CN105477311A - 一种提高免疫力的保健品及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明实施例公开了一种提高免疫力的保健品,主要由以下重量份原料制成:红景天提取物50~100份、北沙参提取物50~100份、麦冬提取物50~100份、桑叶提取物50~100份、银耳提取物50~100份。所述提高免疫力的保健品的制备方法依次包括以下步骤:混料、制软材、制粒、干燥、混料压片,然后进行包衣,得成品。本发明所提供的提高免疫力的保健食品,采用绿色纯天然中药材为主要原料,绿色健康、环保,无毒副作用,药效吸收快,利用率高,效果显著。本发明所提供的制备方法,操作简单,方便,适于工业化生产。
Description
技术领域
本发明涉及保健品技术领域,尤其涉及一种提高免疫力的保健品及其制备方法。
背景技术
免疫力是指机体抵抗外来侵袭,维护体内环境稳定性的能力。空气中充满了各种各样的微生物:细菌、病毒、支原体、衣原体、真菌等等。在人体免疫力不足的情况下,它们都可以成为赶早班的病原体。虽然人体对不同的病原体会产生相应的抗体,以抵御再次感染,但抗体具有专一性和时限性,比如,链球菌抗体只能在较短时期内保护机体不受链球菌的再次侵犯,也并不能抵御其他病毒的感染。
现代医学科学发现,免疫是一个与衰老有密切关系的因素,免疫功能减退是衰老的最重要原因之一。机体免疫系统的一些特殊细胞能将入侵体内的细菌、病毒和体内已衰老死亡的细胞、已突变的细胞以及引起变态反应的物质,统统地加以吞噬和消灭,从体内环境的稳定,保持机体健康。但机体免疫功能在30岁左右就开始减退,这种变化是悄然、缓慢、持续地进行。
免疫力低下的身体易于被感染或患癌症,如引发过敏反应、自身免疫疾病等。各种原因使免疫系统不能正常发挥保护作用,在此情况下,极易招致细菌、病毒、真菌等感染,因此免疫力低下最直接的表现就是容易生病。因经常患病,加重了机体的消耗,所以一般有体质虚弱、营养不良、精神萎靡、疲乏无力、食欲降低、睡眠障碍等表现,生病、打针吃药便成了家常便饭。每次生病都要很长时间才能恢复,而且常常反复发作。长此以往会导致身体和智力发育不良,还易诱发重大疾病。深层原因是免疫力低下或免疫力不健全。当人体免疫功能失调,或者免疫系统不健全时,下列问题就会反复发作:感冒反复发作、扁桃体炎反复发作、哮喘反复发作、支气管炎反复发作、肺炎反复发作、腹泻反复发作。
尤其是老年人和儿童以及大病初愈的病人,还有经放化疗后的癌症病人等,一般自身免疫力较弱,易于感染病毒、病菌。虽然目前用于提高免疫力的药品也有很多,但效果并不理想,有些吸收效果不好,有些过于昂贵,有些含有引发副作用的添加剂,无法很好地满足消费者需求。
发明内容
本发明实施例提供了一种提高免疫力的保健食品,采用绿色纯天然中药材为主要原料,绿色健康、环保,无毒副作用,药效吸收快,利用率高,增强免疫力效果显著。
为了解决上述问题,本发明实施例公开了一种提高免疫力的保健品,主要由以下重量份原料制成:红景天提取物50~100份、北沙参提取物50~100份、麦冬提取物50~100份、桑叶提取物50~100份、银耳提取物50~100份。
可选地,所述红景天提取物中红景天苷含量为1-5%,所述北沙参提取物中粗多糖含量为5-30%,麦冬提取物中粗多糖含量为5-30%,桑叶提取物中粗多糖含量为5-30%,银耳提取物中多糖含量为20-50%。
可选地,所述保健食品为片剂。
可选地,还包括以下原料:微晶纤维素60~150份、硬脂酸镁1~10份。
所述红景天提取物的提取工艺步骤如下:
(1)粉碎:将红景天进行粉碎;
(2)提取:采用重量份数为红景天重量4倍的乙醇提取3次,每次1.5小时,所述提取的温度为90℃,所述乙醇为质量分数为70%的乙醇;
(3)过滤:将步骤(2)中每次提取所得提取液进行过滤,除去滤渣,然后将过滤后所得滤液合并;
(4)浓缩:将步骤(3)过滤后所得滤液进行减压回收乙醇,并将其浓缩至相对密度为1.15-1.18,得浓缩液;
(5)干燥:将步骤(4)所得浓缩液进行喷雾干燥,得干粉;
(6)质检入库:将步骤(5)所得干粉进行取样检测并确认合格后,包装入库。
所述北沙参提取物的提取工艺步骤如下:
(1)粉碎:将北沙参进行粉碎;
(2)提取:采用重量份为北沙参重量10倍的水对粉碎后的北沙参进行提取3次,每次提取2小时,所述提取温度为80℃;
(3)过滤:将步骤(2)中每次提取所得提取液进行过滤,除去滤渣,然后将过滤后所得滤液合并;
(4)浓缩:将步骤(3)合并后的滤液进行减压浓缩至相对密度为1.15-1.18,得浓缩液;
(5)干燥:将步骤(4)所得浓缩液进行真空干燥,得干粉;
(6)过筛:将步骤(5)所得干粉进行粉碎并过80目筛,得细粉;
(7)质检入库:将步骤(6)所得细粉进行取样检测并确认合格后,包装入库。
