CN113122420A - 一种平卧菊三七酒及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种平卧菊三七酒的制备方法,属于食品加工领域。本发明所述平卧菊三七酒的制备方法以马克斯克鲁维酵母为发酵菌种,在特定条件下对浸提后的平卧菊三七进行发酵,该制备方法不仅可提高平卧菊三七原料中总黄酮及绿原酸等活性成分的溶出率,也可保障所得产品的发酵过程充分,具备足够的酒精浓度以及醇香的口感。本发明还公开了通过所述方法制备的平卧菊三七酒,所述产品不仅口感醇香,增加嗜好性,也具有抗氧化及降尿酸等活性功效,有利于发挥其健康功能。
Description
技术领域
本发明涉及食品加工领域,具体涉及一种平卧菊三七酒的制备方法。
背景技术
平卧菊三七(学名:Gynura procumbens(Lour.)Merr.)为菊科三七属,多年生草本植物,生息于我国广东、海南、贵州及云南等南部与西南部广阔地区,越南、泰国及印度尼西亚等东南亚各国,非洲部分地区也有分布。平卧菊三七根茎是中成药的原材料,其茎叶营养丰富,在东南亚食用历史悠久,在我国于2012年被国家卫生部批准为普通食品。平卧菊三七富含绿原酸、黄酮类、萜烯类、生物碱、香豆素类、挥发油、氨基酸及无机盐等多种活性成分。民间常利用平卧菊三七作为通经活络、消肿止痛、消炎止咳、治疗跌打损伤、支气管肺炎及肺结核等用于临床。近代药理学研究表明平卧菊三七具有消炎、抗癌、抗病毒、降压、降糖、降脂、抗氧化及抗溃疡等诸多功效;另一方面,该植物也其具有很好的营养价值。因此,平卧菊三七可广泛应用于食品、保健食品及医药工业等领域,是一种极具潜力和高经济价值的植物资源之一。
早在《汉书.食货志》中记有“酒为百药之长”,而《素问.汤液醪醴论》对酒与汤药间的关系则有更有详细阐述。由此可见,酒文化的产生是基于强身健体。自古以来,酒与医,当然和药都有不解之缘,酒作为药物使用的历史悠久,其临床价值已得到充分肯定。在传统医学中,用酒治病,特别是配制药酒来防治疾病的现象十分普遍。现代科学研究证明,用酒浸泡传统的天然药物,不仅能够将药用植物中的有效成分溶解出来,更使得人们易于吸收,由于酒性善行和宣通血脉,因此有益于促进药物到达疾患部位,提高药效。
将具有生物活性的天然植物制备成低度酒受到消费者的欢迎,目前国内市场上的低度酒饮料多以配制酒为主,而利用发酵制备低度酒的工艺研究及产业化应用相对较少。采用液态发酵生产低度酒饮料是行业发展趋势,同时也可有效提高植物在产品中的生物活性。
发明内容
基于现有技术的不足,本发明的目的在于提供了一种平卧菊三七酒的制备方法,该制备方法以平卧菊三七为原料采用特定发酵法制备低度发酵酒,所得产品不仅口感好,而且平卧菊三七总黄酮及绿原酸等活性成分的溶出率高,可用于抗氧化及降尿酸等方面,具有明显的健康功能。
为了达到上述目的,本发明采取的技术方案为:
一种平卧菊三七酒的制备方法,包括以下步骤:
(1)将平卧菊三七粉碎过筛后,用水浸提,得混合液A;
(2)在步骤(1)所得混合液A中加入糖和盐混合均匀后,灭菌并加入发酵酵母进行发酵;所述糖的添加量占混合液A质量含量的8~14%;所述发酵酵母为马克斯克鲁维酵母;所述接种量占混合液A质量含量的3~8%;
(3)待步骤(2)所述发酵结束,所得发酵液经离心后,将上清液取出并加热灭菌,即得所述平卧菊三七酒。
