CN104667197A - 一种增强免疫力的组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及保健品领域，公开了一种增强免疫力的组合物及其制备方法和应用。本发明所述组合物由红景天的水提物、葡萄籽提取物、虾青素、姜黄提取物组成。本发明将中药和活性物质进行适当搭配，协同各原料的药理和功效，经特殊工艺制备出具有显著增强免疫力的产品，其使用方便、安全无副作用，效果优于当前市售产品。

Description

一种增强免疫力的组合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及保健品领域，具体涉及一种增强免疫力的组合物及其制备方法和应用。

背景技术

中医认为人体所蕴藏着的对疾病的抵抗能力--正气，即为免疫功能。《内经》云:“正气存内，邪不可干”，“邪之所凑，其气必虚”。可见正气是维系人体正常生命活动、抗御外邪及防治疾病的基本物质。它的强盛与否关系着人体的生命活动及疾病的转归。从这个意义上说，中医学的正气包括了现代医学的人体免疫功能。因此，要增强人体的免疫功能，提高机体识别异己，杀灭肿瘤细胞的能力，必须扶助正气。

人体的免疫系统包括免疫器官、免疫细胞和免疫因子。免疫器官是免疫细胞生成、成熟或集中分配的场所；免疫细胞分为淋巴细胞、树突状细胞、单核/巨噬细胞、粒细胞、肥大细胞等；淋巴细胞位于淋巴结、血液和淋巴液中，有T细胞、B细胞、K淋巴细胞、NK淋巴细胞；免疫因子(由免疫细胞或其他细胞产生的发挥免疫作用的物质)有抗体、淋巴因子、溶菌酶等。免疫细胞、免疫因子分布全身，川流不息，形成一个相互制约的网络，主宰人体的免疫功能来抵抗细菌、病毒入侵，清除体内损伤变性及衰老的细胞，清除体内代谢废物，维持机体内环境的稳定。人的身体健康与否，取决于机体的免疫功能保持相对的自身稳定，即免疫功能的相对平衡。

免疫力低下分为原发性和继发性两类。原发性是先天发育不全所致，大多数与遗传有关，多发生于儿童；继发性则由病毒、细菌、真菌等感染或药物、肿瘤、疲劳、失眠、营养不良、压力过大等原因引起，可见于各种年龄的人群。多数病后体弱，易发感染性疾病者属继发性免疫力低下。

目前增强免疫力产品中较为有名的有：春芝堂牌三七葡萄籽胶囊(主要成分：三七提取物、葡萄籽提取物、姜黄提取物)、同仁堂牌葡萄籽提取物软胶囊(主要成分：葡萄籽提取物、粉末磷脂)等。但是这些产品在免疫力增强效果上仍然不是很令人满意，需要进一步提高。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种增强免疫力的组合物及其制备方法和应用，使得所述组合物提高增强免疫力的效果。

为实现以上发明目的，本发明提供如下技术方案：

一种增强免疫力的组合物，由红景天的水提物、葡萄籽提取物、虾青素、姜黄提取物组成。

本发明将中药和活性物质进行适当搭配，经独特工序制备成具有显著增强免疫力的组合物，在注重组合物本身的安全性同时提高增强免疫力的效果。

红景天，性寒、甘、涩，归肺经。具有补气清肺、益智养心、收涩止血、散瘀消肿的功效，主治气虚体弱、病后畏寒、气短乏力、肺热咳嗽、咯血、白带腹泻、跌打损伤等。

葡萄籽提取物是从天然葡萄籽中提取的有效活性营养成份配以维生素E等主要原料精制而成的营养物质。它是目前自然界中发现的抗氧化、清除自由基能力最强的物质，其抗氧化活性为维素E的50倍、维生素C的20倍，它能有效清除人体内多余的自由基，具有超强的延缓衰老和增强免疫力的作用。

虾青素又名虾黄质、龙虾壳色素，是一种类胡萝卜素，呈粉红色，广泛存在于生物界，特别是虾、蟹、鱼、藻体、酵母和鸟类的羽毛中含量较高，是海洋生物体内主要的类胡萝卜素之一。化学名称是3，3′-二羟基-4，4′-二酮基β-胡萝卜素，在体内可与蛋白质结合而呈青、蓝色。对人体具有综合的抗氧化效益，包括：抗衰老、抗肿瘤、预防心脑血管疾病、维护皮肤健康、改善运动机能等作用。