所述麦冬提取物的提取工艺步骤如下:
(1)粉碎:将麦冬进行粉碎;
(2)提取:采用重量份为麦冬重量8倍的水对其进行提取3次,每次1.5小时,得提取液,所述提取温度为70℃;
(3)过滤:将步骤(2)中每次提取所得提取液进行过滤,除去滤渣,然后将过滤后所得滤液合并;
(4)浓缩:将步骤(3)合并后滤液进行减压浓缩,得浓缩液;
(5)醇沉:将步骤(4)所得浓缩液进行醇沉,得沉淀物;
(6)干燥:将步骤(5)所得沉淀物进行真空干燥、粉碎,并过80目筛,得细粉;
(7)质检入库:将步骤(6)所得细粉进行取样检测并确认合格后,包装入库。
所述桑叶提取物的提取工艺步骤如下:
(1)粉碎:将桑叶进行粉碎;
(2)提取:采用重量份为桑叶重量12倍的水对其进行提取3次,每次1小时,得提取液,所述提取温度为80℃;
(3)过滤:将步骤(2)中每次提取所得提取液进行过滤,除去滤渣,然后将过滤后所得滤液合并;
(4)浓缩:将步骤(3)合并后滤液进行减压浓缩,得浓缩液;
(5)醇沉:将步骤(4)所得浓缩液进行醇沉,得沉淀物;
(6)干燥:将步骤(5)所得沉淀物进行真空干燥、粉碎,并过80目筛,得细粉;
(7)质检入库:将步骤(6)所得细粉进行取样检测并确认合格后,包装入库。
所述银耳提取物的提取工艺步骤如下:
(1)粉碎:将银耳进行粉碎;
(2)提取:采用重量份为银耳重量40倍的水在80℃条件下对其进行提取3次,每次3.5小时,得提取液;
(3)过滤:将步骤(2)中每次提取所得提取液进行过滤,除去滤渣,然后将过滤后所得滤液合并;
(4)浓缩:将步骤(3)合并后滤液进行减压浓缩,得浓缩液;
(5)醇沉:将步骤(4)所得浓缩液采用浓缩液3倍体积的质量分数为95%的乙醇进行醇沉,得沉淀物;
(6)干燥:将步骤(5)所得沉淀物进行真空干燥、粉碎,并过80目筛,得细粉;
(7)质检入库:将步骤(6)所得细粉进行取样检测并确认合格后,包装入库。原料介绍:
红景天提取物是红景天根部的提取物,气香甜、味苦涩。主要成份为红景天苷和甙元酪醇、络塞维,具有增强免疫功能、保护心脑血管及抗癌抗抑郁的功效。红景天主要含苯丙酯类和类黄酮类。其独特活性化学成分为苯丙酯类。
红景天可增强免疫功能,主要通过两条途径刺激免疫系统:一是通过对免疫防御的直接特殊刺激(刺激免疫细胞中最重要的类型之一:自然杀伤细胞(Naturalkillercells)。NK-细胞搜索并摧毁机体的受感染细胞)。红景天提取物通过改善T-细胞免疫而使免疫系统恢复正常。这显示其可提升机体对感染逐渐发展所积聚成的毒的抵抗能力。二是使机体不易受压力影响。当我们长期暴露于压力之下,并不断向其它系统夺取能量,总的影响就是免疫反应降低和健康变差。红景天提取物可通过防止对B细胞免疫的因压力和疲劳而来的抑制,从而增强B细胞免疫。
北沙参:为伞形科植物北沙参的根。北沙参多年生草本,生于海岸沙地、沙滩,或栽培于肥活疏松的沙质土壤,分布于山东、辽宁、内蒙古(赤峰)、河北、江苏、浙江、福建、台湾、广东等地。分春参(二年生参)和秋参(一年生参),以秋参为好,刨出根,除去地上部分及须根,洗净,用开水烫后剥去外皮,当日晒干或文火烘干;然后再除去粗糙部分,扎把。或洗净,直接晒干。
北沙参根呈细长圆柱形,偶有分枝,长15至45厘米,直径0.2至1.5厘米。表面淡黄色,略粗糙,偶有残留外皮,不去外皮者表面黄棕色。全体有细纵皱纹及纵沟,并有棕黄色点状细根痕。顶端常留有黄棕色根茎残其,上端稍细,中部略粗,下部渐细。质脆易折断,断面皮部浅黄白色。木部黄色。气特异,味微甜。以粗细均匀,去净栓皮,色黄白者为佳。
北沙参含有挥发油、香豆素、淀粉、生物碱、三萜酸、豆甾醇、各甾醇,沙参素等成分。实验证明,北沙参能提高T细胞比值,提高淋巴细胞转化率,升高白细胞,增强巨噬细胞功能,延长抗体存在时间,提高B细胞,促进免疫功能。北沙参可增强正气,减少疾病,预防癌症的产生。北沙参味甘、微苦,性微寒;归肺、胃经,具有养阴清肺,益胃生津的功效。主治燥伤肺阴之干咳痰少,咽干鼻燥,肺痨阴虚之久咳嗽血,热伤胃阴之口渴舌干,食欲不振。
麦冬提取物:中药麦冬是百合科植物麦冬的干燥块根,具有滋阴生津,润肺清心的功能,可用于热病伤津,心烦口渴等症。现代研究发现:麦冬含有甾体皂苷、高异黄酮、多糖、氨基酸等成分。其中麦冬多糖具有降血糖及免疫增强作用,并有保护心肌细胞,抗心肌缺血等药理活性。
研究表明麦冬多糖对正常小鼠的免疫功能影响。根据实验要求,选择3类不同小鼠每类30只均分为麦冬多糖组、香菇多糖组和生理盐水组;观察胸腺、脾脏重量,碳粒廓清作用以及血清溶血素抗体水平。发现麦冬多糖可显著增加幼鼠的胸腺和脾脏重量,激活小鼠网状内皮系统(RES)的吞噬功能,提高血清溶血素抗体水平。说明麦冬多糖具有免疫活性。
