CN105647974A - 一种酿酒酵母植物发酵物及其应用和皮肤外用剂 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种酿酒酵母植物发酵物及其应用和皮肤外用剂。所述酿酒酵母植物发酵物由酿酒酵母CCTCC？NO:M？2015725在含有植物提取物的培养基上培养获得。所述酿酒酵母植物发酵物具有抗氧化、抗衰老的特性，能够应用于制备皮肤外用剂。所制得的皮肤外用剂具有良好的抗氧化、抗衰老的特性。这些皮肤外用剂能够有效清除自由基，减少光老化和氧化应激对皮肤造成的伤害，延缓皮肤衰老。

Description

一种酿酒酵母植物发酵物及其应用和皮肤外用剂
技术领域
本发明涉及微生物领域，具体涉及一种酿酒酵母植物发酵物及其应用和皮肤外用剂。
背景技术
自由基衰老学说(Harman，D.Aging:Atheorybasedonfreeradicalandradiationchemistry.J.Gerontol.1956，11:289-300)，认为过多的自由基是造成生物老化的重要原因。根据这一理论，体内过量的活性氧自由基与不饱和脂肪酸作用产生丙二醛等物质，丙二醛与细胞膜上的蛋白质等作用产生褐色素，沉淀于皮肤成为各种色斑。过量的自由基还能使皮肤内的胶原纤维、弹性纤维发生交联变性、变脆、失去弹性，当皮肤水分不足时，容易使弹性纤维断裂，出现暗纹、细纹、皱纹等皮肤老化现象。此外，环境中的离子辐射以及诸如空气污染与化学物质的环境污染物，也会使生物体内不断地产生自由基。例如紫外线会使皮肤真皮中的纤维母细胞及粒线体受到刺激，进而释放出超氧阴离子，而过量的超氧阴离子则会转换成其它破坏性更强的自由基。
虽然人体内具有能够维持氧化与抗氧化之间平衡状态的抗氧化防御系统，用以减缓活性氧及自由基的产生，但若长期过度地曝晒在阳光下，则人体内大量产生的自由基会导致皮肤的抗氧化防御能力降低，造成皮肤的伤害，例如光老化、表皮皱纹、皮肤免疫力失调等。目前已知有维生素E、维生素C等生物体内的清除自由基型抗氧化剂，另外也报道了植物来源的抗氧化剂如莲花、梅果提取物等。
皮肤老化的原因可以分为光老化和内因引起的老化，紫外线(UV)暴露引起的光老化会引起皮肤弹性蛋白酶的活性增加。目前已知有植物来源的抗老化活性物有蓼蓝、香豌豆等。
酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)是单细胞真菌，形态通常有球形、卵圆形等，一般为1～5微米至5～30微米，有细胞壁、细胞膜、细胞核、细胞质结构。酿酒酵母主要生长在偏酸性的潮湿的含糖环境中，菌体含有丰富的蛋白质、脂肪、糖分和B族维生素等，以及酶、辅酶、核糖核酸、甾醇和一些新陈代谢的中间产物，具有丰富的营养价值。酿酒酵母丰富的代谢产物可利用于药物或化妆品的制备中，如SAM、NAD(H)激酶、Pos5p、胞外多糖、金属硫蛋白等。SAM是半胱氨酸、牛磺酸和谷胱甘肽等重要物质的前体。如谷胱甘肽是美国MerleNorman经典作品，风行欧美50年，堪称世纪美白祛斑经典。NAD(H)激酶的缺失将导致细胞抗氧化性能出现障碍。在细胞面临不同类型的氧化胁迫时，Pos5p都能有效行使其NAD(H)激酶活性，补充NADP(H)的损耗，从而对细胞起到抗氧化保护作用。酿酒酵母多糖作为多糖中的一种，研究发现其具有多种生理活性，能够提高机体免疫力，还具有抗氧化、抗病毒和抑制肿瘤等作用。