姜黄提取物，为姜黄的醇提产物。姜黄为姜科植物姜黄Curcumza longa L.的干燥根茎。2010版药典记载，姜黄辛、苦、温，破血行气，通经止痛，可用于风湿肩臂疼痛，跌扑肿痛，中医临床用其治疗风湿痹证有着悠久的历史和丰富的经验。

所述姜黄提取物为市售产品，或自制。自制的工艺为：姜黄药材粉碎，以10倍量(重量)50％乙醇提取2次，每次2.5h，提取温度60℃。

葡萄籽提取物为市售产品或自制，制备方法为：将葡萄籽粉碎，以乙醇回流提取后，经浓缩、干燥，得到葡萄籽提取物。

在葡萄籽提取物的提取中，作为优选，葡萄籽的含水量不大于5％。

作为优选，乙醇的质量为葡萄籽的10倍。

作为优选，回流提取的温度为90℃～100℃，提取2次，每次2h。

作为优选，浓缩采用真空浓缩，浓缩至密度为1.2g/cm3～1.5g/cm3。

作为优选，干燥采用喷雾干燥，温度为170℃～180℃。

本发明实施例中采用的葡萄籽提取物中原花青素含量≥95％，水分含量≤5％，pH值为2.5～4.5，灰分≤0.5％，砷≤10mg/kg，铁≤3mg/kg。姜黄提取物中姜黄素含量≥90％。

作为优选，组合物各原料重量份数为：

虾青素0.01-0.4重量份、红景天20-60重量份、葡萄籽提取物2-6重量份、姜黄提取物2-6重量份；更优选地，虾青素0.2重量份、红景天40重量份、葡萄籽提取物4重量份、姜黄提取物3.6重量份。

另外，在本发明的一些实施例中，各原料重量份数为：

虾青素0.01重量份、红景天20重量份、葡萄籽提取物2重量份、姜黄提取物2重量份；虾青素0.4重量份、红景天60重量份、葡萄籽提取物6重量份、姜黄提取物6重量份。

本发明所制备的组合物选用安全性高的物质为原料，且通过相关小鼠模型试验证明，所述组合物能增强小鼠迟发型变态反应、提高小鼠的抗体生成细胞数，提高小鼠单核-巨噬细胞碳廓清的能力，能提高小鼠血清半数溶血值、ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化能力。同时，对小鼠体重增长、脾脏/体重比值、胸腺/体重比值、小鼠NK细胞活性、小鼠巨噬细胞鸡红细胞的能力无明显影响。以上试验结果表明本发明所述组合物能增强免疫力且安全无副作用。

此外，和市售的现有产品相比，本发明组合物在上述试验中具有更优的效果。

基于此，本发明还提供了所述组合物在制备增强免疫力保健品中的应用。作为优选，所述保健品为片剂、丸剂、胶囊剂或颗粒剂。

同时，本发明还提供一种增强免疫力的保健品，包括本发明所述组合物以及辅料。作为优选，所述辅料选自微晶纤维素、预胶化淀粉、硬脂酸镁、交联羧甲基纤维素钠、甲基硅油、乳糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、玉米淀粉、小麦淀粉、稻米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、黄芪胶、聚乙烯吡咯烷酮、磷酸钙。

对于辅料的选择，本领域技术人员可根据实际的产品形式去选择适用的辅料，这对于本领域技术人员来说是可以实现的。例如，利用本发明组合物和微晶纤维素、硬脂酸镁、交联羧甲基纤维素钠等可制备成片剂。