桑叶:为桑科植物桑的干燥叶,始载于《神农本草经》,味苦、甘,性寒,归肺、肝经,具有疏风清热、平肝明目的功效。桑叶是常用中草药之一,含有芦丁、芸香苷、槲皮素、异槲皮素、二氢山茶碱等黄酮类化合物,桑叶多糖以及丰富的蛋白质、脂肪、维生素、碳水化合物等,具有多种药理作用和生物活性功能。可治疗风热感冒,肺热燥咳,头晕头痛,目赤昏花的病症,有疏散风热、清肺润燥、清肝明目的功效。
现代中、西医把桑叶和桑叶生物制剂作为改善糖尿病及其他各种疑难杂症的药物而使用,认为其药效极为广泛。有清肺润燥、止咳、去热、化痰、治盗汗;补肝、清肝明目、治疗头晕眼花、失眠、消除眼部疲劳;消肿、清血、治疗痢疾、腹痛、减肥、除脚气、利大、小肠;抗应激、凉血、降血压、降血脂、预防心肌梗塞、脑溢血、祛头痛、长发;降血糖、抗糖病等。
银耳:又称作白木耳、雪耳、银耳子等,属于真菌类银耳科银耳属,是门担子菌门真菌银耳的子实体,有"菌中之冠"的美称。银耳子实体纯白至乳白色,直径5~10厘米,柔软洁白,半透明,富有弹性。银耳味甘、淡、性平、无毒,既有补脾开胃的功效,又有益气清肠、滋阴润肺的作用。既能增强人体免疫力,又可增强肿瘤患者对放、化疗的耐受力。银耳富有天然植物性胶质,外加其具有滋阴的作用,是可以长期服用的良好润肤食品。
本发明提供的提高免疫力的保健食品,选用红景天提取物、北沙参提取物、麦冬提取物、桑叶提取物、银耳提取物为主要原料相互配伍使用,其各自的原药材均为我国传统常用中药,其中红景天主要成份为红景天苷和甙元酪醇、络塞维,具有增强免疫功能、保护心脑血管及抗癌抗抑郁的功效;北沙参能提高T细胞比值,提高淋巴细胞转化率,升高白细胞,增强巨噬细胞功能,延长抗体存在时间,提高B细胞,促进免疫功能;麦冬中的麦冬多糖具有降血糖及免疫增强作用,并有保护心肌细胞,抗心肌缺血等药理活性;桑叶中的桑叶多糖对风热感冒,肺热燥咳,头晕头痛,目赤昏花的病症有一定的预防和治疗功效;银耳则能增强人体免疫力,又可增强肿瘤患者对放、化疗的耐受力;五者配伍使用,更好地改善人体各器官机能,使各器官更加协调配合,提高人体免疫机制,改善人体健康状况。
本发明所提供的提高免疫力的保健食品,采用绿色纯天然中药材为主要原料,绿色健康、环保,无毒副作用,药效吸收快,利用率高,增强免疫力效果显著。
为了解决上述问题,本发明实施例还公开了一种上述的提高免疫力的保健品的制备方法,包括以下步骤:
(1)混料:将红景天提取物、北沙参提取物、麦冬提取物、桑叶提取物、银耳提取物、微晶纤维素混合均匀,得混合粉;
(2)制软材:将混合粉与乙醇混合,得软材;
(3)制粒:将软材过筛制粒,得湿颗粒;
(4)干燥:将湿颗粒进行干燥,得干颗粒;
(5)混料压片:将步骤(4)所得干颗粒和硬脂酸镁粉混合均匀,得总混合物,然后将总混合物进行压片,得片芯;
(6)将步骤(5)所得片芯进行包衣,得成品。
可选的,步骤(1)中所述混料前还包括将原料预处理,所述预处理为将红景天提取物、北沙参提取物、麦冬提取物、桑叶提取物、银耳提取物、微晶纤维素过70-80目筛,硬脂酸镁过80-100目筛,得各原料细粉。
可选的,步骤(5)中将所述干颗粒和硬脂酸镁粉混合均匀前,将所述干颗粒进行整粒,所述整粒为将干颗粒过14-25目筛。
可选的,步骤(3)中所述制粒过程采用14-25目筛。
可选的,步骤(4)中所述干燥温度为40-50℃。
可选的,步骤(2)中所用乙醇为质量分数为95%的乙醇。
本发明所提供的制备方法,操作简单,方便,适于工业化生产。
具体实施方式
实施例1
本实施例提供了一种提高免疫力的保健品,所述保健是为片剂,按重量份由以下原料制成:红景天提取物50份、北沙参提取物80份、麦冬提取物100份、桑叶提取物50份、银耳提取物78份、微晶纤维素105份、硬脂酸镁10份,其中,所述红景天提取物中红景天苷含量为3%,所述北沙参提取物中粗多糖含量为18%,麦冬提取物中粗多糖含量为30%,桑叶提取物中粗多糖含量为20%,银耳提取物中多糖含量为35%。
上述的提高免疫力的保健品的制备方法,包括以下步骤:
(1)混料:将红景天提取物、北沙参提取物、麦冬提取物、桑叶提取物、银耳提取物、微晶纤维素分别过80目筛,硬脂酸镁过100目筛,得各原料细粉,将各原料细粉混合均匀,得混合粉;
(2)制软材:将总混合粉与质量分数为95%的乙醇混合,制得软材;
(3)制粒:将软材过14目筛制粒,得湿颗粒;
(4)干燥:将湿颗粒在45℃条件下进行干燥,得干颗粒;
(5)整粒:将所述干颗粒进行整粒,所述整粒为将干颗粒过14目筛;
(5)混料压片:将步骤(5)整粒后的干颗粒和硬脂酸镁粉混合均匀,得总混合物,然后将总混合物进行压片,得片芯;
(6)将薄膜包衣剂采用75%乙醇溶解,得包衣液,将步骤(5)所得片芯用包衣液进行包衣,得成品。
实施例2
