TWI793940B

TWI793940B - 雪蓮發酵物的製備方法及改善皮膚狀態的組合物

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Publication number: TWI793940B
Application number: TW110148422A
Authority: TW
Inventors: 方祥銘; 方曉薇
Original assignee: 大陸商上海全麗生物科技有限公司; 大陸商上海仙萃生物科技有限公司
Priority date: 2021-12-23
Filing date: 2021-12-23
Publication date: 2023-02-21
Also published as: TW202325327A

Abstract

本發明提供一種雪蓮發酵物的製備方法，包含下述步驟。提供一發酵原料，所述之發酵原料包含一雪蓮。提供一發酵菌液，所述之發酵菌液包含一酵母菌。進行一發酵步驟，其係混合發酵原料與發酵菌液，以得一混合物，並將混合物於一發酵溫度下培養一發酵時間，以得一發酵後產物。去除發酵後產物之一固體成分，以得一雪蓮發酵物。藉此，可有效地萃取雪蓮的有效成分並保留其活性，以避免傳統的萃取方法所造成的活性成分流失及有機溶劑的危害。另外，本發明同時提供一種包含雪蓮發酵物的改善皮膚狀態的組合物。

Description

雪蓮發酵物的製備方法及改善皮膚狀態的組合物

本發明是關於一種發酵物的製備方法，特別是關於一種雪蓮發酵物的製備方法以及包含雪蓮發酵物之改善皮膚狀態的組合物。

雪蓮( Saussurea involucrata)，又稱雪蓮花，因其頂形似蓮花而得名。雪蓮是傳統醫學中的名貴藥材之一，主要分佈在中國大陸之青海、甘肅、四川、雲南、西藏等高海拔、日照紫外線強烈、晝夜溫差大的高寒地帶。在醫藥應用方面，《本草綱目拾遺》記載雪蓮「性大熱，能補精益陽」，且《新疆中草藥》記載「雪蓮性溫、微苦，功能祛風除濕」，是以食用雪蓮具有通經活血、散寒除濕、止血消腫、排除體內毒素等功效。

過往的文獻中指出，雪蓮富含蛋白質、胺基酸、黃酮類化合物、生物鹼等，然目前未有針對雪蓮應用於美容品、化妝品之功效的研究。

因此，如何提供一種能將雪蓮有效地應用於美容護膚之相關領域的策略，實為相關學界及業界所致力發展的目標。

本發明之一態樣是在於提供一種雪蓮發酵物的製備方法，包含下述步驟。提供一發酵原料，其中所述之發酵原料包含一雪蓮，且雪蓮係以70°C至80°C的溫度乾燥而製得。提供一發酵菌液，其中所述之發酵菌液包含一酵母菌。進行一發酵步驟，其係混合所述之發酵原料與所述之發酵菌液，以得一混合物，並將混合物於一發酵溫度下培養一發酵時間，以得一發酵後產物，其中所述之發酵溫度為20°C至50°C，所述之發酵時間為10小時至50小時。去除發酵後產物之一固體成分，以得一雪蓮發酵物。

依據前述實施方式之雪蓮發酵物的製備方法，其中發酵原料可以2~10 g的雪蓮與100~300 mL的水混合而得。

依據前述實施方式之雪蓮發酵物的製備方法，其中所述之發酵菌液的濃度可為10 ⁵CFU/mL至10 ⁸CFU/mL。

依據前述實施方式之雪蓮發酵物的製備方法，其中於所述之混合物中，發酵菌液與雪蓮的混合比例可為5~10 mL:2~20 g。

依據前述實施方式之雪蓮發酵物的製備方法，其中所述之雪蓮發酵物的pH值可為4.5至6.8。

依據前述實施方式之雪蓮發酵物的製備方法，其中所述之雪蓮發酵物可包含1.0~5.0 mg/mL的蛋白質、4.0~10.0 mg/mL的總多醣、1.0~5.0 mg/mL的總黃酮以及0.2~0.9 mg/mL的總酚。