此外，本发明还提供了所述组合物的制备方法，包括：

将红景天加水提取，过滤后取滤液浓缩、干燥、粉碎，获得干粉；

干粉和葡萄籽提取物、虾青素、姜黄提取物混匀，获得所述组合物。

作为优选，所述制备方法可具体为：

将红景天加6-10倍重量水提取，提取1-3次，每次0.5-3h，过滤后滤液浓缩至1.00-1.30，减压干燥，粉碎，得到干粉；

干粉和葡萄籽提取物、虾青素、姜黄提取物混匀，获得所述组合物。

作为优选或进一步优选，所述制备方法可具体为：

将红景天加8倍重量水提取，提取2次，每次1.5h，过滤后滤液浓缩至1.2，减压干燥，粉碎，得到干粉；

干粉和葡萄籽提取物、虾青素、姜黄提取物混匀，获得所述组合物。

由以上技术方案可知，本发明将中药和活性物质进行适当搭配，协同各原料的药理和功效，经特殊工艺制备出具有显著增强免疫力的产品，其使用方便、安全无副作用，效果优于当前市售产品。

具体实施方式

本发明公开了一种增强免疫力的组合物及其制备方法和应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明所述产品以及制备方法已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

在具体实施方式中，本发明对技术方案进行了试验研究，用来证明本发明的技术效果，所述试验包括体重、脏器/体重比值、足跖厚度(细胞免疫功能试验)、淋巴细胞的增值能力(细胞免疫功能试验)、抗体生成细胞数(体液免疫功能试验)、半数溶血值(HC₅₀)(体液免疫功能试验)、碳廓清指数(单核-巨噬细胞功能试验)、吞噬细胞的吞噬率和吞噬指数(单核-巨噬细胞功能)、NK细胞活性(NK细胞活性试验)。

其中，试验材料、仪器、分组、剂量等如下：

1、动物

ICR小鼠，清洁级，18～22g，雄性，购自扬州大学比较医学中心，合格证号：SCXK(苏)27～0001。

2、药物与试剂

绵羊红细胞(SRBC)、生理盐水、Hank’s液(pH7.2-7.4)、RPMIl640培养液、小牛血清、青霉素、链霉素、刀豆蛋白A(ConA)、1％冰醋酸、1mol/L的HCl溶液、酸性异丙醇(96mL异丙醇加1mol/L的HCl溶液4mL)、MTT、PBS缓冲液(pH7.2-7.4)、补体(豚鼠血清)、SA缓冲液、琼脂糖、都氏试剂(碳酸氢钠1.0g，高铁氰化钾0.2g，氰化钾0.05g，加蒸馏水至1000mL)、YAC-1细胞、乳酸锂、硝基氯化四氮唑、吩嗪二甲酯硫酸盐、氧化型辅酶I、0.2mol/L的Tris-HCl缓冲液(pH 8.2)、1％NP40、印度墨汁、0.1％Na₂CO₃、鸡红细胞、甲醇、Giemsa染液等。

3、仪器

ES-2100A电子天平、BS223S电子天平、755分光光度计、酶标仪、二氧化碳培养箱、低速离心机、恒温水浴、显微镜、倒置显微镜、螺旋测微仪。

洁净工作台、无菌手术器械、微量注射器(25μL)、细胞计数器、24孔和96孔平底细胞培养板、96孔U型细胞培养板、玻璃平皿、纱布、试管、玻片架、200目筛网、计时器、血色素吸管、载玻片等。

4、分组与剂量设置

剂量设置原则：本组合物推荐剂量为成人(按60kg体重计)每日1.68g，相当于0.028g/日/kg体重。实验设人体推荐量的5倍、10倍、30倍，即每日0.14g/kg·BW、0.28g/kg·BW、0.84g/kg·BW为低、中、高剂量组。

空白对照组：给予蒸馏水自由饮用，0.2mL/20g体重灌胃；

低含量组：实施例1所述组合物，以上成分按照优选的制备方法制成制剂，按照小鼠每1kg体重给予本组制剂0.14g的标准，每日饮用，结束后，给蒸馏水自由饮用，0.2mL/20g体重灌胃；

中含量组：实施例1所述组合物，以上成分按照优选的制备方法制成制剂，按照小鼠每1kg体重给予本组制剂0.28g的标准，每日饮用，结束后，给蒸馏水自由饮用，0.2mL/20g体重灌胃；

高含量组：实施例1所述组合物，以上成分按照优选的制备方法制成制剂，按照小鼠每1kg体重给予本组制剂0.84g的标准，每日饮用，结束后，给蒸馏水自由饮用，0.2mL/20g体重灌胃；