本实施例提供了一种提高免疫力的保健品,所述保健是为片剂,按重量份由以下原料制成:红景天提取物100份、北沙参提取物100份、麦冬提取物50份、桑叶提取物75份、银耳提取物50份、微晶纤维素150份、硬脂酸镁1份,其中,所述红景天提取物中红景天苷含量为1%,所述北沙参提取物中粗多糖含量为30%,麦冬提取物中粗多糖含量为5%,桑叶提取物中粗多糖含量为5%,银耳提取物中多糖含量为50%。
上述的提高免疫力的保健品的制备方法,包括以下步骤:
(1)混料:将红景天提取物、北沙参提取物、麦冬提取物、桑叶提取物、银耳提取物、微晶纤维素分别过70目筛,硬脂酸镁过80目筛,得各原料细粉,将各原料细粉混合均匀,得混合粉;
(2)制软材:将总混合粉与质量分数为95%的乙醇混合,制得软材;
(3)制粒:将软材过25目筛制粒,得湿颗粒;
(4)干燥:将湿颗粒在40℃条件下进行干燥,得干颗粒;
(5)整粒:将所述干颗粒进行整粒,所述整粒为将干颗粒过25目筛;
(5)混料压片:将步骤(5)整粒后的干颗粒和硬脂酸镁粉混合均匀,得总混合物,然后将总混合物进行压片,得片芯;
(6)将薄膜包衣剂采用75%乙醇溶解,得包衣液,将步骤(5)所得片芯用包衣液进行包衣,得成品。
实施例3
本实施例提供了一种提高免疫力的保健品,所述保健是为片剂,按重量份由以下原料制成:红景天提取物50份、北沙参提取物50份、麦冬提取物75份、桑叶提取物100份、银耳提取物100份、微晶纤维素60份、硬脂酸镁6份,其中,所述红景天提取物中红景天苷含量为5%,所述北沙参提取物中粗多糖含量为5%,麦冬提取物中粗多糖含量为30%,桑叶提取物中粗多糖含量为30%,银耳提取物中多糖含量为20%。
上述的提高免疫力的保健品的制备方法,包括以下步骤:
(1)混料:将红景天提取物、北沙参提取物、麦冬提取物、桑叶提取物、银耳提取物、微晶纤维素分别过80目筛,硬脂酸镁过100目筛,得各原料细粉,将各原料细粉混合均匀,得混合粉;
(2)制软材:将总混合粉与质量分数为95%的乙醇混合,制得软材;
(3)制粒:将软材过20目筛制粒,得湿颗粒;
(4)干燥:将湿颗粒在50℃条件下进行干燥,得干颗粒;
(5)整粒:将所述干颗粒进行整粒,所述整粒为将干颗粒过20目筛;
(5)混料压片:将步骤(5)整粒后的干颗粒和硬脂酸镁粉混合均匀,得总混合物,然后将总混合物进行压片,得片芯;
(6)将薄膜包衣剂采用75%乙醇溶解,得包衣液,将步骤(5)所得片芯用包衣液进行包衣,得成品。
下面对本发明实施例所得保健品进行检测。
1.毒性试验:
样品:本发明实施例1所得的棕色片剂,人体推荐量为3.0g/人.日,成人体重按60kg计。
实验动物:SPF级ICR小鼠,共20只,雌雄各半,体重18.2~20.8g,由北京华阜康生物科技股份有限公司提供。饲养环境为屏障级,室温20~22℃,相对湿度45~65%。实验动物标准饲料喂北京阜康生物科技股份有限公司提供。
剂量选择与受试样品给予方式:称取10.0g样品,以蒸馏水配至20ml,终浓度为0.50g/ml,分两次灌胃给予实验动物,间隔4h,每次灌胃量为0.2ml/10g.bw,累积染毒剂量为20.0g/kg.bw。
主要仪器与试剂:电子天平
试验方法:按照最大耐受量(MTD)法试验进行。实验前动物空腹16h备用(不限制饮水)。动物称重、灌胃给予受试样品后,记录动物的中毒表现及死亡情况,连续观察14d。
试验数据统计:计算动物体重均值与标准差、死亡率等。
结果判定:按照MTD法试验求得小鼠经口急性毒性MTD,并判定受试样品毒性分级。
结果:灌胃给予受试样品后,各试验动物未见明显中毒症状,14d内动物无死亡(见表1)。试验结果显示,该受试样品对两种性别小鼠的MTD均大于20.0g/kg.bw。根据急性毒性分级标准,该样品属无毒级。
表1.小鼠急性毒性实验结果
小结:最大耐受量试验结果显示,该受试样品对两种性别小鼠的MTD均大于20.0g/kg.bw。根据急性毒性分级标准,该样品属无毒级。
2.Ames试验
样品:本发明实施例1所得的棕色片剂,棕色片剂。人体推荐量为3.0g/人.日。
试验菌株:经鉴定符合要求的鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102,活化系统为多氯联苯诱导的大鼠肝匀浆(S-9)制备的S-9混合液。
剂量选择与受试样品给予方式:取受试样品,分别以蒸馏水、二甲基亚砜(DMSO)、95%乙醇、丙酮作溶剂,经过比较,该受试样品在蒸馏水中溶解效果最好,故试验中选取蒸馏水作溶剂。根据毒性测定结果,试验设立8、40、200、1000、5000μg/皿5个剂量,同时设立空白对照组、溶剂对照组和阳性对照组。称取受试样品5.00g,以蒸馏水作溶剂,定容至100ml,置蒸为汽消毒器0.055Mpa,20min处理,冷却后取出处置4℃保存,浓度为50000μg/ml。取蒸馏水依次进行1:4稀释,得出浓度分别为10000、2000、400、80μg/ml。每皿加入0.1ml,受试样品浓度分别相当于5000、1000、200、40、8μg/皿。阳性对照组所用阳性物为敌克松、2-氨基芴、甲基磺酸甲酯、1,8-二羟基蒽醌(见表2),所用溶剂均为DMSO。