本发明所述平卧菊三七酒的制备方法中,以马克斯克鲁维酵母(Kluyveromycesmarxianus)为发酵菌种,该酵母不仅具有耐性高、稳定性强以及生长水解速率快的特点,同时在特定条件下可提高平卧菊三七原料中总黄酮及绿原酸等活性成分的溶出率,也可保障所得产品的发酵过程充分,具备足够的酒精浓度以及醇香的口感。
优选地,步骤(1)所述的过筛的目数为40~80目;所述浸提时平卧菊三七与水的质量比为1:15~30,浸提时的温度为85~100℃,时间为30~60min。
所述条件下不仅可使原料在水中分散均匀,同时浸提程度较为充分,平卧菊三七原料中的有效成分可充分析出。
优选地,步骤(2)所述糖包括葡萄糖、蔗糖、乳糖中的至少一种。
所述糖分不仅可为最终制备的酒产品提供必要的甜味,同时可为后续马克斯克鲁维酵母发酵过程提供一定的发酵原料成分。
优选地,步骤(2)所述盐包括钠盐、钙盐、钾盐、镁盐中的至少一种,所述盐的添加量占混合液A质量含量的0.1~0.2%。
优选地,步骤(2)所述发酵的温度为24~28℃,时间为3~7日。
所述发酵条件下马克斯克鲁维酵母可充分对浸提混合液中的有机物进行水解发酵,不仅可充分保留活性成分的抗氧化等功效性,同时生成适宜量的酒精及提升整体产品的风味,所得酒品酒气醇香,口感醇厚。
优选地,所述马克斯克鲁维酵母为经过驯化得到的马克斯克鲁维酵母菌液,所述驯化包括以下步骤:
(1)将马克斯克鲁维酵母菌种接种于沙氏培养液中并在26~30℃下在100~150r/min速率的摇床中恒温培养20~28h,得液体培养液a;
(2)将步骤(1)所得液体培养液a接种于含有平卧菊三七浸提液的培养基溶液中,在26~30℃下在100~150r/min速率的摇床中恒温培养20~28h,得到I级菌液;所述液体培养液a的接种量占所述培养基溶液质量含量的3~5%;所述平卧菊三七浸提液占所述培养基溶液质量含量的10%;
(3)将步骤(2)所得I级菌液接种于含有平卧菊三七浸提液的培养基溶液中,在26~30℃下在100~150r/min速率的摇床中恒温培养20~28h,得到II级菌液;所述I级菌液的接种量占所述培养基溶液质量含量的3~5%;所述平卧菊三七浸提液占所述培养基溶液质量含量的20%;
(4)按每次10%逐级提升平卧菊三七浸提液占所述培养基溶液质量含量,并重复步骤(3)中菌液的接种及培养步骤直至所述平卧菊三七浸提液占所述培养基溶液质量含量的50%,驯化结束,得到经过驯化的马克斯克鲁维酵母菌液。
由于平卧菊三七中含有一定量的绿原酸,且该物质为原料中的活性成分,具有较为广泛的抗菌作用,因此需要采用特定驯化方法对菌种进行驯化,避免发酵过程中菌种发酵效率被抑制。
更优选地,所述经过驯化的马克斯克鲁维酵母菌液中的活菌数为109CFU/mL。
更优选地,驯化的步骤(2)~(4)中培养基溶液还含有蔗糖和硫酸钾,所述蔗糖占所述培养基溶液质量含量的6~10%,所述硫酸钾占所述培养基溶液质量含量的0.15~0.2%。
所述组分的加入可有效为酵母的驯化过程提供稳定的酸碱环境和养分。
优选地,步骤(3)所述离心的速率为4000~6000r/min,时间为5~10min;加热灭菌的温度为100~120℃,时间为5~7s。
所述条件下的处理不仅可充分分离制备得到的酒品和料渣,同时可保证酒品中微生物的清除,避免变质或影响口感。
本发明的另一目的还在于提供所述平卧菊三七酒的制备方法制备得到的平卧菊三七酒。
本发明制备得到的平卧菊三七酒澄清淡雅、略呈棕黄,口感纯正甘甜,入口流畅柔和,醇香浓郁沁人,缠绵不失清冽。该产品中平卧菊三七总黄酮及绿原酸等部分活性成分的溶出率高,可用于抗氧化及降尿酸等方面,具有明显的健康功能;本发明提供的平卧菊三七发酵酒,不仅口感醇香,增加嗜好性,也有利于发挥其健康功能,提高市场竞争力和拓展消费市场,具有较好的经济和社会意义。