人参(PanaxginsengC.A.Mey.)，为五加科人参属多年生草本植物，人参花30-50朵，花淡黄绿色。人参花又名“神草花”，气清香、特异，味苦(王本详主编，人参的研究[M].天津：天津科学出版社，1984.98-99，116-124.)。人参第三年开始开花结实，30公斤的人参一年只能收获一两人参花，且只有几天的采收期，因此稀有珍贵。中国药典规定人参的药用部位为根及根茎，其地上部分有人参叶列入药用标准，研究表明，人参花富含人参皂甙及其他各种挥发油等有效成分，其中人参皂甙含量可比人参高出5倍以上。人参花蕾提取液可以有效清除体系中的羟基自由基(·OH)，保护皮肤细胞不受外界氧化、压力的损伤，起到抗衰老作用。人参花蕾皂苷与人参皂苷可以通过上调超氧化物歧化酶(SOD)基因的表达，增加SOD的活性，抑制脂质过氧化物的产生，减少氧化损伤。人参皂苷Re，Rg1，Rb1均能显著提高人皮肤成纤维细胞的增殖水平。胶原蛋白是皮肤饱满，富有弹性的物质基础，胶原含量高能维持皮肤正常形态，保证皮肤的各项生理功能。人参花里面的主要成分Re，Rd以及人参根里面的皂苷成分Rg1，Rb1在体外细胞实验中能显著提高人成纤维细胞中的胶原总量，这些作用可能是通过调控相关基因及蛋白质(I型前胶原，TIMP-1，MMP-1)的表达而实现的。研究证明，人参皂苷对UVB照射诱导的角质细胞存活率有提升作用。鉴于人参特殊的生长、采收环境，以及其重要的生物活性及药理作用，目前人参有应用于化妆品等皮肤外用剂的潜在价值。类似地，西洋参等其他植物提取物也具有一定的抗氧化清除自由基的能力，正在逐步地应用于化妆品的制备中。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是，针对目前缺乏具有抗氧化和抗衰老活性作用的酵母菌发酵物的不足，提供一种酿酒酵母植物发酵物及其在制备皮肤外用剂中的应用；还提供一种含有所述酿酒酵母植物发酵物的皮肤外用剂。
本发明通过使用一株经特殊选择获得的抵御紫外线能力强、糖苷酶活性强的酿酒酵母，将该酿酒酵母在含有人参花提取物等植物提取物的培养基上培养，获得酿酒酵母植物发酵物，该酿酒酵母植物发酵物具有抗氧化、抗衰老的特性，可以应用于化妆水、乳液等皮肤外用剂中，从而赋予这些皮肤外用剂抗氧化、抗衰老的特性。
本发明的技术方案之一是：一种酿酒酵母植物发酵物，其由包括以下步骤的制备方法制得：(1)、将酿酒酵母CCTCCNO:M2015725在含有植物提取物的培养基中培养得培养液；(2)、将步骤(1)所得的培养液固液分离，取液相即可。
步骤(1)为将酿酒酵母CCTCCNO:M2015725在含有植物提取物的培养基中培养得培养液。其中，所述植物提取物为本领域常规的植物提取物，即指采用适当的溶剂或方法，以植物(植物全部或者某一部分)为原料，从中提取或加工而成的物质。较佳地，所述的植物提取物为人参(PanaxginsengC.A.Mey.)提取物、西洋参(PanaxquinquefoliusLinn.)提取物或雪莲(Saussureainvolucrata)提取物。更佳地为人参提取物。
其中，所述人参提取物为本领域常规的人参提取物，较佳地为整株人参提取物、人参茎叶提取物、人参花提取物、人参籽提取物或人参根提取物，更佳地为人参花提取物。较佳地，所述的人参提取物由包括如下步骤的制备方法制得：将人参加入水中提取，固液分离后，取液相即可。更佳地，将所述人参在加入水中前粉碎。所述水为本领域常规的水，较佳地为去离子水。所述人参和所述水的质量体积比为本领域常规的质量体积比，较佳地为1g:10mL～1g:30mL，更佳地为1g:10mL。所述提取的温度为本领域常规的温度，较佳地为80～99℃，更佳地为90℃。所述提取的时间为本领域常规的时间，较佳地为30～90分钟，更佳地为60分钟。较佳地，所述提取时进行搅拌。较佳地，所述提取和所述固液分离的步骤重复2～4次。所述固液分离的方法为本领域常规的固液分离的方法，较佳地为过滤。较佳地，获得所述液相后还包括去除液相水分的步骤。所述去除液相水分的步骤为本领域常规，较佳地为干燥，更佳地为冷冻干燥。
所述的培养基为本领域常规的培养基，能够生长所述的酵母菌CCTCCNO:M2015725即可，较佳地为PDA液体培养基。所述的PDA液体培养基为本领域常规的PDA液体培养基，较佳地，其包括5g/L马铃薯浸粉、15g/L葡萄糖、15g/L蛋白胨和5g/LNaCl。步骤(1)的所述培养基中，所述的植物提取物的含量为本领域常规的含量，较佳地为0.1～99.9％，所述百分比为质量百分比。