依據前述實施方式之雪蓮發酵物的製備方法，可更包含一滅菌步驟，其係對發酵後產物進行一滅菌處理，且所述之固體成分係利用一離心方式、一過濾方式或上述方式之組合而去除。

本發明之另一態樣是在於提供一種改善皮膚狀態的組合物，包含一有效劑量之一雪蓮發酵物，其中所述之雪蓮發酵物係利用如前段所述之雪蓮發酵物的製備方法所製得。

依據前述實施方式之改善皮膚狀態的組合物，其中改善皮膚狀態的組合物可用以提高皮膚之一保濕能力。

依據前述實施方式之改善皮膚狀態的組合物，其中改善皮膚狀態的組合物可用以提升皮膚之一細緻度及/或改善皮膚之一過敏與發炎現象。

藉此，本發明之雪蓮發酵物的製備方法採用酵母菌對雪蓮進行發酵，可有效地萃取雪蓮的有效成分並保留其活性，避免傳統的萃取方法所造成的活性成分流失及有機溶劑的危害，進而使本發明之雪蓮發酵物的製備方法所製得之雪蓮發酵物可應用於改善皮膚狀態的組合物中，並具有保濕、提升皮膚之細緻度及改善皮膚之過敏與發炎現象等功效，使本發明之雪蓮發酵物的製備方法及改善皮膚狀態的組合物具有優異的市場應用潛力。

下述將更詳細討論本發明各實施方式。然而，此實施方式可為各種發明概念的應用，可被具體實行在各種不同的特定範圍內。特定的實施方式是僅以說明為目的，且不受限於揭露的範圍。

[本發明之雪蓮發酵物的製備方法]

請參照第1圖，其係繪示本發明之雪蓮發酵物的製備方法100的步驟流程圖。雪蓮發酵物的製備方法100包含步驟110、步驟120、步驟130以及步驟140。

步驟110為提供一發酵原料，其中所述之發酵原料包含一雪蓮，且雪蓮係以70°C至80°C的溫度乾燥而製得。詳細而言，本發明所採用之雪蓮可為其植株部分或花朵部分，且發酵原料可以2~10 g的雪蓮與100~300 mL的水混合而得，其中雪蓮可先進行適當的裁切工序而成細塊或粉末後再行與水混合，但本發明並不以此為限。較佳地，發酵原料可以7 g的雪蓮與300 mL的水混合而得。

步驟120為提供一發酵菌液，其中發酵菌液包含一酵母菌。詳細而言，本發明所使用的酵母菌可為但不限於任何品系之釀酒酵母菌( Saccharomyces cerevisiae)或其他品種之酵母菌，而在將酵母菌用於進行發酵之前將先進行一預處理步驟。在預處理步驟方面，首先將酵母菌放入呈現液體的PDA培養基中並於培養箱中進行活化，而後將活化的酵母菌塗布接種於平板培養基上並挑選單一菌落進行後續的擴增，並以25°C至50°C的條件培養至OD值 = 0.5~1.0，此時的酵母菌將處於對數期而具有較佳的活性，即可用於後續之發酵。較佳地，發酵菌液的濃度可為10 ⁵CFU/mL至10 ⁸CFU/mL，但本發明並不以此為限。

步驟130為進行一發酵步驟，其係混合所述之發酵原料與所述之發酵菌液，以得一混合物，並將混合物於一發酵溫度下培養一發酵時間，以得一發酵後產物，其中發酵溫度為20°C至50°C，發酵時間為10小時至50小時。詳細而言，在上述溫度範圍下，酵母菌具有最佳的發酵效率。若發酵時間過短，將使雪蓮的有效成分無法充分釋出；反之，若發酵時間過長，則可能使其他雜菌滋生而影響發酵的品質。再者，於所述之混合物中，發酵菌液與雪蓮的混合比例可為5~10 mL:2~20 g。較佳地，於所述之混合物中，發酵菌液與雪蓮的混合比例可為5 mL:4 g，而發酵溫度可為30°C，發酵時間可為48小時，但本發明並不以此為限。

