CN113186070B

CN113186070B - 一种平卧菊三七醋及其制备方法

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Publication number: CN113186070B
Application number: CN202110364717.4A
Authority: CN
Inventors: 吴晓春; 毛新亮; 郁晓静; 高倩铭; 陈晶; 曾瑜; 栗原博; 古润金
Original assignee: Perfect China Co Ltd; Perfect Guangdong Commodity Co Ltd
Current assignee: Perfect China Co Ltd; Perfect Guangdong Commodity Co Ltd
Priority date: 2021-04-02
Filing date: 2021-04-02
Publication date: 2022-12-06
Anticipated expiration: 2041-04-02
Also published as: CN113186070A

Abstract

本发明公开了一种平卧菊三七醋的制备方法，属于食品加工领域。本发明所述平卧菊三七醋的制备方法以马克斯克鲁维酵母为酒精发酵菌种，在原料中添加碳水化合物并待该酵母发酵后再加入醋酸菌进行醋酸发酵，在特定条件下的制备过程不仅可提高平卧菊三七原料中总黄酮及绿原酸等活性成分的溶出率，抗氧化及降尿酸的功效性显著，也可保障所得醋产品的发酵过程充分，制备得到的产品色泽透亮，香气纯正，口感俱佳。本发明还公开了所述平卧菊三七醋的制备方法制备得到的平卧菊三七醋，该产品不仅口感丰富，也有利于发挥其健康功能，提高市场竞争力和拓展消费市场，具有较好的经济和社会意义。

Description

一种平卧菊三七醋及其制备方法

技术领域

本发明涉及食品加工领域，具体涉及一种平卧菊三七醋的制备方法。

背景技术

平卧菊三七(学名：Gynura procumbens(Lour.)Merr.)为菊科三七属，多年生草本植物，生息于我国广东、海南、贵州及云南等南部与西南部广阔地区，越南、泰国及印度尼西亚等东南亚各国，非洲部分地区也有分布。平卧菊三七根茎是中成药的原材料，其茎叶营养丰富，在东南亚食用历史悠久，在我国于2012年被国家卫生部批准为普通食品。平卧菊三七富含绿原酸、黄酮类、萜烯类、生物碱、香豆素类、挥发油、氨基酸及无机盐等多种活性成分。民间常利用平卧菊三七作为通经活络、消肿止痛、消炎止咳、治疗跌打损伤、支气管肺炎及肺结核等用于临床。近代药理学研究表明平卧菊三七具有消炎、抗癌、抗病毒、降压、降糖、降脂、抗氧化及抗溃疡等诸多功效；另一方面，该植物也其具有很好的营养价值。因此，平卧菊三七可广泛应用于食品、保健食品及医药工业等领域，是一种极具潜力和高经济价值的植物资源之一。

中国人食用醋的历史可以追溯到千年以上，以调料醋和醋饮料等产品形式体现的饮醋文化延续不仅是基于嗜好习惯，更是来自强身健体的功能。自古以来，醋与医，当然醋和药都有不解之缘，醋在中国传统医学中的用途也十分广泛，其临床价值已得到充分肯定。中医认为醋味酸、甘、性平，具有健胃消食、活血化瘀、止泻解毒的功效。《本草纲目》中记有醋能治疗诸疮肿块，心腹疼痛等疾病。现代医学证明，醋具有改善和调节机体新陈代谢，帮助消化，消除疲劳及增进食欲等诸多功效，其中值得关注的是，醋还具有美容护肤的功效。近年来随着生活水平的提高，人们对食醋和醋饮料的需求不断增加，因此开发保健型醋饮料是迎合消费市场的增长需求，也是醋和醋饮料的开发受到人们关注和接受的理由。

目前，市场上具有各种生物活性的健康醋商业产品，多以来自天然素材为主成分配制或酿制而成的饮用醋的统称，该类醋不仅兼具醋的风味，更是来自健康功能，因此也是备受消费者接受的嗜好饮料之一。现有技术领域人员公知，醋的主成分是由乙醇在醋酸菌发酵作用下形成的醋酸，但由于诸多具有健康和药效功能的天然植物缺乏碳水化合，所以难以经发酵制备乙醇，因此目前国内的健康醋饮料市场多以配制醋产品为主，而利用发酵方法制备健康醋的工艺研究及产业化应用也相对较少。此外，醋饮料是作为嗜好和健康产品为商业化目的，因此口感尤为重要。