较佳地，步骤(1)的所述培养基中，所述人参提取物的含量为0.1～30％，更佳地为1～10％，所述百分比为质量百分比。
较佳地，步骤(1)的所述培养基中，所述西洋参提取物的含量为1～20％，所述百分比为质量百分比。
较佳地，步骤(1)的所述培养基中，所述雪莲提取物的含量为1～30％，所述百分比为质量百分比。
其中，所述培养的温度为本领域常规的温度，能够生长所述的酿酒酵母CCTCCNo:M2015725即可，较佳地为25～30℃，更佳地为28℃。所述培养的时间为本领域常规的时间，较佳地为2～8天，更佳地为5天。
较佳地，所述的培养前还包括使用种子培养基进行种子培养的步骤。所述的种子培养为本领域常规的种子培养。所述的种子培养基为本领域常规的种子培养基，较佳地为PDA液体培养基、YPD培养基或GMMY培养基。所述种子培养的时间为本领域常规的时间，较佳地为48小时。所述种子培养的温度为本领域常规的温度，较佳地为28～30℃。所述种子培养的接种量为本领域常规的接种量，较佳地为3～6％，更佳地为5％，所述百分比为体积百分比。
其中，所述的酵母菌CCTCCNO:M2015725为酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)，命名为SaccharomycescerevisiaeJBA-DZ-49-Gly-3-05。该菌株已于2015年12月7日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，并收到保藏中心登记入册编号CCTCCNO:M2015725。
步骤(2)为：将步骤(1)所得的培养液固液分离，取液相即可。其中，所述固液分离的方法为本领域常规的方法，较佳地为过滤或离心，更佳地为离心。所述离心的温度是本领域常规的温度，较佳地为4～10℃，更佳地为8℃。所述离心的时间为本领域常规的时间，较佳地为5～10分钟，更佳地为5分钟。所述离心的转速为本领域常规的转速，较佳地为8000rpm。
较佳地，所述液相还进行后续处理的步骤。所述的步骤为本领域常规的步骤，较佳地包括将所述液相纯化、浓缩或干燥等步骤中的一种或多种。所述干燥的方法为本领域常规的干燥的方法，较佳地为冷冻干燥。
其中，本发明所述酿酒酵母植物发酵物的物理形态为本领域常规，较佳地，所述酿酒酵母人参提取物发酵物的物理形态为淡黄色特征性气味的粉末。
本发明的技术方案之二是：上述的酿酒酵母植物发酵物在制备皮肤外用剂中的应用。
本发明所述酿酒酵母植物发酵物具有抗氧化、抗衰老的特性，能够直接作为原料制备皮肤外用剂。
本发明的技术方案之三是：一种皮肤外用剂，其包括上述的酿酒酵母植物发酵物。
本发明中，所述皮肤外用剂是通常用于皮肤外部的所有成分的统称概念，例如可以是化妆品或药品。所述化妆品中可以是基础化妆品、面部妆容化妆品、头部用护理品、身体用化妆品等，对其剂型无特殊限制，根据不同目的可合理选择。
本发明中，所述的皮肤外用剂的形式可以为任何合适的产品形式，所述的产品形式包括，但不限于气溶胶型喷雾剂、霜剂、乳液、固体、液体、分散体、泡沫、凝胶、化妆水、摩丝、软膏、粉剂、贴剂、润发油、手按泵型喷雾剂、棒状物、面膜和湿纸巾。较佳地，所述的皮肤外用剂为化妆水、乳液、精华液或乳霜。众所周知地，本发明的皮肤外用剂可为化妆品、皮肤病学或药物局部施用产品，其制备方法可为本领域常规的制备方法。
所述的皮肤外用剂还可以进一步包含可药用载体。所述的可药用载体是本领域常规可药用载体，较佳地为防腐剂、香精、亲水性活性剂和亲脂性活性剂中的一种或多种。所述的可药用载体的含量为本领域常规的含量。
所述的皮肤外用剂还可以进一步包括一种或多种下述成分：抗过敏剂、抗微生物剂、抗氧化剂、螯合剂、着色剂去色素剂、润肤剂、乳化剂、表皮脱落剂、香料、保湿剂、昆虫驱避剂、润滑剂、药物活性剂、增湿剂、耐光剂、防腐剂、护肤剂、皮肤渗透增强剂、防晒剂、稳定剂、表面活性剂、增稠剂、粘度调节剂、维生素或其任意组合。该些成分的含量可为本领域常规的含量。
