CN115590800B - 平卧菊三七提取物及其发酵提取物的制备和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及植物提取物和日化领域，尤其涉及一种平卧菊三七提取物和发酵提取物的制备和应用，其主要活性成分为总多酚和总三萜。提取物由下述方法制备而得：取平卧菊三七全株的干燥品，用纯水进行超声波破碎提取，取上清液用壳聚糖～卡拉胶组合的絮凝方法去除杂质，得澄清液后将其板框过滤，取过滤液减压浓缩制得平卧菊三七提取物；发酵提取物由下述方法制备而得：取平卧菊三七全株的干燥品，经酵母菌发酵制得发酵物，用壳聚糖～卡拉胶组合的絮凝方法去除杂质，得澄清液后将其板框过滤，取过滤液减压浓缩制得平卧菊三七发酵提取物。本发明成果具有显著的抗氧化、抗皮肤老化、敏感肌护理、舒缓皮肤等作用，是功效型植物化妆品新原料。

Description

平卧菊三七提取物及其发酵提取物的制备和应用
技术领域
本发明涉及植物提取物和日化领域，尤其涉及一种平卧菊三七提取物和发酵提取物的制备和应用。
背景技术
平卧菊三七(Gynura Procumbens(Lour.)Merr)为菊科菊三七属植物，药食兼用，含有多酚、三萜、黄酮等多种功能活性成分，具有抗氧化、抗炎、抗过敏、抗病原微生物等功效，民间常将其嫩茎叶作蔬菜食、作茶饮，以根或全草入药，清热解毒，用于牙痛、跌打伤痛、咽喉肿痛、痈肿疮疖等症状的治疗，2012年5月平卧菊三七被我国卫生部批准为新资源普通食品(原卫生部公告2012年第8号)。虽然其传统药食价值较高，但截止目前，对平卧菊三七功效成分和作用机制的研究开发尚不够深入，尤其在日化领域内的实际应用几乎空白，在国家药品监督管理局最新发布的《已使用化妆品原料目录(2021年版)》的8972种已使用化妆品原料中，平卧菊三七及其提取物相关制品均未列入其中，因此，本发明的技术成果为我国化妆品产业提供了一种新原料。
皮肤中的黑色素含量是决定皮肤色泽的主要因素，在黑色素生物合成中，酪氨酸酶是关键酶，作用于多巴，形成多巴醌，后者自发进行一系列反应最后形成黑色素，因此抑制酪氨酸酶活性可以减少多巴转化成多巴醌，从而限制黑色素生成，改善皮肤的色素沉着，达到祛斑的目的。但常用的祛斑方法普遍存在较明显的不良反应，例如酪氨酸酶抑制剂氢醌及其衍生物、维A酸，黑色素转运抑制剂烟酰胺、具有黑素细胞抗增殖及毒性作用的壬二酸、各种有机酸皮肤化学剥脱剂、糖皮质激素等常用祛斑成分均易引起皮肤刺激、过敏和炎症反应等副作用，长期或过量使用会对皮肤屏障功能造成严重损伤。因此，在祛斑的同时减少其刺激性，在保证功效的前提下降低不良反应发生率，同时兼有皮肤舒缓功效，是目前功效成分研发亟待解决的问题。
发明内容
为了解决现有技术的问题，本发明提供了一种平卧菊三七提取物和发酵提取物的制备和应用，其主要功效成分为总多酚和总三萜。该提取物和发酵提取物具有显著的酪氨酸酶抑制能力、DPPH自由基清除能力和透明质酸酶抑制能力，可添加于皮肤外用剂中，具有抗氧化、抗皮肤老化、敏感肌护理、舒缓皮肤等作用，安全无毒，使用简单，提取与制备的工艺方法环保、易于实施，应用前景广阔，是优良的天然植物化妆品新原料。
本发明所采用的技术方案如下：
1.平卧菊三七提取物，由下述方法制备而得：
1.1取含水量≤15％的平卧菊三七全株的干燥品，用20～35倍量的纯水，恒温25～45℃浸泡8～24h；优选的，用22～35倍量的纯水，恒温28～45℃浸泡12～24h。
1.2浸泡结束后，进行超声波破碎提取。超声参数如下：超声总时间15～40min、超声输出功率300～1000W、超声工作时间5～15s、超声间隔时间5s；优选的，超声参数如下：总时间18～40min、输出功率320～1000W、工作时间8～15s、间隔时间5s。
1.3超声提取完成后出料静置4h，虹吸上清液，调节体系pH值5.0～6.8；优选的，调节体系pH值5.1～6.8。