近年来，随着人们生活水平的提高，以高能量、高嘌呤类食物的摄入显著增加为特征的饮食结构发生了明显变化，由此引起高尿酸血症和痛风发病率呈逐年增加且显示年轻化的趋势。高尿酸血症(hyperuricemia)是一种代谢性疾病，其特点是尿酸产生过多或尿酸排泄不良而引起，其结果是尿酸盐结晶沉积在关节滑膜及其他组织中引起反复发作性的炎性疾病。此外，尿酸水平过高会也引起氧化应激反应，对机体造成严重损伤。至今为止的研究证明，一部分高尿酸血症患者会自然发展为痛风，也会增加心血管疾病、糖尿病发病率，当然，痛风也可引起肾脏损害，据统计痛风病人中有20～25％并发尿酸性肾病。在传统医学中也有很多对痛风病症的论述，清代医者林佩琴在《类症治裁》中记有“痛风，痛痹之一症也，初因风寒湿郁痹阴分，久则化热致痛，至夜更剧”，提出该疾病严重的影响着人们的日常生活。目前临床治疗高尿酸血症，大多采用别嘌醇抑制尿酸生成或苯溴马隆促进尿酸排泄等药物，但长期服用这些药物在降尿酸的同时往往伴随有许多毒副作用，甚至会引发肾衰竭等超敏反应，因此人们试图在传统中医药中寻找和开发可用于改善与治疗痛风疾病的活性物质。至今为止，一些研究证明平卧菊三七对血液尿酸水平具有一定的改善作用，因但相应原料制备的产品或技术配方鲜有公开。

发明内容

基于现有技术的不足，本发明的目的在于提供了一种平卧菊三七醋的制备方法，该制备方法以平卧菊三七为原料采用特定的酵母菌及醋酸菌作为菌种，通过特定的发酵条件，所得产品不仅口感好，而且平卧菊三七总黄酮及绿原酸等活性成分的溶出率高，可用于抗氧化及降尿酸等方面，具有明显的健康功能。

为了达到上述目的，本发明采取的技术方案为：

一种平卧菊三七醋的制备方法，包括以下步骤：

(1)将平卧菊三七粉碎过筛后，用水浸提，调节pH至5.5～6.5，得混合液A；

(2)在步骤(1)所得混合液A中加入糖源和盐混合均匀后，在90～110℃下灭菌15～25min并加入发酵酵母进行酒精发酵；所述糖的添加量占混合液A质量含量的8～14％；所述发酵酵母为马克斯克鲁维酵母；所述接种量占混合液A质量含量的3～8％；

(3)待步骤(2)所述发酵结束，在90～110℃下灭菌5～7s，得混合液B，在混合液B中接种醋酸菌进行醋酸发酵，所得发酵液灭菌后离心，将上清液取出并加入助剂混合均匀，即得所述平卧菊三七醋；所述醋酸菌的接种量占混合液B质量含量的4～12％。

本发明所述平卧菊三七醋的制备方法中，以马克斯克鲁维酵母(Kluyveromycesmarxianus)为酒精发酵菌种，在原料中添加碳水化合物并待该酵母发酵后再加入醋酸菌进行醋酸发酵，在特定条件下的制备过程不仅可提高平卧菊三七原料中总黄酮及绿原酸等活性成分的溶出率，抗氧化及降尿酸的功效性显著，也可保障所得醋产品的发酵过程充分，制备得到的产品色泽透亮，香气纯正，口感俱佳。

优选地，步骤(1)所述的过筛的目数为40～80目；所述浸提时平卧菊三七的质量与水的容量比为1g:10～300mL，浸提时的温度为85～120℃，时间为30～60min。

更优选地，步骤(1)所述的过筛的目数为50目；所述浸提时平卧菊三七的质量与水的容量比为1g:30mL，浸提时的温度为100℃，时间为30～60min。

所述条件下不仅可使原料在水中分散均匀，同时浸提程度较为充分，平卧菊三七原料中的有效成分可充分析出。

优选地，步骤(2)所述糖源包括单糖、低聚糖、多糖、淀粉中的至少一种；更优选地，所述糖源包括葡萄糖、蔗糖、乳糖中的至少一种。

所述糖分不仅可为最终制备的醋产品的发酵过程提供必要的碳水化合物，同时也可适当调节最终产品的口感。

优选地，步骤(2)所述盐包括钠盐、钙盐、钾盐、镁盐中的至少一种，所述盐的添加量占混合液A质量含量的0.1～0.2％。

优选地，步骤(2)所述酒精发酵的温度为24～28℃，时间为3～7日。

所述发酵条件下马克斯克鲁维酵母可充分对浸提混合液中的有机物进行水解发酵，不仅可充分保留活性成分的抗氧化等功效性，同时生成适宜量的酒精及提升整体产品的风味，为后续醋酸发酵提供充分的原料。