A1组：缺虾青素，红景天60重量份、葡萄籽提取物6重量份、90％姜黄提取物6重量份；以上成分按照实施例1制备方法制成制剂，按照小鼠每1kg体重给予本组制剂0.84g的标准，蒸馏水配成溶液，0.2mL/20g体重灌胃；

A2组：缺红景天，虾青素0.4重量份、葡萄籽提取物6重量份、90％姜黄提取物6重量份；以上成分按照实施例1制备方法制成制剂，按照小鼠每1kg体重给予本组制剂0.84g的标准，蒸馏水配成溶液，0.2mL/20g体重灌胃；

A3组：缺葡萄籽提取物，虾青素0.4重量份、红景天60重量份、90％姜黄提取物6重量份；以上成分按照实施例1制备方法制成制剂，按照小鼠每1kg体重给予本组制剂0.84g的标准，蒸馏水配成溶液，0.2mL/20g体重灌胃；

A4组：缺90％姜黄提取物，虾青素0.4重量份、红景天60重量份、葡萄籽提取物6重量份；以上成分按照实施例1制备方法制成制剂，按照小鼠每1kg体重给予本组制剂0.84g的标准，蒸馏水配成溶液，0.2mL/20g体重灌胃；

现有产品组：春芝堂牌三七葡萄籽胶囊，380mg/粒(每100g含原花青素16g)，按照小鼠每1kg体重给予本组制剂0.84g的标准，蒸馏水配成溶液，0.2mL/20g体重灌胃。

5、实验动物与给药

将324只ICR小鼠分为3批，每批108只，每批随机分为9组，每组12只。

(1)实验一批进行碳廓清实验；

(2)实验二批进行脏体比值测定、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验、迟发型变态反应实验、半数溶血值(HC50)的测定和抗体生成细胞数的测定；

(3)实验三批进行ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验、NK细胞的活性测定。

每日经口灌胃给予各实验组组合物一次，空白组给予蒸馏水，灌胃体积为0.2ml/20g·BW，连续灌胃30天。

6、判断标准

《保健食品检验与评价技术规范)》(2003版)规定：在细胞免疫功能、体液免疫功能、单核-巨噬细胞功能、NK细胞活性四个方面任两个方面结果阳性，可判定该受试样品具有增强免疫力功能作用。其中细胞免疫功能测定项目中的两个实验结果均为阳性，或任一实验的两个剂量组结果阳性，可判定细胞免疫功能测定结果阳性。体液免疫功能测定项目中的两个实验结果均为阳性，或任一实验的两个剂量组结果阳性，可判定体液免疫功能测定结果阳性。单核-巨噬细胞功能测定项目中的两个实验结果均为阳性，或任一实验的两个剂量组结果阳性，可判定单核-巨噬细胞功能结果阳性。NK细胞活性测定实验的一个以上剂量组结果阳性，可判定NK细胞活性结果阳性。

7、数据处理

用SPSS软件进行数据处理。采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值＜F_0.05，结论：各组均数间差异无显著性，F值≥F_0.05，P≤0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。

