浓度反应模型确定IC50值。
作为代表性本发明KRAS G12D抑制剂的化合物A和化合物B在体内人胰腺腺癌异种移植肿瘤中展示出较强的持久RAS路径调节作用
方法：使用人胰腺腺癌HPAC KRASG12D/wt异种移植小鼠模型进行单剂量PK/PD研究。分别通过经口管饲(po)施用100mg/kg的化合物A和化合物B。治疗组以及在各个时间点进行的样品收集汇总于下表5中。收集肿瘤样品，通过在qPCR测定中测量人DUSP6的mRNA水平来评估RAS/ERK信号传导路径调节作用。收集血液样品，通过LC-MS生物分析测定来评估未结合的血浆浓度。
结果：在图1中，两种共价KRASG12D抑制剂化合物A和化合物B在给药后4小时的时候都引起HPAC异种移植肿瘤中DUSP6mRNA水平的抑制，表明较强的RAS路径调节作用。化合物A和化合物B对DUSP6 mRNA水平的抑制作用在药物施用后持续长达48小时。
表5.使用HPAC肿瘤进行的单剂量PD研究中治疗组、剂量和时间点的汇总。
作为代表性本发明KRAS G12D抑制剂的化合物A和化合物B展示较强肿瘤交联，与显著DUSP6抑制作用一致
方法：将在指定时间点从以上图1中所描述的单剂量PK/PD测定收集的肿瘤样品均质化，以提取蛋白质。接着，利用Ras兔mAb(Abcam ab108602)和β-肌动蛋白mAb(CST-4967)对蛋白质溶解产物进行蛋白质印迹。检测到肿瘤样品中较高分子量(MW)谱带(交联的KRASG12D谱带)的出现，在此情况下，化合物共价结合至KRAS G12D蛋白。
结果：如图2中所示，化合物A和B在4小时和长达24小时的时候都展示较强的肿瘤交联，与显著DUSP6抑制作用一致。
作为代表性本发明KRAS G12D抑制剂的化合物A和化合物B在HPAC KRAS G12D CDX模型中驱动深度肿瘤消退且为良好耐受的方法：在使用雌性BALB/c裸小鼠(6-8周龄)的人胰腺腺癌HPAC KRASG12D/wt异种移植模型中评价化合物A和化合物B对体内肿瘤细胞生长的作用。将含HPAC肿瘤细胞的PBS(3×106个细胞/小鼠)皮下植入小鼠的侧腹中。在肿瘤达到约130mm3的平均大小后，将小鼠随机分入治疗组以起始测试物或媒剂的施用。分别每天一次通过经口管饲(po)施用100mg/kg的化合物A和化合物B。一周两次测量体重和肿瘤体积(使用卡尺)，直至研究终点。
结果：图3A显示，在具有杂合型KRASG12D的HPAC CDX模型中，每天po施用100mg/kg单药化合物A和化合物B在治疗结束(起始治疗后第28天)时引起各组中所有肿瘤消退(消退定义为相对于基线>10％肿瘤消退)。事实上，在第28天，化合物A组(100mg/kg po qd)和化合物B组(100mg/kg po qd)中分别有8/10的肿瘤和9/10的肿瘤实现完全消退(完全消退定义为相对于基线>85％肿瘤消退)(图3C)。与对照组相比较，两种化合物的抗肿瘤活性具有统计学显著性(***p<0.001，或二元单因素方差分析，以及通过事后Tukey检验进行的多重比较)。
图3B中的体重变化百分比(％BWC)图展示，在化合物A组(100mg/kg po qd)或化合物B组(100mg/kg po qd)中未观察到体重减轻，表明100mg/kg的两种化合物是良好耐受的。
尽管已结合本发明的具体实施方案描述本发明，但应了解，本发明能够进一步修改，并且本申请意欲涵盖一般遵循本发明的原理且包括在本发明所属领域内的已知或常规实践范围内的与本公开的背离的本发明的任何变化、应用或改编，并且可应用于本文所述的基本特征。
所有出版物、专利和专利申请均以全文引用的方式并入本文中，其引用程度就如同具体地且个别地指示每一个别出版物、专利或专利申请以全文引用的方式并入一般。

Claims (39)

1.一种化合物或其药学上可接受的盐，具有式I的结构：
其中A是任选被取代的3至6元亚杂环烷基、任选被取代的3至6元亚环烷基、任选被取代的6元亚芳基或任选被取代的5至10元亚杂芳基；
X1、X2和X3各自独立地选自CH2、CHF、CF2、C＝O或O；
m是1或2；
n是0或1；
R1是氢、任选被取代的C1-C6杂烷基或任选被取代的3至10元杂环烷基；
R2是任选被取代的C1-C6烷基；并且
R3是任选被取代的C1-C6烷基、任选被取代的C1-C6杂烷基、任选被取代的3至6元环烷基或任选被取代的杂环烷基，
并且其中每个氢是独立地任选富集同位素氘。
2.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1是氢或任选被取代的3至10元杂环烷基。
3.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1是任选被取代的3至10元杂环烷基。
4.如权利要求3所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1是：
5.如权利要求1至4中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中m是1。
6.如权利要求1至5中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中n是1。
7.如权利要求1至6中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中X1、X2和X3各自是CH2。
8.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，具有式II的结构：
9.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，具有式V的结构：
10.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，具有式VI的结构：
11.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，具有式VII的结构：