优选地，所述马克斯克鲁维酵母为经过驯化得到的马克斯克鲁维酵母菌液，所述驯化包括以下步骤：

(1)将马克斯克鲁维酵母菌种接种于沙氏培养液中并在26～30℃下在100～150r/min速率的摇床中恒温培养20～28h，得液体培养液a；

(2)将步骤(1)所得液体培养液a接种于含有平卧菊三七浸提液的培养基溶液中，在26～30℃下在100～150r/min速率的摇床中恒温培养20～28h，得到I级菌液；所述液体培养液a的接种量占所述培养基溶液质量含量的3～5％；所述平卧菊三七浸提液占所述培养基溶液质量含量的10％；

(3)将步骤(2)所得I级菌液接种于含有平卧菊三七浸提液的培养基溶液中，在26～30℃下在100～150r/min速率的摇床中恒温培养20～28h，得到II级菌液；所述I级菌液的接种量占所述培养基溶液质量含量的3～5％；所述平卧菊三七浸提液占所述培养基溶液质量含量的20％；

(4)按每次10％逐级提升平卧菊三七浸提液占所述培养基溶液质量含量，并重复步骤(3)中菌液的接种及培养步骤直至所述平卧菊三七浸提液占所述培养基溶液质量含量的50％，驯化结束，得到经过驯化的马克斯克鲁维酵母菌液。

由于平卧菊三七中含有一定量的绿原酸，且该物质为原料中的活性成分，具有较为广泛的抗菌作用，因此需要采用特定驯化方法对菌种进行驯化，避免发酵过程中菌种发酵效率被抑制。

更优选地，所述经过驯化的马克斯克鲁维酵母菌液中的活菌数为10⁹CFU/mL。

更优选地，马克斯克鲁维酵母驯化的步骤(2)～(4)中培养基溶液还含有蔗糖和硫酸钾，所述蔗糖占所述培养基溶液质量含量的6～10％，所述硫酸钾占所述培养基溶液质量含量的0.15～0.2％。

所述组分的加入可有效为酵母的驯化过程提供稳定的酸碱环境和养分。

优选地，步骤(3)所述醋酸发酵的温度为26～32℃，溶氧量为15～25％，时间为9～11日。

更优选地，步骤(3)所述醋酸发酵的温度为28℃，溶氧量为20％，时间为10日。

所述醋酸发酵条件下发酵效率高，发酵后得到的产品浓度适中且无其他杂质。

优选地，所述醋酸菌为醋酸菌种子液，所述醋酸菌种子液的制备方法为：将醋酸菌种接种于含碳酸钙的筛选培养基上，挑取透明圈最大的单菌落接种于斜面培养基上；将斜面培养基上培养后的醋酸菌株接种于液体培养基，在28℃培养48h，获得初级种子液；将初级种子液接种发酵液，培养48h后即得所述醋酸菌种子液。

由于平卧菊三七中含有多种抑菌活性的多酚类物质，通过所述种子液的制备后得到的发酵醋酸菌中才可避免该物质对菌株繁殖和发酵过程产生影响。

优选地，所述助剂包括糖醇和蜂蜜。

所述助剂的添加可进一步中和发酵醋产品的酸味，使口感更佳丰富且适宜饮用。

本发明的另一目的还在于提供所述平卧菊三七醋的制备方法制备得到的平卧菊三七醋。

本发明制备得到的平卧菊三七醋色泽透亮，香气纯正，口感温润，酸甜爽口。该产品中平卧菊三七总黄酮及绿原酸等部分活性成分的溶出率高，可用于抗氧化及降尿酸等方面，具有明显的健康功能；本发明提供的平卧菊三七醋，不仅口感丰富，也有利于发挥其健康功能，提高市场竞争力和拓展消费市场，具有较好的经济和社会意义。