主要仪器与溶剂:BakerSG603AINT生物安全柜、BINDERKBW240恒温培养箱、JulaboTW20恒温水浴、HIRAYAMAHVE-50蒸汽压力消毒器、IULCountermatflash全自动菌落计数器、YDS-50液氮罐、电子天平。阳性物为2-氨基芴、氨基磺酸甲酯、1,8-二羟基蒽醌。
试验方法:试验按照平板掺入法在加S-9与不加S-9混合液的条件下进行,每个组别设3个平血。增菌培养,融化顶层培养基分装于无菌小试管。在45℃水浴中保温的顶层培养基2ml中,依次加入测试菌株新鲜增菌液0.1ml、受试样品0.1ml(活化时加入S-9混合液0.5ml),混匀,迅速倾入底层培养基上,转动平皿使顶层培养基均匀分布在底层上,平放固化,37℃培养48h观察结果。另做阳性对照组、溶剂对照组和空白对照组。整套试验在相同条件下进行两次。
实验数据统计:计算3个平皿中的菌落数均值、标准差。
结果判定:若试验组的回变菌落数为空白对照组自发回变菌落数的2倍以上,并具有剂量-反应关系则判定为阳性。
结果:由表2、表3可见,两次试验中试验组各剂量组回变菌落数均未超过空白对照组自发回变菌落数的2倍,亦无剂量-反应关系,说明在加与不加S-9时该样品对鼠伤寒沙门氏菌TA97、TA98、TA100、TA102四株试验菌株均未呈现遗传毒性。
表2.Ames试验结果(第一次)
表3.Ames试验结果(第二次)
注:(1)敌克松,50μg/皿,(2)2-氨基芴,10μg/皿,(3)甲基磺酸甲酯,0.5μg/皿,(4)1,8-二羟基蒽醌,50μg/皿。
小结:在加与不加S-9时该样品对鼠伤寒沙门氏菌TA97、TA98、TA100、TA102四株试验菌株均未呈现遗传毒性。
3.功能性实验:
材料和方法
样品:本发明实施例1所得的棕色片剂,棕色片剂,人体推荐剂量为3.0g/人.日(成人体重以60kg计)。
实验动物:选用繁殖得SPF级健康ICR雌性小鼠,体重18-22g,共192只,分为四组,免疫一组进行脏器/体重比值、迟发型变态反应、抗体生成细胞检测及血清溶血素测定;免疫二组进行碳廓清实验;免疫三组进行小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验;免疫四组进行ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验和NK细胞活性测定实验。
实验环境:屏障环境,温度20~22℃,相对湿度45~65%。
饲料:为北京华阜生物科技股份有限公司实验动物标准饲料。
剂量选择与受试样品给予方式:样品人体推荐量为每天3.0g/60kg.bw,实验设三个剂量组,即:0.25g/kg.bw、0.50g/kg.bw、1.50g/kg.bw,低、中、高三个组的剂量分别相当于人体推荐量得5倍、10倍、30倍。以蒸馏水为溶剂将样品分别配至所需浓度,即称取0.50g、1.00g、3.00g样品用蒸馏水分别配至40ml,同时设立溶剂对照组,按每天0.2ml/10g.bw连续经口灌胃30天后,测各项免疫指标。
主要仪器与试剂:SPECRAMAXplus敏标仪、PL203型电子天平、数显游标卡尺(精密度0.01mm)、微量注射器(50μl)、CO2培养箱、SW震荡水浴槽、Thermo高速冷冻离心机、显微镜、玻片架、200目筛网、手术器械、秒表、一次性定量取血管、24孔和96孔细胞培养液;SRBC、补体(豚鼠血清)、Hanks液、SA缓冲液、琼脂糖、印度汁墨、Na2CO3溶液、都氏试剂、YAC-1细胞、RPMI1640完全培养液、乳酸锂、INT、PMS、NAD、0.2mol/LTris-Hcl缓冲液、1%NP40、ConA、1%冰醋酸、MTT液、酸性异丙醇、1mol/LHCL溶液、PBS缓冲液、Giemsa染液等。
试验方法:
3.1迟发型变态反应(DTH)(足跖增厚法)
小鼠腹腔注射2%(V/V)SRBC,致敏后4天测量左右足跖厚度,然后再测量不为皮下注射20%(V/V)SRBC,每鼠注射20μl,注射后24小时测量左后足跖部增厚,同一部位测量三次,取均值。以攻击前后足跖厚度差值(足跖肿胀度)来表示DTH程度。
3.2ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验(MTT法)