本发明的有益效果在于:本发明提供了一种平卧菊三七酒的制备方法,该方法以马克斯克鲁维酵母为发酵菌种,在特定条件下对浸提后的平卧菊三七进行发酵,该制备方法不仅可提高平卧菊三七原料中总黄酮及绿原酸等活性成分的溶出率,也可保障所得产品的发酵过程充分,具备足够的酒精浓度以及醇香的口感。本发明还提供了通过所述方法制备的平卧菊三七酒,所述产品不仅口感醇香,增加嗜好性,也具有抗氧化及降尿酸等活性功效,有利于发挥其健康功能。
附图说明
图1为本发明所述平卧菊三七酒产品各组分的HPLC-MS分析结果谱图;
图2为本发明所述平卧菊三七酒产品的抗氧化测试性能图。
具体实施方式
若无特别说明,本发明实施例中所用原料均购自市场。
为了更好地说明本发明的目的、技术方案和优点,下面将结合具体实施例对本发明作进一步说明,其目的在于详细地理解本发明的内容,而不是对本发明的限制。
本发明所使用的马克斯克鲁维酵母购自中国工业微生物菌种管理保藏中心,菌株保藏编号:CICC 31691。
实施例1
本发明所述一种平卧菊三七酒的制备方法的实施例。
本实施例所述一种平卧菊三七酒的制备方法,包括以下步骤:
(1)将平卧菊三七干燥茎叶粉碎并过50目筛后,用水浸提,得混合液A;所述浸提时平卧菊三七与水的质量比为1:20,浸提时的温度为90℃,时间为60min;
(2)在步骤(1)所得混合液A中加入蔗糖和硫酸钾混合均匀后,高温灭菌并加入发酵酵母在28℃下发酵5日;所述蔗糖的添加量占混合液A质量含量的10%;所述发酵酵母为马克斯克鲁维酵母;所述接种量占混合液A质量含量的5%;所述硫酸钾的添加量占混合液A质量含量的0.18%;
(3)待步骤(2)所述发酵结束,所得发酵液经4000r/min离心10min后,将上清液取出并加热至110℃灭菌6s,即得所述平卧菊三七酒。
所述马克斯克鲁维酵母为经过驯化得到的马克斯克鲁维酵母菌液,所述驯化包括以下步骤:
(1)将马克斯克鲁维酵母菌种接种于沙氏培养液中并在28℃下在120r/min速率的摇床中恒温培养24h,得液体培养液a;
(2)将步骤(1)所得液体培养液a接种于含有平卧菊三七浸提液的培养基溶液中,在28℃下在120r/min速率的摇床中恒温培养24h,得到I级菌液;所述液体培养液a的接种量占所述培养基溶液质量含量的4%;所述平卧菊三七浸提液占所述培养基溶液质量含量的10%;培养基溶液还含有蔗糖和硫酸钾,所述蔗糖占所述培养基溶液质量含量的8%,所述硫酸钾占所述培养基溶液质量含量的0.18%;
(3)将步骤(2)所得I级菌液接种于含有平卧菊三七浸提液的培养基溶液中,在28℃下在120r/min速率的摇床中恒温培养24h,得到II级菌液;所述I级菌液的接种量占所述培养基溶液质量含量的4%;所述平卧菊三七浸提液占所述培养基溶液质量含量的20%;培养基溶液还含有蔗糖和硫酸钾,所述蔗糖占所述培养基溶液质量含量的8%,所述硫酸钾占所述培养基溶液质量含量的0.18%
(4)按每次10%逐级提升平卧菊三七浸提液占所述培养基溶液质量含量,并重复步骤(3)中菌液的接种及培养步骤直至所述平卧菊三七浸提液占所述培养基溶液质量含量的50%,驯化结束,得到经过驯化的马克斯克鲁维酵母菌液。
实施例2
本实施例所述一种平卧菊三七酒的制备方法,包括以下步骤:
(1)将平卧菊三七干燥茎叶粉碎并过40目筛后,用水浸提,得混合液A;所述浸提时平卧菊三七与水的质量比为1:20,浸提时的温度为100℃,时间为50min;