本发明的有益效果在于：本发明提供了一种平卧菊三七醋的制备方法，该方法以马克斯克鲁维酵母为酒精发酵菌种，在原料中添加碳水化合物并待该酵母发酵后再加入醋酸菌进行醋酸发酵，在特定条件下的制备过程不仅可提高平卧菊三七原料中总黄酮及绿原酸等活性成分的溶出率，抗氧化及降尿酸的功效性显著，也可保障所得醋产品的发酵过程充分，制备得到的产品色泽透亮，香气纯正，口感俱佳。本发明还提供了所述平卧菊三七醋的制备方法制备得到的平卧菊三七醋，该产品不仅口感丰富，也有利于发挥其健康功能，提高市场竞争力和拓展消费市场，具有较好的经济和社会意义。

附图说明

图1为本发明所述平卧菊三七醋产品各组分的HPLC-MS分析结果谱图；

图2为本发明所述平卧菊三七醋产品的抗氧化测试性能图。

具体实施方式

若无特别说明，本发明实施例中所用原料均购自市场。

为了更好地说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明作进一步说明，其目的在于详细地理解本发明的内容，而不是对本发明的限制。

本发明所使用的马克斯克鲁维酵母购自中国工业微生物菌种管理保藏中心，菌株保藏编号：CICC 31691。

实施例1

本发明所述一种平卧菊三七醋的制备方法的实施例。

本实施例所述一种平卧菊三七醋的制备方法，包括以下步骤：

(1)将平卧菊三七粉碎过50目筛后，按粉末：水＝1g：30mL将粉末加入水中，在100℃下浸提50min后，加入3％硫酸铵并调节pH至6，得混合液A；

(2)在步骤(1)所得混合液A中加入葡萄糖和盐混合均匀后，在100℃下灭菌20min并加入发酵酵母在28℃下进行发酵5日；所述糖的添加量占混合液A质量含量的12％；所述发酵酵母为马克斯克鲁维酵母；所述接种量占混合液A质量含量的5％；

(3)待步骤(2)所述发酵结束，在100℃下灭菌6s，得混合液B，在混合液B中接种醋酸菌在30℃，20％溶氧量条件下进行醋酸发酵10日，所得发酵液灭菌后离心，将上清液取出并加入糖醇和蜂蜜混合均匀，即得所述平卧菊三七醋；所述醋酸菌的接种量占混合液B质量含量的10％。

所述马克斯克鲁维酵母为经过驯化得到的马克斯克鲁维酵母菌液，所述驯化包括以下步骤：

(1)将马克斯克鲁维酵母菌种接种于沙氏培养液中并在28℃下在120r/min速率的摇床中恒温培养24h，得液体培养液a；

(2)将步骤(1)所得液体培养液a接种于含有平卧菊三七浸提液的培养基溶液中，在28℃下在120r/min速率的摇床中恒温培养24h，得到I级菌液；所述液体培养液a的接种量占所述培养基溶液质量含量的4％；所述平卧菊三七浸提液占所述培养基溶液质量含量的10％；培养基溶液还含有蔗糖和硫酸钾，所述蔗糖占所述培养基溶液质量含量的8％，所述硫酸钾占所述培养基溶液质量含量的0.18％；

(3)将步骤(2)所得I级菌液接种于含有平卧菊三七浸提液的培养基溶液中，在28℃下在120r/min速率的摇床中恒温培养24h，得到II级菌液；所述I级菌液的接种量占所述培养基溶液质量含量的4％；所述平卧菊三七浸提液占所述培养基溶液质量含量的20％；培养基溶液还含有蔗糖和硫酸钾，所述蔗糖占所述培养基溶液质量含量的8％，所述硫酸钾占所述培养基溶液质量含量的0.18％

所述醋酸菌为醋酸菌种子液，所述醋酸菌种子液的制备方法为：将醋酸菌种接种于含碳酸钙的筛选培养基上，挑取透明圈最大的单菌落接种于斜面培养基上；将斜面培养基上培养后的醋酸菌株接种于液体培养基，在28℃培养48h，获得初级种子液；将初级种子液接种发酵液，培养48h后即得所述醋酸菌种子液。