无菌取脾,制备脾细胞悬液,用Hanks液洗2次,每次离心10min(1000r/min),将细胞悬浮于1mlRPMI1640完全培养液中,调整细胞浓度为3×106个/ml。将细胞悬液分两孔加入24孔培养板中,每孔1ml,一孔加入75μlConA液,另一个作为对照,置5%CO2、37℃培养箱中培养72小时。培养结束前4小时,每孔吸取上清液0.7ml,加入0.7ml不含小牛血清的RPMI1640完全营养液,同时加入MTT50μl,继续培养4小时。培养结束后,每孔加入1ml酸性异丙醇,吹打均匀使紫色结晶完全溶解,在570nm波长处测定OD值,以加ConA孔的OD值减去不加ConA孔的OD值表示淋巴细胞增殖能力。
3.3小鼠脏器/体重比值及血清溶血素测定
小鼠腹腔注射SRBC六天后,摘眼球取血,离心取血清稀释100倍,进行半数溶血值测定。然后处死动物,取胸腺、脾脏称重,计算脏器/体重比值。同时制备脾细胞悬液,进行抗体生成细胞测定。
3.4抗体生成细胞检测(Jerne改良玻片法)
取脾,制成细胞悬液。将表层培养基加热溶解后与等量双倍Hanks液混合,分装小试管,每管0.5ml,再向管内加50μl10%SRBC(v/v,用SA液配制)、25μl脾细胞悬液,迅速混匀后,倾倒于已刷琼脂糖薄层的玻片上,待琼脂凝固后,将玻片水平扣放在玻片架上,放入CO2培养箱温育1.5h,然后用SA液稀释的补体(1:8)加入到玻片架凹槽内,继续温育1.5h,计数溶血空斑数。
3.5小鼠碳廓清试验
小鼠尾静脉注射1:3稀释的印度墨汁,待墨汁注入立即计时,注入墨汁后10min,分别从内眦静脉丛取血20μl,并将其加到2mlNaCO3溶液中,在600nm波长处侧光密度值(OD)。将小鼠处死,取肝和脾脏称重,计算吞噬指数。
吞噬指数a=结束体重×K1/3/(肝重+脾重)
K=(logOD1-logOD2)/(t2-t1)
3.6小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验
小鼠腹腔注射20%鸡红细胞悬液1ml,间隔0.5小时处死,固定于鼠板上,剪开腹壁皮肤,注射生理盐水2ml,转动鼠板1分钟,吸出腹腔洗液1ml,分滴于2片玻片上,37℃温育30分钟,用生理盐水漂洗晾干,以1:1丙酮甲醇溶液固定,Giemsa染液染色10分钟,用蒸馏水漂洗晾干,用油镜镜检,计算吞噬率和吞噬指数。
吞噬百分率(%)=吞噬鸡红细胞的吞噬细胞数/计算的吞噬细胞数×100
吞噬指数=被吞噬的鸡红细胞总数/计数的巨噬细胞数
3.7NK细胞活性测定
实验前24小时将靶细胞传代培养,应用前以Hanks液洗3次,用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为4×105个/ml。小鼠劲椎脱臼处死,无菌取脾,制备脾细胞悬液,用Hanks液洗2次,每次离心10min(1000r/min)。弃上清将细胞浆弹起,加入0.5ml灭菌水裂解红细胞,20秒后再加入0.5ml2倍Hanks液及8mlHanks液,离心10min(1000r/min),用1ml含10%小牛血清的RPMI1640完全培养液重悬,用1%冰醋酸稀释后计数,调整细胞浓度为2×107个/ml。将靶细胞加入96孔培养板,每孔100μl,试验孔加入100μl脾细胞(效靶比50:1),自然释放孔加入100μl培养液,最大释放孔加入100μl1%NP40,37℃培养4小时,离心,取上清100μl置96孔酶标板中,加入LDH基质液100μl,反应3分钟,以1mol/L的HCl终止反应,在酶标仪490nm处测定OD值。
NK细胞活性(%)=(反应孔OD-自然释放孔OD)/(最大释放孔OD-自然释放孔OD)×100
3.8结果判定:
增强免疫力功能判定:在细胞免疫功能、体液免疫功能、单核-巨噬细胞功能及NK细胞活性四个方面测定中,任两个方面试验结果为阳性,可以判定该受试样品具有增强免疫力作用。
其中细胞免疫功能测定项目中两个实验得结果均为阳性,或任一个实验得两个剂量组结果阳性,可判定细胞免疫功能试验结果阳性。
体液免疫功能测定项目中两个实验结果均为阳性,或任一个实验的两个剂量组结果阳性,判定体液免疫功能试验结果阳性。单核-巨噬细胞功能测定项目种两个实验得结果均为阳性,或任一个实验得两个剂量组结果阳性,判定单核-巨噬细胞功能试验结果阳性。NK细胞活性测定实验得一个以上剂量结果阳性,判定NK细胞活性结果阳性。
4.结果:
4.1样品对小鼠迟发型变态反应(DTH)的影响
表4样品对小鼠迟发型变态反应(DTH)的影响
组别(g/kg.bw) | 动物数(只) | 足跖肿胀度(nm) | P值 |
0.00 | 12 | 0.20±0.04 | |
0.25 | 12 | 0.39±0.08 | <0.01 |
0.50 | 12 | 0.37±0.09 | <0.01 |
1.50 | 12 | 0.32±0.07 | <0.01 |