(2)在步骤(1)所得混合液A中加入蔗糖和硫酸钾混合均匀后,高温灭菌并加入发酵酵母在24℃下发酵5日;所述蔗糖的添加量占混合液A质量含量的10%;所述发酵酵母为马克斯克鲁维酵母;所述接种量占混合液A质量含量的3%;所述硫酸钾的添加量占混合液A质量含量的0.18%;
(3)待步骤(2)所述发酵结束,所得发酵液经4000r/min离心10min后,将上清液取出并加热至110℃灭菌6s,即得所述平卧菊三七酒。
所述马克斯克鲁维酵母为经过驯化得到的马克斯克鲁维酵母菌液,所述驯化的步骤同实施例1。
实施例3
本实施例所述一种平卧菊三七酒的制备方法,包括以下步骤:
(1)将平卧菊三七干燥茎叶粉碎并过60目筛后,用水浸提,得混合液A;所述浸提时平卧菊三七与水的质量比为1:25,浸提时的温度为85℃,时间为60min;
(2)在步骤(1)所得混合液A中加入蔗糖和硫酸钾混合均匀后,高温灭菌并加入发酵酵母在24℃下发酵6日;所述蔗糖的添加量占混合液A质量含量的10%;所述发酵酵母为马克斯克鲁维酵母;所述接种量占混合液A质量含量的4%;所述硫酸钾的添加量占混合液A质量含量的0.18%;
(3)待步骤(2)所述发酵结束,所得发酵液经4000r/min离心10min后,将上清液取出并加热至110℃灭菌6s,即得所述平卧菊三七酒。
所述马克斯克鲁维酵母为经过驯化得到的马克斯克鲁维酵母菌液,所述驯化的步骤同实施例1。
实施例4
本实施例所述一种平卧菊三七酒的制备方法,包括以下步骤:
(1)将平卧菊三七干燥茎叶粉碎并过50目筛后,用水浸提,得混合液A;所述浸提时平卧菊三七与水的质量比为1:20,浸提时的温度为90℃,时间为60min;
(2)在步骤(1)所得混合液A中加入蔗糖和硫酸钾混合均匀后,高温灭菌并加入发酵酵母在26℃下发酵5日;所述蔗糖的添加量占混合液A质量含量的12%;所述发酵酵母为马克斯克鲁维酵母;所述接种量占混合液A质量含量的3%;所述硫酸钾的添加量占混合液A质量含量的0.18%;
(3)待步骤(2)所述发酵结束,所得发酵液经4000r/min离心10min后,将上清液取出并加热至110℃灭菌6s,即得所述平卧菊三七酒。
所述马克斯克鲁维酵母为经过驯化得到的马克斯克鲁维酵母菌液,所述驯化的步骤同实施例1。
实施例5
为验证本发明所述平卧菊三七酒的制备方法中酵母菌选择的优选性,本实施例将实施例1所用马克斯克鲁维酵母分别替换为酿酒酵母、产朊假丝酵母、乳酸克鲁维酵母和卡氏酵母用于制备平卧菊三七酒,其余步骤及参数与实施例1相同。将所得产品分别使用0~25°酒精仪测定平卧菊三七发酵酒的酒精度,并根据《食品安全国家标准-饮料》对它们进项感官评价,具体方法为,取一定量均匀的被测样品,置于50mL无色透明烧杯中,在自然光下观察色泽、澄清度,鉴别气味,用温开水漱口,品尝滋味,检查其有无异物。测试结果如表1所示。
表1
由表1可知,使用马克斯克鲁维酵母进行发酵得到的平卧菊三七酒产品相比于其他组不仅酒精浓度高,同时使用过程的酒香及口感也更好。
实施例6
为验证本发明所述平卧菊三七酒的制备方法中发酵过程原料含量添加范围的优选性,本实施例将实施例1中加入混合液A的蔗糖含量添加量分别修改为占混合液A质量含量的6%、8%、12%和14%,其余步骤及参数与实施例1相同。将所得产品分别使用0~25°酒精仪测定平卧菊三七发酵酒的酒精度,并根据《食品安全国家标准-饮料》对它们进项感官评价,具体方法为,取一定量均匀的被测样品,置于50mL无色透明烧杯中,在自然光下观察色泽、澄清度,鉴别气味,用温开水漱口,品尝滋味,检查其有无异物。测试结果如表2所示。