所述皮肤外用剂中，上述的酿酒酵母植物发酵物的含量为本领域常规的含量，较佳地为0.0001～99.9％，更佳地为0.01～3％，最佳地0.5～3％，所述百分比为质量百分比。
所述的皮肤外用剂具有抗氧化、抗衰老的特性。所述的皮肤外用剂的剂型为本领域常规，较佳地为化妆水、乳液、精华液或乳霜。
在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。
本发明所用试剂和原料均市售可得。
本发明的积极进步效果在于：本发明利用一种抵御紫外线能力强、糖苷酶活性强的酿酒酵母菌株，提供了一种具有抗氧化、抗衰老特性的酿酒酵母植物发酵物，如酿酒酵母人参发酵物，和该酿酒酵母植物发酵物在制备皮肤外用剂中的应用。该酿酒酵母植物发酵物与单纯的酿酒酵母发酵物或植物提取物相比，清除自由基的能力均显著提高，具有很高的抗氧化、抗衰老活性，因此能够运用于化妆品等皮肤外用剂的制备。本发明还提供了一种包括上述酿酒酵母植物发酵物的皮肤外用剂，这些皮肤外用剂也具有良好的抗氧化、抗衰老的特性，能够有效清除自由基，减少光老化和氧化应激对皮肤造成的伤害，延缓皮肤衰老。
生物材料保藏信息
本发明的所述的酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)，已于2015年12月7日保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏地址：中国武汉武汉大学，邮编：430072，保藏编号为CCTCCNo:M2015725，培养物名称为酿酒酵母JBA-DZ-49-Gly-3-05，分类命名为SaccharomycescerevisiaeJBA-DZ-49-Gly-3-05。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
实施例中所述室温是本领域常规的室温，较佳地为10～30℃。
菌株DZ-49即为保藏编号为CCTCCNo:M2015725的酿酒酵母JBA-DZ-49-Gly-3-05。
实施例1酿酒酵母人参发酵物的制备
(一)、人参提取物的制备
(1)、人参花提取物的制备
将200g市售的人参花粉碎，按1:10(g/mL)加入去离子水，于水浴锅中90℃微沸搅拌提取2次，每次60分钟，固液分离后的滤液，将滤液除去水分即为人参花提取物。
(2)、人参根提取物的制备
将200g市售的人参根粉碎，按1:15(g/mL)加入去离子水，于水浴锅中80℃搅拌提取4次，每次90分钟，固液分离后的滤液，将滤液除去水分即为人参根提取物。
(3)、人参籽提取物的制备
将200g市售的人参籽粉碎，按1:20(g/mL)加入去离子水，于水浴锅中90℃微沸搅拌提取2次，每次60分钟，固液分离后的滤液，将滤液除去水分即为人参籽提取物。
(4)、整株人参提取物的制备
将200g市售的整株人参粉碎，按1:30(g/mL)加入去离子水，于水浴锅中99℃微沸搅拌提取2次，每次30分钟，固液分离后的滤液，将滤液除去水分即为整株人参提取物。
(二)、酿酒酵母人参发酵物的制备：
PDA液体培养基：5g/L马铃薯浸粉、15g/L葡萄糖、15g/L蛋白胨和5g/LNaCl。
(1)、酿酒酵母人参花发酵物的制备
将菌株DZ-49接种至PDA液体培养基中，28℃培养48小时，得种子液；
接种5％(v/v)种子液至含有1％(w/w)步骤(一)所制得的人参花提取物的PDA液体培养基中，28℃，200rpm摇床培养5天，得培养液；将培养液于8℃，8000rpm离心5分钟，取上清液，冷冻干燥即得酿酒酵母人参花发酵物。
(2)、酿酒酵母人参根发酵物的制备
将菌株DZ-49接种至PDA液体培养基中，28℃培养48小时，得种子液；
接种5％(v/v)种子液至含有1％(w/w)步骤(一)所制得的人参根提取物的PDA液体培养基中，28℃，200rpm摇床培养5天，得培养液；将培养液于4℃，8000rpm离心10分钟，取上清液，冷冻干燥即得酿酒酵母人参根发酵物。