步驟140為去除發酵後產物之一固體成分，以得一雪蓮發酵物。詳細而言，在經過步驟110至步驟130的處理後，雪蓮的有效成分已全數進入雪蓮發酵物中，而在將發酵後產物中的固體成分去除後，餘下之液體成分即為本發明之雪蓮發酵物，其中雪蓮發酵物的pH值可為4.5至6.8，且雪蓮發酵物可包含1.0~5.0 mg/mL的蛋白質、4.0~10.0 mg/mL的總多醣、1.0~5.0 mg/mL的總黃酮以及0.2~0.9 mg/mL的總酚。

另外，在本發明之雪蓮發酵物的製備方法100中，可更包含一滅菌步驟，其係對發酵後產物進行一滅菌處理，而固體成分則可利用離心方式、過濾方式或上述方式之組合而去除，但本發明並不以此為限。具體而言，發酵後產物可在121°C的條件下高壓滅菌15分鐘，以使其中的酵母菌失活並去除其他雜菌，而滅菌後的發酵後產物將進一步以4000 r/min至12000 r/min、離心半徑為9公分至12公分的條件離心20分鐘後收集上清液，所述之上清液即為本發明之雪蓮發酵物。

藉此，本發明之雪蓮發酵物的製備方法100採用酵母菌對雪蓮進行發酵，在萃取過程中亦不添加任何有機試劑，如此一來不僅可有效地萃取雪蓮的有效成分並保留其活性，避免傳統的萃取方法所造成的活性成分流失及有機溶劑的危害，更可使本發明之雪蓮發酵物的製備方法100所製得之雪蓮發酵物具有優異的生物安全性，並可用於改善皮膚狀態的組合物等美容品與化妝品中，而具有優異的市場應用潛力。

[本發明之改善皮膚狀態的組合物]

本發明之改善皮膚狀態的組合物包含本發明之雪蓮發酵物的製備方法所製得之雪蓮發酵物，其中雪蓮發酵物具有溫和的pH值並富含與保濕、除皺功能相關的多醣以及與抗氧化、抗過敏、抗發炎功能相關的多酚與黃酮，是以本發明之改善皮膚狀態的組合物具有優異的保濕、提亮、舒緩等功效，具有絕佳的市場應用潛力。

另外，本發明之改善皮膚狀態的組合物之劑型可為液劑、乳劑、霜劑、安瓿、膠囊、丸劑、錠劑、粉末、顆粒、凝膠，並可應用於乳液、化妝水、精華液、隔離霜、洗面乳、面膜或防曬乳上，但本發明並不以此為限。

[實施例與比較例]

一、本發明之雪蓮發酵物

以下將以實施例1的雪蓮發酵物來詳細說明本發明之雪蓮發酵物的製備方法所製得之雪蓮發酵物的性質，並進一步分析其應用於皮膚保濕、提升皮膚之細緻度及改善皮膚之過敏與發炎現象等效果。

實施例1的雪蓮發酵物是以下述步驟製得。首先，將5 mL擴增培養後之濃度為10 ⁵CFU/mL至10 ⁸CFU/mL的發酵菌液接種至發酵原料中，其中發酵原料係以5 g的雪蓮花粉末和300 mL的水混合而得，接著將前述的混合物於30°C的培養箱中培養48小時後，將所得之發酵後產物以121°C高壓滅菌15分鐘使酵母菌失活，而後將滅菌後的發酵後產物以4500 r/min、離心半徑為9公分的條件離心20分鐘後收集上清液，此上清液即為本發明實施例1的雪蓮發酵物。

實施例1的雪蓮發酵物在外觀上呈現淺褐色半透明狀態的液體，而利用習知的酸鹼度或黏度測定法(如酸鹼度計定法及旋轉黏度測定計)測得其pH值為4.5至6.8，黏度為10 cP至15 cP。再者，實施例1的雪蓮發酵物的可溶性固含物的含量約為0.9 wt%至2.0 wt%，菌落總數小於50 CFU/mL，且無致病菌檢出，符合化妝品的品質要求。

二、本發明之雪蓮發酵物的成分分析

本試驗是利用高效液相層析(HPLC)並參照試驗方法GB/T 30483-2013來分析實施例1的雪蓮發酵物的成分。另外，本試驗同時以高效液相層析分析實施例1的雪蓮發酵物的綠原酸(Chlorogenic acid )與紫丁香苷(Ligustrin)的含量，而分析綠原酸含量的高效液相層析的檢測條件列示於表一，分析紫丁香苷含量的高效液相層析的檢測條件列示於表二。