表2
蔗糖添加量(%) | 产品酒精度(%) | 感官评价 |
6 | 2.9 | 黄棕色,澄清透明,酒气较轻,酒韵不足 |
8 | 4.1 | 黄棕色,澄清透明,酒气清香,口感适中 |
10 | 4.6 | 黄棕色,澄清透明,酒气醇香,口感醇厚 |
12 | 4.5 | 黄棕色,澄清透明,酒香浓郁,口感醇厚 |
14 | 4.3 | 黄棕色,澄清透明,酒香淡雅,口感适中 |
16 | 3.5 | 黄棕色,澄清透明,酒香较轻,口感酸涩 |
从表2可知,发酵时的糖添加量为8~14%时,制备得到的平卧菊三七酒产品的酒精度较高且口感较好。
实施例7
为验证本发明所述平卧菊三七酒的制备方法中发酵过程发酵酵母接种量的优选性,本实施例将实施例1中加入的酵母接种量分别替换为1%、3%、8%和10%,其余步骤及参数与实施例1相同。将所得产品分别使用0~25°酒精仪测定平卧菊三七发酵酒的酒精度,并根据《食品安全国家标准-饮料》对它们进项感官评价,具体方法为,取一定量均匀的被测样品,置于50mL无色透明烧杯中,在自然光下观察色泽、澄清度,鉴别气味,用温开水漱口,品尝滋味,检查其有无异物。测试结果如表3所示。
表3
酵母接种量(%) | 产品酒精度(%) | 感官评价 |
1 | 3.1 | 黄棕色,澄清透明,酒气较轻,酒韵不足 |
3 | 4.3 | 黄棕色,澄清透明,酒气清香,口感适中 |
5 | 4.6 | 黄棕色,澄清透明,酒气浓郁,口感醇厚 |
8 | 4.8 | 黄棕色,澄清透明,酒香浓郁,口感醇厚 |
10 | 3.2 | 黄棕色,澄清透明,酒香较轻,口感酸涩 |
从表3可知,发酵时酵母的接种量为3~8%时,制备得到的平卧菊三七酒产品的酒精度较高且口感较好。
实施例8
为验证本发明所述平卧菊三七酒的制备方法中发酵过程发酵时间的优选性,本实施例将实施例1中发酵的时间分别替换为1~4日和6~10日,其余步骤及参数与实施例1相同。将所得产品分别使用0~25°酒精仪测定平卧菊三七发酵酒的酒精度。测试结果如表4所示。
表4
发酵时间(天) | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 |
产品酒精度(%) | 1.5 | 2.3 | 4 | 4.3 | 4.7 | 4.6 | 4.3 | 3.5 | 3.6 | 3.5 |
从表4可知,不同发酵时间对产品的酒精浓度存在较大影响,并非越长时间产生的酒精含量越高;当发酵时间为3~7日时,制备得到的平卧菊三七酒产品的酒精含量较高。
实施例9
为验证本发明所述平卧菊三七酒的制备方法中发酵过程发酵温度的优选性,本实施例将实施例1中发酵的温度分别替换22℃、24℃、26℃、30℃和32℃,其余步骤及参数与实施例1相同。将所得产品分别使用0~25°酒精仪测定平卧菊三七发酵酒的酒精度。测试结果如表5所示。
表5
发酵温度(℃) | 22 | 24 | 26 | 28 | 30 | 32 |
产品酒精度(%) | 3.3 | 4.3 | 4.5 | 4.5 | 3.4 | 3.6 |
从表5可知,不同发酵温度对产品的酒精浓度存在较大影响,并非越高温度下发酵产生的酒精含量越高;当发酵温度为24~28℃时,制备得到的平卧菊三七酒产品的酒精含量较高。
实施例10