1.4用壳聚糖～卡拉胶组合的絮凝方法去除前述步骤制得的上清液中的植物蛋白、鞣质和植物胶等杂质。具体絮凝方法如下：取1％壳聚糖溶于1.5～2.5％的柠檬酸水溶液中，溶胀24h后备用，配制1％卡拉胶水溶液保持温度60～70℃备用。先往前述步骤制得的上清液中搅拌加入壳聚糖溶液，加入量为上清液重量的4.5～13％，混合均匀后静置半小时后搅拌加入卡拉胶溶液，加入量为直至出现絮状沉淀、液体澄清为止；优选的，壳聚糖溶液加入量为上清液重量的5～13％，卡拉胶溶液加入量为上清液重量的2.5～8％。
1.5将含有絮状物的前述待澄清液体静置分离或离心分离，取澄清液将其用0.45μm板框过滤，取过滤液减压浓缩至7倍干燥品重量，即制得平卧菊三七提取物。
2.平卧菊三七发酵提取物，由下述方法制备而得：
2.1取含水量≤15％的平卧菊三七全株的干燥品，加入5～20倍重量纯水和0.1～0.5倍重量酵母菌，发酵设置温度25～45℃、搅拌转速2～50rpm、时间10～24h，经灭菌、过滤取得滤液，补足纯水至加入量，即可制得发酵物；优选的，加入6～20倍重量纯水和0.15～0.5倍重量酵母菌，发酵设置温度27～45℃、搅拌转速4～50rpm、时间12～24h，经121℃灭菌20min、200目过滤取得滤液，补足纯水至加入量，即可制得发酵物。
2.2调节发酵物pH值5.0～6.8；优选的，调节体系pH值5.1～6.8。
2.3用壳聚糖～卡拉胶组合的絮凝方法去除前述步骤制得的发酵物中的植物蛋白、鞣质和植物胶等杂质。具体絮凝方法如下：取1％壳聚糖溶于1.5～2.5％的柠檬酸水溶液中，溶胀24h后备用，配制1％卡拉胶水溶液保持温度60～70℃备用。先往前述步骤制得的发酵物中搅拌加入壳聚糖溶液，加入量为发酵物重量的4.5～13％，混合均匀后静置半小时后搅拌加入卡拉胶溶液，加入量为直至出现絮状沉淀、液体澄清为止；优选的，壳聚糖溶液加入量为发酵物重量的5～13％，卡拉胶溶液加入量为发酵物重量的2.5～8％。
2.4将含有絮状物的前述待澄清液体静置分离或离心分离，取澄清液将其用0.45μm板框过滤，取过滤液减压浓缩至7倍干燥品重量，即制得平卧菊三七发酵提取物。
平卧菊三七提取物在制备化妆品中的应用，可用作抗氧化、抗皮肤老化、修护、敏感肌护理、舒缓功效的活性成分。平卧菊三七提取物的用量为0.01％～30％。
平卧菊三七发酵提取物在制备化妆品中的应用，可用作抗氧化、抗皮肤老化、修护、敏感肌护理、舒缓功效的活性成分。平卧菊三七发酵提取物的用量为0.01％～30％。
本发明提供的技术方案带来的有益效果是：
本发明提供了一种平卧菊三七提取物和发酵提取物的制备和应用，其主要功效成分为总多酚和总三萜。该提取物和发酵提取物具有显著的酪氨酸酶抑制能力、DPPH自由基清除能力和透明质酸酶抑制能力，可添加于皮肤外用剂中，具有抗氧化、抗皮肤老化、修护、敏感肌护理、舒缓皮肤等作用，安全无毒，使用简单，提取与制备的工艺方法环保、易于实施，应用前景广阔，是优良的天然植物化妆品新原料。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合具体实施方式作进一步地详细描述。
实施例1：平卧菊三七提取物制备。
取含水量≤15％的平卧菊三七全株的干燥品，用32倍量的纯水，恒温35℃浸泡16h。浸泡结束后，进行超声波破碎提取。超声参数如下：总时间30min、输出功率450W、工作时间10s、间隔时间5s。超声提取完成后出料静置4h，虹吸上清液，调节体系pH值5.1～6.8。配制2％的柠檬酸水溶液，加入1％壳聚糖溶胀24h后备用，另配制1％卡拉胶水溶液保持温度60～70℃备用。先往前述步骤制得的上清液中搅拌加入壳聚糖溶液，加入量为上清液重量的5～13％，混合均匀后静置半小时后搅拌加入卡拉胶溶液，加入量为上清液重量的2.5～8％，直至出现絮状沉淀、液体澄清为止。将含有絮状物的前述待澄清液体离心分离，取澄清液将其用0.45μm板框过滤，取过滤液减压浓缩至7倍干燥品重量，即制得平卧菊三七提取物。