(3)、酿酒酵母人参籽发酵物的制备
将菌株DZ-49接种至PDA液体培养基中，28℃培养48小时，得种子液；
接种5％(v/v)种子液至含有1％(w/w)步骤(一)所制得的人参籽提取物的PDA液体培养基中，28℃，200rpm摇床培养5天，得培养液；将培养液于10℃，8000rpm离心5分钟，取上清液，冷冻干燥即得酿酒酵母人参籽发酵物。
(4)、酿酒酵母整株人参发酵物的制备
将菌株DZ-49接种至PDA液体培养基中，28℃培养48小时，得种子液；
接种5％(v/v)种子液至含有1％(w/w)步骤(一)所制得的整株人参提取物的PDA液体培养基中，28℃，200rpm摇床培养5天，得培养液；将培养液于8℃，8000rpm离心5分钟，取上清液，冷冻干燥即得酿酒酵母整株人参发酵物。
实施例2酿酒酵母人参发酵物的抗氧化活性的检测
将实施例1步骤(二)中(1)～(4)所制备的酿酒酵母人参花发酵物、酿酒酵母人参根提取物、酿酒酵母人参籽提取物和酿酒酵母整株人参发酵物；以及实施例1步骤(一)中(1)～(4)所制备的人参花提取物、人参根提取物、人参籽提取物和整株人参提取物，用DPPH法测定其清除自由基的抗氧化活性。
测定步骤为：将上述待测样品用去离子水配制成5mg/mL的溶液A，移取2mL溶液A于10mL具塞试管中，加入2mL2×10-4mol/L的DPPH乙醇溶液(DPPH购自国药集团化学试剂有限公司)，充分混匀，室温静置30min后用分光光度计测定517nm波长的吸光度A517；同时测定2mL溶液A与2mL乙醇混合后的吸光度A0，2mL去离子水与2mL2×10-4mol/L的DPPH乙醇溶液混合后的吸光度C，以及2mL去离子水与2mL乙醇溶液混合后的吸光度C0。平行测定三次，取平均值，根据以下公式计算自由基清除率，自由基清除率越大，说明酵母人参发酵物的抗氧化能力越强。
自由基清除率(％)＝[1-(A517-A0)/(C-C0)]×100％
表1DPPH法清除自由基活性的检测结果
检测对象 浓度(mg/mL) 自由基清除率(％)
酿酒酵母人参花发酵物 0.25 95
酿酒酵母人参根提取物 0.25 87
酿酒酵母人参籽提取物 0.25 79
酿酒酵母整株人参发酵物 0.25 88
人参花提取物 0.25 41
人参根提取物 0.25 37
人参籽提取物 0.25 28
整株人参提取物 0.25 39
表1的数据说明，经过菌株DZ-49生物发酵所得的酿酒酵母人参发酵物，与人参提取物相比，抗氧化清除自由基活性极大地增强。因此酿酒酵母人参花发酵物能够用于皮肤外用剂，从而更好地起到保护皮肤免受自由基侵害，延缓皮肤衰老的效果。
实施例3酿酒酵母雪莲发酵物的制备
将菌株DZ-49接种至PDA液体培养基中，28℃培养48小时，得种子液；其中，PDA液体培养基：5g/L马铃薯浸粉、15g/L葡萄糖、15g/L蛋白胨和5g/LNaCl。
取市售雪莲花，粉碎至粒径约为100目的粗粉，加20倍体积去离子水超声提取2次，每次1小时，合并滤液，浓缩至干，得雪莲提取物。
接种5％(v/v)种子液至含有10％(w/w)雪莲提取物的PDA液体培养基中，28℃、200rpm摇床培养5天，得培养液。将培养液于8℃，8000rpm离心5分钟，取上清液得酿酒酵母雪莲发酵物。
实施例4酿酒酵母雪莲发酵物的活性测定
将实施例3所制备的酿酒酵母雪莲发酵物和雪莲提取物用DPPH法测定其清除自由基的抗氧化活性。
操作步骤与实施例2的测定方法完全相同。结果如表2所示。
表2DPPH法清除自由基活性的检测结果
样品名称 浓度(mg/mL) 自由基清除率(％)
酿酒酵母雪莲发酵物 0.125 95
雪莲提取物 0.125 65
表2说明，雪莲提取物经过菌株DZ-49酵母菌发酵转化后的酿酒酵母雪莲发酵物，清除自由基的活性高于雪莲参提取物。
实施例5酿酒酵母西洋参发酵物的制备
将菌株DZ-49接种至PDA液体培养基中，28℃培养48小时，得种子液；其中，PDA液体培养基：5g/L马铃薯浸粉、15g/L葡萄糖、15g/L蛋白胨和5g/LNaCl。