为验证本发明所得平卧菊三七酒产品的功效组分活性及组成,对实施例1~4所得产品进行总黄酮含量及绿原酸含量测试,同时将未发酵的平卧菊三七原料进行相同测试并作为对照组。所述产品中总黄酮含量的测定采用分光光度法进行,具体参考“郑国栋等人发表的《微波辅助提取平卧菊三七中总黄酮的工艺研究》,江苏农业科学,2015,43(8):279-281”。产品中绿原酸含量的测定则采用高效液相色谱法,具体参考“付建平等人的发表的《平卧菊三七中绿原酸的微波辅助提取及制备色谱法纯化》,食品工业,2018,39(8):104-107”。测试结果如表6所示。
表6
样品 | 总黄酮含量(%) | 绿原酸含量(%) |
实施例1 | 2.01 | 0.17 |
实施例2 | 1.67 | 0.11 |
实施例3 | 1.91 | 0.15 |
实施例4 | 1.79 | 0.12 |
对照组 | 0.86 | 0.08 |
从表6可知,相比于未经过发酵的原料对照组,实施例1~4所得产品显示的总黄酮含量和绿原酸含量均较高,说明本发明所述平卧菊三七酒的发酵过程显著提高了原料中总黄酮和绿原酸等活性成分的溶出率。
为此,将实施例1的平卧菊三七酒产品进行活性成分分析。所述产品经0.45μm水膜过滤之后用HPLC-MS仪器分析产品中的化学成分。所用仪器为分析型高效液相色谱仪为Ultimate 3000DGLC、高分辨质谱仪为Q-Exactive离子阱质谱仪和分析色谱柱为Watersacquity HSS T3(1.8μm,100×2.1mm)。实验检测波长设置为全波长扫描,柱温为40℃,进样量为2μL,流速0.4mL/min,流动相为:乙腈(A)-0.1%甲酸水(B),测试过程采用线性梯度洗脱程序:0~1min:5%A,1.5min:10%B,4.5min:13%B,15min:17%B,20min:30%B,23min:45%B,26~28min:80%B,28.2~33min:5%B。所用质谱检测条件为:正、负离子切换扫描方式,扫描质量范围为100~1500m/z,一级扫描分辨率35000,二级扫描分辨率17500,碰撞能设置为30eV,正离子喷雾电压3.0kV,负离子喷雾电压2.8kV,毛细管温度350℃,鞘气40,辅助气1,吹扫气1。
所述平卧菊三七酒产品的活性成分分析结果如图1所示,可以看出,所述产品保留了平卧菊三七中的多种活性化学成分,包括新绿原酸(Neochlorogenic acid)、绿原酸(Chlorogenic acid)、隐绿原酸(Cryptochlorogenic acid)和咖啡酸(Caffeic acid)等诸多活性成分。
实施例11
为验证本发明所述平卧菊三七酒的使用抗氧化效果,将实施例1所得产品进行体外抗氧化活性采用氧自由基吸收能力(oxygen radical absorbance capacity,ORAC)实验评价,该实验过程采用荧光素钠在485nm光的激发下,发射出527nm荧光,此荧光可以被AAPH所释放的自由基氧化导致荧光淬灭。而反应体系中的抗氧化剂与荧光素钠竞争自由基的氧化作用,减缓荧光衰减速度。因此,ORAC实验可用于测定样品的自由基清除活性。
本实验分为自由基对照(AAPH+)、没有添加AAPH的空白对照组(AAPH-)、Trolox组、平卧菊三七酒组及等浓度平卧菊三七水溶液对照组,共六组。具体测定方法如下,在96孔板中添加待测样品溶液,再加入磷酸钾缓冲液和荧光素钠,最后加入AAPH。将96孔板置于37℃的荧光酶标仪开始测定,记录120min内荧光信号的变化,每2min检测一次,绘制荧光衰退曲线并计算曲线下面积。抗氧化剂对氧自由基清除能力ORAC值,是通过待测样品荧光衰退曲线保护面积与Trolox(1μmol·L-1)保护面积相比得出。计算公式为,ORAC=K[(AUCSample-AUCAAPH +)/(AUCTrolox-AUCAAPH +)],其中K为样品稀释倍数。