以下就本发明所提供的一种增强免疫力的组合物及其制备方法和应用做进一步说明。

实施例1：本发明所述组合物的制备

原料：

虾青素0.2重量份、红景天40重量份、葡萄籽提取物(原花青素含量≥95％)4重量份、姜黄提取物(姜黄素含量≥90％)3.6重量份；

方法：

将红景天加8倍重量水提取，提取2次，每次1.5h，过滤后滤液浓缩至1.2，减压干燥，粉碎，得到干粉；

干粉和葡萄籽提取物、虾青素、姜黄提取物混匀，获得所述组合物。

实施例2：本发明所述组合物的制备

原料：

虾青素0.01重量份、红景天20重量份、葡萄籽提取物(原花青素含量≥95％)2重量份、姜黄提取物(姜黄素含量≥90％)2重量份；

方法：

将红景天加6倍重量水提取，提取3次，每次0.5h，过滤后滤液浓缩至1.30，减压干燥，粉碎，得到干粉；

干粉和葡萄籽提取物、虾青素、姜黄提取物混匀，获得所述组合物。

实施例3：本发明所述组合物的制备

原料：

虾青素0.4重量份、红景天60重量份、葡萄籽提取物(原花青素含量≥95％)6重量份、姜黄提取物(姜黄素含量≥90％)6重量份；

方法：

将红景天加10倍重量水提取，提取1次，每次3h，过滤后滤液浓缩至1.00，减压干燥，粉碎，得到干粉；

干粉和葡萄籽提取物、虾青素、姜黄提取物混匀，获得所述组合物。

实施例4：脏器/体重比值的测定

小鼠称重后颈椎脱臼处死，取脾脏和胸腺，去尽筋膜，用滤纸吸干脏器表面血污，称重，计算脾脏/体重比值和胸腺/体重比值，结果见表1-4。

表1本组合物对第一批实验小鼠体重的影响

表2本组合物对第二批实验小鼠体重的影响

表3本组合物对第三批实验小鼠体重的影响

由表1-3可见，各剂量组实验初期、实验中期、实验末期小鼠体重及实验期间小鼠体重增长与空白对照组比较，差异均无显著性(P＞0.05)，即本发明组合物对小鼠体重无不良影响，安全性高。此外，本发明还以实施例2和实施例3组合物为对象进行相同的实验，结果同样与空白对照无明显差异。

表4本组合物对小鼠免疫器官脏器/体重比值的影响

由表4可见，经口给予小鼠不同剂量的本组合物30天，对小鼠脾脏/体重比值和胸腺/体重比值均无显著影响(P＞0.05)。此外，本发明还以实施例2和实施例3组合物为对象进行相同的实验，结果同样与空白对照无明显差异。

实施例5：迟发型变态反应(DTH)实验(足跖增厚法)

取羊血，生理盐水洗涤3次，每只鼠经腹腔注射2％(v/v，用生理盐水配制)压积SRBC(2000r/min，10min)0.2mL，致敏后4d，测量左后足跖部厚度，同一部位测量三次，取平均值。然后在测量部位皮下注射20％(v/v，用生理盐水配制)压积SRBC 20μL，于注射后24h测量左后足跖部厚度，以攻击前后足跖厚度的差值来表示DTH的程度。受试样品组的差值显著高于对照组的差值，可判定该项实验结果阳性，结果见表5。

表5本组合物对小鼠迟发型变态反应(DTH)的影响

*与其他对照组比较有显著性差异

由表5可知，经口给予小鼠不同剂量的本组合物30天，中、高剂量组足跖肿胀度明显高于对照组和现有产品组，差异具有显著性(P＜0.05)。此外，本发明还以实施例2和实施例3组合物为对象进行相同的实验，结果中、高剂量组足跖肿胀度明显高于其他对照组，差异具有显著性。

实施例6：ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验(MTT法)

无菌取脾，置于盛有适量无菌Hank’s液的小平皿中，用镊子轻轻将脾磨碎，制成单个细胞悬液。经200目筛网过滤，制成细胞悬液。用Hank’s液洗3次，每次离心10min(1000r/min)。然后将细胞悬浮于1mL的完全培养液中，镜检计数，调整细胞浓度为3×10⁶个/mL。再将脾细胞悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔1mL，在其中一孔加75μL ConA液(相当于7.5μg/mL)，另一孔作为对照，置5％CO₂，37℃的CO₂孵箱中培养72h。培养结束前4h，每孔轻轻吸去上清液0.7mL，加入0.7mL不含小牛血清的RPMI1640培养液，同时加入MTT(5mg/mL)50μL/孔，继续培养4h。培养结束后，每孔加入1mL酸性异丙醇，吹打混匀，使紫色结晶完全溶解。然后将此液体移入比色杯中，在755分光光度计上比色测定，波长570nm。淋巴细胞的增殖能力用加ConA孔的光密度值减去不加ConA孔的光密度值代表淋巴细胞的增值能力。受试样品组的光密度差值显著高于对照组的光密度差值，可判定该项实验结果阳性，结果见表6。

表6本组合物对小鼠淋巴细胞转化能力实验的影响

*与其他对照组比较有显著

由表6可见，经口给予小鼠不同剂量的本组合物30天，高剂量组小鼠淋巴细胞转化能力与对照组和现有产品组比较，有差异显著性(P＜0.05)，即本组合物在高剂量组能提高ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化能力。此外，本发明还以实施例2和实施例3组合物为对象进行相同的实验，结果高剂量组能提高ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化能力，相对其他对照组差异具有显著性。