平卧菊三七提取物活性物含量测定：
总多酚含量测定方法：T/AHFIA 005-2018《植物提取物及其制品中总多酚含量的测定分光光度法》。结果：总多酚含量1329.4mg/L。
总三萜含量测定方法：《保健食品理化及卫生指标检验与评价技术指导原则》(2020年版)第二部分功效成分/标志性成分检验方法二十、保健食品中总三萜的测定。结果：总三萜含量：0.222mg/ml。
实施例2：平卧菊三七提取物酪氨酸酶抑制试验。
试验原理：在皮肤黑色素生物合成中，酪氨酸酶是关键酶，作用于多巴形成多巴醌，后者自发进行一系列反应最后形成黑色素。酪氨酸酶在pH6.8的磷酸溶液中可催化多巴转化成多巴醌，在分光光度计475nm处可测定吸光值。具有酪氨酸酶活性抑制作用的样品可以减少多巴转化成多巴醌，从而降低吸光值，根据吸光值的变化评估样品对酪氨酸酶活性的抑制作用，本试验方法为体外法，适用于评估抑制酪氨酸酶活性的样品。
试验方法：T/SHRH 015-2018《化妆品-酪氨酸酶活性抑制实验方法》
试验结果表：
名称 样品处理 单位 试验结果 P值
平卧菊三七提取物 稀释成5％水溶液 ％ 90.035±0.612 ＜0.05
平卧菊三七提取物 稀释成15％水溶液 ％ 92.426±6.788 ＜0.05
阴性对照(纯水) / ％ -4.407±1.429 /
阳性对照(曲酸，纯度≥98.5％) 纯水稀释至0.05％ ％ 92.229±0.986 ＜0.05
表1
试验结论：试验样品测试结果见表1，阳性对照酪氨酸酶抑制率>50％，反应体系有效。当样品稀释成5％水溶液时，酪氨酸酶抑制率为90.035％，当样品稀释成15％水溶液时，酪氨酸酶抑制率为92.426％，与阴性对照相比均具有显著性差异(P<0.05)，表明样品具有酪氨酸酶抑制效果。
实施例3：平卧菊三七提取物DPPH自由基清除能力试验。
试验原理：1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(简称DPPH)是一种稳定的长寿命自由基，其乙醇溶液呈深紫色，在517nm附近有强吸收。当有自由基清除剂存在时，由于与其单电子配对而使DPPH乙醇溶液光吸收减弱。DPPH乙醇溶液褪色程度与其接受的电子数呈线性关系，由此可评价试验样品清除自由基的能力，即抗氧化活性的大小。
试验方法：T/SHRH 006-2018《化妆品-自由基(DPPH)清除实验方法》
试验结果表：
名称 样品处理 单位 试验结果 P值
平卧菊三七提取物 稀释成5％水溶液 ％ 60.933±1.251 ＜0.05
平卧菊三七提取物 稀释成15％水溶液 ％ 84.587±0.911 ＜0.05
阴性对照(纯水) / ％ -0.825±0.012 /
阳性对照(维生素E，纯度≥96％) 95％乙醇稀释至0.1％ ％ 82.203±1.235 ＜0.05
表2
试验结论：试验样品测试结果见表2，阳性对照DPPH自由基清除率>50％，反应体系有效。当样品稀释成5％水溶液时，DPPH自由基清除率平均值为60.933％，当样品稀释成15％水溶液时，DPPH自由基清除率平均值为84.587％，与阴性对照相比均具有显著性差异(P<0.05)，表明样品具有抗氧化功效。
实施例4：平卧菊三七提取物透明质酸酶抑制试验。
试验原理：透明质酸酶是透明质酸的特异性裂解酶，是过敏反应的参与者，与肥大细胞释放组胺等有强相关性。试验样品是否具有舒缓功效，可以利用透明质酸酶抑制率来判断，透明质酸酶抑制率越高则反映该物质舒缓效果越强，反之则越弱。
试验方法：样品预处理后与透明质酸酶等溶液进行显色反应，用紫外分光光度计测定波长为528nm处吸光度值，计算透明质酸酶抑制率。
试验结果表：
名称 样品处理 单位 试验结果 P值
平卧菊三七提取物 稀释成5％水溶液 ％ 32.031±0.563 ＜0.05