表一、分析綠原酸含量的HPLC檢測條件
分離管柱	Shim-pack GIST C18 (4.6mm×250 mm, 5 μm)
移動相	移動相A：0.4%磷酸水溶液
移動相B：乙腈
混合比例為A:B = 90:10
檢測波長 (nm)	327
溫度 (°C)	40
流速 (mL/min)	1~-1
樣品處理	取乙醇稀釋樣品至濃度為10%，經0.45 μm濾膜過濾後作為待測液
進樣量	10 μL

表二、分析紫丁香苷含量的HPLC檢測條件
分離管柱	Shim-pack GIST C18 (4.6mm×250 mm, 5 μm)
移動相	移動相A：0.05%磷酸水溶液
移動相B：乙腈
混合比例為A:B = 88:12
檢測波長 (nm)	210
溫度 (°C)	30
流速 (mL/min)	1~-1
樣品處理	取乙醇稀釋樣品至濃度為10%，經0.45 μm濾膜過濾後作為待測液
進樣量	10 μL

另外，本試驗同時包含以傳統的水煮方式處理雪蓮而未經過任何發酵的比較例1(以下稱為「比較例1的雪蓮水萃物」)，以進一步分析以本發明之雪蓮發酵物的製備方法所製得之雪蓮發酵物的有效成分含量。

由高效液相層析的結果顯示，實施例1的雪蓮發酵物含有1.0 mg/mL至5.0 mg/mL的蛋白質、4.0 mg/mL至10.0 mg/mL的總多醣、1.0 mg/mL至5.0 mg/mL的總黃酮以及0.2~0.9 mg/mL的總酚。

再請參照表三，其係實施例1的雪蓮發酵物與比較例1的雪蓮水萃物的綠原酸含量分析結果。

表三
	綠原酸含量 (μg/mL)	出峰時間 (分)
實施例1	5.381	16.017
比較例1	3.567	15.995

綠原酸是一種天然的抗氧化劑，可令餐後葡萄糖釋出進入血液的過程減慢，而由表三的內容可知，每毫升之實施例1的雪蓮發酵物含有5.381 μg的綠原酸，然比較例1的雪蓮水萃物僅含有3.567 μg的綠原酸，明顯低於實施例1的雪蓮發酵物。

再請參照表四，其係實施例1的雪蓮發酵物與比較例1的雪蓮水萃物的紫丁香苷含量分析結果。

表四
	紫丁香苷含量 (μg/mL)	出峰時間 (分)
實施例1	14.338	10.387
比較例1	4.262	10.658

紫丁香苷是雪蓮的關鍵活性成分之一，其具有抗炎鎮痛、抗高血糖、抗抑鬱、抗輻射、止血及抗癌等活性，是以本試驗進一步分析實施例1的雪蓮發酵物的紫丁香苷含量，以評估其改善皮膚之過敏與發炎現象的效果。而如表四的內容可知，每毫升之實施例1的雪蓮發酵物含有14.338 μg的紫丁香苷，其明顯高於比較例1的雪蓮水萃物中的紫丁香苷含量。

由上述結果可見，本發明之雪蓮發酵物的製備方法可有效地萃取雪蓮之蛋白質、多醣、黃酮、綠原酸、紫丁香苷等有效成分，並具有優異的抗氧化活性與抗炎舒緩的效果而具有優異的市場應用潛力。

三、本發明之雪蓮發酵物的保濕能力評估

本試驗是利用經皮水分散失量(trans-epidermal water loss，TEWL)做為皮膚表層含水量的指標，以評估實施例1的雪蓮發酵物的保濕能力。另外，本試驗同樣包含前述之比較例1的雪蓮水萃物，以進一步評估以本發明之雪蓮發酵物的製備方法所製得之雪蓮發酵物的優異保濕效果。