取市售整株西洋参，粉碎至粒径约为10目，加20倍体积去离子水，超声提取2次，每次1小时，合并滤液，浓缩至干，得西洋参提取物。
接种5％(v/v)种子液至含有10％(w/w)西洋参提取物的PDA液体培养基中，28℃、200rpm摇床培养5天，得培养液。将培养液于8℃，8000rpm离心5分钟，取上清液得酿酒酵母西洋参发酵物。
实施例6酿酒酵母西洋参发酵物的活性测定
将实施例5所制备的酿酒酵母西洋参发酵物和西洋参提取物用DPPH法测定其清除自由基的抗氧化活性。
操作步骤与实施例2的测定方法完全相同。
结果如表3所示，表3说明西洋参提取物经过菌株DZ-49酵母菌发酵转化所得的酿酒酵母西洋参发酵物，其清除自由基的活性高于未经菌株DZ-49发酵转化的西洋参提取物。
表3DPPH法清除自由基活性的检测结果
样品名称 浓度(mg/mL) 自由基清除率(％)
酿酒酵母西洋参发酵物 0.125 83
西洋参提取物 0.125 65
实施例7含有酿酒酵母人参发酵物的化妆水
将实施例1步骤(二)中(1)～(4)所制备的酿酒酵母人参花发酵物、酿酒酵母人参根提取物、酿酒酵母人参籽提取物和酿酒酵母整株人参发酵物，统称为酿酒酵母人参发酵物。使用实施例1步骤(二)所得的酿酒酵母人参发酵物，制备含有酵母菌人参花发酵物的化妆水，其具体组成见下表4。其中“-”表示不含有该种组分。
表4化妆水
按照本领域常规的化妆水的制备方法，制得实施例7的化妆水。
实施例8含有酿酒酵母人参发酵物的精华液
使用实施例1步骤(二)所得的酿酒酵母人参发酵物，制备含有酿酒酵母人参发酵物的精华液，其具体组成见下表5。其中“-”表示不含有该种组分。
表5精华液
按照本领域常规的精华液的制备方法，制得实施例8的精华液。
实施例9含有酿酒酵母人参发酵物的乳液/乳霜
使用实施例1步骤(二)所得的酿酒酵母人参发酵物，制备含有酿酒酵母人参发酵物的乳液/乳霜，其具体组成见下表6。其中“-”表示不含有该种组分。
表6乳液/乳霜
按照本领域常规的乳液/乳霜的制备方法，制得实施例9的乳液/乳霜。
实施例10酿酒酵母人参花发酵物的制备
(1)、人参花提取物的制备
与实施例1完全相同。
(2)、酿酒酵母人参花发酵物的制备
菌株DZ-49接种至含有0.1％(w/w)人参花提取物的PDA液体培养基中，28℃培养48小时，得种子液；
接种5％(v/v)种子液至PDA液体培养基中，28℃，200rpm摇床培养2天，得培养液。将培养液于8℃，8000rpm离心5分钟，取上清液，冷冻干燥即得酿酒酵母人参花发酵物。
实施例11酿酒酵母人参发酵物的制备
(1)、人参花提取物的制备
与实施例1完全相同。
(2)、酿酒酵母人参花发酵物的制备
菌株DZ-49接种至含有10％(w/w)人参花提取物的PDA液体培养基中，28℃培养60小时，得种子液；
接种6％(v/v)种子液至PDA液体培养基中，30℃，200rpm摇床培养8天，得培养液。将培养液于8℃，8000rpm离心5分钟，取上清液，冷冻干燥即得酿酒酵母人参花发酵物。
实施例12酿酒酵母人参发酵物的制备
(1)、人参花提取物的制备
与实施例1完全相同。
(2)、酿酒酵母人参花发酵物的制备
菌株DZ-49接种至含有30％(w/w)人参花提取物的PDA液体培养基中，30℃培养48小时，得种子液；
接种3％(v/v)种子液至PDA液体培养基中，25℃，200rpm摇床培养3天，得培养液。将培养液于8℃，8000rpm离心5分钟，取上清液，冷冻干燥即得酿酒酵母人参花发酵物。
实施例13酿酒酵母人参花发酵物的活性测定
将实施例10～12所制备的酿酒酵母人参花发酵物和人参花提取物用DPPH法测定其清除自由基的抗氧化活性。
操作步骤与实施例2的测定方法完全相同。结果如表7所示。
表7DPPH法清除自由基活性的检测结果
检测对象 浓度(mg/mL) 自由基清除率(％)
实施例10制得的酿酒酵母人参花发酵物 0.25 95
实施例11制得的酿酒酵母人参花发酵物 0.25 96