12.如权利要求1至11中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中A是任选被取代的噻唑-二基、任选被取代的噁唑-二基、任选被取代的吗啉-二基、任选被取代的吡咯烷-二基、任选被取代的哌啶-二基或任选被取代的亚苯基。
13.如权利要求1至11中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中A是任选被取代的5至10元亚杂芳基。
14.如权利要求13所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中A是：
15.如权利要求1至11中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中A是任选被取代的亚苯基。
16.如权利要求15所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中A是：
17.如权利要求1至11中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中A是任选被取代的3至6元亚杂环烷基。
18.如权利要求17所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中A选自以下各物或其立体异构体：
19.如权利要求1至18中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2是：
20.如权利要求1至19中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3是任选被取代的C1-C6烷基或任选被取代的3至6元环烷基。
21.如权利要求1至20中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3是任选被取代的C1-C6烷基。
22.如权利要求21所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3是：
23.如权利要求1至20中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3是或任选被取代的3至6元环烷基。
24.如权利要求23所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3是：
25.如权利要求1至24中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物不是表3的化合物。
26.一种化合物或其药学上可接受的盐，具有表1或表3的化合物的结构。
27.一种药物组合物，包含权利要求1至26中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，和药学上可接受的赋形剂。
28.一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的权利要求1至26中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，或权利要求27所述的药物组合物。
29.如权利要求28所述的方法，其中所述癌症是胰腺癌、非小细胞肺癌、结肠直肠癌或子宫内膜癌。
30.如权利要求28或29所述的方法，其中所述癌症包含Ras突变。
31.如权利要求30所述的方法，其中所述Ras突变是K-Ras G12D或K-G13D。
32.一种治疗有需要的受试者的Ras蛋白相关病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的权利要求1至26中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，或权利要求27所述的药物组合物。
33.一种抑制细胞中的Ras蛋白的方法，所述方法包括使所述细胞与有效量的权利要求1至26中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或者权利要求27所述的药物组合物接触。
34.如权利要求32或33所述的方法，其中所述Ras蛋白是K-Ras G12D或K-Ras G13D。
35.如权利要求33或34所述的方法，其中所述细胞是癌细胞。
36.如权利要求35所述的方法，其中所述癌细胞是胰腺癌细胞、非小细胞肺癌细胞、结肠直肠癌细胞或子宫内膜细胞。
37.如权利要求28至36中任一项所述的方法，其中所述方法还包括施用额外抗癌疗法。
38.如权利要求37所述的方法，其中所述额外抗癌疗法是EGFR抑制剂、第二Ras抑制剂、SHP2抑制剂、SOS1抑制剂、Raf抑制剂、MEK抑制剂、ERK抑制剂、PI3K抑制剂、PTEN抑制剂、AKT抑制剂、mTORC1抑制剂、BRAF抑制剂、PD-L1抑制剂、PD-1抑制剂、CDK4/6抑制剂、HER2抑制剂或其组合。
39.一种缀合物或其盐，包含式III的结构：
M-P1
式III
其中P1是单价有机部分；并且
M具有式IV的结构：
其中A是任选被取代的3至6元亚杂环烷基、任选被取代的3至6元亚环烷基、任选被取代的6元亚芳基或任选被取代的5至10元亚杂芳基；
X1、X2和X3各自独立地选自CH2、CHF、CF2、C＝O或O；
m是1或2；
n是0或1；
R1是氢、任选被取代的C1-C6杂烷基或任选被取代的3至10元杂环烷基；
R2是任选被取代的C1-C6烷基；并且
R3是任选被取代的C1-C6烷基、任选被取代的3至6元环烷基、任选被取代的C1-C6杂烷基或任选被取代的杂环烷基，
并且其中式IV的每个氢独立地任选富集同位素氘。
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