实施例2

(1)将平卧菊三七粉碎过40目筛后，按粉末：水＝1g：100mL将粉末加入水中，在120℃下浸提30min后，加入3％硫酸铵并调节pH至6，得混合液A；

(2)在步骤(1)所得混合液A中加入葡萄糖和盐混合均匀后，在110℃下灭菌15min并加入发酵酵母在26℃下进行发酵7日；所述糖的添加量占混合液A质量含量的12％；所述发酵酵母为马克斯克鲁维酵母；所述接种量占混合液A质量含量的4％；

(3)待步骤(2)所述发酵结束，在100℃下灭菌6s，得混合液B，在混合液B中接种醋酸菌在30℃，20％溶氧量条件下进行醋酸发酵11日，所得发酵液灭菌后离心，将上清液取出并加入糖醇和蜂蜜混合均匀，即得所述平卧菊三七醋；所述醋酸菌的接种量占混合液B质量含量的6％。

所述马克斯克鲁维酵母为经过驯化得到的马克斯克鲁维酵母菌液，所述驯化的步骤同实施例1。

所述醋酸菌为醋酸菌种子液，所述醋酸菌种子液的制备方法同实施例1。

实施例3

(1)将平卧菊三七粉碎过70目筛后，按粉末：水＝1g：200mL将粉末加入水中，在90℃下浸提60min后，加入3％硫酸铵并调节pH至6，得混合液A；

(2)在步骤(1)所得混合液A中加入葡萄糖和盐混合均匀后，在110℃下灭菌15min并加入发酵酵母在28℃下进行发酵5日；所述糖的添加量占混合液A质量含量的12％；所述发酵酵母为马克斯克鲁维酵母；所述接种量占混合液A质量含量的6％；

(3)待步骤(2)所述发酵结束，在100℃下灭菌6s，得混合液B，在混合液B中接种醋酸菌在30℃，20％溶氧量条件下进行醋酸发酵9日，所得发酵液灭菌后离心，将上清液取出并加入糖醇和蜂蜜混合均匀，即得所述平卧菊三七醋；所述醋酸菌的接种量占混合液B质量含量的10％。

实施例4

为验证本发明所述平卧菊三七醋的制备方法中酵母菌选择的优选性，本实施例将实施例1所用马克斯克鲁维酵母分别替换为酿酒酵母、产朊假丝酵母、乳酸克鲁维酵母和卡氏酵母用于制备平卧菊三七醋，其余步骤及参数与实施例1相同。将所得产品分别使用酸度计测定平卧菊三七醋的醋精度，并根据《食品安全国家标准-饮料》对它们进项感官评价，具体方法为，取一定量均匀的被测样品，置于50mL无色透明烧杯中，在自然光下观察色泽、澄清度，鉴别气味，用温开水漱口，品尝滋味，检查其有无异物。测试结果如表1所示。

表1

由表1可知，使用马克斯克鲁维酵母和醋酸菌搭配进行发酵得到的平卧菊三七醋产品相比于其他组不仅醋香浓郁，同时口感俱佳。

实施例5

为验证本发明所述平卧菊三七醋的制备方法中醋酸发酵过程醋酸菌接种量的优选性，本实施例将实施例1中加入的醋酸菌接种量分别替换为2～14％，其余步骤及参数与实施例1相同。将所得产品分别酸度计测定平卧菊三七醋的醋精度，并根据《食品安全国家标准-饮料》对它们进项感官评价，具体方法为，取一定量均匀的被测样品，置于50mL无色透明烧杯中，在自然光下观察色泽、澄清度，鉴别气味，用温开水漱口，品尝滋味，检查其有无异物。测试结果如表2所示。

表2

从表3可知，醋酸发酵时醋酸菌的接种量为4～12％时，制备得到的平卧菊三七醋产品的醋精度较高且口感较好。

实施例6

为验证本发明所述平卧菊三七醋的制备方法中醋酸发酵过程发酵温度的优选性，本实施例将实施例1中醋酸发酵的温度分别替换24℃、26℃、28℃、32℃和34℃，其余步骤及参数与实施例1相同。将所得产品分别酸度计测定平卧菊三七醋的醋精度，并根据《食品安全国家标准-饮料》对它们进项感官评价，具体方法为，取一定量均匀的被测样品，置于50mL无色透明烧杯中，在自然光下观察色泽、澄清度，鉴别气味，用温开水漱口，品尝滋味，检查其有无异物。测试结果如表3所示。