实施例12制得的酿酒酵母人参花发酵物 0.25 97
人参花提取物 0.25 41
实施例14酿酒酵母雪莲发酵物的制备
其余条件和操作步骤均与实施例3完全一致，除了接种3％(v/v)种子液至含有1％(w/w)雪莲提取物的PDA液体培养基中。得酿酒酵母雪莲发酵物。
实施例15酿酒酵母雪莲发酵物的制备
其余条件和操作步骤均与实施例3完全一致，除了接种6％(v/v)种子液至含有30％(w/w)雪莲提取物的PDA液体培养基中。得酿酒酵母雪莲发酵物。
实施例16酿酒酵母雪莲发酵物的活性测定
操作步骤与实施例4的测定方法完全相同。结果如表8所示。
表8DPPH法清除自由基活性的检测结果
检测对象 浓度(mg/mL) 自由基清除率(％)
实施例14制得的酿酒酵母雪莲发酵物 0.125 83
实施例15制得的酿酒酵母雪莲发酵物 0.125 96
雪莲提取物 0.125 65
实施例17酿酒酵母西洋参发酵物的制备
其余条件和操作步骤均与实施例5完全一致，除了接种4％(v/v)种子液至含有1％(w/w)西洋参提取物的PDA液体培养基中。得酿酒酵母西洋参发酵物。
实施例18酿酒酵母西洋参发酵物的制备
其余条件和操作步骤均与实施例5完全一致，除了接种6％(v/v)种子液至含有20％(w/w)西洋参提取物的PDA液体培养基中。得酿酒酵母西洋参发酵物。
实施例19酿酒酵母西洋参发酵物的活性测定
操作步骤与实施例6的测定方法完全相同。结果如表9所示。
表9DPPH法清除自由基活性的检测结果
检测对象 浓度(mg/mL) 自由基清除率(％)
实施例17制得的酿酒酵母西洋参发酵物 0.125 78
实施例18制得的酿酒酵母西洋参发酵物 0.125 85
西洋参提取物 0.125 65
对比例1
(一)、人参提取物的制备
与实施例1步骤(一)完全相同。
(二)、酿酒酵母人参发酵物的制备：
菌株CK为购自中国工业微生物菌种保藏管理中心(ChinaCenterofIndustrialCultureCollection，CICC)的酿酒酵母菌株(菌株保藏编号CICC1210)。将菌株CK等分为两份，一份通过神舟十号载人飞船搭载进入太空，历经15天的太空搭载后，分离获得太空诱变的酵母菌菌株DZ-39、DZ-49，另一份菌株CK作为对照。
PDA液体培养基：5g/L马铃薯浸粉、15g/L葡萄糖、15g/L蛋白胨和5g/LNaCl。
(1)、酿酒酵母人参花发酵物的制备
除所用菌株为菌株CK以外，其余与实施例1步骤(二)中“(1)、酿酒酵母人参花发酵物的制备”完全相同。
(2)、酿酒酵母人参根发酵物的制备
除所用菌株为菌株CK以外，其余与实施例1步骤(二)中“(2)、酿酒酵母人参根发酵物的制备”完全相同。
(3)、酿酒酵母人参籽发酵物的制备
除所用菌株为菌株CK以外，其余与实施例1步骤(二)中“(3)、酿酒酵母人参籽发酵物的制备”完全相同。
(4)、酿酒酵母整株人参发酵物的制备
除所用菌株为菌株CK以外，其余与实施例1步骤(二)中“(4)、酿酒酵母整株人参发酵物的制备”完全相同。
(三)、酿酒酵母人参发酵物的抗氧化活性的检测
将对比例1步骤(二)中(1)～(4)所制备的酿酒酵母人参花发酵物、酿酒酵母人参根提取物、酿酒酵母人参籽提取物和酿酒酵母整株人参用DPPH法测定其清除自由基的抗氧化活性。
其中，除所用菌株为菌株CK以外，调整对比例1中发酵后的菌株CK的浓度至与实施例1中制备酿酒酵母发酵物样品时发酵后的菌株DZ-49的菌浓度一致。测定步骤与实施例2的测定步骤完全一致。结果如表10所示。
表10DPPH法清除自由基活性的检测结果
检测对象 自由基清除率(％)
对比例1的酿酒酵母人参花发酵物 52
对比例1的酿酒酵母人参根发酵物 47
对比例1的酿酒酵母人参籽发酵物 43
对比例1的酿酒酵母整株人参发酵物 48
表10说明，在相同的发酵条件下，相同的菌浓度时，菌株DZ-49菌株获得的菌体发酵产物，如酿酒酵母人参发酵物的抗氧化活性优于对照菌株CK所获得的酿酒酵母人参发酵物。
对比例2