在實驗方面，首先在3位受試者的手臂皮膚設定對照區域及實驗區域(各為3 cm × 3 cm)，並分別利用市售之經皮水分散失測定儀Tewameter ^®CM825和TM300(Courage + Khazaka Electronic)獨立檢測對照區域與實驗區域之皮膚的經皮水分散失量。接著，將使用量為2.0±1.0 mg/cm ²之實施例1的雪蓮發酵物與比較例1的雪蓮水萃物單次塗抹於實驗區域的皮膚上，但不對對照區域的皮膚進行任何處理，並於測試前、使用後第1天、使用後第5天、使用後第7天及使用後第14天測量經皮水分散失量，並將所測得之數據以對照區域的經皮水分散失量數據進行校正而得皮膚含水量的評估結果。

請參照第2圖，其係本發明之雪蓮發酵物的改善肌膚含水量的分析結果圖。如第2圖所示，在使用後第14天，受試者使用實施例1的雪蓮發酵物後的皮膚水分含量明顯高於比較例1的雪蓮水萃物的皮膚水分含量，顯示使用實施例1的雪蓮發酵物後的經皮水分散失量較少。由此可見，本發明之雪蓮發酵物的製備方法所製得之雪蓮發酵物具有優異保濕功效並可提高皮膚之保濕能力，並有潛力應用於改善皮膚狀態的組合物或其他化妝品之中而具有相關市場的應用潛力。

四、本發明之雪蓮發酵物的抗敏舒緩效果評估

本試驗是將實施例1的雪蓮發酵物塗抹於5位受試者之皮膚上，以觀察其上之紅血絲的消退情形而評估本發明之雪蓮發酵物的抗敏舒緩效果。

在實驗方面，首先在5位受試者的手臂皮膚設定實驗區域(各為3 cm × 3 cm)，並將使用量為2.0±1.0 mg/cm ²之實施例1的雪蓮發酵物塗抹於實驗區域的皮膚上，每日塗抹2次並持續14天，並拍攝測試前與使用後第14天的皮膚影像及根據所得影像計算其紅血絲平均值。

請參照第3A圖、第3B圖與表五，其中第3A圖係本發明之雪蓮發酵物的抗敏舒緩效果的試驗影像，第3B圖係本發明之雪蓮發酵物的抗敏舒緩效果的分析結果圖，表五則記錄未使用實施例1的雪蓮發酵物與使用14天後的紅血絲平均值。

表五
	紅血絲平均值
	未使用	使用14天後
受試者1	1.17	1.067
受試者2	1.31	1.17
受試者3	1.273	1.125
受試者4	1.396	1.296
受試者5	0.9066	0.856

由第3A圖、第3B圖與表五的內容可見，在使用實施例1的雪蓮發酵物14天後，5位受試者的皮膚紅腫現象明顯消退，其紅血絲平均值亦明顯降低，且5位受試者的皮膚紅血絲平均降低8.94%，顯示本發明之雪蓮發酵物的製備方法所製得之雪蓮發酵物具有相當的抗敏舒緩效果，並有潛力應用於改善皮膚之過敏與發炎現象之改善皮膚狀態的組合物或其他化妝品之中而具有相關市場的應用潛力。

五、本發明之雪蓮發酵物的提升皮膚細緻度效果評估

皮膚細緻度(Evenness)是皮膚組成結構的一種評估方法，其係根據待測皮膚與其周圍的區域於膚色、肌理等皮膚紋理變化而判斷皮膚的細緻度，而本試驗是將實施例1的雪蓮發酵物塗抹於前述之5位受試者的皮膚上，以觀察皮膚紋理的變化而評估本發明之雪蓮發酵物提升皮膚細緻度的效果。

在實驗方面，首先在5位受試者的手臂皮膚設定實驗區域(各為3 cm × 3 cm)，並將使用量為2.0±1.0 mg/cm ²之實施例1的雪蓮發酵物塗抹於實驗區域的皮膚上，每日塗抹1次並持續14天，並拍攝測試前與使用後第14天的皮膚影像，及根據所得影像計算其皮膚的紋理平均值。