实施例7：抗体生成细胞数的测定(Jerne改良玻片法)

取羊血，生理盐水洗涤3次，每只鼠经腹腔注射2％(v/v，用生理盐水配制)压积SRBC 0.2mL。将SRBC免疫5天后的小鼠颈椎脱臼处死，取出脾脏，轻轻磨碎脾脏，制成细胞悬液。离心(1000r/min)10min，用Hank’s液洗2遍，最后将细胞悬液在8mL Hank’s液中。将琼脂糖加热溶解后，与等量双倍Hank’s液混合，分装小试管，每管0.5mL，再向管内加10％(v/v，用SA液配制)压积SRBC 50μL、脾细胞悬液8μL，迅速混匀后，倾倒于已刷琼脂糖薄层的玻片上，做平行片，待琼脂凝固后，将玻片水平扣放在片架上，放入二氧化碳培养箱中37℃温育1h，然后用SA缓冲液稀释的补体(1：8)加入到玻片架凹槽内，继续温育1.5h后，计数溶血空斑数。用空斑数/全脾细胞数来表示。受试样品组的空斑数显著高于对照组的空斑数，可判定该项实验结果阳性，结果见表7。

表7本组合物对小鼠抗体生成细胞数的影响

*与其他对照组比较有显著(P＜0.05)；**与其他对照组比较有显著(P＜0.01)

由表7可知，经口给予小鼠不同剂量的本组合物30天，中、高剂量组小鼠抗体生成细胞数明显高于空白组和现有产品组，差异具有显著性(P＜0.05或P＜0.01)。此外，本发明还以实施例2和实施例3组合物为对象进行相同的实验，结果中、高剂量组能小鼠抗体生成细胞数明显高于其他对照组，差异具有显著性(P＜0.05或P＜0.01)。

实施例8：半数溶血值(HC₅₀)的测定

取羊血，生理盐水洗涤3次，每只鼠经腹腔注射2％(v/v，用生理盐水配制)压积SRBC 0.2mL进行免疫。5天后，摘除眼球取血于离心管内，放置约1h，将凝固血与管壁剥离，使血清充分析出，2000r/min离心10min，收集血清。用SA缓冲液将血清稀释为300倍，取1mL置试管内，依次加入10％(v/v，用SA缓冲液配制)压积SRBC 0.5mL，补体1mL(用SA缓冲液按1∶8稀释)。另设不加血清的对照管(以SA缓冲液代替)。置37℃恒温水浴中保温15min后，冰浴终止反应。2000r/min离心10min，取上清1mL，加都氏试剂至3mL。同时取10％(v/v，用SA缓冲液配制)的压积SRBC 0.25mL，加都氏试剂至4mL于另一试管中，充分混匀，放置10min后，于540nm处以对照管作空白，分别测定各管光密度值。

溶血素的量以半数溶血值(HC₅₀)表示，按下式计算：

样品半数溶血值＝样品光密度值/SRBC半数溶血时的光密度值×稀释倍数

受试样品组的HC₅₀显著高于对照组的HC₅₀，可判定该项实验结果阳性，结果见表8。

表8本组合物对小鼠半数溶血值(HC₅₀)的影响

**与其他对照组比较有显著(P＜0.01)

由表8可见，经口给予小鼠不同剂量的本组合物30天，高剂量组小鼠半数溶血值与空白组和现有产品组比较，差异有显著性(P＜0.01)。即本发明组合物在高剂量时能提高小鼠半数溶血值。此外，本发明还以实施例2和实施例3组合物为对象进行相同的实验，结果高剂量组能小鼠半数溶血值与其他对照组比较，差异有显著性。