(1)、酿酒酵母发酵物的制备
将菌株DZ-49接种至PDA液体培养基中，28℃培养48小时，得种子液；
接种5％(v/v)种子液至PDA液体培养基中，28℃，200rpm摇床培养5天，得培养液；
将培养液于8℃，8000rpm离心5分钟，取上清液，冷冻干燥即得酿酒酵母发酵物A。
(2)、酿酒酵母发酵物的抗氧化活性的检测
检测方法与操作步骤与实施例2完全一致。结果如表11所示。
表11DPPH法清除自由基活性的检测结果
检测对象 浓度(mg/mL) 自由基清除率(％)
酿酒酵母发酵物A 0.25 29
表11说明，不添加植物提取物如人参提取物所制得的酿酒酵母发酵物，其抗氧化活性远低于在培养基中添加植物提取物所制得的酿酒酵母植物发酵物。因此，使用特定的酿酒酵母发酵且在培养基中添加植物提取物所制得的酿酒酵母植物发酵物不仅提高了植物底物的抗氧化活性，还产生了高于酿酒酵母本身代谢产物的抗氧化活性，在化妆品等皮肤外用剂的制备中能够有广泛的用途。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不构成对权利要求范围的限制，本领域技术人员可以想到的其他实质上等同的替代，均在本发明保护范围内。

Claims (10)

1.一种酿酒酵母植物发酵物，其特征在于，其由包括以下步骤的制备方法制得：(1)、将酿酒酵母CCTCCNO:M2015725在含有植物提取物的培养基中培养得培养液；(2)、将步骤(1)所得的培养液固液分离，取液相即可。
2.如权利要求1所述的酿酒酵母植物发酵物，其特征在于，步骤(1)所述的植物提取物为人参提取物、西洋参提取物或雪莲提取物；和/或，步骤(1)的所述培养基中，所述的植物提取物的含量为0.1～99.9％，所述百分比为质量百分比。
3.如权利要求2所述的酿酒酵母植物发酵物，其特征在于，所述人参提取物为整株人参提取物、人参花提取物、人参籽提取物或人参根提取物。
4.如权利要求2所述的酿酒酵母植物发酵物，其特征在于，步骤(1)的所述培养基中，所述人参提取物的含量为0.1～30％，较佳地为1～10％；步骤(1)的所述培养基中，所述西洋参提取物的含量为1～20％；或，步骤(1)的所述培养基中，所述雪莲提取物的含量为1～30％，所述百分比为质量百分比。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的培养基为PDA液体培养基；所述的培养的温度为25～30℃；所述的培养的时间为2～8天；所述的酿酒酵母CCTCCNO:M2015725的接种量为3～6％，所述百分比为体积百分比；所述的培养前还包括使用种子培养基进行种子培养的步骤；所述种子培养的时间为48～60小时；和/或，所述种子培养的温度为28～30℃。
6.如权利要求5所述的酿酒酵母植物发酵物，其特征在于，所述的PDA液体培养基包括5g/L马铃薯浸粉、15g/L葡萄糖、15g/L蛋白胨和5g/LNaCl；所述的培养的温度为28℃；所述的培养的时间为5天；和/或，所述的酿酒酵母CCTCCNO:M2015725的接种量为5％，所述百分比为体积百分比。
7.如权利要求1所述的酿酒酵母植物发酵物，其特征在于，所述步骤(2)的固液分离为过滤或离心，较佳地为离心；所述离心的温度为4～10℃，较佳地为8℃；所述离心的时间为5～10分钟；和/或，还包括对所述的液相的进一步处理，所述处理包括冷冻干燥。
8.如权利要求1～7中任一项所述的酿酒酵母植物发酵物在制备皮肤外用剂中的应用。
9.一种皮肤外用剂，其特征在于，其包括如权利要求1～7中任一项所述的酿酒酵母植物发酵物。
10.如权利要求9所述的皮肤外用剂，其特征在于，所述的皮肤外用剂为化妆水、乳液、精华液或乳霜；和/或，所述酿酒酵母植物发酵物的含量为0.0001～99.9％，较佳地为0.01～3％，更佳地为0.5～3％，所述百分比为质量百分比。
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