請參照第4A圖、第4B圖與表六，其中第4A圖係本發明之雪蓮發酵物的改善皮膚紋理效果的試驗影像，第4B圖係本發明之雪蓮發酵物的改善皮膚紋理效果的分析結果圖，表六則記錄未使用實施例1的雪蓮發酵物與使用14天後的紋理平均值。

由第4A圖、第4B圖與表六的內容可見，在使用實施例1的雪蓮發酵物14天後，5位受試者的皮膚紋理值均有降低，其中又以受試者1、受試者2與受試者5的皮膚紋理值具有明顯降低的現象，且受試者1、受試者2與受試者5的皮膚紋理值平均降低12.19%，顯示本發明之雪蓮發酵物的製備方法所製得之雪蓮發酵物具有相當的淡化細紋與改善皮膚紋理的效果，並有潛力應用於提升皮膚細緻度的改善皮膚狀態的組合物或其他化妝品之中而具有相關市場的應用潛力。

六、本發明之雪蓮發酵物的安全性評估

本試驗是利用封閉式貼布試驗(Closed Patch Test)評估實施例1的雪蓮發酵物對皮膚的潛在刺激性，以確認本發明之雪蓮發酵物應用於人體的安全性。在實驗方面，首先將0.2mL至0.25mL的實施例1的雪蓮發酵物滴加於濾紙片上，再將濾紙片置於斑試器中備用。在受試者方面，隨機選擇年齡為18歲至60歲共30位受試者，並以無刺激性的膠帶於每位受試者的背部固定2個斑試器，使斑試器中的濾紙片貼附於受試者的背部皮膚上24小時，在試驗期間內不移除斑試器，也盡量避免斑試器沾染汗液或水。另外，每個試驗組別皆對應設定一控制組，控制組係以0.20 mL至0.25 mL的蒸餾水進行測試。在測試24小時後取下斑試器，並分別於取下斑試器30分鐘後、24小時後及48小時後觀察斑試器下的皮膚(以下稱為「受試區域」)及受試區域周圍的皮膚是否出現紅斑、浸潤、水腫、丘疹及/或皰疹等過敏或發炎的症狀。

請參照表七，其為實施例1的雪蓮發酵物的安全性測試結果。安全性測試結果共分五個等級，其中圖號「-」代表受試區域為陰性反應而未有任何過敏或發炎的症狀，圖號「±」代表受試區域出現可疑反應(如：具有輕微的紅斑)，圖號「+」代表受試區域出現弱陽性反應(亦稱為紅斑反應，即出現紅斑、浸潤、水腫及/或丘疹)，圖號「++」代表受試區域出現強陽性反應(亦稱為皰疹反應，即出現紅斑、浸潤、水腫、丘疹、皰疹，且皰疹反應超出受試區域以外的皮膚)，圖號「+++」代表受試區域出現極強陽性反應(亦稱為融合性皰疹反應，即出現明顯紅斑、嚴重浸潤、水腫、融合性丘疹，且融合性皰疹反應超出受試區域以外的皮膚)。另外，於表七中同時計算反應程度為陽性反應(即圖號為+、++與+++)的人數，以更清楚確認本發明之雪蓮發酵物的製備方法所製得之雪蓮發酵物的人體安全性。

表七
	反應程度	反應人數 (取下斑試器後)	陽性反應人數
30分鐘	24小時	48小時
控制組	-	30	30	30	0
±	0	0	0
+	0	0	0
++	0	0	0
+++	0	0	0
實施例1	-	30	30	30	0
±	0	0	0
+	0	0	0
++	0	0	0
+++	0	0	0

如表七所示，在取下斑試器30分鐘後、24小時後或48小時後，受試者在受試區域及其周圍的皮膚皆無紅斑、浸潤、水腫、丘疹、皰疹及融合性皰疹等反應，顯示本發明之雪蓮發酵物的製備方法所製得之雪蓮發酵物具有優異的生物安全性，並具有相關市場的應用潛力。