由表4可见,各剂量组小鼠的足跖肿胀度与对照组比较均有极显著性差异(P<0.01)。
4.2样品对ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验的影响
表5样品对ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验的影响
组别(g/kg.bw) | 动物数(只) | 淋巴细胞增殖能力(OD差值) | P值 |
0.00 | 12 | 0.319±0.053 | |
0.25 | 12 | 0.372±0.024 | <0.05 |
0.50 | 12 | 0.391±0.038 | <0.01 |
1.50 | 12 | 0.391±0.056 | <0.01 |
由表5可见,各剂量组小鼠得脾淋巴细胞增殖能力与对照组比较均有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。
4.3样品对小鼠脏器/体重比值的影响
表6样品对小鼠脏器/体重比值的影响
由表6可见,各剂量组小鼠得脾脏/体重与胸腺/体重比值与对照组比较均无显著性差异(P>0.05)。
4.4样品对小鼠抗体生成细胞数的影响
表7样品对小鼠抗体生成细胞数的影响
组别(g/kg.bw) | 动物数(只) | 溶血空斑数(×103/全脾) | P值 |
0.00 | 12 | 21.4±3.3 | |
0.25 | 12 | 36.9±4.6 | <0.01 |
0.50 | 12 | 29.0±4.4 | <0.01 |
1.50 | 12 | 26.5±4.1 | <0.05 |
由表7可见,各剂量组小鼠的抗体生成细胞数与对照组比较均有显著性差异(P<0.01或P<0.05)。
4.5样品对小鼠血清溶血素的影响
表8样品对小鼠血清溶血素的影响
组别(g/kg.bw) | 动物数(只) | 半数溶血值(HC50) | P值 |
0.00 | 12 | 58.2±11.5 | |
0.25 | 12 | 64.3±12.0 | >0.05 |
0.50 | 12 | 56.0±10.2 | >0.05 |
1.50 | 12 | 64.6±12.6 | >0.05 |
由表8可见,各剂量组小鼠的血清溶血素水平与对照组比较均为显著性差异(P>0.05)。
4.6样品对小鼠单核-巨噬细胞碳廓清能力
表9样品对小鼠单核-巨噬细胞碳廓清吞噬指数的影响
组别(g/kg.bw) | 动物数(只) | 吞噬指数(a) | P值 |
0.00 | 12 | 5.13±0.68 | |
0.25 | 12 | 5.20±0.51 | >0.05 |
0.50 | 12 | 5.06±0.53 | >0.05 |
1.50 | 12 | 5.24±0.71 | >0.05 |
由表9可见,各剂量组小鼠的单核-巨噬细胞碳廓清吞噬指数与对照组比较均为显著性差异(P>0.05)。
4.7样品对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力的影响
表10对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力的影响
由表10可见,低、高剂量组小鼠的腹腔吞噬细胞吞噬百分率与对照组比较有显著性差异(P<0.05),高剂量组小鼠的吞噬指数与对照组比较有极显著性差异(P<0.01)。
4.8样品对小鼠的NK细胞活性的影响
表11样品对小鼠NK细胞活性的影响
组别(g/kg.bw) | 动物数(只) | NK细胞活性(%) | P值 |
0.00 | 12 | 30.5±4.8 | |
0.25 | 12 | 31.9±6.4 | >0.05 |
0.50 | 12 | 37.9±5.4 | <0.01 |
1.50 | 12 | 39.1±6.4 | <0.01 |
由表11可见,中、高剂量组小鼠的NK细胞活性与对照组比较有显著性差异(P<0.01)。
4.9样品对小鼠体重的影响
表12各组小鼠的初始体重
由表12可见,小鼠的初始体重在低、中、高剂量组和对照组之间比较均无显著性差异(P>0.05),即小鼠的初始体重在各组之间较为均衡。
表13各组小鼠的中期体重
组别(g/kg.bw) | 动物数(只) | 免疫一组体重(g) | 免疫二组体重(g) | 免疫三组体重(g) | 免疫四组体重(g) |
0.00 | 12 | 28.5±1.5 | 28.6±1.5 | 29.3±1.3 | 28.9±1.7 |
0.25 | 12 | 29.3±1.5 | 28.7±2.3 | 28.8±1.5 | 29.1±1.9 |
0.50 | 12 | 29.2±2.0 | 29.1±1.6 | 29.5±1.4 | 29.0±1.3 |