平卧菊三七提取物 稀释成15％水溶液 ％ 49.651±0.687 ＜0.05
阴性对照(纯水) / ％ -4.664±0.312 /
阳性对照(甘草酸二钾,纯度≥98％) 纯水稀释至3％ ％ 59.671±0.380 ＜0.05
表3
试验结论：试验样品测试结果见表3，阳性对照透明质酸酶抑制率>50％，反应体系有效。当样品稀释成5％水溶液时，透明质酸酶抑制率为32.031％，当样品稀释成15％水溶液时，透明质酸酶抑制率为49.651％，与阴性对照相比均具有显著性差异(P<0.05)，表明样品具有舒缓功效。
实施例5：平卧菊三七发酵提取物制备。
取含水量≤15％的平卧菊三七全株的干燥品，加入10倍重量纯水和0.3倍重量酵母菌，发酵设置温度35℃、搅拌转速5rpm、时间24h，经121℃灭菌20min、200目过滤取得滤液，补足纯水至加入量，即可制得发酵物。调节发酵物pH值5.1～6.8。配制2％的柠檬酸水溶液，加入1％壳聚糖溶胀24h后备用，另配制1％卡拉胶水溶液保持温度60～70℃备用。先往前述步骤制得的发酵物中搅拌加入壳聚糖溶液，加入量为发酵物重量的5～13％，混合均匀后静置半小时后搅拌加入卡拉胶溶液，加入量为发酵物重量的2.5～8％，直至出现絮状沉淀、液体澄清为止。将含有絮状物的前述待澄清液体静置分离或离心分离，取澄清液将其用0.45μm板框过滤，取过滤液减压浓缩至7倍干燥品重量，即制得平卧菊三七发酵提取物。
平卧菊三七发酵提取物活性物含量测定：
总多酚含量测定方法：T/AHFIA 005-2018《植物提取物及其制品中总多酚含量的测定分光光度法》。结果：总多酚含量1156.2mg/L。
总三萜含量测定方法：《保健食品理化及卫生指标检验与评价技术指导原则》(2020年版)第二部分功效成分/标志性成分检验方法二十、保健食品中总三萜的测定。结果：总三萜含量：0.293mg/ml。
实施例6：平卧菊三七发酵提取物酪氨酸酶抑制试验。
试验方法：T/SHRH 015-2018《化妆品-酪氨酸酶活性抑制实验方法》
试验结果表：
名称 样品处理 单位 试验结果 P值
平卧菊三七发酵提取物 稀释成5％水溶液 ％ 91.275±0.403 ＜0.05
平卧菊三七发酵提取物 稀释成15％水溶液 ％ 94.107±1.634 ＜0.05
阴性对照(纯水) / ％ -4.407±1.429 /
阳性对照(曲酸，纯度≥98.5％) 纯水稀释至0.05％ ％ 92.229±0.986 ＜0.05
表4
试验结论：试验样品测试结果见表4，阳性对照酪氨酸酶抑制率>50％，反应体系有效。当样品稀释成5％水溶液时，酪氨酸酶抑制率为91.275％，当样品稀释成15％水溶液时，酪氨酸酶抑制率为94.107％，与阴性对照相比均具有显著性差异(P<0.05)，表明样品具有酪氨酸酶抑制效果。
实施例7：平卧菊三七发酵提取物DPPH自由基清除能力试验。
试验方法：T/SHRH 006-2018《化妆品-自由基(DPPH)清除实验方法》
试验结果表：
名称 样品处理 单位 试验结果 P值
平卧菊三七发酵提取物 稀释成5％水溶液 ％ 87.291±1.033 ＜0.05
平卧菊三七发酵提取物 稀释成15％水溶液 ％ 93.132±0.357 ＜0.05
阴性对照(纯水) / ％ -0.825±0.012 /
阳性对照(维生素E，纯度≥96％) 95％乙醇稀释至0.1％ ％ 82.203±1.235 ＜0.05
表5
试验结论：试验样品测试结果见表5，阳性对照DPPH自由基清除率>50％，反应体系有效。当样品稀释成5％水溶液时，DPPH自由基清除率平均值为87.291％，当样品稀释成15％水溶液时，DPPH自由基清除率平均值为93.132％，与阴性对照相比均具有显著性差异(P<0.05)，表明样品具有抗氧化功效。
实施例8：平卧菊三七发酵提取物透明质酸酶抑制试验。