实施例9：小鼠碳廓清实验

按体重从小鼠尾静脉注射稀释4倍的印度墨汁(0.05mL/10g)，待墨汁注入，立即计时。注入墨汁后2、10min，分别从内眦静脉丛取血20μL，并将其加到2mL 0.1％Na₂CO₃溶液中。用755分光光度计在600nm波长处测光密度值(OD)，以Na₂CO₃溶液作空白对照。将小鼠处死，取肝脏和脾脏称重。以碳廓清指数(a)表示小鼠碳廓清的能力，按下式计算a：

k＝(logOD₁-logOD₂)/(t₂-t₁)

a＝[体重÷(肝重+脾重)]×k^1/3

受试样品组的碳廓清指数显著高于对照组的碳廓清指数，可判定该项实验结果阳性，结果见表9。

表9本组合物对小鼠单核-巨噬细胞碳廓清能力的影响

*与其他对照组比较有显著(P＜0.05)

由表9可见，经口给予小鼠不同剂量的本组合物30天，中、高剂量组小鼠吞噬指数显著高于空白组和现有产品组，差异有显著性(P＜0.05)。即本发明胶囊在中、高剂量时能提高小鼠碳廓清能力。此外，本发明还以实施例2和实施例3组合物为对象进行相同的实验，结果中、高剂量组小鼠吞噬指数显著高于其他对照组，差异有显著性。

实施例10：小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验(半体内法)

小鼠腹腔注射20％(v/v，用生理盐水配制)鸡红细胞(2000r/min，10min)悬液1mL，间隔30min，颈椎脱臼处死，将其仰位固定于鼠板上，经腹腔注入生理盐水2mL，转动鼠板1min。取腹腔巨噬细胞洗液1mL，分别滴于2片载玻片上，放入垫有湿纱布的搪瓷盒内，移置37℃孵箱温育30min。孵毕，于生理盐水中漂洗，以除去未贴片细胞。晾干，以1∶1丙酮甲醇溶液固定，Gicmsa-磷酸缓冲液染色，再用蒸馏水漂洗晾干。油镜下计数，每片计数100个巨噬细胞，按下式计算吞噬率和吞噬指数：

吞噬百分率(％)＝吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/计数的巨噬细胞数×100

吞噬指数＝被吞噬的鸡红细胞总数/计数的巨噬细胞数

得出的吞噬百分率再按下式进行数据转换，X＝Sin-1√P，式中P为吞噬百分率，用小数表示。受试样品组的吞噬百分率和吞噬指数均显著高于对照组的吞噬百分率和吞噬指数，可判定该项实验结果阳性，结果见表10和表11。

表10本组合物对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬率的影响

表11本组合物对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬指数的影响

由表10-11可见，经口给予小鼠不同剂量的本组合物30天，各剂量组与空白组比较，无显著性差异(P＞0.05)。即各剂量组对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力无明显影响。此外，本发明还以实施例2和实施例3组合物为对象进行相同的实验，结果各剂量组与空白组比较，无显著性差异。

实施例11：NK细胞活性的测定(乳酸脱氢酶LDH测定法)

实验前24h将靶细胞YAC-1进行传代培养，应用前以Hank’s液洗3次，用含10％小牛血清的RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为4×10⁵个/mL。受试小鼠颈椎脱臼处死，无菌取脾，制成脾细胞悬液，用Hank’s液洗2次，每次离心10min(1000r/min)。弃上清将细胞浆弹起，加入0.5mL灭菌水20s，裂解红细胞后再加入0.5mL 2倍Hank’s液及8mL Hank’s液，1000r/min，10min离心，用1mL含10％小牛血清的RPMI1640完全培养液重悬，镜检计数，用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为2×10⁷个/mL。使效靶比为50∶1。取靶细胞和效应细胞各100μL，加入U形96孔培养板中；靶细胞自然释放孔加靶细胞和培养液各100μL，靶细胞最大释放孔加靶细胞和1％NP40各100μL；上述各项均设三个平行孔，37℃、5％CO₂培养箱中培养4h，将96孔板以1500r/min离心5min，每孔吸取上清100μL置平底96孔培养板中，加入LDH基质液100μL，反应3-10min，然后每孔加入1mol/L的HCl溶液30μL终止反应，在酶标仪490nm处测光密度值(OD)，计算NK细胞活性：

NK细胞活性(％)＝(反应孔OD-自然释放孔OD)/(最大释放孔OD-自然释放孔OD)×100

得出的NK细胞活性按下式进行数据转换，X＝Sin-1√P，式中P为NK细胞活性，用小数表示。所得数据为计量资料，受试样品组的NK细胞活性显著高于对照组的NK细胞活性，可判定该项实验结果阳性，结果见表12。