表3

醋酸发酵温度℃	产品醋精度(％)	感官评价
			24	2.6	柚黄色，澄清透明，醋香寡淡，酸涩不爽
26	3.3	柚黄色，澄清透明，醋香浓厚，酸甜适中
			28	3.7	柚黄色，澄清透明，醋香浓郁，酸甜爽口
30	3.3	柚黄色，澄清透明，醋香浓厚，酸甜适中
			32	3.2	柚黄色，澄清透明，醋香适宜，酸甜适中
34	3.0	柚黄色，澄清透明，醋香清淡，酸甜适中

从表3可知，不同发酵温度对产品的产品中醋酸的浓度存在较大影响，并非越高温度下发酵产生的醋酸含量越高；当发酵温度为26～32℃时，制备得到的平卧菊三七醋产品的醋酸含量较高且口感俱佳。

实施例7

为验证本发明所得平卧菊三七醋产品中含有功效性活性成分，将实施例1的平卧菊三七醋产品进行活性成分分析。所述产品经0.45μm水膜过滤之后用HPLC-MS仪器分析产品中的化学成分。所用仪器为分析型高效液相色谱仪为Ultimate 3000DGLC、高分辨质谱仪为Q-Exactive离子阱质谱仪和分析色谱柱为Waters acquity HSS T3(1.8μm,100×2.1mm)。实验检测波长设置为全波长扫描，柱温为40℃，进样量为2μL，流速0.4mL/min，流动相为：乙腈(A)-0.1％甲酸水(B)，测试过程采用线性梯度洗脱程序：0～1min：5％A，1.5min：10％B，4.5min：13％B，15min：17％B，20min：30％B，23min：45％B，26～28min：80％B，28.2～33min：5％B。所用质谱检测条件为：正、负离子切换扫描方式，扫描质量范围为100～1500m/z，一级扫描分辨率35000，二级扫描分辨率17500，碰撞能设置为30eV，正离子喷雾电压3.0kV，负离子喷雾电压2.8kV，毛细管温度350℃，鞘气40，辅助气1，吹扫气1。

所述平卧菊三七醋产品的活性成分分析结果如图1所示，可以看出，所述产品保留了平卧菊三七中的多种活性化学成分，包括新绿原酸(Neochlorogenic acid)、绿原酸(Chlorogenic acid)、隐绿原酸(Cryptochlorogenic acid)和咖啡酸(Caffeic acid)等诸多活性成分。

实施例8

为验证本发明所述平卧菊三七醋的使用抗氧化效果，将实施例1所得产品进行体外抗氧化活性采用氧自由基吸收能力(oxygen radical absorbance capacity，ORAC)实验评价，该实验过程采用荧光素钠在485nm光的激发下，发射出527nm荧光，此荧光可以被AAPH所释放的自由基氧化导致荧光淬灭。而反应体系中的抗氧化剂与荧光素钠竞争自由基的氧化作用，减缓荧光衰减速度。因此，ORAC实验可用于测定样品的自由基清除活性。

本实验分为自由基对照(AAPH⁺)、没有添加AAPH的空白对照组(AAPH^-)、Trolox组、平卧菊三七醋组及等浓度平卧菊三七水溶液对照组，共六组。具体测定方法如下，在96孔板中添加待测样品溶液，再加入磷酸钾缓冲液和荧光素钠，最后加入AAPH。将96孔板置于37℃的荧光酶标仪开始测定，记录120min内荧光信号的变化，每2min检测一次，绘制荧光衰退曲线并计算曲线下面积。抗氧化剂对氧自由基清除能力ORAC值，是通过待测样品荧光衰退曲线保护面积与Trolox(1μmol·L^-1)保护面积相比得出。计算公式为，ORAC＝K[(AUC_Sample-AUC_AAPH ⁺)/(AUC_Trolox-AUC_AAPH ⁺)]，其中K为样品稀释倍数。

测试结果如图2所示，实施例1所得平卧菊三七醋与等浓度平卧菊三七水溶液对照组相比(ORAC值：1540.61)，平卧菊三七醋(ORAC值：1873.18)具有较好的体外自由基清除能力，其结果可能与发酵过程引起的总黄酮与绿原酸等抗氧化活性成分的溶出增加相关。