1.50 | 12 | 29.0±1.5 | 28.9±1.6 | 28.7±1.1 | 28.9±1.7 |
表14各组小鼠的末期体重
组别(g/kg.bw) | 动物数(只) | 免疫一组体重(g) | 免疫二组体重(g) | 免疫三组体重(g) | 免疫四组体重(g) |
0.00 | 12 | 30.7±2.0 | 30.6±1.7 | 31.8±1.7 | 31.9±1.6 |
0.25 | 12 | 31.1±1.3 | 31.1±2.1 | 30.8±1.3 | 31.5±2.1 |
0.50 | 12 | 31.2±2.0 | 31.3±2.0 | 31.8±1.7 | 31.3±1.6 |
1.50 | 12 | 30.9±1.4 | 31.0±1.8 | 31.0±1.1 | 31.8±1.7 |
表15样品对小鼠体重的影响
由表13、14、15可见,各组小鼠的中期体重、末期体重和体重增加值与对照组比较均为显著性差异(P>0.05)。
3小结
实验结果表明,该样品能增加小鼠的足趾肿胀度,提高小鼠的脾淋巴细胞增殖能力和抗体生成细胞数、腹腔巨噬细胞吞噬百分率及吞噬指数及小鼠的NK细胞活性;该样品对小鼠脾脏/体重比值、胸腺/体重比值、血清溶血素水品、廓清吞噬指数无明显影响。根据《保健食品检验与评价技术规范》判定标准,该样品有增强免疫力作用。
需要说明的是,对于前述的方法实施例,为了简单描述,故将其都表述为一系列的动作组合,但是本领域技术人员应该知悉,本发明并不受所描述的动作顺序的限制,因为依据本发明,某些步骤可以采用其他顺序或者同时进行。其次,本领域技术人员也应该知悉,说明书中所描述的实施例均属于优选实施例,所涉及的动作并不一定是本发明所必需的。
最后应说明的是:以上实施例仅用以说明本发明的技术方案,而非对其限制;尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明,本领域的普通技术人员应当理解:其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改,或者对其中部分技术特征进行等同替换;而这些修改或者替换,并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。
Claims (10)
1.一种提高免疫力的保健品,其特征在于,主要由以下重量份原料制成:红景天提取物50~100份、北沙参提取物50~100份、麦冬提取物50~100份、桑叶提取物50~100份、银耳提取物50~100份。
2.根据权利要求1所述的提高免疫力的保健品,其特征在于,所述红景天提取物中红景天苷含量为1-5%,所述北沙参提取物中粗多糖含量为5-30%,麦冬提取物中粗多糖含量为5-30%,桑叶提取物中粗多糖含量为5-30%,银耳提取物中多糖含量为20-50%。
3.根据权利要求1或2所述的提高免疫力的保健品,其特征在于,所述保健品为片剂。
4.根据权利要求3所述的提高免疫力的保健品,其特征在于,还包括以下原料:微晶纤维素60~150份、硬脂酸镁1~10份。
5.一种权利要求4所述的提高免疫力的保健品的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)混料:将红景天提取物、北沙参提取物、麦冬提取物、桑叶提取物、银耳提取物、微晶纤维素混合均匀,得混合粉;
(2)制软材:将混合粉与乙醇混合,得软材;
(3)制粒:将软材过筛制粒,得湿颗粒;
(4)干燥:将湿颗粒进行干燥,得干颗粒;
(5)混料压片:将步骤(4)所得干颗粒和硬脂酸镁粉混合均匀,得总混合物,然后将总混合物进行压片,得片芯;
(6)将步骤(5)所得片芯进行包衣,得成品。
6.根据权利要求5所述的提高免疫力的保健品的制备方法,其特征在于,步骤(1)中所述混料前还包括将原料预处理,所述预处理为将红景天提取物、北沙参提取物、麦冬提取物、桑叶提取物、银耳提取物、微晶纤维素过70-80目筛,将硬脂酸镁过80-100目筛,得各原料细粉。
7.根据权利要求5所述的提高免疫力的保健品的制备方法,其特征在于,步骤(5)中将所述干颗粒和硬脂酸镁粉混合均匀前,将所述干颗粒进行整粒,所述整粒为将干颗粒过14-25目筛。
8.根据权利要求5所述的提高免疫力的保健品的制备方法,其特征在于,步骤(3)中所述制粒过程采用14-25目筛。
9.根据权利要求5所述的提高免疫力的保健品的制备方法,其特征在于,步骤(4)中所述干燥温度为40-50℃。
10.根据权利要求5所述的提高免疫力的保健品的制备方法,其特征在于,步骤(2)中所用乙醇为质量分数为95%的乙醇。
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20160413 |