测试结果如图2所示,实施例1所得平卧菊三七酒与等浓度平卧菊三七水溶液对照组相比(ORAC值:992.05),平卧菊三七酒(ORAC值:1173.22)具有较好的体外自由基清除能力,其结果可能与发酵过程引起的总黄酮与绿原酸等抗氧化活性成分的溶出增加相关。
实施例12
为验证本发明所述平卧菊三七酒的使用降尿酸效果,将实施例1所得产品进行降尿酸活性实验评价。本实验使用SPF级昆明雄性健康小鼠60只,初始体重范围为25g~30g。所述小鼠购于广东省医学实验动物中心(许可证号SCXK(粤)2018-0002),饲养温度23±2℃,湿度50±10%,每天日光照为12h,适应环境一周后进行实验,实验开始前分笼饲养,整个试验过程自由进食和饮水。实验动物随机分为6组,分别为等容量水溶液正常对照组、等容量水溶液模型对照组,15mg/kg别嘌醇阳性对照组、等容量平卧菊三七水溶液组,等容量平卧菊三七酒组及等容量1/2浓度平卧菊三七酒组,每组10只。
本实验小鼠为0.2mL/10g灌胃给药方式,正常对照组和模型对照组每天灌胃等容量水溶液,阳性对照组别嘌醇仅最后一天给药一次,前四次均灌胃等容量水溶液,连续灌胃5天。高尿酸血症小鼠模型采用腹腔注射尿酸酶抑制剂氧嗪酸钾盐(250mg/kg)构建,实验最后一天小鼠以0.1mL/10g腹腔注射400mg/kg(0.5%CMC-Na)氧嗪酸钾,正常对照组小鼠腹腔负荷0.5%CMC-Na等容量注射液。实验期间小鼠均正常饮食,氧嗪酸钾负荷前12h禁食,但正常饮水。氧嗪酸钾负荷1h后,异氟烷麻醉小鼠,并摘眼球取血,室温静置分层后3500rpm的转速离心10min后获得血清,采用试剂盒(南京建成;C012-1)检测血清中尿酸的水平,测试结果如表7所示。
表7
实验组别 | 血清尿酸(μmol/L) |
等容量水溶液-正常对照 | 87.3±5.2 |
等容量水溶液-氧嗪酸钾负荷 | 183.4±12.5* |
15mg/kg别嘌醇-氧嗪酸钾负荷 | 75.6±10.3<sup>#</sup> |
等容量平卧菊三七水溶液-氧嗪酸钾负荷 | 126.5±11.9<sup>#</sup> |
等容量平卧菊三七酒-氧嗪酸钾负荷 | 105±6.4<sup>#$</sup> |
等容量1/2浓度平卧菊三七酒-氧嗪酸钾负荷 | 130±9.4<sup>#</sup> |
与等容量水溶液-正常对照组相比,*P<0.05;与等容量水溶液-氧嗪酸钾负荷组相比,#P<0.05;与等容量平卧菊三七水溶液-氧嗪酸钾负荷组相比,$P<0.05。
由表中可知,实施例1所得平卧菊三七酒产品能够有效地降低氧嗪酸钾负荷引起的高尿酸血症(P<0.05),而平卧菊三七酒与等容量平卧菊三七水溶液相比,平卧菊三七发酵酒能够更加有效地降低血清尿酸水平(P<0.05)。
最后所应当说明的是,以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制,尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明,本领域的普通技术人员应当理解,可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换,而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