试验方法：样品预处理后与透明质酸酶等溶液进行显色反应，用紫外分光光度计测定波长为528nm处吸光度值，计算透明质酸酶抑制率。
试验结果表：
试验结论：试验样品测试结果见表6，阳性对照透明质酸酶抑制率>50％，反应体系有效。
名称 样品处理 单位 试验结果 P值
平卧菊三七提取物 稀释成5％水溶液 ％ 37.138±0.451 ＜0.05
平卧菊三七提取物 稀释成15％水溶液 ％ 52.247±0.310 ＜0.05
阴性对照(纯水) / ％ -4.664±0.312 /
阳性对照(甘草酸二钾,纯度≥98％) 纯水稀释至3％ ％ 59.671±0.380 ＜0.05
表6
当样品稀释成5％水溶液时，透明质酸酶抑制率为37.138％，当样品稀释成15％水溶液时，，透明质酸酶抑制率为52.247％，与阴性对照相比均具有显著性差异(P<0.05)，表明样品具有舒缓功效。
实施例9：平卧菊三七提取物在制备精华液中的应用。
含10wt％平卧菊三七提取物的精华液配方如表7所示：
表7
表7配方中各组分按以下工艺进行制备：
(1)首先按上述表格中的组分名称和重量称取各组分投入搅拌锅；(2)将A相中8种组分混合搅拌至完全溶解；
(3)搅拌加入B相，至各组分混合均匀、完全溶解，出料。
实施例10：平卧菊三七发酵提取物在制备舒缓面霜中的应用。
含15wt％平卧菊三七发酵提取物的舒缓面霜配方如表8所示：
表8
表8配方中各组分按以下工艺进行制备：
(1)首先按上述表格中的组分名称和重量称取各组分；
(2)将A相各组分混合后加热至82℃，搅拌均匀；
(3)将B相各组分混合搅拌至全部溶解并加热至82℃；
(4)将B相加入A相，于真空乳化锅中3000rmp均质5min，搅拌冷却至40℃，出料。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.平卧菊三七提取物，其特征在于，由下述方法制备而得：取含水量≤15％的平卧菊三七全株的干燥品，用20～35倍量的纯水，恒温25～45℃浸泡8～24h后进行超声波破碎提取，超声提取完成后出料静置4h，虹吸上清液，调节体系pH值5.0～6.8，用壳聚糖～卡拉胶组合的絮凝方法去除前述步骤制得的上清液中的植物蛋白、鞣质和植物胶等杂质，将含有絮状物的前述待澄清液体静置分离或离心分离，取澄清液将其用0.45μm板框过滤，取过滤液减压浓缩至7倍干燥品重量，制得平卧菊三七提取物。
2.根据权利要求1所述的平卧菊三七提取物，其特征在于，超声波破碎提取的超声参数如下：超声总时间15～40min、超声输出功率300～1000W、超声工作时间5～15s、超声间隔时间5s。
3.平卧菊三七发酵提取物，其特征在于，由下述方法制备而得：取含水量≤15％的平卧菊三七全株的干燥品，加入5～20倍重量纯水和0.1～0.5倍重量酵母菌，发酵设置温度25～45℃、搅拌转速2～50rpm、时间10～24h，经灭菌、过滤取得滤液，补足纯水至加入量，即可制得发酵物，调节发酵物pH值5.0～6.8，用壳聚糖～卡拉胶组合的絮凝方法去除前述步骤制得的发酵物中的植物蛋白、鞣质和植物胶等杂质，将含有絮状物的前述待澄清液体静置分离或离心分离，取澄清液将其用0.45μm板框过滤，最后将板框过滤后的过滤液减压浓缩至7倍平卧菊三七全株的干燥品的重量，即制得平卧菊三七发酵提取物。
4.一种平卧菊三七提取物，其特征在于，通过权利要求1所述制备方法制备。
5.权利要求4所述的平卧菊三七提取物在制备化妆品中的应用。
6.一种平卧菊三七发酵提取物，其特征在于，通过权利要求3所述制备方法制备。
7.权利要求6所述的平卧菊三七发酵提取物在制备化妆品中的应用。
8.权利要求5所述的应用，其特征在于，平卧菊三七提取物的用量为0.01％～30％。
9.权利要求7所述的应用，其特征在于，平卧菊三七发酵提取物的用量为0.01％～30％。
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