表12本组合物对小鼠NK细胞活性的影响

由表12可见，经口给予小鼠不同剂量的本组合物30天，各剂量组对小鼠NK细胞活性与空白组比较，差异无显著性(P＞0.05)。即对小鼠NK细胞活性无明显影响。此外，本发明还以实施例2和实施例3组合物为对象进行相同的实验，结果各剂量组与空白组比较，无显著性差异。

实施例12：实验总结

实施例4-实施例11实验中，经口给予小鼠0.14g/kg·BW、0.28g/kg·BW、0.84g/kg·BW剂量的本组合物30天，0.28g/kg·BW、0.84g/kg·BW剂量能增强小鼠迟发型变态反应、提高小鼠的抗体生成细胞数，提高小鼠单核-巨噬细胞碳廓清的能力，0.84gl/kg·BW剂量能提高小鼠血清半数溶血值、ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化能力。与其他对照组比较，P＜0.05或P＜0.01。对小鼠体重增长、脾脏/体重比值、胸腺/体重比值、小鼠NK细胞活性、小鼠巨噬细胞鸡红细胞的能力无明显影响。以上实验结果提示本发明组合物能显著增强免疫力。

而同时，作为对照组的A1-A4组以及现有产品组对小鼠迟发型变态反应、提高小鼠的抗体生成细胞数，单核-巨噬细胞碳廓清的能力，血清半数溶血值、ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化能力无显著作用，但与空白组比较，均具有一定的提高作用。对小鼠体重增长、脾脏/体重比值、胸腺/体重比值、小鼠NK细胞活性、小鼠巨噬细胞鸡红细胞的能力无明显影响。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (12)

1.一种增强免疫力的组合物，其特征在于，由红景天的水提物、葡萄籽提取物、虾青素、姜黄提取物组成。

2.根据权利要求1所述组合物，其特征在于，组合物各原料重量份数为：

虾青素0.01-0.4重量份、红景天20-60重量份、葡萄籽提取物2-6重量份、姜黄提取物2-6重量份。

3.根据权利要求2所述组合物，其特征在于，组合物各原料重量份数为：

虾青素0.2重量份、红景天40重量份、葡萄籽提取物4重量份、姜黄提取物3.6重量份。

4.根据权利要求1所述组合物，其特征在于，所述姜黄提取物中姜黄素含量不低于90％。

5.根据权利要求1所述组合物，其特征在于，所述葡萄籽提取物中原花青素含量不低于95％。

6.权利要求1-5任意一项所述组合物在制备增强免疫力保健品中的应用。

7.根据权利要求6所述应用，其特征在于，所述保健品为片剂、丸剂、胶囊剂或颗粒剂。

8.一种增强免疫力的保健品，其特征在于，包含权利要求1-5任意一项所述组合物和辅料。

9.根据权利要求8所述保健品，其特征在于，所述辅料选自微晶纤维素、预胶化淀粉、硬脂酸镁、交联羧甲基纤维素钠、甲基硅油、乳糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、玉米淀粉、小麦淀粉、稻米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、黄芪胶、聚乙烯吡咯烷酮、磷酸钙。

10.权利要求1所述组合物的制备方法，其特征在于，包括：

将红景天加水提取，过滤后取滤液浓缩、干燥、粉碎，获得干粉；

干粉和葡萄籽提取物、虾青素、姜黄提取物混匀，获得所述组合物。

11.根据权利要求10所述制备方法，其特征在于，包括：

将红景天加6-10倍重量水提取，提取1-3次，每次0.5-3h，过滤后滤液浓缩至1.00g/mL-1.30g/mL，减压干燥，粉碎，得到干粉；

干粉和葡萄籽提取物、虾青素、姜黄提取物混匀，获得所述组合物。

12.根据权利要求10或11所述制备方法，其特征在于，包括：

将红景天加8倍重量水提取，提取2次，每次1.5h，过滤后滤液浓缩至1.2，减压干燥，粉碎，得到干粉；

干粉和葡萄籽提取物、虾青素、姜黄提取物混匀，获得所述组合物。