需補充的是，本發明雖以特定的菌株、特定的材料、特定的比例、特定的製程、特定的分析方法或特定儀器做為例示，以說明本發明之雪蓮發酵物具有美白、保濕、提升皮膚之細緻度及改善皮膚之過敏與發炎現象等功效，惟本發明所屬技術領域中任何具有通常知識者可知，在不脫離本發明之精神和範圍內，本發明之雪蓮發酵物的成分與功效亦可使用其他的菌株、其他的材料、其他的比例、其他的製程、其他分析方法或其他儀器進行分析，且本發明並不以此為限。

綜上所述，本發明之雪蓮發酵物的製備方法採用酵母菌對雪蓮進行發酵，在萃取過程中不添加任何有機試劑，如此一來不僅可有效地萃取雪蓮的有效成分並保留其活性，更可避免傳統的萃取方法所造成的活性成分流失及有機溶劑的危害。再者，本發明之雪蓮發酵物的製備方法所製得之雪蓮發酵物富含與保濕功能相關的多醣以及與抗氧化與抗敏功能相關的多酚與黃酮，且雪蓮發酵物具有溫和的pH值並可提高皮膚之保濕能力，並具有提升皮膚細緻度、改善皮膚之過敏與發炎現象等功效而可應用於改善皮膚狀態的組合物中，具有優異的市場應用潛力。

雖然本發明已以實施方式揭露如上，然其並非用以限定本發明，任何熟習此技藝者，在不脫離本發明之精神和範圍內，當可作各種之更動與潤飾，因此本發明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。

100:雪蓮發酵物的製備方法 110,120,130,140:步驟

為讓本發明之上述和其他目的、特徵、優點與實施例能更明顯易懂，所附圖式之說明如下：第1圖係繪示本發明之雪蓮發酵物的製備方法的步驟流程圖；第2圖係本發明之雪蓮發酵物的改善肌膚含水量的分析結果圖；第3A圖係本發明之雪蓮發酵物的抗敏舒緩效果的試驗影像；第3B圖係本發明之雪蓮發酵物的抗敏舒緩效果的分析結果圖；第4A圖係本發明之雪蓮發酵物的改善皮膚紋理效果的試驗影像；以及第4B圖係本發明之雪蓮發酵物的改善皮膚紋理效果的分析結果圖。

100:雪蓮發酵物的製備方法

110,120,130,140:步驟

Claims

一種雪蓮發酵物的製備方法，包含：提供一發酵原料，其中該發酵原料包含一雪蓮(Saussurea involucrata)，其中該發酵原料係以2~10g的該雪蓮與100~300mL的水混合而得，且該雪蓮係以70℃至80℃的溫度乾燥而製得；提供一發酵菌液，其中該發酵菌液包含一酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)，其中該發酵菌液的濃度為10⁵CFU/mL至10⁸CFU/mL；進行一發酵步驟，其係混合該發酵原料與該發酵菌液，以得一混合物，並將該混合物於一發酵溫度下培養一發酵時間，以得一發酵後產物，其中於該混合物中，該發酵菌液與該雪蓮的混合比例為5~10mL：2~20g，該發酵溫度為20℃至30℃，該發酵時間為10小時至50小時；以及去除該發酵後產物之一固體成分，以得一雪蓮發酵物；其中該雪蓮發酵物包含1.0~5.0mg/mL的蛋白質、4.0~10.0mg/mL的總多醣、1.0~5.0mg/mL的總黃酮以及0.2~0.9mg/mL的總酚。
如請求項1所述之雪蓮發酵物的製備方法，其中該雪蓮發酵物的pH值為4.5至6.8。
如請求項1所述之雪蓮發酵物的製備方法，更包含：一滅菌步驟，其係對該發酵後產物進行一滅菌處理，且該固體成分係利用一離心方式、一過濾方式或上述方式之組合而去除。
一種改善皮膚狀態的組合物，包含：一有效劑量之一雪蓮發酵物，其中該雪蓮發酵物係利用如請求項1至請求項3任一項之製備方法所製得。
如請求項4所述之改善皮膚狀態的組合物，其中該改善皮膚狀態的組合物係用以提高皮膚之一保濕能力。
如請求項4所述之改善皮膚狀態的組合物，其中該改善皮膚狀態的組合物係用以提升皮膚之一細緻度及/或改善皮膚之一過敏與發炎現象。