实施例9

为验证本发明所述平卧菊三七醋的使用降尿酸效果，将实施例1所得产品进行降尿酸活性实验评价。本实施例采用氧嗪酸钾负荷建立的小鼠高尿酸血症模型用于平卧菊三七醋的功效活性评价，实验动物为SPF级昆明小鼠，雄性，4周龄，体重16～18g，分批次购于广东省医学实验动物中心(许可证号SCXK(粤)2018-0002)，饲养温度23±2℃，湿度50±10％，每天日光照为12h，适应环境一周后进行实验，实验开始前分笼饲养，整个试验过程自由进食和饮水。本实施例使用试剂及用品分别为：氧嗪酸钾(阿拉丁；P137112)；别嘌呤醇(阿拉丁；A105386)；尿酸检测试剂盒(南京建成；C012-1)；黄嘌呤氧化酶检测试剂盒(南京建成；A002-1)；试剂盒检测使用多功能酶标仪(芬兰Labsystems公司)。

本发明将实验动物按体重随机分为等容量水溶液正常对照组、等容量水溶液模型对照组，等容量水溶液别嘌醇(0.5％CMC-Na)阳性对照组、等容量平卧菊三七水溶液组，等容量平卧菊三七醋组及等容量1/2浓度平卧菊三七醋组等6组，每组10只。实验期间小鼠均正常饮食，实验结束取血前12h禁食，但正常饮水。本实验小鼠为0.2mL/10g灌胃给药方式，每天灌胃一次，连续7日。高尿酸血症小鼠模型采用尿酸酶抑制剂氧嗪酸钾盐以250mg/kg剂量，连续7日，每天一次灌胃。实验结束后，异氟烷麻醉小鼠，并摘眼球取血，静置分层后3500rpm的转速离心10min获得血清，采用试剂盒检测血清尿酸及黄嘌呤氧化酶水平等相关指标。同时，颈椎脱臼处死小鼠，快速取肝脏，称重、剪碎，添加5倍体积的80mmol/L磷酸盐缓冲液(pH7.4)，在冰浴中充分匀浆，在4℃条件下，以3000rpm的转速离心10min取上清液，检测肝组织匀浆液中的黄嘌呤氧化酶活力。统计数据以Mean±SD表示，采用SPSS19.0统计软件进行统计学分析，利用One-way ANOVA进行统计学检验，P<0.05表明有统计学差异。测试结果如表4和表5所示。

表4

实验组别	血清尿酸(μmol/L)
		等容量水溶液-正常对照	103.4±8.6
等容量水溶液-氧嗪酸钾负荷	242.1±13.5*
		15mg/kg别嘌醇-氧嗪酸钾负荷	62.4±5.9<sup>#</sup>
等容量平卧菊三七水溶液-氧嗪酸钾负荷	179.5±11.9<sup>#</sup>
		等容量平卧菊三七醋-氧嗪酸钾负荷	136.5±6.4<sup>#$</sup>
等容量1/2浓度平卧菊三七醋-氧嗪酸钾负荷	169.6±9.4<sup>#</sup>

与等容量水溶液-正常对照组相比，*P<0.05；与等容量水溶液-氧嗪酸钾负荷组相比，^#P<0.05；与等容量平卧菊三七水溶液-氧嗪酸钾负荷组相比，^$P<0.05。

表5

实验组别	肝脏(U/g)	血清(U/ml)
			等容量水溶液-正常对照	0.31±0.06	0.12±0.03
等容量水溶液-氧嗪酸钾负荷	0.32±0.08	0.14±0.04
			15mg/kg别嘌醇-氧嗪酸钾负荷	0.16±0.04*	0.06±0.01*
等容量平卧菊三七水溶液-氧嗪酸钾负荷	0.23±0.04*	0.09±0.02*
			等容量平卧菊三七醋-氧嗪酸钾负荷	0.14±0.05*$	0.05±0.02*$
等容量1/2浓度平卧菊三七醋-氧嗪酸钾负荷	0.19±0.03*	0.09±0.03*

由表4中可知，实施例1所得平卧菊三七醋产品能够有效地降低氧嗪酸钾负荷引起的高尿酸血症(P<0.05)，而平卧菊三七醋与等容量平卧菊三七水溶液相比，平卧菊三七醋产品能够更加有效地降低血清尿酸水平(P<0.05)。尿酸是嘌呤核苷酸分解的最终产物，黄嘌呤氧化酶是嘌呤核苷代谢途径的关键酶，从表5可知，本发明所述平卧菊三七醋产品对高尿酸血症显示一定的改善作用，其中机制可能与影响血清和肝脏中的黄嘌呤氧化酶活性有关。