Claims (10)
1.一种平卧菊三七酒的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)将平卧菊三七粉碎过筛后,用水浸提,得混合液A;
(2)在步骤(1)所得混合液A中加入糖和盐混合均匀后,灭菌并加入发酵酵母进行发酵;所述糖的添加量占混合液A质量含量的8~14%;所述发酵酵母为马克斯克鲁维酵母;所述接种量占混合液A质量含量的3~8%;
(3)待步骤(2)所述发酵结束,所得发酵液经离心后,将上清液取出并加热灭菌,即得所述平卧菊三七酒。
2.如权利要求1所述的平卧菊三七酒的制备方法,其特征在于,步骤(1)所述的过筛的目数为40~80目;所述浸提时平卧菊三七与水的质量比为1:15~30,浸提时的温度为85~100℃,时间为30~60min。
3.如权利要求1所述的平卧菊三七酒的制备方法,其特征在于,步骤(2)所述糖包括葡萄糖、蔗糖、乳糖中的至少一种;所述盐包括钠盐、钙盐、钾盐、镁盐中的至少一种,所述盐的添加量占混合液A质量含量的0.1~0.2%。
4.如权利要求1所述的平卧菊三七酒的制备方法,其特征在于,步骤(2)所述发酵的温度为24~28℃,时间为3~7日。
5.如权利要求1所述的平卧菊三七酒的制备方法,其特征在于,所述马克斯克鲁维酵母为经过驯化得到的马克斯克鲁维酵母菌液,所述驯化包括以下步骤:
(1)将马克斯克鲁维酵母菌种接种于沙氏培养液中并在26~30℃下在100~150r/min速率的摇床中恒温培养20~28h,得液体培养液a;
(2)将步骤(1)所得液体培养液a接种于含有平卧菊三七浸提液的培养基溶液中,在26~30℃下在100~150r/min速率的摇床中恒温培养20~28h,得到I级菌液;所述液体培养液a的接种量占所述培养基溶液质量含量的3~5%;所述平卧菊三七浸提液占所述培养基溶液质量含量的10%;
(3)将步骤(2)所得I级菌液接种于含有平卧菊三七浸提液的培养基溶液中,在26~30℃下在100~150r/min速率的摇床中恒温培养20~28h,得到II级菌液;所述I级菌液的接种量占所述培养基溶液质量含量的3~5%;所述平卧菊三七浸提液占所述培养基溶液质量含量的20%;
(4)按每次10%逐级提升平卧菊三七浸提液占所述培养基溶液质量含量,并重复步骤(3)中菌液的接种及培养步骤直至所述平卧菊三七浸提液占所述培养基溶液质量含量的50%,驯化结束,得到经过驯化的马克斯克鲁维酵母菌液。
6.如权利要求5所述的平卧菊三七酒的制备方法,其特征在于,所述经过驯化的马克斯克鲁维酵母菌液中的活菌数为109CFU/mL。
7.如权利要求5所述的平卧菊三七酒的制备方法,其特征在于,所述驯化的步骤(2)~(4)中培养基溶液还含有蔗糖和硫酸钾,所述蔗糖占所述培养基溶液质量含量的6~10%,所述硫酸钾占所述培养基溶液质量含量的0.15~0.2%。
8.如权利要求1所述的平卧菊三七酒的制备方法,其特征在于,步骤(3)所述离心的速率为4000~6000r/min,时间为5~10min。
9.如权利要求1所述的平卧菊三七酒的制备方法,其特征在于,步骤(3)所述加热灭菌的温度为100~120℃,时间为5~7s。
10.如权利要求1~9任一项所述平卧菊三七酒的制备方法制备得到的平卧菊三七酒。
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