最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims

1.一种平卧菊三七醋的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将平卧菊三七粉碎过筛后，用水浸提，调节pH至5.5~6.5，得混合液A；

（2）在步骤（1）所得混合液A中加入糖源和盐混合均匀后，在90~110℃下灭菌15~25min并加入发酵酵母进行酒精发酵；所述糖源为葡萄糖，所述糖源的添加量占混合液A质量含量的8~14%；所述盐为钠盐、钙盐、钾盐、镁盐中的至少一种，所述盐的添加量占混合液A质量含量的0.1~0.2%；所述发酵酵母为马克斯克鲁维酵母；所述马克斯克鲁维酵母的接种量占混合液A质量含量的3~8%；

（3）待步骤（2）所述发酵结束，在90~110℃下灭菌5~7s，得混合液B，在混合液B中接种醋酸菌进行醋酸发酵，所得发酵液灭菌后离心，将上清液取出并加入助剂混合均匀，即得所述平卧菊三七醋；所述醋酸菌的接种量占混合液B质量含量的4~12%；

（a）将马克斯克鲁维酵母菌种接种于沙氏培养液中并在26~30℃下在100~150r/min速率的摇床中恒温培养20~28h，得液体培养液a；

（b）将步骤（a）所得液体培养液a接种于含有平卧菊三七浸提液的培养基溶液中，在26~30℃下在100~150r/min速率的摇床中恒温培养20~28h，得到I级菌液；所述液体培养液a的接种量占所述培养基溶液质量含量的3~5%；所述平卧菊三七浸提液占所述培养基溶液质量含量的10%；

（c）将步骤（b）所得I级菌液接种于含有平卧菊三七浸提液的培养基溶液中，在26~30℃下在100~150r/min速率的摇床中恒温培养20~28h，得到II级菌液；所述I级菌液的接种量占所述培养基溶液质量含量的3~5%；所述平卧菊三七浸提液占所述培养基溶液质量含量的20%；

（d）按每次10%逐级提升平卧菊三七浸提液占所述培养基溶液质量含量，并重复步骤（c）中菌液的接种及培养步骤直至所述平卧菊三七浸提液占所述培养基溶液质量含量的50%，驯化结束，得到经过驯化的马克斯克鲁维酵母菌液；

所述步骤（b）~（d）中培养基溶液还含有蔗糖和硫酸钾，所述蔗糖占所述培养基溶液质量含量的6~10%，所述硫酸钾占所述培养基溶液质量含量的0.15~0.2%。

2.如权利要求1所述的平卧菊三七醋的制备方法，其特征在于，步骤（1）所述的过筛的目数为40~80目；所述浸提时平卧菊三七的质量与水的容量比为1g:10~300mL，浸提时的温度为85~120℃，时间为30~60min。

3.如权利要求2所述的平卧菊三七醋的制备方法，其特征在于，步骤（1）所述的过筛的目数为50目；所述浸提时平卧菊三七的质量与水的容量比为1g:30mL，浸提时的温度为100℃。

4.如权利要求1所述的平卧菊三七醋的制备方法，其特征在于，步骤（2）所述酒精发酵的温度为24~28℃，时间为3~7日。

5.如权利要求1所述的平卧菊三七醋的制备方法，其特征在于，步骤（3）所述醋酸发酵的温度为26~32℃，溶氧量为15~25%，时间为9~11日。

6.如权利要求5所述的平卧菊三七醋的制备方法，其特征在于，步骤（3）所述醋酸发酵的温度为28℃，溶氧量为20%，时间为10日。

7.如权利要求1所述的平卧菊三七醋的制备方法，其特征在于，所述醋酸菌为醋酸菌种子液，所述醋酸菌种子液的制备方法为：将醋酸菌种接种于含碳酸钙的筛选培养基上，挑取透明圈最大的单菌落接种于斜面培养基上；将斜面培养基上培养后的醋酸菌株接种于液体培养基，在28℃培养48h，获得初级种子液；将初级种子液接种发酵液，培养48h后即得所述醋酸菌种子液；所述发酵液为混合液B。

8.如权利要求1所述的平卧菊三七醋的制备方法，其特征在于，所述助剂包括糖醇和蜂蜜。

9.如权利要求1~8任一项所述平卧菊三七醋的制备方法制备得到的平卧菊三七醋。